CN1720034A - 诱导末期分化的方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供选择性诱导瘤性细胞的末期分化、细胞生长终止和/或细胞凋亡的方法，和/或抑制组蛋白脱乙酰酶(HDAC)的方法，该方法给以包含有力的HDAC抑制剂的药物组合物。本发明药物组合物中活性化合物的口服生物利用度之高是惊人的。而且，这些药物组合物意外地引起活性化合物长时间维持较高的、治疗上有效的血液水平。本发明进一步提供这些药物组合物安全的每日服药制度，这种制度是容易实行的，实现HDAC抑制剂的体内治疗有效量。

Description

诱导末期分化的方法

相关申请的交叉参考

本申请要求保护2002年3月4日提交的美国临时申请No.60/361,759的利益。该临时申请的全部教导内容结合在此作为参考。

政府权益的声明

本发明是全部或部分借助政府支持而作出的，National CancerInstitute的授权编号为1R21 CA 096228-01。在本发明中政府可享有一定的权利。

发明领域

本发明提供选择性诱导瘤性细胞的末期分化、细胞生长终止和/或细胞凋亡的方法，和/或抑制组蛋白脱乙酰酶(HDAC)的方法，该方法给以包含HDAC抑制剂的药物组合物。药物组合物的口服制剂具有可取的药动学属性，例如生物利用度高，惊人地引起活性化合物长时间维持较高的血液水平。

发明背景

遍及本申请的多份出版物用括号内的阿拉伯数字表示。在说明书的结尾、紧邻权利要求书之前可以找到对这些出版物的全部引用。这些出版物的全部公开内容结合在本申请中作为参考，目的是更加充分地描述本发明所属领域的现状。

癌症是这样一种障碍，其中细胞群在不同程度上变为对正常支配增殖和分化的控制机理无应答。多年来对癌症的化学治疗存在两种主要策略：a)通过干扰性激素的产生或外周作用而阻滞激素-依赖性肿瘤细胞增殖；和b)通过暴露于细胞毒性物质而直接杀死癌细胞，所述物质既损伤瘤性、也损伤正常细胞群。

癌症疗法还尝试诱导瘤性细胞的末期分化(1)。在细胞培养物模型中，细胞暴露于多种刺激物而分化，所述刺激物包括：环AMP和视黄酸(2，3)、阿柔比星和其他蒽环(4)。

尽管在肿瘤学领域取得很多进展，不过多数实体肿瘤在晚期阶段仍然是不可治愈的。在大多数情况下采用细胞毒性疗法，不过，这经常导致患者显著的发病，没有显著的临床益处。治疗和控制晚期恶性肿瘤的低毒性与特异性药物是有待开发的。

有充分证据表明，瘤性转化没有必然破坏癌细胞分化的潜力(1，5，6)。有很多肿瘤细胞不响应于正常的增殖调节剂，似乎在它们的分化程序表达中被阻滞，也能被诱导分化和停止复制。有多种药物，包括一些相对简单的极性化合物(5，7-9)、维生素D与视黄酸的衍生物(10-12)、类固醇激素(13)、生长因子(6，14)、蛋白酶(15，16)、肿瘤启动子(17，18)和DNA或RNA合成抑制剂(4，19-24)，能够诱导多种转化细胞系和原代人肿瘤外植体表达更加分化的特征。

早期研究鉴别了一系列极性化合物，它们是有效的大量转化细胞系分化诱导剂(8，9)。其中，最有效的诱导剂是杂合的极性/非极性化合物N，N’-六亚甲基双乙酰胺(HMBA)(9)。这种极性/非极性化合物诱导鼠红白血病细胞(MELC)经历红细胞分化伴以致瘤性抑制的应用已经证实是一种可用于研究诱导剂-介导的转化细胞分化的模型(5，7-9)。HMBA-诱导的MELC末期红细胞分化是一种多步骤过程。一旦在培养物中向MELC(745A-DS19)加入HMBA，检测到投身末期分化之前的潜伏期为10至12小时。投身被定义为细胞表达末期分化的能力，与诱导剂的除去无关(25)。一旦持续暴露于HMBA，存在细胞的进行性募集而分化。本发明人已经报道了耐受于相对低水平长春新碱的MELC细胞系变为明显更敏感于HMBA的诱导作用，能够被诱导分化，没有或者有很短的潜伏期(26)。

HMBA能够在多种细胞系中诱导与分化一致的表型变化(5)。已经在鼠红白血病细胞系统(MELC)中最为广泛地研究了药物-诱导的效果的特征(5，25，27，28)。MELC的分化诱导作用既是时间依赖性的也是浓度依赖性的。在大多数细胞株中证明体外有效所需的最小浓度为2至3mM；诱导实质性比例(＞20％)的群体分化而无持续药物暴露一般所需的最小连续暴露持续时间为约36小时。

HMBA的主要作用靶是未知的。有证据表明，蛋白激酶C参与诱导剂-介导的分化途径(29)。体外研究为评价HMBA在人类癌症治疗中的细胞分化剂潜力提供了基础(30)。HMBA的若干I期临床试验业已完成(31-36)。临床试验显示，这种化合物能够诱导癌症患者的治疗性应答(35，36)。不过，这些I期临床试验也证明，HMBA的潜在功效在部分程度上受到剂量-相关性毒性的限制，这妨碍达到最佳的血液水平，还受到大量药物长时间静脉内给药的需要的限制。

据报道，大量与极性基团被非极性键分开的HMBA相关的化合物在摩尔基础上是有活性的(37)或者活性比HMBA高100倍(38)。不过，作为一类化合物，已经发现对称的二聚物、例如HMBA和相关的化合物，不是最佳的细胞分化剂。

已经意外地发现，最佳的化合物包含两个被柔性亚甲基链分开的极性末端基团，其中一个或两个极性末端基团是大型疏水性基团。优选地，极性末端基团是不同的，只有一个是大型疏水性基团。这些化合物意外地活性比HMBA高一千倍，比HMBA相关性化合物高十倍。

组蛋白脱乙酰酶抑制剂属于此类药物，例如辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)，它们具有诱导肿瘤细胞生长终止、分化和/或细胞凋亡的能力(39)。这些化合物针对瘤性细胞变为恶性的能力所固有的机理，因为它们似乎在有效抑制动物肿瘤生长的剂量下不具有毒性(40)。有若干条证据线索表明，组蛋白乙酰化和脱乙酰化是实现细胞转录调节的机理(41)。这些效果被认为是这样发生的，通过改变核小体中组蛋白对螺旋DNA的亲和性，引起染色质的结构变化。在核小体中已经鉴别到五种类型的组蛋白(称为H1、H2A、H2B、H3和H4)。每一核小体在其核心内含有每种组蛋白类型各两个，H1除外，它单独存在于核小体结构的外部区域。据信当组蛋白乙酰化过低时，组蛋白对DNA磷酸盐主链的亲和性更大。这种亲和性导致DNA被紧密键合于组蛋白，使DNA不易受到转录调节性元件和机构的影响。乙酰化状态的调节是通过两种酶复合物之间的活性平衡而发生的，即组蛋白乙酰转移酶(HAT)和组蛋白脱乙酰酶(HDAC)。乙酰化过低状态被认为抑制有关DNA的转录。这种乙酰化过低状态受到包括HDAC酶在内的大型多蛋白复合物的催化。确切而言，已经显示HDAC催化乙酰基从染色质核心组蛋白上的除去。

HDAC受到SAHA的抑制被认为是通过对酶催化性位点的直接相互作用而发生的，这得到X-射线结晶学研究的证明(42)。HDAC抑制的结果不被相信对基因组具有泛化的效果，而是仅仅影响一小部分基因组(43)。由采用与HDAC抑制剂培养的恶性细胞系的DNA微量矩阵所提供的证据显示，存在有限(1-2％)数量的基因，它们的产物被改变。例如，在培养物中用HDAC抑制剂处理的细胞显示细胞周期蛋白-依赖性激酶抑制剂p21的一致性诱导作用(44)。这种蛋白质在细胞周期终止中扮演重要角色。HDAC抑制剂被认为通过传播p21基因区域中组蛋白的乙酰化过高状态而增加p21转录的速率，从而使该基因易受转录机构的影响。其表达不受HDAC抑制剂影响的基因在区域性相关组蛋白的乙酰化作用上没有显示变化(45)。

有若干情形已经显示，在恶性表型的发展中牵涉有HAT或HDAC活性的破坏。例如，在急性前髓细胞性白血病中，由PML与RARα的融合所产生的致癌蛋白似乎抑制特异性基因通过HDAC募集的转录(46)。按照这种方式，瘤性细胞不能完成分化，引起白细胞系的过度增殖。

颁给一些本发明人的美国专利No.5,369,108、5,932,616、5,700,811、6,087,367和6,511,990公开了可用于选择性诱导瘤性细胞末期分化的化合物，这些化合物具有两个被柔性亚甲基链或刚性苯基分开的极性末端基团，其中一个或两个极性末端基团是大型疏水性基团。一些化合物在与第一疏水性基团相同的分子末端具有另外的大型疏水性基团，这进一步增加分化活性，在酶学测定法中增加约100倍，在细胞分化测定法中增加约50倍。合成用在本发明方法和药物组合物中的化合物的方法已完全描述在上述专利中，其完整内容结合在此作为参考。

上述专利没有公开HDAC抑制剂的具体口服制剂或者所述化合物的具体剂量和服药规程。重要的是上述专利没有公开具有可取药动学属性的口服制剂，例如较高的生物利用度，这会引起活性化合物长时间维持较高的血液水平。

本发明化合物种类可以用于选择性诱导瘤性细胞的末期分化，因此有助于患者肿瘤的治疗。因而，迫切需要发现适合于这些化合物的剂量和服药规程，开发制剂，优选口服制剂，它们引起活性化合物长时间维持稳态的治疗上有效的血液水平。

发明概述

本发明提供产生能够体内抑制受治疗者组蛋白脱乙酰酶的组蛋白脱乙酰酶(HDAC)抑制剂平均血浆浓度达给药后至少两小时的方法，该方法包含对所述受治疗者给以有效量的药物组合物，所述组合物包含HDAC抑制剂或其药学上可接受的盐或水合物和药学上可接受的载体或稀释剂。

本发明还提供选择性诱导瘤性细胞的末期分化、细胞生长终止和/或细胞凋亡、从而抑制这类细胞增殖的方法，和通过产生能够体内抑制受治疗者组蛋白脱乙酰酶(HDAC)的组蛋白脱乙酰酶抑制剂平均血浆浓度达给药后至少两小时而诱导肿瘤细胞分化的方法，该方法对所述受治疗者给以有效量的药物组合物，所述组合物包含HDAC抑制剂或其药学上可接受的盐或水合物和药学上可接受的载体或稀释剂。

本发明进一步提供在受治疗者体内产生至少约10nM的辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)平均血浆浓度达给药后至少两小时的方法，该方法包含对所述受治疗者给以有效量的药物组合物，所述组合物包含SAHA或其药学上可接受的盐或水合物和药学上可接受的载体或稀释剂。

本发明还提供选择性诱导瘤性细胞的末期分化、细胞生长终止和/或细胞凋亡、从而抑制这类细胞增殖的方法，和在受治疗者体内产生至少10nM的SAHA平均血浆浓度达给药后至少两小时而诱导肿瘤细胞分化的方法，该方法对所述受治疗者给以有效量的药物组合物，所述组合物包含SAHA或其药学上可接受的盐或水合物和药学上可接受的载体或稀释剂。

本发明提供适合于口服给药的药物组合物，该组合物包含可用于选择性诱导瘤性细胞的末期分化、细胞生长终止和/或细胞凋亡的化合物，和/或该化合物是有力的组蛋白脱乙酰酶(HDAC)抑制剂。药物组合物进一步包含微晶纤维素、交联羧甲基纤维素钠和硬脂酸镁。本发明还提供口服给药用药物组合物，所述组合物包含SAHA、微晶纤维素、交联羧甲基纤维素钠和硬脂酸镁。本发明制剂中活性化合物的口服生物利用度之高是惊人的。而且，这些制剂意外地引起活性化合物长时间维持较高的、治疗上有效的血液水平。本发明进一步提供这些制剂安全的每日服药制度，这种制度是容易实行和坚持的。

正如本文所证明的，已经惊人地和意外地发现，包含HDAC抑制剂、确切为辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)的口服制剂具有非常高的活性化合物体内总体口服生物利用度。此外，这些制剂引起活性化合物维持较高的血液水平，意外地高达较长时间，例如直至10-12小时。本发明口服制剂具有很多优点，尤其在与肠胃外制剂比较时，一方面它们提供较高的、稳定的和延长的治疗上有效的HDAC抑制剂血液水平，另一方面容易借助任意常规的口服给药方式对患者给药。

因此，本发明提供口服给药用药物组合物，所述组合物包含组蛋白脱乙酰酶(HDAC)抑制剂或其药学上可接受的盐或水合物和药学上可接受的载体或稀释剂；其中该组合物提供有效体内抑制组蛋白脱乙酰酶(HDAC)的HDAC抑制剂平均血浆浓度达给药后至少2小时。在优选的实施方式中，HDAC抑制剂的浓度有效抑制HDAC达给药后至少10小时。

在优选的实施方式中，本发明提供口服给药用药物组合物，所述组合物包含SAHA或其药学上可接受的盐或水合物和药学上可接受的载体或稀释剂；其中该组合物提供有效体内抑制组蛋白脱乙酰酶(HDAC)的SAHA平均血浆浓度达给药后至少2小时。在优选的实施方式中，SAHA的浓度有效抑制HDAC达给药后至少10小时。

本发明制剂可用于选择性诱导瘤性细胞的末期分化、细胞生长终止和/或细胞凋亡，因此有助于患者肿瘤的治疗。

因此，本发明还提供选择性诱导受治疗者中瘤性细胞的末期分化、从而抑制受治疗者这类细胞增殖的方法，所述方法包含对该受治疗者口服给以有效量的药物组合物的步骤，所述组合物包含组蛋白脱乙酰酶(HDAC)抑制剂或其药学上可接受的盐或水合物和药学上可接受的载体或稀释剂；其中该组合物提供有效体内抑制组蛋白脱乙酰酶(HDAC)的HDAC抑制剂平均血浆浓度达给药后至少2小时。

