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WO2022270549A1 - 新規なポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ - Google Patents

新規なポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ Download PDF

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WO2022270549A1
WO2022270549A1 PCT/JP2022/024935 JP2022024935W WO2022270549A1 WO 2022270549 A1 WO2022270549 A1 WO 2022270549A1 JP 2022024935 W JP2022024935 W JP 2022024935W WO 2022270549 A1 WO2022270549 A1 WO 2022270549A1
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WO
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cells
producing
formula
alginic acid
cho cells
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PCT/JP2022/024935
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English (en)
French (fr)
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正司 古迫
勉 佐藤
智裕 鳴海
愼吾 佐藤
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Mochida Pharmaceutical Co Ltd
Original Assignee
Mochida Pharmaceutical Co Ltd
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    • C12N5/0068—General culture methods using substrates

Definitions

  • the present invention relates to a polymer-coated crosslinked alginate gel fiber for producing antibodies, physiologically active substances, etc., a method for producing the fibers, and a method for producing antibodies, physiologically active substances, etc. using the fibers.
  • antibodies e.g., interferon, erythropoietin, IL-2 (interleukin-2), CSF (colony stimulating factor), TNF (tumor necrosis factor), etc.
  • physiologically active substances e.g., interferon, erythropoietin, IL-2 (interleukin-2), CSF (colony stimulating factor), TNF (tumor necrosis factor), etc.
  • antibody-producing cells such as CHO cells (derived from Chinese hamster ovary), Sp2/0 cells, and NS0 cells are used as host cells.
  • CHO cells derived from Chinese hamster ovary
  • Sp2/0 cells Sp2/0 cells
  • NS0 cells are used as host cells.
  • the growth rate of cells is high and mass production of the target protein is easy by mass culture of CHO cells, it is frequently used for the production of antibodies.
  • Cultivation of antibody-producing cells is carried out by culturing antibody-producing cell lines in a spinner flask or the like, then expanding the culture while controlling culture conditions such as medium composition, temperature, stirring conditions, gas exchange, and pH. Cultivation is performed in large-scale production culture tanks of several thousand to ten thousand liters.
  • Alginate gel fibers having a core-shell structure in which the core layer contains various cells and the shell layer is made of alginate gel are known (Patent Document 1: International Publication No. 2011/046105, Patent Document 2: Patent Document 2: Japanese Patent Laid-Open No. 2016-77229).
  • Patent Document 4 International Publication No. 2015/178427
  • Patent Document 5 Patent No. 6601931
  • Patent Document 6 JP-A-2014-236698).
  • alginate hydrogel fibers containing cells specifically, human dermal fibroblasts, HEK293T cells
  • Patent Document 7 International Publication No. 2019/078251
  • Patent Document 8 International Publication No. 2019/123886
  • Patent Document 9 JP-A-2014-136128.
  • Adherent cells specifically, C2C12 cells
  • microcarriers and a mixture containing a gel-like polysaccharide (specifically, alginate gel) is coated with a polyamino acid cell structure (e.g., sheet-like (plate-like), fibrous (fibrous), spherical, etc.) are known (Patent Document 10: JP-A-2019-075993).
  • Non-Patent Document 1 PA -Lab Chip, 2008, 8, pp. 1255-1257.
  • Chemically modified alginic acid derivatives are known in which a cyclic alkyne group or an azide group is introduced to any one or more carboxyl groups of alginic acid via an amide bond and a divalent linker (Patent Document 11: International Publication No. 2019 /240219 pamphlet, Patent Document 12: International Publication No. 2021/125255 pamphlet).
  • An alginate gel fiber having a core-shell structure in which the core layer contains antibody-producing cells and the shell layer is a crosslinked alginate gel formed from a chemically modified alginate derivative (Patent Document 13: International Publication No. 2021 / 125279 pamphlet).
  • Non-Patent Document 2 Soft Matter (2012), 8(11), pp. 3122-3130).
  • Patent Documents 1 to 13 and Non-Patent Documents 1 and 2 describe the antibody of the present invention, a polymer-coated crosslinked alginate gel fiber for producing a physiologically active substance, a method for producing the gel fiber, an antibody using the gel fiber, and the like. is not disclosed or suggested.
  • Alginate gel fibers containing cells capable of producing antibodies, physiologically active substances, etc., in particular, cell culture over a long period of time (for example, 7 days or more, 14 days or more, 28 days or more, etc.) without degrading the fibers A possible and more practical alginate gel fiber has been desired.
  • the chemical modification represented by formula (I) and formula (II) described in aspect [1] described later includes cells capable of producing antibodies, physiologically active substances, etc.
  • Novel polymer-coated crosslinked alginate gel fiber for production of antibodies, physiologically active substances, etc. formed by coating a crosslinked alginate gel obtained by performing a cross-linking reaction using an alginate derivative with a cationic polymer, and its Found a manufacturing method.
  • the antibodies, physiologically active substances, etc. could be maintained for a long period of time without degradation of the polymer-coated crosslinked alginate gel fibers.
  • the inventors have found that continuous production is possible and have completed the present invention.
  • the present invention provides a novel polymer-coated crosslinked alginate gel fiber and a method for producing antibodies, physiologically active substances, etc. using the gel fiber.
  • a mixed solution containing cells capable of producing antibodies, physiologically active substances, etc., and chemically modified alginic acid derivatives represented by formulas (I) and (II) described in aspect [1] below A polymer-coated crosslinked alginate gel fiber that can continuously produce antibodies, physiologically active substances, etc. for a long period of time is provided by coating a crosslinked alginate gel produced using a cationic polymer.
  • antibody-producing cells anti-GPVI antibody-producing CHO cells, tocilizumab-producing CHO cells
  • physiologically active substance-producing cells MIN6 cells derived from pancreatic ⁇ cells
  • a crosslinked alginic acid gel also referred to as a core layer
  • a mixed solution containing a chemically modified alginic acid derivative etc.
  • a cationic polymer also referred to as a cationic polymer layer
  • polymer-coated crosslinked alginate gel fibers can be produced, and when cultured using the fiber, it can be cultured for a long period of time (up to 47 It was found that antibody or insulin could be produced continuously.
  • the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber of the present invention provides an environment suitable for cells capable of producing antibodies, physiologically active substances, etc., and the antibodies, physiologically active substances, etc. produced in the core layer of the fiber are produced in the core layer. , continuously permeates the cationic polymer layer and is released out of the fiber.
  • the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber of the present invention provides an environment suitable for the production of antibodies, physiologically active substances, and the like. It is expected that the cells that produce antibodies, physiologically active substances, etc., encapsulated in the core layer will have little physical stress, and that the encapsulated cells will continue to produce antibodies, physiologically active substances, etc. for a long period of time. Therefore, a method for producing antibodies, physiologically active substances, etc. using such fibers can be expected to dramatically improve the production efficiency of antibodies, physiologically active substances, etc. For example, in the case of antibody production, unlike antibody suspension culture, which requires large-scale culture tanks, it is expected that antibodies will be produced in small-scale production facilities. It is also expected to be a continuous production technology for next-generation antibody drugs that is suitable for small-lot, multi-item antibody drug production.
  • FIG. 2 is a cross-sectional view of a polymer-coated crosslinked alginate gel fiber
  • FIG. 2 is a schematic diagram of a core layer and a cationic polymer layer of a polymer-coated crosslinked alginate gel fiber.
  • FIG. 1 is a schematic diagram illustrating one aspect of the manufacturing process of polymer-coated crosslinked alginate gel fibers. 1 is a cross-section of a polymer-coated crosslinked alginate gel fiber;
  • FIG. 2 is a schematic diagram illustrating that antibodies, physiologically active substances, etc. produced in the core layer, metabolites and waste products, culture fluid (nutrition source) and oxygen permeate the cationic polymer layer.
  • FIG. 1 is a schematic diagram illustrating one aspect of the manufacturing process of polymer-coated crosslinked alginate gel fibers.
  • 1 is a cross-section of a polymer-coated crosslinked alginate gel fiber
  • FIG. 2 is a schematic diagram illustrating that antibodies, physiologically active substances,
  • FIG. 10 is a photograph of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber (FB2-A-5-c1) of (Example F2-C) before culture.
  • FIG. 10 is a photograph of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber (FB2-A-5-c1) of (Example F2-C) after incubation.
  • FIG. 10 is a fluorescence microscope photograph of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber produced in (Example F3).
  • FIG. FIG. 10 is a photograph of polymer-coated cross-linked alginate gel fibers (FB9-3-c3) of (Example F9) before culture.
  • FIG. 10 is a photograph of the polymer-coated cross-linked alginate gel fiber (FB9-3-c3) of (Example F9) after incubation.
  • Fig. 10 is a photograph of polymer-coated cross-linked alginate gel fibers (FB9-2-c2) of (Example F9) before culture.
  • FIG. 10 is a photograph of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber (FB9-2-c2) of (Example F9) after incubation.
  • FIG. 10 is a photograph of crosslinked alginate gel fibers (CLA-16A) of (Example F16-A).
  • FIG. 10 is a photograph of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber (FB17-1-c1) of (Example FI-17) after culturing.
  • Fig. 10 is a photograph of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber (FB17-2-c1) of (Example FI-17) before culture.
  • FIG. 10 is a photograph of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber (FB17-2-c1) of (Example FI-17) after culturing.
  • FIG. 10 is a photograph of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber (FB17-3-c1) of (Example FI-17) after culturing.
  • FIG. 10 is a photograph of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber (FB17-4-c1) of (Example FI-17) before culture.
  • FIG. 10 is a photograph of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber (FB17-4-c1) of (Example FI-17) after culturing.
  • Fig. 10 is a photograph of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber (FB18-1-c1) of (Example FI-18) before culture.
  • FIG. 10 is a photograph of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber (FB18-1-c1) of (Example FI-18) after culturing.
  • FIG. 10 is a photograph of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber (FB18-2-c1) of (Example FI-18) after culturing.
  • FIG. 10 is a photograph of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber (FB18-3-c1) of (Example FI-18) after culturing.
  • Fig. 10 is a photograph of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber (CFB19-G19) of (Example FI-19) before culture.
  • Fig. 10 is a photograph of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber (CFB19-G19) of (Example FI-19) after culture.
  • a first aspect is as follows.
  • Antibody-producing cells or physiologically active substance-producing cells (herein A polymer-coated crosslinked alginate gel fiber comprising a core layer containing a core layer containing cells capable of producing antibodies, physiologically active substances, etc.) and a cationic polymer layer covering the core layer.
  • a core comprising cells capable of producing antibodies, physiologically active substances, etc.
  • a crosslinked alginate gel obtained by performing a cross-linking reaction using chemically modified alginic acid derivatives represented by the following formulas (I) and (II):
  • the first A aspect is as follows.
  • a polymer-coated crosslinked alginate gel fiber comprising a core layer and a cationic polymer layer disposed outside said core layer, wherein said core layer comprises cells capable of producing antibodies, physiologically active substances, etc. and formula (I) and a crosslinked alginate gel in which crosslinks are formed using a chemically modified alginate derivative represented by formula (II), wherein the cationic polymer layer is a cationic polymer, a polymer-coated crosslinked alginate gel fiber.
  • the chemically modified alginic acid derivatives represented by formula (I) and formula (II) are the same as those defined in the aspect [1].
  • Akn-L 1 - of the chemically modified alginic acid derivative represented by formula (I) is preferably selected from the following table: is a group selected from the group consisting of the partial structural formulas described in (in each formula, the right side of the dashed line is not included).
  • Akn-L 1 - of the chemically modified alginic acid derivative represented by formula (I) is more preferably represented by the following table: is a group selected from the group consisting of the partial structural formulas described in (in each formula, the right side of the dashed line is not included).
  • Akn-L 1 - of the chemically modified alginic acid derivative represented by formula (I) is more preferably represented by the following partial structural formula (in each formula , not including the right side of the dashed line): It is a group selected from the group consisting of
  • Akn-L 1 - of the chemically modified alginic acid derivative represented by formula (I) is particularly preferably represented by the following partial structural formula (in each formula , not including the right side of the dashed line): is a group selected from
  • Akn-L 1 - of the chemically modified alginic acid derivative represented by formula (I) is represented by the following table: is a group selected from the group consisting of the partial structural formulas described in (in each formula, the right side of the dashed line is not included);
  • the table below: is a group selected from the group consisting of the partial structural formulas described in (in each formula, the right side of the dashed line is not included);
  • the table below: is a group selected from the group consisting of the partial structural formulas described in (in each formula, the right side of the dashed line is not included); More preferably, the following partial structural formula (in each formula, the right side of the dashed line is not included): is a group selected from
  • -L 2 - of the chemically modified alginic acid derivative represented by formula (II) is preferably selected from the following table: is a group selected from the group consisting of the partial structural formulas described in (in each formula, the outside of the dashed lines at both ends is not included).
  • -L 2 - of the chemically modified alginic acid derivative represented by formula (II) is more preferably represented by the following table: is a group selected from the group consisting of the partial structural formulas described in (in each formula, the outside of the dashed lines at both ends is not included).
  • -L 2 - of the chemically modified alginic acid derivative represented by formula (II) is represented by the following table: A group selected from the group consisting of the partial structural formulas described in (in each formula, excluding the outside of the dashed lines at both ends); Preferably, the following partial structural formula (in each formula, the right side of the dashed line is not included): A group selected from the group consisting of the partial structural formulas described in (in each formula, excluding the outside of the dashed lines at both ends); More preferably, the following partial structural formula (in each formula, the right side of the dashed line is not included): A group selected from the group consisting of the partial structural formulas described in (in each formula, excluding the outside of the dashed lines at both ends); More preferably, the following partial structural formula (in each formula, the outside of the dashed lines at both ends is not included): It is a group selected from the group consisting of
  • crosslinked alginate gel in the core layer of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber of the present invention can optionally be formed by using the chemically modified alginate derivative described in the above.
  • a cross-link is formed using a cell capable of producing an antibody, a physiologically active substance, etc., a chemically modified alginic acid derivative represented by the following formula (IA), and a chemically modified alginic acid derivative represented by the following formula (II-A).
  • a polymer-coated crosslinked alginate gel fiber obtained by coating a core layer containing a crosslinked alginate gel with a cationic polymer (cationic polymer layer).
  • the hydrogen atom of —CH 2 — in the formula is a halogen atom, hydroxyl group, amino group, C 1-3 alkyl group, —O—C
  • the first Y aspect is as follows.
  • a polymer-coated crosslinked alginate gel fiber comprising a core layer and a cationic polymer layer disposed outside said core layer, said core layer comprising cells capable of producing antibodies, physiologically active substances, etc. and formula (I- A) and a crosslinked alginate gel in which crosslinks are formed using the chemically modified alginic acid derivative represented by formula (II-A), and the cationic polymer layer comprises a cationic polymer is a polymer-coated cross-linked alginate gel fiber.
  • the chemically modified alginic acid derivatives represented by formulas (IA) and (II-A) are the same as those defined in the aspect [1X].
  • -L 1A - In the above aspect [1X] or [1Y], in the chemically modified alginic acid derivative represented by formula (IA), -L 1A -
  • x is 2 to 45
  • -L 1A - has the following partial structural formula: is a linker selected from (in each formula, excluding the dashed lines outside of both ends); More specifically, -L 1A - has the following partial structural formula: (in each formula, not including the outside of the dashed lines at both ends).
  • the cyclic alkyne group may be condensed with 1 to 3 cyclopropane rings, benzene rings, or 5-membered aromatic heterocycles).
  • the following partial structural formula: (Wherein, the right side of the dashed line at both ends is not included) is a group selected from; Particular preference is given to the partial structural formula: (Wherein, the right side of the dashed line at both ends is not included) is a group selected from; Most preferably, the partial structural formula: (In the formula, the right side of the dashed line at both ends is not included).
  • -L 2A - has the following partial structural formula: is a linker selected from: More specifically, -L 2A - has the following partial structural formula: (wherein the outside of the dashed lines at both ends is not included).
  • Formula (I -A) and a chemically modified alginate derivative represented by formula (II-A) can optionally be used to form a preferred embodiment of the crosslinked alginate gel in the core layer of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber of the present invention.
  • the cells capable of producing antibodies, physiologically active substances, etc. contained in the core layer of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber are, for example, , Antibody (human antibody, humanized antibody, chimeric antibody, mouse antibody, and other monoclonal antibody)-producing cells, bioactive substance-producing cells, and various useful substances useful as pharmaceutical raw materials, chemical raw materials, food raw materials, etc. cells selected from the group consisting of cells capable of
  • cells capable of producing antibodies (also referred to as antibody-producing cells) contained in the core layer of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber ) is a hybridoma or a cultured cell transformed with an antibody expression vector
  • the cultured cell (host cell) used as the host is, for example, CHO cells, CHO cell substrains, COS cells, Sp2/0 cells, NS0 cells, SP2 cells, PERC6 cells, YB2/0 cells, YE2/0 cells, 1R983F cells, Namalwa cells, Wil-2 cells, Jurkat cells, Vero cells, Molt-4 cells, HEK293 cells, BHK cells, HT-1080 cells , KGH6 cells, P3X63Ag8.653 cells, C127 cells, JC cells, LA7 cells, ZR-45-30 cells, hTERT cells, NM2C5 cells, UACC-812 cells, and the like
  • the antibody-producing cells contained in the core layer of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber are preferably , CHO cells, CHO cell sublines, COS cells, Sp2/0 cells, NS0 cells, SP2 cells, and PERC6 cells; more preferably CHO cells, CHO cell sublines, Sp2 /0 cells, and NS0 cells; more preferably CHO cells or CHO cell sublines.
  • the antibody-producing cells are preferably suspension cells or cells or cell sublines adapted to allow suspension culture. Preferred examples, more preferred examples, and still more preferred examples of such cells are as described in the aspect [1-3-2].
  • the antibody-producing cells contained in the core layer of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber are, for example, CHO Antibody-producing CHO cells that are cells, for example, muromonab-CD3-producing CHO cells, trastuzumab-producing CHO cells, rituximab-producing CHO cells, palivizumab-producing CHO cells, infliximab-producing CHO cells, basiliximab-producing CHO cells, tocilizumab-producing CHO cells, gemtuzumab CHO cells producing bevacizumab, CHO cells producing ibritumomab, CHO cells producing adalimumab, CHO cells producing cetuximab, CHO cells producing ranibizumab, CHO cells producing omalizumab, CHO cells producing eculizumab, CHO cells producing panitumumab, CHO cells
  • cells capable of producing a physiologically active substance contained in the core layer of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber are, for example, insulin-secreting cells, pancreatic islets, pancreatic islet cells, dopamine-secreting cells, pituitary cells, growth hormone-secreting cells, parathyroid cells, nerve growth factor-secreting cells, blood coagulation factor-secreting cells, hepatocytes, Cells selected from the group consisting of parathyroid cells, erythropoietin-secreting cells, norepinephrine-secreting cells, physiologically active substance-expressing vectors (genetically-recombinant cells), and the like.
  • the physiologically active substance-producing cells contained in the core layer of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber are preferably insulin-secreting cells, pancreatic islets, and pancreatic islet cells; more preferably MIN6 cells derived from pancreatic beta cells.
  • the components that can be additionally included in the core layer of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber include, for example, alginic acid solution, alginic acid It is a component selected from the group consisting of gel, medium, culture solution, collagen solution, methylcellulose, sucrose solution and the like.
  • the component that can be additionally included in the core layer of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber is preferably alginic acid A component selected from the group consisting of solution, alginate gel, medium, and culture medium.
  • the weight average molecular weight of the chemically modified alginic acid derivative measured by gel filtration chromatography is, for example, in the range of about 100,000 Da to about 3,000,000 Da; preferably about 300,000 Da to about 2,500,000 Da. and more preferably from about 500,000 Da to about 2,000,000 Da.
  • the weight average molecular weight of the chemically modified alginic acid derivative measured by gel filtration chromatography is, for example, in the range of about 100,000 Da to about 3,000,000 Da; preferably about 300,000 Da to about 2,500,000 Da. and more preferably from about 500,000 Da to about 2,000,000 Da.
  • the reactivity of the chemically modified alginic acid derivative represented by formula (I) used for forming the crosslinked alginate gel contained in the core layer of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber The introduction rate of the group (Akn-L 1 -NH 2 group: Akn-L 1 - is the same as defined in the aspect [1] above) is, for example, in the range of about 0.1 to about 30 mol%. preferably in the range of about 0.3 to about 20 mol %; more preferably in the range of about 0.5 to about 10 mol %.
  • the chemically modified alginic acid derivative represented by Formula (IA) used for forming the crosslinked alginate gel contained in the core layer of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber The introduction rate of the reactive group (Aky-L 1A -NH 2 group: Aky, -L 1A - is the same as defined in the embodiment [1X]) is, for example, about 0.1 to about 30 mol%. range; preferably in the range of about 0.3 to about 20 mol %; more preferably in the range of about 0.5 to about 10 mol %.
  • the reactivity of the chemically modified alginic acid derivative represented by formula (II) used for forming the crosslinked alginate gel contained in the core layer of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber is, for example, in the range of about 0.1 to about 30 mol%. preferably in the range of about 0.3 to about 20 mol %; more preferably in the range of about 0.5 to about 15 mol %.
  • the chemically modified alginic acid derivative represented by Formula (II-A) used for forming the crosslinked alginate gel contained in the core layer of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber The introduction rate of the reactive group (N 3 -L 2A -NH 2 group: -L 2A - is the same as defined in the aspect [1X]) is, for example, in the range of about 0.1 to about 30 mol%. preferably in the range of about 0.3 to about 20 mol %; more preferably in the range of about 0.5 to about 15 mol %.
  • the core layer of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber may additionally contain an alginate solution or used to form an alginate gel.
  • the weight-average molecular weight of alginic acid (e.g., sodium alginate, etc.) used in the preparation of the alginic acid solution measured by gel permeation chromatography (GPC method) ranges from, for example, about 150,000 Da to about 2,500,000 Da. preferably in the range of about 300,000 Da to about 2,000,000 Da, more preferably in the range of about 700,000 Da to about 2,000,000 Da.
  • the core layer of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber may additionally contain an alginate solution or an alginate gel.
  • the weight-average molecular weight of alginic acid (e.g., sodium alginate, etc.) used for preparing the alginic acid solution used in the method measured by gel filtration chromatography (GPC method) is, for example, about 150,000 Da to about 2,500,000 Da. preferably in the range of about 300,000 Da to about 2,500,000 Da; more preferably in the range of about 700,000 Da to about 1,400,000 Da, A range selected from about 1,400,000 to about 2,000,000 Da, or from about 1,500,000 to about 2,500,000 Da.
  • the alginic acid e.g., sodium alginate, etc.
  • the alginic acid used for preparing the alginic acid solution used for the weight average molecular weight measured by gel filtration chromatography is preferably about 1,400,000 to about 2, 000,000, or from about 700,000 to about 1,400,000, or from about 800,000 to about 1,500,000; more preferably from about 1,400,000 to about 2,000,000 000,000 range.
  • the chemically modified alginic acid derivative represented by formula (I) used for forming the crosslinked alginate gel contained in the core layer of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber The concentration of the solution ranges, for example, from about 0.01 to about 1.5% by weight; preferably from about 0.05 to about 1.0% by weight; more preferably about 0.08. to about 0.75% by weight.
  • [1-10-1X] In the aspect [1X] or [1Y], chemically modified alginic acid represented by Formula (IA) used for forming the crosslinked alginate gel contained in the core layer of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber
  • concentration of the derivative solution ranges, for example, from about 0.01 to about 1.5% by weight; preferably from about 0.05 to about 1.0% by weight; 0.08 to about 0.75 weight percent.
  • the chemically modified alginic acid derivative represented by formula (II) used for forming the crosslinked alginate gel contained in the core layer of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber The concentration of the solution ranges, for example, from about 0.01 to about 1.5% by weight; preferably from about 0.05 to about 1.0% by weight; more preferably about 0.08. to about 0.75% by weight.
  • [1-10-2X] In the aspect [1X] or [1Y], chemically modified alginic acid represented by formula (II-A) used for forming the crosslinked alginate gel contained in the core layer of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber
  • concentration of the derivative solution ranges, for example, from about 0.01 to about 1.5% by weight; preferably from about 0.05 to about 1.0% by weight; 0.08 to about 0.75 weight percent.
  • the chemical modification represented by formula (IA) used for forming the crosslinked alginate gel contained in the core layer of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber ranges, for example, from about 0.02 to about 2.0% by weight; preferably from about 0.1 to about in the range of 2.0% by weight; more preferably in the range of about 0.15 to about 1.5% by weight.
  • the core layer of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber may additionally contain an alginate solution or alginate gel.
  • concentration of the alginic acid solution used in, for example, ranges from 0 to about 1.98 wt%; preferably ranges from 0 to about 1.8 wt%; more preferably 0 to about 1.7 % range by weight.
  • the core layer of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber may additionally contain an alginate solution or an alginate gel
  • concentration (C ALG ) of the alginic acid solution used to form the is, for example, in the range 0 ⁇ C ALG ⁇ about 1.98 wt%; preferably in the range 0 ⁇ C ALG ⁇ about 1.8 wt% Yes; more preferably in the range 0 ⁇ C ALG ⁇ about 1.7 wt%.
  • the crosslinked alginate gel contained in the core layer of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber includes an alginic acid solution or an alginate gel formed from an alginate solution.
  • the total concentration of the mixed solution containing the chemically modified alginic acid derivatives represented by formulas (I) and (II) used to form the core layer and the alginic acid solution is preferably about 0.5 to about 2 more preferably a concentration selected from about 1.0%, about 1.5% and about 2.0% by weight.
  • the crosslinked alginate gel contained in the core layer of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber contains an alginic acid solution or an alginate gel formed from an alginate solution.
  • the total concentration (C TOL ) of the concentration of the mixed solution containing the chemically modified alginic acid derivatives represented by formulas (I) and (II) used to form the core layer and the concentration of the alginic acid solution is, for example, 0. ⁇ C TOL ⁇ about 2.0 wt%; preferably about 0.5 to about 2.0 wt%; more preferably about 1.0 to about 2.0 wt%; 0% by weight, about 1.5% by weight and about 2.0% by weight.
  • the total concentration (C TOL ) of the concentration of the mixed solution containing the chemically modified alginic acid derivatives represented by formulas (IA) and (II-A) used to form the core layer and the concentration of the alginic acid solution is , for example, 0 ⁇ C TOL ⁇ about 2.0 wt%; preferably about 0.5 to about 2.0 wt%; more preferably about 1.0 to about 2.0 wt%; is a concentration selected from about 1.0%, about 1.5% and about 2.0% by weight.
  • the crosslinked alginate gel contained in the core layer of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber includes an alginic acid solution or an alginate gel formed from an alginate solution.
  • concentration (C1 (% by weight)) of the mixed solution containing the chemically modified alginic acid derivatives represented by formulas (I) and (II) used for forming the core layer and the concentration of the alginic acid solution (C2 (% by weight)) (C1: C2) (about 0.2: about 1.3), (about 0.5: about 1.0), (about 1.0: about 0.5), ( about 0.66:about 1.34), and (about 0.34:about 0.66).
  • the crosslinked alginate gel contained in the core layer of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber contains an alginic acid solution or an alginate gel formed from an alginate solution.
  • the concentration of the mixed solution containing the chemically modified alginic acid derivatives represented by formulas (I) and (II) used for forming the core layer (C1 (% by weight)) and the concentration of the alginic acid solution (C2 (% by weight) )) combinations are, for example, 0 ⁇ C2 (% by weight) ⁇ about 1.98 (% by weight), 0 ⁇ C1 (% by weight) ⁇ about 2.0 (% by weight) - C2 (% by weight), 0 ⁇ C1 + C2 (% by weight) ⁇ about 2.0 (% by weight)
  • (C1: C2) (about 0.2: about 1.3), (about 0.5: about 1.0), (about 1. 0: about 0.5), (about 0.66: about 1.34), and (about 0.34: about 0.66).
  • the crosslinked alginate gel contained in the core layer of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber contains an alginic acid solution or an alginate gel formed from an alginate solution.
  • the concentration of the mixed solution containing the chemically modified alginic acid derivatives represented by formulas (IA) and (II-A) used for forming the core layer (C1x (% by weight)) and the concentration of the alginic acid solution ( C2x (% by weight)) is, for example, 0 ⁇ C2x (% by weight) ⁇ about 1.98 (% by weight), 0 ⁇ C1x (% by weight) ⁇ about 2.0 (% by weight) - C2x (% by weight), 0 ⁇ C1x + C2x (% by weight) ⁇ about 2.0 (% by weight)
  • (C1x: C2x) (about 0.2: about 1.3), (about 0.5: about 1.0), (about 1. 0: about 0.5), (about 0.66: about 1.34), and (about 0.34: about 0.66).
  • the crosslinked alginate gel contained in the core layer of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber includes an alginic acid solution or an alginate gel formed from an alginate solution.
  • the crosslinked alginate gel contained in the core layer of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber contains an alginic acid solution or an alginate gel formed from an alginate solution.
  • the combination of C1N (% by weight)) and the concentration of the alginic acid solution (C2 (% by weight)) is, for example, 0 ⁇ C2 (% by weight) ⁇ about 1.98 (% by weight), 0 ⁇ C1A (% by weight) ⁇ about 2.0 (% by weight) - C2 (% by weight), 0 ⁇ C1N (% by weight) ⁇ about 2.0 (% by weight) - C2 (% by weight), 0 ⁇ C1A + C1N + C2 (% by weight) ⁇ about 2.0 (% by weight)
  • (C1A:C1N:C2) (about 0.1: about 0.1: about 1.3), (about 0.25: about 0.25). 25: about 1.0
  • the crosslinked alginate gel contained in the core layer of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber contains an alginic acid solution or an alginate gel formed from an alginate solution.
  • the concentration (C1Ax (% by weight)) of the solution of the chemically modified alginic acid derivative represented by formula (IA) used for forming the core layer the concentration of the chemically modified alginic acid derivative represented by formula (II-A)
  • the combination of the concentration of the solution (C1Nx (% by weight)) and the concentration of the alginic acid solution (C2x (% by weight)) is, for example, 0 ⁇ C2x (% by weight) ⁇ about 1.98 (% by weight), 0 ⁇ C1Ax (% by weight) ⁇ about 2.0 (% by weight) - C2x (% by weight), 0 ⁇ C1Nx (% by weight) ⁇ about 2.0 (% by weight) - C2x (% by weight), 0 ⁇ C1Ax + C1Nx + C2x (% by weight) ⁇ about 2.0 (% by weight)
  • (C1Ax: C1Nx: C2x) (about 0.1: about
  • the crosslinked alginate gel contained in the core layer of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber includes an alginic acid solution or an alginate gel formed from an alginate solution.
  • the volume of each solution in the solution of the chemically modified alginic acid derivative represented by the formula (I), the solution of the chemically modified alginic acid derivative represented by the formula (II), and the alginic acid solution used to form the core layer
  • v1+v2+v3 15, 0 ⁇ v1 ⁇ 15, 0 ⁇ v2 ⁇ 15, and 0 ⁇ v3 ⁇ 15.
  • the crosslinked alginate gel contained in the core layer of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber includes an alginic acid solution or an alginate gel formed from an alginate solution.
  • v1x+v2x+v3x 15, 0 ⁇ v1x ⁇ 15, 0 ⁇ v2x ⁇ 15, and 0 ⁇ v3x ⁇ 15.
  • the crosslinked alginate gel contained in the core layer of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber has the following formula (III-L): [In formula (III-L), -CONH- and -NHCO- at both ends represent an amide bond via any carboxyl group of alginic acid; -X- is the following table: is a cyclic group selected from the group of partial structural formulas described in (in each formula, excluding the outside of the dashed lines at both ends); -L 1 - is, when -X- is (CL-1) or (CL-1-r), the following table: is a bivalent linker selected from the group of partial structural formulas described in (in each formula, excluding the outside dashed lines at both ends); -L 1 - is, when -X- is (CL-2) or (CL-2-r), the following table: is a bivalent linker selected from the group of partial structural formulas described in (in each formula, excluding
  • the combination -L 2 -XL 1 - has the formula in the table below: (-L 1 - in the table is the same as the definition of the more preferred -L 1 - described in the aspect [1-12-1]; -L 2 - is the same as the definition of the more preferred -L 2 - described in the above aspect [1-2-3]; -X- is as described in the above aspect [1-12]);
  • the combination -L 2 -XL 1 - is represented by the formula in the table below: (-L 1 - in the table is the same as the definition of particularly preferred -L 1 - described in the aspect [1-12-1]; -L 2- is the same as the particularly preferred definition of -L 2 - described in the above aspect [1-2-4]; -X- is as described in the above aspect [1-12]).
  • the crosslinked alginate gel contained in the core layer of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber has the formula (III-L) [
  • formula (III-L) -CONH- and -NHCO- and -X- at both ends are the same as defined in the embodiment [1-12]; -1) or (CL-1-r) is the same as the group represented by the partial structural formula (LK-1a) described in the aspect [1-12]; -X- is (CL-2 ) or (CL- 2 -r) is the same as the group represented by the partial structural formula (LK-2-1) described in the aspect [1-12]; It is the same as the group selected from the partial structural formulas (LN-1), (LN-3) and (LN-5) described in [1]].
  • [1-12A-1] In the above aspect [1-12A], when -X- is (CL-1) or (CL-1-r), preferred, more preferred, and still more preferred -L 1 - , represented by the partial structural formulas (LK-1a-1), (LK-1a-2), (LK-1a-3a), and (LK-1a-3b) according to the aspect [1-12-1]
  • preferred, more preferred, and even more preferred -L 1 - is each the above embodiment [1-12- 1] are the same as the groups represented by the partial structural formulas (LK-2-1), (LK-2-2), and (LK- 2-3 ) described in 1]; It is the same as the groups represented by the partial structural formulas (LN-1-1), (LN-3-1), and (LN-5-1) in aspect [1-2-1], more preferably It is the same as the groups represented by the partial structural formulas (LN-1-2), (LN-3-2), and (LN-5-2) described in the aspect [1-2-2], more preferably It is the same as the groups represented by the partial structural formula
  • the crosslinked alginate gel contained in the core layer of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber has the following formula (III-Lx): [In formula (III-Lx), -CONH- and -NHCO- at both ends represent an amide bond via any carboxyl group of alginic acid; -L 1A - is the same as defined in the aspect [1X]; -L 2A - is the same as defined in the above embodiment [1X]; -X A - is the following partial structural formula: (In the formula, —CH 2 — in the C 5-9 cycloalkene ring is a group selected from the group consisting of —NH—, —S—, —O—, or ⁇ C( ⁇ O), and 1 to 4 optionally substituted; the hydrogen atom of —CH 2 — in the C 5-9 cycloalkene ring is a halogen atom, hydroxyl group, amino
  • C 5-9 cycloalkene ring, C 3-8 cycloalkyl ring, benzene ring, 5- to 6-membered aromatic heterocyclic ring 1- 3 may be condensed; when a C 5-9 cycloalkene ring is condensed with a C 3-8 cycloalkyl ring, a benzene ring, or a 5- to 6-membered aromatic heterocyclic ring, -L 1A - may be substituted with the C 3-8 cycloalkyl ring, benzene ring, or 5- to 6-membered aromatic heterocyclic ring)] via cross-linked alginate gel.
  • -X A - preferably has the following partial structural formula: is a cyclic group selected from the group of More preferably, the following partial structural formula: is a cyclic group selected from the group of More preferably, the following partial structural formula: is a cyclic group selected from the group of (in each formula, the outside of the dashed lines at both ends is not included).
  • the crosslinked alginate gel contained in the core layer is the formula (III-L) [in the formula (III-L) of the aspect [1-12], each The definition is the same as the definition of embodiment [1-12]] or the formula (III-L) of the embodiment [1-12A] [in formula (III-L), each definition is the same as the definition of]] and ionic cross-linking via a divalent metal ion.
  • the crosslinked alginate gel contained in the core layer is the formula (III-Lx) [in the formula (III-Lx) of the aspect [1-12X], each The definition is the same as the definition for embodiment [1-12X]] and includes chemical cross-linking via groups and ionic cross-linking via divalent metal ions.
  • the divalent metal used for forming ionic crosslinks of the crosslinked alginate gel contained in the core layer of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber The ions are preferably divalent metal ions selected from the group of calcium ions, magnesium ions, barium ions, strontium ions and zinc ions; more preferably calcium ions, barium ions or strontium ions; is a calcium ion or a barium ion.
  • the divalent metal used for forming ionic crosslinks of the crosslinked alginate gel contained in the core layer of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber can be sourced from an aqueous solution containing divalent metal ions selected from the group consisting of an aqueous calcium chloride solution, an aqueous calcium carbonate solution, an aqueous calcium gluconate solution, an aqueous barium chloride solution, an aqueous strontium chloride solution, and the like; An aqueous calcium chloride solution or an aqueous barium chloride solution is preferred.
  • the cationic polymer of the cationic polymer layer of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber is a polyamino acid or a basic polysaccharide. , and basic polymers, and the like.
  • the cationic polymer of the cationic polymer layer of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber is preferably a polyamino acid.
  • the cationic polymer of the cationic polymer layer of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber is chitosan.
  • the cationic polymer of the cationic polymer layer of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber is polymethylene-CO-guanidine (PMCG ), polyallylamine (PAA), polyvinylamine (PVA), polyethyleneimine, allylamine-diallylamine copolymer, and allylamine-maleic acid copolymer; preferably polyallylamine (PAA), polyethyleneimine, or polymethylene-CO-guanidine (PMCG); more preferably polyethyleneimine or polymethylene-CO-guanidine (PMCG).
  • the outer diameter of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber is, for example, about 0.1 to about 2000 ⁇ m, about 0.2 ⁇ m to Ranges include about 2000 ⁇ m, about 0.2 to about 1000 ⁇ m, about 0.5 to about 1000 ⁇ m, about 1 to about 1000 ⁇ m, about 10 to about 1000 ⁇ m, about 20 to about 1000 ⁇ m.
  • a preferred embodiment of the crosslinked alginate gel in the core layer of the coated crosslinked alginate gel fiber may optionally be formed.
  • the alginic acid derivative represented by formula (I) used for forming the crosslinked alginate gel is preferably 1-1-1] or the preferred alginic acid derivative of the aspect [1-1-5], and the alginic acid derivative represented by the formula (II) is used in the aspect [1-2-1] selected from the alginic acid derivative described above or the preferred alginic acid derivative of the aspect [1-2-5];
  • the antibody-producing cell is selected from the cells according to the aspects [1-3-1] to [1-3-3] and the cationic polymer layer is a polymer-coated crosslinked alginate gel fiber selected from the cationic polymers according to the aspect [1-15-1].
  • the alginic acid derivative represented by formula (I) used for forming the crosslinked alginate gel is preferably 1-1-1] or the preferred alginic acid derivative of the aspect [1-1-5], and the alginic acid derivative represented by the formula (II) is used in the aspect [1-2-1] selected from the alginic acid derivative described above or the preferred alginic acid derivative of the aspect [1-2-5];
  • the antibody-producing cell is selected from the cells according to aspects [1B-3-1] to [1B-3-9]
  • the cationic polymer layer is a polymer-coated crosslinked alginate gel fiber selected from the cationic polymers according to the aspect [1-15-1];
  • the alginate derivative represented by formula (I) used for forming the crosslinked alginate gel is The alginic acid derivative selected from the alginic acid derivative according to [1-1-2] or the more preferable alginic acid derivative of the aspect [1-1-5], and the alginic acid derivative represented by the formula (II) is the aspect [1-2-2 ] or the more preferable alginic acid derivative of the aspect [1-2-5];
  • the antibody-producing cell is the cell according to the aspects [1-3-2] to [1-3-3] and the cationic polymer layer is a polymer-coated crosslinked alginate gel fiber selected from the cationic polymers according to aspects [1-15-2] to [1-15-4] above.
  • the alginate derivative represented by formula (I) used for forming the crosslinked alginate gel is The alginic acid derivative selected from the alginic acid derivative according to [1-1-2] or the more preferable alginic acid derivative of the aspect [1-1-5], and the alginic acid derivative represented by the formula (II) is the aspect [1-2-2 ] or the more preferable alginic acid derivative of the aspect [1-2-5];
  • the antibody-producing cell is selected from the cells according to aspects [1B-3-2] to [1B-3-9]
  • the cationic polymer layer is a polymer-coated crosslinked alginate gel fiber selected from the cationic polymers according to aspects [1-15-2] to [1-15-4] above.
  • the alginate derivative represented by formula (I) used for forming the crosslinked alginate gel is selected from the alginic acid derivatives according to [1-1-3], wherein the alginic acid derivative represented by formula (II) is selected from the alginic acid derivatives according to the aspect [1-2-3]; selected from the cells according to aspects [1-3-2] to [1-3-3]; the cationic polymer layer is selected from the above aspects [1-15-2] or [1-15-4] Polymer-coated crosslinked alginate gel fibers selected from cationic polymers.
  • the alginate derivative represented by formula (I) used for forming the crosslinked alginate gel is selected from the alginic acid derivatives according to [1-1-3], wherein the alginic acid derivative represented by formula (II) is selected from the alginic acid derivatives according to the aspect [1-2-3]; is selected from the cells according to [1B-3-3] or [1B-3-9]; the cationic polymer layer is the cation according to aspect [1-15-2] or [1-15-4] Polymer-coated cross-linked alginate gel fibers selected from organic polymers.
  • the alginic acid derivative represented by formula (I) used for forming the crosslinked alginate gel is particularly preferably selected from the alginic acid derivatives according to [1-1-4], wherein the alginic acid derivative represented by formula (II) is selected from the alginic acid derivatives according to the aspect [1-2-4]; the antibody-producing cell is an antibody production CHO cells; polymer-coated crosslinked alginate gel fibers in which the cationic polymer layer is selected from poly-L-ornithine, polyallylamine (PAA), polyethyleneimine, or polymethylene-CO-guanidine (PMCG).
  • PAA polyallylamine
  • PMCG polymethylene-CO-guanidine
  • the crosslinked alginate gel of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber is -1].
  • cationic polymer may be combined to form any preferred embodiment of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber.
  • the alginic acid derivative used for forming the crosslinked alginate gel is preferably the alginate derivative of the aspect [1X-1].
  • the antibody-producing cells are selected from the cells according to aspects [1-3-1] to [1-3-3]; and the cationic polymer layer is a polymer-coated crosslinked alginate gel fiber selected from the cationic polymers according to the aspect [1-15-1].
  • the alginate derivative used for forming the crosslinked alginate gel is preferably the alginate derivative of the aspect [1X-1].
  • the antibody-producing cells are selected from the cells according to aspects [1B-3-1] to [1B-3-9]; and the cationic polymer layer is , a polymer-coated crosslinked alginate gel fiber selected from the cationic polymers according to the aspect [1-15-1].
  • the alginic acid derivative used for forming the crosslinked alginate gel is the one described in the aspect [1X-1].
  • Alginic acid derivative represented by formula (IA) having more preferred -L 1A - of and more preferred Aky according to above aspect [1X-2], more preferred -L according to above aspect [1X-3] 2A is selected from alginic acid derivatives represented by the formula (II-A) having -;
  • the antibody-producing cell is selected from the cells according to the above aspects [1-3-2] to [1-3-3];
  • the cationic polymer layer is a polymer-coated crosslinked alginate gel fiber selected from the cationic polymers described in the above aspects [1-15-2] to [1-15-4].
  • the alginic acid derivative used for forming the crosslinked alginate gel is the one described in the aspect [1X-1].
  • the alginic acid derivative used for forming the crosslinked alginate gel is the one described in the aspect [1X-1].
  • Alginic acid derivative represented by formula (IA) having more preferred -L 1A - and more preferred Aky according to above aspect [1X-2], more preferred -L according to above aspect [1X-3] 2A is selected from alginic acid derivatives represented by the formula (II-A) having -;
  • the antibody-producing cell is selected from the cells according to the above aspects [1-3-2] to [1-3-3];
  • the cationic polymer layer is a polymer-coated crosslinked alginate gel fiber selected from the cationic polymers described in the aspect [1-15-2] or [1-15-4].
  • the alginic acid derivative used for forming the crosslinked alginate gel is the one described in the aspect [1X-1].
  • the alginate derivative used for forming the crosslinked alginate gel is the one described in the aspect [1X-1].
  • Alginic acid derivatives represented by Formula (IA) having particularly preferred -L 1A - and particularly preferred Aky according to above aspect [1X-2], particularly preferred -L according to above aspect [1X-3] 2A is selected from alginic acid derivatives of formula (II-A) having -; the antibody-producing cells are antibody-producing CHO cells; and the cationic polymer layer comprises poly-L-ornithine, polyallylamine (PAA), polyethylene Polymer-coated crosslinked alginate gel fibers selected from imines or polymethylene-CO-guanidine (PMCG).
  • the alginic acid derivative used for forming the crosslinked alginate gel is the one described in aspect [1X-1].
  • Alginic acid derivative represented by formula (IA) having most preferred -L 1A - and Aky according to above aspect [1X-2], most preferred -L according to above aspect [1X-3] 2A is selected from alginic acid derivatives of formula (II-A) having -; the antibody-producing cells are antibody-producing CHO cells; and the cationic polymer layer comprises poly-L-ornithine, polyallylamine (PAA), polyethylene Polymer-coated crosslinked alginate gel fibers selected from imines or polymethylene-CO-guanidine (PMCG).
  • PAA polyallylamine
  • PMCG polyethylene Polymer-coated crosslinked alginate gel fibers selected from imines or polymethylene-CO-guanidine
  • -L 1A - of the alginic acid derivative represented by formula (IA) is specifically represented by the following partial structural formula: is a linker selected from: Specifically, Aky has the following partial structural formula: (wherein the right side of the dashed line at both ends is not included) is a cyclic alkyne group selected from; Specifically, -L 2A - of the alginic acid derivative represented by formula (II-A) has the following partial structural formula: (wherein the outside of the dashed lines at both ends is not included) is a linker selected from.
  • Any preferred embodiment of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber can be formed by combining the elements of the chemically modified alginate derivative and the cationic polymer (cationic polymer layer).
  • the cells capable of producing antibodies, physiologically active substances, etc. contained in the core layer of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber are, for example, , antibody (various monoclonal antibodies such as human antibodies, humanized antibodies, chimeric antibodies, and mouse antibodies, or various modified antibodies such as bispecific antibodies, low-molecular-weight antibodies, and sugar chain-engineered antibodies)-producing cells, bioactivity Substance (enzymes, cytokines, hormones, blood coagulation factors, vaccines, etc.)-producing cells, cells capable of producing various useful substances useful as raw materials for pharmaceuticals, chemical raw materials, food raw materials, etc.; preferably antibody-producing cells or Physiologically active substance-producing cells.
  • antibody variant monoclonal antibodies such as human antibodies, humanized antibodies, chimeric antibodies, and mouse antibodies, or various modified antibodies such as bispecific antibodies, low-molecular-weight antibodies, and sugar chain-engineered antibodies
  • bioactivity Substance enzymes, cytokines, hormones, blood coagulation factors, vaccines, etc
  • the antibody-producing cells that can be encapsulated in the core layer of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber are derived from antibody-producing B cells.
  • the antibody-producing cells that can be encapsulated in the core layer of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber preferably produce antibodies. It is a genetically modified animal cell that
  • the animal cells used as hosts are CHO cells, CHO cell substrains (CHO-K1 cells, CHO-DG44 cells, CHO-DXB11 cells, or CHO cells transformed to modify sugar chains, etc.), COS cells, Sp2/0 cells, NS0 cells, SP2 cells, PERC6 cells, YB2/0 cells, YE2/0 cells, 1R983F cells, Namalwa cells, Wil -2 cells, Jurkat cells, Vero cells, Molt-4 cells, HEK293 cells, BHK cells, HT-1080 cells, KGH6 cells, P3X63Ag8.653 cells, C127 cells, JC cells, LA7 cells, ZR-45-30 cells, Cells selected from hTERT cells, NM2C5 cells, or UACC-812 cells.
  • the animal cells used as hosts are preferably CHO cells, CHO cell substrains, COS cells, Sp2/0 cells, NS0 cells, SP2 cells. , PERC6 cells, HEK293 cells, BHK cells, HT-1080 cells, or C127 cells; more preferably CHO cells, CHO cell sublines, Sp2/0 cells, NS0 cells, HEK293 cells, or Cells selected from BHK cells; more preferably CHO cells or CHO cell sublines.
  • the antibody-producing cells that can be encapsulated in the core layer of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber are preferably Cells selected from CHO cells, CHO cell sublines, Sp2/0 cells or NS0 cells; more preferably CHO cells or CHO cell sublines.
  • the antibody-producing cells that can be encapsulated in the core layer of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber are used as biopharmaceuticals or biopharmaceutical raw materials. It is the cell that produces the antibody that is used.
  • the antibody-producing cells contained in the core layer of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber are preferably suspension cells or cells or substrains that have been adapted to allow suspension culture.
  • the antibody-producing cells that can be encapsulated in the core layer of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber include muromonab-CD3, trastuzumab, and rituximab.
  • the antibody-producing cells that can be encapsulated in the core layer of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber are antibody-producing animal cells, Antibody-producing CHO cells, antibody-producing Sp2/0 cells or antibody-producing NS0 cells are preferred, and antibody-producing CHO cells are more preferred.
  • the antibody-producing cells that can be encapsulated in the core layer of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber are preferably Antibody-producing CHO cells that are CHO cells, such as muromonab-CD3-producing CHO cells, trastuzumab-producing CHO cells, rituximab-producing CHO cells, palivizumab-producing CHO cells, infliximab-producing CHO cells, basiliximab-producing CHO cells, tocilizumab-producing CHO cells, gemtuzumab CHO cells producing bevacizumab, CHO cells producing ibritumomab, CHO cells producing adalimumab, CHO cells producing cetuximab, CHO cells producing ranibizumab, CHO cells producing omalizumab, CHO cells producing eculizumab, CHO cells producing panitumuma
  • Antibody-producing CHO cells that are CHO cells, such as muromonab-CD3
  • the physiologically active substance-producing cells contained in the core layer of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber are insulin-secreting cells, pancreatic islets , pancreatic islet cells, or pancreatic ⁇ -cell-derived MIN6 cells.
  • the physiologically active substance-producing cell that can be encapsulated in the core layer of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber comprises a physiologically active substance expression vector It is a cultured cell (physiologically active substance-producing gene-recombinant cell) transformed by
  • the physiologically active substance-producing cells that can be encapsulated in the core layer of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber produce a physiologically active substance. It is a genetically modified animal cell that
  • the animal cells used as hosts include CHO cells, CHO cell substrains, COS cells, Sp2/0 cells, NS0 cells, SP2 cells, or Cells selected from PERC6 cells, HEK293 cells, BHK cells, HT-1080 cells or C127 cells; preferably CHO cells, CHO cell sublines, Sp2/0 cells and NS0 cells, HEK293 cells or BHK A cell selected from cells; more preferably a CHO cell, or a CHO cell subline.
  • the physiologically active substance-producing cells that can be encapsulated in the core layer of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber are preferably The cells are cells selected from CHO cells, CHO cell sublines, HEK293 cells or BHK cells; more preferably CHO cells or CHO cell sublines.
  • the physiologically active substance-producing cells that can be encapsulated in the core layer of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber are biopharmaceuticals or biopharmaceuticals. Cells that produce physiologically active substances used as raw materials.
  • the physiologically active substance-producing cells that can be encapsulated in the core layer of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber are alteplase, monteplase, and imiglucerase.
  • the physiologically active substance-producing cell that can be encapsulated in the core layer of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber is a physiologically active substance-producing animal A cell, preferably a physiologically active substance-producing CHO cell, a physiologically active substance-producing HEK293 cell, or a physiologically active substance-producing BHK cell, more preferably a physiologically active substance-producing CHO cell.
  • the physiologically active substance-producing cells that can be encapsulated in the core layer of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber are preferably Bioactive substance-producing cells CHO cells in which the cells are CHO cells, such asreteplase-producing CHO cells, alglucosidase-producing CHO cells, rurioctocog-producing CHO cells, dulaglutide-producing CHO cells, interferon beta-1a-producing CHO cells, and darbepoetin-producing CHO cells. cells selected from etanercept-producing CHO cells, aflibercept-producing CHO cells or abatacept-producing CHO cells.
  • the second aspect is as follows. Carrying out a cross-linking reaction using cells capable of producing antibodies, physiologically active substances, etc., and the chemically modified alginic acid derivative represented by formula (I) and the chemically modified alginic acid derivative represented by formula (II) according to the aspect [1].
  • step (2) The crosslinked alginate gel fibers (CLA) obtained in step (1), which contain cells capable of producing antibodies, physiologically active substances, etc. in the core layer, are brought into contact with a solution containing a cationic polymer to convert the cation obtaining a polymer-coated cross-linked alginate gel fiber (CFB) coated with a layer of a flexible polymer.
  • CLA crosslinked alginate gel fibers
  • the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber in the aspect [2] is the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber according to any one of the aspects ([1] to [1-17-5]).
  • the cells capable of producing antibodies, physiologically active substances, etc. used for producing the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber are the above aspects [1-3] to [1-3-5]. It is the same as the cell capable of producing the antibody, physiologically active substance, etc. according to any one of .
  • the cells capable of producing antibodies, physiologically active substances, etc. used in the production of the polymer-coated crosslinked alginate gel fibers are the above aspects [1B-3] to [1B-3- 19].
  • the weight-average molecular weight of the chemically modified alginic acid derivative represented by formula (I) used for producing the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber measured by gel filtration chromatography is, for example, in the range of about 100,000 Da to about 3,000,000 Da; preferably in the range of about 300,000 Da to about 2,500,000 Da, more preferably in the range of about 500,000 Da to about 2,000,000 Da is.
  • the weight-average molecular weight of the chemically modified alginic acid derivative represented by the formula (II) used for producing the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber measured by gel filtration chromatography is, for example, in the range of about 100,000 Da to about 3,000,000 Da; preferably in the range of about 300,000 Da to about 2,500,000 Da, more preferably in the range of about 500,000 Da to about 2,000,000 Da is.
  • the reactive group of the chemically modified alginic acid derivative represented by formula (I) used for producing the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber Akn-L 1 -NH 2 group (Akn- L 1 — has the same definition as in the aspects [1] to [1-1-4]), the introduction rate is, for example, in the range of about 0.1 to about 30 mol%; It ranges from 0.3 to about 20 mol %; more preferably from about 0.5 to about 10 mol %.
  • components that can be added to the mixed solution containing cells capable of producing antibodies, physiologically active substances, etc. and chemically modified alginic acid derivatives represented by formulas (I) and (II) include: For example, it is a component selected from the group consisting of alginic acid solution, medium, culture medium, collagen solution, methylcellulose, sucrose solution, mixture thereof, etc.; preferably alginic acid solution, medium, culture medium, mixture thereof, etc. is a component selected from the group consisting of
  • Alginic acid e.g., sodium alginate, etc.
  • GPC method gel filtration chromatography
  • Alginic acid e.g., sodium alginate, etc.
  • Alginic acid used for preparing an alginic acid solution that can be added to the solution has a weight-average molecular weight measured by a gel filtration chromatography method (GPC method), for example, from about 150,000 Da to about 2,500 Da, 000 Da; preferably from about 300,000 Da to about 2,500,000 Da; more preferably from about 700,000 Da to about 1,400,000 Da, from about 800,000 Da to about 1,500,000 Da , from about 1,400,000 to about 2,000,000 Da, or from about 1,500,000 to about 2,500,000 Da.
  • GPC method gel filtration chromatography method
  • Alginic acid e.g., sodium alginate, etc.
  • Alginic acid solution preferably has a weight-average molecular weight of about 1,400,000 to about 2, as measured by gel filtration chromatography (GPC method).
  • GPC method gel filtration chromatography
  • the concentration of the solution of the chemically modified alginic acid derivative represented by the formula (I) used for producing the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber is, for example, about 0.01 to about 1.0%. 5 weight percent; preferably about 0.05 to about 1.0 weight percent; more preferably about 0.08 to about 0.75 weight percent.
  • wt% means w/v%.
  • the concentration of the solution of the chemically modified alginic acid derivative represented by the formula (II) used for producing the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber is, for example, about 0.01 to about 1.0%. 5 weight percent; preferably about 0.05 to about 1.0 weight percent; more preferably about 0.08 to about 0.75 weight percent.
  • Concentrations range, for example, from about 0.02 to about 2.0% by weight; preferably from about 0.1 to about 2.0% by weight; more preferably from about 0.15 to about 1% by weight. .5% by weight.
  • Concentration of alginic acid solution that can be added to a mixed solution containing cells capable of producing antibodies, physiologically active substances, etc. and chemically modified alginic acid derivatives represented by formulas (I) and (II) in the above aspect [2] is, for example, in the range of 0 to about 1.98 weight percent; preferably in the range of 0 to about 1.8 weight percent; more preferably in the range of 0 to about 1.7 weight percent.
  • an alginic acid solution that can be added to a mixed solution containing cells capable of producing antibodies, physiologically active substances, etc. and chemically modified alginic acid derivatives represented by formulas (I) and (II) concentration (C ALG ) is, for example, in the range 0 ⁇ C ALG ⁇ about 1.98 wt%; preferably in the range 0 ⁇ C ALG ⁇ about 1.8 wt%; more preferably 0 ⁇ C ALG ⁇ about 1.7 weight percent.
  • an alginic acid solution is added to a mixed solution containing cells capable of producing antibodies, physiologically active substances, etc. and chemically modified alginic acid derivatives represented by formulas (I) and (II).
  • the total concentration of the mixed solution containing the chemically modified alginic acid derivatives represented by formulas (I) and (II) and the concentration of the alginic acid solution is preferably about 0.5 to about 2.0% by weight. Yes; more preferably at a concentration selected from about 1.0%, about 1.5% and about 2.0% by weight.
  • an alginic acid solution is added to the mixed solution containing cells capable of producing antibodies, physiologically active substances, etc. and chemically modified alginic acid derivatives represented by formulas (I) and (II). is added, the total concentration (C TOL ) of the concentration of the mixed solution containing the chemically modified alginic acid derivative represented by the formula (I) and the formula (II) and the concentration of the alginic acid solution is, for example, 0 ⁇ C TOL ⁇ about 2.0% by weight, preferably about 0.5 to about 2.0% by weight; more preferably about 1.0 to about 2.0% by weight; More preferred are concentrations selected from about 1.0%, about 1.5% and about 2.0% by weight.
  • an alginic acid solution is added to a mixed solution containing cells capable of producing antibodies, physiologically active substances, etc. and chemically modified alginic acid derivatives represented by formulas (I) and (II).
  • an alginic acid solution is added to the mixed solution containing cells capable of producing antibodies, physiologically active substances, etc. and chemically modified alginic acid derivatives represented by formulas (I) and (II).
  • the combination of the concentration of the mixed solution containing the chemically modified alginic acid derivatives represented by the formulas (I) and (II) (C1 (% by weight)) and the concentration of the alginic acid solution (C2 (% by weight)) is ,for example, 0 ⁇ C2 (% by weight) ⁇ about 1.98 (% by weight), 0 ⁇ C1 (% by weight) ⁇ about 2.0 (% by weight) - C2 (% by weight), 0 ⁇ C1 + C2 (% by weight) ⁇ about 2.0 (% by weight)
  • (C1: C2) (about 0.2: about 1.3), (about 0.5: about 1.0), (about 1. 0: about 0.5), (about 0.66: about 1.34), and (about 0.34: about 0.66).
  • an alginic acid solution is added to a mixed solution containing cells capable of producing antibodies, physiologically active substances, etc. and chemically modified alginic acid derivatives represented by formulas (I) and (II).
  • an alginic acid solution is added to a mixed solution containing cells capable of producing antibodies, physiologically active substances, etc. and chemically modified alginic acid derivatives represented by formulas (I) and (II).
  • (C1A:C1N:C2) (about 0.1: about 0.1: about 1.3), (about 0.25: about 0.25). 25: about 1.0), (about 0.5: about 0.5
  • v1+v2 15, 0 ⁇ v1 ⁇ 15 and 0 ⁇ v2 ⁇ 15.
  • the cells capable of producing antibodies, physiologically active substances, etc. and the cells represented by formula (I) and formula (II) used for forming the core layer of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber When an alginic acid solution is added to a mixed solution containing a chemically modified alginic acid derivative, the volume (v1) of the chemically modified alginic acid derivative represented by formula (I) in the mixed solution to which the alginic acid solution has been added is represented by formula (II).
  • v1+v2+v3 15, 0 ⁇ v1 ⁇ 15, 0 ⁇ v2 ⁇ 15, and 0 ⁇ v3 ⁇ 15.
  • a mixed solution containing cells capable of producing antibodies, physiologically active substances, etc. and chemically modified alginic acid derivatives represented by formulas (I) and (II) is injected into the solution.
  • the divalent metal ions contained are divalent metal ions selected from the group of calcium ions, magnesium ions, barium ions, strontium ions, zinc ions and the like; preferably calcium ions, barium ions or strontium ions. more preferably calcium ions or barium ions.
  • the solution for injecting the mixed solution containing cells capable of producing antibodies, physiologically active substances, etc. and the chemically modified alginic acid derivatives represented by formulas (I) and (II) is An aqueous solution containing divalent metal ions selected from the group consisting of an aqueous calcium chloride solution, an aqueous calcium carbonate solution, an aqueous calcium gluconate solution, an aqueous barium chloride solution, an aqueous strontium chloride solution, etc.; preferably an aqueous calcium chloride solution or an aqueous barium chloride solution. .
  • the concentration of the divalent metal ion is, for example, in the range of about 1 mM to about 1 M, or in the range of about 10 to about 500 mM; about 10 to about 100 mM.
  • the mixed solution containing cells capable of producing antibodies, physiologically active substances, etc. and chemically modified alginic acid derivatives represented by formulas (I) and (II) can be prepared by, for example, 3, the mixed solution can be introduced from the inlet 1 of the device XX and injected from the outlet 2 of the device XX.
  • the mixed solution containing cells capable of producing antibodies, physiologically active substances, etc. and chemically modified alginic acid derivatives represented by formulas (I) and (II) is For example, it can be ejected from the discharge port 2 of the apparatus XX using an extrusion cylinder YY or the like as shown in FIG.
  • a syringe can be used as a combination of the device XX and the ejector YY. Also, a syringe made of glass or plastic can be used as the syringe.
  • the injection speed (flow rate) of the mixed solution containing the chemically modified alginic acid derivative is, for example, in the range of about 100 to about 10000 ⁇ L/min.
  • the solution containing the cationic polymer with which the crosslinked alginate gel fiber (CLA) containing cells capable of producing antibodies, physiologically active substances, etc. is brought into contact is polyamino acid (basic amino acid polymer), basic polysaccharides, basic polymers, salts thereof, and the like.
  • the cationic polymer-containing solution with which the crosslinked alginate gel fibers (CLA) containing cells capable of producing antibodies, physiologically active substances, etc. is brought into contact is preferably a polyamino acid.
  • poly-L-ornithine PLO
  • poly-D-ornithine PDO
  • poly-DL-ornithine poly-D-lysine
  • PDL poly-L-lysine
  • PDL poly-DL-lysine
  • PA poly-L-Arginine
  • PDA Poly-D-Arginine
  • PHA Poly-DL-Arginine
  • PDHA Poly-D-Homoarginine
  • Poly-DL-Homoarginine A solution containing a cationic polymer selected from the group consisting of poly-L-histidine (PLH), poly-D-histidine (PDH), poly-DL-histidine and salts thereof; more preferably poly-L - A solution containing a cationic polymer selected from the group consisting of ornithine, poly-L-lysine and salts thereof; more preferably a solution containing a cationic polymer selected from poly-L-
  • the solution containing the cationic polymer with which the crosslinked alginate gel fibers (CLA) containing cells capable of producing antibodies, physiologically active substances, etc. are brought into contact is, for example, a basic polysaccharide is a solution containing a cationic polymer selected from the group consisting of chitosan or salts thereof.
  • the solution containing the cationic polymer with which the crosslinked alginate gel fibers (CLA) containing cells capable of producing antibodies, physiologically active substances, etc. are brought into contact is, for example, a basic polymer. selected from the group consisting of a polymethylene-CO-guanidine (PMCG), polyallylamine (PAA), polyvinylamine (PVA), polyethyleneimine, allylamine-diallylamine copolymer, allylamine-maleic acid copolymer, and salts thereof It is a solution containing a cationic polymer.
  • a basic polymer selected from the group consisting of a polymethylene-CO-guanidine (PMCG), polyallylamine (PAA), polyvinylamine (PVA), polyethyleneimine, allylamine-diallylamine copolymer, allylamine-maleic acid copolymer, and salts thereof It is a solution containing a cationic polymer.
  • the solution containing the cationic polymer is preferably polyallylamine (PAA), polyethyleneimine, polymethylene-CO-guanidine (PMCG) and more preferably a cationic polymer selected from polyethylenimine, polymethylene-CO-guanidine (PMCG), or salts thereof.
  • PAA polyallylamine
  • PMCG polymethylene-CO-guanidine
  • the solution containing the cationic polymer with which the crosslinked alginate gel fibers (CLA) containing cells capable of producing antibodies, physiologically active substances, etc. are brought into contact is an aqueous solution containing divalent metal ions (for example, an aqueous solution of calcium chloride, an aqueous solution of barium chloride, etc.) and components such as a buffer solution can be included.
  • the temperature during production of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber is, for example, in the range of about 4 to about 37°C.
  • Any preferred embodiment of the method for producing the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber can be formed by combining the method for producing the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber and each element described in the above aspects.
  • the chemically modified alginic acid derivatives represented by the formulas (I) and (II) are each combined with the formula (I) according to the aspect [1X].
  • -A) and chemically modified alginic acid derivatives represented by formula (II-A) can optionally form a preferred embodiment of the method for producing polymer-coated crosslinked alginate gel fibers. Due to the replacement, the variables related to the concentration, volume, etc. of the chemically modified alginic acid derivative represented by formula (IA) or formula (II-A) are the above-described embodiments [1-11-2-1X] and [1-11 -3-1X], [1-11-4X], [1-11-5X].
  • the third aspect is as follows. Carrying out a cross-linking reaction using cells capable of producing antibodies, physiologically active substances, etc., and the chemically modified alginic acid derivative represented by formula (I) and the chemically modified alginic acid derivative represented by formula (II) according to the aspect [1].
  • the polymer-coated crosslinked alginate gel fibers are placed in a culture vessel, a culture medium is added to impregnate the polymer-coated crosslinked alginate gel fibers, and culture is performed to produce antibodies, physiologically active substances, and the like. manufacturing method.
  • the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber in the aspect [3] is the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber according to any one of the aspects ([1] to [1-17-5]).
  • the 3X aspect is as follows. Crosslinking using cells capable of producing antibodies, physiologically active substances, etc., and the chemically modified alginic acid derivative represented by formula (IA) and the chemically modified alginic acid derivative represented by formula (II-A) according to the aspect [1X]
  • the polymer-coated crosslinked alginate gel fibers are placed in a culture vessel, a culture medium is added to impregnate the polymer-coated crosslinked alginate gel fibers, and culture is performed to produce antibodies, physiologically active substances, and the like. manufacturing method.
  • the culture vessel is selected from the group consisting of, for example, tissue culture plates, Erlenmeyer flasks, T-flasks, spinner flasks, culture bags, animal cell culture tanks, etc. preferably an Erlenmeyer flask or an animal cell culture vessel.
  • tissue culture plates for example, tissue culture plates, Erlenmeyer flasks, T-flasks, spinner flasks, culture bags, animal cell culture tanks, etc. preferably an Erlenmeyer flask or an animal cell culture vessel.
  • any method such as static culture or shaking culture may be selected, and any method such as batch culture (batch culture), fed-batch culture (fed-batch culture), or continuous culture may be used. Although good, fed-batch or continuous culture is preferred.
  • the temperature during culture is, for example, in the range of about 28°C to about 39°C, for example, about 30°C to about It is in the range of 37°C.
  • the stirring speed during culture is, for example, about 50 to about 500 rpm, about 50 to about 350 rpm, about 50 to about 250 rpm, range from about 50 to about 150 rpm, such as about 125 rpm.
  • the culture conditions are, for example, a culture temperature in the range of about 28°C to about 39°C and a 5% CO2 atmosphere. Incubate with an agitation speed of about 125 rpm in an incubator.
  • the culture period is, for example, 7 days, 14 days, 28 days, or 42 days. or 56 days or 70 days.
  • the cells capable of producing antibodies, physiologically active substances, etc. contained in the core layer of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber are the above aspects [1-3] to [1-3-5]. ].
  • the cells capable of producing antibodies, physiologically active substances, etc. contained in the core layer of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber are the above aspects [1B-3] to [1B-3 -19].
  • [3-7] A method for producing an antibody, a physiologically active substance, etc. according to any one of the above aspects [3] to [3-6-1], which comprises adding a cell growth inhibitor.
  • a preferred embodiment of the method for producing an antibody, a physiologically active substance, etc. can be arbitrarily formed by combining the method for producing an antibody, a physiologically active substance, etc. using the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber and each element described in the above aspect.
  • a fourth aspect is the cationic cationic Antibodies that permeate the polymer layer are, for example, antibodies having an isotype selected from the group consisting of IgG, IgA, IgM, IgD, IgE, and the like.
  • the cationic cationic The molecular weight of the antibody permeating the polymer layer is, for example, about 45,000 to about 1,000,000 Da, about 3,000 to about 1,000,000 Da, about 20,000 to about 1,000,000 Da, about 20 ,000 to about 400,000 Da, about 45,000 to about 400,000 Da, about 20,000 to about 200,000 Da, about 45,000 to about 200,000 Da.
  • insulin produced using MIN6 cells has a molecular weight of, for example, about 5 ,000 to 10,000.
  • the molecular weight of the physiologically active substance produced using the physiologically active substance-producing cells in the production method according to the above aspects [3] to [3-7] is, for example, about 3,000 to about 1,000,000 Da, about 20,000 to about 1,000,000 Da, about 45,000 to about 1,000,000 Da, about 20,000 to about 400,000 Da, about 45,000 - about 400,000 Da, about 20,000 to about 200,000 Da, about 45,000 to about 200,000 Da.
  • the antibody obtained in the method for producing an antibody according to any one of the above aspects [3] to [3-7] is, for example, muromonab using muromonab-CD3-producing CHO cells.
  • dupilumab using dupilumab-producing CHO cells Using avelumab, dupilumab using dupilumab-producing CHO cells, dupilumab using atezolizumab-producing CHO cells, atezolizumab using benralizumab-producing CHO cells, benralizumab using benralizumab-producing CHO cells, inotuzumab using inotuzumab-producing CHO cells, emicizumab using emicizumab-producing CHO cells, guselkumab guselkumab using CHO cells producing durvalumab, durvalumab using CHO cells producing durvalumab, obinutuzumab using CHO cells producing obinutuzumab, cho cells producing vedolizumab, or anti-GPVI antibodies using CHO cells producing anti-GPVI antibodies.
  • examples of antibodies that can be produced include trastuzumab and rituximab production using trastuzumab-producing CHO cells.
  • Rituximab using CHO cells infliximab using infliximab-producing CHO cells, tocilizumab using tocilizumab-producing CHO cells, adalimumab using adalimumab-producing CHO cells, nivolumab or anti-GPVI antibody-producing CHO cells using nivolumab-producing CHO cells anti-GPVI antibodies using anti-GPVI antibodies; eg, tocilizumab using tocilizumab-producing CHO cells, or anti-GPVI antibodies using anti-GPVI antibody-producing CHO cells.
  • the antibody obtained by the method for producing an antibody according to the above aspects [3] to [3-7] is muromonab-CD3, trastuzumab, rituximab, palivizumab, infliximab, basiliximab, tocilizumab, bevacizumab ⁇ , sotrovimab, ocrelizumab, naxitamab, aducanumab, tafasitamab, margetuximab, gantenerumab, tiragolumab, clovalimab, nemolizumab, catumasomab, pramotamab, falisimab, gemtuzumab, ibritumomab, brentuximab, inotuzumab, polatuzumab, enfortuzumab, belantuzumab, sacituzumab, Mogamulizumab,
  • the antibody obtained in the method for producing an antibody according to the above aspects [3] to [3-7] is a muromonab-CD3-producing CHO cell, a trastuzumab-producing CHO cell, a rituximab-producing CHO cell, Palivizumab-producing NS0 cells, Palivizumab-producing CHO cells, Infliximab-producing Sp2/0 cells, Infliximab-producing CHO cells, Basiliximab-producing Sp2/0 cells, Basiliximab-producing CHO cells, Tocilizumab-producing CHO cells, Bevacizumab-producing CHO cells, Adalimumab-producing CHO cells, Cetuximab producing Sp2/0 cells, cetuximab producing CHO cells, omalizumab producing CHO cells, eculizumab producing NS0 cells, eculizumab producing CHO cells, panitumumab producing CHO cells, us
  • the antibody obtained in the method for producing an antibody according to the aspects [3] to [3-7] is muromonab-CD3-producing CHO cells, trastuzumab-producing CHO cells, rituximab-producing CHO cells, and palivizumab-producing CHO cells.
  • infliximab-producing CHO cells basiliximab-producing CHO cells, tocilizumab-producing CHO cells, gemtuzumab-producing CHO cells, bevacizumab-producing CHO cells, ibritumomab-producing CHO cells, adalimumab-producing CHO cells, cetuximab-producing CHO cells, ranibizumab-producing CHO cells, omalizumab-producing CHO cells , eculizumab-producing CHO cells, panitumumab-producing CHO cells, ustekinumab-producing CHO cells, golimumab-producing CHO cells, canakinumab-producing CHO cells, denosumab-producing CHO cells, mogamulizumab-producing CHO cells, certolizumab-producing CHO cells, ofatumumab-producing CHO cells, pertuzumab-producing CHO cells producing brentuximab, CHO
  • the antibody obtained in the method for producing an antibody according to the aspects [3] to [3-7] is trastuzumab-producing CHO cells, rituximab-producing CHO cells, infliximab-producing CHO cells, tocilizumab-producing CHO cells, and adalimumab.
  • the chemically modified alginic acid derivative represented by formula (I) and the chemically modified alginic acid derivative represented by formula (II) are respectively the chemically modified alginic acid derivative represented by formula (IA) and the chemically modified alginic acid derivative represented by formula (II-A). Substitution to the chemically modified alginic acid derivatives represented can be made.
  • alginic acid which is a raw material for synthesizing the chemically modified alginic acid derivatives represented by formula (I), formula (IA), formula (II), and formula (II-A), and in the core layer Alginic acid, which is a raw material for the alginic acid solution or alginic acid gel that can be obtained, will be described below.
  • alginic acid when referring to alginic acid, it means at least one alginic acid (sometimes referred to as "alginates") selected from the group consisting of alginic acid, alginic acid esters, and salts thereof (e.g., sodium alginate). do.
  • the alginic acid used may be naturally occurring or synthetic, but is preferably naturally occurring.
  • Alginic acids that are preferably used are bioabsorbable polysaccharides extracted from brown algae such as Lessonia, Macrocystis, Laminaria, Ascophyllum, Durvillea, Ecklonia, Arame, and Kelp, and D-mannuronic acid (M) and L-guluronic acid (G). More specifically, a homopolymer fraction of D-mannuronic acid (MM fraction), a homopolymer fraction of L-guluronic acid (GG fraction), and randomly arranged D-mannuronic acid and L-guluronic acid The fraction (M/G fraction) is an optionally conjugated block copolymer.
  • Alginic acid is a type of natural polysaccharide produced by extracting and purifying brown algae, and is a polymer in which D-mannuronic acid (M) and L-guluronic acid (G) are polymerized.
  • the physicochemical properties of alginic acid differ depending on the M/G ratio of alginic acid, the arrangement of M and G, etc., and the preferred uses may differ. It is known that the gelling ability of alginic acids and the properties of the resulting gel are affected by the M/G ratio, and generally, the higher the G ratio, the higher the gel strength. The M/G ratio also affects gel hardness, brittleness, water absorption, flexibility, and the like. Therefore, the alginic acid used in the present invention should have an appropriate M/G ratio and an appropriate viscosity depending on its final use.
  • Industrial methods for producing alginic acid include an acid method and a calcium method, but products produced by either method can be used in the present invention.
  • the quantitative value by HPLC method is preferably in the range of 80 to 120% by mass, more preferably in the range of 90 to 110% by mass, and in the range of 95 to 105% by mass. More preferred.
  • an alginic acid whose quantitative value by the HPLC method falls within the above range is referred to as high-purity alginic acid.
  • Alginic acid or a salt thereof used in the present invention is preferably highly pure alginic acid. As a commercially available product, for example, products sold by Kimika Co., Ltd.
  • the salt of alginic acid in "alginic acid” used in the present invention is a "monovalent metal salt of alginic acid", in which the hydrogen ion of the carboxylic acid of D-mannuronic acid or L-guluronic acid of alginic acid is replaced by Na + or K + It is a salt made by ion exchange with monovalent metal ions such as Specific examples of the monovalent metal salt of alginic acid include sodium alginate and potassium alginate, with sodium alginate being particularly preferred.
  • alginic acid is sometimes expressed as (ALG)-COOH, with alginic acid as (ALG) and one of the arbitrary carboxyl groups of alginic acid as -COOH.
  • the alginic acid used in the present invention has an appropriate weight-average molecular weight depending on its final use.
  • the weight average molecular weight (GPC) of alginic acid used in the present invention is, for example, 10,000 to 10,000,000; preferably 100,000 to 5,000,000; more preferably 150,000 to 3,000,000.
  • the alginic acid is sodium alginate.
  • Commercially available sodium alginate can be used as sodium alginate.
  • the sodium alginate used in the examples described later is A-1, A-2, A-3, B-1, B-2, and B-3 sodium alginate (sold by Mochida Pharmaceutical Co., Ltd.).
  • the viscosity, weight average molecular weight and M/G ratio of 1 w/w % aqueous solutions of each sodium alginate are shown in the table below.
  • Each physical property value of the sodium alginate A-1, A-2, A-3, B-1, B-2, and B-3 was measured by the following various methods.
  • the measurement method is not limited to this method, but each physical property value may differ from those described above depending on the measurement method.
  • Pretreatment method After adding the eluent to the sample and dissolving it, the sample was filtered through a 0.45 ⁇ m membrane filter to obtain a measurement solution.
  • the molecular weight of alginic acid, alginic acid derivatives, crosslinked alginic acid, and crosslinked alginic acid may be indicated with Da (Dalton) as a unit.
  • the composition ratio (M/G ratio) of D-mannuronic acid and L-guluronic acid in alginic acids varies depending on the type of organisms from which it is derived, such as seaweed, and is also affected by the habitat and season of the organisms. , from a high G type with an M/G ratio of about 0.2 to a high M type with an M/G ratio of about 5. It is known that the gelling ability of alginic acids and the properties of the resulting gel are affected by the M/G ratio, and generally, the higher the G ratio, the higher the gel strength. The M/G ratio also affects gel hardness, brittleness, water absorption, flexibility, and the like.
  • the M/G ratio of alginic acids and/or salts thereof to be used is usually 0.1 to 4.0, in some embodiments 0.1 to 3.0, in some embodiments 0.1 to 2 .0, in some embodiments from 0.5 to 1.8, and in some embodiments from 0.8 to 1.2. In another aspect, it is 0.1 to 0.5.
  • the alginic acid used in the present invention preferably has an appropriate viscosity and an appropriate M/G ratio depending on its final use.
  • a numerical range indicated using “-” indicates a range that includes the numerical values before and after "-" as the minimum and maximum values, respectively.
  • Alginate and “alginate” used in this specification are not particularly limited, but must not have a functional group that inhibits the cross-linking reaction in order to react with the cross-linking agent.
  • Alginic acid esters preferably include propylene glycol alginate and the like.
  • Alginic acid can take the form of, for example, a monovalent salt of alginic acid and a divalent salt of alginic acid.
  • the monovalent salt of alginic acid includes, for example, sodium alginate, potassium alginate, ammonium alginate, etc., preferably sodium alginate or potassium alginate, more preferably sodium alginate.
  • Divalent salts of alginic acid include, for example, calcium alginate, magnesium alginate, barium alginate, strontium alginate, and the like.
  • Alginic acid is a high-molecular-weight polysaccharide, and although it is difficult to accurately determine its molecular weight, it generally has a weight-average molecular weight of 1,000 to 10,000,000, preferably 10,000 to 8,000,000, more preferably 20,000 to 20,000. 3 million. It is known that the molecular weight measurement of high-molecular-weight substances derived from natural products may result in different values depending on the measurement method.
  • the molecular weight of the alginic acid derivative or alginic acid or salt thereof of the present invention is the weight average molecular weight calculated by size exclusion chromatography (SEC) unless otherwise specified.
  • SEC size exclusion chromatography
  • alginic acid or a salt thereof used in the present invention it is desirable to use one having an appropriate molecular weight distribution according to its final use.
  • GPC gel permeation chromatography
  • SEC size exclusion chromatography
  • the absolute weight average molecular weight can be measured.
  • the weight average molecular weight (absolute molecular weight) measured by the GPC-MALS method is preferably 10,000 or more, more preferably 50,000 or more, still more preferably 60,000 or more, and preferably 1,000,000 or less, more preferably 80. 10,000 or less, more preferably 700,000 or less, and particularly preferably 500,000 or less.
  • the preferred range is 10,000 to 1,000,000, more preferably 50,000 to 800,000, and still more preferably 60,000 to 500,000.
  • a measurement error of about 10% to about 30% can occur. For example, if it is 500,000, the value may fluctuate in the range of 350,000 to 650,000, and if it is 1 million, it may fluctuate in the range of 700,000 to 1,300,000.
  • “about” when “about” is described in the description of molecular weight measurement, it can include values up to ⁇ 10% of the numerical value, and in certain embodiments up to ⁇ 20% of the numerical value.
  • macromolecular substances derived from natural products do not have a single molecular weight, but are aggregates of molecules with various molecular weights, so they are measured as a molecular weight distribution with a certain width.
  • a typical measurement technique is gel filtration chromatography.
  • Representative information on molecular weight distribution obtained by gel filtration chromatography includes weight average molecular weight (Mw), number average molecular weight (Mn), and dispersion ratio (Mw/Mn).
  • the weight average molecular weight emphasizes the contribution of high molecular weight polymers to the average molecular weight, and is expressed by the following formula.
  • W is the total weight of the polymer
  • Wi is the weight of the i-th polymer
  • Mi is the molecular weight at the i-th elution time
  • Ni is the number of molecular weights Mi
  • Hi is the height at the i-th elution time.
  • the weight average molecular weight is a value calculated from a calibration curve using pullulan as a standard substance after measuring the molecular weight by a conventional method such as size exclusion chromatography (SEC) as shown in the above literature. can do.
  • the weight average molecular weight can be an absolute molecular weight measured by a conventional method such as size exclusion chromatography (SEC)-MALS as described in the above literature.
  • the molecular weight of alginic acids can be measured according to a conventional method.
  • the molecular weight of alginic acid or a salt thereof in this specification is the weight average molecular weight calculated by gel filtration chromatography unless otherwise specified.
  • the conditions of the present examples described later can be adopted.
  • a Superose 6 Increase 10/300 GL column GE Healthcare Science
  • blue dextran, thyroglobulin, ferritin, aldolase, conalbumin, ovalbumin, ribonuclease A and aprotinin can be used as molecular weight standards.
  • the viscosity of alginic acid used herein is not particularly limited, but when the viscosity is measured as an aqueous solution of 1 w/w% alginic acid, it is preferably 10 mPa s to 1000 mPa s, more preferably 50 mPa s. s to 800 mPa ⁇ s.
  • the viscosity of the aqueous solution of alginic acid can be measured according to a conventional method.
  • a coaxial double cylindrical rotational viscometer, a single cylindrical rotational viscometer (Brookfield type viscometer), a cone-plate type rotational viscometer (cone plate type viscometer), etc. can be measured by Preferably, it is desirable to follow the viscosity measurement method of the Japanese Pharmacopoeia (16th edition). More preferably, a cone and plate type viscometer is used.
  • alginic acids When alginic acids are first extracted from brown algae, they have a high molecular weight and high viscosity. Alginic acids with different molecular weights can be produced by controlling conditions such as temperature in the production process, selecting brown algae as raw materials, and molecular weight fractionation in the production process. Furthermore, it is also possible to obtain alginic acids having the desired molecular weight by mixing different lots of alginic acids having different molecular weights or viscosities.
  • the alginic acid used herein is, in some embodiments, non-endotoxin treated alginic acid, or in some other embodiments, low endotoxin treated alginic acid.
  • a low endotoxin level means that the endotoxin level is so low that it does not substantially cause inflammation or fever. More preferably, it is an alginic acid treated with low endotoxin.
  • Low endotoxin treatment can be performed by a known method or a method based thereon.
  • the method of Suga et al. for purifying sodium hyaluronate see, for example, JP-A-9-324001
  • the method by Yoshida et al. for purifying ⁇ 1,3-glucan see, for example, JP-A-8-269102 etc.
  • the method of William et al. for purifying biopolymer salts such as alginate and gellan gum
  • the method for purifying polysaccharides by James et al. 93/13136 see, e.g., U.S. Pat. No.
  • Low endotoxin treatment includes, but is not limited to, washing, filtration with filters (endotoxin removal filters, charged filters, etc.), ultrafiltration, columns (endotoxin adsorption affinity columns, gel filtration columns, columns with ion exchange resins, etc.).
  • the endotoxin level can be confirmed by a known method, and can be measured, for example, by a method using Limulus reagent (LAL), a method using Endospecie (registered trademark) ES-24S set (Seikagaku Corporation), or the like. .
  • LAL Limulus reagent
  • Endospecie registered trademark
  • ES-24S set Seikagaku Corporation
  • the endotoxin treatment method used is not particularly limited, but as a result, the endotoxin content of the alginic acid should be 500 endotoxin units (EU)/g or less when endotoxin measurement is performed using the Limulus reagent (LAL). is preferably 100 EU/g or less, particularly preferably 50 EU/g or less, and particularly preferably 30 EU/g or less.
  • EU endotoxin units
  • substantially free of endotoxin means that the endotoxin value measured by the Japanese Pharmacopoeia Endotoxin Test is within the above numerical range.
