MC1146A1

MC1146A1 - Derives peptidiques et procede pour leur preparation

Info

Publication number: MC1146A1
Application number: MC771242A
Authority: MC
Inventors: C Hassall; F Atherton; P Ringrose; M Hall; R Lambert
Original assignee: Hoffmann La Roche
Priority date: 1976-05-14
Filing date: 1977-05-13
Publication date: 1978-01-30
Also published as: DE2721760A1; ATA345877A; PH14715A; IL52040A0; PT66544A; NL7704370A; SE7705628L; JPS52139023A; NO771717L; AU511452B2; FR2351124A1; DK209877A; CA1090785A; IT1075484B; FR2351124B1; FI771518A7; LU77319A1; BE854591A; GR73010B; ZA772732B

Description

L'invention concerne des dérivés de peptides, plus ; spécialement des dérivés peptidiques d'acides phosphonique ; et phosphinique, et un procédé pour les préparer, ainsi j que des préparations pharmaceutiques les contenant.

5. Les dérivés de peptides de l'invention sont des com posés de formule générale

R-

I

-c:

(a)

H2N—CH—0

R

I

-NH—CH—C0-(b)

R1 0

-NH—GH—P—R

il

(=) i

H

10

15

1 1 !

! >

12 3

dans laquelle R , R et R représentent individuellement le groupe caractéristique d'un cc-amino-acide du type habituel dans les protéines, à con-

3

dition que R ne représente pas d'atome d'hydrogène 3

et R represente un groupe méthyle lorsque n = lj

4

R represente le groupe hydroxy ou méthyle ; n = 1, 2 ou 3 ; la configuration à l'atome de carbone (a) est D ; celle à l'atome de carbone (b)

2

est l lorsque R n'est pas de l'hydrogène ; et la configuration à l'atome de carbone (c) est (R) lorsque R"*" a une signification autre qu'un atome d ^hydrogène,

20 et leurs sels thérapeutiquement compatibles,

i ?

j : ; Dans le contexte, le terme "groupe caractéristique d'un

; ; ' cc-amino-acide du type .habituel dans „ .

• les protéines" signifie que le radical R d'un a-amino-acide naturel de formule générale

25

h2n-

-CH-

k

-COOH

est du type de ceux existant dans les protéines. Ainsi, par exemple, si 1'amino-acide est la glycine, le radical R sera de l'hydrogène, et si 1'amino-acide est l'alanine, le radical

2

!

R représentera le groupe méthyle; le radical R représentera en outre les groupes isopropyle dans la valine, isobutyle dans la leucine, 2-carboxyéthyle dans l'acide glutamique et benzyle dans la phényl-Llanine. R- peut aussi représenter un radical relié à l'atome ^d'azote du groupement amino (avec la perte d'un des atomes d'hydro-!gène attachés à celui-ci), formant ainsi un cycle azoté comme dans la proline et l'acide pyroglutamique.

i i

Lorsque R"*" dans la formule générale I ne représente pas de l'hydrogène, la configuration à l'atome de carbone (c) sera 1Q (R), c'est-à-dire celle que l'on obtiendrait en remplaçant le groupe carboxy d'un L a-amino-acide existant dans la nature par un noyau phosphorique.

On notera que dans la formule générale I, lorsque n =

2

2 ou 3, R aura des valeurs égales ou différentes.

15 ' Les composés de formule générale I préférés sont ceux

' dans lesquels R^ représente le groupe hydroxy,ainsi que ceux

■I ?

; dans lesquels R = méthyle, ou ceux dans lesquels R =

^ 3

: methyle et R représente un groupe méthyle, isopropyle ou isobutyle.

20 Comme exemples de composés de formule générale I, on peut citer :

j acide (1R)-1-(D-alanyl-L-alanylamino)-éthylphosphonique,

: !

; acide (1R)-1-(D-alanyl-L-alanyl-L-alanylamino)-éthyl-

; ; phosphonique,

1 i

25 acide (1R)-1- (D-valyl-L-alanyl-L-alanylamino) -éthyl-

; phosphonique,

acide (1R)-1-(D-leucyl-L-alanyl-L-alanylamino)-éthylphosphonique ,

acide (1R)-1-(D-alanyl-L-alanyl-L-alanyl-L-alanylamino)-

30 éthylphosphonique.

