BG107898A - ПОДОБР...НА ВАК'ИНА 'Р...(tm)" MYCOPLASMA HYOPNEUMONIAE БАК'...РИН - Google Patents
ПОДОБР...НА ВАК'ИНА 'Р...(tm)" MYCOPLASMA HYOPNEUMONIAE БАК'...РИН Download PDFInfo
- Publication number
- BG107898A BG107898A BG107898A BG10789803A BG107898A BG 107898 A BG107898 A BG 107898A BG 107898 A BG107898 A BG 107898A BG 10789803 A BG10789803 A BG 10789803A BG 107898 A BG107898 A BG 107898A
- Authority
- BG
- Bulgaria
- Prior art keywords
- mycoplasma hyopneumoniae
- pigs
- vaccine
- mixture
- use according
- Prior art date
Links
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims abstract description 93
- 241000204045 Mycoplasma hyopneumoniae Species 0.000 title claims abstract description 89
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 68
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims abstract description 67
- 229920002125 Sokalan® Polymers 0.000 claims abstract description 32
- 230000036039 immunity Effects 0.000 claims abstract description 21
- PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N dodecahydrosqualene Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 19
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims abstract description 16
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 claims abstract description 7
- JXTPJDDICSTXJX-UHFFFAOYSA-N n-Triacontane Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCC JXTPJDDICSTXJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 7
- 229940032094 squalane Drugs 0.000 claims abstract description 7
- BHEOSNUKNHRBNM-UHFFFAOYSA-N Tetramethylsqualene Natural products CC(=C)C(C)CCC(=C)C(C)CCC(C)=CCCC=C(C)CCC(C)C(=C)CCC(C)C(C)=C BHEOSNUKNHRBNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 5
- 229940031439 squalene Drugs 0.000 claims abstract description 5
- TUHBEKDERLKLEC-UHFFFAOYSA-N squalene Natural products CC(=CCCC(=CCCC(=CCCC=C(/C)CCC=C(/C)CC=C(C)C)C)C)C TUHBEKDERLKLEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 5
- YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N (6E,10E,14E,18E)-2,6,10,15,19,23-hexamethyltetracosa-2,6,10,14,18,22-hexaene Chemical compound CC(C)=CCCC(C)=CCCC(C)=CCCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)C YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 4
- 235000007586 terpenes Nutrition 0.000 claims abstract description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 31
- 229920001400 block copolymer Polymers 0.000 claims description 18
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 18
- 229920002503 polyoxyethylene-polyoxypropylene Polymers 0.000 claims description 18
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 14
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 14
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 14
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 claims description 12
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 11
- 230000003053 immunization Effects 0.000 claims description 11
- 239000003921 oil Substances 0.000 claims description 11
- 150000002430 hydrocarbons Chemical class 0.000 claims description 6
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 4
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 4
- 241000606748 Actinobacillus pleuropneumoniae Species 0.000 claims description 3
- 241000606860 Pasteurella Species 0.000 claims description 3
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 claims description 3
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 claims description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 claims description 2
- 150000003505 terpenes Chemical class 0.000 claims description 2
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 claims 3
- 239000004215 Carbon black (E152) Substances 0.000 claims 1
- 206010008631 Cholera Diseases 0.000 claims 1
- 238000011260 co-administration Methods 0.000 claims 1
- 239000007764 o/w emulsion Substances 0.000 claims 1
- YYGNTYWPHWGJRM-AAJYLUCBSA-N squalene group Chemical group CC(C)=CCC\C(\C)=C\CC\C(\C)=C\CC\C=C(/C)\CC\C=C(/C)\CCC=C(C)C YYGNTYWPHWGJRM-AAJYLUCBSA-N 0.000 claims 1
- 229920001983 poloxamer Polymers 0.000 abstract description 11
- 230000028993 immune response Effects 0.000 abstract description 6
- RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L thimerosal Chemical compound [Na+].CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C([O-])=O RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 abstract description 5
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 abstract description 2
- -1 terpene hydrocarbons Chemical class 0.000 abstract description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 1
- 229920011250 Polypropylene Block Copolymer Polymers 0.000 abstract 1
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 abstract 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 abstract 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 abstract 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 106
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 46
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 37
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 37
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 31
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 24
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 20
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 15
- 239000000047 product Substances 0.000 description 14
- UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L di(octadecanoyloxy)lead Chemical compound [Pb+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 13
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 10
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 10
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 9
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 9
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 8
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 7
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 6
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 241000204031 Mycoplasma Species 0.000 description 5
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 5
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 5
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 5
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 5
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 5
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 5
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 5
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 5
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 5
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N Acrylic acid Chemical group OC(=O)C=C NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 4
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 4
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 4
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 4
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 4
- 229940052907 telazol Drugs 0.000 description 4
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 3
- RVGRUAULSDPKGF-UHFFFAOYSA-N Poloxamer Chemical group C1CO1.CC1CO1 RVGRUAULSDPKGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 description 3
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 3
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 3
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 3
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 235000020030 perry Nutrition 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 3
- 229940033663 thimerosal Drugs 0.000 description 3
- 241000972773 Aulopiformes Species 0.000 description 2
- 206010011224 Cough Diseases 0.000 description 2
- 238000008157 ELISA kit Methods 0.000 description 2
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- YQEZLKZALYSWHR-UHFFFAOYSA-N Ketamine Chemical compound C=1C=CC=C(Cl)C=1C1(NC)CCCCC1=O YQEZLKZALYSWHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000585 Mann–Whitney U test Methods 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 208000035415 Reinfection Diseases 0.000 description 2
- 230000003444 anaesthetic effect Effects 0.000 description 2
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 2
- 238000011888 autopsy Methods 0.000 description 2
- OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N azane;(2e)-3-ethyl-2-[(e)-(3-ethyl-6-sulfo-1,3-benzothiazol-2-ylidene)hydrazinylidene]-1,3-benzothiazole-6-sulfonic acid Chemical compound [NH4+].[NH4+].S/1C2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N(CC)C\1=N/N=C1/SC2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N1CC OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 239000013065 commercial product Substances 0.000 description 2
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 2
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 2
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 2
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 2
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- 229960003299 ketamine Drugs 0.000 description 2
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 2
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 2
- 229960000502 poloxamer Drugs 0.000 description 2
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 2
- 235000019515 salmon Nutrition 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- BPICBUSOMSTKRF-UHFFFAOYSA-N xylazine Chemical compound CC1=CC=CC(C)=C1NC1=NCCCS1 BPICBUSOMSTKRF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960001600 xylazine Drugs 0.000 description 2
- SMZOUWXMTYCWNB-UHFFFAOYSA-N 2-(2-methoxy-5-methylphenyl)ethanamine Chemical compound COC1=CC=C(C)C=C1CCN SMZOUWXMTYCWNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BDDLHHRCDSJVKV-UHFFFAOYSA-N 7028-40-2 Chemical compound CC(O)=O.CC(O)=O.CC(O)=O.CC(O)=O BDDLHHRCDSJVKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NOWKCMXCCJGMRR-UHFFFAOYSA-N Aziridine Chemical compound C1CN1 NOWKCMXCCJGMRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000003322 Coinfection Diseases 0.000 description 1
- VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N Ethene Chemical compound C=C VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005977 Ethylene Substances 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000001572 Mycoplasma Pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 201000008235 Mycoplasma pneumoniae pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 241000204003 Mycoplasmatales Species 0.000 description 1
- 241000282376 Panthera tigris Species 0.000 description 1
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 230000003187 abdominal effect Effects 0.000 description 1
- ZTOJFFHGPLIVKC-CLFAGFIQSA-N abts Chemical compound S/1C2=CC(S(O)(=O)=O)=CC=C2N(CC)C\1=N\N=C1/SC2=CC(S(O)(=O)=O)=CC=C2N1CC ZTOJFFHGPLIVKC-CLFAGFIQSA-N 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001195 anabolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 1
- 239000002518 antifoaming agent Substances 0.000 description 1
- 239000008135 aqueous vehicle Substances 0.000 description 1
- 210000001367 artery Anatomy 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 229960001631 carbomer Drugs 0.000 description 1
- 230000000747 cardiac effect Effects 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 210000000038 chest Anatomy 0.000 description 1
- 208000013116 chronic cough Diseases 0.000 description 1
- 238000005056 compaction Methods 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 229940061607 dibasic sodium phosphate Drugs 0.000 description 1
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 1
- 238000007421 fluorometric assay Methods 0.000 description 1
- 210000004744 fore-foot Anatomy 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000003862 health status Effects 0.000 description 1
- 244000144980 herd Species 0.000 description 1
- 229920001519 homopolymer Polymers 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000013101 initial test Methods 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 230000004726 long-term protective immunity Effects 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- 239000007758 minimum essential medium Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 229940111688 monobasic potassium phosphate Drugs 0.000 description 1
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 1
- 238000001543 one-way ANOVA Methods 0.000 description 1
- 238000011022 operating instruction Methods 0.000 description 1
- 244000039328 opportunistic pathogen Species 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 201000006509 pleuropneumonia Diseases 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 1
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 1
- 235000003784 poor nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 1
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 239000008213 purified water Substances 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- HQOJMTATBXYHNR-UHFFFAOYSA-M thallium(I) acetate Chemical compound [Tl+].CC([O-])=O HQOJMTATBXYHNR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 1
- 241001624918 unidentified bacterium Species 0.000 description 1
- 229930195735 unsaturated hydrocarbon Natural products 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 230000004584 weight gain Effects 0.000 description 1
- 235000019786 weight gain Nutrition 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
- A61K39/0241—Mollicutes, e.g. Mycoplasma, Erysipelothrix
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/52—Bacterial cells; Fungal cells; Protozoal cells
- A61K2039/521—Bacterial cells; Fungal cells; Protozoal cells inactivated (killed)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/55—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the host/recipient, e.g. newborn with maternal antibodies
- A61K2039/552—Veterinary vaccine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55555—Liposomes; Vesicles, e.g. nanoparticles; Spheres, e.g. nanospheres; Polymers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55566—Emulsions, e.g. Freund's adjuvant, MF59
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S424/00—Drug, bio-affecting and body treating compositions
- Y10S424/825—Bacterial vaccine for porcine species, e.g. swine
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Description
ПОДОБРЕНА ВАКСИНА СРЕЩУ MYCOPLASMA HYOPNEUMONIAE БАКГИРИН
Настоящата заявка претендира за приоритет на временна заявка в процедура с входящ номер 60/256,637, подаден на 19.12.2000., чието цяло описание е включено в настоящото, за литературна справка.
