DE2721761A1

DE2721761A1 - Peptidderivate und verfahren zu deren herstellung

Info

Publication number: DE2721761A1
Application number: DE19772721761
Authority: DE
Inventors: Frank Ratcliffe Atherton; Michael John Hall; Cedric Herbert Hassall; Robert Wilson Lambert; Peter Stuart Ringrose; Hertshire Welwyn
Original assignee: F Hoffmann La Roche AG
Current assignee: F Hoffmann La Roche AG
Priority date: 1976-05-14
Filing date: 1977-05-13
Publication date: 1977-12-01
Also published as: FR2351125A1; JPS52139022A

Description

Patentanwälte 6

Dr. Franz Lederer
Oipl.-Ing. Reiner F. Meyer

8000 München 80

Luciie-Grahn-Str. 22. Tel. (089) 472947 j g

RAN 4105/23

F. Hoffmann-La Roche & Co. Aktiengesellschaft, Basel/Schweiz

Peptidderivate und Verfahren zu deren Herstellung

Die vorliegende Erfindung betrifft neue Peptidderivate, insbesondere solche von Phosphon- und Phosphinsäuren, ein Verfahren zu deren Herstellung und diese Verbindungen enthaltende pharmazeutische Präparate.

Die erfindungsgemässen Verbindungen sind insbesondere Peptidderivate der allgemeinen Formel

H-N-CH—CO-

(a)

(b)

UH-CH-CO--NH-CH-P—R (I)

(C)

OH

worin η 1, 2 oder 3 bedeutet; R¹, R² und R

die Reste normalerweise in Proteinen vorkommender α-Aminosäuren darstellen, mit der

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Einschränkung, dass R ^ Wasserstoff; R

Hydroxy oder Methyl bedeutet und wobei die

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Mez/12.4.1977

-Ji-

Konfigurationen an den Kohlenstoffatomen

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(a) und (b) L sind (wenn R und R φ Wasserstoff) und die Konfiguration am Kohlenstoffatom (c) (S) ist,
und deren physiologisch verträgliche Salze.

Der in der Beschreibung verwendete Ausdruck "Rest einer normalerweise in Proteinen vorkommenden α-Aminosäure" soll den Rest R einer α-Aminosäure der allgemeinen Formel

H₀N CH COOH

² I

wie sie normalerweise in Proteinen vorkommt, darstellen. Wenn beispielsweise die Aminosäure Glycin ist, dann stellt R ein Wasserstoffatom dar und wenn die Aminosäure Alanin ist, stellt R eine Methylgruppe dar. Für Valin ist R eine Isopropylgruppe, für Leucin eine Isobutylgruppe, für Glutaminsäure die 2-Carboxyäthylgruppe und für Phenylalanin die Benzylgruppe. R kann aber auch zusätzlich an das a-Aminoatom gebunden und Teil eines stickstoffhaltigen Ringes sein, wie beispielsweise im Prolin und in der Pyroglutaminsäure.

In Verbindungen der Formel I ist die Konfiguration am Kohlenstoffatom (c) (S), das ist die Konfiguration, die erhalten wird durch Ersatz der Carboxylgruppe einer D-a-Aminosäure durch einen Phosphorrest.

Wenn in Formel I η 2 oder 3 bedeutet, kann der Substituent 2
R gleiche oder verschiedene a-Aminosäurereste darstellen.

Bevorzugte Verbindungen der Formel I sind solche, in denen 4

R eine Hydroxygruppe darstellt. Ebenfalls bevorzugt sind Verbindungen der Formel I, in denen R eine Methyl- oder Benzyl-

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gruppe darstellt, sowie Verbindungen, in denen R und R jeweils eine Methylgruppe darstellen.

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Beispiele von Verbindungen der Formel I sind die folgenden:

(IS)-1-(L-Alanyl-L-alanylamino)-äthylphosphonsäure, (IS)-1-(L-Alanyl-L-alanyl-L-alanylamino)-äthylphosphonsäure,

(IS)-1-(L-Alanyl-glycylaraino)-äthylphosphonsäure, (IS)-1-(L-Alanyl-L-alanylamino)-2-phenyl-äthylphosphon-

säure und

(IS)-1-(L-Alanyl-L-lysylamino)-äthylphosphonsäure. 10

Die Peptidderivate der Formel I und ihre physiologisch

verträglichen Salze können erfindungsgemäss dadurch hergestellt

werden, dass man

a) in an sich bekannter Weise die Schutzgruppe(n) einer Verbindung der Formel

_%5

R —NH—CH- CO 20

R³⁰ ,_ R²⁰ ^ R¹⁰O

ι Γ ι Ί I H ₄₀

--NH—CH-CO-f-NH—CH-P—R^4U (II)

₄₀

J (C) I

worin R Wasserstoff oder eine Aminoschutzgruppe; R , R und R die Reste normalerweise in Proteinen vorkommender Aminosäuren darstellen, mit der zu oben analogen Einschränkung und wobei allfällig vorkommende Aminogruppen gegebenenfalls in geschützter Form vorliegen sowie andere funktioneile Gruppen, sofern erforderlich, eben-

40 falls in geschützter Form vorliegen; R Methyl, Hydroxy oder ein nieder-Alkoxy-Schutzgruppen und

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R Hydroxy oder eine nieder-Alkoxy-Schutzgruppe bedeuten und worin η wie oben und die Konfigurationen an den C-Atomen (a), (b) und (c) analog zu oben definiert sind,
abspaltet, oder

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b) aus einem (R,S)-Diastereomerengemisch der Formel I das (S)-Diastereomere in an sich bekannter Weise isoliert, und gegebenenfalls eine erhaltene Verbindung der Formel I in ein physiologisch verträgliches Salz überführt.

Eine oder mehrere in den Resten R , R und R einer Verbindung der Formel II anwesende Aminogruppe(n) kann (können) in geschützter Form vorliegen, wobei die aus der Peptidchemie bekannten Aminoschutzgruppen in Frage kommen. Besonders geeignete Aminoschutzgruppen sind Aralkoxycarbonylgruppen, insbesondere die Benzyloxycarbonyl- und die tert.-Butoxycarbonylgruppe. Als Aminoschutzgruppen kommen aber auch der Formyl-, der Trityl- oder der Trifluoracetylrest in Frage. Eine in den Resten R , R und R einer Verbindung der Formel II anwesende Carboxy- oder Hydroxygruppe kann durch eine der üblichen Carboxyl- oder Hydroxylschutzgruppen geschützt sein. Eine Carboxylgruppe kann beispielsweise durch Ueberführung in eine Alkylester- oder Aralkylesterfunktion, beispielsweise einen tert.-Butylester oder einen Benzylester, geschützt sein. Eine Hydroxygruppe kann beispielsweise mittels eines Aralkoxycarbonylrestes,ζ.B. des Benzyloxycarbonylrestes, eines Alkanoylrestes, z.B. des Acetyl- oder Propionylrestes, eines Aroylrestes, z.B. des Benzoylrestes, eines Alkylrestes, z.B. des tert.-Butylrestes, oder eines Aralkylrestes, z.B. des Benzylrestes, geschüzt werden. Der Schutz weiterer funktioneller Gruppen, die Teile der Substituenten R , R und R sein können, kann in an sich bekannter Weise erfolgen. Bei der durch den Rest R der allgemeinen Formel II genannten Schutzgruppe kann es sich um eine beliebige, in

Verbindung mit den Resten R¹⁰, R²⁰ und R³⁰ vorstehend bereits genannte Aminoschutzgruppe handeln.

