CN102597003B

CN102597003B - 用于治疗炎性病症的组合物和方法

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Publication number: CN102597003B
Application number: CN201080049138.0A
Authority: CN
Inventors: 西村美由希; 坂本佳正; 河野铁; 今井俊夫
Original assignee: Sanitary Material R&d Management Co ltd
Current assignee: Sanitary Material R&d Management Co ltd
Priority date: 2009-10-30
Filing date: 2010-10-28
Publication date: 2016-03-23
Anticipated expiration: 2030-10-28
Also published as: AR109533A2; WO2011052799A1; RS58142B1; KR102099596B1; KR20120104560A; CA2778895A1; SMT201800637T1; HRP20181973T1; US8932592B2; PH12012500828A1; IL219470A; PE20121645A1; US20120213799A1; EP2493930A4; TWI414308B; AR078796A1; LT2493930T; ES2698389T3; AU2010312408A1; IL219470A0

Abstract

本发明的特征在于涉及结合CXXXC趋化分子的人源化抗体及其FKN结合片段的组合物和方法。

Description

用于治疗炎性病症的组合物和方法

发明领域

本发明的特征在于与结合CXXXC趋化分子（fractalkine）的抗体有关的组合物和方法。

发明背景

CXXXC趋化分子（FKN）是在活化内皮细胞的表面上表达且与CX3CR1受体结合的跨膜趋化因子。膜结合型FKN与膜结合型CX3CR1的结合介导强细胞间粘附，而不牵涉选择素或整联蛋白。从膜结合型FKN脱落的分泌型FKN也结合CX3CR1，并且诱导整联蛋白的活化和细胞趋化性。

FKN的表达通过促炎细胞因子在内皮细胞的表面上诱导。FKN的升高表达以及CX3CR1⁺细胞毒性效应淋巴细胞和巨噬细胞的累积已在具有众多病症的受试者中报道，包括炎症和自身免疫病症，包括溃疡性结肠炎（UC）、克罗恩病（CD）、类风湿性关节炎（RA）、自身免疫性肝炎（AIH）、多发性硬化（MS）和糖尿病。Umehara等人，Arterioscler.Thromb.Vasc.Biol.24:34-40（2004）描述了FKN在动脉粥样硬化和血管损伤中的作用。Nishimura等人，Ann.NYAcad.Sci.1173:350-356（2009）讨论了FKN作为用于炎性肠病例如UC和CD的潜在治疗靶。

由于其特异性，抗体和抗体的FKN结合片段是希望的治疗试剂。抗体和FKN结合片段可以用于靶向特异性细胞或组织，从而使非特异性靶向的潜在副作用降到最低。存在鉴定且表征在炎性病症包括在本文中所述那些的治疗中有用的治疗抗体的需要。

发明概述

在第一个方面，本发明的特征在于抗FKN抗体或其FKN结合片段，其中抗体或其片段包括选自下述的6个CDR：

（a）包括SEQIDNO：28的氨基酸序列的CDR-H1；

（b）包括SEQIDNO：29的氨基酸序列的CDR-H2；

（c）包括SEQIDNO：30的氨基酸序列的CDR-H3；

（d）包括SEQIDNO：31的氨基酸序列的CDR-L1；

（e）包括SEQIDNO：32的氨基酸序列的CDR-L2；和

（f）包括SEQIDNO：33的氨基酸序列的CDR-L3。

抗体可以是完整抗体。在一个例子中，抗体是人源化抗体。人源化抗体的重链可变结构域可以包括SEQIDNO：36、SEQIDNO：37、SEQIDNO：39、SEQIDNO：42或SEQIDNO：43的氨基酸序列，并且人源化抗体的轻链可变结构域可以包括SEQIDNO：38、SEQIDNO：44或SEQIDNO：45的氨基酸序列。

在一个例子中，抗体是抗CXXXC趋化分子抗体或其FKN结合片段，其中抗体或其片段包括具有SEQIDNO：37的氨基酸序列的重链和具有SEQIDNO：44的氨基酸序列的轻链。

抗体还可以是嵌合抗体。在一个例子中，嵌合抗体的重链可变结构域包括SEQIDNO：26的氨基酸序列，并且嵌合抗体的轻链可变结构域包括SEQIDNO：27的氨基酸序列。

还考虑了抗体的FKN结合片段。FKN结合片段可以是保留对于FKN的结合特异性的Fab、Fab'、F（ab'）2或Fv片段。

在特定例子中，当抗体或其FKN结合片段包括人恒定区时，恒定区具有IgG同种型（例如IgG2同种型）。在其他例子中，抗体或FKN结合片段包括突变的Fc区，从而使得相对于缺乏突变的Fc区，抗体具有减少的ADCC和/或补体激活。例如，Fc区可以在氨基酸残基V234、G237、C131或C219的一个或多个上是突变的。

希望地，抗体或FKN结合片段使FKN与其受体CX3CR1的结合实质上减少或抑制至少50％、60％、70％、80％、90％或更大，或在趋化性测定例如本文描述的一个测定中实质上抑制中和的hFKN。

本发明的特征还在于药物组合物，其包括本发明的抗体或FKN结合片段和药学可接受的载体或赋形剂。在特定实施方案中，组合物包括一种或多种另外的治疗试剂，例如下文描述的那些。

还考虑的是编码上述抗体或FKN结合片段的核酸。在一个实施方案中，核酸编码抗体或其FKN结合片段的重链的全部或部分。在另一个实施方案中，核酸编码抗体或其FKN结合片段的轻链的全部或部分。核酸可以在载体（例如表达载体）中。

本发明的特征还在于包括本发明的一种或多种载体的宿主细胞。在一个例子中，宿主细胞包括2种载体，第一种载体包括编码本文描述的抗体或FKN结合片段的重链的核酸，并且第二种载体包括编码本文描述的抗体或FKN结合片段的轻链的核酸。重和轻链在宿主细胞中的表达产生抗体或FKN结合片段。在一个实施方案中，宿主细胞是原核生物的。在另一个实施方案中，宿主细胞是真核生物的。对于产生抗体和FKN结合片段有用的示例性哺乳动物细胞是CHO细胞和NS0细胞。

本发明的特征还在于用于制备抗FKN抗体或FKN结合片段的方法。该方法包括（a）在合适的宿主细胞中表达本发明的载体，和（b）回收抗体。抗体或FKN结合片段可以由宿主细胞分泌到培养基内。在一个例子中，纯化抗体或其FKN结合片段，以去除非抗体材料的至少95％或更大纯度。

还考虑了通过施用有效量的根据本发明的抗FKN抗体或FKN结合片段来治疗炎性病症的方法。示例性炎性病症是炎性肠病、克罗恩病和溃疡性结肠炎。对于这些病症，该方法可以进一步包括施用一种或多种另外的治疗试剂。示例性治疗试剂是阿片类、5-氨基水杨酸、6-巯嘌呤、硫唑嘌呤、糖皮质激素、氨甲蝶呤、环孢菌素和甲硝唑。其他合适的治疗试剂在下文描述。

可以通过施用有效量的根据本发明的抗FKN抗体或FKN结合片段治疗的炎性病症还包括自身免疫性肝胆疾病（例如自身免疫性肝炎、原发性胆汁性肝硬变或原发性硬化性胆管炎）。对于这些病症，该方法可以进一步包括施用6-巯嘌呤、熊去氧胆酸、硫唑嘌呤、糖皮质激素、噻嗪类利尿剂、抗醛固酮利尿剂、环孢菌素、白蛋白或螺内酯。

类风湿性关节炎（RA）也可以通过施用有效量的根据本发明的抗FKN抗体或FKN结合片段进行治疗。在RA的治疗中，该方法可以进一步包括施用非甾体抗炎药（NSAID）、氨甲蝶呤、来氟米特、布西拉明、5-氨基水杨酸、糖皮质激素、羟氯喹（hydrochloroquine）、维生素D、钙或阿屈膦酸盐。

系统性红斑狼疮（例如中枢神经系统的狼疮或狼疮性肾炎）也可以通过施用单独或与一种或多种另外的治疗试剂组合的、有效量的抗FKN抗体或FKN结合片段进行治疗。示例性另外的治疗试剂是糖皮质激素、环磷酰胺、氨甲蝶呤、环孢菌素和他克莫司。

多发性硬化和视神经脊髓炎也可以通过施用有效量的抗FKN抗体或FKN结合片段进行治疗。治疗可以进一步包括施用一种或多种另外的治疗试剂，例如糖皮质激素、干扰素-β或Copaxone^?。

脱髓鞘多发性神经根病（例如格-巴二氏综合征或慢性炎性脱髓鞘多发性神经根病）也可以通过施用有效量的抗FKN抗体或FKN结合片段进行治疗。再次，还考虑了协同疗法，并且治疗可以进一步包括施用一种或多种另外的治疗试剂，例如糖皮质激素或静脉内免疫球蛋白。

单独或与另外的治疗试剂组合施用有效量的抗FKN抗体或FKN结合片段也可以用于治疗神经病性疼痛。用于治疗神经病性疼痛的示例性另外试剂是拉莫三嗪、托吡酯、奥卡西平、左乙拉西坦、芬太尼、曲马多、辣椒辣素、可乐定（cloridine）、NSAID、阿米替林、普瑞巴林、利多卡因、度洛西汀和卡马西平。

阿尔茨海默氏病也可以通过施用有效量的抗FKN抗体或FKN结合片段进行治疗。该方法可以进一步包括施用一种或多种另外的治疗试剂，例如盐酸他克林、盐酸多奈哌齐、酒石酸卡巴拉汀、氢溴酸加兰他敏、盐酸美金刚、帕罗西汀、利培酮、喹硫平或哌罗匹隆。

与癌症相关的内脏痛也可以通过施用单独或与一种或多种另外的治疗试剂组合的，有效量的抗FKN抗体或FKN结合片段进行治疗，所述另外的治疗试剂例如吗啡、NSAID、芬太尼、利多卡因、喷他佐辛或可乐定。

动脉粥样硬化也可以通过施用有效量的抗FKN抗体或FKN结合片段进行治疗。该方法可以进一步包括施用一种或多种另外的治疗试剂，例如前列腺环素、阿司匹林、氯吡格雷、噻氯匹定、利马前列素、前列腺素E1、HMGCoA还原酶抑制剂、苯扎贝特、利多卡因、美西律、利尿剂、洋地黄、多巴胺、β-肾上腺素能受体激动剂、二硝酸异山梨酯、硝酸甘油、利钠肽、华法林、肝素、组织型纤溶酶原激活物、尿激酶或普鲁卡因胺。

血管病变（例如年龄相关性黄斑变性、贝切特氏病、原田氏病和肉瘤样病起源的葡萄膜炎）也可以通过施用有效量的根据本发明的抗FKN抗体或FKN结合片段进行治疗。该方法可以进一步包括施用选自下述的一种或多种另外的治疗试剂：糖皮质激素、环磷酰胺、培加尼布、雷珠单抗、NSAID、秋水仙碱、苯丁酸氮芥、沙立度胺和维替泊芬。

肾病（例如狼疮性肾炎、肾小球肾炎或糖尿病性肾病）也可以通过施用有效量的根据本发明的抗FKN抗体或FKN结合片段进行治疗。糖皮质激素、磺酰脲、环磷酰胺、格列奈类（glinides）、环孢菌素、他克莫司、霉酚酸酯、咪唑立宾、利尿剂、胰岛素、双胍、α-葡糖苷酶抑制剂、血管收缩素受体阻断剂、噻唑烷二酮、血管收缩素转换酶（ACE）抑制剂、钙通道阻断剂或β-肾上腺素能受体抑制剂可以包括在治疗方法中。肾上腺素能受体抑制剂可以包括在治疗方法中。

本发明还涉及根据本发明的抗FKN抗体或FKN结合片段在治疗本文描述的任何炎性病症中的用途。

本发明还涉及根据本发明的抗FKN抗体或FKN结合片段在制备用于治疗本文描述的任何炎性病症的药物中的用途。

本发明的特征还在于抑制白细胞召募至受试者中的炎症部位的方法，其通过给需要此类治疗的受试者施用有效量的抗FKN抗体或FKN结合片段实施，由此抑制白细胞召募至炎症部位。

先体外后体内策略也可以用于治疗应用。先体外后体内策略涉及用编码抗体或抗体片段的多核苷酸转染或转导得自受试者的细胞。经转染或转导的细胞随后送回受试者。细胞可以是广泛范围类型中的任何，包括但不限于造血细胞（例如骨髓细胞、巨噬细胞、单核细胞、树突细胞、T细胞或B细胞）、成纤维细胞、上皮细胞、内皮细胞、角化细胞或肌细胞。

为了本发明的目的，下文定义了下述缩写和术语。

术语“抗体”（在本文中可与“免疫球蛋白”互换使用）包括显示出所需生物学活性（例如结合FKN且调节FKN和CX3CR1之间的相互作用的能力）的，完整单克隆和多克隆抗体、多特异性抗体（例如双特异性抗体）以及抗体片段。“完整抗体”是约150,000道尔顿的异四聚糖蛋白，由2条等同轻（L）链和2条等同重（H）链组成。每条轻链通过一个共价二硫键与重链连接，而二硫键数目在不同免疫球蛋白同种型的重链中变化。每条重和轻链也具有规则间隔的链内二硫桥。每条重链具有在一个末端上的可变结构域（VH），随后为许多恒定结构域。每条轻链具有在一个末端上的可变结构域（VL）和在其另一个末端上的恒定结构域。轻链的恒定结构域与重链的第一个恒定结构域对齐，并且轻链可变结构域与重链的可变结构域对齐。特定氨基酸残基认为形成在轻链和重链可变结构域之间的界面。

存在5个主要类别的免疫球蛋白：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，并且其中几个可以进一步分成亚类（同种型），例如IgG₁、IgG₂、IgG₃、IgG₄、IgA₁和IgA₂。抗体可以是更大融合分子的部分，通过抗体与一种或多种其他蛋白质或肽的共价或非共价结合形成。抗体还可以是免疫缀合物的部分，其中抗体与第二种分子（例如毒素、放射性同位素或标记）缀合。

如本文使用的，术语“单克隆抗体”指得自实质上同质抗体群体的抗体，即各个抗体是等同的，除可以以小量存在的可能突变外。

非人抗体的“人源化”形式是包含具有实质上人免疫球蛋白的氨基酸序列的构架区（FR）和具有实质上非人免疫球蛋白的氨基酸序列（即“输入”序列）的互补决定区（CDR）的抗体或其片段。在某些情况下，人免疫球蛋白的构架区残基通过相应非人残基替换。可以做出人源化抗体的进一步修饰，以改善抗体性能。

“互补决定区”或“CDR”意指在免疫球蛋白轻和重链各自内的可变区中的3个高变序列之一。

“构架区”或“FR”意指定位于免疫球蛋白轻和重链的3个CDR的任一侧上的氨基酸序列。

人源化抗体的FR和CDR无需精确对应于亲本序列，例如输入CDR或共有FR可以通过至少一个残基的置换、插入或缺失进行诱变，从而使得在那个位点上的CDR或FR残基不对应于共有或输入序列。然而，此类突变一般不是广泛的。通常，至少75％、80％、85％、90％、95％或99％的人源化抗体残基将对应于亲本序列的残基。

