MX2014000595A - Regulacion hacia abajo de la expresion de genes en plagas de insectos. - Google Patents
Regulacion hacia abajo de la expresion de genes en plagas de insectos.Info
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Abstract
La presente invención se refiere al control genético de infestación por parte de especies de plagas de insectos, particularmente a la prevención y/o el control de infestación por parte de plagas de plantas, utilizando moléculas de ácido ribonucleico (ARN) interferente. Composiciones y combinaciones que contienen las moléculas de ARN interferente de la invención para su uso en aplicaciones tópicas, por ejemplo, en forma de insecticidas.
Description
REGULACIÓN HACIA ABAJO DE LA EXPRESIÓN DE GENES EN
PLAGAS DE INSECTOS
Campo de la invención
La presente invención se refiere, en general, al control genético de infestación por parte de especies de plagas de insectos, particularmente a la prevención y/o el control de infestación por parte de plagas de plantas. Más específicamente, la invención se refiere a la regulación hacia abajo de la expresión de genes objetivo en especies de plagas de insectos por parte de moléculas de ácido ribonucleico (ARN) interferente. También se proporcionan composiciones y combinaciones que contienen las moléculas de ARN interferente de la invención para su uso en aplicaciones tópicas, por ejemplo, en forma de insecticidas.
Antecedentes de la invención
Existe abundancia de especies de plagas de insectos que pueden infectar o infestar una amplia variedad de ambientes y organismos huéspedes. Plagas de insectos incluyen una variedad de especies de los órdenes de insectos Hemiptera (chinches de campo), Coleóptera (escarabajos), Siphonaptera (pulgas), Dichyoptera (cucarachas y mantis), Lepidoptera (polillas y mariposas), Orthoptera (por ejemplo, langostas) y Díptera (moscas). La infestación por parte de plagas puede resultar en daños significativos. Las plagas de insectos que infestan especies de plantas son particularmente problemáticas en la agricultura, ya que pueden causar daños serios a cultivos y reducir significativamente los rendimientos de las plantas. Una amplia gama de diferentes tipos de plantas son susceptibles a la infestación por parte de plagas, incluyendo cultivos comerciales tales como arroz, algodón, soja, papa y maíz.
Tradicionalmente, la infestación con plagas de insectos se ha prevenido o controlado mediante el uso de plaguicidas químicos. Sin embargo, estos químicos no siempre son adecuados para su uso en el tratamiento de cultivos, ya que pueden ser tóxicos para otras especies y pueden provocar daño significativo al
medio ambiente. En las décadas más recientes, los investigadores han desarrollado métodos más ecológicos para controlar la infestación por parte de plagas. Por ejemplo, se han utilizado microorganismos tales como las bacterias Bacillus thuringiensis que expresan naturalmente proteínas tóxicas para plagas de insectos. Los científicos han aislado los genes que codifican estas proteínas insecticidas y las han utilizado para generar cultivos transgénicos resistentes a plagas de insectos, por ejemplo, plantas de maíz y algodón manipuladas genéticamente para producir proteínas de la familia Cry.
Si bien las toxinas bacterianas han sido sumamente exitosas para controlar ciertos tipos de plagas, no son efectivas contra todas las especies de plagas. Por lo tanto, los investigadores han buscado otros abordajes dirigidos para controlar las plagas y en particular para lograr una interferencia de ARN o 'silenciamiento de genes' como medio para controlar plagas a nivel genético.
La interferencia de ARN "iARN" es un proceso mediante el cual la expresión de genes en el contexto de una célula o todo un organismo se regula hacia abajo con especificidad de secuencia. La iARN actualmente es una técnica bien establecida en la técnica de inhibición o regulación hacia abajo de la expresión de genes en una amplia gama de organismos, incluyendo organismos de plagas tales como hongos, nemátodos e insectos. Más aun, estudios previos han demostrado que la regulación hacia abajo de genes objetivo en especies de plagas de insectos puede utilizarse como medio para controlar la infestación por parte de plagas.
El documento WO2007/074405 describe métodos para inhibir la expresión de genes objetivo en plagas invertebradas, incluyendo el escarabajo de la papa de Colorado. Más aun, el documento WO2009/091864 describe composiciones y métodos para la supresión de genes objetivo de especies de plagas de insectos, incluyendo plagas del género Lygus.
Si bien el uso de la iARN para regular hacia abajo la expresión de genes en especies de plagas es bien conocido en la técnica, el éxito de esta técnica como medida para controlar las plagas depende de la selección de los genes objetivo más apropiados, a saber, aquellos en los cuales la pérdida de función provoca una
alteración significativa en un proceso biológico esencial y/o la muerte del organismo. La presente invención se dirige así a la regulación hacia abajo de genes objetivo particulares en plagas de insectos como medio para alcanzar una prevención y/o control más efectivos de infestación por parte de plagas de insectos, particularmente de plantas.
Compendio de la invención
Los inventores de la presente buscaron identificar medios mejorados para prevenir y/o controlar la infestación por parte de plagas de insectos utilizando abordajes genéticos. En particular, investigaron el uso de la iARN para regular hacia abajo genes de forma tal que se altere la capacidad de la plaga de insectos de sobrevivir, crecer, colonizar ambientes específicos y/o infestar organismos huéspedes y así limitar el daño causado por la plaga.
Por lo tanto, de acuerdo con un aspecto de la invención, se proporciona un ácido ribonucleico interferente (ARN o ARN de doble hebra) que funciona tras la captación por parte de una especie de plaga de insectos para regular hacia abajo la expresión de un gen objetivo en dicha plaga de insectos,
en donde el ARN comprende al menos un elemento silenciador, en donde el elemento silenciador es una región de ARN de doble hebra que comprende hebras complementarias apareadas, de las cuales una hebra comprende o consiste en una secuencia de nucleótidos que es al menos parcialmente complementaria a una secuencia de nucleótidos objetivo dentro del gen objetivo, y en donde el gen objetivo
(i) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 11 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123,
132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleótidos que, cuando las dos secuencias se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 11 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 69, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, o
(ii) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que consiste en cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305,
129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161, 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 3 8 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, o
(Ni) se selecciona de un grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende un fragmento de al menos 21 , 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 700, 800, 900 1000, 1100, 1200, 1300, 1400, 1500, 2000 o 3000 nucleótidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 11 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleótidos que, cuando dicho gen que comprende dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 11 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226
a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305,
129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, dicha secuencia de nucleótidos es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 11 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, o
(iv) se selecciona de un grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende un fragmento de al menos 21 , 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 700, 800, 900 1000, 1100, 1200, 1300, 1400, 1500, 2000 o 3000 nucleótidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 11 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182,
130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a
225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, y en donde cuando dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con el fragmento correspondiente en cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, dicha secuencia de nucleótidos de dicho fragmento es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a dicho fragmento correspondiente de cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257,
158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, o
(v) es un ortólogo de plagas de insectos de un gen que tiene una secuencia de nucleótidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, en donde los dos genes ortólogos son similares en secuencia al punto de que cuando los dos genes se alinean y comparan de forma óptima, el ortólogo tiene una secuencia que es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las secuencias representadas mediante las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a
253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, 0
(vi) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que, cuando las dos secuencias de aminoácidos se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 70%, preferiblemente al menos 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a la secuencia de aminoácidos codificada por cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389.
En un aspecto particular de la invención, moléculas de ARN interferente de la presente invención comprenden al menos una región de doble hebra, típicamente el elemento silenciador del ARN interferente, que comprende una hebra de ARN sentido apareada mediante apareamiento de bases complementario a una hebra de ARN antisentido, en donde la hebra sentido de la molécula de ARNdh comprende una secuencia de nucleótidos complementaria a una secuencia de nucleótidos ubicada dentro del transcripto de ARN del gen objetivo.
En una realización, la presente invención se refiere a un ácido ribonucleico interferente (ARN o ARN de doble hebra) que funciona tras la captación por parte de una especie de plaga de insectos para regular hacia abajo la expresión de un gen objetivo en dicha plaga de insectos, en donde el ARN comprende al menos un elemento silenciador, en donde el elemento silenciador es una región de ARN de doble hebra que comprende hebras complementarias apareadas, de las cuales una hebra comprende o consiste en una secuencia de nucleotidos que es al menos parcialmente complementaria a una secuencia de nucleotidos objetivo dentro del gen objetivo, y en donde el gen objetivo
(i) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleotidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 121, 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233 o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleotidos de forma tal que, cuando las dos secuencias se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, o su complemento, o
(ii) se selecciona de un grupo de genes que tienen una secuencia de nucleotidos que comprende un fragmento de al menos 21 nucleotidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, o su complemento, o que tienen una secuencia
de nucleótidos de forma tal que, cuando dicho gen que comprende dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, dicha secuencia de nucleótidos es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, o su complemento, o
(iii) se selecciona de un grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende un fragmento de al menos 21 nucleótidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, o su complemento, y en donde cuando dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con el fragmento correspondiente en cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 2 3, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, dicha secuencia de nucleótidos de dicho fragmento es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a dicho fragmento correspondiente de cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122,
144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, o su complemento, o
(¡v) es un ortólogo de plagas de insectos de un gen que tiene una secuencia de nucleótidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, o su complemento, en donde los dos genes ortólogos son similares en secuencia al punto de que cuando los dos genes se alinean y comparan de forma óptima, el ortólogo tiene una secuencia que es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las secuencias representadas mediante las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233 o
(v) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que, cuando las dos secuencias de aminoácidos se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 85% preferiblemente al menos 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a la secuencia de aminoácidos codificada por cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233.
Estos genes objetivo codifican proteínas dentro del complejo troponina/miofilamentos.
En una realización adicional, la presente invención se refiere a un ácido ribonucleico interferente (ARN o ARN de doble hebra) que funciona tras la captación por parte de una especie de plaga de insectos para regular hacia abajo la expresión de un gen objetivo en dicha plaga de insectos, en donde el ARN comprende al menos un elemento silenciador, en donde el elemento silenciador es una región de ARN de doble hebra que comprende hebras complementarias apareadas, de las cuales una hebra comprende o consiste en una secuencia de nucleotidos que es al menos parcialmente complementaria a una secuencia de nucleotidos objetivo dentro del gen objetivo, y
en donde el gen objetivo
(i) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleotidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs. 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleotidos de forma tal que, cuando las dos secuencias se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs. 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, o su complemento, o
(ii) se selecciona de un grupo de genes que tienen una secuencia de nucleotidos que comprende un fragmento de al menos 21 nucleotidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs. 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 150, 151 , 242 a 245,
152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleotidos de forma tal que, cuando dicho gen que comprende dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con cualquiera de las SEQ ID NOs. 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 8, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, dicha secuencia de nucleotidos es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs. 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, o su complemento, o
(iii) se selecciona de un grupo de genes que tienen una secuencia de nucleotidos que comprende un fragmento de al menos 21 nucleotidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs. 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, o su complemento, y en donde cuando dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con el fragmento correspondiente en cualquiera de las SEQ ID NOs. 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, dicha secuencia de nucleotidos de
dicho fragmento es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a dicho fragmento correspondiente de cualquiera de las SEQ ID NOs. 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, o su complemento, o
(iv) es un ortólogo de plagas de insectos de un gen que tiene una secuencia de nucleótidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs. 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1, 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 150, 15 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, o su complemento, en donde los dos genes ortólogos son similares en secuencia al punto de que cuando los dos genes se alinean y comparan de forma óptima, el ortólogo tiene una secuencia que es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las secuencias representadas mediante las SEQ ID NOs. 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 11 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, o
(v) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que, cuando las dos secuencias de aminoácidos se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 85% preferiblemente al menos 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a la secuencia de aminoácidos codificada por cualquiera de las SEQ ID NOs. 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70,
150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273.
Estos genes objetivo codifican proteína ribosómicas de insecto.
En ciertas realizaciones, la presente invención se refiere a una molécula de
ARN interferente que comprende al menos una región de doble hebra, típicamente el elemento silenciador de la molécula de ARN interferente, que comprende una hebra de ARN sentido apareada mediante apareamiento de bases complementario a una hebra de ARN antisentido, en donde la hebra sentido de la molécula de ARNdh comprende una secuencia de al menos 17, 18, 19, 20, 21 , 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 70, 80, 90, 100, 1 10, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 700, 800, 900 1000, 1 100, 1200, 1300, 1400, 1500, 2000 o 3000 nucleótidos contiguos que es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 99% o 100% complementaria a una secuencia de nucleótidos ubicada dentro del transcripto de ARN de un gen objetivo del complejo troponina/miofilamentos.
En una realización, el gen objetivo codifica una proteína de insecto alas arriba {wings up) A (troponina I) (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG7 78 Dm), estando dicho gen objetivo representado por las SEQ ID NOs 1 , 2, 174, 404, 175, 180, 181 , 188 y 189. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99% o 100% de identidad secuencial en sus aminoácidos con respecto a una o más de las SEQ ID NOs. 79, 349, 405, 352 o 356. En una realización, el gen objetivo codifica una proteína sostenida (upheld) (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG7107 Dm), estando dicho gen objetivo representado por las SEQ ID NOs 121 , 130, 142, 143, 176, 177, 182 y 183. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99% o 100% de identidad secuencial en sus aminoácidos con respecto a una o más de las SEQ ID NOs. 330, 350 o 353. En una realización, el gen objetivo codifica la proteína tropomiosina 1 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG4898 Dm), o
la proteína tropomiosina 2 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG4843 Dm), estando dicho gen objetivo representado por las SEQ ID NOs 123 y 132. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99% o 100% de identidad secuencial en sus aminoácidos con respecto a la SEQ ID NO. 332. En una realización, el gen objetivo codifica la miosina de cadena pesada (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG17927 Dm), estando dicho gen objetivo representado por las SEQ ID NOs 122, 131 , 144, 145, 178 y 179. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99% o 100% de identidad secuencial en sus aminoácidos con respecto a una o más de las SEQ ID NOs. 331 o 351. En una realización, el gen objetivo codifica la proteína miosina citoplásmica de cadena liviana (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG3201 Dm), estando dicho gen objetivo representado por las SEQ ID NOs 124 y 133. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99% o 100% de identidad secuencial en sus aminoácidos con respecto a la SEQ ID NO. 333. En una realización, el gen objetivo codifica la proteína de calabaza espagueti (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG3595 Dm), estando dicho gen objetivo representado por las SEQ ID NOs 125 y 134. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99% o 100% de identidad con respecto a la SEQ ID NO. 334. En una realización, el gen objetivo codifica la proteína cremallera (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG15792 Dm), estando dicho gen objetivo representado por las SEQ ID NOs 126 y 135. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99% o 100% de identidad con respecto a la SEQ ID NO. 335. En una realización, el gen objetivo codifica la troponina C (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG2981 , CG7930, CG9073, CG6514, CG12408, CG9073, CG7930, CG2981 , CG12408 o CG6514 Dm), estando dicho gen objetivo representado por las SEQ ID NOs 127 y 136, o 128 y 137, o 184 y 185. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99% o 100% de identidad
secuencial en sus aminoácidos con respecto a una o más de las SEQ ID NOs. 336, 337 y 354.
De acuerdo con otra realización, la presente invención se refiere a una molécula de ARN interferente que comprende al menos una región de doble hebra, típicamente el elemento silenciador de la molécula de ARN interferente, que comprende una hebra de ARN sentido apareada mediante apareamiento de bases complementario a una hebra de ARN antisentido, en donde la hebra sentido de la molécula de ARNdh comprende una secuencia de al menos 17, 18, 19, 20, 21 , 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 700, 800, 900 1000, 1100, 1200, 1300, 1400, 1500, 2000 o 3000 nucleótidos contiguos que es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 99% o 100% complementaria a una secuencia de nucleótidos ubicada dentro del transcripto de ARN de un gen objetivo que codifica una proteína ribosómica de insecto. En una realización, el gen objetivo codifica la proteína ribosómica S3A (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG2168 Dm), estando dicho gen objetivo representado por las SEQ ID NOs 11 , 12 y 141 . En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99% o 100% de identidad secuencial en sus aminoácidos con respecto a una o ambas de las SEQ ID NO. 84 o 328. En una realización, el gen objetivo codifica la proteína ribosómica LP1 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG4087 Dm), estando dicho gen objetivo representado por SEQ ID NO 3 y 4. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99% o 100% de identidad secuencial en sus aminoácidos con respecto a la SEQ ID NO.80. En una realización, el gen objetivo codifica la proteína ribosómica S3 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG6779 Dm), estando dicho gen objetivo representado por las SEQ ID NOs 7 y 8. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99% o 100% de identidad secuencial en sus aminoácidos con respecto a la SEQ ID NO. 82. En una realización, el gen objetivo codifica la proteína ribosómica LI OAb (por
ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG7283 Dm) representada mediante las SEQ ID NOs 9 y 10. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99% o 100% de identidad secuencial en sus aminoácidos con respecto a la SEQ ID NO. 83. En una realización, el gen objetivo codifica la proteína ribosómica S18 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG8900 Dm), estando dicho gen objetivo representado por SEQ ID NO 13 y 14. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99% o 100% de identidad secuencial en sus aminoácidos con respecto a la SEQ ID NO.85. En una realización, el gen objetivo codifica la proteína ribosómica L4 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG5502 Dm), estando dicho gen objetivo representado por SEQ ID NO 5 y 6. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99% o 100% de identidad secuencial en sus aminoácidos con respecto a la SEQ ID NO.81 . En una realización, el gen objetivo codifica la proteína ribosómica S27 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG10423 Dm), estando dicho gen objetivo representado por SEQ ID NO 15 y 16, 204 y 205. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99% o 100% de identidad secuencial en sus aminoácidos con respecto a una o ambas de las SEQ ID NOs. 86 y 359. En una realización, el gen objetivo codifica la proteína ribosómica L6 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG1 1522 Dm), estando dicho gen objetivo representado por SEQ ID NO 17 y 18. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99% o 100% de identidad secuencial en sus aminoácidos con respecto a la SEQ ID NO. 87. En una realización, el gen objetivo codifica la proteína ribosómica S13 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG13389 Dm), estando dicho gen objetivo representado por SEQ ID NO 19 y 20. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99% o 100% de identidad secuencial en sus aminoácidos con respecto a la SEQ ID NO. 88. En una realización, el gen objetivo codifica la proteína
ribosómica L12 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG3195 Dm), estando dicho gen objetivo representado por las SEQ ID NOs 21 y 22. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99% o 100% de identidad secuencial en sus aminoácidos con respecto a la SEQ ID NO.89. En una realización, el gen objetivo codifica la proteína ribosómica L26 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG6846 Dm), estando dicho gen objetivo representado por las SEQ ID NOs 158 y 159. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99% o 100% de identidad secuencial en sus aminoácidos con respecto a la SEQ ID NO. 343. En una realización, el gen objetivo codifica la proteína ribosómica L21 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG12775 Dm), estando dicho gen objetivo representado por SEQ ID NO 165, 166 y 167. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99% o 100% de identidad secuencial en sus aminoácidos con respecto a las SEQ ID NOs 347 y 348. En una realización, el gen objetivo codifica la proteína ribosómica S12 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG1 1271 Dm), estando dicho gen objetivo representado por las SEQ ID NOs 156 y 157. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99% o 100% de identidad secuencial en sus aminoácidos con respecto a la SEQ ID NO. 342. En una realización, el gen objetivo codifica la proteína ribosómica S28b (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG2998 Dm), estando dicho gen objetivo representado por las SEQ ID NOs 160 y 161 . En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99% o 100% de identidad secuencial en sus aminoácidos con respecto a la SEQ ID NO. 344. En una realización, el gen objetivo codifica la proteína ribosómica L13 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG4651 Dm), estando dicho gen objetivo representado por SEQ ID NOs 154 y 155. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99% o 100% de identidad secuencial en sus aminoácidos con respecto a la SEQ ID NO. 341. En una realización, el gen objetivo codifica la
proteína ribosómica L10 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG17521 Dm), estando dicho gen objetivo representado por SEQ ID NOs 163 y 164. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99% o 100% de identidad secuencial en sus aminoácidos con respecto a la SEQ ID NO. 345. En una realización, el gen objetivo codifica la proteína ribosómica L5 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG17489 Dm), estando dicho gen objetivo representado por SEQ ID NOs 152 y 153. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99% o 100% de identidad secuencial en sus aminoácidos con respecto a la SEQ ID NO. 340. En una realización, el gen objetivo codifica la proteína ribosómica S15Aa (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG2033 Dm), estando dicho gen objetivo representado por SEQ ID NOs 150 y 151. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99% o 100% de identidad secuencial en sus aminoácidos con respecto a la SEQ ID NO. 339. En una realización, el gen objetivo codifica la proteína ribosómica L19 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG2746 Dm), estando dicho gen objetivo representado por las SEQ ID NOs. 200 y 201. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99% o 100% de identidad secuencial en sus aminoácidos con respecto a la SEQ ID NO. 357.
En una realización, el gen objetivo codifica la proteína ribosómica L27 (p. ej., un ortólogo de insecto de la proteína CG4759 Dm), estando dicho gen objetivo representado por la SEQ ID NO. 386. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99% o 100% de identidad secuencial en sus aminoácidos con respecto a la SEQ ID NO. 390. En una realización, el gen objetivo codifica la subunidad II de la proteína citocromo c oxidasa mitocondrial (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG34069 Dm), estando dicho gen objetivo representado por SEQ ID NO 25 y 26. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99% o 100% de identidad secuencial en sus aminoácidos con respecto
a la SEQ ID NO. 91. En una realización, el gen objetivo codifica la cadena ? de ATP sintasa (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG7610 Dm), estando dicho gen objetivo representado por las SEQ ID NOs 129 y 138. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99% o 100% de identidad secuencial en sus aminoácidos con respecto a la SEQ ID NO. 338. En una realización, el gen objetivo codifica la ubiquitina-5E (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG32744 Dm), estando dicho gen objetivo representado por las SEQ ID NOs. 186 y 187, 202 y 203. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99% o 100% de identidad secuencial en sus aminoácidos con respecto a una o ambas de las SEQ ID NOs. 355 y 358. En una realización, el gen objetivo codifica la subunidad tipo beta de proteasoma (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG17331 Dm), estando dicho gen objetivo representado por la SEQ ID NO. 387. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99% o 100% de identidad secuencial en sus aminoácidos con respecto a la SEQ ID NO. 391 .
En una realización, el gen objetivo codifica la proteína que es un ortólogo de insecto de la proteína CG13704 Dm, estando dicho gen objetivo representado por la SEQ ID NO. 388. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99% o 100% de identidad secuencial en sus aminoácidos con respecto a la SEQ ID NO. 392.
En una realización, el gen objetivo codifica la proteína Rpn 12 (p. ej., un ortólogo de insecto de la proteína CG4157 Dm), estando dicho gen objetivo representado por la SEQ ID NO. 389. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99% o 100% de identidad secuencial en sus aminoácidos con respecto a la SEQ ID NO. 393.
De acuerdo con un segundo aspecto de la invención, se proporciona una composición para prevenir y/o controlar la infestación por parte de plagas de insectos que comprende al menos un ácido ribonucleico (ARN) interferente y al menos un portador, excipiente o diluyente aceptable, en donde el ARN interferente
funciona tras la captación por parte de la plaga para regular hacia abajo la expresión de un gen objetivo dentro de dicha plaga,
en donde el ARN comprende al menos un elemento silenciador, en donde el elemento silenciador es una región de ARN de doble hebra que comprende hebras complementarias apareadas, de las cuales una hebra comprende o consiste en una secuencia de nucleótidos que es al menos parcialmente complementaria a una secuencia de nucleótidos objetivo dentro del gen objetivo, y en donde el gen objetivo
(i) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 11 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21. 22, 67 a 70,
23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123,
132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161, 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleótidos de forma tal que, cuando las dos secuencias se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 75% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 11 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23,
24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226
a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, o
(ii) se selecciona de un grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende un fragmento de al menos 21 nucleótidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleótidos de forma tal que, cuando dicho gen que comprende dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150,
151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, dicha secuencia de nucleótidos es al menos 75% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, o
(iii) se selecciona de un grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende un fragmento de al menos 21 nucleótidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317,
186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, y en donde cuando dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con el fragmento correspondiente en cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 77, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, dicha secuencia de nucleotidos de dicho fragmento es al menos 75% idéntica a dicho fragmento correspondiente de cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 89, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 54, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, o
(iv) es un ortólogo de plagas de insectos de un gen que tiene una secuencia de nucleotidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180,
188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 50, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, en donde los dos genes ortólogos son similares en secuencia al punto de que cuando los dos genes se alinean y comparan de forma óptima, el ortólogo tiene una secuencia que es al menos 75% idéntica a cualquiera de las secuencias representadas mediante las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 1 73, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o
(v) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que, cuando las dos secuencias de aminoácidos se alinean y comparan de forma óptima, es al menos
85% idéntica a la secuencia de aminoácidos codificada por cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 11 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389.
La composición de la invención pueden utilizarse para prevenir y/o controlar de infestación por parte de plagas. En ciertas realizaciones, la composición puede utilizarse como plaguicida para una planta o para material de propagación o reproducción de una planta. En un aspecto adicional, en la presente se proporciona una combinación para prevenir y/o controlar la infestación por parte de plagas que comprende la composición de la invención y al menos otro agente activo.
En un aspecto adicional, en la presente se proporciona un método para regular hacia abajo la expresión de un gen objetivo en una especie de plaga de insectos para prevenir y/o controlar una infestación por parte de plagas, que comprende poner en contacto dicha especie de plaga con una cantidad efectiva de al menos un ácido ribonucleico (ARN) interferente, en donde el ARN interferente funciona tras la captación por parte de la plaga para regular hacia abajo la expresión de un gen objetivo dentro de dicha plaga, en donde el ARN comprende al menos un elemento silenciador, en donde el elemento silenciador es una región de ARN de doble hebra que comprende hebras complementarias apareadas, de las cuales una hebra comprende o consiste en una secuencia de nucleótidos que
es al menos parcialmente complementaria a una secuencia de nucleótidos objetivo dentro del gen objetivo, y en donde el gen objetivo
(i) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleótidos de forma tal que, cuando las dos secuencias se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 75, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317,
186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, o
(¡i) se selecciona de un grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende un fragmento de al menos 21 nucleótidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleótidos de forma tal que, cuando dicho gen que comprende dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, dicha secuencia de
nucleótidos es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, o
(iii) se selecciona de un grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende un fragmento de al menos 21 nucleótidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, y en donde cuando dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con el fragmento correspondiente en cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180,
188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, dicha secuencia de nucleótidos de dicho fragmento es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a dicho fragmento correspondiente de cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, o
(iv) es un ortólogo de plagas de insectos de un gen que tiene una secuencia de nucleótidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a
54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, en donde los dos genes ortólogos son similares en secuencia al punto de que cuando los dos genes se alinean y comparan de forma óptima, el ortólogo tiene una secuencia que es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las secuencias representadas mediante las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o
(v) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que, cuando las dos secuencias de aminoácidos se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 85% preferiblemente al menos 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a la secuencia de
aminoácidos codificada por cualquiera de las SEQ ID NOs. Las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 30 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389.
De acuerdo con un aspecto adicional de la invención, se proporciona un polinucleótido aislado que se selecciona del grupo que consiste en:
(i) un polinucleótido que comprende al menos 21 , preferiblemente al menos 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 70, 80, 90, 100, 1 10, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 700, 800, 900, 1000, 1100, 1200, 1300, 1400, 1500, 2000 o 3000 nucleótidos contiguos de una secuencia de nucleótidos tal como se representa mediante cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170,
169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, o
(¡i) un polinucleótido que consiste en al menos 21 , preferiblemente al menos 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 70, 80, 90, 100, 1 10, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 700, 800, 900, 1000, 1 100, 1200, 1300, 1400, 1500, 2000 o 3000 nucleótidos contiguos de una secuencia de nucleótidos tal como se representa mediante cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 47, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 87, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, o
(iii) un polinucleótido que comprende al menos 21 , preferiblemente al menos 22, 23 o 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 70, 80, 90, 100, 1 10, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 700, 800, 900, 1000, 1 100, 1200, 1300, 1400, 1500, 2000 o 3000 nucleótidos contiguos de una secuencia de nucleótidos tal como se representa mediante cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46,
141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 ,
142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146,
125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, que, cuando las dos secuencias se alinean y comparan de forma óptima, dicho polinucleótido es al menos 75 % preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntico a cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, o
(iv) un polinucleótido que comprende un fragmento de al menos 21 , preferiblemente al menos 22, 23 o 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 70, 80, 90, 100, 1 10, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 700, 800, 900, 1000, 1 100, 1200, 1300, 1400, 1500, 2000 o 3000 nucleótidos contiguos de un nucleótido tal como se representa mediante cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 ,
142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178,
131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, y en donde dicho fragmento o dicho complemento tiene una secuencia de nucleótidos que, cuando dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con el fragmento correspondiente en cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 41 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123,
132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, dicha secuencia de nucleótidos es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a dicho fragmento correspondiente de cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133,
218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389 o su complemento, o (v) un polinucleótido que consiste en un fragmento de al menos 21 , preferiblemente al menos 22, 23 o 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 70, 80, 90, 100, 1 10, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 700, 800, 900, 1000, 1 100, 1200, 1300, 1400, 1500, 2000 o 3000 nucleótidos contiguos de un nucleótido tal como se representa mediante cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46,
141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 8 66, 21 , 22, 67 3 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 ,
142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, y en donde dicho fragmento o dicho complemento tiene una secuencia de nucleótidos que, cuando dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con el fragmento correspondiente en cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209,
286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 3 8 a 321 , 386, 387, 388, 389, dicha secuencia de nucleótidos es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a dicho fragmento correspondiente de cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389 o su complemento, o (vi) un polinucleótido que codifica una secuencia de aminoácidos que, cuando las dos secuencias de aminoácidos se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 70 % preferiblemente al menos 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a la secuencia de aminoácidos codificada por cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178,
131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, y
en donde dicho polinucleótido no tiene más de 10000, 9000, 8000, 7000, 6000, 5000, 4000, 3000, 2000 o 1500 nucleótidos de longitud.