Die Abspaltung der Schutzgruppen einer Verbindung der Formel II kann in an sich bekannter Weise durchgeführt werden,

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d.h. nach Verfahren,die für die Schutzgruppenabspaltung zur Zeit tatsächlich angewandt oder in der Literatur beschrieben werden. Demzufolge kann beispielsweise ein Aralkoxycarbonylrest/Z.B. die Benzyloxycarbonyl- oder die tert.-Butoxycarbonylgruppe, hydrolytisch abgespalten werden, beispielsweise durch Behandeln mit einem Gemisch von Bromwasserstoff und Eisessig. Ein Aralkoxycarbonylrest, z.B. der Benzyloxycarbonylrest, kann auch durch Hydrierung, z.B. in Gegenwart von Palladium auf Holzkohle oder Palladiumoxyd, abgespalten werden. Des v/eiteren kann die tert.-Butoxycarbonylgruppe mittels Chlorwasserstoff in Dioxan abgespalten werden. Eine als Rest

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R und/oder R vorhandene niedere Alkoxygruppe kann gerad- oder verzweigtkettig sein und vorzugsweise 1-6 Kohlenstoffatome enthalten (z.B. Methoxy, Aethoxy, Propoxy, Isopropoxy, Butoxy etc.) und in eine Hydroxygruppe durch Behandlung mit einem Gemisch von Bromwasserstoff in Eisessig oder mittels Trimethylchlorsilan und anschliessender wässriger Hydrolyse umgewandelt werden. Es versteht sich, dass, je nach Erfordernissen, die Abspaltung der Schutzgruppen in einer einzigen Reaktionsstufe oder in mehreren Stufen erfolgen kann.

Die Auftrennung einer R,S-diastereomeren Verbindung der allgemeinen Formel I in ihre Diastereomeren und die Gewinnung des S-Diastereomeren kann nach an sich bekannten Verfahren durchgeführt werden, z.B. durch fraktionierte Kristallisation oder durch Hochdruck-Flüssigkeitschromatographie.

Die Verbindungen der Formel I sind amphoter und bilden Salze mit physiologisch verträglichen starken Säuren (z.B.

Methansulfonsäure, p-Toluolsulfonsäure, Salzsäure, Bromwasserstoff säure, Schwefelsäure) und physiologisch verträglichen Basen (z.B. Natriumhydroxyd).

Die Ausgangsverbindungen der allgemeinen Formel II können beispielsweise durch Kondensation einer Verbindung der allgemeinen Formel

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R²⁰ _ R¹⁰ O

L (b)

h4-NH—CH-CO--NH—CH-Ρ —R⁴⁰ (III)

worin m 0, 1, 2 oder 3 bedeutet und

R¹⁰, R²⁰, R⁴⁰ und R⁴¹ sowie die Konfigurationen an den C-Atomen (b) und (c) wie oben definiert sind,

mit einer in geeigneter Weise geschützten α-Aminosäure, einem in geeigneter Weise geschützten Di-, Tri- oder Tetrapeptid oder einem reaktionsfähigen Derivat einer solchen Verbindung in an sich bekannter Weise hergestellt werden.

So kann eine Verbindung der Formel III mit m = 0, mit einem in geeigneter Weise geschützten Dipeptid oder einem reaktionsfähigen Derivat davon zu einer Verbindung der Formel II mit η = 1 oder mit einem in geeigneter Weise geschützten Tripeptid oder einem reaktionsfähigen Derivat davon zu einer

Verbindung der Formel II mit η = 2 oder mit einem in geeigneter Weise geschützten Tetrapeptid oder einem reaktionsfähigen Derivat davon zu einer Verbindung der Formel II mit η = 3 kondensiert werden.

Andererseits kann eine Verbindung der Formel III mit m = 1, mit einer in geeigneter Weise geschützten α-Aminosäure oder einem reaktionsfähigen Derivat einer α-Aminosäure zu einer Verbindung der Formel II mit η = 1 oder mit einem in geeigneter Weise geschützten Dipeptid oder einem reaktionsfähigen

Derivat davon zu einer Verbindung der Formel II mit η = 2 oder mit einem in geeigneter Weise geschützten Tripeptid oder einem reaktionsfähigen Derivat davon zu einer Verbindung der Formel II mit η = 3 kondensiert werden.

Eine Verbindung der Formel III mit m = 2 kann aber auch

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mit einer in geeigneter Weise geschützten α-Aminosäure oder einem reaktionsfähigen Derivat davon zu einer Verbindung der Formel II mit η = 2 oder mit einem in geeigneter Weise geschützten Dipeptid oder einem reaktionsfähigen Derivat davon zu einer Verbindung der Formel II mit η = 3 kondensiert werden.

Schliesslich kann eine Verbindung der Formel III mit m = 3 mit einer in geeigneter Weise geschützten α-Aminosäure oder einem reaktionsfähigen Derivat einer solchen Säure zu einer Verbindung der Formel II mit η = 3 kondensiert werden.

Andererseits kann man die Verbindungen der Formel II dadurch herstellen, dass man die vorstehend beschriebenen Kondensationen unter Verwendung einer R,S-Verbindung der Formel III durchführt und die S-Verbindung aus dem erhaltenen R,S-Produkt in an sich bekannter Weise isoliert, beispielsweise durch Kristallisation, Chromatographie oder fraktionierte Kristallisation unter Verwendung einer geeigneten Base wie a-Methylbenzylamin.

Die vorstehend genannten Kondensationen können nach Methoden durchgeführt werden, die in der Peptidchemie wohlbekannt sind, beispielsweise nach der Methode der gemischten Anhydride, der aktivierten Ester, der Azid- oder der Säurechlorid-Methode.

Nach einer dieser Methoden kann eine geeignete Verbindung der Formel III mit einer in geeigneter Weise geschützten α-Aminosäure oder mit einem in geeigneter Weise geschützten Di-, Tri- oder Tetrapeptid - je nach Wunsch - kondensiert werden, wobei die endständige Carboxylgruppe Teil eines gemischten Anhydrids mit einer organischen oder anorganischen Säure ist. Zweckmässigerweise wird solch eine Aminosäure oder solch ein Di-, Tri- oder Tetrapeptid mit freier Carboxylgruppe mit einer tertiären Base, wie einem Tri-(niederalkyl)-amin, z.B. Triäthylamin, oder mit N-Aethyl-

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morpholin in einem inerten organischen Lösungsmittel (z.B. Tetrahydrofuran, 1,2-Dimethoxyäthan, Dichlormethan, Toluol, Petroläther oder einem Gemisch dieser Lösungsmittel) behandelt und das erhaltene Salz mit einem Chlorameisensäureester, z.B. dem Aethyl- oder Isobutylester, bei niedriger Temperatur umgesetzt. Das erhaltene gemischte Anhydrid wird dann zweckmässigerweise in situ mit der Verbindung der Formel III kondensiert.