Selon le procédé de l'invention, les dérivés de peptides ci-dessus (à savoir les composés de formule générale I et leurs sels thérapeutiquement compatibles) sont préparés par un procédé caractérisé en ce qu'on

3

. aj scinde le(s) groupe(s) protecteur(s) d'un composé de

. formule générale

! i B?° _ R20 R10 0

5 i

R —Eïï—CH—CO

(a)

(b)

II

-NH—CH—COH-NH—CH—P—R40 II

Ui n R

dans laquelle R , R et R ont respectivement i 12 3

: 5 les mêmes significations que R , R et R sauf que

^ ' tout groupe amino présent peut être sous forme

I : protégée et tout autre groupe fonctionnel pouvant

être présent se présente le cas échéant sous forme protégée, R^ représente le groupe méthyle ou R^/

41

10 R représente un groupe hydroxy ou un groupe alcoxy

- C

inférieur protecteur, R représente un atome d'hydrogène ou un groupe protecteur : la configuration à

l'atome de carbone (a) est D ; celle à l'atome de

2 0

carbone (b) est L lorsque R n'est pas de l'hydrogène; 15 et la configuration à l'atome de carbone (c) est (R)

lorsque R"^ a une signification autre qu'un atome d1 hydrogène,

ou b) sépare un composé diastérêomêre (R,S) de formule ,,générale I en ses diastéréomëres et isole le diastérêomêre 20 (R), et convertit le cas échéant un composé de formule générale I obtenu en un sel thêrapeutiquement compatible.

. Le(s) groupe(s) amino éventuellement présent(s) dans les iradicaux R , R^® et R^ de la formule générale II peuvent être protégés par tout groupe protecteur d'amino bien connu en chimie 25 des peptides. Comme groupes protecteurs d'amino particulièrement appropriés aux buts de l'invention, on peut citer les groupes : i iaralcoxycarbonyle, notamment benzyloxycarbonyle, et t.-butoxy-

carbonyle. Le groupe protecteur d'amino peut aussi être un groupe formyle, trityle, ou trifluoroacétyle. Tout groupe carboxy ou 30 hydroxy pouvant être présent dans les groupes R^, R^ et R^ de la formule générale II peut être protégé respectivement par un groupe protecteur classique de carboxy ou d'hydroxy. Un groupe

4

carboxy peut par exemple être protégé par conversion en un ester

. alcoylique (par exemple l'ester t.-butylique) ou un ester

; aralcoylique (par exemple l'ester benzylique). De plus, un

. groupe hydroxy peut par exemple être protégé au moyen d'un

. 5 groupe aralcoxy-carbonyle (par exemple benzyloxy-carbonyle),

• alcanoyle (par exemple acétyle, propionyle, etc.), aroyle (par exemple benzoyle), alcoyle (par exemple t.-butyle) ou aralcoyle

[ (par exemple benzyle). La protection d'autres groupes fonctionnels ' x o *"* n *3 0

I présents dans les radicaux R , R et R peut être effectuée ,10 de manière connue. Le groupe protecteur représenté par R^ dans ' la formule générale II peut être tout groupe protecteur d'amino : imentionné précédemment en rapport avec R10, R20 et R30.

j i i

La scission du (ou des) groupe(s) protecteur(s) présent(s)

1

: dans un composé de formule générale II est effectuée selon des 15 "méthodes connues, c'est-à-dire des méthodes effectivement utili-, sées ou décrites dans la littérature sur la scission de groupes protecteurs. Ainsi, par exemple, un groupe aralcoxy-carbonyle (par exemple benzyloxy-carbonyle) ou t.-butoxycarbonyle peut être i i scindé par hydrolyse (c'est-à-dire par traitement avec un mélange 20 de bromure d'hydrogène et d'acide acétique glacial). Un groupe : ; aralcoxy-carbonyle (par exemple benzyloxy-carbonyle) peut aussi être scindé par hydrogënolyse (par exemple en présence de charbon palladié ou d'oxyde de palladium). Le groupe t.-butoxy-carbonyle i peut aussi être scindé au moyen d'acide chlorhydrique dans du 25 dioxane.Un groupe alcoxy inférieur représenté par R^ et/ou R^ i j j peut être linéairè ou ramifié, contenant de préférence 1-6 atomes

' j !

j |de carbone (par exemple méthoxy, éthoxy, propoxy, isopropoxy,

■ i !

;butoxy, etc.),et peut être converti en un groupe hydroxy par j ; itraitement avec un mélange de bromure d'hydrogène dans de 30 l'acide acétique glacial ou au moyen de triméthylchlorosilane, ; suivi d'une hydrolyse aqueuse. On notera que la scission des groupes protecteurs peut être effectuée en une seule ou plusieurs phases selon la nâture des groupes protecteurs présents.

La résolution d'un composé diastérêomêre (R,S) de for-35 mule générale I en ses diastéréomëres et l'isolation du diastérêomêre (R) peuvent être effectuées selon des méthodes connues, par exemple par cristallisation ou par -chromatographie en phase liquide sous pression-etc.

