[go: up one dir, main page]

WO2016104596A1 - 低タンパク質吸着性材料、低タンパク質吸着性物品、低細胞付着性材料および低細胞付着性物品 - Google Patents

低タンパク質吸着性材料、低タンパク質吸着性物品、低細胞付着性材料および低細胞付着性物品 Download PDF

Info

Publication number
WO2016104596A1
WO2016104596A1 PCT/JP2015/086016 JP2015086016W WO2016104596A1 WO 2016104596 A1 WO2016104596 A1 WO 2016104596A1 JP 2015086016 W JP2015086016 W JP 2015086016W WO 2016104596 A1 WO2016104596 A1 WO 2016104596A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
fluorine
low
cell adhesion
material according
vinyl
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Ceased
Application number
PCT/JP2015/086016
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
谷原　正夫
安藤　剛
匡康 戸谷
毛利　晴彦
田中　義人
將 神原
三木　淳
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Daikin Industries Ltd
Nara Institute of Science and Technology NUC
Original Assignee
Daikin Industries Ltd
Nara Institute of Science and Technology NUC
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Daikin Industries Ltd, Nara Institute of Science and Technology NUC filed Critical Daikin Industries Ltd
Priority to JP2016566437A priority Critical patent/JP6810386B2/ja
Publication of WO2016104596A1 publication Critical patent/WO2016104596A1/ja
Anticipated expiration legal-status Critical
Ceased legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61J—CONTAINERS SPECIALLY ADAPTED FOR MEDICAL OR PHARMACEUTICAL PURPOSES; DEVICES OR METHODS SPECIALLY ADAPTED FOR BRINGING PHARMACEUTICAL PRODUCTS INTO PARTICULAR PHYSICAL OR ADMINISTERING FORMS; DEVICES FOR ADMINISTERING FOOD OR MEDICINES ORALLY; BABY COMFORTERS; DEVICES FOR RECEIVING SPITTLE
    • A61J1/00—Containers specially adapted for medical or pharmaceutical purposes
    • A61J1/05—Containers specially adapted for medical or pharmaceutical purposes for collecting, storing or administering blood, plasma or medical fluids ; Infusion or perfusion containers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L33/00—Antithrombogenic treatment of surgical articles, e.g. sutures, catheters, prostheses, or of articles for the manipulation or conditioning of blood; Materials for such treatment
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08F—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED BY REACTIONS ONLY INVOLVING CARBON-TO-CARBON UNSATURATED BONDS
    • C08F214/00—Copolymers of compounds having one or more unsaturated aliphatic radicals, each having only one carbon-to-carbon double bond, and at least one being terminated by a halogen
    • C08F214/18—Monomers containing fluorine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08F—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED BY REACTIONS ONLY INVOLVING CARBON-TO-CARBON UNSATURATED BONDS
    • C08F218/00—Copolymers of compounds having one or more unsaturated aliphatic radicals, each having only one carbon-to-carbon double bond, and at least one being terminated by an acyloxy radical of a saturated carboxylic acid, of carbonic acid or of a haloformic acid
    • C08F218/02—Esters of monocarboxylic acids
    • C08F218/04—Vinyl esters