Las secuencias de aminoácidos codificadas por los genes objetivo de la presente invención se representan mediante las SEQ ID NOs 79, 349, 405, 352, 356, 80, 326, 81 , 327, 82, 83, 328, 84, 329, 85, 86, 359, 87 a 91 , 330, 350, 353, 331 , 351 , 332 a 336, 337, 354, 338 a 344, 346, 345, 347, 348, 357, 355, 358, 390 a 393, respectivamente.
En un aspecto particular de la invención, el polinucleótido aislado es parte de una molécula de ARN interferente, típicamente parte del elemento silenciador, que comprende al menos una región de doble hebra que comprende una hebra de ARN sentido apareada mediante apareamiento de bases complementario a una hebra de ARN antisentido, en donde la hebra sentido de la molécula de ARNdh comprende una secuencia de nucleótidos complementaria a una secuencia de nucleótidos ubicada dentro del transcripto de ARN del gen objetivo. Más particularmente, el polinucleótido aislado se clona en un constructo de ADN en una orientación sentido y antisentido de forma tal que al transcribirse el polinucleótido sentido y antisentido se forma una molécula de ARNdh, que funciona tras la captación por parte de una plaga para inhibir o regular hacia abajo la expresión de un gen objetivo dentro de dicha plaga.
En una realización, la presente invención se refiere a un polinucleótido aislado que se clona en un constructo de ADN en una orientación sentido y antisentido de forma tal que al transcribirse el polinucleótido sentido y antisentido se forma una molécula de ARNdh, que funciona tras la captación por parte de un
insecto para inhibir o regular hacia abajo la expresión de un gen objetivo dentro del complejo troponina/miofilamentos.
En una realización, el gen objetivo codifica una proteína de insecto alas arriba (wings up) A (troponina I) (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG7178 Dm), estando dicho gen objetivo representado por las SEQ ID NOs 1 , 2, 174, 404, 175, 180, 181 , 188 y 189. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99% o 100% de identidad secuencial en sus aminoácidos con respecto a una o más de las SEQ ID NOs. 79, 349, 405, 352 o 356. En una realización, el gen objetivo codifica una proteína sostenida (upheld) (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG7107 Dm), estando dicho gen objetivo representado por las SEQ ID NOs 121 ,
130, 142, 143, 176, 177, 182 y 183. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99% o 100% de identidad secuencial en sus aminoácidos con respecto a una o más de las SEQ ID NOs. 330, 350 o 353. En una realización, el gen objetivo codifica la proteína tropomiosina 1 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG4898 Dm), o la proteína tropomiosina 2 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG4843 Dm), estando dicho gen objetivo representado por las SEQ ID NOs 123 y 132. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99% o 100% de identidad secuencial en sus aminoácidos con respecto a la SEQ ID NO. 332. En una realización, el gen objetivo codifica la miosina de cadena pesada (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG17927 Dm), estando dicho gen objetivo representado por las SEQ ID NOs 122,
131 , 144, 145, 178 y 179. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99% o 100% de identidad secuencial en sus aminoácidos con respecto a una o más de las SEQ ID NOs. 331 o 351. En una realización, el gen objetivo codifica la proteína miosina citoplásmica de cadena liviana (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG3201 Dm), estando dicho gen objetivo representado por las SEQ ID NOs 124 y 133. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%,
96%, 98%, 99% o 100% de identidad secuencial en sus aminoácidos con respecto a la SEQ ID NO. 333. En una realización, el gen objetivo codifica la proteína de calabaza espagueti (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG3595 Dm), estando dicho gen objetivo representado por las SEQ ID NOs 125 y 134. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99% o 100% de identidad con respecto a la SEQ ID NO. 334. En una realización, el gen objetivo codifica la proteína cremallera (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG15792 Dm), estando dicho gen objetivo representado por las SEQ ID NOs 126 y 135. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99% o 00% de identidad con respecto a la SEQ ID NO. 335. En una realización, el gen objetivo codifica la troponina C (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG2981 , CG7930, CG9073, CG6514, CG12408, CG9073, CG7930, CG2981 , CG12408 o CG6514 Dm), estando dicho gen objetivo representado por las SEQ ID NOs 127 y 136, o 128 y 137, o 184 y 185. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99% o 100% de identidad secuencial en sus aminoácidos con respecto a una o más de las SEQ ID NOs. 336, 337 y 354.
De acuerdo con otras realizaciones, la presente invención se refiere a un polinucleotido aislado que se clona en un constructo de ADN en una orientación sentido y antisentido de forma tal que al transcribirse el polinucleotido sentido y antisentido se forma una molécula de ARNdh, que funciona tras la captación por parte de un insecto para inhibir o regular hacia abajo la expresión de un gen objetivo que codifica una proteína ribosómica de insecto.
En una realización, el gen objetivo codifica la proteína ribosómica S3A (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG2168 Dm), estando dicho gen objetivo representado por las SEQ ID NOs 1 1 , 12 y 141 . En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99% o 100% de identidad secuencial en sus aminoácidos con respecto a una o ambas de las SEQ ID NOs. 84 o 328. En una realización, el gen objetivo codifica
la proteína ribosómica LP1 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG4087 Dm), estando dicho gen objetivo representado por SEQ ID NO 3 y 4. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99% o 100% de identidad secuencial en sus aminoácidos con respecto a la SEQ ID NO.80. En una realización, el gen objetivo codifica la proteína ribosómica S3 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG6779 Dm), estando dicho gen objetivo representado por las SEQ ID NOs 7 y 8. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99% o 100% de identidad secuencial en sus aminoácidos con respecto a la SEQ ID NO. 82. En una realización, el gen objetivo codifica la proteína ribosómica L10Ab (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG7283 Dm) representada mediante las SEQ ID NOs 9 y 10. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99% o 100% de identidad secuencial en sus aminoácidos con respecto a la SEQ ID NO. 83. En una realización, el gen objetivo codifica la proteína ribosómica S18 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG8900 Dm), estando dicho gen objetivo representado por SEQ ID NO 13 y 14. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99% o 100% de identidad secuencial en sus aminoácidos con respecto a la SEQ ID NO.85. En una realización, el gen objetivo codifica la proteína ribosómica L4 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG5502 Dm), dicho gen objetivo está representado por SEQ ID NO 5 y 6. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99% o 100% de identidad secuencial en sus aminoácidos con respecto a la SEQ ID NO.81 . En una realización, el gen objetivo codifica la proteína ribosómica S27 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG10423 Dm), estando dicho gen objetivo representado por SEQ ID NO 15 y 16, 204 y 205. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99% o 100% de identidad secuencial en sus aminoácidos con respecto a una o ambas de las SEQ ID NOs. 86 y 359. En una realización, el gen objetivo codifica la proteína
ribosómica L6 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG1 1522 Dm), estando dicho gen objetivo representado por SEQ ID NO 17 y 18. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99% o 100% de identidad secuencial en sus aminoácidos con respecto a la SEQ ID NO. 87. En una realización, el gen objetivo codifica la proteína ribosómica S13 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG13389 Dm), estando dicho gen objetivo representado por SEQ ID NO 19 y 20. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99% o 100% de identidad secuencial en sus aminoácidos con respecto a la SEQ ID NO. 88. En una realización, el gen objetivo codifica la proteína ribosómica L12 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG3195 Dm), estando dicho gen objetivo representado por las SEQ ID NOs 21 y 22. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99% o 100% de identidad secuencial en sus aminoácidos con respecto a la SEQ ID NO.89. En una realización, el gen objetivo codifica la proteína ribosómica L26 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG6846 Dm), estando dicho gen objetivo representado por las SEQ ID NOs 158 y 159. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99% o 100% de identidad secuencial en sus aminoácidos con respecto a la SEQ ID NO. 343. En una realización, el gen objetivo codifica la proteína ribosómica L21 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG 12775 Dm), estando dicho gen objetivo representado por SEQ ID NO 165, 166 y 167. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99% o 100% de identidad secuencial en sus aminoácidos con respecto a las SEQ ID NOs 347 y 348. En una realización, el gen objetivo codifica la proteína ribosómica S12 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG1 1271 Dm), estando dicho gen objetivo representado por las SEQ ID NOs 156 y 157. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99% o 100% de identidad secuencial en sus aminoácidos con respecto a la SEQ ID NO. 342. En una realización, el gen
objetivo codifica la proteína ribosomica S28b (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CCG2998 Dm), estando dicho gen objetivo representado por las SEQ ID NOs 160 y 161 . En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99% o 100% de identidad secuencial en sus aminoácidos con respecto a la SEQ ID NO. 344. En una realización, el gen objetivo codifica la proteína ribosomica L13 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG4651 Dm), estando dicho gen objetivo representado por SEQ ID NOs. 154 y 155. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99% o 100% de identidad secuencial en sus aminoácidos con respecto a la SEQ ID NO. 341 . En una realización, el gen objetivo codifica la proteína ribosómica L10 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG17521 Dm), estando dicho gen objetivo representado por SEQ ID NOs. 163 y 164. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99% o 100% de identidad secuencial en sus aminoácidos con respecto a la SEQ ID NO. 345. En una realización, el gen objetivo codifica la proteína ribosómica L5 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG17489 Dm), estando dicho gen objetivo representado por SEQ ID NOs. 152 y 153. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99% o 100% de identidad secuencial en sus aminoácidos con respecto a la SEQ ID NO. 340. En una realización, el gen objetivo codifica la proteína ribosómica S15Aa (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG2033 Dm), estando dicho gen objetivo representado por SEQ ID NOs. 150 y 151. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99% o 100% de identidad secuencial en sus aminoácidos con respecto a la SEQ ID NO. 339. En una realización, el gen objetivo codifica la proteína ribosómica L19 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG2746 Dm), estando dicho gen objetivo representado por las SEQ ID NOs. 200 y 201. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99% o 100% de identidad secuencial en sus aminoácidos con respecto a la SEQ ID NO. 357.
En una realización, el gen objetivo codifica la proteína ribosómica L27 (p. ej., un ortólogo de insecto de la proteína CG4759 Dm), estando dicho gen objetivo representado por la SEQ ID NO. 386. En una realización preferida, el ortólogo de insecto tiene al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99% o 100% de identidad secuencial en sus aminoácidos con respecto a la SEQ ID NO. 390.
Preferiblemente, los métodos de la invención tienen aplicación práctica en la prevención y/o el control de infestación por parte de plagas de insectos, en particular, control de infestación por parte de plagas de plantas de cultivo tales como, a modo no taxativo, algodón, papa, arroz, fresas, alfalfa, soja, tomate, cañóla, girasol, sorgo, mijo, maíz, berenjena, pimiento y tabaco. Adicionalmente, el ARN interferente de la invención puede introducirse en las plantas a proteger mediante técnicas de ingeniería genética de rutina.
En todos los aspectos de la invención, en realizaciones preferidas el gen objetivo
(i) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleótidos de forma tal que, cuando las dos secuencias se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, o su complemento, o
(ii) se selecciona de un grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende un fragmento de al menos 21 nucleótidos contiguos
de cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleótidos de forma tal que, cuando dicho gen que comprende dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, dicha secuencia de nucleótidos es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, o su complemento, o
(iii) se selecciona de un grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende un fragmento de al menos 21 nucleótidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233 o su complemento, y en donde cuando dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con el fragmento correspondiente en cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226
a 229, 127, 148, 136, 230 a 233 dicha secuencia de nucleótidos de dicho fragmento es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a dicho fragmento correspondiente de cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233 o su complemento, o
(¡v) es un ortólogo de plagas de insectos de un gen que tiene una secuencia de nucleótidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 22, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, o su complemento, en donde los dos genes ortólogos son similares en secuencia al punto de que cuando los dos genes se alinean y comparan de forma óptima, el ortólogo tiene una secuencia que es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las secuencias representadas mediante las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, o
(v) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que, cuando las dos secuencias de aminoácidos se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 85% preferiblemente al menos 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a la secuencia de aminoácidos codificada por cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a
213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233.
Estos genes objetivo codifican proteínas dentro del complejo troponina/miofilamentos.
En todos los aspectos de la invención, en realizaciones preferidas, el gen objetivo
(i) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleotidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs. 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleotidos de forma tal que, cuando las dos secuencias se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs. 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, o su complemento, o
(ii) se selecciona de un grupo de genes que tienen una secuencia de nucleotidos que comprende un fragmento de al menos 21 nucleotidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs. 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleotidos de forma tal que, cuando dicho gen que comprende dicho fragmento se alinea y compara de forma
óptima con cualquiera de las SEQ ID NOs. 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, dicha secuencia de nucleotidos es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs. 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, o su complemento, o
(iii) se selecciona de un grupo de genes que tienen una secuencia de nucleotidos que comprende un fragmento de al menos 21 nucleotidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs. 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, o su complemento, y en donde cuando dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con el fragmento correspondiente en cualquiera de las SEQ ID NOs. 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, dicha secuencia de nucleotidos de dicho fragmento es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a dicho fragmento correspondiente de cualquiera de las SEQ ID NOs. 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18,
59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249,
154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, o su complemento, o
(iv) es un ortólogo de plagas de insectos de un gen que tiene una secuencia de nucleótidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs. 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, o su complemento, en donde los dos genes ortólogos son similares en secuencia al punto de que cuando los dos genes se alinean y comparan de forma óptima, el ortólogo tiene una secuencia que es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las secuencias representadas mediante las SEQ ID NOs. 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, o
(v) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que, cuando las dos secuencias de aminoácidos se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 85% idéntica a la secuencia de aminoácidos codificada por cualquiera de las SEQ ID NOs. 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154,
155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273.
Estos genes objetivo codifican proteína ribosómicas de insecto.
En todos los aspectos de la invención, en realizaciones preferidas, el gen objetivo (i) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleótidos de forma tal que, cuando las dos secuencias se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, o su complemento, o
(ii) se selecciona de un grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende un fragmento de al menos 21 nucleótidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleótidos de forma tal que, cuando dicho gen que comprende dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, dicha secuencia de nucleótidos es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, o su complemento, o
(iii) se selecciona de un grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende un fragmento de al menos 21 nucleótidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, o su complemento, y en donde cuando dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con el fragmento correspondiente en cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, dicha secuencia de nucleótidos de dicho fragmento es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a dicho fragmento correspondiente de cualquiera de las SEQ ID
NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, o su complemento, o
(iv) es un ortólogo de plagas de insectos de un gen que tiene una secuencia de nucleótidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, o su complemento, en donde los dos genes ortólogos son similares en secuencia al punto de que cuando los dos genes se alinean y comparan de forma óptima, el ortólogo tiene una secuencia que es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las secuencias representadas mediante las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, o
(v) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que, cuando las dos secuencias de aminoácidos se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 85% preferiblemente al menos 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a la secuencia de aminoácidos codificada por cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313.
Breve descripción de las Tablas y las Figuras
Tabla 1 Novedosos objetivos de Lygus hesperus identificados de la primera detección.
Tabla 1 B Novedosos objetivos de Lygus hesperus en la vía de Lh594.
Tabla 1 C Novedosos objetivos de Lygus hesperus identificados en la segunda ronda de detección.
Tabla 2 Secuencias de polinucleótidos de genes objetivo identificados en Lygus hesperus.
Tabla 3 Secuencias de aminoácidos de genes objetivo identificados en Lygus hesperus.
Tabla 4 ARNdh (hebra sentido representada por la secuencia de ADN equivalente) que corresponden a genes objetivo de Lygus hesperus y cebadores para producir los ARNdh.
Tabla 5 Clasificación de objetivos de Lygus hesperus de acuerdo con curvas de respuesta a la dosis (DCR) y comparados con los objetivos de referencia Lh423 y Lh105.
Tabla 6 Objetivos de Lygus hesperus de la clasificación de la segunda ronda de detección de acuerdo con las DRC y comparados con los objetivos de referencia Lh423 y Lh594.
Tabla 7 Secuencias de polinucleótidos de genes objetivo identificados en el escarabajo de la papa de Colorado (CPB).
Tabla 8 Secuencias de aminoácidos de genes objetivo identificados en
CPB.
Tabla 9 ARNdh (hebra sentido representada por la secuencia de ADN equivalente) que corresponde a genes objetivo de CPB y cebadores para producir los ARNdh.
Tabla 10 Secuencias de polinucleótidos de genes objetivo identificados en el saltamontes marrón de las plantas (BPH).
Tabla 11 Secuencias de aminoácidos de genes objetivo identificados en BPH.
Tabla 12 ARNdh (hebra sentido representada por la secuencia de ADN equivalente) que corresponde a genes objetivo de BPH y cebadores para producir los ARNdh.
Tabla 13 Cebadores utilizados para amplificación de ADNc de áfido, en base a la secuencia genómica de áfido de guisante.
Tabla 14 Secuencias de polinucleótidos de genes objetivo identificados en áfidos.
Tabla 15 Secuencias de aminoácidos de genes objetivo identificados en áfidos.
Tabla 16 ARNdh (hebra sentido representada por la secuencia de ADN equivalente) que corresponden a genes objetivo de áfidos y cebadores para producir los ARNdh.
Tabla 17 Cebadores degenerados utilizados para amplificación de ADNc de Ld594 de CPB
Tabla 18 Cebadores degenerados utilizados para amplificación de ADNc de
BPH
Tabla 19: Novedosos objetivos de Leptinotarsa decemlineata de la detección.
Tabla 20: Novedoso objetivo identificado de NHaparvata lugens.
Tabla 21 : Novedosos objetivos identificados de Acyrthosiphon pisum.
Figura 1 : Segundo ensayo de confirmación de las placas Lh001_009. Barras oscuras: mortalidad el día 3 a 6, barras claras: mortalidad el día 6 a 8. Los clones candidatos se nombran usando los códigos de detección "Lygxxx" y los códigos de nomenclatura objetivo "Lhxxx".
Figura 2: Segundo ensayo de confirmación de las placas Lh010_020. Barras oscuras: mortalidad el día 3 a 6, barras claras: mortalidad el día 6 a 8. Los clones candidatos se nombran usando los códigos de detección "Lygxxx" y los códigos de nomenclatura objetivo "Lhxxx".
Figura 3: Análisis de mortalidad de novedosos objetivos de Lygus de las placas Lh001 a Lh009, expresado como % de mortalidad en un período de 10 días. Los testigos se indican con líneas punteadas. Testigo positivo: ARNdh de Lh423 (RpL19). Testigos negativos: ARNdh de GFP y sólo dieta (Testigo).
Figura 4: Análisis de mortalidad de novedosos objetivos de Lygus de las placas Lh010 to Lh020, expresado como % de mortalidad en un período de 10 días. Los testigos se indican con líneas punteadas. Testigo positivo: Lh423 (RpL19). Testigos negativos: GFP y sólo dieta (Testigo).
Figura 5 a 9 Novedosos objetivos de Lygus hesperus - curvas de respuesta a la dosis a concentraciones de ARNdh sintético purificado en el rango de 0.4 a 0.025 Mg/µ? (en la figura, la unidad "µ?/µ?" no se muestra). ARNdh de GFP
y agua milliQ se utilizaron como testigos negativos. El ARNdh de los objetivos se produjo usando los cebadores tal como se describe en la sección de ejemplos 1 .1 .
Figura 10 Curva de respuesta a la dosis de Lh594, a concentraciones de ARNdh en el rango de 0.05 a 0.001 pg/µ?. ARNdh de GFP y agua milliQ se utilizaron como testigos negativos.
Figura 11 A Actividad de ARNdh en bioensayo de Lygus hesperus en ausencia de ARNt. Lh594 (5pg/pl); testigo positivo: Lh423 (5pg/pl); testigos negativos: ARNdh de GFP (5pg/pl) y agua milliQ; Figura 11 B Identificación del límite de actividad de Lh594 usando una concentración cada vez más baja de ARNdh (de 5 pg a 0.25 pg). Testigos negativos: ARNdh de GFP (5pg/pl) y agua milliQ.
Figura 12 Segundo ensayo de confirmación de placas Lh010 a Lh020 de los segundos objetivos de detección. Barras oscuras: mortalidad el día 4 a 8, barras claras: mortalidad el día 4 a 6. Los clones candidatos se nombran usando los códigos de detección "Lygxxx" y los códigos de nomenclatura objetivo "Lhxxx".
Figura 13 Los resultados del ensayo para los objetivos de la vía de troponina de Lygus, evaluados a 0.5 pg/µ? fijos.
Figuras 14 A-B Novedosos objetivos de Lygus hesperus de la vía de troponina - curvas de respuesta a la dosis a concentraciones de ARNdh sintético purificado en el rango de 0.4 a 0.025 pg/µ? (en la figura, la unidad "pg/pl" no se muestra siempre). ARNdh de GFP y agua milliQ se utilizaron como testigos negativos.
Figuras 15 A-D Novedosos objetivos de Lygus hesperus de los objetivos de la segunda detección - curvas de respuesta a la dosis a concentraciones de ARNdh sintético purificado en el rango de 0.5 a 0.05 pg/pl. ARNdh de GFP y agua milliQ se utilizaron como testigos negativos.
Figuras 16 Análisis de supervivencia de larvas de CPB tratadas con 1 pg de Ld594, Ld6 9 y Ld620 de ARNdh. Los testigos positivos incluyeron 1 pg de ARNdh de los objetivos de referencia Ld513 y Ld049. Los testigos negativos incluyeron agua milliQ y FP.
Figura 17 Efectos de ARNdh de Ld594, Ld619 y Ld620 tras pupación de larvas de CPB de 4o estadio, en comparación con testigo sin tratar (UTC). Se alimentaron chinches con 1 pg de ARNdh dispensado en discos de hojas de papa, luego se dejaron alimentarse con hojas de papa sin tratar (A) durante 4 días antes de colocarse sobre vermiculita. Para evaluar el efecto del ARNdh, los insectos muertos se excavaron de la vermiculita (debido a los efectos fuertes inducidos por ARNdh de Ld594, no se recuperaron pupas de la vermiculita y, por lo tanto, no hay ninguna imagen disponible para este ARNdh objetivo) (B).
Figura 18 Efecto de ARNdh de Ld594, 619 y 620 de CPB en la supervivencia y estado físico de adultos de CPB. Las evaluaciones se realizaron los días 4, 6, 7, 8, 1 1 y 13. MQ testigo: agua milliQ.
Figura 19 Actividad de ARNdh de la vía de NI594 en saltamontes marrón de las plantas. Los ARNdh se evaluaron a 0.5 pg/µ? en presencia de 0.1 % de CHAPSO. Testigo positivo: ARNdh de NI537 (0.5 pg/pl), testigos negativos: ARNdh de GFP (0.5 pg/µ?) y solo dieta.
Figura 20 Actividad de ARNdh de Ap594, Ap423, Ap537 y Ap560 en A. pisum. Los ARNdh se evaluaron a 0.5 g/pl en presencia de 5 pg/µ? de ARNt. Testigo negativo: ARNdh de GFP (0.5 pg/µ?).
Figura 21 Porcentajes de mortalidad de larvas de L. decemlineata con dieta artificial tratadas con ARNdh. Ld583, Ld584, Ld586 y Ld588 representan clones objetivos. Testigo positivo: Ld5 3; testigo negativo: FP.
Descripción detallada de la invención
Los inventores de la presente han descubierto que la regulación hacia abajo de la expresión de genes objetivo particulares en especies de plagas de insectos mediante iARN puede utilizarse para prevenir y/o controlar de modo efectivo la infestación por parte de dichas plagas de insectos.
Tal como se utiliza en la presente, el término "control" de infestación por parte de plagas se refiere a cualquier efecto en una plaga que sirve para limitar y/o reducir las cantidades de organismos de plagas y/o el daño causado por dicha
plaga. Los genes objetivo preferidos son, por lo tanto, genes esenciales que controlan o regulan una o más funciones biológicas esenciales dentro de la plaga de insectos, por ejemplo, división celular, reproducción, metabolismo energético, digestión, función neurológica y similares. La regulación hacia abajo de estos genes esenciales mediante técnicas de ¡ARN puede resultar en la muerte del insecto o de otra forma, retardar de modo significativo el crecimiento y desarrollo o deteriorar la capacidad de la plaga de colonizar un ambiente o infestar organismos huéspedes.
Los inventores de la presente han identificado ahora genes objetivo superiores de especies de plagas de insectos que pertenecen a los géneros Lygus, Leptinotarsa, Nilaparvata y Acyrthosiphum, y se prevé que dichos objetivos pueden utilizarse solos o en combinación como un medio efectivo para el control mediado por ¡ARN de infestación de insectos, por ejemplo de cultivos agriculturalmente importantes. Los ortólogos de estos genes objetivo recientemente identificados pueden utilizarse en otras especies de insectos para controlar la infestación por parte de plagas de los cultivos relevantes correspondientes.
Más específicamente, los inventores de la presente describen aquí que los genes que codifican las proteínas del complejo troponina/miofilamentos forman excelentes genes objetivo para la supresión por parte de la maquinaria de inhibición de ARN. Uno de estos genes objetivo codificó la proteína troponina I de insecto (alas arriba A) que es un ortólogo de la proteína de Drosophila CG7178. Esta proteína está implicada en la contracción muscular y pertenece a una vía fisiológica que aún no había sido totalmente explorada para el control de plagas (insectos) mediante la inhibición de ARN. Más aun, dado que este complejo proteico es específico para animales, no se conocen homólogos u ortólogos de genes vegetales, lo que reduce el riesgo de fenotipos vegetales fuera de tipo al expresar ARNdh objetivo en plantas. Adicionalmente, en Drosophila, la troponina I se describe como un gen haploinsuficiente que exhibe un fenotipo muíante en estado heterocigoto. Estos genes son particularmente susceptibles a los niveles
de expresión de ARNm reducidos y, como tales, pueden considerarse objetivos de la ¡ARN ideales.
A continuación se enumeran genes objetivo adicionales interesantes en este complejo de troponina/miofilamentos.
ID anotación Citología Identificador de Dm
up sostenida CG7107
Tm1 tropomiosina 1 CG4898
Tm2 tropomiosina 2 CG4843
Mhc miosina de cadena CG17927
pesada
MIc-c miosina citoplásmica CG3201
de cadena liviana
sqh calabaza espagueti CG3595
zip cremallera CG15792
De esta forma, de acuerdo con una realización la presente invención se refiere a un ácido ribonucleico (ARN) ¡nterferente que funciona tras la captación por parte de una especie de plaga de insectos para regular hacia abajo la expresión de un gen objetivo en dicha plaga de insectos, en donde el ARN comprende al menos un elemento silenciador, en donde el elemento silenciador es una región de ARN de doble hebra que comprende hebras complementarias apareadas, de las cuales una hebra comprende o consiste en una secuencia de nucleotidos que es al menos parcialmente complementaria a una secuencia de nucleotidos objetivo dentro del gen objetivo, y en donde el gen objetivo
(i) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleotidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233 o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleotidos de forma tal que, cuando las dos secuencias
se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, o su complemento, o
(ii) se selecciona de un grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende un fragmento de al menos 21 nucleótidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleótidos de forma tal que, cuando dicho gen que comprende dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, dicha secuencia de nucleótidos es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, o su complemento, o
(iii) se selecciona de un grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende un fragmento de al menos 21 nucleótidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30,
282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, o su complemento, y en donde cuando dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con el fragmento correspondiente en cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, dicha secuencia de nucleótidos de dicho fragmento es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a dicho fragmento correspondiente de cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, o su complemento, o
(iv) es un ortólogo de plagas de insectos de un gen que tiene una secuencia de nucleótidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, o su complemento, en donde los dos genes ortólogos son similares en secuencia al punto de que cuando los dos genes se alinean y comparan de forma óptima, el ortólogo tiene una secuencia que es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las secuencias representadas mediante las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124,
133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, o
(v) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que, cuando las dos secuencias de aminoácidos se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 85% preferiblemente al menos 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a la secuencia de aminoácidos codificada por cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233.
