MX2007006157A

MX2007006157A - Mutacion novedosa implicada en el aumento de la tolerancia a los herbicidas imidazolinona en las plantas.

Info

Publication number: MX2007006157A
Application number: MX2007006157A
Authority: MX
Inventors: Iwona Birk; Bijay Singh; John Moffatt; Rob Bruns
Original assignee: Basf Agrochemical Products Bv
Priority date: 2004-12-01
Filing date: 2005-12-01
Publication date: 2009-02-16
Also published as: CN101443450B; RU2525933C2; JP5535438B2; RU2007124688A; BRPI0518764A2; AU2005311754A1; AR051690A1; AU2005311754B2; WO2006060634A3; EP1824981A2; CN101443450A; US20090029860A1; WO2006060634A2; JP2008521443A; AR078072A2; EP1824981A4; CA2588900A1; CA2588900C; UA97623C2; US9175299B2

Abstract

La presente invención se refiere a ácidos nucleicos que codifican polipéptidos que confieren a la planta una tolerancia a un inidazolinona y/u otros herbicidas inhibidores del ácido hidroxiacético sintasa (AHAS) cuando se expresa en las plantas. La presente invención brinda además plantas que presentan una tolerancia aumentada a un imidazolinona y/u otros herbicidas inhibidores de AHAS. Más especialmente, la presente invención incluye plantas que contienen al menos un ácido nucleico IMI. La presente invención incluye además semillas producidas por estas plantas y métodos para controlar las malezas en las zonas aledañas a estas plantas de trigo.

Description

MUTACIÓN NOVEDOSA IMPLICADA EN EL AUMENTO DE LA TOLERANCIA A LOS HERBICIDAS IMIDAZOLINONA EN LAS PLANTAS CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención, en términos generales, se refiere a las plantas que presentan un aumento de tolerancia a los herbicidas imidazolinona. Más específicamente, la presente invención se refiere a las plantas que se obtienen mediante la mutagénesis, cruzamiento, y transformación que presentan un aumento de tolerancia a los herbicidas imidazolinona. ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN La ácido hidroxiacético sintasa (AHAS; EC 4.1.3.18; acetolactato sintetasa (ALS)), codificada por el ácido nucleico Ais, es la primera enzima que cataliza la síntesis bioquímica de los aminoácidos de cadena ramificada valina, leucina e isoleucina (Singh B.K. (Ed) Aminoácidos de las plantas. ("Plant A inoacids') Marcel Dekker, Inc. Nueva York, Nueva York. Páginas 227-247). AHAS constituye el sitio de acción de cuatro familias de herbicidas estructuralmente diferentes con inclusión de sulfonilúreas (LaRossa RA y Falco SC, 1984, Tendencias Biotecnológicas {"Biotechnol. Trends"), 2: 158-161 ), imidazolinonas (Shaner y col. , 1984, Fisiología de las plantas ("Plant Physiol. ). 76:545-546), triazolopirimidinas (Subramanian y Gerwick, 1989, Inhibición de acetolactato sintasa por triazolopirimidinas ("Inhibition of acetolactate synthase by triazolopyrimidines') en (ed) Whitaker JR, Sonnet PE, La biocatálisis en la biotecnología agrícola ("Biocatalysys ¡n agricultural biotechnology'). La Serie de Simposios ACS ("ACS Symposium Series'), Sociedad Química Estadounidense ("American Chemical Society"), Washington D.C, páginas 277-288), y pirimidiloxibenzoatos (Subramanian y col., 1990, Fisiología de las Plantas ("Plant Physiol. ') 94:239-244). Los herbicidas imidazolinona y sulfonilúrea son de gran utilización en la agricultura moderna debido a su efectividad en proporciones de aplicación muy bajas y a su relativa falta de toxicidad respecto de los anímales. Medíante la inhibición de la actividad de AHAS, estas familias de herbicidas evitan un subsiguiente crecimiento y desarrollo de plantas susceptibles con inclusión de muchas especies de malezas. Entre algunos de los varios ejemplos de herbicidas de imidazolinona disponibles en el mercado encontramos PURSUIT® (imazetapír), SCEPTER® (imazaquin) y ARSENAL® (imazapir). Entre los ejemplos de herbicidas sulfunilúrea encontramos clorsulfurón, metsulfurón metilo, sulfometurón metilo, clorimurón etilo, tifensulfurón metilo, tribenurón metilo, bensulfurón metilo, nicosulfurón, etanmetsulfurón metilo, rimsulfurón, triflusulfurón metilo, triasulfurón, primisulfurón metilo, cinosulfurón, amidosulfurón, fluzasulfurón, imazosulfurón, pirasulfurón etilo, y halosulfurón. Debido a su elevada efectividad y baja toxicidad, los herbicidas imidazolinona 5 son preferidos para su aplicación por pulverización sobre la parte superior de un área amplia de vegetación. La capacidad de pulverizar un herbicida sobre la parte superior de un rango amplio de vegetación disminuye los costos relacionados con el establecimiento y el mantenimiento de la plantación, y disminuye la necesidad de preparar el lugar antes de utilizar dichos productos químicos. La pulverización por sobre de las especies tolerantes que se desea resulta también en la capacidad para J Q lograr un potencial de rendimiento máximo de las especies deseadas debido a la ausencia de las especies competitivas. Sin embargo, la capacidad de utilizar dichas técnicas de pulverización superior depende de que las especies vegetales del lugar en el que se pretende pulverizar sean tolerantes a imidazolinona. Entre los cultivos agrícolas más importantes existen algunas especies de leguminosas como por ejemplo la soja que son naturalmente tolerantes a los herbicidas imidazolinona debido a su capacidad para metabolizar los compuestos del 1 5 herbicida rápidamente (Shaner y Robson, 985, Ciencia de Maleza ("Weed Sci. ') 33:469-471 ). Otros cultivos, tales como el maíz (Newhouse y col., 1992, Fisiología de las Plantas ("Plant Physiol. '), 100:882-886) y el arroz (Barrett y col., 1989, Defensas de los cultivos contra los herbicidas ("Crop Safeners for Herbicides ), Academic Press New York, páginas 195-220) son susceptibles a los herbicidas imidazolinona. La diferencia en sensibilidad a los herbicidas imidazolinona depende de la naturaleza química del herbicida en particular y la diferencia de metabolismo del compuesto de 20 una forma tóxica a una no tóxica depende de cada planta (Shaner y col., 1984, Fisiología de las Plantas {"Plant Physiol. '). 76:545-546; Brown y col., 1987, Fisiología Bioquímica de Pesticidas ("Pestic. Biochem. Physiol. '). 27:24-29). Otras diferencias fisiológicas de las plantas tales como la absorción y la traslocación también juegan un papel importante en la sensibilidad (Shaner y Robson, 1985, Ciencia de Maleza ("Weed Sci.'). 33:469-471 ). Los cultivos tolerantes a imidazolinonas, sulfonilúreas y triazolopirimidinas se 25 produjeron con éxito mediante la utilización de mutagénesis de semillas, microsporas, polen y de tejidos callosos en Zea mays, Brassica napus, Glycine max, y Nicotiana tabacum (Sebastian y col., 1989, Ciencia del Cultivo ("Crop. Sci. '). 29:1403-1408; Swanson y col., 1989, Teoría Genética Aplicada {"Theor. Appli. Genet. ') 78: 525-530; Newhouse y col. , 1991 , Teoría Genética Aplicada {"Theor. Appli. Genet. ') 83:65-70; Sathasivan y col., 1991 , Fisiología de las plantas (Tlant Physiol. ') 97: 1044-1050; Mourand y col. , 1993, J. Heredity 84:91 -96). En todos los casos, un gen nuclear único y parcialmente dominante confirió la tolerancia. Cuatro plantas de trigo tolerantes a imidazolinona fueron también aisladas previamente luego de la mutagénesís de la semilla de Triticum aestivum L cv Fidel (Newhouse y col., 1992, Fisiología de las Plantas ("Plant Physiol. '), 100:882-886). Estudios hereditarios confirmaron que un gen único parcialmente dominante confirió la tolerancia. En base a estudios de los alelos, los autores llegaron a la conclusión de que la mutación en las cuatro líneas identificadas tuvo lugar en el mismo locus. Uno de los genes de tolerancia del cultivar Fidel se denominó FS-4 (Newhouse y col., 1992, Fisiología de las plantas {"Plant Physiol. '), 100:882-886). La modelación por computadora de las tres conformaciones dimensionales del complejo inhibidor de AHAS predice que existen varios aminoácidos en la cavidad de enlace del inhibidor propuesta como sitios en donde las mutaciones inducidas probablemente confieran una tolerancia selectiva a imidazolinonas (Ott y col., 1996, J. Biología Molecular {"Mol. Biol. ') 263:359-368). Las plantas de tabaco producidas con algunas de estas mutaciones diseñadas racionalmente en los sitios de enlace propuestos de la enzima AHAS de hecho han mostrado una tolerancia específica a una única clase de herbicidas (Ott y col., 1996, J. Biología Molecular {"Mol. Biol. ') 263:359-368). La tolerancia de las plantas a los herbicidas imidazolinona también se informó en varias patentes, Patentes de los Estados Unidos Números 4.761.373, 5.331.107, 5.304.732, 6.21 1.438, 6.2 1.439 y 6.222.100, que describen en términos generales el uso de un ácido nucleico Ais alterado para demostrar una tolerancia a los herbicidas por parte de la plantes, y específicamente divulgan ciertas líneas de maíz tolerantes a imidazolinona. La Patente de los Estados Unidos Número 5.013.659, divulga plantas que muestran tolerancia a herbicidas que presentan mutaciones en al menos un aminoácido en una o más regiones conservadas. Las mutaciones que se describen en ellas codifican ya sea una tolerancia cruzada a imidazolinonas y sulfonilúreas o bien una tolerancia específicamente a sulfonilúreas, pero la tolerancia específica a imidazolinona no se describe. Sumado a ello, la Patente de los Estados Unidos número 5.731.180 y la Patente de los Estados Unidos Número 5.767.361 debaten sobre un gen aislado que presenta una única sustitución de aminoácido en la secuencia de aminoácido AHAS de una monocot en estado natural que trae como resultado la tolerancia específica a imidazolinona. A la fecha, la técnica anterior no ha descripto mutaciones en el gen Als1 que confiere un aumento de la tolerancia a un herbicida imidazolinona que no sea la mutación en la línea de tolerancia a imidazolinona FS-4. La técnica anterior tampoco ha descrito plantas de trigo o de triticales tolerantes que comprendan al menos un ácido nucleico Ais alterado de un cultivar Shiloh de Tritucum aestivum. Por lo tanto, lo que se necesita en la técnica es la identificación de mutaciones adicionales que confieran tolerancia a herbicidas imidazolinona. Lo que también se necesita en la técnica es de plantas de trigo y de triticale que presenten un aumento en la tolerancia a herbicidas tales como imidazolinona y que contengan al menos un ácido nucleico Ais alterado. También se necesitan métodos para el control del crecimiento de malezas en las zonas aledañas a tales plantas de trigo y de triticale. Estas composiciones y estos métodos permitirán la utilización de técnicas de pulverizado superior para la aplicación de herbicidas en las zonas que contienen plantas de trigo y de triticale. DESCRIPCIÓN ABREVIADA DE LA INVENCIÓN La presente invención proporciona plantas de trigo que comprenden ácidos nucleicos IMI, en donde la planta de trigo presenta una tolerancia aumentada a un herbicida imidazolinona en comparación con un tipo silvestre de la planta. Las plantas de trigo pueden contener uno, dos, tres o más alelos IMI. En una realización, la planta de trigo comprende al menos un ácido nucleico IMI. En otra realización, el al menos único ácido nucleico IMI es un ácido nucleico Imi1. En otra realización, el al menos único ácido nucleico IMI comprende un ácido nucleico IMI Triticum aestivum. En otra realización, el al menos único ácido nucleico IMI comprende un ácido nucleico IMI cultivar Shiloh. En aún otra realización, la planta de trigo comprende múltiples ácidos nucleicos IMI ubicados en diferentes genomas. En otra realización, los múltiples ácidos nucleicos IMI comprenden un ácido nucleico Imi1 de Triticum aestivum cultivar Shiloh. Preferentemente, el ácido nucleico Imi1 de cultivar Shiloh codifica una proteína que comprende una mutación en una secuencia de aminoácido conservada seleccionada del grupo formado por un Dominio A, Dominio B, Dominio C, Dominio D, y Dominio E. Más preferentemente, la mutación es en un Dominio C conservado. También se proporcionan partes de plantas y semillas de plantas derivadas de las plantas de trigo que se describen en la presente. La presente invención también proporciona plantas de triticale que comprenden ácidos nucleicos IMI, en donde la planta triticale presenta una tolerancia aumentada al herbicida imidazolinona en comparación con un tipo silvestre de la planta de triticale. En una realización, la planta de tritical comprende al menos un ácido nucleico IMI. En otra realización el al menos único ácido nucleico IMI es un ácido nucleico lm¡1. En otra realización, el al menos único ácido nucleico IMI comprende un ácido nucleico IMI Triticum aestivum de cultivar Shiloh. En otra realización, la planta de trigo comprende múltiples ácidos nucleicos IMI ubicados en diferentes genomas. En aún otra realización, los múltiples ácidos nucleicos IMI comprenden un ácido nucleico Imi1 de cultivar Shiloh. En otra realización, los ácidos nucleicos IMI codifican proteínas que comprenden una mutación en una secuencia de aminoácido conservada seleccionada del grupo formado por un Dominio A, Dominio B, Dominio C, Dominio D, y Dominio E. Más preferentemente, la mutación es en un Dominio C conservado. Aún más preferido, la mutación codifica a un polipéptido que presenta una sustitución de alanina por treonina en la posición 96 del polipéptido ALS. También se proporcionan partes de plantas y semillas de plantas derivadas de plantas de triticale que se describen en la presente. Los ácidos nucleicos IMI de la presente invención pueden comprender una secuencia de polinucleótidos seleccionada del grupo conformado por: un polinucleótido tal como se define en la SEQ ID NO:1 ; una secuencia de polipéptidos que codifica a un polipéptido tal como se defina en SEQ ID NO:2; un polinucleótido que comprende al menos 60 nucleótidos consecutivos de cualquiera de los polinucleótidos que se mencionan precedentemente; y un polinucleótido complementario de cualquiera de los polinucleótidos que se mencionan precedentemente. Las plantas de la presente invención pueden ser plantas transgénicas o no transgénicas. Un ejemplo de una planta de trigo no transgénica que presenta una tolerancia aumentada a un herbicida imidazolinona es la planta de trigo bajo el Número de Denominación de Depósito de Patente ATCC PTA-5625; o un derivado mutante, recombinante o creado genéticamente de la planta bajo el Número de Denominación de Depósito de Patente ATCC PTA-5625; o cualquier progenie de la planta con Número de Denominación de Depósito de Patente ATCC PTA-5625; o una planta progenie de cualquiera de estas plantas. Además de las composiciones de la presente invención, se proporcionan varios métodos. En la presente se describen métodos para modificar la tolerancia que una planta posee al herbicida imidazolinona que comprende la modificación de la expresión de un ácido nucleico IMI en la planta. Además, se describen métodos para la producción de una planta transgénica que presenta una tolerancia aumentada a herbicidas imidazolinona que comprende la transformación de una célula de la planta con un vector de expresión que comprende uno o más ácidos nucleicos IMI y así lograr generar la planta a partir de la célula de la planta. La invención incluye además un método para el control de la maleza que se encuentra en las zonas aledañas a las plantas de trigo o de triticale, que comprende la aplicación de herbicida imidazolinona a las malezas y a las plantas de trigo y de triticale, en donde la planta de trigo o la planta de triticale presentan un aumento de su tolerancia al herbicida imidazolinona en comparación con el tipo silvestre de la planta de trigo o de triticale y en donde la planta comprende uno o más ácidos nucleiclos IMI. En algunas realizaciones preferidas de estos métodos, las plantas comprenden múltiples ácidos nucleicos IMI que se encuentren en diferentes genomas del trigo. También se proporcionana casetes de expresión, vectores de transformación, células huésped no humanas transformadas, y plantas, células de plantas, partes de plantas y semillas transformadas que comprenden uno o más de los ácidos nucleicos IMI de la invención. BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS La Figura 1 muestra una alineación de la secuencia ADNc del ácido nucleico Imi1 Shiloh-8 (SEQ ID NO: 1 ), el ácido nucleico Als1 en estado natural (SEO. ID NO:3), y un consenso de secuencia de ácido nucleico (SEQ ID NO:5). El par de base sustituido en la secuencia Imi1 se indica en negritas. La Figura 2 muestra una alineación de la secuencia de aminoácidos del polipéptido Shiloh-8 IMI1 deducida (SEQ ID NO:2), un polipéptido ALS1 en estado natural (SEQ ID NO:4), y una secuencia de aminoácido consensual (SEQ ID NO:6). El aminoácido sustituido en la secuencia IMI1 se indica en negritas. La Figura 3 es una representación esquemática de las secuencias de aminoácidos conservadas en los genes AHAS implicados en la tolerancia a varios de los inhibidores de AHAS. El sitio específico del aminoácido responsable de la tolerancia se indica mediante un subrayado. (Modificado de Devine, M.D. y Eberlein, C.V., 1997, Aspectos fisiológicos, bioquímicos y moleculares de la tolerancia a los herbicidas en base a sitios objetivo alterados en la Actividad del Herbicida: Toxicidad, Bioquímica y Biología Molecular {"Physiological, biochemical, and molecular aspects of herbicide tolerante based on altered sites in Herbicide Activity: Toxicity, Biochemistry, and Molecular Biology'), IOS Press Ámsterdam, páginas 159-185).

DESCRIPCIÓN DETALLADA La presente invención se dirige a ácidos nucleicos aislados que codifican polipéptidos que confieren una tolerancia aumentada a un herbicida imidazolinona cuando se encuentran expresados en una planta. La presente invención se dirige además a las plantas de trigo o de triticale, a las partes de plantas de trigo o de triticale, y a las células de las plantas de trigo o de triticale que presentan un aumento de la tolerancia a los herbicidas imidazolinona. La presente invención incluye también semillas producidas por las plantas de trigo o de triticale descriptas en la presente y los métodos para controlar las malezas en las zonas aledañas a las plantas de trigo o de triticale que se describen en la presente. Tal como se utiliza en la presente, la expresión "planta de trigo" se refiere a una planta miembro del género Triticum. Las plantas de trigo de la presente invención pueden ser miembros de un género Triticum con inclusión de los siguientes, pero sin limitarse a ellos, T. aestivum, T. turgidum, T. timopheevii, T. monococcum, T. zhukovskyi y T. urartu, e híbridos a partir de ellos. Entre los ejemplos de las subespecies de T. aestivum que se incluyen en la presente invención encontramos aestivum (trigo común), compactum (trigo compacto), macha (trigo macha), vavilovi (trigo vavilovi), spelta y sphaecrococcum ("shot wheat'). Entre los ejemplos de las subespecies de T. turgidum que se incluyen en la presente invención encontramos turgidum, carthlicum, dicoccom, durum, paleocolchicum, polonicum, turanicum y dicoccoides. Entre los ejemplos de las subespecies T. monococcum que se incluyen en la presente encontramos monococcum ("einkorn", trigo diploide) y aegilopoides. En una realización de la presente invención, la planta de trigo es miembro de la especie Triticum aestivum L, y más particularmente, de un cultivar Shiloh. La expresión "planta de trigo" pretende abarcar las plantas de trigo en cualquier punto de maduración o desarrollo, asi como también los tejidos u órganos (partes de las plantas) tomadas de cualquiera de dichas plantas o que resulten de ellas salvo que el contexto expresamente indique lo contrario. Entre las partes de las plantas que se incluyen, encontramos las siguientes, tallos, raíces, flores, óvulos, estambres, hojas, embriones, regiones meristemáticas, tejidos callosos, cultivos de anteras, gametofitos, esporofitos, polen, microsporas, protoplasto, y del estilo, pero no se limita a este listado. La presente invención incluye además las semillas producidas por las plantas de trigo de la presente invención. En una realización, las semillas son verdaderas reproductoras de un aumento de la tolerancia a un herbicida imidazolinona en comparación con las semillas de la planta de trigo en estado natural.

La presente invención comprende además plantas de triticale, partes de plantas de triticale, y células de plantas de triticale que presentan un aumento de la tolerancia a los herbicidas imidazolinona. Tal como se utiliza en la presente, una "planta de triticale" se refiere a una planta que se crea a partir del cruzamiento de una planta de centeno (Sécale cereale) ya sea con una planta de trigo tetraploide (por ejempio, Triticum turgidum) o una planta de trigo hexaploide (por ejemplo, Triticum aestivum). La presente invención además incluye las semillas producidas por las plantas de triticale que se describen en la presente y los métodos para controlar las malezas que se encuentran en las zonas aledañas a las plantas de triticale que se describen en la presente. La presente invención describe una planta de trigo que comprende al menos un ácido nucleico IMI, en donde la planta de trigo presenta un aumento de la tolerancia a un herbicida imidazolinona, en comparación con un tipo silvestre de la planta. Es posible que las plantas de trigo de la presente invención contengan múltiples ácidos nucleicos IMI de diferentes genomas, dado que estas plantas pueden contener más de un genoma. Por ejemplo, una planta de trigo Triticum aestivum contiene tres genomas denominados los genomas A, B y D. Dado que AHAS es una enzima metabólica necesaria, se asume que cada genoma presenta al menos un gen que codifica la enzima AHAS (es decir, al menos un gen Ais), comúnmente visto con otras enzimas metabólicas en trigo hexaploide que fue mapeado. Tal como se utiliza en la presente, la expresión "locus de gen Ais" se refiere a la posición de un gen Ais en el genoma, y las expresiones "gen Ais" y "ácido nucleico Ais" se refieren a un ácido nucleico que codifica la enzima AHAS. El ácido nucleico Ais en cada genoma difiere en su secuencia de nucleótidos de un ácido nucleico Ais en otro genoma. Una persona con experiencia en la técnica puede determinar el genoma de origen de cada ácido nucleico Ais mediante el cruzamiento genético y/o mediante métodos de secuencias o métodos de digestión de exonucleasa conocidos por aquellos con experiencia en la técnica. Tal como se utilizan en la presente, las expresiones "ácido nucleico Als1 ", "ácido nucleico Als2", y "ácido nucleico Als3" se refieren a ácidos nucleicos Ais ubicados en tres genomas diferentes. A los fines de la presente invención, el locus del gen de Als3 se encuentra en el genoma A, el locus del gen del Als2 se encuentra en el genoma B y el locus del gen de Als1 se encuentra en el genoma D. También a los fines de la presente invención, los ácidos nucleicos IMI derivados de los genomas A, B o D se distinguen entre sí y se denominan ácidos nucleicos Imi3, Imi2 o Imi1 , respectivamente.

