CZ20023797A3 - Sulfonamidové deriváty - Google Patents

Description

Sulfonamidové deriváty

Oblast techniky

Předložený vynález se týká sulfonamidových derivátů.

Dosavadní stav techniky

V centrálním nervovém systému (CNS) savců je přenos nervových impulsů řízen interakcí mezi neurotransmiterem, který je uvolňován vysílajícím neuronem, a povrchovým receptorem na přijímajícím neuronu, která způsobuje excitaci uvedeného přijímajícího neuronu. L-glutamát, který je nejhojněji se vyskytující neurctransmiter v CNS, působí v hlavních excitačních dráhách savců a je označován jako excitační aminokyselina (EAA). Receptory, které odpovídají na glutamát jsou nazývány receptory excitační aminokyseliny (EAA receptory). Viz Watkins a Evans, Ann. Rev. Pharmacol. Toxicol., 21, 165 (1381); Monaghan, Bridges a Cotman, Ann.

Rev. Pharmacol. Toxicol., 29, 365 (1989); Watkins,

Krogsgaard-Larsen a Honoře, Trans. Pharm. Sci., 11, 25 (1950). Excitační aminokyseliny mají velký fyziologický význam, hrají roli v řadě fyziologických procesů, jako je dlouhodobá potenciace (učení a paměť), vývoj synaptické plasticity, motorická kontrola, respirace, kardiovaskulární regulace a sensorická percepce.

Receptory excitačních aminokyselin jsou klasifikovány do dvou obecných typů. Receptory, které jsou přímo vázány na otevření kationtových kanálů buněčné membrány neuronů jsou nazývány ionotropní. Tento typ receptorů byl rozdělen na alespoň tři podtypy, které jsou definovány depolarizčním působením selektivních agonistů N-methyl-D-aspartátu (NMDA), alfaamino-3-hydroxy-5-methylisoxazol-4-propionové kyseliny (AMPA) a kyseliny kainové (KA - kainic acid, systematický název kyselina (2S,3S,4S)-2-karboxy-4-(1-methylethenyl)-3pyrrolidinoctová). Druhý obecný typ receptorů je G-protein neboli ke druhému poslovi (messenger) vázaný metabotropní receptor excitační aminokyseliny. Ter.ro druhý typ se kopuluje na vícenásobné systémy druhého posla, což vede na zvýšenou hydrolýzu fosfoinositidu, aktivaci fosfolipázy D, zvyšuje nebo snižuje vytváření c-AMP a změny funkce iontových kanálů, viz Schoepp a Conn, Trends in Pharmacol. Sci., 14, 13 (1993). Zdá se, že oba typy receptorů zprostředkovávají nejenom normální synaptické přenosy podél excitačních drah, ale také se podílejí na modifikacích synaptických spojení při vývoji a v průběhu života, Schoepp, Bockaert a Sladeczek, Trends in Pharmacol. Sci., 11, 508 (1990); McDonald a Johnson, Brain Research Reviews, 15, 41 (1990) .

AMPA receptory jsou sestaveny ze čtyř proteinových podjednotek, známých jako GluRl to GluR4, zatímco receptory kyseliny kainové jsou sestaveny z podjednotek GluR5 až GluR7 a KA-1 a KA2, Wong a Mayer, Molecular Pharmacology 44: 505510, 1993. Není dosud známo, jak se tyto podjednotky kombinují v přirozeném stavu. Byla však již osvětlena struktura jistých lidských variant každé podjednotky a byly klonovány buněčné linie, exprimující jednotlivé varianty podjednotek a byly zabudovány do testovacích systémů určených pro identifikace sloučenin, které se k nim váží nebo s nimi interagují a proto mohou modulovat jejich funkci. Tak například evropská patentová přihláška č. EP-A2-0574257 popisuje varianty lidských podjednotek GluRIB, GluR2B, GluR3A a GluR3B. Evropská patentová přihláška č. .EP-A1-0583917 popisuje variantu lidské podjednotky GluR4B.

Jedna charakteristická vlascnost receptorů AMPA a kyseliny kainové je jejich rychlá deaktivace a pokles citlivosti na glutamát, Yamada a Tang, The Journal of Neuroscience, září 1993, 13(9): 3904-3915 a Kachryn M. Partin, J. Neuroscience, 1. listopadu 1996, 16(21): 6634-6647.

Je známo, že rychlý pokles citlivosti a deaktivace receptorů AMPA a/nebo kyseliny kainové na glutamát může být inhibován použitím jistých sloučenin. Toto působení takových sloučenin je často označováno alternacivně jako potenciace receptorů. Jedna taková sloučenina, která selektivně potenciuje AMPA receptorovou funkci je cykiothiazid, Partin a kol., Neuron, sv. 11, 1069-1082, 1993.

Zveřejněná mezinárodní pacentová přihláška WO 98/33496, publikovaná 6. října 1953 popisuje jisté sulfonamidové deriváty, které jsou použitelné například pro léčbu psychiatrických a neurologických poruchy, například kognitivních poruch; neurodegenerativních poruch jako je Alzheimerova nemoc; demencí vztahujících se ke stáří; stářím indukovaných poruch paměti; poruch pohybu jako je tardivní dyskinesie, Huntingtonovy chorey, myoklonu a Parkinsonovy nemoci; změna stavů, indukovaných drogami (jako je stavy indukované kokainem, amfetaminy, alkoholem); depresí; poruch typu deficitu pozornosti; poruch typu hyperaktivního deficitu pozornosti; psychóz; kognitivního deficitu souvisejícího s psychózou a psychóz indukovaných drogami.

Podstata vynálezu

Předložený vynález se týká sloučenin vzorce I:

CH.

nebo jejich farmaceuticky přijatelných solí.

Předložený vynález se dále týká způsobu pouenciace funkce receptorů glutamátu u pacienta, který zahrnuje podávání uvedenému pacientovi účinného množství sloučeniny vzorce I.

Kromě toho se předložený vynález týká způsobu léčení depresí u pacienta, spočívajícího v podávání uvedenému pacientovi účinného množství sloučeniny vzorce I.

Předložený vynález se dále týká způsobu léčení schizofrenie u pacienta, spočívajícího v podávání uvedenému pacientovi účinného množství sloučeniny vzorce I.

Předložený vynález se dále týká způsobu léčení kognitivní poruchy u pacienta, spočívajícího v podávání uvedenému pacientovi účinného množství sloučeniny vzorce I.

Předložený vynález se dále týká farmaceutických kompozic s obsahem sloučenin vzorce I, včetně jejich hydrátů, obsahujících jako účinnou složku sloučeninu vzorce I v kombinaci s farmaceuticky přijatelným nosičem, ředidly nebo excipientem.

Předložený vynález také zahrnuje nové meziprodukty a dále se týká způsobu syntézy sloučenin vzorce Σ.

Navíc se předložený vynález týká použití sloučeniny vzorce I nebo její farmaceuticky přijatelné sole pro potenciaci funkce receptorů glutamátu.

Předložený vynález se mimo to týká použití sloučeniny vzorce I pro výrobu léčiva pro potenciaci funkce receptorů glutamátu.

Předložený vynález se dále týká výrobku, sestávajícího z obalového materiálu a sloučeniny vzorce I nebo její farmaceuticky přijatelné sole, uložené v uvedeném obalovém materiálu, kde uvedený obalový materiál nese označení, uvádějící, že uvedená sloučenina vzorce Ia může být použita pro léčení alespoň jednoho z následujících onemocnění:

Alzheimerova nemoc, schizofrenie, kognitivní deficit související se schizofrenií, depresí a kognitivních poruch.

Předložený vynález se dále týká farmaceutické kompozice připravené způsobem, zahrnujícím rozpuštění {(2R)-2-[4-(4—{2— [(methylsulfonyl)amino]ethyl}fenyl)fenyl]propyl}[(methylethyl)sulfonyl]aminu ve vhodném polyethylenglykclu v kapalné formě a potom ochlazení roztoku na teplotu okolí.

Detailní popis předloženého vynálezu

V tomto popisu výraz potenciace funkce receptorů glutamátu označuje libovolné zvýšení schopnosti odezvy receptorů glutamátu, například AMPA receptorů, na glutamát nebo jeho agonistu, a zahrnuje neomezujícím způsobem inhibici rychlého poklesu citlivosti nebo deaktivace AMPA receptorů na glutamát.

Sloučeninami obecného vzorce I a jejich farmaceuticky přijatelnými solemi může být léčeno nebo dosahováno prevence množství stavů jejich působením jako potenciátorů funkce receptorů glutamátu. Takové stavy zahrnují stavy, související s hypofunkcí glutamátu, jako jsou psychiatrické a neurologické poruchy, například kognitivní poruchy;

neurodegenerativní poruchy jako je Alzheimerova nemoc; s demence; s věkem související zhoršení poruchy jako je tardivní dyskinesie, věkem související paměti; pohybové

I

- 7 Huntingtonova chorea, myoklonus, dystonie a Parkinsonova nemoc; změna stavů indukovaných drogami (jako je kokain, amfetaminy, alkohol); deprese; poruchy typu deficitu pozornosti; poruchy typu hyperaktivního deficitu pozornosti; psychóza; kognitivní deficit související s psychóza a drogami indukovaná psychóza. Kromě toho jsou sloučeniny obecného vzorce I použitelné pro léčení sexuální dysfunkce. Sloučeniny obecného vzorce I mohou být také použity pro zlepšení paměti (jak krátkodobé, tak i dlouhodobé) a schopnosti učení. Předložený vynález se také týká použití sloučenin obecného vzorce I pro léčení každého z těchto stavů.

Jak je zde používáno, označení {(2R)-2-[4-(4-{2[(methylsulfonyl)amino]ethyl)fenyl)fenyl]propyl}[(methylethyl)sulfonyl]amin znamená sloučeninu obecného vzorce I:

Jak je zde používáno, označení (methylsulfonyl){2-[4-(4-{2[(methylsulfonyl)amino]ethyl}fenyl)fenyl]ethyl}amin označuje chirální dimer následující struktury:

Jak je zde používáno, označení ((2R)-2-{4-[4-((IR)-1-methyl2-{[(methylethyl)sulfonyl]aminojethyl)fenyl]fenyl}propyl)[(methylethyl)sulfonyl]amin označuje chirálr.í dimer následující struktury:

Předložený vynález se také týká farmaceuticky přijatelných solí sloučenin definovaných obecným vzorcem I a vzorcem Ia. Výraz farmaceuticky přijatelná sůl, jak je zde používán, označuje sole sloučenin výše uvedeného obecného vzorce, které jsou v zásadě netoxické pro živý organismus. Typické farmaceuticky přijatelné sole zahrnují sole, připravené reakcí sloučenin podle předloženého vynálezu s farmaceuticky přijatelnými organickými nebo anorganickými bázemi. Takové sole jsou známy jako adiční sole bázi. Takové sole zahrnují farmaceuticky přijatelné sole, uvedené v Journal of

Pharmaceutical Science, 66, 2-19 (1977), které jsou známy odborníkům v oboru.

Adiční sole bází zahrnují sole odvozené od anorganických bází jako jsou hydroxid, uhličitan a hydrogenuhličitan amonný a hydroxidy, uhličitany a hydrogenuhličitany alkalických kovů nebo kovů alkalických zemin a podobně. Takové báze, použitelné při přípravě solí podle předloženého vynálezu tedy zahrnují hydroxid sodný, hydroxid draselný, hydroxid amonný, uhličitan draselný, uhličitan sodný, hydrogenuhličitan sodný, hydrogenuhličitan draselný, hydroxid vápenatý, uhličitan vápenatý, methoxid vápenatý, hydroxid hořečnatý, uhličitan hořečnatý, methoxid hořečnatý a podobně. Draselné a sodné sole jsou obzvláště výhodné.

