NL8001380A - Plasmide dna en werkwijze voor het verkrijgen daarvan. - Google Patents
Plasmide dna en werkwijze voor het verkrijgen daarvan. Download PDFInfo
- Publication number
- NL8001380A NL8001380A NL8001380A NL8001380A NL8001380A NL 8001380 A NL8001380 A NL 8001380A NL 8001380 A NL8001380 A NL 8001380A NL 8001380 A NL8001380 A NL 8001380A NL 8001380 A NL8001380 A NL 8001380A
- Authority
- NL
- Netherlands
- Prior art keywords
- plasmid
- puc8
- mycelium
- pure
- dna
- Prior art date
Links
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 title claims description 31
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 8
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 12
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 claims description 7
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 claims description 4
- 239000006166 lysate Substances 0.000 claims description 4
- 241000187438 Streptomyces fradiae Species 0.000 claims description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 20
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 9
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 8
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 5
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 5
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 5
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 5
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 5
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 5
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 4
- 229960005542 ethidium bromide Drugs 0.000 description 4
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 4
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 3
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 3
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 description 3
- 241001655322 Streptomycetales Species 0.000 description 3
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 3
- ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N ethidium bromide Chemical compound [Br-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000012054 meals Nutrition 0.000 description 3
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 3
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JOCBASBOOFNAJA-UHFFFAOYSA-N N-tris(hydroxymethyl)methyl-2-aminoethanesulfonic acid Chemical compound OCC(CO)(CO)NCCS(O)(=O)=O JOCBASBOOFNAJA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 2
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 2
- 239000007994 TES buffer Substances 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 2
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 2
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 2
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 2
- AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M caesium chloride Chemical compound [Cl-].[Cs+] AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- FLJPGEWQYJVDPF-UHFFFAOYSA-L caesium sulfate Chemical compound [Cs+].[Cs+].[O-]S([O-])(=O)=O FLJPGEWQYJVDPF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229960005091 chloramphenicol Drugs 0.000 description 2
- WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N chloramphenicol Chemical compound ClC(Cl)C(=O)N[C@H](CO)[C@H](O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N 0.000 description 2
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 2
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 2
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 2
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 2
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 2
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 2
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 2
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 241000186063 Arthrobacter Species 0.000 description 1
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020004638 Circular DNA Proteins 0.000 description 1
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 102100033195 DNA ligase 4 Human genes 0.000 description 1
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 1
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 1
- 102100031780 Endonuclease Human genes 0.000 description 1
- 108010042407 Endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 241000588722 Escherichia Species 0.000 description 1
- 241000192125 Firmicutes Species 0.000 description 1
- 241000606790 Haemophilus Species 0.000 description 1
- 101000927810 Homo sapiens DNA ligase 4 Proteins 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020005196 Mitochondrial DNA Proteins 0.000 description 1
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 description 1
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 description 1
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108010076181 Proinsulin Proteins 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 108700005075 Regulator Genes Proteins 0.000 description 1
- 102000006382 Ribonucleases Human genes 0.000 description 1
- 108010083644 Ribonucleases Proteins 0.000 description 1
- 102000005157 Somatostatin Human genes 0.000 description 1
- 108010056088 Somatostatin Proteins 0.000 description 1
- 235000019764 Soybean Meal Nutrition 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 230000002759 chromosomal effect Effects 0.000 description 1
- 239000013599 cloning vector Substances 0.000 description 1