此外，本发明还提供选择性诱导受治疗者中瘤性细胞的细胞生长终止、从而抑制受治疗者这类细胞增殖的方法，所述方法包含对该受治疗者口服给以有效量的药物组合物的步骤，所述组合物包含组蛋白脱乙酰酶(HDAC)抑制剂或其药学上可接受的盐或水合物和药学上可接受的载体或稀释剂；其中该组合物提供有效体内抑制组蛋白脱乙酰酶(HDAC)的HDAC抑制剂平均血浆浓度达给药后至少2小时。

此外，本发明还提供选择性诱导受治疗者中瘤性细胞的细胞凋亡、从而抑制受治疗者这类细胞增殖的方法，所述方法包含对该受治疗者口服给以有效量的药物组合物的步骤，所述组合物包含组蛋白脱乙酰酶(HDAC)抑制剂或其药学上可接受的盐或水合物和药学上可接受的载体或稀释剂；其中该组合物提供有效体内抑制组蛋白脱乙酰酶(HDAC)的HDAC抑制剂平均血浆浓度达给药后至少2小时。

此外，本发明还提供诱导患有肿瘤的受治疗者中肿瘤细胞分化的方法，所述方法包含对该受治疗者口服给以有效量的药物组合物的步骤，所述组合物包含组蛋白脱乙酰酶(HDAC)抑制剂或其药学上可接受的盐或水合物和药学上可接受的载体或稀释剂；其中该组合物提供有效体内抑制组蛋白脱乙酰酶(HDAC)的HDAC抑制剂平均血浆浓度达给药后至少2小时。

此外，本发明还提供抑制受治疗者组蛋白脱乙酰酶活性的方法，所述方法包含对该受治疗者口服给以有效量的药物组合物的步骤，所述组合物包含组蛋白脱乙酰酶(HDAC)抑制剂或其药学上可接受的盐或水合物和药学上可接受的载体或稀释剂；其中该组合物提供有效体内抑制组蛋白脱乙酰酶(HDAC)的HDAC抑制剂平均血浆浓度达给药后至少2小时。

此外，本发明还提供选择性诱导受治疗者中瘤性细胞的末期分化、细胞生长终止和/或细胞凋亡、从而抑制受治疗者这类细胞增殖的方法，所述方法包含对该受治疗者给以有效量的药物组合物的步骤，所述组合物包含SAHA或其药学上可接受的盐或水合物；其中该组合物提供有效体内抑制组蛋白脱乙酰酶(HDAC)的SAHA平均血浆浓度达给药后至少2小时。

此外，本发明还提供诱导患有肿瘤的受治疗者中肿瘤细胞分化的方法，所述方法包含对该受治疗者给以有效量的药物组合物的步骤，所述组合物包含SAHA或其药学上可接受的盐或水合物；其中该组合物提供有效体内抑制组蛋白脱乙酰酶(HDAC)的SAHA平均血浆浓度达给药后至少2小时。

此外，本发明提供抑制受治疗者组蛋白脱乙酰酶活性的方法，所述方法包含对该受治疗者口服给以有效量的药物组合物的步骤，所述组合物包含SAHA或其药学上可接受的盐或水合物和药学上可接受的载体或稀释剂；其中该组合物提供有效体内抑制组蛋白脱乙酰酶(HDAC)的SAHA平均血浆浓度达给药后至少2小时。

在优选的实施方式中，SAHA或任意HDAC抑制剂对患者给药的总每日剂量在25-4000mg/m²之间。在另一种优选的实施方式中，SAHA或任意HDAC抑制剂对患者给药的总每日剂量为200mg。SAHA或任意HDAC抑制剂对患者给药的总每日剂量为400mg。

在一种优选的实施方式中，组合物提供能够抑制组蛋白脱乙酰酶的HDAC抑制剂(例如SAHA)平均血浆浓度达给药后至少2小时，优选地浓度为至少约10nM。在另一种优选的实施方式中，组合物提供至少约10nM的HDAC抑制剂平均血浆浓度达给药后至少10小时。

在一种优选的实施方式中，组合物提供HDAC抑制剂(例如SAHA)的这样一种平均血浆浓度，所述浓度能够选择性诱导瘤性细胞的末期分化、细胞生长终止和/或细胞凋亡，或者能够诱导肿瘤中的肿瘤细胞分化，其中该浓度在给药后维持至少2小时，优选地浓度为至少约2.5μM。在另一种优选的实施方式中，组合物提供至少约2.5μM的HDAC抑制剂平均血浆浓度达给药后至少10小时。

本发明组合物可以配制成适合于口服给药的任意单元剂型(液体或固体)，例如颗粒剂、片剂、包衣片、胶囊剂、明胶胶囊剂、溶液、悬液或分散体。在优选的实施方式中，组合物是明胶胶囊剂的形式。

在本发明制剂中可以使用任意普遍用作载体或稀释剂的惰性赋形剂，例如树胶、淀粉、糖、纤维素材料、丙烯酸酯或其混合物。优选的稀释剂是微晶纤维素。组合物可以进一步包含崩解剂(例如交联羧甲基纤维素钠)和润滑剂(例如硬脂酸镁)，另外可以包含一种或多种添加剂，选自粘合剂、缓冲剂、蛋白酶抑制剂、表面活性剂、增溶剂、增塑剂、乳化剂、稳定剂、粘度增加剂、甜味剂、成膜剂或其任意组合。此外，本发明组合物可以是控释制剂或即时释放制剂的形式。

多种HDAC抑制剂都适合用在本发明组合物中。在优选的实施方式中，HDAC抑制剂是辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)。

其他适合用在本发明组合物中的HDAC抑制剂的非限制性实例有：

由下列结构代表的Pyroxamide：

由下列结构代表的化合物：

其中R₃和R₄独立地是取代或未取代的直链或支链烷基、链烯基、环烷基、芳基、烷氧基、芳氧基、芳基烷氧基或吡啶基，或者R₃和R₄一起键合构成哌啶基；R₂是羟氨基；n是整数5至约8；

由下列结构代表的化合物：

其中R是取代或未取代的苯基、哌啶、噻唑、2-吡啶、3-吡啶或4-吡啶；n是整数约4至约8；

由下列结构代表的化合物：

其中A是酰胺部分；R₁和R₂各自选自取代或未取代的芳基(例如苯基)、芳基烷基(例如苄基)、萘基、吡啶氨基、9-嘌呤-6-氨基、噻唑氨基、芳氧基、芳基烷氧基、吡啶基、喹啉基或异喹啉基；R₄是氢、卤素、苯基或环烷基部分；n是整数3至10。

此外，按照本发明的具体实施方式，提供了口服给药用药物组合物，所述组合物包含组蛋白脱乙酰酶(HDAC)抑制剂或其药学上可接受的盐或水合物；微晶纤维素作为载体或稀释剂；交联羧甲基纤维素钠作为崩解剂；和硬脂酸镁作为润滑剂；其中该组合物提供有效体内抑制组蛋白脱乙酰酶的HDAC抑制剂平均血浆浓度达给药后至少2小时。在优选的实施方式中，HDAC抑制剂是辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)。

此外，按照本发明的具体实施方式，提供了口服给药用药物组合物，所述组合物包含辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)或其药学上可接受的盐或水合物；微晶纤维素作为载体或稀释剂；交联羧甲基纤维素钠作为崩解剂；和硬脂酸镁作为润滑剂；其中该组合物提供有效体内抑制组蛋白脱乙酰酶的HDAC抑制剂平均血浆浓度达给药后至少2小时。在另一种优选的实施方式中，组合物包含50-70重量％的SAHA或其药学上可接受的盐或水合物；20-40重量％的微晶纤维素作为载体或稀释剂；5-15重量％的交联羧甲基纤维素钠作为崩解剂；和0.1-5重量％的硬脂酸镁作为润滑剂。在另一种优选的实施方式中，组合物包含约50-200mg的SAHA。在特别优选的实施方式中，组合物是明胶胶囊剂的形式。

本发明进一步提供这些制剂安全的每日服药制度，这种制度是容易实行的和坚持的。本发明制剂可用于选择性诱导瘤性细胞的末期分化、细胞生长终止和/或细胞凋亡，因此有助于患者肿瘤的治疗。

附图的简要说明

本发明的上述和其他目的、特征和优点将因下列优选的发明实施方式的更加详尽说明而显而易见，如附图所述，其中同样的索引字符在不同的图例中表示相同的部分。附图没有必要很精确，重点是阐述发明的原理即可。

图1是蛋白质印迹图(顶栏)，显示SAHA口服或静脉内(IV)给药后患者血浆中的乙酰化组蛋白-4(α-AcH4)含量。IV SAHA的给药是200mg输注两小时。口服SAHA的给药是单一的200mg胶囊。在所示时间点显示α-AcH4含量。底栏：考马斯蓝染剂。

图2是蛋白质印迹图(顶栏)，显示SAHA口服或静脉内(IV)给药后实体肿瘤患者血浆中的乙酰化组蛋白-4(α-AcH4)含量。IV和口服SAHA的给药同图1。在所示时间点显示α-AcH4含量。实验一式两份(图2A和图2B)。底栏：考马斯蓝染剂。

图3是蛋白质印迹图(顶栏)，显示在第1天和第21天SAHA口服或静脉内(IV)给药后患者血浆中的乙酰化组蛋白-4(α-AcH4)(图3A)和乙酰化组蛋白-3(α-AcH3)(图3B-E)的含量。IV和口服SAHA的给药同图1。在所示时间点显示α-AcH4或α-AcH3含量。底栏：考马斯蓝染剂。

图4是蛋白质印迹图(顶栏)，显示SAHA口服或静脉内(IV)给药后实体肿瘤患者血浆中的乙酰化组蛋白-3(α-AcH3)含量。IV和口服SAHA的给药同图1。在所示时间点显示α-AcH3含量。底栏：考马斯蓝染剂。

图5是蛋白质印迹图(顶栏)，显示SAHA口服或静脉内(IV)给药后患者血浆中的乙酰化组蛋白-3(α-AcH3)含量。IV SAHA的给药是400mg输注两小时。口服SAHA的给药是单一的400mg胶囊。在所示时间点显示α-AcH4含量。实验一式三份(图5A和B)。底栏：考马斯蓝染剂。

图6是蛋白质印迹图(顶栏)，显示SAHA口服或静脉内(IV)给药后实体肿瘤患者血浆中的乙酰化组蛋白-3(α-AcH3)含量。IV和口服SAHA的给药同图5。在所示时间点显示α-AcH3含量。底栏：考马斯蓝染剂。

图7是蛋白质印迹图(顶栏)，显示在第1天和第21天SAHA口服或静脉内(IV)给药后实体肿瘤患者血浆中的乙酰化组蛋白-3(α-AcH3)含量。IV和口服SAHA的给药同图4。在所示时间点显示α-AcH4或α-AcH3含量。实验一式三份(图7A-C)。底栏：考马斯蓝染剂。

图8是蛋白质印迹图(顶栏)，显示SAHA口服或静脉内(IV)给药后患者血浆中的乙酰化组蛋白-3(α-AcH3)含量。IV和口服SAHA的给药同图5。在所示时间点显示α-AcH3含量。底栏：考马斯蓝染剂。

图9A-C显示SAHA在给药后所示时间点的平均血浆浓度(ng/ml)。图9A：第8天禁食下的口服剂量(200mg和400mg)。图9B：第9天进食下的口服剂量。图9C：第1天的IV剂量。

图10显示第8、9和22天SAHA 200mg和400mg口服剂量的表观半衰期。

图11显示第8、9和22天SAHA 200mg和400mg口服剂量的AUC(ng/ml/hr)。

图12显示第8、9和22天SAHA 200mg和400mg口服剂量后的生物利用度。

发明的详细说明

本发明提供产生能够体内抑制受治疗者组蛋白脱乙酰酶的组蛋白脱乙酰酶(HDAC)抑制剂平均血浆浓度达给药后至少两小时的方法，该方法包含对所述受治疗者给以有效量的药物组合物，所述组合物包含HDAC抑制剂或其药学上可接受的盐或水合物和药学上可接受的载体或稀释剂。

本发明还提供选择性诱导瘤性细胞的末期分化、细胞生长终止和/或细胞凋亡、从而抑制这类细胞增殖的方法，和通过产生能够体内抑制受治疗者组蛋白脱乙酰酶(HDAC)的组蛋白脱乙酰酶抑制剂平均血浆浓度达至少两小时而诱导肿瘤细胞分化的方法，该方法对所述受治疗者给以有效量的药物组合物，所述组合物包含HDAC抑制剂或其药学上可接受的盐或水合物和药学上可接受的载体或稀释剂。

本发明进一步提供在受治疗者体内产生至少约10nM的辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)平均血浆浓度达给药后至少两小时的方法，该方法包含对所述受治疗者给以有效量的药物组合物，所述组合物包含SAHA或其药学上可接受的盐或水合物和药学上可接受的载体或稀释剂。

本发明还提供选择性诱导瘤性细胞的末期分化、细胞生长终止和/或细胞凋亡、从而抑制这类细胞增殖的方法，和在受治疗者体内产生至少10nM的SAHA平均血浆浓度达给药后至少两小时而诱导肿瘤细胞分化的方法，该方法对所述受治疗者给以有效量的药物组合物，所述组合物包含SAHA或其药学上可接受的盐或水合物和药学上可接受的载体或稀释剂。

本发明提供适合于口服给药的药物组合物，该组合物包含可用于选择性诱导瘤性细胞的末期分化、细胞生长终止和/或细胞凋亡的化合物，和/或该化合物是有力的组蛋白脱乙酰酶(HDAC)抑制剂。药物组合物进一步包含微晶纤维素、交联羧甲基纤维素钠和硬脂酸镁。本发明还提供口服给药用药物组合物，所述组合物包含SAHA、微晶纤维素、交联羧甲基纤维素钠和硬脂酸镁。本发明制剂中活性化合物的口服生物利用度之高是惊人的。而且，这些制剂意外地引起活性化合物长时间维持较高的、治疗上有效的血液水平。本发明进一步提供这些制剂安全的每日服药制度，这种制度是容易实行和坚持的。

本发明制剂中活性化合物的口服生物利用度之高是惊人的。而且，这些制剂意外地引起活性化合物长时间维持较高的、治疗上有效的血液水平。本发明进一步提供这些制剂安全的每日服药制度，这种制度是容易实行的，实现所述化合物的体内治疗有效量。本发明制剂可用于选择性诱导瘤性细胞的末期分化、细胞生长终止和/或细胞凋亡，因此有助于患者肿瘤的治疗。

