DK152129B - Analogifremgangsmaade til fremstilling af 13-deoxyderivater af c-076 aglyconforbindelser og c-076 aglyconforbindelser til brug som udgangsmaterialer derved - Google Patents

Description

i

DK 152129 B

C-076 er en række macrolider med en kraftig antiparasit-virkning. Forbindelserne kan isoleres fra streptomyces avermitilis forgæringsbouillon, og mikroorganismens mor-phologiske karakteristika såvel som fremgangsmåderne, der 5 anvendes til at isolere C-076 forbindelserne, er fuldstæn dig beskrevet i USA patentskrift nr. 4 310 519.

I tysk offentliggørelsesskrift nr. 2 329 486 beskrives beslægtede makrolide forbindelser betegnet B-41 (Milbemyciner), der udelukkende anvendes som insekticider og acaricider inden 10 for gartneribruget og landbruget. De deri omhandlede forbin delser kan ikke anvendes som terapeutica inden for human eller veterinærmedicinen.

Den foreliggende opfindelse angår en analogifremgangsmåde til fremstilling af hidtil ukendte makrolide 13-deoxy-C-076 15 aglyconforbindelser, der er terapeutisk aktive anthelmintica, med den i krav 1 angivne formel I samt hidtil ukendte macro-lide C-076 aglyconforbindelser til brug som udgangsmaterialer ved analogifremgangsmåden og med den i krav 2 angivne formel II.

20 De kendte C-076 forbindelser kan bedst afbildes med følgende almene formel: R4' cb3 Jyæ3 r1° CH3^

Joh J

O-LjJ--CH3 R3' 2'

DK 152129 B

hvori R^ betegner a-L-oleandrosyl-ci-L-oleandrosegruppen med formlen:

CH3K_^ CH

ch3o- ch3o \ og hvori den stiplede linie angiver en fakultativ binding;

Λ I

R betegner hydroxyl og kun er til stede , dersom den 5 stiplede linie ikke angiver en ekstrabinding; 2 R betegner iso-propyl eller sec-butyl; og 3 i R betegner methoxy eller hydroxy.

Idet der henvises til den foranstående almene formel identificeres de enkelte C-076 forbindelser på følgende måde: 10 C-076 R4 ' R2 R3'

Ala dobbeltbinding sec-butyl -OCH^

Alb " iso-propyl -OCH^ A2a -OH sec-butyl -OCH^ A2b -OH iso-propyl -OCH^

15 Bla dobbeltbinding sec-butyl -OH

Blb " iso-propyl -OH

B2a -OH sec-butyl -OH

B2b -OH iso-propyl -OH

Udgangsforbindelserne med formlen II kan fremstilles ud 20 fra de ovennævnte C-076 forbindelser ved at fjerne a-L- oleandrosyl-a-L-oleandrosegruppen og omdanne hydroxygrup-

DK 152129 B

3 pen ved 13-stillingen, som bliver tilbage , efter at disaccharidet er fjernet, til et halogenatom. Herudover er yderligere derivatisering af 13-deoxy-13-halogen-C-076 forbindelserne mulige f.eks. ved acylering af en eller 5 begge eventuelt tilgængelige hydroxygrupper, ved reduktion af en eventuel 22,23 dobbeltbinding, ved alkylering af eventuelle hydroxygrupper, ved substitution med en alkylthiogruppe ved 23-stillingen, og ved oxiderede variationer deraf.

10 De omhandlede 13-deoxy-C-076 forbindelser har følgende almene formel: R4 CH3

csyL 'f R

} onjl OR3 hvori den stiplede linie angiver en fakultativ binding; o R betegner iso-propyl eller sec-butyl, og R3 betegner hydrogen, methyl eller lavere alkanoyl med 13 1-6 C-atomer.

DK 152129 B

4 er kun til stede, dersom den stiplede linie ikke angiver en ekstrabinding og betegner hydrogen, hydroxy, alkanoyloxy, alkylthio, alkylsulfinyl, alkylsulfonyl eller alkoxy, alle med 1-6 C-atomer i alkyldelen.

C

I den foreliggende beskrivelse med krav skal udtrykket "alkoxy" forstås at omfatte sådanne alkoxygrupper, der indeholder fra 1 til 6 carbonatomer i enten en lige eller forgrenet udformning. Eksempler herpå er methoxy, ethoxy, propoxy, iso-propoxy, butoxy, tert-butoxy, pen-toxy, hexoxy og lignende.

Udtrykkene "alkylthio", "alkylsulfinyl" og "alkylsulfonyl" skal forstås at omfatte sådanne thio, sulfinyl-og sulfonylgrupper, der indeholder en alkylgruppe med fra 1 til 6 carbonatomer i enten en lige eller forgre-15 net kæde. Eksempler herpå er methyl, ethyl, propyl, iso-propyl, butyl, sec-butyl, pentyl, hexyl og lignende.

Udtrykkene "alkanoyl" eller "alkanoyloxy" skal forstås at omfatte sådanne alkanoylgrupper eller sådanne alka-noyloxygrupper, der indeholder fra 1 til 6 carbonatomer 2*-* i enten en lige eller forgrenet udformning. Eksempler herpå er acetyl, propionyl, butyryl, pentanoyl, hexanoyl, pivaloyl og lignende.

Udtrykkene "halogen" eller "halo" omfatter halogenatomerne, fluor, chlor, brom og iod.

^ Fremgangsmåden ifølge opfindelsen er ejendommelig ved det i krav l's kendetegnende del angivne.

De omhandlede forbindelser med formlen I fremstilles således ved en række omsætninger, der omdanner de tilsvarende 13-halogen-C-076 udgangsmaterialer til 13-deoxy-^ forbindelserne. Herudover kan og substituentgrup- perne og den umættede stilling 22,23 omdannes ved omsæt- 5

DK 152129B

ninger af den i krav l's kendetegnde del angivne art for at danne andre substituenter.

Som det let vil fremgå af en undersøgelse af 13-deoxy-C-076 forbindelsernes opbygning er der fem umættetheder i 5 1-rækken af forbindelserne. Som beskrevet i dansk patent ansøgning nr. 4345/78 kan man reducere 22,23 dobbeltbindingen, uden at indvirke på de øvrige fire umættede stillinger eller uden at indvirke på nogen anden funktionel gruppe, der er til stede i molekylet. Det er 10 nødvendigt at udvælge en særlig katalysator til hydrogene- ringen, én der er i stand til selektivt at hydrogenere den mindst hindrede blandt rækken af umættede stillinger.

Den foretrukne katalysator til en sådan selektiv hydrogeneringsfremgangsmåde er en med formlen:

[(R5)3P]3RhX

15 hvori betegner lavere alkyl, phenyl, eller lavere alkylsubstitueret phenyl, og X betegner et halogenatom.

I den foretrukne katalysator betegner phenyl, og X betegner chlor, dvs. forbindelsen tris(triphenylphos-phin)rhodium(I)chlorid, der også kendes under betegnelsen 20 Wilkinsons's homogene katalysator.

Reaktionen udføres under anvendelse af en katalytisk mængde katalysator. Mængden af katalysator er ikke kritisk og fra 0,05 til 0,5 mol af katalysatoren for hver mol udgangsmateriale har været anvendt med held. Molære 25 forhold i området 0,25-0,40 foretrækkes.

Hydrogeneringen udføres i en hydrogenatmosfære, der enten kan være ved atmosfæriske tryk eller indtil ca. 4 atmosfæres tryk i standardlaboratorieudstyr til hydrogene-ring. Sædvanligvis anvendes et opløsningsmiddel for 30 at opløse både udgangsmaterialerne og katalysatoren.

'6

DK 152129B

Foretrukne opløsningsmidler er carbonhydridopløsnings-midler som benzen, toluen, petroleumsethere og andre alkancarbonhydrider. Omsætningen er tilendebragt, når den beregnede mængde hydrogen er optaget ved reaktionen.

5 Dette kræver sædvanligvis fra 16 til 48 timer. Omsætnin gen kan udføres ved fra stuetemperatur til ca. 75 °C, imidlertid foretrækkes stuetemperatur. Hydrogeneringsproduktet isoleres og renses med metoder, der er velkendte af fagmanden.

10 De øvrige reaktioner kan udføres på de 22,23-umættede C-076 forbindelser eller på de hydrogenerede produkter til fremstilling af andre omhandlede forbindelser med formlen I. Medens det er muligt at fuldende de andre reaktioner på C-076 udgangsmaterialet og have hydrogene-15 ringstrinnet som den sidste reaktion, foretrækkes det at udføre hydrogeneringstrinnet inden omsætningerne ved 5- eller 13-stillingen. Fordi 22,23-dobbeltbindingen er noget følsom overfor elektrophil addition, må reaktions-betingelserne for at fjerne sukkergrupperne til fremstil-20 ling af udgangsmaterialerne eller for at acylere hydroxy- grupperne omhyggeligt kontrolleres, dersom 22,23 dobbeltbindingen er til stede. Dersom 22,23 dobbeltbindingen først hydrogeneres, gøres de andre reaktioner lettere.

De acylerede forbindelser ved 5- og/eller 23-stillingerne 25 (er alkanoyl og/eller er alkanoyloxy) fremstilles under anvendelse af acyleringsteknikker, i hvilke reaktionsbetingelserne kan variere afhængigt af reaktiviteten af den hydroxygruppe, der skal acyleres. Dersom der er mere end en hydroxygruppe, der skal acyleres, 30 anvendes forskellige reaktionsbetingelser for at for mindske dannelsen af blandinger.

De foretrukne anvendte acyleringsreagenser er sædvanligvis alkanoylhalogenid, fortrinsvis chloridet, eller alkanoylanhydrid.

DK 152129 B

7

Dersom reaktionerne udføres med halogenidreagenserne, er det ofte fordelagtig i reaktionsblandingen af indbefatte en basisk forbindelse, der er i stand til at reagere med og neutralisere hydrogenhalogenidet, der frigøres un-5 der reaktionsforløbet. Tertiære aminer der foretrækkes er triethylamin, pyridin, 4-dimethylaminopyridin, diisopro-pylethylamin og lignende. Den basiske forbindelse kræves i ækvimolære mængder i forhold til antallet af molekyler hydrogenhalogenid, der frigøres ; imidlertid er et overskud, 10 selv når man anvender den basiske forbindelse som opløs ningsmiddel, ikke skadelig.