Je nutno uvést, že volba konrétního protiiontu, vytvářejícího část libovolné sole podle předloženého vynálezu obvykle není kritická, dokud je sůl jako celek farmakologicky přijatelná a dokud protiiont nepropůjčuje soli jako celku nežádoucí vlastnosti. Dále je zřejmé, že výše uvedené sole se mohou vyskytovat ve formě hydrátů nebo existovat ve v zásadě bezvodé formě.

Jak je zde používán, výraz stereoisomer označuje sloučeniny, vytvořené ze stejných atomů, vázaných stejnými vazbami, které však mají odlišné třídimenzionální strukcury, které jsou nezaměnitelné. Třídimenzionální strukrury jsou nazývány konfigurace. Jak je zde používán, výraz enantiomer označuje dva stereoisomery, jejichž molekuly jsou navzájem nezaměnitelnými zrcadlovými obrazy. Výraz chirální centrum označuje atom uhlíku, ke kterému jsou vázány čtyři různé skupiny. Jak je zde používán, výraz diastereomery se týká stereoisomerů, které nejsou enantiomery. Kromě toho dva diastereomery, které mají různé konfigurace v pouze jednom chirálním centru, jsou zde označovány za epimery. Výrazy racemát, racemická směs nebo racemická modifikace označují směsi stejných dílů enantiomerů.

Výraz enantiomerické obohacení, jak je zde používán, označuje vzrůst množství jednoho enantiomerů ve srovnání s druhým. Výhodný způsob vyjadřování dosaženého enantiomerického obohacení je koncept enantiomerického přebynku neboli ee, který se určí následující rovnicí:

E¹-E² _ee =---------x 100

E¹+E² kde Ξ¹ je množství prvního enantiomerů a E² je množství druhého enantiomerů. Jestliže tedy počáteční poměr dvou enantiomerů je 50:50, jako je přítomno v racemické směsi a je získáno enantiomerické obohacení dostatečné pro dosažení konečného poměru 70:30, pak ee vzhledem k prvnímu enantiomerů je 40%. Jestliže však je konečný poměr 90:10, ee vzhledem k prvnímu enantiomerů je 80%. Hodnota ee větší než 90% je výhodná, ee větší než 95% je nejvýhodnější a konečně ee větší než 99% je mimořádně výhodné. Enantiomerické obohacení může snadno určit běžný odborník v oboru použitím standardních

- 11 technik a procedur, jako je plynová nebo vysokovýkonná kapalinová chromatografie s chirální kolonou. Volba vhodné chirální kolony, vymývací rozpouštědlo a podmínky nutné pro dosažení separace enantiomerického páru patří mezi běžné znalosti odborníků v oboru.

Výrazy R a S jsou používány způsobem obvyklým v organické chemii pro označování specifické konfigurace chirálního centra. Výraz R (rectus) označuje konfiguraci chirálního centra se vztahem priorit skupin ve směru hodinových ručiček (od nejvyšší k druhé nejnižší) při pohledu podél vazby, vedoucí ke skupině s nejnižší prioritou. Výraz S (sinister) označuje konfiguraci chirálního centra se vztahem priorit skupin proti směru hodinových ručiček (od nejvyšší k druhé nejnižší) při pohledu podél vazby, vedoucí ke skupině s nejnižší prioritou. Priorita skupin je založena na jejich molekulových hmotnostech (v pořadí klesajících molekulových hmotností). Částečný seznam priorit a diskuse stereochemie je obsažena v Nomenclature of Organic Compounds: Principles and Pracrice, (J.H. Fletcher a kol., editoři, 1974) na stranách 103-120.

Jak je zde používán, výraz Lg označuje vhodnou odštěpitelnou skupinu. Příklady vhodných odštěpitelných skupin jsou Cl, Br a podobně.

Sloučeniny obecného vzorce I mohou být připraveny například postupem podle analogických procedur, uvedených ve zveřejněné mezinárodní patentové přihlášce WO 98/33496, publikované 6.

října 1998 (viz Příklad 51 tam uvedený) pro přípravu racemátu obecného vzorce I následovaného separací pro získání požadovaného (R) enantiomeru (vzorec I) nebo (S) enantiomeru. Konkrétněji sloučeniny obecného vzorce I mohou být připraveny například způsoby podle následujících

Schémat I, II, III, a IIIA. Reagenty a výchozí materiály jsou snadno dostupné pro běžného odborníka v oboru. Všechny substituenty, pokud není uvedeno jinak, jsou jak bylo definováno výše.

Schéma I

Ve Schématu I, krok A, se nitril (1) hydrogenuje pro získání primárního aminu (2) ve formě HCI sole. Například se nitril (i! rozpustí ve vhodném organickém rozpouštědle, jako je ezhanol, zpracovává se vhodným hydrogenačním katalyzátorem, jako je paládium na uhlí, zpracovává se koncentrovaným HCI a vloží se pod vodíkovou atmosférou za tlaku a teploty dostatečné pro dosažení redukce nitrilu (1) na primární amin (2) . Reakční směs se potom filtruje a filtrát se koncentruje pro získání surového primárního aminu (2) ve formě HCI sole. Tento surový materiál se potom čistí způsoby dobře známými v oboru, jako je rekrystalizace z vhodného rozpouštědla.

Ve Schématu I, krok 3, může být primární amin (2) ve formě HCI sole zpracováván vhodným separačním činidlem pro získání sole (3) . Například se primární amin (2) ve formě HCI sole rozpustí ve vhodném organickém rozpouštědle jako je ethanol a zpracovává se přibližně jedním ekvivalentem vhodné báze jako je hydroxid sodný. Reakční směs se filtruje a filtrát se zpracovává vhodným separačním činidlem jako je kyselina Ljablečná. Například se přibližně 0,25 ekvivalentů kyseliny Ljablečné ve vhodném organickém rozpouštědle, jako je ethanol, přidá k filtrátu. Roztok se potom zahřívá na teplotu přibližně 75 °C a míchá se po dobu přibližně 30 minut. Roztok se potom ponechá pomalu chladnout za míchání. Precipitát se potom izoluje filtrací, proplachuje se ethanolem a suší za vakua pro získání sele (3) . Sůl (3) se potom suspenduje ve vhodném organickém rozpouštědle jako je ethanol a přidá se voda. Kaše se zahřívá na teplotu zpětného toku, dokud pevné látky nevstoupí do roztoku. Roztok se potom ponechá pomalu chladnout za míchání po dobu přibližně 8 až 16 hodin. Suspenze se dále ochladí na teplotu přibližně 0 až 5 °C a sůl (3) se izoluje filtrací. Sůl (3) se potom proplachuje ethanolem a suší za ceploty přibližně 35 °C.

Ve Schématu 1, krok C, se sůl (3) přemění na volnou bázi (4) a v Kroku D se volná báze (4) sulfonyluje pro získání sulfonamidu (5). Například se sůl (3) je suspenduje ve vhodném organickém rozpouštědle jako je methylenchlorid a zpracovává se přibližně 2 ekvivalenty vhodné báze jako je vodný hydroxid sodný. Směs se míchá po dobu přibližně jedné hodiny a organická fáze se separuje. Organická fáze se potom suší, například azeotropní destilací s heptanem pro získání volné báze (4) . Suchá volná báze (4) v heptanu se potom zpracovává například katalytickým množstvím 4dimethylaminopyridinu, přebytkem triethylaminu a přidá se methylenchlorid pro dosažení úplného rozpuštění. Roztok se ochladí na teplotu přibližně 5 °C a zpracovává se přibližně jedním ekvivalentem sloučeniny obecného vzorce Lg-SO₂CH (CH3) ₂, jako je isopropylsulfonylchlorid. Reakční směs se potom ponechá zahřát se na teplotu okolí v průběhu přibližně 16 hodin. Reakční směs se potom ochladí na teplotu přibližně 8 °C a zpracovává se 2N vodným HCI. Organická fáze se potom separuje a promývá vodou, hydrogenuhličitanem sodným, suší nad bezvodým síranem sodným, filtruje a koncentruje za vakua pro získání sulfonamidu (5).

Ve Schématu I, krok E, se sulfonamid (5) jóduje pro získání sloučeniny (6). Například se sulfonamid (5) rozpustí v ledové kyselině octové a zpracovává se přibližně 1,1 ekvivalenty koncentrované kyseliny sírové. Do tohoto roztoku se přidají přibližně 0,2 ekvivalenty H₅IO₆ následované přidáním přibližně

0,5 ekvivalentů jódu.	Reakční	směs	se	potom	zahřívá	na
teplotu přibližně 60	C a ponechá	se za	míchání po dobu
přibližně 3 hodiny.	Reakční	směs	se	potom	ochladí	a
zpracovává 10% vodným	NaHSO3.	Směs	se	potom	ochladí	na

teplotu přibližně 0 °C až přibližně .5 °C a vzniklé pevné látky se izolují filtrací a proplachuje vodou. Pevné látky se potom rozpustí ve vhodném organickém rozpouštědle, jako je MTBE a roztok se proplachuje vodou, nasyceným hydrogenuhličitanem sodným, suší nad bezvodým síranem hořečnatým, filtruje a částečně koncentruje za vakua. Potom se přidá vhodné organické rozpouštědlo jako je heptan za pomalého míchání, dokud nezačne krystalizace. Přidá se další množství heptanu a suspenze se ponechá za míchání po dobu přibližně 8 hodin až přibližně 16 hodin. Směs se potom ochladí na teplotu přibližně 0 °C a pevné látky se izolují filtrací a proplachují heptanem pro získání sloučeniny (6).

Schéma II

^C-j-CHa

CH, (10)

CH,

Ve Schématu II, krok A, se primární amin (7) sulfonyluje pro získání sulfonamidu (8). Například se primární amin (7) rozpustí ve vhodném organickém rozpouštědle jako je methylenchlorid a zpracovává se přibližně 1,1 ekvivalenty triethylaminu. Roztok se ochladí na teplotu přibližně 10 °C a zpracovává se přibližně 1,1 ekvivalenty methansulfonylchloridu. Roztok se potom míchá za teploty okolí po dobu přibližně 1 až 2 hodin, promývá se 1 N HCl a potom se koncentruje za vakua pro získání sulfonamidu (8).

Ve Schématu II, krok B, se sulfonamid (8) je jóduje pro získání sloučeniny (9). Například se sulfonamid (8) zkombinuje s kyselinou octovou, 95% kyselinou sírovou a vodou a potom se zpracovává přibližně 0,5 ekvivalenty jódu a přibližně 0,2 ekvivalenty kyseliny jodisté. Reakční směs se zahřívá na teplotu přibližně 70 °C až přibližně 75 °C po dobu přibližně 3 hodin. Reakční směs se potom ponechá za míchání za teploty okolí po dobu přibližně 8 hodin až přibližně 16 hodin. Potom se přidají přibližně 2 ekvivalenty báze jako je hydroxid sodný následované přidáním dostatečného množství nasyceného siřičitanu sodného pro odbarvení směsi, čímž se získá bílá suspenze. Suspenze se ochladí na teplotu přibližně 15 °C a pevné látky se izolují filtrací. Pevné látky se potom rozpustí ve vhodném organickém rozpouštědle jako je methylenchlorid, proplachují se vodou a organická fáze se koncentruje za vakua pro získání sloučeniny (9).

