BRPI0712224A2

BRPI0712224A2 - anticorpos de alta afinidade para o receptor de il-6 humano

Info

Publication number: BRPI0712224A2
Application number: BRPI0712224-1A
Authority: BR
Inventors: Stevens Sean; T. Huang Tammy; H. Martin Joel; L. Fairhurst Jeanette; Rafique Ashique; Smith Eric; J. Pobursky Kevin; J. Papadopoulos Nicholas; P. Fandl James; Chen Gang; Karow Margaret
Original assignee: Regeneron Pharmaceuticals, Inc.
Priority date: 2006-06-02
Filing date: 2007-06-01
Publication date: 2012-01-17
Also published as: WO2007143168A2; US10584173B2; HRP20130228T1; NO2017060I1; RS52643B; DK2041177T3; FR17C1057I1; US11370843B2; US20120003697A1; HRP20120175T1; CN101454345B; NZ587107A; CA2652976A1; IL195393A; CR10462A; MY159787A; AU2007254831A1; CY1113708T1; PL2041177T3; PT2374818E

Abstract

ANTICORPOS DE ALTA AFINIDADE PARA O RECEPTOR DE IL-6 HUMANO. Um anticorpo humano ou um fragmento de ligação ao antígeno que se liga ao receptor de IL-6 humano (hlL-6R) com um K~ d~ de cerca de 500 pM ou menos e bloqueia a atividade de IL-6 com um lC~ 50~ de 200 pM ou menos. O anticorpo ou fragmento de anticorpo liga-se ao hIL-6R com uma afinidade pelo menos 2 vezes maior relativa à sua ligação ao IL-6R de macaco.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "ANTICORPOS DE ALTA AFINIDADE PARA O RECEPTOR DE IL-6 HUMANO"

Relatório de Técnica Relacionada

lnterleucina-6 (IL-6) é uma citocina pleiotrópica produzida por células imunes e não imunes que desempenham um papel crucial na regula- ção da resposta imune, reações de fase aguda, e hematopoiese. Ela liga-se ao IL-6R de ligação de membrana celular e solúvel (cadeia a) formando um complexo binário e este complexo é capaz de interagir com gp130 de ligação de membrana celular (cadeia β), induz formação de complexo de sinalização compreendendo dois de cada de IL-6, IL-6R, e gp130.

Anticorpos para hlL-6R são descritos na patentes US 5.670.373, 5.795.965, 5.817.790, 6.410.691, e EP 409 607B1. Métodos terapêuticos são descritos na patentes US 5.888.510 e 6.723.319.

Breve Sumário da Invenção

Em um primeiro aspecto, a invenção fornece anticorpos huma- nos, preferivelmente anticorpos humanos recombinantes, que especifica- mente ligam-se ao receptor de interleucina-6 humana (hlL-6R). Estes anti- corpos são caracterizados por ligação ao hlL-6R com alta afinidade e cinéticos de dissociação lenta e pela capacidade de neutralizar a atividade de IL-6. Os anticorpos podem ser de tamanho natural (por exemplo, um anticorpo IgGI ou lgG4) ou podem compreender apenas uma porção de ligação ao antígeno (por exemplo, um fragmento Fab, F(ab')2 ou scFv), e podem ser modificados para executar a funcionalidade, por exemplo, para eliminar as funções efeto- ras residuais (Reddy e outro. (2000) J. Immunol. 164:1925-1933). Em uma modalidade preferida, a invenção fornece um anticorpo ou fragmento de liga- ção ao antígeno deste, que se liga ao receptor de IL-6 humano (SEQ ID NO: 1) com um Kd de cerca de 500 pM ou menos, como medido por ressonância de plasmônio de superfície. Em uma modalidade mais específica, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígerio tem um K0 de menos do que 300 pM, ou menos do que 200 pM, ou ainda menos do que 100 pM. Em várias modali- dades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno deste bloqueia a atividade de hlL-6 com um IC50 de 250 pM ou menos, como medido por bioensaio de luciferase. Em modalidades mais específicas, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno deste exibe um IC50 de 150 pM ou menos.

Em aspectos relacionados, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno da invenção liga-se ao hIL- 6R com uma afinidade de pelo me- nos 2 vezes maior do que ele liga-se ao IL-6R de macaco. Em modalidades mais preferidas, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno liga-se à proteína de hlL-6R (SEQ ID NO: 1) com uma afinidade que é até cerca de 3 vezes maior relativa a sua ligação ao IL-6R de macaco (Domínio extracelular fascicular de Macaca mostrado em SEQ ID NO: 251).

Em uma modalidade, o anticorpo ou porção de ligação ao antí- geno do anticorpo da invenção compreende uma região variável de cadeia pesada (HCVR) selecionada do grupo consistindo em SEQ ID NO: 3, 227, 19, 231, 35, 51, 67, 83, 99, 115, 131, 147, 239, 241, 163, 179, 235, 195 e 211, ou seqüência substancialmente similar desta. Em uma modalidade mais específica, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno deste também compreende uma região variável de cadeia leve (LCVR) selecionada do gru- po consistindo em SEQ ID NO: 11, 229, 27, 233, 43, 59, 75, 91, 107, 123, 139, 155, 171, 187, 237, 203 e 219, ou uma seqüência substancialmente similar destas. Em modalidades específicas, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno deste compreende pares de HCVR/LCVR selecionados do grupo consistindo em SEQ ID NO: 3/11 ; 227/229; 19/27; 231/233; 35/43; 51/59; 67/75; 83/91 ; 99/107; 115/123; 131/139; 147/155; 239/155; 241/155; 163/171 ; 179/187; 235/237; 195/203; e 211/219, ou seqüências substanci- almente similares destas.

Em um segundo aspecto, a invenção fornece moléculas de áci- do nucléico isoladas que codificam um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno de um anticorpo da invenção. Em uma modalidade, a molécula de ácido nucléico da invenção codifica um anticorpo ou fragmento deste com- preendendo um HCVR como descrito acima. Em modalidades específicas, a molécula de ácido nucléico que codifica o HCVR é selecionada do grupo consistindo em SEQ ID NO: 2, 226, 18, 230, 34, 50, 66, 82, 98, 114, 130, 146, 238, 240, 162, 178, 234, 194 e 210, ou uma seqüência substancialmen- te idêntica destas. Em um aspecto relacionado, a invenção fornece uma mo- lécula de ácido nucléico isolada que codifica um LCVR como descrito acima. Em modalidades específicas, a molécula de ácido nucléico que codifica o LCVR é uma seqüência de nucleotídeo selecionada do grupo consistindo em SEQ ID NO: 10, 228, 26, 232, 42, 58, 74, 90, 106, 122, 138, 154, 170, 186, 236, 202 e 218, ou uma seqüência substancialmente idêntica destas.

Em um terceiro aspecto, a invenção caracteriza um anticorpo ou Jragmento de ligação ao-antígeno,_compreendendo um domínio de região de determinação complementar 3 (CDR3) de cadeia pesada e um domínio de CDR3 de cadeia leve, em que o domínio de CDR3 de cadeia pesada com- preende uma seqüência de aminoácido da fórmula X1 - X2 - X3 - X4 - X5 - X6 - X7 - X8 - X9 - X10 - X11 - X12 - X13 - X14 - X15 - X16 - X17 - X18 - X19 (SEQ ID NO: 247) em que X1 = Ala, X2 = Lys, X3 = Gly, X4 = Arg, X5 = Asp, X6 = Ser ou Ala, X7 = Phe, X8 = Asp; X9 = He, X10 = Pro ou ausente, X11 = Phe ou ausen- te, X12 = Val ou ausente, X13 = Tyr ou ausente, X14 = Tyr ou ausente, X15 = Tyr ou ausente, X16 = Gly ou ausente, X17 = Met ou ausente, X18 = Asp ou ausente, e X19 = Val ou ausente;e

o domínio de CDR3 de cadeia leve compreende uma seqüência de aminoácido da fórmula X1 - X2 - X3 - X4 - X5 - X6- X7 - X8 - X9 (SEQ ID NO: 250) em que X1 = Gln, X2 = Gln ou His, X3 = Ala, X4 = Asn ou Tyr, X5 = Ser, X6 = Phe, X7 = Pro, X8 = Pro, e X9 = Thr.

Em uma modalidade mais específica, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno também compreende

um domínio de CDR1 de cadeia pesada compreendendo uma seqüência de aminoácido da fórmula X1 - X2- X3 - X4 - X5 - X6 - X7 - X8 (SEQ ID NO: 245) em que X1 = Gly ou Arg, X2 = Phe, X3 = Thr, X4 = Phe, X5 = Asp, X6 = Asp, X7 = Tyr, e X8 = Ala;

um domínio de CDR2 de cadeia pesada compreendendo uma seqüência de aminoácido da fórmula X1 - X2- X3 - X4 - X5 - X6 - X7 - X8 (SEQ ID NO: 246) em que X1 = Ile ou Vai, X2 = Ser, X3 = Trp, X4 = Asn, X5 = Ser, X6 = GIy, X7 = Ser, e X8 = IIe;

um domínio de CDR1 de cadeia leve compreendendo uma se- quêrrcia de aminoácido da fórmula X1 - X2 - X3 - X4 - X5 - X6 - X7 - X8 (SEQ ID NO: 248), em que X1 = Gln1 X2 = Gly, X3 = He, X4 = Ser, X5 = Ser, e X6 = Trp; e um domínio de CDR2 de cadeia leve compreendendo uma se- qüência de aminoácido da fórmula X1 - X2 - X3 (SEQ ID NO: 249), em que X1 = Gly ou Ala, X2 = Ala, e X3 = Ser.

Em um quarto aspecto, a invenção caracteriza um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno, compreendendo:

um domínio de CDR3- de cadeia pesada selecionado do grupo consistindo em SEQ ID NO: 25, 153, 9, 185, 41, 57, 73, 89, 105, 121, 137, 169, 201 e 217; e

um domínio de CDR3 de cadeia leve selecionado do grupo con- sistindo em SEQ ID NO: 33, 161, 17, 193, 49, 65, 81, 97, 113, 129, 145, 177, 209 e 225.

Em uma modalidade mais específica, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno também compreende:

um domínio de CDR1 de cadeia pesada selecionado do grupo consistindo em SEQ ID NO: 21, 149, 5, 181, 37, 53, 69, 85, 101, 117, 133, 165, 197, e 213;

um domínio de CDR2 de cadeia pesada selecionado do grupo consistindo em SEQ ID NO: 23, 151, 7, 183, 39, 55, 71, 87, 103, 119, 135, 167, 199 e 215;

um domínio de CDR1 de cadeia leve selecionado do grupo con- sistindo em SEQ ID NO: 29, 157, 13, 189, 45, 61, 77, 93, 109, 125, 141, 173, 205e221; e

um domínio de CDR2 de cadeia leve selecionado do grupo con- sistindo em SEQ ID NO: 31, 159, 15,191, 47, 63, 79, 95, 111, 127, 143, 175, 207 e 223.**

Em modalidades específicas, o antígeno ou fragmento de liga- ção ao antígeno compreende seqüências de CDR de cadeia pesada SEQ ID NO: 21, 23, 25 e seqüências de CDR de cadeia leve SEQ ID NO: 29, 31, 33; seqüências de CDR de cadeia pesada SEQ ID NO: 149, 151, 153 e seqüên- cias de CDR de cadeia leve SEQ ID NO: 157, 159, 161; seqüências de CDR de cadeia pesada SEQ ID NO: 5, 7, 9 e cadeia leve SEQ ID NO: 13, 15, 17; e seqüências de CDR de cadeia pesada SEQ ID NO: 181, 183, 185 e se- qüências de CDR de cadeia leve SEQ ID NO: 189, 191, 193.

Em um quinto aspecto, a invenção caracteriza moléculas de ácido nucléico isoladas que codificam um anticorpo ou fragmentos de ligação ao antígeno da invenção, em que o anticorpo ou fragmento deste compreende

um domínio de CDR3 de cadeia pesada codificado por uma se- qüência _de-nucleotídeo-selecionada do grupo consistindo em SEQ ID NO: 24, 152, 8, 184, 40, 56, 72, 88, 104, 120, 136, 168, 200 e 216; e

um domínio de CDR3 de "cadeia leve codificado por uma se- qüência de nucleotídeo selecionada do grupo consistindo em SEQ ID NO: 32, 160, 16, 192, 48, 64, 80, 96, 1 12, 128, 144, 176, 208 e 224; bem como seqüências de ácido nucléico substancialmente idênticas destas.

Em uma modalidade mais específica, moléculas de ácido nu- cléico isoladas são fornecidas codificando um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno da invenção, em que o anticorpo ou fragmento deste compreende

uma CDR1 de cadeia pesada codificada por uma seqüência de nucleotídeo selecionada do grupo consistindo em SEQ ID NO: 20, 148, 4, 180, 36, 52, 68, 84, 100, 116, 132, 164, 196 e 212;

um domínio de CDR2 de cadeia pesada codificado por uma se- qüência de nucleotídeo selecionada do grupo consisntindo em SEQ ID NO: 22, 150, 6, 182, 38, 54, 70, 86, 102, 118, 134, 166, 198 e 214;

um domínio de CDR1 de cadeia leve codificado por uma se- quência de nucleotídeo selecionada do grupo consistindo em SEQ ID NO: 28, 156, 12, 188, 44, 60, 76, 92, 108, 124, 140, 172, 204 e 220; e

um domínio de CDR2 de cadeia leve codificado por uma se- qüência de nucleotídeo selecionada do grupo consistindo em SEQ ID NO: 30, 158, 14, 190, 30, 46, 62, 78, 94, 110, 126, 142, 174, 206 e 222; bem co- mo seqüências de ácido nucléico substancialmente idênticas destas.

A invenção abrange anticorpos anti-hlL-6R ou fragmentos de ligação ao antígeno destes tendo um padrão de glicosilação modificado. Em algumas aplicações, modificação para remover sítios de glicosilação indese- jáveis pode ser útil, ou um anticorpo com falta de uma porção fucose sobre uma cadeia de oligossacarídeo, por exemplo, para aumentar a citotoxicidade celular dependente de anticorpo (ADCC) (veja Shield e outro. (2002) JBC 277:26733). Em outras aplicações, modificação de uma galactosilação pode ser feita a fim de modificar a citotoxicidade dependente de complemento (CDC).

Em outros aspectos, a invenção fornece vetores de expressão recombinantes transportando umas moléculas de ácido nucléico da inven- ção, e células hospedeiras nas quais tais vetores foram introduzidos, como são métodos de preparar os anticorpos ou fragmentos de ligação ao antíge- no da invenção obtidos por cultura das células hospedeiras da invenção. A célula hospedeira pode ser uma célula procariótica ou eucariótica, preferi- velmente a célula hospedeira é uma célula de E. coli ou uma célula de ma- mífero, tal como uma célula CHO.

Em um outro aspecto, a invenção caracteriza uma composição farmacêutica compreendendo um anticorpo humano ou fragmento de ligação ao antígeno de um anticorpo que especificamente liga-se ao hlL-6R e um veículo farmaceuticamente aceitável.

Em outros aspectos, a invenção caracteriza métodos para inibir atividade de IL-6 humana utilizando um anticorpo, ou porção de ligação ao antígeno deste, da invenção. Em uma modalidade, a invenção abrange um método terapêutico compreendendo administrar um anticorpo da invenção, ou um fragmento deste, a um indivíduo humano sofrendo de um distúrbio que é tratado ou melhorado por inibição da atividade de IL-6. O distúrbio po- de ser, por exemplo, artrite, incluindo artrite reumatóide crônica; doenças inflamatórias do intestino, incluindo doença de Crohn e colite ulcerativa; lú- pus eritematoso sistêmico; e doenças inflamatórias.

Em outros aspectos, a invenção fornece o uso de um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno de um anticorpo como definido acima na fabricação de um medicamento para uso para atenuar ou inibir um distúr- bio ou doença mediada por IL-6 em um ser humano. Em um aspecto rela- cionado, a invenção fornece um anticorpo ou fragmento de ligação ao antí- geno de um anticorpo como definido acima para uso na atenuação ou inibi- ção de um distúrbio ou doença mediada por IL-6 em um humano.

