MXPA01008972A - Derivados de piridopiranoacepinas, preparacion y uso terapeutico. - Google Patents

Abstract

Compuestos de formula general (I) en la cual: R1 representa un atomo de hidrogeno, un grupo alquilo, fenilalquilo, fenilhidroxialquilo, furanilalquilo o furanilhidroxialquilo, R2 representa ya sea un atomo de hidrogeno o de halogeno o un grupo trifluorometilo, ciano, hidroxi, nitro, acetilo, alquilo, alcoxi, amino de formula general NR4R5 en la cual R4 y R5 representan cada uno un atomo de hidrogeno o un grupo alquilo o que forman, con el atomo de nitrogeno que los contiene, un ciclo en C4-C7, ya sea un grupo fenilo o naftilo eventualmente sustituido por un atomo de halogeno o un grupo trifluorometilo, trifluorometoxi, ciano, hidroxi, nitro, acetilo, alquilo, alcoxi, o metilenodioxi, y R3 representa un atomo de hidrogeno o de halogeno o un grupo alquilo.

Description

DERIVADOS DE P1RIDOPIRANOACEPINAS, PREPARACIÓN Y USO TERAPÉUTICO La presente invención tiene por objeto los compuestos de fórmula general (I) en la cual RL representa un átomo de hidrógeno, un grupo (C?-C4) alquilo, un grupo fenil (C?-C )alquilo, un grupo fenilhidroxi (C?-C4)alquilo, un grupo furanil(C1-C4)alquilo o un grupo furanilhidroxi (C? -C4) alquilo, R2 representa ya sea un átomo de hidrógeno o de halógeno o un grupo trifluorometilo, ciano, hidroxi, nitro, acetilo, (C1 -C6)alquilo, (C'1-C6)alcoxi o un grupo de fórmula general NR R5 en la cual R representa un átomo de hidrógeno o un grupo (C?-C ) alquilo o (d-C4)alcanoilo y R5 representa un átomo de hidrógeno o un grupo (C?-C4)alquilo, o bien R4 y R5 forman, con ei átomo de nitrógeno que los contiene, un ciclo en C4-C7, ya sea un grupo fenilo o naftilo eventualmente sustituido por un átomo de halógeno o un grupo trifluorometilo, trifluorometoxi, ciano, hidroxi, nitro, acetilo, (Ci-C6)alquilo,( Ci-CßJalcoxi, metilenodioxi enlazado en las posiciones 2 y 3 o 3 y 4 del ciclo fenilo, o fenilo, y R3 representa un átomo de hidrógeno o de halógeno o un grupo (d-C ) alquilo.

Los compuestos de fórmula general (I) pueden existir en estado de bases o de sales de adición a ácidos. Por otro lado, al ser asimétricos los átomos en posiciones 5a y 1 0a, un compuesto puede existir en forma de isómeros geométricos y ópticos puros o de mezclas de estos últimos. De acuerdo con la invención, pueden prepararse los compuestos de fórmula general (I) por un procedimiento ilustrado por el siguiente esquema. Esquema Se hace reaccionar un 2-metilpiridin-3-ol de fórmula general (I I) , en la cual R2 y R3 son tal como se han definido anteriormente, con un alquillitio, luego se condensa el intermediario así obtenido con la 1 -azabiciclo[2.2.2]octan-3-ona de fórmula (l l l), a baja temperatura y en un solvente aprótico tal como el tetrahidrofurano. Se obtiene un compuesto de fórmula general (IV) , sobre el cual se puede, si se desea, introducir o modificar los sustituyentes R2 y R3 según cualquiera de los métodos conocidos por el especialista. Se somete luego el compuesto de fórmula general (IV) a una deshidratación, acompañada por un reacondicionamiento en medio ácido, por ejemplo el ácido metansulfónico o el ácido sulfúrico a alta temperatura. Se obtiene un compuesto de fórmula general (la) , sobre el cual pueden modificarse los sustituyentes R2 y R3 y/o introducir el sustituyente Ri , según cualquiera de los métodos conocidos por el especialista. J Los compuestos de partida de fórmulas (I I) y (ll l) están disponibles en el comercio (R2=R3=H) o pueden ser preparados según métodos conocidos. Los ejemplos que siguen ilustran la preparación de algunos compuestos de la invención. Los microanálisis elementales y los espectros I.R. y R.M. N., así como los espectros de difracción de rayos X, en ciertos casos, confirman las estructuras de los compuestos obtenidos. Los números indicados entre paréntesis en los títulos de los ejemplos corresponden a los de l era columna de la tabla presentada más adelante.

