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CN1913880A - 治疗adamts－5相关疾病的方法 - Google Patents

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CN1913880A
CN1913880A CNA200480041193XA CN200480041193A CN1913880A CN 1913880 A CN1913880 A CN 1913880A CN A200480041193X A CNA200480041193X A CN A200480041193XA CN 200480041193 A CN200480041193 A CN 200480041193A CN 1913880 A CN1913880 A CN 1913880A
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CN
China
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adamts
methyl
biphenyl
sulfonamido
nmr
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Withdrawn
Application number
CNA200480041193XA
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English (en)
Inventor
E·A·莫里斯
S·S·格拉森
向少云
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Wyeth LLC
Original Assignee
Wyeth LLC
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Publication date
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Abstract

本发明涉及治疗ADAMTS－5相关疾病、特别是骨关节炎的方法，该方法包括给予疾病困扰对象能够调节ADAMTS－5活性的药物。所述药物优选为联芳基磺酰胺化合物。本发明部分以下发现：不表达功能性ADAMTS－5的转基因动物与WT动物相比在诱导骨关节炎后显示一定程度的骨关节炎减少。另外，所述ADAMTS－5转基因动物与WT动物相比在关节组织具有较低的聚集蛋白聚糖酶活性。这些动物是ADAMTS－5相关疾病的良好模型，用于筛选治疗和/或预防这些疾病的药物。不存在其中单个基因活性缺失能够阻碍骨关节炎过程的其它动物模型。因此，这些动物也显示，骨关节炎可通过给予对象ADAMTS－5抑制剂、尤其是能够抑制ADAMTS－5的聚集蛋白聚糖酶活性的药物而得到预防和/或治疗。

Description

治疗ADAMTS-5相关疾病的方法
            相关申请的交叉引用
本申请根据35U.S.C.§119(e)要求2003年12月4日递交的美国临时申请第60/526,883号的优先权。
                    发明领域
本发明涉及治疗ADAMTS-5相关疾病、具体地说治疗骨关节炎的方法。本文中使用的术语“ADAMTS”意指带有I型血小板反应蛋白基元的解联蛋白和金属蛋白酶。本文中使用的术语“KO”指携带引起基因产物(例如转基因动物的细胞中ADAMTS-5基因产物)表达显著减少或者缺乏的突变的动物。
                    发明背景
骨关节炎为滑液关节病理症状，其特征为软骨细胞外基质降解。软骨细胞外基质的主要成分为蛋白聚糖聚集蛋白聚糖。聚集蛋白聚糖的病理性裂解发生在蛋白骨架的球间域中的两个主要位点，它导致自细胞外基质的功能实体释放。一个位点(N341-342F)通过基质金属蛋白酶(MMP)裂解，而聚集蛋白聚糖中第二个非-MMP裂解位点为E373-374A。E373-374A裂解位点已鉴定为骨关节炎滑液流体样品(Lohmander，Neame和Sandy，1993，Arthritis & Rhuem 36：1214)和细胞因子刺激的软骨培养物(Sandy等，1991，J.Biol.Chem.266：8683)中降解的重要位点。已证实几种ADAMTS酶可在E373-374A或“聚集蛋白聚糖酶(aggrecanase)”位点裂解聚集蛋白聚糖(Kuno等，2000，FEBS Letters478：241；Rodriquez-Manzaneque等，2002，Biochem.Biophys.Res.Commun.293：501；Somerville等，2003，Biol.Chem.278：9503；美国专利第6451575号)。ADAMTS-4和ADAMTS-5或者聚集蛋白聚糖酶-1和聚集蛋白聚糖酶-2，分别似乎为能够由关节软骨合成的两种酶，其具有最有效的“聚集蛋白聚糖酶”活性(＞1000倍)(Tortorella等，1999，Science 284：1664和Abbaszade等，1999，J.Biol.Chem.274：23443)。然而，不清楚是否这些酶共同或者独立地引起骨关节炎中聚集蛋白聚糖降解。
ADAMTS-4在关节疾病中的证据被发现于在用炎性细胞因子刺激关节组织后增加ADAMTS-4表达的几篇报道中。Bau等，Arthritis &Rhuem 46：2648-2657；Curtis等，2000，J.Biol.Chem.275：721-724；Tortorella等，2001，Osteoarthritis Cartilage 9：539-552；Little等，2002，Arthritis & Rhuem 46：124-129；和Yamanashi等，2002，J.Immunol.168：1405-1412。体外发现指明ADAMTS-4为在天然疾病的裂解部位可有效裂解聚集蛋白聚糖的少数酶之一。Tortorella等，2000，J.Biol.Chem.275：18566-18573；Tortorella等，2002，Matrix Biol.21：499-511。
另外，已知聚集蛋白聚糖酶在其中发生细胞外蛋白降解或者破坏的其它疾病中起作用，例如癌症、哮喘、慢性阻塞性肺疾病(“COPD”)、动脉粥样硬化、与年龄有关的黄斑变性、心肌梗塞、角膜溃疡和其它眼表面疾病、肝炎、主动脉瘤、腱炎、中枢神经系统疾病、异常伤口愈合、血管生成、再狭窄、肝硬变、多发性硬化症、肾小球肾炎、移植物抗宿主病、糖尿病、炎性肠病、休克、椎间盘变性、中风、骨质减少和牙周病。
先前已报道ADAMTS-4敲除(KO)的产生(Glasson等，2004，Arthritis and Rhuem，50：2547-2558)。虽然许多报道显示ADAMTS-4参与骨关节炎发展的至少某些证据，令人惊讶的是该小鼠在骨关节炎发作上与野生型(WT)相比不显示任何差异，并且在聚集蛋白聚糖酶活性上不呈现任何差异。迄今，尽管ADAMTS-4仍然可能在包括人的其它动物体内参与骨关节炎，尚未鉴定与聚集蛋白聚糖降解产物的病理聚集有关的聚集蛋白聚糖酶活性。
                    发明概述
本发明提供治疗ADAMTS-5相关疾病特别是骨关节炎的方法，该方法包括给予对象有效量的ADAMTS-5抑制剂。在一个实施方案中，ADAMTS-5抑制剂抑制ADAMTS-5的金属蛋白酶活性。在另一个实施方案中，该抑制剂抑制ADAMTS-5的聚集蛋白聚糖酶活性。用于治疗ADAMTS-5相关疾病特别是骨关节炎的特别优选的药物包括联芳基磺酰胺化合物和结合并抑制ADAMTS-5的抗体。
本发明的优选联芳基磺酰胺化合物为式I的化合物：
其中：
R1为H或者C1-C6烷基；
R2为H、C1-C6烷基、(CH2)nR2′、苯基或者苄基；
n为0-6；
R2′为芳基、杂芳基、环烷基或者杂环烷基；
R3每次出现时独立为H、卤素、OC(卤素)3、C(卤素)3、烷氧基或者C1-C6烷基；
X选自CH2O、OCH2、C(R3)＝C(R3)、C(R3)2-C(R3)2、CH2NHC(＝O)、O(C＝O)NH、O、C(＝O)CH2、SO2CH2C(＝O)NH、SO2NH、OC(＝O)、CH2S(O)和CH2S(O)2；
Z为至少一个芳基或者杂芳基部分。
尤其优选的本发明联芳基磺酰胺列于以下实施例4的表1中。
另外，本发明提供了采用本发明的转基因动物及自其分离的细胞，鉴定用于治疗骨关节炎的药物的方法。在一个具体的实施方案中，所述方法包括给予本发明的ADAMTS-5转基因动物和具有ADAMTS-5活性的动物潜在的治疗药物，并且测定所述潜在的治疗药物是否能够消除在WT型动物中诱发的骨关节炎发作但不影响ADAMTS-5转基因动物。在另一个实施方案中，所述方法包括使来自ADAMTS-5转基因动物的细胞和来自具有ADAMTS-5活性的动物的细胞与潜在的治疗药物接触，并且测定药物是否抑制具有ADAMTS-5活性的细胞内金属蛋白酶活性而不抑制ADAMTS-5转基因动物细胞内的金属蛋白酶活性。两种方法可以还包括测定药物是否抑制ADAMTS-5金属蛋白酶活性和/或聚集蛋白聚糖酶活性。
在另一个实施方案中，用于治疗ADAMTS-5相关疾病、具体地说为骨关节炎的潜在药物的鉴定方法包括通过接触ADAMTS-5并且测定所述药物是否抑制ADAMTS-5，鉴定抑制ADAMTS-5的药物。在一个优选的实施方案中，所述药物抑制ADAMTS-5的金属蛋白酶活性。在一个特别优选的实施方案中，所述药物抑制ADAMTS-5的聚集蛋白聚糖酶活性。
                    附图简述
通过参照以下例证性实施方案的详述以及所附附图，本发明的这些和其它方面将得到更清楚理解，其中：
图1图示了鼠ADAMTS-5基因的靶向破坏，(A)显示ADAMTS-5的氨基酸序列图，(B)显示ADAMTS-5KO动物的等位基因鉴定和用于生成PCR产物的引物定位，(C)显示采用1B中显示的引物1和2生成的PCR产物，及采用1B中显示的引物3和4生成的PCR产物，(D)显示用于逆转录酶(RT)PCR以鉴定WT和KO动物中mRNA的引物位点图，(E)显示采用引物4和5生成的RT-PCR产物，和(G)显示采用引物4和6生成的RT-PCR产物；
图2显示14-18周老龄WT动物(顶部)、ADAMTS-4KO动物(左底部)和ADAMTS-5KO动物(右底部)的生长面上聚集蛋白聚糖酶生成的TEGE373新表位的免疫组织化学定位；
图3图示了在诱导外科关节不稳定性后4和8周来自WT、ADAMTS-5纯合KO和ADAMTS-5杂合小鼠的关节组织分数，(A)显示表示为各关节的平均最大分数的组织分数，(B)显示表示为通过关节的各组织切片的总分数平均值的组织分数；
图4图示了在诱导关节不稳定性后4和8周WT、纯合ADAMTS-5KO和杂合ADAMTS-5KO动物的内侧胫骨坪的平均最大组织分数；
图5图示了自WT和ADAMTS-5KO动物的关节软骨释放的蛋白聚糖，(A)显示自培养关节软骨释放的总蛋白聚糖百分数，(B)显示自关节软骨释放的TEGE373新表位的蛋白质印迹分析，(C)显示来自WT(顶部)、ADAMTS-4KO(中部)和ADAMTS-5KO(底部)关节软骨的股骨头关节软骨的免疫染色。
                    发明详述
本发明涉及以下发现：ADAMTS-5的表达与骨关节炎直接相关。当被刺激形成骨关节炎时，转基因ADAMTS-5KO小鼠对骨关节炎的发作具有抗性。这些转基因动物代表第一种动物模型，其中单一基因的破坏已导致对骨关节炎的抗性。因此，这一发现已导致确定ADAMTS-5为治疗骨关节炎的药物靶分子，并且抑制剂、优选为ADAMTS-5的聚集蛋白聚糖酶抑制剂可用于治疗骨关节炎。
因此，本发明涉及预防和/或治疗骨关节炎的方法，包括给予对象有效量的抑制ADAMTS-5的药物。这种药物包括但不限于反义RNA、药物化合物、尤其是结合并抑制ADAMTS-5的金属蛋白酶位点的化合物、肽和蛋白质以及能够结合并抑制ADAMTS-5的抗体。
本文使用的术语“有效量”指当给予对象时有效至少部分缓解(在优选的实施方案中，预防和/或治愈)患者推测所患疾病的药物量。
在一个优选的实施方案中，药物为能够抑制ADAMTS-5金属蛋白酶活性和/或聚集蛋白聚糖酶活性的抗-ADAMTS-5抗体。在一个特别优选的实施方案中，所述抗体抑制ADAMTS-5。这种抗体在以下实施例5中进一步讨论。
在另一个优选的实施方案中，药物为已发现用作金属蛋白酶抑制剂和/或聚集蛋白聚糖酶抑制剂的联芳基磺酰胺化合物。在一个特别优选的实施方案中，药物为已发现用作ADAMTS-5抑制剂并且能够抑制ADAMTS-5的聚集蛋白聚糖酶活性的联芳基磺酰胺化合物。
在一个优选的实施方案中，联芳基磺酰胺化合物为式I：
Figure A20048004119300131
其中：
R1为H或者C1-C6烷基；
R2为H、C1-C6烷基、(CH2)nR2′、苯基或者苄基；
n为0-6；
R2′为芳基、杂芳基、环烷基或者杂环烷基；
R3每次出现时独立为H、卤素、OC(卤素)3、C(卤素)3、烷氧基或者C1-C6烷基；
X选自CH2O、OCH2、C(R3)＝C(R3)、C(R3)2-C(R3)2、CH2NHC(＝O)、O(C＝O)NH、O、C(＝O)CH2、SO2CH2C(C＝O)NH、SO2NH、OC(＝O)、CH2S(O)和CH2S(O)2；
Z为至少一个芳基或者杂芳基部分。
应该理解上述定义包括这些化合物的药物可接受盐和前药。
在一个实施方案中，Z为吡啶、嘧啶、哌嗪、哒嗪、苯基、萘、呋喃、噻吩、吡咯、吡唑、咪唑、唑、异唑、噻唑、苯并噻唑、喹啉或者异喹啉，或者
Figure A20048004119300141
其中：
U选自S、O、C(R3)＝C(R3)、C(R3)＝N和N(R4)；
W选自C(R3)和N；
M选自C(R3)和N；
L选自S、O、C(R3)＝C(R3)、C(R3)＝N和N(R4)；
R4和R5每次出现时独立为连接至其它的键(a bond to the other)、H、C1-C6烷基或者苯基；
R7选自连接R3的键、H、卤素、C(卤素)3、NR4R5、N[(CH2)2]2O、N[(CH2)2]2NR4、NHSO2R4、NR4C(＝O)R5、NHC(＝O)OR4、NO2、SO2NR4R5、SO2R4、OR4、C(＝O)R4、COOR4、CONR4R5、CN、苯基、杂芳基、C1-C6烷基、C2-C6烯基或者C2-C6炔基；
R8选自H、苯基、杂芳基和C1-C6烷基。
取代时，R7优选用NR4R5、N[(CH2)2]2O、N[(CH2)2]2NR4、NHSO2R4、NR4C(＝O)R5、NHC(＝O)OR4、NO2、SO2NR4R5、SO2R4、OR8、C(＝O)R4、COOR4、CONR4R5、CN、苯基或杂芳基取代。
取代时，R8优选用NR4R5、N[(CH2)2]2O、N[(CH2)2]2NR4、NR4SO2R5、NR4C(＝O)R5、NHC(＝O)OR4、NO2、SO2NR4R5、SO2R4、C(＝O)R4、COOR4、CONR4R5、CN、苯基或杂芳基取代。
以上提及的R1基团中优选H和支链烷基，更优选为异丙基。
以上提及的R3基团中优选卤素、CF3、OCH3和CH3。
以上提及的X基团中优选CH2O、OCH2、C(R3)＝C(R3)和CH2NHC(＝O)。
以上提及的R7基团中优选CH3、乙基、异丙基、CF3、CN和OCH3。
以上提及的R8基团中优选CH3、苯基和苄基。
在一个实施方案中，X为CH2O，并且Z为芳基或者杂芳基，优选为双环。
优选的联芳基磺酰胺显示在以下式2中：
Figure A20048004119300151
其中
R1为H或者C1-C6烷基；
Rc为H、卤素或者C1-C6烷基；
X为O、CH2O或者OCH2；
Z为至少一个芳基或者杂芳基部分。
当Z为芳基时，优选的部分包括取代苯基。苯基的取代基优选包括OH、卤素、C1-C6烷氧基、苯甲酰基、C1-C6烷基或者C1-C6烷酰基。
当Z为杂芳基时，优选部分包括苯并呋喃基、吡啶基、吲哚基。
在另一个实施方案中，X为OCH2，并且Z为芳基或者杂芳基，优选为双环。
在另一个实施方案中，X为C(R3)＝C(R3)，并且Z为芳基或者杂芳基，优选为双环。X更优选为反式碳-碳双键。
在再另一个实施方案中，X为C(R3)2-C(R3)2，Z为芳基或者杂芳基，优选为双环。
在一个实施方案中，X为CH2NHCO，Z为芳基或者杂芳基，优选为双环。
当X为氨基甲酸酯O-CO-NH时，Z优选为芳基或者杂芳基，优选为双环。
在一个实施方案中，X为CO2，Z为芳基或者杂芳基，优选为双环。
在另一个实施方案中，X为O，Z为芳基或者杂芳基，优选为双环。
在另一个实施方案中，X为C(＝O)CH2，Z为芳基或者杂芳基，优选为双环。
在一个实施方案中，X为SO2CH2，Z为芳基或者杂芳基，优选为双环。
在一个实施方案中，X为OCH2，Z为芳基或者杂芳基，优选为双环。如果取代，所述取代优选处于第二个苯环上。
在一个实施方案中，X为OCH2，Z为芳基或者杂芳基，优选为双环。如果取代，所述取代优选处于第一个苯环上。
在一个实施方案中，X为CH2OCH2，Z为芳基或者杂芳基，优选为双环。如果取代，所述取代优选处于第一个苯环上。
无论单独使用或者作为另一个基团的部分，本文使用的术语“烷基”指取代或者未取代的脂族烃链，除非另外具体指明，包括但不限于含1-12个碳原子、优选为1-6个碳原子的直链和支链。例如，术语“烷基”包括甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基和叔丁基。C1-C6烷基包括1-6个碳原子的直链和支链脂族基团。具体包括在“烷基”定义中的为任选取代的脂族烃链。
本文定义中使用的碳数目指碳骨架和碳分支，但是不包括取代基的碳原子，例如烷氧基取代等。
无论单独使用或者作为另一个基团的部分，本文使用的术语“烯基”指取代或者未取代的脂族烃链，并且包括但不限于具有2-8个碳原子并含至少一个双键的直链和支链。烯基部分优选具有1或2个双键。这种烯基部分可以以E或者Z构型存在，本发明的化合物包括两种构型。C2-C6烯基包括具有至少一个碳-碳双键的1-6个碳原子直链或支链。具体包括在“烯基”定义中的为任选取代的脂族烃链。杂原子例如连接于烯基的O、S或N-R1不应连接至连接双键的碳原子。
术语“炔基”指含至少一个碳-碳叁键的烃部分。C2-C6炔基包括具有至少一个碳-碳叁键的1-6个碳的直链或支链。
术语“环烷基”指单环、双环、三环、稠和、桥连或者螺接的单价饱和烃部分，其中碳原子位于所述环系统的内部或者外部。环烷基部分的任何合适环位置可共价结合于定义的化学结构。环烷基部分的实例包括但不限于化学基团，例如环丙基、环丙基甲基、环丁基、环戊基、环己基、环己基甲基、环己基乙基、环庚基、降冰片基、金刚烷基、螺[4.5]癸基和同系物、异构体等。C3-C6环烷基包括任选被R3取代的3-6个碳原子的单环饱和环或者螺不饱和烃部分。实例为环戊烷、环己烷和环己二烯。
术语“环烯基”指单环、双环、三环、稠和、桥连或者螺接的单价饱和烃部分，其中碳原子位于所述环系统的内部或者外部。环烷基部分的任何合适环位置可共价结合于定义的化学结构。环烷基部分的实例包括但不限于化学基团，例如环丙基、环丙基甲基、环丁基、环戊基、环己基、环己基甲基、环己基乙基、环庚基、降冰片基、金刚烷基、螺[4.5]癸基和同系物、异构体等。C3-C6环烷基包括3-6个碳原子的单环饱和环，任选被R3取代。
“芳基”指具有一个或者多个环的不饱和环烃，可以与碳环或杂环在任何可能的位置稠合。芳基化合物一般具有带有苯、萘等环结构特征的分子。
“杂芳基”指5-6元芳基杂环，其在环中含有1-3个选自氧、氮和硫原子的杂原子，可与碳环或杂环在任何可能的位置稠合。包括不为芳族的不饱和杂环，例如噻吩基、呋喃基、吡咯基等。
“杂环烷基”指含碳原子和1-2个选自N、O和S的杂原子的5-7元饱和环。
无论单独使用或者作为另一个基团的部分，本文使用的术语“苯基”指取代或未取代的苯基。
可用一个或多个取代基取代任选取代的部分。合适的任选取代基可独立选自H、卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、NR4R5、N[(CH2)2]2O、N[(CH2)2]2NR4、NHSO2R4、NR4C(＝O)R5、NHC(＝O)OR4、NO2、SO2NR4R5、SO2R4、OR4、C(＝O)R4、COOR4、CONR4R5和CN。
当这种部分被取代时，例如，它们通常可以被单-、二-、三-或者全取代。卤素取代基的实例包括1-溴乙烯基、1-氟乙烯基、1，2-二氟乙烯基、2，2-二氟乙烯基、1，2，2-三氟乙烯基、1，2-二溴乙烷、1，2-二氟乙烷、1-氟-2-溴乙烷、CF2CF3、CF2CF2CF3等。
术语卤素包括溴、氯、氟和碘。
为简单化起见，连接点(“-”)未指明。当描述原子或者化合物以定义变量时，应理解打算以满足原子或者化合物的化合价的方式替换变量。例如，当L为C(R3)＝C(R3)时，两个碳原子形成环的部分以满足它们各自的化合价。
本文使用的术语“药物可接受盐”指当本发明的化合物含碱性部分时衍生自有机和无机酸的盐，例如乙酸、丙酸、乳酸、枸橼酸、酒石酸、琥珀酸、马来酸、丙二酸、扁桃酸、苹果酸、邻苯二甲酸、盐酸、氢溴酸、磷酸、硝酸、硫酸、甲磺酸、萘磺酸、苯磺酸、甲苯磺酸、樟脑磺酸以及类似已知的可接受的酸。当本发明的化合物含羧酸或者酚部分，或者能够形成碱加成盐的类似部分时，盐也可以由有机和无机碱形成，优选为碱金属盐，例如钠、锂或者钾。
本文使用的术语“对象”指哺乳动物，优选为人。
本文使用的术语“给予”指直接给予患者化合物或者组合物，或者给予患者化合物的前药衍生物或者类似物，它们在患者体内形成等量的活性化合物或者物质。
本文使用的术语“载体”应包括载体、赋形剂和稀释剂。
本发明的化合物可以包含不对称碳原子，本发明的某些化合物可以包含一个或多个不对称中心并且可以因此产生光学异构体和非对映体。虽然式I中不显示立体化学，本发明包括这种光学异构体和非对映体，以及外消旋和拆分的对映体纯的R和S立体异构体，以及R和S立体异构体的其它混合物及其药物可接受盐。当优选立体异构体时，在某些实施方案中，其可以基本上不含相应的对映体。因此，基本上不含相应对映体的对映体指通过分离技术分离或者制备为不含相应的对映体的化合物。本文使用的术语“基本上不含”指化合物由明显更大部分的一种立体异构体组成，优选相应对映体少于约50％，更优选少于约25％，甚至更优选少于约10％。
因此本发明提供包含至少一种联芳基磺酰胺化合物和一种或多种药物可接受载体、赋形剂或者稀释剂的药用组合物。
这种载体的实例对本领域技术人员是熟知的，按照可接受的药学方法制备，例如那些在Remington′s Pharmaceutical Sciences，第17版，Alfonoso R.Gennaro编辑，Mack出版公司，Easton，PA(1985)中描述的方法，其通过引用整体结合到本文中。药物可接受载体为与制剂中其它成分相容和生物可接受的载体。
本发明的化合物可以单独或者与常规药用载体组合，口服或者胃肠外给药。可应用的固体载体包括一种或多种物质，它们也可用作矫味剂、润滑剂、助溶剂、悬浮剂、填充剂、助流剂、压制助剂、粘合剂或者片剂-崩解剂或者包囊材料。它们以常规方式配制，例如，以类似于用于已知的抗高血压药、利尿药和β-阻滞剂的方式。含本发明活性化合物的口服制剂可包括任何常规使用的口服形式，包括片剂、胶囊剂、颊形式、含片、锭剂和口服液体、混悬剂或者溶液剂。在粉剂中，载体为微小分散的固体，其与微小分散的活性成分混合。在片剂中，活性成分以合适的比例与具有必要压制性质的载体混合，并且压制为要求的形状和大小。粉剂和片剂优选含有最多达99％的活性成分。
胶囊剂可以包含活性化合物与惰性填充剂和/或稀释剂例如药物可接受淀粉(例如玉米、马铃薯或者木薯淀粉)、糖、人工甜味剂、粉末纤维素如结晶和微晶纤维素、着色剂、明胶、胶等的混合物。
有用的片剂制剂可通过常规压制、湿法制粒或者干法制粒方法制备，采用以下药物可接受稀释剂、粘合剂、润滑剂、崩解剂、表面修饰剂(包括表面活性剂)、悬浮剂或者稳定剂，包括但不限于硬脂酸镁、硬脂酸、十二烷基硫酸钠、滑石粉、糖、乳糖、糊精、淀粉、明胶、纤维素、甲基纤维素、微晶纤维素、羧甲基纤维素钠、羧甲基纤维素钙、聚乙烯吡咯烷酮、藻酸、阿拉伯胶、黄蓍胶、枸橼酸钠、复合硅酸盐、碳酸钙、甘氨酸、蔗糖、山梨糖醇、磷酸二钙、硫酸钙、乳糖、高岭土、甘露糖醇、氯化钠、低熔点石蜡和离子交换树脂。优选的表面修饰剂包括非离子和阴离子表面修饰剂。表面修饰剂的代表性实例包括但不限于POLOAXEMER 188，乙二醇和丙二醇的嵌段共聚物、苯扎氯铵、硬脂酸钙、十六醇十八醇混合物、聚西托醇乳化蜡、脱水山梨糖醇酯、胶态二氧化硅、磷酸盐、十二烷基磺酸钠、硅酸铝镁和三乙醇胺。本文的口服制剂可以使用改变活性化合物吸收的标准延迟或者定时释放制剂。口服制剂也可以包括在水中或者果汁中给予活性成分，按需要包含合适的稳定剂或者乳化剂。
液体载体可以用于制备溶液剂、混悬剂、乳剂、糖浆剂和酏剂。本发明的活性成分可被溶于或者悬浮于药物可接受液体载体例如水、有机溶剂、两者的混合物或者药物可接受油或者脂肪中。液体载体可含其它合适的药用添加剂例如增溶剂、乳化剂、缓冲剂、防腐剂、甜味剂、矫味剂、悬浮剂、增稠剂、着色剂、粘度调节剂、稳定剂或者渗透压-调节剂。用于口服和胃肠外给药的液体载体的合适的实例包括水(尤其包含以上添加剂，例如纤维素衍生物，优选为羧甲基纤维素钠溶液)、醇(包括一元醇和多元醇例如乙二醇)、它们衍生物和油(例如分馏椰子油和花生油)。对胃肠外给药，载体也可为油酯例如油酸乙酯和肉豆蔻酸异丙酯。灭菌液体载体用于胃肠外给药的灭菌液体形式组合物。用于加压组合物的液体载体可为卤代烃或者其它药物可接受喷射剂。
液体药用组合物为灭菌溶液或者混悬液，可用于例如肌内、腹膜内或者皮下注射。灭菌溶液也可静脉给药。用于口服给药的组合物可为液体或者固体形式。
药用组合物优选以单位剂量形式存在，例如片剂、胶囊剂、粉剂、溶液剂、混悬剂、乳剂、颗粒剂或者栓剂。以这种形式，组合物再分为含合适量的活性成分的单位剂量，单位剂量形式可为包装的组合物，例如包装的粉末、小瓶、安瓿、预装注射器或者含液体的囊剂。单位剂量形式可为例如胶囊或者片剂本身，或者它可为合适数量的包装形式的任何这种组合物。这种单位剂量形式可以含约1mg/kg至250mg/kg，可以以单一剂量或者以两个或者更多个分剂量给药。这种剂量可以以用于将本文的活性化合物给至接受者血流的任何方式，包括口服、通过植入、胃肠外(包括静脉内、腹膜内和皮下注射)、直肠、阴道和透皮。可在洗剂、霜剂、泡沫剂、贴剂、混悬剂、溶液剂和栓剂(直肠和阴道)中采用本发明化合物或者其药物可接受盐，进行这种给药。
当给药用于治疗或者抑制具体疾病状态或者病症时，应理解有效剂量可以依采用的具体化合物、给药方式、待治疗疾病的情况及其严重程度以及与受治疗个体有关的各种身体因素而变化。在治疗应用中，以足以治愈或者至少部分缓解疾病症状及其并发症的量向已患有疾病的患者提供本发明的化合物。足以实现该目的的量定义为“治疗有效量”。用于治疗具体病例的剂量必须由主治医师主观确定。涉及的变体包括患者的具体疾病和体积、年龄和应答模式。
在某些情况下，可期望以气溶胶形式直接将化合物给予气道。对通过鼻内或者支气管内吸入给药，本发明的化合物可以配制成水溶液或者部分水溶液。
本发明的化合物可胃肠外或者腹膜内给药。这些活性化合物作为游离碱或者药物可接受盐的溶液剂或者混悬剂可以制备在适合与表面活性剂例如羟基-丙基纤维素混合的水中。分散液也可以制备在甘油、液体聚乙二醇和它们在油中的混合物中。在储存和使用的常规条件下，这些制剂含抑制微生物生长的防腐剂。
适于注射用途的药用形式包括灭菌水溶液或者分散液和用于临时制备灭菌水溶液或者分散液的灭菌粉末。在所有的情况下，所述形式必须是无菌的，并且必须为以易于注射的程度存在的流体。它在制备和贮存条件下必须是稳定的，并且必须防腐以防止微生物例如细菌和真菌的污染。载体可为溶剂或者分散介质，包括例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇和液体聚乙二醇)、其合适的混合物和植物油。
可通过使用透皮贴剂透皮给予本发明的化合物。对本公开的目的，透皮给药被理解为包括透过身体表面和身体通道内衬(包括上皮和粘膜组织)的所有给药。可在洗剂、霜剂、泡沫剂、贴剂、混悬剂、溶液剂和栓剂(直肠和阴道)中使用本发明化合物或者其药物可接受盐，进行这种给药。
通过使用含活性化合物和对活性化合物惰性、对皮肤无毒性、使药物通过皮肤全身吸收进入血流的载体的透皮贴剂，可以实现透皮给药。载体可以采用任何形式，例如霜剂和膏剂、糊剂、凝胶剂和包藏装置。霜剂和膏剂可以为粘稠的液体或者水包油或者油包水型的半固体乳剂。包含活性成分、分散于石油或者亲水性石油中的吸收性粉末的糊剂也可以是合适的。各种包藏装置可以用于释放活性成分进入血流，例如覆盖含活性成分(带有或者不带有载体)的贮器的半透膜、或者含活性成分的基质。其它包藏装置在文献中已知。
本发明的化合物可以以常规栓剂形式直肠或者阴道给药。栓剂制剂可以由常规材料制备，包括可可豆脂(加入或者不加入蜡以改变栓剂熔点)和甘油。也可以使用水溶性栓剂基质，例如各种分子量的聚乙二醇。
在某些实施方案中，本发明涉及联芳基磺酰胺化合物的前药。各种形式的前药是本领域已知的，例如以下中讨论的：例如Bundgaard(编辑)，前药设计(Design of Prodrugs)，Elsevier(1985)；Widder等(编辑)，酶学方法(Methods in Enzymology)，第4卷，Academic Press(1985)；Krogsgaard-Larsen等(编辑)，“前药设计与应用(Design and Application of Prodrugs)”，药物设计和发展的教科书(Textbook of Drug Design and Development)，第5章，113-191(1991)，Bundgaard等，Journal of Drug Deliver reviews，8：1-38(1992)，Bundgaard，J.of Pharmaceutical Sciences，77：285 et seq.(1988)；和Higuchi andStella(编辑)作为新药传递系统的前药(Prodrugs as Novel DrugDelivery Systems)，American Chemical Society(1975)，其各自通过引用整体结合到本文中。
应理解本发明的化合物的剂量、给药方案和方式应根据所治疗的疾病和个体而变化，并且由参与的医疗实践者的判断决定。优选一种或多种本文化合物的给药在低剂量下开始，并且增加直到达到要求的作用。
按照以下一般合成流程，自市售可得到的起始原料、如文献方法中的描述制备的材料、或者在所述流程和实验方法中描述的新中间体制备本发明的化合物。该一般流程覆盖大多数的实施例。对更详细的信息，请参照以下实施例部分中的流程。
                    一般合成流程
Figure A20048004119300241
这里使用的碱为三乙胺、碳酸钾、NaH、Hunig碱等。偶合通常通过Suzuki偶合或者Stille偶合进行。采用TFA、NaOH、LiOH、K2CO3等进行水解。
本发明许多化合物的更具体的合成途径包括在以下流程中。本领域技术人员应理解，这些合成可要求未在流程中显示的保护和脱保护步骤，并且步骤顺序可以变化以符合靶分子的官能度。
在流程1中，用4个步骤制备本发明的化合物1。在Hunig碱存在下用4-溴-苯磺酰氯进行缬氨酸甲酯的磺酰化，得到磺酰胺中间体1。在Suzuki偶合条件下，采用钯催化剂使该4-溴-苯磺酰胺进一步与硼酸酯偶合，获得联苯磺酰胺中间体2，然后用各种烷基化试剂使联苯磺酰胺中间体2烷基化，提供联苯磺酰胺酯(中间体3)。采用碱例如NaOH或者LiOH进行中间体3的水解，形成最终产物1。
流程1
化合物1的另一条途径显示在流程2中。在碱性条件下，于DMF中酚衍生物转变成硼酸频哪醇酯(中间体4)。然后在Suzuki偶合条件下，硼酸频哪醇酯与4-溴-苯磺酰胺偶合，提供联苯磺酰胺中间体5，后者在碱性条件下水解为最终产物。
流程2
制备本发明化合物1的第三种选择方案基于流程3进行。流程3中的合成顺序类似于流程1中的方法，但采用不同的起始原料，缬氨酸叔丁酯。因此，通过采用TFA使中间体8的叔丁酯脱保护，进行形成产物1的最后步骤。
流程3
Figure A20048004119300261
可进行流程3的稍微改进以产生本发明的化合物1。这图示在流程4A中。在这种情况下，可自商业来源购买带有合适醚部分的硼酸酯，用于Suzuki偶合以提供中间体8。自中间体8的叔丁酯脱保护产生要求的最终产物1。
流程4A
通过水解合适的酯例如中间体10也可制备本发明化合物1。
流程4B
Figure A20048004119300271
流程4B有以下特征：烷基化、Suzuki偶合和脱保护步骤。
烷基化：使苯酚衍生物(4.14mmol)溶于甲醇(6mL)中并且用氢氧化四丁基铵(4.14mmol)处理。搅拌混合物10分钟，减压除去溶剂。使残余物溶于THF(10mL)中并用苄基溴(4.14mmol)的THF溶液(5mL)处理。室温下搅拌反应物过夜。减压除去溶剂并重新溶于二氯甲烷(5mL)和乙醚(50mL)中。用水(4×50mL)和饱和氯化钠溶液(50mL)洗涤有机溶液，经硫酸镁干燥。过滤有机溶液并且减压浓缩。经快速硅胶层析法纯化粗品物料，以53％收率得到纯化产物，后者为中间体4硼酸酯。
