NL8001676A - Plasmide dna en werkwijze voor het verkrijgen daarvan. - Google Patents
Plasmide dna en werkwijze voor het verkrijgen daarvan. Download PDFInfo
- Publication number
- NL8001676A NL8001676A NL8001676A NL8001676A NL8001676A NL 8001676 A NL8001676 A NL 8001676A NL 8001676 A NL8001676 A NL 8001676A NL 8001676 A NL8001676 A NL 8001676A NL 8001676 A NL8001676 A NL 8001676A
- Authority
- NL
- Netherlands
- Prior art keywords
- puc7
- plasmid
- mycelium
- pure
- plasmid dna
- Prior art date
Links
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 title claims description 41
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 12
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 12
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 claims description 11
- 241000207965 Acanthaceae Species 0.000 claims description 9
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 9
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 9
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 9
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 claims description 7
- 239000006166 lysate Substances 0.000 claims description 7
- 241000187133 Streptomyces espinosus Species 0.000 claims description 6
- 238000010586 diagram Methods 0.000 claims description 5
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 claims description 5
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 claims description 4
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 24
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 13
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 13
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 13
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 description 9
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 9
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 7
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 5
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 5
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 5
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241001655322 Streptomycetales Species 0.000 description 4
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 3
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010042407 Endonucleases Proteins 0.000 description 3
- 102000004533 Endonucleases Human genes 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 3
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 3
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 3
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 3
- 229960005542 ethidium bromide Drugs 0.000 description 3
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 3
- 235000012054 meals Nutrition 0.000 description 3
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 2
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 2
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 2
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 2
- AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M caesium chloride Chemical compound [Cl-].[Cs+] AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- FLJPGEWQYJVDPF-UHFFFAOYSA-L caesium sulfate Chemical compound [Cs+].[Cs+].[O-]S([O-])(=O)=O FLJPGEWQYJVDPF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 229960005091 chloramphenicol Drugs 0.000 description 2
- WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N chloramphenicol Chemical compound ClC(Cl)C(=O)N[C@H](CO)[C@H](O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N 0.000 description 2
- 230000002759 chromosomal effect Effects 0.000 description 2
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 2
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 238000001493 electron microscopy Methods 0.000 description 2
- ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N ethidium bromide Chemical compound [Br-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 230000002101 lytic effect Effects 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 2
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 2
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 2
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- NLMKTBGFQGKQEV-UHFFFAOYSA-N 2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2-hexadecoxyethoxy)ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethanol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCO NLMKTBGFQGKQEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 241000186063 Arthrobacter Species 0.000 description 1
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 1
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 1
- 240000007124 Brassica oleracea Species 0.000 description 1
- 235000003899 Brassica oleracea var acephala Nutrition 0.000 description 1
- 235000011301 Brassica oleracea var capitata Nutrition 0.000 description 1
- 235000001169 Brassica oleracea var oleracea Nutrition 0.000 description 1
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M Bromide Chemical compound [Br-] CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108020004638 Circular DNA Proteins 0.000 description 1
- 108010073254 Colicins Proteins 0.000 description 1
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 description 1
- 102100033195 DNA ligase 4 Human genes 0.000 description 1
- 230000007018 DNA scission Effects 0.000 description 1
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 1
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 241001646716 Escherichia coli K-12 Species 0.000 description 1
- 241000701959 Escherichia virus Lambda Species 0.000 description 1
- 241000192125 Firmicutes Species 0.000 description 1
- 241000606768 Haemophilus influenzae Species 0.000 description 1
- 241000606766 Haemophilus parainfluenzae Species 0.000 description 1
- 101000927810 Homo sapiens DNA ligase 4 Proteins 0.000 description 1
- 241000588747 Klebsiella pneumoniae Species 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108050005735 Maltoporin Proteins 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 108020005196 Mitochondrial DNA Proteins 0.000 description 1
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 description 1
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 description 1
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 1
- JOCBASBOOFNAJA-UHFFFAOYSA-N N-tris(hydroxymethyl)methyl-2-aminoethanesulfonic acid Chemical compound OCC(CO)(CO)NCCS(O)(=O)=O JOCBASBOOFNAJA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 241000364057 Peoria Species 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- 108010076181 Proinsulin Proteins 0.000 description 1