- 229910017052 cobalt Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010941 cobalt Substances 0.000 description 1
- GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N cobalt atom Chemical compound [Co] GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 description 1
- 235000012343 cottonseed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 108010049705 endonuclease R Proteins 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 1
- 238000007429 general method Methods 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 238000000464 low-speed centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000002934 lysing effect Effects 0.000 description 1
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 description 1
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 description 1
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- WPBNNNQJVZRUHP-UHFFFAOYSA-L manganese(2+);methyl n-[[2-(methoxycarbonylcarbamothioylamino)phenyl]carbamothioyl]carbamate;n-[2-(sulfidocarbothioylamino)ethyl]carbamodithioate Chemical compound [Mn+2].[S-]C(=S)NCCNC([S-])=S.COC(=O)NC(=S)NC1=CC=CC=C1NC(=S)NC(=O)OC WPBNNNQJVZRUHP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 150000002739 metals Chemical class 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 235000013379 molasses Nutrition 0.000 description 1
- 229910017464 nitrogen compound Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002830 nitrogen compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 108020004418 ribosomal RNA Proteins 0.000 description 1
- 238000007363 ring formation reaction Methods 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 229940016590 sarkosyl Drugs 0.000 description 1
- 108700004121 sarkosyl Proteins 0.000 description 1
- KSAVQLQVUXSOCR-UHFFFAOYSA-M sodium lauroyl sarcosinate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCC(=O)N(C)CC([O-])=O KSAVQLQVUXSOCR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- NHXLMOGPVYXJNR-ATOGVRKGSA-N somatostatin Chemical compound C([C@H]1C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CC=2C3=CC=CC=C3NC=2)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@H](C(=O)N1)[C@@H](C)O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)N)C(O)=O)=O)[C@H](O)C)C1=CC=CC=C1 NHXLMOGPVYXJNR-ATOGVRKGSA-N 0.000 description 1
- 229960000553 somatostatin Drugs 0.000 description 1
- 239000004455 soybean meal Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 1
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/74—Vectors or expression systems specially adapted for prokaryotic hosts other than E. coli, e.g. Lactobacillus, Micromonospora
- C12N15/76—Vectors or expression systems specially adapted for prokaryotic hosts other than E. coli, e.g. Lactobacillus, Micromonospora for Actinomyces; for Streptomyces
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/465—Streptomyces
- C12R2001/54—Streptomyces fradiae
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
\ %
Plasmide DNA en werkwijze voor het verkrijgen daarvan.
Het is bekend, dat bacteriële plasmiden worden gebruikt voor recombinant DNA onderzoek. Voor een goed overzicht van de ontwikkeling op dit gebied wordt verwezen naar Science, vol.
196, april 1977. Recombinant DNA onderzoek aan industrieel belang-5 rijke micro-organismen van het genus Streptomvces is beschreven door Bibb, M.J., Ward, J.M., en Hopwood, D.A., 1978: "Transformation of Plasmid DNA into Streptomvces at high frequency", Nature 274, 398-400.
Aan verscheidene Streptomyceten is vastgesteld, 10 dat deze DNA plasmiden bevatten. Zie Huber, M.L.B. en Godfrey, O.
1978: "A general method for lysis of Streptomvces species"; Can. J. Microbio. 24, 631-632; Schrempf, H., Bujard, H., Hopwood, D.A. en Goebel, W., 1975: "Isolation of covalently closed circular deoxyribonucleic acid from Streptomvces coelicolor A3 (2) ", J. Bacterid.
15 121, 416-421; Umezawa, H., 1977: "Microbial secondary metabolities with potential use in cancer treatment (Plasmid involvement in biosynthesis and compounds)", Biomedicine 26, 236-249; en Malik, V.S., 1977: "Preparative method for the isolation of supercoiled DNA from a chloramphenicol producing Streptoraycete, J. Antiobiotics 20 30.' 897-899. Niettemin is tot nog toe slechts één Streptomyceet plasmide geïsoleerd en beschreven door Schrempf supra. Dat in het genus Streptomvces nog andere plasmiden voorkomen, kan worden afgeleid uit resultaten van genetisch onderzoek beschreven door: (1) Akagawa, H., Okanishi, M. en Umezawa, H., 25 1975: "A plasmid involved in chloramphenicol production in Streptomvces venenzuelae:
Evidence from genetic mapping", J. Gen.
Microbiol. 90, 336-346.
(2) Freeman, R.F. en Hopwood, D.A., 1978: 80 0 1 3 80 2 "Unstable naturally occurring resistance to antibiotics in Streptomyces", J. Gen.
Microbiol. 106, 377-381.
(3) Friend, E.J., Warren, M. en HOpwood, D.A., 5 1978s "Genetic evidence for a plasmid control ling fertility in an industrial strain of Streptomyces rimosus", J. Gen. Microbiol.
106, 201-206.
(4) Hopwood, D.A. en Wright, H.M. 1973: "A plasmid 10 of Streptomyces coellcolor carrying a chromo somal locus and its inter-specific transfer", J. Gen. Microbiol. 79, 331-342.
(5) Botta, K., Okami, Y en Umezawa, H. 1977: "Elimination of the ability of a kanaraycin- 15 producing strain to biosynthesize deoxystrepta- mine moiety by acriflavine", J. Antibiotics 30, 1146-1149.
