CN101400346A - 包含至少一种pkc抑制剂和至少一种jak3激酶抑制剂用于治疗自身性免疫障碍的药物组合组合物 - Google Patents

Abstract

本发明涉及包含至少一种PKC抑制剂特别是吲哚基马来酰亚胺和至少一种JAK3激酶抑制剂的药物组合产品以及该组合产品例如在自身免疫性疾病、例如在预防或治疗I型糖尿病和其相关障碍或在移植中的用途。

Description

包含至少一种PKC抑制剂和至少一种JAK3激酶抑制剂用于治疗自身性免疫障碍的药物组合组合物

本发明涉及包含至少一种PKC抑制剂特别是吲哚基马来酰亚胺和至少一种JAK3激酶抑制剂的药物组合产品以及该组合产品例如在自身免疫性疾病、例如在预防或治疗I型糖尿病和其相关障碍或在移植中的用途。

本发明还涉及包含至少一种和至少一种JAK3激酶抑制剂的药物组合产品以及该组合产品例如在自身免疫性疾病、例如在预防或治疗I型糖尿病和其相关的障碍或在移植中的用途。

尽管器官移植和自身免疫性疾病患者有多种治疗选择，但仍需要有效并且安全的免疫抑制剂并且需要其在组合治疗中的优选应用。

现在已经发现包含至少一种PKC抑制剂和詹纳斯激酶3(JAK3)激酶抑制剂(例如下面所定义的)的组合产品对自身免疫性疾病，例如I型糖尿病和其相关病症或移植物排斥反应具有有益的作用。

本发明的PKC抑制剂可以是星形孢菌素类似物或马来酰亚胺衍生物。例如，它们可以是式I

其中R_pk是芳香环，例如芳香杂环，任选与另一个环，例如另一个芳香环，任选芳香杂环稠合；R_pk和稠合的环任选为取代的，且环A和B任选为取代的。

适当的PKC抑制剂的实例是例如：

-在EP1337527A1、和EP1490355A1中公开的化合物，例如式II的化合物或其可药用盐或其水合物，

其中

R_a为H；C_1-4烷基；或被OH、NH₂、NHC_1-4烷基或N(二-C_1-4烷基)₂取代的C_1-4烷基；

R_b为H；或C_1-4烷基；且

R为式(a)、(b)、(c)、(d)、(e)或(f)的基团

其中

R₁、R₄、R₇、R₈、R₁₁和R₁₄的每个为OH；SH；杂环残基；NR₁₆R₁₇其中R₁₆和R₁₇彼此独立地为H或C_1-4烷基或者R₁₆和R₁₇与它们结合的氮原子一同构成杂环残基；或者式α的基团

-X-R_c-Y                                 (α)

其中X为直接键、O、S或NR₁₈其中R₁₈为H或C_1-4烷基，

R_c为C_1-4亚烷基或其中一个CH₂被CR_xR_y替换的C_1-4亚烷基，其中R_x和R_y中的一个为H，且另一个为CH₃。R_x和R_y的每一个为CH₃或R_x和R_y一同构成-CH₂-CH₂-，且

Y与末端碳原子结合，并选自OH、杂环残基和-NR₁₉R₂₀其中R₁₉和R₂₀彼此独立地为H、C_3-6环烷基、C_3-6环烷基-C_1-4烷基、芳基-C_1-4烷基或者任选地在末端碳原子被OH取代的C_1-4烷基，或者R₁₉和R₂₀与它们结合的氮原子一同构成杂环残基；

R₂、R₃、R₅、R₆、R₉、R₁0、R₁₂、R₁₃、R₁₅和R’₁₅彼此独立地为H、卤素、

C_1-4烷基、CF₃、OH、SH、NH₂、C_1-4烷氧基、C_1-4烷硫基、NHC_1-4烷基、N(二-C_1-4烷基)₂或CN；

E为-N＝且G为-CH＝，或者E为-CH＝且G为-N＝；且

环A为任选被取代的。

-式(III)的化合物或其可药用盐或其水合物或溶剂合物

其中

R₄₁为式(g)、(h)或(i)的基团

其中v和w彼此独立地为1、2、3、或4；

s为0、1、2或3；

t为1或2；

u为0或1；且

R₄₁₂为氢、烷基、卤代烷基、环烷基、乙酰基、芳基、-CH(芳基)₂、氨基、单-烷基氨基、二烷基氨基、胍基、-C(＝N(烷氧基羰基))-NH(烷氧基-羰基)、脒基、羟基、羧基、烷氧基羰基或杂环基；

R’₄₁为氢、C_1-4烷基、氨基烷基、单烷基氨基烷基、或二烷基氨基烷基，R₄₂和R’₄₂彼此独立地为氢、烷基、烷氧基烷基、羟基烷基、C₁-C₃烷硫基、S(O)C₁-C₃烷基、CF₃；

R₄₃为氢或CH₃CO-；且

R₄₄、R’₄₄、R₄₅、R’₄₅、R₄₆、R’₄₆、R₄₇和R’₄₇彼此独立地为氢、卤素、烷基、羟基、烷氧基、-COO(C₁-C₃烷基)、CF₃、硝基、氨基、乙酰基氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、烷硫基、C₁-C₃烷硫基、或S(O)C₁-C₃烷基。

式(I)、(II)和(III)化合物可按照本领域已知的方法合成，例如按照US6,645,970或EP1490355A1(用于式II化合物)、EP1490355A1(用于式II化合物)、US5,545,636(用于式III化合物)中所描述的方法。

本发明的PKC抑制剂可抑制数种PKC亚型，特别地它们可选择性地抑制特异性PKC亚型，即是选择性的PKC抑制剂，即同工酶-选择性PKC抑制剂。优选地，本发明的PKC抑制剂能够选择性地抑制PKC亚型，其选自经典的PKC亚型(α、β₁、β₂、γ)和新的PKC亚型(ε、η、δ、θ)，更优选地选自α、β(β₁和β₂亚型)和θPKC亚型。本发明的优选的PKC抑制剂能够选择性地抑制α、β，和任选的θPKC亚型。

