DE102009015609A1

DE102009015609A1 - Verwendung wenigstens eines Alkylglycosids als alterungshemmender und/oder beruhigender Wirkstoff für sensible Haut in kosmetischen Zusammensetzungen und kosmetische Pflegeverfahren, welche die genannten Zusammensetzungen verwenden

Info

Publication number: DE102009015609A1
Application number: DE102009015609A
Authority: DE
Inventors: Nicolas Thiebault; Jean-Christophe Archambault; Patrice Andre; Florence Pilard; Vincent Moreau
Original assignee: LVMH Recherche GIE; Universite de Picardie Jules Verne
Current assignee: LVMH Recherche GIE; Universite de Picardie Jules Verne
Priority date: 2008-04-02
Filing date: 2009-04-02
Publication date: 2009-11-19
Also published as: US20090274760A1; JP5601660B2; FR2929510A1; US8394773B2; JP2009249383A; FR2929510B1

Abstract

Die vorliegende Erfindung betrifft eine neue Verwendung von Alkylglycosiden und Alkylglycosidmischungen mit alterungshemmenden und/oder beruhigenden Eigenschaften als Wirkstoff in kosmetischen Zusammensetzungen, sowie kosmetische Pflegeverfahren, welche die genannten Zusammensetzungen verwenden.

Description

TECHNISCHES GEBIET DER ERFINDUNG
Die vorliegende Erfindung betrifft eine neue Verwendung von Alkylglycosiden oder Alkylglycosidmischungen mit alterungshemmenden und/oder beruhigenden Eigenschaften sowie die Alkylglycoside enthaltende kosmetische Zusammensetzungen und kosmetische Pflegeverfahren, welche die genannten Zusammensetzungen verwenden.
HINTERGRUND DER ERFINDUNG
Alkylglycoside und ihre Anwendungen sind bekannt, vor allem aus den Dokumenten US 2006/0046969 und WO 2006/107386 .
Die Patentanmeldung WO 2005/041983 offenbart die Verwendung eines reduzierenden Alkyl-Zucker-Monomers, von dem eine Hydroxylfunktion durch ein Alkoxyradikal substituiert ist, als neues Medikament, das vorteilhafterweise für die Regulierung der Entzündungsmechanismen bestimmt ist.
Die vorgenannte Patentanmeldung offenbart die Verwendung als entzündungshemmenden Wirkstoff von nur einer begrenzten Anzahl von durch ein Zuckermonomer gebildeten Verbindungen.
Die Hautalterung ist ein physiologischer Prozeß, an dem äußere Umweltfaktoren sowie genetische Faktoren beteiligt sind. Die extrinsische Hautalterung ist das Resultat von beispielsweise chemischen und physikalischen Umweltreizen (Sonnen- und UV-Strahlen, Streß, falsche Ernäherung), welche die normalen Funktionen der Haut schädigen; die intrinsische Hautalterung ist das Ergebnis einer programmierten genetischen Alterung.
Die vorliegende Erfindung befaßt sich mit diesen beiden Arten der Alterung.
Es wurde eine direkte Verbindung zwischen Hautalterung und Entzündung nachgewiesen. Die Entzündung ist eine physiologische Antwort auf jedweden Streß, beispielweise chemischen (UV-Strahlen, Tabak, Umweltverschmutzung), mechanischen oder infektiösen Streß, der durch die Freisetzung von Mediatoren des Typs Prostaglandine (PGE₂) oder Zytokine (II-8) zum Ausdruck kommt. Diese proinflammatorischen Mediatoren spielen eine direkte Rolle bei der Hautalterung, vor allem durch die Aktivierung von Proteasen (Elastasen), die an der Faltenbildung beteiligt sind, sowie von Enzymen (Metalloproteasen), welche die Bestandteile der Lederhaut und der Epidermis, insbesondere die extrazelluläre Matrix schädigen (Pillai et al., Int. J. Cosmet. Sci., 2005, 27, 17–34).
Die Hautalterung kommt ferner durch eine schrittweise Versprödung der Haut zum Ausdruck, die dann ihre Barrierefunktion gegenüber Angriffen oder Streß von außen nicht mehr so wirkungsvoll erfüllt. Es wurde auch nachgewiesen, daß die einer UV-Strahlung ausgesetzten Zellen der Haut älterer Menschen – im Vergleich zu denjenigen von jungen Menschen – die proinflammatorischen Prostaglandine, insbesondere PGE₂, sowie Cyclooxygenase-2 in größerer Menge exprimieren. Die Studie legt nahe, daß die erhöhte Expression dieser Entzündungsmarker beim älteren Menschen eine erhebliche Rolle bei der lichtinduzierten Alterung der Haut spielen könnte (Seo et al., Mech Ageing Dev. 2003, (8–9): 903-10).
Darüber hinaus haben einige Menschen eine genetische Veranlagung, wodurch ihre Haut gegenüber Umweltreizen, chemischen Reizen oder Faktoren wie Emotionen – im Vergleich zu der bei gleichem Reiz an einer „normalen” Haut beobachteten Reaktion – übermäßig empfindlich ist, ohne daß deswegen die Haut der Personen mit dieser Veranlagung einen pathologischen Zustand aufweist.
Diese Überempfindlichkeit kommt durch nicht pathologische Entzündungserscheinungen sowie durch ein Unbehaglichkeitsgefühl im Bereich der Haut und vor allem durch Kribbeln, Rötungen, Erwärmungen, Ameisenlaufen oder Jucken, manchmal in Verbindung mit Rötungen, zum Ausdruck. Der Hauttyp dieser Personen wird oftmals als „sensible Haut” oder „reaktive Haut” bezeichnet.
Es ist demnach unerläßlich, Wirkstoffe zur Verfügung zu haben, die geeignet sind, durch wirkungsvolles Einwirken auf bestimmte Entzündungsmediatoren die nicht pathologischen Erscheinungen entzündlichen Ursprungs zu bekämpfen, und die sich demnach eignen, die Hautalterung zu verlangsamen, sensible Haut zu beruhigen, die Hautempfindlichkeit und die Unbehaglichkeitsreaktionen zu bekämpfen, eine beruhigende, irritations- und juckreizhemmende Wirkung zu haben.
OFFENBARUNG DER ERFINDUNG
Das Hauptziel der vorliegenden Erfindung besteht darin, einen neuen Wirkstoff bereitzustellen, der geeignet ist, die nicht pathologischen Erscheinungen entzündlichen Ursprungs, wie die Alterung der Haut, sei sie nun intrinsisch oder extrinsisch, zu bekämpfen, die Hautunbehaglichkeitsempfindungen, welche mit dem Streß in Verbindung stehen, dem die Haut ausgesetzt ist, insbesondere im Fall von sensibler Haut, zu mildern oder zu beheben.
Ein weiteres Ziel der vorliegenden Erfindung ist es, einen neuen alterungshemmenden und/oder beruhigenden Wirkstoff für sensible Haut, insbesondere in kosmetischen Zusammensetzungen bereitzustellen.