(6) Kirby, R., Wright, L.F. en Hopwood., D.A., 1975: "plasmid-determined antibiotic synthe* 20 sis and resistance in Streptomyces coelicolor
Nature 254, 265-267.
(7) Kirby, R. en Hopwood, D.A. 1977: "Genetic determination of methylenomycin synthesis by the SCPl plasmid of Streptomyces coellcolor 25 A3(2)", J. Gen. Microbiol. 98, 239-252.
(8) Okanishi, M., Ohta, T. en Umezawa, H. 1969: "Possible control of formation of aerial mycelium and antibiotic production in Streptomyces by episomic factors", J, Anti- 30 biotics, 33^, 45-47,
Gevonden is, dat het micro-organisme Streptomyces fradlae NRRL 11445 een niet eerder beschreven plasmide bevat. Dit plasmide, dat de code p UC8 kreeg, bezit een molecuulgewicht van ongeveer 45,0 megadaltonf/wordt door restrictie endonuleasen BamHl 35 op meer dan 10 plaatsen, Pst I op meer dan 10 plaatsen, Xba I op 1 80 0 1 3 80 -¾ 3 plaats, Bgl II op 5 nlaatsen, Hind III op 2 plaatsen en Xho I op meer dan 13 plaatsen gefragmenteerd.
p UC8 wordt uit Streotomyces fradiae NRRL 11445 geïsoleerd door het mycelium van een cultuur te fragmenteren, de 5 fragmenten te incuberen, de cultuur te oogsten, het mycelium te lyseren en het plasmide uit het lysaat te isoleren. Het plasmide is praktisch zuiver.
Omdat p UC8 door verschillende restrictie endonucleasen wordt afgebroken of "geknipt, kan het gemakkelijk worden gerecombineerd en 10 aangepast voor een aantal gastheervektoren. p UC8 kan ook worden gebruikt als een klonerende vektor bij recombinant DNA onderzoek waarbij’ gekozen genen in het plasmide worden ingebouwd waarna het plasmide in een gastheerbacterie en/of vektor wordt ingebracht. Karakteristieken van p UC8 15 Molecuulgewicht: ongeveer 45,0 megadalton.
Aantal copiën per cel: -1.
Restrictie endonuclease plaatsen:
Aantal restrictieplaatsen Aantal restrictieplaatsen
Enzym pUC8 Enzym pUC8 20 BamHI > 10 Hind III 2
Pst I >10 Xho I >13
Xba I 1
Bgl II 5
Deze waarden werden verkregen door p ÜC8 DNA te 25 fragmenteren bij aanwezigheid van een overmaat restrictie endonuclease en het aantal in 0,7 en 1,0 %-ige agarose gelen oplosbare fragmenten te bepalen.
pUC8 kan worden gebruikt voor het verkrijgen van recombinant Dlasmiden die in gastheerbacteriën kunnen worden inge-30 bracht. Daarbij wordt het DNA van het circulaire vektoriële plasmide met restrictie endonuclease, bijvoorbeeld Hind III of Xba I op specifieke Plaatsen onengeknipt waarbij lineair DNA ontstaat. Tussen de uiteinden daarvan wordt een stukje vreemd niet-vektorieel DNA geplakt onder ringsluiting door de lineaire vektor of stukjes daar-35 van, en de niet-lineaire vektor te mengen bij aanwezigheid van een 80 0 1 3 80 Γ 4 polynucleotide ligase.
Het vreemde DNA, verkregen met hetzelfde enzym kan afkomstig zijn van hogere micro-organismen. Zo kan bijvoorbeeld uit kikkers afkomstig DNA dat codeert voor ribosomaal RNA in pUC8 worden ingebouwd.
5 Het circulaire recombinant plasmide bestaat dan uit pUC8 en een stukje kikker rDNA.
Het recombinant plasmide kan in een gastheerorga-nisme worden ingebracht en daarin tot expressie komen. Voorbeelden van waardevolle genen zijn die welke coderen voor somatostatine, 10 ratte-proinsuline en proteasen.
pUC8 ontleent zijn betekenis daaraan dat het in staat is om als plasmide vektor te functioneren in micro-organismen die voor industriële toepassingen Tan belang zijn zoals Streotomyces. Kloneren van DNA uit Streptomyces in pUC8 biedt de mogelijkheid om 15 de vorming van economisch belangrijke produkten uit deze organismen, zoals antibiotica, te verhogen. Dit voorstel kan worden vergeleken met het kloneren van genen voor antibiotica in Escherichia coll K-12. Deze Gram-negatieve bacterie heeft echter het bezwaar, dat genen uit bepaalde Gram-positieve bacteriën zoals Bacillus daarin niet 20 goed tot expressie komen. Evenzo komen genen uit Gram-negatieve bacteriën slecht of in het geheel niet tot expressie in Gram-positieve gastheren. Hiermee wordt het voordeel van een Gram-positief gastheervektorsysteem en daarmee de bruikbaarheid van pUC8 in een dergelijk systeem onderstreept.