- 108010059712 Pronase Proteins 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 241000588778 Providencia stuartii Species 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 108700005075 Regulator Genes Proteins 0.000 description 1
- 102000006382 Ribonucleases Human genes 0.000 description 1
- 108010083644 Ribonucleases Proteins 0.000 description 1
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102000005157 Somatostatin Human genes 0.000 description 1
- 108010056088 Somatostatin Proteins 0.000 description 1
- 235000019764 Soybean Meal Nutrition 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 241000187432 Streptomyces coelicolor Species 0.000 description 1
- 241001446311 Streptomyces coelicolor A3(2) Species 0.000 description 1
- 241000187419 Streptomyces rimosus Species 0.000 description 1
- 241000531819 Streptomyces venezuelae Species 0.000 description 1
- 239000007994 TES buffer Substances 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 241000566997 Xanthomonas vasicola Species 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 239000013599 cloning vector Substances 0.000 description 1
- 229910017052 cobalt Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010941 cobalt Substances 0.000 description 1
- GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N cobalt atom Chemical compound [Co] GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 description 1
- 235000012343 cottonseed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N deoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N 0.000 description 1
- 229960003964 deoxycholic acid Drugs 0.000 description 1
- KXGVEGMKQFWNSR-UHFFFAOYSA-N deoxycholic acid Natural products C1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(O)=O)C)C1(C)C(O)C2 KXGVEGMKQFWNSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 1
- 239000000428 dust Substances 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 108010049705 endonuclease R Proteins 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 238000012869 ethanol precipitation Methods 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 230000035558 fertility Effects 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 1
- 238000007429 general method Methods 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 229940047650 haemophilus influenzae Drugs 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 238000000464 low-speed centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000002934 lysing effect Effects 0.000 description 1
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 description 1
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 description 1
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- WPBNNNQJVZRUHP-UHFFFAOYSA-L manganese(2+);methyl n-[[2-(methoxycarbonylcarbamothioylamino)phenyl]carbamothioyl]carbamate;n-[2-(sulfidocarbothioylamino)ethyl]carbamodithioate Chemical compound [Mn+2].[S-]C(=S)NCCNC([S-])=S.COC(=O)NC(=S)NC1=CC=CC=C1NC(=S)NC(=O)OC WPBNNNQJVZRUHP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 150000002739 metals Chemical class 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 235000013379 molasses Nutrition 0.000 description 1
- 229910017464 nitrogen compound Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002830 nitrogen compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 108020004418 ribosomal RNA Proteins 0.000 description 1
- 238000007363 ring formation reaction Methods 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- NHXLMOGPVYXJNR-ATOGVRKGSA-N somatostatin Chemical compound C([C@H]1C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CC=2C3=CC=CC=C3NC=2)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@H](C(=O)N1)[C@@H](C)O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)N)C(O)=O)=O)[C@H](O)C)C1=CC=CC=C1 NHXLMOGPVYXJNR-ATOGVRKGSA-N 0.000 description 1
- 229960000553 somatostatin Drugs 0.000 description 1
- 239000004455 soybean meal Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 1
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 1
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/74—Vectors or expression systems specially adapted for prokaryotic hosts other than E. coli, e.g. Lactobacillus, Micromonospora
- C12N15/76—Vectors or expression systems specially adapted for prokaryotic hosts other than E. coli, e.g. Lactobacillus, Micromonospora for Actinomyces; for Streptomyces
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/465—Streptomyces
- C12R2001/54—Streptomyces fradiae
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
Description
tf " >
Plasmide DM en werkwijze voor het verkrijgen daarvan.
Het is bekend, dat bacteriële plasmiden worden gebruikt voor recombinant DM onderzoek. Voor een goed overzicht van de ontwikkeling op dit gebied wordt verwezen naar Science, vol. 196, april 1977· Recombinant DM onderzoek aan industrieel belangrijke 5 mieroorganismen van het genus Streptomyces is beschreven door
Bibb, M.J., Ward, J.M., en Hopwood, D.A., 1978: "Transformation of plasmid DNA into Streptomyces at high frequency”, Nature 271+, 398-1*00.
Aan verscheidene Streptomyceten is vastgesteld, 10 dat deze DNA plasmiden bevatten. Zie Huber, M.L.B. en Godfrey, 0.
1978 : "A general method for lysis of Streptomyces species”, Can.
J. Microbiol. 2^, 631-632; Schrempf, H., Bufard, H., Hopwood, D.A. en Goebel, W., 1975·* "Isolation of covalently closed circular deoxyribonucleic acid from Streptomyces coelicolor A3(2)", 15 J. Bacterid. 121, 1+16-1+21; Umezawa, H, 1977: "Microbial secondary metabolities with potential use in cancer treatment (Plasmid involvement in biosynthesis and compounds)", Biomedicine 26, 236-21+9; en Malik, V.S. 1977: Preparative Method for the isolation of supercoiled DNA from a chloramphenicol producing Streptomycete, 20 J. Antibiotics 30, 897-899. Niettemin is tot nog toe slechts êén Streptomyceet plasmide geïsoleerd en beschreven door Schrempf supra. Dat in het genus Streptomyces nog andere plasmiden voorkomen, kan worden afgeleid uit resultaten van genetisch onderzoek beschreven door: 25 (t) Akagawa, H., Okanishi, M. en Umezawa, H. , 1975: "A plasmid involved in chloramphenicol production in Streptomyces venezuelae: Evidence from genetic mapping", J. Gen. Microbiol. 90, 336-31+6 8 0 0 1 6 76 2 (2) Freeman, R.F. en ïïopwood, D.A., 1978: "Unstable naturally occurring resistance to antibiotics in Streptomyces”, J. Gen, Microbiol. 106, 377-381.