Ve Schématu II, krok C, se sloučenina (9) přemění na Boc sulfonamid (10). Například se sloučenina (9) rozpustí ve vhodném organickém rozpouštědle jako je methylenchlorid a zpracovává se katalytickým množstvím 4-dimethylaminopyridinu a přibližně 1,2 ekvivalenty di-terc.-butylhydrogenuhličitanu. Reakční směs se potom ponechá za míchání za teploty okolí po dobu přibližně 8 hodin až přibližně 16 hodin. Reakční směs se potom proplachuje vodou a organická fáze se částečně koncentruje za vakua. Přidá se vhodné organické rozpouštědlo jako je hexan a tento roztok se znovu proplachuje vodou. Organická fáze se potom koncentruje za vakua a přidá se hexan, což vytvoří precipitát. Pevné látky

se izolují filtrací sulfonamidu (10).	a suší	za	vakua pro	získání Boc
Ve Schématu II,	krok	D, se	Boc	sulfonamid	(10) vystaví
boračním podmínkám	pro	získání	sloučeniny (11).	Například se
Boc sulfonamid	(10)	rozpustí	ve vhodném	organickém
rozpouštědle jako	je	acetonitril a	zpracovává	se přebytkem

triethylaminu, katalytického množství komplexu 1,1'bis(difenylfosfino)ferrocendichlorpaládia (II) - CH₂C1₂ (2,9 g, 0,0035 molů) a přibližně 1,3 ekvivalenty pínakolborítanu. Reakční směs se ponechá za míchání za teploty přibližně 70 °C až přibližně 74 °C po dobu přibližně 8 hodin. Reakční směs se potom ochladí na teplotu okolí a koncentruje se na tekutý olej . Tento olej se rozdělí mezi vhodné organické rozpouštědlo jako je MTBE a vodu. Organická fáze se separuje, promývá vodou a koncentruje za vakua. Residuum se částečně rozpustí ve vhodném organickém rozpouštědle jako je heptan. Heptanový roztok se filtruje přes Celit® 521 a filtrát se koncentruje za vakua pro získání oleje. Residuum se rozpustí ve směsi rozpouštědel acetonu a heptanu a filtruje se přes Celit® 521. Filtráty se koncentrují za vakua pro získání sloučeniny (11).

Ve Schématu II, krok E, se sloučenina (11) zbaví ochrany pro získání sloučeniny (12). Například se sloučenina (11) rozpustí ve vhodném organickém rozpouštědle jako je methylenchlorid a zpracovává se přebytkem kyseliny trifluoroctové. Reakční směs se ochladí na teplotu přibližně

5°C a neutralizuje se vodnou bází jako je vodný hydroxid sodný pro dosažení pH vodné fáze přibližně 10,5. Fáze se separují a vodná fáze se extrahuje vhodným organickým rozpouštědlem jako je methylenchlorid. Organická fáze a organické extrakty se zkombinují, promývají solným roztokem, vodou, zředí heptanem a koncentrují za vakua pro získání suspenze. Pevné látky se izolují filtrací, proplachují se pentanem a suší za vakua pro získání sloučeniny (12).

Ve Schématu II, krok F, se sloučenina (12) se vystaví štěpení pinakolátem pro získání sloučeniny (13) . Například se sloučenina (12) zkombinuje s 1 N octanu amonného a přebytkem periodátu sodného ve vhodném organickém rozpouštědle jako je aceton. Směs se míchá po dobu přibližně 8 hodin až přibližně 16 hodin a potom se filtruje. Pevné látky se proplachují acetonem. Filtráty se zkombinují a koncentrují za vakua pro získání suspenze, která se izoluje filtrací. Izolovaná pevná látka se potom suspenduje ve vodě a zpracovává vodným hydroxidem sodným pro dosažení pH přibližně 12,5. Suspenze se potom filtruje a filtrát se odbarvuje uhlíkem. Směs se potom filtruje a filtrát se zředí kyselinou sírovou do dosažení pH přibližně 5,0. Vzniklý precipitát se izoluje filtrací a suší se za vakua pro získání sloučeniny (13).

Schéma III

Ve Schématu III se sloučenina (13) kopuluje na sloučeninu (6) pro získání sloučeniny obecného vzorce I. Například se vodný roztok mravenčanu draselného připraví zkombinováním vody, hydroxidu draselného a jednoho ekvivalentu 98% kyselina mravenčí. Do tohoto roztoku se potom přidá přibližně 0,2 ekvivalentů uhličitanu draselného, přibližně 1,8 ekvivalentů sloučeniny (13) a přibližně 2,0 ekvivalentů sloučeniny (6) ve vhodném organickém rozpouštědle, jako je n-propanol. Je zřejmé, že výše uvedené složky, zahrnující vhodné organické rozpouštědlo, mohou být přidány v libovolném pořadí do vodného roztoku mravenčanu draselného. Do této směsi, která byla deoxygenována a vložena pod dusíkovou atmosféru, se přidá katalytické množství paládiové černi a směs se znovu deoxygenuje a vloží pod dusíkovou atmosféru. Směs se potom zahřívá na teplotu přibližně 88 °C po dobu přibližně 8 hodin až přibližně 18 hodin. Reakční směs se potom ochladí a zředí vhodným organickým rozpouštědlem jako je ethylacetát. Potom se filtruje přes Celit®, filtrát se koncentruje za vakua a residuum se rozdělí mezi ethylacetát a vodu. Organická fáze se separuje, koncentruje za vakua a residuum se rekrystalizuje směsí vhodných rozpouštědel jako je aceton/voda pro získání sloučeniny obecného vzorce I.

I

- 23 Schéma IIIA

(11)

O

HjC—J—CH,

Ve Schématu IIIA, krok A, se sloučenina (11) vystaví štěpení pinakolátem boritým pro získání sloučeniny (14). Například se sloučenina (11) rozpustí ve vhodném organickém rozpouštědle, jako je aceton a přidá se za mícháni do roztoku octanu produktu a vodná rozpouštědly, jako separují a vodná Organická fáze a amonného, do kterého byl přidán přebytek periodátu sodného. Reakční směs se ponechá za míchání po dobu přibližně 8 hodin až přibližně 16 hodin a potom se koncentruje za vakua pro odstranění acetonu. Vodná fáze se dekantuje z olejovitého se extrahuje vhodnými organickými je methylenchlorid a MTBE. Olejovitý produkt a organické extrakty se zkombinují a zpracovávají se vodnou bází jako je hydroxid sodný pro dosažení pH přibližně 12,5. Fáze se separují a organická fáze se extrahuje 1 N hydroxidem sodným a vodou. Vodná fáze a vodné extrakty se potom zkombinují a promývají vhodnými organickými rozpouštědly ;ako je methylenchlorid a MTBE. Vodná fáze se potom přidá do vhodného organického rozpouštědla jako je methylenchlorid a zpracovává se vhodnou kyselinou, jako je 1 N kyselina sírová, pro dosažení pH přibližně 3. Fáze se fáze se extrahuje methylenchloridem. organické extrakty se zkombinují a koncentrují za vakua. Residuum se rozetře s vhodnou směsí rozpouštědel jako je MTBE/heptan pro získání sloučeniny (14).

Ve Schématu ZZIA, krok B, se sloučenina (14) kopuluje na sloučeninu (6) pro získání sloučeniny obecného vzorce I. Například sloučenina (6) se zkombinuje s přibližně 1,4 ekvivalenty sloučeniny (14) a přibližně 1,2 ekvivalenty uhličitanu draselného ve vhodném organickém rozpouštědle, jako je n-propanol. Do této směsi se přidá voda a katalytické množství octanu paladnatého. Reakční směs se potom zahřívá na teplotu zpětného toku po dobu přibližně 20 hodin. Potom se ochladí na neplenu okolí a zředí vhodným organickým rozpouštědlem jako je ethylacetát. Zředěná směs se filtruje přes Celit®, který se proplachuje ethylacetátem. Filtráty se zkombinuji, koncentrují za vakua a residuum se zředí vhodným organickým rozpouštědlem jako je ethylacetát a 10% vodným uhličitanem draselným. Fáze se separují a vodná fáze se extrahuje ethylacetátem. Organická fáze a organické extrakty se zkombinují, suší se nad bezvodým síranem hořečnatým, filtrují se a částečně koncentrují. Roztok se zahřívá na teplenu přibližně 60 °C za míchání a přidá se vhodné organické rozpouštědlo, jako je heptan, pro získání objemového poměru ethylacetát/heptan přibližně 17:11. Roztok se ponechá ochladit se pomalu na teplotu okolí za míchání po dobu přibližně 8 hodin až přibližně 16 hodin a potom se ochladí na teplotu přibližně 0 °C. Vzniklé pevné látky se izolují filtrací a proplachují se směsí ethylacetét/heptan pro získání sloučeniny obecného vzorce I.

Příklady provedení vynálezu

Následující příklady jsou pouze ilustrativní a nejsou zamýšleny jako omezení předloženého vynálezu jakýmkoli způszbem. Reagenty a výchozí materiály jsou snadno dostupné běžnému odborníkovi v oboru. Pokud není uvedeno jinak, subsrituenty jsou jak bylo definováno výše. Jak jsou zde používány, následující výrazy mají tyto významy: ekv označuje ekvivalenty; g označuje gramy; mg označuje miligramy; ng označuje nanogramy; 1 označuje litry; ml označuje mililitry; μΐ označuje mikrolitry; mol označuje moly; mmol označuje milimoly; psi označuje libru na čtvereční palec; kPa označuje kilopascaly; min označuje minuty; h označuje hodiny; °C označuje stupně Celsia; TLC označuje chromatografií na tenké vrstvě; HPLC označuje vysokovýkonnou kapalinovou chromatografií; GC označuje plynovou chromatografií; R_f označuje retenční faktor; delta označuje části na milion pod hodnotou tetramethylsilanu; THF označuje tetrahydrofuran; DMF označuje N,N-dimezhylformamid; DMSO označuje methylsulfoxid; LDA označuje lithium diisopropylamid; aq označuje vodný; iPrOAc označuje isopropylacetát; EtOAc označuje ethylacetát; MIBK označuje methyl-isobutyl-keton; EtOH označuje ethylalkohol; MeOH označuje methanol; MTBE označuje terč.-butyl-methylether, DEAD označuje diethylazodikarboxylát; TMEDA označuje Ν,Ν,Ν',Ν'tetramethylethylendiamir. a RT označuje teplotu okolí.

Příklad 1

Příprava { (2R)-2-Í4-(4-{2—[(methylsulfonyl)amino]ethyl}fenyl)fenyl]propyl} [ (mezhylethyl)sulfonyl]aminu.

Příprava hydrochloridu 2-fenyl-l-propylaminu.

HCI

Schéma I, krok A: Do autoklávového hydrogenačního zařízení pod dusíkovou atmosférou bylo vloženo vodou navlhčené 5% paláaium na uhlí (453 g) , ethanol (6,36 1), 2fenylpropionicril (636 g, 4,85 molů) a nakonec koncentrovaná (12I<) kyselina chlorovodíková (613g, 5,6 molů). Směs byla rychle míchána a natlakován na 89,7-92,7 psi (618,46-639,15 kPa) vodíku. Směs byla potom zahřívána na teplotu 50-64 °C po dobu 3 hodin. ^ΤΗ NMR analýza alikvotu ukázala méně než 5% výchozího materiálu. Reakční směs byla zbavena tlaku a filtrována pro získání dvou dávek filtrátu, které byly koncentrovány za sníženého tlaku každá na ~ 400 ml. Do každé dávky byl přidán methyl-terc.-butylether (MTBE) (2,2 1 každý) a precipitované pevné látky byly ponechány za míchání přes noc. Každá dávka byla filtrován a izolované pevné látky byly každá promývána čerstvým MTBE (100 ml) a sušeny přes noc. Dávky byly zkombinovány pro získání hydrochloridu 2-fenyl-lpropylaminu (634,4 g, 76,2%) ve formě bílého prášku.