25 Behalve bovengeschetste moeilijkheden met gen expressie, kunnen zich ook moielijkheden voordoen bij het kweken van het micro-organisme en met de extractie en zuiverheid van het produkt. Aan deze moeilijkheden zou tegemoet kunnen worden gekomen door een plasmide vektor bijvoorbeeld pUC8 in te brengen in een 30 gastheer die het produkt vormt en de genen voor het betreffende produkt in het plasmide te kloneren. Aldus zouden de moeilijkheden met fermentatie, extractie en zuivering in elk geval worden verkleind. Bovendien zou het in een dergelijk systeem niet noodzakelijk zijn om al de genen voor de biosynthese te kloneren en te ver-35 menigvuldigen maar alleen de regulerende genen of genen die coderen 800 1 3 80 5 4
C
voor de enzymen die de produktiesnelheid beheersen. Omdat pUC8 een streptomyceet plasmide is, leent het zich voor deze doeleinden bij uitstek in Streptomyces. Omdat pUC8 verder een plasmide uit een Gram-positief micro-organisme is, kan het bovendien dienen als vek-5 tor in een aantal andere micro-organismen zoals Bacillus en Arthrobacter.
Streptomyces fradiae NRKL 11445 kan in een waterig voedingsmedium onder submerse aerobe omstandigheden worden gekweekt, Het voedingsmedium kan een koolstofbron bijvoorbeeld een 10 assimileerbare koolhydraat bevatten en een stikstofbron bijvoorbeeld een assimileerbare stikstofverbinding of een proteïne. Kool-stofbronnen die de voorkeur hebben omvatten, glucose, bruine suiker, sucrose, glycerol, zetmeel, maïszetmeel, lactose, dextrine en molas-se. Stikstofbronnen die de voorkeur hebben omvatten maïsweekvloei-15 stof, gist, geautolyseerde brouwersgist met vaste melkbestanddelen, sojaboonmeel, katoenzaadmeel, maïsmeel, vaste.melkbestanddelen, pancreaties verteerd vaseïne, gistmeel, vaste destillateurs bestanddelen, dierlijke pepton vloeistoffen en vlees- en beender afval. Combinaties van voornoemde koolstof- en stikstofbronnen komen even-20 eens in aanmerking. Omdat verder kraanwater en ongezuiverde bestanddelen worden gebruikt alvorens het medium te steriliseren, is het niet nodig om spore-metalen zoals zink, magnesium, mangaan, kobalt en ijzer, toe te voegen.
Het geënte medium wordt bij een temperatuur van 25 ongeveer 18-50° C en bij voorkeur 20-37° C geïncubeerd. Na ongeveer 3-15 dagen is de groei van het micro-organisme optimaal. Het medium blijft tijdens de groeicyclus zuur. De eind pH is gedeeltelijk afhankelijk van eventueel aanwezige buffer en gedeeltelijk van de begin pH van het medium.
30 Wanneer het kweken wordt uitgevoerd in grote vaten of tanks, verdient het voorkeur om in plaats van de spore-vorm de vegetatieve vorm van het micro-organisme te gebruiken voor het enten om een al te grote la^g in de groei van het micro-organisme te vermijden en daarmee ondoelmatig gebruik van de apparatuur. Om een 35 vegetatieve ent te vormen wordt een voedingsbouillon geënt met een 80 0 1 3 80 ' 6 ƒ passend gekozen hoeveelheid van een kweek in een vloeibare agar, of een kweek in een schuine buis. De jonge, actieve vegetatieve ent wordt dan onder aseptische omstandigheden in een kweekvat of kweek-tank gebracht. Het medium waarin de vegetatieve ent wordt gevormd 5 kan hetzelfde zijn als wordt gebruikt voor de groei van het micro-organisme.
Voorbeeld - isolatie van pUC8 uit een zuivere cultuur van Streptomyces fradiae NRRL 11445.