Nach einer anderen Methode kann eine geeignete Verbindung der Formel III mit einer in zweckmässiger Weise geschützten α-Aminosäure oder mit einem in zweckmässiger Weise geschützten Di-, Tri- oder Tetrapeptid - je nach Wunsch kondensiert werden, wobei die endständige Carboxylgruppe in Form einer Säureazidgruppe vorliegt. Diese Kondensation wird vorzugsweise in einem inerten organischen Lösungsmittel, wie Dimethylformamid oder Aethylacetat, bei niedriger Temperatur durchgeführt.

Nach einer weiteren Methode wird eine geeignete Verbindung der Formel III mit einer in geeigneter Weise geschützten α-Aminosäure oder mit einem in geeigneter Weise geschützten Di-, Tri- oder Tetrapeptid - je nach Wunsch kondensiert, wobei die endständige Carboxylgruppe in Form einer aktiven Estergruppe vorliegt, z.B. einer p-Nitrophenyl-, 2,4,5-Trichlorphenyl- oder N-Hydroxysuccinimid-estergruppe. Diese Kondensation wird entweder in einem inerten organischen Lösungsmittel, wie Dimethylformamid, oder,falls R und/oder

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R niedere Alkoxygruppen darstellen, in einem wässrigen Alkanol, z.B. wässrigem Aethanol, durchgeführt.

Nach einer weiteren Methode kann eine geeignete Verbindung der Formel III mit einer in geeigneter Weise geschützten α-Aminosäure oder mit einem in geeigneter Weise geschützten Di-, Tri- ader Tetrapeptid - je nach Wunsch kondensiert werden, wobei die endständige Carboxylgruppe in Form eines Säurechlorids vorliegt. Diese Kondensation wird

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vorzugsweise in Gegenwart einer Base und bei niedriger Temperatur durchgeführt.

Die Peptide der vorliegenden Erfindung besitzen antibakterielle Aktivität gegen Organismen wie Streptococcus faecalis und Haemophilus influenzae.

Die erfindungsgemässen Verbindungen können als pharmazeutische Präparate mit direkter oder verzögerter Freigabe des Wirkstoffs in Mischung mit einem für die enterale, perkutane oder parenterale Applikation geeigneten organischen oder anorganischen inerten Trägermaterial, wie z.B. Wasser, Gelatine, Gummi arabicum, Milchzucker, Stärke, Magnesiumstearat, Talk, pflanzlichen Oelen, Polyalkylenglykolen, Vaseline, usw.

verwendet werden. Die pharmazeutischen Präparate können in fester Form, z.B. als Tabletten, Dragees, Suppositorien, Kapseln; in halbfester Form, z.B. als Salben; oder in flüssiger Form, z.B. als Lösungen, Suspensionen oder Emulsionen, vorliegen. Gegebenenfalls sind sie sterilisiert und bzw. oder enthalten weitere Hilfsstoffe, wie Konservierungs-, Stabilisierungs-, Netz- oder Emulgiermittel, Mittel zur geschmacklichen Verbesserung, Salze zur Veränderung des osmotischen Druckes oder Puffersubstanzen. Die Herstellung der pharmazeutischen Präparate kann in der jedem Fachmann geläufigen Weise erfolgen.

Die Menge des zu verabreichenden Peptidderivats kann innerhalb weiter Grenzen variiert werden und hängt von Faktoren ab wie der Art der spezifischen Verbindung, dem Applikationsweg und dem zu bekämpfenden Krankheitserreger.

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-j Beispiel 1

3,25 g Benzylaminsalz von (IS)-1-[N-Benzyloxycarbonyl-L-alanyl-L-alanyl) -amino] -äthylphosphonsäure wurden in einer minimalen Menge von 2 N Anunoniumhydroxyd gelöst. Die Lösung wurde über eine Säule eines stark sauren Kationenaustauschers (sulfoniertes Polystyrol; frisch regeneriert) gegeben. Elution mit Wasser lieferte eine saure Fraktion von ca. 150 ml, der 0,5 g eines 10% Pd/C-Katalysators, 100 ml Methanol und 2 Tropfen Eisessig zugesetzt wurden. Das Gemisch wurde über Nacht bei Raumtemperatur und unter Normaldruck hydriert. Der Katalysator wurde abfiltriert, das Lösungsmittel abgezogen und der Rückstand dreimal mit je 50 ml n-Propanol eingeengt. Der feste Rückstand, aus einem Gemisch aus 100 ml Wasser und 200 ml Aethanol umkristallisiert, lieferte 1,24 g eines bei 289-290° (Zersetzung) schmelzenden Produktes; [a]_D = +2,9° (c = 1% in Wasser). Nochmalige Umkristallisation aus einem Gemisch von 40 ml Wasser und 80 ml Aethanol lieferte 1,05 g (IS)-I-(L-Alanyl-L-alanylamino)-äthylphosphonsäure, Smp. 293-294 (Zer-

setzung); ta] ° = +2,9° (c = 1% in Wasser).

Das Ausgangsmaterial wurde folgendermassen hergestellt:

a) Eine Lösung von 42,2 g (IR,S)-1-(Benzyloxycarbonyl-amino)-äthylphosphonsäure in 100 ml Methanol wurde mit einer Lösung von 30,8 g Chinintrihydrat in 100 ml Methanol behandelt. Das Gemisch wurde 3 Stunden bei Zimmertemperatur und dann über Nacht bei 0 stehen gelassen. Das Chininsalz von (IS)-I-(Benzyloxycarbonyl-amino)-äthylphosphonsäure wurde abfiltriert und mit Methanol gewaschen. Es wurden 36 g mit einem Schmelzpunkt von 212-218° (Zersetzung); [a]^⁰ = -110,8° (c = O,25% in Methanol); erhalten. Umkristallisation aus einem Gemisch aus 700 ml n-Butanol und 70 ml Wasser lieferte 31 g des reinen Chininsalzes mit einem Schmelzpunkt von 228-230 (Zersetzung); [«Iß⁰ = -112,1° (c = 0,25% in Methanol).

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b) Eine Lösung von 26 g des Chininsalzes von (IS)-1-(Benzyloxycarbonyl-amino)-äthylphosphonsäure in 3OO ml 2 N Ammoniumhydroxyd wurde dreimal mit 300 und zweimal mit 150 ml Chloroform extrahiert. Die Chloroformextrakte wurden zweimal mit je 150 ml Wasser gewaschen, die vereinigten wässrigen Extrakte eingeengt und über eine Säule eines stark sauren Kationenaustauschers (B.D.H., Zerolit 225, SRC 13, RSO₃H; sulfoniertes Polystyrol, ca. 700 g, frisch regeneriert) gegeben. Das wässrige Eluat wurde auf etwa 1 Liter eingeengt und dann mit einem Liter Methanol, 2 g eines 10% Pd/C-Katalysators und 1 ml Eisessig versetzt. Nach Entfernung des Katalysators und des Lösungsmittels wurde dreimal mit 200 ml n-Propanol bis zur Trockene eingeengt. Behandlung mit Aether lieferte 6,52 g eines Rohproduktes vom Schmelzpunkt 282-284 (Zersetzung). Umkristalli-

sation aus einem Gemisch von 24 ml Wasser und 37,5 ml Aethanol ergab 5,2 g (IS)-1-Amino-äthylphosphonsäure, F. 296-298° (Zersetzung); [a]^° = +16,8° (c = 1,9% in 1 N Natriumhydroxyd).