5

"" Les composés de formule générale I sont amphotères et forment des sels thérapeutiquement compatibles avec des acides forts (par exemple acides méthane- et p-toluènesulfoniques, chlorhydrique, bromhydrique, sulfurique etc.) et avec des 5 , bases (par exemple hydroxyde de sodium).

i i

: j Les substances de départ de formule générale II peuvent

; par exemple être préparées par condensation d'un composé de ; formule générale

1°

15

avec un a-ammo-aciae, un aipeptiae, un rripepriae ou un tétrapeptide protégés de manière adéquate, ou un de leurs ! idérivés réactifs, selon le cas.

Ainsi, quand on emploie un composé de formule générale III dans laquelle m = 0, xin tel composé peut être condensé avec un dipeptide protégé de manière adéquate, ou l'un de ses dérivés réactifs, pour donner un composé de formule générale II, dans laquelle n = 1, ou avec un tripeptide protégé de manière adéquate, ou l'un de ses dérivés réactifs, pour donner un composé de formule générale II, dans laquelle n = 2, ou avec un tétrapeptide protégé de manière adéquate, ou l'un de ses dérivés réactifs, pour donner un composé de formule générale II, dans laquelle n = 3.

30 De plus, un composé de formule générale III, dans la quelle m = 1, peut être condensé avec un a-amino-acide protégé

R

20 „10

I

-c: (b)

R 0

■ I' 40

H—HlH—CH—C 0-HNH—CH—P—R^u III

'41

m R

dans laquelle m = 0, 1, 2 ou 3 et R"^, R2^, R^-et R^ ont la même signification que ci-dessus/ la configuration

20

à l'atome de carbone (b) est L lorsque R n'est pas de l'hydrogène " et la configuration à l'atome de carbone (c) est (R) lorsque R a une signification autre qu'un atome d'hydrogène,

20

25

6

de manière appropriée, ou l'un de ses dérivés réactifs, pour donner un composé de formule générale II, dans laquelle n = 1, i ou avec un dipeptide protégé de manière appropriée, ou l'un de ; ses dérivés réactifs, pour donner un composé de formule géné-5 raie II, dans laquelle n = 2, ou avec un tripeptide protégé de i

■ ; ; manière appropriée, ou l'un de ses dérivés réactifs, pour

! donner un composé de formule générale II, dans laquelle n = 3,

D'autre part, un composé de formule générale III, dans laquelle m = 2, peut être condensé avec un a-amino-acide pro- ■ 10 tégé de manière adéquate, ou l'un de ses dérivés réactifs,

; pour donner un composé de formule générale II, dans laquelle n = 2, ou avec un dipeptide protégé de manière appropriée, ou l'un de ses dérivés réactifs, pour donner un composé de formule générale II, dans laquelle n = 3.

15 Enfin, un composé de formule générale III, dans laquelle m = 3, peut être condensé avec un a-amino-acide protégé de manière adéquate, ou l'un de ses dérivés réactifs, pour donner un composé de formule générale II, dans laquelle n = 3.

Par ailleurs, on peut préparer les composés de formule 20 générale II en effectuant la condensation ci-dessus au moyen d'un composé (R,S) de formule générale III et en séparant de manière connue le composé (R) du produit (R,S) résultant, par exemple par cristallisation, chromatographie ou cristallisation fractionnée au moyen d'une base appropriée, par 25 exemple 1'a-méthylbenzylamine.

La condensation mentionnée ci-dessus peut être effectuée selon des méthodes connues en chimie des peptides, par exemple par la méthode de l'anhydride mixte, de l'azide, de l'ester activé ou du chlorure d'acide.

3 0 Selon une méthode, un composé approprié de formule gé

nérale III peut être condensé avec un a-amino-acide (di-, tri-ou tétrapeptidique selon le cas) protégé de manière appropriée, la fonction carboxy terminale étant un radical d'anhydride mixte formé avec un acide organique ou inorganique. Avanta-35 geusement, un tel amino-acide di-, tri- ou tétrapeptidique

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portant une fonction carboxy libre est traité avec une base tertiaire telle qu'une trialcoylamine inférieur (par exemple

■ une triéthylamine) ou une N-éthylmorpholine dans un solvant organique inerte (par exemple le tétrahydrofuranne, 1,2-diméthoxy-

: 5 éthane, dichlorométhane, toluène, éther de pétrole ou des mélanges de ceux-ci) et le sel résultant est mis en réaction avec un ester d'acide chloroformique (par exemple ester butylique ou isobutylique) à basse température. L'anhydride mixte obtenu est ensuite condensé avantageusement in situ 10 avec le composé de formule générale III.

Dans un autre méthode, un composé de formule générale III approprié peut être condensé avec un a-amino-acide (di-, tri- ou tétrapeptidique selon le cas) protégé de manière appropriée, le groupe carboxy terminal étant sous forme d'un 15 azide d'acide. Cette condensation est effectuée de préférence dans un solvant organique inerte tel que le diméthylformamide ou l'acétate d'éthyle à basse température.

