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WO2013105430A1 - フィコシアニンの調製方法 - Google Patents

フィコシアニンの調製方法 Download PDF

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WO2013105430A1
WO2013105430A1 PCT/JP2012/083471 JP2012083471W WO2013105430A1 WO 2013105430 A1 WO2013105430 A1 WO 2013105430A1 JP 2012083471 W JP2012083471 W JP 2012083471W WO 2013105430 A1 WO2013105430 A1 WO 2013105430A1
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WO
WIPO (PCT)
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chitosan
phycocyanin
suspension
activated carbon
filtration
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Ceased
Application number
PCT/JP2012/083471
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English (en)
French (fr)
Inventor
岩夫 小島
光司 大段
正洋 西川
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
GLICO NUTRITION CO Ltd
Ezaki Glico Co Ltd
Original Assignee
GLICO NUTRITION CO Ltd
Ezaki Glico Co Ltd
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Publication date
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Priority to JP2013553241A priority patent/JP6084169B2/ja
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Ceased legal-status Critical Current

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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C09—DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
    • C09B—ORGANIC DYES OR CLOSELY-RELATED COMPOUNDS FOR PRODUCING DYES, e.g. PIGMENTS; MORDANTS; LAKES
    • C09B61/00—Dyes of natural origin prepared from natural sources, e.g. vegetable sources