Настоящото изобретение се отнася до подобрени методи за индуциране на защитет имунитет срещу Mycoplasma hyopneumoniae, по-специално чрез използуване на инактивиран Mycoplasma hyopneumoniae бактерии в количество, ефективно да имунизира животно реципиент срещу инфекция чрез Mycoplasma hyopneumoniae в единчна доза.
ПРЕДШЕСТВАЩО СЪСТОЯНИЕ НА ТЕХНИКАТА
Mycoplasma hyopneumoniae е етиологичен агент на микоплазмената пневмония при свинете.заболяването е основна причина за икономически загуби в свинепроизводството, дължащи се на намалено добив на тегло и слаба ефиктивност на храненето. Болестта причинява хронична кашлица, козината загубва лъсксавината си, забавен растеж и умърлушен вид, оставащи няколко седмици. Наблюдават се характерни лезии от пурпурни до сиви зони на уплътняване, по-специално в коремните апикални и кардиални лобове при инфектирани животни. Въпреки че болестта причинавя малка смъртност, засегнатите свине често са предразположени на вторични инфекции от опортюнистични патогени, водощи до смърт или стрес. Сами по себе си, икономическите загуби са изчислени от между 200 до 250 милиона долара годишно.
Mycoplasma hyopneumoniae е бавно растяща, деликатна бактерия, на която липсва клетъчна стена. Често е трудно да се изолира от респираторния тракт, поради Mycoplasma hyopneumoniae, обикновен вторичен агент, също локализиран в респираторния тракт. Заболяването се разпространява по въздушно капков път, аерозол продуциран от кашлица, и чрез директен контакт с засегнат или оздравяло прасе носител. Смес от инфектирани животни и неинфектирани животни води до ранно и често повторно инфектиране. Често инфекцията започва с инфектиране на малки прасенца от носител прасящи свине. Дължащо се на техниките на управлуние стадата, инфекцията може да не се прояви до по-късно в живота.обикновено се наблюдава допълнителна инфекция след отбиване, когато прасетата са съберат. Ясно заболяване нормално се наблюдава при прасета на шест седмична възраст или по-възрастни. Темповете на растеж и темповете на конверсията на храната са маркирано намалени при засегнатите животни. Лечение при прилагане на анаболи е скъпо и се нуждае от продължително използеване. Повторно инфектиране е, също така, проблем. Ваксините са понастоящем най-ефективния метод за избягване на инфекции и последствията от тях.
Fort Dodge Animal Healt (FDAH) продава Mycoplasma hyopneumoniae бактерии под името Suvaxyne® Respifend® за използуване н аваксината за предпазване на здрави свине от ф клинични прояви, причинени от Mycoplasma hyopneumoniae.
Ваксината съдържа Carbopol, като помощно средство и се препоръчва при двойна доза ваксина за прасета, при наймалко едно-седмична възраст, при втора доза две до три седмици след първата ваксинация. Въпреки това, двойната доза ваксина има един очевиден недостатък, защото изисква повторно третиране на жовотното с цел да се предостави пълно предпазване от заболяването.
Следователно, цел на настоящото изобретение е да се 0 предостави ефективна ваксина срещу, Mycoplasma hyopneumoniae, която да предизвиква защитен имунитет и да предпазва от болести, причинени от този организъм при прилагане на единична доза от ваксината.
Друга цел нанастоящото изобретение е да се предостави състав на ваксина, подходящ за използуване при свине срещу инфекция и болест, причинена от Mycoplasma hyopneumoniae, и която да може да се използува в комбинация с други бактерини и/или токсиди.
Друга цел нанастоящото изобретение е да се предостави метод за предпазване или подобряване на заболяването, където организмът причинител е Mycoplasma hyopneumoniae, чрез използуване на приведеното във лекарствена форма помощно средство, което засилва имуногенноста на бакгерина, така че да предизвика предпазващ имунитет след една единична доза от ваксината.
Други цели и особености на настоящото изобретение ще станат явни от подробното описание, което следва.
КРАТКО ОПИСАНИЕ НА ИЗОБРЕТЕНИЕТО
Настоящото изобретение се отнася до състав за имунизиране на животни срещу инфекция от Mycoplasma hyopneumoniae, който включва едно имунизиращо количество енактивиран Mycoplasma hyopneumoniae бактерии; смес от помощни средства, която включва полимер на акриловата киселина и смес от способни да метаболизират масла и полиоксиетилен-полиоксипропилен блок съполимер; и фармацевтично приемлив носител, която смес на ваксина, след единично прилагане, предизвиква имунитет срещу Mycoplasma hyopneumoniae.
При един друг аспект, настоящото изобретение предоставя имуногенен състав за имунизиране на животно срещу инфекция с Mycoplasma hyopneumoniae, който включва енактивиран Mycoplasma hyopneumoniae бактерин в комбинация с горе-посочената смес от помощни средства и фармацевтично приембиви стабилизатори, носители или разредители. Помощното средство, обикновено присъства в състава за ваксина при кройна концентрация от приблизително 1-25% (v/v), и за предпочитане приблизително
5-12% (v/v). Съставът може да включва, също така, други компоненти на ваксината, включително инакгивирани бактерини или пречистени токсоиди, от един или повече патогени, като Harmonphilus parasuis, Pasteurella multiocida, Streptococcum suis, Actinobacillus pleuropneumoniae, Bordatella bronchiseptica, Salmonella choleraesuis и лептоспира и могат да се прилагат по интрамускулни, подкожни, орални, аерозолни или интраназални пътища.
При един друг аспакт на настоящото изобретение се предоставя метод за предпазване на животно от заболяване, причинено от Mycoplasma hyopneumoniae чрез прилагане на единична доза от горе-посочената ваксина, която включва инактивиран Mycoplasma hyopneumoniae бактерин.
ПОДРОБНО ОПИСАНИЕ НА ИЗОБРЕТЕНИЕТО
Всички патентни, заявки за патенти и друг вид литература, цитирани в настоящото са включени в настоящото описание, като литературна справка в тяхната цялост. В случай на противоречие преобладава настоящото описание.
Както се използува в настоящото, “бактерин” е получена бактерия, която е енактивирана, и която, в комбинация с някои помощни вещества може да предизвика предпазващ имунитет за предпазване срещу заболявания или инфекции, когато се прилага на животни.
“Помощни вещества” означава състав, който включва едно или повече вещества, който засилва имуногенноста и ефикастноста на Mycoplasma hyopneumoniae бактерин в състав на ваксина.
Както се използува в заявката и патентните претенции, терминът MHDCE означава Mycoplasma hyopneumoniae ДНК клетъчен еквивалент.
“Имунизиращо количество” е това количество, което предоставя имунитет срещу Mycoplasma hyopneumoniae. “Имунизиращото количество” зависи от вида, отглеждането, възраста, размера, здравословния статус и дали животното е било преди това ваксинирано срещу същия организъм.
Настоящото изобретение предоставя ваксина срещу Mycoplasma hyopneumoniae, която е подходяща за имунизиране с единична доза. Ваксината от настоящото изобретение включва смес от помощни вещества, която засилва имуногенноста на бакгерина, като по този начин предоставя възможност за прилагане на единична доза за предизвикване на предпазващ имунитет.
Ваксината може да се приготви от свежо получени култури по методи, които са стандартни за предшестващото състояние на техниката (виж например, U.S. Patent 5,338,543 или U.S. Patent 5,565,205, както и пример 2, по-долу). Организмът може да се развива в културална среда, като PPLO (Pleuropneumonia-like organism) пълна среда [Difco]. Laboratories]. Прорастването на организма се следи чрез стандартни техники, като определяне на изменението цветните единици (CCU), и събиране, когато се достигне достатъчно висок титър. След това, суровият продукт може да се концентрира или да се лиофилизира по конвенционални методи преди въвеждането в ваксиналната форма. Могат да се използуват други методи, като тези описани в Thomas et al., Agri-Practice, Vol. 7 No. 5, pp. 26-30.
Ваксината от настоящото изобретение включва инактивиран Mycoplasma hyopneumoniae бактерии, в комбинация със смес от помощни вещества и един или повече фармацевтично приемливи носители. Подходящи за използуване носители включват водна среда, например, физиологичен разтвор, физиологичен разтвор с фосфатен буфер, Минимална Есенциална Среда (МЕМ), или HEPES буфер.
Сместта от помощни вещества, за използуване в съставите на ваксината от настоящото изобретение засилват имунния отговор и съдържа смес от полимер на акриловата киселина със смес от способни да метаболизират масла, например ненаситени въглеводороди на терпен или негови хидрогенирани продукти, за предпочитане сквалан (2,3,10,15,19,23-хексаметилтетракозан) или сквален и полиоксиетилен-полиоксипропилен блок съполимер. Един такъв полимер на акриловата киселина може да е хомополимер или съполимер. Полимерът на акриловата киселина е, за предпочитане, карбомер. Карбомерите са достъпни на пазара под търговското наименование Carbopol. Полимерите на акриловата киселина, както е описано, например, в U.S. Patent 2,909,462 и U.S. Patent 3,790,665, чиито описания са включени в настоящото, като литературна справка. Полиоксиетилен-полиоксипропилен блок съполимерите са повърхностно активни вещества, за предпочитане течни сурфактанти, които спомагат при суспендирането на твърди или течни съставни части. Сурфактантите са достъпни на пазара, като полимери под търговското наименование Pluronic®. Предпочитан сурфактант е полоксамер 401, който е достъпен на пазара под търговското наименование Pluronic® L121.
Имуногенно стимулераната смес от помощни вещества е характерно присъства в състава на ваксината от изобратанието в v/v от приблизително 1-25% (v/v), и за попредпочитано приблизително 5-12% (v/v). Количеството на използуваната смес от помощни вещества и съотношението на двата компонента от помощни вещества може да варира според прибавянето на други бакгерини или пречистени токсоиди. Сместта от помощни вещества включва обикновено способни да метаболизират масла, полимер на акриловата киселина и полиоксиетилен-полиоксипропилен блок съполимер, приведени в лекарствена форма, като емулсия във водна среда.