正如本文所证明的，由本发明所提供的药物组合物产生一种初始平均血浆浓度(也就是在制剂给药后立即获得的浓度)，该浓度意外地长时间维持较高水平。与具有相同剂量的肠胃外制剂(例如IV制剂)相比，其中活性化合物几乎立即被清除，口服组合物长时间保持活性化合物的较高平均血浆浓度达至少2小时，但是更通常为至少10或12小时。通常，口服制剂的平均血浆浓度不下降至初始平均血浆浓度的50％以下长达12小时甚至更长。

直到本发明的发现以前，本文所述HDAC抑制剂的静脉内给药被证实是最有效的。化合物的静脉内给药必须是长时间连续进行的，也就是每天，例如至少3天，优选多于5天。这显然为接受这种治疗的患者带来沉重的负担。本发明的意外与惊人发现使配制口服剂型成为可能，所述剂型引起活性化合物维持较高的体内稳态水平，无需通过IV输注连续给药，为接受治疗的患者提供巨大的便利。

因此，本发明提供口服给药用药物组合物，所述组合物包含组蛋白脱乙酰酶(HDAC)抑制剂或其药学上可接受的盐或水合物和药学上可接受的载体或稀释剂；其中该组合物提供有效体内抑制组蛋白脱乙酰酶(HDAC)的HDAC抑制剂平均血浆浓度达给药后至少2小时。在优选的实施方式中，HDAC抑制剂的浓度有效抑制HDAC达给药后至少8小时。在另一种优选的实施方式中，HDAC抑制剂的浓度有效抑制HDAC达给药后至少10小时。在另一种优选的实施方式中，HDAC抑制剂的浓度有效抑制HDAC达给药后至少12小时。

在优选的实施方式中，本发明提供口服给药用药物组合物，所述组合物包含SAHA或其药学上可接受的盐或水合物和药学上可接受的载体或稀释剂；其中该组合物提供有效体内抑制组蛋白脱乙酰酶(HDAC)的SAHA平均血浆浓度达给药后至少2小时。在优选的实施方式中，SAHA的浓度有效抑制HDAC达给药后至少8小时。在另一种优选的实施方式中，SAHA的浓度有效抑制HDAC达给药后至少10小时。在另一种优选的实施方式中，SAHA的浓度有效抑制HDAC达给药后至少12小时。

本发明制剂可用于选择性诱导瘤性细胞的末期分化、细胞生长终止和/或细胞凋亡，因此有助于患者肿瘤的治疗。

因此，本发明还提供选择性诱导受治疗者中瘤性细胞的末期分化、从而抑制受治疗者这类细胞增殖的方法，包含产生能够体内抑制受治疗者组蛋白脱乙酰酶的HDAC抑制剂平均血浆浓度达给药后至少两小时，所述方法对所述受治疗者给以有效量的药物组合物，所述组合物包含HDAC抑制剂或其药学上可接受的盐或水合物和药学上可接受的载体或稀释剂。

此外，本发明还提供选择性诱导受治疗者中瘤性细胞的细胞生长终止、从而抑制受治疗者这类细胞增殖的方法，包含产生能够体内抑制受治疗者组蛋白脱乙酰酶的HDAC抑制剂平均血浆浓度达给药后至少两小时，所述方法对所述受治疗者给以有效量的药物组合物，所述组合物包含HDAC抑制剂或其药学上可接受的盐或水合物和药学上可接受的载体或稀释剂。

此外，本发明还提供选择性诱导受治疗者中瘤性细胞的细胞凋亡、从而抑制受治疗者这类细胞增殖的方法，包含产生能够体内抑制受治疗者组蛋白脱乙酰酶的HDAC抑制剂平均血浆浓度达给药后至少两小时，所述方法对所述受治疗者给以有效量的药物组合物，所述组合物包含HDAC抑制剂或其药学上可接受的盐或水合物和药学上可接受的载体或稀释剂。

此外，本发明还提供诱导患有肿瘤的受治疗者中肿瘤细胞分化的方法，产生能够体内抑制受治疗者组蛋白脱乙酰酶的HDAC抑制剂平均血浆浓度达给药后至少两小时，所述方法对所述受治疗者给以有效量的药物组合物，所述组合物包含HDAC抑制剂或其药学上可接受的盐或水合物和药学上可接受的载体或稀释剂。

此外，本发明还提供抑制受治疗者组蛋白脱乙酰酶活性的方法，包含产生能够体内抑制受治疗者组蛋白脱乙酰酶的HDAC抑制剂平均血浆浓度达给药后至少两小时，所述方法对所述受治疗者给以有效量的药物组合物，所述组合物包含HDAC抑制剂或其药学上可接受的盐或水合物和药学上可接受的载体或稀释剂。

此外，本发明还提供选择性诱导受治疗者中瘤性细胞的末期分化、细胞生长终止和/或细胞凋亡、从而抑制受治疗者这类细胞增殖的方法，包含产生能够体内抑制受治疗者组蛋白脱乙酰酶的SAHA平均血浆浓度达给药后至少两小时，所述方法对所述受治疗者给以有效量的药物组合物，所述组合物包含SAHA或其药学上可接受的盐或水合物和药学上可接受的载体或稀释剂。

此外，本发明还提供选择性诱导受治疗者中瘤性细胞的末期分化、细胞生长终止和/或细胞凋亡、从而抑制受治疗者这类细胞增殖的方法，包含产生受治疗者体内至少10nM的SAHA平均血浆浓度达给药后至少两小时，所述方法对所述受治疗者给以有效量的药物组合物，所述组合物包含SAHA或其药学上可接受的盐或水合物和药学上可接受的载体或稀释剂。

此外，本发明还提供诱导患有肿瘤的受治疗者中肿瘤细胞分化的方法，包含产生能够体内抑制受治疗者组蛋白脱乙酰酶的SAHA平均血浆浓度达给药后至少两小时，所述方法对所述受治疗者给以有效量的药物组合物，所述组合物包含SAHA或其药学上可接受的盐或水合物和药学上可接受的载体或稀释剂。

此外，本发明还提供诱导患有肿瘤的受治疗者中肿瘤细胞分化的方法，包含产生受治疗者体内至少10nM的SAHA平均血浆浓度达给药后至少两小时，所述方法对所述受治疗者给以有效量的药物组合物，所述组合物包含SAHA或其药学上可接受的盐或水合物和药学上可接受的载体或稀释剂。

此外，本发明提供抑制受治疗者组蛋白脱乙酰酶活性的方法，包含产生能够体内抑制受治疗者组蛋白脱乙酰酶的SAHA平均血浆浓度达给药后至少两小时，所述方法对所述受治疗者给以有效量的药物组合物，所述组合物包含SAHA或其药学上可接受的盐或水合物和药学上可接受的载体或稀释剂。

此外，本发明提供抑制受治疗者组蛋白脱乙酰酶活性的方法，包含产生受治疗者体内至少10nM的SAHA平均血浆浓度达给药后至少两小时，所述方法对所述受治疗者给以有效量的药物组合物，所述组合物包含SAHA或其药学上可接受的盐或水合物和药学上可接受的载体或稀释剂。

在另一种优选的实施方式中，组合物提供能够抑制组蛋白脱乙酰酶的HDAC抑制剂(例如SAHA)平均血浆浓度达给药后至少2小时，优选地浓度为至少约10nM。在另一种实施方式中，组合物提供至少约10nM的HDAC抑制剂平均血浆浓度达给药后至少8小时。在另一种实施方式中，组合物提供至少约10nM的HDAC抑制剂平均血浆浓度达给药后至少10小时。在另一种实施方式中，组合物提供至少约10nM的HDAC抑制剂平均血浆浓度达给药后至少12小时。平均血浆浓度的非限制性实例有约10nM、25nM、40nM、45nM、50nM、100nM、1μM、2μM、2.5μM、5μM、10μM、25μM、50μM、100μM等。对本领域技术人员应当显而易见的是，这些剂量决不限制本发明的范围，任意能够抑制组蛋白脱乙酰酶的平均血浆浓度都是适合的。

在一种优选的实施方式中，组合物提供能够选择性诱导瘤性细胞的末期分化、细胞生长终止和/或细胞凋亡、或者诱导肿瘤中肿瘤细胞分化的HDAC抑制剂(例如SAHA)平均血浆浓度，其中该浓度在给药后维持至少2小时，优选地浓度为至少约2.5μM。在另一种实施方式中，组合物提供至少约2.5μM的HDAC抑制剂平均血浆浓度达给药后至少8小时。在另一种实施方式中，组合物提供至少约2.5μM的HDAC抑制剂平均血浆浓度达给药后至少10小时。在另一种实施方式中，组合物提供至少约2.5μM的HDAC抑制剂平均血浆浓度达给药后至少12小时。平均血浆浓度的非限制性实例有约10nM、25nM、40nM、45nM、50nM、100nM、1μM、2μM、2.5μM、5μM、10μM、25μM、50μM、100μM等。对本领域技术人员应当显而易见的是，这些剂量决不限制本发明的范围，任意能够诱导瘤性细胞的末期分化、细胞生长终止和/或细胞凋亡的平均血浆浓度都是适合的。

在另一种优选的实施方式中，组合物提供有效诱导患有肿瘤的受治疗者中肿瘤细胞分化的HDAC抑制剂(例如SAHA)平均血浆浓度，其中该浓度在对该受治疗者给药后维持至少2小时。在另一种优选的实施方式中，组合物提供有效诱导患有肿瘤的受治疗者中肿瘤细胞分化的HDAC抑制剂平均血浆浓度，其中该浓度在对该受治疗者给药后维持至少8小时。在另一种优选的实施方式中，组合物提供有效诱导患有肿瘤的受治疗者中肿瘤细胞分化的HDAC抑制剂平均血浆浓度，其中该浓度在对该受治疗者给药后维持至少10小时。平均血浆浓度的非限制性实例有约10nM、25nM、40nM、45nM、50nM、100nM、1μM、2μM、2.5μM、5μM、10μM、25μM、50μM、100μM等。对本领域技术人员应当显而易见的是，这些剂量决不限制本发明的范围，任意能够诱导肿瘤中肿瘤细胞分化的平均血浆浓度都是适合的。

本发明方法适合于体外和体内实施。如果这些方法是体外实施的，通过温育细胞和化合物，可以进行接触。与细胞接触的化合物的浓度应当从约1nM至约25mM，例如从约10nM至约1mM、从约40nM至约0.5mM。具体剂量的非限制性实例有10nM、25nM、40nM、45nM、50nM、100nM、1μM、2μM、2.5μM、5μM、10μM、25μM、50μM、100μM等。浓度依赖于个别的化合物和瘤性细胞的状态。

尽管本发明方法可以是体外实施的，不过选择性诱导瘤性细胞的末期分化、细胞生长终止和/或细胞凋亡的方法的优选实施方式将包含体内与细胞接触，也就是将化合物对需要治疗的隐匿有瘤性细胞或肿瘤细胞的受治疗者给药。

本发明方法还可以包含最初对受治疗者给以一种抗肿瘤剂，以便赋予受治疗者瘤性细胞对抗肿瘤剂的耐受性，随后给以有效量的任意本发明组合物，有效地选择性诱导这类细胞的末期分化、细胞生长终止和/或细胞凋亡。

抗肿瘤剂可以是大量化疗剂中的一种，例如烷基化剂、抗代谢产物、激素试剂、抗生素、秋水仙碱、长春花属生物碱、L-天冬酰胺酶、丙卡巴肼、羟基脲、米托坦、亚硝基脲或咪唑甲酰胺。适合的试剂是那些促进微管蛋白去极化的试剂。优选地，抗肿瘤剂是秋水仙碱或长春花属生物碱；尤其优选的是长春花碱和长春新碱。在抗肿瘤剂是长春新碱的实施方式中，优选地这样处理细胞，以便它们耐受于浓度约5mg/ml的长春新碱。处理细胞以赋予它们对抗肿瘤剂的耐受性可以这样进行，使细胞与试剂接触至少3至5天。所得细胞与任意上述化合物的接触是如前人所述进行的。除了上述化疗剂以外，化合物还可以与放射疗法一起给药。

本发明还提供治疗以瘤性细胞增殖为特征的肿瘤患者的方法，该方法包含对该患者给以有效量的任意上述本发明组合物，有效地选择性诱导这类瘤性细胞的末期分化，从而抑制它们的增殖。

本发明方法打算用于人类肿瘤患者的治疗。不过，该方法在其他哺乳动物肿瘤的治疗中同样也将是有效的。术语肿瘤打算包括任意由瘤性细胞增殖所导致的癌症，例如肺癌、急性淋巴性骨髓瘤、何杰金氏淋巴瘤、非何杰金氏淋巴瘤、膀胱黑瘤、肾癌、乳腺癌、前列腺癌、卵巢癌或结肠直肠癌。

药物组合物的给药可以按单元剂量进行，可以每天一次、每天两次、每天三次等口服给药。当前优选的实施方式是每日一次给药、每日两次给药和每日三次给药。

组蛋白脱乙酰酶和组蛋白脱乙酰酶抑制剂

本文所用的术语组蛋白脱乙酰酶(HDAC)是催化乙酰基从核小体核心组蛋白氨基末端中赖氨酸残基中除去的酶。因此，HDAC与组蛋白乙酰转移酶(HAT)一起调节组蛋白的乙酰化状态。组蛋白乙酰化作用影响基因表达，HDAC抑制剂、例如异羟肟酸类杂合极性化合物辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)体外诱导转化细胞的生长终止、分化和/或细胞凋亡，体内抑制肿瘤生长。基于结构同源性，HDAC可以分为三类。第I类HDAC(HDAC1、2、3和8)怀有与酵母RPD3蛋白的相似性，位于核中，见于与转录辅阻遏物有关的复合体中。第II类HDAC(HDAC4、5、6、7和9)与酵母HDA1蛋白相似，既有核定位性，也有胞质亚细胞定位性。第I和II类HDAC都受到异羟肟酸类HDAC抑制剂的抑制，例如SAHA。第III类HDAC构成结构上疏远的一类NAD依赖性酶，它们与酵母SIR2蛋白相关，不受异羟肟酸类HDAC抑制剂所抑制。

本文所用的术语组蛋白脱乙酰酶抑制剂或HDAC抑制剂是能够体内、体外或体内与体外抑制组蛋白脱乙酰化的化合物。因此，HDAC抑制剂抑制至少一种组蛋白脱乙酰酶的活性。作为抑制至少一种组蛋白脱乙酰化的结果，出现乙酰化组蛋白的增加，乙酰化组蛋白的蓄积是适合于评估HDAC抑制剂活性的生物学标志。因此，能够测定乙酰化组蛋白蓄积的工艺能够用于测定有关化合物的HDAC抑制活性。可以理解的是，能够抑制组蛋白脱乙酰酶活性的化合物也能够与其他底物结合，因此能够抑制其他生物活性分子，例如酶。也可以理解的是，本发明化合物能够抑制任意上述组蛋白脱乙酰酶或任意其他组蛋白脱乙酰酶。