Definitions

  • the present invention relates to a method for preparing phycocyanin.
  • Cyanobacteria such as Spirulina contain phycocyanin and have been used as functional materials such as health foods and food coloring.
  • As methods for preparing phycocyanin from cyanobacteria the methods of Patent Documents 1 and 2 are known.
  • Patent Documents 1 and 2 disclose a method using calcium phosphate as a flocculant.
  • this method has a very slow filtration rate, and the purity is not sufficient. It is conceivable to remove impurities by centrifugation, but in this case the impurities cannot be removed sufficiently.
  • the ratio of impurities is high and clogging occurs, so that the solid-liquid separation process by filtration is difficult and the sterilization process by the filter cannot be incorporated.
  • phycocyanin Since phycocyanin is unstable to heat, it cannot be sterilized by heating in the process and cannot be sterilized by a filter. Therefore, the product must be dried immediately and sterilized after drying.
  • An object of the present invention is to provide a technique for preparing phycocyanin contained in cyanobacteria with high efficiency and high purity.
  • the present invention provides the following method for preparing phycocyanin.
  • Item 1. A method for preparing phycocyanin, comprising adding chitosan to a suspension of cyanobacteria containing phycocyanin and filtering the suspension.
  • Item 2. Item 2. The method for preparing phycocyanin according to Item 1, wherein the concentration of chitosan in the suspension to be filtered is 0.01 to 1% by weight.
  • Item 3. Item 3.
  • the method for preparing phycocyanin according to Item 1 or 2 wherein the suspension used for filtration contains a buffer solution.
  • Item 4. Item 4. The method for preparing phycocyanin according to Item 3, wherein the buffer is a phosphate buffer or an acetate buffer.
  • Item 5. Item 5.
  • Impurities that cause clogging of the membrane could be removed in the aggregation process by improving the aggregation process, so that the phycocyanin-containing liquid could be sterilized by incorporating a sterilization process in the subsequent process. Since it was sterilized at an early stage of the manufacturing process, it was possible to prevent quality deterioration due to contamination with various bacteria during the manufacturing process. Further, it is not necessary to dry the product, and liquid products (which occupy most of the current distribution products) can be easily manufactured without using unnecessary processes.
  • a liquid product when manufacturing a liquid product, it was necessary to add an antifoaming agent (a fatty acid ester or the like as a main component) for the purpose of preventing intense foaming when the dried product was dissolved again in water.
  • an antifoaming agent a fatty acid ester or the like as a main component
  • a liquid product can be produced without adding an antifoaming agent.
  • activated carbon is used in combination to promote the effect of removing impurities and significantly improve the filterability. At the same time, it is possible to reduce the cleaning burden on the filter cloth and microfiltration membrane used during actual production. .
  • the cyanobacteria include the genus Spirulina, the genus Arthrospira, the genus Aphanizomenon, the genus Fisherella, the genus Anabenaa, the genus Nestocchi, The genus Synechococcus, the genus Tolypothrix, the genus Aphanothace, the genus Mastigoclaus, the genus Pleurocapsa, and the genus Pleurocapsa are confirmed on an industrial scale. Preferred are those belonging to Spirulina and Arthrospira.
  • raw cyanobacteria As raw materials for preparing phycocyanin, raw cyanobacteria can be used, or dried cyanobacteria can be used.
  • the dry product of cyanobacteria may be a raw product of raw cyanobacteria according to a conventional method, or a commercially available dry product may be used.
  • a suspension of cyanobacteria is prepared.
  • a suspension of 0.1 to 20% by weight of the dry product of cyanobacteria solids (dry product) may be used.
  • a solid content suspension equivalent to this may be prepared.
  • the cyanobacteria suspension suspends cyanobacteria in water.
  • the suspension may be composed of water and cyanobacteria, but cyanobacteria may be suspended in a buffer solution to prepare pH.
  • a buffer solution to prepare pH.
  • a phosphate buffer or an acetate buffer is preferably used, but is not limited to these buffers.
  • the pH of the suspension is about 4 to 8, preferably about 5 to 7.
  • the salt for keeping the pH constant may be added as a solid, or may be added to cyanobacteria or a suspension thereof in the form of an aqueous solution.
  • the type of buffer salt (buffering agent) is not particularly limited, but is preferably phosphate, acetate, citrate, more preferably phosphate, acetate. When the type of salt is phosphate, it may be added as a solution to the suspension, or the phosphate may be added as a solid.
  • the acid salt examples include sodium phosphates such as sodium phosphate, sodium dihydrogen phosphate, and disodium hydrogen phosphate; potassium phosphates such as potassium phosphate, potassium dihydrogen phosphate, and dipotassium hydrogen phosphate; Water-soluble phosphates such as ammonium dihydrogen acid are listed.
  • the phosphate buffer is preferably a buffer of phosphoric acid and an alkali metal (sodium, potassium, lithium, etc.).
  • a buffer solution of sodium dihydrogen phosphate and disodium hydrogen phosphate, potassium dihydrogen phosphate and hydrogen phosphate examples include dipotassium buffer.
  • the phosphate buffer may use other materials such as trisodium phosphate and phosphate.
  • the phosphate buffer is preferably a buffer containing sodium dihydrogen phosphate and disodium hydrogen phosphate.
  • acetates include water-soluble acetates such as sodium acetate, potassium acetate, lithium acetate, and ammonium acetate.
  • the acetic acid buffer is preferably a buffer of acetic acid and an alkali metal (sodium, potassium, lithium, etc.), and examples thereof include a buffer of acetic acid and sodium acetate, a buffer of acetic acid and potassium acetate, and the like.
  • the acetate buffer may use other materials such as calcium acetate or magnesium acetate and acetic acid.
  • citrate examples include sodium citrate such as sodium citrate, sodium dihydrogen citrate, disodium hydrogen citrate, trisodium citrate; potassium citrate, potassium dihydrogen citrate, dipotassium hydrogen citrate, Examples thereof include potassium citrate such as tripotassium citrate; water-soluble citrate such as ammonium dihydrogen citrate.
  • the citrate buffer is preferably a buffer of citric acid and alkali metal (sodium, potassium, lithium, etc.), such as a buffer solution of sodium dihydrogen citrate and disodium hydrogen citrate, potassium dihydrogen citrate and hydrogen citrate. Examples include dipotassium buffer, citric acid and trisodium citrate buffer.
  • the citrate buffer may use other materials such as calcium citrate and citrate.
  • the buffer solution is preferably added so that the concentration of the buffering agent is 0.1 to 10% by weight in the suspension, and more preferably 0.3 to 3% by weight.
  • the phosphate buffer is preferably added so that the concentration of phosphoric acid + phosphate is 0.1 to 10% by weight in the suspension, more preferably 0.3 to 3% by weight.
  • the acetic acid buffer is preferably added so that the concentration of acetic acid + acetate is 0.1 to 10% by weight in the suspension, more preferably 0.3 to 3% by weight.
  • the citrate buffer is preferably added so that the concentration of citric acid + citrate is 0.1 to 10% by weight in the suspension, and more preferably 0.1 to 1% by weight.
  • chitosan additive chitosan to the blue-green algae suspension.
  • Chitosan effectively adsorbs impurities derived from cyanobacteria and can be easily removed by filtration.
  • the amount of chitosan is about 0.01 to 1% by weight, preferably about 0.03 to 0.8% by weight, more preferably about 0.05 to 0.5% by weight, based on the suspension. If the amount of chitosan blended is too small, the filtration rate will decrease due to clogging, and if the amount of chitosan blended is too large, the filtration rate will decrease. That is, there is an optimum blending amount for chitosan.
  • the optimal chitosan concentration differs between phosphate buffer and acetate buffer.
  • the preferred amount of chitosan when using an acetate buffer is about 0.05 to 0.3% by weight, and the preferred amount of chitosan when using a citrate buffer is about 0.1 to 0.6% by weight.
  • the optimal chitosan concentration depends on the buffer concentration. That is, the concentration of chitosan is preferably increased when the concentration of the buffer solution is increased, and the amount of chitosan is preferably decreased when the concentration of the buffer solution is decreased.
  • chitosan and activated carbon are added to the cyanobacterial suspension and filtered. Regardless of the order of addition of chitosan and activated carbon, activated carbon may be added after addition of chitosan, chitosan may be added after addition of activated carbon, or chitosan and activated carbon may be added simultaneously. It is preferable to filter in the presence of chitosan and activated carbon.
  • the amount of the activated carbon is not particularly limited, but a preferable amount is about 0.05 to 5% by weight, and a more preferable amount is about 0.1 to 2% by weight.