En los nombres de los compuestos, el guión "-" forma parte del término, y el guión "_"; no se utiliza para el corte al final de la línea; se suprime en la ausencia de corte, y no debe reemplazarse ni por un guión normal ni por un espacio.

Ejemplo 1 (Compuesto N° 1 ) Clorhidrato de (r/-aA7s)-5a,6,7,9, 10, 1 1 -hexahidro-8, 10a-metanopirido[2', 3':5,6]pirano[2,3- ]acepina (2:1 ). 1 .1 . 3-[(3-Hidroxipiridin-2-il)metil]-1 -azabiciclo[2.2.2]octan-3-ol. En un matraz de triple cuello de 2000 ml se introducen 52,9 g (484 mmoles) de 2-metil-3-hidroxipiridina en solución en 1 300 ml de tetrahidrofurano bajo argón. Se enfría la solución a -56°C y se agregan 750 ml (975 mmoles) de una solución de 1 -metilpropillitio 1 ,3 M en el ciciohexano, gota a gota, en 3 hrs, manteniendo la temperatura inferior a -50°C. Al final de la adición, se deja que la temperatura se remonte hasta -4°C en 45 min, luego se enfría nuevamente a -58°C para agregar 60,6 g (484 mmoles) de 1 -azabiciclo[2.2.2]octan-3-ona en solución en 250 ml de tetrahidrofurano, gota a gota, en 40 min. Se deja que la temperatura se remonte a la temperatura ambiente y se mantiene la agitación durante 20 hrs. Se enfría la mezcla reactiva a 4°C y se hidroliza agregando 1 10 ml de una solución acuosa de ácido clorhídrico a 36%. Se agregan 400 ml de agua, se decantan las dos fases y se extrae la fase orgánica con agua. Se reúnen las fases acuosas, se enfría el medio a 4°C y se agrega una solución acuosa concentrada de hidróxido de sodio hasta pH 8,4. Se filtra el precipitado obtenido y se seca al vacío a 80°C Se obtienen así 62,5 g de producto. Punto de fusión: 270-272°C. 1.2. Clorhidrato de (frapsj-da.ß , 9,10,11-hexahidro-8,10a-metanopirido[2', 3':5,6]pirano(2,3-o')acep¡na (2:1). En un matraz de 50 ml se introducen 2,34 g (10 mmoles) de 3- [(3-hidroxipiridin-2-il)metil]-1-azabiciclo[2.2.2]octan-3-ol en solución en 10 mi de ácido metansulfónico y se calienta a 180°C durante 48 hrs. Se enfría el medio reactivo y se vierte en hielo. Se alcaliniza agregando una solución acuosa concentrada de hidróxido de sodio y se extrae con cloroformo. Se seca la fase orgánica sobre sulfato de magnesio y se concentra bajo presión reducida. Se purifica el residuo por cromatografía sobre columna de gel de sílice eluyendo con una mezcla 90/10/1 de cloroformo, métanol y amoníaco. Se obtiene el producto en forma de base que se salifica agregando una solución de ácido clorhídrico en el etanol. Se aisla 1,55 g de clorhidrato. Punto de fusión: >300°C. Ejemplo 2 (Compuesto N° 2) Clorhidrato de (5aS,10atf)-5a,6,7,9,10,11-hexahidro-8,10a-metanopirido[2', 3l:5,6]pirano[2,3-o']acepina (2:1). 2.1. (SR.dRM-J-O.O'-dibenzoil-L-tartrato de (5aS,10aft)-5a,6,7,9,10,11-hexahidro-8,10a-metanopirido[2', 3' :5, 6]pirano [2,3-d]acepina (1:2). En un matraz de 500 ml se introducen 15,335 g (0,0709 mol) de (íraf7s)-5a,6,7,9,10,11-hexahidro-8,10a-metanopirido[2', S^d.dJpirano^.S-cfjacepina en 50 ml de acetato de etilo. Se agrega una solución de 50,83 g (0,142 mol) de ácido SR.SRM-hCO'-dibenzoil-L- tartárico en 50 ml de acetato de etilo, se evapora el solvente bajo presión reducida y se disuelve el residuo en 885 ml de una mezcla 7/3 de agua y de etanol hasta el reflujo. Luego de enfriar se recogen los cristales obtenidos por filtrado y se recristalizan en 50 ml de propan-2-ol en caliente. Luego del enfriamiento se obtienen 13,7 g de cristales. Punto de fusión: 145-148°C; [a]%°= -1 04,3° (c=0,5, MeOH). 