  • Low endotoxin-treated sodium alginate is commercially available, for example, Sea Matrix (registered trademark) (Mochida Pharmaceutical Co., Ltd.), PRONOVA TM UP LVG (FMC BioPolymer), and the like.
  • alginic acid as a raw material for synthesis of chemically modified alginic acid derivatives represented by formula (I), formula (IA), formula (II) and formula (II-A) herein
  • Sodium and sodium alginate as a raw material for the alginate solution or alginate gel that can be contained in the core layer are not particularly limited, but examples include sodium alginate A-1, A-2, It is possible to choose from A-3, B-1, B-2, or B-3.
  • the concentration of the alginic acid solution (also referred to as sodium alginate solution) prepared using sodium alginate is, for example, in the range of about 0.1 to about 3.3% by weight.
  • sodium alginate which is a raw material for synthesizing the chemically modified alginic acid derivatives represented by formula (I), formula (IA), formula (II) and formula (II-A), is preferably A-2, A-3, B-2 or B-3, more preferably A-2 or A-3.
  • concentration of the sodium alginate solution used in the synthesis of the chemically modified alginic acid derivatives represented by formula (I), formula (IA), formula (II) and formula (II-A) is preferably 1. It ranges from 5 to 2.0% by weight.
  • the alginate solution that can be included in the core layer of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber or the sodium alginate used to prepare the alginate solution used to form the alginate gel is preferably as described in Table 8 above.
  • the concentration of the alginic acid solution prepared using the sodium alginate is preferably in the range of about 0.3 to about 1.5% by weight.
  • an alginic acid solution means a solution in which alginic acid is dissolved in a solvent.
  • the solvent include, but are not limited to, medium, cell culture medium, culture solution, isotonic buffer, water, phosphate buffered saline (PBS), and physiological saline.
  • PBS phosphate buffered saline
  • sodium alginate solution When sodium alginate is dissolved in a solvent, it is called a sodium alginate solution.
  • chemically modified alginate derivatives represented by Formula (I), Formula (IA), Formula (II) and Formula (II-A) used to form the core layer of polymer-coated crosslinked alginate gel fibers solution and alginic acid solution are not particularly limited, but it is also possible to mix a collagen solution, a medium, a culture solution, and the like.
  • the solutions of the chemically modified alginic acid derivatives represented by formula (I), formula (IA), formula (II) and formula (II-A) and the solvents used for preparing the alginic acid solutions are as described below. be.
  • the chemically modified alginic acid derivatives herein are added to any one or more carboxyl groups of alginic acid via an amide bond and a divalent linker to achieve reactivity in the Huisgen reaction described below. group, or a reactive group complementary to the reactive group.
  • the bivalent linker (-L 1 - or -L 2 -) can be selected and used from the bivalent linkers described in the above embodiments.
  • formula (IA) [In formula (IA), the definitions of (ALG), Aky-L 1A -, and -NH-CO- are the same as those in the 1X aspect above], and the following formula (II-A): An alginic acid derivative represented by [in formula (II-A), the definitions of (ALG), -L 2A -, and -NH-CO- are the same as those in the above-mentioned 1X embodiment]. .
  • the bivalent linker (-L 1A - or -L 2A -) can be selected and used from the bivalent linkers described in the aspect [1X].
  • halogen atom includes, for example, a fluorine atom, a chlorine atom, a bromine atom, an iodine atom, and the like.
  • C 1-3 alkyl group includes, for example, methyl, ethyl, propyl and isopropyl groups.
  • C 2-4 alkanoyl group means a “C 1-3 alkylcarbonyl group” in which a carbonyl group is bonded to the above “C 1-3 alkyl group”.
  • groups such as acetyl, propionyl, butyryl, and the like.
  • C 3-8 cycloalkyl ring includes a monocyclic or polycyclic saturated or unsaturated cycloalkyl ring having 3 to 8 carbon atoms, such as , cyclopropane, cyclobutane, cyclopentane, cyclohexane, cycloheptane, or cyclooctane.
  • C 5-9 cycloalkene ring includes monocyclic cycloalkene rings having 5 to 9 carbon atoms, such as cyclopentene, cyclohexene, cycloheptene, cyclooctene. , cyclononene, and the like.
  • 5- to 6-membered aromatic heterocyclic ring means a nitrogen atom, a sulfur atom, and a heteroatom selected from the group consisting of oxygen atoms. It means a 6-membered unsaturated ring.
  • examples of the "5- to 6-membered aromatic heterocyclic ring” include pyrrole, furan, thiophene, imidazole, pyrazole, oxazole, isoxazole, thiazole, isothiazole, triazole, oxa Groups such as diazole, furazane, thiadiazole, tetrazole, pyridine, pyridazine, pyrimidine, pyrazine, triazine, thiadiazine, and the like.
  • 5- to 6-membered non-aromatic heterocyclic ring refers to a 5- to 6-membered heterocyclic ring containing 1 to 4 heteroatoms selected from oxygen atoms, sulfur atoms and nitrogen atoms.
  • a saturated heterocycle is meant.
  • examples of the "5- to 6-membered non-aromatic heterocyclic ring” include pyrrolidine, tetrahydrofuran, thiolane, piperidine, dihydropyran, tetrahydropyran, tetrahydrothiopyran, piperazine, dioxane, Rings such as morpholine, thiomorpholine, or quinuclidine are included.
  • cyclic alkyne group means “5- to 9-membered cycloalkyne group”
  • -CH 2 - of "5- to 9-membered cycloalkyne group” is -
  • the cyclic alkyne group has 1 to 3 rings selected from C 3-8 cycloalkyl rings, benzene rings and 5- to 6-membered aromatic heterocycles; It may be condensed.
  • the "5- to 9-membered cycloalkyne group” refers to a monocyclic saturated cycloalkyl group having 5 to 9 carbon atoms, in which -CH 2 -CH 2 - is -C ⁇ It means a group substituted for C-, and examples thereof include groups such as cyclopentyne group, cyclohexyne group, cycloheptyne group, cyclooctyne group, cyclononyne group, and the like.
  • 1 to 3 rings may be condensed); More preferably, the following partial structural formula: a group selected from [wherein the right side of the dashed line at both ends is not included]; Particular preference is given to the partial structural formula: a group selected from [wherein the right side of the dashed line at both ends is not included]; Most preferably, the partial structural formula: It is a group selected from [In the formula, the right side of the dashed line at both ends is not included].
  • the bivalent linker (-L 1 - or -L 2 -) herein is provided so long as it does not inhibit the reaction (Huisgen reaction) with the cyclic alkyne group (Akn-) and the azide group. Any linker can be used.
  • the hydrogen atom of the imino group (-NH-) in the -NH-CO- group of the chemically modified alginic acid derivative represented by formula (I), formula (IA), formula (II) or formula (II-A) can be substituted with a methyl group to form a -N(Me)-CO- group.
  • the linker (-L 1 -, -L 2 -) and alginic acid are bonded in a -NH-CO- bond or -N (Me )--CO-- bonds; preferably --NH--CO-- bonds.
  • the -NH-CO- bond or -CO- of the -N(Me)-CO- bond is derived from the carboxyl group of alginic acid.
  • the linker (-L 1A -, -L 2A -) and alginic acid are bonded in a -NH-CO- bond, or --N(Me)--CO-- bonds; preferably --NH--CO-- bonds.
  • the -NH-CO- bond or -CO- of the -N(Me)-CO- bond is derived from the carboxyl group of alginic acid.
  • the chemically modified alginic acid derivative represented by formula (I), formula (IA), formula (II), or formula (II-A) is produced, for example, by the method for synthesizing a chemically modified alginic acid derivative described below. it is possible to
  • the weight-average molecular weight of the chemically modified alginic acid derivative represented by formula (I) or formula (IA) of the present specification as measured by gel filtration chromatography is in the range of about 100,000 Da to about 3,000,000 Da; It is preferably in the range of about 300,000 Da to about 2,500,000 Da, more preferably in the range of about 500,000 Da to about 2,000,000 Da. Further, the weight-average molecular weight of the chemically modified alginic acid derivative represented by formula (II) or formula (II-A) measured by gel filtration chromatography is in the range of about 100,000 Da to about 3,000,000 Da; It ranges from about 300,000 Da to about 2,500,000 Da, more preferably from about 500,000 Da to about 2,000,000 Da.
  • the Akn-L 1 -NH- group of formula (I) need not be bound to all the carboxyl groups of the alginic acid constitutional units, and the N 3 -L 2 - The NH-group need not be attached to all carboxyl groups of the alginic acid building blocks.
  • the Aky-L 1A -NH- group of formula (IA) need not be bound to all the carboxyl groups of the alginic acid structural unit, and the N 3 The -L 2A -NH- group need not be attached to all the carboxyl groups of the alginic acid building blocks.
  • the Akn-L 1 -NH- group of formula (I) is referred to as a reactive group
  • the N 3 -L 2 -NH- group of formula (II) is a complementary reactive group
  • the Akn-L 1 -NH- group of formula (I) is a complementary reactive group.
  • the Aky-L 1A -NH- group of formula (IA) when the Aky-L 1A -NH- group of formula (IA) is referred to as a reactive group, the N 3 -L 2A -NH- group of formula (II-A) has complementary reactivity base. Conversely, when the N 3 -L 2A -NH- group of formula (II-A) is referred to as a reactive group, the Aky-L 1A -NH- group of formula (IA) is a complementary reactive group becomes.
  • the introduction rate of reactive groups in the chemically modified alginic acid derivative represented by formula (I) or formula (IA) is, for example, in the range of about 0.1 to about 30 mol%; It ranges from about 0.3 to about 20 mol%; more preferably from about 0.5 to about 10 mol%. Also, the introduction rate of reactive groups in the chemically modified alginic acid derivative represented by formula (II) or formula (II-A) is, for example, in the range of about 0.1 to about 30 mol %; It ranges from 3 to about 20 mol %; more preferably from about 0.5 to about 15 mol %.
  • the rate of introduction of the reactive group or complementary reactive group is expressed as a percentage of the number of uronic acid monosaccharide units into which each reactive group has been introduced, among the uronic acid monosaccharide units, which are the repeating units of alginic acid. value.
  • the introduction rate of each reactive group or complementary reactive group can be determined by the method described in Examples below.
  • the cyclic alkyne group (Akn) in formula (I) and the azide group in formula (II) form a triazole ring through Huisgen reaction, thereby forming a bridge.
  • the cyclic alkyne group (Aky) in formula (IA) and the azide group in formula (II-A) form a triazole ring by Huisgen reaction, thereby forming a bridge.
  • chemically modified alginic acid derivatives represented by formula (I), formula (IA), formula (II) or formula (II-A) are monovalent at any carboxyl group in the molecule. Also included are those forming salts of (for example, sodium salts, etc.).
  • Huisgen reaction (1,3-dipolar cycloaddition reaction) is a condensation reaction between compounds having a terminal azide group and a terminal alkyne group as shown in the following formula.
  • a disubstituted 1,2,3-triazole ring is obtained in good yield, and it is characterized in that no unnecessary by-products are produced. It is thought that the reaction can generate 1,4- or 1,5-disubstituted triazole rings, and it is possible to regioselectively obtain triazole rings using a Cu catalyst.
  • the Huisgen reaction can be applied to azide compounds having substituted primary, secondary, tertiary, aromatic azides, etc., and terminal or cyclic alkynes, which are complementary reactive groups of the azide group.
  • a compound having a group can be used.
  • various functional groups for example, ester groups, carboxyl groups, alkenyl groups, hydroxyl groups, amino groups, etc.
  • 1,2,3-triazoles can be prepared quickly, easily, and efficiently without copper catalysts to avoid undesirable side products and avoid copper-catalyzed cytotoxicity.
  • the cyclic alkyne group (cyclooctyl group) described in the aspect [1] is used as the alkyne group for the Huisgen reaction in order to form a ring-based bridge between alginic acid molecules.
  • the chemically modified alginic acid derivative represented by formula (I) or formula (II) is represented by formula (AM-1) (Akn-L 1 —NH 2 :Akn-L 1 — has the same definition as in the aspect [1] above), or an amine represented by the formula (AM-2) (N 3 —L 2 —NH 2 : —L 2 — is the same as defined in the aspect [1] above) can be produced by a condensation reaction using an arbitrary carboxyl group of alginic acid and an arbitrary condensing agent. Detailed conditions for each reaction conform to the conditions described in International Publication No. 2019/240219.
  • the introduction rate of the amine represented by formula (AM-1) or formula (AM-2) (formula ( I) or the introduction rate of the reactive group of the chemically modified alginic acid derivative represented by the formula (II)) is the same as the introduction rate of the reactive group of the chemically modified alginic acid derivative represented by the formula (II). Adjustment is possible by appropriately selecting and combining reaction conditions.
  • the amines represented by the formulas (AM-1) and (AM-2) are replaced with the amines represented by the formulas (AM-1A) and (AM-2A), respectively, and the same can produce a chemically modified alginic acid derivative represented by formula (IA) or formula (II-A).
  • Aky-L 1A - of Aky-L 1A -NH 2 is the same as defined in the above aspect [1X]
  • -L 2A - of N 3 -L 2A -NH 2 is the same as the above aspect. Same definition as in [1X].
  • X halogen atom (fluorine atom, chlorine atom, bromine atom , iodine atom, etc.).
  • formula (SM-A1), formula (SM-A2), formula (SM-B), formula (SM-C1), formula (SM-C2), formula (SM-D) Formula (SM-E1), Formula (SM-E2), Formula (SM-F), Formula (SM-G1), Formula (SM-G2), Formula (SM-H), Formula (SM-J), Formula (SM-K), Formula (SM-L), Formula (RG-A1), Formula (RG-A2), Formula (RG-B1), Formula (RG-C1), Formula (RG-C2), Formula (RG-D1), formula (RG-E1), formula (RG-E2), formula (RG-F1), formula (RG-F2), formula (RG-F3), formula (RG-G1-1), Formula (RG-G1-2), Formula (RG-G1-3), Formula (RG-G2-1),
  • protection and deprotection of the protecting group P 1 are carried out by methods known in the literature, such as "Protective Groups in Organic Synthesis, 4th Edition, 4th Edition,” 2007, John Wiley & Sons, Greene et al.” Protection and deprotection can be carried out according to the deprotection method described in the book.
  • condensation reaction means the same reaction as the condensation reaction described above.
  • Step 1> Using the compound of formula (SM-A) and the compound of formula (RG-A1), a condensation reaction is performed to obtain a condensate. Subsequently, after addition of bromine, an alkyne group is formed by performing a debromination reaction using a base such as tert-BuOK. Subsequently, by deprotecting the protecting group P1, the amine represented by the formula (AM - 1-1A) or a salt thereof can be produced.
  • Step 2> A condensation reaction is performed using the compound of formula (SM-A2) and the compound of formula (RG-A2) obtained in the same manner as in [Manufacturing method A] ⁇ Step 1> above, followed by protection An amine represented by the formula (AM-1-1B) or a salt thereof can be produced by deprotecting the group P1.
  • a condensate is obtained by carrying out a condensation reaction using the compound of formula (SM-B) and the compound of formula (RG-B1). Subsequently, by deprotecting the protecting group P1, the amine represented by the formula (AM- 1-2 ) or a salt thereof can be produced.
  • a condensation reaction is performed using the compound of formula (SM-D) and the compound of formula (RG-D1) to obtain a condensate.
  • the amine represented by the formula (AM- 1 -D) or a salt thereof can be produced.
  • ⁇ Step 1> Using the compound of formula (SM-F) and the compound of formula (RG-F1), a condensation reaction is carried out to obtain a condensate. Subsequently, by deprotecting the protecting group P1, the amine represented by the formula (AM- 1 -F) or a salt thereof can be produced.
  • ⁇ Step 2> Using the compound of formula (SM-F) and the compound of formula (RG-F2), a condensation reaction is carried out to obtain a condensate. Subsequently, in the presence of a base such as sodium hydroxide, in a solvent such as methanol, ethanol, tetrahydrofuran, water, etc.
  • ⁇ Step 1> Using the compound of formula (SM-G1) and the compound of formula (RG-G1-1), a condensation reaction is performed to obtain a condensate. Subsequently, by deprotecting the protecting group P1, an amine represented by the formula (AM- 1 -G1) or a salt thereof can be produced.
  • ⁇ Step 2> Using the compound of formula (SM-G1) and the compound of formula (RG-G1-2), a condensation reaction is carried out to obtain a condensate. Subsequently, by hydrolyzing the ester group, a carboxylic acid represented by formula (IM-G1) or a salt thereof can be produced.
  • ⁇ Step 3> [Production Method G] Using the compound of formula (IM-G1) and the compound of formula (RG-G1-3) obtained in ⁇ Step 2>, a condensation reaction is performed to obtain a condensate. Subsequently, by deprotecting the protecting group P1, an amine represented by the formula (AM- 1 -G1) or a salt thereof can be produced.
  • ⁇ Step 4> Using the compound of formula (SM-G2) and the compound of formula (RG-G2-1), a condensation reaction is performed to obtain a condensate. Subsequently, by deprotecting the protecting group P1, an amine represented by the formula (AM- 1 -G2) or a salt thereof can be produced.
  • ⁇ Step 5> Using the compound of formula (SM-G2) and the compound of formula (RG-G2-2), a condensation reaction is carried out to obtain a condensate. Subsequently, by hydrolyzing the ester group, a carboxylic acid represented by formula (IM-G2) or a salt thereof (eg, lithium salt, sodium salt, potassium salt, etc.) can be produced.
  • a condensation reaction is performed to obtain a condensate. Subsequently, by deprotecting the protecting group P1, an amine represented by the formula (AM- 1 -G2) or a salt thereof can be produced.
  • ⁇ Step 1> Using the compound of formula (SM-H) and the compound of formula (RG-H1), a method known in the literature, for example, "European Journal of Organic Chemistry, 2014 (6), p. 1280-1286; 2014 ], etc., (i) in the presence of reagents PPh 3 and N 2 (CO 2 CHMe 2 ) 2 in a solvent that does not participate in the reaction such as tetrahydrofuran, the Mitsunobu reaction is performed, followed by [ Production method F] In the same manner as the method described in ⁇ Step 2>, the compound represented by the formula (IM-H1) or a salt thereof (e.g., lithium salt, sodium salt, potassium salt, etc.) is obtained by hydrolysis. ) can be manufactured.
  • a salt thereof e.g., lithium salt, sodium salt, potassium salt, etc.
  • ⁇ Step 2> [Manufacturing method H]
  • the compound of formula (IM-H1) and the compound of formula (RG-H2) obtained in ⁇ Step 1> are subjected to a condensation reaction to obtain a condensate. Subsequently, by deprotecting the protecting group P1, an amine represented by the formula (AM-2-H) or a salt thereof can be produced.
  • ⁇ Step 1A> [Manufacturing Method H]
  • the compound of formula (IM-H1) and the compound of formula (RG-I1) obtained in ⁇ Step 1> are subjected to a condensation reaction to obtain a condensate. Subsequently, by deprotecting the protecting group P1, the amine represented by the formula (AM-2- I ) or a salt thereof can be produced.
  • Step 1> Using the compound of formula (SM-J) and the compound of formula (RG-J1), the compound of formula (IM-J1) can be produced by performing a condensation reaction.
  • Step 2> [Manufacturing method J] Using the compound of formula (IM-J1) obtained in ⁇ Step 1>, a method known in the literature, for example, Organometallics, 29 (23), p6619-6622; 2010 et al., in a solvent such as dimethylsulfoxide that does not participate in the reaction, NaN 3 is reacted to introduce an azide group, and then the protecting group P 1 is deprotected to form the formula (AM-2-J). ) or a salt thereof can be produced.
  • the compound of formula (IM-K) can be produced by performing a condensation reaction using the compound of formula (SM-K) and the compound of formula (RG-K).
  • ⁇ Step 2> [Manufacturing method K] Using the compound of formula (IM-K) obtained in ⁇ Step 1>, react in the same manner as in [Manufacturing method J] ⁇ Step 2> to deprotect the protecting group P 1 .
  • An amine represented by the formula (AM-2-K) or a salt thereof can be produced by carrying out.
  • the amine is a commercially available compound, or a compound that can be produced from a commercially available compound by a production method known in the literature, using a method known in the literature, such as WO 2019/240219, WO 2021/125255, " Jikken Kagaku Koza 5th Edition, 2007, Maruzen, Comprehensive Organic Transformations, A Guide to Functional Group Preparations, 3rd Edition (Edited by Richard C.
  • a desired amine can be produced by appropriately combining elimination reaction, condensation reaction, protection/deprotection, etc.).
  • amines represented by formula (AM-1), formula (AM-1A), formula (AM-2), and formula (AM-2A) are pharmaceutical
  • Pharmaceutically acceptable salts eg, acid addition salts; eg, hydrochloride, hydrobromide, sulfate, acetate, trifluoroacetate, p-toluenesulfonate, etc.
  • acid addition salts eg, hydrochloride, hydrobromide, sulfate, acetate, trifluoroacetate, p-toluenesulfonate, etc.
  • the compounds herein are capable of forming salts, and according to conventional methods, for example, the desired salt is formed by mixing a solution containing an appropriate amount of acid or base, followed by fractional filtration, or It can be obtained by distilling off the mixed solvent.
  • Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use, Stahl & Wermuth (Wiley-VCH, 2002) has been published as a review article on salts, and detailed descriptions are provided in this document.
  • amines represented by formula (AM-1), formula (AM-1A), formula (AM-2), formula (AM-2A) (including subordinate formulas of each formula) or salts thereof can form solvates with solvents such as water, ethanol, glycerol and the like.
  • variable substituent when a cyclic group is substituted with a variable substituent, it means that the variable substituent is not bound to a specific carbon atom of the cyclic group.
  • the variable substituent Rs in formula A below means that any of carbon atoms i, ii, iii, iv or v in said formula A can be substituted.
  • crosslinked Alginate Gel In the present specification, the crosslinked alginate gel contained in the core layer of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber is formed using the chemically modified alginate derivative described in the section "2. Chemically Modified Alginate Derivative". Crosslinked alginate gels having (i) crosslinks via divalent metal ion bonds, (ii) crosslinks via chemical bonds, or (iii) crosslinks via both divalent metal ion bonds and chemical bonds (crosslinked can also be referred to as alginic acid or chemically crosslinked alginic acid).
  • the cross-linked alginate gel contained in the core layer of the polymer-coated cross-linked alginate gel fiber is chemically cross-linked by a triazole ring formed by performing a Huisgen reaction (cross-linking reaction) as a cross-link, and a divalent metal ion (eg, calcium ion, etc.).
  • the crosslinked alginate gel contained in the core layer of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber is a crosslinked alginate gel containing chemical crosslinks with triazole rings formed by performing a Huisgen reaction (crosslinking reaction) as crosslinks.
  • the chemically modified alginic acid derivative represented by formula (I) and the chemically modified alginic acid derivative represented by formula (II) are respectively the chemically modified alginic acid derivative represented by formula (IA) and the chemically modified alginic acid derivative represented by formula (II- It can be replaced with a chemically modified alginic acid derivative represented by A).
  • the crosslinked alginate gel contained in the core layer of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber is obtained by using the chemically modified alginic acid derivatives represented by the formula (I) and the formula (II), and chemically It is obtained by performing a Huisgen reaction (crosslinking reaction) to form a crosslink.
  • it can be obtained by allowing divalent metal ions to coexist in the chemically modified alginic acid derivatives represented by the formulas (I) and (II) to form ionic crosslinks between the derivatives.
  • the Huisgen reaction (crosslinking reaction) is performed using the chemically modified alginic acid derivatives represented by the formula (I) and the formula (II) to form chemical crosslinks between the derivatives, and further divalent metal ions can also be obtained by forming ionic crosslinks between the derivatives.
  • crosslinks are formed”, “crosslinks are formed”, or “performs a cross-linking reaction” means the chemically modified alginic acid derivatives represented by the formulas (I) and (II). to form a chemical crosslink (chemical bond) between the chemically modified alginic acid derivatives represented by the formula (I) and the formula (II), or by performing the Huisgen reaction using the formula (I) and by adding a divalent metal ion to the chemically modified alginic acid derivative represented by the formula (II), the chemically modified alginic acid derivative represented by the formula (I) and the chemically modified alginic acid derivative represented by the formula (II) It means that ionic crosslinks (ionic bonds) are formed between derivatives, or that both chemical crosslinks due to the Huisgen reaction and ionic crosslinks due to divalent metal ions are formed. It also means that ionic crosslinks are formed in alginic acid by allowing divalent metal ions to coexist in
  • ionic crosslinks are formed, and the time to form an ionically crosslinked alginic acid gel is, for example, instantaneous (for example, , 1-5 seconds) to several hours (eg, 1-3 hours).
  • the Huisugen reaction proceeds between the chemically modified alginic acid derivatives represented by the formulas (I) and (II) to form chemical crosslinks, and the time to form a chemically crosslinked alginic acid gel is, for example, several seconds to 24 seconds. hours, seconds to 12 hours, or seconds to 30 minutes.
  • the divalent metal ion used to obtain the crosslinked alginate gel is not particularly limited, but examples thereof include calcium ion, magnesium ion, barium ion, strontium ion, zinc ion and the like, preferably calcium ion and barium ion. or strontium ions, more preferably calcium ions or barium ions.
  • the solution containing divalent metal ions is not particularly limited. , an aqueous solution such as an aqueous solution of barium chloride), and a solution containing strontium ions (e.g., an aqueous solution such as an aqueous solution of strontium chloride), preferably a solution containing calcium ions or a solution containing barium ions, more preferably calcium chloride. It is an aqueous solution or an aqueous solution of barium chloride.
  • the divalent metal ion concentration (e.g., calcium ion or barium ion concentration) of the solution containing divalent metal ions is not particularly limited, but is, for example, in the range of about 1 mM to about 1 M, or in the range of about 10 to about 500 mM. preferably about 10 to about 100 mM.
  • Solvents used for preparing a solution or the like containing divalent metal ions are not particularly limited. Examples include ultrapure water (MilliQ water), medium, cell culture medium, culture solution, phosphate buffered saline (PBS), physiological saline, and the like; physiological saline or ultrapure water is preferred.
  • Ultrapure water MilliQ water
  • PBS phosphate buffered saline
  • physiological saline and the like
  • physiological saline or ultrapure water is preferred.
  • the reaction of the ionic crosslinks is instantaneous and reversible, whereas the reaction of the chemical crosslinks is carried out under relatively mild conditions. It is obtained by a slow reaction and is irreversible.
  • the mixed solution of the chemically modified alginic acid derivatives represented by the formulas (I) and (II) is mixed with divalent metal ions using the apparatus XX in "9.
  • the physical properties of the crosslinked alginic acid gel can be changed, for example, by changing the concentration of an aqueous solution containing divalent metal ions to be used (for example, an aqueous solution of calcium chloride), or by changing the introduction rate of reactive groups introduced into the chemically modified alginic acid derivative. method can be adjusted.
  • an aqueous solution containing divalent metal ions to be used for example, an aqueous solution of calcium chloride
  • the chemically modified alginate derivatives represented by formulas (I) and (II) are used to convert the crosslinked alginate gel contained in the core layer of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber of the present invention into a fiber (fiber). It can be made as a shape (also called "crosslinked alginate gel fiber").
  • an alginic acid (for example, sodium alginate) solution may be added to the mixed solution of the chemically modified alginic acid derivatives represented by the formulas (I) and (II). can be done.
  • the length of the crosslinked alginate gel fiber is determined, for example, by cells capable of producing antibodies, physiologically active substances, etc. and formula (I ) and the chemically modified alginic acid derivative represented by the formula (II), the injected mixed solution is cut at regular intervals using a cutting tool such as scissors or a cutter to obtain desired It is possible to obtain crosslinked alginate gel fibers with length.
  • the length of the crosslinked alginate gel fiber is not particularly limited, but includes the lengths described in "9. Production method of polymer-coated crosslinked alginate gel fiber" below.
  • chemical cross-linking (Huisugen reaction) is used as one method of strengthening the fiber structure (for example, obtaining long-term stability, etc.).
  • the crosslinked alginate gel fibers having both ionic crosslinks and chemical crosslinks prepared as described above are cultured in a culture medium, the divalent metal ions forming the ionic crosslinks gradually become reversible.
  • the gel structure is maintained by the irreversible chemical crosslinks, and it is possible to continue stably culturing.
  • the crosslinked alginic acid gel of the present invention which is formed by performing a crosslinking reaction using the chemically modified alginic acid derivatives represented by formulas (I) and (II), is not particularly limited, but examples include collagen solution, collagen gel, Other components such as media, cell culture media, media, methylcellulose, sucrose solutions, alginate solutions, alginate gels, and the like can be included.
  • alginate gel when simply referred to as "alginate gel", it means an alginate gel in which ionic crosslinks are formed by allowing divalent metal ions to coexist in alginic acid (e.g., sodium alginate) or a solution thereof. .
  • alginic acid e.g., sodium alginate
  • the cross-linked alginate gel can be obtained by mixing the chemically modified alginic acid derivatives represented by the above formulas (I) and (II) and performing the Huisgen reaction. . It can also be obtained by mixing the chemically modified alginic acid derivatives represented by the formula (IA) and the formula (II-A) and performing the Huisgen reaction.
  • the crosslinked alginate gel forms a three-dimensional network structure through chemical crosslinking (crosslinking by triazole rings formed from alkyne groups and azide groups).
  • Preferred chemically modified alginate derivatives improve the stability of the crosslinked alginate gel after cross-linking.
  • the physical properties of the crosslinked alginic acid gel can be adjusted, for example, by the introduction rate of each reactive group in the chemically modified alginic acid represented by formula (I) or formula (II), which is the raw material.
  • Some embodiments of the crosslinked alginate gel have the following formula (III-L): [In formula (III-L), -CONH- and -NHCO- at both ends represent an amide bond via any carboxyl group of alginic acid; -L 1 -, -L 2 -, and -X- It is a crosslinked alginic acid gel crosslinked via a group represented by [the definition is the same as in the aspect [1-12]].
  • the crosslinked alginate gel forms a three-dimensional network structure through chemical crosslinking (crosslinking by triazole rings formed from alkyne groups and azide groups).
  • Preferred chemically modified alginate derivatives improve the stability of the crosslinked alginate gel after cross-linking.
  • the physical properties of the crosslinked alginic acid gel can be adjusted, for example, by the introduction rate of each reactive group in the chemically modified alginic acid represented by formula (IA) or formula (II-A), which is the raw material. .
  • Some embodiments of the crosslinked alginate gel have the following formula (III-Lx): [In formula (III-Lx), -CONH- and -NHCO- at both ends represent an amide bond via any carboxyl group of alginic acid; -L 1A -, -L 2A -, and -X A - are , which is the same definition as in the aspect [1-12X]].
  • formula (I) and formula (II) can be replaced with formula (IA) and formula (II-A), respectively.
  • the mixing ratio of the chemically modified alginic acid derivative represented by formula (I) and the chemically modified alginic acid derivative represented by formula (II) when producing a crosslinked alginate gel is the formula (I ) to the chemically modified alginic acid derivative represented by formula (II), for example, 1:1.0 to 4.0, or 1:1.0 to 3.0 or 1:1.0-2.0, or 1:1.0-1.5, or 1:1; preferably 1:1.0-3.0.
  • the mixing ratio of the chemically modified alginic acid derivative represented by formula (II) and the chemically modified alginic acid derivative represented by formula (I) when producing a crosslinked alginate gel is the formula (II ) to the chemically modified alginic acid derivative represented by formula (I), for example, 1:1.0 to 4.0, or 1:1.0 to 3.0 , or 1:1.0 to 2.0, or 1:1.0 to 1.5, or 1:1.
  • the mixing ratio of the chemically modified alginic acid derivative represented by formula (I) and the chemically modified alginic acid derivative represented by formula (II) when producing a crosslinked alginate gel is more preferably
  • the introduction ratio (mol%) of the reactive groups between the chemically modified alginic acid derivative represented by formula (I) and the chemically modified alginic acid derivative represented by formula (II) is, for example, 1:1.0 to 4.0. 0, or 1:1.0 to 3.0, or 1:1.0 to 2.0, or 1:1.0 to 1.5, or 1:1; preferably 1:1.0 to 3.0.
  • the mixing ratio of the chemically modified alginic acid derivative represented by formula (II) and the chemically modified alginic acid derivative represented by formula (I) when producing a crosslinked alginate gel is more preferably
  • the introduction ratio (mol%) of the reactive group between the chemically modified alginic acid derivative represented by formula (II) and the chemically modified alginic acid derivative represented by formula (I) is, for example, 1:1.0 to 4.0. 0, or 1:1.0-3.0, or 1:1.0-2.0, or 1:1.0-1.5, or 1:1.
  • the crosslinked alginic acid gel does not need to have the crosslinks of formula (III-L) above for all the carboxyl groups of the constituent units of alginic acid.
  • the introduction rate of the crosslink represented by the above formula (III-L) (also referred to as the crosslinkage rate) is, for example, about 0.1 to about 80%, about 0.3 to about 60%, about 0.5%. It ranges from 5 to about 30%, or from about 1.0 to about 10%.
  • the introduction rate of the crosslink represented by the above formula (III-Lx) is, for example, about 0.1 to about 80%, about 0.3 to about 60%, about 0.5%. It ranges from 5 to about 30%, or from about 1.0 to about 10%.
  • the concentration of the solution of the alginic acid derivative represented by formula (I) or (II) is, for example, about 0. about 0.01 to about 1.5% by weight; preferably about 0.05 to about 1.0% by weight; more preferably about 0.08 to about 0.75% by weight. is.
  • the concentration of the solution of the alginic acid derivative represented by the formula (IA) or (II-A) is For example, in the range of about 0.01 to about 1.5 weight percent; preferably in the range of about 0.05 to about 1.0 weight percent; more preferably about 0.08 to about 0.75. % range by weight.
  • the concentration (C ALG ) of the alginic acid solution is, for example, in the range of 0 ⁇ C ALG ⁇ about 1.98% by weight; Preferably, 0 ⁇ C ALG ⁇ about 1.8 wt%; more preferably, 0 ⁇ C ALG ⁇ about 1.7 wt%.
  • the concentration (C ALG ) of the alginic acid solution is, for example, 0 ⁇ C ALG ⁇ about 1.0. preferably in the range 0 ⁇ C ALG ⁇ about 1.8 wt%; more preferably in the range 0 ⁇ C ALG ⁇ about 1.7 wt%.
  • the reaction temperature of the Huisgen reaction (the temperature at which crosslinked alginate gel and crosslinked alginate gel fibers are produced) is usually an external temperature of about 4 to about 60°C, preferably an external temperature of about 15 to about 37°C. .
  • the chemically modified alginic acid derivative represented by formula (I) and the chemically modified alginic acid derivative represented by formula (II) are respectively the chemically modified alginic acid derivatives represented by formula (IA). Derivatives can be substituted with chemically modified alginic acid derivatives represented by formula (II-A).
  • the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber undergoes a cross-linking reaction using cells capable of producing antibodies, physiologically active substances, etc., and chemically modified alginic acid derivatives represented by the above formulas (I) and (II).
  • the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber is a fibrous (fibrous) structure including a core layer and a cationic polymer layer arranged outside the core layer.
  • the core layer contains cells capable of producing antibodies, physiologically active substances, etc., and a crosslinked alginate gel in which crosslinks are formed using the chemically modified alginic acid derivatives represented by the formulas (I) and (II),
  • the cationic polymer layer is a cationic polymer.
  • the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber is a fibrous (fibrous) structure including a core layer and a cationic polymer layer arranged outside the core layer.
  • the core layer contains cells capable of producing antibodies, physiologically active substances, etc., and a crosslinked alginate gel
  • the crosslinked alginate gel uses chemically modified alginate derivatives represented by the formulas (I) and (II).
  • the cationic polymer layer is a cationic polymer.
  • FIG. 1 shows a cross-sectional view of an example of a polymer-coated crosslinked alginate gel fiber formed by coating a crosslinked alginate gel fiber with a cationic polymer.
  • This polymer-coated crosslinked alginate gel fiber has an outer diameter of c and comprises a core layer 5 of diameter a and a cationic polymer layer 4 of thickness b, the core layer 5 producing antibodies, physiologically active substances, etc. It contains a crosslinked alginate gel in which cells 6 are contained.
  • the crosslinked alginic acid gel of the core layer 5 is a crosslinked alginate gel formed by performing a cross-linking reaction using chemically modified alginic acid derivatives represented by formulas (I) and (II).
  • the core layer of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber of some embodiments is formed by performing a crosslinking reaction using the chemically modified alginic acid derivatives represented by the formulas (I) and (II) described in the embodiment [1].
  • the crosslinked alginate gel it is not particularly limited as long as it does not have cytotoxicity, but collagen solution, collagen gel, medium, cell culture medium, culture solution, methyl cellulose, sucrose solution, alginic acid solution, alginate gel , etc.; preferably, a component selected from the group consisting of alginic acid solution, alginate gel, medium, and culture medium.
  • the "polymer-coated crosslinked alginate gel fiber” is a fibrous structure having an outer diameter (c in FIG. 1) of, for example, about 0.1 to about 2000 ⁇ m. Also called microfiber.
  • the cross-sectional shape perpendicular to the central axis of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber is not limited to a circular shape, and may be an asymmetrical structure or a deformed shape.
  • the cross-sectional shape may be circular, elliptical, or polygonal. (eg, triangular, square, pentagonal, etc.), preferably a circular cross-sectional shape as shown in FIG.
  • the outer diameter of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber (if it is non-circular, the major or maximum diameter is considered as the outer diameter) is, for example, about 0.1 to about 2000 ⁇ m, about 0.2 ⁇ m to about 2000 ⁇ m, about 0.2 to about 1000 ⁇ m, about 0.5 to about 1000 ⁇ m, about 1 to about 1000 ⁇ m, about 10 to about 1000 ⁇ m, about 20 to about 1000 ⁇ m, and the like.
  • the diameter of the core layer of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber is, for example, about 0.1 to about 2000 ⁇ m, about 0.2 ⁇ m to about 2000 ⁇ m, about 1 to about 1000 ⁇ m, about 2 to about 500 ⁇ m, about 2 to about 200 ⁇ m, etc. Range. Also, for example, about 0.1 to about 2000 ⁇ m, about 0.2 to about 2000 ⁇ m, about 0.2 to about 1000 ⁇ m, about 0.5 to about 1000 ⁇ m, about 1 to about 1000 ⁇ m, about 10 to about 1000 ⁇ m, about 20 to about 1000 ⁇ m, and so on.
  • the cross-sectional diameter of the core layer is preferably 50% or more less than the fiber cross-sectional diameter.
  • the thickness of the polymer layer is, for example, about 0.1 to about 200 ⁇ m, about 1 to about 200 ⁇ m, about 5 ⁇ m to about 200 ⁇ m, and the like.
  • the values of the core layer diameter, outer diameter, and polymer layer inner diameter of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber are obtained by, for example, using a fluorescent cationic polymer in the polymer layer to prepare the fiber, and observing the phase-contrast optical microscope. It is possible to measure from the image. It is expressed as the mean value of measurements at several locations on the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber.
  • the core layer and polymer layers of the polymer-coated crosslinked alginate gel fibers described above typically have substantially uniform thicknesses, preferably each layer has a thickness uniformity within ⁇ 10%.
  • the length of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber is not particularly limited. Lengths from 1 m to about 75 m, from about 0.3 to about 50 m, and the like are included.
  • the core layer of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber of some embodiments is a chemically modified compound represented by Formula (I) and Formula (II) containing cells capable of producing antibodies, bioactive substances, and the like. It can be formed using a mixed solution of alginic acid derivatives.
  • the concentration of the solution of the chemically modified alginic acid derivative represented by formula (I) or formula (II) is, for example, each in the range of about 0.01 to about 1.5% by weight; more preferably from about 0.08 to about 0.75 weight percent.
  • the concentration of the mixed solution of the chemically modified alginic acid derivatives represented by formula (I) and formula (II) is, for example, in the range of about 0.02 to about 2.0% by weight; preferably about 0.1. to about 2.0 weight percent; more preferably about 0.15 to about 1.5 weight percent.
  • the alginic acid concentration (C ALG ) is, for example, 0 ⁇ C ALG ⁇ in the range of about 1.98 wt%; preferably in the range 0 ⁇ C ALG ⁇ about 1.8 wt%; more preferably in the range 0 ⁇ C ALG ⁇ about 1.7 wt%.
  • concentration of the mixed solution containing the chemically modified alginic acid derivatives represented by the formulas (I) and (II) (C1 (% by weight)) and the concentration of the alginic acid solution (C2 ( %)) is not particularly limited, but for example, 0 ⁇ C2 (% by weight) ⁇ about 1.98 (% by weight), 0 ⁇ C1 (% by weight) ⁇ about 2.0 (% by weight) - C2 (% by weight), 0 ⁇ C1 + C2 (% by weight) ⁇ about 2.0 (% by weight)
  • (C1: C2) (about 0.2: about 1.3), (about 0.5: about 1.0), (about 1.0 : about
  • chemically modified alginic acid derivatives represented by formulas (I) and (II) containing cells capable of producing antibodies, physiologically active substances, etc., used for forming the core layer of polymer-coated crosslinked alginate gel fibers When adding an alginic acid solution to the mixed solution, the concentration of the solution of the chemically modified alginic acid derivative represented by the formula (I) (C1A (% by weight)), the concentration of the solution of the chemically modified alginic acid derivative represented by the formula (II)
  • the combination of the concentration (C1N (% by weight)) and the concentration of the alginic acid solution (C2 (% by weight)) is not particularly limited, but for example, 0 ⁇ C1A ⁇ about 2.0-C2, 0 ⁇ C1N ⁇ about 2.0 -C2, 0 ⁇ C2 ⁇ about 1.98, 0 ⁇ C1A + C1N + C2 ⁇ about 2.0.
  • concentrations of C1A, C1N, and C2 can be appropriately combined for preparation.
  • Formula (IA) and Formula (II-A) containing cells capable of producing antibodies, physiologically active substances, etc., used for forming the core layer of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber When an alginic acid solution is added to a mixed solution of chemically modified alginic acid derivatives, the concentration (C1Ax (% by weight)) of the chemically modified alginic acid derivative solution represented by the formula (IA) is represented by the formula (II-A).
  • the volume (v1) of the chemically modified alginic acid derivative represented by formula (I) and the volume of the solution of the chemically modified alginic acid derivative represented by formula (II) in the mixed solution to which the alginic acid solution has been added
  • the alginic acid used for the preparation of the alginic acid solution e.g., alginic acid sodium, etc.
  • 000 Da to about 2,000,000 Da such as from about 700,000 Da to about 2,000,000 Da.
  • the alginic acid used for the preparation of the alginic acid solution e.g., alginic acid sodium, etc.
  • the solvent used for preparing the solution or the like is not particularly limited. preferably medium, cell culture medium, culture solution, physiological saline or isotonic buffer.
  • Cationic polymer Polycation refers to a compound having two or more cationic groups in one molecule, and the cationic group refers to a cationic group or a group that can be induced into a cationic group.
  • Cationic groups include, for example, amino groups; monoalkylamino groups such as methylamino and ethylamino groups; dialkylamino groups such as dimethylamino and diethylamino groups; imino groups; The amino group may be a -NH 3 + group with a proton coordinated bond.
  • a cationic polymer refers to a polymer having two or more cationic groups in one molecule.
  • cationic polymers include those obtained by polymerizing monomers having cationic groups.
  • the cationic polymer preferably has a hydrophilicity that allows it to be dissolved in water, and has the property of being positively charged by the dissociation of the cationic groups in water.
  • a polymer having two or more amino groups in one molecule is particularly preferred.
  • the cationic polymer is formed by performing a cross-linking reaction using chemically modified alginic acid derivatives represented by formulas (I) and (II), which contain cells capable of producing antibodies, physiologically active substances, etc. crosslinked alginate gel fibers, or chemically modified alginic acid derivatives represented by formulas (IA) and (II-A) containing cells capable of producing antibodies, physiologically active substances, etc.
  • the surface of the crosslinked alginate gel fiber is formed by the cationic polymer due to the electrostatic interaction between the carboxyl group of the crosslinked alginate gel fiber and the cationic group of the cationic polymer.
  • the cationic polymer is such that antibodies, physiologically active substances, etc. produced from cells that produce antibodies, physiologically active substances, etc. contained in the core layer permeate the cationic polymer (polymer layer) covering the core layer. It is preferably a substance that can be released out of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber.
  • cationic polymers include, for example, polyamino acids (polymers of basic amino acids), basic polysaccharides (e.g., chitosan, etc.), basic polymers (polymethylene-CO-guanidine (PMCG), polyallylamine (PAA), polyvinylamine (PVA), polyethyleneimine, allylamine-diallylamine copolymer and allylamine-maleic acid copolymer), preferably poly-L-ornithine which is a polyamino acid ( PLO), poly-D-ornithine (PDO), poly-DL-ornithine, poly-D-lysine (PDL), poly-L-lysine (PLL), poly-DL-lysine, poly-L-arginine (PLA) , poly-D-arginine (PDA), poly-DL-arginine, poly-L-homoarginine (PLHA), poly-D-homoarginine (PDHA), poly-DL
  • the cationic polymer used in preparing the solution containing the cationic polymer includes, for example, the polyamino acids, basic polysaccharides, basic polymers and salts thereof (hydrochloride, hydrobromide, etc.).
  • the cationic polymer it is possible to use commercial products or those prepared from commercial products.
  • the degree of polymerization of the cationic polymer is not particularly limited. be done.
  • the degree of polymerization is 130 to 1,300;
  • polyallylamine for example, the degree of polymerization is 50 to 1,800;
  • chitosan for example, 60 to 6,000. is the degree of polymerization.
  • the weight average molecular weight (Mw) of the cationic polymer is not particularly limited. Within the range of 300,000, within the range of 5,000 to 100,000, within the range of 10,000 to 50,000, and the like.
  • the weight average molecular weight (Mw) of cationic polymers can be measured by gel permeation chromatography (GPC).
  • poly-L-ornithine commercially available poly-L-ornithine hydrobromide [e.g. ⁇ 30,000, 30,000 to 70,000, 5,000 to 15,000 (manufactured by Sigma-Aldrich), etc.] can be used; Molecular weight: 1,600, 3,000, 5,000, 8,000, 15,000, 25,000 (manufactured by Nittobo), ⁇ 15,000, ⁇ 65,000 (manufactured by Sigma-Aldrich), etc.], commercially available product polyallylamine hydrochloride [for example, molecular weight: 1,600, 3,000, 5,000, 15,000, 100,000 (manufactured by Nittobo), ⁇ 17,500, 50,000 (manufactured by Sigma-Aldrich) etc.] can be used; for example, in the case of chitosan, commercially available chitosan [e.g. 160,000, 180,000 (manufactured by Sigma-Aldrich), etc.
  • Chitosan which is one of the cationic polymers, is a deacetylated product of chitin, and from the viewpoint of its water solubility, the degree of deacetylation is, for example, within the range of 40 to 100%, or within the range of 45 to 90%. , or in the range of 50 to 80%, etc. can be used.
  • the concentration of the solution containing the cationic polymer is not particularly limited, and may be any concentration that allows the surface of the alginate gel fiber to be uniformly coated. 0.01 to about 5.0 wt%, about 0.02 to about 1.0 wt%, preferably about 0.02 to about 5.0 wt%, more preferably about 0.05 to about It has a concentration of about 1.0% by weight.
  • the viscosity of the solution containing the cationic polymer is not particularly limited, but for example, within the range of 10.0 to 500.0 mPa s, within the range of 20.0 to 300.0 mPa s, 50.0 to 200.0 mPa ⁇ It is within the range of s.
  • the solvent for the solution containing the cationic polymer is not particularly limited as long as it can dissolve the cationic polymer.
  • examples include water (tap water, pure water (e.g., distilled water, ion exchange water, RO -EDI water, etc.), ultrapure water (MilliQ water)), aqueous solutions of inorganic salts (phosphate buffered saline (PBS), physiological saline, etc.), etc., to increase the amount of charge of the cationic polymer Ultrapure water, water or physiological saline is preferred.
  • cells that can be encapsulated in the core layer of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber are not particularly limited.
  • the antibody-producing cells that can be encapsulated in the core layer of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber include hybridomas obtained from antibody-producing B cells (antibody-producing hybridomas), or cultures transformed with an antibody expression vector. cells (antibody-producing gene-recombinant cells);
  • physiologically active substance-producing cells that can be encapsulated in the core layer of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber include cultured cells transformed with a physiologically active substance-expressing vector (biologically active substance-producing gene-recombinant cells). .
  • Cultured cells used as hosts for these genetic modifications are not particularly limited, but include microorganisms such as bacteria and yeast, plant cells, insect cells, and animal cells.
  • microorganisms used as hosts include Escherichia coli, budding yeast, fission yeast, and Pichia yeast, and examples of insect cells used as hosts include Sf9 cells, Sf21 cells, and High five cells.
  • Animal cells used as hosts include, for example, CHO cells, CHO cell substrains (CHO-K1 cells, CHO-DG44 cells, CHO-DXB11 cells, CHO cells transformed to modify sugar chains, etc.). , COS cells, Sp2/0 cells, NS0 cells, SP2 cells, PERC6 cells, YB2/0 cells, YE2/0 cells, 1R983F cells, Namalwa cells, Wil-2 cells, Jurkat cells, Vero cells, Molt-4 cells, HEK293 cells, BHK cells, HT-1080 cells, KGH6 cells, P3X63Ag8.653 cells, C127 cells, JC cells, LA7 cells, ZR-45-30 cells, hTERT cells, NM2C5 cells, UACC-812 cells, etc.
  • CHO cells CHO cell substrains (CHO-K1 cells, CHO-DG44 cells, CHO-DXB11 cells, CHO cells transformed to modify sugar chains, etc.).
  • COS cells Sp2/
  • CHO cells can be appropriately selected from those listed in the ATCC cell line catalog available from the American Type Culture Collection).
  • the term "CHO cells” means cells including "CHO cell substrains", and other cells also include cells including each cell substrain. means.
  • the antibody-producing cells that can be encapsulated in the core layer of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber are preferably animal cells transformed with an antibody expression vector, that is, transgenic animal cells that produce antibodies.
  • the physiologically active substance-producing cells that can be encapsulated in the core layer are preferably animal cells transformed with a physiologically active substance expression vector, ie, genetically modified animal cells that produce a physiologically active substance.
  • Animal cells used as their hosts specifically include CHO cells, CHO cell substrains, COS cells, Sp2/0 cells, NS0 cells, SP2 cells, PERC6 cells, HEK293 cells, BHK cells, HT- 1080 cells, or C127 cells; more preferably cells selected from the group consisting of CHO cells, CHO cell sublines, Sp2/0 cells, and NSO cells, HEK293 cells, and BHK cells; , CHO cells or CHO cell sublines.
  • host cells for antibody-producing cells are preferably CHO cells, CHO cell sublines, Sp2/0 cells, or NS0 cells; more preferably CHO cells or CHO cell sublines.
  • Host cells for physiologically active substance-producing cells are preferably CHO cells, CHO cell substrains, HEK293 cells, or BHK cells; more preferably CHO cells or CHO cell substrains.
  • the antibody-producing cells that can be contained in the core layer of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber are not particularly limited, but include cells that produce antibodies used as biopharmaceuticals or raw materials for biopharmaceuticals. be done.
  • the physiologically active substance-producing cells are not particularly limited, but include cells that produce physiologically active substances used as biopharmaceuticals or raw materials for biopharmaceuticals.
  • biopharmaceuticals include various cancers, autoimmune diseases, inflammatory diseases, eye diseases, blood diseases, cranial nerve diseases, hereditary rare diseases, endocrine and metabolic system diseases, cardiovascular diseases, respiratory diseases, digestive diseases, Drugs for various diseases such as skin diseases, muscle/bone diseases, and infectious diseases can be mentioned.
  • specific targets of antibody drugs are not particularly limited, but include C5 (complement), CD3, CD19, CD20, CD22, CD25, CD30, CD33, CD38, CD52, CD79, IL-1 ⁇ , IL-4R, IL-5, IL-6, IL-6R, IL-12, IL-17, IL-17R, IL-23, IFNAR, PCSK9, CGRP, CGRPR, GD2 (ganglioside), HER2 , HER3, TROP2, BCMA, PD-1, PD-L1, CTLA-4, LAG-3, TIM-3, TIGIT, KIR, SLAMF7, RANKL, TNF- ⁇ , BLyS, EGFR, VEGF, VEGFR, FGF, nectin , integrin, EpCAM, CCR4, TfR, TF, FIXa, FX, GPVI, sclerostin, amyloid ⁇ , IgE, or various viruses (including sub
  • antibody-producing cells that can be contained in the core layer of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber are not particularly limited, but specific examples include muromonab-CD3, trastuzumab, rituximab, palivizumab, and infliximab.
  • Cells that produce antibodies with modified sugar chains such as mogamulizumab, benralizumab, obinutuzumab, inevirizumab; ranibizumab, idarucizumab, blinatumomab, brolucizumab, abciximab , caplacizumab, certolizumab, and the like, which produce low-molecular-weight antibodies composed of antibody fragments.
  • the antibody-producing cells that can be contained in the core layer of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber are not particularly limited, but specific examples include antibody-producing animal cells, preferably They are antibody-producing CHO cells, antibody-producing Sp2/0 cells or antibody-producing NS0 cells, more preferably antibody-producing CHO cells. More specifically, the antibody-producing animal cells are not particularly limited.
  • infliximab producing Sp2/0 cells infliximab producing CHO cells
  • basiliximab producing Sp2/0 cells basiliximab producing CHO cells
  • tocilizumab producing CHO cells bevacizumab producing CHO cells
  • cetuximab producing Sp2/0 cells cetuximab producing CHO cells
  • omalizumab-producing CHO cells eculizumab-producing NS0 cells
  • eculizumab-producing CHO cells panitumumab-producing CHO cells
  • ustekinumab-producing Sp2/0 cells ustekinumab-producing CHO cells
  • golimumab-producing Sp2/0 cells golimumab-producing CHO cells
  • canakinumab-producing Sp2 /0 cells canakinumab-producing CHO cells
  • denosumab-producing CHO cells denosumab-producing CHO cells, ofatumumab-producing NS0 cells, ofatumuma
  • the antibody-producing CHO cells include muromonab-CD3-producing CHO cells, trastuzumab-producing CHO cells, rituximab-producing CHO cells, palivizumab-producing CHO cells, infliximab-producing CHO cells, basiliximab-producing CHO cells, tocilizumab-producing CHO cells, and gemtuzumab-producing CHO cells.
  • CHO cells selected from the group consisting of trastuzumab-producing CHO cells, rituximab-producing CHO cells, infliximab-producing CHO cells, tocilizumab-producing CHO cells, adalimumab-producing CHO cells, nivolumab-producing CHO cells, and anti-GPVI antibody-producing CHO cells.
  • trastuzumab-producing CHO cells rituximab-producing CHO cells, infliximab-producing CHO cells, tocilizumab-producing CHO cells, adalimumab-producing CHO cells, nivolumab-producing CHO cells, and anti-GPVI antibody-producing CHO cells.
  • trastuzumab-producing CHO cells for example, rituximab-producing CHO cells, infliximab-producing CHO cells, tocilizumab-producing CHO cells, adalimumab-producing CHO cells, ni
  • Antibodies produced in this way can be modified or modified after production, specifically PEGylation, drug binding modification, radiolabeling, and the like. That is, in the production of modified antibodies such as PEGylated antibodies and antibody-drug conjugates, cells used to produce raw antibodies (raw antibody-producing cells) can be included as cells that can be encapsulated in the core layer.
  • the raw antibody-producing cells are not particularly limited, but examples of the raw antibody-producing cells of the PEGylated antibody include cells that produce raw antibody fragments of certolizumab pegol, specifically certolizumab-producing CHO cells.
  • Raw material antibody-producing cells for antibody-drug conjugates include, for example, gemtuzumab ozogamicin, ibritumomab tiuxetan, trastuzumab emtansine, trastuzumab deruxtecan, brentuximab vedotin, inotuzumab ozogamicin, cetuximab sarotarocan sodium, polatuzumab vedotin, enfortuzumab vedotin, sacituzumab govitecan, Examples include cells that produce raw material antibodies such as belantamab mafodotin, roncastuximab tecilin, tisotumab vedotin, datopotamab deruxtecan, patritumab deruxtecan, etc.
  • gemtuzumab-producing NS0 cells ibritumomab-producing CHO cells, trastuzumab-producing CHO cells, Bren Tuximab-producing CHO cells, Inotuzumab-producing CHO cells, Cetuximab-producing Sp2/0 cells, Polatuzumab-producing CHO cells, Enfortuzumab-producing CHO cells, Sacituzumab-producing Sp2/0 cells, Belantamab-producing CHO cells, Roncastuximab-producing CHO cells, Tisotuzumab-producing CHO cells CHO cells and the like are included.
  • the core layer can also contain cells that produce fusion proteins of antibodies or antibody fragments with other proteins or peptides, such as CHO cells that produce pavinafsp alfa and CHO cells that produce vintrafusp alfa. be done.
  • CHO cells that produce pavinafsp alfa and CHO cells that produce vintrafusp alfa.
  • physiologically active substance means a substance or compound group that exerts a physiological or pharmacological action on living organisms.
  • Substances and compound groups that exert physiological and pharmacological effects on organisms include, for example, enzymes, insulin, alkaloids, cytokines (interferons, interleukins, chemokines, tumor necrosis factors, etc.), plant hormones, neurotransmitters, and pheromones. , hormones (animal hormones), growth factors, growth regulatory factors, growth inhibitory factors, activating factors, hematopoietic factors, blood coagulation factors, vaccines (attenuated vaccines, inactivated vaccines, protein vaccines, etc.) and the like.
  • physiologically active substances are also substances that exhibit physiological and pharmacological actions and are included in physiologically active substances.
  • physiologically active substances originally present in living organisms, substances obtained by modifying or altering physiologically active substances, substances that activate or inhibit physiological activities, fusion proteins that combine multiple physiologically active substances or partial regions or fragments thereof. are included in physiologically active substances as long as they are substances that exhibit physiological or pharmacological effects, and in the present specification, these substances are also referred to as physiologically active substances.
  • the physiologically active substance is preferably a proteinaceous physiologically active substance, that is, a physiologically active substance composed of protein or peptide.
  • physiologically active substance-producing cells that can be contained in the core layer of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber are not particularly limited. Cells that produce active substances are included.
  • Physiologically active substances used as biopharmaceuticals are not particularly limited. Enzymes such as tripeptidyl peptidase, hyaluronidase, phenylalanine ammonia lyase, alkaline phosphatase; blood coagulation factors and blood-related proteins such as FVIIa, FVIII, FIX, FXIII, thrombomodulin, antithrombin, albumin; insulin, growth hormone, diuretic peptide, gonads hormones such as stimulating hormones, GLP-1, GLP-2, parathyroid hormone and leptin; interferons such as IFN- ⁇ , IFN- ⁇ and IFN- ⁇ ; hematopoietic factors such as erythropoietin and thrombopoietin; G-CSF and IL-2 , IL-10, IL-2R, IL-4R, IL-5R, IL-6R, IL-17R, TNFR, EGF, EGFR, F
  • physiologically active substances include structurally modified substances, and examples thereof include substances with amino acid sequence modifications that alter the activity of the substance, specifically insulin analogues, GLP -1 analogs, erythropoietin analogs and the like.
  • Substances consisting of amino acid sequences of partial regions or fragments of original substances are also included, and substances obtained by combining a plurality of amino acid sequences of these partial regions or fragments may also be used; specifically, insulin analogues, Examples include FVIII analogues, parathyroid hormone analogues, and the like.
  • fusion proteins in which two or more kinds of substances or partial regions or fragments thereof are combined are also included.
  • the core layer can contain cells that produce these structurally modified physiologically active substances.
  • Physiologically active substances produced in this way can be modified or modified after production, and specific examples include PEGylation, sugar chain modification, drug binding modification, radiolabeling, and the like. That is, in the production of modified proteins and peptides such as PEGylated proteins and fatty acid-added peptides, it can be used for the production of proteins and peptides as raw materials.
  • the core layer can contain cells that produce the physiologically active substance (raw material physiologically active substance-producing cells) that serve as the raw material.
  • physiologically active substance-producing cells that can be included in the core layer of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber are not particularly limited, but specific examples include alteplase, monteplase, imiglucerase, veraglucerase, and agalsidase.
  • the physiologically active substance-producing cells that can be contained in the core layer of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber are not particularly limited, but specific examples include physiologically active substance-producing animal cells. , preferably physiologically active substance-producing CHO cells, physiologically active substance-producing HEK293 cells or physiologically active substance-producing BHK cells, more preferably physiologically active substance-producing CHO cells. More specifically, the physiologically active substance-producing animal cells are not particularly limited.
  • CHO cells avalglucosidase-producing CHO cells, idursulfase-producing CHO cells, galsulfase-producing CHO cells, erosulfase-producing CHO cells, dornase-producing CHO cells, cerliponase-producing CHO cells, hyaluronidase-producing CHO cells, asfotase-producing CHO cells , rurioctocog-producing CHO cells, turoctocog-producing CHO cells, lonoctocog-producing CHO cells, nonacog-producing CHO cells, albutrepe nonacog-producing CHO cells, thrombomodulin-producing CHO cells, antithrombin-producing CHO cells, bonicog-producing CHO cells, follitropin-producing CHO cells, chriogonadotropin-producing CHO cells, dulaglutide-producing CHO cells, interferon beta-1a-producing CHO cells, inter
  • the physiologically active substance-producing CHO cells include alteplase-producing CHO cells, alglucosidase-producing CHO cells, rurioctocog-producing CHO cells, dulaglutide-producing CHO cells, interferon beta-1a-producing CHO cells, darbepoetin-producing CHO cells, and etanercept-producing CHO cells. , aflibercept-producing CHO cells and abatacept-producing CHO cells.
  • the physiologically active substances listed here may be modified or modified after production as described above, but they are based on the cells that produce the physiologically active substances that are the raw materials. can be included in layers.
  • layers For example, elapeguademase, pegvariase, rurioctocog alfa pegol, turoctocog alfa pegol, damoctocog alfa pegol, nonacog beta pegol, pegvisomant, peginterferon alfa-2a, peginterferon alfa-2b, epoetin beta pegol, pegfilgrastim, peg
  • the core layer can contain cells that produce the physiologically active substances that are the raw materials thereof.
  • Cells capable of producing a physiologically active substance include, in addition to the above-mentioned genetically modified cells producing a physiologically active substance, natural cells and cells that have been artificially modified, and cell masses composed of a plurality of cells. Also included are, for example, insulin-secreting cells, pancreatic islets, pancreatic islet cells, dopamine-secreting cells, pituitary cells, growth hormone-secreting cells, parathyroid cells, nerve growth factor-secreting cells, blood coagulation factor-secreting cells, hepatocytes, epithelial small cells. Examples include somatic cells, erythropoietin-secreting cells, norepinephrine-secreting cells, and the like.
  • cells that produce a physiologically active substance are, in certain embodiments, insulin-secreting cells, pancreatic islets or pancreatic islet cells, or pancreatic ⁇ -cell-derived MIN6 cells.
  • insulin-secreting cells refers to cells that have the function of secreting insulin, and for example, in the case of pancreatic islet cells, ⁇ cells that secrete insulin.
  • insulin-secreting cells may be cells that have come to have an insulin-secreting function through differentiation, maturation, modification, or the like.
  • cells with insulin-secreting function obtained by differentiating stem cells such as stem cells, cells with insulin-secreting function obtained by maturing immature cells or progenitor cells, and cells with insulin-secreting function obtained by genetic recombination. can also contain cells.
  • differentiating or maturing the cells includes culturing the cells, that is, cells obtained by differentiation or maturation may include cells obtained by culturing.
  • pancreatic islet is a cell mass composed of about 2000 pancreatic islet cells on average, which is also called islets of Langerhans. Pancreatic islets are composed of five cells: ⁇ cells that secrete glucagon, ⁇ cells that secrete insulin, ⁇ cells that secrete somatostatin, ⁇ cells that secrete ghrelin, and PP (pancreatic polypeptide) cells that secrete pancreatic polypeptides. Consists of seed cells.
  • Panter islet cells include at least one of the five types of cells that make up the pancreatic islet, but preferably include at least ⁇ cells.
  • the islet cells may be a mixture containing all ⁇ -cells, ⁇ -cells, ⁇ -cells, ⁇ -cells, and PP-cells, or may be contained in pancreatic islets.
  • Pantenchymal stem cells may also be pancreatic islet cells that have become pancreatic islet cells through differentiation, maturation, modification, or the like.
  • pancreatic islet cells include, for example, islet cells obtained by differentiating stem cells such as iPS cells, ES cells, and somatic stem cells (e.g., mesenchymal stem cells), immature cells, and progenitor cells. It may also contain islet cells obtained by maturation of
  • Insulin-secreting cells or “pancreatic islets (including pancreatic islet cells)"
  • pancreatic islets when used for transplantation, have the degree of viability and function that can recover the patient's pathological condition when transplanted into the patient. It is preferred to have Functions of insulin-secreting cells, pancreatic islets, or pancreatic islet cells include, for example, insulin secretion, and glucose responsiveness is preferably maintained even after transplantation.
  • Donors of "insulin-secreting cells”, “pancreatic islets” or “islet cells” are animals, preferably vertebrates, more preferably mammals, specifically humans, pigs, monkeys, rats or mice. Humans or pigs are more preferred.
  • the donor of "insulin-secreting cells”, “pancreatic islets” or “pancreatic islet cells” is, in some aspects, a pig from the viewpoint of resolving the shortage of donors.
  • Insulin-secreting cells may be pancreatic islets or pancreatic islet cells obtained from a donor animal, or insulin-secreting cells or pancreatic islet cells obtained from donor-derived cells, For example, insulin-secreting cells or pancreatic islet cells differentiated from human-derived ES cells or iPS cells may be used.
  • pancreatic islets or “pancreatic islet cells” are derived from pigs, adult porcine islets, fetal, neonatal, or perinatal porcine islets, or obtained from said islets and insulin-secreting cells or pancreatic islet cells.
  • the pancreatic islets may be appropriately cultured before use, or mature islets obtained from fetal, neonatal, or perinatal porcine islets may be used.
  • Blood coagulation factor-secreting cells include, for example, factor VIII-secreting cells and factor IX-secreting cells.
  • the method for producing the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber is not particularly limited, for example, it is performed using the apparatus XX shown in FIG.
  • Apparatus XX herein is an apparatus preferably used to make polymer-coated crosslinked alginate gel fibers.
  • Apparatus XX is, for example, as shown in FIG.
  • the solution is discharged from the discharge port in the form of fibres.
  • Device XX is, for example, cells capable of producing antibodies, physiologically active substances, etc., and formula (I) and formula (II) introduced from the introduction port of device XX using an extrusion cylinder YY etc. as shown in FIG.
  • the mixed solution containing the chemically modified alginic acid derivative represented by the mixed solution can be injected from the outlet of the device XX.
  • a syringe can be used as a device comprising the device XX and the ejector YY.
  • the device XX is the outer cylinder
  • the extrusion cylinder YY for pushing out the solution introduced into the device XX from the discharge port is the inner cylinder.
  • a syringe made of glass or plastic can be used.
  • a container DD such as a beaker containing a solution containing divalent metal ions is used as a container for receiving the fibrous substance discharged from the discharge port 2 of the device XX.
  • a container EE such as a beaker containing a solution containing a cationic polymer is used as a container for coating the surface of the crosslinked alginate gel fiber CLA with the cationic polymer.
  • FIG. 3 is a schematic diagram illustrating one aspect of the manufacturing process of polymer-coated crosslinked alginate gel fibers.
  • a production method using a mixed solution of chemically modified alginic acid derivatives represented by formulas (I) and (II) containing cells (cells capable of producing antibodies, physiologically active substances, etc.) will be described.
  • a polymer-coated crosslinked alginate gel fiber can be produced, for example, by a method including the following steps (S) to (2).
  • Step (2) A cationic polymer layer is formed by contacting the crosslinked alginate gel fibers (CLA) containing cells capable of producing antibodies, physiologically active substances, etc. obtained in step (1) with a solution containing a cationic polymer. obtaining a polymer-coated crosslinked alginate gel fiber (CFB) formed by coating with
  • step (S) cells capable of producing antibodies, physiologically active substances, etc., which are described in terms of the cells contained in the core layer, are treated with a solution containing chemically modified alginic acid derivatives represented by formulas (I) and (II). Suspend or dissolve in At this time, components such as alginic acid solution, medium, culture solution, collagen solution, methylcellulose, sucrose solution, etc. can be added in addition to cells capable of producing antibodies, physiologically active substances, and the like.
  • step (1) a mixed solution (or suspension) containing the antibody prepared in step (S), cells capable of producing a physiologically active substance, etc., and chemically modified alginic acid derivatives represented by formulas (I) and (II) is slowly released into a solution containing divalent metal ions, and the released solution is sequentially gelled, thereby producing a fibrous (fibrous) structure.
  • ionic cross-linking proceeds between the chemically modified alginic acid derivatives represented by formulas (I) and (II), and at the same time, chemical cross-linking due to the Huisgen reaction also proceeds, producing a gel. can.
  • step (2) the crosslinked alginate gel fibers containing cells capable of producing antibodies, physiologically active substances, etc. obtained in step (1) are brought into contact with a solution containing a cationic polymer, thereby producing antibodies, physiologically active substances, etc.
  • the surface of crosslinked alginate gel fibers containing cells capable of producing is coated with a cationic polymer layer.
  • the term “contact” refers to a solution (e.g., a solution of a chemically modified alginic acid derivative) or gel (e.g., a crosslinked alginate gel) with another solution (e.g., a solution containing divalent metal ions, a cationic polymer, etc.). It means immersing or adding to a solution containing
  • the flow rate (injection rate) of the mixed solution containing cells capable of producing antibodies, physiologically active substances, etc., and chemically modified alginic acid derivatives represented by formulas (I) and (II), which is injected from the outlet 2 of the apparatus XX, is, for example, , about 100 to about 10000 ⁇ L/min.
  • the flow rate when producing a polymer-coated crosslinked alginate gel fiber containing anti-GPVI antibody-producing CHO cells or tocilizumab-producing CHO cells in the core layer is, for example, 250 ⁇ L/min, 4 mL/min, 10 mL/min, etc.
  • the flow rate for fabricating polymer-coated crosslinked alginate gel fibers with MIN6 cells in the core layer is, for example, 125 ⁇ L/min.
  • the flow rate (injection rate) can be adjusted using a syringe pump or the like, making it possible to produce fibers of various sizes. Also, by changing the size (diameter) of the outlet 2 of the apparatus XX, it is possible to manufacture a fiber in which the diameter of the core layer can be adjusted.
  • Luer lock needles made of metal or other materials
  • silicon tubes made of metal or other materials
  • glass capillaries etc.
  • cells capable of producing antibodies, physiologically active substances, etc. and formula (I) and a chemically modified alginic acid derivative represented by formula (II) can be released into a solution containing divalent metal ions.
  • a mixed solution containing antibodies, cells capable of producing a physiologically active substance, etc., and chemically modified alginic acid derivatives represented by formulas (I) and (II) introduced from the introduction port 1 of the device XX is, for example, the embodiment [1]
  • solvents e.g., medium, cell culture medium, culture medium, isotonic buffer, phosphate buffered saline, and Physiological saline, etc.
  • a predetermined concentration for example, the concentration of each chemically modified alginic acid derivative solution is about 0.01 to about 1.5% by weight, represented by formula (I) and formula (II)
  • a mixed solution of chemically modified alginic acid derivatives represented by formulas (I) and (II) is prepared in a concentration of about 0.02 to about 2.0% by weight.
  • the concentration of the mixed solution containing the chemically modified alginic acid derivatives represented by formulas (I) and (II) and the concentration of the alginic acid solution is adjusted, for example, in the range of about 0.5 to about 2.0% by weight. be.
  • alginic acid solution is added to a mixed solution containing cells capable of producing antibodies, physiologically active substances, etc. and chemically modified alginic acid derivatives represented by formula (IA) and formula (II-A), which are introduced from inlet 1 of device XX.
  • alginic acid solution is added to a mixed solution containing cells capable of producing antibodies, physiologically active substances, etc. and chemically modified alginic acid derivatives represented by formula (IA) and formula (II-A), which are introduced from inlet 1 of device XX.
  • v1+v2+v3 15, 0 ⁇ v1 ⁇ 15, 0 ⁇ v2 ⁇ 15, and 0 ⁇ v3 ⁇ 15.
  • alginic acid solution is added to a mixed solution containing cells capable of producing antibodies, physiologically active substances, etc. and chemically modified alginic acid derivatives represented by formula (IA) and formula (II-A), which are introduced from inlet 1 of device XX.
  • v1x+v2x+v3x 15, 0 ⁇ v1x ⁇ 15, 0 ⁇ v2x ⁇ 15, and 0 ⁇ v3x ⁇ 15.
  • Mixed solution injected when a mixed solution containing cells capable of producing antibodies, physiologically active substances, etc. and chemically modified alginic acid derivatives represented by formulas (I) and (II) is injected from outlet 2 of device XX can be cut at regular intervals using a cutting tool such as scissors or a cutter to obtain crosslinked alginate gel fibers (CLA) having a desired length.
  • a cutting tool such as scissors or a cutter to obtain crosslinked alginate gel fibers (CLA) having a desired length.
  • the length of the crosslinked alginate gel fiber (CLA) is not particularly limited, but is, for example, about 0.01 m to about 100 m, about 0.1 m to about 75 m, about 0.3 m to about 50 m, about 0.5 m to about 30 m, about 1.0 m to about 10 m, about 1.0 m to about 2.0 m, about 2.0 m to about 3.0 m, about 3.0 m to about 4.0 m, about 4.0 m to about 5.0 m, About 5.0 m to about 6.0 m, about 6.0 m to about 7.0 m, about 7.0 m to about 8.0 m, about 8.0 m to about 9.0 m, about 9.0 m to about 10 m, about 1 cm ⁇ about 5 cm, about 5 cm to about 10 cm, about 10 cm to about 20 cm, about 20 cm to about 30 cm, about 30 cm to about 40 cm, about 40 cm to about 50 cm, about 50 cm to about 60 cm, about 60 cm to about 70 cm, about 70 cm
  • injection Crosslinked alginate gel fibers (CLA) having a desired length can be obtained by cutting the resulting mixed solution at regular intervals using a cutting tool such as scissors or a cutter.
  • the length of the crosslinked alginate gel fiber (CLA) is not particularly limited, but may be the same length as described above.
  • the outer diameter of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber (CFB) to be produced is not particularly limited, but is as described above. to about 1000 ⁇ m, about 0.5 to about 1000 ⁇ m, about 1 to about 1000 ⁇ m, about 10 to about 1000 ⁇ m, about 20 to about 1000 ⁇ m, and the like.
  • the length of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber (CFB) is not particularly limited and is as described above. For example, it may be about 0.3 to about 50 m.
  • the length of the above-mentioned crosslinked alginate gel fiber (CLA) for example, about 0.01 m to about 100 m, about 0.1 m to about 75 m, about 0.3 m to about 50 m, about 0 .5 m to about 30 m, about 1.0 m to about 10 m, about 1.0 m to about 2.0 m, about 2.0 m to about 3.0 m, about 3.0 m to about 4.0 m, about 4.0 m to about 5.0 m, about 5.0 m to about 6.0 m, about 6.0 m to about 7.0 m, about 7.0 m to about 8.0 m, about 8.0 m to about 9.0 m, about 9.0 m to about 10 cm, about 1 cm to about 5 cm, about 5 cm to about 10 cm, about 10
  • the cross-sectional shape of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber (CFB) is as described above.
  • a mixed solution containing cells capable of producing antibodies, physiologically active substances, etc., and chemically modified alginic acid derivatives represented by formula (I) and formula (II), or physiologically active substances, etc., ejected from the outlet 2 of the device XX can be produced.
  • the solution containing divalent metal ions with which the cells and the mixed solution containing the chemically modified alginic acid derivatives represented by formulas (IA) and (II-A) are brought into contact is the above-mentioned "5-1.
  • Crosslinked alginic acid gel Examples include solutions containing calcium ions, magnesium ions, barium ions, strontium ions, zinc ions, and the like.
  • the divalent metal ion concentration of the solution containing divalent metal ions is, for example, in the range of about 1 mM to about 1 M, or in the range of about 10 to about 500 mM; preferably about 10 to about 100 mM.
  • the solvent used for preparing the solution containing divalent metal ions is as described in "5-1.
  • a mixed solution containing antibodies, cells capable of producing a physiologically active substance, etc., and chemically modified alginic acid derivatives represented by formulas (I) and (II) ejected from the outlet 2 of the apparatus XX is added to a solution containing divalent metal ions.
  • the contact time is, for example, about 1 minute to 60 minutes, 1 minute to 30 minutes, or the like.
  • the cationic polymer-containing solution with which the crosslinked alginate gel fiber (CLA) obtained in step (2) of the method for producing the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber is brought into contact is described in "7. Cationic polymer" above. It is a solution containing a cationic polymer, and examples thereof include solutions containing polyamino acids, basic polysaccharides, basic polymers, and the like.
  • the concentration of the cationic polymer-containing solution with which the crosslinked alginate gel fibers (CLA) are brought into contact is as described above in "7.
  • Cationic polymer for example, about 0.02 to about 0.2. % by weight, such as from about 0.05 to about 0.1% by weight.
  • the solution containing the cationic polymer with which the crosslinked alginate gel fiber (CLA) is brought into contact includes an aqueous solution containing divalent metal ions (e.g., an aqueous solution of calcium chloride, an aqueous solution of barium chloride, etc.), an aqueous solution of sodium chloride, and pH adjustment of the solution.
  • divalent metal ions e.g., an aqueous solution of calcium chloride, an aqueous solution of barium chloride, etc.
  • sodium chloride e.g., sodium chloride, sodium bicarbonate, etc.
  • pH adjustment of the solution e.g., sodium bicarbonate, sodium bicarbonate, etc.
  • components such as buffers (aqueous solutions of acetic acid, sodium acetate, sodium hydroxide, hydroxyethylpiperazineethanesulfonic acid, etc.).
  • the time for which the crosslinked alginate gel fiber (CLA) is brought into contact with the solution containing the cationic polymer is, for example, about 1 minute to 60 minutes, 1 minute to 30 minutes, or the like.
  • the temperature during manufacturing of the polymer-coated cross-linked alginate gel fibers ranges, for example, from about 4 to about 37°C.
  • polymer-coated crosslinked alginate gel fibers having a core layer containing a certain number of cells capable of producing antibodies, physiologically active substances, etc. can be easily obtained.
  • polymer-coated crosslinked alginate gel fibers by culturing polymer-coated crosslinked alginate gel fibers in a culture solution, antibody-producing cells, physiologically active substance-producing cells, etc. can be cultured, and antibodies, physiologically active substances, etc. can be produced.
  • the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber enables continuous culture of antibody-producing cells, physiologically active substance-producing cells, etc. for several weeks to several months by appropriately exchanging the culture solution.
  • the strength of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber can be measured by a shaking disintegration test, a tensile strength test, etc., according to methods well known to those skilled in the art.
  • an antibody produced by the above-described production method an antibody using a polymer-coated crosslinked alginate gel fiber containing cells capable of producing a physiologically active substance, etc. in the core layer , bioactive substances, etc. are provided.
  • antibodies, physiologically active substances, etc. can be produced by placing the polymer-coated crosslinked alginate gel fibers in a culture vessel, adding a medium to impregnate the polymer-coated crosslinked alginate gel fibers, and culturing.
  • methods for producing antibodies, physiologically active substances, etc.” may be referred to as “methods for culturing antibody-producing cells, physiologically active substance-producing cells, etc.”.
  • the method for culturing antibody-producing cells, physiologically active substance-producing cells, etc. after producing polymer-coated crosslinked alginate gel fibers containing cells capable of producing antibodies, physiologically active substances, etc. in the core layer by the above-described production method,
  • culture of antibody-producing cells, physiologically active substance-producing cells, etc. can be started by infiltrating into the culture solution.
  • the culture solution (nutrition source) and oxygen can be immediately supplied to the core layer. can be cultured without necrosis.
  • antibodies, physiologically active substances, etc. can be produced while sufficiently preventing necrosis of antibody-producing cells, physiologically active substance-producing cells, etc. in the core layer of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber.
  • the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber containing cells capable of producing the antibody, physiologically active substance, etc. of the present invention in the core layer is sufficient for components such as the culture medium (nutrition source) and oxygen that exist outside the fiber during culture. It has good permeability.
  • a polymer-coated crosslinked alginate gel fiber containing antibody-producing cells in the core layer prepared by the above-described manufacturing method was placed in an Erlenmeyer flask with a vent cap (Corning, Cat. 431143), and the composition of Table 31 described later was added. After adding a certain medium (30 mL) and impregnating the gel fibers, they were incubated at 37 °C and 125 rpm using a shaker (MIR-S100C, Panasonic Healthcare Co., Ltd.) in an incubator under a 5 % CO atmosphere. Cultivate while shaking under conditions.
  • a shaker MIR-S100C, Panasonic Healthcare Co., Ltd.
  • a polymer-coated crosslinked alginate gel fiber containing physiologically active substance-producing cells in the core layer produced by the above-described manufacturing method is placed in a low-adhesion surface dish, and a medium (5 mL) having the composition shown in Table 35 described later is added. Then, the cells are allowed to stand in an incubator at 37° C. in a 5% CO 2 atmosphere for culturing.
  • the technology for producing antibodies, physiologically active substances, etc., using polymer-coated crosslinked alginate gel fibers of certain embodiments prevents the antibody-producing cells, physiologically active substance-producing cells, etc. contained in the core layer from proliferating above a certain number. Since there is little physical stress on the body, the encapsulated antibody-producing cells, physiologically active substance-producing cells, etc. are excellent in that they have the possibility of continuing to produce antibodies, physiologically active substances, etc. for a long period of time.
  • the antibody production and purification efficiency may be dramatically improved (for example, by using the preferred embodiment of polymer-coated crosslinked alginate gel fiber, unlike suspension culture that requires a large-scale culture tank, It is also possible to culture antibodies in small-scale production facilities), and it is expected to be a continuous production technology for next-generation antibody drugs that is suitable for manufacturing antibody drugs in small quantities and in a wide variety of items.
  • Antibodies e.g., anti-GPVI antibodies, tocilizumab
  • bioactive substances e.g., insulin
  • the culture may be retained in the core layer of polymer-coated crosslinked alginate gel fibers, preferably polymer-coated crosslinked alginate gel. It permeates the core layer of the fiber and the cationic polymer layer and is retained in the medium outside the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber.
  • antibodies, physiologically active substances, etc. produced in the core layer of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber pass through the core layer and the cationic polymer layer and are sequentially released out of the fiber.
  • antibodies, physiologically active substances, etc. can be continuously cultured.
  • metabolites and waste products may also be released out of the fiber.
  • cells selected from anti-GPVI antibody-producing CHO cells, tocilizumab-producing CHO cells, or MIN6 cells are used as cells to be included in the core layer, and the formula ( As the chemically modified alginic acid derivative of I), the following formula: [Wherein, (ALG) represents alginic acid; -NHCO- represents an amide bond via any carboxyl group of alginic acid] is combined with a chemically modified alginic acid derivative of formula (II) As a derivative, the following formula: [wherein (ALG) represents alginic acid; -NHCO- represents an amide bond via any carboxyl group of alginic acid], using a chemically modified alginic acid derivative selected from the cationic Polymer-coated crosslinked alginate gel fibers were fabricated using poly-L-ornithine, polyallylamine (PAA), polyethyleneimine or polymethylene-CO-guanidine (PMCG) as the polymer.
  • PAA polyallylamine
  • the produced antibody anti-GPVI antibody, tocilizumab
  • physiologically active substance insulin
  • Examples of culture vessels for culturing polymer-coated crosslinked alginate gel fibers containing cells capable of producing antibodies, physiologically active substances, etc. in the core layer include tissue culture plates, Erlenmeyer flasks, T-flasks, spinner flasks, culture bags, It is a container selected from the group consisting of animal cell culture tanks and the like; preferably an Erlenmeyer flask or an animal cell culture tank.
  • any method such as static culture, shaking/rocking culture, and the like may be selected.
  • Increasing the number of cells such as antibody-producing cells and physiologically active substance-producing cells per culture is effective for improving the productivity of antibodies and physiologically active substances, but on the other hand, excessive proliferation occurs and the culture environment deteriorates. However, shortening of the culture period may occur.
  • physical damage to cells caused by excessive proliferation of antibody-producing cells, physiologically active substance-producing cells, etc. contained in the core layer of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber As a method for reducing physical stress, for example, as a method to prevent antibody-producing cells, physiologically active substance-producing cells, etc. contained in the core layer from growing beyond a certain number, control of the culture temperature during culture, A method such as adding a cell growth inhibitor to the
  • the culture temperature is, for example, in the range of about 28°C to about 39°C, for example, in the range of about 30°C to about 37°C.
  • the culture temperature from the start to the end of culture can be changed as appropriate. For example, it is possible to set the temperature at about 37° C. at the start of culture and change it to about 30° C. after culturing for a certain period of time.
  • the culture period is, for example, 7 days or more, or 10 days or more, or 20 days or more, or 30 days or more, or 40 days or more, or 50 days or more, or 60 days or more, or 70 days or more.
  • the culture period is, for example, 7 days, 14 days, 28 days, 35 days, or 42 days. Yes, or 49 days, or 56 days, or 63 days, or 70 days.
  • a cell growth inhibitor can also be added to the culture medium in some embodiments of the method for producing an antibody.
  • the cytostatic agent is an agent capable of suppressing excessive cell proliferation during the culture period. agents.
  • the timing of adding the cell growth inhibitor to the culture medium can be either at the start of the culture or during the culture period (when the cells have grown to the required number).
  • methotrexate (MTX) is added when culturing using anti-GPVI antibody-producing cells.
  • a commercially available medium base or prepared medium, or a self-made medium can be used as the cell culture medium.
  • a natural medium for example, soybean-casein digest medium (SCD medium), etc.