Sporen vein een zuivere cultuur van Streptomyces 10 fradiae NRRL 11445 werden geënt in 10 ml medium dat 1 gew.% glucose, 0,4 gew.% pepton, 0,4 gew.% gist-extract, 0,05 gew.% MgS04.7H20, 0,2 gew.% kh2P04 en 0,4 gew.% K2HPC>4 bevatte.
Het medium was tevoren gesteriliseerd in een 50 ml Erlenmeyerkolf.
Na het enten werd de inhoud van de kolf ongeveer 24-36 uren gelncu-15 beerd bij 32° C in een Gump of New Brunswick rotatie-schud-inrichting bij een snelheid van 100-250 omw./min.
Na afloop werd 0,5 ml van de cultuur in een 50 ml Erlenmeyerkolf gemengd met 10 ml van bovengenoemd medium waaraan 0,5-2,0 gew./vol.% glycine was toegevoegd. De aanwezigheid van 20 glycine is niet noodzakelijk maar bevordert de lysis van de cellen. De hoeveelheid glycine in het medium kan overigens variëren maar wordt gewoonlijk zodanig gekozen dat de lysis van de cellen erdoor wordt bevorderd. De inhoud van de kolf werd nog eens 24-36 uren geincubeerd bij 32° c in een Gump rotatie-schud-inrichting. Na af-25 loop werd het mycelium van de cultuurvloeistof gescheiden door centrifugeren bij lage snelheid zoals 6000 x g gedurende 15 min. bij 4° C gevolgd door afschenken van de bovenstaande vloeistof. Hierna werd het mycelium gesuspendeerd in 1,5 ml TES buffer (0,03 M tris-(hydroxymethyl)aminomethaan (Tris), 0,005 M EDTA en 0,05 M NaCl, 30 pH 8,0) waaraan 20 gew./vol.% sucrose was toegevoegd. Na toevoegen van 0,3 ml van een 5 mg/ml oplossing van lysozym en 0,15 ml van een 1 mg/ml RNase in dezelfde buffer werd het mengsel 30 min. geincubeerd bij 37° C waarbij van tijd tot tijd werd geroerd. Na toevoegen van 0,6 ml 0,25 M EDTA (pH 8,0) werd het incuberen bij 37° C nog 35 15 min. voortgezet en na toevoegen van 0,3 ml 5 mg/ml pönase nog 800 1 3 80
V
n ^ * eens 10 min. bij 37° C. Na afloop werd de celsuspensie gelyseerd door toevoegen van 3,0 ml 2 gew.% sarkosyl bevattende TES buffer en werd 20-30 min. geincubeerd bij 37° c. Het lvsaat werd daarna afgeschoven door het 5-10 keer door een 50 ml injectiespuit zonder naald 5 te halen.
Het ruwe lvsaat werd vervolgens gemengd met een zout bijvoorbeeld cesiumsulfaat en bij voorkeur cesiumchloride, en de ingevoerde kleurstof ethidiumbromide om een oplossing met een dichtheid van 1,550 te verkrijgen. De oplossing werd gecentrifugeerd 10 tot evenwicht bij 145.000 st g (isopyknische dichtheidsgradiënt).
Het covalent gesloten circulaire plasmide DNA was in de centrifu-geerbuis onder langgolvige ultraviolette straling (320 nm) waarneembaar als een flauwe fluorescerende band onder de intens fluorescerende band van lineaire chromosomale en plasmide DNA's.
15 Het plasmide DNA werd uit de isopyknische gra diënten verwijderd en het ethidiumbromide wordt geëxtraheerd door twee keer behandelen met 1/3 volume isopropanol waarna de waterige fase werd gedialvseerd tegen een buffer zoals een 0,1 X SSC buffer (0,015 M NaCl, 0,0015 M Na^HgO^HjO, pH 7,4) waarbij praktisch 20 zuiver pUC8 wordt verkregen.
Karakterisering van pUC8.
De grootte van pUC8 werd bepaald door sedimentatie in neutrale en basische sucrose gradiënten onder gebruikmaking vaneen intern markeur plasmide DNA met een molecuulgewicht van onge-25 veer 28,0 megadalton en een overeenkomstige sedimentatiewaarde van ongeveer 58S. Uit de neutrale sucrose gradiënten werd de sedimentatiewaarde van het geïsoleerde pUC8 bepaald op 76S.Het molecuulgewicht werd berekend uit de vergelijkingen van Hudson et al (Hudson, B., Clayton, D.A. en Vinograd, J, 1968; "Complex mitochondrial DNA", 30 Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol. 33, 435-442) en was in goede overeenstemming met de bepaling op grond van de basische sucrose gradiënten.