Definitions

  • the present invention relates to a low protein adsorbing material, a low protein adsorbing article, a low cell adhering material, and a low cell adhering article.
  • Polymer materials are used as materials constituting instruments for storing blood, instruments for culturing cells, and the like.
  • Patent Document 1 describes a biocompatible substrate in which at least a part of the surface is composed of a hydrophobic fluororesin and a hydrophilic fluororesin.
  • Patent Document 2 includes a medical article, a coating disposed on at least a portion of an implantable medical device, wherein the coating includes (a) a fluorinated polymer, and (b) a biobeneficial polymer. Medical articles are described.
  • Patent Document 3 as a film used for water treatment or medical use, a copolymer of tetrafluoroethylene (TFE) and vinyl acetate (VAc) or at least a part of an acetate group contained in the copolymer is included.
  • a fluorine-containing copolymer film comprising a saponified copolymer and having a tetrafluoroethylene content of 1 to 70 mol% contained in the copolymer.
  • Patent Document 4 describes a copolymer obtained by deprotecting a copolymer of tetrafluoroethylene and t-butyl vinyl ether or vinyl acetate as a hydrophilizing material used for an aqueous liquid separation membrane. .
  • Patent Document 5 discloses a molded product having a low protein adsorption layer on the surface of a support layer, the low protein adsorption layer is made of an amphiphilic polymer, and is bonded to the support layer by a covalent bond to form a layer.
  • Patent Document 6 describes a protein adsorption inhibitor containing a 2-methacryloyloxyethyl phosphorylcholine polymer and / or a copolymer of 2-methacryloyloxyethyl phosphorylcholine-containing components.
  • Patent Document 7 describes a cell culture substrate using a polymer composite in which a water-swellable clay mineral is finely dispersed in a water-soluble (meth) acrylic acid ester polymer.
  • Patent Document 8 describes a cell culture well plate in which the inner surface of the well is composed of polymethacrylate and the growth of anchorage-independent cells is easy.
  • Patent Document 9 describes a culture vessel for embryoid body formation, which is formed by a cell low adhesion treatment or a cell non-adhesion treatment using a water-soluble resin.
  • Japanese Patent Laid-Open No. 4-336072 Special table 2007-515208 JP-A-5-261256 International Publication No. 2012/165503 Japanese Patent Application Laid-Open No. 2004-276552 Japanese Patent Laid-Open No. 7-83923 JP 2013-176402 A JP-A-8-322593 JP 2012-210166 A
  • the present invention makes it difficult for proteins to adsorb, a novel low protein adsorbing material excellent in heat resistance, alkali resistance and molding processability and cells, and excellent in heat resistance, alkali resistance and molding processability.
  • An object is to provide a novel low cell adhesion material.
  • the present invention is a low protein adsorptive material comprising a fluorine-containing copolymer having a fluorine-containing olefin unit and a vinyl alcohol unit.
  • the fluorine-containing olefin unit content in the fluorine-containing copolymer is preferably 60 to 10 mol%.
  • the alternating ratio of fluorine-containing olefin units and vinyl alcohol units in the fluorine-containing copolymer is 1 to 75%.
  • the fluorinated olefin is preferably at least one selected from the group consisting of tetrafluoroethylene, chlorotrifluoroethylene and hexafluoropropylene.
  • the fluorine-containing copolymer preferably has a fluorine-containing olefin unit, a vinyl alcohol unit and a vinyl ester monomer unit.
  • the low protein adsorptive material is preferably a coating film.
  • the present invention also provides a coating composition comprising the above-described low protein adsorptive material.
  • the present invention also provides a coating layer formed from the above-described low protein adsorptive material.
  • the present invention is a low protein comprising the above-described low protein adsorbing material, the above coating composition, or the above coating layer, and being a bag, sheet, film, vial, petri dish, or flask. It is also an absorptive article.
  • the present invention comprises the above-described low protein-adsorbing material, the above-described coating composition, or the above-described coating layer, and includes a biopharmaceutical bag, a biopharmaceutical sheet, a biopharmaceutical film, a biopharmaceutical vial, and a biopharmaceutical. It is also a low protein adsorptive article characterized by being a petri dish or a biopharmaceutical flask.
  • the present invention is also a low cell adhesion material characterized by comprising a fluorine-containing copolymer having a fluorine-containing olefin unit and a vinyl alcohol unit.
  • the fluorine-containing olefin unit content in the fluorine-containing copolymer is preferably 60 to 10 mol%.
  • the alternating rate of the fluorinated olefin unit and the vinyl alcohol unit in the fluorinated copolymer is 1 to 75%.
  • the fluorinated olefin is preferably at least one selected from the group consisting of tetrafluoroethylene, chlorotrifluoroethylene and hexafluoropropylene.
  • the fluorine-containing copolymer preferably has a fluorine-containing olefin unit, a vinyl alcohol unit and a vinyl ester monomer unit.
  • the low cell adhesion material is preferably a coating film.
  • the present invention also provides a coating composition comprising the above-mentioned low cell adhesion material.
  • the present invention is also a coating layer formed from the above-mentioned low cell adhesion material.
  • the present invention comprises the above-mentioned low cell adhesion material, the above-mentioned coating composition, or the above-mentioned coating layer, and is a bag, sheet, film, vial, petri dish or flask, It is also a cell-adhesive article.
  • the present invention comprises the above-mentioned low cell adhesion material, the above-mentioned coating composition, or the above-mentioned coating layer, and comprises a cell culture bag, a cell culture sheet, a cell culture film, a cell culture vial, a cell It is also a low cell adhesion article characterized by being a petri dish for culture or a flask for cell culture.
  • the present invention is also a low cell adhesion article comprising the above-mentioned low cell adhesion material, the above-mentioned coating composition, or the above-mentioned coating layer and being a culture container for embryoid body formation.
  • the low protein adsorptive material of the present invention hardly adsorbs protein, and is excellent in heat resistance, alkali resistance and moldability. From the low protein adsorptive material of the present invention, it is possible to obtain an article that is difficult to adsorb proteins and is excellent in heat resistance, alkali resistance and molding processability. Further, the low cell adhesion material of the present invention is less likely to adhere to cells and is excellent in heat resistance, alkali resistance and molding processability. From the low cell adhesion material of the present invention, it is possible to obtain an article that is difficult to adhere to cells and is excellent in heat resistance, alkali resistance and molding processability.
  • the low protein adsorptive article of the present invention hardly adsorbs protein on the surface, and is excellent in heat resistance, alkali resistance and molding processability.
  • the low cell adhesion article of the present invention is less susceptible to cell adhesion on the surface and is excellent in heat resistance, alkali resistance and molding processability.
  • the low protein adsorptive material and the low cell adhesion material of the present invention comprise a fluorine-containing copolymer having a fluorine-containing olefin unit and a vinyl alcohol unit (—CH 2 —CH (OH) —).
  • the low protein adsorption property and low cell adhesion property of the fluorine-containing copolymer are characteristics newly found by the present inventors.
  • the low protein adsorptive material and the low cell adhesion material of the present invention are excellent in heat resistance, they can withstand sterilization performed at high temperatures. For example, it can withstand autoclave sterilization performed at 121 ° C. It is preferable that the low protein adsorbing material and the low cell adhesion material of the present invention have a decomposition temperature exceeding 121 ° C.
  • the low protein adsorbing material and the low cell adhesion material of the present invention are excellent in alkali resistance, they can withstand disinfection using an alkaline aqueous solution containing hypochlorous acid.
  • the low protein adsorptive material and the low cell adhesion material of the present invention are immersed in an aqueous solution containing 0.5% by mass of sodium hypochlorite and 0.4% by mass of sodium hydroxide for 24 hours
  • the weight change rate is 10% by mass or less.
  • the low protein adsorptive material and the low cell adhesion material of the present invention are excellent in moldability.
  • a weak solvent such as alcohol can be used as the organic solvent, so that it is eroded by the strong solvent. It can also be applied to substrates and undercoats.
  • the fluorine-containing copolymer preferably contains the fluorine-containing olefin unit in an amount of 60 to 10 mol% of all monomer units constituting the fluorine-containing copolymer. More preferably, it is 40 to 10 mol%, still more preferably 35 to 20 mol%, and still more preferably 35 to 25 mol%.
  • the content of the fluorinated olefin unit is within the above range, proteins are more difficult to adsorb to the low protein adsorbing material, and cells are less likely to adhere to the low cell adhering material.
  • the content of the fluorinated olefin unit is less than 10 mol%, the water-soluble property of the fluorinated copolymer is increased, and the fluorinated copolymer is easily eluted in water, and the function is hardly exhibited.
  • the content of the fluorine-containing olefin unit is large, the heat resistance, alkali resistance, and molding processability of the low protein adsorbing material and the low cell adhesion material tend to be excellent.
  • the fluorine-containing copolymer preferably contains 60 to 10 mol% of fluorine-containing olefin units and 40 to 90 mol% of vinyl alcohol units.
  • the content of each monomer unit is 40 to 10 mol% of the fluorinated olefin unit, more preferably 60 to 90 mol% of the vinyl alcohol unit, and 35 to 20 mol% of the fluorinated olefin unit.
  • the vinyl alcohol unit is 65 to 80 mol%
  • the fluorinated olefin unit is 35 to 25 mol%
  • the vinyl alcohol unit is 65 to 75 mol%.
  • each monomer unit When the content of each monomer unit is in such a range, proteins are more difficult to adsorb to the low protein adsorbing material, and cells are less likely to adhere to the low cell adhering material.
  • the content of the fluorinated olefin unit is less than 10 mol%, the water-soluble property of the fluorinated copolymer is increased, and the fluorinated copolymer is easily eluted in water, and the function is hardly exhibited.
  • the content of the fluorine-containing olefin unit When the content of the fluorine-containing olefin unit is large, the heat resistance, alkali resistance, and molding processability of the low protein adsorbing material and the low cell adhesion material tend to be excellent.
  • the said fluorine-containing olefin unit represents the polymerization unit based on a fluorine-containing olefin.
  • the fluorine-containing olefin is a monomer having a fluorine atom.
  • PAVE perfluoro (methyl vinyl ether) [PMVE], perfluoro (ethyl vinyl ether) [PEVE], perfluoro (propyl vinyl ether) [PPVE], perfluoro (butyl vinyl ether), and the like.
  • At least 1 sort (s) selected from the group which consists of TFE, CTFE, and HFP is more preferable, and TFE is still more preferable.
  • the fluorine-containing copolymer preferably has an alternating ratio of fluorine-containing olefin units and vinyl alcohol units of 1 to 75%.
  • the alternating rate is within the above range, proteins are more difficult to adsorb to the low protein adsorbing material, and cells are less likely to adhere to the low cell adhering material. More preferably, it is 10 to 60%, still more preferably 10 to 35%, and particularly preferably 10 to 20%.
  • the alternating rate of the fluorinated olefin unit and the vinyl alcohol unit was determined by performing 1 H-NMR measurement of the fluorinated copolymer using a solvent in which the fluorinated copolymer such as heavy acetone is dissolved, It can be calculated as the alternating rate of chaining.
  • Alternating rate (%) C / (A + B + C) ⁇ 100
  • the number of V units of A, B and C is calculated from the intensity ratio of H of the main chain bonded to the tertiary carbon of the vinyl alcohol unit (—CH 2 —CH (OH) —) measured by 1 H-NMR.
  • the estimation of the strength ratio of H in the main chain by 1 H-NMR measurement is carried out with the fluorine-containing copolymer before saponification.
  • the fluorine-containing copolymer is more difficult to adsorb proteins and more difficult to adhere to cells, —CH (OH) —CXY— (wherein X and Y are the same or different and H, F or a fluoroalkyl group, provided that at least one of X and Y is F or a fluoroalkyl group).
  • the fluorine-containing copolymer preferably has a fluorine alcohol structure represented by —CH (OH) —CF 2 —.
  • the fluorine-containing copolymer is further represented by —CH 2 —CH (O (C ⁇ O) R) — (wherein R represents a hydrogen atom or a hydrocarbon group having 1 to 17 carbon atoms). It may have a vinyl ester monomer unit.
  • R represents a hydrogen atom or a hydrocarbon group having 1 to 17 carbon atoms.
  • the fluorinated copolymer in the present invention has a fluorinated olefin unit, a vinyl alcohol unit, and a vinyl ester monomer unit.
  • fluorine-containing olefin / vinyl alcohol / vinyl ester monomer copolymer consisting essentially of a fluorine-containing olefin unit, a vinyl alcohol unit and a vinyl ester monomer unit.
  • the vinyl ester monomer unit is a monomer represented by —CH 2 —CH (O (C ⁇ O) R) — (wherein R represents a hydrogen atom or a hydrocarbon group having 1 to 17 carbon atoms). Although it is a unit, R in the above formula is preferably an alkyl group having 1 to 11 carbon atoms, more preferably an alkyl group having 1 to 5 carbon atoms. Particularly preferred is an alkyl group having 1 to 3 carbon atoms.
  • vinyl ester monomer unit examples include monomer units derived from the following vinyl esters. Vinyl formate, vinyl acetate, vinyl propionate, vinyl butyrate, vinyl isobutyrate, vinyl valelate, vinyl isovalerate, vinyl caproate, vinyl heptylate, vinyl caprylate, vinyl pivalate, vinyl pelargonate, vinyl caprate, Vinyl laurate, vinyl myristate, vinyl pentadecylate, vinyl palmitate, vinyl margarate, vinyl stearate, vinyl octylate, Veova-9 (manufactured by Showa Shell Sekiyu KK), Veova-10 (Showa Shell Sekiyu KK) )), Vinyl benzoate, vinyl versatate.
  • monomer units derived from vinyl acetate, vinyl propionate, and vinyl versatate are preferable. More preferred are vinyl acetate monomer units and vinyl propionate monomer units, and even more preferred are vinyl acetate monomer units.
  • the fluorine-containing copolymer has a fluorine-containing olefin unit, a vinyl alcohol unit and a vinyl ester monomer unit
  • the content of each monomer unit is 60 to 10 mol% of the fluorine-containing olefin unit, and vinyl alcohol
  • the units are 40 to 90 mol% and the vinyl ester monomer units are more than 0 mol% and less than 30 mol%.
  • the content of each monomer unit is within the above range, proteins are more difficult to adsorb to the low protein adsorbing material, and cells are less likely to adhere to the low cell adhering material.
  • each monomer unit is such that the fluorine-containing olefin unit is 60 to 10 mol%, the vinyl alcohol unit is 40 to 90 mol%, and the vinyl ester monomer unit is more than 0 and less than 10 mol%. More preferably, the fluorine-containing olefin unit is 40 to 10 mol%, the vinyl alcohol unit is 60 to 90 mol%, the vinyl ester monomer unit is more than 0 and less than 1.0 mol%, and more preferably More preferably, the fluorine olefin unit is 35 to 20 mol%, the vinyl alcohol unit is 65 to 80 mol%, the vinyl ester monomer unit is more than 0 and less than 1.0 mol%.
  • the alternating rate of the fluorine-containing olefin unit, the vinyl alcohol unit, and the vinyl ester monomer unit is 1 to 75%. It is preferable.
  • the alternating rate is within the above range, proteins are more difficult to adsorb to the low protein adsorbing material, and cells are less likely to adhere to the low cell adhering material. More preferably, it is 10 to 60%, still more preferably 10 to 35%, and particularly preferably 10 to 20%.
  • the alternating rate of the fluorinated olefin unit, the vinyl alcohol unit, and the vinyl ester monomer unit was measured by 1 H-NMR measurement of the fluorinated copolymer using a solvent in which the fluorinated copolymer such as heavy acetone was dissolved, It can be calculated as an alternating rate of three chains from the following formula.
  • Alternating rate (%) C / (A + B + C) ⁇ 100
  • T- fluorine-containing olefin unit
  • V vinyl alcohol unit or vinyl ester monomer unit
  • the number of V units in A, B, and C is the vinyl alcohol unit (—CH 2 —CH (OH) —) and vinyl ester monomer unit (—CH 2 —CH (O (C ⁇ O)) measured by 1 H-NMR.
  • the said fluorine-containing copolymer may have other monomer units other than a fluorine-containing olefin unit, a vinyl alcohol unit, and a vinyl ester monomer unit in the range which does not impair the effect of this invention.
  • Examples of the other monomer include monomers not containing a fluorine atom (excluding vinyl alcohol and vinyl ester monomers) such as ethylene, propylene, 1-butene, 2-butene, vinyl chloride, Preference is given to at least one fluorine-free ethylenic monomer selected from the group consisting of vinylidene chloride, vinyl ether monomers and unsaturated carboxylic acids.
  • monomers not containing a fluorine atom such as ethylene, propylene, 1-butene, 2-butene, vinyl chloride
  • the total content of the other monomer units is preferably 0 to 50 mol%, more preferably 0 to 40 mol%, and more preferably 0 to 40 mol% of the total monomer units of the fluorine-containing copolymer. More preferably, it is 30 mol%.
  • each monomer unit constituting the fluorine-containing copolymer can be calculated by appropriately combining NMR, FT-IR, and elemental analysis depending on the type of monomer.
  • the weight average molecular weight of the fluorine-containing copolymer is not particularly limited, but is preferably 10,000 or more. More preferably, it is 12,000 to 2,000,000, and still more preferably 12,000 to 1,000,000.
  • the weight average molecular weight can be determined by gel permeation chromatography (GPC).
  • the fluorine-containing copolymer can be produced by saponifying a copolymer having a fluorine-containing olefin unit and a vinyl ester monomer unit. That is, the fluorine-containing copolymer in the present invention is a copolymer obtained by saponifying a copolymer having a fluorine-containing olefin unit and a vinyl ester monomer unit.
  • the fluorine-containing copolymer in the present invention is a copolymer obtained by saponifying a copolymer having a fluorine-containing olefin unit and a vinyl ester monomer unit.
  • the manufacturing method of the fluorine-containing copolymer in this invention is demonstrated.
  • the fluorine-containing copolymer in the present invention is produced by copolymerizing a fluorine-containing olefin such as tetrafluoroethylene and a vinyl ester monomer such as vinyl acetate, and then saponifying the obtained copolymer. can do.
  • a method for polymerizing the fluorine-containing copolymer it is preferable to carry out the polymerization under a condition in which the composition ratio of the fluorine-containing olefin and the vinyl ester monomer is kept substantially constant.
  • the above-mentioned fluorine-containing copolymer is polymerized under a condition in which the composition ratio of the fluorine-containing olefin and the vinyl ester monomer is kept almost constant to obtain a copolymer having a fluorine-containing olefin unit and a vinyl ester monomer unit. It is preferably obtained by a production method comprising a step and a step of saponifying the obtained copolymer to obtain a copolymer having a fluorine-containing olefin unit and a vinyl alcohol unit.
  • vinyl ester monomers examples include vinyl formate, vinyl acetate, vinyl propionate, vinyl butyrate, vinyl isobutyrate, vinyl valerate, vinyl isovalerate, vinyl caproate, vinyl heptylate, vinyl caprylate, vinyl pivalate, pelargon.
  • vinyl acetate, vinyl propionate, and vinyl versatate are preferably used because they are easily available and inexpensive.
  • 1 type of these may be used and 2 or more types may be mixed and used.
  • Examples of the method of copolymerizing the fluorinated olefin and the vinyl ester monomer include solution polymerization, bulk polymerization, emulsion polymerization, suspension polymerization and the like, and emulsion polymerization is easy because it is industrially easy to implement. However, it is preferable to produce by solution polymerization or suspension polymerization, but not limited thereto.
  • a polymerization initiator In emulsion polymerization, solution polymerization, or suspension polymerization, a polymerization initiator, a solvent, a chain transfer agent, a surfactant, a dispersant, and the like can be used, and those usually used can be used.
  • the solvent used in the solution polymerization is preferably a solvent capable of dissolving the fluorine-containing olefin, the vinyl ester monomer, and the fluorine-containing copolymer to be synthesized.
  • n-butyl acetate, t-butyl acetate, ethyl acetate Esters such as methyl acetate and propyl acetate; Ketones such as acetone, methyl ethyl ketone and cyclohexanone; Aliphatic hydrocarbons such as hexane, cyclohexane and octane; Aromatic hydrocarbons such as benzene, toluene and xylene; Methanol and ethanol Alcohols such as tert-butanol and 2-propanol; cyclic ethers such as tetrahydrofuran and dioxane; fluorine-containing solvents such as HCFC-225; dimethyl sulfoxide, di
  • polymerization initiator examples include peroxycarbonates such as diisopropyl peroxydicarbonate (IPP) and di-n-propyl peroxydicarbonate (NPP), and t-butyl peroxypivalate (for example, NOF Corporation).
  • Oil-soluble radical polymerization initiators typified by peroxyesters such as perbutyl PV), for example, persulfuric acid, perboric acid, perchloric acid, perphosphoric acid, ammonium percarbonate, potassium salt, sodium Water-soluble radical polymerization initiators such as salts can be used. Particularly in emulsion polymerization, ammonium persulfate and potassium persulfate are preferred.
  • a commonly used surfactant can be used.
  • a nonionic surfactant an anionic surfactant, a cationic surfactant and the like can be used.