¹H NMR analýza volné báze: ^XH NMR (CDCI3, 300 MHz) δ 7,32 (m, 2H), 7,21 (m, 3H), 2,86 (m, 2H) , 2,75 (m, 1H) , 1,25 (d, 3H, J=6,9), 1,02 (br s, 2H).

Příprava jablečnanu (2R)-2-fenylpropylaminu.

Schéma I, krok B: Do 3-litrové baňky pod dusíkovou atmosférou byl vložen hydrochlorid 2-fenyl-l-prcpylaminu (317,2 g,l,85 molů), bezvodý ethanol (2,0 1) a kuličky NaOH (75,4 g, 1,89 molů), které byly promývány dalším ethanolem (500 ml) . Směs byla míchána po dobu 1,6 hodiny a vzniklé mléčně bílé NaCI sole byly filtrovány. Alikvoc filtrátu byl analyzován plynovou chromatografií pro získání množství volného aminu, 2-fenyl-l-propylaminu (1,85 molů). Roztok kyseliny L-jablečné (62,0 g, 0,462 molů, 0,25 ekvivalentů) v ethanolu (320 ml) byl přidán po kapkách do žlutého filtrátu a roztok byl zahříván na teplotu 75 °C. Rozcok byl míchán při teplotě 75 °C po dobu 30 minut. Zdroj tepla byl odstraněn a roztok byl ponechán pomalu chladnout. Vzniklý hustý precipitát byl ponechán za míchání přes noc. Precipitát byl filtrován a sušen za vakua po promývání ethanolem (325 ml) pro získání jablečnanu (2R)-2-fenylpropylaminu (147,6 g, 39,5%) ve formě bílé krystalické pevné látky. Chirální GC analýza volné báze, 2-fenyl-l-propylaminu, ukázala 83,2% e.e. obohacení Risomerem (konfigurace byla určena spektrometrickým porovnáním s komerčním 2-fenyl-l-propylaminem).

^ΧΗ NMR (CDCI3, 300 MHz) δ 7,32 (m, 2H) , 7,21 (m, 3H) , 2,86 (m,

2H) , 2,75 (m, 1H), 1,25 (d, 3H, J=6,9), 1,02 (br s, 2H) .

Kaše jablečnanu (2R)-2-fenylpropylaminu (147,1 g, 83,2% e.e.) v 1325 ml ethanolu a 150 ml deionizované vody byla zahřívána na teplotu zpětného toku (~ 79,2 °C) dokud pevné látky nevstoupily do roztoku. Homogenní roztok byl ponechán pomalu ochladnout za míchání přes noc. Precipitované bílé pevné látky byly ochlazeny (0-5 °C) a filtrovány. Izolované pevné látky byly proplachovány ethanolem (150 ml) a sušeny při teplotě 35 °C pro získání jablečnanu (2R)-2-fenylpropylaminu (125,3 g, 85,2% výtěžek) ve formě bílého prášku. Chirální GC analýza volné báze, (2R)-2-fenylpropylaminu, ukázala 96,7% e.e. obohacení R-isomerem.

*Η NMR' (CD₃OD, 300 MHz) δ 7,32 (m, 10H) , 4,26 (dd, 1H, J=3,6, 9,9), 3,08 (m, 6H), 2,72 (dd, 1H, J=9,3, 15,3), 2,38 (dd, 1H, J=9,3, 15,6), 1,33 (d, 6H, J=6,6).

Příprava ((2R)-2-fenylpropyl)[(methylethyl)sulfonyl]aminu.

O CH,

H-I-7

II \

CH,

Schéma I, kroky C a D: Do míchané kaše jablečnanu (2R)-2fenylpropylaminu (200 g, 0, 494 molů) v CH2CI2 (1000 ml) byl přidán 1,0 N NaOH (1050 ml, 1,05 molů). Směs byla míchána za teploty okolí po dobu jedné hodiny a organická fáze byla separována a gravitačně filtrována do 3,0 1 baňky s promýváním CH2CI2 (200 ml). Vzniklá volná báze, (2R)-230 fenylpropylamin, byl sušen azeotropní destilací. Čirý filtrát byl koncentrován na 600 ml za atmosférického tlaku destilací’ přes jednoduchou destilační hlavu. Byl přidán heptan (1000 ml) a roztok byl koncentrován znovu za atmosférického tlaku na 600 mi použitím proudu dusíku pro zvýšení rychlosti destilace. Závěrečná teplota nádoby byla 109 °C.

Roztok byl ochlazen na teplotu okolí pod dusíkovou atmosférou za míchání pro získání čirého bezbarvého heptanového roztoku (600 ml) (2R)-2-fenylpropylaminu. Do tohoto roztoku byl přidán 4-dimethylaminopyridin (6,04 g, 0,0494 molů), triethylamin (200 g, 1,98 molů) a CH₂C1₂ (500 ml). Směs byla míchána za teploty okolí dokud nebyl získán čirý roztok. Tento roztok byl ochlazen na teplotu 5 °C a po kapkách a za míchání byl přidán roztok isopropylsulfonylchloridu (148 g, 1,04 molů) v CH₂C1₂ (250 ml) v průběhu 2 hodin. Směs byla ponechána zahřát se postupně na teplotu okolí během 16 hodin. GC analýza prokázala úplné spotřebování (2R)-2fenylpropylaminového výchozího materiálu.

Míchaná směs byla ochlazena na teplotu 8 °C a po kapkách byl přidán 2 N HCl (500 ml) . Organická fáze byla separována a extrahována vodou (1 x 500 ml) a nasyceným NaHCO3 (1 x 500 ml). Organická fáze byla izolována, sušena (Na₂SO₄) a gravitačně filtrována, u byl koncentrován za sníženého tlaku pro získání ((2R)-2-fenylpropyl)[ (methylethyl)sulfonyl]amin (230g, 96%) ve formě bledě žlutého oleje.

^XH NMR (CDC1₃, 300 MHz) δ 7,34 (m, 2H) , 7,23 (m, 3H) , 3,89 (široký t, 1H, J=5,4), 3,36 (m, 1H) , 3,22 (m, 1H) , 3,05 (m,

ΙΗ), 2,98 (m, ΙΗ), 1,30 (d, 3H, J=7,2), 1,29 (d, 3H, J=6,9), 1,25 (d, 3H, J=6,9).

Příprava [(2R)-2-(4-jodfenyl)propyl][(methylethyl)sulfonyl]aminu

Schéma I, krok E: Za teploty okolí míchaný roztok ((2R)—2— fenylpropyl) [ (methylethyl)sulfonyl]aminu (37,1 g, 0,154 molů) v ledové kyselině octové (185 ml) byl zpracováván koncentrovanou H₂SO₄ (16,0 g, 0,163 molů), přidanou po kapkách pomalým způsobem, následovanou proplachováním H₂0 (37 ml). Do tohoto roztoku (-30 °C) byl přidán Η₅ΙΟ₆ (8,29 g, 0,0369 molů), následovaný jódem (17,9 g, 0,0707 molů). Vzniklá reakční směs byla zahřívána a ponechána za míchání po 3 hodiny při teplotě 60 °C. Poté, co HPLC analýza ověřila spotřebování výchozího materiálu, byla reakční směs ochlazena na teplotu 30° C a po kapkách byl přidán 10% vodný roztok NaHSO₃ (220 ml), udržujíce teplotu mezi 25 ° C a 30 ° C. Směs krystalizovala na pevnou hmotu po ochlazení na teplotu 05 °C. Pevné látky byly podtlakově filtrovány a proplachovány H₂O pro získání 61,7 g surových pevných látek, které byly znovu rozpuštěny v horkém ΜΤΒΞ (500 ml) . Tento roztok byl extrahován pomocí H₂0 (2 x 200 ml) a nasyceného NaHCO₃ (1 x 200 ml) a organická fáze byla sušena (MgSO₄) , filtrována a koncentrována za sníženého tlaku na ~ 200 ml. Heptan (100 ml) byl přidán po kapkách do roztoku produktu s pomalým mícháním, dokud nezačala krystalizace. Bylo přidáno dalších 100 ml heptanu a vzniklá suspenze byla ponechána za míchání pomalu přes noc za teploty okolí. Směs byla potom ochlazena (0 °C) , filtrována a izolované pevné látky byly proplachovány heptanem. Pevné látky byly potom sušeny na vzduchu pro získání meziproduktu z názvu, [(2R)-2-(4-jodfenyl)propyl][(methylethyl)sulfonyl]aminu (33,7 g, 59,8%) ve formě bílého prášku. Chirální chromatografie této dávky indikovala 100 % e.e.

^XH NMR (CDC1₃, 300 MHz) δ 7,66 (d, 2H, J=8,l), 6,98 (d, 2H, J=8,4), 3,86 (široký t, 1H, J=5,l), 3,33 (m, 1H) , 3,18 (m,

1H) , 3,06 (m, 1H) , 2,92 (m, 1H) , 1,30 (d, 3H, J=6, 6) , 1,27 (d, 6H, J=6,6).

Příprava (methylsulfonyl)(2-fenylethyl)aminu.

Schéma II, krok A: Do 10 °C roztoku fenethylaminu (12,1 g, 0,100 molů) a triethylaminu (11,1 g, 0,110 molů) v CH₂C1₂ (50 ml) byl přidán methansulfonylchlorid (12,6 g, 0,110 molů) po kapkách během 10 min. Roztok byl míchán za teploty okolí po 1,5 hodiny a byl potom promýván 1 N HCI (5 x 20 ml). Organická fáze byl přímo koncentrována pro získání meziproduktu z názvu, (methylsulfonyl)(2-fenylethyl)aminu, (21,2 g, 93,3%) ve formě oleje.

^XH NMR (CDC1₃, 300 MHz) δ 7,32 (m, 2H) , 7,23 (m, 3H) , 4,30 (br s, 1H), 3,40 (t, 2H, J=3,9), 2,88 (t, 2H, J=4,2), 2,81 (s, 3H) .

Příprava [2-(4-jodfenyl)ethyl](methylsulfonyl)aminu.

O

H,C—S—N O^H

Schéma II, krok B: Do roztoku míchaného za teploty okolí (methylsulfonyl)(2-fenylethyl)aminu (205 g, 1,03 molů), vody (200 ml), 95% kyseliny sírové (111 g, 1,08 molů) v kyselině octové (1 1), byl přidán jód (111 g, 0,438 molů) a kyselina jodistá (H₅IO₆, 45,6 g, 0,206 molů). Reakční směs byla zahřívána na teplotu 70-75 °C po 3 hodiny. Zdroj tepla byl odebrán a tmavě fialová reakční směs byla ponechána přes noc za teploty okolí. Byly přidány tabletky hydroxidu draselného (85%, 143 g, 2,16 molů) pro neutralizaci kyseliny sírové a potom dostatek nasyceného vodného siřičitanu sodného pro odbarvení směsi pro získání bílé suspenze. Suspenze byla ochlazena na teplotu 15 °C a filtrována. Filtrační koláč byl rozetřen důkladně s vodou a byl potom rozpuštěn v CH₂C1₂ (1 1) a extrahován další vodou (2 x 200 ml) . Organická fáze byla koncentrována za sníženého tlaku pro získání meziproduktu z názvu, [2-(4-jodfenyl)ethyl](methylsulfonyl)aminu, (201 g, 60,2%) ve formě bílého prášku.

^TH NMR (CDC1₃, 300 MHz) δ 7,64 (d, 2H, J=4,8), 6,97 (d, 2H,

J=5,l), 4,37 (široký t, 1H, J=4), 3,36 (zjevný q, 2H, J=3,9), 2,85 (s, 3H), 2,82 (t, 2H, J=3,9).

