DE2329486A1

DE2329486A1 - Neue antibiotika und verfahren zu ihrer herstellung

Info

Publication number: DE2329486A1
Application number: DE2329486A
Authority: DE
Inventors: Atsushi Aoki; Rikiya Fukuda; Keijiro Ishibashi; Mitsuo Ishida; Toshio Nakayabu; Hokkaido Sapporo; Chiyoko Takeichi
Original assignee: Sankyo Co Ltd
Current assignee: Sankyo Co Ltd
Priority date: 1972-06-08
Filing date: 1973-06-08
Publication date: 1973-12-20
Also published as: FR2187778B1; SU1360574A3; AU5663173A; IT986430B; CH585514A5; DE2329486C2; ZA733857B; ES415591A1; FR2187778A1; IL42401A0; BR7304308D0; CH585789A5; JPS4914624A; SU588926A3; IL42401A; GB1390336A

Description

Neue Antibiotika und Verfahren zu ihr;

Die Erfindung betrifft neue antibiotischt Substanzen B-41 sowie ein Verfahren zur Herstellung dieser antibiotischon Substanz, bei welchem man in einem Medium einen zu der Art Streptomyces gehörenden Stamm, der B-41 erzeugt, züchtet und sodann das erhaltene B-41 aus der Kultursubctanz isoliert. Die Erfindung betrifft auch ein Insektizides und acarizides Mittel, welches als Wirkstoff wenigstens eine der neuen antibiotischen Substanzen B-41 enthält.

Als insektizide und acarizide Mittel sind bereits viele organische Verbindungen verwendet v/orden. Unter den antibiotischen Substanzen zeigen jedoch nur wenige gleich-

-Z-

3098S1/121C

zeitig insektizide und acarizide Wirkungen. Darüber hinaus haben diese Substanzen bislang noch keine praktische Verwendung gefunden.

Es wurde nun eine neue antibiotische Substanz B~41 gefunden, welche von dem Stamm B-41-146 erzeugt v/ird. Dieser neue Stamm gehört zur Art Streptomyces. Das.erfindungsgemäße Antibiotikum hat nicht nur eine weitaus höhere acarizide Aktivität als die bislang bekennten Verbindungen mit acarizider Wirksamkeit, sondern ist auch dazu imstande, für die Landwirtschaft und den Gartenbau schädliche Insekten zu kontrollieren, wie Blattläuse, Larven von Insekten der Art Lepdoptera etc.

Die antibiotische Substanz B-41, die den Wirkstoff des Insektiziden und acariziden Mittels der vorliegenden Erfindung darstellt, konnte in neun Arten von Substanzen, nämlich A^, Ap, A,, A., IL, Bp, B,, C. und Cp, aufgeteilt werden.

Die physikochemischen Eigenschaften dieser Substanzen sind in der folgenden Tabelle zusammengestellt:

3 0 a 8 5 1 / 1 2 1 fi

Summenformel A. A₉ A, A/, B₁ B₀ B, C. C₉ ^C32^H48°7 ^C5B^K56°O ^C31^K44°7 ^C32^H46°7 ^C39^H58°10 ^C32^H46°7 ^C33^H43°7 ^C36^H4₇°9^{N C}37^H49°9^N

Elemen- berechnet C 70,56 67,83 70,43 70,82 68,19 70.82 71,19 C: 67,80 C 68,18

tarana- H: 7,43 H 7,58

lyse (%) . H 8,88 8,39 8,39 8,54 8,51 8,54 8,69 N: 2,20 N: 2,15

gefunden C 70,74 71,73 65,73 69,85 68,00 69,S6 70,72 C: 65,93 C:68,09

H: 7 53 Hi 7 54

H 9,18 8,26 7,89 8,37 8,32 8,32 8*59 N: 2^14 N: 2*13

Moleku- Osmometri-

large- sehe Me-
«·»■· wicht thode (in

" Aceton) 513,9 672,1 517,0 - 629,5 524,3

■"·. Massen-

-~ spektrum

-* (M+) 544 672 528. 542 686 542 556 679 693

^ (Note 1) (Note Λ)

Schmelz- amorphes amorphes 212 193 176 139 amorphes amorphes amorphes

kt (⁰C) Pulver Pulver -215 -195 -178 -142 Pulver Pulver Pulver

Spezifische Drehung ■

£° +160° +54° +106° +103° +75° +131° +126° +57° +54

(Konzentration der co

Probe 5 mg/2 ml, jr-

Länge der Schicht · oo

in Aceton 10 cm) -h- CD

UV-Absorptionsspektrum ( \-max, mu ) 240,5

' Fig.1

IR-Absorptionsspektrum (Nujol-Methode)

NMR-Spektrum (in (CD,)₂· CO im Falle der Fig.19 bis 25 und in CDCl im Falle der Fig. 26 und 27

245
Fig.2 Fig.3

245 245 245 245 240 240 Fig.4 Fig.5 Fig.6 Fig.7 Fig.8 Fig.9

Fig.10 Fig.11 Fig.12 Fig.13 Fig.14 Fig.15 Fig.16 Fig.17 Fig.18

	60 MHz	Fig. 19	Fig.	20 Fig.21	Fig	.22 Flg.23	Fig. 2	4 Fig.	25 Fig.26	Fig. 2
	Massenspektrum (Haupt-
cn	peaks bei den Bedin	544	672	528	542	686	542	556	679	692
OD	gungen 75 eV, Tempera	402	181	400	414	414	400	414	568	582
CTt	tur des Ionisations	181	153	181	195	195	181	195	400	414
—^k	raums 200 C und Probe-	153	151	• 153	167	167	153	167	181	195
	terrmeratur 120 bis			151	151	151			153	167
ro	190⁰C)					125	151	151	111	111
									(Note 1)	(Note
er·.	Löslichkeit in Lö	schlecht
	sungsmitteln	löslich
		in Was
		ser,
		leicht	dto	dto	dto	dto	dto	dto	dto
		löslüi
		in n-Hexan,
		B_enzol,
		Aceton,
		Äthanol

									-5

und Chlo
roform

TV) CD

Färb- Jod/Chloreaktion roform

gelb gelb gelb gelb gelb gelb gelb gelb gelb

(bei der

Ninhydrin

nega-

nega

pH-Wer

12

nega

nega

nega

nega- nega

nega

nega

pH-Wer

12

to

Dünn

tiv

ten von

tiv

tiv

tiv tiv

tiv

tiv

ten von

GO

schi cht-
chroma-
togra-
phie)

Besprühen
mit Schwe
felsäure
unter Er

braun

röt

2 bis

braun

braun

röt

braun braun

braun

2 bis

iO

hitzen

lich

lich

^p

purpur

OO

C

farben

CD

cc
OD ·

Kaliumper-

cn

manganat-

lösung

gelb

gelb gelb

gelb

Neutraiisation-Ti-

kein

kein

tration :

pKa-

dto

' dto

pKa- dto

pKa-

dto

Ln alko-

Wert

tr»

holischer Lösung

bei

bei

farblos

pH-Wer

farb

ten von

los

farblos

2 bis 9

farb

(bei

los

einem pH-

wert von

8,7 er

folgte

eine Kri

stallisa

tion, wo

durch die

Messung

unmöglich

wurde)

farb

farb

färb- farb

los

los

los los

Farbe der Substanz

Fußnote 1: Die Massenspektren von C. und Cp wurden bei dem acetylierten Derivat ermittelt, das durch Substitution des Wasserstoffatoms des Substituenten FL in der angegebenen Strukturformel durch eine CH^CO-Gruppe erhalten worden war.