В тази смес от помощни вещества, способните да метаболизират масла и полимера на акриловата киселина могат да присъстват в количества в граници от приблизително 10 до 150 ml/L и от приблизително 0,5 до 10 g/L, съответно. При един предпочитан вариант за изпълнание на сместа от помощни вещества, компопентьт на сместта от способни да метаболизират масла и полиоксиетилен-полиоксипропилен блок съполимер е смес от скварен и Pluronic® L121 (полоксамер 401), който може да присъства в количество от приблизително 50 до 100 ml/L и карбоксиметиленов полимер е Carbopol 934Р (Carbamer 934Р), който може да присъства в количество от приблизително 2 ml/L. Характерно, сместта от помощни вещества съдържа приблизително съотношение 1:23 до 1:50 от полимера на акриловата киселина към способни да метаболизират масла/полиоксиетилен-полиоксипропилен блок съполимер смес.
Предпочитани полимери на акриловата киселина са тези, отбелязани от B.F. Goodrich, като Carbopol 934 Р NF и 941 NF, които са полимери на акриловата киселина, омрежена с полиалилзахароза и, които са с химична формула (СН2СНОООН)п. Тези полимери образуват телове, подходящи за формулиране с водни носители. Предпочитан полиоксиетилен-полиоксипропилен блок съполимери са Q нейонните сурфактанти, отбелязани от BASF като Pluronic®
L121, L61, L81 или L101.
Ваксината от настоящото изобретение може да се прилага интрамускулно, подкожно, интраназално, интраперитонеално или орално, за предпочитане интремускулно или подкожно.
Ваксината от изобретението обикновено включва инактивиран Mycoplasma hyopneumoniae, способни да метаболизират масла, полиоксиетилен-полиоксипропилен 0 блок съполимер и полимер на акриловата киселина, под формата на мастно водна емулсия. Ваксината за предпочитане съдържа полимер на акриловата киселина в концентрация в граници от 0,5 до 10 g/L. за предпочитане ваксината съдържа способни да метаболизират масла в концентрация в граници от 2 до 6 ml/L. Ваксината, за предпочитане, съдържа полиоксиетилен-полиоксипропилен блок съполимер в концентрация в гланици от 1 до 3 ml/.
За прилагане в единични дози, ваксината трялва, за предпочитане, да съдържа едно количество Mycoplasma hyopneumoniae бактерии, съответстващо на приблизително
1x108 до 3x1011 MHDCE/mL, за предпочитане прибилизително 1х109 MHDCE/mL. Приблизително един до пет mL, за предпочитане 2 mL, могат да се приложат на животно интрамускулно, подкожно или интраперитонеално. Един до десет mL, за предпочитане 2 до 5 mL могат да се приложат орално или интраназално.
Следните примери за изпълнение се счита, че по-пълно илюстрират изобретението, без да ограничават неговия обхват.
ПРИМЕРИ ЗА ИЗПЪЛНЕНИЕ НА ИЗОБРЕТЕНИЕТО
ПРИМЕР 1
Препарат на Mycoplasma hyopneumoniae бактерии за състава на ваксината
Описание на вирусния суров продукт
Mycoplasma hyopneumoniae може да се получи да се получи от който и да е от лесно достъпните източници. При един вариант за изпълнение на изобретението може да се използува Mycoplasma hyopneumoniae щам Р-5722-3. културата се получава от С. Armstrong, Purdue University, West Lafayette, India. Като следва рецептурата за култивиране на Mycoplasma hyopneumoniae, те се пасират седемкратно в Mycoplasma hyopneumoniae бульон, за да се установи Master Seed.
Клетъчна култура
Mycoplasma hyopneumoniae се култивира в среда, съдържаща Bacto PPLO Powder, дрождев екстракт, глюкоза, Lцистеин хидрохлорид, ампицилин, талиев ацетат, фенол-рот, противопенител, нормален стерилен свински серум и вода за един период от време в граници от 18-144 часа. За инактивиране се прибавя бинарен етиленимин (BEI) към продуктната култура във ферментационния съд. pH се довежда до 7,4 и след това се събира, съгласно конвенционални процедури, за да се осигури Mycoplasma hyopneumoniae бактерии.
ИЗГОТВЯНЕ НА СЪСТАВ НА ВАКСИНА
Състав на Консерваните и Използувани Пропорции
Полученият бактерин се консервира чрез прибавяне на тимерозал и етилен диаминин тетра-оцетна киселин, тетранатриева сол (EDTA) при не повече от 0,01% и 0,07%, съответно. Ампицилин U.S.P. присъства в растежната хранителна среда при 0,250 g/L. Концентрацията на остатъчния ампицилин варира в крайния продукт според обема на получените течности, при концентрация на остатъчния ампицилин в получения краен продукт не повече от 30 ug/ml.
СТАНДАРТИЗИРАНЕ НА ПРОДУКТА
Концентратът на Mycoplasma се определя количествено чрез ДНК Флуорометрично Изследване.
Смес от способни да метаболизират масла, която съдържа един или повече въглеводороди на терпен и полиоксиетилен-полиоксипропилен блок съполимер, например сквалан/Pluronic® L121 смес, се приготвя чрез разтваряне на 10 g натриев хлорид, 0,25 g калиев хлорид, 2,72 дибазичен натриев фосфат, 0,25 монобазичен калиев фосфат, 20 mL Pluronic® L121 (BASF Corporation) 40 ml Squalane (Kodak),
3,2 mL Tween 80 в 900 ml пречистена вода, допълване до 1000 ml. След размесване, съставките могат да се автоклавират. След това сместта се хомогинизира до образуване на стабилна емулсия. Може да се добави формалин до крайна концентрация от 0,2% или да се добави тимерозол до крайна концентрация от 1:10,000.
СГЛОБЯВАНЕ НА ЕДИНИЦИТЕ, ЗА ПОЛУЧАВАНЕ НА СЕРИЯ Задоволителни концентрати. на Mycoplasma Q hyopneumoniae са асептично комбинирани с помощни вещества, консерванти и разредители, в стерилни контейнери с бъркалка и се смесват за неповече от 30 минути.
Количества за 1,000,000 дози (2 ml всяка)
| Концентрат на Mycoplasma (>1,0х101° MHDCE/ml) | 400,000ml | 20,0 |
| сквалан/Pluronic® L121 смес | 100,000.ml | 5,0 |
| Carbopol (2% w/v във вода) | 200,000 ml | 10,0 |
| Разтвор на Тимерозал 1 % w/v във вода и EDTA (тетранатриева сол) 7 w/v% | 18,000 ml | 0,9 |
| Стерилен физиологичен разтвор | 1,282,000 ml | 64,1 |
pH на серията се довежда до 7,0 + 0,2.
MHDCE=Mycoplasma hyopneumoniae ДНК Клетъчен
Еквилалент
МЕТОД И ТЕХНИКИ ЗА ПЪЛНЕНЕ И ЗАПЕЧАТВАНЕ НА
КРАЙНИТЕ КОНТЕЙНЕРИ
Продуктът може да се филтрира грубо през стерилен елемент 200-500 микронен филтър и се пълни при условия, определени в 9 CFR 114,6 в стерилни крайни контейнери в определено помещение за операцията пълнене. Стъклените или пластамосови контейнери се затварят с гумени стопери и се гофрират с алуминева тапа. Всяка 2 ml-ова доза съдържа не по-малко от 1х109 Mycoplasma hyopneumoniae ДНК клетъчни еквиваленти.
ТЕСТВАНЕ ЗА СИЛА
Маси или проби от краен контейнер от завършения продукт може да се тестват за сила както следва: метод на Изследване за Тестване на Сила: използузват се ICR женски мишки, на възраст от шест до седем седмици, доставени от Harlan Sprague Daweley или друг приемлив доставчик. Необходим е минимум от 20 мишки за имунизиране с Неизвестен и Контролен бактерии. Минимум от пет мишки се задържат като неинокулирани контроли. Тест и контролните бактерини се смесват индивидуално съвсем. Стерилни, оставени на разположение спринцовки, пригоден с 25-ти размер на 5/8 инча игли се използуват за инокулиране на мишките подкожно в ингвиналната зона с 1/10-та от доза на животно гостоприемник (0,2 ml). Всяка група мишки се подслонява като индивидуална единица и й се дава свободон достъп до храна и вода в продължение на 14 дни. След това, всяка мишка се анестизира и се поставя на гръб. При използуване на една ръка, главата се навежда и един преден крак се отдалечава от тялото. Използува се скалпел за срязване на кожата на прииблизително инч между отдалечения крак и торакса, като се прекъсва брахиалната (мишнична) артерия. Използува се спринцовка от 3 ml без игла, кръвтта която изтича от среза се събира. Кръвтта се Q излива в белязана епруветка и се отставя да се съсири.
Съсирените епруветки се центрофугират при 1,000 х д, за да се отдели серума от съсирека. Индивидуалните серуми се съхраняват при -20°С или при по-студено, до използуването им.
СЕРОЛОГИЧНО ТЕСТВАНЕ:
Използва се ELISA процедура, за да се измери отговора на антитялото на мишка към Контролен и/или Неизвестен 0 бактерии. ELISA процедулата се провежда при използуване на на Immulon II Плоскодънни Микротитърни блюдана разположение от Dynatech или друг еквивалент и четящо устройство за ELISA блюда.
РЕАГЕНТИ ЗА ТЕСТА: Физиологичен разтвор, буфериран с фосфатен буферTween (PBST) (pH доведено до 7,2 -7,4 с 5 N NaOH или с 5 N HCL).
Количество на литър
| Съставки | Литър |
| NaCI | 8,50 грама |
| Na2PO4 | 0,22 грама |
| Na2HPO4 | 1,19 грама |
| Tween-20 | 0,50 ml |
| Допълва се c дейонизирана вода | 1,000,00 ml |
© Буфериран с глицин физиологичен разтвор (GBS) ( pH доведено да 9,5-9,7 с 5N NaOH или с 5N HCL).
| Съставки | Количество на литър |
| Глицин | 0,75 грама |
| NaCI | 8,50 грама |
| Допълва се с дейонизирана вода | 1,000,00 ml |
Положителен контролен серум: Положителният С контролен серум е сбор от серуми от мишки, ваксинирани с
Mycoplasma hyopneumoniae бактерии.
Помощни средства и субстрати:
От Kirkegaard and Perry Laboratories, Inc. (Caralog No.
074-1802) се получава Афинитетно Пречистен Анти-Миши IgG маркиран с Пероксидаза. Процедурата да определяне на оптималното разреждане на помощното средство е описано подробно по-долу. Пероксидазните Субстратни Разтвори (ABTS) се получават от Kirkegaard and Perry Laboratories, Inc.
