MX2010012869A - Vacunas contra coccidiosis. - Google Patents

Abstract

La presente invención describe una vacuna que proporciona la protección contra la coccidiosis, y métodos para producir y usar la vacuna sola, o en combinación con otros agentes protectores.

Description

VACUNAS CONTRA COCCIDIOSIS Campo de la Invención La presente invención se refiere a vacunas que proporcionan la protección contra las coccidiosis. También se proporciona los métodos para hacer y usar las vacunas solas, o en combinación con otros agentes protectores.

Antecedentes de la Invención La coccidiosis es una enfermedad entérica de los animales que afecta al ganado doméstico ,en todo el mundo. Las empresas que se basan en la producción animal frecuentemente se enfrentan a costos significativos debido a la coccidiosis, los cuales incluyen pérdidas financieras debido al ganado enfermo, así como costos por tratamientos profilácticos previstos para reducir y/o prevenir la enfermedad. Tales costos son especialmente relevantes para la industria de las aves de corral, donde el alojamiento intensivo de las aves favorece la propagación de la coccidiosis.

Las causas etiológicas de la coccidiosis son miembros del esporozoo intracelular estricto, subclase, Coccidia. Un género de esta subclase que tiene un impacto significativo sobre la producción animal es Eimeria. Según lo aplicado a los géneros Isospora, Cystolsospora, y Cryptosporidium estrechamente relacionados, el género Eimeria requiere solamente un solo anfitrión para completar su ciclo vital. Bajo condiciones naturales, este ciclo vital comienza con la ingestión de oocistos esporulados del ambiente.

El género Eimeria son parásitos unicelulares con un ciclo vital complejo monóxeno, que exhibe un alto nivel de especificidad de anfitrión-especie y tejido, las especies Eimeria incluyen aquellas que se encuentran en pollos: E. tenella, E. acervuiina, E. máxima, E. necatrix, E. mitis, E. praecox, E. mivatiy E. brunettr, y aquellas encontradas en pavos: E. Meieagrimitis, E. adenoeides, E. gailopavonis, E. dispersa, E. meleagridis, E. innocua, y E. subrotunda . Las etapas del ciclo vital de Eimeria son esencialmente iguales para todas las especies de Eimeria, aunque cada especie tiene un sitio preferido en el intestino para el desarrollo y el tiempo requerido para completar el ciclo vital varía dependiendo de cada especie.

Numerosas especies de Eimeria pueden infectar a un solo anfitrión vía la ruta oral, ruta nasal y/o por la entrada de partículas infecciosas en el conducto lacrimal. Una vez que son injeridos, los parásitos penetran las células de la mucosa intestinal y experimentan las etapas asexuales y sexuales del ciclo vital. El daño intestinal resultante puede conducir finalmente al crecimiento deteriorado (atrofiamiento), aprovechamiento alimenticio disminuido, pérdida de pigmentación, y mortalidad aumentada. Además, el daño al recubrimiento intestinal pone en riesgo al animal a otras condiciones infecciosas, por ejemplo, los pollos afectados se vuelven más propensos a la enteritis necrótica inducida por Clostridiumperfringens.

La infección comienza con la ingestión por un anfitrión de los oocistos de E/'mer/aesporulados. Los oocistos injeridos entonces liberan los esporocistos en el intestino del anfitrión. Los esporocistos liberan esporozoítos que entran a las células epiteliales intestinales y después las transforman en trofozoítos. Los trofozoítos, a su vez, experimentan un proceso conocido como merogonia para formar esquizontes de primera generación. Debido a su tamaño relativamente grande, los esquizontes son los que causan el efecto patogénico principal de la infección, es decir, el daño al tejido del anfitrión.

Los esquizontes de primera generación producen numerosos merozoítos, que se liberan, y entonces crecen y forman los esquizontes de la siguiente generación. Esta fase asexual continúa para un número variable de generaciones antes del inicio de la fase sexual. La fase sexual comienza cuando los esquizontes forman microgametocitos y macrogametos.

Los microgametocitos se. convierten posteriormente en microgametos que fertilizan, los macrogametos para producir una progenie de oocistos no esporulados. Los oocistos no esporulados entonces se liberan en el lumen intestinal y se excretan con las heces del anfitrión, se conoce como manifestación la conclusión del ciclo vital, indicado por la aparición de oocistos no esporulados en las heces del anfitrión.

La esporulación de los oocistos ocurre fuera del anfitrión, cuando las condiciones ambientales son favorables. La ingestión inevitable por un anfitrión de los oocistos esporulados comienza el siguiente ciclo de infección. El tiempo a partir de la ingestión por el anfitrión de los oocistos esporulados hasta la aparición de los oocistos no esporulados eni las heces se llama periodo de incubación. El periodo de incubación es diferente entre varias especies de Eimeria.

Las aves de corral que se exponen en varias ocasiones a las infecciones por Eimeria pueden adquirir inmunidad a la coccidiosis. de hecho, dependiendo de la inmunogenicidad de cada especie Eimeria, la infección diaria de los pollos de criadero con una pequeña cantidad de oocistos esporulados puede dar lugar a aves que adquieren una inmunidad completa después de tan poco como dos infecciones repetidas. Por lo tanto, los protocolos actuales que utilizan las vacunas vivas de Eimeria se basan en el principio de la inmunidad adquirida, es decir, infecciones repetidas con una pequeña cantidad de oocistos infecciosos.

La vacunación es realizada generalmente en el criadero el día del nacimiento del ave administrando la vacuna viva de Eimeria directamente a las aves, o a través de su aplicación durante su alimentación y/o consumo de agua. Los oocistos infecciosos terminan su ciclo vital dentro del tracto intestinal del ave, según lo descrito anteriormente, culminando con la liberación de una nueva generación de oocistos no esporulados en 5-11 días, dependiendo de la especie Eimeria. Los oocistos no esporulados excretados con las heces entonces llegan a ser contagiosos, es decir, esporulan, en el ambiente exterior, e infectan nuevamente a las aves a través de la ingestión del anfitrión. Después de dos o tres de tales ciclos, las aves se inmunizan contra la coccidiosis. Esta inmunidad se caracteriza por: (i) una disminución y/o ausencia de parásitos observados microscópicamente en el intestino, (ii) una reducción de la liberación de oocistos, (iii) una reducción de las lesiones intestinales, (iv) una reducción de la enfermedad clínica, y/o (v) una reducción o prevención de la perdida de peso. La inmunidad adquirida disminuye durante un periodo de tiempo de tres a cuatro meses en ausencia de exposición subsecuente a los oocistos infecciosos.

La especie Eimeria natural se aisla de brotes de enfermedad clínica en una numerosa cantidad de aves de corral y se puede generalmente propagar para el uso como cepas patogénicas de desafío. Las vacunas atenuadas no comunes se componen de oocistos infecciosos de cepas patogénicas de ligeras a moderadas de diferentes especies de Eimeria que se han mantenido mediante la inoculación en laboratorio. Estas especies de Eimeria no atenuadas son ¡ capaces de causar coccidiosis cuando son injeridas en grandes cantidades. Los fabricantes y usuarios de las vacunas deben ser cuidadosos al asegurar que la vacunación proporcione solamente los oocistos infecciosos suficientes para producir la inmunidad, pero no la enfermedad en el anfitrión sin tratamiento previo. Después de la dosis inicial, el proceso de vacunación depende solamente de la infección repetida a través de la ingestión del anfitrión de los oocistos esporulados de la carnada.