Outros objetivos e vantagens tornar-se-ão evidentes a partir de uma revisão da seguinte descrição detalhada.

DESCRIÇÃO DETALHADA

Antes dos presentes métodos serem descritos, deve ser enten- dido que-esta invençãojião é limitada aos„métodos particulares e condições experimentais descritas, visto que tais métodos e condições podem variar.

Deve ser também entendido que a terminologia utilizada aqui é para o pro- pósito de descrever modalidades particulares apenas, e não é pretendida ser limitante, uma vez que o escopo da presente invenção será limitado apenas pelas reivindicações anexas.

A menos que definido de outra maneira, todos os termos técni- cos e científicos utilizados aqui têm o mesmo significado como comumente entendido por alguém versado na técnica a qual esta invenção pertence.

Embora quaisquer métodos e materiais similares ou equivalentes àqueles descritos aqui possam ser utilizados na prática ou teste da presente inven- ção, os métodos e materiais preferidos são agora descritos.

O termo "IL6R humano" (hlL-6R), como utilizado aqui, é preten- dido referir-se a um receptor de citocina humano que especificamente liga-se à interleucina-6 (IL-6). O domínio extracelular de hlL-6R é mostrado em SEQ ID NO: 1.

O termo "anticorpo", como utilizado aqui, é pretendido referir-se às moléculas de imunoglobulina compreendendo quatro cadeias de polipep- tídeo, duas cadeias pesadas (H) e duas cadeias leves (L) interconectadas por pontes de dissulfeto. Cada cadeia pesada compreende uma região vari- ável de cadeia pesada (abreviada aqui como HCVR ou VH) e uma região constante de cadeia pesada. A região constante de cadeia pesada compre- ende três domínios, CH1, CH2 e CH3. Cada cadeia leve compreende uma região variável de cadeia leve (abreviada aqui como LCVR ou VL) e uma região constante de cadeia leve. A região constante de cadeia leve é com- preendidarde um dommro (CL1). As regiões VH e VL podem ser também subdivididas em regiões de hipervariabilidade, denominadas regiões de de- terminação complementares (CDR), entremeadas com regiões que são mais conservadas, denominadas regiões de estrutura (FR). Cada VH e VL é com- posta de três CDRs e quatro FRs, dispostas do terminal amino ao terminal carbóxi na seguinte ordem: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4.

O termo "porção de ligação ao antígeno" de um anticorpo (ou simplesmente-"porçãQjde_an.tico.rpolou-!!fragmento- de-anticorpo"),.como uti- lizado aqui, refere-se a um ou mais fragmentos de um anticorpo que mantêm a capacidade de especificamente ligar-se á um antígeno (por exemplo, hlL- 6R). Foi mostrado que a função de ligação ao antígeno de um anticorpo po- de ser realizada por fragmentos de um anticorpo de tamanho natural. Exem- plos de fragmentos de ligação abrangidos dentro do termo "porção de liga- ção ao antígeno" de um anticorpo incluem (i) um fragmento Fab1 um frag- mento monovalente consistindo nos domínios de VL, VH, CL1 e CH1; (ii) um fragmento F(ab')2, um fragmento bivalente compreendendo dois fragmentos Fab ligados por uma ponte de dissulfeto na região de dobradiça; (iii) um fragmento Fd consistindo nos domínios de VH e CH1; (iv) um fragmento Fv consistindo nos domínios de VL e VH de um único braço de um anticorpo, (v) um fragmento dAb (Ward e outro. (1989) Nature 241 :544-546), que con- siste em um domínio de VH; e (vi) uma região de determinação complemen- tar isolada (CDR). Além disso, embora os dois domínios do fragmento Fv, VL e VH, sejam codificados por genes separados, eles podem ser unidos, utili- zando métodos recombinantes, por um ligante sintético que permite eles se- rem feitos como uma única cadeia contígua na qual as regiões VL e VH pa- reiam-se para formar moléculas monovalentes (conhecidas como Fv de ca- deia única (scFv); veja por exemplo, Bird e outro. (1988) Science 242:423- 426; e Huston e outro. (1988) Proc. Natl. Acad. Sei. USA 85:5879-5883). Tais anticorpos de cadeia única são também pretendidos ser abrangidos dentro do termo "porção de ligação ao antígeno" de um anticorpo. Outras formas de anticorpos de cadeia única, tais como diacorpos, são também a- brangidas (veja por exemplo, Holliger e outro. (1993) Proc. Natl. Acad Sci. USA 90:6444-6448).

Um anticorpo de "neutralização" ou "bloqueio", como utilizado aqui, é pretendido referir-se a um anticorpo cuja ligação ao hlL-6R resulta na inibição da atividade biológica de hlL-6. Esta inibição da atividade biológica de hlL-6 pode ser estimada medindo-se um ou mais indicadores de atividade biológica de hlL-6 conhecidos na técnica, tais como ativação celular induzida por hlL-6 e ligação de hlL-6 ao hlL-6R (veja exemplos abaixo).

Uma "CDR" ou região, de. determinação complementar é uma região de hipervariabilidade entremeada dentro de regiões que são mais conservadas, denominadas "regiões de estrutura" (FR). Em modalidades diferentes do anticorpo anti-hlL-6R ou fragmento da invenção, as FRs podem ser idênticas às seqüências de linha germinativa humanas, ou podem ser naturalmente ou artificialmente modificadas. Um grupo de CDRs pode ser definido como uma seqüência de consenso de aminoácido; por exemplo, em uma modalidade, o anticorpo anti-hlL-6R ou fragmento de ligação ao antíge- no da invenção pode ser descrito como compreendendo um domínio de CDR3 de cadeia pesada compreendendo uma seqüência de aminoácido da fórmula X1 - X2 - X3 - X4 - X5 - X6- X7 - X8 - X9 - X10 - X11 - X12 - X13- X14 - X15 - X16 - X17 - X18 - X19 (SEQ ID NO: 247) em que X1 = Ala, X2 = Lys, X3 = Gly, X4 = Arg, X5 = Asp, X6 = Ser ou Ala, X7 = Phe, X8 = Asp; X9 = He, X10 = Pro ou ausente, X11 = Phe ou ausente, X12 = Val ou ausente, X13 = Tyr ou ausen- te, X14 = Tyr ou ausente, X15 = Tyr ou ausente, X16 = Gly ou ausente, X17 = Met ou ausente, X18 = Asp ou ausente, e X19 = Val ou ausente; e um domínio de CDR3 de cadeia leve compreendendo uma seqüência de aminoácido da fórmula X1 - X2 - X3 - X4 - X5 - X6- X7 - X8 - X9 (SEQ ID NO: 250) em que X1 = Gln, X2 = Gln ou His, X3 = Ala, X4 = Asn ou Tyr, X5 = Ser, X6 = Phe, X7 = Pro, X8 = Pro, e X9 = Thr.

O termo "ressonância de plasmônio de superfície", como utiliza- do aqui, refere-se a um fenômeno ótico que leva em conta a análise de inte- rações em tempo real por detecção de alterações em concentrações de pro- teína dentro de uma matriz de biossensor, por exemplo utilizando o sistema BlAcore® (Pharmacia Biosensor AB). O termo "epítopo" é um determinante antigênico que interage com um sítio de ligação de antígeno específico na região variável de uma molécula de anticorpo conhecida como um parátopo. Um único antígeno po- de ter mais do que um epítopo. Epítopos podem ser conformacionais ou li- neares. Um epítopo conformacional é produzido espacialmente por aminoá- cidos justapostos de diferentes segmentos da cadeia de polipeptídeo linear. Um epítopo linear é um produzido por resíduos de aminoácido adjacentes em uma cadeia de polipeptídeo. Em certasjcircunstâncias, um epítopo pode incluir porções de sacarídeos, grupos fosforila, ou grupos sufonila sobre o antígeno.

O termo "identidade substancial" ou "substancialmente idêntico", quando referindo-se a um ácido nucléico ou fragmento deste, indica que, quando idealmente alinhado com deleções ou inserções de nucleotídeo a- propriadas com outro ácido nucléico (ou seu filamento complementar), existe identidade de seqüência de nucleotídeo em pelo menos cerca de 95%, e mais preferivelmente pelo menos cerca de 96%, 97%, 98% ou 99% das ba- ses de nucleotídeo, como medido por qualquer algoritmo bem conhecido de identidade de seqüência, tal como FASTA, BLAST ou Gap, como descrito abaixo.

Como aplicado para polipeptídeos, o termo "similaridade subs- tancial" ou "substancialmente similar" significa que duas seqüências de pep- tídeo, quando idealmente alinhadas, tais como pelos programas GAP ou BESTFIT utilizando pesos de intervalo padrão, compartilham pelo menos 95% de identidade de seqüência, ainda mais preferivelmente pelo menos 98% ou 99% de identidade de seqüência. Preferivelmente, posições de resí- duo que não são idênticas diferem-se por substituições de aminoácido con- servativas. Uma "substituição de aminoácido conservativa" é uma em que um resíduo de aminoácido é substituído por outro resíduo de aminoácido tendo uma cadeia lateral (grupo R) com propriedades químicas similares (por exemplo, carga ou hidrofobicidade). Em geral, a substituição de amino- ácido conservativa substancialmente não alterará as propriedades funcionais de uma proteína. Em casos onde duas ou mais seqüências de aminoácido diferem-se uma da outra por substituições conservativas, a porcentagem de identidade de seqüência ou grau de similaridade pode ser ajustado para ci- ma para corrigir quanto à natureza conservativa da substituição. Métodos para executar este ajuste são bem conhecidos por aqueles versados na téc- nica. Veja, por exemplo, Pearson (1994) Methods Mol. Biol. 24: 307-331. Exemplos de grupos de aminoácidos que têm cadeias laterais com proprie- dades químicas similares incluem 1) cadeias laterais alifáticas: glicina, alani- na, valina, Ieucina e isoleucina; 2) cadeias laterais de hidroxila alifática: seri- na e treonina; 3) cadeias laterais contendo amida: asparagina e glutamina; 4) cadeias laterais aromáticas: fenilalanina, tirosina, e triptofano; 5) cadeias laterais básicas: lisina, arginina, e histidina; 6) cadeias laterais acídicas: as- partato e glutamato, e 7) cadeias laterais contendo enxofre são cisteína e metionina. Grupos de substituição de aminoácidos conservativa preferidos são: valina-leucina-isoleucina, fenilalanina-tirosina, lisina-arginina, alanina- valina, glutamato-aspartato, e asparagina-glutamina. Alternativamente, uma substituição conservativa é qualquer alteração tendo um valor positivo na matriz de probabilidade Iog PAM250 descrita em Gonnet e outro. (1992) Sci- ence 256: 1443 45. Uma substituição "moderadamente conservativa" é qual- quer alteração tendo um valor não negativo na matriz de probabilidade log PAM250.

Similaridade de seqüência para polipeptídeos, que é também referida como identidade de seqüência, é tipicamente medida utilizando software de análise de seqüência. Software de análise de proteína compara seqüências similares utilizando medidas de similaridade designadas a várias substituições, deleções e outras modificações, incluindo substituições de aminoácido conservativas. Por exemplo, software GCG contém programas tais como Gap e Bestfit que podem ser utilizados com parâmetros padrões para determinar a homologia de seqüência ou identidade de seqüência entre polipeptídeos intimamente relacionados, tais como polipeptídeos homólogos de diferentes espécies de organismos ou entre uma proteína de tipo selva- gem e uma muteína desta. Veja, por exemplo, GCG Versão 6.1. Seqüências de polipeptídeo também podem ser comparadas utilizando FASTA utilizando parâmetros padrão oa recomendadosrum-programa em GCG Versão 6.1. FASTA (por exemplo, FASTA2 e FASTA3) fornece alinhamentos e porcen- tagem de identidade de seqüência das regiões da melhor sobreposição entre as seqüências de dúvida e pesquisa (Pearson (2000) supra). Outro algoritmo preferido quando compara-se uma seqüência da invenção a uma base de dados contendo um grande número de seqüências de diferentes organismos é o programa de computador BLAST, especialmente blastp ou tblastn, utili- zando parâmetros padrão. Veja, por exemplo, Altschuleoutro. (1990) J. Mol. Biol. 215: 403 410 e Altschul e outro. (1997) Nucleic Acids Res. 25:3389 402.

Preparação de Anticorpos Humanos

Métodos para gerar anticorpos humanos incluem, por exemplo, Veloclmmune® (Regeneron Pharmaceuticals), tecnologia XenoMouse® (Gre- en e outro. (1994) Nature Genetics 7:13-21 ; Abgenix), o método de "minilo- cos", e exibição de fago (e veja, por exemplo, US 5.545.807, US 6.787.637). A tecnologia Veloclmmune® (US 6.596.541) abrange um método de gerar um anticorpo totalmente humano de especificidade elevada para um antíge- no selecionado. Esta tecnologia envolve geração de um camundongo trans- gênico tendo um genoma compreendendo regiões variáveis de cadeias leve e pesada humanas operavelmente ligadas aos Iocos de região constante de camundongo endógenos de modo que o camundongo produza um anticorpo compreendendo uma região variável humana e uma região constante de camundongo em resposta à estimulação antigênica. O DNA que codifica as regiões variáveis das cadeias leve e pesada do anticorpo é isolado e opera- velmente ligado ao DNA que codifica as regiões constantes de cadeias leve e pesada humanasrO DNA é em seguida expresso em uma célula capaz de expressar o anticorpo totalmente humano. Em modalidade específica, a cé- lula é uma célula CHO.

Anticorpos podem ser terapeuticamente úteis no bloqueio de uma interação de ligando-receptor ou inibição de interação de componente de receptor, em vez de morte de células através de fixação de complemento (citotoxicidade dependente de complemento) (CDC) e participação de citoto- xicidade mediada por célula dependente de anticorpo (ADCC). A região constante de um anticorpo é importante na capacidade de um anticorpo fi- xar-se ao complemento e mediar citotoxicidade dependente de célula. Desse modo, o isotipo de um anticorpo pode ser selecionado com base no caso de ser desejável para o anticorpo mediar a citotoxicidade.

Imunoglobulinas humanas podem existir em duas formas que são associadas com heterogeneidade de dobradiça. Em uma forma, uma molécula de imunoglobulina compreende uma construção de quatro cadeias estável de aproximadamente 150-160 kDa em que os dímeros são mantidos juntos por uma ligação de dissulfeto de cadeia pesada entre as cadeias. Em uma segunda forma, os dímeros não são ligados por meio de pontes de dis- sulfeto entre as cadeias e uma molécula de cerca de 75-80 kDa é formada composta de cadeias leve e pesada covalentemente acopladas (meio anti- corpo). Estas formas foram extremamente difícies de separar, mesmo após purificação de afinidade. A freqüência de aparecimento da segunda forma em vários isotipos de IgG intactos é devido a, porém não limitada a, diferen- ças estruturais associadas com o isotipo de região de dobradiça do anticor- po. De fato, uma única substituição de aminoácido na região de dobradiça da dobradiça de lgG4 humana pode significantemente reduzir o aparecimen- to da segunda forma (Angal e outro. (1993) Molecular Imunology 30:105) para níveis tipicamente observados utilizando uma dobradiça de IgGI hu- mana. A presente invenção abrange anticorpos tendo uma ou mais muta- ções na região de dobradiça, CH2 ou CH3 que pode ser desejável, por e- xemplo, na produção, para melhorar a produção da forma de anticorpo dese- jada.