Титруване на помощните средства: Immulon II Плоскодънно Микротитърно блюдо се покрива с 100 ul на ямка от 20 ug на mL Mycoplasma hyopneumoniae Антиген на Цяла Клетка, разтворен в 10 mM GBS. Блюдото се инкубира за не по-малко от един час при 37°С+2°С и се прехвърля на 2-7°С за не по-малко от една седмица. Преди да се използва, блюдото се промива трикратно с PBST, при една минута време за напояване между всяко промиване, й се изцежда до сухо. Приготвя се Положителен Контролен Серум в PBST при разреждане от 1:40, а разреденият Положителен контролен серум (100 ul/блюдо) се прибавя към половината от ямките на блюдата. Към останалата половина от ямките се прибавя РВБТблюдото се инкубира един час при стайна температура, след което блюдото се промива трикратно. Серумът с помощното средство се разрежда серийно с PBST два пъти, като се забочва от 1:100 разреждане и се завършва с 1:10,240 разреждане. 100 ul от всяко разреждане на помощното средство се прибавят към четири ямки на Положителения серум и към четири ямки с PBST и се остават в продължение на половин час да реагират на стайна температура. Блюдата се промиват четири пъти и се добавят 100 ul Пероксидазен Субстратен Разтвор (abts) на ямка. Блюдото се отчита при настройване на двойна дължина на вълната от Τλ=450. Избира се разреждане на Помощното средство, което позволява отчитане от 0,850 до 1,050 за Положителния Контролен Серум, когато стойността на PBST Конотрола се извади от стойноста на Положителния Контролен Серум.
ТЕСТ АНТИГЕН
Mycoplasma hyopneumoniae антиген е препарат от цели клетки и се доставя от Fort Dodge Animal Health.
ELISA се провежда както следва: Използват се Dynatech Immulon II Плоскодънни Микротитърни блюда. Една ампула с лиофилизиран Mycoplasma hyopneumoniae антиген от цели клетки се възстановява от десет ml Буфериран с глицин физиологичен разтвор (GBS). Концентрацията на възстановения протеин от Mycoplasma е 20 pg/ml. 100 μΙ © (2 pg) от разредения антиген се прибавят, след това, към всички ямки на блюдото. Блюдото се инкубира при 37°С ± 2°С за не по-малко от един час, след което се прехвърля на 2-7°С за минимум 18 часа и максимум от едена седмица. Блюдата се промиват трикратно с PBST, напояват се една минута между всяко промиване, след което се изцеждат до сухо. Серумите се разреждат до 1:40 в PBST. Положителният контролен серум се включва в четворен размер при всяко блюдо. Обема на пробата на ямка е 100 pl. Серийните Тестови С Серумни Проби и Контролните Серумни Проби се тестват в две повоторения на същото блюдо. Блюдата се инкубират един час при стайна температура и се промиват трикратно с PBST. 100 pl помощно средство на Анти-Миши IgG маркиран с Пероксидаза (Kirkegaard and Perry ), разредено в PBST се прибавят към всички ямки, а те се инкубират 30 минути при стайна температура. Блюдата се промиват четирикратно с PBST. 100 pl Пероксидазен Субстратен Разтвор (ABTS) се прибавят към всички ямки и блюдата се инкубират докато Позитивната Серумна Контрола не достигне OD405 (450) от
0,850 до 1,050, когато устройството е празно срещу PBST Контролни ямки. Блюдата се отчитат и празни срещу PBST ямките. За да бъде валиден теста, серумите от мишки инкубирани с Конотролен бактерин трябва да продуцират минимална средна стояност от 0,5000, а серумите от неваксинираните конторлни мишки не трябва да надвишават максималната средна стойност от 0,1000. Иначе казано, разликата между средените стойности на серумите на мишки инокулирани с Конотролен бактерин и на серумите от Q неваксинираните конторлни мишки трябва да надвишава или да е равен на 0,400.
Средните стойности за Серийните Ваксинирани, за Конролните Ваксинирани и за Контролите са изчислени и определени както следва: за да се счита за задоволителен, Тестовият бактерин трябва да проявява средна стойност на Оптическа Плътност равана на или по-голяма от Конотролата. Или, при използуване на One-Tailed Student’s Test, Тестовият бактерин не трябва да е значително по-нисък (р<0,05 q дверителен интервал) от Контролния бактерин. Която и да е изчислена Т-стойност равана на или по-голяма от 1,686 би означавала значителна разлика между Контролния и Тестовия бактерин, и би била причина Тест бактеринът да се отхвърли. . Която и да е изчислена Т-стойност по-ниска от 1,686 би означавала задоволителна серия. Който и да е тестов бактерин, определен чрез Теста за незадоволителен поради каквато и да е причина, несвързана с ефикастноста на продукта, се тесетва отново, а първоначалният тест се счита за невалиден.
ПРИМЕР 2
ТЕСТ ВАКСИНА:
Ваксината за тестване се приготвя съгласно процедурата, разглеждана в детайли в пример 1, при използване на 5% от смес от способни да метаболизират масла, която включва един или повече въглеводороди на терпен и полиоксиетилен-полиоксипропилен блок съполимер (сквален/Pluronic® L121 смес) и 0,2% полимер на акриловата киселина (Carbopol), като помощно средство, и 2x109 © Mycoplasma hyopneumoniae ДНК клетъчен еквивалент (MHDCE) на доза.
ПРИМЕР 3
Това изследване се определя за демонстриране на четири месечна продължителностн на имунитета (DOI) при прасета, индуцирани чрез едно-дозово ваксиниране с ваксината от пример 2, при три седмична възраст.
При това изследване се провеждат два отделни опита с 0 животни. Всички прасета при двата опита са серо-отрицателни (тигър на антитяло <10) по времето на ваксинирането, което означава, че животните са чувствителни на Mycoplasma hyopneumoniae. Всички прасета в контролната група остават серо-отрицателни преди заразяването. Това означава, че имунният отговор при ваксинираните прасета се дължи на ваксината, а не на каквото и да е влияние на средата.
При първия опит, ваксината от пример 2 се развива заедно с продукт от търговската мрежа, Ingelvac М. hyo® производство на Boehringer Ingelheim (Bl), чрез висока степен на заразяване с вирулентен М. hyopneumoniae (4x105 организми). Двадесет и две (22) прасета на възраст от 18-21 дни се ваксинират с ваксината от пример2 интрамускулно (IM), а осем (8) прасета с Ingelvac М. hyo® [серия 271 032]. Двадесе и две (22) прасета служат като контроли за заразяването, а десет (10) като контроли без заразяване. Прасетата във ваксинираните и заразените контролни групи се заразяват с вирулентен Mycoplasma hyopneumoniae четири месеца след ваксинирането. Прасетата, ваксинирани с ваксината от пример 2 имат средни лезии на белите дробове © от 15,9%, а заразените контролни животни имат средни лезии на белите дробове от 19,6%. Средни лезии на белите дробове в групата, ваксинирана с ваксината от пример2 са по-малко от контролите, въпреки че прасутата са били заразени с повисока доза, отколкото препоръчаната от Iowa State University (ISU), въпреки че разликата не е значителна (р=0,19).подобно, когато търговският продукт, Ingelvac М. hyo® се определя в същата група от животни със същата доза на заразяване се наблюдава подобно ниво на средни лезии на белите дробове © (14,6%). Няма знечими разлики, също така, между групата, ваксинирана с Ingelvac М. hyo® и контролната група (р=0,27) и между групата, ваксинирана с Ingelvac М. hyo® игрупата, ваксинирана с ваксината от пример 2.
При втория опит, вааксината от пример 2 се определя чрез заразяване с вирулентен Mycoplasma hyopneumoniae при степен, препоръчана от ISU (1,0х106 организми) четири месеца след ваксинирането. Двадесет и три (23) прасета се ваксинират с едена доза от ваксината на възраст от 21 дни, 25 прасета служат за контрола на заразяване, а 7 прасета за кантрола без заразяване. Прасетата в контролната група и заразената група се заразяват с вирулентен Mycoplasma hyopneumoniae четири месеца след ваксинирането. Конотролната група има средни лезии на белите дробове от 10,4%, а ваксинираната група има средни лезии на белите дробове от 5,5%. Има значителна разлика между ваксинираната група и контролната група (р=0,031).това означава, че ваксината от пример 2 е ефикасна и стимулираща предпазния имунитет, която може да трае найО малко четири месеца след ваксинирането с единична доза при прасета на възраст от три седмици.
Когато данните, имащи връзка с ваксината от пример 2 от двата опита, се комбинират и анализират, средните лезии на белите дробове на вексиниранат група са значително нониски от контролната група.
В заключение, ваксината от пример2 индуцира предпазен имунитет срещу заразяване с вирулентен Mycoplasma hyopneumoniae четири месеца след ваксиниране q с единична доза при прасета на възраст от три седмици.
ЕКСПЕРИМЕНТАЛНИ ДАННИ
За това изследване се Ппровеждат два отделни опита.
При първия опит, шестдесет и седем (67) прасета се разпределят в четири групи, ато се използува Microsoft Excel рандомизирана програма. Двадесет и четири (24) прасета се ваксинират с единчна доза от ваксина, приготвена съгласно пример 2 интрамускулно (IM) на възраст от 18-21 дни. Двадесет и четири (24) прасета служат като контроли за заразяването, а десет (10) като контроли без заразяване.
Девет прасета се ваксинират IM с търговския продукт Ingelvac М. hyo® [серия 271 032, производство на Boehringer Ingelheim (Bl)], съгласно инструкциите за експроатация. Пет прасета (две прасета ваксинирани с ваксината от пример 2, едно ваксинирано BI ваксина и две контролни) умират по време на ваксинационния период на задържане, поради причини несвързани с ваксинирането. Осотаналите прасета във ваксинираната група и заразената контролна група се заразяват с 14 ml вирулентен Mycoplasma hyopneumoniae (1,4x105 организми) четири месеца след ваксинирането. На прасетата от всичките четири групи се прилага евтаназия 30 дни след заразяването и се установяват лезиите на белите дробове при всяко прасе от опита.