  • chitosan and activated carbon are added simultaneously and then filtered.
  • “simultaneously” means that both are present in the same solution, and there is no limitation on the order and timing of addition.
  • the temperature of the aqueous suspension when preparing and filtering the suspension is preferably about 5 to 50 ° C, more preferably about 10 to 35 ° C.
  • the aqueous suspension may be subjected to ultrasonic treatment or stirring treatment. Stirring may be very slow, or may be performed at a higher stirring speed so that the foaming of the suspension does not become severe. Moreover, you may perform stirring intermittently.
  • Chitosan can be filtered after adding activated carbon as necessary and stirring for a certain period of time. The time for stirring and the like is 1 minute to 24 hours, preferably about 15 minutes to 5 hours. After chitosan and activated carbon are uniformly mixed in the suspension, filtration is performed. The suspension may be stirred until filtration is completed, or may be allowed to stand. The time to complete the filtration is 1 minute to 64 hours, preferably about 3 minutes to 24 hours.
  • the phycocyanin thus obtained can be used in a solution state (filtrate), but may be further concentrated.
  • concentration by ultrafiltration is preferable because the low molecular weight dye, organic impurities, and inorganic ion content contaminated in the solution can be reduced and the degree of purification can be improved.
  • the ultrafiltration membrane used for the ultrafiltration preferably has a fractional molecular weight of 1,000 to 30,000, more preferably 5,000 to 20,000.
  • the sterilization is preferably performed with a membrane filter (MF membrane) because the dye is decomposed by heating in a solution state.
  • MF membrane membrane filter
  • chitosan and activated carbon components that cause clogging have been removed and can be filtered with a membrane filter without any problem.
  • the phycocyanin obtained by the preparation method of the present invention is stabilized by adding saccharides (trehalose, glycerin, etc.), salts (for example, citrate), etc., and provided as an aqueous solution or as a dry powder through a drying step. Can do. Any drying method may be used as long as phycocyanin is not denatured and deteriorated, but spray drying, reduced pressure drying, and freeze drying are preferable.
  • chitosan refers to a substance that dissolves in an acidic aqueous solution obtained by deacetylating chitin, which is a component that forms the exoskeleton of crustaceans such as crabs and shrimps together with inorganic substances (calcium compounds). .
  • the chemical structure of chitosan is characterized by having many amino structures in the molecule with glucosamine deacetylated from chitin.
  • the “activated carbon” used in the present invention is not particularly limited, and any activated carbon in the market can be widely used.
  • the activated carbon may be in the form of powder or granules.
  • raw materials for activated carbon coconut shell, palm coconut, fruit seeds, sawdust, eucalyptus, pine and other plant-based, coal-based, petroleum-based coke and pitch carbides, phenol resin, vinyl chloride resin, Examples thereof include vinylidene chloride resin, and those derived from plant-based materials such as coconut shell, palm coconut, fruit seed, sawdust, eucalyptus, and pine are preferably used.
  • the specific surface area of the activated carbon is about 500 to 3000 m 2 / g, preferably about 800 to 2500 m 2 / g.
  • chitosan used in the present invention contains as little impurities as possible.
  • the content of impurities is preferably about 10% by weight or less, more preferably about 5% by weight or less, and still more preferably about 1% by weight or less.
  • Chitosan used in the present invention may be used as an aqueous solution or may be used by dissolving in a solvent other than water. Chitosan may be added directly to the algae suspension in the form of powder or solid without dissolving in water or a solvent.
  • Example 1 The dried spirulina alga was suspended in a sodium phosphate solution (0.82% sodium dihydrogen phosphate + 0.84% disodium hydrogen phosphate), and slowly stirred at 20 ° C. for 16 hours to extract the phycocyanin component.
  • Various flocculants were added to this extract, and filtration using a filter paper (100 ml scale) was performed, and the amount of filtrate for the first minute was analyzed and the filtrate was analyzed.
  • the absorption peak of phycocyanin was A618 nm, and an A260 nm (absorption maximum of nucleic acid) value with respect to the A618 value was calculated as an impurity index.
  • the residual color value (recovery rate in the filtration step) was expressed as a relative value to the A618 value of the untreated (filtrate not subjected to the flocculant treatment).
  • Example 2 Spirulina dried alga body is suspended in sodium phosphate solution (each solution with different weight ratio of sodium dihydrogen phosphate and disodium hydrogen phosphate, each concentration changed) or a mixture of sodium acetate and acetic acid at 20 ° C The phycocyanin component was extracted by slowly stirring for 16 hours. Chitosan (Flownac C) was added to this extract, and filtration using a filter paper (100 ml scale) was performed, and the amount of filtrate for the first minute was analyzed and the filtrate was analyzed.
  • the absorption peak of phycocyanin was A618 nm, and an A260 nm (absorption maximum of nucleic acid) value with respect to the A618 value was calculated as an impurity index.
  • the residual color value was expressed as a relative value to the A618 value of the untreated (filtrate not subjected to the flocculant treatment).
  • Example 3 Comparative Example 1 According to the following protocol, phycocyanin was prepared by centrifugation (Comparative Example 1) or filtration (Example 3).
  • the phycocyanin preparation obtained by filtration had a larger flow rate of 0.45 ⁇ m membrane filter than the phycocyanin preparation obtained by centrifugation. From this result, it became clear that filtration has fewer impurities that cause clogging.
  • Example 4 According to the following protocol, phycocyanin was prepared by “simultaneous treatment of chitosan and activated carbon” or “separate treatment of chitosan and activated carbon”. Separate treatment process: “Extraction” ⁇ “Coagulation (chitosan) treatment” ⁇ “Filtration” ⁇ “Activated carbon treatment” ⁇ “Filtration” Simultaneous treatment process: “Extraction” ⁇ “Chitosan + activated carbon treatment” ⁇ “Filtration” (i) Extraction: Phosphate Buffer (0.86% sodium dihydrogen phosphate + 0.88% Disperse 3% of Spirulina powder in disodium hydrogen phosphate) Extract with stirring for 15 h.
  • Phosphate Buffer 0.86% sodium dihydrogen phosphate + 0.88% Disperse 3% of Spirulina powder in disodium hydrogen phosphate
  • the amount of liquid passing through the 0.45 ⁇ m membrane filter was higher in the simultaneous processing step than in the separate processing step. It was revealed that the simultaneous processing step has fewer impurities causing clogging.
  • the simultaneous treatment process is superior to the separate treatment process for the preparation of phycocyanin using chitosan and activated carbon.
  • Example 5 and Comparative Example 2 Preparation of phycocyanin by simultaneous treatment of chitosan and activated carbon was performed by centrifugation (Comparative Example 2) or filtration (Example 5) according to the following protocol: (i) Extraction: Disperse 3% of Spirulina powder in phosphate buffer (0.86% sodium dihydrogen phosphate + 0.88% disodium hydrogen phosphate) Extract with stirring for 15 h. (ii) Aggregation: 0.3% of water-soluble chitosan is added to the extract to cause aggregation. : Activated carbon treatment: Add 0.5% activated carbon to the extract and stir slowly for 1 h. (iii) Solid-liquid separation: Use filter paper for filtration and collect the filtrate.
  • impurities that clog the 0.45 ⁇ m membrane can be removed by simultaneously treating chitosan and activated carbon in the preparation of phycocyanin and using filtration instead of centrifugation.
  • the phycocyanin preparation method according to the present invention can quickly prepare phycocyanin from a cyanobacterial suspension, and can remove cyanobacterial residues, unwanted proteins, nucleic acids, and the like very efficiently. Furthermore, the present invention makes it possible to remove microfiltration impervious impurities before the microfiltration step, which has been a problem of the conventional method of preparing phycocyanin by coagulation filtration using a calcium phosphate reaction or centrifugation. The liquid product of phycocyanin can also be produced. Further, the combined use of activated carbon at the time of agglomeration can be expected to reduce the work on the following processes during actual production.
  • ⁇ Filtration process> The amount of filtrate recovered is improved because the cake can be squeezed sufficiently. • The amount of liquid that can be processed increases greatly due to the fact that filter cloth such as filter presses are not easily clogged. ⁇ Easy to clean the filter cloth after use. -Good cake separation from the cake. Furthermore, automatic operation control by a fully automatic press filter is possible.
  • ⁇ Microfiltration process> The precision membrane permeation rate increases and the amount of liquid that can be processed increases greatly. ⁇ Membrane clogging is remarkably reduced and cleaning (regeneration) is simplified.