Suzuki偶合：使硼酸酯(1.07mmol)和芳基溴(1.07mmol)溶于乙二醇二甲醚(10mL)中，用四(三苯基膦)合钯(0)(0.054mmol)处理生成的溶液。加入碳酸钾(2.14mmol)的水溶液(3.5mL)，将反应物加热至回流，反应1小时。冷却反应物，过滤除去固体，用水(10mL)稀释并且减压浓缩。用二氯甲烷(3×25mL)提取残余物，用水(25mL)和饱和氯化钠溶液(25mL)洗涤有机层。经硫酸镁干燥有机溶液，过滤并减压浓缩。经快速硅胶层析法纯化，以57％收率得到产物中间体10，要求的产物的(三甲基甲硅烷基)乙酯。在某些情况下，PdCl2(dppf)用作催化剂，替代四(三苯基膦)合钯(0)。
用MgBr2脱保护：使2-(三甲基甲硅烷基)乙酯(0.0621mmol)溶于二氯甲烷(58mL)中，用溴化镁醚化物(0.186mmol)处理。剧烈搅拌混合物过夜或者直到反应完成，然后与10％HCl(2×25mL)和饱和氯化钠溶液(25mL)一起振摇。然后经硫酸镁干燥有机溶液，过滤并减压浓缩，以95％收率得到产物。需要时粗品产物可经HPLC纯化。
如流程4C中所示，可用硼酸酯对游离酸进行Suzuki偶合。因此，避免酯的水解(如在中间体10中)。这导致直接制备化合物1。
流程4C
与游离酸的Suzuki偶合：使硼酸酯(1.36mmol)和溴代酸(1.36mmol)溶于乙二醇二甲醚(13.8mL)中，用四(三苯基膦)合钯(0)(0.068mmol)处理生成的溶液。室温下搅拌10分钟后，加入碳酸钾(4.08mmol)的水溶液(4.8mL)。将溶液加热至回流，反应2小时，然后冷却至室温过夜。减压下将混合液浓缩为含水的残余物，加入乙酸乙酯(50mL)。用10％HCl(2×25mL)和饱和氯化钠溶液(25mL)洗涤有机混合物。经硫酸镁干燥有机溶液，过滤并减压浓缩为粗残余物，后者采用快速硅胶层析法纯化，以64％收率得到产物。
在流程5中以3个步骤制备本发明的化合物2。通过碱性条件下烷基化制备硼酸酯(中间体11)。由此得到的中间体11可易于与4-溴-苯磺酰胺衍生物偶合，提供联苯磺酰胺类似物(中间体12)。
中间体12中的酯官能团可在各种条件下水解，得到要求的联苯磺酰胺产物2。
流程5
Figure A20048004119300291
在流程6中显示提供化合物2的另一种方法。起始原料4-羟基联苯磺酰胺衍生物易于通过Suzuki偶合得到。4-羟基联苯磺酰胺在碱性条件下烷基化，提供带有醚连接基团的联苯磺酰胺酯中间体13。采用NaOH水溶液使酯(中间体13)水解，提供要求的本发明产物2。
流程6
Figure A20048004119300292
采用流程6A中显示的途径，可进行流程6中所示酯例如甲酯的脱保护。
流程6A
甲酯的脱保护
使中间体13A甲酯(0.294mmol)溶于THF∶MeOH(2∶1)(2mL)中，加入1M LiOH(0.881mmol)。搅拌反应混合液3天。除去溶剂并使剩余的白色固体溶于H2O中。用乙醚提取H2O。除去乙醚层并用HCl(浓)将水层酸化至pH 2，形成混浊的溶液。用CH2Cl2提取该溶液。除去生成的水层，用盐水洗涤剩余的有机层。除去溶剂，使剩余的固体溶于少量CH2Cl2中，然后加入己烷，沉淀出白色固体。过滤固体并减压干燥，得到要求的产物。
基于合成流程7制备本发明的化合物3。4-乙烯基苯基硼酸和4-溴苯磺酰胺衍生物通过钯催化剂催化的Suzuki偶合反应，提供中间体14。中间体14与芳基卤化物的Heck反应生成中间体15。中间体15为联苯基磺酰胺衍生物，带有作为连接基团连接至芳环的双键。中间体15的叔丁酯的常规TFA脱保护以高收率获得要求的产物13。
流程7
流程8显示获得本发明化合物4的多步骤合成。常规Suzuki偶合后用三氟甲磺酸酐烷基化，得到三氟甲磺酸酯中间体16。通过Sonagoshira反应，三氟甲磺酸酯中间体16被转变成炔化产物17。通过TBAF除去17的TBDMS保护基，随后进行另一个Sonagoshira反应，提供用叁键连接联苯基与芳基部分的中间体18。然后通过氢化还原中间体18，随后经TFA脱保护除去酯基，得到要求的产物4。
流程8
Figure A20048004119300311
在流程9中显示结构5化合物的途径。4-氨基甲基苯基硼酸用于Suzuki偶合产生中间体19。用乙酸酐酰基化中间体19，随后通过TFA脱保护，得到具有结构5的化合物。
流程9
Figure A20048004119300312
在流程10中呈现制备结构5的另一种途径。通过DMF中4-溴苯乙酸与苯胺的EDCL偶合，形成中间体21。中间体21与相应的锡试剂Stille偶合，随后经TFA脱保护，得到产物5。
流程10
在流程11中，通过在三乙胺存在下使4-羟基联苯磺酰胺衍生物与异氰酸酯反应，制备本发明的化合物6。用TFA处理由此得到的氨基甲酸酯(中间体24)，除去叔丁酯保护基，得到化合物6。
流程11
Figure A20048004119300322
在流程12中显示制备化合物6的另一种途径，在三乙胺存在下采用4-羟基联苯磺酰胺游离酸与异氰酸酯反应。直接得到化合物6而无须脱保护步骤。
流程12
在流程13中显示结构7的化合物的途径。采用DCC试剂，中间体23与羧酸偶合得到酯24。用TFA处理中间体24选择性除去叔丁基，得到化合物7。
流程13
Figure A20048004119300331
在流程14中，通过烷基化后用TFA脱保护(除去保护基叔丁基)，自中间体23制备本发明化合物8。
流程14
在流程15中，以多步骤合成制备本发明化合物9。基于已知的文献方法制备中间体26。Stille偶合后TFA脱保护，得到要求的产物9。
流程15
Figure A20048004119300341
在流程16中显示结构10化合物的途径。按照文献方法制备中间体28([1，2，3]噻唑-4-基-苯酚)。用苄基溴衍生物烷基化后缩合，得到硫醚中间体29。29与4-溴苯磺酰胺的Suzuki偶合生成中间体30。用mCPBA氧化后经水解提供化合物10。
流程16
用TFA除去叔丁酯保护基
流程17
Figure A20048004119300351
使叔丁酯保护的联苯磺酰胺(0.505mmol)溶于CH2Cl2(2.5mL)中。使TFA(2.5mL)溶于CH2Cl2(2.5mL)中，将其缓慢加入到溶解的酯中并搅拌1.5小时。减压除去溶剂，使剩余的油溶于甲苯中，除去甲苯。最后，使油溶于最少量的CH2Cl2中，加入己烷，沉淀出白色固体。减压除去溶剂，在真空泵干燥后，得到干燥固体，收率98％。
本发明另外涉及鉴定用于治疗骨关节炎的药物的方法。所述鉴定用于治疗骨关节炎的药物的方法包括测定具体药物是否具有ADAMTS-5特异性聚集蛋白聚糖酶抑制活性。所述方法也可包括使用ADAMTS-5转基因动物测定用于治疗骨关节炎的潜在药物是否在具有ADAMTS-5活性的动物中有效但是在不显示ADAMTS-5活性的动物中无效。
如在以下实施例中进一步所述，ADAMTS-5基因等位基因在细胞中是由所述等位基因与突变ADAMTS-5基因或其部分之间的纯合重组引起的功能性破坏。所述细胞可为通常表达ADAMTS-5的分化细胞型，例如巨噬细胞或单核细胞或巨噬细胞样或单核细胞样细胞系。或者，所述细胞可为能够发育成动物的多能祖细胞例如胚胎干细胞。在一个优选的实施方案中，使用胚胎干细胞。可将所述胚胎干细胞引入到囊胚泡中，将所述囊胚泡引入到假孕动物中产生具有体细胞和生殖细胞的动物，其中ADAMTS-5基因等位基因被功能性破坏。这种动物是“同源重组”动物。本发明优选的同源重组动物是小鼠。小鼠是优选动物，因为它们更易于用于实验室研究，还因为它们提供了技术公知的模型，如以下实施例中进一步的描述。然而，可使用任何动物，包括但不限于猪、牛、绵羊、山羊及其它动物。在一个尤其优选的实施方案中，所述动物为近交小鼠。
为了产生同源重组细胞或动物，可制备含有ADAMTS-5蛋白编码DNA或其部分的靶向载体，其中具有引入的突变。所述靶向载体可包括非同源ADAMTS-5替代部分，其优选包含Cre/Lox-P位点，第一同源性区域位于与第一ADAMTS-5基因序列基本相同的非同源部分上游；第二同源性区域位于与第二ADAMTS-5基因序列基本相同的非同源部分下游。本文中使用的“基本相同”意在描述与ADAMTS-5基因具有足够同源性以允许所述核苷酸序列与内源序列之间同源重组的核苷酸序列，以允许所述核苷酸序列与宿主细胞中内源ADAMTS序列之间的同源重组。通常，侧翼同源区域的核苷酸序列与内源序列具有约80％-100％的同一性。在一个尤其优选的实施发方案中，它们100％相同。所述同源区域也具有足够的长度以允许与宿主细胞中的内源基因同源重组，即至少1千碱基长度，更优选为至少数千碱基长度。
所述靶向载体可另外包括阳性和阴性选择盒。这些盒包含编码阳性和阴性选择标记的核苷酸序列，其有效连接于控制选择标记表达的调节元件。
为了功能性破坏宿主细胞中的内源ADAMTS-5基因等位基因，将靶向载体引入到所述宿主细胞例如分化细胞或者胚胎干细胞中。所述靶向载体可通过任何本领域已知技术引入到所述细胞中，包括但不限于磷酸钙沉淀、DEAE-葡聚糖转染、微注射、脂质转染、电穿孔等。向所述宿主细胞中引入载体后，培养细胞，其时间和条件足以允许所引入的靶向载体与内源ADAMTS-5基因之间的同源重组。选择宿主细胞(例如通过阳性和/或阴性选择)并通过本领域已知的标准技术(例如DNA杂交或使用区别正常内源等位基因与同源重组等位基因的探针/引物的PCR)筛选在内源ADAMTS-5基因座的同源重组。
为了产生同源重组动物，将具有至少一个功能性破坏的ADAMTS-5基因等位基因的胚细胞引入到囊胚泡中，所述囊胚泡被植入假孕的代孕母亲体内，允许胚胎发育至足月。所得动物是具有胚胎干细胞的细胞后代的嵌合体。其中所述胚胎干细胞已经对动物生殖细胞产生影响的嵌合动物可与WT动物交配，产生在所有的体细胞和生殖细胞中ADAMTS-5基因破坏的杂合动物。然后所述杂合动物可交配产生ADAMTS-5基因破坏的纯合动物(即具有两个功能破坏的ADAMTS-5基因等位基因)。可将任何种类的突变引入到转基因动物中，包括无效突变和点突变。点突变可导致ADAMTS-5基因产物的正常表达，但所述产物可具有异常活性，例如可没有聚集蛋白聚糖酶活性。
另外，来自ADAMTS-5基因破坏的纯合动物的细胞可分离自所述动物，并且体外培养用于各种研究，包括用于筛选实验。
ADAMTS-5转基因动物和从中得到的细胞用作阳性对照，以评价ADAMTS-5抑制剂的效力。所述纯合与杂合动物提供这种标准。在鉴定和评价ADAMTS-5抑制剂效力的筛选实验中，未用抑制剂处理的WT动物(或者从中得到的细胞)用作0％抑制标准，ADAMTS-5破坏的纯合动物用作100％抑制标准，而ADAMTS-5基因破坏的杂合动物用作少于100％抑制但是多于0％抑制的标准。然后相对于这些标准评价用ADAMTS-5抑制剂处理的对象中ADAMTS-5活性的量。所述抑制作用可通过聚集蛋白聚糖酶活性的％抑制作用或者骨关节炎症状的％减少来测量。
所述转基因动物和从中得到的细胞也可用于筛选ADAMTS-5抑制剂的副作用或毒性，其由所述抑制剂对非ADAMTS-5靶点(例如ADAMTS-5同工型或ADAMTS-4)的作用引起。例如，可将ADAMTS-5抑制剂给予本发明的ADAMTS-5动物以评价所述抑制剂的副作用或毒性。因为所述ADAMTS-5转基因动物缺乏抑制剂的正常靶点，在给予ADAMTS-5无效突变体抑制剂时，观察到的作用可归因于所述ADAMTS-5抑制剂对其它靶点的副作用。因此，ADAMTS-5转基因动物用于区别这些副作用与所述抑制剂对ADAMTS-5活性的直接作用。
所述转基因动物也可用于体内筛选实验，以鉴定其中ADAMTS-5在所述疾病状况的发病机理中起作用的疾病。这种筛选实验进一步用于鉴定可用ADAMTS-5抑制剂治疗的其它疾病。例如，所述转基因动物可用于评价ADAMTS-5在其它疾病中的作用，所述疾病中发生细胞外蛋白降解或破坏，例如癌症、哮喘、慢性阻塞性肺疾病(“COPD”)、动脉粥样硬化、与年龄有关的黄斑变性、心肌梗塞、角膜溃疡和其它眼表面疾病、肝炎、主动脉瘤、腱炎、中枢神经系统疾病、异常伤口愈合、血管生成、再狭窄、肝硬变、多发性硬化症、肾小球肾炎、移植物抗宿主病、糖尿病、炎性肠病、休克、椎间盘变性、中风、骨质减少、类风湿性关节炎和其它形式的关节炎及牙周病。可给予本发明的转基因动物刺激以引起疾病症状，如在以下实施例中对骨关节炎的进一步描述。或者本发明转基因动物可用遗传易患具体疾病的动物繁殖。在ADAMTS-4或ADAMTS-5无效突变动物中诱导疾病后，测定所述动物对所述疾病的易感性或抗性。所述动物相对于WT对所述疾病的抗性表明所述疾病的病理学涉及ADAMTS-4或ADAMTS-5的作用，因此所述疾病可分别用ADAMTS-4或ADAMTS-5的抑制剂治疗。作为该用途的实例，以下实施例1和附图3A与附图3B证实，纯合与杂合ADAMTS-5转基因动物对诱导的骨关节炎具有抗性。
ADAMTS-5无效突变的纯合ADAMTS-5转基因动物或从中得到的细胞可与人同等基因重构，产生表达人ADAMTS-5基因产物的非人细胞或动物。这些细胞和动物可用于筛选化合物，以鉴定所培养的细胞中或体内人ADAMTS-5活性的抑制药物。这种动物和细胞可通过本领域技术人员熟知的技术制备。具有表达人ADAMTS-5多肽的细胞的非人动物和/或从中得到的细胞可用于筛选和鉴定可体内抑制人ADAMTS-5的药物。
ADAMTS-5转基因动物也用于确定具体物质是否是ADAMTS-5的底物。ADAMTS-5是具有聚集蛋白聚糖酶活性的金属蛋白酶。为了评价假定底物的前体形式是否被ADAMTS-5裂解，可以评价在ADAMTS-5动物中存在或者不存在裂解产物。在所述转基因动物中裂解产物将显著减少或不存在。
提供以下实施例以举例说明，但不限制本发明。
                    实施例
实施例1：材料和方法
ADAMTS-5KO小鼠的生成
自携带Cre/LoxP型条件KOADAMTS5等位基因的近交129SvEv-Brd小鼠(Lexicon Genetics，The Woodlands，TX)产生用于这些研究的ADAMTS-5KO小鼠。条件等位基因含外显子3侧翼的LoxP位点，使得Cre重组导致外显子3的缺失，后者编码大部分的酶活性位点，如图1A中所示。
通过在ES细胞中同源重组，随后通过囊胚泡注射以产生嵌合小鼠，产生携带ADAMTS-5条件KO等位基因的小鼠。通过使条件KO小鼠与鱼精蛋白-Cre转基因小鼠(由Lexicon Genetics提供)杂交，产生ADAMTS-5KO小鼠系，导致携带突变ADAMTS-5和Prot-Cre等位基因两者的雄性后代精液中Cre介导的外显子3缺失，如图1B中所示。
ADAMTS-5WT、条件KO和KO等位基因的基因型分型
使用得自尾部活体的粗品蛋白酶K消化液的DNA模板，通过PCR进行ADAMTS-5基因的等位基因的基因型分型。采用序列(5′TGTTCA CCC AAA GCA ACT AC3′)的正向引物(引物1)和序列(5′TAGAGG AGA GGA GAG GAG G3′)的反向引物(引物2)，通过PCR鉴定野生型和杂合KO等位基因。这些引物在(5′)LoxP位点的插入位点的侧面，在WT和杂合动物中产生230bp扩增子，在KO动物没有扩增子(图1B，C)。采用正向引物(5′GTG AAC CAC ATG GAC TTTGG3′)(引物3)和反向引物(5′TCG TAG CAA ACA CCC ACC TG3′)(引物4)鉴定敲除等位基因，产生外显子3缺失(KO)等位基因的500bpPCR产物(图1B，C)。
用于RT-PCR的RNA的制备
按照制造商的说明书，采用RNAeasy试剂盒(Qiagen，Valencia，CA)，自WT和KO小鼠脾脏制备总RNA。采用Bioanalyzer(AgilentTechnologies，Palo Alto，CA)在RNA 6000Nano试验中证实RNA样品的质量。如下设计并合成PCR引物(BioSource International，Camarillo，CA)：
引物5，5′CGACCCTCAAGAACTTTTGC3′，SEQ ID No：4
引物6，5′CTCAGGCCCAAATGTCAAGT3′，SEQ ID No：5
引物7，5′CGTCATGAGAAAGGCCAAGT3′，SEQ ID No：6。
通过采用Qiagen OneStep RT-PCR试剂盒，600nM浓度的各种引物和200ng总RNA，在DNA Engine Dyad热循环仪(MJ Research，Waltham，MA)中进行RT-PCR。所述RT-PCR于50℃下运行30分钟，95℃下15分钟，进行35个95℃下15秒、59℃下1分钟和72℃下30秒的循环。在图1D中显示RT-PCR引物，在图1E和1F中显示所述RT-PCR产物。采用引物5和6，图1E显示WT的mRNA为506bp，KO为338bp。采用引物5、4和7，图1F显示WT的mRNA为258bp，并且正如期待的，在KO小鼠体内没有产物，因为引物7位于在KO中被除去的外显子3中。
幼年和老年小鼠的组织与病理评价
对18周龄的22只WT和20只ADAMTS-5KO雄性小鼠进行完全的尸体剖检。尸体剖检包括显微镜观察、身体和器官重量、血液学、全血清化学以及脑、关节、心脏、肺、胸腺、脾、肝、肾、唾液腺、下颌淋巴结、睾丸、附睾、眼、哈德泪腺、泪腺、胸骨和肱骨的显微镜检查。所有的组织固定在10％中性缓冲福尔马林中，如果矿物化须脱钙，常规加工，石蜡包埋并且制备成常规苏木精及伊红染色切片。所有载玻片由委员会认证的兽医病理学家(BS)评价是否存在病理性病变。
外科手术诱发骨关节炎：
经Wyeth Institutional Animal Care and Use委员会批准进行所有研究。小鼠中外科手术诱发骨关节炎是用于研究骨关节炎的技术公认模型。因此，用250mg/kg三溴乙醇(Sigma-Aldrich，St.Louis，MO)腹膜内麻醉10周龄小鼠，准备膝骨用于无菌手术。制备内侧髌骨旁切口以暴露和横切半月板韧带(使内侧半月板锚定于胫骨坪)，导致内侧半月板的不稳定(DMM)。用8-0和9-0Vicryl(Ethicon公司，Somerville，NJ)分别缝合关节囊和皮下层，并用NexabandS/C组织粘合剂(Abbott Laboratories，North Chicago，IL)封闭皮肤。术前和术后以0.03mg/kg提供丁丙诺啡(Buprenex，Reckitt and Coleman Products，Hull，England)。DMM术后4周，用二氧化碳处死19只WT和19只KO小鼠。术后8周，处死33只WT、20只杂合和28只纯合KO小鼠。小部分动物经历假手术以确定关节切开术对疾病进展的继发炎症作用。假手术后4或8周动物的组织学评分与未经历任何手术的动物无统计学差异。
骨关节炎的进展和严重性的评价：
将完整的膝关节放入4％低聚甲醛中24小时，然后在20％EDTA中脱钙5天。在石蜡中包埋关节并且贯穿整个关节取6μm额向切片。用Safranin-O/牢固绿将载玻片染色，贯穿所述关节以70μm间隔由3盲的独立评分者评定等级。半定量评分系统改进自Chambers等(Chambers等，2001，Arthritis & Rheum 44：1455)，其中0表示正常软骨，0.5为无结构变化的Safranin-O丢失；1表示粗糙的关节表面和小的原纤维形成；2表示原纤维形成向下到仅低于表层的层并且带有某些表面板丢失；3为温和(＜20％)，5为中度(20-80％)，6为严重(＞80％)丢失未钙化的软骨。关节的所有象限(内侧胫骨坪(MTP)、股骨内侧踝、外侧胫骨坪和股骨外侧踝)分开评分。每个膝关节评价为约12个水平，评分持续一直到任何象限下不再观察到关节软骨。如图3A中所示，评分表示为整个关节的所有水平上发现的最大组织学分数。如图3B中所示，将全部四个象限的所有水平的分数相加，得到总组织学分数，以反映OA病变的严重性以及受影响的表面积。
为将这些结果与在IL-1β、IL-1βr、INOS和ICE KO小鼠中检测骨关节炎的进展(Clements等，2003，Arthritis & Rheum 48：3452)的公开结果进行比较，也将这些结果表示为各实验组的内侧胫骨坪的平均分。图4显示这些评分也在ADAMTS-5纯合和杂合动物中明显减少。软骨外植体的制备和培养：
收获4周龄WT和KO小鼠的股骨头，并将所述软骨与下面的软骨下骨分开。在含1％抗真菌-抗生素(Sigma，Aldrich)、2mM谷氨酰胺、10mM Hepes、50mg/ml抗坏血酸盐和10％FBS的Dulbecco氏改良伊格尔氏培养基(DMEM)中，在5％CO2和95％空气的潮湿气氛中作为外植体37℃培养软骨样品48小时。然后将外植体冲洗3次，在无血清DMEM+10ng小鼠IL-1α/ml(Sigma，Aldrich)和10-5M维A酸(Sigma，Aldrich)中培养另外72小时。收集条件培养基，在培养阶段结束时收获软骨。
蛋白聚糖的定量
按照先前报道的方法(Farndale等，1986，Biochim Biophys Acta 883：173)，采用二甲基亚甲基蓝(DMMB)和得自鲨鱼软骨的硫酸软骨素C(Sigma，Aldrich)作为标准品，通过比色法试验，测量培养基中作为硫酸化的葡糖胺聚糖(GAG)的蛋白聚糖含量。用蛋白酶K(Sigma，Aldrich)消化收割的软骨样品16小时，离心并收集上清液。也测量消化软骨中的蛋白聚糖含量，以提供软骨中的总蛋白聚糖含量，并且能够计算实验期间蛋白聚糖的释放百分比。
蛋白质分析
采用设计为识别聚集蛋白聚糖酶产生的片段的新表位抗体，通过蛋白质分析法分析条件培养基中的聚集蛋白聚糖片段。条件培养基对50mM Tris-乙酸盐(pH 6.5)透析，于37℃用软骨素酶ABC(Sigma，1mU/μg的GAG)、角蛋白酶I(Seikagaku America，Falmouth，MA，1mU/μg GAG)和角蛋白酶II(Seikagaku，0.02mU/μg GAG)消化2小时。通过YM-10离心过滤装置(Millipore Corp.，Bedford，MA)浓缩样品，冷冻干燥，以1mg/ml的GAG浓度(通过DMMB测量)重构在水中。减压条件下在4-12％梯度Tris-甘氨酸凝胶上(Invitrogen，Carlsbad，CA)分离各样品的等量GAG，转移至硝酸纤维素膜上。采用识别聚集蛋白聚糖酶产生的C-末端球间新表位NITEGE373的单克隆抗体(MAb)AGG-C1(0.04μg/ml)(Collins-Racie等，2004，Matrix Biol.23：219-230)，进行免疫印迹法。用初级和碱性磷酸酶缀合的次级山羊抗小鼠IgG(Promega公司，Madison，WI，1∶7500)分别于4℃温育过夜和在室温下温育1小时。室温下用NBT/BCIP底物(Promega)温育免疫印迹2-15分钟，以获得最佳显色。
小鼠关节软骨中TEGE373新表位的免疫组织化学鉴定
通过标准多克隆抗体技术(Glasson等，2004，Arthritis & Rheum.50：2547-2558.)合成多克隆抗体TEGE373。所述抗体与牛聚集蛋白聚糖的ADAMTS-4消化液生成的G1-TEGE373反应，但不与完整的(未消化的)聚集蛋白聚糖反应，证实其为“新表位”抗体。采用免疫肽通过亲和层析纯化阳性血清。
对于小鼠关节软骨中TEGE373新表位的免疫染色，在10ng IL-1α/ml[是γ还是α](Sigma)和10-5M维A酸(Sigma)存在或者不存在时，组织培养3天后，收获ADAMTS-4KO、ADAMTS-5KO和WT动物的股骨头。在OCT中冷冻组织并切割成5微米的切片。用过氧化氢酶(DakoCytomation，Carpinteria，CA)阻断内源性过氧化物酶活性，并且用0.1U软骨素酶ABC/ml(Sigma)、0.1U角蛋白酶I/ml(Seikagaku公司，东京，日本)和0.1U角蛋白酶II/ml(Seikagaku公司，东京，日本)将切片于37℃去糖基化1小时，将初级抗体或者正常的兔血清加入到切片12小时，加入次级抗体(驴抗兔抗体，Rockland公司，Gilbertsville PA)，持续30分钟。切片用ABC-过氧化物酶温育后用DAB底物(Vector Laboratories，Burlingame，CA)温育。用苏木精将切片复染。
实施例2：结果与讨论
产生ADAMT-4敲除(KO)(Glasson等，2004，Arthritis & Rheum.50：2547-2558.)。如上详述，通过Cre-Lox介导的重组产生外显子3编码的56个氨基酸缺失，包括锌结合位点的破坏和“甲硫氨酸转角”的缺失(图1A)，产生ADAMTS-5KO。采用引物1和2从WT和杂合小鼠产生230bp的PCR产物。引物2位于包含外显子3的缺失部分中，因此在纯合KO动物体内不产生PCR产物。由于外显子3缺失，在杂合和纯合KO动物中引物3和4产生500bp产物。相对于反向引物(2和4)，最佳扩增需要使用两种正向引物(1和3)。因为长和短扩增子之间扩增效力的差异，与使用从单引物对(即3和4)产生的一个短(缺失)扩增子和一个长(wt)扩增子相比，使用短的、等位基因-特异性扩增子提供更可靠的基因型分型。图1E显示脾总RNA的RT-PCR，通过跨外显子3的引物制备的PCR产物证实KO中产生的mRNA大小减少。mRNA的存在表明该框内缺失不引起信息的不稳定。不能证实缺乏催化功能区的翻译蛋白质的存在。
允许雄性和雌性WT及纯合KO小鼠生长至14-18周龄。检查动物的任何可见异常，抽取血液样本用于全血计数和血清化学，收获17种组织，由持有委员会认证的兽医病理学家(BS)检查。受检查的组织包括心脏、肺、胸腺、脾、肝、肾、脑、唾液腺、下颌淋巴结、睾丸、附睾、眼、哈德泪腺、泪腺、胸骨、股骨和全爪。整体重无异常，已检测的任何血液或者血清分析或者任何组织的组织学表现显示，ADAMTS-5酶活性对正常发展和生长不是必须的。
聚集蛋白聚糖为生长板中软骨以及关节的关节软骨中的丰富成分。图2显示通过用产生为抗聚集蛋白聚糖酶裂解后聚集蛋白聚糖的新C末端G1-TEGE373的多克隆抗体，通过近侧胫骨生长板的免疫染色法，对WT、ADAMTS-4和ADAMTS-5KO动物生长板的分析。
如图2中所示，WT小鼠证实近侧胫骨生长板中细胞内抗体的显著杂交，并且该染色不再存在于ADAMTS-4KO动物中。相反，ADAMTS-5KO小鼠生长板中抗-TEGE373抗体的杂交与WT生长板的染色非常相似。这些结果提示生长板中聚集蛋白聚糖转换是ADAMTS-4而不是ADAMTS-5的酶活性的结果。值得注意的是，两种KO动物中动物的可见外观、长骨长度和生长板的组织学表现与WT相同。因此，有可能在ADAMTS-4不存在时，生长板中ADAMTS-4的任何聚集蛋白聚糖降解活性可被其它酶适当补偿。
如以上实施例1中的详述，通过手术横切前新月形-胫骨韧带导致内侧半月板(DMM)不稳定，产生单侧关节不稳定，数据显示在图3A和图3B中。术后4和8周处死小鼠，采用报道的评分系统(Chambers等，2001，Arthritis & Rheum 44：1455)对贯穿关节的切片评分。评分报道为WT和ADAMTS-5纯合KO和杂合KO的平均最大分数。另外，相加关节各切片的评分，以作为各治疗组在各时间点上总分数的平均值表示的OA严重性。评分的第二种方法考虑病变严重性以及受影响关节的表面积。如图3A和3B中所示，两种方法的分析显示，与WT小鼠相比ADAMTS-5纯合和杂合KO的分数明显减少(p＜0.05)(图3)。ADAMTS-5KO动物的总分数减少到少于WT的50％，表明较小的严重性及影响表面积。值得注意的是，我们先前报道ADAMTS-4KO小鼠上进行的同一手术模型分数无差异。另外，描述在IL-1β、IL-1βr、INOS和ICE KO小鼠中诱导OA的文献中类似研究报道，基因改造小鼠的病理学严重性增加(Clements等，2003，Arthritis & Rheum48：3452)。为将这些结果与已公开的检测骨关节炎在IL-1β、IL-1βr、INOS和ICE KO小鼠中进展的结果进行比较，结果也表示为各实验组的内侧胫骨坪的平均分。图4显示，在ADAMTS-5纯合和杂合KO动物中这些分数也显著减少。
自ADAMTS-4KO、ADAMTS-5KO和WT小鼠取出股骨头的关节软骨并放入组织培养基中。将炎性细胞因子(IL-1和维A酸)加入到培养系统中以诱导降解酶活性，并且通过定量蛋白多糖的总释放和采用生成为抗“聚集蛋白聚糖酶”裂解后聚集蛋白聚糖新C末端(G1-TEGE373)的单克隆新表位抗体的蛋白质印迹，评价自软骨释放的聚集蛋白聚糖降解产物的分析(Collins-Racie等，2004，Matrix Biology23：219-230)。在图5A和5B中描述的结果证实，WT和ADAMTS-4KO小鼠关节软骨中总蛋白多糖释放相等，TEGE373新表位的生成相等，而没有关于ADAMTS-5KO小鼠的关节软骨的条件培养基中聚集蛋白聚糖酶生成片段的证据。图5C显示这些股骨头采用产生为抗TEGE373新表位的多克隆抗体的免疫组织化学分析，证实与WT和ADAMTS-4KO小鼠关节软骨中聚集蛋白聚糖酶生成的聚集蛋白聚糖新表位的显著杂交，以及ADAMTS-5KO软骨中的可忽略杂交。
这项工作检测了ADAMTS-5(聚集蛋白聚糖酶-2)活性的缺失对正常小鼠发育、生长和生理学的影响。与先前检测ADAMTS-4KO小鼠的报道类似，ADAMTS-5活性的缺失不负面影响任何这些功能。ADAMTS-5的活性缺失不影响生长板中聚集蛋白聚糖酶生成的聚集蛋白聚糖转换。然而，令人惊奇地是，ADAMTS-5活性的缺失显著阻止这些小鼠体内骨关节炎的进展，而ADAMTS-4活性的缺失没有这种影响。通过ADAMTS-5敲除小鼠中体外细胞因子刺激关节软骨后缺乏这些片断的出现，进一步证实了在ADAMTS-5敲除在底物球间结构域中的“聚集蛋白聚糖酶”位点上不能裂解聚集蛋白聚糖。已报道几种酶能够在聚集蛋白聚糖球间结构域中的E373-374A位点上裂解聚集蛋白聚糖，包括ADAMTS-1、ADAMTS-4、ADAMTS-5和ADAMTS-9。本发明显示ADAMTS-5为骨关节炎中引起关节软骨细胞外基质降解的酶。这是能够阻止动物模型中骨关节炎过程的单基因缺失的第一次报道。从这些结果可以清晰看出，ADAMTS-5为引起小鼠骨关节炎中聚集蛋白聚糖降解的主要“聚集蛋白聚糖酶”。
实施例3：联芳基磺酰胺类的制备
基于流程1制备实施例3.1和3.2。
实施例3.1
Figure A20048004119300471
3-甲基-2-[4′-(3-甲基-喹啉-2-基氧基甲基)-联苯-4-磺酰氨基]-丁酸
步骤1A[中间体1]：向干燥圆底烧瓶中加入4-溴-苯磺酰氯(12.2g，47.7mmol，1当量)、无水二氯甲烷(170mL)和H-D-Val-OMe(8.0g，47.7mmol，1当量)。使混合物在冰浴中冷却至0℃，随后加入Hunig碱(19.11mL，109.7mmol，2.3当量)。使反应混合物升至室温并搅拌过夜。经TLC确定反应完成。然后用二氯甲烷(100mL)稀释反应混合物并用盐水洗涤。经无水MgSO4干燥有机层，蒸发溶剂，以96％收率得到2-(4-溴-苯磺酰氨基)-3-甲基-丁酸甲酯(16.0g)。
1H NMR(400MHz，CHLOROFORM-D)δppm 0.87(d，J＝6.82Hz，3H)0.96(d，J＝6.82Hz，3H)2.04(m，1H)3.49(s，3H)3.74(d，J＝14.40Hz，1H)5.10(d，J＝9.85Hz，1H)7.66(m，4H)。
步骤1B[中间体2]：在N2气氛下，使2-(4-溴-苯磺酰氨基)-3-甲基-丁酸甲酯(3.4g，9.71mmol)、4-羟基甲基苯基硼酸(1.48g，9.71mmol，1当量)、Pd(PPh3)4(561mg，0.48mmol，0.05当量)溶于乙二醇二甲醚(90mL)中并在室温下搅拌30分钟。然后向反应混合物中加入在H2O(30mL)中的K2CO3(2.68g，19.4mmol，2当量)，加热至回流反应过夜。在TLC确定反应完成后，旋转蒸发除去溶剂，在EtOAc与盐水之间分配残余物，经MgSO4干燥有机层，除去溶剂，用EtOAc研磨粗残余物，以67％收率得到2-(4′-羟基甲基-联苯-4-磺酰氨基)-3-甲基-丁酸甲酯(2.46g)。
1H NMR(400MHz，CHLOROFORM-D)δppm 0.90(d，J＝7.07Hz，3H)0.97(d，J＝6.82 Hz，3H)1.57(s，1H)2.04(m，1H)3.43(s，3H)3.79(dd，J＝10.11，5.05Hz，1H)4.78(s，2H)5.11(d，J＝10.36Hz，1H)7.49(d，J＝8.34Hz，2H)7.60(d，J＝8.34Hz，2H)7.70(d，J＝8.84Hz，2H)7.88(d，J＝8.59Hz，2H)。