При втория опит, двадесет и пет (25) прасета се ваксинират ΙΜ с единична доза ваксина, изготвена съгласно пример 2, при възраст от 21 дни. Двадесет и пет (25) прасета служат за контроли за заразяване, а десет (10) сбужат за контроли без заразяване. Две прасета умират поради причини не свързани с ваксинирането, а едно прасе по погрешка се продава по време на периодана задържане на ваксинирането. Останалите прасета в заразената и ваксинираната контролни групи се заразяват с 10 ml вирулентен Mycoplasma hyopneumoniae (1,0x106 организми) четири месеца сле д ваксинирането. Две прасета умират през наблюдателния период след заразяването , пореди причини не свързани с ваксинирането/заразяването. Останалите прасета във всички групи се подлагат на евтанизия 30 дни след заразяването се установяват лезиите на белите дробове за всяко прасе от опита.
ВАКСИНИРАНЕ
На всяко прасе от ваксинираната група се дават 2 ml-ова доза от тестваната ваксина IM отстрани на врата.
ЗАРАЗЯВАНЕ И АУТОПСИЯ:
Вирулентният суров продукт от Mycoplasma hyopneumoniae за заразяване, замразен (-70°С) хомогенат от бял дроб, се изготвят от Dr. Eileen Thacker от Iowa State University (ISU). Потвърждава се, че суровият продукт за Q заразяване и съдържа приблизително 107 Mycoplasma hyopneumoniae организми на ml. Препоръчителната доза за заразяване е 10 ml от 1:100 разреден суров продукт (т.е., 1,0 х 106 организми).
Прасетата във ваксинираните и заразените контролни групи при първия опит се заразяват с 14 ml от 1:100 разреден суров продукт (т.е., 1,4 х 106 организми). Прасетата при втория опит се заразяват с 10 ml от 1:100 разреден суров продукт (т.е., 1,0x106 организми)., както се препоръчва.
ОВ деня на заразяването, хомогенатът се размразява бързо под гореща вода и се разрежда съгласно препоръките от ISU, при използуване на стерилна растежна среда за Mycoplasma hyopneumoniae. Прасетата се успокояват със смес от Xylazine-Ketamine-Telazol™, състояща се от 50 mg/ml Xylazine, 50 mg/ml Ketamine и 100 mg/ml Telazol™ . анестетичната смес се прилага IM при 0,01-0,02 ml/lb телесно тегло. На всяко прасе му се дава единична 14 ml (парви опит) или 10 ml доза (втори опит) от продукта за заразяване, интратрахеално. За да се подсигури правилното разполагане на иглата се пропуска въздух в спринцовката преди прилагането на заразяващата доза. Не ваксинираните не заразени контролни прасета се държат в отделни помещения и не се заразяват.
дни след заразяването (DPC) всички прасета се подлагат на евтаназия. Отстраняват се белите дробаве и се преброяват големите белодробни лезии за всяко, с придобитите знания от тестовите групи.
С СЪБИРАНЕ НА ПРОБИ И ТЕСТВАНЕ:
Събират се кръвни проби от всички прасета в деня на ваксинирането (0 DPV), един месец след ваксинирането (1 MPV), 4 MPV/0 DPC и 30 DPC за серумни антитела срещу Mycoplasma hyopneumoniae, както се откриват с компетитивна ELISA комплект (произведен от DAKO Co.), серумните проби се съхраняват при -20°С преди началото на теста.
АНАЛИЗ НА ДАННИТЕ:
Броят на белодробните лезии се сравнява между вакасинираните и не ваксинираните групи чрез анализ на варианса (ANOVA). Броят на белодробните лезии се транформира с arcsine, за подобряване на разпределението на остатъците.
РЕЗУЛТАТИ И КОМЕНТАРИ:
СЕРОЛОГИЯ: Всички прасета от двата опита се тестват за серумни антитела срещу Mycoplasma hyopneumoniae чрез търговски ELISA тест комплект, при използуване на 1:10 разреждане на всички тестове. Всички прасета са серонегативни (титър на антитяло<10) по време на ваксинирането, което означава, че животните са чувствителни към Mycoplasma hyopneumoniae. Всички прасета в контролните групи остават серонегативни преди заразяването. Това означава, че имунният отговор при ваксинираните прасета се дължи на ваксината, а не на външни фактори.всички прасета във ваксинираните групи и повечето прасета в заразените контролни групи (18 от 22 прасета при първия опит и 15 от 25 при втория опит) серо-конвертирани на С Mycoplasma hyopneumoniae след заразяването, докато всички не заразени животни остават серонегативни. Това означава, че заразяването е специфично за Mycoplasma hyopneumoniae. Серологичният статус на тези животни е обобщен в таблица 1.
ТЕСТВАНЕ НА ИМУНОГЕННОСТ ПРИ ПЪРВИЯ ОПИТ: Първият опит се провежда за определяне дали ваксината от пример 2 би могла да стимулира силен имунитет, който да предпазва от по-високи степени на заразяване, отколкото препоръчителните от ISU четири месеца след q ваксинирането. Този опит сравнява, също така, ваксината от пример 2 с намиращата се в търговската мрежа, Ingelvac М. hyo®, за нейната способност да стимулира предпазния имунитет четири седмици след ваксинирането.
Двадесет и две прасета, ваксинирани с FDAH Suvaxyn МН-One и осем прасета с лицензиран продукт, Ingelvac М. hyo® серия 271 032, се заразяват с 10 ml от 1,4 х 106 организми на прасе, от материала за заразяване (1,0х106 организми на прасе се препоръчва от ISU, виж раздел
5.5).двадесет и две прасета служат като контроли за заразяване, а 10 прасета, като не заразени контроли.
Процентът на белодробни лезии са обобщени в таблица 2. прасетата, ваксинирани с ваксината от пример 2 имат среден размер на белодробни лезии от 15,9%, а заразените контролни прасета имат среден размер на белодробни лезии от 19,6%. Белодробните лезии в групата, ваксинирана с ваксината от пример 2 са по-малко от контролната група, даже когато прасетата са били заразени с по-висока доза Mycoplasma hyopneumoniae. Въпреки това, разликата е незначителна (р=0,19). Подобно, когато продуктът от търговската мрежа, Ingelvac М. hyo® се определя в същата група животни със същата доза на заразяване, се наблюдава подобна степен на белодробни лезии (14,6%). Няма значима разлика между групата ваксинирана с Ingelvac М. hyo® и контролната група (р=0,27) и между групата ваксинирана с Ingelvac М. hyo® и групата ваксинирана с ваксината от пример 2 (р=0,88).
Въпреки че, се регистрира незначително намаление на бройката на лезиите в групата, получаваща ваксината от пример 2, данните, получени при този опит предполагат, че по-високата доза на заразяване (1,4 х 106 организми), използувана при този опит, е най-вероятно поразителна, даже и за имунитета на прасета, стимулирани с продукта Ingelvac М. hyo® от търговската мрежа. Степента на заразяване е, найвероятно, не подходяща за изследването за определяне размерите на ваксиниране/заразяване на 20-25 животни, въпреки че с по-големи групи е възможно да се докаже тази значимост.
ТЕСТВАНЕ НА ИМУНОГЕННОСТ ПРИ ВТОРИЯ ОПИТ:
Прасетата при ваксинираните и заразените контролни групи при втория опит се определят с доза на заразяване (1,0 х 106 организми), както се препоръчва от ISU, четоро месеца след ваксинирането, за да се покаже четири месечно DOI. Процентът на белодробни лезии се обобщава в таблица 3. контролната група има среден брой белодробни лезии от 10,4%. Ваксинираната група е със среден брой белодробни лезии от 5,5%.съществува една значителна разлика между ваксинираните и контролните групи (р=0,031). Това означава, че ваксината от пример 2 е ефикасна при стимулиране предпазния имунитет, което може да се запази поне четири месеца след прилагане на единична доза , при прасета на възраст от три седмици.
ОЦЕНЯВАНЕ НА КОМБИНИРАНИТЕ РЕЗУЛТАТИ ОТ ДВАТА ОПИТА:
Докато двата опита се различават значително, действието от опитите върху групите не е знечителен. размерът на ефекта от група е подобен между двата опита. Следователно, ефектът върху групите би могъл да се оцени без да се взима предвид опита. Щом анализът на целия модел показва, че взаимовръзката между група и опит е незначителна, това поддържа схващането, че ефектът на група е същия при двата опита и оправдава комбинирането на данните от двата опита в един единствен анализ. В такъв случай, когато данните отнасящи се до ваксината от пример 2 от двата опита се комбинират и arcsine трансформирайте променливи за белодробни лезии се анализират с група и опит, като независими променливи (редуциран модел), групата е статистически значима (р=0,013).
ТАБЛИЦА 1
Обобщение на серологичния статус за Mycoplasma hyopneumoniae при контролни и ваксинирани прасета
Първи опит положителен/отрицателен (1:10) при
| ГРУПА | Брой прасета | ODPV | -1DPC | 30DPC |
| FDAH ваксина | 22 | 0/22 | 0/22 | 22/22 |
| BI ваксина | 8 | 0/8 | 4/8 | 8/8 |
| Контрола заразяване | 22 | 0/22 | 0/22 | 18/22 |
| Незаразена контрола | 10 | 0/10 | 0/10 | 0/10 |
Втори опит положителен/отрицателен (1:10) при
| ГРУПА | Брой прасета | ODPV | -1DPC | 30DPC |
| FDAH ваксина | 23 | 0/23 | 6/23 | 23/23 |
| Контрола | 25 | 0/25 | 0/25 | 14/25 |
| Незаразена контрола | 7 | 0/7 | 0/7 | 0/7 |
ТАБЛИЦА 2
Обобщение на процента на белодробни лезии при първия опит (свръхдоза*)
| ГРУПА | Брой прасета | Среден брой белодробни лезии | Р-стойност |
| FDAH ваксина | 22 | 15,90% | 0,19** |
| BI ваксина | 8 | 14,60% | 0,27*** |
| Контрола | 22 | 19,60% | |
| Незаразена контрола | 10 | 0% | 0,88**** |
* Прасетата се заразяват с 1,4 х 106 организми на прасе (ISL препоръчителна доза 1,0 х 106 организми на прасе) ** Сравнение между група ваксинирана с FDAH и контролна група *** Сравнение между група ваксинирана с BI и контролна група **** Сравнение между група ваксинирана с BI и група ваксинирана с FDAH
ТАБЛИЦА 3
Обобщение на процента на белодробни лезии при втория опит (препоръчителна доза)
| ГРУПА | Брой прасета | Среден брой белодробни лезии | Р-стойност |
| FDAH ваксина | 23 | 5,50% | 0,031** |
| Контрола | 25 | 10,40% | |
| Незаразена контрола | 7 | 0,77% |
* Прасета заразени с препоръчаната от ISU доза (1,0 х 106 организми на прасе) ** Сравнение между група ваксинирана с FDAH и контролна група
ПРИМЕР 3
Оценяване на дълготрайния имунитет индуциран от състав на ваксината от изобретението срещу вирулентно заразяване шест месеца след прилагане на единчна © доза
При използуване на, по същество същата процедура, описана в примери 1 и 2 и при използуване на количествата, посочени по-долу, се приготвя тест ваксина А.
