DE2721760A1

DE2721760A1 - Peptidderivate und verfahren zu deren herstellung

Info

Publication number: DE2721760A1
Application number: DE19772721760
Authority: DE
Inventors: Frank Ratcliffe Atherton; Michael John Hall; Cedric Herbert Hassall; Robert Wilson Lambert; Peter Stuart Ringrose; Hertshire Welwyn
Original assignee: F Hoffmann La Roche AG
Current assignee: F Hoffmann La Roche AG
Priority date: 1976-05-14
Filing date: 1977-05-13
Publication date: 1977-12-01
Also published as: ATA345877A; PH14715A; IL52040A0; PT66544A; NL7704370A; SE7705628L; JPS52139023A; NO771717L; AU511452B2; FR2351124A1; DK209877A; CA1090785A; IT1075484B; FR2351124B1; FI771518A7; LU77319A1; BE854591A; GR73010B; ZA772732B; PT66544B

Description

Patentanwälte

/.-ing. Reiner F. Meyer ·

München 80

Luci/e-Grahn-S!,-. 22. IeI. (089) 472947

1 3. Mai «77

RAN 4105/24

F. Hoffmann-La Roche & Co. Aktiengesellschaft, Basel/Schweiz

Peptidderivate und Verfahren zu deren Herstellung

Die vorliegende Erfindung betrifft neue Peptidderivate, insbesondere solche von Phosphon- und Phosphinsäuren, ein Verfahren zu deren Herstellung und diese Verbindungen enthaltende pharmazeutische Präparate.

Die erfindungsgemässen Peptidderivate sind Verbindungen der allgemeinen Formel

R³ _r R² _, R¹ C

I Γ I I I Il

H_N—CH— CO -J-NH- CH- CO +NH- CH- Ρ — (a) L (b) J (C) I

R⁴ (D

η OH

worin η 1, 2 oder 3 bedeutet;

12 3
R , R und R die Reste normalerweise

in Proteinen vorkommender α-Aminosäuren darstellen, mit der Einschränkung, dass R nie Ka^g^j^j^^d eine

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Methylgruppe darstellt, wenn η = 1 ist;

4
R Hydroxy oder Methyl bedeutet und wobei die Konfigurationen am C-Atom (a) D, am C-Atom (b) L und am C-Atom (c) R sind

2 1
(sofern R und R φ Wasserstoff),

und deren physiologisch verträgliche Salze.

Der in der Beschreibung verwendete Ausdruck "Rest einer normalerweise in Proteinen vorkommenden α-Aminosäure" soll den Rest R einer α-Aminosäure der allgemeinen Formel

H~N — CH- COOH

² I

wie sie normalerweise in Proteinen vorkommt, darstellen. Wenn beispielsweise die Aminosäure Glycin ist, dann stellt R ein Viasserstoff atom dar und wenn die Aminosäure Alanin ist, stellt R eine Methylgruppe dar. Für Valin ist R eine Isopropylgruppe, für Leucin eine Isobutylgruppe, für Glutaminsäure die 2-Carboxyäthylgruppe und für Phenylalanin die Benzylgruppe. R kann aber auch zusätzlich an das a-Aminoatom gebunden und Teil eines stickstoffhaltigen Ringes sein, wie beispielsweise im Prolin und in der Pyroglutaminsäure.

Für den Fall, das R ψ Wasserstoff, ist die Konfiguration am Kohlenstoffatom (c) R, das ist die Konfiguration, die erhalten wird durch Ersatz der Carboxylgruppe einer natürlichen L-Aminosäure durch einen Phosphorrest.

Wenn in Formel I η 2 oder 3 bedeutet, kann der Substi-2
tuent R gleiche oder verschiedene a-Aminosäurereste darstellen.

Bevorzugte Verbindungen der Formel I sind solche,

4
in denen R eine Hydroxygruppe darstellt. Ebenfalls bevorzugt sind Verbindungen der Formel I, in denen R eine Methylgruppe

2 darstellt, sowie Verbindungen, in denen R eine Methylgruppe und R eine Methyl-, Isopropyl- oder Isobutylgruppe darstellen.

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Beispiele von Verbindungen der Formel I sind die folgenden:

(IR)-1-(D-Alanyl-L-alanylamino)-äthylphosphonsäure,

(IR)-1-(D-Alanyl-L-alanyl-L-alanylamino)-äthylphosphonsäure,

(IR)-I-(D-Valyl-L-alanyl-L-alanylamino)-äthylphosphonsäure,

(IR)-1-(D-Leucyl-L-alanyl-L-alanylamino)-äthylphosphonsäure und

(IR)-l-(D-Alanyl-L-alanyl-L-alanyl-L-alanylamino)-äthylphosphonsäure.

