NL8004080A - Methode voor het bepalen van transaminases, alsmede een daarmee verband houdende diagnostische uitrusting. - Google Patents
Methode voor het bepalen van transaminases, alsmede een daarmee verband houdende diagnostische uitrusting. Download PDFInfo
- Publication number
- NL8004080A NL8004080A NL8004080A NL8004080A NL8004080A NL 8004080 A NL8004080 A NL 8004080A NL 8004080 A NL8004080 A NL 8004080A NL 8004080 A NL8004080 A NL 8004080A NL 8004080 A NL8004080 A NL 8004080A
- Authority
- NL
- Netherlands
- Prior art keywords
- acid
- cooh
- transaminase
- gpt
- alanine
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 23
- 108090000340 Transaminases Proteins 0.000 title claims description 18
- 102000003929 Transaminases Human genes 0.000 title claims description 14
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 15
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 13
- KHPXUQMNIQBQEV-UHFFFAOYSA-N oxaloacetic acid Chemical compound OC(=O)CC(=O)C(O)=O KHPXUQMNIQBQEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 11
- 229960003767 alanine Drugs 0.000 claims description 10
- ADVPTQAUNPRNPO-UHFFFAOYSA-N 2-azaniumyl-3-sulfinopropanoate Chemical compound OC(=O)C(N)CS(O)=O ADVPTQAUNPRNPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 9
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 9
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 claims description 7
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 claims description 7
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 claims description 6
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 claims description 6
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 6
- 101710088194 Dehydrogenase Proteins 0.000 claims description 5
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 5
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 5
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 claims description 5
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 claims description 5
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 claims description 5
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 claims description 5
- QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N D-alpha-Ala Natural products CC([NH3+])C([O-])=O QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N L-Alanine Natural products C[C@@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N 0.000 claims description 4
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 4
- 235000009754 Vitis X bourquina Nutrition 0.000 claims description 2
- 235000012333 Vitis X labruscana Nutrition 0.000 claims description 2
- 240000006365 Vitis vinifera Species 0.000 claims description 2
- 235000014787 Vitis vinifera Nutrition 0.000 claims description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims 1
- 125000000896 monocarboxylic acid group Chemical group 0.000 description 13
- LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-N Pyruvic acid Chemical compound CC(=O)C(O)=O LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- ADVPTQAUNPRNPO-REOHCLBHSA-N 3-sulfino-L-alanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)C[S@@](O)=O ADVPTQAUNPRNPO-REOHCLBHSA-N 0.000 description 8
- 229940107700 pyruvic acid Drugs 0.000 description 7
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 5
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 5
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 4
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 4
- 238000010791 quenching Methods 0.000 description 4
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 4
- 102000014898 transaminase activity proteins Human genes 0.000 description 4
- 238000005891 transamination reaction Methods 0.000 description 4
- 229910014033 C-OH Inorganic materials 0.000 description 3
- 229910014570 C—OH Inorganic materials 0.000 description 3
- 229930027945 nicotinamide-adenine dinucleotide Natural products 0.000 description 3
- BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-N nicotinamide-adenine dinucleotide Chemical compound C1=CCC(C(=O)N)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O2)N2C3=NC=NC(N)=C3N=C2)O)O1 BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-N 0.000 description 3
- 230000000171 quenching effect Effects 0.000 description 3
- BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N (S)-malic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010020056 Hydrogenase Proteins 0.000 description 2
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 2
- BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N alpha-hydroxysuccinic acid Natural products OC(=O)C(O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004737 colorimetric analysis Methods 0.000 description 2
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 2
- 239000001630 malic acid Substances 0.000 description 2
- 235000011090 malic acid Nutrition 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 2
- HORQAOAYAYGIBM-UHFFFAOYSA-N 2,4-dinitrophenylhydrazine Chemical compound NNC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1[N+]([O-])=O HORQAOAYAYGIBM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OZDAOHVKBFBBMZ-UHFFFAOYSA-N 2-aminopentanedioic acid;hydrate Chemical compound O.OC(=O)C(N)CCC(O)=O OZDAOHVKBFBBMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VXUGVISSBXKUEL-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxypropanoic acid;2-oxopropanoic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O.CC(=O)C(O)=O VXUGVISSBXKUEL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 description 1
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100033814 Alanine aminotransferase 2 Human genes 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100036608 Aspartate aminotransferase, cytoplasmic Human genes 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 101710155216 Methylamine dehydrogenase heavy chain Proteins 0.000 description 1
- 101710183893 Methylamine dehydrogenase light chain Proteins 0.000 description 1
- 241000269319 Squalius cephalus Species 0.000 description 1
- LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-N Sulfurous acid Chemical compound OS(O)=O LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004357 Transferases Human genes 0.000 description 1
- 108090000992 Transferases Proteins 0.000 description 1
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 1
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 description 1
- 239000006225 natural substrate Substances 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 239000000376 reactant Substances 0.000 description 1
- 238000007430 reference method Methods 0.000 description 1
- 238000010405 reoxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/48—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving transferase
- C12Q1/52—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving transferase involving transaminase
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/81—Packaged device or kit
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Description
*· 49 723/Bs/AS - 1 - BIODATA S.p.A., te Rome, Italië.
Methode voor het bepalen van traisaninases, alsmede een daarmee verband houdende diagnostische uitrusting.
De uitvinding heeft betrekking op een werkwijze voor het bepalen van transaminases voor toepassing op-het gebied van klinische diagnoses.
Transaminatie betekent het proces van het over-5 brengen van een aminogroep van een aminozuur naar een ketonzuur. Enzymen, die dit type reactie katalyseren worden transaminases genoemd, en de bepaling ervan is van belang geworden in de klinische chemie, sinds in 1954 LaDue, Wroblewski en Karmen meedeelden, dat GOT (gluta-10 minezuur oxaalazijnzuur transaminase, of asparaginezuur aminozuur transferase ofwel EC 2,6.1.1. volgens I.U.B. klassificatie) toeneemt na myocardiale infarctie. Variaties zijn opgemerkt hoofdzakelijk van zowel GOT en GPT (glutaminezuur pyrodruiverzuur transaminase, of alino 15 amino transferase ofwel EC 2.6.1.2. volgens I.U.B. klassificatie) onder andere pathologische vormen, in het bijzonder bij epathopatieën.
GOT katalyseert de volgende reactie:
COOH COOH COOH COOH
20 ja2 + | 2 _, |H2 |H2 CHNH0 CH„ * C=0 CH0 I T I - COOH CO CCOH CHNH2
COOH COOH
asparagine- cc -ketoglutaar- oxaalazijn- glutamine- 25 zuur zuur zuur zuur terwijl GTP de volgende reactie katalyseert: 800 4 0 80 m f~ - 2 -
CH0 COOH CH, COOH
l3 I J i I 2 I 2<-- I I 2 COOH CH., COOH CH0 I 2 I 2 CO CHNH- , I 1 2
5 COOH COOH
alanine a-ketoglutaar- pyrodruive- glutamine- zuur zuur zuur
In het geval van GOT is het niet gemakkelijk om het asparagine en het <*-ketoglutaarzuur te bepalen; 10 daarom zijn alle daadwerkelijk in gebruik zijnde methodes gebaseerd op de bepaling van oxaalazijnzuur, hetzij direct hetzij indirect.
Over de gehele wereld worden twee methodes gebruikt: 15 1) De colorimetrische methode, gebaseerd op de reactie van oxaalazijnzuur met 2,4-dinitrofenylhydrazine, deze reactie is niet kinetisch, maar na een vastgestelde incubatieperiode wordt de hoeveelheid gevormd ketonzuur gedoseerd door bij 536 nm de uitdoving van het gevormde fenylhydra-20 zon te meten. Deze methode, hoewel gemodificeerd in de loop der jaren, vertoont toch nog bezwaren in het geval van monsters van icterische mensen..