Når det drejer sig om Al-aglyconforbindelserne, er der ikke nogen hydroxygrupper, der kan acyleres.

A2-forbindelserne har en enkelt tilgængelig hydroxygruppe 15 ved 23-stillingen, der er i stand til at blive acyleret.

23-Acylforbindelsen kan fremstilles ved at opvarme reaktionsblandingen ved fra stuetemperatur til 100 °C i fra 1 til 24 timer.

Bl-forbindelserne har også en enkelt tilgængelig hydroxy-20 gruppe: nemlig ved 5-stillingen. Reaktionen med det acy- lerende middel udføres i pyridin ved fra 0 °C til stuetemperatur i fra 4 til 24 timer. For at udvinde de acylerede forbindelser, elueres reaktionsblandingen gennem en kromatografisk søjle eller en præparativ lagkromatografisk pla-25 de af aluminiumoxid eller silicagel, og de rensede forbindelser isoleres let. Herudover kan andre teknikker som høj-tryksvæskekromatografi anvendes.

B2-forbindelserne har to hydroxygrupper, der er tilgængelige for substitution: nemlig ved 5- og 23-stillingerne.

30 5,23-diacylforbindelsen kan fremstilles ved at udføre om sætningen ved fra stuetemperatur til 100 °C i fra én til 24 timer. 5-Acylforbindelsen kan fremstilles ved at udføre reaktionen ved fra 0 °C til stuetemperatur i fra 4 til 8

DK 152129B

seres 5,23-diacylforbindelsen med en vandig base som f.eks. vandig natriumhydroxid ved fra stuetemperatur i fra én til 24 timer. 5-Acylgruppen vil hydrolyseres, idet den efterlader 23-monoacylforbindelse.

5 De ovenfor beskrevne acylforbindelser isoleres fra reak tionsblandingen under anvendelse af metoder, der er velkendte af fagmanden.

Forbindelserne, hvor 23-substituenten (R^) betegner alkoxy eller alkylthio, fremstilles ud fra Ι- ΙΟ rækken af forbindelser (forbindelser med 22,23-umætning).

Denne umættethed er mere følsom over for elektrophil addition end andre umættetheder i molekylet, hvorved man ved at kontrollere reaktionsbetingelserne omhyggeligt, kan gøre reaktionen udmærket specifik.

15 Reaktionen udføres i nærvær af en syre og en al- kanol eller en alkylthiol. Reaktionen kan udføres i et inert aprotisk opløsningsmiddel såsom dioxan, tetrahydro-furan eller ether, eller dersom en alkohol eller thiol er tilgængelig i tilstrækkelige mængder, kan alkoholen eller 20 thiolen anvendes i stort overskud, og man behøver ikke det inerte opløsningsmiddel. Velegnede syrer er svovlsyre, hy-drohalogensyre, phosphorsyre, trifluoreddikesyre, trifluor-methansulfonsyre og lignende. Foretrukne hydrohalogensyrer er saltsyre eller hydrogenbromidsyre. Den mest foretrukne 23 syre er svovlsyre. Syren er til stede i reaktionsblandin gen i fra 0,1 til 10 vægt-%. Reaktionen er sædvanligvis løbet til ende ved fra 0 til 50 °C i fra 2 til 24 timer.

Det foretrækkes at omrøre reaktionsblandingen natten over ved stuetemperatur.

30 Af og til kan der findes en ringe mængde 22-additionspro- dukter i reaktionsblandingen. Dette vil være et mindre biprodukt, da 23-substituenten er den termodynamisk foretrukne forbindelse, og urenheden kan let fjernes ved kro-

DK 152129 B

9 matografisk adskillelse.

23-alkylthiosubstituenten kan oxideres til 23-alkyl-sulfinyl- eller 23-alkylsulfonylgruppen med et mildt oxiderende middel. Det foretrukne oxiderende middel 5 er m-chlorperbenzoesyrer, og reaktionen udføres sædvan ligvis i et opløsningsmiddel, der er inert over for oxidering. Halogenerede carbonhydrider som f.eks. methy-lenchlorid eller chloroform er velegnede. For at fremstille sulfoxidet anvendes en enkelt molækvivalent af 10 det oxiderede middel, og reaktionen er fuldendt i løbet af 5 minutter til 1 time ved -20 °C til stuetemperatur.

For at fremstille sulfonen anvendes to ækvivalenter af det oxiderende middel, og reaktionen er fuldendt i løbet af 1-24 timer ved 0 °C til stuetemperatur. Pro-15 dukterne isoleres under anvendelse af metoder, der er velkendte af fagmanden.

13-deoxy-13-chlor- og 13-deoxy-C-076 forbindelserne kan fremstilles ud fra C-076 stamforbindelserne således som beskrevet nedenfor. Reaktionerne ved 13-stillingen 20 kan sædvanligvis udføres enten før eller efter de andre' ovenfor beskrevne reaktioner.

Rækken af reaktioner til omdannelse af 13-stillingen begynder med fjernelse af a-L-oleandrosyl-a-L-oleandrose-sidekæden, der findes i C-076 stamforbindelserne. Denne 25 reaktion giver, hvad der betegnes som "C-076 aglycon" forbindelser, der er karakteristiske ved at have en hydroxygruppe ved 13-stillingen. C-076 aglyconforbindel-serne halogeneres herefter med et tilsvarende reaktivt benzensulfonylhalogenid, fortrinsvis -chlorid eller 30 -bromid i nærværelse af en base, hvorved man får 13-deoxy-13-halogen-C-076-aglycon forbindelserne med formlen II, der er mellemprodukterne. Herefter fjernes halogenet ved en reaktion med trialkyltinhydrid, hvorved man får de omhandlede 13-deoxy-C-076;-aglycon forbindelser med 35 formlen I.

DK 152129 B

10

Reaktionsbetingelserne, der sædvanligvis er anvendelige til fremstilling af C-076 aglycon, indebærer opløsning af C-076 forbindelsen i et vandigt ikke-nucleophilt organisk opløsningsmiddel, der er blandbart med vand, fortrinsvis 5 dioxan, tetrahydrofuran, dimethoxyethan, dimethylformamid eller bis-2-methoxyethylether, i hvilke vandkoncentrationen er fra Q,il til 20 rumfangsprocent. Syren sættes til det vandige organiske opløsningsmiddel til et niveau på 1,0-10 rumfangsprocent. Reaktionsblandingen omrøres sædvanlig-10 vis ved 20-40 °C, fortrinsvis ved stuetemperatur, i fra 6 til 24 timer. Forbindelserne isoleres, og blandingerne adskilles ved teknikker som f.eks. søjle-, tyndtlags-, præparativ lag- og højtryksvæskekromatografi eller andre velkendte metoder.

15 Syrer, der kan anvendes ved ovenfor anførte proces, ind befatter mineralsyrer og organiske syrer som f.eks. svovlsyre, hydrobalogensyre, phosphorsyre, trifluoreddike-syre, trif1uormethansulfonsyre og lignende. De foretrukne hydrohalogensyrer er saltsyre eller hydrogenbromidsyre.

20 Den foretrukne syre i den ovenfor anførte fremgangsmåde er svovlsyre.

En yderligere fremgangsmåde til fremstilling af aglycon-forbindelserne er anvendelig til alle C-076 forbindelserne, imidlertid foretrækkes den til anvendelse på forbin-25 delserne, hvori den stiplede linie angiver en enkelt-bin ding, da en vis addition til 22,23-dobbeltbindingen ses i sådanne forbindelser med 22,23-umættethed. Ved denne fremgangsmåde til fremstilling af aglyconen har man fundet at 1 rumfangsprocent svovlsyre i methanol ved fra 20 til 30 40 °C, fortrinsvis ved stuetemperatur i fra 6 til 24 timer er velegnet.

De ovennævnte syrer kan også anvendes til denne fremgangsmåde ved omtrent samme koncentrationer, som der anvendes til svovlsyre.

DK 152129 B

n

De ovenfor beskrevne aglyconforbindelser isoleres fra reaktionsblandingen, og blandingerne af forbindelserne adskilles under anvendelse af metoder, der er velkendte af fagmanden, og specielt ved de ovenfor beskrevne kroma-5 tografiske metoder.

Det således fremstillede "C-076 aglycon" halogeneres herefter til frembringelse i 13-deoxy-13-halogen-C-076 aglycon. Halogeneringen udføres lettest i nærværelse af en tilstrækkelig reaktiv benzensulfonylhalogenidforbindelse 10 i nærværelse af en base. Tilstedeværelsen af elektronfra- trækkende substituenter på benzensulfonylhalogenid er fordelagtig, og o-nitrosubstitution foretrækkes. Reaktionen udføres i ikke-protisk, inert opløsningsmiddel som f.eks. en halogeneret alkylforbindelse, fortrinsvis i methylen-15 chlorid eller chloroform. Reaktanterne blandes langsomt ved en begyndelsestemperatur på fra -25 til +10 °C, således at man er i stand til at kontrollere eventuelt begyndelsesexoterme reaktioner, og man holder reaktionsblandingen ved denne temperatur i indtil 2 timer. Herefter hæves 20 reaktionstemperaturen til fra ca. stuetemperatur til reak tionsblandingens tilbagesvalingstemperatur i fra 10 minutter til 6 timer. Det er nødvendigt at udføre reaktionen i nærværelse af en base, fortrinsvis en organisk amin. Det har vist sig at være fordelagtigt at anvende kombinatio-25 nen af 4-di-lavere alkylaminopyridin og trialkylamin. Mest foretrukkent er det at anvende 4-dimethylaminopyridin og diisopropylethylamin som baserne ved de foran omtalte reaktioner. 13-deoxy-13-halogen-C-076 aglyconforbindelserne isoleres ved fremgangsmåder, der er velkendt af fagmanden.