步骤1C[中间体3]：使2-(4′-羟基甲基-联苯-4-磺酰氨基)-3-甲基-丁酸甲酯(1.2g，3.2mmol，1.0当量)、2-氯-3-甲基喹啉(2.26g，12.7mmol，4当量)溶于DMF(30mL)中，随后加入NaH(382mg，60％在油中，9.54mmol，3当量)。在100℃下搅拌混合物5小时，然后在室温下搅拌过夜。然后将反应混合物倾入到冷水中，过滤收集从混合物中沉淀的固体，用水洗涤。常规柱层析(硅胶，1％MeOH/CH2Cl2)以12％收率得到203mg的3-甲基-2-[4′-(3-甲基-喹啉-2-基氧基甲基)-联苯-4-磺酰氨基]-丁酸甲酯。
H NMR(400MHz，CHLOROFORM-D)δppm 0.89(d，J＝6.82Hz，3H)0.97(d，J＝6.82Hz，3H)2.04(m，1H)2.40(s，3H)3.43(s，3H)3.78(dd，J＝10.11，5.31Hz，1H)5.09(d，J＝10.11Hz，1H)5.64(s，2H)7.37(m，1H)7.64(m，8H)7.86(m，4H)。
步骤1D：使3-甲基-2-[4′-(3-甲基-喹啉-2-基氧基甲基)-联苯-4-磺酰氨基]-丁酸甲酯(203mg，0.39mmol，1当量)溶于THF(8mL)和MeOH(4mL)中，用1N NaOH(5.83mL，5.83mmol，13当量)水解。搅拌3天后，除去溶剂并使残余物溶于H2O中。然后用1N HCl将混合物酸化至pH 3。过滤收集从混合物中沉淀的固体，用水洗涤。在真空烘箱中干燥后，以76.3％收率得到101mg的3-甲基-2-[4′-(3-甲基-喹啉-2-基氧基甲基)-联苯-4-磺酰氨基]-丁酸。
1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.81(d，J＝6.57Hz，3H)0.84(d，J＝6.82Hz，3H)1.95(m，1H)2.36(s，3H)3.56(dd，J＝9.09，5.81Hz，1H)5.61(s，2H)7.42(t，J＝7.45Hz，1H)7.61(t，J＝7.71Hz，1H)7.67(d，J＝7.83Hz，2H)7.83(m，8H)8.08(d，J＝8.34Hz，2H)12.58(s，1H)。
实施例3.2
Figure A20048004119300491
3-甲基-2-[4′-(5-三氟甲基-吡啶-2-基氧基甲基)-联苯-4-磺酰氨基]-丁酸
按照与实施例3.1中所述类似的方法制备标题化合物3-甲基-2-[4′-(5-三氟甲基-吡啶-2-基氧基甲基)-联苯-4-磺酰氨基]-丁酸。
步骤1C：使2-(4′-羟基甲基-联苯-4-磺酰氨基)-3-甲基-丁酸甲酯(350mg，0.93mmol，1当量)、2-氯-5-三氟甲基吡啶(841mg，4.64mmol，5当量)溶于DMF(7mL)中，随后在N2气氛下加入NaH(111mg，2.78mmol，3当量)。将混合物加热至100℃反应2小时，冷却至室温。将反应混合物倾入到冷水中，过滤收集生成的固体。经柱层析进一步纯化(硅胶，20％EtOAc/己烷)，以54％收率得到259mg的G9058-182-2。
1H NMR(400MHz，CHLOROFORM-D)δppm 0.82(d，J＝6.82Hz，3H)0.90(d，J＝6.82Hz，3H)1.98(m，1H)3.36(s，3H)3.72(dd，J＝10.11，5.05Hz，1H)5.02(d，J＝10.11Hz，1H)5.43(s，2H)6.84(d，J＝8.84Hz，1H)7.52(m，4H)7.64(d，J＝6.82Hz，2H)7.74(d，J＝8.84Hz，1H)7.82(m，2H)8.40(s，1H)。
步骤1D：按照实施例1A步骤1D的方法，使用3-甲基-2-[4′-(5-三氟甲基-吡啶-2-基氧基甲基)-联苯-4-磺酰氨基]-丁酸甲酯(250mg)作为起始原料，制备3-甲基-2-[4′-(5-三氟甲基-吡啶-2-基氧基甲基)-联苯-4-磺酰氨基]-丁酸(86.4％收率，210mg)。
1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.81(d，J＝6.82Hz，3H)0.84(d，J＝6.57Hz，3H)1.95(m，1H)3.56(m，1H)5.51(d，2H)7.12(d，J＝8.84Hz，1H)7.59(d，J＝8.34Hz，2H)7.77(d，J＝8.34Hz，2H)7.86(m，4H)8.11(m，2H)8.63(m，1H)12.57(s，1H)。
基于流程2制备实施例3.3和3.4。
实施例3.3
Figure A20048004119300501
2-[4′-(2，8-双-三氟甲基-喹啉-2-基氧基甲基)-联苯-4-磺酰氨基]-3-甲基-丁酸
步骤2A[中间体4，G9591-157-1]：在N2气氛下，向2，8-双-三氟甲基-喹啉-4-醇(3.85g，13.7mmol，1.1当量)的DMF溶液(40mL)中加入2-(4-溴甲基苯基)-4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂硼杂环戊烷(3.7g，12.5mmol，1.0当量)和K2CO3(3.45g，24.92mmol，2.2当量)。在室温下搅拌反应混合物过夜。经TLC确定反应完成。将反应混合物倾入到冷水中，过滤收集形成的白色沉淀，用水洗涤，真空干燥，以73％收率得到4-[4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-苄氧基]-2，8-双-三氟甲基-喹啉(4.95g)。
1H NMR(400MHz，CHLOROFORM-D)δppm 1.36(s，12H)5.38(s，2H)7.21(s，1H)7.51(d，J＝8.34Hz，2H)7.65(t，J＝7.83Hz，1H)7.90(d，J＝8.08Hz，2H)8.14(d，J＝7.33Hz，1H)8.50(d，J＝8.59Hz，1H)。
步骤2B[中间体5，G9591-162]：在N2下，向在45mL乙二醇二甲醚中的4-[4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-苄氧基]-2，8-双-三氟甲基-喹啉(1.5g，3.0mmol，1当量)中加入2-(4-溴-苯磺酰氨基)-3-甲基-丁酸甲酯(1.06g，3.0mmol，1.0当量)和Pd(PPh3)4(174mg，0.15mmol，0.05当量)。搅拌反应混合物0.5小时，然后加入K2CO3水溶液(834mg，6.0mmol，2当量)。将混合物加热至回流反应过夜。冷却至室温后，真空除去溶剂。用EtOAc(100mL)稀释残余物并用盐水溶液洗涤。经无水MgSO4干燥有机层，真空蒸发溶剂，将粗品产物在硅胶柱上(30％EtOAc/己烷)纯化，以53％收率得到1.026g的2-[4′-(2，8-双-三氟甲基-喹啉-4-基氧基甲基)-联苯-4-磺酰氨基]-3-甲基-丁酸甲酯。
1H NMR(400MHz，CHLOROFORM-D)δppm 0.90(d，J＝6.82Hz，3H)0.98(d，J＝6.82Hz，3H)2.07(m，1H)3.45(s，3H)3.81(dd，J＝10.11，5.05Hz，1H)5.12(d，J＝10.11Hz，1H)5.44(s，2H)7.25(s，1H)7.70(m，7H)7.92(d，J＝8.84Hz，2H)8.16(d，J＝7.33Hz，1H)8.52(d，J＝8.59Hz，1H)。
步骤2C：使2-[4′-(2，8-双-三氟甲基-喹啉-4-基氧基甲基)-联苯-4-磺酰氨基]-3-甲基-丁酸甲酯(1.026g，1.6mmol，1当量)溶于THF(15mL)和MeOH(6mL)中，加入1N NaOH(17.6mL，11当量)。通过TLC监测反应。反应在3天内完成。旋转蒸发除去溶剂，使残余物溶于H2O中。然后用1N HCl将混合物酸化至pH 3。过滤收集生成的沉淀，用冷水洗涤并干燥过夜，以46％收率得到460mg的白色固体。
1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.82(d，J＝6.82Hz，3H)0.85(d，J＝6.82Hz，3H)1.96(m，1H)3.57(dd，J＝9.35，6.32Hz，1H)5.66(s，2H)7.83(m，10H)8.11(d，J＝9.35Hz，1H)8.35(d，J＝7.33Hz，1H)8.58(d，J＝7.83Hz，1H)12.57(s，1H)。
实施例3.4
D-3-甲基-2-[4′-(2-甲基-喹啉-4-基氧基甲基)-联苯-4-磺酰氨基]-丁酸
按照与实施例3.3所述类似的方法制备D-3-甲基-2-[4′-(2-甲基-喹啉-4-基氧基甲基)-联苯-4-磺酰氨基]-丁酸。
步骤2A：按照实施例1C步骤2A的方法用2-(4-溴甲基-苯基)-4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂硼杂环戊烷进行2-甲基-喹啉-4-醇的烷基化，以28％收率得到2-甲基-4-[4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-苄氧基]-喹啉。
1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 1.3(s，12H)2.6(s，3H)5.4(s，2H)7.0(s，1H)7.5(m，1H)7.6(d，J＝8.1Hz，2H)7.7(m，1H)7.7(d，J＝8.1Hz，2H)7.9(d，J＝8.1Hz，1H)8.1(dd，J＝8.3，0.8Hz，1H)。
步骤2B：按照实施例3.3的步骤2B中的方法，以80％收率进行D-2-(4-溴-苯磺酰氨基)-3-甲基-丁酸甲酯与2-甲基-4-[4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-苄氧基]-喹啉的Suzuki偶合。
1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.8(dd，J＝15.0，6.7Hz，6H)1.9(m，1H)2.6(s，3H)3.3(s，3H)3.6(dd，J＝9.3，7.1Hz，1H)5.5(s，2H)7.1(s，1H)7.5(t，J＝7.6Hz，1H)7.7(m，3H)7.8(d，J＝7.6Hz，4H)7.9(m，1H)7.9(m，2H)8.1(d，J＝8.3Hz，1H)8.3(d，J＝9.3Hz，1H)。
步骤2C：按照实施例3.3的步骤2C中的方法，以定量收率进行D-3-甲基-2-[4′-(2-甲基-喹啉-4-基氧基甲基)-联苯-4-磺酰氨基]-丁酸甲酯的水解。
1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm0.8(dd，J＝40.2，6.8Hz，6H)2.0(m，1H)2.6(s，3H)3.0(s，1H)5.4(s，2H)7.1(s，1H)7.5(t，J＝8.1Hz，1H)7.7(t，J＝7.7Hz，3H)7.8(m，7H)8.1(d，J＝9.3Hz，1H)。
基于流程3制备实施例3.5。
实施例3.5
步骤3A：向圆底烧瓶中加入4-溴-苯磺酰氯(24.37g，95.4mmol，1当量)、无水二氯甲烷(350mL)和H-D-Val-OtBu(20g，95.4mmol，1当量)。使混合物冷却至0℃，随后加入Hunig碱(38.2mL，219mmol，2.3当量)。然后除去冷却浴，使反应混合物升至室温并搅拌过夜。经TLC确定起始原料被消耗。然后用二氯甲烷(200mL)稀释反应混合物并用H2O(500mL)、盐水(250mL)洗涤。经无水MgSO4干燥有机层，真空蒸发，以定量收率得到2-(4-溴-苯磺酰氨基)-3-甲基-丁酸叔丁酯(35.0g)。
1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.82(d，J＝6.82Hz，3H)0.84(d，J＝6.82Hz，3H)1.19(s，9H)1.93(m，1H)3.46(dd，J＝9.35，6.06Hz，1H)7.69(d，J＝8.59Hz，2H)7.79(m，2H)8.24(d，J＝9.60Hz，1H)。
步骤3B：将2-(4-溴-苯磺酰氨基)-3-甲基-丁酸叔丁酯(11.96g，30.47mmol，1当量)、4-(羟基甲基苯)硼酸(4.63g，30.5mmol，1当量)和Pd(PPh3)4(1.76g，1.52mmol，0.05当量)加入到反应瓶中并加入乙二醇二甲醚(300mL)。在室温下搅拌混合物10分钟，然后加入K2CO3(8.43g，60.9mmol，2当量)溶于100mL H2O中的溶液。将反应混合物加热至回流，反应过夜。冷却至室温后，旋转蒸发除去溶剂并在EtOAc与盐水之间分配残余物。分离有机层并经MgSO4干燥。旋转蒸发除去溶剂后，以65％收率得到8.3g白色固体2-(4′-羟基甲基-联苯-4-磺酰氨基)-3-甲基-丁酸叔丁酯。
1H NMR(400MHz，MeOD)δppm 1.05(d，J＝6.82Hz，3H)1.12(d，J＝6.82Hz，3H)1.33(s，9H)2.16(m，1H)3.73(d，J＝5.56Hz，1H)4.81(s，2H)7.62(d，J＝8.59Hz，2H)7.78(d，J＝8.34Hz，2H)7.92(d，J＝8.84Hz，2H)8.04(m，2H)。
步骤3C：使2-(4′-羟基甲基-联苯-4-磺酰氨基)-3-甲基-丁酸叔丁酯(700mg，1.68mmol，1当量)、2-氯喹啉(1.1g，6.7mmol，4当量)溶于DMF(20mL)中并加入NaH(202mg，60％在油中，5.04mmol，3当量)。将混合物加热至100℃反应2小时。冷却至室温后，用饱和NH4Cl(水溶液)猝灭反应混合物。搅拌0.5小时后，从混合物中沉淀出固体。过滤收集固体，用水洗涤并干燥过夜，以87％收率得到793mg的2-[4′-(异喹啉-3-基氧基甲基)-联苯-4-磺酰氨基]-3-甲基-丁酸叔丁酯。
1H NMR(400MHz，CHLOROFORM-D)δppm 0.87(d，J＝6.82Hz，3H)1.03(d，J＝6.82Hz，3H)1.19(s，9H)2.05(m，1H)3.66(dd，J＝9.85，4.55Hz，1H)5.14(d，J＝9.85Hz，1H)5.62(s，2H)6.98(d，J＝8.84Hz，1H)7.40(m，1H)7.66(m，9H)7.89(m，2H)8.03(d，J＝8.59Hz，1H)。
步骤3D：使2-[4′-(异喹啉-3-基氧基甲基)-联苯-4-磺酰氨基]-3-甲基-丁酸叔丁酯(480mg，0.88mmol)溶于15mL二氯甲烷中。使溶液冷却至0℃，随后加入5mL的TFA。在室温下搅拌生成的混合物4小时。旋转蒸发除去溶剂并用MeOH洗涤残余物。使因此得到的固体真空干燥过夜，以14％收率得到60mg的2-[4′-(异喹啉-3-基氧基甲基)-联苯-4-磺酰氨基]-3-甲基-丁酸。
1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.81(d，J＝6.82Hz，3H)0.84(d，J＝6.82Hz，3H)1.95(m，1H)3.56(dd，J＝9.35，6.06Hz，1H)5.58(s，2H)7.11(d，J＝8.84Hz，1H)7.46(dd，J＝7.58，6.32Hz，1H)7.79(m，11H)8.08(d，J＝9.35Hz，1H)8.29(d，J＝8.59Hz，1H)12.57(s，1H)。
基于流程4制备实施例3.6。
实施例3.6
Figure A20048004119300541
2-[4′-(苯并噻唑-2-基氧基甲基)-联苯-4-磺酰氨基]-3-甲基-丁酸
向在9mL二甲氧基乙烷中的2-[4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-苄氧基]-苯并噻唑(300mg，0.604mmol，1当量)中加入2-(4-溴-苯磺酰氨基)-3-甲基-丁酸叔丁酯(237mg，0.604mmol，1当量)和Pd(PPh3)4(35mg，0.03mmol，0.05当量)。在室温下搅拌混合物20分钟，随后加入在H2O(3mL)中的K2CO3(167mg，1.208mmol，2当量)。将混合物加热至回流反应过夜。冷却至室温后，旋转蒸发除去溶剂。使残余物溶于二氯甲烷中并用水、盐水洗涤。经MgSO4干燥有机层，真空除去溶剂，经柱层析(30％EtOAc/己烷)纯化粗品混合物，以85％收率得到285mg。
1H NMR(400MHz，CHLOROFORM-D)δppm 1.07(d，J＝6.82Hz，3H)1.23(d，J＝6.82Hz，3H)1.39(s，9H)1.47(t，J＝7.20Hz，1H)3.86(dd，J＝9.85，4.55Hz，1H)5.42(s，2H)6.99(s，1H)7.22(d，J＝7.07Hz，1H)7.39(m，2H)7.61(d，J＝8.59Hz，2H)7.67(d，J＝6.32Hz，1H)7.72(m，2H)7.84(d，J＝8.84Hz，2H)8.09(d，J＝8.59Hz，2H)。
步骤4B：使2-[4′-(苯并噻唑-2-基氧基甲基)-联苯-4-磺酰氨基]-3-甲基-丁酸叔丁酯(140mg，0.25mmol)溶于6mL二氯甲烷中，随后加入TFA(3mL)。经TLC确定在6小时内反应完成。除去溶剂并使残余物溶于EtOAc中。向溶液中加入正己烷并从混合物中沉淀出固体。收集沉淀并干燥，以68％收率得到86mg。
1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.80(d，J＝6.82Hz，3H)0.83(d，J＝6.82Hz，3H)1.93(m，1H)3.54(dd，J＝9.35，6.06Hz，1H)5.26(s，2H)7.21(m，1H)7.33(m，2H)7.44(d，J＝8.59Hz，2H)7.71(t，J＝8.46Hz，3H)7.82(s，4H)8.07(d，J＝9.35Hz，1H)12.55(s，1H)。
基于流程4B制备实施例3.7、3.8、3.9、3.10、3.11、3.12、3.13、3.14、3.15、3.16、3.17、3.18。
实施例3.7
Figure A20048004119300551
ES-480.1(M-H)-HRMS：482.16311(M+Na)+；理论值482.16319。
实施例3.8
Figure A20048004119300552
ES+544.2(M+H)+HRMS：544.17694(M+H)；理论值544.17884。
实施例3.9
ES-480.2(M-H)-HRMS：482.1635(M+H)+；理论值482.16319。
实施例3.10
Figure A20048004119300561
ES-495.2(M-H)-HRMS：497.17284(M+H)+；理论值497.17409。
实施例3.11
Figure A20048004119300562
ES-468.2(M-H)-HRMS：470.16231(M+H)+；理论值470.16319。
实施例3.12
Figure A20048004119300563
ES-456.1(M-H)-HRMS：458.14323(M+H)+；理论值458.1432。
实施例3.13
ES-551.2(M-H)-HRMS：553.19849(M+H)+；理论值553.2003。
实施例3.14
Figure A20048004119300565
ES-535.2(M-H)-HRMS：537.20469(M+H)+；理论值537.20539。
实施例3.15
ES-456.1(M-H)-HRMS：458.14389(M+H)+；理论值458.1432。
实施例3.16
ES-468.2(M-H)-HRMS：470.16151(M+H)+；理论值470.16319。
实施例3.17
Figure A20048004119300573
ES+539.1(M+H)+HRMS：539.22021(M+H)+；理论值539.22104。
实施例3.18
Figure A20048004119300574
ES-514.1(M-H)-HRMS：516.18313(M+H)+；理论值516.18392。
基于流程4C制备实施例3.19、3.20、3.21、3.22、3.23、3.24、3.25、3.26、3.27、3.28、3.29、3.30、3.32。
实施例3.19
Figure A20048004119300581
ES-495.1(M-H)-HRMS：497.17429(M+H)+；理论值497.17409。
实施例3.20
Figure A20048004119300582
ES-488.1(M-H)-HRMS：490.16864(M+H)+；理论值490.16827。
实施例3.21
Figure A20048004119300583
ES+m/z 452.1(M-H)-HRMS：454.16745(M+H)+；理论值454.16827。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ0.82(d，3H，J＝6.8Hz)，0.94(d，3H，J＝6.8Hz)，2.06(m，1H)，2.31(s，3H)，3.80(dd，1H，J＝4.4，10Hz)，5.13(m，3H)，6.90(m，2H)，7.17(m，2H)，7.55(d，2H，J＝8Hz)，7.60(d，2H，J＝8Hz)，7.66(d，2H，J＝8Hz)，7.86(d，2H，J＝8Hz)。
实施例3.22
Figure A20048004119300591
ES+m/z 481.2(M+H)+HRMS：483.19410(M+H)+；理论值483.19482。
1H NMR(400MHz，CD3OD)：δ0.90(d，3H，J＝6.8Hz)，0.99(d，3H，J＝6.8Hz)，2.06(m，1H)，2.92(s，6H)，3.42(s，3H)，3.70(d，1H，J＝5.6，10Hz)，5.14(s，2H)，6.41(m，3H)，7.11(m，1H)，7.57(d，2H，8Hz)，7.71(d，2H，J＝8Hz)，7.80(d，2H，J＝8Hz)，7.92(d，2H，J＝8Hz)。
实施例3.23
ES+m/z 544.1(M+H)+HRMS：546.19448(M+H)+；理论值546.19449。
1H NMR(400MHz，CD3OD)：δ0.93(d，3H，J＝6.8Hz)，0.99(d，3H，J＝6.8Hz)，2.07(m，1H)，3.70(d，1H，J＝5.6)，5.03(s，2H)，5.10(s，2H)，6.94(s，4H)，7.31(m，1H)，7.37(m，2H)，7.43(m，2H)，7.55(d，2H，8Hz)，7.71(d，2H，J＝8Hz)，7.80(d，2H，J＝8Hz)，7.92(d，2H，J＝8Hz)。
实施例3.24
ES+m/z 553.2(M-H)-HRMS：577.19777(M+Na)+；理论值577.19789。
1H NMR(400MHz，CD3OD)：δ0.91(d，3H，J＝6.8Hz)，0.97(d，3H，J＝6.8Hz)，1.50(s，9H)，2.04(m，1H)，3.68(d，1H，J＝5.6Hz)，5.10(s，2H)，6.92(s，2H)，7.28(d，2H，J＝8Hz)，7.54(d，2H，J＝8Hz)，7.70(d，2H，J＝8Hz)，7.79(d，2H，J＝8Hz)，7.91(d，2H，J＝8Hz)。
实施例3.25
Figure A20048004119300602
ES+m/z 470.2(M+H)+HRMS：470.16364(M+H)+；理论值470.16319。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ0.89(d，3H，J＝6.8Hz)，0.96(d，3H，J＝6.8Hz)，2.10(m，1H)，3.82(m，1H)，3.90(s，3H)，5.07(d，1H，J＝9.6Hz)，5.21(s，2H)，6.93(m，4H)，7.54(d，2H，J＝8Hz)，7.58(d，2H，J＝8Hz)，7.65(d，2H，J＝8Hz)，7.89(d，2H，J＝8Hz)。
实施例3.26
Figure A20048004119300611
ES+m/z 466.2(M-H)-HRMS：468.18540(M+H)+；理论值468.18392。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ0.83(d，3H，J＝6.8Hz)，0.95(d，3H，J＝6.8Hz)，2.05(m，1H)，2.33(s，6H)，3.82(dd，1H，J＝5.2，10Hz)，4.88(s，2H)，5.07(d，1H，J＝10Hz)，6.97(m，1H)，7.05(m，2H)，7.64(m，4H)，7.67(d，2H，J＝8Hz)，7.87(d，2H，J＝8Hz)。
实施例3.27
Figure A20048004119300612
ES+m/z 454.1(M-H)-HRMS：456.14707(M+H)+；理论值456.14754。
1H NMR(400MHz，丙酮(d6))：δ0.92(d，3H，J＝6.8Hz)，0.98(d，3H，J＝6.8Hz)，2.10(m，1H)，3.16(m，1H)，5.16(s，2H)，6.45(d，1H，J＝8Hz)，6.53(m，2H)，7.10(t，1H，J＝8Hz)，7.61(d，2H，J＝8Hz)，7.76(d，2H，J＝8Hz)，7.86(d，2H，J＝8Hz)，7.94(d，2H，J＝8Hz)。
实施例3.28
Figure A20048004119300613
ES+m/z 530.1(M-H)-HRMS：532.17709(M+H)+；理论值532.17884。
1H NMR(400MHz，CD3OD)：δ0.93(d，3H，J＝6.8Hz)，0.99(d，3H，J＝6.8Hz)，2.06(m，1H)，3.70(d，1H，J＝5.6，10Hz)，5.16(s，2H)，6.93(m，3H)，7.04(m，3H)，7.31(m，2H)，7.58(d，2H，J＝8Hz)，7.72(d，2H，J＝8Hz)，7.81(d，2H，J＝8Hz)，7.93(d，2H，J＝8Hz)。
实施例3.29
ES+m/z 531.1(M-H)-HRMS：533.17293(M+H)+；理论值533.17409。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ0.88(d，3H，J＝6.8Hz)，1.00(d，3H，J＝6.8Hz)，2.13(m，1H)，3.83(m，1H)，5.13(m，3H)，6.82(m，1H)，7.02(m，5H)，7.56(m，4H)，7.67(m，3H)，7.89(m，2H)，8.16(m，1H)。
实施例3.30
Figure A20048004119300622
ES+m/z 545.2(M-H)-HRMS：547.19006(M+H)+；理论值547.18974。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ0.89(d，3H，J＝6.8Hz)，1.01(d，3H，J＝6.8Hz)，2.19(m，1H)，2.44(s，3H)，3.83(m，1H)，5.04(s，2H)，6.39(d，1H，J＝8Hz)，6.83(m，1H)，6.90(m，2H，J＝8Hz)，6.97(d，2H，J＝8Hz)，7.52(m，5H)，7.60(d，2H，J＝8Hz)，7.90(d，2H，J＝8Hz)。
实施例3.31
Figure A20048004119300631
ES+m/z 506.2(M-H)-HRMS：508.17782(M+H)+；理论值508.17884。
1H NMR(400MHz，DMSO)：δ0.81(d，3H，J＝6.8Hz)，0.84(d，3H，J＝6.8Hz)，1.98(m，3H)，2.64(d，2H)，2.91(t，2H，J＝6Hz)，3.56(dd，1H，J＝6，9.2Hz)，5.27(s，2H)，6.99(d，2H，J＝8Hz)，7.59(d，2H，J＝8Hz)，7.78(d，2H，J＝8Hz)，7.85(m，4H)，8.08(d，1H，8Hz)。
基于流程5制备实施例3.32、3.33、3.34、3.35、3.36、3.37、3.38、3.39、3.40、3.41。
实施例3.32
Figure A20048004119300632
D-3-甲基-2-[4′-(3-甲基-苯并呋喃-2-基甲氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-丁酸
步骤5A：将2-氯甲基-3-甲基-苯并呋喃(675.9mg，3.75mmol)、4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-苯酚(825mg，3.75mmol，1当量)、K2CO3(2.1g，15.2mmol，4当量)在20mL CN3CN中的混合物在氮气氛下加热至回流。12小时后反应完成。常规处理并柱纯化(5％EtOAc/己烷)，以44％收率得到3-甲基-2-[4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-苯氧基甲基]-苯并呋喃(601mg)。
1H NMR(400MHz，CHLOROFORM-D)δppm 1.3(s，12H)2.3(s，3H)5.2(s，2H)7.0(d，J＝8.6Hz，2H)7.3(m，2H)7.5(dd，J＝21.6，7.7Hz，2H)7.8(d，J＝8.8Hz，2H)。
步骤5B：将D-2-(4-溴-苯磺酰氨基)-3-甲基-丁酸甲酯(568.07mg，1.62mmol)、3-甲基-2-[4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-苯氧基甲基]-苯并呋喃(590.7mg，1.62mmol，1当量)、Pd(PPh3)4(93.7mg，0.08mmol，0.05当量)和K2CO3(448.35mg，3.24mmol，2当量)在5mL的DMF和5mL的H2O中的混合物加热至回流，反应12小时。冷却至室温后，将混合物载荷到柱上用于纯化。以75％收率得到616mg的产物G8475-146。
1H NMR(400MHz，MeOD)δppm 0.8(d，J＝6.8Hz，6H)1.9(m，1H)2.2(s，3H)3.2(s，3H)3.5(d，J＝6.6Hz，1H)5.1(s，2H)7.0(m，J＝9.1Hz，2H)7.1(m，1H)7.2(m，1H)7.3(m，1H)7.4(m，1H)7.5(d，J＝9.1Hz，2H)7.6(d，J＝8.8Hz，2H)7.7(m，2H)。
步骤5C：使D-3-甲基-2-[4′-(3-甲基-苯并呋喃-2-基甲氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-丁酸甲酯(364mg)溶于THF(10mL)和MeOH(3mL)中。加入1N LiOH(3mL)，搅拌混合物过夜。常规处理并柱纯化，定量得到D-3-甲基-2-[4′-(3-甲基-苯并呋喃-2-基甲氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-丁酸。
1H NMR(400MHz，MeOD)δppm0.8(dd，J＝30.3，6.8Hz，6H)2.0(m，1H)2.2(s，3H)3.5(d，J＝5.3Hz，1H)5.1(s，2H)7.1(d，J＝9.1Hz，2H)7.1(m，1H)7.2(m，1H)7.3(d，J＝8.3Hz，1H)7.5(d，J＝8.3Hz，1H)7.5(d，J＝9.1Hz，3H)7.6(d，J＝8.6Hz，2H)7.8(d，J＝8.8Hz，2H)。
实施例3.33
Figure A20048004119300641
D-2-[4′-(苯并呋喃-2-基甲氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-3-甲基-丁酸
按照与实施例3.32类似的方法制备标题化合物，D-2-[4′-(苯并呋喃-2-基甲氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-3-甲基-丁酸。
步骤5A：在氩气下使2-溴甲基-苯并呋喃(1.5g，7.1mmol，1当量)、4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-苯酚(1.56g，7.1mmol，1当量)、碳酸钾(1.96g，14.2mmol，2当量)溶于乙腈(50mL)中并在70℃下加热16小时。在处理和快速柱层析后，得到2-[4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-苯氧基甲基]-苯并呋喃。收率：63％。
1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 1.3(s，12H)5.3(s，2H)7.1(m，3H)7.3(m，1H)7.3(m，1H)7.6(m，4H)。