2) De kinetische ü.V. methode, welke algemeen beschouwd wordt als de referentiemethode als gevolg van de hoge 25 nauwkeurigheid en specificiteit daarvan.
Het oxaalazijnziiur, geproduceerd in de transa-minatiereactie, wordt bepaald door een enzymatische reactie gekoppeld met appelzuurdehydrogenase (MDH) door bij 340 nm de oxidatie te meten van MADH (nicotin-30 amide adenine dinucleotide in de gereduceerde vorm).
COOH COOH
CH0 MDH Aho + NAD+ | 2 _ψ | 2
C = O + NADH + H+ «- H-C-OH
I I
COOH COOH
3 5 oxaalazi jnzuur appelzuur 800 4 0 80 'Kt - 3 -
De modificaties, gemaakt in deze methode, die voor het eerst werd ingevoerd door Karmen, maakten het mogelijk, dat de reactie werd geoptimaliseerd als functie van de concentratie van.substraat en van de bepalings-5 temperaturen, en de moeilijkheden als gevolg van de te overwinnen niet lineaire kinetische fases.
Ook voor GTP kunnen overeenkomstige overwegingen worden gemaakt in het geval van de colorimetrische test, omdat de kinetische U.V. methode, geïntroduceerd door 10 Henley en Pollard, is gebaseerd op de bepaling van pyro-druivezuur, gevormd in de reactie van alaninetransami-natie door een enzymatisch reactiekoppel met melkzuurde-hydrogenase (LDH), waarbij de re-oxidatie van het NADH .wordt gemeten bij 340 nm.
15 CH, CH,
I I
C = O + NADH-H* LDH H-C-OH + NAD+
ï I
COOH * COOH
pyrodruivezuur melkzuur
Ook voor de kinetische U.V. methode maakten de 20 modificaties, geïntroduceerd en beschreven in de literatuur, het mogelijk, dat de reactie werd geoptimaliseerd als functie van de concentraties van substraat en van de bepalingstemperaturen.
De bepaling van GOT en GPT activiteiten aanwezig 25 in het serum of in andere biologische monsters, wordt uitgevoerd door de bovengenoemde colorimetrische of U.V. kinetische methoden. Hierdoor is de analyst altijd verplicht om twee verschillende analyses uit te voeren voor de twee transaminases. Dit is het gevolg van de technische 30 onmogelijkheid om de twee U.V. kinetische enzymen, bovengenoemd, te koppelen in één bepaling wegens het kruis-inhibitiefenomeen.
Het doel van de uitvinding is nu een nieuwe methode, die het mogelijk maakt om spectrofotometrisch 35 in U.V. kinetica met slechts één proef de som te bepalen van de twee transaminase-activiteiten, en deze proef 800 4 0 80 * - 4 - τ vormt aldus de eerste selectieproef tussen normale en pathologische waarden van dergelijke enzymatische activiteiten. In toevoeging maakt de nieuwe methode het in overeenstemming met de vereisten van de analyst mogelijk 5 om door eenvoudig de volgorde van introductie van reactie-middelen en substraten in het reactiemengsel te modificeren, exact de activiteiten van de twee transaminases te bepalen in eenheden per liter in het zelfde monster van plasma of serum, waardoor tijd wordt bespaard in verge-10 lijking met de methodes, die traditioneel in de laboratoria worden gebruikt.