例如，在接受HDAC抑制剂的患者中，可以比照合适的对照测定乙酰化组蛋白在用HDAC抑制剂处理的外周单核细胞以及组织中的蓄积。

可以体外测定特定化合物的HDAC抑制活性，例如采用显示至少一种组蛋白脱乙酰酶抑制作用的酶测定法。进而，乙酰化组蛋白在用特定组合物处理的细胞中的蓄积可以是化合物HDAC抑制活性的测定指标。

乙酰化组蛋白蓄积的测定法是文献所熟知的。例如参见Marks，P.A.et al.，J.Natl.Cancer Inst.，92：1210-1215，2000，Butler，L.M.et al.，Cancer Res.60：5165-5170(2000)，Richon，V.M.et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.，USA，95：3003-3007，1998和Yoshida，M.et al.，J.Biol.Chem.，265：17174-17179，1990。

例如，测定组蛋白脱乙酰酶抑制剂化合物活性的酶测定法可以如下进行。简而言之，HDAC抑制剂化合物对经过亲和性纯化的人表位-标记(Flag)HDAC1的效果可以这样测定，在没有底物的存在下，将酶制备物与所示量抑制剂化合物在冰上温育约20分钟。加入底物([³H]-乙酰基-标记的鼠红白血病组蛋白)，将样本在37℃下温育20分钟，总体积为30μL。然后使反应停止，提取所释放的乙酸盐，借助闪烁计数测定所释放的放射性。可用于测定组蛋白脱乙酰酶抑制剂化合物活性的替代测定法是″HDAC Fluorescent Activity Assay；Drug DiscoveryKit-AK-500″，可从BIOMOLResearch Laboratories，Inc.，PlymouthMeeting，PA获得。

体内研究可以如下进行。向动物、例如小鼠腹膜内注射HDAC抑制剂化合物。在给药后预定时间分离所选定的组织，例如脑、脾、肝等。从组织中分离组蛋白，基本上如Yoshida et al.，J.Biol.Chem.265：17174-17179，1990所述。将等量组蛋白(约1μg)在15％SDS-聚丙烯酰胺凝胶上电泳，转移至Hybond-P滤器(可从Amersham获得)。将滤器用3％乳封闭，用兔纯化多克隆抗-乙酰化组蛋白H4抗体(αAc-H4)和抗乙酰化组蛋白H3抗体(αAc-H3)(Upstate Biotechnology，Inc.)探查。利用辣根过氧化物酶-缀合的山羊抗-兔抗体(1∶5000)和SuperSignal化学发光底物(Pierce)使乙酰化组蛋白水平可视化。作为组蛋白的加载对照，进行平行的凝胶电泳，用考马斯蓝(CB)染色。

另外，已经显示异羟肟酸类HDAC抑制剂增量调节p21^WAF1基因的表达。利用标准方法，在多种转化细胞中在与HDAC抑制剂培养2小时内诱导p21^WAF1蛋白。p21^WAF1基因的诱导与乙酰化组蛋白在这种基因的染色质区域中的蓄积有关。p21^WAF1的诱导因此可以被视为参与转化细胞中由HDAC抑制剂所导致的G1细胞周期终止。

通常，HDAC抑制剂分为五大类：1)异羟肟酸衍生物；2)短链脂肪酸(SCFA)；3)环状四肽；4)苯甲酰胺；和5)亲电性酮。

因而，本发明在其广泛的范围内包括包含HDAC抑制剂的组合物，所述抑制剂是1)异羟肟酸衍生物；2)短链脂肪酸(SCFA)；3)环状四肽；4)苯甲酰胺；5)亲电性酮；和/或任意其他类能够抑制组蛋白脱乙酰酶的化合物，用于抑制组蛋白脱乙酰酶，诱导瘤性细胞的末期分化，和/或诱导肿瘤中肿瘤细胞的分化。

这类HDAC抑制剂的实例包括但不限于：

A.异羟肟酸衍生物，例如辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)(Richon etal.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 95，3003-3007(1998))；间-羧基肉桂酸双异羟肟酰胺(CBHA)(Richon et al.，supra)；pyroxamide；曲古柳菌素类似物，例如曲古柳菌素A(TSA)和曲古柳菌素C(Koghe et al.1998.Biochem.Pharmaeol.56：1359-1364)；水杨基异羟肟酸(SBHA)(Andrews et al.，International J.Parasitology 30，761-768(2000))；辛二酰双异羟肟酸(SBHA)(美国专利No.5,608,108)；壬二酰双异羟肟酸(ABHA)(Andrews et al.，supra)；壬二酰-1-异羟肟酸-9-酰苯胺(AAHA)(Qiu et al.，Mol.Biol.Cell 11，2069-2083(2000))；6-(3-氯苯脲基)己酰异羟肟酸(3Cl-UCHA)；oxamflatin((2E)-5-[3-[(苯磺酰基)氨基]苯基]-戊-2-烯-4-炔基异羟肟酸)(Kim et al.Oncogene，18：2461-2470(1999))；A-161906，Scriptaid(Su et al.2000 Cancer Research，60：3137-3142)；PXD-101(Prolifix)；LAQ-824；CHAP；MW2796(Andrews et al.，supra)；MW2996(Andrews et al.，supra)；或者公开在美国专利No.5,369,108、5,932,616、5,700,811、6,087,367和6,511,990中的任何异羟肟酸。

B.环状四肽，例如trapoxin A(TPX)-环状四肽(环-(L-苯丙氨酰-L-苯丙氨酰-D-哌啶甲酰-L-2-氨基-8-氧代-9，10-环氧癸醇))(Kijima etal.，J Biol.Chem.268，22429-22435(1993))；FR901228(FK 228，depsipeptide)(Nakajima et al.，Ex.Cell Res.241，126-133(1998))；FR225497环状四肽(H.Mori et al.，PCT申请WO 00/08048(17 Feb.2000))；apicidin环状四肽(环-(N-O-甲基-L-色氨酰-L-异亮氨酰-D-哌啶甲酰-L-2-氨基-8-氧代癸酰))(Darkin-Rattray et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 93，13143-13147(1996))；apicidin Ia、apicidin Ib、apicidin Ic、apicidin IIa和apicidin IIb(P.Dulski et al.，PCT申请WO 97/11366)；CHAP，HC-毒素环状四肽(Bosch et al.，Plant Cell 7，1941-1950(1995))；WF27082环状四肽(PCT申请WO 98/48825)；和chlamydocin(Bosch etal.，supra)。

C.短链脂肪酸(SCFA)衍生物，例如丁酸钠(Cousens et al.，J.Biol.Chem.254，1716-1723(1979))；异戊酸盐(McBain et al.，Biochem.Pharm.53：1357-1368(1997))；戊酸盐(McBain et al.，supra)；4-苯基丁酸盐(4-PBA)(Lea and Tulsyan，Anticancer Research，15，879-873(1995))；苯基丁酸盐(PB)(Wang et al.，Cancer Research，59，2766-2799(1999))；丙酸盐(McBain et al.，supra)；丁酰胺(Lea and Tulsyan，supra)；异丁酰胺(Lea and Tulsyan，supra)；苯基乙酸盐(Lea and Tulsyan，supra)；3-溴丙酸盐(Lea and Tulsyan，supra)；甘油三丁酸酯(Guan et al.，Cancer Research，60，749-755(2000))；丙戊酸和丙戊酸盐。

D.苯甲酰胺衍生物，例如CI-994；MS-27-275(N-(2-氨基苯基)-4-[N-(吡啶-3-基甲氧羰基)氨基甲基]苯甲酰胺)(Saito et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 96，4592-4597(1999))；和MS-27-275的3’-氨基衍生物(Saito et al.，supra)。

E.亲电性酮衍生物，例如三氟甲基酮(Frey et al，Bioorganic &Med.Chem.Lett.(2002)，12，3443-3447；U.S.6,511,990)和α-酮基酰胺，例如N-甲基-α-酮基酰胺。

F.其他HDAC抑制剂，例如depudecin(Kwon et al.1998.PNAS 95：3356-3361)。

优选的异羟肟酸类HDAC抑制剂是辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)、间-羧基肉桂酸双异羟肟酸酯(CBHA)和pyroxamide。已经显示SAHA直接结合在组蛋白脱乙酰酶的催化部位。SAHA诱导培养物中转化细胞的细胞周期终止、分化和/或细胞凋亡，抑制啮齿动物中肿瘤生长。SAHA在实体肿瘤和血液学癌症中都有效地诱导这些效应。已经显示SAHA有效地抑制动物肿瘤生长，对动物没有毒性。SAHA-诱导的肿瘤生长抑制与乙酰化组蛋白在肿瘤中的蓄积有关。SAHA有效地抑制致癌物-诱导的(N-甲基亚硝基脲)大鼠乳房肿瘤的发育和持续生长。在进行研究的130天中，将SAHA在饲料中对大鼠给药。因而，SAHA是一种无毒的、口服有活性的抗肿瘤剂，它的作用机理牵涉组蛋白脱乙酰酶活性的抑制。

优选的HDAC抑制剂是公开在颁给一些本发明人的美国专利No.5,369,108、5,932,616、5,700,811、6,087,367和6,511,990中的那些，其全部内容结合在此作为参考，这些抑制剂的非限制性实例如下所述。

因而，在一种实施方式中，本发明提供药物组合物，所述组合物包含由式1结构代表的化合物或其药学上可接受的盐或水合物和药学上可接受的载体或赋形剂。

其中R₁和R₂可以是相同或不同的；当R₁和R₂是相同的时，各自是取代或未取代的芳基氨基、环烷基氨基、吡啶氨基、哌啶子基、9-嘌呤-6-胺或噻唑氨基；当R₁和R₂是不同的时，R₁＝R₃-N-R₄，其中每个R₃和R₄独立地是彼此相同或不同的，是氢原子、羟基、取代或未取代的直链或支链烷基、链烯基、环烷基、芳基、烷氧基、芳氧基、芳基烷氧基或吡啶基，或者R₃和R₄一起键合构成哌啶基，R₂是羟氨基、羟基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基或烷氧基；n是整数约4至约8。

在确切的式1实施方式中，R₁和R₂是相同的，是取代或未取代的噻唑氨基；n是整数约4至约8。

在另一种实施方式中，本发明提供药物组合物，所述组合物包含由式2结构代表的化合物或其药学上可接受的盐或水合物和药学上可接受的载体或赋形剂。

其中每个R₃和R₄独立地是彼此相同或不同的，是氢原子、羟基、取代或未取代的直链或支链烷基、链烯基、环烷基、芳基烷氧基、芳氧基、芳基烷氧基或吡啶基，或者R₃和R₄一起键合构成哌啶基，R₂是羟氨基、羟基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基或烷氧基；n是整数约4至约8。

在确切的式2实施方式中，每个R₃和R₄独立地是彼此相同或不同的，是氢原子、羟基、取代或未取代的直链或支链烷基、链烯基、环烷基、芳基、烷氧基、芳氧基、芳基烷氧基或吡啶基，或者R₃和R₄一起键合构成哌啶基，R₂是羟氨基、羟基、氨基、烷基氨基或烷氧基；n是整数5至7；R₃-N-R₄和R₂是不同的。

在另一种确切的式2实施方式中，n是6。在另一种式II实施方式中，R₄是氢原子，R₃是取代或未取代的苯基，n是6。在另一种式II实施方式中，R₄是氢原子，R₃是取代的苯基，n是6，其中该苯基取代基选自由甲基、氰基、硝基、三氟甲基、氨基、氨基羰基、甲基氰基、氯、氟、溴、碘、2，3-二氟、2，4-二氟、2，5-二氟、3，4-二氟、3，5-二氟、2，6-二氟、1，2，3-三氟、2，3，6-三氟、2，4，6-三氟、3，4，5-三氟、2，3，5，6-四氟、2，3，4，5，6-五氟、叠氮基、己基、叔丁基、苯基、羧基、羟基、甲氧基、苯氧基、苄氧基、苯氨基氧基、苯氨基羰基、甲氧羰基、甲氨基羰基、二甲氨基、二甲氨基羰基或羟氨基羰基组成的组。

在另一种式2实施方式中，n是6，R₄是氢原子，R₃是环己基。在另一种式2实施方式中，n是6，R₄是氢原子，R₃是甲氧基。在另一种式2实施方式中，n是6，R₃和R₄一起键合构成哌啶基。在另一种式2实施方式中，n是6，R₄是氢原子，R₃是苄氧基。在另一种式2实施方式中，R₄是氢原子，R₃是γ-吡啶基。在另一种式2实施方式中，R₄是氢原子，R₃是β-吡啶基。在另一种式2实施方式中，R₄是氢原子，R₃是α-吡啶基。在另一种式2实施方式中，n是6，R₃和R₄都是甲基。在另一种式2实施方式中，n是6，R₄是甲基，R₃是苯基。

在另一种实施方式中，本发明提供药物组合物，所述组合物包含由式3结构代表的化合物或其药学上可接受的盐或水合物和药学上可接受的载体或赋形剂。

其中n是整数5至约8。

在优选的式3实施方式中，n是6。按照这种实施方式，本发明提供药物组合物，所述组合物包含SAHA(4)或其药学上可接受的盐或水合物和药学上可接受的载体或赋形剂。SAHA可以由下列结构式所代表。