Anticorpos da invenção são preferivelmente preparados com o uso de tecnologia Veloclmmune®. Um camundongo transgênico em que as regiões variáveis de cadeias leve e pesada de imunoglobulina endógena são substituídas com as regiões variáveis humanas correspondentes é desafiado com o antígeno de interesse, e células linfáticas (tais como células B) são recuperadas dos camundongos que expressam anticorpos. As células linfáti- cas podem ser fundidas com uma linhagem de célula de mieloma para pre- parar linhagens de célula de hibridoma imortais, e tais linhagens de célula de hibrrdoma são avaliadas e se lecionadas para identificar linhagens de célula de hibridoma que produzem anticorpos específicos ao antígeno de interesse. DNA que codifica as regiões variáveis da cadeia pesada e cadeia leve pode ser isolado e ligado às regiões constantes isotípicas desejáveis da cadeia pesada e cadeia leve. Uma tal proteína de anticorpo pode ser produzida em uma célula, tal como uma célula CHO. Alternativamente, o DNA que codifica os anticorpos quiméricos específicos ao antígeno ou os domínios variáveis das cadeias leve e pesada pode serJsoIado diretamente de linfócitos especí- ficos ao antígeno.

Em uma modalidade, o camundongo transgênico compreende até 18 genes de cadeia pesada variável humana funcional e 12 genes de cadeia leve kapa variável humana funcional. Em outra modalidade, o ca- mundongo transgênico compreende até 39 genes de cadeia pesada variável humana e 30 genes de cadeia leve kapa variável humána. Em ainda outra modalidade, o camundongo transgênico compreende até 80 genes de ca- deia pesada variável humana e 40 genes de cadeia leve kapa variável hu- mana.

Em geral, os anticorpos da presente invenção possuem afinida- des muito elevadas, tipicamente possuindo KdS de cerca de 10'9 até cerca de 10-12 M, quando medido por ligação ao antígeno imobilizado em fase sóli- da ou em fase de solução.

Inicialmente, anticorpos quiméricos de alta afinidade são isola- dos tendo uma região variável humana e uma região constante de camun- dongo. Como descrito abaixo, os anticorpos são caracterizados e seleciona- dos quanto às características desejáveis, incluindo afinidade de ligação ao hlL-6R, capacidade de bloquear hlL-6, e/ou seletividade para a proteína hu- mana. As regiões constantes de camundongo são substituídas com uma região constante humana desejada para gerar o anticorpo totalmente huma- no da invenção, por exemplo IgG1 ou lgG4 modificada ou tipo selvagem (por exemplo, SEQ ID NO: 242, 243, 244). Enquanto a região constante selecio- nada pode variar de acordo com o uso específico, características de especi- ficidade alvo e ligação ao antígeno de alta afinidade residem na região variável. Mapeamento de Epítopo eTecnologias Relacionadas

Para avaliar os anticorpos que se ligam a um epítopo particular, um ensaio de interbloqueio de rotina tal como aquele descrito em Antibodies: A Laboratory Manual 1988 Cold Spring Harbor Laboratory1 Harlow e Lane, eds., pode ser realizado. Outros métodos incluem análise de mutantes de varredura de alanina, manchas de peptídeo (Reineke (2004) Methods Mol Biol 248:443-63), ou clivagem de peptídeo como descrito nos exemplos a- baixo. AlértLdisso, métodos tais como excisão_de epítopo, extração de epí- topo e modificação química de antígenos podem ser empregados (Tomer (2000) Protein Science: 9: 487-496).

Perfil de Modificação Assistida (MAP)1 também conhecido como Perfil de Anticorpo com Base em Estrutura de Antígeno (ASAP) é um méto- do que categoriza grandes números de anticorpos monoclonais (mAbs) dire- cionados contra o mesmo antígeno de acordo com as similaridades do perfil de ligação de cada anticorpo às superfícies de antígeno quimicamente ou enzimaticamente modificado (Publicação de Pedido de Patente dos Estados Unidos N2 2004/0101920). Cada categoria pode refletir um único epítopo distintamente diferente de ou parcialmente sobrepondo-se com um epítopo representado por outra categoria. Esta tecnologia permite filtração rápida de anticorpos geneticamente idênticos, de modo que a caracterização possa ser focalizada em anticorpos geneticamente distintos. Quando aplicado à avaliação de hibridoma, MAP pode facilitar a identificação de clones de hi- bridoma raros com características desejadas. MAP pode ser utilizado para classificar os anticorpos de hlL-6R da invenção em grupos de diferentes epí- topos de ligação de anticorpos.

Agentes úteis para alteração da estrutura do antígeno imobiliza- do são enzimas, tais como, por exemplo enzimas proteolíticas e agentes químicos. A proteína de antígeno pode ser imobilizada em superfícies de chip biossensor ou contas de poliestireno. As últimas podem ser processa- das com, por exemplo, um ensaio tal como um ensaio de detecção multiplex Luminex® (Luminex Corp., TX). Por causa da capacidade de Luminex® con- duzir análise multiplex com até 100 tipos diferentes de contas, Luminex® for- rrecersuperfícies de antígeno quase não limitadas com várias modificações, resultando em resolução melhorada no perfil de epítopo de anticorpo sobre um ensaio de biossensor.

Administração e Formulações Terapêuticas

A administração de entidades terapêuticas de acordo com a in- venção será administrada com adequados veículos, excipientes, e outros agentes que são incorporados em formulações para fornecer transferência, distribuição, tolerância-melhoradas. e-similares. Uma multidão de formula- ções apropriadas pode ser encontrada no formulário conhecido por todos os químicos farmacêuticos: Remington1S Pharmaceutical Sciences (15ã ed, Mack Publishing Company, Easton, Pa., 1975), particularmente Capítulo 87 por Blaug, Seymour, nesse particular. Estas formulações incluem, por exem- plo, pós, pastas, unguentos, geléias, ceras, óleos, lipídeos, vesículas con- tendo lipídeo (catiônico ou aniônico) (tais como Lipofectin®), conjugados de DNA, pastas de absorção anidrosas, emulsões óleo em água e água em ó- leo, emulsões carbowax (polietileno glicóis de vários pesos moleculares), géis semi-sólidos, e misturas semi-sólidas contendo carbowax. Qualquer uma das misturas precedentes pode ser apropriada em tratamentos e tera- pias de acordo com a presente invenção, contanto que o ingrediente ativo na formulação não seja inativado pela formulação e a formulação seja fisiologi- camete compatível e tolerável com a rotina de administração. Veja também Powell e outro. PDA (1998) J Pharm Sci Technol. 52:238-311 e as citações a esse respeito para informação adicional relacionada aos excipientes e veícu- los bem conhecidos por químicos farmacêuticos.

Exemplos

Os seguintes exemplos são apresentados a fim de prover aque- les versados na técnica com uma descrição completa e descrição de como preparar e usar os métodos e composições da invenção, e não são preten- didos limitar o escopo do qual os inventores consideram como sua invenção. Esforços foram feitos para assegurar exatidão com respeito aos números utilizados (por exemplo, quantidades, temperatura etc.), porém algumas di- vergências e erros experimentais devem ser considerados. A menos que Hndrcado de outra maneira, partes são partes por peso, peso molecular é pe- so molecular médio, temperatura é em graus centígrados, e pressão é em ou próxima a atmosférica.

Exemplo 1

Geração de Anticorpos humanos para Receptor de IL-6 Humana

Imunização de roedores pode ser feita por quaisquer métodos conhecidos na técnica (veja, por exemplo, Harlow e Lane (1988) supra; Malik e ..Lil.le.hojV Antibody techniques: Academic Press,. 1994,_CA). Em.uma moda- lidade preferida, antígeno de hlL-6R é administrado diretamente aos camun- dongos que compreendem Iocos de DNA codificando tanto região variável de cadeia pesada de Ig humana quanto região variável de cadeia leve capa (Veloclmmune®, Regeneron Pharmaceuticals, Inc.; US 6,596,541), com um adjuvante para estimular a resposta imune. Um tal adjuvante inclui adjuvante de Freund completo e incompleto, sistema adjuvante MPL+TDM (Sigma), ou RIBI (dipeptídeos de muramila) (veja 0'Hagan, Vaccine Adjuvant, por Hu- man Press, 2000, NJ). Um tal adjuvante pode prevenir dispersão rápida de polipeptídeo por seqüestro do antígeno em um depósito local, e pode conter fatores que podem estimular a resposta imune do hospedeiro. Em uma mo- dalidade, hlL-6R é administrado indiretamente como DNA plasmídeo que contém gene de hlL-6R e expressa hlL-6R utilizando a maquinaria de ex- pressão de proteína celular hospedeira para produzir polipeptídeo de antíge- no in vivo. Em ambos os métodos, o esquema de imunização requer diver- sas administrações espaçadas por algumas semanas. A resposta imune de anticorpo é monitorada por imunoensaio específico ao antígeno padrão. Quando os animais alcançaram sua resposta imune máxima, as células B de expressão de anticorpo foram colhidas e fundidas com células de mieloma de camundongo para preservar sua viabilidade, formando células de hibri- doma. Para selecionar anticorpos monoclonais funcionalmente desejáveis, meios condicionados das células de hibridoma ou células transfectadas fo- ram avaliados quanto à especificidade, afinidade de ligação ao antígeno, e potência no bloqueio de ligação de hlL-6 ao hlL-6R (descrito abaixo). Exemplo 2

Anticorpos anti-hlL6R gerados por meio de isolamento direto de esplenócitos DNA que codifica domínios de VH e VL pode ser isolado direta- mente de uma única célula B positiva de antígeno. Resumidamente, o ca- mundongo transgênico imunizado por hlL-6Roc foi terminado e esplenócitos foram colhidos. Células sangüíneas vermelhas foram removidas por Iise se- guida por peletização dos esplenócitos colhidos. Esplenócitos ressuspensos foram primeiro incubados com um coquetel de IgG humana, FITC-anti-mFc, e biotina-IL6Ra durante 1 hora. As células manchadas foram lavadas duas vezes com PBS, em seguida manchadas com um coquetel de IgG de rato e humana, APC-anti-mlgM, e SA-PE durante uma hora. As células manchadas foram lavadas uma vez com PBS e foram analisadas por citometria de fluxo em um MoFIo (Cytomation). Cada IgG positiva, IgM negativa, e célula B po- sitiva de antígeno foi classificada e semeada em uma cavidade separada em uma placa de 96 cavidades. RT-PCR de genes de anticorpo destas células B foi realizada de acordo com um método descrito por Wang e outro. (2000) (J Imunol Methods 244:217-225). Resumidamente, cDNAs para cada célula B única foram sintetizados por meio de RT-PCR. Cada produto de RT resultan- te foi em seguida dividido e transferido em duas cavidades correspondentes em duas placas de 96 cavidades. Um grupo dos produtos de RT resultantes foi primeiro amplificado por PCR utilizando um iniciador degenerado 5' espe- cífico para seqüência líder de região variável de cadeia pesada humana de IgG e um iniciador 3' específico para região constante de cadeia pesada de camundongo, para formar um amplicon. O amplicon foi em seguida amplifi- cado novamente por PCR utilizando um grupo de iniciador degenerado 5' específico para estrutura 1 de seqüência de região variável de cadeia pesa- da humana de IgG e um iniciador 3' em ninho específico para região cons- tante de cadeia pesada de camundongo. O outro grupo dos produtos de RT resultantes foi primeiro amplificado por PCR utilizando um iniciador degene- rado 5' específico para seqüência líder de região variável de cadeia leve ca- pa humana e um iniciador 3' específico para região constante de cadeia leve kapa de camundongo para formar um amplicon. O amplicon foi em seguida amplificado novamente por PCR utilizando um grupo de iniciador degenera- do 5' específico para estrutura 1 de seqüência de região variável de cadeia leve kapa humana e um iniciador 3' em ninho específico para região cons- tante de cadeia leve kapa de camundongo. Os produtos de PCR de cadeia pesada e cadeia leve foram clonados em vetores de anticorpo 1inearizados por Sap I contendo região constante de cadeia pesada de IgG1 e região constante de cadeia leve kapa, respectivamente. O plasmídeo de cadeia pasada tem ura sítio. Lox2272 e um sítio lox511 flanqueando os cassetes de expressão de cadeia pesada. Além disso, imediatamente a jusante do I- ox2272 no plásmídeo de cadeia pesada existe um gene de resistência à hi- gromicina que carece de um promotor e um ATG de iniciação. O gene de resistência à higromicina é também transcricionalmente ligado a um gene eGFP a jusante por meio de uma seqüência IRES. O plasmídeo de cadeia leve tem um sítio loxP e sítio lox2272 flanqueando o cassete de expressão de cadeia leve. Além disso, o plasmídeo de cadeia leve tem um promotor SV40 imediatamente antes de um ATG no sítio lox2272, de modo que sob integração em uma célula hospedeira apropriada o promotor SV40 próximo ao lox2272 e ATG de iniciação do plasmídeo de cadeia leve seja trazido ad- jacente ao gene de resistência à higromicina no plasmídeo de cadeia pesada na estrutura de leitura apropriada para permitir transcrição e translação dos genes de resistência à higromicina e eGFP. Plasmídeos recombinantes puri- ficados tendo uma seqüência de região variável de cadeia pesada e plasmí- deos tendo uma seqüência de região variável de cadeia leve da mesma cé- lula B foram em seguida combinados e transfectados, juntamente com um plasmídeo que expressa a Cre recombinase, em uma linhagem de célula hospedeira CHO modificada. A linhagem de célula hospedeira CHO modifi- cada contém, de 5' a 3', um sítio IoxP, um eCFP, um sítio lox2272, DsRed, e um sítio lox511 em um Iocos transcricionalmente ativo. Consequentemente, a célula CHO hospedeira pode ser isolada por citometria de fluxo como uma célula positiva azul, positiva vermelha, e negativa verde. Quando plasmídeos recombinantes expressando genes de cadeia pesada e cadeia leve são transfectados juntamente com um plasmídeo expressando a Cre recombina- se, recombinação específica de sítio mediada pela Cre recombinase resulta na integração dos plasmídeos de anticorpo no Iocos cromossômico contendo os sítios Iox e substituição dos genes eCFP e DsRed. Recombinantes po- dem em seguida ser isolados como células negativa azul, negativa verme- lha, e positiva verde por citometria de fluxo. Consequentemente, células CHO transfectadas com plasmídeos recombinantes tendo uma seqüência de região variável de cadeia pesada e plasmídeos tendo uma seqüência de re- gião variável de_ cadeia Ieve da mesma célula B foram classificados por ci- tometria de fluxo, e recombinantes apropriados que mostram os fenótipos negativo azul, negativo vermelho, e positivo verde foram isolados, e linha- gens de célula CHO expressando anticorpo recombinante estável foram es- tabelecidas de clones isolados.

Exemplo 3

Determinação de Afinidade de Ligação ao Antíqeno

O Kp da ligação de antígeno aos anticorpos selecionados descri- tos acima foi determinado por cinéticos de superfície em um ensaio de res- sonância de plasmônio de superfície de biossensor em tempo real (BIAco- re®). Mais especificamente, a afinidade dos anticorpos ao IL-6R humano foi medida utilizando um BlAcore® 2000 ou BlAcore® 3000. O anticorpo foi cap- turado em uma superfície de IgG anti-camundongo e exposto a várias con- - centrações de proteína de hlL-6R recombinante em forma monomérica ou dimérica. Análise cinética utilizando software BlAevaluation® foi realizada para obter as constantes de taxas de associação e dissociação.

Afinidades de ligação dos anticorpos ao hlL-6R foram também medidas para meios condicionados de hibridoma ou proteínas purificadas por imunoensaio de competição com base em placa. As proteínas de anti- corpo foram purificadas utilizando cromatografia de afinidade de Proteína G de meio de condicionamento de célula de hibridoma que foi depauperado de IgG bovina (Invitrogen). Para o ELISA de competição, resumidamente, quan- tidades constantes de anticorpo em diferentes níveis foram pré-misturadas com diluições seriais de proteína de antígeno, hlL-6R-hFc, variando de 0 a 10 Mg/ml, e incubadas durante duas horas em temperatura ambiente para alcançar-equilíbrio de pseudo-ligação entre o anticorpo e antígeno. Estas soluções foram em seguida transferidas para placas pré-revestidas de hlL- 6R-hFc de 96 cavidades para permitir o anticorpo livre nas misturas ligar-se à hll_-6R-hFc revestida na placa. As placas foram tipicamente revestidas com 1 a 2 pg/ml de proteína hlL-6R-hFc em solução PBS durante a noite a 4°C seguido por bloqueio não específico de BSA. Após lavagem do excesso de anticorpo em solução, anticorpos ligados à placa foram detectados com um xeagente de anticorpo policlonal IgG ou IgA antieamundongo de cabra conjugado a HRP e desenvolvidos utilizando substratos colorimétricos ou de quimioluminescência. A dependência dos sinais nas concentrações de antí- geno em solução foi analisada com uma análise de ajuste de 4 parâmetros utilizando software Prism® (Graph Pad) e relatada como IC50. Imunoensaio de competição foi também realizado utilizando instrumento Kinexa® de fase de solução em estado equilibrado (Sapidyne Inc.).