Het percentage plasmide DNA in StrePtomvces fradiae NRRL 11445 werd bepaald door de cultuur te mer-ken met 35 (methyl-3H)thymidine, prepareren van de ruwe lysaten, en monsters 80 0 1 3 80 > 8 / van de lysaten te centrifugeren in cesiumchloride ethidiumbromide dichtheidsgradiënten. De gradiënten werden gefractioneerd en de radio-activiteit werd gemeten waarna uit het percentage radio-activiteit in de plasmideband het percentage plasmide DMA en het aantal 5 plasmidecopiën werden berekend (Radloff, R. Bauer ,W. en Vinograd, J, 1967: "A dye-buoyant density method for detection and isolation of closed circular duplex DNA: The closed circular DNA in HèLa cells", Proc. Nat. Acad. Sci. PSA 57, 1514-1520).
Restrictie endonucelase fragmentering en agarosegel elektroforese.
10 Restrictie endonucleasen werden als handelprepa- raten verkregen van Miles Laboratories en Mew England Biolabs die ook de specificaties verschaften voor het frag-menteren met tenminste een tweevoudige overmaat endonuclease.
De gefragmenteerde monsters werden opgebracht op 15 0,7 en 1 gew.% agarose gelen en 2 uren onderworpen aan elektrofore se bij een constante spanning van 10-15 v/cm gel hoogte (Sharp, P.A., Sugden, J. en Sambrook, J., 1973: Detection of two restriction endonuclease activities in Haemophilus paralnfluen2ae using analytical agarose-ethidium bromide electrophoresis, Biochemistry 12, 3055-20 3063). De mol-cuulgewichten van de fragmenten werden bepaald ten opzichte van de standaardmigratiepatronen van bacteriofaag DNA gefragmenteerd met enzym EcoRl (Helling, R.B., Goodman, H.M. en Boyer, H.W., 1974: Analysis of endonuclease R.EcoRl fragments of DNA from lambdiod bacteriophages and other viruses by agarose-gel 25 electrophorsis, J. Virology 14_, 1235-1244).
Al de beschreven proeven en bepalingen werden uitgevoerd volgens de specificaties in de NIH Guidelines.
30 800 1 3 80
Claims (6)
1. Plasmide DNA met het kenmerk» dat plasmide DNA met de code pUC8 in zuivere of praktisch zuivere toestand een molecuulgewicht bezit van ongeveer 45,0 megadalton en door de re- 5 strictie endonucleasen BamH I op meer dan 10 plaatsen, Pst I op meer dan 10 plaatsen, Xba I op 1 olaats, Bgl II op 5 plaatsen, Hind III op 2 plaatsen en Xho"*/op meer dan 13 plaatsen wordt gefragmenteerd.
2. Werkwijze voor het isoleren van plasmide DNA 10 uit een micro-organisme, met het kenmerk, dat zuiver of praktisch zuiver pUC8 zoals omschreven in conclusie 1 wordt geïsoleerd uit Streptomvces fradiae NRRL 11445 waarbij (a) S.fradiae NRRL 11445 wordt gekweekt tot het mycelium voldoende is gegroeid, 15 (b) het mycelium wordt gefragmenteerd, (c) het gefragmenteerde mycelium wordt geïncu-beerd, (d) de cultuur wordt geoogst, (e) het geoogste mycelium wordt'gelyseerd, en 20 (f) uit het lysaat zuiver of praktisch zuiver pUC8 wordt geïsoleerd.
3. Werkwijze volgens conclusie 2, met het kenmerk, dat het micro-organisme ongeveer 24-36 uren wordt gekweekt bij een temperatuur van ongeveer 32° C.
4. Werkwijze volgens conclusie 3, met het kenmerk, dat het gefragmenteerde mycelium wordt geïncubeerd in een glycine bevattend groeimedium.