步骤5B：按照实施例3.32的步骤5B中的方法，进行2-[4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-苯氧基甲基]-苯并呋喃与D-2-(4-溴-苯磺酰氨基)-3-甲基-丁酸叔丁酯的偶合，得到D-2-[4′-(苯并呋喃-2-基甲氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-3-甲基-丁酸叔丁酯。收率：33％。
1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.8(dd，J＝8.3，7.1Hz，6H)1.2(s，9H)1.9(m，1H)3.5(dd，J＝9.7，6.2Hz，1H)5.3(s，2H)7.1(s，1H)7.2(d，J＝8.6Hz，2H)7.3(m，1H)7.3(m，1H)7.6(dd，J＝8.2，0.6Hz，1H)7.7(m，3H)7.8(d，J＝3.3Hz，4H)8.1(d，J＝9.9Hz，1H)。
步骤5C：将在乙腈(10mL)中的D-2-[4′-(苯并呋喃-2-基甲氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-3-甲基-丁酸叔丁酯(126mg，0.23mmol，1当量)、七水合氯化铈(175mg，0.47mmol，2当量)、碘化钾(51mg，0.30mmol，1.3当量)在70℃下加热16小时。在处理和快速柱层析后，得到D-2-[4′-(苯并呋喃-2-基甲氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-3-甲基-丁酸。收率：25％。NMR：1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.8(dd，J＝12.5，6.7Hz，6H)2.0(m，1H)3.5(dd，J＝9.2，5.9Hz，1H)5.3(s，2H)7.1(s，1H)7.2(d，J＝8.8Hz，2H)7.3(dd，J＝8.1，0.8Hz，1H)7.3(m，1H)7.6(d，J＝8.1Hz，1H)7.7(m，1H)7.7(d，J＝8.8Hz，2H)7.8(d，4H)8.0(d，J＝9.3Hz，1H)。
实施例3.34
Figure A20048004119300661
D-3-甲基-2-[4′-(萘-2-基甲氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-丁酸
按照与实施例3.32类似的方法制备标题化合物，D-3-甲基-2-[4′-(萘-2-基甲氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-丁酸。
步骤5A：按照实施例3.32步骤5A中的方法，用4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-苯酚进行2-溴甲基-萘的烷基化，以85％收率得到4，4，5，5-四甲基-2-[4-(萘-2-基甲氧基)-苯基]-[1，3，2]二氧杂硼杂环戊烷。
1H NMR(400MHz，CHLOROFORM-D)δppm 1.3(s，12H)5.3(s，2H)7.0(d，J＝8.6Hz，2H)7.5(m，2H)7.5dd，J＝8.3，1.8Hz，1H)7.8(d，J＝8.6Hz，2H)7.9(m，4H)。
步骤5B：按照实施例3.32步骤5B中的方法，进行4，4，5，5-四甲基-2-[4-(萘-2-基甲氧基)-苯基]-[1，3，2]二氧杂硼杂环戊烷与D-2-(4-溴-苯磺酰氨基)-3-甲基-丁酸甲酯的Suzuki偶合，以44％收率得到D-3-甲基-2-[4′-(萘-2-基甲氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-丁酸甲酯。
1H NMR(400MHz，CHLOROFORM-D)δppm 0.9(dd，J＝32.1，6.8Hz，6H)2.0(m，1H)3.4(s，3H)3.8(dd，J＝10.2，5.2Hz，1H)5.1(d，J＝10.1Hz，1H)5.3(s，2H)7.1(d，J＝9.1Hz，2H)7.5(m，2H)7.6(m，3H)7.7(d，J＝8.6Hz，2H)7.9(m，6H)。
步骤5C：按照实施例3.32步骤5C中的方法，以定量收率进行D-3-甲基-2-[4′-(萘-2-基甲氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-丁酸甲酯的水解。
1H NMR(400MHz，MeOD)δppm 0.8dd，J＝32.6，6.8Hz，6H)1.9(m，1H)3.5(d，J＝5.3Hz，1H)5.2(s，2H)7.1(d，J＝8.8Hz，2H)7.4(m，2H)7.5(dd，J＝8.6，1.8Hz，1H)7.5(d，J＝8.8Hz，2H)7.6(d，J＝8.8Hz，2H)7.8(m，5H)7.8(s，1H)。
实施例3.35
D-2-(4′-苄氧基-联苯-4-磺酰氨基)-3-甲基-丁酸
按照与实施例3.32类似的方法制备标题化合物，D-2-(4′-苄氧基-联苯-4-磺酰氨基)-3-甲基-丁酸。
步骤5B：按照实施例3.32步骤5B中的方法，进行4-苄氧基苯基硼酸与D-2-(4-溴-苯磺酰氨基)-3-甲基-丁酸叔丁酯的Suzuki偶合，以73％收率得到D-2-(4′-苄氧基-联苯-4-磺酰氨基)-3-甲基-丁酸叔丁酯。1H NMR(400MHz，MeOD)δppm 0.8(dd，J＝29.7，6.7Hz，6H)1.1(s，9H)1.9(m，1H)3.5(d，J＝5.8Hz，1H)5.0(s，2H)7.0(d，J＝8.8Hz，2H)7.2(t，J＝7.3Hz，1H)7.3(m，2H)7.4(d，J＝6.8Hz，2H)7.5(d，J＝9.1Hz，2H)7.6(d，J＝8.6Hz，2H)7.8(d，J＝8.8Hz，2H)。
步骤5C：按照实施例3.32步骤5C中的方法以定量收率制备D-2-(4′-苄氧基-联苯-4-磺酰氨基)-3-甲基-丁酸。1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.8(dd，J＝12.3，6.7Hz，6H)1.9(m，1H)3.5(dd，J＝9.3，6.1Hz，1H)5.2(s，2H)7.1(d，J＝9.1Hz，2H)7.4(m，3H)7.5(m，2H)7.7(d，J＝8.8Hz，2H)7.8(s，4H)8.0(d，J＝9.3Hz，1H)。
实施例3.36
D-3-甲基-2-[4′-(喹啉-2-基甲氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-丁酸
按照与实施例3.32类似的方法制备标题化合物，D-3-甲基-2-[4′-(喹啉-2-基甲氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-丁酸。
步骤5A：按照实施例3.32步骤5A中的方法，用4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-苯酚进行2-氯甲基-喹啉的烷基化，以90％收率得到2-[4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-苯氧基甲基]-喹啉。
1H NMR(400MHz，MeOD)δppm 1.2(s，12H)5.3(s，2H)7.0(d，J＝8.6Hz，2H)7.5(m，1H)7.6(dd，J＝11.4，8.6Hz，3H)7.7(m，1H)7.8(dd，J＝8.1，1.5Hz，1H)7.9(d，J＝8.6Hz，1H)8.3(d，J＝8.6Hz，1H)。
步骤5B：按照实施例3.32步骤5B中的方法，进行2-[4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-苯氧基甲基]-喹啉与D-2-(4-溴-苯磺酰氨基)-3-甲基-丁酸叔丁酯的Suzuki偶合，以70％收率得到D-3-甲基-2-[4′-(喹啉-2-基甲氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-丁酸叔丁酯。
1H NMR(400MHz，MeOD)δppm0.8(dd，J＝29.8，6.8Hz，6H)1.1(s，9H)1.9(m，1H)3.5(d，J＝5.6Hz，1H)5.3(s，2H)7.1(d，J＝8.8Hz，2H)7.5(m，3H)7.6(t，J＝8.6Hz，3H)7.7(m，1H)7.8(d，J＝8.8Hz，2H)7.9(dd，J＝8.2，0.9Hz，1H)8.0(m，1H)8.3(d，J＝8.8Hz，1H)。
步骤5C：按照实施例3.32步骤5C中的方法，以定量收率除去叔丁酯。1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.8(dd，J＝12.5，6.7Hz，6H)1.9(m，1H)3.5(dd，J＝9.3，6.1Hz，1H)5.5(s，2H)7.2(d，J＝8.8Hz，2H)7.7(m，1H)7.7(dd，J＝8.7，1.9Hz，3H)7.8(s，5H)8.0(m，3H)8.5(d，J＝8.6Hz，1H)。
实施例3.37
D-3-甲基-2-[4′-(2-硝基-苄氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-丁酸
按照与实施例3.32类似的方法制备标题化合物，D-3-甲基-2-[4′-(2-硝基-苄氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-丁酸。
步骤5A：按照实施例3.32步骤5A中的方法，用4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-苯酚进行1-溴甲基-2-硝基-苯的烷基化，以62％收率得到4，4，5，5-四甲基-2-[4-(2-硝基-苄氧基)-苯基]-[1，3，2]二氧杂硼杂环戊烷。
1H NMR(400MHz，CHLOROFORM-D)δppm 1.3(s，12H)5.5(s，2H)7.0(d，J＝8.6Hz，2H)7.5(m，1H)7.7(m，1H)7.8(d，J＝8.6Hz，2H)7.9(dd，J＝7.8，1.0Hz，1H)8.2(dd，J＝8.1，1.3Hz，1H)。
步骤5B：按照实施例3.32步骤5B中的方法进行4，4，5，5-四甲基-2-[4-(2-硝基-苄氧基)-苯基]-[1，3，2]二氧杂硼杂环戊烷与D-2-(4-溴-苯磺酰氨基)-3-甲基-丁酸叔丁酯的Suzuki偶合，以20％收率得到D-3-甲基-2-[4′-(2-硝基-苄氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-丁酸叔丁酯。
1H NMR(400MHz，MeOD)δppm 0.8(dd，J＝30.1，6.8Hz，6H)1.1(s，9H)1.9(m，1H)3.5(d，J＝5.6Hz，1H)5.4(s，2H)7.0(d，J＝8.8Hz，2H)7.5(m，1H)7.5(d，J＝8.8Hz，2H)7.6(m，3H)7.8(d，J＝8.6Hz，3H)8.1(dd，J＝8.1，1.3Hz，1H)。
步骤5C：按照实施例3.32步骤5C中的方法以定量收率除去叔丁酯。1H NMR(400MHz，MeOD)δppm 0.8(dd，J＝24.3，6.8Hz，6H)2.0(m，1H)3.6(d，J＝5.8Hz，1H)5.4(s，2H)7.0(d，J＝8.6Hz，2H)7.5(t，J＝7.7Hz，1H)7.6(d，J＝8.8Hz，2H)7.7(m，3H)7.8(m，3H)8.1(d，J＝9.6Hz，1H)。
实施例3.38
Figure A20048004119300691
D-2-[4′-(2-氯-苄氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-3-甲基-丁酸
按照与实施例3.32类似的方法制备标题化合物，D-2-[4′-(2-氯-苄氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-3-甲基-丁酸。
步骤5A：按照实施例2A的步骤5A中的方法，进行2-氯苄基溴与4-羟基苯基硼酸酯的偶合，得到2-[4-(2-氯-苄氧基)-苯基]-4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂硼杂环戊烷。收率：85％。1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 1.3(s，12H)5.2(s，2H)7.0(d，J＝8.8Hz，2H)7.4(m，2H)7.5(m，1H)7.6(m，1H)7.6(d，J＝8.8Hz，2H)。
步骤5B：按照实施例3.32步骤5B中的方法，进行2-[4-(2-氯-苄氧基)-苯基]-4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂硼杂环戊烷与D-2-(4-溴-苯磺酰氨基)-3-甲基-丁酸甲酯的偶合，得到D-2-[4′-(2-氯-苄氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-3-甲基-丁酸甲酯。收率：73％。
1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.8(dd，J＝15.4，6.6Hz，6H)1.9(m，1H)3.3(s，3H)3.6(dd，J＝9.3，7.1Hz，1H)5.2(s，2H)7.2(d，J＝8.8Hz，2H)7.4(m，2H)7.5(m，1H)7.6(m，1H)7.7(d，J＝8.8Hz，2H)7.8(d，J＝8.6Hz，2H)7.8(m，2H)8.3(d，J＝9.3Hz，1H)。
步骤5C：按照实施例3.32步骤5C中的方法，进行D-2-[4′-(2-氯-苄氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-3-甲基-丁酸甲酯水解为D-2-[4′-(2-氯-苄氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-3-甲基-丁酸。收率：55％。
1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.8(dd，J＝12.6，6.8Hz，6H)1.9(m，1H)3.5(dd，J＝9.2，5.9Hz，1H)5.2(s，2H)7.2(d，J＝8.8Hz，2H)7.4(m，2H)7.5(m，1H)7.6(m，1H)7.7(d，J＝8.8Hz，2H)7.8(s，4H)8.0(d，J＝9.3Hz，1H)12.6(s，1H)。
实施例3.39
Figure A20048004119300701
D-2-[4′-(2-氟-6-硝基-苄氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-3-甲基-丁酸
按照与实施例3.32类似的方法制备标题化合物，D-2-[4′-(2-氟-6-硝基-苄氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-3-甲基-丁酸。
步骤5A：按照实施例3.32的步骤5A中的方法进行2-氟-6-硝基苄基溴与4-羟基苯基硼酸酯的偶合，得到2-[4-(2-氟-6-硝基-苄氧基)-苯基]-4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂硼杂环戊烷。收率：95％。
1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 1.3(s，12H)5.3(d，J＝1.3Hz，2H)7.0(d，J＝8.8Hz，2H)7.6(d，J＝8.8Hz，2H)7.7(m，2H)7.9(m，1H)。
步骤5B：按照实施例3.32步骤5B中的方法进行2-[4-(2-氟-6-硝基-苄氧基)-苯基]-4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂硼杂环戊烷与D-2-(4-溴-苯磺酰氨基)-3-甲基-丁酸甲酯的偶合，得到D-2-[4′-(2-氟-6-硝基-苄氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-3-甲基-丁酸甲酯。收率：49％。
1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.8(dd，J＝15.2，6.8Hz，6H)1.9(M，1H)3.3(s，3H)3.6(dd，J＝9.5，7.2Hz，1H)5.4(d，J＝1.3Hz，2H)7.1(d，J＝8.8Hz，2H)7.8(m，6H)7.8(m，2H)7.9(m，1H)8.3(m，J＝9.3Hz，1H)。
步骤5C：除了通过制备型HPLC纯化，按照实施例3.32步骤5C中的方法进行D-2-[4′-(2-氟-6-硝基-苄氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-3-甲基-丁酸甲酯水解为D-2-[4′-(2-氟-6-硝基-苄氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-3-甲基-丁酸。收率：30％。1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.8(dd，J＝12.9，6.8Hz，6H)1.9(m，1H)3.5(dd，J＝9.2，5.9Hz，1H)5.4(d，J＝1.3Hz，2H)7.1(d，J＝8.8Hz，2H)7.7(m，4H)7.8(d，J＝0.8Hz，4H)7.9(m，2H)8.0(d，J＝9.1Hz，1H)。
实施例3.40
Figure A20048004119300711
D-3-甲基-2-[4′-(喹啉-4-基甲氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-丁酸
按照与实施例3.32类似的方法制备标题化合物，D-3-甲基-2-[4′-(喹啉-4-基甲氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-丁酸。
步骤5A：按照实施例3.32的步骤5A中的方法进行4-氯甲基-喹啉与4-羟基苯基硼酸酯的偶合，得到4-[4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-苯氧基甲基]-喹啉。收率：62％。1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 1.3(s，12H)5.7(d，J＝0.5Hz，2H)7.1(d，J＝8.8Hz，2H)7.7(m，4H)7.8(m，1H)8.1(dd，J＝8.5，0.9Hz，1H)8.2(d，J＝8.3Hz，1H)8.9(d，J＝4.5Hz，1H)。
步骤5B：按照实施例3.32步骤5B中的方法，进行4-[4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-苯氧基甲基]-喹啉与D-2-(4-溴-苯磺酰氨基)-3-甲基-丁酸甲酯的偶合，得到D-3-甲基-2-[4′-(喹啉-4-基甲氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-丁酸甲酯。收率：47％。
1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.8(dd，J＝15.2，6.8Hz，6H)1.9(m，1H)3.3(s，3H)3.6(dd，J＝9.3，7.1Hz，1H)5.8(s，2H)7.3(d，J＝8.8Hz，2H)7.8(m，9H)8.1(d，J＝8.6Hz，1H)8.2(d，J＝8.6Hz，1H)8.3(d，J＝9.3Hz，1H)8.9(d，J＝4.3Hz，1H)。
步骤5C：按照实施例3.32步骤5C中的方法，进行D-3-甲基-2-[4′-(喹啉-4-基甲氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-丁酸甲酯水解为D-3-甲基-2-[4′-(喹啉-4-基甲氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-丁酸。收率：54％。
1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.8(dd，J＝43.6，6.9Hz，6H)2.0(m，1H)3.0(d，J＝3.0Hz，1H)5.8(d，2H)7.3(d，J＝8.8Hz，2H)7.7(m，4H)7.8(m，5H)8.1(m，1H)8.2(dd，J＝8.3，0.8Hz，1H)8.9(d，J＝4.5Hz，1H)。
实施例3.41
Figure A20048004119300721
D-2-[4′-(2-氰基甲基-苄氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-3-甲基-丁酸
按照与实施例3.32类似的方法制备标题化合物，D-3-甲基-2-[4′-(喹啉-4-基甲氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-丁酸。
步骤5C：按照实施例3.32步骤5C中的方法，进行D-2-[4′-(2-氰基甲基-苄氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-3-甲基-丁酸甲酯(按照步骤3制备)水解为D-2-[4′-(2-氰基甲基-苄氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-3-甲基-丁酸。制备型HPLC用于纯化。收率：75％。
1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.8(dd，J＝23.7，6.8Hz，6H)2.0(m，1H)2.8(d，J＝6.6Hz，1H)4.1(s，2H)5.2(s，2H)7.2(d，J＝9.1Hz，2H)7.4(m，2H)7.5(m，1H)7.6(m，1H)7.7(d，J＝8.8Hz，2H)7.8(d，J＝2.0Hz，4H)。
基于流程6制备实施例3.42、3.43、3.44、3.45、3.46、3.47、3.48、3.49。
实施例3.42
Figure A20048004119300722
D-3-甲基-2-[4′-(2-甲基-喹啉-4-基甲氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-丁酸
步骤A：将4-氯甲基-2-甲基-喹啉(165mg，0.86mmol，1当量)、D-2-(4′-羟基-联苯-4-磺酰氨基)-3-甲基-丁酸甲酯(314mg，0.86mmol，1当量)和K2CO3(270mg，1.13mmol，1.3当量)在8mL DMF中的混合物在氮气下加热至90℃，反应12小时。在处理和柱层析(30-60％EtOAc/己烷)后，以34％收率得到D-3-甲基-2-[4′-(2-甲基-喹啉-4-基甲氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-丁酸甲酯(150mg)。
1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.8(dd，J＝15.0，6.7Hz，6H)1.9(m，1H)2.7(s，3H)3.3(s，3H)3.6(dd，J＝9.2，7.2Hz，1H)5.7(s，2H)7.3(d，J＝8.8Hz，2H)7.6(m，2H)7.8(m，4H)7.8(m，2H)8.0(d，J＝9.3Hz，1H)8.1(d，J＝8.3Hz，1H)8.1(none，1H)8.3(d，J＝9.6Hz，1H)。
步骤6B：使D-3-甲基-2-[4′-(2-甲基-喹啉-4-基甲氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-丁酸甲酯(150mg)溶于THF(8mL)和MeOH(4mL)中，加入1N LiOH(3mL，3mmol)。将生成的溶液在室温下搅拌过夜。经TLC确定反应完成。除去溶剂并常规处理和柱层析化，以定量收率得到148mg。1HNMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.8(dd，J＝31.8，6.8Hz，6H)2.0(m，1H)2.7(s，3H)3.2(s，1H)5.7(s，2H)7.3(d，J＝8.8Hz，2H)7.6(m，2H)7.8(m，7H)8.0(d，J＝7.6Hz，1H)8.1(d，J＝6.8Hz，1H)。
实施例3.43
D-2-[4′-(3-氰基-苄氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-3-甲基-丁酸
按照与实施例3.42类似的方法制备标题化合物，D-2-[4′-(3-氰基-苄氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-3-甲基-丁酸。
步骤6A：按照实施例3.42的步骤6A中的方法，进行α-溴-间甲苯基氰与D-2-(4′-羟基-联苯-4-磺酰氨基)-3-甲基-丁酸甲酯的偶合，得到D-2-[4′-(3-氰基-苄氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-3-甲基-丁酸甲酯。收率：25％。1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.8(dd，J＝14.9，6.8Hz，6H)1.9(m，1H)3.3(s，3H)3.6(dd，J＝9.5，7.2Hz，1H)5.3(s，2H)7.2(d，J＝9.1Hz，2H)7.6(t，J＝8.0Hz，1H)7.7(m，4H)7.8(m，4H)8.0(s，1H)8.3(d，J＝9.3Hz，1H)。
步骤6B：按照实施例3.42的步骤6B中的方法，进行D-2-[4′-(3-氰基-苄氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-3-甲基-丁酸甲酯的水解为D-2-[4′-(3-氰基-苄氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-3-甲基-丁酸。收率：24％。
1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.8(dd，J＝26.0，6.8Hz，6H)2.0(m，1H)2.7(s，1H)5.2(s，2H)7.2(d，J＝8.8Hz，2H)7.6(d，J＝7.6Hz，1H)7.7(d，J＝8.8Hz，2H)7.8(m，6H)8.0(s，1H)。
实施例3.44
Figure A20048004119300741
D-3-甲基-2-[4′-(萘-1-基甲氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-丁酸
按照与实施例3.42类似的方法制备标题化合物，D-3-甲基-2-[4′-(萘-1-基甲氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-丁酸。
步骤6A：按照实施例3.42的步骤6A中的方法，用D-2-(4′-羟基-联苯-4-磺酰氨基)-3-甲基-丁酸甲酯进行1-氯甲基-萘的烷基化，以34％收率得到D-3-甲基-2-[4′-(萘-1-基甲氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-丁酸甲酯。1H NMR(400MHz，CHLOROFORM-D)δppm 0.9(dd，J＝32.3，6.8Hz，6H)2.0(m，1H)3.4(s，3H)3.8(dd，J＝10.1，5.1Hz，1H)5.1(d，J＝10.1Hz，1H)5.6(s，2H)7.2(d，J＝8.8Hz，2H)7.5(dd，J＝8.2，6.9Hz，1H)7.6(m，4H)7.6(d，J＝6.6Hz，1H)7.7(d，J＝8.6Hz，2H)7.9(m，4H)8.1(dd，J＝8.5，1.4Hz，1H)。
步骤6B：按照实施例3.42的步骤6B中的方法，以定量收率进行D-3-甲基-2-[4′-(萘-1-基甲氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-丁酸甲酯的水解。1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.8(dd，J＝15.4，6.8Hz，6H)2.0(m，1H)3.5(s，1H)5.6(s，2H)7.2(d，J＝8.8Hz，2H)7.6(m，3H)7.7(m，3H)7.8(d，J＝2.8Hz，4H)8.0(m，3H)8.1(m，1H)。
实施例3.45
Figure A20048004119300751
D-2-[4′-(2-氟-苄氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-3-甲基-丁酸
按照与实施例3.42类似的方法制备标题化合物，D-2-[4′-(2-氟-苄氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-3-甲基-丁酸。
步骤6A：按照实施例3.42的步骤6A中的方法，进行2-氟苄基溴与D-2-(4′-羟基-联苯-4-磺酰氨基)-3-甲基-丁酸甲酯的偶合，得到D-2-[4′-(2-氟-苄氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-3-甲基-丁酸甲酯。收率：47％。1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.8(dd，J＝15.2，6.8Hz，6H)1.9(dd，1H)3.3(s，3H)3.6(dd，J＝9.3，7.1Hz，1H)5.2(s，2H)7.2(d，J＝8.8Hz，2H)7.3(m，2H)7.4(m，1H)7.6(m，1H)7.7(m，4H)7.8(m，2H)8.3(d，J＝9.3Hz，1H)。
步骤6B：按照实施例3.42的步骤6B中的方法，进行D-2-[4′-(2-氟-苄氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-3-甲基-丁酸甲酯水解为D-2-[4′-(2-氟-苄氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-3-甲基-丁酸。收率：67％。
1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.8(dd，J＝43.7，6.8Hz，6H)2.0(m，1H)2.9(d，J＝2.8Hz，1H)5.2(s，2H)6.8(s，1H)7.2(d，J＝8.8Hz，2H)7.3(m，2H)7.4(m，1H)7.6(m，1H)7.7(d，J＝8.8Hz，2H)7.8(s，4H)。
实施例3.46
Figure A20048004119300752
D-2-[4′-(2，3-二氟-苄氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-3-甲基-丁酸
按照与实施例3.42类似的方法制备标题化合物，D-2-[4′-(2，3-二氟-苄氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-3-甲基-丁酸。
步骤6A：除了在室温下反应16小时，按照实施例3.42的步骤6A中的方法，进行2，3-二氟苄基溴与D-2-(4′-羟基-联苯-4-磺酰氨基)-3-甲基-丁酸甲酯的偶合，得到D-2-[4′-(2，3-二氟-苄氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-3-甲基-丁酸甲酯。收率：42％。
1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm(s，2H)7.2(d，J＝8.8Hz，2H)7.3(m，1H)7.5(m，2H)7.7(m，4H)7.8(m，2H)8.3(d，J＝9.3Hz，1H)。
步骤6B：按照实施例3.42的步骤6B中的方法，进行D-2-[4′-(2，3-二氟-苄氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-3-甲基-丁酸甲酯水解为D-2-[4′-(2，3-二氟-苄氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-3-甲基-丁酸。收率：63％。