Las vacunas atenuadas; se componen de oocistos infecciosos que tienen una patogenicidad reducida. Debido a la correlación fuerte entre la patogenicidad y posesión atenuadas de un período de incubación, muchas cepas atenuadas también son precoces. Constantemente, las líneas atenuadas que poseen períodos acortados previos a la manifestación comúnmente son llamadas "líneas precoces".

Por consiguiente, una cierta atenuación de la patogenicidad de Eimeria se puede alcanzar a través de la selección para la aparición temprana de oocistos durante el paso repetido de los parásitos en el animal anfitrión. De esta manera, se ha identificado que las poblaciones de una especie dada de Eimeria tienen periodos de tiempo previos a la manifestación muy reducida, y una patogenicidad muy reducida. Aunque la causa de la patogenicidad reducida observada no se entienda completamente, se cree generalmente que se vincula a la disminución y/o reducción del tamaño de por lo menos una generación de esquizontes, para de tal modo reducir el daño de tejido en el anfitrión.

Existen ventajas y desventajas para las vacunas no atenuadas y atenuadas. Una ventaja para las vacunas compuestas de parásitos no atenuados, es que la replicación de parásitos en cantidades más grandes da por resultado una acumulación más rápida de oocistos en el ambiente, lo cual es necesario para la infección recurrente e inmunización subsecuente de las aves. Por otra parte, el proceso de replicación de la especie Eimeria no atenuada en el tracto intestinal de un pollo sin tratamiento previo puede producir lesiones que dan lugar a una salud deficiente del animal, pérdida de aprovechamiento alimenticio, y a otros efectos perjudiciales, incluyendo infecciones e inflamación secundarias.

Otra desventaja de las vacunas no atenuadas es la necesidad de asegurar que cada ave reciba la dosis inicial correcta, puesto que un inoculo demasiado grande causaría graves lesiones intestinales, y un inoculo demasiado pequeño daría lugar a un retraso en el inicio del proceso de inmunización, con relación a la parvada. En el último caso, las aves que reciben una dosis inicial insuficiente pueden llegar a ser susceptibles a ser afectadas por el desafío debido al número amplificado de oocistos infecciosos excretados por las aves de la parvada i después del período inicial de incubación. De hecho, la carencia de suficiente inmunidad antes de tales desafíos subsecuentes de Eimeria explica probablemente; la mayor parte de las fallas experimentadas cuando se utiliza una vacuna no atenuada viva.

Una ventaja importante de las vacunas atenuadas es que causan solamente lesiones mínimas. Las vacunas atenuadas, sin embargo, producen menos oocistos que las cepas no atenuadas, lo cual de tal modo da por resultado una acumulación más lenta de oocistos infecciosos en el ambiente, disminuyendo así la probabilidad de infección recurrente después del período inicial de incubación. Esto, a su vez, da lugar a un periodo más largo requerido para que la inmunización sea establecida completamente, y puede incluso interrumpir todo el proceso de inmunización. La acumulación más lenta de oocistos infecciosos en el ambiente es particularmente problemática en la inmunización contra las especies Eimeria, E. máxima, debido a que E. máxima natural produce una cantidad relativamente grande de oocistos.

Puesto que una sola especie de anfitrión se puede infectar por múltiples especies Eimeria, las vacunas vivas contra la coccidiosis se diseñan generalmente para comprender oocistos de un número de especies Eimeria. Hasta ahora, ha habido solamente tres tipos de tales vacunas vivas: vacunas no atenuadas que consisten de solamente oocistos cultivados en laboratorio; vacunas atenuadas que consisten de solamente oocistos atenuados; y vacunas mezcladas en donde los oocistos de una cierta especie Eimeria son no atenuados, y los oocistos de otra especie Eimeriason atenuados. Desafortunadamente, ninguna de estas vacunas supera las desventajas conocidas anteriormente, de hecho, debido a las desventajas significativas de cada uno de los tipos actuales de vacunas vivas de Eimeria, junto con el considerable costo para la industria de la coccidiosis debido a las infecciones de Eimeria, sigue habiendo una necesidad antigua de vacunas mejoradas que puedan proteger mejor a las aves de corral contra esta enfermedad entérica costosa.

La mención de cualquier referencia en la presente no se debe interpretar como una aceptación de que tal referencia está disponible como una "técnica anterior" para la presente solicitud.

Breve Descripción de la Invención Por consiguiente, la presente invención proporciona nuevas composiciones inmunogenéticas que se pueden utilizar en vacunas contra la coccidiosis. En un aspecto de la presente invención, se proporciona una vacuna que comprende por lo menos dos diferentes cepas de una sola especie de un género esporozoo Coccidia, y en donde por lo menos dos diferentes cepas de una sola especie del género esporozoo Coccidia poseen un período de incubación asincrónico relacionado.

En una modalidad, la composición para vacuna comprende una primera cepa de una especie de un género Coccidia junto con una segunda cepa de la misma especie en donde la primera cepa y la segunda cepa poseen un período de incubación asincrónico. En tal modalidad, el género Coccidia es Isospora. En otra modalidad, el género Coccidia es Cystolsospora. En aún otra modalidad, el género Coccidia es Cryptosporidium . En una modalidad particular, el género Coccidia es Eimeria.

También se proporciona vacunas polivalentes que comprenden cualquiera y todas las combinaciones de los géneros Coccidia. En las modalidades particulares, se proporcionan vacunas que comprenden dos o más cepas de dos o más de tales géneros individuales Coccidia. En una modalidad de este tipo, la vacuna comprende pares de cepas de múltiples géneros Coccidia en donde los múltiples pares de cepas de una sola especie del género Coccidia poseen períodos asincrónicos de incubación. En una modalidad particular la vacuna comprende los pares de cepas de una sola especie de Cystolsospora que poseen un período de incubación asincrónico y los pares de cepas de una sola especie de Isospora que poseen un período de incubación asincrónico. En otra modalidad, todos los pares de cepas de una sola especie del género Coccidia en la vacuna poseen períodos asincrónicos de incubación.

En una modalidad, la primera cepa de la especie de los esporozoos, género Coccidia en la vacuna, es una cepa no atenuada y la segunda cepa ;es una cepa precoz. En una modalidad particular de este tipo, la cepa precoz es también una cepa atenuada.

Las vacunas de la presente invención pueden comprender esporozoos en cualquier etapa en su ciclo vital incluyendo mezclas de una o más, o incluso todas las etapas de sus ciclos vitales. En una modalidad particular, los esporozoos en la vacuna son oocistos. En otra modalidad los esporozoos son esporozoítos. En aún otra modalidad los esporozoos son merozoítos. En aún otra modalidad, los esporozoos son una mezcla de merozoítos y/o esporozoítos y/o oocistos. .