Une autre méthode consiste à condenser un composé de formule générale III approprié avec un a-amino-acide (di-, 20 tri- ou tétrapeptidique selon le cas) protégé de manière appropriée, la fonction carboxy terminale étant sous forme d'un groupe ester actif (par exemple p-nitrophényle, 2,4,5-trichlorophényle ou groupe ester N-hydroxysuccinimidique).

: Cette condensation est effectuée avantageusement dans un 25 solvant organique inerte tel que le diméthylformamide ou,

■ - dans le cas où R^ et/ou R^"*" représentent un groupe alcoxy inférieur, dans un alcanol aqueux (par exemple éthanol aqueux).

Selon encore une autre méthode, un composé approprié de formule générale III peut être condensé avec un a-amino-"i30 acide (di-, tri- ou tétrapeptidique selon le cas) , protégé de manière appropriée, la fonction carboxy terminale se ; présentant sous forme de chlorure d'acide. Cette condensation est effectuée de préférence en présence d'une base et à basse température.

35 Les dérivés peptidiques de la présente invention po-

tentialisent l'activité de la D-cyclosérine. Les dérivés

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peptidiques de l'invention possèdent également une activité antibactérienne contre les organismes tels que Escherichia coli, Klebsiella aerogenes, Streptococcus faecalis et Haemophilus influenzae.

5 Les dérivés peptidiques de l'invention peuvent par conséquent être employés comme médicaments, par exemple sous forme de préparations pharmaceutiques les contenant, en combinaison avec un véhicule pharmaceutique compatible qui peut être organique ou inorganique, adapté à l'administration en-10 térale ou parentërale, par exemple l'eau, le lactose, l'amidon, le stéarate de magnésium, la gomme arabique, la gélatine, les polyalcoylèneglycols, la vaseline, etc. Ces préparations peuvent se présenter sous forme solide, par exemple de comprimés,

dragées, suppositoires, capsules ; ou sous forme liquide, par 15 exemple de solutions, suspensions ou émulsions. Le cas échéant, les préparations peuvent être stérilisées ou contenir des adjuvants,par exemple des agents conservateurs, stabilisants, de mouillage ou d'émulsification. Elles peuvent également > contenir des sels régularisant la pression osmotique ou des 20 composés-tampons.

Les dérivés peptidiques de l'invention et la D-cyclosérine peuvent être administrés en combinaison ou chacun séparément, le cas échéant par des voies différentes. La quantité de peptide,ainsi que le rapport dérivé peptidique/ 25 D-cyclosérine peuvent varier dans de larges limites dépendant de facteurs tels que le dérivé choisi, le mode d'adminis-

»

tration et l'organisme à combattre. Le dérivé peptidique et la D-cyclosérine peuvent par exemple être administrés dans un rapport compris entre environ 100:1 et 1:100.

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Exemple 1

(A) Procédé:

i 4,3 g (7,4 mmoles) de sel de benzylamine de l'acide

(1R)-1-[(N-benzyloxycarbonyl-D-alanyl-L-alanyl-L-alanyl)-amino]-5 éthylphosphonique sont ajoutés à 12 ml d'une solution remuée à 45% de bromure d'hydrogène dans de l'acide acétique glacial, puis lavés avec 4 ml d'acide acétique glacial. Le mélange est remué à la température ambiante pendant 6 heures, après quoi on ajoute 100 ml d'éther,tout en remuant. On décante 10 la partie surnageante et traite le résidu de nouveau avec 100 ml d'éther. La gomme obtenue est reprise dans 30 ml de méthanol et la solution traitée avec une solution de 3 ml d'oxyde de propylène dans 5 ml de méthanol, ce qui donne un précipité blanc. Après avoir laissé au repos jusqu'au lendemain 15 à la température ambiante, on filtre le précipité, le lave successivement avec du méthanol et de l'éther, puis sèche. La cristallisation dans un mélange eau/éthanol donne 1,96 g d'acide (1R)-1-(D-alanyl-L-alanyl-L-alanylamino)-éthylphosphonique fondant à 318-320° (déc.) ; = -10^° (c = dans 20 l'hydroxyde de sodium IN).