30 For at undgå uønskede bireaktioner er det vigtigt, at man i de C-076 forbindelser, der har en hydroxygruppe ved 5-stillingen (B-rækkerne af forbindelserne) og i mindre udstrækning 23-hydroxygruppen i 2-rækken af forbindelserne, 12 '

DK 152129B

at disse hydroxygrupper beskyttes. Den beskyttende gruppe er ideelt en sådan, der let kan indføres, der ikke vil påvirke reaktionen i retning at ændre 13-stillingssubsti-tuenten, og som let kan fjernes uden at påvirke nogen an-5 den funktion i molekylet. En foretrukken type af beskyt tende gruppe til C-076 typen af molekylet er den trisub-stituerede silylgruppe, fortrinsvis en trialkylsilylgrup-pe. Et foretrukkent eksempel er tert-butyldimethylsilyl-gruppen. Reaktionen udføres ved at omsætte hydroxyforbin-10 delsen med det egnede substituerede silylhalogenid, for trinsvis silylchlorid, i et aprotisk polært opløsningsmiddel som f.eks. dimethylformamid. Imidazol tilsættes som katalysator. Reaktionen er løbet til ende efter fra 1/2 til 24 timer ved fra 0 til 25 °C. For 5-stillings-hydroxygrup-15 pen vedkommende er reaktionen løbet til ende efter ca. 1/2 - 3 timer ved fra 0 °C til stuetemperatur. Silyleringsreak-tionen er meget langsommere ved 23-stillings-hydroxygrup-pen (2-rækken af forbindelser) end ved 5-stillingshydroxy-gruppen, og beskyttelse er sædvanligvis ikke nødvendig.

20 Hvis det imidlertid ønskes at beskytte 23-hydroxygruppen, er reaktionen løbet til ende efter ca. 5-24 timer ved fra stuetemperatur til 75 °C. Denne reaktion er selektiv over for 5- og 23-stillingerne under de ovenfor nævnte betingelser, og kun ringe, om overhovedet nogen, silylering 25 iagttages ved 13-stillingen.

Silylgruppen kan fjernes efter 13-halogeneringen, eller fjernelsen kan udsættes, indtil 13-halogengruppen er fjernet. Silylgruppen eller -grupperne kan fjernes ved at om-røre silylforbindelsen i methanol katalyseret med en ka-30 talytisk mængde af en syre, fortrinsvis en sulfonsyre som f.eks. p-toluensulfonsyre. Reaktionen er løbet til ende i løbet af 1-12 timer ved fra 0 til 50 °C.

13-Deoxy-13-halogen-C-076 aglyconen, der har eller ikke har silylgrupper, der beskytter 5- og/eller 23-hydroxygrupperne, reduceres herefter under dannelse af 13-deoxy-C-076 agly- 13.

DK 152129B

conen. Det anvendte reducerende middel er et sådant, der selektivt vil fjerne 13-halogengruppen, men som vil efterlade det øA/rige af molekylet uberørt. Det reducerende middel er trialkyltinhydrid, fortrinsvis tributyltinhydrid. Yderligere indbefattes i reaktionsblandingen en fri radikal initiator, da man antager, at reaktionen skrider frem via en fri radikal mekanisme (idet man dog ikke ønsker at være bundet til denne teori, da andre mulige mekanismer ikke kan udelukkes). Acceptable fri radikal-10 initiatorer varierer og omfatter peroxider, som f.eks. benzoylperoxider; thioler i nærværelse af luft; azo-dialkylnitriler som f.eks. azobisisobutyronitril; ultraviolet lys; varme og lignende. Reaktionsbetingelserne varierer afhængig af typen af den frie radikal initiator, 15 der anvendes. Når det drejer sig om de kemiske initiatorer, er reaktionen løbet til ende efter ca. 1-6 timer ved fra 60 til 120 °C. Den foretrukne reaktionstemperatur er ca.

85 °C. Dersom varme er det initierende middel, kræves højere temperaturer ca. 100-200 °C i fra 1 til 6 timer. Der-20 som der anvendes ultraviolet beståling, foretrækker man at anvende lavere temperaturer. Sædvanligvis vil reaktionen være fuldendt i løbet af 1-6 timer ved -25 - 50 °C i nærværelse af ultraviolet lys. Trialkyltinhydridreaktio-nen udføres sædvanligvis uden opløsningsmiddel under et 25 tæppe af nitrogen eller en anden inert gasart. Tinhydrid- forbindelsen kan anvendes i overskud og bliver derved opløsningsmiddel. Dersom det ønskes, kan man imidlertid anvende inert opløsningsmiddel som f.eks. benzen, toluen eller xy-len. Af nærliggende årsager kan halogenerede opløsnings-30 midler ikke anvendes. Produkterne isoleres under anvendelse af metoder, der er velkendte af fagmanden.

Bortset fra når det drejer sig om 22,23-hydrogeneringsreak-tionen og den ovenfor nævnte silyleringsreaktion, er der ingen krav om, at de ovenfor nævnte reaktioner skal udfø-35 res i nogen speciel rækkefølge. Ingen gensidigt påvirkende reaktioner, bortset fra de·ovenfor nævnte undtagelser, 14 '

DK 152129B

bemærkes i de før omtalte rækker af reaktioner, og en reaktion ved en særlig stilling vil ikke påvirke eventuelle substituentgrupper ved en anden reaktion.

De omhandlede 13-deoxy-C-076 forbindelser er i besiddelse 5 af signifikante parasiticide egenskaber som anthelmintica og ectoparasiticider inden for human og veterinær medicinen .

Sygdommen eller den gruppe af sygdomme, der sædvanligvis 10 beskrives som helminthiasis skyldes infektion af et værts dyr med parasitorme, der kaldes helminther. Helminthiasis er en ofte forekommende og alvorligt økonomisk problem hos husdyr som f.eks. svin, får, heste, kvæg, geder, hunde, katte og fjerkræ. Blandt helmintherne, forårsager den grup-15 pe af orme, der beskrives som nematoder udbredt og ofte alvorlig infektion hos forskellige dyrearter. Den mest almindelige slægt af nematoder, der inficerer de ovenfor nævnte dyr er: Haemonchus, Trichostrongylus, Ostertagia, Nematodirus, Cooperia, Ascaris, Bunostomum, Oesophagosto-20 mum, Chabertia, Trichuris, Strongylus, Trichonema, Dictyo- caulus, Capillaria, Heterakis, Toxocara, Ascaridia, Oxy-uris, Ancylostoma, Uncinaria, Toxascaris og Parascaris.

Visse af disse som Nematodirus, Cooperia og Oesphagosto-mum angriber først og fremmest tarmkanalen medens andre 25 som f.eks. Haemonchus og Ostertagia oftere forekommer i maven, mens andre som f.eks. Dictyocaulus findes i lungerne. Andre parasitter findes yderligere i andre væv og organer af legemet som f.eks. i hjertet og i blodkarrene, i de subcutane og lymfevævene og lignende. Parasitinfektio-30 ner betegnet helminthiasis fører til anæmi, dårlig triv sel, svaghed, vægttab, alvorlige skader på tarmkanalen og i andre væv og organer og kan, dersom man ikke behandler resultere i at den smittede værtsorganisme dør. De omhandlede 13-deoxy-C-076 forbindelser har vist uventet kraf-35 tig virkning overfor disse parasitter og er yderligere virksomme over for Dirofilaria hos hunde, over for Nemato- 15

DK 152129B

spiroider, Syphacia, Aspiculuris hos gnavere, over for ar-thropode ectoparasitter hos dyr og fugle som f.eks. blodmider, mider, lus, fluer, spyfluer, hos får over for Lucilia sp., over for bidende insekter og vandrende tovingede lar-5 ver som Hypoderma sp. hos kvæg, over for Gastrophilus hos heste og Cuterebra sp. hos gnavere.

De omhandlede forbindelser er også virksomme over for parasitter, der inficerer mennesker. Den mest almindelige slægt af parasitter i mave-tarmkanalen hos mennesket er 10 Ancylostoma, Necator, Ascaris, Strongyloides, Trichinel- la, Capillaria, Trichuris og Enterobius. Andre medicinsk vigtige arter af parasitter, der findes i blodet eller i væv og organer udenfor mave-tarmkanalen, er filiaridæ-or-mene som f.eks. Wuchereria, Brugia, Onchocerca og Loa.

15 Dracunculus og ekstra intestinale stadier af indvoldsorme ne som Strongyloides og Trichinella. De omhandlede forbindelser er også af værdi overfor arthropoder, der er parasitter hos mennesket, overfor bidende insekter og andre tovingede skadedyr, der er ubehagelige for mennesket.

20 De omhandlede forbindelser kan administreres peroralt i enhedsdosisform som f.eks. i en kapsel, bolus eller tablet eller som et flydende væskeindgift, der anvendes som anthelmintica overfor pattedyr. Præparater til væskeindgivelse indeholder sædvanligvis fra ca. 0,001 til 0,5 vægt-25 % af den aktive forbindelse. Foretrukne præparater til væs keindgivelse kan indeholde fra 0,01 til 1 yægt-?o.

Dersom det ønskes at administrere C-076 derivaterne i tør, fast enhedsdosisform kan kapsler, boluser eller tabletter, 30 der indeholder den ønskede mængde aktiv forbindelse, anvendes .

Den aktive forbindelse kan administreres via dyrefoder, hvor den en grundigt blandet i foderet eller anvendes som en 16 '

DK 152129B

væskeformig tilsætning eller i form af piller, der kan tilsættes til færdige foder eller eventuelt indgives separat. Alternativt kan de omhandlede antiparasitære forbindelser administreres parenteralt til dyrene f.eks. ved intramus-5 kulær, intratracheal eller subcutan injektion, i hvilke tilfælde den aktive ingrediens opløses eller dispergeres i et flydende hjælpebærestof. Den/de omhandlede aktive 13-deoxy-C~076 forbindelse/forbindelser kan opslæmmes i præparatformuleringer til administrering; sådanne præpa-10 rater indeholder sædvanligvis fra 0,005 til 5 vægt-?i af den aktive forbindelse.