1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.8(dd，J＝12.4，6.8Hz，6H)1.9(m，1H)3.5(dd，J＝9.3，6.1Hz，1H)5.3(s，2H)7.2(d，J＝9.1Hz，2H)7.3(m，1H)7.5(m，2H)7.7(d，J＝9.1Hz，2H)7.8(d，J＝1.8Hz，4H)8.0(d，J＝9.3Hz，1H)12.6(s，1H)。
实施例2P
D-3-甲基-2-[4′-(2-甲基-3-硝基-苄氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-丁酸
按照与实施例3.42类似的方法制备标题化合物，D-3-甲基-2-[4′-(2-甲基-3-硝基-苄氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-丁酸。
步骤6A：除了在室温下反应16小时，按照实施例3.42的步骤6A中的方法，进行2-甲基-3-硝基苄基溴与D-2-(4′-羟基-联苯-4-磺酰氨基)-3-甲基-丁酸甲酯的偶合，得到D-3-甲基-2-[4′-(2-甲基-3-硝基-苄氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-丁酸甲酯。收率：26％。1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.8(dd，J＝15.2，6.8Hz，6H)1.9(m，1H)2.4(s，3H)3.3(s，3H)3.6(m，1H)5.3(s，2H)7.2(d，J＝8.8Hz，2H)7.5(t，J＝7.8Hz，1H)7.8(m，8H)8.3(d，J＝9.3Hz，1H)。
步骤6B：按照实施例3.42的步骤6B中的方法，进行D-3-甲基-2-[4′-(2-甲基-3-硝基-苄氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-丁酸甲酯水解为D-3-甲基-2-[4′-(2-甲基-3-硝基-苄氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-丁酸。收率：33％。1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.8(dd，J＝12.4，6.8Hz，6H)1.9(dd，1H)3.5(dd，J＝9.3，6.1Hz，1H)5.3(s，2H)7.2(d，J＝9.1Hz，2H)7.3(m，1H)7.5(m，2H)7.7(d，J＝9.1Hz，2H)7.8(d，J＝1.8Hz，4H)8.0(d，J＝9.3Hz，1H)12.6(s，1H)。
实施例3.48
Figure A20048004119300771
D-2-[4′-(2-碘-苄氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-3-甲基-丁酸
按照与实施例3.42类似的方法制备标题化合物，D-2-[4′-(2-碘-苄氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-3-甲基-丁酸。
步骤6A：按照实施例3.42的步骤6A中的方法，用D-2-(4′-羟基-联苯-4-磺酰氨基)-3-甲基-丁酸甲酯进行1-氯甲基-2-碘-苯的烷基化，以55％收率得到D-2-[4′-(2-碘-苄氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-3-甲基-丁酸甲酯。1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.8(dd，J＝15.3，6.7Hz，6H)1.9(m，1H)3.3(s，3H)3.6(dd，J＝9.5，7.2Hz，1H)7.1(m，3H)7.5(m，1H)7.6(m，1H)7.7(m，4H)7.8(m，2H)7.9(dd，J＝8.0，1.1Hz，1H)8.3(d，J＝9.3Hz，1H)。
步骤6B：按照实施例3.42的步骤6A中的方法，以定量收率进行D-2-[4′-(2-碘-苄氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-3-甲基-丁酸甲酯的水解。
1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.8(dd，J＝12.1，6.8Hz，6H)1.9(m，1H)3.5(dd，J＝9.3，6.1Hz，1H)5.1(s，2H)7.1(d，J＝8.8Hz，2H)7.5(m，1H)7.6(d，J＝7.6Hz，1H)7.7(d，J＝8.8Hz，2H)7.8(s，4H)7.9(dd，J＝7.8，1.3Hz，1H)8.0(d，J＝9.3Hz，1H)。
实施例3.49
D-2-[4′-(苯并噻唑-2-基甲氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-3-甲基-丁酸
按照与实施例3.42类似的方法制备标题化合物，D-2-[4′-(苯并噻唑-2-基甲氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-3-甲基-丁酸。
步骤6A：按照实施例3.42的步骤6A中的方法，用D-2-(4′-羟基-联苯-4-磺酰氨基)-3-甲基-丁酸甲酯进行2-溴甲基-苯并噻唑的烷基化，以20％收率得到D-2-[4′-(苯并噻唑-2-基甲氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-3-甲基-丁酸甲酯。1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.8(dd，J＝15.0，6.7Hz，6H)1.9（m，1H)3.6(dd，J＝9.5，7.2Hz，1H)5.7(s，2H)7.2(m，J＝8.8Hz，2H)7.5(m，1H)7.6(m，1H)7.7(m，4H)7.8(m，2H)8.0(d，J＝7.3Hz，1H)8.1(d，J＝7.8Hz，1H)8.3(d，J＝9.6Hz，1H)。
步骤6B：按照实施例3.42的步骤6B中的方法，以定量收率进行D-2-[4′-(苯并噻唑-2-基甲氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-3-甲基-丁酸甲酯的水解。1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.8(dd，J＝12.4，6.8Hz，6H)1.9(m，1H)3.5(dd，J＝9.3，5.8Hz，1H)5.7(s，2H)7.2(d，J＝8.8Hz，2H)7.5(m，1H)7.6(m，1H)7.7(d，J＝8.8Hz，2H)7.8(d，J＝2.3Hz，4H)8.0(dd，J＝9.1，4.5Hz，2H)8.1(d，J＝8.6Hz，1H)。97％。
基于流程6B制备实施例3.50、3.51、3.52、3.53、3.54、3.55、3.56。
实施例3.50
Figure A20048004119300782
2-[4′-(2，3-二氢-苯并[1，4]二英-6-基甲氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-3-甲基-丁酸
1H NMR(400MHz，DMSO)：δ0.778(d，3H)，0.845(d，3H)，1.99(dd，1H)，3.17(bs，1H)，4.24(s，4H)，5.04(s，2H)，6.91(m，3H)，7.10(d，2H)，7.68(d，2H)；ES+m/z 496.0(M-H)；HRMS(C26H27NO7S)：理论值：520.14004；实测值：520.13995(M+Na)。
实施例3.51
Figure A20048004119300791
3-甲基-2-[4′-(吡啶-2-基甲氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-丁酸。
1H NMR(400MHz ，DMSO)：δ0.800(d，3H)，0.803(d，3H)，1.94(m，1H)，3.51(bs，1H)，5.25(s，2H)，7.15(d，2H)，7.36(m，1H)，7.54(d，2H)，7.71(d，2H)，7.83(m，3H)，8.59(d，2H)；ES+m/z441.2(M+H)；HRMS(C23H24N2O5S)：理论值：440.14004；实测值：440.14037(M+H)。
实施例3.52
Figure A20048004119300792
3-甲基-2-[4′-(吡啶-3-基甲氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-丁酸
1H NMR(400MHz，DMSO)：δ0.800(d，3H)，0.803(d，3H)，1.95(m，1H)，3.49(bs，1H)，5.23(s，2H)，7.16(d，2H)，7.45(m，1H)7.71(d，2H)，7.80(m，3H)，7.90(d，2H)，8.56(d，1H)，8.70(bs，1H)；ES+m/z441.1(M+H)；HRMS(C23H24N2O5S)：理论值：441.14787；实测值：441.14617(M+H)。
实施例3.53
2-[4′-(1H-苯并咪唑-2-基甲氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-3-甲基-丁酸
1H NMR(400MHz，DMSO)：δ0.802(d，3H)，0.833(d，3H)，1.94(m，1H)，3.54(m，1H)，5.51(s，2H)，6.88(d，2H)，7.24(d，1H)，7.34(m，1H)，7.58(d，2H)，7.66(m，1H)，7.78(m，4H)，8.03(d，1H)；ES+m/z 480.1(M+H)；HRMS(C25H25N3O5S)：理论值：480.15877；实测值：480.15787(M+H)。
实施例3.54
2-[4′-(3-甲氧基-苄氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-3-甲基-丁酸。
1H NMR(400MHz，DMSO)：δ0.804(d，3H)，0.835(d，3H)，1.95(m，1H)，3.54(m，1H)，3.7(s，3H)，5.15(s，2H)，6.89(m，2H)7.04(m，2H)，7.13(m，2H)，7.32(m，1H)，7.58(d，1H)，7.69(d，2H)，7.80(m，1H)，8.01(d，1H)；ES+m/z 470.1(M+H)；HRMS(C25H27NO6S)：理论值：470.16319；实测值：470.16183(M+H)。
实施例3.55
2-[4′-(4-甲氧基-苄氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-3-甲基-丁酸。
1H NMR(400MHz，DMSO)：δ0.805(d，3H)，0.836(d，3H)，1.94(m，1H)，3.54(m，1H)，3.76(s，3H)5.09(s，2H)，6.96(d，2H)，7.12(d，2H)，7.40(d，2H)，7.69(d，2H)，7.80(s，3H)，8.01(d，1H)；ES+m/z 468.2(M-H)；HRMS(C25H27NO6S)：
理论值：470.16319；实测值：470.16248(M+H)。
实施例3.56
2-[4′-(3，5-二甲氧基-苄氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-3-甲基-丁酸。
1H NMR(400MHz，DMSO)：δ0.804(d，3H)，0.835(d，3H)，1.95(m，1H)，3.55(m，1H)，3.7(s，6H)，5.11(s，2H)，6.45(bs，1H)，6.62(bs，2H)，7.12(d，2H)，7.70(d，2H)，7.80(s，3H)，8.01(d，1H)；ES+m/z498.2(M-H)；HRMS(C26H29NO7S)：
理论值：500.17375；实测值：500.17223(M+H)。
基于流程7制备实施例3.57。
实施例3.57
3-甲基-2-(4′-乙烯基-联苯-4-磺酰氨基)-丁酸叔丁酯。
步骤7A：使4-乙烯基苯基硼酸(1.89g，12.7mmol，1当量)和2-(4-溴-苯磺酰氨基)-3-甲基-丁酸叔丁酯(5g，12.7mmol，1当量)溶于乙二醇二甲醚(180mL)中，加入Pd(Ph3)4(736.0mg，0.64mmol)并在室温下搅拌20分钟。然后向反应混合物中加入K2CO3水溶液(3.52g，25.5mmol，2当量)并加热至回流反应过夜。冷却至室温后，蒸发溶剂并在EtOAc与H2O之间分配残余物。用盐水洗涤有机层，经MgSO4干燥并经柱层析(硅胶，10％EtOAc/己烷)纯化，以15.2％收率得到808mg的G9058-169。
1H NMR(400MHz，CHLOROFORM-D)δppm 0.80(d，J＝6.82Hz，3H)0.95(d，J＝6.82Hz，3H)1.12(s，9H)1.99(m，1H)3.59(dd，J＝9.85，4.55Hz，1H)5.06(d，J＝10.11Hz，1H)5.25(d，J＝10.86Hz，1H)5.75(d，J＝16.93z，1H)6.70(m，1H)7.45(m，4H)7.61(d，J＝8.84Hz，2H)7.82(d，J＝8.84Hz，2H)。
步骤7B：将3-甲基-2-(4′-乙烯基-联苯-4-磺酰氨基)-丁酸叔丁酯(300mg，0.72mmol，1.2当量)、Pd2(dba)3(11mg，0.012mmol，0.02当量)、四氟硼酸三叔丁基(14mg，0.048mmol，0.08当量)和二烷(1.5mL)在N2下置于微波管中。注射2-溴-1-苯并呋喃(118mg，0.6mmol，1当量)和二环己基甲胺(0.15mL，0.72mmol，1.2当量)。然后用微波反应器在180℃下照射混合物30分钟。在EtOAc和H2O之间分配混合物，经MgSO4干燥有机层。经柱层析(硅胶，20％EtOAc/己烷)纯化粗残余物，以25％收率得到80mg 2-[4′-(2-苯并呋喃-2-基-乙烯基)-联苯-4-磺酰氨基]-3-甲基-丁酸叔丁酯(G9058-171)。
1H NMR(400MHz，CHLOROFORM-D)δppm 0.80(d，J＝6.82Hz，3H)0.96(d，J＝6.82Hz，3H)1.14(s，9H)2.01(m，1H)3.60(dd，J＝9.98，4.42Hz，1H)5.07(d，J＝9.85HZ，1H)6.66(s，1H)7.01(d，J＝15.92Hz，1H)7.14(m，1H)7.25(m，2H)7.42(d，J＝8.08Hz，1H)7.52(m，5H)7.64(d，J＝8.59Hz，2H)7.84(d，J＝8.59Hz，2H)。
步骤7C：将在二氯乙烷(4.5mL)中的2-[4′-(2-苯并呋喃-2-基-乙烯基)-联苯-4-磺酰氨基]-3-甲基-丁酸叔丁酯(80mg)加入到TFA(1.5mL)中并在室温下搅拌。经TLC确定在3小时后反应完成。除去溶剂后，然后经柱层析(5-10％ MeOH/CH2Cl2)纯化粗残余物，以30.7％收率得到22mg的2-[4′-(2-苯并呋喃-2-基-乙烯基)-联苯-4-磺酰氨基]-3-甲基-丁酸G9058-172。
1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.79(d，J＝6.82Hz，3H)0.86(d，J＝6.82Hz，3H)1.23(s，2H)2.02(m，1H)3.18(m，1H)7.01(s，1H)7.25(t，J＝7.07Hz，1H)7.33(m，1H)7.38(d，J＝14.65Hz，1H)7.59(d，J＝8.08Hz，1H)7.64(d，J＝8.08Hz，1H)7.79(d，J＝6.57Hz，4H)7.83(d，J＝8.59Hz，2H)7.90(m，2H)。
基于流程8制备实施例3.58。
实施例3.58
Figure A20048004119300821
N-({4′-[2-4-甲基异喹啉-3-基)乙基]-1，1′-联苯-4-基}磺酰基)-D-缬氨酸
步骤8A：在N2气氛下，使2-(4-溴-苯磺酰氨基)-3-甲基-丁酸叔丁酯(10.65g，27.1mmol，1当量)、4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯酚(5.97g，27.1mmol，1当量)、Pd(PPh3)4(1.57g，1.4mmol，0.05当量)溶于乙二醇二甲醚(210mL)中，在室温下搅拌30分钟。然后向反应混合物中加入在H2O(70mL)中的K2CO3(7.5g，54.3mmol，2当量)并加热至回流反应过夜。经TLC确定反应完成。旋转蒸发除去溶剂并在二氯甲烷与盐水之间分配残余物。经MgSO4干燥有机层，除去溶剂，经柱层析(硅胶，30％EtOAc/正己烷)纯化粗品，以65％收率得到7.1g的2-(4′-羟基-联苯-4-磺酰氨基)-3-甲基-丁酸叔丁酯。
1H NMR(400MHz，CHLOROFORM-D)δppm 0.79(d，J＝6.82Hz，3H)0.95(d，J＝6.57Hz，3H)1.13(s，9H)1.51(s，1H)1.99(m，1H)3.59(dd，J＝10.11，4.55Hz，1H)5.06(d，J＝9.85Hz，1H)6.86(d，J＝8.84Hz，2H)7.38(d，J＝8.84Hz，2H)7.55(d，J＝8.59Hz，2H)7.79(d，J＝8.59Hz，2H)。
步骤8B：使2-(4′-羟基-联苯-4-磺酰氨基)-3-甲基-丁酸叔丁酯(330mg，0.81mmol)溶于20mL干燥二氯甲烷中并冷却至0℃。在N2下加入NaH(83mg，60％在油中，2.0mmol，2.5当量)并搅拌混合物15分钟。注射三氟甲磺酸酐(251mg，0.89mmol，1.1当量)，使混合物升至室温反应1小时。TLC显示反应完成。用二氯甲烷稀释反应混合物并用1N HCl中和。用水、盐水洗涤混合物并经MgSO4干燥。常规柱层析(40％EtOAc/己烷)以72％收率得到314mg要求的产物。
1H NMR(400MHz，CHLOROFORM-D)δppm 0.87(d，J＝6.82Hz，3H)1.03(d，J＝6.82Hz，3H)1.21(s，9H)2.01-2.20(m，1H)3.68(dd，J＝9.85，4.55Hz，1H)5.18(d，J＝10.11Hz，1H)7.39(d，J＝8.84Hz，2H)7.64(dd，J＝13.52，8.72Hz，4H)7.93(d，J＝8.59Hz，2H)。
步骤8C：在氮气下，用来自步骤8B的三氟甲磺酸酯(300mg，0.56mmol)、氯化锂(24mg，0.56mmol，1当量)、CuI(11mg，0.05mmol，10％)和PdCl2(PPh3)2(19.6mg，0.028mmol，5％)填充反应管，随后加入DMF(5mL)。注射叔丁基二甲基乙炔(235mg，1.68mmol，3当量)和二乙胺(409mg，5.6mmol，10当量)。用微波反应器在125℃下照射试管10分钟。经TLC确定起始原料被消耗。在乙酸乙酯和水之间分配混合物。收集有机相并且常规处理和柱层析化，以92％收率得到270mg要求的炔类产品N-[(4′-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]乙炔基}-1，1′-联苯-4-基)磺酰基]-D-缬氨酸叔丁酯。1HNMR(400MHz，CHLOROFORM-D)δppm 0.00(s，6H)0.66(d，J＝6.82Hz，3H)0.81(s，9H)0.82(d，J＝6.82Hz，3H)0.98(s，9H)1.75-1.98(m，1H)3.46(dd，J＝9.85，4.55Hz，1H)4.93(d，J＝9.85Hz，1H)7.27-7.32(m，2H)7.33-7.39(m，2H)7.47(d，J＝8.84Hz，2H)7.70(d，J＝8.84Hz，2H)。
步骤8D：使N-[(4′-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]乙炔基}-1，1′-联苯-4-基)磺酰基]-D-缬氨酸叔丁酯(600mg，1.14mmol)溶于THF(8mL)中，加入TBAF(1.7mL，1M，1.7mmol，1.5当量)。在室温下搅拌溶液半小时，完成反应。除去溶剂并经柱层析(硅胶，20％EtOAc/己烷)纯化残余物。以定量收率分离469mg的产物N-[(4′-乙炔基-1，1′-联苯-4-基)磺酰基]-D-缬氨酸叔丁酯。1HNMR(400MHz，CHLOROFORM-D)δppm 0.86(d，J＝6.82Hz，2H)1.02(d，J＝6.82Hz，2H)1.20(s，9H)1.88-2.29(m，1H)3.17(s，1H)3.67(dd，J＝9.85，4.55Hz，1H)5.14(d，J＝10.11Hz，1H)7.52(d，J＝8.59Hz，2H)7.56-7.62(m，2H)7.67(d，J＝8.84Hz，2H)7.91(d，J＝8.59Hz，2H)。
步骤8E：将N-[(4′-乙炔基-1，1′-联苯-4-基)磺酰基]-D-缬氨酸叔丁酯(117mg，0.28mmol)、2-氯-3-甲基异喹啉(60mg，0.34mmol，1.2当量)、CuI(5.3mg，0.028mmol，10％)和PdCl2(PPh3)2(9.8mg，0.014mmol，5％)在N2下置于反应管中并加入DMF(4mL)和10当量的二乙胺。在125℃下照射混合物10分钟。通过LCMS确定反应完成。用EtOAc稀释混合物，用水洗涤3次，用盐水洗涤1次，然后经MgSO4干燥。柱层析(硅胶，30％EtOAc/己烷)以76％收率得到120mg要求的产物N-({4′-[(4-甲基异喹啉-3-基)乙炔基]-1，1′-联苯-4-基}磺酰基)-D-缬氨酸叔丁酯。
1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.86(dd，J＝8.59，6.82Hz，6H)1.17(s，9H)1.94(m，1H)2.67(s，3H)3.50(dd，J＝10.61，7.33Hz，1H)7.62(t，J＝7.45Hz，1H)7.69-7.78(m，1H)7.80-7.85(m，4H)7.87(d，J＝8.59Hz，2H)7.90-7.97(m，2H)8.00(d，J＝8.59Hz，1H)8.20(d，J＝9.60Hz，1H)8.30(s，1H)。
步骤8F：使N-({4′-[(4-甲基异喹啉-3-基)乙炔基]-1，1′-联苯-4-基}磺酰基)-D-缬氨酸叔丁酯(46mg，0.08mmol)溶于25mL甲醇中并加入催化量的Pd/C(8.5mg，炭的10％重量，0.008mmol)。在H2(50PSI)下，于帕尔摇瓶中进行氢化。5小时后终止反应，LCMS显示反应完成。通过硅藻土过滤混合物并以定量收率浓缩为要求的产物G8594-178(46mg)。
1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.77-0.93(m，，6H)1.15(s，9H)1.85-2.06(m，1H)2.51(s，3H)3.13-3.28(m，2H)3.25-3.39(m，2H)3.47(d，J＝8.84Hz，1H)7.47(d，J＝8.08Hz，2H)7.52(t，J＝7.45Hz，1H)7.59-7.71(m，3H)7.76-7.90(m，4H)7.97(d，J＝8.34Hz，1H)8.06(s，1H)8.15(s，1H)。
步骤8G：使N-({4′-[2-(4-甲基异喹啉-3-基)乙基]-1，1′-联苯-4-基}磺酰基-D-缬氨酸叔丁酯(46mg，0.08mmol)溶于5mL干燥二氯甲烷中，随后加入2.5mL TFA。在室温下搅拌混合物3小时，TLC显示反应完成。旋转蒸发除去溶剂并在真空烘箱中干燥产物过夜。以95％收率得到44mg产物N-({4′-[2-(4-甲基异喹啉-3-基)乙基]-1，1′-联苯-4-基}磺酰基-D-缬氨酸。
1H NMR(400MHz，MeOD)δppm 0.83(d，J＝6.82Hz，3H)0.88(d，J＝6.82Hz，3H)1.80-2.13(m，1H)2.57(s，3H)3.15(t，J＝7.83Hz，2H)3.45-3.55(m，2H)3.60(d，J＝5.56Hz，1H)7.25(d，J＝8.08Hz，2H)7.53(d，J＝8.08Hz，2H)7.65(d，J＝8.34Hz，2H)7.81(d，J＝8.59Hz，3H)7.98(t，J＝7.58Hz，1H)8.02-8.09(m，1H)8.13(d，J＝8.08Hz，1H)8.83(s，1H)。
基于流程9制备实施例3.59。
实施例3.59
D-2-[4′-(乙酰氨基-甲基)-联苯-4-磺酰氨基]-3-甲基-丁酸
步骤9A：使4-氨基甲基苯基硼酸(143mg，0.77mmol，1当量)、D-2-(4-溴-苯磺酰氨基)-3-甲基-丁酸叔丁酯(300mg，0.77mmol，1当量)、钯四(44mg，0.038mmol，0.05当量)在二甲氧基乙烷(10mL)中合并，在室温下搅拌10分钟。向反应混合物中加入在4mL水中的碳酸钾(212mg，1.53mmol，2当量)并在88℃下加热4小时。然后使反应物冷却至室温并用乙酸乙酯稀释，用盐水洗涤，经硫酸镁干燥并除去至干。经硅胶上的快速层析法纯化残余物，用在含2％Et3N的二氯甲烷中的4-10％MeOH洗脱，得到200mg D-2-(4′-氨基甲基-联苯-4-磺酰氨基)-3-甲基-丁酸叔丁酯。收率：63％。
1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.9(dd，J＝8.1，7.1Hz，6H)1.1(s，9H)1.9(m，1H)3.5(d，J＝6.3Hz，2H)3.8(s，2H)7.5(d，J＝8.3Hz，2H)7.6(d，J＝8.3Hz，2H)7.8(d，J＝2.0Hz，4H)。
步骤9B：在氩气下，向在CH2Cl2(5mL)中的乙酸酐(71μL，0.75mmol，1.05当量)中加入吡啶(70μL，0.86mmol，1.2当量)并搅拌5分钟，然后加入D-2-(4′-氨基甲基-联苯-4-磺酰氨基)-3-甲基-丁酸叔丁酯(300mg，0.72mmol，1当量)并搅拌16小时。在处理和快速柱层析后，得到D-2-[4′-(乙酰氨基-甲基)-联苯-4-磺酰氨基]-3-甲基-丁酸叔丁酯。收率：32％。1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.8(dd，J＝9.1，6.8Hz，6H)0.9(t，J＝7.3Hz，3H)1.2(s，9H)1.3(m，2H)1.5(m，2H)1.9(m，1H)2.5(m，2H)3.4(dd，J＝9.6，6.3Hz，1H)7.0(dd，4H)7.1(m，2H)7.5(d，J＝8.8Hz，2H)7.7(d，J＝9.6Hz，1H)8.6(s，1H)。
步骤9C：向D-2-[4′-(乙酰氨基-甲基)-联苯-4-磺酰氨基]-3-甲基-丁酸叔丁酯(300mg，0.65mmol)的6mL二氯乙烷溶液中加入3mL三氟乙酸。在室温下搅拌反应混合物4小时，通过TLC确定反应完成。除去溶剂并经真空烘箱干燥残余物，得到250mg的D-2-[4′-(乙酰氨基-甲基)-联苯-4-磺酰氨基]-3-甲基-丁酸。收率：94％。
1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.8(dd，J＝12.5，6.7Hz，6H)1.9(s，3H)2.0(m，1H)3.6(dd，J＝9.3，5.8Hz，1H)4.3(d，J＝5.8Hz，2H)7.4(d，J＝8.1Hz，2H)7.7(d，J＝8.3Hz，2H)7.8(s，4H)8.1(d，J＝9.3Hz，1H)8.4(t，J＝5.8Hz，1H)12.6(s，1H)。
基于流程10制备实施例3.60和3.61。
实施例3.60
Figure A20048004119300871
D-3-甲基-2-(4′-苯基氨基甲酰基甲基-联苯-4-磺酰氨基)-丁酸
步骤10A：将4-溴苯基乙酸(1.5g，7.0mmol，1当量)、EDC(2.67g，14.0mmol，2当量)、DMAP(846mg，7.0mmol，1当量)和苯基胺(0.765mL，8.4mmol，1.2当量)在15mL DMF中的混合物在氮气下，于室温下搅拌3.5小时。在水处理和重结晶后，以69％收率得到2-(4-溴苯基)-N-苯基-乙酰胺(1.4g)。
1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 3.6(s，2H)7.0(m，1H)7.3(m，4H)7.5(m，2H)7.6(dd，J＝8.7，1.1Hz，2H)10.2(s，1H)。
步骤10B：将2-(4-溴苯基)-N-苯基-乙酰胺(107mg，0.37mmol，1.1当量)、D-3-甲基-2-(4-三丁基锡烷基-苯磺酰氨基)-丁酸叔丁酯(202mg，0.34mmol，1当量)和Pd(PPh3)4(38.5mg，0.033mmol，0.1当量)在5mL甲苯中的混合物在氮气下加热至回流。5小时后反应完成。常规处理和柱纯化，以34％收率得到D-3-甲基-2-(4′-苯基氨基甲酰基甲基-联苯-4-磺酰氨基)-丁酸叔丁酯(60mg)。
1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.9(dd，J＝8.3，6.8Hz，6H)1.1(s，9H)1.9(m，1H)3.5(dd，J＝9.6，6.3Hz，1H)3.7(s，2H)7.0(t，J＝7.3Hz，1H)7.3(m，，2H)7.5(d，J＝8.3Hz，2H)7.6(dd，J＝8.6，1.0Hz，2H)7.7(d，J＝8.3Hz，2H)7.8(d，J＝2.5Hz，4H)8.1(d，J＝9.6Hz，1H)10.2(s，1H)。
步骤10C：使用二氯乙烷中的TFA(1∶1)，除去D-3-甲基-2-(4′-苯基氨基甲酰基甲基-联苯-4-磺酰氨基)-丁酸叔丁酯的叔丁酯。蒸发溶剂后，以定量收率得到D-3-甲基-2-(4′-苯基氨基甲酰基甲基-联苯-4-磺酰氨基)-丁酸。
1H NMR(400MHz，MeOD)δppm 0.8(dd，J＝27.0，6.8Hz，6H)2.0(m，1H)3.6(d，J＝5.6Hz，1H)3.6(s，2H)7.0(m，1H)7.2(m，2H)7.4(d，J＝8.3Hz，2H)7.5(dd，J＝8.7，1.1Hz，2H)7.6(d，J＝8.3Hz，2H)7.7(dd，J＝48.0，8.6Hz，4H)。
实施例3.61
Figure A20048004119300881
D-2-[4′-(苄基氨基甲酰基-甲基)-联苯-4-磺酰氨基]-3-甲基-丁酸
步骤10A：按照实施例3.60的步骤10A中的方法，进行4-溴苯基乙酸与苄基胺的酰胺偶合，以82％收率得到N-苄基-2-(4-溴-苯基)-乙酰胺。1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 3.5(s，2H)4.3(d，J＝5.8Hz，2H)7.2(dd，J＝7.8，5.6Hz，5H)7.3(m，2H)7.5(d，J＝8.3Hz，2H)8.6(t，J＝5.9Hz，1H)。
步骤10B：按照实施例3.60的步骤10B中的方法，进行N-苄基-2-(4-溴-苯基)-乙酰胺与D-3-甲基-2-(4-三丁基锡烷基-苯磺酰氨基)-丁酸叔丁酯的Stille偶合，以31％收率得到D-2-[4′-(苄基氨基甲酰基-甲基)-联苯-4-磺酰氨基]-3-甲基-丁酸叔丁酯。
1H NMR(400MHz，CHLOROFORM-D)δppm 0.9(d，J＝6.8Hz，3H)1.0(d，J＝6.6Hz，3H)1.2(s，9H)2.1(m，1H)3.7(m，3H)4.5(d，J＝5.8Hz，2H)5.1(d，J＝9.9Hz，1H)5.7(s，1H)7.3(m，5H)7.4(d，J＝8.1Hz，2H)7.5(d，J＝8.3Hz，2H)7.7(d，J＝8.3Hz，2H)7.9(d，J＝8.3Hz，2H)。
步骤10C：按照实施例3.60的步骤10C中的方法，除去叔丁酯。
1H NMR(400MHz，MeOD)δppm 0.8(dd，J＝26.3，6.8Hz，6H)2.0(m，1H)3.5(s，2H)3.6(d，J＝5.6Hz，1H)4.3(d，J＝5.6Hz，2H)7.2(m，5H)7.3(d，J＝8.3Hz，2H)7.5(d，J＝8.3Hz，2H)7.7(d，J＝8.8Hz，2H)7.8(d，J＝8.8Hz，2H)8.5(s，1H).