  • a synthetic medium a medium supplemented with all chemicals necessary for growth
  • the medium is not particularly limited, but may be a basal medium containing components (inorganic salts, carbohydrates, hormones, essential amino acids, non-essential amino acids, vitamins, etc.) necessary for the survival and growth of cells.
  • DMEM Dulbecco's Modified Eagle Medium
  • MEM Minimum Essential Medium
  • BME Basal Medium Eagle
  • Dulbecco's Modified Eagle's Medium F1 Medium DM/Nutrient Medium 12
  • Glasgow Minimum Essential Medium Glasgow MEM
  • G016 medium DMEM (High Glucose) and the like.
  • the medium may further contain serum.
  • serum examples include, but are not limited to, FBS/FCS (Fetal Bovine/Calf Serum), NCS (Newborn Calf Serum), CS (Calf Serum), HS (Horse Serum), and the like.
  • concentration of serum contained in the medium is, for example, 2 wt % or more and 10 wt % or less.
  • both ends of the core layer of the crosslinked alginate gel fiber are coated with a cationic polymer. This leads to the prevention, suppression, or reduction of a large amount (for example, 1 ⁇ 10 5 cells/mL or more) of cells such as cells leaking out of the fiber.
  • Method for calculating the number of viable cells in the core layer The following is the number of viable antibody-producing cells contained in the core layer of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber containing antibody-producing cells at the start of culture, during the culture period, or after culture. A specific example of the measurement method will be described, but the measurement method is not limited to this.
  • Crosslinked alginate gel fiber containing antibody-producing cells and polymer-coated crosslinked alginate gel fiber (0.2 mL) were transferred to a 15 mL tube (centrifuge tube (with printed scale, bulk), model: 2325-015-MYP), and the tube was graduated.
  • Add G016 medium (4.5 mL) having the composition in Table 31 described below to about 4.5 mL.
  • Alginate lyase Poly ⁇ -guluronate lyase recombinant Zobellia galactanivorans
  • Creative Enzymes Cat#NATE-1563
  • the solution was pipetted or the Alginate lyase was added as appropriate until the crosslinked alginate gel fibers were uniformly dissolved.
  • the liquid volume was confirmed, and the G016 medium was added to make 5 mL. An aliquot of the solution is taken and the number of cells is counted. The average value of two measurements is used as the number of viable cells in the crosslinked alginate gel fiber.
  • Antibodies are called mouse antibodies, rat antibodies, rabbit antibodies, human antibodies, etc., depending on the animal species to be immunized at the time of preparation. Chimeric antibodies and humanized antibodies are used as biopharmaceuticals as modified antibodies in which partial regions of antibodies derived from different species are converted to human sequences in order to reduce immunogenicity when used in humans. There are also antibodies produced from human antibody genes using mice into which human antibody genes have been integrated, which are called human antibodies or simply human antibodies, and are used as biopharmaceuticals.
  • modified antibodies called next-generation antibodies have also been developed, and modified antibodies are also included in the term "antibody” in the present specification.
  • antibody there is a multivalent antibody that is an antibody that exhibits specificity for two or more antigens, and an antibody that exhibits bispecificity in particular is called a bispecific antibody, which is one of highly functionalized antibodies.
  • bispecific antibody which is one of highly functionalized antibodies.
  • low-molecular-weight antibodies which are low-molecular-weight antibodies obtained by removing the Fc portion of antibodies, such as Fab, F(ab') 2 , scFv (single-chain Fv), VHH, etc., which are used as biopharmaceuticals. .
  • bispecific low-molecular-weight antibodies have also been produced, and scFv-scFv, for example, are used as biopharmaceuticals.
  • An antibody in which the Fc region or the like is mutated to modify the sugar chain is also an example of a modified antibody.
  • Glycoengineered antibodies can also be produced by previously transforming host cells to have glycoengineering, such as defucose-depleted antibodies.
  • a fusion protein of an antibody or antibody fragment and another protein or peptide is also mentioned as an example of a modified antibody, that is, an antibody. Also included in active substances.
  • Antibodies are classified into classes (isotypes) and subclasses as shown in the table below, depending on the structural differences in their constant regions.
  • antibody-producing cells are cultured in the core layer of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber to produce an antibody that can permeate the polymer layer.
  • an antibody that can permeate the polymer layer.
  • the produced antibody is used as a biopharmaceutical, it is preferably an IgG antibody.
  • the molecular weight of the antibody produced in the core layer of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber and permeable through the cationic polymer layer is particularly limited by culturing the antibody-producing cells.
  • antibodies in the range of about 45,000 to about 1,000,000 Da are particularly limited.
  • the molecular weight of the antibody that can permeate the cationic polymer layer is, for example, about 3,000 to about 1,000,000 Da, about 20,000 to about 1,000,000 Da, about 20,000 to about 400,000 Da, Antibodies ranging from about 45,000 to about 400,000 Da, from about 20,000 to about 200,000 Da, from about 45,000 to about 200,000 Da.
  • the molecular weight of the physiologically active substance produced in the core layer of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber and permeable through the cationic polymer layer is not particularly limited; It is a physiologically active substance in the range of 20,000 to about 400,000 Da, about 45,000 to about 400,000 Da, about 20,000 to about 200,000 Da, and about 45,000 to about 200,000 Da.
  • antibodies corresponding to the antibody-producing cells used are produced.
  • muromonab-CD3-producing CHO cells when muromonab-CD3 are used, muromonab-CD3 is produced as an antibody.
  • antibodies produced include muromonab-CD3 using muromonab-CD3-producing CHO cells (IgG; 150,000), trastuzumab-producing CHO cells using trastuzumab (IgG; 148,000), and rituximab-producing CHO cells.
  • ixekizumab using ixekizumab-producing CHO cells IgG; 149,000
  • brodalumab using brodalumab-producing CHO cells IgG; 147,000
  • idarucizumab using idarucizumab-producing CHO cells IgG (Fab); 47, 782
  • elotuzumab (IgG; 148,000) using elotuzumab-producing NS0 cells pembrolizumab (IgG; 149,000) using pembrolizumab-producing CHO cells
  • sarilumab IgG; 150,000
  • sarilumab-producing CHO cells bezlotoxumab (IgG; 148,000) using bezlotoxumab-producing CHO cells
  • the produced antibody is purified through, for example, the following three steps.
  • Step 1 In order to remove most of the proteins other than the antibody and solids contained in the medium, centrifugation or filtration with a filter is performed.
  • Step 2 For example, the antibody of interest is isolated by chromatography such as affinity chromatography (in the case of antibodies, affinity chromatography using Protein A or Protein G) or ion exchange chromatography.
  • Step 3 In order to remove contaminants mixed in in step 2, ion exchange chromatography, gel filtration chromatography, hydroxyapatite chromatography, or the like is performed to purify the antibody of interest to a high degree of purity.
  • the produced physiologically active substance is purified, for example, through a method similar to the above steps.
  • Affinity chromatography using Protein A or Protein G As a method for purifying IgG, for example, a method for purifying an antibody using Protein A or Protein G is known. As an antibody purification method using protein A, the following method is mentioned as an example. (1) Using a column packed with Protein A-immobilized beads, serum was added to the solution obtained by the method in [Step 1] above, and the solution was filtered to remove IgG from the beads in the column. , and other serum components flow out of the column. (2) Then, by passing an acidic solution through the column, the IgG bound to the beads is cleaved and eluted out of the column to obtain IgG. Since the binding strength of Ig to Protein A and Protein G differs depending on the animal species and subclass, Protein A or Protein G can be used properly depending on the purpose.
  • Ion exchange chromatography This is a method of separating proteins by utilizing the electrical properties (charge) of proteins.
  • a positively charged basic protein binds to a negatively charged cation exchanger (carrier), and a negatively charged acidic protein binds to a positively charged anion exchanger.
  • Proteins bind to the ion exchanger by passing the sample through a column packed with an ion exchanger. After that, by increasing the salt concentration of the solvent that is passed through the column, the ionic bond between the protein and the ion exchanger weakens, and the protein with the weakest binding force comes off the ion exchanger and flows out of the column. come.
  • the selection of the cation exchanger or the anion exchanger shall be made according to the charge of the protein used as the sample.
  • Gel filtration chromatography It is a method of separating proteins by utilizing the difference in protein molecular weight. By passing a sample through a column filled with a carrier with small pores, proteins with a small molecular weight flow out while entering the small pores, while proteins with a large molecular weight flow out without entering the small pores. Therefore, protein with a small molecular weight passes through the column slowly, and protein with a large molecular weight passes quickly, so that proteins can be separated with a time lag.
  • Hydroxyapatite chromatography This is a chromatography using hydroxyapatite, which is a type of calcium phosphate. It is a method of separating proteins using multiple interactions, mainly based on metal affinity by calcium ions and cation exchange by phosphate groups. The carboxyl group and amino group of the amino acid are adsorbed by interacting with the carrier, respectively, and a target substance and impurities are separated by flowing a solvent with a high concentration of phosphoric acid or a high salt concentration.
  • ⁇ Shake disintegration test> The polymer-coated crosslinked alginate gel fibers obtained by the above manufacturing method were suspended in phosphate-buffered saline (PBS) and shaken for a certain period of time. By confirming the (shaking disintegration degree), the physical strength can be measured.
  • PBS phosphate-buffered saline
  • Specific test methods include, for example, the methods described in Examples below.
  • ⁇ Tensile strength test> Using the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber obtained by the above manufacturing method, the physical strength is measured by confirming the breaking value (mN) using a tensile strength measuring device. can do. Specific test methods include, for example, the methods described in Examples below.
  • the strength of the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber of the present invention depends on the strength of the crosslinked alginate gel contained in the core layer that constitutes it, and the static properties of the crosslinked alginate gel and the cationic polymer formed between the core layer and the cationic polymer layer. This is due to the electrical action having optimum properties for the strength of the fibers of the invention.
  • the polymer-coated crosslinked alginate gel fiber of the present invention has high physical stability, and antibodies, physiologically active substances, etc. produced in the core layer are released from the core layer and can permeate the polymer layer. It also has appropriate permeability, and is also a suitable structure for producing antibodies, physiologically active substances, and the like.
  • Measurement of introduction rate of reactive group (complementary reactive group) of chemically modified alginic acid derivative It means the number of reactive groups or complementary reactive groups expressed as a percentage. In Examples described later, the reactive group or complementary reactive group introduction rate (mol %) was calculated from the integral ratio of 1 H-NMR. In addition, the amount of alginic acid necessary for calculating the introduction rate is measured by the carbazole-sulfuric acid method using a calibration curve, and the amount of reactive groups or complementary reactive groups is measured by an absorbance measurement method using a calibration curve. You can also
  • the molecular weight of alginic acid into which a reactive group or a complementary reactive group has been introduced is blue dextran (molecular weight 2,000,000 Da, SIGMA), thyroglobulin (molecular weight 669,000 Da, GE Healthcare Science), ferritin ( molecular weight 440,000 Da, GE Healthcare Science), aldolase (molecular weight 158,000 Da, GE Healthcare Science), conalbumin (molecular weight 75,000 Da, GE Healthcare Science), ovalbumin (molecular weight 4 40,000 Da, GE Healthcare Sciences), ribonuclease A (molecular weight 13,700 Da, GE Healthcare Sciences) and aprotinin (molecular weight 6500 Da, GE Healthcare Sciences) as standard products, reactive groups or Gel filtration was performed under the same conditions as alginic acid into which a complementary reactive group was introduced, and the eluate volume of each component was determined using Unicorn software.
  • the eluate volume of each component was plotted on the horizontal axis and the logarithmic value of the molecular weight was plotted on the vertical axis, and linear regression was performed to prepare a calibration curve.
  • Two types of calibration curves were prepared from blue dextran to ferritin and from ferritin to aprotinin.
  • M molecular weight
  • RT retention time
  • [M+H] + molecular ion peak.
  • Room temperature or “r.t.” in the examples shall generally indicate a temperature of from about 0°C to about 35°C.
  • DMT-MM in the examples is 4-(4,6-dimethoxy-1,3,5-triazin-2-yl)-4-methylmorpholinium chloride (CAS REGISTRY NO.: 3945-69- 5), and commercially available products or those synthesized by methods known in literature can be used.
  • the reactive group introduction rate (mol%) in the examples is the number of moles of monosaccharide (guluronic acid and mannuronic acid) units constituting alginic acid calculated from the integral ratio of 1 H-NMR (D 2 O). shall indicate the ratio of the number of moles of reactive groups added.
  • sodium alginate (A-1 to A-3 or B-2 to B-3) exhibiting the physical property values shown in Table 8 above was used.
  • sodium alginate or various alginic acid derivatives were sterilized by filtration as necessary.
  • Tables 24-1 and 24-2 show physical property values of alginic acid derivatives into which reactive groups were introduced (specifically, reactive group-introduced ratio (mol%), molecular weight, and weight average molecular weight (Da)).
  • Tables 25-1 to 25-3 show 1 H-NMR and LC-Mass data of each intermediate in Examples.
  • ⁇ Step 2> Synthesis of 2-amino-N-[3-(11,12-didehydrodibenz[b,f]azocin-5(6H)-yl)-3-oxopropyl]acetamide (IM3-2): (Example 3) A solution of piperidine (56 ⁇ L) in N,N-dimethylformamide (315 ⁇ L) was added to the compound of formula IM3-1 (63 mg) obtained in ⁇ Step 1>, and the mixture was stirred at room temperature for 30 minutes. Stirred. Ethyl acetate (15 mL) and water (5 mL) were added to the reaction solution, and after liquid separation, the organic layer was washed with water and saturated brine in that order.
  • tert-butyl (4-(2-(2,2,2-trifluoroacetamido)ethoxy)benzyl)carbamate (IM-5-1): Commercially available tert-butyl (4-hydroxybenzyl) carbamate (formula RG5-1, CAS REGISTRY NO.: 149505-94-2) (0.36 g), N obtained commercially or synthesized by a method known in the literature -(2-bromoethyl)-2,2,2-trifluoroacetamide (formula SM5, CAS REGISTRY NO.: 75915-38-7) (0.46 g), potassium iodide (0.35 g) and N Potassium carbonate (0.45 g) was added to a mixture of -methylpyrrolidone (3.6 mL) at room temperature, and the mixture was stirred at 140°C for 5 hours.
  • ⁇ Step 2> Synthesis of N-(2-(4-(aminomethyl)phenoxy)ethyl)-2,2,2-trifluoroacetamide hydrochloride (IM5-2): (Example 5)
  • IM5-2 N-(2-(4-(aminomethyl)phenoxy)ethyl)-2,2,2-trifluoroacetamide hydrochloride
  • 4N-hydrogen chloride was added while stirring under water cooling.
  • /1,4-dioxane (1.4 mL) was added, and the mixture was stirred at room temperature for 7 hours.
  • Diisopropyl ether (20 mL) was added to the reaction solution, and the suspension was stirred at room temperature for 1 day. The precipitate was filtered and the collected solid was dried under reduced pressure to give the title compound (0.15 g) as a white solid.
  • the separated aqueous layer was extracted twice with methyl tert-butyl ether (5 mL), washed successively with water (5 mL) and saturated brine (5 mL), and dried over anhydrous sodium sulfate. The dried organic layer was filtered and concentrated under reduced pressure. The crude product was purified by silica gel column chromatography (n-heptane/ethyl acetate) to give the title compound (99 mg) as a white amorphous.
  • ⁇ Step 4> Synthesis of N-(4-(2-aminoethoxy)benzyl-2-(cyclooct-2-yn-1-yloxy)acetamide (IM5-4): (Example 5) Potassium carbonate (64.17 mg) and water (495 ⁇ L) were added to a mixture of the compound of formula IM5-3 (99 mg) obtained in ⁇ Step 3> and methanol (1485 ⁇ L) under water-cooling and stirring. ) was added and stirred at room temperature for 15 hours. After completion of the reaction, methanol was concentrated under reduced pressure, and the resulting aqueous layer was extracted with ethyl acetate (5 mL) three times.
  • Step 5 Synthesis of N-(4-(2-aminoethoxy)benzyl)-2-(cyclooct-2-yn-1-yloxy)acetamide group-introduced alginic acid (5-A2 and 5-B2): Compounds of formulas 5-A2 and 5-B2 were synthesized according to the synthesis method and reaction conditions described below. [Synthesis method] DMT-MM was added to an aqueous solution of sodium alginate (manufactured by Mochida Pharmaceutical Co., Ltd.) adjusted to 1% by weight while stirring at room temperature.
  • Example 5 a solution of the compound of formula IM5-4 obtained in ⁇ Step 4> in water (1 mL) and ethanol (EtOH 1) was added dropwise at room temperature and stirred at the same temperature. (EtOH 2) was added sequentially and stirred at room temperature. The resulting precipitate was collected by filtration, washed with ethanol, and dried under reduced pressure. The resulting solid was dissolved in water and lyophilized to give the title compound. [Reaction conditions/results]
  • DMT-MM (112 mg) was added to an aqueous solution (40 mL) of sodium alginate (manufactured by Mochida Pharmaceutical Co., Ltd., A-2) adjusted to 1% by weight, with stirring at room temperature, and N-[2 obtained by a method known in the literature.
  • -(2-aminoethoxy)ethyl]-2-(2-cyclooctyne-1-yloxy)-acetamide [CAS REGISTRY NO. : 2401876-51-3] (SM7) (30 mg) in ethanol (4.0 mL) and 1 molar sodium bicarbonate solution (101 ⁇ L) were sequentially added and stirred at 30° C. for 3 hours.
  • ⁇ Step 1> Synthesis of tert-butyl (2-oxo-2-((2-(2,2,2-trifluoroacetamido)ethyl)amino)ethyl)carbamate (IM8-1): N-(2-Aminoethyl)-2,2,2-trifluoroacetamide hydrochloride (formula SM8) obtained by a method known in the literature [CAS REGISTRY NO. :496946-73-7] (100 mg) and N-(tert-butoxycarbonyl)glycine (Formula RG8-1) [CAS REGISTRY NO. :4530-20-5] (91 mg) was dissolved in acetonitrile (3.0 mL).
  • ⁇ Step 2> Synthesis of N-(2-(2-aminoacetamido)ethyl)-2,2,2-trifluoroacetamide hydrochloride (IM8-2): (Example 8) To the compound of formula IM8-1 (180 mg) obtained in ⁇ Step 1> was added 4 N-hydrogen chloride/1,4-dioxane (1.2 mL) under cooling with ice water, and then the mixture was cooled to room temperature. for 0.8 hours. Diisopropyl ether (3.6 mL) was added to the reaction solution and stirred for 30 minutes. The resulting solid was filtered to give the title compound (114 mg) as a white solid.
  • Step 5 Synthesis of N-(2-aminoethyl)-2-(2-(cyclooct-2-yn-1-yloxy)acetamido)acetamide group-introduced alginic acid (8-A2 and 8-B2): Compounds of formulas 8-A2 and 8-B2 were synthesized according to the synthesis method and reaction conditions described below.
  • ⁇ Step 1> Synthesis of tert-butyl (3-oxo-3-((2-(2,2,2-trifluoroacetamido)ethyl)amino)propyl)carbamate (IM9-1): N-(2-Aminoethyl)-2,2,2-trifluoroacetamide hydrochloride (formula SM8) (110 mg) and N-(tert-butoxycarbonyl)- ⁇ -alanine obtained by methods known in the literature. (Formula RG9-1) [CAS REGISTRY NO.
  • ⁇ Step 2> Synthesis of 3-amino-N-(2-(2,2,2-trifluoroacetamido)ethyl)propanamide hydrochloride (IM9-2): (Example 9) To the compound of formula IM9-1 (80 mg) obtained in ⁇ Step 1> was added 4N-hydrogen chloride/1,4-dioxane (1.1 mL) under cooling with ice water, and then the mixture was cooled to room temperature. and stirred for 2 hours. Diisopropyl ether (3.4 mL) was added to the reaction solution, and the mixture was stirred for 1.5 hours. The resulting solid was filtered to give the title compound (61 mg) as a white solid.
  • ⁇ Step 3> Synthesis of 3-(2-(cyclooct-2-yn-1-yloxy)acetamide)-N-(2-(2,2,2-trifluoroacetamido)ethyl)propanamide (IM9-3) :
  • ⁇ Step 4> Synthesis of N-(2-aminoethyl-3-(2-(cyclooct-2-yn-1-yloxy)acetamide)propanamide (IM9-4): (Example 9) A solution of potassium carbonate (42 mg) in water (0.3 mL) was added to a methanol (3.0 mL) solution of the compound of formula IM9-3 (60 mg) obtained in ⁇ Step 3>. After stirring at room temperature for 3 hours, a solution of potassium carbonate (42 mg) in water (0.3 mL) was added, and the mixture was stirred at room temperature for 16.5 hours. The reaction mixture was concentrated under reduced pressure, saturated brine (2 mL) was added, and the mixture was saturated with sodium chloride.
  • ⁇ Step 5> Synthesis of N-(2-aminoethyl)-3-(2-(cyclooct-2-yn-1-yloxy)acetamide)propanamide group-introduced alginic acid (9-A2): Sodium alginate (manufactured by Mochida Pharmaceutical Co., Ltd.: A-2) aqueous solution (41 mL) prepared to 1% by weight, DMT-MM (114 mg), (Example 9) Formula IM9-4 obtained in ⁇ Step 4> A solution of the compound (30.5 mg) in ethanol (4.1 mL) and a 1 molar aqueous solution of sodium bicarbonate (103 ⁇ L) were added. After stirring at 30° C.
  • ⁇ Step 1> Synthesis of tert-butyl (2-(2-(3-(2,2,2-trifluoroacetamido)propanamido)ethoxy)ethyl)carbamate (IM10-1): The compound of formula SM10 obtained by methods known in the literature [CAS REGISTRY NO. : 50632-82-1] (400 mg), and the compound of formula RG10-1 (tert-butyl (2-(2-aminoethoxy)ethyl)carbamate obtained commercially or by methods known in the literature, CAS REGISTRY NO. : 127828-22-2) (441 mg) in ethanol (4.0 mL) was added with DMT-MM (897 mg) and stirred for 3.5 hours.
  • ⁇ Step 2> Synthesis of N-(2-(2-aminoethoxy)ethyl)-3-(2,2,2-trifluoroacetamide)propanamide hydrochloride (IM10-2): (Example 10) To the compound of formula IM10-1 (451 mg) obtained in ⁇ Step 1> was added 4N-hydrogen chloride/1,4-dioxane (3.16 mL) under cooling with ice water, and the mixture was stirred at room temperature for 3 hours. Stirred for an hour. Diisopropyl ether (6.4 mL) was added to the reaction mixture, and the mixture was concentrated under reduced pressure to give the title compound (433 mg) as a colorless gum.
  • IM10- Synthesis of 3 N-(2-(2-(2-(cyclooct-2-yn-1-yloxy)acetamido)ethoxy)ethyl-3-(2,2,2-trifluoroacetamido)propanamide (IM10- Synthesis of 3): The compound of formula RG5-2 (111 mg) obtained by a method known in the literature and the compound of formula IM10-2 (215 mg) obtained in (Example 10) ⁇ Step 2> were added with ethanol (1.7 mL). ), DMT-MM (253 mg) and triethylamine (102 ⁇ L) were added, and the mixture was stirred at room temperature for 21 hours.
  • ⁇ Step 4> Synthesis of 3-amino-N-(2-(2-(2-(cyclooct-2-yn-1-yloxy)acetamido)ethoxy)ethyl)propanamide (IM10-4): (Example 10) To a solution of the compound of formula IM10-3 (35 mg) obtained in ⁇ Step 3> in methanol (700 ⁇ L) was added a solution of potassium carbonate (33 mg) in water (175 ⁇ L). Stirred for .5 hours. After the reaction mixture was concentrated under reduced pressure, water (2 mL) was added and the mixture was saturated with sodium chloride.
  • ⁇ Step 5> Synthesis of 3-amino-N-(2-(2-(2-(cyclooct-2-yn-1-yloxy)acetamido)ethoxy)ethyl)propanamide group-introduced alginic acid (10-A2): Sodium alginate (manufactured by Mochida Pharmaceutical Co., Ltd.: A-2) aqueous solution (28 mL) prepared to 1% by weight, DMT-MM (78 mg), (Example 10) Formula IM10-4 obtained in ⁇ Step 4> A solution of the compound (24 mg) in ethanol (2.8 mL) and a 1 molar aqueous solution of sodium bicarbonate (71 ⁇ L) were added.
  • Example 11a-m 4-(2-aminoethoxy)-N-(3-azidopropyl)benzamide group-introduced alginic acid (11-A2, 11-A1, 11-A3, 11-B2, 11-B2b, 11 - Synthesis of B2c, 11-A2b, 11-A2c, 11-B2d, 11-A2d, 11-A2e, 11-A3 and 11-A2f):
  • DMT-MM (50.19 mg) was added to an aqueous solution (19.6 mL) of sodium alginate (manufactured by Mochida Pharmaceutical Co., Ltd.: A-2) adjusted to 1% by weight, under ice-cooling and stirring, by a method known in the literature.
  • Example 14cb was obtained by dissolving the solid from the previous procedure in water and lyophilizing to give the title compound.
  • Example 17c was obtained by dissolving the solid from the previous procedure in water and lyophilizing to give the title compound.
  • Sodium alginate manufactured by Mochida Pharmaceutical Co., Ltd.: A-2) aqueous solution (40 mL) prepared to 1% by weight, DMT-MM (112 mg), the compound of formula SM18 synthesized by a method known in the literature (N-( 2-(2-(2-aminoethoxy)ethoxy)ethyl)-4-azidobenzamide hydrochloride; CAS REGISTRY NO.: 2401876-48-8) (45 mg) in ethanol (4.0 mL), 1 molar Concentration-Sodium bicarbonate water (151 ⁇ L) was added, and the mixture was stirred at 30° C. for 3 hours.
  • Example F1-A Preparation of crosslinked alginate gel fiber (1) 3% by weight aqueous alkyne solution prepared from compound 4-A2d or compound 1-A2d (alkyne solution) and 3% by weight aqueous azide solution prepared from compound 11-A2d, compound 13-A2b or compound 16-A2b (azide solution ) was used to mix equal volumes of the alkyne solution and the azide solution in the combination shown in Table 26 to prepare a chemically modified alginic acid mixed solution (F1A-M1).
  • alginic acid mixed solution F1A-M1 and 3% by weight alginic acid aqueous solution (ALGS) prepared from sodium alginate (B-2) were mixed at the ratio shown in Table 26 to obtain alginic acid mixed solution (F1A-M2). Subsequently, the mixed solution F1A-M2 and 20 mg/mL of blue dextran (Blue Dextran 2000, code number 17036001, manufactured by cytiva) containing 1.8% by weight saline were mixed in equal volumes to form an alginic acid mixed solution (F1A-M3).
  • AGS alginic acid aqueous solution
  • B-2 sodium alginate
  • a Hamilton syringe is filled with the mixed solution F1A-M3, and a metal needle (Musashi Engineering, SNA-19G-B), a silicon tube (AS ONE, ⁇ 1 ⁇ 2) and a glass capillary (Narishige, G-1) are sequentially connected to the syringe. , was set on the syringe pump.
  • the tip of the glass capillary was immersed in a beaker containing a 100 mmol/L aqueous calcium chloride solution, and injected into the aqueous calcium chloride solution at a flow rate of 250 ⁇ L/min for 1 minute.
  • the fibrous material injected into the aqueous calcium chloride solution was allowed to stand for 30 minutes or more to obtain crosslinked alginate gel fibers (CLA-1A) (see CLA-1A No. in Table 26).
  • Example F1-B Preparation of crosslinked alginate gel fiber (2) Equal volumes of a 3 wt% compound 4-A2d aqueous solution prepared from compound 4-A2d and a 3 wt% compound 11-A2d aqueous solution prepared from compound 11-A2d were mixed to form a mixed solution of chemically modified alginic acid (F1B-M1). was prepared. A 3 wt% aqueous sodium alginate solution (ALGS) prepared from the mixed solution F1B-M1 and sodium alginate (B-2) was mixed at a volume ratio of 1:2 to obtain a 3 wt% alginic acid mixed solution (F1B-M1B). did.
  • a 3 wt% aqueous sodium alginate solution (ALGS) prepared from the mixed solution F1B-M1 and sodium alginate (B-2) was mixed at a volume ratio of 1:2 to obtain a 3 wt% alginic acid mixed solution (F1B-M1B). did.
  • the mixed solution F1B-M1B was prepared to the concentration shown in Table 27 (in Table 27; concentration of F1B-M2), and a saline solution (F1B -BS: The concentration of blue dextran and the concentration of sodium chloride are as shown in Table 27) were mixed at the volume ratio shown in Table 27 to prepare an alginic acid mixed solution (F1B-M3).
  • the concentrations of blue dextran (mg/mL) and sodium chloride (mg/mL) in the mixed solution F1B-M3 were adjusted to 10 mg/mL for blue dextran and 9 mg/mL for sodium chloride.
  • Mixed solution F1B-M3 was filled into a Hamilton syringe.
  • a metal needle (Musashi Engineering, SNA-19G-B), a silicon tube (As One, ⁇ 1 ⁇ 2) and a glass capillary (Narishige, G-1) were sequentially connected to the syringe and set in a syringe pump.
  • the tip of the glass capillary was immersed in a beaker containing a 100 mmol/L calcium chloride aqueous solution, and ejected at a flow rate of 250 ⁇ L/min for 1 minute.
  • the fibrous material injected into the aqueous calcium chloride solution was left to stand for 30 minutes or more to obtain crosslinked alginate gel fibers (CLA-1B) (see CLA-1B No. in Table 27).
  • Example F1-C Fabrication of polymer-coated crosslinked alginate gel fibers (1)
  • the crosslinked alginate gel fibers in the calcium chloride aqueous solution obtained in (Example F1-A) or (Example F1-B) were filtered and fractionated using a cell strainer.
  • the separated crosslinked alginate gel fibers were added to an aqueous solution containing a cationic polymer having each composition shown in Table 28 and shaken at 37° C. and 125 rpm for 20 minutes to coat the crosslinked alginate gel fibers with a polymer.
  • the fibers in the aqueous solution were filtered and collected using a cell strainer, washed twice with 5 mL of physiological saline, and polymer-coated crosslinked alginate gel fibers (CFB-1) (CFB-1 No. in Table 29). .) was obtained.
  • Example F1-D Stability of polymer-coated crosslinked alginate gel fiber (1) EDTA treatment of fiber The polymer-coated crosslinked alginate gel fiber (CFB-1) obtained in (Example F1-C) was It was added to 2Na/physiological saline solution (5 mL), and shaken and stirred at 37° C. and 125 rpm for 20 minutes. The chelate-treated polymer-coated crosslinked alginate gel fibers were filtered again using a cell strainer, fractionated, and washed twice with 5 mL of physiological saline. The resulting polymer-coated crosslinked alginate gel fibers were immersed in 5 mL saline until stability evaluation testing was performed.
  • Stability rating 3: No disintegration/dissolution/deformation/elution of blue dextran, etc. of fiber is observed at all 2: Disintegration/dissolution/deformation/elution of blue dextran, etc. (cumulative less than 100 ⁇ g/mL) is observed in part of fiber : Obvious disintegration/dissolution/deformation/elution of blue dextran (100 ⁇ g/mL or more in total), etc. are observed in the fiber.
  • Example F2-A Production of Crosslinked Alginate Gel Fiber Containing Antibody-Producing Cells
  • a G016 medium having the composition shown in Table 31 below was prepared.
  • methotrexate hereinafter referred to as MTX
  • the MTX solution was diluted with G016 medium to a final concentration of 1 ⁇ mol/L to prepare an antibody-producing medium solution.
  • Alkyne aqueous solutions and azide aqueous solutions prepared according to the formulations shown in Tables 32 and 33 below were mixed in equal volumes in the combinations shown in Table 34 to prepare an alginic acid mixed solution (F2A-M1).
  • the tip of the needle was immersed in a beaker containing a 100 mmol/L aqueous solution of calcium chloride, and injected into the aqueous solution of calcium chloride at a flow rate of 250 ⁇ L/min for 2 minutes.
  • the fibrous material injected into the aqueous calcium chloride solution was allowed to stand for 30 minutes or more to obtain crosslinked alginate gel fibers (CLA-G) containing anti-GPVI antibody-producing cells (CLA-G in Table 34). G No.).
  • Example F2-B Preparation of crosslinked alginate gel fibers containing physiologically active substance-producing cells A complete medium having the composition shown in Table 35 below was prepared.
  • Equal volumes of the alkyne aqueous solution of F2A1 and the azide aqueous solution of F2N2 described in Tables 32 and 33 of (Example F2-A) were mixed to prepare a chemically modified alginic acid mixed solution (F2B-M1).
  • F2B-M1 and sodium alginate (B-2) and 3 wt% alginic acid aqueous solution (containing 0.9% sodium chloride) prepared from 0.9 wt% sodium chloride aqueous solution were mixed at a ratio of 1:2. , and an alginic acid mixed solution (F2B-M2).
  • Example F2-C Production of cell-containing polymer-coated crosslinked alginate gel fibers Various cell-containing crosslinked alginate gel fibers obtained in (Example F2-A) or (Example F2-B) are shown in Table 36. Using a solution containing a cationic polymer of each composition, coating was performed in the same manner as described in (Example F1-C) (shaking and stirring time was 30 minutes) to crosslink the polymer coating. Alginate gel fibers (CFB-S) (see CFB-S No. in Table 37) were obtained.
  • CFB-S Alginate gel fibers
  • Example F3 Confirmation of coating of crosslinked alginate gel fiber with cationic polymer No. of (Example F1-A).
  • a crosslinked alginate gel fiber (FB1-A-6) prepared under the conditions shown in F1-A-6 was immersed in an aqueous solution containing 0.1% poly-L-lysine-FITC label/100 mM calcium chloride. . After performing the same operation as in (Example F1-C), the surface of the obtained fiber was observed using a fluorescence microscope.
  • Fig. 7 shows the observation results. It was confirmed that the surface of the gel fiber was coated with poly-L-lysine-FITC. This result suggested that the crosslinked alginate gel fibers were coated with a cationic polymer.
  • Example F4-A Preparation of crosslinked alginate gel fiber (3)
  • a 3% by weight alginic acid aqueous solution (containing 0.9% by weight sodium chloride) (ALGS2) was prepared from sodium alginate (B-2) and physiological saline for injection (manufactured by Otsuka Pharmaceutical Factory) (INs). Subsequently, an alkyne aqueous solution and an azide aqueous solution were prepared according to the formulations shown in Tables 38 and 39 below.
  • the alkyne aqueous solutions (F4A1, F4A2) and the azide aqueous solutions (F4N1, F4N2 and F4N3) were mixed in equal volumes in the combinations shown in the table below to obtain a chemically modified alginic acid mixed solution (F4A-M1).
  • Mixed solutions F4A-M1 and ALGS2 were mixed at a ratio of 1:2 to prepare an alginic acid mixed solution (F4A-M2).
  • an alginic acid mixed solution (F4A-M2), a 9.9% by weight aqueous sodium chloride solution and physiological saline for injection (manufactured by Otsuka Pharmaceutical Factory) (INs) were prepared, and the mixed solution (F4A -M3).
  • the total alginic acid concentration contained in F4A-M3 is about 1.5% by weight.
  • the mixed solution F4A-M3 was filled in a Hamilton syringe, and a metal needle (Musashi Engineering, SNA-19G-B), a silicon tube (AS ONE, ⁇ 1 ⁇ ⁇ 2) and a glass capillary (Narishige, G-1) were attached to the syringe. They were connected in order and set on the syringe pump.
  • the tip of the glass capillary was immersed in a beaker containing a 100 mmol/L aqueous calcium chloride solution, and injected into the aqueous calcium chloride solution at a flow rate of 250 ⁇ L/min for 1 minute.
  • crosslinked alginate gel fibers CLA-X1 (see CLA-X1 No. in Table 40).
  • Example F4-A2 Preparation of crosslinked alginate gel fiber (3a) To compound 4-A2d or compound 11-A2d, 0.9% by weight aqueous sodium chloride solution (prepared with sodium chloride and water) was added, and 3% by weight alkyne aqueous solution and azide aqueous solution (containing 0.9% by weight sodium chloride). were prepared (alkyne F4A3, azide F4N4).
  • 3% by weight sodium alginate aqueous solution (containing 0.9% by weight sodium chloride) was prepared from various sodium alginate and 0.9% by weight sodium chloride aqueous solution according to the formulations shown in Table 41 below.
  • Equal volumes of the alkyne aqueous solution (F4A3) and the azide aqueous solution (F4N4) were mixed to obtain a chemically modified alginic acid mixed solution (F4A2-M1).
  • the mixed solution F4A2-M1 and a 3 wt% sodium alginate aqueous solution (containing 0.9 wt% sodium chloride) were mixed at a ratio of 5:10 in the combination shown in Table 42 below, and the alginic acid mixed solution (F4A2-M2 ).
  • Equal volumes of the mixed solution F4A2-M2 and physiological saline for injection (manufactured by Otsuka Pharmaceutical Factory) (INs) were mixed to prepare a mixed solution (F4A2-M3).
  • the total alginic acid concentration contained in F4A-M3 was 1.5% by weight.
  • the mixed solution F4A2-M3 was filled in a Hamilton syringe, a luer lock needle (Kanto Kagaku Co., Ltd., 15/23 NL-F) was connected to the syringe, and set to a syringe pump.
  • the tip of the needle was immersed in a beaker containing a 20 mmol/L barium chloride aqueous solution containing 0.9% sodium chloride, and injected into the barium chloride aqueous solution at a flow rate of 250 ⁇ L/min for 0.8 minutes.
  • the fibrous material injected into the aqueous solution was allowed to stand for 30 minutes or more to obtain crosslinked alginate gel fibers (CLA-X1A) (see CLA-X1A No. in Table 42).
  • Example F4-B Preparation of crosslinked alginate gel fiber (4) Equal amounts of the alkyne aqueous solution (F4A1) and the azide aqueous solution (F4N1) described above (Example F4-A) were mixed to obtain a chemically modified alginic acid mixed solution (F4B-M1).
  • the mixed solution F4B-M1 and the ALGS2 were prepared according to the formulations shown in Table 43 below to obtain an alginic acid mixed solution (F4B-M2).
  • a mixed solution (F4B-M3) was prepared at a mixing ratio of the alginic acid mixed solution F4B-M2 and INs shown in Table 43 below.
  • the mixed solution F4B-M3 is filled in a Hamilton syringe, and a metal needle (Musashi Engineering, SNA-19G-B), a silicon tube (AS ONE, ⁇ 1 ⁇ ⁇ 2) and a glass capillary (Narishige, G-1) are attached to the syringe. They were connected in order and set on the syringe pump.
  • the tip of the glass capillary was immersed in a beaker containing a 100 mmol/L aqueous calcium chloride solution, and injected into the aqueous calcium chloride solution at a flow rate of 250 ⁇ L/min for 1 minute.
  • the fibrous material injected into the aqueous calcium chloride solution was allowed to stand for 30 minutes or more to obtain crosslinked alginate gel fibers (CLA-X2) (see No. CLA-X2 in Table 43).
  • Example F4-C Fabrication of polymer-coated crosslinked alginate gel fibers (2a)
  • the crosslinked alginate gel fibers (CLA-X1 and CLA-X2) in the aqueous calcium chloride solution obtained in (Example F4-A) or (Example F4-B) were filtered and fractionated using a cell strainer. .
  • the separated crosslinked alginate gel fibers were added to an aqueous solution of 0.1% poly-L-ornithine hydrobromide/100 mM calcium chloride and shaken at 37°C and 125 rpm for 30 minutes to form crosslinked alginate gel fibers. was polymer coated.
  • the fibers in the aqueous solution were filtered and separated using a cell strainer, washed twice with 5 mL of physiological saline, and polymer-coated crosslinked alginate gel fibers (CFB-X) (CFB-X No. in Table 44). .) was obtained.
  • Examples F4-C2 Fabrication of polymer-coated crosslinked alginate gel fibers (2)
  • a 1% poly-L-ornithine aqueous solution containing 1% poly-L-ornithine hydrobromide, 9.2 mmol/L hydroxyethylpiperazineethanesulfonic acid, and 154 mmol/L sodium chloride was prepared.
  • the 1% poly-L-ornithine aqueous solution was diluted with an aqueous solution containing 0.9% sodium chloride and 20 mmol/L barium chloride to obtain a 0.1% poly-L-ornithine aqueous solution.
  • the crosslinked alginate gel fibers (CLA-X1A) in the barium chloride aqueous solution obtained above (Example F4-A2) were filtered and fractionated using a cell strainer.
  • the separated crosslinked alginate gel fibers were added to the 0.1% poly-L-ornithine aqueous solution and shaken at 37° C. and 125 rpm for 30 minutes to coat the crosslinked alginate gel fibers with a polymer.
  • the fibers in the aqueous solution were filtered and separated using a cell strainer, washed once with 10 mL of physiological saline, and polymer-coated crosslinked alginate gel fibers (CFB-X2) (CFB-X2 No. in Table 45). .) was obtained.
  • the antibody-producing cell-containing polymer-coated crosslinked alginate gel fibers obtained in (Example F2-C) (FB2-A-1-c1, FB2-A-2-c1, FB2-A- 3-c1, FB2-A-4-c1, FB2-A-5-c1, FB2-A-6-c1, FB2-A-7-c1, FB2-A-8-c1, FB2-A-9- c1, and FB2-A-10-c1)
  • add the antibody-producing medium solution (30 mL) described in (Example F2-A) add the antibody-producing medium solution (30 mL) described in (Example F2-A), and incubate at 37° C. under 5% CO 2 atmosphere in an incubator.
  • Cultures were carried out for 14 or 20 days with shaking at rpm. 1.8 mL of the culture medium was removed once every 2 to 3 days, and 1.8 mL of the antibody-producing medium solution or 1.8 mL of Feed solution (Irvine, Catalog No. JX F003) was added to bring the total volume of the medium to 30. mL was kept. In addition, half of the culture solution was exchanged once a week. During the culture period, the IgG concentration in the culture medium was measured as human IgG concentration using a Cedex Bioanalyzer (Roche Diagnostics). In the culture using the cell-encapsulating polymer-coated crosslinked alginate gel fiber, the cumulative amount of antibody during the culture period and the concentration of anti-GPVI antibody-producing CHO cells detected in the culture medium were as shown in Table 47.
  • ⁇ Step 1> Cultivation of MIN6 cell-containing polymer-coated crosslinked alginate gel fibers (Example F2-C)
  • MIN6 cell-encapsulating polymer-coated crosslinked alginate gel fibers cultured for 3 days or 14 days in ⁇ Step 1> was evaluated.
  • MIN6 cell-encapsulating polymer-coated cross-linked alginate gel fibers were incubated in 10 mL of low glucose solution (2 mM glucose/KRBH/0.1% BSA) for 2 h, followed by 10 mL of high glucose solution (20 mM glucose/KRBH/0.1% BSA). After exchanging the solution to 10 mL, culture was continued for an additional 2 hours.
  • the solution was exchanged again with 10 mL of the low glucose solution and cultured for 2 hours.
  • the insulin concentration in the solution at the end of each step was measured using an ultra-sensitive mouse insulin measurement kit (manufactured by Morinaga Institute of Biological Science). It was confirmed that insulin was released depending on the glucose concentration.
  • Example F5-A Preparation of antibody-producing cell-containing crosslinked alginate gel fibers (Example F2-A) After preparing a wt% aqueous solution (containing 0.9 wt% sodium chloride), equal volumes of each aqueous solution were mixed to prepare a chemically modified alginic acid mixed solution (F5A-M1).
  • alginic acid aqueous solution containing 0.9% sodium chloride
  • equal volumes of G016 medium having the composition described in (Example F2-A) containing the mixed solution F5A-M2 and tocilizumab-producing CHO cells (1 ⁇ 10 8 cells/mL) were mixed to form a cell-containing alginic acid mixed solution. (F5A-M3).
  • a Hamilton syringe was filled with the mixed solution F5A-M3, a luer lock needle (Kanto Kagaku Co., Ltd., 15/23 NL-F) was connected to the syringe, and set to a syringe pump.
  • the tip of the needle is immersed in a beaker containing a 100 mmol/L calcium chloride aqueous solution or a 20 mmol/L barium chloride aqueous solution containing 0.9% sodium chloride, and the calcium chloride or barium chloride aqueous solution is immersed at a flow rate of 250 ⁇ L/min. was injected for 0.8 minutes.
  • the fibrous material injected into the aqueous solution was allowed to stand for 30 minutes or more to obtain tocilizumab-producing CHO cell-containing crosslinked alginate gel fibers (CLA-G5) (CLA-G5 No. in Table 49). reference).
  • Example F5-B Preparation of antibody-producing cell-containing polymer-coated cross-linked alginate gel fiber
  • Example F5-A The antibody-producing cell-containing cross-linked alginate gel fiber (CLA-G5) obtained in (Example F5-A) has each composition shown in Table 50. of the cationic polymer-containing aqueous solution, and shaken and stirred at 37° C. and 125 rpm for 30 minutes to coat the cell-containing crosslinked alginate gel fibers with the polymer. The amount of aqueous solution used for polymer coating was 10 times the amount of fiber to be coated.
  • the fibers in the aqueous solution were filtered and collected using a cell strainer, washed twice with 5 mL of physiological saline, and antibody-producing cell-containing polymer-coated crosslinked alginate gel fibers (CFB-S2) (Table 51). CFB-S2 No.) was obtained.
  • Example FI-3 Culture of antibody-producing cell-containing polymer-coated crosslinked alginate gel fibers (FB5 -A-1-c1 or FB5-A-2-c2), add the G016 medium (30 mL) described in (Example F2-A), 37 ° C., 5% CO 2 atmosphere, Culturing was started while shaking at 125 rpm in an incubator, and after 5 days, the culture temperature was changed to 30° C., and the culture was continued at the same temperature. During this period, 1.8 mL of the culture medium was removed once every 2 to 3 days, and 1.8 mL of the G016 medium or 1.8 mL of Feed solution (manufactured by Irvine, Catalog No.
  • Example F6 Preparation of antibody - producing cell - containing polymer-coated cross-linked alginate gel fiber
  • Equal volumes of the G016 medium having the composition and the mixed solution F5A-M2 prepared above (Example F5-A) were mixed to obtain a cell-containing alginic acid mixed solution (F6A-M3).
  • the mixed solution F6A-M3 contained alkyne compounds and azide compounds at a final concentration of 0.5% by weight, and tocilizumab-producing CHO cells at concentrations shown in Table 53.
  • a Hamilton syringe was filled with the mixed solution F6A-M3, a luer lock needle (Kanto Kagaku Co., Ltd., 15/23 NL-F) was connected to the syringe, and set to a syringe pump.
  • the tip of the needle was immersed in a beaker containing a 20 mmol/L barium chloride aqueous solution containing 0.9% sodium chloride, and injected into the aqueous solution at a flow rate of 250 ⁇ L/min for the time shown in Table 53.
  • the fibrous material injected into the aqueous solution was allowed to stand for 30 minutes or more to obtain crosslinked alginate gel fibers containing tocilizumab-producing CHO cells.
  • Example FI-4 Culture of antibody-producing cell-containing polymer-coated cross-linked alginate gel fibers (FB6-1) obtained in (Example F6) was added to a 125 mL polycarbonate Erlenmeyer flask. -c1, FB6-2-c1 or FB6-4-c1 is 1, FB6-3-c1 is 2), (Example F2-A) G016 medium having the composition described in (Example F2-A) is added, and the gel The total amount of fiber and G016 medium is 30 mL, culture is started in an incubator at 37 ° C., 5% CO 2 atmosphere, shaking at 125 pm, and after 5 days, the culture temperature is set to 30 ° C. and cultured at the same temperature. continued.
  • Example F7 Preparation of antibody - producing cell-containing polymer-coated crosslinked alginate gel fibers
  • Equal volumes of the mixed solution F5A-M2 prepared in Example F5-A) were mixed to obtain a cell-containing alginic acid mixed solution (F7A-M3).
  • the mixed solution F7A-M3 contained the alkyne compound and the azide compound at a final concentration of 0.5% by weight.
  • a Hamilton syringe was filled with the mixed solution F7A-M3, a luer lock needle (Kanto Kagaku Co., Ltd., 15/23 NL-F) was connected to the syringe, and set to a syringe pump.
  • the tip of the needle was immersed in a beaker containing a 20 mmol/L barium chloride aqueous solution containing 0.9% sodium chloride, and injected into the aqueous solution at a flow rate of 250 ⁇ L/min for the time shown in Table 55.
  • the fibrous material injected into the aqueous solution was allowed to stand for 30 minutes or more to obtain crosslinked alginate gel fibers containing anti-GPVI antibody-producing cells.
  • Example FI-5 Culture of antibody-producing cell-containing polymer-coated crosslinked alginate gel fibers (FB7-1) obtained in (Example F7) was added to a 125 mL polycarbonate Erlenmeyer flask. -c1 or FB7-2-c1 one, FB7-3-c1 two), add the antibody-producing medium solution described in (Example F2-A), and gel fiber and antibody-producing medium solution The total volume was adjusted to 30 mL, and cultured in an incubator at 37° C. in a 5% CO 2 atmosphere with shaking at 125 rpm.
  • Example F8 Production of antibody-producing cell-containing polymer-coated cross-linked alginate gel fibers Using the formulations shown in Table 57 below, various types of sodium alginate and physiological saline for injection (manufactured by Otsuka Pharmaceutical Factory) (INs) were mixed with 3% by weight alginate aqueous solution (0. 9% by weight sodium chloride) was prepared. Subsequently, a 3% by weight alkyne aqueous solution and an azide aqueous solution (containing 0.9% by weight sodium chloride) were prepared according to the formulations shown in Table 58 below.
  • the tip of the needle was immersed in a beaker containing a 20 mmol/L barium chloride aqueous solution containing 0.9% sodium chloride, and injected at a flow rate of 250 ⁇ L/min for 0.8 minutes.
  • the fibrous material injected into the aqueous solution was allowed to stand for 30 minutes or more to obtain crosslinked alginate gel fibers containing tocilizumab-producing CHO cells.
  • the obtained tocilizumab-producing CHO cell-containing crosslinked alginate gel fibers and an aqueous solution containing 0.1% poly-L-ornithine hydrobromide, 0.9% sodium chloride and 20 mmol/L barium chloride were added.
  • a polymer-coated crosslinked alginate gel fiber (CFB-S5) (see CFB-S5 No. in Table 59) by coating in the same manner as described in (Example F5-B) above. rice field.
  • Example FI-6 Culture of antibody-producing cell-containing polymer-coated crosslinked alginate gel fibers (FB8-1) obtained in (Example F8) was added to a 125 mL polycarbonate Erlenmeyer flask.
  • G016 medium (30 mL ) was added, culture was started in an incubator at 37° C., 5% CO 2 atmosphere with shaking at 125 rpm. During this period, 1.8 mL of the culture medium was removed once every 2 to 3 days, and 1.8 mL of the G016 medium or 1.8 mL of Feed solution (manufactured by Irvine, Catalog No. JX F003) was added, and the total volume of the medium was adjusted to 30. mL was kept.
  • the IgG concentration in the culture medium was measured as human IgG concentration using a Cedex Bioanalyzer (Roche Diagnostics).
  • Table 60 shows the cumulative antibody concentration and the concentration of tocilizumab-producing CHO cells detected in the culture medium on each day of measurement in the culture using the antibody-producing cell-encapsulating polymer-coated crosslinked alginate gel fiber. From the culture results, it was confirmed that the amount of antibody produced increased over time in the culture of each fiber. In the results of the main culture, higher antibody production was obtained according to the stretchability of the fiber (the result of the tensile test in (Example F4-D)).
  • Example F9 Preparation of antibody-producing cell-containing polymer-coated crosslinked alginate gel fibers G016 medium having the composition described in (Example F2-A) containing tocilizumab-producing CHO cells (1 x 10 8 cells/mL) and the above ( Equal volumes of the alginic acid mixed solution F5A-M2 prepared in Example F5-A) were mixed to obtain a cell-containing alginic acid mixed solution (F9A-M3).
  • the mixed solution F9A-M3 contained the alkyne compound and the azide compound at a final concentration of 0.5% by weight.
  • a Hamilton syringe was filled with the mixed solution F9A-M3, a luer lock needle (Kanto Kagaku Co., Ltd., 15/23 NL-F) was connected to the syringe, and set to a syringe pump.
  • the tip of the needle was immersed in a beaker containing a 20 mmol/L barium chloride aqueous solution containing 0.9% sodium chloride, and injected into the aqueous solution at a flow rate of 250 ⁇ L/min for 0.8 minutes.
  • the fibrous material injected into the aqueous solution was allowed to stand for 30 minutes or more to obtain crosslinked alginate gel fibers containing tocilizumab-producing CHO cells.
  • the obtained cell-containing crosslinked alginate gel fibers were coated in the same manner as described in (Example F5-B) using cationic polymer-containing aqueous solutions having compositions shown in Table 61. , antibody-producing cell-containing polymer-coated cross-linked alginate gel fibers (CFB-S6) (cf. CFB-S6 No. in Table 62) were obtained.
  • CFB-S6 antibody-producing cell-containing polymer-coated cross-linked alginate gel fibers
  • Example FI-7 Culture of antibody-producing cell-containing polymer-coated crosslinked alginate gel fibers (FB9- 1-c1, FB9-2-c2 or FB9-3-c3), add G016 medium (30 mL) described in (Example F2-A), 37 ° C., 5% CO 2 atmosphere , culturing was started with shaking at 125 pm in an incubator, and after 5 days, the culture temperature was changed to 30°C, and the culture was continued at the same temperature. During this period, 1.8 mL of the culture medium was removed once every 2 to 3 days, and 1.8 mL of the G016 medium or 1.8 mL of Feed solution (manufactured by Irvine, Catalog No.
  • Example F16-A Fabrication of Crosslinked Alginate Gel Fiber
  • a 3% by weight sodium alginate aqueous solution, an alkyne aqueous solution and an azide aqueous solution (containing 0.9% by weight sodium chloride) were prepared according to the formulations shown in Table 64 below.
  • Equal volumes of the alkyne aqueous solution (F16A1) and the azide aqueous solution (F16N1) were mixed to prepare a chemically modified alginic acid mixed solution (F16A-M1).
  • the mixed solution F16A-M2 and the bead suspension (Fluorescent UV Particles manufactured by Spheretech, Code No. FP-10040-2) were mixed in equal volumes to obtain a bead-containing alginic acid mixed solution (F16A-M3).
  • a Hamilton syringe was filled with the mixed solution F16A-M3, a luer lock needle (Kanto Kagaku Co., Ltd., 15/23 NL-F) was connected to the syringe, and set to a syringe pump.
  • the tip of the needle was immersed in a beaker containing a 20 mmol/L barium chloride aqueous solution containing 0.9% sodium chloride, and injected at a flow rate of 250 ⁇ L/min for 1 minute. Note that every 3 seconds dissecting scissors were used to cut the material in fibrous form immediately after injection.
  • the cut fibrous material was allowed to stand in the barium chloride aqueous solution for 30 minutes or more to obtain crosslinked alginate gel fibers (CLA-16A) having a length of about 5 cm.
  • CLA-16A crosslinked alginate gel fibers
  • Example F16-B Production of polymer-coated crosslinked alginate gel fiber
  • the crosslinked alginate gel fiber in the aqueous barium chloride solution obtained in (Example F16-A) was filtered using a cell strainer, fractionated, and fractionated.
  • the obtained crosslinked alginate gel fibers are added to an aqueous solution containing a cationic polymer, shaken and stirred at 37° C. and 125 rpm for 30 minutes, the crosslinked alginate gel fibers are polymer-coated, and the fibers in the aqueous solution are passed through a cell strainer. Filter, aliquot, and wash twice with 5 mL of physiological saline to obtain polymer-coated crosslinked alginate gel fibers (CFB-16).
  • Example F17-A Preparation of Crosslinked Alginate Gel Fiber Containing Antibody-Producing Cells A 3% by weight alkyne aqueous solution and an azide aqueous solution (containing 0.9% by weight sodium chloride) were prepared according to the formulations shown in Table 65 below.
  • alginic acid aqueous solution containing 0.9% sodium chloride
  • an equal volume of G016 medium having the composition described in (Example F2-A) containing the mixed solution F17A-M2 and tocilizumab-producing CHO cells (3 ⁇ 10 7 cells/mL) was mixed to obtain a cell-containing alginic acid mixed solution.
  • Example F17-B Preparation of antibody-producing cell-containing polymer-coated cross-linked alginate gel fiber (Example F17-A)
  • the antibody-producing cell-containing cross-linked alginate gel fiber (CLA-G17) obtained in (Example F17-A) was - coating using an aqueous solution containing L-ornithine hydrobromide, 0.9% sodium chloride and 20 mmol/L barium chloride in the same manner as described above (Example F5-B)
  • Example F5-B antibody-producing cell-containing polymer-coated crosslinked alginate gel fibers (CFB-G17) were obtained.
  • the amount of fiber used for coating is as shown in Table 67 below (see CFB-G17 No. in Table 67).
  • Example FI-17 Culture of polymer-coated crosslinked alginate gel fibers containing antibody-producing cells
  • the antibody-producing cell-containing polymer-coated crosslinked alginate gel fibers were cultured by carrying out operations according to (operation methods 1 and 2).
  • (Implementation operation 1) 0.01% antifoaming agent (manufactured by Sigma, AntiformC Emulsion, Catalog No. A8011) was added to a glass fermenter (total volume 500 mL fermenter) equipped with a magnetic stirrer, as described above (Example F2-A).
  • Example F17-B the antibody-producing cell-containing polymer-coated crosslinked alginate gel fibers (FB17-1-c1 or FB17-3-c1) obtained above (Example F17-B) were added, and the total volume of the culture system was adjusted to 300 mL. .
  • the culture vessel containing the antibody-producing cell-containing polymer-coated cross-linked alginate gel fibers was aerated continuously with filter - sterilized air while being appropriately aerated with CO to bring the pH to about 7, at 37° C., as shown in Table 68 below. Cultivation was started while stirring at a high speed, and after 5 days, the culture temperature was set to 30° C., and the culture was continued at the same temperature.
  • the culture medium was continuously replaced at the medium exchange rate (vessel volume/day, hereinafter referred to as vvd) described in Table 68 below.
  • vvd medium exchange rate
  • 0.01% antifoaming agent was added to the G016 medium and used.
  • Examplementation operation 2 Put the antibody-producing cell-containing polymer-coated crosslinked alginate gel fiber (FB17-2-c1 or FB17-4-c1) obtained in (Example F17-B) into a 125 mL polycarbonate Erlenmeyer flask (Example F2 The G016 medium described in -A) was added to bring the total volume of the culture system to 30 mL. Cultivation was initiated in an incubator at 37° C.
  • Example F18-A Preparation of antibody-producing cell-containing crosslinked alginate gel fibers (Example F2-A) After preparing a wt% aqueous solution (containing 0.9 wt% sodium chloride), equal volumes of each aqueous solution were mixed to prepare a chemically modified alginic acid mixed solution (F18A-M1).
  • alginic acid aqueous solution containing 0.9% sodium chloride
  • equal volumes of the mixed solution F18A-M2 and the antibody-producing medium solution described above (Example F2-A) containing anti-GPVI antibody-producing cells (2 ⁇ 10 7 cells/mL) were mixed, and cell-containing alginic acid was mixed.
  • a solution (F18A-M3) was obtained.
  • Crosslinked alginate gel fibers containing antibody-producing cells (CLA-G18) were obtained by performing the same operation as (Operation method B) described in (Example F17-A) using the mixed solution F18A-M3. rice field.
  • Example F18-B Preparation of antibody-producing cell-containing polymer-coated cross-linked alginate gel fiber (Example F18-A)
  • the antibody-producing cell-containing cross-linked alginate gel fiber (CLA-G18) obtained in (Example F18-A) was - coating using an aqueous solution containing L-ornithine hydrobromide, 0.9% sodium chloride and 20 mmol/L barium chloride in the same manner as described above (Example F5-B)
  • Example F5-B antibody-producing cell-containing polymer-coated crosslinked alginate gel fibers (CFB-G18) were obtained.
  • the amount of fiber used for coating is as shown in Table 69 below (see CFB-G18 No. in Table 69).
  • Example FI-18 Culture of antibody-producing cell-containing polymer-coated crosslinked alginate gel fibers ( FB18-1-c1, FB18-2-c1 or FB18-3-c1) was added, and the antibody-producing medium solution described above (Example F2-A) was added to bring the total volume of the culture system to 30 mL. Cultivation was initiated by shaking the Erlenmeyer flask at 37° C. in a 5% CO 2 atmosphere in an incubator at 125 pm, and continued at the same temperature. During this period, 1.8 mL of the culture medium was withdrawn once every 2 to 3 days, and 1.8 mL of Feed solution (manufactured by Irvine, Catalog No.
  • JX F003 was added, or half of the culture medium was replaced.
  • 45% D-(+) glucose solution manufactured by SIGMA, Glucose-supplemented antibody-producing medium solution containing 1/100 or 1/50 volume of Catalog No. G8769 was used.
  • the IgG concentration in the culture medium was measured as human IgG concentration using a Cedex Bioanalyzer (Roche Diagnostics).
  • Table 70 shows the cumulative antibody concentration and the concentration of anti-GPVI antibody-producing cells detected in the culture medium on each measurement day in the culture using the antibody-producing cell-containing polymer-coated crosslinked alginate gel fiber. From the culture results, it was confirmed that in the fiber culture of FB18-1-c1, FB18-2-c1 or FB18-3-c1, the amount of antibody produced increased over time.
  • Example F19-A Preparation of antibody-producing cell-containing crosslinked alginate gel fiber (Example F16-A) 3% by weight aqueous solution of compound 4-A2d and compound 11-A2f in the same manner as the formulation in Table 64 described in (Example F16-A) (containing 0.9% by weight of sodium chloride), each aqueous solution was mixed in an equal volume to prepare a chemically modified alginic acid mixed solution (F19A-M1).
  • alginic acid aqueous solution containing 0.9% sodium chloride
  • equal volumes of the mixed solution F19A-M2 and the antibody-producing medium solution described above (Example F2-A) containing anti-GPVI antibody-producing cells (2 ⁇ 10 7 cells/mL) were mixed, and cell-containing alginic acid was mixed.
  • a solution (F19A-M3) was obtained.
  • F19A-M3 60 mL of antibody-producing cell-containing crosslinked alginate gel fibers (CLA-19A) having a fiber length of about 2-4 cm were obtained by performing the operation according to (Example F16-A). Obtained.
  • Example F19-B Preparation of antibody-producing cell-containing polymer-coated cross-linked alginate gel fiber (Example F19-A)
  • the antibody-producing cell-containing cross-linked alginate gel fiber (CLA-G19) obtained in (Example F19-A) was - coating using an aqueous solution containing L-ornithine hydrobromide, 0.9% sodium chloride and 20 mmol/L barium chloride in the same manner as described above (Example F5-B)
  • antibody-producing cell-containing polymer-coated crosslinked alginate gel fibers (CFB-G19) were obtained.
  • Example FI-19 Cultivation of antibody-producing cell-containing polymer-coated crosslinked alginate gel fibers
  • a glass culture tank total volume 500 mL culture tank
  • the medium solution and the antibody-producing cell-containing polymer-coated cross-linked alginate gel fiber (CFB-G19) obtained above (Example F19-B) were added to bring the total volume of the culture system to 300 mL.
  • the culture vessel containing the antibody-producing cell-containing polymer-coated cross-linked alginate gel fibers was constantly aerated with filter-sterilized air while appropriately aerating with CO 2 so that the pH was about 7, and stirred at 37° C. and 350 rpm. Cultivation was started while One day later, the agitation speed was changed to 210 rpm, and culture was continued at 37°C at the same speed. One day after the start of culture, the culture solution was continuously replaced at about 0.5 vvd in the same manner as in (Example FI-17).
  • the antibody production medium solution described above (Example F2-A) or 0.01% antifoaming agent (manufactured by Sigma, AntiformC Emulsion, catalog number A8011) was added.
  • a medium solution was used.
  • the IgG concentration in the culture medium was measured as human IgG concentration using a Cedex Bioanalyzer (Roche Diagnostics).
  • Table 71 shows the cumulative antibody concentration and the concentration of anti-GPVI antibody-producing cells detected in the culture medium on each day of measurement in the culture using the antibody-producing cell-containing polymer-coated crosslinked alginate gel fiber.
  • a polymer-coated crosslinked alginate gel fiber in which a core layer containing cells capable of producing antibodies, physiologically active substances, etc. and a crosslinked alginate gel is coated with a cationic polymer (cationic polymer layer).
  • a method for producing the fiber and a method for culturing antibodies, physiologically active substances, etc. using the fiber it is possible to provide a method for producing the fiber and a method for culturing antibodies, physiologically active substances, etc. using the fiber.
  • a diameter of core layer of polymer-coated crosslinked alginate gel fiber
  • b thickness of cationic polymer layer of polymer-coated crosslinked alginate gel fiber
  • c outer diameter of polymer-coated crosslinked alginate gel fiber 4: cationic polymer layer 5: core layer 6: Cells (cells that can produce antibodies, physiologically active substances, etc.)
