DE1248057B - Verfahren zur Gewinnung von reinem Adenosintriphosphat-Natrium - Google Patents
Verfahren zur Gewinnung von reinem Adenosintriphosphat-NatriumInfo
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Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
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- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
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Description
Int. Gl.:
C07d
DEUTSCHES
PATENTAMT Deutsche Kl.: 12 ρ - 7/1Θ
PATENTSCHRIFT
Nummer:
Aktenzeichen:
Anmeldetag:
1 248 057
V23248IVd/12p
V23248IVd/12p
6. November 1962
24. August 1967
24. August 1967
7. März 1968
Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Gewinnung von reinem Adenosintriphosphat-Natrium aus
Konzentraten, die aus Adenosin durch Hefegärung in Gegenwart von vergärbaren Zuckern und Phosphatpuffergemisch
unter Zusatz von Äther zur Vergiftung der Hefe und dann von Acetaldehyd, anschließende
Fällung als Bariumsalz und Enteiweißung der Lösung erhalten worden sind.
Es ist bekannt, daß Adenosin durch einen Gärprozeß phosphoryliert werden kann, bei dem als
Phosphat- und Kohlehydratquelle anorganische Phosphate und vergärbare Zucker bzw. deren
Phosphorsäureester verwendet werden. (»Hop pe-Seylers,
Zeitschrift für Physiologische Chemie«, Bd. 250, 1937, S. 155 f., Bd. 251, 1938, S. 258 ff.).
Als Endprodukt des Gärprozesses entsteht ein komplexes Gemisch, aus welchem nach Entfernung von
Hefe-Zellbestandteilen die phosphorylierten Produkte mit Erdalkalisalzlösungen ausgefällt werden.
Eine weitere Reinigung erfolgt nach der Entfernung von Proteinen mittels Trichloressigsäure entweder
durch Alkoholfällung oder nach der deutschen Auslegeschrift 1130 785 durch Adsorption an
Aktivkohle. Durch diesen Schritt können andere Phosphorsäureester und anorganisches Phosphat
abgetrennt werden.
Es ist jedoch schwierig, eine für diesen Verfahrensschritt
geeignete Aktivkohle zu finden, da auch Aktivkohlesorten gleicher Bezeichnung innerhalb
verschiedener Fabrikationschargen große Unterschiede insofern aufweisen, als die Phosphorylierungsprodukte
des Adenosins zwar fest adsorbiert werden, jedoch nicht oder nur zum Teil eluierbar
sind. Diese verschieden große Haftfestigkeit ist von Faktoren abhängig, die bei der Herstellung von
Aktivkohle nicht beeinflußt werden können.
Auf diese Weise wird die durch den biologischen Phosphorylierungsprozeß erreichte gute Ausbeute
wieder erheblich herabgesetzt. Es konnte festgestellt werden, daß durchschnitlich 30 bis 40% der Phosphorylierungsprodukte
des Adenosins an der Aktivkohle irreversibel adsorbiert werden und verlorengehen.
Erfindungsgemäß wurde festgestellt, daß es möglich ist, diese Nachteile völlig zu vermeiden, indem
das enteiweißte Konzentrat auf eine Säule eines durch Kondensation von m-Pheny!endiamin und
Formaldehyd erhaltenen Adsorptionsmittels gebracht und nach Auswaschen von Orthophosphat, anderen
Phosphorsäureestern sowie weiteren inaktiven BaI-laststoffen die Adenosintriphosporsäure mittels wäßrigem
ammoniakalischem Alkohol eluiert, in bekann-Auslegetag:
Ausgabetag:
Patentschrift stimmt mit der Auslegeschrift überein
Verfahren zur Gewinnung von reinem
Adenosintriphosphat-Natrium
Adenosintriphosphat-Natrium
Patentiert für:
VEB Arzneimittelwerk Dresden,
Radebeul 1, Wilhelm-Pieck-Str. 35
Radebeul 1, Wilhelm-Pieck-Str. 35
Als Erfinder benannt:
Dr.-Ing. Gerhardt Schäfer, Radebeul
ter Weise als Bariumsalz ausgefällt und zu reinem Adenosintriphosphat-Natrium aufgearbeitet wird.
Es war überraschend, daß ein Allgemeinadsorber selektiv die Nucleotide adsorbieren würde, während
die große Zahl der in der von Zeil- und Eiweißstoffen befreiten Gärlösung noch vorhandenen Stoffwechselprodukte
der Hefe, wie 3-Phosphoglycerinsäure, Fruktose-l,6-diphosphat, Glukose-6-phosphat
usw., nicht adsorbiert werden, da sich die erwähnten Adsorptionsmittel durch ihren positiven Ladungssinn grundsätzlich von den negativen geladenen
Aktivkohlen unterscheiden.
Die Phosphorylierungsprodukte des Adenosins werden von dem genannten Adsorbens festgehalten.