Die beigefügten Zeichnungen zeigen die UV-Absorptionsspektren, die IR-Absorptionsspektren und die NMR-Spektren der antibiotisehen Substanz B-41. Die Figuren 1 bin 9 zeigen die UV-Spektren von A₁, Ap, A^, A,, B., Bp, B,, C. und Cp der antibiotischen Substanz B-41. Die Figuren 10 bis 10 zeigen die IR-Spektren von A., Ap, A,, A. , B₁, Bp, B,, C₁ und Cp der antibiotischen Substanz B-41 und die Figuren 19 bis 27 zeigen die NMR-Spektren von A₁, Ap, A^, A», B₁, Bp, B,, C^ und Cp der antibiotischen Substanz B-41.

In der untenstehenden Tabelle werden die Rf-Werte der obengenannten Substanzen, gemessen durch Dünnschichtchromatographie, angegeben. Hierzu wurde ein Dünnschichtchromatographiefilm verwendet, der ein Fluoreszenzreagens enthielt (von Tokyo Kasei Kogyo Co. Ltd., Warenzeichen "Spotfilm fluorescent"). Die Erfassung erfolgte entsprechend der Intensität der emittierten Fluoreszenz bei der Bestrahlung der einzelnen Substanzen mit UV-Strahlen mit 2536 Ä.

3 (J 9851/1216

Silicagel F

Lösungs- A. A₀ A, A, B. B₀ B, C. C₀ mittel- ^Ί ^ά * * ^Ί ^ά * ^Ί ^ά system

Accton/n-He-

xan (30/70) 0,47 0,32 0,42 0,44 0,47 0,61 0,63 0,22 0,24

Äthylacetat/

Benzol (50/

50) 0,61 0,62 0,63 0,65 0,79 0,80 0,82 0,45 0,47

Äthylacetat/ Chloroform

(25:75) 0,27 0,35 0,39 0,41 0,75 0,79 0,81 0,12 0,13

Aceton/Ben-

zol (40:60) 0,85 0,75 0,77 0,79 0,92 0,92 0,92 0,6n 0,63

Aceton/Ben-

zol (15:75) 0,39 0,32 0,39 0,39 0,57 0,51 0,53 0,11 0,13

Äthano1/η-He-

xan (2:98) 0 0 0 00 00 00

Aluminiumoxid F

Lösungs- Α_Λ A₀ A-. A. B. B₀ B, C₁ C₀ mittel- ' ^d * * ^Ί ^d * ^j ^ά system

Aceton/n-He-

xan (3C-.70) 0,55 0,16 0,32 0,34 0,67 0,92 0,92 0 0

Äthylacetat/

Benzol (50:

50) 0,56 0,10 0,21 0,23 0,73 0,81 0,83 0 0

Äthylacetat/ Chloroform

(25:75) 0,40 0,10 0,15 0,17 0,63 0,65 0,67 0 0

Aceton/Ben-

zol (15:75) 0,27 0,05 0,09 0,11 0,35 0,45 0,47 0 0

Äthano1/η-He-

xan (2:98) 0,17 0,03 0,07 0,09 0,20 0,42 0,44 0 0

3U y 8 S 1 / 1 2 1 6

Aus den oben angegebenen physikocheraisehen Eigenschaften, insbesondere den Massenspektren mit hoher Auflösung, sowie aus den Ergebnissen der Röntgenanalyse ergab sich die folgende ebene Strukturformel für die Substanzen A,, A,, B„, B₃, C^ und C₂ von B-41:

R,-

^Λ3	H	CHj	CKj	C₂H
^Α4	H	CH₂	C₂Ii₅
^Β2	CHj	CHj	CHj
^Β3	CHj	CHj	C₂H₅
^Cl	H	-ΠΗ^.000	CHv
			j
C₂	H

Gleichermaßen ergab sich für A₁ von B-41 die folgende Strukturformel:

CH.

⁰Vl <> .A

OCH₂ 3 U 9 H 5 i / 1 2 1 G

Die Strukturen von Ap und IL von B-41 sind noch nicht aufgeklärt. Aus der Aufspaltung der Massenspektren kann jedoch geschlossen werden, daß diese Verbindungen eine ähnliche chemische Struktur wie die Substanzen A^, A^, A,, B^, B^, Ο,, und Cp haben.

Nachdem keine bekannten antibiotisehen Substanzen existieren, die die angegebenen chemischen Strukturen und die angegebenen physikochemisehen Eigenschaften besitzen, muß es sich bei der erfindungsgemäßen Substanz B-41 um ein neues Antibiotikum handeln.

Der Stamm B-41-146 der Art Streptomyces, der das Antibiotikum B-41 erzeugt, hat die unten angegebenen mykologischen Eigenschaften.

1. Morphologische Eigenschaften:

Auf den meisten Laboratoriumsmedien entwickelte sich aus einem feinverzweigten Substratmycelium ein langes, luftiges Mycelium, das Windungen mit Spiralen oder Schleifen bildete.

Im Anfangsstadium wurden keine Aufspaltungen des Myceliums beobachtet.

Es bildeten sich mehr oder weniger kurze v/arzige Sporen mit Abmessungen von 0,6 - 0,9 x 1,1 - 1,5 η in Ketten mit 10 bis 50 Konidien.

Auf den Oberflächen der Sporen waren verhältnismäßig kurze warzige Vorsprünge.

Sporenträger und Verharzungen wurden nicht beobachtet.