5. Plasmide pUC8 verkrijgbaar met de werkwijze zoals beschreven in de beschrijving en het voorbeeld.
6. Produkten en werkwijzen zoals beschreven in de beschrijving en het voorbeeld. . 35 SO0 1 3 80
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US2488979A | 1979-03-29 | 1979-03-29 | |
| US2488979 | 1979-03-29 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NL8001380A true NL8001380A (nl) | 1980-10-01 |
Family
ID=21822891
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NL8001380A NL8001380A (nl) | 1979-03-29 | 1980-03-07 | Plasmide dna en werkwijze voor het verkrijgen daarvan. |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS55133398A (nl) |
| DE (1) | DE3008646A1 (nl) |
| FR (1) | FR2452518A1 (nl) |
| GB (1) | GB2045251B (nl) |
| IT (1) | IT1130967B (nl) |
| NL (1) | NL8001380A (nl) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4703009A (en) * | 1983-03-08 | 1987-10-27 | Merck & Co., Inc. | RDNA cloning vector pVE1, deletion and hybrid mutants and recombinant derivatives thereof products and processes |
| US5272254A (en) * | 1984-10-02 | 1993-12-21 | Biogen Inc. | Production of streptavidin-like polypeptides |
-
1980
- 1980-03-03 GB GB8007078A patent/GB2045251B/en not_active Expired
- 1980-03-06 DE DE19803008646 patent/DE3008646A1/de not_active Withdrawn
- 1980-03-07 NL NL8001380A patent/NL8001380A/nl not_active Application Discontinuation
- 1980-03-14 IT IT20657/80A patent/IT1130967B/it active
- 1980-03-21 JP JP3484680A patent/JPS55133398A/ja active Pending
- 1980-03-28 FR FR8006947A patent/FR2452518A1/fr active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS55133398A (en) | 1980-10-17 |
| IT1130967B (it) | 1986-06-18 |
| IT8020657A0 (it) | 1980-03-14 |
| GB2045251B (en) | 1982-11-24 |
| GB2045251A (en) | 1980-10-29 |
| FR2452518A1 (fr) | 1980-10-24 |
| FR2452518B1 (nl) | 1983-10-21 |
| DE3008646A1 (de) | 1980-10-09 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4273875A (en) | Plasmid and process of isolating same | |
| US4332900A (en) | Construction of co-integrate plasmids from plasmids of Streptomyces and Escherichia | |
| US4338400A (en) | Co-integrate plasmids and their construction from plasmids of Escherichia and Streptomyces | |
| US4340674A (en) | Cointegrate plasmids and their construction from plasmids of Escherichia and Streptomyces | |
| US4332898A (en) | Hybrid plasmid and process of making same | |
| Van Elsas et al. | Occurrence of antibiotic resistance among bacilli in Brazilian soils and the possible involvement of resistance plasmids | |
| EP0213898B1 (en) | A host-vector system | |
| HU197354B (en) | Process for selecting streptomyces containing recombinant dna | |
| NL8001240A (nl) | Plasmide dna en werkwijze voor het verkrijgen daarvan. | |
| US4362816A (en) | Hybrid plasmid and process of making same | |
| NL8001380A (nl) | Plasmide dna en werkwijze voor het verkrijgen daarvan. | |
| Gusek et al. | Review of the Streptomyces lividans/Vector plJ702 System for Gene Cloning | |
| NL8001379A (nl) | Plasmide dna en werkwijze voor het verkrijgen daarvan. | |
| NL8001676A (nl) | Plasmide dna en werkwijze voor het verkrijgen daarvan. | |
| EP0035914A2 (en) | Plasmid vectors, plasmids and their preparation, and cloning processes using them | |
| NL8001381A (nl) | Plasmide dna en werkwijze voor het verkrijgen daarvan. | |
| EP0038156A2 (en) | A plasmid and its microbiological preparation | |
| US4401761A (en) | Process for stabilizing plasmids by deletion of DNA | |
| MacNeil | A flexible boiling procedure for isolating plasmid DNA from gram-positive microorganisms | |
| US4518698A (en) | Plasmid and production thereof | |
| US4686184A (en) | Gene transfer vector | |
| WO2013083566A1 (en) | New actinomycete integrative and conjugative element from actinoplanes sp. se50/110 as plasmid for genetic transformation of related actinobacteria | |
| EP0251510A1 (en) | A new tylosin resistance-conferring gene, designated tlrB for use in streptomyces and other organisms | |
| NL8100853A (nl) | Plasmide dna en werkwijze voor het verkrijgen daarvan. | |
| Sankarasubramanian et al. | Development of genetic markers in cyanobacteria and stability of genetically marked strains in soil |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A85 | Still pending on 85-01-01 | ||
| BV | The patent application has lapsed |