En una realización preferida, el gen objetivo codifica una proteína de insecto que se selecciona del complejo troponina/miofilamentos que se selecciona del grupo que comprende la troponina I (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG7178 Dm), la proteína sostenida (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG7107 Dm), la proteína tropomiosina 1 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG4898 Dm), la proteína tropomiosina 2 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG4843 Dm), la miosina de cadena pesada (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG17927 Dm), la proteína miosina citoplásmica de cadena liviana (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG3201 Dm), la proteína de calabaza espagueti (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG3595 Dm), la proteína cremallera (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG15792 Dm), la troponina C (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG2981 , CG7930, CG9073, CG6514, CG12408, CG9073, CG7930, CG2981 , CG12408 o CG6514 Dm)
En otras realizaciones, la presente invención se refiere a un ácido ribonucleico (ARN) interferente que funciona tras la captación por parte de una especie de plaga de insectos para regular hacia abajo la expresión de un gen objetivo en dicha plaga de insectos, en donde el ARN comprende al menos un elemento silenciador, en donde el elemento silenciador es una región de ARN de
doble hebra que comprende hebras complementarias apareadas, de las cuales una hebra comprende o consiste en una secuencia de nucleotidos que es al menos parcialmente complementaria a una secuencia de nucleotidos objetivo dentro del gen objetivo, y en donde el gen objetivo
(i) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleotidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs. 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleotidos de forma tal que, cuando las dos secuencias se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs. 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, o su complemento, o
(ii) se selecciona de un grupo de genes que tienen una secuencia de nucleotidos que comprende un fragmento de al menos 21 nucleotidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs. 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleotidos de forma tal que, cuando dicho gen que comprende dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con cualquiera de las SEQ ID NOs. 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205,
55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, dicha secuencia de nucleotidos es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs. 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 á 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, o su complemento, o
(iii) se selecciona de un grupo de genes que tienen una secuencia de nucleotidos que comprende un fragmento de al menos 21 nucleotidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs. 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, o su complemento, y en donde cuando dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con el fragmento correspondiente en cualquiera de las SEQ ID NOs. 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, dicha secuencia de nucleotidos de dicho fragmento es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a dicho fragmento correspondiente de cualquiera de las SEQ ID NOs. 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 150, 15 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249,
154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, o su complemento, o
(iv) es un ortólogo de plagas de insectos de un gen que tiene una secuencia de nucleótidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs. 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269,
165, 167, 166, 270 a 273, o su complemento, en donde los dos genes ortólogos son similares en secuencia al punto de que cuando los dos genes se alinean y comparan de forma óptima, el ortólogo tiene una secuencia que es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las secuencias representadas mediante las SEQ ID NOs. 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, o
(v) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que, cuando las dos secuencias de aminoácidos se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 85% preferiblemente al menos 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a la secuencia de aminoácidos codificada por cualquiera de las SEQ ID NOs. 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 9, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167,
166, 270 a 273.
En una realización preferida, el gen objetivo codifica una proteína ribosómica de insecto que se selecciona del grupo que comprende la proteína
ribosomica S3A (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG2168 Dm), la proteína ribosomica LP1 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG4087 Dm), la proteína ribosomica S3 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG6779 Dm), la proteína ribosomica L10Ab (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG7283 Dm), la proteína ribosomica S18 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG8900 Dm), la proteína ribosomica L4 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG5502 Dm), la proteína ribosomica S27 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG10423 Dm), la proteína ribosomica L6 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG1 1522 Dm), la proteína ribosomica S13 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG13389 Dm), y la proteína ribosomica L12 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG3195 Dm), la proteína ribosomica L26 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG6846 Dm), la proteína ribosomica L21 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG 12775 Dm), la proteína ribosomica S12 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG1 1271 Dm), la proteína ribosomica S28b (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG2998 Dm), la proteína ribosomica L13 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG4651 Dm), la proteína ribosomica L10 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG17521 Dm), la proteína ribosomica L5 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG17489 Dm), la proteína ribosomica S15Aa (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG2033 Dm), la proteína ribosomica L19 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG2746 Dm), la proteína ribosomica L27 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG4759 Dm)
En una realización, la presente invención se refiere a un ácido ribonucleico
(ARN) interferente que funciona tras la captación por parte de una especie de plaga de insectos para regular hacia abajo la expresión de un gen objetivo en dicha plaga de insectos, en donde el ARN comprende al menos un elemento silenciador, en donde el elemento silenciador es una región de ARN de doble hebra que comprende hebras complementarias apareadas, de las cuales una
hebra comprende o consiste en una secuencia de nucleótidos que es al menos parcialmente complementaria a una secuencia de nucleótidos objetivo dentro del gen objetivo, y en donde el gen objetivo
(i) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188,
2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleótidos de forma tal que, cuando las dos secuencias se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, o su complemento, o
(ii) se selecciona de un grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende un fragmento de al menos 21 nucleótidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleótidos de forma tal que, cuando dicho gen que comprende dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, dicha secuencia de nucleótidos es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, o su complemento, o
(iii) se selecciona de un grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende un fragmento de al menos 21 nucleótidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, o su complemento, y en donde cuando dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con el fragmento correspondiente en cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, dicha secuencia de nucleótidos de dicho fragmento es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98%
o 99% idéntica a dicho fragmento correspondiente de cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 3 3, o su complemento, o
(iv) es un ortólogo de plagas de insectos de un gen que tiene una secuencia de nucleótidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180,
188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, o su complemento, en donde los dos genes ortólogos son similares en secuencia al punto de que cuando los dos genes se alinean y comparan de forma óptima, el ortólogo tiene una secuencia que es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las secuencias representadas mediante las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, o
(v) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que, cuando las dos secuencias de aminoácidos se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 85% preferiblemente al menos 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a la secuencia de aminoácidos codificada por cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313.
En una realización, la presente invención se refiere a un ácido ribonucleico (ARN) interferente que funciona tras la captación por parte de una especie de plaga de insectos para regular hacia abajo la expresión de un gen objetivo en dicha plaga de insectos, en donde el ARN comprende al menos un elemento silenciador, en donde el elemento silenciador es una región de ARN de doble hebra que comprende hebras complementarias apareadas, de las cuales una hebra comprende o consiste en una secuencia de nucleótidos que es al menos parcialmente complementaria a una secuencia de nucleótidos objetivo dentro del gen objetivo, y en donde el gen objetivo
(i) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs 141 , 1 1 , 12, o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleótidos de forma tal que,
cuando las dos secuencias se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs 141 , 11 , 12, o su complemento, o
(ii) se selecciona de un grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende un fragmento de al menos 21 nucleótidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs 141 , 1 1 , 12, o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleótidos de forma tal que, cuando dicho gen que comprende dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con cualquiera de las SEQ ID NOs 141 , 1 1 , 12, dicha secuencia de nucleótidos es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs 141 , 1 1 , 12, o su complemento, o
(i¡¡) se selecciona de un grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende un fragmento de al menos 21 nucleótidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs 141 , 1 1 , 12, o su complemento, y en donde cuando dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con el fragmento correspondiente en cualquiera de las SEQ ID NOs 141 , 1 1 , 12, dicha secuencia de nucleótidos de dicho fragmento es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a dicho fragmento correspondiente de cualquiera de las SEQ ID NOs 141 , 1 1 , 12, o su complemento, o
(¡v) es un ortólogo de plagas de insectos de un gen que tiene una secuencia de nucleótidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs 141 , 1 1 , 12, o su complemento, en donde los dos genes ortólogos son similares en secuencia al punto de que cuando los dos genes se alinean y comparan de forma óptima, el ortólogo tiene una secuencia que es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las secuencias representadas mediante las SEQ ID NOs 141 , 1 1 , 12, o
(v) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que, cuando las dos secuencias de aminoácidos se alinean y comparan de forma óptima, es al menos
85% preferiblemente al menos 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a la secuencia de aminoácidos codificada por cualquiera de las SEQ ID NOs 141 , 1 1 , 12.
En una realización, la presente invención se refiere a un ácido ribonucleico (ARN) interferente que funciona tras la captación por parte de una especie de plaga de insectos para regular hacia abajo la expresión de un gen objetivo en dicha plaga de insectos, en donde el ARN comprende al menos un elemento silenciador, en donde el elemento silenciador es una región de ARN de doble hebra que comprende hebras complementarias apareadas, de las cuales una hebra comprende o consiste en una secuencia de nucleótidos que es al menos parcialmente complementaria a una secuencia de nucleótidos objetivo dentro del gen objetivo, y en donde el gen objetivo
(i) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs 17, 18, o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleótidos de forma tal que, cuando las dos secuencias se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs 17, 18, o su complemento, o
(¡i) se selecciona de un grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende un fragmento de al menos 21 nucleótidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs 17, 18, o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleótidos de forma tal que, cuando dicho gen que comprende dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con cualquiera de las SEQ ID NOs 17, 18, dicha secuencia de nucleótidos es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs 17, 18, o su complemento, o
(iii) se selecciona de un grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende un fragmento de al menos 21 nucleótidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs 17, 18, o su complemento, y en donde cuando dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con el fragmento correspondiente en cualquiera de las SEQ ID NOs 17, 18, dicha secuencia de
nucleótidos de dicho fragmento es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a dicho fragmento correspondiente de cualquiera de las SEQ ID NOs 17, 18, o su complemento, o
(iv) es un ortólogo de plagas de insectos de un gen que tiene una secuencia de nucleótidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs 17, 18, o su complemento, en donde los dos genes ortólogos son similares en secuencia al punto de que cuando los dos genes se alinean y comparan de forma óptima, el ortólogo tiene una secuencia que es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las secuencias representadas mediante las SEQ ID NOs 17, 18, o
(v) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que, cuando las dos secuencias de aminoácidos se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 85% preferiblemente al menos 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a la secuencia de aminoácidos codificada por cualquiera de las SEQ ID NOs 17, 18.
En una realización, la presente Invención se refiere a un ácido ribonucleico (ARN) interferente que funciona tras la captación por parte de una especie de plaga de insectos para regular hacia abajo la expresión de un gen objetivo en dicha plaga de insectos, en donde el ARN comprende al menos un elemento silenciador, en donde el elemento silenciador es una región de ARN de doble hebra que comprende hebras complementarias apareadas, de las cuales una hebra comprende o consiste en una secuencia de nucleótidos que es al menos parcialmente complementaria a una secuencia de nucleótidos objetivo dentro del gen objetivo, y en donde el gen objetivo
(i) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs 19, 20, o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleótidos de forma tal que, cuando las dos secuencias se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs 19, 20, o su complemento, o
(ii) se selecciona de un grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende un fragmento de al menos 21 nucleótidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs 19, 20, o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleótidos de forma tal que, cuando dicho gen que comprende dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con cualquiera de las SEQ ID NOs 19, 20, dicha secuencia de nucleótidos es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs 19, 20, o su complemento, o
(iii) se selecciona de un grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende un fragmento de al menos 21 nucleótidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs 19, 20, o su complemento, y en donde cuando dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con el fragmento correspondiente en cualquiera de las SEQ ID NOs 19, 20, dicha secuencia de nucleótidos de dicho fragmento es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a dicho fragmento correspondiente de cualquiera de las SEQ ID NOs 19, 20, o su complemento, o
(iv) es un ortólogo de plagas de insectos de un gen que tiene una secuencia de nucleótidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs 19, 20, o su complemento, en donde los dos genes ortólogos son similares en secuencia al punto de que cuando los dos genes se alinean y comparan de forma óptima, el ortólogo tiene una secuencia que es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las secuencias representadas mediante las SEQ ID NOs 19, 20, o
(v) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que, cuando las dos secuencias de aminoácidos se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 85% preferiblemente al menos 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a la secuencia de aminoácidos codificada por cualquiera de las SEQ ID NOs 19, 20.
En una realización, la presente invención se refiere a un ácido ribonucleico (ARN) interferente que funciona tras la captación por parte de una especie de
plaga de insectos para regular hacia abajo la expresión de un gen objetivo en dicha plaga de insectos, en donde el ARN comprende al menos un elemento silenciador, en donde el elemento silenciador es una región de ARN de doble hebra que comprende hebras complementarias apareadas, de las cuales una hebra comprende o consiste en una secuencia de nucleótidos que es al menos parcialmente complementaria a una secuencia de nucleótidos objetivo dentro del gen objetivo, y en donde el gen objetivo
(i) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs 165, 166, 167, o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleótidos de forma tal que, cuando las dos secuencias se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs 165, 166, 167, o su complemento, o
(ii) se selecciona de un grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende un fragmento de al menos 21 nucleótidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs 165, 166, 167, o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleótidos de forma tal que, cuando dicho gen que comprende dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con cualquiera de las SEQ ID NOs 165, 166, 167, dicha secuencia de nucleótidos es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs 165, 166, 167, o su complemento, o
(iii) se selecciona de un grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende un fragmento de al menos 21 nucleótidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs 165, 166, 167, o su complemento, y en donde cuando dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con el fragmento correspondiente en cualquiera de las SEQ ID NOs 17, 18, dicha secuencia de nucleótidos de dicho fragmento es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a dicho fragmento correspondiente de cualquiera de las SEQ ID NOs 165, 166, 167, o su complemento, o
(iv) es un ortólogo de plagas de insectos de un gen que tiene una secuencia de nucleótidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs 165, 166, 167, o su complemento, en donde los dos genes ortólogos son similares en secuencia al punto de que cuando los dos genes se alinean y comparan de forma óptima, el ortólogo tiene una secuencia que es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las secuencias representadas mediante las SEQ ID NOs 165, 166, 167, o
(v) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que, cuando las dos secuencias de aminoácidos se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 85% preferiblemente al menos 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a la secuencia de aminoácidos codificada por cualquiera de las SEQ ID NOs 165, 166, 167.
En una realización, la presente invención se refiere a un ácido ribonucleico (ARN) interferente que funciona tras la captación por parte de una especie de plaga de insectos para regular hacia abajo la expresión de un gen objetivo en dicha plaga de insectos, en donde el ARN comprende al menos un elemento silenciador, en donde el elemento silenciador es una región de ARN de doble hebra que comprende hebras complementarias apareadas, de las cuales una hebra comprende o consiste en una secuencia de nucleótidos que es al menos parcialmente complementaria a una secuencia de nucleótidos objetivo dentro del gen objetivo, y en donde el gen objetivo
(i) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs 143, 121 , 142, 176,
182, 130, 177, 183, o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleótidos de forma tal que, cuando las dos secuencias se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177,
183, o su complemento, o
(ii) se selecciona de un grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende un fragmento de al menos 21 nucleótidos contiguos
de cualquiera de las SEQ ID NOs 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleótidos de forma tal que, cuando dicho gen que comprende dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con cualquiera de las SEQ ID NOs 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, dicha secuencia de nucleótidos es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, o su complemento, o
(iii) se selecciona de un grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende un fragmento de al menos 21 nucleótidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, o su complemento, y en donde cuando dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con el fragmento correspondiente en cualquiera de las SEQ ID NOs 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, dicha secuencia de nucleótidos de dicho fragmento es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a dicho fragmento correspondiente de cualquiera de las SEQ ID NOs 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, o su complemento, o
(iv) es un ortólogo de plagas de insectos de un gen que tiene una secuencia de nucleótidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, o su complemento, en donde los dos genes ortólogos son similares en secuencia al punto de que cuando los dos genes se alinean y comparan de forma óptima, el ortólogo tiene una secuencia que es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las secuencias representadas mediante las SEQ ID NOs 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, o
(v) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que, cuando las dos secuencias de aminoácidos se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 85% preferiblemente al menos 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a la secuencia de aminoácidos codificada por cualquiera de las SEQ ID NOs 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183.
En una realización, la presente invención se refiere a un ácido ribonucleico (ARN) interferente que funciona tras la captación por parte de una especie de plaga de insectos para regular hacia abajo la expresión de un gen objetivo en dicha plaga de insectos, en donde el ARN comprende al menos un elemento silenciador, en donde el elemento silenciador es una región de ARN de doble hebra que comprende hebras complementarias apareadas, de las cuales una hebra comprende o consiste en una secuencia de nucleótidos que es al menos parcialmente complementaria a una secuencia de nucleótidos objetivo dentro del gen objetivo, y en donde el gen objetivo
(i) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs 145, 122, 144, 178, 131 , 179 o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleótidos de forma tal que, cuando las dos secuencias se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs 145, 122, 144, 178, 131 , 179, o su complemento, o
(ii) se selecciona de un grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende un fragmento de al menos 21 nucleótidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs 145, 122, 144, 178, 131 , 179, o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleótidos de forma tal que, cuando dicho gen que comprende dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con cualquiera de las SEQ ID NOs 145, 122, 144, 178, 131 , 179, dicha secuencia de nucleótidos es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs 145, 122, 144, 178, 131 , 179, o su complemento, o
(iii) se selecciona de un grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende un fragmento de al menos 21 nucleótidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs 145, 122, 144, 178, 131 , 179, o su complemento, y en donde cuando dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con el fragmento correspondiente en cualquiera de las SEQ ID NOs 145, 122, 144, 178,
131 , 179, dicha secuencia de nucleótidos de dicho fragmento es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a dicho fragmento correspondiente de cualquiera de las SEQ ID NOs 145, 122, 144, 178, 131 , 179, o su complemento, o
(iv) es un ortólogo de plagas de insectos de un gen que tiene una secuencia de nucleótidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs 145, 122, 144, 178, 131 , 179, o su complemento, en donde los dos genes ortólogos son similares en secuencia al punto de que cuando los dos genes se alinean y comparan de forma óptima, el ortólogo tiene una secuencia que es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las secuencias representadas mediante las SEQ ID NOs 145, 122, 144, 178, 131 , 179, o
(v) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que, cuando las dos secuencias de aminoácidos se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 85% preferiblemente al menos 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a la secuencia de aminoácidos codificada por cualquiera de las SEQ ID NOs 145, 122, 144, 178, 131 , 179.
En una realización, la presente invención se refiere a un ácido ribonucleico (ARN) interferente que funciona tras la captación por parte de una especie de plaga de insectos para regular hacia abajo la expresión de un gen objetivo en dicha plaga de insectos, en donde el ARN comprende al menos un elemento silenciador, en donde el elemento silenciador es una región de ARN de doble hebra que comprende hebras complementarias apareadas, de las cuales una hebra comprende o consiste en una secuencia de nucleótidos que es al menos parcialmente complementaria a una secuencia de nucleótidos objetivo dentro del gen objetivo, y en donde el gen objetivo
(i) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs 128, 149, 184, 137, o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleótidos de forma tal que, cuando las dos secuencias se alinean y comparan de forma óptima, es al menos
75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs 128, 149, 184, 137, o su complemento, o
(ii) se selecciona de un grupo de genes que tienen una secuencia de nucleotidos que comprende un fragmento de al menos 21 nucleotidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs 128, 149, 184, 137, o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleotidos de forma tal que, cuando dicho gen que comprende dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con cualquiera de las SEQ ID NOs 128, 149, 184, 137, dicha secuencia de nucleotidos es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs 128, 149, 184, 137, o su complemento, o
(iii) se selecciona de un grupo de genes que tienen una secuencia de nucleotidos que comprende un fragmento de al menos 21 nucleotidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs 128, 149, 184, 137, o su complemento, y en donde cuando dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con el fragmento correspondiente en cualquiera de las SEQ ID NOs 128, 149, 184, 137, dicha secuencia de nucleotidos de dicho fragmento es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a dicho fragmento correspondiente de cualquiera de las SEQ ID NOs 128, 149, 184, 137, o su complemento, o
(iv) es un ortólogo de plagas de insectos de un gen que tiene una secuencia de nucleotidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs 128, 149, 184, 137, o su complemento, en donde los dos genes ortólogos son similares en secuencia al punto de que cuando los dos genes se alinean y comparan de forma óptima, el ortólogo tiene una secuencia que es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las secuencias representadas mediante las SEQ ID NOs 128, 149, 184, 137, o
(v) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleotidos que codifica una secuencia de aminoácidos que, cuando las dos secuencias de aminoácidos se alinean y comparan de forma óptima, es al menos
85% preferiblemente al menos 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a la secuencia de aminoácidos codificada por cualquiera de las SEQ ID NOs 128, 149, 184, 137.
En otras realizaciones adicionales, la presente invención se refiere a un ácido ribonucleico interferente (ARN o ARN de doble hebra) que inhibe o regula hacia abajo la expresión de un gen objetivo que codifica a mitochondrial cytochrome c oxidase subunit II protein (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG34069 Dm).
De esta forma, en un aspecto, la invención proporciona un ácido ribonucleico (ARN) interferente que funciona tras la captación por parte de una especie de plaga de insectos para regular hacia abajo la expresión de un gen objetivo en dicha plaga de insectos.
Tal como se utiliza en la presente, un "gen objetivo" comprende cualquier gen en la plaga de insectos que se pretende regular hacia abajo. En una realización preferida, el gen objetivo se regula hacia abajo de forma tal de controlar la infestación por parte de plagas, por ejemplo alterando un proceso biológico esencial de la plaga, o disminuyendo la patogenicidad de la plaga. Los genes objetivo preferidos incluyen, por lo tanto, a modo no taxativo, aquellos que tienen papeles clave en la regulación de la alimentación, supervivencia, crecimiento, desarrollo, reproducción, infestación e infectividad. De acuerdo con una realización, el gen objetivo es tal que cuando su expresión se regula hacia abajo o inhibe, la plaga de insectos muere. De acuerdo con otra realización, el gen objetivo es tal que cuando su expresión se regula hacia abajo o inhibe, se previene o retarda o atrofia o retrasa o impide el crecimiento de la plaga, se previene la reproducción de la plaga, o se previene la transición a través de ciclos vitales de la plaga. De acuerdo con otra realización de la invención, el gen objetivo es tal que cuando su expresión se regula hacia abajo o inhibe, se reduce el daño causado por la plaga y/o la capacidad de la plaga de infectar o infestar ambientes, superficies y/o especies de plantas o cultivos; o la plaga deja de alimentarse de sus recursos alimenticios naturales tales como plantas y productos de plantas. En
general los términos "infestar" e "infectar" o "infestación" e "infección" se utilizan indistintamente en la presente.
Los genes objetivo pueden expresarse en todas o algunas de las células de la plaga de insectos. Más aun, los genes objetivo pueden ser expresados solamente por la plaga de insectos en una etapa particular de su ciclo vital, por ejemplo, la fase de adulto maduro, la fase de ninfa o larva inmadura o la etapa de huevos.
Tal como se utiliza en la presente, especies de "plaga" son preferiblemente especies de insectos que causan infección o infestación, preferiblemente de plantas. Las especies de insecto pueden comprender especies pertenecientes a los órdenes Coleóptera, Lepidoptera, Díptera, Dichyoptera, Orthoptera, Hemiptera, o Siphonaptera.
Insectos patogénicos de plantas preferidos de acuerdo con la invención son plagas de plantas que se seleccionan del grupo que consiste en Leptinotarsa spp. (por ejemplo, L. decemlineata (escarabajo de la papa de Colorado), L. juncta (falso escarabajo de la papa), o L. texana (escarabajo de la papa tejano)); Nilaparvata spp. (por ejemplo, N. Lugens (saltamontes marrón)); Laodelphax spp. (por ejemplo, L. striatellus (saltamontes marrón pequeño)); Nephotettix spp. (por ejemplo, N. virescens o N. cincticeps (saltahojas verde), o N.nigropictus (saltahojas del arroz)); Sogatella spp. (por ejemplo, S. f urdiera (saltamontes blanco y negro)); Chilo spp. (por ejemplo, C. suppressalis (barrenador rayado del arroz), C. auricilius (polilla dorada), o C. polychrysus (barrenador de cabeza negra)); Sesamia spp. (por ejemplo, S. inferens (barrenador del arroz rosado)); Tryporyza spp. (por ejemplo, T. innotata (barrenador del arroz blanco), o T. ¡ncertulas (barrenador del arroz amarillo)); Anthonomus spp. (por ejemplo, A. grandis (gorgojo)); Phaedon spp. (por ejemplo, P. cochleariae (escarabajo de la hoja de la mostaza)); Epilachna spp. (por ejemplo, E. varivetis (escarabajo del frijol mexicano)); Tribolium spp. (por ejemplo, T. castaneum (escarabajo rojo)); Diabrotica spp. (por ejemplo, D. virgifera virgifera (gusano de la raíz del maíz occidental), D. barben (gusano de la raíz del maíz del norte), D. undecimpunctata howardi (gusano de la raíz del maíz del sur),
D. virgifera zeae (gusano de la raíz del maíz mexicano); Ostrinia spp. (por ejemplo, O. nubilalis (gusano barrenador del maíz europeo)); Anaphothrips spp. (por ejemplo, A. obscrurus (trips de hierba)); Pectinophora spp. (por ejemplo, P. gossypiella (gusano bellotero rosado)); Heliothis spp. (por ejemplo, H. virescens (gusano de la yema del tabaco)); Trialeurodes spp. (por ejemplo, T. abutiloneus (mosca blanca de alas con bandas) T. vaporariorum (mosca blanca de invernadero)); Bemisia spp. (por ejemplo, B. argentifolii (mosca blanca de la hojaplata)); Aphis spp. (por ejemplo, A. gossypii (áfido del algodón)); Lygus spp. (por ejemplo, L. Lineolaris (chinche lygus) o L. hesperus (chinche lygus del oeste)); Euschistus spp. (por ejemplo, E. conspersus (chinche hedionda moteada)); Chlorochroa spp. (por ejemplo, C. sayi (Chinche del algodonero)); Nezara spp. (por ejemplo, N. viridula (chinche verde del sur)); Thrips spp. (por ejemplo, T. tabaci (trips de la cebolla)); Frankliniella spp. (por ejemplo, F. fusca (trips del tabaco), o F. occidentalis (trips de las flores occidental)); Acheta spp. (por ejemplo, A. domesticus (grillo doméstico)); Myzus spp. (por ejemplo, M. persicae (áfido verde del durazno)); Macrosiphum spp. (por ejemplo, M. euphorbiae (áfido de la papa)); Blissus spp. (por ejemplo, B. Leucopterus leucopterus (chinche de prado)); Acrosternum spp. (por ejemplo, A. hilare (chinche verde)); Chilotraea spp. (por ejemplo, C. polychrysa (barrenador del tallo del arroz)); Lissorhoptrus spp. (por ejemplo, L. oryzophilus (gorgojo de agua de arroz:)); Rhopalosiphum spp. (por ejemplo, R. maidis (áfido de la hoja del maíz)); y Anuraphis spp. (por ejemplo, A. maidiradicis (áfido de la raíz del maíz)).
De acuerdo con una realización más específica, la invención es aplicable a especies pertenecientes a la familia de Chrysomelidae o galerucas. Escarabajos crisomélidos, tales como escarabajos de la papa de Colorado, pulguillas, gusanos de la raíz del maíz y curculiónidos tales como los gorgojos del arroz son plagas particularmente importantes. Especies Leptinotarsa específicas para controlar de acuerdo con la invención incluyen el escarabajo de la papa de Colorado (Leptinotarsa decemlineata (Say) y falso escarabajo de la papa [Leptinotarsa juncia (Say). El CPB es una plaga (grave) para nuestras papas domésticas, otras
especies de papas con y sin tubérculos cultivadas y silvestres y otras especies de plantas solanáceas incluyendo las especies de cultivo de tomate, berenjena, pimientos, tabaco (especie Nicotiana, incluyendo ornamentales), alquequenjes, arroz, maíz o algodón; y las especies de maleza/hierba ortiga caballo, hierba mora común, espino, beleño negro y hierba sosa. Los gusanos de la raíz del maíz incluyen especies encontradas en el género Diabrotica (por ejemplo, D. undecimpunctata undecimpunctata, D. undecimpunctata howardii, D. Longicornis, D. virgifera y D. balteata). Los gusanos de la raíz del maíz provocar grandes daños al maíz y las cucurbitáceas.
De acuerdo con una realización más específica, la invención es aplicable a especies pertenecientes a el orden de Hemipterans (familia de Aphidoidea), tales como Myzus persicae (áfido verde del durazno, Aphis fabae (áfido del frijol negro), Acyrthosiphum pisum (áfido del guisante), Brevicoryne brassicae (áfido del repollo), Sitobion avenae (áfido del grano), Cavariella aegopodii (áfido de la Zanahoria), Aphis craccivora (áfido del cacahuate,), Aphis gossypii (áfido del algodón,), Toxoptera aurantii (áfido de los cítricos negro), Cavariella spp (áfido del sauce), Chaitophorus spp (áfidos de las hojas del sauce), Cinara spp. (áfidos del pino negro), Drepanosiphum platanoides (áfidos del sicómoro) Elatobium spp (áfidos del abeto) que causan daño a plantas tales como árboles Prunus, particularmente durazno, damasco y ciruela; árboles que son principalmente cultivados para producción de madera tales como sauces y álamos, a cultivos en hileras tales como maíz, algodón, soja, trigo y arroz, a cultivos de vegetales de las familias Solanaceae, Chenopodiaceae, Compositae, Cruciferae y Cucurbitaceae, incluyendo a modo no taxativo, alcachofa, espárrago, frijoles, remolachas, brócoli, repollitos de Bruselas, repollo, zanahoria, coliflor, cantalupo, apio, maíz, pepino, hinojo, col rizada, colirrábano, nabo, berenjena, lechuga, mostaza, quingombó, perejil, chirivía, chícharo, pimiento, papa, rabanito, espinaca, zapallito, tomate, nabo, berro, y melón; o cultivos de campo tales como, a modo no taxativo, tabaco, remolacha azucarera, y girasol; un cultivo de flores u otras plantas ornamentales tales como pinos y coniferas. Otros Hemipterans pertenecen a Nilaparvata ssp
(por ejemplo, N. Lugens, Sogatella furcifera) y causan daño a plantas de arroz. Otros Hemipterans pertenecen a Lygus ssp (por ejemplo, Lygus hesperus, Lygus rugulipennis, Lygus lineolaris, Lygus sully) y otras especies de insectos que se alimentan de plantas en la familia de los Miridae, y causan daño a plantas de algodón, papas, fresas, algodón, alfalfa, cañóla, durazno, ciruelas, uva, lechuga, berenjena, cebolla y frijoles verdes. También varios árboles mediterráneos y varios árboles ornamentales tales como el olmo (Ulmus spp.), pino piñonero (Pinus Pinea), plátano de Londres (Platanus Acerifolia), pomera blanca (Malus alba). Otros Hemipterans pertenecen a la familia de los Pentatomoidea y son comúnmente conocidos como chinche de escudo y chinches hediondas (por ejemplo, la chinche hedionda marmórea marrón (Halyomorpha halys), la chinche hedionda moteada (Euschistus conspersus), chinche verde del sur (Nezara virídula), chinche del bosque (Pentatoma rufipes), chinche Arlequín (Murgantia histrionica) y chinche del arroz (Oebalus pugnax)) y causan daño a frutas, incluyendo manzanas, duraznos, higos, moras, frutas cítricas y caquíes, mora, y vegetales, incluyendo maíz dulce, tomates, frijoles de soja, frijoles de lima y pimientos verdes, repollo, coliflor, nabos, rábano picante, coles, mostaza, repollitos de Bruselas, papa, berenjena, quingombó, frijoles, espárrago, remolachas, malezas, árboles frutales y cultivos de campo tales como campos de maíz y soja frijoles. Las chinches también son una plaga de céspedes, sorgo y arroz.