在另一种实施方式中，本发明提供药物组合物，所述组合物包含由式5结构代表的化合物或其药学上可接受的盐或水合物和药学上可接受的载体或赋形剂。

在另一种实施方式中，本发明提供药物组合物，所述组合物包含由式6结构代表的化合物(pyroxamide)或其药学上可接受的盐或水合物和药学上可接受的载体或赋形剂。

在另一种实施方式中，本发明提供药物组合物，所述组合物包含由式7结构代表的化合物或其药学上可接受的盐或水合物和药学上可接受的载体或赋形剂。

在另一种实施方式中，本发明提供药物组合物，所述组合物包含由式8结构代表的化合物或其药学上可接受的盐或水合物和药学上可接受的载体或赋形剂。

在另一种实施方式中，本发明提供药物组合物，所述组合物包含由式9结构代表的化合物或其药学上可接受的盐或水合物和药学上可接受的载体或赋形剂。

在另一种实施方式中，本发明提供药物组合物，所述组合物包含由式10结构代表的化合物或其药学上可接受的盐或水合物和药学上可接受的载体或赋形剂。

其中R₃是氢，R₄是环烷基、芳基、芳氧基、芳基烷氧基或吡啶基，或者R₃和R₄一起键合构成哌啶基；R₂是羟氨基；n是整数5至约8。

在另一种实施方式中，本发明提供药物组合物，所述组合物包含由式11结构代表的化合物或其药学上可接受的盐或水合物和药学上可接受的载体或赋形剂。

其中R₃和R₄独立地是取代或未取代的直链或支链烷基、链烯基、环烷基、芳基、烷氧基、芳氧基、芳基烷氧基或吡啶基，或者R₃和R₄一起键合构成哌啶基；R₂是羟氨基；n是整数5至约8。

在另一种实施方式中，本发明提供药物组合物，所述组合物包含由式12结构代表的化合物或其药学上可接受的盐或水合物和药学上可接受的载体或赋形剂。

其中每个X和Y独立地是彼此相同或不同的，是羟基、氨基或羟氨基、取代或未取代的烷氧基、烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、烷基芳基氨基、烷氧基氨基、芳氧基氨基、烷氧基烷基氨基或芳氧基烷基氨基；R是氢原子、羟基、取代或未取代的烷基、芳基烷氧基或芳氧基；每个m和n独立地是彼此相同或不同的，各自是整数约0至约8。

在确切的实施方式中，HDAC抑制剂是式XI化合物，其中X、Y和R各自是羟基，m和n都是5。

在另一种实施方式中，本发明提供药物组合物，所述组合物包含由式13结构代表的化合物或其药学上可接受的盐或水合物和药学上可接受的载体或赋形剂。

其中每个X和Y独立地是彼此相同或不同的，是羟基、氨基或羟氨基、取代或未取代的烷氧基、烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、烷基芳基氨基、烷氧基氨基、芳氧基氨基、烷氧基烷基氨基或芳氧基烷基氨基；每个R₁和R₂独立地是彼此相同或不同的，是氢原子、羟基、取代或未取代的烷基、芳基、烷氧基或芳氧基；每个m、n和o独立地是彼此相同或不同的，各自是整数约0至约8。

在一种确切的式13实施方式中，每个X和Y是羟基，每个R₁和R₂是甲基。在另一种确切的式13实施方式中，每个X和Y是羟基，每个R₁和R₂是甲基，每个n和o是6，m是2。

在另一种实施方式中，本发明提供药物组合物，所述组合物包含由式14结构代表的化合物或其药学上可接受的盐或水合物和药学上可接受的载体或赋形剂。

其中每个X和Y独立地是彼此相同或不同的，是羟基、氨基或羟氨基、取代或未取代的烷氧基、烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、烷基芳基氨基、烷氧基氨基、芳氧基氨基、烷氧基烷基氨基或芳氧基烷基氨基；每个R₁和R₂独立地是彼此相同或不同的，是氢原子、羟基、取代或未取代的烷基、芳基、烷氧基或芳氧基；每个m和n独立地是彼此相同或不同的，各自是整数约0至约8。

在另一种实施方式中，本发明提供药物组合物，所述组合物包含由式15结构代表的化合物或其药学上可接受的盐或水合物和药学上可接受的载体或赋形剂。

其中每个X和Y独立地是彼此相同或不同的，是羟基、氨基或羟氨基、取代或未取代的烷氧基、烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、烷基芳基氨基、烷氧基氨基、芳氧基氨基、烷氧基烷基氨基或芳氧基烷基氨基；每个m和n独立地是彼此相同或不同的，各自是整数约0至约8。

在一种确切的式1实施方式中，每个X和Y是羟基，每个m和n是5。

在另一种实施方式中，本发明提供药物组合物，所述组合物包含由式16结构代表的化合物或其药学上可接受的盐或水合物和药学上可接受的载体或赋形剂。

其中每个X和Y独立地是彼此相同或不同的，是羟基、氨基或羟氨基、取代或未取代的烷氧基、烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、烷基芳基氨基、烷氧基氨基、芳氧基氨基、烷氧基烷基氨基或芳氧基烷基氨基；R₁和R₂独立地是彼此相同或不同的，是氢原子、羟基、取代或未取代的烷基、芳基、烷氧基或芳氧基；每个m和n独立地是彼此相同或不同的，各自是整数约0至约8。

在另一种实施方式中，本发明提供药物组合物，所述组合物包含由式17结构代表的化合物或其药学上可接受的盐或水合物和药学上可接受的载体或赋形剂。

其中每个X和Y独立地是彼此相同或不同的，是羟基、氨基或羟氨基、取代或未取代的烷氧基、烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、烷基芳基氨基或芳氧基烷基氨基；n是整数约0至约8。

在一种确切的式17实施方式中，每个X和Y是羟氨基；R₁是甲基，R₂是氢原子；每个m和n是2。在另一种确切的式17实施方式中，每个X和Y是羟氨基；R₁是羰基羟氨基，R₂是氢原子；每个m和n是5。在另一种确切的式17实施方式中，每个X和Y是羟氨基；每个R₁和R₂是氟代基团；每个m和n是2。

在另一种实施方式中，本发明提供药物组合物，所述组合物包含由式18结构代表的化合物或其药学上可接受的盐或水合物和药学上可接受的载体或赋形剂。

其中每个X和Y独立地是彼此相同或不同的，是羟基、氨基或羟氨基、取代或未取代的烷氧基、烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、烷基芳基氨基、烷氧基氨基、芳氧基氨基、烷氧基烷基氨基或芳氧基烷基氨基；R₁和R₂独立地是彼此相同或不同的，是氢原子、羟基、取代或未取代的烷基、芳基、烷氧基、芳氧基、羰基羟氨基或氟代基团；每个m和n独立地是彼此相同或不同的，各自是整数约0至约8。

在另一种实施方式中，本发明提供药物组合物，所述组合物包含由式19结构代表的化合物或其药学上可接受的盐或水合物和药学上可接受的载体或赋形剂。

其中每个R₁和R₂独立地是彼此相同或不同的，是羟基、烷氧基、氨基、羟氨基、烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、烷基芳基氨基、烷氧基氨基、芳氧基氨基、烷氧基烷基氨基或芳氧基烷基氨基。在确切的实施方式中，HDAC抑制剂是结构式X化合物，其中R₁和R₂都是羟氨基。

在一种确切的式19实施方式中，R₁是苯氨基，R₂是羟氨基。

在另一种实施方式中，本发明提供药物组合物，所述组合物包含由式20结构代表的化合物或其药学上可接受的盐或水合物和药学上可接受的载体或赋形剂。

其中每个R₁和R₂独立地是彼此相同或不同的，是羟基、烷氧基、氨基、羟氨基、烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、烷基芳基氨基、烷氧基氨基、芳氧基氨基、烷氧基烷基氨基或芳氧基烷基氨基。在确切的实施方式中，HDAC抑制剂是结构式XI化合物，其中R₁和R₂都是羟氨基。

在一种确切的式XVIII实施方式中，R₁是羟氨基。在另一种确切的式21实施方式中，R₂是羟氨基。

在另一种实施方式中，本发明提供药物组合物，所述组合物包含由式22结构代表的化合物或其药学上可接受的盐或水合物和药学上可接受的载体或赋形剂。

其中每个R₁和R₂独立地是彼此相同或不同的，是羟基、烷氧基、氨基、羟氨基、烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、烷基芳基氨基、烷氧基氨基、芳氧基氨基、烷氧基烷基氨基或芳氧基烷基氨基。在确切的实施方式中，HDAC抑制剂是结构式XII化合物，其中R₁和R₂都是羟氨基。

在一种确切的式23实施方式中，R₁是苯氨基，R₂是羟氨基。

在另一种实施方式中，本发明提供药物组合物，所述组合物包含由式24结构代表的化合物或其药学上可接受的盐或水合物和药学上可接受的载体或赋形剂。

其中R是被下列基团取代的苯氨基：氰基、甲基氰基、硝基、羧基、氨基羰基、甲氨基羰基、二甲氨基羰基、三氟甲基、羟氨基羰基、N-羟氨基羰基、甲氧羰基、氯、氟、甲基、甲氧基、2，3-二氟、2，4-二氟、2，5-二氟、2，6-二氟、3，5-二氟、2，3，6-三氟、2，4，6-三氟、1，2，3-三氟、3，4，5-三氟、2，3，4，5-四氟或2，3，4，5，6-五氟；n是整数4至8。

在另一种实施方式中，本发明提供药物组合物，所述组合物包含由式25结构代表的化合物(CBHA)或其药学上可接受的盐或水合物和药学上可接受的载体或赋形剂。

在另一种实施方式中，本发明提供药物组合物，所述组合物包含由式26结构代表的化合物或其药学上可接受的盐或水合物和药学上可接受的载体或赋形剂。

在另一种实施方式中，本发明提供药物组合物，所述组合物包含由式27结构代表的化合物或其药学上可接受的盐或水合物和药学上可接受的载体或赋形剂。

其中R是取代或未取代的苯基、哌啶、噻唑、2-吡啶、3-吡啶或4-吡啶，n是整数约4至约8。

在一种确切的式27实施方式中，R是取代的苯基。在另一种确切的式27实施方式中，R是取代的苯基，其中该取代基选自由甲基、氰基、硝基、硫代、三氟甲基、氨基、氨基羰基、甲基氰基、氯、氟、溴、碘、2，3-二氟、2，4-二氟、2，5-二氟、3，4-二氟、3，5-二氟、2，6-二氟、1，2，3-三氟、2，3，6-三氟、2，4，6-三氟、3，4，5-三氟、2，3，5，6-四氟、2，3，4，5，6-五氟、叠氮基、己基、叔丁基、苯基、羧基、羟基、甲氧基、苯氧基、苄氧基、苯氨基氧基、苯氨基羰基、甲氧羰基、甲氨基羰基、二甲氨基、二甲氨基羰基或羟氨基羰基组成的组。

在另一种确切的式27实施方式中，R是取代或未取代的2-吡啶、3-吡啶或4-吡啶，n是整数约4至约8。

在另一种实施方式中，本发明提供药物组合物，所述组合物包含由式28结构代表的化合物或其药学上可接受的盐或水合物和药学上可接受的载体或赋形剂。

其中R是取代或未取代的苯基、吡啶、哌啶或噻唑基团，n是整数约4至约8，或其药学上可接受的盐。

在一种确切的式28实施方式中，R是取代的苯基。在另一种确切的式27实施方式中，R是取代的苯基，其中该取代基选自由甲基、氰基、硝基、硫代、三氟甲基、氨基、氨基羰基、甲基氰基、氯、氟、溴、碘、2，3-二氟、2，4-二氟、2，5-二氟、3，4-二氟、3，5-二氟、2，6-二氟、1，2，3-三氟、2，3，6-三氟、2，4，6-三氟、3，4，5-三氟、2，3，5，6-四氟、2，3，4，5，6-五氟、叠氮基、己基、叔丁基、苯基、羧基、羟基、甲氧基、苯氧基、苄氧基、苯氨基氧基、苯氨基羰基、甲氧羰基、甲氨基羰基、二甲氨基、二甲氨基羰基或羟氨基羰基组成的组。

在另一种确切的式28实施方式中，R是苯基，n是5。在另一种实施方式中，n是5，R是3-氯苯基。

在另一种实施方式中，本发明提供药物组合物，所述组合物包含由式29结构代表的化合物或其药学上可接受的盐或水合物和药学上可接受的载体或赋形剂。

其中每个R₁和R₂是直接或者通过连接基团连接的，是取代或未取代的芳基(例如苯基)、芳基烷基(例如苄基)、萘基、环烷基、环烷基氨基、吡啶氨基、哌啶子基、9-嘌呤-6-氨基、噻唑氨基、羟基、直链或支链烷基、链烯基、烷氧基、芳氧基、芳基烷氧基、吡啶基、或喹啉基或异喹啉基；n是整数约3至约10；R₃是异羟肟酸、羟氨基、羟基、氨基、烷基氨基或烷氧基。连接基团可以是酰胺部分，例如O-、-S-、-NH-、NR₅、-CH₂-、-(CH₂)_m-、-(CH＝CH)-、亚苯基、亚环烷基或其任意组合，其中R₅是取代或未取代的C₁-C₅烷基。

在某些式29实施方式中，R₁是-NH-R₄，其中R₄是取代或未取代的芳基(例如苯基)、芳基烷基(例如苄基)、萘基、环烷基、环烷基氨基、吡啶氨基、哌啶子基、9-嘌呤-6-氨基、噻唑氨基、羟基、直链或支链烷基、链烯基、烷氧基、芳氧基、芳基烷氧基、吡啶基、喹啉基或异喹啉基。

在另一种实施方式中，本发明提供药物组合物，所述组合物包含由式30结构代表的化合物或其药学上可接受的盐或水合物和药学上可接受的载体或赋形剂。

其中每个R₁和R₂是取代或未取代的芳基(例如苯基)、芳基烷基(例如苄基)、萘基、环烷基、环烷基氨基、吡啶氨基、哌啶子基、9-嘌呤-6-氨基、噻唑氨基、羟基、直链或支链烷基、链烯基、烷氧基、芳氧基、芳基烷氧基、吡啶基、喹啉基或异喹啉基；R₃是异羟肟酸、羟氨基、羟基、氨基、烷基氨基或烷氧基；R₄是氢、卤素、苯基或环烷基部分；A可以是相同或不同的，代表酰胺部分、O-、-S-、-NH-、NR₅、-CH₂-、-(CH₂)_m-、-(CH＝CH)-、亚苯基、亚环烷基或其任意组合，其中R₅是取代或未取代的C₁-C₅烷基；n和m各自是整数3至10。

在进一步确切的实施方式中，具有化合物29或30范围内多个具体结构的化合物是：

由式31结构代表的化合物：

其中A是酰胺部分；R₁和R₂各自选自取代或未取代的芳基(例如苯基)、芳基烷基(例如苄基)、萘基、吡啶氨基、9-嘌呤-6-氨基、噻唑氨基、芳氧基、芳基烷氧基、吡啶基、喹啉基或异喹啉基；n是整数3至10。