Os resultados são mostrados na Tabela 1 (controle: anticorpo monoclonal humanizado ao IL-6R humano (Patente dos Estados Unidos N- 5.817.790 SEQ ID NO: 69 e 71). Anticorpo (seqüências de aminoácido de HCVR e LCVR): VQ8A9-6 (3, 11); VQ8F11-21 (19, 27); W7G4-1 (35, 43); W7G4-10 (51, 59); W6C10-1 (67, 75); W6C10-3 (83, 91); W6C10-4 (99, 107); W6F12-11 (115, 123); W9A6-11 (131, 139); W6A9-5 (147, 155), W3D8-4 (163, 171); W1G4-7 (179, 187); 248982-13-1-E5 (195, 203); 248982-13-2-A9 (211, 219). K0 de monômero e dímero determinado por Bl- Acore®; K0 da solução por Kinexa®; IC5o por ensaios ELISA (n.d. = não de- terminado).

Tabela 1 - Afinidade de Ligação ao Antígeno

<table>table see original document page 22</column></row><table> Tabela 1 -continuacão-

<table>table see original document page 23</column></row><table>

Exemplo 4

Neutralização da Atividade de hlL-6

Atividades de bloqueio de hlL-6 dos anticorpos anti-hlL-6R da invenção foram avaliadas por imunoensaios de bloqueio de hlL-6, bioensaios de crescimento de célula dependente de hlL-6 in vitro, e ressonância de plasmônio de superfície (BlAcore®). O imunoensaio foi utilizado para avaliar a capacidade do anticorpo testado bloquear ligação de hlL-6 ao hlL-6R, e o bioensaio in vitro foi utilizado para determinar a potência dos anticorpos na neutralização de transdução de sinal celular mediado por hlL-6R.

Para o imunoensaio, proteína recombinante de hlL-6 foi revesti- da em uma placa de 96 cavidades em tampão PBS durante a noite a 4°C. Esta placa foi utilizada para capturar hlL-6R-hFc livre de soluções de amos- tra de anticorpo, e a quantidade de hlL-6R-hFc capturada foi quantificada de acordo com a curva padrão. As soluções de amostra foram compostas de uma quantidade constante de proteína recombinante de hlL-6R-hFc (100 pM) e quantidades variantes de anticorpo, em meio de condição de hibrido- ma cru ou como proteína de anticorpo purificado, variando de 0 a cerca de 50 nM em diluições seriais. As misturas de anticorpo-antígeno foram incuba- das em temperatura ambiente durante ~2 horas para permitir ligação anti- corpo-antígeno para alcançar o equilíbrio. As soluções de amostra equilibra- das foram em seguida transferidas para as placas revestidas por hlL-6 para medida de hlL-6R-hFc livre. Após 1 hora de ligação, a placa foi lavada e hlL- 6R-hFc ligada foi detectada utilizando anticorpos policlonais anti-hFc de ca- bra conjugados a HRP (Jackson Immuno Research), e desenvolvida utilizan- do substrato TMB (BD Pharmigen). IC50S foram determinadas como a quan- tidade de anticorpo requerida para reduzir 50% de IL-6R-hFc detectável por ligando hlL-6 ligado à placa. Os resultados são mostrados na primeira coluna da Tabela 2.

Adicionalmente, a capacidade do anticorpo teste bloquear liga- ção de hlL-6 ao receptor hlL-6R foi determinada utilizando ressonância de plãsmônio de superfície. Moléculas de hlL-6R-hFc de antígeno purificadas foram capturadas por anticorpos policlonais de IgG anti-humanos de cabra imobilizados em superfície de CM-5 através de acoplamento de amina em uma densidade de 250 RU. Solução de hlL-6 (0,25 ml, 50 nM) foi injetada sobre a superfície do receptor e hlL-6 ligada registrada (primeiro injeção de IL-6). hlL-6 ligada foi em seguida removida com um pulso de 3 M de MgCl2 seguindo por tampão de condicionamento. Anticorpo anti-hlL6R em meio condicionado de hibridoma foi injetado sobre a superfície do receptor captu- rado seguido por segunda injeção de hlL-6. A porcentagem de redução em ligação de hL-6 resultando de complexo anticorpo e receptor pré-formado foi utilizada como um escore para definir bloqueadores de hlL-6 de não bloque- adores (segunda coluna, Tabela 2).

Tabela 2 - Neutralização de Ligação de hlL-6

<table>table see original document page 24</column></row><table> Tabela 2 - continuação-

<table>table see original document page 25</column></row><table>

A capacidade de anticorpos de hlL-6R bloquearem a atividade de hlL-6 in vitro foi medida na linhagem XG-1 de mieloma dependente de hlL-6. Células XG-1 mantidas em meio contendo hlL-6 foram lavadas duas vezes com meios livres de hlL-6 e cultivadas durante 24 horas em meio livre de hlL-6 para depauperar hlL-6 residual. As células privadas de alimento fo- ram em seguida centrifugadas e ressuspensas no meio em 4 χ 105 células por ml e semeadas 20.000 células por cavidade em uma placa de cultura de tecido de 96 cavidades. As proteínas de anticorpo purificadas foram serial- mente diluídas em meio e adicionadas às células semeadas em concentra- ções variando de 0 a 50 nM. Subseqüentemente, hlL-6 recombinante foi adi- cionada às cavidades para uma concentração final de 8 pM. As células fo- ram deixadas desenvolver durante -72 horas a 37°C em uma incubadora de CO2 a 5% umidificada. No final do período de desenvolvimento, as células vivas foram medidas utilizando kit CCK-8 (Dojindo, Japan). IC50S foram de- terminadas como descrito acima, e relatadas na terceira coluna da Tabela 2.

A capacidade de anticorpos de hlL-6R bloquearem a atividade de hlL-6 foi também medida in vitro na linhagem de célula de hepatoma hu- mano sensível a hlL-6, HepG2. Células HepG2 foram transfectadas com um plasmídeo repórter contendo um elemento de resposta a STAT3 (Transdutor de Sinal e Ativador de Transcrição 3) ligado a um gene de luciferase. As cé- lulas transfectadas foram tripsinizadas, centrifugadas e ressuspensas no meio em aproximadamente 2,5 χ 105 células por ml e semeadas em 20.000 células por cavidade em uma placa de cultura de tecido de 96 cavidades. As proteínas de anticorpo purificadas foram serialmente diluídas em meio e adi- cionadas às células semeadas em concentrações variando de 0 a 100 nM.

Subseqüentemente, hlL-6 recombinante foi adicionada às cavidades para uma concentração final de 50 pM. A resposta foi medida após incubação das células durante 6 horas a 37°C em uma incubadora de CO2 a 5% humidifi- cada. Atividade de Iuciferase foi medida com o sistema de ensaio de Iucife- rase Steady-GIo® (Promega). LC50 Sforam determinadas como. descrito aci- ma, e relatadas na quarta coluna da Tabela 2.

Exemplo 5.

Diversidade de Epítopo de Ligação

Um imunoensaio de competição de ligação de anticorpo foi rea- lizado utilizando como um controle anticorpo humanizado para IL-6R huma- na. Resumidamente, uma placa imunoabsorvente de 96 cavidades foi reves- tida com 20 ng por cavidade de proteína recombinante de hlL-6R durante a noite a 4°C. Após bloquear ligação não-específica com BSA, os sítios de ligação de hlL-6R em uma metade da placa foram saturados com ligação do anticorpo de controle pela adição de 500 ng do controle por cavidade, e à outra metade da placa foi adicionado apenas o tampão de ligação. Após três horas de ligação em temperatura ambiente, os anticorpos purificados atingi- ram o máximo de uma concentração final de 50 ng/ml com e sem o anticorpo de controle preexistente na cavidade. Após uma hora de ligação adicional, o anticorpo livre foi desgastado pela água e um anticorpo Iigador à placa foi detectado com IgG ou IgA anti-camundongo de cabra conjugado a HRP, an- ticorpo policlonal e a placa foi desenvolvida utilizando substratos de HRP cromáticos e a absorvência em 450 nm foi registrada. Deduções de percen- tage da ligação dos anticorpos anti-hll_6R pela presence do anticorpo de controle são listadas na Tabela 3 abaixo. Um experimento similar foi condu- zido utilizando ressonância de plasmônio de tecnologia de superfície (Tabela 3). Ambos os métodos geraram Resultados consistentes. Anticorpos VQ8F11, W3D8, W6A9, W6C10-1 ligaram epítopos sobrepondo com o anti- corpo de controle; enquanto que os anticorpos VQ8A9, W1 G4, W6F12, W7G4, W9A6, e W6C10-3 pareceram ligar-se a epítopos distintos quando a ligação de antígeno não foi bloqueada pelo anticorpo de controle. Competi- ção parcial pode resultar de impedimento estérico da primeira ligação de anticorpo, mesmo que os epítopos não possam ser sobrepostos.

Tabela 3 - Competição de Ligação de Antígeno com Anticorpo Controle

<table>table see original document page 27</column></row><table>

Exemplo 6.

Propriedade de Ligação de Interespécies

Quatro anticorpos foram testados quanto a inter-reatividade para IL-6R de proteína recombinante de macaco utilizando tecnologia BlAcore®. Resumidamente, um chip biossensor sobre o qual anticorpo policlonal de Fc anti-camundongo de cabra foi imobilizado foi utilizado para apresentar anti- corpos monoclonais anti-hlL-6R em uma densidade de cerca de 75 RU. Pro- teína IL-6R humana recombinante ou monomérica de macaco (Macaca fas- ciculahs, domínio extracelular; SEQ ID NO: 251), em uma faixa de concen- tração entre 1,25 - 40 nM, foi injetada sobre a superfície do anticorpo. A liga- ção do receptor ao anticorpo e a dissociação do complexo de ligação foram monitoradas em tempo real. Tanto a constant da taxa de associação (ka) quanto a constante da taxa dissociada (kd) foram obtidas, e K0 calculada (Tabela 4). Tabela 4 - Comparação de Afinidade de Ligação ao IL-6R Humano e de Macaco

<table>table see original document page 28</column></row><table>

Entre os quatro anticorpos testados, VQ8F11, W6A9, e VQ8A9 reagiram fortemente ao receptor de macaco com valores K0 que diferiram em até cerca de 1,5 a cerca de 3 vezes de ligação de receptor humano, res- pectivamente. W1G4, que não foi bloqueado pelo anticorpo de controle (Ta- bela 3), não mostrou nenhuma ligação ao receptor de macaco a despeito de forte ligação ao receptor humano com KD de 241 pM.

Exemplo 7.

Efeito de Região Constante sobre a Afinidade de Ligação

A afinidade de ligação ao hlL-6R monomérico de quatro anticor- pos tendo IgG de camundongo, IgG humano ou lgG4 humano (tipo selvagem e modificado) foram determinado utilizando BlAcore® como descrito acima exceto uma superfície de anticorpo policlonal de Fc anti-humano de cabra foi utilizada para capturar anticorpos de hlgG. hlL-6R monomérica foi injetada em concentrações de 12,5, 6,25, 3,12, e 1,56 nM. A capacidade dos anticor- pos para neutralizar a transdução de sinal de HepG2/STAT3 dependente de hlL-6 foi também determinada em um ensaio de Iuciferase (ICso)- IC50S para isótipos de IgG diferentes foram similares, sugerindo nenhum efeito de isóti- po sobre a afinidade de anticorpo para antígeno. Tabela 5 - Comparação de Isótipos de IgG

<table>table see original document page 29</column></row><table> LISTAGEM DE SEQÜÊNCIA

<110> Regeneron Pharmaceuticals, Inc.

<120> Anticorpos de Alta Afinidade para Receptor de IL-6 Humano

<13Ό> 6OlOA-WO

<140> A ser designado <141> 2007-06-01

<150> 60/810,664 <151> 2006-06-02

<150> 60/843,232 <151> 2006-09-08

<160> 251

<170> FastSEQ para Windows Versão 4.0

<210> 1

<211> 358

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<400> 1

Met Val Ala Val Gly Cys Ala Leu Leu Ala Ala Leu Leu Ãla Ala Pro 1 5 10 15 Gly Ala Ala Leu Ala Pro Arg Arg Cys Pro Ala Gln Glu Val Ala Arg 20 25 30 Gly Val Leu Thr Ser Leu Pro Gly Asp Ser Val Thr Leu Thr Cys Pro 35 40 45 Gly Val Glu Pro Glu Asp Asn Ala Thr Val His Trp Val Leu Arg Lys 50 55 60 Pro Ala Ala Gly Ser His Pro Ser Arg Trp Ala Gly Met Gly Arg Arg 65 70 75 80 Leu Leu Leu Arg Ser 85 Val Gln Leu His Asp 90 Ser Gly Asn Tyr Ser 95 Cys Tyr Arg Ala Gly Arg Pro Ala Gly Thr Val His Leu Leu Val Asp Val 100 105 110 Pro Pro Glu 115 Glu Pro Gln Leu Ser 120 Cys Phe Arg Lys Ser 125 Pro Leu Ser Asn Val Val Cys Glu Trp Gly Pro Arg Ser Thr Pro Ser Leu Thr Thr 130 135 140 Lys Ala Val Leu Leu Val Arg Lys Phe Gln Asn Ser Pro Ala Glu Asp 145 150 155 160 Phe Gln Glu Pro Cys 165 Gln Tyr Ser Gln Glu 170 Ser Gln Lys Phe Ser 175 Cys Gln Leu Ala Val 180 Pro Glu Gly Asp Ser 185 Ser Phe Tyr Ile Val 190 Ser Met Cys Val Ala 195 Ser Ser Val Gly Ser 200 Lys Phe Ser Lys Thr 205 Gln Thr Phe Gln Gly Cys Gly Ile Leu Gln Pro Asp Pro Pro Ala Asn Ile Thr Val 210 215 220 Thr Ala Val Ala Arg Asn Pro Arg Trp Leu Ser Val Thr Trp Gln Asp 225 230 235 240 Pro His Ser Trp Asn 245 Ser Ser Phe Tyr Arg 250 Leu Arg Phe Glu Leu 255 Arg Tyr Arg Ala Glu 260 Arg Ser Lys Thr Phe 265 Thr Thr Trp Met Val 270 Lys Asp Leu Gln His His Cys Val Ile His Asp Ala Trp Ser Gly Leu Arg His 275 280 285 Val Val Gln Leu Arg Ala Gln Glu

290 295

Glu Trp Ser Pro Glu Ala Met Gly 305 310

Pro Pro Ala Glu Asn Glu Val Ser 325

Asn Lys Asp Asp Asp Asn Ile Leu 340

Ser Leu Pro Val Gln Asp 355

Glu Phe Gly Gln Gly Glu Trp Ser 300

Thr Pro Trp Thr Glu Ser Arg Ser 315 320

Thr Pro Met Gln Ala Leu Thr Thr

330 335

Phe Arg Asp Ser Ala Asn Ala Thr 345 350

<210> 2 <211> 379 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 2

gaagtgcagc tggtggagtc tgggggaaac tcctgtgcag cctctggatt catctttgat ccagggaagg gcctggagtg ggtctcaggt gcggactctg tgaagggccg attcaccatc ctgcaaatga acagtctgag agctgaggac ggcagcagct ggttaccgtt cgtctactac acggtcaccg tctcgtcag