Het is bekend, dat GOT in staat is om transami-natie te katalyseren niet alleen van zijn natuurlijke substraten (glutaminezuur en asparaginezuur), maar even-15 eens van andere aminozuren . Onder deze wordt ook het cysteïnesulfininezuur actief getransamineerd in aanwezigheid van 0C-ketoglutaarzuur onder vorming van {^-sulfinyl-pyrodruivezuur, dat, gezien het in wateroplossing onstabiel is, snel hydrolyseert tot druivezuur en sulfiet 20 volgens het volgende reactieschema:
CH2-S02H (jOOH CH2-S02H COOH
CHNH0 + CH, GOT C = 0 + CHn I 2 12 I 12 COOH CH0 COOH CHn 12 . i2 C = O CHNH- 1 i
25 COOH COOH
cysteïnesul- cL-ketoglu- ^ -sulf inyl- glutamine- finezuur taarzuur pyrcdruivezuur zuur +Ho0 \ CH_ \l IC = O + HoS0o
30 COOH
pyrodruive z uur 800 4080 % - 5 -
Zelfs bij afwezigheid van d,-ketoglutaarzuur is GOT in staat om een reactie aan te gaan met cysteïnesul-finezuur en een ot— )¾ eliminatiereactie te katalyseren volgens het volgende reactieschema: 5 CHo-S0oH CH9 ,22 || 2 CHNH0 GOT C-NEL· + H^S0o I -» | 2 23 COOH COOH \+ Ho0 CH-.
C = 0 + nh3 COOH
10 cysteïnesul- aminoacryl- pyrodruive- finezuur zuur zuur
Ook in dit geval is het eindprodukt van de reactie druivezuur, en de activiteit van GOT kan worden bepaald in spectrometrische kinetica bij 340 nm door de 15 re-oxidatie te meten van NADH in aanwezigheid van melk-zuurdehydrogenase, hetzelfde enzym, dat wordt gebruikt voor de bepaling van de GPT activiteit.
Het gebruik van cysteïnesulfinezuur als substraat van GOT maakt het aldus mogelijk om slechts ëén aantonend 20 enzym te gebruiken, het melkzuurdehydrogenase (LDH), in de- gekoppelde bepaling van de twee transaminases volgens het volgende reactieschema: ch3
<!;hnh0 + a-KG
1 \
25 COOH NGPT
alanine *CH-, CH0
I I
C = O + NADH LDH H-C-OH + NAD+ I —» i
CH9S00H GOT COOH COOH
| 2 2 * ch-nh2
30 COOH + Ot-KG
cysteïnesul- pyrodruive- melkzuur finezuur zuur 800 4080 - 6 - Μ “De vermindering van uitdoving bij 340 nm geeft een maat voor de hoeveelheid geproduceerd druivezuur, en als gevolg van de activiteiten van beide transaminases. Het is belangrijk op te merken, dat de simultane bepaling 5 van transaminases onder deze omstandigheden mogelijk is dankzij de afwezigheid van kruisinhibitie tussen de gebruikte substraten. De bijzondere kinetische eigenschappen van de reactie tussen GOT en cysteïnesulfinezuur maken twee verschillende toepassingen van het systeem 10 mogelijk, die in de volgende voorbeelden worden toegelicht:
Voorbeeld I.
Methode voor het bepalen van de absolute GOT en GPT activiteiten.
Aan een reactiemengsel van 2,5 ml, dat L-alanine 15 (200 mM), ^--ketoglutaarzuur (2 mM), -NADH (0,24 mM) en 3,6 eenheden melkzuurdehydrogenase in tris-HCl buffer (80 mM), pH 8,5 bevatte, voegde men 0,5 ml plasma of serum toe, waarna de afname werd gemeten van de uitdoving bij 340 nm (of bij andere golflengtes, bijvoorbeeld 20 334 of 365 nm, al naar gelang het gebruikte instrument).
Deze afname staat in directe betrekking met de hoeveelheid transformatie van alanine in pyrodruivezuur, veroorzaakt door GPT.
Na een paar minuten reactie werd 0,1 ml van een 25 oplossingscysteïnesulfinezuur toegevoegd, zodat de eind- concentratie in het reactiemengsel 66 mM bedroeg.
De toename Δ E/min. is in dit geval het gevolg van de transformatie van cysteïnesulfinezuur in pyrodruivezuur, dat wordt veroorzaakt door GOT.
30 Door middel van transformatiecoëfficiënten is het mogelijk om uit de toename Δ E/min., waargenomen voor en na de toevoeging van het cysteïnesulfinezuur, de exacte waarden te berekenen van GOT en GPT enzymatische eenheden, aanwezig is het serum, door middel één 35 enkel bepalingsproces.