5 (3) Friend, E.J., Warren, M. en Hopvood, D.A., 1978: "Genetic evidence for a plasmid controlling fertility in an industrial strain of Streptomyces rimosus", J. Gen. Microbiol. J06, 201-206.
10 (U) Hopvood, D.A. en Wright, H.M. 1973: "A plasmid of Streptomyces coelicolor carrying a chromosomal locus and its inter-specific transfer", J. Gen. Microbiol. 79, 331-3^2.
(5) Hotta, K., Okami, Y. en Umezava, H. 1977: 15 "Elimination of the ability of a kanamycin- producing strain to biosynthesize deoxystrepta-- mine moiety bij acriflavine", J. Antibiotics 30, 11U6-11U9.
(6) Kirby, R., Wright, L.F. en Hopvood, D.A., 1975: 20 "Plasmid-determined antibiotic synthesis and resistance in Streptomyces coelicolor", Nature 25k, 265-267.
(7) Kirby, R. en Hopvood, D.A. 1977: "Genetic determination, of methylenomycin synthesis bij 25 the SCPI plasmid of Streptomyces coelicolor A3(2)", J. Gen. Microbiol. 98, 239-252.
(8) Okanishi, M., Ohta, T. en Umezava, H. 1969: "Possible control of formation of aerial mycelium and antibiotic production in 30 Streptomyces bij episomic factors", J. Anti biotics 33, l*5-VT.
Gevonden is, dat het micro-organisme Streptomyces espinosus subsp.acanthus NRRL 11081 een niet eerder beschreven plasmide bevat. Dit plasmide, dat de code p UC7 kreeg, bezit een 35 molekuulgevicht van ongeveer 10-11 megadalton, vordt door restrictie 800 1 6 76 3 endonuleasen afgebroken volgens het fragmentatiepatroon zoals weergegeven in het diagram en komt in 2-b copien per cel S.espinus subsp.acanthus NRRL 11081 voor. Het diagram is gebaseerd op plasmide p UC7 met een molekuulgewicht van ongeveer 10,7 megadalton en een 5 molekuullengte van ongeveer 16,2 kilóbasen. De restrictieplaatsen zijn aangegeven als kilobase coördinaten ten opzichte van de Bgl II restrictieplaats bij 0,0/16,2 kilóbasen. De gebruikte afkortingen voor de restrictie endonucleasen zijn: (1) Bgl II, een enzym uit Bacillus globigii; (2) Bam Hl, een enzym uit Bacillus amylolique-10 faciens Hl; (3) Pst I, een enzym uit Providencia stuartii 16^; (k)
Kpn I, een enzym uit Klebsiella pneumoniae; (5)Xho I, een enzym uit Xanthomonas holcicola.
Ten aanzien van het diagram wordt opgemerkt, dat voor de restrictieplaats bij ongeveer 14,5 kilobase niet ondubbelzinnig 15 kon worden vastgesteld of deze geldt voor Bam MI of voor Pst I.. Verder kon uit overwegingen van symmetrie niet ondubbelzinnig worden vastgesteld of êén van de twee Κηρ I restrictieplaatsen bij ongeveer 0,7 of bij ongeveer 3,7 kilobase moet worden aangegeven.
Deze laatste dubbelzinnigheid is uitgedrukt met de streepjeslijnen.
20 p UC7 wordt uit Streptomyees espinosus subsp.
acanthus NRRL 11081 geïsoleerd door het mycelium van een cultuur te fragmenteren, de fragmenten te incuberen, de cultuur te oogsten, het mycelium te lyseren en het plasmide uit het lysaat te isoleren. Het plasmide is praktisch zuiver.
25 Omdat p UC7 betrekkelijk klein is en door verschillende restrictie endonucleasen wordt afgebroken of "geknipt", kan het gemakkelijk worden gerecombineerd en aangepast voor een aantal gastheervektoren. p UC7 kan ook worden gebruikt als een klonerende vektor bij recombinant DNA onderzoek waarbij gekozen genen in het plasmide worden 30 ingebouwd waarna het plasmide in een gastheerorganisme wordt ingébracht .
Karakteristieken van p UC7 Molekuulgewicht: ongeveer 10-11 megadalton.
Aantal copien per cel: 2-k 35 Restrictie endonuclease plaatsen (zie het diagram).