Tal como se utiliza en la presente, la expresión "ácido nucleico ??G se refiere a un ácido nucleico Ais que presenta una secuencia que es mutada a partir de un ácido nucleico Ais en estado natural y que confiere un aumento de la tolerancia a imidazolinona a la planta en la cual se encuentra expresado. Tal como se utiliza en la presente, las expresiones "ácido nucleico Imi1 ", "ácido nucleico Imi2" y "ácido nucleico Imi3" son ácidos nucleicos IMI que se refieren a los átelos tolerantes a imidazolinona de los genes Als1 , Als2 y Als3, respectivamente. Dado que las plantas de trigo presentan dos copias de cada genoma, una planta de trigo contiene dos copias de cada ácido nucleico Ais en particular. Por ejemplo, una planta de trigo Triticum aestivum, comprende dos copias de cada uno de los genomas A, B y D, y por lo tanto, dos copias de cada uno de los genes Als3, Als2 y Als1. Tal como se utiliza en la presente, la expresión "alelo IMI" se refiere a una única copia de un ácido nucleico IMI en especial. De conformidad, a los fines de la presente invención, una planta de trigo puede presentar dos alelos Imi1 , uno en cada una de las dos copias del genoma D. En otra realización, la planta de trigo comprende múltiples ácidos nucleicos IMI. Tal como se utiliza en la presente, al describir una planta que comprende múltiples "ácidos nucleicos IMI", la frase "múltiples ácidos nucleicos IMI" se refiere a la presencia de diferentes ácidos nucleicos IMI en la planta y no al hecho si la planta es homocigoto o heterocigoto en un locus Ais en especial. Por ejemplo, una planta que contiene múltiples ácidos nucleicos IMI puede comprender un ácido nucleico Imi1 y un ácido nucleico lm¡2, a diferencia de presentar dos copias de un ácido nucleico Imi1 . La clase de ácidos nucleicos Imi1 incluye el gen FS- tal como lo describe Newhouse y col. (1992, Fisiología de las plantas {"Plant Physiol. '). 100:882-886) y el gen Shiloh-8 que se describe en más detalle a continuación. Cada clase Imi puede incluir miembros de diferentes especies de trigo. Por lo tanto, cada clase Imi incluye ácidos nucleicos IMI que presentan una secuencia de nucleótidos diferente pero que no obstante se designan como de origen o de ubicación en el mismo genoma de trigo mediante la utilización de estudios hereditarios tal como es de conocimiento de cualquier persona con experiencia en la técnica. De conformidad, la presente invención incluye una planta de trigo que comprende al menos un ácido nucleico IMI, en donde la planta de trigo presenta una tolerancia aumentada a un herbicida imidazolinona en comparación con un tipo silvestre de la planta y en donde el al menos único ácido nucleico IMI es un ácido nucleico lm¡1. En una realización preferida, el ácido nucleico Imi1 comprende la secuencia de polinucleótidos que se muestra en SEQ ID NO: 1. En otra realización preferida, la planta de trigo comprende múltiples ácidos nucleicos IMI. La presente invención contiene además una planta de triticale tolerante a imidazolinanona. Tal como se utiliza en la presente, una "planta de triticale" se refiere a una planta creada a partir del cruzamiento de una planta de centeno (Sécale cereale) ya sea con una planta de trigo tetraploide (por ejemplo, Triticum turgidum) o una planta de trigo hexaploide (por ejemplo, Triticum aestivum). A los fines de la presente invención, una planta de triticale tolerante a imidazolinona comprende al menos un ácido nucleico IMI, en donde la planta de triticale presenta un aumento de la tolerancia a un herbicida imidazolinona en comparación con la planta en estado natural y en donde el al menos único ácido nucleico IMI es un ácido nucleico Imi1. En una realización preferida, el ácido nucleico Imi1 comprende la secuencia de polinucleótidos de SEQ ID NO: 1. En otra realización preferida, la planta de triticale comprende múltiples ácidos nucleicos IMI. Tal como se utiliza en la presente con relación a los ácidos nucleicos, el término "desde" se refiere a un ácido nucleico "ubicado en" o "derivado de" un genoma en particular. La expresión "ubicado en" se refiere a un ácido nucleico contenido dentro de ese genoma en particular. Como también se utiliza en la presente con relación a un genoma, la expresión "derivado de" se refiere a un ácido nucleico que fue extraído o aislado de ese genoma. El término "aislado" se define en más detalle a continuación.

La presente invención incluye plantas de trigo que comprende uno, dos, tres o más alelos IMI, en donde la planta de trigo presenta un aumento de la tolerancia a un herbicida imidazolinona en comparación con un tipo silvestre de la planta. Los alelos IMI pueden comprender una secuencia de nucleótidos seleccionada del grupo • conformado por un polinucleótido tal como se define en SEQ ID NO: 1 ; un polinucleótido que codifica un polipéptido tal como se define en SEQ ID NO:2; un polinucleótido que comprende al menos 60 nucleótidos consecutivos de cualquiera de los polinucleótidos mencionados precedentemente; y un polinucleótido complementario a cualquiera de los polinucleótidos mencionados precedentemente. La presente invención incluye también plantas de triticale que comprenden uno, dos, tres o más alelos IMI, en donde la planta de triticale presenta un aumento de tolerancia a un herbicida imidazolinona, al comparársela con un tipo silvestre de la planta. Los alelos IMI pueden comprender una secuencia de polinucleótidos seleccionada del grupo conformado por un polinucleótido tal como se define en SEQ ID NO: 1 ; un polinucleótido que codifica un polipéptido tal como se define en SEQ ID NO: 2; un polinucleótido que comprende al menos 60 nucleótidos consecutivos de cualquiera de los polinucleótidcs que se mencionan precedentemente; y un polinucleótido complementario a cualquiera de los polinucleótidos mencionados precedentemente. En una realización, la planta de trigo o la planta de triticale comprende dos ácidos nucleicos IMI diferentes. Preferentemente, el al menos único de los dos ácidos 5 nucleicos es un ácido nucleico Imi1. Más preferentemente, al menos uno de los dos ácidos nucleicos IMI comprende la secuencia de polinucleótidos SEQ ID NO: 1 . En otra realización, la planta de trigo o la planta de triticale comprende un ácido nucleico IMI, en donde el ácido nucleico comprende la secuencia de polinucleótidos de SEQ ID NO: 1. En aún otra realización, la planta de trigo comprende más de dos ácidos nucleicos IMI en donde cada ácido nucleico IMI pertenece a un genoma diferente.

I Q Preferentemente, al menos uno de los ácidos nucleicos IMI comprende una secuencia de polinucleótidos que codifica una sencuencia de polipéptidos de SEQ ID NO:2, o la secuencia de polinucléotidos SEQ ID NO: 1. En una realización preferida de la presente invención, el ácido nucleico IMI aislado codifica una secuencia de aminoácido que comprende una mutación en un dominio que se conserva entre varias proteínas AHAS. Estos dominios conservados se denominan en la presente el Dominio A, Dominio B, Dominio C, Dominio D y 1 5 Dominio E. La Figura 3 muestra la ubicación general de cada dominio en una proteina AHAS. El Dominio A contiene la secuencia de aminoácido AITGQVPRRMIGT (SEQ ID NO:7). El Dominio B contiene la secuencia de aminoácido QWED (SEQ ID NO:8). El Dominio C contiene la secuencia de aminoácido VFAYPGGASMEIHQALTRS (SEQ ID NO:9). El Dominio D contiene la secuencia de aminoácido AFQETP (SEQ ID NO: 10). El Dominio E contiene la secuencia de aminoácido IPSGG (SEQ ID NO: 1 1). La presente invención también contempla el hecho de que pueden existir pequeñas 20 variaciones en los dominios conservados, por ejemplo, en las plantas "plantas ajonjeras", el residuo de serina en el Dominio E se reemplaza por un residuo de alanina. De conformidad, la presente invención incluye plantas de trigo o de triticale que comprenden un ácido nucleico IMI que codifica una secuencia de aminoácido que presenta una mutación dentro de una dominio conservado seleccionado del grupo conformado por un Dominio A, un Dominio B, un Dominio C, un Dominio D, y un 25 Dominio E. En una realización, la planta de trigo o la planta de triticale comprenden un ácido nucleico IMI que codifica una secuencia de aminoácido que presenta una mutación en un Dominio E. Además en otras realizaciones preferidas, las mutaciones en los dominios conservados suceden en las ubicaciones indicadas por lo que sigue que se indica subrayado: AITGVPRRMIGT (SEQ ID NO:7); QWED (SEQ ID NO:8); VFAYPGGASMEIHQALTRS (SEQ ID NO:9); AFQETP (SEQ ID NO:10) e IPSGG (SEQ ID NO: 1 1 ). Una sustitución preferida es de elanina por treonina en el Dominio C. Aún más preferida es la sustitución de alanina por treonina en la posición 96 del polipéptido ALS. La presente invención brinda los métodos para aumentar la tolerancia o la resistencia de una planta, el tejido de la planta, la célula de una planta u otra célula anfitriona a al menos un herbicida que interfiere con la actividad de la enzima AHAS. La presente invención además proporciona plantas, células de plantas, partes de plantas, órganos de plantas, tejidos de plantas, semillas y células anfitrionas con tolerancia a un herbicida al menos, particularmente un herbicida inhibidor de AHAS. Preferentemente, dicho herbicida inhibidor de AHAS es un herbicida imidazolinona, un herbicida sulfonilúrea, un herbicida triazolopirimidina, un herbicida pirimidiniloxibenzoico, un herbicida sulfonilamino-carboniltriazolinona, o una mezcla de ellos. Más preferentemente, dicho herbicida es un herbicida imidazolinona o una mezcla de dos o más herbicidas imidazolinona. Para la presente invención, entre los herbicidas imidazolinona se incluyen, pero no se limitan a los siguientes, PURSUIT® (imazetapir), CADRE® (imazapic), RAPTOR® (imazamox), SCEPTER® (¡mazaquín), ASSERT® (¡mazetabenz), ARSENAL® (imazapir), un derivado de cualquiera de los herbicidas que anteceden, y una mezcla de dos o más de los herbicidas mencionados precedentemente, por ejemplo, imazapir/imazamox (ODYSSEY®). Más específicamente, el herbicida imidazolinona se puede seleccionar, pero no se limita a, ácido 2-(4-isopropil-4-metil-5-oxo-2-imidazolin-2il)-nicotínico, ácido [2-(4-isopropil)-4-] [metil-5-oxo-2-imidazolin-2-il)-3-quinolincarboxílico], ácido [5-etil-2-(4-isopropil-]4-metil-5-oxo-2-imidazolin-2-il)-nicotínico, ácido 2-(4-isopropil-4-metil-5-oxo-2-imidazolin-2-il)- 5-(metoximetil)-nicotínico, ácido [2-(4-isopropil-4-metil-5-oxo-2]-imidazolin-2-il)-5-metilnicotínico, y una mezcla de [6-(4-¡sopropil-4-]metil-5-oxo-2-imidazolin-2-il)-m-toluato de metilo y [2-(4-isopropil-4-met¡l-5-]oxo-2-imidazolin-2-il)-p-toluato de metilo. Se prefiere el uso de ácido 5-etil-2-(4-isopropil-4-metil-5-oxo-2-imidazolin-2-il)-nicotinico y ácido [2-(4-isopropil-4-metil-5-oxo-2-imidazolin-2-]il)-5-(metoximetil)-nicotínico. Particulamente se prefiere el uso ácido [2-(4-¡sopropil-4-]metil-5-oxo-2-imidazolin-2-il)-5-(metoximetil)-nicotínico. Para la presente invención, entre los herbicidas sulfonilúrea se incluye pero no se limita a, clorsulfurón, metsulfurón metilo, sulfometurón metilo, clorimurón etilo, tifensulfurón metilo, tribenuron metilo, bensulfuron metilo, nicosulfurón, etametsulfuron metilo, rimsulfurón, triflusulfurón metilo, triasulfurón, primisulfurón metilo, cinosulfurón, amidosulfurón, fluzasulfurón, imazosulfurón, pirazosulfurón etilo, halosulfurón, azimsulfurón, ciclosulfurón, etoxisulfurín, flazasulfurón, flupirsulfurón metilo, foramsulfurón, iodosulfurón, oxasulfurón, mesosulfurón, prosulfurón, sulfosulfurón, trifloxisulfurón, tritosulfurón, un derivado de cualquiera de los herbicidas que anteceden, y una mezcla de dos o más de los herbicidas que anteceden. Los herbicidas triazolopimiridina de la invención incluyen, pero no se limitan a, cloransulam, diclosulam, florasulam, flumetsulam, metosulam, y penoxsulam. Los herbicidas pirimidiniloxybenzoatos de la invención incluyen, pero no se limitan a, bispirabac, piritiobac, piriminobac, piribenzoxim y piriftalid. Los herbicidas sulfonilamino-carboniltriazolinona incluyen, pero no se limitan a, flucarbazone y propoxicarbazone. ] Se reconoce que los herbicidas pirimidiniloxibenzoico se encuentran relacionados muy de cerca con los herbicidas pirimidiniltiobenzoato y que la Sociedad de Ciencias de Malezas de Estados Unidos ("Weed Science Society of America') los generaliza bajo el título de estos últimos herbicidas. De conformidad, los herbicidas de la presente invención incluyen también herbicidas pirimidiniltiobenzoato, con inclusión de los siguientes, pero sin limitarse a ellos, los herbicidas pirimidiniloxibenzoico que se describen más arriba. Las plantas de trigo que se describen en la presente pueden ser plantas de trigo transgénicas o no transgénicas. En forma similar, las plantas de triticale que se describen en la presente pueden ser plantas de triticale transgénicas o no transgénicas. Tal como se utiliza en la presente, el término "transgénica" se refiere a las plantas, células de plantas, callos, tejido de plantas, o parte de una planta que contiene todo o parte de por lo menos un polinucleótido recombinante. En muchos casos, el polinucleótido recombinada o la parte de éste se encuentran integrado en forma estable en un cromosoma o un elemento extra-cromosómico estable, de manera tal que se transmite a las generaciones siguientes. A los fines de la invención, la expresión "polinucleótido recombinante" se refiere a un polinucleótido que se alteró, reacomodó o se modificó mediante la aplicación de ingeniería genética. Entre los ejemplos de éstos encontramos todos los polinucleótidos clonados, o polinucleótidos, que se encuentran enlazados o ligados a secuencias heterólogas. El término "recombinante" no se refiere a alteraciones de polinucleótidos que resultan de eventos que suceden naturalmente, tales como mutaciones espontáneas, o de mutagénesis no espontáneas seguidas de un mejoramiento genético selectivo. Las plantas que contienen mutaciones resultado de mutagénesis no espontánea y mejoramiento genético selectivo en la presente se denominan plantas no transgénicas y se las incluye en la presente invención. En realizaciones en las cuales la planta de trigo o de triticale es transgénica y comprende múltiples ácidos nucleicos IMI, los ácidos nucleicos se pueden derivar de diferentes genomas o bien del mismo genoma. En forma alternativa, en las realizaciones en las cuales la planta de trigo o la planta de triticale no es transgénica y comprende múltiples ácidos nucleicos IMI, los ácidos nucleicos se encuentran en el mismo genoma o en diferentes genomas. Un ejemplo de un cultivar de planta de trigo no transgénica que comprende un ácido nucleico IMI es el cultivar de la planta presentada bajo el Número de Denominación de Depósito de Patente ATCC PTA-5625 y que en la presente se denomina la línea Shiloh-8. La línea Shiloh-8 contiene un ácido nucleico Imi1. La longitud parcial de la secuencia de nucleótidos que corresponde al gen Shiloh-8 se muestra en la SEQ ID NO: 1. Un depósito de 2500 semillas de la línea Shiloh-8 (designado ¡4417-8) se realizó ante la Recolección de Tipos de Cultivos de Estados Unidos {"American Type Culture Collection"), Virgina, el 30 de octubre de 2003. Estos depósitos se realizaron de conformidad con los términos y las condiciones del Tratado de Budapest, que se refiere al depósito de microorganismos. Los depósitos se realizaron por el plazo de al menos treinta años y de al menos cinco años después de la solicitud más reciente de presentación de una muestra del depósito recibida por la ATCC. Las semillas depositadas recibieron el Número de Designación de Patente de Depósito PTA-5625.

La presente invención incluye la planta de trigo que presenta el Número de Designación de Patente PTA-5625; un derivado mutante, recombinante, o diseñado genéticamente de la planta bajo el Número de Designación de Patente PTA-5625; los progenies de la planta bajo Número de Designación de Patente PTA-5625; y una planta progenie de cualquiera de estas plantas. En una realización preferida, la planta de trigo de la presente invención adicionalmente presenta las características de tolerancia a los herbicidas que posee la planta bajo Número de Designación de Patente PTA-5625. También se incluye en la presente invención los híbridos de las plantas de trigo Shiloh-8 que se describen en la presente y los híbridos de Shiloh-8 con otra planta de trigo. Entre las otras plantas de trigo se incluyen las siguientes, sin limitarse a ellas, T. aestivum L. cv Fidel y las plantas de trigo que alojan un gen mutante FS-1 , FS-2, FS-3 o FS-4 (Ver Patente de los Estados Uní Jo Número 6.339.184 y la Solicitud de Patente de Estados Unidos Número 08/474.832). Los términos "cultivar" y "variedad" se refieren a un grupo de plantas dentro de una especie que se define por el hecho de que comparten un conjunto de características o rasgos comunes que aquellos con experiencia en la técnica aceptan y consideran suficientes como para distinguir a un cultivar o a una variedad de otros cultivares o variedades. En ninguno de los términos se implica que las plantas de cualquier cultivar o variedad en particular sean idénticas genéticamente ni respescto a todo el gen ni a nivel molecular o que cualquier planta en particular será homocigota en todo loci. Un cultivar o una variedad se considera una "mejora verdadera" respecto a una característica en particular, cuando el cultivar o la variedad se auto-poliniza, toda la progenie contiene esa característica. Las expresiones "línea mejorada" o "línea" se refieren a un grupo de plantas dentro de un cultivar que se define porque comparten un conjunto común de características o rasgos que aquellos con experiencia en la técnica consideran y aceptan como suficientes para distinguir una línea mejorada o línea de otras líneas mejoradas o líneas. Ninguna de las expresiones implica que todas las plantas dentro de una línea mejorada o dentro de una línea serán idénticas en términos genéticos ya sea a todo su nivel genético o molecular, o que cualquier planta en particular será homocigoto a todo loci. Una línea mejorada o una línea se considera una "mejora verdadera" respecto a una característica en particular si, cuando la línea mejorada verdadera o la línea de mejora se auto-poliniza, toda la progenie contiene esa característica. En la presente invención, la característica surge de una mutación en un gen Ais de la planta o la semilla de trigo o de triticale. Sumado a ello, en la presente la utilización de los términos "cultivar" y "variedad" no pretende limitar las plantas de la presente invención a una o más variedades de plantas. Mientras que la presente invención abarca variedades de plantas, las plantas de la presente invención incluyen las plantas que comprenden características de tolerancia a herbicidas de la planta bajo el Número de Denominación de Depósito de Patente ATCC PTA-5625 y/o uno o más de los ácidos nucleicos IMI de la presente invención. Se debe entender que la planta de trigo o de triticale de la presente invención puede comprender un ácido nucleico Ais en estado natural además del ácido nucleico IMI. Tal como se describe en el Ejemplo 1 , se contempla que la línea Shiloh-8 contiene una mutación en sólo una de las múltiples isoenzimas AHAS. Por lo tanto, la presente invención incluye una planta de trigo o una planta de triticale que comprende al menos un ácido nucleico IMI además de uno o más ácidos nucleicos Ais en estado natural. Además de las plantas de trigo y de triticale, la presente invención abarca proteínas y ácidos nucleicos IMI asilados. Los ácidos nucleicos comprenden un polinucleótido seleccionado del grupo conformado por un polinucléotido tal como se lo define en SEQ ID NO: 1 ; un polinucleótido que codifica un polipéptido tal como se lo define en SEQ ID NO:2; un polinucleótido que comprende al menos 60 nucleotidos consecutivos de cualquiera de los polinucleótidos antes mencionados; y un polinucleótido complementario a cualquiera de los polinucleótidos mencionados precedentemente. En una realización preferida, el ácido nucleico IMI comprende una secuencia de polinucleótidos de SEQ ID NO: 1. Las expresiones "proteína AHAS", "polipéptido AHAS", "Proteína ALS", y "polipéptido ALS" se refieren a una proteína sintasa del ácido hidroxiacético, y las expresiones "proteína IMI" o "polipéptido IMI" se refieren a una proteína AHAS mulada a partir de una proteína AHAS en estado natural y que confiere un aumento de la tolerancia a imidazolinona a una planta, célula de planta, parte de planta, semilla de planta o tejido de planta cuando se encuentra expresada en cualquiera de ellas. En una realización preferida, la proteína IMI comprende un polipéptido cofidicado por una secuencia de polinucleótidos que comprende SEQ ID NO: 1. Tales proteínas IMI comprenden una actividad AHAS tolerante a los herbicidas, particularmente una actividad de tolerancia a imidazolinona. Dicha actividad AHAS tolerante al herbicida se puede evaluar mediante mediciones de la actividad AHAS. Ver, por ejemplo, Singh y col. (1988) Análisis Bioquímico ("Anal. Biochem. ') 171 : 173-179, que en la presente se incorpora por referencia. En otra realización preferida, la proteína IMI comprende un polipéptido que comprende SEQ ID NO:2. Como también se utiliza en la presente, las expresiones "ácido nucleico" y "polinucleótido" se refieren a ARN o ADN lineal o ramificado, de cadena simple o doble, o un híbrido de ellos. La expresión comprende además híbridos ARN/ADN. Estas expresiones comprenden además una secuencia no traducida ubicada en los extremos 3' y 5'-terminales de la región de codificación del gen; al menos aproximadamente 1000 nucleotidos de la secuencia corriente arriba desde el extremó 5' terminal de la región de codificación y al menos aproximadamente 200 nucleotidos de secuencia abajo desde el extremo 3' terminal de la región de codificación del gen. Bases menos comunes, tales como inosina, 5-metilcitosina, 6-metiladenina, hipoxantina y otras también se pueden utilizar para el antisentido, ARNbc y par ribosómico. Por ejemplo, los polinucleótidos que contienen análogos de C-5 propina de uridina y citidina demostraron que enlazan ARN con alta afinidad y que son potentes inhibidores antisentido de expresión genética. Se pueden realizar otras modificaciones, tales como la modificación del esqueleto de enlaces fosfodiéster o del 2'-hidroxi en el grupo de azúcar ribosa de ARN. Los polinucleótidos y ribosomas antisentido puedem consistir totalmente en ribonucleótidos, o pueden contener ribonucleótidos y deoxirribonucleótidos mezcladas. Los polinucleótidos de la invención se pueden producir aplicando cualquier medio, con inclusión de preparaciones genómicas, preparaciones ADNc, síntesis in Vitro, RT-PCR, y transcripciones in Vitro o in Vivo. Una molécula de ácido nucleico "aislada" es aquella que se encuentra sustancialmente separada de las demás moléculas de ácido nucleico que se encuentran presentes en la fuente natural del ácido nucleico (es decir, secuencias que codifican a otros polipéptidos). Preferentemente, un ácido nucleico "aislado" se encuentra libre de algunas de las secuencias que naturalmente flanquean al ácido nucleico (es decir, secuencias ubicadas en los extremos 5'-terminal y 3'-terminal del ácido nucleico) en su replicón en estado natural. Por ejemplo, se considera que un ácido nucleico clonado es un ácido nucleico aislado. En varias realizaciones, la molécula de ácido nucleico IMI puede contener menos de aproximadamente 5 kb, 4 kb, 3 kb, 2 kb, 1 kb, 0,5 kb o 0, 1 kb de las secuencias de nucleótidos que naturalmente flanquean la molécula de ácido nucleico en el ADN genómico de la célula de la cual se deriva el ácido nucleico (por ejemplo, una célula Triticum aestivum). También se considera que un ácido nucleico se encuentra aislado si éste fue alterado mediante la intervención humana, o ubicado en un locus o en un sitio que no es su ubicación natural, o si se lo introduce en una célula mediante agroinfección, biolística, o cualquier otro método de transformación de las plantas. Además, una molécula de ácido nucleico "aislada", tal como una molécula de ADNc, se puede encontrar libre de parte del resto del material celular que naturalmente se encuentra relacionado, o del medio de cultivo cuando se la produce mediante técnicas recombinantes, o precursores químicos u otros químicos cuando se sintetiza químicamente. Quedan específicamente excluidos de la definición de "ácidos nucleicos aislados": cromosomas que ocurren naturalmente (tal como por ejemplo por propagación cromosómica), librerías cromosómicas artificiales, librerías genómicas y genotecas ADNc que existan ya sea en una preparación de ácido nucleico in Vitro o en la preparación de la célula huésped trasnfectada/transformada, en donde las células huésped son una preparación heterogénea in Vitro o presentada como una población heterogénea de colonias simples. También quedan específicamente excluidas las librerías mencionadas precedentemente en donde un ácido nucleico especificado conforma menos del 5% de la cantidad de inserciones de ácido nucleico en las moléculas vectores. Además, quedan específicamente excluidas preparaciones de células totalmente ADN genómico o preparaciones de células totalmente ARN (con inclusión de preparaciones de células completas que se encuentran divididas mecánicamente o digeridas enzimáticamente). Incluso quedan específicamente excluidas las preparaciones completas de células que se encuentran ya sea como preparaciones in Vitro o como una mezcla heterogénea separada por electroforesis en donde el ácido nucleico de la invención no se vio además separado de los ácidos nucleicos heterólogos en el medio de electroforesis (por ejemplo, separando además mediante extirpación de una única banda de una población de bandas heterogénea en un gel agaroso o transferencia de nylon blot. Una molécula de ácido nucleico de la presente invención, por ejemplo, una molécula de ácido nucleico que contiene una secuencia de nucleótidos de SEQ ID NO: 1 o una porción de este, que se puede aislar mediante la utilización de técnicas de biología molecular estándar y la información de secuencia que se brinda en la presente. Por ejemplo, un ADNc IMI T. aestivum se puede aislar de una librería T. aestivum mediante la utilización de toda o parte de la secuencia de SEQ ID NO: 1.