例如，本发明的PKC抑制剂可拥有对一种或多种PKC亚型的选择性，例如PKCα或PKCα、β和任选θ，是其他PKC亚型的至少20倍，例如100、500、1000或2000倍。

本发明的PKC抑制剂的PKC抑制活性可在同种异体的混合淋巴细胞反应(MLR)中测定。MLR分析可按照已知方法进行，例如人MLR测定的小鼠，例如照EP1337527A1中所公开的。关于MLR分析的内容引入本文作为参考。

在优选的实施方案中，本发明的PKC抑制剂在上文提及的测定中显示的IC₅₀值，例如对于α和β型，和任选的θ，PKC亚型，为1μM或更低，优选地为10nM或更低。

在式II中，任意烷基或例如烷氧基的烷基部分中可以是直链或直链的。卤素可以是F、Cl、Br或I，优选地为F或Cl。任意芳基可以是苯基或萘基，优选为苯基。

如R_pk、R₁、R₄、R₇、R₈、R₁₁、R₁₄或Y或分别由NR₁₆R₁₇或NR₁₉R₂₀形成的杂环残基，意指包含一或两个优选地选自N、O和S的杂原子、并且任选为取代的3至8元，优选5至8元饱和、不饱和或芳香杂环。

如R₁、R₄、R₇、R₈、R₁₁、R₁₄或Y或由NR₁₆R₁₇或NR₁₉R₂₀形成的适当的杂环残基的实例包括例如吡啶基，例如3-或4-吡啶基、哌啶基、例如哌啶-1-基、3-或4-哌啶基、高哌啶基(homopiperidyl)、哌嗪基、例如1-哌嗪基、高哌嗪基(homopiperazinyl)、吗啉-4-基、咪唑基、咪唑烷基、吡咯基或吡咯烷基，任选为取代的，例如单取代的或多取代的。

如R₁₁的杂环残基的适当实例包括例如，4，7-二氮杂-螺[2.5]辛-7-基。

当杂环残基是取代的时，其可以是在一个或多个环碳原子上和/或当存在环氮原子时在环氮原子上。环碳原子上的取代基实例包括例如C_1-4烷基例如CH₃；

C_3-6环烷基例如环丙基，任选进一步被C_1-4烷基取代；

其中p为1、2或3，优选为1；CF₃；卤素；OH；NH₂；-CH₂-NH₂；-CH₂-OH；哌啶-1-基；或吡咯烷基。环氮原子上的取代基实例为例如C_1-6烷基；酰基，例如R’_x-CO其中R’_x为H、C_1-6烷基、任选被C_1-4烷基、C_1-4烷氧基或氨基取代的苯基，例如甲酰基；C_3-6环烷基；C_3-6环烷基-C_1-4烷基；苯基；苯基-C_1-4烷基例如苄基；杂环残基，例如如上文所公开的，例如包含1或2个氮原子的芳香杂环残基；或式β的残基

-R₂₁-Y’                        (β)

其中R₂₁为C_1-4亚烷基或被O间隔的C_2-4亚烷基并且Y’为OH、NH₂、NH(C_1-4烷基)或N(C_1-4烷基)₂。

在式II中被O间隔的C_2-4亚烷基可以是例如-CH₂-CH₂-O-CH₂-CH₂-。

在式II中，当环氮原子上的取代基为杂环残基时，其可以是包含1或2个优选地选自N、O和S的杂原子的五或六元饱和、不饱和或芳香杂环。实例包括3-或4-吡啶基、哌啶基，例如哌啶-1-基、3-或4-哌啶基，高哌啶基、哌嗪基、高哌嗪基、嘧啶基、吗啉-4-基、咪唑基、咪唑烷基、吡咯基或吡咯烷基，

在式II中，当R_a为取代的C_1-4烷基时，取代基优选地在末端碳原子上。

当环A被取代时，其可为单取代的或多取代的，优选为单取代的，取代基选自例如卤素、OH、C_1-4烷氧基例如OCH₃、C_1-4烷基例如CH₃、NO₂、CF₃、NH₂、NHC_1-4烷基、N(二-C_1-4烷基)₂和CN。例如，环A可以是下式的残基

其中

R_d为H；C_1-4烷基；或卤素；且

R_e为OH；NO₂；NH₂；NHC_1-4烷基；或N(二-C_1-4烷基)₂。

优选R_d在位置1；优选R_e在位置3。

当R_c有被CR_xR_y替换的CH₂时，优选地CH₂带有Y。

如R₁、R₄、R₇、R₈、R₁₁、R₁₄或Y或分别由NR₁₆R₁₇或NR₁₉R₂₀形成的杂环残基的实例，包括例如式(γ)的残基

其中

环D为5、6或7元饱和的、不饱和的或芳香环；

X_b为-N-、-C＝或-CH-；

X_c为-N＝、-NR_f-、-CR_f’＝或-CHR_f’-，其中R_f为上文环氮原子上所指明的取代基，且R_f’为上文环碳原子上所指明的取代基；

在C₁和C₂之间的价键是饱和的或不饱和的；

C₁和C₂彼此独立地为碳原子，其任选被一个或两个选自上文环碳原子所指明的那些取代基所取代；并且

C₃和X_b之间的线和C₁和X_b之间的线分别表示碳原子数，按需要得到5、6或7元环D。

优选地式(γ)残基是其中D构成如指出的任选C-和/或N-取代的1，4-哌嗪基环的基团。

式(γ)残基的代表性实例为例如3-或4-吡啶基；哌啶-1-基；1-N-(C_1-4烷基)-或-(ω-羟基-C_1-4烷基)-3-哌啶基；吗啉-4-基；咪唑基；吡咯烷基；1-哌嗪基；2-C_1-4烷基-或-C_3-6环烷基-1-哌嗪基；3-C_1-4烷基-或-C_3-6环烷基-1-哌嗪基；2，2-或3，5-或2，5-或2，6-二(C_1-4烷基)-1-哌嗪基；3，4，5-三-(C_1-4烷基)-1-哌嗪基；4-N-(C_1-4烷基)-或-(ω-羟基-C_1-4烷基)-或-(ω-二甲基氨基-C_1-4烷基)-1-哌嗪基；4-N-吡啶-4-基-1-哌嗪基；4-N-苯基-或-C_3-6环烷基-1-哌嗪基；4-N-(C_1-4烷基)-或-(ω-羟基-C_1-4烷基)-3-C_1-4烷基-或-3，3-二(C_1-4烷基)-1-哌嗪基；4-N-(1-C_1-4烷基-C_3-6环烷基)-1-哌嗪基；4-N-甲酰基-1-哌嗪基；4-N-嘧啶-2-基-1-哌嗪基；4，7-二氮杂-螺[2.5]辛-7-基或4-N-C_1-4烷基-1-高哌嗪基。

