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WO2007139149A1 - 生物学的試薬用化合物 - Google Patents

生物学的試薬用化合物 Download PDF

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Publication number
WO2007139149A1
WO2007139149A1 PCT/JP2007/060989 JP2007060989W WO2007139149A1 WO 2007139149 A1 WO2007139149 A1 WO 2007139149A1 JP 2007060989 W JP2007060989 W JP 2007060989W WO 2007139149 A1 WO2007139149 A1 WO 2007139149A1
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WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
group
ethyl
compound
imidazole
methyl
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Ceased
Application number
PCT/JP2007/060989
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Teiji Kimura
Toshiki Kurokawa
Takeo Sasaki
Yoshiyuki Murata
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Eisai R&D Management Co Ltd
Original Assignee
Eisai R&D Management Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Eisai R&D Management Co Ltd filed Critical Eisai R&D Management Co Ltd
Publication of WO2007139149A1 publication Critical patent/WO2007139149A1/ja
Anticipated expiration legal-status Critical
Ceased legal-status Critical Current

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Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F5/00—Compounds containing elements of Groups 3 or 13 of the Periodic Table
    • C07F5/02—Boron compounds
    • C07F5/022—Boron compounds without C-boron linkages
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/10—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a carbon chain containing aromatic rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D495/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D495/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D495/04—Ortho-condensed systems
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
    • G01N33/6896—Neurological disorders, e.g. Alzheimer's disease
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2500/00—Screening for compounds of potential therapeutic value

Definitions

  • the present invention relates to a compound for a biological reagent. More specifically, a biological reagent compound that can be used as a biological reagent useful for elucidating the mechanism of amyloid beta tank (A ⁇ protein) formation, and A The present invention relates to a method for elucidating the mechanism of j8 protein production, and a kit for elucidating the mechanism of A ⁇ protein production, comprising the compound for biological reagent.
  • Alzheimer's disease is a disease characterized by the formation of senile plaques and neurofibrillary tangles as well as neuronal degeneration and loss.
  • symptomatic treatment with symptom ameliorating agents represented by acetylcholine esterase inhibitors, and a fundamental therapeutic agent that suppresses the progression of the disease has been developed!
  • Development of a method for controlling the cause of the pathogenesis is necessary for the creation of a therapeutic agent for Alzheimer's disease.
  • 8 protein which is a metabolite of amyloid precursor protein ( ⁇ ⁇ ⁇ ), is thought to be greatly involved in the degeneration and loss of neurons and the appearance of dementia symptoms (see Non-Patent Documents 1 and 2, for example) .
  • the main component of the 8 protein is ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ 40, which has 40 amino acids, and 42 ⁇ 42, which has 2 amino acids added to the C-terminal.
  • ⁇ 40 and 42 are highly cohesive (see, for example, Non-Patent Document 3), are the main constituents of the elderly population (see, for example, Non-Patent Documents 3, 4, and 5), and are also familial Alach Mutations in the sputum and presenelin genes found in Imah's disease are known to increase these sputum ⁇ 40 and 42 (see, for example, Non-Patent Documents 6, 7, and 8). Therefore, compounds that reduce the production of Aj840 and 42 are expected to be used as an Alzheimer's disease progression inhibitor or preventive agent.
  • a j8 is produced by APP being cleaved by beta secretase and then cleaved by gamma secretase. From this, gamma cell is used to reduce A ⁇ production.
  • Attempts have been made to create inhibitors of secretase and beta-secretase.
  • Many of these secretase inhibitors already known include peptides such as L-685, 458 (see, for example, Non-Patent Document 9) and LY-411575 (see, for example, Non-Patent Documents 10, 11, and 12). Or peptidomimetics.
  • This synamido compound is a compound that strongly suppresses the production of ⁇ 40 and 42, and is expected as a therapeutic or prophylactic agent for diseases caused by ⁇ ⁇ ⁇ represented by Alzheimer's disease.
  • Patent Document 1 For the above-mentioned cinnamidi compound (Patent Document 1) that suppresses the production of A ⁇ 40 and 42, the search for the target protein using a biological reagent has not yet been made.
  • Non-patent literature l Klein WL, 7 others, Alzheimer's disease -affected brain: Pre sence oi oligomeric A ⁇ ligands (DDLs suggests a molecular basi s for reversible memory loss, Proceeding National Academy of Science USA 2003 , Sep 2; 100 (18), p. 10417-10422.
  • DDLs Pre sence oi oligomeric A ⁇ ligands
  • Non-Patent Document 2 Nitsch RM, 16 others, Antibodies against ⁇ -amyloid slow cognitive decline in Alzheimer's disease, Neuron, 2003, May 22; 3 8, p. 547-554.
  • Non-Patent Document 3 Jarrett JT, 2 others, The carboxy terminus of the ⁇ amyl oid protein is critical for the seeding of amyloid formation: Implications for the pathogenesis of Alzheimers' disease, Biochemistry, 199 3, 32 (18), p.4693-4697.
  • Patent Document 4 Glenner GG, 1 other, Alzheimer's disease: initial report of the purification and characterization of a novel cerebrovascular a myloid protein, Biochemical and oiophysical research communication s, 1984, May 16, 120 (3), p. 885— 890.
  • Non-Patent Document 5 Masters CL, 5 others, Amyloid plaque core protein in Alzh eimer disease and Down syndrome, Proceeding National Academy of Science USA, 1985, Jun, 82 (12), p.4245-4249.
  • Non-Patent Document 6 Gouras GK, 11 others, Intraneuronal ⁇ 42 accumulation in human brain, American Journal of Pathology, 2000, Jan, 156 (1), p. 15-20.
  • Non-Patent Document 7 Scheuner D, 20 others, Secreted amyloid ⁇ -protein simila r to that in the senile plaques of Alzheimer's disease is increased d in vivo by the presenilin 1 and 2 and APP mutations linked to familial Alzheimer's disease, Nature Medicine , 1996, Aug, 2 (8), p. 864-870.
  • Non-Patent Document 8 Forman MS, 4 others, Differential effects of the Swedish mutant amyloid precursor protein on ⁇ -amyloid accumulation and secretion in neurons and nonneuronal cells, The Journal of Biolog ical Chemistry, 1997, Dec 19, 272 (51) , p. 32247-32253.
  • Non-Patent Document 9 Shearman MS, 9 others, L— 685, 458, an Aspartyl Protease
  • Non-Patent Document 10 Shearman MS, 6 others, Catalytic Site -Directed ⁇ — Seer etase Complex Inhibitors Do Not Discriminate Pharmacologically be etweeen Notch S3 and ⁇ — APP Clevages, Biochemistry, 2003, Jun 24, 42 (24), p. 7580-7586.