-10-3 U y 8 5 1 / 1 2 1 6

- 1ΰ

2. Wachstumseigenschaften auf verschiedenen Medien:

a) Saccharosenitratagar:

Gutes Wachstum; Substratiriycelium farblos; vungekehrtes Mycelium hellbraun; Luftmyceliurn spärlich, halbtransparent, lederartig'; lösliches Pigment hellbraun.

b) Glucoseasparaginagar:

Üppiges Wachstum, Substratmyceliirn farblos; umgekehrtes Substrat hellbraun; Luftmycelium üppig, graugefärbt; lösliches Pigment hellbraun.

c) Glycerinasparaginagar:

Üppiges Wachstum; Substratnycelium farblos; umgekehrtes Substrat hellbraun; Luftmycelium weiß, wobei sich auf einer Schrägkultur auf einem weißen Hintergrund viele glänzend grau-braune Flekken bildeten; lösliches Pigment gelb-grau.

d) Anorganische Salze-Stärkeagar:

Üppiges Wachstum; Substratmycelium farblos; umgekehrtes Mycelium gelblich-grau; Luftmycelium grau, wobei sich auf einer Schrägkultur auf einem grauen Hintergrund viele fahlgelbliche Flecken bildeten; lösliches Pigment glänzend olivgrün.

e) Tyrosinagar:

üppiges Wachstum; Substratmycelium grau-gelbbraun; umgekehrtes Mycelium braun; Luftmycelium grau, wobei sich auf einer Schrägkultur auf einem grauen Hintergrund manchmal gelbliche graue Flekken bildeten; lösliches Pigment glänzend braun.

f) Nährstoffagar:

Schlechtes Wachstum; Substratmycelium farblos; umgekehrtes Mycelium hellbraun; Luftmycelium spär-

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3U9851/121G

lieh, weiß; kein lösliches Pigment gebildet.

g) Hefeextrakt-Malzextraktagar:

Üppiges Wachstum; Substratmycelium grau-gelbbraun; umgekehrtes Mycelium gelblich braun; LuiCtmycelium üppig, grau, wobei sich auf einer Schrägkultur auf einem grauen Hintergrund viele hellgelbe Flecken bildeten; lösliches Pigment . gelb.

h) Haferraehlagar:

Üppiges Wachstum; Substratmycelium farblos; umgekehrtes Mycelium olivgrün; Luftmycelium grau, wobei sich auf einer Schrägkultur hellgelbe Flekken bildeten; lösliches Pigment fahl oliv.

Physiologische Eigenschaften:

a) Wachstumstemperaturbereich: 18 bis 37⁰C; Optimale Wachstumstemperatur: 25 bis 30⁰C.

b) Verflüssigung von Gelatine: Langsam, jedoch stark positiv.

c) Hydrolyse von Stärke: Stark positiv.

d) Koagulation von Magermilch: Positiv (28⁰C).

e) Peptonisierung von Magermilch: Positiv (28 C).

f) Melaninbildung: Negativ.

g) Reduktion von Nitrat: Positiv.

h) Verwertung von verschiedenen Kohlenstoffquellen (Pridham und Gottlieb Agar)
Verwertungsgrad:
+++ Raffinose
++ D-Glucose, D-Fructose, Saccharose, L-Rhamnose,

I-Inosit, D-Mannit + L-Ar&binose, D-Xylose.

-12-

3 υ .- η 5 1 / 1 2 1 G

Aus den obigen charakteristischen Eigenschaften geht hervor, daß dieser Stamm Streptomyces chattanoogensis (International Journal of Systematic Bacteriology, Band 18, Nr. 2, Seite 97 (1968)) eng nahesteht. Jedoch bestehen folgende Unterschiede der beiden Stämme:

1; Der Stamm B-41-146 bildet üppig Wirbel, während S.chattanoogensis sich monopodial verzweigt.

2. Die Sporenoberflache des Stamms B-41-146 ist warzig, während diejenige von S.chattanoogensis dornig ist.

3. Auf Hefemalzextraktagar und einem anorganischen SaI-ze-Stärkeagar bildete der Stamm B-41-146 fahl- bzw. hellgelbe Flecken an einem grauen Hintergrund, was bei S.chattanoogensis nicht der Fall war.

4. Der Stamm B-41-146 assimiliert L-Arabinose, D-Xylose und I-Inosit, während S.chattanoogensis diese Kohlenstoff quellen nicht assimiliert.

Aufgrund der obengenannten vier Unterschiede der mykologischen'Eigenschaften wurde geschlossen, daß der Stamm B-41-146 eine neue Art von Streptomyces ist. Der Stamm B-41-146 wurde am Research Institute of Industrial Technology of Microorganisms, Agency of Industrial Science and Technology in Japan mit der Hinterlegungsnuramer Bikokenkinki Nr. 1438 hinterlegt.

Bekanntlich neigen Actinomyceten in der Natur und durch Anwendung von künstlichen Maßnahmen, wie UV-Bestrahlung, Strahlungsreizung, chemischen Behandlung, zu einer Mutation. Dies trifft auf den erfindungsgemäß verwendeten

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3 (J 9 8 5 1 / 1 2 1 6

B-41-146 zu. Die hierin verwendete Bezeichnung "Stamm B-41-146" soll sämtliche solche Mutanten einschließen. Somit fallen sämtliche Stämme, die die antibiotische Substanz B-41 erzeugen, und die nicht klar von dem Stamm B-41-146 und seinen Mutanten unterscheidbar sind, unter den Begriff »Stamm B-41-146".

Bei dem Verfahren der Erfindung wird die antibiotische Substanz B-41 erhalten, indem man den Stamm B-41-146 in einem geeigneten Medium züchtet und sodann die erhaltene Substanz aus dem Medium isoliert. Der Stamm kann in stationären Kulturen gezüchtet v/erden. Wenn das Antibiotikum in großen Mengen hergestellt werden soll, dann ist es vorzuziehen, den Stamm in einer Flüssigkeitskultur unter Belüftung und Durchbewegung zu züchten.

Als Kulturmedien können alle diejenigen verwendet v/erden, die normalerweise zur Züchtung von Stämmen der Art Streptomyces eingesetzt werden. Beispiele für geeignete Kohlenstoff quellen sind Stärke, Dextrin, Glucose, Maltose, Maisquellflüssigkeit und Molassen. Beispiele für geeignete Stickstoffquellen sind Fleischextrakt, Peptone, Hefeextrakt, Soyabohnenmehl, Kasein, Ammoniumsulfat und Ammoniumnitrat. Erforderlichenfalls können Kalium-, Calcium-, Magnesium-, Eisen-, Kupfer-, Zink-, Mangan-, Kobalt- und ähnliche anorganische Salze sowie Spurenelemente zugesetzt werden.

Zur Gewinnung des Antibiotikums B-41 aus der Brühe können herkömmliche Arbeitsweisen angewendet werden, beispielsweise eine Extraktion mit einem organischen Lösungsmittel in Gegenwart oder in Abwesenheit eines Adsorbens oder eines Hilfsmittels. In diesem Falle können die Zellen durch Filtration von der Brühe abgetrennt und sodann mit organi-

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309861/1216

sehen. Lösungsmitteln, wie Methanol oder Aceton, extrahiert werden. Man kann aber auch die Brühe direkt einer Extraktion mit organischen Lösungsmitteln, wie Chloroform, Äthylacetat, Benzol, η-Hexan oder Cyclohexan, unterwerfen.