(B) Préparation de la substance de départ :

2,7 g (10 mmoles) d'acide (1R)-1-(L-alanyl-L-alanylamino)-éthylphosphonique sont remués dans 50 ml d'eau à 5°,tandis qu'on ajoute 2,0 g (20 mmoles) de triéthylamine et 50 ml d'étha-25 nol. La solution claire obtenue est refroidie à 0°, puis on lui ajoute 3,8 g (12 mmoles) d'ester N-hydroxysuccinimique de N-benzyloxycarbonyl-D-alanine solide en une seule portion. Cet ester est lavé avec 25 ml d'éthanol. Le mélange est remué pendant 2 heures à 0°,puis pendant 16 heures à la température 30 ambiante, ce qui donne une solution claire. Les solvants sont éliminés par évaporation et le résidu est réparti entre 150 ml d'eau et 100 ml de chloroforme. La couche aqueuse est lavée avec encore 100 ml de chloroforme, puis les extraits sont rincés avec 50 ml d'eau. Les extraits aqueux sont combinés et évaporés. 35 Le résidu est repris dans un mélange de 40 ml d'eau et 40 ml de méthanol, puis passé à travers une colonne de résine échan-

10

geuse de cations (polystyrène sulfoné, fraîchement régénéré •dans le cycle acide). L'êlution est effectuée avec le même système solvant. L'éluat acide obtenu est évaporé, le résidu ' repris dans 250 ml d'eau et extrait 2 fois avec 100 ml d'éther 5 chaque fois. Les extraits éthérés sont rincés avec 50 ml d'eau. ; Les extraits aqueux combinés sont concentrés à environ 100 ml,

i après quoi on ajoute une même quantité de méthanol et titre la solution obtenue à pH 4,5 au moyen de benzylamine aqueuse 1M. La solution est évaporée à siccité et le résidu solide 10 obtenu recristallisé dans un mélange de 100 ml d'eau chaude,

400 ml d'éthanol et 500 ml d'éther. On obtient ainsi 4,38 g du sel de benzylamine de l'acide (1R)-1-[(N-benzyloxycarbonyl-D-alanyl-L-alanyl-L-alanyl) -amino] -éthylphosphonique fondant à 240-243° (déc.) ; = ""3®'-'-° (c = 0,53% dans l'acide

15 acétique).

Exemple 2

(A) Procédé :

D'une manière analogue à celle décrite à l'exemple 1, et à partir de sel de benzylamine de (1R)-1-[(N-benzyloxy-20 carbonyl-D-valyl-L-alanyl-L-alanyl)-amino]-éthylphosphonique, on obtient l'acide (1R)-1-(D-valyl-L-alanyl-L-alanylamino)-éthylphosphonique fondant à 301-304° (déc.) ;[a]20 = -105°

(c = 0,45% dans l'hydroxyde de sodium IN).

(B) Préparation de la substance de départ

25 3,8 g (15 mmoles) de N-benzyloxycarbonyl-D-valine sont remués dans 200 ml d'éther de pétrole (limites d'ébullition 60-80°). puis 1,5 g (15 mmoles) de triéthylamine sont ajoutés et le mé

lange est refroidi à -5°. 2,1 g (15 mmoles) de chloroformiate d'isobutyle sont ajoutés et le mélange est maintenu à —5° pendant 30 30 minutes. Tout en remuant à -5°, on ajoute goutte à goutte une solution de 2,7 g (10 mmoles) d'acide (1R)-1-(L-alanyl-L-alanylamino)-éthylphosphonique dans un mélange de 2,0 g (20 mmoles) de triéthylamine et 15 ml d'eau. Cette solution est lavée avec 5 ml d'eau. On.continue de remuer entre -5° et 0°

11

pendant encore 2 heures, puis jusqu'au lendemain à la température ambiante. On ajoute 150 ml d'eau et sépare les phases organiques et aqueuses. La phase organique est évaporée, le résidu repris.dans un mélange de 40 ml d'eau et 40 ml de 5 méthanol, puis le résidu est passé à travers une colonne de résine échangeuse de cations fraîchement régénérés dans le cycle acide. La colonne est éluée avec le même mélange solvant, puis la fraction acide est évaporée et ré-évaporée avec 5 fois 50 ml d'eau. Le résidu est trituré avec 100 ml d'éther et le 10 solide séparé par filtration. Ce dernier est repris dans un mélange de 400 ml de méthanol et 400 ml d'eau, après quoi la solution est titrée à pH 4,5 au moyen de benzylamine aqueuse . 4M. La solution est évaporée à siccité et le résultat solide recristallisé dans un mélange de 100 ml de méthanol et 150 ml 15 d'éther pour obtenir 3,24 g du sel de benzylamine d'acide

(1R)-1-[(N-benzyloxycarbonyl-D-valyl-L-alanyl-L-alanyl)-amino]-éthylphosphonique fondant à 238-244° (déc.).