  • Patent Literature ll Lanz TA, 3 others, Studies of A j8 pharmacodynamics in the brain, cerebrospinal fluid, and plasma in young (plaque ⁇ free) Tg 2576 mice using the y—secretase inhibitor N2— [(2S) — 2— (3, 5— difluorophenyl) — 2— hydroxyethanoyl] — Nl— [(7S) —5— methyl— 6— ox o— 6, 7— dihydro— 5H— dibenzo [b, d] azepin— 7— yl] — L— alaninamide (LY— 411575), The journal of pharmacology and experimental thera peutics, 2004, Apr, 309 (1), p. 49— 55.
  • Non-Patent Document 12 Wong GT, 12 others, Chronic treatment with the ⁇ — seer etase inhibitor LY—411, 575 inhibits ⁇ -amyloid peptide productio n and alters lymphopoiesis and intestinal cell differentiation, The j ournal of biological chemistry, 2004, Mar 26, 279 (13), p. 12876— 12 882.
  • Non-Patent Document 13 Li YM, 17 others, Photoactivated ⁇ -secretase inhibitors di rected to the active site covalently label presenilin 1, Nature, 200
  • Patent Document 1 International Publication No. WO2005Z115990 Pamphlet
  • Patent Document 2 International Publication No. WO00Z019210 Pamphlet
  • An object of the present invention is to provide a compound for a biological reagent comprising the above-mentioned cinnamidi compound that suppresses the production of A ⁇ 40 and 42 as a constituent component.
  • a further object of the present invention is to provide a method for analyzing the production mechanism of ⁇ protein by searching for a target protein of a cinnamidine compound using this biological reagent compound as a chemical probe.
  • a further object of the present invention is to provide a kit for analyzing the production mechanism of A
  • the present inventors have intensively studied for the purpose of solving the above problems, and have constructed a compound for a biological reagent containing a cinnamide compound as a constituent component. By using the product, it was found that the production mechanism of ⁇ protein can be analyzed, and the present invention has been completed.
  • the present invention relates to the following compounds 1) to 14) for biological reagents or salts thereof.
  • Ar represents an imidazolyl group which may be substituted with 1 to 3 substituents selected from the following substituent group A1;
  • Ar may be substituted with 1 to 3 substituents selected from the following substituent group A2.
  • X is c ⁇ c or one CR 2 — CR 3 —
  • R 2 and IT represent a substituent selected from the following substituent group A3,
  • R 1 represents a group selected from the following substituent group A4; X may be substituted with a protein labeling group or a group containing a protein labeling group, C1
  • the C1 6 alkylene group is a halogen atom, a hydroxyl group, a cyano group, a C3-8 cycloalkyl group, a C3-8 cycloalkoxy group, a formyl group, a C1 6 alkyl group (the C 1-6 alkyl group is It may be substituted with a hydroxyl group, and the same carbon atom on the C1 6 alkylene group may be substituted with 1 or 2 carbon atoms, and the two C1 6 alkyl groups may be bonded together with a cyclic group (the cyclic group).
  • a methylene group on the ring may be substituted with 1 oxygen atom)), a C 1-6 alkoxy group, an amino group (the amino group is C1— A group selected from the group of A5 and 1 or 3 selected from the substituent group A5, or 5 or a group of 14-membered non-aromatic heterocyclic groups. Force is also selected 1 or 3 and may be substituted with 3 substituents;
  • X is a single bond, an imino group which may be substituted with a substituent selected from substituent group A5,-
  • Ar may be substituted with 1 to 3 substituents selected from Substituent Group A5 6 to 6
  • a 14-membered aromatic hydrocarbon group or a substituent group selected from 1 to 3 substituents selected from the substituent group A5, 5 or 14 represents a 14-membered aromatic heterocyclic group;
  • R 4 represents a substituent selected from the substituent group A3;
  • Z represents a single bond, CO, one (CH) n— (here Te, n is 1 to an integer of 3) or - in CR3 ⁇ 4 6 (wherein, R 5 and R 6 represents a substituent selected from lower Symbol Substituent Group A4) indicates; Z is a single Bond, one O, one NR
  • n an integer of 1 to 3
  • R 7 and R 8 represent a substituent which is also selected from the following substituent group A4 force) or —O;
  • X is
  • A represents a single bond, a protein labeling group or a group containing a protein labeling group;
  • A represents a single bond or a linker;
  • A represents a single bond or a cleavable linker
  • A is a hydrogen atom, fishing tag group, detectable marker, solid support or solid phase
  • Substituent group A1 halogen atom, cyano group, nitro group, C3-8 cycloalkyl group, C2-6 alkyl group, C2-6 alkyl group, C1-6 alkoxy group, C3-8 cycloalkoxy group, A formyl group, a C1 6 alkyl carbo group and a C 1-6 alkyl group (the C 1 6 alkyl group includes a halogen atom, a hydroxyl group, a cyano group, a C 16 alkoxy group, a C 3-8 cycloalkyl group, a C 1 6 alkyl carbo -Which may be substituted with 1 to 3 substituents selected from the group consisting of a thiol group), a protein labeling group, a group containing a protein labeling group, and a group to be bound to a solid phase carrier;
  • Substituent group A2 halogen atom, hydroxyl group, cyano group, C1 6 alkoxy group (the C1 6 alkoxy group is a halogen atom, cyano group, C1-6 alkoxy group, C2-6 alkyl group, C2-6 alkyl group) Group may be substituted with 1 or 3 substituents selected from the group consisting of a C1-8 group and a C3-8 cycloalkyl group), a C3-8 cycloalkoxy group, a C2-6 alkoxy group, a C2— 6 groups containing an alkyloxy group, a protein labeling group and a protein labeling group;
  • Substituent group A3 substituted with 1 to 3 substituents selected from halogen atom, substituent group A5 ⁇ 6 to 14-membered aromatic hydrocarbon ring group, selected from substituent group A5 1 V, and may be substituted with 3 substituents, 5 or 14-membered aromatic heterocyclic group, C1-6 alkyl group (the C16 alkyl group includes a formyl group, a halogen atom, a hydroxyl group, and a protecting group).