Die Peptidderivate der Formel I und ihre physiologisch verträglichen Salze können erfindungsgemäss dadurch hergestellt werden, dass man

a) in an sich bekannter Weise die Schutzgruppe(n) einer Verbindung der Formel

30 .20 _M _

^{1 !} «-_R~ _(II)

R^JU _ R" -, * 0

ei.· ... i„ Ü „40 R³

I Γ ι ι»

⁵_-NH_CH—CO 4-NH-CH-CO--NH—CH—Ρ — (a) L (b) J_n (C) L₁

worin η wie oben und die Konfigurationen an den C-Atomen (a), (b) und (c) analog zu oben definiert sind;

R Wasserstoff oder eine Aminoschutzgruppe;

R¹⁰, R²⁰ und R³⁰ die Reste normalerv/eise in Proteinen vorkommender α-Aminosäuren darstellen mit der zu oben analogen Einschränkung und wobei allfällig vorkommende Aminogruppen sowie andere funktionelle Gruppen gegebenenfalls in geschützter Form vorliegen;

40
R Methyl, Hydroxy oder eine Niederalkoxyschutzgruppe und R Hydroxy oder eine Nieder-

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alkoxyschutzgruppe bedeuten,
abspaltet oder
b) aus einem (R,S)-Diastereomerengemisch der Formel I das

R-Diastereomere in an sich bekannter Weise isoliert und gegebenenfalls eine erhaltene Verbindung der Formel I in ein physiologisch verträgliches Salz überführt.

Eine oder mehrere in den Resten R , R und R einer Verbindung der Formel II anwesende Aminogruppe(n) kann (können) in geschützter Form vorliegen, wobei die aus der Peptidchemie bekannten Aminoschutzgruppen in Frage kommen. Besonders geeignete Aminoschutzgruppen sind Aralkoxycarbonylgruppen, insbesondere die Benzyloxycarbonyl- und die tert.-Butoxycarbonylgruppe. Als Aminoschutzgruppen kommen aber auch der Formyl-, der Trityl- oder der Trifluoracetylrest in Frage. Eine in den Resten R , R und R einer Verbindung der Formel II anwesende Carboxy- oder Hydroxygruppe kann durch eine der üblichen Carboxyl- oder Hydroxylschutzgruppen geschützt sein. Eine Carboxylgruppe kann beispielsweise durch Ueberführung in eine Alkylester- oder Aralkylesterfunktion, beispielsweise einen tert.-Butylester oder einen Benzylester, geschützt sein. Eine Hydroxygruppe kann beispielsweise mittels eines Aralkoxycarbonylrestes,ζ.B. des Benzyloxycarbonylrestes, eines Alkanoylrestes, z.B. des Acetyl- oder Propionylrestes, eines Aroylrestes, z.B. des Benzoylrestes, eines Alkylrestes, z.B. des tert.-Butylrestes, oder eines Aralkylrestes, z.B. des Benzylrestes, geschützt werden. Der Schutz weiterer funktioneller Gruppen, die Teile der Substituenten R , R und R sein können, kann in an sich bekannter Weise erfolgen. Bei der durch den Rest R der allgemeinen Formel II genannten Schutzgruppe kann es sich um eine beliebige, in Verbindung mit den Resten R , R ° und R vorstehend bereits genannte Aminoschutzgruppe handeln.

Die Abspaltung der Schutzgruppen einer Verbindung der Formel II kann in an sich bekannter Weise durchgeführt werden,

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d.h. nach Verfahren,die für die Schutzgruppenabspaltung zur Zeit tatsächlich angewandt oder in der Literatur beschrieben werden. Demzufolge kann beispielsweise ein Aralkoxycarbonylrest/Z.B. die Benzyloxycarbonyl- oder die tert.-Butoxycarbonylgruppe, hydrolytisch abgespalten werden, beispielsweise durch Behandeln mit einem Gemisch von Bromwasserstoff und Eisessig. Ein Aralkoxycarbonylrest, z.B. der Benzyloxycarbonylrest, kann auch durch Hydrierung, z.B. in Gegenwart von Palladium auf Holzkohle oder Palladiumoxyd, abgespalten werden. Des v/eiteren kann die tert .-Butoxycarbonylgruppe mittels Chlorwasserstoff in Dioxan abgespalten werden. Eine als Rest

40 41

R und/oder R vorhandene niedere Alkoxygruppe kann gerad- oder verzweigtkettig sein und vorzugsweise 1-6 Kohlenstoffatome enthalten (z.B. Methoxy, Aethoxy, Propoxy, Isopropoxy, Butoxy etc.) und in eine Hydroxygruppe durch Behandlung mit einem Gemisch Bromwasserstoff in Eisessig oder mittels Trimethylchlorsilan und anschliessender wässriger Hydrolyse umgewandelt werden. Es versteht sich, dass, je nach Erfordernissen, die Abspaltung der Schutzgruppen in einer einzigen Reaktionsstufe oder in mehreren Stufen erfolgen kann.

Die Auftrennung einer R,S-diastereomeren Verbindung der allgemeinen Formel I in ihre Diastereomeren und die Gewinnung des R-Diastereomeren kann nach an sich bekannten Verfahren durchgeführt werden, z.B. durch fraktionierte Kristallisation oder durch Hochdruck- Flüssigkeitschromatographie.

Die Verbindungen der Formel I sind amphoter und bilden Salze mit physiologisch verträglichen starken Säuren (z.B. Methansulfonsäure, p-Toluolsulfonsäure, Salzsäure, Bromwasserstoff säure, Schwefelsäure) und physiologisch verträglichen Basen (z.B. Natriumhydroxyd).

