AR107621A2 - Plantas de algodón con tolerancia a herbicidas y métodos para identificarlas - Google Patents

Abstract

Reivindicación 1: Un método para identificar un evento de elite en una muestra de una planta, un material vegetal, una semilla o un producto que comprende dicho material vegetal, caracterizado porque dicho método comprende amplificar la secuencia blanco de dicho evento de elite entre 100 y 500 bp a partir de un ácido nucleico presente en dichas muestras de una planta, un material vegetal, una semilla o un producto que comprende dicho material vegetal, usando una reacción en cadena de la polimerasa con dos cebadores, donde uno de dichos cebadores reconoce la región circundante 5’ de EE-GH3, donde dicha región circundante 5’ tiene la secuencia de nucleótidos de SEQ ID Nº 1, desde el nucleótido 1 hasta el nucleótido 732, o la región circundante 3’ de EE-GH3, donde dicha región circundante 3’ tiene la secuencia de nucleótidos del complemento de SEQ ID Nº 2, desde el nucleótido 431 hasta el nucleótido 654, y el otro cebador de dicho par de cebadores reconoce una secuencia dentro del transgen que tiene la secuencia de nucleótidos del complemento de SEQ ID Nº 1, desde el nucleótido 733 hasta el nucleótido 1214, o la secuencia de nucleótidos de SEQ ID Nº 2, desde el nucleótido 1 hasta el nucleótido 430, en donde dicho evento de elite comprende: un transgén que comprende un gen quimérico que comprende una enzima 5-enol-piruvilshikimato-3-fosfato sintetasa (EPSPD) tolerante al glifosato como se describe en la patente US 6,566,587, bajo el control de un promotor de un gen de histonas como se describe en US 5,491,288 o US 5,792,930; SEQ ID Nº 1, donde los nucleótidos 1 - 732 de SEQ ID Nº 1 están inmediatamente aguas arriba de y contiguos con dicho transgén y los nucleótidos 733 - 1214 de SEQ ID Nº 1 son ADN del transgén; SEQ ID Nº 2, donde los nucleótidos 431 - 654 de SEQ ID Nº 2 están inmediatamente aguas debajo de y contiguos con dicho transgén, y los nucleótidos 1 a 430 de SEQ ID Nº 2 son ADN del transgén; donde dicho evento de elite está presente en semillas que han sido depositadas en la ATCC bajo el número de depósito PTA-6878. Reivindicación 5: Un par de moléculas aisladas de ADN que es un cebador adecuado para su uso en la detección de un evento de elite de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizado porque una molécula de ADN comprende en su extremo 3’ una secuencia de nucleótidos de 17 nucleótidos consecutivos seleccionados de la secuencia de nucleótidos de SEQ ID Nº 1, desde el nucleótido 1 hasta el nucleótido 732, o una secuencia de nucleótidos de 17 nucleótidos consecutivos seleccionados de la secuencia de nucleótidos del complemento de SEQ ID Nº 2, desde el nucleótido 431 hasta el nucleótido 654, en donde una molécula de ADN comprende en su extremo 3’ una secuencia de nucleótidos de 17 nucleótidos consecutivos seleccionados de la secuencia de nucleótidos del complemento de SEQ ID Nº 1, desde el nucleótido 733 hasta el nucleótido 1214,o la secuencia de nucleótidos de 17 nucleótidos consecutivos seleccionados de la secuencia de nucleótidos de SEQ ID Nº 2, desde el nucleótido 1 hasta el nucleótido 430, en donde al menos uno de dichos cebadores está marcado. Reivindicación 10: Un método para confirmar la pureza de semillas, caracterizado porque dicho método comprende la detección de una región específica para el evento de elite de acuerdo con la reivindicación 1, con un cebador o una sonda específica, que reconoce específicamente la región circundante 5’ o 3’ de dicho evento de elite, en muestras de semillas. Reivindicación 12: Un método para determinar el estado de cigosidad de una planta, un material vegetal o una semilla que comprende el evento elite de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizado porque dicho método comprende amplificar la secuencia blanco de dicho evento de elite entre 100 y 500 bp a partir de un ácido nucleico presente en dicha planta, material vegetal o semilla, usando una reacción. en cadena de la polimerasa con tres cebadores, donde uno de dichos cebadores reconoce la región circundante 5’ de dicho evento de elite, donde dicha región circundante 5’ tiene la secuencia de nucleótidos de SEQ ID Nº 1, desde el nucleótido 1 hasta el nucleótido 732, el segundo de dichos cebadores reconoce específicamente la región circundante 3’ de dicho evento de elite, donde dicha región circundante 3’ tiene la secuencia de nucleótidos del complemento de SEQ ID Nº 2, desde el nucleótido 431 hasta el nucleótido 654, y el tercero de dichos cebadores reconoce una secuencia dentro del transgen que tiene la secuencia de nucleótidos del complemento de SEQ ID Nº 1, desde el nucleótido 733 hasta el nucleótido 1214, o la secuencia de nucleótidos de SEQ ID Nº 2, desde el nucleótido 1 hasta el nucleótido 430. Reivindicación 15: Un método para producir una planta o una semilla de algodón resistente a glifosato que comprende el evento elite EE-GH3, caracterizado porque dicho método comprende introducir una molécula de ADN recombinante, donde dicha molécula de ADN recombinante comprende un gen quimérico que comprende una enzima 5-enol-piruvilshikimato-3-fosfato sintetasa (EPSPD) tolerante al glifosato como se describe en la patente US 6,566,587, bajo el control de un promotor de un gen de histonas como se describe en US 5,491,288 o US 5,792,930, en una región del ADN cromosomal de algodón que comprende la secuencia SEQ ID Nº 1, nucleótidos 1 - 732 y SEQ ID Nº 2, nucleótidos 431 - 654, mediante el cruzamiento de plantas que poseen dicho evento elite en el genoma, y sembrar la semilla obtenida a partir de dicho cruzamiento y tratar las plantas en crecimiento con glifosato, donde dicho evento elite comprende dicha molécula de ADN recombinante integrado en el ADN cromosomal, y donde los nucleótidos 1 - 732 de SEQ ID Nº 1 están inmediatamente aguas arriba de y contiguos con dicho ADN recombinante y donde los nucleótidos 733 - 1214 de SEQ ID Nº 1 son ADN recombinante, y donde los nucleótidos 431 - 654 de SEQ ID Nº 2 están inmediatamente aguas abajo de y contiguos con dicho ADN recombinante, y donde los nucleótidos 1 a 430 de SEQ ID Nº 2 son ADN recombinante, y donde dichas plantas que poseen un evento elite se obtienen de las semillas que han sido depositadas en la ATCC bajo el número de deposito PTA-6878.