式I和II的化合物可存在游离形式或盐形式，例如与有机或无机酸的加成盐，例如盐酸、乙酸，当R₁、R₄、R₇、R₈、R₁₁或R₁₄和/或R₂、R₃、R₅、R₆、R₉、R₁₀、R₁₂、R₁₃或R₁₅包含任选取代的氨基基团或可构成酸加成盐的杂环残基时。

应该理解式I、式II和式III化合物可存在光学异构体、消旋体或非对映异构体形式，例如，杂环残基上带的取代基如R₁、R₄、R₇、R₈、R₁₁、R₁₄或Y或分别由NR₁₆R₁₇或NR₁₉R₂₀形成的环碳原子是不对称的，且可具有D或L构型。应理解本发明包含全部对映体及其混合物。相似的考虑适用于涉及存在如提及的不对称碳原子的起始材料。

在式II化合物中，以下意义是单独优选的或在任何亚组合中优选的：

1.R_a为H或CH₃；

2.R_b为H；

3.环A为未取代的；或在位置7被甲基取代；

4.通过NR₁₆R₁₇形成的优选的杂环残基为例如任选N-取代的哌嗪-1-基，例如被C_1-4烷基、ω-羟基-C_1-4烷基、ω-二甲基氨基-C_1-4烷基、C_5-6环烷基、C_1-4烷基-C_5-6环烷基、包含1或2个氮原子的芳香杂环残基，例如吡啶基或嘧啶-2-基，或如上文定义的式β残基和/或任选C-取代，例如被CH₃取代例如在位置2、和/或3和/或5和/或6和/或2，2或3，3或被

取代，例如在位置2或3；任选C取代的哌啶-1-基，例如在位置4，被NH₂、-CH₂-NH₂或哌啶-1-基取代，或在位置3，例如被OH或NH₂取代；或任选在位置3被OH或NH₂在C上取代的吡咯烷基；

5.R₁₈为H或CH₃；

6.R_c为C_1-4亚烷基或其中末端CH₂被CR_xR_y替换的C_1-4亚烷基，其中R_x和R_y一同构成-CH₂-CH₂-；

7.X为O；

8.式(α)基团为-O-CH₂-CH₂-Y；

9.R₁₉和R₂₀每个为H、C_1-4烷基，例如在末端碳原子被OH取代的甲基、C_1-4烷基，例如-CH₂-CH₂-OH、或环丙基；

10.如由NR₁₉R₂₀构成的优选的杂环残基为，例如任选被C_1-4烷基或式β残基N-取代的哌嗪-1-基；哌啶-1-基；1-(C_1-4烷基)-哌啶-3-基；3-或4-吡啶基；咪唑基；吡咯烷基；或吗啉-4-基；

11.R₁、R₄、R₇、R₈、R₁₁或R₁₄各自独立地为1-N-甲基-哌啶-4-基；4-甲基-哌嗪-1-基；4-甲基-1-高哌嗪基；4-(2-羟基乙基)-哌嗪-1-基；或-X’-C_{1，2 或3}-亚烷基-NR₁₉R₂₀，其中X’为直接键、O或NH；

12.在式(a)的残基中，R₂和R₃每个为H或R₂和R₃中的一个为H且另一个为F、Cl、CH₃、OH、OCH₃或CF₃；

13.在式(a)的基团中R₂为OH；

14.在式(b)的残基中，R₅和R₆的每一个为H或R₅和R₆中的一个为H且另一个为F、Cl、CH₃、OCH₃或CF₃；

15.在式(b)的残基中，R₄为式(α)或NR₁₆R₁₇的基团；

16.在式(d)的残基中，R₉和R₁₀的每个为H或R₉和R₁₀中的一个为H且另一个为F、Cl、CH₃、OCH₃或CF₃；优选地R₁₀为H且R₉在位置5、6、7或8、优选地在位置6；

17.在式(d)的残基中，R₉和R₁₀的每一个为H，R₈任选为取代的哌嗪，例如R₈为4-甲基-哌嗪-1-基

18.在式(e)的残基中，R₁₂和R₁₃的每一个为H；

19.在式(e)的残基中，R₁₂和R₁₃中的一个为H且另一个为F、Cl、CH₃、OCH₃或CF₃；

当E为-N＝且G为-CH＝时，优选地R₁₃为H且R₁₂在位置6或7；

当E为-CH＝且G为-N＝时，优选地R₁₃为H且R₁₂在位置7；

20.在式(e)的残基中，R₁₂和R₁₃的每一个为H；E为-CH＝且G为-N＝，R₁₁为4，7-二氮杂-螺[2.5]辛-7-基；或在位置3被甲基或乙基取代并且任选在位置4被甲基取代的哌嗪-1-基，

21.在式(f)的残基中，R₁₅为H、CH₃或Cl、例如在位置5或6；

22.在式(f)的残基中，R’₁₅为H或CH₃，例如在位置5，优选为H；

23.R为式(d)、(e)或(f)的基团。

在式III化合物中，以下含义是优选的：

R₄₄、R’₄₄、R₄₅、R’₄₅、R₄₆、R’₄₆、R₄₇和R’₄₇的每一个为氢；

R₄₁为

其中s’为0并且R’₁₂为氢或C_1-4烷基；或s’为1并且R’₄₁₂为吡啶基，优选为2-吡啶基，且

R_41’为H；或C_1-4烷基。

优选的式II化合物为3-(1.H.-吲哚-3-基)-4-[2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-喹唑啉-4-基]-吡咯-2，5-二酮(在下文中指化合物A)、3-(1.H.-吲哚-3-基)-4-[2-(哌嗪-1-基)-喹唑啉-4-基]-吡咯-2，5-二酮(在下文中指化合物B)、3-[3-(4，7-二氮杂-螺[2.5]辛-7-基)-异喹啉-1-基]-4-(7-甲基-1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮(化合物C)，以游离形式或可药用盐形式，例如其醋酸盐。