c) 3,5 g (IS)-1-Aminoäthylphosphonsäure in 140 ml Wasser und 70 ml Aethanol wurden unter Rühren portionsweise mit 7,06 g Natriumbicarbonat versetzt. Dem bei 0 gehaltenen Gemisch wurde dann unter Rühren eine heisse Lösung von 8,96 g des N-Hydroxysuccinimidesters von N-Benzyloxycarbonyl-L-alanin in 70 ml Methanol tropfenweise aber rasch zugesetzt. Das heterogene Ge-

misch wurde 3 Stunden bei 0° und dann 16 Stunden bei Raumtemperatur gerührt bis es homogen wurde. Es wurde eingeengt und nochmals nach Zusatz von Wasser, zwecks Entfernung des Aethanols, zur Trockene gebracht. Der erhaltene gummiartige Rückstand wurde in 250 ml Wasser gelöst, die Lösung wurde einmal mit 250 ml und zweimal mit je 125 ml Chloroform extrahiert, dann mit ca. 40 ml 2 N Salzsäure auf pH 2 angesäuert und wiederum einmal mit 250 ml und zweimal mit je 125 ml Chloroform extrahiert. Die wässrige Phase wurde eingeengt und anschliessend unter Aufnahme mit jeweils lOO ml Wasser noch dreimal zur Trockene gebracht. Der Rückstand wurde in Wasser gelöst und mit 1 M wässrigem Benzylamin auf pH 4,5 titriert. Die erhaltene Lösung wurde zur Trockene eingeengt und der feste

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■j Rückstand aus 100 ml Wasser umkristallisiert. Es wurden 3,0 g Benzylaminsalz von (IS)-1-[(N-Benzyloxycarbonyl-L-alanyl)-amino]-äthylphosphonsäure, F. 219-220 (Zersetzung); [a]^⁰ = +22,0° (c = 1% in Essigsäure); erhalten.

d) 4,4 g Benzylaminsalz von (IS)-1-[(N-Benzyloxycarbonyl-L-alanyl) -amino] -äthylphosphonsäure wurden in 15 ml 2 N Ammoniumhydroxyd gelöst. Die Lösung wurde eingeengt, über eine Säule eines stark sauren Kationenaustauschers (sulfoniertes PoIystyrol; 12Ο g; frisch regeneriert) gegeben und mit Wasser eluiert. Es wurden ca. 300 ml des sauren Eluats gesammelt und auf 100 ml eingeengt. Dann wurden 0,5 g Palladiumoxyd-Katalysator, lOO ml Methanol und 2 Tropfen Eisessig zugesetzt. Das Gemisch wurde bei Raumtemperatur und unter Normaldruck hydriert.

Nach Entfernung von Katalysator und Lösungsmittel wurde der gummiartige Rückstand dreimal mit je 100 ml n-Propanol aufgenommen und zur Trockene gebracht. Es wurde ein weisser Rückstand erhalten, der nach Behandlung mit Aether 1,72 g festes Rohprodukt mit einem Schmelzpunkt von 280-285 (Zersetzung); [a] ^⁰ = +72,4° (c = 1,0% in Wasser); lieferte. Umkristallisation aus einem Gemisch aus 10 ml Wasser und 20 ml Aethanol ergab 0,72 g (IS)-l-(L-Alanylamino)-äthylphosphonsäure, F. 296-298° (Zersetzung); [a]^° = +84,1° (c = 1% in Wasser).

e) In zu Absatz c) dieses Beispiels analoger Weise wurde ausgehend von 4,8 g des N-Hydroxysuccinimidesters von N-Benzyloxycarbonyl-L-alanin und 1,96 g (IS)-1-(L-Alanylamino)-äthylphosphonsäure nach Rühren über Nacht eine klare Lösung erhalten. Es wurde mehrmals mit Wasser zur Trockene eingeengt, die wässrige Lösung mit Chloroform behandelt und schliesslich mit einer gleichen Menge Methanol versetzt. Diese Lösung wurde über eine Säule eines stark sauren Kationenaustauschers gegeben (sulfoniertes Polystyrol; frisch regeneriert). Das saure Eluat wurde eingeengt, der Rückstand in Wasser gelöst und mit Aether extrahiert. Die Aetherextrakte wurden wiederum mit Wasser gewaschen, der wässrige Extrakt wurde auf ca. 30 ml eingeengt und mit 4 M wässrigem Benzylamin auf pH 4,5 titriert. Die Lösung

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wurde dann eingeengt und liefert einen festen Rückstand der aus 40 ml Wasser umkristallisiert wurde. 2,2 g eines Rohproduktes vom Schmelzpunkt 229-231° (Zersetzung); [a]j?° = -0,5° (c = 1% in Essigsäure); wurden erhalten. Weitere Umkristallisation aus einem Gemisch von 10 ml Wasser, 100 ml Aethanol und 150 ml Aether lieferten das Benzylaminsalz von (IS)-1-[(N-Benzyloxycarbony1-L-alany1-L-alany1)-amino]-äthylphosphonsäure, F. 230-233° (Zersetzung); [α]£° = 0,0° (c = 1% in Essigsäure).

Beispiel 2

Eine Lösung von 8,0 g (IS)-1-[(N-Benzyloxycarbony1-L-alany 1-L-alany1-L-alany1)-amino]-äthylphosphonsäure in einem Gemisch aus 15 ml einer 45%igen Lösung von Bromwasserstoff in Eisessig wurde 6 Stunden bei Raumtemperatur gerührt und dann unter Rühren mit 100 ml Aether versetzt. Der Aether wurde abdekantiert und der verbleibende Rückstand nochmals mit 100 ml Aether behandelt. Der gummiartige Rückstand wurde in 30 ml Aethanol aufgenommen, die erhaltene Lösung wurde unter Rühren mit einer Lösung von 3 ml Propylenoxyd in 5 ml Methanol behandelt, wodurch ein weisser Niederschlag entstand. Das Rohprodukt wurde abfiltriert und lieferte nach Waschen mit Methanol und Aether 5,97 g eines Produktes mit einem Schmelzpunkt von 288-291° (Zersetzung). Durch Kristallisation aus 2 1 heissem

Wasser und nachfolgendem Zusatz von 4 1 Aethanol wurden 3,6 g (IS)-I- (L-Alanyl-L-alanyl-L-alanylamino)-äthylphosphonsäure, F. 319-321° (Zersetzung); [a]^° = -64,0° (c = 0,5% in 1 N Natriumhydroxyd); erhalten.

Das Ausgangsmaterial wurde folgendermassen hergestellt:

Zu einer auf 0° gekühlten Lösung aus 5 g (IS)-1-(L-Alanyl-L-alanylamino)-äthylphosphonsäure, 3,5 g Triäthylamin, 100 ml Wasser und 100 ml Aethanol wurden 7,2 g des N-Hydroxysuccinimidesters von N-Benzyloxycarbonyl-L-alanin sowie 50 ml Aethanol gegeben. Das Gemisch wurde 2 Stunden bei 0° gehalten und dann über Nacht bei Raumtemperatur stehen gelassen. Es

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resultierte eine klare Lösung, die in der in Beispiel 1, Absatz e), angegebenen Weise aufgearbeitet wurde und 8,15 g Benzylaminsalz von (IS)-1-[(N-Benzyloxycarbonyl-L-alanyl-L-alanyl-L-alanyl) -amino] -äthylphosphonsäure lieferte, F. 237-

240° (Zersetzung); [α]^° = -15,7° (c = 0,5% in Essigsäure).