例如式30化合物可以具有结构31或32：

其中R₁、R₂和n具有式30的含义。

由式33结构代表的化合物：

其中R₇选自取代或未取代的芳基(例如苯基)、芳基烷基(例如苄基)、萘基、吡啶氨基、9-嘌呤-6-氨基、噻唑氨基、芳氧基、芳基烷氧基、吡啶基、喹啉基或异喹啉基；n是整数3至10；Y选自：

由式34结构代表的化合物：

其中n是整数3至10，Y选自：

R₇’选自：

由式35结构代表的化合物：

其中Y选自芳基(例如苯基)、芳基烷基(例如苄基)、萘基、吡啶氨基、9-嘌呤-6-氨基、噻唑氨基、芳氧基、芳基烷氧基、吡啶基、喹啉基或异喹啉基；n是整数3至10；R₇’选自：

由式36结构代表的化合物：

其中A是酰胺部分；R₁和R₂各自选自取代或未取代的芳基(例如苯基)、芳基烷基(例如苄基)、萘基、吡啶氨基、9-嘌呤-6-氨基、噻唑氨基、芳氧基、芳基烷氧基、吡啶基、喹啉基或异喹啉基；R₄是氢、卤素、苯基或环烷基部分；n是整数3至10。

例如，式36化合物可以具有结构37或38：

其中R₁、R₂、R₄和n具有式36的含义。

由式39结构代表的化合物：

其中L是连接基团，选自由酰胺部分、O-、-S-、-NH-、NR₅、-CH₂-、-(CH₂)_m-、-(CH＝CH)-、亚苯基、亚环烷基或其任意组合组成的组，其中R₅是取代或未取代的C₁-C₅烷基；其中每个R₇和R₈独立地是取代或未取代的芳基(例如苯基)、芳基烷基(例如苄基)、萘基、吡啶氨基、9-嘌呤-6-氨基、噻唑氨基、芳氧基、芳基烷氧基、吡啶基、喹啉基或异喹啉基；n是整数3至10，m是整数0至10。

例如，式39化合物可以是：

其他适合用在本发明中的HDAC抑制剂包括如下多个具体结构式所示那些：

其中n是整数3至10，或对映体。在一种确切的式41实施方式中，n＝5。

其中n是整数3至10，或对映体。在一种确切的式42实施方式中，n＝5。

其中n是整数3至10，或对映体。在一种确切的式43实施方式中，n＝5。

其中n是整数3至10，或对映体。在一种确切的式44实施方式中，n＝5。

其中n是整数3至10，或对映体。在一种确切的式45实施方式中，n＝5。

其中n是整数3至10，或对映体。在一种确切的式46实施方式中，n＝5。

其中n是整数3至10，或对映体。在一种确切的式47实施方式中，n＝5。

其中n是整数3至10，或对映体。在一种确切的式48实施方式中，n＝5。

其中n是整数3至10，或对映体。在一种确切的式49实施方式中，n＝5。

其中n是整数3至10，或对映体。在一种确切的式50实施方式中，n＝5。

其中n是整数3至10，或对映体。在一种确切的式51实施方式中，n＝5。

其中n是整数3至10，或对映体。在一种确切的式52实施方式中，n＝5。

其他这类化合物和其他HDAC抑制剂的实例可以见于1994年11月29日公布的美国专利No.5,369,108、1997年12月23日公布的美国专利No.5,700,811、1998年6月30日公布的美国专利No.5,773,474、1999年8月3日公布的美国专利No.5,932,616和2003年1月28日公布的美国专利No.6,511,990，均颁给Breslow et al.；1991年10月8日公布的美国专利No.5,055,608、1992年12月29日公布的美国专利No.5,175,191和1997年3月4日公布的美国专利No.5,608,108，均颁给Marks et al.；以及Yoshida，M.，et al.，Bioassays 17，423-430(1995)；Saito，A.，et al.，PNAS USA 96，4592-4597，(1999)；Furamai R.et al.，PNAS USA 98(1)，87-92(2001)；Komatsu，Y.，et al.，Cancer Res.61(11)，4459-4466(2001)；Su，G.H.，et al.，Cancer Res.60，3137-3142(2000)；Lee，B.I.et al.，Cancer Res.61(3)，931-934；Suzuki，T.，et al.，J.Med.Chem.42(15)，3001-3003(1999)；Sloan-Kettering Institute for CancerResearch和The Trustees of Columbia University的PCT申请公报WO01/18171，2001年3月15日公开；Hoffmann-La Roche的PCT申请公报WO 02/246144；Novartis的PCT申请公报WO 02/22577；Prolifix的PCT申请公报WO 02/30879；Methylgene，Inc.的PCT申请公报WO01/38322(2001年5月31日公开)、WO 01/70675(2001年9月27日公开)和WO 00/71703(2000年11月30日公开)；Fujisawa PharmaceuticalCo.，Ltd.的PCT申请公报WO 00/21979，1999年10月8日公开；BeaconLaboratories，L.L.C.的PCT申请公报WO 98/40080，1998年3月11日公开；Curtin M.(Current patent status of histone deacetylase inhibitors，Expert Opina.Ther.Patents(2002)12(9)：1375-1384和其中引用的参考文献)。

SAHA或任意其他HDAC可以按照实验细节部分所述方法或者按照下列文献所述方法加以合成：美国专利No.5,369,108、5,700,811、5,932,616和6,511,990，其内容全部结合在此作为参考，或者按照本领域技术人员已知的任意其他方法加以合成。

本发明除了上列化合物以外，还打算涵盖这类化合物的同系物和类似物的应用。在这种背景下，同系物是具有上述化合物的实质性结构相似性的分子，类似物是具有与结构相似性无关的实质性生物相似性的分子。

本发明还涵盖药物组合物，所述组合物包含HDAC抑制剂与有机和无机酸的药学上可接受的盐，例如酸加成盐，酸例如可以是盐酸、硫酸、甲磺酸、富马酸、马来酸、琥珀酸、乙酸、苯甲酸、草酸、柠檬酸、酒石酸、碳酸、磷酸等。药学上可接受的盐还可以借助无机碱和有机碱的处理而制备，无机碱例如钠、钾、铵、钙或铁的氢氧化物，有机碱例如异丙胺、三甲胺、2-乙氨基乙醇、组氨酸、普鲁卡因等。

本发明还涵盖药物组合物，所述组合物包含HDAC抑制剂的水合物。术语“水合物”包括但不限于半水合物、一水合物、二水合物、三水合物等。

本发明还涵盖药物组合物，所述组合物包含SAHA或任意其他HDAC抑制剂的任意固体或液体物理形式。例如，HDAC抑制剂可以是结晶形式、无定形，并且具有任意的粒径。HDAC抑制剂粒子可以被微粉化，或者可以是聚结的微粒状颗粒、粉末、油、油悬液或任意其他固体或液体物理形式。

药物组合物

本发明化合物及其衍生物、片段、类似物、同系物、药学上可接受的盐或水合物可以与药学上可接受的载体或赋形剂一起制成适合于口服给药的药物组合物。这类组合物通常包含治疗有效量的任意上述化合物和药学上可接受的载体。优选地，有效量是有效地选择性诱导适合的瘤性细胞的末期分化的量并且小于导致患者毒性的量。

在本发明制剂中可以使用任意普遍用作载体或稀释剂的惰性赋形剂，例如树胶、淀粉、糖、纤维素材料、丙烯酸酯或其混合物。优选的稀释剂是微晶纤维素。组合物可以进一步包含崩解剂(例如交联羧甲基纤维素钠)和润滑剂(例如硬脂酸镁)，另外可以包含一种或多种添加剂，选自粘合剂、缓冲剂、蛋白酶抑制剂、表面活性剂、增溶剂、增塑剂、乳化剂、稳定剂、粘度增加剂、甜味剂、成膜剂或其任意组合。此外，本发明组合物可以是控释制剂或即时释放制剂的形式。

一种实施方式是口服给药用药物组合物，包含HDAC抑制剂或其药学上可接受的盐或水合物、微晶纤维素、交联羧甲基纤维素钠和硬脂酸镁。另一种实施方式具有SAHA作为HDAC抑制剂。另一种实施方式包含50-70重量％的HDAC抑制剂或其药学上可接受的盐或水合物、20-40重量％的微晶纤维素、5-15重量％的交联羧甲基纤维素钠和0.1-5重量％的硬脂酸镁。另一种实施方式包含约50-200mg的HDAC抑制剂。

在一种实施方式中，药物组合物是口服给药的，因而被配制成适合于口服给药的形式，也就是固体或液体制备物。适合的固体口服制剂包括片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、小丸等。适合的液体口服制剂包括溶液、悬液、分散体、乳剂、油剂等。在一种本发明实施方式中，组合物被配制成胶囊剂。按照这种实施方式，本发明组合物除了HDAC抑制剂活性化合物和惰性载体或稀释剂以外，还包含硬明胶胶囊。

本文所用的“药学上可接受的载体”打算包括任意和所有的溶剂、分散介质、包衣、抗细菌与抗真菌剂、等渗剂和吸收延迟剂等，它们与药学给药是可相容的，例如无菌无热原的水。适合的载体描述在最新版Remington′s Pharmaceutical Sciences中，它是本领域的标准参考书，结合在此作为参考。这类载体或稀释剂的优选实例包括但不限于水、盐水、林格氏溶液、葡萄糖溶液和5％人血清白蛋白。还可以使用脂质体和非水性载体，例如固定油。这类介质和试剂应用于药学活性物质是本领域熟知的。除非任何常规介质或试剂与活性化合物是不可相容的，其在组合物中的用途都涵盖在内。还可以向组合物掺入补充性活性化合物。

固体载体/稀释剂包括但不限于树胶、淀粉(例如玉米淀粉、预胶凝淀粉)、糖(例如乳糖、甘露糖醇、蔗糖、葡萄糖)、纤维素材料(例如微晶纤维素)、丙烯酸酯(例如聚甲基丙烯酸酯)、碳酸钙、氧化镁、滑石或其混合物。

就液体制剂而言，药学上可接受的载体可以是水性或非水性溶液、悬液、乳剂或油。非水性溶剂的实例有丙二醇、聚乙二醇和可注射的有机酯，例如油酸乙酯。水性载体包括水、醇/水溶液、乳液或悬液，包括盐水和经过缓冲的介质。油的实例有石油、动物、植物或合成来源的那些，例如花生油、大豆油、矿物油、橄榄油、葵花油和鱼肝油。溶液或悬液还可以包括下列组分：无菌稀释剂，例如注射用水、盐水溶液、固定油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其他合成溶剂；抗菌剂，例如苯甲醇或对羟基苯甲酸甲酯；抗氧化剂，例如抗坏血酸或亚硫酸氢钠；螯合剂，例如乙二胺四乙酸(EDTA)；缓冲剂，例如乙酸盐、柠檬酸盐或磷酸盐；和调节张性的试剂，例如氯化钠或葡萄糖。pH可以用酸或碱来调节，例如盐酸或氢氧化钠。

另外，组合物可以进一步包含粘合剂(例如阿拉伯胶、玉米淀粉、明胶、carbomer、乙基纤维素、瓜尔胶、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、聚维酮)、崩解剂(例如玉米淀粉、马铃薯淀粉、藻酸、二氧化硅、交联羧甲基纤维素钠、交联聚维酮、瓜尔胶、淀粉羟乙酸钠、Primogel)、不同pH和离子强度的缓冲剂(例如Tris-HCl、乙酸盐、磷酸盐)、防止表面吸收的添加剂(例如白蛋白或明胶)、洗涤剂(例如吐温20、吐温80、Pluronic F68、胆汁酸盐)、蛋白酶抑制剂、表面活性剂(例如月桂基硫酸钠)、渗透增强剂、增溶剂(例如甘油、聚乙烯甘油)、助流剂(例如胶体二氧化硅)、抗氧化剂(例如抗坏血酸、偏亚硫酸氢钠、丁基化羟基茴香醚)、稳定剂(例如羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素)、增粘剂(例如carbomer、胶体二氧化硅、乙基纤维素、瓜尔胶)、甜味剂(例如蔗糖、阿斯巴甜、柠檬酸)、矫味剂(例如薄荷、水杨酸甲酯或橙味调料)、防腐剂(例如硫汞撒、苯甲醇、对羟基苯甲酸酯)、润滑剂(例如硬脂酸、硬脂酸镁、聚乙二醇、月桂基硫酸钠)、流动助剂(例如胶体二氧化硅)、增塑剂(例如邻苯二甲酸二乙酯、柠檬酸三乙酯)、乳化剂(例如carbomer、羟丙基纤维素、月桂基硫酸钠)、聚合物包衣(例如泊洛沙姆或poloxamine)、包衣与成膜剂(例如乙基纤维素、丙烯酸酯、聚甲基丙烯酸酯)和/或助剂。

在一种实施方式中，与活性化合物一起配制的载体将保护化合物防止从机体迅速消除，例如控释制剂，包括植入物和微囊包封的递送系统。可以使用生物可降解的、生物可相容的聚合物，例如乙烯乙酸乙烯酯、聚酐、聚乙醇酸、胶原、聚原酸酯和聚乳酸。这类制剂的制备方法对本领域技术人员而言将是显而易见的。材料还可以在商业上从AlzaCorporation和Nova Pharmaceuticals，Inc获得。还可以使用脂质体悬液(包括定向于感染细胞的脂质体和病毒抗原的单克隆抗体)作为药学上可接受的载体。这些可以按照本领域技术人员已知的方法加以制备，例如美国专利No.4,522,811所述。

配制剂量单元形式的口服组合物尤其有利于轻松给药和剂量一致性。本文所用的剂量单元形式表示物理上离散的单元，适合作为受治疗者的单位剂量；每一单元含有与所需药物载体缔合的预定量活性化合物，根据计算产生所需的治疗效果。本发明剂量单元形式的规格取决于并且直接依赖于活性化合物的独特特征和所要达到的特定治疗效果，以及本领域围绕这样一种活性化合物就个体治疗而言所固有的限制。

药物组合物可以与给药指导一起包括在容器、包装或配药器中。

然后连续地重复每日给药达数天至数年。口服治疗可以持续一周至患者寿命。优选地，给药达连续五天，然后可以评价患者以确定是否需要进一步的给药。给药可以是连续的或间歇的，也就是连续几天治疗继之以休息期。