  • XX Apparatus
  • YY Extrusion cylinder 1: Inlet 2: Outlet DD: Container (e.g., beaker) (divalent metal ion-containing solution)
  • EE container (e.g., beaker) (cationic polymer-containing solution)
  • CLA cross-linked alginate gel fiber
  • CFB polymer-coated cross-linked alginate gel fiber

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Abstract

さらなる抗体の生産方法が求められていた。ここでは、抗体産生細胞（例えば、抗体産生ＣＨＯ細胞）又は生理活性物質産生細胞（例えば、膵 β 細胞由来のＭＩＮ６細胞）と架橋アルギン酸ゲルとを含むコア層を、カチオン性ポリマーで被覆したポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ、および当該ファイバを用いる抗体、生理活性物質等の製造方法が提供される。

Description

新規なポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ
　本発明は、抗体、生理活性物質等の生産用のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ、当該ファイバの製造方法、及び当該ファイバを用いる抗体、生理活性物質等の製造方法に関する。
　これ迄に、動物細胞を用いた培養による、抗体、生理活性物質（例えば、インターフェロン、エリスロポエチン、ＩＬ－２（インターロイキン－２）、ＣＳＦ（コロニー刺激因子）、ＴＮＦ（腫瘍壊死因子）、等）等の種々の生産方法が知られていた。
　抗体生産の場合、抗体産生細胞としては、ＣＨＯ細胞（チャイニーズハムスター卵巣由来）、Ｓｐ２／０細胞、ＮＳ０細胞等が宿主細胞として用いられ、とりわけ、ＣＨＯ細胞は、浮遊培養が可能な細胞であり、又細胞の増殖速度が速く、ＣＨＯ細胞の大量培養により、目的のタンパク質を大量生産することが容易なことから、抗体の製造に頻用されている。
　近年、抗体医薬品の開発・製造において、抗体医薬品の安定生産、低コスト化への取組みが求められており、それらを達成するべく、より生産性の高い効率的な生産システム（例えば、連続生産方法、小規模生産設備による必要な量の抗体産生の為の新規な培養技術、等）の開発が注目されている。
　抗体産生細胞の培養は、抗体産生細胞株をスピナーフラスコ等で細胞を起こした後に、培地組成・温度・攪拌条件・ガス交換・ｐＨ等の培養条件を制御しながら拡大培養を行い、最終的に数千から１万Ｌスケールの大規模な生産培養タンクにて培養が行われる。
　抗体産生細胞を高密度で連続培養する場合、（１）細胞と培養液の分離方法、（２）効果的な酸素の供給方法、等が問題になる場合がある。（１）および（２）について、種々の改善が図られているものの、抗体を効率的に生産させるためには、他の種々の問題を解決することが必要とされている。
　コア層に各種細胞が含まれ、シェル層がアルギン酸ゲルからなる、コア・シェル構造を有するアルギン酸ゲルファイバが知られている（特許文献１：国際公開第２０１１／０４６１０５号パンフレット、特許文献２：特開２０１６－７７２２９号公報）。
　コア層に抗体産生細胞が含まれ、シェル層がアルギン酸ゲルからなる、コア・シェル構造を有するアルギン酸ゲルファイバが知られている（特許文献３：国際公開第２０２０／０３２２２１号パンフレット）。
　中空部に各種細胞が含まれ、外殻層がアルギン酸ゲルである、アルギン酸ゲル中空ファイバが知られている（特許文献４：国際公開第２０１５／１７８４２７号パンフレット、特許文献５：特許第６６０１９３１号公報、特許文献６：特開２０１４－２３６６９８号公報）。
　細胞（具体的には、ヒト皮膚線維芽細胞、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞）を含むアルギン酸ハイドロゲルファイバを、カチオン性水溶性ポリマーで表面が被覆されたナノ粒子を含む接着剤を用いて接着したバンドルが知られている（特許文献７：国際公開第２０１９／０７８２５１号パンフレット、特許文献８：国際公開第２０１９／１２３８８６号パンフレット）。
　神経幹細胞又は神経幹細胞を含むアルギン酸ハイドロゲルファイバを、キトサンを用いてバンドル化した移植用神経束が知られている（特許文献９：特開２０１４－１３６１２８号公報）。
　接着性細胞（具体的には、Ｃ２Ｃ１２細胞）、マイクロキャリア、及びゲル状の多糖類（具体的には、アルギン酸ゲル）を含む混合物がポリアミノ酸で被覆されている細胞構造体（例えば、シート状（板状）、ファイバー状（繊維状）、球状等が挙げられる）が知られている（特許文献１０：特開２０１９－０７５９９３号公報）。
　細胞（２９３／ＧＦＰ細胞）が含まれるアルギン酸カルシウムマイクロファイバをポリ－Ｌ－リジンで被覆し、クエン酸ナトリウム溶液で溶解して得られた、管状ゲルが知られている（非特許文献１：ＰＡ－Ｌａｂ　Ｃｈｉｐ，　２００８，　８，　ｐｐ．１２５５－１２５７）。
　アルギン酸の任意の１つ以上のカルボキシル基に、アミド結合及び２価のリンカーを介して環状アルキン基又はアジド基が導入された化学修飾アルギン酸誘導体が知られている（特許文献１１：国際公開第２０１９／２４０２１９号パンフレット、特許文献１２：国際公開第２０２１／１２５２５５号パンフレット）。
　コア層に抗体産生細胞が含まれ、シェル層が化学修飾アルギン酸誘導体から形成される架橋アルギン酸ゲルからなる、コア・シェル構造を有するアルギン酸ゲルファイバが知られている（特許文献１３：国際公開第２０２１／１２５２７９号パンフレット）。
　細胞（３Ｔ３およびＨｅＬａ細胞）が含まれるアルギン酸プロピレングリコール（ｐｒｏｐｙｌｅｎｅ　ｇｌｙｃｏｌ　ａｌｇｉｎａｔｅ，　ＰＧＡ）およびアルギン酸ナトリウム溶液から形成されるコア層を、アルギン酸ナトリウム溶液から形成されるシェル層で挟み込みこんだ、異方性カルシウムアルギネートハイドロゲルファイバーを、ポリ－Ｌ－リジンで被覆したマイクロファイバーが知られている（非特許文献２：Ｓｏｆｔ　Ｍａｔｔｅｒ　（２０１２），　８（１１），　ｐｐ．３１２２－３１３０）。
　特許文献１～１３及び非特許文献１、２には、本発明の抗体、生理活性物質等の生産用のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ、当該ゲルファイバの製造方法、及び当該ゲルファイバを用いる抗体等の製造方法が開示されていないし、示唆もされていない。
国際公開第２０１１／０４６１０５号パンフレット 特開２０１６－７７２２９号公報 国際公開第２０２０／０３２２２１号パンフレット 国際公開第２０１５／１７８４２７号パンフレット 特許第６６０１９３１号公報 特開２０１４－２３６６９８号公報 国際公開第２０１９／０７８２５１号パンフレット 国際公開第２０１９／１２３８８６号パンフレット 特開２０１４－１３６１２８号公報 特開２０１９－０７５９９３号公報 国際公開第２０１９／２４０２１９号パンフレット 国際公開第２０２１／１２５２５５号パンフレット 国際公開第２０２１／１２５２７９号パンフレット
PA-Lab Chip, 2008, 8, pp.1255-1257 Soft Matter, (2012), 8(11), pp.3122-3130
　抗体、生理活性物質等を産生できる細胞を含んだアルギン酸ゲルファイバ、とりわけ、ファイバが分解することなく、長期間（例えば、７日以上、１４日以上、２８日以上等）に渡って細胞培養が可能となる、より実用的なアルギン酸ゲルファイバが求められていた。
　本発明者らは、鋭意研究を重ねた結果、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞を含み、後述の態様［１］に記載の式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体を用いて架橋反応を行うことにより得られる架橋アルギン酸ゲルを、カチオン性ポリマーで被覆することにより形成される、抗体、生理活性物質等の生産用の新規なポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバおよびその製造方法を見出した。又、当該ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバを用いて、抗体、生理活性物質等の産生細胞の培養を行ったところ、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバが分解することなく、抗体、生理活性物質等を長期間連続して産生できることを見出し本発明を完成するに至った。
　本発明により、新規なポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ及び当該ゲルファイバを用いた、抗体、生理活性物質等の生産方法が提供される。いくつかの態様では、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞、後述の態様［１］に記載の式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体等が含まれる混合液を用いて作製される架橋アルギン酸ゲルを、カチオン性ポリマーで被覆することにより、長期間連続して抗体、生理活性物質等を産生できるポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバが提供される。
　後述の実施例から、抗体産生細胞（抗ＧＰＶＩ抗体産生ＣＨＯ細胞、トシリズマブ産生ＣＨＯ細胞）又は生理活性物質産生細胞（膵β細胞由来のＭＩＮ６細胞）、式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体等が含まれる混合液を用いて形成される架橋アルギン酸ゲル（コア層とも言う）を、ポリ－Ｌ－オルニチン、ポリアリルアミン、ポリエチレンイミン、又はポリメチレン－ＣＯ－グアニジン（ＰＭＣＧ）のカチオン性ポリマー（カチオン性ポリマー層とも言う）で被覆することで、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバを作製することができ、当該ファイバを用いて培養したところ、長期間（後述の実施例において、最大４７日間）連続して、抗体またはインスリンが産生できることが分かった。本発明のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバは、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞に適した環境を提供しており、当該ファイバのコア層で産生された抗体、生理活性物質等は、コア層、カチオン性ポリマー層を連続的に透過し、当該ファイバ外に放出される特徴を有する。
　本発明のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバは、抗体、生理活性物質等の生産に適した環境を提供する。コア層に封入されている抗体、生理活性物質等の産生細胞への物理的ストレスが少なく、封入した当該細胞が長期間に渡り抗体、生理活性物質等を産生し続けることが期待される。従って、このようなファイバを用いた抗体、生理活性物質等の製造方法は、抗体、生理活性物質等の生産効率を飛躍的に向上させることが期待できる。例えば、抗体生産の場合、大規模な培養タンクを要する抗体の浮遊培養とは異なり、小規模の生産設備にて抗体を製造することも期待される。少量・多種品目の抗体医薬品製造にも適した次世代型抗体医薬品の連続生産技術としても期待される。
ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの断面図である。 ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層とカチオン性ポリマー層との模式図である。 ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの製造過程の１つの態様を説明する模式図である。 ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの横断面である。コア層で産生された抗体、生理活性物質等、代謝物及び老廃物、並びに培養液（栄養源）及び酸素がカチオン性ポリマー層を透過することを説明する模式図である。 （実施例Ｆ２－Ｃ）のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＦＢ２－Ａ－５－ｃ１）の培養前の写真である。 （実施例Ｆ２－Ｃ）のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＦＢ２－Ａ－５－ｃ１）の培養後の写真である。 （実施例Ｆ３）で作製されたポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの蛍光顕微鏡での写真である。 （実施例Ｆ９）のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＦＢ９－３－ｃ３）の培養前の写真である。 （実施例Ｆ９）のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＦＢ９－３－ｃ３）の培養後の写真である。 （実施例Ｆ９）のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＦＢ９－２－ｃ２）の培養前の写真である。 （実施例Ｆ９）のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＦＢ９－２－ｃ２）の培養後の写真である。 （実施例Ｆ１６－Ａ）の架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＬＡ－１６Ａ）の写真である。 （実施例ＦＩ－１７）のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＦＢ１７－１－ｃ１）の培養後の写真である。 （実施例ＦＩ－１７）のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＦＢ１７－２－ｃ１）の培養前の写真である。 （実施例ＦＩ－１７）のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＦＢ１７－２－ｃ１）の培養後の写真である。 （実施例ＦＩ－１７）のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＦＢ１７－３－ｃ１）の培養後の写真である。 （実施例ＦＩ－１７）のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＦＢ１７－４－ｃ１）の培養前の写真である。 （実施例ＦＩ－１７）のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＦＢ１７－４－ｃ１）の培養後の写真である。 （実施例ＦＩ－１８）のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＦＢ１８－１－ｃ１）の培養前の写真である。 （実施例ＦＩ－１８）のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＦＢ１８－１－ｃ１）の培養後の写真である。 （実施例ＦＩ－１８）のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＦＢ１８－２－ｃ１）の培養後の写真である。 （実施例ＦＩ－１８）のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＦＢ１８－３－ｃ１）の培養後の写真である。 （実施例ＦＩ－１９）のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＦＢ１９－Ｇ１９）の培養前の写真である。 （実施例ＦＩ－１９）のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＦＢ１９－Ｇ１９）の培養後の写真である。
［具体的態様］
　ここでは、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ、当該ファイバの製造方法、及び当該ファイバを用いる抗体、生理活性物質等の製造方法の具体的態様について説明する。より具体的には、以下の態様［１］～［７Ｃ－２］に記載の通りである。
［１］第１の態様は、次の通りである。式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体を用いて架橋反応を行うことにより得られる架橋アルギン酸ゲルに包埋された抗体産生細胞又は生理活性物質産生細胞（本明細書中、「抗体、生理活性物質等を産生できる細胞」ともいう）を含むコア層と、前記コア層を被覆するカチオン性ポリマー層を含む、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ。又は、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞と、下記式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体を用いて架橋反応を行うことにより得られる架橋アルギン酸ゲルとを含むコア層を、カチオン性ポリマー（カチオン性ポリマー層）で被覆して得られる、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ。
［式（Ｉ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体］
　下記式（Ｉ）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000006
 ［式（Ｉ）中、（ＡＬＧ）は、アルギン酸を表わし；－ＮＨＣＯ－は、アルギン酸の任意のカルボキシル基を介したアミド結合を表わし；Ａｋｎ－Ｌ１－（Ａｋｎは環状アルキン基を表し；－Ｌ１－は、環状アルキン基（Ａｋｎ）と結合する２価のリンカーである）は、下記表：
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000007
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000008
 に記載された部分構造式（各式中、破線右側は含まない）からなる群より選択される基である］で表される化学修飾アルギン酸誘導体。
［式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体］
　下記式（ＩＩ）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000009
 ［式（ＩＩ）中、（ＡＬＧ）はアルギン酸を表わし；－ＮＨＣＯ－は、アルギン酸の任意のカルボキシル基を介したアミド結合を表わし；－Ｌ２－は、下記表：
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000010
 に記載された部分構造式（各式中、両端の破線外側は含まない）からなる群より選択されるリンカーを表わす］で表される化学修飾アルギン酸誘導体。
［１Ａ］第１Ａの態様は、次の通りである。コア層と、前記コア層の外側に配置されるカチオン性ポリマー層を含む、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバであって、前記コア層は、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞と式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体を用いて架橋が形成された架橋アルギン酸ゲルとを含み、前記カチオン性ポリマー層は、カチオン性ポリマーである、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ。式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体は、前記態様［１］に定義されたものと同じである。
［１－１－１］前記態様［１］又は［１Ａ］において、式（Ｉ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体のＡｋｎ－Ｌ１－は、好ましくは、下記表：
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000011
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000012
 に記載された部分構造式（各式中、破線右側は含まない）からなる群より選択される基である。
［１－１－２］前記態様［１］又は［１Ａ］において、式（Ｉ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体のＡｋｎ－Ｌ１－は、より好ましくは、下記表：
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000013
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000014
 に記載された部分構造式（各式中、破線右側は含まない）からなる群より選択される基である。
［１－１－３］前記態様［１］又は［１Ａ］において、式（Ｉ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体のＡｋｎ－Ｌ１－は、更に好ましくは、下記部分構造式（各式中、破線右側は含まない）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000015
 からなる群より選択される基である。
［１－１－４］前記態様［１］又は［１Ａ］において、式（Ｉ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体のＡｋｎ－Ｌ１－は、特に好ましくは、下記部分構造式（各式中、破線右側は含まない）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000016
 から選択される基である。
［１－１－５］前記態様［１］又は［１Ａ］において、式（Ｉ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体のＡｋｎ－Ｌ１－は、下記表：
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000017
 に記載された部分構造式（各式中、破線右側は含まない）からなる群より選択される基であり；
好ましくは、下記表：
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000018
 に記載された部分構造式（各式中、破線右側は含まない）からなる群より選択される基であり；
より好ましくは、下記表：
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000019
 に記載された部分構造式（各式中、破線右側は含まない）からなる群より選択される基であり；
更に好ましくは、下記部分構造式（各式中、破線右側は含まない）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000020
 から選択される基である。
［１－２－１］前記態様［１］又は［１Ａ］において、式（ＩＩ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体の－Ｌ２－は、好ましくは、下記表：
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000021
 に記載された部分構造式（各式中、両端の破線外側は含まない）からなる群より選択される基である。
［１－２－２］前記態様［１］又は［１Ａ］において、式（ＩＩ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体の－Ｌ２－は、より好ましくは、下記表：
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000022
 に記載された部分構造式（各式中、両端の破線外側は含まない）からなる群より選択される基である。
［１－２－３］前記態様［１］又は［１Ａ］において、式（ＩＩ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体の－Ｌ２－は、更に好ましくは、下記部分構造式（各式中、両端の破線外側は含まない）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000023
 からなる群より選択される基である。
［１－２－４］前記態様［１］又は［１Ａ］において、式（ＩＩ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体の－Ｌ２－は、特に好ましくは、下記部分構造式（各式中、両端の破線外側は含まない）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000024
 からなる群より選択される基である。
［１－２－５］前記態様［１］又は［１Ａ］において、式（ＩＩ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体の－Ｌ２－は、下記表：
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000025
 に記載された部分構造式（各式中、両端の破線外側は含まない）からなる群より選択される基であり；
好ましくは、下記部分構造式（各式中、破線右側は含まない）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000026
 に記載された部分構造式（各式中、両端の破線外側は含まない）からなる群より選択される基であり；
より好ましくは、下記部分構造式（各式中、破線右側は含まない）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000027
 に記載された部分構造式（各式中、両端の破線外側は含まない）からなる群より選択される基であり；
更に好ましくは、下記部分構造式（各式中、両端の破線外側は含まない）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000028
 からなる群より選択される基である。
［１－２Ａ］前記態様［１］～［１－２－５］に記載されたＡｋｎ、－Ｌ１－、－Ｌ２－の定義を適宜組み合わせた式（Ｉ）および式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を用いることにより、本発明のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層における、架橋アルギン酸ゲルの好ましい態様を任意に形成し得る。
［１Ｘ］第１Ｘの態様は、次の通りである。抗体、生理活性物質等を産生できる細胞と、下記式（Ｉ－Ａ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体及び下記式（ＩＩ－Ａ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体を用いて架橋が形成された架橋アルギン酸ゲルとを含むコア層を、カチオン性ポリマー（カチオン性ポリマー層）で被覆して得られる、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ。
［式（Ｉ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体］
下記式（Ｉ－Ａ）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000029
 ［式（Ｉ－Ａ）中、（ＡＬＧ）はアルギン酸を表わし；－ＮＨＣＯ－は、アルギン酸の任意のカルボキシル基を介したアミド結合を表わし；－Ｌ１Ａ－は、下記部分構造式：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000030
 （式中、ｘ＝１～５０であり；
式中の－ＣＨ２－は、－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｏ－、－ＮＨ－、－Ｎ（Ｃ１－３アルキル基）－、－Ｓ－、Ｃ３～８シクロアルキル環、ベンゼン環、５～６員芳香族複素環、又は５～６員非芳香族複素環等の基で１～１５個、置換されていても良く；
式中の－ＣＨ２－の水素原子は、ハロゲン原子、水酸基、アミノ基、Ｃ１－３アルキル基、－Ｏ－Ｃ１－３アルキル基、－ＮＨ（Ｃ１－３アルキル基）、－Ｎ（Ｃ１－３アルキル基）２、－ＣＯＯ－Ｍ（Ｍ＝Ｎａ、Ｋ、１／２Ｃａ、水素原子、Ｃ１－３アルキル基）、ヒドロキシＣ１－３アルキル基、Ｃ２－４アルカノイル基、－Ｓ－Ｃ１－３アルキル基、－ＳＯ２－Ｃ１－３アルキル基、フェニル基、ベンジル基、５～６員芳香族複素環、又は５～６員非芳香族複素環等の基で１～１０個、置換されていても良く；
Ａｋｙは、環状アルキン基である）（式中、両端の破線外側は含まない）］で表される化学修飾アルギン酸誘導体。
［式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体］
下記式（ＩＩ－Ａ）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000031
 ［式（ＩＩ－Ａ）中、（ＡＬＧ）はアルギン酸を表わし；－ＮＨＣＯ－は、アルギン酸の任意のカルボキシル基を介したアミド結合を表わし；－Ｌ２Ａ－は、下記部分構造式：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000032
 （式中、ｙ＝１～５０であり；
式中の－ＣＨ２－は、－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｏ－、－ＮＨ－、－Ｎ（Ｃ１－３アルキル基）－、－Ｓ－、Ｃ３～８シクロアルキル環、ベンゼン環、５～６員芳香族複素環、又は５～６員非芳香族複素環等の基で１～１５個、置換されていても良く；
式中の－ＣＨ２－の水素原子は、ハロゲン原子、水酸基、アミノ基、Ｃ１－３アルキル基、－Ｏ－Ｃ１－３アルキル基、－ＮＨ（Ｃ１－３アルキル基）、－Ｎ（Ｃ１－３アルキル基）２、－ＣＯＯ－Ｍ（Ｍ＝Ｎａ、Ｋ、１／２Ｃａ、水素原子、Ｃ１－３アルキル基）、ヒドロキシＣ１－３アルキル基、Ｃ２－４アルカノイル基、－Ｓ－Ｃ１－３アルキル基、－ＳＯ２－Ｃ１－３アルキル基、フェニル基、ベンジル基、５～６員芳香族複素環、又は５～６員非芳香族複素環等の基で１～１０個、置換されていても良い）（式中、両端の破線外側は含まない）］で表される化学修飾アルギン酸誘導体。
［１Ｙ］第１Ｙの態様は、次の通りである。コア層と、前記コア層の外側に配置されるカチオン性ポリマー層を含む、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバであって、前記コア層は、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞と式（Ｉ－Ａ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体及び式（ＩＩ－Ａ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体を用いて架橋が形成された架橋アルギン酸ゲルとを含み、前記カチオン性ポリマー層は、カチオン性ポリマーである、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ。式（Ｉ－Ａ）及び式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体は、前記態様［１Ｘ］に定義されたものと同じである。
［１Ｘ－１］前記態様［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、式（Ｉ－Ａ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体において、－Ｌ１Ａ－は、
好ましくは、ｘ＝２～４５であり、－Ｌ１Ａ－中の－ＣＨ２－は、－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｏ－、－ＮＨ－、－Ｎ（Ｃ１－３アルキル基）－、シクロヘキサン環、６員芳香族複素環、６員非芳香族複素環、ベンゼン環等の基で１～１５個、置換されていても良く、－Ｌ１Ａ－中の－ＣＨ２－の水素原子は、水酸基、アミノ基、Ｃ１－３アルキル基、－Ｏ－Ｃ１－３アルキル基、－ＮＨ（Ｃ１－３アルキル基）、－Ｎ（Ｃ１－３アルキル基）２、－ＣＯＯ－Ｍ（Ｍ＝Ｎａ、Ｋ、１／２Ｃａ、水素原子、Ｃ１－３アルキル基）等の基で１～１０個、置換されていても良く；
より好ましくは、ｘ＝２～４５であり、－Ｌ１Ａ－中の－ＣＨ２－は、－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｏ－、－ＮＨ－、－Ｎ（Ｃ１－３アルキル基）－、シクロヘキサン環、ベンゼン環等の基で１～１５個、置換されていても良く；
更に好ましくは、ｘ＝２～４５であり、－Ｌ１Ａ－中の－ＣＨ２－は、－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｏ－、－ＮＨ－、ベンゼン環等の基で１～１５個、置換されていても良く；
特に好ましくは、ｘ＝３～２５であり、－Ｌ１Ａ－中の－ＣＨ２－は、－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｏ－、－ＮＨ－、ベンゼン環等の基で１～１５個、置換されていても良く；
最も好ましくは、ｘ＝３～１５であり、－Ｌ１Ａ－中の－ＣＨ２－は、－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｏ－、－ＮＨ－、ベンゼン環等の基で１～１０個、置換されていても良く；
具体的には、例えば、－Ｌ１Ａ－は、下記部分構造式：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000033
 （各式中、両端の破線外側は含まない）から選ばれるリンカーであり；
より具体的には、－Ｌ１Ａ－は、下記部分構造式：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000034
 （各式中、両端の破線外側は含まない）から選ばれるリンカーである。
［１Ｘ－２］前記態様［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、式（Ｉ－Ａ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体において、Ａｋｙは、
好ましくは、７～９員環状アルキン基（環状アルキン基の－ＣＨ２－の水素原子は、ハロゲン原子、水酸基、アミノ基、ケト基、Ｃ１－３アルキル基、－Ｏ－Ｃ１－３アルキル基、－ＮＨ（Ｃ１－３アルキル基）、－Ｎ（Ｃ１－３アルキル基）２、－ＣＯＯ－Ｍ（Ｍ＝Ｎａ、Ｋ、１／２Ｃａ、水素原子、Ｃ１－３アルキル基）等の基から選択される基で、１～５個置換されていても良く；環状アルキン基は、Ｃ３～８シクロアルキル環、ベンゼン環、又は５～６員芳香族複素環が１～３個縮環していてもよい）であり；
より好ましくは、８員環状アルキン基（環状アルキン基の－ＣＨ２－の水素原子は、ハロゲン原子、ケト基、Ｃ１－３アルキル基、－Ｏ－Ｃ１－３アルキル基等の基から選択される基で、１～５個置換されていても良く；環状アルキン基は、シクロプロパン環、ベンゼン環、又は５員芳香族複素環が１～３個縮環していてもよい）であり；
更に好ましくは、下記部分構造式：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000035
 （式中、両端の破線右側は含まない）から選択される基であり；
特に好ましくは、下記部分構造式：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000036
 （式中、両端の破線右側は含まない）から選択される基であり；
最も好ましくは、下記部分構造式：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000037
 （式中、両端の破線右側は含まない）から選択される基である。
［１Ｘ－３］前記態様［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、式（ＩＩ－Ａ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体において、－Ｌ２Ａ－は、
好ましくは、ｙ＝５～４０であり、－Ｌ２Ａ－中の－ＣＨ２－は、－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｏ－、－ＮＨ－、－Ｎ（Ｃ１－３アルキル基）－、シクロヘキサン環、６員芳香族複素環、６員非芳香族複素環、ベンゼン環等の基で１～１５個、置換されていても良く、
－Ｌ２Ａ－中の－ＣＨ２－の水素原子は、水酸基、アミノ基、Ｃ１－３アルキル基、－Ｏ－Ｃ１－３アルキル基、－ＮＨ（Ｃ１－３アルキル基）、－Ｎ（Ｃ１－３アルキル基）２、－ＣＯＯ－Ｍ（Ｍ＝Ｎａ、Ｋ、１／２Ｃａ、水素原子、Ｃ１－３アルキル基）等の基で１～１０個、置換されていても良く；
より好ましくは、ｙ＝５～４０であり、－Ｌ２Ａ－中の－ＣＨ２－は、－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｏ－、－ＮＨ－、－Ｎ（Ｃ１－３アルキル基）－、シクロヘキサン環、ベンゼン環等の基で１～１０個、置換されていても良く；
更に好ましくは、ｙ＝５～４０であり、－Ｌ２Ａ－中の－ＣＨ２－は、－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｏ－、－ＮＨ－、－Ｎ（Ｃ１－３アルキル基）－、ベンゼン環等の基で１～１０個、置換されていても良く；
特に好ましくは、ｙ＝５～２０であり、－Ｌ２Ａ－中の－ＣＨ２－は、－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｏ－、－ＮＨ－、ベンゼン環等の基で１～１０個、置換されていても良く；
最も好ましくは、ｙ＝５～１５であり、－Ｌ２Ａ－中の－ＣＨ２－は、－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｏ－、－ＮＨ－、ベンゼン環等の基で１～１０個、置換されていても良く；
具体的には、例えば、－Ｌ２Ａ－は、下記部分構造式：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000038
 （式中、両端の破線外側は含まない）から選ばれるリンカーであり；
より具体的には、－Ｌ２Ａ－は、下記部分構造式：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000039
 （式中、両端の破線外側は含まない）から選ばれるリンカーである。
［１Ｘ－４］前記態様［１Ｘ］、［１Ｙ］、［１Ｘ－１］～［１Ｘ－３］に記載されたＡｋｙ、－Ｌ１Ａ－、－Ｌ２Ａ－の定義を適宜組み合わせた式（Ｉ－Ａ）および式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を用いることにより、本発明のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層における、架橋アルギン酸ゲルの好ましい態様を任意に形成し得る。
［１－３］前記態様［１］、［１Ａ］、［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞は、例えば、抗体（ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、マウス抗体等の各種のモノクローナル抗体）産生細胞、生理活性物質産生細胞、及び医薬品原料、化学原料、食品原料等として有用な各種の有用物質を産生できる細胞からなる群より選択される細胞である。
［１－３－１］前記態様［１］、［１Ａ］、［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる、抗体を産生できる細胞（抗体産生細胞とも言う）は、ハイブリドーマまたは抗体発現ベクターにより形質転換された培養細胞であり、その宿主として用いられる培養細胞（宿主細胞）が、例えば、ＣＨＯ細胞、ＣＨＯ細胞亜株、ＣＯＳ細胞、Ｓｐ２／０細胞、ＮＳ０細胞、ＳＰ２細胞、ＰＥＲＣ６細胞、ＹＢ２／０細胞、ＹＥ２／０細胞、１Ｒ９８３Ｆ細胞、Ｎａｍａｌｗａ細胞、Ｗｉｌ－２細胞、Ｊｕｒｋａｔ細胞、Ｖｅｒｏ細胞、Ｍｏｌｔ－４細胞、ＨＥＫ２９３細胞、ＢＨＫ細胞、ＨＴ－１０８０細胞、ＫＧＨ６細胞、Ｐ３Ｘ６３Ａｇ８．６５３細胞、Ｃ１２７細胞、ＪＣ細胞、ＬＡ７細胞、ＺＲ－４５－３０細胞、ｈＴＥＲＴ細胞、ＮＭ２Ｃ５細胞、ＵＡＣＣ－８１２細胞等からなる群から選択される細胞である。
［１－３－２］前記態様［１］、［１Ａ］、［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる抗体産生細胞は、好ましくは、その宿主細胞が、ＣＨＯ細胞、ＣＨＯ細胞亜株、ＣＯＳ細胞、Ｓｐ２／０細胞、ＮＳ０細胞、ＳＰ２細胞、及びＰＥＲＣ６細胞からなる群から選択される細胞であり；より好ましくは、ＣＨＯ細胞、ＣＨＯ細胞亜株、Ｓｐ２／０細胞、及びＮＳ０細胞からなる群から選択される細胞であり；更に好ましくは、ＣＨＯ細胞またはＣＨＯ細胞亜株である。
［１－３－２－１］前記態様［１－３－２］において、抗体産生細胞は、好ましくは、浮遊細胞または浮遊培養可能なように馴化された細胞または細胞亜株であり、このような細胞の好ましい例、より好ましい例、更に好ましい例は、前記態様［１－３－２］に記載の通りである。
［１－３－３］前記態様［１］、［１Ａ］、［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる抗体産生細胞は、例えば、その宿主細胞がＣＨＯ細胞である抗体産生ＣＨＯ細胞であり、例えば、ムロモナブ－ＣＤ３産生ＣＨＯ細胞、トラスツズマブ産生ＣＨＯ細胞、リツキシマブ産生ＣＨＯ細胞、パリビズマブ産生ＣＨＯ細胞、インフリキシマブ産生ＣＨＯ細胞、バシリキシマブ産生ＣＨＯ細胞、トシリズマブ産生ＣＨＯ細胞、ゲムツズマブ産生ＣＨＯ細胞、ベバシズマブ産生ＣＨＯ細胞、イブリツモマブ産生ＣＨＯ細胞、アダリムマブ産生ＣＨＯ細胞、セツキシマブ産生ＣＨＯ細胞、ラニビズマブ産生ＣＨＯ細胞、オマリズマブ産生ＣＨＯ細胞、エクリズマブ産生ＣＨＯ細胞、パニツムマブ産生ＣＨＯ細胞、ウステキヌマブ産生ＣＨＯ細胞、ゴリムマブ産生ＣＨＯ細胞、カナキヌマブ産生ＣＨＯ細胞、デノスマブ産生ＣＨＯ細胞、モガムリズマブ産生ＣＨＯ細胞、セルトリズマブ産生ＣＨＯ細胞、オファツムマブ産生ＣＨＯ細胞、ペルツズマブ産生ＣＨＯ細胞、ブレンツキシマブ産生ＣＨＯ細胞、ナタリズマブ産生ＣＨＯ細胞、ニボルマブ産生ＣＨＯ細胞、アレムツズマブ産生ＣＨＯ細胞、セクキヌマブ産生ＣＨＯ細胞、ラムシルマブ産生ＣＨＯ細胞、イピリムマブ産生ＣＨＯ細胞、エボロクマブ産生ＣＨＯ細胞、メポリズマブ産生ＣＨＯ細胞、アリロクマブ産生ＣＨＯ細胞、イキセキズマブ産生ＣＨＯ細胞、ブロダルマブ産生ＣＨＯ細胞、イダルシズマブ産生ＣＨＯ細胞、エロツズマブ産生ＣＨＯ細胞、ペムブロリズマブ産生ＣＨＯ細胞、サリルマブ産生ＣＨＯ細胞、ベズロトクスマブ産生ＣＨＯ細胞、ベリムマブ産生ＣＨＯ細胞、ダラツムマブ産生ＣＨＯ細胞、アベルマブ産生ＣＨＯ細胞、デュピルマブ産生ＣＨＯ細胞、アテゾリズマブ産生ＣＨＯ細胞、ベンラリズマブ産生ＣＨＯ細胞、イノツズマブ産生ＣＨＯ細胞、エミシズマブ産生ＣＨＯ細胞、グセルクマブ産生ＣＨＯ細胞、デュルバルマブ産生ＣＨＯ細胞、オビヌツズマブ産生ＣＨＯ細胞、ベドリズマブ産生ＣＨＯ細胞、抗ＧＰＶＩ抗体産生ＣＨＯ細胞等からなる群から選択されるＣＨＯ細胞であり；例えば、トラスツズマブ産生ＣＨＯ細胞、リツキシマブ産生ＣＨＯ細胞、インフリキシマブ産生ＣＨＯ細胞、トシリズマブ産生ＣＨＯ細胞、アダリムマブ産生ＣＨＯ細胞、ニボルマブ産生ＣＨＯ細胞、及び抗ＧＰＶＩ抗体産生ＣＨＯ細胞からなる群から選択されるＣＨＯ細胞であり；例えば、トシリズマブ産生ＣＨＯ細胞又は抗ＧＰＶＩ抗体産生ＣＨＯ細胞である。
［１－３－４］前記態様［１］、［１Ａ］、［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる生理活性物質を産生できる細胞（生理活性物質産生細胞とも言う）は、例えば、インスリン分泌細胞、膵島、膵島細胞、ドーパミン分泌細胞、脳下垂体細胞、成長ホルモン分泌細胞、副甲状腺細胞、神経成長因子分泌細胞、血液凝固因子分泌細胞、肝細胞、上皮小体細胞、エリスロポエチン分泌細胞、ノルエピネフリン分泌細胞、生理活性物質発現ベクター（遺伝子組換え細胞）等からなる群から選択される細胞である。
［１－３－５］前記態様［１］、［１Ａ］、［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる生理活性物質産生細胞は、好ましくは、インスリン分泌細胞、膵島、及び膵島細胞からなる群から選択される細胞であり；より好ましくは、膵β細胞由来のＭＩＮ６細胞である。
［１－４］前記態様［１］、［１Ａ］、［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に追加で含むことができる成分としては、例えば、アルギン酸溶液、アルギン酸ゲル、培地、培養液、コラーゲン溶液、メチルセルロース、スクロース溶液等からなる群から選択される成分である。
［１－４－１］前記態様［１］、［１Ａ］、［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に追加で含むことができる成分としては、好ましくは、アルギン酸溶液、アルギン酸ゲル、培地、及び培養液からなる群から選択される成分である。
［１－５］前記態様［１］、［１Ａ］、［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる架橋アルギン酸ゲルの形成に用いられる式（Ｉ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体のゲルろ過クロマトグラフィー法により測定した重量平均分子量は、例えば、約１００，０００Ｄａ～約３，０００，０００Ｄａの範囲であり；好ましくは約３００，０００Ｄａ～約２，５００，０００Ｄａの範囲であり、より好ましくは約５００，０００Ｄａ～約２，０００，０００Ｄａの範囲である。
［１－６］前記態様［１］、［１Ａ］、［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる架橋アルギン酸ゲルの形成に用いられる式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体のゲルろ過クロマトグラフィー法により測定した重量平均分子量は、例えば、約１００，０００Ｄａ～約３，０００，０００Ｄａの範囲であり；好ましくは約３００，０００Ｄａ～約２，５００，０００Ｄａの範囲であり、より好ましくは約５００，０００Ｄａ～約２，０００，０００Ｄａの範囲である。
［１－７］前記態様［１］又は［１Ａ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる架橋アルギン酸ゲルの形成に用いられる式（Ｉ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の反応性基（Ａｋｎ－Ｌ１－ＮＨ２基：Ａｋｎ－Ｌ１－は、前記態様［１］中の定義と同じである）の導入率は、例えば、約０．１～約３０ｍｏｌ％の範囲であり；好ましくは、約０．３～約２０ｍｏｌ％の範囲であり；より好ましくは、約０．５～約１０ｍｏｌ％の範囲である。
［１－７Ｘ］前記態様［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる架橋アルギン酸ゲルの形成に用いられる式（Ｉ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の反応性基（Ａｋｙ－Ｌ１Ａ－ＮＨ２基：Ａｋｙ、－Ｌ１Ａ－は、前記態様［１Ｘ］中の定義と同じである）の導入率は、例えば、約０．１～約３０ｍｏｌ％の範囲であり；好ましくは、約０．３～約２０ｍｏｌ％の範囲であり；より好ましくは、約０．５～約１０ｍｏｌ％の範囲である。
［１－８］前記態様［１］又は［１Ａ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる架橋アルギン酸ゲルの形成に用いられる式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の反応性基（Ｎ３－Ｌ２－ＮＨ２基：－Ｌ２－は、前記態様［１］中の定義と同じである）の導入率は、例えば、約０．１～約３０ｍｏｌ％の範囲であり；好ましくは、約０．３～約２０ｍｏｌ％の範囲であり；より好ましくは、約０．５～約１５ｍｏｌ％の範囲である。
［１－８Ｘ］前記態様［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる架橋アルギン酸ゲルの形成に用いられる式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の反応性基（Ｎ３－Ｌ２Ａ－ＮＨ２基：－Ｌ２Ａ－は、前記態様［１Ｘ］中の定義と同じである）の導入率は、例えば、約０．１～約３０ｍｏｌ％の範囲であり；好ましくは、約０．３～約２０ｍｏｌ％の範囲であり；より好ましくは、約０．５～約１５ｍｏｌ％の範囲である。
［１－９］前記態様［１］、［１Ａ］、［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に追加で含むことができるアルギン酸溶液、又はアルギン酸ゲルの形成に用いられるアルギン酸溶液の調製に用いられるアルギン酸（例えば、アルギン酸ナトリウム、等）のゲルろ過クロマトグラフィー法（ＧＰＣ法）により測定した重量平均分子量は、例えば、約１５０，０００Ｄａ～約２，５００，０００Ｄａの範囲であり；好ましくは約３００，０００Ｄａ～約２，０００，０００Ｄａの範囲であり、より好ましくは約７００，０００Ｄａ～約２，０００，０００Ｄａの範囲である。
［１－９－１］前記態様［１］、［１Ａ］、［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に追加で含むことができるアルギン酸溶液、又はアルギン酸ゲルの形成に用いられるアルギン酸溶液の調製に用いられるアルギン酸（例えば、アルギン酸ナトリウム、等）のゲルろ過クロマトグラフィー法（ＧＰＣ法）により測定した重量平均分子量は、例えば、約１５０，０００Ｄａ～約２，５００，０００Ｄａの範囲であり；好ましくは、約３００，０００Ｄａ～約２，５００，０００Ｄａの範囲；より好ましくは、約７００，０００Ｄａ～約１，４００，０００Ｄａ、約８００，０００Ｄａ～約１，５００，０００Ｄａ、約１，４００，０００～約２，０００，０００Ｄａ、または約１，５００，０００～約２，５００，０００から選ばれる範囲である。
［１－９－２］前記態様［１］、［１Ａ］、［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に追加で含むことができるアルギン酸溶液、又はアルギン酸ゲルの形成に用いられるアルギン酸溶液の調製に用いられるアルギン酸（例えば、アルギン酸ナトリウム、等）のゲルろ過クロマトグラフィー法（ＧＰＣ法）により測定した重量平均分子量は、好ましくは、約１，４００，０００～約２，０００，０００、又は約７００，０００　～約１，４００，０００、又は約８００，０００～約１，５００，０００から選ばれる範囲であり；より好ましくは、約１，４００，０００～約２，０００，０００の範囲である。
［１－１０－１］前記態様［１］又は［１Ａ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる架橋アルギン酸ゲルの形成に用いられる式（Ｉ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の溶液の濃度は、例えば、約０．０１～約１．５重量％の範囲であり；好ましくは、約０．０５～約１．０重量％の範囲であり；より好ましくは、約０．０８～約０．７５重量％の範囲である。
［１－１０－１Ｘ］前記態様［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる架橋アルギン酸ゲルの形成に用いられる式（Ｉ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の溶液の濃度は、例えば、約０．０１～約１．５重量％の範囲であり；好ましくは、約０．０５～約１．０重量％の範囲であり；より好ましくは、約０．０８～約０．７５重量％の範囲である。
［１－１０－２］前記態様［１］又は［１Ａ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる架橋アルギン酸ゲルの形成に用いられる式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の溶液の濃度は、例えば、約０．０１～約１．５重量％の範囲であり；好ましくは、約０．０５～約１．０重量％の範囲であり；より好ましくは、約０．０８～約０．７５重量％の範囲である。
［１－１０－２Ｘ］前記態様［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる架橋アルギン酸ゲルの形成に用いられる式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の溶液の濃度は、例えば、約０．０１～約１．５重量％の範囲であり；好ましくは、約０．０５～約１．０重量％の範囲であり；より好ましくは、約０．０８～約０．７５重量％の範囲である。
［１－１０－３］前記態様［１］又は［１Ａ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる架橋アルギン酸ゲルの形成に用いられる、式（Ｉ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体と式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の混合溶液の濃度は、例えば、約０．０２～約２．０重量％の範囲であり；好ましくは、約０．１～約２．０重量％の範囲であり；より好ましくは約０．１５～約１．５重量％の範囲である。
［１－１０－３Ｘ］前記態様［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる架橋アルギン酸ゲルの形成に用いられる、式（Ｉ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体と式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の混合溶液の濃度は、例えば、約０．０２～約２．０重量％の範囲であり；好ましくは、約０．１～約２．０重量％の範囲であり；より好ましくは約０．１５～約１．５重量％の範囲である。
［１－１０－４］前記態様［１］、［１Ａ］、［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に追加で含むことができるアルギン酸溶液、又はアルギン酸ゲルの形成に用いられるアルギン酸溶液の濃度は、例えば、０～約１．９８重量％の範囲であり；好ましくは、０～約１．８重量％の範囲であり；より好ましくは、０～約１．７重量％の範囲である。
［１－１０－４－１］前記態様［１］、［１Ａ］、［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に追加で含むことができるアルギン酸溶液、又はアルギン酸ゲルの形成に用いられるアルギン酸溶液の濃度(ＣＡＬＧ)は、例えば、０＜ＣＡＬＧ≦約１．９８重量％の範囲であり；好ましくは、０＜ＣＡＬＧ≦約１．８重量％の範囲であり；より好ましくは、０＜ＣＡＬＧ≦約１．７重量％の範囲である。
［１－１１－１］前記態様［１］又は［１Ａ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる架橋アルギン酸ゲルに、アルギン酸溶液、又はアルギン酸溶液から形成されるアルギン酸ゲルが含まれる場合、コア層の形成に用いられる式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液の濃度とアルギン酸溶液の濃度の総濃度は、好ましくは約０．５～約２．０重量％であり；より好ましくは、約１．０重量％、約１．５重量％及び約２．０重量％から選ばれる濃度である。
［１－１１－１－１］前記態様［１］又は［１Ａ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる架橋アルギン酸ゲルに、アルギン酸溶液、又はアルギン酸溶液から形成されるアルギン酸ゲルが含まれる場合、コア層の形成に用いられる式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液の濃度とアルギン酸溶液の濃度の総濃度（ＣＴＯＬ）は、例えば、０＜ＣＴＯＬ≦約２．０重量％であり；好ましくは約０．５～約２．０重量％；より好ましくは約１．０～約２．０重量％であり；更に好ましくは、約１．０重量％、約１．５重量％及び約２．０重量％から選ばれる濃度である。
［１－１１－１－１Ｘ］前記態様［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる架橋アルギン酸ゲルに、アルギン酸溶液、又はアルギン酸溶液から形成されるアルギン酸ゲルが含まれる場合、コア層の形成に用いられる式（Ｉ－Ａ）及び式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液の濃度とアルギン酸溶液の濃度の総濃度（ＣＴＯＬ）は、例えば、０＜ＣＴＯＬ≦約２．０重量％であり；好ましくは約０．５～約２．０重量％；より好ましくは約１．０～約２．０重量％であり；更に好ましくは、約１．０重量％、約１．５重量％及び約２．０重量％から選ばれる濃度である。
［１－１１－２］前記態様［１］又は［１Ａ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる架橋アルギン酸ゲルに、アルギン酸溶液、又はアルギン酸溶液から形成されるアルギン酸ゲルが含まれる場合、コア層の形成に用いられる式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液の濃度（Ｃ１（重量％））とアルギン酸溶液の濃度（Ｃ２（重量％））の組合せは、好ましくは、（Ｃ１：Ｃ２）＝（約０．２：約１．３）、（約０．５：約１．０）、（約１．０：約０．５）、（約０．６６：約１．３４）、および（約０．３４：約０．６６）からなる群から選ばれる組み合わせである。
［１－１１－２－１］前記態様［１］又は［１Ａ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる架橋アルギン酸ゲルに、アルギン酸溶液、又はアルギン酸溶液から形成されるアルギン酸ゲルが含まれる場合、コア層の形成に用いられる式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液の濃度（Ｃ１（重量％））とアルギン酸溶液の濃度（Ｃ２（重量％））の組合せは、例えば、
０＜Ｃ２（重量％）≦約１．９８（重量％）、
０＜Ｃ１（重量％）＜約２．０（重量％）－Ｃ２（重量％）、
０＜Ｃ１＋Ｃ２（重量％）≦約２．０（重量％）
で表される式を満たす範囲の組合せであり；好ましくは、（Ｃ１：Ｃ２）＝（約０．２：約１．３）、（約０．５：約１．０）、（約１．０：約０．５）、（約０．６６：約１．３４）、および（約０．３４：約０．６６）からなる群から選ばれる組み合わせである。
［１－１１－２－１Ｘ］前記態様［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる架橋アルギン酸ゲルに、アルギン酸溶液、又はアルギン酸溶液から形成されるアルギン酸ゲルが含まれる場合、コア層の形成に用いられる式（Ｉ－Ａ）及び式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液の濃度（Ｃ１ｘ（重量％））とアルギン酸溶液の濃度（Ｃ２ｘ（重量％））の組合せは、例えば、
０＜Ｃ２ｘ（重量％）≦約１．９８（重量％）、
０＜Ｃ１ｘ（重量％）＜約２．０（重量％）－Ｃ２ｘ（重量％）、
０＜Ｃ１ｘ＋Ｃ２ｘ（重量％）≦約２．０（重量％）
で表される式を満たす範囲の組合せであり；好ましくは、（Ｃ１ｘ：Ｃ２ｘ）＝（約０．２：約１．３）、（約０．５：約１．０）、（約１．０：約０．５）、（約０．６６：約１．３４）、および（約０．３４：約０．６６）からなる群から選ばれる組み合わせである。
［１－１１－３］前記態様［１］又は［１Ａ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる架橋アルギン酸ゲルに、アルギン酸溶液、又はアルギン酸溶液から形成されるアルギン酸ゲルが含まれる場合、コア層の形成に用いられる式（Ｉ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の溶液の濃度（Ｃ１Ａ（重量％））、式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の溶液の濃度（Ｃ１Ｎ（重量％））及びアルギン酸溶液の濃度（Ｃ２（重量％））の組合せは、好ましくは、（Ｃ１Ａ：Ｃ１Ｎ：Ｃ２）＝（約０．１：約０．１：約１．３）、（約０．２５：約０．２５：約１．０）、（約０．５：約０．５：約０．５）、（約０．３３：約０．３３：約１．３４）、および（約０．１７：約０．１７：約０．６６）からなる群から選ばれる組み合わせである。
［１－１１－３－１］前記態様［１］又は［１Ａ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる架橋アルギン酸ゲルに、アルギン酸溶液、又はアルギン酸溶液から形成されるアルギン酸ゲルが含まれる場合、コア層の形成に用いられる式（Ｉ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の溶液の濃度（Ｃ１Ａ（重量％））、式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の溶液の濃度（Ｃ１Ｎ（重量％））及びアルギン酸溶液の濃度（Ｃ２（重量％））の組合せは、例えば、
０＜Ｃ２（重量％）≦約１．９８（重量％）、
０＜Ｃ１Ａ（重量％）＜約２．０（重量％）－Ｃ２（重量％）、
０＜Ｃ１Ｎ（重量％）＜約２．０（重量％）－Ｃ２（重量％）、
０＜Ｃ１Ａ＋Ｃ１Ｎ＋Ｃ２（重量％）≦約２．０（重量％）
で表される式を満たす範囲の組合せであり；好ましくは、（Ｃ１Ａ：Ｃ１Ｎ：Ｃ２）＝（約０．１：約０．１：約１．３）、（約０．２５：約０．２５：約１．０）、（約０．５：約０．５：約０．５）、（約０．３３：約０．３３：約１．３４）、および（約０．１７：約０．１７：約０．６６）からなる群から選ばれる組み合わせである。
［１－１１－３－１Ｘ］前記態様［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる架橋アルギン酸ゲルに、アルギン酸溶液、又はアルギン酸溶液から形成されるアルギン酸ゲルが含まれる場合、コア層の形成に用いられる式（Ｉ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の溶液の濃度（Ｃ１Ａｘ（重量％））、式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の溶液の濃度（Ｃ１Ｎｘ（重量％））及びアルギン酸溶液の濃度（Ｃ２ｘ（重量％））の組合せは、例えば、
０＜Ｃ２ｘ（重量％）≦約１．９８（重量％）、
０＜Ｃ１Ａｘ（重量％）＜約２．０（重量％）－Ｃ２ｘ（重量％）、
０＜Ｃ１Ｎｘ（重量％）＜約２．０（重量％）－Ｃ２ｘ（重量％）、
０＜Ｃ１Ａｘ＋Ｃ１Ｎｘ＋Ｃ２ｘ（重量％）≦約２．０（重量％）
で表される式を満たす範囲の組合せであり；好ましくは、（Ｃ１Ａｘ：Ｃ１Ｎｘ：Ｃ２ｘ）＝（約０．１：約０．１：約１．３）、（約０．２５：約０．２５：約１．０）、（約０．５：約０．５：約０．５）、（約０．３３：約０．３３：約１．３４）、および（約０．１７：約０．１７：約０．６６）からなる群から選ばれる組み合わせである。
［１－１１－４］前記態様［１］又は［１Ａ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる架橋アルギン酸ゲルの形成に用いられる、式（Ｉ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の溶液および式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の溶液の混合溶液における、各誘導体の溶液の容量比（ｖ１、ｖ２）は、例えば、ｖ１＋ｖ２＝１５の比率であり、例えば、（ｖ１：ｖ２）＝（７．５：７．５）である。但し、ｖ１＋ｖ２＝１５において、０＜ｖ１＜１５、０＜ｖ２＜１５である。
［１－１１－４Ｘ］前記態様［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる架橋アルギン酸ゲルの形成に用いられる、式（Ｉ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の溶液および式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の溶液の混合溶液における、各誘導体の溶液の容量比（ｖ１ｘ、ｖ２ｘ）は、例えば、ｖ１ｘ＋ｖ２ｘ＝１５の比率であり、例えば、（ｖ１ｘ：ｖ２ｘ）＝（７．５：７．５）である。但し、ｖ１ｘ＋ｖ２ｘ＝１５において、０＜ｖ１ｘ＜１５、０＜ｖ２ｘ＜１５である。
［１－１１－５］前記態様［１］又は［１Ａ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる架橋アルギン酸ゲルに、アルギン酸溶液、又はアルギン酸溶液から形成されるアルギン酸ゲルが含まれる場合、コア層の形成に用いられる式（Ｉ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の溶液、式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の溶液、およびアルギン酸溶液の混合溶液における、各々の溶液の容量（ｖ１、ｖ２、ｖ３）の容量比は、例えば、ｖ１＋ｖ２＋ｖ３＝１５の比率であり、例えば、（ｖ１：ｖ２：ｖ３）＝（５：５：５）、（２．５：２．５：１０）、（１：１：１３）等の組み合わせである。但し、ｖ１＋ｖ２＋ｖ３＝１５において、０＜ｖ１＜１５、０＜ｖ２＜１５、０＜ｖ３＜１５である。
［１－１１－５Ｘ］前記態様［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる架橋アルギン酸ゲルに、アルギン酸溶液、又はアルギン酸溶液から形成されるアルギン酸ゲルが含まれる場合、コア層の形成に用いられる式（Ｉ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の溶液、式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の溶液、およびアルギン酸溶液の混合溶液における、各々の溶液の容量（ｖ１ｘ、ｖ２ｘ、ｖ３ｘ）の容量比は、例えば、ｖ１ｘ＋ｖ２ｘ＋ｖ３ｘ＝１５の比率であり、例えば、（ｖ１ｘ：ｖ２ｘ：ｖ３ｘ）＝（５：５：５）、（２．５：２．５：１０）、（１：１：１３）等の組み合わせである。但し、ｖ１ｘ＋ｖ２ｘ＋ｖ３ｘ＝１５において、０＜ｖ１ｘ＜１５、０＜ｖ２ｘ＜１５、０＜ｖ３ｘ＜１５である。
［１－１２］前記態様［１］又は［１Ａ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる架橋アルギン酸ゲルが、下記式（ＩＩＩ－Ｌ）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000040
  
［式（ＩＩＩ－Ｌ）中、両端の－ＣＯＮＨ－及び－ＮＨＣＯ－は、アルギン酸の任意のカルボキシル基を介したアミド結合を表わし；
－Ｘ－は、下記表： 
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000041
 に記載された部分構造式の群から選択される環状基であり（各式中、両端の破線外側は含まない）；
－Ｌ１－は、－Ｘ－が、（ＣＬ－１）または（ＣＬ－１－ｒ）の場合、下記表：
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000042
 に記載された部分構造式の群から選択される２価のリンカーであり（各式中、両端の破線外側は含まない）；
－Ｌ１－は、－Ｘ－が、（ＣＬ－２）または（ＣＬ－２－ｒ）の場合、下記表：
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000043
 に記載された部分構造式の群から選択される２価のリンカーであり（各式中、両端の破線外側は含まない）；
－Ｌ２－は、前記態様［１］中の式（ＩＩ）の定義と同じである］で表わされる基を介した化学架橋を含むものである。
［１－１２－１］前記態様［１－１２］に記載の式（ＩＩＩ－Ｌ）において、－Ｌ１－は前記態様［１－１２］であって、好ましくは、－Ｘ－が、（ＣＬ－１）または（ＣＬ－１－ｒ）の場合、下記表：
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000044
 に記載された部分構造式の群から選択される２価のリンカーであり（各式中、両端の破線外側は含まない）；
－Ｘ－が、（ＣＬ－２）または（ＣＬ－２－ｒ）の場合、下記表：
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000045
 に記載された部分構造式の群から選択される２価のリンカーであり（各式中、両端の破線外側は含まない）；
より好ましくは、－Ｘ－が、（ＣＬ－１）または（ＣＬ－１－ｒ）の場合、下記表：
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000046
 に記載された部分構造式の群から選択される２価のリンカーであり（各式中、両端の破線外側は含まない）；
－Ｘ－が、（ＣＬ－２）または（ＣＬ－２－ｒ）の場合、下記表：
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000047
 に記載された部分構造式の群から選択される２価のリンカーであり（各式中、両端の破線外側は含まない）；
更に好ましくは、－Ｘ－が、（ＣＬ－１）または（ＣＬ－１－ｒ）の場合、下記部分構造式： 
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000048
 の群から選択される２価のリンカーであり（各式中、両端の破線外側は含まない）；
－Ｘ－が、（ＣＬ－２）または（ＣＬ－２－ｒ）の場合、下記部分構造式： 
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000049
 の群から選択される２価のリンカーであり（各式中、両端の破線外側は含まない）；
特に好ましくは、－Ｘ－が、（ＣＬ－１）または（ＣＬ－１－ｒ）の場合、下記部分構造式：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000050
 の２価のリンカーであり（各式中、両端の破線外側は含まない）；
－Ｘ－が、（ＣＬ－２）または（ＣＬ－２－ｒ）の場合、下記部分構造式：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000051
 の２価のリンカーである（各式中、両端の破線外側は含まない）。
［１－１２－２］前記態様［１－１２］に記載の式（ＩＩＩ－Ｌ）において、好ましい、より好ましい、更に好ましい、特に好ましい－Ｌ２－は、各々、前記態様［１－２－１］～［１－２－４］に記載された定義と同じである。
［１－１２－３］前記態様［１－１２］において、式（ＩＩＩ－Ｌ）で表わされる基の－Ｌ２－Ｘ－Ｌ１－の好ましい組み合わせは、下記表の式：
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000052
 の群から選択される部分構造で示される通りであり（表中の－Ｌ１－は前記態様［１－１２－１］に記載の好ましい－Ｌ１－の定義と同じであり；－Ｌ２－は前記態様［１－２－１］に記載の好ましい－Ｌ２－の定義と同じであり；－Ｘ－は前記態様［１－１２］に記載の通りである）；
より好ましくは、－Ｌ２－Ｘ－Ｌ１－の組み合わせは、下記表の式：
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000053
 の群から選択される部分構造で示される通りであり（表中の－Ｌ１－は前記態様［１－１２－１］に記載のより好ましい－Ｌ１－の定義と同じであり；－Ｌ２－は前記態様［１－２－２］に記載のより好ましい－Ｌ２－の定義と同じであり；－Ｘ－は前記態様［１－１２］に記載の通りである）；
更に好ましくは、－Ｌ２－Ｘ－Ｌ１－の組み合わせは、下記表の式：
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000054
 の群から選択される部分構造で示される通りであり（表中の－Ｌ１－は前記態様［１－１２－１］に記載の更に好ましい－Ｌ１－の定義と同じであり；－Ｌ２－は前記態様［１－２－３］に記載の更に好ましい－Ｌ２－の定義と同じであり；－Ｘ－は前記態様［１－１２］に記載の通りである）；
特に好ましくは、－Ｌ２－Ｘ－Ｌ１－の組み合わせは、下記表の式：
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000055
 の群から選択される部分構造で示される通りである（表中の－Ｌ１－は前記態様［１－１２－１］に記載の特に好ましい－Ｌ１－の定義と同じであり；－Ｌ２－は前記態様［１－２－４］に記載の特に好ましい－Ｌ２－の定義と同じであり；－Ｘ－は前記態様［１－１２］に記載の通りである）。
［１－１２Ａ］前記態様［１］又は［１Ａ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる架橋アルギン酸ゲルが、前記態様［１－１２］に記載の式（ＩＩＩ－Ｌ）［式（ＩＩＩ－Ｌ）中、両端の－ＣＯＮＨ－及び－ＮＨＣＯ－、－Ｘ－は、前記態様［１－１２］中の定義と同じであり；－Ｌ１－は、－Ｘ－が（ＣＬ－１）または（ＣＬ－１－ｒ）の場合、前記態様［１－１２］に記載の部分構造式（ＬＫ－１ａ）で表される基と同じであり；－Ｘ－が（ＣＬ－２）または（ＣＬ－２－ｒ）の場合、前記態様［１－１２］に記載の部分構造式（ＬＫ－２－１）で表される基と同じであり；－Ｌ２－は、前記態様［１］に記載の部分構造式（ＬＮ－１）、（ＬＮ－３）及び（ＬＮ－５）から選ばれる基と同じである］で表わされる基を介した化学架橋を含むものである。
［１－１２Ａ－１］前記態様［１－１２Ａ］において、－Ｘ－が（ＣＬ－１）または（ＣＬ－１－ｒ）の場合、好ましい、より好ましい、更に好ましい－Ｌ１－は、各々、前記態様［１－１２－１］に記載の部分構造式（ＬＫ－１ａ－１）、（ＬＫ－１ａ－２）、（ＬＫ－１ａ－３ａ）、（ＬＫ－１ａ－３ｂ）で表される基と同じであり；－Ｘ－が、（ＣＬ－２）または（ＣＬ－２－ｒ）の場合、好ましい、より好ましい、更に好ましい－Ｌ１－は、各々、前記態様［１－１２－１］に記載の部分構造式（ＬＫ－２－１）、（ＬＫ－２－２）、（ＬＫ－２－３）で表される基と同じであり；－Ｌ２－は、好ましくは前記態様［１－２－１］に記載の部分構造式（ＬＮ－１－１）、（ＬＮ－３－１）、（ＬＮ－５－１）で表される基と同じであり、より好ましくは前記態様［１－２－２］に記載の部分構造式（ＬＮ－１－２）、（ＬＮ－３－２）、（ＬＮ－５－２）で表される基と同じである、更に好ましくは前記態様［１－２－３］に記載の部分構造式（ＬＮ－１－３）、（ＬＮ－３－３ａ）、（ＬＮ－５－３ａ）で表される基と同じである。
［１－１２Ａ－２］前記態様［１－１２Ａ］において、式（ＩＩＩ－Ｌ）で表わされる基の－Ｌ２－Ｘ－Ｌ１－の好ましい、より好ましい、更に好ましい組み合わせは、下記表の式：
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000056
 の群から選択される部分構造で示される通りである（表中の－Ｌ１－、－Ｌ２－は、前記態様［１－１２Ａ－１］に記載の定義と同じであり；－Ｘ－は前記態様［１－１２］に記載の通りである）。
［１－１２Ｘ］前記態様［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる架橋アルギン酸ゲルが、下記式（ＩＩＩ－Ｌｘ）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000057
 ［式（ＩＩＩ－Ｌｘ）中、両端の－ＣＯＮＨ－及び－ＮＨＣＯ－は、アルギン酸の任意のカルボキシル基を介したアミド結合を表わし；
－Ｌ１Ａ－は、前記態様［１Ｘ］中の定義と同じであり；
－Ｌ２Ａ－は、前記態様［１Ｘ］中の定義と同じであり；
－ＸＡ－は、下記部分構造式：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000058
 （式中、Ｃ５－９シクロアルケン環中の－ＣＨ２－は、－ＮＨ－、－Ｓ－、－Ｏ－、又は＝Ｃ（＝Ｏ）からなる群から選ばれる基で１～４個置換されていても良く；Ｃ５－９シクロアルケン環中の－ＣＨ２－の水素原子は、ハロゲン原子、水酸基、アミノ基、ケト基、Ｃ１－３アルキル基、－Ｏ－Ｃ１－３アルキル基、－ＮＨＣ１－３アルキル基、－Ｎ（Ｃ１－３アルキル基）２、－ＣＯＯ－Ｍ（Ｍ＝Ｎａ、Ｋ、１／２Ｃａ、水素原子、Ｃ１－３アルキル基）等の基から選択される基で、１～５個置換されていても良く；Ｃ５－９シクロアルケン環に、Ｃ３－８シクロアルキル環、ベンゼン環、５～６員芳香族複素環が１～３個縮環していてもよく；Ｃ５－９シクロアルケン環に、Ｃ３－８シクロアルキル環、ベンゼン環、５～６員芳香族複素環が縮環している場合、－Ｌ１Ａ－は、当該Ｃ３－８シクロアルキル環、ベンゼン環、５～６員芳香族複素環に置換しても良い）］で表される環状基（式中、両端の破線外側は含まない）を介して結合した架橋アルギン酸ゲル。
［１－１２Ｘ－１］前記態様［１－１２Ｘ］において、好ましい、より好ましい、更に好ましい、特に好ましい、最も好ましい－Ｌ１A－は、前記前記態様［１Ｘ－１］に記載の、－Ｌ１A－の定義と同じである。
［１－１２Ｘ－２］前記態様［１－１２Ｘ］において、好ましい、より好ましい、更に好ましい、特に好ましい、最も好ましい－Ｌ２A－は、前記前記態様［１Ｘ－３］に記載の、－Ｌ２A－の定義と同じである。
［１－１２Ｘ－３］前記態様［１－１２Ｘ］において、－ＸＡ－は好ましくは、下記部分構造式：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000059
 の群から選択される環状基であり（各式中、両端の破線外側は含まない）；
より好ましくは、下記部分構造式：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000060
 の群から選択される環状基であり（各式中、両端の破線外側は含まない）；
更に好ましくは、下記部分構造式：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000061
 の群から選択される環状基である（各式中、両端の破線外側は含まない）。
［１－１２Ｘ－４］前記態様［１－１２Ｘ］～［１－１２Ｘ－３］に記載された、－Ｌ１Ａ－、－Ｌ２Ａ－、－ＸＡ－の定義を適宜組み合わせることで、架橋アルギン酸ゲルにおける式（ＩＩＩ－Ｌｘ）の好ましい態様を任意に形成し得る。
［１－１３］前記態様［１］又は［１Ａ］において、コア層に含まれる架橋アルギン酸ゲルが、前記態様［１－１２］の式（ＩＩＩ－Ｌ）［式（ＩＩＩ－Ｌ）中、各定義は、態様［１－１２］の定義と同じである］又は前記態様［１－１２Ａ］の式（ＩＩＩ－Ｌ）［式（ＩＩＩ－Ｌ）中、各定義は、態様［１－１２Ａ］の定義と同じである］で表わされる基を介した化学架橋及び２価金属イオンを介したイオン架橋を含むものである。
［１－１３Ｘ］前記態様［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、コア層に含まれる架橋アルギン酸ゲルが、前記態様［１－１２Ｘ］の式（ＩＩＩ－Ｌｘ）［式（ＩＩＩ－Ｌｘ）中、各定義は、態様［１－１２Ｘ］の定義と同じである］で表わされる基を介した化学架橋及び２価金属イオンを介したイオン架橋を含むものである。
［１－１３Ａ］前記態様［１］、［１Ａ］、［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる架橋アルギン酸ゲルの、イオン架橋形成に用いられる２価金属イオンは、好ましくは、カルシウムイオン、マグネシウムイオン、バリウムイオン、ストロンチウムイオン及び亜鉛イオンの群から選択される２価金属イオンであり；より好ましくは、カルシウムイオン、バリウムイオン又はストロンチウムイオンであり；更に好ましくは、カルシウムイオン又はバリウムイオンである。
［１－１４］前記態様［１］、［１Ａ］、［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる架橋アルギン酸ゲルの、イオン架橋形成に用いられる２価金属イオンを含む水溶液は、塩化カルシウム水溶液、炭酸カルシウム水溶液、グルコン酸カルシウム水溶液、塩化バリウム水溶液、塩化ストロンチウム水溶液等からなる群から選択される２価金属イオンを含む水溶液を供給源とすることができ；好ましくは、塩化カルシウム水溶液又は塩化バリウム水溶液である。
［１－１５－１］前記態様［１］、［１Ａ］、［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのカチオン性ポリマー層のカチオン性ポリマーは、ポリアミノ酸、塩基性多糖類、及び塩基性ポリマー等からなる群から選択されるカチオン性ポリマーである。
［１－１５－２］前記態様［１］、［１Ａ］、［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのカチオン性ポリマー層のカチオン性ポリマーは、好ましくは、ポリアミノ酸である、ポリ－Ｌ－オルニチン（ＰＬＯ）、ポリ－Ｄ－オルニチン（ＰＤＯ）、ポリ－ＤＬ－オルニチン、ポリ－Ｄ－リジン（ＰＤＬ）、ポリ－Ｌ－リジン（ＰＬＬ）、ポリ－ＤＬ－リジン、ポリ－Ｌ－アルギニン（ＰＬＡ）、ポリ－Ｄ－アルギニン（ＰＤＡ）、ポリ－ＤＬ－アルギニン、ポリ－Ｌ－ホモアルギニン（ＰＬＨＡ）、ポリ－Ｄ－ホモアルギニン（ＰＤＨＡ）、ポリ－ＤＬ－ホモアルギニン、ポリ－Ｌ－ヒスチジン（ＰＬＨ）、ポリ－Ｄ－ヒスチジン（ＰＤＨ）およびポリ－ＤＬ－ヒスチジンからなる群から選択されるカチオン性ポリマーであり；より好ましくは、ポリ－Ｌ－オルニチンまたはポリ－Ｌ－リジンであり；更に好ましくは、ポリ－Ｌ－オルニチンである。
［１－１５－３］前記態様［１］、［１Ａ］、［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのカチオン性ポリマー層のカチオン性ポリマーは、キトサンである。
［１－１５－４］前記態様［１］、［１Ａ］、［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのカチオン性ポリマー層のカチオン性ポリマーは、ポリメチレン－ＣＯ－グアニジン（ＰＭＣＧ）、ポリアリルアミン（ＰＡＡ）、ポリビニルアミン（ＰＶＡ）、ポリエチレンイミン、アリルアミン－ジアリルアミン共重合体、およびアリルアミン－マレイン酸共重合体からなる群から選択されるカチオン性ポリマーであり；好ましくは、ポリアリルアミン（ＰＡＡ）、ポリエチレンイミン、又はポリメチレン－ＣＯ－グアニジン（ＰＭＣＧ）であり；より好ましくは、ポリエチレンイミン又はポリメチレン－ＣＯ－グアニジン（ＰＭＣＧ）である。
［１－１６］前記態様［１］、［１Ａ］、［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの外径は、例えば、約０．１～約２０００μｍ、約０．２μｍ～約２０００μｍ、約０．２～約１０００μｍ、約０．５～約１０００μｍ、約１～約１０００μｍ、約１０～約１０００μｍ、約２０～約１０００μｍ等の範囲である。
　前記態様に記載されたＡｋｎ、－Ｌ１－、－Ｌ２－、Ｘの定義を適宜組み合わせた式（Ｉ）および式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を用いることにより、前記態様のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層における、架橋アルギン酸ゲルの好ましい態様を任意に形成し得る。
　前記態様に記載されたＡｋｙ、－Ｌ１Ａ－、－Ｌ２Ａ－、ＸＡの定義を適宜組み合わせた式（Ｉ－Ａ）および式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を用いることにより、前記態様のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層における、架橋アルギン酸ゲルの好ましい態様を任意に形成し得る。
［１－１７－１］前記態様［１］又は［１Ａ］のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバは、好ましくは、架橋アルギン酸ゲルの形成に用いられる式（Ｉ）で表されるアルギン酸誘導体が前記態様［１－１－１］に記載のアルギン酸誘導体又は前記態様［１－１－５］の好ましいアルギン酸誘導体から選択され、式（ＩＩ）で表されるアルギン酸誘導体が前記態様［１－２－１］に記載のアルギン酸誘導体又は前記態様［１－２－５］の好ましいアルギン酸誘導体から選択され；抗体産生細胞が、前記態様［１－３－１］～［１－３－３］に記載の細胞から選択され；カチオン性ポリマー層が、前記態様［１－１５－１］に記載のカチオン性ポリマーから選択される、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバである。
［１－１７－１Ｂ］前記態様［１］又は［１Ａ］のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバは、好ましくは、架橋アルギン酸ゲルの形成に用いられる式（Ｉ）で表されるアルギン酸誘導体が前記態様［１－１－１］に記載のアルギン酸誘導体又は前記態様［１－１－５］の好ましいアルギン酸誘導体から選択され、式（ＩＩ）で表されるアルギン酸誘導体が前記態様［１－２－１］に記載のアルギン酸誘導体又は前記態様［１－２－５］の好ましいアルギン酸誘導体から選択され；抗体産生細胞が、態様［１Ｂ－３－１］～［１Ｂ－３－９］に記載の細胞から選択され；カチオン性ポリマー層が、前記態様［１－１５－１］に記載のカチオン性ポリマーから選択される、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバである。
［１－１７－２］前記態様［１］又は［１Ａ］のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバは、より好ましくは、架橋アルギン酸ゲルの形成に用いられる式（Ｉ）で表されるアルギン酸誘導体が前記態様［１－１－２］に記載のアルギン酸誘導体又は前記態様［１－１－５］のより好ましいアルギン酸誘導体から選択され、式（ＩＩ）で表されるアルギン酸誘導体が前記態様［１－２－２］に記載のアルギン酸誘導体又は前記態様［１－２－５］のより好ましいアルギン酸誘導体から選択され；抗体産生細胞が前記態様［１－３－２］～［１－３－３］に記載の細胞から選択され；カチオン性ポリマー層が、前記態様［１－１５－２］～［１－１５－４］に記載のカチオン性ポリマーから選択される、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバである。
［１－１７－２Ｂ］前記態様［１］又は［１Ａ］のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバは、より好ましくは、架橋アルギン酸ゲルの形成に用いられる式（Ｉ）で表されるアルギン酸誘導体が前記態様［１－１－２］に記載のアルギン酸誘導体又は前記態様［１－１－５］のより好ましいアルギン酸誘導体から選択され、式（ＩＩ）で表されるアルギン酸誘導体が前記態様［１－２－２］に記載のアルギン酸誘導体又は前記態様［１－２－５］のより好ましいアルギン酸誘導体から選択され；抗体産生細胞が態様［１Ｂ－３－２］～［１Ｂ－３－９］に記載の細胞から選択され；カチオン性ポリマー層が、前記態様［１－１５－２］～［１－１５－４］に記載のカチオン性ポリマーから選択される、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバである。
［１－１７－３］前記態様［１］又は［１Ａ］のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバは、更に好ましくは、架橋アルギン酸ゲルの形成に用いられる式（Ｉ）で表されるアルギン酸誘導体が前記態様［１－１－３］に記載のアルギン酸誘導体から選択され、式（ＩＩ）で表されるアルギン酸誘導体が前記態様［１－２－３］に記載のアルギン酸誘導体から選択され；抗体産生細胞が前記態様［１－３－２］～［１－３－３］に記載の細胞から選択され；カチオン性ポリマー層が、前記態様［１－１５－２］又は［１－１５－４］に記載のカチオン性ポリマーから選択される、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバである。
［１－１７－３Ｂ］前記態様［１］又は［１Ａ］のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバは、更に好ましくは、架橋アルギン酸ゲルの形成に用いられる式（Ｉ）で表されるアルギン酸誘導体が前記態様［１－１－３］に記載のアルギン酸誘導体から選択され、式（ＩＩ）で表されるアルギン酸誘導体が前記態様［１－２－３］に記載のアルギン酸誘導体から選択され；抗体産生細胞が態様［１Ｂ－３－３］又は［１Ｂ－３－９］に記載の細胞から選択され；カチオン性ポリマー層が、前記態様［１－１５－２］又は［１－１５－４］に記載のカチオン性ポリマーから選択される、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバである。
［１－１７－４］前記態様［１］又は［１Ａ］のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバは、特に好ましくは、架橋アルギン酸ゲルの形成に用いられる式（Ｉ）で表されるアルギン酸誘導体が前記態様［１－１－４］に記載のアルギン酸誘導体から選択され、式（ＩＩ）で表されるアルギン酸誘導体が前記態様［１－２－４］に記載のアルギン酸誘導体から選択され；抗体産生細胞は抗体産生ＣＨＯ細胞であり；カチオン性ポリマー層が、ポリ－Ｌ－オルニチン、ポリアリルアミン（ＰＡＡ）、ポリエチレンイミン、又はポリメチレン－ＣＯ－グアニジン（ＰＭＣＧ）から選択される、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバである。
［１－１７－５］前記態様［１－１７－１］～［１－１７－４］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの架橋アルギン酸ゲルは、前記態様［１－４］～［１－４－１］に記載されたいずれかの添加できる成分を含むものである。
　前記態様に記載されたポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバにおける、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞、架橋アルギン酸ゲルの形成に用いられる式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体、カチオン性ポリマー（カチオン性ポリマー層）の各要素を組み合わせることで、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの好ましい態様を任意に形成し得る。
［１－１７Ｘ－１］前記態様［１Ｘ］又は［１Ｙ］のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバは、好ましくは、架橋アルギン酸ゲルの形成に用いられるアルギン酸誘導体が、前記態様［１Ｘ－１］に記載の好ましい－Ｌ１Ａ－および前記態様［１Ｘ－２］に記載の好ましいＡｋｙを有する式（Ｉ－Ａ）で表されるアルギン酸誘導体、前記態様［１Ｘ－３］に記載の好ましい－Ｌ２Ａ－を有する式（ＩＩ－Ａ）で表されるアルギン酸誘導体から選択され；抗体産生細胞が、前記態様［１－３－１］～［１－３－３］に記載の細胞から選択され；カチオン性ポリマー層が、前記態様［１－１５－１］に記載のカチオン性ポリマーから選択される、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバである。
［１－１７Ｘ－１Ｂ］前記態様［１Ｘ］又は［１Ｙ］のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバは、好ましくは、架橋アルギン酸ゲルの形成に用いられるアルギン酸誘導体が、前記態様［１Ｘ－１］に記載の好ましい－Ｌ１Ａ－および前記態様［１Ｘ－２］に記載の好ましいＡｋｙを有する式（Ｉ－Ａ）で表されるアルギン酸誘導体、前記態様［１Ｘ－３］に記載の好ましい－Ｌ２Ａ－を有する式（ＩＩ－Ａ）で表されるアルギン酸誘導体から選択され；抗体産生細胞が、態様［１Ｂ－３－１］～［１Ｂ－３－９］に記載の細胞から選択され；カチオン性ポリマー層が、前記態様［１－１５－１］に記載のカチオン性ポリマーから選択される、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバである。
［１－１７Ｘ－２］前記態様［１Ｘ］又は［１Ｙ］のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバは、より好ましくは、架橋アルギン酸ゲルの形成に用いられるアルギン酸誘導体が、前記態様［１Ｘ－１］に記載のより好ましい－Ｌ１Ａ－および前記態様［１Ｘ－２］に記載のより好ましいＡｋｙを有する式（Ｉ－Ａ）で表されるアルギン酸誘導体、前記態様［１Ｘ－３］に記載のより好ましい－Ｌ２Ａ－を有する式（ＩＩ－Ａ）で表されるアルギン酸誘導体から選択され；抗体産生細胞が前記態様［１－３－２］～［１－３－３］に記載の細胞から選択され；カチオン性ポリマー層が、前記態様［１－１５－２］～［１－１５－４］に記載のカチオン性ポリマーから選択される、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバである。
［１－１７Ｘ－２Ｂ］前記態様［１Ｘ］又は［１Ｙ］のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバは、より好ましくは、架橋アルギン酸ゲルの形成に用いられるアルギン酸誘導体が、前記態様［１Ｘ－１］に記載のより好ましい－Ｌ１Ａ－および前記態様［１Ｘ－２］に記載のより好ましいＡｋｙを有する式（Ｉ－Ａ）で表されるアルギン酸誘導体、前記態様［１Ｘ－３］に記載のより好ましい－Ｌ２Ａ－を有する式（ＩＩ－Ａ）で表されるアルギン酸誘導体から選択され；抗体産生細胞が態様［１Ｂ－３－２］～［１Ｂ－３－９］に記載の細胞から選択され；カチオン性ポリマー層が、前記態様［１－１５－２］～［１－１５－４］に記載のカチオン性ポリマーから選択される、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバである。
［１－１７Ｘ－３］前記態様［１Ｘ］又は［１Ｙ］のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバは、更に好ましくは、架橋アルギン酸ゲルの形成に用いられるアルギン酸誘導体が、前記態様［１Ｘ－１］に記載の更に好ましい－Ｌ１Ａ－および前記態様［１Ｘ－２］に記載の更に好ましいＡｋｙを有する式（Ｉ－Ａ）で表されるアルギン酸誘導体、前記態様［１Ｘ－３］に記載の更に好ましい－Ｌ２Ａ－を有する式（ＩＩ－Ａ）で表されるアルギン酸誘導体から選択され；抗体産生細胞が前記態様［１－３－２］～［１－３－３］に記載の細胞から選択され；カチオン性ポリマー層が、前記態様［１－１５－２］又は［１－１５－４］に記載のカチオン性ポリマーから選択される、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバである。