如本文使用的，当指可测量的值例如量、暂时持续时间等时，术语“约”意欲涵盖距离指定值高达±20％、优选±10％、更优选±5％、更加优选±2％的变动，当此类变动适合于执行公开的方法时。除非另有说明，在说明书和权利要求中使用的表达成分的数量、性质例如分子量、反应条件等等的所有数目应理解为在所有情况下由术语“约”修饰。相应地，除非指出相反，在下述说明书和附加权利要求中所示的数目参数是近似值，其可以取决于通过本发明寻求获得的所需性质而改变。最低限度地，并且不作为限制关于权利要求范围的等同原则的应用的尝试，每个数目参数应至少根据报道的有效数字的数目和通过应用普通舍入技术加以解释。

“足够的量”或“有效量”意指以临床相关方式治疗或改善病症例如炎性病症所需的治疗抗体或其药物组合物的量。用于实践本发明用于例如炎性病症的治疗性处理的治疗抗FKN抗体、其FKN结合片段或药物组合物的足够量取决于施用方式、患者的年龄和一般健康而改变。

“结合亲和力”一般指在分子（例如抗体）的单个结合位点及其结合配偶体（例如抗原）之间的非共价相互作用的总和强度。结合亲和力可以由解离常数（Kd）表示。亲和力可以通过本领域已知的方法进行测量，包括放射性标记的FKN结合测定（RIA）或通过表面等离子体共振测定（例如BIACORE^?）。

“嵌合”或“嵌合化”抗体（即免疫球蛋白）指这样的抗体，其中重和/或轻链的部分与衍生自特定物种或属于特定抗体类别或亚类的抗体中的相应序列等同或同源，而一条或多条链的其余部分与衍生自另一个物种或属于另一个抗体类别或亚类的抗体中的相应序列等同或同源，以及此类抗体的片段，只要它们显示出所需生物学活性（Morrison等人，Proc.Natl.Acad..Sci.U.S.A.81:6851-6855，1984）。

“表位”或“抗原决定簇”意指由于线性结构或三维构象，形成关于抗体的结合位点的氨基酸序列。由于表位的三级结构，可以包括抗原的氨基酸序列的不连续部分的构象表位与抗体相互作用。相比之下，线性表位是基于其一级结构由抗体识别的表位。在一个实施方案中，形成与Fab的最低限度界面的CXXXC趋化分子表位包括例如E66-Q69、W81-Q87、H70-F73和H88-D90。

术语“表达”和“产生”在本文中可同义使用，并且指基因产物的生物合成。这些术语涵盖基因转录成RNA。这些术语还涵盖RNA翻译成一种或多种多肽，且进一步涵盖所有天然存在的转录后和翻译后修饰。抗体的表达/产生可以在细胞的细胞质内，和/或进入细胞外环境例如细胞培养的生长培养基内。

“CXXXC趋化分子”、“FKN”、“FK”或“神经趋化蛋白（neurotactin）”意指这样的多肽，其与由SEQIDNO：1（图1）限定的多肽同源，并且具有FKN生物学活性（例如与CX3CR1受体结合；化学吸引T细胞和单核细胞；或促进白细胞粘附至活化内皮细胞）。FKN多肽的生物学活性可以使用任何标准方法进行测定。如本文使用的，FKN还包括任何FKN家族成员或同种型。参见例如在此引入作为参考的美国专利号7,390,490、WO2006/046739和美国专利申请公开号2006/0233710。

“FKN结合片段”包括完整抗体的部分，其包含其FKN结合区且能够结合FKN。FKN结合片段可以是Fab、Fab'、F（ab'）₂或Fv片段；双抗体；三抗体；四抗体；微型抗体；亲和体分子；微体（minibodies）；线性抗体；单链抗体分子；或由抗体片段形成的多特异性抗体。

“同源的”意指任何基因或蛋白质序列，其在比较序列的长度上与已知基因或蛋白质序列具有至少30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、99％或更多同源性。“同源”蛋白质还可以具有比较蛋白质的至少一种生物学活性。对于多肽，比较序列的长度一般是至少15、20、25、35个或更多个氨基酸。对于核酸，比较序列的长度一般是至少50、60、75、100、125个或更多个核苷酸。“同源性”还可以指在用于生成抗体的表位和抗体针对其的蛋白质或其片段之间的实质相似性。在这种情况下，同源性指足以引发可以特异性识别所讨论的蛋白质的抗体产生的相似性。

“人抗体”意指抗体仅来自人起源或其中可变和恒定结构域序列是人序列或人抗体的序列的任何抗体。该术语涵盖这样的抗体，其具有衍生自（即利用）人基因的序列，但已改变，例如以减少可能的免疫原性，增加亲和力，消除可能引起不希望的折叠的半胱氨酸等。该术语涵盖在非人细胞中重组产生的此类抗体，这可以赋予并非人细胞典型的糖基化。

“杂交瘤”指在培养的瘤性淋巴细胞和预处理的B或T淋巴细胞之间的细胞融合产物，其表达亲本细胞的特异性免疫潜力。

如本文使用的，“炎性病症”指其中免疫系统异常激活的任何疾病、病症或状况。炎性病症可以是例如溃疡性结肠炎、克罗恩病、炎性肠病、类风湿性关节炎、肌炎、多发性硬化、视神经脊髓炎、动脉粥样硬化、牛皮癣、系统性红斑狼疮（例如中枢神经系统的狼疮或狼疮性肾炎）、肾炎、肾小球肾炎、自身免疫性肝胆疾病（例如自身免疫性肝炎、原发性胆汁性肝硬化或原发性硬化性胆管炎）、移植物抗宿主病、特应性皮炎、哮喘、神经变性疾病（例如阿尔茨海默氏病）、脱髓鞘多发性神经根病（例如格-巴二氏综合征或慢性炎性脱髓鞘多发性神经根病）、神经病性疼痛、癌症的内脏痛、动脉粥样硬化、年龄相关性黄斑变性、糖尿病性肾病、肉瘤样病起源的葡萄膜炎或糖尿病。

可替代地，疾病、病症或状况是上或下呼吸道的疾病，例如淋巴瘤气管支气管炎；变应性超敏反应或分泌过多状况，例如慢性支气管炎和囊性纤维化；不同病因学的肺纤维化（例如特发性肺纤维化）；慢性阻塞性肺疾病（COPD）；肉瘤样病；变应性和非变应性鼻炎；变应性或非变应性荨麻疹；特征在于失调的炎症、组织重塑、血管发生和赘生物的皮肤相关疾病；胃肠道的疾病，例如赫希施普龙（Hirschsprung）氏病、腹泻、吸收不良状况和炎性状况；中枢和外周神经系统的病症，例如抑郁、焦虑状态、帕金森氏病、偏头痛和其他形式的颅疼痛、中风和呕吐；免疫系统例如在脾和淋巴组织中的疾病，自身免疫疾病或其他免疫相关疾病；心血管系统的疾病，例如肺水肿、高血压、先兆子痫、复杂区域性疼痛综合征2型和中风；慢性炎性疾病例如关节炎；骨相关疾病；慢性疼痛例如纤维肌痛；及其中神经激肽、速激肽或其他相关物质（例如血细胞激肽）的作用涉及发病机理、病理学和病因学的其他病症。

炎性病症的另外例子是寻常座疮；急性呼吸窘迫综合征；阿狄森氏病、变应性眼内炎性疾病；ANCA相关小血管脉管炎；强直性脊柱炎；自身免疫性溶血性贫血；贝切特氏病；贝尔氏麻痹；大疱性类天疱疮；脑缺血症；肝硬化；寇甘（Cogan）氏综合征；接触性皮炎；库兴氏综合征；皮肌炎；盘状红斑狼疮；嗜酸性粒细胞筋膜炎；结节性红斑；剥落性皮炎；局灶性肾小球硬化；局灶性节段性肾小球硬化；节段性肾小球硬化；巨细胞动脉炎；痛风；痛风性关节炎；手部湿疹；亨诺-许兰二氏（Henoch-Schonlein）紫癜；妊娠疱疹；多毛症；特发性角膜巩膜炎（ceratoscleritis）；特发性血小板减少性紫癜；免疫性血小板减少性紫癜；炎性肠或胃肠病症；炎性皮肤病；扁平苔藓；淋巴瘤气管支气管炎；黄斑水肿；重症肌无力；非特异性纤维肺病；骨关节炎；胰腺炎；妊娠性类天疱疮；寻常天疱疮；牙周炎；结节性多发性动脉炎；风湿性多肌痛；阴囊瘙痒；瘙痒（pruritis）/炎症；牛皮癣关节炎；肺组织胞浆菌病；复发性多软骨炎；酒糟鼻；肉瘤样病；硬皮病；脓毒性休克综合征；肩部腱炎或滑膜炎；斯耶格伦（Sjogren）氏综合征；斯提耳（Still）氏病；Sweet氏病；系统性硬化病；高安氏动脉炎；颞动脉炎；中毒性表皮坏死松懈症；移植排斥和移植排斥相关综合征；肺结核；1型糖尿病；脉管炎；伏-小柳-原田三氏（VKH）病；和韦格纳氏肉芽肿病。

“分离的”或“纯化的”意指“通过人工”由天然状态改变的。如果分子或组合物在自然界中出现，如果它已从其起源环境中改变或取出或改变且取出，那么它已是“分离的”或“纯化的”。例如，天然存在于活植物或动物中的多核苷酸或多肽不是“分离的”或“纯化的”，但从其天然状态的共存材料中分离的相同多核苷酸或多肽是“分离的”或“纯化的”，如该术语在本文中采用的。

术语“可操作地连接的”或“可操作地插入的”意指将编码序列表达所需的调节序列置于核酸分子中相对于编码序列的合适位置中，以便使得编码序列的表达成为可能。例如，当启动子能够控制编码序列的转录或表达时，启动子与那种编码序列可操作地连接。编码序列可以在有义或反义方向与启动子或调节序列可操作地连接。术语“可操作地连接的”有时应用于在表达载体中其他转录控制元件（例如增强子）的排列。

“多核苷酸”同义地称为“核酸分子”，指任何多核糖核苷酸或多脱氧核糖核苷酸，其可以是未修饰的RNA或DNA或修饰的RNA或DNA。“多核苷酸”包括但不限于单和双链的DNA，其为单和双链区的混合物的DNA，单和双链RNA，和其为单和双链区的混合物的RNA，包含其可以是单链或更一般地双链或单和双链区的混合物的DNA和RNA的杂交分子。此外，“多核苷酸”指包含RNA或DNA或RNA和DNA的三链区。术语多核苷酸还包括含有一个或多个修饰碱基的DNA或RNA和具有由于稳定性或其他原因修饰的主链的DNA或RNA。“修饰”碱基包括例如三苯甲基化碱基和稀有碱基例如肌苷。可以对于DNA和RNA做出多种修饰；因此，“多核苷酸”涵盖如在自然界中一般发现的多核苷酸的化学、酶促或代谢修饰形式，以及病毒和细胞特有的DNA和RNA的化学形式。“多核苷酸”还涵盖相对短的核酸链，通常称为寡核苷酸。

“多肽”指短链，通常称为肽、寡肽或寡聚物，并且指更长的链，一般称为蛋白质。多肽可以含有除20种基因编码的氨基酸外的氨基酸。“多肽”包括通过天然过程例如翻译后加工或通过本领域众所周知的化学修饰技术修饰的氨基酸序列。此类修饰在基本课本和更详细的专题论文以及长篇研究文献中充分描述。修饰可以在多肽中的任何地方出现，包括肽主链、氨基酸侧链、和氨基或羧基末端。应当理解相同类型的修饰可以以相同或不同程度存在于给定多肽中的几个位点上。此外，给定多肽可以含有许多类型的修饰。多肽可以由于遍在蛋白化而是分支的，并且它们可以是环状的，含或不含分支。环状、分支和分支环状多肽可以起因于天然翻译后过程或可以通过合成法制备。修饰包括例如乙酰化、酰化、ADP-核糖基化、酰胺化、黄素的共价附着、血红素部分的共价附着、核苷酸或核苷酸衍生物的共价附着、脂质或脂质衍生物的共价附着、磷脂酰肌醇的共价附着、交联、环化、二硫键形成、脱甲基化、共价交联的形成、胱氨酸的形成、焦谷氨酸盐的形成、甲酰化、γ-羧基化、糖基化、GPI锚形成、羟基化、碘化、甲基化、豆蔻酰化、氧化、蛋白酶解加工、磷酸化、异戊烯化、外消旋化、硒化、硫酸化、和转移RNA介导的氨基酸对蛋白质的添加例如精氨酰和遍在蛋白化。参见例如，Proteins-StructureandMolecularProperties，第2版，T.E.Creighton，W.H.FreemanandCompany，NewYork，1993和Wold，F.，PosttranslationalProteinModifications：PerspectivesandProspects，第1-12页inPosttranslationalCovalentModificationofProteins，B.C.Johnson，编辑，AcademicPress，NewYork，1983；Seifter等人，AnalysisforProteinModificationsandNonproteinCofactors，MethEnzymol（1990）182:626-646和Rattan等人，ProteinSynthesis：PosttranslationalModificationsandAging，AnnNYAcadSci（1992）663:48-62。

“特异性结合”意指抗体或其片段识别且结合抗原（例如FKN或其片段），但实质上不识别且结合样品（例如生物学样品）中的其他分子。“特异性”意欲区分有时可以在例如具有暴露的亲水结构域的随机蛋白质之间发生的低水平、非特异性粘性。它不意欲暗示抗体将不与除本发明的抗原外的任何蛋白质结合。抗体可以与包括有关表位的任何蛋白质交叉反应（和“特异性结合”）。

“受试者”意指意指任何动物，例如哺乳动物（例如人）。待就例如炎性病症治疗的受试者是已通过医学或兽医学从业者诊断为情况可能是具有此类状况的受试者。诊断可以通过任何合适方式执行。本领域技术人员应当理解本发明的受试者可以已实施标准测试或可以无需检查而由于一种或多种危险因素例如年龄、遗传学或家族史的存在已鉴定为处于高危的受试者。

当例如DNA已引入细胞内时，细胞已由此类DNA等的外源或异源核酸“转化”或“转染”。转化DNA可以整合或不整合（例如共价连接）到细胞的基因组内。在原核生物、酵母和哺乳动物细胞中，例如转化DNA可以维持在附加型元件例如质粒上。就真核细胞而言，稳定转化的细胞或“稳定细胞”是这样的细胞，其中转化DNA已变得整合到染色体内，从而使得它通过染色体复制由子细胞继承。这种稳定性通过真核细胞建立由含有转化DNA的子细胞群体组成的细胞系或克隆的能力证实。“克隆”是通过有丝分裂衍生自单细胞或共同祖先的细胞群体。“细胞系”是能够在体外稳定生长多代的原代细胞克隆。

“治疗”意指施用治疗抗体或其药物组合物用于预防和/或治疗目的。“治疗疾病或病症”或用于“治疗性处理”的用途指将治疗施用于已患有疾病的受试者，以改善受试者的病状。基于任何特征性症状的鉴定或本领域技术人员已知的诊断法的使用，受试者可以诊断有炎性病症。“预防疾病或病症”指受试者的预防性处理，所述受试者还不是有病的，但对发展特定疾病敏感或另外处于发展特定疾病的危险中。受试者使用本领域已知的诊断法测定为处于发展炎性病症的危险中。