Die Ausgangsverbindungen der allgemeinen Formel II können beispielsweise durch Kondensation einer Verbindung der allgemeinen Formel

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^r2° ί ^r10°

H-j-NH—CH-CO--NH —CH-P —R ° (III)

L (b) J (C) I₄₁

worin m O, 1, 2 oder 3 bedeutet und

_π1Ο „2O _π4Ο , _π41 . ,. R , R , R und R sowie die

Konfigurationen an den C-Atomen (b) und (c) wie oben definiert sind,

mit einer in geeigneter Weise geschützten α-Aminosäure, einem in geeigneter Weise geschützten Di-, Tri- oder Tetrapeptid oder einem reaktionsfähigen Derivat einer solchen Verbindung in an sich bekannter Weise hergestellt werden.

So kann eine Verbindung der Formel III mit m = 0, mit einem in geeigneter Weise geschützten Dipeptid oder einem reaktionsfähigen Derivat davon zu einer Verbindung der Formel II mit η = 1 oder mit einem in geeigneter Weise geschützten Tripeptid oder einem reaktionsfähigen Derivat davon zu einer Verbindung der Formel II mit η = 2 oder mit einem in geeigneter Weise geschützten Tetrapeptid oder einem reaktionsfähigen Derivat davon zu einer Verbindung der Formel II mit η = 3 kondensiert werden.

Andererseits kann eine Verbindung der Formel III mit ITi=I, mit einer in geeigneter Weise geschützten α-Aminosäure oder einem reaktionsfähigen Derivat einer α-Aminosäure zu einer Verbindung der Formel II mit η = 1 oder mit einem in geeigneter Weise geschützten Dipeptid oder einem reaktionsfähigen Derivat davon zu einer Verbindung der Formel II mit η = 2 oder mit einem in geeigneter Weise geschützten Tripeptid oder einem reaktionsfähigen Derivat davon zu einer Verbindung der Formel II mit η = 3 kondensiert werden.

Eine Verbindung der Formel III mit m = 2 kann aber auch

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mit einer in geeigneter Weise geschützten α-Aminosäure oder einem reaktionsfähigen Derivat davon zu einer Verbindung der Formel II mit η = 2 oder mit einem in geeigneter Weise geschützten Dipeptid oder einem reaktionsfähigen Derivat davon zu einer Verbindung der Formel II mit η = 3 kondensiert werden.

Schliesslich kann eine Verbindung der Formel III mit m = 3 mit einer in geeigneter Weise geschützten α-Aminosäure oder einem reaktionsfähigen Derivat einer solchen Säure zu einer Verbindung der Formel II mit η = 3 kondensiert werden.

Andererseits kann man die Verbindungen der Formel II dadurch herstellen, dass man die vorstehend beschriebenen Kondensationen unter Verwendung einer R,S-Verbindung der Formel III durchführt und die R-Verbindung aus dem erhaltenen R,S-Produkt in an sich bekannter Weise isoliert, beispielsweise durch Kristallisation, Chromatographie oder fraktionierte Kristallisation unter Verwendung einer geeigneten Base wie a-Methylbenzylamin.

Die vorstehend genannten Kondensationen können nach Methoden durchgeführt werden, die in der Peptidchemie wohlbekannt sind, beispielsweise nach der Methode der gemischten Anhydride, der aktivierten Ester, der Azid- oder der Säurechlorid-Methode .

Nach einer dieser Methoden kann eine geeignete Verbindung der Formel III mit einer in geeigneter Weise geschützten α-Aminosäure oder mit einem in geeigneter Weise geschützten Di-, Tri- oder Tetrapeptid - je nach Wunsch kondensiert werden, wobei die endständige Carboxylgruppe Teil eines gemischten Anhydrids mit einer organischen oder anorganischen Säure ist. Zweckmässigerweise wird solch eine Aminosäure oder solch ein Di-, Tri- oder Tetrapeptid mit freier Carboxylgruppe mit einer tertiären Base, wie einem Tri-(niederalkyl)-amin, z.B. Triäthylamin, oder mit N-Aethyl-

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-Jf -

Ab

morpholin in einem inerten organischen Lösungsmittel (z.B. Tetrahydrofuran, 1,2-Dimethoxyäthan, Dichlormethan, Toluol, Petroläther oder einem Gemisch dieser Lösungsmittel) behandelt und das erhaltene Salz mit einem Chlorameisensäureester, z.B. dem Aethyl- oder Isobutylester, bei niedriger Temperatur umgesetzt. Das erhaltene gemischte Anhydrid wird dann zweckmässigerweise in situ mit der Verbindung der Formel III kondensiert.

Nach einer anderen Methode kann eine geeignete Verbindung der Formel III mit einer in zweckmässiger Weise geschützten α-Aminosäure oder mit einem in zweckmässiger Weise geschützten Di-, Tri- oder Tetrapeptid - je nach Wunsch kondensiert werden, wobei die endständige Carboxylgruppe in Form einer Säureazidgruppe vorliegt. Diese Kondensation wird vorzugsweise in einem inerten organischen Lösungsmittel, wie Dimethylformamid oder Aethylacetat, bei niedriger Temperatur durchgeführt.