  • V 5 or 14-membered aromatic heterocyclic group, substituted with 1 to 3 substituents selected from substituent group A5 A 6 to 14-membered non-aromatic hydrocarbon ring group , A substituent selected from the substituent group A5, and a substituent substituted with 3 substituents, a 5-membered, 14-membered non-aromatic heterocyclic group and —X—A (where X is an imino A group, —O or —S, and A is substituted with 1 or 3 substituents selected from the substituent group A5, 6 or 14 membered aromatic hydrocarbon ring or 5 represents a 14-membered aromatic heterocyclic group (may be substituted with 1 to 3 substituents selected from the group of groups), a C 1-6 alkoxy group, a protein label A group comprising a group and a protein labeling group;
  • Substituent group A4 hydrogen atom, halogen atom, hydroxyl group, cyano group, nitro group, C3-8 cycloalkyl group, C2-6 alkyl group, C2-6 alkyl group, C3-8 cycloalkoxy group, C3 — 8 cycloalkylthio group, formyl group, C16 alkyl carbonyl group, C1-6 alkylthio group, C16 alkyl sulfier group, C16 alkylsulfol group, hydroxyimino group, C 1-6 alkoxyimino group May be substituted with 1 to 3 substituents selected from Substituent Group A5, or may be substituted with C1-6 alkyl group, 1 or 3 substituents selected from Substituent Group A5 C1-6 alkoxy group, 1 selected from substituent group A5
  • Substituent group A5 halogen atom, hydroxyl group, cyan group, nitro group, C3-8 cycloalkyl group, C2-6 alkyl group, C2-6 alkyl group, C3-8 cycloalkoxy group, C3-8 group Chloalkylthio group, formyl group, C16 alkyl carbonyl group, C16 alkylthio group, C1-6 alkylsulfur group, C1-6 alkylsulfol group, hydroxyimino group, C2-6 alkke Groups containing a ruoxy group, a C2-6 alkyloxy group, a C3-8 cycloalkylsulfuryl group, a C3-8 cycloalkylsulfol group, a protein labeling group and a protein labeling group.
  • Chloalkylthio group formyl group, C16 alkyl carbonyl group, C16 alkylthio group, C1-6 alkylsulfur
  • the basic force represented by the formula (II) is selected from the substituent group A5 and may be substituted with 1 or 4 substituents,
  • R 9 represents a substituent selected from the substituent group A4, and R 4 , X, X and Ar are
  • Ar may be substituted with 1 to 3 substituents selected from Substituent Group A2.
  • R 1U represents a C1-C6 alkyl group optionally substituted by a hydrogen atom or a hydroxyl group, and A, A, A and A have the above-mentioned meanings.
  • the linker of A is L4-L1-L2-L3- (where L4 may have a substituent).
  • Heterocycle, C1 20 alkylene group, C2-20 alkylene group, and C2-20 alkylylene group, L1 and L3 are each substituted with a single bond, —O—, —S—, C16 alkyl group NH-OC (0) NH-NHC (0) 0 NHC (0) NH NHC (O) C (0) NH C (O) or
  • R represents a C1-C6 alkyl group
  • L2 represents a single bond, one (CH 2 CH 2 O 3
  • L3 may be a halogen atom, a hydroxyl group, or a heterocyclic group, and L1 and L3 may form a ring with an adjacent group), A compound for biological reagent or a salt thereof according to any one of 1) to 8).
  • the cleavable linker of A is S—S, —O Si—O or —sugar residue—.
  • a compound for biological reagent or a salt thereof according to any one of 1) to 9) above.
  • the fishing tag group of A is Piotin, or 3— (4,4
  • a detectable marker is radiolabeled group, fluorescent labeling group, chemiluminescent group, heavy metal
  • Group power The compound for biological reagent or salt thereof according to any one of 1) to 12) above, which is selected.
  • Group power The compound for biological reagent or salt thereof according to any one of 1) to 12) above, which is selected.
  • the present invention relates to a method for analyzing the production mechanism of the A
  • R 1 represents a C1-C6 alkyl group optionally substituted with a hydrogen atom or a hydroxyl group, and A, A, A and A have the above-mentioned meanings]
  • 8 protein production composed of X, X and Ar The method according to any one of 15) to 17) above, wherein the target protein of the portion to be exhibited is searched and the suppression mechanism of A
  • the present invention relates to the following kit 19).
  • a kit for analyzing the production mechanism of A ⁇ protein comprising the biological reagent compound or salt thereof according to any one of 1) to 14) above.
  • the present invention relates to the following compounds for biological reagents or salts thereof which do not have the action of suppressing the production of
  • the compound for biological reagent or the salt thereof according to 20) above which is a compound or a salt thereof.
  • halogen atom refers to a fluorine atom, a chlorine atom, a bromine atom, an iodine atom, etc., preferably a fluorine atom, a chlorine atom, or a bromine atom.
  • C1-6 alkyl group refers to an alkyl group having 1 to 6 carbon atoms, and preferred groups include, for example, a methyl group, an ethyl group, an n propyl group, an i propyl group, and an n butyl group.
  • C16 alkoxy group refers to a group in which a hydrogen atom of an alkyl group having 1 to 6 carbon atoms is substituted with an oxygen atom.
  • Preferred groups include, for example, a methoxy group, an ethoxy group, n Propoxy group, i-propoxy group, n-butoxy group, i-butoxy group, sec butoxy group, tertiary butoxy group, n-pentoxy group, i-pentoxy group, sec pentoxy group, tertiary pentoxy group, n— Hexoxy, i-hexoxy, 1,2-dimethylpropoxy, 2-ethylpropoxy, 1-methyl-2-ethylpropoxy, 1-ethyl-2-methylpropoxy, 1, 1,2- Trimethylpropoxy group, 1,1,2-trimethylpropyloxy group, 1,1-dimethylbutoxy group, 2,2-dimethylbutoxy group, 2-ethylbutoxy group, 1,3 dimethylbutoxy group, 2-methylpen
  • C 1-6 alkylsulfonyl group refers to a group in which one hydrogen atom is substituted with a sulfonyl group in an alkyl group having 1 to 6 carbon atoms.
  • Preferred groups include, for example, Examples thereof include a methanesulfol group and an ethanesulfol group.
  • amino group refers to an amino group that may be substituted with 1 or 6 alkyl groups, and is a preferred group. Examples thereof include an amino group, a methylamino group, an ethylamino group, a propylamino group, and a dimethylamino group.
  • C2-6 alkenyl group refers to a alkenyl group having 2 to 6 carbon atoms, and preferred groups include, for example, a bur group, a allyl group, a 1 probe group, an isopropyl group.
  • Base group 1-butene-1-yl group, 1-butene-2-yl group, 1-butene-3-yl group, 2-butene-1-yl group, 2-butene-2-yl group
  • linear or branched alkenyl groups such as a group.
  • C2-6 alkyl group refers to an alkyl group having 2 to 6 carbon atoms, and preferred groups include, for example, an ethur group, a 1 propyl group, and a 2-propyl group. And linear or molecular chain alkyl groups such as a group, butynyl group, pentynyl group, and hexyl group.
  • C3-8 cycloalkyl group refers to a cyclic alkyl group having 3 to 8 carbon atoms. Preferred examples of the group include a cyclopropyl group, a cyclobutyl group, a cyclobenthyl group, and a cyclohexyl group. Group, cycloheptyl group, cyclooctyl group and the like.