Beispiel 3

In zu Beispiel 1 analoger Weise aber unter Verwendung von Aethanol/Wasser (1:1) als Lösungsmittel bei der Entfernung des Benzylamins durch Ionenaustausch, wurden aus 9,8 g Benzylaminsalz von (IS)-1-[(N-Benzyloxycarbonyl-L-alanyl-glycyl)-amino]-äthylphosphonsäure, 4,0 g (IS)-1-(L-Alanyl-glycylamino)-äthylphosphonsäure erhalten, P. 267-269 (Zersetzung); ^[alD° ^{= +74}/⁴° <^c = ^{1% in} Wasser).

Das Ausgangsmaterial wurde folgendermassen hergestellt:

a) In zu Beispiel 1, Absatz c), analoger Weise wurden 50 g (1R,S)-1-Aminoäthylphosphonsäure mit 244 g des N-Hydroxysuccinimidesters von N-Benzyloxycarbonyl-glycin umgesetzt. Das Gemisch wurde in zu Beispiel 1, Absatz e), analoger Weise aufgearbeitet bis zur Entfernung des Methanols nach dem Ionenaustausch. Die wässrige Lösung wurde mit Aethylacetat extrahiert, das Aethylacetat wurde wiederum mit Wasser extrahiert und die vereinigten wässrigen Extrakte wurden auf 400 ml eingeengt und mit 2 N (+)-a-Methylbenzylamin in Aethanol/Wasser (1:1) auf ein pH von 4,5 titriert. Die Lösung wurde zur Trockene eingeengt und dreimal mit jeweils 200 ml Methanol aufgenommen und wieder eingeengt. Der erhaltene Rückstand wurde aus 7OO ml Methanol umkristallisiert und lieferte 40,3 g (+)-a-Methylbenzylaminsalz von (IR)-1-[(Benzyloxycarbonyl-glycyl)-amino]-äthylphosphonsäure, F. 207-210° (Zersetzung); [α]^^{0 =} -14,3° (c = 1% in Wasser). Nach nochmaliger Umkristallisation wurden 32,5 g reines Produkt mit einem Schmelzpunkt von 209-211° (Zersetzung); [^Q]_D - -15,2 (c = 1% in Wasser); erhalten.

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Die Mutterlaugen der ersten Kristallisation aus 700 ml Methanol wurden eingeengt und an einer Säule aus einem stark sauren Kationenaustauscher (sulfoniertes Polystyrol; frisch regeneriert) wurde aus dem a-Methylbenzylaminsalz die Säure in Freiheit gesetzt. Titration der erhaltenen wässrigen Lösung mit (-)-a-Methylbenzylamin, Einengen zur Trockene und Kristallisation aus 600 ml Methanol lieferte 45,3 g des gewünschten (lS)-Isomers mit einem Schmelzpunkt von 205-210° (Zersetzung); [α] = +15,1° (c = 1% in Wasser). Umkristallisation aus 1 Liter Aethanol lieferte 27,9 g des (-)-a-Methylbenzylaminsalzes von (IS)-1-[(N-Benzyloxycarbonyl-glycyl)-amino]-äthyl-

2C ¹D

phosphonsäure, F. 215-216° (Zersetzung); [α] = +15,7° (c = 1% in Wasser).

b) In zu Beispiel 1, Absatz d), analoger Weise aber unter Verwendung von 1 g eines 10% Pd/C-Katalysators wurden aus 21,85 g des (-)-a-Methylbenzylaminsalzes von (IS)-1- [ (N-Benzyloxycarbonyl-glycyl)-amino]-äthylphosphonsäure, 6,78 g (IS)-1-Glycylamino-äthylphosphonsäure, F. 280° (Zersetzung); [α] = +69,6° (c = 1% in Wasser); erhalten.

c) Einem Gemisch aus 7,28 g (IS)-l-Glycylamino-äthylphosphonsäure und 40 ml Wasser wurden bei 0 unter Rühren 11,2 ml Triäthylamin und 80 ml Dimethylformamid sowie 2O,15 g fester 2,4,5-Trichlorphenylester von N-Benzyloxycarbonyl-L-alanin zugesetzt. Das erhaltene heterogene Gemisch wurde während 2 Stunden bei 0° gerührt und dann über Nacht bei Raumtemperatur stehen gelassen, während welcher Zeit sich eine klare Lösung bildete. Das Lösungsmittel wurde abgezogen, der Rückstand in 150 ml Aethanol/Wasser (2:1) aufgenommen und über eine Säule eines stark sauren Kationenaustauschers (sulfoniertes Polystyrol; frisch regeneriert) gegeben. Das saure Eluat (5OO ml) wurde eingeengt und der ölige Rückstand zwischen lOO ml Wasser und 100 ml Aether verteilt. Die wässrige Phase wurde dann mit

^ 100 ml Aether extrahiert und der Aetherextrakt wurde zweimal

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mit 50 ml Wasser gewaschen. Die vereinigten wässrigen Extrakte wurden mit 4 M wässrigem Benzylamin auf einen pH von 4,5 titriert und das erhaltene Gemisch wurde zur Trockene eingeengt. Umkristallisation des weissen Rückstandes aus einem Gemisch aus 300 ml Wasser und 900 ml Aceton lieferte 13,2 g eines Rohproduktes, F. 234-249° (Zersetzung); [«1^° ⁼ +15,4° (c = 1% in Essigsäure), das bei weiterer Kristallisation aus einem Gemisch von 125 ml Wasser und 375 ml Aceton 9,8 g reines Benzylaminsalz von (IS)-1-[(N-Benzyloxycarbonyl-L-alanyl-

glycyl)-amino]-äthylphosphonsäure, F. 235-238 (Zersetzung); [ct]p° = +15,3° (c = 1% in Essigsäure); lieferte.

Beispiel 4

In zu Beispiel 1 analoger Weise wurde aus dem Benzylaminsalz von (IS)-1-[(N-Benzyloxycarbonyl-L-alanyl-L-alanyl)-amino] 2-phenyl-äthylphosphonsäure die (IS)-1-(L-Alanyl-L-alanylamino) 2-phenyl-äthylphosphonsäure mit einem Schmelzpunkt von 290-291 (Zersetzung); [α] = +0,9° (c = 0,35% in Wasser); erhalten.

Das Ausgangsmaterial wurde folgendermassen hergestellt:

a) In zu Beispiel 1, Absatz c), analoger Weise wurde aus dem N-Hydroxysuccinimidester von N-Benzyloxycarbonyl-L-alanin und (lR,S)-l-Amino-2-phenyl-äthylphosphonsäure (IR,S)-1-[(N-Benzyloxycarbonyl-L-alanyl)-amino]-2-phenylphosphonsäure erhalten.

Das vorstehend genannte Diastereomerengemisch wurde über seine Benzylaminsalze und anschliessende Kristallisation aus Wasser in zu Beispiel 1 c) analoger Weise aufgetrennt. Es wurde auf diese Weise das Benzylaminsalz von (IS)-1-[(N-Benzyloxycarbonyl-L-alanyl)-amino]-2-phenyl-äthylphosphonsäure, F. 228-234° (Zersetzung); [a]£° = +10,1° (c = 0,4% in Essigsäure); erhalten.