800 1 6 76
Jt • 1 k
Aantal restrictieplaatsen Aantal restrictieplaatsen
Enzym püC7 Enzym pUC7
Bgl I >7 Bgl II 2
Bam HI H Hpa I O
5 Hpa II veel Hind III 2-3
EcoRI 0 Κρη I 2
Pst I 2 Pvu II >5
Mbo II >6 Ava I >8
Xba I 3 Xho I 3 10 Sal I >7 Sma I veel
Hinc II veel Bel I veel
Deze waarden werden verkregen door p UC7 DNA te fragmenteren bij aanwezigheid van een overmaat restrictie endonuclease en het aantal 15- in 0,7 en 1,0^-ige agarose gelen oplosbare fragmenten te bepalen.
pUC7 kan worden gebruikt voor het verkrijgen van recombinant plasmiden die in gastheerbacteriën kunnen worden ingébracht. Daarbij wordt het DNA van het circulaire vectoriële plasmide met restrictie endonuclease, bijvoorbeeld Bgl II of Pst I op 20 specifieke plaatsen opengeknipt waarbij lineair DNA ontstaat.
Tussen de uiteinden daarvan wordt een stukje vreemd niet-vectorieel DNA geplakt onder ringsluiting door de lineaire vektor of stukjes daarvan, en de niet-lineaire vektor te mengen bij aanwezigheid van een polynucleotide ligase.
25 Het vreemde DNA, verkregen met hetzelfde enzym, kan afkomstig zijn van hogere microorganismen. Zo kan bijvoorbeeld uit-kikkers afkomstig DNA dat codeert voor ribosomaal RNA in pUC7 worden ingebouwd. Het circulaire recombinant plasmide bestaat dan uit pUC7 en een stukje kikker rDNA.
30 Het recombinant plasmide kan in een gastheerorganis- me worden ingebracht en daarin tot expressie komen. Voorbeelden van waardevolle genen zijn die welke coderen voor somatostatine, ratte-proinsuline en proteasen.
pUC7 ontleent zijn betekenis daaraan dat het in 35 staat is om als plasmide veötor te functioneren in microorganismen 800 1 6 76 5 die voor industriële toepassingen van "belang zijn zoals Streptomyces. Kloneren van DM uit Streptomyces in pUC7 "biedt de mogelijkheid om de vorming van economisch "belangrijke produkten uit deze organismen, zoals antibiotica, te verhogen. Dit voorstel kan worden vergeleken 5 met het kloneren van genen voor antibiotica in Escherichia coli K-12. Deze Gram-negatieve bacterie heeft echter het bezwaar, dat genen uit bepaalde Gram-positieve bacteriën zoals Baccillus daarin niet goed tot expressie komen. Evenzo komen genen uit Gram-negatieve bacteriën slecht of in het geheel niet tot expressie in Gram-posi-10 tieve gastheren. Hiermee wordt het voordeel van een Gram-positief gastheervectorsysteem en daarmee de bruikbaarheid van pUC7 in een dergelijk systeem onderstreept.
Behalve bovengeschetste moeilijkheden van genexpressie, kunnen zich ook moeilijkheden voordoen bij het kweken van het 15 micro-organisme en met de extractie en zuiverheid van het product.
Aan deze moeilijkheden zou tegemoet kunnen worden gekomen door een plasmide vector bijvoorbeeld pUC7 in te brengen in een gastheer die het product vormt en de genen voor het betreffende produkt in het plasmide te kloneren. Aldus zouden de moeilijkheden met fermen-20 tatie, extractie en zuivering in elk geval worden verkleind. Bovendien zou het in een dergelijk systeem niet noodzakelijk zijn om al de genen voor de biosynthese te kloneren en te vermenigvuldigen maar alleen de regulerende genen of genen die coderen voor de enzymen die de productiesnelheid besturen. Omdat pUC7 een streptomyceet 25 plasmide is, leent het zich voor deze doeleinden bij uitstek in
Streptomyces. Omdat pUC7 verder een plasmide uit een Gram-positief micro-organisme is, kan het bovendien dienen als vector in een aantal andere micro-organismen zoals Bacillus en Arthrobacter.
Streptomyces espinosus subsp. acanthus NRRL 11081, 30 gedeponeerd in de permanente collectie van het Northern Regional Research Laboratory, Peoria, Illinois, Amerika en taxSmisch be-schrevén in het Belgisch octrooischrift 861(-.1(-01, kan in een waterig voedingsmedium onder submerse aerobe omstandigheden worden gekweekt. Het voedingsmedium kan een koolstofbron bijvoorbeeld een assimileer-35 bare koolhydraat bevatten en een stikstofbron bijvoorbeeld een assi- 800 1 β 75 cfl 6 mileerbare stikstofverbinding of een proteïne. Koolstofbronnen die de voorkeur hebben omvatten glucose, bruine suiker, sucrose, glycerol, zetmeel, maïszetmeel, lactose, dextrine en molasse. Sdkstof-bronnen die de voorkeur hebben omvatten maisweekvloeistof, gist, 5 geautolyseerde brouwersgist met vaste melkbestanddelen, soyaboon-meel, katoenzaadmeel, maïsmeel, vaste melkbestanddelen, pancreaties verteerd caseïne, gistmeel, vaste destillateurs bestanddelen, dierlijke pepton vloeistoffen en vlees- en beender afval. Combinaties van voornoemde koolstof- en stikstofbronnen komen eveneens in 10 aanmerking. Omdat verder kraanwater en ongezuiverde bestanddelen worden gebruikt alvorens het medium te steriliseren, is het niet nodig om spore-metalen zoals zink, magnesium, mangaan, kobalt en ijzer, toe te voegen.