“载体”是复制子，例如质粒、噬菌体、粘粒或病毒，其中另一个核酸区段可以可操作地插入，以便达到区段的复制或表达。

如本说明书和附加权利要求中使用的，单数形式“一（a、an）”和“该（the）”包括复数参考，除非上下文另有说明。因此，例如提及“细胞”包括2种或更多种细胞的组合等。

本发明的其他特征和优点由于详述和权利要求将是显而易见的。

附图简述

图1是人FKN的氨基酸序列。

图2是显示抗FKN单克隆抗体的结合特征（即中和活性、结合亲和力和物种交叉反应性）的表。

图3是人源化抗FKNmAb序列（以出现的次序，分别为SEQIDNOS36-37和42-43）、m3A5-2序列（SEQIDNO：26）、种系Ig序列（SEQIDNO：40）和AAA68427.1序列（SEQIDNO：34）的重链可变区比对。

图4是人源化抗FKNmAb序列（以出现的次序，分别为SEQIDNOS38和44-45）、m3A5-2序列（SEQIDNO：27）、种系Ig序列（SEQIDNO：41）和ABU90602.1序列（SEQIDNO：35）的轻链可变区比对。

图5是概括来自3个独立趋化性测定结果的表。人源化抗hFKNmAb的中和活性使用趋化性测定进行分析。成功地人源化H3和H3-2与L2和L4的所有组合，因为这些mAb显示与嵌合mAb的相似中和活性。然而，通过使用缩小关键残基制备的HK2显示与L2或L4组合减少的中和活性。

图6A和6B描述了显示m3A5-2mAb和嵌合mAb的中和活性的一系列曲线图。图6A是显示如通过趋化性测定来测定的m3A5-2mAb的中和活性的曲线图。图6B是显示如通过趋化性测定来测定的嵌合mAb的中和活性的曲线图。

图7A-7D描述了显示如通过趋化性测定来测定的人源化抗hFKN抗体的中和活性的一系列曲线图。图7A显示了H3L2-IgG2的中和活性。图7B显示了H3-L4-IgG2的中和活性。图7C显示了HK2L2-IgG2的中和活性。图7D显示了HK2L4-IgG2的中和活性。

图8A-8F描述了显示如通过趋化性测定来测定的人源化抗hFKN抗体的中和活性的一系列曲线图。图8A显示了H3-2L2-IgG2的中和活性。图8B显示了H3-2L4-IgG2的中和活性。图8C显示了H3-2L5-IgG2的中和活性。图8D显示了HK3L2-IgG2的中和活性。图8E显示了HK3L4-IgG2的中和活性。图8F显示了HK3L5-IgG2的中和活性。

图9是概括来自用于测量mAb与hFKN和食蟹猴FKN的结合亲和力的BIACORE^?测定结果的表。

图10A-10C描述了显示如通过BIACORE^?测定来测定的，嵌合和人源化抗hFKN抗体（H3L2、H3-2L2、H3L4、H3-2L4和HK2L4）与hFKN-SEAP和食蟹猴FKN-SEAP的结合亲和力的一系列曲线图。图10A是显示Ka值（1/Ms）的条形图。图10B是显示Kd值（1/s）的条形图。图10C是显示KD值（M）的条形图。

图11描述了使用来自FKN趋化因子结构域的重叠合成肽文库（以出现的次序，分别为SEQIDNOS115-135）的表位作图结果。

图12描述了使用ELISA的hFKN的表位作图结果。

图13描述了使用BIACORE^?的hFKN的表位作图结果。

图14显示了鉴定在CXXXC趋化分子上的Fab结合位点的交叉饱和实验结果。该曲线显示了FKN的E66-Q69、W81-Q87、H70-F73和H88-D90区包括在与Fab的最低限度界面中。

发明详述

我们已设计且分离了嵌合抗FKN抗体、人源化抗FKN抗体及其FKN结合片段。本文表征的人源化抗FKN抗体及其FKN结合片段可以用于治疗炎性病症。此类抗体还可以用于抑制白细胞召募至炎症部位。可以根据本发明治疗的炎性病症包括溃疡性结肠炎，克罗恩病，炎性肠病，类风湿性关节炎，肌炎，多发性硬化，视神经脊髓炎，动脉粥样硬化，牛皮癣，系统性红斑狼疮（例如中枢神经系统的狼疮或狼疮性肾炎），肾炎，肾小球肾炎，自身免疫性肝胆疾病（例如自身免疫性肝炎，原发性胆汁性肝硬化或原发性硬化性胆管炎），移植物抗宿主病，特应性皮炎，哮喘，神经变性疾病（例如阿尔茨海默氏病），脱髓鞘多发性神经根病（例如格-巴二氏综合征或慢性炎性脱髓鞘多发性神经根病），神经病性疼痛，癌症的内脏痛，动脉粥样硬化，年龄相关性黄斑变性，糖尿病性肾病，肉瘤样病起源的葡萄膜炎，糖尿病，淋巴瘤气管支气管炎，变应性超敏反应或分泌过多状况例如慢性支气管炎和囊性纤维化，不同病因学的肺纤维化（例如特发性肺纤维化），慢性阻塞性肺疾病（COPD），肉瘤样病，变应性和非变应性鼻炎，变应性或非变应性荨麻疹，特征在于失调的炎症、组织重塑、血管发生和赘生物的皮肤相关疾病，胃肠道的疾病例如赫希施普龙氏病、腹泻、吸收不良状况和炎性状况，中枢和外周神经系统的病症例如抑郁、焦虑状态、帕金森氏病、偏头痛和其他形式的颅疼痛、中风和呕吐，免疫系统例如在脾和淋巴组织中的疾病，自身免疫疾病或其他免疫相关疾病，心血管系统的疾病例如肺水肿、高血压、先兆子痫、复杂区域性疼痛综合征2型和中风，慢性炎性疾病例如关节炎，骨相关疾病，慢性疼痛例如纤维肌痛，寻常座疮，急性呼吸窘迫综合征，阿狄森氏病、变应性眼内炎性疾病，ANCA相关小血管脉管炎，强直性脊柱炎，自身免疫性溶血性贫血，贝切特氏病，贝尔氏麻痹，大疱性类天疱疮，脑缺血症，肝硬化，寇甘氏综合征，接触性皮炎，库兴氏综合征，皮肌炎，盘状红斑狼疮，嗜酸性粒细胞筋膜炎，结节性红斑，剥落性皮炎，局灶性肾小球硬化，局灶性节段性肾小球硬化，节段性肾小球硬化，巨细胞动脉炎，痛风，痛风性关节炎，手部湿疹，亨诺-许兰二氏紫癜，妊娠疱疹，多毛症，特发性角膜巩膜炎，特发性血小板减少性紫癜，免疫性血小板减少性紫癜，炎性肠或胃肠病症，炎性皮肤病，扁平苔藓，淋巴瘤气管支气管炎，黄斑水肿，重症肌无力，非特异性纤维肺病，骨关节炎，胰腺炎，妊娠性类天疱疮，寻常天疱疮，牙周炎，结节性多发性动脉炎，风湿性多肌痛，阴囊瘙痒，瘙痒（pruritis）/炎症，牛皮癣关节炎，肺组织胞浆菌病，复发性多软骨炎，酒糟鼻，肉瘤样病，硬皮病，脓毒性休克综合征，肩部腱炎或滑膜炎，斯耶格伦（Sjogren）氏综合征；斯提耳（Still）氏病，Sweet氏病，系统性硬化病，高安氏动脉炎，颞动脉炎，中毒性表皮坏死松懈症，移植排斥和移植排斥相关综合征，肺结核，1型糖尿病，脉管炎，伏-小柳-原田三氏（VKH）病，和韦格纳氏肉芽肿病。

抗体

用于制备且纯化抗体或其FKN结合片段的方法是本领域众所周知的。参见例如，Kohler等人，Nature256:495-497（1975）；Hongo等人，Hybridoma14:253-260（1995）；Harlow等人，Antibodies：ALaboratoryManual（ColdSpringHarborLaboratoryPress），第2版（1988）；Hammerling等人，MonoclonalAntibodiesandT-CellHybridomas（Elsevier），563-681（1981）；Ni，XiandaiMianyixue，26:265-268（2006）；美国专利号7,189,826；7,078,492；和7,153,507；Vollmers和Brandlein，HistologyandHistopathology20:927-937（2005）；Vollmers和Brandlein，MethodsandFindingsinExperimentalandClinicalPharmacology27:185-191（2005）；US2006/258841；US2006/183887；US2006/059575；US2005/287149；US2005/100546；和US2005/026229。

嵌合抗体

嵌合抗体和产生其的方法是本领域众所周知和确定的。如本文使用的，术语“嵌合抗体”意指抗体或其FKN结合片段具有衍生自非人哺乳动物、啮齿类动物或爬行类动物的抗体氨基酸序列的至少一个可变结构域的至少某些部分，而抗体或其FKN结合片段的其余部分衍生自人。例如，嵌合抗体可以包含小鼠抗原结合结构域及人Fc或其他此类结构域。

人源化抗体

本发明涵盖人源化抗FKN抗体及其FKN结合片段，其例如调节FKN和CX3CR1之间的相互作用。人源化可以借助于互补决定区（CDR）嫁接法执行（Kontermann和Dübel，AntibodyEngineering，SpringerLabManual（2001）和Tsurushita等人，Methods36:69-83（2005））。人源化还可以根据本领域已知的方法通过用高变区序列取代人抗体的相应序列执行（参见例如，Jones等人，Nature321:522-525（1986）；Riechmann等人，Nature332:323-327（1988）；和Verhoeyen等人，Science239:1534-1536（1988））。人源化抗体一般是人抗体，其中某些高变区残基和可能地某些FR残基通过来自非人抗体中的类似位点的残基取代。

在制备人源化抗体中使用的轻和重链人可变结构域的选择对于减少抗原性可以是重要的。根据“最佳拟合”法，啮齿类动物抗体的可变结构域的序列针对已知人可变结构域序列的整个文库进行筛选。最接近于啮齿类动物那种的人序列随后接受为用于人源化抗体的人构架。参见例如，Sims等人，J.Immunol.151:2296-2308（1993）和Chothia等人，J.Mol.Biol.196:901-917（1987）。另一种方法使用衍生自轻或重链特定亚组的所有人抗体的共有序列的特定构架。相同构架可以用于几种不同人源化抗体。参见例如，Carter等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA89:4285-4289（1992）和Presta等人，J.Immunol.151:2623-2632（1993）。

一般进一步希望抗体是人源化的，保留对于抗原的高亲和力和其他有利的生物学性质。为了达到这个目标，根据一个方法，使用亲本和人源化序列的三维模型，通过分析亲本序列和多种概念人源化产物的过程制备人源化抗体。三维免疫球蛋白模型是商购可得的，并且是本领域技术人员熟悉的。举例说明且展示出所选的候选免疫球蛋白序列的可能三维构象结构的计算机程序是可获得的。这些展示的检查允许分析残基在候选免疫球蛋白序列的功能中的可能作用，即分析影响候选免疫球蛋白结合其抗原的能力的残基。以这种方式，FR残基可以选择且从受体和输入序列组合，从而使得达到所需抗体特征，例如对于一种或多种靶抗原（例如FKN或其片段）增加的亲和力。一般而言，CDR残基直接且最实质地涉及影响抗原结合。

FKN结合片段

在本发明的特定实施方案中，提供了调节FKN和CX3CR1之间的相互作用的FKN结合片段。此类片段可以是完整、人源化和/或嵌合抗体的功能抗原结合片段，例如Fab、Fab'、F（ab'）₂、Fv或ScFv片段（参见例如，Bird等人，Science242:423-426（1998））。此类片段通过直接来自重组转化的宿主细胞的完整抗体的蛋白酶解消化通过例如木瓜蛋白酶消化（参见例如，WO94/29348）产生。FKN结合片段可以使用下文描述的多种改造技术产生。

Fv片段在其2条链之间具有比Fab片段更低的相互作用能量。为了稳定VH和VL结构域的结合，Fv片段已与肽（参见例如，Bird等人，Science242:423-426（1998）和Huston等人，PNAS85:5879-5883（1998））、二硫桥（参见例如，Glockshuber等人，Biochemistry29:1362-1367（1990））、和“结进孔（knobinhole）”突变（参见例如，Zhu等人，ProteinSci.6:781-788（1997））连接。ScFv片段可以通过本领域技术人员众所周知的方法产生（参见例如，Whitlow等人，MethodsEnzymol.2:97-105（1991）和Huston等人，Int.Rev.Immunol.10:195-217（1993））。ScFv可以在细菌细胞例如大肠杆菌（E.coli）中产生，但还可以在真核细胞中产生。ScFv的一个缺点是产物的单价，这排除由于多价结合增加的亲合力，和ScFv片段的短半衰期。克服这些问题的尝试包括通过化学偶联（参见例如，Adams等人，CancerRes.53:4026-4034（1993）和McCartney等人，ProteinEng.8:301-314（1995））或通过含有不成对C末端半胱氨酸残基的ScFv的自发性位点特异性二聚化（参见例如，Kipriyanov等人，Cell.Biophys.26:187-204（1995）），由含有另外C末端半胱氨酸的ScFv产生的二价（ScFv'）₂。可替代地，通过将肽接头缩短至3–12个残基，ScFv可以被迫形成多聚体，以形成“双抗体”（参见例如，Holliger等人，PNAS90:6444-6448（1993））。减少接头进一步可以导致ScFv三聚体，以形成“三抗体”（参见例如，Kortt等人，ProteinEng.10:423-433（1997）），和四聚体，以形成“四抗体”（参见例如，LeGall等人，FEBSLetters453:164-168（1999））。二价ScFv分子的构建还可以通过与蛋白质二聚化基序的基因融合来达到，以形成“微型抗体”（参见例如，Pack等人，Biochemistry31:1579-1584（1992））和“微体”（参见例如，Hu等人，CancerRes.56:3055-3061（1996））。ScFv-Sc-Fv串联（（ScFV）₂）还可以通过经由第三个肽接头连接2个ScFv单位产生（参见例如，Kurucz等人，J.Immunol.154:4576-4582（1995））。经由2个单链融合产物的非共价结合可以产生双特异性抗体，所述融合产物含有通过短接头与另一个抗体的VL结构域连接的来自一个抗体的VH结构域（参见例如，Kipriyanov等人，Int.J.Can.77:763-772（1998））。通过引入二硫桥或“结进孔”突变或通过形成单链双抗体（ScDb），可以增强此类双特异性抗体的稳定性，其中2个杂交ScFv片段通过肽接头连接（参见例如，Kontermann等人，J.Immunol.Methods226:179-188（1999））。通过经由铰链区例如使ScFv片段与IgG分子的CH3结构域或Fab片段融合（参见例如，Coloma等人，NatureBiotechnol.15:159-163（1997）），四价双特异性分子是获得的。可替代地，通过双特异性单链双抗体的融合（参见例如，Alt等人，FEBSLetters454:90-94（1999）），四价双特异性抗体是可获得的。通过具有含有螺旋-环-螺旋基序的接头的ScFv-ScFv串联（DiBi微型抗体）（参见例如，Muller等人，FEBSLetters432:45-49（1998）），或包含以阻止分子内配对方向的4个抗体可变结构域（VH和VL）的单链分子（串联双抗体）（参见例如，Kipriyanov等人，J.Mol.Biol.293:41-56（1999））的二聚化，也可以形成较小的四价双特异性分子。通过Fab'片段的化学偶联或通过经由亮氨酸拉链的异二聚化（参见例如，Shalaby等人，J.Exp.Med.175:217-225（1992）和Kostelny等人，J.Immunol.148:1547-1553（1992）），可以制备双特异性F（ab'）₂片段。还可获得的是分离的VH和VL结构域（参见例如，在此引入作为参考的美国专利号6,248,516；6,291,158；和6,172,197）。