Voorbeeld II.
Methode voor het kritisch onderzoeken van normale en pathologische waarden van GOT en GPT activiteiten in plasma of serum.
8004080 - 7 -
Aan een reactiemengsel van 2,5 ml, dat L-alanine (200 mM) , ct'-ketoglutaarzuur (2 mM) , -NADH (0,24 mM) , cysteïnesulfinezuur (7 mM), en 3,6 eenheden melkzuurde-hydrogenase in tris-HCl buffer (50 mM), pH 8,5 bevatte, 5 voegde men 0,5 ml cerum of plasma toe, en de afname in uitdoving werd gemeten bij 340 nm (of bij andere golflengtes, bijvoorbeeld 334 of 365 nm, al naar gelang het gebruikte instrument). In dit geval staat de afname van uitdoving in direct verband met de hoeveelheid transfor-10 matie van zowel alanine als cysteïnesulfinezuur tot pyrodruivezuur, respectievelijk veroorzaakt door GPT en GOT, en dit vormt een maat van de som van de twee enzymatische activiteiten.
De kinetische eigenschappen van de proef maken 15 het mogelijk om een grenswaarde in te stellen voor Δ E/min. tussen normale en pathologische waarden.
Door middel van geschikte transformatiequotiënten is het mogelijk om in het geval van normale monsters exact de daadwerkelijke enzymatische eenheden te berekenen 20- van zowel GOT en GPT, terwijl in het geval van pathologische monsters de methode een fout heeft van ongeveer 10-15%.
Conclusies.
8004080
Claims (4)
1. Kinetische U.V. methode voor de simultane bepaling van glutaminezuur oxaalazijnzuur transaminase (GOT) en glutaminezuur druivezuur transaminase (GPT) in één enkel monster serum of plasma, met het k e n -5 merk, dat als specifieke aminozuursubstraten voor de bovengenoemde transaminases respectievelijk worden gebruikt L-cysteïnesulfinezuur en L-alanine, en dat als aantonend enzym van beide transaminase-activiteiten melkzuur dehydrogenase wordt genomen.
2. Methode volgens conclusie 1, m e t het kenmerk , dat de totale GOT en GPT transaminase-activiteiten worden bepaald door het meten van de totale waarde f\ E/min.. waarbij de twee aminozuursubstraten van het begin af in de reactieomgeving aanwezig zijn.
3. Methode volgens conclusie 1, m e t het kenmerk, dat Δ E/min. eerst wordt gemeten in aanwezigheid van L-alanine als substraat, en vervolgens de toename van Δ E/min. na de toevoeging van· cysteïnesul-finezuur wordt gemeten, waarbij de laatste/\E/min. toe-20 name de maat vormt van de GOT transaminase-activiteit.
4. Diagnostische uitrusting voor het aantonen· van normale of pathologische waarden van GOT en GPT onder toepassing van de methode van conclusie 1, 2 of 3, m et het kenmerk, dat deze uitrusting als component-25 substraten cystexnesulfinezuur en L-alanine heeft. 800 4 0 80
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| IT49789/79A IT1162349B (it) | 1979-07-17 | 1979-07-17 | Metodo per la determinazione delle transaminasi e relativo kit diagnostico |
| IT4978979 | 1979-07-17 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NL8004080A true NL8004080A (nl) | 1981-01-20 |
Family
ID=11271566
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NL8004080A NL8004080A (nl) | 1979-07-17 | 1980-07-16 | Methode voor het bepalen van transaminases, alsmede een daarmee verband houdende diagnostische uitrusting. |