7098 4

8/^0

o>
ν/

■j b) In zu Beispiel 1 analoger Weise aber unter Verwendung von Methanol/Wasser beim Ionenaustausch, wurden aus dem Benzylaminsalz von (IS)-1-[(N-Benzyloxycarbonyl-L-alanyl)-amino]-2-phenyl-äthylphosphonsäure die (IS)-1-(L-Alanylamino)-

2-phenyl-äthylphosphonsäure, F. 312-314 (Zersetzung); [a]p° = +48,9° (c = 0,26% in Wasser); erhalten.

c) In zu Absatz a) dieses Beispiels analoger Weise wurde aus dem N-Hydroxysuccinimidester von N-Benzyloxycarbonyl-L-alanin -JO und (IS)-1-(L-Alanylamino)-2-phenyl-äthylphosphonsäure das Benzylaminsalz von (IS)-1-[(N-Benzyloxycarbonyl-L-alanyl-L-alanyl) -amino] -2-phenyl-äthylphosphonsäure, F. 232-237 (Zersetzung); [α] = +3,7° (c = 0,3% in Essigsäure); erhalten.

Beispiel 5

Zu 45 ml einer 35%igen Lösung von Bromwasserstoff in Eisessig wurden 12,87 g (IS)-1-[(N-Benzyloxycarbonyl-L-alanyl-L-alanyl)-amino]-äthylphosphonsäure-dimethylester gegeben und das Gemisch wurde 3 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Unter weiterem Rühren wurden 150 ml Aether zugegeben. Die ätherische Phase wurde abdekantiert und dieses Prozedere wurde noch zweimal mit jeweils 100 ml Aether wiederholt. Der Rückstand wurde in 125 ml Aethanol gelöst. Der Lösung wurden 12 ml Propylenoxyd zugesetzt. Das Gemisch wurde über Nacht bei 0 aufbewahrt, der gebildete Niederschlag abfiltriert, mit Methanol und Aether gewaschen und unter vermindertem Druck getrocknet. Es wurden 7,88 g (IS)-1-(L-Alanyl-L-alanylamino)-äthylphosphonsäure, F. 276-278° (Zersetzung), erhalten. Nach Umkristallisation aus wässrigem Aethanol wurden 7,02 g einer Substanz mit einem Schmelzpunkt von 286-287° (Zersetzung) erhalten; [a]p° = +3,6° (c = 1% in Wasser); [a]^° = +12,2° (c = 1% in 1 N Salzsäure).

Das Ausgangsmaterial wurde folgendermassen hergestellt:

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a) 139,7 g 1-Benzylaminoäthylphosphonsäure-dimethylesterhydrochlorid wurden in 1000 ml Methanol gelöst. Die Lösung wurde bei Raumtemperatur und unter Normaldruck in Gegenwart von 15 g eines 10% Pd/C-Katalysators mehrere Stunden hydriert, bis die Wasserstoffaufnahme beendet war. Der Katalysator wurde entfernt und das Filtrat unter vermindertem Druck zur Trockene eingeengt. Der Rückstand, 1-Aminoäthylphosphonsäure-dimethylester-hydrochlorid, wurde in 500 ml trockenem Dimethylformamid aufgenommen und dann mit 160 g N-Hydroxysuccinimidester von N-Benzyloxycarbonyl-L-alanin behandelt. Dann wurden unter Rühren und bei einer Temperatur unter 0 tropfenweise 70 ml trockenes Triäthylamin zugesetzt. Das Gemisch wurde über Nacht bei Zimmertemperatur gerührt, das Triäthylamin-hydrochlorid abfiltriert, mit einer geringen Menge Dimethylformamid gewaschen und das Filtrat unter Oelpumpenvakuum bei einer Badtemperatur unterhalb 40 eingeengt. Das zurückbleibende OeI wurde mit 40 1 Wasser behandelt und das entstandene Gemisch viermal mit je 40 ml Chloroform extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen wurden mit einer geringen Menge einer konzentrierten Kaliumcarbonatlösung gewaschen und über Natriumsulfat getrocknet. Nach Filtration wurde zunächst unter Wasserstrahl- dann unter Oelpumpenvakuum eingeengt und der Rückstand mit 600 ml Aether behandelt. Es wurden 72,5 g (IS)-1-[(N-Benzyloxycarbonyl-L-alanyl)-amino]-äthylphosphonsäure-dimethylester, F. 134-135°; [a]^⁰ = +14,9° (c = 1% in Methanol); erhalten.

b) Eine Lösung von 35,8 g (IS)-1-[(N-Benzyloxycarbonyl-L-alanyl) -amino] -äthylphosphonsäure-methylester in 125 ml Methanol mit einem Gehalt von 0,1 Mol Chlorwasserstoff wurde bei Raumtemperatur und unter Normaldruck in Gegenwart von 3 g eines 10% Pd/C-Katalysators hydriert. Der Katalysator wurde abfiltriert, das Filtrat unter vermindertem Druck eingeengt und der Rückstand zweimal mit Aethylacetat aufgenommen und abgedampft. Der erhaltene gummiartige Rückstand wurde dann in 100 ml Methylenchlorid gelöst und mit 22,3 g N-Benzyloxycarbonyl-L-alanin versetzt. Das Gemisch wurde unter Rühren auf

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-5 abgekühlt. Dann wurden 14 ml trockenes Triäthylamin zugesetzt und zwar so, dass die Temperatur nicht über 0 stieg. Dann wurde unter gleichen Bedingungen eine Lösung von 20,6 g Dicyclohexyl-carbodiimid in 20 ml Methylenchlorid zugegeben.

Nach beendigter Zugabe wurde das Gemisch 15 Stunden bei 0 gerührt. Der Niederschlag wurde abfiltriert und mit Methylenchlorid gewaschen. Die vereinigten Filtrate und Waschwasser wurden mit 50 ml Wasser und 50 ml einer 20%igen Kaliumcarbonatlösung gewaschen. Die organische Phase wurde dann abgetrennt und über Natriumsulfat getrocknet. Nach Filtration wurde die Lösung unter vermindertem Druck eingeengt und lieferte einen Rückstand, der mit 100 ml Aether behandelt, auf 0° abgekühlt, filtriert, mit Aether gewaschen und im Vakuum getrocknet wurde. Es wurden 34,3 g (IS)-1-[(N-Benzyloxycarbonyl-L-alanyl-L-alanyl)-amino]-äthylphosphonsäure-dimethylester, F. 159-161 , erhalten. Umkristallisation aus Methanol/Aether erhöhte den Schmelzpunkt auf 162-163°; [a]^° = -22,1° (c = 1% in Wasser).