Příprava (terč.-butoxy)-N-[2-(4-jodfenyl)ethyl]-N(methylsulfonyl)karboxamidu.

Schéma II, krok C: Roztok [2-(4-jodfenyl)ethyl](methylsulfonyl)aminu (201 g, 0,618 molů), 4dimethylaminopyridinu (3,8 g, 0,031 molů) a di-terc.-butyl dikarbonátu (162 g, 0,744 molů) o teplotě okolí v CH₂C1₂ (1 1) byl ponechán za míchání přes noc. Reakční směs byla promývána vodou (2 x 400 ml) a organická fáze byla koncentrována na přibližně 600 ml a byl přidán hexan (400 ml) . Tento zkombinovaný roztok byl promýván znovu vodou {400 ml} a byl koncentrován na pevnou látku, která byla suspendována v hexanu (600 ml) a filtrována. Izolované pevné látky byly sušeny za sníženého tlaku pro získání meziproduktu z názvu, (terč.-butoxy)-N-[2-(4-jodfenyl)ethyl]-N-(methylsulfonyl)karboxamidu (241,5 g, 91,5%) ve formě bílé pevné látky.

^XH NMR (CDCI3, 300 MHz) δ 7,63 (d, 2H, J=7,8), 6,98 (d, 2H, J=7,8), 3,88 (t, 2H, J=6,9), 3,10 (s, 3H) , 2,88 (t, 2H, J=6,9), 1,51 (s, 9H).

Příprava (terč.-butoxy)-N-(methylsulfonyl)-N-{2-[4-(4,4,5,5tetraměthy1-(1,3,2-dioxaborolan~2-yl))fenyl] ethyl}karboxamidu.

Schéma II, krok D: Do odplyněného roztoku (terc.-butoxy)-N[2-(4-jodfenyl)ethyl]-N-(methylsulfonyl)karboxamidu (128 g; 0,300 molů), triethylaminu (91,1 g, 0,900 molů), a komplexu 1,1'-bis(difenylfosfino)ferrocendichlorpaládia (II) - CH₂C1₂ (2,9 g, 0,0035 molů) v acetonitrilu (600 ml) byl pc kapkách přidán pinakolboritan (50 g, 0,391 molů). Směs byla míchána při teplotě 70-74 °C po 8 hodin a potom byla ochlazena na teplotu okolí. Reakční směs byla koncentrována na tekutý olej, který byl rozdělen mezi MTBE (500 ml) a vodu (500 ml). Organická fáze byla separována a promývána vodou (2 x 200 ml) a koncentrována na residuum, které bylo částečně rozpuštěno v heptanu (1 1). Heptanem rozpustná frakce byla filtrována přes Celit® 521 a koncentrována na olej (95 g) . Residuum bylo rozpuštěno v acetonu (600 ml) a heptanu (600 ml) a filtrováno přes Celit® 521. Zkombinované filtráty byly koncentrovány na 95 g směsi v 3:1 molárním poměru (¹H NMR, 81,0% hmot.) meziproduktu z názvu, (terč.-butoxy)-N-(methylsulfonyl)-N-{2[4-(4,4,5,5-tetramethyl(1,3,2-dioxaborolan-2-yl))fenyl]ethyl}karboxamidu, (60,3% korigovaný výtěžek) a protio derivátu.

^XH NMR (CDC1₃, 300 MHz) δ 7,75 (d, 2H, J=7,8), 7,23 (d, 2H, J=8,l), 3,87 (t, 2H, J=8,l), 2,99 (s, 3H) , 2,90 (t, 2H, J=7,5), 1,53 (s, 9H), 1,33 (s, 6H), 1,27 (s, 6H).

Příprava (methylsulfonyl){2- [4- (4,4,5,5-tetramethyl(1,3,2dio?:aborolan-2-yl) ) fenyl] ethyl}aminu.

Schéma II, krok E: Do 2 1 baňky naplněné míchaným roztokem (terč.-butoxy)-N-(methylsulfonyl)N-{2-[4-(4,4,5,5tetramethyl(1,3,2-dioxaborolan-2-yl))fenyl]ethyl}karboxamidu (98,7 g, 0,232 molů) v CH2CI2 (500 ml) byla přidána kyselina trifluoroctová (82 ml, 121,4 g, 1,06 molů) po kapkách přičávací nálevkou. Nebyla pozorována žádná exotermie a reakční roztok byl ponechán za míchání za teploty okolí po 18 hodin.

- 37 HPLC analýza ukázala 98% ukončení reakce a tak byla ochlazená (5 °C) reakční směs neutralizována pomalým přidáním 5N NaOH (175 ml). pH vodné fáze bylo 10,5. Fáze byly separovány a vodná fáze byla extrahována CH2CI2 (50 ml) . Zkombinované CH2CI2 fáze byly promývány solným roztokem (2 x 100 ml) a vodou (1 x 100 ml). CH₂C1₂ fáze byla zředěna heptanem (300 ml) a byla koncentrována za sníženého tlaku pro získání suspenze, která byla izolována filtrací. Izolované pevné látky byly promývány pentanem (2 x 100 ml) a sušeny za vakua pro získání meziproduktu z názvu, (methylsulfonyl){2-[4-(4,4,5,5tetramethyl(1,3,2-dioxaborolan-2-yl))fenyl]ethyljaminu, (69,Og, 91,4%) ve formě bílého prášku.

^TH NMR (CDCI3, 300 MHz) δ 7,77 (d, 2H, J=8,l), 7,22 (d, 2H, J=7,8), 4,26 (široký t, 1H, J=6) , 3,40 (q, 2H, J=6,9), 2,89 (t, 2H, J=6,6), 2,82 (s, 3H) , 1,34 (s, 12H) .

Příprava kyseliny 4-{2- [ (methylsulfonyl)amino]ethyl}benzenborité.

Schéma II, krok F: . (Methylsulfonyl){2-[4-(4, 4,5,5tetramethyl(1,3,2-dioxaborolan-2-yl))fenyl]ethyl]amin (68,0 g, 0,209 molů) byl vložen do 2-litrové baňky a zkombinován s acetonem (600 ml), 1 N octanem amonným (600 ml), a NaIO₄ (168,1 g, 0,786 molů). Tato směs byla míchán za teploty okolí přes noc. Reakční směs byla filtrována pro odstranění nerozpustných látek pro získání filtrátu A. Izolované pevné látky byly promývány s acetonem (2 x 100 ml) a tento filtrát byl zkombinován s filtrátem A. Zkombinované filtráty byly koncentrovány za sníženého tlaku na 600 ml pro získání precipitátu, který byl izolován filtrací. Izolované pevné látky byly sušeny na vzduchu pro získání 110 g surového materiálu. Tento surový materiál byl suspendován ve vodě (100 ml) a byl přidáván 5N NaOH až do dosažení pH 12,5. Vzniklá suspenze byla filtrována a filtrát byl zpracováván dekclorizačním uhlíkem (Darco 6-60). Směs byla filtrována a filtrát byl zředěn pomocí 10N H₂SO₄ až do dosažení pH 5,0 pro precipitaci meziproduktu z názvu. Tento precipitát byl izolován filtrací a sušen za sníženého tlaku pro získání meziproduktu z názvu, kyseliny 4-{2-[(methylsulfonyl)amino]ethylJbenzenborité (41,9 g, 82,5%) ve formě bílého prášku.

*H NXR (aceton-d₆, 300 MHz) δ 7,82 (d, 2H, J=8,4), 7,27 (d,

2H, J=7,8), 7,11 (s, 2H), 6,03 (m, 1H) , 3,36 (m, 2H) , 2,91 (m, 2H), 2,84 (s, 3H).

Tříprava výsledné sloučeniny z názvu.

Schéma III: Vodný roztok mravenčanu draselného byl připraven následujícím způsobem. Do 15 ml vody byl přidán KOH (85% vločky,' 6,73 g, 0,102 molů), potom 98% kyselina mravenčí (4,73 g, 0,102 molů). Alternativně se může použít komerčně dostupný mravenčan draselný. Do tohoto roztoku byl potom přidán K₂CO₃ (2,76 g, 0,0210 molů), kyselina 4-{239 [(methylsulfonyl)amino]ethyljbenzenboritá (4,62 g, 0,190 molů), 1-propanol (100 ml) a [(2R)-2-(4-jodfenyl)propyl][(methylethyl)sulfonyl]amin (7,35 g, 0,200 molů). Tato směs byla deoxygenována třemi cykly vakuum/naplnění N₂. Byla přidána paládiová čerň (0,0215 g, 0,0002 molů) a směs byla znovu deoxygenována třemi cykly vakuum/naplnění N₂. Reakční baňka byla zahřívána předehřáté olejové lázni při teplotě 88 °C a směs byla míchán přes noc.

HPLC analýza prokázala úplné spotřebování kyseliny 4—{2— [(methylsulfonyl)amino]ethyl}benzenborité a směs byla zředěna ethylacetátem a filtrována přes Celit® pro odstranění paládia. Směs byla koncentrována za sníženého tlaku a vzniklé residuum bylo rozděleno mezi ethylacetát a vodu. Organická fáze byla koncentrována a pevné residuum bylo izolováno a rekrystalizováno ze směsi 1:1 aceton/voda pro získání výsledné sloučeniny z názvu, { (2R) —2 — [ 4 - (4 — {2[(methylsulfonyl)amino]ethyljfenyl)fenyl]propyl}[(methylethyl)sulfonyl]aminu, (6,2 g, 75%) ve formě bílého krystalického prášku.

^XH NMR (CDC1₃, 300 MHz) δ 7,54 (dd, 4H, J=l,8, 8,1), 7,29 (dd, 4H, J=l,8, 8,1), 4,27 (t, 1H, J=6,6), 3,91 (m, 1H), 3,43 (q, 2H, J=6,6), 3,37 (dd, 1H, J=5,7, 7,5), 3,26 (m, 1H) , 3,07 (m, 2H), 2,93 (t, 2H, J=6,6) , 2,87 (s, 3H), 1,34 (d, 3H, J=7,2), 1,31 (d, 3H, J=6,9), 1,27 (d, 3H, J=6,6).

Další způsob přípravy { (2R)-2-[4-(4-{2-[(methylsulfonyl)amino]ethyljfenyl)fenyl]propyl)[(methylethyl)sulfonyl]aminu

Schéma III: Do jednohrdlé 3-litrové baňky vybavené magnetickým míchadlem byl vložen mravenčan draselný (112,8 g, 1,34 molů, 5,1 ekv.) a voda (200 ml) pro dosažení pH roztoku rovné 8. Byly přidány uhličitan draselný (72,7g, 0,526 molů, 2,0 ekv.) a kyselina 4-{2-[(methylsulfonyl)amino]ethylJbenzenboritá (60,8 g, 0,250 molů, 0,95 ekv.) pro vytvoření míchané suspenze po přidání 1-propanolu (720 ml) . Byl přidán [(2R)-2-(4-jodfenyl)propyl][(methylethyl)sulfonyl]amin (96,6 g, 0,263 molů, 1,0 ekv.) následovaný dalším 1-propanolem (600 ml). Vzniklá směs byla míchána po 3 minuty, zatímco reakční baňka byla opatřena zahřívacím pláštěm a glykolem chlazeným refluxním kondenzátorem. Vakuum (10-20 torrů) bylo pomalu aplikováno v systému během 10 minut. Míchání se zastavilo v důsledku další precipitace chlazeného systému; nicméně po 30 minutách se systém navrátil k atmosférickému tlaku s dusíkem. Za mírného míchání byla baňka evakuována a zahřívána na teplotu zpětného toku s dusíkem ještě dvakrát. Míchání bylo zastaveno a rychle byla přidána paládiová čerň (0,28 g, 0,0026 molů, 0,01 ekv.). Míchání bylo opět spuštěno a systém byl znovu evakuován a přiveden zpět k atmosférickému tlaku dusíku v 2 minutovém cyklu. Toto cyklování evakuace/dusík bylo opakováno ještě dvakrát v 15 sekundovém cyklu a směs byla zahřívána na teploou zpětného toku.