<210> 3 <211> 126 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial

ttggtacagc ctggcaggtc cctgagactc 60 gattatgcca tgcactgggt ccggcaagct 120 attagttgga atagtggtag cataggctat 180 tccagagaca acgccaagaa ctccctgtat 240 acggccttgt attactgtgc aaaagatgga 300 tacggtatgg acgtctgggg ccaagggacc 360

379

<220>

<223> Sintético

<400> 3

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asn Leu Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu 20 Ser Cys Ala Ala Ser 25 Gly Phe Ile Phe Asp 30 Asp Tyr Ala Met His 35 Trp Val Arg Gln Ala 40 Pro Gly Lys Gly Leu 45 Glu Trp Val Ser Gly 50 Ile Ser Trp Asn Ser 55 Gly Ser Ile Gly Tyr 60 Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser 85 Leu Arg Ala Glu Asp 90 Thr Ala Leu Tyr Tyr 95 Cys Ala Lys Asp Gly 100 Gly Ser Ser Trp Leu 105 Pro Phe Val Tyr Tyr 110 Tyr Gly Met Asp Val 115 Trp Gly Gln Gly Thr 120 Thr Val Thr Val Ser 125 Ser

<210> 4 <211> 24 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético

<400> 4

ggattcatct ttgatgatta tgcc

24 <210> 5 <211> 8 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 5

Gly Phe Ile Phe Asp Asp Tyr Ala 1 5

<210> 6 <211> 24 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 6

attagttgga atagtggtag cata 24

<210> 7 <211> 8 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 7

Ile Ser Trp Asn Ser Gly Ser Ile 1 5

<210> 8 <211> 57 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 8

gcaaaagatg gaggcagcag ctggttaccg ttcgtctact actacggtat ggacgtc 57

<210> 9 <211> 19 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 9

Ala Lys Asp Gly Gly Ser Ser Trp Leu Pro Phe Val Tyr Tyr Tyr Gly

15 10 15

Met Asp Val

<210> 10 <211> 325 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 10

gaaatagtga tgacgcagtc tccagccacc ctgtctgtgt ctcccgggga aagagccacc 60

ctctcctgca gggccagtca gagtattagc àgcaactttg cctggtacca gcagaaacct 120

ggccaggctc ccaggctcct catctatggt gcatccacca gggccactgg tatcccagcc 180

aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac ttcactctca ccatcagcag cctgcagtct 240

gaagattttg cagtttatta ctgtcagcag tatagtagct ggcctccgta cacttttggc 300

caggggacca agctggagat caaac 325

<210> 11 <211> 108 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 11

Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr 20 Leu Ser Cys Arg Ala 25 Ser Gln Ser Ile Ser 30 Ser Asn Phe Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Val 85 Tyr Tyr Cys Gln Gln 90 Tyr Ser Ser Trp Pro 95 Pro Tyr Thr Phe Gly 100 Gln Gly Thr Lys Leu 105 Glu Ile Lys

<210> 12 <211> 18 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 12

cagagtatta gcagcaac 18

<210> 13 <211> 6 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 13

Gln Ser Ile Ser Ser Asn 1 5

<210> 14 <211> 9 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial

<220> <223> Sintético <400> 14

ggtgcatcc 9

<210> 15 <211> 3 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético

<400> 15 Gly Ala Ser 1

<210> 16 <211> 30 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 16

cagcagtata gtagctggcc tccgtacact 30

<210> 17 <211> 10 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 17

Gln Gln Tyr Ser Ser Trp Pro Pro Tyr Thr 15 10

<210> 18 <211> 349 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 18

gaagtgcagc tggtggagtc tgggggaggc tcctgtgcag cctctagatt tacctttgat ccagggaagg gcctggagtg ggtctcaggt gçggactctg tgaagggccg attcaccatc ctgcaaatga acggtctgag agcagaggac gattcttttg atatctgggg ccaagggaca

<210> 19 <211> 116 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético

ttggttcagc ctggcaggtc cctgagactc 60 gattatgcca tgcactgggt ccggcaagct 120 attagttgga atagtggtag aataggttat 180 tccagagaca acgccgagaa ctccctcttt 240 acggccttgt attactgtgc aaaaggccga 300 atggtcaccg tctcttcag 349

<400> 19 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Arg Phe Thr Phe Asp Asp Tyr

20 25 30

Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Gly Ile Ser Trp Asn Ser Gly Arg Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Glu Asn Ser Leu Phe 65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Gly Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Gly Arg Asp Ser Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser 115

<210> 20 <211> 24 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 20

agatttacct ttgatgatta tgcc 24

<210> 21 <211> 8 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 21

Arg Phe Thr Phe Asp Asp Tyr Ala 1 5

<210> 22 <211> 24 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 22

attagttgga atagtggtag aata 24

<210> 23 <211> 8 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 23

Ile Ser Trp Asn Ser Gly Arg Ile 1 5

<210> 24 <211> 27 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético

<400> 24

gcaaaaggcc gagattcttt tgatatc 27

<210> 25 <211> 9 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético

<400> 25

Ala Lys Gly Arg Asp Ser Phe Asp Ile 1 5

<210> 26 <211> 322 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético

<400> 26

gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc gggaaagccc ctaagctcct gatctatggt aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat gaagattttg caagttatta ttgtcaacag gggaccaagc tggagatcaa ac

gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120 gcatccagtt tggaaagtgg ggtcccatca 180 ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240 gctaacagtt tcccgtacac ttttggccag 300

322

<210> 27 <211> 107 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético

<400> 27

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly

15 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Gly Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Ser Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Tyr

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105

<210> 28 <211> 18 <212> DNA <213> Seqüência Artificial

<220>

<223> Sintético <400> 28

cagggtatta gcagctgg

<210> 29

<211> 6 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 29

Gln Gly Ile Ser Ser Trp 1 5

<210> 30 <211> 9 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220> .

<223> Sintético

<400> 30 ggtgcatcc

<210> 31 <211> 3 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético

<400> 31 Gly Ala Ser 1

<210> 32 <211> 27 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 32

caacaggcta acagtttccc gtacact

<210> 33 <211> 9 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético

<400> 33

Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Tyr Thr 1 5 <210> 34 <211> 370 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 34

caggttcagc tggtgcagtc tggagctgag ctgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggtta cacttttacc cattatggta tcagctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg atcagcgctt acaatgatga cacaaactat 180 gcacagaagt tccaggggag agtcaccatg accacagaca catccacgag cacagcctac 240 atggagctga ggagcctgag atctgacgac acggccgttt attactgtgc gagagaagcg 300 cagctcgtcc tctactacta ctacggtatg gacgtctggg gccaagggac cacggtcacc 360 gtctcctcag 370

<210> 35 <211> 123 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 35

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val 20 Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr 25 / Thr Phe Thr 30 His Tyr Gly Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp 50 Ile Ser Ala Tyr Asn 55 Asp Asp Thr Asn Tyr 60 Ala Gln Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser 85 Leu Arg Ser Asp Asp Thr 90 Ala Val Tyr Tyr 95 Cys Ala Arg Glu Ala Gln Leu Val Leu Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val 100 105 - 110 Trp Gly Gln 115 Gly Thr Thr Val Thr 120 Val Ser Ser

<210> 36 <211> 24 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 36

ggttacactt ttacccatta tggt 24

<210> 37 <211> 8 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 37

Gly Tyr Thr Phe Thr His Tyr Gly 1 5

<210> 38 <211> 24 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 38

atcagcgctt acaatgatga caca 24

<210> 39 <211> 8 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 39

Ile Ser Ala Tyr Asn Asp Asp Thr 1 5

<210> 40 <211> 48 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 40

gcgagagaag cgcagctcgt cctctactac tactacggta tggacgtc 48

<210> 41 <211> 16 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial. <220>

<223> Sintético <400> 41

Ala Arg Glu Ala Gln Leu Val Leu Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val 1 5 10 15

<210> 42 <211> 322 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 42

gaaattgtgt tgacacagtc tccagccacc ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc ggccaggctc ccaggctcct catctatgat aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac gaagattttg cagtttatta ctgccagcag gggaccaagc tggagatcag ac

ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60 agcttcttag cctggaacca acagaaacct 120 gcatccaaca gggccactgg catcccagcc 180 ttcactctca ccatcagcag cctagagcct 240 cgtaacaatt ggccgtacat ttttggccag 300

322 <210> 43 <211> 107 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 43

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Phe

20 25 30

Leu Ala Trp Asn Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Asn Asn Trp Pro Tyr

85 90 95

Ile Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Arg 100 105

<210> 44 <211> 18 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 44

cagagtgtta gcagcttc

<210> 45 <211> 6 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220> '

<223> Sintético <400> 45

Gln Ser Val Ser Ser Phe 1 5

<210> 46 <211> 9 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético

<400> 46 gatgcatcc

<210> 47 <211> 3 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 47 Asp Ala Ser 1

<210> 48 <211> 27 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 48

cagcagcgta acaattggcc gtacatt 27

<210> 49 <211> 9 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 49

Gln Gln Arg Asn Asn Trp Pro Tyr Ile 1 5

<210> 50 <211> 370 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 50

caggttcagc tggtgcagtc tggagctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggtta cacctttacc agttatggta tcagctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg atcagcgctt acaatgatga cacaaactat 180 gcacagaagt tccaggggag agtcaccatg accacagaca catccacgag cacagcctac 240 atggagctga ggagcctgag atctgacgac acggccgttt attactgtgc gagagaagcg 300 cagctcgtcc tctactacta ctacggtatg gacgtctggg gccaagggac cacggtcacc 360 gtctcctcag 370

<210> 51 <211> 123 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético

<400> 51

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val 20 Ser Cys Lys Ala Ser 25 Gly Tyr Thr Phe Thr 30 Ser Tyr Gly Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Ser Ala Tyr Asn Asp Asp Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Ala Gln Leu Val Leu 100

Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr 115 120

90 95

Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val 105 110

Val Ser Ser

<210> 52 <211> 24 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 52

ggttacacct ttaccagtta tggt

<210> 53 <211> 8 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 53

Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Gly 1 5

<210> 54 <211> 24 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 54

atcagcgctt acaatgatga caca

<210> 55 <211> 8 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 55

Ile Ser Ala Tyr Asn Asp Asp Thr 1 5

<210> 56 <211> 48 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 56

gcgagagaag cgcãgctcgt cctctactac tactacggta tggacgtc

<210> 57 <211> 16 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético

<400> 57

Ala Arg Glu Ala Gln Leu Val Leu Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val 1 5 10 15

<210> 58 <211> 322 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 58

gaaattgtgt tgacacagtc tccagccacc ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc ggccaggctc ccaggctcct catctatgat aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac gaagattttg cagtttatta ctgccagcag gggaccaagc tggagatcaa ac

ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60 agcttcttag cctggaacca acagaaacct 120 gcatccaaca gggccactgg catcccagcc 180 ttcactctca ccatcagcag cctagagcct 240 cgtagcaatt ggccgtacat ttttggccag 300

322

<210> 59 <211> 107 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético

<400> 59

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Phe

20 25 30

Leu Ala Trp Asn Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Tyr

85 90 95

Ile Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105

<210> 60 <211> 18 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 60

cagagtgtta gcagcttc 18

<210> 61 <211> 6 <212> PRT <213> Seqüência Artificial

<220>

<223> Sintético

<400> 61

Gln Ser Val Ser Ser Phe 1 5

<210> 62 <211> 9 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético

<400> 62 gatgcatcc

<210> 63 <211> 3 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético

<400> 63 Asp Ala Ser 1

<210> 64 <211> 27 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 64

cagcagcgta gcaattggcc gtacatt

<210> 65 <211> 9 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 65

Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Tyr Ile 1 5

<210> 66 <211> 349 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético

<400> 66 gaagtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggcaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttgat gattatgccc tgcactgggt ccggcaagct 120 ccagggaagg gcctggagtg ggtctcaggt gttagttgga atggtggtag aataggctat 180 gcggactctg tgaaaggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa ctccctcttt 240 ctgcaaatga acagtctgag agttgaggac acggccttgt attattgtgc aaaaggccgg 300 gatgcttttg atatctgggg ccaagggaca ttggtcaccg tctcttcag 349

<210> 67 <211> 116 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 67 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr 20 25 30 Ala Leu His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Gly Val Ser Trp Asn Gly Gly Arg Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Val Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Gly Arg Asp Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115

<210> 68 <211> 24 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 68

ggattcacct ttgatgatta tgcc 24

<210> 69 <211> 8 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 69

Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr Ala 1 5

<210> 70 <211> 24 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético

<400> 70 gttagttgga atggtggtag aata 24

<210> 71 <211> 8 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 71

Val Ser Trp Asn Gly Gly Arg Ile 1 5

<210> 72 <211> 27 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 72

gcaaaaggcc gggatgcttt tgatatc 27

<210> 73 <211> 9 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 73

Ala Lys Gly Arg Asp Ala Phe Asp Ile 1 5

<210> 74 <211> 325 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 74

gaaattgtgt tgacacagtc ctctcctgca gggccagtca ggccaggctc ccaggctcct aggttcagtg gcagtgggtc gaagattttg cattttatta cctgggacca aagtggatgt

<210> 75 <211> 108 <212> PRT <213> Seqüência Artificial

<220>

<223> Sintético <400> 75

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr

tccagccacc ctgtctttgt gagtgttagc agttacttag catctatgat gcatccaaca tgggacagac ttcactctca ctgtcagcag cgtaacaacc cagac

ctccagggga aagagccacc 60 cctggtacca acagaaacct 120 gggccactgg catcccagcc 180 ccatcagcag cctagagcct 240 ggcctccatt cactttcggc 300

325 20 25 30 Leu Ala Trp 35 Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala 40 Pro Arg 45 Leu Leu Ile Tyr Asp 50 Ala Ser Asn Arg Ala 55 Thr Gly Ile Pro Ala 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Phe 85 Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg 90 Asn Asn Arg Pro Pro 95 Phe Thr Phe Gly 100 Pro Gly Thr Lys Val Asp Val 105 Arg

<210> 76 <211> 18 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 76

cagagtgtta gcagttac

<210> 77 <211> 6 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 77

Gln Ser Val Ser Ser Tyr 1 5

<210> 78 <211> 9 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético

<400> 78 gatgcatcc

<210> 79 <211> 3 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético

<400> 79 Asp Ala Ser 1

<210> 80 <211> 30 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial

<220> <223> Sintético <400> 80

cagcagcgta acaaccggcc tccattcact 30

<210> 81 <211> 10 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 81

Gln Gln Arg Asn Asn Arg Pro Pro Phe Thr 1 5 10

<210> 82 <211> 370 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 82

caggttcagc tggtgcagtc tggagctgag gtgaagaagc ctggggcctc a"gtgaaggtc 60 tcctgtaagg cttctggttt caacttcttt cattatggta tcacctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg atcagcactt acaatggtga cacaatctat 180 gcacagaagg tccagggcag agtcaccatg accacagaca cagccacgag cacggcctat 240 atggaactga ggagcctgag atctgacgac acggccgtgt attactgtgc gagatcggaa 300 cagcaggtgg actactactt ctacggtatg gacgtctggg gccaagggac cacggtcacc 360 gtttcctcag 370

<210> 83 <211> 123 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 83

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val 20 Ser Cys Lys Ala Ser 25 Gly Phe Asn Phe Phe 30 His Tyr Gly Ile Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp 50 Ile Ser Thr Tyr Asn 55 Gly Asp Thr Ile Tyr 60 Ala Gln Lys Val Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ala Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser 85 Leu Arg Ser Asp Asp 90 Thr Ala Val Tyr Tyr 95 Cys Ala Arg Ser Glu 100 Gln Gln Val Asp Tyr 105 Tyr Phe Tyr Gly Met 110 Asp Val Trp Gly Gln 115 Gly Thr Thr Val Thr 120 Val Ser Ser