Zur Reinigung des öligen rohen B~41, das durch Entfernung des Lösungsmittels von dem Extrakt erhalten wird, können bekannte Reinigungsmaßnahmen, beispielsweise eine Säulenchromatographie oder eine Extraktion mit Lösungsmitteln, angewendet werden.

Die Erfindung wird in den Beispielen erläutert. In diesen Beispielen wurde die Aktivität der Brühe durch Eintauchen von zweifleckigen Spinnenmilben bestimmt. Hierzu wurde so verfahren, daß Blätter von weißen Bohnen, die mit den zv/eifleckigen Spinnenmilben befallen v/aren, 1 Minute in einen 70%igen Acetonextrakt der Brühe oder in dessen wäßriger Verdünnung eingetaucht und sodann an der Luft getrocknet wurden. Nach 24 Stunden wurde die acarizide Aktivität gemessen, wodurch die Aktivität ermittelt wurde.

Beispiel 1

30 1 eines flüssigen Kulturmediums (pH-Wert etwa 7,2), welches 2,O?6 Glucose, 1,O?o Soyabohnenmehl und 0,2% Natriumchlorid enthielt, wurden in einen 50-1-Gärungsbehälter gebracht und sodann durch Erhitzen sterilisiert. Der Stamm B-41-146 wurde in das Medium inokkuliert und einer aerobischen Rührkultur bei einer Temperatur von 28°C, einer Belüftung von 8 l/min und einem Rühren von 250 Upm unterworfen. Nach 120-stündiger Durchführung der Kultivierung zeigte die Brühe eine brilliant-gelbe Färbung. Zu diesem Zeitpunkt wurde die Kultivierung unterbrochen und die Aktivi-

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30 y8 51 /1216

tat wurde bestimmt. Dabei wurde festgestellt, daß eine 300-fache Verdünnung der Brühe eine acarizide Aktivität von 100% zeigte. Sodann wurden die Zellen durch Filtration von der Brühe abgetrennt und mit Aceton extrahiert. Sodann wurde das Aceton abdestilliert, wodurch A4 g einer braunen Substanz erhalten wurden. Diese Substanz wurde mit heißem Hexan extrahiert, worauf das Hexan abdestilliert wurde. Der Rückstand wurde in einer geringen Menge Methanol aufgelöst. Die erhaltene Lösung vrurde über Nacht bei -20⁰C stehengelassen, wodurch ein Niederschlag zur Ausfällung kam. Dieser wurde entfernt. Sodann wurde das Methanol abdestilliert, wodurch 35 g einer braunen öligen Substanz erhalten wurden. Die auf diese Weise erhaltene ölige Substanz wurde einer Chromatographie auf einer Aluminiumoxidsäule unterworfen. Es wurde mit Chloroform eluiert. Wirksame Fraktionen wurden entsprechend der acariziden Aktivität gesammelt. Sodann wurde die Chloroformlösung konzentriert. Dieses Vorgehen wurde mehrmals wiederholt, wodurch 8,2 g einer rohen Substanz erhalten wurden. Die acarizide Aktivität der rohen Substanz betrug bei Verwendung mit einer Konzentration von 2 ug/ml 100^.

Die rohe Substanz wurde durch eine Säule geleitet, die mit "Sephadex LH-20" (Warenzeichen für ein Produkt der Pharmacia Co.) gefüllt war, und mit Methanol eluiert. Hierdurch wurden die Substanzen Ap, B., Bp, A-, und A₁, die die Hauptkomponenten von B-41 sind, in dieser Reihenfolge eluiert. Diese Substanzen hatten sich jedoch miteinander über-.läppt und wurden daher getrennt in Form von zwei Gruppen von B-i+Ap und Bp+A.+A, gewonnen. Die B.+Ap-Gruppe wurde einer Chromatographie auf einer Silicagelsäule unterworfen und sodann mit Chloroformäthylacetat eluiert. Auf diese Weise wurden 210 mg B^ und 115 mg Ap erhalten. Die B₀+

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A₁,+A^-Gruppe wurde einer Silicagel-Säulenchromatographie unterworfen, wodurch 200 mg Bp und 30 mg B^, das B₂ ähnlich war, erhalten wurden. Hierauf wurde die zurückbleibende A₁+A-2-Gruppe einer Aluminiumoxidsäulen-Chromatographie unterworfen, wodurch 372 mg A₁, 42 mg A-. und 15 mg A. , das A-, ähnlich v/ar, erhalten wurden. Die Aluminiumoxid- §äule, durch welche die vorstehend beschriebene braune ölige Substanz geleitet, worden war, wurde weiterhin mehrfach mit Methanol eluiert. Es erfolgte damit eine Silicagelsäulen-Chromatographie, wodurch 78 mg C₁ von B-41 und 52 mg C₂ von B-41 erhalten wurden.

Zur Herstellung der Insektiziden und acariziden Mittel der vorliegenden Erfindung werden eine oder mehrere der auf diese V/eise erhaltenen Substanzen A₁, A₂, A,, A., B₁, B₂, B,, C₁ und Cp von B-41 mit einem Träger verdünnt und erforderlichenfalls mit anderen Hilfsstoffen versetzt. Auf diese Weise können die Substanzen zu Stäuben, Granulaten, feinen Granulaten, befeuchtbaren Pulvern, emulgierbaren Konzentraten, Ölsprays und dergleichen konfektioniert werden. Die Reinigung kann naturgemäß bei einer gewünschten Stufe der Reinigung unterbrochen werden und die resultierende, noch nicht vollständig gereinigte Substanz kann ebenfalls als Wirkstoff verwendet werden. Im Falle, daß eine solche rohe Substanz wie sie ist als Wirkstoff verwendet werden soll, reicht es aus, daß die rohe Substanz so gereinigt wird, daß diese bei einer Konzentration von 5 ppm eine acarizide Aktivität von 100% erhält. In diesem Falle beträgt der Gehalt von B-41 in der rohen Substanz etwa 5O?o. Der Rest sind Verunreinigungen aus der Brühe.

Unter "Träger" soll hierin eine synthetische oder natürliche, anorganische oder organische Substanz verstanden

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werden, welche einem Insektizid zugesetzt wird, damit der Wirkstoff leicht die angestrebten Ziele, beispielsweise Pflanzen, Milben, schädliche Insekten etc., erreichen kann oder damit die Lagerung, der Transport oder die Handhabung des Wirkstoffs erleichtert wird.

Beispiele für geeignete feste Träger sind anorganische Substanzen, wie Ton, Talk, Diatomeenerde, Kaolin, Bentonit, Calciumcarbonat und synthetisches Calciumsilikat, natürliche und synthetische Harze, wie Coumaronharze, Alkylharze und Polyvinylchlorid, Wachse, wie Carnaubawachs und Paraffinwachs, Hüllen von Nüssen, v/ie von Walnüssen und Kokosnüssen, und Soyabohnenmehl.