Skønt de omhandlede antiparasitære forbindelser først og fremmest anvendes ved behandling og/eller forhindring af helminthiasis, vil de også være værdifulde ved behandling og 15 forhindring af sygdomme, der er forårsaget af andre para sitter som f.eks. arthropode parasitter som blodmider, lus, fluer, mider og andre bidende insekter, der findes hos husdyr og fjerkræ. De er også effektive ved behandlingen af parasitære sygdomme, der findes hos andre dyr, herun-20 der mennesket. Den optimale mængde, der anvendes for at opnå det bedste resultat, vil naturligvis afhænge af den særlige anvendte forbindelse, af den art af organisme, der skal behandles, og af arten og sværhedsgraden af den parasitære sygdom eller sygelige tilstand. Sædvanligvis 25 opnås gode resultater med de omhandlede forbindelser med peroral administrering på fra 0,001 til 10 mg pr. kg dyre-legemsvægt, således at den totale dosis, der gives på en gang eller i adskilte doser indgives i løbet af en forholdsvis kort periode på fra 1 til 5 dage. Med de fore-30 trukne omhandlede forbindelser opnås udmærket kontrol af sådanne parasitter ved til dyrene at administrere fra ca.

0,025 til 0,5 mg pr. kg legemsvægt i en enkelt dosis. Gentagne behandlinger gives dersom det kræves for at bekæmpe re-infektioner og er afhængig af arten af den parasit, der 35 skal behandles, og husdyropdrættets art. Teknikken for ad- 17

DK 152129 B

ministrering af disse materialer til dyr er velkendte for fagmanden inden for veterinærområdet.

De omhandlede forbindelser kan administreres som en komponent i foderet til dyrene eller opløses eller opslæmmes i 5 drikkevandet, idet det er muligt at få præparater, i hvil ke den/de aktive forbindelser er grundigt blandet i inert bærestof eller fortyndingsmiddel. Ved inert bærestof forstås et, der ikke vil reagere med det antiparasitære middel, og et, der kan indgives uden fare for dyrene. For-10 trinsvis er bærestof til foderadministrering et sådant, der er eller kan være en del af dyrefoderet.

Velegnede præparater omfatter foderpræmixer eller -tilskud, i hvilke den aktive ingrediens er til stede i forholdsvis store mængder og som er velegnet til direkte fodring til 15 dyrene eller som tilsætning til foderet enten direkte el ler efter en forudgående fortynding eller blanding. De omhandlede 13-deoxy-C-076 forbindelser fordeles omhyggeligt i hele bærestoffet ved fremgangsmåder, som f.eks. formaling, omrøring, maling eller tumling. Præparater inde-20 holdende fra ca. 0,005 til 2,0 vægt-% aktiv forbindelse er særlig velegnet som foderpræmixer. Fodertilskud, der fodres direkte til dyrene, indeholder fra ca. 0,0002 til 0,3 vægt-?o aktive forbindelser.

Sådanne tilskud sættes til dyrefoderet i en mængde på mel-25 lem 0,00001 til 0,002 % i foderet for at o.pnå den ønskede parasitære virkning.

Når man anvender de omhandlede forbindelser kan de enkelte 13-deoxy-C-076 komponenter anvendes og bruges som sådan. Alternativt kan blandinger af to eller flere af de enkelte 30 13-deoxy-C-076 komponenter anvendes, såvel som blandinger af stam-C-076 forbindelserne og de omhandlede forbindelser.

Ved isoleringen af stam-C-076 forbindelserne, der tjener som 18'

DK 152129B

udgangsmaterialer for de ovennævnte fremgangsmåder ud fra forgæringsbouillon, vil de forskellige C-076 forbindelser findes at være fremstillet i forskellige mængder. Specielt vil "a" række forbindelser være fremstillet i større mæng-5 der end den tilsvarende "b" række forbindelse. Vægtforhol det mellem "a" rækken og den tilsvarende "b" rækken er ca. 85:15 til 99:1. Forskellen mellem "a" rækken og "b" rækken er konstant gennem alle C-076 forbindelserne og består af henholdsvis see.-butylgrupper og en isopropylgruppe ved 25-10 stillingen. Forskellen griber naturligvis ikke ind i nogen af de omhandlede reaktioner. Specielt er det ikke nødvendigt at adskille "b" komponenterne fra den beslægtede "a" komponent. Adskillelse af disse nært beslægtede forbindelser er sædvanligvis ikke gennemført, da "b" forbindelsen 15 kun er til stede i så ringe vægt-Si-mængde, og da den struk turmæssige forskel ikke har nogen indvirkning på reaktionsprocesserne og på de biologiske virkninger.

De følgende eksempler belyser opfindelsen nærmere, medens de følgende præparationer belyser fremstillingen af C-076 20 aglyconforbindelser.

13-halogen-13-deoxy-C-076 derivaterne, der er fremstillet i de følgende eksempler, er sædvanligvis isoleret i form af amorfe faste stoffer og ikke som krystallinske faste stoffer. De er karakteriseret analytisk under anvendelse 25 af metoder som f.eks. massespektrometri, kernemagnetisk resonans og lignende. De omhandlede 13-deoxy-C-076 forbin delser er også amorfe, og er derfor ikke karakteriseret ved skarpe smeltepunkter, men ved de anvendte kromatografiske og analytiske metoder, der angiver, at forbindelserne 30 er rene.

Spektraldata for de fremstillede og biologiske resultater i forsøg med forbindelserne med formlen I over for en række parasitter er angivet efter eksemplerne og præparationerne.

19

DK 152129B

EKSEMPEL 1 Δλ 23-Q-t-butyldimethylsilyl-C-Q76-A2a-aqlycon 200 mg C-076-A2a-aglycon i 2,4 ml tør dimethylformamid slås sammen med 133 mg imidazol, og der omrøres indtil 5 alle komponenterne er opløst. 146 mg t-butyldimethylsilyl- chlorid tilsættes, og reaktionsblandingen omrøres i 24 timer ved stuetemperatur. Reaktionsblandingen fortyndes med ether og vaskes 5 gange med vand. De forenede vand-vaske-opløsninger ekstraheres med ether, og de forenede organis-10 ke lag vaskes atter med vand, efterfulgt af en enkelt afvaskning med mættet natriumchloridopløsning. Etherlaget kontreres til tørhed i vakuum, hvorved man får 340 mg af en gylden olie. Præparativt lagkromatografi af olien på to plader af silicagel, der elueres med en blanding af 5¾ 15 tetrahydrofuran og 5?ό ethanol i methylenchlorid, giver 113,2 mg 23-0-t-butyldimethylsilyl-C-076-A2a-aglycon, hvis opbygning bekræftes ved massespektrometri og kernemagnetisk resonans.

JL.

20 23-0-t-butyldimethylsilyl-13-chlor-13“deoxy-C-076-A2a- aqlycon 20 mg 23-0-t-butyldimethylsilyl-C-076-A2a-aglycon slås sammen med 0,7 ml methylenchloridopløsning, der indeholder 15 mg dimethylaminopyridin og 0,021 ml (15,5 ml) diisopro-25 pylmethylamin. Blandingen afkøles i isbad, og en opløs ning af 0,1 ml methylenchlorid indeholdende 20 mg o-nitro-benzensulfonylchlorid tilsættes dråbevis. Reaktionsblandingen omrøres i isbad i 45 minutter, derefter i 3 timer ved stuetemperatur. Isklumper sættes til reaktionsblan-30 dingen, og der omrøres. Når isen er smeltet tilsættes ether til blandingen, og lagene adskilles. Det vandige lag eks- 20

DK 152129B

traheres atter med ether og de forenede organiske lag vaskes 2 gange med vand, tørres over magnesiumsulfat og inddampes til tørhed under en strøm af nitrogen, hvorved man får 35 mg af en gylden film. Præparativ lagkromatografi af 5 materialet på enenkelt silicagelplade, der elueres med 5% tetrahydrofuran og 5¾ ethanol i methylenchlorid giver 10,1 mg 23-0-t-butyldimethylsilyl-13-chlor-13-deoxy-C-076-A2a-aglycon, hvis opbygning konfirmeres ved massespektrometri og 300 Mhz kernemagnetisk resonans.

10 Ll 13-chlor-13-deoxy-C-076-A2a-aqlycon

En opløsning af 10 mg 23-0-t-butyldimethylsilyl-13-chlor-13-deoxy-C-076-A2a-aglycon i 1,0 methanol indeholdende 1% p-toluen-sulfonsyre dihydrat omrøres i 5 timer ved stuetemperatur.

15 Reaktionsblandingen fortyndes med 25 ml ethylacetat, og der vaskes med vandig natriumbicarbonater og vand. Det organiske lag tørres og inddampes til tørhed, hvorved man får 13-chlor-13-deoxy-C-076-A2a-aglycon.

EKSEMPEL 2 20 13-chlor-15-deoxy-C-076-A2a-aqlycon 20 mg C-076-A2a-aglycon opløses i 0,7 ml methylenchlorid, der indeholder 16 mg 4-dimethylaminopyridin og 16,8 (0,023 ml) diisopropylethylamin. Reaktionsblandingen afkøles i isbad, og 0,1 ml methylenchlorid indeholdende 29,5 mg o-25 nitrobenzensulfonylchlorid tilsættes dråbevis. Reaktions blandingen omrøres i isbad i 1 time, hvorefter man lader temperaturen stige til stuetemperatur og omrører 4 timer.

Der tilsættes is, og der omrøres indtil isen er smeltet.

Ether tilsættes og lagene udrystes og adskilles. Det van-30 dige lag ekstraheres med ether, og de organiske lag slås 21

DK 152129B

sammen, vaskes 3 gange med vand, tørres over magnesiumsulfat og inddampes til tørhed under en strøm af nitrogen, hvorved man får 40 mg af en brun film. Præparativ lågkromatografi på silicagel, der elueres med 3% tetrahydrofuran og 3 1% ethanol i methylenchlorid giver 4,7 mg 13-chlor-13-deo- xy-C-Q76-A2a-aglycon, der identificeres ved kernemagnetisk resonans og massespektrometri.