Тест ваксна А
Количества за 1,000,000 дози (2 ml всяка)
| Концентрат на Mycoplasma (>1,Ox1O10 MHDCE/ml) | 1,200,000 ml | 60,0 |
| сквалан/Pluronic L121 смес | 200,000 ml | 10,0 |
| Carbopol (2% w/v във вода) | 200,000 ml | 10,0 |
| Разтвор на Тимерозал 1% w/v във вода и EDTA (тетранатриева сол) 7 w/v% | 18,000 ml | 0,9 |
| Стерилен физиологичен разтвор | 382,000 ml | 19,1 |
pH на серията се довежда до 7,0 ± 0,2.
MHDCE = Mycoplasma hyopneumoniae ДНК клетъчни еквиваленти
ОБОБЩАВАНЕ
Трийсет и три 21-дневни прасета се приемат за настоящото оценяване. Двадесет прасета се ваксинират с езна доза от ваксина А интрамускулно (IM) на възраст от три седмици, десет прасета служат за не ваксинирани контроли, а три прасета служат за не заразени от околната среда контроли.
Всички прасета са серонегативни (титър на антитела <10) по времето на ваксинирането, което означава, че животните са чувствителни на Mycoplasma hyopneumoniae. Всички животни в контролната група остават серонегативни прези заразяването. Това означава, че имунният отговор във ваксинираните прасета се дължи на ваксината, а не на каквото и да е излагане на заобикалящата среда.
Шест месеца след ваксинирането, 20 вакасинирани прасета и 10 не ваксинирани контролни прасета се заразяват с вирулентен Mycoplasma hyopneumoniae (1,0 х 106 организми на прасе). Три прасета служат за не заразени контроли. Ваксинираните прасета имат среден брой белодробни лезии от 3,6%, а заразените контролни прасета имат среден брой белодробни лезии от 14,6%. Броят на белодробни лезии във ваксинираната група е значително по-малък от този в контролните групи (р=0,0215).
Данните, получени при оценяването показват, че тест ваксина А индуцира дълготраен предпазен имунитет срещу заразяване с вирулентен Mycoplasma hyopneumoniae шест месеца след прилагане на единична доза на ваксиниране.
ПРОЕКТИРАНЕ НА ЕКСПЕРИМЕНТА
Трийсет и три 21-дневни прасета се определят рандомизирано в три групи (ваксинирана група, заразена контролна група и не заразена от околната среда група), при използуване на Microsoft Excel рандомизирана програма на литър. Двадесет (20) прасета се ваксинират с единчна доза от ваксина А, интрамускулно (IM) на възраст от 3 седмици. Десет (10) прасета служат като контроли за заразяването, а три прасета за незаразени от околната среда контроли. Прасетата от ваксинираната контролна група и от заразената контролна група се заразяват с 10 ml вирулентна култура на Mycoplasma hyopneumoniae (1,0 х 106 организми) на прасе, шест месеца след ваксинирането. Три не ваксинирани прасета се използват за не заразени контроли. Заразените прасета и не заразените контроли са подлагат на евтаназия 25 дни след заразяването и се преброяват белодробните лезии за всяко прасе.
На всяко прасе от ваксинираните групи се прилагат 2 mlдоза от тест ваксината IM отстрани на врата.
ЗАРАЗЯВАНЕ И АУТОПСИЯ:
Вирулентният Mycoplasma hyopneumoniae суров продукт за заразяване, замразен (<-70°С) хомогенат от бял дроб, се изготвят от Dr. Eileen Thacker от Iowa State University (ISU). Потвърждава се, че суровият продукт за заразяване е чист и съдържа приблизително 107 Mycoplasma hyopneumoniae организми на ml.
Прасетата се заразяват с 10 ml от 1:100 разреден суров продукт (т.е., 1,0 х 106 организми).
*
В деня на заразяването, хомогенатът се размразява бързо под гореща вода и се разрежда съгласно препоръките на ISU, при използуване на стерилна растежна среда за Mycoplasma hyopneumoniae. Прасетата се успокояват със смес от Xylazine-Ketamine-Telazol™, състояща се от 50 mg/ml Xylazine, 50 mg/ml Ketamine и 100 mg/ml Telazol™. Анестетичната смес се прилага IM при 0,01-0,02 ml/lb телесно тегло. На всяко прасе му се прилага единична 10 ml доза от продукта за заразяване (1,0 х 106 организми), © интратрахейално. За да се подсигури правилното разполагане на иглата се пропуска въздух в спринцовката преди прилагането на заразяващата доза. Не ваксинираните не заразени контролни прасета се държат в отделни помещуния и не се заразяват.
дни след заразяването (DPC) всички прасета се подлагат на евтаназия. Отстраняват се белите дробаве и се оценяват големите белодробни лезии, както е описано в пример 3..
СЪБИРАНЕ НА ПРОБИ И ТЕСТВАНЕ:
Събират се кръвни проби от всички прасета в деня на ваксинирането (0 DPV), 35 DPV, -1 DPC и 26 DPC за да се определят серумните антитела срещу Mycoplasma hyopneumoniae, както се откриват чрез компетитивен ELISA комплект (произведен от DAKO Co.). Серумните проби се съхраняват при <-20°С преди началото на теста.
АНАЛИЗ НА ДАННИТЕ:
Броят на белодробните лезии се сравнява между вакасинираните и контролните групи чрез еднопосочен ANOVA. Броят на белодробните лезии се транформира с arc sine, за подобряване на разпределението на остатъците. При положение, че приемането на нормално броя белодробни лезии се поставя под въпрос, и двете, броя на белодробни лезии и броя на arc sine трансформираните лезии се анализира чрез Wilcoxon Rank Sum тест. Степента на значимост се усутановява на р<0,05. резултатите от непараметричния Wilcoxon Rank Sum тест се използват за цели на докладване.
РЕЗУЛТАТИ И КОМЕНТАРИ:
СЕРОЛОГИЯ: Всички прасета се тестват за серумни антитела срещу Mycoplasma hyopneumoniae чрез търговски ELISA тест комплект, при използуване на 1:10 разреждане на всички тестове. Пробите с резултатите от тестовете подчинени на инструкциите от комплекта се третират като положителни при анализа на данните. Всички прасета са серонегативни (титър на антитяло<10) по време на ваксинирането, което означава, че животните са чувствителни към Mycoplasma hyopneumoniae. Всички прасета в контролните групи остават серонегативни преди заразяването. След заразяването, петнайсет от двайсет ваксинирани (15/20) стават сароположителни към Mycoplasma hyopneumoniae поне веднъж (проби, събрани при 35 DPV и -1DPC). Това означава, че имунният отговор при ваксинираните прасета се дължи на ваксината, а не на външни фактори. Всички ваксинирани
4.
прасета и четири от десет прасета в заразените контролни групи стават сероположителни към Mycoplasma hyopneumoniae след заразяването, докато всички не заразени животни остават серонегативни. Серологичният статус на тези животни е обобщен в таблица 4.
БРОЙ БЕЛОДРОБНИ ЛЕЗИИ
Двайсет прасета, ваксинирани с Тест Ваксина А и десет невааксинирани контролни прасета се заразяват с вирулентен Mycoplasma hyopneumoniae (1,0 χ 106 организми на прасе). Шест месеца след ваксинирането. Три прасета служат за незаразени контроли. Осем от двайсет и две ваксинирани (40%) не развиват белодробни лезии след заразяване, докато в контролната група само едно от 10 прасета (10%) не развива белодробни лезии. Процентите на белодробни лезии са обобщени в таблица 5. Ваксинираните прасета имат среден брой на белодробни лезии от 3,6%, а заразените контролни прасета имат среден брой белодробни лезии от 14,6%. Белодробните лезии при ваксинираната група са значително по-малко от контролите (р=0,0215).
ТАБЛИЦА 4
Серологичен статус към Mycoplasma hyopneumoniae на прасетата при изследването*
Брой позитивни (1:10)/общия брой
| Група | Лечение | Брой прасета | 0DPV** | 35DPV | -1DPC*** | 26DPC |
| 1 | Ваксина/ заразяване | 20 | 0/20 | 9/20 | 12/20 | 20/20 |
| 2 | Кантрола/ Заразяване | 10 | 0/10 | 0/10 | 0/10 | 4/10 |
| 3 | Контрола/ заразяване | 3 | 0/3 | 0/3 | 0/3 | 0/3 |
* Серумните проби се тестват за серумни антитела към Mycoplasma hyopneumoniae чрез ELISA, при използуване на търговски комплект.
Всички проби се тестват при серумно разреждане от 1:10. резултатите се интерпретират според инструкциите на комплекта.
Съмнителните резултати от пробите при 1:10 се приемат за положителни.
** DPV = дни след ваксиниране ***DPC = дни след заразяване.
ТАБЛИЦА 5
Обобщение на броя на белодробни лезии (%) при прасета, заразени с Mycoplasma hyopneumoniae и незаразени контроли
Среден %
| Група | Лечение | Брой прасета | Брой белодроб ни лезии | Станда ртно отклоне ние | Най-ниски 95% CL* за средни | Найвисоки 95% CL за средни | Р стойност** |
| 1 | Ваксин а/ заразя ване | 20 | 3,6 | 7,6 | 0,07 | 7,19 | 0,0215 |
| 2 | Кантро ла/ Заразя ване | 10 | 14,6 | 20,0 | 0,33 | 28,94 | |
| 3 | Контро ла/ заразя ване | 3 | 1,8 | 1,8 | -2,67 | 6,27 |
* CL ** Р стойността се образува от сравнението на групи 1 и 2.
Както може да се види от данните, показани на таблици 4 и 5, Тест Ваксина А индуцира предпазен имунитет срещу залазяване с вирулентен Mycoplasma hyopneumoniae шест месеца след прилагане на единчна доза на прасета, ваксинирани на възраст от три седмици.