Nach einer weiteren Methode wird eine geeignete Verbindung der Formel III mit einer in geeigneter Weise geschützten α-Aminosäure oder mit einem in geeigneter Weise geschützten Di-, Tri- oder Tetrapeptid - je nach Wunsch kondensiert, wobei die endständige Carboxylgruppe in Form einer aktiven Estergruppe vorliegt, z.B. einer p-Nitrophenyl-, 2,4,5-Trichlorphenyl- oder N-Hydroxysuccinimid-estergruppe. Diese Kondensation wird entweder in einem inerten organischen

40 Lösungsmittel, wie Dimethylformamid, oder,falls R und/oder

41
R niedere Alkoxygruppen darstellen, in einem wässrigen Alkanol, z.B. wässrigem Aethanol, durchgeführt.

Nach einer weiteren Methode kann eine geeignete Verbindung der Formel III mit einer in geeigneter Weise geschützten α-Aminosäure oder mit einem in geeigneter Weise geschützten-Di-, Tri- oder Tetrapeptid - je nach Wunsch kondensiert werden, wobei die endständige Carboxylgruppe in Form eines Säurechlorids vorliegt. Diese Kondensation wird

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-yf -

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vorzugsweise in Gegenwart einer Base und bei niedriger Temperatur durchgeführt.

Die Peptide der vorliegenden Erfindung potenzieren die Aktivität von D-Cycloserin. Sie besitzen darüber hinaus antibakterielle Aktivität gegen Organismen wie Escherichia coli, Klebsiella aerogenes, Streptococcus faecalis und Haemophilus influenzae.

Die erfindungsgemässen Verbindungen können als pharmazeutische Präparate mit direkter oder verzögerter Freigabe des Wirkstoffs in Mischung mit einem für die enterale, perkutane oder parenterale Applikation geeigneten organischen oder anorganischen inerten Trägermaterial, wie z.B. Wasser, Gelatine, Gummi arabicum, Milchzucker, Stärke, Magnesiumstearat, Talk, pflanzlichen Oelen, Polyalkylenglykolen, Vaseline, usw. verwendet werden. Die pharmazeutischen Präparate können in fester Form, z.B. als Tabletten, Dragees, Suppositorien, Kapseln; in halbfester Form, z.B. als Salben; oder in flüssiger Form, z.B. als Lösungen, Suspensionen oder Emulsionen, vorliegen. Gegebenenfalls sind sie sterilisiert und bzw. oder enthalten weitere Hilfsstoffe, wie Konservierungs-, Stabilisierungs-, Netz- oder Emulgiermittel, Mittel zur geschmacklichen Verbesserung, Salze zur Veränderung des osmotischen Druckes oder Puffersubstanzen. Die Herstellung der pharmazeutischen Präparate kann in der jedem Fachmann geläufigen Weise erfolgen.

Die erfindungsgemässen Peptidderivate können aber auch in Kombination mit D-Cycloserin, und zwar sowohl als Gemisch als auch als Einzelkomponenten und gegebenenfalls auf getrennten Wegen verabreicht werden. Die Menge des zu verabreichenden Peptidderivats, wie auch das Verhältnis des Peptidderivats zum D-Cycloserin kann innerhalb weiter Grenzen variiert werden und hängt von Faktoren ab wie der Art der spezifischen Verbindung, dem Applikationsweg und dem zu bekämpfenden Krankheitserreger. Das Verhältnis von Peptidderivat zu D-Cycloserin kann

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ytf-

beispielsweise 100:1 bis 1:100 (v//w) betragen.

Beispiel 1

4,3 g Benzylaminsalz von (IR)-1-[(N-Benzyloxycarbonyl-D-alanyl-L-alanyl-L-alanyl)-amino]-äthylphosphonsäure wurden unter Rühren und Nachspülen mit 4 ml Eisessig zu 12 ml einer 45%igen Lösung von Bromwasserstoff in Eisessig gegeben. Das Gemisch wurde 6 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Dann wurden lOO ml Aether zugefügt, die überstehende Flüssigkeit wurde dekantiert und der Rückstand mit 100 ml Aether behandelt. Der erhaltene Gummi wurde in 30 ml Methanol aufgenommen. Die Lösung wurde dann mit 3 ml Propylenoxyd in 5 ml Methanol behandelt. Es bildete sich ein weisser Niederschlag, der über Nacht bei Zimmertemperatur stehengelassen, abfiltriert und nacheinander mit Methanol und Aethanol gewaschen sowie getrocknet wurde. Kristallisation aus Wasser/Aethanol lieferte 1,96 g (IR)-1-(D-Alanyl-L-alanyl-L-alanylamino)-äthylphosphonsäure, F. 318°-32O°C (Zers.): [a]^° = -107° (c = 0,5% in 1 N Natriumhydroxyd).