<210> 84 <211> 24 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 84

ggtttcaact tctttcatta tggt 24

<210> 85 <211> 8 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 85

Gly Phe Asn Phe Phe His Tyr Gly 1 5

<210> 86 <211> 24 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 86

atcagcactt acaatggtga caca 24

<210> 87 <211> 8 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 87

Ile Ser Thr Tyr Asn Gly Asp Thr 1 5

<210> 88 <211> 48 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 88

gcgagatcgg aacagcaggt ggactactac ttctacggta tggacgtc 48

<210> 89 <211> 16 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 89

Ala Arg Ser Glu Gln Gln Val Asp Tyr Tyr Phe Tyr Gly Met Asp Val 15 10 15 <210> 90 <211> 325 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 90

<210> 91 <211> 108 <212> PRT <213> Seqüência Artificial

<220>

<223> Sintético <400> 91

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr 20 Leu Ser Cys Arg Ala 25 Ser Gln Ser Val Ser 30 Ser Tyr Leu Ala Trp 35 Tyr Gln Gln Lys Pro Gly 40 Gln Ala Pro Arg 45 Leu Leu Ile Tyr Asp 50 Ala Ser Asn Arg Ala 55 Thr Gly Ile Pro Ala 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Phe 85 Tyr Tyr Cys Gln Gln 90 Arg Asn Asn Arg Pro Pro 95 Phe Thr Phe Gly 100 Pro Gly Thr Lys Val 105 Asp Val Arg

325

<210> 92 <211> 18 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 92

cagagtgtta gcagttac 18

<210> 93 <211> 6 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 93

Gln Ser Val Ser Ser Tyr 1 5

<210> 94 <211> 9 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 94

gatgcatcc 9

<210> 95 <211> 3 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético

<400> 95 Asp Ala Ser 1

<210> 96 <211> 30 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 96

cagcagcgta acaaccggcc tccattcact 30

<210> 97 <211> 10 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 97

Gln Gln Arg Asn Asn Arg Pro Pro Phe Thr 1 5 10

<210> 98 <211> 370 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 98

caggttcagc tggtgcagtc tggagctgag tcctgtaagg cttctggttt caacttcttt cctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg gcacagaagg tccagggcag agtcaccatg atggaactga ggagcctgag atctgacgac cagcaggtgg actactactt ctacggtatg gtttcctcag

<210> 99 <211> 123 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial

gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60 cattatggta tcacctgggt gcgacaggcc 120 atcagcactt acaatggtga cacaatctat 180 accacagaca cagccacgag cacggcctat 240 acggccgtgt attactgtgc gagatcggaa 300 gacgtctggg gccaagggac cacggtcacc 360

370 <220>

<223> Sintético <400> 99

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Phe Phe His Tyr

20 25 30

Gly Ile Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Ser Thr Tyr Asn Gly Asp Thr Ile Tyr Ala Gln Lys Val

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ala Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Glu Gln Gln Val Asp Tyr Tyr Phe Tyr Gly Met Asp Val

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120

<210> 100 <211> 24 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 100

ggtttcaact tctttcatta tggt

<210> 101 <211> 8 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 101

Gly Phe Asn Phe Phe His Tyr Gly 1 5

<210> 102 <211> 24 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 102

atcagcactt acaatggtga caca

<210> 103 <211> 8 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético

<400> 103 Ile Ser Thr Tyr Asn Gly Asp Thr 1 5

<210> 104 <211> 48 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 104

gcgagatcgg aacagcaggt ggactactac ttctacggta tggacgtc 48

<210> 105 <211> 16 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 105

Ala Arg Ser Glu Gln Gln Val Asp Tyr Tyr Phe Tyr Gly Met Asp Val 1 5 10 15

<210> 106 <211> 325 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético

<400> 106

gaaattgtgt

ctctcctgca

ggccaggctc

aggttcagtg

gaagattttg

cctgggacca

tgacacagtc gggccagtca ccaggctcct gcagtgggtc cattttatta aagtggatgt

tccagccacc gagtgttagc catctatgat tgggacagac ctgtcagcag cagac

ctgtctttgt agttacttag gcatccaaca ttcactctca cgtaacaacc

ctccagggga cctggtacca gggccactgg ccatcagcag ggcctccatt

aagagccacc 60 acagaaacct 120 catcccagcc 180 cctagagcct 240 cactttcggc 300 325

<210> 107 <211> 108 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético

<400> 107

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr 20 Leu Ser Cys Arg Ala 25 Ser Gln Ser Val Ser 30 Ser Tyr Leu Ala Trp 35 Tyr Gln Gln Lys Pro 40 Gly Gln Ala Pro Arg 45 Leu Leu Ile Tyr Asp 50 Ala Ser Asn Arg Ala 55 Thr Gly Ile Pro Ala 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Phe 85 Tyr Tyr Cys Gln Gln 90 Arg Asn Asn Arg Pro 95 Pro Phe Thr Phe Gly 100 Pro Gly Thr Lys Val 105 Asp Val Arg <210> 108

<211> 18 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 108

cagagtgtta gcagttac

<210> 109 <211> 6 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 109

Gln Ser Val Ser Ser Tyr 1 5

<210> 110 <211> 9 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético

<400> 110 gatgcatcc

<210> 111 <211> 3 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético

<400> 111 Asp Ala Ser 1

<210> 112 <211> 30 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 112

cagcagcgta acaaccggcc tccattcact

<210> 113 <211> 10 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial

<220> <223> Sintético <400> 113

Gln Gln Arg Asn Asn Arg Pro Pro Phe Thr 1 5 10

<210> 114 <211> 361 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 114

caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaaagagc ctggggcctc agtgaagatc 60 tcctgcaagg cttctggata caccttcacc tcttatgata tcatctgggt gcgacaggcc 120 actggacaag ggcttgagtg gatgggatgg atgaacccaa acagtggtga cagaggctat 180 acacagaacc tccagggcag agtcaccttg accagggaca cctccataag tacagtctac 240 atggaactga gcagcctgag atctgaggac acggccgtat attattgtgc gcgagactac 300 agtaaccact actacggttt ggacgtctgg ggccaaggga ccacggtcac tgtctcctca 360 g 361

<210> 115 <211> 120 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 115

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Glu Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Asp Ile Ile Trp Val Arg Gln Ala Thr Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Trp Met Asn Pro Asn Ser Gly Asp Arg Gly Tyr Thr Gln Asn Leu

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Leu Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asp Tyr Ser Asn His Tyr Tyr Gly Leu Asp Val Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120

<210> 116 <211> 24 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 116

ggatacacct tcacctctta tgat 24

<210> 117 <211> 8 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 117

Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Asp 1 5

<210> 118 <211> 24 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 118

atgaacccaa acagtggtga caga 24

<210> 119 <211> 8 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 119

Met Asn Pro Asn Ser Gly Asp Arg 1 5

<210> 120 <211> 39 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 120

gcgcgagact acagtaacca ctactacggt ttggacgtc 39

<210> 121 <211> 13 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 121

Ala Arg Asp Tyr Ser Asn His Tyr Tyr Gly Leu Asp Val 15 10

<210> 122 <211> 322 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 122

gacatccagt tgacccagtc tccatccttc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgct gggccagtca ggacattagc aattatttag cctggtatca gcaaaaacca 120 gggaaagccc ctaagctcct gatctttgtt gcatccactt tgcagagtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacagaa ttcactctca caatcagtag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttatta ctgtcaacag tttaatagtt acccgctcac tttcggcgga 300 gggaccaagg tggagatcag ac 322

<210> 123 <211> 107 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 123

Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr 20 Ile Thr Cys Trp Ala Ser 25 Gln Asp Ile Ser 30 Asn Tyr Leu Ala Trp 35 Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys 40 Ala Pro Lys 45 Leu Leu Ile Phe Val 50 Ala Ser Thr Leu Gln 55 Ser Gly Val Pro Ser 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr 85 Tyr Tyr Cys Gln Gln 90 Phe Asn Ser Tyr Pro Leu 95 Thr Phe Gly Gly 100 Gly Thr Lys Val Glu Ile 105 Arg

<210> 124 <211> 18 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 124

caggacatta gcaattat 18

<210> 125 - - <211> 6 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 125

Gln Asp Ile Ser Asn Tyr 1 5

<210> 126 <211> 9 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 126

gttgcatcc 9

<210> 127 <211> 3 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético

<400> 127 Val Ala Ser

1

<210> 128 <211> 30 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 128

caacagttta atagttaccc gctcactttc 30

<210> 129 <211> 9 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 129

Gln Gln Phe Asn Ser Tyr Pro Leu Thr 1 5

<210> 130 <211> 370 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 130

caggttcagc tggtgcagtc tggagctgag tcctgcaagg cttctggtta cacctttacc cctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg gcacagaagt tccaggggag agtcaccatg atggagctga ggagcctgag atctgacgac cagctcgtcc tctactacta ctacggtatg gtctcctcag

gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60 agttatggta tcagctgggt gcgacaggcc 120 atcagcgctt acaatgatga cacaaactat 180 accacagaca catccacgag cacagcctac 240 acggccgttt attactgtgc gagagaagcg 300 gacgtctggg gccaagggac cacggtcacc 360

370

<210> 131 <211> 123 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético

<400> 131

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Gly Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp 50 Ile Ser Ala Tyr Asn 55 Asp Asp Thr Asn Tyr 60 Ala Gln Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser 85 Leu Arg Ser Asp Asp 90 Thr Ala Val Tyr Tyr 95 Cys Ala Arg Glu Ala 100 Gln Leu Val Leu Tyr 105 Tyr Tyr Tyr Gly Met 110 Asp Val Trp Gly Gln 115 Gly Thr Thr Val Thr 120 Val Ser Ser

<210> 132 <211> 24 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 132

ggttacacct ttaccagtta tggt 24

<210> 133 <211> 8 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 133

Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Gly 1 5

<210> 134 <211> 24 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial

<220> - - - <223> Sintético

<400> 134

atcagcgctt acaatgatga caca 24

<210> 135 <211> 8 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 135

Ile Ser Ala Tyr Asn Asp Asp Thr 1 5

<210> 136 <211> 48 <212> DNA <213> Seqüência

Artificial

<220>

<223> Sintético <400> 136

gcgagagaag cgcagctcgt cctctactac tactacggta tggacgtc 48

<210> 137 <211> 16 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 137

Ala Arg Glu Ala Gln Leu Val Leu Tyr Tyr Tyx Tyr Gly Met Asp Val 15 10 15

<210> 138 <211> 322 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 138

gaaattgtgt tgacacagtc tccagccacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60 ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agcttcttag cctggaacca acagaaacct 120 ggccaggctc ccaggctcct catctatgat gcatccaaca gggccactgg catcccagcc 180 aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac ttcactctca ccatcagcag cctagagcct 240 gaagattttg cagtttatta ctgccagcag cgtagcaatt ggccgtacat ttttggccag 300 gggaccaagc tggagatcaa ac 322

<210> 139 <211> 107 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 139

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

15 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Phe

20 25 30

Leu Ala Trp Asn Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Tyr

85 90 95

Ile Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105

<210> 140 <211> 18 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 140 cagagtgtta gcagcttc 18

<210> 141 <211> 6 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 141

Gln Ser Val Ser Ser Phe 1 5

<210> 142 <211> 9 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 142

gatgcatcc 9

<210> 143 <211> 3 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético

<400> 143 Asp Ala Ser 1

<210> 144 <211> 27 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 144

cagcagcgta gcaattggcc gtacatt 27

<210> 145 <211> 9 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 145

Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Tyr Ile 1 5

<210> 146 <211> 349 <212> DNA <213> Seqüência

Artificial <220>

<223> Sintético <400> 146

gaagtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggcaggtc cctgagactc 60

tcctgtgcag cctctggatt cacctttgat gattatgccc tgcactgggt ccggcaagct 120

ccagggaagg gcctggagtg ggtctcaggt gttagttgga atggtggtag aataggctat 180

gcggactctg tgaaaggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa ctccctcttt 240

ctgcaaatga acagtctgag agttgaggac acggccttgt attattgtgc aaaaggccgg 300

gatgcttttg atatctgggg ccaagggaca ttggtcaccg tctcttcag 349

<210> 147 <211> 116 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 147

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr 20 25 30 Ala Leu His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Gly Val Ser Trp Asn Gly Gly Arg Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Val Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Gly Arg Asp Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser 115

<210> 148

<211> 24

<212> DNA .

<213> Seqüência Artificial

<220>

<223> Sintético <400> 148

ggattcacct ttgatgatta tgcc 24

<210> 149 <211> 8 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 149

Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr Ala 1 5

<210> 150 <211> 24 <212> DNA <213> Seqüência

Artificial <220>

<223> Sintético <400> 150

gttagttgga atggtggtag aata 24

<210> 151 <211> 8 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 151

Val Ser Trp Asn Gly Gly Arg Ile 1 5

<210> 152 <211> 27 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 152

gcaaaaggcc gggatgcttt tgatatc 27

<210> 153 <211> 9 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 153

Ala Lys Gly Arg Asp Ala Phe Asp Ile 1 5 *

<210> 154 <211> 322 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 154

gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120 gggaaagccc ctaaactcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttacta ttgtcaacat gcttacagtt tcccgtacac ttttggccag 300 gggaccaagc tggagatcaa ac 322

<210> 155 <211> 107 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 155

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Ala Tyr Ser Phe Pro Tyr

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105

<210> 156 <211> 18 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 156

cagggtatta gcagctgg

<210> 157 <211> 6 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 157

Gln Gly Ile Ser Ser Trp 1 5

<210> 158 <211> 9 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético

<400> 158 gctgcatcc

<210> 159 <211> 3 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético

<400> 159 Ala Ala Ser 1

<210> 160 <211> 27 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 160

caacatgctt acagtttccc gtacact 27

<210> 161 <211> 9 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 161

Gln His Ala Tyr Ser Phe Pro Tyr Thr 1 5

<210> 162 <211> 349 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 162

gaagtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggcaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttgat gattatgcct tgcactgggt ccggcaagct 120 ccagggaagg gcctggagtg ggtctcaggt attagttgga acagtggtag aataggctat 180 gcggactctg tgaagggccg attcaccatt tccagagaca acgccaagaa ctccctcttt 240 ctgcaaatga acagtctgag agctgaggac acggccttgt attattgtgc aaaaggccgg 300 gatgcttttg atatctgggg ccaagggaca ttggtcaccg tctcttcag 349

<210> 163 <211> 116

<212> PRT <213> Seqüência Artificial <220> <223> Sintético <400> 163 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr 20 25 30 Ala Leu His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Gly Ile Ser Trp Asn Ser Gly Arg Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Gly Arg Asp Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115

<210> 164 <211> 24

<212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 164

ggattcacct ttgatgatta tgcc

<210> 165 <211> 8 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 165

Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr Ala 1 5

<210> 166 <211> 24 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 166

attagttgga acagtggtag aata

<210> 167 <211> 8 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 167

Ile Ser Trp Asn Ser Gly Arg Ile 1 5

<210> 168 <211> 27 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 168

gcaaaaggcc gggatgcttt tgatatc

<210> 169 <211> 9 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético

<400> 169 Ala Lys Gly Arg Asp Ala Phe Asp Ile 1 5

<210> 170 <211> 322 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 170

gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120 gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttacta ttgtcaacag gctaacagtt tcccgtacac ttttggccag 300 gggaccaagc tggagatcaa ac 322

<210> 171 <211> 107 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético

<400> 171 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp 35 Tyr Gln Gln Lys Pro 40 Gly Lys Ala Pro Lys 45 Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr 85 Tyr Tyr Cys Gln Gln 90 Ala Asn Ser Phe Pro 95 Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 172 <211> 18 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 172

cagggtatta gcagctgg 18

<210> 173 <211> 6 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético

<400> 173

Gln Gly Ile Ser Ser Trp 1 5 <210> 174 <211> 9 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 174

gctgcatcc 9

<210> 175 <211> 3 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético

<400> 175 Ala Ala Ser 1

<210> 176 <211> 27 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 176

caacaggcta acagtttccc gtacact 27

<210> 177 . .