  • dispersant used in suspension polymerization examples include partially saponified polyvinyl acetate, methylcellulose, hydroxyethylcellulose, hydroxypropylcellulose, hydroxypropylmethylcellulose, and other water-soluble cellulose ethers used in ordinary suspension polymerization, and acrylic acid polymers. And water-soluble polymers such as gelatin. Suspension polymerization is carried out under the condition that the ratio of water / monomer is usually 1.5 / 1 to 3/1 by mass ratio, and the dispersant is 0.01 to 0 with respect to 100 parts by mass of the monomer. .1 part by weight is used. If necessary, a pH buffer such as polyphosphate can be used.
  • Examples of the chain transfer agent include hydrocarbons such as ethane, isopentane, n-hexane, and cyclohexane; aromatics such as toluene and xylene; ketones such as acetone; acetates such as ethyl acetate and butyl acetate; Examples include alcohols such as methanol and ethanol; mercaptans such as methyl mercaptan; halogenated hydrocarbons such as carbon tetrachloride, chloroform, methylene chloride, and methyl chloride.
  • the addition amount of the chain transfer agent may vary depending on the chain transfer constant of the compound used, but is usually used in the range of 0.001 to 10% by mass with respect to the polymerization solvent.
  • the polymerization temperature may be in a range in which the composition ratio during the reaction of the fluorinated olefin and the vinyl ester monomer is substantially constant, and may be 0 to 100 ° C.
  • the polymerization pressure may be in a range in which the composition ratio during the reaction of the fluorinated olefin and the vinyl ester monomer is substantially constant, and may be 0 to 10 MPaG.
  • Saponification of an acetate group derived from vinyl acetate is well known in the art, and can be performed by a conventionally known method such as alcoholysis or hydrolysis using an acid or alkali. By this saponification, the acetate group (—OCOCH 3 ) is converted to a hydroxyl group (—OH). Similarly, other vinyl ester monomers can be saponified by a conventionally known method to obtain a hydroxyl group.
  • the degree of saponification in the case of obtaining a fluorine-containing copolymer in the present invention by saponifying a copolymer having a fluorine-containing olefin unit and a vinyl ester monomer unit is the content of each monomer unit of the fluorine-containing copolymer in the present invention. It is sufficient that the rate is in the range described above, specifically 90% or more is preferable, 95% or more is more preferable, and 99% or more is still more preferable.
  • the low protein adsorptive material and the low cell adhesion material may further contain other components other than the fluorine-containing copolymer as long as the effects of the present invention are not impaired.
  • hydrophilic polymers such as polyvinyl alcohol, polyvinyl pyrrolidone, and polyethylene glycol.
  • the blending amount of the other component is preferably 1 to 30% by mass, and more preferably 1 to 10% by mass with respect to 100% by mass of the fluorine-containing copolymer.
  • the surface of the low protein adsorbing material and the low cell adhering material is preferably treated with an aqueous solution containing an organic solvent.
  • an aqueous solution containing an organic solvent By this surface treatment, the hydroxyl structure further increases on the surface of the low protein adsorbing material and the low cell adhering material, so that protein adsorption and cell adhesion are more strongly suppressed.
  • the organic solvent that can be used for the surface treatment is not particularly limited as long as it is soluble in water and can dissolve the fluorine-containing copolymer.
  • Examples of the treatment method using the aqueous solution containing the organic solvent include a method of wetting the surfaces of the low protein adsorbing material and the low cell adhesion material with the aqueous solution.
  • the low protein adsorbing material and the low cell adhering material are provided by being molded into various shapes depending on the application.
  • the molding method is not particularly limited, and spin coating method, drop casting method, dip nip method, spray coating method, brush coating method, dipping method, ink jet printing method, electrostatic coating method, compression molding method, extrusion molding method, calendar molding method. Methods, transfer molding methods, injection molding methods, lotto molding methods, lotining molding methods, thermally induced phase separation methods, non-solvent induced phase separation methods, and the like can be employed.
  • the low protein adsorbing material and the low cell adhering material are preferably coating films.
  • the said coating film means the film
  • the method for forming the coating film include spin coating, drop casting, dip nip, spray coating, brush coating, dipping, electrostatic coating, and inkjet printing. Of these, spin coating, drop casting, and dipping are preferred from the standpoint of simplicity.
  • the coating film is preferably obtained by applying a coating composition containing the fluorine-containing copolymer and an organic solvent.
  • the organic solvent methanol, ethanol, 2-propanol, 2-butanol, 1-butanol, 1-hexanol, acetone, tetrahydrofuran, methyl ethyl ketone, dimethylacetamide, dimethylformamide and the like can be used.
  • 2-butanol, 1-butanol, 1-hexanol and tetrahydrofuran are preferred in that a transparent and uniform coating film can be easily obtained.
  • methanol, ethanol, 2-propanol, tetrahydrofuran, and dimethylformamide are preferable.
  • the said coating film can be obtained also from the coating composition which uses weak solvents, such as alcohol, as an organic solvent, it can be manufactured easily.
  • the film thickness is preferably 0.1 to 50 ⁇ m, more preferably 0.5 to 30 ⁇ m, and 1.0. More preferably, it is ⁇ 20 ⁇ m.
  • the low protein adsorptive material may have an adsorption amount of bovine serum albumin of 200 ng / cm 2 or less when contacted with a 0.05 mg / ml bovine serum albumin solution at 23.4 ° C. for 0.5 hour. it can.
  • the low protein adsorptive material may have a bovine plasma fibrinogen adsorption amount of 500 ng / cm 2 or less when contacted with a 0.05 mg / ml bovine plasma fibrinogen solution at 23.4 ° C. for 0.5 hour. it can.
  • the low protein adsorptive material has an adsorption amount of bovine serum-derived immunoglobulin G of 500 ng / cm when contacted with 0.05 mg / ml bovine serum-derived immunoglobulin G solution at 23.4 ° C. for 0.5 hour. 2 or less.
  • the protein-adsorbing material has a surprising effect that protein hardly adsorbs even when contacted with a protein solution of 10 to 0.05 mg / ml. That is, the protein adsorbing material may be a protein adsorbing material that is brought into contact with a protein solution of 10 to 0.05 mg / ml.
  • the protein adsorption amount is measured by the method described in “Protein adsorption test” described later.
  • a method for preventing adsorption of the protein by applying a low protein adsorbent material to at least the surface of an article in contact with a protein solution of 10 to 0.05 mg / ml is also used as the method for using the low white matter adsorbent material. preferable.
  • the low protein adsorptive material Since the low protein adsorptive material has low protein adsorptivity, it can be applied to various articles required to avoid protein adsorption.
  • the shape of the article is not particularly limited, and may be a bag, a sheet, a film, a vial, a petri dish, or a flask.
  • the method for preventing protein adsorption to the article, comprising the step of applying the low protein adsorptive material to the article, is preferable as a method for using the low protein adsorptive material.
  • the protein include plasma proteins and biopharmaceuticals described below.
  • Examples of the plasma protein include albumin, globulin, and fibrinogen.
  • the method for applying the low protein adsorptive material is not particularly limited, and is not particularly limited as long as at least a part of the surface of the article can be covered with the low protein adsorptive material.
  • a method of forming a coating film by applying the fluorine-containing copolymer or a coating composition containing the fluorine-containing copolymer can be mentioned.
  • the method for forming the coating film is as described above.
  • the present invention is also a coating composition comprising the low protein adsorbing material or the low cell adhesion material.
  • the coating composition may contain an organic solvent.
  • the organic solvent methanol, ethanol, 2-propanol, 2-butanol, 1-butanol, 1-hexanol, acetone, tetrahydrofuran, methyl ethyl ketone, dimethylacetamide, dimethylformamide and the like can be used.
  • 2-butanol, 1-butanol, 1-hexanol and tetrahydrofuran are preferred in that a transparent and uniform coating film can be easily obtained.
  • methanol, ethanol, 2-propanol, tetrahydrofuran, and dimethylformamide are preferable.
  • the said coating composition can use weak solvents, such as alcohol, as an organic solvent. Therefore, the present invention can be applied to a base material or an undercoat that is eroded by a strong solvent.
  • the coating composition can be applied to a desired substrate to form a coating film or coating layer.
  • the coating method include spin coating, drop casting, dip nip, spray coating, brush coating, dipping, electrostatic coating, and inkjet printing. Of these, spin coating, drop casting, and dipping are preferred from the standpoint of simplicity.
  • the coating film or coating layer formed from the coating composition preferably has a thickness of 0.1 to 50 ⁇ m, more preferably 0.5 to 30 ⁇ m, and 1.0 to 20 ⁇ m. Is more preferable.
  • the coating composition can be applied to bags, sheets, films, vials, petri dishes, or flasks.
  • the present invention is also a coating layer formed from the low protein adsorbing material or the low cell adhesion material.
  • the said coating layer is obtained by apply
  • the coating method include spin coating, drop casting, dip nip, spray coating, brush coating, dipping, electrostatic coating, and inkjet printing. Of these, spin coating, drop casting, and dipping are preferred from the standpoint of simplicity.
  • the coating layer is preferably obtained by applying a coating composition containing the fluorine-containing copolymer and an organic solvent.
  • the organic solvent methanol, ethanol, 2-propanol, 2-butanol, 1-butanol, 1-hexanol, acetone, tetrahydrofuran, methyl ethyl ketone, dimethylacetamide, dimethylformamide and the like can be used.
  • 2-butanol, 1-butanol, 1-hexanol and tetrahydrofuran are preferred in that a transparent and uniform coating film can be easily obtained.
  • methanol, ethanol, 2-propanol, tetrahydrofuran, and dimethylformamide are preferable.
  • the said coating layer can be obtained also from the coating composition which uses weak solvents, such as alcohol, as an organic solvent, it can be manufactured easily.
  • the coating layer preferably has a thickness of 0.1 to 50 ⁇ m, more preferably 0.5 to 30 ⁇ m, and still more preferably 1.0 to 20 ⁇ m.
  • the coating layer preferably forms the surface of a bag, sheet, film, vial, petri dish, or flask. Bags, sheets, films, vials, petri dishes, or flasks having the coating layer on the surface are less likely to adhere proteins or cells.
  • the present invention is a low protein comprising the above-described low protein adsorbing material, the above coating composition, or the above coating layer, and being a bag, sheet, film, vial, petri dish, or flask. It is also an absorptive article.
  • the present invention comprises the above-described low protein-adsorbing material, the above-described coating composition, or the above-described coating layer, and includes a biopharmaceutical bag, a biopharmaceutical sheet, a biopharmaceutical film, a biopharmaceutical vial, and a biopharmaceutical. It is also a low protein adsorptive article characterized by being a petri dish or a biopharmaceutical flask.
  • biopharmaceutical If the biopharmaceutical is easily adsorbed to an instrument for storing the biopharmaceutical or an instrument for using the biopharmaceutical, the biopharmaceutical cannot be accurately quantified or accurate analysis becomes difficult. Moreover, since biopharmaceuticals are expensive, there is a great economic loss.
  • a biopharmaceutical bag, a biopharmaceutical sheet, a biopharmaceutical film, a biopharmaceutical vial, a biopharmaceutical petri dish, or a biopharmaceutical flask is the above-described low protein adsorptive material, the above-described coating composition, or When the coating layer is composed of the above-described coating layer, the biopharmaceutical is hardly adsorbed, and the biopharmaceutical can be recovered at a high recovery rate.
  • biopharmaceuticals include protein drugs, genetically modified viruses, cellular therapeutic drugs, and nucleic acid drugs.
  • the above protein drugs include: (1) Enzyme proteins: Arterase, Montebrase, Imiglucerase, Veraglucerase alpha, Agarcidase alpha, Agarcidase beta, Laronidase, Alglucosidase alpha, Idursulfase, Galsulfase, Rasburicase, Dornase alpha, (2 ) Proteins of blood coagulation and fibrinolytic factors: Octocog alpha, Luriooctogog alpha, Eptacog alpha (active form), Nonacog alpha, Turoctocog alpha, Eftrenonacog alpha, thrombomodulin alpha, (3) Serum proteins: Human serum albumin, (4) Hormonal proteins: human insulin, insulin lispro, insulin aspart, insulin glargine, i Surin detemir, insulin gur
  • nucleic acid pharmaceuticals include antisense, siRNA, decoy nucleic acid, nucleic acid aptamer, ribozyme, miRNA antisense, miRNAmimic, and CpG oligodeoxynucleotide.
  • the low cell adhesion material Since the low cell adhesion material has low cell adhesion, it can be applied to various articles required to avoid cell adhesion.
  • the shape of the article is not particularly limited, and may be a bag, a sheet, a film, a vial, a petri dish, or a flask.
  • the method for preventing cell adhesion to the article comprising the step of applying the low cell adhesion material to the article, is preferable as a method for using the low cell adhesion material.
  • the method of applying the low cell adhesion material is not particularly limited as long as it is a method capable of covering at least a part of the surface of the article with the low cell adhesion material.
  • a method of forming a coating film by applying the fluorine-containing copolymer or a coating composition containing the fluorine-containing copolymer can be mentioned.
  • the method for forming the coating film is as described above.
  • the present invention comprises the above-mentioned low cell adhesion material, the above-mentioned coating composition, or the above-mentioned coating layer, and is a bag, sheet, film, vial, petri dish or flask, It is also a cell-adhesive article.
  • the present invention comprises the above-mentioned low cell adhesion material, the above-mentioned coating composition, or the above-mentioned coating layer, and comprises a cell culture bag, a cell culture sheet, a cell culture film, a cell culture vial, a cell It is also a low cell adhesion article characterized by being a petri dish for culture or a flask for cell culture.
  • the present invention also relates to a low cell adhesion article comprising the above-mentioned low cell adhesion material, the above coating composition, or the above coating layer, which is a culture container for embryoid body formation.
  • the culture container for embryoid body formation preferably has two or more wells.
  • the shape of each well is not particularly limited, it is preferable that the cross section in the vertical direction has a substantially U-shaped bottom portion and a substantially circular opening.
  • the curvature radius (R ′) of the inner surface of the bottom is preferably 1.0 mm or more and 3.5 mm or less, and more preferably 3.0 mm or less.
  • the diameter of the opening is preferably 4.0 to 11.0 mm.
  • the volume of each well can be 80-500 ⁇ L.
  • it is preferable that at least the inner surface of the well is composed of the low cell adhesion material, the coating composition described above, or the coating layer described above.
  • a cell culture bag, a cell culture sheet, a cell culture film, a cell culture vial, a cell culture petri dish or a cell culture flask is the above-mentioned low cell adhesion material, the above-mentioned coating composition, or the above-mentioned In the case of the coating layer, cells are difficult to adhere, and cells obtained by culturing can be recovered at a high recovery rate and in a preferable state of cell shape and properties.
  • the cells include hematopoietic stem cells, neural stem cells, mesenchymal hepatocytes, mesodermal stem cells, hepatic stem cells, pancreatic stem cells, embryonic stem cells, and the like, cells obtained by differentiating stem cells into target cells, or the immune system Cells, blood cells, neurons, vascular endothelial cells, fibroblasts, epithelial cells, keratinocytes, corneal cells, osteoblasts, chondrocytes, adipocytes, epidermal cells, hepatocytes, pancreatic ⁇ cells, cardiomyocytes, Cells derived from living bodies such as bone marrow cells, amniotic cells, umbilical cord blood cells, NIH3T3 cells, 3T3-L1 cells, 3T3-E1 cells, Hela ( Healer) cells, PC-12 (PC Zelb) cells, P19 (Pineteen) cells, CHO (Chinese hamster oocytes) cells, C S (SEOS
  • the low cell adhesion article of the present invention can suppress adhesion of cultured cells.
  • EBs embryoid bodies
  • ES cells embryonic stem cells
  • iPS cells induced pluripotent stem cells
  • Embryoid body formation is a widely adopted technique because it is effective in inducing differentiation of pluripotent stem cells including ES cells in vitro.
  • embryoid body formation it is important to culture ES cells and iPS cells in a floating state where they are not allowed to adhere to the culture vessel, and it is difficult to form embryoid bodies in adhesion culture using a normal culture vessel.
  • the embryoid body-forming incubator is composed of the above-mentioned low cell adhesion material, the above-mentioned coating composition, or the above-mentioned coating layer, it is uniform, efficient, and high-quality embryoid body Can be formed.
  • the average molecular weight was calculated from data measured by flowing tetrahydrofuran (THF) as a solvent at a flow rate of 1 ml / min by gel permeation chromatography (GPC). RI was used for the detector, and a polystyrene standard sample was used for the calibration curve sample, and the measurement was performed at a flow rate of 1 ml / min and a sample injection amount of 200 ⁇ L.
  • THF tetrahydrofuran
  • GPC gel permeation chromatography
  • Tm Melting point
  • the decomposition temperature was the temperature at the inflection point that showed a significant weight loss in the thermal decomposition curve in the TGA (calorimeter) measurement. Specifically, in the TGA curve, the decomposition temperature was obtained by a method (intersection method) in which an auxiliary line was drawn before and after a large weight loss to obtain an intersection point.
  • QCM-D crystal oscillator microbalance method
  • the amount of protein adsorbed on the coating films of P-1 to P-4 is determined by using the real mass [ng / cm 2 ] from the Sauerbrey formula introduced in the analysis software QTools for the frequency after 30 minutes of adsorption time obtained from the experiment. ] was calculated. Details of the experiment are described in Example 1.
  • Example 1 A 0.1 mass% methanol solution of polymer P-1 was spin-coated at room temperature on the reaction surface of one side of a PET-coated QCM chip (disc shape: diameter 1.4 cm). Specifically, 30 ⁇ L of the above solution was dropped on a QCM chip and rotated at 2000 rpm for 60 seconds. Then, it dried under reduced pressure with the rotary vacuum pump at room temperature for 3 hours, and obtained the coating film (QCM chip).
  • the obtained coating film was incorporated into QCM-D, and a protein adsorption test (derived from bovine serum albumin and fibrinogen bovine plasma) on the coating film was evaluated by the following method. The results of the experiment are shown in Table 2.
  • the amount of protein adsorbed on the coating film was calculated by analyzing the real mass [ng / cm 2 ] from the Sauerbrey equation introduced in the analysis software QTools, based on the frequency after 30 minutes of adsorption time obtained from the experiment.
  • Examples 2-4 Coating films of polymers P-2 to P-4 were obtained in the same manner as in Example 1. The obtained coating film was subjected to a protein adsorption test in the same manner as in Example 1.
  • Comparative Example 1 A 1.0% by mass solution of polyethylene terephthalate (PET) (dissolved in a mixed solvent of trifluoroacetic acid, dichloromethane and 1,1,2,2 tetrachloroethane (mixing ratio 1/4/45)) at room temperature Spin coating was applied to one side reaction surface of a chip (disk shape: diameter 1.4 cm). Specifically, 30 ⁇ L of the above solution was dropped on a QCM chip and rotated at 2000 rpm for 60 seconds. Then, it dried under reduced pressure with the rotary vacuum pump at 50 degreeC for 3 hours, and obtained the coating film. The obtained coating film was subjected to the protein adsorption test in the same manner as in Example 1.
  • PET polyethylene terephthalate
  • Example 5 A 0.1 mass% methanol solution of polymer P-1 was spin-coated on a PET film (1.0 cm ⁇ 1.0 cm) at room temperature. Specifically, 30 ⁇ L of the above solution was dropped on a PET film and rotated at 2000 rpm for 60 seconds. Then, it dried under reduced pressure with the rotary vacuum pump at room temperature for 3 hours, and obtained the coating film. About the obtained coating film
  • NIH3T3 Mouse fibroblasts (NIH3T3) were cultured in Dulbecco's modified Eagle medium (FCS-containing DMEM) containing 10% fetal calf serum (FCS) in an environment of 5% CO 2 and 37 ° C.
  • FCS-containing DMEM Dulbecco's modified Eagle medium
  • FCS fetal calf serum
  • the cell suspension was centrifuged to collect NIH3T3 cells, and then resuspended in FCS-containing DMEM to obtain a solution of 61.2 ⁇ 10 4 cells / mL.
  • the cell suspension was prepared in a medium at 1 ⁇ 10 4 cells / cm 2 for each well of the cell culture plate on which the coating membrane was fixed, and seeded on the coating membrane. After culturing in an environment of 5% CO 2 and 37 ° C. for 1 hour, the coating membrane was washed three times with PBS, and adherent cells on the coating membrane were immobilized using 4% paraformaldehyde PBS solution. After washing with ultrapure water three times, it was dried under reduced pressure with a rotary vacuum pump. Adherent cells were stained with a crystal violet PBS staining solution at a concentration of 1% by mass, and the number of adherent cells was counted by arbitrarily observing three visual fields using an optical microscope.
  • Examples 6-8 Coating films of polymers P-2 to P-4 were obtained in the same manner as in Example 5. The resulting coating film was subjected to a cell adhesion test in the same manner as in Example 5.
  • Comparative Example 2 A cell adhesion test was performed in the same manner as in Example 5 using a PET film (1.0 cm ⁇ 1.0 cm).
  • Examples 9 to 12 and Comparative Example 3 A protein adsorption test was performed in the same manner as in Examples 1 to 4 and Comparative Example 1 except that bovine serum-derived immunoglobulin G (IgG) was used as the protein. The results are shown in Table 4.
  • IgG bovine serum-derived immunoglobulin G