Das Ausgangsmaterial wurde folgendermassen hergestellt:

Zu einer Lösung von 2,7 g (IR)-1-(L-Alanyl-L-alanylamino)-äthylphosphonsäure in 50 ml Wasser wurden unter Rühren bei 5°C 2,0 g Triäthylamin und 50 ml Aethanol zugegeben. Die erhaltene klare Lösung wurde auf O⁰C abgekühlt und mit 3,8 g festem N-Hydroxysuccinimidester von N-Benzyloxycarbonyl-D-alanin sowie 25 ml Aethanol versetzt. Das Gemisch wurde 2 Stunden bei 0 C und 16 Stunden bei Zimmertemperatur gerührt. Die klare Lösung wurde eingedampft und der Rückstand zwischen 150 ml Wasser und 100 ml Chloroform verteilt. Die wässrige Lösung wurde nochmals mit 100 ml Chloroform und die organische Phase mit 50 ml Wasser gewaschen. Die vereinigten wässrigen Extrakte wurden eingedampft, der Rückstand wurde mit einem Gemisch von 40 ml Wasser und 40 ml Methanol aufgenommen und durch eine

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Säule eines frisch regenerierten Kationenaustauscherharzes geschickt. Es wurde mit einem Gemisch von Wasser und Methanol (1:1, v/v) eluiert. Das Eluat wurde eingedampft und der Rückstand mit 250 ml Wasser aufgenommen. Die wässrige Lösung wurde 2mal mit 100 ml Aether extrahiert, der Aetherextrakt wurde mit 50 ml Wasser gewaschen und die vereinigten wässrigen Extrakte wurden dann auf etwa 100 ml eingeengt. Es wurde die gleiche Menge Methanol hinzugefügt und die erhaltene Lösung mit 1 M wässrigem Benzylamin auf ein pH von 4,5 titriert. Die Lösung wurde zur Trockene eingeengt und der Rückstand aus 100 ml heissem Wasser, dem 400 ml Aethanol und 5OO ml Aether zugesetzt wurden, umkristallisiert. Es wurden 4,38 g Benzylaminsalz von (IR)-1-[(N-Benzyloxycarbonyl-D-alanyl-L-alanyl-L-alanyl)-amino]-äthylphosphonsäure, erhalten; F. 24O°-243°C (Zers.); [a]^⁰ = -38,1° (c = 0,53% in Essigsäure) .

Beispiel 2

In zu Beispiel 1 analoger Weise wurde aus dem Benzylaminsalz von (IR)-1-[(N-Benzyloxycarbonyl-D-valyl-L-alanyl-L-alanyl)-amino]-äthylphosphonsäure (IR)-1-(D-Valyl-L-alanyl-L-alanylamino)-äthylphosphonsäure, F. 301 -304 C (Zers.), [α]²⁰ = -105° (c = 0,45% in 1 N Natriumhydroxyd), erhalten.

Das Ausgangsmaterial wurde folgendennassen hergestellt:

3,8 g N-Benzyloxycarbonyl-D-valin in 2OO ml Petroläther (Kp. 6O°-8O°C) wurden unter Rühren und Kühlung auf -5°C mit 1,5 g Triäthylamin versetzt. Nach Zusatz von 2,1 g Chlorameisensäure-isobutylester wurde das Gemisch weitere 30 Minuten auf -5°C gekühlt. Dann wurde bei -5°C tropfenweise eine Lösung von 2,7 g (IR)-1-(L-Alanyl-L-alanylamino)-äthylphosphonsäure in einem Gemisch aus 2,0 g Triäthylamin und 15 ml Wasser, sowie weitere 5 ml Wasser zugesetzt. Es wurde weitere 2 Stunden bei -5° bis O⁰C und über Nacht bei Raumtemperatur gerührt.. Nach Zusatz von 150 ml Wasser wurde die wässrige

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Phase abgetrennt, eingedampft, der Rückstand mit einem Gemisch aus 40 ml Wasser und 40 ml Methanol aufgenommen und über eine Säule mit einem frisch regenerierten Kationenaustauscher auf der Basis eines sulfonierten Polystyrolharzes geschickt. Die Säule wurde mit einem l:l-Gemisch aus Wasser und Methanol eluiert, das Eluat eingedampft und 5mal mit jeweils 50 ml Wasser aufgenommen und wieder eingeengt. Der Rückstand wurde schliesslich mit 100 ml Aether behandelt, abfiltriert und in einem Gemisch aus 400 ml Methanol und 400 ml Wasser gelöst. Die Lösung wurde mit 4 M wässrigem Benzylamin auf ein pH von 4,5 titriert und zur Trockene eingeengt. Der erhaltene Rückstand wurde aus einem Gemisch von 100 ml Methanol und 100 ml Aether umkristallisiert und lieferte 3,24 g des Benzylaminsalzes von (IR)-1-[(N-Benzyloxycarbonyl-D-valyl-L-alanyl-L-alanyl)-amino]-äthylphosphonsäure, F. 238°-244°C (Zers.).

Beispiel 3

In zu Beispiel 1 analoger Weise wurde aus dem Benzylaminsalz von (IR)-1-[(N-Benzyloxycarbonyl-D-alanyl-L-alanyl-L-alanyl-L-alanyl)-amino]-äthylphosphonsäure (IR)-I-(D-Alanyl-L-alanyl-L-alanyl-L-alanylamino)-äthylphosphonsäure, F. 323°-325°C (Zers.), [α]£° = -121° (c = 0,48% in 1 N Natriumhydroxyd), erhalten.