Schließlich ist es auch Ziel der Erfindung, die technische Aufgabe mittels einer einfachen, kostengünstigen sowie auf industrieller Ebene und im Kosmetikbereich verwendbaren Lösung zu lösen.
Eine erste Aufgabe der vorliegenden Erfindung ist die neue Verwendung – in kosmetischen Zusammensetzungen – wenigstens eines Alkylglycosids oder einer Mischung aus wenigstens zwei Alkylglycosiden als beruhigender Wirkstoff für sensible Haut und/oder als Wirkstoff, der dazu bestimmt ist, dem Auftreten von Anzeichen der intrinsischen und/oder extrinsischen Hautalterung vorzubeugen oder dieses zu verzögern oder die Folgen der Hautalterung abzuschwächen, dadurch gekennzeichnet, daß das Alkylglycosid oder die Alkylglycoside der Mischung die folgende allgemeine Formel haben, nämlich (S)-O-R₁, worin (S) ein von einer Sequenz aus 2 bis 8 identischen oder unterschiedlichen Zuckereinheiten gebildetes Oligosaccharid und R₁ eine Alkylgruppe mit 1 bis 24 Kohlenstoffatomen ist.
So ermöglicht die vorliegende Erfindung, nachzuweisen, daß die Alkylglycoside, die von einem wenigstens zwei Zuckereinheiten umfassenden Oligosaccharid gebildet sind, als alterungshemmender Wirkstoff und/oder als beruhigender Wirkstoff für sensible Haut verwendet werden können, die sie in kosmetischen Zusammensetzungen anwendbar machen, um eine beruhigende Wirkung auf entzündeten Bereichen der Körper- oder Gesichtshaut unter Einfluß endogener oder exogener Faktoren zu verleihen oder aber um die Folgen der Alterung auf diesen Bereichen des Körpers abzuschwächen.
Unter einem weiteren Aspekt wies die Erfindung vollkommen unerwartet nach, daß Mischungen aus Alkylglycosiden, deren Alkylketten unterschiedlich lang sind und/oder die von Oligosacchariden mit mehr oder weniger langen Sequenzen von Zuckereinheiten gebildet sind, einen Synergieeffekt der kosmetischen Wirkung verleihen, wenn die Wirkung der Mischungen aus diesen Verbindungen mit den für jede der einzeln getesteten Verbindungen erhaltenen Ergebnissen verglichen wird.
Dieser Synergieeffekt ermöglicht somit die Herstellung von kosmetischen Zusammensetzungen, die als Wirkstoff diese Alkylglycosidmischungen enthalten, die, wie sich herausstellt, eine bessere Wirksamkeit bei konstanter Dosis als bei den gleichen Zusammensetzungen mit nur einem Alkylglycosid aufweisen.
Dieser Synergieeffekt kann auch ermöglichen, die wirkungsvollen Gesamtdosen an Alkylglycosiden zu verringern und gleichzeitig die gleiche kosmetische Wirkung zu erzielen.
Erfindungsgemäß kann das Oligosaccharid (S) von einer Sequenz aus zwei Zuckereinheiten (Zweifachzucker) oder aus drei Zuckereinheiten (Dreifachzucker) gebildet sein.
Bei einer bevorzugten Ausführungsform sind die Zuckereinheit(en) reduzierende Zucker vom Typ Pentose oder Hexose oder ein Derivat dieser Zucker, vorzugsweise ein Uron-Derivat, ein Sulfat-Derivat oder ein Desoxy-Derivat.
Bei einer weiteren bevorzugten Ausführungsform sind die Zuckereinheit(en) aus Arabinose, Xylose, Ribose, Glucose, Galactose, Mannose, Rhamnose, Fucose ausgewählt.
Erfindungsgemäß können die Zuckereinheit(en) in gleicher Weise aus der Reihe der linkdrehenden Zucker (L-Reihe) oder rechtsdrehenden Zucker (D-Reihe) ausgewählt sein, sie sind jedoch insbesondere aus der Reihe der rechtsdrehenden Zucker (D-Reihe) ausgewählt.
Bei einer weiteren besonders bevorzugten Ausführungsform ist die Zuckereinheit D-Glucose.
Die das Oligosaccharid bildende Sequenz von Zuckereinheiten kann aus der Wiederholung einer gleichen Zuckereinheit bestehen oder von unterschiedlichen Zuckereinheiten gebildet sein.
Die das Oligosaccharid bildende Sequenz von Zuckereinheiten kann linear oder verzweigt sein.
Die Verknüpfungen zwischen den Zuckereinheiten sind von einer kovalenten osidischen Bindung zwischen der reduzierenden Gruppe (Hydroxyl) der Alkoholfunktion des Hemiacetalkohlenstoffs eines Zuckers (anomerer Kohlenstoff, Nummer 1) und der Säuregruppe (freier Wasserstoff) eines weiteren Moleküls gebildet.
Diese Bindung kann in gleicher Weise vom Typ alpha oder beta und vorzugsweise vom Typ beta sein.
Die osidische Bindung kann vom Typ 1–3, d. h. zwischen dem anomeren Kohlenstoff Nr. 1 des ersten Zuckers und der Hydroxyl-Gruppe des Kohlenstoffs Nr. 3 des zweiten Zuckers, vom Typ 1–4 oder vom Typ 1–6 sein.
Die Bindung ist vorzugsweise vom Typ 1–4.
Die Bedingungen der Synthese der erfindungsgemäßen Alkylglycoside ermöglichen, speziell Verbindungen zu erhalten, deren Bindung zwischen dem Oligosaccharid (S) und der Gruppe R₁ entweder von der Art alpha-Bindung oder von der Art beta-Bindung ist, bzw. ermöglichen, eine Mischung aus der gleichen Verbindung zu erhalten, von welcher eine Fraktion diese Bindung vom Typ alpha und die resultierende Fraktion die gleiche Bindung vom Typ beta hat.
Erfindungsgemäß kann die Bindung zwischen dem Oligosaccharid (S) und der Gruppe R₁ in gleicher Weise vom Typ alpha oder beta, vorzugsweise vom Typ beta sein.
Erfindungsgemäß ist die Gruppe R₁ eine gesättigte Alkylgruppe, vorzugsweise eine gesättigte lineare Alkylgruppen.
In bevorzugter Weise ist die Gruppe R₁ eine Alkylgruppe mit 1 bis 18 Kohlenstoffatomen, vorzugsweise eine Methyl- oder Dodecylgruppe.
Gemäß der Erfindung kann das Oligosaccharid (S) aus Maltose, Cellobiose, Lactose und Maltotriose ausgewählt sein.
Das Oligosaccharid kann linksdrehend (L-) oder rechtdrehend (D-) sein und ist vorzugsweise aus den Oligosacchariden der (D-)Reihe ausgewählt.
Insbesondere kann das Oligosaccharid vorzugsweise aus beta-D-Maltose oder beta-D-Maltotriose ausgewählt sein.
Erfindungsgemäß kann wenigstens eines der verwendeten Alkylglycoside aus Methyl-beta-D-Maltosid, Methyl-beta-D-Maltotriosid, Dodecyl-beta-D-Maltosid, Dodecyl-beta-D-Maltotriosid ausgewählt sein.
In einer ersten bevorzugten Ausführungsvariante betrifft die Verwendung speziell eine insbesondere aus zwei Alkylglycosiden bestehende Mischung, die derart ist, daß sie folgendes umfaßt:

– ein Alkylglycosid der allgemeinen Formel (S)-O-R₂, worin (S) so wie vorstehend definiert und R₂ eine Alkylgruppe mit 1 bis 6 Kohlenstoffatomen ist, und
– ein Alkylglycosid der allgemeinen Formel (S)-O-R₃, worin (S) so wie vorstehend definiert und R₃ eine Alkylgruppe mit 8 bis 24 Kohlenstoffatomen ist, wobei die Gruppen (S) der die Mischung bildenden Verbindungen unterschiedlich sein können.

Bei dieser Ausführungsvariante wird vorzugsweise eine Mischung bestehend aus zwei Alkylglycosiden verwendet, die in einem Verhältnis zwischen 1/99 und 99/1, vorzugsweise zwischen 75/25 und 25/75, weiterhin bevorzugt von etwa 1 vorliegen.
Bei dieser Variante ist die Gruppe R₂ eine gesättigte Alkylgruppe, vorzugsweise eine gesättigte lineare Alkylgruppe und in besonders bevorzugter Weise eine Methylgruppe.
Bei dieser Variante ist die Gruppe R₃ eine gesättigte Alkylgruppe, vorzugsweise eine gesättigte lineare Alkylgruppe und in besonders bevorzugter Weise eine Dodecylgruppe.
Eine erste bevorzugte Mischung besteht aus Methyl-beta-D-Maltosid und einem Alkylglycosid, das von einer Sequenz aus drei Zuckereinheiten, vorzugsweise von Dodecyl-beta-D-Maltotriosid gebildet ist.
Eine zweite bevorzugte Mischung besteht aus Methyl-beta-D-Maltotriosid und einem Alkylglycosid, das von einer Sequenz aus zwei Zuckereinheiten, vorzugsweise von Dodecyl-beta-D-Maltosid gebildet ist.
Insbesondere ist eine bevorzugte Mischung von zwei Alkylglycosiden gebildet, die dadurch gekennzeichnet ist, daß sie Dodecyl-beta-D-Maltotriosid umfaßt.
Bei dieser Ausführungsform ist eine besonders bevorzugte Mischung diejenige, welche von Dodecyl-beta-D-Maltotriosid und Methyl-beta-D-Maltosid gebildet ist.
Bei einer bevorzugten zweiten Ausführungsvariante besteht die Alkylglycosidmischung aus vier Alkylglycosiden.
Vorzugsweise liegen die vier Alkylglycoside in der Mischung in im wesentlichen gleichen Anteilen vor.
Insbesondere ist eine bevorzugte Mischung von Methyl-beta-D-Maltosid, Methyl-beta-D-Maltotriosid, Dodecyl-beta-D-Maltosid, Dodecyl-beta-D-Maltotriosid gebildet.
Die Alkylglycoside werden in ausreichender Menge verwendet, um einen kosmetisch wirksamen Effekt auf die Hautalterung und/oder Hautüberempfindlichkeit herbeizuführen.
Das Alkylglycosid oder die Mischung aus wenigstens zwei Alkylglycosiden wie sie vorstehend definiert sind werden insbesondere als Wirkstoff in wirkungsvoller Menge in kosmetischen Zusammensetzungen verwendet, um dem Auftreten der Anzeichen der intrinsischen und/oder extrinsischen Hautalterung vorzubeugen oder dieses zu verzögern oder um die Folgen der Hautalterung abzuschwächen.
Das Alkylglycosid oder die Mischung aus wenigstens zwei Alkylglycosiden wie sie vorstehend definiert sind werden weiterhin als Wirkstoff in wirkungsvoller Menge in kosmetischen Zusammensetzungen eingesetzt, um durch eine Überempfindlichkeit der Haut bedingte(n) Juckreiz oder Rötungen des gesamten Gesichts oder Körpers oder eines Teils dessen zu mildern oder zu beruhigen.
Das Alkylglycosid oder die Mischung aus wenigstens zwei Alkylglycosiden wie sie vorstehend definiert sind werden insbesondere als Wirkstoff in wirkungsvoller Menge in kosmetischen Zusammensetzungen zum Beruhigen von sensibler oder reaktiver Haut eingesetzt.
Gemäß der Erfindung liegt der Wirkstoff in einer Höhe von 0,001 bis 10 Gew.-% der ihn enthaltenden kosmetischen Zusammensetzung, insbesondere von 0,01 bis 5 Gew.-% der Zusammensetzung vor.
Eine zweite Aufgabe der vorliegenden Erfindung besteht in einer kosmetischen Zusammensetzung, die dadurch gekennzeichnet ist, daß sie als Wirkstoff mit alterungshemmender und/oder beruhigender Wirkung für sensible Haut eine Mischung aus wenigstens zwei Alkylglycosiden enthält, derart, daß die Alkylglycoside der Mischung die allgemeine Formel (S)-O-R₁ haben, worin (S) ein von einer Sequenz aus 2 bis 8 identischen oder unterschiedlichen Zuckereinheiten gebildetes Oligosaccharid und R₁ eine Alkylgruppe mit 1 bis 24 Kohlenstoffatomen ist.
Bei den beiden letzten erfindungsgemäßen Aufgaben ist die Mischung insbesondere der Art, wie sie in all den vorhergehenden Betrachtungen bezüglich der beiden ersten erfindungsgemäßen Aufgaben definiert ist.
In besonders bevorzugter Weise wird eine Mischung aus zwei Alkylglycosiden gewählt, die derart ist, daß sie insbesondere folgendes umfaßt:

Gemäß der Erfindung umfaßt die Zusammensetzung ferner vorzugsweise wenigstens ein kosmetisch akzeptables Bindemittel.
Insbesondere kann das kosmetisch akzeptable Bindemittel aus der Gruppe umfassend Pigmente, Farbstoffe, Polymere, grenzflächenaktive Substanzen, Rheologiemittel, Duftstoffe, Elektrolyte, pH-Regulatoren, Antioxidantien, Konservierungsmittel, sowie deren Mischungen ausgewählt sein.
Bei einer bevorzugten Ausführungsform ist die Zusammensetzung für eine Anwendung auf der gesamten Gesichts- oder Körperhaut oder einem Teil dieser bestimmt.
Insbesondere kann die Zusammensetzung ein Serum, eine Lotion, eine Emulsion, vorzugsweise eine reichhaltige Creme oder aber ein Hydrogel, vorzugsweise eine Maske sein oder in Form eines Sticks vorliegen.
Erfindungsgemäß enthält die Zusammensetzung vorzugsweise 0,001 bis 10 Gew.-% von einer der vorgenannten Mischungen, insbesondere 0,01 bis 5 Gew.-% von einer der vorgenannten Mischungen.
Die erfindungsgemäße Zusammensetzung kann vorteilhafterweise einen oder mehrere weitere kosmetisch aktive Wirkstoffe enthalten, die aus den Substanzen ausgewählt sein können, welche dazu bestimmt sind, die Folgen der Hautalterung, insbesondere die Faltenbildung, zu mildern oder zu verzögern, und zwar mittels einer Aktivität, die darauf abzielt, die Erhaltung der Hautstruktur zu begünstigen und/oder den Abbau der extrazellulären Matrix der Oberflächenschichten der Lederhaut und der Epidermis zu begrenzen und/oder eine die Haut schützende, korrigierende oder restrukturierende Wirkung zu erhalten, wobei die Substanzen eine beruhigende oder entspannende Aktivität haben.