2.2. Clorhidrato de (5aS, 10aR)-5a,6,7,9, 1 0, 1 1 -hexahidro-8, 1 0a-metanopirido[2\ 3':5,6]pirano[2,3-d]acepina (2: 1 ). El tratamiento del compuesto precedente con una solución acuosa de carbonato de potasio, seguido de una extracción con diclorometano, permite obtener 3, 1 g (0,0143 mol) de compuesto en forma de base. Punto de fusión: 69-71 °C. [a °= -75,4° (C=1 , MeOH). En un matraz de 50 ml se coloca en solución esta base en 1 0 ml de etanol, se agregan 6 ml (0,030 mol) de una solución de ácido clorhídrico a 6 M en el propan-2-ol, se concentra la mezcla en seco bajo presión reducida, se retoma el residuo en 40 ml de propan-2-ol, se calienta hasta el reflujo y se agregan 5 ml de etanol. Luego de enfriar se recogen los cristales obtenidos por filtrado y se secan bajo presión reducida. Se obtienen 3,4 g de cristales blancos. Punto de fusión: 330°C ; [aj °= -85,3° (c=1 , MeOH). Ejemplo 3 (Compuesto N° 4). (frans)-2-Bromo-5a,6,7,9, 10, 1 1 -hexahidro-8, 1 0a-metanopir?do[2', 3':5,6]pirano[2,3-o']acepina. 3.1 . 3-[(6-Bromo-3-hidroxipiridin-2-il)metil]-1 -azabiciclo [2.2.2]octan-3-ol. En un matraz de 1000 ml se introducen 52,23 g (0,223 mol) de 3-[(3-hidroxipiridin-2-il)metil]-1 -azabiciclo [2.2.2]octan- 3-ol en suspensión en 500 ml de agua a temperatura ambiente. Se agregan 26,7 g (0,669 mol) de hidróxido de sodio en solución en 350 ml de agua y 26,5 g (0,223 mol) de bromuro de potasio, luego se agita hasta disolverlo completamente antes de agregar 1 1 ,5 ml (0,223 mol) de bromo, gota a gota, en 2 hrs. Se deja agitando durante 18 hrs. a temperatura ambiente, luego se neutraliza el medio reactivo agregando 23 ml de ácido acético. Se enfría en un baño de hielo y se filtra el precipitado obtenido. Se concentran las aguas madres y se tritura el precipitado obtenido en el propan-2-ol, se filtra y se enjuaga Se obtienen 27,9 g de producto. Punto de fusión: 215-221 °C. 3.2. (fra/7s)-2-Bromo-5a,6,7,9, 10, 1 1 -hexahidro-8, 10a-metano pirido[2,,3':5,6]pirano[2,3-o']acepina. En un matraz de 100 ml se introducen 6, 1 g de 3-[(6-bromo- 3-hidroxip¡ridin-2-il)metil]-1 -azabiciclo[2.2.2]octan-3-ol y 50 ml de ácido sulfúrico concentrado. Se calienta la mezcla a 1 30°C durante 72 hrs. , luego se enfría a temperatura ambiente y se vierte sobre hielo. Se alcaliniza la fase acuosa a pH 10 agregando una solución acuosa concentrada de hidróxido de sodio y se extrae con cloroformo. Se secan las fases orgánicas sobre sulfato de magnesio y se concentran bajo presión reducida. Se purifica el residuo por cromatografía sobre columna de gel de sílice eluyendo con una mezcla 90/10/4 de diclorometano, metanol y amoníaco. Se obtienen 1,2 g de producto. Punto de fusión: 157-159°C. Ejemplo 4 (Compuesto N°28) Bromhidrato de fra/?s-(-)-2-bromo-5a,6,7,9,10,11-hexahidro-8,10a-metanopirido[2', 3':5,6]pirano[2,3-d]acepina (1:1). 4.1. (3R,5/?)-(-)-O,O'-dibenzoil-L-tartrato de (5aS,10afi)-2-bromo-5a,6,7,9, 10,11-hexahidro-8,10a-metanopirido [2,,3':5,6]pirano[2,3-cf]acepina (1:2). En un matraz de 50 ml se introduce 0,3 g (1 mmol) de (trans)-2-bromo-5a,6,7,9,10,11-hexahidro-8,10a-metanopirido[2,,3':5,6]pirano[2,3-djacepina en solución en 10 ml de acetato de etilo, se agrega 0,358 g(1 mmo)de ácido O,O'-(-)-dibenzoil-L-tartárico en solución en 3 ml de acetato de etilo, se evapora el solvente bajo presión reducida y se ^cristaliza el residuo en 5 ml de propan-2-ol caliente. Luego de enfriar se recogen los cristales obtenidos por filtrado y se secan al vacío Se obtiene 0,12 g de cristales. Punto de fusión: 200°C. [a] °= -106° (c=0,5, MeOH). 4.2. Bromhidrato de íraf7s-(-)-2-bromo-5a,6,7,9,10,11-hexahidro-8,10a-metanopirido[2,,3,:5,6]pirano[2,3-/]acepina (1:1). El pasaje a la base se efectúa tratando el compuesto precedente con una solución acuosa de hidróxido de sodio, seguido de una extracción con diclorometano.