优选的式II化合物为3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-[1-{(1-吡啶-2-基甲基)-哌啶-4-基}-1H-吲哚-3-基]-吡咯-2，5-二酮(化合物D)、3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-[1-(哌啶-4-基)-1H-吲哚-3-基]-吡咯-2，5-二酮(化合物E)，或其可药用盐、水合物或溶剂合物。

JAK3是主要在T和B细胞中表达的酶并且在T细胞发育和功能中起重要作用。JAK3激酶抑制剂是例如在以下测定中具有IC₅₀值<5μM、优选为<1μM、更优选为<0.1μM的化合物：

CTL/L和HT-2细胞的白细胞介素-2(IL-2)依赖性增殖测定

IL-2依赖性小鼠T细胞系CTL/L和HT-2在RPMI 1640(Gibco52400-025)中培养，RPMI 1640用以下物质补充：10％ Fetal CloneI(HyClone)、50μM 2-巯基乙醇(31350-010)、50μg/mL庆大霉素(Gibco15750-037)、1mM丙酮酸钠(Gibco 11360-039)、非必需氨基酸(Gibco11140-035；100×)和250U/mL小鼠IL-2(根据Genzyme标准，包含50’000U/mL小鼠IL-2的X63-Ag8转染细胞的上清液)。培养物以1:40每周分裂两次。

在使用细胞前，将细胞用不含小鼠IL-2的培养介质洗涤两次。增殖测定是以4000CTL/L细胞/孔或2500HT-2细胞/孔在平底96-孔组织培养皿中进行的，其中包含适当的试验化合物于含有50U/mL小鼠IL-2的培养介质中的稀释液。CTL/L培养物在37℃培养24小时并且HT-2培养物培养48小时。加入1μCi³H-胸腺嘧啶核苷并且进一步培养过夜后，将细胞收获在纤维滤膜上并计数放射性。

人外周血单核细胞的白细胞介素-2依赖性增殖

人外周血单核细胞是从未知HLA型血沉棕黄层蟾蜍色素(Blutspendezentrum，Kantonsspital，Basel，Switzerland)中用Ficoll分离出来的。细胞在液氮中以2×10⁷细胞/mL(90％FCS，10％DMSO)于冷冻管(Nunc)中保存直至应用。

细胞以7×10⁵细胞/mL于培养介质中放入costar培养瓶中，在潮湿的CO₂(7％)培养箱中于37℃培养4天，该培养介质包含RPMI 1640(Gibco，Pacely，England)，RPMI 1640用以下物质补充：丙酮酸钠(1mM；Gibco)、MEM非必需氨基酸和维生素(Gibco)、2-巯基乙醇(50μM)、L-谷氨酰胺(2mM)、庆大霉素和青霉素/链霉素(100μg/mL；Gibco)、细菌用天门冬氨酸(20□g/mL；Difco)、人胰岛素(5□g/mL；Sigma)、人转铁蛋白(40□g/mL；Sigma)、选择的胎牛血清(10％，Hyclone Laboratories，Logan，UT)和100μg/mL植物凝集素。细胞在包含10％FCS的RPMI 1640介质中洗涤两次并且培养2小时。离心后，细胞继续放于上述的包含白细胞介素-2(Chiron200U/mL)的培养介质(无植物凝集素)中，在适当浓度的试验化合物存在下以5×10⁴细胞/0.2mL的浓度以一式三份铺于平底的96-孔组织培养皿(Costar # 3596)中并且在37℃培养72小时。在培养的最后16小时加入³H-胸腺嘧啶核苷(1μCi/0.2mL)。接下来收获细胞并在液闪计数器上计数。