［１－１７Ｘ－３Ｂ］前記態様［１Ｘ］又は［１Ｙ］のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバは、更に好ましくは、架橋アルギン酸ゲルの形成に用いられるアルギン酸誘導体が、前記態様［１Ｘ－１］に記載の更に好ましい－Ｌ１Ａ－および前記態様［１Ｘ－２］に記載の更に好ましいＡｋｙを有する式（Ｉ－Ａ）で表されるアルギン酸誘導体、前記態様［１Ｘ－３］に記載の更に好ましい－Ｌ２Ａ－を有する式（ＩＩ－Ａ）で表されるアルギン酸誘導体から選択され；抗体産生細胞が態様［１Ｂ－３－３］又は［１Ｂ－３－９］に記載の細胞から選択され；カチオン性ポリマー層が、前記態様［１－１５－２］又は［１－１５－４］に記載のカチオン性ポリマーから選択される、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバである。
［１－１７Ｘ－４］前記態様［１Ｘ］又は［１Ｙ］のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバは、特に好ましくは、架橋アルギン酸ゲルの形成に用いられるアルギン酸誘導体が、前記態様［１Ｘ－１］に記載の特に好ましい－Ｌ１Ａ－および前記態様［１Ｘ－２］に記載の特に好ましいＡｋｙを有する式（Ｉ－Ａ）で表されるアルギン酸誘導体、前記態様［１Ｘ－３］に記載の特に好ましい－Ｌ２Ａ－を有する式（ＩＩ－Ａ）で表されるアルギン酸誘導体から選択され；抗体産生細胞は抗体産生ＣＨＯ細胞であり；カチオン性ポリマー層が、ポリ－Ｌ－オルニチン、ポリアリルアミン（ＰＡＡ）、ポリエチレンイミン、又はポリメチレン－ＣＯ－グアニジン（ＰＭＣＧ）から選択される、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバである。
［１－１７Ｘ－５］前記態様［１Ｘ］又は［１Ｙ］のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバは、最も好ましくは、架橋アルギン酸ゲルの形成に用いられるアルギン酸誘導体が、前記態様［１Ｘ－１］に記載の最も好ましい－Ｌ１Ａ－および前記態様［１Ｘ－２］に記載の最も好ましいＡｋｙを有する式（Ｉ－Ａ）で表されるアルギン酸誘導体、前記態様［１Ｘ－３］に記載の最も好ましい－Ｌ２Ａ－を有する式（ＩＩ－Ａ）で表されるアルギン酸誘導体から選択され；抗体産生細胞は抗体産生ＣＨＯ細胞であり；カチオン性ポリマー層が、ポリ－Ｌ－オルニチン、ポリアリルアミン（ＰＡＡ）、ポリエチレンイミン、又はポリメチレン－ＣＯ－グアニジン（ＰＭＣＧ）から選択される、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバである。
［１－１７Ｘ－５－１］前記態様［１－１７Ｘ－５］において、式（Ｉ－Ａ）で表されるアルギン酸誘導体の－Ｌ１Ａ－は、具体的には、下記部分構造式：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000062
 （各式中、両端の破線外側は含まない）から選択されるリンカーであり；
Ａｋｙは、具体的には、下記部分構造式：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000063
 （式中、両端の破線右側は含まない）から選択される環状アルキン基であり；
式（ＩＩ－Ａ）で表されるアルギン酸誘導体の－Ｌ２Ａ－は、具体的には、下記部分構造式：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000064
 （式中、両端の破線外側は含まない）から選択されるリンカーである。
［１－１７Ｘ－６］前記態様［１－１７Ｘ－１］～［１－１７Ｘ－５－１］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの架橋アルギン酸ゲルは、前記態様［１－４］～［１－４－１］に記載されたいずれかの添加できる成分を含むものである。
　前記態様に記載されたポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバにおける、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞、架橋アルギン酸ゲルの形成に用いられる式（Ｉ－Ａ）及び式（ＩＩ－Ａ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体、カチオン性ポリマー（カチオン性ポリマー層）の各要素を組み合わせることで、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの好ましい態様を任意に形成し得る。
［１Ｂ－３］前記態様［１］、［１Ａ］、［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞は、例えば、抗体（ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、マウス抗体等の各種のモノクローナル抗体又はそれらのバイスペシフィック抗体、低分子化抗体、糖鎖改変抗体等の各種の改変型抗体）産生細胞、生理活性物質（酵素、サイトカイン、ホルモン、血液凝固系因子、ワクチン等）産生細胞、医薬品原料、化学原料、食品原料等として有用な各種の有用物質を産生できる細胞が挙げられ；好ましくは、抗体産生細胞または生理活性物質産生細胞である。
［１Ｂ－３－１］前記態様［１］、［１Ａ］、［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に封入できる抗体産生細胞は、抗体を産生するＢ細胞から得られたハイブリドーマ（抗体産生ハイブリドーマ）又は抗体発現ベクターにより形質転換された培養細胞（抗体産生遺伝子組換え細胞）である。
［１Ｂ－３－２］前記態様［１］、［１Ａ］、［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に封入できる抗体産生細胞は、好ましくは、抗体を産生する遺伝子組換え動物細胞である。
［１Ｂ－３－３］前記態様［１Ｂ－３－２］において、宿主として用いられる動物細胞は、ＣＨＯ細胞、ＣＨＯ細胞亜株（ＣＨＯ－Ｋ１細胞、ＣＨＯ－ＤＧ４４細胞、ＣＨＯ－ＤＸＢ１１細胞、又は糖鎖を改変させるように形質転換されたＣＨＯ細胞等）、ＣＯＳ細胞、Ｓｐ２／０細胞、ＮＳ０細胞、ＳＰ２細胞、ＰＥＲＣ６細胞、ＹＢ２／０細胞、ＹＥ２／０細胞、１Ｒ９８３Ｆ細胞、Ｎａｍａｌｗａ細胞、Ｗｉｌ－２細胞、Ｊｕｒｋａｔ細胞、Ｖｅｒｏ細胞、Ｍｏｌｔ－４細胞、ＨＥＫ２９３細胞、ＢＨＫ細胞、ＨＴ－１０８０細胞、ＫＧＨ６細胞、Ｐ３Ｘ６３Ａｇ８．６５３細胞、Ｃ１２７細胞、ＪＣ細胞、ＬＡ７細胞、ＺＲ－４５－３０細胞、ｈＴＥＲＴ細胞、ＮＭ２Ｃ５細胞、又はＵＡＣＣ－８１２細胞から選択される細胞である。
［１Ｂ－３－４］前記態様［１Ｂ－３－２］において、宿主として用いられる動物細胞は、好ましくは、ＣＨＯ細胞、ＣＨＯ細胞亜株、ＣＯＳ細胞、Ｓｐ２／０細胞、ＮＳ０細胞、ＳＰ２細胞、ＰＥＲＣ６細胞、ＨＥＫ２９３細胞、ＢＨＫ細胞、ＨＴ－１０８０細胞、又はＣ１２７細胞から選択される細胞であり；より好ましくは、ＣＨＯ細胞、ＣＨＯ細胞亜株、Ｓｐ２／０細胞、ＮＳ０細胞、ＨＥＫ２９３細胞、又はＢＨＫ細胞から選択される細胞であり；更に好ましくは、ＣＨＯ細胞またはＣＨＯ細胞亜株である。
［１Ｂ－３－５］前記態様［１］、［１Ａ］、［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に封入できる抗体産生細胞は、好ましくは、その宿主細胞がＣＨＯ細胞、ＣＨＯ細胞亜株、Ｓｐ２／０細胞、又はＮＳ０細胞から選択される細胞であり；より好ましくは、ＣＨＯ細胞又はＣＨＯ細胞亜株である。
［１Ｂ－３－６］前記態様［１］、［１Ａ］、［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に封入できる抗体産生細胞は、バイオ医薬品またはバイオ医薬品原料として用いられる抗体を産生する細胞である。
　本明細書中、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる抗体産生細胞は、好ましくは、浮遊細胞または浮遊培養可能なように馴化された細胞または亜株である。
［１Ｂ－３－７］前記態様［１］、［１Ａ］、［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に封入できる抗体産生細胞は、ムロモナブ－ＣＤ３、トラスツズマブ、リツキシマブ、パリビズマブ、インフリキシマブ、バシリキシマブ、トシリズマブ、ベバシズマブ、アダリムマブ、セツキシマブ、オマリズマブ、エクリズマブ、パニツムマブ、ウステキヌマブ、ゴリムマブ、カナキヌマブ、デノスマブ、オファツムマブ、ペルツズマブ、ナタリズマブ、ニボルマブ、アレムツズマブ、セクキヌマブ、ラムシルマブ、イピリムマブ、エボロクマブ、メポリズマブ、アリロクマブ、イキセキズマブ、ブロダルマブ、エロツズマブ、ペムブロリズマブ、サリルマブ、ベズロトクスマブ、ベリムマブ、ダラツムマブ、アベルマブ、デュピルマブ、アテゾリズマブ、エミシズマブ、グセルクマブ、デュルバルマブ、ベドリズマブ、ロモソズマブ、リサンキズマブ、ネシツムマブ、ラブリズマブ、ブロスマブ、イサツキシマブ、チルドラキズマブ、サトラリズマブ、ガルカネズマブ、ジヌツキシマブ、フレマネズマブ、エレヌマブ、カシリビマブ、イムデビマブ、アニフロルマブ、ソトロビマブ、オクレリズマブ、ナキシタマブ、アデュカヌマブ、タファシタマブ、マルジェツキシマブ、ガンテネルマブ、チラゴルマブ、クロバリマブ、ネモリズマブ、カツマクソマブ、プラモタマブ、ファリシマブ、ゲムツズマブ、イブリツモマブ、ブレンツキシマブ、イノツズマブ、ポラツズマブ、エンホルツマブ、サシツズマブ、ベランタマブ、ロンカスツキシマブ、チソツマブ、ダトポタマブ、パトリツマブ等の抗体を産生する細胞；モガムリズマブ、ベンラリズマブ、オビヌツズマブ、イネビリズマブ等の改変糖鎖を有する抗体を産生する細胞；ラニビズマブ、イダルシズマブ、ブリナツモマブ、ブロルシズマブ、アブシキシマブ、カプラシズマブ、セルトリズマブ等の抗体断片からなる低分子抗体を産生する細胞等から選択される細胞である。
［１Ｂ－３－８］前記態様［１］、［１Ａ］、［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に封入できる抗体産生細胞は、抗体産生動物細胞であり、好ましくは、抗体産生ＣＨＯ細胞、抗体産生Ｓｐ２／０細胞又は抗体産生ＮＳ０細胞であり、より好ましくは、抗体産生ＣＨＯ細胞である。
［１Ｂ－３－９］前記態様［１］、［１Ａ］、［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に封入できる抗体産生細胞は、好ましくは、その宿主細胞がＣＨＯ細胞である抗体産生ＣＨＯ細胞あり、例えば、ムロモナブ－ＣＤ３産生ＣＨＯ細胞、トラスツズマブ産生ＣＨＯ細胞、リツキシマブ産生ＣＨＯ細胞、パリビズマブ産生ＣＨＯ細胞、インフリキシマブ産生ＣＨＯ細胞、バシリキシマブ産生ＣＨＯ細胞、トシリズマブ産生ＣＨＯ細胞、ゲムツズマブ産生ＣＨＯ細胞、ベバシズマブ産生ＣＨＯ細胞、イブリツモマブ産生ＣＨＯ細胞、アダリムマブ産生ＣＨＯ細胞、セツキシマブ産生ＣＨＯ細胞、ラニビズマブ産生ＣＨＯ細胞、オマリズマブ産生ＣＨＯ細胞、エクリズマブ産生ＣＨＯ細胞、パニツムマブ産生ＣＨＯ細胞、ウステキヌマブ産生ＣＨＯ細胞、ゴリムマブ産生ＣＨＯ細胞、カナキヌマブ産生ＣＨＯ細胞、デノスマブ産生ＣＨＯ細胞、モガムリズマブ産生ＣＨＯ細胞、セルトリズマブ産生ＣＨＯ細胞、オファツムマブ産生ＣＨＯ細胞、ペルツズマブ産生ＣＨＯ細胞、ブレンツキシマブ産生ＣＨＯ細胞、ナタリズマブ産生ＣＨＯ細胞、ニボルマブ産生ＣＨＯ細胞、アレムツズマブ産生ＣＨＯ細胞、セクキヌマブ産生ＣＨＯ細胞、ラムシルマブ産生ＣＨＯ細胞、イピリムマブ産生ＣＨＯ細胞、エボロクマブ産生ＣＨＯ細胞、メポリズマブ産生ＣＨＯ細胞、アリロクマブ産生ＣＨＯ細胞、イキセキズマブ産生ＣＨＯ細胞、ブロダルマブ産生ＣＨＯ細胞、イダルシズマブ産生ＣＨＯ細胞、エロツズマブ産生ＣＨＯ細胞、ペムブロリズマブ産生ＣＨＯ細胞、サリルマブ産生ＣＨＯ細胞、ベズロトクスマブ産生ＣＨＯ細胞、ベリムマブ産生ＣＨＯ細胞、ダラツムマブ産生ＣＨＯ細胞、アベルマブ産生ＣＨＯ細胞、デュピルマブ産生ＣＨＯ細胞、アテゾリズマブ産生ＣＨＯ細胞、ベンラリズマブ産生ＣＨＯ細胞、イノツズマブ産生ＣＨＯ細胞、エミシズマブ産生ＣＨＯ細胞、グセルクマブ産生ＣＨＯ細胞、デュルバルマブ産生ＣＨＯ細胞、オビヌツズマブ産生ＣＨＯ細胞、ベドリズマブ産生ＣＨＯ細胞、ロモソズマブ産生ＣＨＯ細胞、リサンキズマブ産生ＣＨＯ細胞、ネシツムマブ産生ＣＨＯ細胞、ラブリズマブ産生ＣＨＯ細胞、ブロスマブ産生ＣＨＯ細胞、イサツキシマブ産生ＣＨＯ細胞、チルドラキズマブ産生ＣＨＯ細胞、サトラリズマブ産生ＣＨＯ細胞、ガルカネズマブ産生ＣＨＯ細胞、ジヌツキシマブ産生ＣＨＯ細胞、フレマネズマブ産生ＣＨＯ細胞、エレヌマブ産生ＣＨＯ細胞、カシリビマブ産生ＣＨＯ細胞、イムデビマブ産生ＣＨＯ細胞、アニフロルマブ産生ＣＨＯ細胞、ソトロビマブ産生ＣＨＯ細胞、オクレリズマブ産生ＣＨＯ細胞、ナキシタマブ産生ＣＨＯ細胞、アデュカヌマブ産生ＣＨＯ細胞、タファシタマブ産生ＣＨＯ細胞、マルジェツキシマブ産生ＣＨＯ細胞、ポラツズマブ産生ＣＨＯ細胞、エンホルツマブ産生ＣＨＯ細胞、サシツズマブ産生ＣＨＯ細胞、ベランタマブ産生ＣＨＯ細胞、ロンカスツキシマブ産生ＣＨＯ細胞、チソツマブ産生ＣＨＯ細胞、イネビリズマブ産生ＣＨＯ細胞、ブリナツモマブ産生ＣＨＯ細胞、ブロルシズマブ産生ＣＨＯ細胞、アブシキシマブ産生ＣＨＯ細胞、カプラシズマブ産生ＣＨＯ細胞、又は抗ＧＰＶＩ抗体産生ＣＨＯ細胞から選択される細胞であり；トラスツズマブ産生ＣＨＯ細胞、リツキシマブ産生ＣＨＯ細胞、インフリキシマブ産生ＣＨＯ細胞、トシリズマブ産生ＣＨＯ細胞、アダリムマブ産生ＣＨＯ細胞、ニボルマブ産生ＣＨＯ細胞、又は抗ＧＰＶＩ抗体産生ＣＨＯ細胞から選択される細胞である。
［１Ｂ－３－１０］前記態様［１］、［１Ａ］、［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる生理活性物質産生細胞は、前記態様［１－３－４］に記載された、生理活性物質産生細胞と同じである。
［１Ｂ－３－１１］前記態様［１］、［１Ａ］、［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる生理活性物質産生細胞は、インスリン分泌細胞、膵島、膵島細胞、又は膵β細胞由来のＭＩＮ６細胞からなる群から選択される細胞である。
［１Ｂ－３－１２］前記態様［１］、［１Ａ］、［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に封入できる生理活性物質産生細胞は、生理活性物質発現ベクターにより形質転換された培養細胞（生理活性物質産生遺伝子組換え細胞）である。
［１Ｂ－３－１３］前記態様［１］、［１Ａ］、［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に封入できる生理活性物質産生細胞は、生理活性物質を産生する遺伝子組換え動物細胞である。
［１Ｂ－３－１４］前記態様［１Ｂ－３－１３］において、宿主として用いられる動物細胞としては、ＣＨＯ細胞、ＣＨＯ細胞亜株、ＣＯＳ細胞、Ｓｐ２／０細胞、ＮＳ０細胞、ＳＰ２細胞、又はＰＥＲＣ６細胞、ＨＥＫ２９３細胞、ＢＨＫ細胞、ＨＴ－１０８０細胞、又はＣ１２７細胞から選択される細胞であり；好ましくは、ＣＨＯ細胞、ＣＨＯ細胞亜株、Ｓｐ２／０細胞、及びＮＳ０細胞、ＨＥＫ２９３細胞、又はＢＨＫ細胞から選択される細胞であり；より好ましくは、ＣＨＯ細胞、又はＣＨＯ細胞亜株である。
［１Ｂ－３－１５］前記態様［１］、［１Ａ］、［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に封入できる生理活性物質産生細胞は、好ましくは、その宿主細胞がＣＨＯ細胞、ＣＨＯ細胞亜株、ＨＥＫ２９３細胞、又はＢＨＫ細胞から選択される細胞であり；より好ましくは、ＣＨＯ細胞、又はＣＨＯ細胞亜株である。
［１Ｂ－３－１６］前記態様［１］、［１Ａ］、［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に封入できる生理活性物質産生細胞は、バイオ医薬品又はバイオ医薬品原料として用いられる生理活性物質を産生する細胞である。
［１Ｂ－３－１７］前記態様［１］、［１Ａ］、［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に封入できる生理活性物質産生細胞は、アルテプラーゼ、モンテプラーゼ、イミグルセラーゼ、ベラグルセラーゼ、アガルシダーゼ、ラロニダーゼ、アルグルコシダーゼ、アバルグルコシダーゼ、イデュルスルファーゼ、ガルスルファーゼ、エロスルファーゼ、ラスブリカーゼ、ドルナーゼ、セルリポナーゼ、グルカルピダーゼ、ヒアルロニダーゼ、アスホターゼ等の酵素を産生する細胞；エプタコグ、オクトコグ、ルリオクトコグ、ツロクトコグ、ロノクトコグ、ダモクトコグ、シモクトコグ、ノナコグ、アルブトレペノナコグ、カトリデカコグ、エフラロクトコグ、エフトレノナコグ、トロンボモデュリン、アンチトロンビン、ボニコグ、アルブミン等の血液凝固系因子及び血液関連蛋白を産生する細胞；インスリン、インスリン　リスプロ、インスリン　アスパルト、インスリン　グラルギン、インスリン　デテミル、インスリン　グルリジン、インスリン　デグルデク、ソマトロピン、ソマプシタン、メカセルミン、カルペリチド、ボソリチド、グルカゴン、ホリトロピン、コリオゴナドトロピン、デュラグルチド、リラグルチド、セマグルチド、テデュグルチド、テリパラチド、メトレレプチン等のホルモンを産生する細胞；インターフェロンアルファ－２ａ、インターフェロンアルファ－２ｂ、インターフェロンベータ－１ａ、インターフェロンベータ－１ｂ、インターフェロンガンマ－１ａ等のインターフェロンを産生する細胞；エポエチン、ダルベポエチン、ロミプロスチム等の造血因子を産生する細胞；フィルグラスチム、レノグラスチム、テセロイキン、トラフェルミン、ベルフェルミン、エタネルセプト、アフリベルセプト、デニロイキン　ジフチトクス等のサイトカイン及びそれらの受容体を産生する細胞；アバタセプト等の細胞表面抗原、細胞表面受容体及びそれらのリガンドを産生する細胞から選択される細胞である。
［１Ｂ－３－１８］前記態様［１］、［１Ａ］、［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に封入できる生理活性物質産生細胞は、生理活性物質産生動物細胞であり、好ましくは、生理活性物質産生ＣＨＯ細胞、生理活性物質産生ＨＥＫ２９３細胞又は生理活性物質産生ＢＨＫ細胞であり、より好ましくは、生理活性物質産生ＣＨＯ細胞である。
［１Ｂ－３－１９］前記態様［１］、［１Ａ］、［１Ｘ］又は［１Ｙ］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に封入できる生理活性物質産生細胞は、好ましくは、その宿主細胞がＣＨＯ細胞である生理活性物質産生細胞ＣＨＯ細胞であり、例えば、アルテプラーゼ産生ＣＨＯ細胞、アルグルコシダーゼ産生ＣＨＯ細胞、ルリオクトコグ産生ＣＨＯ細胞、デュラグルチド産生ＣＨＯ細胞、インターフェロンベータ－１ａ産生ＣＨＯ細胞、ダルベポエチン産生ＣＨＯ細胞、エタネルセプト産生ＣＨＯ細胞、アフリベルセプト産生ＣＨＯ細胞又はアバタセプト産生ＣＨＯ細胞から選択される細胞である。
［２］第２の態様は、次の通りである。抗体、生理活性物質等を産生できる細胞ならびに前記態様［１］に記載の式（Ｉ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を用いて架橋反応を行うことで得られる架橋アルギン酸ゲルを含むコア層を、カチオン性ポリマーで被覆して形成されるポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの製造方法であって、
工程（１）：抗体、生理活性物質等を産生できる細胞ならびに前記態様［１］に記載の式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体が含まれる混合溶液を、２価金属イオンを含む溶液中に射出し、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞をコア層に含む架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＬＡ）を得る工程、
工程（２）：工程（１）で得られた抗体、生理活性物質等を産生できる細胞をコア層に含む架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＬＡ）を、カチオン性ポリマーを含む溶液に接触させることで、カチオン性ポリマー層で被覆されたポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＦＢ）を得る工程、を含むことを特徴とする、製造方法である。
［２Ａ］前記態様［２］におけるポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバは、前記態様（［１］～［１－１７－５］）のいずれかに記載のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバである。
［２－１］前記態様［２］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの製造に用いられる抗体、生理活性物質等を産生できる細胞は、前記態様［１－３］～［１－３－５］のいずれか１項に記載の抗体、生理活性物質等を産生できる細胞と同じである。
［２－１－１］前記態様［２］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの製造に用いられる抗体、生理活性物質等を産生できる細胞は、前記態様［１Ｂ－３］～［１Ｂ－３－１９］のいずれか１項に記載の抗体、生理活性物質等を産生できる細胞と同じである。
［２－２］前記態様［２］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの製造に用いられる式（Ｉ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体のゲルろ過クロマトグラフィー法により測定した重量平均分子量は、例えば、約１００，０００Ｄａ～約３，０００，０００Ｄａの範囲であり；好ましくは約３００，０００Ｄａ～約２，５００，０００Ｄａの範囲であり、より好ましくは約５００，０００Ｄａ～約２，０００，０００Ｄａの範囲である。
［２－３］前記態様［２］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの製造に用いられる式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体のゲルろ過クロマトグラフィー法により測定した重量平均分子量は、例えば、約１００，０００Ｄａ～約３，０００，０００Ｄａの範囲であり；好ましくは約３００，０００Ｄａ～約２，５００，０００Ｄａの範囲であり、より好ましくは約５００，０００Ｄａ～約２，０００，０００Ｄａの範囲である。
［２－４］前記態様［２］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの製造に用いられる式（Ｉ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の反応性基：Ａｋｎ－Ｌ１－ＮＨ２基（Ａｋｎ－Ｌ１－は、前記態様［１］～［１－１－４］中の定義と同じである）の導入率は、例えば、約０．１～約３０ｍｏｌ％の範囲であり；好ましくは、約０．３～約２０ｍｏｌ％の範囲であり；より好ましくは、約０．５～約１０ｍｏｌ％の範囲である。
［２－５］前記態様［２］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの製造に用いられる式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の反応性基：Ｎ３－Ｌ２－ＮＨ２基（－Ｌ２－は、前記態様［１］、［１－２－１］～［１－２－４］中の定義と同じである）の導入率が、例えば、約０．１～約３０ｍｏｌ％の範囲であり；好ましくは、約０．３～約２０ｍｏｌ％の範囲であり；より好ましくは、約０．５～約１５ｍｏｌ％の範囲である。
［２－６］前記態様［２］において、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞ならびに式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液に添加できる成分としては、例えば、アルギン酸溶液、培地、培養液、コラーゲン溶液、メチルセルロース、スクロース溶液、又はそれらの混合物等からなる群から選択される成分であり；好ましくは、アルギン酸溶液、培地、培養液、又はそれらの混合物等からなる群から選択される成分である。
［２－７］前記態様［２］において、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞ならびに式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液に添加できるアルギン酸溶液の調製に用いられるアルギン酸（例えば、アルギン酸ナトリウム、等）のゲルろ過クロマトグラフィー法（ＧＰＣ法）により測定した重量平均分子量が、例えば、約１５０，０００Ｄａ～約２，５００，０００Ｄａの範囲であり；好ましくは約３００，０００Ｄａ～約２，０００，０００Ｄａの範囲であり、より好ましくは約７００，０００Ｄａ～約１，５００，０００Ｄａの範囲である。
［２－７Ａ］前記態様［２］のファイバ製造の工程（１）で、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞ならびに式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液に添加できるアルギン酸溶液の調製に用いられるアルギン酸（例えば、アルギン酸ナトリウム、等）のゲルろ過クロマトグラフィー法（ＧＰＣ法）により測定した重量平均分子量が、例えば、約１５０，０００Ｄａ～約２，５００，０００Ｄａの範囲であり；好ましくは、約３００，０００Ｄａ～約２，５００，０００Ｄａの範囲；より好ましくは、約７００，０００Ｄａ～約１，４００，０００Ｄａ、約８００，０００Ｄａ～約１，５００，０００Ｄａ、約１，４００，０００～約２，０００，０００Ｄａ、または約１，５００，０００～約２，５００，０００から選ばれる範囲である。
［２－７Ｂ］前記態様［２］のファイバ製造の工程（１）で、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞ならびに式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液に添加できるアルギン酸溶液の調製に用いられるアルギン酸（例えば、アルギン酸ナトリウム、等）のゲルろ過クロマトグラフィー法（ＧＰＣ法）により測定した重量平均分子量は、好ましくは、約１，４００，０００～約２，０００，０００、又は約７００，０００　～約１，４００，０００、又は約８００，０００～約１，５００，０００から選ばれる範囲であり；より好ましくは、約１，４００，０００～約２，０００，０００の範囲である。
［２－８］前記態様［２］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの製造に用いられる式（Ｉ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の溶液の濃度は、例えば、約０．０１～約１．５重量％の範囲であり；好ましくは、約０．０５～約１．０重量％の範囲であり；より好ましくは、約０．０８～約０．７５重量％の範囲である。
　本明細書中、重量％と記載した場合、ｗ／ｖ％を意味するものとする。
［２－９］前記態様［２］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの製造に用いられる式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の溶液の濃度は、例えば、約０．０１～約１．５重量％の範囲であり；好ましくは、約０．０５～約１．０重量％の範囲であり；より好ましくは、約０．０８～約０．７５重量％の範囲である。
［２－１０］前記態様［２］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの製造に用いられる式（Ｉ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体と式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の混合溶液の濃度は、例えば、約０．０２～約２．０重量％の範囲であり；好ましくは、約０．１～約２．０重量％の範囲であり；より好ましくは約０．１５～約１．５重量％の範囲である。
［２－１１］前記態様［２］において、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞ならびに式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液に添加できるアルギン酸溶液の濃度は、例えば、０～約１．９８重量％の範囲であり；好ましくは、０～約１．８重量％の範囲であり；より好ましくは、０～約１．７重量％の範囲である。
［２－１１－１］前記態様［２］において、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞ならびに式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液に添加できるアルギン酸溶液の濃度(ＣＡＬＧ)は、例えば、０＜ＣＡＬＧ≦約１．９８重量％の範囲であり；好ましくは、０＜ＣＡＬＧ≦約１．８重量％の範囲であり；より好ましくは、０＜ＣＡＬＧ≦約１．７重量％の範囲である。
［２－１１－１］前記態様［２］において、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞ならびに式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液にアルギン酸溶液を添加する場合、当該式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液の濃度とアルギン酸溶液の濃度の総濃度は、好ましくは約０．５～約２．０重量％であり；より好ましくは、約１．０重量％、約１．５重量％及び約２．０重量％から選ばれる濃度である。
［２－１１－１－１］前記態様［２］において、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞ならびに式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液にアルギン酸溶液を添加する場合、当該式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液の濃度とアルギン酸溶液の濃度の総濃度（ＣＴＯＬ）は、例えば、０＜ＣＴＯＬ≦約２．０重量％であり、
好ましくは約０．５～約２．０重量％；
より好ましくは約１．０～約２．０重量％であり；
更に好ましくは、約１．０重量％、約１．５重量％及び約２．０重量％から選ばれる濃度である。
［２－１１－２］前記態様［２］において、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞ならびに式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液にアルギン酸溶液を添加する場合、当該式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液の濃度（Ｃ１（重量％））とアルギン酸溶液の濃度（Ｃ２（重量％））の組合せは、好ましくは、（Ｃ１：Ｃ２）＝（約０．２：約１．３）、（約０．５：約１．０）、（約１．０：約０．５）、（約０．６６：約１．３４）、および（約０．３４：約０．６６）からなる群から選ばれる組み合わせである。
［２－１１－２－１］前記態様［２］において、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞ならびに式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液にアルギン酸溶液を添加する場合、当該式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液の濃度（Ｃ１（重量％））とアルギン酸溶液の濃度（Ｃ２（重量％））の組合せは、例えば、
０＜Ｃ２（重量％）≦約１．９８（重量％）、
０＜Ｃ１（重量％）＜約２．０（重量％）－Ｃ２（重量％）、
０＜Ｃ１＋Ｃ２（重量％）≦約２．０（重量％）
で表される式を満たす範囲の組合せであり、好ましくは、（Ｃ１：Ｃ２）＝（約０．２：約１．３）、（約０．５：約１．０）、（約１．０：約０．５）、（約０．６６：約１．３４）、および（約０．３４：約０．６６）からなる群から選ばれる組み合わせである。
［２－１１－３］前記態様［２］において、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞ならびに式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液にアルギン酸溶液を添加する場合、当該式（Ｉ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の溶液の濃度（Ｃ１Ａ（重量％））、式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の溶液の濃度（Ｃ１Ｎ（重量％））及びアルギン酸溶液の濃度（Ｃ２（重量％））の組合せは、好ましくは、（Ｃ１Ａ：Ｃ１Ｎ：Ｃ２）＝（約０．１：約０．１：約１．３）、（約０．２５：約０．２５：約１．０）、（約０．５：約０．５：約０．５）、（約０．３３：約０．３３：約１．３４）、および（約０．１７：約０．１７：約０．６６）からなる群から選ばれる組み合わせである。
［２－１１－３－１］前記態様［２］において、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞ならびに式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液にアルギン酸溶液を添加する場合、当該式（Ｉ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の溶液の濃度（Ｃ１Ａ（重量％））、式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の溶液の濃度（Ｃ１Ｎ（重量％））及びアルギン酸溶液の濃度（Ｃ２（重量％））の組合せは、例えば、
０＜Ｃ２（重量％）≦約１．９８（重量％）、
０＜Ｃ１Ａ（重量％）＜約２．０（重量％）－Ｃ２（重量％）、
０＜Ｃ１Ｎ（重量％）＜約２．０（重量％）－Ｃ２（重量％）、
０＜Ｃ１Ａ＋Ｃ１Ｎ＋Ｃ２（重量％）≦約２．０（重量％）
で表される式を満たす範囲の組合せであり；好ましくは、（Ｃ１Ａ：Ｃ１Ｎ：Ｃ２）＝（約０．１：約０．１：約１．３）、（約０．２５：約０．２５：約１．０）、（約０．５：約０．５：約０．５）、（約０．３３：約０．３３：約１．３４）、および（約０．１７：約０．１７：約０．６６）からなる群から選ばれる組み合わせである。
［２－１２－１］前記態様［２］において、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞ならびに式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液中の、式（Ｉ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の溶液および式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の溶液の各容量比（ｖ１、ｖ２）は、例えば、ｖ１＋ｖ２＝１５の比率であり、例えば、（ｖ１：ｖ２）＝（７．５：７．５）である。但し、ｖ１＋ｖ２＝１５において、０＜ｖ１＜１５、０＜ｖ２＜１５である。
［２－１２－２］前記態様［２］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層の形成に用いる、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞ならびに式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液に、アルギン酸溶液を添加する場合、アルギン酸溶液を添加した混合溶液における、式（Ｉ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の容量（ｖ１）、式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の溶液の容量（ｖ２）およびアルギン酸溶液の容量（ｖ３）の容量比は、例えば、ｖ１＋ｖ２＋ｖ３＝１５の比率であり、例えば、（ｖ１：ｖ２：ｖ３）＝（５：５：５）、（２．５：２．５：１０）、（１：１：１３）等の組み合わせである。但し、ｖ１＋ｖ２＋ｖ３＝１５において、０＜ｖ１＜１５、０＜ｖ２＜１５、０＜ｖ３＜１５である。
［２－１３］前記態様［２］において、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞ならびに式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体が含まれる混合溶液を射出させる溶液中に含まれる２価金属イオンとしては、カルシウムイオン、マグネシウムイオン、バリウムイオン、ストロンチウムイオン、亜鉛イオン等の群から選択される２価金属イオンであり；好ましくは、カルシウムイオン、バリウムイオン又はストロンチウムイオンであり；より好ましくは、カルシウムイオン又はバリウムイオンである。
［２－１４］前記態様［２］において、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞ならびに式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体が含まれる混合溶液を射出させる溶液は、塩化カルシウム水溶液、炭酸カルシウム水溶液、グルコン酸カルシウム水溶液、塩化バリウム水溶液、塩化ストロンチウム水溶液等からなる群から選択される２価金属イオンを含む水溶液であり；好ましくは、塩化カルシウム水溶液又は塩化バリウム水溶液である。
［２－１５］前記態様［２］または［２－１４］において、２価金属イオンの濃度は、例えば、約１ｍＭ～約１Ｍの範囲、又は約１０～約５００ｍＭの範囲であり；好ましくは、約１０～約１００ｍＭである。
［２－１６－１］前記態様［２］において、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞ならびに式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液は、例えば、図３に示されるような、導入口１および排出口２が備わる装置ＸＸ等を用い、装置ＸＸの導入口１から当該混合溶液を導入し、装置ＸＸの排出口２から、射出することができる。
［２－１６－２］前記態様［２－１６－１］において、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞ならびに式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液は、例えば、図３に示されるような、押出筒ＹＹ等を用いて、装置ＸＸの排出口２から、射出することができる。
［２－１７］前記態様［２－１６－２］において、装置ＸＸと押出筒ＹＹを合わせたものとして、例えば、注射筒を用いることができる。また、注射筒はガラス製またはプラスチック製の注射筒を用いることができる。
［２－１８］前記態様［２］、［２－１６－１］および［２－１６－２］において、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞ならびに式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液の射出速度（流速）は、例えば、約１００～約１００００μＬ／分の範囲である。
［２－１９－１］前記態様［２］において、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞を含む架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＬＡ）を接触させるカチオン性ポリマーを含む溶液は、ポリアミノ酸（塩基性アミノ酸の重合体）、塩基性多糖類、塩基性ポリマー、それらの塩等からなる群から選択されるカチオン性ポリマーを含む溶液である。
［２－１９－２］前記態様［２］において、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞を含む架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＬＡ）を接触させるカチオン性ポリマーを含む溶液は好ましくは、ポリアミノ酸である、ポリ－Ｌ－オルニチン（ＰＬＯ）、ポリ－Ｄ－オルニチン（ＰＤＯ）、ポリ－ＤＬ－オルニチン、ポリ－Ｄ－リジン（ＰＤＬ）、ポリ－Ｌ－リジン（ＰＬＬ）、ポリ－ＤＬ－リジン、ポリ－Ｌ－アルギニン（ＰＬＡ）、ポリ－Ｄ－アルギニン（ＰＤＡ）、ポリ－ＤＬ－アルギニン、ポリ－Ｌ－ホモアルギニン（ＰＬＨＡ）、ポリ－Ｄ－ホモアルギニン（ＰＤＨＡ）、ポリ－ＤＬ－ホモアルギニン、ポリ－Ｌ－ヒスチジン（ＰＬＨ）、ポリ－Ｄ－ヒスチジン（ＰＤＨ）、ポリ－ＤＬ－ヒスチジンおよびそれらの塩からなる群から選択されるカチオン性ポリマーを含む溶液であり；より好ましくは、ポリ－Ｌ－オルニチン、ポリ－Ｌ－リジンおよびそれらの塩からなる群から選ばれるカチオン性ポリマーを含む溶液であり；更に好ましくは、ポリ－Ｌ－オルニチンまたはその塩から選択されるカチオン性ポリマーを含む溶液である。
［２－１９－３］前記態様［２］において、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞を含む架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＬＡ）を接触させるカチオン性ポリマーを含む溶液は、例えば、塩基性多糖類であるキトサンまたはその塩からなる群から選択されるカチオン性ポリマーを含む溶液である。
［２－１９－４］前記態様［２］において、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞を含む架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＬＡ）を接触させるカチオン性ポリマーを含む溶液は、例えば、塩基性ポリマーであるポリメチレン－ＣＯ－グアニジン（ＰＭＣＧ）、ポリアリルアミン（ＰＡＡ）、ポリビニルアミン（ＰＶＡ）、ポリエチレンイミン、アリルアミン－ジアリルアミン共重合体、アリルアミン－マレイン酸共重合体、およびそれらの塩からなる群から選択されるカチオン性ポリマーを含む溶液である。
［２－１９－４－１］前記態様［２－１９－４］において、好ましくは、カチオン性ポリマーを含む溶液は、ポリアリルアミン（ＰＡＡ）、ポリエチレンイミン、ポリメチレン－ＣＯ－グアニジン（ＰＭＣＧ）及びそれらの塩からなる群から選択されるカチオン性ポリマーを含む溶液であり；より好ましくは、ポリエチレンイミン、ポリメチレン－ＣＯ－グアニジン（ＰＭＣＧ）、またはその塩から選択されるカチオン性ポリマーを含む溶液である。
［２－２０］前記態様［２］において、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞を含む架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＬＡ）を接触させるカチオン性ポリマーを含む溶液は、２価金属イオンを含む水溶液（例えば、塩化カルシウム水溶液、塩化バリウム水溶液、等）、緩衝液等の成分を含むことができる。
［２－２１］前記態様［２］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの製造時の温度は、例えば、約４～約３７℃の範囲である。
　前記態様に記載されたポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの製造方法および各要素を組み合わせることで、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの製造方法の好ましい態様を任意に形成し得る。
［２－２２］前記態様［２］～［２－２１］において、式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を、各々、前記態様［１Ｘ］に記載の、式（Ｉ－Ａ）及び式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体に置き換えることで、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの製造方法の好ましい態様を任意に形成し得る。
当該置き換えにより、式（Ｉ－Ａ）又は式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の濃度、容量等に係る変数は、上記態様［１－１１－２－１Ｘ］、［１－１１－３－１Ｘ］、［１－１１－４Ｘ］、［１－１１－５Ｘ］中に記載された対応する変数に置き換わるものとする。
［３］第３の態様は、次の通りである。抗体、生理活性物質等を産生できる細胞ならびに前記態様［１］に記載の式（Ｉ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を用いて架橋反応を行うことにより得られる架橋アルギン酸ゲルを含むコア層を、カチオン性ポリマーで被覆して形成されるポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバを用いる抗体、生理活性物質等の製造方法である。一態様の前記製造方法は、前記ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバを培養容器に入れ、培地を添加して前記ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバを含浸させ、培養を行うことによる、抗体、生理活性物質等の製造方法である。
［３Ａ］前記態様［３］におけるポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバは、前記態様（［１］～［１－１７－５］）のいずれかに記載のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバである。
［３Ｘ］第３Ｘの態様は、次の通りである。抗体、生理活性物質等を産生できる細胞ならびに前記態様［１Ｘ］に記載の式（Ｉ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体及び式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を用いて架橋反応を行うことにより得られる架橋アルギン酸ゲルを含むコア層を、カチオン性ポリマーで被覆して形成されるポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバを用いる抗体、生理活性物質等の製造方法である。一態様の前記製造方法は、前記ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバを培養容器に入れ、培地を添加して前記ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバを含浸させ、培養を行うことによる、抗体、生理活性物質等の製造方法である。
［３－１］前記態様［３］又は［３Ｘ］において、培養容器は、例えば、組織培養用プレート、三角フラスコ、Ｔ－フラスコ、スピナーフラスコ、培養バッグ、動物細胞培養槽等からなる群から選択される容器であり；好ましくは三角フラスコ又は動物細胞培養槽である。培養は、例えば、静置培養または振とう培養などのいずれの方法を選択してもよく、回分培養（バッチ培養）、流加培養（フェドバッチ培養）、連続培養などのいずれの方法を用いてもよいが、流加培養または連続培養が好ましい。
［３－２］前記態様［３］～［３－１］のいずれか１つにおいて、培養時の温度は、例えば、約２８℃～約３９℃の範囲であり、例えば、約３０℃～約３７℃の範囲である。
［３－３］前記態様［３］～［３－２］のいずれか１つにおいて、培養時の攪拌速度は、例えば、約５０～約５００ｒｐｍ、約５０～約３５０ｒｐｍ、約５０～約２５０ｒｐｍ、約５０～約１５０ｒｐｍ、の範囲であり、例えば、約１２５ｒｐｍである。
［３－４］前記態様［３］～［３－３］のいずれか１つにおいて、培養条件は、例えば、培養温度を約２８℃～約３９℃の範囲とし、５％ＣＯ２雰囲気下に培養装置で、約１２５ｒｐｍの攪拌速度で培養をする。
［３－５］前記態様［３］～［３－４］のいずれか１つにおいて、培養する期間は、例えば、７日間であり、又は１４日であり、又は２８日であり、又は４２日であり、又は５６日であり、又は７０日である。
　本明細書中、培養温度において、「約」と記載した場合、当該数値の±１０％迄、ある態様では当該数値の±２０％迄の値も含み得るものである。
［３－６］前記態様［３］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる抗体、生理活性物質等を産生できる細胞は、前記態様［１－３］～［１－３－５］のいずれか１項に記載の抗体、生理活性物質等を産生できる細胞と同じである。
［３－６－１］前記態様［３］において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる抗体、生理活性物質等を産生できる細胞は、前記態様［１Ｂ－３］～［１Ｂ－３－１９］のいずれか１項に記載の抗体、生理活性物質等を産生できる細胞と同じである。
［３－７］前記態様［３］～［３－６－１］のいずれか１つにおいて、細胞増殖抑制剤を添加することを含む、抗体、生理活性物質等の製造方法である。
　前記態様に記載されたポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバを用いる抗体、生理活性物質等の製造方法及び各要素を組み合わせることで、抗体、生理活性物質等の製造方法の好ましい態様を任意に形成し得る。
［４］第４の態様は、前記態様［３］～［３－７］のいずれか１つに記載の抗体の製造方法で得られるポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層で産生されたカチオン性ポリマー層を透過する抗体が、例えば、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、及びＩｇＥ等からなる群から選択されるアイソタイプを有する抗体である。
［５］第５の態様は、前記態様［３］～［３－７］のいずれか１つに記載の抗体の製造方法で得られるポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層で産生されたカチオン性ポリマー層を透過する抗体の分子量が、例えば、約４５，０００～約１，０００，０００Ｄａ、約３，０００～約１，０００，０００Ｄａ、約２０，０００～約１，０００，０００Ｄａ、約２０，０００～約４００，０００Ｄａ、約４５，０００～約４００，０００Ｄａ、約２０，０００～約２００，０００Ｄａ、約４５，０００～約２００，０００Ｄａの範囲である抗体である。
［６］第６の態様は、前記態様［３］～［３－７］のいずれか１つに記載の製造方法にて、ＭＩＮ６細胞を用いて産生されたインスリンの分子量が、例えば、約５，０００～１０，０００の範囲であるインスリンである。
［６Ｂ］第６Ｂの態様は、前記態様［３］～［３－７］に記載の製造方法にて、生理活性物質産生細胞を用いて産生された生理活性物質の分子量が、例えば、例えば、約３，０００～約１，０００，０００Ｄａ、約２０，０００～約１，０００，０００Ｄａ、約４５，０００～約１，０００，０００Ｄａ、約２０，０００～約４００，０００Ｄａ、約４５，０００～約４００，０００Ｄａ、約２０，０００～約２００，０００Ｄａ、約４５，０００～約２００，０００Ｄａの範囲である生理活性物質である。
［７］第７の態様は、前記態様［３］～［３－７］のいずれか１つに記載の抗体の製造方法において得られる抗体が、例えば、ムロモナブ－ＣＤ３産生ＣＨＯ細胞を用いてムロモナブ－ＣＤ３、トラスツズマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてトラスツズマブ、リツキシマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてリツキシマブ、パリビズマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてパリビズマブ、インフリキシマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてインフリキシマブ、バシリキシマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてバシリキシマブ、トシリズマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてトシリズマブ、ゲムツズマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてゲムツズマブ、ベバシズマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてベバシズマブ、イブリツモマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてイブリツモマブ、アダリムマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてアダリムマブ、セツキシマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてセツキシマブ、ラニビズマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてラニビズマブ、オマリズマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてオマリズマブ、エクリズマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてエクリズマブ、パニツムマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてパニツムマブ、ウステキヌマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてウステキヌマブ、ゴリムマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてゴリムマブ、カナキヌマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてカナキヌマブ、デノスマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてデノスマブ、モガムリズマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてモガムリズマブ、セルトリズマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてセルトリズマブ、オファツムマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてオファツムマブ、ペルツズマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてペルツズマブ、ブレンツキシマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてブレンツキシマブ、ナタリズマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてナタリズマブ、ニボルマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてニボルマブ、アレムツズマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてアレムツズマブ、セクキヌマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてセクキヌマブ、ラムシルマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてラムシルマブ、イピリムマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてイピリムマブ、エボロクマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてエボロクマブ、メポリズマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてメポリズマブ、アリロクマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてアリロクマブ、イキセキズマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてイキセキズマブ、ブロダルマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてブロダルマブ、イダルシズマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてイダルシズマブ、エロツズマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてエロツズマブ、ペムブロリズマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてペムブロリズマブ、サリルマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてサリルマブ、ベズロトクスマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてベズロトクスマブ、ベリムマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてベリムマブ、ダラツムマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてダラツムマブ、アベルマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてアベルマブ、デュピルマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてデュピルマブ、アテゾリズマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてアテゾリズマブ、ベンラリズマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてベンラリズマブ、イノツズマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてイノツズマブ、エミシズマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてエミシズマブ、グセルクマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてグセルクマブ、デュルバルマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてデュルバルマブ、オビヌツズマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてオビヌツズマブ、ベドリズマブ産生ＣＨＯ細胞、又は抗ＧＰＶＩ抗体産生ＣＨＯ細胞を用いて抗ＧＰＶＩ抗体である。
［７－１］前記態様［３］～［３－７］のいずれか１つに記載の抗体の製造方法において、産生可能な抗体としては、例えば、トラスツズマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてトラスツズマブ、リツキシマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてリツキシマブ、インフリキシマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてインフリキシマブ、トシリズマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてトシリズマブ、アダリムマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてアダリムマブ、ニボルマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてニボルマブ又は抗ＧＰＶＩ抗体産生ＣＨＯ細胞を用いて抗ＧＰＶＩ抗体であり；例えば、トシリズマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてトシリズマブ、又は抗ＧＰＶＩ抗体産生ＣＨＯ細胞を用いて抗ＧＰＶＩ抗体である。
［７Ｂ］第７Ｂの態様は、前記態様［３］～［３－７］に記載の抗体の製造方法において得られる抗体が、ムロモナブ－ＣＤ３、トラスツズマブ、リツキシマブ、パリビズマブ、インフリキシマブ、バシリキシマブ、トシリズマブ、ベバシズマブ、アダリムマブ、セツキシマブ、オマリズマブ、エクリズマブ、パニツムマブ、ウステキヌマブ、ゴリムマブ、カナキヌマブ、デノスマブ、オファツムマブ、ペルツズマブ、ナタリズマブ、ニボルマブ、アレムツズマブ、セクキヌマブ、ラムシルマブ、イピリムマブ、エボロクマブ、メポリズマブ、アリロクマブ、イキセキズマブ、ブロダルマブ、エロツズマブ、ペムブロリズマブ、サリルマブ、ベズロトクスマブ、ベリムマブ、ダラツムマブ、アベルマブ、デュピルマブ、アテゾリズマブ、エミシズマブ、グセルクマブ、デュルバルマブ、ベドリズマブ、ロモソズマブ、リサンキズマブ、ネシツムマブ、ラブリズマブ、ブロスマブ、イサツキシマブ、チルドラキズマブ、サトラリズマブ、ガルカネズマブ、ジヌツキシマブ、フレマネズマブ、エレヌマブ、カシリビマブ、イムデビマブ、アニフロルマブ、ソトロビマブ、オクレリズマブ、ナキシタマブ、アデュカヌマブ、タファシタマブ、マルジェツキシマブ、ガンテネルマブ、チラゴルマブ、クロバリマブ、ネモリズマブ、カツマクソマブ、プラモタマブ、ファリシマブ、ゲムツズマブ、イブリツモマブ、ブレンツキシマブ、イノツズマブ、ポラツズマブ、エンホルツマブ、サシツズマブ、ベランタマブ、ロンカスツキシマブ、チソツマブ、ダトポタマブ、パトリツマブ等の抗体；モガムリズマブ、ベンラリズマブ、オビヌツズマブ、イネビリズマブ等の改変糖鎖を有する抗体；ラニビズマブ、イダルシズマブ、ブリナツモマブ、ブロルシズマブ、アブシキシマブ、カプラシズマブ、セルトリズマブ等の抗体断片からなる低分子抗体である。
［７Ｃ］第７Ｃの態様は、前記態様［３］～［３－７］に記載の抗体の製造方法において得られる抗体が、ムロモナブ－ＣＤ３産生ＣＨＯ細胞、トラスツズマブ産生ＣＨＯ細胞、リツキシマブ産生ＣＨＯ細胞、パリビズマブ産生ＮＳ０細胞、パリビズマブ産生ＣＨＯ細胞、インフリキシマブ産生Ｓｐ２／０細胞、インフリキシマブ産生ＣＨＯ細胞、バシリキシマブ産生Ｓｐ２／０細胞、バシリキシマブ産生ＣＨＯ細胞、トシリズマブ産生ＣＨＯ細胞、ベバシズマブ産生ＣＨＯ細胞、アダリムマブ産生ＣＨＯ細胞、セツキシマブ産生Ｓｐ２／０細胞、セツキシマブ産生ＣＨＯ細胞、オマリズマブ産生ＣＨＯ細胞、エクリズマブ産生ＮＳ０細胞、エクリズマブ産生ＣＨＯ細胞、パニツムマブ産生ＣＨＯ細胞、ウステキヌマブ産生Ｓｐ２／０細胞、ウステキヌマブ産生ＣＨＯ細胞、ゴリムマブ産生Ｓｐ２／０細胞、ゴリムマブ産生ＣＨＯ細胞、カナキヌマブ産生Ｓｐ２／０細胞、カナキヌマブ産生ＣＨＯ細胞、デノスマブ産生ＣＨＯ細胞、オファツムマブ産生ＮＳ０細胞、オファツムマブ産生ＣＨＯ細胞、ペルツズマブ産生ＣＨＯ細胞、ナタリズマブ産生ＮＳ０細胞、ナタリズマブ産生ＣＨＯ細胞、ニボルマブ産生ＣＨＯ細胞、アレムツズマブ産生ＣＨＯ細胞、セクキヌマブ産生ＣＨＯ細胞、ラムシルマブ産生ＮＳ０細胞、ラムシルマブ産生ＣＨＯ細胞、イピリムマブ産生ＣＨＯ細胞、エボロクマブ産生ＣＨＯ細胞、メポリズマブ産生ＣＨＯ細胞、アリロクマブ産生ＣＨＯ細胞、イキセキズマブ産生ＣＨＯ細胞、ブロダルマブ産生ＣＨＯ細胞、エロツズマブ産生ＮＳ０細胞、エロツズマブ産生ＣＨＯ細胞、ペムブロリズマブ産生ＣＨＯ細胞、サリルマブ産生ＣＨＯ細胞、ベズロトクスマブ産生ＣＨＯ細胞、ベリムマブ産生ＮＳ０細胞、ベリムマブ産生ＣＨＯ細胞、ダラツムマブ産生ＣＨＯ細胞、アベルマブ産生ＣＨＯ細胞、デュピルマブ産生ＣＨＯ細胞、アテゾリズマブ産生ＣＨＯ細胞、エミシズマブ産生ＣＨＯ細胞、グセルクマブ産生ＣＨＯ細胞、デュルバルマブ産生ＣＨＯ細胞、ベドリズマブ産生ＣＨＯ細胞、ロモソズマブ産生ＣＨＯ細胞、リサンキズマブ産生ＣＨＯ細胞、ネシツムマブ産生ＮＳ０細胞、ネシツムマブ産生ＣＨＯ細胞、ラブリズマブ産生ＣＨＯ細胞、ブロスマブ産生ＣＨＯ細胞、イサツキシマブ産生ＣＨＯ細胞、チルドラキズマブ産生ＣＨＯ細胞、サトラリズマブ産生ＣＨＯ細胞、ガルカネズマブ産生ＣＨＯ細胞、ジヌツキシマブ産生Ｓｐ２／０細胞、ジヌツキシマブ産生ＣＨＯ細胞、フレマネズマブ産生ＣＨＯ細胞、エレヌマブ産生ＣＨＯ細胞、カシリビマブ産生ＣＨＯ細胞、イムデビマブ産生ＣＨＯ細胞、アニフロルマブ産生ＮＳ０細胞、アニフロルマブ産生ＣＨＯ細胞、ソトロビマブ産生ＣＨＯ細胞、オクレリズマブ産生ＣＨＯ細胞、ナキシタマブ産生ＣＨＯ細胞、アデュカヌマブ産生ＣＨＯ細胞、タファシタマブ産生ＣＨＯ細胞、マルジェツキシマブ産生ＣＨＯ細胞、ゲムツズマブ産生ＮＳ０細胞、ゲムツズマブ産生ＣＨＯ細胞、イブリツモマブ産生ＣＨＯ細胞、ブレンツキシマブ産生ＣＨＯ細胞、イノツズマブ産生ＣＨＯ細胞、ポラツズマブ産生ＣＨＯ細胞、エンホルツマブ産生ＣＨＯ細胞、サシツズマブ産生Ｓｐ２／０細胞、サシツズマブ産生ＣＨＯ細胞、ベランタマブ産生ＣＨＯ細胞、ロンカスツキシマブ産生ＣＨＯ細胞、チソツマブ産生ＣＨＯ細胞、モガムリズマブ産生ＣＨＯ細胞、ベンラリズマブ産生ＣＨＯ細胞、オビヌツズマブ産生ＣＨＯ細胞、イネビリズマブ産生ＣＨＯ細胞、ラニビズマブ産生ＣＨＯ細胞、イダルシズマブ産生ＣＨＯ細胞、ブリナツモマブ産生ＣＨＯ細胞、ブロルシズマブ産生ＣＨＯ細胞、アブシキシマブ産生ＣＨＯ細胞、カプラシズマブ産生ＣＨＯ細胞、セルトリズマブ産生ＣＨＯ細胞、抗ＧＰＶＩ抗体産生ＣＨＯ細胞等のＣＨＯ細胞から産生される抗体である。
［７Ｃ－１］前記態様［３］～［３－７］に記載の抗体の製造方法において得られる抗体が、ムロモナブ－ＣＤ３産生ＣＨＯ細胞、トラスツズマブ産生ＣＨＯ細胞、リツキシマブ産生ＣＨＯ細胞、パリビズマブ産生ＣＨＯ細胞、インフリキシマブ産生ＣＨＯ細胞、バシリキシマブ産生ＣＨＯ細胞、トシリズマブ産生ＣＨＯ細胞、ゲムツズマブ産生ＣＨＯ細胞、ベバシズマブ産生ＣＨＯ細胞、イブリツモマブ産生ＣＨＯ細胞、アダリムマブ産生ＣＨＯ細胞、セツキシマブ産生ＣＨＯ細胞、ラニビズマブ産生ＣＨＯ細胞、オマリズマブ産生ＣＨＯ細胞、エクリズマブ産生ＣＨＯ細胞、パニツムマブ産生ＣＨＯ細胞、ウステキヌマブ産生ＣＨＯ細胞、ゴリムマブ産生ＣＨＯ細胞、カナキヌマブ産生ＣＨＯ細胞、デノスマブ産生ＣＨＯ細胞、モガムリズマブ産生ＣＨＯ細胞、セルトリズマブ産生ＣＨＯ細胞、オファツムマブ産生ＣＨＯ細胞、ペルツズマブ産生ＣＨＯ細胞、ブレンツキシマブ産生ＣＨＯ細胞、ナタリズマブ産生ＣＨＯ細胞、ニボルマブ産生ＣＨＯ細胞、アレムツズマブ産生ＣＨＯ細胞、セクキヌマブ産生ＣＨＯ細胞、ラムシルマブ産生ＣＨＯ細胞、イピリムマブ産生ＣＨＯ細胞、エボロクマブ産生ＣＨＯ細胞、メポリズマブ産生ＣＨＯ細胞、アリロクマブ産生ＣＨＯ細胞、イキセキズマブ産生ＣＨＯ細胞、ブロダルマブ産生ＣＨＯ細胞、イダルシズマブ産生ＣＨＯ細胞、エロツズマブ産生ＣＨＯ細胞、ペムブロリズマブ産生ＣＨＯ細胞、サリルマブ産生ＣＨＯ細胞、ベズロトクスマブ産生ＣＨＯ細胞、ベリムマブ産生ＣＨＯ細胞、ダラツムマブ産生ＣＨＯ細胞、アベルマブ産生ＣＨＯ細胞、デュピルマブ産生ＣＨＯ細胞、アテゾリズマブ産生ＣＨＯ細胞、ベンラリズマブ産生ＣＨＯ細胞、イノツズマブ産生ＣＨＯ細胞、エミシズマブ産生ＣＨＯ細胞、グセルクマブ産生ＣＨＯ細胞、デュルバルマブ産生ＣＨＯ細胞、オビヌツズマブ産生ＣＨＯ細胞、ベドリズマブ産生ＣＨＯ細胞、ロモソズマブ産生ＣＨＯ細胞、リサンキズマブ産生ＣＨＯ細胞、ネシツムマブ産生ＣＨＯ細胞、ラブリズマブ産生ＣＨＯ細胞、ブロスマブ産生ＣＨＯ細胞、イサツキシマブ産生ＣＨＯ細胞、チルドラキズマブ産生ＣＨＯ細胞、サトラリズマブ産生ＣＨＯ細胞、ガルカネズマブ産生ＣＨＯ細胞、ジヌツキシマブ産生ＣＨＯ細胞、フレマネズマブ産生ＣＨＯ細胞、エレヌマブ産生ＣＨＯ細胞、カシリビマブ産生ＣＨＯ細胞、イムデビマブ産生ＣＨＯ細胞、アニフロルマブ産生ＣＨＯ細胞、ソトロビマブ産生ＣＨＯ細胞、オクレリズマブ産生ＣＨＯ細胞、ナキシタマブ産生ＣＨＯ細胞、アデュカヌマブ産生ＣＨＯ細胞、タファシタマブ産生ＣＨＯ細胞、マルジェツキシマブ産生ＣＨＯ細胞、ポラツズマブ産生ＣＨＯ細胞、エンホルツマブ産生ＣＨＯ細胞、サシツズマブ産生ＣＨＯ細胞、ベランタマブ産生ＣＨＯ細胞、ロンカスツキシマブ産生ＣＨＯ細胞、チソツマブ産生ＣＨＯ細胞、イネビリズマブ産生ＣＨＯ細胞、ブリナツモマブ産生ＣＨＯ細胞、ブロルシズマブ産生ＣＨＯ細胞、アブシキシマブ産生ＣＨＯ細胞、カプラシズマブ産生ＣＨＯ細胞、抗ＧＰＶＩ抗体産生ＣＨＯ細胞等のＣＨＯ細胞から産生される抗体である。
［７Ｃ－２］前記態様［３］～［３－７］に記載の抗体の製造方法において得られる抗体が、トラスツズマブ産生ＣＨＯ細胞、リツキシマブ産生ＣＨＯ細胞、インフリキシマブ産生ＣＨＯ細胞、トシリズマブ産生ＣＨＯ細胞、アダリムマブ産生ＣＨＯ細胞、ニボルマブ産生ＣＨＯ細胞、及び抗ＧＰＶＩ抗体産生ＣＨＯ細胞等のＣＨＯ細胞から産生される抗体であり；又はトシリズマブ産生ＣＨＯ細胞又は抗ＧＰＶＩ抗体産生ＣＨＯ細胞から産生される抗体であり； 又はトシリズマブ産生ＣＨＯ細胞から産生される抗体である。
　以下、各態様についてより詳細に説明する。尚、式（Ｉ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体、式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体は、各々、式（Ｉ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体、式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体へ置き換えることができる。
１．アルギン酸（Alginic acid）
　本明細書中の、式（Ｉ）、式（Ｉ－Ａ）、式（ＩＩ）及び式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の合成原料になるアルギン酸、及びコア層に含むことができるアルギン酸溶液又はアルギン酸ゲルの原料になるアルギン酸について、以下説明する。
　本明細書中、アルギン酸と記載する場合、アルギン酸、アルギン酸エステル、及びそれらの塩（例えば、アルギン酸ナトリウム）からなる群から選択される少なくとも１種のアルギン酸（「アルギン酸類」という場合がある）を意味する。用いられるアルギン酸は、天然由来でも合成物であってもよいが、天然由来であるのが好ましい。好ましく用いられるアルギン酸類は、レッソニア、マクロシスティス、ラミナリア、アスコフィラム、ダービリア、カジメ、アラメ、コンブなどの褐藻類から抽出される生体内吸収性の多糖類であって、Ｄ－マンヌロン酸（Ｍ）とＬ－グルロン酸（Ｇ）という２種類のウロン酸が直鎖状に重合したポリマーである。より具体的には、Ｄ－マンヌロン酸のホモポリマー画分（ＭＭ画分）、Ｌ－グルロン酸のホモポリマー画分（ＧＧ画分）、およびＤ－マンヌロン酸とＬ－グルロン酸がランダムに配列した画分（Ｍ／Ｇ画分）が任意に結合したブロック共重合体である。
　アルギン酸は、褐藻類の海藻から抽出し、精製して製造される天然多糖類の一種であり、Ｄ－マンヌロン酸（Ｍ）とＬ－グルロン酸（Ｇ）が重合したポリマーである。アルギン酸のＤ－マンヌロン酸とＬ－グルロン酸の構成比（Ｍ／Ｇ比）、すなわちゲル強度は、主に海藻等の由来となる生物の種類によって異なり、また、その生物の生育場所や季節による影響を受け、Ｍ／Ｇ比が約０．２の高Ｇ型からＭ／Ｇ比が約５の高Ｍ型まで高範囲にわたる。アルギン酸のＭ／Ｇ比、ＭとＧの配列の仕方等によってアルギン酸の物理化学的性質が異なり、また好ましい用途が異なる場合がある。アルギン酸類のゲル化能力および生成したゲルの性質は、Ｍ／Ｇ比によって影響を受け、一般的に、Ｇ比率が高い場合にはゲル強度が高くなることが知られている。Ｍ／Ｇ比は、その他にも、ゲルの硬さ、もろさ、吸水性、柔軟性などにも影響を与える。したがって、本発明で使用するアルギン酸は、その最終使用用途に応じて、適切なＭ／Ｇ比や適切な粘度のものを用いるのがよい。
　アルギン酸の工業的な製造方法には、酸法とカルシウム法などがあるが、本発明ではいずれの製法で製造されたものも使用することができる。精製により、ＨＰＬＣ法による定量値が８０～１２０質量％の範囲に含まれるものが好ましく、９０～１１０質量％の範囲に含まれるものがより好ましく、９５～１０５質量％の範囲に含まれるものがさらに好ましい。本発明においては、ＨＰＬＣ法による定量値が前記の範囲に含まれるものを高純度のアルギン酸と称する。本発明で使用するアルギン酸又はその塩は、高純度アルギン酸であることが好ましい。市販品としては、例えば、キミカアルギンシリーズとして、（株）キミカより販売されているもの、好ましくは、高純度食品・医薬品用グレードのものを購入して使用することができる。市販品を、さらに適宜精製して使用することも可能である。例えば、低エンドトキシン処理することが好ましい。精製法や低エンドトキシン処理方法は、例えば特開２００７－７５４２５号公報に記載されている方法を採用することができる。本明細書中、質量％と記載した場合、ｗ／ｗ％又はｗ／ｖ％を意味するものとする。
　本発明で使用する「アルギン酸」におけるアルギン酸の塩としては、「アルギン酸の１価金属塩」であり、アルギン酸のＤ－マンヌロン酸またはＬ－グルロン酸のカルボン酸の水素イオンを、Ｎａ+やＫ+などの１価金属イオンとイオン交換することでつくられる塩である。アルギン酸の１価金属塩としては、具体的には、アルギン酸ナトリウム、アルギン酸カリウムなどを挙げることができるが、特に、アルギン酸ナトリウムが好ましい。
　本明細書中、アルギン酸は、アルギン酸を（ＡＬＧ）として、アルギン酸の任意のカルボキシル基の１つを－ＣＯＯＨとして、（ＡＬＧ）－ＣＯＯＨと表記する場合がある。
　本発明で使用するアルギン酸は、その最終使用用途に応じて、適切な重量平均分子量を有するものを用いる。本発明で使用するアルギン酸の重量平均分子量（ＧＰＣ）は、例えば、１万～１，０００万であり；好ましくは１０万～５００万であり；より好ましくは１５万～３００万である。
　いくつかの態様では、アルギン酸は、アルギン酸ナトリウムである。アルギン酸ナトリウムは、市販品のアルギン酸ナトリウムを用いることができる。ここで、後述の実施例で用いられるアルギン酸ナトリウムは、下表に記載したＡ－１、Ａ－２、Ａ－３、Ｂ－１、Ｂ－２、及びＢ－３のアルギン酸ナトリウム（発売元　持田製薬株式会社）から選択される。各アルギン酸ナトリウムの１ｗ／ｗ％の水溶液の粘度、重量平均分子量及びＭ／Ｇ比を下記の表に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000065
　前記アルギン酸ナトリウムＡ－１、Ａ－２、Ａ－３、Ｂ－１、Ｂ－２、及びＢ－３の各物性値は、下記の各種方法により測定した。測定方法は、当該方法に限定されるものではないが、測定方法により各物性値が上記のものと異なる場合がある。
［アルギン酸ナトリウムの粘度測定］
　日本薬局方（第１６版）の粘度測定法に従い、回転粘度計法（コーンプレート型回転粘度計）を用いて測定した。具体的な測定条件は以下のとおりである。試料溶液の調製は、MilliQ水を用いて行った。測定機器は、コーンプレート型回転粘度計（粘度粘弾性測定装置レオストレスRS600（Thermo Haake GmbH）センサー：３５／１）を用いた。回転数は、１ｗ／ｗ％アルギン酸ナトリウム溶液測定時は１ｒｐｍとした。読み取り時間は、２分間測定し、開始１分から２分までの平均値とした。３回の測定の平均値を測定値とした。測定温度は２０℃とした。
［アルギン酸ナトリウムの重量平均分子量測定］
（１）ゲル浸透クロマトグラフィー（ＧＰＣ）と、（２）ＧＰＣ－ＭＡＬＳの２種類の測定法で測定した。測定条件は以下のとおりである。
［前処理方法］
　試料に溶離液を加え溶解後、０．４５μｍメンブランフィルターろ過したものを測定溶液とした。
（１）ゲル浸透クロマトグラフィー（ＧＰＣ）測定
［測定条件（相対分子量分布測定）］
　カラム：ＴＳＫｇｅｌ　ＧＭＰＷ－ＸＬ×２＋Ｇ２５００ＰＷ－ＸＬ（７．８ｍｍ　Ｉ．Ｄ．×３００ｍｍ×３本）
　　溶離液：２００ｍＭ硝酸ナトリウム水溶液
　　流量：１．０ｍＬ／ｍｉｎ
　　濃度：０．０５％
　　検出器：ＲＩ検出器
　　カラム温度：４０℃
　　注入量：２００μＬ
　　分子量標準：標準プルラン、グルコース
（２）ＧＰＣ－ＭＡＬＳ測定
［屈折率増分（ｄｎ／ｄｃ）測定（測定条件）］
　示差屈折率計：Ｏｐｔｉｌａｂ　Ｔ－ｒＥＸ
　測定波長：６５８ｎｍ
　測定温度：４０℃
　溶媒：２００ｍＭ硝酸ナトリウム水溶液
　試料濃度：０．５～２．５ｍｇ／ｍＬ（５濃度）
［測定条件（絶対分子量分布測定）］
　カラム：ＴＳＫｇｅｌ　ＧＭＰＷ－ＸＬ×２＋Ｇ２５００ＰＷ－ＸＬ（７．８ｍｍ　Ｉ．Ｄ．×３００ｍｍ×３本）
　　溶離液：２００ｍＭ硝酸ナトリウム水溶液
　　流量：１．０ｍＬ／ｍｉｎ
　　濃度：０．０５％
　　検出器：ＲＩ検出器、光散乱検出器（ＭＡＬＳ）
　　カラム温度：４０℃
　　注入量：２００μＬ
　本明細書中、アルギン酸、アルギン酸誘導体、架橋アルギン酸、及び架橋アルギン酸の分子量において、単位としてＤａ（ダルトン）を付記する場合がある。
　アルギン酸類のＤ－マンヌロン酸とＬ－グルロン酸の構成比（Ｍ／Ｇ比）は、主に海藻等の由来となる生物の種類によって異なり、また、その生物の生育場所や季節による影響を受け、Ｍ／Ｇ比が約０．２の高Ｇ型からＭ／Ｇ比が約５の高Ｍ型まで高範囲にわたる。アルギン酸類のゲル化能力および生成したゲルの性質は、Ｍ／Ｇ比によって影響を受け、一般的に、Ｇ比率が高い場合にはゲル強度が高くなることが知られている。Ｍ／Ｇ比は、その他にも、ゲルの硬さ、もろさ、吸水性、柔軟性などにも影響を与える。用いるアルギン酸類および／またはその塩のＭ／Ｇ比は、通常、０．１～４．０であり、ある態様では、０．１～３．０であり、ある態様では、０．１～２．０であり、ある態様では０．５～１．８であり、ある態様では０．８～１．２である。又、別の態様では、０．１～０．５である。
　また、本発明で使用するアルギン酸は、その最終使用用途に応じて、適切な粘度や、適切なＭ／Ｇ比のものを用いるのがよい。
　本明細書中、「～」を用いて示された数値範囲は、「～」の前後に記載される数値をそれぞれ最小値および最大値として含む範囲を示す。
　本明細書中、用いられる「アルギン酸エステル」、「アルギン酸塩」とは、特に限定されないが、架橋剤と反応させるため、架橋反応を阻害する官能基を有していないことが必要である。アルギン酸エステルとしては、好ましくは、アルギン酸プロピレングリコール、等が挙げられる。
　アルギン酸は、例えば、アルギン酸の１価の塩、アルギン酸の２価の塩の形態をとることができる。アルギン酸の１価の塩としては、例えば、アルギン酸ナトリウム、アルギン酸カリウム、アルギン酸アンモニウム、等が挙げられ、好ましくは、アルギン酸ナトリウムまたはアルギン酸カリウムであり、より好ましくは、アルギン酸ナトリウムである。アルギン酸の２価の塩としては、例えば、アルギン酸カルシウム、アルギン酸マグネシウム、アルギン酸バリウム、アルギン酸ストロンチウム、等が挙げられる。
　アルギン酸は、高分子多糖類であり、分子量を正確に定めることは困難であるが、一般的に重量平均分子量で１，０００～１０００万、好ましくは１万～８００万、より好ましくは２万～３００万である。天然物由来の高分子物質の分子量測定では、測定方法により値に違いが生じうることが知られている。
　本明細書において本発明のアルギン酸誘導体またはアルギン酸又はその塩の分子量を特定する場合は、特段のことわりがない限り、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）により算出される重量平均分子量である。本発明で使用するアルギン酸又はその塩としても、その最終使用用途に応じて、適切な分子量分布のものを用いることが望ましい。
　例えば、後記実施例に記載したゲル浸透クロマトグラフィー（ＧＰＣ）又はゲルろ過クロマトグラフィー（これらを合わせてサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）ともいう）の測定条件にて、好ましくは、１０万～５００万であり、より好ましくは１５万～３００万である。また、ある態様では、５０万～３００万であり、より好ましくは、１００万～２５０万であり、さらに好ましくは、１００万～２００万である。
　また、例えば、ＧＰＣ－ＭＡＬＳ（ＳＥＣ－ＭＡＬＳ）法によれば、絶対重量平均分子量を測定することができる。ＧＰＣ－ＭＡＬＳ法により測定した重量平均分子量(絶対分子量)は、好ましくは１万以上、より好ましくは５万以上、さらに好ましくは６万以上であり、また好ましくは、１００万以下、より好ましくは８０万以下、さらに好ましくは７０万以下、とりわけ好ましくは５０万以下である。その好ましい範囲は、１万～１００万であり、より好ましくは５万～８０万であり、さらに好ましくは６万～５０万である。
　通常、高分子多糖類の分子量を上記のようなＳＥＣ、ＳＥＣ－ＭＡＬＳを用いた手法で算出する場合、約１０％～約３０％の測定誤差を生じうる。例えば、５０万であれば３５万～６５万、１００万であれば７０万～１３０万程度の範囲で値の変動が生じうる。本明細書中、分子量測定の記載において「約」と記載した場合、当該数値の±１０％迄、ある態様では当該数値の±２０％迄の値も含み得るものである。
　ここで、一般に天然物由来の高分子物質は、単一の分子量を持つのではなく、種々の分子量を持つ分子の集合体であるため、ある一定の幅を持った分子量分布として測定される。代表的な測定手法はゲルろ過クロマトグラフィーである。ゲルろ過クロマトグラフィーにより得られる分子量分布の代表的な情報としては、重量平均分子量（Ｍｗ）、数平均分子量（Ｍｎ）、分散比（Ｍｗ／Ｍｎ）があげられる。
　分子量の大きい高分子の平均分子量への寄与を重視したのが重量平均分子量であり、下記式で表される。
　　Ｍｗ＝Σ（ＷｉＭｉ）／Ｗ＝Σ（ＨｉＭｉ）／Σ（Ｈｉ）
　数平均分子量は、高分子の総重量を高分子の総数で除して算出される。
　　Ｍｎ＝Ｗ／ΣＮｉ＝Σ（ＭｉＮｉ）／ΣＮｉ＝Σ（Ｈｉ）／Σ（Ｈｉ／Ｍｉ）
　ここで、Ｗは高分子の総重量、Ｗｉはｉ番目の高分子の重量、Ｍｉはｉ番目の溶出時間における分子量、Ｎｉは分子量Ｍｉの個数、Ｈｉはｉ番目の溶出時間における高さである。
　天然物由来の高分子物質の分子量測定では、測定方法により値に違いが生じうることが知られている（ヒアルロン酸の例：Ｃｈｉｋａｋｏ　ＹＯＭＯＴＡ　ｅｔ．ａｌ．　Ｂｕｌｌ．Ｎａｔｌ．Ｈｅａｌｔｈ　Ｓｃｉ．，　Ｖｏｌ．１１７，　ｐｐ１３５－１３９（１９９９）、Ｃｈｉｋａｋｏ　ＹＯＭＯＴＡ　ｅｔ．ａｌ．　Ｂｕｌｌ．Ｎａｔｌ．Ｉｎｓｔ．　Ｈｅａｌｔｈ　Ｓｃｉ．，　Ｖｏｌ．１２１，　ｐｐ３０－３３（２００３））。アルギン酸の分子量測定については、固有粘度（Ｉｎｔｒｉｎｓｉｃ　ｖｉｓｃｏｓｉｔｙ）から算出する方法、ＳＥＣ－ＭＡＬＬＳ（Ｓｉｚｅ　Ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ　Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ　ｗｉｔｈ　Ｍｕｌｔｉｐｌｅ　Ａｎｇｌｅ　Ｌａｓｅｒ　Ｌｉｇｈｔ　Ｓｃａｔｔｅｒｉｎｇ　Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ）により算出する方法が記載された文献がある（ＡＳＴＭ　Ｆ２０６４－００（２００６），ＡＳＴＭ　Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ発行）。本発明においては、重量平均分子量は、上記文献に示されるような常法にて、例えばサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）により分子量を測定し、プルランを標準物質として用いた較正曲線により算出した値とすることができる。
　又、本発明においては、重量平均分子量は、上記文献に示されるような常法にて、例えばサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）―ＭＡＬＳにより測定した絶対分子量とすることができる。
　アルギン酸類の分子量の測定は、常法に従い測定することができる。
　本明細書中においてアルギン酸又はその塩の分子量を特定する場合は、特段のことわりがない限り、ゲルろ過クロマトグラフィーにより算出される重量平均分子量である。分子量測定にゲルろ過クロマトグラフィーを用いる場合の代表的な条件は、例えば、後述する本実施例の条件を採用することができる。カラムは、例えば、Ｓｕｐｅｒｏｓｅ６　Ｉｎｃｒｅａｓｅ１０／３００　ＧＬカラム（ＧＥヘルスケアサイエンス社）を用いることができ、展開溶媒として、例えば、０．１５ｍｏｌ／Ｌ　ＮａＣｌを含む１０ｍｍｏｌ／Ｌリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）を使用することができ、分子量標準としてブルーデキストラン、チログロブリン、フェリチン、アルドラーゼ、コンアルブミン、オブアルブミン、リボヌクレアーゼＡおよびアプロチニンを用いることができる。
　本明細書中で用いられるアルギン酸の粘度は、特に限定されないが、１ｗ／ｗ％のアルギン酸類の水溶液として粘度を測定した場合、好ましくは、１０ｍＰａ・ｓ～１０００ｍＰａ・ｓ、より好ましくは、５０ｍＰａ・ｓ～８００ｍＰａ・ｓである。
　アルギン酸の水溶液の粘度の測定は、常法に従い測定することができる。例えば、回転粘度計法の、共軸二重円筒形回転粘度計、単一円筒形回転粘度計（ブルックフィールド型粘度計）、円すい－平板形回転粘度計（コーンプレート型粘度計）等を用いて測定することができる。好ましくは、日本薬局方（第１６版）の粘度測定法に従うことが望ましい。より好ましくは、コーンプレート型粘度計を用いる。
　アルギン酸類は、褐藻類から抽出された当初は、分子量が大きく、粘度が高めだが、熱による乾燥、精製などの過程で、分子量が小さくなり、粘度は低めとなる。製造工程の温度等の条件管理、原料とする褐藻類の選択、製造工程における分子量の分画などの手法により分子量の異なるアルギン酸類を製造することができる。さらに、異なる分子量あるいは粘度を持つ別ロットのアルギン酸類と混合することにより、目的とする分子量を有するアルギン酸類とすることも可能である。
　本明細書中で用いられるアルギン酸は、いくつかの態様においては、低エンドトキシン処理されていないアルギン酸であり、又は別のいくつかの態様においては、低エンドトキシン処理されたアルギン酸である。低エンドトキシンとは、実質的に炎症、または発熱を惹起しない程度にまでエンドトキシンレベルが低いことをいう。より好ましくは、低エンドトキシン処理されたアルギン酸類であることが望ましい。
　低エンドトキシン処理は、公知の方法またはそれに準じる方法によって行うことができる。例えば、ヒアルロン酸ナトリウムを精製する、菅らの方法（例えば、特開平９－３２４００１号公報など参照）、β１，３－グルカンを精製する、吉田らの方法（例えば、特開平８－２６９１０２号公報など参照）、アルギネート、ゲランガム等の生体高分子塩を精製する、ウィリアムらの方法（例えば、特表２００２－５３０４４０号公報など参照）、ポリサッカライドを精製する、ジェームスらの方法（例えば、国際公開第９３／１３１３６号パンフレットなど参照）、ルイスらの方法（例えば、米国特許第５５８９５９１号明細書など参照）、アルギネートを精製する、ハーマンフランクらの方法（例えば、Ａｐｐｌ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ（１９９４）４０：６３８－６４３など参照）等またはこれらに準じる方法によって実施することができる。低エンドトキシン処理は、それらに限らず、洗浄、フィルター（エンドトキシン除去フィルターや帯電したフィルターなど）によるろ過、限外ろ過、カラム（エンドトキシン吸着アフィニティーカラム、ゲルろ過カラム、イオン交換樹脂によるカラムなど）を用いた精製、疎水性物質、樹脂または活性炭などへの吸着、有機溶媒処理（有機溶媒による抽出、有機溶剤添加による析出・沈降など）、界面活性剤処理（例えば、特開２００５－０３６０３６号公報など参照）など公知の方法によって、あるいはこれらを適宜組合せて実施することができる。これらの処理の工程に、遠心分離など公知の方法を適宜組み合わせてもよい。アルギン酸の種類に合わせて適宜選択するのが望ましい。
　エンドトキシンレベルは、公知の方法で確認することができ、例えば、リムルス試薬（ＬＡＬ）による方法、エンドスペシー（登録商標）ＥＳ－２４Ｓセット（生化学工業株式会社）を用いる方法などによって測定することができる。
　用いられるエンドトキシンの処理方法は特に限定されないが、その結果として、アルギン酸類のエンドトキシン含有量が、リムルス試薬（ＬＡＬ）によるエンドトキシン測定を行った場合に、５００エンドトキシン単位（ＥＵ）／ｇ以下であることが好ましく、さらに好ましくは、１００ＥＵ／ｇ以下、とりわけ好ましくは、５０ＥＵ／ｇ以下、特に好ましくは、３０ＥＵ／ｇ以下である。本発明において、「実質的にエンドトキシンを含まない」とは、日局エンドトキシン試験により測定したエンドトキシン値が前記の数値範囲にあるものを意味する。低エンドトキシン処理されたアルギン酸ナトリウムは、例えば、Ｓｅａ　Ｍａｔｒｉｘ（登録商標）（持田製薬株式会社）、ＰＲＯＮＯＶＡＴＭ　ＵＰ　ＬＶＧ（ＦＭＣＢｉｏＰｏｌｙｍｅｒ）など市販品により入手可能である。
　別のいくつかの態様において、本明細書中の、式（Ｉ）、式（Ｉ－Ａ）、式（ＩＩ）及び式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の合成原料になるアルギン酸ナトリウム、及びコア層に含むことができるアルギン酸溶液又はアルギン酸ゲルの原料になるアルギン酸ナトリウムは、特に限定されることは無いが、例えば、前記表８に記載のアルギン酸ナトリウムＡ－１、Ａ－２、Ａ－３、Ｂ－１、Ｂ－２、又はＢ－３から選択することが可能である。
　本明細書中、前記アルギン酸ナトリウムを用いて調製されたアルギン酸溶液（アルギン酸ナトリウム溶液ともいう）の濃度は、例えば、約０．１～約３．３重量％の範囲である。
　本明細書中、式（Ｉ）、式（Ｉ－Ａ）、式（ＩＩ）及び式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の合成原料になるアルギン酸ナトリウムは、好ましくは、前記表８に記載のＡ－２、Ａ－３、Ｂ－２又はＢ－３であり、より好ましくは、Ａ－２又はＡ－３である。又、式（Ｉ）、式（Ｉ－Ａ）、式（ＩＩ）及び式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の合成で用いられる当該アルギン酸ナトリウム溶液の濃度は、好ましくは、１．５～２．０重量％の範囲である。
　本明細書中、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含むことができるアルギン酸溶液、又はアルギン酸ゲルの形成に用いられるアルギン酸溶液の調製に用いられるアルギン酸ナトリウムは、好ましくは、前記表８に記載のＡ－２、Ａ－３、Ｂ－２又はＢ－３であり、より好ましくは、Ａ－２又はＡ－３であり、更に好ましくは、Ａ－３である。又、当該アルギン酸ナトリウムを用いて調製したアルギン酸溶液の濃度は、好ましくは約０．３～約１．５重量％の範囲である。
　本明細書中、アルギン酸溶液とは、アルギン酸を溶媒に溶解させた溶液を意味する。当該溶媒としては、特に限定されないが、例えば、培地、細胞培養用培地、培養液、等張緩衝液、水、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、及び生理食塩水等が挙げられる。アルギン酸ナトリウムを溶媒に溶解した場合、アルギン酸ナトリウム溶液と言う。
　いくつかの態様において、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層の形成に用いられる式（Ｉ）、式（Ｉ－Ａ）、式（ＩＩ）及び式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の溶液、アルギン酸溶液は、特に限定されることは無いが、コラーゲン溶液、培地、培養液等を、混合することも可能である。尚、式（Ｉ）、式（Ｉ－Ａ）、式（ＩＩ）及び式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の溶液、及びアルギン酸溶液の調製に用いられる溶媒は、後述の通りである。
２．化学修飾アルギン酸誘導体
　いくつかの態様において、本明細書中の化学修飾アルギン酸誘導体は、アルギン酸の任意の１つ以上のカルボキシル基にアミド結合及び２価のリンカーを介して、後述のＨｕｉｓｇｅｎ反応における反応性基、又は当該反応性基の相補的な反応性基が導入されたものである。より具体的には、下記式（Ｉ）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000066
 ［式（Ｉ）中、（ＡＬＧ）、Ａｋｎ－Ｌ１－、及び－ＮＨ－ＣＯ－の定義は、前述の第１の態様中の定義と同じである］で表されるアルギン酸誘導体、及び下記式（ＩＩ）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000067
 ［式（ＩＩ）中、（ＡＬＧ）、－Ｌ２－、及び－ＮＨ－ＣＯ－の定義は、前述の第１の態様中の定義と同じである］で表されるアルギン酸誘導体である。
　２価のリンカー（－Ｌ１－又は－Ｌ２－）は、具体的には、前記態様中に記載される２価のリンカーから選択して用いることができる。
より具体的には、下記式（Ｉ－Ａ）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000068
 ［式（Ｉ－Ａ）中、（ＡＬＧ）、Ａｋｙ－Ｌ１Ａ－、及び－ＮＨ－ＣＯ－の定義は、前述の第１Ｘの態様中の定義と同じである］で表されるアルギン酸誘導体、及び下記式（ＩＩ－Ａ）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000069
 ［式（ＩＩ－Ａ）中、（ＡＬＧ）、－Ｌ２Ａ－、及び－ＮＨ－ＣＯ－の定義は、前述の第１Ｘの態様中の定義と同じである］で表されるアルギン酸誘導体である。
　２価のリンカー（－Ｌ１Ａ－又は－Ｌ２Ａ－）は、具体的には、前記態様［１Ｘ］中に記載される２価のリンカーから選択して用いることができる。
　本明細書中、特に断りのない限り、「ハロゲン原子」としては、例えば、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、又はヨウ素原子等が挙げられる。
　本明細書中、特に断りのない限り、「Ｃ1-３アルキル基」としては、例えば、メチル、エチル、プロピル、イソプロピルの基が挙げられる。
　本明細書中、特に断りのない限り、「Ｃ２－４アルカノイル基」とは、前記「Ｃ１－３アルキル基」にカルボニル基が結合した、「Ｃ１－３アルキルカルボニル基」を意味し、例えば、アセチル、プロピオニル、ブチリル等の基が挙げられる。
　本明細書中、特に断りのない限り、「Ｃ3-8シクロアルキル環」としては、炭素数３～８の単環式又は多環式の飽和又は不飽和のシクロアルキル環が挙げられ、例えば、シクロプロパン、シクロブタン、シクロペンタン、シクロヘキサン、シクロヘプタン、又はシクロオクタン等の環が挙げられる。
　本明細書中、特に断りのない限り、「Ｃ５－９シクロアルケン環」としては、炭素数５～９の単環式のシクロアルケン環が挙げられ、例えば、シクロペンテン、シクロヘキセン、シクロヘプテン、シクロオクテン、シクロノネン等の環が挙げられる。
　本明細書中、特に断りのない限り、「５～６員芳香族複素環」とは、窒素原子、硫黄原子、及び酸素原子からなる群から選ばれるヘテロ原子を１～４個含有する５～６員不飽和環を意味する。
　本明細書中、特に断りのない限り、前記「５～６員芳香族複素環」としては、例えば、ピロール、フラン、チオフェン、イミダゾール、ピラゾール、オキサゾール、イソオキサゾール、チアゾール、イソチアゾール、トリアゾール、オキサジアゾール、フラザン、チアジアゾール、テトラゾール、ピリジン、ピリダジン、ピリミジン、ピラジン、トリアジン、チアジアジン等の基が挙げられる。
　本明細書中、特に断りのない限り、「５～６員非芳香族複素環」とは、酸素原子、硫黄原子及び窒素原子から選ばれるヘテロ原子を１～４個含有する５～６員の飽和複素環を意味する。
　本明細書中、特に断りのない限り、前記「５～６員非芳香族複素環」としては、例えば、ピロリジン、テトラヒドロフラン、チオラン、ピペリジン、ジヒドロピラン、テトラヒドロピラン、テトラヒドロチオピラン、ピペラジン、ジオキサン、モルホリン、チオモルホリン、又はキヌクリジン等の環が挙げられる。