En un matraz de 100 ml se coloca en solución 0,3 g (1 mmol) de base en 30 ml de propan-2-ol. Se agrega 0,36 ml (2 mmoles) de una solución de ácido bromhídríco al 33% en el ácido acético. Luego de enfriar a 4°C se recogen los cristales obtenidos por filtrado y se secan al vacío. Se obtiene 0,25 g de cristales blancos. Punto de fusión: 350-352°C ; [a]%°= -76, 3° ,(c=0,5 MeOH) Ejemplo 5 (Compuesto N°24) Clorhidrato de rraAJS-(-)-2-cloro-5a,6,7,9,10,11-hexahidro- 8,10a-metanop¡rido[2\ 3':5,6]pirano[2,3-o']acepina (2:1). Se disuelve 0,2 g (0,68 mmol) de tta/7s-(-)-2-bromo- 5a,6,7,9,10,11-hexahidro-8,10a-metanopirido[2', 3':5,6]pirano [2,3-d]acep¡na en 4 ml de una solución acuosa concentrada de ácido clorhídrico y se calienta a 180°C en un tubo sellado durante 48 hrs. Se evapora la fase acuosa y se recristaliza el residuo en el propan-2-ol. Se obtiene 0,075 g de cristales. Punto de fusión: 339-344°C; [a]^0= -81° (c=0,5 MeOH). Ejemplo 6 (Compuesto N°27) Bromhidrato de (rrans)-2-ciano-5a,6,7,9,10,11-hexahidro-8,10a-metanop¡r¡do[2\ 3':5,6]pirano[2,3-d]acepina (1:1). En un matraz de 50 ml se coloca en solución 0,45 g (1,52 mmoi) de (fra/7s)-2-bromo-5a,6,7,9,10,11-hexahidro-8,10a-metano pirido[2,,3':5,6]pirano[2,3-d]acepina en 8 ml de piridina, se agregan 0,205 g (2,29 mmoles) de cianuro de cobre y se calienta hasta el reflujo durante 30 hrs.

Se agregan 75 ml de diclorometano y se lava la fase orgánica con 45 ml de una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, luego con 75 ml de agua. Luego de secar y concentrar la fase orgánica bajo presión reducida, se obtiene 0,22 g del producto esperado. Se coloca en solución en el propan-2-ol y se trata con un equivalente de ácido bromhídrico en solución al 33% en el ácido acético. Se obtiene luego de enfriar, recoger los cristales por filtrado y secar al vacío, 0,21 g de producto. Punto de fusión: 329-332°C. Ejemplo 7 (Compuesto N°10) Bromhidrato de (fraps)-2-(4-metilfenil)-5a,6,7,9, 1 0, 1 1 -hexahidro-8, 1 0a-metanop¡rido[2',3' :5,6]pirano[2,3-o']acepina (2: 1 ). t En un reactor de 10 ml se introduce 0,3 g (1 mmol) de (trans)- 2-bromo-5a,6,7,9, 10, 1 1 -hexahidro-8, 10a-metanopirido[2' ,3':5,6]pirano[2,3-djacepina en 6 ml de tolueno, 0, 1 93 g (1 ,4 mmol) de ácido 4-metilfenilborónico, 0,072 g (0,06 mmol) de éster de titanio de paladio(trifenilfosfina, 1 ml (2 mmoles) de carbonato de sodio en solución acuosa 2 M y 0, 05 ml de etanol, y se calienta el medio reactivo hasta el reflujo durante 72 hrs. Luego de decantar, se deposita la fase orgánica sobre gel de sílice y se eluye con una mezcla 97/3/0,3 de diclorometano, metanol y amoníaco. Se obtiene 0,31 g de producto que se salifica con dos equivalentes de ácido bromhídrico en solución en el ácido acético. Punto de fusión: 355°C.