Además, una molécula de ácido nucleico que abarca toda o una parte de SEQ ID NO: 1 se puede aislar mediante la reacción en cadena de la polimerasa mediante la utilización de cebadores oligonucleótidos diseñados en base a esta secuencia. Por ejemplo, una ARNm se puede aislar de las células de las plantas (por ejemplo, mediante el procedimiento de extracción guanidina-tiocianato de Chirgwin y col., 1979, Bioquímica "Biochemistry'), 18:5294-5299), y ADNc se puede preparación mediante la utilización de la transcriptasa inversa (por ejemplo, Transcriptasa inversa MLV Molones, disponible en Gibco/BRL, Bethesda, MD; o transcriptasa inversa AMV, disponible de Seikagaku America, Inc., St. Petersburg, FL). Los cebadores oligonucleótidos sintéticos para la amplificación de la reacción en cadena de la polimerasa se pueden diseñar en base a la secuencia de nucleótido que se muestra en SEQ ID NO: 1. Se puede amplificar una molécula de ácido nucleico de la invención mediante la utilización de ADNc o, en forma alternativa, ADN genómico, como modelo de cebadores de oligonucleótido adecuado de conformidad con las técnicas de amplificación de la PCR estándar. La moplécula de ácido nucleico amplificada de esta manera se puede clonar en un vector adecuado y se la puede caracterizar mediante el análisis de la secuencia de ADN. Además, los oligonucleótidos que corresponden a una secuencia de nucleótidos IMI se pueden preparar utilizando técnicas sintéticas estándar, por ejemplo mediante la utilización de un sintetizador de ADN automatizado.

Los ácidos nucleicos IMI de la presente invención pueden comprender secuencias que codifican una proteína IMI (es decir, "regiones de codificación"), así como también secuencias 5' sin traducir y secuencias 3' sin traducir. Alternativamente, las moléculas de ácido nucleico de la presente invención pueden comprender sólo las regiones de codificación de un gen IMI, o pueden contener fragmentos genómicos completos aislados del ADN genómico. Una región de codificación de estas secuencias se indica como una "posición ORF". Además, la molécula de ácido nucleico de la invención puede comprender una porción de una región de codificación de un gen IMI, por ejemplo, un fragmento que se puede utilizar como sonda o cebador.

Las secuencias de nucleótidos determinadas a partir de la clonación de los genes IMI de T. aestivum permiten la generación de sondas o cebadores diseñados para su utilización para identificar y/o clonar homólogos IMI en otros tipos de células y organismos, asi como también homólogos IMI de otras plantas de trigo y especies relacionadas. La porción de la región de codificación también puede codificar un fragmento biológicamente activo de una proteína IMI. Tal como se utiliza en la presente, la expresión "porción biológicamente activa de" una proteína IMI pretende incluir una porción, por ejemplo, un dominio/motivo, de una proteína IMI que, al ser producida en una planta aumenta la tolerancia de la planta a un herbicida imidazolinona en comparación con la tolerancia a dicho herbicida que la planta presenta en estado natural. Los métodos para cuantificar el aumento de la tolerancia a los herbicidas imidazolinonas se brindan en los Ejemplos que siguen a continuación. Las porciones biológicamente activas de una proteína IMI incluyen los péptidos derivados de SEQ ID NO: 2, que incluyen menos aminoácidos de que una proteína IMI de largo completo e imparten un aumento de la tolerancia a un herbicida imidazolinona al expresarse en una planta. Típicamente, las porciones biológicamente activas (por ejemplo los péptidos que son, por ejemplo, 5, 10, 15, 20, 30, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 50, 100 o más aminoácidos de largo) comprenden un dominio o motivo que presenta al menos una actividad de una proteína IMI. Además, otras porciones biológicamente activas en las cuales otras regiones del polipéptido se encuentran eliminadas se pueden preparar mediante técnicas recombinantes y se pueden evaluar respecto de una o más de las actividades que se describen en la presente. Preferentemente, las porciones biológicamente activas de una proteína IMI incluyen uno o más dominios conservados seleccionados del grupo conformado por un Dominio A, un Dominio B, un Dominio C, un Dominio D y un Dominio E, en donde el dominio conservado contiene una mutación. La invención también proporciona polipéptidos IMI quiméricos o fusionados. Tal como se utiliza en la presente, un "polipéptido IMI quimérico" o un "polipéptido IMI fusionado" comprende un polipéptido que se encuentra operativamente enlazado a un polipéptido no-IMI. Un "polipéptido no-IMI" se refiere a un polipéptido que presenta una secuencia de aminoácidos que no es sustancialmente idéntica a la de un polipéptido IMI, por ejemplo, un polipéptido que no es una isoenzima IMI, cuyo péptido desempeña una función diferente a la del polipéptido IMI. Tal como se utiliza en la presente con respecto al polipéptido fusionado, la expresión "enlazado operativamente" pretende indicar que el polipéptido IMI y el polipéptido no-IMI se encuentran fusionados el uno al otro de manera tal que ambas secuencias cumplen con la función propuesta que se le atribuye a la secuencia utilizada. El polipéptido no-IMI se fusiona a la N-terminal o C-terminal del polipéptido IMI. Por ejemplo, en una realización, el polipéptido fusionado es un polipéptido fusionado GST-IMI en el cual la secuencia IMI se encuentra fusionada a la C-terminal de la secuencia de GST. Tales polipéptidos fusionados pueden facilitar la purificación de los polipéptidos IMI recombinantes. En otra realización, el polipéptido fusionado es un polipéptido IMI que contiene una secuencia de señal heteróloga en su N-terminal. En ciertas células huésped (por ejemplo, en las células huésped de los mamíferos), la expresión y/o la secreción de un polipéptido IMI se puede aumentar mediante el uso de una secuencia de señal heteróloga. Una molécula de ácido nucleico aislada que codifica un polipéptido IMI que presenta un cierto porcentaje de identidad de secuencia con un polipéptido de SEQ ID NO: 2, se puede crear mediante la introducción de una o más sustituciones, adiciones o deleciones de nucleótidos en una secuencia de nucleótidos de SEQ ID NO: 1 , de manera tal que se introduzcan una o más sustituciones, adiciones o deleciones de aminoácidos en el polipéptido codificado. Las mutaciones se pueden introducir en una secuencia de SEQ ID NO: 1 mediante la utilización de técnicas estándar, tales como mutagénesis dirigida al sitio y mutagénesis mediada por PCR. Preferentemente, se realizan sustituciones conservadoras de aminoácidos en uno o más residuos de aminoácidos no esenciales previstos. Una "sustitución conservadora de aminoácidos" es aquella en la cual el residuo de aminoácido se reemplaza por un residuo de aminoácido que presenta una cadena lateral similar. Las familias de residuos de aminoácidos que presentan cadenas laterales similares ya fueron definidas en la técnica. Estás familias incluyen aminoácidos con cadenas laterales básicas (por ejemplo, lisina, arginina, histidina), cadenas laterales ácidas (por ejemplo, ácido aspártico, ácido glutaminico), cadenas laterales polares sin carga (por ejemplo, glicina, asparagina, glutamina, serina, treonina, tirosina, cisteina), cadenas laterales no polares (por ejemplo, alanina, valina, leucina, isoleucina, prolina, fenilalanina, metionina, triptofán), cadenas laterales ramificadas beta (por ejemplo, treonina, valina, isoleucina) y cadenas laterales aromáticas (por ejemplo, tirosina, fenilalanina, triptofán, histidina). De esta manera, un residuo de aminoácido no esencial previsto en un polipéptido IMI se reemplaza preferentemente por otro residuo de aminoácido de la misma familia de cadena lateral. En forma alternativa, en otra realización, las mutaciones se pueden introducir al azar a lo largo de toda o parte de una secuencia de codificación IMI, tal como por ejemplo mediante mutagénesis de saturación, y los mutantes resultantes se pueden controlar respecto de si presentan una actividad IMI tal como se describe en la presente para identificar los mutantes que conservan la actividad IMI. Después de la mutagénesis de la secuencia de SEQ ID NO: 1 , el polipéptido codificado se puede expresar en forma recombinante y la actividad del polipéptido se puede determinar mediante el análisis de la tolerancia a imidazolinona de una planta que expresa el polipéptido tal como se describe en los Ejemplos que se proporcionan a continuación. A fin de determinar el porcentaje de identidad de secuencia de las secuencias de aminoácidos, las secuencias se alinean con la finalidad de poder realizar una comparación óptima (por ejemplo, se pueden introducir baches en la secuencia de un polipéptido para su alineación óptima con el otro polipéptido). Entonces, se comparan los residuos de aminoácidos en las posiciones correspondientes de los aminoácidos. Cuando el mismo residuo aminoácido ocupa la misma posición en una secuencia a la posición correspondiente en la otra secuencia, entonces las moléculas son idénticas en esa posición. Se puede realizar el mismo tipo de comparación entre las dos secuencias de aminoácidos. El porcentaje de identidad entre las dos secuencias es una función de la cantidad de posiciones idénticas que las secuencias comparten (es decir, porcentaje de identidad de secuencia = cantidad de posiciones idénticas/cantidad total de posiciones x 100). A los fines de la invención, el porcentaje de identidad de secuencia entre dos ácidos nucleicos o secuencias de polipéptidos se determina mediante la utilización del Paquete de Software Vector NTI 6.0 (PC) (InforMax, 7600 Wisconsin Ave., Bethesda, MD 20814). Se utiliza una penalidad por diferencia de brechas de 15 y una penalidad por extensión de la brecha de 6,66 para determinar el porcentaje de identidad entre los dos ácidos nucleicos. Se utiliza una penalidad por diferencia de brechas de 10 y una penalidad por extensión de la brecha de 0,1 para determinar el porcentaje de identidad entre dos polipéptidos. Todos los demás parámetros se predeterminan por defecto. Se debe entender que a los fines de determinar la identidad entre las secuencias, al comparar una secuencia de ADN con una secuencia de ARN, un nucleótido timidina es equivalente a un nucleótido uracilo. Preferentemente, los ácidos nucleicos IMI aislados de la presente invención son al menos aproximadamente un 50-60%, preferentemente al menos aproximadamente un 60-70%, y más preferentemente al menos aproximadamente un 70-75%, 75-80%, 80-85%, 85-90% o 90-95%, y más preferido por sobre todo al menos aproximadamente un 96%, 97%, 98%, 99%, o más, idénticos a la totalidad de la secuencia de polinucleótidos que se muestra en SEQ ID NO: 1. En otra realización, los ácidos nucleicos aislados que se incluyen en la presente invención son al menos aproximadamente un 50-60%, preferentemente al menos aproximadamente un 60-70% y más preferentemente al menos aproximadamente un 70-75%, 75-80%, 80-85%, 85-90% o 90-95%, y más preferido por sobre todo al menos aproximadamente un 96%, 97%, 98%, 99%, o más, idénticos a la totalidad de una secuencia de polinucleótidos que se muestra en SEQ ID NO: 1. Preferentemente, los polipéptidos IMI aislados de la presente invención son al menos aproximadamente un 50-60%, preferentemente al menos aproximadamente un 60-70% y más preferentemente al menos aproximadamente un 70-75%, 75-80%, 80-85%, 85-90% o 90-95%, y más preferido por sobre todo al menos aproximadamente un 96%, 97%, 98%, 99%, o más, idénticos a toda una secuencia de amino ácido que se muestra en SEQ ID NO: 2. En otra realización, los polipéptidos IMI aislados que se incluyen en la presente invención son al menos aproximadamente un 50-60%, preferentemente al menos aproximadamente un 60-70% y más preferentemente al menos aproximadamente un 70-75%, 75-80%, 80-85%, 85-90% o 90-95%, y más preferido por sobre todo al menos aproximadamente un 96%, 97%, 98%, 99%, o más, idénticos a toda una secuencia de aminoácidos que se muestra en SEQ ID NO: 2. Adicionalmente, se pueden crear ácidos nucleicos IMI optimizados. Preferentemente, un ácido nucleico IMI optimizado codifica un polipéptido IMI que modula la tolerancia de una planta a los herbicidas imidazolinonas, y más preferentemente aumenta la tolerancia de una planta a un herbicida imidazolinona al sobre expresarse en la planta. Tal como se utiliza en la presente, "optimizado" se refiere a un ácido nucleico que se encuentra generado genéticamente para lograr un aumento de su expresión en una planta o en un animal dado. A fin de proporcionar un ácido nucleico IMI optimizado, la secuencia de ADN del gen se puede modificar para 1 ) comprender codones preferidos por genes de plantas de elevada expresión; 2) comprender un contenido A+T en la composición base de nucleótido a la que sustancialmente se encuentra en las plantas; 3) formar una secuencia de iniciación de la planta, 4) eliminar las secuencias que provocan la desestabilización, poliadenilación inapropiada, degradación y terminación de ARN, o que forman horquillas de estructura secundaria o lugares de empalme de ARN. La expresión aumentada de los ácidos nucleicos IMI en las plantas se puede lograr mediante la utilización de la distribución de la frecuencia del uso de codones en las plantas en general o en una planta en particular. Los métodos para la optimización de la expresión de ácido nucleico en las plantas se pueden encontrar en EPA 0359472; EPA 03585962; Solicitud PCT Número WO 91/16432; Patente de los Estados Unidos Número 5.380.831 ; Patente de los Estados Unidos Número 5.436.391 ; Perlack y col., 1991 , Proc. Nati. Acad. Sci. ESTADOS UNIDOS 88:3324-3328; y Murria y col., 1989, Residuos de Ácidos Nucleicos {"Nucleic Acids Res. '), 17:477-498. Tal como se utiliza en la presente, "frecuencia del uso preferido de codones" se refiere a la preferencia mostrada por una célula huésped específica en la utilización de los codones de nucleótidos para especificar un aminoácido en particular. Para determinar la frecuencia de uso de un codón en particular en un gen, se divide la cantidad de ocurrencias de dicho codón en el gen por la cantidad total de ocurrencias de todos los codones especificando el mismo aminoácido en el gen. En forma similar, la frecuencia del uso preferido de codones mostrada por una célula huésped se puede calcular mediante la obtención del promedio de la frecuencia del uso preferido del codón en una gran cantidad de genes expresados por la célula huésped. Es preferible que este análisis se limite a genes que se encuentran altamente expresados en la célula huésped. El porcentaje de desviación de la frecuencia de uso preferido del codón para un gen sintético de la empleada por una célula huésped se calcula mediante, en primer lugar, la determinación del porcentaje de desviación de la frecuencia de uso de un único condón respecto de aquellos de la célula huésped y luego se obtiene la desviación estándar sobre todos los codones. Tal como se define en la presente, este cálculo incluye codones únicos (es decir, ATG y TGG). En términos generales, el porcentaje de desviación total del uso de codón de un gen optimizado en comparación con el uso de la célula huésped se calcula mediante la aplicación de la ecuación 1A = n = 1 Z Xn - YnXn veces 100 Z en donde Xn=frecuencia de uso de codón n en la célula huésped; Yn = frecuencia de uso de un codón n en el gen sintético, n representa un codón individual que especifica un aminoácido y la cantidad total de codones es Z. La desviación total de la frecuencia de uso de codón, A, para todos los aminoácidos, preferentemente debería ser menor a aproximadamente un 25%, y más preferentemente menos de aproximadamente un 10%. En consecuencia, un ácido nucleico IMI se puede optimizar de manera tal que su distribución de la frecuencia de uso de codón se desvie, preferentemente, no más de aproximadamente un 25% de aquella de los genes de las plantas de más alta expresión y, más preferentemente, no más de aproximadamente un 10%. Sumado a ello, se presta consideración al porcentaje del contenido C+G de la tercera base degenerada (las monocotiledóneas parecen favorecer G+C en esta posición, no así las dicotiledóneas). Se reconoce también que el nucleótido XCG (en donde X es A, T, C o G) es el codón menos preferido en el caso de las dicot mientras que el codón XTA se evita tanto en las monocot como en las dicot. Los ácidos nucleicos IMI optimizados de la presente invención preferentemente presentan además índices de evasión del doblete CG y TA cercanos que se aproximan a aquellos de la planta huésped seleccionada (es decir, Triticum aestivum). Más preferentemente, estos índices se desvían de aquellos de los huéspedes por no más de aproximadamente un 10-15%. Además de las moléculas de ácido nucleico que codifican el polipéptido IMI que se describe más arriba, otro aspecto de la invención pertenece a las moléculas de ácido nucleico aisladas que son antisentido a ellas. Se cree que los polinucleótidos antisentido inhiben la expresión genética de un polinuclétido meta mediante su enlace específico con el polinucleótido meta y la interferencia en la trascripción, el empalme, el transporte, la traducción y/o la estabilidad del polinucleótido meta. En la técnica se describieron métodos para apuntar al polinucleótido atisentido del ADN cromosómico, a una transcripción primaria ARN o a una ARNm procesada. Preferentemente, las regiones meta incluyen sitios de empalme, codones de iniciación de traducción, codones terminales de traducción, y otras secuencias dentro del marco de lectura abierto. El término "antisentido", a los fines de la invención, se refiere a un ácido nucleico que comprende un polinucleótido que es suficientemente complementario de todo o parte de un gen, trascripción primaria, o ARNm procesada, de manera tal que interfiere con la expresión del gen endógeno. Los polinucleótidos "complementarios" son aquellos que son capaces de aparearse en base de acuerdo con el estándar Watson-Crick de reglas de complementación. Específicamente, las purinas se aparearán en base con pirimidinas para formar una combinación de guanina apareada con citosina (C.G) y adenina apareada ya sea con timina (A:T) en el caso de ADN, o adenina con uracilo (A:U) en el caso de ARN. Se entiende que dos polinucleótidos pueden hibridizarse entre sí incluso si no son totalmente complementarios el uno del otro, siempre que cada uno presente al menos una región sustancialmente complementaria al otro. La expresión "ácido nucleico antisentido" incluye ARN de única hebra así como casetes de expresión de ADN de doble hebra que se transcriben para producir un ARN antisentido. Los ácidos nucleicos antisentido "activos" son moléculas ARN antisentido que son capaces de hibridarse selectivamente con un transcriptor primario o una ARNm que codifique un polipéptido que presenta al menos un 80% de identidad de secuencia con la secuencia de polipéptido SEQ ID NO: 2. Además de los ácidos nucleicos IMI y los polipéptidos que se describen más arriba, la presente invención abarca estos ácidos nucleicos y polipéptidos adjuntos a un grupo. Esos grupos incluyen, pero no se limitan a, grupos de detección, grupos de hibridación, grupos de purificación, grupos de entrega, grupos de reacción, grupos de enlace, y del estilo. Un conjunto típico de ácidos nucleicos que presenta grupos adjuntos es el de sondas y cebadores. Las sondas y los cebadores típicamente comprenden un oligonucleótido sustancialmente aislado. El oligonucleótido típicamente comprende una región de secuencia de nucleótido que se híbridiza bajo condiciones estrictas a al menos aproximadamente 12, preferentemente aproximadamente 25, más preferentemente aproximadamente 40, 50, o 75 nucleótidos consecutivos de una cadena homosentido de la secuencia que se establece en SEQ ID NO: 1 , o mutantes que ocurre naturalmente a partir de ella. Los cebadores que se basan en una secuencia de nucleótido de SEQ ID NO:1 se pueden utilizar en reacciones PCR para clonar homólogos IMI. Las sondas que se basan en las secuencias de nucleótidos IMI se pueden utilizar para detectar transcripciones o secuencias genómicas que codifican los mismos polipéptidos o polipéptidos homólogos. En realizaciones preferidas, la sonda comprende además un grupo de etiqueta adjunto, por ejemplo, el grupo de etiqueta puede ser un radioisótopo, un compuesto fluorescente, una enzima, o un cofactor de enzima. Dichas sondas se pueden utilizar como parte de un equipo de prueba de marcador de genoma para identificar aquellas células que expresan un polipéptido IMI, tal como por ejemplo, mediante la medición de un nivel de un ácido nucleico que codifica IMI, en una muestra de células, por ejemplo, la detección de niveles de IMI en ARNm o la determinación sobre si el gen IMI genómico fue mutado o eliminado. La invención brinda también un vector de expresión de recombinación aislado que comprende un ácido nucleico tal como se describe más arriba, en donde la expresión del vector en una célula huésped resulta en un aumento de la tolerancia a un herbicida imidazolinona en comparación con un tipo silvestre de la célula huésped.