?o uplynutí 16 hodin byl odebrán alikvot pro analýzu pomocí HPLC (275 nm detekce). Analýza prokázala 0,07% achirálního dimeru, (methylsulfonyl){2-[4-(4—{2—[(methylsulfonyl)amino]ethyl}fenyl)fenyl]ethyl}aminu v poměru k žádanému produktu produkt, { (2R)-2-[4-(4 — {2—[(methylsulfonyl)amino]ethyl}fenyl)fenyl]propyl}[(methylethyl)sulfonyl]aminu. Reakční směs byla ochlazena na teplotu 50 °C a byl přidán ethylacetát (500 ml) . Reakční směs byla potom ochlazena na teplotu okolí a produkt, { (2R) -2-[4-(4—{2—[(methylsulfonyl)amino]ethyl}fenyl)fenyl]propyl}[(methylethyl)sulfonyl]amin, začal precípitát. Byl přiveden další ethylacetát (1 1) pro opětné rozpuštění produktu a vrchní organická fáze byla dekantována a filtrována přes Celit® pro odstranění kovového paládia. Filtrační koláč byl proplachován 1-propanolem. Homogenní filtrát byl koncentrován za sníženého tlaku pro odstranění npropanolu a po odstranění 1,5 1 destilátu byla suspenze produktu filtrována. Zkombinované filtrační koláče byly sušeny pro získání 109,8g surové výsledné sloučeniny z názvu.

Rekrystalizace.

Surová výsledná sloučenina z názvu (109,8 g) byla rozpuštěna v acetonu (490 ml). Tento roztok byl filtrován přes skleněný filtr pro zadržení malého množství tmavého nerozpustného materiálu. Do pomalu míchaného filtrátu byla přidána voda (300 ml) během 15 minut. Vzniklá suspenze byla míchána po 15 minut a během 10 minut byla přivedena další voda (20 ml) . Suspenze byla následně míchána po 30 minut za teploty okolí a byla filtrována. Koláč byl promýván 1:1 směsí aceton/voda (600 ml) a byl sušen při teplotě 35 °C přes noc. Tento proces poskytl 80,3 g (81,1 %) {(2R)-2-[4-(4-{2-[(methylsulfonyl)amino]ethyl}fenyl)fenyl]propyl}[(methylethyl)sulfonyl]aminu ve formě bílého krystalického prášku. HPLC analýza ukázala 0,01 % achirálního dimeru, (methylsulfonyl){2-[4-(4—{242 [(methylsulfonyl)amino]ethyl}fenyl)fenyl]ethyl}aminu, a 0,02% chirálního dimeru, ((2R)-2-{4-[4-((IR)-l-methyl-2{[(methylethyl)sulfonyl]amino}ethyl)fenyl]fenylJpropyl)[(methylethyl)sulfonyl]aminu.

Příklad 2

Alternativní příprava {(2R)-2-[4-(4{2-[ (methylsulfonyl)amino]ethyl]fenyl)fenyl]propyl}[(methylethyl)sulfonyl]aminu.

Příprava kyseliny 4-{2-[(terč.-butoxy)-N-(methylsulfonyl)karbonylamino]ethyl}benzenborité.

Schéma IIZA, krok A: Do roztoku o teplotě okolí, obsahujícího (terč.-butoxy)-N-(methylsulfonyl)-N-{2—[4—(4,4,5,5tetramethyl(1,3,2-dioxaborolan-2-yl))fenyl]ethyl}karboxamid (81,0%, 95 g, 0,18 molů, připravený v příkladu 1) v acetonu (2 1) byl za míchání přidán 1 N octan amonný (1 1) a periodát sodný, (145 g, 0,678 molů). Reakce byl ponechána probíhat přes noc. Reakční směs byla koncentrována pro odstranění acetonu a vodná fáze byla odstraněna dekantováním z olejovitého produktu. Vodná fáze byla extrahována CH2CI2 (100 ml) a MTBE (2 x 100 ml) . Zkombinovaný olejovitý produkt a organické fáze byly upraveny na pH 12,5 přidáním 1 N NaOH. Fáze byly separovány a organická fáze byla extrahována 1 N NaOH (100 ml) a vodou (2 x 100 ml). HPLC analýza (60% CH3CN / 40% H₂O, 2 ml/min, Zorbax G18, 205 nm) organické fáze ukázala, že produkt byl odstraněn z této fáze. Vodné fáze (obsahující produkt) byly nakonec zkombinovány a promývány CH₂C1₂ (100 ml) a MTBE (2 x 100 ml) . Vodná fáze byla přidána do CH2CI2 (450 ml) a 1 N H₂SO₄ byla přidávána dokud pH vodné fáze nebylo 3,05. Fáze byly separovány a vodná fáze byla extrahována CH2CI2 (100 ml). Zkombinované organické extrakty 'obsahující produkt) byly koncentrovány na olej (58,5 g) , který krystalizoval přes noc. Vzniklá pevná látka byla rozečtena s 10% MTBE v heptanu (100 ml) pro získání, po filtraci a sušení za sníženého tlaku, meziproduktu z názvu, kyseliny 4—{2—[ (terč.-butoxy)-N-(methylsulfonyl)karbonylamine]ethylJbenzenborité (47,7 g, 77,2%) ve formě bílého prášku.

^:H NEB. (d_s-DMSO, 300 MHz) δ 7,83 (d, 2H, J=4,8), 7,24 (d, 2H, J=5,l), 7,12 (s, 2H), 3,90 (t, 2H, J=3,9), 3,12 (s, 3H), 2,95 (t, 2H, J=4,5) , 1,52 (s, 9H) .

Příprava výsledné sloučeniny z názvu.

Schéma IIIA, Krok B: Běh l.V 3-hrdlé 1000 ml baňce byl umíscěn [(2R)-2-(4-jodfenyl)propyl][(methylethyl)sulfonyl]amin (15,0 g, 0,0408 molů, připravený v příkladu 1), kyselina 4—{2-[(terč.-butoxy)-N-(methylsulfonyl)karbonylamino]ethyllbenzenboritá (19,1 g, 0,0557 molů), K₂CO₃ (6,8 g, 0,0490 molů) a 1-propanol (300 ml). Do tOto směsi byla potom přidána voda (42 ml) a nakonec Pd(OAc)2 (18 mg, 8,17 x 10~⁵ molů, 0,2 % mol.). Vzniklý čirý bledě jantarově zbarvený roztok byl zahříván na teplotu zpětného toku (87 °C) a zabarvil se tmavě jantarovou barvou, potom se z něho stal čirý olivově zbarvený roztok za míchání černých částic (Pd°). Reakční směs byla ponechána za míchání po 20 hodin a byla ponechána ochladit se na teplotu okolí.

TLC analýza (1:9 EtOAc / CH2CI2) vzniklé bělavé suspenze ukázal požadovaný produkt (R_f 032), úplné spotřebování [(2R)— 2-(4-jodfenyl)propyl][(methylethyl)sulfonyl]aminu (Rf 0,60) a pouze stopy kyseliny 4-{2-[(terc.-butoxy)-N-(methylsulfonyl)karbonylamino]ethyijbenzenborité (R_f 0,49). Suspenze byla zředěna EtOAc (300 ml) pro získání čirého bledě žlutého roztoku, který byl filtrován přes Celit(c) (předem nasycený EtOAc).

Po promývání Celíc® pomocí EtOAc byl filtrát zkombinován s identickým filtrátem z běhu 2, který byl prováděn stejně jako je popsáno výše. Zkombinované filtráty z obou běhů byly koncentrovány za sníženého tlaku pro získání bílé pevné látky, která byla zředěna EtOAc (1 1) a 10% K2CO3 (300 ml) pro vytvoření čirého jantarového dvoufázového roztoku, který byl míchán. Vodná fáze (světle růžová) byla separována a organická fáze byla promývána dalším 10% K2CO3 (4 x 300 ml) . Vodná fáze byla zpětně extrahována EtOAc (300 ml) a zkombinované organické fáze (1500 ml) byly sušeny (MgSO₄) , filtrovány a koncentrovány na objem přibližně 620 ml v 3 1 baňce. Čirý bledě žlutý roztok byl míchán pomalu za zahřívání na teplotu 60 °C. Heptan (400 ml) byl přidán po kapkách ze separační nálevky do míchaného EtOAc roztoku při teplotě 60 °C (17 objemů EtOAc/ 11 objemů heptanu) . Heptan byl přidán v průběhu periody 1,5 hodin a čirý bledě žlutý roztok byl ponechán pomalu chladnout s pomalým mícháním přes noc. Vzniklé bílé krystalické pevné látky byly ochlazeny na teplotu 0 °C, filtrovány a promývány minimálním množstvím směsi 1:1 EtOAc/heptan pro získání výsledné sloučeniny z názvu, { (2R)-2- [4-{4—{2—[(methylsulfonyl)amino]ethyljfenyl)fenyljpropyl][(methylethyl)sulfonyl]aminu (27,1 g, 75,7%), ve formě bílého krystalického prášku.

Příklad 3

Alternativní příprava ((2R)-2-fenylpropyl)[(methylethyl)sulfenyl]aminu.

Příprava (2R)-2-fenylpropan-l-olu.

V peci sušená 500,0 ml tříhrdlá baňka vybavená mechanickým míchadlem, teploměrem, přidávací nálevkou s kontinuálním přívodem dusíku byla naplněna 2,0 M roztoku trimethylalumina (65,6 ml, 131,2 mmolů) a toluenu (75,0 ml). Reakční roztok byl potom ochlazen na teplotu -60 °C lázní suchého ledu/acetonu. Do tohoto roztoku byl potom v průběhu periody 50,0 minut přidán R-stvrenoxíd, rozpuštěný v 100,0 ml toluenu (reakce je zcela exotermická a může být řízena rychlostí přidávání substrázu). Po míchání za této teploty po 60,0 minut byla reakční směs zahřáta na teplotu okolí a míchána po 4,0 hodiny. Reakce byla zastavena za teploty okolí velmi opatrným vlitím do kaše THF (100,0 ml) a dekahydrštu síranu sodného (46,0 g) v průběhu periody 90,0 minut (což byl velmi exotermický proces s vývinem plynu). Vytvořený precipitát byl filtrován na hyflo, potom filtrát byl koncentrován pro získání meziproduktu z názvu, (2R)-2-fenylpropan-l-olu (11,03 g, 92,6%) ve formě oleje.

^XH NMR (CDC1₃) δ '., 28-1,29 (d, 3H, J = 6,9Hz), 1,5 (b, 1H) ,

2,9-3,0 (m, 1H) , 3,65-3,70 (d, 2H, J = 6,64Hz), 7,24-7,35 (aromatický);

¹³ NMR (CDCI3) δ 15,31, 43, 15, 69, 40, 127,38, 128,20,

129,26144,39.