Het geente medium wordt bij een temperatuur van onge-15 veer 18-50°C en bij voorkeur 20-37°C geincubeerd. Ha ongeveer 3-15 dagen is de groei van het micro-organisme optimaal. Het medium blijft tijdens de groeicyclus zuur. De eind pH is gedeeltelijk afhankelijk van eventueel aanwezige buffer en gedeeltelijk van de begin pH van het medium.
20 Warneer het kweken wordt uigevóerd in grote vaten of tanks, verdient het voorkeur om in plaats van de spore-vorm de vegetatieve vorm van het micro-organisme te gebruiken voor het enten om een al te grote lag in de groei van het micro-organisme te vermijden en daarmee ondoelmatig gebruik van de apparatuur. Om 25 een vegetatieve ent te vormen wordt een voedingsbouillon geent met een passend gekozen hoeveelheid van een kweek in een vloeibare agar, of een kweek in een schuine buis. De jonge en actieve vegetatieve ent wordt dan onder aseptische omstandigheden in een kweekvat of kweektank gebracht. Het medium waarin de vegetatieve ent wordt 30 gevormd kan hetzelfde zijn als wordt gebruikt voor de groei van het micro-organisme.
Voorbeeld - Isolatie van pUC7 uit een zuivere cultuur van
Streptomyces espinosus subs, acanthus HERL 11081 35 Sporen van een zuivere cultuur van Streptomyces 800 1 6 76 * 7 w espinos subsp. acanthus KRRL 11081 werden geent in 10 ml Difco Antibiotic Medium no.3 Broth van Difco Labs., Detroit, Michigan, dat 0,15 gev.# vleesextrakt, 0,15 gew.$ gistextrakt, 0,5 gew./» pepton, 0,1 gew.# glucose, 0,35 gew.# NaCl, 0,368 gew.# KgHPO^ en 5 0,132 gew.# KHgPO^ bevat. Het medium was tevoren gesteriliseerd in een 50 ml Erlenmeyerkolf. Na het enten werd de inhoud van de kolf ongeveer 36*48 uren geincubeerd bij 37°C in een Gump of New Brunswick rotatie-schudinrichting bij een snelheid van 100-250 omw./min.
Na afloop werd de mycelium-bouillon suspensie onder 10 steriele omstandigheden gehomogeniseerd en daarna in een 125 ml Erlenmeyerkolf gemengd met 10 ml van bovengenoemd medium waaraan 68 gew./vol.# sucrose en 1 gew./vol.# glycine waren toegevoegd. De aanwezigheid van sucrose en glycine is niet noodzakelijk maar bevordert de lysis van de cellen. De hoeveelheid sucrose en glycine in 15 het medium kan overigen variëren maar wordt gewoonlijk zodanig gekozen dat de lysis van de cellen erdoor wordt bevorderd. De inhoud van de kolf werd nog eens 36-^8 uren geincubeerdbij 37°C in een Gump rotatieschudinrichting. Na afloop werd het mycelium van de cultuurvloeistof gescheiden door centrifugeren bij lage snelheid 20 zoals 6000 x g gedurende 15 min. bij U°C gevolgd door afschenken van de bovenstaande vloeistof. Hierna werd het mycelium gesuspendeerd in 1,5 ml isotone TES buffer (0,03 M tris (hydroxymethyl) aminomethaan (Tris), 0,005 M EDTA en 0,05 M NaCl, pH 8,0) waaraan 20 gew./vol.# sucrose was toegevoegd. Na toevoegen van 1,5 ml van 25 een 5 mg/ml oplossing van lysozym in dezelfde buffer werd het mengsel 30 min. geincubeerd bij 37°C onder tussentijds roeren. Na toevoegen van 1,5 ml 0,25 M EDTA (pH 8,0) werd het incuberen bij 37 °C nog 15 min wordt voortgezet. Na afloop werd de celsuspensie gelyseerd door toevoegen van 2,5 ml van een lytisch mengsel (1,0 gew./vol.# 30 Brij-58 (een detergens van Pierce Chem. Co., Rockford, Illinois),
0,i+ gew./vol.# deoxycholzuur, 0,05 M Tris (pH 8,0) en 0,06 M EDTA) en werd 20 min. geincubeerd bij 37°C. Het lysaat werd daarna afgeschoven door het 5-10 keer door een 10 ml pipet te halen. Het ruwe lysaat werd daarna verteerd met ribonuclease (1H0 ^ug/ml) en pro-35 nase (300 yug/ml) gedurende 20 min. bij 37°C. Het cel-lysozym-EDTA
800 1 6 76 ï* 8- mengsel kan echter ook eerst worden verteerd met rihonuclease en pronase alvorens te worden gelyseerd met een lytisch middel zoals een 2 gew.$ oplossing van natriumdodecylsulfaat in water.