Sie kann ferner auch einen oder mehrere kosmetisch aktive Wirkstoff(e) enthalten, die aus folgendem ausgewählt sind, nämlich den Substanzen mit hautaufhellender Aktivität, den Substanzen mit schlankmachender Aktivität, den Substanzen mit hydratisierender Aktivität, den Substanzen mit einer die Hautmikrozirkulation stimulierenden Aktivität, um die Helligkeit des Teints, insbesondere des Gesichts zu verbessern, den Substanzen mit talgregulierender Aktivität für die Pflege von fettender Haut, den zum Säubern oder Reinigen der Haut bestimmten Substanzen, den Substanzen mit antiradikalischer Aktivität.
Schließlich umfaßt die Zusammensetzung erfindungsgemäß eine Menge an Alkylglycosiden in einer wirkungsvollen Konzentration, um Eigenschaften zur Hemmung des mikrobiellen Wachstums und insbesondere eine Wirkung als wirkungsvolles Konservierungsmittel innerhalb der Zusammensetzung zu verleihen.
So ist es möglich, eine kosmetische Zusammensetzung ohne jedes weitere Konservierungsmittel herzustellen, da der Wirkstoff aus einem Alkylglycosid oder einer Alkylglycosidmischung, wie sie vorstehend beschrieben sind, besteht, deren Aktivitätsspektrum gegenüber verschiedenen Mikroorganismen, wie Bakterien, Pilzen oder aber Hefen, ihn geeignet macht, die Konservierung der kosmetischen Zusammensetzung sowie ihre mikrobiologische Stabilität sicherzustellen.
In einer bevorzugten Ausführung ist die kosmetische Zusammensetzung, die eine solche Alkylglycosidmischung enthält, frei von Verbindungen der Familie der Parabene oder deren Derivaten.
Eine dritte Aufgabe der vorliegenden Erfindung ist ein kosmetisches Pflegeverfahren mit dem Ziel, dem Auftreten der Anzeichen der intrinsischen und/oder extrinsischen Hautalterung vorzubeugen oder dieses zu verzögern oder die Folgen der Hautalterung abzuschwächen, wobei das Verfahren das Auftragen einer Zusammensetzung wie sie vorstehend definiert ist auf wenigstens einen Teil des Körpers oder des Gesichts umfaßt.
Eine letzte Aufgabe der vorliegenden Erfindung besteht in einem kosmetischen Pflegeverfahren, mit dem Ziel, die Hautunbehaglichkeitsempfindungen, welche mit dem Streß in Verbindung stehen, dem die Haut ausgesetzt ist, insbesondere im Fall von sensibler Haut, zu mildern, wobei das Verfahren das Auftragen einer kosmetischen Zusammensetzung, wie sie vorstehend definiert ist, auf den betroffenen Bereich des Körpers oder des Gesichts umfaßt.
Weitere Ziele, Merkmale sowie Vorteile der Erfindung werden aus der nachfolgenden erläuternden Beschreibung anhand der verschiedenen Ausführungsbeispiele der Erfindung, welche einfach zur Veranschaulichung gegeben sind und folglich in keiner Weise den Umfang der Erfindung einschränken können, klar hervorgehen. In den Beispielen sind alle Prozentangaben Gewichtsprozente, ist die Temperatur in Grad Celsius angegeben, ist der Druck der atmosphärische Druck, es sei denn, es ist etwas anderes angegeben.
BEISPIELE
MATERIAL SOWIE SYNTHESE- UND TESTVERFAHREN
1. Synthese der Verbindungen
Sofern nichts anderes angegeben ist, werden die unterschiedlichen Alkylglycoside nach dem durch Takeo et al. (Carbohydrate Research, 48 (1976) 197–208) beschriebenen Verfahren synthetisiert.
Das hier verwendete Syntheseverfahren unterscheidet sich von der Publikation lediglich im Bereich des Glykosylierungsschrittes (Pfropfen der Alkylkette), wobei das Benzol durch Dichlormethan (CH₂Cl₂) und das Quecksilberacetat durch ein HgO/HgBR₂-Gemisch ersetzt wird. Dieser Schritt wird speziell für jede der nachfolgend als Beispiel angeführten Verbindungen beschrieben.
Wobei die Wahl der Verbindungen der Reaktion, der Katalysatoren und der Reaktionsbedingungen, um die Reaktion mit einem ausreichenden Ertrag zu Ende zu führen, aus dem Stand der Technik wohl bekannt ist.
Die Produkte, die synthetisiert werden, um anschließend getestet zu werden, sind folgende:
DP2-1: Methyl-beta-D-Maltosid, hergestellt nach Beispiel 1.
DP2-8: Octyl-beta-D-Maltosid.
DP2-12: Dodecyl-beta-D-Maltosid, von ACROS ORGANICS.
DP3-1: Methyl-beta-D-Maltotriosid, hergestellt nach Beispiel 2.
DP3-12: Dodecyl-beta-D-Maltotriosid, hergestellt nach Beispiel 3.
DP7-1: Methyl-beta-D-Maltoheptanose.
Um die anti-inflammatorische Aktivität der erfindungsgemäßen Verbindungen mit anderen bekannten Verbindungen zu vergleichen, werden bekannte Alkylglycoside mit anti-inflammatorischer Aktivität, die in der Patentanmeldung WO 2005/0419893 beschrieben sind, synthetisiert.
Diese Verbindungen sind folgende:
DP1-8: n-Octyl-beta-D-glucopyranosid, von ACROS ORGANICS.
DP1-12: n-Dodecyl-beta-D-glucopyranosid, von ACROS ORGANICS.
2. Quantifizierung der Freisetzung des Prostaglandins PGE₂ und des Interleukin II-8
Es wurde bewiesen, daß Keratinozyten unter Stimulation mit Interleukin-1 beta das II-8 exprimieren und freisetzen.
Das PGE₂ ist ein wichtiger Marker der mit Gewebeschädigungen verbundenen inflammatorischen Antwort. Erzeugt wird es durch eine große Auswahl von Zellen, hierzu gehören die Monozyten, die Makrophagen oder die Keratinozyten.
Verschiedene Wirkstoffe, wie zum Beispiel Indomethacin oder Pflanzenextrakte, können die Freisetzung des PGE₂ durch die Keratinozyten der Haut modulieren.
a) Prinzip des Tests
Die Freisetzung der Marker II-8 und PGE₂ wird in Zellkulturüberständen von immortalisierten Keratinozyten-Linien (HaCaT), die für 24 Stunden in Anwesenheit von Oligosacchariden stimuliert werden, quantifiziert.
HaCaT werden bis zu einer Konfluenz von 80% kultiviert.
Es wird eine 24-stündige Behandlung mit dem zu bewertenden Produkt, mit – lediglich im Fall des II-8 – einer Parallelstimulation mittels Interleukin-1 durchgeführt.
Man verwendet eine Positivkontrolle durch Behandlung einer Säule mit einem speziell die Freisetzung eines jeden der Marker hemmenden Mittel.
Die die Marker enthaltenden Kulturüberstände werden entnommen und bis zum Tag der quantitativen Bestimmung bei –20°C konserviert.
Die quantitative Bestimmung wird mittels eines für jeden der Marker speziellen Kits durchgeführt.
b) Verwendete Kits und Reagenzien
Kits
Quantitative Bestimmung des humanen II-8 mittels des ELISA-Kit AbC204/3 (Abcys).
Quantitative Bestimmung von PGE₂ mittels des PGE₂-Parameter-Kit (R&D Systems).
Reagenzien