Country Status (16)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4329425A (nl) |
| JP (1) | JPS5935600B2 (nl) |
| AR (1) | AR224900A1 (nl) |
| AT (1) | AT369034B (nl) |
| AU (1) | AU528558B2 (nl) |
| BE (1) | BE884323A (nl) |
| CA (1) | CA1144459A (nl) |
| CH (1) | CH647600A5 (nl) |
| DE (1) | DE3026854C2 (nl) |
| ES (1) | ES8106556A1 (nl) |
| FR (1) | FR2461952A1 (nl) |
| IL (1) | IL60504A (nl) |
| IT (1) | IT1162349B (nl) |
| NL (1) | NL8004080A (nl) |
| SE (1) | SE436894B (nl) |
| ZA (1) | ZA804096B (nl) |
Families Citing this family (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IT1171257B (it) * | 1981-05-28 | 1987-06-10 | Biodata Spa | Metodo per la determinazione della attivita' degli isoenzimi citoplasmatico e mitocondriale della glutammico ossalacetico transaminasi nel siero o plasma umano |
| DE3221730A1 (de) * | 1982-06-09 | 1983-12-15 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Verfahren und analytische mittel zur aktivitaetsbestimmung von glutamat-oxalacetat-transaminase |
| DE3330246A1 (de) * | 1983-08-22 | 1985-03-14 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Verfahren und reagenz zur bestimmung von transaminasen |
| US4547460A (en) * | 1984-04-16 | 1985-10-15 | Eastman Kodak Company | Multizone analytical element and method for analyte determination |
| US5834226A (en) * | 1991-01-31 | 1998-11-10 | Xytronyx, Inc. | One-step test for aspartate aminotransferase |
| JPH05900U (ja) * | 1991-06-19 | 1993-01-08 | 株式会社新来島どつく | 折り畳み式梯子 |
| JPH0693713A (ja) * | 1992-09-14 | 1994-04-05 | Kashiwabara Token Kogyo Kk | 円筒タンクの外壁面作業用足場 |
| KR100318552B1 (ko) * | 1998-12-24 | 2002-09-05 | 한국과학기술연구원 | 간질환관련표식물질의검출용스트립 |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3206376A (en) * | 1964-05-22 | 1965-09-14 | Warner Lambert Pharmaceutical | Method of determining glutamic-oxalacetic transaminase |
| US3746625A (en) * | 1966-12-12 | 1973-07-17 | H Bergmeyer | Stabilized coenzyme test compositions |
| BE786291A (fr) * | 1971-07-20 | 1973-01-15 | Technicon Instr | Compositions de diagnostic pour determination de la glutamate-oxalate-transaminase (got) et de la glutamate-pyruvate-transaminase (gpt) |
| JPS5631957B2 (nl) * | 1973-10-09 | 1981-07-24 | ||
| US4241179A (en) * | 1978-08-14 | 1980-12-23 | Coulter Electronics, Inc. | Method for determining a transaminase in a biological fluid and reagent combination for use in the method |
-
1979
- 1979-07-17 IT IT49789/79A patent/IT1162349B/it active
-
1980
- 1980-07-04 IL IL60504A patent/IL60504A/xx not_active IP Right Cessation
- 1980-07-07 CA CA000355611A patent/CA1144459A/en not_active Expired
- 1980-07-08 ZA ZA00804096A patent/ZA804096B/xx unknown
- 1980-07-10 US US06/168,286 patent/US4329425A/en not_active Expired - Lifetime
- 1980-07-11 SE SE8005122A patent/SE436894B/sv not_active IP Right Cessation
- 1980-07-15 AU AU60407/80A patent/AU528558B2/en not_active Ceased
- 1980-07-15 AR AR281764A patent/AR224900A1/es active
- 1980-07-15 BE BE0/201416A patent/BE884323A/fr unknown