Exemple 3

(A) Procédé :

20 D'une manière analogue à cellé décrite à l'exemple 1,

et à partir de sel de benzylamine d'acide (1R)-1-[N-benzyloxy-carbonyl-D-alanyl-L-alanyl-L-alanyl-L-alanyl)-amino]-éthylphosphonique, on obtient l'acide (1R)-1-(D-alanyl-L-alanyl-L-alanyl-L-alanylamino)-éthylphosphonique fondant à 323-325° 25 (déc.) ;[a]20 = -121° (c = 0,48% dans l'hydroxyde de sodium IN).

(B) Préparation de la substance de départ

De manière analogue à celle décrite à l'exemple 1 (B) et à partir de 1'ester N-hydroxysuccinimique de N-benzyloxycarbonyl-L-alanine et d'acide (1R)-1-(L-alanyl-L-alanylamino)-ëthyl-30 phosphonique, on obtient l'acide (1R)-1-[(N-benzyloxycarbonyl-L-alanyl-L-alanyl-L-alanyl) -amino] -éthylphosphonique fondant à 255-257° (déc.) j [a]2^ = -62,0° (c = 0,4% dans l'acide acétique glacial) .

12

D'une manière analogue à celle décrite à l'exemple 1(A) et en partant d'acide (1R)-1-[(N-benzyloxycarbonyl-L-alanyl-L-alanyl-L-alanyl)-amino]-éthylphosphonique, on obtient l'acide (1R)-1-(L-alanyl-L-alanyl-L-alanylamino)-éthylphosphonique 5 fondant à 312-313° (déc.) ; = -101° (c = 0,53% dans l'hydroxyde de sodium IN).

D'une manière analogue à celle décrite à l'exemple 1(B), mais avec acidification à pH 2 et extraction ultérieure avec de l'éther remplaçant le passage à travers la colonne de résine 10 suivie d'extraction avec de l'éther, et en partant de l'ester

N-hydroxysuccinimique de N-benzyloxycarbonyl-D-alanine et d'acide (1R)-1-(L-alanyl-L-alanyl-L-alanylamino)-éthylphosphonique, on obtient le sel de benzylamine de l'acide (1R)-1-[(N-benzyloxy-carbonyl-D-alanyl-L-alanyl-L-alanyl-L-alanyl)-amino]-éthyl-15 phosphonique fondant à 272-277° (déc.) ; = (c =

0f5% dans l'acide acétique).

Exemple 4

(A) Procédé :

10,85 g de (1R)-1-[(N-benzyloxycarbonyl-D-leucyl-20 L-alanyl-L-alanyl)-amino]-éthylphosphonate de diméthyle sont dissous dans 30 ml de solution à 35% de bromure d'hydrogène dans de l'acide acétique glacial, puis le mélange est remué , à la température ambiante pendant 4 heures. Tout en remuant, on'ajoute 130 ml d'éther, après quoi on arrête de remuer et 25 décante l'éther. Ce procédé est répété deux fois avec des portions de 80 ml d'éther. Le résidu est ensuite dissous dans 70 ml de méthanol et la solution obtenue additionnée de 10 ml d'oxyde de propylène. Après refroidissement jusqu'au lendemain, le précipité blanc obtenu est séparé par filtration, puis lavé 30 avec de l'éthanol et de l'éther. Le produit est séché dans le vide à poids constant de 7,99 g ; p.f. 293-295° (déc.). Par recristallisation dans 500 ml d'eau froide et 7 00 ml d'éthanol, on obtient 6,67 g d'acide (1R)-1-(D-leucyl-L-alanyl-L-alanylamino)-éthylphosphonique fondant à 300-302° (déc.) ; = -129,3°

3 5 (c = 1% dans l'eau).

13

(B) Préparation de la substance de départ :

12,9 g (0,03 mole) de (1R)-1-[(N-benzyloxycarbonyl-L-alanyl-L-alanyl) amino] -éthylphosphonate de diméthyle sont dissous dans 150 ml de méthanol contenant 0,032 mole de chlo-5 rure d'hydrogène, ta solution est hydrogénée à température et pression ambiante en présence de 1 g de charbon palladié à 10% jusqu'à ce que l'absorption d'hydrogène cesse. Le catalyseur est séparé par filtration, le filtrat est évaporé dans le vide et le chlorhydrate huileux évaporé deux fois 10 avec de l'acétate d'éthyle.