　本明細書中、特に断りのない限り、「環状アルキン基」とは、「５～９員シクロアルキン基」を意味し、また「５～９員シクロアルキン基」の－ＣＨ２－が、－ＮＨ－、－Ｓ－、－Ｏ－、又は＝Ｃ（＝Ｏ）からなる群から選ばれる基で１～４個置換された、シクロアルキン基も含む。環状アルキン基は、その環上の－ＣＨ２－の水素原子が、ハロゲン原子、水酸基、アミノ基、ケト基、Ｃ１－３アルキル基、－Ｏ－Ｃ１－３アルキル基、－ＮＨ（Ｃ１－３アルキル基）、－Ｎ（Ｃ１－３アルキル基）２、－ＣＯＯ－Ｍ（Ｍ＝Ｎａ、Ｋ、１／２Ｃａ、水素原子、Ｃ１－３アルキル基）等の基から選択される基で、１～５個置換されていても良く；また環状アルキン基は、Ｃ3-8シクロアルキル環、ベンゼン環、５～６員芳香族複素環から選択される環が１～３個縮環していてもよい。
　本明細書中、特に断りのない限り、「５～９員シクロアルキン基」は、炭素数５～９の単環式の飽和シクロアルキル基の、－ＣＨ２－ＣＨ２－が、－Ｃ≡Ｃ－に置き換えられた基を意味し、例えば、シクロペンチン基、シクロヘキシン基、シクロへプチン基、シクロオクチン基、シクロノニン基、等の基が挙げられる。また「５～９員シクロアルキン基」の－ＣＨ２－は、－ＮＨ－、－Ｓ－、－Ｏ－、又は＝Ｃ（＝Ｏ）からなる群から選ばれる基で１～４個置換することもできる。
　本明細書中、特に断りのない限り、環状アルキン基は、好ましくは７～９員環状アルキン基であり（７～９員シクロアルキン基の－ＣＨ２－が、－ＮＨ－、－Ｓ－、－Ｏ－、又は＝Ｃ（＝Ｏ）からなる群から選ばれる基で１～４個置換されたシクロアルキン基も含み；７～９員環状アルキン基の環上の－ＣＨ２－の水素原子が、ハロゲン原子、水酸基、アミノ基、ケト基、Ｃ１－３アルキル基、－Ｏ－Ｃ１－３アルキル基、－ＮＨ（Ｃ１－３アルキル基）、－Ｎ（Ｃ１－３アルキル基）２、－ＣＯＯ－Ｍ（Ｍ＝Ｎａ、Ｋ、１／２Ｃａ、水素原子、Ｃ１－３アルキル基）等の基から選択される基で、１～５個置換されていても良く；また７～９員環状アルキン基は、Ｃ3-8シクロアルキル環、ベンゼン環、５～６員芳香族複素環から選択される環が１～３個縮環していてもよく）；
より好ましくはシクロオクチン基であり（シクロオクチン基の－ＣＨ２－が、－ＮＨ－、－Ｓ－、－Ｏ－、又は＝Ｃ（＝Ｏ）からなる群から選ばれる基で１～４個置換されたシクロアルキン基も含み；シクロオクチン基の環上の－ＣＨ２－の水素原子が、ハロゲン原子、水酸基、アミノ基、ケト基、Ｃ１－３アルキル基、－Ｏ－Ｃ１－３アルキル基、－ＮＨ（Ｃ１－３アルキル基）、－Ｎ（Ｃ１－３アルキル基）２、－ＣＯＯ－Ｍ（Ｍ＝Ｎａ、Ｋ、１／２Ｃａ、水素原子、Ｃ１－３アルキル基）等の基から選択される基で、１～５個置換されていても良く；またシクロオクチン基は、Ｃ3-8シクロアルキル環、ベンゼン環、５～６員芳香族複素環から選択される環が１～３個縮環していてもよく）；
更に好ましくは、下記部分構造式：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000070
 ［式中、両端の破線右側は含まない］から選択される基であり；
特に好ましくは、下記部分構造式：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000071
 ［式中、両端の破線右側は含まない］から選択される基であり；
最も好ましくは、下記部分構造式：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000072
 ［式中、両端の破線右側は含まない］から選択される基である。
　いくつかの態様において、本明細書中の２価のリンカー（－Ｌ１－又は－Ｌ２－）は、環状アルキン基（Ａｋｎ－）およびアジド基との反応（Ｈｕｉｓｇｅｎ反応）を阻害しない限り、任意のリンカーを使用することも可能である。具体的には、直鎖のアルキレン基（－（ＣＨ２）ｎ－、ｎ＝１～３０）［当該基中の－ＣＨ２－は、－Ｃ（＝Ｏ）－、－ＣＯＮＨ－、－Ｏ－、－ＮＨ－、－Ｓ－、炭素数が３～８のシクロアルキル環、ベンゼン環、複素環（ピリジン環、ピペリジン環、ピペラジン環、等の５～６員芳香族複素環又は５～６員非芳香族複素環）、等の基で複数個（例えば、１～１０個、又は１～５個）置き換えられても良く；当該直鎖のアルキレン基（－ＣＨ２－）の水素原子は、オキソ基（＝Ｏ）、Ｃ１－６アルキル基（例えば、メチル基、エチル基、ｎ－プロピル基、ｉｓｏ－プロピル基、等の基）、ハロゲン原子（例えば、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子、等）、水酸基（－ＯＨ）、等の基から選択される基で複数個（例えば、１～１０個、又は１～５個）置換されていても良い］が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
　前記式（Ｉ）、式（Ｉ－Ａ）、式（ＩＩ）又は式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の－ＮＨ－ＣＯ－基における、イミノ基（－ＮＨ－）の水素原子をメチル基に置換し－Ｎ（Ｍｅ）－ＣＯ－基することが可能である。
　前記式（Ｉ）又は式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体における、リンカー（－Ｌ１－、－Ｌ２－）とアルギン酸の結合様式は、－ＮＨ－ＣＯ－結合、又は－Ｎ（Ｍｅ）－ＣＯ－結合があり；好ましくは、－ＮＨ－ＣＯ－結合である。前記－ＮＨ－ＣＯ－結合、又は－Ｎ（Ｍｅ）－ＣＯ－結合の－ＣＯ－はアルギン酸のカルボキシル基に由来するものである。
　前記式（Ｉ－Ａ）又は式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体における、リンカー（－Ｌ１Ａ－、－Ｌ２Ａ－）とアルギン酸の結合様式は、－ＮＨ－ＣＯ－結合、又は－Ｎ（Ｍｅ）－ＣＯ－結合があり；好ましくは、－ＮＨ－ＣＯ－結合である。前記－ＮＨ－ＣＯ－結合、又は－Ｎ（Ｍｅ）－ＣＯ－結合の－ＣＯ－はアルギン酸のカルボキシル基に由来するものである。
　本明細書中、式（Ｉ）、式（Ｉ－Ａ）、式（ＩＩ）又は式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体は、例えば、後述の化学修飾アルギン酸誘導体の合成方法により製造することが可能である
　本明細書の式（Ｉ）又は式（Ｉ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体のゲルろ過クロマトグラフィー法により測定した重量平均分子量が、約１０万Ｄａ～約３００万Ｄａの範囲であり；好ましくは約３０万Ｄａ～約２５０万Ｄａの範囲であり、より好ましくは約５０万Ｄａ～約２００万Ｄａの範囲である。又、式（ＩＩ）又は式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体のゲルろ過クロマトグラフィー法により測定した重量平均分子量が、約１０万Ｄａ～約３００万Ｄａの範囲であり；好ましくは約３０万Ｄａ～約２５０万Ｄａの範囲であり、より好ましくは約５０万Ｄａ～約２００万Ｄａの範囲である。
　本明細書中、式（Ｉ）のＡｋｎ－Ｌ１－ＮＨ－基は、アルギン酸構成単位の全てのカルボキシル基に結合している必要はなく、又、式（ＩＩ）のＮ３－Ｌ２－ＮＨ－基は、アルギン酸構成単位の全てのカルボキシル基に結合している必要はない。
　本明細書中、式（Ｉ－Ａ）のＡｋｙ－Ｌ１Ａ－ＮＨ－基は、アルギン酸構成単位の全てのカルボキシル基に結合している必要はなく、又、式（ＩＩ－Ａ）のＮ３－Ｌ２Ａ－ＮＨ－基は、アルギン酸構成単位の全てのカルボキシル基に結合している必要はない。
　本明細書中、式（Ｉ）のＡｋｎ－Ｌ１－ＮＨ－基を反応性基と言う場合、式（ＩＩ）のＮ３－Ｌ２－ＮＨ－基が相補的な反応性基となる。又、逆に式（ＩＩ）のＮ３－Ｌ２－ＮＨ－基を反応性基と言う場合、式（Ｉ）のＡｋｎ－Ｌ１－ＮＨ－基が相補的な反応性基となる。
　本明細書中、式（Ｉ－Ａ）のＡｋｙ－Ｌ１Ａ－ＮＨ－基を反応性基と言う場合、式（ＩＩ－Ａ）のＮ３－Ｌ２Ａ－ＮＨ－基が相補的な反応性基となる。又、逆に式（ＩＩ－Ａ）のＮ３－Ｌ２Ａ－ＮＨ－基を反応性基と言う場合、式（Ｉ－Ａ）のＡｋｙ－Ｌ１Ａ－ＮＨ－基が相補的な反応性基となる。
　本明細書中、式（Ｉ）又は式（Ｉ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の反応性基の導入率は、例えば、約０．１～約３０ｍｏｌ％の範囲であり；好ましくは、約０．３～約２０ｍｏｌ％の範囲であり；より好ましくは、約０．５～約１０ｍｏｌ％の範囲である。又、式（ＩＩ）又は式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の反応性基の導入率は、例えば、約０．１～約３０ｍｏｌ％の範囲であり；好ましくは、約０．３～約２０ｍｏｌ％の範囲であり；より好ましくは、約０．５～約１５ｍｏｌ％の範囲である。
　前記反応性基又は相補的な反応性基の導入率は、アルギン酸の繰り返し単位であるウロン酸単糖単位のうち、各反応性基が導入されたウロン酸単糖単位の数を百分率で表した値である。各反応性基又は相補的な反応性基の導入率は、後述の実施例に記載の方法により求めることができる。
　本明細書中、式（Ｉ）中の環状アルキン基（Ａｋｎ）及び式（ＩＩ）中のアジド基が、Ｈｕｉｓｇｅｎ反応によりトリアゾール環を形成し、これにより架橋が形成される。
　本明細書中、式（Ｉ－Ａ）中の環状アルキン基（Ａｋｙ）及び式（ＩＩ－Ａ）中のアジド基が、Ｈｕｉｓｇｅｎ反応によりトリアゾール環を形成し、これにより架橋が形成される。
　本明細書中、式（Ｉ）、式（Ｉ－Ａ）、式（ＩＩ）又は式（ＩＩ－Ａ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体は、その分子内の任意のカルボキシル基にて１価の塩（例えば、ナトリウム塩等）を形成しているものも、含まれる。
３．Ｈｕｉｓｇｅｎ反応
　Ｈｕｉｓｇｅｎ反応（１，３－双極子付加環化反応）は、下記式に示される様に末端アジド基及び末端アルキン基を有する化合物間の縮合反応である。反応の結果、二置換１，２，３－トリアゾール環が収率良く得られ、余計な副生成物が生じないという特徴を有している。当該反応は、１，４－又は１，５－二置換トリアゾール環が生成し得ると考えられるが、銅触媒（Cu catalyst）を用いることで位置選択的にトリアゾール環を得ることが可能である。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000073
　又、銅触媒を用いないＨｕｉｓｇｅｎ反応がＷｉｔｔｉｇとＫｒｅｂｓにより報告がなされている。即ち、シクロオクチンとフェニルアジドを混合するだけで環化付加体が得られる反応である（下記式中、Ｒ３＝フェニルである）。本反応は、シクロオクチンの三重結合が大きく歪んでいるため、フェニルアジドとの反応による歪みの解消が駆動力となり、反応が自発的に進行することにより、触媒が不要となった。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000074
　以上の様に、Ｈｕｉｓｇｅｎ反応は、置換された１級アジド、２級アジド、３級アジド、芳香族アジド、等を有するアジド化合物、及びアジド基の相補的な反応性基である末端又は環状アルキン基を有する化合物を用いることができる。又、Ｈｕｉｓｇｅｎ反応では、ほぼアジド基及びアルキン基のみが反応することから、反応基質中に種々の官能基（例えば、エステル基、カルボキシル基、アルケニル基、水酸基、アミノ基、等）を置換させることが可能である。
　いくつかの態様では、望ましくない副生成物を生じさせず、銅触媒による細胞毒性を回避させる為に銅触媒を用いずに、短時間、容易に、且つ効率的に１，２，３－トリアゾール環による架橋をアルギン酸分子間に形成させる為に、Ｈｕｉｓｇｅｎ反応のアルキン基としては、例えば、前記態様［１］に記載の環状アルキン基（シクロオクチル基）を用いる。
　好ましい態様の化学修飾アルギン酸誘導体の架橋方法においては、当該反応（Ｈｕｉｓｇｅｎ反応）にて望ましくない副反応は起こらず、副生成物がほとんど形成されない。したがって、本発明のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞を取込むことが可能となる。
４．化学修飾アルギン酸誘導体の製造方法
　本明細書中、式（Ｉ）又は式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体は、下記反応式に示される様に、式（ＡＭ－１）（Ａｋｎ－Ｌ１－ＮＨ２：Ａｋｎ－Ｌ１－は、前記態様［１］中の定義と同じである）で表わされるアミン、又は、式（ＡＭ－２）（Ｎ３－Ｌ２－ＮＨ２：－Ｌ２－は、前記態様［１］中の定義と同じである）で表わされるアミンを、アルギン酸の任意のカルボキシル基と、任意の縮合剤（ｃｏｎｄｅｎｓｉｎｇ　ａｇｅｎｔ）を用いる縮合反応により製造することができる。各反応の詳細条件は、国際公開第２０１９／２４０２１９号パンフレットに記載された条件に準じる。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000075
　前記、式（Ｉ）又は式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の製造方法において、式（ＡＭ－１）又は式（ＡＭ－２）で表わされるアミンの導入率（前記態様中の式（Ｉ）又は式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の反応性基の導入率と同じ意味になる）は、当該アミンの性質等を考慮することで、下記（ｉ）～（ｖ）等の反応条件を適宜選択して組み合わせることにより調節が可能になる。（ｉ）縮合剤の等量の増減、（ｉｉ）反応温度の上昇・下降、（ｉｉｉ）反応時間の延長・短縮、（ｉｖ）反応基質のアルギン酸の濃度の調整、（ｖ）式（ＡＭ－１）又は式（ＡＭ－２）のアミンの溶解度を上げる為に水に混和する有機溶媒を添加する、等。
　また、前記縮合反応において、式（ＡＭ－１）、式（ＡＭ－２）で表わされるアミンを、各々、式（ＡＭ－１Ａ）、式（ＡＭ－２Ａ）で表わされるアミンに置き換えて、同様に縮合反応を行うことで、式（Ｉ－Ａ）又は式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を製造することができる。各反応式中、Ａｋｙ－Ｌ１Ａ－ＮＨ２のＡｋｙ－Ｌ１Ａ－は、前記態様［１Ｘ］中の定義と同じであり、Ｎ３－Ｌ２Ａ－ＮＨ２の－Ｌ２Ａ－は、前記態様［１Ｘ］中の定義と同じである。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000076
　以下に、式（ＡＭ－１）又は式（ＡＭ－２）で表わされるアミンのうち、本明細書中で用いられる、より具体的なアミンの製造方法を示す。
　以下の各製造方法において、ｘ１ａ、ｘ１ｂ、ｙ１ｂ、ｘ２、ｙ２、ｚ２、ｘ３ａ、ｙ３ａ、ｚ３ａ、ｘ３ｂ、ｙ３ｂ、ｚ３ｂ、ｘ４、ｙ４、ｘ５ａ、ｙ５ａ、ｚ５ａ、ｘ５ｂ、ｙ５ｂ、ｚ５ｂ、ｘ６、ｙ６、ｚ６、ｘ７ａ、ｙ７ａ、ｚ７ａ、ｖ７ａ、ｘ７ｂ、ｙ７ｂ、ｚ７ｂ、ｖ７ｂ、ａ１、ｂ１、ａ２、ｂ２、ａ３、ｂ３、ａ４、ｂ４、ａ５及びａ６の定義は前記態様［１］中の記載と同じ定義であり；ＲＡ＝メチル基、エチル基、等のＣ１～６アルキル基であり；Ｐ１は、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－ｔｅｒｔＢｕ基、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－Ｂｎ基、－Ｃ（Ｏ）ＣＨ３基、－Ｃ（Ｏ）ＣＦ３基、－ＳＯ２Ｐｈ、－ＳＯ２ＰｈＭｅ基、－ＳＯ２Ｐｈ（ＮＯ２）基、等から選択されるアミノ基の保護基であり；Ｅ＝ハロゲン原子（フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子、等）、－ＯＴｓ基、－ＯＭｓ基、等の脱離基であり、Ｘ＝ハロゲン原子（フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子、等）である。又、以下の各製造方法において、式（ＳＭ－Ａ１）、式（ＳＭ－Ａ２）、式（ＳＭ－Ｂ）、式（ＳＭ－Ｃ１）、式（ＳＭ－Ｃ２）、式（ＳＭ－Ｄ）、式（ＳＭ－Ｅ１）、式（ＳＭ－Ｅ２）、式（ＳＭ－Ｆ）、式（ＳＭ－Ｇ１）、式（ＳＭ－Ｇ２）、式（ＳＭ－Ｈ）、式（ＳＭ－Ｊ）、式（ＳＭ－Ｋ）、式（ＳＭ－Ｌ）、式（ＲＧ－Ａ１）、式（ＲＧ－Ａ２）、式（ＲＧ－Ｂ１）、式（ＲＧ－Ｃ１）、式（ＲＧ－Ｃ２）、式（ＲＧ－Ｄ１）、式（ＲＧ－Ｅ１）、式（ＲＧ－Ｅ２）、式（ＲＧ－Ｆ１）、式（ＲＧ－Ｆ２）、式（ＲＧ－Ｆ３）、式（ＲＧ－Ｇ１－１）、式（ＲＧ－Ｇ１－２）、式（ＲＧ－Ｇ１－３）、式（ＲＧ－Ｇ２－１）、式（ＲＧ－Ｇ２－２）、式（ＲＧ－Ｇ２－３）、式（ＲＧ－Ｈ１）、式（ＲＧ－Ｈ２）、式（ＲＧ－Ｉ１）、式（ＲＧ－Ｊ１）、式（ＲＧ－Ｋ）、式（ＲＧ－Ｌ１）及び式（ＲＧ－Ｍ）で表される化合物は市販化合物、又は市販化合物から文献公知の製造方法により製造できる化合物である。
　又、以下の各製造方法において、保護基Ｐ１の保護・脱保護は、文献公知の方法、例えば、『プロテクティブ・グループス・イン・オーガニック・シンセシス（Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ　Ｇｒｏｕｐｓ　ｉｎ　Ｏｒｇａｎｉｃ　Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　４ｔｈＥｄｉｔｉｏｎ）　第４版、２００７年、ジョン　ウィリー　アンド　サンズ（Ｊｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ　＆　Ｓｏｎｓ）、グリーン（Ｇｒｅｅｎｅ）ら』の成書に記載された脱保護の方法に準じて、保護・脱保護を行うことができる。
　又、以下の各製造方法において、縮合反応と記載した場合、前記の縮合反応と同様の反応を意味する。
［製造方法Ａ］
　式（ＡＭ－１－１Ａ）及び式（ＡＭ－１－１Ｂ）で表されるアミンの製造方法：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000077
＜Ｓｔｅｐ　１＞　式（ＳＭ－Ａ）の化合物及び式（ＲＧ－Ａ１）の化合物を用いて、縮合反応を行うことで縮合体を得る。続いて、臭素を付加させた後、ｔｅｒｔ－ＢｕＯＫ等の塩基を用いて脱臭素化反応を行うことによりアルキン基を形成させる。続いて、保護基Ｐ１を脱保護することにより式（ＡＭ－１－１Ａ）で表されるアミン、又はその塩を製造することができる。
＜Ｓｔｅｐ　２＞　前記［製造方法Ａ］＜Ｓｔｅｐ　１＞と同様な方法で得られる式（ＳＭ－Ａ２）の化合物及び式（ＲＧ－Ａ２）の化合物を用いて縮合反応を行い、続いて、保護基Ｐ１を脱保護することにより式（ＡＭ－１－１Ｂ）で表されるアミン、又はその塩を製造することができる。
［製造方法Ｂ］
　式（ＡＭ－１－２）で表されるアミンの製造方法：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000078
　式（ＳＭ－Ｂ）の化合物及び式（ＲＧ－Ｂ１）の化合物を用いて縮合反応を行うことで縮合体を得る。続いて、保護基Ｐ１を脱保護することにより式（ＡＭ－１－２）で表されるアミン、又はその塩を製造することができる。
［製造方法Ｃ］式（ＡＭ－１－３Ａ）及び式（ＡＭ－１－３Ｂ）で表されるアミンの製造方法：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000079
　式（ＳＭ－Ｃ１）の化合物及び式（ＲＧ－Ｃ１）の化合物を用いて、縮合反応を行い縮合体を得る。続いて、保護基Ｐ１を脱保護することにより式（ＡＭ－１－３Ａ）で表されるアミン、又はその塩を製造することができる。
　式（ＳＭ－Ｃ２）の化合物及び式（ＲＧ－Ｃ２）の化合物を用いて、縮合反応を行い縮合体を得る。続いて、保護基Ｐ１を脱保護することにより式（ＡＭ－１－３Ｂ）で表されるアミン、又はその塩を製造することができる。
［製造方法Ｄ］式（ＡＭ－１－Ｄ）で表されるアミンの製造方法：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000080
　式（ＳＭ－Ｄ）の化合物及び式（ＲＧ－Ｄ１）の化合物を用いて縮合反応を行い、縮合体を得る。続いて保護基Ｐ１を脱保護することにより式（ＡＭ－１－Ｄ）で表されるアミン、又はその塩を製造することができる。
［製造方法Ｅ］式（ＡＭ－１－Ｅ１）及び式（ＡＭ－１－Ｅ２）で表されるアミンの製造方法：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000081
　式（ＳＭ－Ｅ１）の化合物及び式（ＲＧ－Ｅ１）の化合物を用いて、縮合反応を行い縮合体を得る。続いて、保護基Ｐ１を脱保護することにより式（ＡＭ－１－Ｅ１）で表されるアミン、又はその塩を製造することができる。
　式（ＳＭ－Ｅ２）の化合物及び式（ＲＧ－Ｅ２）の化合物を用いて、縮合反応を行い縮合体を得る。続いて、保護基Ｐ１を脱保護することにより式（ＡＭ－１－Ｅ２）で表されるアミン、又はその塩を製造することができる。
［製造方法Ｆ］式（ＡＭ－１－Ｆ）で表されるアミンの製造方法：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000082
＜Ｓｔｅｐ　１＞　式（ＳＭ－Ｆ）の化合物及び式（ＲＧ－Ｆ１）の化合物を用いて、縮合反応を行い縮合体を得る。続いて、保護基Ｐ１を脱保護することにより式（ＡＭ－１－Ｆ）で表されるアミン、又はその塩を製造することができる。
＜Ｓｔｅｐ　２＞　式（ＳＭ－Ｆ）の化合物及び式（ＲＧ－Ｆ２）の化合物を用いて、縮合反応を行い縮合体を得る。続いて、水酸化ナトリウム等の塩基存在下、メタノール、エタノール、テトラヒドロフラン、水等の反応に関与しない溶媒若しくはそれらの混合溶媒中で、エステル基を加水分解することにより式（ＩＭ－Ｆ１）で表されるカルボン酸、又はその塩を製造することができる。
＜Ｓｔｅｐ　３＞　［製造方法Ｆ］＜Ｓｔｅｐ　２＞で得られた式（ＩＭ－Ｆ１）の化合物及び式（ＲＧ－Ｆ３）の化合物を用いて、縮合反応を行い縮合体を得る。続いて、保護基Ｐ１を脱保護することにより式（ＡＭ－１－Ｆ）で表されるアミン、又はその塩を製造することができる。
［製造方法Ｇ］式（ＡＭ－１－Ｇ１）及び式（ＡＭ－１－Ｇ２）で表されるアミンの製造方法：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000083
＜Ｓｔｅｐ　１＞　式（ＳＭ－Ｇ１）の化合物及び式（ＲＧ－Ｇ１－１）の化合物を用いて、縮合反応を行い縮合体を得る。続いて、保護基Ｐ１を脱保護することにより式（ＡＭ－１－Ｇ１）で表されるアミン、又はその塩を製造することができる。
＜Ｓｔｅｐ　２＞　式（ＳＭ－Ｇ１）の化合物及び式（ＲＧ－Ｇ１－２）の化合物を用いて、縮合反応を行い縮合体を得る。続いて、エステル基を加水分解することにより式（ＩＭ－Ｇ１）で表されるカルボン酸、又はその塩を製造することができる。
＜Ｓｔｅｐ　３＞　［製造方法Ｇ］＜Ｓｔｅｐ　２＞で得られた式（ＩＭ－Ｇ１）の化合物及び式（ＲＧ－Ｇ１－３）の化合物を用いて、縮合反応を行い縮合体を得る。続いて、保護基Ｐ１を脱保護することにより式（ＡＭ－１－Ｇ１）で表されるアミン、又はその塩を製造することができる。
＜Ｓｔｅｐ　４＞　式（ＳＭ－Ｇ２）の化合物及び式（ＲＧ－Ｇ２－１）の化合物を用いて、縮合反応を行い縮合体を得る。続いて、保護基Ｐ１を脱保護することにより式（ＡＭ－１－Ｇ２）で表されるアミン、又はその塩を製造することができる。
＜Ｓｔｅｐ　５＞　式（ＳＭ－Ｇ２）の化合物及び式（ＲＧ－Ｇ２－２）の化合物を用いて、縮合反応を行い縮合体を得る。続いて、エステル基を加水分解することにより式（ＩＭ－Ｇ２）で表されるカルボン酸、又はその塩（例えば、リチウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩等）を製造することができる。
＜Ｓｔｅｐ　６＞　［製造方法Ｇ］＜Ｓｔｅｐ　５＞で得られた式（ＩＭ－Ｇ２）の化合物及び式（ＲＧ－Ｇ２－３）の化合物を用いて、縮合反応を行い縮合体を得る。続いて、保護基Ｐ１を脱保護することにより式（ＡＭ－１－Ｇ２）で表されるアミン、又はその塩を製造することができる。
［製造方法Ｈ］
　式（ＡＭ－２－Ｈ）で表されるアミンの製造方法：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000084
＜Ｓｔｅｐ　１＞　式（ＳＭ－Ｈ）の化合物及び式（ＲＧ－Ｈ１）の化合物を用いて、　文献公知の方法、例えば、『Ｅｕｒｏｐｅａｎ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｏｒｇａｎｉｃ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，　２０１４（６），　ｐ１２８０－１２８６；　２０１４年』等に記載された方法に準じて、（ｉ）ＰＰｈ３、及びＮ２（ＣＯ２ＣＨＭｅ２）２の試薬存在下、テトラヒドロフラン等の反応に関与しない溶媒中、光延反応を行い、続いて［製造方法Ｆ］＜Ｓｔｅｐ　２＞に記載の方法と同様に、加水分解を行うことにより、式（ＩＭ－Ｈ１）で表される化合物、又はその塩（例えば、リチウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩等）をを製造することができる。
＜Ｓｔｅｐ　２＞　［製造方法Ｈ］＜Ｓｔｅｐ　１＞で得られた式（ＩＭ－Ｈ１）の化合物及び式（ＲＧ－Ｈ２）の化合物を用いて縮合反応を行い縮合体を得る。続いて、保護基Ｐ１を脱保護することにより式（ＡＭ－２－Ｈ）で表されるアミン、又はその塩を製造することができる。
［製造方法Ｉ］
　式（ＡＭ－２－Ｉ）で表されるアミンの製造方法：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000085
＜Ｓｔｅｐ　１Ａ＞　［製造方法Ｈ］＜Ｓｔｅｐ　１＞で得られた式（ＩＭ－Ｈ１）の化合物及び式（ＲＧ－Ｉ１）の化合物を用いて縮合反応を行い縮合体を得る。続いて、保護基Ｐ１を脱保護することにより式（ＡＭ－２－Ｉ）で表されるアミン、又はその塩を製造することができる。
［製造方法Ｊ］
　式（ＡＭ－２－Ｊ）で表されるアミンの製造方法：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000086
＜Ｓｔｅｐ　１＞　式（ＳＭ－Ｊ）の化合物及び式（ＲＧ－Ｊ１）の化合物を用いて、縮合反応を行うことにより式（ＩＭ－Ｊ１）を製造することができる。
＜Ｓｔｅｐ　２＞［製造方法Ｊ］＜Ｓｔｅｐ　１＞で得られる式（ＩＭ－Ｊ１）の化合物を用いて、文献公知の方法、例えば、『Ｏｒｇａｎｏｍｅｔａｌｌｉｃｓ，２９（２３），ｐ６６１９－６６２２；２０１０年』等に記載された方法に準じて、ジメチルスルホキシド等の反応に関与しない溶媒中、ＮａＮ３を反応させアジド基を導入した後、保護基Ｐ１を脱保護することにより式（ＡＭ－２－Ｊ）で表されるアミン、又はその塩を製造することができる。
［製造方法Ｋ］
　式（ＡＭ－２－Ｋ）で表されるアミンの製造方法：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000087
＜Ｓｔｅｐ　１＞　式（ＳＭ－Ｋ）の化合物及び式（ＲＧ－Ｋ）の化合物を用いて縮合反応を行うことにより式（ＩＭ－Ｋ）を製造することができる。
＜Ｓｔｅｐ　２＞［製造方法Ｋ］＜Ｓｔｅｐ　１＞で得られる式（ＩＭ－Ｋ）の化合物を用いて、［製造方法Ｊ］＜Ｓｔｅｐ　２＞と同様な反応、保護基Ｐ１の脱保護を行うことにより式（ＡＭ－２－Ｋ）で表されるアミン、又はその塩を製造することができる。
［製造方法Ｌ］
　式（ＡＭ－２－Ｌ）で表されるアミンの製造方法：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000088
式（ＳＭ－Ｌ）の化合物及び式（ＲＧ－Ｌ１）の化合物を用いて、縮合反応を行い縮合体を得る。続いて、保護基Ｐ１を脱保護することにより式（ＡＭ－２－Ｌ）で表されるアミン、又はその塩を製造することができる。　
［製造方法Ｍ］
　式（ＡＭ－２－Ｍ）で表されるアミンの製造方法：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000089
　式（ＳＭ－Ｌ）の化合物及び式（ＲＧ－Ｍ）の化合物を用いて、縮合反応を行い縮合体を得る。続いて、保護基Ｐ１を脱保護することにより式（ＡＭ－２－Ｍ）で表されるアミン、又はその塩を製造することができる。
　前記［製造方法Ａ］～［製造方法Ｍ］で製造することができる式（ＡＭ－１）又は式（ＡＭ－２）で表わされるアミン以外のアミン、例えば、式（ＡＭ－１）のリンカー－Ｌ１－又は式（ＡＭ－２）のリンカー－Ｌ２－が、直鎖のアルキレン基（－（ＣＨ２）ｎ－、ｎ＝１～３０）［当該基中の－ＣＨ２－は、－Ｃ（＝Ｏ）－、－ＣＯＮＨ－、－Ｏ－、－ＮＨ－、－Ｓ－、炭素数が３～８のシクロアルキル環、ベンゼン環、複素環（ピリジン環、ピペリジン環、ピペラジン環、等の５～６員芳香族複素環又は５～６員非芳香族複素環）、等の基で複数個（例えば、１～１０個、又は１～５個）置き換えられても良く；当該直鎖のアルキレン基（－ＣＨ２－）の水素原子は、オキソ基（＝Ｏ）、Ｃ１－６アルキル基（例えば、メチル基、エチル基、ｎ－プロピル基、ｉｓｏ－プロピル基、等の基）、ハロゲン原子（例えば、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子、等）、水酸基（－ＯＨ）、等の基から選択される基で複数個（例えば、１～１０個、又は１～５個）置換されていても良い］である場合、文献公知の方法、例えば、『実験化学講座　第５版、各本、２００７年、丸善』、『Comprehensive Organic Transformations, A Guide to Functional Group Preparations, 3rd Edition (Edited by Richard C. Larock), 2018年』、『Strategic Applications of Named Reactions in Organic Synthesis, (Edited by Laszlo Kurti, Barbara Czako), Academic Press, 2005年』等に記載の合成方法を適宜組み合わせることにより、所望のアミンを製造することができる。
式（ＡＭ－１Ａ）又は式（ＡＭ－２Ａ）［各式中の、Ａｋｙ、－Ｌ１Ａ－、－Ｌ２Ａ－の定義は、前記態様［１Ｘ］中の定義と同じである］で表されるアミンは、市販化合物、又は市販化合物から文献公知の製造方法により製造できる化合物を用いて、文献公知の方法、例えば、国際公開第２０１９／２４０２１９号パンフレット、国際公開第２０２１／１２５２５５号パンフレット、『実験化学講座　第５版、各本、２００７年、丸善』、『Comprehensive Organic Transformations, A Guide to Functional Group Preparations, 3rd Edition (Edited by Richard C. Larock), 2018年』、『Strategic Applications of Named Reactions in Organic Synthesis, (Edited by Laszlo Kurti, Barbara Czako), Academic Press, 2005年』等に記載の合成方法（酸化・還元反応、－O-CH2-結合形成反応、ハロゲン化反応、アジド化反応、付加・脱離反応、縮合反応、保護・脱保護等）を適宜組み合わせることにより、所望のアミンを製造することができる。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000090
　本明細書中、式（ＡＭ－１）、式（ＡＭ－１Ａ）、式（ＡＭ－２）、式（ＡＭ－２Ａ）で表わされるアミン（各々の式の下位の式も含む）は、製薬学的に許容される塩（例えば、酸付加塩；例えば塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、ｐ－トルエンスルホン酸塩等）を形成する場合がある。
　本明細書中の化合物は、塩を形成することができ、常法に従い、例えば、適量の酸もしくは塩基を含む溶液を混合することにより目的の塩を形成させた後に分別濾取するか、もしくは該混合溶媒を留去することにより得ることができる。塩に関する総説として、Ｈａｎｄｂｏｏｋ　ｏｆ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｓａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，　Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，　ａｎｄ　Ｕｓｅ、Ｓｔａｈｌ＆Ｗｅｒｍｕｔｈ（Ｗｉｌｅｙ－ＶＣＨ、２００２）が出版されており、本書に詳細な記載がなされている。
　本明細書中、式（ＡＭ－１）、式（ＡＭ－１Ａ）、式（ＡＭ－２）、式（ＡＭ－２Ａ）で表わされるアミン（各々の式の下位の式も含む）又はその塩は、水、エタノール、グリセロール等の溶媒と溶媒和物を形成し得る。
　本明細書中、特に断りのない限り、環状基に可変置換基が置換している場合、該可変置換基は環状基の特定の炭素原子に結合されていない事を意味する。例えば、下記式Ａにおける可変置換基Ｒｓは、該式Ａにおける炭素原子ｉ、ｉｉ、ｉｉｉ、ｉｖ又はｖの何れかに置換する事ができる事を意味する。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000091
５－１．架橋アルギン酸ゲル
　本明細書中、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる架橋アルギン酸ゲルは、前記「２．化学修飾アルギン酸誘導体」の項に記載の化学修飾アルギン酸誘導体を用いて形成される、（ｉ）２価の金属イオン結合を介した架橋、（ｉｉ）化学結合を介した架橋、又は（ｉｉｉ）２価の金属イオン結合及び化学結合の両方を介した架橋を有する架橋アルギン酸ゲル（架橋アルギン酸または化学架橋アルギン酸と言うこともできる）がある。ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる架橋アルギン酸ゲルは、架橋としてＨｕｉｓｇｅｎ反応（架橋反応）を行うことにより形成されるトリアゾール環による化学架橋、及び２価金属イオン（例えば、カルシウムイオン等）を共存させることにより形成されるイオン架橋の両方を含む架橋アルギン酸ゲルである。又、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる架橋アルギン酸ゲルは、架橋としてＨｕｉｓｇｅｎ反応（架橋反応）を行うことにより形成されるトリアゾール環による化学架橋を含む、架橋アルギン酸ゲルである。
　下記の記載において、式（Ｉ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体、式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体は、各々、式（Ｉ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体、式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体へ置き換えることができる。
　本明細書中、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる架橋アルギン酸ゲルは、前記式（Ｉ）及び前記式（ＩＩ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体を用いて、当該誘導体間に化学架橋を形成させるＨｕｉｓｇｅｎ反応（架橋反応）を行うことで得られる。又は、前記式（Ｉ）及び前記式（ＩＩ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体に２価の金属イオンを共存させることにより、当該誘導体間にイオン架橋を形成させることで得られる。又は、前記式（Ｉ）及び前記式（ＩＩ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体を用いて、Ｈｕｉｓｇｅｎ反応（架橋反応）を行い、当該誘導体間に化学架橋を形成させ、更に２価の金属イオンを共存させることにより、当該誘導体間にイオン架橋を形成させることでも得られる。
　本明細書中、「架橋が形成される」、「架橋が形成された」、又は「架橋反応を行う」とは、前記式（Ｉ）及び前記式（ＩＩ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体を用いて、Ｈｕｉｓｇｅｎ反応を行うことにより、当該式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体間で化学架橋（化学結合）が形成されること、又は、前記式（Ｉ）及び前記式（ＩＩ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体に２価の金属イオンを共存させることにより当該式（Ｉ）の化学修飾アルギン酸誘導体及び式（ＩＩ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体の各誘導体間でイオン架橋（イオン結合）が形成されること、又は、前記Ｈｕｉｓｇｅｎ反応による化学架橋及び２価の金属イオンによるイオン架橋の両方が形成されることを意味する。また、アルギン酸（アルギン酸ナトリウム等）に２価の金属イオンを共存させることにより、アルギン酸にイオン架橋が形成されることも意味する。
　前記式（Ｉ）及び前記式（ＩＩ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体に２価金属イオンを接触させることにより、イオン架橋が形成され、イオン架橋アルギン酸ゲルになる時間は、例えば、瞬時（例えば、１～５秒）～数時間（例えば、１～３時間）である。又、前記式（Ｉ）及び前記式（ＩＩ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体間でＨｕｉｓｕｇｅｎ反応が進行して、化学架橋が形成され、化学架橋アルギン酸ゲルになる時間は、例えば、数秒～２４時間、数秒～１２時間、又は数秒～３０分間である。
　前記架橋アルギン酸ゲルを得る為に用いられる２価金属イオンとしては、特に限定されないが、例えば、カルシウムイオン、マグネシウムイオン、バリウムイオン、ストロンチウムイオン、亜鉛イオン等が挙げられ、好ましくはカルシウムイオン、バリウムイオン又はストロンチウムイオンであり、より好ましくはカルシウムイオン又はバリウムイオンである。
　２価金属イオンを含む溶液としては、特に限定されないが、例えば、カルシウムイオンを含む溶液（例えば、塩化カルシウム水溶液、炭酸カルシウム水溶液、グルコン酸カルシウム水溶液、等の水溶液）、バリウムイオンを含む溶液（例えば、塩化バリウム水溶液等の水溶液）、ストロンチウムイオンを含む溶液（例えば、塩化ストロンチウム水溶液等の水溶液）が挙げられ、好ましくはカルシウムイオンを含む溶液又はバリウムイオンを含む溶液であり、より好ましくは、塩化カルシウム水溶液又は塩化バリウム水溶液である。
　２価金属イオンを含む溶液の２価金属イオン濃度（例えば、カルシウムイオン又はバリウムイオン濃度）は、特に限定されないが、例えば、約１ｍＭ～約１Ｍの範囲、又は約１０～約５００ｍＭの範囲であり；好ましくは、約１０～約１００ｍＭである。
　２価金属イオンを含む溶液等を調製する際に用いる溶媒は、特に限定されないが、例えば、水道水、純水（例えば、蒸留水、イオン交換水、ＲＯ水、ＲＯ－ＥＤＩ水、等）、超純水（ＭｉｌｌｉＱ水）、培地、細胞培養用培地、培養液、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、及び生理食塩水等が挙げられ；好ましくは生理食塩水又は超純水である。
　前記ファイバのコア層に含まれる架橋アルギン酸ゲルにおいて、イオン架橋及び化学架橋がある場合、イオン架橋の反応は瞬時かつ可逆的であるのに対して、化学架橋の反応は、比較的温和な条件でゆっくり反応が進行して得られ、非可逆的である。この性質を利用して、化学架橋とイオン架橋を適切に組み合わせることにより、本発明の架橋アルギン酸ゲルを効率的に作製することが可能となる。例えば、後述の「９．ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの製造方法」における装置ＸＸを用いて、式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体の混合溶液を、２価金属イオンを含有する溶液の中に射出することにより、イオン架橋が形成され、瞬時にファイバ（繊維）形状の架橋アルギン酸ゲルを作製することができる。又、同時に式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体間でＨｕｉｓｇｅｎ反応（架橋反応）が進行し化学架橋が形成されることで、イオン架橋および化学架橋の両方を含むファイバ（繊維）形状の架橋アルギン酸ゲルが得られる。架橋アルギン酸ゲルの物性は、例えば、使用する２価金属イオンが含まれる水溶液（例えば、塩化カルシウム水溶液）の濃度、若しくは、化学修飾アルギン酸誘導体に導入される反応性基の導入率を変化させる等の方法で、調整が可能である。
　前記の架橋反応を利用し、式（Ｉ）及び（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を用いて、本発明のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる架橋アルギン酸ゲルをファイバ（繊維）形状（「架橋アルギン酸ゲルファイバ」ともいう）として作製することができる。尚、当該架橋アルギン酸ゲルファイバを作製する際に、式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の混合溶液に、アルギン酸（例えば、アルギン酸ナトリウム）溶液を添加して、作製することができる。
　架橋アルギン酸ゲルファイバの長さは、例えば、後述の「９．ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの製造方法」において、装置ＸＸの排出口２から、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞ならびに式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液を射出する際に、射出される混合溶液を、ハサミ、カッター等の切断器具を用いて一定間隔で切断することで、所望の長さを有する架橋アルギン酸ゲルファイバを得ることが可能である。
　架橋アルギン酸ゲルファイバの長さは、特に限定はされないが、後述の「９．ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの製造方法」に記載された、長さのものが挙げられる。
　本発明では、ファイバ構造を強化（例えば、長期安定性の獲得、等）する方法の１つとして、化学架橋（Ｈｕｉｓｕｇｅｎ反応）を利用している。前記の様に作製されたイオン架橋及び化学架橋の両方を有する架橋アルギン酸ゲルファイバを用いて、培養液中で培養を行う場合、イオン架橋を形成している２価金属イオンが徐々に可逆的に放出され、化学架橋のみが残った架橋アルギン酸ゲルファイバとなるが、非可逆的な化学架橋によりゲル構造が保たれ、安定に継続して培養することが可能である。
　本発明の、式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を用いて架橋反応を行うことにより形成される架橋アルギン酸ゲルは、特に限定されないが、例えば、コラーゲン溶液、コラーゲンゲル、培地、細胞培養用培地、培養液、メチルセルロース、スクロース溶液、アルギン酸溶液、アルギン酸ゲル、等の他の成分を含むことができる。
　本明細書中、単純に「アルギン酸ゲル」と記載する場合、アルギン酸（例えば、アルギン酸ナトリウム）又はその溶液に２価の金属イオンを共存させることで、イオン架橋が形成された、アルギン酸ゲルを意味する。
５－２．架橋アルギン酸ゲルにおける化学架橋
　本明細書中、架橋アルギン酸ゲルは、前記式（Ｉ）及び前記式（ＩＩ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体を混合してＨｕｉｓｇｅｎ反応を行うことにより、得ることができる。また、前記式（Ｉ－Ａ）及び前記式（ＩＩ－Ａ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体を混合してＨｕｉｓｇｅｎ反応を行うことでも、得ることができる。
　本明細書中、架橋アルギン酸ゲルは、化学架橋（アルキン基及びアジド基から形成されるトリアゾール環による架橋）を介して三次元の網目構造を形成する。好ましい化学修飾アルギン酸誘導体は、架橋後の架橋アルギン酸ゲルの安定性を改善するものである。なお、架橋アルギン酸ゲルの物性は、例えば、原料である式（Ｉ）又は式（ＩＩ）で表される化学修飾アルギン酸における各反応性基の導入率によって調整することが可能である。
　いくつかの態様の架橋アルギン酸ゲルは、下記式（ＩＩＩ－Ｌ）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000092
 ［式（ＩＩＩ－Ｌ）中、両端の－ＣＯＮＨ－及び－ＮＨＣＯ－は、アルギン酸の任意のカルボキシル基を介したアミド結合を表わし；－Ｌ１－、－Ｌ２－、及び－Ｘ－は、前記態様[１－１２]中の定義と同じである］で表わされる基を介して架橋された架橋アルギン酸ゲルである。
　本明細書中、架橋アルギン酸ゲルは、化学架橋（アルキン基及びアジド基から形成されるトリアゾール環による架橋）を介して三次元の網目構造を形成する。好ましい化学修飾アルギン酸誘導体は、架橋後の架橋アルギン酸ゲルの安定性を改善するものである。なお、架橋アルギン酸ゲルの物性は、例えば、原料である式（Ｉ－Ａ）又は式（ＩＩ－Ａ）で表される化学修飾アルギン酸における各反応性基の導入率によって調整することが可能である。
　いくつかの態様の架橋アルギン酸ゲルは、下記式（ＩＩＩ－Ｌx）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000093
 ［式（ＩＩＩ－Ｌｘ）中、両端の－ＣＯＮＨ－及び－ＮＨＣＯ－は、アルギン酸の任意のカルボキシル基を介したアミド結合を表わし；－Ｌ１Ａ－、－Ｌ２Ａ－、及び－ＸＡ－は、前記態様［１－１２Ｘ］中の定義と同じである］で表わされる基を介して架橋された架橋アルギン酸ゲルである。
　下記の記載において、式（Ｉ）及び式（ＩＩ）は、各々、式（Ｉ－Ａ）及び式（ＩＩ－Ａ）に置き換えることができる。
　いくつかの態様にて、架橋アルギン酸ゲルを作製する際の、式（Ｉ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体と、式（ＩＩ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体の混合比は、式（Ｉ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体と式（ＩＩ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体の重量比にて、例えば、１：１．０～４．０、又は１：１．０～３．０、又は１：１．０～２．０、又は１：１．０～１．５、又は１：１であり；好ましくは１：１．０～３．０である。
　いくつかの態様にて、架橋アルギン酸ゲルを作製する際の、式（ＩＩ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体と、式（Ｉ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体の混合比は、式（ＩＩ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体と式（Ｉ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体の重量比にて、例えば、１：１．０～４．０、又は１：１．０～３．０、又は１：１．０～２．０、又は１：１．０～１．５、又は１：１である。
　いくつかの態様にて、架橋アルギン酸ゲルを作製する際の、式（Ｉ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体と、式（ＩＩ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体の混合比は、より好ましくは式（Ｉ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体と式（ＩＩ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体の反応性基の導入率（ｍｏｌ％）比にて、例えば、１：１．０～４．０、又は１：１．０～３．０、又は１：１．０～２．０、又は１：１．０～１．５、又は１：１であり；好ましくは１：１．０～３．０である。
　いくつかの態様にて、架橋アルギン酸ゲルを作製する際の、式（ＩＩ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体と、式（Ｉ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体の混合比は、より好ましくは式（ＩＩ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体と式（Ｉ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体の反応性基の導入率（ｍｏｌ％）比にて、例えば、１：１．０～４．０、又は１：１．０～３．０、又は１：１．０～２．０、又は１：１．０～１．５、又は１：１である。
　架橋アルギン酸ゲルは、アルギン酸の構成単位の全てのカルボキシル基が上記式（ＩＩＩ－Ｌ）の架橋を有している必要はない。架橋アルギン酸ゲルにおける、上記式（ＩＩＩ－Ｌ）で表わされる架橋の導入率（架橋率とも言う）は、例えば、約０．１～約８０％、約０．３～約６０％、約０．５～約３０％、または約１．０～約１０％の範囲である。
　架橋アルギン酸ゲルは、アルギン酸の構成単位の全てのカルボキシル基が上記式（ＩＩＩ－Ｌｘ）の架橋を有している必要はない。架橋アルギン酸ゲルにおける、上記式（ＩＩＩ－Ｌｘ）で表わされる架橋の導入率（架橋率とも言う）は、例えば、約０．１～約８０％、約０．３～約６０％、約０．５～約３０％、または約１．０～約１０％の範囲である。
　本発明のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる架橋アルギン酸ゲルを得るためのＨｕｉｓｇｅｎ反応における前記式（Ｉ）又は式（ＩＩ）で表わされるアルギン酸誘導体の溶液の濃度は、例えば、約０．０１～約１．５重量％の範囲であり；好ましくは、約０．０５～約１．０重量％の範囲であり；より好ましくは、約０．０８～約０．７５重量％の範囲である。
　本発明のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる架橋アルギン酸ゲルを得るためのＨｕｉｓｇｅｎ反応における前記式（Ｉ－Ａ）又は式（ＩＩ－Ａ）で表わされるアルギン酸誘導体の溶液の濃度は、例えば、約０．０１～約１．５重量％の範囲であり；好ましくは、約０．０５～約１．０重量％の範囲であり；より好ましくは、約０．０８～約０．７５重量％の範囲である。
　本発明のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる架橋アルギン酸ゲルを得るための前記式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされるアルギン酸誘導体を用いたＨｕｉｓｇｅｎ反応において、前記式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされるアルギン酸誘導体の混合溶液に、アルギン酸溶液を添加する場合、当該アルギン酸溶液の濃度(ＣＡＬＧ)は、例えば、０＜ＣＡＬＧ≦約１．９８重量％の範囲であり；好ましくは、０＜ＣＡＬＧ≦約１．８重量％の範囲であり；より好ましくは、０＜ＣＡＬＧ≦約１．７重量％の範囲である。
　本発明のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる架橋アルギン酸ゲルを得るための前記式（Ｉ－Ａ）及び式（ＩＩ－Ａ）で表わされるアルギン酸誘導体を用いたＨｕｉｓｇｅｎ反応において、前記式（Ｉ－Ａ）及び式（ＩＩ－Ａ）で表わされるアルギン酸誘導体の混合溶液に、アルギン酸溶液を添加する場合、当該アルギン酸溶液の濃度（ＣＡＬＧ）は、例えば、０＜ＣＡＬＧ≦約１．９８重量％の範囲であり；好ましくは、０＜ＣＡＬＧ≦約１．８重量％の範囲であり；より好ましくは、０＜ＣＡＬＧ≦約１．７重量％の範囲である。
　Ｈｕｉｓｇｅｎ反応の反応温度（架橋アルギン酸ゲル、架橋アルギン酸ゲルファイバを作製する際の温度）は、通常、外温約４～約６０℃であり、好ましくは外温約１５～約３７℃の範囲である。
６．ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ
　下記の記載において、式（Ｉ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体、式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体は、各々、式（Ｉ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体、式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体へ置き換えることができる。
　本明細書中、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバは、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞と、前記式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体を用いて架橋反応を行うことにより得られる架橋アルギン酸ゲルとを含むコア層を、カチオン性ポリマー（カチオン性ポリマー層）で被覆して得られる、ファイバ状（繊維状）の構造体を意味する（ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの製造方法は後述する）。
　又、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバは、コア層とコア層の外側に配置されるカチオン性ポリマー層を含む、ファイバ状（繊維状）の構造体である。前記コア層は、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞と前記式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体を用いて架橋が形成された架橋アルギン酸ゲルとを含み、前記カチオン性ポリマー層は、カチオン性ポリマーである。
　又、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバは、コア層とコア層の外側に配置されるカチオン性ポリマー層を含む、ファイバ状（繊維状）の構造体である。前記コア層は、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞と、架橋アルギン酸ゲルとを含み、前記架橋アルギン酸ゲルは、前記式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体を用いて架橋反応を行うことにより得られる架橋を含み、前記カチオン性ポリマー層は、カチオン性ポリマーである。
　図１は、架橋アルギン酸ゲルファイバをカチオン性ポリマーで被覆することで形成されたポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの一例の断面図を示す。このポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバは、その外径がｃであり、直径ａのコア層５と厚さｂのカチオン性ポリマー層４を含み、コア層５は、抗体、生理活性物質等を産生する細胞６が含まれた架橋アルギン酸ゲルを含んでいる。当該、コア層５の架橋アルギン酸ゲルは、式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を用いて架橋反応を行うことにより形成された架橋アルギン酸ゲルである。
　いくつかの態様のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層は、前記態様［１］に記載の式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を用いて架橋反応を行うことにより形成された架橋アルギン酸ゲルの他に、細胞毒性を有さないものであれば特に限定されないが、コラーゲン溶液、コラーゲンゲル、培地、細胞培養用培地、培養液、メチルセルロース、スクロース溶液、アルギン酸溶液、アルギン酸ゲル、等の他の成分を含むことができ；好ましくは、アルギン酸溶液、アルギン酸ゲル、培地、培養液からなる群から選択される成分を含むことができる。
　「ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ」は、ファイバの外径（図１でのｃ）が、例えば、約０．１～約２０００μｍ程度である繊維状の構造体であることから、「ポリマーコーティング架橋アルギン酸マイクロファイバ」と言うこともある。
　ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの中心軸に対する垂直方向の断面形状は、円形に限定されるものではなく、非対称構造や変形させた形状でも良く、例えば、断面形状は、円形、楕円系、又は多角形（例えば、三角形、四角形、五角形等）等の多様な形状であっても良く、好ましくは、図１に示されるような円形の断面形状である。
　ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの外径（非円形の場合は、長径又は最大径を外径とみなす）は、例えば、約０．１～約２０００μｍ、約０．２μｍ～約２０００μｍ、約０．２～約１０００μｍ、約０．５～約１０００μｍ、約１～約１０００μｍ、約１０～約１０００μｍ、約２０～約１０００μｍ等の範囲である。
　ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層の直径は、例えば、約０．１～約２０００μｍ、約０．２μｍ～約２０００μｍ、約１～約１０００μｍ、約２～約５００μｍ、約２～約２００μｍ等の範囲である。又、例えば、約０．１～約２０００μｍ、約０．２μｍ～約２０００μｍ、約０．２～約１０００μｍ、約０．５～約１０００μｍ、約１～約１０００μｍ、約１０～約１０００μｍ、約２０～約１０００μｍ等の範囲である。コア層の断面の直径は、ファイバ断面の直径未満であって５０％以上であることが好ましい。
　ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのポリマー層（ｂ）の厚さは、「（ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの外径－コア層の直径）／２（図１でｂ＝（ｃ－ａ）／２）」により求めることができる。ポリマー層の厚さは、例えば、約０．１～約２００μｍ、約１～約２００μｍ、約５μｍ～約２００μｍ等である。
　上記のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層の直径、外径、及びポリマー層の内径の値は、例えば、ポリマー層に蛍光発色するカチオン性ポリマーを用いてファイバを作製し、位相差光学顕微鏡による画像から計測することが可能である。当該ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの数カ所における計測値の平均値として表される。上記のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層及びポリマー層は、通常、実質的に均一な厚みを有しており、好ましくは、各層は、±１０％の範囲内の厚さ均一性を有する。
　ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの長さは、特に限定はされないが、例えば、後述の「９．ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの製造方法」に記載された、約０．０１ｍ～約１００ｍ、約０．１ｍ～約７５ｍ、約０．３～約５０ｍ等の長さが挙げられる。
　本明細書中、いくつかの態様のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層は、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞を含ませた、式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の混合溶液を用いて形成することができる。その場合、式（Ｉ）又は式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の溶液の濃度は、例えば、各々、約０．０１～約１．５重量％の範囲であり；好ましくは、約０．０５～約１．０重量％の範囲であり；より好ましくは、約０．０８～約０．７５重量％の範囲である。
　又、式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の混合溶液の濃度は、例えば、約０．０２～約２．０重量％の範囲であり；好ましくは、約０．１～約２．０重量％の範囲であり；より好ましくは約０．１５～約１．５重量％の範囲である。
　又、前記、式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の混合溶液に、アルギン酸溶液を添加する場合の、当該アルギン酸の濃度(ＣＡＬＧ)は、例えば、０＜ＣＡＬＧ≦約１．９８重量％の範囲であり；好ましくは、０＜ＣＡＬＧ≦約１．８重量％の範囲であり；より好ましくは、０＜ＣＡＬＧ≦約１．７重量％の範囲である。
　本明細書中、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層の形成に用いる、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞を含ませた、式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の混合溶液に、アルギン酸溶液を添加する場合、当該式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液の濃度（Ｃ１（重量％））とアルギン酸溶液の濃度（Ｃ２（重量％））の組合せは、特に限定されないが、例えば、０＜Ｃ２（重量％）≦約１．９８（重量％）、
０＜Ｃ１（重量％）＜約２．０（重量％）－Ｃ２（重量％）、
０＜Ｃ１＋Ｃ２（重量％）≦約２．０（重量％）
で表される式を満たす範囲の組合せであり；例えば、（Ｃ１：Ｃ２）＝（約０．２：約１．３）、（約０．５：約１．０）、（約１．０：約０．５）、（約０．６６：約１．３４）、（約０．３４：約０．６６）、（約０．１６：約０．３４）等の組み合わせが挙げられる。これら濃度以外にも、Ｃ１およびＣ２の濃度を適宜組み合わせて調製することができる。
　本明細書中、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層の形成に用いる、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞を含ませた、式（Ｉ－Ａ）及び式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の混合溶液に、アルギン酸溶液を添加する場合、当該式（Ｉ－Ａ）及び式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液の濃度（Ｃ１ｘ（重量％））とアルギン酸溶液の濃度（Ｃ２ｘ（重量％））の組合せは、例えば、
０＜Ｃ２ｘ（重量％）≦約１．９８（重量％）、
０＜Ｃ１ｘ（重量％）＜約２．０（重量％）－Ｃ２ｘ（重量％）、
０＜Ｃ１ｘ＋Ｃ２ｘ（重量％）≦約２．０（重量％）
で表される式を満たす範囲の組合せであり；
例えば、（Ｃ１ｘ：Ｃ２ｘ）＝（約０．２：約１．３）、（約０．５：約１．０）、（約１．０：約０．５）、（約０．６６：約１．３４）、（約０．３４：約０．６６）、（約０．１６：約０．３４）等の組み合わせが挙げられる。これら濃度以外にも、Ｃ１ｘおよびＣ２ｘの濃度を適宜組み合わせて調製することができる。
　本明細書中、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層の形成に用いる、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞を含ませた、式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の混合溶液に、アルギン酸溶液を添加する場合、当該式（Ｉ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の溶液の濃度（Ｃ１Ａ（重量％））、式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の溶液の濃度（Ｃ１Ｎ（重量％））及びアルギン酸溶液の濃度（Ｃ２（重量％））の組合せは、特に限定されないが、例えば、０＜Ｃ１Ａ≦約２．０－Ｃ２、０＜Ｃ１Ｎ≦約２．０－Ｃ２、０＜Ｃ２≦約１．９８、０＜Ｃ１Ａ＋Ｃ１Ｎ＋Ｃ２≦約２．０で表される式を満たす範囲の組合せであり；例えば、（Ｃ１Ａ：Ｃ１Ｎ：Ｃ２）＝（約０．１：約０．１：約１．３）、（約０．２５：約０．２５：約１．０）、（約０．５：約０．５：約０．５）、（約０．３３：約０．３３：約１．３４）、（約０．１７：約０．１７：約０．６６）、（約０．０８：約０．０８：約０．３４）等の組み合わせが挙げられる。これら濃度以外にも、Ｃ１Ａ、Ｃ１Ｎ、Ｃ２の濃度を適宜組み合わせて調製することができる。
　本明細書中、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層の形成に用いる、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞を含ませた、式（Ｉ－Ａ）及び式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の混合溶液に、アルギン酸溶液を添加する場合、当該式（Ｉ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の溶液の濃度（Ｃ１Ａｘ（重量％））、式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の溶液の濃度（Ｃ１Ｎｘ（重量％））及びアルギン酸溶液の濃度（Ｃ２ｘ（重量％））の組合せは、特に限定されないが、例えば、
０＜Ｃ２ｘ（重量％）≦約１．９８（重量％）、
０＜Ｃ１Ａｘ（重量％）＜約２．０（重量％）－Ｃ２ｘ（重量％）、
０＜Ｃ１Ｎｘ（重量％）＜約２．０（重量％）－Ｃ２ｘ（重量％）、
０＜Ｃ１Ａｘ＋Ｃ１Ｎｘ＋Ｃ２ｘ（重量％）≦約２．０（重量％）
で表される式を満たす範囲の組合せであり；
例えば、（Ｃ１Ａｘ：Ｃ１Ｎｘ：Ｃ２ｘ）＝（約０．１：約０．１：約１．３）、（約０．２５：約０．２５：約１．０）、（約０．５：約０．５：約０．５）、（約０．３３：約０．３３：約１．３４）、（約０．１７：約０．１７：約０．６６）、（約０．０８：約０．０８：約０．３４）等の組み合わせが挙げられる。これら濃度以外にも、Ｃ１Ａｘ、Ｃ１Ｎｘ、Ｃ２ｘの濃度を適宜組み合わせて調製することができる。
　本明細書中、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層の形成に用いる、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞ならびに式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液中の、式（Ｉ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の溶液および式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の溶液の各容量比（ｖ１、ｖ２）は、例えば、ｖ１＋ｖ２＝１５の比率であり、例えば、（ｖ１：ｖ２）＝（７．５：７．５）である。但し、ｖ１＋ｖ２＝１５において、０＜ｖ１＜１５、０＜ｖ２＜１５である。
　本明細書中、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層の形成に用いる、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞ならびに式（Ｉ－Ａ）及び式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液中の、式（Ｉ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の溶液および式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の溶液の各容量比（ｖ１ｘ、ｖ２ｘ）は、例えば、ｖ１ｘ＋ｖ２ｘ＝１５の比率であり、例えば、（ｖ１ｘ：ｖ２ｘ）＝（７．５：７．５）である。但し、ｖ１ｘ＋ｖ２ｘ＝１５において、０＜ｖ１ｘ＜１５、０＜ｖ２ｘ＜１５である。
　本明細書中、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層の形成に用いる、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞ならびに式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液に、アルギン酸溶液を添加する場合、アルギン酸溶液を添加した混合溶液における、式（Ｉ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の容量（ｖ１）、式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の溶液の容量（ｖ２）およびアルギン酸溶液の容量（ｖ３）の容量比は、例えば、ｖ１＋ｖ２＋ｖ３＝１５の比率であり、例えば、（ｖ１：ｖ２：ｖ３）＝（５：５：５）、（２．５：２．５：１０）、（１：１：１３）等の組み合わせである。但し、ｖ１＋ｖ２＋ｖ３＝１５において、０＜ｖ１＜１５、０＜ｖ２＜１５、０＜ｖ３＜１５である。
　本明細書中、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層の形成に用いる、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞ならびに式（Ｉ－Ａ）及び式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液に、アルギン酸溶液を添加する場合、アルギン酸溶液を添加した混合溶液における、式（Ｉ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の容量（ｖ１ｘ）、式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の溶液の容量（ｖ２ｘ）およびアルギン酸溶液の容量（ｖ３ｘ）の容量比は、例えば、ｖ１ｘ＋ｖ２ｘ＋ｖ３ｘ＝１５の比率であり、例えば、（ｖ１ｘ：ｖ２ｘ：ｖ３ｘ）＝（５：５：５）、（２．５：２．５：１０）、（１：１：１３）等の組み合わせである。但し、ｖ１ｘ＋ｖ２ｘ＋ｖ３ｘ＝１５において、０＜ｖ１ｘ＜１５、０＜ｖ２ｘ＜１５、０＜ｖ３ｘ＜１５である。
　本明細書中、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層の形成に用いる、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞を含ませた、式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の混合溶液、又は式（Ｉ－Ａ）及び式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の混合溶液に、アルギン酸溶液を添加する場合、当該アルギン酸溶液の調製に用いられるアルギン酸（例えば、アルギン酸ナトリウム、等）の分子量は、特に限定はされないが、ゲルろ過クロマトグラフィー法（ＧＰＣ法）により測定した重量平均分子量が、例えば、約１５０，０００Ｄａ～約２，５００，０００Ｄａの範囲、約３００，０００Ｄａ～約２，０００，０００Ｄａの範囲、約７００，０００Ｄａ～約２，０００，０００Ｄａ等の範囲である。
　本明細書中、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層の形成に用いる、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞を含ませた、式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の混合溶液、又は式（Ｉ－Ａ）及び式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の混合溶液に、アルギン酸溶液を添加する場合、当該アルギン酸溶液の調製に用いられるアルギン酸（例えば、アルギン酸ナトリウム、等）の分子量は、特に限定はされないが、ゲルろ過クロマトグラフィー法（ＧＰＣ法）により測定した重量平均分子量が、例えば、約１５０，０００Ｄａ～約２，５００，０００Ｄａの範囲、約３００，０００Ｄａ～約２，５００，０００Ｄａの範囲、約７００，０００Ｄａ～約１，４００，０００Ｄａ、約８００，０００Ｄａ～約１，５００，０００Ｄａ、約１，４００，０００～約２，０００，０００Ｄａ、約１，５００，０００～約２，５００，０００等の範囲である。
　ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層を作製する際に用いる、式（Ｉ）、式（Ｉ－Ａ）、式（ＩＩ）又は式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の溶液、アルギン酸溶液等を調製する際に用いる溶媒としては、特に限定されないが、例えば、培地、細胞培養用培地、培養液、等張緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、及び生理食塩水等が挙げられ；好ましくは、培地、細胞培養用培地、培養液、生理食塩水または等張緩衝液である。
７．カチオン性ポリマー
　ポリカチオンとは、１分子中に２個以上のカチオン性基を有する化合物をいい、カチオン性基とは、カチオン基又はカチオン基に誘導され得る基をいう。カチオン性基としては、例えば、アミノ基；メチルアミノ基、エチルアミノ基等のモノアルキルアミノ基；ジメチルアミノ基、ジエチルアミノ基等のジアルキルアミノ基；イミノ基；グアニジノ基、等の基が挙げられる。アミノ基はプロトンが配位結合した－ＮＨ３ ＋基であってもよい。
　本明細書中、カチオン性ポリマーとは、１分子中に２個以上のカチオン性基を有するポリマーをいう。カチオン性ポリマーとしては、カチオン性基を有するモノマーを重合させたものが挙げられる。また、カチオン性ポリマーは、水に溶解することが可能な親水性を有し、水中でカチオン性基が解離することにより正電荷を帯びるという特性を有するものが好ましい。カチオン性ポリマーとしては、特に１分子中に２個以上のアミノ基を有するポリマーが好ましい。
　本明細書中、カチオン性ポリマーとしては、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞を含む、式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を用いて架橋反応を行うことにより形成される架橋アルギン酸ゲルファイバ、又は抗体、生理活性物質等を産生できる細胞を含む、式（Ｉ－Ａ）及び式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を用いて架橋反応を行うことにより形成される架橋アルギン酸ゲルファイバの表面において、当該架橋アルギン酸ゲルファイバが有するカルボキシル基とカチオン性ポリマーのカチオン性基とが静電的相互作用により、当該架橋アルギン酸ゲルファイバの表面がカチオン性ポリマーにて被覆される（図２を参照）ことで、架橋アルギン酸ゲルファイバの強度を高めることができる物質であることが好ましい。また、カチオン性ポリマーは、コア層に含まれる、抗体、生理活性物質等を産生する細胞から産生された抗体、生理活性物質等が、コア層を被覆したカチオン性ポリマー（ポリマー層）を透過して、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの外に放出できる、物質であることが好ましい。
　本明細書中、カチオン性ポリマーとしては、例えば、ポリアミノ酸（塩基性アミノ酸の重合体）、塩基性多糖類（例えば、キトサン等）、塩基性ポリマー（ポリメチレン－ＣＯ－グアニジン（ＰＭＣＧ）、ポリアリルアミン（ＰＡＡ）、ポリビニルアミン（ＰＶＡ）、ポリエチレンイミン、アリルアミン－ジアリルアミン共重合体およびアリルアミン－マレイン酸共重合体等）のカチオン性ポリマーが挙げられ、好ましくは、ポリアミノ酸であるポリ－Ｌ－オルニチン（ＰＬＯ）、ポリ－Ｄ－オルニチン（ＰＤＯ）、ポリ－ＤＬ－オルニチン、ポリ－Ｄ－リジン（ＰＤＬ）、ポリ－Ｌ－リジン（ＰＬＬ）、ポリ－ＤＬ－リジン、ポリ－Ｌ－アルギニン（ＰＬＡ）、ポリ－Ｄ－アルギニン（ＰＤＡ）、ポリ－ＤＬ－アルギニン、ポリ－Ｌ－ホモアルギニン（ＰＬＨＡ）、ポリ－Ｄ－ホモアルギニン（ＰＤＨＡ）、ポリ－ＤＬ－ホモアルギニン、ポリ－Ｌ－ヒスチジン（ＰＬＨ）、ポリ－Ｄ－ヒスチジン（ＰＤＨ）、及びポリ－ＤＬ－ヒスチジン；塩基性ポリマーである、ポリメチレン－ＣＯ－グアニジン（ＰＭＣＧ）、ポリアリルアミン（ＰＡＡ）及びポリエチレンイミンからなる群から選ばれるカチオン性ポリマーであり；より好ましくは、ポリ－Ｌ－オルニチン（ＰＬＯ）、ポリ－Ｌ－リジン（ＰＬＬ）、ポリメチレン－ＣＯ－グアニジン（ＰＭＣＧ）、ポリアリルアミン（ＰＡＡ）又はポリエチレンイミンであり；更に好ましくは、ポリ－Ｌ－オルニチン（ＰＬＯ）、ポリメチレン－ＣＯ－グアニジン（ＰＭＣＧ）又はポリエチレンイミンである。
　本明細書中、カチオン性ポリマーを含む溶液を調製する際に用いるカチオン性ポリマーとしては、例えば、前記ポリアミノ酸、塩基性多糖類、塩基性ポリマー及びそれらの塩（塩酸塩、臭化水素酸塩等）が挙げられる。前記、カチオン性ポリマーは市販品または市販品から調製されたものを使用することが可能である。
　本明細書中、カチオン性ポリマーの重合度は、特に限定されないが、例えば、５０～６，０００の重合度、５０～２，０００の重合度、１００～１，５００の重合度等が、挙げられる。ポリ－Ｌ－オルニチンの場合、例えば、１３０～１，３００の重合度であり、ポリアリルアミンの場合、例えば、５０～１，８００の重合度であり、キトサンの場合、例えば、６０～６，０００の重合度である。
　本明細書中、カチオン性ポリマーの重量平均分子量（Ｍｗ）は、特に限定されないが、例えば、５００～１，０００，０００の範囲内、１，０００～５００，０００の範囲内、３，０００～３００，０００の範囲内、５，０００～１００，０００の範囲内、１０，０００～５０，０００の範囲内、等が、挙げられる。カチオン性ポリマーの重量平均分子量（Ｍｗ）は、ゲル浸透クロマトグラフィー（ＧＰＣ）によって測定することができる。
　例えば、ポリ－Ｌ－オルニチンの場合、市販品のポリ－Ｌ－オルニチン臭化水素酸塩［例えば、分子量：７０，０００～１５０，０００（富士フィルム－和光純薬製）、分子量：１５，０００～３０，０００、３０，０００～７０，０００、５，０００～１５，０００（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ製）等］を使用することができ；例えば、ポリアリルアミンの場合、市販品のポリアリルアミン［例えば、分子量：１，６００、３，０００、５，０００、８，０００、１５，０００、２５，０００（日東紡製）、～１５，０００、～６５，０００（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ製）等］、市販品のポリアリルアミン塩酸塩［例えば、分子量：１，６００、３，０００、５，０００、１５，０００、１００，０００（日東紡製）、～１７，５００、５０，０００（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ製）等］を使用することができ；例えば、キトサンの場合、市販品のキトサン［例えば、分子量：～１５，０００（富士フィルム－和光純薬製）、５，０００、５０，０００、１００，０００、１６０，０００、１８０，０００（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ製）等］を使用することができる。
　カチオン性ポリマーの１つであるキトサンは、キチンの脱アセチル化物であり、その水溶性の観点より、その脱アセチル化度が、例えば、４０～１００％の範囲内、４５～９０％の範囲内、または５０～８０％の範囲内等のものを用いることができる。
　カチオン性ポリマーを含む溶液の濃度は、特に限定されないが、アルギン酸ゲルファイバの表面を均一にコーティングすることができる濃度であればよく、例えば、約０．０１～約１０．０重量％、約０．０１～約５．０重量％、約０．０２～約１．０重量％の濃度が挙げられ、好ましくは、約０．０２～約５．０重量％、より好ましくは約０．０５～約１．０重量％の濃度である。
　カチオン性ポリマーを含む溶液の粘度は、特に限定されないが、例えば、１０．０～５００．０ｍＰａ・ｓの範囲内、２０．０～３００．０ｍＰａ・ｓ の範囲内、５０．０～２００．０ｍＰａ・ｓの範囲内等である。
　カチオン性ポリマーを含む溶液には、２種類以上のカチオン性ポリマーを併用することが可能である。
　カチオン性ポリマーを含む溶液の溶媒としては、カチオン性ポリマーを溶解できるものであれば、特に限定されないが、例えば、水（水道水、純水（例えば、蒸留水、イオン交換水、ＲＯ水、ＲＯ－ＥＤＩ水、等）、超純水（ＭｉｌｌｉＱ水））、無機塩類の水溶液（リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、生理食塩水等）等が挙げられ、カチオン性ポリマーの電荷量をより多くできる、超純水、水又は生理食塩水が好ましい。
８．コア層に含まれる細胞
　本明細書中、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に封入できる細胞としては、特に制限されないが、例えば、抗体（ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、マウス抗体等の各種のモノクローナル抗体又はそれらのバイスペシフィック抗体、低分子化抗体、糖鎖改変抗体等の各種の改変型抗体）産生細胞、生理活性物質（酵素、サイトカイン、ホルモン、血液凝固系因子、ワクチン等）産生細胞、医薬品原料、化学原料、食品原料等として有用な各種の有用物質を産生できる細胞が挙げられる。好ましくは、抗体産生細胞または生理活性物質産生細胞である。
　本明細書中、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に封入できる抗体産生細胞としては、抗体を産生するＢ細胞から得られたハイブリドーマ（抗体産生ハイブリドーマ）、または抗体発現ベクターにより形質転換された培養細胞（抗体産生遺伝子組換え細胞）が挙げられる。
　本明細書中、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に封入できる生理活性物質産生細胞としては、生理活性物質発現ベクターにより形質転換された培養細胞（生理活性物質産生遺伝子組換え細胞）が挙げられる。
これらの遺伝子組換えの宿主として用いられる培養細胞は、特に限定されることは無いが、細菌もしくは酵母等の微生物、植物細胞、昆虫細胞又は動物細胞が挙げられる。
　宿主として用いられる微生物としては、例えば、大腸菌、出芽酵母、分裂酵母又はピキア酵母等が挙げられ、宿主として用いられる昆虫細胞としては、例えば、Ｓｆ９細胞、Ｓｆ２１細胞又はＨｉｇｈ　ｆｉｖｅ細胞等が挙げられる。
　宿主として用いられる動物細胞としては、例えば、ＣＨＯ細胞、ＣＨＯ細胞亜株（ＣＨＯ－Ｋ１細胞、ＣＨＯ－ＤＧ４４細胞、ＣＨＯ－ＤＸＢ１１細胞、又は糖鎖を改変させるように形質転換されたＣＨＯ細胞等）、ＣＯＳ細胞、Ｓｐ２／０細胞、ＮＳ０細胞、ＳＰ２細胞、ＰＥＲＣ６細胞、ＹＢ２／０細胞、ＹＥ２／０細胞、１Ｒ９８３Ｆ細胞、Ｎａｍａｌｗａ細胞、Ｗｉｌ－２細胞、Ｊｕｒｋａｔ細胞、Ｖｅｒｏ細胞、Ｍｏｌｔ－４細胞、ＨＥＫ２９３細胞、ＢＨＫ細胞、ＨＴ－１０８０細胞、ＫＧＨ６細胞、Ｐ３Ｘ６３Ａｇ８．６５３細胞、Ｃ１２７細胞、ＪＣ細胞、ＬＡ７細胞、ＺＲ－４５－３０細胞、ｈＴＥＲＴ細胞、ＮＭ２Ｃ５細胞、又はＵＡＣＣ－８１２細胞等（これらの細胞は、Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｔｙｐｅ　Ｃｕｌｔｕｒｅ　Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎから入手可能なＡＴＣＣ細胞系カタログに記載されているものもある）から、適宜選択することができる。なお、本明細書において、特に断りのない限り、「ＣＨＯ細胞」と記した場合「ＣＨＯ細胞亜株」も含めた細胞を意味し、他の細胞においても各々の細胞亜株を含めた細胞を意味する。
　本明細書中、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に封入できる抗体産生細胞としては、好ましくは、抗体発現ベクターにより形質転換された動物細胞であり、すなわち、抗体を産生する遺伝子組換え動物細胞である。又、コア層に封入できる生理活性物質産生細胞としては、好ましくは、生理活性物質発現ベクターにより形質転換された動物細胞であり、すなわち、生理活性物質を産生する遺伝子組換え動物細胞である。
それらの宿主として用いられる動物細胞としては、具体的には、ＣＨＯ細胞、ＣＨＯ細胞亜株、ＣＯＳ細胞、Ｓｐ２／０細胞、ＮＳ０細胞、ＳＰ２細胞、又はＰＥＲＣ６細胞、ＨＥＫ２９３細胞、ＢＨＫ細胞、ＨＴ－１０８０細胞、又はＣ１２７細胞であり；より好ましくは、ＣＨＯ細胞、ＣＨＯ細胞亜株、Ｓｐ２／０細胞、及びＮＳ０細胞、ＨＥＫ２９３細胞、及びＢＨＫ細胞からなる群から選択される細胞であり；更に好ましくは、ＣＨＯ細胞またはＣＨＯ細胞亜株である。また、ある態様では、抗体産生細胞の宿主細胞としては、好ましくは、ＣＨＯ細胞、ＣＨＯ細胞亜株、Ｓｐ２／０細胞、又はＮＳ０細胞であり；より好ましくは、ＣＨＯ細胞又はＣＨＯ細胞亜株である。また、生理活性物質産生細胞の宿主細胞としては、好ましくは、ＣＨＯ細胞、ＣＨＯ細胞亜株、ＨＥＫ２９３細胞、又はＢＨＫ細胞であり；より好ましくは、ＣＨＯ細胞又はＣＨＯ細胞亜株である。
　本明細書中、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含むことのできる抗体産生細胞としては、特に限定されることは無いが、バイオ医薬品またはバイオ医薬品原料として用いられる抗体を産生する細胞が挙げられる。また、生理活性物質産生細胞としては、特に限定されることは無いが、バイオ医薬品またはバイオ医薬品原料として用いられる生理活性物質を産生する細胞が挙げられる。
　バイオ医薬品としては、例えば、各種がん、自己免疫疾患・炎症性疾患、眼疾患、血液疾患、脳神経疾患、遺伝性希少疾患、内分泌代謝系疾患、循環器疾患、呼吸器疾患、消化器疾患、皮膚疾患、筋・骨疾患、感染症等の各種疾患に対する医薬品が挙げられる。
　バイオ医薬品のうち、抗体医薬品の具体的な標的としては、特に限定されることは無いが、Ｃ５（補体）、ＣＤ３、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２５、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ５２、ＣＤ７９、ＩＬ－１β、ＩＬ－４Ｒ、ＩＬ－５、ＩＬ-６、ＩＬ-６Ｒ、ＩＬ－１２、ＩＬ－１７、ＩＬ－１７Ｒ、ＩＬ－２３、ＩＦＮＡＲ、ＰＣＳＫ９、ＣＧＲＰ、ＣＧＲＰＲ、ＧＤ２（ガングリオシド）、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、ＴＲＯＰ２、ＢＣＭＡ、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ－３、ＴＩＧＩＴ、ＫＩＲ、ＳＬＡＭＦ７、ＲＡＮＫＬ、ＴＮＦ－α、ＢＬｙＳ、ＥＧＦＲ、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ、ＦＧＦ、ネクチン、インテグリン、ＥｐＣＡＭ、ＣＣＲ４、ＴｆＲ、ＴＦ、ＦＩＸａ、ＦＸ、ＧＰＶＩ、スクレロスチン、アミロイドβ、ＩｇＥ、又は各種ウイルス等（これらのサブタイプ、サブユニット、断片も含む）が挙げられ、これら標的に対する抗体を産生する細胞をコア層に含むことができる。
　本明細書中、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含むことのできる抗体産生細胞としては、特に限定されることは無いが、具体的には、ムロモナブ－ＣＤ３、トラスツズマブ、リツキシマブ、パリビズマブ、インフリキシマブ、バシリキシマブ、トシリズマブ、ベバシズマブ、アダリムマブ、セツキシマブ、オマリズマブ、エクリズマブ、パニツムマブ、ウステキヌマブ、ゴリムマブ、カナキヌマブ、デノスマブ、オファツムマブ、ペルツズマブ、ナタリズマブ、ニボルマブ、アレムツズマブ、セクキヌマブ、ラムシルマブ、イピリムマブ、エボロクマブ、メポリズマブ、アリロクマブ、イキセキズマブ、ブロダルマブ、エロツズマブ、ペムブロリズマブ、サリルマブ、ベズロトクスマブ、ベリムマブ、ダラツムマブ、アベルマブ、デュピルマブ、アテゾリズマブ、エミシズマブ、グセルクマブ、デュルバルマブ、ベドリズマブ、ロモソズマブ、リサンキズマブ、ネシツムマブ、ラブリズマブ、ブロスマブ、イサツキシマブ、チルドラキズマブ、サトラリズマブ、ガルカネズマブ、ジヌツキシマブ、フレマネズマブ、エレヌマブ、カシリビマブ、イムデビマブ、アニフロルマブ、ソトロビマブ、オクレリズマブ、ナキシタマブ、アデュカヌマブ、タファシタマブ、マルジェツキシマブ、ガンテネルマブ、チラゴルマブ、クロバリマブ、ネモリズマブ、カツマクソマブ、プラモタマブ、ファリシマブ、ゲムツズマブ、イブリツモマブ、ブレンツキシマブ、イノツズマブ、ポラツズマブ、エンホルツマブ、サシツズマブ、ベランタマブ、ロンカスツキシマブ、チソツマブ、ダトポタマブ、パトリツマブ等の抗体を産生する細胞；モガムリズマブ、ベンラリズマブ、オビヌツズマブ、イネビリズマブ等の改変糖鎖を有する抗体を産生する細胞；ラニビズマブ、イダルシズマブ、ブリナツモマブ、ブロルシズマブ、アブシキシマブ、カプラシズマブ、セルトリズマブ等の抗体断片からなる低分子抗体を産生する細胞等が挙げられる。
　本明細書中、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含むことのできる抗体産生細胞としては、特に限定されることは無いが、具体的には、抗体産生動物細胞が挙げられ、好ましくは、抗体産生ＣＨＯ細胞、抗体産生Ｓｐ２／０細胞又は抗体産生ＮＳ０細胞であり、より好ましくは、抗体産生ＣＨＯ細胞である。
　より具体的には、前記抗体産生動物細胞としては、特に限定されることは無いが、例えば、ムロモナブ－ＣＤ３産生ＣＨＯ細胞、トラスツズマブ産生ＣＨＯ細胞、リツキシマブ産生ＣＨＯ細胞、パリビズマブ産生ＮＳ０細胞、パリビズマブ産生ＣＨＯ細胞、インフリキシマブ産生Ｓｐ２／０細胞、インフリキシマブ産生ＣＨＯ細胞、バシリキシマブ産生Ｓｐ２／０細胞、バシリキシマブ産生ＣＨＯ細胞、トシリズマブ産生ＣＨＯ細胞、ベバシズマブ産生ＣＨＯ細胞、アダリムマブ産生ＣＨＯ細胞、セツキシマブ産生Ｓｐ２／０細胞、セツキシマブ産生ＣＨＯ細胞、オマリズマブ産生ＣＨＯ細胞、エクリズマブ産生ＮＳ０細胞、エクリズマブ産生ＣＨＯ細胞、パニツムマブ産生ＣＨＯ細胞、ウステキヌマブ産生Ｓｐ２／０細胞、ウステキヌマブ産生ＣＨＯ細胞、ゴリムマブ産生Ｓｐ２／０細胞、ゴリムマブ産生ＣＨＯ細胞、カナキヌマブ産生Ｓｐ２／０細胞、カナキヌマブ産生ＣＨＯ細胞、デノスマブ産生ＣＨＯ細胞、オファツムマブ産生ＮＳ０細胞、オファツムマブ産生ＣＨＯ細胞、ペルツズマブ産生ＣＨＯ細胞、ナタリズマブ産生ＮＳ０細胞、ナタリズマブ産生ＣＨＯ細胞、ニボルマブ産生ＣＨＯ細胞、アレムツズマブ産生ＣＨＯ細胞、セクキヌマブ産生ＣＨＯ細胞、ラムシルマブ産生ＮＳ０細胞、ラムシルマブ産生ＣＨＯ細胞、イピリムマブ産生ＣＨＯ細胞、エボロクマブ産生ＣＨＯ細胞、メポリズマブ産生ＣＨＯ細胞、アリロクマブ産生ＣＨＯ細胞、イキセキズマブ産生ＣＨＯ細胞、ブロダルマブ産生ＣＨＯ細胞、エロツズマブ産生ＮＳ０細胞、エロツズマブ産生ＣＨＯ細胞、ペムブロリズマブ産生ＣＨＯ細胞、サリルマブ産生ＣＨＯ細胞、ベズロトクスマブ産生ＣＨＯ細胞、ベリムマブ産生ＮＳ０細胞、ベリムマブ産生ＣＨＯ細胞、ダラツムマブ産生ＣＨＯ細胞、アベルマブ産生ＣＨＯ細胞、デュピルマブ産生ＣＨＯ細胞、アテゾリズマブ産生ＣＨＯ細胞、エミシズマブ産生ＣＨＯ細胞、グセルクマブ産生ＣＨＯ細胞、デュルバルマブ産生ＣＨＯ細胞、ベドリズマブ産生ＣＨＯ細胞、ロモソズマブ産生ＣＨＯ細胞、リサンキズマブ産生ＣＨＯ細胞、ネシツムマブ産生ＮＳ０細胞、ネシツムマブ産生ＣＨＯ細胞、ラブリズマブ産生ＣＨＯ細胞、ブロスマブ産生ＣＨＯ細胞、イサツキシマブ産生ＣＨＯ細胞、チルドラキズマブ産生ＣＨＯ細胞、サトラリズマブ産生ＣＨＯ細胞、ガルカネズマブ産生ＣＨＯ細胞、ジヌツキシマブ産生Ｓｐ２／０細胞、ジヌツキシマブ産生ＣＨＯ細胞、フレマネズマブ産生ＣＨＯ細胞、エレヌマブ産生ＣＨＯ細胞、カシリビマブ産生ＣＨＯ細胞、イムデビマブ産生ＣＨＯ細胞、アニフロルマブ産生ＮＳ０細胞、アニフロルマブ産生ＣＨＯ細胞、ソトロビマブ産生ＣＨＯ細胞、オクレリズマブ産生ＣＨＯ細胞、ナキシタマブ産生ＣＨＯ細胞、アデュカヌマブ産生ＣＨＯ細胞、タファシタマブ産生ＣＨＯ細胞、マルジェツキシマブ産生ＣＨＯ細胞、ゲムツズマブ産生ＮＳ０細胞、ゲムツズマブ産生ＣＨＯ細胞、イブリツモマブ産生ＣＨＯ細胞、ブレンツキシマブ産生ＣＨＯ細胞、イノツズマブ産生ＣＨＯ細胞、ポラツズマブ産生ＣＨＯ細胞、エンホルツマブ産生ＣＨＯ細胞、サシツズマブ産生Ｓｐ２／０細胞、サシツズマブ産生ＣＨＯ細胞、ベランタマブ産生ＣＨＯ細胞、ロンカスツキシマブ産生ＣＨＯ細胞、チソツマブ産生ＣＨＯ細胞、モガムリズマブ産生ＣＨＯ細胞、ベンラリズマブ産生ＣＨＯ細胞、オビヌツズマブ産生ＣＨＯ細胞、イネビリズマブ産生ＣＨＯ細胞、ラニビズマブ産生ＣＨＯ細胞、イダルシズマブ産生ＣＨＯ細胞、ブリナツモマブ産生ＣＨＯ細胞、ブロルシズマブ産生ＣＨＯ細胞、アブシキシマブ産生ＣＨＯ細胞、カプラシズマブ産生ＣＨＯ細胞、セルトリズマブ産生ＣＨＯ細胞、抗ＧＰＶＩ抗体産生ＣＨＯ細胞等が挙げられ； 
　例えば、前記抗体産生ＣＨＯ細胞としては、ムロモナブ－ＣＤ３産生ＣＨＯ細胞、トラスツズマブ産生ＣＨＯ細胞、リツキシマブ産生ＣＨＯ細胞、パリビズマブ産生ＣＨＯ細胞、インフリキシマブ産生ＣＨＯ細胞、バシリキシマブ産生ＣＨＯ細胞、トシリズマブ産生ＣＨＯ細胞、ゲムツズマブ産生ＣＨＯ細胞、ベバシズマブ産生ＣＨＯ細胞、イブリツモマブ産生ＣＨＯ細胞、アダリムマブ産生ＣＨＯ細胞、セツキシマブ産生ＣＨＯ細胞、ラニビズマブ産生ＣＨＯ細胞、オマリズマブ産生ＣＨＯ細胞、エクリズマブ産生ＣＨＯ細胞、パニツムマブ産生ＣＨＯ細胞、ウステキヌマブ産生ＣＨＯ細胞、ゴリムマブ産生ＣＨＯ細胞、カナキヌマブ産生ＣＨＯ細胞、デノスマブ産生ＣＨＯ細胞、モガムリズマブ産生ＣＨＯ細胞、セルトリズマブ産生ＣＨＯ細胞、オファツムマブ産生ＣＨＯ細胞、ペルツズマブ産生ＣＨＯ細胞、ブレンツキシマブ産生ＣＨＯ細胞、ナタリズマブ産生ＣＨＯ細胞、ニボルマブ産生ＣＨＯ細胞、アレムツズマブ産生ＣＨＯ細胞、セクキヌマブ産生ＣＨＯ細胞、ラムシルマブ産生ＣＨＯ細胞、イピリムマブ産生ＣＨＯ細胞、エボロクマブ産生ＣＨＯ細胞、メポリズマブ産生ＣＨＯ細胞、アリロクマブ産生ＣＨＯ細胞、イキセキズマブ産生ＣＨＯ細胞、ブロダルマブ産生ＣＨＯ細胞、イダルシズマブ産生ＣＨＯ細胞、エロツズマブ産生ＣＨＯ細胞、ペムブロリズマブ産生ＣＨＯ細胞、サリルマブ産生ＣＨＯ細胞、ベズロトクスマブ産生ＣＨＯ細胞、ベリムマブ産生ＣＨＯ細胞、ダラツムマブ産生ＣＨＯ細胞、アベルマブ産生ＣＨＯ細胞、デュピルマブ産生ＣＨＯ細胞、アテゾリズマブ産生ＣＨＯ細胞、ベンラリズマブ産生ＣＨＯ細胞、イノツズマブ産生ＣＨＯ細胞、エミシズマブ産生ＣＨＯ細胞、グセルクマブ産生ＣＨＯ細胞、デュルバルマブ産生ＣＨＯ細胞、オビヌツズマブ産生ＣＨＯ細胞、ベドリズマブ産生ＣＨＯ細胞、ロモソズマブ産生ＣＨＯ細胞、リサンキズマブ産生ＣＨＯ細胞、ネシツムマブ産生ＣＨＯ細胞、ラブリズマブ産生ＣＨＯ細胞、ブロスマブ産生ＣＨＯ細胞、イサツキシマブ産生ＣＨＯ細胞、チルドラキズマブ産生ＣＨＯ細胞、サトラリズマブ産生ＣＨＯ細胞、ガルカネズマブ産生ＣＨＯ細胞、ジヌツキシマブ産生ＣＨＯ細胞、フレマネズマブ産生ＣＨＯ細胞、エレヌマブ産生ＣＨＯ細胞、カシリビマブ産生ＣＨＯ細胞、イムデビマブ産生ＣＨＯ細胞、アニフロルマブ産生ＣＨＯ細胞、ソトロビマブ産生ＣＨＯ細胞、オクレリズマブ産生ＣＨＯ細胞、ナキシタマブ産生ＣＨＯ細胞、アデュカヌマブ産生ＣＨＯ細胞、タファシタマブ産生ＣＨＯ細胞、マルジェツキシマブ産生ＣＨＯ細胞、ポラツズマブ産生ＣＨＯ細胞、エンホルツマブ産生ＣＨＯ細胞、サシツズマブ産生ＣＨＯ細胞、ベランタマブ産生ＣＨＯ細胞、ロンカスツキシマブ産生ＣＨＯ細胞、チソツマブ産生ＣＨＯ細胞、イネビリズマブ産生ＣＨＯ細胞、ブリナツモマブ産生ＣＨＯ細胞、ブロルシズマブ産生ＣＨＯ細胞、アブシキシマブ産生ＣＨＯ細胞、カプラシズマブ産生ＣＨＯ細胞、抗ＧＰＶＩ抗体産生ＣＨＯ細胞等が挙げられ；