Beispiele für geeignete flüssige Trägar sind Wasser, Alkohole, wie Äthanol, Isopropanol und Äthylenglykol, Glykoläther, wie Äthylenglykolmonophenyläther, und Dläthylenglykolmonoäthyläther, Ketone, wie Aceton, Methylisobutylketon, Cyclohexanon, Acetophenon und Isophoron, Äther, wie Tetrahydrofuran und Dioxan, aromatische Kohlenwasserstoffe, wie Benzol, Toluol, Xylol und Methylnaphthalin, chlorierte Kohlenwasser stoffe, v/ie Trichlorethylen und Tetrachlorkohlenstoff, und niedrig-, mittel- und hochsiedende Petroleumfraktionen, wie Kerosin, Leichtöle oder aromatische Kohlenwasserstoffe.

Beispiele für geeignete Treibmittel sind Furongase, verflüssigte Erdgase, Methyläther und Vinylchloridmonomere.

Zur Emulgierung, Dispergierung, Benetzung oder Ausbreitung v/erden oberflächenaktive Mittel, die ionogen oder nichtionogen sein können, verwendet. Beispiele für geeignete anionische oberflächenaktive Mittel sind Natrium- und CaI-ciumsalze von Lignosulfonsäure, Natrium- und Kaliumsalze

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von Ölsäure, das Natriumsalz von Laurylsulfonsäure und die Natrium- und Calciumsalze von Dodecylbenzolsulfonsäure. Beispiele für geeignete kationische oberflächenaktive Mittel sind höhere aliphatische Amine und Äthylenoxidkondensate von höheren aliphatischen Aminen. Beispiele für geeignete nicht-ionogene oberflächenaktive Mittel sind die Glyceride von Fettsäuren, Saccharoseester von Fettsäuren, Äthylenoxidkondensate von höheren aliphatischen Alkoholen, Äthylenoxidkondensate von höheren Fettsäuren, Äthylenoxidkondensate von Alkylphenolen und von Alkylnaphtholen und Copolymere von Äthylenoxid mit Propylenoxid.

Die insektiziden und acariziden Mittel der vorliegenden Erfindung können ein Schutzkolloid, wie Gelatine, Gummi arabikum, Kasein, Polyvinylalkohol oder Carboxymethylcellulose, oder ein thixotropischer Mittel, wie Natriumpolyphosphat oder Bentonit enthalten. Die erfindungsgeinäßen Mittel können weiterhin andere Verbindungen mit insektiziden und acariziden Aktivitäten, wie 2-(i-Methylpropyl)-4,6-dinitrophenyl-ß,ß-dimethylacrylat, Di-(p-chlorphenyl)-cyclopropylcarbinol, N'- (2-Methyl~4-chlorphenyl )--N, N-dimethyiformaraidin, 2,4,4',5-Tetrachlordiphenylsulfon, 1,1-Bis(p-chlorphenyl)-2,2,2-trichloräthanol, O,O-Diäthyl-S-(2-äthylthio)äthyl-phosphordithioat, O,O-Dimethyl-S-(N-methyl-N-formylcarbamoylmethyl)phosphordithioat, 2-sec-Butylphenyl-N-methylcarbamat oder m-Tolyl~N-methylcarbamat, oder ein Mineralöl enthalten, wodurch die Wirkungen des Mittels gesteigert werden und in manchen Fällen synergistische Wirkungen erwartet werden können. Naturgemäß können die erfindungsgemäßen Mittel im Gemisch mit Fungiziden, Herbiziden, Pflanzenwachstumsregulatoren, Anziehungsmittel, Düngemittel und dergleichen verwendet werden.

-19-3 Ü a 8 5 1 / 1 2 1 G

Die Wirkungen der Insektiziden und acariziden Mittel der vorliegenden Erfindung werden anhand der folgenden Versuchsbeispiele erläutert.

Versuchsbei spiel_l

Emulgierbare Konzentrate, die jeweils 20?j der Substanzen A., Ap, A,, A^, B^₁ Bp, B₇, C₁ -and C₀ von B-41 enthielten, die nach der Arbeitsweise des Beispiels 1 isoliert worden waren, wurden zu einer gegebenen Konzentration verdünnt. Blätter von weißen Bohnen, die mit zweifleckigen Spinnenmilben befallen waren, wurden eine Minute lang in die hierdurch erhaltene Lösung getaucht und sodann an der Luft getrocknet. Nach 24 Stunden wurde die acarizide Aktivität (50 errechnet. Die erhaltenen Ergebnisse sind in der folgenden Tabelle zusammengestellt:

-20-

3 υ 9 8 5 1 / 1 2 1 G

Konzentration (ppm)

Fraktion

20

10

2,5

0,63

0,31

0,16

0,08

0,04

³1 ³2 ^B3 ^C1 ^C2

Vergleichssubstanz*

100	100	100	19	,9	.)
100	100	100	67	,6	0
100	100	100	100		100
100	100	100	100		100
98,1	81,5	69,2	20	,0	0
100	100	100	100		100
100	100	100	100		100
100	100	100	100		100
100	100	100	100		100

100

56,4

100	100	93,	2	100	)	15,2	232!
100	100	100		100	21,3	UJ -Γ ΟΟ
100	80,5	16,	6	0
100	100	74,	1	18,3	0
100	100	100		100	51,8
100	100	100		100.	97,3

1 (Warenzeichen	"Kelthane";

Versuchsbeispiel 2

Ein emulgierbares Konzentrat, das 20% der rohen Substanz B-41 enthielt, die erhalten worden war, indem die braune ölige Substanz des Beispiels 1 zweimal einer Aluminiumoxidsäulen-Chromatographie unterworfen worden war, wurde zu einer gegebenen Konzentration verdünnt. Die erhaltene Lösung wurde auf Apfelblätter aufgesprüht, die mit etwa 100 europäischen Rotmilben befallen waren. 5 Tage später wurde die Anzahl der noch lebenden Milben ermittelt. Die erhaltenen Ergebnisse sind in der folgenden Tabelle zusammengestellt:

200 ppm 100 ppm 50 ppm

Rohes B-41	5/108	14/121	50/115
Vergleichssubstanz
(Kelthane)	0/97	8/103	56/128
Nicht behandelt		88/102

(Der Zähler gibt die Anzahl der Milben an, die zum Zeitpunkt des Zählens lebten. Der Nenner gibt die Anzahl der Milben vor dem Sprühen an).