基于流程11制备实施例3.62、3.63、3.64、3.65、3.66、3.67、3.68、3.69、3.70、3.71、3.72、3.73、3.74、3.75、3.76、3.77、3.78、3.79、3.80。
实施例3.62
Figure A20048004119300891
2-[4′-(4-氟-苯基氨基甲酰基氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-3-甲基-丁酸
步骤11A：使2-(4′-羟基-联苯-4-磺酰氨基)-3-甲基-丁酸叔丁酯(300mg，0.74mmol，1当量)溶于乙醚(7.5mL)中，随后加入异氰酸4-氟苯基酯(101mg，0.74mmol，1当量)和Et3N(1mL)。在室温下搅拌反应混合物50分钟。从反应混合物沉淀出固体。过滤收集固体并用乙醚洗涤，以57％收率得到2-[4′-(4-氟-苯基氨基甲酰基氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-3-甲基-丁酸叔丁酯(228mg)。
1H NMR(400MHz，CHLOROFORM-D)δppm 0.87(d，J＝6.82Hz，3H)1.03(d，J＝6.82Hz，3H)1.20(s，9H)2.05(m，1H)3.67(dd，J＝9.98，4.42Hz，1H)5.13(d，J＝9.85Hz，1H)6.95(s，1H)7.05(d，J＝9.09Hz，2H)7.30(d，J＝8.59Hz，2H)7.43(m，2H)7.57(d，J＝8.59Hz，2H)7.67(s，2H)7.90(d，J＝8.34Hz，2H)。
步骤11B：使2-[4′-(4-氟-苯基氨基甲酰基氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-3-甲基-丁酸叔丁酯(223mg)溶于二氯乙烷(7.5mL)中并加入TFA(2.5mL)。在室温下搅拌混合物5小时，TLC表明反应完成。常规处理和柱层析以89％收率得到2-[4′-(4-氟-苯基氨基甲酰基氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-3-甲基-丁酸(178mg)。
1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.81(d，J＝6.57Hz，3H)0.84(d，J＝6.82Hz，3H)1.96(m，1H)3.56(dd，J＝9.35，6.06Hz，1H)7.19(t，J＝8.84Hz，2H)7.37(d，J＝8.59Hz，2H)7.54(dd，J＝9.09，4.80Hz，2H)7.79(d，J＝8.84Hz，2H)7.86(d，J＝4.29Hz，4H)8.08(d，J＝9.35Hz，1H)10.34(s，1H)。
实施例3.63
D-3-甲基-2-[4′-(4-苯氧基-苯基氨基甲酰基氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-丁酸
按照与实施例3.62类似的方法制备标题化合物D-3-甲基-2-[4′-(4-苯氧基-苯基氨基甲酰基氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-丁酸。
步骤11A：按照实施例3.62步骤11A中的方法，进行异氰酸4-苯氧基苯基酯与D-2-(4′-羟基-联苯-4-磺酰氨基)-3-甲基-丁酸叔丁酯的反应，得到D-3-甲基-2-[4′-(4-苯氧基-苯基氨基甲酰基氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-丁酸叔丁酯。收率：36％。1H NMR(400MHz，DMSO-D6)□ppm 0.9(dd，J＝8.2，6.9Hz，6H)1.2(s，9H)1.9(m，1H)3.5(dd，J＝9.6，6.3Hz，1H)7.0(dd，J＝8.6，1.0Hz，2H)7.0(d，J＝9.1Hz，2H)7.1(m，1H)7.4(m，4H)7.5(d，J＝8.8Hz，2H)7.7(d，J＝8.8Hz，2H)7.9(m，4H)8.2(d，J＝9.6Hz，1H)10.3(s，1H)。
步骤11B：按照实施例3.62步骤11B中的方法，进行D-3-甲基-2-[4′-(4-苯氧基-苯基氨基甲酰基氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-丁酸叔丁酯转化为D-3-甲基-2-[4′-(4-苯氧基-苯基氨基甲酰基氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-丁酸。收率：87％。1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.8(dd，J＝12.1，6.8Hz，6H)1.9(m，1H)3.6(dd，J＝9.3，6.1Hz，1H)7.0(m，2H)7.0(d，J＝9.1Hz，2H)7.1(t，J＝7.3Hz，1H)7.4(m，4H)7.5(d，J＝8.8Hz，2H)7.8(d，J＝8.8Hz，2H)7.9(d，J＝4.8Hz，4H)8.1(d，J＝9.3Hz，1H)10.3(s，1H)。
实施例3.64
Figure A20048004119300902
D-3-甲基-2-[4′-(萘-2-基氨基甲酰基氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-丁酸
按照与实施例3.62类似的方法制备标题化合物D-3-甲基-2-[4′-(萘-2-基氨基甲酰基氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-丁酸。
步骤11A：按照实施例3.62步骤11A中的方法，进行异氰酸2-萘基酯与D-2-(4′-羟基-联苯-4-磺酰氨基)-3-甲基-丁酸叔丁酯的反应，得到D-3-甲基-2-[4′-(萘-2-基氨基甲酰基氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-丁酸叔丁酯。收率：16％。1H NMR(400MHz，DMSO-D6)□ppm 0.9(dd，J＝8.2，6.9Hz，6H)1.2(s，9H)1.9(m，1H)3.5(dd，J＝9.9，6.3Hz，1H)7.4(m，3H)7.5(m，1H)7.6(dd，J＝8.8，2.3Hz，1H)7.8(d，J＝8.8Hz，2H)7.9(m，7H)8.1(s，1H)8.2(d，J＝9.9Hz，1H)10.5(s，1H)。
步骤11B：按照实施例3.62步骤11B中的方法，进行D-3-甲基-2-[4′-(萘-2-基氨基甲酰基氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-丁酸叔丁酯转化为D-3-甲基-2-[4′-(萘-2-基氨基甲酰基氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-丁酸。收率：40％。1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.8(dd，J＝12.5，6.7Hz，6H)2.0(m，1H)3.6(dd，J＝9.1，5.8Hz，1H)7.4(m，3H)7.5(m，1H)7.6(dd，J＝8.8，2.3Hz，1H)7.9(m，9H)8.1(m，2H)10.5(s，1H)12.6(s，1H)。
实施例3.65
Figure A20048004119300911
D-2-[4′-(4-苄氧基-苯基氨基甲酰基氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-3-甲基-丁酸
按照与实施例3.62类似的方法制备标题化合物D-2-[4′-(4-苄氧基-苯基氨基甲酰基氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-3-甲基-丁酸。
步骤11A：按照实施例3.62步骤11A中的方法，进行异氰酸4-苄氧基苯基酯与D-2-(4′-羟基-联苯-4-磺酰氨基)-3-甲基-丁酸叔丁酯的反应，得到D-2-[4′-(4-苄氧基-苯基氨基甲酰基氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-3-甲基-丁酸叔丁酯。收率：37％。NMR：G8701-142.1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.9(dd，J＝8.1，6.8Hz，6H)1.2(s，9H)1.9(m，1H)3.5(dd，J＝9.9，6.3Hz，1H)5.1(s，2H)7.0(d，J＝9.1Hz，2H)7.4(m，9H)7.7(d，J＝8.8Hz，2H)7.9(m，4H)8.2(d，J＝9.6Hz，1H)10.1(s，1H)。
步骤11B：按照实施例3.62步骤11B中的方法，进行D-2-[4′-(4-苄氧基-苯基氨基甲酰基氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-3-甲基-丁酸叔丁酯转化为D-2-[4′-(4-苄氧基-苯基氨基甲酰基氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-3-甲基-丁酸。收率：60％。NMR：G8701-151.1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.8(dd，J＝12.1，6.8Hz，6H)1.9(m，1H)3.6(dd，J＝9.3，6.1Hz.1H)5.1(s，2H)7.0(d，J＝9.1Hz，2H)7.4(m，9H)7.8(d，J＝8.8Hz，2H)7.9)(m，4H)8.1(d，J＝9.3Hz，1H)10.1(s，1H)。
实施例3.66
Figure A20048004119300921
D-2-(4′-环戊基氨基甲酰基氧基-联苯-4-磺酰氨基)-3-甲基-丁酸
按照与实施例3.62类似的方法制备标题化合物D-2-(4′-环戊基氨基甲酰基氧基-联苯-4-磺酰氨基)-3-甲基-丁酸。
步骤11A：按照实施例3.62步骤11A中的方法，进行异氰酸环戊酯与D-2-(4′-羟基-联苯-4-磺酰氨基)-3-甲基-丁酸叔丁酯的反应，得到D-2-(4′-环戊基氨基甲酰基氧基-联苯-4-磺酰氨基)-3-甲基-丁酸叔丁酯。收率：70％。1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.9(dd，J＝8.1，7.1Hz，6H)1.2(s，9H)1.5(m，4H)1.7(m，2H)1.8(m，2H)1.9(m，1H)3.5(dd，J＝9.6，6.3Hz，1H)3.9(m，1H)7.2(d，J＝8.6Hz，2H)7.7(d，J＝8.6Hz，2H)7.8(m，5H)8.2(d，J＝9.6Hz，1H)。
步骤11B：按照实施例3.62步骤11B中的方法，进行D-2-(4′-环戊基氨基甲酰基氧基-联苯-4-磺酰氨基)-3-甲基-丁酸叔丁酯转化为D-2-(4′-环戊基氨基甲酰基氧基-联苯-4-磺酰氨基)-3-甲基-丁酸。收率：91％。1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.8(m，6H)1.5(m，4H)1.7(d，J＝4.5Hz，2H)1.8(m，2H)1.9(m，1H)3.6(dd，J＝9.3，6.1Hz，1H)3.9(m，1H)7.2(d，J＝8.6Hz，2H)7.7(d，J＝8.8Hz，2H)7.8(s，5H)8.1(d，J＝9.3Hz，1H)12.6(s，1H)。
实施例3.67
Figure A20048004119300931
D-2-[4′-(4-二甲基氨基-苯基氨基甲酰基氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-3-甲基-丁酸
按照与实施例3.62类似的方法制备标题化合物D-2-[4′-(4-二甲基氨基-苯基氨基甲酰基氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-3-甲基-丁酸。
步骤11A：按照实施例3.62步骤11A中的方法，进行异氰酸4-(二甲基氨基)苯基酯与D-2-(4′-羟基-联苯-4-磺酰氨基)-3-甲基-丁酸叔丁酯的反应，得到D-2-[4′-(4-二甲基氨基-苯基氨基甲酰基氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-3-甲基-丁酸叔丁酯。收率：28％。1HNMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.9(dd，J＝8.1，6.8Hz，6H)1.2(s，9H)1.9(m，1H)2.8(s，6H)3.5(dd，J＝9.6，6.3Hz，1H)6.7(d，J＝9.1Hz，2H)7.3(d，J＝8.6Hz，4H)7.7(d，J＝8.6Hz，2H)7.8(m，4H)8.2(d，J＝9.9Hz，1H)9.9(s，1H)。
步骤11B：按照实施例3.62步骤11B中的方法，进行D-2-[4′-(4-二甲基氨基-苯基氨基甲酰基氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-3-甲基-丁酸叔丁酯转化为D-2-[4′-(4-二甲基氨基-苯基氨基甲酰基氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-3-甲基-丁酸。收率：99％。NMR：G8701-161.1H NMR(400MHz，MeOD)δppm 0.8(dd，J＝23.7，6.8Hz，6H)2.0(m，1H)3.1(s，6H)3.6(d，J＝5.6Hz，1H)7.2(d，J＝8.8Hz，2H)7.4(d，J＝9.1Hz，3H)7.6(m，6H)7.8(d，J＝8.8Hz，2H)。
实施例3.68
Figure A20048004119300941
D-2-[4′-(4-异丙基-苯基氨基甲酰基氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-3-甲基-丁酸
按照与实施例3.62类似的方法制备标题化合物D-2-[4′-(4-异丙基-苯基氨基甲酰基氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-3-甲基-丁酸。
步骤11A：按照实施例3.62步骤11A中的方法，进行异氰酸4-异丙基苯基酯与D-2-(4′-羟基-联苯-4-磺酰氨基)-3-甲基-丁酸叔丁酯的反应，得到D-2-[4′-(4-异丙基-苯基氨基甲酰基氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-3-甲基-丁酸叔丁酯。收率：38％。NMR：G8701-158.1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.9(dd，J＝8.3，6.8Hz，6H)1.2(m，15H)1.9(m，1H)2.8(m，1H)3.5(dd，J＝9.9，6.3Hz，1H)7.2(d，J＝8.6Hz，2H)7.4(d，J＝8.6Hz，2H)7.4(d，J＝8.6Hz，2H)7.7(d，J＝8.6Hz，2H)7.9(m，4H)8.2(d，J＝9.9Hz，1H)10.2(s，1H)。
步骤11B：按照实施例3.62步骤11B中的方法，进行D-2-[4′-(4-异丙基-苯基氨基甲酰基氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-3-甲基-丁酸叔丁酯转化为D-2-[4′-(4-异丙基-苯基氨基甲酰基氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-3-甲基-丁酸。收率：34％。NMR：G8701-165.1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.8(dd，J＝12.4，6.8Hz，6H)1.2(d，J＝6.8Hz，6H)2.0(m，1H)2.8(m，1H)3.6(dd，J＝9.3，6.1Hz，1H)7.2(d，J＝8.6Hz，2H)7.4(d，J＝8.8Hz，2H)7.4(d，J＝8.6Hz，2H)7.8(d，J＝8.8Hz，2H)7.9(m，4H)8.1(d，J＝9.3Hz，1H)10.2(s，1H)12.6(s，1H)。
实施例3.69
Figure A20048004119300942
D-3-甲基-2-[4′-(2-噻吩-2-基-乙基氨基甲酰基氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-丁酸
按照与实施例3.62类似的方法制备标题化合物D-3-甲基-2-[4′-(2-噻吩-2-基-乙基氨基甲酰基氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-丁酸。
步骤11A：按照实施例3.62步骤11A中的方法，进行异氰酸2-(2-噻吩基)乙酯与D-2-(4′-羟基-联苯-4-磺酰氨基)-3-甲基-丁酸叔丁酯的反应，得到D-3-甲基-2-[4′-(2-噻吩-2-基-乙基氨基甲酰基氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-丁酸叔丁酯。收率：63％。NMR：G8701-169.1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.9(dd，J＝8.3，7.1Hz，6H)1.2(s，9H)1.9(m，1H)3.0(t，J＝7.1Hz，2H)3.3(m，2H)3.5(dd，J＝9.6，6.3Hz，1H)7.0(m，2H)7.2(d，J＝8.8Hz，2H)7.4(dd，J＝5.1，1.3Hz，1H)7.7(d，J＝8.6Hz，2H)7.8(d，J＝2.3Hz，4H)8.0(t，J＝5.7Hz，1H)8.2(d，J＝9.9Hz，1H)。
步骤11B：按照实施例3.62步骤11B中的方法，进行D-3-甲基-2-[4′-(2-噻吩-2-基-乙基氨基甲酰基氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-丁酸叔丁酯转化为D-3-甲基-2-[4′-(2-噻吩-2-基-乙基氨基甲酰基氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-丁酸。收率：43％。NMR：G8701-175.1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm0.8(dd，J＝12.4，6.8Hz，6H)2.0(m，1H)3.0(t，J＝7.1Hz，2H)3.3(m，2H)3.6(dd，J＝9.2，5.9Hz，1H)6.9(d，J＝3.3Hz，1H)7.0(dd，J＝5.1，3.3Hz，1H)7.2(d，J＝8.8Hz，2H)7.4(dd，J＝5.1，1.3Hz，1H)7.7(d，J＝8.6Hz，2H)7.8(s，4H)8.0(t，J＝5.8Hz，1H)8.1(d，J＝9.3Hz，1H)。
实施例3.70
D-3-甲基-2-[4′-(4-三氟甲氧基-苯基氨基甲酰基氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-丁酸
按照与实施例3.62类似的方法制备标题化合物D-3-甲基-2-[4′-(4-三氟甲氧基-苯基氨基甲酰基氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-丁酸。
步骤11A：按照实施例3.62步骤11A中的方法，进行异氰酸4-甲氧基苯基酯与D-2-(4′-羟基-联苯-4-磺酰氨基)-3-甲基-丁酸叔丁酯的反应，得到D-2-[4′-(4-甲氧基-苯基氨基甲酰基氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-3-甲基-丁酸叔丁酯。收率：49％。NMR：G8701-199.1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.9(dd，J＝8.3，6.8Hz，6H)1.2(s，9H)1.9(m，1H)3.5(dd，J＝9.9，6.3Hz，1H)3.7(s，3H)6.9(d，J＝9.1Hz，2H)7.4(d，J＝8.8Hz，2H)7.4(d，J＝8.8Hz，2H)7.7(d，J＝8.6Hz，2H)7.9(m，4H)8.2(d，J＝9.9Hz，1H)10.1(s，1H)。
步骤11B：按照实施例3.62步骤11B中的方法，进行D-2-[4′-(4-甲氧基-苯基氨基甲酰基氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-3-甲基-丁酸叔丁酯转化为D-3-甲基-2-[4′-(4-三氟甲氧基-苯基氨基甲酰基氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-丁酸。收率：91％。NMR：G9241-4.1HNMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.8(dd，J＝12.6，6.8Hz，6H)1.9(m，1H)3.6(dd，J＝9.3，5.8Hz，1H)3.7(s，3H)6.9(d，J＝9.1Hz，2H)7.4(d，J＝8.8Hz，2H)7.4(d，J＝8.8Hz，2H)7.8(d，J＝8.6Hz，2H)7.9(m，4H)8.1(d，J＝9.3Hz，1H)10.1(s，1H)12.6(s，1H)。
实施例3.71
Figure A20048004119300961
D-3-甲基-2-[4′-(4-三氟甲氧基-苯基氨基甲酰基氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-丁酸
按照与实施例3.62类似的方法制备标题化合物D-3-甲基-2-[4′-(4-三氟甲氧基-苯基氨基甲酰基氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-丁酸。
步骤11A：在氩气下，向D-2-(4′-羟基-联苯-4-磺酰氨基)-3-甲基-丁酸叔丁酯(300mg，0.74mmol，1当量)的乙醚(10mL)溶液中加入异氰酸4-(三氟甲氧基)苯酯(123μL，0.81mmol，1.1当量)和三乙胺(124μL，0.89mmol，1.2当量)并在室温下搅拌。反应完成后，常规处理和快速柱层析以37％收率得到D-3-甲基-2-[4′-(4-三氟甲氧基-苯基氨基甲酰基氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-丁酸叔丁酯。
1H NMR(400MHz，DMSO-D6)□ppm 0.9(dd，J＝8.1，6.8Hz，6H)1.2(s，9H)1.9(m，1H)3.5(dd，J＝9.9，6.3Hz，1 NMR：G8701-200.1HNMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.9(dd，J＝8.1，6.8Hz，6H)1.2(s，9H)1.9(m，1H)3.5(dd，J＝9.9，6.3Hz，1H)7.4(m，4H)7.6(d，J＝9.3Hz，2H)7.8(d，J＝8.8Hz，2H)7.9(m，4H)8.2(d，J＝9.6Hz，1H)10.5(s，1H)。
步骤11B：按照实施例3.62步骤11B中的方法，进行D-3-甲基-2-[4′-(4-三氟甲氧基-苯基氨基甲酰基氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-丁酸叔丁酯转化为D-3-甲基-2-[4′-(4-三氟甲氧基-苯基氨基甲酰基氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-丁酸。收率：76％。NMR：G9241-5.1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.8(dd，J＝12.4，6.8Hz，6H)2.0(m，1H)3.6(dd，J＝9.3，5.8Hz，1H)7.4(m，4H)7.6(d，J＝9.1Hz，2H)7.8(d，J＝8.6Hz，2H)7.9(m，4H)8.1(d，J＝9.3Hz，1H)10.5(s，1H)。
实施例3.72
D-2-(4′-氨基甲酰基氧基-联苯-4-磺酰氨基)-3-甲基-丁酸
按照与实施例3.62类似的方法制备标题化合物D-2-(4′-氨基甲酰基氧基-联苯-4-磺酰氨基)-3-甲基-丁酸。
步骤11A：在氩气下，向D-2-(4′-羟基-联苯-4-磺酰氨基)-3-甲基-丁酸叔丁酯(500mg，1.23mmol，1当量)的CH2Cl2溶液(2mL)中加入氯磺酰异氰酸酯(107μL，1.23mmol，1当量)并在室温下搅拌16小时。经TLC确定反应完成。在处理和快速柱层析后得到D-2-(4′-氨基甲酰基氧基-联苯-4-磺酰氨基)-3-甲基-丁酸叔丁酯。收率：45％。
NMR：G9241-38.1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.9(dd，J＝8.3，6.8Hz，6H)1.1(s，9H)1.9(m，1H)3.5(dd，J＝9.9，6.3Hz，1H)7.2(d，J＝8.8Hz，2H)7.7(d，J＝8.8Hz，2H)7.8(d，J＝1.0Hz，4H)8.2(d，J＝9.6Hz，1H)。
步骤11B：按照实施例3.62步骤11B中的方法，进行D-2-(4′-氨基甲酰基氧基-联苯-4-磺酰氨基)-3-甲基-丁酸叔丁酯转化为D-2-(4′-氨基甲酰基氧基-联苯-4-磺酰氨基)-3-甲基-丁酸。收率：85％。
NMR：G9241-46.1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.8(dd，J＝12.4，6.8Hz，6H)2.0(m，1H)3.6(dd，J＝9.3，5.8Hz，1H)7.0(s，1H)7.2(m，3H)7.7(d，J＝8.8Hz，2H)7.8(s，4H)8.1(d，J＝9.3Hz，1H)。
实施例3.73
Figure A20048004119300981
3-甲基-2-(4′-苯基氨基甲酰基氧基-联苯-4-磺酰氨基)-丁酸叔丁酯
按照与实施例3.62类似的方法制备标题化合物3-甲基-2-(4′-苯基氨基甲酰基氧基-联苯-4-磺酰氨基)-丁酸叔丁酯。
步骤11A：使2-(4′-羟基-联苯-4-磺酰氨基)-3-甲基-丁酸叔丁酯(300mg，0.74mmol，1当量)溶于乙醚(7.5mL)中，先后加入异氰酸苯酯(0.08mL，0.74mmol，1当量)和Et3N(1mL)。搅拌反应混合物4小时。过滤收集从反应混合物中沉淀的固体，用乙醚洗涤，得到76％收率(295mg)。
1H NMR(400MHz，CHLOROFORM-D)δppm 0.87(d，J＝7.07Hz，3H)1.03(d，J＝6.82Hz，3H)1.20(s，9H)2.07(m，1H)3.67(dd，J＝9.98，4.42Hz，1H)5.13(d，J＝9.85Hz，1H)6.96(s，1H)7.14(m，1H)7.31(d，J＝8.59Hz，2H)7.36(m，2H)7.47(d，J＝8.34Hz，2H)7.58(d，J＝8.59Hz，2H)7.66(d，J＝8.34Hz，2H)7.91(m，2H)。
步骤11B：按照实施例3.62步骤11B中的方法，水解3-甲基-2-(4′-苯基氨基甲酰基氧基-联苯-4-磺酰氨基)-丁酸叔丁酯(200mg)，以88％收率得到3-甲基-2-(4′-苯基氨基甲酰基氧基-联苯-4-磺酰氨基)-丁酸(158mg)。
1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.82(d，J＝6.82Hz，3H)0.85(d，J＝6.57Hz，3H)1.95(m，1H)3.56(dd，J＝9.22，5.94Hz，1H)3.90(s，1H)7.07(m，1H)7.35(m，4H)7.53(d，J＝7.83Hz，2H)7.80(d，J＝8.59Hz，2H)7.86(d，J＝22.23Hz，4H)8.08(d，J＝9.35Hz，1H)10.29(s，1H)。
实施例3.74
2-[4′-(苯并[b]噻吩-3-基氨基甲酰基氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-3-甲基-丁酸叔丁酯
按照与实施例3.62类似的方法制备标题化合物2-[4′-(苯并[b]噻吩-3-基氨基甲酰基氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-3-甲基-丁酸叔丁酯。
步骤11A：使2-(4′-羟基-联苯-4-磺酰氨基)-3-甲基-丁酸叔丁酯(300mg，0.74mmol，1.0当量)溶于乙醚(7.5mL)中，先后加入异氰酸1-苯并噻吩-3-基酯(129.6mg，0.74mmol，1.0当量)和0.5mL Et3N。在5分钟内从反应混合物中沉淀出固体。在室温下继续搅拌混合物2小时并过滤收集沉淀，用乙醚洗涤，得到43％收率(187mg)。