Ejemplo 8 (Compuesto N°5) Clorhidrato de (fra/7s)-11-met¡1-5a,6,7,9,10,11-hexahidro-8,10a-metanopirido[2' 1 3,:5,6]pirano[2,3-c]acepina (2:1). En un matraz de triple cuello de 100 ml se introduce 0,43 g (2 mmoles) de (fra/7s)-5a,6,7,9,10,11-hexahidro-8,10a-metano pirido[2',3':5,6]pirano[2,3-d]acepina en 20 ml de tetrahidrofurano anhidro, se enfría el medio reactivo a -78°C para agregar 1,2 ml (3 mmoles) de butillitio 2,5 M en el hexano, gota a gota, y se continúa agitando a -78°C durante 30 min. Se agrega 0,19 ml (3 mmoles) de yodometano y se deja que la mezcla se caliente lentamente hasta temperatura ambiente antes de agregar 100 ml de agua y de extraer con diclorometano. Se seca la fase orgánica sobre sulfato de magnesio, se evapora bajo presión reducida y se purifica el residuo por cromatografía sobre gel de sílice eluyendo con una mezcla 90/10/1 de diclorometano, metanol y amoníaco. - Se trata el producto obtenido con dos equivalentes de ácido clorhídrico en solución en el propan-2-ol y se aisla por filtrado 0,15 g de cristales. Punto de fusión: >330°C. Ejemplo 9 (Compuesto N°9) Bromhidrato de (rra/?s)-a-furan-3-i1-5a,6,7,9,10,11-hexahidro-10a--8,10a-metanopirido[2,,3':5,6]pirano[2,3-d]acepina-11-metanol (2:1). Se trata 0,43 g (2 mmoles) de (íraps)-5a,6,7,9,10,11-hexah¡dro-8,10a-metanop¡rido[2,,3':5,6]pirano[2,3- ]acepina con furano-3-carboxaldehído en las condiciones descriptas en el ejemplo 8. Luego de salificar con 2 equivalentes de ácido bromhídrico en el ácido acético, se obtiene 0,3 g de compuesto. Punto de fusión: 69-73°C con descomposición. Ejemplo 1 0 (Compuesto N°26) Bromhidrato de (f?ans)-2,4-dibromo-5a,6,7,9, 10, 1 1 -hexahidro-8, 1 0a-metanopirido[2,,3':5,6]pirano[2,3-d]acepina (1 : 1 ). 10.1 . 3-[(4,6-dibromo-3-Hidroxipiridin-2-il)metil]-1 -azabiciclo[2.2.2]octan-3-ol. En un matraz de 2000 ml se introduce una solución de 24 g (0,426 mol) de hidróxido de potasio en 600 ml de agua, se agregan 50,0 g (0,213 mol) de 3-[(3-hidroxipiridin-2-íl)metil]-1 -azabiciclo[2.2.2]octan-3-ol, luego gota a gota en 40 min, una solución de 10,93 ml (0,213 mol) de bromo y 152,4 g (1 ,280 mol) de bromuro de potasio en 600 ml de agua, y se agita la mezcla a temperatura ambiente durante 16 hrs. Se ajusta el pH a 7,5 agregando ácido acético, se agita durante 1 h. Se filtra, se seca el sólido obtenido, se retoma eh 1000 ml de etanol y se calienta la suspensión obtenida durante 2 hrs. Luego de enfriar se recoge el precipitado mediante filtrado y se seca. Se obtienen 21 ,24 g de sólido. Punto de fusión: 260-265°C. 10.2. Bromhidrato de (íraf7s)-2,4-dibromo-5a,6,7,9, 1 0, 1 1 - hexahidro-8, 1 0a-metanopirido[2',3,:5,6]pirano[2,3-o']acepina (1 : 1 ). En un matraz de 500 ml se introducen 1 0 g (25 mmoles) de 3- [(4,6-dibromo-3-hidroxipiridin-2-il)metil]-1 -azabiciclo[2.2.2]octan-3-ol, se agregan 150 ml de ácido sulfúrico concentrado y 3,6 g (25 mmoles) de pentóxido de fósforo y se calienta la mezcla a 150°C durante 48 hrs. Se enfría, se vierte sobre 300 g de hielo, se ajusta el pH a 10 agregando amoníaco y se extrae con cloroformo. Se seca la fase orgánica sobre sulfato de sodio, se filtra, se evapora el solvente bajo presión reducida y se purifica el residuo por cromatografía sobre columna de gel de sílice eluyendo con una mezcla 98/2/0,2 de cloroformo, metanol y amoníaco. Luego de salificar el sólido obtenido con un equivalente de ácido bromhídrico en el ácido acético, se obtienen 3,53 g de bromhidrato. Punto de fusión: 320°C con descomposición. La tabla que sigue ilustra las estructuras químicas y las propiedades físicas de algunos compuestos de la invención. En las columnas KRJ' y "R2", "CeH5", "C6H4" y "C6H3" designan, respectivamente, grupos fenilos no sustituidos, monosustituídos o disustituidos. Se indican los sustituyentes y sus posiciones. "C4H3O" designa un grupo furan-3-ilo. "2-C? 0H7" designa un grupo naftalen-2-ilo. La columna "5a, 10a" indica la configuración de los centros quirales 5a y 10a y "+/-" designa un racemato. En la columna "Sel", "-" designa un compuesto en estado de base, "HCI" designa un clorhidrato, "HBr" designa un bromhidrato, "dbL" designa un dibenzoil-L-tartrato y "dbD" designa un dibenzoil-D-tartrato. Se indican las proporciones molares de ácido. base. En la columna "F(°C)", "(d)" indica un punto de fusión con descomposición.