药物制剂

包含本发明的抗体或其FKN结合片段的治疗制剂可以以水性或干燥制剂形式与生理学可接受的载体、赋形剂或稳定剂组合。可接受的载体、赋形剂或稳定剂包括例如盐水；缓冲剂例如磷酸盐、柠檬酸盐和其他有机酸；抗氧化剂包括抗坏血酸；低分子量多肽；蛋白质（例如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白）；亲水聚合物例如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸；单糖、二糖及其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂例如EDTA；糖醇例如甘露醇或山梨糖醇；成盐抗衡离子例如钠；或非离子型表面活性剂例如TWEEN^TM、PLURONICS^TM或PEG。

本发明的抗体或其FKN结合片段可以陷入微胶囊、胶体药物递送系统（例如脂质体、白蛋白微球体、微乳液、纳米颗粒或纳米胶囊）或粗乳液中。当抗体的持续释放施用在具有适合于治疗需要抗体施用的任何病症的释放特征的制剂中是需要的时，可以考虑抗体的微胶囊封装。持续释放基质的例子包括聚酯、水凝胶（例如聚（2-羟乙基-甲基丙烯酸酯）或聚（乙烯醇））、聚乳酸酯（参见例如，美国专利号3,773,919）、L-谷氨酸和γ乙基-L-谷氨酸盐的共聚物、不可降解的乙烯乙酸乙烯酯、可降解的乳酸-乙醇酸共聚物例如LUPRONDEPOT^TM（由乳酸-乙醇酸共聚物和乙酸亮丙瑞林组成的可注射微球体）和聚-D-（-）-3-羟丁酸。

待用于体内施用的制剂必须是无菌的。这通过经由无菌滤膜过滤容易地完成。

组合治疗

本发明的治疗抗体或其FKN结合片段可以单独或与其他组合物组合在治疗中使用。例如，本发明的抗体可以与下述中的一种或多种共施用：另一种抗体、抗炎剂、细胞毒剂、抗血管生成因子、细胞因子、生长抑制试剂或抗TNF-α治疗。此类组合治疗包括组合施用（其中2种或更多种试剂包括在相同或分开的制剂中）和分开施用（例如同时或序贯地）。当2种或更多种试剂分开施用时，本发明的抗体的施用可以在附加治疗的施用前或后发生。

与抗FKN抗体或其FKN结合片段组合施用的治疗试剂的有效量将根据医生的判断。剂量测定计算为达到待治疗状况的最大限度管理。剂量将另外取决于此类因素，如待使用的治疗试剂的类型和待治疗的特定受试者。由于另外治疗试剂和抗FKN抗体或其FKN结合片段的组合作用（协同作用），合适剂量可以降低。

抗炎剂

抗炎化合物可以与本发明的抗体或FKN结合片段组合施用。示例性抗炎剂包括类固醇例如糖皮质激素、非甾体抗炎药（例如布洛芬或他克莫司）、环加氧酶-2-特异性抑制剂例如罗非昔布（Vioxx?）和塞来昔布（Celebrex?）、皮质类固醇（例如泼尼松或氢化可的松）、针对T淋巴细胞功能的特异性细胞因子、氟比洛芬、双氯芬酸和酮咯酸（ketarolac）。参见例如，在此引入作为参考的美国专利号7,112,578和7,199,119。

其他试剂

可以施用的其他治疗试剂包括例如氨基水杨酸盐（例如5-氨基水杨酸）、柳氮磺胺吡啶（例如柳氮磺吡啶（azulfadine）、美沙拉嗪（例如Asacol^?或Pentasa^?）、硫唑嘌呤（例如Imuran^?）、6-巯嘌呤（例如Purinethol^?）、环孢菌素、氨甲蝶呤、英夫利昔单抗（例如Remicade^?）、干扰素（例如干扰素-β）、乙酸格拉默（例如Copaxone^?）、那他珠单抗（Tysabri^?）、抗整联蛋白α4、熊去氧胆酸、盐酸他克林、HMGCoA还原酶抑制剂、利多卡因、磺酰脲、环磷酰胺、静脉内免疫球蛋白、阿米替林、阿片类（例如吗啡）、地芬诺酯、阿托品、维生素D、钙、拉莫三嗪、喹硫平、前列腺素E1、硝酸甘油、培加尼布、雷珠单抗、二硝酸异山梨酯、哌罗匹隆、托吡酯、奥卡西平、多巴胺、霉酚酸酯、咪唑立宾、左乙拉西坦、芬太尼、曲马多、洋地黄、辣椒辣素、利钠肽、羟氯喹、-dronates（例如阿屈膦酸盐）、苯扎贝特、美西律、格列奈类（例如那格列奈或瑞格列奈）、盐酸多奈哌齐、来氟米特、普瑞巴林、酒石酸卡巴拉汀、芬太尼、前列腺环素、普鲁卡因胺、秋水仙碱、α-葡糖苷酶抑制剂、利尿剂（例如噻嗪类利尿剂或抗醛固酮利尿剂）、他克莫司、盐酸美金刚、喷他佐辛、氯吡格雷、组织型纤溶酶原激活物、沙立度胺、血管收缩素受体阻断剂、噻唑烷二酮、甲硝唑、螺内酯、度洛西汀、帕罗西汀、可乐定、噻氯匹定、肝素、钙通道阻断剂、胰岛素、白蛋白、布西拉明、卡马西平、利培酮、利马前列素、华法林、维替泊芬、加巴喷丁、氢溴酸加兰他敏、阿司匹林、尿激酶、苯丁酸氮芥、血管紧张素转换酶抑制剂、双胍、β-肾上腺素能受体抑制剂或激动剂、羟氯喹和米托蒽醌。

本文描述的病症（例如炎性病症）的治疗可以另外涉及其他治疗的施用。例如，血浆去除术（例如血浆交换治疗）可以用于治疗例如格-巴二氏综合征、脱髓鞘多发性神经根病（例如慢性炎性脱髓鞘多发性神经根病）、特发性血小板减少性紫癜（TTP）、贝切特氏病或多发性硬化。

剂量和施用

炎性病症的减轻或治疗一般涉及与病症有关的一种或多种症状或并发症的减少。在炎性病症的情况下，治疗抗体、其FKN结合片段或药物组合物的治疗有效量可以完成下述中的一种或组合：减少炎症；减少腹痛或绞痛（cramping）；减少胃气胀；减少或消除腹泻；减少消化道的溃疡形成；减少发热；减少或缓解恶心；减少疲乏；使重量减轻降到最低；缓和关节疼痛；减少肿胀；止痒或皮疹；消除黄疸；和/或缓解与炎性病症相关的一种或多种症状。待施用的抗体的“治疗有效量”是阻止、改善或治疗炎性病症所需的最低限度量。

本文描述的抗体、FKN结合片段和药物组合物依照已知方法施用于受试者，例如作为推注剂或通过经过一段时间的连续输注的静脉内施用、局部、经口、皮下、通过支气管注射、脑内、鼻内、经皮、腹膜内、肌内、肺内、经阴道、经直肠、关节内、动脉内、损伤内、肠胃外、在脑中的脑室内或眼内。如果广泛副作用或毒性与治疗相关，那么局部施用可以是特别需要的。

用于经口使用的制剂还可以作为咀嚼片，或作为其中活性成分与惰性固体稀释剂混合的硬明胶胶囊，或作为其中活性成分与水或油介质混合的软明胶胶囊提供。

本发明的组合物的施用剂量和时机取决于多种临床因素，包括受试者的总体健康和炎性病症症状的严重性。治疗可以继续范围为1天-4年、1天-3年、1天-2年、1天-1年、1-100天、1-60天、1-20天、1-10天的时间段，或直至炎性病症或炎性病症的症状被治疗或缓和。本发明的组合物可以每天4次、每天3次、每天2次、每天1次、每周1次、每月2次、每月1次、每2月1次、每3月1次或每年1次施用。剂量取决于状况的严重性改变，并且逐步增加至达到范围为约1ng/mL-10μg/mL或1-500ng/mL的稳态血液血清浓度。施用的抗体量一般在约0.001-约30mg/kg受试者重量（例如0.01-约10mg/kg受试者重量）范围中。

实施例

本发明通过下述实施例举例说明，所述实施例决不预期是本发明的限制。

实施例1.小鼠抗人CXXXC趋化分子（hFKN）单克隆抗体的制备

如先前所述生成小鼠抗hFKN单克隆抗体（mAb）（参见例如，在此引入作为参考的美国专利号7,390,490）。获得中和mAb克隆1F3-1、3A5-2、1F3、1G1、2B2、3D5、3H7、6D1、7F6和5H7-6。

实施例2.用于人源化的候选mAb的选择

使用用于测量中和活性的趋化性测定，用于测量与hFKN的结合亲和力的BIACORE^?测定，和用于测量与食蟹猴FKN的物种交叉反应性的酶联免疫吸附测定（ELISA），分析克隆1F3-1、3A5-2和5H7-6。中和活性、结合亲和力和与食蟹猴FKN的物种交叉反应性概括于图2中。克隆3A5-2显示最高中和活性和对于hFKN的最高结合亲和力。克隆3A5-2显示与食蟹猴FKN和hFKN的相等反应性。因此，克隆3A5-2选择为用于人源化的候选物。

趋化性测定如下执行。将细胞置于transwell培养板（MultiScreen-MICPlate，5.0μm，Millipore，目录号MAMIC5S10）的上层孔中，而在下层孔中具有配体。首先，使重组人FKN（R&DSystems，目录号362-CX/CF）（33ng/ml终浓度）（图1）与不同浓度（0-10μg/ml）的纯化抗体在室温预温育。组合物含有下述组分：10x趋化因子溶液，15μl/孔；10x纯化的mAb，15μl/孔；和1x趋化性缓冲液（溶于RPMI1640（Invitrogen）中的0.5％BSA、0.5％FBS、20mMHEPES（pH7.4）、50μM2-巯基乙醇），120μl/孔。在30分钟后，将由CX3CR1（2x10⁵细胞/75μl）转染的B300.19细胞应用于上层孔，并且在5％-CO₂温箱中在37℃温育4小时。在温育后，收集下层孔的150μl溶液，用50μl4％PFA/PBS固定，并且将30μl样品应用于FACSCantoII细胞分析仪，以计数迁移的细胞。

BIACORE^?测定如下执行。将重组蛋白质A/G（PierceChemical）固定在BIACORE^?传感器芯片（CM5）上，所述传感器芯片用胺偶联试剂（GEHealthcare）预活化。将纯化的mAb以0.2μg/ml的浓度加入传感器芯片内。将可溶性抗原（与分泌型碱性磷酸酶（SEAP）或对照SEAP蛋白质缀合的可溶性FKN）以不同浓度（0-200nM）加入传感器芯片内。连续监控在传感器芯片上捕获的加入抗原与mAb的结合，并且使用BIACORE^?A100系统（GEHealthcare）测定抗原的相对结合应答。

ELISA如下执行。将多克隆抗兔IgG抗体（JacksonImmunoResearchLaboratories，目录号711-005-152）包被在96孔板（Nunc，目录号442402）的孔上。在4℃过夜温育后，将孔用1xBlock-Ace（DainipponPharma）在室温封闭1小时。在用0.05％Tween20/PBS洗涤3次后，将10nM兔多克隆抗PLAP抗体（Biomeda）加入孔中（50μl/孔）。在室温温育1小时且如上所述洗涤3次后，将含有hFKN-SEAP或食蟹猴FKN-SEAP的培养上清液加入（1nM终浓度）孔中，并且在室温温育1小时。在洗涤3次后，将纯化的抗hFKNmAb以不同浓度（0-10μg/ml）加入孔中。在温育1小时且洗涤3次后，将辣根过氧化物酶缀合的抗小鼠IgG抗体（JacksonImmunoResearchLaboratories，目录号715-036-151）以0.16μg/ml（50μl/孔）加入，并且在室温温育1小时。在洗涤3次后，将TMB（3,3’,5,5’-四甲基联苯胺）溶液加入孔中，并且允许温育15-30分钟。将等体积的停止液（2MH₂SO₄）加入孔中，并且通过微板阅读器（Arvo，PerkinElmer）读出在450nm的光密度。

可溶性hFKN-SEAP如下制备。编码hFKN的细胞外区域的cDNA用5’-SalI-hFKN引物（CGCGTCGACGCCACCAT-GGCTCCGATATCTCTGTC；SEQIDNO：2）和3’-NotI-hFKN引物（GCGGGCG-GCCGCCCTCCGGGTGGCAGCCTGGG；SEQIDNO：3）扩增，并且亚克隆到含有SEAPcDNA的pcDNA3.1（+）dSalISEAP载体内。将hFKN-SEAP的表达载体转染到HEK293EBNA（HEK293E）细胞（Invitrogen）内。在转染前一天，用HEK293E细胞接种补充有10％胎牛血清的DMEM（Invitrogen）。在转染当天，将培养基更换为OPTI-MEMII无血清培养基（Invitrogen）。根据制造商的说明书，用TransITLT1（TAKARA）转染表达载体。在温育（5％CO₂在37℃）3天后，收获培养上清液。使用GreatEscAPeSEAP化学发光试剂盒2.0（Clontech）测量SEAP蛋白质的浓度。

可溶性食蟹猴FKN-SEAP如下制备。编码食蟹猴FKN的细胞外区域的cDNA用5’-XhoI-食蟹猴FKN引物（GCGCTCGAGGCCACCATGGCTCCGATA-TCTCTGTCGTGG；SEQIDNO：4）和3’-NotI-食蟹猴FKN引物（CGCGGCGGCCGCGGTGGCAGCCTGGGAGTCAGGGAC；SEQIDNO：5）扩增，并且亚克隆到含有SEAPcDNA的pENTR1A（Invitrogen）内。通过使用GATEWAY系统（Invitrogen），将编码食蟹猴FKN和SEAP的片段转移至含有盒B的pcDNA3.1。如上所述制备含有食蟹猴FKN-SEAP的培养上清液。