En un aspecto de la presente invención, se proporcionan las vacunas que comprenden esporozoos no atenuados y esporozoos precoces de la misma especie de un género de Coccidia que están en relaciones y/o cantidades definidas. Así, en una modalidad particular, una vacuna de la presente invención comprende esporozoos no atenuados y esporozoos precoces de la misma especie de un género de Coccidia en donde la relación de esporozoos no atenuados a los esporozoos precoces en la vacuna es de aproximadamente 1 esporozoo no atenuado a aproximadamente 4 esporozoos precoces. En otra modalidad de este tipo, la relación de los esporozoos no atenuados a los esporozoos precoces de la misma especie es de aproximadamente 1 esporozoo no atenuado a aproximadamente 2 esporozoos precoces. En aún otra modalidad la relación de esporozoos no atenuados a los esporozoos precoces de la misma especie es de aproximadamente 1 esporozoo no atenuado a aproximadamente 1 esporozoo precoz. En aún otra modalidad la relación de esporozoos no atenuados a los esporozoos precoces de la misma especie es de aproximadamente 2 esporozoos no atenuados a aproximadamente 1 esporozoo precoz. En aún otra modalidad la relación de esporozoos no atenuados a los esporozoos precoces de la misma especie es de aproximadamente 4 esporozoos no atenuados a aproximadamente 1 esporozoo precoz, en las modalidades específicas de este tipo, los esporozoos no atenuados son oocistos no atenuados. En otra modalidad los esporozoos precoces son oocistos precoces. En aún otra modalidad de la vacuna, los esporozoos no atenuados son oocistos no atenuados, y los esporozoos precoces son oocistos precoces.

También se proporcionan las vacunas, que comprenden cualquiera y/o todas las combinaciones y cantidades de cepas de las mismas especies de un género de Coccidia, que tienen períodos asincrónicos de incubación. En una modalidad particular de este tipo, la vacuna comprende de aproximadamente 10 a aproximadamente 1000 oocistos no atenuados. En otra modalidad, la vacuna comprende de aproximadamente 25 a aproximadamente 500 oocistos no atenuados. En aún otra modalidad, la vacuna comprende aproximadamente 50 a aproximadamente 250 oocistos no atenuados. En aún otra modalidad, la vacuna comprende de aproximadamente 100 a aproximadamente 200 oocistos no atenuados.

En una modalidad relacionada de este tipo, la vacuna comprende de aproximadamente 50 a aproximadamente 20000 oocistos no atenuados. En otra modalidad, la vacuna comprende de aproximadamente 100 a aproximadamente 10,000 oocistos no atenuados. En aún otra modalidad, la vacuna comprende de i aproximadamente 250 a aproximadamente 5000 oocistos no atenuados. En aún otra modalidad, la vacuna comprende de aproximadamente 500 a aproximadamente 3000 oocistos no atenuados. En aún otra modalidad, la vacuna comprende de aproximadamente 750 a aproximadamente 2000 oocistos no atenuados.

En otra modalidad, la vacuna comprende de aproximadamente 50 a aproximadamente 20000 oocistos precoces y/o atenuados. En otra modalidad, la vacuna comprende de aproximadamente 100 a aproximadamente 10,000 oocistos precoces. En aún otra modalidad, la vacuna comprende de aproximadamente 250 a aproximadamente 5000 oocistos precoces. En aún otra modalidad, la vacuna comprende de aproximadamente 500 a aproximadamente 3000 oocistos precoces. En aún otra modalidad, la vacuna comprende de aproximadamente 750 a aproximadamente 2000 oocistos precoces. En aún otra modalidad, una vacuna de la presente i invención comprende de aproximadamente 10 a aproximadamente 1000 oocistos precoces. En otra modalidad, la vacuna comprende de aproximadamente 25 a aproximadamente 500 oocistos precoces. En aún otra modalidad, la vacuna comprende de aproximadamente 50 a aproximadamente 250 oocistos precoces no atenuados. En aún otra modalidad, la vacuna comprende de aproximadamente 100 a aproximadamente 200 oocistos precoces. En las modalidades particulares, los oocistos precoces son oocistos atenuados.

Cuando una vacuna de la presente invención incluye un género Coccidia deesporozoo particular, por ejemplo, Eimeria, se puede utilizar cualquier especie. En tal modalidad, la vacuna comprende una especie Eimeria que puede ayudar a proteger a los pollos contra la coccidiosis. En tal modalidad, la especie Eimeria es E. tenella. En otra modalidad, la especie Eimeria es E. acervulina. En aún otra modalidad, la especie Eimeria es E. necatrix. En aún otra modalidad la especie Eimeria es E. mivati. En aún otra modalidad, la especie Eimeria es E. mitis. En aún otra modalidad, la especie Eimeria es E. praecox. En aún otra modalidad, la especie Eimeriaes E. brunetti. En una modalidad particular, la especie Eimeria es E. máxima.

También se proporcionan las vacunas que comprenden cualquiera y todas las combinaciones de tales especies Eimeria. Además, se proporcionan las vacunas que comprenden dos o más cepas de dos o más de tales especies individuales. En una modalidad de este tipo, la vacuna comprende pares de cepas de múltiples especies Eimeria en donde los múltiples pares de cepas de una sola especie Eimeria poseen períodos asincrónicos de incubación. En una modalidad particular de este tipo, todos los pares de cepas de una sola especie Eimeria en la vacuna poseen períodos asincrónicos de incubación.

En una modalidad específica, una vacuna comprende una cepa natural y/o no atenuada de E. máxima y una cepa atenuada y/o precoz de E. máxima. En tal modalidad, la cepa natural y/o no atenuada de E. máxima tiene esencialmente todas las características de identificación y/o esencialmente todas las características de la cepa de E. máxima encontrada en la vacuna vendida bajo el nombre COCCIVAC®. En otra modalidad específica de este tipo, una vacuna comprende una cepa atenuada y/o precoz de E. máxima que tiene esencialmente todas las características de identificación y/o esencialmente todas las características de la cepa E. máxima encontrada en la vacuna vendida bajo el nombre PARACOX®. En aún otra modalidad, una vacuna comprende una cepa natural y/o no atenuada de E. máxima que tiene esencialmente todas las características de identificación y/o esencialmente todas las características de la cepa de E. máxima encontrada en la vacuna vendida bajo el nombre COCCIVAC® y una cepa atenuada, precoz de E. máxima r que tiene esencialmente todas las características de identificación y/o esencialmente todas las propiedades de la cepa E. máxima encontrada en la vacuna vendida bajo el nombre PARACOX®.

Otra vacuna de la presente invención comprende una o más especies Eimeria que pueden ayudar a proteger a los pavos contra la coccidiosis. En tal modalidad, la especie Eimeria es E. meieagrimitis. En otra modalidad, la especie Eimeria es E. adenoides. En aún otra modalidad, la especie Eimeria es E. gallopavonis. En aún otra modalidad, la especie Eimeria es E. dispersa. En aún otra modalidad, la especie Eimeria es £. meleagridis. En aún otra modalidad, la especie Eimeria es E. innocua. En aún otra modalidad, la especie Eimeria es E. subrotunda . También se proporcionan las vacunas que comprenden cualquiera y todas las combinaciones de especies Eimeria de pavo.. Además, se proporciona las vacunas que comprenden dos o más cepas de dos o más de tales especies individuales. En una modalidad de este tipo, la vacuna comprende pares de cepas de múltiples especies Eimeria de pavo en donde los múltiples pares de cepas de una sola especie Eimeria de pavo poseen períodos asincrónicos de incubación. En una modalidad particular de este tipo, todos los pares de cepas de una sola especie Eimeria de pavo en la vacuna poseen períodos asincrónicos de incubación.