  • C16 alkylthio group refers to a group in which one hydrogen atom is substituted with a sulfur atom in an alkyl group having 1 to 6 carbon atoms.
  • Preferred groups include, for example, a methylthio group, an ethylthio group, n Propylthio group, i-propylthio group, n-butylthio group, i-butylthio group, tertiary butylthio group, n-pentylthio group, i-pentylthio group, neopentylthio group, n-hexylthio group, 1-methylpropylthio group, etc. .
  • C16 alkyl sulfiel group refers to a group in which one hydrogen atom is substituted with a sulfiel group in an alkyl group having 1 to 6 carbon atoms.
  • Preferred examples of the group include a methyl sulfiel group.
  • Ethylmethylsulfuryl group n-propylsulfiel group, i-propylsulfiel group, n-butylsulfiel group, i-butylsulfiel group, tertiary-butylsulfiel group, n-pentylsulfur Fier, i-pentylsulfi -L group, neopentyl sulfier group, n-hexyl sulfier group, 1-methylpropyl sulfier group and the like.
  • C 1-6 alkyl carbo group refers to a group in which one hydrogen atom is substituted with a carbo yl group in an alkyl group having 1 to 6 carbon atoms. Examples include a acetyl group, propionyl group, and petityl group.
  • C3-8 cycloalkoxy group refers to a cyclic alkyl group having 3 or 8 carbon atoms, in which one hydrogen atom is substituted with an oxygen atom
  • Preferable groups include, for example, a cyclopropoxy group, a cyclobutoxy group, a cyclopentoxy group, a cyclohexoxy group, a cycloheptyloxy group, a cyclooctoxy group, and the like.
  • C3-8 cycloalkylthio group refers to a cyclic alkyl group having 3 or 8 carbon atoms, wherein one hydrogen atom is substituted with a sulfur atom
  • Preferred groups include, for example, cyclopropylthio group, cycloptylthio group, cyclopentylthio group, cyclohexylthio group, cycloheptylthio group, cyclooctylthio group and the like.
  • C16 alkoxyimino group refers to a group in which a hydrogen atom of an imino group is substituted with a C16 alkoxy group, and preferred groups include, for example, a methoxyimino group and an ethoxyimino group.
  • C2-6 alkyloxy group refers to a group in which one hydrogen atom is substituted with an oxygen atom in an alkenyl group having 2 to 6 carbon atoms.
  • C2-6 alkyloxy group refers to a group in which one hydrogen atom is substituted with an oxygen atom in an alkyl group having 2 to 6 carbon atoms.
  • Examples thereof include straight-chain or branched alkynyloxy groups such as an ethuroxy group, a 1-propyloxy group, a 2-propyloxy group, a butyroxy group, a pentynyloxy group, and a hexynyloxy group.
  • C3-8 cycloalkylsulfier group refers to a group in which one hydrogen atom is substituted with a sulfinyl group in a cyclic alkyl group having 3 or 8 carbon atoms
  • Preferable groups include, for example, cyclopropylsulfuryl group, cycloptylsulfuryl group, cyclopentylsulfuryl group, cyclohexylsulfuryl group, cycloheptylsulfuryl group, cyclooctylsulfuryl group and the like.
  • C3-8 cycloalkylsulfol group refers to a group in which one hydrogen atom is substituted with a sulfonyl group in a cyclic alkyl group having 3 or 8 carbon atoms.
  • Preferred examples of the group include, for example, a cyclopropylsulfol group, a cycloptylsulfol group, a cyclopentylsulfol group, a cyclohexylsulfol group, a cycloheptylsulfol group, and a cyclooctylsulfol group.
  • the “6 or 14-membered cyclic aromatic hydrocarbon ring group” means a monocyclic, bicyclic or tricyclic aromatic hydrocarbon ring group having 6 or 14 carbon atoms, Preferred examples of the group include a phenyl group, an indur group, a naphthyl group, an azulenyl group, a heptalyl group, a biphenyl group, a fluorine group, a phenol group, a phenanthryl group, an anthracene group.
  • Monocyclic, bicyclic or tricyclic 6 or 14 membered aromatic hydrocarbon ring groups such as
  • the "5 or 14-membered aromatic heterocyclic group” refers to a monocyclic, bicyclic or tricyclic aromatic heterocyclic group having 5 and 14 carbon atoms, which is preferable in the group.
  • the group include a pyrrolyl group, a pyridyl group, a pyridazinyl group, a pyrimidinyl group, a pyrazol group, a virazolinyl group, an imidazolyl group, a triazolyl group, a tetrazolyl group, an indolyl group, an isoindolyl group, an indolizyl group, a purinyl group, and an indazolyl group.
  • quinolyl group isoquinolyl group, quinolidyl group, phthalazinyl group, naphthyridyl group, quinoxalinyl group, quinazolinyl group, cinnolyl group, pteridyl group, imidazotriazyl group, virazinopyridazini
  • Nitrogen-containing aromatics such as ruthel groups, talidyl groups, phenanthryl groups, carbazolyl groups, perimidyl groups, phenanthral groups, phenacyl groups, etc.
  • Primitive ring group sulfur-containing aromatic heterocyclic group such as chael group and benzocher group; oxygen-containing aromatic group such as furyl group, biranyl group, cyclopentabiral group, benzofuran group and isobenzofuranyl group Heterocyclic group: thiazolyl group, isothiazolyl group, benzthiazol group, benzthiadiazolyl group, phenothiazyl group, isoxazolyl group Group such as nitrogen atom, sulfur atom, and oxygen nuclear energy such as benzene, furazal group, phenoxazyl group, biazoloxazolyl group, imidazothiazolyl group, thienofuryl group, furopyrrolyl group, pyridoxadiyl group, etc.
  • An aromatic complex ring group containing two or more different atoms can be mentioned.
  • the "6- to 14-membered non-aromatic hydrocarbon ring group” refers to a 6- to 14-cyclic aliphatic hydrocarbon group, for example, a cyclopropyl group, a cyclobutyl group, a cyclopentyl group, a cyclohexyl group , Cycloheptyl group, cyclooctyl group, spiro [3.4] octal group, decane group, indanyl group, 1-acenaphthyl group, cyclopentacyclootatur group, benzocyclooctenyl group, indur group , Tetrahydronaphthyl group, 6, 7, 8, 9-tetrahydra 5H benzocycloheptyl group, 1,4-dihydronaphthalyl group, etc., cyclic aliphatic carbonization consisting of 6 to 14 carbon atoms It means a hydrogen group.