实施例3.克隆3A5-2小鼠抗hFKNmAb的重和轻链的可变区的cDNA克隆

通过RT-PCR扩增克隆3A5-2的重和轻链的cDNA。用RNeasyMiniKit（QIAGEN）从克隆3A5-2的杂交瘤中提取总RNA。通过使用总RNA，使用cDNA合成试剂盒（TAKARA）合成cDNA，并且分别地对于重链用下述扩增：5’-Mm-HC-前导区1引物（GGGATGGRATGSAG-CTGKGTMATSCTCTT；SEQIDNO：6），5’-Mm-HC-前导区2引物（GGGATGRA-CTTCGGGYTGAGCTKGGTTTT；SEQIDNO：7）或5’-Mm-HC-前导区3引物（GGGATGGCTGTCTTGGGGCTGCTCTTCT；SEQIDNO：8）和3’-Mm-IgG2a-CH3-R引物（TCATTTACCCGGAGTCCGGGAGAAGCTCTTAGTC；SEQIDNO：9），并且对于轻链用下述扩增：5’-Mm-LC-前导区1引物（GGGATGGAGACAGACACA-CTCCTGCTAT；SEQIDNO：10）或5’-Mm-LC-前导区2引物（GGGATGGATTTT-CAGGTGCAGATTTTCAG；SEQIDNO：11）或5’-Mm-LC-前导区3引物（GGGATGRAGTCACAKACYCAGGTCTTYRTA；SEQIDNO：12）或5’-Mm-LC-前导区4引物（GGGATGAGGKCCCCWGCTCAGYTYCTKGGR；SEQIDNO：13）或5’-Mm-LC-前导区5引物（GGGATGAAGTTGGCTGTTAGGCTGTTG；SEQIDNO：14）和3’-Mm-Cκ-R引物（CTAACACTCATTCCTGTTGAAGCTC；SEQIDNO：15）。将扩增的cDNA亚克隆到pCR2.1载体（Invitrogen）内。使用ABI3130XL分析序列。获得全长重链和L链的5'截短形式。为了扩增L链的截短区域，并且鉴定精确的前导序列，执行cDNA末端的5'快速扩增（5’-RACE）。使用cDNA合成试剂盒（TAKARA）制备双链cDNA，并且加入5’衔接子（使ad29S；ACATCACTC-CGT（SEQIDNO：16）和as29AS；ACGGAGTGATGTCCGTCGACGTATCTCTGC-GTTGATACTTCAGCGTAGCT（SEQIDNO：17）退火）。分别地，对于第一个PCR，用5’-PCR1引物（GTATCAACGCAGAGATACGTCGACGG；SEQIDNO：18），并且对于第二个PCR，5’-PCR4引物（AGCTACGCTGAAGTATCAACGC-AG-AG；SEQIDNO：19），并且对于第一个PCR，3’HCRACE引物_1（GTACGGA-GTACTCCAAAAATGTTG；SEQIDNO：20），或对于第二个PCR，3’HCRACE引物_2（TCTTCAGGCTGCAGGCTGATGATC；SEQIDNO：21）用于H链，对于第一个PCR，3’LCRACE引物_3（AAATCTTCAGGCTGCAGGCTGTTG；SEQIDNO：22），或对于第二个PCR，3’LCRACE引物_4（CTGTTGATCTTGAGAGAATAT-TGTG；SEQIDNO：23）用于L链，扩增cDNA。如上所述亚克隆且测序扩增的cDNA。鉴定的可变区序列如下。

重（H）链可变区的核苷酸序列：

轻（L）链可变区的核苷酸序列：

重（H）链可变区的氨基酸序列：

轻（L）链可变区的氨基酸序列：

实施例4.来自克隆3A5-2的人源化抗FKNmAb的设计

小鼠抗hFKNmAb克隆3A5-2借助于互补决定区（CDR）嫁接法进行人源化（Kontermann和Dübel，AntibodyEngineering，SpringerLabManual（2001）和Tsurushita等人，Methods36:69-83（2005））。CDR的氨基酸序列如下。

在人可变区区段中选择人受体构架。将3A5-2的鉴定CDR移植到所选人受体构架内。设计的人源化序列如下。

H链（指定为H3；SEQIDNO：36）

H链（指定为H3-2；SEQIDNO：37）

L链（指定为L2；SEQIDNO：38）

H链（指定为H4；SEQIDNO：39）

关于H链的种系序列（SEQIDNO：40）

关于L链的种系序列（SEQIDNO：41）

H链（指定为HK2；SEQIDNO：42）

H链（指定为HK3；SEQIDNO：43）

L链（指定为L4；SEQIDNO：44）

L链（指定为L5；SEQIDNO：45）

比对了所有人源化序列（图3和4）。

实施例5.人源化抗hFKNmAb的表达载体的构建

为了选择用于表达人源化mAb的前导序列，基于与AAA68427.1和ABU90602.1的相似性搜索种系区段。区段VH1-1-18和VKI-O12分别最类似于AAA68427.1和ABU90602.1。它们的前导序列用于表达人源化mAb。它们的前导序列如下。

H链氨基酸序列（SEQIDNO：46）

H链核苷酸序列

ATGGACTGGACCTGGAGCATCCTTTTCTTGGTGGCAGCACCAACAGGTGCCCACTCC（对于H3和H3-2；SEQIDNO：47）

ATGGACTGGACATGGTCCATCCTGTTCCTGGTGGCCGCTCCAACTGGCGCACACTCT（对于HK2和HK3；SEQIDNO：48）

L链氨基酸序列（SEQIDNO：49）

L链核苷酸序列（SEQIDNO：50）

用下述引物通过PCR生成具有上述前导序列加入的设计人源化抗hFKNmAb的可变区。

对于H3重链

h3A5-2_VH3-1引物（SEQIDNO：51）:

h3A5-2_VH3-2R引物（SEQIDNO：52）:

h3A5-2_VH3-3引物（SEQIDNO：53）:

h3A5-2_VH3-4R引物（SEQIDNO：54）:

h3A5-2_VH3-5引物（SEQIDNO：55）:

h3A5-2_VH3-6R引物（SEQIDNO：56）:

h3A5-2_VH3-7引物（SEQIDNO：57）:

h3A5-2_VH3-8R引物（SEQIDNO：58）:

h3A5-2_VH3-9引物（SEQIDNO：59）:

h3A5-2_VH3-10R引物（SEQIDNO：60）:

h3A5-2_VH3-11引物（SEQIDNO：61）:

h3A5-2_VH3-12R引物（SEQIDNO：62）:

h3A5-2VH3-13引物（SEQIDNO：63）:

h3A5-2_R引物（SEQIDNO：64）:

对于L2轻链

h3A5-2_VL2-1引物（SEQIDNO：65）:

h3A5-2_VL2-2R引物（SEQIDNO：66）:

h3A5-2_VL2-3引物（SEQIDNO：67）:

h3A5-2_VL2-4R引物（SEQIDNO：68）:

h3A5-2_VL2-5引物（SEQIDNO：69）:

h3A5-2_VL2-6R引物（SEQIDNO：70）:

h3A5-2_VL2-7引物（SEQIDNO：71）:

h3A5-2_VL2-8R引物（SEQIDNO：72）:

h3A5-2_VL-R（SEQIDNO：73）：

通过PCR扩增生成的H3和L2，分别地，对于H3使用5’-Eco-Sal-h3A5-2_VH_F引物（GCGAATTCGTCGACGCCACCATGGACTGGACCTGGAGCATCCTTTT-CTTG；SEQIDNO：74）和3’-NheI-h3A5-2_VH_R（CGCGCTAGCTGAAGAGAC-GGTGACCGTGGT-CCC；SEQIDNO：75），并且对于L2，使用5’-h3A5-2_VL_SalI-kozac_F引物（GCGGTCGACGCCACCATGGACATGAGGGTCCCC；SEQIDNO：76）和3’-h3A5-2_VL-R引物（GACAGATGGTGCAGCCACAGTTCGTTTGATCTCCAC-CTTGGTCCCTCC；SEQIDNO：77）。

通过GenscriptUSAInc生成H4。H4的序列如下。

H4（SEQIDNO：78）:

用下述引物，使用PCR通过点突变由H4生成HK2的可变区。

3A5-2_HKG2_sal24F引物（SEQIDNO：79）:

h3A5-2_HKG2_280F引物（SEQIDNO：80）:

h3A5-2_HKG2_300R引物（SEQIDNO：81）:

h3A5-2_HKG2_340F引物（SEQIDNO：82）:

h3A5-2_HKG2_370R引物（SEQIDNO：83）:

h3A5-2_HKG2_Nhe24R（SEQIDNO：84）:

用下述引物，使用PCR通过点突变由HK2生成HK3的可变区。

h3A5-2_HKG2_sal24F引物（SEQIDNO：85）:

HKG3_R引物（SEQIDNO：86）:

HKG3_F引物（SEQIDNO：87）:

h3A5-2_HKG2_Nhe24R引物（SEQIDNO：88）:

用下述引物，使用PCR通过点突变由L2生成L4的可变区。

h3A5-2_VL4_sal24F引物（SEQIDNO:89）:

h3A5-2_VL4_200R引物（SEQIDNO：90）:

h3A5-2_VL4_190F引物（SEQIDNO：91）:

h3A5-2_VL4_260R引物（SEQIDNO：92）:

h3A5-2_VL4_250F引物（SEQIDNO：93）:

h3A5-2_VL4_BsiW24R引物（SEQIDNO：94）:

用下述引物，使用PCR通过点突变由L4生成L5的可变区。

h3A5-2_VL4_sal24F引物（SEQIDNO：95）:

VL5_R引物（SEQIDNO：96）:

VL5_F引物（SEQIDNO：97）:

h3A5-2_VL4_BsiW24R（SEQIDNO：98）:

扩增IgG2和Igκ的恒定区，分别地，对于IgG2使用5’-NheI-IgG2_F引物（CGCGCTAGCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCC；SEQIDNO：99）和3’-EcoRV-IgG2_R引物（CGCGATATCTCATTTACCCGGAGACAGGGAGAG；SEQIDNO：100），并且对于Igκ使用5’-BsiWI-Igk_F引物（CGCCGTACGGTGGCTGCACCA-TCTGTCTTCATC；SEQIDNO：101）和3’-EcoRV-Igk_R引物（CGCGATATCCT-AACACTCTCCCCTGTTGAAGCT；SEQIDNO：102）。将扩增的恒定区亚克隆到其中缺失NotI的pENTR1AdNotI内。

分别地，通过使用SalI-NheI位点用于重链或SalI-BsiWI位点用于轻链，将生成的可变区亚克隆到pENTR1A-IgG2或pENTR1A-Igκ内。在L2的情况下，Igκ的恒定区用5’-hIGK_F引物（CGAACTGTGGCTGCACCATCTGTC；SEQIDNO：103）和3’-hIGK_NotI-R引物（CGCGCGGCCGCCTAACACTCTCCCCTGTTGAAGCTCTT；SEQIDNO：104）进行扩增。通过PCR组合扩增的Igκ恒定区和生成的L2并且亚克隆到pENTR1A中。通过使用GATEWAY系统（Invitrogen），分别地，对于重链和轻链，将亚克隆的可变区和恒定区转移到pEE6.4或pEE12.4（Lonza）内。

用GeneTailor定点诱变系统，通过点突变由pENTR1A-H3-IgG2生成H3-2，其使用5’-h3A5-2_H3-2_300F引物（TTGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGACACGGCC；SEQIDNO：105）和3’-h3A5-2_H3-2_320R引物（AGATCTCAGGCTGCTCAGCAACATGTAGGC；SEQIDNO：106）。根据制造商的说明书执行GeneTailor定点诱变。如上所述将突变的可变区和恒定区转移到pEE6.4内。

实施例6.人源化抗hFKNmAb的制备

将人源化抗hFKNmAb的重和轻链的表达载体转染到HEK293E细胞内。在转染当天，用HEK293E细胞接种补充有10％胎牛血清的DMEM（Invitrogen）。在温育5小时后，根据制造商的说明书，用Lipofectamine2000（Invitrogen）转染重和轻链表达载体的混合物。在转染第二天，将培养基更换为293无血清培养基（SFM）II（Invitrogen）。在37℃温育5天后，收获培养上清液。对于BIACORE^?测定，直接使用收获的上清液。对于趋化性测定，用重组蛋白质A琼脂糖柱（Pharmacia）纯化上清液。

实施例7.小鼠-人嵌合3A5-2mAb的制备

用5’-EcoRI-SalI-3A5-2VH引物（GCGGAATTCGTCGACGCCACCATGCGATGGAGCTGGA-TC；SEQIDNO：107）和3’-IgG重叠的3A5-2VH引物（GACCGATGGGCC-CTTGGTGGAGGCTGAGGAGACTGTGAGAGTGGTGCC；SEQIDNO：108）扩增小鼠3A5-2的重链的可变区。用5’-hIgG2引物（GCCTCCACCA-AGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCGCCCTG；SEQIDNO：109）和3’-NotI-hIgG2（CGCGCGGCCGCTCATTTACCCGGAGACAGGGAGAG；SEQIDNO：110）扩增人IgG2恒定区。用PCR组合扩增的3A5-2VH和人IgG2恒定区，并且亚克隆到具有用于细胞选择的杀稻瘟菌素抗性基因的pCX-IRES-bsr内。用5’-3A_VL-SalI-kozac_F引物（GCGGTCGACGCCACCATGAGTGTGCTCACTCAG；SEQIDNO：111）和3’-3A-IgG1,2_VH-R引物（GACAGATGGTGCAGCCACAGTTCGTTTTATTTCCAGCTTGGTCCCCCCT；SEQIDNO：112）扩增小鼠3A5-2的轻链的可变区。用5’-hIGK_F引物（CGAACTGTGGCTGCACCATCTGTC；SEQIDNO：113）和3’-hIGK_NotI-R（CGCGCGGCCGCCTAACACTCTCCCCTGTTGA-AGCTCTT；SEQIDNO：114）扩增人Igκ恒定区。用PCR组合扩增的3A5-2VH和人IgG2恒定区，并且亚克隆到具有用于细胞选择的嘌呤霉素抗性基因的pMX-IRES-puro内。

用pE-Eco和pGp（TAKARA），将嵌合轻链的表达载体转染到HEK293E细胞内用于逆转录病毒包装。在转染前一天，用HEK293E细胞接种补充有10％胎牛血清的DMEM（Invitrogen）。在转染当天，用TranITLT1（TAKARA）转染载体。在温育3天后，收获含有逆转录病毒的培养上清液，并且加入B300.19细胞中。在温育8小时后，去除培养上清液，并且加入具有10％FBS的RPMI1640（Invitrogen）。在培养2天后，加入嘌呤霉素，以选择受感染细胞。所选细胞随后用携带嵌合重链的另一种重组逆转录病毒感染，其使用如对于轻链所述的相似方法制备。在用杀稻瘟菌素选择后，双重选择的细胞与含有8mMGlutamax、55μM2-巯基乙醇、1x胆固醇（Invitrogen）的SF-O（SankoJunyaku）一起在IntegraCELLine（IntegraBioscience）中培养。对于趋化性测定和BIACORE^?测定，使用重组蛋白质A琼脂糖柱（Pharmacia）纯化培养上清液。

实施例8.人源化抗hFKNmAb的分析

使用用于测量中和活性的趋化性测定和用于测量与hFKN和食蟹猴FKN的结合亲和力的BIACORE^?测定，分析人源化抗hFKNmAb。来自3次独立趋化性测定的代表性数据和结果概括于图5中且显示于6A-B、7A-D和8A-F中。成功地人源化关于重链的H3和H3-2与关于轻链的L2和L4的所有组合，因为这些mAb显示与嵌合mAb的相似中和活性。然而，通过使用缩小关键残基制备的HK2显示与L2或L4组合的减少中和活性。BIACORE^?测定的结果概括于图9和10A-C中。与嵌合mAb比较，关于重链的H3和H3-2与关于轻链的L2和L4的所有组合显示相似水平的亲和力。另一方面，HK2L4显示低于其他的亲和力。这些结果暗示3A5-2无法使用通常关键残基鉴定通过一般方法成功地人源化，特别是在重链的情况下。