En otro aspecto de la presente invención, se proporcionan las vacunas que incluyen una o más especies y/o cepas de especies de Isospora, Cystolsospora , y/o Cryptosporidium . En tales modalidades de este tipo, por lo menos dos cepas de la especie Isospora, Cystolsospora, y/o Cryptosporidium también poseen un período asincrónico de incubación. Además, cualquiera de las vacunas de Eimeria de la presente invención se puede combinar con tales vacunas de Isospora, Cystolsospora , y/o Cryptosporidium .

En una modalidad particular, una vacuna incluye una cepa no atenuada de una especie de Cryptosporidium y una cepa precoz de la misma especie de .Cryptosporidium. En otra modalidad tal vacuna de Cryptosporidium adicionalmente comprende una cepa no atenuada de una especie de Isospora y una cepa precoz de la misma especie de Isospora. En aún otra modalidad, la vacuna de Cryptosporidium adicionalmente comprende una cepa nq atenuada de una especie de Cystolsospora y una cepa precoz de la misma especie de Cystolsospora . En aún otra modalidad, la vacuna de Cryptosporidium comprende adicionalmente una cepa no atenuada de una especie de Cystolsospora, una cepa precoz de la misma especie de Cystolsospora, una cepa no atenuada de una especie de Isospora, y una cepa precoz de la misma especie de Isospora.

En la modalidad relacionada, la presente invención proporciona una vacuna que incluye una cepa no atenuada de una especie de Isospora y una cepa precoz de la misma especie de Isospora. En otra modalidad, la vacuna incluye una cepa no atenuada de una especie de Cystolsospora y una cepa precoz de la misma especie de Cystolsospora . En aún otra modalidad, la vacuna comprende una cepa no atenuada de una especie de Cystolsospora, una cepa precoz de la misma especie de Cystolsospora , una cepa no atenuada de una especie de Isospora, y una cepa precoz de la misma especie de Isospora.

En otro aspecto de la invención, se proporcionan los métodos para inmunizar a un sujeto animal contra la coccidiosis. Tal modalidad comprende administrar al animal una cantidad inmunológicamente efectiva de cualquier vacuna de la presente invención. En una modalidad, la vacuna se administra oralmente. En otra modalidad, la vacuna se administra en el huevo. En aún otra modalidad, la vacuna se administra tópicamente. En aún otra modalidad, la vacuna se administra por inyección.

En una modalidad particular, la vacuna se administra en el agua para beber del animal. En otra modalidad, la vacuna se administra en el alimento del animal. En aún otra modalidad, la vacuna se administra en el alimento y en el agua para beber del animal.

En aún otra modalidad, la vacuna es administrada por rocío. En tal modalidad, una solución que contiene la vacuna se rocía sobre los polluelos de un día de edad. En una modalidad específica de este tipo, los polluelos de un día de edad se vacunan usando un gabinete de rocío en su criadero. En aún otra modalidad, la vacuna es administrada aplicando la vacuna al ojo del animal. En una modalidad específica de este tipo, la aplicación de la vacuna al ojo del animal se realiza con un gotero ocular. En aún otra modalidad, la vacuna es administrada a través de dos, tres, cuatro, o más medios de administración.

En una modalidad particular, una vacuna de la presente invención se administra a un tipo de ave. En una modalidad, el tipo de ave es un ave domesticada. En tal modalidad, el animal es un pollo. En otra modalidad, el ave domesticada es un pavo. En aún otra modalidad, el ave domesticada es un pato. En aún otra modalidad, el ave domesticada es un ave de caza. En una modalidad particular de este tipo, el ave de caza es una codorniz. En otra modalidad, el ave de caza es un faisán. En aún otra modalidad, la vacuna se administra a un mamífero. En una modalidad particular de este tipo, el mamífero es un mamífero no humano. Éstos y otros aspectos de la presente invención serán apreciados mejor mediante la referencia a la descripción detallada y al ejemplo.

Breve Descripción de la Invención La presente invención, por lo tanto, proporciona una vacuna contra la coccidiosis formulada para maximizar las ventajas de las distintas características de las vacunas contra Coccidia no atenuadas y precoces, respectivamente, mientras que minimiza sus desventajas individuales. En un aspecto de la invención, una vacuna comprende una combinación de una o más cepas de una especie natural de Coccidia con una o más cepas de Coccidia atenuada de la misma especie. Tal vacuna puede producir una inmunorespuesta más fuerte en el anfitrión que aquella de dos tipos individuales de cepas separados. Por otra parte, los ciclos vitales parasitarios duales y dispares resultantes de estos dos tipos de cepas puede acelerar el logro de la inmunidad sólida en el anfitrión.

Generalmente, toma más tiempo lograr la inmunidad sólida contra una especie específica de Eimeria con una vacuna que comprende una cepa precoz que una que utiliza una cepa no atenuada, a pesar de que la manifestación se logra antes con las vacunas precoces. Este resultado sugiere que los ciclos de replicación adicionales que las cepas no atenuadas experimentan en el período de incubación, pueden acelerar la inmunorespuesta del anfitrión en relación con la observada con las cepas precoces, y/o en comparación con el número sustancialmente mayor de oocistos liberados en la manifestación después de la infección/vacunación con Eirneria no atenuada, puede conducir a una inmunidad en el animal anfitrión en pocos ciclos vitales parasitarios.

Aunque no está limitada de ninguna manera por ningún mecanismo de acción particular, la presente invención se ajusta a la presencia de un efecto sinérgico en el sistema inmunológico del anfitrión que se produce a través de la vacunación de un animal anfitrión con una vacuna que comprende dos ó más cepas de una especie elegida de un género Coccidia, por ejemplo, Eirneria, en donde por lo menos dos de las cepas tienen un período asincrónico de incubación. Tal período asincrónico de incubación permite que el proceso de. inmunización proceda más rápidamente que el encontrado al utilizar cualquier cepa separada debido al efecto de refuerzo de las manifestaciones alternantes. De hecho, la sucesión más rápida de la manifestación facilita el proceso de inmunización recurrente aumentando la frecuencia de la disponibilidad de los oocistos generados recientemente para que el anfitrión los injiera. El efecto de refuerzo, llamado en la presente como "efecto de eco", puede de tal modo producir una inmunidad temprana para el animal anfitrión.

Por lo tanto, en un aspecto, la presente invención proporciona una vacuna que comprende una cepa atenuada que tiene un período de incubación más corto, junto con una cepa no atenuada de la misma especie que tiene un período de incubación más largo, pero una capacidad mucho mayor de replicar y contaminar el ambiente con una nueva generación de oocistos. Tal vacuna ejemplar de la presente invención incluye dos cepas (o líneas) distintas de Eimeria máxima, una cepa atenuada, precoz derivada de la misma semilla principal usada para producir la vacuna vendida bajo el nombre, PARACOX®, y una cepa no atenuada, derivada de la semilla principal usada para producir la vacuna vendida bajo el nombre, COCCIVAC®. Ambas cepas proporcionan eficacia contra un desafío en el campo de E. máxima. Sin embargo, la vacunación con una cepa no atenuada da lugar a una parvada de pollos de engorde que muestran una inmunidad completa antes de. concluir 3 semanas, mientras que la vacunación con las vacunas precoces y/o atenuadas tarda por lo menos cuatro semanas en establecerse completamente.