Beispiel 6

2,79 g des Monobenzylaminsalzes von (IS)-1-[(N-Benzyloxycarbonyl-L-alanyl)-(N^G-benzyloxycarbonyl-L-lysyl)-amino]-äthylphosphonsäure wurden in 100 ml eines heissen Gemisches aus Aethanol und Wasser (1:1) gelöst. Die Lösung wurde über eine Säule eines stark sauren Kationenaustauschers (sulfoniertes Polystyrol; 125 g; frisch regeneriert) in einem l:l-Gemisch aus Aethanol und Wasser gegeben. Die Säule wurde mit einem warmen Gemisch aus einem l:l-Gemisch aus Aethanol und Wasser eluiert und 500 ml des sauren Eluates wurden gesammelt. Nach Zusatz von 0,1 g eines 10% Pd/C-Katalysators und 2 Tropfen Eisessig wurde über Nacht bei Raumtemperatur und unter Atmosphärendruck hydriert. Der Katalysator wurde abfiltriert, das Filtrat zur Trockene eingeengt und noch zweimal mit n-Propanol aufgenommen und wieder eingeengt. Der Rückstand wurde dann in 10 ml Wasser aufgenommen, die Lösung filtriert und das Filtrat mit 40 ml Aethanol verdünnt, worauf sich ein zunächst gummiartiger, später kristalliner Niederschlag

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bildete. Das Gemisch wurde dann 2 Stunden bei 0° stehen gelassen, der Niederschlag wurde abfiltriert und sukzessive mit einem 1:4-Gemisch von Wasser und Aethanol sowie Aethanol und Aether gewaschen. Nach dem Trocknen wurden 1,15 g (IS)-1-(L-Alanyl-L-lysylamino)-äthylphosphonsäure, F. 242-244 (Zersetzung), erhalten. Aufarbeitung des Filtrates lieferte weitere 0,18 g des gleichen Produktes. Die erhaltene (IS)-I-(L-Alanyl-L-lysylamino)-äthylphosphonsäure wurde auf folgende Weise in das Monooxalat übergeführt: 0,93 g (IS)-1-(L-Alanyl-L-lysylamino)-äthylphosphonsäure wurden in 6 ml Wasser gelöst und mit 0,361 g Oxalsäuredihydrat behandelt. Die entstandene Lösung wurde mit 12 ml Aethanol verdünnt (woraufhin sich ein weisser Niederschlag bildete) und über Nacht im Kühlschrank aufbewahrt. Der Niederschlag wurde dann abfiltriert, mit Aethanol gewaschen und getrocknet. Es wurden 0,79 g des Monooxalats mit einem Schmelzpunkt von 234 (Zersetzung) erhalten.

Das Ausgangsmaterial wurde folgendermassen erhalten:

Ein auf 0° gekühltes Gemisch aus 1,25 g (IS)-1-Aminoäthylphosphonsäure, 10 ml Wasser und 10 ml Dimethylformamid wurde zunächst mit.2,8 ml Triäthylamin und dann mit einer Lösung von 5,98 g N -tert.Butoxycarbonyl-N^e-benzyloxycarbonyl-L-lysin-2,4,5-trichlorphenylester in 10 ml Dimethylformamid versetzt, wobei die Temperatur nicht über 0° stieg. Die entstandene homogene Mischung wurde 2 Stunden bei 0° gerührt. Nach kurzer Zeit bildete sich ein fester Niederschlag, der sich aber während des weiteren 18-stündigen Rührens bei Raumtemperatur wieder auflöste. Das Gemisch wurde unter OeI-pumpenvakuum eingeengt, der Rückstand wurde in einem Gemisch aus 20 ml Wasser und 20 ml Aethanol gelöst, filtriert und das Filtrat über eine Säule eines stark sauren Kationenaustauschers (sulfoniertes Polystyrol; frisch regeneriert) in einem l:l-Gemisch aus Wasser und Aethanol gegeben. Das saure Eluat wurde eingeengt und lieferte 5,9 g (IS)-1-[(N^a-tert,-Butoxycarbonyl-N^e-benzyloxycarbonyl-L-lysyl)-amino]-äthylphos-

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phonsäure in Form eines OeIs.

b) Das erhaltene OeI wurde in einem Gemisch aus 200 ml Wasser und 100 ml Aethanol gelöst, die Lösung mit 5 ml konzentrierter Salzsäure (spezifisches Gewicht 1,18) behandelt und über Nacht bei Raumtemperatur stehengelassen. Es wurde dann eingeengt, der gummiartige Rückstand in einem Gemisch aus 15 ml Wasser und 15 ml Aethanol gelöst und die erhaltene Lösung anschliessend mit 7 ml konzentrierter Salzsäure behandelt. Das Gemisch wurde über Nacht bei Raumtemperatur stehengelassen. Es wurde eingeengt und zweimal mit je 20 ml Wasser aufgenommen und wieder eingeengt. Der erhaltene gummiartige Rückstand wurde in 60 ml Methanol gelöst und die Lösung unter Rühren mit 10 ml Propylenoxyd versetzt. Die Lösung wurde 1 Stunde bei Zimmertemperatur und anschliessend 3 Stunden bei 0 stehengelassen. Der feste Niederschlag wurde abfiltriert, mit Methanol und Aether gewaschen und lieferte 2,61 g (IS)-I-[(N^e-Benzyloxycarbonyl-L-lysyl)-amino]-äthylphosphonsäure, F. 268-269° (Zersetzung); i^a^° = +87,0° (^c = 0,5% in Essigsäure). Einengen des Filtrates und Behandlung des Rückstandes mit Methanol lieferte weitere 0,235 g der gleichen Verbindung mit einem Schmelzpunkt von 253-255 (Zersetzung).

c) 2,715 g (IS)-1-[(N^e-Benzyloxycarbonyl-L-lysyl)-amino]-äthylphosphonsäure wurden mit einem Gemisch aus 28 ml Wasser, 56 ml Dimethylformamid und 1,96 g Triethylamin behandelt. Eine geringe Menge (ca. 0,2 g) unlöslichen Anteils wurde abfiltriert und verworfen, während das Filtrat unter Rühren bei 0 mit 2,24 g des N-Hydroxysuccinimidesters von N-Benzyloxycarbonyl-L-alanin versetzt wurde. Das Gemisch wurde zunächst 1 1/2 Stunden bei 0° und dann etwa 60 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Die Lösung wurde zur Trockene eingeengt und der Rückstand in einem Gemisch aus 35 ml Aethanol und 35 ml Wasser gelöst. Die erhaltene Lösung wurde über eine Säule eines stark sauren Kationenaustauschers (sulfoniertes Polystyrol; 125 g; frisch regeneriert) gegeben und mit einem l:l-Gemisch aus

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Aethanol und Wasser eluiert. Es wurden 300 ml saures Eluat aufgefangen, das über Nacht stehengelassen und anschliessend eingeengt wurde. Der gelatinöse Rückstand wurde nacheinander mit 50 ml Methylenchlorid, 25 ml Methylenchlorid, 50 ml Aceton, 25 ml Aceton und 50 ml Wasser behandelt. Der wässrige Extrakt und das im Wasser nicht gelöste Material wurden vereinigt und mit 50 ml Aethanol versetzt. Die erhaltene Lösung wurde mit wässrigem Benzylamin auf ein pH von 4,5 titriert und über Nacht im Kühlschrank stehengelassen. Der Rückstand wurde ab-

filtriert, mit einem l:l-Gemisch aus Aethanol und Wasser und anschliessend mit Aether gewaschen und getrocknet. Es wurden 2,47 g des Monobenzylaminsalzes von (IS)-1-[(N-Benzyloxycarbonyl-L-alanyl)-(N -benzyloxycarbonyl-L-lysyl)-amino]-äthylphosphonsäure, F. 232-233° (Zersetzung); [⁰¹Iq⁰ = "1/2°