适合的JAK3激酶抑制剂包括例如

-在USP 2003/0073719A1中公开的化合物，例如式IV化合物

其中

R_2j和R_3j各自独立地选自H、氨基、卤素、OH、硝基、羧基、C_2-6链烯基、C_2-6炔基、CF₃、三氟甲氧基、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、C_3-6环烷基，其中烷基、烷氧基或环烷基任选地被1-3个选自卤素、OH、羧基、氨基、C_1-6烷硫基、C_1-6烷基氨基、(C_1-6烷基)₂氨基、C_5-9杂芳基、C_2-9杂环烷基、C_3-9环烷基或C_6-10芳基的基团取代；或R_2j和R_3j各自独立地是C_3-10环烷基、C_3-10环烷氧基、C_1-6烷基氨基、(C_1-6烷基)₂氨基、C_6-10芳氨基、C_1-6烷硫基、C_6-10芳硫基、C_1-6烷基亚磺酰基、C_6-10芳基亚磺酰基、C_1-6烷基磺酰基、C_6-10芳基磺酰基、C_1-6酰基、C_1-6烷氧基-CO-NH-、C_1-6烷基氨基-CO-、C_5-9杂芳基、C_2-9杂环烷基或C_6-10芳基，其中杂芳基、杂环烷基和芳基任选地被1-3个卤素、C_1-6烷基、C_1-6烷基-CO-NH-、C_1-6烷氧基-CO-NH-、C_1-6烷基-CO-NH-C_1-6烷基、C_1-6烷氧基-CO-NH-C_1-6烷基、C_1-6烷氧基-CO-NH-C_1-6烷氧基、羧基、羧基-C_1-6烷基、羧基-C_1-6烷氧基、苄氧基羰基-C_1-6烷氧基、C_1-6烷氧基羰基-C_1-6烷氧基、C_6-10芳基、氨基、氨基C_1-6烷基、C_2-7烷氧基羰基氨基、C_6-10芳基-C_2-7烷氧基羰基氨基、C_1-6烷基氨基、(C_1-6烷基)₂氨基、C_1-6烷基氨基-C_1-6烷基、(C_1-6烷基)₂氨基-C_1-6烷基、羟基、C_1-6烷氧基、羧基、羧基-C_1-6烷基、C_2-7烷氧基羰基、C_2-7烷氧基羰基-C_1-6烷基、C_1-6烷氧基-CO-NH-、C_1-6烷基-CO-NH-、氰基、C_5-9杂环烷基、氨基-CO-NH-、C_1-6烷基氨基-CO-NH-、(C_1-6烷基)₂氨基-CO-NH-、C_6-10芳基氨基-CO-NH-、C_5-9杂芳基氨基-CO-NH-、C_1-6烷基氨基-CO-NH-C_1-6烷基、(C_1-6烷基)₂氨基-CO-NH-C_1-6烷基、C_6-10芳基氨基-CO-NH-C_1-6烷基、C_5-9杂芳基氨基-CO-NH-C_1-6烷基、C_1-6烷基磺酰基、C_1-6烷基磺酰基氨基、C_1-6烷基磺酰基氨基C_1-6烷基、C_6-10芳基磺酰基、C_6-10芳基磺酰基氨基、C_6-10芳基磺酰基氨基-C_1-6烷基、C_1-6烷基磺酰基氨基、C_1-6烷基磺酰基氨基-C_1-6烷基、C_5-9杂芳基或C_2-9杂环烷基取代；例如甲基-[(3R，4R)-4-甲基-1-(丙烷-1-磺酰基)-哌啶-3-基]-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-胺；(3R，4R)-4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2-，3-d]嘧啶-4-基)-氨基]-哌啶-1-甲酸甲酯；3，3，3-三氟-1-{(3R，4R)-4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-氨基]-哌啶-1-基}-丙-1-酮；(3R，4R)-4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-氨基]-哌啶-1-甲酸二甲酰胺；{(3R，4R)-4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-氨基]-哌啶-1-羰基}-氨基)乙酸乙酯；3-{(3R，4R)-4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-氨基]-哌啶-1-基}-3-氧代-丙腈；3，3，3-三氟-1-{(3R，4R)-4-甲基-3-[甲基-(5-甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-氨基]-哌啶-1-基}-丙-1-酮；1-{(3R，4R)-4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-氨基]-哌啶-1-基}-丁-3-炔-1-酮；1-{(3R，4R)-3-[(5-氯-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-甲基-氨基]-4-甲基-哌啶-1-基}-丙-1-酮；1-{(3R，4R)-3-[(5-氟-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-甲基-氨基]-4-甲基-哌啶-1-基}-丙-1-酮；(3R，4R)-N-氰基-4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-氨基]-N’-丙基-哌啶-1-甲酰胺；或(3R，4R)-N-氰基-4，N’，N’-三甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-氨基]-哌啶-1-甲酰胺；

-在WO 01/042246中公开的化合物，例如式IVb化合物

-在WO 02/092571中公开的化合物，例如式V化合物

其中

Ar₁选自苯基、四氢萘亚甲基、吲哚基、吡唑基、二氢茚基、1-氧代-2，3-二氢茚基或吲唑基，这些基团各自可以任选地被一个或多个下列基团取代：卤素、羟基、氰基、C_1-8烷氧基、CO₂R_8k、CONR_9kR_10k、C_1-8烷基-O-C_1-8烷基、C_1-8烷基-NR_8k-C_1-8烷基、C_1-8烷基-CONR₈-C_1-8烷基、C_1-8烷基-CONR_9kR_10k、NR_8kCOC_1-8烷基、C_1-8硫烷基、C_1-8烷基(本身任选地被一个或多个OH或氰基或氟取代)或C_1-8烷氧基；

X_k是NR_3k或O；n_k是0或1；

R_k基团各自独立地是氢或C_1-8烷基；

R_1k和R_2k各自独立地选自H、卤素、硝基、氰基、C_1-8烷基、C_1-8烷氧基、OH、芳基、Y_k(CR_11k2)_pkNR_4kR_5k、Y_k(CR_11k2)_pkCONR_4kR_5kY_k(CR_11k2)_pkCO₂R_6k、Y_k(CR_11k2)_pkOR_6k、Y_k(CR_11k2)_pkR_6k；或R_1k和R_2k连接在一起为-OCHO-或-OCH₂CH₂O-；

R_11k各自独立地是H、C_1-8烷基、羟基或卤素；p_k是0、1、2、3、4或5；

R_3k是H或C_1-8烷基；

Y_k是氧、CH₂或NR_7kR_3k是氢或C_1-8烷基；

R_4k和R_5k各自独立地是H、C_1-8烷基或R_4k和R_5k与它们所连接的氮原子一起形成4-至7-元饱和的或芳香杂环体系，该体系任选地包含另外的O、S或NR_6k，或R_4k和R_5k中的一个是H或C_1-8烷基并且另一个是任选地包含另外的O、S或N原子的5或6元杂环体系；

R_6k是H、C_1-8烷基、苯基或苄基；

R_7k是H或C_1-8烷基；

R_8k是H或C_1-8烷基；R_9k和R_10k各自独立地是氢或C_1-8烷基；

-在US 2002/0055514A1中公开的化合物，例如式VI化合物

其中

X_o是NH、NR_11o、S、OCH₂或R_11oCH；

R_11o是H、C_1-4烷基或C_1-4烷酰基；

R_1o至R_8o各自独立地是H、卤素、OH、巯基、氨基、硝基、C_1-4烷基、C_1-4烷氧基或C_1-4烷硫基；其中2个R_1o-R_5o与它们所连接的苯环一起可以任选地形成稠环，例如形成萘基或四氢萘基环；另外其中由两个邻近的R_1o-R_5o基团形成的环可以任选地被1、2、3或4个卤素、羟基、巯基、氨基、硝基、C_1-4烷基、C_1-4烷氧基或C_1-4烷硫基取代；条件是R_2o-R_5o中至少一个是OH，并且