Das Ausgangsmaterial wurde folgendermassen hergestellt:

In zu Beispiel 1 analoger Weise wurde aus dem N-Hydroxysuccinimidester von N-Benzyloxycarbonyl-L-alanin und (IR)-1-(L-Alanyl-L-alanylamino)-äthylphosphonsäure

(IR)-1-[(N-Benzyloxycarbonyl-L-alanyl-L-alanyl-L-alanyl)-amino]-äthylphosphonsäure, F. 255°-257°C (Zers.), [a)^° = -62,0° (c = 0,4% in Eisessig), hergestellt.

Diese Verbindung Wurde dann ebenfalls in zu Beispiel

1 analoger Weise in (IR)-1-[(N-Benzyloxycarbonyl-L-alanyl-L-

no]-äthylphosph

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alanyl-L-alanyl)-amino]-äthylphosphonsäure, F. 312 -313 C

(Zers.), [α]ρ° = -101° (c = 0,53% in 1 N Natriumhydroxyd), übergeführt.

Schliesslich wurde in zu Beispiel 1 analoger Weise, wobei jedoch auf pH 2 angesäuert wurde und der Ionenaustausch mit anschliessender Aetherextraktion durch eine einfache Aetherextraktion ersetzt wurde, das Benzylaminsalz von (IR)-1-[(N-Benzyloxycarbonyl-D-alanyl-L-alanyl-L-alanyl-L-alanyl)-amino]-äthylphosphonsäure, F. 272°-277°C (Zers.)» [α] = -47,0° (c = 0,5% in Essigsäure), aus dem N-Hydroxysuccinimidester von N-Benzyloxycarbonyl-D-alanin und (IR)-1-(L-Alanyl-L-alanyl-L-alanylamino)-äthylphosphonsäure erhalten.

Beispiel 4

10,85 g (IR)-1-[(N-Benzyloxycarbonyl-D-leucyl-L-alanyl-L-alanyl)-amino]-äthylphosphonsäure-dimethylester wurden in 30 ml einer 35%igen Lösung von Bromwasserstoff in Eisessig gelöst. Das Gemisch wurde 4 Stunden bei Raumtemperatur gerührt und unter weiterem Rühren mit 130 ml Aether versetzt. Der Aether wurde dann abdekantiert und dieses Prozedere wurde noch 2mal unter Verwendung von jeweils 80 ml Aether wiederholt. Der Rückstand wurde in 70 ml Methanol gelöst und die erhaltene Lösung mit 10 ml Propylenoxyd versetzt und über Nacht im Kühlschrank aufbewahrt. Der erhaltene Niederschlag wurde abfiltriert, mit Aethanol und Aether gewaschen und unter vermindertem Druck bis zur Gewichtskonstanz von 7,99 g getrocknet; F. 293°-295°C (Zers.). Umkristallisation aus 500 ml kaltem Wasser und aus 700 ml Aethanol lieferte 6,6 7 g (IR)-1-(D-Leucyl-L-alanyl-L-alanylamino)-äthylphosphonsäure, F. 3OO°-32O°C (Zers.); [α]*° = -129,3° (c = 1% in Wasser).

Das Ausgangsmaterial wurde folgendermassen hergestellt:

12,9 g (IR)-1-[(N-Benzyloxycarbonyl-L-alanyl-L-alanyl)-amino]-äthylphosphonsäure-dimethylester wurden in 150 ml

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μ-

Methanol mit einem Gehalt von 0,032 Mol Fluorwasserstoff gelöst. Die Lösung wurde bei Zimmertemperatur und unter Normaldruck in Gegenwart von 1 g eines 10% Pd/C-Katalysators hydriert, der Katalysator wurde abfiltriert, das Filtrat unter vermindertem Druck eingeengt und das ölige Hydrochlorid 2mal mit Aethylacetat abgedampft.

Das erhaltene Produkt und 10,9 g des N-Hydroxysuccinimidesters von N-Benzyloxycarbonyl-D-leucin wurden in Gegenwart von 100 ml trockenem Dimethylformamid gerührt. Bei einer Temperatur unterhalb von 15 wurden 4,2 ml trockenes Triäthylamin unter Rühren tropfenweise zugesetzt. Das Gemisch wurde dann über Nacht bei Zimmertemperatur gerührt, das Triäthylamin-hydrochlorid abfiltriert und das Filtrat unter Oelpumpen- Vakuum bei einer Badtemperatur unterhalb 40 eingeengt. Das zurückbleibende OeI wurde mit 50 ml Wasser behandelt und das entstandende Gemisch 4mal mit je 50 ml Chloroform extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen wurden mit 20%iger Kaliumcarbonatlösung gewaschen und über Natriumsulfat getrocknet. Nach Einengen zur Trockene und 2maligem Abdampfen mit Aethylacetat wurden 15,5 g (IR)-1-[(N-Benzyloxycarbonyl-D-leucyl-L-alanyl-L-alanyl)-amino] · äthylphosphonsäure-dimethylester erhalten, dessen Schmelzpunkt nach Umkristallisation aus Acetonitril 173°-176°C betrug; [a]p° = -36,6° (c = 1% in Methanol).