Debido a las diferentes longitudes de sus períodos previos a la manifestación, la inmunidad temprana para el animal anfitrión se puede obtener con el efecto de eco. Así, creando un estímulo asincrónico de la inmunorespuesta, es decir, un efecto de eco, las cepas combinadas de Eimeria máxima pueden estimular una exposición más prolongada del antígeno al sistema ¡nmunológico y de tal modo, acelerar el proceso de desarrollo de la inmunidad protectora.

De hecho, la administración de las dos cepas juntas puede crear un aumento de la eficacia del proceso de inmunización. Los oocistos no atenuados y precoces comienzan simultáneamente sus ciclos vitales respectivos en el anfitrión, pero la cepa no atenuada termina su período de incubación entre 11 a 31 horas después que la cepa precoz. La cepa no atenuada también libera un número significativamente más grande de oocistos en las heces.

Así, la cepa precoz termina primero su ciclo vital en el anfitrión, para de tal modo iniciar la inmunorespuesta del anfitrión. Los oocistos precoces entonces se excretan, esporulan, y después de ser ingeridos por el anfitrión, comienzan su segundo ciclo vital. Al mismo tiempo, el primer ciclo vital de la cepa no atenuada continúa produciendo una o más generaciones adicionales de esquizontes, para finalmente dar por resultado la formación de gametocitos, para reforzar y ampliar la inmunorespuesta iniciada por la cepa precoz. Los oocistos no atenuados excretados entonces se esporulan en la carnada, y son injeridos por un anfitrión que esta listo para hospedar a la cepa precoz que experimenta su segundo ciclo vital. Estos ciclos vitales asincrónicos simultáneos así sirven para disminuir el tiempo requerido para alcanzar la inmunidad sólida en el anfitrión. El proceso total también puede permitir que las vacunas contengan pocos oocistos no atenuados en la dosis inicial, dando por resultado una disminución del número y/o una disminución de la gravedad de las lesiones formadas en el intestino del anfitrión debido a la infección de la cepa no atenuada.

El uso de los términos singulares para la conveniencia en la descripción de ninguna manera se piensa como limitante. Así, por ejemplo, la referencia a una composición que comprende "una cantidad" incluye la referencia a una o más de tales cantidades. Además, la referencia a un "oocisto" incluye la referencia a una pluralidad de tales oocistos, a menos que se indique lo contrario.

Según lo utilizado en la presente los siguientes términos deben tener las definiciones establecidas a continuación: Los términos "adyuvante" y "estimulante inmunológico" se utilizan alternativamente en la presente, y se definen como una o más sustancias que causan el estimulo del sistema inmunológico. Los adyuvantes son agentes que aumentan de manera no específica una inmunorespuesta a un antígeno particular, reduciendo así la cantidad de antígeno necesaria en cualquier vacuna específica, y/o la frecuencia de la inyección necesaria para generar una inmunorespuesta adecuada al antígeno de interés, en este contexto, un adyuvante es utilizado para aumentar una inmunorespuesta a uno o más antígenos/aislados de vacuna. Un adyuvante se puede administrar al animal objeto antes, en combinación con, o después de la administración de la vacuna.

Según lo ¡"utilizado en la presente el término "aproximadamente" se utiliza alternativamente con el término "casi" y significa que un valor está dentro de cincuenta por ciento del valor indicado es decir, una composición que contiene "aproximadamente" 100 oocistos contiene de 50 a 150 oocistos.

Según lo utilizado en la presente, una cepa "atenuada" de una especie de un género de Coccidia (tal como "Eimeria atenuada") es una cepa que se ha seleccionado por su patogenicidad reducida en el anfitrión. Tal atenuación se puede alcanzar por un número de medios que incluyen el paso serial (tal como un paso serial de embrión), mutagénesis química, y por métodos de irradiación.

Según lo utilizado en la presente, una cepa "precoz" de una especie de un género Coccidia (tal como una "Eimeria precoz") es una cepa que tiene un período de incubación acortado con relación a la cepa no atenuada de la misma especie. Una cepa precoz puede también ser una cepa atenuada.

Según lo utilizado en la presente, una cepa "natural" de una especie de un género Coccidia (tal como una "Eimeria natural") es un aislado de campo que no ha sido alterado por el paso de atenuación o por cualquier otro tratamiento que incluye la selección por: aislamiento de un solo oocisto, tolerancia inmunológica, u otro proceso segregativo.

Según lo utilizado en la presente, una cepa "no atenuada" de una especie de un género Coccidia (tal como "Eimeria no atenuada") es una cepa que no tiene un período de incubación acortado ni una patogenicidad reducida en el anfitrión con relación a la cepa natural de la misma especie.

Según lo utilizado en la presente, "cepa" de una especie de un género Coccidia (por ejemplo, una especie de Eimeria) es una población secundaria de la especie del género Coccidia que se puede distinguir de la población general de esa especie por una o más de las siguientes características: patogenicidad, inmunogenicidad, período de incubación, y/o una población resultante de la expansión de un solo oocisto.

El término "periodo asincrónico de incubación" se refiere a periodos de incubación de dos o más especies de un género Coccidia y/o dos o más cepas de úna especie de un género Coccidia que se diferencian por 10% o más. En una modalidad particular, dos o más especies de un género Coccidia y/o dos o más cepas de una sola especie de un género Coccidia tienen períodos asincrónicos de incubación que se diferencian por 20% o más. En aún otra modalidad, dos o más especies de un género Coccidia y/o dos o más cepas de una sola especie de un género Coccidia tienen períodos asincrónicos de incubación que se diferencian por 25% o más.

Con referencia a los períodos asincrónicos de incubación para las cepas precoces y/o atenuadas con las cepas no atenuadas que se diferencian por un porcentaje (%) de tiempo, el porcentaje se basa en el periodo de incubación de la cepa no atenuada. Así, cuando una cepa no atenuada de un género Coccidia tiene un período de incubación de 120 horas y una cepa precoz de la misma especie del género Coccidia tiene un período de incubación de 108 horas, las dos cepas tienen períodos asincrónicos de incubación que se diferencien por 10%.

El término "aves domesticadas" según lo utilizado en la presente, a menos que se indique lo contrario, incluye pollos, pavos, patos, aves de caza (incluyendo, pero sin limitarse a, codornices, faisanes, y gansos) y aves rátidas (que incluye, pero sin limitarse a emú y avestruces).

El término "Eimeria", según lo utilizado en la presente, a menos que se indique lo contrario, significa una o más especies del género Eimeria que infectan las aves domesticadas. Las especies Eimeria incluyen aquellas que se encuentran en pollos, e incluyen, por ejemplo, E. tenelia, E. acervuiina, E. máxima, E. necatrix, E. mitis, E. praecox, E. mivati y E. brunetti, y también aquellas que se encuentran en pavos, incluyendo E. meleagrimitis, E. adenoeides, E. gallopavonis, E. dispersa, E. meleagridis, E. innocua, y E. subrotunda, y también las especies de Eimeria que infectan otros aves domesticados según lo definido anteriormente. El término "Eimeria" también incluye todas las cepas de la especie anteriores de Eimeria, incluyendo, pero sin limitarse a, cepas precoces, y cepas atenuadas, que también incluyen las cepas que se han irradiado, o tratado de otra manera, para que no puedan completar el desarrollo. El término Eimeria adicionalmente incluye cualquier cepa o especie de Eimeria descubierta recientemente que infecte las aves domesticadas según lo definido anteriormente.