Interleukin-1β: Recombinant Human IL-1 beta, R&D Systems Cholecalciferol (Vitamin D₃): Sigma
Indomethacin: Sigma

c) Präparieren und Behandeln der Zellen
Diese HaCaT werden mit einer Zelldichte von 10000 Zellen pro Well (komplementiertes KSFM-Kulturmedium, Gibco) in eine 96-Well-Mikroplatte eingesät.
Die Platte wird für 24 Stunden in den Trockenofen (37°C und 5% CO₂) eingebracht.
Die Oligosaccharide, anfangs in Form einer Stammlösung mit 1 mM in DMSO, werden nach angemessener Verdünnung in Kulturmedium mit den Zellen zur Reaktion gebracht.
Parallel hierzu werden die Zellen, für das II-8, mit II-1 beta in einer Konzentration von 25 ng/ml stimuliert.
Eine Säule wird mit Cholecalciferol (Vitamin D₃) in einer Konzentration von 0,39 μg/ml behandelt und mit II-1 beta stimuliert, als die II-8-Freisetzung hemmende Positivkontrolle.
Eine Kontrollsäule ist nicht behandelt und mit II-1 beta stimuliert.
Eine Säule wird mit Indomethacin behandelt, als die PGE₂-Freisetzung hemmende Positivkontrolle.
Jede Produktkonzentration, die Positivkontrolle und die unbehandelte Kontrolle werden an 4 oder 6 HaCaT-Wells ausgewertet.
d) Quantitative Bestimmung der Marker
Nach 24-stündiger Behandlung werden die Kulturüberstände entnommen und bei –20°C gelagert.
Die quantitative Bestimmung erfolgt entsprechend dem in jedem der Kits beschriebenen Protokoll mittels eines immunenzymatischen Tests, der ermöglicht, durch spektrophotometrische Messung bei 450 nm die jeweiligen Mengen an II-8 und PGE₂, welches in den Überständen vorhanden ist, zu bestimmen.
Die Werte der optischen Dichte (OD), die für die Standard-IL-8- und Standard-PGE₂-Verdünnungsreihe mit einem Verhältnis 2 (7 Konzentrationen, im Duplikat) erhalten werden, werden in einem logarithmischen Diagramm aufgetragen.
Die bekannten Konzentrationen von IL-8 und PGE₂, die in pg/ml ausgedrückt werden, werden an der Abszisse und die optischen Dichten an der Ordinate aufgetragen, um eine Gerade zu erhalten.
Die für jede Probe gemessenen Werte der optischen Dichte werden ihrerseits im Graphen aufgetragen, um die jeweiligen Konzentrationen an IL-8 und an PGE₂, ausgedrückt in pg/ml zu bestimmen.
3. Quantitative Bestimmung der Gesamtproteine
Eine quantitative Proteinbestimmung erfolgt an jeder Vertiefung der Kulturmikroplatte.
a) Prinzip des Tests
Die quantitative Bestimmung (in mg/ml) der in den Zellrückständen vorhandenen Gesamtproteine, nach der Behandlung oder keiner Behandlung der HaCaT, ermöglicht, den Gehalt an IL-8 und PGE₂ auf die Menge an Proteinen in jeder Zellen-Vertiefung, ausgedrückt in Pikogramm (pg) Marker pro Milligramm (mg) Proteine, zu beziehen.
b) Verwendete Kits und Reagenzien
Kit
Es wird ein BCA- oder Bicinchoninsäure-Test (BC Assay UP40840A Uptima, Interchim) nach einem kolorimetrischen Verfahren verwendet.
Reagenzien
Die quantitative Bestimmung erfolgt anhand von 2 Lösungen, nämlich der Bicinchoninsäure (Reagenz A) und Kupfersulfat (Reagenz B). Die Mischung aus diesen Reagenzien, jeweils in den Verhältnissen 50:1, bildet eine grüne Lösung, die durch das Cu⁺ violett wird. Diese beiden Reagenzien befinden sich in dem BOA Assay Kit von Uptima.
Eine Standard-Proteinlösung (BSA 2 mg/ml in 0,05% NaN₃) wird ebenfalls in dem Kit mitgeliefert, um eine Reihe zu erstellen.
c) Quantitative Bestimmung der Proteine
Nach 24-stündiger Behandlung werden die Kulturüberstände der 96-Well-Mikroplatte abgenommen.
Vor Einfrieren der Platte für einige Stunden werden die Wells mit PBS (Phosphate Buffer Saline) gespült.
Nach dem Auftauen der Mikroplatte wird dann die Mischung aus den Reagenzien A + B in einer Menge von 200 μL/Well zugegeben.
Die Platte wird für 30 Minuten im Trockenofen (37°C, 5% CO₂) und in Dunkelheit plaziert. Die optische Dichte kann dann bei 570 nm gemessen werden.
Parallel hierzu wird mittels einer 2 mg/ml BSA-Stammlösung eine Standardkurve mit einem Verhältnis 2 erstellt.
Wiedergabe der Ergebnisse
Die Werte der optischen Dichte der 6 Wells werden mittels der durch die Standardkurve erhaltenen Geraden in mg Proteine pro HaCaT-Well umgewandelt (bekannte Proteinmenge für eine bei 570 nm bestimmte optische Dichte).
Am Ende wird für jede Vertiefung und jede Behandlungsbedingung eine quantitative Bestimmung der II-8- und PGE₂-Freisetzung, in pg/ml erhalten.
Dieser Gehalt wird auf eine Proteinmenge, ausgedrückt in mg/ml bezogen. Folglich wird das quantitative Endergebnis von II-8 in pg/mg Proteine zum Ausdruck gebracht.
Der Prozentsatz der Hemmung der IL-8-Produktion wird somit wie folgt berechnet:
AUSFÜHRUNGSBEISPIELE
Beispiel 1: Synthese des Methyl-Maltosid
Es wird eine Lösung aus 5 Gramm D-Maltose in 220 ml Pyridin hergestellt, es werden 80 ml Essigsäureanhydrid (80 ml) zugegeben.
Der spezielle Zwischenschritt des Verfahrens besteht darin, einer Lösung von 2,2',3,3',4',6,6'-Hepta-O-acetyl-alpha-D-maltosylbromid (2,05 g) in Dichlormethan (16,5 ml) 5,5 ml Methanol zuzugeben, es werden 5,5 ml Methanol, zu feinem Pulver gemahlenes CaSO₄ (2 g), HgO gelbes Pulver (1 g) und HgBr₂ (49 mg) zugegeben.
Das Syntheseverfahren führt zu Methyl-beta-D-Maltosid.
Der Gesamtertrag der Synthese liegt bei 75,4%.
Beispiel 2: Synthese des Methyl-Maltotriosid
Es wird eine Lösung aus 5 Gramm D-Maltotriose in 150 ml Pyridin (150 ml) hergestellt, es werden 50 ml Essigsäureanhydrid zugegeben. Der spezielle Zwischenschritt des Verfahrens besteht darin, dem nach den ersten Schritten des Verfahrens erhaltenen 2,2',2'',3,3',3'',4',4'',6,6',6''-Deca-O-acteyl-alpha-D-maltotriosylbromid (2,878 g), in Dichlormethan (20 ml) gelöst, 6 ml Methanol sowie zu feinem Pulver gemahlenes CaSO₄ (2 g), HgO gelbes Pulver (1 g) und HgBr₂ (49 mg) zuzugeben.
Das Syntheseverfahren nach Takeo et al. wird zu Ende geführt und führt schließlich zu Methyl-beta-D-Maltotriosid.
Der Gesamtertrag des Syntheseverfahrens liegt bei 85%.
Beispiel 3: Synthese des Dodecyl-Maltotriosid
Es wird eine Lösung aus 1,5 Gramm D-Maltotriose (2,97 mmol) in 50 ml Pyridin hergestellt, der 15 ml Essigsäureanhydrid zugegeben werden.
Der spezielle Schritt des Syntheseverfahrens besteht darin, dem nach den Anfangsschritten des Verfahrens erhaltenen 2,2',2'',3,3',3'',4',4'',6,6',6''-Deca-O-acteyl-alpha-D-maltotriosylbromid (2,93 g), in 20 ml Dichlormethan gelöst, 6,75 ml Dodecanol sowie zu feinem Pulver gemahlenes CaSO₄ (2,02 g), HgO gelbes Pulver (1,017 g) und HgBr₂ (50,6 mg) zuzugeben.
Das Syntheseverfahren nach Takeo et al. wird zu Ende geführt und führt schließlich zu Dodecyl-beta-D-Maltotriosid.
Der Gesamtertrag der Synthese liegt bei 77,1%.
Beispiel 4: Anti-inflammatorische Aktivität der allein getesteten Alkylglycoside
a) Quantifizierung der II-8-Freisetzung
Der Test erfolgt bei einer Alkylglycosid-Konzentration von gleich 1 μM, nach Verdünnung im Kulturmedium, die Negativkontrolle ist reines DMSO.

Die erzielten Ergebnisse sind in der nachfolgenden Tabelle 1 angegeben:

		Stand der Technik		Erfindung
	(–) Kontrolle	DP1-8	DP1-12	DP2-1	DP2-8	DP2-12	DP3-1	DP3-12	DP7-8
pg IL8/mg Prot	1233,2	1121,6	930,3	497,7	377,7	211,0	346,6	521,5	711,0
Standardabweichung	94,4	37,2	5,7	56,2	86,2	22,9	90,1	70,0	23,3
II-8-Freisetzung (%)	100	91,0	75,4	40,4	30,6	17,1	28,1	79,9	108,9
Hemmaktivität (%)	0	9,1	24,6	59,6	69,4	82,9	71,9	20,1	–8,9

Tabelle 1: anti-inflammatorische Aktivität der Alkylglycoside der Erfindung

b) Quantifizierung der PGE₂-Freisetzung
Der Test erfolgt bei einer Alkylglycosid-Konzentration von gleich 1 μM, nach Verdünnung im Kulturmedium.

Der erzielten Ergebnisse sind in der nachfolgenden Tabelle 2 angegeben:

		Stand der Technik		Erfindung
	(–)Kontrolle	DP1-8	DP1-12	DP2-1	DP2-8	DP2-12	DP3-1	DP3-12	DP7-8
pg PGE₂/mg Prot	313,7	312,8	150,0	131,3	195,5	159,8	159,6	171,8	148,1
Standardabweichung	115,7	127,4	49,1	22,1	78,9	71,0	57,8	51,9	14,4
PGE₂-Freisetzung (%)	100	99,7	47,8	41,8	62,3	50,9	50,9	81,2	70,0
Hemmaktivität (%)	0	0,3	52,2	58,2	37,7	49,1	49,1	18,8	30,0

Tabelle 2: anti-inflammatorische Aktivität der Alkylglycoside der Erfindung

Schlußfolgerungen:
Mit Ausnahme von DP3-12 und DP7-8 weisen die getesteten Verbindungen alle eine höhere Anti-II-8-Aktivität als die im Stand der Technik beschriebenen Produkte auf sowie eine PGE₂-Hemmaktivität, die denjenigen der Verbindungen des Standes der Technik entspricht oder darüber liegt.
DP3-12 wirkt dennoch auf die beiden Marker, und DP7-8 weist eine speziell gegen den PGE₂-Marker gerichtete anti-inflammatorische Aktivität auf.
Beispiel 5: Anti-inflammatorische Aktivität von Mischungen, die ein Methyl-Oligosaccharid (DPx-1) und ein Dodecyl-Oligosaccharid (DPy-12), mit x = 2 oder 3, y = 2 oder 3 und x = y oder x ≠ y, umfassen.
a) Aktivität zur Hemmung der IL-8-Freisetzung
Der Test erfolgt bei einer Alkylglycosid-Gesamtkonzentration von gleich 1 μM, nach Verdünnung im Kulturmedium.