　例えば、トラスツズマブ産生ＣＨＯ細胞、リツキシマブ産生ＣＨＯ細胞、インフリキシマブ産生ＣＨＯ細胞、トシリズマブ産生ＣＨＯ細胞、アダリムマブ産生ＣＨＯ細胞、ニボルマブ産生ＣＨＯ細胞、及び抗ＧＰＶＩ抗体産生ＣＨＯ細胞からなる群から選択されるＣＨＯ細胞であり；例えば、トシリズマブ産生ＣＨＯ細胞である。
　このようにして産生した抗体を、産生後に修飾や改変することもでき、具体的には、ＰＥＧ化、薬物の結合修飾、放射標識等が挙げられる。すなわち、ＰＥＧ化抗体や抗体薬物複合体等の修飾抗体の生産において、原料となる抗体の産生に用いる細胞（原料抗体産生細胞）を、コア層に封入できる細胞として挙げることができる。当該原料抗体産生細胞としては、特に制限されないが、ＰＥＧ化抗体の原料抗体産生細胞としては、例えば、セルトリズマブ　ペゴルの原料抗体断片を産生する細胞、具体的には、セルトリズマブ産生ＣＨＯ細胞等が挙げられ；抗体薬物複合体の原料抗体産生細胞としては、例えば、ゲムツズマブ　オゾガマイシン、イブリツモマブ　チウキセタン、トラスツズマブ　エムタンシン、トラスツズマブ　デルクステカン、ブレンツキシマブ　ベドチン、イノツズマブ　オゾガマイシン、セツキシマブ　サロタロカンナトリウム、ポラツズマブ　ベドチン、エンホルツマブ ベドチン、サシツズマブ　ゴビテカン、ベランタマブ　マホドチン、ロンカスツキシマブ　テシリン、チソツマブ　ベドチン、ダトポタマブ　デルクステカン、パトリツマブ　デルクステカン等の原料抗体を産生する細胞が挙げられ、具体的には、ゲムツズマブ産生ＮＳ０細胞、イブリツモマブ産生ＣＨＯ細胞、トラスツズマブ産生ＣＨＯ細胞、ブレンツキシマブ産生ＣＨＯ細胞、イノツズマブ産生ＣＨＯ細胞、セツキシマブ産生Ｓｐ２／０細胞、ポラツズマブ産生ＣＨＯ細胞、エンホルツマブ産生ＣＨＯ細胞、サシツズマブ産生Ｓｐ２／０細胞、ベランタマブ産生ＣＨＯ細胞、ロンカスツキシマブ産生ＣＨＯ細胞、チソツマブ産生ＣＨＯ細胞等が挙げられる。
　また、抗体又は抗体断片と他の蛋白質又はペプチドとの融合蛋白質を産生する細胞を、コア層に含むこともでき、例えば、パビナフスプアルファ産生ＣＨＯ細胞、ビントラフスプアルファ産生ＣＨＯ細胞等が挙げられる。
　「抗体」に関しては、「１２．抗体の分類」及び「１３．抗体・生理活性物質の産生及び精製法」にて詳述する。
　本明細書中、生理活性物質とは、生物に対して生理作用や薬理作用を発現する物質及び化合物群を意味する。生物に対して生理作用や薬理作用を発現する物質及び化合物群としては、例えば、酵素、インスリン、アルカロイド、サイトカイン（インターフェロン、インターロイキン、ケモカイン、腫瘍壊死因子等）、植物ホルモン、神経伝達物質、フェロモン、ホルモン（動物ホルモン）、成長因子、成長調節因子、成長阻害因子、活性化因子、造血因子、血液凝固系因子、ワクチン（弱毒化ワクチン、不活化ワクチン、蛋白ワクチン等）等が挙げられる。
　また、これら物質の受容体、細胞表面抗原、細胞表面受容体及びそれらのリガンドも、生理作用や薬理作用を発現する物質であり、生理活性物質に含まれる。さらに、生体が本来有する生理活性物質に加え、生理活性物質を修飾や改変した物質、生理活性を活性化又は阻害する物質、複数の生理活性物質又はその一部領域や断片を組合わせた融合蛋白質も、生理作用や薬理作用を発現する物質である限りは、生理活性物質に含まれ、本明細書においては、これらも含めて生理活性物質と称する。本明細書中、生理活性物質としては、好ましくは蛋白性の生理活性物質、すなわち蛋白質又はペプチドからなる生理活性物質である。
　本明細書中、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含むことのできる生理活性物質産生細胞としては、特に限定されることは無いが、前述の通り、バイオ医薬品またはバイオ医薬品原料として用いられる生理活性物質を産生する細胞が挙げられる。
　バイオ医薬品として用いられる生理活性物質としては、特に限定されることは無いが、例えば、ｔ－ＰＡ、グルコセレブロシダーゼ、ガラクトシダーゼ、ヒアルロニダーゼ、イズロニダーゼ、グルコシダーゼ、スルファターゼ、尿酸オキシダーゼ、ＤＮＡ分解酵素、アデノシンデアミナーゼ、トリペプチジルペプチダーゼ、ヒアルロニダーゼ、フェニルアラニンアンモニアリアーゼ、アルカリホスファターゼ等の酵素；ＦＶＩＩａ、ＦＶＩＩＩ、ＦＩＸ、ＦＸＩＩＩ、トロンボモジュリン、アンチトロンビン、アルブミン等の血液凝固系因子及び血液関連蛋白；インスリン、成長ホルモン、利尿ペプチド、性腺刺激ホルモン、ＧＬＰ－１、ＧＬＰ－２、副甲状腺ホルモン、レプチン等のホルモン；ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、ＩＦＮ－γ等のインターフェロン；エリスロポエチン、トロンボポエチン等の造血因子；Ｇ－ＣＳＦ、ＩＬ－２、ＩＬ－１０、ＩＬ－２Ｒ、ＩＬ－４Ｒ、ＩＬ－５Ｒ、ＩＬ－６Ｒ、ＩＬ－１７Ｒ、ＴＮＦＲ、ＥＧＦ、ＥＧＦＲ、ＦＧＦ、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ、ＰＤＧＦ、ＰＤＧＦＲ、ＴＧＦ－β等のサイトカイン及びそれらの受容体；ＣＴＬＡ－４等の細胞表面抗原、細胞表面受容体及びそれらのリガンド；Ｂ型肝炎ウイルス由来抗原、パピローマウイルス由来抗原、水痘帯状疱疹ウイルス由来抗原、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来抗原等のワクチン用蛋白・ペプチド等が挙げられ、これらのサブタイプ、サブユニット、活性断片も挙げられ、これら生理活性物質を産生する細胞をコア層に含むことができる。
　本明細書中、生理活性物質としては構造改変された物質も含むが、例えば、物質の活性を変化させるようなアミノ酸配列の改変を加えた物質が挙げられ、具体的には、インスリンアナログ、ＧＬＰ－１アナログ、エリスロポエチンアナログ等が挙げられる。また、本来の物質の一部領域や断片のアミノ酸配列からなる物質も含まれ、それら一部領域や断片のアミノ酸配列を複数配列組合せた物質であっても良く；具体的には、インスリンアナログ、ＦＶＩＩＩアナログ、副甲状腺ホルモンアナログ等が挙げられる。さらに、二種類以上の物質やその一部領域や断片を組合わせた融合蛋白質も含まれ、例えば、酵素と抗体の融合蛋白質、サイトカイン受容体と抗体Ｆｃ部分の融合蛋白質、細胞表面抗原細胞外ドメインと抗体Ｆｃ部分の融合蛋白質、血液凝固系因子と抗体Ｆｃ部分の融合蛋白質、血液凝固系因子と血漿タンパクの融合蛋白質等が挙げられる。これら構造改変された生理活性物質を産生する細胞をコア層に含むことができる。
　このようにして産生した生理活性物質を、産生後に修飾や改変することもでき、具体的には、ＰＥＧ化、糖鎖修飾、薬物の結合修飾、放射標識等が挙げられる。すなわち、ＰＥＧ化蛋白質、脂肪酸付加ペプチド等の修飾蛋白質・ペプチドの生産において、原料となる蛋白質・ペプチドの生産に用いることができ、具体的には、ＰＥＧ化ＦＶＩＩＩ、ＰＥＧ化エリスロポエチン、脂肪酸付加インスリンアナログ等の原料蛋白質・ペプチドを産生する細胞が挙げられ、これら原料となる生理活性物質を産生する細胞（原料生理活性物質産生細胞）をコア層に含むことができる。
　本明細書中、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含むことのできる生理活性物質産生細胞としては、特に限定されることは無いが、具体的には、アルテプラーゼ、モンテプラーゼ、イミグルセラーゼ、ベラグルセラーゼ、アガルシダーゼ、ラロニダーゼ、アルグルコシダーゼ、アバルグルコシダーゼ、イデュルスルファーゼ、ガルスルファーゼ、エロスルファーゼ、ラスブリカーゼ、ドルナーゼ、セルリポナーゼ、グルカルピダーゼ、ヒアルロニダーゼ、アスホターゼ等の酵素を産生する細胞；エプタコグ、オクトコグ、ルリオクトコグ、ツロクトコグ、ロノクトコグ、ダモクトコグ、シモクトコグ、ノナコグ、アルブトレペノナコグ、カトリデカコグ、エフラロクトコグ、エフトレノナコグ、トロンボモデュリン、アンチトロンビン、ボニコグ、アルブミン等の血液凝固系因子及び血液関連蛋白を産生する細胞；インスリン、インスリン　リスプロ、インスリン　アスパルト、インスリン　グラルギン、インスリン　デテミル、インスリン　グルリジン、インスリン　デグルデク、ソマトロピン、ソマプシタン、メカセルミン、カルペリチド、ボソリチド、グルカゴン、ホリトロピン、コリオゴナドトロピン、デュラグルチド、リラグルチド、セマグルチド、テデュグルチド、テリパラチド、メトレレプチン等のホルモンを産生する細胞；インターフェロンアルファ－２ａ、インターフェロンアルファ－２ｂ、インターフェロンベータ－１ａ、インターフェロンベータ－１ｂ、インターフェロンガンマ－１ａ等のインターフェロンを産生する細胞；エポエチン、ダルベポエチン、ロミプロスチム等の造血因子を産生する細胞；フィルグラスチム、レノグラスチム、テセロイキン、トラフェルミン、ベルフェルミン、エタネルセプト、アフリベルセプト、デニロイキン　ジフチトクス等のサイトカイン及びそれらの受容体を産生する細胞；アバタセプト等の細胞表面抗原、細胞表面受容体及びそれらのリガンドを産生する細胞が挙げられ；これらのサブタイプ、サブユニット、活性断片を産生する細胞も挙げられる。
　本明細書中、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含むことのできる生理活性物質産生細胞としては、特に限定されることは無いが、具体的には、生理活性物質産生動物細胞が挙げられ、好ましくは、生理活性物質産生ＣＨＯ細胞、生理活性物質産生ＨＥＫ２９３細胞又は生理活性物質産生ＢＨＫ細胞であり、より好ましくは、生理活性物質産生ＣＨＯ細胞である。
　より具体的には、前記生理活性物質産生動物細胞としては、特に限定されることは無いが、例えば、アルテプラーゼ産生ＣＨＯ細胞、イミグルセラーゼ産生ＣＨＯ細胞、アガルシダーゼ産生ＣＨＯ細胞、ラロニダーゼ産生ＣＨＯ細胞、アルグルコシダーゼ産生ＣＨＯ細胞、アバルグルコシダーゼ産生ＣＨＯ細胞、イデュルスルファーゼ産生ＣＨＯ細胞、ガルスルファーゼ産生ＣＨＯ細胞、エロスルファーゼ産生ＣＨＯ細胞、ドルナーゼ産生ＣＨＯ細胞、セルリポナーゼ産生ＣＨＯ細胞、ヒアルロニダーゼ産生ＣＨＯ細胞、アスホターゼ産生ＣＨＯ細胞、ルリオクトコグ産生ＣＨＯ細胞、ツロクトコグ産生ＣＨＯ細胞、ロノクトコグ産生ＣＨＯ細胞、ノナコグ産生ＣＨＯ細胞、アルブトレペノナコグ産生ＣＨＯ細胞、トロンボモデュリン産生ＣＨＯ細胞、アンチトロンビン産生ＣＨＯ細胞、ボニコグ産生ＣＨＯ細胞、ホリトロピン産生ＣＨＯ細胞、コリオゴナドトロピン産生ＣＨＯ細胞、デュラグルチド産生ＣＨＯ細胞、インターフェロンベータ－１ａ産生ＣＨＯ細胞、エポエチン産生ＣＨＯ細胞、ダルベポエチン産生ＣＨＯ細胞、レノグラスチム産生ＣＨＯ細胞、エタネルセプト産生ＣＨＯ細胞、アフリベルセプト産生ＣＨＯ細胞、アバタセプト産生ＣＨＯ細胞等の生理活性物質産生ＣＨＯ細胞；シモクトコグ産生ＨＥＫ２９３細胞、エフラロクトコグ産生ＨＥＫ２９３細胞、エフトレノナコグ産生ＨＥＫ２９３細胞等の生理活性物質産生ＨＥＫ２９３細胞；モンテプラーゼ産生ＢＨＫ細胞、エプタコグ産生ＢＨＫ細胞、オクトコグ産生ＢＨＫ細胞、ダモクトコグ産生ＢＨＫ細胞等の生理活性物質産生ＢＨＫ細胞；ベラグルセラーゼ産生ＨＴ－１０８０細胞、アガルシダーゼ産生ＨＴ－１０８０細胞、イデュルスルファーゼ産生ＨＴ－１０８０細胞等の生理活性物質産生ＨＴ－１０８０細胞；ホリトロピン産生ＰＥＲＣ６細胞等の生理活性物質産生ＰＥＲＣ６細胞等が挙げられ；
　例えば、前記生理活性物質産生ＣＨＯ細胞としては、アルテプラーゼ産生ＣＨＯ細胞、アルグルコシダーゼ産生ＣＨＯ細胞、ルリオクトコグ産生ＣＨＯ細胞、デュラグルチド産生ＣＨＯ細胞、インターフェロンベータ－１ａ産生ＣＨＯ細胞、ダルベポエチン産生ＣＨＯ細胞、エタネルセプト産生ＣＨＯ細胞、アフリベルセプト産生ＣＨＯ細胞及びアバタセプト産生ＣＨＯ細胞等が挙げられる。
　なお、ここに挙げた生理活性物質は、前述のように産生後に修飾や改変を加えられた物質名を記している場合があるが、それらはその原料となる生理活性物質を産生する細胞をコア層に含むことができる。例えば、エラペグアデマーゼ、ペグバリアーゼ、ルリオクトコグ　アルファ　ペゴル、ツロクトコグ　アルファ　ペゴル、ダモクトコグ　アルファ　ペゴル、ノナコグ　ベータ　ペゴル、ペグビソマント、ペグインターフェロン　アルファ－２ａ、ペグインターフェロン　アルファ－２ｂ、エポエチン　ベータ　ペゴル、ペグフィルグラスチム、ペグベルフェルミン等のＰＥＧ化された生理活性物質においては、それらの原料となる生理活性物質を産生する細胞をコア層に含むことができる。
　生理活性物質を産生できる細胞としては、前述の生理活性物質産生遺伝子組換え細胞に加え、天然の細胞や、人工的な改変操作を施された細胞も含まれ、複数個の細胞からなる細胞塊も含まれ、例えば、インスリン分泌細胞、膵島、膵島細胞、ドーパミン分泌細胞、脳下垂体細胞、成長ホルモン分泌細胞、副甲状腺細胞、神経成長因子分泌細胞、血液凝固因子分泌細胞、肝細胞、上皮小体細胞、エリスロポエチン分泌細胞、ノルエピネフリン分泌細胞等が挙げられる。本明細書中、生理活性物質を産生する細胞としては、ある態様においては、インスリン分泌細胞、膵島又は膵島細胞、又は膵β細胞由来のＭＩＮ６細胞である。
　「インスリン分泌細胞」とは、インスリンを分泌する機能を有する細胞を意味し、例えば、膵島を構成する細胞においては、インスリンを分泌するβ細胞を意味する。また、「インスリン分泌細胞」は、分化、成熟や改変などによってインスリン分泌機能を有するようになった細胞であってもよく、例えば、ｉＰＳ細胞、ＥＳ細胞、又は体性幹細胞（例えば、間葉系幹細胞）等の幹細胞を分化させて得られたインスリン分泌機能を有する細胞、幼若細胞や前駆細胞を成熟させて得られたインスリン分泌機能を有する細胞、及び、遺伝子組み換えによりインスリン分泌機能を付与された細胞も含み得る。ここで、当該細胞を分化や成熟させることには、当該細胞を培養させることが含まれ、すなわち、分化又は成熟させて得られた細胞とは、培養されて得られた細胞を含み得る。
　「膵島」とは、別名ランゲルハンス氏島とも呼ばれる、平均約２０００個の膵島細胞より構成される細胞塊である。膵島は、グルカゴンを分泌するα細胞、インスリンを分泌するβ細胞、ソマトスタチンを分泌するδ細胞、グレリンを分泌するε細胞、及び膵ポリペプチドを分泌するＰＰ（pancreatic　polypeptide；膵ポリペプチド）細胞の５種の細胞から構成される。
　本明細書において、「膵島細胞」とは、上記の膵島を構成する５種類の細胞うちの少なくとも１種類の細胞を含むものであればよいが、少なくともβ細胞を含むことが好ましい。いくつかの態様では、膵島細胞としては、α細胞、β細胞、δ細胞、ε細胞、及びＰＰ細胞の全てを含む混合物でもよく、膵島に含まれた状態のものでもよい。
　また、「膵島細胞」は、分化、成熟や改変などにより膵島細胞になったものであってもよい。この場合、「膵島細胞」には、例えば、ｉＰＳ細胞、ＥＳ細胞、及び体性幹細胞（例えば、間葉系幹細胞）等の幹細胞を分化させて得られた膵島細胞、及び幼若細胞や前駆細胞を成熟させて得られた膵島細胞も含み得る。
　「インスリン分泌細胞」又は「膵島（膵島細胞を含む）」としては、移植用途として用いる場合は、患者に移植した際に、患者の病的状態を回復することができる程度の生存性と機能とを有することが好ましい。インスリン分泌細胞、膵島又は膵島細胞の機能としては、例えば、インスリンを分泌することが挙げられ、移植後においてもグルコース応答性が維持されていることが好ましい。
　「インスリン分泌細胞」、「膵島」又は「膵島細胞」のドナーは、動物、好ましくは脊椎動物、より好ましくは哺乳類であり、具体的にはヒト、ブタ、サル、ラット又はマウスなどが挙げられ、更に好ましくはヒト又はブタである。「インスリン分泌細胞」、「膵島」又は「膵島細胞」のドナーは、いくつかの態様では、ドナー不足解消の観点からブタである。「インスリン分泌細胞」、「膵島」又は「膵島細胞」としては、ドナーである動物から得られた膵島又は膵島細胞、あるいはドナー由来細胞から得られたインスリン分泌細胞又は膵島細胞のいずれかでもよく、例えば、ヒト由来のＥＳ細胞またはiＰＳ細胞から分化したインスリン分泌細胞又は膵島細胞でもよい。
　「インスリン分泌細胞」、「膵島」又は「膵島細胞」がブタ由来である場合には、成体のブタ膵島、又は、胎生期、新生児期、もしくは周産期のブタ膵島、又は当該膵島から得られたインスリン分泌細胞もしくは膵島細胞が挙げられる。当該膵島は適宜培養してから使用するようにしてもよく、胎生期、新生児期、もしくは周産期のブタ膵島を成熟させた膵島を使用してもよい。
　血液凝固因子分泌細胞としては、例えば、第VIII因子分泌細胞及び第IX因子分泌細胞を挙げることができる。
９．ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの製造方法
　下記の記載において、式（Ｉ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体、式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体は、各々、式（Ｉ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体、式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体へ置き換えることができる。
　ここでは、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞を含み、式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体を用いて架橋反応を行うことにより形成される架橋アルギン酸ゲル（コア層）がカチオン性ポリマー（カチオン性ポリマー層）で被覆された、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの製造方法が提供される。例えば、図３に示される装置ＸＸを用いることを含む当該ファイバの製造方法が提供される。
　以下に、前記ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの製造方法について説明する。
　前記ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの製造方法は、特に限定されないが、例えば、図３に示される装置ＸＸを用いて行う。ここでの装置ＸＸは、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバを作製するのに好ましく用いられる装置である。
　装置ＸＸは、例えば、図３に示されるように、導入口を１つ、排出口を１つ備える微細流路を作ることが可能な装置であり、導入口から溶液を導入し、適当な速さで流すことで、排出口から溶液がファイバ状（繊維状）となり排出される。
　装置ＸＸは、例えば、図３に示されるような押出筒ＹＹ等を用いて、装置ＸＸの導入口から導入した、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞ならびに式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液を、押し出すことで装置ＸＸの排出口から、当該混合溶液を射出することができる。
　装置ＸＸと押出筒ＹＹを備えるものとして、例えば、注射筒を用いることができる。注射筒の場合、装置ＸＸが外筒となり、装置ＸＸに導入された溶液を排出口から押し出すための押出筒ＹＹが内筒になる。注射筒を用いる場合、ガラス製またはプラスチック製の注射筒を用いることができる。
　図３に示すように、装置ＸＸの排出口２より排出されるファイバ状物質を受ける容器として、２価金属イオンを含む溶液を含むビーカー等の容器ＤＤが用いられる。又、架橋アルギン酸ゲルファイバＣＬＡの表面を、カチオン性ポリマーで被覆するための容器として、カチオン性ポリマーを含む溶液を含むビーカー等の容器ＥＥが用いられる。
　図３は、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの製造過程の１つの態様を説明する模式図である。一例として、細胞（抗体、生理活性物質等を産生できる細胞）を含み、式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体の混合溶液を用いる作製方法について説明する。
　ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバは、例えば下記工程（Ｓ）～（２）を含む方法により製造することができる。
工程（Ｓ）：装置ＸＸの導入口１から、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞ならびに式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液を導入する工程、
工程（１）：装置ＸＸの排出口２から、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞ならびに式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体が含まれる混合溶液を、２価金属イオンを含む溶液中に射出し、２価金属イオンに接触させ、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞を含む架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＬＡ）を得る工程、
工程（２）：工程（１）で得られた抗体、生理活性物質等を産生できる細胞を含む架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＬＡ）を、カチオン性ポリマーを含む溶液に接触させることで、カチオン性ポリマー層で被覆して形成されるポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＦＢ）を得る工程。
　工程（Ｓ）では、前述のコア層に含まれる細胞で説明される、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞を、式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む溶液に懸濁または溶解させる。この際、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞以外に、アルギン酸溶液、培地、培養液、コラーゲン溶液、メチルセルロース、スクロース溶液等の成分を添加することも可能である。
　工程（１）では、工程（Ｓ）で調製した抗体、生理活性物質等を産生できる細胞ならびに式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液（または懸濁液）を、２価金属イオンを含む溶液へゆっくりと放出することで、放出された溶液が順次、ゲル化していくことにより、ファイバー状（繊維状）の構造物を製造することができる。２価金属イオンを含む溶液と接触させることにより、式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の間でイオン架橋が進むのと同時にＨｕｉｓｇｅｎ反応による化学架橋も進み、ゲルが作製できる。
　工程（２）では、工程（１）で得られた抗体、生理活性物質等を産生できる細胞を含む架橋アルギン酸ゲルファイバを、カチオン性ポリマーを含む溶液に接触させることにより、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞を含む架橋アルギン酸ゲルファイバの表面がカチオン性ポリマー層で被覆される。
　前記（Ｓ）～（２）の工程を行うことにより、本発明のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＦＢ）を製造することができる。
　本明細書において、「接触」とは、ある溶液（例えば、化学修飾アルギン酸誘導体の溶液）またはゲル（例えば、架橋アルギン酸ゲル）を別の溶液（例えば、２価金属イオンを含む溶液、カチオン性ポリマーを含む溶液）に浸漬または添加すること等を意味する。
　装置ＸＸの排出口２から射出される抗体、生理活性物質等を産生できる細胞ならびに式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液の流速（射出速度）は、例えば、約１００～約１００００μＬ／分程度であってもよい。例えば、抗ＧＰＶＩ抗体産生ＣＨＯ細胞又はトシリズマブ産生ＣＨＯ細胞をコア層に含む、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバを作製する場合の流速は、例えば、２５０μＬ／分、４ｍＬ／分、１０ｍＬ／分等であり、ＭＩＮ６細胞をコア層に含む、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバを作製する場合の流速は、例えば、１２５μＬ／分である。流速（射出速度）はシリンジポンプ等を用いて調整することが可能であり、様々なサイズのファイバーを製造することが可能になる。又、装置ＸＸの排出口２の大きさ（径）を変化させることにより、コア層の直径を調整できたファイバーを製造することも可能となる。
　装置ＸＸの排出口２には、ルアーロック用ニードル（金属製等の材質）、シリコンチューブ、ガラスキャピラリ等を適宜組み合わせて接続して、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞ならびに式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液を２価金属イオンを含む溶液へ放出することができる。
　装置ＸＸの導入口１から導入される抗体、生理活性物質等を産生できる細胞ならびに式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液は、例えば、前記態様［１］に記載の式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を用いて、溶媒（例えば、培地、細胞培養用培地、培養液、等張緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水、及び生理食塩水等）を添加して、所定の濃度（例えば、各化学修飾アルギン酸誘導体の溶液の濃度が約０．０１～約１．５重量％、式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の混合溶液の濃度が約０．０２～約２．０重量％）の式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の混合溶液を調製する。
　装置ＸＸの導入口１から導入される抗体、生理活性物質等を産生できる細胞ならびに式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液にアルギン酸溶液を添加する場合、当該式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液の濃度とアルギン酸溶液の濃度の総濃度は、例えば、約０．５～約２．０重量％の範囲に調整される。
　装置ＸＸの導入口１から導入される、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞ならびに式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液にアルギン酸溶液を添加する場合、当該式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液の濃度（Ｃ１（重量％））とアルギン酸溶液の濃度（Ｃ２（重量％））の組合せは、特に限定されないが、
例えば、０＜Ｃ２（重量％）≦約１．９８（重量％）、
０＜Ｃ１（重量％）＜約２．０（重量％）－Ｃ２（重量％）、
０＜Ｃ１＋Ｃ２（重量％）≦約２．０（重量％）
で表される式を満たす範囲の組合せであり、
例えば、（Ｃ１：Ｃ２）＝（約０．２：約１．３）、（約０．５：約１．０）、（約１．０：約０．５）、（約０．６６：約１．３４）、（約０．３４：約０．６６）、（約０．１６：約０．３４）等の組み合わせが挙げられる。これら濃度以外にも、Ｃ１およびＣ２の濃度を適宜組み合わせて調製することができる。
　装置ＸＸの導入口１から導入される、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞ならびに式（Ｉ－Ａ）及び式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液にアルギン酸溶液を添加する場合、当該式（Ｉ－Ａ）及び式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液の濃度（Ｃ１ｘ（重量％））とアルギン酸溶液の濃度（Ｃ２ｘ（重量％））の組合せは、特に限定されないが、
例えば、０＜Ｃ２ｘ（重量％）≦約１．９８（重量％）、
０＜Ｃ１ｘ（重量％）＜約２．０（重量％）－Ｃ２ｘ（重量％）、
０＜Ｃ１ｘ＋Ｃ２ｘ（重量％）≦約２．０（重量％）
で表される式を満たす範囲の組合せであり；
例えば、（Ｃ１ｘ：Ｃ２ｘ）＝（約０．２：約１．３）、（約０．５：約１．０）、（約１．０：約０．５）、（約０．６６：約１．３４）、（約０．３４：約０．６６）、（約０．１６：約０．３４）等の組み合わせが挙げられる。これら濃度以外にも、Ｃ１およびＣ２の濃度を適宜組み合わせて調製することができる。
　装置ＸＸの導入口１から導入される、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞ならびに式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液にアルギン酸溶液を添加する場合、当該式（Ｉ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の溶液の濃度（Ｃ１Ａ（重量％））、式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の溶液の濃度（Ｃ１Ｎ（重量％））及びアルギン酸溶液の濃度（Ｃ２（重量％））の組合せは、特に限定されないが、例えば、
０＜Ｃ２（重量％）≦約１．９８（重量％）、
０＜Ｃ１Ａ（重量％）＜約２．０（重量％）－Ｃ２（重量％）、
０＜Ｃ１Ｎ（重量％）＜約２．０（重量％）－Ｃ２（重量％）、
０＜Ｃ１Ａ＋Ｃ１Ｎ＋Ｃ２（重量％）≦約２．０（重量％）
で表される式を満たす範囲の組合せであり；
例えば、（Ｃ１Ａ：Ｃ１Ｎ：Ｃ２）＝（約０．１：約０．１：約１．３）、（約０．２５：約０．２５：約１．０）、（約０．５：約０．５：約０．５）、（約０．３３：約０．３３：約１．３４）、（約０．１７：約０．１７：約０．６６）、（約０．０８：約０．０８：約０．３４）等の組み合わせが挙げられる。これら濃度以外にも、Ｃ１Ａ、Ｃ１Ｎ、Ｃ２の濃度を適宜組み合わせて調製することができる。
　装置ＸＸの導入口１から導入される、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞ならびに式（Ｉ－Ａ）及び式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液にアルギン酸溶液を添加する場合、当該式（Ｉ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の溶液の濃度（Ｃ１Ａｘ（重量％））、式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の溶液の濃度（Ｃ１Ｎｘ（重量％））及びアルギン酸溶液の濃度（Ｃ２ｘ（重量％））の組合せは、特に限定されないが、例えば、
０＜Ｃ２ｘ（重量％）≦約１．９８（重量％）、
０＜Ｃ１Ａｘ（重量％）＜約２．０（重量％）－Ｃ２ｘ（重量％）、
０＜Ｃ１Ｎｘ（重量％）＜約２．０（重量％）－Ｃ２ｘ（重量％）、
０＜Ｃ１Ａｘ＋Ｃ１Ｎｘ＋Ｃ２ｘ（重量％）≦約２．０（重量％）
で表される式を満たす範囲の組合せであり；
例えば、（Ｃ１Ａｘ：Ｃ１Ｎｘ：Ｃ２ｘ）＝（約０．１：約０．１：約１．３）、（約０．２５：約０．２５：約１．０）、（約０．５：約０．５：約０．５）、（約０．３３：約０．３３：約１．３４）、（約０．１７：約０．１７：約０．６６）、（約０．０８：約０．０８：約０．３４）等の組み合わせが挙げられる。これら濃度以外にも、Ｃ１Ａｘ、Ｃ１Ｎｘ、Ｃ２ｘの濃度を適宜組み合わせて調製することができる。
　装置ＸＸの導入口１から導入される、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞ならびに式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液中の、式（Ｉ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の溶液および式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の溶液の各容量比（ｖ１、ｖ２）は、例えば、ｖ１＋ｖ２＝１５の比率であり、例えば、（ｖ１：ｖ２）＝（７．５：７．５）である。但し、ｖ１＋ｖ２＝１５において、０＜ｖ１＜１５、０＜ｖ２＜１５である。
　装置ＸＸの導入口１から導入される、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞ならびに式（Ｉ－Ａ）及び式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液中の、式（Ｉ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の溶液および式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の溶液の各容量比（ｖ１ｘ、ｖ２ｘ）は、例えば、ｖ１ｘ＋ｖ２ｘ＝１５の比率であり、例えば、（ｖ１ｘ：ｖ２ｘ）＝（７．５：７．５）である。但し、ｖ１ｘ＋ｖ２ｘ＝１５において、０＜Ｖ１ｘ＜１５、０＜Ｖ２ｘ＜１５である。
　装置ＸＸの導入口１から導入される、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞ならびに式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液にアルギン酸溶液を添加する場合、アルギン酸溶液を添加した混合溶液における、式（Ｉ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の容量（ｖ１）、式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の溶液の容量（ｖ２）およびアルギン酸溶液の容量（ｖ３）の容量比は、例えば、ｖ１＋ｖ２＋ｖ３＝１５の比率であり、例えば、（ｖ１：ｖ２：ｖ３）＝（５：５：５）、（２．５：２．５：１０）、（１：１：１３）等の組み合わせである。但し、ｖ１＋ｖ２＋ｖ３＝１５において、０＜ｖ１＜１５、０＜ｖ２＜１５、０＜ｖ３＜１５である。
　装置ＸＸの導入口１から導入される、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞ならびに式（Ｉ－Ａ）及び式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液にアルギン酸溶液を添加する場合、アルギン酸溶液を添加した混合溶液における、式（Ｉ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の容量（ｖ１ｘ）、式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体の溶液の容量（ｖ２ｘ）およびアルギン酸溶液の容量（ｖ３ｘ）の容量比は、例えば、ｖ１ｘ＋ｖ２ｘ＋ｖ３ｘ＝１５の比率であり、例えば、（ｖ１ｘ：ｖ２ｘ：ｖ３ｘ）＝（５：５：５）、（２．５：２．５：１０）、（１：１：１３）等の組み合わせである。但し、ｖ１ｘ＋ｖ２ｘ＋ｖ３ｘ＝１５において、０＜ｖ１ｘ＜１５、０＜ｖ２ｘ＜１５、０＜ｖ３ｘ＜１５である。
　装置ＸＸの排出口２から、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞ならびに式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液を射出する際に、射出される混合溶液を、ハサミ、カッター等の切断器具を用いて一定間隔で切断することで、所望の長さを有する架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＬＡ）を得ることが可能である。架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＬＡ）の長さは、特に限定はされないが、例えば、約０．０１ｍ～約１００ｍ、約０．１ｍ～約７５ｍ、約０．３ｍ～約５０ｍ、約０．５ｍ～約３０ｍ、約１．０ｍ～約１０ｍ、約１．０ｍ～約２．０ｍ、約２．０ｍ～約３．０ｍ、約３．０ｍ～約４．０ｍ、約４．０ｍ～約５．０ｍ、約５．０ｍ～約６．０ｍ、約６．０ｍ～約７．０ｍ、約７．０ｍ～約８．０ｍ、約８．０ｍ～約９．０ｍ、約９．０ｍ～約１０ｍ、約１ｃｍ～約５ｃｍ、約５ｃｍ～約１０ｃｍ、約１０ｃｍ～約２０ｃｍ、約２０ｃｍ～約３０ｃｍ、約３０ｃｍ～約４０ｃｍ、約４０ｃｍ～約５０ｃｍ、約５０ｃｍ～約６０ｃｍ、約６０ｃｍ～約７０ｃｍ、約７０ｃｍ～約８０ｃｍ、約８０ｃｍ～約９０ｃｍ、約９０ｃｍ～約１．０ｍ、約９０ｃｍ～約１．０ｍ等が挙げられる。
　装置ＸＸの排出口２から、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞ならびに式（Ｉ－Ａ）及び式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液を射出する際に、射出される混合溶液を、ハサミ、カッター等の切断器具を用いて一定間隔で切断することで、所望の長さを有する架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＬＡ）を得ることが可能である。架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＬＡ）の長さは、特に限定はされないが、上記と同様の長さが挙げられる。
　作製されるポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＦＢ）の外径は、特に限定されないが、前述の通りであり、例えば、約０．１～約２０００μｍ、約０．２μｍ～約２０００μｍ、約０．２～約１０００μｍ、約０．５～約１０００μｍ、約１～約１０００μｍ、約１０～約１０００μｍ、約２０～約１０００μｍ等の範囲である。
　ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＦＢ）の長さは特に限定されず、前述の通りであり、例えば、約０．３～約５０ｍ程度であってもよい。また、前述の架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＬＡ）の長さを調整して得ることで、例えば、約０．０１ｍ～約１００ｍ、約０．１ｍ～約７５ｍ、約０．３ｍ～約５０ｍ、約０．５ｍ～約３０ｍ、約１．０ｍ～約１０ｍ、約１．０ｍ～約２．０ｍ、約２．０ｍ～約３．０ｍ、約３．０ｍ～約４．０ｍ、約４．０ｍ～約５．０ｍ、約５．０ｍ～約６．０ｍ、約６．０ｍ～約７．０ｍ、約７．０ｍ～約８．０ｍ、約８．０ｍ～約９．０ｍ、約９．０ｍ～約１０ｍ、約１ｃｍ～約５ｃｍ、約５ｃｍ～約１０ｃｍ、約１０ｃｍ～約２０ｃｍ、約２０ｃｍ～約３０ｃｍ、約３０ｃｍ～約４０ｃｍ、約４０ｃｍ～約５０ｃｍ、約５０ｃｍ～約６０ｃｍ、約６０ｃｍ～約７０ｃｍ、約７０ｃｍ～約８０ｃｍ、約８０ｃｍ～約９０ｃｍ、約９０ｃｍ～約１．０ｍ、約９０ｃｍ～約１．０ｍ等の長さの、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＦＢ）が得られることが可能となる。
　ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＦＢ）の断面形状としては、前述の通りであり、例えば、円形、楕円系、四角形や五角形等の多角形等が挙げられる。
　装置ＸＸの排出口２から射出される抗体、生理活性物質等を産生できる細胞ならびに式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液、又は生理活性物質等を産生できる細胞ならびに式（Ｉ－Ａ）及び式（ＩＩ－Ａ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液、を接触させる、２価金属イオンを含む溶液は、前述の「５－１．架橋アルギン酸ゲル」に記載の通りであり、例えば、カルシウムイオン、マグネシウムイオン、バリウムイオン、ストロンチウムイオン、亜鉛イオン等が含まれる溶液があげられる。
　２価金属イオンを含む溶液の２価金属イオン濃度は、例えば、約１ｍＭ～約１Ｍの範囲、又は約１０～約５００ｍＭの範囲であり；好ましくは、約１０～約１００ｍＭである。
　２価金属イオンを含む溶液を調製する際に用いる溶媒は、前述の「５－１．架橋アルギン酸ゲル」に記載の通りであり、例えば、水、及び生理食塩水等が挙げられる。
　装置ＸＸの排出口２から射出される抗体、生理活性物質等を産生できる細胞ならびに式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体を含む混合溶液を２価金属イオンを含む溶液に接触させる時間は、例えば、約１分～６０分、１分～３０分等である。
　前記ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの製造方法の工程（２）で得られる架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＬＡ）を接触させる、カチオン性ポリマーを含む溶液は、前述の「７．カチオン性ポリマー」に記載されるカチオン性ポリマーを含む溶液であり、例えば、ポリアミノ酸、塩基性多糖、塩基性ポリマー等を含む溶液が挙げられる。
　前記架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＬＡ）を接触させる、カチオン性ポリマーを含む溶液の濃度は、前述の「７．カチオン性ポリマー」に記載される通りであり、例えば、約０．０２～約０．２重量％、約０．０５～約０．１重量％等である。
　前記架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＬＡ）を接触させる、カチオン性ポリマーを含む溶液は、２価金属イオンを含む水溶液（例えば、塩化カルシウム水溶液、塩化バリウム水溶液、等）、塩化ナトリウム水溶液、溶液のｐＨ調整のための緩衝液（酢酸、酢酸ナトリウム、水酸化ナトリウム、ヒドロキシエチルピペラジンエタンスルホン酸等の水溶液）等の成分を含むことができる。
　前記架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＬＡ）をカチオン性ポリマーを含む溶液に接触させる時間は、例えば、約１分～６０分、１分～３０分等である。
　いくつかの態様では、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの製法時の温度は、例えば、約４～約３７℃の範囲である。
　前記製造方法により、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞がある一定数含まれたコア層を有するポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバを容易に得ることができる。
　いくつかの態様では、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバを培養液中で培養することにより、抗体産生細胞、生理活性物質産生細胞等が培養され、抗体、生理活性物質等を産生することができる。ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバは、培養液を適切に交換することにより、抗体産生細胞、生理活性物質産生細胞等を数週間～数か月の間連続培養することが可能となる。
　前記ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの強度については、当業者に周知の方法に従って、振盪崩壊試験、引張強度試験等により測定することができる。
　本明細書中の記載において「約」と記載した場合、特に断りが無い場合には、当該数値の±２０％迄、好ましくは当該数値の±１０％迄の値も含み得るものである。
１０．抗体産生細胞、生理活性物質産生細胞等の培養方法
　ここでは、前記製造方法にて作製される抗体、生理活性物質等を産生できる細胞をコア層に含むポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバを用いた、抗体、生理活性物質等の製造方法が提供される。例えば、前記ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバを培養容器に入れ、培地を添加して前記ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバを含浸させ、培養を行うことにより、抗体、生理活性物質等を製造することができる。以下、「抗体、生理活性物質等の製造方法」を「抗体産生細胞、生理活性物質産生細胞等の培養方法」という場合がある。
　好ましい態様の抗体産生細胞、生理活性物質産生細胞等の培養方法によれば、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞をコア層に含むポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバを前記製造方法にて作製した後の早い段階で、培養液に浸潤させ抗体産生細胞、生理活性物質産生細胞等の培養を開始することができる。これにより、図４に示すように、コア層への培養液（栄養源）及び酸素の供給をすぐに行うことができ、すなわち、コア層に含まれる、抗体産生細胞、生理活性物質産生細胞等を壊死させることなく、培養が可能となる。特に好ましい態様では、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層での抗体産生細胞、生理活性物質産生細胞等の壊死を十分に防ぎつつ、抗体、生理活性物質等を産生することができる。
　本発明の抗体、生理活性物質等を産生できる細胞をコア層に含むポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバは、培養時にファイバ外に存在している培養液（栄養源）及び酸素等の成分に対して十分な透過性を有しているものである。
　以下に、抗体産生細胞の培養方法の一例について、具体的に説明するが、これに限定されない。ベントキャップ付三角フラスコ（Ｃｏｒｎｉｎｇ社、　Ｃａｔ．４３１１４３）に、前述の製造方法にて作製された、コア層に抗体産生細胞を含む、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバを入れ、後述する表３１の組成である培地（３０　ｍＬ）を添加し、ゲルファイバを含浸させた後、３７℃、５％ＣＯ２雰囲気下にインキュベータ内で振盪器（パナソニックヘルスケア（株）ＭＩＲ－Ｓ１００Ｃ）を用いた１２５　ｒｐｍの条件で振とうしながら培養を行う。培養期間中、２～３日に一回、培地１．８　ｍＬを抜き取り、Ｆｅｅｄ液（Ｉｒｖｉｎｅ社製、ＪＸ　Ｆｅｅｄ　００３）または表３１の組成である培地１．８ｍＬを添加し、培地の総量を３０　ｍＬに保つ。また、培養期間中、週に一度培地の半量交換をおこなう。
　また、以下に、生理活性物質産生細胞の培養方法の一例について、具体的に説明するが、これに限定されない。前述の製造方法にて作製された、コア層に生理活性物質産生細胞を含む、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバを低接着表面ディッシュに入れ、後述する表３５の組成である培地（５　ｍＬ）を添加し、３７℃、５％ＣＯ２雰囲気下、インキュベータ内で静置して培養をおこなう。
　ある態様のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバを用いる抗体、生理活性物質等の製造技術は、コア層に含まれる抗体産生細胞、生理活性物質産生細胞等がある一定数以上には増殖しないことにより、細胞への物理的ストレスが少ないため、封入した抗体産生細胞、生理活性物質産生細胞等が長期間に渡り抗体、生理活性物質等を産生し続ける可能性を有している点で優れている。
　特に好ましい態様では、抗体の生産・精製効率を飛躍的に向上させる可能性があり（例えば、好ましい態様のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバを用いることで、大規模な培養タンクを要する浮遊培養とは異なり、小規模の生産設備にて抗体を培養することも可能となる）、少量・多種品目の抗体医薬品の製造にも適した次世代型抗体医薬品の連続生産技術として期待できる。
　培養により産生された抗体（例えば、抗ＧＰＶＩ抗体、トシリズマブ）または生理活性物質（例えば、インスリン）は、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に貯留されても良く、好ましくは、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層およびカチオン性ポリマー層を透過しポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ外の培養液中に貯留される。
　尚、抗体、生理活性物質等の回収・精製は、後述の記載を参照し、行うことが可能である。
　好ましい態様では、図４に示すように、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層内で産生された抗体、生理活性物質等が、コア層及びカチオン性ポリマー層を透過して当該ファイバ外へ順次放出されることとなり、抗体、生理活性物質等の連続培養が可能なサイクルが形成可能である。尚、このとき、代謝物及び老廃物も当該ファイバ外へ放出されてもよい。
　実際に、後述の実施例では、コア層に含める細胞として、抗ＧＰＶＩ抗体産生ＣＨＯ細胞、トシリズマブ産生ＣＨＯ細胞またはＭＩＮ６細胞から選択される細胞を用い、コア層の架橋アルギン酸ゲルの形成に用いる式（Ｉ）の化学修飾アルギン酸誘導体として、下記式：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000094
 ［式中、（ＡＬＧ）は、アルギン酸を表わし；－ＮＨＣＯ－は、アルギン酸の任意のカルボキシル基を介したアミド結合を表わす］から選択される化学修飾アルギン酸誘導体を、式（ＩＩ）の化学修飾アルギン酸誘導体として、下記式：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000095
 ［式中、（ＡＬＧ）は、アルギン酸を表わし；－ＮＨＣＯ－は、アルギン酸の任意のカルボキシル基を介したアミド結合を表わす］から選択される化学修飾アルギン酸誘導体を用い、カチオン性ポリマー層のカチオン性ポリマーとして、ポリ－Ｌ－オルニチン、ポリアリルアミン（ＰＡＡ）、ポリエチレンイミン又はポリメチレン－ＣＯ－グアニジン（ＰＭＣＧ）を用いて、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバを作製した。
　また、前記で得られたポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバを培養した処、産生された抗体（抗ＧＰＶＩ抗体、トシリズマブ）又は生理活性物質（インスリン）が、コア層及びカチオン性ポリマー層を透過して培養液中に貯留された事が確認できた。
　抗体、生理活性物質等を産生できる細胞をコア層に含むポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバを培養する、培養容器としては、例えば、組織培養用プレート、三角フラスコ、Ｔ－フラスコ、スピナーフラスコ、培養バッグ、動物細胞培養槽等からなる群から選択される容器であり；好ましくは三角フラスコ又は動物細胞培養槽である。培養は、静置培養、振とう・揺動培養などのいずれの方法を選択してもよい。
　抗体、生理活性物質等の生産性向上には、培養当たりの抗体産生細胞、生理活性物質産生細胞等の細胞数の増大化が有効であるが、一方で過剰な増殖が起こり、培養環境が悪化し、培養期間の短縮が起こりうる。いくつかの態様の抗体、生理活性物質等の製造方法にて、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる、抗体産生細胞、生理活性物質産生細胞等の過剰増殖に起因する細胞への物理的ストレスを少なくする為の方法として、例えば、コア層に含まれる抗体産生細胞、生理活性物質産生細胞等がある一定数以上に増殖しない方法としては、培養中の培養温度のコントロール、培養液中に細胞増殖抑制剤を添加する、等の方法が挙げられる。
　いくつかの態様の抗体、生理活性物質等の製造方法にて、培養温度は、例えば、約２８℃～約３９℃の範囲であり、例えば、約３０℃～約３７℃の範囲である。
　いくつかの態様の抗体、生理活性物質等の製造方法にて、培養開始から終了時までの培養温度は、適時、変化させることも可能である。例えば、培養開始時の温度を約３７℃として、ある一定時間培養した段階で、約３０℃に変化させることが可能である。
　いくつかの態様の抗体、生理活性物質等の製造方法にて、培養期間は、例えば、７日以上であり、又は１０日以上であり、又は２０日以上であり、又は３０日以上であり、又は４０日以上であり、又は５０日以上であり、又は６０日以上であり、又は７０日以上である。
　いくつかの態様の抗体、生理活性物質等の製造方法にて、培養期間は、例えば、７日であり、又は１４日であり、又は２８日であり、又は３５日であり、又は４２日であり、又は４９日であり、又は５６日であり、又は６３日であり、又は７０日である。
　いくつかの態様の抗体の製造方法にて、培養液中に細胞増殖抑制剤を添加することもできる。細胞増殖抑制剤とは、培養期間中、過剰な細胞増殖を抑制することが可能な剤であり、例えば、ジメチルスルホキシド、酪酸ナトリウム、バルプロ酸、塩化リチウム、吉草酸、メトトレキサート（ＭＴＸ）等の添加剤が挙げられる。細胞増殖抑制剤を培養液に添加するタイミングは、培養開始時点、又は培養期間中（必要な細胞数まで増殖できた時点）のいずれでも可能である。本明細書にて、抗ＧＰＶＩ抗体産生細胞を用いて培養を行う場合、メトトレキサート（ＭＴＸ）を添加している。
　本明細書中、細胞培養用培地には、市販の培地基材又は調製済み培地、若しくは自製した培地を使用することができる。又、天然培地（例えば、ソイビーン－カゼインダイジェスト培地（ＳＣＤ培地）等がある）又は合成培地（増殖に必要な各種栄養素を全て化学薬品にて補う培地である）を使用することもできる。又、当該培地は、特に限定されることは無いが、細胞の生存増殖に必要な成分（無機塩、炭水化物、ホルモン、必須アミノ酸、非必須アミノ酸、ビタミン等）が含まれる基本培地であれば良く、例えば、Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ　Ｍｏｄｉｆｉｅｄ　Ｅａｇｌｅ　Ｍｅｄｉｕｍ（ＤＭＥＭ）、Ｍｉｎｉｍｕｍ　Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ　Ｍｅｄｉｕｍ（ＭＥＭ）、ＲＰＭＩ－１６４０、Ｂａｓａｌ　Ｍｅｄｉｕｍ　Ｅａｇｌｅ（ＢＭＥ）、Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ　Ｍｏｄｉｆｉｅｄ　Ｅａｇｌｅ’ｓ　Ｍｅｄｉｕｍ：Ｎｕｔｒｉｅｎｔ　Ｍｉｘｔｕｒｅ　Ｆ－１２（ＤＭＥＭ／Ｆ－１２）、Ｇｌａｓｇｏｗ　Ｍｉｎｉｍｕｍ　Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ　Ｍｅｄｉｕｍ（Ｇｌａｓｇｏｗ ＭＥＭ）、Ｇ０１６培地、ＤＭＥＭ（Ｈｉｇｈ　Ｇｌｕｃｏｓｅ）等が挙げられる。
　又、前記培地には、更に血清が含まれていても良い。前記血清としては、特に限定されることは無いが、例えば、ＦＢＳ／ＦＣＳ（Ｆｅｔａｌ　Ｂｏｖｉｎｅ／Ｃａｌｆ　Ｓｅｒｕｍ）、ＮＣＳ（Ｎｅｗｂｏｒｎ　Ｃａｌｆ　ｓｅｒｕｍ）、ＣＳ（Ｃａｌｆ　Ｓｅｒｕｍ）、ＨＳ（Ｈｏｒｓｅ　Ｓｅｒｕｍ）等が挙げられる。培地に含まれる血清の濃度は、例えば、２重量％以上１０重量％以下である。
　本発明のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバは、そのコア層の架橋アルギン酸ゲルファイバの両端がカチオン性ポリマーで被覆されていることから、培養期間中にコア層に含まれる抗体産生細胞、生理活性物質産生細胞等の細胞が、多量に（例えば、１×１０５個／ｍＬ以上）ファイバ外へ漏れだすことの防止、抑制又は低減に繋がる。
１１．コア層における生細胞数の算出方法
　以下に、培養開始時、培養期間中または培養後における、抗体産生細胞を含有するポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層に含まれる抗体産生細胞の生細胞数の測定方法の一例について、具体的に説明するが、これに限定されるものではない。
　抗体産生細胞を含有する架橋アルギン酸ゲルファイバ、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（０．２ｍＬ）を１５ｍＬチューブ（遠沈管（印刷目盛付・バルク），型式：２３２５－０１５－ＭＹＰ）に移し、チューブの目盛で約４．５ｍＬまで後述する表３１の組成であるＧ０１６培地（４．５　ｍＬ）を添加する。続いて、１　ｍｇ／ｍＬ　Ａｌｇｉｎａｔｅ　ｌｙａｓｅ　（Ｐｏｌｙ　α－ｇｕｌｕｒｏｎａｔｅ　ｌｙａｓｅ　Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ　Ｚｏｂｅｌｌｉａ　ｇａｌａｃｔａｎｉｖｏｒａｎｓ）　（Ｃｒｅａｔｉｖｅ　Ｅｎｚｙｍｅｓ，　Ｃａｔ＃ＮＡＴＥ－１５６３）を３０μＬ添加し、３０　℃、１２５　ｒｐｍで１時間以上振盪撹拌した。振盪撹拌の間、架橋アルギン酸ゲルファイバが均一に溶解するまで、適宜、溶液のピペッティングあるいは前記Ａｌｇｉｎａｔｅ　ｌｙａｓｅを添加した。前記架橋アルギン酸ゲルファイバが均一に溶解したことを確認後、液量を確認し、前記Ｇ０１６培地を追加して５ｍＬとする。前記溶液の一部を採取し、細胞数をカウントする。２回測定の平均値を用いて、架橋アルギン酸ゲルファイバ中の生細胞数とする。
１２．抗体の分類
　抗体は、作製時の免疫動物種によって、マウス抗体、ラット抗体、ウサギ抗体、ヒト抗体等と称される。ヒトで使用する際の免疫原性を減じるために、異なる種由来の抗体の部分領域をヒト配列に変換させた改変抗体として、キメラ抗体とヒト化抗体があり、バイオ医薬品として用いられる。また、ヒト抗体遺伝子を組込まれたマウスなどを用いて、ヒト抗体遺伝子から産生された抗体もあり、ヒト型抗体、あるいは単にヒト抗体と称され、バイオ医薬品として用いられる。
　上記の各種抗体に加え、次世代抗体と言われる様々な改変抗体も開発されており、本明細書においては、改変抗体も「抗体」に含まれる。例えば、２以上の抗原に対して特異性を示す抗体である多価抗体があり、特に二重特異性を示すものをバイスペシフィック抗体と言い、高機能化抗体の一つである。抗体のＦｃ部位を除去し低分子化した抗体である低分子化抗体もあり、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖ（単鎖Ｆｖ）、ＶＨＨ等が挙げられ、バイオ医薬品として用いられている。さらに、バイスペシフィック低分子化抗体も作製されており、例えばｓｃＦｖ－ｓｃＦｖがバイオ医薬品として用いられている。糖鎖を改変させるようにＦｃ領域等に変異を入れた抗体も、改変抗体の一例である。糖鎖を改変させるように宿主細胞を予め形質転換させることで、糖鎖改変抗体を産生させることもでき、例えば、フコース除去抗体が挙げられる。なお、本明細書において、抗体又は抗体断片と他の蛋白質又はペプチドとの融合蛋白質も、改変抗体、すなわち抗体の一例として挙げられるが、前記の生理活性物質との融合蛋白質である場合は、生理活性物質にも含まれる。
　抗体は、定常領域の構造上の違いにより、下記表に示されるようなクラス（アイソタイプ）やサブクラスに分類される。
ヒトＩｇの分類
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000096
１３．抗体・生理活性物質の産生及び精製法
　いくつかの態様の抗体の製造方法にて、抗体産生細胞を培養することよってポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層で産生されポリマー層を透過し得る抗体としては、特に限定されることは無いが、例えば、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＥ等からなる群から選択されるクラス（アイソタイプ）を有する抗体が挙げられる。産生抗体をバイオ医薬品として用いる場合には、好ましくは、ＩｇＧ抗体である。
　いくつかの態様の抗体の製造方法にて、抗体産生細胞を培養することによって、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層で産生されカチオン性ポリマー層を透過し得る抗体の分子量は、特に限定されることは無いが、例えば、約４５，０００～約１，０００，０００Ｄａの範囲にある抗体である。また、カチオン性ポリマー層を透過し得る抗体の分子量は例えば、約３，０００～約１，０００，０００Ｄａ、約２０，０００～約１，０００，０００Ｄａ、約２０，０００～約４００，０００Ｄａ、約４５，０００～約４００，０００Ｄａ、約２０，０００～約２００，０００Ｄａ、約４５，０００～約２００，０００Ｄａの範囲にある抗体である。
　いくつかの態様の生理活性物質の製造方法にて、生理活性物質産生細胞を培養することによって、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層で産生されカチオン性ポリマー層を透過し得る生理活性物質の分子量は、特に限定されることは無いが、例えば、約３，０００～約１，０００，０００Ｄａ、約２０，０００～約１，０００，０００Ｄａ、約４５，０００～約１，０００，０００Ｄａ、約２０，０００～約４００，０００Ｄａ、約４５，０００～約４００，０００Ｄａ、約２０，０００～約２００，０００Ｄａ、約４５，０００～約２００，０００Ｄａの範囲にある生理活性物質である。
　本明細書中、前記の各抗体産生細胞を用いて前記の抗体の製造方法にて培養を行う場合、用いた抗体産生細胞に対応する抗体が産生される。例えば、ムロモナブ－ＣＤ３産生ＣＨＯ細胞を用いる場合、抗体としてムロモナブ－ＣＤ３が産生される。
　本明細書中、前記の各生理活性物質産生細胞を用いて前記の生理活性物質の製造方法にて培養を行う場合、用いた生理活性物質産生細胞に対応する生理活性物質が産生される。
　産生される抗体としては、例えば、ムロモナブ－ＣＤ３産生ＣＨＯ細胞を用いてムロモナブ－ＣＤ３（ＩｇＧ；１５０，０００）、トラスツズマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてトラスツズマブ（ＩｇＧ；１４８，０００）、リツキシマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてリツキシマブ（ＩｇＧ；１４４，５１０）、パリビズマブ産生ＮＳ０細胞を用いてパリビズマブ（ＩｇＧ；１４７，７００）、インフリキシマブ産生Ｓｐ２／０細胞又はインフリキシマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてインフリキシマブ（ＩｇＧ；１４９，０００）、バシリキシマブ産生Ｓｐ２／０細胞を用いてバシリキシマブ（ＩｇＧ；１４７，０００）、トシリズマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてトシリズマブ（ＩｇＧ；１４８，０００）、ゲムツズマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてゲムツズマブ（ＩｇＧ；１５０，０００）、ベバシズマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてベバシズマブ（ＩｇＧ；１４９，０００）、イブリツモマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてイブリツモマブ（ＩｇＧ；１４８，０００）、アダリムマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてアダリムマブ（ＩｇＧ；１４８，０００）、セツキシマブ産生Ｓｐ２／０細胞を用いてセツキシマブ（ＩｇＧ；１５１，８００）、ラニビズマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてラニビズマブ（ＩｇＧ（Ｆａｂ）；４８，０００）、オマリズマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてオマリズマブ（ＩｇＧ；１４９，０００）、エクリズマブ産生ＮＳ０細胞を用いてエクリズマブ（ＩｇＧ；１４５，２３５）、パニツムマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてパニツムマブ（ＩｇＧ；１４７，０００）、ウステキヌマブ産生Ｓｐ２／０細胞を用いてウステキヌマブ（ＩｇＧ；１４８，０７９～１４９，６９０）、ゴリムマブ産生Ｓｐ２／０細胞を用いてゴリムマブ（ＩｇＧ；１４９，８０２～１５１，０６４）、カナキヌマブ産生Ｓｐ２／０細胞を用いてカナキヌマブ（ＩｇＧ；１４８，０００）、デノスマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてデノスマブ（ＩｇＧ；１５０，０００）、モガムリズマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてモガムリズマブ（ＩｇＧ；１４９，０００）、セルトリズマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてセルトリズマブ（ＩｇＧ（Ｆａｂ’）；５０，０００）、オファツムマブ産生ＮＳ０細胞を用いてオファツムマブ（ＩｇＧ；１４９，０００）、ペルツズマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてペルツズマブ（ＩｇＧ；１４８，０００）、ブレンツキシマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてブレンツキシマブ（ＩｇＧ；１４８，０００）、ナタリズマブ産生ＮＳ０細胞を用いてナタリズマブ（ＩｇＧ；１４６，１７８）、ニボルマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてニボルマブ（ＩｇＧ；１４５，０００）、アレムツズマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてアレムツズマブ（ＩｇＧ；１５０，０００）、セクキヌマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてセクキヌマブ（ＩｇＧ；１５１，０００）、ラムシルマブ産生ＮＳ０細胞を用いてラムシルマブ（ＩｇＧ；１４７，０００）、イピリムマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてイピリムマブ（ＩｇＧ；１４８，０００）、エボロクマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてエボロクマブ（ＩｇＧ；１４１，７８９）、メポリズマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてメポリズマブ（ＩｇＧ；１４９，０００）、アリロクマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてアリロクマブ（ＩｇＧ；１４５８９２．０４９．）、イキセキズマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてイキセキズマブ（ＩｇＧ；１４９，０００）、ブロダルマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてブロダルマブ（ＩｇＧ；１４７，０００）、イダルシズマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてイダルシズマブ（ＩｇＧ（Ｆａｂ）；４７，７８２）、エロツズマブ産生ＮＳ０細胞を用いてエロツズマブ（ＩｇＧ；１４８，０００）、ペムブロリズマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてペムブロリズマブ（ＩｇＧ；１４９，０００）、サリルマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてサリルマブ（ＩｇＧ；１５０，０００）、ベズロトクスマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてベズロトクスマブ（ＩｇＧ；１４８，０００）、ベリムマブ産生ＮＳ０細胞を用いてベリムマブ（ＩｇＧ；１４７，０００）、ダラツムマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてダラツムマブ（ＩｇＧ；１４８，０００）、アベルマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてアベルマブ（ＩｇＧ；１４７，０００）、デュピルマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてデュピルマブ（ＩｇＧ；１５２，０００）、アテゾリズマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてアテゾリズマブ（ＩｇＧ；１４４，６１１）、ベンラリズマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてベンラリズマブ（ＩｇＧ；１４８，０００）、イノツズマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてイノツズマブ（ＩｇＧ；１４９，０００）、エミシズマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてエミシズマブ（ＩｇＧ；１４８，０００）、グセルクマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてグセルクマブ（ＩｇＧ；１４６，０００）、デュルバルマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてデュルバルマブ（ＩｇＧ；１４９，０００）、オビヌツズマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてオビヌツズマブ（ＩｇＧ；１４８，０００～１５０，０００）、ベドリズマブ産生ＣＨＯ細胞を用いてベドリズマブ（ＩｇＧ；１５０，０００）又は抗ＧＰＶＩ抗体産生ＣＨＯ細胞を用いて抗ＧＰＶＩ抗体（ＩｇＧ；１５０，０００）が挙げられる（抗体名後のカッコ内は、当該抗体のクラス（アイソタイプ）及び分子量を示す）。尚、本発明の抗体の製造方法で得ることができる抗体は、前記クラス（アイソタイプ）やサブクラスに、特に限定されるものではない。
　産生された抗体は、例えば、下記の３工程を経て精製が行われる。
〔工程１〕培地中に含まれる、抗体以外のタンパク質及び固形物をほぼ取り除く為に、遠心分離法又はフィルターによる濾過等を行う。
〔工程２〕例えば、アフィニティークロマトグラフィー（抗体の場合は、Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ａ又はＰｒｏｔｅｉｎ　Ｇを用いたアフィニティークロマトグラフィー）、又はイオン交換クロマトグラフィー等のクロマトグラフィーにて目的とする抗体を取り出す。
〔工程３〕工程２で混入してきた夾雑物を除去する為に、イオン交換クロマトグラフィー、ゲルろ過クロマトグラフィー又はヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー等を行い、目的とする抗体を高純度精製する。
　産生された生理活性物質は、例えば、前記工程と同様な方法を経て精製が行われる。
Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ａ又はＰｒｏｔｅｉｎ　Ｇを用いたアフィニティークロマトグラフィー：
　ＩｇＧの精製法としては、例えば、Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ａ又はＰｒｏｔｅｉｎ　Ｇを用いた抗体の精製方法が知られている。Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ａを用いた抗体の精製法として、下記方法が１例として挙げられる。（１）Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ａが固定されたビーズが充填されたカラムを用いて、前記〔ステップ１〕の方法で得られてくる溶液に血清を添加した溶液をろ過することで、ＩｇＧがカラム中のビーズに結合して、他の血清成分がカラム外へ流出がされる。（２）その後、カラムに酸性溶液を通過させることにより、ビーズに結合していたＩｇＧが切れて、カラム外へ溶出されてＩｇＧが得られる。尚、ＩｇのＰｒｏｔｅｉｎ　ＡとＰｒｏｔｅｉｎ　Ｇへの結合力が、動物種やサブクラスによって違うことから、目的によって、Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ａ又はＰｒｏｔｅｉｎ　Ｇを使い分けることができる。
イオン交換クロマトグラフィー：
　タンパク質が有する電気的な性質（電荷）を利用してタンパク質を分離する方法である。正電荷を示す塩基性タンパク質は、負電荷をもつ陽イオン交換体（担体）にイオン結合し、負電荷を示す酸性タンパク質は正電荷を持つ陰イオン交換体に結合することから、タンパク質が含まれる試料をイオン交換体が充填されたカラムを通すことで、タンパク質がイオン交換体に結合する。その後、カラムを通す溶媒の塩濃度を高濃度にすることで、タンパク質とイオン交換体とのイオン結合が弱くなり、結合力の弱いタンパク質から順番に、イオン交換体から外れて、カラム外へ流出してくる。陽イオン交換体又は陰イオン交換体の選択は、試料として用いるタンパク質の電荷から選択するものとする。
ゲルろ過クロマトグラフィー：
　タンパク質の分子量の違いを利用してタンパク質を分離する方法である。小孔が付いている担体が充填されたカラムに試料を流すことで、分子量の小さいタンパク質は、前記小孔に入り込みながら流出していき、分子量の大きいタンパク質は前記小孔に入らずに流出してくる為、カラムを通過する時間が分子量の小さいタンパク質は遅く、分子量の大きいタンパク質は早くなることから、時間差的にタンパク質を分離することが可能となる。
ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー：
　リン酸カルシウムの１種であるヒドロキシアパタイトを用いたクロマトグラフィーである。主にカルシウムイオンによる金属アフィニティーとリン酸基による陽イオン交換に基づく、複数の相互作用を利用してタンパク質を分離する方法である。アミノ酸のカルボキシル基及びアミノ基がそれぞれ担体と相互作用することで吸着し、高濃度リン酸または高塩濃度の溶媒を流すことで目的物と不純物の分離を行う。
１４．ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの物性
［ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの安定性の確認法］
　本明細書中、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの安定性は、例えば、以下の試験法により確認することができる。より具体的には、後記実施例に記載の方法で確認することができる。
＜振盪崩壊試験＞：上記の製造方法で得られるポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバをリン酸緩衝生理食塩水中（ＰＢＳ）に懸濁させ、これを一定時間、振盪させたのち、ファイバの崩壊し易さ（振盪崩壊度）を確認することにより、その物理的な強度を測定することができる。具体的な試験方法としては、例えば、後述の実施例に記載の方法が挙げられる。
＜引張強度試験＞：上記の製造方法で得られるポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバを用いて、引張強度測定装置を用いて、その破断値（ｍＮ）を確認することにより、その物理的な強度を測定することができる。具体的な試験方法としては、例えば、後述の実施例に記載の方法が挙げられる。
　本発明のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの強度は、これを構成するコア層に含まれる架橋アルギン酸ゲル、およびコア層とカチオン性ポリマー層の間で形成されている架橋アルギン酸ゲルとカチオン性ポリマーの静電的作用が、本発明のファイバーの強度にとって最適な性質を有していることに起因する。
　本発明のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバは、高い物理的安定性を有するとともに、コア層で産生された抗体、生理活性物質等がコア層から放出され、更にポリマー層を透過することができることから、適切な透過性も有しており、抗体、生理活性物質等を生産するのに適した構造体でもある。
１５．化学修飾アルギン酸誘導体の反応性基（相補的な反応性基）の導入率測定
　反応性基又は相補的な反応性基導入率は、アルギン酸の繰り返し単位であるウロン酸単糖単位あたりに導入された反応性基又は相補的な反応性基の数を百分率で表した値を意味する。
　後記実施例においては、反応性基又は相補的な反応性基導入率（ｍｏｌ％）は、１Ｈ－ＮＭＲの積分比により計算した。又、導入率の算出に必要なアルギン酸の量は、検量線を利用したカルバゾール硫酸法により測定し、反応性基又は相補的な反応性基の量は、検量線を利用した吸光度測定法により測定することもできる。
１６．化学修飾アルギン酸誘導体の分子量の測定
　後記実施例で得られた化学修飾アルギン酸誘導体の固体を０．１５　ｍｏｌ／ＬのＮａＣｌを含む１０　ｍｍｏｌ／Ｌリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）に溶解し０．１％又は０．２％溶液を調製し、孔径０．２２μｍのポリエーテルスルフォン製ろ過フィルター（Ｍｉｎｉｓａｒｔ　Ｈｉｇｈ　Ｆｌｏｗ　Ｆｉｌｔｅｒ、Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ社）を通し不溶物を除いた後、ゲルろ過用サンプルとした。各サンプルのスペクトルを分光光度計ＤＵ－８００（Ｂｅｃｋｍａｎ－Ｃｏｕｌｔｅｒ社）により測定し、各化合物のゲルろ過における測定波長を決定した。特異的な吸収波長を持たない化合物に関しては、示差屈折計を用いた。
　ゲルろ過用サンプルの２００μＬをＳｕｐｅｒｏｓｅ６　Ｉｎｃｒｅａｓｅ１０／３００　ＧＬカラム（ＧＥヘルスケアサイエンス社）に供した。ゲルろ過は、クロマトグラフ装置としてＡＫＴＡ　Ｅｘｐｌｏｒｅｒ　１０Ｓを、展開溶媒として０．１５　ｍｏｌ／Ｌ　ＮａＣｌを含む１０　ｍｍｏｌ／Ｌリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）を使用し、室温で流速０．８　ｍＬ／ｍｉｎの条件で実施した。サンプルの溶出プロファイルは、各化合物で決定した波長の吸収をモニターし作製した。得られたクロマトグラムは、Ｕｎｉｃｏｒｎ５．３１ソフトウエア（ＧＥヘルスケアサイエンス社）にて解析し、ピーク範囲を決定した。
　反応性基又は相補的な反応性基が導入されたアルギン酸の分子量は、ブルーデキストラン（分子量２００万Ｄａ、ＳＩＧＭＡ社）、チログロブリン（分子量６６．９万Ｄａ、ＧＥヘルスケアサイエンス社）、フェリチン（分子量４４万Ｄａ、ＧＥヘルスケアサイエンス社）、アルドラーゼ（分子量１５．８万Ｄａ、ＧＥヘルスケアサイエンス社）、コンアルブミン（分子量７．５万Ｄａ、ＧＥヘルスケアサイエンス社）、オブアルブミン（分子量４．４万Ｄａ、ＧＥヘルスケアサイエンス社）、リボヌクレアーゼＡ（分子量１．３７万Ｄａ、ＧＥヘルスケアサイエンス社）及びアプロチニン（分子量６５００Ｄａ、ＧＥヘルスケアサイエンス社）を標準品として用い、反応性基又は相補的な反応性基が導入されたアルギン酸と同じ条件でゲルろ過を行い、各成分の溶出液量をＵｎｉｃｏｒｎソフトウエアにて決定した。この各成分の溶出液量を横軸に、分子量の対数値を縦軸にそれぞれプロットし、直線回帰し、検量線を作成した。検量線は、ブルーデキストランからフェリチンまで、フェリチンからアプロチニンまでの２種類を作成した。
　この検量線を用いて、先に得られたクロマトグラムの溶出時間ｉにおける分子量（Ｍｉ）を計算した。次いで、溶出時間ｉにおける吸光度を読み取りＨｉとした。これらのデータから重量平均分子量（Ｍｗ）を以下の式から求めた。
Figure JPOXMLDOC01-appb-M000097
　尚、本明細書において引用した全ての文献、及び公開公報、特許公報、その他の特許文献は、その目的にかかわらず参照として本明細書に組み込むものとする。
　また、本発明の目的、特徴、利点、及びそのアイデアは、本明細書の記載により、当業者には明らかであり、本明細書の記載から、当業者であれば、本発明を実施できる。発明を実施するための最良の形態及び具体的な実施例などは、本発明の好ましい実施態様を示すものであり、例示又は説明のために示されているのであって、本発明をそれらに限定するものではない。本明細書で開示されている本発明の意図ならびに範囲内で、本明細書の記載に基づき、様々に修飾ができることは、当業者にとって明らかである。
　以下、実施例により本発明を説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。
[化学修飾アルギン酸誘導体の合成法]
　核磁気共鳴スペクトル（ＮＭＲ）の測定には、ＪＥＯＬ　ＪＮＭ－ＥＣＸ４００　ＦＴ－ＮＭＲ（日本電子）を用いた。液体クロマトグラフィー－質量分析スペクトル（ＬＣ－Ｍａｓｓ）は以下の方法で測定した。［ＵＰＬＣ］Ｗａｔｅｒｓ　ＡＣＱＵＩＴＹ　ＵＰＬＣシステムおよびＢＥＨ　Ｃ１８カラム（２．１ｍｍ×５０ｍｍ、１．７μｍ）（Ｗａｔｅｒｓ）を用い、アセトニトリル：０．０５％トリフルオロ酢酸水溶液＝５：９５（０分）～９５：５（１．０分）～９５：５（１．６分）～５：９５（２．０分）の移動相およびグラジエント条件を用いた。
　１Ｈ－ＮＭＲデータ中、ＮＭＲシグナルのパターンで、ｓはシングレット、ｄはダブレット、ｔはトリプレット、ｑはカルテット、ｍはマルチプレット、ｂｒはブロード、Ｊはカップリング定数、Ｈｚはヘルツ、ＣＤＣｌ３は重クロロホルム、ＤＭＳＯ－ｄ６は重ジメチルスルホキシド、Ｄ２Ｏは重水を意味する。１Ｈ－ＮＭＲデータ中、水酸基（ＯＨ）、アミノ基（ＮＨ２）、カルボキシル基（ＣＯＯＨ）のプロトン等、ブロードバンドであるため確認ができないシグナルについては、データに記載していない。
　ＬＣ－Ｍａｓｓデータ中、Ｍは分子量、ＲＴは保持時間、［Ｍ＋Ｈ］＋，［Ｍ＋Ｎａ］＋は分子イオンピークを意味する。
　実施例中の「室温」又は「ｒ．ｔ．」は、通常約０℃から約３５℃の温度を示すものとする。実施例中の「ＤＭＴ－ＭＭ」は、４－（４、６－ジメトキシ－１、３、５－トリアジン－２－イル）－４－メチルモルホリニウムクロリド（ＣＡＳ　ＲＥＧＩＳＴＲＹ　ＮＯ．：３９４５－６９－５）を意味し、市販品または文献公知の方法で合成したものを使用することができる。
　実施例中の反応性基導入率（ｍｏｌ％）は、１Ｈ－ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）の積分比から算出されたアルギン酸を構成する単糖（グルロン酸およびマンヌロン酸）単位のモル数に対する導入された反応性基のモル数の割合を示すものとする。
　実施例中、アルギン酸ナトリウムは、前記表８に記される物性値を示すアルギン酸ナトリウム（Ａ－１～Ａ－３またはＢ－２～Ｂ－３）を用いた。また、アルギン酸ナトリウムあるいは各種アルギン酸誘導体は、必要に応じてろ過滅菌を実施した。
　表２４－１～表２４－２には、（実施例１）～（実施例１８）で得られた、反応性基が導入されたアルギン酸誘導体の物性値（具体的には、反応性基導入率（ｍｏｌ％）、分子量、及び重量平均分子量（Ｄａ））を示す。
　表２５－１～表２５－３には、実施例中の各中間体の１Ｈ－ＮＭＲ、ＬＣ－Ｍａｓｓのデータを示す。
（実施例１ａ～ｉ）ジベンゾシクロオクチン－アミノ基導入アルギン酸（１－Ａ２、１－Ａ１、１－Ａ３、１－Ｂ２、１－Ｂ２ｂ、１－Ｂ２ｃ、１－Ａ２ｂ、１－Ａ２ｃおよび１－Ａ２ｄ）の合成： 
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000098
　下記の合成方法および反応条件にて、１－Ａ２、１－Ａ１、１－Ａ３、１－Ｂ２、１－Ｂ２ｂ、１－Ｂ２ｃ、１－Ａ２ｂ、１－Ａ２ｃおよび１－Ａ２ｄの化合物を合成した。
［合成方法］
　１重量％または２重量％に調製したアルギン酸ナトリウム（持田製薬株式会社製）水溶液に、４－（４、６－ジメトキシ－１、３、５－トリアジン－２－イル）－４－メチルモルホリニウムクロリド（ＤＭＴ－ＭＭ）、１モル濃度－重曹水を加えた。この溶液に、市販のジベンゾシクロオクチン－アミン（３－アミノ－１－（１１，１２－ジデヒドロジベンズ［ｂ，ｆ］アゾシン－５（６Ｈ）－イル）－１－プロパノン）［ＣＡＳ　ＲＥＧＩＳＴＲＹ　ＮＯ．：１２５５９４２－０６－３］（ＳＭ１）のエタノール（ＥｔＯＨ　１）溶液を滴下し、室温で攪拌した。塩化ナトリウムを加えた後、エタノール（ＥｔＯＨ　２）を加え、室温で攪拌した。得られた沈殿をろ取し、エタノールで洗浄後、減圧乾燥して、標記化合物を得た。実施例１ｇ、１ｈおよび１ｉは、先の操作で得られた固体を水に溶かし、凍結乾燥することで標記化合物を得た。
［反応条件・結果］
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000099
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000100
（実施例２）５－アミノ－１－（１１，１２－ジデヒドロジベンズ［ｂ，ｆ］アゾシン－５（６Ｈ）－イル）－１－ペンタノン基（ＡＤＩＢＯ－Ｃ５－アミン）導入アルギン酸（２－Ｂ２）の合成：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000101
　１重量％に調製したアルギン酸ナトリウム（持田製薬株式会社製：Ｂ－２）水溶液（２８．５　ｍＬ）に、ＤＭＴ－ＭＭ（６０　ｍｇ）、文献公知の方法で得られたＡＤＩＢＯ－Ｃ５－アミン［ＣＡＳ　ＲＥＧＩＳＴＲＹ　ＮＯ．：２４０１８７６－２９－５　］（ＳＭ２）（２２　ｍｇ）のエタノール（２．９　ｍＬ）溶液、１モル濃度－重曹水（７２　μＬ）を加え、３０℃で３時間攪拌した。塩化ナトリウム（２８５　ｍｇ）を加えた後、エタノール（５７　ｍＬ）を加え、３０分間室温で攪拌した。得られた沈殿をろ取し、エタノールで洗浄後、減圧乾燥して、標記化合物（２７７　ｍｇ）を白色固体として得た。
（実施例３）２－アミノ－Ｎ－［３－（１１，１２－ジデヒドロジベンズ［ｂ，ｆ］アゾシン－５（６Ｈ）－イル）－３－オキソプロピル］アセタミド基導入アルギン酸（３－Ａ２）の合成：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000102
＜Ｓｔｅｐ１＞　（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メチル－Ｎ－［３－（１１，１２－ジデヒドロジベンズ［ｂ，ｆ］アゾシン－５（６Ｈ）－イル）－３－オキソプロピル］アセタミド－２－カルバメート（ＩＭ３－１）の合成：
　式ＳＭ１の化合物（５０　ｍｇ）、Ｎ－［（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシ）カルボニル］グリシン［ＣＡＳ　ＲＥＧＩＳＴＲＹ　ＮＯ．：２９０２２－１１－５］（５４　ｍｇ）をアセトニトリル（１．５　ｍＬ）に溶解した。Ｏ－（７－アザベンゾトリアゾール－１－イル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロリン酸塩（７６　ｍｇ）、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（７０　μＬ）を加え、室温で４．５時間撹拌した。反応液に、酢酸エチル（１５　ｍＬ）、水（５　ｍＬ）を加え、分液後、有機層を水、飽和食塩水で順次洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して、標記化合物（６３　ｍｇ）を薄いベージュアモルファスとして得た。
＜Ｓｔｅｐ２＞　２－アミノ－Ｎ－［３－（１１，１２－ジデヒドロジベンズ［ｂ，ｆ］アゾシン－５（６Ｈ）－イル）－３－オキソプロピル］アセタミド（ＩＭ３－２）の合成：
　（実施例３）＜Ｓｔｅｐ１＞で得られた式ＩＭ３－１の化合物（６３　ｍｇ）に、ピぺリジン（５６　μＬ）のＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（３１５　μＬ）溶液を加え、室温で３０分間攪拌した。反応液に、酢酸エチル（１５　ｍＬ）、水（５　ｍＬ）を加え、分液後、有機層を水、飽和食塩水で順次洗浄した。有機層を、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮した。得られた固体に、ｔｅｒｔ－ブチルメチルエーテル（５　ｍＬ）を加え、トリチュレートした後、ろ取し、標記化合物（１０　ｍｇ）を薄いベージュ固体として得た。また、ろ液から回収し、追加で、標記化合物（１１　ｍｇ）を淡黄色ガム状物として得た。
＜Ｓｔｅｐ３＞　２－アミノ－Ｎ－［３－（１１，１２－ジデヒドロジベンズ［ｂ，ｆ］アゾシン－５（６Ｈ）－イル）－３－オキソプロピル］アセタミド基導入アルギン酸（３－Ａ２）の合成：
　１重量％に調製したアルギン酸ナトリウム（持田製薬株式会社製：Ａ－２）水溶液（１９　ｍＬ）に、ＤＭＴ－ＭＭ（１０６　ｍｇ）、（実施例３）＜Ｓｔｅｐ２＞で得られた式ＩＭ３－２の化合物（２１　ｍｇ）のエタノール（１．９　ｍＬ）溶液、１モル濃度－重曹水（４８　μＬ）を加えた。３０℃で３時間攪拌した後、塩化ナトリウム（０．１９　ｇ）、エタノール（３８　ｍＬ）を順次加え、３０分間室温で攪拌した。得られた沈殿をろ取し、エタノールで洗浄後、減圧乾燥した。得られた固体を水に溶解後凍結乾燥して、標記化合物（１８８　ｍｇ）を白色固体として得た。
（実施例４ａ～ｇ）Ｎ－（４－（アミノメチル）ベンジル）－２－（シクロオクト－２－イン－１－イロキシ）アセタミド基導入アルギン酸（４－Ｂ２、４－Ａ２、４－Ｂ２ｂ、４－Ａ２ｂ、４－Ａ２ｃ、４－Ａ２ｄおよび４－Ａ３）の合成： 
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000103
　下記の合成方法および反応条件にて、４－Ｂ２、４－Ａ２、４－Ｂ２ｂ、４－Ａ２ｂ、４－Ａ２ｃ、４－Ａ２ｄおよび４－Ａ３の化合物を合成した。
［合成方法］
　１重量％または２重量％に調製したアルギン酸ナトリウム（持田製薬株式会社製）水溶液に、室温撹拌下、ＤＭＴ－ＭＭを加えた。続いて、文献公知の方法で得られたＮ－［［４－（アミノメチル）ベンジル］－２－（２－シクロオクチン－１－イロキシ）－アセタミド［ＣＡＳ　ＲＥＧＩＳＴＲＹ　ＮＯ．：２４０１８７６－３３－１］（ＳＭ４）のエタノール（ＥｔＯＨ　１）溶液を室温で滴下し、攪拌した。室温に冷却後、塩化ナトリウムを加えた後、エタノール（ＥｔＯＨ　２）を加え、攪拌した。得られた沈殿をろ取し、エタノール（２ｍＬ）で３回洗浄後、減圧下乾燥し、標記化合物を得た。実施例４ｂ、４ｃ、４ｄ、４ｅ、４ｆおよび４ｇは、先の操作で得られた固体を水に溶かし、凍結乾燥することで標記化合物を得た。
［反応条件・結果］
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000104
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000105
（実施例５ａ、ｂ）Ｎ－（４－（２－アミノエトキシ）ベンジル）－２－（シクロオクト－２－イン－１－イロキシ）アセタミド基導入アルギン酸（５－Ａ２および５－Ｂ２）の合成：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000106
＜Ｓｔｅｐ１＞　ｔｅｒｔ－ブチル　（４－（２－（２，２，２－トリフルオロアセタミド）エトキシ）ベンジル）カルバメート（ＩＭ－５－１）の合成：
　市販のｔｅｒｔ－ブチル　（４－ヒドロキシベンジル）カルバメート（式ＲＧ５－１、ＣＡＳ　ＲＥＧＩＳＴＲＹ　ＮＯ．：１４９５０５－９４－２）（０．３６ｇ）、市販または文献公知の方法にて合成して得られたＮ－（２－ブロモエチル）－２，２，２－トリフルオロアセタミド（式ＳＭ５、ＣＡＳ　ＲＥＧＩＳＴＲＹ　ＮＯ．：７５９１５－３８－７）（０．４６　ｇ）、ヨウ化カリウム（０．３５　ｇ）およびＮ－メチルピロリドン（３．６　ｍＬ）の混合物に対し、室温で炭酸カリウム（０．４５　ｇ）を加え、１４０℃で５時間攪拌した。反応終了後、室温まで冷却し、水（１０　ｍＬ）で希釈した。メチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル（１０　ｍＬ）で３回抽出し、有機層を１規定－水酸化ナトリウム水溶液（５　ｍＬ）で２回、水（５　ｍＬ）、飽和食塩水（５　ｍＬ）で順次洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。有機層をろ過後、減圧下で濃縮することで、粗生成物を得た。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ－ヘプタン／酢酸エチル）で精製し、標記化合物（０．２０２　ｇ）を白色アモルファスとして得た。
＜Ｓｔｅｐ２＞　Ｎ－（２－（４－（アミノメチル）フェノキシ）エチル）－２，２，２－トリフルオロアセタミド　塩酸塩（ＩＭ５－２）の合成：
　（実施例５）＜Ｓｔｅｐ１＞で得られた式ＩＭ５－１の化合物（０．２　ｇ）および１，４－ジオキサン（１．４　ｍＬ）の混合物に対し、水冷攪拌下、４規定－塩化水素／１，４－ジオキサン（１．４　ｍＬ）を加えた後、室温で７時間撹拌した。反応液に、ジイソプロピルエーテル（２０　ｍＬ）を加え、懸濁液を室温で１日攪拌した。析出物をろ過し、回収した固体を減圧乾燥して、標記化合物（０．１５　ｇ）を白色固体として得た。
＜Ｓｔｅｐ３＞　Ｎ－（２－（４－（（２－（シクロオクト－２－イン－１－イロキシ）アセタミド）メチル）フェノキシ）エチル）－２，２，２－トリフルオロアセタミド（ＩＭ５－３）の合成：
　文献公知の方法（Ｏｒｇ．　Ｐｒｏｃｅｓｓ　Ｒｅｓ．　Ｄｅｖ．（２０１８）２２：１０８－１１０）に従い合成した２－（２－シクロオクチン－１－イロキシ）－酢酸（式ＲＧ５－２）［ＣＡＳ　ＲＥＧＩＳＴＲＹ　ＮＯ．：９１７７５６－４２－４］（５０　ｍｇ）、（実施例５）＜Ｓｔｅｐ２＞で合成した式ＩＭ５－２の化合物（８１．９６　ｍｇ）およびエタノール（１　ｍＬ）の混合物に対し、氷冷攪拌下、ＤＭＴ－ＭＭ（１３７．２２　ｍｇ）およびトリエチルアミン（３８．２５　μＬ）を加え、室温で１時間３０分攪拌した。反応終了後、水（２　ｍＬ）を加え、懸濁液を攪拌し、メチル　ｔｅｒｔ－ブチルエーテル（０．５　ｍＬ）を加えた。分離した水層をメチル　ｔｅｒｔ－ブチルエーテル（５　ｍＬ）で２回抽出し、水（５　ｍＬ）、飽和食塩水（５　ｍＬ）で順次洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。乾燥した有機層をろ過し、減圧下で濃縮した。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ－へプタン／酢酸エチル）で精製し、標記化合物（９９　ｍｇ）を白色アモルファスとして得た。
＜Ｓｔｅｐ４＞　Ｎ－（４－（２－アミノエトキシ）ベンジル－２－（シクロオクト－２－イン－１－イロキシ）アセタミド（ＩＭ５－４）の合成：
　（実施例５）＜Ｓｔｅｐ３＞で得られた式ＩＭ５－３の化合物（９９　ｍｇ）およびメタノール（１４８５　μＬ）の混合物に対し、水冷攪拌下、炭酸カリウム（６４．１７　ｍｇ）及び水（４９５　μＬ）を加え、室温で１５時間攪拌した。反応終了後、メタノールを減圧下で濃縮し、生じた水層を酢酸エチル（５　ｍＬ）で３回抽出した。有機層を水（５　ｍＬ）及び飽和食塩水（５　ｍＬ）で順次洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。乾燥させた有機層をろ過後、減圧下で濃縮することで、標記化合物（６８　ｍｇ）の粗生成物を黄色油状物として得た。