Beispiel 5

In zu Beispiel 4 analoger Weise wurden 9,92 g

(IR)-1-[(N-Benzyloxycarbonyl-D-alanyl-L-alanyl)-amino]-äthylphosphonsäure-dimethylester mit 45 ml einer 35%igen Lösung von Bromwasserstoff in Essigsäure behandelt. Analoge Aufarbeitung lieferte 6,16 g eines Rohproduktes mit dem Schmelzpunkt 282°-285°C und nach Umkristallisation aus Wasser/Aethanol 5,47 g reine (IR)-1-(D-Alanyl-L-alanylamino)-äthylphosphonsäure, F. 292°-:
(c = 1% in Wasser).

phonsäure, F. 292°-293°C (Zers.), [α]²⁰ = -101,2°

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Das Ausgangsmaterial, (IR)-1-[(N-Benzyloxycarbonyl-D-alanyl-L-alanyl)-amino]-äthylphosphonsäure-dimethylester, F. 115^O-117°C, [a]p° = -28,4° (c = 0,5% in Methanol), Ausbeute: 11,1 g, wurde in zu Beispiel 4 analoger Weise durch Umsetzung von 7,82 g (IR)-1-(L-Alanylamino)-äthylphosphonsäure-dimethylester-hydrochlorid mit 9,6 g des N-Hydroxysuccinimidesters von N-Benzyloxycarbonyl-D-alanin erhalten.

Das folgende Beispiel illustriert ein typisches pharmazeutisches Präparat mit einem Gehalt an einer erfindungsgemässen Verbindung:

Beispiel 6

Es wurden 1000 ml einer Injektionslösung der folgenden Zusammensetzung hergestellt:

pro lOOO ml

(IR)-I-(D-Alanyl-L-alanylamino)-äthylphosphonsäure 100,O g

Chlorkresol 1,0 g

Eisessig 1,2 g

Natriumhydroxydlösung (0,1 N) q.s. ad pH 4,5

Wasser für Injektionslösungen ad 1000 ml

Herstellung:

Die (IR)-1-(D-Alanyl-L-alanylamino)-äthylphosphonsäure wurae in 500 ml Wasser für Injektionen suspendiert. Dieser Lösung wurde eine Lösung des Chlorkresols in 200 ml Wasser für Injektionen zugesetzt. Dann wurde unter Rühren die Essigsäure zugesetzt, sowie die 0,1 N Natriumhydroxydlösung bis zu einem pH von 4,5. Schliesslich wurde mit Wasser auf 1000 ml aufgefüllt, durch ein steriles Membranfilter (0,22 μ) filtriert und in Ampullen abgefüllt. Die Ampullen wurden geschlossen und im Autoklaven 20 Minuten bei 121°C sterilisiert.

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■/·

Claims

Patentansprüche

12 3
R , R und R die Reste normalerweise

in Proteinen vorkommender α-Aminosäuren darstellen, mit der Einschränkung, dass R nie Wasserstoff ist und eine Methylgruppe darstellt, wenn η = 1 ist; R Hydroxy oder Methyl bedeutet und wobei die Konfigurationen am C-Atom (a) D, am C-Atom (b) L und am C-Atom (c) R sind (sofern R und R f Viasserstoff) ,

und von physiologisch verträglichen Salzen dieser Verbindungen, dadurch gekennzeichnet, dass man

a) in an sich bekannter Weise die Schutzgruppe(n) einer Verbindung der Formel

30

.20

(a)

R —NH-CH-CO-i-NH — CH-CO--NH-CH- P— R

(b)

Il

(C)

(II)

.41

worin η wie oben und die Konfigurationen an den C-Atomen (a), (b) und (c) analog zu oben definiert sind;

R Wasserstoff oder eine Aminoschutzgruppe; R , R und R die Reste normalerweise in Proteinen vorkommender α-Aminosäuren darstellen mit der zu oben analogen Einschränkung und wobei

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ORiGlNAL INSPECTED

allfällig vorkommende Aminogruppen gegebenenfalls
in geschlitzter Form vorliegen, sowie andere
funktioneile Gruppen, sofern erforderlich, ebenfalls in geschlitzter Form vorliegen;

40
R Methyl, Hydroxy oder eine Niederalkoxy-

41
schutzgruppe und R Hydroxy oder eine Nieder-

alkoxyschutzgruppe bedeuten,
abspaltet oder
b) aus einem (R,S)-Diastereomerengemisch der Formel I das

R-Diastereomere in an sich bekannter Weise isoliert und
gegebenenfalls eine erhaltene Verbindung der Formel I in
ein physiologisch verträgliches Salz überführt.

2. Verfahren gemäss Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass man ein Peptidderivat der Formel I herstellt, in dem

R eine Hydroxygruppe darstellt.

3. Verfahren gemäss Anspruch 1 oder Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, dass man ein Peptidderivat der Formel I herstellt, in dem R eine Methylgruppe darstellt.

4. Verfahren gemäss einem der Ansprüche 1-3, dadurch

gekennzeichnet, dass man ein Peptidderivat der Formel I her-

2
stellt, in dem R eine Methylgruppe und

propyl- oder Isobuty!gruppe darstellen.

