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DE1248057B - Verfahren zur Gewinnung von reinem Adenosintriphosphat-Natrium - Google Patents

Verfahren zur Gewinnung von reinem Adenosintriphosphat-Natrium

Info

Publication number
DE1248057B
DE1248057B DEV23248A DEV0023248A DE1248057B DE 1248057 B DE1248057 B DE 1248057B DE V23248 A DEV23248 A DE V23248A DE V0023248 A DEV0023248 A DE V0023248A DE 1248057 B DE1248057 B DE 1248057B
Authority
DE
Germany
Prior art keywords
adenosine
adenosine triphosphate
pure
triphosphate sodium
production
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
DEV23248A
Other languages
English (en)
Inventor
Dr-Ing Gerhardt Schaefer
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Teva GmbH
Original Assignee
Arzneimittelwerk Dresden GmbH
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Arzneimittelwerk Dresden GmbH filed Critical Arzneimittelwerk Dresden GmbH
Priority to DEV23248A priority Critical patent/DE1248057B/de
Publication of DE1248057B publication Critical patent/DE1248057B/de
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12PFERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/26Preparation of nitrogen-containing carbohydrates
    • C12P19/28N-glycosides
    • C12P19/30Nucleotides
    • C12P19/32Nucleotides having a condensed ring system containing a six-membered ring having two N-atoms in the same ring, e.g. purine nucleotides, nicotineamide-adenine dinucleotide

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
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  • Health & Medical Sciences (AREA)
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  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Description

BUNDESREPUBLIK DEUTSCHLAND
Int. Gl.:
C07d
DEUTSCHES
PATENTAMT Deutsche Kl.: 12 ρ - 7/1Θ
PATENTSCHRIFT
Nummer:
Aktenzeichen:
Anmeldetag:
1 248 057
V23248IVd/12p
6. November 1962
24. August 1967
7. März 1968
Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Gewinnung von reinem Adenosintriphosphat-Natrium aus Konzentraten, die aus Adenosin durch Hefegärung in Gegenwart von vergärbaren Zuckern und Phosphatpuffergemisch unter Zusatz von Äther zur Vergiftung der Hefe und dann von Acetaldehyd, anschließende Fällung als Bariumsalz und Enteiweißung der Lösung erhalten worden sind.
Es ist bekannt, daß Adenosin durch einen Gärprozeß phosphoryliert werden kann, bei dem als Phosphat- und Kohlehydratquelle anorganische Phosphate und vergärbare Zucker bzw. deren Phosphorsäureester verwendet werden. (»Hop pe-Seylers, Zeitschrift für Physiologische Chemie«, Bd. 250, 1937, S. 155 f., Bd. 251, 1938, S. 258 ff.). Als Endprodukt des Gärprozesses entsteht ein komplexes Gemisch, aus welchem nach Entfernung von Hefe-Zellbestandteilen die phosphorylierten Produkte mit Erdalkalisalzlösungen ausgefällt werden.
Eine weitere Reinigung erfolgt nach der Entfernung von Proteinen mittels Trichloressigsäure entweder durch Alkoholfällung oder nach der deutschen Auslegeschrift 1130 785 durch Adsorption an Aktivkohle. Durch diesen Schritt können andere Phosphorsäureester und anorganisches Phosphat abgetrennt werden.
Es ist jedoch schwierig, eine für diesen Verfahrensschritt geeignete Aktivkohle zu finden, da auch Aktivkohlesorten gleicher Bezeichnung innerhalb verschiedener Fabrikationschargen große Unterschiede insofern aufweisen, als die Phosphorylierungsprodukte des Adenosins zwar fest adsorbiert werden, jedoch nicht oder nur zum Teil eluierbar sind. Diese verschieden große Haftfestigkeit ist von Faktoren abhängig, die bei der Herstellung von Aktivkohle nicht beeinflußt werden können.
Auf diese Weise wird die durch den biologischen Phosphorylierungsprozeß erreichte gute Ausbeute wieder erheblich herabgesetzt. Es konnte festgestellt werden, daß durchschnitlich 30 bis 40% der Phosphorylierungsprodukte des Adenosins an der Aktivkohle irreversibel adsorbiert werden und verlorengehen.
Erfindungsgemäß wurde festgestellt, daß es möglich ist, diese Nachteile völlig zu vermeiden, indem das enteiweißte Konzentrat auf eine Säule eines durch Kondensation von m-Pheny!endiamin und Formaldehyd erhaltenen Adsorptionsmittels gebracht und nach Auswaschen von Orthophosphat, anderen Phosphorsäureestern sowie weiteren inaktiven BaI-laststoffen die Adenosintriphosporsäure mittels wäßrigem ammoniakalischem Alkohol eluiert, in bekann-Auslegetag:
Ausgabetag:
Patentschrift stimmt mit der Auslegeschrift überein
Verfahren zur Gewinnung von reinem
Adenosintriphosphat-Natrium
Patentiert für:
VEB Arzneimittelwerk Dresden,
Radebeul 1, Wilhelm-Pieck-Str. 35
Als Erfinder benannt:
Dr.-Ing. Gerhardt Schäfer, Radebeul
ter Weise als Bariumsalz ausgefällt und zu reinem Adenosintriphosphat-Natrium aufgearbeitet wird.
Es war überraschend, daß ein Allgemeinadsorber selektiv die Nucleotide adsorbieren würde, während die große Zahl der in der von Zeil- und Eiweißstoffen befreiten Gärlösung noch vorhandenen Stoffwechselprodukte der Hefe, wie 3-Phosphoglycerinsäure, Fruktose-l,6-diphosphat, Glukose-6-phosphat usw., nicht adsorbiert werden, da sich die erwähnten Adsorptionsmittel durch ihren positiven Ladungssinn grundsätzlich von den negativen geladenen Aktivkohlen unterscheiden.
Die Phosphorylierungsprodukte des Adenosins werden von dem genannten Adsorbens festgehalten. Nach · Entfernung von Orthophosphat und anderen Phosphorsäureestern durch Auswaschen mit verdünnter Salzsäure kann die Adenosintriphosphorsäure durch Elution mit verdünntem ammoniakalischem Methanol ohne Verlust gewonnen und wie oben angegeben in das Adenosintriphosphat-Natrium übergeführt werden.
Beispiel
Ein durch Vergärung von 100 g Adenosin mittels äthervergifteter untergäriger Brauereihefe und Acetaldehydzusatz erhaltenes Gemisch von Phosphorylierüngsprodukten des Adenosins wird mit etwa 5 kg Eisstückchen versetzt und von festen Hefezellbestandteilen abzentrifugiert. Nach Ausfällung des Adenylsäuregemisches durch Bariumsalz sowie dessen Lösung werden noch vorhandene Proteine durch Trichloressigsäure gefällt und entfernt. Das enteiweißte Konzentrat wird auf eine Adsorptionssäule gegeben, die mit 5 1 des unter dem Warenzeichen Wofatit E (®) bekannten Kondensationsproduktes aus m-Phenylendiamin und Formaldehyd beschickt wurde. Das Adsorbens wird mit 3 η-Salzsäure aktiviert und anschließend mit bidestilliertem Wasser säurefrei gewaschen.
809 525/364
Die mit den Phosphorylierungsprodukten des Adenosins beladene Säule wird mit 0,01 n-Salzsäure bariumfrei gewaschen. Darauf erfolgt die Elution in der Gegenrichtung zur Adsorption mit einem Gemisch aus
40 Volumteilen 20°/oigem Ammoniak,
60 Volumteilen destilliertem Wasser,
100 Volumteilen 96°/oigem Äthanol.
Aus dem Eluat wird mit einem Bariumsalz Adenosintriphosphat-Barium ausgefällt und dieses in bekannter Weise in das Natriumsalz übergeführt. Die Ausbeute an Adenosintriphosphorsäure beträgt 90 bis 100%.