Tal como se utiliza en la presente, el término "vector" se refiere a una molécula de ácido nucleico capaz de transportar otro ácido nucleico a la cual se la enlazó. Un tipo de vector es un "plásmido", que se refiere a un rulo de ADN doble circular al cual se pueden enlazar segmentos adicionales de ADN. Otro tipo de vector es el vector viral, en donde se pueden enlazar segmentos adicionales de ADN al genoma viral. Ciertos vectores son capaces de su replicación autónoma en la célula huésped en la cual se los introduce (por ejemplo, vectores bacteriales que presentan un origen bacterial de vectores de replicación bacterial y episomales de mamíferos). Otros vectores (por ejemplo, vectores no episomales de mamíferos) se integran en el genoma de una célula huésped mediante su introducción en la célula huésped, y allí se replican junto con el genoma huésped. Además, ciertos vectores son capaces de dirigir la expresión de los genes a los cuales se encuentran ligados operativamente. Tales vectores son denominados en la presente "vectores de expresión". En general, los vectores de expresión de utilidad en las técnicas de ADN recombínante comúnmente toman la forma de plásmidos. En la presente especificación, "plásmido" y "vector" se pueden utilizar en forma intercambiable ya que el plásmido es la forma de vector de uso más común. Sin embargo, la invención pretende incluir dichas otras formas de vectores de expresión, tales como los vectores virales (por ejemplo, retrovirus de replicación defectuosos, adenovirus y virus adeno-asociados), que cumplen funciones equivalentes. Los vectores de expresión recombínante de la invención comprenden un ácido nucleico de la invención en la forma de una expresión adecuada del ácido nucleico en una célula huésped, lo que significa que los vectores de expresión recombínante incluyen una o más secuencias reguladoras, seleccionadas en base a las células huésped a utilizar para su expresión, que se encuentran enlazadas operativamente a la secuencia de ácido nucleico a expresar. Con relación a un vector de expresión recombínante, "enlazado operativamente", pretende significar que la secuencia de nucleótidos de interés se encuentra enlazada a la secuencia o las secuencias reguladoras de manera tal que permite la expresión de la secuencia de nucleótidos (por ejemplo, en una sistema de trasncripción/traducción in Vitro o en una célula huésped cuando el vector se introduce en la célula huésped). La expresión "secuencia reguladora" pretende incluir promotores, acrecentadores y otros elementos de control de expresión (por ejemplo, señaladores de poliadenilación). Dichas secuencias reguladoras se describen, por ejemplo, en Goeddel, Tecnología de Expresión ^ Genética: Métodos de Enzimología ("Gene Expresión Technology: Methods in Enzymology), 185, Academia Press, San Diego CA (1990) y en Gruber y Crosby, en: Métodos de Biología y Biotecnología Molecular en plantas ("Methods in Plant Molecular Biology and Biotechnology'), eds. Glick and Thompson, Capítul 7, 89-108, CRC Press: Boca Ratón, Florida, con inclusión de las referencias que en ellos se menciona. Las secuencias reguladoras incluyen aquellas que dirigen la expresión constitutiva de una secuencia de nucleótidos en muchos tipos de células huésped y aquellas que dirigen la expresión de la secuencia de nucleótidos sólo a ciertas células huésped o en ciertas condiciones. Aquellos con experiencia en la técnica podrán apreciar que el diseño del vector de expresión puede depender de factores tales como la elección de la célula huésped a ser transformada, el nivel de expresión del polipéptido deseado, etc. Los vectores de expresión de la invención se pueden introducir en las células huésped y así producir polipéptidos o péptidos, con inclusión 5 de polipéptidos o péptidos fusionados, codificados por ácidos nucleicos tal como se describe en la presente (por ejemplo, polipéptidos IMI, polipéptidos fusionados, etc). En una realización preferida de la presente invención, los polipéptidos IMI se expresan en las plantas y en las células de las plantas tales como células de plantas unicelulares (tal como algas) (Ver: Falciatore y col. , 1999, Biotecnología Marina ("Marine Biotechnology") 1 (3):239-251 y las referencias allí mencionadas) y células de plantas superiores (por ejemplo, los espermatofitos, tales como las plantas de Q cultivos). Se puede "introducir" un polinucleótido IMI en la célula de una planta aplicando cualquier medio, con inclusión de transfección, transformación o transducción, electroporación, bombardeo de partículas, agroinfección, biolística, y del estilo. Se puede encontrar métodos adecuados para la transformación o transfección de células huésped con inclusión de células de plantas en Sambrook y col. (Clonación Molecular: Un Manual de Laboratorio 'Molecular Cloning: A Laboratory Manual"), 2da. 5 Edición, ed., Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, 1989) y en otros manuales de laboratorio tales como "Métodos en Biología Molecular" ("Methods in Molecular Biology"), 1995, Volumen 44, Protocolos de Agrobacterias {"Agrobacterium protocols'), ed: Gartland and Davey, Humana Press, Totowa, New Jersey. Dado que la tolerancia aumentada a herbicidas imidazolinona es una característica general que se desea se transmita por herencia a una mayor cantidad de plantas como el maíz, el trigo, el centeno, la avena, el triticale, el arroz, la cebada, la soja, el maní, el algodón, la colza y la cañóla, mandioca, la pimienta, el girasol y tagetes, plantas solanáceas como la papa, el tabaco, la berenjena y el tomate, especies Vicia, arveja, alfalfa, arbustos (café, cacao, te), especies Salix, árboles (palmera de aceite o africana, coco), pastos perennes y cultivos forrajeros, estas plantas también se prefieren como plantas meta para su ingeniería genética como una realización adicional de la presente invención. En una realización preferida, la planta es una planta de trigo. Entre los cultivos forrajeros se incluyen los siguientes, sin limitarse a ellos, agropiro, alpiste (hierba), hierba de Brome, ballico ("Wildrye Grass'), Pasto azul, Pasto Ovillo ("Orchardgrass"), Alfalfa, "Salfoin", Cuernecillo del Campo ("Birdsfoot') Trifolio- trébol, trébol híbrido, trébol de suecia, o trébol de los pantanos ("alsike clover"), trébol rojo, trébol morado, trébol de los prados {"red clover1), trébol cloroso, trébol de olor ("sweet clover"). En una realización de la presente invención, la transfección de un polinucleótido IMI en una planta se logra mediante la transferencia de genes mediada por Agrobacterium. Un método de transformación conocido por aquellos con experiencia en la técnica es el de someter a una planta en florecimiento a un baño de inmersión en solución Agrobacteria, en donde la Agrobacteria contiene el ácido nucleico IMI, y luego se incuban los gametos transformados. La transformación de las plantas por Agrobacterium se puede realizar utilizando, por ejemplo, la cepa GV3101 (pMP90) (Koncz and Schell, 1986, Mol. Gen. Genet. 204:383-396) o LBA4404 (Clontech) cepa Agrobacterium tumefaciens. La transformación se puede llevar a cabo mediante técnicas de aplicación y de transformación estándar (Dablaere y col. , 1994, "Nucí. Acids. Res. " 13:4777-4788; Gelvin, Stanton B. y Schilperoort, Robert A, Manual de Biología Molecular de las Plantas ("Plant Molecular Biology Manual"), 2nd Ed. -Dordrecht: Kluwer Academic Publ. , 1995 - in Sect. Ringbuc Zentrale Signatur: BT1 1 -P ISBN 0-7923-2731 -4; Glick, Bernard R. y Thompson, John E., Métodos en Biología y Biotecnología Molecular de las Plantas ("Methods in Plant Molecular Biology and Biotechnology'), Boca Ratón: CRC Press, 1993 360 S., ISBN 0-8493-5164-2). Por ejemplo, la colza se puede transformer mediante transformado de cotiledón o hipocotilo (Moloney y col., 1989, Informe Sobre Células de las Plantas ("Plant Cell Report') 8:238-242); De Block y col., 1989, Fisiología de las plantas ("Plant Physiol. ') 91 :694-701 ). El uso de antibióticos para Agrobacterium y la selección de plantas depende del vector binario y de la cepa de Agrobacterium que se utilice para la transformación. La selección de colza normalmente se realiza con kanamicina como un marcador de planta seleccionare. La transferencia de genes mediante Agrobacterium al envase se puede realizar aplicando, por ejemplo, un técnica que se describe en la Patente Europea Número 0424 047, Patente de ESTADOS UNIDOS Número 5.322.783, Patente Europea Número 0397 687, Patente de Estados Unidos Número 5.376.543, o Patente de ESTADOS UNIDOS Número 5.169.770. La transformación del maíz se puede lograr mediante el bombardeo de partículas, la absorción de ADN mediada por polietileno glicol, o a través de la técnica de fibra de carburo de silicio. (Ver, por ejemplo, Freeling and Walbot, El Manual del Maíz ("The maize handbook") Springer Verlag: Nuva York (1993) ISBN 3-540-97826-7). Un ejemplo específico de tranformación de maíz se describe en la Patente de Estados Unidos Número 5.990.387, y un ejemplo específico de la transformacióin de trigo se puede encontrar en la Solicitud PCT Número WO 93/07256. De acuerdo con la presente invención, el polinucleótido IMI introducido se puede mantener en la célula de la planta en forma estable si el mismo se incorpora en un replicón autónomo no cromosomico o si se integra en los cromosomas de la planta. Alternativamente, el polinucleótido IMI que se introduce puede estar presente en un vector no de replicación extra- cromosomico y puede ser de expresión transitoria o ser transitoriamente activo. En una realización, un microorganismo recombinante homólogo se puede crear en donde el polinucleótido IMI se integra en un cromosoma, se prepara un vector que contiene al menos una porción de un gen AHAS en el cual se introdujo una deleción, adición o sustitución para así producir la alteración, por ejemplo, interrumpir funcionalmente, el gen AHAS endógeno y crear un gen IMI. Para crear una mutación puntual a través de la recombinación homologa, se pueden utilizar los híbridos ADN-ARN en una técnica conocida como quimeroplastía (Cole-Strauss y col., 1999, Investigación de Ácidos Nucleicos ("Nucleic Acids Research') 27(5): 1323-1330 y Kmiec, 1999, Científico estadounidense de terapia genética ("Gene therapy American Scientist") 87(3):240-247). Otros procedimientos de recombinación homologa en especies Triticum son también bien conocidos en la técnica y contemplados para su uso en la presente. En el vector de recombinación homologa, el gen IMI se puede flanquear en sus extremos 5'-terminal y 3'-terminal mediante una molécula de ácido nucleico adicional del gen AHAS para permitir que suceda una recombinación homologa entre el gen IMI exógeno transportado por el vector y un gen AHAS endógeno, en un microorganismo o en una planta. La molécula de ácido nucleico AHAS adicional que se flanquea presenta el largo suficiente para la recombinación homologa exitosa con el gen endógeno. Típicamente, varios de cientos de pares de bases hasta kilobases de ADN flanqueante (tanto en el extremo 5'-terminal como el 3'-terminal) se incluyen en el vector (Ver, por ejemplo, Thomas, K.R., y Capecchi, M.R., 1987, Célula ("Ce//") 51 :503 para obtener una descripción de vectores de recombinación homologa o Streep y col., 1998, PNAS, 95(8):4368-4373 para recombinación en base a ADNc en Physcomitrella patens). Sin embargo, dado que el gen IMI normalmente difiere del gen AHAS en muy pocos aminoácidos, la secuencia flanqueante no siempre es necesaria. El vector de recombinación homologa se introduce en un microorganismo o en una célula de una planta (por ejemplo, a través de ADN mediado por polietileno glicol), y se seleccionan las células en las cuales el gen IMI introducido se recombinó homólogamente con el gen AHAS endógeno mediante la utilización de las técnicas conocidas. En otra realización, se pueden producir microorganismos recombinantes que contengan los sistemas seleccionados que permitan la expresión regulada del gen introducido. Por ejemplo, la inclusión de un gen IMI en un vector colocándolo bajo el control del operón Lac permite que el gen IMI sólo se exprese en presencia de IPTG. Tales sistemas regulatorios son bien conocidos en la técnica. Ya sea que se encuentre presente en un vector extra-cromosómico no replicante o en un vector que se encuentra integrado en un cromosoma, el polinucleótido IMI preferentemente reside en un cásete de expresión de una planta. Un cásete de expresión de una planta preferentemente contiene secuencias reguladoras capaces de conducir expresiones genéticas a las células de las plantas que se encuentran unidas operativamente de manera tal que cada secuencia pueda cumplir con su función, por ejemplo, la terminación de la trascripción mediante señales de poliadenilación. Las señales de poliadenilación preferidas son aquellas que se originan de ADNt Agrobacterium tumafaciens tal como el gen 3 conocido como octopina sintasa del plásmido Ti pTiACH5 (Gielen y col. 1984, EMBO J. 3:835) o sus funcionales equivalentes, pero también son adecuados todos los terminadores funcionalmente activos en las plantas. Dado que la expresión genética en las plantas comúnmente no se limita a niveles transcripcionales, un cásete de expresión de una planta preferentemente contiene otras secuencias operativas relacionadas como acrecentadores traduccionales tales como la secuencia de sobremarcha que contiene la secuencia líder 5' sin traducir del virus del mosaico del tabaco que acrecienta el polipéptido en proporción del ARN (Gallie y col., 1987, Investigación sobre Ácidos Nucleicos {"Nucí. Acids Research') 15:8693-871 1 ). Entre los ejemplos de vectores de expresión de las plantas se incluyen aquellos que se detallan en: Becker, D. y col., 1992, Nuevos vectores binarios de las plantas con marcadores seleccionabas ubicados próximos al borde izquierdo, Biología Molecular de las Plantas {"New plant binary vectors with selectable markers located proximal to the left border, Plant Mol.

Biol. ') 20: 1 195-1 197; Bevan, M.W., 1984, Vectores Agrobacterium binarios para la transformación de plantas, Investigación sobre Ácidos Nucleicos {"Nucí. Acid. Res. ') 12:871 1 -8721 ; y Vectores para la transferencia de genes en plantas superiores; en: Plantas Transgénicas, Vol. 1 , Ingeniería y Utilización {"Vectors for Gene Transfer in Higher Plants; in Transgenic Plants, Vol. 1, Engineering and Utilization' , eds.: Kung and R. Wu, Academic Press, 1993, S. 15-38. La expresión genética de las plantas se debería encontrar operativamente enlazada a un promotor adecuado que confiera la expresión del gen en el momento adecuado, en el tipo de célula y tejido preferidos. Los promotores de utilidad en los casetes de expresión de la invención incluyen cualquier promotor que sea capaz de iniciar la transcripción en la célula de una planta. Entre dichos promotores encontramos los que se pueden obtener de las plantas, virus de las plantas y bacterias que contienen genes que se expresan en las plantas, tales como Agrobacterium y Rhizobium, sin limitarnos a ellos. El promotor puede ser constitutivo, inducible, de preferencia de etapa de desarrollo, preferencia por tipo de célula, preferencia de tejido o preferencia de órgano. Los promotores constitutivos son activos en la mayoría de las condiciones. Entre los ejemplos de promotores consitutivos encontramos los promotores CaMV 19S y 35S (Odell y col. , 1985, Naturaleza {"Nature') 313:810-812), el promotor sX CaMV 35S (Kav y coL' 987 > Ciencia {"Science') 236: 1299-1302), el promotor Sep1 , el promotor de la actina del arroz (McEIroy y col., 1990, Célula Vegetal {"Plant Ce//") 2: 163-171 ), el promotor de la actina Arabidopsis, el promotor de la ubiquitina (Christensen y col. , 1989, Biología Molecular de las Plantas {"Plant Molec. Biol. ') 18:675-689); pEmu (Last y col. , 1991 , Teoría de Genética Aplicada {"Theor. Appl. Genet. ') 81 :581-588), el promotor 35S del virus del mosaico de la escrofularia, el promotor Smas (Velten y col., 1984, EMBO J. 3:2723-2730), el promotor GRP1-8, el promotor de cinamil alcohol deshidrogenasa (Patente de Estados Unidos Número 5.683.349), promotores de Agrobacterium ADN-T, tales como manopina sintasa, nopalina sintasa, y octopina sintasa, el promotor de la pequeña subunidad de ribulosa bifosfato carboxilasa (ssuRUBISCO), y del estilo. Los promotores inducibles están activos en ciertas condiciones del entorno, tal como la presencia o la ausencia de un nutriente o de un metabolito, el calor o el frío, la luz, el ataque patógeno, las condiciones anaeróbicas, y del estilo. Por ejemplo, el promotor PPDK es inducido por la luz; el promotor PR-1 del tabaco, Arabidopsis, y el maíz se inducen por la infección con un patógeno; y el promotor Adh1 es inducido por hipoxia o estrés frío. La expresión genética de la planta se puede facilitar también a través de un promotor ¡nducible (Para su revisión, ver Gatz, 1997, "Annu. Rev. Plant Physiol. Plant Mol. Biol. " 48:89-108). Los promotores inducibles químicamente son especialmente adecuados si se desea que la expresión genética se produzca en un momento en particular. Entre los ejemplos de dichos promotores encontramos el promotor ácido salicílico (Solicitud PCT Número WO 95/19443), un promotor ¡nducible por tetraciclina (Gatz y col., 1992, Plant J. 2:397-404) y un promotr ¡nducible por etanol (Solicitud PCT Número WO 93/21334). Los promotores de preferencia de etapa de desarrollo preferentemente se expresan en ciertas etapas del desarrollo. Entre los promotores de tejidos y órganos preferidos se incluye aquellos que preferentemente se expresan en ciertos tejidos u órganos, tales como las hojas, las raíces, las semillas o en los xilemas. Entre los ejemplos de los promotores de tejido y de órganos preferidos encontramos los de preferencia por el fruto, por el óvulo, por el tejido macho, por la semilla, por el tegumento, por el tubérculo, por el tronco, por el pericarpio, por la hoja, por el estigma, por el polen, por la antera, por el pétalo, por el sépalo, por el pedúnculo, por el silicua, por el tallo, por la raíz, y del estilo, sin limitarse a esta enumeración. Los promotores con preferencia por la semilla preferentemente se expresan durante el desarrollo y/o la germinación de la semilla. Por ejemplo, los promotores con preferencia por la semilla pueden presentar preferencia por el embrión, el endosperma y por el recubrimiento de la semilla. Ver Thompson y col., 1989, BioEssays 10: 108. Entre los ejemplos de promotores con preferencia por las semillas encontramos, celulosa sintasa (celA), Cim1 , gamma-zein, globulin-1 , maíz 19 kD zein (cZ19B1 ), y del estilo, sin limitarse a ellos. Entre otros promotores de preferencia por tejidos u órganos se incluye el promotor del gen napin de la colza (Patente de EEUU Número 5.608.152), el promotor USP de Vicia faba (Baeumlein y col., 1991 , Mol Gen Genet. 225(3):459-67), el promotor de la oleosina de Arabidopsis (Solicitud PCT Número WO 98/45461 ), el promotor de la faseolina de Phaseolus vulgarís (Patente de Estados Unidos Número 5.504.200), el promotor Bce4 de Brassica (Solicitud PCT Número WO 91/13980), o el promotor de la legumina B4 (LeB4; Baeumlein y col. , 1992, Diario sobre las Plantas {"Plant Journal'), 2(2):233-9), así como también promotores que confieren una expresión específica en la semilla de plantas monocot como el maíz, la cebada, el trigo, el centeno, el arroz, etc. Entre los promotores adecuados para destacar encontramos el promotor de gen Ipt2 o Ipt1 de la cebada (Solicitud PCT Número WO 95/15389 y Solicitud PCT Número WO 95/23230) o aquellos que se describen en la Solicitud PCT Número WO 99/16890 (Promotores de la hordeina genética de la cebada, de la glutelina genética del arroz, el gen de la orizina del arroz, prolamina genética del arroz, gliadina genética del trigo, glutelina genética del trigo, glutelina genética de la avena, carisina genética del sorgo y secalina genética del centeno). Entre otros promotores útiles en los casetes de expresión de la invención se incluyen, el promotor de la protema principal de enlace de clorofila a/b, promotores de histona, promotor Ap3, promotor ß-conglicina, el promotor napina, el promotor de lectina de soja, el promotor de maíz 15 kD zein, el promotor zein 22kD, el promotor zein 27kD, el promotor g-zein, el ceroso, Shrunken 1 , Shrunken 2, y promotores bronce, el promotor Zm13 (Patente de Estados Unidos Número 5.086.169), los promotores poligalacturonasa de maíz (PG) (Patentes de Estados Unidos Números 5.412.085 y 5.545.546) y el promotor SGB6 (Patente de Estados Unidos Número 5.470.359), así como también promotores sintéticos u otros naturales, sin limitarse a la lista que antecede. Se puede obtener una flexibilidad adicional en el control de expresiones genéticas heterólogas en las plantas mediante la utilización de dominios de enlace de ADN y elementos de respuesta de fuentes heterólogas (es decir, dominios de enlace ADN de fuentes que no son plantas). Un ejemplo de dichos dominios de enlace ADN heterólogos es el dominio de enlace ADN LexA (Bent and Ptashne, 1985, Cell 43:729- 736). La presente invención proporciona casetes de expresión para la expresión de las moléculas de nucleótidos de la invención en plantas, en células de plantas, y otras, células huésped no humanas. Los casetes de expresión comprenden un promotor que se puede expresar en la planta, en la célula de la planta o en otras células huésped de interés enlazadas operativamente a un ácido nucleico IMI. En caso de ser necesario para dirigir la expresión al cloroplasto, el cásete de expresión puede también comprender una secuencia dirigida al cloroplasto enlazada operativamente que codifica a un péptido de tránsito de cloroplasto para que conduzca a una proteína IMI expresada al cloroplasto. En una realización, los ácidos nucleicos IMI se dirigen al cloroplasto para su expresión. De esta manera, en la cual el ácido nucleico IMI no se inserta directamente en el cloroplasto, el cásete de expresión contendrá además una secuencia de dirección hacia el cloroplasto que comprenderá una secuencia de nucleótidos que codifica un péptido de tránsito de cloroplasto para que dirija al producto genético de interés a los cloroplastos. Dichos péptidos de transporte son conocidos en la técnica. Con respecto a las secuencias de dirección al cloroplasto, "enlazado operativamente" significa que la secuencia de ácido nucleico que codifica un péptido de transporte (es decir, la secuencia de dirección al cloroplasto) se encuentra enlazada al ácido nucleico IMI de la invención de manera tal que las dos secuencias sean contiguas y se encuentren dentro del mismo marco de lectura. Ver, por ejemplo, Von Heijne y col. (1991) "Plant Mol. Biol. Rep." 9:104-126; Clark y col. (1989) J. Biol. Chem. 264:17544- 17550; Della-Cioppa y col. (1987) Fisiología de las plantas ("Plant Physiol. ') 84:965-968; Romer y col. (1993) "Biochem. Biophys. Res. Commun. " 196:1414-1421 ; y Shah y col. (1986), Ciencia ("Science') 233:478-481. Mientras que las proteínas IMI de la invención pueden incluir un péptido de transporte de cloroplasto nativo, a la secuencia de una proteína IMI madura de la invención se le puede fusionar cualquier péptido de transporte de cloroplasto conocido en la técnica mediante el enlace operativo de una secuencia dirigida al cloroplasto al extremo 5'-terminal de una secuencia de nucleótidos que codifica una proteína IMI madura de la invención. Las secuencias de dirección hacia el cloroplasto son conocidas en la técnica e incluyen la pequeña unidad de cloroplasto de ribulosa-1.5-bifosfato carboxilasa (Rubisco) (de Castro Silva Filho y col. (1996) "Plant. Mol. Biol. " 30-769-780; Schnell y col. (1991 ) "J. Biol. Chem. " 266(5):3335-3342; 5-(enolpiruvil)shiquimato-3-fosfato sintasa (EPSPS) (Archer y col. (1990) "J. Bioenerg. Biomemb. " 22(6):789-810); triptofan sintasa (Zhao y col. (1995) "J. Biol. Chem. " 270(11):6081 -6087); plastocianina (Lawrence y col. (1997) "J. Biol. Chem." 272(33):20357-20363); corismato sintasa (Schmidt y col. 1993) "J. Biol. Chem." 268(36):27447-27457; y la proteína a/b de enlace de cultivo liviano de la clorofila (LHBP) (Lamppa y col. (1988) "J. Biol. Chem. " 263:14996-14999). Ver también Von Heijne y col. (1991) "Plant Mol. Biol. " Rep. 9:104-126; Clark y col. (1989) "J. Biol. Chem." 264:17544-17550; Della Cioppa y col. (1987) Fisiología de las plantas ("Plant Physiol. ") 84:965-968; Romer y col. (1993) "Biochem.

Biophys. Res. Commun. " 196:1414-1421 ; y Shah y col. (1986) Ciencia ("Science') 233:478-481.