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Description

フィコシアニンの調製方法
本発明は、フィコシアニンの調製方法に関する。
　スピルリナ等の藍藻類にはフィコシアニンが含まれ、健康食品等の機能性素材や食品用色素として利用されてきた。
藍藻類からのフィコシアニンの調製方法として、特許文献１～２の方法が知られている。
　特許文献１、２は、リン酸カルシウムを凝集剤として用いる方法を開示しているが、この方法では濾過速度が非常に遅くなり、純度は十分ではなかった。遠心分離により不純物を除去することも考えられるが、この場合には不純物が十分に除去できない。
分離後のフィコシアニン含有液中に不純物の割合が高く目詰まりを起こすため、ろ過による固液分離工程に困難が生じることや、フィルターによる無菌化工程を組み入れることができなかった。
　フィコシアニンは熱に不安定なため工程中で加熱による殺菌ができず、フィルターによる無菌化もできないため、早急に製品を乾燥させ乾燥後に製品を殺菌せざるを得なかった。
特許第４６７７２５０号 特許第４０４８４２０号
　本発明は、藍藻類に含まれるフィコシアニンを高効率かつ高純度で調製する技術を提供することを目的とする。
　本発明は、以下の、フィコシアニンの調製方法を提供するものである。
項１．　フィコシアニンを含有する藍藻類の懸濁液にキトサンを加え、濾過することを特徴とする、フィコシアニンの調製方法。
項２．　ろ過に供する懸濁液におけるキトサンの濃度が0.01～1重量％である、項1に記載のフィコシアニンの調製方法。
項３．　ろ過に供する懸濁液が緩衝液を含む、項１又は２に記載のフィコシアニンの調製方法。
項４．　前記緩衝液がリン酸緩衝液もしくは酢酸緩衝液である、項３に記載のフィコシアニンの調製方法。
項５．　フィコシアニンを含有する藍藻類の懸濁液にキトサンと活性炭を加え、濾過することを特徴とする、項１～４のいずれかに記載のフィコシアニンの調製方法。
項６．　ろ過に供する懸濁液におけるキトサンの濃度が0.01～1重量％であり、活性炭の濃度が0.1～10重量％である、項５に記載のフィコシアニンの調製方法。
項７．　キトサンと活性炭を同時に加えた後ろ過することを特徴とする項１～６のいずれかに記載のフィコシアニンの調製方法。
　フィコシアニンの乾燥品あるいは液状品を製造する場合に、不純物の少ない高品質のフィコシアニン色素を製造することができるようになった。また色素成分の回収率が向上した。更に、液状品製造の場合、乾燥後に殺菌を行った後再溶解するという無駄な工程を経ることなく無菌化した液状品を製造することができた。
製造工程中の凝集工程に使用する凝集剤としてキトサンを用い、その配合量を最適化することで、良好なろ過スピードを保ったろ過によるフィコシアニンと藍藻残渣との分離を実現できた。
　凝集工程の改良により膜の目詰まりを引き起こす不純物（核酸成分など）をも凝集工程で除去できたため、その後工程中に無菌化工程を組み入れてフィコシアニン含有液を無菌化することができた。製造工程の早い段階で無菌化できたため、製造工程中の雑菌汚染による品質低下を防止できた。また、製品を乾燥する必要がなく、無駄な工程をなくして液状品（現在の流通品で大半を占める）を容易に製造できるようになった。さらに、液状品を製造するにあたり、これまでは、乾燥させた製品を再度水に溶解させる際、激しい泡立ちを防ぐ目的で消泡剤（脂肪酸エステルなどが主成分）を添加する必要があったが、本発明により、消泡剤を添加することなく液状品を製造することが可能となった。
　さらに、キトサン凝集工程において、活性炭を併用して不純物除去効果を促進してろ過性を著しく改良すると同時に、実製造時に使用するろ布や精密ろ過膜の洗浄負担を軽減することが可能となった。
　本発明において、藍藻類としては、スピルリナ（Ｓｐｉｒｕｌｉｎａ）属、アルスロスピラ（Arthrospira）属、アファニゾメノン（Ａｐｈａｎｉｚｏｍｅｎｏｎ）属、フィッシェレラ（Ｆｉｓｈｅｒｅｌｌａ）属、アナベナ（Ａｎａｂａｅｎａ）属、ネンジュモ（Ｎｏｓｔｏｃ）属、シネコキスチス（Ｓｙｎｅｃｈｏｃｙｓｔｉｓ）属、シネココッカス（Ｓｙｎｅｃｈｏｃｏｃｃｕｓ）属、トリポスリクス（Ｔｏｌｙｐｏｔｈｒｉｘ）属、スイゼンジノリ（Ａｐｈａｎｏｔｈｅｃｅ）属、マスティゴクラディス（Ｍａｓｔｉｇｏｃｌａｕｓ）属、プルロカプサ（Ｐｌｅｕｒｏｃａｐｓａ）属等が挙げられるが、工業的規模で生産され、その安全性が確認されているスピルリナおよびアルスロスピラに属するものが好ましく例示される。
フィコシアニン調製の原料として、生の藍藻類を使用することもできるし、乾燥処理した藍藻類を使用してもよい。藍藻類の乾燥品は、生の藍藻類を常法に従い乾燥品としてもよく、市販の乾燥品を使用することもできる。
　本発明の方法では、藍藻類の懸濁液を調製する。例えば藍藻類の乾燥品を使用する場合には、藍藻類の固形分（乾燥品）として0.1～20重量％の乾燥品の懸濁液とすればよい。生の藍藻類を使用する場合には、これに準ずる程度の固形分の懸濁液を調製すればよい。
　藍藻類の懸濁液は、水に藍藻類を懸濁させる。懸濁液は水と藍藻類から構成されてもよいが、ｐHを調製するために緩衝液に藍藻類を懸濁してもよい。緩衝液としては、リン酸緩衝液や酢酸緩衝液が好ましく使用されるが、これらの緩衝液に限定はされない。懸濁液のｐHとしては、4～8程度、好ましくは5～7程度が挙げられる。ｐＨを一定にするための塩は、固体のまま添加しても良いし、水溶液とした状態で藍藻類もしくはその懸濁液に添加しても良い。緩衝液の塩(緩衝剤)の種類は特に限定されないが、好ましくはリン酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、さらに好ましくはリン酸塩、酢酸塩である。塩の種類がリン酸塩の場合、溶液として懸濁液に添加してもよく、固体としてリン酸塩を添加してもよい。リン　　　