Het ruwe lysaat werd vervolgens gemengd met een zout 5 bijvoorbeeld cesiumsulfaat en bij voorkeur cesiumchloride, en de ingevoegde kleurstof ethidiumbromide om een oplossing met een dichtheid van 1,550 te verkrijgen. De oplossing werd gecentrifugeerd tot evenwicht bij 11*5 *000 x g (isopyknische dichtheidsgradient).
Het covalent gesloten circulaire plasmide DNA was in de centrifu-10 geerbuis onder langgolvige ultraviolette straling (320 nm) waarneembaar als een flauwe fluorescerende band onder de intens fluorescerende band van lineaire chromosomale en plasmide DNA's.
Het plasmide DNA werd uit de isopyknische gradiënten verwijderd en het ethidiumbromide wordt geextraheerd door twee 15 keer behandelen met 1/3 volume isopropanol waarna de waterige fase werd gedialyseerd tegen een buffer zoals een 0,1 X SSC buffer (0,015 M NaCl, 0,0015 M Na 0^0^.2^0 pH » 7,*0 waarbij praktisch zuiver pUC7 wordt verkregen.
Karakterisering van pUC7 20 De grootte van pUC7 werd bepaald door sedimentatie in neutrale en basische sucrose gradiënten onder gebruikmaking van een intern markeur plasmide DNA met een molekuulgewicht van ongeveer 9,0 megadalton en een overeenkomstige sedimentatiewaarde van ongeveer 3^S. Uit de neutrale sucrose gradiënten werd de sedimen-25 tatie waarde van het geïsoleerde pUC7 bepaald op 35-37 S. Het molekuulgewicht werd berekend uit de vergelijkingen van Hudson et al (Hudson, B, Clayton, D.A. en Vinograd, J., 1978) "Complex mitochondrial DNA", Cold Spring Harbor Symp. Quant, Biol. 33, l*35-^2) en was in goede overeenstemming met de bepaling op grond van de 30 basische sucrose gradiënten.
Het molekuulgewicht van pUC7 werd ook bepaald door electronenmieroscopie van afzonderlijke DNA molekulen (Kleinschmidt, A.K. (1968): Monolayer techniques in electron microscopy of nucleic acid molecules, "Method in Enzymology" (S.P. Colowick en N.O. Kaplan 35 eds.) Vol. 12B, biz. 361-377, Academic Press, New York).
800 1 6 76 TTr 9
Voor de gemiddelde contour lengte werd een waarde van 5.^3-10~^m gevonden en een overeenkomstig molekuulgewicht van 10,7 megadalton.
Het percentage plasmide DNA in Streptomyces espinosus 5 subsp. acanthus NRRL 11081 werd bepaald door de cultuur te merken met (methyl-^H)-thymidine, prepareren van de ruwe lysaten, en monsters van de lysaten te centrifugeren in cesiumchloride ethium-bromide dichtheidsgradienten. De gradiënten werden gefractioneerd en de radioactiviteit werd gemeten waarna uit het percentage radio-10 activiteit in de plasmideband het percentage plasmide DNA en het aantal piasmidecopiën werden berekend (Radloff, R., Bauer, W. en Vinograd, J. 1967: "A dye-buoyant density method for detection and isolation of closed circular duplex DNA: The closed circular DNA in HeLa cells", Proc. Nat. Acad. Sci. USA 57, 151^-1520).
15 Restrictie endonuclease fragmentering en agarosegel electroforese.
Restrictie endonucleasen werden als handelprepara-ten verkregen van Miles Laboratories en New England Biolabs die 00k de specifikaties verschaften voor het fragmenteren met ten minste een tweevoudige overmaat endonuclease. Bij sommige bepalingen werd 20 het plasmide DNA gefragmenteerd met meer dan ëén endonuclease. De bepalingen werden uitgevoerd volgens twee methoden. Volgens de eerste werd het plasmide DNA eerst gefragmenteerd met het enzym dat een lagere ionische sterkte behoeft en daarna met het enzym dat een hogere ionische sterkte behoeft na toevoeging van een gelijk 25 volume 2X buffer van het tweede enzym. Volgens de tweede methode werden restrictiefragmenten van ëén enzym geïsoleerd uit een pre-paratieve agarosegel zoals beschreven door Tanaka en Weisblum (Tanaka, T., en Weisblum, B. 1975: Construction of a colicin El-R factor composite plasmid in vitro: Means for amplification of 30 deoxyribonucleic acid, J. Bacteriol. 121, 35^-3^2).