本发明化合物可以在治疗第一天静脉内给药，在第二天和所有后续日期口服给药。

本发明化合物可以出于预防疾病进展或者使肿瘤生长稳定的目的而给药。

含有活性成分的药物组合物的制备是本领域熟知的，例如混合、造粒或压片过程。经常将活性治疗成分与药学上可接受的并且可与活性成分相容的赋形剂混合。就口服给药而言，将活性试剂与惯用于此目的的添加剂混合，例如载体、稳定剂或惰性稀释剂，再借助惯用方法转化为适合于给药的剂型，例如片剂、包衣片、硬或软明胶胶囊剂、水、醇或油溶液等，如上所述。

本发明化合物口服给药的总每日剂量在25至4000mg/m²之间，例如约25至1000mg、50-1000mg、100mg、200mg、300mg、400mg、600mg、800mg、1000mg等。通常，当对患者给药至多400mg时，将化合物作为单一剂量给药。就更高的总剂量而言(也就是大于400mg)，将总量分为多个剂量，例如每日两次、每日三次等，优选地在当天内间隔相等的时间。例如，可以间隔12小时给以两剂，例如各500mg，一天的总剂量达到1000mg。

在一种当前优选的实施方式中，SAHA或任意HDAC抑制剂对患者给药的总每日剂量为200mg。在另一种当前优选的实施方式中，SAHA或任意HDAC抑制剂对患者给药的总每日剂量为400mg。在另一种当前优选的实施方式中，SAHA或任意HDAC抑制剂对患者给药的总每日剂量为600mg。

化合物对患者给药的量小于将对患者导致毒性的量。在某些实施方式中，化合物对患者给药的量小于导致化合物在患者血浆中的浓度等于或超过化合物毒性水平的量。优选地，化合物在患者血浆中的浓度维持在约10nM。在另一种实施方式中，化合物在患者血浆中的浓度维持在约25nM。在另一种实施方式中，化合物在患者血浆中的浓度维持在约50nM。在另一种实施方式中，化合物在患者血浆中的浓度维持在约100nM。在另一种实施方式中，化合物在患者血浆中的浓度维持在约500nM。在另一种实施方式中，化合物在患者血浆中的浓度维持在约1000nM。在另一种实施方式中，化合物在患者血浆中的浓度维持在约2500nM。在另一种实施方式中，化合物在患者血浆中的浓度维持在约5000nM。利用HMBA已经发现，约5gm/m²/天至30gm/m²/天、确切约20gm/m²/天的化合物给药量是有效的，不会对患者产生毒性。在本发明的实施中，化合物应当对患者给药的最佳量将依赖于所使用的特定化合物和所治疗癌症的类型。

在当前优选的本发明实施方式中，药物组合物包含组蛋白脱乙酰酶(HDAC)抑制剂；微晶纤维素作为载体或稀释剂；交联羧甲基纤维素钠作为崩解剂；和硬脂酸镁作为润滑剂。在特别优选的实施方式中，HDAC抑制剂是辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)。

活性成分与各种赋形剂在制剂中的百分比可以各不相同。例如，组合物可以包含20至90重量％、优选50-70重量％的组蛋白脱乙酰酶(HDAC)。此外，组合物可以包含10至70重量％、优选20-40重量％的微晶纤维素作为载体或稀释剂。此外，组合物可以包含1至30重量％、优选5-15重量％的交联羧甲基纤维素钠作为崩解剂。此外，组合物可以包含0.1-5重量％的硬脂酸镁作为润滑剂。在另一种优选的实施方式中，组合物包含约50-200mg的HDAC抑制剂(例如50mg、100mg和200mg的HDAC抑制剂，例如SAHA)。在特别优选的实施方式中，组合物是明胶胶囊剂的形式。

当前优选的本发明实施方式是SAHA与微晶纤维素NF(Avicel Ph101)、交联羧甲基纤维素钠NF(AC-Di-Sol)和硬脂酸镁NF的固体制剂，包含在明胶胶囊中。进一步优选的实施方式是200mg固体SAHA与89.5mg微晶纤维素、9mg交联羧甲基纤维素钠和1.5mg硬脂酸镁，包含在明胶胶囊中。

对本领域技术人员而言应当显而易见的是，本发明药物组合物不仅可用于抑制瘤性细胞的增殖和治疗癌症，而且这些组合物可用于治疗多种已经发现HDAC抑制剂有用的疾病。

例如，已经发现HDAC抑制剂、确切为SAHA可用于治疗多种急性与慢性炎性疾病、自体免疫疾病、变应性疾病、与氧化性应激反应有关的疾病和以细胞过度增殖为特征的疾病。非限制性实例有关节的炎性病症，包括类风湿性关节炎(RA)和牛皮癣性关节炎；炎性肠疾病，例如克罗恩氏病和溃疡性结肠炎；脊关节病；硬皮病；牛皮癣(包括T-细胞介导的牛皮癣)和炎性皮肤病，例如皮炎、湿疹、特应性皮炎、变应性接触性皮炎、荨麻疹；结节性脉管炎，例如坏死性、皮肤与过敏性结节性脉管炎；嗜曙红细胞性肌炎、嗜曙红细胞性筋膜炎；伴有皮肤或器官白细胞浸润的癌症；缺血性损伤，包括脑缺血(例如作为创伤、癫痫、出血或中风结果的脑损伤，它们均可以引起神经变性)；HIV；心力衰竭；慢性、急性或恶性肝疾病；自体免疫性甲状腺炎；系统性红斑狼疮；斯耶格伦氏综合征；肺疾病，例如ARDS；急性胰腺炎；肌萎缩性侧索硬化(ALS)；阿尔茨海默氏病；恶病质/食欲缺乏；哮喘；动脉粥样硬化；慢性疲劳综合征；发热；糖尿病，例如胰岛素性糖尿病或青少年糖尿病；肾小球性肾炎；宿主对移植物的排斥，例如在移植术中；出血性休克；痛觉过敏；炎性肠疾病；多发性硬化；肌病，例如肌肉蛋白代谢，尤其在脓毒病中；骨质疏松；帕金森氏病；疼痛；早产；牛皮癣；再灌注损伤；细胞因子-诱导的毒性，例如脓毒性休克、内毒素休克；来自放射疗法的副作用；颞下颌关节疾病；肿瘤转移；或者由劳损、扭伤、软骨损伤、创伤(例如灼伤)、矫形手术、感染或其他疾病过程导致的炎性病症。变应性疾病和病症包括但不限于呼吸变应性疾病，例如哮喘、变应性鼻炎、过敏性肺疾病、过敏性肺炎、嗜曙红细胞性肺炎(例如Loeffler氏综合征、慢性嗜曙红细胞性肺炎)、迟发型过敏、间质性肺疾病(ILD)(例如自发性肺纤维变性或者与类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、强直性脊椎炎、全身硬化、斯耶格伦氏综合征、多肌炎或皮肌炎有关的ILD)；全身过敏症或过敏反应、药物变态反应(例如对青霉素、头孢菌素)、昆虫叮咬变态反应等。

例如，已经发现HDAC抑制剂、确切为SAHA可用于治疗多种神经变性疾病，其非穷举性列表有：

I.以没有其他突出的神经病学迹象存在的进行性痴呆为特征的障碍，例如阿尔茨海默氏病；阿尔茨海默型老年性痴呆；和皮克氏病(脑叶萎缩)。

II.合并有进行性痴呆与其他突出的神经病学异常的综合征，例如A)主要见于成人的综合征(例如亨廷顿氏病、合并有痴呆与共济失调的多系统萎缩和/或帕金森氏病的表现、进行性核上性麻痹(Steel-Richardson-Olszewski)、扩散性利维小体病和corticodentatonigral变性)；和B)主要见于儿童或青年的综合征(例如哈-斯二氏病和进行性家族性肌阵挛性癫痫)。

III.体位与运动渐进性异常的综合征，例如震颤麻痹(帕金森氏病)、striatonigral变性、进行性核上性麻痹、扭转张力障碍(扭转痉挛；变形性肌张力障碍)、痉挛性斜颈与其他运动障碍、家族性震颤和图雷特氏综合征。

IV.进行性共济失调的综合征，例如小脑变性(例如小脑皮质变性和橄榄体脑桥小脑萎缩(OPCA))和脊髓小脑变性(弗里德希氏共济失调和相关障碍)。

V.中枢自主神经系统衰竭的综合征(Shy-Drager综合征)。

VI.没有感觉改变的肌肉虚弱和消瘦的综合征(运动神经元疾病，例如肌萎缩性侧索硬化、脊柱肌肉萎缩(例如婴儿脊柱肌肉萎缩(Werdnig-Hoffman)、青少年脊柱肌肉萎缩(Wohlfart-Kugelberg-Welander)和其他形式的家族性脊柱肌肉萎缩)、原发性侧索硬化和遗传性痉挛性截瘫。

VII.合并有肌肉虚弱和消瘦与感觉改变的综合征(进行性神经肌肉萎缩；慢性家族性多神经病)，例如A.腓肌肉萎缩(Charcot-Marie-Tooth)，B.肥大性间质性多神经病(Dejerine-Sottas)，和C.各种形式的慢性进行性神经病。

VIII.进行性视觉丧失的综合征，例如色素性视网膜变性(色素性视网膜炎)和遗传性视神经萎缩(利伯氏病)。

下列实验细节部分中的实施例进一步阐述本发明。该部分有助于理解发明，但是不打算、也不应当被解释为以任何方式限制如下权利要求书所限定的发明。

实验细节部分

实施例1：

SAHA的合成

SAHA可以按照下述方法合成，或者按照美国专利No.5,369,108所述方法合成，其全部内容结合在此作为参考，或者按照任意其他方法合成。

SAHA的合成

步骤1-辛二酰苯胺酸的合成

在22L烧瓶中放入3,500g(20.09mol)辛二酸，加热熔化。温度升至175℃，然后加入2,040g(21.92mol)苯胺。温度升至190℃，在该温度下保持20分钟。将熔化物倒入含有4,017g氢氧化钾的50L水溶液的Nalgene罐中。加入熔化物后，将混合物搅拌20分钟。按照相同规模重复反应，向同一氢氧化钾溶液倒入第二熔化物。将混合物彻底搅拌后，关闭搅拌器，使混合物沉降。然后将混合物通过C盐垫(4,200g)过滤(过滤产物以除去中性副产物(防止苯胺攻击辛二酸的两个末端)。滤液含有产物的盐和未反应辛二酸的盐。使混合物沉降是因为过滤是非常缓慢的，花费数天)。将滤液用5L浓盐酸酸化；将混合物搅拌1小时，然后沉降过夜。过滤收集产物，在漏斗上用去离子水洗涤(4×5L)。将湿滤饼放入含有44L去离子水的72L烧瓶中，将混合物加热至50℃，趁热过滤分离固体(所需产物被辛二酸污染，辛二酸在热水中的溶解度大得多。进行数次趁热研制，以除去辛二酸。用NMR[D6DMSO]检查产物，以监测辛二酸的除去)。用44L 50℃水重复趁热研制。再次过滤分离产物，用4L热水冲洗。在65℃真空烘箱中干燥过周末，使用Nash泵作为真空源(Nash泵是一种液体环流泵(水)，牵引约29英寸汞的真空。利用间歇性氩净化有助于带走水)；得到4,182.8g辛二酰苯胺酸。

产物仍然含有少量辛二酸；因此在65℃下分批进行趁热研制，一次使用约300g产物。将每一部分过滤，用另外的热水彻底冲洗(总计约6L)。重复该操作，以纯化全部批次。这样完全除去了产物中的辛二酸。将固体产物合并在烧瓶中，与6L甲醇/水(1∶2)搅拌，然后过滤分离，在滤器上风干过周末。将其放入托盘中，在65℃真空烘箱中干燥45小时，使用Nash泵和氩的泄放。最终产物的重量为3,278.4g(32.7％收率)。

步骤2-辛二酰苯胺酸甲酯的合成

向装有机械搅拌器和冷凝器的50L烧瓶放入来自前一步骤的3,229g辛二酰苯胺酸、20L甲醇和398.7g Dowex 50WX2-400树脂。将混合物加热至回流，在回流下保持18小时。将混合物过滤以除去树脂珠粒，在旋转蒸发器上蒸发滤液得到残余物。

将来自旋转蒸发器的残余物转移至装有冷凝器和机械搅拌器的50L烧瓶中。向该烧瓶加入6L甲醇，加热该混合物得到溶液。然后加入2L去离子水，关闭热源。使搅拌着的混合物冷却，然后将烧瓶放入冰浴中，混合物冷却。过滤分离固体产物，将滤饼用4L冷甲醇/水(1∶1)冲洗。将产物在45℃真空烘箱中干燥64小时，使用Nash泵，得到2,850.2g(84％收率)辛二酰苯胺酸甲酯CSL Lot#98-794-92-31。

步骤3-粗SAHA的合成

向装有机械搅拌器、热电偶和惰性气氛入口的50L烧瓶加入1,451.9g盐酸羟胺、19L无水甲醇和3.93L 30％甲醇钠的甲醇溶液。然后向烧瓶加入2,748.0g辛二酰苯胺酸甲酯，继之以1.9L 30％甲醇钠的甲醇溶液。将混合物搅拌16小时又10分钟。将大约一半反应混合物从反应烧瓶(烧瓶1)转移至装有机械搅拌器的50L烧瓶(烧瓶2)中。然后向烧瓶1加入27L去离子水，将混合物搅拌10分钟。用pH计测量pH；pH为11.56。加入100ml 30％甲醇钠的甲醇溶液调节混合物的pH至12.02；这样得到澄清的溶液(反应混合物此时含有少量固体。调节pH得到澄清溶液，产物将从中沉淀出来)。按照相同方式稀释烧瓶2中的反应混合物；加入27L去离子水，向混合物加入100ml 30％甲醇钠溶液调节pH，得到12.01的pH(澄清溶液)。

加入冰乙酸，将每一烧瓶中的反应混合物酸化，使产物沉淀出来。烧瓶1的最终pH为8.98，烧瓶2的最终pH为8.70。利用布氏漏斗和滤布过滤分离两只烧瓶产物。将滤饼用15L去离子水洗涤，盖住漏斗，在真空下将产物在漏斗上部分干燥15.5小时。取下产物，放入五只玻璃托盘中。将托盘放入真空烘箱中，干燥至恒重。第一干燥周期为60℃22小时，使用Nash泵作为真空源和氩的泄放。从真空烘箱中取出托盘，称重。将托盘放回烘箱，将产物干燥另外4小时又10分钟，使用油泵作为真空源，没有氩的泄放。将产物包装在双4-磨聚乙烯袋中，放入塑料外部容器。取样后的最终重量为2633.4g(95.6％)。