<211> 9 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 177

Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Tyr Thr 1 5

<210> 178 <211> 361 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 178

caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag tcctgcaagg cttctggata caccttcacc actggacaag ggcttgagtg gatgggatgg acacagaacc tccagggcag agtcaccttg atggaactga gcagcctgag ctctgaggac agtagccact actacggttt ggacgtctgg a

gtgaaagagc ctggggcctc agtgaaggtc 60 tcttatgata tcatctgggt gcgacaggcc 120 atgaacccaa acagtggtaa cacaggctat 180 accaggaaca cctccataac tacagtctac 240 acggccgttt attactgtgc gcgagactac 300 ggccaaggga ccacggtcac cgtctcctca 360

361 <210> 179 <211> 120 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético

<400> 179 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Glu Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val 20 Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe 25 Thr 30 Ser Tyr Asp Ile Ile Trp Val Arg Gln Ala Thr Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Met Asn Pro Asn Ser Gly Asn Thr Gly Tyr Thr Gln Asn Leu 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Leu Thr Arg Asn Thr Ser Ile Thr Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser 85 Leu Ser Ser Glu Asp Thr Ala Val 90 Tyr Tyr Cys 95 Ala Arg Asp Tyr 100 Ser Ser His Tyr Tyr Gly Leu Asp Val 105 Trp 110 Gly Gln Gly Thr Thr 115 Val Thr Val Ser Ser 120

<210> 180 <211> 24 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 180

ggatacacct tcacctctta tgat

<210> 181 <211> 8 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 181

Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Asp 1 5

<210> 182 <211> 24 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 182

atgaacccaa acagtggtaa caca

<210> 183 <211> 8 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 183

Met Asn Pro Asn Ser Gly Asn Thr 1 5

<210> 184 <211> 39 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 184

gcgcgagact acagtagcca ctactacggt ttggacgtc 39

<210> 185 <211> 13 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 185

Ala Arg Asp Tyr Ser Ser His Tyr Tyr Gly Leu Asp Val 15 10

<210> 186 <211> 322 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 186

gacatccagt tgacccagtc tccatccttc ctgtctacat ctataggaga cagagtcacc 60 atcacttgct gggccagtca ggacattagc aattatttag cctggtatca gcaaaaacca 120 gggaaagccc ctaagctcct gatctttgtt gcatccactt tgcagagtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacagaa ttcactctca caatcagtag cctgcagcct 240 gaggattttg caacttatta ctgtcaacag tttaatagtt acccgctcac tttcggcgga 300 gggaccaagg tggaaatcaa ac 322

<210> 187 <211> 107 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético

<400> 187

Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Thr Ser Ile Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr 20 Ile Thr Cys Trp Ala Ser 25 Gln Asp Ile Ser 30 Asn Tyr Leu Ala Trp 35 Tyr Gln Gln Lys Pro 40 Gly Lys Ala Pro Lys 45 Leu Leu Ile Phe Val 50 Ala Ser Thr Leu Gln 55 Ser Gly Val Pro Ser 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Asn Ser Tyr Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105

<210> 188 <211> 18 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 188

caggacatta gcaattat 18

<210> 189 <211> 6 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 189

Gln Asp Ile Ser Asn Tyr 1 5

<210> 190 <211> 9 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 190

gttgcatcc 9

<210> 191 <211> 3 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético

<400> 191 Val Ala Ser 1

<210> 192 <211> 30 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 192

caacagttta atagttaccc gctcactttc 30

<210> 193 <211> 10 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 193

Gln Gln Phe Asn Ser Tyr Pro Leu Thr Phe 1 5 10

<210> 194 <211> 378 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 194

caggtccagc tggtgcagtc tcctgtgcag cctctggatt ccagggaagg gcctggagtg gcggactctg tgaagggccg ctgcaaatga acagtctgag gtgggagcta cggtggatta acggtcaccg tctcctca

<210> 195 <211> 126 <212> PRT <213> Seqüência Artificial

<220>

<223> Sintético <400> 195

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Asp Leu Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu 20 Ser Cys Ala Ala Ser 25 Gly Phe Thr Phe Asp 30 Asp Tyr Ala Met His 35 Trp Val Arg Gln Thr- 40 Pro Gly Lys Gly Leu 45 Glu Trp Val Ser Gly Ile Ser Trp Asn Ser Gly Ala Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser 85 Leu Arg Ala Glu Asp 90 Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys 95 Thr Lys Glu Glu 100 Val Gly Ala Thr Val 105 Asp Tyr Phe Tyr Phe 110 Tyr Gly Met Asp Val 115 Trp Gly Gln Gly Thr 120 Thr Val Thr Val Ser 125 Ser

tgggggagac ttggtacagc cacctttgat gattatgcca ggtctcaggt attagttgga attcaccatc tccagagaca agctgaggac acggccttgt tttctacttc tacggtatgg

ccggcaggtc cctgagactc 60 tgcactgggt ccggcaaact 120 atagtggggc cataggctat 180 acgccaagaa ctccctgtat 240 attactgtac aaaagaagaa 300 acgtctgggg ccaagggacc 360

378

<210> 196 <211> 24 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 196

ggattcacct ttgatgatta tgcc 24

<210> 197 <211> 8 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 197

Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr Ala 1 5

<210> 198 <211> 24 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 198

attagttgga atagtggggc cata

<210> 199 <211> 8 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 199

Ile Ser Trp Asn Ser Gly Ala Ile 1 5

<210> 200 <211> 57 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial

<220> ..... - -

<223> Sintético

<400> 200

acaaaagaag aagtgggagc tacggtggat tatttctact tctacggtat ggacgtc

<210> 201 <211> 19 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 201

Thr Lys Glu Glu Val Gly Ala Thr Val Asp Tyr Phe Tyr Phe Tyr Gly

15 10 15

Met Asp Val

<210> 202 <211> 318 <212> DNA <213> Seqüência

Artificial <220>

<223> Sintético <400> 202

gaaattgtga tgactcagtc tccagccacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60 ctctcctgct gggccagtca gagtgttagc aactacttag cctggtacca acagaaacct 120 ggccaggctc ccagactcct catctatgat gcatccaaca gggccactgg catcccagcc 180 aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac ttcactctca ccatcagcag cctagagcct 240 gaagattttg cagtttatta ctgtcagcag cgtagcaact ggcctacgtt cggccaaggg 300 accaaggtgg aaatcaaa 318

<210> 203 <211> 106 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 203

Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr 20 Leu Ser Cys Trp Ala 25 Ser Gln Ser Val Ser 30 Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Val 85 Tyr Tyr Cys Gln Gln 90 Arg Ser Asn Trp Pro 95 Thr Phe Gly Gln Gly 100 Thr Lys Val Glu Ile 105 Lys

<210> 204 <211> 18 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 204

cagagtgtta gcaactac 18

<210> 205 <211> 6 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 205

Gln Ser Val Ser Asn Tyr 1 5

<210> 206 <211> 9 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 206

gatgcatcc 9

<210> 207 <211> 3 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético

<400> 207 Asp Ala Ser 1

<210> 208 <211> 24 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 208

cagcagcgta gcaactggcc tacg 24

<210> 209 <211> 8 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 209

Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Thr 1 5

<210>„210 <211> 348 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 210

caagtgcagc tggtgcagtc tgggggaggc tcctgtgcag cctctggatt cacctttgat ccagggaagg gcctggagtg ggtctcaggt gcggactctg tgaagggccg attcaccatc ctgcaaatga acagtctgag agctgaggac gatgcttttg atatctgggg ccaggggaca

<210> 211 <211> 116 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético

ttggtacagc ctggcaggtc cctgagactc 60 gattatgcca tgcactgggt ccggcaagct 120 attagttgga atagtggtag ggtaggctat 180 tccagagaca acgccaagaa ctccctgtat 240 acggccttgt attactgtac aaaaggccgg 300 atggtcaccg tctcttca 348

<400> 211

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr 20 25 30 Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 .40 45 Ser Gly Ile Ser Trp Asn Ser Gly Arg Val Gly Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Lys Gly Arg Asp Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser 115

<210> 212 <211> 24 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 212

ggattcacct ttgatgatta tgcc 24

<210> 213 <211> 8 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 213

Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr Ala 1 5

<210> 214 <211> 24 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 214

attagttgga atagtggtag ggta 24

<210> 215 <211> 8 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 215

Ile Ser Trp Asn Ser Gly Arg Val 1 5

<210> 216 <211> 27 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 216

acaaaaggcc gggatgcttt tgatatc 27

<210> 217 <211> 9 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 217

Thr Lys Gly Arg Asp Ala Phe Asp Ile 1 5

<210> 218 <211> 321 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 218

gatattgtga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120 gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttacta ttgtcaacag gctaacagtt tcccgtacac ttttggccag 300 gggaccaagc tggagatcaa a 321

<210> 219 <211> 107 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 219 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105

<210> 220 <211> 18 <212> DNA <213> Seqüência Artificial

<220>

<223> Sintético <400> 220

cagggtatta gcagctgg

<210> 221 <211> 6

<212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 221

Gln Gly Ile Ser Ser Trp 1 5

<210> 222 <211> 9 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético

<400> 222 gctgcatcc

<210> 223 <211> 3 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético

<400> 223 Ala Ala Ser 1

<210> 224 <211> 27 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 224

caacaggcta acagtttccc gtacact

<210> 225 <211> 9 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 225

Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Tyr Thr 1 5 <210> 226 <211> 378 <212> DNA <213> Seqüência

<220>

<223> Sintético

Artificial

<400> 226

gaagtgcagc tggtggaatc tggaggagga tcttgtgctg cttctggatt tatctttgat cctggaaagg gactggaatg ggtgtctgga gctgattctg tgaagggaag atttacaatc ctgcagatga attctctgag agctgaagat ggatcttctt ggctgccttt tgtgtattat acagtgacag tgtcttct

<210> 227 <211> 126 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial

ctggtgcagc ctggaagatc tctgagactg 60 gattatgcta tgcattgggt gagacaggct 120 atctcttgga attctggatc tatcggatat 180 tctagagata atgctaagaa ttctctgtat 240 acagctctgt attattgtgc taaggatgga 300 tatggaatgg atgtgtgggg acagggaaca 360

378

<220>

<223> Sintético <400> 227

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu 20 Ser Cys Ala Ala Ser 25 Gly Phe Ile Phe Asp 30 Asp Tyr Ala Met His 35 Trp Val Arg Gln Ala 40 Pro Gly Lys Gly Leu 45 Glu Trp Val Ser Gly 50 Ile Ser Trp Asn Ser 55 Gly Ser Ile Gly Tyr 60 Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser 85 Leu Arg Ala Glu Asp Thr 90 Ala Leu Tyr Tyr Cys 95 Ala Lys Asp Gly 100 Gly Ser Ser Trp Leu 105 Pro Phe Val Tyr Tyr 110 Tyr Gly Met Asp Val 115 Trp Gly Gln Gly Thr 120 Thr Val Thr Val Ser 125 Ser

<210> 228 <211> 324 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético

<400> 228

gaaatcgtga tgacacagtc tcctgctaca ctgtcttgta gagcttctca gtctatctct ggacaggctc ctagactgct gatctatgga agattttctg gatctggatc tggaacagaa gaagattttg ctgtgtatta ttgtcagcag cagggaacaa agctggaaat caag

<210> 229 <211> 108 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial

ctgtctgtgt ctcctggaga aagagctaca 60 tctaatctgg cttggtatca gcagaagcct 120 gcttctacaa gagctacagg aatccctgct 180 tttacactga caatctcttc tctgcagtct 240 tattcttctt ggcctcctta tacatttgga 300

324 <220>

<223> Sintético <400> 229

Glu Xle Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Asn

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Ser Trp Pro Pro

85 90 95

Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105

<210> 230 <211> 348 <212> DNA <213> Seqüência

<220>

<223> Sintético

Artificial

<400> 230

gaggtccagc tggtcgagtc aggaggaggc tcctgtgccg ccagtaggtt tactttcgat cctggtaagg gcttggagtg ggtgtccggt gccgacagcg tgaagggaag gttcactatc ctgcaaatga acagcctccg ggccgaagac gatagtttcg atatctgggg tcaaggcacc

ctcgtccaac cagggcgcag ccttcgactc 60 gactatgcca tgcactgggt ccggcaggcc 120 atctcctgga actccggacg tatcggttac 180 tctcgtgaca acgccaagaa ctccttgtat 240 accgccttgt attactgtgc caagggtagg 300 atggtgactg tgtcttca 348

<210> 231 <211> 116 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 231

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu 20 Ser Cys Ala Ala Ser 25 Arg Phe Thr Phe Asp 30 Asp Tyr Ala Met His 35 Trp Val Arg Gln Ala 40 Pro Gly Lys Gly Leu 45 Glu Trp Val Ser Gly 50 Ile Ser Trp Asn Ser 55 Gly Arg Ile Gly Tyr 60 Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Glu Asn Ser Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Gly 85 Leu Arg Ala Glu Asp 90 Thr Ala Leu Tyr Tyr 95 Cys Ala Lys Gly Arg Asp Ser Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val 100 105 110 Thr Val Ser 115 Ser

<210> 232 <211> 321 <212> DNA <213> Seqüência

Artificial <220>

<223> Sintético <400> 232

gacatacaga tgacccaaag cccaagcagc gttagcgctt ccgtaggcga cagggtgaca 60 attacatgca gagcctctca gggaatttct tcatggctgg catggtatca gcagaagccc 120 ggaaaagctc ccaagctgct gatatatggt gcctcctctc tccaaagcgg agtcccatca 180 cgcttctccg ggagtggctc tggtacagat tttactttga caatctctag ccttcagcct 240 gaagactttg ctacatacta ctgtcagcag gccaacagtt ttccttacac cttcggtcag 300 ggaactaaac tggaaattaa g 321

<210> 233 <211> 107 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 233 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Gly Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 234 <211> 360 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 234

caggtgcagc tggtgcagtc tggagctgaa gtgaagaagc ctggagcttc tgtgaaggtg 60 tcttgtaagg cttctggata tacatttaca tcttatgata tcatctgggt gagacaggct 120 acaggacagg gactggaatg gatgggatgg atgaatccta attctggaaa tacaggatat 180 gctcagaagt ttcagggaag agtgacaatg acaagaaata catctatctc tacagtgtat 240 atggaactgt cttctctgag atctgaagat acagctgtgt attattgtgc tagagattat 300 tcttctcatt attatggact ggatgtgtgg ggacagggaa caacagtgac agtgtcttct 360

<210> 235 <211> 120 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 235

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Asp Ile Ile Trp Val Arg Gln Ala

35 40

Gly Trp Met Asn Pro Asn Ser Gly

50 55

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg 65 70

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser 85

Ala Arg Asp Tyr Ser Ser His Tyr 100

Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120

Thr Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 45

Asn Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe 60

Asn Thr Ser Ile Ser Thr Val Tyr

75 80

Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

90 95

Tyr Gly Leu Asp Val Trp Gly Gln 105 110

<210> 236 <211> 321 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 236

gatatccagc tgacacagtc tccttctttt ctgtctgctt ctgtgggaga tagagtgaca 60 atcacatgta gagcttctca ggatatctct aattatctgg cttggtatca gcagaagcct 120 ggaaaggctc ctaagctgct gatctatgtg gcttctacac tgcagtctgg agtgccttct 180 agattttctg gatctggatc tggaacagaa tttacactga caatctcttc tctgcagcct 240 gaagattttg ctacatatta ttgtcagcag tttaattctt atcctctgac atttggagga 300 ggaacaaagg tggaaatcaa g 321

<210> 237 <211> 107 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 237

Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly

15 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Val Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Asn Ser Tyr Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105

<210> 238 <211> 349 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 238

gaagtgcagc tggtggagtc tgggggaggc tcctgtgcag cctctggatt cacctttgat ccagggaagg gcctggagtg ggtctcaggt

ttggtacagc ctggcaggtc cctgagactc 60 gattatgccc tgcactgggt ccggcaagct 120 gttagttgga atggtggtag aataggctat 180 gcggactctg tgaaaggccg attcaccatc ctgcaaatga acagtctgag agttgaggac gatgcttttg atatctgggg ccaagggaca

<210> 239 <211> 116 <212> PRT

<213> Seçtuência Artificial <220>

<223> Sintético

tccagagaca acgccaagaa ctccctcttt 240 acggccttgt attattgtgc aaaaggccgg 300 ttggtcaccg tctcttcag 349