EKSEMPEL 3 13-deoxy-C-076-A2a-aqlycon 10 80 mg 13-chlor-13-deoxy-C-076-A2a-aglycon opløses i 1,5 ml tributyltinhydrid, og der tilsættes 20 mg azobisisobu-tyronitril. Reaktionsblandingen opvarmes under et tæppe af nitrogen ved 85 °C i 3 1/2 time, der afkøles og anbringes på en silicagel præparativ-lagchromatografiplade, der 15 elueres med chloroform, hvorved man får 110 mg af et glas.

Gentagen præparativ-lagkromatografi på silicagel, idet man anvender methylenchlorid med 2% tetrahydrofuran og 0,07% ethanol som elueringsmiddel, giver 70 mg af et hvidt glas, der identificeres ved massespektrometri og Mhz Kernemagne-20 tisk resonans som 13-deoxy-13-C-076-A2a-aglycon.

EKSEMPEL 4 L·.

13-deoxy-23-0-t-butyldimethylsilyl-C-076-A2a-aqlycon 1 mg 13-chlor-13-deoxy-23-0-t-butyldimethylsilyl-C-076-30 A2a-aglycon opløses i 50 mikroliter toluen og 100 mikro- liter tributyltinhydrid og 200 ^ug azobisisobutyronitril, og der opvarmes i 4 timer ved 60 °C. Produktet isoleres ved direkte kromatografi på en præparativ lag-silicagel-kromatografiplade, der elueres med 1,5% tetrahydrofuran 35 i chloroform, hvorved man får 13-deoxy-23-0-t-butyldime-thylsilyl-C-076-A2a-aglycon, der identificeres ved masse-SDektrometri.

DK 152129 B

22* L·.

13-deoxy-C-076-A2a-aqlycon

Idet man går som beskrevet i eksempel 1 under anvendelse af 13-deoxy-23-0-t-butyldimethylsilyl-C-076~A2a-aglycon 5 i stedet for 23-0-t-butyldimethylsilyl-13-chlor-13-deoxy-C-076-A2a-aglycon fås 13-deoxy-C-076-A2a-aglycon.

EKSEMPEL 3 A_;_ 5-0-t-butyldimethylsilyl-C-076-Bla-aqlycon 10 100 mg C-076-Bla-aglycon opløses i 1,2 ml vandfri dimethyl- formamid, og 46 mg imidazol tilsættes efterfulgt af 50 mg t-butyldimet'hylsilylchlorid. Reaktionsblandingen holdes ved 20 “C i 30 minutter, der fortyndes med ether. Blandingen vaskes med vand, der tørres, koncentreres i vakuum 15 til et farveløst glas. Yderligere rensning på en lagkroma-tografiplade, der elueres i methylenchlorid-tetrahydrofu-ranblamding, giver renset 5-0-t-butyldimethylsilyl-C-Q76-Bla-aglycon.

Idet man går frem som ovenfor men anvender C-076-B2a-agly-20 con i stedet for C-076-Bla-aglycon fås 5-0-t-butyldimethyl-silyl-C-076-B2a-aglycon.

EL

5-Q-t-butyldimethylsilyl-13-deoxy-13-chlor-C-Q76-Bla-aqly- con 25 Idet man går frem som beskrevet i eksempel 2 men anvender 5-0-t-butyldimethylsilyl-C-076-Bla-aglycon i stedet for C-076-A2a-aglycon fås en 5-0-t-butyldimethylsilyl-13-deoxy-13-chlor-C-076-Bla-aglycon.

23

DK 152129B

Idet man går frem som beskrevet ovenfor men anvender 5-0-t-butyldimethylsilyl-C-076-B2a-aglycon i stedet for 5-0-t-butyldimethyl-C-076-Bla-aglycon fås 5-0-t-butyl-dimethylsilyl-13-deoxy-13-chlor-C-076-B2a-aglycon.

5 Ci.

5-0-t-butyldimethvlsilyl-13-deoxy-C-076-Bla-aqlycon

Idet man går frem som i eksempel 3 men anvender 5-0-t-bu-tyldimethylsilyl-13-deoxy-13-chlor-C-076-Bla-aglycon i stedet for 13-chlor-13-deoxy-C-076-A2a fås 5-0-t-butyldime-10 thylsilyl-13-deoxy-C-076-Bla-aglycon.

Idet man går frem som beskrevet ovenfor men anvender 5-0-t-butyldimethylsilyj.—13-deoxy-13-chlor-C-076-B2a i stedet for 5-0-t-butyldime'thylsilyl-13-deoxy-13-chlor-C-076-Bla-aglycon fås 5-0-t-bultyldimethylsilyl-13-deoxy-C-076-B2a-15 aglycon.

'L·.

13-deoxy-C-076-Bla-aqlycon

En opløsning af 13 mg 5-Q-t-butyldimethylsilyl-13-deoxy-C-076-Bla-aglycon i 1,0 ml methanol indeholdende 1¾ p-20 toluensulfonsyre dihydrat omrøres i 3 timer ved 20 °C. Reaktionsblandingen fortyndes med 30 ml ethylacetat, og der . .

vaskes med vandig natriumbicarbonatopløsning og herefter med vand. Det organiske lag tørres og inddampes i vakuum til tørhed, hvorved man får 13-deoxy-C-076-Bla-aglycon 25 som et klart glas.

Idet man går frem som beskrevet ovenfor men anvender 5-0-t-butyldimethylsilyl-13-deoxy-C-076-B2a-aglycon i stedet for 5-0-t-butyldimethylsilyl-13-deoxy-C-076-Bia-aglycon, fps 13-deoxy-C-076-B2a-aglycon.

24

DK 152129 B

Dersom 5-Q-t-butyldimethylsilyl-13-deoxy-13-chlor-C-076-Bla- og B2a forbindelserne opnået ovenfor hydrolyseres efter den foran nævnte metode, får man 13-chlor-13-deoxy-C-076-Bla-aglycon og 13-chlor-13-deoxy-C-076-B2a-aglycon.

3 Yderligere kan 13-chlor mellemproduktet af Ala-aglycon fremstilles som beskrevet i eksempel 2 og fremgangsmåden fra eksempel 3 vil give den tilsvarende 5-deoxy-forbindel-se.

EKSEMPEL 6 10 13-chlor-13-deoxy-22,23-dihydro-C-076-Ala-aglycon

En opløsning af 8,2 mg 22,23-dihydro-C-076-Ala-aglycon og 0,35 ml methylenchlorid indeholdende 7,5 mg 4-dimethylami-nopyridin og 10,5 mikroliter diisopropylethylamin afkøles til 0 °C, og der behandles med 10 mg o-nitrobenzensulfo-15 nylchlorid. Efter omrøring ved 0 °C i 1 time, opvarmes reaktionsblandingen til stuetemperatur i 2 timer. Reaktionsblandingen bratkøles med is, og der behandles med 2 ml ether. Lagene adskilles, og den vandige fase vaskes 2 gange med 1 ml ether. De forenede organiske lag vaskes 2 gange med 20 vand, der tørres med natriumsulfat og inddampes til tørhed ved vakuum. Produktet isoleres ved præparativ-lagkromato-grafi på en enkelt silicagelplade, der elueres med chloroform. Lyofilisering af resten giver 1,3 mg af et hvidt pulver, der identificeres ved massespektrometri og kernemag-25 netisk resonans som 13-chlor-13-deoxy-22,23-dihydro-C-076-Ala-aglycon.

EKSEMPEL 7 13-deoxy-22,23-dihydro-C-076-Ala-aqlycon

En opløsning af 1,0 mg af 13-chlor-13-deoxy-22,23-dihydro-30 C-076-Ala-aglycon opløses i 0,2 ml tributyltinhydrid indeholdende 0,2 mg azobisisobutyronitril, og der opvarmes un-

DK 152129B

25 der nitrogen i 3 1/2 time ved 83 °C. Blandingen afkøles og kromatograferes på en enkel silicagel-præparativlagkro-matografiplade, der elueres med chloroform. Det.tilbageblevne tributyltinhydrid og tributyltinchlorid fjernes med 5 opløsningsmiddelfronten, og produktet findes ved Rf på ca.

0,15 til 0,4. Dette bånd opsamles, og der elueres fra si-licagelen med ethylacetat. Blandingen kromatograferes på en præparativ-lagsilicagelkromatografiplade, der elueres med chloroform, hvorved man får 0,5 mg 13-deoxy-22,23-di-10 hydro-C-076-Ala-aglycon, der identificeres ved massespek-trometri og kernemagnetisk resonans.

EKSEMPEL 8 5-0-t-butyldimethylsilyl-22,23-dihydro-C-076-Bla-aqlycon 15 50 mg 22,23-dihydro-C-076-Bla-aglycon opløses i 1,1 ml di- methylformamid indeholdende 50 mg imidazol. Medens reaktionsblandingen er under nitrogen tilsættes 75 mg t-butyl-dimethylsilylchlorid, og den tilproppede blanding står natten over ved stuetemperatur. Reaktionsblandingen bratkøles 20 med 2 ml vand efter fortynding af reaktionsblandingen med 15 ml ether. Den vandige fase fraskilles og der ekstrahe-res med 5 ml ether. De forenede organiske faser vaskes 5 gange med 10 ml vand, de forenede vandige vaskeopløsninger ekstraheres med 5 ml ether, og de forenede organiske faser 25 vaskes atter en gang med 5 ml vand. Det organiske lag tørres over magnesiumsulfat, og der inddampes til tørhed i vakuum til en olie. Olien kromatograferes på 2 silicagel-præparativlagkromatografiplader, der elueres 2 gange med methylenchlorid. Det langsomt bevægende og mest intense 30 bånd opsamles, og der vaskes fra silicagelen med ethylacetat. Lyofilisering fra benzen giver 35,3 mg af et hvidt pulver, der identificeres ved kernemagnetisk resonans og masse-spektrometri som 5-0-t-butyldimethylsilyl-22,23-dihydro-C-076-Bla-aglycon.

26

DK 152129B

L·.