Claims (18)
- ПАТЕНТНИ ПРЕТЕНЦИИ1. Използуване на Mycoplasma hyopneumoniae бактеририн при метод за производство на състав на ваксина срещу заболяване причинено от Mycoplasma hyopneumoniae, в което се използва имунизиращо количество Mycoplasma hyopneumoniae бактерии;помощно средство, включващо полимер на акриловата киселина и смес от способни да метаболизират масла и полиоксиетилен-полиоксипропилен блок съполимер; и фармацевтично приемлив носител, който при прилагане на единчна доза от състава на ваксината предизвиква предпазен имунитет от Mycoplasma hyopneumoniae.
- 2. Използуване съгласно претенция 1, при което сместта на помощно средство се състои от полимер на акриловата киселина и смес от способни да метаболизират масла, включваща един или повече въглеводороди на терпен и полиоксиетилен-полиоксипропилен блок съполимер в съотношение 1:25 до 1:50 на полимера на акриловата киселина към метаболизиращите масла/смес на полиоксиетилен-полиоксипропилен блок съполимер.
- 3. Използуване съгласно претенция 1, на смес на помощно средство, включващо приблизително 1-25% v/v състав на ваксината.
- 4. Използуване съгласно претенция 3, където полимерът на акриловата киселина присъства в крайна концентрация от приблизително 1% v/v и въглеводородите на терпена/смес от полиоксиетилен-полиоксипропилен блок съполимер присъства в крайна концентрация от приблизително 5% до 10% v/v.
- 5. Използуване съгласно претенция 3, където сместта на помощно средство включва приблизително 2%-15% от състава на ваксината.
- 6. Използуване съгласно претенция 5, където сместта на помощно средство включва приблизително 5%-12% от състава на ваксината.
- 7. Използуване съгласно претенция 1, където способното да метаболизира масло е сквален.
- 8. Използуване съгласно претенция 6 или 7, където полимерът на акриловата киселина е Carbopol.
- 9. Използуване съгласно коя да е претенция от 1-8, включващо освен това бактерии, избран от група състояща се от бактериите Harmonphilus parasuis, Pasteurella multiocida, Streptococcum suis, Actinobacillus pleuropneumoniae, Bordatella bronchiseptica, Salmonella choleraesuis и лептоспира.
- 10. Използуване на състав на ваксинва срещу заболяване, причинено от Mycoplasma hyopneumoniae върху животно при метод за производство на състав на ваксина срещу заболяване причинено от Mycoplasma hyopneumoniae, при което се прилага върху посоченото животно състав на ваксина включващ имунизиращо количество Mycoplasma hyopneumoniae бактерии;помощно средство, включващо полимер на акриловата киселина и смес от способни да метаболизират масла и полиоксиетилен-полиоксипропилен блок съполимер; и фармацевтично приемлив носител, който при прилагане на единчна доза от състава на ваксината предизвиква предпазен имунитет от инфекция с Mycoplasma hyopneumoniae.
- 11. Използуване съгласно претенция 10, където имунизиращото количество от посочената бактерия е приблизително 1х108 до 3x1011 MHDCEL/mL.
- 12. Използуване съгласно претенция 11, където имунизиращото количество от посочената бактерия е © приблизително 1 х109 до 3x109 MHDCEL/mL.
- 13. Използуване съгласно претенция 10, където начинът на прилагане на посоченото прилагане е интрамускулно, подкожно, интраперитонеално аерозолно, орално или интраназално.
- 14. Използуване съгласно претенция 10, където сместта на помощното средство включва полимер на акриловата киселина и смес от способни да метаболизират масла, които съдържат един или повече въглеводороди на терпена и ф полиоксиетилен-полиоксипропилен блок съполимер, присъстващ в крайна концентрация приблизително 1-25% v/v.
- 15. Използуване съгласно претенция 14, където полимерът на акриловата киселина е Carbopol
- 16. Използуване съгласно претенция 14, където способното да метаболизира масло на сместа на помощното средство е въглеводород на терпена, избран измежду група от сквален и сквалан.
- 17. Използуване съгласно коя да е претенция от 10-16, включващо освен това съвместно прилагане на поне един допълнителен бактерии, избран от група състояща се от бактериите Haemonphilus parasuis, Pasteurella multiocida, Streptococcum suis, Actinobacillus pleuropneumoniae, Bordatella bronchiseptica, Salmonella choleraesuis и лептоспира.
- 18. Използуване на инактивиран Mycoplasma hyopneumoniae, на способни да метаболизират масла, полиоксиетилен-полиоксипропилен блок съполимер и полимер на акриловата киселина под формата на масло във вода емулсия.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US25663700P | 2000-12-19 | 2000-12-19 | |
| PCT/US2001/047865 WO2002049666A2 (en) | 2000-12-19 | 2001-12-11 | Mycoplasma hyopneumoniae bacterin vaccine |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| BG107898A true BG107898A (bg) | 2004-08-31 |
| BG66213B1 BG66213B1 (bg) | 2012-05-31 |
Family
ID=22972978
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| BG107898A BG66213B1 (bg) | 2000-12-19 | 2003-06-11 | Ваксина срещу mycoplasma hyopneumoniae бактерин |
Country Status (27)
| Country | Link |
|---|---|
| US (4) | US20020131980A1 (bg) |
| EP (1) | EP1343525B1 (bg) |
| JP (2) | JP5074656B2 (bg) |
| KR (1) | KR100874119B1 (bg) |
| CN (1) | CN1296095C (bg) |
| AR (1) | AR033410A1 (bg) |
| AT (1) | ATE359813T1 (bg) |
| AU (2) | AU2899302A (bg) |
| BG (1) | BG66213B1 (bg) |
| BR (1) | BRPI0116249B1 (bg) |
| CY (1) | CY1106669T1 (bg) |
| CZ (1) | CZ307075B6 (bg) |
| DE (1) | DE60127994T2 (bg) |
| DK (1) | DK1343525T3 (bg) |
| ES (1) | ES2283452T3 (bg) |
| HR (1) | HRP20030585B1 (bg) |
| HU (1) | HU227431B1 (bg) |
| ME (1) | ME00570A (bg) |
| MX (1) | MXPA03005357A (bg) |
| MY (1) | MY129765A (bg) |
| NZ (1) | NZ526904A (bg) |
| PL (1) | PL211174B1 (bg) |
| PT (1) | PT1343525E (bg) |
| RS (1) | RS51536B (bg) |
| TW (1) | TWI308872B (bg) |
| WO (1) | WO2002049666A2 (bg) |
| ZA (1) | ZA200305545B (bg) |
Families Citing this family (36)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| MY129765A (en) * | 2000-12-19 | 2007-04-30 | Wyeth Corp | Improved mycoplasma hyopneumoniae bacterin vaccine |
| US7018638B2 (en) * | 2000-12-19 | 2006-03-28 | Wyeth | Mycoplasma hyopneumoniae bacterin vaccine |
| GB0400264D0 (en) * | 2004-01-07 | 2004-02-11 | Polytherics Ltd | Complexes |
| UA95602C2 (ru) | 2004-12-30 | 2011-08-25 | Берингер Ингельхейм Ветмедика, Инк. | Иммуногенная композиция цвс2 и способы приготовления такой композиции |
| US7700285B1 (en) | 2005-12-29 | 2010-04-20 | Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. | PCV2 immunogenic compositions and methods of producing such compositions |
| US7833707B2 (en) | 2004-12-30 | 2010-11-16 | Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. | Methods of overexpression and recovery of porcine circovirus type 2 ORF2 |
| US8834891B2 (en) | 2005-03-14 | 2014-09-16 | Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. | Immunogenic compositions comprising Lawsonia intracellularis |
| DK1968630T5 (en) | 2005-12-29 | 2018-08-13 | Boehringer Ingelheim Vetmedica Inc | MULTIVALENT PCV2 IMMUNOGENIC COMPOSITIONS. |
| SG170792A1 (en) | 2005-12-29 | 2011-05-30 | Boehringer Ingelheim Vetmed | Use of a pcv2 immunogenic composition for lessening clinical symptoms in pigs |
| EP2101815A4 (en) | 2006-12-11 | 2010-10-06 | Boehringer Ingelheim Vetmed | Effective method of treatment of porcine circovirus and lawsonia intracellularis infections |
| WO2008076915A2 (en) | 2006-12-15 | 2008-06-26 | Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. | Treatment of pigs with pcv2 antigen |
| EP1941903A1 (en) | 2007-01-03 | 2008-07-09 | Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh | Prophylaxis and treatment of PRDC |
| EP1958644A1 (en) | 2007-02-13 | 2008-08-20 | Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh | Prevention and treatment of sub-clinical pcvd |
| US7829274B2 (en) | 2007-09-04 | 2010-11-09 | Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. | Reduction of concomitant infections in pigs by the use of PCV2 antigen |
| WO2009061798A1 (en) | 2007-11-06 | 2009-05-14 | Wyeth | Mycoplasma hyopneumoniae avirulent -adjuvanted live vaccine |
| CN101980720A (zh) | 2008-01-23 | 2011-02-23 | 贝林格尔.英格海姆维特梅迪卡有限公司 | Pcv2猪肺炎支原体致免疫组合物及其制备方法 |
| US8444989B1 (en) | 2008-04-18 | 2013-05-21 | Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh | One dose vaccination against mycoplasma infections of pigs |
| JP5627581B2 (ja) * | 2008-06-25 | 2014-11-19 | ブラーシュ・バイオテック・エルエルシー | ソマトスタチン免疫原性増進のための組成物および方法 |
| CN102458462B (zh) * | 2009-05-19 | 2014-03-19 | 澳大利亚生物资源公司 | 一种温度敏感的猪肺炎支原体疫苗株及其应用 |
| TWI583403B (zh) | 2009-06-04 | 2017-05-21 | 國立感染症研究所 | 黴漿菌感染症用疫苗 |