Tabla I — - Ol Los compuestos de la invención han sido objeto de ensayos que evidenciaron sus propiedades terapéuticas. De este modo han sido estudiados en cuanto a su afinidad frente a receptores nicotínicos que contienen la subunidad a ß2 según los métodos descritos por Anderson y Arneric, Eur. J. Pharmacol (1 994) 253 261 , y por Hall y col. , Brain Res. (1993) 600 127. Se decapitan ratas macho Sprague Dawley de 1 50 a 200 g y se extrae rápidamente la totalidad del cerebro, se homogeneiza en 15 volúmenes de una solución de sucrosa a 0,32 M a 4°C, luego se centrifuga, a 1000 g durante 10 min. Se elimina el fondo y se centrifuga el sobrenadante a 20000 g durante 20 min a 4°C. Se recupera el fondo y se homogeneiza por medio de un triturador Polytron™ en 1 5 volúmenes de agua bidestilada a 4°C, luego se centrifuga a 8000 g durante 20 min. Se elimina el fondo y se centrifuga el sobrenadante y la capa de piel ("buffy coat") a 40000 g durante 20 min, se recupera el fondo, se coloca nuevamente en suspensión en 1 5 ml de agua bidestilada a 4°C y se centrifuga una vez a 40000 g antes de conservarlo a -80°C. El día del experimento se descongela lentamente el tejido y se pone en suspensión en 3 volúmenes de tampón. Se hacen incubar 150 µl de esta suspensión de membrana a 4°C durante 120 min en presencia de 100 µl de [3H]citisina 1 nM en un volumen final de 500 µl de tampón, en presencia o en ausencia de compuesto a probar. Se detiene la reacción por filtrado en filtros Whatman GF/B™ previamente tratados con poíietilenimina, se enjuagan los filtros con dos veces 5 ml de tampón a 4°C y se mide la radiactividad retenida en el filtro por centellografía líquida.

Se determina el enlace no específico en presencia de (-)-nicotina a 1 0 µM; eí enlace no específico representa 75 a 85% del enlace total recuperado sobre el filtro. Para cada concentración de compuesto estudiado se determina el porcentaje de inhibición del enlace específico de [3H]citisina, luego se calcula la Cls0, concentración de compuesto que inhibe el 50% del enlace específico. Las Cl50 de los compuestos de la invención más afines se sitúan entre 0,08 y 1 µM. Los compuestos de la invención también han sido estudiados en cuanto a su afinidad frente a receptores nicotínicos que contienen la subunidad al, según los métodos descritos por Marks y Collins, J. Pharmacol. Exp. Ther. (1982) 22 554 y por Marks et al.. , Mol. Pharmacol. (1986) 30 427 Se decapitan ratas macho OFA de 150 a 200 g, se extrae rápidamente la totalidad del cerebro, se homogeneiza por medio de un triturador Polytron™ en 15 volúmenes de una solución de sucrosa a 0,32 M a 4°C, luego de lo cual se centrifuga a 1000 g durante 10 min. Se elimina el fondo y se centrifuga el sobrenadante a 8000 g durante 20 min a 4°C. Se recupera el fondo y se homoge.neiza por medio de triturador Polytron™ en 15 volúmenes de agua bidestilada a 4°C, luego se centrifuga a 8000 g durante 20 min. Se elimina el fondo y se centrifuga el sobrenadante y la capa de piel ("buffy coat") a 40000 g durante 20 min. Se recupera el fondo, se coloca nuevamente en suspensión con 15 volúmenes de agua bidestilada a 4°C y se centrifuga una vez más a 40000 g durante 20 min antes de conservarlo a -80°C.