＜Ｓｔｅｐ５＞　Ｎ－（４－（２－アミノエトキシ）ベンジル）－２－（シクロオクト－２－イン－１－イロキシ）アセタミド基導入アルギン酸（５－Ａ２および５－Ｂ２）の合成：
　下記の合成方法および反応条件にて、式５－Ａ２および５－Ｂ２の化合物を合成した。
［合成方法］
　１重量％に調製したアルギン酸ナトリウム（持田製薬株式会社製）水溶液に、室温撹拌下、ＤＭＴ－ＭＭを加えた。続いて（実施例５）＜Ｓｔｅｐ４＞で得られた式ＩＭ５－４の化合物の水（１　ｍＬ）およびエタノール（ＥｔＯＨ　１）溶液を室温で滴下し、同温で攪拌した後、塩化ナトリウム、エタノール（ＥｔＯＨ　２）を順次加え、室温で攪拌した。得られた沈殿をろ取し、エタノールで洗浄後、減圧乾燥した。得られた固体を水に溶解後凍結乾燥して、標記化合物を得た。
［反応条件・結果］
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000107
（実施例６ａ、６ｂ、６ｃ）Ｎ－（２－アミノエチル）－２－（シクロオクト－２－イン－１－イロキシ）アセタミド基導入アルギン酸（６－Ａ２、６－Ｂ２および６－Ｂ２ｂ）の合成：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000108
　下記の合成方法および反応条件にて、６－Ａ２、６－Ｂ２および６－Ｂ２ｂの化合物を合成した。
［合成方法］
　１重量％に調製したアルギン酸ナトリウム（持田製薬株式会社製）水溶液に、室温撹拌下、ＤＭＴ－ＭＭ、文献公知の方法で得られたＮ－（２－アミノエチル）－２－（２－シクロオクチン－１－イロキシ）－アセタミド［ＣＡＳ　ＲＥＧＩＳＴＲＹ　ＮＯ．：１８０９７８９－７６－１］（ＳＭ６）のエタノール（ＥｔＯＨ　１）溶液、１モル濃度重曹水を順次加え、攪拌した。反応液に、塩化ナトリウムを加えた後、エタノール（ＥｔＯＨ　２）を加え、攪拌した。得られた沈殿をろ取し、エタノールで洗浄後、減圧乾燥して、標記化合物を得た。先の操作で得られた固体を水に溶かし、凍結乾燥することで標記化合物を得た。
［反応条件・結果］
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000109
（実施例７）Ｎ－（２－（２－アミノエトキシ）エチル）－２－（シクロオクト－２－イン－１－イロキシ）アセタミド基導入アルギン酸（７－Ａ２）の合成：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000110
　１重量％に調製したアルギン酸ナトリウム（持田製薬株式会社製、Ａ－２）水溶液（４０　ｍＬ）に、室温撹拌下、ＤＭＴ－ＭＭ（１１２　ｍｇ）、文献公知の方法で得られたＮ－［２－（２－アミノエトキシ）エチル］－２－（２－シクロオクチン－１－イロキシ）－アセタミド［ＣＡＳ　ＲＥＧＩＳＴＲＹ　ＮＯ．：２４０１８７６－５１－３］（ＳＭ７）（３０　ｍｇ）のエタノール（４．０　ｍＬ）溶液、１モル濃度重曹水（１０１　μＬ）を順次加え、３０℃で３時間攪拌した。反応液に、塩化ナトリウム（０．４　ｇ）を加えた後、エタノール（８０　ｍＬ）を加え、３０分間攪拌した。得られた沈殿をろ取し、エタノールで洗浄後、減圧乾燥した。得られた固体を水に溶かし、凍結乾燥して、標記化合物（４１０　ｍｇ）を白色固体として得た。
（実施例８ａ、８ｂ）Ｎ－（２－アミノエチル）－２－（２－（シクロオクト－２－イン－１－イロキシ）アセタミド）アセタミド基導入アルギン酸（８－Ａ２、８－Ｂ２）の合成：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000111
＜Ｓｔｅｐ１＞　ｔｅｒｔ－ブチル　（２－オキソ－２－（（２－（２，２，２－トリフルオロアセタミド）エチル）アミノ）エチル）カルバメート（ＩＭ８－１）の合成：
　文献公知の方法で得られたＮ－（２－アミノエチル）－２，２，２－トリフルオロアセタミド　塩酸塩（式ＳＭ８）［ＣＡＳ　ＲＥＧＩＳＴＲＹ　ＮＯ．：４９６９４６－７３－７］（１００　ｍｇ）およびＮ－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）グリシン（式ＲＧ８－１）［ＣＡＳ　ＲＥＧＩＳＴＲＹ　ＮＯ．：４５３０－２０－５］（９１　ｍｇ）をアセトニトリル（３．０　ｍＬ）に溶解した。Ｏ－（７－アザベンゾトリアゾール－１－イル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロリン酸塩（２１７　ｍｇ）、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（２８１　μＬ）を加え、室温で３．５時間撹拌した。反応液に、酢酸エチル（１５　ｍＬ）、水（５　ｍＬ）を加え、分液後、有機層を水、飽和食塩水で順次洗浄した。有機層を、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：４０％酢酸エチル／ｎ－ヘプタン→酢酸エチル）で精製し、標記化合物（１８０　ｍｇ）を薄いベージュアモルファスとして得た。
＜Ｓｔｅｐ２＞　Ｎ－（２－（２－アミノアセタミド）エチル）－２，２，２－トリフルオロアセタミド　塩酸塩（ＩＭ８－２）の合成：
　（実施例８）＜Ｓｔｅｐ１＞で得られた式ＩＭ８－１の化合物（１８０　ｍｇ）に、氷水冷下４規定－塩化水素／１，４－ジオキサン（１．２　ｍＬ）を加えた後、室温で０．８時間撹拌した。反応液に、ジイソプロピルエーテル（３．６　ｍＬ）を加え、３０分間撹拌した。得られた固体をろ過して、標記化合物（１１４　ｍｇ）を白色固体として得た。
＜Ｓｔｅｐ３＞　Ｎ－（２－（２－（２－（シクロオクト－２－イン－１－イロキシ）アセタミド）アセタミド）エチル）－２，２，２－トリフルオロアセタミド（ＩＭ８－３）の合成：
　文献公知の方法で得られた２－（２－シクロオクチン－１－イロキシ）－酢酸（式ＲＧ５－２）［ＣＡＳ　ＲＥＧＩＳＴＲＹ　ＮＯ．：９１７７５６－４２－４］（８０　ｍｇ）、（実施例８）＜Ｓｔｅｐ２＞で得られた式ＩＭ８－２の化合物（１１０　ｍｇ）に、エタノール（１．６　ｍＬ）、ＤＭＴ－ＭＭ（２１９　ｍｇ）、トリエチルアミン（６７　μＬ）を加え、室温で３時間撹拌した。反応液に、水（３．２　ｍＬ）を加え、室温で３０分間撹拌した後、固体をろ過し、水で洗浄した。得られた固体に、酢酸エチル／エタノール（１／１、１０　ｍＬ）を加え、不溶物をろ去した。ろ液を減圧濃縮して、標記化合物（１０１　ｍｇ）を白色固体として得た。
＜Ｓｔｅｐ４＞　Ｎ－（２－（アミノエチル）－２－（２－（シクロオクト－２－イン－１－イロキシ）アセタミド）アセタミド（ＩＭ８－４）の合成：
　（実施例８）＜Ｓｔｅｐ３＞で得られた式ＩＭ８－３の化合物（６０　ｍｇ）のメタノール（１．８　ｍＬ）溶液に、炭酸カリウム（５９　ｍｇ）の水（０．３　ｍＬ）溶液を加え、室温で４時間撹拌した。反応液を減圧濃縮した後、水（２ｍＬ）を加え、塩化ナトリウムで飽和させた。酢酸エチル（１５ｍＬ，１０　ｍＬ×４）で抽出し、有機層を減圧濃縮した。残渣に酢酸エチル（１０　ｍＬ）、エタノール（１ｍＬ）を加え、不溶物をろ去した。得られたろ液を減圧濃縮して、標記化合物（４９　ｍｇ）を無色ガム状物として得た。
＜Ｓｔｅｐ５＞　Ｎ－（２－アミノエチル）－２－（２－（シクロオクト－２－イン－１－イロキシ）アセタミド）アセタミド基導入アルギン酸（８－Ａ２および８－Ｂ２）の合成：
　下記の合成方法および反応条件にて、式８－Ａ２および８－Ｂ２の化合物を合成した。
［合成方法］
　１重量％に調製したアルギン酸ナトリウム（持田製薬株式会社製）水溶液に、ＤＭＴ－ＭＭ、式ＩＭ８－４の化合物のエタノール（ＥｔＯＨ　１）溶液、１モル濃度－重曹水を加え、攪拌した後、塩化ナトリウム、エタノール（ＥｔＯＨ　２）を順次加え、室温で攪拌した。得られた沈殿をろ取し、エタノールで洗浄後、減圧乾燥した。得られた固体を水に溶解後凍結乾燥して、標記化合物を白色固体として得た。先の操作で得られた固体を水に溶かし、凍結乾燥することで標記化合物を得た。
［反応条件・結果］
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000112
（実施例９）　Ｎ－（２－アミノエチル）－３－（２－（シクロオクト－２－イン－１－イロキシ）アセタミド）プロパンアミド基導入アルギン酸（９－Ａ２）の合成：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000113
＜Ｓｔｅｐ１＞ｔｅｒｔ－ブチル　（３－オキソ－３－（（２－（２，２，２－トリフルオロアセタミド）エチル）アミノ）プロピル）カルバメート（ＩＭ９－１）の合成：
　文献公知の方法で得られたＮ－（２－アミノエチル）－２，２，２－トリフルオロアセタミド　塩酸塩（式ＳＭ８）（１１０　ｍｇ）及びＮ－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－β－アラニン（式ＲＧ９－１）［ＣＡＳ　ＲＥＧＩＳＴＲＹ　ＮＯ．：３３０３－８４－２］（１１３．５　ｍｇ）をアセトニトリル（３．３　ｍＬ）に溶解し、Ｏ－（７－アザベンゾトリアゾール－１－イル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロリン酸塩（２６１　ｍｇ）、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（３１９　μＬ）を加え、室温で３時間撹拌した。反応液に、酢酸エチル（１５　ｍＬ）、水（５　ｍＬ）を加え、分液後、有機層を水、飽和食塩水で順次洗浄した。有機層を、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮し、メチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル（２０　ｍＬ）でトリチュレートした。固体をろ取し、酢酸エチル（２０　ｍＬ）に溶解した。有機層を、１規定－クエン酸、水、飽和食塩水で順次洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮した。残渣をメチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル（１０　ｍＬ）でトリチュレートした後、固体をろ取し、標記化合物（８０　ｍｇ）を白色固体として得た。
＜Ｓｔｅｐ２＞　３－アミノ－Ｎ－（２－（２，２，２－トリフルオロアセタミド）エチル）プロパンアミド　塩酸塩（ＩＭ９－２）の合成：
　（実施例９）＜Ｓｔｅｐ１＞で得られた式ＩＭ９－１の化合物（８０　ｍｇ）に、氷水冷下４規定－塩化水素／１，４－ジオキサン（１．１　ｍＬ）を加えた後、室温で２時間撹拌した。反応液に、ジイソプロピルエーテル（３．４　ｍＬ）を加え、１．５時間撹拌した。得られた固体をろ過して、標記化合物（６１　ｍｇ）を白色固体として得た。
＜Ｓｔｅｐ３＞　３－（２－（シクロオクト－２－イン－１－イロキシ）アセタミド）－Ｎ－（２－（２，２，２－トリフルオロアセタミド）エチル）プロパンアミド（ＩＭ９－３）の合成：
　文献公知の方法で得られた式ＲＧ５－２の化合物（４４　ｍｇ）、（実施例９）＜Ｓｔｅｐ２＞で得られた式ＩＭ９－２の化合物（６１　ｍｇ）に、エタノール（１．２　ｍＬ）、ＤＭＴ－ＭＭ（１１５　ｍｇ）、トリエチルアミン（３９　μＬ）を加え、室温で２時間撹拌した。反応液に、水（３．７　ｍＬ）を加え、酢酸エチル（１５　ｍＬ，　５　ｍＬ）で抽出した。有機層を、水、飽和食塩水で順次洗浄し、無水硫酸ナトリウム乾燥後、減圧濃縮した。得られた固体に、ｔｅｒｔ－ブチルメチルエーテル（１０　ｍＬ）を加え、トリチュレートし、ろ過した。得られた固体をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（８０％酢酸エチル／ｎ－ヘプタン→酢酸エチル→２０％メタノール／酢酸エチル）で精製して、標記化合物（６０　ｍｇ）を淡黄色固体として得た。
＜Ｓｔｅｐ４＞　Ｎ－（２－アミノエチル－３－（２－（シクロオクト－２－イン－１－イロキシ）アセタミド）プロパンアミド（ＩＭ９－４）の合成：
　（実施例９）＜Ｓｔｅｐ３＞で得られた式ＩＭ９－３の化合物（６０　ｍｇ）のメタノール（３．０　ｍＬ）溶液に、炭酸カリウム（４２　ｍｇ）の水（０．３　ｍＬ）溶液を加え、室温で３時間撹拌後、さらに、炭酸カリウム（４２　ｍｇ）の水（０．３　ｍＬ）溶液を加え、室温で１６．５時間撹拌した。反応液を減圧濃縮した後、飽和食塩水（２ｍＬ）を加え、さらに塩化ナトリウムで飽和させた。酢酸エチル（１５ｍＬ，１０　ｍＬ×４）で抽出し、抽出層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮した。残渣に酢酸エチル（５　ｍＬ）と数滴のメタノールを加え、不溶物をろ去した。得られたろ液を減圧濃縮して、標記化合物（３１　ｍｇ）を無色油状物として得た。
＜Ｓｔｅｐ５＞　Ｎ－（２－アミノエチル）－３－（２－（シクロオクト－２－イン－１－イロキシ）アセタミド）プロパンアミド基導入アルギン酸（９－Ａ２）の合成：
　１重量％に調製したアルギン酸ナトリウム（持田製薬株式会社製：Ａ－２）水溶液（４１　ｍＬ）に、ＤＭＴ－ＭＭ（１１４　ｍｇ）、（実施例９）＜Ｓｔｅｐ４＞で得られた式ＩＭ９－４の化合物（３０．５　ｍｇ）のエタノール（４．１　ｍＬ）溶液、１モル濃度－重曹水（１０３　μＬ）を加えた。３０℃で３時間攪拌した後、塩化ナトリウム（０．４１　ｇ）、エタノール（８２　ｍＬ）を順次加え、３０分間室温で攪拌した。得られた沈殿をろ取し、エタノールで洗浄後、減圧乾燥した。得られた固体を水に溶解後凍結乾燥して、標記化合物（４０６　ｍｇ）を白色固体として得た。
（実施例１０）　３－アミノ－Ｎ－（２－（２－（２－（シクロオクト－２－イン－１－イロキシ）アセタミド）エトキシ）エチル）プロパンアミド基導入アルギン酸（１０－Ａ２）の合成：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000114
＜Ｓｔｅｐ１＞　ｔｅｒｔ－ブチル　（２－（２－（３－（２，２，２－トリフルオロアセタミド）プロパンアミド）エトキシ）エチル）カルバメート（ＩＭ１０－１）の合成：
　文献公知の方法で得られた式ＳＭ１０の化合物［ＣＡＳ　ＲＥＧＩＳＴＲＹ　ＮＯ．：５０６３２－８２－１］（４００　ｍｇ）、および市販品または文献公知の方法で得られる式ＲＧ１０－１の化合物（ｔｅｒｔ－ブチル　（２－（２－アミノエトキシ）エチル）カルバメート、ＣＡＳ　ＲＥＧＩＳＴＲＹ　ＮＯ．：１２７８２８－２２－２）（４４１　ｍｇ）のエタノール（４．０　ｍＬ）溶液に、ＤＭＴ－ＭＭ（８９７　ｍｇ）を加え、３．５時間撹拌した。反応液に、水（５　ｍＬ）を加え、酢酸エチル（２０　ｍＬ、１０　ｍＬ）で抽出後、有機層を水、飽和食塩水で順次洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（［溶出溶媒・比率％］酢酸エチル：ｎ－ヘプタン＝３０：７０→酢酸エチル：ｎ－ヘプタン＝１００：０）で精製して、標記化合物（４５１　ｍｇ）を無色油状物として得た。
＜Ｓｔｅｐ２＞　Ｎ－（２－（２－アミノエトキシ）エチル）－３－（２，２，２－トリフルオロアセタミド）プロパンアミド　塩酸塩（ＩＭ１０－２）の合成：
　（実施例１０）＜Ｓｔｅｐ１＞で得られた式ＩＭ１０－１の化合物（４５１　ｍｇ）に、氷水冷下４規定－塩化水素／１，４－ジオキサン（３．１６　ｍＬ）を加え、室温で３時間撹拌した。反応液に、ジイソプロピルエーテル（６．４　ｍＬ）を加え、減圧濃縮して、標記化合物（４３３　ｍｇ）を無色ガム状物として得た。
＜Ｓｔｅｐ３＞　Ｎ－（２－（２－（２－（シクロオクト－２－イン－１－イロキシ）アセタミド）エトキシ）エチル－３－（２，２，２－トリフルオロアセタミド）プロパンアミド（ＩＭ１０－３）の合成：
　文献公知の方法で得られた式ＲＧ５－２の化合物（１１１　ｍｇ）、および（実施例１０）＜Ｓｔｅｐ２＞で得られた式ＩＭ１０－２の化合物（２１５　ｍｇ）に、エタノール（１．７　ｍＬ）、ＤＭＴ－ＭＭ（２５３　ｍｇ）、トリエチルアミン（１０２　μＬ）を加え、室温で２１時間撹拌した。反応液に、水（５　ｍＬ）を加え、酢酸エチル（１５　ｍL）で抽出した。有機層を、水、飽和食塩水で順次洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（［溶出溶媒・比率％］酢酸エチル：ｎ－ヘプタン＝３０：７０→酢酸エチル：ｎ－ヘプタン＝１００：０→メタノール：酢酸エチル＝１５：８５）で精製して、標記化合物（３５　ｍｇ）を無色油状物として得た。
＜Ｓｔｅｐ４＞　３－アミノ－Ｎ－（２－（２－（２－（シクロオクト－２－イン－１－イロキシ）アセタミド）エトキシ）エチル）プロパンアミド（ＩＭ１０－４）の合成：
　（実施例１０）＜Ｓｔｅｐ３＞で得られた式ＩＭ１０－３の化合物（３５　ｍｇ）のメタノール（７００　μＬ）溶液に、炭酸カリウム（３３　ｍｇ）の水（１７５　μＬ）溶液を加え、室温で１６．５時間撹拌した。反応液を減圧濃縮した後、水（２　ｍＬ）を加え、塩化ナトリウムで飽和させた。酢酸エチル（１０　ｍＬ×５）で抽出し、抽出層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮した。残渣に酢酸エチル（１０　ｍＬ）と数滴のメタノールを加え、不溶物をろ去した。得られたろ液を減圧濃縮して、標記化合物（２４　ｍｇ）を無色ガム状物として得た。
＜Ｓｔｅｐ５＞　３－アミノ－Ｎ－（２－（２－（２－（シクロオクト－２－イン－１－イロキシ）アセタミド）エトキシ）エチル）プロパンアミド基導入アルギン酸（１０－Ａ２）の合成：
　１重量％に調製したアルギン酸ナトリウム（持田製薬株式会社製：Ａ－２）水溶液（２８　ｍＬ）に、ＤＭＴ－ＭＭ（７８　ｍｇ）、（実施例１０）＜Ｓｔｅｐ４＞で得られた式ＩＭ１０－４の化合物（２４　ｍｇ）のエタノール（２．８　ｍL）溶液、１モル濃度－重曹水（７１　μＬ）を加えた。３０℃で３．５時間攪拌した後、塩化ナトリウム（０．２８　ｇ）、エタノール（５６　ｍＬ）を順次加え、３０分間室温で攪拌した。得られた沈殿をろ取し、エタノールで洗浄後、減圧乾燥した。得られた固体を水に溶解後凍結乾燥して、標記化合物（２７２　ｍｇ）を白色固体として得た。
（実施例１１ａ～ｍ）４－（２－アミノエトキシ）－Ｎ－（３－アジドプロピル）ベンズアミド基導入アルギン酸（１１－Ａ２、１１－Ａ１、１１－Ａ３、１１－Ｂ２、１１－Ｂ２ｂ、１１－Ｂ２ｃ、１１－Ａ２ｂ、１１－Ａ２ｃ、１１－Ｂ２ｄ、１１－Ａ２ｄ、１１－Ａ２ｅ、１１－Ａ３および１１－Ａ２ｆ）の合成：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000115
　下記の合成方法および反応条件にて、１１－Ａ２、１１－Ａ１、１１－Ａ３、１１－Ｂ２、１１－Ｂ２ｂ、１１－Ｂ２ｃ、１１－Ａ２ｂ、１１－Ａ２ｃ、１１－Ｂ２ｄ、１１－Ａ２ｄ、１１－Ａ２ｅ、１１－Ａ３および１１－Ａ２ｆの化合物を合成した。
［合成方法］
　１重量％または２重量％に調製したアルギン酸ナトリウム（持田製薬株式会社製）水溶液に、ＤＭＴ－ＭＭ、文献公知の方法にて合成した式ＳＭ１１の化合物（４－（２－アミノエトキシ）－Ｎ－（３－アジドプロピル）ベンズアミド　塩酸塩；ＣＡＳ　ＲＥＧＩＳＴＲＹ　ＮＯ．：２４０１８７６－１９－３）、１モル濃度－重曹水を加え攪拌した。塩化ナトリウムを加えた後、エタノール（ＥｔＯＨ　２）を加え、室温で攪拌した。得られた沈殿をろ取し、エタノールで洗浄後、減圧乾燥して、標記化合物を固体として得た。実施例１１ｇ、１１ｈ、１１ｉ、１１ｊ、１１ｋ、１１ｌおよび１１ｍは、先の操作で得られた固体を水に溶かし、凍結乾燥することで標記化合物を得た。
［反応条件・結果］
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000116
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000117
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000118
（実施例１２）　４－（３－アミノプロポキシ）－Ｎ－（２－（２－（２－アジドエトキシ）エトキシ）エチル）ベンズアミド基導入アルギン酸（１２－Ａ２）の合成：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000119
　１重量％に調製したアルギン酸ナトリウム（持田製薬株式会社製：Ａ－２）水溶液（１９．６　ｍＬ）に、氷冷撹拌下、ＤＭＴ－ＭＭ（５０．１９　ｍｇ）、文献公知の方法にて合成した式ＳＭ１２の化合物（４－（３－アミノプロポキシ）－Ｎ－（２－（２－（２－アジドエトキシ）エトキシ）エチル）ベンズアミド　塩酸塩；ＣＡＳ　ＲＥＧＩＳＴＲＹ　ＮＯ．：２４０１８７６－２２－８）（７０．３５　ｍｇ）、１モル濃度－重曹水（１８１．４　μＬ）を加え、室温で５時間攪拌した。塩化ナトリウム（２００　ｍｇ）を加えた後、エタノール（３９．２　ｍＬ）を加え、３０分間室温で攪拌した。得られた沈殿をろ取し、エタノールで洗浄後、減圧乾燥して、標記化合物（１９９　ｍｇ）を白色固体として得た。
（実施例１３ａ、ｂ）　Ｎ－（２－（２－アミノエトキシ）エチル）－４－（アジドメチル）ベンズアミド基導入アルギン酸（１３－Ａ２および１３－Ａ２ｂ）の合成：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000120
　下記の合成方法および反応条件にて、１３－Ａ２および１３－Ａ２ｂの化合物を合成した。
［合成方法］
　１重量％に調製したアルギン酸ナトリウム（持田製薬株式会社製）水溶液に、ＤＭＴ－ＭＭ、文献公知の方法にて合成した式ＳＭ１３の化合物（Ｎ－（２－（２－アミノエトキシ）エチル）－４－（アジドメチル）ベンズアミド　塩酸塩；ＣＡＳ　ＲＥＧＩＳＴＲＹ　ＮＯ．：２４０１８７６－３８－６）、１モル濃度－重曹水を加え攪拌した。塩化ナトリウムを加えた後、エタノール（ＥｔＯＨ　２）を加え、室温で攪拌した。得られた沈殿をろ取し、エタノールで洗浄後、減圧乾燥して、標記化合物を固体として得た。先の操作で得られた固体を水に溶かし、凍結乾燥することで標記化合物を得た。
［反応条件・結果］
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000121
（実施例１４ａ～ｃ）　Ｎ－（２－アミノエチル）－４－（アジドメチル）ベンズアミド基導入アルギン酸（１４－Ａ２、１４－Ｂ２および１４－Ａ２ｂ）の合成： 
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000122
　下記の合成方法および反応条件にて、１４－Ａ２、１４－Ｂ２および１４－Ａ２ｂの化合物を合成した。
［合成方法］
　１重量％に調製したアルギン酸ナトリウム（持田製薬株式会社製）水溶液に、ＤＭＴ－ＭＭ、文献公知の方法にて合成した式ＳＭ１４の化合物（Ｎ－（２－アミノエチル）－４－（アジドメチル）ベンズアミド　塩酸塩；ＣＡＳ　ＲＥＧＩＳＴＲＹ　ＮＯ．：２４０１８７６－２５－１）、１モル濃度－重曹水を加え攪拌した。塩化ナトリウムを加えた後、エタノール（ＥｔＯＨ　２）を加え、室温で攪拌した。得られた沈殿をろ取し、エタノールで洗浄後、減圧乾燥して、標記化合物を固体として得た。実施例１４ｃｂは、先の操作で得られた固体を水に溶かし、凍結乾燥することで標記化合物を得た。
［反応条件・結果］
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000123
（実施例１５）　Ｎ－（２－（２－（２－アミノエトキシ）エトキシ）エチル）－４－（アジドメチル）ベンズアミド基導入アルギン酸（１５－Ａ２）の合成： 
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000124
　１重量％に調製したアルギン酸ナトリウム（持田製薬株式会社製：Ａ－２）水溶液（４０　ｍＬ）に、ＤＭＴ－ＭＭ（１１２　ｍｇ）、文献公知の方法にて合成した式ＳＭ１５の化合物（Ｎ－（２－（２－（２－アミノエトキシ）エトキシ）エチル）－４－（アジドメチル）ベンズアミド　塩酸塩；ＣＡＳ　ＲＥＧＩＳＴＲＹ　ＮＯ．：２４０１８７６－４１－１）（３８　ｍｇ）のエタノール（４．０　ｍＬ）溶液、１モル濃度－重曹水（１５１　μＬ）を加え、３０℃で３時間攪拌した。塩化ナトリウム（０．４　ｇ）を加えた後、エタノール（８０　ｍＬ）を加え、３０分間室温で攪拌した。得られた沈殿をろ取し、エタノールで洗浄後、減圧乾燥した。先の操作で得られた固体を水に溶かし、凍結乾燥することで標記化合物（４１６　ｍｇ）を白色固体として得た。
（実施例１６ａ，ｂ）　Ｎ－（２－（２－アミノエトキシ）エチル）－４－アジドベンズアミド基導入アルギン酸（化合物：１６－Ａ２、１６－Ａ２ｂ）の合成：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000125
下記の合成方法および反応条件にて、１６－Ａ２および１６－Ａ２ｂの化合物を合成した。
［合成方法］
　１重量％に調製したアルギン酸ナトリウム（持田製薬株式会社製）水溶液に、ＤＭＴ－ＭＭ、文献公知の方法にて合成した式ＳＭ１６の化合物（Ｎ－（２－（２－アミノエトキシ）エチル）－４－アジドベンズアミド　塩酸塩；ＣＡＳ　ＲＥＧＩＳＴＲＹ　ＮＯ．：２４０１８７６－４７－７）、１モル濃度－重曹水を加え攪拌した。塩化ナトリウムを加えた後、エタノール（ＥｔＯＨ　２）を加え、室温で攪拌した。得られた沈殿をろ取し、エタノールで洗浄後、減圧乾燥して、標記化合物を固体として得た。先の操作で得られた固体を水に溶かし、凍結乾燥することで標記化合物を得た。
［反応条件・結果］
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000126
（実施例１７ａ～ｃ）　Ｎ－（２－アミノエチル）－４－アジドベンズアミド基導入アルギン酸（１７－Ｂ２、１７－Ｂ２ｂおよび１７－Ａ２）の合成：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000127
　下記の合成方法および反応条件にて、１７－Ｂ２、１７－Ｂ２ｂおよび１７－Ａ２の化合物を合成した。
［合成方法］
　１重量％に調製したアルギン酸ナトリウム（持田製薬株式会社製）水溶液に、ＤＭＴ－ＭＭ、文献公知の方法にて合成した式ＳＭ１７の化合物（Ｎ－（２－アミノエチル）－４－アジドベンズアミド　塩酸塩；ＣＡＳ　ＲＥＧＩＳＴＲＹ　ＮＯ．：１６４０１３－００－７）、１モル濃度－重曹水を加え攪拌した。塩化ナトリウムを加えた後、エタノール（ＥｔＯＨ　２）を加え、室温で攪拌した。得られた沈殿をろ取し、エタノールで洗浄後、減圧乾燥して、標記化合物を固体として得た。実施例１７ｃは、先の操作で得られた固体を水に溶かし、凍結乾燥することで標記化合物を得た。
［反応条件・結果］
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000128
（実施例１８）　Ｎ－（２－（２－（２－アミノエトキシ）エトキシ）エチル）－４－アジドベンズアミド基導入アルギン酸（１８－Ａ２）の合成：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000129
　１重量％に調製したアルギン酸ナトリウム（持田製薬株式会社製：Ａ－２）水溶液（４０　ｍＬ）に、ＤＭＴ－ＭＭ（１１２　ｍｇ）、文献公知の方法にて合成した式ＳＭ１８の化合物（Ｎ－（２－（２－（２－アミノエトキシ）エトキシ）エチル）－４－アジドベンズアミド　塩酸塩；ＣＡＳ　ＲＥＧＩＳＴＲＹ　ＮＯ．：２４０１８７６－４８－８）（４５　ｍｇ）のエタノール（４．０　ｍＬ）溶液、１モル濃度－重曹水（１５１　μＬ）を加え、３０℃で３時間攪拌した。塩化ナトリウム（０．４　ｇ）を加えた後、エタノール（８０　ｍＬ）を加え、３０分間室温で攪拌した。得られた沈殿をろ取し、エタノールで洗浄後、減圧乾燥した。先の操作で得られた固体を水に溶かし、凍結乾燥することで標記化合物（４０８　ｍｇ）を白色固体として得た。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000130
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000131
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000132
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000133
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000134
（実施例Ｆ１－Ａ）架橋アルギン酸ゲルファイバの作製（１）
　化合物４－Ａ２ｄまたは化合物１－Ａ２ｄから調製される３重量％アルキン水溶液（アルキン溶液）および化合物１１－Ａ２ｄ、化合物１３－Ａ２ｂまたは化合物１６－Ａ２ｂから調製される３重量％のアジド水溶液（アジド溶液）を用いて、表２６に示す組合せにて、前記アルキン溶液およびアジド溶液を等容量混合し、化学修飾アルギン酸混合溶液（Ｆ１Ａ－Ｍ１）を調製した。混合溶液Ｆ１Ａ－Ｍ１およびアルギン酸ナトリウム（Ｂ－２）から調製された３重量％アルギン酸水溶液（ＡＬＧＳ）を表２６に示す比率にて混合し、アルギン酸混合溶液（Ｆ１Ａ－Ｍ２）とした。続いて、混合溶液Ｆ１Ａ－Ｍ２および２０ｍｇ／ｍＬのブルーデキストラン（ｃｙｔｉｖａ製、Ｂｌｕｅ　Ｄｅｘｔｒａｎ　２０００、コード番号１７０３６００１）含有の１．８重量％食塩水を等容量混合し、アルギン酸混合溶液（Ｆ１Ａ－Ｍ３）とした。混合溶液Ｆ１Ａ－Ｍ３をハミルトンシリンジに充填し、シリンジに金属ニードル（武蔵エンジニアリング，　ＳＮＡ－１９Ｇ－Ｂ）、シリコンチューブ（アズワン，φ１×φ２）及びガラスキャピラリ（ナリシゲ，Ｇ－１）を順次接続し、シリンジポンプにセットした。前記ガラスキャピラリの先端を１００　ｍｍｏｌ／Ｌの塩化カルシウム水溶液が含まれるビーカーに浸漬し、流速２５０μＬ／ｍｉｎで当該塩化カルシウム水溶液中に１分間射出した。前記塩化カルシウム水溶液中に射出された繊維状形態の物質は、３０分以上静置することにより、架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＬＡ－１Ａ）として得られた（表２６中　ＣＬＡ－１Ａ Ｎｏ．参照）。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000135
（実施例Ｆ１－Ｂ）架橋アルギン酸ゲルファイバの作製（２）
　化合物４－Ａ２ｄから調製された３重量％化合物４－Ａ２ｄ水溶液および化合物１１－Ａ２ｄから調製された３重量％化合物１１－Ａ２ｄ水溶液を等容量混合し、化学修飾アルギン酸の混合溶液（Ｆ１Ｂ－Ｍ１）を調製した。混合溶液Ｆ１Ｂ－Ｍ１およびアルギン酸ナトリウム（Ｂ－２）から調製された３重量％アルギン酸ナトリウム水溶液（ＡＬＧＳ）を１：２の容量比率にて混合し、３重量％アルギン酸混合溶液（Ｆ１Ｂ－Ｍ１Ｂ）とした。混合溶液Ｆ１Ｂ－Ｍ１Ｂを表２７に示す濃度に調製し（表２７中；Ｆ１Ｂ－Ｍ２の濃度）、別途調製したブルーデキストラン（ｃｙｔｉｖａ製、Ｂｌｕｅ　Ｄｅｘｔｒａｎ　２０００、コード番号１７０３６００１）を含有する食塩水（Ｆ１Ｂ－ＢＳ：ブルーデキストランの濃度と塩化ナトリウムの濃度は表２７の通り）とを、表２７に示す容量比率にて混合し、アルギン酸混合溶液（Ｆ１Ｂ－Ｍ３）とした。混合溶液Ｆ１Ｂ－Ｍ３中のブルーデキストラン濃度（ｍｇ／ｍＬ）と塩化ナトリウム濃度（ｍｇ／ｍＬ）は、ブルーデキストランが１０　ｍｇ／ｍＬ、塩化ナトリウムが９　ｍｇ／ｍＬとなる様に調製した。混合溶液Ｆ１Ｂ－Ｍ３を、ハミルトンシリンジに充填した。続いて、シリンジに金属ニードル（武蔵エンジニアリング，　ＳＮＡ－１９Ｇ－Ｂ）、シリコンチューブ（アズワン，φ１×φ２）及びガラスキャピラリ（ナリシゲ，Ｇ－１）を順次接続し、シリンジポンプにセットした。前記ガラスキャピラリの先端を、１００　ｍｍｏｌ／Ｌの塩化カルシウム水溶液が含まれるビーカーに浸漬し、流速２５０μＬ／ｍｉｎで１分間射出した。前記塩化カルシウム水溶液中に射出された繊維状形態の物質は、３０分以上静置することにより、架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＬＡ－１Ｂ）として得られた（表２７中　ＣＬＡ－１Ｂ Ｎｏ．参照）。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000136
（実施例Ｆ１－Ｃ）ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの作製（１）
　前記（実施例Ｆ１－Ａ）または（実施例Ｆ１－Ｂ）で得られた、塩化カルシウム水溶液中の架橋アルギン酸ゲルファイバをセルストレーナーを用いてろ過、分取した。分取した架橋アルギン酸ゲルファイバを、表２８に示す各組成のカチオン性ポリマーが含まれる水溶液に添加し、３７℃、１２５　ｒｐｍで２０分間振とう攪拌し、架橋アルギン酸ゲルファイバをポリマーコーティングした。水溶液中のファイバを、セルストレーナーを用いてろ過、分取し、生理食塩液５ｍＬを使用して２回洗浄して、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＦＢ－１）（表２９中　ＣＦＢ－１ Ｎｏ．参照）を得た。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000137
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000138
（実施例Ｆ１－Ｄ）ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの安定性
（１）ファイバのＥＤＴＡ処理
　前記（実施例Ｆ１－Ｃ）で得られたポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＦＢ－１）を２０ｍＭ　ＥＤＴＡ・２Ｎａ／生理食塩液（５ｍＬ）に添加し、３７℃、１２５　ｒｐｍで２０分間振とう攪拌した。前記キレート処理したポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバは、再度セルストレーナーを用いてろ過、分取し、生理食塩液５ｍＬを使用して２回洗浄した。得られたポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバは安定性評価試験の実施まで５ｍＬ生理食塩液中に浸漬した。
（２）振盪崩壊試験
　前記ＥＤＴＡ処理したポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバをセルストレーナーを用いて分離した後、１０ｍＬのＰＢＳ溶液を加えた２５ｍＬ遠沈管に添加し、３７℃で２４時間振盪した。
　前記、ＥＤＴＡ処理後、振盪後のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの安定性は、以下の指標に基づき評価した。
安定性評価（スコア）：
３：ファイバの崩壊/溶解/変形/ブルーデキストランの溶出等が全く認められない
２：ファイバの一部に崩壊/溶解/変形/ブルーデキストランの溶出（累積で１００μｇ／ｍＬ未満）等が認められる
１：ファイバに明らかな崩壊/溶解/変形/ブルーデキストランの溶出（累積で１００μｇ／ｍＬ以上）等が認められる
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000139
（実施例Ｆ２－Ａ）抗体産生細胞含有架橋アルギン酸ゲルファイバの作製
　下記表３１の組成を有するＧ０１６培地を調製した。続いて、メトトレキサート（以下、ＭＴＸとする）を１　ｍｍｏｌ／ＬになるようにＤ－ＰＢＳに溶解させ、ＭＴＸ溶液を調製した。前記ＭＴＸ溶液を終濃度１　μｍｏｌ／ＬになるようにＧ０１６培地で希釈し、抗体産生培地溶液を調製した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000140
　下記表３２および表３３の処方で調製されたアルキン水溶液およびアジド水溶液を用いて、表３４に示す組合せで等容量混合し、アルギン酸混合溶液（Ｆ２Ａ－Ｍ１）を調製した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000141
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000142
　混合溶液Ｆ２Ａ－Ｍ１およびアルギン酸ナトリウム（Ｂ－２）と０．９重量％塩化ナトリウム水溶液から調製された３重量％アルギン酸水溶液（０．９％塩化ナトリウム含有）（ＡＬＧＳ２）またはアルギン酸ナトリウム（Ａ－２）と０．９重量％塩化ナトリウム水溶液から調製された３重量％アルギン酸水溶液（０．９％塩化ナトリウム含有）（ＡＬＧＳ２Ａ）を表３４に示す比率にて混合し、アルギン酸混合溶液（Ｆ２Ａ－Ｍ２）とした。続いて、混合溶液Ｆ２Ａ－Ｍ２および抗ＧＰＶＩ抗体産生細胞（２×１０７細胞／ｍＬ）を含む抗体産生培地溶液を等容量混合し、混合溶液（Ｆ２Ａ－Ｍ３）とした。混合溶液Ｆ２Ａ－Ｍ３をハミルトンシリンジに充填し、シリンジにルアーロック用ニードル（関東化学株式会社，　１５／２３　ＮＬ－Ｆ）を接続し、シリンジポンプにセットした。前記ニードルの先端を１００　ｍｍｏｌ／Ｌの塩化カルシウム水溶液が含まれるビーカーに浸漬し、流速２５０μＬ／ｍｉｎで当該塩化カルシウム水溶液中に２分間射出した。前記塩化カルシウム水溶液中に射出された繊維状形態の物質は、３０分以上静置することにより、抗ＧＰＶＩ抗体産生細胞含有の架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＬＡ－Ｇ）を得た（表３４中　ＣＬＡ－Ｇ　Ｎｏ．参照）。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000143
（実施例Ｆ２－Ｂ）生理活性物質産生細胞含有架橋アルギン酸ゲルファイバの作製
下記表３５の組成を有する完全培地を調製した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000144
（実施例Ｆ２－Ａ）の表３２および３３に記載された、Ｆ２Ａ１のアルキン水溶液およびＦ２Ｎ２のアジド水溶液を等容量混合し、化学修飾アルギン酸混合溶液（Ｆ２Ｂ－Ｍ１）を調製した。混合溶液Ｆ２Ｂ－Ｍ１およびアルギン酸ナトリウム（Ｂ－２）と０．９重量％塩化ナトリウム水溶液から調製された３重量％アルギン酸水溶液（０．９％塩化ナトリウム含有）を１：２の比率にて混合し、アルギン酸混合溶液（Ｆ２Ｂ－Ｍ２）とした。続いて、混合溶液Ｆ２Ｂ－Ｍ２とＭＩＮ６細胞（１×１０７細胞／ｍＬ）を含む表３５の完全培地を等容量を混合し、混合溶液Ｆ２Ｂ－Ｍ３とした。混合溶液Ｆ２Ｂ－Ｍ３をハミルトンシリンジに充填し、シリンジにルアーロック用ニードル（関東化学株式会社，　１５／２３　ＮＬ－Ｆ）を接続し、シリンジポンプにセットした。ニードルの先端を１００　ｍｍｏｌ／Ｌの塩化カルシウム水溶液が含まれるビーカーに浸漬し、流速１２５μＬ／ｍｉｎで当該塩化カルシウム水溶液中に２分間射出した。前記塩化カルシウム水溶液中に射出された繊維状形態の物質は、３０分以上静置することにより、ＭＩＮ６細胞含有の架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＬＡ－Ｍ）（ＦＢ２－Ｂ－１）として得られた。
（実施例Ｆ２－Ｃ）細胞含有ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの作製
　前記（実施例Ｆ２－Ａ）または（実施例Ｆ２－Ｂ）で得られた各種細胞含有架橋アルギン酸ゲルファイバを、表３６に示す各組成のカチオン性ポリマーが含まれる溶液を用いて、前記（実施例Ｆ１－Ｃ）に記載される方法と同様にして（振とう攪拌時間は３０分）、コーティングを行うことで、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＦＢ－Ｓ）（表３７中　ＣＦＢ－Ｓ　Ｎｏ．参照）を得た。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000145
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000146
（実施例Ｆ３）カチオン性ポリマーによる架橋アルギン酸ゲルファイバのコーティング確認
　（実施例Ｆ１－Ａ）のＮｏ．Ｆ１－Ａ－６に示す条件で作製した架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＦＢ１－Ａ－６）を用いて、０．１％　ポリ－Ｌ－リシン－ＦＩＴＣラベル／１００ｍＭ　塩化カルシウムが含有される水溶液に浸漬した。（実施例Ｆ１－Ｃ）と同様の操作をした後、得られたファイバの表面を蛍光顕微鏡を使用して観察した。
　観察結果を図７に示す。ゲルファイバの表面にポリ－Ｌ－リシン－ＦＩＴＣがコーティングされていることが確認された（図７の背景（黒色）に反転した色の部分がポリ－Ｌ－リシン－ＦＩＴＣである）。この結果は、架橋アルギン酸ゲルファイバがカチオン性ポリマーによってコーティングされていることを示唆するものであった。
（実施例Ｆ４－Ａ）架橋アルギン酸ゲルファイバの作製（３）
　アルギン酸ナトリウム（Ｂ－２）と注射用生理食塩水（大塚製薬工場製）（ＩＮｓ）から３重量％アルギン酸水溶液（０．９重量％塩化ナトリウム含有）（ＡＬＧＳ２）を調製した。続いて、下記表３８および表３９の処方でアルキン水溶液およびアジド水溶液を調製した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000147
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000148
前記アルキン水溶液（Ｆ４Ａ１、Ｆ４Ａ２）及びアジド水溶液（Ｆ４Ｎ１、Ｆ４Ｎ２及びＦ４Ｎ３）を下記表の組合せにて等容量混合し、化学修飾アルギン酸混合溶液（Ｆ４Ａ－Ｍ１）とした。混合溶液Ｆ４Ａ－Ｍ１及びＡＬＧＳ２を１：２の比率にて混合し、アルギン酸混合溶液（Ｆ４Ａ－Ｍ２）とした。続いて、下表４０の処方で、アルギン酸混合溶液（Ｆ４Ａ－Ｍ２）、９．９重量％塩化ナトリウム水溶液及び注射用生理食塩水（大塚製薬工場製）（ＩＮｓ）で調製し、混合溶液（Ｆ４Ａ－Ｍ３）とした。尚、Ｆ４Ａ－Ｍ３に含まれる全アルギン酸濃度は約１．５重量％である。続いて、混合溶液Ｆ４Ａ－Ｍ３をハミルトンシリンジに充填し、シリンジに金属ニードル（武蔵エンジニアリング，　ＳＮＡ－１９Ｇ－Ｂ）、シリコンチューブ（アズワン，φ１×φ２）及びガラスキャピラリ（ナリシゲ，Ｇ－１）を順次接続し、シリンジポンプにセットした。前記ガラスキャピラリの先端を１００　ｍｍｏｌ／Ｌの塩化カルシウム水溶液が含まれるビーカーに浸漬し、流速２５０μＬ／ｍｉｎで当該塩化カルシウム水溶液中に１分間射出した。前記塩化カルシウム水溶液中に射出された繊維状形態の物質は、３０分以上静置することにより、架橋アルギン酸ゲルファイバ(ＣＬＡ－Ｘ１)（表４０中　ＣＬＡ－Ｘ１　Ｎｏ．参照）を得た。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000149
 （実施例Ｆ４-Ａ２）架橋アルギン酸ゲルファイバの作製（３ａ）
化合物４－Ａ２ｄあるいは化合物１１－Ａ２ｄに対して、０．９重量％塩化ナトリウム水溶液（塩化ナトリウムおよび水で調製）を加え、３重量％アルキン水溶液およびアジド水溶液（０．９重量％塩化ナトリウム含有）を調製した（アルキンをＦ４Ａ３、アジドをＦ４Ｎ４とする）。続いて、下表４１の処方で各種アルギン酸ナトリウムと０．９重量％塩化ナトリウム水溶液から３重量％アルギン酸ナトリウム水溶液（０．９重量％塩化ナトリウム含有）を調製した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000150
 前記アルキン水溶液（Ｆ４Ａ３）及びアジド水溶液（Ｆ４Ｎ４）を等容量混合し、化学修飾アルギン酸混合溶液（Ｆ４Ａ２－Ｍ１）とした。続いて、下表４２に記載の組み合わせで混合溶液Ｆ４Ａ２－Ｍ１及び３重量％アルギン酸ナトリウム水溶液（０．９重量％塩化ナトリウム含有）を５：１０の比率で混合し、アルギン酸混合溶液（Ｆ４Ａ２－Ｍ２）とした。混合溶液Ｆ４Ａ２-Ｍ２と注射用生理食塩水（大塚製薬工場製）（ＩＮｓ）を等容量混合し、混合溶液（Ｆ４Ａ２－Ｍ３）とした。尚、Ｆ４Ａ－Ｍ３に含まれる全アルギン酸濃度は１．５重量％である。続いて、混合溶液Ｆ４Ａ２－Ｍ３をハミルトンシリンジに充填し、シリンジにルアーロック用ニードル（関東化学株式会社，　１５／２３　ＮＬ－Ｆ）を接続し、シリンジポンプにセットした。前記ニードルの先端を０．９％塩化ナトリウム含有２０　ｍｍｏｌ／Ｌの塩化バリウム水溶液が含まれるビーカーに浸漬し、流速２５０μＬ／ｍｉｎで当該塩化バリウム水溶液中に０．８分間射出した。前記水溶液中に射出された繊維状形態の物質は、３０分以上静置することにより、架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＬＡ－Ｘ１Ａ）を得た（表４２中　ＣＬＡ－Ｘ１Ａ　Ｎｏ．参照）。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000151
（実施例Ｆ４－Ｂ）架橋アルギン酸ゲルファイバの作製（４）
　前記（実施例Ｆ４－Ａ）記載のアルキン水溶液（Ｆ４Ａ１）及びアジド水溶液（Ｆ４Ｎ１）を等容量混合し、化学修飾アルギン酸混合溶液（Ｆ４Ｂ－Ｍ１）とした。混合溶液Ｆ４Ｂ－Ｍ１及び前記ＡＬＧＳ２を下表４３の処方で調製し、アルギン酸混合溶液（Ｆ４Ｂ－Ｍ２）とした。続いて、下表４３に示すアルギン酸混合溶液Ｆ４Ｂ－Ｍ２及びＩＮｓの混合比率で混合溶液（Ｆ４Ｂ－Ｍ３）を調製した。続いて、混合溶液Ｆ４Ｂ－Ｍ３をハミルトンシリンジに充填し、シリンジに金属ニードル（武蔵エンジニアリング，　ＳＮＡ－１９Ｇ－Ｂ）、シリコンチューブ（アズワン，φ１×φ２）及びガラスキャピラリ（ナリシゲ，Ｇ－１）を順次接続し、シリンジポンプにセットした。前記ガラスキャピラリの先端を１００　ｍｍｏｌ／Ｌの塩化カルシウム水溶液が含まれるビーカーに浸漬し、流速２５０μＬ／ｍｉｎで当該塩化カルシウム水溶液中に１分間射出した。前記塩化カルシウム水溶液中に射出された繊維状形態の物質は、３０分以上静置することにより、架橋アルギン酸ゲルファイバ(ＣＬＡ－Ｘ２)（表４３中　ＣＬＡ－Ｘ２　Ｎｏ．参照）を得た。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000152
（実施例Ｆ４－Ｃ）ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの作製（２ａ）
　前記（実施例Ｆ４－Ａ）あるいは（実施例Ｆ４－Ｂ）で得られた、塩化カルシウム水溶液中の架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＬＡ－Ｘ１およびＣＬＡ－Ｘ２）をセルストレーナーを用いてろ過、分取した。分取した架橋アルギン酸ゲルファイバを、０．１％　ポリ－Ｌ－オルニチン臭化水素酸塩／１００ｍＭ　塩化カルシウムの水溶液に添加し、３７℃、１２５　ｒｐｍで３０分間振とう攪拌し、架橋アルギン酸ゲルファイバをポリマーコーティングした。水溶液中のファイバを、セルストレーナーを用いてろ過、分取し、生理食塩液５ｍＬを使用して２回洗浄して、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＦＢ－Ｘ）（表４４中　ＣＦＢ－Ｘ Ｎｏ．参照）を得た。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000153
（実施例Ｆ４－Ｃ２）ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの作製（２）
１％　ポリ－Ｌ－オルニチン臭化水素酸塩、９．２ｍｍｏｌ／Ｌ　ヒドロキシエチルピペラジンエタンスルホン酸、１５４ｍｍｏｌ／Ｌ　塩化ナトリウムが含まれる１％ポリ－Ｌ－オルニチン水溶液を調製した。前記１％ポリ－Ｌ－オルニチン水溶液を、０．９％　塩化ナトリウム及び２０ｍｍｏｌ／Ｌ　塩化バリウムが含まれる水溶液を用いて希釈し、０．１％ポリ－Ｌ－オルニチン水溶液とした。続いて、前記（実施例Ｆ４－Ａ２）で得られた塩化バリウム水溶液中の架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＬＡ－Ｘ１Ａ）をセルストレーナーを用いてろ過、分取した。分取した架橋アルギン酸ゲルファイバを、前記０．１％ポリ－Ｌ－オルニチン水溶液に添加し、３７℃、１２５　ｒｐｍで３０分間振とう撹拌し、架橋アルギン酸ゲルファイバをポリマーコーティングした。水溶液中のファイバを、セルストレーナーを用いてろ過、分取し、生理食塩液１０ｍＬを使用して１回洗浄して、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＦＢ－Ｘ２）（表４５中　ＣＦＢ－Ｘ２ Ｎｏ．参照）を得た。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000154
(実施例Ｆ４－Ｄ)ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの引張試験
　前記（実施例Ｆ４－Ｃ）及び（実施例Ｆ４－Ｃ２）で得られたポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＦＢ－ＸあるいはＣＦＢ－Ｘ２）の引張試験は、小型卓上ゲル強度測定機ＥＺ－ＳＸ　５ＮＣ１（島津、Ｎｏ．Ｉ３０８２５６Ｄ０５９２）、ロードセルＳＭＴ１－５Ｎ（Ｓ／Ｎ＝９１３１９３）を用い、注射用生理食塩水（大塚製薬工場製）中で、ファイバを治具にセットし測定した。測定値は、ファイバが破断したところの応力をＭＰａ、および歪みを％で、表４６に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000155
　表４６中、Ｎｏ．Ｆ４－Ｄ－１～Ｆ４－Ｄ－１０およびＦ４－Ｄ－１２～Ｆ４－Ｄ－１５において、０．１ＭＰａ以上の引張強度、および１００％以上の歪み（伸び率）を示す、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバであることが確認された。
（実施例ＦＩ－１）抗体産生細胞含有ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの培養
　１２５　ｍＬポリカーボネート製三角フラスコに、（実施例Ｆ２－Ｃ）で得られた抗体産生細胞含有ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＦＢ２－Ａ－１－ｃ１、ＦＢ２－Ａ－２－ｃ１、ＦＢ２－Ａ－３－ｃ１、ＦＢ２－Ａ－４－ｃ１、ＦＢ２－Ａ－５－ｃ１、ＦＢ２－Ａ－６－ｃ１、ＦＢ２－Ａ－７－ｃ１、ＦＢ２－Ａ－８－ｃ１、ＦＢ２－Ａ－９－ｃ１、およびＦＢ２－Ａ－１０－ｃ１）を入れ、（実施例Ｆ２－Ａ）に記載の抗体産生培地溶液（３０　ｍＬ）を添加し、３７℃、５％ＣＯ２雰囲気下、インキュベータ内で１２５　ｒｐｍで振とうしながら培養を１４日または２０日間実施した。２～３日に一回、培養液１．８　ｍＬを抜き取り、前記抗体産生培地溶液１．８ｍＬまたはＦｅｅｄ液（Ｉｒｖｉｎｅ社製、カタログ番号ＪＸ　Ｆ００３）１．８ｍＬを添加し、培地の総量を３０　ｍＬに保った。また、週に一度培養液の半量交換を実施した。培養期間において、培養液のＩｇＧ濃度をＣｅｄｅｘ　Ｂｉｏアナライザー（ロシュ・ダイアグノスティクス社）によりヒトＩｇＧ濃度として測定した。前記細胞封入ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバを用いた培養において、培養期間中の累積抗体量および培養液に検出される抗ＧＰＶＩ抗体生産ＣＨＯ細胞の濃度は表４７の通りであった。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000156
（実施例ＦＩ－２）生理活性物質産生細胞含有ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの培養
＜工程１＞　ＭＩＮ６細胞含有ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの培養
　（実施例Ｆ２－Ｃ）で得られたポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＦＢ２－Ｂ－１－ｃ１）を６０ｍｍ超低接着表面ディッシュ（Ｃｏｒｎｉｎｇ社製、製品番号：３２６１）に入れ、（実施例Ｆ２－Ｂ）に記載の完全培地（５　ｍＬ）を添加し、３７℃、５％ＣＯ２雰囲気下、インキュベータ内で静置して３日あるいは１４日間培養した。
＜工程２＞インスリン分泌能評価
　（実施例ＦＩ－２）＜工程１＞で３日間あるいは１４日間培養した、ＭＩＮ６細胞封入ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ中のＭＩＮ６細胞のインスリン分泌能を評価した。ＭＩＮ６細胞封入ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバを低グルコース溶液（２　ｍＭ　ｇｌｕｃｏｓｅ／ＫＲＢＨ／０．１％　ＢＳＡ）１０ｍＬ中で２時間培養し、高グルコース溶液（２０　ｍＭ　ｇｌｕｃｏｓｅ／ＫＲＢＨ／０．１％　ＢＳＡ）１０ｍＬへ溶液交換したのちにさらに２時間培養した。その後再び低グルコース溶液１０ｍＬへ溶液交換して２時間培養した。各工程の終了時の溶液中インスリン濃度を超高感度マウスインスリン測定キット（森永生科学研究所製）を使用して測定した。グルコース濃度に依存して、インスリンを放出することが確認できた。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000157
（実施例Ｆ５－Ａ）抗体産生細胞含有架橋アルギン酸ゲルファイバの作製
（実施例Ｆ２－Ａ）に記載の表３２および表３３の処方と同様にして、化合物４－Ａ２ｄおよび化合物１１－Ａ２ｄの３重量％水溶液（０．９重量％塩化ナトリウム含有）を調製した後、各水溶液を等容量混合して、化学修飾アルギン酸混合溶液（Ｆ５Ａ－Ｍ１）を調製した。前記混合溶液Ｆ５Ａ－Ｍ１、アルギン酸ナトリウム（Ｂ－２）と注射用生理食塩水（大塚製薬工場製）（ＩＮｓ）から調製された３重量％アルギン酸水溶液（０．９％塩化ナトリウム含有）（ＡＬＧＳ２）をＦ５Ａ－Ｍ１：ＡＬＧＳ２＝５：１０の比率にて混合して、アルギン酸混合溶液（Ｆ５Ａ－Ｍ２）とした。続いて、混合溶液Ｆ５Ａ－Ｍ２およびトシリズマブ産生ＣＨＯ細胞（１×１０８細胞／ｍＬ）を含む（実施例Ｆ２－Ａ）に記載の組成を有するＧ０１６培地を等容量混合し、細胞含有アルギン酸混合溶液（Ｆ５Ａ－Ｍ３）とした。前記混合溶液Ｆ５Ａ－Ｍ３をハミルトンシリンジに充填し、シリンジにルアーロック用ニードル（関東化学株式会社，　１５／２３　ＮＬ－Ｆ）を接続し、シリンジポンプにセットした。前記ニードルの先端を１００　ｍｍｏｌ／Ｌの塩化カルシウム水溶液あるいは０．９％塩化ナトリウム含有２０　ｍｍｏｌ／Ｌの塩化バリウム水溶液が含まれるビーカーに浸漬し、流速２５０μＬ／ｍｉｎで当該塩化カルシウムあるいは塩化バリウム水溶液中に０．８分間射出した。前記水溶液中に射出された繊維状形態の物質は、３０分以上静置することにより、トシリズマブ産生ＣＨＯ細胞含有の架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＬＡ－Ｇ５）を得た（表４９中　ＣＬＡ－Ｇ５　Ｎｏ．参照）。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000158
（実施例Ｆ５－Ｂ）抗体産生細胞含有ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの作製
（実施例Ｆ５－Ａ）で得られた抗体産生細胞含有架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＬＡ－Ｇ５）を表５０に示す各組成のカチオン性ポリマー含有水溶液に添加し、３７℃、１２５　ｒｐｍで３０分間振とう撹拌し、細胞含有架橋アルギン酸ゲルファイバをポリマーコーティングした。尚、ポリマーコーティングに使用した水溶液はコーティングするファイバ量の１０倍量使用した。水溶液中のファイバを、セルストレーナーを用いてろ過、分取し、生理食塩水５ｍＬを使用して２回洗浄して、抗体産生細胞含有ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＦＢ－Ｓ２）（表５１中　ＣＦＢ－Ｓ２　Ｎｏ．参照）を得た。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000159
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000160
（実施例ＦＩ－３）抗体産生細胞含有ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの培養
１２５　ｍＬポリカーボネート製三角フラスコに、（実施例Ｆ５－Ｂ）で得られた抗体産生細胞含有ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＦＢ５－Ａ－１－ｃ１又はＦＢ５－Ａ－２－ｃ２）を１本入れ、（実施例Ｆ２－Ａ）に記載のＧ０１６培地（３０　ｍＬ）を添加し、３７℃、５％ＣＯ２雰囲気下、インキュベータ内で１２５　ｒｐｍで振とうしながら培養を開始し、５日後に培養温度を３０℃とし、同温度にて培養を継続した。この間、２～３日に一回、培養液１．８　ｍＬを抜き取り、前記Ｇ０１６培地１．８ｍＬまたはＦｅｅｄ液（Ｉｒｖｉｎｅ社製、カタログ番号ＪＸ　Ｆ００３）１．８ｍＬを添加し、培地の総量を３０　ｍＬに保った。また、週に一度培養液の半量交換を実施した。培養期間において、培養液のＩｇＧ濃度をＣｅｄｅｘ　Ｂｉｏアナライザー（ロシュ・ダイアグノスティクス社）によりヒトＩｇＧ濃度として測定した。前記抗体産生細胞封入ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバを用いた培養において、各測定日における累積抗体濃度および培養液に検出されるトシリズマブ産生ＣＨＯ細胞の濃度は表５２の通りであった。培養結果より、各ファイバの培養において、抗体の産生量が経時的に増加していることが確認できた。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000161
（実施例Ｆ６）抗体産生細胞含有ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの作製
　トシリズマブ産生ＣＨＯ細胞（３×１０７細胞／ｍＬあるいは１×１０８細胞／ｍＬ）を含む（実施例Ｆ２－Ａ）に記載の組成を有するＧ０１６培地および前記（実施例Ｆ５－Ａ）で調製された混合溶液Ｆ５Ａ－Ｍ２を等容量混合し、細胞含有アルギン酸混合溶液（Ｆ６Ａ－Ｍ３）とした。尚、混合溶液Ｆ６Ａ－Ｍ３中には、アルキン化合物およびアジド化合物の終濃度が０．５重量％に、トシリズマブ産生ＣＨＯ細胞を表５３に示す濃度で含有させた。前記混合溶液Ｆ６Ａ－Ｍ３をハミルトンシリンジに充填し、シリンジにルアーロック用ニードル（関東化学株式会社，　１５／２３　ＮＬ－Ｆ）を接続し、シリンジポンプにセットした。前記ニードルの先端を０．９％塩化ナトリウム含有２０　ｍｍｏｌ／Ｌの塩化バリウム水溶液が含まれるビーカーに浸漬し、流速２５０μＬ／ｍｉｎで当該水溶液中に表５３に記載した時間射出した。前記水溶液中に射出された繊維状形態の物質は、３０分以上静置することにより、トシリズマブ産生ＣＨＯ細胞含有の架橋アルギン酸ゲルファイバとして得た。続いて、０．１％　ポリ－Ｌ－オルニチン臭化水素酸塩、０．９％　塩化ナトリウム及び２０ｍｍｍｏｌ／Ｌ　塩化バリウムが含まれる水溶液を用いて、前記（実施例Ｆ５－Ｂ）に記載される方法と同様にしてコーティングを行うことで、抗体産生細胞含有ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＦＢ－Ｓ３）（表５３中　ＣＦＢ－Ｓ３　Ｎｏ．参照）を得た。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000162
（実施例ＦＩ－４）抗体産生細胞含有ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの培養
１２５　ｍＬポリカーボネート製三角フラスコに、（実施例Ｆ６）で得られた抗体産生細胞含有ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＦＢ６－１－ｃ１、ＦＢ６－２－ｃ１又はＦＢ６－４－ｃ１は１本、ＦＢ６－３－ｃ１は２本）を入れ、（実施例Ｆ２－Ａ）に記載の組成を有するＧ０１６培地を添加し、ゲルファイバ及びＧ０１６培地の総量を３０ｍＬとし、３７℃、５％ＣＯ２雰囲気下、インキュベータ内で１２５　ｐｍで振とうしながら培養を開始し、５日後に培養温度を３０℃とし、同温度にて培養を継続した。培養開始２日後に、培養液１．８　ｍＬを抜き取り、Ｆｅｅｄ液（Ｉｒｖｉｎｅ社製、カタログ番号ＪＸ　Ｆ００３）１．８ｍＬを添加し、培地の総量を３０　ｍＬに保った。以降、２～３日に一回、培養液の半量交換を実施した。培養期間において、培養液のＩｇＧ濃度をＣｅｄｅｘ　Ｂｉｏアナライザー（ロシュ・ダイアグノスティクス社）によりヒトＩｇＧ濃度として測定した。前記抗体産生細胞封入ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバを用いた培養において、各測定日における累積抗体濃度および培養液に検出されるトシリズマブ産生ＣＨＯ細胞の濃度は表５４の通りであった。培養結果より、各ファイバの培養において、抗体の産生量が経時的に増加していることが確認できた。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000163
（実施例Ｆ７）抗体産生細胞含有ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの作製
抗ＧＰＶＩ抗体産生細胞（２×１０７細胞／ｍＬ）を含む（実施例Ｆ２－Ａ）に記載の抗体産生培地溶液および前記（実施例Ｆ５－Ａ）で調製された混合溶液Ｆ５Ａ－Ｍ２を等容量混合し、細胞含有アルギン酸混合溶液（Ｆ７Ａ－Ｍ３）とした。尚、混合溶液Ｆ７Ａ－Ｍ３中には、アルキン化合物およびアジド化合物を終濃度０．５重量％で含有させた。前記混合溶液Ｆ７Ａ－Ｍ３をハミルトンシリンジに充填し、シリンジにルアーロック用ニードル（関東化学株式会社，　１５／２３　ＮＬ－Ｆ）を接続し、シリンジポンプにセットした。前記ニードルの先端を０．９％塩化ナトリウム含有２０　ｍｍｏｌ／Ｌの塩化バリウム水溶液が含まれるビーカーに浸漬し、流速２５０μＬ／ｍｉｎで当該水溶液中に表５５に記載した時間射出した。前記水溶液中に射出された繊維状形態の物質は、３０分以上静置することにより、抗ＧＰＶＩ抗体産生細胞含有の架橋アルギン酸ゲルファイバとして得た。続いて、０．１％　ポリ－Ｌ－オルニチン臭化水素酸塩、０．９％　塩化ナトリウム及び２０ｍｍｏｌ／Ｌ　塩化バリウムが含まれる水溶液を用いて、前記（実施例Ｆ５－Ｂ）に記載される方法と同様にしてコーティングを行うことで、抗体産生細胞含有ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＦＢ－Ｓ４）（表５５中　ＣＦＢ－Ｓ４　Ｎｏ．参照）を得た。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000164
（実施例ＦＩ－５）抗体産生細胞含有ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの培養
１２５　ｍＬポリカーボネート製三角フラスコに、（実施例Ｆ７）で得られた抗体産生細胞含有ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＦＢ７－１－ｃ１又はＦＢ７－２－ｃ１は１本、ＦＢ７－３－ｃ１は２本）を入れ、（実施例Ｆ２－Ａ）に記載の抗体産生培地溶液を添加し、ゲルファイバ及び抗体産生培地溶液の総量を３０ｍＬとし、３７℃、５％ＣＯ２雰囲気下、インキュベータ内で１２５　ｒｐｍで振とうしながら培養した。培養開始２日後に、培養液１．８　ｍＬを抜き取り、Ｆｅｅｄ液（Ｉｒｖｉｎｅ社製、カタログ番号ＪＸ　Ｆ００３）１．８ｍＬを添加し、培地の総量を３０　ｍＬに保った。以降、２～３日に一回、抗体産生培地溶液を使用して培養液の半量交換を実施した。培養期間において、培養液のＩｇＧ濃度をＣｅｄｅｘ　Ｂｉｏアナライザー（ロシュ・ダイアグノスティクス社）によりヒトＩｇＧ濃度として測定した。前記抗体産生細胞封入ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバを用いた培養において、各測定日における累積抗体濃度および培養液に検出される抗ＧＰＶＩ抗体産生細胞の濃度は表５６の通りであった。培養結果より、各ファイバの培養において、抗体の産生量が経時的に増加していることが確認できた。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000165
（実施例Ｆ８）抗体産生細胞含有ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの作製
下表５７の処方で各種アルギン酸ナトリウムと注射用生理食塩水（大塚製薬工場製）（ＩＮｓ）から３重量％アルギン酸水溶液（０．９重量％塩化ナトリウム含有）を調製した。続いて、下表５８の処方で３重量％アルキン水溶液およびアジド水溶液（０．９重量％塩化ナトリウム含有）を調製した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000166
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000167
前記表５８に記載の３重量％アルキン水溶液及びアジド水溶液（０．９重量％塩化ナトリウム含有）を下表５９に示す処方にて等容量混合し、化学修飾アルギン酸混合溶液（Ｆ８Ａ－Ｍ１）を調製した。混合溶液Ｆ８Ａ－Ｍ１、前記３重量％アルギン酸ナトリウム水溶液（０．９重量％塩化ナトリウム含有）を下表５９に記載された組み合わせで５：１０になるように混合し、アルギン酸混合溶液（Ｆ８Ａ－Ｍ２）を調製した。続いて、トシリズマブ産生ＣＨＯ細胞（１×１０８細胞／ｍＬ）を含む（実施例Ｆ２－Ａ）に記載の組成を有するＧ０１６培地および混合溶液Ｆ８Ａ－Ｍ２を等容量混合し、細胞含有アルギン酸混合溶液（Ｆ８Ａ－Ｍ３）とした。尚、混合溶液Ｆ８Ａ－Ｍ３中には、アルキン化合物およびアジド化合物を終濃度０．５重量％で含有させた。
混合溶液Ｆ８Ａ－Ｍ３をハミルトンシリンジに充填し、シリンジにルアーロック用ニードル（関東化学株式会社，　１５／２３　ＮＬ－Ｆ）を接続し、シリンジポンプにセットした。前記ニードルの先端を０．９％塩化ナトリウム含有２０　ｍｍｏｌ／Ｌの塩化バリウム水溶液が含まれるビーカーに浸漬し、流速２５０μＬ／ｍｉｎで０．８分間射出した。前記水溶液中に射出された繊維状形態の物質は、３０分以上静置することにより、トシリズマブ産生ＣＨＯ細胞含有の架橋アルギン酸ゲルファイバとして得た。続いて、得られたトシリズマブ産生ＣＨＯ細胞含有の架橋アルギン酸ゲルファイバおよび、０．１％　ポリ－Ｌ－オルニチン臭化水素酸塩、０．９％　塩化ナトリウム及び２０ｍｍｍｏｌ／Ｌ　塩化バリウムが含まれる水溶液を用いて、前記（実施例Ｆ５－Ｂ）に記載される方法と同様にしてコーティングを行うことで、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＦＢ－Ｓ５）（表５９中　ＣＦＢ－Ｓ５　Ｎｏ．参照）を得た。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000168
（実施例ＦＩ－６）抗体産生細胞含有ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの培養
１２５　ｍＬポリカーボネート製三角フラスコに、（実施例Ｆ８）で得られた抗体産生細胞含有ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＦＢ８－１－ｃ１、ＦＢ８－２－ｃ１、ＦＢ８－３－ｃ１、ＦＢ８－４－ｃ１又はＦＢ８－５－ｃ１）を１本入れ、（実施例Ｆ２－Ａ）に記載の組成を有するＧ０１６培地（３０　ｍＬ）を添加し、３７℃、５％ＣＯ２雰囲気下、インキュベータ内で１２５　ｒｐｍで振とうしながら培養を開始し、５日後に培養温度を３０℃とし、同温度にて培養を継続した。この間、２～３日に一回、培養液１．８　ｍＬを抜き取り、前記Ｇ０１６培地１．８ｍＬまたはＦｅｅｄ液（Ｉｒｖｉｎｅ社製、カタログ番号ＪＸ　Ｆ００３）１．８ｍＬを添加し、培地の総量を３０　ｍＬに保った。また、週に一度培養液の半量交換を実施した。培養期間において、培養液のＩｇＧ濃度をＣｅｄｅｘ　Ｂｉｏアナライザー（ロシュ・ダイアグノスティクス社）によりヒトＩｇＧ濃度として測定した。前記抗体産生細胞封入ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバを用いた培養において、各測定日における累積抗体濃度および培養液に検出されるトシリズマブ産生ＣＨＯ細胞の濃度は表６０の通りであった。培養結果より、各ファイバの培養において、抗体の産生量が経時的に増加していることが確認できた。本培養結果において、ファイバの伸縮性（（実施例Ｆ４－Ｄ）における引張試験の結果）に応じて、より高い抗体産生となった。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000169
（実施例Ｆ９）抗体産生細胞含有ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの作製
トシリズマブ産生ＣＨＯ細胞（１×１０８細胞／ｍＬ）を含む（実施例Ｆ２－Ａ）に記載の組成を有するＧ０１６培地および前記（実施例Ｆ５－Ａ）で調製されたアルギン酸混合溶液Ｆ５Ａ－Ｍ２を等容量混合し、細胞含有アルギン酸混合溶液（Ｆ９Ａ－Ｍ３）とした。尚、混合溶液Ｆ９Ａ－Ｍ３中には、アルキン化合物およびアジド化合物の終濃度を０．５重量％で含有させた。前記混合溶液Ｆ９Ａ－Ｍ３をハミルトンシリンジに充填し、シリンジにルアーロック用ニードル（関東化学株式会社，　１５／２３　ＮＬ－Ｆ）を接続し、シリンジポンプにセットした。前記ニードルの先端を０．９％塩化ナトリウム含有２０　ｍｍｏｌ／Ｌの塩化バリウム水溶液が含まれるビーカーに浸漬し、流速２５０μＬ／ｍｉｎで当該水溶液中に０．８分間射出した。前記水溶液中に射出された繊維状形態の物質は、３０分以上静置することにより、トシリズマブ産生ＣＨＯ細胞含有の架橋アルギン酸ゲルファイバとして得た。得られた前記細胞含有架橋アルギン酸ゲルファイバを、表６１に示す各組成のカチオン性ポリマー含有水溶液を用いて、前記（実施例Ｆ５－Ｂ）に記載される方法と同様にしてコーティングを行うことで、抗体産生細胞含有ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＦＢ－Ｓ６）（表６２中　ＣＦＢ－Ｓ６　Ｎｏ．参照）を得た。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000170
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000171
（実施例ＦＩ－７）抗体産生細胞含有ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの培養
１２５　ｍＬポリカーボネート製三角フラスコに、前記（実施例Ｆ９）で得られた抗体産生細胞含有ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＦＢ９－１－ｃ１、ＦＢ９－２－ｃ２又はＦＢ９－３－ｃ３）を１本入れ、（実施例Ｆ２－Ａ）に記載のＧ０１６培地（３０　ｍＬ）を添加し、３７℃、５％ＣＯ２雰囲気下、インキュベータ内で１２５　ｐｍで振とうしながら培養を開始し、５日後に培養温度を３０℃とし、同温度にて培養を継続した。この間、２～３日に一回、培養液１．８　ｍＬを抜き取り、前記Ｇ０１６培地１．８ｍＬまたはＦｅｅｄ液（Ｉｒｖｉｎｅ社製、カタログ番号ＪＸ　Ｆ００３）１．８ｍＬを添加、あるいは培養液の半量交換を実施した。培養期間において、培養液のＩｇＧ濃度をＣｅｄｅｘ　Ｂｉｏアナライザー（ロシュ・ダイアグノスティクス社）によりヒトＩｇＧ濃度として測定した。前記抗体産生細胞封入ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバを用いた培養において、各測定日における累積抗体濃度および培養液に検出されるトシリズマブ産生ＣＨＯ細胞の濃度は表６３の通りであった。培養結果より、ＦＢ９－１－ｃ１及びＦＢ９－１－ｃ３のファイバの培養において、抗体の産生量が経時的に増加していることが確認できた。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000172
（実施例Ｆ１６－Ａ）架橋アルギン酸ゲルファイバの作製
　下表６４の処方で３重量％アルギン酸ナトリウム水溶液、アルキン水溶液およびアジド水溶液（０．９重量％塩化ナトリウム含有）を調製した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000173
　前記アルキン水溶液（Ｆ１６Ａ１）およびアジド水溶液（Ｆ１６Ｎ１）を等容量混合し、化学修飾アルギン酸混合溶液（Ｆ１６Ａ－Ｍ１）を調製した。混合溶液Ｆ１６Ａ－Ｍ１およびＡＬＧＳ２ＢをＦ１６Ａ－Ｍ１：ＡＬＧＳ２Ｂ＝５：１０の比率で混合して、アルギン酸混合溶液（Ｆ１６Ａ－Ｍ２）とした。続いて、混合溶液Ｆ１６Ａ－Ｍ２およびビーズ懸濁液（Ｓｐｈｅｒｅｔｅｃｈ製、Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ　ＵＶ　Ｐａｒｔｉｃｌｅｓ、コード番号ＦＰ－１００４０－２）を等容量混合し、ビーズ含有アルギン酸混合溶液（Ｆ１６Ａ－Ｍ３）とした。混合溶液Ｆ１６Ａ－Ｍ３をハミルトンシリンジに充填し、シリンジにルアーロック用ニードル（関東化学株式会社，　１５／２３　ＮＬ－Ｆ）を接続し、シリンジポンプにセットした。前記ニードルの先端を０．９％塩化ナトリウム含有２０　ｍｍｏｌ／Ｌの塩化バリウム水溶液が含まれるビーカーに浸漬し、流速２５０μＬ／ｍｉｎで１分間射出した。尚、３秒毎に解剖ハサミを使用して、射出直後の繊維状形態の物質を切断した。切断した繊維状形態の物質は、前記塩化バリウム水溶液中で３０分以上静置することにより、長さ約５ｃｍの架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＬＡ－１６Ａ）として得た。
（実施例Ｆ１６－Ｂ）ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの作製
　前記（実施例Ｆ１６－Ａ）で得られた、塩化バリウム水溶液中の架橋アルギン酸ゲルファイバをセルストレーナーを用いてろ過、分取し、分取した架橋アルギン酸ゲルファイバを、カチオン性ポリマーが含まれる水溶液に添加し、３７℃、１２５　ｒｐｍで３０分間振とう撹拌し、架橋アルギン酸ゲルファイバをポリマーコーティングし、水溶液中のファイバを、セルストレーナーを用いてろ過、分取し、生理食塩液５ｍＬを使用して２回洗浄して、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＦＢ－１６）を得る。
（実施例Ｆ１７－Ａ）抗体産生細胞含有架橋アルギン酸ゲルファイバの作製
下表６５の処方で３重量％アルキン水溶液およびアジド水溶液（０．９重量％塩化ナトリウム含有）を調製した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000174
前記表６５に記載の化合物４－Ａ２ｄ、化合物１１－Ａ２ｄおよび化合物１１－Ａ２ｆの３重量％水溶液（０．９重量％塩化ナトリウム含有）を調製した後、下表６６に記載の組み合わせにて、アルキンおよびアジド水溶液を等容量混合して、化学修飾アルギン酸混合溶液（Ｆ１７Ａ－Ｍ１）を調製した。前記混合溶液Ｆ１７Ａ－Ｍ１、アルギン酸ナトリウム（Ｂ－２）と注射用生理食塩水（大塚製薬工場製）（ＩＮｓ）から調製された３重量％アルギン酸水溶液（０．９％塩化ナトリウム含有）（ＡＬＧＳ２）をＦ１７Ａ－Ｍ１：ＡＬＧＳ２＝５：１０の比率にて混合して、アルギン酸混合溶液（Ｆ１７Ａ－Ｍ２）とした。続いて、混合溶液Ｆ１７Ａ－Ｍ２およびトシリズマブ産生ＣＨＯ細胞（３×１０７細胞／ｍＬ）を含む（実施例Ｆ２－Ａ）に記載の組成を有するＧ０１６培地を等容量混合し、細胞含有アルギン酸混合溶液（Ｆ１７Ａ－Ｍ３）とした。前記混合溶液Ｆ１７Ａ－Ｍ３を用いて、以下の操作方法（操作方法Ａ、Ｂ）に準じて、操作を実施することで、抗体産生細胞含有架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＬＡ－Ｇ１７）（表６６中　ＣＬＡ－Ｇ１７　Ｎｏ．参照）を得た。
（操作方法Ａ）（実施例Ｆ１６－Ａ）に記載の操作方法
（操作方法Ｂ）前記ニードルの先端を０．９％塩化ナトリウム含有２０　ｍｍｏｌ／Ｌの塩化バリウム水溶液が含まれるビーカーに浸漬し、流速２５０μＬ／ｍｉｎで当該塩化バリウム水溶液中に射出した。前記水溶液中に射出された繊維状形態の物質は、３０分以上静置する。
尚、ＦＢ１７－３およびＦＢ１７-４のファイバ長は、約２－４ｃｍである。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000175
（実施例Ｆ１７－Ｂ）抗体産生細胞含有ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの作製
（実施例Ｆ１７－Ａ）で得られた抗体産生細胞含有架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＬＡ－Ｇ１７）を、０．１％　ポリ－Ｌ－オルニチン臭化水素酸塩、０．９％　塩化ナトリウム及び２０ｍｍｍｏｌ／Ｌ　塩化バリウムが含まれる水溶液を用いて、前記（実施例Ｆ５－Ｂ）に記載される方法と同様にしてコーティングを行うことで、抗体産生細胞含有ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＦＢ－Ｇ１７）を得た。尚、コーティングに使用したファイバ量は下表６７に示す通りである（表６７中　ＣＦＢ－Ｇ１７　Ｎｏ．参照）。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000176
（実施例ＦＩ－１７）抗体産生細胞含有ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの培養
前記（実施例Ｆ－１７Ｂ）で得られたポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＦＢ－Ｇ１７）を用いて、以下の操作方法（操作方法１、２）に準じて、操作を実施することで抗体産生細胞含有ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの培養を行った。
（実施操作１）
磁気撹拌子を備えたガラス製培養槽（全容５００ｍＬ培養槽）に、０．０１％の消泡剤（Ｓｉｇｍａ製、ＡｎｔｉｆｏｒｍＣ　Ｅｍｕｌｓｉｏｎ、カタログ番号Ａ８０１１）を添加した前記（実施例Ｆ２－Ａ）に記載のＧ０１６培地及び前記（実施例Ｆ１７－Ｂ）で得られた抗体産生細胞含有ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＦＢ１７－１－ｃ１あるいはＦＢ１７－３－ｃ１）を入れ、培養系の総量を３００ｍＬとた。前記抗体産生細胞含有ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバを含む培養槽を、フィルター滅菌した空気を常時通気しながら、ｐＨが約７になるようにＣＯ２を適宜通気させ、３７℃、下表６８に示す速度で撹拌しながら培養を開始し、５日後に培養温度を３０℃とし、同温度にて培養を継続した。培養開始日から下表６８に記載の培地交換速度（ｖｅｓｓｅｌ　ｖｏｌｕｍｅ／ｄａｙ、以下ｖｖｄと記載）にて培養液を連続的に入れ替えた。尚、培養液の交換には、前記Ｇ０１６培地に０．０１％の消泡剤を添加して使用した。
（実施操作２）
１２５　ｍＬポリカーボネート製三角フラスコに、前記（実施例Ｆ１７－Ｂ）で得られた抗体産生細胞含有ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＦＢ１７－２－ｃ１あるいはＦＢ１７－４－ｃ１）を入れ、（実施例Ｆ２－Ａ）に記載のＧ０１６培地を添加し、培養系の総量を３０ｍＬとした。３７℃、５％ＣＯ２雰囲気下、インキュベータ内で下表６８に記載の撹拌速度で振とうしながら培養を開始し、５日後に培養温度を３０℃とし、同温度にて培養を継続した。この間、２～３日に一回、培養液１．８　ｍＬを抜き取り、前記Ｇ０１６培地１．８ｍＬまたはＦｅｅｄ液（Ｉｒｖｉｎｅ社製、カタログ番号ＪＸ　Ｆ００３）１．８ｍＬを添加、あるいは培養液の半量交換を実施した。
培養期間において、培養液のＩｇＧ濃度をＣｅｄｅｘ　Ｂｉｏアナライザー（ロシュ・ダイアグノスティクス社）によりヒトＩｇＧ濃度として測定した。前記抗体産生細胞含有ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバを用いた培養において、培養最終日における培養液に検出されるトシリズマブ産生ＣＨＯ細胞の濃度および累積抗体濃度は下表６８の通りであった。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000177
表６８の結果は、ファイバ長を短くすることで、リアクター培養における抗体産生量がフラスコ培養と比較して向上することを示唆するものであった。
（実施例Ｆ１８－Ａ）抗体産生細胞含有架橋アルギン酸ゲルファイバの作製
（実施例Ｆ２－Ａ）に記載の表３２および表３３の処方と同様にして、化合物４－Ａ２ｄおよび化合物１１－Ａ２ｄの３重量％水溶液（０．９重量％塩化ナトリウム含有）を調製した後、各水溶液を等容量混合して、化学修飾アルギン酸混合溶液（Ｆ１８Ａ－Ｍ１）を調製した。前記混合溶液Ｆ１８Ａ－Ｍ１、アルギン酸ナトリウム（Ａ－３）と注射用生理食塩水（大塚製薬工場製）（ＩＮｓ）から調製された３重量％アルギン酸水溶液（０．９％塩化ナトリウム含有）（ＡＬＧＳ３Ａ）をＦ１８Ａ－Ｍ１：ＡＬＧＳ３Ａ＝５：１０の比率にて混合して、アルギン酸混合溶液（Ｆ１８Ａ－Ｍ２）とした。続いて、混合溶液Ｆ１８Ａ－Ｍ２および抗ＧＰＶＩ抗体産生細胞（２×１０７細胞／ｍＬ）を含む前記（実施例Ｆ２－Ａ）に記載の抗体産生培地溶液を等容量混合し、細胞含有アルギン酸混合溶液（Ｆ１８Ａ－Ｍ３）とした。前記混合溶液Ｆ１８Ａ－Ｍ３を用いて、（実施例Ｆ１７－Ａ）に記載の（操作方法Ｂ）と同様の操作を実施することで、抗体産生細胞含有架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＬＡ－Ｇ１８）を得た。
（実施例Ｆ１８－Ｂ）抗体産生細胞含有ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの作製
（実施例Ｆ１８－Ａ）で得られた抗体産生細胞含有架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＬＡ－Ｇ１８）を、０．１％　ポリ－Ｌ－オルニチン臭化水素酸塩、０．９％　塩化ナトリウム及び２０ｍｍｍｏｌ／Ｌ　塩化バリウムが含まれる水溶液を用いて、前記（実施例Ｆ５－Ｂ）に記載される方法と同様にしてコーティングを行うことで、抗体産生細胞含有ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＦＢ－Ｇ１８）を得た。尚、コーティングに使用したファイバ量は下表６９に示す通りである（表６９中　ＣＦＢ－Ｇ１８　Ｎｏ．参照）。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000178
（実施例ＦＩ－１８）抗体産生細胞含有ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの培養
１２５　ｍＬポリカーボネート製三角フラスコに、前記（実施例Ｆ１８－Ｂ）で得られた抗体産生細胞含有ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＦＢ１８－１－ｃ１、ＦＢ１８－２－ｃ１又はＦＢ１８－３－ｃ１）を入れ、前記（実施例Ｆ２－Ａ）に記載の抗体産生培地溶液を添加し、培養系の総量を３０ｍＬとした。前記三角フラスコを３７℃、５％ＣＯ２雰囲気下、インキュベータ内で１２５　ｐｍで振とうしながら培養を開始し、同温度にて培養を継続した。この間、２～３日に一回、培養液１．８　ｍＬを抜き取り、Ｆｅｅｄ液（Ｉｒｖｉｎｅ社製、カタログ番号ＪＸ　Ｆ００３）１．８ｍＬを添加、あるいは培養液の半量交換を実施した。尚、培養液の半量交換には、前記（実施例Ｆ２－Ａ）に記載の抗体産生培地溶液の他、前記抗体産生培地溶液に対して、４５％Ｄ－（＋）グルコース溶液（ＳＩＧＭＡ製、カタログ番号Ｇ８７６９）を１/１００あるいは１/５０容量添加したグルコース追加抗体産生培地溶液を使用した。培養期間において、培養液のＩｇＧ濃度をＣｅｄｅｘ　Ｂｉｏアナライザー（ロシュ・ダイアグノスティクス社）によりヒトＩｇＧ濃度として測定した。前記抗体産生細胞含有ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバを用いた培養において、各測定日における累積抗体濃度および培養液に検出される抗ＧＰＶＩ抗体産生細胞の濃度は表７０の通りであった。培養結果より、ＦＢ１８－１－ｃ１、ＦＢ１８－２－ｃ１又はＦＢ１８－３－ｃ１のファイバ培養において、抗体の産生量が経時的に増加していることが確認できた。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000179
（実施例Ｆ１９－Ａ）抗体産生細胞含有架橋アルギン酸ゲルファイバの作製
（実施例Ｆ１６－Ａ）に記載の表６４の処方と同様にして、化合物４－Ａ２ｄおよび化合物１１－Ａ２ｆの３重量％水溶液（０．９重量％塩化ナトリウム含有）を調製した後、各水溶液を等容量混合して、化学修飾アルギン酸混合溶液（Ｆ１９Ａ－Ｍ１）を調製した。前記混合溶液Ｆ１９Ａ－Ｍ１、アルギン酸ナトリウム（Ａ－３）と注射用生理食塩水（大塚製薬工場製）（ＩＮｓ）から調製された３重量％アルギン酸水溶液（０．９％塩化ナトリウム含有）（ＡＬＧＳ３Ａ）をＦ１９Ａ－Ｍ１：ＡＬＧＳ３Ａ＝５：１０の比率にて混合して、アルギン酸混合溶液（Ｆ１９Ａ－Ｍ２）とした。続いて、混合溶液Ｆ１９Ａ－Ｍ２および抗ＧＰＶＩ抗体産生細胞（２×１０７細胞／ｍＬ）を含む前記（実施例Ｆ２－Ａ）に記載の抗体産生培地溶液を等容量混合し、細胞含有アルギン酸混合溶液（Ｆ１９Ａ－Ｍ３）とした。前記混合溶液Ｆ１９Ａ－Ｍ３を用いて、（実施例Ｆ１６－Ａ）に準じた操作を実施することで、ファイバ長が約２－４ｃｍの抗体産生細胞含有架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＬＡ－１９Ａ）を６０ｍＬ得た。
（実施例Ｆ１９－Ｂ）抗体産生細胞含有ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの作製
（実施例Ｆ１９－Ａ）で得られた抗体産生細胞含有架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＬＡ－Ｇ１９）を、０．１％　ポリ－Ｌ－オルニチン臭化水素酸塩、０．９％　塩化ナトリウム及び２０ｍｍｍｏｌ／Ｌ　塩化バリウムが含まれる水溶液を用いて、前記（実施例Ｆ５－Ｂ）に記載される方法と同様にしてコーティングを行うことで、抗体産生細胞含有ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＦＢ－Ｇ１９）を得た。
（実施例ＦＩ－１９）抗体産生細胞含有ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの培養
磁気撹拌子を備えたガラス製培養槽（全容５００ｍＬ培養槽）に、前記（実施例Ｆ２－Ａ）に記載の抗体産生培地溶液及び前記（実施例Ｆ１９－Ｂ）で得られた抗体産生細胞含有ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ（ＣＦＢ－Ｇ１９）を入れ、培養系の総量を３００ｍＬとた。前記抗体産生細胞含有ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバを含む培養槽を、フィルター滅菌した空気を常時通気しながら、ｐＨが約７になるようにＣＯ２を適宜通気させ、３７℃、３５０　ｒｐｍで撹拌しながら培養を開始した。１日後に撹拌速度を２１０　ｒｐｍとし、３７℃、同速度にて培養を継続した。培養開始１日後から、（実施例ＦＩ－１７）と同様に約０．５ｖｖｄにて培養液を連続的に入れ替えた。尚、培養液の交換には、前記（実施例Ｆ２－Ａ）に記載の抗体産生培地溶液あるいは０．０１％の消泡剤（Ｓｉｇｍａ製、ＡｎｔｉｆｏｒｍＣ　Ｅｍｕｌｓｉｏｎ、カタログ番号Ａ８０１１）を添加した前記抗体産生培地溶液を使用した。培養期間において、培養液のＩｇＧ濃度をＣｅｄｅｘ　Ｂｉｏアナライザー（ロシュ・ダイアグノスティクス社）によりヒトＩｇＧ濃度として測定した。前記抗体産生細胞含有ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバを用いた培養において、各測定日における累積抗体濃度および培養液に検出される抗ＧＰＶＩ抗体産生細胞の濃度は表７１の通りであった。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000180
　前記（実施例ＦＩ-１９）の結果は、抗体産生細胞含有ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバを用いたリアクター培養において、抗ＧＰＶＩ抗体産生細胞が抗体産生していることを示唆するものであった。
　ここでは、抗体、生理活性物質等を産生できる細胞及び架橋アルギン酸ゲルを含むコア層が、カチオン性ポリマー（カチオン性ポリマー層）で被覆されたポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバが提供される。また、当該ファイバの製造方法、及び当該ファイバを用いた抗体、生理活性物質等の培養方法を提供することができる。
ａ：ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのコア層の直径
ｂ：ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバのカチオン性ポリマー層の厚さ
ｃ：ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの外径
４：カチオン性ポリマー層
５：コア層
６：細胞（抗体、生理活性物質等を産生できる細胞）
ＸＸ：装置
ＹＹ：押出筒
１：導入口
２：排出口
ＤＤ：容器（例えば、ビーカー）（２価金属イオン含有溶液）
ＥＥ：容器（例えば、ビーカー）（カチオン性ポリマー含有溶液）
ＣＬＡ：架橋アルギン酸ゲルファイバ
ＣＦＢ：ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ
 

Claims (8)

  1. 　式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表される化学修飾アルギン酸誘導体を用いて架橋反応を行うことにより得られる架橋アルギン酸ゲルに包埋された抗体産生細胞又は生理活性物質産生細胞を含むコア層と、前記コア層を被覆するカチオン性ポリマー層を含む、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ：
    式（Ｉ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体は、下記式（Ｉ）：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000001
     ［式（Ｉ）中、（ＡＬＧ）は、アルギン酸を表わし；－ＮＨＣＯ－は、アルギン酸の任意のカルボキシル基を介したアミド結合を表わし；Ａｋｎ－Ｌ１－（Ａｋｎは環状アルキン基を表し；－Ｌ１－は、環状アルキン基（Ａｋｎ）と結合する２価のリンカーである）は、下記表：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-T000002
    Figure JPOXMLDOC01-appb-T000003
     に記載された部分構造式（各式中、破線右側は含まない）からなる群より選択される基である］で表される化学修飾アルギン酸誘導体であり；
    式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体は、下記式（ＩＩ）：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000004
     ［式（ＩＩ）中、（ＡＬＧ）はアルギン酸を表わし；－ＮＨＣＯ－は、アルギン酸の任意のカルボキシル基を介したアミド結合を表わし；－Ｌ２－は、下記表：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-T000005
     に記載された部分構造式（各式中、両端の破線外側は含まない）からなる群より選択されるリンカーを表わす］で表される化学修飾アルギン酸誘導体。
  2. 　コア層に含まれる抗体産生細胞が、抗体を産生する遺伝子組換え動物細胞であって、その宿主細胞が、ＣＨＯ細胞、ＣＨＯ細胞亜株、ＣＯＳ細胞、Ｓｐ２／０細胞、ＮＳ０細胞、ＳＰ２細胞、ＰＥＲＣ６細胞、ＹＢ２／０細胞、ＹＥ２／０細胞、１Ｒ９８３Ｆ細胞、Ｎａｍａｌｗａ細胞、Ｗｉｌ－２細胞、Ｊｕｒｋａｔ細胞、Ｖｅｒｏ細胞、Ｍｏｌｔ－４細胞、ＨＥＫ２９３細胞、ＢＨＫ細胞、ＨＴ－１０８０細胞、ＫＧＨ６細胞、Ｐ３Ｘ６３Ａｇ８．６５３細胞、Ｃ１２７細胞、ＪＣ細胞、ＬＡ７細胞、ＺＲ－４５－３０細胞、ｈＴＥＲＴ細胞、ＮＭ２Ｃ５細胞、及びＵＡＣＣ－８１２細胞からなる群から選択される細胞である、請求項１に記載のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ。
  3. 　コア層に含まれる生理活性物質産生細胞が、インスリン分泌細胞、膵島、膵島細胞、ドーパミン分泌細胞、脳下垂体細胞、成長ホルモン分泌細胞、副甲状腺細胞、神経成長因子分泌細胞、血液凝固因子分泌細胞、肝細胞、上皮小体細胞、エリスロポエチン分泌細胞、ノルエピネフリン分泌細胞及び生理活性物質発現ベクター（遺伝子組換え細胞）からなる群から選択される細胞である、請求項１に記載のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ。
  4. 　コア層に追加で含まれる成分が、アルギン酸溶液、アルギン酸ゲル、培地、培養液、コラーゲン溶液、メチルセルロース及びスクロース溶液からなる群から選択される成分である、請求項１ないし３のいずれか１項に記載のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ。
  5. 　カチオン性ポリマー層が、ポリアミノ酸、塩基性多糖類、及び塩基性ポリマーからなる群から選択されるカチオン性ポリマーである、請求項１ないし４のいずれか１項に記載のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ。
  6. 　カチオン性ポリマー層が、ポリ－Ｌ－オルニチン（ＰＬＯ）、ポリ－Ｄ－オルニチン（ＰＤＯ）、ポリ－ＤＬ－オルニチン、ポリ－Ｄ－リジン（ＰＤＬ）、ポリ－Ｌ－リジン（ＰＬＬ）、ポリ－ＤＬ－リジン、ポリ－Ｌ－アルギニン（ＰＬＡ）、ポリ－Ｄ－アルギニン（ＰＤＡ）、ポリ－ＤＬ－アルギニン、ポリ－Ｌ－ホモアルギニン（ＰＬＨＡ）、ポリ－Ｄ－ホモアルギニン（ＰＤＨＡ）、ポリ－ＤＬ－ホモアルギニン、ポリ－Ｌ－ヒスチジン（ＰＬＨ）、ポリ－Ｄ－ヒスチジン（ＰＤＨ）、ポリ－ＤＬ－ヒスチジン、ポリメチレン－ＣＯ－グアニジン（ＰＭＣＧ）、ポリアリルアミン（ＰＡＡ）、ポリビニルアミン（ＰＶＡ）、ポリエチレンイミン、アリルアミン－ジアリルアミン共重合体、およびアリルアミン－マレイン酸共重合体からなる群から選択されるカチオン性ポリマーである、請求項１ないし５のいずれか１項に記載のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバ。
  7. 　請求項１ないし６のいずれか１項に記載のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの製造方法であって、
    （１）抗体産生細胞又は生理活性物質産生細胞ならびに請求項１に記載の式（Ｉ）及び式（ＩＩ）で表わされる化学修飾アルギン酸誘導体が含まれる混合溶液を、２価金属イオンを含む溶液中に射出し、抗体又は生理活性物質を産生できる細胞を含む架橋アルギン酸ゲルファイバを得る工程、
    （２）（１）で得られた抗体産生細胞又は生理活性物質産生細胞を含む架橋アルギン酸ゲルファイバを、カチオン性ポリマーを含む溶液に接触させることで、カチオン性ポリマー層で被覆されたポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバを得る工程、
    を含むことを特徴とする、ポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバの製造方法。
  8. 　請求項１ないし６のいずれか１項に記載のポリマーコーティング架橋アルギン酸ゲルファイバを用いる、抗体又は生理活性物質の製造方法。
     
     
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