(c = 0,5% in Essigsäure); erhalten. Einengen des Filtrates und Behandlung mit Aethanol lieferte weitere 0,7 g des gleichen Monobenzylaminsalzes mit einem Schmelzpunkt von 202-205 (Zersetzung), das nach Umkristallisation aus einem Gemisch von 0,5 ml Wasser und 5 ml Aethanol 0,325 g des Monobenzylaminsalzes,

F. 227-229° (Zersetzung), ergab.

Das folgende Beispiel illustriert ein typisches pharmazeutisches Präparat mit einem Gehalt an einer erfindungsgemässen Verbindung:
25

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- 34 -

Beispiel

Es wurden 1000 ml einer Injektionslösung der folgenden Zusammensetzung hergestellt:

pro 1000 ml

(IS)-1-(L-Alanyl-L-alanylamino)-

äthylphosphonsäure 100,0 g

Chlorkresol 1,0 g

Eisessig 1,2 g

Natriumhydroxydlösung (0,1 N) q.s. ad pH 4,5

Wasser für Injektionslösungen ad 1000 ml

Herstellung;

Die (IS)-1-(L-Alanyl-L-alanylamino)-äthylphosphonsäure wurde in 500 ml Wasser für Injektionen suspendiert. Dieser Lösung wurde eine Lösung des Chlorkresols in 200 ml Wasser für Injektionen zugesetzt. Dann wurde unter Rühren die Essigsäure zugesetzt, sowie die 0,1 N Natriumhydroxydlösung bis zu einem pH von 4,5. Schliesslich wurde mit Wasser auf 1000 ml aufgefüllt, durch ein steriles Membranfilter (0,22 μ) filtriert und in Ampullen abgefüllt. Die Ampullen wurden geschlossen und im Autoklaven 20 Minuten bei 121 sterilisiert.

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Claims

Patentansprüche

NH-CH- CO-J-NH-CH- CO-i-NH —CH-P —R

(b)

worin R Wasserstoff oder eine Aminoschutzgruppe; R , R und R die Reste normalerweise in Proteinen vorkommender Aminosäuren darstellen, mit der zu oben analogen Einschränkung und wobei allfällig vorkommende Aminogruppen gegebenenfalls in geschützter Form vorliegen sowie andere funktionelle Gruppen, sofern erforderlich, eben-

40 falls in geschützter Form vorliegen; R Methyl, Hydroxy oder eine nieder-Alkoxy-Schutzgruppe und

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ORIGINAL INSPECTED

■J»

41
R Hydroxy oder eine nieder-Alkoxy-Schutzgruppe bedeuten und worin η wie oben und die Konfigurationen an den C-Atomen (a), (b) und (c) analog zu oben definiert sind,
abspaltet, oder

b) aus einem (R,S)-Diastereomerengemisch der Formel I das (S)-Diastereomere in an sich bekannter Weise isoliert, und gegebenenfalls eine erhaltene Verbindung der Formel I in ein physiologisch verträgliches Salz überführt.
2. Verfahren gemäss Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet,

4 dass man ein Peptidderivat der Formel I herstellt, in dem R eine Hydroxygruppe darstellt.
3. Verfahren gemäss Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, dass man ein Peptidderivat der Formel I herstellt, in dem R eine Methyl- oder Benzylgruppe darstellt.
4. Verfahren gemäss einem der Ansprüche 1-3, dadurch

gekennzeichnet, dass man ein Peptidderivat der Formel I herstellt, in dem R² und R³ jeweils eine Methylgruppe darstellen.
5. Verfahren gemäss Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass man (IS)-1-(L-Alanyl-L-alanylamino)-äthylphosphonsäure herstellt.
6. Verfahren gemäss Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass man (IS)-1-(L-Alanyl-L-alanyl-L-alanylamino)-äthylphosphonsäure herstellt.
7. Verfahren gemäss Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass man (IS)-1-(L-Alanyl-glycylamino)-äthylphosphonsäure herstellt.

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8. Verfahren gemäss Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass man (IS)-1-(L-Alanyl-L-alanylamino)-2-phenyl-äthylphosphonsäure herstellt.
9. Verfahren gemäss Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass man (IS)-1-(L-Alanyl-L-lysylamino)-äthylphosphonsäure herstellt.
10. Verfahren gemäss Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass man die Ausgangsverbindung der Formel II durch Kondensation einer Verbindung der allgemeinen Formel

R²⁰ - R¹⁰ 0

H-f-NH — CH- CO-f-NH— CH- P— R⁴⁰ (HI) 15

worin m 0, 1, 2 oder 3 bedeutet und R , R , R und R sowie die Konfigurationen an den C-Atomen (b) und (c) wie in

Anspruch 1 definiert sind,

mit einer in geeigneter Weise geschützten α-Aminosäure, einem in geeigneter Weise geschützten Di-, Tri- oder Tetrapeptid oder einem reaktionsfähigen Derivat einer solchen Verbindung in an sich bekannter Weise herstellt.

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11. Verfahren zur Herstellung pharmazeutischer Präparate, dadurch gekennzeichnet, dass man eine Verbindung der Formel I aus Anspruch 1 oder ein physiologisch verträgliches Salz einer solchen Verbindung als aktiven Bestandteil mit zur therapeutischen Verabreichung geeigneten, nicht-toxischen, inerten, an sich in solchen Präparaten üblichen festen oder flüssigen Trägern vermischt und die erhaltene Mischung in eine geeignete galenische Form bringt.

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12. Pharmazeutische Präparate, gekennzeichnet durch einen Gehalt eines Peptidderivats der Formel I aus Anspruch 1 und einen zur therapeutischen Verabreichung geeigneten, nichttoxischen, inerten, festen oder flüssigen Träger.

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13. Peptidderivate der allgemeinen Formel „3 _ „2

(a)

H„N—CH-CO-4-NH—CH-CO-L-MH-CH-P—R (D

(b)

(O

OH

worin η 1, 2 oder 3 bedeutet; R , R und R^J

die Reste normalerwrise in Proteinen vorkommender α-Aminosäuren darstellen, mit der

1 4

Einschränkung, dass R ψ Wasserstoff; R

Hydroxy oder Methyl bedeutet und wobei die

Konfigurationen an den Kohlenstoffatomen

3 2

(a) und (b) L sind (wenn R und R ψ Wasserstoff) und die Konfiguration am Kohlenstoffatom (c) (S) ist,
und pharmazeutisch verträgliche Salze dieser Verbindungen.
14. Peptidderivate gemäss Anspruch 13, dadurch gekenn-

4
zeichnet, dass R eine Hydroxygruppe darstellt.
15. Peptidderivate gemäss Anspruch 13 oder 14, dadurch gekennzeichnet, dass R eine Methyl- oder Benzylgruppe darstellt.
16. Peptidderivate gemäss einem der Ansprüche 13-15,

2 3

dadurch gekennzeichnet, dass R und R jeweils eine Methylgruppe darstellen.
l7. (Is)-1-(L-Alanyl-L-alanylamino)-äthylphosphonsäure.
18. (IS) -1- (Ii-Alanyl-L-alanyl-L-alanylamino) -äthylphosphonsäure.
19. (IS)-1-(L-Alanyl-glycylamino)-äthylphosphonsäure.

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20. (IS)-I-(L-Alanyl-L-alanylamino)-2-phenyl-äthylphos- /' phonsäure. -^"*
21. (IS)-1-(L-Alanyl-L-lysylamino)-äthylphosphonsäure.

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