Le produit obtenu au paragraphe précédent et 10,9 g (0,03 mole) d'ester N-hydroxysuccinimidique de N-benzvloxy-carbonyl-D-leucine sont remués en présence de 100 ml de diméthylformamide sec. Tout en remuant et maintenant à tempé-15 rature au-dessous de 15°, on ajoute goutte à goutte 4,2 ml de triêthylamine sèche. Le mélange est ensuite remué à température ambiante jusqu'au lendemain. Le chlorhydrate de triêthylamine est séparé par filtration et lavé avec une petite quantité de diméthylformamide. Le filtrat est évaporé sous 20 vide de la trompe à huile et à une température de bain inférieure à 40°. L!huile résiduelle est traitée avec 50 ml d'eau, puis le mélange résiduel extrait avec 4 fois 50 ml de chloroforme. Les phases organiques ccmbinées sont lavées avec un petit volume de solution à 2 0% de carbonate de potassium, 25 puis séchées sur du sulfate de sodium. Le sulfate de sodium est séparé par filtration et le filtrat évaporé sous vide de la trompe à eau. Le résidu est évaporé à nouveau deux fois avec de l'acétate d'éthyle. Par trituration avec de l'éther sec, filtration et séchage dans le vide, on obtient 15,5 g 30 de (1R) -l-r [ (N-benzyloxycarbonyl-D-leucyl-L-alanyl-L-alanyl) -amino]-éthylphosphonate de diméthyle fondant à 163-167°. Après ■ recristallisation dans 1'acétonitrile, le point de fusion est de 173-176° ; = "-36,6° (c = 1% dans le méthanol) .

14

Exemple 5

; t (A) Procédé :

D'une manière analogue à celle décrite à l'exemple 4 (A), | on traite 9,92 g dé (1R)-1-[(N-benzyloxycarbonyl-D-alanyl-L-. 5 alanyl)-amino]-éthylphosphonate de diméthyle avec 45 ml de solution à 35% de bromure d'hydrogène dans de l'acide acétique. En travaillant selon les données de l'exemple 4(A), on obtient 6,16 g de produit brut fondant à 282-285° (déc.) qui, après recristallisation dans le mélange eau/éthanol, donne 5,47 g 10 d'acide (1R)-1-(D-alanyl-L-alanylamino)-éthylphosphonique pur à p.f. 292-293° (déc.) ; = -101,2° (c = 1% dans

1'eau).

(B) Préparation de la substance de départ :

De manière analogue à celle décrite à l'exemple 4(B) 15 et à partir de 7,82 g (0,03 mole) de chlorhydrate de (1R)-1-

(L-alanylamino)-éthylphosphonate de diméthyle et 9,6 g (0,03 mole) de l'ester N-hydroxysuccinimidique de N-benzyloxycarbonyl-D-alanine, on obtient 11,1 g de (1R)-1-[(N-benzyloxycarbonyl-D-alanyl-L-alanyl)-amino]-éthylphosphonate de diméthyle fondant 20 à 115-117° ; = "28,4° (c = 0,5% dans le méthanol).

15

L'exemple suivant illustre une préparation pharmaceutique typique contenant un dérivé de peptide selon la présente inven-: tion :

Exemple 6

5 On prépare 1000 ml d'une solution d'injection contenant les ingrédients suivants :

par 1000 ml acide (1R) -1-(D-alanyl-L-alanylamino)-

éthylphosphonique 100,0 g chlorocrésol 1,0 g

10 acide acétique glacial 1,2 g solution d'hydroxyde de sodium 0,1N q.s. pH 4,5

eau pour injection ad 1000 ml

L'acide (1R)-1-(D-alanyl-L-alanylamino)-éthylphosphonique est dissous dans 500 ml d'eau pour injection. Le chlorocrésol 15 est dissous dans 200 ml d'eau pour injection et ajouté à la première solution. L'acide acétique est ensuite ajouté sous agitation. Une solution 0,1N d'hydroxyde de sodium dans de l'eau pour injection est ajoutée sous agitation jusqu'à pH 4,5. Ensuite, la solution est complétée à 1000 ml avec 20 de l'eau pour injection, filtrée à travers une membrane stérile de 0,22 microns et mise en ampoules. Les ampoules sont scellées,

puis stérilisées à 121° pendant 20 minutes dans un autoclave.

16

Claims

REVENDICATIONS

1. Procédé pour la préparation de peptides de formule générale

R'

H2N—CH—C Oj-NH—CH—CO

(a)

R

I

(b)

R1 0

I "H <

-m—CH—P—R (c)

n

OH

10

15

12 3

dans laquelle R , R et R représentent individuellement le groupe caractéristique d'un a-amino-

acide du type habituel dans les protéines, à con-3

dition que R ne représente pas d'atome d'hydrogène 3

et R represente un groupe méthyle lorsque n = 1;

4

R représente le groupe hydroxy ou méthyle ; n = 1, 2 ou 3 ; la configuration à l'atome de carbone (a) est D ; celle à l'atome de carbone (b)

2

est L lorsque R n'est pas de l'hydrogène ; et la configuration à l'atome de çarbone (c) est (R) lorsque R"*" a une signification autre qu'un atome d'hydrogène,

et de leurs sels thérapeutiquement compatibles, caractérisé en ce qu'on

20

a) scinde le(s) groupe(s) protecteur(s) d'un composé de formule générale

>30

R'

20

R-!