Una planta a ser utilizada en los métodos de la invención, o una planta transgénica de acuerdo con la invención, abarca cualquier planta pero es preferiblemente una planta que es susceptible a ser infestada por parte de un insecto patogénico de planta.
Por lo tanto, la presente invención abarca plantas y métodos tal como se describe en la presente en donde la planta se selecciona del siguiente grupo de plantas (o cultivos): alfalfa, manzana, damasco, alcachofa, espárrago, palta, banana, cebada, frijoles, remolacha, mora, arándano, brócoli, repollitos de Bruselas, repollo, cañóla, zanahoria, mandioca, coliflor, un cereal, apio, cereza, cítrico, clementina, café, maíz, algodón, pepino, berenjena, endivia, eucalipto,
higos, uva, pomelo, cacahuetes, alquequenje, kiwi, lechuga, puerro, limón, lima, pino, maíz, mango, melón, mijo, hongo, frutos secos, avena, quingombó, cebolla, naranja, un árbol o flor o planta ornamental, papaya, perejil, chícharo, durazno, cacahuete, turba, pimiento, caqui, piña, plátano, ciruela, granada, papa, calabaza, radicha, rabanito, semilla de colza, frambuesa, arroz, centeno, sorgo, soja, soja, espinaca, fresa, remolacha azucarera, caña de azúcar, girasol, boniato, tangerina, té, tabaco, tomate, una vid, melón, trigo, ñame y zucchini.
En realizaciones específicas, la presente invención proporciona genes objetivo que codifican las proteínas implicadas en la función de una alas arriba A (troponina I), una subunidad II de la proteína citocromo c oxidasa mitocondrial o una de las proteínas ribosómicas que se especifican en la Tabla 1 .
En realizaciones preferidas, la presente invención proporciona genes objetivo que se seleccionan del grupo de genes (i) que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 3 8 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleótidos de forma tal que, cuando las dos secuencias se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a
42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 7, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, o (ü) que tienen una secuencia de nucleótidos que consiste en cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46,
141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 ,
142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, o (iii) que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende un fragmento de al menos 20, 21 , 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 70, 80, 90, 100, 1 10, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 700, 800, 900 1000, 1 100, 1200, 1300, 1400, 1500, 2000, o 3000 nucleótidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18,
59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleótidos de forma tal que, cuando dicho gen que comprende dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 47, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, dicha secuencia de nucleótidos es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 79, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133,
218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, o (iv) que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende un fragmento de al menos 20, 21 , 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 70, 80, 90, 100, 1 10, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 700, 800, 900 1000, 1 100, 1200, 1300, 1400, 1500, 2000, o 3000 nucleótidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, y en donde cuando dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con el fragmento correspondiente en cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126,
135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, dicha secuencia de nucleótidos de dicho fragmento es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a dicho fragmento correspondiente de cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 11 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, o (v) que tienen una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que, cuando las dos secuencias de aminoácidos se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 70%, preferiblemente al menos 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a la secuencia de aminoácidos codificada por cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225,
147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389 o (vi) cuyo gen es un ortólogo de plagas de insectos de un gen que tiene una secuencia de nucleótidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, en donde los dos genes ortólogos son similares en secuencia al punto de que cuando los dos genes se alinean y comparan de forma óptima, el ortólogo tiene una secuencia que es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las secuencias representadas mediante las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234
a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389;
y en donde la secuencia de nucleótidos de dicho gen no tiene más de 10000, 9000, 8000, 7000, 6000, 5000, 4000, 3000, 2000 o 1500 nucleótidos de longitud.
Las secuencias de aminoácidos codificadas por los genes objetivo de la presente invención se representan mediante las SEQ ID NOs. Las SEQ ID NOs 79, 349, 405, 352, 356, 80, 326, 81 , 327, 82, 83, 328, 84, 329, 85, 86, 359, 87 a 91 , 330, 350, 353, 331 , 351 , 332 a 336, 337, 354, 338 a 344, 346, 345, 347, 348, 357, 355, 358, 390 a 393.
Tal como se utiliza en la presente, la expresión "que tiene" tiene el mismo significado que "que comprende".
Tal como se utiliza en la presente, la expresión "identidad de secuencia" se utiliza para describir la relación de secuencia entre dos o más nucleótidos o secuencias de aminoácidos. El porcentaje de "identidad de secuencia" entre dos secuencias se determina comparando dos secuencias óptimamente alineadas en una ventana de comparación (un número definido de posiciones), en donde la porción de la secuencia en la ventana de comparación puede comprender adiciones o eliminaciones (es decir, brechas) en comparación con la secuencia de referencia para lograr una alineación óptima. La identidad de secuencia porcentual se calcula determinando el número de posiciones en las cuales la base de nucleótidos o residuo de aminoácidos idénticos se encuentran en ambas secuencias para obtener el número de posiciones coincidentes, dividiendo el número de posiciones coincidentes entre el total de posiciones en la ventana de comparación y multiplicando el resultado por 100. Los métodos y el software para determinar la identidad de secuencia se encuentran disponibles en la técnica e incluyen el software Blast y el análisis GAP. Para ácidos nucleicos, la identidad
porcentual se calcula preferiblemente mediante la herramienta de alineación BlastN, con la cual se calcula la identidad porcentual en la totalidad de la longitud de la secuencia de nucleótidos de consulta.
Un experto en la técnica reconocerá que los homólogos u ortólogos (homólogos que existen en diferentes especies) de los genes objetivo representados mediante cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389 pueden identificarse. Estos homólogos y/u ortólogos de plagas también se encuentran dentro del alcance de la presente invención. Homólogos y/u ortólogos preferidos son genes similares en secuencia de nucleótidos al punto de que cuando los dos genes se alinean y comparan de forma óptima, el homólogo y/u ortólogo tiene una secuencia que es al menos 75%, preferiblemente al menos 80% o 85%, más preferiblemente al menos 90% o 95%, y aun más preferiblemente al menos aproximadamente 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225,
147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389 o su complemento. De forma similar, homólogos y/u ortólogos preferidos también son proteínas que son similares en secuencia de aminoácidos al punto de que cuando las dos secuencias de aminoácidos se alinean y comparan de forma óptima, el homólogo y/u ortólogo tiene una secuencia que es al menos 75%, preferiblemente al menos 80% o 85%, más preferiblemente al menos 90% o 95%, y aun más preferiblemente al menos aproximadamente 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs 79, 349, 405, 352, 356, 80, 326, 81 , 327, 82, 83, 328, 84, 329, 85, 86, 359, 87 a 91 , 330, 350, 353, 331 , 351 , 332 a 336, 337, 354, 338 a 344, 346, 345, 347, 348, 357, 355, 358, 390 a 393.
Otros homólogos son genes que son alelos de un gen que comprende una secuencia tal como se representa mediante cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389. Homólogos más preferidos son genes que comprenden al menos un polimorfismo de nucleótido único (SNP) en comparación con un gen que
comprende una secuencia tal como se representa mediante cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389.
El "ácido ribonucleico (ARN) interferente" de la presente invención abarca cualquier tipo de molécula de ARN capaz de regular hacia abajo o "silenciar" la expresión de un gen objetivo, incluyendo, a modo no taxativo, ARN sentido, ARN antisentido, ARN interferente pequeño (ARNip), microARN (miARN), ARN de doble hebra (ARNdh), ARN en horquilla (ARN) y similares. Los métodos para evaluar moléculas funcionales de ARN interferente son bien conocidos en la técnica y se describen en otras partes de la presente.
Las moléculas de ARN interferente de la presente invención producen la regulación hacia abajo específica de las secuencias de expresión de un gen objetivo mediante la unión a una secuencia de nucleótidos objetivo dentro del gen objetivo. La unión se produce como resultado de un apareamiento de bases entre regiones complementarias del ARN interferente y la secuencia de nucleótidos objetivo. Tal como se utiliza en la presente, la expresión 'elemento silenciador' se refiere a la porción o región del ARN interferente que comprende o consiste en una secuencia de nucleótidos que es complementaria, o al menos parcialmente complementaria, a una secuencia de nucleótidos objetivo dentro del gen objetivo, y que funciona como la porción activa del ARN interferente para dirigir la
regulación hacia abajo de la expresión de dicho gen objetivo. En una realización de la invención, el elemento silenciador comprende o consiste en una secuencia de al menos 17 nucleótidos contiguos, preferiblemente al menos 18 o 19 nucleótidos contiguos, más preferiblemente al menos 21 nucleótidos contiguos, aun más preferiblemente al menos 22, 23, 24 o 25 nucleótidos contiguos complementarios a una secuencia de nucleótidos objetivo dentro del gen objetivo.
Tal como se utiliza en la presente, "expresión de un gen objetivo" se refiere a la transcripción y acumulación del transcripto de ARN codificado por un gen objetivo y/o traducción del ARNm en proteína. La expresión "regular hacia abajo" pretende hacer referencia a cualquiera de los métodos conocidos en la técnica mediante los cuales las moléculas de ARN interferente reducen el nivel del transcriptos primarios de ARN, ARNm o proteína producida a partir de un gen objetivo. En ciertas realizaciones, la regulación hacia abajo se refiere a una situación en la cual el nivel de ARN o proteína producida a partir de un gen se reduce al menos 10%, preferiblemente al menos 33%, más preferiblemente al menos 50%, aun más preferiblemente al menos 80%. En realizaciones particularmente preferidas, la regulación hacia abajo se refiere a una reducción en el nivel de ARN o proteína producida a partir de un gen al menos 80%, preferiblemente al menos 90%, más preferiblemente al menos 95%, y aun más preferiblemente al menos 99% dentro de las células de la plaga de insectos en comparación con una plaga de insectos testigo apropiada que, por ejemplo, no se ha expuesto a un ARN interferente o se ha expuesto a una molécula de ARN interferente testigo. En la técnica se conocen bien los métodos para detectar reducciones en los niveles de ARN o proteína e incluyen hibridación de solución de ARN, hibridación tipo Northern, transcripción inversa (por ejemplo, análisis por RT-PCR cuantitativa), análisis de micromatrices, unión de anticuerpos, ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA) y prueba de Western blot. En otra realización de la invención, la regulación hacia abajo se refiere a una reducción en el ARN o niveles de proteína suficiente como para provocar un cambio detectable en un fenotipo de la plaga en comparación con un testigo de plaga apropiado, por
ejemplo, muerte celular, detención del crecimiento, o similares. La regulación hacia abajo puede así medirse mediante análisis fenotípico de la plaga de insectos utilizando técnicas de rutina en la técnica.
En una realización preferida de la invención, el ARN interferente regula hacia abajo la expresión de genes mediante interferencia de ARN o ¡ARN. La ¡ARN es un proceso de regulación genética con especificidad de secuencia mediado típicamente por moléculas de ARN de doble hebra tales como ARN interferentes pequeños (ARNip). Los ARNip comprenden una hebra de ARN sentido apareada mediante apareamiento de bases complementario a una hebra de ARN antisentido. La hebra sentido o "hebra guía" de la molécula de los ARNip comprende una secuencia de nucleótidos complementaria a una secuencia de nucleótidos ubicada dentro del transcripto de ARN del gen objetivo. La hebra sentido de los ARNip es así capaz de aparearse con el transcripto de ARN mediante apareamiento de bases Watson-Crick y dirigirse al ARN para degradarse dentro de un complejo celular conocido como el complejo del silenciamiento inducido por ¡ARN o RISC. De esta forma, en el contexto de las moléculas preferidas de ARN interferente de la presente invención, el elemento silenciador tal como se menciona en la presente puede ser una región de doble hebra que comprende hebras complementarias apareadas, de las cuales al menos una hebra comprende o consiste en una secuencia de nucleótidos que es complementaria o al menos parcialmente complementaria a una secuencia de nucleótidos objetivo dentro de un gen objetivo. En una realización la región de doble hebra tiene una longitud de al menos 21 , 22, 23, 24, 25, 30, 35, 40, 50, 55, 60, 70, 80, 90, 100, 125, 150, 175, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 1 100, 1200, 1300, 1400, 1500, 2000 o 3000 pares de bases.
También se contemplan dentro del alcance de la presente invención moléculas de ARN de doble hebra (ARNdh) más largas que comprenden uno o más elementos silenciadores de doble hebra funcionales tal como se describen en otras partes de la presente y capaces de lograr el silenciamiento de genes mediado por ¡ARN. Dichas moléculas de ARNdh más largas comprenden al menos
80, 200, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 700, 800, 900, 1000, 1100, 1200, 1300, 1400, 1500, 2000 o 3000 pares de bases. Estas moléculas de ARNdh pueden oficiar de precursores para las moléculas de ARNip activas que dirigen el transcripto de ARN al complejo RISC para su subsiguiente degradación. Las moléculas de ARNdh presentes en el ambiente que rodea a un organismo o a las células del mismo pueden ser captadas por el organismo y procesadas por una enzima denominada Dicer para proporcionar moléculas de ARNip. De forma alternativa, el ARNdh puede producirse ¡n vivo, es decir, transcribirse de un polinucleótido o polinucleótidos que codifican el mismo presente dentro de una célula, por ejemplo, una célula de bacteria o célula de planta, y a continuación procesarse mediante Dicer dentro de la célula huésped o preferiblemente dentro de las células de la plaga de insectos tras la captación del precursor de ARNdh más largo. El ARNdh puede estar formado por dos hebras de ARN (sentido y antisentido) separadas que se aparean en virtud de apareamiento de bases complementario. De forma alternativa, el ARNdh puede ser de una sola hebra que es capaz de plegarse sobre sí misma para formar un ARN en horquilla (ARN) o estructura de tallo-bucle. En el caso de un ARN, la región de doble hebra o 'tallo' se forma a partir de dos regiones o segmentos del ARN que son esencialmente repeticiones invertidas del otro y presentan complementariedad suficiente como para permitir la formación de una región de doble hebra. Uno o más elementos silenciadores de doble hebra funcionales pueden estar presentes en esta región 'tallo' de la molécula. Las regiones de repeticiones invertidas están típicamente separadas mediante una región o segmento del ARN conocido como la región 'bucle'. Esta región puede comprender cualquier secuencia de nucleótidos que confiera flexibilidad suficiente como para permitir que ocurra el auto-apareamiento entre las regiones complementarias flanqueadoras del ARN. En general, la región bucle es básicamente de una sola hebra y actúa como un elemento separador entre las repeticiones invertidas.
Todas las moléculas de ARN interferente de la invención producen la regulación hacia abajo específica de las secuencias de expresión de un gen
objetivo mediante la unión a una secuencia de nucleótidos objetivo dentro del gen objetivo. La unión se produce como resultado de un apareamiento de bases complementario entre el elemento silenciador del ARN interferente y la secuencia de nucleótidos objetivo. Las moléculas de ARN interferente de la invención comprenden al menos uno o al menos dos elementos silenciadores. En una realización de la presente invención, la secuencia de nucleótidos objetivo comprende una secuencia de nucleótidos tal como se representa mediante el transcripto de ARN del gen objetivo, o un fragmento de la misma en donde el fragmento es preferiblemente de al menos 17 nucleótidos, más preferiblemente al menos 18, 19 o 20 nucleótidos, o aun más preferiblemente al menos 21 , 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 70, 80, 90, 100, 1 10, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 700, 800, 900, 1000, 1 100, 1200, 1300, 1400, 1500, 2000 o 3000 nucleótidos. En una realización preferida de la presente invención, la secuencia de nucleótidos objetivo comprende una secuencia de nucleótidos equivalente al transcripto de ARN codificado por cualquiera de los polinucleótidos que se seleccionan del grupo que consiste en (i) un polinucleótido que comprende al menos 21 , preferiblemente al menos 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 70, 80, 90, 100, 1 10, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 700, 800, 900, 1000, 1 100 o 1 1 15 nucleótidos contiguos de una secuencia de nucleótidos tal como se representa mediante cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164,
266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, o (ii) un polinucleótido que consiste en al menos 21 , preferiblemente al menos 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 70, 80, 90, 100, 1 10, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 700, 800, 900, 1000, 1 100, 1200, 1300, 1400, 1500, 2000 o 3000 nucleótidos contiguos de una secuencia de nucleótidos tal como se representa mediante cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, o (iii) un polinucleótido que comprende al menos 21 , preferiblemente al menos 22, 23 o 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 70, 80, 90, 100, 1 10, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 700, 800, 900, 1000, 1 100, 1200, 1300, 1400, 1500, 2000 o 3000 nucleótidos contiguos de una secuencia de nucleótidos tal como se representa mediante cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46,
141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 ,
142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146,
125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, de forma tal que, cuando las dos secuencias se alinean y comparan de forma óptima, dicho polinucleótido es al menos 75 % preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntico a cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, o (iv) un polinucleótido que comprende un fragmento de al menos 21 , preferiblemente al menos 22, 23 o 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 700, 800, 900, 1000, 1 100, 1200, 1300, 1400, 1500, 2000 o 3000 nucleótidos contiguos de un nucleótido tal como se representa mediante cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 ,
145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, y en donde dicho fragmento o dicho complemento tiene una secuencia de nucleótidos de forma tal que, cuando dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con el fragmento correspondiente en cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, dicha secuencia de nucleótidos es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a dicho fragmento correspondiente de cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126,
135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389 o su complemento,
o (v) un polinucleótido que consiste en un fragmento de al menos 21 , preferiblemente al menos 22, 23 o 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 70, 80, 90, 100, 1 10, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 700, 800, 900, 1000, 1 100, 1200, 1300, 1400, 1500, 2000 o 3000 nucleótidos contiguos de un nucleótido tal como se representa mediante cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46,
141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 ,
142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, y en donde dicho fragmento o dicho complemento tiene una secuencia de nucleótidos que, cuando dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con el fragmento correspondiente en cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209,
286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, dicha secuencia de nucleótidos es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a dicho correspondiente fragmento de cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 79, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389 o su complemento, o (vi) un polinucleótido que codifica una secuencia de aminoácidos que, cuando las dos secuencias de aminoácidos se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 70 % preferiblemente al menos 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a la secuencia de aminoácidos codificada por cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179,
210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389. En una realización más preferida de lo precedente, dicho polinucleótido no tiene más de 10000, 9000, 8000, 7000, 6000, 5000, 4000, 3000, 2000 o 1500 nucleótidos de longitud.
Preferiblemente, las moléculas de ARN interferente de la presente invención comprenden al menos una región de doble hebra, típicamente el elemento silenciador del ARN interferente, que comprende una hebra de ARN sentido apareada mediante apareamiento de bases complementario a una hebra de ARN antisentido, en donde la hebra sentido de la molécula de ARNdh comprende una secuencia de nucleótidos complementaria a una secuencia de nucleótidos ubicada dentro del transcripto de ARN del gen objetivo.
El elemento silenciador, o al menos una hebra del mismo en donde el elemento silenciador es de doble hebra, puede ser totalmente complementario o parcialmente complementario a la secuencia de nucleótidos objetivo del gen objetivo. Tal como se utiliza en la presente, la expresión "totalmente complementario" significa que todas las bases de la secuencia de nucleótidos del elemento silenciador son complementarias o 'coinciden' con las bases de la secuencia de nucleótidos objetivo. La expresión "al menos parcialmente complementario" significa que hay una coincidencia menor a 100% entre las bases del elemento silenciador y las bases de la secuencia de nucleótidos objetivo. El experto en la técnica comprenderá que el elemento silenciador necesita ser solo al menos parcialmente complementario a la secuencia de nucleótidos objetivo para mediar la regulación hacia abajo de la expresión del gen objetivo. Es bien conocido en la técnica que las secuencias de ARN con inserciones, eliminaciones y no coincidencias con relación a la secuencia objetivo igualmente pueden ser
efectivas en la iARN. De acuerdo con la presente invención, se prefiere que el elemento silenciador y la secuencia de nucleótidos objetivo del gen objetivo compartan al menos 80% o 85% de identidad de secuencia, preferiblemente al menos 90% o 95% de identidad de secuencia, o más preferiblemente al menos 97% o 98% de identidad de secuencia y aun más preferiblemente al menos 99% de identidad de secuencia. De forma alternativa, el elemento silenciador puede comprender 1 , 2 o 3 no coincidencias en comparación con la secuencia de nucleótidos objetivo en cada extensión de 24 nucleótidos parcialmente complementarios.
El experto en la técnica apreciará que el grado de complementariedad compartido entre el elemento silenciador y la secuencia de nucleótidos objetivo puede variar dependiendo del gen objetivo a ser regulado hacia abajo o dependiendo de la especie de plaga de insectos cuya expresión de genes ha de ser controlada.
En otra realización de la presente invención, el elemento silenciador comprende una secuencia de nucleótidos que es el ARN equivalente de cualquiera de los polinucleótidos que se seleccionan del grupo que consiste en un polinucleótido que comprende al menos 21 , preferiblemente al menos 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 70, 80, 90, 100, 1 10, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 700, 800, 900, 1000, 100 O 1 1 15 nucleótidos contiguos de una secuencia de nucleótidos tal como se representa mediante cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 26, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a
253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, o (ii) un pollnucleótido que comprende al menos 21 , preferiblemente al menos 22, 23 o 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 700, 800, 900, 1000, 1 100, 1200, 1300, 1400, 1500, 2000 o 3000 nucleótidos contiguos de una secuencia de nucleótidos tal como se representa mediante cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, de forma tal que, cuando las dos secuencias se alinean y comparan de forma óptima, dicho polinucleótido es al menos 75 % preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntico a cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234
a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, o (üi) un polinucleótido que comprende un fragmento de al menos 21 , preferiblemente al menos 22, 23 o 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 70, 80, 90, 100, 1 10, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 700, 800, 900, 1000, 1 100, 1200, 1300, 1400, 1500, 2000 o 3000 nucleótídos contiguos de un nucleótido tal como se representa mediante cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 76, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, y en donde dicho fragmento o dicho complemento tiene una secuencia de nucleótidos de forma tal que, cuando dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con el fragmento correspondiente en cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46,
141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 ,
142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146,
125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, dicha secuencia de nucleótidos es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a dicho fragmento correspondiente de cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 11 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, en donde dicho polinucleótido no tiene más de 10000, 9000, 8000, 7000, 6000, 5000, 4000, 3000, 2000 o 1500 nucleótidos de longitud. Se apreciará que en dichas realizaciones el elemento silenciador puede comprender o consistir en una región de ARN de doble hebra que comprende hebras complementarias apareadas, de las cuales una hebra, la hebra sentido, comprende una secuencia de nucleótidos al menos parcialmente complementaria a una secuencia de nucleótidos objetivo dentro de un gen objetivo.
La secuencia de nucleótidos objetivo puede seleccionarse de cualquier región o secuencia de nucleótidos adecuada del gen objetivo o transcripto de ARN del mismo. Por ejemplo, la secuencia de nucleótidos objetivo puede ubicarse
dentro de 5'UTR o 3'UTR del gen objetivo o transcripto de ARN o dentro de regiones exónicas o intrónicas del gen.
El experto en la técnica sabrá qué métodos utilizar para identificar la secuencia de nucleotidos objetivo más adecuada dentro del contexto del gen objetivo de longitud completa. Por ejemplo, pueden sintetizarse y evaluarse múltiples elementos silenciadores que se dirigen a diferentes regiones del gen objetivo. De forma alternativa, puede utilizarse la digestión del transcripto de ARN con enzimas tales como RNAse H para determinar sitios en el ARN que se encuentran en una conformación susceptible del silenciamiento de genes. Los sitios objetivo también pueden identificarse utilizando abordajes in silico, por ejemplo, el uso de algoritmos informáticos diseñados para predecir la eficacia del silenciamiento de genes en base al direccionamiento a diferentes sitios dentro del gen de longitud completa.
Los ARN interferentes de la presente invención pueden comprender un elemento silenciador o múltiples elementos silenciadores, en donde cada elemento silenciador comprende o consiste en una secuencia de nucleotidos que es al menos parcialmente complementaria a una secuencia de nucleotidos objetivo dentro de un gen objetivo y que funciona tras la captación por parte de una especie de plaga de insectos para regular hacia abajo la expresión de dicho gen objetivo. En el documento WO2006/046148 se describen constructos de ARN concateméricos de este tipo tal como se incorpora a la presente a modo de referencia. En el contexto de la presente invención, el término "múltiple" significa al menos dos, al menos tres, al menos cuatro, etc. y más hasta al menos 10, 15, 20 o al menos 30. En una realización, el ARN interferente comprende múltiples copias de un solo elemento silenciador, es decir, repeticiones de un elemento silenciador que se une a una secuencia de nucleotidos objetivo particular dentro de un gen objetivo específico. En otra realización, los elementos silenciadores dentro del ARN interferente comprenden o consisten en diferentes secuencias de nucleotidos complementarias a diferentes secuencias de nucleotidos objetivo. Debería ser claro que las combinaciones de múltiples copias del mismo elemento silenciador
combinadas con elementos silenciadores que se unen a una secuencia de nucleótidos objetivo diferentes se encuentran dentro del alcance de la presente invención.
Las diferentes secuencias de nucleótidos objetivo pueden originarse a partir de un solo gen objetivo en una especie de plaga de insectos para alcanzar una regulación hacia abajo mejorada de un gen objetivo específico en una especie de plaga de insectos. En ese caso, los elementos silenciadores pueden combinarse en el ARN interferente en el orden original en el cual las secuencias de nucleótidos objetivo se encuentra en el gen objetivo, o los elementos silenciadores pueden mezclarse y combinarse aleatoriamente en cualquier orden de rango en el contexto del ARN interferente en comparación con el orden de las secuencias de nucleótidos objetivo en el gen objetivo.
De forma alternativa, las diferentes secuencias de nucleótidos objetivo representan un solo gen objetivo pero se originan de diferentes especies de plagas de insectos.
De forma alternativa, las diferentes secuencias de nucleótidos objetivo pueden originarse de diferentes genes objetivo. Si el ARN interferente es para ser utilizado en la prevención y/o el control de infestación por parte de plagas, se prefiere que los diferentes genes objetivo se seleccionen del grupo de genes que regulan las funciones biológicas esenciales de las especies de plagas de insectos, incluyendo, a modo no taxativo, supervivencia, crecimiento, desarrollo, reproducción y patogenicidad. Los genes objetivo pueden regular vías biológicas o procesos iguales o diferentes. En una realización, al menos uno de los elementos silenciadores comprende o consiste en una secuencia de nucleótidos que es al menos parcialmente complementaria a una secuencia de nucleótidos objetivo dentro de un gen objetivo en donde el gen objetivo se selecciona del grupo de genes tal como se describió anteriormente.
En una realización adicional de la invención, los diferentes genes objetivo de los diferentes elementos silenciadores se originan de la misma especie de plaga de insectos. Este abordaje está diseñado para lograr un ataque mejorado
contra una sola especie de plaga de insectos. En particular, los diferentes genes objetivo pueden expresarse diferencialmente en las diferentes etapas del ciclo de vida del insecto, por ejemplo, las etapas de adulto maduro, larva inmadura y huevos. El ARN interferente de la invención puede así utilizarse para prevenir y/o controlar una infestación por parte de plagas de insectos en más de una etapa del ciclo de vida del insecto.
En una realización alternativa de la invención, los diferentes genes objetivo de los diferentes elementos silenciadores se originan de diferentes especies de plagas de insectos. El ARN interferente de la invención puede así utilizarse en la prevención y/o el control de infestación por parte de más de una especie de plaga de insectos simultáneamente.
Los elementos silenciadores pueden disponerse como una región contigua del ARN interferente o pueden separarse mediante la presencia de secuencias enlazantes. La secuencia enlazante puede comprender una secuencia de nucleótidos aleatoria corta que no es complementaria a ninguna secuencia de nucleótidos objetivo o genes objetivo. En una realización, el enlazante es una secuencia de ARN que se auto-escinde condicionalmente, preferiblemente un enlazante sensible al pH o a enlazante sensible a la hidrofobicidad. En una realización, el enlazante comprende una secuencia de nucleótidos equivalente a una secuencia intrónica. Las secuencias enlazantes de la presente invención pueden tener una longitud que puede variar de aproximadamente 1 par de bases a aproximadamente 10000 pares de bases, siempre que el enlazante no altere la habilidad del ARN interferente de regular hacia abajo la expresión del o los genes objetivo.