R_9o和R_10o各自独立地是H、卤素、C_1-4烷基、C_1-4烷氧基或C_1-4烷酰基；或R_9o和R_10o一起是亚甲基二氧基；

-在WO 04/052359中公开的化合物，例如式VII化合物

其中n_p是1、2、3、4或5；

R_1p是H、CH₃或CH₂N(CH₃)₂；并且

R_3p是CH₂N(CH₃)₂

以游离形式或可药用盐形式存在。

式IV至VII化合物可以以游离或盐形式存在。式IV至VI化合物可药用盐的实例包括与无机酸的盐，例如盐酸盐，与有机酸例如与乙酸或柠檬酸的盐，或适当时，与金属如钠或钾的盐，与胺例如三乙胺的盐以及与二元氨基酸例如赖氨酸的盐。

当式IV至VII化合物在分子中具有一个或多个不对称中心时，本发明被理解为包括多种旋光异构体，以及包含外消旋体、非对映异构体和其混合物。当式IV至VII化合物包含双键时，化合物可以以顺式或反式构型或其混合物存在。

在式IV中，C_6-10芳基是苯基或萘基。C_2-9杂环烷基可以是例如吡咯烷基、四氢呋喃基、二氢呋喃基、四氢吡喃基、吡喃基、噻喃基、吖丙啶基、环氧乙烷基、亚甲二氧基、异噁唑烷基、1，3-噁唑烷-3-基、异噻唑烷基、1，3-噻唑烷-3-基、1，2-吡唑烷-2-基、1，3-吡唑烷-1-基、哌啶基、吗啉基、哌嗪基等。该基团可以通过C或N原子连接。C_2-9杂芳基可以是例如呋喃基、噻吩基、噻唑基、吡唑基、异噻唑基、噁唑基、异噁唑基、吡咯基、三唑基、四唑基、咪唑基、噁二唑基、噻二唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、三嗪基、吡唑并[3，4-b]吡啶基、噌啉基、蝶啶基、嘌呤基、苯并噁唑基、苯并噻唑基、苯并呋喃基、异吲哚基、吲哚基、中氮茚基、吲唑基、异喹啉基、喹啉基、酞嗪基、喹喔啉基、喹唑啉基、苯并噁嗪基等。该基团可以通过C或N原子连接。

优选的JAK3激酶抑制剂包括例如N-苄基-3，4-二羟基-亚苄基-氰基乙酰胺α-氰基-(3，4-二羟基)]-N-苄基肉桂酰胺(Tyrphostin AG 490)、灵菌红素25-C(PNU156804)、[4-(4’-羟基苯基)-氨基-6，7-二甲氧基喹唑啉](WHI-P131)、[4-(3’-溴-4’-羟基苯基)-氨基-6，7-二甲氧基喹唑啉](WHI-P154)、[4-(3’，5’-二溴-4’-羟基苯基)-氨基-6，7-二甲氧基喹唑啉](WHI-P97)和3-{(3R，4R)-4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-氨基]-哌啶-1-基}-3-氧代-丙腈，以游离形式或可药用盐例如单-柠檬酸盐形式，或游离或可药用盐形式的式IVb化合物，例如单-柠檬酸盐形式(也称为CP-690,550)或式VII化合物。

在每个实例中引用的专利申请如上，与化合物相关的主要内容并入本申请中作为参考。同样地包括在其中公开的其可药用盐、相应的外消旋体、非对映异构体、对映异构体、互变异构体以及相应的以例如溶剂化物、水合物和多晶型物存在的以上公开的化合物的晶体变型。作为活性成分应用于本发明的组合产品中的化合物可以如引用的文献中描述的分别进行制备和施用。两种以上不同的上述活性成分的组合也在本发明的范围内，即本发明范围内的药物组合产品可以包括三种或更多种活性成分。

根据本发明的特殊发现，本发明提供了

1.药物组合产品，包括

a)至少一种PKC抑制剂，和

b)至少一种JAK3激酶抑制剂。

2.在需要该治疗的个体中治疗或预防自身免疫性疾病或障碍或细胞、组织或器官的移植物排斥反应的方法，包括例如并行或相继共同施用于所述个体的治疗有效量的至少一种PKC抑制剂并优选至少一种JAK3激酶抑制剂，例如以上公开的那些。

自身免疫性疾病的实例包括例如结节病、纤维化肺、自发间质性肺炎、阻塞性气道疾病，包括例如哮喘、内源性哮喘、外源性哮喘、粉尘性哮喘、特别是慢性或难治性哮喘(例如晚期哮喘和气道高反应)的病症、支气管炎，包括支气管哮喘、婴儿哮喘、变应性类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、狼疮性肾病综合征、桥本甲状腺炎、多发性硬化、重症肌无力、I型糖尿病及其并发症、II型成年型糖尿病、眼色素层炎、肾病综合征、类固醇依赖性和类固醇抵抗性肾病、掌跖脓疱病、过敏性脑脊髓炎、肾小球肾炎、银屑病、银屑病关节炎、变应性湿疹(变应性皮炎)、接触性皮炎和其他的湿疹性皮炎、脂溢性皮炎、扁平苔藓、天疱疮、大疱性类天疱疮、大疱性表皮松懈、荨麻疹、血管性水肿、血管炎、红斑、皮肤嗜酸粒细胞增多、痤疮、斑秃、嗜酸性细胞增多性肌膜炎、动脉粥样硬化、结膜炎、角膜结膜炎、角膜炎、春季结膜炎、伴有贝赫切特病的眼色素层炎、疱疹性角膜炎、圆锥形角膜、角膜上皮营养不良、角膜白斑、眼天疱疮、莫伦溃疡、巩膜炎、格雷夫斯眼病、严重的眼内炎症、粘膜或血管的炎症例如白三烯B4-介导的疾病、胃溃疡、局部缺血性疾病和血栓引起的血管损伤、缺血性肠病、炎性肠病(例如克罗恩病和溃疡性结肠炎)、坏死性小肠结肠炎、肾病包括间质性肾炎、古德帕斯丘综合征、溶血性尿毒症综合征和糖尿病肾病、选自多发性肌炎、吉-巴综合征、梅尼埃病和神经根病的神经疾病、胶原病包括硬皮病、韦格纳肉芽肿病和舍格伦综合征、慢性自身免疫性肝病包括自身免疫性肝炎、原发性胆汁性肝硬化和硬化性胆管炎、部分肝切除、急性肝坏死(例如中毒、病毒性肝炎、休克或缺氧引起的坏死)、乙型病毒性肝炎、非甲/非乙型肝炎和肝硬化、暴发型肝炎、脓疱性银屑病、贝赫切特病、慢性活动性肝炎、埃文斯综合征、花粉症、特发性甲状旁腺功能减退、艾迪生病、自身免疫性萎缩性胃炎、类狼疮肝炎、肾小管间质性肾炎、膜性肾炎、肌萎缩性侧索硬化或风湿热。