  • a "5 or 14-membered non-aromatic heterocyclic group” means that 1) the number of atoms constituting the ring is 5, and 14; and 2) 1 to 5 atoms in the atoms constituting the ring Containing, for example, a nitrogen atom, a hetero atom such as O or S, etc. 3)
  • the ring may contain one or more carbonyl groups, double bonds or triple bonds, Not only a 14-membered non-aromatic heterocyclic monocyclic group, but also a saturated heterocyclic group condensed with an aromatic hydrocarbon cyclic group, or a saturated hydrocarbon cyclic group or saturated heterocyclic group condensed with an aromatic heterocyclic group.
  • a ring group is shown.
  • 5- to 14-membered non-aromatic heterocyclic group examples include azetidyl ring, pyrrolidyl ring, piberidyl ring, azepar ring, azo-ring ring, tetrahydrofuranyl ring, tetrahydrovillar.
  • heterocyclic group means a 5- or 14-membered aromatic heterocyclic group or a 5- or 14-membered non-aromatic heterocyclic group.
  • Preferable groups in the "hydroxyl group having a protecting group” include, for example, a methoxymethyl ether group, a tetrahydrovinyl ether group, a tertiary butyl ether group, a aryl ether group, a benzoate group, an acetate group, a formate group, and a crotonate group.
  • Protein labeling group means a group that chemically irreversibly binds to an amino acid residue of a protein.
  • a protein labeling group include a photoaffinity labeling group and a chemical affinity group.
  • Specific examples of the photoaffinity labeling group include a benzoyl group, a benzophenone group, an azide group, a carborazide group, a diaziridine group, an enone group, a diazo group, and a nitro group.
  • the chemical affinity group include a ketone group substituted with a halogen atom, a strong rubamoyl group or ester group, an alkylthio group, and an oxylan group.
  • the photoaffinity labeling group preferred by the photoaffinity labeling group is particularly preferably a benzophenone group, a benzoyl group, an azide group, a carborazide group, a diaziridin group, an enone group, a diazo group, or a nitro group.
  • the "group containing a protein labeling group” means that the above-described protein labeling group is an appropriate linker (for example, a linker for A described later), a 6 to 14-membered aromatic hydrocarbon ring group,
  • C5 C6 alkyl group CI—C6 alkoxy group, C2—C6 alkenyl group, C2—C 6 substituted or directly substituted via a 14-membered aromatic heterocyclic group Alkynyl group, phenol group, naphthyl group, benzoyl group and the like can be mentioned.
  • the "group to be bound to a solid phase carrier” means a group that can be bound to a solid phase carrier having a functional group.
  • a solid phase carrier has an amino group, a carbonyl group, an ester group, a carboxyl group, an isocyanate group, etc.
  • the solid phase carrier has a carboxyl group, the amino group, etc.
  • Group or alkynyl group In the case where it has, a strong solid phase carrier such as a halogen atom, methanesulfonate group or azide group may contain an amino group, a hydroxyl group, a thiol group and the like when it has a halogen atom.
  • the substituent group Al, the substituent group A2, the substituent group A3, the substituent group A4 and the substituent group A5 represent the following groups.
  • Substituent group A1 is a halogen atom, cyano group, nitro group, C3-8 cycloalkyl group, C2-6 alkyl group, C2-6 alkyl group, C1-6 alkoxy group, C3-8 Cycloalkoxy group, formyl group, C1 6 alkyl carbo group and C1 6 alkyl group (the C1 6 alkyl group is a halogen atom, a hydroxyl group, a cyano group, a C1 6 alkoxy group, a C3-8 cycloalkyl group and a C1 6 alkyl group)
  • a protein labeling group a group containing a protein labeling group, and a group to be bound to a solid phase carrier.
  • Substituent group A2 is a halogen atom, a hydroxyl group, a cyano group, a C16 alkoxy group (the C16 alkoxy group is a halogen atom, a cyano group, a C1-6 alkoxy group, a C2-6 alkoxyl group, C2 — Group power consisting of 6 alkyl groups and C3-8 cycloalkyl groups (which may be substituted with 1 to 3 substituents selected), C3-8 cycloalkoxy groups, C2-6 alkyloxy groups and C2 — A group containing a 6 alkyloxy group, a protein labeling group and a protein labeling group.
  • Substituent group A3 may be substituted with 1 to 3 substituents selected from halogen atom and substituent group A5.
  • 6 to 14-membered aromatic hydrocarbon ring group substituent group A5 1 or 3 selected from the following: 5- or 14-membered aromatic heterocyclic group, C1-6 alkyl group (wherein the C16 alkyl group is a formyl group, a halogen atom) Atom, hydroxyl group, hydroxyl group with protecting group, cyano group, C2-6 alkyl group, C2-6 alkyl group, C3-8 cycloalkyl group, C1-6 alkoxy group, C1-6 alkylthio group, C1— 6 alkylsulfier group, C16 alkylsulfol group, C16 alkylcarbonyl group, amino group (the amino group may be optionally substituted with a C16 alkyl group having 1 to 5 halogen atoms) 1 or 3 selected from the substituent group A5, 6 or 14 and substituted
  • Substituent may be substituted with 1 to 3 substituents selected from hydrocarbon ring group, substituent group A5! /, 5 or 14 membered aromatic heterocyclic group, 1 group selected from substituent group A5 , Then 3 substitutions Substituted with a group ⁇ 6 or 14 membered non-aromatic hydrocarbon ring group, selected from substituent group A5 1 or 3 A membered non-aromatic heterocyclic group and —X—A (wherein X represents an imino group, —O or —S, and A represents one or three substituents selected from substituent group A 5) 6 or 6 or 14-membered aromatic hydrocarbon ring group or 5 or 14-membered aromatic heterocyclic group) And a group containing a C 1-6 alkoxy group, a protein labeling group, and a protein labeling group.
  • Substituent group A4 includes a hydrogen atom, a halogen atom, a hydroxyl group, a cyano group, a nitro group, a C3-8 cycloalkyl group, a C2-6 alkyl group, a C2-6 alkyl group, and a C3-8 Cycloalkoxy group, C3—8 cycloalkylthio group, formyl group, C1 6 alkyl carbo group, C1 6 alkylthio group, C1 6 alkyl sulfier group, C1 6 alkyl sulfol group, hydroxyimino group, C 1— 6Alkoxyimino group, optionally substituted with 1 to 3 substituents selected from Substituent Group A5 C 1-6 alkyl group, substituted with 1 or 3 substituents selected from Substituent Group A5 C1-6 alkoxy group, which may be substituted with 1 or 2 substituents selected from substituent group A5, or may
  • Substituent group A5 is a halogen atom, a hydroxyl group, a cyano group, a nitro group, a C3-8 cycloalkyl group, a C2-6 alkyl group, a C2-6 alkyl group, a C3-8 cycloalkoxy group, C3-8 cycloalkylthio group, formyl group, C1 6 alkyl carbo group, C1 6 alkyl Thio group, CI 6 alkyl sulfier group, C 16 alkyl sulfo group, hydroxyimino group, C 2-6 alkyloxy group, C 2-6 alkyloxy group, C 3-8 cycloalkyl sulfier group and C 3— 8 represents a group containing a cycloalkylsulfol group, a protein labeling group and a protein labeling group.