1H NMR(400MHz，CHLOROFORM-D)δppm 0.87(d，J＝6.82Hz，3H)1.03(d，J＝6.82Hz，3H)1.20(s，9H)2.08(m，1H)3.68(m，1H)5.15(d，J＝10.11Hz，1H)7.35(d，J＝8.34Hz，2H)7.43(m，2H)7.60(d，J＝8.59Hz，2H)7.67(d，J＝8.34Hz，3H)7.74(s，1H)7.90(t，J＝9.09Hz，3H)。
步骤11B：在N2气氛下，使2-[4′-(苯并[b]噻吩-3-基氨基甲酰基氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-3-甲基-丁酸叔丁酯(180mg，0.31mmol)溶于二氯甲烷中，在0℃下加入TFA(2mL)并搅拌4小时。蒸发溶剂并在高真空下干燥产物，以66％收率得到2-[4′-(苯并[b]噻吩-3-基氨基甲酰基氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-3-甲基-丁酸(108mg)。
1H NMR(400MHz，MeOD)δppm 0.82(d，J＝6.82Hz，3H)0.89(d，J＝6.82Hz，3H)1.20(s，1H)3.54(d，J＝5.05Hz，1H)7.30(m，2H)7.35(m，2H)7.58(s，1H)7.66(d，J＝8.59Hz，2H)7.71(d，J＝8.59Hz，2H)7.78(d，J＝7.83Hz，1H)7.84(d，J＝8.59Hz，2H)7.92(d，J＝8.08Hz，1H)
实施例3.75
Figure A20048004119301001
N-[(4′-{[2，3-二氢-1-苯并呋喃-5-基氨基]羰基}氧基]-1，1′-联苯-4-基)磺酰基]-D-缬氨酸
按照与实施例3.62类似的方法制备标题化合物N-[(4′-{[2，3-二氢-1-苯并呋喃-5-基氨基)羰基]氧基}-1，1′-联苯-4-基)磺酰基]-D-缬氨酸。
步骤11A和11B：收率40％。1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm0.80(d，J＝6.82Hz，3H)0.85(d，J＝6.82Hz，3H)1.98(m，1H)3.17(t，J＝8.97Hz，2H)3.39(s，1H)4.50(t，J＝8.59Hz，2H)6.72(d，J＝8.34Hz，1H)7.19(d，J＝8.84Hz，1H)7.34(d，J＝8.59Hz，2H)7.40(s，1H)7.78(d，J＝8.59Hz，2H)7.85(d，J＝1.77Hz，4H)10.05(s，1H)。
实施例3.76
Figure A20048004119301002
N-[(4′-{[(2，3-二氢-1，4-苯并二烷-6-基氨基)羰基]氧基}-1，1′-联苯-4-基)磺酰基]-D-缬氨酸
按照与实施例3.62类似的方法制备标题化合物N-[(4′-{[(2，3-二氢-1，4-苯并二烷-6-基氨基)羰基]氧基}-1，1′-联苯-4-基)磺酰基]-D-缬氨酸。
步骤11A：收率62％。1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.80(d，J＝6.82Hz，3H)0.85(d，J＝6.82Hz，3H)1.98(m，1H)3.42(s，1H)4.21(m，4H)6.81(d，J＝8.84Hz，1H)6.94(d，J＝10.86Hz，1H)7.09(s，1H)7.34(d，J＝8.84Hz，2H)7.78(d，J＝8.84Hz，3H)7.85(d，J＝1.77Hz，4H)10.11(s，1H)。
实施例3.77
Figure A20048004119301011
N-[(4′-{[(3，4-二氢-2H-1，5-苯并二氧杂环庚烷-7-基氨基)羰基]氧基}-1，1′-联苯-4-基)磺酰基]-D-缬氨酸
按照与实施例3.62类似的方法制备标题化合物N-[(4′-{[(3，4-二氢-2H-1，5-苯并二氧杂环庚烷-7-基氨基)羰基]氧基}-1，1′-联苯-4-基)磺酰基]-D-缬氨酸。
步骤11A和11B：收率55％。1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.80(d，J＝6.82Hz，3H)0.85(d，J＝6.82Hz，3H)1.97(m，1H)2.08(m，2H)3.45(s，1H)4.08(m，4H)6.94(d，J＝8.59Hz，1H)7.06(d，J＝2.53Hz，1H)7.18(d，J＝2.27Hz，1H)7.35(d，J＝8.59Hz，2H)7.79(d，J＝8.59Hz，2H)7.85(d，J＝3.79Hz，4H)7.88(s，1H)10.21(s，1H)。
实施例3.78
N-[(4′-{[(5-甲基-3-苯基异唑-4-基)氨基)羰基]氧基}-1，1′-联苯-4-基)磺酰基]-D-缬氨酸
按照与实施例3.62类似的方法制备标题化合物N-[(4′-{[(5-甲基-3-苯基异唑-4-基)氨基)羰基]氧基}-1，1′-联苯-4-基)磺酰基]-D-缬氨酸。
步骤11B：收率75％。1H NMR(400MHz，ACETONITRILE-D3)δppm 0.63(d，J＝6.82Hz，3H)0.74(d，J＝6.57Hz，3H)1.83-1.88(m，1H)2.20(s，1H)2.34(m，3H)3.81(s，1H)6.56(s，1H)6.66(s，1H)7.12(d，J＝7.83Hz，1H)7.45(d，J＝4.80Hz，4H)7.59(m，4H)7.68(d，J＝3.54Hz，2H)7.80(d，J＝8.08Hz，2H)。
实施例3.79
Figure A20048004119301021
N-[(4′-{[(甲基氨基)羰基]氧基}-1，1′-联苯-4-基)磺酰基]-D-缬氨酸
按照与实施例3.62类似的方法制备标题化合物N-[(4′-{[(甲基氨基)羰基]氧基}-1，1′-联苯-4-基)磺酰基]-D-缬氨酸。
步骤11B：收率90％。
1H NMR(400MHz，MeOD)δppm 0.80(d，J＝8.34Hz，3H)0.87(d，J＝6.82Hz，3H)1.91-2.02(m，1H)2.71(s，3H)3.52(d，J＝5.05Hz，1H)7.11(d，J＝8.84Hz，2H)7.58(d，J＝8.84Hz，2H)7.66(d，J＝8.59Hz，2H)7.81(d，J＝8.59Hz，2H)。
实施例3.80
Figure A20048004119301022
N-[(4′-{[(1-苯并呋喃-2-基氨基)羰基]氧基}-1，1′-联苯-4-基)磺酰基]-D-缬氨酸
步骤12A：将溶解在二氯甲烷(10mL)和乙醚(20mL)中的2-(4′-羟基-联苯-4-磺酰氨基)-3-甲基-丁酸(314mg，0.9mmol)加入异氰酸苯并呋喃酯(143mg，0.9mmol，1当量)和三乙胺(363mg，3.6mmol，4当量)。在室温下搅拌混合物过夜。过滤收集从反应混合物中沉淀的固体，随后经柱层析(硅胶，5％MeOH/CH2Cl2)。以16％收率得到76mg白色固体。
1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.74-1.00(m，6H)1.90-2.07(m，1H)3.22-3.48(m，1H)6.86(d，J＝8.59Hz，2H)7.10-7.28(m，2H)7.33-7.62(m，4H)7.69-7.83(m，4H)7.86(s，1H)。
基于流程13制备实施例81和82。
实施例81
Figure A20048004119301031
D-3-甲基-苯并呋喃-2-甲酸4′-(1-羧基-2-甲基-丙基氨基磺酰基)-联苯-4-基酯
步骤13A：在氮气氛下，使D-2-(4′-羟基-联苯-4-磺酰氨基)-3-甲基-丁酸叔丁酯(305mg，0.75mmol，1当量)、3-甲基-苯并呋喃-2-甲酸(131mg，0.74mmol，1当量)、4-二甲基氨基吡啶(DMAP，95mg，0.77mmol，1当量)和1，3-二环己基碳二亚胺(DCC，240mg，1.17mmol，1.6当量)溶解在5mL二氯甲烷中的混合物在室温下反应3.5小时。常规处理和柱层析(10％EtOAc在己烷中)，以71％收率得到D-3-甲基-苯并呋喃-2-甲酸4′-(1-叔丁氧基羰基-2-甲基-丙基氨基磺酰基)-联苯-4-基酯(300mg)。NMR：G8475-101。1H NMR(400MHz，CHLOROFORM-D)δppm 0.9(d，J＝7.1Hz，3H)1.0(d，J＝6.8Hz，3H)1.2(s，9H)2.1(m，1H)2.7(s，3H)3.7(dd，J＝10.0，4.4Hz，1H)5.1(d，J＝9.9Hz，1H)7.4(m，3H)7.5(m，1H)7.6(t，J＝8.0Hz，3H)7.7(m，3H)7.9(d，J＝8.3Hz，2H)。
步骤13B：按照实施例3.62步骤11B中的方法，以定量收率除去叔丁酯。1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.8(dd，J＝12.1，6.8Hz，6H)2.0(m，1H)2.7(s，3H)3.6(dd，J＝9.2，5.9Hz，1H)7.4(t，J＝7.6Hz，1H)7.5(d，J＝8.8Hz，2H)7.6(t，J＝8.2Hz，1H)7.8(d，J＝8.3Hz，1H)7.9(m，7H)8.1(d，J＝9.3Hz，1H)。
实施例3.82
苯并呋喃-2-甲酸4′-(1-叔丁氧基羰基-2-甲基-丙基氨基磺酰基)-联苯-4-基酯
按照与实施例3.81类似的方法制备标题化合物苯并呋喃-2-甲酸4′-(1-叔丁氧基羰基-2-甲基-丙基氨基磺酰基)-联苯-4-基酯。
步骤13A：向溶解在干燥CH2Cl2(50mL)中的2-苯并呋喃甲酸(400.5mg，2.47mmol，1当量)中加入DCC(1.019g，4.94mmol，2当量)并在N2下搅拌15分钟。然后向反应混合物中加入2-(4′-羟基-联苯-4-磺酰氨基)-3-甲基-丁酸叔丁酯(1.0g，2.47mmol，1当量)，随后加入DMAP(50mg，0.41mmol)。在室温下搅拌混合物过夜。然后用CH2Cl2稀释反应混合物，用H2O和盐水洗涤。经MgSO4干燥有机层并除去溶剂，得到粗品产物。使残余物溶于EtOAc中并经柱层析(硅胶，20％EtOAc/正己烷)纯化，以30.5％收率得到G9058-53-1(325mg)。
1H NMR(400MHz，CHLOROFORM-D)δppm 0.87(d，J＝6.82Hz，3H)1.03(d，J＝6.82Hz，3H)1.21(s，9H)2.07(m，1H)3.68(dd，J＝9.85，4.55Hz，1H)5.15(d，J＝9.85Hz，1H)7.37(m，3H)7.53(t，J＝7.83Hz，1H)7.66(m，5H)7.77(m，2H)7.92(d，J＝8.34Hz，2H)。
步骤13B：使苯并呋喃-2-甲酸4′-(1-叔丁氧基羰基-2-甲基-丙基氨基磺酰基)-联苯-4-基酯(325mg)溶于二氯甲烷(15mL)中并加入TFA。在室温下搅拌溶液7小时。旋转蒸发除去溶剂并经柱层析(5-20％MeOH/EtOAc)纯化粗品产物，以76％收率得到苯并呋喃-2-甲酸4′-(1-羧基-2-甲基-丙基氨基磺酰基)-联苯-4-基酯(341mg)。
1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.80(d，J＝6.57Hz，3H)0.87(d，J＝6.82Hz，3H)2.04(m，1H)3.24(m，1H)7.43(t，J＝7.58Hz，1H)7.49(d，J＝8.84Hz，2H)7.60(t，J＝7.96Hz，1H)7.70(d，J＝9.85Hz，1H)7.85(m，7H)8.08(s，1H)。
基于流程14制备实施例3.83、3.84、3.85、3.86、3.87、3.88、3.89。
实施例3.83
3-甲基-2-[4′-(5-三氟甲基-吡啶-2-基氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-丁酸叔丁酯
步骤14A：使2-(4′-羟基-联苯-4-磺酰氨基)-3-甲基-丁酸叔丁酯(100mg，0.25mmol，1.0当量)、2-氯-5-三氟甲基吡啶(45.4mg，0.25mmol，1当量)和K2CO3(86.4mg，0.63mmol，2.5当量)在DMF(8mL)中混合，加热至110℃反应4.5小时。经TLC确定反应完成。然后使反应混合物冷却至室温，用EtOAc稀释，用盐水洗涤并经MgSO4干燥。除去溶剂后，经柱层析(硅胶，20％EtOAc/正己烷)纯化粗品产物，以74％收率得到G9058-109-1(100mg)。
1H NMR(400MHz，CHLOROFORM-D)δppm 0.80(d，J＝6.82Hz，3H)0.96(d，J＝6.82Hz，3H)1.14(s，9H)2.01(m，1H)3.61(m，1H)5.07(d，J＝9.85Hz，1H)7.03(d，J＝8.59Hz，1H)7.19(s，1H)7.21(s，1H)7.55(d，J＝8.59Hz，2H)7.62(d，J＝8.59Hz，2H)7.85(d，J＝2.02Hz，2H)7.88(d，J＝6.06Hz，1H)8.40(s，1H)。
步骤14B：使3-甲基-2-[4′-(5-三氟甲基-吡啶-2-基氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-丁酸叔丁酯(97mg)溶于CH2Cl2(6mL)中并加入TFA(2mL)。经TLC确定在6小时内反应完成。除去溶剂后，经柱层析(10％MeOH/CH2Cl2)纯化残余物，以66％收率得到3-甲基-2-[4′-(5-三氟甲基-吡啶-2-基氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-丁酸(54.5mg)。
1H NMR(400MHz，MeOD)δppm 0.81(d，J＝6.82Hz，3H)0.88(d，J＝6.82Hz，3H)1.97(m，1H)3.55(d，J＝5.31Hz，1H)7.09(d，J＝8.59Hz，1H)7.19(d，J＝8.59Hz，2H)7.68(dd，J＝14.65，8.59Hz，4H)7.83(d，J＝8.34Hz，2H)8.02(d，J＝11.37Hz，1H)8.35(d，J＝2.53Hz，1H)。
实施例3.84
3-甲基-2-[4′-(喹啉-2-基氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-丁酸叔丁酯
按照与实施例3.83类似的方法制备标题化合物3-甲基-2-[4′-(喹啉-2-基氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-丁酸叔丁酯。
步骤14A[9058-120-1]：使2-(4′-羟基-联苯-4-磺酰氨基)-3-甲基-丁酸叔丁酯(200mg，0.49mmol，1当量)、2-氯喹啉(242mg，1.48mmol，3当量)和Cs2CO3(402mg，1.235mmol，2.5当量)在DMF(8mL)中混合并在100℃下搅拌7小时。使反应混合物冷却至室温，然后置于冰浴中并加入水。过滤收集从混合物中沉淀的固体，用水洗涤。干燥后，以66％收率得到174mg黄色固体。
1H NMR(400MHz，CHLOROFORM-D)δppm 0.88(d，J＝6.82Hz，3H)1.03(d，J＝6.82Hz，3H)1.22(s，9H)2.07(m，1H)3.68(dd，J＝9.85，4.55Hz，1H)5.15(d，J＝9.85Hz，1H)7.15(d，J＝8.84Hz，1H)7.38(d，J＝8.84Hz，2H)7.45(m，1H)7.63(m，3H)7.71(d，J＝8.84Hz，2H)7.81(t，J＝8.72Hz，2H)7.91(d，J＝8.59Hz，2H)8.17(d，J＝8.34Hz，1H)。
步骤14B[9058-121-2]：使3-甲基-2-[4′-(喹啉-2-基氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-丁酸叔丁酯(164mg)溶于二氯乙烷(12mL)中，在室温下经4小时期间用TFA(4mL)水解。除去溶剂并经柱层析(洗脱剂10％MeOH/DCE)纯化，以58％收率得到3-甲基-2-[4′-(喹啉-2-基氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-丁酸(84.8mg)。
1H NMR(400MHz，MeOD)δppm 0.82(d，J＝6.82Hz，3H)0.88(d，J＝6.82Hz，3H)1.97(m，1H)3.60(d，J＝5.56Hz，1H)7.10(d，J＝8.84Hz，1H)7.25(d，J＝8.84Hz，2H)7.39(t，J＝6.82Hz，1H)7.56(t，J＝7.71Hz，1H)7.63(d，J＝0.51Hz，1H)7.65(d，J＝1.26Hz，1H)7.68(m，1H)7.69(d，J＝2.27Hz，1H)7.72(m，1H)7.74(m，1H)7.79(dd，J＝7.83，1.26Hz，1H)7.82(m，1H)7.85(m，1H)8.23(d，J＝8.84Hz，1H)。
实施例3.85
Figure A20048004119301061
N-({4′-[(5-硝基吡啶-2-基)氧基]-1，1′-联苯-4-基}磺酰基)-D-缬氨酸
按照与实施例3.83类似的方法制备标题化合物N-({4′-[(5-硝基吡啶-2-基)氧基]-1，1′-联苯-4-基}磺酰基)-D-缬氨酸。
步骤14A和14B：收率60％。
1H NMR(400MHz，MeOD)δppm 0.82(d，J＝6.82Hz，3H)0.88(d，J＝6.82Hz，3H)1.96(m，1H)3.58(d，J＝5.31Hz，1H)7.11(d，J＝9.09Hz，1H)7.22(d，J＝8.84Hz，2H)7.70(dd，J＝11.87，8.84Hz，4H)7.83(d，J＝8.59Hz，2H)8.52(dd，J＝9.09，2.78Hz，1H)8.91(d，J＝3.28Hz，1H)。
实施例3.86
N-({4′-[(2，6-二甲氧基嘧啶-4-基)氧基]-1，1′-联苯-4-基}磺酰基)-D-缬氨酸
按照与实施例3.83类似的方法制备标题化合物N-({4′-[(2，6-二甲氧基嘧啶-4-基)氧基]-1，1′-联苯-4-基}磺酰基)-D-缬氨酸。
步骤14A和14B：收率82％。
1H NMR(400MHz，MeOD)δppm 0.81(d，J＝6.82Hz，3H)0.88(d，J＝6.82Hz，3H)1.97(m，1H)3.56(d，J＝5.31Hz，1H)3.78(s，3H)3.85(s，3H)5.73(s，1H)7.18(d，J＝8.84Hz，2H)7.66(d，J＝8.84Hz，3H)7.70(d，J＝8.84Hz，3H)7.81(s，1H)7.83(s，1H)。
实施例3.87
N-({4′-[(4-氯嘧啶-2-基)氧基]-1，1′-联苯-4-基}磺酰基)-D-缬氨酸
按照与实施例3.83类似的方法制备标题化合物N-({4′-[(4-氯嘧啶-2-基)氧基]-1，1′-联苯-4-基}磺酰基)-D-缬氨酸。
步骤14A和14B：收率59％。
1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.80(d，J＝6.82Hz，3H)0.85(d，J＝6.82Hz，3H)1.97(m，1H)3.47(s，1H)7.24(d，J＝5.81Hz，1H)7.42(d，J＝8.84Hz，2H)7.87(d，7H)8.66(d，J＝5.56Hz，1H)。
实施例3.88
N-{[4′-(吡啶-2-基氧基)-1，1′-联苯-4-基]磺酰基}-D-缬氨酸
按照与实施例3.83类似的方法制备标题化合物N-{[4′-(吡啶-2-基氧基)-1，1′-联苯-4-基]磺酰基}-D-缬氨酸。
步骤14A和14B：收率83％。
1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.82(d，J＝6.82Hz，3H)0.85(d，J＝6.82Hz，3H)1.85-2.02(m，1H)3.57(dd，J＝10.48，4.67Hz，1H)7.10(d，J＝9.85Hz，1H)7.17(dd，J＝7.20，4.93Hz，1H)7.26(d，J＝8.84Hz，2H)7.79(d，J＝8.84Hz，2H)7.82-7.95(m，4H)8.09(d，J＝9.35Hz，1H)8.13-8.28(m，1H)。
实施例3.89
Figure A20048004119301082
N-{[4′-(1，3-苯并唑-2-基氧基)-1，1′-联苯-4-基]磺酰基}-D-缬氨酸
按照与实施例3.83类似的方法制备标题化合物N-{[4′-(1，3-苯并唑-2-基氧基)-1，1′-联苯-4-基]磺酰基}-D-缬氨酸。
步骤14A和14B：收率85％。
1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.82(d，J＝6.82Hz，3H)0.85(d，J＝6.82Hz，3H)1.86-2.05(m，1H)3.58(dd，J＝9.22，5.94Hz，1H)7.32(d，J＝9.35Hz，1H)7.53(d，J＝7.33Hz，1H)7.61-7.73(m，3H)7.81-7.99(m，6H)8.10(d，J＝9.35Hz，1H)。
基于流程15制备实施例3.90。
实施例3.90
N-({4′-[2-(1-苯并呋喃-2-基)-2-氧代乙基]-1，1′-联苯-4-基}磺酰基)-D-缬氨酸
步骤15A：在氮气氛下，使(4-溴苯基)-乙酸(5.0g，23.2mmol，1当量)溶于亚硫酰氯(50mL)中并加热至回流反应1小时。使溶液冷却至室温并蒸发溶剂。使因此得到的残余物溶于无水二氯甲烷中，用于步骤15B。
步骤15B：使苯并呋喃-2-基-三甲基-甲硅烷(3.4g，17.86mmol)溶于二氯甲烷(40mL)中并冷却至-78℃。在该温度下加入4-溴苯基-乙酰氯(19.65mmol，1.1当量)。剧烈搅拌下，滴加TiCl4(23mL，1M，23.2mmol，1.3当量)在CH2Cl2中的溶液并继续搅拌20分钟。然后用H2O(100mL)猝灭反应物，除去冷却浴并使混合物升至室温。然后用H2O(100mL)稀释并用CH2Cl2(3X)提取。合并有机层，用盐水洗涤，经MgSO4干燥，蒸发溶剂。使因此得到的粗品产物经柱纯化(硅胶，10％EtOAc/己烷)。以17％收率得到980mg 1-苯并呋喃-2-基-2-(4-溴-苯基)-乙酮。
1H NMR(400MHz，CHLOROFORM-D)δppm 4.34(s，2H)7.34(d，J＝8.59Hz，2H)7.44(d，1H)7.58(d，J＝8.59Hz，2H)7.62(d，J＝5.81Hz，1H)7.67(s，1H)7.71(m，1H)7.84(t，J＝6.19Hz，1H)。
步骤15C：将3-甲基-2-(4-三丁基锡烷基-苯磺酰氨基)-丁酸叔丁酯(347.5mg，0.58mmol，1.0当量)、1-苯并呋喃-2-基-2-(4-溴-苯基)-乙酮(200mg，0.64mmol，1.1当量)和Pd(PPh3)4(66mg，0.06mmol，10％)在无水甲苯(10mL)中的溶液加热至回流反应7小时。经TLC确定反应完成。旋转蒸发除去溶剂并经柱层析(硅胶，20％EtOAc/正己烷)纯化粗品产物，以20％收率得到2-[4′-(2-苯并呋喃-2-基-2-氧代-乙基)-联苯-4-磺酰氨基]-3-甲基-丁酸叔丁酯(62mg)。
1H NMR(400MHz，CHLOROFORM-D)δppm 0.79(d，J＝6.82Hz，3H)0.95(d，J＝6.82Hz，3H)1.11(s，9H)3.58(dd，J＝9.85，4.55Hz，1H)4.26(s，2H)5.05(d，J＝9.85Hz，1H)7.26(t，J＝7.07Hz，1H)7.43(m，5H)7.56(m，4H)7.65(d，J＝7.83Hz，1H)7.81(d，J＝8.59Hz，2H)。
步骤15D：使2-[4′-(2-苯并呋喃-2-基-2-氧代-乙基)-联苯-4-磺酰氨基]-3-甲基-丁酸叔丁酯(62mg)溶于无水CH2Cl2(6mL)中并加入TFA(2mL)。在室温下搅拌反应混合物3小时。除去溶剂，经柱层析(10％MeOH/CH2Cl2)纯化粗品产物，以19％收率得到2-[4′-(2-苯并呋喃-2-基-2-氧代-乙基)-联苯-4-磺酰氨基]-3-甲基-丁酸(10.7mg)。
1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.79(d，J＝6.82Hz，3H)0.84(m，J＝6.82Hz，3H)1.97(m，1H)3.33(s，1H)4.42(s，2H)7.39(t，J＝7.07Hz，1H)7.47(d，J＝8.34Hz，2H)7.57(t，J＝8.59Hz，1H)7.73(m，3H)7.83(d，4H)7.88(d，J＝8.84Hz，1H)8.13(s，1H)10.08(s，1H)。
基于流程16制备实施例3.91。
实施例3.91
Figure A20048004119301101
D-2-[4′-(苯并呋喃-2-磺酰基甲基)-联苯-4-磺酰氨基]-3-甲基-丁酸
步骤16A：按照文献方法(M.A.Abramov，W.Dehean，B.D′hooge，M.L.Petrov，S.Smeets，S.Toppet和M.Voets Tetrahedron，2000，56，3933-3940)制备起始原料2-[1，2，3]噻二唑-4-基-苯酚。在氮气氛下，使2-[1，2，3]噻二唑-4-基-苯酚(241mg，1.35mmol)、2-(4-溴甲基-苯基)-4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂硼杂环戊烷(406mg，1.37mmol，1当量)和K2CO3(396mg，2.87mmol，1.9当量)在8mL的CH3CN中混合并加热至90℃。经TLC确定反应完成后，使混合物冷却至室温并蒸发溶剂。使生成的粗品物质经柱层析(20％EtOAc/己烷)，以40％收率得到2-[4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-苄基硫基]-苯并呋喃(198mg)。NMR：G8475-125。
1H NMR(400MHz，CHLOROFORM-D)δppm 1.3(s，12H)4.1(s，2H)6.6(d，J＝1.0Hz，1H)7.2(m，4H)7.4(d，J＝7.8Hz，2H)7.7(d，J＝8.1Hz，2H)。
步骤16B：按照实施例2A步骤5B中的方法进行D-2-(4-溴-苯磺酰氨基)-3-甲基-丁酸甲酯与2-[4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-苄基硫基]-苯并呋喃的Suzuki偶合，以54％收率得到D-2-[4′-(苯并呋喃-2-基硫基甲基)-联苯-4-磺酰氨基]-3-甲基-丁酸甲酯。MR：G8475-165.1H NMR(400MHz，BENZENE-D6)δppm 0.7(d，J＝6.8Hz，3H)0.9(d，J＝6.8Hz，3H)1.9(m，1H)3.0(s，3H)4.0(m，3H)5.0(d，J＝10.1Hz，1H)6.6(d，J＝1.0Hz，1H)7.1(m，4H)7.3(m，6H)7.3(s，1H)7.4(m，1H)。
步骤16C：将D-2-[4′-(苯并呋喃-2-基硫基甲基)-联苯-4-磺酰氨基]-3-甲基-丁酸甲酯(75mg，0.15mmol，1当量)的4mL THF溶液置于冰浴中。滴加在3mL THF中的125mg MCPBA(77％，0.55mmol，3.7当量)。加入完成后，除去冰浴，使反应物升至室温并搅拌12小时。TLC表明反应完成。常规处理和柱层析(20％EtOAc/己烷)以70％收率得到D-2-[4′-(苯并呋喃-2-基磺酰基甲基)-联苯-4-磺酰氨基]-3-甲基-丁酸甲酯(56mg)。
1H NMR(400MHz，CHLOROFORM-D)□ppm 0.9(dd，J＝33.3，6.8Hz，6H)2.0(m，1H)3.4(s，3H)3.8(dd，J＝10.1，5.3Hz，1H)4.6(s，2H)5.1(d，J＝10.1Hz，1H)7.4(m，4H)7.5(m，3H)7.6(m，1H)7.7(m，3H)7.9(d，J＝8.8Hz，2H)。
步骤16D：按照实施例1A步骤1D中的方法以定量收率进行D-2-[4′-(苯并呋喃-2-基磺酰基甲基)-联苯-4-磺酰氨基]-3-甲基-丁酸甲酯的水解。1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 0.8(dd，J＝12.1，6.8Hz，6H)1.9(m，1H)3.5(dd，J＝9.3，6.1Hz，1H)5.0(s，2H)7.4(d，J＝8.3Hz，2H)7.4(m，1H)7.6(m，1H)7.7(d，J＝1.0Hz，1H)7.7(d，J＝8.3Hz，2H)7.8(m，6H)8.1(d，J＝9.1Hz，1H)。