移植物排斥反应指的是细胞、组织或实体器官的同种异体移植物或异种移植物的急性或慢性排斥反应，该移植物例如胰岛、干细胞、骨髓、皮肤、肌肉、角膜组织、神经元组织、心、肺、心-肺联合、肾、肝、肠、胰、气管或食管，或移植物抗宿主病。慢性排斥反应也可以称为移植物血管病(graft vessel diseases或graft vasculopathies)。

3.例如以药盒的形式，其可以进一步包括施用说明书，例如在以上2)项下所定义的方法中使用的以上1)项下所定义的药物组合产品。

4.用于制备在以上2)项下所定义的方法中使用的药物的以上1)项下所定义的药物组合产品。

本发明组合产品在上文说明的方法中的用途可以在动物试验方法以及例如根据下文描述的方法在临床中证实。

A.大鼠心脏移植

组合使用的种类：雄性Lewis(RT¹单元型)和BN(RT¹单元型)。动物用可吸入的异氟烷麻醉。供体大鼠通过腹下腔静脉进行肝素化并同时主动脉放血，随后打开胸部并且使心脏迅速冷却。结扎主动脉并且将向远端剥离至第一分支处，并且头臂动脉在第一杈处剥离。将左侧肺动脉结扎并且剥离，右侧剥离但保持开放。其他所有的血管被剥离开、结扎和分开并且将供体心脏移至冰冷的生理盐水中。

受体通过下肾腹主动脉和腔静脉的剖分和横断钳闭术制备。移植物用端边吻合进行移植，在供体头臂动脉和受体主动脉以及供体右侧肺动脉和受体腔静脉之间使用10/0单丝缝线。移去钳子，移植物束缚在后腹腔，腹部内容物用温生理盐水洗涤并且将动物缝合，使其在加热灯下恢复。移植物的存活通过每日触诊腹壁的供体心脏跳动来监控。当心跳停止时认为排斥完成。在用本发明的组合产品例如醋酸盐形式的化合物A和单柠檬酸盐形式的化合物CP-690,550的组合产品，组合产品的每个成分以日剂量0.1-50mg/kg口服施用治疗的动物中获得了增加的移植物存活。因此醋酸盐形式的化合物A以1-30mg/kg/天的剂量施用，并且CP-690,550单柠檬酸盐以60ng/mL的EC₅₀(50％动物维持其移植物>28天的血中药物浓度)施用时显著增加移植物存活。

B.组合治疗

适合的临床研究是例如在银屑病或多发性硬化的患者中进行开放性、剂量递增研究。该研究特别证明了本发明组合产品的活性成分的协同作用。直接通过本领域技术人员公知的这些研究结果可以确定在银屑病或多发性硬化中的有益作用。该研究特别适用于将用活性成分和用本发明的组合产品的单一治疗的效果加以比较。优选地，活性剂(a)的剂量不断增加直至达到最大耐受剂量，并且活性剂(b)以固定剂量施用。或者，活性剂(a)以固定剂量施用并且活性剂(b)的剂量增加。每个患者每天或间断接受活性剂(a)的剂量。治疗的有效性可以在该研究中例如在12、18或24周后通过每6周症状分数的评价来确定。

或者，可以应用安慰剂对照双盲研究以证明本文中提及的本发明组合产品例如在器官、组织或细胞(例如胰岛细胞)的移植中的益处。

与仅应用本发明组合产品中应用的药物活性成分中的一种的单一治疗相比，本发明的药物组合产品的施用不仅引起有益的作用(例如协同治疗作用，例如减轻、延迟进程或抑制症状)，而且还有令人惊奇的有益作用，例如较低的副作用、改善的生活质量或发病率的降低。

另外的益处是可以应用较低剂量的本发明组合产品的活性成分，例如剂量通常更低而且也应用得不那么频繁，这可以减少副作用的发生或降低其严重性。这要根据被治疗患者的愿望和要求而定。

本文中使用的术语“共同施用”或“组合施用”等意指包含将所选择的治疗剂施用于单个患者，并且旨在包括其中各活性剂不一定通过相同的施用途径或在相同时间进行施用的治疗方案。

本发明的目的之一是提供包含一定的量(例如对移植物排斥反应或自身免疫性疾病或障碍及其相关障碍的共同治疗有效的量)的包含本发明的组合产品的药物组合物。在该组合物中，活性剂a)和活性剂b)可以同时施用，一个在另一个之后施用或分别以一种组合单位剂量形式或以两种分开的单位剂量形式施用。单位剂量形式也可以是固定的组合。

根据本发明，可以按照已知的方法和那些适合肠道施用(例如口服)以及非肠道施用于哺乳动物(温血动物，包括人)的方法制备活性剂a)和活性剂b)分别施用或以固定组合施用的药物组合物，即包含至少两种组合成分a)和b)的盖伦制剂组合物，所述药物组合物包含治疗有效量的包含至少一种单独的上述药用活性组合成分，或与一种或多种可药用载体或稀释剂、特别是适合肠道或非肠道应用的载体或稀释剂组合。

适合的药物组合物包含例如约0.1％至约99.9％、优选为约1％至约60％的活性成分。肠道或非肠道施用的组合治疗的药物制剂是例如那些单位剂量形式的药物制剂，例如糖包衣片、片剂、胶囊剂或栓剂，或安瓿。如果没有另外说明，可以按照已知的方法进行制备，例如通过常规的混合、制粒、糖包衣、溶解或冻干的方法。需要注意的是在每个剂量形式的各个剂量中包含的组合成分的单位含量本身不需要构成有效量，因为需要的有效量可以通过多剂量单位施用达到。