Además del o los elementos silenciadores y cualquier secuencia enlazante, el ARN interferente de la invención puede comprender al menos una secuencia de polinucleótidos adicional. En diferentes realizaciones de la invención, la secuencia adicional se selecciona de (i) una secuencia capaz de proteger el ARN interferente del procesamiento del ARN, (ii) una secuencia que afecta la estabilidad del ARN interferente, (iii) una secuencia que permita la unión de proteína, por ejemplo para
facilitar la captación del ARN interferente mediante las células de la especie de plaga de insectos, (iv) una secuencia que facilita la producción a gran escala del ARN interferente, (v) una secuencia que es un aptámero que se une a un receptor o a una molécula en la superficie de las células de la plaga de insectos para facilitar la captación, o (v) una secuencia que cataliza el procesamiento del ARN interferente dentro de las células de la plaga de insectos y mejora de esta forma la eficacia del ARN interferente. Las estructuras para mejorar la estabilidad de las moléculas de ARN se conocen bien en la técnica y se describen adicionalmente en el documento WO2006/046148, que se incorpora a la presente a modo de referencia.
La longitud del ARN interferente de la invención necesita ser suficiente para la captación por parte de las células de una especie de plaga de insectos y la regulación hacia abajo de genes objetivo dentro de la plaga tal como se describe en otras partes de la presente. Sin embargo, el límite superior de longitud puede depender de (i) el requerimiento de ARN interferente a ser captado por las células de la plaga y (ii) el requerimiento de ARN interferente a ser procesado en las células de la plaga para mediar el silenciamiento de genes mediante la vía de iARN. La longitud también puede determinarse por el método de producción y la formulación para la liberación del ARN interferente a células. Preferiblemente, el ARN interferente de la presente invención será de entre 21 y 10000 nucleotidos de longitud, preferiblemente entre 50 y 5000 nucleotidos o entre 100 y 2500 nucleotidos, más preferiblemente entre 80 y 2000 nucleotidos de longitud.
El ARN interferente puede contener bases de ADN, bases no naturales o uniones de estructura principal o modificaciones de la estructura principal de azúcar-fosfato no naturales, por ejemplo para mejorar la estabilidad durante el almacenamiento o mejorar la resistencia a la degradación por parte de nucleasas. Más aun, el experto en la técnica puede producir el ARN interferente químicamente o enzimáticamente mediante reacciones manuales o automatizadas. De forma alternativa, el ARN interferente puede transcribirse a partir de un polinucleótido que lo codifica. De esta forma, en la presente se proporciona un
polinucleótido aislado que codifica cualquiera de los ARN interferentes de la presente invención.
En la presente también se proporciona un polinucleótido aislado que se selecciona del grupo que consiste en (i) un polinucleótido que comprende al menos 21 , preferiblemente al menos 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 70, 80, 90, 100, 10, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 700, 800, 900, 1000, 1100, 1200, 1300, 1400, 1500, 2000 o 3000 nucleótidos contiguos de una secuencia de nucleótidos tal como se representa mediante cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 11 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261, 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, o (ii) un polinucleótido que consiste en al menos 21 , preferiblemente al menos 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 70, 80, 90, 100, 1 0, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 700, 800, 900, 1000, 1100 o 1115 nucleótidos contiguos de una secuencia de nucleótidos tal como se representa mediante cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 11 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123,
132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, o (iii) un polinucleótido que comprende al menos 21 , preferiblemente al menos 22, 23 o 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 125, 150, 75, 200, 225, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 700, 800, 900, 1000, 1 100, 1200, 1300, 1400, 1500, 2000 o 3000 nucleótidos contiguos de una secuencia de nucleótidos tal como se representa mediante cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, Í4, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, de forma tal que, cuando las dos secuencias se alinean y comparan de forma óptima, dicho polinucleótido es al menos 75 % preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntico a cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177,
183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, o (iv) un polinucleótido que comprende un fragmento de al menos 21 , preferiblemente al menos 22, 23 o 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 70, 80, 90, 100, 1 10, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 700, 800, 900, 1000, 1 100, 1200, 1300, 1400, 1500, 2000 o 3000 nucleótidos contiguos de un nucleótido tal como se representa mediante cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, y en donde dicho fragmento o dicho complemento tiene una secuencia de nucleótidos de forma tal que, cuando dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con el fragmento correspondiente en cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18,
59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, dicha secuencia de nucleótidos es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a dicho fragmento correspondiente de cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389 o su complemento, o (v) un polinucleótido que consiste en un fragmento de al menos 21 , preferiblemente al menos 22, 23 o 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 70, 80, 90, 100, 1 10, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 700, 800, 900, 1000, 1100, 1200, 300, 1400, 1500, 2000 o 3000 nucleótidos contiguos de un nucleótido tal como se representa mediante cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 89, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205,
55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, y en donde dicho fragmento o dicho complemento tiene una secuencia de nucleótidos de forma tal que, cuando dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con el fragmento correspondiente en cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, dicha secuencia de nucleótidos es al menos 75%, preferiblemente al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99 % idéntica a dicho correspondiente fragmento de cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177,
183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389 o su complemento, o (vi) un polinucleótido que codifica una secuencia de aminoácidos que, cuando las dos secuencias de aminoácidos se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 70 % preferiblemente al menos 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a la secuencia de aminoácidos codificada por cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 11 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, y en donde dicho polinucleótido no tiene más de 10000, 9000, 8000, 7000, 6000, 5000, 4000, 3000, 2000 o 1500 nucleótidos de longitud.
En realizaciones preferidas, el polinucleótido aislado es parte de una molécula de ARN interferente, típicamente parte del elemento silenciador, que comprende al menos una región de doble hebra que comprende una hebra de ARN sentido apareada mediante apareamiento de bases complementario a una hebra de ARN antisentido, en donde la hebra sentido de la molécula de ARNdh
comprende una secuencia de nucleótidos complementaria a una secuencia de nucleótidos ubicada dentro del transcripto de ARN del gen objetivo. La hebra sentido del ARNdh es, por lo tanto, capaz de aparearse con el transcripto de ARN y dirigirse al ARN para degradarse dentro del complejo del silenciamiento inducido por ¡ARN o RISC.
Los polinucleótidos de la invención pueden insertarse mediante técnicas de clonación molecular de rutina en vectores o constructos de ADN conocidos en la técnica. Por lo tanto, de acuerdo con una realización, se proporciona un constructo de ADN que comprende cualquiera de los polinucleótidos de la presente invención. Preferiblemente, en la presente se proporciona un constructo de ADN que comprende un polinucleótido que codifica al menos uno de los ARN interferentes de la presente invención. El constructo de ADN puede ser un vector de ADN recombinante, por ejemplo un vector bacteriano, viral o de levadura. En una realización preferida de la invención, el constructo de ADN es un constructo de expresión y el polinucleótido se encuentra unido de forma operativa a al menos una secuencia reguladora capaz de dirigir la expresión de la secuencia de polinucleótidos. La expresión 'secuencia reguladora' debe considerarse en un contexto amplio y pretende hacer referencia a cualquier secuencia de nucleótidos capaz de efectuar la expresión de los polinucleótidos a los cuales está unido de forma operativa incluyendo, a modo no taxativo, promotores, mejoradores y otros elementos activadores transcripcionales sintéticos o naturales. La secuencia reguladora puede ubicarse en el extremo 5' o 3' de la secuencia de polinucleótidos. La expresión 'unido de forma operativa' se refiere a una unión funcional entre la secuencia reguladora y la secuencia de polinucleótidos de forma tal que la secuencia reguladora dirige la expresión del polinucleótido. Los elementos unidos de forma operativa pueden ser contiguos o no contiguos.
Preferiblemente, la secuencia reguladora es un promotor que se selecciona del grupo que comprende, a modo no taxativo, promotores constitutivos, promotores inducibles, promotores específicos de tejido y promotores específicos de etapa de crecimiento/desarrollo. En una realización, el polinucleótido se coloca
bajo el control de un promotor constitutivo fuerte cualquiera que se seleccione del grupo que comprende el promotor CaMV35S, promotor CaMV35S doble, promotor de ubiquitina, promotor de actina, promotor de rubisco, promotor GOS2, promotor 34S del virus del mosaico de la escrofularia.
Opcionalmente, una o más secuencias de terminación de transcripción pueden incorporarse en el constructo de expresión de la invención. La expresión 'secuencia de terminación de la transcripción' abarca una secuencia de control al final de una unidad de transcripción, que señala la terminación de la transcripción, el procesamiento en 3' y la poliadenilación de un transcripto primario. Secuencias reguladoras adicionales incluyendo, a modo no taxativo, mejoradores translacionales o transcripcionales, pueden incorporarse en el constructo de expresión, por ejemplo, como con el promotor CaMV35S doble mejorado.
La presente invención también abarca un método para generar cualquiera de los ARN interferentes de la invención que comprende las etapas de (i) poner en contacto un polinucleótido que codifica dicho ARN ¡nterferente o un constructo de ADN que lo comprende con componentes sin células; o (ii) introducir (por ejemplo, mediante transformación, transfección o inyección) un polinucleótido que codifica dicho ARN ¡nterferente o un constructo de ADN que lo comprende dentro de una célula.
La invención también se refiere así a cualquier ribonucleótido de doble hebra producido a partir de la expresión de un polinucleótido descrito en la presente.
Por lo tanto, en la presente también se proporciona una célula huésped transformada con cualquiera de los polinucleótidos descritos en la presente. También abarcados por las presentes células huésped que comprenden cualquiera de los ARN interferentes de la presente invención, cualquiera de los polinucleótidos de la presente invención o un constructo de ADN que los comprende. La célula huésped puede ser una célula procariota incluyendo, a modo no taxativo, células bacterianas gram-positivas y gram-negativas, o una célula eucariota incluyendo, a modo no taxativo, células de levadura o células
vegetales. Preferiblemente, dicha célula huésped es una célula bacteriana o una célula vegetal. La célula bacteriana puede seleccionarse del grupo que comprende, a modo no taxativo, células Gram positivas y Gram negativas que comprenden Escherichia spp. (por ejemplo, E. coli), Bacillus spp. (por ejemplo, B. thuringiensis), Rhizobium spp., Lactobacillus spp., Lactococcus spp., Pseudomonas spp. y Agrobacterium spp. El polinucleotido o constructo de ADN de la invención puede existir o mantenerse en la célula huésped como un elemento extra-cromosómico o puede incorporarse de forma estable en el genoma de la célula huésped. Características de interés particular al seleccionar una célula huésped para los propósitos de la presente invención incluyen la facilidad con la cual el polinucleotido o constructo de ADN que codifica el ARN ¡nterferente puede introducirse en el huésped, la disponibilidad de los sistemas de expresión compatibles, la eficiencia de la expresión, y la estabilidad del ARN interferente en el huésped.
Preferiblemente, los ARN interferentes de la invención se expresan en una célula huésped de una planta. Las plantas de interés preferidas incluyen, a modo no taxativo, algodón, papa, arroz, tomate, cañóla, soja, girasol, sorgo, mijo, maíz, alfalfa, fresas, berenjena, pimiento y tabaco.
En situaciones en las cuales el ARN interferente se expresa dentro de una célula huésped y/o se utiliza para prevenir y/o controlar una infestación por parte de plagas de un organismo huésped, se prefiere que el ARN interferente no exhiba efectos inesperados significativos, es decir, el ARN interferente no afecte la expresión de genes dentro del huésped. Preferiblemente, el elemento silenciador no exhibe complementariedad significativa con secuencias de nucleótidos que no sean la secuencia de nucleótidos objetivo del gen objetivo pretendida. En una realización de la invención, el elemento silenciador muestra menos del 30%, más preferiblemente menos del 20%, más preferiblemente menos del 10% y aun más preferiblemente menos del 5% de identidad de secuencia con cualquier gen de la célula u organismo huésped. Si los datos de la secuencia genómica están disponibles para el organismo huésped, es posible verificar de forma cruzada la
identidad con el elemento silenciador utilizando herramientas bioinformáticas convencionales. En una realización, no hay identidad de secuencia entre el elemento silenciador y un gen de la célula huésped u organismo huésped en una región de 17, más preferiblemente en una región de 18 o 19 y aun más preferiblemente en una región de 20 o 21 nucleótidos contiguos.
En la aplicación práctica de la invención, los ARN ¡nterferentes de la invención pueden utilizarse para prevenir y/o controlar cualquier plaga de insectos pertenecientes a los órdenes Coleóptera, Lepidoptera, Díptera, Dichyoptera, Orthoptera, Hemiptera y Siphonaptera.
Más aun, de acuerdo con otro aspecto de la invención, en la presente se proporciona una composición para prevenir y/o controlar la infestación por parte de plagas de insectos que comprende al menos un ácido ribonucleico (ARN) interferente y opcionalmente al menos un portador, excipiente o diluyente aceptable, en donde el ARN interferente funciona tras la captación por parte de la plaga para regular hacia abajo la expresión de un gen objetivo dentro de dicha plaga. El ARN interferente puede ser cualquiera de los descritos en otras partes de la presente. Preferiblemente, el ARN interferente comprende o consiste en al menos un elemento silenciador y dicho elemento silenciador es una región de ARN de doble hebra que comprende hebras complementarias apareadas, de las cuales una hebra (la hebra sentido) comprende una secuencia de nucleótidos que es al menos parcialmente complementaria a una secuencia de nucleótidos objetivo dentro de un gen objetivo. El 'gen objetivo' puede ser cualquier gen de plaga objetivo tal como se divulga en otras partes en la presente incluyendo, a modo no taxativo, genes implicados en la regulación de la supervivencia, crecimiento, desarrollo, reproducción y patogenicidad de la plaga. De forma alternativa, la composición comprende al menos una célula huésped que comprende al menos una molécula de ARN interferente o constructo de ADN que lo codifica y opcionalmente al menos un portador, excipiente o diluyente aceptable, en donde el ARN interferente funciona tras la captación de la célula huésped por parte de la
plaga de insectos para regular hacia abajo la expresión de un gen objetivo dentro de dicha plaga.
En la aplicación práctica de la invención, la composición puede utilizarse para prevenir y/o controlar cualquier plaga de insectos pertenecientes a los órdenes Coleóptera, Lepidoptera, Díptera, Dichyoptera, Orthoptera, Hemiptera y Siphonaptera. La composición puede, por lo tanto, presentarse en cualquier forma adecuada para aplicación a plagas de insectos o para aplicación a sustratos y/u organismos, en particular plantas, susceptibles a infestación por parte de dicha plaga de insectos. En una realización, la composición se usa para prevenir y/o controlar infestación por parte de plagas de plantas o materiales de propagación o reproducción de plantas y, por lo tanto, se dirige a especies de plagas de insectos que infestan plantas. La composición de la presente invención es particularmente efectiva cuando la plaga de insectos pertenece a la categoría de insectos "masticadores" que causan daño considerable a plantas por comer tejidos de plantas tales como raíces, hojas, flores, brotes, ramas pequeñas y similares. Ejemplos de esta gran categoría de insectos incluyen escarabajos y sus larvas.
La composición de la invención puede utilizarse para controlar plagas de insectos en todas las etapas de su ciclo vital, por ejemplo, las etapas de adulto maduro, larva y huevos.
En el contexto de la composición de la invención, el ARN ¡nterferente puede ser producido a partir de un constructo de ADN, en particular un constructo de expresión tal como se describe en otras partes de la presente, que comprende un polinucleótido que lo codifica. En realizaciones preferidas, el ARN ¡nterferente puede producirse dentro de una célula u organismo huésped manipulado genéticamente para expresar dicho ARN ¡nterferente a partir de un polinucleótido que lo codifica.
Organismos huéspedes adecuados para su uso en las composiciones de la presente invención incluyen, a modo no taxativo, microorganismos conocidos por colonizar el ambiente de las plantas o cultivos de interés y/o sus alrededores, es decir, plantas o cultivos susceptibles a infestación por parte de especies de plagas
de insectos. Dichos microorganismos incluyen, a modo no taxativo, aquellos que ocupan filoplano (la superficie de las hojas de las plantas) y/o la rizósfera (el suelo que rodea las raíces de las plantas). Estos microorganismos se seleccionan de forma tal que sean capaces de competir exitosamente con cualquier organismo de tipo silvestre presente en el ambiente de la planta. Microorganismos adecuados para su uso como huéspedes incluyen varias especies de bacterias, algas y hongos. Es claro que los microorganismos seleccionados no deben ser tóxicos para las plantas. Dichas composiciones aplicadas a plantas susceptibles de infestación por parte de especies de plagas de insectos serán ingeridas por las plagas de insectos que se alimentan de las plantas tratadas.
Los organismos huéspedes que no colonizan plantas y/o su ambiente de forma natural también se encuentran dentro del alcance de la presente invención. Dichos organismos pueden servir solamente como medio para generar el ARN interferente de la composición. Por ejemplo, en una realización, el ARN interferente se fermenta/produce en un huésped bacteriano y las bacterias subsiguientemente se inactivan/mueren. Las bacterias resultantes pueden procesarse y utilizarse como un spray insecticida de la misma forma que las cepas de Bacillus thuringiensis se han utilizado como un insecticida para aplicación en spray. En ciertas realizaciones, un lisado o extracto bacteriano puede purificarse adecuadamente para dejar un extracto que contenga un ARN interferente sustancialmente puro, que subsiguientemente se formula en una de las composiciones de la invención. El experto en la técnica conocerá las técnicas de purificación/extracción convencionales.
Las composiciones de la invención pueden presentarse en cualquier forma física adecuada para aplicación a insectos. Por ejemplo, la composición puede presentarse en forma sólida (polvo, gránulos o cebo), forma líquida (incluyendo una forma para ser administrada como un insecticida en spray) o en forma de gel. En una realización específica, la composición puede ser un recubrimiento, pasta o polvo que puede aplicarse a un sustrato para proteger dicho sustrato de infestación por parte de insectos. En esta realización, la composición puede
utilizarse para proteger cualquier sustrato o material que es susceptible a infestación o daño causado por un insecto.
La naturaleza de los excipientes y la forma física de la composición puede variar dependiendo de la naturaleza del sustrato que se quiere tratar. Por ejemplo, la composición puede ser un líquido que se esparce o pulveriza o imprime en el material o sustrato a tratar, o un recubrimiento o polvo que se aplica al material o sustrato a tratar.
En una realización, la composición se presenta en forma de un cebo. El cebo está diseñado para atraer al insecto para entrar en contacto con la composición. Al contactarse con la misma, la composición es entonces internalizada por el insecto, por ejemplo, mediante ingestión y mediación de ¡ARN para matar así al insecto. Dicho cebo puede comprender una sustancia alimenticia, tal como un alimento en base a proteínas, por ejemplo, comida de pez. También puede utilizarse ácido bórico como un cebo. El cebo puede depender de la especie objetivo. También puede utilizarse un atrayente. El atrayente puede ser una feromona, tal como, por ejemplo, una feromona masculina o femenina. A modo de ejemplo, en la invención pueden utilizarse las feromonas a las que se hace referencia en el libro "Insect Pheremones and their use in Pest Management" (Howse et al, Chapman y Hall, 1998). El atrayente actúa para atraer al insecto hacia el cebo y puede dirigirse a un insecto en particular o puede atraer a una amplia gama de insectos. El cebo puede presentarse en cualquier forma adecuada, tal como una forma sólida, en pasta, gránulos o en polvo.
El cebo también puede ser llevado por el insecto de vuelta a la colonia. El cebo puede entonces actuar como una fuente de comida para otros miembros de la colonia proporcionando así un control efectivo de un gran número de insectos y potencialmente una colonia entera de plaga de insectos. Esto es una ventaja asociada al uso de ARN de doble hebra de la invención ya que la acción retrasada de los efectos mediados por la ¡ARN sobre las plagas permite que el cebo sea llevado de vuelta a la colonia lo que proporciona máximo impacto en términos de exposición a los insectos.
Adicionalmente, las composiciones que entran en contacto con los insectos pueden permanecer en la cutícula del insecto. Cuando se limpian, ya sea un insecto a sí mismo o un insecto a otro, las composiciones pueden ser ingeridas y así mediar sus efectos en el insecto. Esto requiere que la composición sea suficientemente estable como para que el ARN interferente permanezca intacto y sea capaz de lograr la ¡ARN aun cuando se exponga a condiciones ambientales externas durante un período de tiempo que, por ejemplo, puede ser un lapso de días.
Los cebos pueden proporcionarse en un "receptáculo" o "trampa". Dichos receptáculos y trampas se encuentran comercialmente disponibles y pueden adaptarse trampas existentes para incluir las composiciones de la invención. Cualquier receptáculo o trampa que pueda atraer a un insecto a entrar en él se incluye en el alcance de la invención. El receptáculo o trampa puede presentarse en forma de caja, por ejemplo, y puede proporcionarse pre-armado o puede formarse a partir de cartón plegable, por ejemplo. Materiales adecuados para el receptáculo o la trampa incluyen plásticos y cartón, particularmente cartón corrugado. Las dimensiones adecuadas para dichos receptáculo o trampa son, por ejemplo, 7-15 cm de ancho, 15-20 cm de largo y 1-5 cm de altura. Las superficies internas de las trampas pueden estar forradas con una sustancia pegajosa para restringir el movimiento del insecto una vez dentro de la trampa. El receptáculo o trampa puede contener un recipiente adecuado en su interior que puede mantener el cebo en su lugar. Una trampa se distingue de un receptáculo porque el insecto luego de entrar no puede salir de la trampa fácilmente, mientras que un receptáculo actúa como una "estación para alimentarse" que proporciona al insecto un ambiente preferido en el cual alimentarse y sentirse a salvo de depredadores.
Por lo tanto, en un aspecto adicional la invención proporciona un receptáculo o trampa para insectos que contiene una composición de la invención, que puede incorporar cualquiera de las características de la composición descritas en la presente.
En una realización alternativa adicional, la composición puede proporcionarse en forma de spray. De esta forma, un humano que la utilice puede pulverizar la composición directamente sobre la plaga. La composición es entonces internalizada por el insecto, desde donde puede mediar la interferencia de ARN, controlando así al insecto. El spray preferiblemente es un spray presurizado/aerosolizado o un atomizador. Las partículas pueden ser de un tamaño adecuado como para que se adhieran al insecto, por ejemplo, al exoesqueleto, y puedan absorberse desde el mismo. El tamaño de las partículas puede medirse mediante medios conocidos, tal como mediante el uso de un Mastersizer, que es un dispositivo comercialmente disponible.
En otra realización adicional, el portador es una partícula o polvo cargado electroestáticamente que se adhiere al insecto. Partículas y polvos adecuados que son capaces de adherirse a un insecto y así liberar los constructos de ARN de la invención se describen detalladamente en los documentos WO 94/00980 y WO 97/33472 los cuales se incorporan a la presente a modo de referencia.
De forma alternativa, el portador puede comprender partículas magnéticas que se adhieren a la cutícula del insecto. Partículas magnéticas adecuadas que son capaces de adherirse a un insecto y así liberar los constructos de ARN de la invención se describen detalladamente en el documento WO 00/01236, el cual se incorpora a la presente a modo de referencia.
En otra realización adicional, el portador de la composición comprende partículas metálicas que inicialmente no están magnetizadas pero que son capaces de volverse magnéticamente polarizadas cuando se someten al campo eléctrico proporcionado por el cuerpo del insecto. Este modo de acción se describen detalladamente en el documento WO 2004/049807, el cual se incorpora a la presente a modo de referencia.
Preferiblemente, la composición incorpora un portador que aumenta la captación del ARN interferente dentro de la plaga de insectos. Dicho portador puede ser un portador de base lípida, que preferiblemente comprende una o más de emulsiones de aceite en agua, micelas, colesterol, lipopoliaminas y liposomas.
Otros agentes que promueven la captación de los constructos de la invención son bien conocidos por lo expertos en la técnica e incluyen policationes, dextranos y lípidos catiónicos (tris), tal como CS096, CS102 etc. Liposomas comercialmente disponibles incluyen LIPOFECTIN® y CELLFECTIN®, etc. En el documento WO 03/004644, bajo el título "Agente promotor de la transfección", se enumeran varios portadores adecuados y cada uno de los ejemplos proporcionados se incorpora a la presente a modo de referencia.
En una realización adicional preferida, el portador es un agente condensador de ácido nucleico. Preferiblemente, el condensador de ácido nucleico comprende sulfato de protamina o espermidina o un derivado de los mismos.
Cuando la composición de la invención se usa para prevenir y/o controlar infestación por parte de plagas de una planta, la composición puede contener un portador agrícolamente adecuado. Dicho portador puede ser cualquier material que la planta a ser tratada pueda tolerar, que no cause daño indebido al ambiente u otros organismos en la presente y, que permita que el ARN interferente permanezca efectivo contra la especie de plaga de insectos. En particular, las composiciones de la invención pueden formularse para administrarse a plantas de acuerdo con prácticas agrícolas de rutina en la industria bioinsecticida. La composición puede contener componentes adicionales capaces de ejecutar otras funciones incluyendo, a modo no taxativo, (i) mejora o promoción de la captación del ARN interferente mediante células de la plaga y (ii) estabilización de los componentes activos de la composición. Ejemplos específicos de dichos componentes adicionales contenidos en la composición que comprende el ARN interferente son ARNt de levadura o ARN total de levadura.
Las composiciones pueden formularse para aplicación directa o como una concentración de una composición primaria que requiere diluirse antes de su uso. De forma alternativa, la composición puede suministrarse como un kit que comprende el ARN interferente o la célula huésped que lo comprende o expresa en un recipiente y el diluyente o portador adecuado para la célula huésped o ARN en un recipiente separado. En la aplicación práctica de la invención, la
composición puede aplicarse a una planta o cualquier parte de una planta en cualquier etapa del desarrollo de la planta. En una realización, la composición se aplica a las partes aéreas de una planta, por ejemplo durante el cultivo de las plantas en un campo. En una realización adicional, la composición se aplica a las semillas de una planta mientras están almacenadas o una vez que se plantan en el suelo. Generalmente es importante obtener un buen control de plagas en las etapas más tempranas del crecimiento de la planta ya que estos son los momentos en los que la planta puede verse más severamente dañada por parte de especies de plagas.
La composición puede aplicarse al ambiente de una plaga de insectos mediante varias técnicas incluyendo, a modo no taxativo, pulverizado, atomizado, empolvado, difusión, vertido, recubrimiento de semillas, tratamiento de semillas, introducción en el suelo e introducción en el agua de riego. En el tratamiento de plantas susceptibles a infestación por parte de plagas, la composición puede administrarse a la planta o parte de una planta antes de que aparezca la plaga (a los efectos de prevenir), o una vez que comienzan a aparecer signos de infestación por parte de plagas (a los efectos de controlar la plaga).
En una realización adicional de la invención, las composiciones de la invención pueden formularse de forma tal de contener al menos un agente activo adicional. De esta forma, la composición puede proporcionarse como un "kit de partes" que comprende el ARN interferente y contiene la composición en un recipiente y uno o más ingredientes activos adecuados, por ejemplo un plaguicida químico o biológico, en un recipiente separado. De forma alternativa, las composiciones pueden proporcionarse en una mezcla y son estables y pueden utilizarse juntas.
Ingredientes activos adecuados que pueden actuar de forma complementaria a las moléculas de ARN interferente de la presente invención incluyen, a modo no taxativo, los siguientes: Clorpirifós, Aletrina, Resmetrina, Tetrabromoetilo, Ácido dimetol-ciclopropano carboxílico (que generalmente se incluyen en composiciones líquidas); e Hidrametilnón, Avermectina, Clorpirifós,
Sulfuramid, Hidropreno, Fipronil (receptor GABA), Isopropilfenil metil carbamato, Indoxacarb (PARA), Noviflumurón (inhibidor de la síntesis de quitina), Imiprotrina (PARA), Abamectina (canal de cloruro regulado por glutamato), Imidacloprid (receptor de Acetilcolina) (que generalmente se incluyen en composiciones de cebos).
En una realización preferida, el ingrediente activo se conoce por ser un insecticida preferido en términos de salud y consideraciones ambientales tales como, por ejemplo, Hidrametilnón y Avermectina.
En una realización adicional de la invención, la composición se formula de forma tal de contener al menos un agente agronómico adicional, por ejemplo un herbicida o un plaguicida adicional. Tal como se utiliza en la presente, un 'segundo plaguicida' o 'plaguicida adicional' se refiere a un plaguicida que no sea la primera u original molécula de ARN interferente de la composición. De forma alternativa, la composición de la invención puede administrarse en combinación con al menos otro agente agronómico, por ejemplo un herbicida o un segundo plaguicida. En una realización, la composición se proporciona en combinación con un herbicida que se selecciona de cualquiera de los conocidos en la técnica, por ejemplo, glifosato, imidazolinona, sulfonilurea y bromoxinilo. En una realización adicional, la composición se proporciona en combinación con al menos un plaguicida adicional. El plaguicida adicional puede seleccionarse de cualquier plaguicida conocido en la técnica y/o puede comprender un ácido ribonucleico interferente que funciona tras la captación por parte de una plaga para regular hacia abajo la expresión de un gen objetivo en dicha especie de plaga. En una realización, la plaga objetivo es una especie de plaga de insectos y el ARN interferente se selecciona de cualquiera de los ARN interferentes tal como se describe en la presente. En una realización adicional, el plaguicida adicional comprende un ARN interferente que funciona para regular hacia abajo la expresión de un gen conocido en cualquier especie de plaga objetivo sin limitarse a plagas de insectos. La molécula de ARN interferente original de la composición y el o los segundos plaguicidas o plaguicidas adicionales pueden dirigirse a la misma especie de plaga de insectos o
pueden tener como objetivo una especie de plaga de insectos diferente. Por ejemplo, el ARN interferente original y el segundo plaguicida pueden dirigirse a diferentes especies de plagas de insectos o pueden dirigirse a diferentes familias o clases de organismos de plagas, por ejemplo, hongos o nemátodos o insectos. Será evidente para el experto en la técnica cómo evaluar los efectos sinergísticos de las combinaciones de moléculas de ARN interferente con otros agentes agronómicos. En una realización preferida, la composición contiene una primera molécula de ARN interferente descrita en otras partes de la presente y uno o más plaguicidas adicionales, cada uno tóxico para la misma plaga de insectos, en donde el o los plaguicidas adicionales se seleccionan de una patatina, una proteína insecticida Bacillus thuringiensis, una proteína insecticida Xenorhabdus, una proteína insecticida Photorhabdus, una proteína insecticida Bacillus laterosporous, una proteína insecticida Bacillus spaericus, y una lignina, y en donde dicha proteína insecticida de Bacillus thuringiensis se selecciona del grupo que consiste en una CryIAb, una CryI C, una Cry2Aa, una Cry3, una TIC851 , una CryET70, una Cry22, una VIP, una TIC901 , una TIC1201 , una TIC407, una TIC417, una proteína insecticida binaria que se selecciona de CryET33 y CryET34, CryET80 y CryET76, TIC100 y TIC101 , y PS149B1 , y quimeras insecticidas de cualquiera de las proteínas insecticidas precedentes.