趋化性测定如下执行。将细胞置于transwell培养板（MultiScreen-MICPlate，5.0μm，Millipore，目录号MAMIC5S10）的上层孔中，而在下层孔中具有配体。首先，将重组人FKN（R&DSystems，目录号362-CX/CF）（10ng/ml终浓度）与不同浓度（0-10μg/ml）的纯化抗体一起加入下层孔中。组合物含有下述组分：3x趋化因子溶液，50μl/孔；1.5x纯化的mAb，100μl/孔；用1x趋化性缓冲液（上文描述）稀释趋化因子和纯化的抗体。将由CX3CR1（2x10⁵细胞/75μl）转染的B300.19细胞与不同浓度（0-10μg/ml）的纯化抗体一起应用于上层孔。组合物含有下述组分：3x细胞悬液，25μl/孔；1.5x纯化的mAb溶液，50μl/孔；用1x趋化性缓冲液稀释细胞和纯化的抗体。趋化性测定在5％-CO₂温箱中在37℃温育4小时。在温育后，收集下层孔的150μl，用50μl4％PFA/PBS固定，并且将30μl样品应用于FACSCantoII细胞分析仪，以计数迁移的细胞。

BIACORE^?测定如上所述执行。然而，对于人源化和嵌合mAb，抗人IgG小鼠mAb（GEHealthcare）用作传感器芯片上的捕获抗体。

实施例9.使用来自FKN趋化因子结构域的合成肽的表位作图

执行使用来自FKN趋化因子结构域的重叠合成肽文库的表位作图。通过SigmaGenosys合成二十一种15残基肽。用DMSO将肽溶解至10mg/ml。将这些肽（50μg/ml）在ELISA板（Nunc）上在4℃包被过夜。去除肽溶液，并且将含有1％BlockAce（DainipponPharma）的PBS溶液加入每个孔中，在室温温育1小时，并且用含有0.05％Tween20的Tris缓冲盐水（pH7.4）（洗涤液）洗涤。将H3-2L4抗体溶液（50μg/ml）加入孔中，并且在室温温育2小时。去除抗体溶液，并且用洗涤液洗涤。将过氧化物酶标记的抗人IgG抗体溶液（Zymed；400ng/ml）加入孔中，并且在室温温育1小时。去除抗体溶液，并且用洗涤液洗涤。将TMBZ溶液（Sigma）加入每个孔中，并且在室温温育10分钟。用1NH₂SO₄溶液终止反应，并且测量在450-650nm的吸光度。

结果显示于图11中。H3-2L4抗体与来自人FKN的N末端和中间区的肽反应。

实施例10.丙氨酸或丝氨酸取代突变体的制备

如下制备hFKN-SEAP的丙氨酸或丝氨酸取代突变体。通过使用SalI/NotI限制性酶，从hFKN-SEAP，pcDNA3.1（+）hFKN-SEAP的表达载体中分离编码hFKN的细胞外区域的cDNA，并且亚克隆到含有SEAPcDNA的pENTR1A_dSEAP-（His）10载体（pENTR1A购自Invitrogen）内。根据制造商的说明书，通过使用GeneTailor^?定点诱变系统（Invitrogen）诱导丙氨酸或丝氨酸取代突变。使用Gateway系统（Invitrogen），将hFKN-SEAP的突变诱导的cDNA片段转移到pcDNA3.1（+）_盒B载体（盒B购自Invitrogen）内。将hFKN-SEAP的丙氨酸或丝氨酸取代突变体的表达载体转染到HEK293EBNA（HEK293E）细胞（Invitrogen）内。在转染前1天，用HEK293E细胞接种补充有10％胎牛血清的DMEM（Invitrogen）。根据制造商的说明书，用TransITLT1（Takara）转染表达载体。在温育（5％CO₂在37℃）3天后，收获培养上清液。通过使用GreatEscAPeSEAP化学发光试剂盒2.0（Clontech）测量SEAP蛋白质的浓度。

实施例11.用于hFKN的表位作图的ELISA

将抗hFKN多克隆抗体（eBioscience）和H3-2L4各自在ELISA板（Nunc）的每个孔上在4℃包被过夜。对于每一种，去除抗体溶液，并且将含有1％牛血清白蛋白的PBS加入每个孔中，并且在室温温育1小时，随后用含有0.05％Tween20的Tris缓冲盐水（pH7.4）（洗涤液）洗涤。用含有1％BSA的PBS将丙氨酸或丝氨酸取代突变体稀释至0.13nM，并且将50μl等分试样加入ELISA板孔中，并且在室温温育4小时。去除突变体溶液，并且用洗涤液洗涤。将对硝基苯基磷酸酯溶液（ThermoScientific）加入每个孔中，并且在室温温育30分钟。用1NNaOH溶液终止反应，并且测量在405nm的吸光度。结果显示于图12中。R68A突变体特异性丧失与H3-2L4的反应性。丧失与H3-2L4的反应性的其他突变体也丧失与多克隆抗体的反应性。这些结果显示R68是关于H3-2L4的关键表位。

实施例12.使用BIACORE^?的hFKN的表位作图

将抗组氨酸标记抗体（Bethyl）固定在CM5传感器芯片（GEHealthcare）上。用HBS-EP缓冲液（GEHealthcare）将丙氨酸或丝氨酸取代突变体溶液稀释10倍，装载到芯片上，用HBS-EP洗涤，并且测量抗原结合水平。将H3-2L4和抗FKN多克隆抗体溶液装载到抗原结合的芯片上，用HBS-EP洗涤，并且测量抗体结合水平。计算[抗体结合水平/抗原结合水平]，并且对于每个突变体计算的值与野生型的那种比较。结果显示于图13中。

实施例13.其他抗体与R68A突变体的反应性

将小鼠抗人FKN单克隆抗体（1F3、1G1、2B2、3D5、6D1、7F6）和H3-2L4抗体在ELISA板（Nunc）上在4℃包被过夜。去除抗体溶液。将含有1％BSA的PBS溶液加入每个孔中，并且在室温温育1小时，并且用含有0.05％Tween20的Tris缓冲盐水（pH7.4）洗涤孔。将野生型和R68A突变的FKN-SEAP-His溶液（1、0.5、0.25、0.125nM）加入孔中，并且在室温温育2小时。去除抗原溶液，并且用洗涤液洗涤。将对硝基苯基磷酸酯溶液（ThermoScientific）加入每个孔中，并且在室温温育30分钟。用1NNaOH溶液终止反应，并且测量在405nm的吸光度。

如上所述，基于趋化性测定测试这些抗体的中和活性。将10nM人FKN和不同浓度的这些抗体加入transwell板的下层孔中。在板的上层孔中，加入表达CX3CR1的细胞。在37℃温育4小时后，去除下层孔的培养基，并且使用4％甲醛溶液固定细胞。使用FACS分析仪计数细胞数目。中和活性和与R68A突变体的反应性之间的关系显示于表1中。强烈中和CTX活性的抗体丧失与R68A突变体的反应性。这一结果显示人FKN的R68是关于可以有效中和FKN功能的抗体的关键识别位点。

表1.在与R68A突变体的结合和中和活性之间的关系

抗体	R68A/野生型（％）	CTX（IC50，nM）
			1F3	131	12.7
1G1	39	80<
			2B2	51	80<
3D5	0	4.09
			3H7	0	19.1
6D1	58	80<
			7F6	56	80<
H3-2L4	0	0.2

实施例14.通过NMR的hFKN的表位作图

来自H3-2L4抗体的Fab的纯化

100mg纯化的H3-2L4抗体溶液（20mg/mlPBS溶液）针对含有2mMEDTA的0.1M磷酸盐缓冲液（pH7.0）透析。用透析缓冲液将抗体浓度调整至15mg/ml，并且加入30mM半胱氨酸。将0.2mg木瓜蛋白酶（Sigma）加入抗体溶液中，并且在37℃温育14小时。将碘乙酰胺加入溶液中，以终止酶反应。木瓜蛋白酶消化的抗体溶液针对PBS溶液在室温透析过夜。将溶液应用于ProSepvA（Millipore）柱，并且收集流通物级分。将流通物级分应用于抗人IgGFc抗体（JacksonImmunoResearchLaboratories）固定的柱，并且收集流通物。将流通物级分浓缩，并且应用于Superose1210/300GL（GEHealthcare），并且收集含有Fab片段的级分。通过SDSPAGE分析这些级分的纯度，并且合并Fab占优势的级分。

在CXXXC趋化分子上的Fab结合位点的鉴定

为了鉴定在CXXXC趋化分子上的Fab结合位点，制备稳定同位素标记的（²H,¹⁵N和²H,¹³C,¹⁵N）CXXXC趋化分子（Mizoue，L等人，Biochemistry，38：1402-1414（1999）），并且执行基于¹⁵N-异核单量子相干（HSQC）的NMR实验。在20mM乙酸盐缓冲液（pH5.0）和80％D₂O（交叉饱和实验）或5％D₂O（其他实验）中制备NMR样品。所有NMR实验在配备致冷探针的700MHzBrukerAvance分光光度计上在45℃下执行。

未标记Fab的添加诱导CXXXC趋化分子的光谱变化，指示在标记的CXXXC趋化分子和Fab之间的相互作用。与Fab复合的CXXXC趋化分子的主链¹⁵N和¹H_N的顺序指定（Sequentialassignment）根据3DHNCA光谱完成。

交叉饱和实验是测定蛋白质-蛋白质相互作用的结合界面的最精确NMR法之一（Takahashi，H等人，Nat.Struct.Mol.Biol.，7：220-223（2000））。该实验的结果是，通过Fab的选择性照射减少几个残基的信号强度（图14）。这些残基定位于2个分开的邻接区上。一个区域由E66-Q69组成，并且另一个区域由W81-Q87组成。此外，这些残基的化学位移在很大程度上在Fab的添加后受影响，支持交叉饱和数据（图14）。根据这些结果，我们得出结论，这些区域包括在与Fab的界面中。

其他实施方案

根据上述说明书，显而易见的是可以对本文描述的本发明做出变动和修饰，以使其适合于多种使用和条件。此类实施方案也在所附权利要求的范围内。

说明书中提及的所有出版物引入本文作为参考，其程度与每个独立出版物或专利申请特别并个别指出引入作为参考相同。

序列表

<110>EISAIR&DMANAGEMENTCO.,LTD.

<120>用于治疗炎性病症的组合物和方法

<130>50549/006001

<150>61/256,521

<151>2009-10-30

<160>135

<170>PatentInversion3.5

<210>1

<211>397

<212>PRT

<213>智人

<400>1

MetAlaProIleSerLeuSerTrpLeuLeuArgLeuAlaThrPheCys

151015

HisLeuThrValLeuLeuAlaGlyGlnHisHisGlyValThrLysCys

202530

AsnIleThrCysSerLysMetThrSerLysIleProValAlaLeuLeu

354045

IleHisTyrGlnGlnAsnGlnAlaSerCysGlyLysArgAlaIleIle

505560

LeuGluThrArgGlnHisArgLeuPheCysAlaAspProLysGluGln

65707580

TrpValLysAspAlaMetGlnHisLeuAspArgGlnAlaAlaAlaLeu

859095

ThrArgAsnGlyGlyThrPheGluLysGlnIleGlyGluValLysPro

100105110

ArgThrThrProAlaAlaGlyGlyMetAspGluSerValValLeuGlu

115120125

ProGluAlaThrGlyGluSerSerSerLeuGluProThrProSerSer

130135140

GlnGluAlaGlnArgAlaLeuGlyThrSerProGluLeuProThrGly

145150155160

ValThrGlySerSerGlyThrArgLeuProProThrProLysAlaGln

165170175

AspGlyGlyProValGlyThrGluLeuPheArgValProProValSer

180185190

ThrAlaAlaThrTrpGlnSerSerAlaProHisGlnProGlyProSer

195200205

LeuTrpAlaGluAlaLysThrSerGluAlaProSerThrGlnAspPro

210215220

SerThrGlnAlaSerThrAlaSerSerProAlaProGluGluAsnAla

225230235240

ProSerGluGlyGlnArgValTrpGlyGlnGlyGlnSerProArgPro

245250255

GluAsnSerLeuGluArgGluGluMetGlyProValProAlaHisThr

260265270

AspAlaPheGlnAspTrpGlyProGlySerMetAlaHisValSerVal

275280285

ValProValSerSerGluGlyThrProSerArgGluProValAlaSer

290295300

GlySerTrpThrProLysAlaGluGluProIleHisAlaThrMetAsp

305310315320

ProGlnArgLeuGlyValLeuIleThrProValProAspAlaGlnAla

325330335

AlaThrArgArgGlnAlaValGlyLeuLeuAlaPheLeuGlyLeuLeu

340345350

PheCysLeuGlyValAlaMetPheThrTyrGlnSerLeuGlnGlyCys

355360365

ProArgLysMetAlaGlyGluMetAlaGluGlyLeuArgTyrIlePro

370375380

ArgSerCysGlySerAsnSerTyrValLeuValProVal

385390395

<210>2

<211>35

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<223>人工序列描述:合成引物

<400>2

cgcgtcgacgccaccatggctccgatatctctgtc35

<210>3

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gcgggcggccgccctccgggtggcagcctggg32

<210>4

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gcgctcgaggccaccatggctccgatatctctgtcgtgg39

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gggatggratgsagctgkgtmatsctctt29

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gggatggctgtcttggggctgctcttct28

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tcatttacccggagtccgggagaagctcttagtc34

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gggatggagacagacacactcctgctat28

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gggatggattttcaggtgcagattttcag29

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gggatgragtcacakacycaggtcttyrta30

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gggatgaggkccccwgctcagytyctkggr30

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ctaacactcattcctgttgaagctc25

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<223>人工序列描述:合成寡核苷酸

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<223>人工序列描述:合成引物

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<223>人工序列描述:合成引物

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agctacgctgaagtatcaacgcagag26

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<223>人工序列描述:合成引物

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gtacggagtactccaaaaatgttg24

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<211>24

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<213>人工序列

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tcttcaggctgcaggctgatgatc24

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<213>人工序列

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<223>人工序列描述:合成引物

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aaatcttcaggctgcaggctgttg24

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<213>人工序列

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<223>人工序列描述:合成引物

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ctgttgatcttgagagaatattgtg25

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<223>人工序列描述:合成多核苷酸

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tcctgcaaggcttctggctacaccttcacaaactactatatacactgggtgaagcagagg120

cctggacagggacttgagtggattggatggatttatcctggagatggtagtcctaagttc180

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actgatggcgactactttgactactggggccagggcaccactctcacagtctcctca357

<210>25

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<213>人工序列

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<223>人工序列描述:合成多核苷酸

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gacatccagatgactcagtctccagcctccctatctgcatctgtgggagaaactgtcacc60

atcacatgtcgagcaagcgggaatattcacaattttttagcatggtatcagcagaaacag120

ggaaaatctcctcagttcctggtctataatgaaaaaaccttagcagatggtgtgccatca180

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gggaccaagctggaaataaaa321

<210>26

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<212>PRT

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<223>人工序列描述:合成多肽

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GlnValGlnLeuGlnGlnSerGlyProGluLeuValLysProGlyAla