具体而言，治疗有效量的本发明组合产品的每种组合成分可以同时或顺次并以任何顺序施用，并且组分可以分别或作为固定组合施用。例如，根据本发明预防或治疗移植物排斥反应或自身免疫性疾病的方法可以包括(i)施用游离或可药用盐形式的第一种活性剂a)以及(ii)施用游离或可药用盐形式的活性剂b)，同时或以任何顺序顺次，以共同治疗有效量，优选为以协同有效量，例如以与本文中描述的量一致的日剂量或间隔剂量施用。本发明组合产品的各个组合成分可以在治疗过程中的不同时间分别施用或同时以分开的或单一组合产品形式施用。另外，术语“施用”也包括在体内转化为相应的组合成分的前药组合成分的应用。因此，本发明被理解为包括同时或交替治疗的所有方案并且术语“施用”也作同样解释。

用于本发明组合产品中的每个组合成分的有效剂量可以根据应用的具体化合物或药物组合物、施用方式、所治疗的病症、所治疗病症的严重性而变化。因此，本发明组合产品的剂量方案根据多种因素而选择，包括施用途径以及患者的肾和肝的功能。本领域中普通的医生、临床医师或兽医可以容易地确定并开出减轻、对抗或抑制病症进程所需的有效量的单一活性成分。在产生疗效而无毒性的范围内获得最精确的活性成分的浓度需要基于活性物质对靶点的利用度的动力学而定。

当然，活性剂a)或活性剂b)的日剂量需要根据多种因素，例如选择的化合物、治疗的具体病症和所需的效果而变化。但是，通常而言，每天以约0.1-100mg/kg的单剂量或分剂量施用活性剂a)即可获得满意的结果。PKC抑制剂(例如式I至III化合物，例如化合物A、B、C、D或E)，可以通过任何常规途径施用，特别是肠道施用(例如经口服，例如以片剂、胶囊剂的形式)或非肠道施用(例如以注射用溶液剂或混悬剂的形式)，局部施用(例如以洗剂、凝胶、软膏或乳霜的形式，或以鼻腔或栓剂的形式)。在较大的哺乳动物例如人中口服施用的日剂量范围为约0.5mg至2000mg活性成分，例如化合物A、B、C、D或E，以高至一天四次的分剂量或以延迟的剂型方便地施用。

活性剂b)例如CP-690,550或式XVII化合物，可以以日剂量范围为0.5-1000mg施用于人。适合的口服施用的单位剂量形式包括约0.1-500mg活性成分，以及一种或多种可药用的稀释剂或载体。

与仅应用本发明组合产品中应用的药用活性成分中的一种的单一治疗相比，本发明的药物组合产品的施用不仅具有有益的作用(例如协同治疗作用，例如在移植患者中抑制移植物排斥反应或减缓或抑制自身免疫病症)，而且还有令人惊奇的有益作用，例如较低的副作用、改善的生活质量或发病率的降低。

另外的益处是可以应用较低剂量的本发明组合产品的活性成分，例如剂量可以应用得更低而且也应用得不那么频繁，或可以用于减少副作用的发生率。这与所治疗患者的愿望和要求相一致。

优选的组合产品是化合物A、B、C、D或E，优选化合物A，更优选醋酸盐形式的化合物A与CP-690,555单柠檬酸盐的组合产品。

Claims (10)

1.药物组合产品，该药物组合产品包括：

a)至少一种PKC抑制剂，以及

b)至少一种JAK3激酶抑制剂。

2.根据权利要求1中所述的药物组合产品，其中活性剂a)为选自上文所述的式I和II的化合物，其可药用盐或水合物，上文所述的式III的化合物，其可药用盐、水合物或溶剂合物。

3.根据权利要求1或2的药物组合产品，其中活性剂b)是在与CTL/L和HT-2细胞的IL-2依赖性增殖测定和人外周血单核细胞的IL-2依赖性增殖测定中IC₅₀值<5μM的JAK3激酶抑制剂。

4.根据权利要求1的药物组合产品，其中活性剂b)为选自上文所述的式IV和VII的化合物，或其可药用盐。

5.根据权利要求1的药物组合产品，其中活性剂a)为3-(1.H.-吲哚-3-基)-4-[2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-喹唑啉-4-基]-吡咯-2，5-二酮；3-(1.H.-吲哚-3-基)-4-[2-(哌嗪-1-基)-喹唑啉-4-基]-吡咯-2，5-二酮；或3-[3-(4，7-二氮杂-螺[2.5]辛-7-基)-异喹啉-1-基]-4-(7-甲基-1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮，以游离形式或可药用盐形式或水合物形式存在；3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-[1-{(1-吡啶-2-基甲基)-哌啶-4-基}-1H-吲哚-3-基]-吡咯-2，5-二酮或3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-[1-(哌啶-4-基)-1H-吲哚-3-基]-吡咯-2，5-二酮，或其可药用盐、水合物或溶剂合物；优选所述的活性剂a)为3-(1.H.-吲哚-3-基)-4-[2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-喹唑啉-4-基]-吡咯-2，5-二酮的醋酸盐。

6.根据权利要求1或5的药物组合产品，其中JAK3激酶抑制剂b)是游离形式或可药用盐形式的3-{(3R，4R)-4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-氨基]-哌啶-1-基}-3-氧代-丙腈或如权利要求5中定义的式XVII化合物。

7.根据权利要求1或5的药物组合产品，其中所述的JAK3激酶抑制剂b)是游离形式或可药用盐形式的CP-690，550。

8.在治疗或预防自身免疫性疾病或障碍或细胞、组织或器官的移植物排斥反应的方法中应用的根据权利要求1的药物组合产品。

9.在制备用于治疗和预防自身免疫性疾病或障碍或细胞、组织或器官的移植物排斥反应的药物或药盒中应用的根据权利要求1的药物组合产品。

10.在需要该治疗的个体中治疗和预防自身免疫性疾病或障碍或细胞、组织或器官的移植物排斥反应的方法，该方法包括例如并行或相继共同施用于所述个体治疗有效量的至少一种PKC抑制剂以及至少一种JAK3激酶抑制剂。