Los diferentes componentes de las combinaciones descritos en la presente pueden administrarse, por ejemplo a un organismo huésped susceptible a infestación por parte de plagas, en cualquier orden. Los componentes pueden administrarse simultáneamente o secuencialmente al área u organismo a tratar.
En la presente también se proporciona un método para prevenir y/o controlar la infestación por parte de plagas, que comprende poner en contacto una especie de plaga de insectos con una cantidad efectiva de al menos un ARN interferente en donde el ARN funciona al ser captado por dicha plaga para regular hacia abajo la expresión de un gen objetivo de plaga esencial. El gen objetivo esencial puede ser cualquier gen de plaga implicado en la regulación de un proceso biológico esencial necesario para que la plaga inicie o mantenga la
infestación incluyendo, a modo no taxativo, supervivencia, crecimiento, desarrollo, reproducción y patogenicidad. En particular, el gen objetivo puede ser cualquier gen de plaga tal como se describe en otras partes de la presente.
En los métodos descritos en la presente para regular hacia abajo la expresión de un gen objetivo en una especie de plaga de insectos, las moléculas de ARN de doble hebra que comprenden al menos 21 pb, de las cuales una hebra comprende o consiste en una secuencia de nucleótidos que es complementaria a al menos 21 nucleótidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297 o 310 a 313, O SU complemento, pueden utilizarse para regular hacia abajo la expresión del gen objetivo ortólogo en un insecto coleóptero, hemíptero, lepidóptero o díptero que se selecciona del grupo que comprende, a modo no taxativo, Leptinotarsa spp. (por ejemplo, L. decemlineata (escarabajo de la papa de Colorado), L. juncta (falso escarabajo de la papa), o L. texana (escarabajo de la papa tejano)); Nilaparvata spp. (por ejemplo, N. Lugens (saltamontes marrón)); Lygus spp. (por ejemplo, L. Lineolaris (chinche lygus) o L. hesperus (chinche lygus del oeste)); Myzus spp. (por ejemplo, M. persicae (áfido verde del durazno)); Diabrotica spp. (por ejemplo, D. virgifera virgifera (gusano de la raíz del maíz occidental), D. barberi (gusano de la raíz del maíz del norte), D. undecimpunctata howardi (gusano de la raíz del maíz del sur) o D. virgifera zeae (gusano de la raíz del maíz mexicano).
En los métodos descritos en la presente para regular hacia abajo la expresión de un gen objetivo en una especie de plaga de insectos, las moléculas de ARN de doble hebra que comprenden al menos 21 pb, de las cuales una hebra comprende o consiste en una secuencia de nucleótidos que es complementaria a al menos 21 nucleótidos contiguos en cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297 o 310 a 313, o su complemento, pueden utilizarse para regular hacia abajo la expresión del gen objetivo ortólogo en un insecto coleóptero, hemíptero, lepidóptero o díptero que se selecciona del grupo que comprende, a modo no taxativo, Leptinotarsa spp. (por ejemplo, L. decemlineata (escarabajo de la papa de Colorado), L. juncta (falso
escarabajo de la papa), o L. texana (escarabajo de la papa tejano)); Nilaparvata spp. (por ejemplo, N. Lugens (saltamontes marrón)); Lygus spp. (por ejemplo, L. Lineolaris (chinche lygus) o L. hesperus (chinche lygus del oeste)); Myzus spp. (por ejemplo, M. persicae (áfido verde del durazno)); Diabrotica spp. (por ejemplo, D. virgifera virgifera (gusano de la raíz del maíz occidental), D. barberi (gusano de la raíz del maíz del norte), D. undecimpunctata howardi (gusano de la raíz del maíz del sur) o D. virgifera zeae (gusano de la raíz del maíz mexicano),
en donde los genes ortólogos codifican una proteína que tiene una secuencia de aminoácidos que es al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99% idéntica a la secuencia de aminoácidos tal como se presenta en cualquiera de las SEQ ID NOs 79, 349, 405, 352 o 356 (cuando dichas proteínas codificadas se alinean de forma óptima).
En los métodos descritos en la presente para regular hacia abajo la expresión de un gen objetivo en una especie de plaga de insectos, las moléculas de ARN de doble hebra que comprenden al menos 21 pb, de las cuales una hebra comprende o consiste en una secuencia de nucleótidos que es complementaria a al menos 21 nucleótidos contiguos en cualquiera de las SEQ ID NOs 141 , 11 , 12, 47 a 50, o su complemento, pueden utilizarse para regular hacia abajo la expresión del gen objetivo ortólogo en un insecto coleóptero, hemíptero, lepidóptero o díptero que se selecciona del grupo que comprende, a modo no taxativo, Leptinotarsa spp. (por ejemplo, L. decemlineata (escarabajo de la papa de Colorado), L. juncta (falso escarabajo de la papa), o L. texana (escarabajo de la papa tejano)); Nilaparvata spp. (por ejemplo, N. Lugens (saltamontes marrón)); Lygus spp. (por ejemplo, L. Lineolaris (chinche lygus) o L. hesperus (chinche lygus del oeste)); Myzus spp. (por ejemplo, M. persicae (áfido verde del durazno)); Diabrotica spp. (por ejemplo, D. virgifera virgifera (gusano de la raíz del maíz occidental), D. barberi (gusano de la raíz del maíz del norte), D. undecimpunctata howardi (gusano de la raíz del maíz del sur) o D. virgifera zeae (gusano de la raíz del maíz mexicano).
En los métodos descritos en la presente para regular hacia abajo la expresión de un gen objetivo en una especie de plaga de insectos, las moléculas de ARN de doble hebra que comprenden al menos 21 pb, de las cuales una hebra comprende o consiste en una secuencia de nucleótidos que es complementaria a al menos 21 nucleótidos contiguos en cualquiera de las SEQ ID NOs 141 , 11 , 12, 47 a 50, o su complemento, pueden utilizarse para regular hacia abajo la expresión del gen objetivo ortólogo en un insecto coleóptero, hemíptero, lepidóptero o díptero que se selecciona del grupo que comprende, a modo no taxativo, Leptinotarsa spp. (por ejemplo, L. decemlineata (escarabajo de la papa de Colorado), L. juncta (falso escarabajo de la papa), o L. texana (escarabajo de la papa tejano)); Nilaparvata spp. (por ejemplo, N. Lugens (saltamontes marrón)); Lygus spp. (por ejemplo, L. Lineolaris (chinche lygus) o L. hesperus (chinche lygus del oeste)); Myzus spp. (por ejemplo, M. persicae (áfido verde del durazno)); Diabrotica spp. (por ejemplo, D. virgifera virgifera (gusano de la raíz del maíz occidental), D. barberi (gusano de la raíz del maíz del norte), D. undecimpunctata howardi (gusano de la raíz del maíz del sur) o D. virgifera zeae (gusano de la raíz del maíz mexicano), en donde los genes ortólogos codifican una proteína que tiene una secuencia de aminoácidos que es al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99% idéntica a la secuencia de aminoácidos tal como se presenta en cualquiera de las SEQ ID NOs 328 o 84 (cuando dichas proteínas codificadas se alinean de forma óptima).
En los métodos descritos en la presente para regular hacia abajo la expresión de un gen objetivo en una especie de plaga de insectos, las moléculas de ARN de doble hebra que comprenden al menos 21 pb, de las cuales una hebra comprende o consiste en una secuencia de nucleótidos que es complementaria a al menos 21 nucleótidos contiguos en cualquiera de las SEQ ID NOs 17, 18, 59 a 62, o su complemento, pueden utilizarse para regular hacia abajo la expresión del gen objetivo ortólogo en un insecto coleóptero, hemíptero, lepidóptero o díptero que se selecciona del grupo que comprende, a modo no taxativo, Leptinotarsa spp. (por ejemplo, L. decemlineata (escarabajo de la papa de Colorado), L. juncta (falso
escarabajo de la papa), o L. texana (escarabajo de la papa tejano)); Nilaparvata spp. (por ejemplo, N. Lugens (saltamontes marrón)); Lygus spp. (por ejemplo, L. Lineolaris (chinche lygus) o L. hesperus (chinche lygus del oeste)); Myzus spp. (por ejemplo, M. persicae (áfido verde del durazno)); Diabrotica spp. (por ejemplo, D. virgifera virgifera (gusano de la raíz del maíz occidental), D. barben (gusano de la raíz del maíz del norte), D. undecimpunctata howardi (gusano de la raíz del maíz del sur) o D. virgifera zeae (gusano de la raíz del maíz mexicano).
En los métodos descritos en la presente para regular hacia abajo la expresión de un gen objetivo en una especie de plaga de insectos, las moléculas de ARN de doble hebra que comprenden al menos 21 pb, de las cuales una hebra comprende o consiste en una secuencia de nucleótidos que es complementaria a al menos 21 nucleótidos contiguos en cualquiera de las SEQ ID NOs 17, 18, 59 a 62, o su complemento, pueden utilizarse para regular hacia abajo la expresión del gen objetivo ortólogo en un insecto coleóptero, hemíptero, lepidóptero o díptero que se selecciona del grupo que comprende, a modo no taxativo, Leptinotarsa spp. (por ejemplo, L. decemlineata (escarabajo de la papa de Colorado), L. juncta (falso escarabajo de la papa), o L. texana (escarabajo de la papa tejano)); Nilaparvata spp. (por ejemplo, N. Lugens (saltamontes marrón)); Lygus spp. (por ejemplo, L. Lineolaris (chinche lygus) o L. hesperus (chinche lygus del oeste)); Myzus spp. (por ejemplo, M. persicae (áfido verde del durazno)); Diabrotica spp. (por ejemplo, D. virgifera virgifera (gusano de la raíz del maíz occidental), D. barberi (gusano de la raíz del maíz del norte), D. undecimpunctata howardi (gusano de la raíz del maíz del sur) o D. virgifera zeae (gusano de la raíz del maíz mexicano), en donde los genes ortólogos codifican una proteína que tiene una secuencia de aminoácidos que es al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99% idéntica a la secuencia de aminoácidos tal como se presenta en las SEQ ID NOs 87 (cuando dichas proteínas codificadas se alinean de forma óptima).
En los métodos descritos en la presente para regular hacia abajo la expresión de un gen objetivo en una especie de plaga de insectos, las moléculas de ARN de doble hebra que comprenden al menos 21 pb, de las cuales una hebra
comprende o consiste en una secuencia de nucleótidos que es complementaria a al menos 21 nucleótidos contiguos en cualquiera de las SEQ ID NOs 19, 20, 63 a 66, o su complemento, pueden utilizarse para regular hacia abajo la expresión del gen objetivo ortólogo en un insecto coleóptero, hemíptero, lepidoptero o díptero que se selecciona del grupo que comprende, a modo no taxativo, Leptinotarsa spp. (por ejemplo, L. decemlineata (escarabajo de la papa de Colorado), L. juncta (falso escarabajo de la papa), o L. texana (escarabajo de la papa tejano)); Nilaparvata spp. (por ejemplo, N. Lugens (saltamontes marrón)); Lygus spp. (por ejemplo, L. Lineolaris (chinche lygus) o L. hesperus (chinche lygus del oeste)); Myzus spp. (por ejemplo, M. persicae (áfido verde del durazno)); Diabrotica spp. (por ejemplo, D. virgifera virgifera (gusano de la raíz del maíz occidental), D. barberi (gusano de la raíz del maíz del norte), D. undecimpunctata howardi (gusano de la raíz del maíz del sur) o D. virgifera zeae (gusano de la raíz del maíz mexicano).
En los métodos descritos en la presente para regular hacia abajo la expresión de un gen objetivo en una especie de plaga de insectos, las moléculas de ARN de doble hebra que comprenden al menos 21 pb, de las cuales una hebra comprende o consiste en una secuencia de nucleótidos que es complementaria a al menos 21 nucleótidos contiguos en cualquiera de las SEQ ID NOs 19, 20, 63 a 66, o su complemento, pueden utilizarse para regular hacia abajo la expresión del gen objetivo ortólogo en un insecto coleóptero, hemíptero, lepidoptero o díptero que se selecciona del grupo que comprende, a modo no taxativo, Leptinotarsa spp. (por ejemplo, L. decemlineata (escarabajo de la papa de Colorado), L. juncta (falso escarabajo de la papa), o L. texana (escarabajo de la papa tejano)); Nilaparvata spp. (por ejemplo, N. Lugens (saltamontes marrón)); Lygus spp. (por ejemplo, L. Lineolaris (chinche lygus) o L. hesperus (chinche lygus del oeste)); Myzus spp. (por ejemplo, M. persicae (áfido verde del durazno)); Diabrotica spp. (por ejemplo, D. virgifera virgifera (gusano de la raíz del maíz occidental), D. barberi (gusano de la raíz del maíz del norte), D. undecimpunctata howardi (gusano de la raíz del maíz del sur) o D. virgifera zeae (gusano de la raíz del maíz mexicano), en donde los genes ortólogos codifican una proteína que tiene una secuencia de
aminoácidos que es al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99% idéntica a la secuencia de aminoácidos tal como se presenta en la SEQ ID NO 88 (cuando dichas proteínas codificadas se alinean de forma óptima).
En los métodos descritos en la presente para regular hacia abajo la expresión de un gen objetivo en una especie de plaga de insectos, las moléculas de ARN de doble hebra que comprenden al menos 21 pb, de las cuales una hebra comprende o consiste en una secuencia de nucleótidos que es complementaria a al menos 21 nucleótidos contiguos en cualquiera de las SEQ ID NOs 165, 167, 166, 270 a 273, o su complemento, pueden utilizarse para regular hacia abajo la expresión del gen objetivo ortólogo en un insecto coleóptero, hemíptero, lepidóptero o díptero que se selecciona del grupo que comprende, a modo no taxativo, Leptinotarsa spp. (por ejemplo, L. decemlineata (escarabajo de la papa de Colorado), L. juncta (falso escarabajo de la papa), o L. texana (escarabajo de la papa tejano)); Nilaparvata spp. (por ejemplo, N. Lugens (saltamontes marrón)); Lygus spp. (por ejemplo, L. Lineolaris (chinche lygus) o L. hesperus (chinche lygus del oeste)); Myzus spp. (por ejemplo, M. persicae (áfido verde del durazno)); Diabrotica spp. (por ejemplo, D. virgifera virgifera (gusano de la raíz del maíz occidental), D. barberi (gusano de la raíz del maíz del norte), D. undecimpunctata howardi (gusano de la raíz del maíz del sur) o D. virgifera zeae (gusano de la raíz del maíz mexicano). En los métodos descritos en la presente para regular hacia abajo la expresión de un gen objetivo en una especie de plaga de insectos, las moléculas de ARN de doble hebra que comprenden al menos 21 pb, de las cuales una hebra comprende o consiste en una secuencia de nucleótidos que es complementaria a al menos 21 nucleótidos contiguos en cualquiera de las SEQ ID NOs 165, 167, 166, 270 a 273, o su complemento, pueden utilizarse para regular hacia abajo la expresión del gen objetivo ortólogo en un insecto coleóptero, hemíptero, lepidóptero o díptero que se selecciona del grupo que comprende, a modo no taxativo, Leptinotarsa spp. (por ejemplo, L. decemlineata (escarabajo de la papa de Colorado), L. juncta (falso escarabajo de la papa), o L. texana (escarabajo de la papa tejano)); Nilaparvata spp. (por ejemplo, N. Lugens
(saltamontes marrón)); Lygus spp. (por ejemplo, L. Lineolaris (chinche lygus) o L. hesperus (chinche lygus del oeste)); Myzus spp. (por ejemplo, M. persicae (áfido verde del durazno)); Diabrotica spp. (por ejemplo, D. virgifera virgifera (gusano de la raíz del maíz occidental), D. barberi (gusano de la raíz del maíz del norte), D. undecimpunctata howardi (gusano de la raíz del maíz del sur) o D. virgifera zeae (gusano de la raíz del maíz mexicano), en donde los genes ortólogos codifican una proteína que tiene una secuencia de aminoácidos que es al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99% idéntica a la secuencia de aminoácidos tal como se presenta en cualquiera de las SEQ ID NOs 347 o 348 (cuando dichas proteínas codificadas se alinean de forma óptima).
En los métodos descritos en la presente para regular hacia abajo la expresión de un gen objetivo en una especie de plaga de insectos, las moléculas de ARN de doble hebra que comprenden al menos 21 pb, de las cuales una hebra comprende o consiste en una secuencia de nucleótidos que es complementaria a al menos 21 nucleótidos contiguos en cualquiera de las SEQ ID NOs 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 83, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , o su complemento, pueden utilizarse para regular hacia abajo la expresión del gen objetivo ortólogo en un insecto coleóptero, hemíptero, lepidóptero o díptero que se selecciona del grupo que comprende, a modo no taxativo, Leptinotarsa spp. (por ejemplo, L. decemlineata (escarabajo de la papa de Colorado), L. juncta (falso escarabajo de la papa), o L. texana (escarabajo de la papa tejano)); Nilaparvata spp. (por ejemplo, N. Lugens (saltamontes marrón)); Lygus spp. (por ejemplo, L. Lineolaris (chinche lygus) o L. hesperus (chinche lygus del oeste)); Myzus spp. (por ejemplo, M. persicae (áfido verde del durazno)); Diabrotica spp. (por ejemplo, D. virgifera virgifera (gusano de la raíz del maíz occidental), D. barberi (gusano de la raíz del maíz del norte), D. undecimpunctata howardi (gusano de la raíz del maíz del sur) o D. virgifera zeae (gusano de la raíz del maíz mexicano).
En los métodos descritos en la presente para regular hacia abajo la expresión de un gen objetivo en una especie de plaga de insectos, las moléculas de ARN de doble hebra que comprenden al menos 21 pb, de las cuales una hebra
comprende o consiste en una secuencia de nucleótidos que es complementaria a al menos 21 nucleótidos contiguos en cualquiera de las SEQ ID NOs 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , o su complemento, pueden utilizarse para regular hacia abajo la expresión del gen objetivo ortólogo en un insecto coleóptero, hemíptero, lepidóptero o díptero que se selecciona del grupo que comprende, a modo no taxativo, Leptinotarsa spp. (por ejemplo, L. decemlineata (escarabajo de la papa de Colorado), L. juncta (falso escarabajo de la papa), o L. texana (escarabajo de la papa tejano)); Nilaparvata spp. (por ejemplo, N. Lugens (saltamontes marrón)); Lygus spp. (por ejemplo, L. Lineolaris (chinche lygus) o L. hesperus (chinche lygus del oeste)); Myzus spp. (por ejemplo, M. persicae (áfido verde del durazno)); Diabrotica spp. (por ejemplo, D. virgifera virgifera (gusano de la raíz del maíz occidental), D. barberi (gusano de la raíz del maíz del norte), D. undecimpunctata howardi (gusano de la raíz del maíz del sur) o D. virgifera zeae (gusano de la raíz del maíz mexicano),
en donde los genes ortólogos codifican una proteína que tiene una secuencia de aminoácidos que es al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99% idéntica a la secuencia de aminoácidos tal como se presenta en cualquiera de las SEQ ID NOs 330, 350 o 353 (cuando dichas proteínas codificadas se alinean de forma óptima).
En los métodos descritos en la presente para regular hacia abajo la expresión de un gen objetivo en una especie de plaga de insectos, las moléculas de ARN de doble hebra que comprenden al menos 21 pb, de las cuales una hebra comprende o consiste en una secuencia de nucleótidos que es complementaria a al menos 21 nucleótidos contiguos en cualquiera de las SEQ ID NOs 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, o su complemento, pueden utilizarse para regular hacia abajo la expresión del gen objetivo ortólogo en un insecto coleóptero, hemíptero, lepidóptero o díptero que se selecciona del grupo que comprende, a modo no taxativo, Leptinotarsa spp. (por ejemplo, L. decemlineata (escarabajo de la papa de Colorado), L. juncta (falso escarabajo de la papa), o L. texana (escarabajo de la papa tejano)); Nilaparvata spp. (por ejemplo, N. Lugens
(saltamontes marrón)); Lygus spp. (por ejemplo, L. Lineolaris (chinche lygus) o L. hesperus (chinche lygus del oeste)); Myzus spp. (por ejemplo, M. persicae (áfido verde del durazno)); Diabrotica spp. (por ejemplo, D. virgifera virgifera (gusano de la raíz del maíz occidental), D. barberi (gusano de la raíz del maíz del norte), D. undecimpunctata howardi (gusano de la raíz del maíz del sur) o D. virgifera zeae (gusano de la raíz del maíz mexicano).
En los métodos descritos en la presente para regular hacia abajo la expresión de un gen objetivo en una especie de plaga de insectos, las moléculas de ARN de doble hebra que comprenden al menos 21 pb, de las cuales una hebra comprende o consiste en una secuencia de nucleótidos que es complementaria a al menos 21 nucleótidos contiguos en cualquiera de las SEQ ID NOs 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, o su complemento, pueden utilizarse para regular hacia abajo la expresión del gen objetivo ortólogo en un insecto coleóptero, hemíptero, lepidóptero o díptero que se selecciona del grupo que comprende, a modo no taxativo, Leptinotarsa spp. (por ejemplo, L. decemlineata (escarabajo de la papa de Colorado), L. juncta (falso escarabajo de la papa), o L. texana (escarabajo de la papa tejano)); Nilaparvata spp. (por ejemplo, N. Lugens (saltamontes marrón)); Lygus spp. (por ejemplo, L. Lineolaris (chinche lygus) o L. hesperus (chinche lygus del oeste)); Myzus spp. (por ejemplo, M. persicae (áfido verde del durazno)); Diabrotica spp. (por ejemplo, D. virgifera virgifera (gusano de la raíz del maíz occidental), D. barberi (gusano de la raíz del maíz del norte), D. undecimpunctata howardi (gusano de la raíz del maíz del sur) o D. virgifera zeae (gusano de la raíz del maíz mexicano), en donde los genes ortólogos codifican una proteína que tiene una secuencia de aminoácidos que es al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99% idéntica a la secuencia de aminoácidos tal como se presenta en cualquiera de las SEQ ID NOs 331 o 351 (cuando dichas proteínas codificadas se alinean de forma óptima).
En los métodos descritos en la presente para regular hacia abajo la expresión de un gen objetivo en una especie de plaga de insectos, las moléculas de ARN de doble hebra que comprenden al menos 21 pb, de las cuales una hebra
comprende o consiste en una secuencia de nucleótidos que es complementaria a al menos 21 nucleótidos contiguos en cualquiera de las SEQ ID NOs 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, o su complemento, pueden utilizarse para regular hacia abajo la expresión del gen objetivo ortólogo en un insecto coleóptero, hemíptero, lepidóptero o díptero que se selecciona del grupo que comprende, a modo no taxativo, Leptinotarsa spp. (por ejemplo, L. decemlineata (escarabajo de la papa de Colorado), L. juncta (falso escarabajo de la papa), o L. texana (escarabajo de la papa tejano)); Nilaparvata spp. (por ejemplo, N. Lugens (saltamontes marrón)); Lygus spp. (por ejemplo, L. Lineolaris (chinche lygus) o L. hesperus (chinche lygus del oeste)); Myzus spp. (por ejemplo, M. persicae (áfido verde del durazno)); Diabrotica spp. (por ejemplo, D. virgifera virgifera (gusano de la raíz del maíz occidental), D. barberi (gusano de la raíz del maíz del norte), D. undecimpunctata howardi (gusano de la raíz del maíz del sur) o D. virgifera zeae (gusano de la raíz del maíz mexicano).
En los métodos descritos en la presente para regular hacia abajo la expresión de un gen objetivo en una especie de plaga de insectos, las moléculas de ARN de doble hebra que comprenden al menos 21 pb, de las cuales una hebra comprende o consiste en una secuencia de nucleótidos que es complementaria a al menos 21 nucleótidos contiguos en cualquiera de las SEQ ID NOs 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, o su complemento, pueden utilizarse para regular hacia abajo la expresión del gen objetivo ortólogo en un insecto coleóptero, hemíptero, lepidóptero o díptero que se selecciona del grupo que comprende, a modo no taxativo, Leptinotarsa spp. (por ejemplo, L. decemlineata (escarabajo de la papa de Colorado), L. juncta (falso escarabajo de la papa), o L. texana (escarabajo de la papa tejano)); Nilaparvata spp. (por ejemplo, N. Lugens (saltamontes marrón)); Lygus spp. (por ejemplo, L. Lineolaris (chinche lygus) o L. hesperus (chinche lygus del oeste)); Myzus spp. (por ejemplo, M. persicae (áfido verde del durazno)); Diabrotica spp. (por ejemplo, D. virgifera virgifera (gusano de la raíz del maíz occidental), D. barberi (gusano de la raíz del maíz del norte), D. undecimpunctata howardi (gusano de la raíz del maíz del sur) o D. virgifera zeae
(gusano de la raíz del maíz mexicano), en donde los genes ortólogos codifican una proteína que tiene una secuencia de aminoácidos que es al menos 85%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 99% idéntica a la secuencia de aminoácidos tal como se presenta en cualquiera de las SEQ ID NOs 337 o 354 (cuando dichas proteínas codificadas se alinean de forma óptima).
Más aun, en la presente se proporciona un método para prevenir y/o controlar la infestación por parte de plagas de insectos en un campo de plantas de cultivo, comprendiendo dicho método expresar en dichas plantas una cantidad efectiva de un ARN interferente tal como se describe en la presente.
Cuando el método es para el control de infestación por parte de plagas, la frase "cantidad efectiva" abarca la cantidad o concentración de ARN interferente que se necesita para producir un efecto fenotípico en la plaga de forma tal que se reducen las cantidades de organismos plaga que infestan un organismo huésped y/o se reduce el daño causado por la plaga. En una realización, el efecto fenotípico es la muerte de la plaga y el ARN interferente se utiliza para alcanzar al menos 20%, 30%, 40%, preferiblemente al menos 50%, 60%, 70%, más preferiblemente al menos 80% o 90% de mortalidad de la plaga en comparación con plagas de insectos testigo. En una realización adicional, los efectos fenotípicos incluyen, a modo no taxativo, atrofia en el crecimiento de la plaga, cese de la alimentación y puesta de huevos reducida. Las cantidades totales de organismos plaga que infestan un organismo huésped pueden, de esta forma, reducirse al menos 20%, 30%, 40%, preferiblemente al menos 50%, 60%, 70%, más preferiblemente al menos 80% o 90% en comparación con plagas testigo. De forma alternativa, el daño causado por la plaga de insectos pude reducirse al menos 20%, 30%, 40%, preferiblemente al menos 50%, 60%, 70%, más preferiblemente al menos 80% o 90% en comparación con plagas de insectos testigo. Por lo tanto, el método de la invención puede utilizarse para alcanzar al menos 20%, 30%, 40%, preferiblemente al menos 50%, 60%, 70%, más preferiblemente al menos 80% o 90% de control de la plaga.
Tal como se utiliza en la presente, el término "planta" puede incluir cualquier material de reproducción o propagación para una planta. Las referencias a una planta también pueden incluir células vegetales, protoplastos vegetales, cultivos de tejidos vegetales, callos vegetales, acúmulos vegetales y células vegetales que están intactas en plantas o partes de plantas tales como embriones, polen, óvulos, semillas, hojas, flores, ramas, frutos, granos, espigas, mazorcas, cáscaras, tallos, raíces, puntas de raíces y similares.
En la presente también se proporciona el uso del ácido ribonucleico (ARN) interferente tal como se describe en la presente o el constructo de ADN tal como se describe en la presente para prevenir y/o controlar la infestación por parte de plagas de insectos, preferiblemente infestación por parte de plagas de insectos de plantas.
La invención se comprenderá además con referencia a los siguientes ejemplos no taxativos.