　酸塩としては、例えば、リン酸ナトリウム、リン酸二水素ナトリウム、リン酸水素二ナトリウム等のリン酸ナトリウム；リン酸カリウム、リン酸二水素カリウム、リン酸水素二カリウム等のリン酸カリウム；リン酸二水素アンモニウム等の水溶性リン酸塩が挙げられる。リン酸緩衝液は、リン酸とアルカリ金属（ナトリウム、カリウム、リチウムなど）の緩衝液が好ましく、たとえばリン酸二水素ナトリウムとリン酸水素二ナトリウムの緩衝液、リン酸二水素カリウムとリン酸水素二カリウムの緩衝液などが挙げられる。リン酸緩衝液は、リン酸三ナトリウムとリン酸などの他の材料を使用してもよい。リン酸緩衝液は、リン酸二水素ナトリウムとリン酸水素二ナトリウムを含む緩衝液が好ましい。
 酢酸塩としては、例えば、酢酸ナトリウム、酢酸カリウム、酢酸リチウム、酢酸アンモニウム等の水溶性酢酸塩が挙げられる。酢酸緩衝液は、酢酸とアルカリ金属（ナトリウム、カリウム、リチウムなど）の緩衝液が好ましく、たとえば酢酸と酢酸ナトリウムの緩衝液、酢酸と酢酸カリウムの緩衝液などが挙げられる。酢酸緩衝液は、酢酸カルシウムもしくは酢酸マグネシウムと酢酸などの他の材料を使用してもよい。
　クエン酸塩としては、例えば、クエン酸ナトリウム、クエン酸二水素ナトリウム、クエン酸水素二ナトリウム、クエン酸三ナトリウム等のクエン酸ナトリウム；クエン酸カリウム、クエン酸二水素カリウム、クエン酸水素二カリウム、クエン酸三カリウム等のクエン酸カリウム；クエン酸二水素アンモニウム等の水溶性クエン酸塩が挙げられる。クエン酸緩衝液は、クエン酸とアルカリ金属（ナトリウム、カリウム、リチウムなど）の緩衝液が好ましく、たとえばクエン酸二水素ナトリウムとクエン酸水素二ナトリウムの緩衝液、クエン酸二水素カリウムとクエン酸水素二カリウムの緩衝液、クエン酸とクエン酸三ナトリウムの緩衝液などが挙げられる。クエン酸緩衝液は、クエン酸カルシウムとクエン酸などの他の材料を使用してもよい。
　緩衝液は、緩衝剤の濃度が懸濁液中で0.1～10重量％の濃度になるように添加するのが好ましく、0.3～3重量％の濃度がより好ましい。
　たとえば、リン酸緩衝液は、リン酸＋リン酸塩の濃度が懸濁液中で0.1～10重量％の濃度になるように添加するのが好ましく、0.3～3重量％の濃度がより好ましい。
　酢酸緩衝液は、酢酸＋酢酸塩の濃度が懸濁液中で0.1～10重量％の濃度になるように添加するのが好ましく、0.3～3重量％の濃度がより好ましい。
　クエン酸緩衝液は、クエン酸＋クエン酸塩の濃度が懸濁液中で0.1～10重量％の濃度になるように添加するのが好ましく、0.1～1重量％の濃度がより好ましい。
　藍藻類の懸濁液には、キトサンを加える。キトサンは、藍藻類由来の不純物を効果的に吸着し、ろ過により容易に不純物を除去することができる。キトサンを加えることで、ろ過速度は格段に向上する。キトサンの配合量は、懸濁液に対し0.01～1重量％程度、好ましくは0.03～0.8重量％程度、より好ましくは0.05～0.5重量％程度である。キトサンの配合量が少なすぎると、目詰まりにより濾過速度が低下し、キトサンの配合量が多すぎても濾過速度が低下する。すなわち、キトサンには最適な配合量が存在する。
　最適なキトサン濃度は、リン酸緩衝液と酢酸緩衝液とで相違する。酢酸緩衝液を用いた場合のキトサンの好ましい配合量は、0.05～0.3重量％程度であり、クエン酸緩衝液を用いた場合のキトサンの好ましい配合量は、0.1～0.6重量％程度である。
　また、最適なキトサン濃度は、緩衝液の濃度に依存する。すなわち、緩衝液の濃度が濃くなればキトサンの配合量を多くするのが好ましく、緩衝液の濃度が薄くなればキトサンの配合量を少なくするのが好ましい。
好ましい実施形態では、キトサンと活性炭を藍藻類の懸濁液に加え、濾過する。キトサンと活性炭の添加順序は問わず、キトサンを添加後活性炭を添加してもよく、活性炭を添加後キトサンを添加してもよく、キトサンと活性炭を同時に添加してもよい。キトサンと活性炭の存在下で濾過することが好ましい。活性炭の配合量は特に限定されないが、好ましい配合量は、0.05～5重量％程度であり、より好ましい配合量は、0.1～2重量％程度である。
　好ましい１つの実施形態では、キトサンと活性炭を同時に加えた後ろ過する。ここで、「同時」とは、同一の溶液中に共に存在していることを意味し、添加の順番やタイミングに制限はない。
　懸濁液の調製及び濾過を行う際の水懸濁液の温度は5～50℃程度が好ましく、10～35℃程度がより好ましい。
　フィコシアニン色素の調製液を得る際に水懸濁液に対して超音波処理や撹拌処理を行ってもよい。攪拌は非常にゆっくりでもよいし、懸濁液の泡立ちが甚だしく激しくならない程度に攪拌速度を上げて行ってもよい。また、攪拌を間欠的に行ってもよい。キトサン、必要に応じて活性炭を加えて一定時間撹拌した後、濾過することができる。撹拌等の時間としては、1分～24時間、好ましくは15分～5時間程度が挙げられる。キトサン、活性炭が懸濁液中に一様に混ざった後、濾過を行う。ろ過が完了するまで懸濁液は攪拌を行ってもよいし、静置しておいてもよい。ろ過が完了するまでの時間は、1分～64時間、好ましくは3分～24時間程度が挙げられる。
　このようにして得られたフィコシアニンは、溶液状態（ろ液）で使用に供することも可能であるが、更に濃縮しても良い。濃縮方法としては、溶液に夾雑している低分子性色素、有機不純物、及び無機イオン含量を低下させ、精製度を向上することができるため、限外濾過による濃縮が好ましい。限外濾過に用いる限外濾過膜は、分画分子量が１，０００～３０，０００のものが好ましく、５，０００～２０，０００のものがより好ましい。