- 1980-07-16 CH CH5459/80A patent/CH647600A5/it not_active IP Right Cessation
- 1980-07-16 JP JP55096297A patent/JPS5935600B2/ja not_active Expired
- 1980-07-16 DE DE3026854A patent/DE3026854C2/de not_active Expired
- 1980-07-16 NL NL8004080A patent/NL8004080A/nl not_active Application Discontinuation
- 1980-07-16 AT AT0370280A patent/AT369034B/de not_active IP Right Cessation
- 1980-07-17 ES ES493473A patent/ES8106556A1/es not_active Expired
- 1980-07-17 FR FR8015815A patent/FR2461952A1/fr active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CH647600A5 (it) | 1985-01-31 |
| ES493473A0 (es) | 1981-09-01 |
| FR2461952A1 (fr) | 1981-02-06 |
| AR224900A1 (es) | 1982-01-29 |
| AU6040780A (en) | 1981-01-22 |
| AT369034B (de) | 1982-11-25 |
| US4329425A (en) | 1982-05-11 |
| DE3026854A1 (de) | 1981-02-12 |
| CA1144459A (en) | 1983-04-12 |
| BE884323A (fr) | 1980-11-03 |
| IT7949789A0 (it) | 1979-07-17 |
| IT1162349B (it) | 1987-03-25 |
| ATA370280A (de) | 1982-04-15 |
| AU528558B2 (en) | 1983-05-05 |
| DE3026854C2 (de) | 1986-09-18 |
| FR2461952B1 (nl) | 1983-08-05 |
| IL60504A (en) | 1983-07-31 |
| JPS5655200A (en) | 1981-05-15 |
| JPS5935600B2 (ja) | 1984-08-29 |
| IL60504A0 (en) | 1980-09-16 |
| ZA804096B (en) | 1981-08-26 |
| SE8005122L (sv) | 1981-01-18 |
| SE436894B (sv) | 1985-01-28 |
| ES8106556A1 (es) | 1981-09-01 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Seefeldt et al. | A continuous, spectrophotometric activity assay for nitrogenase using the reductant titanium (III) citrate | |
| JP6913956B2 (ja) | Ｌ−キヌレニンの測定方法及び測定キット | |
| NL8004080A (nl) | Methode voor het bepalen van transaminases, alsmede een daarmee verband houdende diagnostische uitrusting. | |
| Ishihara et al. | Enzymatic determination of ammonia in blood plasma | |
| JP3034969B2 (ja) | アンモニア、α−アミノ酸類またはα−ケト酸の高感度定量法および高感度定量用組成物 | |
| KR20010101130A (ko) | 황화수소 또는 황화물 이온의 정량법 및 그것을 이용한특정물질의 정량법 | |
| JP5043081B2 (ja) | 生体試料中のｌ−リジンの定量法 | |
| EP0100217A2 (en) | Process for quantitative determination of substrate treated with oxidase | |
| JP4257568B2 (ja) | 生体成分の測定方法およびそれに用いる試薬組成物 | |
| Gleeson et al. | A simple enzymatic fluorimetric method for the determination of branched-chain L-amino acids in microlitre volumes of plasma | |
| JP4044702B2 (ja) | 硫化水素又は硫化物イオンの定量法及びそれを利用した特定物質の定量法 | |
| JPH07203991A (ja) | カリウムイオンの定量方法 | |
| CN111575339A (zh) | 1，5-脱水葡萄糖醇酶学定量方法及其试剂 | |
| JPS61247963A (ja) | アンモニアを反応生成物とする生体物質の定量方法 | |
| JP3164165B2 (ja) | カルシウムの定量方法 | |
| Holme et al. | Coupled optical rate determinations of amino acid oxidase activity | |
| JP3036711B2 (ja) | 乳酸またはピルビン酸の高感度定量法および定量用組成物 | |
| JP4288334B2 (ja) | ホモシステインの測定方法及び測定用試薬 | |
| JP4228047B2 (ja) | Ｌ−システインの測定方法及び測定用試薬 | |
| JP3034988B2 (ja) | イソクエン酸またはα−ケトグルタル酸の高感度定量法および定量用組成物 | |
| JP6638648B2 (ja) | 生体試料中の亜鉛測定試薬及び測定方法 | |
| JP3614967B2 (ja) | アンモニウムイオンの消去方法及び試料中の特定成分を定量する方法 | |
| JP4731733B2 (ja) | システイン共存試料中のホモシステインの測定法 | |
| JP2761768B2 (ja) | Ｎａｄｈの定量法及びそれを用いた胆汁酸の定量法 | |
| JP3227486B2 (ja) | 銅の測定方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| BV | The patent application has lapsed |