El día del experimento se descongela lentamente el tejido y se pone en suspensión en 5 volúmenes de tampón. Se preincuban 1 50 µl de esta suspensión de membrana a 37°C durante 30 min, a oscuras, en presencia o en ausencia del compuesto a probar. Luego se incuban las membranas durante 60 min a 37°C, a oscuras, en presencia de 50 µl de [3H]a-bungarotoxina 1 nM en un volumen final de 250 µl de tampón HEPES mM a 0,05% de polietilenimina. Se detiene la reacción por filtrado en , filtros Whatman GF/C™ previamente tratados durante 3 horas con polietilenoimina al 0,5%. Se enjuagan los filtros con dos veces 5 ml de tampón a 4°C y se mide la radiactividad retenida en el filtro por centellografía líquida. Se determina el enlace no específico en presencia de a-bungarotoxina a 1 µM .final; el enlace no específico representa aproximadamente el 60% del enlace total recuperado sobre el filtro. Para cada concentración de compuesto estudiado se determina el porcentaje de inhibición del enlace específico de [3H] a-bungarotoxina, luego se calcula la CI5o, concentración de compuesto que inhibe el 50% del enlace específico. Las Cl50 de los compuestos de la invención se sitúan entre 1 y 2 0 µM. Los compuestos de la invención también han sido estudiados en cuanto a su afinidad frente a receptores nicotínicos periféricos tipo ganglionar según el método descrito por Houghtling et al. , Mol. Pharmacol. (1995) 48 280-287. La capacidad de un compuesto de desplazar la [3H]-epibatidina de las membranas de glándulas suprarrenales de buey mide su afinidad para este receptor.

Se descongelan glándulas suprarrenales de buey conservadas a -80°C, se homogeneizan por medio de un triturador Polytron™ en 20 volúmenes de tampón Tris-HCl 50 mM a pH 7,4 a 4°C, luego de lo cual se centrifugan a 35000 g durante 10 min. Se elimina el sobrenadante y se vuelve a colocar en suspensión el fondo en 30 volúmenes de tampón Tris-HCl 50 mM a 4°C y se rehomogeneiza antes de volver a centrifugar a 35000 g durante 10 min. Se retoma el último fondo en 1 0 volúmenes de tampón Tris-HCl a 4°C. Se hacen incubar 100 µl de membrana, o sea 10 mg de tejido fresco a 24°C durante 3 hrs en presencia de 50 µl [3H]--epibatidina 0,66 nM final en un volumen final de 250 µl de tampón, en presencia o en ausencia del compuesto a probar. Se detiene la reacción por dilución de las muestras con tampón Tris-HCl 50 µM pH 7,4 a 4°C, luego se filtra en filtros Whatman GF/C™ previamente tratados durante 3 horas con polietilenimina al 0,5%. Se enjuagan los filtros dos veces con 5 ml de tampón y se mide la radiactividad retenida en el filtro por centellografía líquida. Se determina el enlace no específico en presencia de (-)nicotina 2mM final; el enlace no específico representa 30 a 40% del enlace total recuperado sobre el filtro. Para cada concentración de compuesto estudiado se determina el porcentaje de inhibición del enlace específico de [3H]-epibatidina, luego se calcula la Cl50, concentración de compuesto que inhibe el 50% del enlace específico. Las CI50 de los compuestos de la invención más afines se sitúan entre 9 y 20 µM. Los resultados de los ensayos precedentes demuestran que ciertos compuestos de la invención son ligandos selectivos para las subunidades a4ß2 del receptor nicotínico. Finalmente los compuestos de la inven ción fueron objeto de ensayos in vivo que evidenciaron sus propiedades terapéuticas. Así por ejemplo, han sido estudiados en el modelo de la placa calentadora, según el método de Eddy y Leimbach, J. Pharmacol. Exp. Ther. (1953) 107 385-393 con el objeto de investigar y cuantificar un eventual efecto analgésico. Ratas de 20 a 30 g fueron sometidas a un estímulo térmico por contacto de las patas con una placa mantenida a la temperatura constante, de 57,5°C con un baño María termostatado. Se mide el tiempo de reacción al dolor que se manifiesta por un lamido de patas o un salto. Así, luego del plazo de pretratamiento efectuado por vía subcutánea u oral (estando constituido cada lote por ocho animales para un mismo pretratamiento), las ratas son depositadas individualmente sobre la placa y se mide el tiempo de reacción al dolor. El animal es retirado de la placa inmediatamente luego de la manifestación del dolor. El tiempo máximo de exposición al estímulo es de 30 s. Se expresa para cada lote el tiempo medio de reacción acompañado del error estándar al promedio (e.e.p.) . Se efectúa un análisis de varianza no paramétrico (Kruskal-Wallis), sobre el conjunto del lote. Una prueba de Wilcoxon permite la comparación de cada lote tratado con el lote testigo. Las diferencias son consideradas estadísticamente significativas al umbral 5%. Este tiempo de reacción es aumentado significativamente con los analgésicos principalmente de efectos centrales. Los compuestos de la invención muestran una actividad en esta prueba en las dosis comprendidas entre 3 y 30 mg/kg por vía intraperitoneal u oral. Estos resultados sugieren la utilización de los compuestos en el tratamiento o la prevención de los desórdenes relacionados con una disfunción de los receptores nicotínicos, sobre todo al nivel del sistema nervioso central o del sistema gastrointestinal. Al nivel del sistema nervioso central, estos desórdenes comprenden las alteraciones cognitivas, más específicamente mnésicas, pero también atencionales, relacionadas con la enfermedad de Alzheimer, J el envejecimiento patológico (Age Associated Memory Impairment, AAMI), el síndrome Parkinsoniano, la trisomía 21 (Síndrome de Down), el síndrome alcohólico de Korsakoff, las demencias vasculares (multi-infarct dementia, MID). Los compuestos de la invención también podrían ser útiles para el tratamiento de los trastornos motores observados en la enfermedad de Parkinson u otras enfermedades neurológicas tales como la corea de Huntington, el síndrome de Tourette, la discinesia tardía y la hiperquinesia. Los compuestos de la invención también pueden constituir un tratamiento curativo o sintomático de los accidentes vasculares cerebrales y de los episodios hipóxicos cerebrales. Pueden ser utilizados en los casos de patologías psiquiátricas: esquizofrenia, depresión, ansiedad, ataques de pánico, comportamientos compulsivos y obsesivos. Pueden prevenir los síntomas provocados por la abstinencia al tabaco, al alcohol, a las diferentes sustancias que implican una dependencia, tales como la cocaína, el LSD, el canabis, las benzodiacepinas. Finalmente pueden ser útiles para el tratamiento del dolor. Al nivel del sistema gastrointestinal, los compuestos de la invención podrían ser útiles para el tratamiento de la enfermedad de Crohn, de la colitis ulcerosa, del síndrome del colon irritable y de la obesidad. A tal efecto, los compuestos de la invención pueden presentarse bajo cualquier forma de composiciones apropiadas para la administración enteral, parenteral o transdérmica, tales como comprimidos, grageas, pildoras, cápsulas, suspensiones o soluciones bebibles o inyectables tales como jarabes o ampollas, parches transdérmicos ("patch"), etc. , asociados a excipientes convenientes y dosificados para permitir una administración diaria de 0,01 a 20 mg/kg .