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SerValLysMetSerCysLysAlaSerGlyTyrThrPheThrAsnTyr

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TyrIleHisTrpValLysGlnArgProGlyGlnGlyLeuGluTrpIle

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GlyTrpIleTyrProGlyAspGlySerProLysPheAsnGluArgPhe

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LysGlyLysThrThrLeuThrAlaAspLysSerSerAsnThrAlaTyr

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ThrThrLeuThrValSerSer

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<212>PRT

<213>人工序列

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<223>人工序列描述:合成多肽

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AspIleGlnMetThrGlnSerProAlaSerLeuSerAlaSerValGly

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GluThrValThrIleThrCysArgAlaSerGlyAsnIleHisAsnPhe

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ThrPheGlyGlyGlyThrLysLeuGluIleLys

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<223>人工序列描述:合成肽

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AsnTyrTyrIleHis

15

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<211>17

<212>PRT

<213>人工序列

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<223>人工序列描述:合成肽

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TrpIleTyrProGlyAspGlySerProLysPheAsnGluArgPheLys

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Gly

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<211>10

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<213>人工序列

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<223>人工序列描述:合成肽

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GlyProThrAspGlyAspTyrPheAspTyr

1510

<210>31

<211>11

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述:合成肽

<400>31

ArgAlaSerGlyAsnIleHisAsnPheLeuAla

1510

<210>32

<211>7

<212>PRT

<213>人工序列

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<223>人工序列描述:合成肽

<400>32

AsnGluLysThrLeuAlaAsp

15

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<211>9

<212>PRT

<213>人工序列

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<223>人工序列描述:合成肽

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GlnGlnPheTrpSerThrProTyrThr

15

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GlnValLysLeuLeuGluSerGlyAlaGluValLysLysProGlyAla

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SerValLysValSerCysLysAlaSerGlyTyrThrPheThrGlyHis

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TyrMetHisTrpValArgGlnAlaProGlyGlnGlyLeuGluTrpIle

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GlyTrpIleSerProAsnArgGlyAlaThrArgPheAlaGlnLysPhe

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GlnGlyArgValThrMetThrSerAspThrSerIleAsnThrValTyr

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ThrThrValThrValSerSer

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<212>PRT

<213>智人

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AspIleGlnMetThrGlnSerProSerSerLeuSerAlaSerValGly

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AspArgValThrIleThrCysArgAlaSerGlnAsnIleAspAsnTyr

202530

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GlnValGlnLeuValGlnSerGlyAlaGluValLysLysProGlyAla

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SerValLysValSerCysLysAlaSerGlyTyrThrPheThrAsnTyr

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TyrIleHisTrpValLysGlnAlaProGlyGlnGlyLeuGluTrpIle

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GlyTrpIleTyrProGlyAspGlySerProLysPheAsnGluArgPhe

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LysGlyArgThrThrLeuThrAlaAspLysSerThrAsnThrAlaTyr

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MetLeuLeuSerSerLeuArgSerAspAspThrAlaValTyrPheCys

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AlaThrGlyProThrAspGlyAspTyrPheAspTyrTrpGlyGlnGly

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ThrThrValThrValSerSer

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<212>PRT

<213>人工序列

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GlnValGlnLeuValGlnSerGlyAlaGluValLysLysProGlyAla

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SerValLysValSerCysLysAlaSerGlyTyrThrPheThrAsnTyr

202530

TyrIleHisTrpValLysGlnAlaProGlyGlnGlyLeuGluTrpIle

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GlyTrpIleTyrProGlyAspGlySerProLysPheAsnGluArgPhe

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LysGlyArgThrThrLeuThrAlaAspLysSerThrAsnThrAlaTyr

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MetLeuLeuSerSerLeuArgSerGluAspThrAlaValTyrPheCys

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AspIleGlnMetThrGlnSerProSerSerLeuSerAlaSerValGly

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AspArgValThrIleThrCysArgAlaSerGlyAsnIleHisAsnPhe

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LeuAlaTrpTyrGlnGlnLysProGlyLysAlaProLysPheLeuVal

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TyrAsnGluLysThrLeuAlaAspGlyValProSerArgPheSerGly

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SerGlySerGlyThrGlnTyrThrLeuThrIleSerSerLeuGlnPro

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GluAspPheAlaThrTyrPheCysGlnGlnPheTrpSerThrProTyr

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ThrPheGlyGlyGlyThrLysValGluIleLys

100105

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<211>119

<212>PRT

<213>人工序列

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<223>人工序列描述:合成多肽

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GlnValGlnLeuValGlnSerGlyAlaGluValLysLysProGlyAla

151015

SerValLysValSerCysLysAlaSerGlyTyrThrPheThrAsnTyr

202530

TyrIleHisTrpValArgGlnAlaProGlyGlnGlyLeuGluTrpIle

354045

GlyTrpIleTyrProGlyAspGlySerProLysPheAsnGluArgPhe

505560

LysGlyArgThrThrLeuThrArgAspLysSerThrAsnThrAlaTyr

65707580

MetGluLeuSerSerLeuArgSerAspAspThrAlaValTyrPheCys

859095

AlaThrGlyProThrAspGlyAspTyrPheAspTyrTrpGlyGlnGly

100105110

ThrThrValThrValSerSer

115

<210>40

<211>119

<212>PRT

<213>人工序列

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<223>人工序列描述:合成多肽

<220>

<221>MOD_RES

<222>(31)..(35)

<223>任何氨基酸

<220>

<221>MOD_RES

<222>(50)..(66)

<223>任何氨基酸

<220>

<221>MOD_RES

<222>(99)..(108)

<223>任何氨基酸

<400>40

GlnValGlnLeuValGlnSerGlyAlaGluValLysLysProGlyAla

151015

SerValLysValSerCysLysAlaSerGlyTyrThrPheThrXaaXaa

202530

XaaXaaXaaTrpValArgGlnAlaProGlyGlnGlyLeuGluTrpMet

354045

GlyXaaXaaXaaXaaXaaXaaXaaXaaXaaXaaXaaXaaXaaXaaXaa

505560

XaaXaaArgValThrMetThrArgAspThrSerThrSerThrAlaTyr

65707580

MetGluLeuSerSerLeuArgSerGluAspThrAlaValTyrTyrCys

859095

AlaArgXaaXaaXaaXaaXaaXaaXaaXaaXaaXaaTrpGlyGlnGly

100105110

ThrThrValThrValSerSer

115

<210>41

<211>107

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述:合成多肽

<220>

<221>MOD_RES

<222>(24)..(34)

<223>任何氨基酸

<220>

<221>MOD_RES

<222>(50)..(56)

<223>任何氨基酸

<220>

<221>MOD_RES

<222>(89)..(97)

<223>任何氨基酸

<400>41

AspIleGlnMetThrGlnSerProSerSerLeuSerAlaSerValGly

151015

AspArgValThrIleThrCysXaaXaaXaaXaaXaaXaaXaaXaaXaa

202530

XaaXaaTrpTyrGlnGlnLysProGlyLysAlaProLysLeuLeuIle

354045

TyrXaaXaaXaaXaaXaaXaaXaaGlyValProSerArgPheSerGly

505560

SerGlySerGlyThrAspPheThrLeuThrIleSerSerLeuGlnPro

65707580

GluAspPheAlaThrTyrTyrCysXaaXaaXaaXaaXaaXaaXaaXaa

859095

XaaPheGlyGlyGlyThrLysValGluIleLys

100105

<210>42

<211>119

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述:合成多肽

<400>42

GlnValGlnLeuValGlnSerGlyAlaGluValLysLysProGlyAla

151015

SerValLysValSerCysLysAlaSerGlyTyrThrPheThrAsnTyr

202530

TyrIleHisTrpValArgGlnAlaProGlyGlnGlyLeuGluTrpIle

354045

GlyTrpIleTyrProGlyAspGlySerProLysPheAsnGluArgPhe

505560

LysGlyArgThrThrMetThrAlaAspThrSerThrSerThrAlaTyr

65707580

MetGluLeuSerSerLeuArgSerGluAspThrAlaValTyrPheCys

859095

AlaArgGlyProThrAspGlyAspTyrPheAspTyrTrpGlyGlnGly

100105110

ThrThrValThrValSerSer

115

<210>43

<211>119

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述:合成多肽

<400>43

GlnValGlnLeuValGlnSerGlyAlaGluValLysLysProGlyAla

151015

SerValLysValSerCysLysAlaSerGlyTyrThrPheThrAsnTyr

202530

TyrIleHisTrpValArgGlnAlaProGlyGlnGlyLeuGluTrpIle

354045

GlyTrpIleTyrProGlyAspGlySerProLysPheAsnGluArgPhe

505560

LysGlyArgThrThrLeuThrAlaAspLysSerThrSerThrAlaTyr

65707580

MetGluLeuSerSerLeuArgSerGluAspThrAlaValTyrPheCys

859095

AlaArgGlyProThrAspGlyAspTyrPheAspTyrTrpGlyGlnGly

100105110

ThrThrValThrValSerSer

115

<210>44

<211>107

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述:合成多肽

<400>44

AspIleGlnMetThrGlnSerProSerSerLeuSerAlaSerValGly

151015

AspArgValThrIleThrCysArgAlaSerGlyAsnIleHisAsnPhe

202530

LeuAlaTrpTyrGlnGlnLysProGlyLysAlaProLysLeuLeuIle

354045

TyrAsnGluLysThrLeuAlaAspGlyValProSerArgPheSerGly

505560

SerGlySerGlyThrAspTyrThrLeuThrIleSerSerLeuGlnPro

65707580

GluAspPheAlaThrTyrPheCysGlnGlnPheTrpSerThrProTyr

859095

ThrPheGlyGlyGlyThrLysValGluIleLys

100105

<210>45

<211>107

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述:合成多肽

<400>45

AspIleGlnMetThrGlnSerProSerSerLeuSerAlaSerValGly

151015

AspArgValThrIleThrCysArgAlaSerGlyAsnIleHisAsnPhe

202530

LeuAlaTrpTyrGlnGlnLysProGlyLysAlaProLysLeuLeuIle

354045

TyrAsnGluLysThrLeuAlaAspGlyValProSerArgPheSerGly

505560

SerGlySerGlyThrGlnTyrThrLeuThrIleSerSerLeuGlnPro

65707580

GluAspPheAlaThrTyrPheCysGlnGlnPheTrpSerThrProTyr

859095

ThrPheGlyGlyGlyThrLysValGluIleLys

100105

<210>46

<211>19

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述:合成肽

<400>46

MetAspTrpThrTrpSerIleLeuPheLeuValAlaAlaProThrGly

151015

AlaHisSer

<210>47

<211>57

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述:合成寡核苷酸

<400>47

atggactggacctggagcatccttttcttggtggcagcaccaacaggtgcccactcc57

<210>48

<211>57

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述:合成寡核苷酸

<400>48

atggactggacatggtccatcctgttcctggtggccgctccaactggcgcacactct57

<210>49

<211>22

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述:合成肽

<400>49

MetAspMetArgValProAlaGlnLeuLeuGlyLeuLeuLeuLeuTrp

151015

LeuArgGlyAlaArgCys

20

<210>50

<211>66

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述:合成寡核苷酸

<400>50

atggacatgagggtccccgctcagctcctggggctcctgctactctggctccgaggtgcc60

agatgt66

<210>51

<211>50

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述:合成引物

<400>51

atggactggacctggagcatccttttcttggtggcagcaccaacaggtgc50

<210>52

<211>50

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述:合成引物

<400>52

ccagactgcaccagctgcacctgggagtgggcacctgttggtgctgccac50

<210>53

<211>50

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述:合成引物

<400>53

gtgcagctggtgcagtctggggctgaggtgaagaagcctggggcctcagt50

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<211>50

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述:合成引物

<400>54

gtgtatccagaagccttgcaggagaccttcactgaggccccaggcttctt50

<210>55

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<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述:合成引物

<400>55

tgcaaggcttctggatacaccttcaccaactactatatacactgggtgaa50

<210>56

<211>50

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述:合成引物

<400>56

atccactcaagcccttgtccaggggcctgcttcacccagtgtatatagta50

<210>57

<211>50

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述:合成引物

<400>57

ggacaagggcttgagtggataggatggatttatcctggagatggtagtcc50

<210>58

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<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述:合成引物

<400>58

gtcctgcccttgaacctctcattgaacttaggactaccatctccaggata50

<210>59

<211>50

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述:合成引物

<400>59

gagaggttcaagggcaggaccaccctgaccgcagacaagtccacgaacac50

<210>60

<211>50

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述:合成引物

<400>60

gatctcaggctgctcagcaacatgtaggctgtgttcgtggacttgtctgc50

<210>61

<211>50

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述:合成引物

<400>61

ttgctgagcagcctgagatctgacgacacggccgtgtatttctgtgcgac50

<210>62

<211>50

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述:合成引物

<400>62

tagtcaaagtagtcgccatcagtgggccctgtcgcacagaaatacacggc50

<210>63

<211>50

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述:合成引物

<400>63

gatggcgactactttgactactggggccaagggaccacggtcaccgtctc50

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<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述:合成引物

<400>64

gaccgatgggcccttggtggaggctgaagagacggtgaccgtggtccc48

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<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述:合成引物

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gccaccatggacatgagggtccccgctcagctcctggggctcctgctactctggctccga60

ggtgccagat70

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<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述:合成引物

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tcctacagatgcagacagggaggatggagactgggtcatctggatgtcacatctggcacc60

tcggagccag70

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<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述:合成引物

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ccctgtctgcatctgtaggagacagagtcaccatcacttgccgagcaagcgggaatattc60

acaatttttt70

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<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述:合成引物

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gaacttaggggctttccctggtttctgttgataccatgctaaaaaattgtgaatattccc60

gcttgctcgg70

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<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述:合成引物

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cagggaaagcccctaagttcctggtctataatgaaaaaaccttagcagatggggtcccat60

caaggttcag70

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<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述:合成引物

<400>70

gttgcagactgctgatggtgagagtatattgtgtcccagatccactgccactgaaccttg60

atgggacccc70

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<211>70

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述:合成引物

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tactccgtat70

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<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述:合成引物

<400>72

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gaa63

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<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述:合成引物

<400>73

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<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述:合成引物

<400>74

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<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述:合成引物

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<211>33

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述:合成引物

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<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述:合成引物

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gacagatggtgcagccacagttcgtttgatctccaccttggtccctcc48

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<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述:合成多核苷酸

<400>78

gaattcgtcgacgccaccatggactggacatggtccatcctgttcctggtggccgctcca60

actggcgcacactctcaggtgcagctggtgcagagtggcgctgaggtgaagaaacccgga120

gcatcagtgaaggtgtcctgcaaagccagcggatacaccttcaccaactactatattcat180

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ggttcccctaagttcaacgaaaggtttaaaggccggaccacactgaccagggataagtca300

accaatacagcttacatggaactgtccagcctgcgctctgacgatacagcagtgtatttc360

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accgtgtctagtgctagc438

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<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述:合成引物

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<211>39

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<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述:合成引物

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<211>30

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述:合成引物

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<211>39

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述:合成引物

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<220>

<223>人工序列描述:合成引物

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<220>

<223>人工序列描述:合成引物

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<220>

<223>人工序列描述:合成引物

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<220>

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<220>

<223>人工序列描述:合成引物

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<220>

<223>人工序列描述:合成引物

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<220>

<223>人工序列描述:合成引物

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<220>

<223>人工序列描述:合成引物

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<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述:合成引物