Claims (1)

  1. Patentanspruch:
    Verfahren zur Gewinnung von reinem Adenosintriphosphat-Natrium aus Konzentraten höherer Adenosinphosphorsäureester, die aus zo Adenosin durch Hefegärung in Gegenwart von vergärbaren Zuckern und Phosphatpuffergemisch unter Zusatz von Äther zur Vergiftung der Hefe und dann von Acetaldehyd, anschließende Fällung als Bariumsalz und Enteiweißung der Lösung erhalten worden sind, dadurch gekennzeichnet, daß das Konzentrat auf eine Säule eines durch Kondensation von m-Phenylendiamin und Formaldehyd erhaltenen Adsorptionsmittels gebracht und nach Auswaschen von Orthophosphat, anderen Phosphorsäureestern sowie weiteren inaktiven Ballaststoffen die Adenosintriphosphorsäure mittels wäßrigem aminoniakalischem Alkohol eluiert, in bekannter Weise als Bariumsalz ausgefällt und zu reinem Adenosintriphosphat-Natrium aufgearbeitet wird.
    In Betracht gezogene Druckschriften:
    Deutsche Auslegeschrift Nr. 1130 785;
    USA.-Patentschrift Nr. 2 700 038;
    »Chimia«, Bd. 9, 1955, S. 92;
    »Journal of the American Chemical Society«, Bd. 80, 1958, S. 1143 bis 1145.
DEV23248A 1962-11-06 1962-11-06 Verfahren zur Gewinnung von reinem Adenosintriphosphat-Natrium Pending DE1248057B (de)

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Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2700038A (en) * 1951-09-27 1955-01-18 Pabst Brewing Co Dibasic salts of adenosine triphosphate and method of preparation
DE1130785B (de) * 1958-03-21 1962-06-07 Takeda Pharmaceutical Verfahren zur Herstellung von 5'-Nucleotiden, Nucleosiden und deren Gemischen durch Hydrolyse von Ribonucleinsaeuren, Oligoribonucleotiden oder deren Gemischen

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2700038A (en) * 1951-09-27 1955-01-18 Pabst Brewing Co Dibasic salts of adenosine triphosphate and method of preparation
DE1130785B (de) * 1958-03-21 1962-06-07 Takeda Pharmaceutical Verfahren zur Herstellung von 5'-Nucleotiden, Nucleosiden und deren Gemischen durch Hydrolyse von Ribonucleinsaeuren, Oligoribonucleotiden oder deren Gemischen

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