El término "enquistado" significa la etapa de oocisto del parásito protozoo.

Según lo utilizado en la presente, los términos "inmunizan" y "vacunan" son sinónimos y se utilizan alternativamente. El término "dosis de inmunización efectiva", según lo utilizado en la presente, a menos que se indique lo contrario, significa el número de esporozoos en cualquier etapa en su ciclo vital incluyendo las mezclas de una o más, o incluso todas etapas de sus ciclos vitales, por ejemplo, esporozoítos, oocistos y/o merozoítos, o, cuando se mezclan, por ejemplo, el número de esporozoítos, oocistos y merozoítos, suficientes para producir una reacción inmunológica en los animales vacunados, por ejemplo, producen una elevación de los títulos de anticuerpo correspondientes y/o una activación de la inmunidad de medición celular. Preferiblemente, la reacción inmunológica que es producida proporciona la inmunidad protectora que limita o reduce los síntomas clínicos de la enfermedad, pérdida de peso, morbosidad, y/o mortalidad en los animales vacunados (por ejemplo, aves) cuando se someten a un desafío con una dosis virulenta de esporozoos (por ejemplo, Eimeria o Cryptosporidia) .

Los términos "oocistos", "merozoítos" y "esporozoítos", según lo utilizado en la presente, y a menos que se indique lo contrario, significan viable, es decir, oocistos, merozoítos y esporozoítos vivos de Coccidia (por ejemplo Eimeria o Cryptosporidia) , que pueden ser atenuados o no atenuados.

El término "inmunidad sólida" se- utiliza alternativamente en la presente con el término "inmunidad completa" y denota un grado de inmunidad impartido a un grupo de animales vacunados (por ejemplo, una parvada de aves vacunadas) que proporcione la protección contra un desafío homólogo tal que los animales vacunados son estadísticamente similares a los animales de control no desafiados (y/o estadísticamente diferentes a los animales de control desafiados no vacunados) en salud y rendimiento según lo medido mediante por ejemplo, conversión de alimentación, aumento de peso, y/o lesiones (visibles o microscópicas) de la coccidiosis.

El término "estadísticamente similar" según lo utilizado en la presente denota que una comparación estadística de los dos grupos o poblaciones de animales daría lugar a la aceptación de la hipótesis nula (o hipótesis de no diferencia) a un nivel de importancia de <0.1.

El término "estadísticamente diferente" según lo utilizado en la presente denota que una comparación estadística de los dos grupos o poblaciones de animales daría lugar al rechazo de la hipótesis nula (o hipótesis de no diferencia) a un nivel de importancia de < 0.1.

El término "esporocisto" se refiere a la cápsula que incluye los esporozoítos en el oocisto.

Sujetos animales El animal que se tratará es preferiblemente, pero no exclusivamente, un vertebrado, y preferiblemente un mamífero, ave o pez. Cualquiera de las vacunas de la invención se puede administrar al sujeto animal. Los sujetos animales apropiados incluyen aquellos en la naturaleza, ganado (por ejemplo, criados para obtener carne, leche, mantequilla, huevos, piel, cuero, plumas y/o lana), bestias de carga, animales de investigación, animales de compañía, así como aquellos criados en zoológicos, ambientes naturales y/o circos.

Los pájaros (aves) tratados o protegidos por las vacunas de la invención se pueden asociar a la avicultura comercial o no comercial. Éstos incluyen por ejemplo, Anatidae, tal como cisnes, gansos, y patos, Columbidae, por ejemplo, palomas y pichones, tal como pichones domésticos, Phasianidae, por ejemplo, codorniz, perdiz, urogallo, faisanes, y pavos, Thesienidae, por ejemplo, pollos domésticos, Psittacines, por ejemplo, pericos, guacamayos, y loros, por ejemplo, criados para el mercado de mascotas o coleccionista, entre otros.

Los sujetos mamíferos incluyen bovinos (por ejemplo, ganado o vacas lecheras), porcinos (por ejemplo, puercos o cerdos), ovinos (por ejemplo, cabras u ovejas), equinos (por ejemplo, caballos), caninos (por ejemplo, perros), felinos (por ejemplo, gatos domésticos), camellos, ciervos, antílopes, conejos, conejillos de Indias y roedores (por ejemplo, ardillas, ratas, ratones, jerbos, y hámsters), cetáceos (ballenas, delfines, marsopa), pinípedos (focas, morsas).

Los peces pueden también ser el sujeto para las vacunas de la presente invención. Para los propósitos de la presente invención, el término "pez" será entendido como que incluye sin limitación, el grupo Teieosti de peces, es decir teleósteos. La clase Saimoniformes (que incluye la familia Salmonidae) y la clase Perciformes (que incluye la familia Centrarchidae) son contenidas dentro del grupo Teieosti. Los ejemplos de los receptores peces potenciales incluyen la familia Salmonidae, Serranidae, Sparidae, Cichlidae, Centrarchidae, ronco japonés (Parapristipoma trilineatum), y el Plecostomus ojos azules (Plecostomusspp) , entre otros. Aún otros ejemplos de los peces que se pueden tratar incluyen, pero no se limitan a, bagre, róbalo, atún, fletán, trucha alpina, esturión, rodaballo, platija, lenguado, carpa, tilapia, lubina, anguila, pargo, limanda, coronado, mero y serviola.

A n t í q e n o s Los oocistos naturales son obtenibles de las heces o tejido de animales infectados; alimentación o agua contaminada; suelo; cama o lecho de corral; o una variedad de otras fuentes. Se conocen los métodos para aislar los esporocistos y oocistos. Los procedimientos exactos usados para separar los oocistos variarán con el material del cual se obtienen los oocistos y serán fácilmente evidentes para los expertos en la técnica. Los merozoítos se pueden desarrollar en un cultivo por métodos de acuerdo con lo descrito por ejemplo, en el documento US 7,250,286 B2.

Un método disponible para aislar los organismos de las muestras ambientales naturales es como sigue: La etapa inicial es la separación dé los esporocistos y/o oocistos de la materia externo. El estiércol o excremento es procesado generalmente formando una mezcla con la solución salina saturada y separando los esporocistos y/o oocistos de la mezcla. Por ejemplo, el material que se procesará se mezcla con un mínimo de 2 volúmenes (peso/volumen) de NaCI acuoso saturado para formar una mezcla. En caso de ser necesario, la mezcla se puede procesar en un mezclador o licuadora hasta que se alcance una consistencia homogénea. La mezcla se centrifuga a aproximadamente 800 x g durante 10 minutos a 4°C. El sobrenadante es recolectado al verterlo a través de una capa doble de estopilla tejida de 24 x 24. Otros métodos para purificar los oocistos de las muestras que son usados comúnmente incluyen flotación de sucrosa en solución de Sheather y flotación de zinc-sulfato, [por ejemplo, ver LR Ash and TC Orihel, Parasites: A Guide toLaboratoryProcedures and Identification, ASCP Press © 1991].