  • a protein labeling group As a group, a protein labeling group, a group containing a protein labeling group, or a group to be bonded to a solid phase carrier may be substituted.
  • Ar is an imidazolyl group which may be substituted with 1 to 3 substituents selected from the substituent group A1. is there.
  • Ar is preferably an imidazolyl group which may be substituted with one or two substituents selected from the substituent group A1.
  • Ar is a hydrogen atom, a halogen atom, a C3-8 cycloalkyl group, a C2-6 alkene.
  • the force is also selected 1 Substituted with 2 substituents
  • An imidazolyl group which may be substituted, or an imidazolyl group substituted with an azide group as a protein labeling group is more preferred
  • Ar is selected from a hydrogen atom, a halogen atom, a C3-8 cycloalkyl group and a C16 alkyl group. 1 or 2 may be substituted with 2 substituents! ⁇ More preferred is an imidazolyl group.
  • Ar is selected from the substituent group A2.
  • Ar is a hydrogen atom, a halogen atom, a cyano group, a hydroxyl group, C1-6
  • the C16 alkoxy group may be substituted with 1 to 3 substituents selected from the group consisting of C2-6 alkyl group, C2-6 alkyl group and C3-8 cycloalkyl group
  • a pyridyl group, a pyrimidyl group or a phenyl group which may be substituted with 1 to 3 substituents selected from a C2-6 alkyloxy group and a C2-6 alkyloxy group, or
  • a group having a protein labeling group a pyridinyl group, a pyrimidinyl group or a phenyl group substituted by an alkoxy group having an oxysilane group is more preferred.
  • a pyridyl group, a pyrimidyl group or a phenyl group which may be substituted with 3 to 3 substituents is more preferable.
  • pyridinyl pyrimidinyl or phenol groups that may be
  • R 1 is a group selected from the substituent group A4.
  • R 1 is a hydrogen atom or a C 1-6 alkyl group (the C 1-6 alkyl group is a hydroxyl group, a C 3-8 cycloalkyl group, a C 3-8 cycloalkoxy group, a C 1-6 alkylthio group, an amino group (the The amino group may be substituted with a C16 alkyl group having 1 to 5 halogen atoms as appropriate), or may be substituted with 1 or 3 substituents selected from Substituent Group A6.
  • X is a protein labeling group or tamper.
  • C1-6 alkylene group (the C1-6 alkylene group is a halogen atom, hydroxyl group, cyano group, C3-8 cycloalkyl group, C3-8 Cyclo An alkoxy group, a formyl group, a C16 alkyl group (the C16 alkyl group may be substituted with a hydroxyl group, and the same carbon atom on the C16 alkylene group may be substituted by 1 or 2;
  • the two C16 alkyl groups may form a cyclic group (which may be substituted with an oxygen atom having a methylene group on the ring of the cyclic group) together with the carbon atom to be bonded) , C1-6 alkoxy group, amino group (the amino group may be substituted with C1-6 alkyl group) and substituent group A5 selected from 1 to 3 substituents However, it is 5 or 1 and may be substituted with 1 or 3 substituents selected from the group consisting of 14-membered non-aromatic heterocyclic groups.
  • C16 alkylene group may be substituted by 1 or 2 and the two C16 alkyl groups may be bonded together with a carbon atom to which a cyclic group (the cyclic group is substituted).
  • X is preferably a C1-6 alkylene group (the C1-6
  • the alkylene group is preferably a C16 alkyl group (the C16 alkyl group may be substituted with a hydroxyl group! /,)!).
  • X is selected from a single bond and substituent group A5
  • R 4 represents a substituent selected from the substituent group A3;
  • Z represents a single bond, one CO—, one (CH 2) n— (here
  • n is 1 to an integer of 3) or - in CR3 ⁇ 4 6 (wherein, R 5 and R 6 represents a substituent selected from lower Symbol Substituent Group A4) indicates; Z is a single Bond, one O—, one NR
  • n represents an integer of 1 to 3
  • —CR 7 R 8 — (wherein R 7 and R 8 represent a substituent which is also selected from the following substituent group A4 force) or —O—.
  • X, X and Ar are
  • Formula ( ⁇ ) may be substituted with 1 or 4 substituents selected from Substituent Group A5, and
  • R 9 represents a substituent selected from the substituent group A4, and R 4 , X, X and Ar are
  • cyclic group represented by formula ( ⁇ ) may be substituted with a substituent of 1 or 4 selected from the substituent group A5.
  • R represents a C1-C6 alkyl group which may be substituted with a hydroxyl group
  • A, A, A and A have the aforementioned meanings.
  • the corresponding component is preferred ⁇ .
  • A represents a single bond, a protein labeling group or a group containing a protein labeling group.
  • A represents a single bond or a linker.
  • Linkers are well known in the art and include, for example, ordinary bonds (eg, ester, amide, force rubamate, ether, thioether, urea, alkyl groups having an amine group, alkaryl groups).
  • L4 is a heterocyclic ring which may have a substituent, a C1 20 alkyl group, a C2-20 alkyl group; , And C2—20 alkyl groups, L1 and L3 are each a single bond, 1 O, 1 S, 1 NH, 1 OC (0) N, 1 NC (0) 0—, 1 NC (0) N, 1 NC (O) —, 1 C (0) N, 1 C (O) or
  • L2 represents a C2-20 alkylene group, a C2-20 alkylene group, a C2-20 alkylene group, or — (CH CH 0) p
  • L3 may be a single bond, a halogen atom, a hydroxyl group, or a heterocyclic group, and L1 and L3 may form a ring with an adjacent group) Preferred linkers are listed.
  • examples of the heterocyclic ring when L3 is a heterocyclic group include triazole.
  • Examples of the case where L1 and L3 may form a ring with an adjacent group include a piperazine group.
  • A is a single bond or a cleavable linker.
  • a cleavable linker refers to a portion that does not contain a fishing tag group, a detectable marker, or a solid phase carrier from the complex after the compound for biological reagent forms a complex with a target protein. Cleavage by chemical reaction, enzyme reaction, etc. It means the best linker.
  • the chemical reaction or enzyme reaction for cleaving the linker is selected so that it is specific to the intended cleavage of the bond and does not cause an unintended reaction on the complex. Examples of such a cleavable linker include S—S—, —0-Si— o, and one monosaccharide residue.