Příprava 2-((2R)-2-fenylpropyl)isoindolin-1,3-dionu

V peci vysušená 250,0 ml tříhrdlá baňka vybavená mechanickým míchadlem, teploměrem, přidávací nálevkou s kontinuálním přívodem dusíku byla naplněna (2R)-2-fenylpropan-l-olem (2,0 ml, 14,32 mmolů), ftalimidem (2,1 g, 14,32 mmolů), trifenylfosfinem (5,63 g, 21,48 mmolů) a THF (70,0 ml). Do tohoto roztoku byl potom za teploty okolí přidán roztok diethylazodikarboxylázu (3,38 ml, 21,48 mmolů) rozpuštěného v

- 47 THF (10,0 ml) v průběhu periody 15-20 minut (reakce mírně exotermovala na teplotu 50 °C a ke konci přidávání se čirá směs zabarvila červeně). Reakční směs byla míchána za teploty okolí přes noc. Do červeného roztoku byla přidána voda (50,0 ml) a organická fáze byla extrahována chloroformem (140,0 ml). Organický roztok byl sušen bezvodým síranem hořečnatým, filtrován a koncentrován za sníženého tlaku na olej. Do oleje byl za míchání přidán heptan (150,0 ml). Precipitáty byly filtrovány a potom byl filtrát koncentrován na olej. Filtrace oleje na silikagelu směsí 1:1 ethylacetát/hexan a koncentrace produktových frakcí poskytla meziprodukt z názvu, 2—((2R)—2— fenylpropyl)isoindolin-1,3-dion (4,27 g, 96%), ve formě oleje, který tuhnut při vyrovnávání teploty s teplotou okolí. ¹H NMR (CDCls, 300 MHz) δ 1,3 (d, 3H), 3,3-4,0(m, 1H) , 3,7-3,9 (m, 2H), 7,1-7,3 (aromatický m, 2H), 7,63-7,7 (aromatický m, 2H), 7,3-7,85 (aromatický m, 4H).

Příprava (2R)-2-fenylpropylaminu.

500 ml tříhrdlá baňka vybavená mechanickým míchadlem, teploměrem a přidávací nálevkou byla naplněna 2—((2R)—2— fenylpropyl)isoindolin-1,3-dionem (11,54 g, 43,49 mmolů), toluenem (200,0 ml) a bezvodým hydrazinem (2,73 ml, 86,99 mmolů). Reakční směs byla potom míchána za teploty okolí po 3,0 hodiny a potom zahřívána na teplotu 90 °C až 95 °C po 2,0 hodiny. Kaše byla ochlazena na teplotu okolí, precipitáty byly filtrovány, potom byl filtrát koncentrován pro získání meziproduktu z názvu, (2R)-2-fenylpropylaminu (5,58 g, 94,9%), ve formě oleje.

1H NMR (CDCI3, 300 MHz) δ 1,21 (d,3H), 1, 40-1, 60 (b, 2H) ,

2, 68-2,80 (m, 1H), 2,81-2,87 (m, 2H) , 7,20 (m, 2H) , 7,32 (m,

2H) .

Příprava výsledné sloučeniny z názvu.

Do roztoku (2R)-2-fenylpropylaminu (1,2 g, 8,87 mmolů) v hexanu (16,0 ml) byl přidán triethylamin (2,47 ml, 17,74 mmolů) a dimethylaminopyridin (0,30 g, 2,47 mmolů). Reakční směs byla ochlazena na teplotu 5 °C, potom byl přidán roztok isopropylsulfonylchloridu (0,97 ml, 8,69 mmolů), rozpuštěného v methylenchloridu (6,0 ml) v průběhu periody 15,0 minut. Míchání probíhalo po 45,0 minut, potom za teploty okolí po 120,0 minut. Reakce byla zastavena přidáním 1 N HCI (20,0 ml) a organická fáze byla extrahována methylenchloridem (25,0 ml). Organická vrstva byla sušena bezvodým síranem hořečnatým, filtrována a filtrát byl koncentrován pro získání výsledné sloučenina z názvu, ((2R)-2fenylpropyl)[(methylethyl)sulfonyl]aminu (1,93 g, 90,1 %), ve formě oleje.

⁴H NMR (CDCI3, 300 MHz) δ 1,25 (d, 3H, J=6,9 Hz), 1,29 (d, 3H, J=6, 9 Hz), 1,30 (d, 3H, J= 7,2 Hz), 2,98 (m, 1H) , 3,05 (m, 1H), 3,22 (m, 1H), 3,36 (m, ÍH), 3,89 (b, 1H) , 7,23 (m, 2H), 7,34 (m, 2H).

Schopnost sloučenin obecného vzorce I zprostředkovanou receptory glutamátu fluorescenčními barvivý pro indikaci potenciovat odezvu může být určena vápníku (Molecular

Probes, Eugene, Oregon, Fluo-3) a měřením glutamátem vyvolaný příliv vápníku do buněk HEK293 transfektovaných GluR4, jak je popsáno detailněji dále.

V jednom testu byly připraveny 96-jamkové destičky, obsahující splývající monovrstvy buněk HEK 293 stabilně exprimující lidské GluR4B (získány jak je popsáno ve zveřejněné evropské patentové přihlášce č. EP-A1-583917). Tkáňové kultivační médium v jamkách bylo potom odstraněno a jamky byly každá promývány jednou 200 μΐ pufru (glukóza, 10mM, chlorid sodný, 138mM, chlorid hořečnatý, 1 mM, chlorid draselný, 5 mM, chlorid vápenatý, 5 mM, kyselina N-[2hydroxyethyl]-piperazin-N-[2-ethansulfonová], lOmM, na pH 7,1 až 7,3). Destičky byly potom inkubovány po 60 minut ve tmě s 20 μΜ barviva Fluc3-AM (získáno od Molecular Probes lne., Eugene, Oregon) v pufru v každé jamce. Po inkubaci byla každá jamka promývána ječnou 100 μΐ pufru, bylo přidáno 200 μΐ pufru a destičky byly inkubovány po 30 minut.

Roztoky pro použití v testu byly také připraveny následujícím způsobem. 30 μΜ, 10 μΜ, 3 μΜ a 1 μΜ ředění testované sloučeniny byly připraveny použitím pufru z 10 mM roztoku testované sloučeniny v DMSO. 100 μΜ cyklothiazidový roztok se připraví přidáním 3 μΐ 100 mM cyklothiazidu do 3 ml pufru. Kontrolní pufrový roztok byl připraven přidáním 1,5 μΐ DMSO do 498,5 μΐ pufru.

Každý test byl potom prováděn následujícím způsobem. 200 μΐ kontrolního pufru v každé jamce bylo odstraněno a nahrazeno 45 μΐ kontrolního pufrového roztoku. Základní měření fluorescence bylo prováděno použitím fluorimetru FLUOROSKAN II (získán od společnosti Labsystems, Needham Heights, MA, USA, Division of Life Sciences International Plc). Pufr byl potom odstraněn a nahrazen 45 μΐ pufru a 45 μΐ testované sloučeniny v pufru v odpovídajících jamkách. Druhý odečítání fluorescence bylo prováděno po 5 minutové inkubaci. 15 μΐ 400 μΜ glutamátového roztoku bylo potom přidáno do každé jamky (konečná koncentrace glutamátu 100 μΜ) a bylo provedeno třetí odečítání. Účinky testovaných sloučenin a cyklothiazidových roztoků byly určeny odečtením druhého odečtu od třetího (fluorescence v důsledku přidání glutamátu v přítomnosti nebo nepřítomnosti testované sloučeniny nebo cyklothiazidu) a byly vyjádřeny vzhledem k zvýšené fluorescenci způsobované 100 μΜ cyklothiazidu.

V jiném testu byly použity buňky HEK293 stabilně exprimující lidské GluR4 (získány jak je popsáno ve zveřejněné evropské patentové přihlášce č. EP-A1-0583917) pro elektrofyziologickou charakterizaci potenciátorů AMPA receptorů. Mezibuněčný záznamový roztok obsahuje (v mM) : 140 NaCl, 5 KC1, 10 HEPES, 1 MgCl₂, 2 CaCl₂, 10 glukózy, pH = 7,4 s NaOH, 295 mOsm kg^-1. Vnitrobuněčný záznamový roztok obsahuje (v mM) : 140 CsCl, 1 MgCl₂, 10 HEPES, (N-[2hydroxyethyl]piperazin-Nl-[2-ethansulfoncvou kyselinu]) 10 EGTA (kyselina ethylen-bis(oxvethyien-nitrilo)tetraoctová), pH = 7,2 s CsOH, 295 mOsm kg^-1. S těmito roztoky měly záznamové pipety odpor 2-3 ΜΩ. Použití techniky celobuněčné napěťové svorky (Hamill a kol.(1981) Pflugers Arch., 391: 85100) byly buňky napěťově zachyceny na -60mV a byly zjišťovány proudové odezvy řídícího proudu na 1 mM glutamátu. Odezvy na 1 mM glutamátu byly potom určeny v přítomnosti testované sloučeniny. Sloučeniny byly považovány za účinné, jestliže v testovací koncentraci 10 μΜ nebo méně vyvolaly větší než 10% vzrůst hodnoty proudu, vyvolaného 1 mM glutamátu.

Pro určení účinku testovaných sloučenin byly koncentrace testovaných sloučenin, jak v rozcoku, tak i současně aplikované s glutamátem, zvyšovány v polologaritmických krocích, dokud nebyl pozorován maximální účinek. Data získaná tímto způsobem byla dosazena do Hillovy rovnice, která dává hodnoty ΕΟ₅₀, určující účinnost cestovaných sloučenin. Reversibilita účinku testované sloučeniny byla určena stanovením kontrolní odezvy na glutamát 1 mM. Jakmile byly znovu určeny kontrolní odezvy na dráždění glutamátem, potenciace těchto odezev 100 μΜ cykiothiazidem byla určena jeho vložením do rozteku lázně a co roztoku obsahujícího glutamát. Tímto způsobem může být určena účinnost testované sloučeniny vzhledem k cyklothiazidu.

Předložený vynález se dále týká farmaceutických kompozic, které zahrnují sloučeninu vzorce la nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl a farmaceuticky přijatelné ředidlo nebo nosič.

Farmaceutické kompozice se připraví známými způsoby použitím dobře známých a snadno dostupných složek. Při výrobě kompozic podle předloženého vynálezu se účinná složka obvykle smíchá s nosičem nebo zředění nosičem nebo obalí nosičem a kompozice mohou být ve formě kapsle, sáčku, papírového nebo jiného obalu. Pokud nosič slouží ředidlo, může jím být pevná látka, polotuhá látka nebo kapalný materiál, který slouží jako vehikulum, excipient nebo médium pro účinnou složku. Kompozice mohou být ve formě tablet, pilulek, prášků, pastilek, váčků, elixírů, suspenzí, emulzí, roztoků, sirupů, aerosolů, mastí, obsahujících například až do 10% hmot. účinné sloučeniny, měkkých a tvrdých želatinových kapslí, čípků, sterilních injektovatelných roztoků a sterilně balených prášků.

Některé příklady vhodných nosičů, excipientu a ředidel zahrnují laktózu, dextrózu, sacharózu, sorbitoi, mar.itol, škroby, gumu, arabskou gumu, fosforečnan vápenatý, algináty, tragkanth, želatinu, křemičitan vápenatý, mikrokrystaiickou celulózu, polyvinylpyrrolidon, celulózu, vodný sirup, methylcelulózu, methyl a propyl hydroxybenzoány, nalek, stearan hořečnatý a minerální olej. Přípravky mohou dodatečně zahrnovat lubrikační činidla, smáčecí činidlo, emulzifikační a suspenzní činidla, konzervační činidla, sladidla nebo chuťová činidla. Kompozice podle předloženého vynálezu mohou být připraveny pro získání rychlého, trvalého nebe zpožděného uvolňování účinné složky po podání pacientovi použitím způsobů dobře známých v oboru.