Versuchsbeispiel 3

Emulgierbare Konzentrate, die 20% eines rohen B-41 (das durch Reinigung der im Beispiel 1 hergestellten braunen öligen Substanz durch Silicagel-Säulenchromatographie erhalten worden war) und ein rohes A.+Ap+A,-Gemisch (das durch säulenchromatographische Reinigung des rohen B-41 unter Verwendung eines Mischlösungsmittels aus 50:50 Äthylacetat und Benzol erhalten worden war) enthielten, wurden zu einer gegebenen Konzentration verdünnt. Die Lösungen wurden auf Orangenblätter aufgesprüht, die mit Zitrus-Rot-

-22-309851/1216

milben befallen waren. Nach 24 Stunden wurde die acarizide Aktivität (%) ermittelt. Die erhaltenen Ergebnisse sind in der folgenden Tabelle zusammengestellt:

20 ppm 10 ppm 7 ppm 3,3ppra

Rohes Β-41 100# 85,5?£

Rohes A.+A₉+A,-

Gemisch' ^ ^ 100 100

Vergleichs substanz (Kelthane) 90,9 30,8

Versuchsbeispiel 4

Emulgierbare Konzentrate, die 2O?o eines rohen Λ.+B.-Gemisches B-41 (erhalten durch dreimalige Reinigung der in Beispiel 1 hergestellten braunen öligen Substanz durch Silicagel-Chromatographie mit 70:30 η-Hexan:Aceton) und ein rohes A₂+A^+Bp-Gemisch von b-41 (in der gleichen Weise wie das erstere Gemisch erhalten) enthielten, wurden zu einer gegebenen Konzentration verdünnt. Die Lösung wurde auf Chinakohl aufgesprüht, der mit grünen Pfirsichblattläusen befallen war. Nach 24 Stunden wurde die Sterblichkeit (%) der Blattläuse bestimmt. Die erhaltenen Ergebnisse sind in der folgenden Tabelle zusammengestellt:

250 ppm 25 ppm 2,5 ppm

Rohes A₁+B₁- Gemisch	100%	92	,3%	64,	2%
Rohes A^+A^+B,,- Gemisch^ ^{D c}	100	89	,8	52,	8
Vergleichssubstanz**	100	73	,1	33,	1

** 0,O-Dimethyl-0-(2,2-dichlorvinyl)phosphat.

-23-

309861/12 16

2329A86

Versuchsbeispiel 5

Eier des Reisstammbohrers der ersten Generation wurden auf Reispflanzen (Abart "Kinmaze") inokkuliert. Die Pflan-

zen waren in 200-cm -Topfen eingepflanzt. Die Eier wurden ausbrüten gelassen, damit die Larven die Stämme befallen konnten. Sodann wurde ein befeuchtbares Pulver, das 40% des rohen B-41 enthielt, erhalten wurde zweimalige Reinigung der braunen öligen Substanz des Beispiels 1 durch eine Aluminiumoxid-Säulenchromatographie, zu einer gegebenen Konzentration verdünnt und sodann in einer Menge von 100 cnr⁵ Je Topf auf die Pflanzen aufgesprüht. 5 Tage danach wurden die Stämme bzw. Stengel aufgespalten, um die Anzahl der lebenden und toten Larven zu bestimmen. Daraus wurde die Sterblichkeit der Larven (%) errechnet. Die erhaltenen Ergebnisse sind in der folgenden Tabelle zusammengestellt:

100 ppm 50 ppm

Rohes B-41 100% 79,4%

Vergleichssubstanz *** 82,1 25,5

*** 0,0-Diäthyl-0-(2-isopropyl-4-methyl-6-pyrimidinyl)pho sphorthio at.

Aus den Versuchsbeispielen 1 bis 5 wird ersichtlich, dafi die antibiotische Substanz B-41 eine ausgezeichnete insektizide und acarizide Aktivität besitzt und daß sie insbesondere auf Milben einen stärkeren Einfluß ausübt als die herkömmlichen Chemikalien.

Nachstehend werden Arbeitsmethoden zur Herstellung der Insektiziden und acariziden Mittel der vorliegenden Erfindung als Herstellungsbeispiele angegeben. Darin sind alle Teile auf das Gewicht bezogen.

-24-

30985 1/12 16

2329A86

Herstellungsbeispiel 1

10 Teile eines rohen B-41, erhalten durch zweimalige Silicagel-Säulenchromatographie der im Beispiel 1 erhaltenen braunen öligen Substanz, wurden homogen mit 5 Teilen Kieselsäure, 50 Teilen Talk und 35 Teilen Ton vermischt. Das erhaltene Gemisch wurde dreimal mittels eines Schlag-Pulverisierungsapparat pulverisiert und zu einem Staub homogenisiert.

Herstellunffsbeispiel 2

40 Teile des gleichen B-41 wie im Herstellungsbeispiel 1 wurden homogen mit 20 Teilen Kieselsäure, 5 Teilen Natriumdodecylbenzolsulfonat, 2 Teilen Polyvinylalkohol und 33 Teilen Ton vermischt. Das resultierende Gemisch wurde dreimal unter Verwendung eines Schlag-Pulverisierungsapparats pulverisiert und sodann zu einem befeuchtbaren Pulver homogenisiert.

Herstellungsbeispiel 3

20 Teile des gleichen rohen B-41 wie im Herstellungsbeispiel 1 wurden homogen mit 7 Teilen Polyoxyäthylennonylphenyläther, 3 Teilen Calciumdodecylbenzolsulfonat und 70 Teilen Xylol vermischt. Das resultierende Gemisch wurde filtriert, wodurch ein emulgierbares Konzentrat erhalten wurde.

Herstellungsbeispiel 4

10 Teile des gleichen rohen B-41 wie im Herstellungsbei spiel 1 wurden in 10 Teilen Xylol aufgelöst. Die erhalte ne Lösung wurde mit 80 Teilen eines Maschinenöls ver mischt und sodann filtriert, wodurch ein Ölspray erhalten wurde.

-25-309851 /12 16

Claims

Patentansprüche

steht und FU eine M<=>-

worin FL ein Wasserstoffatom oder eine Methylgruppe bedeutet, R₉ für eine Methylgruppe oder eine Pyrroyloxymethyl-

gruppe der Formel -CH₂OOC[I

thylgruppe oder Äthylgruppe bedeutet, mit der Maßgabe, daß, wenn FL ein Wasserstoffatom ist, R₂ eine Methylgruppe oder eine Pyrroyloxymethylgruppe und R, eine Methylgruppe oder Äthylgruppe ist, und, wenn R^ eine Methylgruppe ist, R₂ eine Methylgruppe und R^ eine Methylgruppe oder Äthyl gruppe ist.
2. Verbindung nach Anspruch 1, dadurch g e k e η η zeichnet, daß R,. ein V/asser stoff atom, R₂ eine Methylgruppe und R-, eine Methylgruppe bedeuten.
3. Verbindung nach Anspruch 1, dadurch g e k e η η zeichnet, daß R^ ein Wasserstoffatom, R₂ eine Methylgruppe und R, eine Äthylgruppe sind.