按照流程6.63制备以下化合物(3.92和3.93)。
实施例3.92
3-甲基-2-[4′-(萘-2-基甲氧基)-3′-甲氧基-联苯-4-磺酰氨基]-丁酸。
1H NMR(400MHz，DMSO)：δ0.806(d，3H)，0.837(d，3H)，1.94(m，1H)，3.53(t，1H)，3.90(s，3H)，5.33(s，2H)，7.20(d，1H)，7.27(m，1H)，7.34(s，1H)，7.54(d，2H)，7.61(d，1H)，7.89(m，8H)；ES+m/z 518.2(M-H)；HRMS(C29H29NO6S)：
理论值；520.17884；实测值；520.17839(M+H)。
实施例3.93
Figure A20048004119301122
2-[4′-(3，5-二甲氧基-苄氧基)-3′-甲氧基-联苯-4-磺酰氨基]-3-甲基-丁酸。
1H NMR(400MHz，DMSO)：δ0.808(d，3H)，0.838(d，3H)，1.94(m，1H)，3.74(s，6H)，3.89(s，3H)，5.09(s，2H)，6.45(t，1H)，6.62(d，2H)，7.11(d，1H)，7.25(d，1H)，7.32(d，1H)，7.79(d，2H)，7.85(d，2H)，8.02(d，1H)；ES+m/z 528.2(M-H)；HRMS(C27H31NO8S)：理论值；530.18432；实测值；530.18367(M+H)。
采用在流程17中描述的方法制备以下化合物(3.94-3.111)。
实施例3.94
Figure A20048004119301123
2-(4′-羟基-3-三氟甲氧基-联苯-4-磺酰氨基)-3-甲基-丁酸。
1H NMR(400MHz，DMSO)：δ0.825(d，3H)，0.875(d，3H)，2.04(m，1H)，3.70(m，1H)，6.89(d，2H)，7.59(m，2H)，7.75(dd，1H)，7.94(d，1H)，8.16(d，1H)；ES+m/z 432.1(M-H)；HRMS(C18H18F3NO6S)：
理论值；451.11451；实测值；451.11461(M+NH4)。
实施例3.95
2-(4′-羟基-3-三氟甲基-联苯-4-磺酰氨基)-3-甲基-丁酸。
1H NMR(400MHz，DMSO)：δ0.850(m，6H)，2.02(m，1H)，3.60(m，1H)，6.90(d，2H)，7.67(d，2H)，8.10(m，3H)；ES+m/z416.0(M-H)；HRMS(C18H18F3NO5S)：
理论值；435.11960；实测值；435.11966(M+NH4)。
实施例3.96
Figure A20048004119301132
2-(4′-羟基-3-甲基-联苯-4-磺酰氨基)-3-甲基-丁酸。
1H NMR(400MHz，DMSO)：δ0.810(t，6H)，1.93(m，1H)，2.64(s，3H)，3.39(m，1H)，6.87(m，2H)，7.56(m，3H)，7.81(d，1H)，8.00(d，1H)；ES+m/z 362.1(M-H)；HRMS(C18H21NO5S)：
理论值；381.14786；实测值；381.14808(M+NH4)。
实施例3.97
2-(3-氟-4′-羟基-联苯-4-磺酰氨基)-3-甲基-丁酸。
1H NMR(400MHz，DMSO)：δ0.850(m，6H)，2.02(m，1H) 3.63(m，1H)，6.87(d，2H)，7.61(m，3H)，7.76(t，1H)，8.22(d，1H)；ES+m/z 366.0(M-H)；HRMS(C17H18FNO5S)：理论值；385.12279；实测值；385.12276(M+NH4)。
实施例3.98
Figure A20048004119301141
2-(2，5-二氟-4′-羟基-联苯-4-磺酰氨基)-3-甲基-丁酸。
1H NMR(400MHz，DMSO)：δ0.880(m，6H)，2.04(m，1H)，3.69(m，1H)，6.89(d，1H)，7.45(m，2H)，7.58(m，2H)，8.45(d，1H)；ES+m/z 384.1(M-H)；HRMS(C17H17F2NO5S)：理论值；403.1137；实测值；403.11328(M+NH4)。
实施例3.99
3-甲基-2-[4′-(萘-2-基甲氧基)-3-三氟甲基-联苯-4-磺酰氨基]-丁酸。
1H NMR(400MHz，DMSO)：δ0.900(d，3H)，0.960(d，3H)，2.06(m，1H)，3.70(d，1H)，4.19(s，2H)，6.95(d，1H)，7.43(m，6H)，7.69(s，1H)，7.75(m，3H)，7.88(m，1H)，7.97(s，1H)，8.15(d，1H)；ES+m/z 556.1(M-H)；HRMS(C29H26F3NO5S)：
理论值；558.15566；实测值；558.15484(M+H)。
实施例3.100
2-[3-氟-4′-(萘-2-基甲氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-3-甲基-丁酸。
1H NMR(400MHz，MeOH)：δ0.920(d，3H)，0.980(d，3H)，2.10(m，1H)，3.76(d，1H)，4.19(s，2H)，6.94(d，1H)，7.43(m，7H)，7.70(s，1H)，7.78(m，4H)；ES+m/z 506.1(M-H)；HRMS(C28H26FNO5S)：
理论值；508.15885；实测值；508.15818(M+H)。
实施例3.101
2-[2，5-二氟-4′-(萘-2-基甲氧基)-联苯-4-磺酰氨基]-3-甲基-丁酸。
1H NMR(400MHz，MeOH)：δ0.910(d，3H)，0.980(d，3H)，2.09(m，1H)，3.78(d，1H)，4.16(s，2H)，6.92(d，1H)，7.37(m，6H)，7.56(m，1H)，7.67(s，1H)，7.75(m，4H)；ES+m/z 524.1(M-H)；HRMS(C28H25F2NO5S)：
理论值；526.14943；实测值；526.14881(M+H)。
实施例3.102
ES+m/z 614.1(M-H)-HRMS：616.16053(M+H)+；理论值616.16114。
H NMR(400MHz，DMSO)：δ0.83(d，3H，J＝6.8Hz)，0.88(d，3H，J＝6.8Hz)，2.06(m，1H)，3.74(dd，1H，J＝5.6，10Hz)，5.18(s，2H)，5.35(d，1H，J＝10Hz)，6.92(d，2H，J＝8Hz)，7.00(d，2H，J＝8Hz)，7.07(d，2H，J＝8Hz)，7.34(d，2H，J＝8Hz)，7.61(d，2H，J＝8Hz)，7.69(s，1H)，7.79(d，2H，J＝8Hz)，7.88(m，1H)，8.02(d，1H，J＝8Hz)，8.24(m，1H)，12.70(s，1H)。
实施例3.103
ES+m/z 598.1(M-H)-HRMS：600.16554(M+H)+；理论值600.16622。
H NMR(400MHz，DMSO)：δ0.85(d，3H，J＝6.8Hz)，0.86(d，3H，J＝6.8Hz)，2.05(m，
实施例3.104
ES+m/z 564.1(M-H)-HRMS：566.13860(M+H)+；理论值566.13978。
H NMR(400MHz，DMSO)：δ0.84(d，3H，J＝6.8Hz)，0.86(d，3H，J＝6.8Hz)，2.02(m，1H)，3.57(dd，1H，J＝6，9.2Hz)，5.17(s，2H)，6.92(d，2H，J＝8Hz)，6.99(d，2H，J＝8Hz)，7.07(m，3H)，7.33(m，2H)，7.59(d，2H，J＝8Hz)，7.83(m，5H)，7.95(d，1H，J＝1.6Hz)，8.03(d，1H，J＝8Hz)，8.21(m，1H)，12.65(s，1H)。
实施例3.105
ES+m/z 590.1(M-H)-HRMS：592.16098(M+H)+；理论值592.16114。
1H NMR(400MHz，DMSO)：δ0.83(d，3H，J＝6.8Hz)，0.88(d，3H，J＝6.8Hz)，2.05(m，3H)，2.53(t，2H，J＝6Hz)，2.91(t，2H，J＝6Hz)，3.74(dd，1H，J＝5.6，10Hz)，5.28(s，2H)，6.98(m，2H)，7.60(d，2H，J＝8Hz)，7.69(s，1H)，7.85(m，4H)，8.02(d，1H，J＝8Hz)，8.25(d，1H，J＝8Hz)，12.70(s，1H)。
实施例3.106
Figure A20048004119301171
ES+m/z 574.1(M-H)-HRMS：576.16522(M+H)+；理论值576.16622。
1H NMR(400MHz，DMSO)：δ0.85(d，3H，J＝6.8Hz)，0.86(d，3H，J＝6.8Hz)，2.04(m，3H)，2.53(t，2H，J＝6Hz)，2.91(t，2H，J＝6Hz)，3.63(dd，1H，J＝6，10Hz)，5.29(s，2H)，6.98(m，2H)，7.61(d，2H，J＝8Hz)，7.85(m，3H)，8.20(m，4H)，12.70(s，1H)。
实施例3.107
Figure A20048004119301172
ES+m/z 524.1(M-H)-HRMS：526.16859(M+H)+；理论值526.16942。
1H NMR(400MHz，DMSO)：δ0.84(d，3H，J＝6.8Hz)，0.87(d，3H，J＝6.8Hz)，2.02(m，3H)，2.53(t，2H，J＝6Hz)，2.91(t，2H，J＝6Hz)，3.66(dd，1H，J＝6，9.2Hz)，5.27(s，2H)，6.98(m，2H)，7.58(d，2H，J＝8Hz)，7.70(m，1H)，7.83(m，5H)，8.30(d，1H，J＝10Hz)，12.65(s，1H)。
实施例3.108
ES+m/z 629.2(M-H)-HRMS：631.17159(M+H)+；理论值631.17204。
1H NMR(400MHz，DMSO)：δ0.83(d，3H，J＝6.8Hz)，0.88(d，3H，J＝6.8Hz)，2.07(m，1H)，2.30(s，3H)，3.74(dd，1H，J＝5.6，9.6Hz)，5.20(s，2H)，6.68(d，1H，J＝8Hz)，6.95(d，1H，J＝8Hz)，7.06(m，4H)，7.62(d，2H，J＝8Hz)，7.69(m，2H)，7.80(d，2H，J＝8Hz)，7.87(dd，1H，J＝1.6，8Hz)，8.03(d，1H，J＝8Hz)，8.25(d，2H，J＝9.2Hz)，12.70(s，1H).
实施例3.109
Figure A20048004119301182
ES+m/z 613.2(M-H)-HRMS：615.17639(M+H)+；理论值615.17712。
1H NMR(400MHz，DMSO)：δ0.85(d，3H，J＝6.8Hz)，0.87(d，3H，J＝6.8Hz)，2.05(m，1H)，2.30(s，3H)，3.63(dd，1H，J＝6，9.6Hz)，5.20(s，2H)，6.68(d，1H，J＝8Hz)，6.95(d，1H，J＝8Hz)，7.06(m，4H)，7.63(d，2H，J＝8Hz)，7.69(t，1H，J＝8Hz)，7.87(d，2H，J＝8Hz)，8.21(m，4H)，12.70(s，1H).
实施例3.110
Figure A20048004119301191
ES+m/z 563.2(M-H)-HRMS：565.18038(M+H)+；理论值565.18032。
1H NMR(400MHz，DMSO)：δ0.84(d，3H，J＝6.8Hz)，0.87(d，3H，J＝6.8Hz)，2.04(m，1H)，2.30(s，3H)，3.66(dd，1H，J＝6，9.6Hz)，5.19(s，2H)，6.68(d，1H，J＝8Hz)，6.95(d，1H，J＝8Hz)，7.06(s，4H)，7.60(d，2H，J＝8Hz)，7.70(m，2H)，7.83(m，4H)，8.31(d，1H，J＝9.2Hz)，12.70(s，1H)。
实施例3.111
ES+m/z 579.1(M-H)-HRMS：581.15050(M+H)+；理论值581.15077。
1H NMR(400MHz，DMSO)：δ0.84(d，3H，J＝6.8Hz)，0.86(d，3H，J＝6.8Hz)，2.02(m，1H)，2.30(s，3H)，3.58(dd，1H，J＝6.4，9.6Hz)，5.20(s，2H)，6.68(d，1H，J＝8Hz)，6.95(d，1H，J＝8Hz)，7.06(s，4H)，7.60(d，2H，J＝8Hz)，7.62(d，2H，J＝8Hz)，7.83(m，3H)，7.95(d，1H，J＝1.6)，8.03(d，1H，J＝8Hz)，8.22(d，1H，J＝9.6Hz)，12.70(s，1H)。
基于流程5制备实施例112、113、114。
实施例3.112
Figure A20048004119301201
3-甲基-2-[4′-(吡啶-3-基甲氧基甲基)-联苯-4-磺酰氨基]-丁酸
1H NMR(400MHz，MeOD)：δ；ES+m/z(M+H)455.1；HRMS(M+H)m/z理论值455.16352；实测值；455.16317；(C24H26N2O5S)。
实施例3.113
3-甲基-2-[4′-(萘-2-基甲氧基甲基)-联苯-4-磺酰氨基]-丁酸
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ0.85(d，3H)，0.95(d，3H)，2.10(m，1H)，3.83(m，1H)，4.63(s，2H)，4.74(s，2H)，5.25(bs，1H)，7.44-7.55(m，7H)，7.65(d，2H)，7.82-7.90(m，6H)；ES+m/z(M-H)502.1；HRMS(M+H)m/z
理论值504.18392；实测值；504.18503；(C29H29NO5S)。
实施例3.114
3-甲基-2-[4′-(吡啶-3-基甲氧基甲基)-联苯-4-磺酰氨基]-丁酸
1H NMR(400MHz，DMSO)：δ0.81(d，3H)，0.84(d，3H)，1.95(m，1H)，3.55(dd，1H)，4.56(s，2H)，4.63(d，2H)，7.44(d，2H)，7.50(d，1H)，7.70(d，2H)，7.74(d，1H)，7.84(m，4H)，8.08(m，2H)；ES+m/z(M+H)455.1；HRMS(M+H)m/z
理论值455.16352；实测值；455.16290；(C24H26N2O5S)。
实施例4：使用本发明的联芳基磺酰胺化合物抑制ADAMTS-5聚集蛋白聚糖酶的活性：
测试本发明联芳基磺酰胺化合物抑制ADAMTS-4(Agg-1)和ADAMTS-5(Agg-2)的聚集蛋白聚糖酶活性的能力。结果显示在以下表1中，其显示了以μM表示的抑制所述酶50％聚集蛋白聚糖酶活性的化合物浓度(IC50)。这些化合物从对ADAMTS-5的效力由低至高列表，最后的是最有效的。
                       表1
Figure A20048004119301231
采用连续实验，其中Agg-1和Agg-1作用的底物为含有被能量传递猝灭的荧光基团的合成肽。所述肽被聚集蛋白聚糖酶的裂解导致荧光大幅度增加。比较所述反应的初始速率与含有联芳基磺酰胺化合物的反应初始速率，以评价所述化合物的抑制效力。
在所述实验中的酶源为纯化的重组人聚集蛋白聚糖酶-2。更具体地讲，所采用的形式为Ag2t-Phe628-Strep(MW＝41,737)。该形式相对于所述全长酶被截短，并含有亲和标记。该酶的等分试样在-80℃下保存于25mM Tris(pH8.0)、100mM NaCl、5mM CaCl2、10μMZnCl2、10％甘油中。
所述实验中的底物按照聚集蛋白聚糖酶-2的一种天然底物短小蛋白聚糖的部分设计。该肽，称为WAKB-5，含有荧光基团2-氨基苯甲酰基(Abz)，其通过将能量传递至2，4-二硝基苯基(Dnp)基而猝灭。WAKB-5(质量＝1740)由AnaSpec，Inc.(San Jose，CA)委托合成，基于HPLC分析纯度＞95％。WAKB-5具有序列Abz-TESESRGAIY-Dap(Dnp)-KK-NH2。所述底物的储备液用MilliQ水制备，在-80℃下贮藏等分试样。该底物储备液的浓度在354nm下采用消光系数测定的分光光度为18，172M-1cm-1。测定出该酶/底物反应的Vmax和Km对最高达至少10％(v/v)的DMSO不敏感。
所述实验缓冲液(pH7.4)由50mM Hepes、100mM NaCl、5mMCaCl2、0.1％CHAPS、5％甘油组成。黑聚苯乙烯96-孔或38-孔板的每孔中包含由实验缓冲液、纯化Agg-2(用实验缓冲液稀释)和各种浓度的抑制剂(通过在96-孔聚丙烯板中用DMSO连续稀释制备)组成的反应物。然后将所述板在室温下温育10分钟。通过加入底物至25μM终浓度并通过用移液管上下吸取混合，引发酶促反应。在加入底物后立即用荧光板读出器测定室温下所述裂解反应的初始速率。
对于96-孔板中具有4％最终DMSO浓度和0.5μg/ml最终酶浓度(在大多数情况下合适的浓度)的100μl反应，详细方法如下：(1)在实验中所述化合物在96-孔聚丙烯板中用100％DMSO稀释至25X最终浓度，(2)Agg-2用实验缓冲液稀释至2.083X最终浓度(即1.04μg/ml)，(3)然后向孔中加入48.0μl的2.083X Agg-2，(4)将4.0μl的25X化合物转移至实验板并将这些试剂混合，(5)于室温下将板温育10分钟，(6)用实验缓冲液将底物稀释至52.075μM(2.083X最终浓度)，(7)预温育10分钟后，加入48.0μl的2.083X底物并充分混合这些试剂，(8)室温下在激发为316nm、带宽12nm和发射为432nm，带宽12nm的Tecan Safire上用荧光板读出器立即监测反应。
通过产生各样品RFU对时间的图进行结果分析。这用作反应的“渐进曲线”。然后测定渐进曲线最线性部分的斜率。该斜率(RFU/分钟)用作反应的初始速率。然后抑制剂浓度对初始裂解速率的图拟合于以下方程：y＝Vmax*(1-(xn/(Kn+xn)))，其中x＝抑制剂浓度，y＝初始速率，Vmax＝不存在抑制剂时的初始速率，n＝斜率因子，K＝抑制曲线的IC50。因此测定在表1中显示的IC50计算结果。
实施例5：使用本发明抗-ADAMTS-5抗体抑制ADAMTS-5聚集蛋白聚糖酶的活性：
测试本发明的抗-ADAMTS-5抗体抑制ADAMTS-4(Agg-1)和ADAMTS-5(Agg-2)的聚集蛋白聚糖酶活性的能力。结果显示在表2中，其显示了针对重组人ADAMTS-5产生的四种单克隆抗体的性质，它们在ELISA中显示与ADAMTS-5具有反应性，但与ADAMTS-4或牛血清蛋白(BSA)没有。通过蛋白质印迹分析鉴定，所有抗体识别rhADAMTS-5。
                                                表2
克隆   ELISA全长RhADAMTS-5   ELISA截短的RhADAMTS-5   ELISA全长RhADAMTS-5   ELISA截短RhADAMTS-5   ELISA全长RhADAMTS-4   ELISA全长RhADAMTS-5   ELISA全长RhADAMTS-4   ELISABSA   Western印迹   Western印迹
  6/01/03   6/01/03   6/11/03   6/11/03   6/11/03   6/12/03   6/12/03   BSA   6/25还原   6/26非还原
  17   2.522   2.645   3.194   3.348   0.067   3.758   0.115   0.094   +   +
  18   2.432   2.666   3.107   3.406   0.043   3.839   0.291   0.122   +   +
  34   2.589   2.654   3.258   3.328   0.068   3.786   0.207   0.064   +   +
  41   2.622   2.627   3.422   3.538   0.276   4.000   0.374   0.104   +   +
虽然已经描述了认为的本发明优选实施方案，本领域技术人员将认识到，可对其作出其它和进一步的改进，例如以适合各种条件或其它要求，而不背离以下权利要求定义的本发明精神。

Claims (40)

1.一种治疗疾病困扰对象中的ADAMTS-5相关疾病的方法，所述方法包括给予所述对象抑制ADAMTS-5的药物。
2.权利要求1的方法，其中所述药物抑制ADAMTS-5的金属蛋白酶活性。
3.权利要求1的方法，其中所述药物抑制ADAMTS-5的聚集蛋白聚糖酶活性。
4.权利要求1的方法，其中ADAMTS-5相关疾病选自骨关节炎、癌症、哮喘、慢性阻塞性肺疾病(“COPD”)、动脉粥样硬化、与年龄有关的黄斑变性、心肌梗塞、角膜溃疡和其它眼表面疾病、肝炎、主动脉瘤、腱炎、中枢神经系统疾病、异常伤口愈合、血管生成、再狭窄、肝硬变、多发性硬化症、肾小球肾炎、移植物抗宿主病、糖尿病、炎性肠病、休克、椎间盘变性、中风、骨质减少、类风湿性关节炎和其它形式的关节炎及牙周病。
5.权利要求3或4的方法，其中所述疾病为骨关节炎。
6.权利要求5的方法，其中所述药物选自抗ADAMTS-5抗体和联芳基磺酰胺化合物。
7.权利要求6的方法，其中所述联芳基磺酰胺化合物为式I的化合物：
Figure A2004800411930002C1
其中：
R1为H或者C1-C6烷基；
R2为H、C1-C6烷基、(CH2)nR2′、苯基或者苄基；
n为0-6；
R2′为芳基、杂芳基、环烷基或者杂环烷基；
R3每次出现时独立为H、卤素、OC(卤素)3、C(卤素)3、烷氧基或者C1-C6烷基；
X选自CH2O、OCH2、C(R3)＝C(R3)、C(R3)2-C(R3)2、CH2NHC(＝O)、O(C＝O)NH、O、C(＝O)CH2、SO2CH2C(＝O)NH、SO2NH、OC(＝O)、CH2S(O)和CH2S(O)2；
Z为至少一个芳基或者杂芳基部分。
8.权利要求7的方法，其中Z为吡啶、嘧啶、哌嗪、哒嗪、苯基、萘、呋喃、噻吩、吡咯、吡唑、咪唑、唑、异唑、噻唑、苯并噻唑、喹啉或者异喹啉，或者
Figure A2004800411930003C1
其中：
U选自S、O、C(R3)＝C(R3)、C(R3)＝N和N(R4)；
W选自C(R3)和N；
M选自C(R3)和N；
L选自S、O、C(R3)＝C(R3)、C(R3)＝N和N(R4)；
R4和R5每次出现时独立为连接至其它的键、H、C1-C6烷基或者苯基；
R7选自连接R3的键、H、卤素、C(卤素)3、NR4R5、N[(CH2)2]2O、N[(CH2)2]2NR4、NHSO2R4、NR4C(＝O)R5、NHC(＝O)OR4、NO2、SO2NR4R5、SO2R4、OR4、C(＝O)R4、COOR4、CONR4R5、CN、苯基、杂芳基、C1-C6烷基、C2-C6烯基或者C2-C6炔基；
R8选自H、苯基、杂芳基和C1-C6烷基。
9.权利要求8的方法，其中R7被NR4R5、N[(CH2)2]2O、N[(CH2)2]2NR4、NHSO2R4、NR4C(＝O)R5、NHC(＝O)OR4、NO2、SO2NR4R5、SO2R4、OR8、C(＝O)R4、COOR4、CONR4R5、CN、苯基或杂芳基取代。
10.权利要求8的方法，其中R8被NR4R5、N[(CH2)2]2O、N[(CH2)2]2NR4、NR4SO2R5、NR4C(＝O)R5、NHC(＝O)OR4、NO2、SO2NR4R5、SO2R4、C(＝O)R4、COOR4、CONR4R5、CN、苯基或杂芳基取代。
11.权利要求7的方法，其中R1为H或者支链烷基。
12.权利要求7的方法，其中R1为异丙基。
13.权利要求7的方法，其中R3为卤素、CF3、OCH3或者CH3。
14.权利要求7的方法，其中X为CH2O、OCH2、C(R3)＝C(R3)或者CH2NHC(＝O)。
15.权利要求7的方法，其中R7为CH3、乙基、异丙基、CF3、CN或者OCH3。
16.权利要求7的方法，其中R8为CH3、苯基和苄基。
17.权利要求7的方法，其中Z为双环。
18.一种鉴定用于治疗ADAMTS-5相关疾病的潜在药物的方法，所述方法包括使ADAMTS-5与所述潜在药物接触并测定所述潜在药物存在时的ADAMTS-5活性，其中活性减少表明所述潜在药物对治疗所述疾病有用。
19.权利要求18的方法，其中所述活性选自金属蛋白酶活性和聚集蛋白聚糖酶活性。
20.权利要求18或19的方法，其中ADAMTS-5在细胞中，所述活性在细胞中测量。
21.权利要求20的方法，所述方法进一步包括使缺乏ADAMTS-5的细胞与所述潜在药物接触，测量缺乏ADAMTS-5的细胞中的活性，并将所述活性与具有ADAMTS-5的细胞的活性比较。
22.权利要求18的方法，其中ADAMTS-5相关疾病选自骨关节炎、癌症、哮喘、慢性阻塞性肺疾病(“COPD”)、动脉粥样硬化、与年龄有关的黄斑变性、心肌梗塞、角膜溃疡和其它眼表面疾病、肝炎、主动脉瘤、腱炎、中枢神经系统疾病、异常伤口愈合、血管生成、再狭窄、肝硬变、多发性硬化症、肾小球肾炎、移植物抗宿主病、糖尿病、炎性肠病、休克、椎间盘变性、中风、骨质减少和牙周病。
23.权利要求18的方法，其中ADAMTS-5相关疾病为骨关节炎。
24.一种调节ADAMTS-5活性的方法，所述方法包括使ADAMTS-5与式I化合物接触：
Figure A2004800411930005C1
其中：
R1为H或者C1-C6烷基；
R2为H、C1-C6烷基、(CH2)nR2′、苯基或者苄基；
n为0-6；
R2′为芳基、杂芳基、环烷基或者杂环烷基；
R3每次出现时独立为H、卤素、OC(卤素)3、C(卤素)3、烷氧基或者C1-C6烷基；
X选自CH2O、OCH2、C(R3)＝C(R3)、C(R3)2-C(R3)2、CH2NHC(＝O)、O(C＝O)NH、O、C(＝O)CH2、SO2CH2C(＝O)NH、SO2NH、OC(＝O)、CH2S(O)和CH2S(O)2；
Z为至少一个芳基或者杂芳基部分。
25.权利要求24的方法，其中Z为吡啶、嘧啶、哌嗪、哒嗪、苯基、萘、呋喃、噻吩、吡咯、吡唑、咪唑、唑、异唑、噻唑、苯并噻唑、喹啉或者异喹啉，或者
其中：
U选自S、O、C(R3)＝C(R3)、C(R3)＝N和N(R4)；
W选自C(R3)和N；
M选自C(R3)和N；
L选自S、O、C(R3)＝C(R3)、C(R3)＝N和N(R4)；
R4和R5每次出现时独立为连接至其它的键、H、C1-C6烷基或者苯基；
R7选自连接R3的键、H、卤素、C(卤素)3、NR4R5、N[(CH2)2]2O、N[(CH2)2]2NR4、NHSO2R4、NR4C(＝O)R5、NHC(＝O)OR4、NO2、SO2NR4R5、SO2R4、OR4、C(＝O)R4、COOR4、CONR4R5、CN、苯基、杂芳基、C1-C6烷基、C2-C6烯基或者C2-C6炔基；
R8选自H、苯基、杂芳基和C1-C6烷基。
26.权利要求25的方法，其中R7被NR4R5、N[(CH2)2]2O、N[(CH2)2]2NR4、NHSO2R4、NR4C(＝O)R5、NHC(＝O)OR4、NO2、SO2NR4R5、SO2R4、OR8、C(＝O)R4、COOR4、CONR4R5、CN、苯基或杂芳基取代。
27.权利要求25的方法，其中R8被NR4R5、N[(CH2)2]2O、N[(CH2)2]2NR4、NR4SO2R5、NR4C(＝O)R5、NHC(＝O)OR4、NO2、SO2NR4R5、SO2R4、C(＝O)R4、COOR4、CONR4R5、CN、苯基或杂芳基取代。
28.权利要求24的方法，其中R1为H或者支链烷基。
29.权利要求24的方法，其中R1为异丙基。
30.权利要求24的方法，其中R3为卤素、CF3、OCH3或者CH3。
31.权利要求24的方法，其中X为CH2O、OCH2、C(R3)＝C(R3)或者CH2NHC(＝O)。
32.权利要求24的方法，其中R7为CH3、乙基、异丙基、CF3、CN或者OCH3。
33.权利要求24的方法，其中R8为CH3、苯基和苄基。
34.权利要求24的方法，其中Z为双环。
35.权利要求24的方法，其中所述活性为金属蛋白酶活性。
36.权利要求35的方法，其中所述活性为聚集蛋白聚糖酶活性。
37.权利要求7或24的方法，其中所述化合物选自表1中列出的化合物。
38.权利要求1或18的方法，其中所述药物为抗ADAMTS-5抗体。
39.权利要求38的方法，其中所述抗体具有金属蛋白酶抑制活性。
40.权利要求39的方法，其中所述抗体具有聚集蛋白聚糖酶抑制活性。
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