De geïsoleerde restrictiefragmenten werden geconcentreerd door ethanol precipitatie en daarna gefragmenteerd met andere restrictie enzymen. In duplo uitgevoerde fragmentaties werden vergeleken met enkelvoudig uitgevoerde fragmentaties om er zeker van 35 te zijn dat geen abnormale restrictiepatronen werden verkregen, dat 80 0 1 6 76 'vy * 10 vil zeggen dat er niet een niet-specifieke splitsing van DNA optreedt na verandering van de ionische sterkte van het voor de fragmentering gebruikte mengsel.
De gefragmenteerde monsters werden opgebracht op 5 0,7 en 1 gev.% agarose gelen en 2 uren onderworpen aan electroforese bij een constante spanning van 10-15 V/cm gel hoogte (Sharp, P.A., Sugden, J. en Sambrook, J., 1973: Detection of two restriction endonuclease activities in Haemophilus parainfluenzae using analytical agarose-ethidium bromide electrophoresis, Biochemistry 12, 305-3063). 10 De molekuulgewichten van de fragmenten werden bepaald ten opzichte van de standaardmigratiepatronen van bacteriofaag λ DNA gefragmenteerd met Hind III (Murray, K. en Murray, N.E. 1975: Phage lambda receptor chromosomes for DNA fragments made with restriction endonuclease III of Haemophilus influenzae and restriction endonuclease 15 I of Escherichia coli J. Mol. Biol. 98, 551-56¾) of EcoRI (Helling, R.B. Goodman, H.M. en Boyer, H.W. 197^: Analysis of endonuclease R.EcoRI fragments of DNA form lambdiod bacteriophages and other viruses bij agarose-gel electrophoresis, J. Virology 1¾^ 1235-12¾¾).
Al de beschreven proefen en bepalingen werden uit-20 gevoerd volgens de specifikaties in de NIH Guidelines.
800 1 6 76
Claims (7)
1. Plasmide DNA met het kenmerk, dat plasmide DNA met de code pUC7 in zuivere of praktisch zuivere toestand een mole-kuulgewicht "bezit van ongeveer 10-11 megadalton en een restrictie endonuclease fragmenteringspatroon zoals weergegeven in het diagram.
2. Werkwijze voor het isoleren van plasmide DNA uit een micro-organisme, met het kenmerk, zuiver of praktisch zuiver pUC7 zoals omschreven in conclusie 1 wordt geïsoleerd uit Strepto-myces espinosus subsp. acanthus NRR1 11081 waarbij (a) S.espinosus subs, acanthus NRRL 11081 wordt ge- 10 kweekt tot het mycelium voldoende is gegroeid, (b) het mycelium wordt gefragmenteerd, (c) het gefragmenteerde mycelium wordt geincubeerd, (d) de cultuur wordt geoogst, (e) het geoogste mycelium wordt gelyseerd, en 15 (f) uit het lysaat zuiver of praktisch zuiver pUC7 wordt geïsoleerd.
3. Werkwijze volgens conclusie 3, met ‘het kenmerk, dat het micro-organisme ongeveer 36-48 uren wordt gekweekt bij een temperatuur van ongeveer 37°C.
4. Werkwijze volgens conclusie 3, met het kenmerk, dat het gefragmenteerde mycelium wordt geincubeerd in een sucrose en glycine bevattend groeimedium.