　無菌化は、溶液状態で加熱することにより色素が分解するので、メンブランフィルター（MF膜）により行うのが好ましい。キトサンおよび活性炭の使用により、目詰まりを生じる成分は除去されているので、メンブランフィルターで問題なくろ過できる。
本発明の調製方法で得られるフィコシアニンは、糖類（トレハロース、グリセリン等）、塩類（例えばクエン酸塩）等を加えて安定化させ水溶液として、あるいは乾燥工程を経ることにより、乾燥粉末として提供することができる。乾燥方法は、フィコシアニンが変性劣化しない条件であれば何れでも良いが、噴霧乾燥、減圧乾燥、凍結乾燥が好ましい。
　本明細書中では用語「キトサン」とは、カニ、エビなどの甲殻類の外骨格を無機物（カルシウム化合物）とともに形成している成分であるキチンを脱アセチル化した、酸性水溶液に溶けるものをいう。キトサンの化学構造は、キチンが脱アセチル化したグルコサミンで分子内に多くのアミノ構造を有するのが特徴である。
　本発明において使用される「活性炭」としては、特に限定されることなく、市場に流通している活性炭全般を広く使用することができる。活性炭は粉末状であっても顆粒状であってもよい。活性炭の原料としては、椰子殻、パーム椰子、果実の種、鋸屑、ユーカリ、松などの植物系、石炭系、石油系のコークス及びそれらを原料としたピッチの炭化物、フェノール樹脂、塩化ビニル樹脂、塩化ビニリデン樹脂などをあげることができるが、好ましくは椰子殻、パーム椰子、果実の種、鋸屑、ユーカリ、松などの植物系材料由来のものが用いられる。活性炭の比表面積が５００～３０００ｍ２／ｇ程度、好ましくは８００～２５００ｍ２／ｇ程度のものが好適である。
  本発明において使用されるキトサンは、なるべく不純物を含まないことが好ましい。不純物の含有量は、好ましくは約１０重量％以下、より好ましくは約５重量％以下、さらに好ましくは約１重量％以下である。
  本発明において使用されるキトサンは、水溶液として使用されてもよいし、水以外の溶媒に溶解して使用してもよい。またキトサンは水や溶媒に溶かさず粉体もしくは固体のまま直接藻類の懸濁液中に添加されてもよい。
以下、本発明を実施例に基づきより詳細に説明する。
（使用した凝集剤）
・ポリ塩化アルミニウム（PAC；カチオン系高分子凝集剤）
　　　製品名 タイパック（大明化学工業株式会社製）
・ジメチルアミノエチルメタクリラートメチルクロリド塩ホモポリマー（カチオン系高分子凝集剤）
　　　製品名 タイポリマーTC-580（大明化学工業株式会社製）
・アクリルアミド-アクリル酸ソーダ共重合物（アニオン系高分子凝集剤）
　　　製品名 タイポリマーTA945（大明化学工業株式会社製）
・キチンキトサン（カチオン系高分子凝集剤）
・活性炭
　　　製品名 フジ活性炭 花F1-W50（セラケム株式会社製）
実施例１
（方法）
スピルリナ乾燥藻体をリン酸ナトリウム溶液（0.82％リン酸二水素ナトリウム+0.84％リン酸水素二ナトリウム）に懸濁し、20℃16時間ゆっくり攪拌してフィコシアニン成分を抽出した。本抽出液に、各種凝集剤を添加し、ろ紙を用いたろ過（100mlスケール）を行い、最初の1分間のろ液量の測定ならびにろ液の分析を行った。フィコシアニンの吸収ピークはA618nm、不純物の指標として、A618値に対するA260nm（核酸の吸収極大）値を計算した。色価残存率（ろ過工程の回収率）は、未処理（凝集剤処理を行っていないろ液）のA618値に対する相対値で表した。
（結果）
表１、表２に示すとおり、キトサン処理のろ過速度が最も速く、ろ液中の不純物の割合が最も低かった。色価残存率も、キトサン処理が最も高かった。さらに、無菌化用フィルターのろ液通過量もキトサン処理が最も多かった。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000001
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000002
得られたフィコシアニン溶液は、260nm付近の核酸等の不純物の極大吸収が凝集剤未処理およびリン酸カルシウム処理の従来法と比較して大きく低減されており、本発明の色素液がスピルリナ由来の不純物をほとんど含まないことが明らかになった。
実施例２
（方法）
スピルリナ乾燥藻体をリン酸ナトリウム溶液（リン酸二水素ナトリウムとリン酸水素二ナトリウムの重量比は変えず、濃度を変えたそれぞれの溶液）もしくは酢酸ナトリウムと酢酸の混合液に懸濁し、20℃16時間ゆっくり攪拌してフィコシアニン成分を抽出した。本抽出液に、キトサン（フローナックＣ）を添加し、ろ紙を用いたろ過（100mlスケール）を行い、最初の1分間のろ液量の測定ならびにろ液の分析を行った。フィコシアニンの吸収ピークはA618nm、不純物の指標として、A618値に対するA260nm（核酸の吸収極大）値を計算した。色価残存率（ろ過工程の回収率）は、未処理（凝集剤処理を行っていないろ液）のA618値に対する相対値で表した。
（結果）
　表３に示すとおり、塩濃度０％（水道水）、もしくは各濃度のリン酸緩衝液、あるいは酢酸緩衝液にスピルリナ乾燥藻体を懸濁したいずれの場合においても、キトサン処理によって良好なろ過速度をもってろ過を行うことができ、ろ液中の不純物の割合も低かった。また無菌化用フィルターのろ液通過量も十分に確保できた。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000003
実施例３及び比較例１
　以下のプロトコールに従って、フィコシアニンの調製を遠心分離(比較例１)又はろ過(実施例３)により行った。
(i)抽出    ：リン酸Buffer（0.86%リン酸二水素ナトリウム+ 0.88%リン酸水
             素二ナトリウム）にスピルリナ粉末を3%分散させ、15h撹拌抽