13-chlor-13-deoxy-5-0-t-butyldimethylsilyl-22,23-dihydro- C-076-Bla-aqlycon

En opløsning af 35,5 mg 5-0-t-butyldimethylsilyl-22,23-di-5 hydro-C-076-Bla-aglycon i 2,6 ml methylenchlorid indehol dende 56' mg 4-dimethylaminopyridin og 78 mikroliter (59 mg) diisopropylethylamin afkøles til 0 °C, og der behandles med 75 mg o-nitrobenzensulfonylchlorid. Reaktionsblandingen omrøres ved 0 °C i 1 time, man lader den varme op til 10 stuetemperatur og omrører i 3 timer. 3 ml knust is tilsæt tes reaktionsblandingen efterfulgt af 4 ml ether. Lagene adskilles, og den vandige fase vaskes med 4 ml ether, og de forenede organiske faser vaskes 2 gange med 5 ml vand.

Det organiske lag tørres over natriumsulfat, og der ind-15 dampes til tørhed i vakuum. Benzen sættes til remanensen, og den fjernes azeotropisk. Produktet isoleres ved præpa-rativ-lagkromatografi, der elueres med 1:2 blanding af pe-troleumsether (kogepunkt 30-60 °C) og chloroform, hvorved man får 5,4 mg 13-chlor-13-deoxy-5-0-t-butyldimethylsilyl-20 22,23-dihydro-C-076-Bla-aglycon, der identificeres ved mas- sespektrometri og kernemagnetisk resonans.

C_l 13-deoxy-5-0-t-butyldimethylsilyl-22,23-dihydro-C-076-Bla-aqlycon 25 En opløsning af 13,2 mg 13-chlor-13-deoxy-5-0-butyldime- thylsilyl-22,23-dihydro-C-076-Bla-aglycon sammen med 0,7 ml tributyltinhydrid og 2,0 mg azobisisobutyronitril, opvarmes til 85 °C i 3 1/2 time under et tæppe af nitrogen. Reaktionsblandingen afkøles, og der opløses i 1,5 ml me-30 thylenchlorid, hvorefter man filtrerer gennem en søjle af silicagel, der elueres med methylenchlorid. Tributyltin- 27

DK 152129 B

hydrid og tributyltinchlorid ledes gennem søjlen efter afvaskning med 250 ml methylenchlorid, og produktet forbliver på søjlen. Opløsningsmidlet ændres til ethylacetat, og produktet elueres med opløsningsmiddelfronten. Ethyl-5 acetatopløsningen koncentreres til en olie, og produktet renses ved præparativ-lagkromatografi på silicagelplader, der elueres med 1:1 blanding af petroleumsether (kogepunkt 30-60 °C) og methylchlorid, hvorved der efter lyofilisering fra benzen fås 8,2 mg 13-deoxy-5-0-t-butyldimethylsilyl-10 22,23-dihydro-C-076-Bla-aglycon, der identificeres ved mas- sespektrometri og kernemagnetisk resonans.

13-deoxy-22,23-dihydro-C-076-Bla-aqlycon

En opløsning af 6,9 mg 13-deoxy-5-0-t-butyldimethylsilyl-15 22,23-dihydro-C-076-Bla-aglycon i 0,6 ml 1% p-toluensul- fonsyre i methanol omrøres ved stuetemperatur i 3 timer. Reaktionsblandingen bratkøles med 5 ml ether og 1 ml mættet vandig natriumbicarbonat. Lagene adskilles, og den vandige fase vaskes i 2 ml ether, og de forenede organiske 20 lag vaskes med vand, tørres over natriumsulfat og inddam pes til tørhed.i vakuum. Olien kromatograferes på en enkel silicagelplade, der elueres med 2:1 blanding af methylen-chlorid og petroleumsether (kogepunkt 30-60 °C). Efter lyo-filiseringen fås 4,5 mg 13-deoxy-22,23-dihydro-C-076-Bla-25 aglycon, der identificeres ved massespektrometri og ker nemagnetisk resonans.

Præparation 1 C-Q76 Ala-aqlycon 100 mg C-076 Ala opløses i 5 ml dioxan, omrøres og tilsættes ved stuetemperatur en blanding af 0,1 ml koncentreret 3g svovlsyre, 1,9 ml methanol og 3,0 ml dioxan. Reaktions- 28

DK 152129B

fast natriumbicarbonat tilsættes, og blandingen omrores 1 20 minutter. Der tilsættes 3 ml vand og omrøres i yderligere 10 minutter. Reaktionsblandingen koncentreres, og der tilsættes 40 ml chloroform og udrystes. Det vandige 5 lag fraskilles, og der ekstraheres med 5 ml chloroform.

De organiske lag slås sammen, og der vaskes en gang med fortyndet natriumchloridopløsning, tørres over magnesiumsulfat og inddampes til tørhed i vakuum. Halvdelen af remanensen anbringes på 5 præparative lag-kromatografisilica-gelplader, og der elueres med 2% methanol i chloroform, hvorved man får 4 båndmateriale. Resten af materialet køres på 2 præparative lagkromatografiplader, der elueres med 2% methanol i chloroform, der giver 4 lignende bånd som i den første række. De andre hurtigere bånd fjernes 15 fra hver af pladerne, slås sammen, ekstraheres og inddam pes til tørhed i vakuum, hvorefter der atter kromatogra-feres på præparativlag-kromatografisilicagelplader, der elueres med 3% tetrahydrofuran og chloroform, hvorved man får 9,4 mg af et porøst, hvidt fast stof, der identifice-20 res ved massespektrometri som C-076 Ala-aglycon.

Præparation 2 C-076-A2a-aqlycon 2 g C-076 A2a slås sammen med 40 ml af en rumfangsprocent opløsning af koncentreret svovlsyre i methanol. Reaktions- 25 blandingen omrøres ved stuetemperatur i 17 timer, og der fortyndes med 300 ml chloroform. Blandingen vaskes en gang med 30 ml mættet natriumbicarbonatopløsning, en gang med 30 ml mættet natriumchloridopløsning, der tørres over magnesiumsulfat og inddampes til tørhed i vakuum. 5 ml metha-30 nol tilsættes remanensen og den henstår ved stuetempera tur natten over. Afkøling af blandingen i is forårsager en langsom udfældning af krystaller. Den ovenstående væske fjernes, og de faste krystaller vaskes 2 gange med 1 ml koldt methanol, hvorved man får 340 mg af et fast hvidt 35 stof. Moderluden og vaskeopløsninger inddampes til et rum-

DK 152129B

29 fang på ca. 2 ml, og ved henstand får man en yderligere mængde krystaller. 630 mg af et fast hvidt stof opnås, der slås sammen med den første udfældning af krystaller og 8 ml methanol, og der inddampes til et rumfang på 2,3 ml, 5 der herefter henstår i adskillige timer. Man opnår 910 mg af et snavset hvidt fast stof, der ved massespektrometri identificeres som C-076 A2a-aglycon.

Præparation 3 C-Q76-B2a-aqlycon 10 2 g af C-076-B2a tilsættes 40ml af en 1 rumfangsprocent op løsning af koncentreret svovlsyre i methanol. Reaktionsblandingen amTøres ved stuetemperatur i 17 timer. 300 ml chloroform tilsættes efterfulgt af 30 ml af en vandig mættet natriiumbicarbonatopløsning. Lagene skilles, og det or-15 g a:n i ske lag Maskes med 30 ml mættet natriumchloridopløs- ning., der ifcørrres over magnesiumsulfat og inddampes til tørhed i vakuum. 5 ml methanol tilsættes for at opløse remanensen, og blandingen henstår ved stuetemperatur, hvorefter den afkøles i et isbad, hvorved der sker udkrystal-20 lisation. Den ovenstående væske fjernes og remanensen vaskes 2 gange med 1 ml portioner kold methanol, og de faste krystaller tørrer natten over og herefter i vakuum ved 35 °C, hvorved man får 1,0 g hvide krystaller. En anden udfældning opnås ved at inddampe moderludene til et rum-25 fang på 2 ml, og herefter lade væsken henstå natten over ved stuetemperatur. Der tilsættes 2 ml methanol, og blandingen henstår i et isbad, hvorved man får 140 mg af et fast gult stof. De 2 faste fraktioner forenes, og der opløses i kogende methanol, idet der anvendes ca.. 30 ml me-30 ethanol. Opløsningen filtreres varmt, og der koncentreres til et rumfang på ca. 20 ml i vakuum, hvorefter fast stof begynder at udfælde. Opløsningen filtreres varmt, og det faste materiale vaskes med methanol, hvorved man får 340 mg af et fast hvidt stof. Filtraterne koges ned til et rum-35 fang på ca. 8 ml, og de henstår for at udkrystallise- 30

DK 152129B

re ved stuetemperatur, hvorved man får 433 mg af et fast hvidt stof. Massespektrometri viser, at de to fraktioner er identiske, og de kan identificeres som C-076-B2a-agly-con.

5 Præparation 4 C-076-Bla-aqlycon 100 mg C-076 Bla opløses i 2,5 ml dioxan, og der tilsættes 2,5 ml af en blanding fremstillet af 0,5 ml vand, 0,5 ml koncentreret svovlsyre og 9,0 ml dioxan. Reaktionsblan-10 dingen omrøres ved stuetemperatur i 17 timer. 50 ml ether og 25 ml mættet vandig natriumbicarbonatopløsning tilsættes, lagene adskilles, og det organiske lag vaskes to gange med vand, og vandlaget ekstraheres med ether. De organiske lag slås sammen, tørres over natriumsulfat og ind-15 dampes til tørhed. Der tilsættes benzen, og opløsningen giver 60 mg af en gul olie. Olien kromatograferes på præparativ lagkromatografi-silicagelplade, der elueres med en 9:1 blanding af chloroform og tetrahydrofuran, hvorved man ved en Rf på ca. 0,35 får 16 mg C-076-Bla-aglycon, der i-20 dentificeres ved 300 MHz kernemagnetisk resonans.