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<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述:合成引物

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tgtcccagatccactgccactgaaccttga30

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<211>36

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<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述:合成引物

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<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述:合成引物

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<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述:合成引物

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<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述:合成引物

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<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述:合成引物

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<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述:合成引物

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cgccgtacgtttgatctccaccttggtccctcc33

<210>99

<211>33

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述:合成引物

<400>99

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<211>33

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<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述:合成引物

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<211>33

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<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述:合成引物

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cgccgtacggtggctgcaccatctgtcttcatc33

<210>102

<211>33

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述:合成引物

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<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述:合成引物

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<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述:合成引物

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<210>105

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<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述:合成引物

<400>105

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<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述:合成引物

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<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述:合成引物

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<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述:合成引物

<400>108

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<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述:合成引物

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<210>110

<211>35

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述:合成引物

<400>110

cgcgcggccgctcatttacccggagacagggagag35

<210>111

<211>33

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述:合成引物

<400>111

gcggtcgacgccaccatgagtgtgctcactcag33

<210>112

<211>49

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述:合成引物

<400>112

gacagatggtgcagccacagttcgttttatttccagcttggtcccccct49

<210>113

<211>24

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述:合成引物

<400>113

cgaactgtggctgcaccatctgtc24

<210>114

<211>38

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述:合成引物

<400>114

cgcgcggccgcctaacactctcccctgttgaagctctt38

<210>115

<211>15

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述:合成肽

<400>115

GlnHisHisGlyValThrLysCysAsnIleThrCysSerLysMet

151015

<210>116

<211>15

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述:合成肽

<400>116

GlyValThrLysCysAsnIleThrCysSerLysMetThrSerLys

151015

<210>117

<211>15

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述:合成肽

<400>117

LysCysAsnIleThrCysSerLysMetThrSerLysIleProVal

151015

<210>118

<211>15

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述:合成肽

<400>118

IleThrCysSerLysMetThrSerLysIleProValAlaLeuLeu

151015

<210>119

<211>15

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述:合成肽

<400>119

SerLysMetThrSerLysIleProValAlaLeuLeuIleHisTyr

151015

<210>120

<211>15

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述:合成肽

<400>120

ThrSerLysIleProValAlaLeuLeuIleHisTyrGlnGlnAsn

151015

<210>121

<211>15

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述:合成肽

<400>121

IleProValAlaLeuLeuIleHisTyrGlnGlnAsnGlnAlaSer

151015

<210>122

<211>15

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述:合成肽

<400>122

AlaLeuLeuIleHisTyrGlnGlnAsnGlnAlaSerCysGlyLys

151015

<210>123

<211>15

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述:合成肽

<400>123

IleHisTyrGlnGlnAsnGlnAlaSerCysGlyLysArgAlaIle

151015

<210>124

<211>15

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述:合成肽

<400>124

GlnGlnAsnGlnAlaSerCysGlyLysArgAlaIleIleLeuGlu

151015

<210>125

<211>15

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述:合成肽

<400>125

GlnAlaSerCysGlyLysArgAlaIleIleLeuGluThrArgGln

151015

<210>126

<211>15

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述:合成肽

<400>126

CysGlyLysArgAlaIleIleLeuGluThrArgGlnHisArgLeu

151015

<210>127

<211>15

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述:合成肽

<400>127

ArgAlaIleIleLeuGluThrArgGlnHisArgLeuPheCysAla

151015

<210>128

<211>15

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述:合成肽

<400>128

IleLeuGluThrArgGlnHisArgLeuPheCysAlaAspProLys

151015

<210>129

<211>15

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述:合成肽

<400>129

ThrArgGlnHisArgLeuPheCysAlaAspProLysGluGlnTrp

151015

<210>130

<211>15

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述:合成肽

<400>130

HisArgLeuPheCysAlaAspProLysGluGlnTrpValLysAsp

151015

<210>131

<211>15

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述:合成肽

<400>131

PheCysAlaAspProLysGluGlnTrpValLysAspAlaMetGln

151015

<210>132

<211>15

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述:合成肽

<400>132

AspProLysGluGlnTrpValLysAspAlaMetGlnHisLeuAsp

151015

<210>133

<211>15

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述:合成肽

<400>133

GluGlnTrpValLysAspAlaMetGlnHisLeuAspArgGlnAla

151015

<210>134

<211>15

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述:合成肽

<400>134

ValLysAspAlaMetGlnHisLeuAspArgGlnAlaAlaAlaLeu

151015

<210>135

<211>16

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述:合成肽

<400>135

AlaMetGlnHisLeuAspArgGlnAlaAlaAlaLeuThrArgAsnGly

151015

Claims

1.一种抗CXXXC趋化分子抗体或其CXXXC趋化分子结合片段，其中所述抗体或其片段包含：

（a）由SEQIDNO:28的氨基酸序列组成的CDR-H1；

（b）由SEQIDNO:29的氨基酸序列组成的CDR-H2；

（c）由SEQIDNO:30的氨基酸序列组成的CDR-H3；

（d）由SEQIDNO:31的氨基酸序列组成的CDR-L1；

（e）由SEQIDNO:32的氨基酸序列组成的CDR-L2；和

（f）由SEQIDNO:33的氨基酸序列组成的CDR-L3。

2.权利要求1的抗体或其CXXXC趋化分子结合片段，其中所述抗体是完整抗体。

3.权利要求1或2的抗体或其CXXXC趋化分子结合片段，其中所述抗体或CXXXC趋化分子结合片段是人源化的。

4.权利要求3的抗体或其CXXXC趋化分子结合片段，其中所述抗体包含重链和轻链，其中所述抗体或CXXXC趋化分子结合片段的重链可变结构域由SEQIDNO:36、SEQIDNO:37、SEQIDNO:39、SEQIDNO:42或SEQIDNO:43的氨基酸序列组成，并且其中所述抗体或CXXXC趋化分子结合片段的轻链可变结构域由SEQIDNO:38、SEQIDNO:44或SEQIDNO:45的氨基酸序列组成。

5.权利要求1的抗体或其CXXXC趋化分子结合片段，其中所述抗体或CXXXC趋化分子结合片段是嵌合的。

6.权利要求5的抗体或其CXXXC趋化分子结合片段，其中所述抗体包含重链和轻链，其中所述抗体的重链可变结构域由SEQIDNO:26的氨基酸序列组成，并且其中所述抗体的轻链可变结构域由SEQIDNO:27的氨基酸序列组成。

7.权利要求5的抗体或其CXXXC趋化分子结合片段，其中所述抗体包含重链和轻链，其中所述抗体或CXXXC趋化分子结合片段的重链可变结构域由SEQIDNO:36的氨基酸序列组成，并且其中所述抗体或CXXXC趋化分子结合片段的轻链可变结构域由SEQIDNO:44的氨基酸序列组成。

8.权利要求5的抗体或其CXXXC趋化分子结合片段，其中所述抗体包含重链和轻链，其中所述抗体或CXXXC趋化分子结合片段的重链可变结构域由SEQIDNO:37的氨基酸序列组成，并且其中所述抗体或CXXXC趋化分子结合片段的轻链可变结构域由SEQIDNO:38的氨基酸序列组成。

9.权利要求5的抗体或其CXXXC趋化分子结合片段，其中所述抗体包含重链和轻链，其中所述抗体或CXXXC趋化分子结合片段的重链可变结构域由SEQIDNO:36的氨基酸序列组成，并且其中所述抗体或CXXXC趋化分子结合片段的轻链可变结构域由SEQIDNO:38的氨基酸序列组成。

10.一种抗CXXXC趋化分子抗体或其CXXXC趋化分子结合片段，其中所述抗体或其片段包含重链和轻链，其中所述抗体或其片段的重链可变结构域由SEQIDNO:37的氨基酸序列组成，并且其中所述抗体或其片段的轻链可变结构域由SEQIDNO:44的氨基酸序列组成。

11.权利要求1的抗体或其CXXXC趋化分子结合片段，其包含人恒定区。

12.权利要求11的抗体或其CXXXC趋化分子结合片段，其包含IgG同种型的恒定区。

13.权利要求12的抗体或其CXXXC趋化分子结合片段，其包含IgG2同种型的恒定区。

14.权利要求1的抗体或其CXXXC趋化分子结合片段，其包含突变的Fc区，从而使得所述抗体具有减少的ADCC和/或补体激活。

15.权利要求14的抗体或其CXXXC趋化分子结合片段，其中所述Fc区在V234、G237、C131或C219中的一个或多个上是突变的。

16.权利要求1的抗体或其CXXXC趋化分子结合片段，其中所述CXXXC趋化分子结合片段选自Fab、Fab'、F(ab')2和Fv，并且其中所述CXXXC趋化分子结合片段保留对于CXXXC趋化分子的结合特异性。

17.权利要求1的抗体或其CXXXC趋化分子结合片段，其中所述抗体抑制CXXXC趋化分子和CX3CR1之间的结合。

18.权利要求1的抗体或其CXXXC趋化分子结合片段，所述抗体或其CXXXC趋化分子结合片段用于在治疗炎性病症中使用，其中所述炎性病症是溃疡性结肠炎、克罗恩病或类风湿性关节炎。

19.一种药物组合物，其包含权利要求1-18中任一项的抗体或其CXXXC趋化分子结合片段。

20.权利要求19的药物组合物，所述药物组合物用于在治疗炎性病症中使用，其中所述炎性病症是溃疡性结肠炎、克罗恩病或类风湿性关节炎。

21.权利要求19或20的药物组合物，其中所述组合物进一步包含载体。

22.权利要求19或20的药物组合物，其中所述组合物进一步包含另外的治疗剂。

23.一种核酸，其编码权利要求1-18中任一项的抗体或其CXXXC趋化分子结合片段。

24.一种载体，其包含权利要求23的核酸。

25.权利要求24的载体，其中所述载体是表达载体。

26.一种宿主细胞，其包含权利要求24或25的一种或多种载体。

27.权利要求26的宿主细胞，其中所述宿主细胞包含第一种载体和第二种载体，所述第一种载体包含编码权利要求1-18中任一项的抗体或其CXXXC趋化分子结合片段的重链的核酸，并且所述第二种载体包含编码权利要求1-18中任一项的抗体或其CXXXC趋化分子结合片段的轻链的核酸。

28.权利要求27的宿主细胞，其中所述宿主细胞中所述重链和轻链的表达产生权利要求1-18中任一项的抗体或其CXXXC趋化分子结合片段。

29.权利要求26-28中任一项的宿主细胞，其中所述宿主细胞是原核的。

30.权利要求26-28中任一项的宿主细胞，其中所述宿主细胞是真核的。

31.权利要求30的宿主细胞，其中所述宿主细胞是哺乳动物的。

32.权利要求31的宿主细胞，其中所述细胞是CHO细胞或NS0细胞。

33.一种用于制备抗CXXXC趋化分子抗体或其CXXXC趋化分子结合片段的方法，所述方法包含（a）在合适宿主细胞中表达权利要求24或25的载体，和（b）回收所述抗体或其CXXXC趋化分子结合片段。

34.权利要求33的方法，其中所述抗体或其CXXXC趋化分子结合片段通过所述宿主细胞分泌到培养基内。

35.权利要求34的方法，其中所述抗体或其CXXXC趋化分子结合片段纯化至就含所述抗体的培养基而言至少95％。

36.根据权利要求1-18中任一项的抗体或其CXXXC趋化分子结合片段在制备用于在治疗炎性病症中使用的药物中的用途，其中所述炎性病症是溃疡性结肠炎、克罗恩病或类风湿性关节炎。

37.权利要求10的抗体或其CXXXC趋化分子结合片段，其包含人恒定区。

38.权利要求37的抗体或其CXXXC趋化分子结合片段，其包含IgG同种型的恒定区。

39.权利要求38的抗体或其CXXXC趋化分子结合片段，其包含IgG2同种型的恒定区。

40.权利要求10的抗体或其CXXXC趋化分子结合片段，其包含突变的Fc区，从而使得所述抗体具有减少的ADCC和/或补体激活。

41.权利要求40的抗体或其CXXXC趋化分子结合片段，其中所述Fc区在V234、G237、C131或C219中的一个或多个上是突变的。

42.权利要求10的抗体或其CXXXC趋化分子结合片段，其中所述CXXXC趋化分子结合片段选自Fab、Fab'、F(ab')2和Fv，并且其中所述CXXXC趋化分子结合片段保留对于CXXXC趋化分子的结合特异性。

43.权利要求10的抗体或其CXXXC趋化分子结合片段，其中所述抗体抑制CXXXC趋化分子和CX3CR1之间的结合。

44.权利要求10的抗体或其CXXXC趋化分子结合片段，所述抗体或其CXXXC趋化分子结合片段用于在治疗炎性病症中使用，其中所述炎性病症是溃疡性结肠炎、克罗恩病或类风湿性关节炎。

45.一种药物组合物，其包含权利要求10的抗体或其CXXXC趋化分子结合片段。

46.权利要求45的药物组合物，所述药物组合物用于在治疗炎性病症中使用，其中所述炎性病症是溃疡性结肠炎、克罗恩病或类风湿性关节炎。

47.权利要求45或46的药物组合物，其中所述组合物进一步包含载体。

48.权利要求45或46的药物组合物，其中所述组合物进一步包含另外的治疗剂。

49.一种核酸，其编码权利要求10的抗体或其CXXXC趋化分子结合片段。

50.一种载体，其包含权利要求49的核酸。

51.权利要求50的载体，其中所述载体是表达载体。

52.一种宿主细胞，其包含权利要求50或51的一种或多种载体。

53.权利要求52的宿主细胞，其中所述宿主细胞包含第一种载体和第二种载体，所述第一种载体包含编码权利要求10的抗体或其CXXXC趋化分子结合片段的重链的核酸，并且所述第二种载体包含编码权利要求10的抗体或其CXXXC趋化分子结合片段的轻链的核酸。

54.权利要求53的宿主细胞，其中所述宿主细胞中所述重链和轻链的表达产生权利要求10的抗体或其CXXXC趋化分子结合片段。

55.权利要求52-54中任一项的宿主细胞，其中所述宿主细胞是原核的。

56.权利要求52-54中任一项的宿主细胞，其中所述宿主细胞是真核的。

57.权利要求56的宿主细胞，其中所述宿主细胞是哺乳动物的。

58.权利要求57的宿主细胞，其中所述细胞是CHO细胞或NS0细胞。

59.一种用于制备抗CXXXC趋化分子抗体或其CXXXC趋化分子结合片段的方法，所述方法包含（a）在合适宿主细胞中表达权利要求50或51的载体，和（b）回收所述抗体或其CXXXC趋化分子结合片段。

60.权利要求59的方法，其中所述抗体或其CXXXC趋化分子结合片段通过所述宿主细胞分泌到培养基内。

61.权利要求60的方法，其中所述抗体或其CXXXC趋化分子结合片段纯化至就含所述抗体的培养基而言至少95％。

62.根据权利要求10的抗体或其CXXXC趋化分子结合片段在制备用于在治疗炎性病症中使用的药物中的用途，其中所述炎性病症是溃疡性结肠炎、克罗恩病或类风湿性关节炎。