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Surgery (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
  • Materials For Medical Uses (AREA)
  • Addition Polymer Or Copolymer, Post-Treatments, Or Chemical Modifications (AREA)
  • Laminated Bodies (AREA)

Abstract

タンパク質が吸着しにくく、耐熱性、耐アルカリ性及び成形加工性にも優れた新規な低タンパク質吸着性材料を提供する。含フッ素オレフィン単位及びビニルアルコール単位を有する含フッ素共重合体からなることを特徴とする低タンパク質吸着性材料である。

Description

低タンパク質吸着性材料、低タンパク質吸着性物品、低細胞付着性材料および低細胞付着性物品
本発明は、低タンパク質吸着性材料、低タンパク質吸着性物品、低細胞付着性材料および低細胞付着性物品に関する。
血液を保管するための器具、細胞を培養するための器具等を構成する材料として、高分子材料が使用されている。用途によって、高分子材料への血液の吸着を抑制したいとの要求があったり、高分子材料に細胞を吸着させたいとの要求があったりする。これらの要求に応えるために、血液や細胞の高分子材料に対する吸着性を制御する試みがなされてきた。
特許文献１には、表面の少なくとも一部が疎水性弗素樹脂と親水性弗素樹脂とから構成されていることを特徴とする生体親和性基材が記載されている。
特許文献２には、医療用物品であって、埋め込み型医療用具の少なくとも一部に配置されるコーティングを含み、前記コーティングが（ａ）フッ素化ポリマー、及び（ｂ）生体有益性のポリマーを含む医療用物品が記載されている。
特許文献３には、水処理用や医療用に用いられる膜として、テトラフルオロエチレン（ＴＦＥ）と酢酸ビニル（ＶＡｃ）との共重合体又は該共重合体に含まれるアセテート基の少なくとも一部をケン化した共重合体からなり、該共重合体中に含まれるテトラフルオロエチレン含有率が１～７０モル％であることを特徴とする含フッ素共重合体膜が記載されている。
特許文献４には、水系液体の分離膜に用いられる親水化材料として、テトラフルオロエチレンとｔ－ブチルビニルエーテル又は酢酸ビニルとの共重合体を脱保護して得られる共重合体が記載されている。
特許文献５には、支持層表面に低タンパク質吸着層を有する成形物であって、該低タンパク質吸着層が両親媒性の重合体からなり、支持層に共有結合で結合して層を形成していることを特徴とする低タンパク質吸着性成形物が記載されている。
特許文献６には、２－メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリン重合体及び／又は２－メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリン含有成分の共重合体を含むタンパク質吸着防止剤が記載されている。
特許文献７には、水溶性（メタ）アクリル酸エステル重合体中に、水膨潤性粘土鉱物が微分散している高分子複合体を用いた細胞培養基材が記載されている。
特許文献８には、ウエル内表面がポリメタクリレートにて構成されており、足場非依存性細胞の増殖が容易である細胞培養ウエルプレートが記載されている。
特許文献９には、水溶性樹脂を用いた細胞低接着化処理または細胞非接着化処理にて形成されることを特徴とする胚様体形成用培養容器が記載されている。
特開平４－３３６０７２号公報 特表２００７－５１５２０８号公報 特開平５－２６１２５６号公報 国際公開第２０１２／１６５５０３号 特開２００４－２７７６５２号公報 特開平７－８３９２３号公報 特開２０１３－１７６４０２号公報 特開平８－３２２５９３号公報 特開２０１２－２１０１６６号公報
本発明は、タンパク質が吸着しにくく、耐熱性、耐アルカリ性及び成形加工性にも優れた新規な低タンパク質吸着性材料および細胞が付着しにくく、耐熱性、耐アルカリ性及び成形加工性にも優れた新規な低細胞付着性材料を提供することを目的とする。
本発明は、含フッ素オレフィン単位及びビニルアルコール単位を有する含フッ素共重合体からなることを特徴とする低タンパク質吸着性材料である。
本発明の低タンパク質吸着性材料において含フッ素共重合体における含フッ素オレフィン単位の含有率が６０～１０モル％であることが好ましい。
本発明の低タンパク質吸着性材料において含フッ素共重合体における含フッ素オレフィン単位とビニルアルコール単位との交互率が１～７５％であることが好ましい。
本発明の低タンパク質吸着性材料において含フッ素オレフィンは、テトラフルオロエチレン、クロロトリフルオロエチレン及びヘキサフルオロプロピレンからなる群より選択される少なくとも１種であることが好ましい。
本発明の低タンパク質吸着性材料において含フッ素共重合体は、含フッ素オレフィン単位、ビニルアルコール単位及びビニルエステルモノマー単位を有することが好ましい。
上記低タンパク質吸着性材料は、コーティング膜であることが好ましい。
本発明は、上述の低タンパク質吸着性材料を含むことを特徴とするコーティング用組成物でもある。
本発明は、上述の低タンパク質吸着性材料から形成されることを特徴とするコーティング層でもある。
本発明は、上述の低タンパク質吸着性材料、上述のコーティング組成物、又は、上述のコーティング層からなり、バッグ、シート、フィルム、バイアル瓶、シャーレ、又は、フラスコであることを特徴とする低タンパク質吸着性物品でもある。
本発明は、上述の低タンパク質吸着性材料、上述のコーティング組成物、又は、上述のコーティング層からなり、バイオ医薬用バッグ、バイオ医薬用シート、バイオ医薬用フィルム、バイオ医薬用バイアル瓶、バイオ医薬用シャーレ、又は、バイオ医薬用フラスコであることを特徴とする低タンパク質吸着性物品でもある。
本発明は、含フッ素オレフィン単位及びビニルアルコール単位を有する含フッ素共重合体からなることを特徴とする低細胞付着性材料でもある。
本発明の低細胞付着性材料において含フッ素共重合体における含フッ素オレフィン単位の含有率が６０～１０モル％であることが好ましい。
本発明の低細胞付着性材料において含フッ素共重合体における含フッ素オレフィン単位とビニルアルコール単位との交互率が１～７５％であることが好ましい。
本発明の低細胞付着性材料において含フッ素オレフィンは、テトラフルオロエチレン、クロロトリフルオロエチレン及びヘキサフルオロプロピレンからなる群より選択される少なくとも１種であることが好ましい。
本発明の低細胞付着性材料において含フッ素共重合体は、含フッ素オレフィン単位、ビニルアルコール単位及びビニルエステルモノマー単位を有することが好ましい。
上記低細胞付着性材料は、コーティング膜であることが好ましい。
本発明は、上述の低細胞付着性材料を含むことを特徴とするコーティング用組成物でもある。
本発明は、上述の低細胞付着性材料から形成されることを特徴とするコーティング層でもある。
本発明は、上述の低細胞付着性材料、上述のコーティング用組成物、又は、上述のコーティング層からなり、バッグ、シート、フィルム、バイアル瓶、シャーレ、又は、フラスコであることを特徴とする低細胞付着性物品でもある。
本発明は、上述の低細胞付着性材料、上述のコーティング用組成物、又は、上述のコーティング層からなり、細胞培養用バッグ、細胞培養用シート、細胞培養用フィルム、細胞培養用バイアル瓶、細胞培養用シャーレ、又は、細胞培養用フラスコであることを特徴とする低細胞付着性物品でもある。
本発明は、上述の低細胞付着性材料、上述のコーティング用組成物、又は、上述のコーティング層からなり、胚様体形成用培養容器であることを特徴とする低細胞付着性物品でもある。
本発明の低タンパク質吸着性材料は、タンパク質が吸着しにくく、耐熱性、耐アルカリ性及び成形加工性にも優れている。本発明の低タンパク質吸着性材料からは、タンパク質が吸着しにくく、耐熱性、耐アルカリ性及び成形加工性にも優れた物品を得ることができる。また、本発明の低細胞付着性材料は、細胞が付着しにくく、耐熱性、耐アルカリ性及び成形加工性にも優れている。本発明の低細胞付着性材料からは、細胞が付着しにくく、耐熱性、耐アルカリ性及び成形加工性にも優れた物品を得ることができる。
本発明の低タンパク質吸着性物品は、表面にタンパク質が吸着しにくく、耐熱性、耐アルカリ性及び成形加工性にも優れている。また、本発明の低細胞付着性物品は、表面に細胞が付着しにくく、耐熱性、耐アルカリ性及び成形加工性にも優れている。
以下、本発明を具体的に説明する。
本発明の低タンパク質吸着性材料および低細胞付着性材料は、含フッ素オレフィン単位及びビニルアルコール単位（－ＣＨ２－ＣＨ（ＯＨ）－）を有する含フッ素共重合体からなる。上記含フッ素共重合体の低タンパク質吸着性および低細胞付着性は本発明者等によって新たに見出された特性である。
本発明の低タンパク質吸着性材料および低細胞付着性材料は、耐熱性にも優れるので、高温で実施する滅菌処理にも耐え得る。例えば、１２１℃で実施するオートクレーブ滅菌にも耐え得る。本発明の低タンパク質吸着性材料および低細胞付着性材料は、分解温度が１２１℃超であることが好ましい。
本発明の低タンパク質吸着性材料および低細胞付着性材料は、耐アルカリ性にも優れるので、次亜塩素酸を含むアルカリ性の水溶液を使用する消毒にも耐え得る。例えば、本発明の低タンパク質吸着性材料および低細胞付着性材料は、０．５質量％の次亜塩素酸ナトリウム及び０．４質量％の水酸化ナトリウムを含む水溶液中に、２４時間浸漬した場合でも、重量変化率が１０質量％以下である。
本発明の低タンパク質吸着性材料および低細胞付着性材料は、成形加工性にも優れる。例えば、本発明の低タンパク質吸着性材料および低細胞付着性材料が有機溶剤を含む塗料組成物である場合、有機溶剤としてアルコール等の弱溶剤を使用することができるので、強溶剤により侵食される基材や下塗りにも適用できる。
上記含フッ素共重合体は、上記含フッ素オレフィン単位を、上記含フッ素共重合体を構成する全単量体単位の６０～１０モル％含有することが好ましい。より好ましくは４０～１０モル％であり、更に好ましくは３５～２０モル％であり、より更に好ましくは３５～２５モル％である。上記含フッ素オレフィン単位の含有率が上記範囲内にあると、低タンパク質吸着性材料にタンパク質が更に吸着しにくく、また、上記低細胞付着性材料に細胞が更に付着しにくい。上記含フッ素オレフィン単位の含有率が１０モル％未満にあると、含フッ素共重合体の水溶性が高くなり、含フッ素共重合体が水中に溶出しやすくなり機能が発現しにくくなる。上記含フッ素オレフィン単位の含有量が多い方が、上記低タンパク質吸着性材料及び上記低細胞付着性材料の耐熱性、耐アルカリ性及び成形加工性が優れる傾向がある。
上記含フッ素共重合体は、含フッ素オレフィン単位が６０～１０モル％であり、ビニルアルコール単位が４０～９０モル％であることが好ましい。各モノマー単位の含有率としては、含フッ素オレフィン単位が４０～１０モル％であり、ビニルアルコール単位が６０～９０モル％であることがより好ましく、含フッ素オレフィン単位が３５～２０モル％であり、ビニルアルコール単位が６５～８０モル％であることが更に好ましく、含フッ素オレフィン単位が３５～２５モル％であり、ビニルアルコール単位が６５～７５モル％であることがより更に好ましい。各モノマー単位の含有率がこのような範囲であることによって、低タンパク質吸着性材料にタンパク質が更に吸着しにくく、また、上記低細胞付着性材料に細胞が更に付着しにくい。上記含フッ素オレフィン単位の含有率が１０モル％未満にあると、含フッ素共重合体の水溶性が高くなり、含フッ素共重合体が水中に溶出しやすくなり機能が発現しにくくなる。上記含フッ素オレフィン単位の含有量が多い方が、上記低タンパク質吸着性材料及び上記低細胞付着性材料の耐熱性、耐アルカリ性及び成形加工性が優れる傾向がある。
上記含フッ素オレフィン単位とは、含フッ素オレフィンに基づく重合単位を表している。該含フッ素オレフィンは、フッ素原子を有する単量体である。
上記含フッ素オレフィンとしては、テトラフルオロエチレン〔ＴＦＥ〕、フッ化ビニリデン〔ＶｄＦ〕、クロロトリフルオロエチレン〔ＣＴＦＥ〕、フッ化ビニル、へキサフルオロプロピレン〔ＨＦＰ〕、へキサフルオロイソブテン、ＣＨ２＝ＣＺ１（ＣＦ２）ｎ１Ｚ２（式中、Ｚ１はＨ、Ｆ又はＣｌ、Ｚ２はＨ、Ｆ又はＣｌ、ｎ１は１～１０の整数である。）で示される単量体、ＣＦ２＝ＣＦ－ＯＲｆ１（式中、Ｒｆ１は、炭素数１～８のパーフルオロアルキル基を表す。）で表されるパーフルオロ（アルキルビニルエーテル）〔ＰＡＶＥ〕、及び、ＣＦ２＝ＣＦ－ＯＣＨ２－Ｒｆ２（式中、Ｒｆ２は、炭素数１～５のパーフルオロアルキル基）で表されるアルキルパーフルオロビニルエーテル誘導体からなる群より選択される少なくとも１種の含フッ素オレフィンであることが好ましい。
上記ＣＨ２＝ＣＺ１（ＣＦ２）ｎ１Ｚ２で示される単量体としては、ＣＨ２＝ＣＦＣＦ３、ＣＨ２＝ＣＨＣＦ３、ＣＨ２＝ＣＦＣＨＦ２、ＣＨ２＝ＣＣｌＣＦ３等が挙げられる。
上記ＰＡＶＥとしては、パーフルオロ（メチルビニルエーテル）〔ＰＭＶＥ〕、パーフルオロ（エチルビニルエーテル）〔ＰＥＶＥ〕、パーフルオロ（プロピルビニルエーテル）〔ＰＰＶＥ〕、パーフルオロ（ブチルビニルエーテル）等が挙げられる。
上記含フッ素オレフィンとしては、ＴＦＥ、ＣＴＦＥ及びＨＦＰからなる群より選択される少なくとも１種がより好ましく、ＴＦＥが更に好ましい。
上記含フッ素共重合体は、含フッ素オレフィン単位とビニルアルコール単位との交互率が１～７５％であることが好ましい。交互率が上記範囲内にあると、低タンパク質吸着性材料にタンパク質が更に吸着しにくく、また、上記低細胞付着性材料に細胞が更に付着しにくい。より好ましくは１０～６０％であり、更に好ましくは１０～３５％であり、特に好ましくは１０～２０％である。