El sobrenadante filtrado se diluye con dos volúmenes de agua potable y se somete a centrifugación a aproximadamente 1600 x g durante 10 minutos a 4°C. Los oocistos granulados se lavan con agua y son granulados por centrifugación según lo descrito tres veces adicionales. Los oocistos entonces se lavan tres veces en 2.5% de dicromato de potasio usando el mismo procedimiento usado para los lavados con agua. Después del lavado final, los oocistos se pueden almacenar en 2.5% de dicromato de potasio a 4°C o transferirse a un envase para la esporulación.

Alternativamente, la filtración secuencial se puede utilizar para aislar los oocistos con base en el tamaño. Si se utiliza la filtración, los oocistos se lavan con agua y 2.5% de dicromato de potasio según lo descrito previamente.

Las líneas no atenuadas que se originaron como aislados de campo naturales se han mantenido en ajustes de laboratorio por paso serial durante muchos años y caracterizado bien como bajas a medias en patogenicidad, con una fecundidad media a alta, períodos de incubación definidos y patrones conocidos de liberación desde el anfitrión.

Además de las líneas de Eimeria precoces existentes, según lo ejemplificado en el documento US 5,055,292, cuyo contenido es incorporado en este medio por referencia en su totalidad, las líneas precoces también se pueden obtener de cepas madre naturales virulentas o cepas no atenuadas después del paso serial en pollos. En tal caso, los oocistos se recolectan de las heces solamente durante las primeras horas después de la manifestación. En esta manera, el periodo de incubación se puede reducir progresivamente. Este tipo de paso es llamado paso de selección. Alternativamente, para aumentar los números de oocistos disponibles para la cosecha, puede ser ventajoso recolectar los oocistos a la vez entre el inicio de la manifestación y el periodo de incubación aproximado de la cepa madre. Este tipo de paso es llamado un paso neutral. Finalmente, en el proceso conocido como paso relajado, virtualmente todos los oocistos se recolectan, incluyendo aquellos producidos posteriormente en comparación con el periodo de incubación de la cepa madre.

Vacunas Sistema de grupo de semillas Las semillas principales de cada línea de Eimeria no atenuada o atenuada, por ejemplo, se pueden almacenar en nitrógeno líquido. Una semilla de trabajo se puede preparar a partir de una muestra de cada semilla principal después de la inoculación en el anfitrión, por ejemplo, pollos SPF. Los oocistos se pueden recuperar de las heces y/o intestino grueso del anfitrión para generar las semillas de trabajo. Las semillas de trabajo se almacenan a 4°C y se utilizan para iniciar cada producción de vacuna. Las semillas de trabajo tienen una vida útil de 6 a 12 meses después de lo cual se deben sustituir. Cuando se prepara la semilla de trabajo, los oocistos se cosechan solamente hasta aproximadamente el periodo de incubación de la cepa madre natural para esas especies, es decir, paso neutral. Cuando se prepara la vacuna, los oocistos se cosechan a través del período de manifestación de la infección, es decir, paso relajado.

Criamiento de pollos Los pollos son incubados a partir de los huevos obtenidos de una parvada SPF certificada. Son mantenidos libres de Coccidia durante el criamiento hasta una edad apropiada para la producción de vacunas, comúnmente 1-12 semanas de edad. Los pollos son entonces: transferidos al alojamiento de producción de vacunas, asignados por grupos en habitaciones separadas, o transferidos a aisladores designados para cada especie Eimeria.

Inoculación Cada grupo de aves se inocula oralmente con una dosis de semilla de trabajo determinada previamente. La inoculación se puede configurar dé acuerdo con un horario escalonado para que solamente una especie de Eimeria sea cosechada y procesada en un día laborable dado.

Cosecha Se recolectan las heces, aunque el tiempo y duración de la recolección varíe de especie a especie. Una mezcla de heces (y/o contenido del intestino grueso) se hace en agua que entonces se homogeneiza. El homogenado se lava a través de un tamiz de 150 micrones y los lavados son centrifugados en una centrifugadora de tazón de flujo continuo. El depósito centrifugado fue suspendido nuevamente en la solución de sal saturada y fue centrifugado nuevamente. El sobrenadante se recolecta, diluye con agua y pasa una tercera vez a través de la centrifugadora. El depósito se suspende nuevamente en una solución de 2% de dicromato de potasio.

Esporulación La suspensión de oocisto en la solución de dicromato de potasio se incuba a 29°C durante 48 horas con aireación forzada para esporular los oocistos. Después de la esporulación la solución de dicromato es eliminada por centrifugación y los oocistos se tratan con 10% de Chiorox (solución de hipoclorito de sodio) durante 10 minutos. Los oocistos tratados se suspenden nuevamente en agua y formalina y se agregan a una concentración de 0.05%. La suspensión se almacena a 4°C, Mezcla Se hace el conteo de oocistos de cada suspensión de solución a granel de oocisto y los volúmenes calculados de cada suspensión se mezclan con un agente de suspensión para producir una vacuna de múltiples componentes con los oocistos de cada especie presente en las proporciones deseadas. La vacuna se llena en los envases finales y se almacena a 4°C.

Adyuvante Algunas composiciones de vacuna de la presente invención pueden incluir un adyuvante farmacéuticamente aceptable. Los adyuvantes de la presente invención se pueden obtener de cualquiera de un número de fuentes que incluyen fuentes naturales, fuentes recombinantes, y/o sintetizarse químicamente, etc. Los adyuvantes convenientes para la vacunación de animales incluyen, pero no se limitan a, Adjuvant 65 (que contiene aceite de cacahuete, monooleato de manida y monoestearato de aluminio); adyuvante completo o incompleto de Freund; geles minerales, compuestos de aluminio tal como hidróxido de aluminio, fosfato de aluminio, y alumbre; tensioactivos, tal como hexadecilamina , octadecilamina, lisolecitina, bromuro de dimetildioctadecilamonio, N,N-dioctadecil-N',N'-bis(2-hidroximetil)propandiamina, metoxihexadecilglicerol, y polioles plurónicos; polianiones, tal como piran, sulfato de dextrano, IC de polietileno, ácido de poliacrílico; péptidos, tales como dipéptido de muramilo y tuftsina; y emulsiones de aceite. La información referente a los adyuvantes es descrita, por ejemplo, en la serie por P. Tijssen (Practice and Theory of Enzyme immunoassays, 3rd Edition, Elsevier, New York, (1987)).

Otros adyuvantes potenciales incluyen, pero no se limitan a aceites metabolizables y no metabolizables, polímeros de bloque, ISCOM (complejos estimulantes inmunológicos), vitaminas y minerales (incluyendo pero sin limitarse a: vitamina E, vitamina A, selenio, y vitamina B12), Quil A (saponinas), polímeros de ácido acrílico reticulados con éteres depolialquenilo o divinilglicol, según lo vendido bajo la marca registrada CARBOPOL® (por ejemplo, CARBOPOL® 941), y pequeñas gotas micrométricas de aceite uniformemente dispersas en la emulsión de agua (por ejemplo, según lo vendido bajo la marca registrada Emulsigen®).