Los ácidos nucleicos IMI o los casetes de expresión que contienen los ácidos nucleicos IMI también se pueden introducir en el cloroplasto para su expresión. Los métodos para la transformación de los cloroplastos son conocidos en la técnica. Ver, por ejemplo, Svab y col. (1990) "Proc. Nati. Acad. Sci. " USA 87:8526-8530; Svab y Maliga (1993) "Proc. Nati. Acad. Sci. " USA 90:913-917; Svab y Maliga (1993) EMBO J. 12:601-606. El método se basa en la técnica de bombardeo de partículas de ADN ("Particle gun deliveraby of DNA') que contienen un marcador seleccionare y direccionamiento del ADN al genoma plásico a través de recombinación homologa. Adicionalmente, la transformación plástida se puede lograr mediante la transactivación de un transgen de propagación de plástico silencioso mediante la expresión de preferencia de tejido de una polimerasa ARN codificada en el núcleo y dirigida al plástido. Tal sistema se informó en McBride y col. (1994) "Proc. Nati. Acad. Sci. " USA 91 :7302-7305. Se puede optimizar los ácidos nucleicos dirigidos al cloroplasto para su expresión en el cloroplasto y responder a las diferencias en el uso de codones entre el núcleo de la planta y esta organela. De esta manera, los ácidos nucleicos de interés se pueden sintetizar utilizando codones de preferencia de cloroplasto. Ver, por ejemplo, la Patente de Estados Unidos Número 5.380.831 , que en este acto se incorpora a la presente por referencia. En caso de ser necesario para la expresión de cloroplasto, el cásete de expresión puede además comprender un promotor de cloroplasto enlazado operativamente al ácido nucleico IMI. Dichos promotores de cloroplastos son conocidos en la técnica. Otro aspecto de la invención corresponde a las células huéspedes a las cuales se introdujo un vector de expresión de recombinación de la invención. Las expresiones "célula huésped" y "célula huésped recombinante" se utilizan en la presente en forma intercambiable. Se entiende que dichas expresiones se refieren no solamente a la célula objeto en particular, sino que también se aplican a la progenie o potencial progenie de dicha célula. Debido a que pueden ocurrir ciertas modificaciones en las generaciones subsiguientes a causa de la mutación o bien de la influencia del entorno, tal progenie no puede, de hecho, ser idéntica a la célula madre, pero aún asi quedan incluidas dentro del alcance de la expresión tal como se la utiliza en la presente. La célula huésped puede ser cualquier célula procariótica o eucariótica. Por ejemplo, un polinucleótido IMI se puede expresar en una célula bacterial tal como C. glutamicum, células de insectos, células fúngicas, o células mamíferas (tal como las células del ovario del hámster chino (CHO) o las células COS), algas, ciliados, células de plantas, hongos, u otros microorganismos tales como C. glutamicum. Aquellos con experiencia en la técnica conocen otras células huésped adecuadas. Una célula huésped de la invención, tal como un huésped procariótico o eucariótico en cultivo, se puede utilizar para producir (es decir, expresar) un polinucleótido IMI, utilizando las células huésped de la invención. En una realización, el método comprende el cultivo de una célula huésped de la invención (en la cual se introdujo un vector de expresión recombinante que codifica un polipéptido IMI, o en la cual se introdujo un gen que codifica un polipéptido IMI o en estado natural al genoma) en un medio apropiado hasta que se produce el polipéptido IMI. En otra realización, el método comprende además el aislamiento de los polipéptidos IMI del medio o de la célula huésped. Otro aspecto de la invención pertenece a los polipéptidos IMI aislados y a sus porciones biológicamente activas. Un polipéptido "aislado" o "purificado" o su porción biológicamente activa se encuentra libre de parte del material celular al ser producido mediante técnicas de ADN recombinante, o precursores químicos u otros productos químicos cuando se sintetiza químicamente. La expresión "sustancialmente libre de material celular" incluye las preparaciones del polipéptido IMI en las cuales el polipéptido se separa de algunos de los componentes celulares en el cual se produce naturalmente o por recombinación. En una realización, la expresión "sustancialmente libre de material celular" incluye preparaciones de un polipéptido IMI que presentan menos de aproximadamente el 30% (por peso en seco) de material no IMI (al que también se refiere en la presente como un "polipéptido contaminante"), más preferentemente menos de aproximadamente el 20% de material no IMI, aún más preferentemente menos de aproximadamente el 10% de material no IMI, y lo más preferido es menos de aproximadamente el 5% de material no IMI. Cuando el polipéptido IMI o su porción biológicamente activa se produce por recombinación, preferentemente también se encuentra sustancialmente libre del medio de cultivo, es decir, el medio de cultivo representa menos de aproximadamente un 20%, más preferentemente menos de aproximadamente un 10% y más preferentemente menos de aproximadamente un 5% del volumen de la preparación del polipéptido. La expresión "sustancialmente libre de productos químicos precursores o de otros productos químicos" incluye las preparaciones de polipéptido IMI en las cuales el polipéptido se separa de sus productos químicos precursores o de otros productos químicos que se encuentran implicados en la síntesis de un polipéptido. En una realización, la expresión "sustancialmente libre de productos químicos precursores o de otros productos químicos" incluye las preparaciones de polipéptido IMI que presentan menos de aproximadamente un 30% (peso en seco) de productos químicos precursores o productos químicos, más preferentemente menos de aproximadamente un 10% de productos químicos precursores o productos químicos, y más preferentemente menos de aproximadamente un 5% de productos químicos precursores o productos químicos. En realizaciones preferidas, los polipéptidos aislados, o sus partes biológicamente activas, carecen de los polipéptidos contaminantes del mismo organismo del cual se derivó el polipéptido IMI. Típicamente, dichos polipéptidos se producen mediante expresión recombinante de, por ejemplo, un polipéptido IMI Triticum aestivum en plantas que no sean Triticum aestivum o microorganismos tales como C. glutamicum, ciliados, algas u hongos. Las secuencias de polinucleótido y polipéptido IMI de la invención presentan una variedad diferente de usos. Las secuencias de ácido nucleico y de aminoácidos de la presente invención se pueden utilizar para transformar plantas, y así modular la tolerancia de las plantas a los herbicidas imidazolinonas. De conformidad, la invención proporciona un método para producir una planta transgénica que presenta un aumento de su tolerancia a un herbicida imidazolinona que comprende: (a) la transformación de una célula de una planta con uno o más vectores de expresión que contienen uno o más ácidos nucleicos, y (b) la generación, a partir de la célula de la planta, una planta transgénica que presenta un aumento de tolerancia a un herbicida imidazolinona en comparación con un tipo silvestre de la planta. En una realización, los múltiples ácidos nucleicos IMI se derivan de diferentes genomas. En la presente invención también se incluyen los métodos para la producción de una planta transgénica que presenta un aumento de tolerancia a un herbicida imidazolinona que comprende (a) la transformación de una célula de una planta con un vector de expresión que contiene un ácido nucleico IMI, en donde el ácidcT nucleico es un ácido nucleico no Imi1 y (b) la generación, a partir de la célula de la planta, de una planta transgénica con un aumento de tolerancia a un herbicida imidazolinona en comparación con un tipo silvestre de la planta. La presente invención incluye los métodos para modificar la tolerancia de una planta a un herbicida imidazolinona que comprende la modificación de la expresión de uno o más ácidos nucleicos IMI. La tolerancia de la planta al herbicida imidazolinona se puede aumentar o disminuir según se logre mediante el aumento o la disminución de la expresión de un polinucleótido IMI, respectivamente. Preferentemente, se aumenta la tolerancia de la planta al herbicida imidazolinona mediante el aumento en la expresión de un polinucleótido IMI. La expresión de un polinucleótido IMI se puede modificar mediante la aplicación de cualquier método conocido por aquellos con experiencia en la técnica. Los métodos para aumentar la expresión de polinucleótidos IMI se pueden utilizar en los casos en que la planta es transgénica y en los que no lo es. En los casos en que la planta es transgénica, la planta se puede transformar mediante un vector que contenga cualquiera de los ácidos nucleicos IMI codificadores que se describen más arriba, o se puede transformar la planta con un promotor que dirija la expresión de polinucleótidos IMI endógenos en la planta, por ejemplo. La invención establece que dicho promotor puede ser específico del tejido o regulado según el desarrollo. Alternativamente, las plantas no transgénicas pueden presentar una expresión de polinucleótido IMI endógeno modificada por un promotor nativo. La expresión de polinucleótidos que comprenden una secuencia de polinucleótido tal como se define en SEQ ID NO:1 en las plantas meta se puede lograr mediante uno de los siguientes ejemplos, sin querer limitarse a estos: (a) promotor constitutivo, (b) promotor inducido por productos químicos, y (c) sobre expresión de promotores mediante la aplicación de ingeniería con, por ejemplo, factores de trascripción derivados de los dedos de cinc (Greisman y Pabo, 1997, Ciencia {"Science') 275:657).

En una realización preferida, la trascripción del polinucleótido IMI se modula mediante la utilización de factores derivados de los dedos de cinc (ZFPs) tal como se describe en Peinman y Pabo, 1997, Ciencia ("Science') 275:657 y como lo fabrica Sangamo Biosciences, Inc. Estos ZFPs comprenden tanto el dominio de reconocimiento de ADN como un dominio funcional que causa la activación o la represión de un ácido nucleico meta tal como un ácido nucleico IMI. Por lo tanto, la activación y la represión de los ZFPs se puede crear de manera tal que reconozcan específicamente los promotores de polinucleótido IMI que se describen más arriba y se puede utilizar para aumentar o disminuir la expresión de polinucleótido IMI en una planta, y así lograr modular la tolerancia al herbicida que presenta la planta. Tal como se describe en más detalle más arriba, las plantas producidas mediante los métodos de la presente invención pueden ser monocot o dicot. Las plantas se pueden seleccionar de maíz, trigo, centeno, avena, triticale, arroz, cebada, soja, maní, algodón, colza, cañóla, mandioca, la pimienta, el girasol, tagetes, plantas solanáceas, papa, tabaco, berenjena, tomate, especies Vicia, arveja, alfalfa, café, cacao, te, especies Salix, palmera de aceite o africana, coco, pastos perennes y cultivos forrajeros, por ejemplo. Entre los cultivos forrajeros se incluyen los siguientes, sin limitarse a ellos, agropiro, alpiste (hierba), hierba de Brome, ballico {"Wildryegrass'), Pasto azul, "Orchardgrass", Alfalfa, "Salfoin", Trifolio- trébol, trébol híbrido, trébol de suecia, o trébol de los pantanos ("alsike clover"), trébol rojo, trébol morado, trébol de los prados (Ved clover1), trébol cloroso, trébol de olor ("sweet clover"). En una realización preferida, la planta es una planta de trigo o una planta de triticale. En cada uno de los métodos que se describen más arriba, la célula de la planta incluye lo siguiente, sin limitarse a este listado, protoplasto, célula productora de gametos y una célula que se regenera en una planta entera. Tal como se utiliza en la presente, el término "transgénica" se refiere a las plantas, células de plantas, callos, tejido vegetal, o parte de una planta, que contiene todo o parte de al menos un polinucleótido recombinante. En muchos casos, todo o parte del polinucleótido recombinante se encuentra integrado en forma estable en un cromosoma o en forma estable en un elemento fuera del cromosoma, de manera tal que se transmita a las generaciones subsiguientes. Tal como se describe más arriba, la presente invención revela composiciones y métodos para aumentar la tolerancia a imidazolinona de las plantas o de las semillas en comparación con un tipo silvestre de la planta o semilla. En una realización preferida, la tolerancia a imidazolinona de una planta o de una semilla de trigo se aumenta de manera tal que la planta o la semilla puede soportar una aplicación de herbicida imidazolinona preferentemente de aproximadamente 10-300 g ai ha"1 , más preferentemente 20-160 g ai ha"1, más preferentemente 40-80 g ai ha"1. Tal como se utiliza en la presente, "tolerar" una aplicación de herbicida imidazolinona significa que la planta no muere ante la aplicación o bien que no sufre un daño a causa de dicha aplicación. La presente invención proporciona plantas, partes de plantas, órganos de plantas, tejidos de plantas, células de plantas, semillas y células huésped que presentan un aumento de tolerancia a al menos un herbicida imidazolinona, al comparárselas con un tipo silvestre de una planta, parte de planta, órgano de planta, tejido de planta, células de plantas, semillas y células huésped respectivamente. Se pretende que "una planta, parte de planta, órgano de planta, tejido de planta, células de plantas, semillas y células huésped de tipo silvestre" sea un tipo natural de una planta, parte de planta, órgano de planta, tejido de planta, células de plantas, semillas y células huésped, respectivamente, es de tipo silvestre con respecto de las características de tolerancia a los herbicidas de la planta bajo el Número de Depósito de Patente ATCC PTA-5625 y/o los ácidos nucleicos IMI de la presente invención. Eso significa que dicha planta, parte de planta, órgano de planta, tejido de planta, células de plantas, semillas y células huésped de tipo silvestre no comprenden las características de resistencia a herbicida de la planta bajo el Número de Depósito de Patente ATCC PTA-5625 y/o no comprenden los ácidos nucleicos IMI de la presente invención. El uso de la expresión "tipo silvestre" no pretende, por lo tanto, implicar que una planta, parte de planta, órgano de planta, tejido de planta, células de plantas, semillas y células huésped carezcan de ADN recombinante en su genoma, y/o no comprenden características de tolerancia a los herbicidas y/o ácidos nucleicos IMI diferentes a aquellas características de tolerancia a los herbicidas y ácidos nucleicos IMI de la presente invención. Adicionalmente, en la presente se establece un método para el control de las malezas dentro de las zonas aledañas a las plantas de trigo o a las plantas de triticale, que comprende la aplicación de un herbicida imidazolinona a las malezas y a la planta de trigo o a la planta de triticale, en donde la planta de trigo o la planta de triticale presenta una tolerancia aumentada al herbicida imidazolinona en comparación con un tipo silvestre de la planta de trigo o la planta de triticale, y en donde la planta de trigo o la planta de triticale tolerante a imidazolinona comprende al menos un ácido nucleico IMI. En una realización, la planta comprende múltiples ácidos nucleicos IMI. En otra realización, la planta comprende un ácido nucleico Imi1. Mediante la provisión de plantas de trigo y plantas de triticale que presentan una tolerancia aumentada a imidazolinona, se puede emplear una gran variedad de formulaciones para proteger a las plantas de trigo y a las plantas de triticale de la maleza, de manera tal que se pueda acrecentar el crecimiento de la planta y disminuir la competencia por nutrientes. Se puede utilizar un herbicida imidazolinona por sí mismo para el control de la maleza en las zonas aledañas a las plantas de trigo que se describen en la presente en forma premergente, postemergente, precultivo y durante el cultivo, o bien se puede utilizar una formulación de imidazolinona que contiene otros aditivos. El herbicida imidazolinona se puede utilizar también para el tratamiento de semillas. Entre los aditivos en una formulación de herbicida imidazolinona encontramos otros herbicidas, detergentes, adyuvantes, agentes de distribución, agentes de cohesión, agentes estabilizadores, o del estilo. La formulación de herbicida imizadolinona puede presentarse en preparaciones secas o húmedas y pueden incluir, sin limitarse a, polvos para espolvorear, concentrados emulsificables y concentrados líquidos. El herbicida imidazolinona y las formulaciones de herbicida se pueden aplicar conforme a los métodos convencionales, por ejemplo, pulverización, irrigación, espolvoreo, o del estilo. La presente invención establece además vectores de transformación que comprenden un gen marcador seleccionare de la invención. El gen marcador seleccionare comprende un promotor que conduce la expresión a una célula huésped que se encuentra enlazada operativamente a un ácido nucleico IMI de la invención. El vector de transformación adicionalmente puede comprender un gen que se interesa expresar en la célula huésped y además puede, si así lo desea, incluir una secuencia de dirección al cloroplasto que se encuentra enlazada operativamente al polinucleótido de la invención. La presente invención establece además métodos para la utilización de los vectores de transformación de la invención para la selección de células transformadas con el gen de interés. Tales métodos implican la transformación de una célula huésped con el vector de transformación, exponiendo la célula a un nivel de herbicida imidazolinona o de sulfonilúrea que mataría o inhibiría el crecimiento de una célula huésped no transformada, y la identificación de la célula huésped por su capacidad para crecer en presencia del herbicida. En una realización de la invención, la célula huésped es una célula de una planta y el gen marcador seleccionable comprende un promotor que conduce la expresión a una célula de una planta. Los vectores de transformación de la invención se pueden utilizar para producir plantas transformadas con un gen de interés. El vector de transformación comprenderá un gen marcador seleccionable de la invención y un gen de interés a ser introducido y típicamente expresado en la planta transformada. Dicho gen marcador seleccionable comprende un ácido nucleico IMI de la invención enlazado operativamente a un promotor que conduce su expresión a una célula huésped. El ácido nucleico IMI comprende la secuencia de polinucleótido establecida en SEQ ID NO: 1 , una secuencia de polinucleótido que codifica la secuencia de aminoácido que se establece en SEQ ID NO: 2, y fragmentos funcionales y variantes de cualquiera de estas secuencias de polinucleótidos, en donde el fragmento o la variante codifica un polipéptido que contiene una sustitución de alanina por treonina en la posición 96 correspondiente a un polipéptido AHAS en estado natural. Para su utilización en plantas y en células de plantas, el vector de transformación comprende un gen marcador seleccionable que comprende un ácido nucleico IMI de la invención enlazado operativamente a un promotor que conduce la expresión a una célula de una planta. La invención se refiere también a un vector de expresión de una planta que comprende un promotor que conduce expresión a una planta enlazada operativamente a un ácido nucleico IMI de la invención. El ácido nucleico IMI comprende la secuencia de polinucleótido que se establece en SEQ ID NO: 1 , una secuencia de polinucleótido que codifica la secuencia de aminoácido establecida en SEQ ID NO: 2, y fragmentos funcionales y variantes de cualquiera de estas secuencias de polinucleótidos, en donde el fragmento o la variante codifica un polipéptido que comprende una sustitución alanina por treonina en la posición 96 correspondiente a un polipéptido 5 AHAS de tipo silvestre. El vector de expresión de una planta de la invención no depende de un promotor en particular, sólo depende de que dicho promotor sea capaz de conducir una expresión genética a una célula de una planta. Entre los promotores preferidos se incluyen los promotores constitutivos y los promotores de preferencia por el tejido. Los genes de interés de la invención varían dependiendo del resultado J Q deseado. Por ejemplo, muchos cambios en el fenotipo pueden ser de interés, con inclusión de la modificación de la composición de ácidos grasos en una planta, la alteración del contenido de aminoácidos de una planta, la alteración de los mecanismos de defensa de una planta contra un insecto y/o patógeno, y del estilo. Estos resultados se pueden obtener mediante la provisión de la expresión de productos heterólogos o una expresión aumentada de productos endógenos en las plantas. Alternativamente, los resultados se pueden lograr mediante la provisión de ! 5 una reducción en la expresión de uno o más productos endógenos, particularmente enzimas o cofactores en la planta. Estos cambios resultan en un cambio en el fenotipo de la planta transformada. En una realización de la invención, entre los genes de interés se incluye genes de resistencia a los insectos tal como, por ejemplo, genes de la proteína de la toxina Bacillus thuringiensis (Patente de Estados Unidos Números 5.366.892; 5.747.450; 5.736.514; 5.723.756; 5.593.881 ; y Geiser y col. (1986) Gen (Gene) 48:109). 20 Las proteínas o los polipéptidos IMI de la invención se pueden purificar de, por ejemplo, plantas de cañóla, y se pueden utilizar en compuestos. Asimismo, un ácido nucleico IMI aislado que codifica una proteína IMI de la invención se puede utilizar para expresar una proteína IMI de la invención en un microbio tal como E. coli o una levadura. La proteína IMI expresada se puede purificar a partir de extractos de £. co// o levadura mediante cualquier método conocido por aquellos con conocimiento normal en la técnica. ~J En ciertas realizaciones de la invención, los métodos implican el uso de plantas tolerantes a los herbicidas o resistentes a los herbicidas. Se pretende que una planta "resistente a los herbicidas" o "tolerante a los herbicidas" sea una planta que es tolerante o resistente a al menos un herbicida aplicado al nivel que normalmente mataría o inhibiría el crecimiento de una planta normal o de tipo silvestre. En una realización de la invención, las plantas tolerantes a los herbicidas de la invención comprenden un ácido nucleico IMI que codifica una proteína IMI. Para la presente invención, las expresiones "tolerante a los herbicidas" y 5 "resistente a los herbicidas" se utilizan en forma intercambiable y se pretende que posean un significado equivalente y el mismo alcance. Similarmente, las expresiones "tolerancia a los herbicidas" y "resistencia a los herbicidas" se utilizan en forma intercambiable y se pretende que posean un significado equivalente y el mismo alcance. De igual forma, las expresiones "resistente a ¡midazolinona" y "resistencia a ¡midazolinona" se utilizan en forma intercambiable y se pretende que posean un J Q significado equivalente y el mismo alcance que las expresiones "tolerante a imidazolinona" y "tolerancia a ¡midazolinona" respectivamente. La presente invención proporciona plantas, tejidos de plantas, células de plantas y células huésped con una resistencia o tolerancia aumentada a al menos un herbicida, particularmente un herbicida que interfiere con la actividad de la enzima AHAS, más particularmente un herbicida imidazolinona o sulfonilúrea. La cantidad o la concentración preferida de un herbicida busca significar una "cantidad efectiva" o una 1 5 "concentración efectiva". Por "cantidad efectiva" o "concentración efectiva" se entiende la cantidad o la concentración, respectivamente, suficiente para matar o inhibir el crecimiento de una planta, un tejido vegetal, una célula de una planta, microespora, o célula huésped similar de tipo silvestre, peroque dicha cantidad no mataría ni inhibiría tan severamente el crecimiento de las plantas, tejidos vegetales, células vegetales, mocroesporas, y células huésped resistentes al herbicida de la presente invención. Típicamente, la cantidad efectiva de un herbicida es la cantidad que se utiliza de rutina 20 en sistemas de producción agrícola para matar a las malezas que se desea eliminar.