步骤4-粗SAHA的重结晶

使粗SAHA从甲醇/水中重结晶。向装有机械搅拌器、热电偶、冷凝器和惰性气氛入口的50L烧瓶装入所要结晶的粗SAHA(2,525.7g)，继之以2.625ml去离子水和15,755ml甲醇。将混合物加热至回流，得到溶液。然后向反应混合物加入5,250ml去离子水。关闭热源，使混合物冷却。当混合物已经充分冷却以便能够安全地触摸烧瓶时(28℃)，从加热罩中取出烧瓶，放入用作冷却浴的桶中。向桶中加入冰/水以冷却混合物至-5℃。将混合物保持在该温度以下达2小时。过滤分离产物，将滤饼用1.5L冷甲醇/水(2∶1)洗涤。盖住漏斗，将产物在真空下部分干燥1.75小时。从漏斗上取下产物，放入6只玻璃托盘中。将托盘放入真空烘箱中，在60℃下干燥64.75小时，使用Nash泵作为真空源，并使用氩的泄放。取出托盘称重，然后放回烘箱中，在60℃下干燥另外4小时至恒重。第二干燥周期的真空源是油泵，没有使用氩的泄放。将产物包装在双4-磨聚乙烯袋中，放入塑料外部容器。取样后的最终重量为2540.9g(92.5％)。

实施例2：

辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)的口服给药

背景：用杂合极性细胞分化剂处置已经导致人实体肿瘤细胞系和异种移植物生长的抑制。该效果在部分程度上受到组蛋白脱乙酰酶抑制作用的介导。SAHA是一种有力的组蛋白脱乙酰酶抑制剂，已经显示在实验室和临床前期研究中具有诱导肿瘤细胞生长终止、分化和细胞凋亡的能力。

目的：为了限定能够用于II期研究的SAHA安全每日口服制度。另外，评价SAHA口服制剂的药动学属性。还监测SAHA在人体中禁食与非禁食状态中的口服生物利用度和抗肿瘤治疗效果。另外，评估SAHA对正常组织和肿瘤细胞的生物学效果，证实关于组蛋白乙酰化水平的应答。

患者：患者患有经过组织学证实的晚期阶段、原发性或转移性成人实体肿瘤，它们是标准疗法所难以治疗的，或者不存在可治愈的标准疗法。患者必须具有≥70％的Kamofsky Performance Status，和适当的血液学、肝脏和肾脏功能。患者必须距离任意在先化疗、放射疗法或其他研究性抗癌药物至少四周。

服药方案：第一天，首先将患者用200mg静脉内给药的SAHA处理。从第二天开始，按照表1将患者用口服SAHA的每日剂量处理。每一队接受不同剂量的SAHA。“QD”表示每天服药一次；“Q12”表示每天服药两次。例如，第IV队患者每天接受两次800mg SAHA剂量。剂量对患者的给药是每天和连续进行的。在口服治疗的第1天和第21天采集血样。患者从口服SAHA治疗中退出的原因是疾病进展、肿瘤消退、不可接受的副作用或其他疗法的治疗。

表1：口服SAHA剂量方案

队列	口服剂量(mg)	天数	每日服药方案
				I	200	连续	QD
II	400	连续	QD
				III	400	连续	Q12小时
IV	800	连续	Q12小时
				V	1200	连续	Q12小时
VI	1600	连续	Q12小时
				VII	2000	连续	Q12小时

结果：对比血清血浆水平显示，与静脉内给药的SAHA(IV SAHA)相比，无论患者禁食还是没有禁食，口服给药SAHA的生物利用度都是高的。“AUC”是SAHA生物利用度的估计值，以(ng/ml)min计，其中660ng/ml等于2.5μM SAHA。AUC以及半衰期(t_1/2)一起显示，口服SAHA的总体生物利用度好于IV SAHA。C_max是在给药后观察到的最大SAHA浓度。IV SAHA的给药剂量为200mg，输注2小时。口服SAHA的给药剂量是200mg的单一胶囊。表2和3总结了HPLC测定的结果(使用氘代内标的LC-MS)，该测定量化了患者血浆中SAHA量与时间的关系，使用乙酰化组蛋白-4(α-AcH4)作为标志物。

表2：口服SAHA的血清血浆水平-患者#1

	IV	口服(禁食)	口服(不禁食)
				Cmax(ng/ml)	1329	225	328
t1/2(min)	20	80	64
				AUC(ng/ml)min	153,000	25,000	59,000

表3：口服SAHA的血清血浆水平-患者#2

	IV	口服(禁食)	口服(不禁食)
				Cmax(ng/ml)	1003	362	302
t1/2(min)	21	82	93
				AUC(ng/ml)min	108,130	63,114	59,874

图1至8是HPLC切片，显示第I和II队患者中α-AcH4的含量，这是在接受口服剂量后至多10小时时测量的，并且与静脉给药SAHA的α-AcH4水平对比。图9显示在给药后所示时间点的SAHA平均血浆浓度(ng/ml)。图9A：禁食下第8天的口服剂量(200mg和400mg)。图9B：进食第9天的口服剂量。图9C：第1天的IV剂量。图10显示第8、9和22天SAHA 200mg和400mg口服剂量的表观半衰期。图11显示第8、9和22天SAHA 200mg和400mg口服剂量的AUC(ng/ml/hr)。图12显示第8、9和22天SAHA 200mg和400mg口服剂量后的生物利用度。

实施例3：

辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)的口服剂量-剂量扩大

在另一项实验中，将二十五名实体肿瘤患者编入A支，十三名何杰金氏或非何杰金氏淋巴瘤患者编入B支，一名急性白血病患者和一名脊髓发育不良综合征患者编入C支，如表4所示。

表4：剂量调查流程和每种剂量水平下的患者人数

队列	剂量(mg/天)	服药方案	#服药天数	静息期	#所编入的患者(A支/B支/C支)*
						I	200	每天一次	连续	无	6/0/0
II	400	每天一次	连续	无	5/4/2
						III	400	q12小时	连续	无	6/3/0
IV	600	每天一次	连续	无	4/3/0
						V	200	q12小时	连续	无	4/3/0
VI	300	q12小时	连续	无	-/-/-
											小计：25/13/2
					总计：40

^*A支＝实体肿瘤，B支＝淋巴瘤，C支＝白血病

结果：

在第II队所治疗的十一名患者中，有一名患者在第一治疗周期表现3级腹泻和3级脱水的DLT。九名患者进入第III队。就28天毒性评估而言有两名患者是不可评价的，因为疾病的迅速进展而终止早期研究。在其余七名患者中，有五名在第一治疗周期表现下列DLT：腹泻/脱水(n＝1)、疲劳/脱水(n＝1)、食欲缺乏(n＝1)、脱水(n＝1)和食欲缺乏/脱水(n＝1)。这五名患者在维持研究用药后大约一周内恢复。随后减少剂量至400mg QD，该剂量似乎可被良好耐受。第III队全部患者400mg BID的中位天数为21天。基于这些发现，判断400mg q12小时服药方案已经超过最大耐受剂量。在方案修正之后，在第IV队中继续增加剂量，为600mg每天一次。在编入第IV队的七名患者中，就28天毒性评估而言有两名是不可评价的，因为疾病的迅速进展而终止早期研究。有三名患者在第一治疗周期表现下列DLT：食欲缺乏/脱水/疲劳(n＝1)和腹泻/脱水(n＝2)。因此判断600mg剂量已经超过最大耐受剂量，400mg每天一次被定义为每日一次口服给药的最大耐受剂量。修正方案，以评价另外的剂量水平，为每天两次服药方案，即连续给药的200mg BID和300mg BID。

基于在200mg QD、400mg QD和400mg BID剂量水平下治疗的18名患者进行中期药动学分析。一般而言，在禁食或进食条件下口服给药的SAHA的C_max和AUC_inf平均估计值在200mg至400mg剂量范围内与剂量成比例增加。总体而言，由外推法所得AUC_inf部分为1％或以下。在禁食或进食条件下表观半衰期的平均估计值在剂量组之间是可变的，从61至114分钟不等。C_max的平均估计值从233ng/ml(0.88μM)至570ng/ml(2.3μM)不等。在IV输注和口服途径给药后从AUC_inf值计算SAHA的生物可用部分，为大约0.48。

在疗法之前、输注后立即和在SAHA胶囊口服摄入后2-10小时之间收集外周血单核细胞，以评估SAHA对正常宿主细胞组蛋白乙酰化程度的影响。分离组蛋白，用抗乙酰化组蛋白(H3)抗体、继之以HRP-继发抗体探查。初步分析证明乙酰化组蛋白在外周单核细胞中的蓄积有所增加，在400mg每天剂量水平的SAHA胶囊摄入后长达10小时都能检测到。

十三名患者继续3-12月治疗，响应性或稳定性疾病为：甲状腺(n＝3)、汗腺(n＝1)、肾(n＝2)、喉(n＝1)、前列腺(n＝1)、何杰金氏淋巴瘤(n＝2)、非何杰金氏淋巴瘤(n＝2)和白血病(n＝1)。

根据CT扫描，六名患者的肿瘤收缩。这六名患者中有三名满足部分响应的标准(一名患者患有转移性喉癌，两名患者患有非何杰金氏淋巴瘤)。这些部分响应发生在400mg BID(n＝2)和600mg QD(n＝1)的剂量水平。

实施例4：

SAHA的静脉给药

表5显示接受静脉内SAHA的患者的给药方案。患者开始于第I队，一周连续五天接受300mg/m² SAHA，总剂量为1500mg/m²。然后观察患者两周，继续第II队，然后进行后面各队，除非由于疾病进展、肿瘤消退、不可接受的副作用或患者接受其他治疗而终止治疗。

表5：静脉内给药SAHA的标准剂量扩大

队列	剂量(mg/m2)	天数/周	连续周数	观察期(周)	总剂量(mg/m2)
						I	300	5	1	2	1500
II	300	5	2	2	3000
						III	300	5	3	1*	4500
IV	600	5	3	1*	9000
						V	800	5	3	1*	13500
VI	1200	5	3	1*	18000
						VII	1500	5	3	1*	22500

^*血液学患者开始于剂量水平III。

尽管已经参照优选的实施方式确切地显示和描述了本发明，不过将为本领域技术人员所理解的是可以进行各种形式与细节上的变化，而不背离所述发明的含义。发明的范围是由权利要求书所限定的。

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Claims (27)

1、在受治疗者体内产生至少约10nM的组蛋白脱乙酰酶(HDAC)抑制剂平均血浆浓度达给药后至少两小时的方法，该方法包含对所述受治疗者给以有效量的药物组合物，所述组合物包含HDAC抑制剂或其药学上可接受的盐或水合物和药学上可接受的载体或稀释剂。

2、根据权利要求1的方法，其中该药物组合物是口服给药的。

3、根据权利要求1的方法，其中所述组合物体内提供至少约10nM的所述HDAC抑制剂平均血浆浓度达给药后至少10小时。

4、根据权利要求1的方法，其中所述组合物体内提供至少约2.5μM的所述HDAC抑制剂平均血浆浓度达给药后至少2小时。

5、根据权利要求1的方法，其中所述组合物被包含在明胶胶囊中。

6、根据权利要求1的方法，其中所述载体或稀释剂是微晶纤维素。

7、根据权利要求1的方法，进一步包含交联羧甲基纤维素钠作为崩解剂。

8、根据权利要求1的方法，进一步包含硬脂酸镁作为润滑剂。

9、根据权利要求1的方法，其中所述组合物是每日一次、每日两次或每日三次给药的。

10、权利要求1的方法，其中所述HDAC抑制剂对受治疗者给药的总每日剂量为约25-4000mg/m²。

11、根据权利要求1的方法，其中所述组合物对受治疗者给药的总每日剂量为200mg。

12、根据权利要求1的方法，其中所述组合物对受治疗者给药的总每日剂量为400mg。

13、根据权利要求1的方法，其中所述HDAC抑制剂是辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)：

14、根据权利要求1的方法，其中所述HDAC抑制剂是由下列结构代表的pyroxamide：

15、根据权利要求1的方法，其中所述HDAC抑制剂是由下列结构代表的：

其中R₃和R₄独立地是取代或未取代的直链或支链烷基、链烯基、环烷基、芳基、烷氧基、芳氧基、芳基烷氧基或吡啶基，或者R₃和R₄一起键合构成哌啶基；R₂是羟氨基；n是整数5至8。

16、根据权利要求1的方法，其中所述HDAC抑制剂是由下列结构代表的：

其中R是取代或未取代的苯基、哌啶、噻唑、2-吡啶、3-吡啶或4-吡啶；n是整数4至8。

17、根据权利要求1的方法，其中所述HDAC抑制剂是由下列结构代表的：

其中A是酰胺部分；R₁和R₂各自选自取代或未取代的芳基(例如苯基)、芳基烷基(例如苄基)、萘基、吡啶氨基、9-嘌呤-6-氨基、噻唑氨基、芳氧基、芳基烷氧基、吡啶基、喹啉基或异喹啉基；R₄是氢、卤素、苯基或环烷基部分；n是整数3至10。

18、权利要求1的方法，其中该组合物选择性诱导受治疗者中瘤性细胞的末期分化，从而抑制所述受治疗者中这类细胞的增殖。

19、权利要求1的方法，其中该组合物诱导患有肿瘤的受治疗者中肿瘤细胞的分化。

20、权利要求1的方法，其中该组合物选择性诱导受治疗者中瘤性细胞的细胞生长终止，从而抑制所述受治疗者中这类细胞的增殖。

21、权利要求1的方法，其中该组合物选择性诱导受治疗者中瘤性细胞的细胞凋亡，从而抑制所述受治疗者中这类细胞的增殖。

22、口服给药用药物组合物，包含：

组蛋白脱乙酰酶(HDAC)抑制剂或其药学上可接受的盐或水合物；

微晶纤维素；

交联羧甲基纤维素钠；和

硬脂酸镁。

23、根据权利要求22的组合物，其中所述HDAC抑制剂是辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)：

24、根据权利要求22的组合物，包含：

50-70重量％的所述组蛋白脱乙酰酶(HDAC)抑制剂或其药学上可接受的盐或水合物；

20-40重量％的微晶纤维素；

5-15重量％的交联羧甲基纤维素钠；和0.1-5重量％的硬脂酸镁。

25、根据权利要求22的组合物，包含约50-200mg所述HDAC抑制剂。

26、根据权利要求22的组合物，被包含在明胶胶囊中。

27、根据权利要求22的组合物，其中该HDAC抑制剂是SAHA。

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