Die Prozentsätze der Hemmung der verschiedenen getesteten Mischungen sind in der nachfolgenden Tabelle 3 angegeben:

	(–) Kontrolle	A	B	C	D
pg IL8/mg Prot	1040,00	261,10	141,89	48,27	33,11
Standardabweichung	132,39	33,32	12,76	5,62	4,41
II-8-Freisetzung (%)	100	25,11	13,64	4,64	3,18
Hemmaktivität (%)	-	74,89	86,36	95,36	96,82

Tabelle 3: anti-inflammatorische Aktivität von binären Alkylglycosidmischungen

A = DP2-1 + DP2-12 (1:1)
B = DP3-1 + DP3-12 (1:1)
C = DP2-1 + DP3-12 (1:1)
D = DP2-12 + DP3-1 (1:1)

Zum Nachweis eventueller Synergien hinsichtlich der anti-inflammatorischen Aktivität der Mischungen bewertet man die relative Abweichung zwischen der II-8-Menge, die durch die Zellen in Anwesenheit jeder Mischung freigesetzt wird, und der gleichen II-8-Menge, die durch die Zellen in Anwesenheit einer jeden der diese Mischung bildenden Verbindungen freigesetzt wird.
Eine Synergie liegt vor, wenn das unter der Wirkung der Mischung freigesetzte II-8 im Vergleich zu der II-8-Freisetzung, welche in Anwesenheit einer jeden allein getesteten Verbindung gemessen wird, erheblich abnimmt.

Die erhaltenen Ergebnisse sind in der nachfolgenden Tabelle 4 angegeben:

		(2)
		DP2-12	DP3-12
(1)	DP2-1	-
		ΔA/(1) → 45,3%	ΔC/(1) → –90,0%
		ΔA/(2) → +9,1%	ΔC/(2) → –94,7%
	DP3-1	-
		ΔD/(1) → 90,1%	ΔB/(1) → –57,8%
		-
		ΔD/(2) → 86,1%	ΔB/(2) → –84,3%

Tabelle 4: anti-inflammatorische Aktivität verglichen zwischen Mischungen und einzelnen Verbindungen

ΔM/(1) und ΔM/(2): relative Abweichung (in %) zwischen dem Grad der II-8-Freisetzung der Mischung M (1 + 2) im Vergleich zu den jeweils von der Verbindung (1) allein und von der Verbindung (2) allein gemessenen freigesetzten II-8-Mengen.
Ein negativer Wert bedeutet hier, daß die II-8-Freisetzung in Anwesenheit der Mischung im Vergleich zu der einen oder anderen der Verbindungen dieser Mischung geringer ist.
A, B, C, D: siehe Tabelle 3
b) Aktivität zur Hemmung der PGE₂-Freisetzung
Der Test erfolgt bei einer Alkylglycosid-Gesamtkonzentration von gleich 1 μM, nach Verdünnung im Kulturmedium.

Die Prozentsätze der Hemmung der verschiedenen getesteten Mischungen sind für jede Mischung in Tabelle 5 angegeben:

	(–) Kontrolle	A	B	C	D
pg PGE₂/mg Prot	187,0	173,2	78,2	156,5	164,0
Standardabweichung	85,2	92,4	49,5	85,8	73,0
PGE₂-Freisetzung(%)	100	92,6	41,8	83,7	87,7
Hemmaktivität (%)	0	7,4	58,2	16,3	12,3

Tabelle 5: anti-inflammatorische Aktivität von binären Alkylglycosidmischungen A, B, C, D: siehe Tabelle 3

Schlußfolgerungen:
Die anti-inflammatorische Aktivität durch Hemmung der II-8-Freisetzung von Mischungen, die ein methyliertes Oligosaccharid mit einem Oligosaccharid mit langer Alkylkette enthalten, ist größer als die einer jeden der beiden die Mischung bildenden Verbindungen. Diese Mischungen bewirken eine Synergie der Wirkung zur Hemmung der II-8-Freisetzung, was durch eine anti-inflammatorische Aktivität zum Ausdruck kommt, welche deutlich größer als die jeder einzelnen Verbindung ist.
Diese Mischungen weisen hingegen nur eine mäßige Anti-PGE₂-Aktivität ohne besondere Synergie auf.
Beispiel 6: anti-inflammatorische Aktivität von Mischungen, die Dodecyl-Maltotriosid (DP3-12) und ein Dodecyl-Oligosaccharid (DPz-n), mit z = 2 oder 3, n = 1 oder 12, enthalten.
a) Aktivität zur Hemmung der II-8-Freisetzung
Der Test erfolgt bei einer Alkylglycosid-Gesamtkonzentration von gleich 1 μM, nach Verdünnung im Kulturmedium.
Die Prozentsätze der Hemmung sind in der nachfolgenden Tabelle 6 für jede der getesteten Mischungen angegeben:

(–) Kontrolle B C E

pg IL8/mg Prot 1040,0 141,9 48,3 70,1

Standardabweichung 132,4 12,8 5,6 4,6

II-8-Freisetzung (%) 100 13,6 4,6 6,7

Hemmaktivität (%) 0 86,4 95,4 93,3

Tabelle 6: anti-inflammatorische Aktivität von binären Alkylglycosidmischungen

B = DP3-1 + DP3-12 (1:1)
C = DP2-1 + DP3-12 (1:1)
E = DP2-12 + DP3-12 (1:1)

Wie in Beispiel 5 wird durch Vergleichen der Aktivität jeder Mischung B, C und E mit der Aktivität einer jeden diese Mischung bildenden Verbindung nach eventuellen Synergien gesucht.
Die erzielten Ergebnisse sind in der nachfolgenden Tabelle 7 aufgeführt:

(2) = DP3-12

(1) DP2-1 ΔC/(1) → –90%

-

ΔC/(2) → 94,7%

DP2-12 -

ΔE(1) → 72,6%

-

ΔE/(2) → 92,3%

DP3-1 -

ΔB(1) → 57,8%

-

ΔB/(2) → 84,3%

Tabelle 7: anti-inflammatorische Aktivität verglichen zwischen Mischungen und einzelnen Verbindungen
ΔM/(1) und ΔM/(2): relative Abweichung (in %) zwischen dem Grad der II-8-Freisetzung der Mischung M (1 + 2) im Vergleich zu den jeweils von der Verbindung (1) allein und von der Verbindung (2) allein gemessenen II-8-Freisetzungsgraden. Ein negativer Wert bedeutet hier, daß die II-8-Freisetzung in Anwesenheit der Mischung im Vergleich zu der einen oder anderen der Verbindungen dieser Mischung geringer ist.
Eine Synergie liegt vor, wenn die II-8-Freisetzung unter der Wirkung der Mischung bei Vergleich mit den für jede allein getestete Verbindung erhaltenen Werten deutlich geringer ist.
b) Aktivität zur Hemmung der PGE₂-Freisetzung
Der Test erfolgt bei einer Alkylglycosid-Gesamtkonzentration von gleich 1 μM, nach Verdünnung im Kulturmedium.
Die Prozentsätze der Hemmung sind in der nachfolgenden Tabelle 8 für jede Mischung angegeben:

(–) Kontrolle B C E

pg PGE₂/mg Prot 187,0 78,2 156,5 112,4

Standardabweichung 85,2 49,5 85,8 43,1

PGE₂ Freisetzung(%) 100 41,8 83,7 60,1

Hemmaktivität (%) 0 58,2 16,3 39,9

Tabelle 8: anti-inflammatorische Aktivität von binären Alkylglycosidmischungen B, C, E: siehe Tabelle 6
Schlußfolgerungen
Die anti-inflammatorische Aktivität der Dodecyl-Maltotriosid enthaltenden Mischungen ist größer als die für jede allein getestete Verbindung.
Das Vorliegen von Dodecyl-Maltotriosid in der Mischung bewirkt eine Synergie der Wirkung zur Hemmung der II-8-Freistzung, was durch eine anti-inflammatorische Aktivität zum Ausdruck kommt, die deutlich größer als die jeder einzeln getesteten Verbindung ist. Es ist festzuhalten, daß Dodecyl-Maltotriosid selbst, wenn es alleine verwendet wird, eine sehr schwache Wirkung auf die Freisetzung von II-8 verleiht (siehe Beispiel 4).
Diese Mischungen weisen hingegen nur eine mäßige Anti-PGE₂-Aktivität ohne Synergie auf.
Beispiel 7: anti-inflammatorische Aktivität einer Mischung aus vier Alkylglycosiden, DP2-1, DP2-12, DP3-1 und DP3-12 (1:1:1:1)
a) Aktivität zur Hemmung der IL-8-Freisetzung
Der Test wird bei einer Alkylglycosid-Gesamtkonzentration von gleich 1 μM, nach Verdünnung im Kulturmedium durchgeführt.