5 i

R —m—CH—COH-HH—CH—co-

(a)

r i t TVTTT Q

(b)

R10 0

I H

-3m—CH—P—R

{41

40

II

n

R

dans' laquelle R , R et R ont respectivement

12 3

les mêmes significations que R , R et R sauf que tout groupe amino présent peut être sous forme protégée et tout autre groupe fonctionnel pouvant

17

être présent se présente le cas échéant sous forme protégée; représente le groupe méthyle ou R^/

41

R represente un groupe hydroxy ou un groupe alcoxy inférieur protecteur, R~* représente un atome d'hydro-

5 gène ou un groupe protecteur ; la configuration à

l'atome de carbone (a) est D ; celle à l'atome de

20

. carbone (b) est L lorsque R n'est pas de l'hydrogène; et la configuration à l'atome de carbone (c) est (R) lorsque R^® a une signification autre qu'un atome 1Q d'hydrogène, n = 1, 2 ou 3,

par des méthodes connues,

ou b) sépare un composé diastéréomêre (R,S) de formule générale I en ses diastéréomëres et isole le diastéréomêre (R), et convertit le cas échéant un composé de formule géné-1S raie I obtenu en un sel thérapeutiquement compatible.

2". Procédé selon la revendication 1 , caractérisé en ce qu'on prépare un peptide, dans lequel R^ représente un groupe hydroxy.

3. Procédé selon la revendication 1 ou 2, caractérisé 'on pré;

groupe méthyle.

20 en ce qu'on prépare un peptide, dans lequel R"'" représente un

4. Procédé selon l'une des revendications 1,2 ou 3,

^ - 2

caractérisé en ce qu'on prépare un peptide, dans lequel R repré-

3

sente un groupe méthyle et R représente un groupe méthyle, iso-25 propyle ou isobutyle.

5 Procédé selon la revendication 1 , caractérisé en ce qu'on prépare l'acide (1R)-1-(D-alanyl-L-alanylamino)-éthylphosphonique .

6. Procédé selon la revendication 1 , caractérisé en ce 3Q. qu'on prépare l'acide (1R) -1- (D-alanyl-L-alanyl-L-alanylamino) -éthylphosphonique.

7- Procédé selon la revendication 1 , caractérisé en ce qu'on prépare l'acide (1R)-1-(D-valyl-L-alanyl-L-alanylamino)-éthylphosphonique.

M

18

8- Procédé selon la revendication 1 , caractérisé en ce qu'on prépare l'acide (1R)-1-(D-leucyl-L-alanyl-L-alanylamino)-éthylpho sphonique.

9*- Procédé selon la revendication 1 , caractérisé en ce qu'on prépare l'acide (1R)-1-(D-alanyl-L-alanyl-L-alanyl-L-alanylamino)-éthylphosphonique.

10. Procédé selon la revendication 1 , caractérisé en ce qu un composé de formule générale II est obtenu par condensation d'un composé de formule générale

R'

20

H-+NH—CH-(b)

R10 0

C0—MH—CH—P—R

40

III

(c)

m

R'

41

dans laquelle m = 0, 1, 2 ou 3 ; R^, R2^, R^-et R41 ont la même signification que dans la revendication 1 } la configuration

20

à l'atome de carbone (b) est L lorsque R n'est pas de l'hydrogène et la configuration à l'atome de carbone (c) est (R) lorsque R"^ a une signification autre qu'un atome d'hydrogène,

avec un a-amino-acide, un dipeptide, un tripeptide ou un tétrapeptide protégés de manière adéquate, ou un de leurs dérivés réactifs, selon le cas.

11. Procédé pour la fabrication de préparations pharmaceutiques, caractérisé en ce qu'un composé de formule générale I selon la revendication 1 est mélangé, en tant que substance active, avec des supports solides ou liquides, non-toxiques, inertes et thérapeutiquement compatibles, usuellement utilisés dans de telles préparations, et/ou des excipients, et que le mélange obtenu est mis en formes de dosages pharmaceutiquement appropriées.

12. Procédé pour la fabrication de préparations pharmaceutiques, caractérisé en ce qu'un composé de formule générale I

19

selon la revendication 1, et la D-cyclosérine, sont mélangés, en tant que substances activer, avec des supports solides ou liquides, non-toxiques, inertes et thérapeutiquement compatibles usuellement utilisés dans de telles préparations, et/ou des excipients, et que le mélange obtenu est mis en formes de dosages pharmaceutiquement appropriées.

ORIGINAL

en M pages 4contenant xxuCuf\Renvois O? mot ajouté -..al. mot rayé nul

José JURAU

Conseil en Propriété tataW*

monte-cahi-o Pu procuration d»