5. Plasmide pUC7 verkrijgbaar met de werkwijze zoals beschrevenen de beschrijving en het voorbeeld.
6. Produkten en werkwijzen zoals beschreven in de beschrijving en het voorbeeld. 800 1 6 76. \ (14.5) Bam HI (15.5) Pst Jj®* * Bgl II (0/16.2) ,Κρη I (0.7) / \ Xho I (1.9) / Α^Κρη I (2.2) “O-Xho I (2.4) pUC7 (10.1) Xho I -V / 'Kpn I (3.7) (9.7) Bam Hry \/ N\' HI (4.6) (8.5) Bam Hl^"^--- ^Bgl II (5.3)
80. T 6 76 Th· ϋρjoha Co*p*ny# t· Kaluaxoo, Michigan, Ver.St.v.Aaerlka
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US2826879A | 1979-04-09 | 1979-04-09 | |
| US2826879 | 1979-04-09 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NL8001676A true NL8001676A (nl) | 1980-10-13 |
Family
ID=21842482
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NL8001676A NL8001676A (nl) | 1979-04-09 | 1980-03-21 | Plasmide dna en werkwijze voor het verkrijgen daarvan. |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS55141500A (nl) |
| DE (1) | DE3011995A1 (nl) |
| FR (1) | FR2453894A1 (nl) |
| GB (1) | GB2046272B (nl) |
| IT (1) | IT8021179A0 (nl) |
| NL (1) | NL8001676A (nl) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4508826A (en) * | 1982-04-15 | 1985-04-02 | Merck & Co., Inc. | Bacteriophage DNA cloning vector TG1 and microorganisms containing TG1 |
| US4460689A (en) * | 1982-04-15 | 1984-07-17 | Merck & Co., Inc. | DNA Cloning vector TG1, derivatives, and processes of making |
| FR2528069B1 (fr) * | 1982-06-02 | 1985-07-12 | Elf Bio Rech | Nouveau vecteur de clonage et d'expression, levure transformee par ce vecteur |
| US4703009A (en) * | 1983-03-08 | 1987-10-27 | Merck & Co., Inc. | RDNA cloning vector pVE1, deletion and hybrid mutants and recombinant derivatives thereof products and processes |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4259450A (en) * | 1977-02-28 | 1981-03-31 | The Upjohn Company | Antibiotic acanthomycin and process for preparing |
-
1980
- 1980-03-21 NL NL8001676A patent/NL8001676A/nl not_active Application Discontinuation
- 1980-03-27 DE DE19803011995 patent/DE3011995A1/de not_active Withdrawn
- 1980-04-02 GB GB8011000A patent/GB2046272B/en not_active Expired
- 1980-04-03 IT IT8021179A patent/IT8021179A0/it unknown
- 1980-04-07 JP JP4477880A patent/JPS55141500A/ja active Pending
- 1980-04-08 FR FR8007839A patent/FR2453894A1/fr active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| FR2453894B1 (nl) | 1984-04-20 |
| GB2046272A (en) | 1980-11-12 |
| FR2453894A1 (fr) | 1980-11-07 |
| DE3011995A1 (de) | 1981-02-19 |
| JPS55141500A (en) | 1980-11-05 |
| IT8021179A0 (it) | 1980-04-03 |
| GB2046272B (en) | 1982-11-17 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4273875A (en) | Plasmid and process of isolating same | |
| Gernhardt et al. | Construction of an integration vector for use in the archaebacterium Methanococcus voltae and expression of a eubacterial resistance gene | |
| EP0204549A2 (en) | Method of isolating antibiotic biosynthetic genes | |
| US4332900A (en) | Construction of co-integrate plasmids from plasmids of Streptomyces and Escherichia | |
| US4338400A (en) | Co-integrate plasmids and their construction from plasmids of Escherichia and Streptomyces | |
| US4340674A (en) | Cointegrate plasmids and their construction from plasmids of Escherichia and Streptomyces | |
| US6787360B2 (en) | Bacteriophage, a process for the isolation thereof, and a universal growth medium useful in the process thereof | |
| US4332898A (en) | Hybrid plasmid and process of making same | |
| US4343906A (en) | Hybrid plasmid of pBR322 and Streptomyces plasmid and E. coli containing same | |
| NL8001676A (nl) | Plasmide dna en werkwijze voor het verkrijgen daarvan. | |
| EP0213898B1 (en) | A host-vector system | |
| US4362816A (en) | Hybrid plasmid and process of making same | |
| US4393137A (en) | Cloning plasmid for streptomyces | |
| EP0035914A2 (en) | Plasmid vectors, plasmids and their preparation, and cloning processes using them | |
| CN112921045B (zh) | 氨基糖苷类抗生素生物合成基因簇及应用 | |
| Vallins et al. | Cloning of a DNA fragment from Streptomyces griseus which directs streptomycin phosphotransferase activity | |
| NL8001240A (nl) | Plasmide dna en werkwijze voor het verkrijgen daarvan. | |
| US4401761A (en) | Process for stabilizing plasmids by deletion of DNA | |
| NL8001379A (nl) | Plasmide dna en werkwijze voor het verkrijgen daarvan. | |
| EP0038156A2 (en) | A plasmid and its microbiological preparation | |
| US4686184A (en) | Gene transfer vector | |
| NL8001380A (nl) | Plasmide dna en werkwijze voor het verkrijgen daarvan. | |
| HU204090B (en) | Process for producing and using new gene marked by t1rb, ensuring tylosin resistance and applicable within the domain of streptomyces and other microorganisms | |
| NL8100853A (nl) | Plasmide dna en werkwijze voor het verkrijgen daarvan. | |
| MacNeil | A flexible boiling procedure for isolating plasmid DNA from gram-positive microorganisms |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A85 | Still pending on 85-01-01 | ||
| BV | The patent application has lapsed |