Die nachfolgende Tabelle 9 enthält die Prozentsätze der Hemmung für die Mischung, im Vergleich zu jeder einzeln getesteten Verbindung:

	(–) Kontrolle	DP2-1	DP2-12	DP3-1	DP3-12	F
pg IL8/mg Prot	1040,0	497,7	211,0	346,6	521,5	22,5
Standardabweichung	132,4	56,2	22,9	90,1	70,0	6,1
II-8-Freisetzung (%)	100	40,4	17,1	28,1	79,9	2,2
Hemmaktivität (%)	0	59,6	82,9	71,9	20,1	97,8

Tabelle 9: anti-inflammatorische Aktivität einer Mischung aus vier Alkylglycosiden

F = DP2-1 + DP3-1 + DP2-12 + DP3-12 (1:1:1:1)

Wie bei den Beispielen 5 und 6 wird durch Vergleichen der Aktivität der Mischung F mit der Aktivität jeder diese Mischung bildenden Verbindung nach eventuellen Synergien gesucht.
Die erzielten Ergebnisse sind in der nachfolgenden Tabelle 10 aufgeführt:

F

(1) DP2-1 ΔF/(1) → –94,6%

(2) DP2-12 ΔF/(2) → –87,4%

(3) DP3-1 ΔF/(3) → –92,3%

(4) DP3-12 ΔF/(4) → –97,3%

Tabelle 10: anti-inflammatorische Aktivität verglichen zwischen der Mischung und den einzelnen Verbindungen.
ΔF/(1), ΔF/(2), ΔF/(3), ΔF/(4): relative Abweichung (in %) zwischen dem Grad der II-8-Freisetzung der Mischung F (1 + 2) im Vergleich zu den jeweils von den Verbindungen (1) bis (4) allein gemessenen II-8-Freisetzungsgraden.
Ein negativer Wert bedeutet hier, daß die II-8-Freisetzung in Anwesenheit der Mischung im Vergleich zu der einen oder anderen der Verbindungen dieser Mischung geringer ist.
b) Aktivität zur Hemmung der PGE₂-Freisetzung
Der Test erfolgt bei einer Alkylglycosid-Gesamtkonzentration von gleich 1 μM, nach Verdünnung im Kulturmedium.

Die nachfolgende Tabelle 11 enthält die Prozentsätze der Hemmung für die Mischung, im Vergleich zu jeder einzeln getesteten Verbindung:

	(–) Kontrolle	DP2-1	DP2-12	DP3-1	DP3-12	F
pg PGE₂/mg Prot	313,7	131,3	159,8	159,6	171,8	114,2
Standardabweichung	115,7	22,1	71,0	57,8	51,9	42,7
PGE₂-Freisetzung(%)	100	41,8	50,9	50,9	81,2	61,1
Hemmaktivität (%)	0	58,2	49,1	49,1	18,8	38,9

Tabelle 11: anti-inflammatorische Aktivität einer Mischung aus vier Alkylglycosiden F: siehe Tabelle 9

Schlußfolgerungen
Die Mischung aus vier Alkylglycosiden der Erfindung bewirkt eine Synergie der Wirkung zur Hemmung der II-8-Freisetzung, was durch eine anti-inflammatorische Aktivität zum Ausdruck kommt, die deutlich größer als die einer jeden einzeln getesteten Verbindung ist. Bei gleicher Konzentration ist die anti-inflammatorische Anti-PGE₂-Aktivität der Mischung signifikant und hinsichtlich der Intensität mit derjenigen einer jeden die Mischung bildenden Verbindung vergleichbar.
Die Alkylglycoside des Beispiels 4 sowie die Alkylglycosidmischungen der Beispiele 5 bis 7, die für Anwendungen der Erfindung repräsentative Beispiele sind, weisen eine signifikante Hemmwirkung gegenüber den Markern der II-8- und PGE₂-Entzündung auf. Diese besondere Aktivität macht sie für eine Verwendung als Wirkstoff in dermatologischen Zusammensetzungen zur Entzündungshemmung oder in alterungshemmenden oder beruhigenden kosmetischen Zusammensetzungen interessant.
Beispiel 8: Kosmetische Anti-Aging-Emulsion, die eine erfindungsgemäße Mischung aus zwei Alkylglycosiden enthält

Die Prozentangaben der nachfolgenden Formulierung sind Gewichtsprozente bezogen auf die Endzusammensetzung:

– grenzflächenaktive Substanz	5
– Fettalkohol	2
– Wachse	1,5
– Öle	11,5
– Silikonöl	1
– Polymere	0,35
– Base	0,15
– Methyl-beta-D-Maltotriosid	0,1
– Dodecyl-beta-D-Maltotriosid	0,1
– Wasser	qs 100

Beispiel 9: Anti-Aging-Serum, das eine erfindungsgemäße Mischung aus vier Alkylglycosiden enthält

– Glykole	16
– Polymere	9
– Polymergel	8
– Basen	0,1
– Komplexbildner	0,1
– Weichmacher	1,8
– Lösungsvermittler	0,3
– Duftstoff	0,1
– Alkohol	5
– Methyl-beta-D-Maltosid	0,05
– Dodecyl-beta-D-Maltosid	0,05
– Methyl-beta-D-Maltotriosid	0,05
– Dodecyl-beta-D-Maltotriosid	0,05
– Wasser	qs 100

Beispiel 10: Beruhigende Lotion für sensible Haut, die eine erfindungsgemäße Mischung aus zwei Glycosiden enthält

– Glykol	8,5
– Feuchtigkeitsspender	0,5
– Phosphat-Puffer	6
– Komplexbildner	0,2
– Base	0,5
– Alkohol	5
– Lösungsvermittler	0,2
– Duftstoff	0,05
– Methyl-beta-D-Maltosid	0,1
– Dodecyl-beta-D-Maltotriosid	0,1
– Wasser	qs 100

Beispiel 11: Alterungshemmendes oder beruhigendes Creme-Gel für sensible Haut, die eine erfindungsgemäße Mischung aus vier Alkylglycosiden enthält

– Glykol	21
– Polymere	1,6
– Komplexbildner	0,1
– Silikone	1,8
– Weichmacher	1,5
– Alkohol	2
– Polymergel	0,1
– Basen	0,05
– Feuchtigkeitsspender	1,5
– Methyl-beta-D-Maltosid	0,05
– Dodecyl-beta-D-Maltosid	0,05
– Methyl-beta-D-Maltotriosid	0,05
– Dodecyl-beta-D-Maltotriosid	0,05
– Wasser	qs 100

ZITATE ENTHALTEN IN DER BESCHREIBUNG
Diese Liste der vom Anmelder aufgeführten Dokumente wurde automatisiert erzeugt und ist ausschließlich zur besseren Information des Lesers aufgenommen. Die Liste ist nicht Bestandteil der deutschen Patent- bzw. Gebrauchsmusteranmeldung. Das DPMA übernimmt keinerlei Haftung für etwaige Fehler oder Auslassungen.
Zitierte Patentliteratur

- US 2006/0046969 [0002]
- WO 2006/107386 [0002]
- WO 2005/041983 [0003]
- WO 2005/0419893 [0075]

Zitierte Nicht-Patentliteratur

- Pillai et al., Int. J. Cosmet. Sci., 2005, 27, 17–34 [0007]
- Seo et al., Mech Ageing Dev. 2003, (8–9): 903-10 [0008]
- Carbohydrate Research, 48 (1976) 197–208 [0071]