| AR078253A1 (es) | 2009-09-02 | 2011-10-26 | Boehringer Ingelheim Vetmed | Metodos para reducir la actividad antivirica en composiciones pcv-2 y composiciones pcv-2 con mejor inmunogenicidad |
| KR101746880B1 (ko) * | 2009-09-10 | 2017-06-14 | 메리얼 인코포레이티드 | 사포닌-함유 면역보강제를 포함하는 신규 백신 제형 |
| SG184804A1 (en) | 2010-04-30 | 2012-11-29 | Temasek Life Sciences Lab Ltd | Universal vaccine against h5n1 lineages |
| WO2013149017A1 (en) * | 2012-03-28 | 2013-10-03 | Kansas State University Research Foundation | Vaccine adjuvant |
| UA114503C2 (uk) | 2012-04-04 | 2017-06-26 | Зоетіс Сервісіз Ллс | Комбінована вакцина pcv та mycoplasma hyopneumoniae |
| US9120859B2 (en) | 2012-04-04 | 2015-09-01 | Zoetis Services Llc | Mycoplasma hyopneumoniae vaccine |
| UA114504C2 (uk) | 2012-04-04 | 2017-06-26 | Зоетіс Сервісіз Ллс | Комбінована вакцина pcv, mycoplasma hyopneumoniae та prrs |
| CN103623400B (zh) * | 2012-08-24 | 2016-08-17 | 普莱柯生物工程股份有限公司 | 抗猪支原体肺炎、传染性胸膜肺炎疫苗组合物及制备方法 |
| US9878027B2 (en) * | 2012-12-28 | 2018-01-30 | Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh | Immunogenic composition comprising mycoplasma antigens |
| EP2938747B1 (en) | 2012-12-28 | 2019-05-01 | Boehringer Ingelheim Vetmedica GmbH | Method of making a mycoplasma vaccine |
| CN104338128B (zh) * | 2013-07-31 | 2017-09-05 | 普莱柯生物工程股份有限公司 | 一种疫苗组合物及其制备方法和应用 |
| CN105658660A (zh) | 2013-10-02 | 2016-06-08 | 勃林格殷格翰动物保健公司 | Pcv2 orf2蛋白变体和由其组成的病毒样颗粒 |
| WO2017196318A1 (en) * | 2016-05-11 | 2017-11-16 | Phibro Animal Health Corporation | A composition comprising antigens and a mucosal adjuvant and a method for using |
| CA3082959A1 (en) * | 2017-12-04 | 2019-06-13 | Intervet International B.V. | Canine lyme disease vaccine |
| CN108324941A (zh) * | 2018-04-03 | 2018-07-27 | 林淑卿 | 猪疾病疫苗用佐剂及其制备方法 |
| CN117100851A (zh) * | 2023-10-23 | 2023-11-24 | 成都依思康生物科技有限公司 | 一种佐剂、疫苗组合物及其制备方法和应用 |
Family Cites Families (30)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US2909462A (en) * | 1955-12-08 | 1959-10-20 | Bristol Myers Co | Acrylic acid polymer laxative compositions |
| US3790665A (en) * | 1968-02-23 | 1974-02-05 | Haver Lockhart Labor Inc | Injectable adjuvant,method of preparing same and compositions including such adjuvant |
| US4606918A (en) * | 1983-08-22 | 1986-08-19 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Polyoxypropylene-polyoxyethylene block polymer based adjuvants |
| JPH0832637B2 (ja) * | 1985-02-14 | 1996-03-29 | アクゾ・エヌ・ヴエー | 合成免疫原 |
| ZA881694B (en) | 1987-03-17 | 1988-09-06 | Akzo N.V. | Adjuvant mixture |
| EP0315153B1 (en) * | 1987-11-03 | 1994-05-11 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Vaccine adjuvant |
| US5240706A (en) * | 1989-04-07 | 1993-08-31 | Ml Technology Ventures, L.P. | Intranasal administration of Mycoplasma hyopneumoniae antigen |
| US6113916A (en) * | 1990-05-29 | 2000-09-05 | American Cyanamid Company | Method of enhancing cell mediated immune responses |
| ES2112274T5 (es) | 1990-05-29 | 2006-03-01 | Wyeth Holdings Corporation | Vacuna contra la pneumonia en cerdos y metodo para la preparacion de la misma. |
| US5695769A (en) * | 1990-06-13 | 1997-12-09 | Pfizer Inc. | Pasteurella multocida toxoid vaccines |
| US5565205A (en) * | 1990-08-16 | 1996-10-15 | Solvay Animal Health, Inc. | Inactivated Mycoplasma hypopneumoniae bacterin and method of use thereof |
| EP0669971B1 (en) | 1991-11-15 | 2003-03-19 | Pfizer Inc. | Method of producing gram-negative bacterial vaccines |
| US5338543A (en) * | 1992-02-27 | 1994-08-16 | Ambico, Inc. | Thimerosal inactivated mycoplasma hyopneumoniae vaccine |
| US5534256A (en) * | 1992-07-02 | 1996-07-09 | University Of Saskatchewan | Haemophilus somnus outer membrane protein extract enriched with iron-regulated proteins |
| JP3265095B2 (ja) * | 1993-11-19 | 2002-03-11 | 本田技研工業株式会社 | キャニスタ |
| NZ285324A (en) * | 1994-05-10 | 1998-08-26 | American Home Prod | Vaccine containing modified live bovine respiratory syncytial virus (brsv) with an adjuvant and pharmaceutically acceptable carrier |
| US5820869A (en) * | 1995-06-07 | 1998-10-13 | American Home Products Corporation | Recombinant raccoon pox viruses and their use as an effective vaccine against feline immunodeficiency virus infection |
| DE19601754A1 (de) * | 1996-01-19 | 1997-07-24 | Hoechst Ag | Dictyocaulus viviparus Antigen zur Diagnose des Lungenwurmbefalls und zur Vakzinierung |
| US5846735A (en) * | 1996-04-18 | 1998-12-08 | University Of Iowa Research Foundation | Hepatitis C virus Fc-binding function |
| CA2274495C (en) * | 1996-12-20 | 2009-06-02 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Uspa1 and uspa2 antigens of moraxella catarrhalis |
| FR2775601B1 (fr) * | 1998-03-03 | 2001-09-21 | Merial Sas | Vaccins vivants recombines et adjuves |
| US6342231B1 (en) * | 1998-07-01 | 2002-01-29 | Akzo Nobel N.V. | Haemophilus parasuis vaccine and diagnostic |
| US6632439B2 (en) * | 1999-09-29 | 2003-10-14 | Novartis Animal Health, Inc. | Fusobacterium necrophorum vaccine and method for making such vaccine |
| US6585981B1 (en) * | 2000-07-27 | 2003-07-01 | Regents Of The University Of Minnesota | Temperature-sensitive live vaccine for Mycoplasma hyopneumoniae |
| US7018638B2 (en) * | 2000-12-19 | 2006-03-28 | Wyeth | Mycoplasma hyopneumoniae bacterin vaccine |
| MY129765A (en) * | 2000-12-19 | 2007-04-30 | Wyeth Corp | Improved mycoplasma hyopneumoniae bacterin vaccine |
| PT1474067E (pt) * | 2001-07-02 | 2008-11-14 | Pfizer Prod Inc | Vacinação numa dose com mycoplasma hyopneumoniae |
| EP1480619B1 (en) * | 2002-03-07 | 2013-08-07 | Biocompatibles UK Limited | Drug carriers comprising amphiphilic block copolymers |
| ITMI20030269A1 (it) * | 2003-02-14 | 2004-08-15 | Advance Holdings Ltd | Sale di cetilpiridino di un agente antiinfiammatorio |
| US8052762B1 (en) * | 2010-09-02 | 2011-11-08 | Kelly Van Gogh, LLC | Compositions for dyeing keratin-containing fibers |
-
2001
- 2001-11-27 MY MYPI20015418A patent/MY129765A/en unknown
- 2001-12-11 ES ES01990123T patent/ES2283452T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2001-12-11 JP JP2002551004A patent/JP5074656B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 2001-12-11 PL PL363220A patent/PL211174B1/pl unknown
- 2001-12-11 EP EP01990123A patent/EP1343525B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-12-11 ME MEP-859/08A patent/ME00570A/xx unknown
- 2001-12-11 AU AU2899302A patent/AU2899302A/xx active Pending
- 2001-12-11 BR BRPI0116249A patent/BRPI0116249B1/pt active IP Right Grant
- 2001-12-11 PT PT01990123T patent/PT1343525E/pt unknown
- 2001-12-11 CN CNB018226345A patent/CN1296095C/zh not_active Expired - Lifetime
- 2001-12-11 AT AT01990123T patent/ATE359813T1/de active
- 2001-12-11 MX MXPA03005357A patent/MXPA03005357A/es active IP Right Grant
- 2001-12-11 NZ NZ526904A patent/NZ526904A/en not_active IP Right Cessation
- 2001-12-11 CZ CZ2003-1721A patent/CZ307075B6/cs not_active IP Right Cessation
- 2001-12-11 DK DK01990123T patent/DK1343525T3/da active
- 2001-12-11 AU AU2002228993A patent/AU2002228993B2/en not_active Expired
- 2001-12-11 KR KR1020037008293A patent/KR100874119B1/ko not_active Expired - Lifetime
- 2001-12-11 RS YUP-493/03A patent/RS51536B/sr unknown
- 2001-12-11 DE DE60127994T patent/DE60127994T2/de not_active Expired - Lifetime
- 2001-12-11 WO PCT/US2001/047865 patent/WO2002049666A2/en not_active Ceased
- 2001-12-11 HU HU0400687A patent/HU227431B1/hu unknown
- 2001-12-11 HR HR20030585A patent/HRP20030585B1/xx not_active IP Right Cessation
- 2001-12-14 TW TW090131039A patent/TWI308872B/zh not_active IP Right Cessation
- 2001-12-18 AR ARP010105861A patent/AR033410A1/es not_active Application Discontinuation
-
2002
- 2002-01-08 US US10/039,383 patent/US20020131980A1/en not_active Abandoned
-
2003
- 2003-06-11 BG BG107898A patent/BG66213B1/bg unknown
- 2003-07-17 ZA ZA200305545A patent/ZA200305545B/en unknown
-
2006
- 2006-08-21 US US11/507,231 patent/US7666439B2/en not_active Expired - Lifetime
-
2007
- 2007-06-21 CY CY20071100827T patent/CY1106669T1/el unknown
-
2008
- 2008-11-13 JP JP2008291001A patent/JP2009073855A/ja active Pending
-
2010
- 2010-01-22 US US12/692,275 patent/US8187588B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2012
- 2012-04-27 US US13/458,541 patent/US9238065B2/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| BG107898A (bg) | ПОДОБР...НА ВАК'ИНА 'Р...(tm)" MYCOPLASMA HYOPNEUMONIAE БАК'...РИН | |
| EP1506006B1 (en) | Improved combined vaccine against mycoplasma hyopneumoniae and porcine viruses | |
| HK1056513B (en) | Improved i mycoplasma hyopneumoniae /i bacterin vaccine |