             出する。
(ii)凝集    ：抽出液に水溶性キトサンを0.3%添加し、凝集させる。
(iii)固液分離：ろ過はろ紙を用い、ろ液を回収する。
  　           遠心は440～10,000xgの条件で10分間遠心分離を行い、上澄
               液を回収する。
(iv)分析    ：0.45μｍメンブレンフィルターにて各回収液の通液量を測定
              する。
ろ紙：ADVANTEC No.2定性ろ紙を使用
遠心機：日立 ＳＣＲ２０Ｂ、アングルローター（50F-6A）を使用
        結果を以下の表４に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000004
　ろ過により得られたフィコシアニン調製液の方が、遠心分離により得られたフィコシアニン調製液よりも、0.45μmメンブレンフィルターの通液量が多かった。この結果から、ろ過の方が目詰まりを起こす不純物が少ないことが明らかになった。
　この結果により、本発明により、実製造においてろ過後の精密ろ過工程の膜への負担を減らし、目詰まりによる膜の再生工程を減らすことが可能となる。
　以上のことより、キトサンを用いたフィコシアニンの調製には遠心分離よりもろ過の方が優れている。
実施例４
　以下のプロトコールに従って、フィコシアニンの調製を「キトサンと活性炭の同時処理」あるいは 「キトサンと活性炭の別処理」により行った。
別処理工程：「抽出」→「凝集（キトサン）処理」→「ろ過」→「活性炭処
             理」→「ろ過」
同時処理工程：「抽出」→「キトサン＋活性炭処理」→「ろ過」
(i)抽出     ：リン酸Buffer（0.86%リン酸二水素ナトリウム+ 0.88%     
              リン酸水素二ナトリウム）にスピルリナ粉末を3%分散させ、
　　　　　　　15h撹拌抽出する。
(ii)キトサン処理 ：抽出液に水溶性キトサンを0.4%添加し、凝集させる。
(iii)活性炭処理   ：抽出液に活性炭を0.5%添加し、1h撹拌する。
(iv)ろ過         ：ろ紙を用い、ろ液を回収する。
(v)分析         ：0.45μｍメンブレンフィルターにて各回収液の通液量を
　　　　　　　　　測定する。
結果を表５に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000005
　同時処理工程の方が別処理工程よりも0.45μmメンブレンフィルターの通液量が多かった。同時処理工程の方が目詰まりを起こす不純物が少ないことが明らかになった。
　キトサンと活性炭の同時処理を行うことで、実製造においてろ過後の精密ろ過工程の膜への負担を減らし、目詰まりによる膜の再生工程を減らすことが可能となる。
　以上のことより、キトサンと活性炭を用いたフィコシアニンの調製には別処理工程よりも同時処理工程の方が優れている。
実施例５及び比較例２
　以下のプロトコールに従って、キトサンと活性炭の同時処理によるフィコシアニンの調製を遠心分離(比較例２)又はろ過(実施例5)により行った：
(i)抽出       ：リン酸Buffer（0.86%リン酸二水素ナトリウム+ 0.88%リン
　　　　　　　　酸水素二ナトリウム）にスピルリナ粉末を3%分散させ、
　　　　　　　　15h撹拌抽出する。
(ii)凝集       ：抽出液に水溶性キトサンを0.3%添加し、凝集させる。
　　　　　　　 ：活性炭処理：抽出液に活性炭を0.5%添加し、1hゆっくりと
　　　　　　　　 攪拌する
(iii)固液分離  ：ろ過はろ紙を用い、ろ液を回収する。
　　　　　　　 　遠心は10,000xgの条件で10分間遠心分離を行い、上澄液を
                 回収する。
(v)分析        ：0.45μｍメンブレンフィルターにて各回収液の通液量を
　　　　　　　　 測定する。
ろ紙：ADVANTEC No.2定性ろ紙を使用
遠心機：日立 ＳＣＲ２０Ｂ、アングルローター（ 50F-6A）を使用
結果を表６に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000006
　同時処理条件において、ろ過と遠心分離で0.45μmフィルターの通液量はろ過処理の方が明らかに良好な結果を得た。
　表６の結果より、フィコシアニンの調製において、キトサンと活性炭を同時処理し、かつ、遠心分離ではなくろ過法を用いることで、0.45μｍメンブレンを目詰まりさせる不純物を除去することができる。
産業上の利用の可能性
　本発明に係るフィコシアニン調製方法は、藍藻類の懸濁液からフィコシアニンを高純度かつ速やかに調製することができ、藍藻類残渣、不要タンパク質、核酸などを非常に効率的に除去することができる。さらに本発明は、従来のリン酸カルシウム反応を用いた凝集ろ過あるいは遠心分離によるフィコシアニン調製方法の問題点であった、精密ろ過非透過性不純物を、精密ろ過工程前に除去することを可能にし、その結果、フィコシアニンの液状品の製造をも可能とするものである。また、凝集時の活性炭の併用により実製造時における以下のような工程上の作業軽減を期待することができる。
＜ろ過工程＞
・ケーキの圧搾が十分にできることより、ろ液の回収量が向上する。
・フィルタープレス等のろ布が目詰まりし難いことにより、処理できる液量
  が大きく増加する。
・使用後のろ布の洗浄が容易となる。
・ケーキのろ布離れが良い。さらに全自動プレスろ過機による自動運転制御が可能となる。
 ＜精密ろ過工程＞
　　・精密膜透過速度が増え、処理できる液量が大きく増加する。
　　・膜の目詰まりが著しく軽減し、洗浄（再生）が簡便になる。