-26-

30y8b1 /12 16
4. Verbindung nach Anspruch 1, dadurch g e k e η η zeichnet , daß R₁ eine Methylgruppe, Rp eine Methylgruppe und R, eine Methylgruppe .sind.
5. Verbindung nach Anspruch 1, dadurch g e k e η η zeichnet , daß R^ eine Methylgruppe, R„ eine Methylgruppe und R^ eine Äthylgruppe sind.
6. Verbindung nach Anspruch 1, dadurch g e k e η η zeichnet, daß R^ ein Wasserstoffatom, R_p eine Pyrroyloxymethylgruppe und R₇ eine Kethylgruppe sind.
7. Verbindung nach Anspruch 1, dadurch g e k e η η zeichnet , daß R^ ein Wasserstoffatorn, R_? eine Pyrroyloxymethylgruppe und R-^ eine Äthylgruppe sind.
8. Verbindung der folgenden Formel

CH
9. Antibiotische Substanz B-41 -A₂ mit einer Aktivität gegen schädliche Insekten, dadurch gekenn zeich .net, daß sie ein farbloses amorphes Pulver, das in Wasser schwer löslich und in η-Hexan, Benzol, Aceton, Äthanol und Chloroform leicht löslich ist, eine Summenformel von ^·58^Η55^-|0' ^eine Zusammensetzung von 71,73% Kohlenstoff und 8,26?c Wasserstoff und die folgenden Eigen-

-27-

3 Ü 9 8 S i / 1 2 1 ο

schäften aufweist: Molekulargewichte von 672,1, erhalten nach der osmometrischen Methode in Aceton, und von 672 nach der massenspektroskopisehen Methode, eine spezifische Drehung von (<yO)ß = +54°, erhalten bei einer Konzentration der Probe von 5 mg/2 ml und der Länge der Schicht von 10 cm in Aceton, keinen pKa-Wert bei einem pH-Wert im Bereich von 2 bis 12, ein Absorptionsmaximum im ultravioletten Teil des Spektrums bei 245 mu, charakteristische Absorptionsbanden des Infrarotspektrums gemäß Figur 11, ein magnetisches Kernresonanzspektrum in (CD.,)«· CO gemäß Figur 20, Hauptpeaks des Massenspektrums bei 672, 181, 153 und 151, erhalten bei den Bedingungen von 75 eV bei einer Ionisationsraumtemperatur von 200⁰C und einer Probetemperatur von 120 bis 190°C, und den folgenden Farbreaktionen bei der Dünnschichtchromatographie: gelb bei Jod/Chloroform, negativ bei Ninhydrin, rötlich purpurfarben bei Schwefelsäure und gelb bei Kaliumpermanganat.
10. Antibiotische Subtitan:; B-41-B. mit einer Aktivität gegen schädliche Insekten, dadurch gekennzeichnet, daß sie eine farblose Substanz ist, die in Wasser schwer löslich und in η-Hexan, Benzol, Aceton, Äthanol und Chloroform leicht löslich ist, eine Suinmenformel von C^gH^gO^Q, eine Zusammensetzung von 68,00% Kohlenstoff und 8,32% Wasserstoff und die folgenden Eigenschaften aufweist: einen Schmelzpunkt von 176 bis 178°C, Molekulargewichte von 629,5, erhalten nach der osmometrischen Methode in Aceton, und von 686 nach der massenspektroskopi sehen Methode, eine spezifische Drehung von (oC)]} = +75 , erhalten bei einer Konzentration der Probe von 5 iag/2 ml und einer Länge der Schicht von 10 cm in Aceton, keinen pKa-Wert bei einem pH-Wert im Bereich von 2 bis 12, ein Absorptionsmaximum im ultravioletten Teil des Spektrums bei 245 mn, charakteristische Absorptions-

-28-309851/1216

banden des Infrarotspektrums gemäß Figur 14, ein magneti sches Kernresonanz spektrum in (CXOp'CO gemäß Figur 23, Hauptpeaks des Massenspektrums bei 686, 414, 195, 167, 151 und 125, erhalten bei den Bedingungen von 75 eV bei einer Ionisationsraumtemperatur von 200⁰C und einer Probetemperatur von 120 bis 190⁰C, und den folgenden Farbreaktionen bei der Dünnschichtchromatographie: gelb bei Jod/Chloroform, negativ bei Ninhydrin, rötlich purpurfar ben bei Schwefelsäure und gelb bei Kaliumpermanganat.
11. Verfahren zur Herstellung der antibiotischen Substanzen B-AI-A₁, B-Vl-A₂, B-41-A B-41-A^, 3-41-B₁, B-41-B₂, 3-41-C₁ und B-41-C₂, dadurch gekennzeichnet , daß man einen B-41 erzeugenden Stamm der Art Streptomyces züchtet und daß man die antibiotischen Substanzen entweder für sich oder in der Form von Gemischen aus der Fermentationsbrühe gewinnt.
12. Verfahren nach Anspruch 11, dadurch gekennzeichnet
verwendet.

daß man als Stamm den Stamm B-41-146
13. · Acarizide Mischung für die Landwirtschaft, dadurch gekennzeichnet , daß sie als Wirkstoff wenigstens eine der antibiotischen Substanzen

von Verbindungen der Formel

-29-

309851/1216

worin R₁ ein Wasserstoffatom oder eine Methy!gruppe bedeutet, R₂ für eine Methylgruppe oder eine Pyrroyl-

oxymethylgruppe der Formel -

steht und

■tr

R^, eine Methylgruppe oder Äthylgruppe bedeutet, mit der Maßgabe, daß, wenn R^ ein YJasserstoffatom ist, Rp eine Methylgruppe oder eine Pyrroyloxytnethylgruppe und R-, eine Methylgruppe oder Äthylgruppe ist, und, wenn R^ eine Methylgruppe ist, R₂ eine Methylgruppe und R, eine Methylgruppe oder Äthylgruppe ist,

b) die Verbindung der Formel

eine Substanz, die ein farbloses amorphes Pulver ist, das in V/asser schwer löslich und in η-Hexan, Benzol, Aceton, Äthanol und Chloroform leicht löslich ist, eine Summenformel von ^-50^56^10» ^eine Zusammensetzung von 71,73% Kohlenstoff und 8,26% Wasserstoff land die folgenden Eigenschaften aufweist: Molekulargewichte von 672,1, erhalten nach der osmometrischen Methode in Aceton, und von 672 nach der massenspektrosKopisehen Methode, eine spezifische Drehung von (06 )jj β +54 , erhalten bei einer Konzentration der Probe von 5 mg/2 ml und der Länge der Schicht von 10 cm in Aceton, keinen pKa-Wert bei einem pH-Wert