Præparation 5 22,23-dihydro-C-076-Ala 51,0 mg C-076-Ala og 14,4 mg tris (triphenylphosphin)-rhodium ( I ) chlorid slås sammen med 3,5 ml benzen og der hydro-25 generes i 20 timer ved stuetemperatur under atmosfærisk tryk. Den rå reaktionsblanding kromatograferes på en præparativ lagkromatografiplade, der elueres to gange med 10?0 tetrahydrofuran i chloroform. Produktet fjernes fra understøttelsen under anvendelse af ethylacetat, der inddampes 30 til tørhed, og resten analyseres med 300 MHz-kernemagne- tisk resonans og massespektroskopi, der indicerer fremstilling af 22,23-dihydro-C-076 Ala.

31

DK 152129 B

Præparation 6 22,23-dihydro-C-076 Bla

En opløsning af 1,007 g C-076-Bla, 314 mg tris (triphenyl-phosphin)rhodium(I)chlorid og 33 ml benzen hydrogeneres 5 ved stuetemperatur i 21 timer under en atmosfæres hydrogentryk. Opløsningsmiddel fjernes i vakuum, og remanensen opløses i 1:1 blanding af methylenchlorid og efchylacetat, og der filtreres. Filtratet anbringes på en søjle bestående af 60 g silicagel, der elueres med 1:1 blanding af me-10 thylenchlorid og ethylacetat, idet man udtager 10 ml fraktioner. Fraktionerne 14-65 slås sammen og der inddampes til tørhed, hvorved man får 1,118 g af et fast materiale, der ved højtryksvæskekromatografi viser sig at være en 60/40 .blanding af det hydrogenerede produkt og udgangs-15 materialet. Blandintgsen hydrogeneres atter i 55 ml benzen, lodset oåe;r itiiil'sæ't'ties !3M) mg tris (triphenylphosphin)rhodium (I.^dhlsoTid, -øsg idet ,man omrører ved stuetemperatur i 21 tirmrer søg ved 1 atmosffæres hydrogentryk. Opløsningsmiddel fjte’pntes i vakuum, og remanensen kromatograferes på 80 g 20 silicagel, idet man anvender en 40:60 blanding af ethylacetat og methylenchlorid som elueringsmiddel. Der udtages 10 ml fraktioner, og produktet kommer til syne a fraktionerne 26 - 80. Disse fraktioner slås sammen, og der inddampes til tørhed i vakuum, hvorved man får en gul olie. Oli-25 en opløses i benzen, og der lyofiliseres, hvilket giver et svagt gult pulver, der identificeres som 22,'23-dihy-dro-C-076-Bla ved massespektrometri og 300 MHz-;kernemag-netisk resonans. Der opnås 0,976 g af forbindelsen.

Præparation 7 30 22,23-dihydro-C-076-Ala aqlycon 10,1 mg 22,23-dihydro-C-076 Ala omrøres i 20 timer i 1 ml 1% svovlsyre i methanol wed stuetemperatur. Reaktionsbian- 32

DK 152129B

dingen behandles således som angivet under præparation 6, hvorved man får en olie, der renses ved præparativlag-kro-matografi på silicagel, der elueres med 5% tetrahydrofu-ran i chloroform. Produktet fjernes fra kromatografipla-5 den, og lyofiliseres fra benzen, hvorved man får 4,2 mg af et hvidt pulver, der ved 300 MHz-kernemagnetisk resonans og massespektrometri viser at være 22,23-dihydro-C-076-Ala aglycon.

Præparation 8 10 22,23-dihydro-C-076-Bla-aqlycon 0,486 g 22,23-dihydro-C-076-Bla sættes til en omrørt opløsning af 50 ml 13$ svovlsyre i methanol, og reaktionsblandingen omrøres ved stuetemperatur i 13 timer. Reaktionsblandingen fortyndes med 250 ml methylenchlorid, og der 15 vaskes med 50 ml mættet vandig kaliumbicarbonat og 50 ml vand. Det vandige lag vaskes 2 gange med 20 ml portioner methylenchlorid, og de forenede organiske faser tørres med mættet saltopløsning og natriumsulfat, og der inddampes til tørhed i vakuum, hvorved man får 0,480 g af et svagt 20 gult skum. Skummet opløses i 4 ml methylenchlorid, og det anbringes på 4 præparativ-lagkromatografisilicagelplader, og der elueres 4 gange med 4% tetrahydrofuran og chloroform. Produktet fås fra silicagelpladerne i form af en olieagtig remanens, der lyofiliseres fra benzen, hvorved 25 man får 255,8 mg af et hvidt fast stof. Spor af methyl-oleandrosid ses at være til stede i det faste materiale. Det hvide faste stof lyofiliseres herefter igen fra benzen, og anbringes i højvakuum i 20 timer for at fjerne urenheden, hvorved man får 22,23-dihydro-C-076-Bla-aglycon.

DK 152129B

33

TABEL I

Tabel over 300 MHz PMR bestemmelser1

Eksempel 6 Eksempel 7 Eksempel 8A.

13-chlor-13 13-deoxy-22, 5-iD-t-butyl-di- deoxy-22,23- 23-dihydro- meithylsilyl-22, dihydro-C076- C076-Ala 23-dihydro-C076

Proton Ala-aqlycon aglycon_ Bla aglycon_ C2H 3,30 q, 0 = 2 3,31 q, 0 = 2 3.,36 q, 0=2 C^H 5,33 br s 5,41 br s 5„34 br s C CH3 1,89 br s 1,82 br s 1,,79 br s C5H 3,97 br d,3 = 6 3,99 br d,0=6 4„<45 m C 0CH3 3,51 s 3,52 s C OS: (CH)C(CH) - - 0,,:93 s 5 5 .2 3 2 C 0S-: (DH ) 0CCCH 1 - - 0.,13 s 5 .3 .2. d .2 C H 4,04 d,0 = 6 4,1)5 d,0 = 6 3.,83 d,0 = 6 Ό £ BH 4.,03 s 4,12 S 4,10 s C O-) V6-3 dd.,J = 2,14 4,54 br d,0=14 4„56 dd, 0=2,15 '8 .2 4.,71 dd, 0 = 2,14 4,72 br d,0 = 14 4.,669 dd, 0=2,15 C?H 5,76 dt, 0 = 12,2 5,81 dt, 0 = 12,1 C5„tS3 m C10H :5.,84 dd, 0 = 12,14 5,75 t,J = 10 05.,¾ 3 m C H 5,36 m 5,40 m C5„t83 m C H 2,56 br m 2,42 br m .2,,.53 br m C12CH3 1,21 d,0=6 1,01 d,0=7 1„18 d,0=7 C H 4,10 d,0=11 1,89 d,0=13 4„02 m C, . CH_ 1,51 br s 1,53 br s 1„53 br s 14 3 C15H C5,32 m 4,96 br t,0 = 7 05.,34 m C H 3,59 m 3,60 m 3,,69 m C H 5,29 m 5,31 m 5„30 m C24CH3 0,80 d ,0=6 0,80 d,0=6 0,,80 d, 0=6 C25H 3,18 br d,0 = 8 3,20 br d,0 = 8 3.,20 dd,0=2,8 C0 XH, 0,85 d,0 = 6 0,85 d,0 = 6 0„85 d,0=6 26 3 C00CH, 0,95 t, 0=7 0,96 t,0=8 0.,96 t,0=7 28 1> 34

DK 152129B

Eksempel 8B Eksempel 8C Eksempel 8D

13-chlor-13- 13-deoxy-5- deoxy-5-0-t- O-t-butyl- 13-deoxy- butyldimethyl- dimethyl- 22,23-di- silyl-22,23-di- silyl-22,23- hydro-C076 hydro-C076 Bla dihydro-C076 Bla agly-

Forbindelse anlycon_ Bla aglycon con_ C2H 3,37 q, 0=2 3,37 q,0=2 3,28 q,0=2 C^H 5,34 br s 5,34 br s 5,46 br s C^CH^ 1,80 br s 1,80 br s 1,88 br s C_H 4,45 m 4,45 m 4,32 br t,0=6 5 S0CH3 C OS:(CH ) C(CH ) 0,93 s 0,93 s 2 2 λ 2 2 C 0S:(CH_)oC(CH_), 0,14 s 0,14 s 2 2 Δ 2 2 C H 3,83 d,3=6 3,84 d,0=5 3,99 d,0 = 6 6

0?0Η 4,02 s 4,11 s 4,08 S

C CH 4,61 dd,0=2,14 4,60 br d,J=14 4,68 dd,0=2,13 8 2 4,71 dd,J=2,14 4,70 br d,J=14 4,74 dd,J=2,13 C9H 5,77 dt,J=ll,2 5,42 dt,0=12,2 5,88 dt,0=2,ll C10H 5,83 dd,0=11,14 5,75 t,0=12 5,78 dd,0=10,11 C H 5,34 dd,0=10,14 5,38 dd,0=11,12 5,44 dd,0=10,14 C H 2,56 m 2,42 m 2,44 br m 12 C12CH3 1,20 d, 0=6 1,01 d,0=6 1,02 d,0=7 C H 4,12 br d, 0=1 1,90 br d,0=12 Cl,9 d 13 C, CH 1,51 br s 1,51 br s 1,52 br s 14 2 C15H C5,34 m 4,96 br t,0=7 4,97 br t,0=7 C17H 3,59 m 3,60 m 3,61 m C^^H 5,25 m 5,29 m 5,34 m C24CH3 0,80 d,0=6 0,80 d,0=6 0,80 d,0=6 C25H 3,18 dd,0=6 3,20 br d,0=8 3,21 dd,0=2,8 C CH 0,85 d, 0=6 0,86 d, 0=6 0,86 d, 0 C2gCH3 0,95 t,0=8 0,96 t,0=8 0,96 t,0=8 35

DK 152129B

s = singlet, d = doublet, t = triplet, q = auartet dd= doublet af doublets, dt= doublet af tripleter m = multiplet, br= bred

Alle koblingskonstanter (J) er givet i hertz.

Alle spektre er foretaget i CDC1 med (CH)Si som indre standard.