Los ejemplos adicionales de los adyuvantes, que ocasionalmente se han referido específicamente como estimulantes inmunológicos, incluyen componentes de la pared celular bacterianos y fúngicos (por ejemplo, lipopolisacáridos, lipoproteínas, glicoproteínas, muramilpéptidos, befa-1 ,3/1 ,6-glucanos), varios carbohidratos complejos derivados de plantas (por ejemplo, glicanos, acemanano), varias proteínas y péptidos derivados de animales (por ejemplo, hormonas, citosinas, factores co-estimulantes), y nuevos ácidos nucléicos derivados de virus y otras fuentes (por ejemplo, ARN de doble filamento, CpG). Además, cualquier número de combinaciones de las sustancias ya mencionadas puede proporcionar un efecto adyuvante, y por lo tanto, puede formar un adyuvante de la presente invención.

Una vacuna de la presente invención es administrada fácilmente por cualquier ruta incluyendo vacunación oral (por ejemplo, por gotas oculares, intranasal, en alimentación, en agua, o por rocío), en el huevo, tópica, o por inyección (por ejemplo, intravenosa, subcutánea, intramuscular, intraorbital , infraocular, intradérmica, e intraperitoneal). El experto en la técnica apreciará que la composición de vacuna preferiblemente sea formulada apropiadamente para cada tipo de receptor animal y ruta de administración .

Aunque las vacunas de la presente invención ejemplifican la Eimeria, las vacunas de la presente invención también se pueden construir con especies y/o cepas no atenuadas y atenuadas y/o precoces de las especies de los géneros estrechamente relacionados: Isospora, Cystolsospora, y Cryptosporidium , respectivamente.

Ejemplo 1 Vacuna que comprende una cepa de E. máxima atenuada y no atenuada Cepas de E. máxima Eimeria máxima MFP: Tiene aproximadamente un período de incubación de 96 horas (una reducción de hasta 25 horas a partir del periodo de incubación de 121 horas de la cepa madre). El periodo de cosecha puede ser de entre 104-110 horas, por ejemplo, 108-110, horas (4.5-4.58 días). Los gametocitos aparecen a aproximadamente 72 horas o antes después de la infección. Los tamaños promedio de los esquizontes y los números promedio de merozoítos en los mismos son sustancialmente similares a los de la cepa madre.

Coccivac de Eimeria máxima tienen un período de incubación de aproximadamente 121 horas y los oocistos producidos se pueden cosechar entre 144 y 192 horas.

Formulación de vacuna: Los oocistos se cosechan según lo descrito anteriormente y después se esporulan. Los grupos de producto de los oocistos esporulados de título conocido, se seleccionan para proporcionar el número deseado de oocistos esporulados por volumen. La preparación de la vacuna es completada transfiriendo las suspensiones de oocistos a un envase estéril y después agregando cuantitativamente a ese envase una solución de 2.5% de dicromato de potasio. La vacuna se distribuye de manera estéril en los envases, que entonces se sellan.

Se debe entender que esta invención no está limitada a las configuraciones, etapas de proceso, y materiales particulares descritos en la presente como tal las configuraciones, etapas de proceso, y materiales pueden variar parcialmente. También se debe entender que la terminología utilizada en la presente es usada para el propósito de describir las modalidades particulares solamente y que no está pensada como una limitante, puesto que el alcance de la presente invención está limitado solamente por las reivindicaciones anexas y equivalentes de las mismas.

Claims (26)

REIVINDICACIONES

1. Una composición de vacuna, que comprende una primera cepa de una especie de un género Coccidia y una segunda cepa de tal especie; en donde la primera cepa y la segunda cepa tienen un período asincrónico de incubación.

2. La vacuna de la reivindicación 1, en donde el género se selecciona del grupo que consiste de Isospora, Cystolsospora, Cryptosporidium , y Eimeria:-

3. La vacuna de la reivindicación 2, en donde el género es Eimeria.

4. La vacuna de la reivindicación 3, en donde la primera cepa es una cepa de Eimeria no atenuada y la segunda cepa es una cepa de Eimeria precoz.

5. La vacuna de la reivindicación 4, en donde la cepa de Eimeria precoz es una cepa de Eimeria atenuada.

6. La vacuna de la reivindicación 4, que comprenden los oocistos no atenuados de Eimeria y oocistos precoces de Eimeria.

7. La vacuna de la reivindicación 6, en donde la cantidad de oocistos no atenuados de Eimeria es de aproximadamente 10 a aproximadamente 1000.

8. La vacuna de la reivindicación 6, en donde la cantidad de oocistos precoces de Eimeria es de aproximadamente 100 a aproximadamente 10,000.

9. La vacuna de la reivindicación 8, en donde la cantidad de oocistos no atenuados de Eimeria es de aproximadamente 10 a aproximadamente 1000.

10. La vacuna de la reivindicación 8, que adicionalmente comprende los merozoítos no atenuados de Eimeria y esporozoítos, y merozoítos y esporozoítos precoces de Eimeria.

11. La vacuna de la reivindicación 4, en donde la especie de Eimeria se selecciona del grupo que consiste de E. tenelia, E. acervuiina, E. máxima, E. necatrix, E. mitis, E. praecox, E. mivati y E. brunetti.

12. La vacuna de la reivindicación 11, en donde la especie de Eimeria es E. máxima.

13. La vacuna de la reivindicación 12, que comprende adicionalmente una o más especies adicionales de Eimeria seleccionadas del grupo que consiste de E. tenelia, E. acervuiina, E, máxima, E. necatrix, E. mitis, E. praecox, E. mivati y E. brunetti.

14. La vacuna de la reivindicación 3, que adicionalmente comprende una o más cepas adicionales de un género Coccidia seleccionadas del grupo que consiste de Isospora, Cystolsospora, y Cryptosporidium.

15. La vacuna de la reivindicación 14, en donde el género de Coccidia es Cryptosporidium y uno o más cepas adicionales de Cryptosporidium incluyen una cepa no atenuada de una especie de Cryptosporidium y una cepa precoz de la especie de Cryptosporidium.

16. La vacuna de la reivindicación 4, en donde la especie de Eimeria se selecciona de E. meleagrimitis, E. adenoeides, E. gallopavonis, E. dispersa, E. meleagridis, E. innocua, y E. subrotunda .

17. La vacuna de la reivindicación 2, en donde la primera cepa es una cepa no atenuada y la segunda cepa es una cepa precoz.

18. La vacuna de la reivindicación 17, en donde el género es Cryptosporidium .

19. La vacuna de la reivindicación 18, que adicionalmente comprende una cepa no atenuada de una especie de Isospora y una cepa precoz de la especie de Isospora.

20. Un método para inmunizar a un sujeto animal contra la coccidiosis que comprende administrar al animal una cantidad inmunológicamente efectiva de la vacuna de la reivindicación 1.

21. El método de la reivindicación 20, en donde la vacuna se administra oralmente.

22. El método de la reivindicación 21 , en donde la vacuna es administrada oralmente por un método seleccionado del grupo que consiste de agregar la vacuna al agua para beber del animal, agregar la vacuna al alimento del animal, aplicar la vacuna al ojo del animal, y rociar la vacuna sobre el animal.

23. El método de la reivindicación 20, en donde la vacuna se administra en el huevo.

24. El método de la .reivindicación 20, en donde el animal es un ave domesticada.

25. El método de la reivindicación 24, en donde el ave domesticada se selecciona del grupo que consiste de un pollo, pavo, pato, y un ave de caza.

26. El método de la reivindicación 25, en donde el ave domesticada es un pollo.