-30-309851/ 1216

im Bereich von 2 bis 12, ein Absorptionsraaximum im ultravioletten Teil des Spektrums bei 245 mn , charakteristische Absorptionsbanden des Infrarotspektrums gemäß Figur 11, ein magnetisches Kernresonanzspektrum in (CD,)-'CO gemäß Figur 20, Hauptpeaks des Massenspektrums bei 672, 181, 153 und 151, erhalten bei den Bedingungen von 75 eV bei einer Ionisationsraumtemperatur von 200 C und einer Probetoraperatur von 120 bis 190 C, und den folgenden Farbreaktionen bei der Dünnschichtchromatographie: gelb bei Jod/Chloroform, negativ bei Ninhydrin, rötlich purpurfarben bei Schwefelsäure und gelb bei Kaliumpermanganat, und/oder

d) eine Substanz, die eine farblose Substanz ist, die in Wasser schwer löslich und in η-Hexan, Benzol, Aceton, Äthanol und Chloroform leicht löslich ist, eine Summenformel von C^JHLgOx eine Zusammensetzung von 68,00% Kohlenstoff und 8,32>o Wasserstoff und die folgenden Eigenschaften aufweist: einen Schmelzpunkt von 176 bis 178°C, Molekulargewichte von 629,5, erhalten nach der osmometrischen Methode in Aceton, und von 686 nach der massenspektroskopisehen Methode, eine spezifische Drehung von (P )ß

+75°, erhalten bei einer Konzentration der Probe von 5 mg/2 ml und einer Länge der Schicht von 10 ein in Aceton, keinen pKa-Wert bei einem pH-Wert im Bereich von 2 bis 12, ein Absorptionsmaximum im ultravioletten Teil des Spektrums bei 245 rau, charakteristische Absorptionsbanden des Infrarotspektrums gemäß Figur 14, ein magnetisches KernresonanzSpektrum in (CD,)₂'CO gemäß Figur 23, Hauptpeaks des Massenspektrums bei 686, 414, 195, 167, 151 und 125, er-

-31-

3 Ü d H 5 1 / j 2 1 G

halten bei den Bedingungen von 75 eV bei einer Ionisationsraumtemperatur von 200 C und einer Probetemperatur von 120 bis 190°C_f und den folgenden Farbreaktionen bei der Dünnschichtchromatographie: gelb bei Jod/Chloroform, negativ bei Ninhydrin, rötlich purpurfarben bei Schwefelsäure und gelb bei Kaliumperraanganat,

zusammen mit einem landwirtschaftlich annehmbaren Träger enthält.
14. Insektizides Mittel für die Landwirtschaft, dadurch gekennzeichnet, daß es als Wirkstoff wenigstens eine der antibiotischen Substanzen

a) von Verbindungen der Formel

worin R^ ein Wasserstoffatom oder eine Methylgruppe bedeutet, R₂ für eine Methylgruppe oder eine Pyrroyloxymethy1gruppe der Formel -CHLOOcJl ■ _N J] steht und

R, eine Methylgruppe oder Äthylgruppe bedeutet, mit der Maßgabe, daß, wenn R«. ein Wasser stoff atom ist, R₂ eine Methylgruppe oder eine Pyrroyloxymethylgrup-

-32-309851/1216

pe und R, eine Methylgruppe oder Äthylgruppe ist, und, wenn R«. eine Methylgruppe ist, R2 eine Methylgruppe und R, eine Methylgruppe oder Äthylgruppe ist,

b) die Verbindung der Formel

CH.

c) eine Substanz, die ein farbloses amorphes Pulver ist, das in Wasser schwer löslich und in η-Hexan, Benzol, Aceton, Äthanol und Chloroform leicht löslich ist, eine Summenformel von C-rgHt-gO^Q, eine Zusammensetzung von 71,73% Kohlenstoff und 8,26% Wasserstoff und die folgenden Eigenschaften aufweist: Molekular-,. gewichte von 672,1, erhalten nach der osmometrischen Methode in Aceton, und von 672 nach der massenspektroskopischen Methode, eine spezifische Drehung von (oC )p = +54°, erhalten bei einer Konzentration der Probe von 5 mg/2 ml und der Länge der Schicht von . 10 cm in Aceton, keinen pKa-Wert bei einem pH-Wert im Bereich von 2 bis 12, ein Absorptionsmaximum im ultravioletten Teil des Spektrums bei 245 m 11 , charakteristische Absorptionsbanden des Infrarotspektrums gemäß Figur 11, ein magnetisches Kernresonanzspektrum in (CIU)₂*CO gemäß Figur 20, Haupt-

-33-309851/1216

peaks des Massenspektrums bei 672, 181, 153 und 151, erhalten bei den Bedingungen von 75 eV bei einer Ionisationsraumtemperatur von 200 C und einer Probetempera tuijvoii 120 bis 190⁰C, und Hen folgenden Farbreaktionen bei der Dünnschichtchromatographie: gelb bei Jod/Chloroform, negativ bei Ninhydrin, rötlich purpurfarben bei Schwefelsäure und gelb bei Kaliumpermanganat, und/oder

d) eine Substanz, die eine farblose Substanz ist, die in Wasser schwer löslich und in η-Hexan, Benzol, Aceton, Äthanol und Chloroform leicht löslich ist, eine Summenforrael von C^qH^qO^^, eine Zusammensetzung von 68,00% Kohlenstoff und 8,32% Wasserstoff und die folgenden Eigenschaften aufv/eisti einen Schmelzpunkt von 176 bis 178⁰C, Molekulargewichte von 629,5, erhalten nach der ocrnometrisehen Methode in Aceton, und von 686 nach der massenspektroskopisehen Methode, eine spezifische Drehung von +75°, erhalten bei einer Konzentration der Probe von 5 mg/2 ml und einer Länge der Schicht von 10 cm in Aceton, keinen pKa-Wert bei einem pH-Wert im Bereich von 2 bis 12, ein Absorptionsmaximum im ultravioletten Teil decJ Spektrums bei 245 m u , charakterißtische Absorptionsbanden des Infrarotspektrums gemäß Figur 14, ein magnetisches Kernresonanzspektrum in (CD,)₂'C0 gemäß Figur 23, Bauptpeaks des Massenspektrums bei 686, 414, 195, 167, 151 und 125, erhalten bei den Bedingungen von 75 eV bei einer Ionisationsraumtemperatur von 200°C und einer Probetemperatur von 120 bis 190⁰C, und den folgenden Farbreaktionen bei der Dünnschichtchromatographie: gelb bei Jod/Chloroform, negativ bei Ninhydrin, rötlich purpurfarben bei Schwefelsäure und gelb bei Kaliumpermanganat,
zusammen mit einem landwirtschaftlich annehmbaren Träger

enthält.

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