Ejemplos
Ejemplo 1 Identificación de genes objetivo en especies de plagas de insectos
1.1 Biblioteca de ADNc normalizado de Lygus hesperus y preparación de ARNdh en placas de múltiples pocilios para ensayos de detección
Se aislaron ácidos nucleicos de ninfas de Lygus hesperus de diferentes etapas de vida, incluidas ninfas recién eclosionadas de 2, 4, 6 y 9 días de edad y adultas. Se preparó una biblioteca de ADNc usando el Kit de Síntesis de ADNc de PCR SMARTer™, siguiendo las instrucciones del fabricante (Clontech Cat. No 634925). La biblioteca de ADNc se normalizó usando el kit Trimmer (Evrogen Cat No NK001 ) y se clonó en el vector PCR4-TOPO (Invitrogen). La normalización de los clones introdujo adaptadores de M2 (Trimmer Kit, Evrogen, SEQ ID NO 92: AAGCAGTGGTATCAACGCAG) orientados en dirección opuesta a cada extremo de los clones. Los constructos del vector recombinante se transformaron en células de la cepa TOP10 de Escherichia coli (Invitrogen). Posteriormente se diluyeron las células transformadas y se colocaron en placas para obtener
colonias individuales o clones. Los clones se revisaron para asegurarse de que la redundancia de clones para la biblioteca no excediera el 5%. Se recogieron clones únicos en medios de LB (caldo Luria) líquido, en placas de 96 pocilios profundos y se cultivaron a 37°C. Las placas también incluyeron clones testigo positivos (Lh423) y negativos (FP).
Para generar el ARNdh, se generaron mediante PCR fragmentos de ADN sentido y antisentido que contenían la secuencia promotora T7. En resumen, por clon, se dispensó 1 ? de suspensión bacteriana en placas de PCR de múltiples pocilios que contenían REDTaq® (Sigma Cat No D4309) y los cebadores OGCC2738 (SEQ ID NO 93: AAGCAGTGGTATCAACGCAG) y oGCC2739 (SEQ ID NO 94: GCGTAATACGACTCACTATAGGAAGCAGTGGTATCAACGCAG) en base a las secuencias de M2 y T7-M2 respectivamente. Luego de la reacción de PCR se realizó una transcripción ¡n vitro, donde por clon se agregaron 6µ? del producto de PCR a 9µ? del Sistema de Producción de ARN a Gran Escala RiboMAX™— T7 (Promega Cat No P1300) y se incubó durante toda la noche a 37°C. La solución de ARNdh final se diluyó 2 veces en dieta de sacarosa de L. hesperus, que contenía 15% de sacarosa y 5pg/pl de ARNt de levadura (Invitrogen Cat No 15401-029) y se utilizó para detección. El ARNdh que corresponde al clon testigo de Lh423 positivo es SEQ ID NO 101 y al clon testigo de FP negativo es SEQ ID NO 104 (ver la Tabla 4).
1.2 Detección de genes objetivo de Lygus hesperus novedosos y potentes usando una biblioteca de ADNc de expresión de ARNdh
Se ha desarrollado un nuevo ensayo de detección de objetivos de Lygus hesperus. El montaje del ensayo fue el siguiente: cada pocilio de una placa de 96 pocilios aloja una ninfa de L. hesperus de un día de vida expuesta a un sachet de Parafilm que contiene dieta de sacarosa que incluye ARNdh de prueba o ARNdh testigo en presencia de ARNt. Cada placa contenía ARNdh de 90 clones diferentes, 3 x Lh423 (testigo positivo) y 3 x FP (proteína fluorescente; testigo negativo). Cada clon (ARNdh de prueba) se replicó en tres placas. Después de tres días de exposición, se registró el número de supervivencia de las ninfas y la
dieta se reemplazó con una dieta (compleja) de cultivos frescos en ausencia de ARNdh. La mortalidad se ensayó los días 4, 6 y 8. Se utilizó un montaje idéntico para la primera y la segunda ronda de ensayos de confirmación, con 8 y 20 insectos respectivamente, con una ninfa por pocilio.
El sistema del ensayo fue validado usando ARNdh que corresponde al objetivo de Lh423 como el testigo positivo y un ARNdh de proteína fluorescente como el testigo negativo: más de 90% fueron verdaderos positivos y menos del 5% fueron falsos positivos, respectivamente.
Se evaluaron veinte placas de 96 pocilios, denominadas Lh001 a Lh020 (ver la línea inferior en las Figuras 1 y 2), que contenían 1800 clones individuales. Se identificaron 205 candidatos y se evaluaron en un primer ensayo de confirmación. Al fijar el umbral para que muestre > 50% de mortalidad, se identificaron 41 clones independientes y evolucionaron hasta una segunda ronda de confirmación. En el ensayo, los clones se compararon con los testigos positivos Lh423 (RpL19) y Lh105.2 (Sec23) y el testigo negativo Pt (que codifica una proteína fluorescente de coral). El ARNdh que corresponde al clon testigo positivo (Lh423) es SEQ ID NO 101 , al clon testigo Lh105.2 positivo es SEQ ID NO 102 y al clon testigo negativo (Pt) es SEQ ID NO 104 (ver la Tabla 4).
La segunda ronda de ensayos de confirmación, que evaluó 20 insectos / ARNdh de prueba, se inició para todos los ARNdh de prueba que exhibieron > 50% de mortalidad en la primera confirmación (Figuras 1 y 2). Los objetivos candidatos que correspondían a los ARNdh de prueba confirmados se nombraron con un "número Lhxxx" (ver la Tabla 1). Usando el mismo corte en > 50% de mortalidad, se confirmaron 15 objetivos en la primera detección.
Se realizó una segunda detección para identificar más objetivos de Lygus hesperus. Los resultados de la segunda ronda de ensayos de confirmación están representados en la Figura 12. Usando el mismo corte en > 50% de mortalidad, se confirmaron varios objetivos en la segunda detección (ver la Tabla 1C).
1.3. Identificación de objetivos de Lygus
En paralelo a los ensayos de confirmación de insectos, se secuenciaron los insertos que correspondían a los clones positivos y se utilizaron búsquedas de BlastX en bases de datos de proteínas de Drosophila y Tribolium para confirmar la identidad de los objetivos. La Tabla 1 proporciona un resumen del análisis de bioinformática y las anotaciones actuales de las secuencias objetivo de L. hesperus novedosas identificadas.
Se identificaron quince novedosos objetivos de L. hesperus en la primera detección y se identificaron 11 novedosos objetivos de L. hesperus en la segunda detección. Todos los objetivos exhiben alta potencia contra ninfas de L. hesperus, lo que indica que los ADNc que codifican ARN de doble hebra contenidos en los mismos son esenciales para la supervivencia de las plagas y representan de esa forma genes objetivo de interés a los efectos del control de plagas. Por lo tanto, se determinaron las secuencias de ADN y secuencias de aminoácidos deducidas de estos genes objetivo y se proporcionan en las Tablas 2 y 3, respectivamente.
Lh594, el ortólogo de Lygus hesperus de troponina I de Drosophila, que participa en la contracción muscular y, por lo tanto, está ausente en las plantas, representa una novedosa clase de objetivo que pertenece a una vía fisiológica específica de animales en la que aún no se ha explorado el GM-iARN. En la mosca de la fruta, la troponina I se describe como un gen haploinsuficiente que exhibe un fenotipo muíante en estado heterocigoto. Dichos genes pueden ser parlicularmeníe susceptibles a niveles de expresión de ARNm reducidos y de esa forma pueden considerarse objetivos de ¡ARN ideales.
En esta vía de Lh594 se seleccionaron ocho objetivos (ver la Tabla 1 B). Para cada objetivo, se diseñaron hasta 4 pares de cebadores de PCR degenerados en base a las alineaciones de las secuencias de varios insectos, incluidos abeja, Tribolium y áfido. Los cebadores se utilizan para amplificar los segmentos de objeíivos de Lygus hesperus. Se determinaron las secuencias de ADN y las secuencias de aminoácidos deducidas de estos genes objeíivo y se proporcionan en las Tablas 2 y 3, respectivamente.
Tabla 1 : Los novedosos objetivos de Lygus hesperus se clasificaron en % de mortalidad de acuerdo con los resultados del segundo ensayo de confirmación (primera detección).
alas arriba A (troponina
CG7178 wupA
I)
proteina ribosómica
CG2168 RpS3A
S3A
proteína ribosómica
CG4087 RpLP1
LP1
no se encontró
coincidencia con
Drosophila,
objetivo/secuencia
específicos de Lygus
CG6779 proteína ribosómica S3 RpS3 protema ribosómica
6 CG 10423 RpS27
S27
no se encontró
coincidencia con
Drosophila, RpL34b objetivo/secuencia
específicos de Lygus
8 CG1 1522 proteína ribosómica L6 RpL6
CG7283 proteína ribosómica RpLIOAb
L10Ab
proteína ribosomica
10 CG 13389 RpS13
S13
proteína ribosomica
1 1 CG3195 RpL12
L12
proteína ribosomica
12 CG8900 RpS18
S18
13 CG5502 proteína ribosomica L4 RpL4 no se encontró
14
coincidencia
subunidad II de
15 CG34069 citocromo c oxidasa mt:Coll mitocondrial
cadena ATP
CG7610 ATPsyn-? sintasa-?
Tabla 1 B: Novedosos objetivos de Lygus hesperus en la vía de Lh594
*no claro : múltiples coincidencias en la familia - clasificadas de acuerdo con el valor e
Tabla 1C: Los novedosos objetivos de Lygus hesperus se clasificaron en % de mortalidad de acuerdo con los resultados del segundo ensayo de confirmación (segunda detección).
Lh628 CG 17489 Proteína RpL5
ribosómica L5
Lh633 10 CG 17521 Proteína RpL10
ribosómica L10
Lh627 11 CG2033 Proteína RpS15A
ribosómica S15Aa
1.4. Clonación de ADNc de longitud completa por RACE (amplificación
rápida de los extremos de ADNc)
Para clonar el ADNc de longitud completa, comenzando con un clon conocido de fragmento interno desde los objetivos más potentes, se utilizó el kit de RACE de 573' (Roche, Cat. No. 1 734 792; basado en Sambrook, J. & Russell, D.M). Se siguió el protocolo estándar, descrito en el Manual de Instrucciones. En resumen, para una RACE de 5', se diseñó un cebador antisentido específico de secuencia objetivo en la secuencia conocida y se utilizó para una primera síntesis de ADNc de primera hebra, usando ARN de Lygus como plantilla. Se agregó una cola al ADNc de primera hebra y se utilizó como ancla para la síntesis de la segunda hebra y amplificación de una porción del extremo desconocida del transcripto. Para una RACE de 3', se utilizó un cebador de ancla oligo dT para la síntesis de ADNc de primera hebra. Para las RACE de 5' y 3', se utilizaron cebadores anidados, específicos para la secuencia objetivo en una segunda reacción de PCR. Los fragmentos de PCR se analizaron sobre gel de agarosa, se purificaron, se clonaron y se secuenciaron para confirmación.
Las secuencias de ADNc de longitud completa que corresponden a los objetivos se ensamblaron en VectorNTi, un paquete de software de análisis de secuencias completamente integrado para análisis de secuencia de ADN (Invitrogen).
Ejemplo 2 producción in vítro de ARN de doble hebra para silenciamiento de genes
2.2. Producción de ARNdh que corresponde a las secuencias parciales de los genes objetivo de Lygus hesperus
Se sintetizó ARN de doble hebra en cantidades de miligramos. Primero se generaron mediante PCR dos plantillas de promotor de polimerasa de ARN 5' T7 (una plantilla sentido y una platilla antisentido). Se diseñaron y se llevaron a cabo PCR para producir polinucleótidos de plantilla sentido y antisentido, que tenía cada uno el promotor T7 en una orientación diferente con respecto a la secuencia objetivo a transcribir.
Para cada uno de los genes objetivo, la plantilla sentido se generó usando un cebador directo T7 específico de objetivo y un cebador inverso específico de objetivo. Las plantillas antisentido se generaron usando los cebadores directos específicos de objetivos y los cebadores inversos T7 específicos de objetivos. Las secuencias de los cebadores respectivos para amplificar las plantillas sentido y antisentido mediante PCR para cada uno de los genes objetivo se proporcionan en la Tabla 4. Los productos de PCR se analizaron mediante electrofóresis de gel de agarosa y se purificaron. Las plantillas T7 sentido y antisentido resultantes se mezclaron y se transcribieron mediante la adición de polimerasa de ARN T7. Los ARN de una sola hebra producidos mediante transcripción a partir de las plantillas se dejaron aparear, se trataron con DNasa y RNasa y se purificaron mediante precipitación. La hebra sentido del ARNdh resultante producida a partir de cada uno de los genes objetivo se proporciona en la Tabla 4.
2.2. Ensayos de análisis de supervivencia para novedosos objetivos de Lygus hesperus
Para permitir la clasificación de acuerdo con la potencia, se sintetizaron ARNdh in vitro correspondientes a los novedosos objetivos y se aplicaron a L. hesperus en bioensayos de análisis de supervivencia de 10 días. En resumen, las ninfas de L. hesperus de un día de vida se colocaron en placas de 96 pocilios con sellos de sacarosa que contenían 0.5pg/pl de ARNdh objetivo, complementados con 5pg/pl de ARNt de levadura. Las placas se incubaron durante 3 días en condiciones de cultivo de Lygus estándar. El día 3, 6 y 8, los sellos de dieta se renovaron con sellos que contenían dieta de Lygus únicamente. Se utilizó Lh423
(RpL19) como testigo positivo y se utilizó ARNdh de GFP y dieta de sacarosa como testigos negativos.
Los resultados de los análisis de supervivencia confirmaron los datos del primer y el segundo ensayo de confirmación. Se estableció Lh594 como un objetivo muy potente, con actividad y velocidad hasta destrucción más fuerte que el testigo fuerte Lh423.
Hasta ahora, la detección de Lygus en busca de novedosos objetivos identificó nuevos objetivos con actividades mayores o en el rango del testigo positivo Lh423; estos incluyen Lh429, Lh594, Lh609, Lh610, Lh61 1 , Lh617 y Lh618. La mortalidad inducida por estos objetivos se muestra en las Figuras 3 y 4.
Para obtener una clasificación más precisa de los objetivos de acuerdo con su actividad, se realizaron análisis de concentración de respuesta a la dosis. Los novedosos objetivos se evaluaron en ensayos in vitro, con concentraciones en el rango de 0.4 a 0.025 Mg/µ?. Por condición, se evaluaron ninfas de 24 horas de vida en el montaje de placas de 96 pocilios, en dieta de sacarosa complementada con portador de ARNdh y ARNt. Los resultados se presentan como % de supervivencia en un experimento de 10 días (Figuras 5 a 9) y se resumen en la Tabla 5.
En base a los análisis de la curva de concentración, los objetivos se clasificaron por comparación con los testigos de referencia Lh423 y Lh105 (Tabla 5).
Tabla 5: Clasificación de novedosos objetivos de Lygus de acuerdo con DRC y comparados con los objetivos de referencia Lh423 y Lh105.
La potencia de Lh594 se confirmó adicionalmente. El efecto de este objetivo se observa claramente al menos un día antes que los otros objetivos y el testigo positivo de referencia Lh105 y Lh423. Dado que Lh594 fue muy potente, la DL50 no se alcanzó en el experimento de DRC estándar, con una concentración en el rango de 0.4 a 0.025pg/pl de ARNdh (Figura 6), el experimento de Lh594 por lo tanto se repitió, incluidas concentraciones más bajas en el rango de 0.05 a 0.001 pg/µ? de ARNdh (Figura 10). En conclusión, la actividad de Lh594 se observó a una concentración de 0.0025 pg/µ? y aproximadamente 90% de destrucción (correspondiente a aproximadamente 10 % de supervivencia) se obtuvo el día 6 con 0.025 pg de ARNdh.
Para explorar más la potencia de Lh594 y el rol del portador de ARNt en la respuesta de la ¡ARN en Lygus hesperus, se montaron ensayos de alimentación in vitro adicionales en ausencia del ARNt portador. Se produjeron ARNdh de Lh594, Lh423 (testigo de referencia) y GFP (testigo negativo) in vitro, usando el método estándar. Los ARNdh se purificaron y se evaluaron a 5 g/ l en ausencia de ARNt (Figura 11 A).
En ausencia de ARNt, los objetivos Lh594 y Lh423 indujeron una letalidad alta en ninfas de Lygus. Los resultados de este experimento se han reproducido desde entonces. El ARNdh objetivo fue capaz de inducir efectos de iARN por alimentación en ninfas de Lygus en ausencia de ARNt.
Para investigar la actividad de ARNdh en concentraciones más bajas en ausencia del ARNt portador, se montaron experimentos adicionales, usando cantidades cada vez más bajas de ARNdh (Figura 11 B).
Un abordaje similar se siguió para los objetivos de Lygus que se identificaron en la segunda detección. Para obtener una clasificación de los objetivos de acuerdo con su actividad, se realizaron análisis de concentración de respuesta a la dosis. Los novedosos objetivos se evaluaron en ensayos in vitro, con concentraciones en el rango de 0.5 a 0.05 Mg/µ?. Por condición, se evaluaron ninfas de 24 horas de vida en el montaje de placas de 96 pocilios, en dieta de sacarosa complementada con portador de ARNdh y ARNt. Los resultados se presentan como % de supervivencia en un experimento de 9 días (Figuras 15 A-D). Lh594 y Lh423 se han incluido en el ensayo como objetivos de referencia. Los resultados se resumen en la Tabla 6. En base a los análisis de la curva de concentración, los objetivos se clasificaron por comparación con el testigo referencia Lh423.
Tabla 6: Novedosos objetivos de Lygus de la clasificación de la segunda detección de acuerdo con DRC y comparados con los objetivos de referencia Lh423 y Lh594.
Ejemplo 3 Detección de la vía de troponina
Para permitir las pruebas de los objetivos de la vía de Troponina, los ARNdh producidos en vivo que correspondían a Lh619, Lh620, Lh621 , Lh622, Lh622, Lh623, Lh624, Lh625 y Lh626 se sintetizaron y se aplicaron a L. hesperus en bioensayos de análisis de supervivencia de 10 días. En resumen, las ninfas de L. hesperus de un día de vida se colocaron en placas de 96 pocilios con sellos de sacarosa que contenían 0.5 g/ l de ARNdh objetivo, complementados con 5 pg/µ? de ARN de levadura. Las placas se incubaron durante 3 días en condiciones de cultivo de Lygus estándar. El día 3, 6 y 8, los sellos de dieta se renovaron con sellos que contenían dieta de Lygus únicamente. Se utilizó Lh594 (Troponina I) como testigo positivo y se utilizó ARNdh de GFP y dieta de sacarosa como testigos negativos (Figura 13). Luego se incluyeron cuatro objetivos en análisis de curvas de respuesta a la dosis en un ensayo in vitro, con concentraciones en el rango de 0.4 a 0.025 pg/pl. Por condición, se evaluaron ninfas de 24 horas de vida en el montaje de placas de 96 pocilios, en dieta de sacarosa complementada con portador de ARNdh y ARNt. Los resultados se presentan como % de supervivencia en un experimento de 10 días (Figuras 14 A-B).
Ejemplo 4 Identificación de genes objetivo en Leptinotarsa decemlineata
4.1 Biblioteca de ADNc normalizada de Leptinotarsa decemlineata y preparación de ARNdh en placas de múltiples pocilios para ensayos de detección
Se aislaron ácidos nucleicos de larvas de Leptinotarsa decemlineata de diferentes etapas. Una biblioteca de ADNc se preparó usando el Kit de Síntesis de ADNc de PCR SMARTer™, siguiendo las instrucciones del fabricante (Clontech Cat. No 634925). La biblioteca de ADNc se normalizó usando el kit Trimmer (Evrogen Cat No NK001 ) y se clonó en el vector PCR®-BLUNTI l-TOPO® (Invitrogen). La normalización de los clones introdujo adaptadores M2 (Trimmer Kit, Evrogen, SEQ ID NO 92: AAG CAGTG GTATC AAC G C AG ) orientados en dirección opuesta a cada extremo de los clones. Los constructos del vector recombinante se transformaron en células de la cepa TOP10 de Escherichia coli (Invitrogen). Las células transformadas se diluyeron posteriormente y se colocaron en placas para obtener colonias individuales o clones. Los clones se revisaron para asegurarse de que la redundancia de clones para la biblioteca no excediera el 5%. Se inocularon clones únicos en medios de LB (caldo Luria) líquido, placas de 96 pocilios, y se cultivaron a 37°C. Las placas también incluyeron clones testigo positivos (Ld513) y negativos (FP).
Para generar el ARNdh, se generaron mediante PCR fragmentos de ADN sentido y antisentido que contenían la secuencia promotora T7. En resumen, por clon, se dispensó 1 µ? de suspensión bacteriana en placas de PCR de múltiples pocilios que contenían REDTaq® (Sigma Cat No D4309) y los cebadores OGCC2738 (SEQ ID NO 93: AAGCAGTGGTATCAACGCAG) y OGCC2739 (SEQ ID NO 94: G CGTAATACG ACTCACTATAGG AAG CAGTGGTATCAACG CAG ) en base a las secuencias de M2 y T7-M2 respectivamente. Luego de la reacción de PCR se realizó una transcripción in vitro, donde, por clon, se utilizó un producto de 6 µ? de PCR en un volumen de reacción de 20 µ? que conteníla los reactivos de transcripción proporcionados por el Sistema de Producción de ARN a Gran Escala RiboMAX™ - kit T7 (Promega Cat No P1300) y se incubaron durante toda la noche a 37°C. La solución de ARNdh final se diluyó en agua Milli-Q estéril y se utilizó para detección. El ARNdh que corresponde al clon testigo de Ld513 positivo es SEQ ID NO 400 (ver la Tabla 9) y al clon testigo de FP negativo es SEQ ID NO 104 (ver la Tabla 4).
4.2 Detección de genes objetivo de Leptinotarsa decemlineata novedosos y potentes usando una biblioteca de ADNc de expresión de ARNdh
Cada pocilio de una placa de 48 pocilios contenía 0.5 mL de dieta artificial pretratada con una transparencia tópica de 25 µ? (o 1 pg) del ARNdh de prueba o testigo. Una larva L2 se colocó en cada pocilio y se evaluaron 3 larvas por clon. Los números de supervivencia de CPB se evaluaron los días 4, 7 y 10.
En un segundo bioensayo, las larvas de CPB se alimentaron con dieta y se trataron con un ARNdh de prueba aplicado tópicamente generado a partir de clones derivados de una biblioteca de ADNc normalizado. Una larva se colocó en un pocilio de una multiplaca de 48 pocilios que contenía una dieta de 0.5 mL pretratados con una transparencia de 25 pL de una solución de 40 ng/pL de ARNdh. Se evaluó un total de veinticuatro larvas por tratamiento (clon). El número de insectos sobrevivientes se evaluó los días 4, 5, 6, 7, 8 y 1 1 . El porcentaje de mortalidad de las larvas se calculó con respecto al día 0 (comienzo del ensayo) (ver la Figura 21 ).
4.3 Identificación de objetivos de escarabajos L. decemlineata
Las nuevas secuencias objetivo de la detección en 5.2. y las secuencias objetivo correspondientes a los objetivos de la vía de troponina, ortólogos a las secuencias Lh594, Lh619 y Lh620 de Lygus, se han identificado en L. decemlineata. Los cebadores que proporcionaron un fragmento de ADNc relevante para Ld594 se enumeran en la Tabla 17. Se determinaron las secuencias de ADNc y secuencias de aminoácidos deducidas de estos genes objetivo y se proporcionan en las Tablas 7 y 9, respectivamente.
4.4 Producción de ARNdh que corresponde a las secuencias parciales de los genes objetivo de L. decemlineata
El ARNdh se sintetizó usando los cebadores tal como se proporcionan en la Tabla 9. La hebra sentido del ARNdh resultante producida a partir de los genes objetivo se proporciona en la Tabla 9.
4.5 Ensayos de análisis de supervivencia para objetivos de L.
decemlineata novedosos
Ensayo de larvas temprano
Se produjeron ARNdh sintéticos para los 3 objetivos, Ld594, Ld619 y Ld620, y se evaluaron en un ensayo de alimentación con las larvas de CPB (ver la Figura 16). Se llevó a cabo un ensayo de 10 días en placas de 48 pocilios, con dieta artificial (basada en Gelman et al, J Ins Se, 1 :7, 1-10: Artificial diets for rearing the Colorado Potato Beetle), complementada con 1 pg de ARNdh/pocillo, con 12 larvas por condición.
Pudo observarse un claro efecto en el desarrollo de las larvas. Se montó un segundo ensayo para investigar el efecto de estos ARNdh durante el transcurso de la pupación y metamorfosis (ver el ensayo de pupación más abajo).
Ensayo de pupación
Se montó un ensayo de pupación de CPB para investigar el efecto de la desactivación de iARN de Ld594, Ld619 y Ld620 durante la pupación y la metamorfosis. Las larvas de cuarto estadio se alimentaron con 1 pg de ARNdh sintetizado in vitro dispensado en un disco de hoja de papa y luego se transfirieron a un caja que contenía hojas de papa frescas sin tratar. Cuatro días después los insectos que sobrevivieron se colocaron en vermiculita para permitir la pupación. Los insectos tratados con Lh594 fueron lentos, más pequeños y en mayor medida fueron incapaces de superar la pupación. La eclosión de la pupa se evaluó al final del experimento. Para el control sin tratar, puparon 24 larvas y todas eclosionaron en adultos saludables. Para Ld620, se observó una disminución del número de larvas que evolucionaron hasta pupación. Para los tres objetivos evaluados, ninguna larva evolucionó en pupas saludables y ninguna emergió como adulto. Los insectos muertos recuperados de la vermiculita mostraron varios grados de malformaciones (Figura 17).
Ld594, Ld619 y Ld620 primero aparecieron como objetivos no letales en el ensayos de larvas de CPB, a pesar de que la reducción de la vitalidad se observó claramente en los insectos tratados con ARNdh. Por otro lado, en el ensayo de
pupación, los 3 objetivos indujeron efectos importantes e inhibieron la entrada en pupación y/o metamorfosis.
Ensayo de adultos
Para evaluar la actividad de Ld594, Ld619 y Ld620 en adultos de CPB, se montó un ensayo de disco de hojas. Un disco de hoja de papa (1.7 cm de diámetro) se pintó con ARNdh o testigos y se colocó en una placa Petri de 3.5 cm con un escarabajo adulto. Al día siguiente se proporcionó un disco nuevo de hojas tratadas a los insectos. El tercer día, los adultos se transfirieron a una caja que contenía suficientes hojas de papa nuevas sin tratar para soportar la supervivencia de los testigos sin tratar. Por tratamiento, se evaluaron 6 adultos y los números de supervivientes e insectos moribundos se contó a intervalos regulares del día 6 al día 13. Los insectos se consideraron moribundos sí fueron incapaces de enderezarse después de colocarse boca arriba.
A pesar del nivel relativamente alto de fondo en el testigo negativo en este ensayo particular, se observaron claros efectos para los insectos que se habían expuesto a ARNdh de Ld594 o Ld619 (Figura 18).
Ejemplo 5 Identificación de genes objetivo en Nilaparvata lugens
5.1 Identificación de objetivos de Nilaparvata lugens
Se han identificado en saltamontes marrón de las plantas, Nilaparvata lugens, nuevas secuencias objetivo, que corresponden a los objetivos de la vía de Troponina y nombrados como NI594 (Troponina I), NI619 (Troponina T) y NI626 (Troponina C). Las secuencias ortólogas de los genes de Lygus, nombrados como NI594 (Troponina I), NI619 (Troponina T) y NI625/626 (Troponina C), se clonaron a través de PCR de cebador degenerado, usando ADNc de BPH como plantilla. Además, el ADNc de longitud completa se identificó para NI594, usando RACE (ver el método anteriormente). Se utilizó el sistema de PCR AmpliTaq Gold (Applied Biosystems) siguiendo las instrucciones del fabricante y con condiciones estándar para las reacciones de PCR de cebador degenerado, normalmente de la siguiente forma: 1 ciclo con 10 minutos a 95°C, posteriormente 40 ciclos con 30 segundos a 95°C, 1 minuto a 50°C y 1 minuto a 72°C y posteriormente 10 minutos
a 72°C. Para aumentar la tasa de éxito, se diseñaron hasta 10 cebadores degenerados diferentes, directos e inversos, en base a alineaciones de secuencias ortólogas en otras especies, y se utilizaron en varias combinaciones. Los fragmentos de PCR obtenidos se purificaron a partir del gel mediante el kit de extracción de gel (Qiagen Cat. No 28706) y se clonaron en un vector TOPO TA (Invitrogen). Se secuenciaron los clones y se utilizaron las secuencias de consenso en búsquedas Blast en bases de datos de secuencias de insectos disponibles para confirmar la relevancia del inserto. Los cebadores degenerados que resultaron en una amplificación exitosa se enumeran en la Tabla 18.
Se determinaron las secuencias de ADN y secuencias de aminoácidos deducidas de estos genes objetivo y otro gen objetivo (NI537) y se proporcionan en las Tablas 10 y 11 , respectivamente.
5.2 Producción de ARNdh que corresponde a las secuencias parciales de los genes objetivo de Nilaparvata lugens
El ARNdh se sintetizó usando los cebadores tal como se proporcionan en la
Tabla 12. La hebra sentido del ARNdh resultante producida a partir de cada uno de los genes objetivo se proporciona en la Tabla 12.
5.3 Ensayos de análisis de supervivencia para objetivos de Nilaparvata lugens novedosos
Los ARNdh se sintetizaron y se evaluaron en ensayos de iARN por alimentación de BPH previamente optimizados, en presencia del detergente zwitteriónico, CHAPSO, a 0.1 % de concentración final. Los ARNdh se evaluaron a 0.5 pg/µ? de concentración final. Se utilizó NI537, un objetivo potente en los ensayos de BPH como un objetivo de referencia en el ensayo. La supervivencia de los insectos se evaluó con el trascurso de 9 días.