含フッ素オレフィン単位とビニルアルコール単位との交互率は、重アセトン等の含フッ素共重合体が溶解する溶媒を用いて、含フッ素共重合体の１Ｈ－ＮＭＲ測定を行い、以下の式より３連鎖の交互率として算出できる。
交互率（％）＝Ｃ／（Ａ＋Ｂ＋Ｃ）×１００
Ａ：－Ｖ－Ｖ－Ｖ－のように２つのＶと結合したＶの個数
Ｂ：－Ｖ－Ｖ－Ｔ－のようにＶとＴとに結合したＶの個数
Ｃ：－Ｔ－Ｖ－Ｔ－のように２つのＴに結合したＶの個数
（Ｔ：含フッ素オレフィン単位、Ｖ：ビニルアルコール単位）
Ａ、Ｂ、ＣのＶ単位の数は、１Ｈ－ＮＭＲ測定のビニルアルコール単位（－ＣＨ２－ＣＨ（ＯＨ）－）の３級炭素に結合する主鎖のＨの強度比より算出する。１Ｈ－ＮＭＲ測定による主鎖のＨの強度比の見積もりは、ケン化前の含フッ素共重合体で実施する。
上記含フッ素共重合体は、タンパク質が更に吸着しにくく、また、細胞が更に付着しにくいことから、－ＣＨ（ＯＨ）－ＣＸＹ－（式中、Ｘ及びＹは、同一又は異なり、それぞれＨ、Ｆ又はフルオロアルキル基を表す。ただし、Ｘ及びＹのうち少なくとも一つはＦ又はフルオロアルキル基である。）で表されるフッ素アルコール構造を有することが好ましい。また、上記含フッ素共重合体は、－ＣＨ（ＯＨ）－ＣＦ２－で表されるフッ素アルコール構造を有することがより好ましい。
上記含フッ素共重合体は、更に、－ＣＨ２－ＣＨ（Ｏ（Ｃ＝Ｏ）Ｒ）－（式中、Ｒは、水素原子又は炭素数１～１７の炭化水素基を表す。）で表されるビニルエステルモノマー単位を有するものであってもよい。このように、本発明における含フッ素共重合体が、含フッ素オレフィン単位、ビニルアルコール単位及びビニルエステルモノマー単位を有することもまた、本発明の好適な実施形態の１つである。そして更には、実質的に含フッ素オレフィン単位、ビニルアルコール単位及びビニルエステルモノマー単位のみからなる含フッ素オレフィン／ビニルアルコール／ビニルエステルモノマー共重合体であることもまた、本発明の好適な実施形態の１つである。
上記ビニルエステルモノマー単位は、－ＣＨ２－ＣＨ（Ｏ（Ｃ＝Ｏ）Ｒ）－（式中、Ｒは、水素原子又は炭素数１～１７の炭化水素基を表す。）で表されるモノマー単位であるが、上記式中のＲとしては、炭素数１～１１のアルキル基が好ましく、炭素数１～５のアルキル基がより好ましい。特に好ましくは、炭素数１～３のアルキル基である。
上記ビニルエステルモノマー単位としては、中でも、以下のビニルエステルに由来するモノマー単位などが例示される。
ギ酸ビニル、酢酸ビニル、プロピオン酸ビニル、酪酸ビニル、イソ酪酸ビニル、バレリン酸ビニル、イソバレリン酸ビニル、カプロン酸ビニル、へプチル酸ビニル、カプリル酸ビニル、ピバリン酸ビニル、ペラルゴン酸ビニル、カプリン酸ビニル、ラウリン酸ビニル、ミリスチン酸ビニル、ペンタデシル酸ビニル、パルチミン酸ビニル、マルガリン酸ビニル、ステアリン酸ビニル、オクチル酸ビニル、ベオバ－９（昭和シェル石油（株）製）、ベオバ－１０（昭和シェル石油（株）製）、安息香酸ビニル、バーサチック酸ビニル。
これらの中でも、酢酸ビニル、プロピオン酸ビニル、バーサチック酸ビニルに由来するモノマー単位が好ましい。より好ましくは、酢酸ビニルモノマー単位、プロピオン酸ビニルモノマー単位であり、更に好ましくは、酢酸ビニルモノマー単位である。
上記含フッ素共重合体が、含フッ素オレフィン単位、ビニルアルコール単位及びビニルエステルモノマー単位を有する場合の、各モノマー単位の含有率としては、含フッ素オレフィン単位が６０～１０モル％であり、ビニルアルコール単位が４０～９０モル％であり、ビニルエステルモノマー単位が０モル％より多く３０モル％未満であることが好ましい。各モノマー単位の含有率が上記範囲内にあると、低タンパク質吸着性材料にタンパク質が更に吸着しにくく、また、上記低細胞付着性材料に細胞が更に付着しにくい。各モノマー単位の含有率としては、含フッ素オレフィン単位が６０～１０モル％であり、ビニルアルコール単位が４０～９０モル％であり、ビニルエステルモノマー単位が０より多く１０モル％未満であることがより好ましく、含フッ素オレフィン単位が４０～１０モル％であり、ビニルアルコール単位が６０～９０モル％であり、ビニルエステルモノマー単位が０より多く１．０モル％未満であることが更に好ましく、含フッ素オレフィン単位が３５～２０モル％であり、ビニルアルコール単位が６５～８０モル％であり、ビニルエステルモノマー単位が０より多く１．０モル％未満であることがより更に好ましく、含フッ素オレフィン単位が３５～２５モル％であり、ビニルアルコール単位が６５～７５モル％であり、ビニルエステルモノマー単位が０より多く１．０モル％未満であることがより更にもっと好ましい。上記含フッ素オレフィン単位の含有量が多い方が、上記低タンパク質吸着性材料及び上記低細胞付着性材料の耐熱性、耐アルカリ性及び成形加工性が優れる傾向がある。
上記含フッ素共重合体が、含フッ素オレフィン単位、ビニルアルコール単位及びビニルエステルモノマー単位を有する場合、含フッ素オレフィン単位とビニルアルコール単位及びビニルエステルモノマー単位との交互率は、１～７５％であることが好ましい。交互率が上記範囲内にあると、低タンパク質吸着性材料にタンパク質が更に吸着しにくく、また、上記低細胞付着性材料に細胞が更に付着しにくい。より好ましくは１０～６０％であり、更に好ましくは１０～３５％であり、特に好ましくは１０～２０％である。
含フッ素オレフィン単位とビニルアルコール単位及びビニルエステルモノマー単位との交互率は、重アセトン等の含フッ素共重合体が溶解する溶媒を用いて、含フッ素共重合体の１Ｈ－ＮＭＲ測定を行い、以下の式より３連鎖の交互率として算出できる。
交互率（％）＝Ｃ／（Ａ＋Ｂ＋Ｃ）×１００
Ａ：－Ｖ－Ｖ－Ｖ－のように２つのＶと結合したＶの個数
Ｂ：－Ｖ－Ｖ－Ｔ－のようにＶとＴとに結合したＶの個数
Ｃ：－Ｔ－Ｖ－Ｔ－のように２つのＴに結合したＶの個数
（Ｔ：含フッ素オレフィン単位、Ｖ：ビニルアルコール単位又はビニルエステルモノマー単位）
Ａ、Ｂ、ＣのＶ単位の数は、１Ｈ－ＮＭＲ測定のビニルアルコール単位（－ＣＨ２－ＣＨ（ＯＨ）－）及びビニルエステルモノマー単位（－ＣＨ２－ＣＨ（Ｏ（Ｃ＝Ｏ）Ｒ）－）の３級炭素に結合する主鎖のＨの強度比より算出する。１Ｈ－ＮＭＲ測定による主鎖のＨの強度比の見積もりは、ケン化前の含フッ素共重合体で実施する。
上記含フッ素共重合体は、本発明の効果を損なわない範囲で、含フッ素オレフィン単位、ビニルアルコール単位及びビニルエステルモノマー単位以外の他の単量体単位を有していてもよい。
上記他の単量体としては、フッ素原子を含まない単量体（但し、ビニルアルコール及びビニルエステル単量体を除く）として、例えば、エチレン、プロピレン、１－ブテン、２－ブテン、塩化ビニル、塩化ビニリデン、ビニルエーテル単量体、及び、不飽和カルボン酸からなる群より選択される少なくとも１種のフッ素非含有エチレン性単量体が好ましい。
上記他の単量体単位の合計含有率は、含フッ素共重合体の全単量体単位の０～５０モル％であることが好ましく、０～４０モル％であることがより好ましく、０～３０モル％であることが更に好ましい。
本明細書において、含フッ素共重合体を構成する各単量体単位の含有量は、ＮＭＲ、ＦＴ－ＩＲ、元素分析を単量体の種類によって適宜組み合わせることで算出できる。
上記含フッ素共重合体の重量平均分子量は、特に制限されないが、１０，０００以上であることが好ましい。より好ましくは、１２，０００～２，０００，０００であり、更に好ましくは、１２，０００～１，０００，０００である。
上記重量平均分子量は、ゲル浸透クロマトグラフィー（ＧＰＣ）により求めることができる。
上記含フッ素共重合体は、後述するように、含フッ素オレフィン単位及びビニルエステルモノマー単位を有する共重合体をケン化することにより製造することができる。すなわち、本発明における含フッ素共重合体が、含フッ素オレフィン単位及びビニルエステルモノマー単位を有する共重合体をケン化して得られた共重合体であることもまた、本発明の好適な実施形態の１つである。
以下に、本発明における含フッ素共重合体の製造方法について説明する。
通常、本発明における含フッ素共重合体は、テトラフルオロエチレン等の含フッ素オレフィンと酢酸ビニル等のビニルエステルモノマーとを共重合して、その後、得られた共重合体をケン化することにより製造することができる。上記含フッ素共重合体の重合方法としては、含フッ素オレフィンとビニルエステルモノマーの組成比を、ほぼ一定に保つ条件下で重合を行うことが好ましい。すなわち、上記含フッ素共重合体は、含フッ素オレフィンとビニルエステルモノマーの組成比を、ほぼ一定に保つ条件下で重合して、含フッ素オレフィン単位とビニルエステルモノマー単位とを有する共重合体を得る工程、及び、得られた共重合体をケン化して、含フッ素オレフィン単位及びビニルアルコール単位を有する共重合体を得る工程、からなる製造方法により得られたものであることが好ましい。
上記ビニルエステルモノマーとしては、ギ酸ビニル、酢酸ビニル、プロピオン酸ビニル、酪酸ビニル、イソ酪酸ビニル、バレリン酸ビニル、イソバレリン酸ビニル、カプロン酸ビニル、へプチル酸ビニル、カプリル酸ビニル、ピバリン酸ビニル、ペラルゴン酸ビニル、カプリン酸ビニル、ラウリン酸ビニル、ミリスチン酸ビニル、ペンタデシル酸ビニル、パルチミン酸ビニル、マルガリン酸ビニル、ステアリン酸ビニル、オクチル酸ビニル、ベオバ－９（昭和シェル石油（株）製）、ベオバ－１０（昭和シェル石油（株）製）、安息香酸ビニル、バーサチック酸ビニル等が挙げられるが、中でも入手が容易で安価である点から、酢酸ビニル、プロピオン酸ビニル、バーサチック酸ビニルが好ましく用いられる。
上記ビニルエステルモノマーとしてはこれらの１種を用いてもよいし、２種以上を混合して用いてもよい。
含フッ素オレフィンとビニルエステルモノマーとを共重合させる方法としては、溶液重合、塊状重合、乳化重合、懸濁重合等の重合方法を挙げることができ、工業的に実施が容易であることから乳化重合、溶液重合又は懸濁重合により製造することが好ましいが、この限りではない。
乳化重合、溶液重合又は懸濁重合においては、重合開始剤、溶媒、連鎖移動剤、界面活性剤、分散剤等を使用することができ、それぞれ通常用いられるものを使用することができる。
溶液重合において使用する溶媒は、含フッ素オレフィンとビニルエステルモノマー、及び、合成される含フッ素共重合体を溶解することができるものが好ましく、例えば、酢酸ｎ－ブチル、酢酸ｔ－ブチル、酢酸エチル、酢酸メチル、酢酸プロピル等のエステル類；アセトン、メチルエチルケトン、シクロヘキサノン等のケトン類；ヘキサン、シクロヘキサン、オクタン等の脂肪族炭化水素類；ベンゼン、トルエン、キシレン等の芳香族炭化水素類；メタノール、エタノール、ｔｅｒｔ－ブタノール、２－プロパノール等のアルコール類；テトラヒドロフラン、ジオキサン等の環状エーテル類；ＨＣＦＣ－２２５等の含フッ素溶媒；ジメチルスルホキシド、ジメチルホルムアミド、又はこれらの混合物等が挙げられる。
乳化重合において使用する溶媒としては、例えば、水、水とアルコールとの混合溶媒等が挙げられる。
上記重合開始剤としては、例えば、ジイソプロピルパーオキシジカーボネート（ＩＰＰ）、ジ－ｎ－プロピルパーオキシジカーボネート（ＮＰＰ）等のパーオキシカーボネート類やｔ－ブチルパーオキシピバレート（例えば日油株式会社製のパーブチルＰＶ）等のパーオキシエステル類に代表される油溶性ラジカル重合開始剤や、例えば、過硫酸、過ホウ酸、過塩素酸、過リン酸、過炭酸のアンモニウム塩、カリウム塩、ナトリウム塩等の水溶性ラジカル重合開始剤等を使用できる。特に乳化重合においては、過硫酸アンモニウム、過硫酸カリウムが好ましい。
上記界面活性剤としては、通常用いられる界面活性剤が使用でき、例えば、非イオン性界面活性剤、アニオン性界面活性剤、カチオン性界面活性剤等が使用できる。また、含フッ素系界面活性剤を用いてもよい。
懸濁重合において用いられる上記分散剤としては、通常の懸濁重合に用いられる部分鹸化ポリ酢酸ビニル、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースなどの水溶性セルロースエーテル、アクリル酸系重合体、ゼラチンなどの水溶性ポリマーを例示できる。懸濁重合は、水／単量体の比率が通常質量比で１．５／１～３／１である条件下で行なわれ、分散剤は単量体１００質量部に対し０．０１～０．１質量部が用いられる。また、必要に応じて、ポリリン酸塩のようなｐＨ緩衝剤を用いることもできる。
上記連鎖移動剤としては、例えば、エタン、イソペンタン、ｎ－ヘキサン、シクロヘキサン等の炭化水素類；トルエン、キシレン等の芳香族類；アセトン等のケトン類；酢酸エチル、酢酸ブチル等の酢酸エステル類；メタノール、エタノール等のアルコール類；メチルメルカプタン等のメルカプタン類；四塩化炭素、クロロホルム、塩化メチレン、塩化メチル等のハロゲン化炭化水素等が挙げられる。
上記連鎖移動剤の添加量は用いる化合物の連鎖移動定数の大きさにより変わりうるが、通常重合溶媒に対して０．００１～１０質量％の範囲で使用される。
重合温度としては、含フッ素オレフィンとビニルエステルモノマーの反応中の組成比がほぼ一定になる範囲であればよく、０～１００℃であってよい。
重合圧力としては、含フッ素オレフィンとビニルエステルモノマーの反応中の組成比がほぼ一定になる範囲であればよく、０～１０ＭＰａＧであってよい。
酢酸ビニルに由来するアセテート基のケン化は従来からよく知られており、アルコリシスや、酸やアルカリを用いた加水分解等の従来公知の方法によって行うことができる。このケン化によって、アセテート基（－ＯＣＯＣＨ３）は、水酸基（－ＯＨ）に変換される。他のビニルエステルモノマーにおいても同様に、従来公知の方法によってケン化され、水酸基を得ることができる。
含フッ素オレフィン単位とビニルエステルモノマー単位とを有する共重合体をケン化して本発明における含フッ素共重合体を得る場合のケン化度は、本発明における含フッ素共重合体の各モノマー単位の含有率が上述した範囲となるような範囲であればよく、具体的には９０％以上が好ましく、９５％以上がより好ましく、９９％以上が更に好ましい。