  • a monosaccharide residue specifically,
  • monosaccharides such as glucose group and galactose group, or disaccharides such as ratatose.
  • A is a fishing tag group, and is detectable.
  • a marker, a solid phase carrier, or a group to be bound to a solid phase carrier is shown.
  • the term “phishing tag group” means a group used for separating the complex of the biological reagent compound and the target protein to separate the protein force without forming a complex. Phishing tag groups include, for example, piotin, 3-(4,4-difluoro-1,5, dimethyl-1,4H—3a, 4a-diaza, 4-bora, s-indacene, 3-yl) propiol groups.
  • a detectable marker means a radioactive label, a fluorescent label, a chemiluminescent label, a heavy metal ion, and the like.
  • detectable markers include radioactive labeling groups such as 125 I, 32 P, 3 H, and “C; fluorescein, rhodamine, downsyl, umbelliferone, 7—trotroazal, 3— (4, 4— Difluoro-5,7-dimethyl-4H-3a, 4a-diaza 4-bora s-indacene 3-yl) propiol and other fluorescent labeling groups; luminiferin, luminol and other chemiluminescent groups; lanthanoid metal ions Heavy metal ions such as radium ions, etc.
  • Solid phase carrier means a solid carrier that can be bonded to a linker having a functional group, such as glass beads, glass beds, microbe. Examples include titer plates, agarose beads, agarose beds, polystyrene beads, polystyrene beds, nylon beads, nylon beds.
  • X is a protein labeling group or tan
  • A binds the solid phase carrier or the solid phase carrier.
  • A is preferably the linker.
  • the compound for biological reagent of formula (I) of the present invention may be in the form of a salt.
  • hydrofluoric acid salts such as hydrofluoride, hydrochloride, hydrobromide, hydroiodide; sulfate, nitrate, perchlorate, phosphate, carbonate, bicarbonate
  • Inorganic acids such as salts; organic carboxylates such as acetate, oxalate, maleate, tartrate, fumarate, citrate; methanesulfonate, trifluoromethanesulfonate, ethanesulfonate
  • Organic sulfonates such as acid salts, benzene sulfonates, toluene sulfonates and camphor sulfonates; amino acid salts such as aspartate and glutamate; quaternary amine salts; alkali metal salts such as sodium salts and potassium salts And alkaline earth metal salts such as magnesium salts such
  • A is used for fishing.
  • tag group is one having piotin or 3- (4,4-difluoro-5,7-dimethyl-4H—3a, 4 a diaza-4-bora-s indacene-3-yl) propiol group.
  • Specific examples include the following compounds.
  • a protective group known to those skilled in the art suitable for each step in conveniently producing the compound of the present invention for example, T. Greene et al., “Protective Groups in Organic Synthesis” (John Wiley & Sons. Inc., New York, Needless to say, it includes a protection reaction step and a deprotection reaction step as appropriate.
  • Y and Y are hydrogen atoms, fluorine atoms, chlorine atoms, bromine atoms, iodine atoms, etc.
  • Alkyl tin groups such as logogen atoms, trifluoromethanesulfonic acid ester groups and trimethyltin groups, alkyne groups such as boronic acid groups, boronic acid ester groups and acetylene groups, alkene groups such as vinyl groups, azide groups, carboxyl groups, amino acids Group and hydroxyl group.
  • [General production method 1] is an example of a method for producing a compound of the general formula (I) by condensing the compound (4) and the compound (5) according to [Step 1-3].
  • the compound of the general formula (I) can be prepared by condensing the compound (4) and the compound (5) according to [Step 1-3]. That is, [Step 1-3] varies depending on the starting material, but is not particularly limited as long as it is a condition like this reaction, and known methods described in many literatures can be used. For example, i) a method in which a carboxylic acid compound is converted into an acid halide, and then the acid halide compound is reacted with an amine compound under basic conditions (for example, “New Experimental Chemistry Course edited by Japan Chemical Society”).
  • the acid halogenation reaction is a method of converting the compound (4) (where Y represents a carboxyl group) into an acid halide.
  • the solvent and reaction temperature used in this reaction vary depending on the starting materials and are not particularly limited. There is no particular limitation, and a known method can be used.
  • the compound (a) is a known method.
  • the compound (a) is a known method.
  • the solvent to be used varies depending on the starting material and is not particularly limited, but is preferably an inert solvent such as, for example, chloride methylene, toluene, tetrahydrofuran or the like.
  • the reaction temperature should be a temperature that is sufficient to complete the reaction without promoting formation of undesirable by-products, and is preferably ice-cold to 100 ° C.
  • the base to be used varies depending on the starting materials and is not particularly limited.
  • the solvent used is not particularly limited as long as it does not inhibit the reaction and dissolves the starting materials to some extent! However, preferably, for example, methylene chloride, toluene, tetrahydrofuran, 1,4-dioxane, water, etc. Or a mixture of them.
  • a base may be used as a solvent.
  • the reaction temperature should be a temperature that is sufficient to complete the reaction without promoting formation of undesirable by-products, and is preferably ice-cold to 100 ° C. This reaction is completed in 1 to 24 hours, and the progress of the reaction can be monitored by known chromatographic techniques. Desirably, by-products can be removed by conventional chromatographic techniques or techniques known to those skilled in the art such as Z and crystallization.
  • this reaction is carried out, for example, when Y of compound (4) is an amino group or a hydroxyl group, and Y of compound (5)
  • the condensing agent to be used varies depending on the starting materials and is not particularly limited. However, for example, 1,3-dicyclohexylcarbodiimide, 1-ethyl-3- (3′-dimethylaminopropyl) is preferable. And carbodiimide or benzotriazole-1-yloxytris (dimethylamino) phospho-hexafluorophosphate.
  • N-hydroxysuccinimide, N-hydroxybenzotriazole, etc. may be added in an amount of 1.0 to 2.0 equivalents relative to compound (4).
  • the solvent to be used varies depending on the starting material and the condensing agent to be used, and is not particularly limited as long as it does not inhibit the reaction and dissolves the starting material to some extent.
  • methylene chloride 1, 2— Halogen solvents such as dichloroethane or polar solvents such as tetrahydrofuran, N, N-dimethylformamide.
  • the reaction temperature should be a temperature that is sufficient to complete the reaction without promoting formation of undesirable by-products, and is preferably ice-cold to 100 ° C., for example. Under preferred reaction conditions, the reaction is complete in 1-24 hours and the progress of the reaction can be monitored by known chromatographic techniques. Undesirable by-products can be removed by conventional chromatographic techniques or techniques known to those skilled in the art such as Z and crystallization.