Los resultados del bioensayo mostraron que en BPH, NI594, NI619 y NI626 también fueron objetivo de iARN potentes en BPH (Figura 19).
Ejemplo 6 Identificación de genes objetivo en Acyrthosiphon pisum
6.1 Identificación de objetivos de Acyrthosiphon pisum
Se han identificado nuevas secuencias objetivo en áfidos y se nombraron como Ap423, Ap537, Ap560 y Ap594, siguiendo la misma nomenclatura: "Apxxx", donde "Ap" corresponde a Acyrthosiphon pisum y "xxx" a la ID del objetivo. Los cebadores se diseñaron en base a una predicción de genes de dominio público en AphidBase (ref: http://www.aphidbase.com/) (Tabla 13).
Se determinaron las secuencias de ADN y secuencias de aminoácidos deducidas de estos genes objetivo y se proporcionan en las Tablas 14 y 15, respectivamente.
6.2 Producción de ARNdh que corresponde a las secuencias parciales de los genes objetivo de áfido
El ARNdh se sintetizó usando los cebadores tal como se proporcionan en la Tabla 16. La hebra sentido del ARNdh resultante producida a partir de cada uno de los genes objetivo se proporciona en la Tabla 16.
6.3 Ensayos de análisis de supervivencia para novedosos objetivos de áfidos
Se evaluó la iARN por alimentación en Acyrthosiphon pisum (áfido del guisante) con 4 objetivos: Ap594, Ap423, Ap560, Ap537. Las secuencias se amplificaron mediante PCR usando cebadores, se diseñaron con información de secuencias de dominio público (http://www.aphidbase.com) y se preparó ADNc de áfido. Se prepararon y se evaluaron ARNdh sintéticos a una concentración final de 0.5 pg/µ? en presencia de 5 pg/µ? de ARNt de levadura en una dieta de sacarosa. Diez ninfas de áfido de guisante recién nacidas se colocaron en una placa de Petri (32 mm). Se colocaron en una pipeta cincuenta µ? de dieta (con ARNt y ARNdh) sobre la primera capa de parafilm. Una segunda capa de parafilm cubrió la dieta y creó un sachet de alimentación donde los áfidos pudieron alimentarse. Por objetivo se montaron cinco repeticiones objetivo de 10 ninfas recién nacidas. El ARNdh de GFP se utilizó como testigo negativo. La dieta se renovó el día 4 y 7 de los ensayos y se evaluó la supervivencia (Figura 20).
Tabla 2
ID Objetivo Secuencia de ADNc (hebra sentido) 5'
Tabla 4
Tabla 7
Tabla 10
Tabla 11
Tabla 12
Tabla 13
Tabla 14
Tabla 16
Tabla 19
Los expertos en la técnica apreciarán que pueden realizarse numerosas variaciones y/o modificaciones a los ensayos mencionados anteriormente sin apartarse del espíritu o alcance de este ensayo tal como se describe de forma genérica. Los expertos en la técnica reconocerán, o podrán determinar utilizando no más que experimentos de rutina, numerosos equivalentes de ejemplos específicos, y se pretende que dichos equivalentes queden abarcados por la presente invención. El presente ejemplo, por lo tanto, debe considerarse en todos los aspectos como ilustrativo y no restrictivo.
Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.
Claims (49)
1 . Un ácido ribonucleico (ARN) interferente que funciona tras la captación por parte de una especie de plaga de insectos para regular hacia abajo la expresión de un gen objetivo en dicha plaga de insectos, en donde el ARN comprende al menos un elemento silenciador, en donde el elemento silenciador es una región de ARN de doble hebra que comprende hebras complementarias apareadas, de las cuales una hebra comprende o consiste en una secuencia de nucleótidos que es al menos parcialmente complementaria a una secuencia de nucleótidos objetivo dentro del gen objetivo, y en donde el gen objetivo (i) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleótidos de forma tal que, cuando las dos secuencias se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 75% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, o (ii) se selecciona de un grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende un fragmento de al menos 21 nucleótidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleótidos de forma tal que, cuando dicho gen que comprende dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281, 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, dicha secuencia de nucleótidos es al menos 75% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 11 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121, 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 3 8 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, o (iii) se selecciona de un grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende un fragmento de al menos 21 nucleótidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 11 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 65, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, y en donde cuando dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con el fragmento correspondiente en cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, dicha secuencia de nucleótidos de dicho fragmento es al menos 75% idéntica a dicho fragmento correspondiente de cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, o (iv) es un ortólogo de plagas de insectos de un gen que tiene una secuencia de nucleótidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 68, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, en donde los dos genes ortólogos son similares en secuencia al punto de que cuando los dos genes se alinean y comparan de forma óptima, el ortólogo tiene una secuencia que es al menos 75% idéntica a cualquiera de las secuencias representadas mediante las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o (v) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleotidos que codifica una secuencia de aminoácidos que, cuando las dos secuencias de aminoácidos se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 85% idéntica a la secuencia de aminoácidos codificada por cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389.
2. El ARN interferente de la reivindicación 1 en donde el elemento silenciador comprende o consiste en una secuencia de al menos 21 nucleotidos contiguos que es complementaria o al menos parcialmente complementaria a una secuencia de nucleotidos objetivo dentro del gen objetivo.
3. El ARN interferente de la reivindicación 1 o reivindicación 2 en donde el ARN comprende al menos dos elementos silenciadores, en donde cada elemento silenciador comprende o consiste en una secuencia de nucleotidos que es al menos parcialmente complementaria a una secuencia de nucleotidos objetivo dentro de un gen objetivo.
4. El ARN interferente de la reivindicación 3 en donde cada uno de los elementos silenciadores comprende o consiste en una secuencia de nucleotidos diferente que es complementaria a una secuencia de nucleotidos objetivo diferente.
5. El ARN ¡nterferente de la reivindicación 4 en donde las diferentes secuencias de nucleótidos objetivo se originan de un solo gen objetivo o de diferentes genes objetivo.
6. El ARN interferente de la reivindicación 5 en donde los diferentes genes objetivo se originan de la misma especie de plaga de insectos o diferentes especies de plaga de insectos.
7. El ARN interferente de cualquiera de las reivindicaciones 1 -6 en donde la especie de plaga de insectos es una plaga de plantas.
8. El ARN interferente de la reivindicación 7 en donde la plaga de plantas es una especie de plaga de insectos que se selecciona de especies de insectos pertenecientes a los órdenes Coleóptera, Hemiptera, Lepidoptera, Díptera, Dichyoptera, Orthoptera y Siphonaptera.
9. El ARN interferente de la reivindicación 8 en donde la plaga de plantas de insectos se selecciona del grupo que consiste en Leptinotarsa spp. (por ejemplo, L. decemlineata (escarabajo de la papa de Colorado), L. juncta (falso escarabajo de la papa), o L. texana (falso escarabajo de la papa tejano)); Nilaparvata spp. (por ejemplo, N. Lugens (saltamontes marrón)); Lygus spp. (por ejemplo, L. Lineolaris (chinche lygus) o L. hesperus (chinche lygus del oeste)); Myzus spp. (por ejemplo, M. persicae (áfido verde del durazno)); Diabrotica spp. (por ejemplo, D. virgifera virgifera (gusano de la raíz del maíz occidental), D. barberi (gusano de la raíz del maíz del norte), D. undecimpunctata howardi (gusano de la raíz del maíz del sur), D. virgifera zeae (gusano de la raíz del maíz mexicano).
10. El ARN interferente de cualquiera de las reivindicaciones 1 -9 en donde el gen objetivo codifica una proteína de insecto que se selecciona del grupo que comprende (i) una proteína del complejo troponina/miofilamentos que se selecciona del grupo que comprende la troponina I (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG7178 Dm), la proteína sostenida (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG7107 Dm), la proteína tropomiosina 1 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG4898 Dm), la proteína tropomiosina 2 (por ejemplo, un ortólogo de Insecto de la proteína CG4843 Dm), la miosina de cadena pesada (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG17927 Dm), la proteína miosina citoplásmica de cadena liviana (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG3201 Dm), la proteína de calabaza espagueti (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG3595 Dm), la proteína cremallera (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG15792 Dm), la troponina C (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG2981 , CG7930, CG9073, CG6514, CG12408, CG9073, CG7930, CG2981 , CG12408 o CG6514 Dm); (ii) una proteína ribosomica de insecto que se selecciona del grupo que comprende la proteína ribosomica S3A (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG2168 Dm), la proteína ribosomica LP1 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG4087 Dm), la proteína ribosómica S3 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG6779 Dm), la proteína ribosómica L10Ab (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG7283 Dm), la proteína ribosómica S18 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG8900 Dm), la proteína ribosómica L4 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG5502 Dm), la proteína ribosómica S27 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG10423 Dm), la proteína ribosómica L6 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG1 1522 Dm), la proteína ribosómica S13 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG13389 Dm), y la proteína ribosómica L12 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG3195 Dm), la proteína ribosómica L26 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG6846 Dm), la proteína ribosómica L21 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG12775 Dm), la proteína ribosómica S12 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG1 1271 Dm), la proteína ribosómica S28b (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG2998 Dm), la proteína ribosómica L13 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG4651 Dm), la proteína ribosómica L10 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG17521 Dm), la proteína ribosómica L5 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG17489 Dm), la proteína ribosómica S15Aa (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG2033 Dm), la proteína ribosómica L19 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG2746 Dm), la proteína ribosómica L27 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG4759 Dm); (iii) la subunidad II de la proteína citocromo c oxidasa mitocondrial (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG34069 Dm); (¡v) la cadena ? de ATP sintasa (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG7610 Dm); (v) la ubiquitina-5E (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG32744 Dm); (vi) la subunidad tipo beta de proteasoma (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG17331 Dm), (vii) la proteína que es un ortólogo de insecto de la proteína CG13704 Dm; y (viii) la proteína Rpn12 (por ejemplo, un ortólogo de insecto de la proteína CG4157 Dm).
1 1 . El ARN ¡nterferente de cualquiera de las reivindicaciones 1-10 en donde la regulación hacia abajo de la expresión del gen objetivo provoca una reducción del crecimiento, desarrollo, reproducción o supervivencia de la plaga en comparación con especies de plagas expuestas a un ácido ribonucleico ¡nterferente dirigido a un gen no esencial o un ácido ribonucleico ¡nterferente que no regula hacia abajo ningún gen dentro de las especies de plagas.
12. Un polinucleotido que comprende una secuencia de nucleótidos que codifica el ARN ¡nterferente de cualquiera de las reivindicaciones 1 -1 1 .
13. El polinucleotido de la reivindicación 12 que está comprendido en un constructo de ADN.
14. El constructo de ADN de la reivindicación 13 que es un constructo de expresión, en donde la secuencia de polinucleótidos que codifica el ARN ¡nterferente se encuentra unido de forma operativa a al menos una secuencia reguladora capaz de dirigir la expresión de la secuencia de polinucleótidos.
15. Una célula huésped que comprende un ARN ¡nterferente de cualquiera de las reivindicaciones 1-1 1 , el polinucleotido de la reivindicación 12 o el constructo de ADN de la reivindicación 13 o 14.
16. La célula huésped de la reivindicación 15 en donde la célula huésped es una célula procariota o eucariota.
17. La célula huésped de la reivindicación 16 en donde la célula huésped es una célula bacteriana.
18. Una composición para prevenir y/o controlar la infestación por parte de plagas de insectos que comprende al menos un ácido ribonucleico (ARN) interferente y al menos un portador, excipiente o diluyente aceptable, en donde el ARN interferente funciona tras la captación por parte de la plaga para regular hacia abajo la expresión de un gen objetivo dentro de dicha plaga, en donde el ARN comprende al menos un elemento silenciador, en donde el elemento silenciador es una región de ARN de doble hebra que comprende hebras complementarias apareadas, de las cuales una hebra comprende o consiste en una secuencia de nucleótidos que es al menos parcialmente complementaria a una secuencia de nucleótidos objetivo dentro del gen objetivo, y en donde el gen objetivo (i) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleótidos de forma tal que, cuando las dos secuencias se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 75% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, o (ii) se selecciona de un grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende un fragmento de al menos 21 nucleótidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs I , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleótidos de forma tal que, cuando dicho gen que comprende dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, dicha secuencia de nucleótidos es al menos 75% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 11 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121, 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, o (iii) se selecciona de un grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende un fragmento de al menos 21 nucleótidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 11 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, y en donde cuando dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con el fragmento correspondiente en cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, dicha secuencia de nucleótidos de dicho fragmento es al menos 75% idéntica a dicho fragmento correspondiente de cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 30, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 31 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 51 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, o (iv) es un ortólogo de plagas de insectos de un gen que tiene una secuencia de nucleótidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, en donde los dos genes ortólogos son similares en secuencia al punto de que cuando los dos genes se alinean y comparan de forma óptima, el ortólogo tiene una secuencia que es al menos 75% idéntica a cualquiera de las secuencias representadas mediante las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o (v) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que, cuando las dos secuencias de aminoácidos se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 85% idéntica a la secuencia de aminoácidos codificada por cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 45, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 28, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389.
19. La composición de la reivindicación 18 en donde el ARN interferente es como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 -11 .
20. La composición de la reivindicación 18 o reivindicación 19 en donde el ARN interferente es codificado por un constructo de ADN de la reivindicación 13 o reivindicación 14.
21 . La composición de cualquiera de las reivindicaciones 18-20 que comprende una célula huésped que expresa o es capaz de expresar el ARN interferente.
22. La composición de la reivindicación 21 en donde la célula huésped es una célula bacteriana.
23. La composición de cualquiera de las reivindicaciones 18-22 en donde la composición se presenta en una forma adecuada para ser ingerida por un insecto.
24. La composición de cualquiera de las reivindicaciones 18-23 en donde la composición se presenta en forma sólida, líquida o de gel.
25. La composición de cualquiera de las reivindicaciones 18-24 en donde la composición es formulada como un insecticida en spray.
26. La composición de la reivindicación 25 en donde el spray es un spray presurizado/aerosolizado o un atomizador.
27. La composición de cualquiera de las reivindicaciones 18-26 en donde la composición además comprende al menos un agente plaguicida que se selecciona del grupo que consiste en un insecticida químico, una patatina, una proteína insecticida de Bacillus thuringiensis, una proteína insecticida de Xenorhabdus, una proteína insecticida de Photorhabdus, una proteína insecticida de Bacillus laterosporus y una proteína insecticida de Bacillus sphaericus.
28. La composición de la reivindicación 27 en donde dicha proteína insecticida de Bacillus thuringiensis se selecciona del grupo que consiste en una Cry1 , una Cry3, una TIC851 , una CryET170, una Cry22, una TIC901 , una TIC201 , una TIC407, una TIC417, una proteína insecticida binaria CryET80 y CryET76, una proteína insecticida binaria TIC100 y TIC101 , una combinación de una proteína insecticida ET29 o ET37 con una proteína insecticida TIC810 o TIC812, y una proteína insecticida binaria PS149B1.
29. Un receptáculo o trampa para una plaga de insectos que contiene una composición tal como se define en cualquiera de las reivindicaciones 18-28.
30. El uso de una composición de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 18 a 28 para prevenir y/o controlar la infestación por parte de plagas.
31. El uso de una composición de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 18 a 28 como plaguicida para una planta o para la propagación de material reproductivo de una planta.
32. Una combinación para prevenir y/o controlar la infestación por parte de plagas que comprende la composición de cualquiera de las reivindicaciones 18 a 28 y al menos otro agente activo.
33. La combinación de la reivindicación 32 en donde la combinación es para prevenir y/o controlar la infestación por parte de plagas de una planta y el otro agente activo es un agente agronómico.
34. La combinación de la reivindicación 33 en donde el agente agronómico comprende un herbicida.
35. La combinación de la reivindicación 34 en donde el herbicida se selecciona de una versión insensible al glifosato de una 5-enolpiruv¡lshikimato-3-fosfato sintasa (EPSPS), una enzima catabólica que es capaz de descomponer dicamba tal como dicamba monooxigenasa o un gen de fosfinotricina acetil transferasa que es capaz de catabolizar glufosinato amónico.
36. La combinación de la reivindicación 33 en donde el agente agronómico comprende un segundo plaguicida.
37. La combinación de la reivindicación 36 en donde el segundo plaguicida se selecciona del grupo que consiste en un insecticida químico, una patatina, una proteína insecticida de Bacillus thuringiensis, una proteína insecticida de Xenorhabdus, una proteína insecticida de Photorhabdus, una proteína insecticida de Bacillus laterosporus y una proteína insecticida de Bacillus sphaericus.
38. La combinación de la reivindicación 37 en donde dicha proteína insecticida de Bacillus thuringiensis se selecciona del grupo que consiste en una Cry1 , una Cry3, una TIC851 , una CryETI 70, una Cry22, una TIC901 , una TIC201 , una TIC407, una TIC417, una proteína insecticida binaria CryET80 y CryET76, una proteína insecticida binaria TIC100 y TIC101 , una combinación de una proteína insecticida ET29 o ET37 con una proteína insecticida TIC810 o TIC812, y una proteína insecticida binaria PS149B1 .
39. Un método para regular hacia abajo la expresión de un gen objetivo en una especie de plaga de insectos para prevenir y/o controlar una infestación por parte de plagas que comprende poner en contacto dicha especie de plaga con una cantidad efectiva de al menos un ácido ribonucleico (ARN) interferente, en donde el ARN interferente funciona tras la captación por parte de la plaga para regular hacia abajo la expresión de un gen objetivo dentro de dicha plaga, en donde el ARN comprende al menos un elemento silenciador, en donde el elemento silenciador es una región de ARN de doble hebra que comprende hebras complementarias apareadas, de las cuales una hebra comprende o consiste en una secuencia de nucleótidos que es al menos parcialmente complementaria a una secuencia de nucleótidos objetivo dentro del gen objetivo, y en donde el gen objetivo (i) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 11 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleótidos de forma tal que, cuando las dos secuencias se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 75% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 11 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, o (ii) se selecciona de un grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende un fragmento de al menos 21 nucleótidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 11 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 54, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleótidos de forma tal que, cuando dicho gen que comprende dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 11 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281, 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, dicha secuencia de nucleotidos es al menos 75% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 75, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 11 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121, 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161, 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, o (iii) se selecciona de un grupo de genes que tienen una secuencia de nucleotidos que comprende un fragmento de al menos 21 nucleotidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 11 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, y en donde cuando dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con el fragmento correspondiente en cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, dicha secuencia de nucleótidos de dicho fragmento es al menos 75% idéntica a dicho fragmento correspondiente de cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 7, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 58, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, o (iv) es un ortólogo de plagas de insectos de un gen que tiene una secuencia de nucleótidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 69, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, en donde los dos genes ortólogos son similares en secuencia al punto de que cuando los dos genes se alinean y comparan de forma óptima, el ortólogo tiene una secuencia que es al menos 75% idéntica a cualquiera de las secuencias representadas mediante las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189L 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 72, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, 0 (v) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que, cuando las dos secuencias de aminoácidos se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 85% idéntica a la secuencia de aminoácidos codificada por cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 3 281 , 200, 201 , 314 8 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389.
40. El método de la reivindicación 39 en donde el ARN interferente es como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1-11.
41. El método de la reivindicación 39 o reivindicación 40 en donde la regulación hacia abajo de la expresión de un gen objetivo en una especie de plaga de insectos se utiliza para obtener al menos 20% de control de la plaga o al menos 20% de mortalidad de la plaga en comparación con plagas de insectos testigo que se ponen en contacto con un ácido ribonucleico (ARN) interferente dirigido a un gen no esencial de la plaga o un gen objetivo no expresado en dicha plaga.
42. El método de cualquiera de las reivindicaciones 39 a 41 en donde el método se utiliza para prevenir y/o controlar una infestación por parte de plagas de una planta.
43. El método de la reivindicación 42 en donde la planta se selecciona del grupo que comprende algodón, papa, arroz, cañóla, girasol, sorgo, mijo, maíz, fresas, soja, alfalfa, tomate, berenjena, pimiento y tabaco.
44. El uso del ácido ribonucleico (ARN) interferente de cualquiera de las reivindicaciones 1-11 , el constructo de ADN de la reivindicación 13 o reivindicación 14, o la composición de cualquiera de las reivindicaciones 18-28 para prevenir y/o controlar la infestación por parte de plagas de insectos.
45. Un kit que comprende el ácido ribonucleico (ARN) interferente de cualquiera de las reivindicaciones 1-11 , el constructo de ADN de la reivindicación 13 o reivindicación 14, o la composición de cualquiera de las reivindicaciones 18-28 para prevenir y/o controlar la infestación por parte de plagas de insectos.
46. Un polinucleótido aislado que se selecciona del grupo que consiste en: (i) un polinucleótido que comprende al menos 21 nucleótidos contiguos de una secuencia de nucleótidos tal como se representa mediante cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 11 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, o (ii) un polinucleótido que comprende al menos 21 nucleótidos contiguos de una secuencia de nucleótidos tal como se representa mediante cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, de forma tal que, cuando las dos secuencias se alinean y comparan de forma óptima, dicho polinucleótido es al menos 75 % idéntico a cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, o (iii) un polinucleótido que comprende un fragmento de al menos 21 nucleótidos contiguos de una secuencia de nucleótidos tal como se representa mediante cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, o su complemento, y en donde dicho fragmento o dicho complemento tiene una secuencia de nucleotidos que, cuando dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con el fragmento correspondiente en cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 11 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, dicha secuencia de nucleotidos es al menos 75% idéntica a dicho fragmento correspondiente de cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 16 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389 o su complemento, o (iv) un polinucleótido que codifica una secuencia de aminoácidos que, cuando las dos secuencias de aminoácidos se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 85 % idéntica a la secuencia de aminoácidos codificada por cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 23, 24, 71 a 74, 25, 26, 75 a 78, 143, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, 128, 149, 184, 137, 185, 234 a 237, 302 a 305, 129, 138, 238 a 241 , 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, 168, 170, 169, 274 a 277, 172, 173, 278 a 281 , 200, 201 , 314 a 317, 186, 202, 187, 203, 306 a 309, 318 a 321 , 386, 387, 388, 389, y en donde dicho polinucleótido no tiene más de 10000 nucleótidos de longitud.
47. El ARN interferente de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 -10, el polinucleótido de la reivindicación 12 o reivindicación 13, el constructo de ADN de la reivindicación 14, la célula huésped de cualquiera de las reivindicaciones 15-17, la composición de cualquiera de las reivindicaciones 18-28, el receptáculo o trampa de la reivindicación 29, el uso de cualquiera de las reivindicaciones 30, 31 o 44, la combinación de cualquiera de las reivindicaciones 32-38, el método de cualquiera de las reivindicaciones 39-43, el kit de la reivindicación 45 o el polinucleótido aislado de la reivindicación 46 en donde el gen objetivo (i) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233 o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleótidos de forma tal que, cuando las dos secuencias se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 75% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, o su complemento, o (¡i) se selecciona de un grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende un fragmento de al menos 21 nucleótidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleótidos de forma tal que, cuando dicho gen que comprende dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, dicha secuencia de nucleótidos es al menos 75% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, o su complemento, o (¡ii) se selecciona de un grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende un fragmento de al menos 21 nucleótidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, o su complemento, y en donde cuando dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con el fragmento correspondiente en cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, dicha secuencia de nucleótidos de dicho fragmento es al menos 75% idéntica a dicho fragmento correspondiente de cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233 o su complemento, o (iv) es un ortólogo de plagas de insectos de un gen que tiene una secuencia de nucleótidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 79, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233 o su complemento, en donde los dos genes ortólogos son similares en secuencia al punto de que cuando los dos genes se alinean y comparan de forma óptima, el ortólogo tiene una secuencia que es al menos 75% idéntica a cualquiera de las secuencias representadas mediante las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233, o (v) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que, cuando las dos secuencias de aminoácidos se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 85% idéntica a la secuencia de aminoácidos codificada por cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, 121 , 142, 176, 182, 130, 177, 183, 206 a 209, 286 a 289, 298 a 301 , 145, 122, 144, 178, 131 , 179, 210 a 213, 290 a 293, 123, 132, 214 a 217, 124, 133, 218 a 221 , 146, 125, 134, 222 a 225, 147, 126, 135, 226 a 229, 127, 148, 136, 230 a 233.
48. El ARN interferente de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 -10, el polinucleótido de la reivindicación 12 o reivindicación 13, el constructo de ADN de la reivindicación 14, la célula huésped de cualquiera de las reivindicaciones 15-17, la composición de cualquiera de las reivindicaciones 18-28, el receptáculo o trampa de la reivindicación 29, el uso de cualquiera de las reivindicaciones 30, 31 o 44, la combinación de cualquiera de las reivindicaciones 32-38, el método de cualquiera de las reivindicaciones 39-43, el kit de la reivindicación 45 o el polinucleótido aislado de la reivindicación 46 en donde el gen objetivo (i) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs. 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273 o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleótidos de forma tal que, cuando las dos secuencias se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 75% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs. 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273 o su complemento, o (ii) se selecciona de un grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende un fragmento de al menos 21 nucleótidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs. 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273 o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleótidos de forma tal que, cuando dicho gen que comprende dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con cualquiera de las SEQ ID NOs. 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, dicha secuencia de nucleótidos es al menos 75% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs. 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 150, 15 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, o su complemento, o (iii) se selecciona de un grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende un fragmento de al menos 21 nucleótidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs. 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, o su complemento, y en donde cuando dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con el fragmento correspondiente en cualquiera de las SEQ ID NOs. 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, dicha secuencia de nucleótidos de dicho fragmento es al menos 75% idéntica a dicho fragmento correspondiente de cualquiera de las SEQ ID NOs. 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, o su complemento, o (¡v) es un ortólogo de plagas de insectos de un gen que tiene una secuencia de nucleótidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs. 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, o su complemento, en donde los dos genes ortólogos son similares en secuencia al punto de que cuando los dos genes se alinean y comparan de forma óptima, el ortólogo tiene una secuencia que es al menos 75% idéntica a cualquiera de las secuencias representadas mediante las SEQ ID NOs. 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273, o (v) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que, cuando las dos secuencias de aminoácidos se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 85% idéntica a la secuencia de aminoácidos codificada por cualquiera de las SEQ ID NOs. 3, 4, 31 a 34, 139, 5, 6, 35 a 38, 140, 7, 8, 39 a 42, 9, 10, 43 a 46, 141 , 1 1 , 12, 47 a 50, 13, 14, 51 a 54, 15, 204, 16, 205, 55 a 58, 322 a 325, 17, 18, 59 a 62, 19, 20, 63 a 66, 21 , 22, 67 a 70, 150, 151 , 242 a 245, 152, 153, 246 a 249, 154, 155, 250 a 253, 156, 157, 254 a 257, 158, 159, 258 a 261 , 160, 161 , 262 a 265, 163, 162, 164, 266 a 269, 165, 167, 166, 270 a 273.
49. El ARN interferente de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 -10, el polinucleótido de la reivindicación 12 o reivindicación 13, el constructo de ADN de la reivindicación 14, la célula huésped de cualquiera de las reivindicaciones 15-17, la composición de cualquiera de las reivindicaciones 18-28, el receptáculo o trampa de la reivindicación 29, el uso de cualquiera de las reivindicaciones 30, 31 o 44, la combinación de cualquiera de las reivindicaciones 32-38, el método de cualquiera de las reivindicaciones 39-43, el kit de la reivindicación 45 o el polinucleótido aislado de la reivindicación 46 en donde el gen objetivo (i) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313 o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleótidos de forma tal que, cuando las dos secuencias se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 75% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, o su complemento, o (ii) se selecciona de un grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende un fragmento de al menos 21 nucleótidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, o su complemento, o que tienen una secuencia de nucleótidos de forma tal que, cuando dicho gen que comprende dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, dicha secuencia de nucleótidos es al menos 75% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, o su complemento, o (ii¡) se selecciona de un grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que comprende un fragmento de al menos 21 nucleótidos contiguos de cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, o su complemento, y en donde cuando dicho fragmento se alinea y compara de forma óptima con el fragmento correspondiente en cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, dicha secuencia de nucleótidos de dicho fragmento es al menos 75% idéntica a dicho fragmento correspondiente de cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, o su complemento, o (iv) es un ortólogo de plagas de insectos de un gen que tiene una secuencia de nucleótidos que comprende cualquiera de las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, o su complemento, en donde los dos genes ortólogos son similares en secuencia al punto de que cuando los dos genes se alinean y comparan de forma óptima, el ortólogo tiene una secuencia que es al menos 75% idéntica a cualquiera de las secuencias representadas mediante las SEQ ID NOs 1 , 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181 , 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, 310 a 313, o (v) se selecciona del grupo de genes que tienen una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que, cuando las dos secuencias de aminoácidos se alinean y comparan de forma óptima, es al menos 85% idéntica a la secuencia de aminoácidos codificada por cualquiera de las SEQ Os 1, 174, 404, 180, 188, 2, 175, 181, 189, 27 a 30, 282 a 285, 294 a 297, a 313. RESUMEN La presente invención se refiere al control genético de infestación por parte de especies de plagas de insectos, particularmente a la prevención y/o el control de infestación por parte de plagas de plantas, utilizando moléculas de ácido ribonucleico (ARN) interferente. Composiciones y combinaciones que contienen las moléculas de ARN interferente de la invención para su uso en aplicaciones tópicas, por ejemplo, en forma de insecticidas.
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