Claims (7)

  1. フィコシアニンを含有する藍藻類の懸濁液にキトサンを加え、濾過することを特徴とする、フィコシアニンの調製方法。
  2. ろ過に供する懸濁液におけるキトサンの濃度が0.01～1重量％である、請求項1に記載のフィコシアニンの調製方法。
  3. ろ過に供する懸濁液が緩衝液を含む、請求項１又は２に記載のフィコシアニンの調製方法。
  4. 前記緩衝液がリン酸緩衝液もしくは酢酸緩衝液である、請求項３に記載のフィコシアニンの調製方法。
  5. フィコシアニンを含有する藍藻類の懸濁液にキトサンと活性炭を加え、濾過することを特徴とする、請求項１～４のいずれかに記載のフィコシアニンの調製方法。
  6. ろ過に供する懸濁液におけるキトサンの濃度が0.01～1重量％であり、活性炭の濃度が0.1～10重量％である、請求項５に記載のフィコシアニンの調製方法。
  7. キトサンと活性炭を同時に加えた後ろ過することを特徴とする請求項１～６のいずれかに記載のフィコシアニンの調製方法。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2019054472A1 (ja) * 2017-09-14 2019-03-21 三栄源エフ・エフ・アイ株式会社 天然由来の水溶性色素の泡立ちを抑制する方法
WO2021251093A1 (ja) * 2020-06-09 2021-12-16 Dic株式会社 フィコシアニン色素組成物

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DK3460006T3 (da) * 2016-06-28 2020-10-26 Dainippon Ink & Chemicals Farvningsmateriale og fremgangsmåde til fremstilling af farvningsmateriale
CN106491659A (zh) * 2016-10-13 2017-03-15 暨南大学 一种抗肠炎螺旋藻硒化藻胆蛋白多肽复合体及其制备与应用
US20190357573A1 (en) 2017-01-20 2019-11-28 ADM WILD Europe GmbH & Co. KG Liquid composition comprising phycocyanin
CN111417315B (zh) * 2017-12-08 2024-03-22 Dic株式会社 色素材料水溶液、色素材料水溶液的制造方法和蓝色着色饮料
CN111116737A (zh) * 2020-01-13 2020-05-08 江西理工大学 一种高纯度藻蓝蛋白及其制备方法

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2007124912A (ja) * 2005-11-01 2007-05-24 Hosokawa Seian Kk 小豆色色付け剤の製造方法
JP2008126168A (ja) * 2006-11-22 2008-06-05 Fuji Eng Kk 廃水の凝集沈殿処理方法
JP2008295365A (ja) * 2007-05-31 2008-12-11 Cosmo Shokuhin Kk 小豆色色付け剤の製造方法

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH05328938A (ja) 1992-06-01 1993-12-14 Takami Sato 藻類、微細藻類、キチン、キトサン混合粉末
JPH0616519A (ja) * 1992-07-02 1994-01-25 Dainippon Ink & Chem Inc 農園芸用肥料
JPH06277075A (ja) * 1993-03-25 1994-10-04 Kanegafuchi Chem Ind Co Ltd フィコシアニンの増収法
JPH07310023A (ja) * 1994-05-19 1995-11-28 Kuraray Co Ltd 青色系色素組成物
JP3410610B2 (ja) * 1996-03-04 2003-05-26 東洋インキ製造株式会社 ベニバナ抽出液からのベニバナ黄色素と糖類の分離方法
JP2000154333A (ja) * 1998-11-20 2000-06-06 Tokai Sangyo Kk スピルリナからの色素の製造方法
JP4048420B2 (ja) 2002-06-26 2008-02-20 大日本インキ化学工業株式会社 フィコシアニン色素液の精製方法
CN1259335C (zh) * 2004-03-27 2006-06-14 中国科学院水生生物研究所 一种水华蓝藻制备藻蓝蛋白的方法
JP4677250B2 (ja) * 2005-02-24 2011-04-27 Ｄｉｃライフテック株式会社 藍藻類からのフィコシアニンの抽出方法
CN101899102B (zh) 2010-07-12 2013-05-08 华南理工大学 一种从螺旋藻中分离高纯度藻蓝蛋白的方法
WO2013066864A1 (en) * 2011-10-31 2013-05-10 The Florida International University Board Of Trustees Combination anti-cancer therapy

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2007124912A (ja) * 2005-11-01 2007-05-24 Hosokawa Seian Kk 小豆色色付け剤の製造方法
JP2008126168A (ja) * 2006-11-22 2008-06-05 Fuji Eng Kk 廃水の凝集沈殿処理方法
JP2008295365A (ja) * 2007-05-31 2008-12-11 Cosmo Shokuhin Kk 小豆色色付け剤の製造方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
DATABASE CA accession no. 52: 237122 *

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2019054472A1 (ja) * 2017-09-14 2019-03-21 三栄源エフ・エフ・アイ株式会社 天然由来の水溶性色素の泡立ちを抑制する方法
WO2021251093A1 (ja) * 2020-06-09 2021-12-16 Dic株式会社 フィコシアニン色素組成物
JPWO2021251093A1 (ja) * 2020-06-09 2021-12-16
JP7288170B2 (ja) 2020-06-09 2023-06-07 Dic株式会社 フィコシアニン色素組成物

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