Nach · Entfernung von Orthophosphat und anderen Phosphorsäureestern durch Auswaschen mit verdünnter
Salzsäure kann die Adenosintriphosphorsäure durch Elution mit verdünntem ammoniakalischem
Methanol ohne Verlust gewonnen und wie oben angegeben in das Adenosintriphosphat-Natrium
übergeführt werden.
Ein durch Vergärung von 100 g Adenosin mittels äthervergifteter untergäriger Brauereihefe und Acetaldehydzusatz
erhaltenes Gemisch von Phosphorylierüngsprodukten des Adenosins wird mit etwa 5 kg
Eisstückchen versetzt und von festen Hefezellbestandteilen abzentrifugiert. Nach Ausfällung des
Adenylsäuregemisches durch Bariumsalz sowie dessen Lösung werden noch vorhandene Proteine durch
Trichloressigsäure gefällt und entfernt. Das enteiweißte Konzentrat wird auf eine Adsorptionssäule
gegeben, die mit 5 1 des unter dem Warenzeichen Wofatit E (®) bekannten Kondensationsproduktes
aus m-Phenylendiamin und Formaldehyd beschickt wurde. Das Adsorbens wird mit 3 η-Salzsäure aktiviert
und anschließend mit bidestilliertem Wasser säurefrei gewaschen.
809 525/364
Die mit den Phosphorylierungsprodukten des Adenosins beladene Säule wird mit 0,01 n-Salzsäure
bariumfrei gewaschen. Darauf erfolgt die Elution in der Gegenrichtung zur Adsorption mit einem Gemisch
aus
40 Volumteilen 20°/oigem Ammoniak,
60 Volumteilen destilliertem Wasser,
100 Volumteilen 96°/oigem Äthanol.
60 Volumteilen destilliertem Wasser,
100 Volumteilen 96°/oigem Äthanol.
Aus dem Eluat wird mit einem Bariumsalz Adenosintriphosphat-Barium
ausgefällt und dieses in bekannter Weise in das Natriumsalz übergeführt. Die Ausbeute an Adenosintriphosphorsäure beträgt 90
bis 100%.
Claims (1)
- Patentanspruch:Verfahren zur Gewinnung von reinem Adenosintriphosphat-Natrium aus Konzentraten höherer Adenosinphosphorsäureester, die aus zo Adenosin durch Hefegärung in Gegenwart von vergärbaren Zuckern und Phosphatpuffergemisch unter Zusatz von Äther zur Vergiftung der Hefe und dann von Acetaldehyd, anschließende Fällung als Bariumsalz und Enteiweißung der Lösung erhalten worden sind, dadurch gekennzeichnet, daß das Konzentrat auf eine Säule eines durch Kondensation von m-Phenylendiamin und Formaldehyd erhaltenen Adsorptionsmittels gebracht und nach Auswaschen von Orthophosphat, anderen Phosphorsäureestern sowie weiteren inaktiven Ballaststoffen die Adenosintriphosphorsäure mittels wäßrigem aminoniakalischem Alkohol eluiert, in bekannter Weise als Bariumsalz ausgefällt und zu reinem Adenosintriphosphat-Natrium aufgearbeitet wird.In Betracht gezogene Druckschriften:
Deutsche Auslegeschrift Nr. 1130 785;
USA.-Patentschrift Nr. 2 700 038;
»Chimia«, Bd. 9, 1955, S. 92;
»Journal of the American Chemical Society«, Bd. 80, 1958, S. 1143 bis 1145.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DEV23248A DE1248057B (de) | 1962-11-06 | 1962-11-06 | Verfahren zur Gewinnung von reinem Adenosintriphosphat-Natrium |
Applications Claiming Priority (1)
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| DEV23248A DE1248057B (de) | 1962-11-06 | 1962-11-06 | Verfahren zur Gewinnung von reinem Adenosintriphosphat-Natrium |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DE1248057B true DE1248057B (de) | 1967-08-24 |
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ID=7580405
Family Applications (1)
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|---|---|---|---|
| DEV23248A Pending DE1248057B (de) | 1962-11-06 | 1962-11-06 | Verfahren zur Gewinnung von reinem Adenosintriphosphat-Natrium |
Country Status (1)
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Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US2700038A (en) * | 1951-09-27 | 1955-01-18 | Pabst Brewing Co | Dibasic salts of adenosine triphosphate and method of preparation |
| DE1130785B (de) * | 1958-03-21 | 1962-06-07 | Takeda Pharmaceutical | Verfahren zur Herstellung von 5'-Nucleotiden, Nucleosiden und deren Gemischen durch Hydrolyse von Ribonucleinsaeuren, Oligoribonucleotiden oder deren Gemischen |
-
1962
- 1962-11-06 DE DEV23248A patent/DE1248057B/de active Pending
Patent Citations (2)
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| DE1130785B (de) * | 1958-03-21 | 1962-06-07 | Takeda Pharmaceutical | Verfahren zur Herstellung von 5'-Nucleotiden, Nucleosiden und deren Gemischen durch Hydrolyse von Ribonucleinsaeuren, Oligoribonucleotiden oder deren Gemischen |
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