上記ケン化度は、含フッ素共重合体のＩＲ測定又は１Ｈ－ＮＭＲ測定により、以下の式から算出される。
ケン化度（％）＝Ｄ／（Ｄ＋Ｅ）×１００
Ｄ：含フッ素共重合体中のビニルアルコール単位数
Ｅ：含フッ素共重合体中のビニルエステルモノマー単位数
上記低タンパク質吸着性材料及び上記低細胞付着性材料は、本発明の効果を損なわない範囲で、上記含フッ素共重合体以外の他の成分を更に含んでもよい。
上記他の成分としては、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリエチレングリコール等の親水性高分子等が挙げられる。
上記他の成分の配合量は、上記含フッ素共重合体１００質量％に対して、１～３０質量％であることが好ましく、１～１０質量％であることがより好ましい。
上記低タンパク質吸着性材料及び上記低細胞付着性材料は、表面が有機溶剤を含む水溶液により処理されていることが好ましい。この表面処理により、上記低タンパク質吸着性材料及び上記低細胞付着性材料の表面に更に水酸基構造が増加するため、タンパク質の吸着及び細胞の付着がより強く抑制される。
上記表面処理で使用することが可能な有機溶剤としては、水に可溶で上記含フッ素共重合体を溶解する有機溶剤であれば特に限定されないが、メタノール、エタノール、２－プロパノール、アセトン、テトラヒドロフラン、メチルエチルケトン、ジメチルアセトアミド、ジメチルホルムアミド等が挙げられる。中でもメタノール、エタノール、２－プロパノール、テトラヒドロフランが好ましい。
上記有機溶剤を含む水溶液による処理の方法としては、当該水溶液で上記低タンパク質吸着性材料及び上記低細胞付着性材料の表面を濡らす方法が挙げられる。
上記低タンパク質吸着性材料及び上記低細胞付着性材料は、用途に応じて種々の形状に成形されて提供される。成形方法は特に限定されず、スピンコート法、ドロップキャスト法、ディップニップ法、スプレーコート法、刷毛塗り法、浸漬法、インクジェットプリント法、静電塗装法、圧縮成形法、押出成形法、カレンダー成形法、トランスファー成形法、射出成形法、ロト成形法、ロトライニング成形法、熱誘起相分離法、非溶媒誘起相分離法等が採用できる。
多様な形状の物品に適用できることから、上記低タンパク質吸着性材料及び上記低細胞付着性材料は、コーティング膜であることが好ましい。上記コーティング膜とは、上記含フッ素共重合体又は上記含フッ素共重合体を含む塗料組成物を塗布することにより得られる膜をいう。コーティング膜の製膜方法としては、スピンコート法、ドロップキャスト法、ディップニップ法、スプレーコート法、刷毛塗り法、浸漬法、静電塗装法、インクジェットプリント法等が挙げられる。中でも、簡便性の点で、スピンコート法、ドロップキャスト法、浸漬法が好ましい。
上記コーティング膜は、上記含フッ素共重合体及び有機溶剤を含む塗料組成物を塗布することにより得られることが好ましい。有機溶剤としては、メタノール、エタノール、２－プロパノール、２－ブタノール、１－ブタノール、１－ヘキサノール、アセトン、テトラヒドロフラン、メチルエチルケトン、ジメチルアセトアミド、ジメチルホルムアミド等が使用できる。なかでも、透明で均一なコーティング膜が容易に得られる点で、２－ブタノール、１－ブタノール、１－ヘキサノール、テトラヒドロフランが好ましい。また、含フッ素共重合体の溶解性の観点からは、メタノール、エタノール、２－プロパノール、テトラヒドロフラン、ジメチルホルムアミドが好ましい。
上記コーティング膜は、有機溶剤としてアルコール等の弱溶剤を使用した塗料組成物からも得ることができるので、容易に製造することができる。
上記低タンパク質吸着性材料及び上記低細胞付着性材料がコーティング膜である場合、その膜厚は０．１～５０μｍであることが好ましく、０．５～３０μｍであることがより好ましく、１．０～２０μｍであることが更に好ましい。
上記低タンパク質吸着性材料は、０．０５ｍｇ／ｍｌのウシ血清アルブミン溶液と２３．４℃で０．５時間接触させた場合の、ウシ血清アルブミンの吸着量を２００ｎｇ／ｃｍ２以下とすることができる。
上記低タンパク質吸着性材料は、０．０５ｍｇ／ｍｌのウシ血漿フィブリノーゲン溶液と２３．４℃で０．５時間接触させた場合の、ウシ血漿フィブリノーゲンの吸着量を５００ｎｇ／ｃｍ２以下とすることができる。
上記低タンパク質吸着性材料は、０．０５ｍｇ／ｍｌのウシ血清由来免疫グロブリンＧ溶液と２３．４℃で０．５時間接触させた場合の、ウシ血清由来免疫グロブリンＧの吸着量を５００ｎｇ／ｃｍ２以下とすることができる。
上記タンパク質吸着性材料は、１０～０．０５ｍｇ／ｍｌのタンパク質溶液と接触させた場合でも、タンパク質がほとんど吸着しないという、驚くべき効果を奏する。すなわち、上記タンパク質吸着性材料は、１０～０．０５ｍｇ／ｍｌのタンパク質溶液と接触させるタンパク質吸着性材料であってよい。
上記のタンパク質の吸着量は、後述する「タンパク質吸着試験」に記載の方法により測定する。
１０～０．０５ｍｇ／ｍｌのタンパク質溶液と接触する物品の少なくとも表面に、低タンパク質吸着性材料を適用することにより、上記タンパク質の吸着を防止する方法も、上記低白質吸着性材料の使用方法として好ましい。
上記低タンパク質吸着性材料は、タンパク質の吸着性が低いことから、タンパク質の吸着を避けることが要求される種々の物品に適用できる。上記物品の形状は特に限定されず、バッグ、シート、フィルム、バイアル瓶、シャーレ、又は、フラスコであってよい。
上記低タンパク質吸着性材料を上記物品に適用する工程を含むことを特徴とする、上記物品にタンパク質の吸着を防止する方法は、上記低タンパク質吸着性材料の使用方法として好ましい。上記タンパク質としては、血漿タンパク質、後述するバイオ医薬を挙げることができる。上記血漿タンパク質としては、アルブミン、グロブリン、フィブリノーゲン等が挙げられる。上記低タンパク質吸着性材料を適用する方法は、特に限定されず、物品の少なくとも表面の一部を上記低タンパク質吸着性材料で覆うことができる方法であれば特に限定されない。例えば、上記含フッ素共重合体又は上記含フッ素共重合体を含む塗料組成物を塗布することによりコーティング膜を成膜する方法が挙げられる。上記コーティング膜の成膜方法は上述したとおりである。
本発明は、上記低タンパク質吸着性材料又は上記低細胞付着性材料を含むことを特徴とするコーティング用組成物でもある。
上記コーティング用組成物は、有機溶剤を含むものであってもよい。有機溶剤としては、メタノール、エタノール、２－プロパノール、２－ブタノール、１－ブタノール、１－ヘキサノール、アセトン、テトラヒドロフラン、メチルエチルケトン、ジメチルアセトアミド、ジメチルホルムアミド等が使用できる。なかでも、透明で均一なコーティング膜が容易に得られる点で、２－ブタノール、１－ブタノール、１－ヘキサノール、テトラヒドロフランが好ましい。また、含フッ素共重合体の溶解性の観点からは、メタノール、エタノール、２－プロパノール、テトラヒドロフラン、ジメチルホルムアミドが好ましい。
上記コーティング組成物は、有機溶剤としてアルコール等の弱溶剤を使用することができる。従って、強溶剤により侵食される基材や下塗りにも適用できる。
上記コーティング用組成物は、所望の基材に塗布して、コーティング膜又はコーティング層を形成することができる。塗布方法としては、スピンコート法、ドロップキャスト法、ディップニップ法、スプレーコート法、刷毛塗り法、浸漬法、静電塗装法、インクジェットプリント法等が挙げられる。中でも、簡便性の点で、スピンコート法、ドロップキャスト法、浸漬法が好ましい。
上記コーティング用組成物から形成されたコーティング膜又はコーティング層は、膜厚が０．１～５０μｍであることが好ましく、０．５～３０μｍであることがより好ましく、１．０～２０μｍであることが更に好ましい。
上記コーティング用組成物は、バッグ、シート、フィルム、バイアル瓶、シャーレ、又は、フラスコに適用することができる。
本発明は、上記低タンパク質吸着性材料又は上記低細胞付着性材料から形成されることを特徴とするコーティング層でもある。
上記コーティング層は、上記含フッ素共重合体又は上記含フッ素共重合体を含む塗料組成物を塗布することにより得られる。塗布方法としては、スピンコート法、ドロップキャスト法、ディップニップ法、スプレーコート法、刷毛塗り法、浸漬法、静電塗装法、インクジェットプリント法等が挙げられる。中でも、簡便性の点で、スピンコート法、ドロップキャスト法、浸漬法が好ましい。
上記コーティング層は、上記含フッ素共重合体及び有機溶剤を含む塗料組成物を塗布することにより得られることが好ましい。有機溶剤としては、メタノール、エタノール、２－プロパノール、２－ブタノール、１－ブタノール、１－ヘキサノール、アセトン、テトラヒドロフラン、メチルエチルケトン、ジメチルアセトアミド、ジメチルホルムアミド等が使用できる。なかでも、透明で均一なコーティング膜が容易に得られる点で、２－ブタノール、１－ブタノール、１－ヘキサノール、テトラヒドロフランが好ましい。また、含フッ素共重合体の溶解性の観点からは、メタノール、エタノール、２－プロパノール、テトラヒドロフラン、ジメチルホルムアミドが好ましい。
上記コーティング層は、有機溶剤としてアルコール等の弱溶剤を使用した塗料組成物からも得ることができるので、容易に製造することができる。
上記コーティング層は、膜厚が０．１～５０μｍであることが好ましく、０．５～３０μｍであることがより好ましく、１．０～２０μｍであることが更に好ましい。
上記コーティング層は、バッグ、シート、フィルム、バイアル瓶、シャーレ、又は、フラスコの表面を形成するものであることが好ましい。上記コーティング層を表面に備えるバッグ、シート、フィルム、バイアル瓶、シャーレ、又は、フラスコは、タンパク質又は細胞が付着しにくい。
本発明は、上述の低タンパク質吸着性材料、上述のコーティング組成物、又は、上述のコーティング層からなり、バッグ、シート、フィルム、バイアル瓶、シャーレ、又は、フラスコであることを特徴とする低タンパク質吸着性物品でもある。
本発明は、上述の低タンパク質吸着性材料、上述のコーティング組成物、又は、上述のコーティング層からなり、バイオ医薬用バッグ、バイオ医薬用シート、バイオ医薬用フィルム、バイオ医薬用バイアル瓶、バイオ医薬用シャーレ、又は、バイオ医薬用フラスコであることを特徴とする低タンパク質吸着性物品でもある。
バイオ医薬を保管するための器具やバイオ医薬を使用するための器具にバイオ医薬が吸着しやすいと、バイオ医薬を正確に定量できなかったり、正確な分析が困難になったりする。また、バイオ医薬は高価であるため、経済的損失も大きい。バイオ医薬用バッグ、バイオ医薬用シート、バイオ医薬用フィルム、バイオ医薬用バイアル瓶、バイオ医薬用シャーレ、又は、バイオ医薬用フラスコが、上述の低タンパク質吸着性材料、上述のコーティング組成物、又は、上述のコーティング層からなるものであると、バイオ医薬が吸着しにくく、バイオ医薬を高い回収率で回収することができる。
バイオ医薬としては、タンパク質医薬品、遺伝子組み換えウイルス、細胞性治療薬、核酸医薬品等を挙げることができる。
上記タンパク質医薬品としては、（１）酵素類のタンパク質：アルテラーゼ、モンテブラーゼ、イミグルセラーゼ、ベラグルセラーゼ　アルファ、アガルシダーゼ　アルファ、アガルシダーゼ　ベータ、ラロニダーゼ、アルグルコシダーゼ　アルファ、イデュルスルファーゼ、ガルスルファーゼ、ラスブリカーゼ、ドルナーゼ　アルファ、（２）血液凝固線溶系因子類のタンパク質：オクトコグ　アルファ、ルリオクトコグ　アルファ、エプタコグ　アルファ（活性型）、ノナコグアルファ、ツロクトコグ　アルファ、エフトレノナコグ　アルファ、トロンボモデュリン　アルファ、（３）血清タンパク質類：人血清アルブミン、（４）ホルモン類のタンパク質：ヒトインスリン、インスリン　リスプロ、インスリン　アスパルト、インスリン　グラルギン、インスリン　デテミル、インスリン　グルリジン、インスリン　デグルデク、インスリン　デグルデク及びインスリン　アスパルト、ソマトロピン、ペグビソマント、メカセルミン、カルペリチド、グルカゴン、ホリトロピン　アルファ、フォリトロピン　ベータ、リラグルチド、テリパラチド、メトレレプチン、（５）ワクチン類のタンパク質：組換え沈降Ｂ型肝炎ワクチン（酵母由来）、乾燥細胞培養不活化Ａ型肝炎ワクチン、組換え沈降２価ヒトパピローマウイルス様粒子ワクチン（イラクサギンウワバ細胞由来）、組換え沈降４価ヒトパピローマウイルス様粒ワクチン（酵母由来）、（６）インターフェロン類のタンパク質：インターフェロン　アルファ（ＮＡＭＡＬＷＡ）、インターフェロン　アルファ－２ｂ、インターフェロン　アルファ（ＢＡＬＬ－１）、インターフェロン　アルファコン－１、インターフェロン　ベータ、インターフェロン　ベータ－１ａ、インターフェロン　ベータ－１ｂ、インターフェロン　ガンマ－１ａ、ペグインターフェロン　アルファ－２ａ、ペグインターフェロン　アルファ－２ｂ、（７）エリスロポエチン類のタンパク質：エポエチン　アルファ、エポエチン　ベータ、ダルベポエチン　アルファ、エポエチン　ベータ　ペゴル、エポエチン　カッパ、（８）サイトカイン類のタンパク質：フィルグラスチム、ペグフィルグラスチム、レノグラスチム、ナルトグラスチム、セルモロイキン、テセロイキン、トラフェルミン、（９）抗体類のタンパク質：ムロモナブ－ＣＤ３、トラスツズマブ、リツキシマブ、パリビズマブ、インフリキシマブ、バシリキシマブ、トシリズマブ、ゲムツズマブ　オゾガマイシン、ベバシズマブ、イブリツモマブ　チウキセタン、アダリムマブ、セツキシマブ、ラニビズマブ、オマリズマブ、エクリズマブ、パニツムマブ、ウステキヌマブ、ゴリムマブ、カナキヌマブ、デノスマブ、モガムリズマブ、セルトリズマブ　ペゴル、オファツムマブ、ペルツズマブ、トラスツズマブ　エムタンシン、ブレンツキシマブ　ベドチン、ナタリズマブ、ニボルマブ、アレムツズマブ、（１０）融合タンパク質類：エタネルセプト、アバタセプト、ロミプロスチム、アフリベルセプト等を挙げることができる。