Tal cantidad es conocida por aquellos con una experiencia normal en la técnica, o bien se puede determinar con facilidad mediante la utilización de métodos conocidos en la técnica. Sumado a ello, se reconoce que la cantidad efectiva de un herbicida en un sistema de producción agrícola puede ser sustancialmente diferente a una cantidad efectiva de herbicida en un sistema de cultivo vegetal in Vitro. Los ácidos nucleicos IMI de la presente invención se pueden utilizar para la transformación de cualquier especie de planta, con inclusión de monocots y dicots, pero sin limitarse a ellas. Entre los ejemplos de especies vegetales de interés encontramos, maíz (Zea mays), Brassica sp. (por ejemplo, B. napus, B. rapa, B. júncea), particularmente aquellas especies de Brassica útiles como fuente de aceite de semilla, alfalfa (Medicago sativa), arroz (Ryza sativa), sorgo (Sorghum bicolor, Sorghum vulgare), mijo (por ejemplo, mijo perla (Pennisetum glaucum), mijo proso (Panicum miliaceum), mijo de cola de zorra {Setaria itálica), mijo dedo (Eleucine coracana), girasol {Helianthus annuus), cártamo {Carthamus tinctorius), trigo (Triticum 5 aestivum, T. Turgifum ssp. durum), soja {Glycine max), tabaco {Nicotiana tabacum), papa (Solanum tuberosum), maní (Arachis hypogaea), algodón (Gossypium barbadense, Gossypium hirsutum), batata (Ipomoea batatus), madioca {Manihot esculenta), café {Coffea spp.) coco {Cocos nucífera), ananá (Ananas comosus), árbol de cítrico (Citrus spp.), cacao (Theobroma cacao), te (Camellia sinensis), banana (Musa spp.), palta (Persea americana), higo (Picus casica), guayaba (Psidium J Q guajava), mango (Magnifera indica), aceituna (Olea europaea), papaya (Carica papaya), cayú (Anacardium occidentale), macadamia (Macadamia integrifolia), almendra (Prunas amygdalus), remolacha azucarera (Beta vulgarís), caña de azúcar (Saccharum spp.), avenas, cebada, verduras, ornamentales y coniferas, pero sin limitarse a estas. Preferentemente, las plantas de la presente invención son las plantas de cultivo (por ejemplo, girasol, Brassica sp., algodón, azúcar, remolacha, soja, maní, alfalfa, cártamo, tabaco, maíz, arroz, trigo, centeno, triticale cebada, sorgo, mijo, etc.). 15 La plantas de la invención resistentes a los herbicidas encuentran su utilidad en los métodos para el control de las malezas. De esta manera, la presente invención proporciona además un método para el control de malezas en las zonas aledañas a una planta resistente a los herbicidas de la invención. El método comprende la aplicación de una cantidad efectiva de un herbicida a las malezas y a la planta resistente a herbicidas, en donde la planta presenta una resistencia aumentada a al menos un herbicida, particularmente a un herbicida imidazolinona o sulfonilúrea, al 20 comparársela con una planta de tipo silvestre. En dicho método para el control de malezas, la plantas resistentes a los herbicidas de la invención preferentemente son plantas de cultivo, con inclusión de las siguientes, pero sin limitarse a ellas, girasol, alfalfa, Brassica sp., soja, algodón, cártamo, maní, tabaco, tomate, papa, trigo, maíz, arroz, sorgo, cebada, centeno, mijo y sorgo. Mediante la provisión de plantas que presentan una resistencia aumentada a herbicidas, especialmente a herbicidas ¡midazolinonas o sulfonilúreas, se puede 25 emplear una gran variedad de formulaciones para proteger a las plantas de las malezas, y así poder acrecentar el crecimiento de las plantas y disminuir la competencia por los nutrientes. Un herbicida sólo puede utilizarse por sí mismo como premergente, postemergente, precultivo y al momento de cultivar, como control de las malezas en la zona aledaña a las plantas que se describen en la presente, o se puede utilizar una formulación de herbicida imidazolinona que contenga otros aditivos. El herbicida también se puede utilizar para el tratamiento de la semilla. Es decir, una concentración efectiva o una cantidad efectiva de herbicida, o una composición que 5 contiene una concentración efectiva o una cantidad efectiva del herbicida, se puede aplicar directamente a las semillas antes de la siembra o durante la siembra de las semillas. Los aditivos que se encuentran en la formulación o la composición de herbicidas imidazolinonas o sulfonilúreas incluyen otros herbicidas, detergentes, adyuvantes, agentes de diseminación, agentes de cohesión, agentes estabilizadores, o del estilo. La formulación de herbicida imizadolinona puede presentarse en J Q preparaciones secas o húmedas y pueden incluir, sin limitarse a éstas, polvos para espolvorear, concentrados emulsificables y concentrados líquidos. El herbicida imidazolinona y las formulaciones de herbicida se pueden aplicar conforme a lo métodos convencionales, por ejemplo, pulverización, irrigación, espolvoreo, o del estilo. La presente invención proporciona semillas no transgénicas y transgénicas con una tolerancia aumentada a al menos un herbicida, particularmente un herbicida 15 inhibidor de AHAS, más específicamente a un herbicida imidazolinona. Entre dichas semillas se incluye, por ejemplo, semillas de trigo no transgénicas de la planta bajo el Número de Denominación de Depósito de Patente ATCC PTA-5625 que comprenden características de tolerancia a herbicidas, y semillas transgénicas que comprenden , una molécula de ácido nucleico IMI de la invención que codifica una proteína IMI. La presente invención establece métodos para la producción de una planta resistente a los herbicidas, especialmente una planta de trigo o una planta de triticale 20 resistente a los herbicidas, mediante el cultivo convencional de las plantas que implica la reproducción sexual. Los métodos comprenden el cruzamiento de una primera planta resistente a un herbicida con una segunda planta que no es resistente al herbicida. La primera planta puede ser cualquiera de las plantas resistentes a herbicidas de la presente invención con inclusión, por ejemplo, de plantas transgénicas que comprenden al menos uno de los polinucleótidos de la presente invención que codifica una proteína IMI resistente a herbicidas y las plantas de trigo no transgénicas 25 qUe comprenden las características de tolerancia a los herbicidas de la planta de trigo que se encuentra bajo el Número de Denominación de Depósito de Patente ATCC PTA-5625. La segunda planta puede ser cualquier planta que sea capaz de producir progenies viables de plantas (es decir, semillas) al ser cruzada con la primera planta. Típicamente, pero no necesariamente, la primera y la segunda planta pertenecen a la misma especie. Los métodos de la invención además pueden implicar una o más generaciones de retrocruzamiento de plantas de progenie del primer cruzamiento con una planta de la misma línea o genotipo de cualquiera de las dos plantas, la primera o 5 la segunda. Alternativamente, la progenie de primer cruzamiento o cualquier cruzamiento subsiguiente se puede cruzar con una tercera planta que pertenece a una línea o genotipo diferente a la de la primera o de la segunda planta. Los métodos de la invención adicionalmente pueden implicar la selección de plantas que comprenden las características de tolerancia a los herbicidas de la primera planta. La presente invención además proporciona métodos para aumentar la I Q resistencia a herbicidas de una planta, particularmente una planta de trigo resistente a herbicidas, mediante el cultivo convencional de la planta que implica la reproducción sexual. Los métodos comprenden el cruzamiento de una primera planta resistente a un herbicida con una segunda planta que puede o no ser resistente al herbicida o que bien puede ser resistente a un herbicida o a varios herbicidas diferentes a los que es resistente la primera planta. La primera planta puede ser cualquiera de las plantas resistentes a herbicidas de la presente invención con inclusión, por ejemplo, de plantas 15 transgénicas que comprenden al menos uno de los ácidos nucleicos IMI de la presente invención que codifica una proteína IMI y las plantas de trigo y de triticale no transgénicas que comprenden las características de tolerancia a herbicidas de la planta de trigo que se encuentra bajo el Número de Denominación de Depósito de Patente ATCC PTA-5625. La segunda planta puede ser cualquier planta que sea capaz de producir progenies viables de plantas (es decir, semillas) al ser cruzada con la primera planta. Típicamente, pero no necesariamente, la primera y la segunda 20 planta pertenecen a la misma especie. Las plantas progenies producidas mediante este método de la presente invención presentan una resistencia aumentada a un herbicida al ser comparadas ya sea con la primera o la segunda planta o con ambas. Cuando la primera y la segunda planta son resistentes a diferentes herbicidas, las plantas progenie tendrán características de tolerancia a herbicidas combinadas de la primera y la segunda planta. Los métodos de la invención además pueden implicar una o más generaciones de retrocruzamiento de plantas de progenie del primer 25 cruzamiento con una planta de la misma línea o genotipo de cualquiera de las dos plantas, la primera o la segunda. Alternativamente, se puede cruzar la progenie de primer cruzamiento o cualquier cruzamiento subsiguiente con una tercera planta que pertenece a una línea o genotipo diferente a la de la primera o de la segunda planta. Los métodos de la invención adicionalmente pueden implicar la selección de plantas que comprenden las características de tolerancia a herbicidas de la primera planta, de la segunda planta, o de ambas, la primera y la segunda planta. Las plantas de la presente invención pueden ser transgénicas o no transgénicas. Un ejemplo de una planta de trigo no transgénica que presenta un aumento en su resistencia a imidazolinona es la planta de trigo (Shiloh-8) bajo el Número de Denominación de Depósito de Patente ATCC PTA-5625; o derivados mutantes, recombinantes, o de ingeniería genética de la planta bajo el Número de Denominación de Depósito de Patente ATCC PTA-5625; o de cualquiera de la progenie de la planta bajo el Número de Denominación de Depósito de Patente ATCC PTA-5625; o una planta progenie de cualquiera de las plantas que anteceden; o una planta que comprende las características de tolerancia a herbicidas de la planta bajo el Número de Denominación de Depósito de Patente ATCC PTA-5625. Las presente invención establece además plantas, órganos de plantas, tejidos de plantas, células de plantas, semillas y células huésped no humanas que se transforman con la al menos única molécula de polinucleótido, cásete de expresión o vector de transformación de la invención. Dichas plantas, órganos de plantas, tejidos de plantas, células de plantas, semillas y células no humanas transformadas presentan una tolerancia o una resistencia aumentada a al menos un herbicida, a los niveles en que el herbicida mata o inhibe el crecimiento de una planta, un tejido de una planta, una célula de planta o una célula huésped no humana no transformada, respectivamente. Preferentemente, la plantas, los tejidos de plantas, las células de las plantas y las semillas transformadas de la invención son Arabidopsis thaliana y plantas de cultivo. La presente invención brinda métodos que implican el uso de al menos un herbicida inhibidor de AHAS seleccionado del grupo conformado por herbicidas imidazolinona, herbicidas sulfonilúrea, herbicidas triazolopirimidina, herbicidas pirimidiniloxibenzoico, herbicidas sulfonilamino-carboniltriazolinona, y mezclas de ellos. En estos métodos, el herbicida inhibidor de AHAS se puede aplicar mediante cualquier método conocido en la técnica con inclusión, no restrictiva, de tratamiento de semilla, tratamiento del suelo y tratamiento foliar. Antes de su aplicación, se puede convertir al herbicida inhibidor de AHAS en las formulaciones que se acostumbra utilizar, por ejemplo, soluciones, emulsiones, suspensiones, polvos, pastas y gránulos. La forma de uso depende del objetivo en particular a cumplir; en todos los casos, debe asegurar una distribución fina y pareja del compuesto de acuerdo con la invención. Las formulaciones se preparan en la formas conocidas (ver, por ejemplo, para su estudio Estados Unidos 3.060.084, EP-A 707 445 (para concentrados líquidos), Browning, Aglomeración {Agglomeration), Ingeniería Química, 4 de diciembre de 1967, 147-8, El Manual de Ingeniería Química de Perry {Perry's Chemical Engineer's Handbook), 4ta Edición, McGraw-Hill, New York, 1963, páginas 8-57 y sig. WO 91/13456, Estados Unidos 4.172.714, Estados Unidos 4.144.050, Estados Unidos 3.920.442, Estados Unidos 5.180.587, Estados Unidos 5.232.701 , Estados Unidos 5.208.030, GB 2.095.558, Estados Unidos 3.299.566, Klingman, El Control de la Maleza como una Ciencia (Weed Control as a Science), John Wiley and Sons, Inc., Nueva York, 1961 , Hance y col., El Manual de Control de la Maleza {Weed Control Handbook), 8va Edición, Blackwell Scientific Publications, Oxford, 1989 y Mollet, H. Grubermann, A., Tecnología de Formulación (Formulation technology'), Wiley VCH Verlag GmbH, Weinheim (Alemania), 2001 , 2. D.A. Knowles, Química y Tecnología de Formulaciones Agrícolas ("Chemistry and Technology of Agricultural Formulations"), Kluwer Academic Publishes, Dordrecht, 1998 (ISBN 0-7514-0443-8), por ejemplo mediante la extensión del compuesto activo con auxiliares adecuados para la formulación de agroquímicos, tales como solventes y/o transportadores, si se desea emulsionantes, surfactantes y dispersantes, conservantes, agentes anti-espuma, agentes antí-congelantes, para las formulaciones para el tratamiento de semillas también opcionalmente, colorantes y/o adhesivos y/o agentes gelificantes. Entre los ejemplos de los solventes adecuados encontramos, el agua, los solventes aromáticos (por ejemplo, productos de Solvesso, xileno), las parafinas (por ejemplo fracciones de aceite mineral), los alcoholes (por ejemplo, metanol, butanol, pentanol, alcohol benzilo), las cetonas (ciclohexanona, gamma-butirolactona), las pirrolidonas (NMP, NOP), los acetatos (diacetato de glicol), los glicoles, las dimetilamidas de ácidos grasos y los esteres de ácidos grasos. En principio, también se pueden utilizar mezclas de solventes. Entre los ejemplos de los transportadores adecuados encontramos los minerales naturales de la tierra (por ejemplo, caolín, arcilla, talco, cal) y los minerales sintéticos de la tierra (por ejemplo, altamente dispersa sílice, silicatos). Los emulsionantes adecuados son los emulsionantes no iónicos y aniónicos (por ejemplo, ester del acohol graso del polioxietileno, alquilsulfonatos y arilsulfonatos).

Ejemplos de dispersantes son licores residuales de sulfito de lignina y metilcelulosa. Los surfactantes adecuados son los metales alcalinos, metales alcalinos de la tierra y sales de amoníaco de ácido lignosulfónico, ácido naftalensulfonico, ácido fenolsulfónico, ácido dibutilnaftalensulfónico, alquilarilsulfonatos, alquilsulfatos, alquilsulfonatos, sulfatos de alcohol graso, ácidos grasos y ácidos grasos sulfatados 5 de éteres de alcohol glicólico, además condensados de naftaleno sulfonado y derivados de naftaleno con formaldehído, condensados de naftaleno o de ácido naftalensulfonico con fenol y formaldehído, éter de octilfenol polioxietileno, isooctilfenol etoxilado, octilfenil, nonilfelón, éteres alquilfenol poliglicólico, éter tributilfenilglicol, éter poliglicol tristearilfenil, alocoholes alquilarílicos de polieter, condensados de de alcohol y alcohol graso de óxido de etileno oxide, aceite de ricino etoxilado, éteres I Q alquilopoliexietileno, polioxipropileno etoxilado, acetal éter de poliglicol lauril alcohol, esteres de sorbitol, desperdicios de licor de lignosulfito y metilcelulosa. La sustancias que son adecuadas para la preparación de soluciones, emulsiones, pastas o dispersiones de aceite pulve zables directamente son fracciones de aceite mineral del punto de ebullición medio a elevado, tales como kerosén o combustible diesel, además aceites de alquitrán de hulla y aceites de origen vegetal o animal, alifáticos, hidrocarburos cíclicos y aromáticos, por ejemplo, tolueno, xileno, 1 5 parafina, tetrahidronaftaleno, naftalenos alquilados o sus derivados, metanol, etanol, propanol, butanol, ciclohexanol, ciclohexanona, isoforona, solventes altamente polares, por ejemplo, dimetilsulfóxido, N-metilpirrolidona o agua. Así como también se puede agregar agentes anti-congelantes tales como glicerina, etilenglicol, propilenglicol y bactericidas como tales se pueden agregar a la formulación. Entre los agentes anti-espuma adecuados encontramos por ejemplo los 20 agentes anti-espuma que se basan en silicio y estearato de magnesio. Conservantes adecuados son, por ejemplo, diclorofeno und enzylalkoholhemiformal. Las formulaciones para el tratamiento de semillas pueden comprender además aglutinantes y opcionalmente colorantes. Los aglutinantes se pueden agregar para mejorar la adhesión de los materiales activos a las semillas después del tratamiento. Entre los aglutinantes adecuados J encontramos copolímeros surfactantes EO/PO en bloque pero también, acoholes polivinílicos, polivinilpirrolidonas, poliacrilatos, polimetacrilatos, polibutenos, polisobutilenos, poliestireno, polietileniminas, polietileneamidas, polietileniminas (Lupasol©, Polymin®), poliéters, poliuretanos, acetato de polivinilo, tilosa y copolímeros derivados de estos polímeros. Opcionalmente, también se pueden incluir colorantes en la formulación. Los colorantes o las tinturas adecuadas para las formulaciones para el tratamiento de semillas son Rhodamina B, Cl Pigmento Rojo 112, Cl Solvente Rojo 1 , pigmento azul 5 15:4, pigmento azul 15:3, pigmento azul 15:2, pigmento azul 15:1 , pigmento azul 80, pigmento amarillo 1 , pigmento amarillo 13, pigmento rojo 1 12, pigmento rojo 48:2, pigmento rojo 48:1 , pigmento rojo 57:1 , pigmento rojo 53:1 , pigmento naranja 43, pigmento naranja 34, pigmento naranja 5, pigmento verde 36, pigmento verde 7, pigmento blanco 6, pigmento marrón 25, violeta básico 10, violeta básico 49, rojo ácido 51 , rojo ácido 52, rojo ácido 14, azul ácido 9, amarillo ácido 23, rojo básico 10, rojo J Q básico 108. Ejemplos de un agente gelificante adecuado es carragahen (Satiagel®). Polvos, materiales para dispersión, y productos en polvo se pueden preparar mezclando o moliendo en forma concomitante las sustancias activas con un transportador sólido. Los gránulos, por ejemplo los gránulos recubiertos, los gránulos impregnados y los gránulos homogéneos, se pueden preparan mediante la unión de compuestos 15 activos con transportadores sólidos. Entre los ejemplos de los transportadores sólidos encontramos las tierras minerales tales como geles de sílice, silicatos, talco, caolín, "attaclay", piedra caliza, cal, creta, tierra arcillosa fina, loes, arcilla, dolomita, tierra diatomácea, sulfato de calcio, sulfato de magnesio, óxido de magnesio, materiales sintéticos de la tierra, fertilizantes, tales como, sulfato de amoníaco, fosfato de amoníaco, nitrato de amoníaco, ureas, y productos de origen vegetal, tales como harina de cereal, harina de corteza de árbol, aserrín y harina de cáscara de nuez, 20 polvos de celulosa y otros transportadores sólidos. En general, las formulaciones comprenden de 0,01 al 95% por peso, preferentemente de 0,1 al 90% por peso, del herbicida inhibidor de AHAS. En este caso, los herbicidas inhibidores de AHAS se emplean con una pureza de un 90% al 100% por peso, preferentemente del 95% al 100% por peso (de acuerdo con el espectro NMR). Para el tratamiento de las semillas, las formulaciones respectivas se pueden diluir en 2-10 veces llevando a concentraciones en las preparaciones listas 2$ para usar del 0,01% al 60% por peso de componente activo por peso, preferentemente 0,1 % al 40% por peso. El herbicida inhibidor de AHAS se puede utilizar como tal, en la forma de sus formulaciones o el uso de formas preparadas a partir de ellas, por ejemplo, en forma de soluciones, suspensiones o dispersiones, emulsiones, dispersiones de aceite, pastas, productos en polvo, materiales para desparrame, o gránulos directamente pulverizables, por medio de pulverización, atomización, espolvoreo, dispersión o vertido. Las formas de uso dependen por completo de la finalidad que se pretende; buscando asegurar en cada caso asegurar la distribución más prolija del herbicida inhibidor de AHAS de acuerdo con la invención. Las formas de uso acuosas se pueden preparar a partir de concentrados emulsionados, pastas o polvos mojables (polvos pulverizables, dispersiones de aceite) mediante la adición de agua. Para preparar emulsiones, pastas o dispersiones de aceite, las substancias, como tales o disueltas en un aceite o en un solvente, se pueden homogeneizar en agua por medio de un humectante, espesante, dispersante o emulsionante. Sin embargo, es también posible preparar concentrados compuestos de sustancia activa, un humectante, un espesante, un dispersante o emulsionante y, si corresponde, solvente o aceite, y tales concentrados son adecuados para su dilución con agua. Las concentraciones de compuesto activo en las preparaciones listas para usar pueden variar dentro de rangos relativamente amplios. En general, los rangos van desde 0,0001 a 10% preferentemente desde 0,01 al 1 % por peso. El herbicida inhibidor de AHAS también se puede usar con éxito en el proceso de volumen ultra bajo (ULV); siendo posible aplicar formulaciones que comprenden sobre el 95% en peso del compuesto activo, o incluso aplicar el compuesto activo sin los aditivos. A continuación se presentan ejemplos de formulaciones: 1. Productos para su dilución en agua para aplicaciones foliares. Para el tratamiento de semillas, dichos productos se pueden aplicar a la semilla ya sea diluido o sin diluir. A) Concentrados solubles en agua (SL, LS) Diez partes por peso del herbicida inhibidor de AHAS se disuelven en 90 partes en peso de agua o de un solvente soluble en agua. Como alternativa, se agregan humectantes u otros auxiliares. El herbicida inhibidor de AHAS se disuelve ante su dilución con agua, por medio de lo cual se obtiene una formulación con 10% (p/p) de herbicida inhibidor de AHAS. B) Concentrados dispersables (DC) Veinte partes por peso de herbicida inhibidor de AHAS se disuelven en 70 partes por peso de ciclohexanona con adición de 10 partes en peso de un dispersante, por ejemplo, polivinilpirrolidona. La dilución con agua le brinda una dispersión, mediante los cual se obtiene una formulación con 20% (p/p) de herbicida inhibidor de AHAS. C) Concentrados emulsificables (EC) Quince partes por peso del herbicida inhibidor de AHAS se disuelven en 7 partes en peso de xileno con adición de dodecilbencenosulfonato de calcio y aceite de ricino etoxilado (en cada caso 5 partes en peso). La dilución con agua brinda emulsión, mediante lo cual se obtiene una formulación con 15% (p/p) de herbicida inhibidor de AHAS. D) Emulsiones (EW, EO, ES). Veinticinco partes por peso del herbicida inhibidor de AHAS se disuelven en 35 partes en peso de xileno con adición de dodecilbencenosulfonato de calcio y aceite de ricino etoxilado (en cada caso 5 partes en peso). La mezcla se introduce en 30 partes en peso de agua por medio de una máquina emulsionante (por ejemplo, Ultraturrax) y se transforma en una emulsión homogénea. La dilución con agua brinda emulsión, mediante lo cual se obtiene una formulación con 25% (p/p) de herbicida inhibidor de AHAS. E) Suspensiones (SC, OD, FS). En un molino de bolas agitado, 20 partes en peso de herbicida inhibidor de AHAS se tritura con 10 partes en peso de dispersantes, humectantes y 70 partes en peso de agua o de un solvente orgánico para brindar una suspensión de herbicida inhibidor de AHAS fina. La dilución con agua brinda una suspensión estable del herbicida inhibidor de AHAS, mediante lo cual se obtiene una formulación con 20% (p/p) de herbicida inhibidor de AHAS. F) Gránulos dispersables con agua y gránulos solubles en agua (WG, SG) Cincuenta partes en peso del herbicida inhibidor de AHAS se muelen en froma refinada con la adición de 50 partes en peso de dispersantes y humectantes y se transforman en gránulos dispersables con agua o solubles en agua por medio de artefactos técnicos (por ejemplo, extrusión, torre de rociado, lecho fluidizado). La dilución con agua produce una dispersión o solución estable del herbicida inhibidor de AHAS, mediante lo cual se obtiene una formulación con 50% (p/p) de herbicida inhibidor de AHAS. G) Polvos dispersables con agua o polvos solubles en agua (WP, SP, SS, WS). 5 Setenta y cinco partes en peso del herbicida inhibidor de AHAS se muelen en un molino rotor-estator y se agregan 25 partes en peso de dispersantes, humectantes y gel de sílice. La dilución con agua brinda una dispersión o solución estable del herbicida inhibidor de AHAS, mediante lo cual se obtiene una formulación con 75% (p/p) de herbicida inhibidor de AHAS. J Q I) Formulación en gel (GF). En un molino de bolas agitado, 20 partes en peso del herbicida inhibidor de AHAS se trituran junto con 10 partes en peso de dispersantes, 1 parte en peso de un agentes gelificantes humectantes y 70 partes en peso de agua o de un solvente orgánico para obtener una suspensión refinada de herbicida inhibidor de AHAS. La dilución con agua brinda una suspensión estable del herbicida inhibidor de AHAS, mediante lo 15 cual se obtiene una formulación con 20% (p/p) de herbicida inhibidor de AHAS. Esta formulación constituye un gel apto para el tratamiento de semillas. 2. Productos a ser aplicados sin diluir para su aplicación foliar. Para el tratamiento de semillas, dichos productos deben diluirse para su aplicación en las semillas. A) Polvos para espolvorear (DP, DS). 20 Cinco partes en peso del herbicida inhibidor de AHAS se muelen finamente y se mezclan muy bien con 95 partes en peso de caolín dividido finamente. Como resultado se obtiene un producto espolvoreable que presenta 5% (p/p) de herbicida inhibidor de AHAS. B) Gránulos (GR, FG, GG, MG) Media parte por peso del herbicida inhibidor de AHAS se muele finamente y se asocia con 95,5 partes en peso de transportadores, 25 mediante lo cual se obtiene una formulación con 0,5% (p/p) de herbicida inhibidor de AHAS. Los métodos actuales son la extrusión, el secado por pulverizado o lecho fluidizado. Como resultado se obtienen gránulos para su aplicación foliar sin previa dilución. Las formulaciones convencionales para el tratamiento de las semillas incluyen por ejemplo los concentrados FS autosuspensibles, soluciones LC, polvos DS para el tratamiento en seco, polvos dispersables SS en agua para tratamiento en mezcla y emulsión ES y EC y formulación en gel GF. Estas formulaciones se pueden aplicar a las semillas estando ya diluidas o sin diluir. La aplicación a las semillas se realiza antes de la siembra, o directamente sobre las semillas. En una realización preferida se utiliza una formulación FS para el tratamiento de las semillas. Típicamente, una formulación FS puede comprender 1-800 g/l de ingrediente activo, 1 -200 g/l de surfactante, 0 a 200 g/l de agente anti-congelante, 0 a 400 g/l de aglutinante, 0 a 200 g/l de un pigmento y hasta 1 litro de un solvente, preferentemente agua. La presente invención semillas no-transgénicas y transgénicas de las plantas resistentes a los herbicidas. Entre dichas semillas se incluyen, por ejemplo, las semillas de trigo no transgénicas que comprenden las características de tolerancia a los herbicidas de la planta bajo el Número de Depósito de Patente ATCC PTA-5625, y semillas transgénicas que comprenden la molécula de polinucleótido de la invención que codifican una proteína IMI. Para el tratamiento de las semillas, de conformidad con la presente invención, las semillas de las plantas resistentes a los herbicidas preferentemente los herbicidas seleccionados del grupo conformado por los herbicidas inhibidores de AHAS tales como amidosulfurón, azimsulfurón, bensulfurón, clorimurón, clorsulfurón, cinosulfurón, ciclosulfamurón, etametsulfurón, etoxisulfurón, flazasulfurón, flupirsulfurón, foramsulfurón, halosulfurón, imazosulfurón, iodosulfurón, mesosuifurón, metsulfurón, nicosulfurón, oxasulfurón, primisulfurón, prosulfurón, pirazosulfurón, rimsulfurón, sulfometurón, sulfosulfurón, tifensulfurón, triasulfurón, tribenurón, trifloxisulfurón, triflusulfurón, tritosulfurón, imazametabenz, imazamox, imazapic, imazapir, ¡mazaquín, imazetapir, cloransulam, diclosulam, florasulam, flumetsulam, metosulam, penoxsulam, bispiribac, piriminobac, propoxicarbazona, flucarbazona, piribenzoxim, piriftalid, piritiobac, y mezclas de ellos, o con una formulación que comprende un herbicida inhibidor de AHAS. La expresión tratamiento de semillas abarca a todas las técnicas adecuadas para el tratamiento de las semillas que se conocen en la técnica, tales como el recubrimiento de las semillas, el revestimiento de las semillas, el espolvoreo de las semillas, mojado de las semillas, y peleteado de semillas.