3 3 4 36

DK 152129B

Q

00 Ό i i" _J >1 ·η o ^ LU X Ό ϋ C + Λ 0- Oli O S3 S gi r\ o o w ω το m n > σι I - Ή CO Ή O CM CM m is: in cm >. >-ι σ r·' m < <n

tu Η Μ Γ Π β in tn I I <i I OM

I vo CJ i tn Γ" c co tn i cm o o

I rH I - O O

_J >i >1 <—1 OM I >1 ^ LU X H-> >. CM O rH + n D.oojriHa s (D S (1) -O -Μ -Η Ό CO —' C LU "D I (0 >. >s O ΙΛ Ι·μΕΗ£» <f« OM tn

•H is: Kl I M .ri -H H CO vo <r CM

4J LU »H O Ό 0) Ό CD VO vo I l-=f I CM

c ta

S I

+j σ i ·η co

CO CO Η Ό H

tn U I I >» I CD * 4jq_ æ kv -p r μ + ^ h I op Ή I +> CM vo S3 o μ ιοω-Ο' — —

M— (U _J Ih I E OM O

+J LU O m ·*Η CM O C O CM CO

M uc 0.ΜΙΌΙΙΟ CM O O' co s _c >* .-h .-h o o i^h- d _J Q LU O X >s >s H >i 'n, 'ή 'h tu tn tn io-ui-ηώι-ι co o cm -hl vo o m m cd is: ιλ i) 3 h >, o .-h a co vo nf cm

d cn lu Η Ό O W XI (0 1^ O' vo Ό Hi Hf OM

i— tn

CO E

I I

H >—I O

(D I >< Ih

> éc£ —I I—I "O

O 00 >« ·Η >> -p tn .c i—( I 3 Η Ή CH ' ' (LI LU JD ><O rt C + xi o. i si i m o s CO 2 +> U ΙΛ O'-Η I- LU I ω OM vo >1 tn o e - ·—i o cm oo o in is: i ή Μ o oi o oo n f om

LU m "D CM O CO O' vo I I Μ M CM

CM 1

[V. OM O

I IH

_J >. Ό CO h-h LU X >1 *-H C + CL O -C Æ o s S Q) ·γΗ O h-h lu Ό Ό vo > tn I I N ri f Ό CM m

ϋ m tn o a co Ό -Hl· OM

LU H CM U CO in m I l-nflOM

I c H cd o Ό i—I Ή I I d H-H E O)

tn tn + CO CO

V0 H CM vo S +·> > j ~ f**· -v—* (0 t/)

_J N N O

LU OCMOCOCvl CO Η II

a. r—i i i o csi o r- s x:>,ooom3 <r LU OX(-l>'v'V "h tn I O Ό Ή CO O CM d VO O tn + h-h \£ tn (D >> ΟΙ .-H O 00 M3 O' Hf CM S3 lu η ό o μ vo vo in in -sr sr cm '-h 37

DK 152129B

TABEL I fortsat

Eksempel 2: NMR "b" forbindelse 1,1 - 1,2 ppm doublet "a" forbindelse 3,40 - 3,44 ppm doublet M.S. "b" forbindelse 460 "a" forbindelse 474

Eksempel 3: NMR "b" forbindelse 1,10 - 1,14 ppm doublet 3,44 - 3,48 ppm doublet "a" forbindelse 3,60 - 3,64 ppm doublet M.S. "b" forbindelse 426 "a" forbindelse 440 "b" forbindelse 408 "a" forbindelse 422

Eksempel 5A: M.S. "b" forbindelse 666 "a" forbindelse 680 "b" forbindelse 442 "a" forbindelse 456 "b" forbindelse 291 "a" forbindelse 305 "b" forbindelse 179 "a" forbindelse 193

Eksempel 5B: NMR "b" forbindelse 1,05 - 1,1 ppm doublet

Eksempel 5C: M.S. "b" forbindelse 426 "a" forbindelse 440 "b" forbindelse 207 "a" forbindelse 221 "b" forbindelse 179 "a" forbindelse 193

DK 152129 B

38

Eksempel 5D: NMR "b" forbindelse 3,40 ppm doublet "a" forbindelse 2,48 - 3,52 ppm doublet M.S. "b" forbindelse 554 "a" forbindelse 568 "b" forbindelse 426 "a" forbindelse 440 "b" forbindelse 179 "a" forbindelse 193

Eksempel 6: NMR "b" forbindelse 3,12 ppm M.S. "b" forbindelse 462 "a" forbindelse 476 "b" forbindelse 426 "a" forbindelse 440

Eksempel 7: NMR "b" forbindelse 3,05 - 3,08 ppm doublet "b" forbindelse 2,08 - 2,10 ppm doublet "b" forbindelse 0,9 ppm

Eksempel 8A: NMR "b" forbindelse 1,05 ppm doublet "b" forbindelse 3,20 - 3,23 ppm M.S. "b" forbindelse 668 "a" forbindelse 682

Eksempel 8B: NMR "b" forbindelse 3,1 ppm "b" forbindelse 1,02 - 1,04 ppm "b" forbindelse 3,08 ppm (udvidet spektrum)

Eksempel 8C: NMR "b" forbindelse 3,10 - 3,15 ppm "b" forbindelse 3,05 ppm (udvidet spektrum)

Eksempel 8D: NMR "b" forbindelse 3,10 ppm "b" forbindelse 1,03 - 1,05 ppm "b" forbindelse 0,85 ppm "a" forbindelse 3,24 ppm

DK 152129 B

39

Eksempel 8D: M.S. "b" forbindelse 556 "a" forbindelse 570 "b" forbindelse 426 "a" forbindelse 440

Præparation 7 NMR "b" forbindelse 3,1 ppm M.S. "b" forbindelse 587 "a" forbindelse 601 "b" forbindelse 568 "a" forbindelse 582

Præparation 8: NMR "b" forbindelse 3,15 ppm

Præparation 4: M.S. "b" forbindelse 291 "a" forbindelse 305

DK 152129 B

40

TABEL II

Biologisk aktivitet af visse C-076 forbindelser Forbindelse Forsøg Aktiv ved: 13-deoxy-22,23-dihydro- Ts 5 mg/kg

Ala aglycon To 1 mg/kg

Eksempel 7 Hc 5 mg/kg 13-deoxy-22,23-dihydro Ts 200^,ug/kg

Bla aglycon T . nn „ .. „ , n nn Tc 100 ug/kg eksempel oU /

Hc 500^ug/kg 13-deoxy A2a aglycon Ts 2,5 mg/kg eksempel 3 og 4 Tc j. mg/kg 13-deoxy Bla aglycon Ts 5 mg/kg eksompel 50 TC 0,1 mg/kg

Hc 0,1 mg/kg 13-deoxy B2a aglycon Ts 2,5 mg/kg ekse"pel 50 Tc 100^ug/kg

Hc 2,5 mg/kg

Forsøgskode

Ts Trychostrongylus sigmodontus Tc Trychostrongylus colubriformus Hc Haemonchus contartus

Claims (3)

1. Analogifremgangsmåde til fremstilling af makrolide 13-deoxy C-076 aglyconforbindelser med formlen R4 ?H3 XR CH3 ‘Jl J OR3 hvori den stiplede linie angiver en fakultativ binding , 2 5. betegner isopropyl eller sec-butyl, 3 R betegner hydrogen, methyl eller alkanoyl med 1-6 C-ato-mer, R^ kun er til stede, dersom den stiplede linie ikke angiver en ekstrabinding, og betegner hydrogen, :hydroxy, 10 alkanoyloxy, alkylthio, alkylsulfinyl, alkylsulfonyl eller alkoxy^ alle med indtil 6 C-atomer i allcyldelen; kendetegnet ved, at man behandler en Forbindelse, som svarer til en forbindelse med den ovemfor angivne formel I, men som indeholder et halogenatom i 13-stillingen i stedet for hydrogen med et trialkyl-13 tinhydrid i nærværelse af en fri radikal initiator til fremstilling af forbindelsen med formlen I, hvorefter man eventuelt acylerer en fremstillet forbindelse med DK 152129B formlen I, hvori er hydrogen og/eller er hydroxy med et C, alkanoyleringsmiddel til dannelse af en til-svarende mono- eller diester med formlen I, hvorpå en dannet 5,23-diesterforbindelse om ønsket hydrolyseres 5 med en vandig base til dannelse af den tilsvarende 23-mono-esterforbindelse , og/eller hydrogenerer 22,23-dobbelt-bindingen i en fremstillet forbindelse med formel I, hvori den stiplede linie angiver en ekstrabinding, med hydrogen i nærværelse af en katalytisk mængde af en for-10 bindelse med formlen [(R5)3P]3RhX, hvori R^ er lavere alkyl, phenyl eller lavere alkylsub-stitueret phenyl, og X er halogen, og/eller omsætter den fremstillede forbindelse med formlen I, hvori den stiplede linie angiver en ekstrabinding i nærværelse 15 af en syre med en alkanol eller alkylthiol med 1-6 carbon-atomer, hvorefter man eventuelt oxiderer en fremstillet alkylthioforbindelse til den tilsvarende alkylsulfinyl-eller alkylsulfonylforbindelse med et mildt oxiderende middel, hvorhos man til beskyttelse af reaktive hydroxyl-20 grupper som ikke ønskes omsat under én eller flere af de ovennævnte reaktioner eventuelt beskytter disse ved omsætning i et aprotisk polært opløsningsmiddel med et substitueret silylhalogenid, fortrinsvis silylchlorid, hvorefter en eventuel beskyttelsesgruppe fjernes.

2. Makrolid C-076 forbindelse til brug som udgangsmateri ale ved fremgangsmåden ifølge krav 1, kendetegnet ved, at den har formlen II DK 152129 B . 43 R4 PH3 "yWu;

®3| J ojt jf"CH3 OR3 hvori den stiplede linie angiver en fakultativ binding; 2 R .bet®c§ne;r isopropyl eller sec-butyl, R3 bet-e.gner hydrogen, methyl eller alkanoyl med indtil 6 ‘5 C-a tomer, og R^ kun er tilstede, dersom den stiplede linie ikke angiver en ekstrabinding og betegner hydrogen, hydroxy, alkanoyloxy, alkylthio, alkylsulfiny1, alkylsulfonyl eller alkoxy alle med indtil 6 C-atomer i alkyldelen.