また、核酸医薬品としては、アンチセンス、ｓｉＲＮＡ、デコイ核酸、核酸アプタマー、リボザイム、ｍｉＲＮＡアンチセンス、ｍｉＲＮＡｍｉｍｉｃ、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチドなどを挙げることができる。
上記低細胞付着性材料は、細胞の付着性が低いことから、細胞の付着を避けることが要求される種々の物品に適用できる。上記物品の形状は特に限定されず、バッグ、シート、フィルム、バイアル瓶、シャーレ、又は、フラスコであってよい。
上記低細胞付着性材料を上記物品に適用する工程を含むことを特徴とする、上記物品に細胞の付着を防止する方法は、上記低細胞付着性材料の使用方法として好ましい。上記低細胞付着性材料を適用する方法は、特に限定されず、物品の少なくとも表面の一部を上記低細胞付着性材料で覆うことができる方法であれば特に限定されない。例えば、上記含フッ素共重合体又は上記含フッ素共重合体を含む塗料組成物を塗布することによりコーティング膜を成膜する方法が挙げられる。上記コーティング膜の成膜方法は上述したとおりである。
本発明は、上述の低細胞付着性材料、上述のコーティング用組成物、又は、上述のコーティング層からなり、バッグ、シート、フィルム、バイアル瓶、シャーレ、又は、フラスコであることを特徴とする低細胞付着性物品でもある。
本発明は、上述の低細胞付着性材料、上述のコーティング用組成物、又は、上述のコーティング層からなり、細胞培養用バッグ、細胞培養用シート、細胞培養用フィルム、細胞培養用バイアル瓶、細胞培養用シャーレ、又は、細胞培養用フラスコであることを特徴とする低細胞付着性物品でもある。
本発明は、また、上述の低細胞付着性材料、上述のコーティング用組成物、又は、上述のコーティング層からなり、胚様体形成用培養容器であることを特徴とする低細胞付着性物品でもある。上記胚様体形成用培養容器は、２個以上のウェルを有することが好ましい。各ウェルの形状は特に限定されないが、垂直方向における断面が略Ｕ字形状の底部、及び、略円形の開口部を有することが好ましい。更に、上記底部内面の曲率半径（Ｒ’）が、１．０ｍｍ以上、３．５ｍｍ以下であることが好ましく、３．０ｍｍ以下とすることがより好ましい。上記開口部の直径は４．０～１１．０ｍｍとすることが好ましい。各ウェルの容量は８０～５００μＬとすることができる。上記胚様体形成用培養容器は、少なくともウェルの内面が上記低細胞付着性材料、上述のコーティング用組成物、又は、上述のコーティング層からなるものであることが好ましい。
細胞を培養するために使用する器具に細胞が付着しやすいと、培養した細胞の回収率が低下したり、細胞が増殖している形状のまま回収できなかったり、細胞の性質が変化してしまったりする。細胞培養用バッグ、細胞培養用シート、細胞培養用フィルム、細胞培養用バイアル瓶、細胞培養用シャーレ又は細胞培養用フラスコが、上述の低細胞付着性材料、上述のコーティング用組成物、又は、上述のコーティング層からなるものであると、細胞が付着しにくく、培養により得られた細胞を高い回収率で、かつ細胞の形状や性質を好ましい状態で回収することができる。
上記細胞としては、造血幹細胞、神経幹細胞、間葉系肝細胞、中胚葉系幹細胞、肝幹細胞、膵幹細胞、胚性幹細胞等の幹細胞や、幹細胞を目的の細胞に分化させた細胞、あるいは免疫系細胞、血球系細胞、神経細胞、血管内皮細胞、繊維芽細胞、上皮細胞、角化細胞、角膜細胞、骨芽細胞、軟骨細胞、脂肪細胞、表皮細胞、肝細胞、膵β細胞、心筋細胞、骨髄細胞、羊膜細胞、臍帯血細胞などの生体由来の細胞、あるいはＮＩＨ３Ｔ３（エヌアイエイチスリーティースリー）細胞、３Ｔ３－Ｌ１（スリーティースリーエルワン）細胞、３Ｔ３－Ｅ１（スリーティースリーイーワン）細胞、Ｈｅｌａ（ヒーラ）細胞、ＰＣ－１２（ピーシーツェルブ）細胞、Ｐ１９（ピーナインティーン）細胞、ＣＨＯ（チャイニーズハムスター卵母）細胞、ＣＯＳ（シーオーエス）細胞、ＨＥＫ（エッチイーケー）細胞、Ｈｅｐ－Ｇ２（ヘップジーツー）細胞、Ｌ９２９（エルナインツーナイン）細胞、Ｃ２Ｃ１２（シーツーシーツェルブ）細胞、Ｄａｕｄｉ（ダウディ）細胞、Ｊｕｒｋａｔ（ジャーカット）細胞、ＫＧ－１ａ（ケージーワンエー）細胞、ＣＴＬＬ－２（シーティーエルエルツー）細胞、ＮＳ－１（エヌエスワン）細胞、ＭＯＬＴ－４（エムオーエルティーフォー）細胞、ＨＵＴ７８（エッチユーティーセブンティエイト）細胞、ＭＴ－４（エムティーフォー）細胞などの株化細胞、あるいは抗体産生細胞である各種ハイブリドーマ細胞株、あるいはこれら細胞を遺伝子工学的に改変した細胞などが挙げられる。
特に高分子材料に付着しやすい細胞である接着性細胞を培養する場合であっても、本発明の低細胞付着性物品であれば、培養した細胞の付着を抑制することができる。
上記細胞としては、胚性幹細胞（ＥＳ細胞）や人工多能性幹細胞（ｉＰＳ細胞）などの胚様体（ｅｍｂｒｙｏｉｄ　ｂｏｄｙ：ＥＢ）も挙げられる。
胚様体形成は、ＥＳ細胞をはじめとする多能性幹細胞をｉｎ　ｖｉｔｒｏで分化誘導する際に有効であるため、広く採用されている手法である。胚様体形成はＥＳ細胞やｉＰＳ細胞を培養容器に接着させない浮遊状態で培養することが重要であり、通常の培養容器を使用した接着培養では胚様体は形成されにくい。上記胚様体形成用培養器が、上述の低細胞付着性材料、上述のコーティング用組成物、又は、上述のコーティング層からなるものであると、均一で、効率よく、質の高い胚様体を形成することができる。
つぎに本発明を実施例をあげて説明するが、本発明はかかる実施例のみに限定されるものではない。
実施例の各数値は以下の方法により測定した。
〔フッ素含有率による含フッ素オレフィン単位の含有率の測定〕
酸素フラスコ燃焼法により試料１０ｍｇを燃焼し、分解ガスを脱イオン水２０ｍｌに吸収させ、吸収液中のフッ素イオン濃度をフッ素選択電極法で測定することにより求めた（質量％）。ポリマー中の含フッ素オレフィン単位の含有率（モル％）は、ケン化前のポリマーのフッ素含有率から計算した。
〔ＮＭＲ（核磁気共鳴法）による交互率の測定〕
１Ｈ－ＮＭＲ測定条件：４００ＭＨｚ（テトラメチルシラン＝０ｐｐｍ）
〔分子量及び分子量分布〕
ゲルパーミエーションクロマトグラフィー（ＧＰＣ）により、溶媒としてテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）を流速１ｍｌ／分で流して測定したデータより、平均分子量を算出した。
検出器にはＲＩ、検量線サンプルはポリスチレン標準サンプルを使用し、流速１ｍｌ／分、サンプル打込量２００μＬで測定を行った。
〔ＩＲ分析によるケン化度の測定〕
フーリエ変換赤外分光光度計で室温にて測定した。
〔融点（Ｔｍ）〕
ＤＳＣ（示差走査熱量計）を用いて、１０℃／分の条件で昇温（セカンドラン）したときの融解熱曲線における極大値に対応する温度をＴｍ（℃）とした。
〔分解温度〕
分解温度は、ＴＧＡ（熱量測定装置）の測定における熱分解曲線において大きく重量減少を示す変曲点の温度とした。具体的には、ＴＧＡ曲線において、大きな重量減少の前後で補助線を引いて交点を求める方法（交点法）により分解温度を求めた。
〔水晶発振子マイクロバランス法（ＱＣＭ－Ｄ）〕
ＱＣＭ－Ｄ（メイワフォーシス社製ＱＣＭ－Ｄ３００）を用いて、Ｐ－１～４のコーティング膜上に吸着したタンパク質量を求めた。ＱＣＭチップは、ｑｓｅｎｓｅ社製のもの（ＱＳＸ　３０１、Ａｕ）を使用した。このＱＣＭチップにまずＰＥＴをコートした後、Ｐ－１～４をコートしたものを測定に用いた。ＱＣＭチップへのＰＥＴコーティング方法については、比較例１に詳細を示している。
Ｐ－１～４のコーティング膜に吸着したタンパク質量の求め方は、実験から得られた吸着時間３０分後の周波数を解析ソフトＱＴｏｏｌｓに導入されているＳａｕｅｒｂｒｅｙの式からＡｒｅａｌ　ｍａｓｓ［ｎｇ／ｃｍ２］の解析を行い算出した。実験の詳細については、実施例１に記す。
実施例で使用したポリマーを表１に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000001
耐アルカリ性の評価
ポリマーＰ－２が１３質量％、メタノールが８７質量％からなるポリマー溶液２．３ｇを調製し、直径約５８ｍｍのシャーレ上に展開した後乾燥させてポリマーフィルムを得た。該ポリマーフィルムを１００ｍｇ、０．５質量％の次亜塩素酸ナトリウム及び０．４質量％の水酸化ナトリウムを含む水溶液に浸漬し、２４時間室温にて保持した。重量変化率を測定した結果、約１％しか減少しておらず、十分な耐アルカリ性が確認できた。また、目視による、外観の変化もなかった。
実施例１
ポリマーＰ－１の０．１質量％メタノール溶液を室温でＰＥＴコーティング済みＱＣＭチップ（円盤状：直径１．４ｃｍ）の片側反応面へスピンコートした。具体的には、上記溶液３０μＬをＱＣＭチップ上に滴下し、６０秒間、２０００ｒｐｍ回転させた。その後、室温にて３時間、ロータリー真空ポンプにて減圧乾燥し、コーティング膜（ＱＣＭチップ）を得た。
得られたコーティング膜をＱＣＭ－Ｄに組み込み、以下の方法でコーティング膜上のタンパク質吸着試験（ウシ血清アルブミンとフィブリノーゲン　ウシ血漿由来）を評価した。実験の結果を表２に示す。
〔タンパク質吸着試験〕
上記の方法でＰＥＴコーティング済みＱＣＭチップに重ねてＰ－１をコーティングしたＱＣＭチップをＱＣＭ－Ｄに装着させ、２３．４℃環境下のリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中で安定化を行った。
周波数のベースラインが平行であることを確認した上、タンパク質を含むリン酸緩衝生理食塩水溶液（タンパク質の濃度０．０５ｍｇ／ｍＬ）を０．５ｍＬ注入し、吸着時間３０分間の周波数の変化量を測定した。タンパク質としては、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）またはウシ血漿フィブリノーゲン（ＢＰＦ）を使用した。
コーティング膜に吸着したタンパク質量は、実験から得られた吸着時間３０分後の周波数を解析ソフトＱＴｏｏｌｓに導入されているＳａｕｅｒｂｒｅｙの式からＡｒｅａｌ　ｍａｓｓ［ｎｇ／ｃｍ２］の解析を行い算出した。
実施例２～４
実施例１と同様の方法でポリマーＰ－２からＰ－４のコーティング膜を得た。得られたコーティング膜について実施例１と同様の方法でタンパク質吸着試験を実施した。
比較例１（ＰＥＴ）
ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）の１．０質量％溶液（トリフルオロ酢酸、ジクロロメタンと１，１，２，２テトラクロロエタンの混合溶剤（混合比１／４／４５）に溶解させたもの）を室温でＱＣＭチップ（円盤状：直径１．４ｃｍ）の片側反応面へスピンコートした。具体的には、上記溶液３０μＬをＱＣＭチップ上に滴下し、６０秒間、２０００ｒｐｍ回転させた。その後、５０℃にて３時間、ロータリー真空ポンプにて減圧乾燥し、コーティング膜を得た。
得られたコーティング膜について実施例１と同様にタンパク質の吸着試験を実施した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000002
実施例５
ポリマーＰ－１の０．１質量％メタノール溶液を室温でＰＥＴフィルム（１．０ｃｍ×１．０ｃｍ）上へスピンコートした。具体的には、上記溶液３０μＬをＰＥＴフィルム上に滴下し、６０秒間、２０００ｒｐｍ回転させた。その後、室温にて３時間、ロータリー真空ポンプにて減圧乾燥し、コーティング膜を得た。
得られたコーティング膜について、以下の方法で細胞の接着試験を評価した。結果を表３に示す。
〔細胞接着試験〕
ＰＥＴフィルム（１．０ｃｍ×１．０ｃｍ）上にＰ－１をスピンコートしたコーティング膜を２４穴の細胞培養プレートの底に少量のシリコン接着剤で固定した。超純水で３回洗浄した後に３７℃環境下のＰＢＳ中で１２時間浸漬させた。
マウス繊維芽細胞（ＮＩＨ３Ｔ３）を５％ＣＯ２、３７℃環境下で１０％ウシ胎児血清（ＦＣＳ）を含有するダルベッコ改変イーグル培地（ＦＣＳ含有ＤＭＥＭ）中で培養した。培養したＮＩＨ３Ｔ３細胞を滅菌ＰＢＳで一回洗浄し、１ｍＬの０．０２％　エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）溶液と１ｍＬの０．２５％トリプシン溶液を加え細胞培養プレートから剥がした。その細胞懸濁液を遠心してＮＩＨ３Ｔ３細胞を回収した後、ＦＣＳ含有ＤＭＥＭで再懸濁し６１．２×１０４個／ｍＬの溶液を得た。
細胞懸濁液は、コーティング膜を固定した細胞培養プレートの各ウェルに対して１×１０４個／ｃｍ２に培地で調製し、コーティング膜上に播種した。５％ＣＯ２、３７℃環境下で１時間培養した後、コーティング膜をＰＢＳで３回洗浄し、４％パラホルムアルデヒド　ＰＢＳ溶液を用いてコーティング膜上の接着細胞を固定化した。超純水で３回洗浄した後、ロータリー真空ポンプにて減圧乾燥した。１質量％濃度のクリスタルバイオレット　ＰＢＳ染色液で接着細胞を染色し、光学顕微鏡を用いて３視野任意に観察を行い接着細胞の数を数えた。
実施例６～８
実施例５と同様の方法でポリマーＰ－２からＰ－４のコーティング膜を得た。得られたコーティング膜について実施例５と同様の方法で細胞接着試験を実施した。
比較例２（ＰＥＴ）
ＰＥＴフィルム（１．０ｃｍ×１．０ｃｍ）を用いて実施例５と同様に細胞の接着試験を実施した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000003
実施例９～１２及び比較例３
タンパク質としてウシ血清由来免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）を使用したこと以外は実施例１～４及び比較例１と同様にして、タンパク質吸着試験を実施した。結果を表４に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000004