Kompozice se výhodně připraví jako jednotkové dávkové formy, každá dávka obsahuje od přibližně 5 mikrogramu do přibližně 5 mg účinné složky, výhodně od přibližně 5 mikrogramu do přibližně 500 mikrogramů účinné složky, nejvýhodněji od přibližně 5 mikrogramů do přibližně 200 mikrogramů účinné složky a obzvláště výhodně od přibližně 5 mikrogramů do přibližně 100 mikrogramů. Jak je zde používán, výraz účinná složka označuje sloučeninu spadající do rozsahu obecného vzorce I, jako je {(2R)-2-[4-(4-{2-[(methylsulfonyl)amino]ethyl}fenyl)fenyl]propyl}[(methylethyl)sulfonyl]amin.

Výraz jednotková dávková forma označuje fyzikálně diskrétní jednotky, vhodné jako jednotkové dávky pro pacienta, kde každá jednotka obsahuje předem určené množství účinné složky, vypočtené tak, aby vytvořilo požadovaný terapeutický účinek, spolu s vhodným farmaceutickým nosičem, ředidlem nebo excipientem. Složky přípravku se spojují dohromady standardními způsoby, dobře známými běžnému odborník v oboru, použitím obvyklé přípravy a výrobních způsobů. Následující příklady přípravků jsou pouze ilustrarivní a nejsou zamýšleny jako omezení rozsahu předloženého vynálezu jakýmkoli způsobem. Reagenty a výchozí materiály jsou snadno dostupné pro běžného odborníka v oboru.

Přípravek

Tvrdé želatinové kapsle se připraví použitím následujících složek pro získání kapslí, obsahujících 0,005 mg, 0,040 mg,

0,200 mg a 1,0 mg {(2R)-2-[4-(4-(2-[(methylsulfonyl)amino]ethyl}fenyl)fenyl]propyl}[(methylethyl)sulfonyl] aminu:

Složka	mg/kapsle	mg/kapsle	mg/kapsle	mg/kapsle
{ (2R) -2-[4-(4-(2- [(methylsulfonyl)- amino]-ethyl}- fenyl)- fenyl]propyl}- [ (methylethyl)- sulfonyl]amin	0,005	0, 040	0,200	1,0
PEG 3350	249,995	249, 060	249,800	249, 0
Celkově	250	250	250	250

Jak je zde používán, výraz PEG označuje polyethylenglykol. Jak je zde používán, výraz vhodný polyethylenglykol označuje polyethylenglykol, který je pevná látka při teplorě pod přibližně 35 °C a umožňuje rozpuštění {(2R)-2-[4-(4-{2[(methylsulfonyl)amino]ethyljfenyl)fenyl]propyl}[(methylethyl)sulfonyl]amin, když vhodný polyethylenglykol je v kapalné formě. Příklady vhodných polyethylenglykolů zahrnují PEG 3350, PEG 6000, PEG 8000 a podobně. Kromě toho je zřejmé, že směsi PEG spadají do rozsahu výrazu vhodný polyethylenglykol, jako jsou PEG 300 nebo PEG 400 smíchané s PEG o vyšších molekulových hmotnostech. Výhodné vhodné polyethylenglykoly jsou PEG 3350, PEG 6000, PEG 8000, přičemž PEG 3350 je nejvýhodnější. Konkrétně se například PEG 3350 roztaví za teploty přibližně 62 °C a {(2R)—2—[4 —(4 — {2 — [(methylsulfonyl)amino]ethyljfenyl)fenyl]propyl}55 [(methylethyl)sulfonyl]amin se přidá za míchání do úplného rozpuštění. Roztavený roztok se potom plní přímo do vhodných kapslí, jako jsou tvrdé želatinové kapsle. Roztok v kapslích ztuhne při ochlazování na teplotu okolí.

Výše uvedený přípravek přináší nezbytno stejnoměrnost při nízkých dávkách {(2R)-2-[4-(4-{2-[(methylsulfonyl)amino]ethyljfenyl)fenyl]propyl)[(methylethyl)sulfonyl]aminu. Kromě toho při rozpuštění sloučeniny v PEG se významně snižuje vytváření prachu při způsobu výroby kapslí.

Jak je zde používán, výraz pacient označuje savce, jako je myš, morče, krysa, pes nebo člověk. Je zřejmé, že výhodný pacient je člověk.

Výraz léčení (nebo léčit), jak je zde používán, zahrnuje své obecně přijímané významy, mezi něž patří zabránění, prevence, potlačení a zpomalení, zastavení nebo zpětný postup symptomů onemocnění. Takto způsoby podle předloženého vynálezu zahrnují terapeutické i profylaktické podávání.

Jak je zde používán, výraz účinné množství označuje množství nebo dávku sloučeniny, v jednoduché nebo vícenásobné dávce podávání pacientovi, která přináší požadovaný účinek pro pacienta v diagnóze nebo léčení.

Účinné množství může být snadno určeno ošetřujícím diagnostikem jako odborníkem v oboru, použitím známých způsobů a sledováním výsledků získaných za analogických okolností. Při určování účinného množství nebo dávky podávané sloučeniny sleduje ošetřující diagnostik řadu faktorů, zahrnujících neomezujícím způsobem druh savce; jeho velikost, věk a obecný zdravotní stav; specifické uvažované onemocnění; stupeň nebo závažnost onemocnění; odezvu individuálního pacienta; konkrétní podávanou sloučeninu; způsob podávání; biologickou dostupnost podávaného přípravku; zvolený dávkový režim; používání souběžné medikace; a další relevantní okolnosti. Například typická denní dávka může obsahovat od přibližně 150 mikrogramů do přibližně 150 mg účinné složky. Sloučeniny mohou být podávány řadou způsobů, zahrnujících orální, rektální, transdermální, subkutánní, intravenózní, intramuskulární, bukální nebo intranasální cestu. Alternativně sloučenina může být podáván kontinuální infúzí.

Claims (25)

1. Sloučenina obecného vzorce:

nebo její farmaceuticky přijatelné sole.

2. Sloučenina obecného vzorce: CH, U i » Πλ 1 u θ CH, xxj 11/3 -s—< II ' f ϊ 0 ch₃ 9 n.c-s-n-^ ³ il H 0 • 3. Kompozice vyznačující se tím, že obsahuje sloučeninu

obecného vzorce:

nebo její farmaceuticky přijatelné sole v kombinaci s farmaceuticky přijatelným nosičem, ředidlem nebo excipientem.

4. Způsob potenciace funkce receptorů glutamátu u pacienta, vyznačující se tím, že zahrnuje podávání uvedenému pacientovi účinného množství sloučeniny obecného vzorce:

CH.

nebo její farmaceuticky přijatelné sole.

5. Způsob léčení deprese u pacienta, vyznačující se tím, že zahrnuje podávání uvedenému pacientovi účinného množství sloučeniny obecného vzorce:

nebo její farmaceuticky přijatelné sole.

6. Způsob léčení schizofrenie u pacienta, vyznačující se tím, že zahrnuje podávání uvedenému pacientovi účinného množství sloučeniny obecného vzorce:

nebo její farmaceuticky přijatelné sole.

7. Způsob léčení kognitivní poruchy u pacienta, vyznačující se tím, že zahrnuje podávání uvedenému pacientovi účinného množství sloučeniny obecného vzorce:

nebo její farmaceuticky přijatelné sole.

8. Výrobek zahrnující obalový materiál a sloučeninu obecného vzorce:

nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl obsaženou v uvedeném obalovém materiálu, vyznačující se tím, že uvedený obalový materiál nese označení, uvádějící, že uvedená sloučenina může mohou být použita pro léčení alespoň jednoho z následujících onemocnění: Alzheimerova nemoc, schizofrenie, kognitivní deficit související se schizofrenií, deprese a kognitivní poruchy.

9. Výrobek podle nároku 8, vyznačující se tím, že uvedené označení uvádí, že uvedená sloučenina může být použita pro léčení Alzheimerova nemoc.

10. Výrobek podle nároku 8, vyznačující se tím, že uvedené označení uvádí, že uvedená sloučenina může být použita pro léčení schizofrenie.

11. Výrobek podle nároku 8, vyznačující se tím, že uvedené označení uvádí, že uvedená sloučenina může být použita pro léčení deprese.

12. Výrobek podle nároku 8, vyznačující se tím, že uvedené označení uvádí, že uvedená sloučenina může být použita pro léčení kognitivního deficitu souvisejícího se schizofrenií.

13. Farmaceutická kompozice, vyznačující se tím, že zahrnuje sloučeninu vzorce:

nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl v množství od přibližně 5 mikrogramů do přibližně 500 mikrogramů.

14. Farmaceutická kompozice podle nároku 13, vyznačující se tím, že sloučenina vzorce:

nebo její farmaceuticky přijatelná sůl je přítomna v množství od přibližně 5 mikrogramů do přibližně 200 mikrogramů.

15. Farmaceutická kompozice podle nároku 13, vyznačující se tím, že sloučenina vzorce:

nebo její farmaceuticky přijatelná sůl je přítomna v množství od přibližně 5 mikrogramů do přibližně 100 mikrogramů.

16. Farmaceutická kompozice, vyznačující se tím, že je připravena způsobem zahrnujícím rozpuštění {(2R)-2-[4-(4-{2[(methylsulfonyl)amino]ethyl}fenyl)fenyl]propyl}63 [(methylethyl)sulfonyl]aminu ve vhodném polyethylenglykolu v kapalné formě a následné ochlazeni roztoku na teplotu okolí.

17. Farmaceutická kompozice podle nároku 16, vyznačující se tím, že vhodný polyethylenglykol je polyethylenglykol 3350.

18 Farmaceutická kompozice podle nároku 17, vyznačující se tím, že farmaceutická kompozice je plněna do vhodných kapslí.

19. Farmaceutická kompozice podle nároku 18, vyznačující se tím, že vhodné kapsle jsou tvrdé želatinové kapsle.

20. Farmaceutická kompozice podle nároku 18, vyznačující se tím, že { (2R)-2-[4-(4-{2-[(methylsulfonyl)amino]ethyl]fenyl)fenyl]propyl}[(methylethyl)sulfonyl]amin je přítomen v množství od přibližně 5 mikrogramů do přibližně 500 mikrogramů v každé vhodné kapsli.

21. Farmaceutická kompozice, vyznačující se tím, že obsahuje rozpuštění { (2R) -2-[4-(4-{2-[(methylsulfonyl)amino]ethyl}fenyl)fenyl]propyl}[(methylethyl)sulfonyl]aminu a vhodný polyethylenglykol.

22. Farmaceutická kompozice podle nároku 21, vyznačující se tím, že vhodný polyethylenglykol je PEG 3350.

23. Farmaceutická kompozice podle nároku 21, vyznačující se tím, že { (2R)-2-[4-(4-(2-[(methylsulfonyl)amino]ethyl]fenyl)64 fenyl]propyl}[(methylethyl)sulfonyl]amin je přítomen v množství od přibližně 5 mikrogramů do přibližně 500 mikrogramů.

24. Farmaceutická kompozice podle nároku 21, vyznačující se tím, že {(2R)-2-[4-(4-{2-[(methylsulfonyl)amino]ethyl}fenyl)fenyl]propyl}[(methylethyl)sulfonyl]amin je přítomen v množství od přibližně 5 mikrogramů do přibližně 500 mikrogramů.a vhodný polyethylenglykol je PEG 3350.

pro výrobu léčiva pro léčení Alzheimerovy nemoci.

26. Použití sloučeniny obecného vzorce:

pro výrobu léčiva pro léčení schizofrenie.

pro výrobu léčiva pro léčení kognitivního souvisejícího se schizofrenií.

28. Sloučenina obecného vzorce:

deficitu nebo její farmaceuticky přijatelné sole pro použití farmaceutického přípravku.

ve formě.

29. Sloučenina obecného vzorce:

nebo její farmaceuticky přijatelná sůl pro výrobu léčiva pro potenciaci funkce receptorů glutamátu.