Claims

Verwendung – in kosmetischen Zusammensetzungen – wenigstens eines Alkylglycosids oder einer Mischung aus wenigstens zwei Alkylglycosiden als beruhigender Wirkstoff für sensible Haut und/oder als Wirkstoff, der dazu bestimmt ist, dem Auftreten von Anzeichen der Hautalterung vorzubeugen oder dieses zu verzögern oder die Folgen der Hautalterung abzuschwächen, dadurch gekennzeichnet, daß das Alkylglycosid oder die Alkylglycoside der Mischung die folgende allgemeine Formel haben, nämlich (S)-O-R₁, worin (S) ein von einer Sequenz aus 2 bis 8 identischen oder unterschiedlichen Zuckereinheiten gebildetes Oligosaccharid und R₁ eine Alkylgruppe mit 1 bis 24 Kohlenstoffatomen ist.
Verwendung nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die Gruppe R₁ eine gesättigte Alkylgruppe, vorzugsweise eine gesättigte lineare Alkylgruppe ist.
Verwendung nach einem der Ansprüche 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß die Gruppe R₁ eine Alkylgruppe mit 1 bis 18 Kohlenstoffatomen, vorzugsweise eine Methyl- oder Dodecylgruppe ist.
Verwendung nach einem der Ansprüche 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, daß (S) ein Oligosaccharid ist, das von einer Sequenz aus zwei Zuckereinheiten (Zweifachzucker) oder aus drei Zuckereinheiten (Dreifachzucker) gebildet ist.
Verwendung nach einem der Ansprüche 1 bis 4, dadurch gekennzeichnet, daß die Zuckereinheit(en) reduzierende Zucker vom Typ Pentose oder Hexose oder ein Derivat dieser Zucker, vorzugsweise ein Uron-Derivat, ein Sulfat-Derivat oder ein Desoxy-Derivat sind.
Verwendung nach einem der Ansprüche 1 bis 5, dadurch gekennzeichnet, daß die Zuckereinheit(en) aus Arabinose, Xylose, Ribose, Glucose, Galactose, Mannose, Rhamnose, Fucose ausgewählt sind.
Verwendung nach einem der Ansprüche 1 bis 6, dadurch gekennzeichnet, daß die Zuckereinheit D-Glucose ist.
Verwendung nach einem der Ansprüche 1 bis 7, dadurch gekennzeichnet, daß das Oligosaccharid (S) aus Maltose, Cellobiose, Lactose und Maltotriose ausgewählt ist.
Verwendung nach einem der Ansprüche 1 bis 8, dadurch gekennzeichnet, daß die Zuckereinheit(en) aus der Reihe der rechtsdrehenden Zucker (D-Reihe) ausgewählt sind.
Verwendung nach einem der Ansprüche 1 bis 9, dadurch gekennzeichnet, daß das Oligosaccharid beta-D-Maltose oder beta-D-Maltotriose ist.
Verwendung nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß wenigstens eines der Alkylglycoside aus Methyl-beta-D-Maltosid, Methyl-beta-D-Maltotriosid, Dodecyl-beta-D-Maltosid, Dodecyl-beta-D-Maltotriosid ausgewählt ist.
Verwendung nach einem der Ansprüche 1 bis 11, dadurch gekennzeichnet, daß die Mischung insbesondere aus zwei Alkylglycosiden besteht, derart, daß sie folgendes umfaßt: – ein Alkylglycosid der allgemeinen Formel (S)-O-R₂, worin (S) so wie vorstehend definiert und R₂ eine Alkylgruppe mit 1 bis 6 Kohlenstoffatomen ist, und – ein Alkylglycosid der allgemeinen Formel (S)-O-R₃, worin (S) so wie vorstehend definiert und R₃ eine Alkylgruppe mit 8 bis 24 Kohlenstoffatomen ist, wobei die Oligosaccharid-Gruppen (S) der die Mischung bildenden Verbindungen unterschiedlich sein können.
Verwendung nach Anspruch 12, dadurch gekennzeichnet, daß die beiden die Mischung bildenden Alkylglycoside in einem Verhältnis zwischen 1/99 und 99/1, vorzugsweise zwischen 75/25 und 25/75, weiterhin bevorzugt von etwa 1 vorliegen.
Verwendung nach Anspruch 12 oder 13, dadurch gekennzeichnet, daß die Gruppe R₂ eine gesättigte Alkylgruppe, vorzugsweise eine gesättigte lineare Alkylgruppe und in besonders bevorzugter Weise eine Methylgruppe ist.
Verwendung nach Anspruch 12 bis 14, dadurch gekennzeichnet, daß die Gruppe R₃ eine gesättigte Alkylgruppe, vorzugsweise eine gesättigte lineare Alkylgruppe und in besonders bevorzugter Weise eine Dodecylgruppe ist.
Verwendung nach einem der Ansprüche 12 bis 15, dadurch gekennzeichnet, daß die Mischung aus Methyl-beta-D-Maltosid und einem Alkylglycosid besteht, das von einer Sequenz aus 3 Zuckereinheiten, vorzugsweise von Dodecyl-beta-D-Maltotriosid gebildet ist.
Verwendung nach einem der Ansprüche 12 bis 15, dadurch gekennzeichnet, daß die Mischung aus Methyl-beta-D-Maltotriosid und einem Alkylglycosid besteht, das von einer Sequenz aus 2 Zuckereinheiten, vorzugsweise von Dodecyl-beta-D-Maltosid gebildet ist.
Verwendung nach einem der Ansprüche 1 bis 11, dadurch gekennzeichnet, daß die Alkylglycosidmischung aus vier Alkylglycosiden besteht.
Verwendung nach Anspruch 18, dadurch gekennzeichnet, daß die vier Alkylglycoside in der Mischung in im wesentlichen gleichen Anteilen vorliegen.
Verwendung nach Anspruch 18 oder 19, dadurch gekennzeichnet, daß die Mischung von Methyl-beta-D-Maltosid, Methyl-beta-D-Maltotriosid, Dodecyl-beta-D-Maltosid, Dodecyl-beta-D-Maltotriosid gebildet ist.
Verwendung nach einem der Ansprüche 1 bis 20, dadurch gekennzeichnet, daß der Wirkstoff in einer Höhe von 0,001 bis 10 Gew.-% der ihn enthaltenden Zusammensetzung, insbesondere von 0,01 bis 5 Gew.-% der Zusammensetzung vorliegt.
Kosmetische Zusammensetzung, dadurch gekennzeichnet, daß sie als kosmetisch aktiven Wirkstoff eine Mischung aus wenigstens zwei Alkylglycosiden enthält, wie sie in einem der Ansprüche 1 bis 21 definiert sind.
Zusammensetzung nach Anspruch 22, dadurch gekennzeichnet, daß sie ferner wenigstens ein kosmetisch akzeptables Bindemittel enthält.
Zusammensetzung nach Anspruch 23, dadurch gekennzeichnet, daß das kosmetisch akzeptable Bindemittel aus der Gruppe umfassend Pigmente, Farbstoffe, Polymere, grenzflächenaktive Substanzen, Rheologiemittel, Duftstoffe, Elektrolyte, pH-Regulatoren, Antioxidantien, Konservierungsmittel, sowie deren Mischungen ausgewählt ist.
Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 22 bis 24, dadurch gekennzeichnet, daß sie für eine Anwendung auf der gesamten Gesichts- oder Körperhaut oder einem Teil dieser bestimmt ist.
Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 22 bis 25, dadurch gekennzeichnet, daß die Zusammensetzung ein Serum, eine Lotion, eine Emulsion, vorzugsweise eine reichhaltige Creme oder aber ein Hydrogel, vorzugsweise eine Maske ist oder in Form eines Sticks vorliegt.
Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 22 bis 26, dadurch gekennzeichnet, daß sie 0,001 bis 10 Gew.-% von einer der vorgenannten Mischungen, insbesondere 0,01 bis 5 Gew.-% von einer der vorgenannten Mischungen enthält.
Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 22 bis 27, dadurch gekennzeichnet, daß sie eine Menge an Alkylglycosiden in einer wirkungsvollen Konzentration enthält, um antimikrobielle Eigenschaften und insbesondere eine Wirkung zur Hemmung des mikrobiellen Wachstums innerhalb der Zusammensetzung zu verleihen.
Kosmetisches Pflegeverfahren mit dem Ziel, dem Auftreten der Anzeichen der intrinsischen und/oder extrinsischen Hautalterung vorzubeugen oder dieses zu verzögern oder die Folgen der Hautalterung abzuschwächen, wobei das Verfahren das Auftragen einer Zusammensetzung, wie sie durch einen der Ansprüche 22 bis 28 definiert ist, auf wenigstens einen Teil des Körpers oder des Gesichts umfaßt.
Kosmetisches Pflegeverfahren, mit dem Ziel, die Hautunbehaglichkeitsempfindungen, welche mit dem Streß in Verbindung stehen, dem die Haut ausgesetzt ist, insbesondere im Fall von sensibler Haut, zu mildern, wobei das Verfahren das Auftragen einer kosmetischen Zusammensetzung, wie sie durch einen der Ansprüche 22 bis 28 definiert ist, auf den betroffenen Bereich des Körpers oder des Gesichts umfaßt.