Claims (4)

1. REIVINDICACIONES 1 . Compuesto, en forma de isómero geométrico u óptico puro o de mezcla de tales isómeros, de fórmula general (I) en la cual Ri , representa un átomo de hidrógeno, un grupo (Ci-C ) alquilo, un grupo fenil (C -C4)alquilo, un grupo fenilhidroxi (C?-C4)alquilo, un grupo furanil(C1-C4)alquilo o un grupo furanilhidroxi (Cj-C4) alquilo, R2 representa ya sea un átomo de hidrógeno o de halógeno o un grupo trifluorometilo, ciano, hidroxr, nitro, acetilo, (Ci-Cejalquilo, (C?-C6)alcoxi o un grupo de fórmula general NR4R5 en la cual R representa un átomo de hidrógeno o un grupo (C?-C4) alquilo o (C?-C )alcanoilo y R5 representa un átomo de hidrógeno o un grupo (C?-C )alquilo, o bien R4 y R5 forman, con el átomo de nitrógeno que los contiene, un ciclo en C4-C7, ya sea un grupo fenilo o naftilo eventualmente sustituido por un átomo de halógeno o un grupo trifluorometilo, trifluorometoxi, ciano, hidroxi, nitro, acetilo, (Ci-C6)alquilo, ( C?-Cß)alcoxi, metilenodioxi enlazado en las posiciones 2 y 3 o 3 y 4 del ciclo fenilo, o fenilo, y R3 representa un átomo de hidrógeno o de halógeno o un grupo (C1-C4) alquilo, en estado de base o de sal de adición a un ácido.
2. 2. Procedimiento de preparación de compuestos según la reivindicación 1 , caracterizado porque se somete un compuesto de fórmula general (IV) en la cual R2 y R3 son tal como se han definido en la reivindicación 1 , a una deshidratación en medio ácido seguida de un reacondicionamiento a alta temperatura, para obtener un compuesto de fórmula general (la) sobre el cual, si se desea, se modifican los sustituyentes R2 y R3 y/o se introduce un sustituyente Ri tal como se ha definido en la reivindicación 1 .
3. 3. Medicamento caracterizado porqué consiste en un compuesto según la reivindicación 1 .
4. 4. Composición farmacéutica caracterizada porque contiene un compuesto según la reivindicación 1 , asociado a un excipiente.