Claims (21)

  1. 含フッ素オレフィン単位及びビニルアルコール単位を有する含フッ素共重合体からなることを特徴とする低タンパク質吸着性材料。
  2. 前記含フッ素共重合体における含フッ素オレフィン単位の含有率が６０～１０モル％である請求項１記載の低タンパク質吸着性材料。
  3. 前記含フッ素共重合体における含フッ素オレフィン単位とビニルアルコール単位との交互率が１～７５％である請求項１又は２記載の低タンパク質吸着性材料。
  4. 前記含フッ素オレフィンは、テトラフルオロエチレン、クロロトリフルオロエチレン及びヘキサフルオロプロピレンからなる群より選択される少なくとも１種である請求項１、２又は３記載の低タンパク質吸着性材料。
  5. 前記含フッ素共重合体は、含フッ素オレフィン単位、ビニルアルコール単位及びビニルエステルモノマー単位を有する請求項１、２、３又は４記載の低タンパク質吸着性材料。
  6. コーティング膜である請求項１、２、３、４又は５記載の低タンパク質吸着性材料。
  7. 請求項１、２、３、４又は５記載の低タンパク質吸着性材料を含むことを特徴とするコーティング用組成物。
  8. 請求項１、２、３、４又は５記載の低タンパク質吸着性材料から形成されることを特徴とするコーティング層。
  9. 請求項１、２、３、４、５若しくは６記載の低タンパク質吸着性材料、請求項７記載のコーティング組成物、又は、請求項８記載のコーティング層からなり、バッグ、シート、フィルム、バイアル瓶、シャーレ、又は、フラスコであることを特徴とする低タンパク質吸着性物品。
  10. 請求項１、２、３、４、５若しくは６記載の低タンパク質吸着性材料、請求項７記載のコーティング組成物、又は、請求項８記載のコーティング層からなり、バイオ医薬用バッグ、バイオ医薬用シート、バイオ医薬用フィルム、バイオ医薬用バイアル瓶、バイオ医薬用シャーレ、又は、バイオ医薬用フラスコであることを特徴とする低タンパク質吸着性物品。
  11. 含フッ素オレフィン単位及びビニルアルコール単位を有する含フッ素共重合体からなることを特徴とする低細胞付着性材料。
  12. 前記含フッ素共重合体における含フッ素オレフィン単位の含有率が６０～１０モル％である請求項１１記載の低細胞付着性材料。
  13. 前記含フッ素共重合体における含フッ素オレフィン単位とビニルアルコール単位との交互率が１～７５％である請求項１１又は１２記載の低細胞付着性材料。
  14. 前記含フッ素オレフィンは、テトラフルオロエチレン、クロロトリフルオロエチレン及びヘキサフルオロプロピレンからなる群より選択される少なくとも１種である請求項１１、１２又は１３記載の低細胞付着性材料。
  15. 前記含フッ素共重合体は、含フッ素オレフィン単位、ビニルアルコール単位及びビニルエステルモノマー単位を有する請求項１１、１２、１３又は１４記載の低細胞付着性材料。
  16. コーティング膜である請求項１１、１２、１３、１４又は１５記載の低細胞付着性材料。
  17. 請求項１１、１２、１３、１４又は１５記載の低細胞付着性材料を含むことを特徴とするコーティング用組成物。
  18. 請求項１１、１２、１３、１４又は１５記載の低細胞付着性材料から形成されることを特徴とするコーティング層。
  19. 請求項１１、１２、１３、１４、１５若しくは１６記載の低細胞付着性材料、請求項１７記載のコーティング用組成物、又は、請求項１８記載のコーティング層からなり、バッグ、シート、フィルム、バイアル瓶、シャーレ、又は、フラスコであることを特徴とする低細胞付着性物品。
  20. 請求項１１、１２、１３、１４、１５若しくは１６記載の低細胞付着性材料、請求項１７記載のコーティング用組成物、又は、請求項１８記載のコーティング層からなり、細胞培養用バッグ、細胞培養用シート、細胞培養用フィルム、細胞培養用バイアル瓶、細胞培養用シャーレ、又は、細胞培養用フラスコであることを特徴とする低細胞付着性物品。
  21. 請求項１１、１２、１３、１４、１５若しくは１６記載の低細胞付着性材料、請求項１７記載のコーティング用組成物、又は、請求項１８記載のコーティング層からなり、胚様体形成用培養容器であることを特徴とする低細胞付着性物品。
PCT/JP2015/086016 2014-12-26 2015-12-24 低タンパク質吸着性材料、低タンパク質吸着性物品、低細胞付着性材料および低細胞付着性物品 Ceased WO2016104596A1 (ja)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2016566437A JP6810386B2 (ja) 2014-12-26 2015-12-24 低タンパク質吸着性材料、低タンパク質吸着性物品、低細胞付着性材料および低細胞付着性物品

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2014-264445 2014-12-26
JP2014264445 2014-12-26

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2016104596A1 true WO2016104596A1 (ja) 2016-06-30

Family

ID=56150609

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/JP2015/086016 Ceased WO2016104596A1 (ja) 2014-12-26 2015-12-24 低タンパク質吸着性材料、低タンパク質吸着性物品、低細胞付着性材料および低細胞付着性物品

Country Status (2)

Country Link
JP (1) JP6810386B2 (ja)
WO (1) WO2016104596A1 (ja)

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2017110184A1 (ja) * 2015-12-24 2017-06-29 旭硝子株式会社 細胞捕捉フィルター
WO2018135228A1 (ja) * 2017-01-18 2018-07-26 ダイキン工業株式会社 タンパク質低吸着性を有するタンパク質若しくはタンパク質を含む組成物の投与用、保存用、運搬用、または輸送用の容器及びタンパク質若しくはタンパク質組成物の製造用器材
WO2019035365A1 (ja) * 2017-08-15 2019-02-21 国立大学法人 奈良先端科学技術大学院大学 物品
CN109563466A (zh) * 2016-07-29 2019-04-02 大金工业株式会社 分化细胞的制造方法和用于该制造方法的培养袋
WO2020195860A1 (ja) * 2019-03-27 2020-10-01 Ａｇｃ株式会社 重合体、その製造方法、耐水耐油剤組成物、物品及び耐水耐油紙
EP4338954A4 (en) * 2021-06-07 2024-10-30 Nissan Chemical Corporation Composition for forming coating film, coating film and cell culture container

Citations (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS51125978A (en) * 1975-03-18 1976-11-02 Rikagaku Kenkyusho Material for antiithrombus artificial human organ
JPH04325160A (ja) * 1991-04-24 1992-11-13 Japan Gore Tex Inc 医療用複合化材料
JPH04336072A (ja) * 1991-05-10 1992-11-24 Japan Gore Tex Inc 生体親和性基材
JPH0523557A (ja) * 1991-07-24 1993-02-02 Asahi Chem Ind Co Ltd 親水性耐熱膜及びその製造方法
JPH05261256A (ja) * 1992-03-19 1993-10-12 Japan Gore Tex Inc 含フッ素共重合体膜及び分離膜
JP2008511733A (ja) * 2004-08-31 2008-04-17 アドヴァンスド カーディオヴァスキュラー システムズ， インコーポレイテッド フッ素化モノマーと親水性モノマーのポリマー
JP2011225659A (ja) * 2010-04-16 2011-11-10 Asahi Glass Co Ltd 親水化されたエチレン／テトラフルオロエチレン共重合体多孔体の製造方法およびエチレン／テトラフルオロエチレン共重合体多孔体
WO2013099966A1 (ja) * 2011-12-28 2013-07-04 ダイキン工業株式会社 高分子多孔質膜
WO2014084356A1 (ja) * 2012-11-30 2014-06-05 旭硝子株式会社 含フッ素共重合体からなる分離膜
WO2014208592A1 (ja) * 2013-06-26 2014-12-31 ダイキン工業株式会社 組成物、高分子多孔質膜及び親水化剤
WO2015087966A1 (ja) * 2013-12-12 2015-06-18 国立大学法人 奈良先端科学技術大学院大学 抗血栓性材料、抗血栓性物品、抗菌性材料、抗菌性物品、及び、物品表面の大腸菌の増殖を阻害する方法

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2003180801A (ja) * 2001-12-21 2003-07-02 Yoichiro Miyake 抗菌性材料
JP4111794B2 (ja) * 2002-09-30 2008-07-02 富士フイルム株式会社 親水性部材

Patent Citations (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS51125978A (en) * 1975-03-18 1976-11-02 Rikagaku Kenkyusho Material for antiithrombus artificial human organ
JPH04325160A (ja) * 1991-04-24 1992-11-13 Japan Gore Tex Inc 医療用複合化材料
JPH04336072A (ja) * 1991-05-10 1992-11-24 Japan Gore Tex Inc 生体親和性基材
JPH0523557A (ja) * 1991-07-24 1993-02-02 Asahi Chem Ind Co Ltd 親水性耐熱膜及びその製造方法
JPH05261256A (ja) * 1992-03-19 1993-10-12 Japan Gore Tex Inc 含フッ素共重合体膜及び分離膜
JP2008511733A (ja) * 2004-08-31 2008-04-17 アドヴァンスド カーディオヴァスキュラー システムズ， インコーポレイテッド フッ素化モノマーと親水性モノマーのポリマー
JP2011225659A (ja) * 2010-04-16 2011-11-10 Asahi Glass Co Ltd 親水化されたエチレン／テトラフルオロエチレン共重合体多孔体の製造方法およびエチレン／テトラフルオロエチレン共重合体多孔体
WO2013099966A1 (ja) * 2011-12-28 2013-07-04 ダイキン工業株式会社 高分子多孔質膜
WO2014084356A1 (ja) * 2012-11-30 2014-06-05 旭硝子株式会社 含フッ素共重合体からなる分離膜
WO2014208592A1 (ja) * 2013-06-26 2014-12-31 ダイキン工業株式会社 組成物、高分子多孔質膜及び親水化剤
WO2015087966A1 (ja) * 2013-12-12 2015-06-18 国立大学法人 奈良先端科学技術大学院大学 抗血栓性材料、抗血栓性物品、抗菌性材料、抗菌性物品、及び、物品表面の大腸菌の増殖を阻害する方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
TOSHIAKI TAKAMATSU ET AL.: "Hoshasen ni yoru Takoshitsu polytetrafluoroethylene Graft Kyojugotai no Kyusuisei to Ko Kessensei", JAPANESE JOURNAL OF POLYMER SCIENCE AND TECHNOLOQY, vol. 37, no. 12, 1980, pages 781 - 787 *

Cited By (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2017110184A1 (ja) * 2015-12-24 2017-06-29 旭硝子株式会社 細胞捕捉フィルター
JP7039473B2 (ja) 2016-07-29 2022-03-22 ダイキン工業株式会社 分化細胞の製造方法、及びその製造方法のために使用する培養バッグ
CN109563466A (zh) * 2016-07-29 2019-04-02 大金工业株式会社 分化细胞的制造方法和用于该制造方法的培养袋
EP3492577A4 (en) * 2016-07-29 2020-04-08 Daikin Industries, Ltd. METHOD FOR PRODUCING DIFFERENTIATED CELLS AND CULTURE POCKET USED THEREFOR
JP2020127439A (ja) * 2016-07-29 2020-08-27 ダイキン工業株式会社 分化細胞の製造方法、及びその製造方法のために使用する培養バッグ
WO2018135228A1 (ja) * 2017-01-18 2018-07-26 ダイキン工業株式会社 タンパク質低吸着性を有するタンパク質若しくはタンパク質を含む組成物の投与用、保存用、運搬用、または輸送用の容器及びタンパク質若しくはタンパク質組成物の製造用器材
WO2019035365A1 (ja) * 2017-08-15 2019-02-21 国立大学法人 奈良先端科学技術大学院大学 物品
WO2020195860A1 (ja) * 2019-03-27 2020-10-01 Ａｇｃ株式会社 重合体、その製造方法、耐水耐油剤組成物、物品及び耐水耐油紙
JPWO2020195860A1 (ja) * 2019-03-27 2020-10-01
CN113646344A (zh) * 2019-03-27 2021-11-12 Ａｇｃ株式会社 聚合物、其制造方法、耐水耐油剂组合物、物品及耐水耐油纸
JP7359202B2 (ja) 2019-03-27 2023-10-11 Ａｇｃ株式会社 耐水耐油剤組成物、その製造方法、物品及び耐水耐油紙
US11913175B2 (en) 2019-03-27 2024-02-27 AGC Inc. Polymer, method for producing same, water- and oil-proofing composition, article, and water- and oil-proof paper
EP4338954A4 (en) * 2021-06-07 2024-10-30 Nissan Chemical Corporation Composition for forming coating film, coating film and cell culture container

Also Published As

Publication number Publication date
JP6810386B2 (ja) 2021-01-06
JPWO2016104596A1 (ja) 2017-10-05

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP6810386B2 (ja) 低タンパク質吸着性材料、低タンパク質吸着性物品、低細胞付着性材料および低細胞付着性物品
JP7123346B2 (ja) 生体適合性材料、コーティング組成物、コーティング膜及び物品
US10689615B2 (en) Temperature-responsive base material, method for producing same, and method for evaluating same
EP3971201B1 (en) Cell culturing scaffold material and cell culturing container
JP6617704B2 (ja) タンパク質付着防止剤
JP6214583B2 (ja) 高分子基材、その用途及びその製造方法
JP6165280B2 (ja) 細胞培養器材
TW201706405A (zh) 用於細胞配給、保存或培養之容器
JP2016026520A (ja) タンパク質付着防止用化合物、塗布液および医療用デバイス
JP7655353B2 (ja) 溶融成形材料および成形した物品
US11246966B2 (en) Copolymer-comprising antimicrobial, cell culture, antithrombotic, or biopharmaceutical article
Imamura et al. Protein-stabilizing effect of amphiphilic block copolymers with a tertiary sulfonium-containing zwitterionic segment
US20240287322A1 (en) Composition for forming coating film, coating film, and cell culture vessel
US20250011602A1 (en) Adhesion suppressing material of biological substances
WO2015087966A1 (ja) 抗血栓性材料、抗血栓性物品、抗菌性材料、抗菌性物品、及び、物品表面の大腸菌の増殖を阻害する方法
JP2022069292A (ja) 生体由来物質付着防止基材及び該基材を含む器具
CN120208555A (zh) 被覆聚合物的玻璃基材
EP3301121A1 (en) A thermoresponsive polymer and its use in a cell culture support

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 15873164

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2016566437

Country of ref document: JP

Kind code of ref document: A

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

122 Ep: pct application non-entry in european phase

Ref document number: 15873164

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1