2 3

stellt, in dem R eine Methylgruppe und R eine Methyl-,Iso-

5. Verfahren gemäss Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass man (IR)-1-(D-Alanyl-L-alanylamino)-äthylphosphonsäure
herstellt.

6. Verfahren gemäss Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass man (IR)-1-(D-Alanyl-L-alanyl-L-alanylamino)-äthylphosphonsäure herstellt.

7. Verfahren gemäss Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass man (IR)-1-(D-Valyl-L-alanyl-L-alanylamino)-äthylphosphonsäure herstellt.

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- J/5 -

8. Verfahren gemäss Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass man (IR)-1-(D-Leucyl-L-alanyl-L-alanylamino)-äthylphosphonsäure herstellt.

9. Verfahren gemäss Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass man (IR)-1-(D-Alanyl-L-alanyl-L-alanyl-L-alanylamino)-äthylphosphonsäure herstellt.

10. Verfahren gemäss Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass man die Ausgangsverbindung der Formel II durch Kondensation einer Verbindung der allgemeinen Formel

_ R²⁰ - R¹⁰O

Γ · Ί ι ^!| io

Η-ρΝΗ—CH-CO-t-NK —CH-Ρ—R L (b)

(C) I₄₁

m R⁴ⁱ

in)

worin m 0, 1, 2 oder 3 bedeutet und

R¹⁰, R²⁰, R⁴⁰ und R⁴¹ sowie die Konfigurationen an den C-Atomen (b) und (c) wie in Anspurch 1 definiert sind,

mit einer in geeigneter Weise geschützten α-Aminosäure, einem in geeigneter Weise geschützten Di-, Tri- oder Tetrapeptid oder einem reaktionsfähigen Derivat einer solchen Verbinduna in an sich bekannter Weise herstellt.

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11. Verfahren zur Herstellung pharmazeutischer Präparate, dadurch gekennzeichnet, dass man eine Verbindung der Formel I aus Anspruch 1 oder ein physiologisch verträgliches Salz einer solchen Verbindung, als aktiven Bestandteil, mit zur therapeutischen Verabreichung geeigneten, nicht-toxischen, inerten, an sich in solchen Präparaten üblichen, festen oder flüssigen Trägern vermischt und die erhaltene Mischung in eine geeignete galenische Form bringt.

12. Verfahren zur Herstellung pharmazeutischer Präparate, dadurch gekennzeichnet, dass man eine Verbindung der Formel I aus Anspruch 1 oder ein physiologisch verträgliches Salz einer solchen Verbindung und D-Cycloserin als aktive Bestandteile mit zur therapeutischen Verabreichung geeigneten, nicht-toxischen, inerten, an sich in solchen Präparaten üblichen, festen oder flüssigen Trägern vermischt und das erhaltene Gemisch in eine geeignete galenische Form bringt.

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13. Pharmazeutische Präparate, gekennzeichnet durch einen Gehalt eines Peptidderivats der Formel I aus Anspruch 1 und einem zur therapeutischen Verabreichung geeigneten, nicht-toxischen, inerten, festen oder flüssigen Träger.

14. Pharmazeutische Präparate, gekennzeichnet durch einen Gehalt an einem Peptidderivat der Formel I aus Anspruch 1 und D-Cycloserin sowie einem zur therapeutischen Verabreichung geeigneten,nicht-toxischen,inerten, festen oder flüssigen Träger.

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15. Peptidderivate der allgemeinen Formel

f χ f 1 ι" » 4

ZH-CO--NH —CH-CO + NH —CH-P—R

H„N—CH-CO-

(a)

(D

(b) J (C)

η OH

worin η 1, 2 oder 3 bedeutet;

12 3
R , R und R die Reste normalerweise

in Proteinen vorkommender α-Aminosäuren darstellen, mit der Einschränkung, dass R nie Wasserstoff ist und eine

Methylgruppe darstellt, wenn η = 1 ist;

4
R Hydroxy oder Methyl bedeutet und wobei

die Konfigurationen am C-Atom (a) D, am C-Atom (b) L und am C-Atom (c) R sind (sofern R² und R¹ ^ Wasserstoff), und physiologisch verträgliche Salze dieser Verbindungen.

16. Peptidderivate gemäss Anspruch 15, dadurch gekennzeichnet, dass R eine Hydroxygruppe darstellt.

17. Peptidderivate gemäss Anspruch 15 oder Anspruch 16.,

4
dadurch gekennzeichnet, dass R eine Hydroxygruppe darstellt.

18. Peptidderivate gemäss einem der Ansprüche 15-17,

2 3

dadurch gekennzeichnet, dass R eine Methylgruppe und R eine Methyl-, Isopropyl- oder Isobutylgruppe darstellen.

19. (IR) -1- (D-Alanyl-L-alanylamino) -äthylphosphonsr.ure .

2Q. (IR)-1-(D-Alanyl-L-alanyl-L-alanylamino)-äthylphosphonsäure.

. (IR)-I-(D-Valyl-L-alanyl-L-alanylamino)-äthylphosphonsäure.

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22. (IR)-1-(D-Leucyl-L-alanyl-L-alanylamino)-äthylphosphonsäure .

23. (IR)-I-(D-Alanyl-L-alanyl-L-alanyl-L-alanylamino)-äthylphosphonsäure.

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