De conformidad con una variante de la presente invención, otro objeto de la invención es un método para el tratamiento del suelo mediante a la aplicación, en especial dentro de la sembradora: ya sea una formulación granular que contiene el herbicida inhibidor de AHAS o una composición/formulación (por ejemplo, una formulación granular, opcionalmente con uno o más sólidos o líquidos, transportadores aceptados en la agricultura y/o opcionalmente con uno o más surfactantes aceptados en la agncultura. Este método se usa ventajosamente, por ejemplo, en los plantíos de cereales, maíz, algodón o girasol. La presente invención comprende semillas recubiertas o que contienen una formulación para el tratamiento de semillas que comprende al menos un herbicida inhibidor de AHAS seleccionado del grupo conformado por amidosulfurón, azimsulfurón, bensulfurón, clorimurón, clorsulfurón, cinosulfurón, ciclosulfamurón, etametsulfurón, etoxisulfurón, flazasulfurón, flupirsulfurón, foramsulfurón, halosulfurón, ¡mazosulfurón, iodosulfurón, mesosulfurón, metsulfurón, nicosulfurón, oxasulfurón, primisulfurón, prosulfurón, pirazosulfurón, rimsulfurón, sulfometurón, sulfosulfurón, tifensulfurón, triasulfurón, tribenurón, trifloxisulfurón, triflusulfurón, tritosulfurón, imazametabenz, imazamox, imazapic, imazapir, imazaquín, imazetapir, cloransulam, diclosulam, florasulam, flumetsulam, metosulam, penoxsulam, bispiribac, piriminobac, propoxicarbazona, flucarbazona, piribenzoxim, piriftalid y piritiobac. El término semilla abarca las semillas y los propágulos de las plantas de todo tipo con inclusión de semillas verdaderas, pedazos de semillas, chupones, bulbos, frutos, tubérculos, granos, estacas, "cut shoot", y del estilo, sin limitarse a este listado, y en una realización preferida significa semillas verdaderas. La expresión "recubierta con y/o que contiene" en términos generales significa que el ingrediente activo se encuentra en su mayor parte en la superficie del producto de propagación al momento de aplicación, a pesar de que una mayor o menor parte del ingrediente pueda penetrar en el producto de propagación, dependiendo del método de aplicación. Cuando se (re)siembra dicho producto de propagación, este puede absorber el ingrediente activo. La aplicación del tratamiento de las semillas con el herbicida inhibidor de AHAS o con una formulación que comprende al herbicida inhibidor de AHAS se realiza mediante pulverización o espolvoreo de las semillas antes de sembrar las plantas y antes de la emergencia de las plantas. En el tratamiento de las semillas, las formulaciones que corresponden se aplican mediante el tratamiento de las semillas con una cantidad efectiva del herbicida inhibidor de AHAS o con una formulación que comprende el herbicida inhibidor de AHAS. En este caso, las proporciones de aplicación en general son desde 0,1 g a 10 kg de la a. i. (o de la mezcla de a.i. o de la formulación) cada 100 kg. de semilla, preferentemente de 1 g a 5 kg. cada 100 kg. de semilla, en especial desde 1 g hasta 2,5 kg. cada 100 kg. de semilla. Para ciertos cultivos en particular, tal como la lechuga, las proporciones pueden ser más altas. La presente invención proporciona un método para combatir la vegetación no deseada y para controlar las malezas que están en contacto con las semillas de las plantas resistentes de acuerdo con la presente invención antes de la siembra y/o antes de la pregerminacion con un herbicida inhibidor de AHAS. El método puede además comprender la siembra de las semillas, por ejemplo, en suelo o en un campo o en un medio de tierra orgánica en un invernadero. El método presenta una utilidad particular para combatir la vegetación no deseada o para controlar a las malezas en las zonas inmediatamente aledañas a la semillas. El control de la vegetación no deseada se entiende que significa matar a las malezas y/o bien retardar o inhibir el crecimiento normal de las malezas. Por malezas, en su sentido más amplio, se entiende que significa toda aquella planta que crece en un lugar en el que no se las desea. Las malezas de la presente invención incluyen, por ejemplo, las malezas dicotiledóneas y monocotiledóneas. Entre las malezas dicotiledóneas se incluyen las siguientes, sin limitarse a ellas, Sinapsis, Lepidium, Galium, Stellaria, Matricaria, Anthemis, Galinsoga, Chenopodium, Urtica, Senecio, Amaranthus, Portulaca, Xanthium, Convolvulus, Ipomoea, Polygonum, Sesbania, Ambrosia, Cirsium, Carduus, Sonchus, Solanum, Roríppa, Rotala, Lindemia, Lamium, Verónica, Abutilón, Emex, Datura, Viola, Galeopsis, Papaver, Centaurea, Trifolium, Ranunculus y Taraxacum. Entre las malezas monocotiledóneas encontramos las siguientes, sin limitarse a ellas, a las malezas de los géneros: Echinochloa, Setaria, Panicum, Digitaría, Phleum, Poa, Festuca, Eleusine, Brachiaria, Lolium, Bromus, Avena, Cyperus, Sorghum, Agropyron, Cynodon, Monochoria, Fimbrístyslis, Sagitaria, Eleocharis, Scirpus, Paspalum, Ischaemum, Sphenoclea, Dactyloctenium, Agrostis, Alopecurus y Apera. Además, las malezas de la presente invención pueden incluir, por ejemplo, aquellas plantas de cultivo que crecen en un lugar no deseado. Por ejemplo, se puede considerar como maleza a una planta de maíz voluntaria que se encuentra en un campo que predominantemente comprende plantas de soja, si no se desea el crecimiento de la planta de maíz en dicho campo de plantas de soja.

Los artículos "uno" y "una" se utilizan en la presente para referirse a uno o más de uno (es decir, al menos uno) del objeto gramatical al que modifican. A modo de ejemplo "un elemento" significa uno o más elementos. Tal como se utiliza en la presente la palabra "comprendiendo" o las variaciones tales como "comprende" o "que comprende" se entenderá que implican la inclusión del elemento, entero o el paso, o el grupo de elementos, entero o los pasos, establecidos, sin excluir otros elementos, enteros o los pasos, o grupos de elementos, enteros o los pasos. Los ejemplos que siguen se ofrecen a modo de ilustración y no son limitativos. EJEMPLO 1 Mutagénesís y Selección de Lineas de Trigo Tolerantes Se colocaron muestras de 1.500 se semillas de variedad Shiloh en un vaso de laboratorio de 1.000 mi y se las cubrió con agua deionizada hasta al menos 1 pulgada por sobre el nivel de las semillas. Entonces, se colocó los vasos de laboratorio al frío a 4°C durante 15-20 horas. Se sacó del frío las muestras de la semillas y se las llevó a temperatura ambiente durante un periodo de aproximadamente 3 horas mediante la colocación de los vasos de laboratorio a temperatura ambiente. En algunos casos, el proceso de calentamiento se aceleró mediante la adición de agua deionizada en los vasos de laboratorio. Se drenó el agua deionizada de las semillas, y se llenó el vaso de laboratorio con una solución azida de sodio hasta al menos 1 pulgada por sobre el nivel de las semillas. La solución azida de sodio se preparó mediante la adición de 27,218 g KH2P04 a 1.500 mi de agua deionizada, llevando la solución a un pH 3 con H3P0 concentrado, y llevando la solución final a 2 L de volumen con agua deionizada. Justo antes de su uso, se agregó 0,2604 g NaN3, y la solución se mantuvo a oscuras. Luego de la adición de la solución azida de sodio a las semillas, se incubó a los vasos de laboratorio en un lugar oscuro a temperatura ambiente durante dos horas, mezclándolas ocasionalmente. Se decantó la solución de tratamiento de azido de sodio, y las muestras de las semillas fueron enjuagadas dos veces con agua deionizada. Luego, se cubrió las muestras de las semillas con agua deionizada hasta 1 pulgada por sobre el nivel de las semillas y luego se mantuvieron en remojo a temperatura ambiente durante 1 hora, mezclándolas ocasionalmente. Se decanto el agua deionizada, y se esparció las semillas en forma pareja sobre toallas de papel para su secado. Se plantó las semillas en un campo en Berthoud, Colorado, en 6 parcelas de 5 pies por 40 pies. Se recolectaron aproximadamente 15 libras de semillas M2, y aproximadamente 466.000 semillas se plantaron cerca de Platteville, Colorado. Se pulverizó los campos con 1x (40 gr. ai ha"1 (imazamox)) o 2x (80 gr. ai ha'1 (imazamox)). Se identificaron las plantas tolerantes a los herbicidas y se las transplantó a potes de 1 galón, y se las vernalizó durante 4 semanas a 45°F. Se realizaron catorce plantas únicas de selección del área de proporción 2x. Las plantas M2 tolerantes se extrajeron de la vernalización, se desarrollaron en el invernadero de Berthoud, Colorado, y las plantas M3 se plantaron en parcelas de aproximadamente 4 por 5 pies cerca de Berthoud, Colorado. Se pulverizó las parcelas con 80 gr. ai ha'1 (imazamox) cuando las plantas se encontraban en la etapa de tres hojas, y los resultados de catorce progenies fueron lo que se muestran en la Tabla 1. Tabla 1 - Tolerancia de las plantas Shiloh M3 a 80 gr. ai ha"1 (imazamox).

Se plantaron doce semillas de Shiloh-08 en el invernadero de Berthoud, Colorado y se las cubrió con 40 gr. ai ha"1 imazamox en la etapa de tres hojas, y los resultados confirmaron una reacción homocigótica hereditaria. Se realizaron dos experimentos cruzados de Shiloh-08 con una línea Als1 conocida. Ambos experimentos no mostraron segregación genética de la tolerancia en las poblaciones F2, lo que sugiere que Shiloh-08 fue alélico a Als1 con respecto a la tolerancia a herbicidas. Los resultados se muestran en las Tablas 2 y 3. Tabla 2 Cruza de Fecha de Fecha de Cant. F2 Ambiente FS4? prueba cruzamiento recolección F2 estudiadas F2 ¡Shiloh /iGDN Invierno 99-00 Verano 00 168 1&40g SI Todo R Tabla 3 EXP 2001 Invierno Cant. Sobrevivientes Atrofiadas o Muertas o en DGP+ Cruza de prueba Total fuertes desalojadas punto de vaina F2 muerte marrón 5 iShiloh-08 imi GDN 167 140 27 0 0 ¡Shiloh-8 8 7 1 0 0 Shiloh 7 0 0 0 7 imi GDN 2 1 1 0 0 EJEMPLO 2 j o Caracterización molecular de la línea de trigo Shiloh-8 Caracterizaciones moleculares subsiguientes revelaron que la línea Shiloh-08 albergaba una sustitución de par de base novedoso de adenina por guanina en la posición 142 del gen Als1. Este polinucleótido Als1 mutante codifica un polipéptido AHAS mutante que presenta una sustitución de alanina por treonina en la posición 96 correspondiente a un tipo silvestre de polipéptido AHAS y que confiere a la planta tolerancia a herbicidas imidazolinonas. La línea Shiloh-08 no albergó una mutación del 1 5 gen Als2 ni del gen Als3. EJEMPLO 3 Caracterización del rasgo de tolerancia a imidazolinona de la línea Shiloh-8 Se evaluó la tolerancia a imazamox herbicida imidazolinona en forma comparativa y agronómica en condiciones de campo. La tabla 4 presenta un resumen de las evaluaciones de rendimiento y agronómicas comparando las plantas Shiloh-8 y las plantas Shiloh de tipo silvestre. Estas pruebas fueron los típicos experimentos de 20 evaluación de cereales utilizando el diseño de replicación de tres bloques randomizado incompleto. Las parcelas fueron de 1 ,54 x 4,62 a la recolección. La tabla 5 presenta un resumen de las múltiples comparaciones de campo de tolerancia a imazamox herbicida imidazolinona entre Shiloh-8 y el control estándar de tolerancia 9804. Estas parcelas fueron ubicadas desde parcelas de una fila de 1 m a parcelas más grandes de 1 ,54 m x 4,62 m.

Tabla 4 pru.

Tabla 5 1 Aplicado en campo, transplante a invernadero para terminación y calificación. 2 Aplicación en primavera, temperatura cayó 19°F en la noche siguiente a la aplicación Todas las publicaciones y las solicitudes de patentes que se mencionan en la especificación indican el nivel de las personas con experiencia en la técnica al que pertenece la presente invención. Todas las publicaciones y las solicitudes de patentes en la presente se incorporan por referencia con el mismo alcance de cada una de las publicaciones y de las solicitudes de patentes que se indicaron en forma específica e independiente como incorporaciones por referencia. A pesar de que la invención que antecede se describió con cierto detalle mediante ilustraciones y ejemplificaciones únicamente con el fin de facilitar la comprensión, es obvio que se pueden realizar ciertos cambios y ciertas modificaciones dentro del alcance de las reivindicaciones anexas.

Claims

REIVINDICACIONES

1, Una planta de trigo que comprende al menos un ácido nucleico IMI, CARACTERIZADO porque dicho ácido nucleico es seleccionado del grupo que consiste de: (a) un ácido nucleico Triticum aestivum Imil que codifica para una proteína IMI que comprende una mutación en el Dominio C que resulta en una sustitución de alanina por treonina en la proteína IMI respecto de la proteína AHAS de tipo silvestre, (b) un ácido nucleico IMI que comprende a la secuencia de polinucleotido que se describe en la SEC ID N0:1, y (c) un ácido nucleico IMI que codifica para una proteína que comprende a la secuencia del aminoácido que se describe en la SEC ID N0:2; en donde dicho ácido nucleico IMI confiere a la planta una tolerancia aumentada frente a un herbicida tipo imidazolinona respecto de una planta de trigo tipo silvestre.

2. La planta de trigo de acuerdo a la reivindicación 1, CARACTERIZADA porque la planta comprende el ácido nucleico de Triticum aestivum Imil de (a) .

3. La planta de trigo de acuerdo a la reivindicación 1, CARACTERIZADA porque la planta comprende el ácido nucleico de IMI de (b) .

4. La planta de trigo de acuerdo a la reivindicación 1, CARACTERIZADA porque la planta comprende al ácido nucleico de IMI de (c) .

5. La planta de trigo de acuerdo a las reivindicaciones 1 o 2, CARACTERIZADA porque el ácido nucleico de Triticum aestivum Imil comprende a una secuencia de polinucleotido seleccionada del grupo que consiste de: (i) la secuencia de polinucleotido que se describe en la SEC ID NO:l, (ii) una secuencia de polinucleotido que codifica para la secuencia de polipeptido que se describe en la SEC ID NO: 2; (iii) una secuencia de polinucleotido que comprende al menos un 95% de identidad de secuencia res- pecto del complemento de la secuencia de poli- nucleotido que se describe en la SEC ID N0:1; (iv) una secuencia de polinucleotido que codifica para una secuencia de aminoácido que comprende ^ al menos un 95% de identidad de secuencia con la secuencia de aminoácido que se define en la SEC ID NO: 2; y (v) una secuencia de polinucleotido de al menos 60 nucleotidos consecutivos de las definidas en 0 (i) ° (ü) ·

6. La planta de trigo de acuerdo a cualquiera de las reivindicaciones 1-5, CARACTERIZADA porque la sustitución de la 5 alanina por treonina se encuentra en la posición 96, lo cual corresponde a un polipeptido AHAS de tipo silvestre.

7. La planta de trigo de acuerdo a cualquiera de las reivindicaciones 1-6, CARACTERIZADA porque la planta no es transgénica .

8. La planta de trigo de acuerdo a cualquiera de las reivindicaciones 1-6, CARACTERIZADA porque la planta es transgénica .

9. La planta de trigo de acuerdo a cualquiera de las reivindicaciones 1-8, CARACTERIZADA porque el herbicida tipo imidazolinona se selecciona del grupo que consiste de: ácido [2- (4-isopropil-4-metil-5-oxo-2) -imidiazolin-2-il] -nicotínico, ácido [2- (4-isopropil) -4-metil-5-oxo-2-imidazolin-2-il] -3-quinolin-carboxilico, ácido [5-etil-2- (4-isopropil-4-metil) -5-oxo-2-imidazolin-2-il] -nicotiníco, ácido 2- (4-isopropil-4-metil-5-oxo-2-imidazolin-2-il) -5- (metoximetil ) - nicotiníco, ácido 2- (4-isopropil-4-metil-5-oxo-2-imidazolin-2-il)-5-metil- nicotiníco, y una mezcla de 6- (4-isopropil-4-metil-5-oxo-2-imidazolin-2-il) -m-toluato de metilo, [2- (4-isopropil-4—metil-5-oxo-2-imidazolin-2-il) ] -p-toluato de metilo, y la mezcla de los mismos.

10. La planta de trigo de acuerdo a cualquiera de las reivindicaciones 1-9, CARACTERIZADA porque el herbicida tipo imidazolinona es ácido [5-etil-2- (4-isopropil-4-metil) -5-oxo-2-imidazolin-2-il] -nicotínico.

11. La planta de trigo de acuerdo a cualquiera de las reivindicaciones 1-9, CARACTERIZADA porque el herbicida tipo imidazolinona es ácido 2- (4-isopropil-4-metil-5-oxo-2-imidazolin-2-il) -5- (metoximetil) -nicotiníco.

12. Una parte de una planta, CARACTERIZADA porque es de la planta de trigo de acuerdo a cualquiera de las reivindicaciones 1-11.

13. Una célula de planta, CARACTERIZADA porque es de la planta de trigo de acuerdo a cualquiera de las reivindicaciones 1-11.

14. Una semilla producida por la planta de trigo de acuerdo a cualquiera de las reivindicaciones 1-11, CARACTERIZADA porque dicha semilla comprende al menos uno de los ácidos nucleicos IMI .

15. Una planta de trigo, CARACTERIZADA porque comprende las características de tolerancia a herbicida de la planta con la Designación Número PTA-5625 del Depósito para Pa-tente en la American Type Culture Collection (ATCC) .

16. La planta de trigo de acuerdo a la reivindicación 15, CARACTERIZADA porque: (a) la planta de trigo tiene un Número de Designación para Patente ATCC PTA-5625; la planta de trigo es un recombinante o un derivado obtenido por ingeniería genética de la planta que tiene el Número de Designación de Deposito para Patente ATCC PTA-5625; la planta de trigo corresponde a cualquier progenie de la planta con el Número de Designación de Deposito para Patente ATCC PTA-5625;. o la planta de trigo es la progenie de cualquiera de las plantas definidas desde (a) hasta (c) .

17. La planta de trigo de acuerdo a la reivindicación 15 o 16, CARACTERIZADA porque la planta de trigo es una planta de trigo Triticum aestivum.

18. La planta de trigo de acuerdo a cualquiera de las reivindicaciones 15-17, CARACTERIZADA porque la planta tiene tolerancia aumentada a un herbicida tipo imidazolinona respecto de la planta de trigo tipo silvestre.

19. La planta de trigo de acuerdo a la reivindicación 8, CARACTERIZADA porque el herbicida tipo imidazolinona se se-lecciona del grupo que consiste de: ácido [2- (4-isopropil-4-metil-5-oxo-2) -imidiazolin-2-il] -nicotínico, ácido [2- (4-isopropil) -4-metil-5-oxo-2-imidazolin-2-il] -3-quinolin-carboxilico, ácido [5-etil-2- (4-isopropil-4-metil) -5-oxo-2-imidazolin-2-il] - nicotiníco, ácido 2- (4-isopropil-4-metil-5-oxo-2-imidazolin-2-il) -5- (metoximetil) - ni-cotiníco, ácido 2- (4-isopropil-4-metil-5-oxo-2-imidazolin-2-il) -5-metil- nicotiníco, y una mezcla de 6- (4-isopropil-4-metil-5-oxo-2-imidazolin-2-il) -m-toluato de metilo, [2- (4-isopropil-4—metil-5-oxo-2-imidazolin-2-il) ] -p-toluato de meti-lo, y mezclas de los mismos.

20. Una parte de una planta, CARACTERIZADA porque es de la planta de trigo de acuerdo a cualquiera de las reivindi-caciones 15-19.

21. Una célula de planta, CARACTERIZADA porque es de la planta de trigo de acuerdo a cualquiera de las reivindica-ciones 15-19.

22. Una semilla producida por la planta de trigo de acuerdo a cualquiera de las reivindicaciones 15-19, CARACTERI -ZADA porque la semilla comprende características de tolerancia a herbicida de la planta que tiene el Número de Designación de Deposito para Patente ATCC PTA-5625.

23. Una planta triticale que comprende al menos un ácido nucleico IMI, CARACTERIZADO porque es seleccionado del grupo que consiste de: (a) un ácido nucleico Triticum aestivum Imil que codifica para una proteína IMI que comprende una mutación en el Dominio C que resulta en una sustitución de alanina por treonina en la proteína IMI respecto de la proteína AHAS de tipo silvestre, (b) un ácido nucleico IMI que comprende a la secuencia de polinucleotido que se describe en la SEC ID N0:1, y (c) un ácido nucleico IMI que codifica para una proteína que comprende a la secuencia del aminoácido que se describe en la SEC ID N0:2; en donde dicho ácido nucleico IMI confiere a la planta una tolerancia aumentada para un herbicida tipo imidazolinona respecto de una planta tipo silvestre de triticale.

24. La planta de triticale de acuerdo a la reivindicación 23, CARACTERIZADA porque la planta comprende el ácido nucleico de Triticu aestivum Imil de (a) .

25. La planta de triticale de acuerdo a la reivindicación 23, CARACTERIZADA porque la planta comprende el ácido nucleico de IMI de (b) .

26. La planta de triticale de acuerdo a la reivindicación 23, CARACTERIZADA porque la planta comprende al ácido nucleico de IMI de (c) .

27. La planta de triticale de acuerdo a las reivindicaciones 23 o 24, CARACTERIZADA porque el ácido nucleico de Triticum aestivum Imil comprende a una secuencia de polinucleotido seleccionada del grupo que consiste de: (i) la secuencia de polinucleotido que se describe en la SEC ID NO:l, (ii) una secuencia de polinucleotido que codifica a la secuencia de polipeptido que se describe en la SEC ID NO:2; (iii) una secuencia de polinucleotido que comprende al menos un 95% de la identidad de secuencia respecto del complemento de la secuencia de polinucleotido que se describe en la SEC ID NO : 1 ; (iv) una secuencia de polinucleotido que codifica para una secuencia de aminoácido que comprende al menos un 95% de identidad de secuencia con la secuencia de aminoácido que se define en la SEC ID NO: 2; y (v) una secuencia de polinucleotido de al menos 60 nucleotidos consecutivos definidos bajo (i) o (ii) .

28. La planta de triticale de acuerdo a cualquiera de las reivindicaciones 23-27, CARACTERIZADA porque la sustitución de la alanina por treonina se encuentra en la posición 96 que corresponde a un polipeptido AHAS tipo silvestre.

29. La planta de triticale de acuerdo a cualquiera de las reivindicaciones 23-28, CARACTERIZADA porque la planta es transgénica o no transgénica.

30. Una parte de una planta, CARACTERIZADA porque es de la planta de triticale de acuerdo a cualquiera de las reivindicaciones 23-29.

31. Una célula de planta, CARACTERIZADA porque es de la planta de triticale de acuerdo a cualquiera de las reivindicaciones 23-29.

32. Una semilla producida por la planta de triticale de acuerdo a cualquiera de las reivindicaciones 23-29, CARACTERIZADA porque la semilla comprende al menos uno de los ácidos nucleicos IMI .

33. Una planta de triticale, CARACTERIZADA porque comprende a las características de tolerancia a herbicida de la planta que tiene el Número de Designación de Depósito para Pa-tente ATCC PTA-5625.

34. La planta de triticale de acuerdo a la reivindicación 33, CARACTERIZADA porque: (a) la planta de triticale tiene es un recombinante o un derivado obtenido por ingeniería genética de la planta que tiene el Número de Designación de Deposito para Patente ATCC PTA-5625; la planta de triticale corresponde a cualquier progenie de la planta con el Número de Designación de Deposito para Patente ATCC PTA-5625; o la planta de triticale es la progenie de cualquiera de las plantas definidas bajo (a) hasta (b) .

35. La planta de triticale de acuerdo a cualquiera de las reivindicaciones 33 o 34, CARACTERIZADA porque la planta tiene tolerancia aumentada a un herbicida tipo imidazolinona respecto de la planta de triticale tipo silvestre.

36. Una parte de planta, CARACTERIZADA porque es de la planta de triticale de acuerdo a cualquiera de las reivindicaciones 33-35.

37. Una célula de planta, CARACTERIZADA porque es de la planta de triticale de acuerdo a cualquiera de las reivindicaciones 33-35.