<400> 239

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu 20 Ser Cys Ala Ala Ser 25 Gly Phe Thr Phe Asp 30 Asp Tyr Ala Leu His 35 Trp Val Arg Gln Ala 40 Pro Gly Lys Gly Leu 45 Glu Trp Val Ser Gly 50 Val Ser Trp Asn Gly 55 Gly Arg Ile Gly Tyr Ala 60 Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser 85 Leu Arg Val Glu Asp 90 Thr Ala Leu Tyr Tyr 95 Cys Ala Lys Gly Arg 100 Asp Ala Phe Asp Ile 105 Trp Gly Gln Gly Thr 110 Met Val Thr Val Ser 115 Ser

<210> 240 <211> 348 <212> DNA

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético

<400> 240

gaagtgcagc tggtggaatc tggaggagga tcttgtgctg cttctggatt tacatttgat cctggaaagg gactggaatg ggtgtctgga gctgattctg tgaagggaag atttacaatc ctgcagatga attctctgag agctgaagat gatgcttttg atatctgggg acagggaaca

ctggtgcagc ctggaagatc tctgagactg 60 gattatgcta tgcattgggt gagacaggct 120 gtgtcttgga atggaggaag aatcggatat 180 tctagagata atgctaagaa ttctctgtat 240 acagctctgt attattgtgc taagggaaga 300 atggtgacag tgtcttct 348

<210> 241 <211> 116 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético

<400> 241

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly

1 5

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala 20

Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala

35 40

Ser Gly Val Ser Trp Asn Gly Gly

50 55

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg 65 70

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala

Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

10 15

Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr 25 30

Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 45

Arg Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val 60

Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

75 80

Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Lys Gly Arg Asp Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser 115

<210> 242 <211> 330 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético

<400> 242

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 - 30 Phe Pro Glu 35 Pro Val Thr Val Ser 40 Trp Asn Ser Gly Ala 45 Leu Thr Ser Gly Val 50 His Thr Phe Pro Ala 55 Val Leu Gln Ser Ser 60 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val 85 Asn His Lys Pro Ser 90 Asn Thr Lys Val Asp 95 Lys Lys Val Glu Pro 100 Lys Ser Cys Asp Lys 105 Thr His Thr Cys Pro 110 Pro Cys Pro Ala Pro 115 Glu Leu Leu Gly Gly 120 Pro Ser Val Phe Leu 125 Phe Pro Pro Lys Pro 130 Lys Asp Thr Leu Met 135 Ile Ser Arg Thr Pro 140 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160 Tyr Val Asp Gly Val 165 Glu Val His Asn Ala 170 Lys Thr Lys Pro Arg 175 Glu Glu Gln Tyr Asn 180 Ser Thr Tyr Arg Val 185 Val Ser Val Leu Thr 190 Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn - ^ 195 200 - ■ 205 Lys Ala 210 Leu Pro Ala Pro Ile 215 Glu Lys Thr Ile Ser 220 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu 225 230 235 240 Leu Thr Lys Asn Gln 245 Val Ser Leu Thr Cys 250 Leu Val Lys Gly Phe 255 Tyr Pro Ser Asp Ile 260 Ala Val Glu Trp Glu 265 Ser Asn Gly Gln Pro 270 Glu Asn Asn Tyr Lys 275 Thr Thr Pro Pro Val 280 Leu Asp Ser Asp Gly 285 Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 290 295 300 Val Phe Ser Cys Ser Val Met HiS Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320 Gln Lys Ser Leu Ser 325 Leu Ser Pro Gly Lys 330

<210> 243 <211> 327 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 243

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg

1 5 10 15

Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr 65 70 75 80

Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

85 90 95

Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro

100 105 110

Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

115 120 125

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

130 135 140

Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp 145 150 155 160

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe

165 170 175

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

180 185 190

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu

195 200 205

Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Sêir Lys Alâ. Lys Gly Gln Piro Ax çj

210 215 220

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys 225 230 235 240

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

245 250 255

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

260 265 270

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

275 280 285

Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser

290 295 300

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 305 >310 315 -320

Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 325

<210> 244 <211> 327 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <400> 244

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg

1 5 10 15

Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr 65 70 75 80

Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro

100 105 110

Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

115 120 125

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

130 135 140

Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp 145 150 155 160

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe

165 170 175

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

180 185 190

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu

195 200 205

Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

210 215 220

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys 225 230 235 240

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

245 250 255

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

260 265 270

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

275 280 285

Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser

290 295 300

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 305 310 315 320

Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 325

<210> 245 <211> 8 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <220>

<221> VARIANT <222> (1)...(8)

<223> Xaa = Qualquer aminoácido <400> 245

Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5

<210> 246 <211> 8 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <220>

<221> VARIANT <222> (1)...(8)

<223> Xaa = Qualquer aminoácido <400> 246

Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 <210> 247 <211> 19 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético

<220>

<221> VARIANT

<222> (1)...(19)

<223> Xaa = Qualquer aminoácido

<400> 247

Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa

1 5

Xaa Xaa Xaa

Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 10 15

<210> 248 <211> 8 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220> .

<223> Sintético

<220>

<221> VARIANT <222> (1) . . . (8)

<223> Xaa = Qualquer aminoácido <400> 248

Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5

<210> 249 <211> 3 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <220>

<221> VARIANT <222> (1) ... (3)

<223> Xaa = Qualquer aminoácido

<400> 249 Xaa Xaa Xaa 1

<210> 250 <211> 9 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintético <220>

<221> VARIANT <222> (1)... (9)

<223> Xaa = Qualquer aminoácido <400> 250

Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5

<210> 251 <211> 311 <212> PRT

<213> Macaca Fascicularis

<400> 251

Ala Pro Gly Gly Cys Pro Ala Gln Glu Val Ala Arg Gly Val Leu Thr 1 5 10 15 Ser Leu Pro Gly Asp Ser Val Thr Leu Thr Cys Pro Gly Gly Glu Pro 20 25 30 Glu Asp Asn Ala Thr Val His Trp Val Leu Arg Lys Pro Ala Val Gly 35 40 45 Ser His Leu Ser Arg Trp Ala Gly Val Gly Arg Arg Leu Leu Leu Arg 50 55 60 Ser Val Gln Leu His Asp Ser Gly Asn Tyr Ser Cys Tyr Arg Ala Gly 65 70 75 80 Arg Pro Ala Gly Thr Val His Leu Leu Val Asp Val Pro Pro Glu Glu 85 90 95 Pro Gln Leu Ser Cys Phe Arg Lys Ser Pro Leu Ser Asn Val Ala Cys 100 105 110 Glu Trp Gly Pro Arg Ser Thr Pro Ser Pro Thr Thr Lys Ala Val Leu 115 120 125 Leu Val Arg Lys Phe Gln Asn Ser Pro Ala Glu Asp Phe Gln Glu Pro 130 135 140 Cys Gln Tyr Ser Gln Glu Ser Gln Lys Phe Ser Cys Gln Leu Ala Val 145 150 155 160 Pro Glu Gly Asp Ser Ser Phe Tyr Ile Val Ser Met Cys Val Ala Ser 165 170 175 Ser Val Gly Ser Lys Leu Ser Lys Thr Gln Thr Phe Gln Gly Cys Gly 180 185 190 Ile Leu Gln Pro Asp Pro Pro Ala Asn Ile Thr Val Thr Ala Val Ala 195 200 205 Arg Asn Pro Arg Trp Leu Ser Val Thr Trp Gln Asp Pro His Ser Trp 210 215 220 Asn Ser Ser Phe Tyr Arg Leu Arg Phe Glu Leu Arg Tyr Arg Ala Glu 225 230 235 240 Arg Ser Lys Thr Phe Thr Thr Trp Met Val Lys Asp Leu Gln His His 245 250 255 Cys Val Ile His Asp Ala Trp Ser Gly Leu Arg His Val Val Gln Leu 260 265 270 Arg Ala Gln Glu Glu Phe Gly Gln Gly Glu Trp Ser Glu Trp Ser Pro 275 280 285 Glu Ala Met Gly Thr Pro Trp Thr Glu Ser Arg Ser Pro Pro Ala Glu 290 295 300 Asn Glu Val Ser Thr Pro Thr

305 310

Claims

1. Anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno deste, que especificamente liga-se ao receptor de interleucina-6 humana (hlL-6R) com um Kd de cerca de 500 pM ou menos, e 300 pM ou menos, como medido por ressonância de plasmônio de superfície.

2. Anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno de acordo com a reivindicação 1, que se liga ao hlL-6R com uma afinidade pelo menos 2 vezes maior relativa a sua ligação ao IL-6R de macaco.

3. Anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno de acordo com a reivindicação 1 ou 2, compreendendo um domínio de região de determina- ção complementar 3 (CDR3) de cadeia pesada e um domínio de CDR3 de cadeia leve, em que o domínio de CDR3 de cadeia pesada compreende uma seqüência de aminoácido da fórmula X1 - X2 - X3 - X4 - X5 - X6 - X7 - X8 - X9 - X10 - X11 - X12 - X13 - X14 - X15 - X16 - X17 - X18 - X19 (SEQID NO: 247) em que X1 = Ala, X2 = Lys, X3 = Gly, X4 = Arg, X5 = Asp, X6 = Ser ou Ala, X7 = Phe, X8 = Asp; X9 = lie, X10 = Pro ou ausente, X11 = Phe ou ausente, X12 = Val ou ausente, X13 = Tyr ou ausente, X14 = Tyr ou ausente, X15 = Tyr ou ausente, X16 = Gly ou ausente, X17 = Met ou ausente, X18 = Asp ou ausente, e X19 = Val ou ausente;e o domínio de CDR3 de cadeia leve compreende uma seqüência de aminoácido da fórmula X1 - X2 - X3 - X4 - X5 - X6- X7 - X8 - X9 (SEQ ID NO: - 250) em que X1 = Gln, X2 = Gln ou His, X3 = Ala, X4 = Asn ou Tyr, X5 = Ser, X6 = Phe, X7 = Pro, X8 = Pro, e X9 = Thr.

4. Anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno de acordo com a reivindicação 3, também compreendendo um domínio de CDR1 de cadeia pesada compreendendo uma seqüência de aminoácido da fórmula X1 - X2 - X3 - X4 - X5 - X6- X7 - X8 (SEQ ID NO: 245) em que X1 = Gly ou Arg, X2 = Phe, X3 = Thr, X4 = Phe, X5 = Asp, X6 = Asp, X7 = Tyr, e X8 = Ala; um domínio de CDR2 de cadeia pesada compreendendo uma seqüência de aminoácido da fórmula X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8 (SEQ ID NO: 246) em que X1 = Ile ou Vai, X2 = Ser, X3 = Trp, X4 = Asn, X5 = Ser, X6 = Gly, X7 = Ser, e X8 = lie; um domínio de CDR1 de cadeia leve compreendendo uma se- qüência de aminoácido da fórmula X1 - X2 - X3 - X4 - X5 - X6 - X7 - X8 (SEQ ID NO: 248), em que X1 = Gln, X2 = Gly, X3 = lie, X4 = Ser, X5 = Ser, e X6 = Trp; e um domínio de CDR2 de cadeia leve compreendendo uma seqüência de aminoácido da fórmula X1 - X2 - X3 (SEQ ID NO: 249), em que X1 = Gly ou Ala, X2 = Ala, e X3 = Ser.

5. Anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno de acordo com a reivindicação 1 ou 2, compreendendo: um domínio de CDR3 de cadeia pesada selecionado do grupo consistindo em SEQ ID NO: 25, 153, 9, 185, 41, 57, 73, 89, 105, 121, 137, -169, 201 e 217; e um domínio de CDR3 de cadeia leve selecionado do grupo con- sistindo em SEQ ID NO: 33, 161, 17, 193, 49, 65, 81, 97, 113, 129, 145, 177, -209 e 225.

6. Anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno de acordo com a reivindicação 5, também compreende: um domínio de CDR1 de cadeia pesada selecionado do grupo consistindo em SEQ ID NO: 21, 149, 5, 181, 37, 53, 69, 85, 101, 117, 133, -165, 197, e 213; um domínio de CDR2 de cadeia pesada selecionado do grupo consistindo em SEQ ID NO: 23, 151, 7, 183, 39, 55, 71, 87, 103, 119, 135, -167, 199 e 215; um domínio de CDR1 de cadeia leve selecionado do grupo con- sistindo em SEQ ID NO: 29, 157, 13, 189, 45, 61, 77, 93, 109, 125, 141, 173, -205 e 221;e um domínio de CDR2 de cadeia leve selecionado do grupo con- sistindo em SEQ ID NO: 31,159, 15, 191, 47, 63, 79, 95, 111, 127, 143,175, -207 e 223.

7. Anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno de acordo com a reivindicação 5 ou 6, em que as CDRs de cadeia pesada e as CDRs de cadeia leve compreendem SEQ ID NO: 21, 23, 25 e SEQ ID NO: 29, 31, 33; SEQ ID NO: 149, 151, 153 e SEQ ID NO: 157, 159, 161; SEQ ID NO: 5, 7, 9 e SEQ ID NO: 13, 15, 17; e SEQ ID NO: 181, 183, 185 e SEQ ID NO: 189, 191, 193, respectivamente.

8. Anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno de acordo com a reivindicação 1 ou 2, compreendendo uma região variável de cadeia pesada (HCVR) selecionada do grupo consistindo em SEQ ID NO: 19, 147, 3, 179, 227, 231, 35, 51, 67, 83, - 99, 115, 131, 239, 241, 163, 235, 195 e 211; e uma região variável de cadeia leve (LCVR) selecionada do gru- po consistindo em SEQ ID NO: 27, 155, 11, 187, 229, 233, 43, 59, 75, 91, - 107, 123, 139, 171, 237, 203 e 219.

9. Anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno de acordo com a reivindicação 8, compreendendo pares de HCVR/LCVR selecionados do grupo consistindo em SEQ ID NO: 19/27; 147/155; 3/11; 179/187; 227/229; - 231/233; 35/43; 51/59; 67/75; 83/91; 99/107; 115/123; 131/139; 239/155; - 241/155; 163/171; 235/237; 195/203 e 211/219.

10. Molécula de ácido nucléico isolada que codifica um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno como definido em qualquer uma das reivindicações precedentes.

11. Vetor compreendendo a seqüência de nucleotídeo como definido na reivindicação 10.

12. Sistema hospedeiro-vetor para a produção de um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno de um anticorpo que especificamente liga-se ao receptor de IL-6 humano, compreendendo um vetor como definido na reivindicação 11, em uma célula hospedeira adequada.

13. Sistema hospedeiro-vetor de acordo com a reivindicação 12, em que a célula hospedeira é uma célula procariótica ou eucariótica selecio- nada de uma dentre uma célula de E. coli ou CHO.

14. Método para produzir um anticorpo anti-IL-6R ou fragmento de ligação ao antígeno deste, compreendendo desenvolver células do siste- ma hospedeiro-vetor como definido na reivindicação 12 ou 13, sob condi- ções que permitem produção do anticorpo ou fragmento deste e recuperar o anticorpo ou fragmento assim produzido.

15. Uso de um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno de um anticorpo como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 9, na fabricação de um medicamento para uso para atenuar ou inibir um distúr- bio ou doença mediada por IL-6 em um ser humano.

16. Anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno de um anti- corpo como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 9 para uso na atenuação ou inibição de um distúrbio ou doença mediada por IL-6 em um humano.

17. Composição farmacêutica compreendendo um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno de um anticorpo como definido em qual- quer uma das reivindicações 1 a 9, e um veículo ou excipiente farmaceuti- camente aceitável.

18. Método de atenuar ou inibir um distúrbio ou doença mediada por IL-6 em um paciente humano, o método compreendendo administrar uma quantidade eficaz de um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno de um anticorpo como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 9, a um paciente humano.

19. Método de acordo com a reivindicação 18, em que o distúr- bio ou doença mediada por IL-6 é artrite, tal como artrite reumatóide crônica; uma doença inflamatória do intestino, tal como doença de Crohn ou colite ulcerativa; ou lúpus eritematoso sistêmico.