38. Una semilla producida por la planta de triticale de acuerdo a cualquiera de las reivindicaciones 33-35, CARACTERIZADA porque la semilla comprende características de tolerancia a herbicida de la planta con un Número de Designación de Deposito para Patente ATCC PTA-5625.

39. Un ácido nucleico IMI aislado, CARACTERIZADO porque comprende a una secuencia de polinucleotido seleccionada del grupo que consiste de: (a) la secuencia de polinucleotido que se describe en la SEC ID N0:1, (b) una secuencia de polinucleotido que codifica para el polipeptido que se define en la SEC ID NO: 2; (c) una secuencia de polinucleotido que comprende al menos un 95% de identidad de secuencia con respecto del complemento de la secuencia de polinucleotido que se describe en la SEC ID N0:1, en donde la secuencia de polinucleotido codifica para una proteína IMI que tiene una sustitución de alanina por treonina en la posición 96 que corresponde a un polipeptido AHAS tipo silvestre; (d) una secuencia de polinucleotido que codifica para una secuencia de aminoácido que comprende al menos un 95% de identidad de secuencia con la secuencia de aminoácido que se describe en la SEC ID NO: 2, en donde la secuencia de polinu- cleotido codifica para una proteína IMI que tie- ne una sustitución de alanina por treonina en la posición 96 correspondiendo a un polipeptido AHAS tipo silvestre; (e) una secuencia de polinucleotido que comprende al menos 60 nucleotidos consecutivos de (a) o (b) , en donde la secuencia de polinucleotido codifica para una proteína IMI que tiene una sustitución de alanina por treonina en la posición 96 correspondiendo a un polipeptido AHAS tipo silvestre; y (f) una secuencia de polinucleotido que es complementaria a una de las definidas bajo (a) , (b) , (c) , (d) , o (e) , en donde el complemento de la secuencia de polinucleotido codifica para una proteína IMI que tiene una sustitución de alani- na por treonina en la posición 96 correspondiendo a un polipeptido AHAS tipo silvestre.-

40. Un cásete de expresión, CARACTERIZADO porque comprende un promotor funcionalmente unido al ácido nucleico IMI de la reivindicación 39.

41. El cásete de expresión de acuerdo a la reivindicación 40, CARACTERIZADO porque el promotor es capaz de dirigir la expresión genica en una bacteria, una célula de hongo, una célula animal, o una célula de planta.

42. Una célula huésped no humana, CARACTERIZADA porque es transformada con el cassette de expresión de acuerdo a la reivindicación 40 o 41.

43. La célula huésped de acuerdo a la reivindicación 42, CARACTERIZADA porque la célula huésped es seleccionada del grupo que consiste de una bacteria, una célula fúngica, una cé-lula animal, y una célula de planta.

4 . Un vector de transformación, CARACTERIZADO porque comprende un gen de interés y un gen marcador seleccionable, en donde dicho gen marcador seleccionable comprende un promotor unido funcionalmente al ácido nucleico IMI definido en la reivindicación 39, en donde dicho promotor dirige la expresión en una célula huésped.

45. Un vector de transformación de acuerdo a la reivindicación 44, CARACTERIZADO porque la célula huésped es seleccionada del grupo que consiste de una bacteria, una célula fúngica, una célula animal, y una célula de planta.

46. Una planta transformada, CARACTERIZADA porque comprende incorporar de manera estable en su genoma una molécula de polinucleotido que comprende un ácido nucleico IMI unido funcionalmente a un promotor que dirige la expresión en una célula de planta, en donde dicho ácido nucleico IMI comprende una secuencia de polinucleotido seleccionada del grupo que consiste de: (a) la secuencia de polinucleotido que se describe en la SEC ID N0:1, (b) una secuencia de polinucleotido que codifica para el polipeptido que se define en la SEC ID NO : 2 ; (c) una secuencia de polinucleotido que comprende al menos un 95% de identidad de secuencia con respecto del complemento de la secuencia de polinucleotido que se describe en la SEC ID N0:1, en donde la secuencia de polinucleotido codifica para una proteína IMI que tiene una sustitución de alanina por treonina en la posición 96 que corresponde a un polipeptido AHAS tipo silvestre; (d) una secuencia de polinucleotido que codifica para una secuencia de aminoácido que comprende al menos un 95% de identidad de secuencia con la secuencia de aminoácido que se describe en la SEC ID N0:2, en donde la secuencia de polinucleotido codifica para una proteína IMI que tiene una sustitución de alanina por treonina en la posición 96 correspondiendo a un polipeptido AHAS tipo silvestre; (e) una secuencia de polinucleotido que comprende al menos 60 nucleotidos consecutivos definidos bajo (a) o (b) , en donde la secuencia de polinucleo- tido codifica para una proteína IMI que tiene una sustitución de alanina por treonina en la posición 96 correspondiendo a un polipeptido AHAS tipo silvestre; y (f) una secuencia de polinucleotido que es comple- mentaría a una de las definidas bajo (a) , (b) , (c) , (d) , o (e) , en donde el complemento de la secuencia de polinucleotido codifica para una proteína IMI que tiene una sustitución de alanina por treonina en la posición 96 correspondien- do a un polipeptido AHAS tipo silvestre; en donde dicho ácido nucleico IMI confiere a la planta tolerancia aumentada a un herbicida tipo imidazolinona respecto de una planta no transformada.

47. La planta transformada de acuerdo a la reivindicación 46, CARACTERIZADA porque el promotor es seleccionado del grupo que consiste de los promotores constitutivos y promotores preferidos por tejido.

48. La planta transformada de acuerdo a las reivindicaciones 46 o 47, CARACTERIZADA porque el ácido nucleico IMI además comprende una secuencia dirigida al cloroplasto unida funcionalmente .

49. La planta transformada de acuerdo a cualquiera de las reivindicaciones 46-48, CARACTERIZADA porque la actividad AHAS de la planta transformada es aumentada respecto de la de una planta no transformada.

50. La planta transformada de acuerdo a la' reivindi-cación 46, CARACTERIZADA porque el herbicida tipo imidazolinona es seleccionado del grupo que consiste de: ácido [2- (4-isopropil-4-metil-5-oxo-2) -imidiazolin-2-il] -nicotiníco, ácido [2- (4-isopropil) -4-metil-5-oxo-2-imidazolin-2-il] -3-quinolin-carboxilico, ácido [5-etil-2- (4-isopropil-4-metil) -5-oxo-2-imidazolin-2-il] -nicotiníco, ácido 2- (4-isopropil-4-metil-5-oxo-2-imidazolin-2-il) -5- (metoximetil) -nicotiníco, ácido 2- (4-isopropil-4-metil-5-oxo-2-imidazolin-2-il) -5-metil-nicotinico, y una mezcla de 6- (4-isopropil-4-metil-5-oxo-2-imidazolin-2-il) -m-toluato de metilo, [2- (4-isopropil-4-metil-5-oxo-2-imidazolin-2-il) ] -p-toluato de metilo, y la mezcla de los mismos.

51. La planta transformada de acuerdo a cualquiera de las reivindicaciones 46-50, CARACTERIZADA porque dicha planta transformada es una dicotiledónea o monocotiledónea .

52. La planta transformada de acuerdo a la reivindicación 51, CARACTERIZADA porque la dicotiledónea es selecciona-da del grupo que consiste de maravilla, poroto de soja, algodón, Brassica spp. , Arabidopsis thaliana, tabaco, tomate, papa, remolacha azucarera, alfalfa, cártamo, y cacahuate.

53. La planta transformada de acuerdo a la reivindicación 51, CARACTERIZADA porque la monocotiledónea es seleccio- nada del grupo que consiste de trigo, arroz, maíz, cebada, centeno, avena, triticale, mijo y sorgo.

54. Una semilla de la planta transformada de acuerdo a cualquiera de las reivindicaciones 46-53, CARACTERIZADA porque dicha semilla comprende al ácido nucleico IMI .

55. Una célula de planta transformada, CARACTERIZADA porque comprende incorporar de manera estable en su genoma una molécula de polinucleotido que comprende a un ácido nucleico IMI unido funcionalmente a un promotor que dirige la expresión en una célula de planta, en donde el ácido nucleico comprende una secuencia de polinucleotido seleccionada del grupo que consiste de: (a) la secuencia de polinucleotido que se describe en la SEC ID N0:1, (b) una secuencia de polinucleotido que codifica para el polipeptido que se define en la SEC ID NO : 2 ; (c) una secuencia de polinucleotido que comprende al menos un 95% de identidad de secuencia con respecto del complemento de la secuencia de polinucleotido que se describe en la SEC ID N0:1, en donde la secuencia de polinucleotido codifica para una proteína IMI que tiene una sustitución de alanina por treonina en la posición 96 que corresponde a un polipeptido AKAS tipo silvestre; una secuencia de polinucleotido que codifica para una secuencia de aminoácido que comprende al menos un 95% de identidad de secuencia con la secuencia de aminoácido que se describe en la SEC ID NO: 2, en donde la secuencia de polinucleotido codifica para una proteína IMI que tiene una sustitución de alanina por treonina en la posición 96 correspondiendo a un polipeptido AHAS tipo silvestre; una secuencia de polinucleotido que comprende al menos 60 nucleotidos consecutivos según los definidos bajo (a) o (b) , en donde la secuencia de polinucleotido codifica para una proteína IMI que tiene una sustitución de alanina por treonina en la posición 96 correspondiendo a un polipeptido AHAS tipo silvestre; y una secuencia de polinucleotido que es complementaria a una de las definidas bajo (a) , (b) , (c) , (d) , o (e) , en donde el complemento de la secuencia de polinucleotido codifica para una proteína IMI que tiene una sustitución de alani- na por treonina en la posición 96 correspondiendo a un polipeptido AHAS tipo silvestre; en donde dicho ácido nucleico IMI confiere a la célula de planta una tolerancia aumentada a un herbicida tipo imidazolinona respecto de una célula de planta no transformada.

56. Un método para controlar malezas en la vecindad de una planta, CARACTERIZADO porque comprende aplicar una cantidad efectiva de un herbicida tipo imidazolinona a las malezas y a la planta, en donde dicha planta tiene tolerancia aumentada al herbicida tipo imidazolinona respecto de la planta de tipo silvestre, y en donde dicha planta comprende al menos un ácido nucleico IMI seleccionado del grupo que consiste de: (a) un ácido nucleico Triticum aestivum Imil que codifica para una proteína IMI. que comprende una mutación en el Dominio C que resulta en una sustitución de alanina por treonina en la proteína IMI respecto de la proteína AHAS de tipo silvestre, (b) un ácido nucleico IMI que comprende a la secuencia de polinucleotido que se describe en la SEC ID N0:1, y (c) un ácido nucleico IMI que codifica para una proteína que comprende a la secuencia del aminoácido que se describe en la SEC ID N0:2.

57. El método de acuerdo a la reivindicación 56, CARACTERIZADO porque el ácido nucleico Tri icum aestivum Imil comprende una secuencia de polinucleotido seleccionado del grupo que consiste de: (i) la secuencia de polinucleotido que se describe en la SEC ID N0:1, (ii) una secuencia de polinucleotido que codifica a la secuencia de polipeptido que se describe en la SEC ID NO: 2; (iii) una secuencia de polinucleotido que comprende al menos un 95% de la identidad de secuencia respecto del complemento de la secuencia de polinucleotido que se describe en la SEC ID NO : 1 ; (iv) una secuencia de polinucleotido que codifica para una secuencia de aminoácido que comprende al menos un 95% de identidad de secuencia con la secuencia de aminoácido que se define en la SEC ID NO: 2; y (v) una secuencia de polinucleotido de al menos 60 nucleotidos consecutivos de los definidos bajo (i) o (ii) .

58. Un método para controlar malezas en la vecindad de una planta, CARACTERIZADO porque comprende aplicar una can- tidad efectiva de un herbicida tipo imidazolinona a las malezas y a la planta, en donde dicha planta tiene tolerancia aumentada al herbicida tipo imidazolinona respecto de la planta de tipo silvestre, en donde la planta es una planta de trigo c tritica-le, y en donde la planta comprende características de tolerancia a herbicida de la planta que posee el Número de Designación del Depósito para Patente ATCC PTA-5625.

59. Un método para producir una planta transformada que tiene tolerancia aumentada a un herbicida tipo imidazolinona, CARACTERIZADO porque comprende: (a) transformar una célula de planta con una molécula de polinucleotido que comprende un ácido nucleico IMI unido funcionalmente a un promotor que dirige la expresión en una célula de planta; y (b) regenerar a partir de dicha célula de planta una planta transgénica con una tolerancia aumentada a un herbicida tipo imidazolinona respecto de la planta tipo silvestre; en donde dicho ácido nucleico IMI es seleccionado del grupo que consiste de: (i) la secuencia de polinucleotido establecida en la SEC ID N0:1, una secuencia de polinucleotido que codifica para el polipeptido tal como se declara en la SEC ID NO: 2; una secuencia de polinucleotido que comprende al menos un 95% de la identidad de secuencia para el complemento de la secuencia de polinucleotido que se define en la SEC ID NO:l, en donde la secuencia de polinucleotido codifica para una proteína IMI que tiene una sustitución de alanina por treonina en la posi¬ 10 ción 96 correspondiendo a un polipeptido AHAS de tipo silvestre; una secuencia de polinucleotido que codifica para una secuencia de aminoácido que compren¬ 15 de al menos un 95% de identidad de secuencia con la secuencia de aminoácido que se define en la SEC ID NO: 2, en donde la secuencia de polinucleotido codifica para una proteína IMI que tiene una sustitución de alanina por treonina en la posición 96 correspondiendo a un polipeptido AHAS de tipo silvestre; y una secuencia de polinucleotido que comprende al menos 60 nucleotidos consecutivos de los definidos bajo (i) o (ii) , en donde la secuencia de polinucleotido codifica para una proteína— IMI que -tiene una sustitución .de alanina por treonina en la posición 96 correspondiendo a un polipeptido AHAS de tipo silvestre .

60. El método de acuerdo a la reivindicación 59, CARACTERIZADO porque el promotor es seleccionado del grupo que consiste de los promotores constitutivos y promotores preferidos por tejido.

61. El método de acuerdo a las reivindicaciones 59 o 60, CARACTERIZADO porque la molécula polinucleotido además comprende una secuencia dirigida al cloroplasto funcionalmente unida.

62. El método de acuerdo a cualquiera de las reivindicaciones 59-61, CARACTERIZADO porque la actividad AHAS de la planta transformada esta aumentada respecto a una planta no transformada .

63. El método de acuerdo a cualquiera de las reivin-dicaciones 59-62, CARACTERIZADO porque el herbicida es un herbicida tipo imidazolinona .

64. El método de acuerdo a cualquiera de la reivindicaciones 59-63, CARACTERIZADO porque la célula de planta comprende resistencia al menos a un herbicida, previo a la etapa de la transformación.

65. El método de acuerdo a cualquiera de las reivindicaciones 59-64, CARACTERIZADO porque la célula de planta comprende al menos un ácido nucleico IMI, previo a la etapa de la transformación .

66. Un método para aumentar la actividad AHAS en una planta, CARACTERIZADO porque comprende transformar una célula de planta con una molécula de polinucleotido que comprende un ácido nucleico IMI unido funcionalmente a un promotor que dirige la expresión en una célula de planta y regenera una planta transformada desde la célula de planta transformada, en donde el ácido nucleico IMI comprende una secuencia polinucleotido seleccionada del grupo que consiste de: (a) la secuencia de polinucleotido establecida en la SEC ID N0:1, (b) una secuencia de polinucleotido que codifica para el polipeptido tal como se declara en la SEC ID N0:2; una secuencia de polinucleotido que comprende al menos un 95% de la identidad de secuencia para el complemento de la secuencia de polinucleotido que se define en la SEC ID NO : 1 , en donde la secuencia de polinucleotido codifica para una proteína IMI que tiene una sustitución de alanina por treonina en la posición 96 correspondiendo a un polipeptido AHAS de tipo silvestre; una secuencia de polinucleotido que codifica para una secuencia de aminoácido que comprende al menos un 95% de identidad de secuencia con la secuencia de aminoácido que se define en la SEC ID NO: 2, en donde la secuencia de polinucleotido codifica para una proteína IMI que tiene una sustitución de alanina por treonina en la posición 96 correspondiendo a un polipeptido AHAS de tipo silvestre; y una secuencia de polinucleotido que comprende al menos 60 nucleotidos consecutivos de los definidos bajo (a) o (b) , en donde la secuencia de polinucleotido codifica para una proteína IMI que tiene una sustitución de alanina por treonina en la posición 96 correspondiendo a un polipeptido AHAS de tipo silvestre; en donde la actividad AHAS se ve aumentada en la planta transformada o al menos una parte de ella, respecto de la planta no transformada .

67. Un método para seleccionar una célula de planta transformada, CARACTERIZADO porque comprende las etapas de, transformar una célula de planta con el vector de transformación para planta, exponer a la célula de planta transformada a al menos un herbicida a una concentración que inhibe el crecimiento de una célula de planta no transformada, e identificar a la célula de planta transformada de acuerdo a su capacidad para crecer en presencia del herbicida; en donde dicho vector de transformación de planta comprende un gen marcador seleccionable que comprende un promotor que dirige la expresión en una célula de planta y un ácido nucleico IMI funcionalmente unido, en donde el ácido nucleico IMI comprende una secuencia de polinucleotido seleccionado del grupo que consiste de: (a) la secuencia de polinucleotido establecida en la SEC ID N0:1, (b) una secuencia de polinucleotido que codifica para el polipeptido tal como se declara en la SEC ID NO: 2; (c) una secuencia de polinucleotido que comprende al menos un 95% de la identidad de secuencia para el complemento de la secuencia de polinucleotido que se define en la SEC ID N0:1, en donde la se- ^ cuencia de polinucleotido codifica para una proteína IMI que tiene una sustitución de alanina por treonina en la posición 96 correspondiendo a un polipeptido AHAS de tipo silvestre; (d) una secuencia de polinucleotido que codifica pa-]0 ra una secuencia de aminoácido que comprende al menos un 95% de identidad de secuencia con la secuencia de aminoácido que se define en la SEC ID NO: 2, en donde la secuencia de polinucleotido codifica para una proteína IMI que tiene una 15 sustitución de alanina por treonina en la posición 96 correspondiendo a un polipeptido AHAS de tipo silvestre; y (e) una secuencia de polinucleotido que comprende al menos 60 nucleotidos consecutivos de los definí - 0 dos bajo (a) o (b) , en donde la secuencia de polinucleotido codifica para una proteína IMI que tiene una sustitución de alanina por treonina en la posición 96 correspondiendo a un polipeptido AHAS de tipo silvestre. 5

68. El método de acuerdo a la reivindicación 67, CARACTERIZADO porque el vector de transformación de planta además comprende al menos un gen de interés.

69. El método de acuerdo a la reivindicación 67 o 68, CARACTERIZADO porque además comprende la etapa de regenerar una planta transformada a partir de la célula de planta transformada.

70. Un método para controlar malezas en las vecindades de una planta transformada, CARACTERIZADO porque dicho método comprende aplicar una cantidad efectiva de un herbicida tipo imidazolinona a las malezas y a la planta transformada, en donde dicha planta transformada tiene resistencia aumentada al herbicida respecto de una planta no transformada, y la planta transformada comprende en su genoma al menos un cassette de expresión que comprende a un ácido nucleico IMI unido funcional-mente a un promotor que dirige la expresión génica en una célula de planta, en donde dicho ácido nucleico IMI comprende una secuencia de polinucleotido seleccionado del grupo que consiste de: (a) la secuencia de polinucleotido que se describe en la SEC ID N0:1, una secuencia de polinucleotido que codifica para el polipeptido que se define en la SEC ID NO : 2 ; una secuencia de polinucleotido que comprende al menos un 95% de identidad de secuencia con respecto del complemento de la secuencia de polinucleotido que se describe en la SEC ID NO : 1 , en donde la secuencia de polinucleotido codifica para una proteína IMI que tiene una sustitución de alanina por treonina en la posición 96 que corresponde a un polipeptido AHAS tipo silvestre; una secuencia de polinucleotido que codifica para una secuencia de aminoácido que comprende al menos un 95% de identidad de secuencia con la secuencia de aminoácido que se describe en la SEC ID NO: 2, en donde la secuencia de polinucleotido codifica para una proteína IMI que tiene una sustitución de alanina por treonina en la posición 96 correspondiendo a un polipeptido AHAS tipo silvestre; y una secuencia de polinucleotido que comprende al menos 60 nucleotidos consecutivos de los definidos bajo (a) o (b) , en donde la secuencia de polinucleotido codifica para una proteína IMI que tiene una sustitución de alanina por treonina en la posición 96 correspondiendo a un polipeptido AHAS tipo silvestre.

71. Un polipeptido aislado, CARACTERIZADO porque comprende una secuencia de aminoácido seleccionado del grupo que consiste de: (a) la secuencia de aminoácido que se define en la SEC ID NO:2; (b) la secuencia de aminoácido codificada por la secuencia de nucleotido definida en la SEC ID NO : 1 ; (c) una secuencia de aminoácido que tiene al menos un 95% de identidad de secuencia para la secuencia de aminoácido que se define en la SEC ID NO: 2, en donde el polipeptido comprende actividad AHAS resistente a herbicida y tiene una sustitución de alanina por treonina en la posición 96 correspondiendo a un polipeptido AHAS tipo silvestre; (d) una secuencia de aminoácido codificada por la secuencia de nucleotido que tiene al menos un 95% de identidad de secuencia con respecto de la secuencia de nucleotido que se define en la SEC ID NO:l, en donde el polipeptido comprende actividad AHAS resistente a herbicida y tiene una sustitución de alanina por treonina en la posición 96 correspond endo a un polipeptido AHAS tipo silvestre; y (f) una secuencia de aminoácido que codificada por una secuencia de nucleotido que tiene al menos 95% de identidad de secuencia con respecto de la secuencia de nucleotido que se define en la SEC ID N0:1, en donde el polipeptido comprende una actividad AHAS resistente a herbicida y tiene una sustitución de alanina por treonina en la posición 96 correspondiendo al polipeptido AHAS tipo silvestre.

J5 72. Un método para producir una planta resistente a herbicida, CARACTERIZADO porque comprende cruzar una primera planta que es resistente a un herbicida a una segunda planta que no es resistente al herbicida, en donde dicha primera planta es la planta de acuerdo a cualquiera de las reivindicaciones 20 1-13, 15-19, 23-29, 33-35, y 46-53.

73. El método de acuerdo a la reivindicación 72, CARACTERIZADO porque además comprende seleccionar para una proge5 nie de planta que es resistente al herbicida.

74. Una planta resistente a herbicida, CARACTERIZADA porque es producida de acuerdo al método de la reivindicación 72 o 73.

75. Una semilla de la planta de acuerdo a la reivindicación 74, CARACTERIZADA porque dicha semilla comprende las características resistentes a herbicida de la primera planta.

76. Un método para aumentar la resistencia a herbicida de una planta, CARACTERIZADO porque comprende cruzar una primera planta con una segunda planta, en donde dicha primera planta es la planta de acuerdo a cualquiera de las reivindicáciones 1-13, 15-19, 23-29, 33-35, 46-53, y 74.

77. El método de acuerdo a la reivindicación 76, CARACTERIZADO porque además comprende seleccionar para una proge-nie de planta que comprende resistencia a herbicida aumentada cuando se compara con la resistencia a herbicida de la segunda planta .

78. Una planta, CARACTERIZADA porque es producida por el método de acuerdo a la reivindicación 76 o 77.

79. Una semilla de la planta de acuerdo a la reivindicación 78, CARACTERIZADA porque dicha semilla comprende la resistencia a herbicida aumentada.

80. Una semilla de planta de acuerdo a cualquiera de las reivindicaciones 1-13, 15-19, 23-29, 33-35, 46-53, 74, y 78, CARACTERIZADA porque dicha semilla es tratada con un herbicida que inhibe AHAS .

81. Un método para combatir la vegetación no deseada, CARACTERIZADO porque comprende poner en contacto una semilla de la planta de acuerdo a cualquiera de las reivindicaciones 1-13, 15-19, 23-29, 33-35, 46-53, 74, y 78 antes de sembrar y/o después de pregerminar con un herbicida inhibidor de AHAS .