  • this reaction is carried out, for example, when Y of compound (4) is an amino group and Y of compound (5) is a carboxy group.
  • iii) is a condensation reaction using the Mizorogi-Heck reaction.
  • Mizorogi-In the case of the Heck reaction preferably, for example, compound (4) (where Y represents a halogen atom such as a chlorine atom, a bromine atom or an iodine atom, or a sulfonate group such as a triflate group) )
  • compound (4) where Y represents a halogen atom such as a chlorine atom, a bromine atom or an iodine atom, or a sulfonate group such as a triflate group
  • the solvent to be used varies depending on the starting material and the transition metal catalyst to be used, and is not particularly limited as long as it does not inhibit the reaction and dissolves the starting material to some extent.
  • acetonitrile, tetrahydrofuran, 1, 4 — Examples include dioxane, 1,2-dimethoxyethane, benzene, toluene, xylene, 1-methyl-2-pyrrolidone, N, N-dimethylformamide and the like.
  • the transition metal catalyst used is preferably, for example, a palladium complex, and more preferably, for example, palladium acetate ( ⁇ ), dichlorobis (triphenylphosphine) palladium ( ⁇ ), tetrakis (triphenyl).
  • Known palladium complexes such as phosphine) palladium (0) and tris (dibenzylideneacetone) dipalladium (0) can be mentioned.
  • a phosphorus ligand preferably, for example, triphenylphosphine, trio-tolylphosphine, tritertiarybutylphosphine, 2- (ditertiarybutylphosphine) is used.
  • Ino) bifuel etc. may be added as appropriate.
  • a preferable result may be given in the presence of a base, and the base to be used is not particularly limited as long as it is used in this reaction-like coupling reaction.
  • the base to be used is not particularly limited as long as it is used in this reaction-like coupling reaction.
  • triethylamine, N examples thereof include N-diisopropylethylamine, N, N-dicyclohexylmethylamine, tetraptylammonium chloride and the like.
  • the reaction temperature should be a temperature sufficient to complete the coupling reaction, and is preferably room temperature to 150 ° C., for example.
  • This reaction is preferably performed in an inert gas atmosphere, more preferably, for example, in a nitrogen or argon atmosphere.
  • the reaction is complete in 1-24 hours and the progress of the reaction can be monitored by known chromatographic techniques. Undesirable by-products can be removed by conventional chromatographic techniques or techniques known to those skilled in the art such as Z and crystallization.
  • this reaction may be carried out, for example, when Y in compound (4) is an alkene group and Y in compound (5) is a chlorine atom.
  • the desired compound of the general formula (I) can be efficiently obtained even by a combination of a halogen atom such as a 12 atom, a bromine atom or an iodine atom, or a sulfonate group such as a triflate group.
  • a halogen atom such as a 12 atom, a bromine atom or an iodine atom
  • a sulfonate group such as a triflate group.
  • iv) is a condensation reaction using the Suzuki-Kajiura reaction.
  • Suzuki-Kajiura reaction preferably, for example, compound (4) (wherein Y represents a halogen atom such as a chlorine atom, a bromine atom or an iodine atom, or a sulfonate group such as a triflate group).
  • Y represents a halogen atom such as a chlorine atom, a bromine atom or an iodine atom, or a sulfonate group such as a triflate group.
  • Solvents used include starting materials, use The starting material is not particularly limited as long as it varies depending on the transition metal catalyst to be used and does not inhibit the reaction but dissolves the starting material to some extent. Preferably, for example, acetonitrile, tetrahydrofuran, 1,4 dioxane, 1,2 dimethoxyethane , Benzene, toluene, xylene, 1-methyl-2-pyrrolidone, N, N dimethylformamide, water, or a mixed solvent thereof.
  • the transition metal catalyst used is preferably, for example, a known paradium complex, and more preferably, for example, palladium acetate ( ⁇ ), dichroic bis (triphenylphosphine) palladium ( ⁇ ), tetrakis (triphenyl).
  • Known palladium complexes such as -lphosphine) palladium (0), tris (dibenzylideneacetone) dipalladium (0), and the like.
  • a phosphorus ligand preferably, for example, triphenylphosphine, tritolylphosphine, tricyclohexylphosphine, treater tributylphosphine, etc.
  • a phosphorus ligand preferably, for example, triphenylphosphine, tritolylphosphine, tricyclohexylphosphine, treater tributylphosphine, etc.
  • a quaternary ammonium salt preferably, for example, a salted tetratetramyl ammonium, a odorized tetraptyl ammonium or the like may be appropriately added.
  • the base to be used varies depending on the starting material, the solvent to be used, etc., and is not particularly limited.
  • sodium hydroxide, barium hydroxide, potassium fluoride, cesium fluoride, sodium carbonate, sodium carbonate, cesium carbonate, potassium phosphate and the like can be mentioned.
  • the reaction temperature should be a temperature sufficient to complete the coupling reaction, and is preferably room temperature to reflux of the solvent, for example.
  • This reaction is preferably performed, for example, in an inert gas atmosphere, and more preferably, for example, in a nitrogen or argon atmosphere.
  • the reaction is complete in 1-24 hours and the progress of the reaction can be monitored by known chromatographic techniques.
  • the reaction is completed in 1-24 hours and the progress of the reaction can be monitored by known chromatographic techniques.
  • Undesirable by-products can be removed by conventional chromatographic techniques or techniques known to those skilled in the art such as Z and crystallization.
  • Y of the compound (4) is a boronic acid or boronic acid ester group
  • Y of the compound (5) is a halogen atom such as a chlorine atom, a bromine atom or an iodine atom, or bird
  • v) is a condensation reaction using the fungus head reaction.
  • fungus head reaction preferably, for example, compound (4) (where Y is a halogen atom such as a chlorine atom, a bromine atom or an iodine atom, or a sulfonate group such as a triflate group).
  • compound (4) where Y is a halogen atom such as a chlorine atom, a bromine atom or an iodine atom, or a sulfonate group such as a triflate group.
  • compound (5) wherein Y represents An acetylene group
  • the solvent to be used varies depending on the starting material and the transition metal catalyst to be used, and is not particularly limited as long as it does not inhibit the reaction and dissolves the starting material to some extent.
  • acetonitrile, tetrahydrofuran, 1 , 4-dioxane, 1,2-dimethoxyethane, benzene, toluene, xylene, 1-methyl-2-pyrrolidone, N, N-dimethylformamide, dimethyl sulfoxide, etc. more preferably, for example, tetrahydrofuran, 1, 4-Dioxane, 1-methyl-2-pyrrolidone, N, N-dimethylformamide and the like.
  • the transition metal catalyst used is preferably, for example, a known palladium complex, and more preferably, for example, palladium acetate ( ⁇ ), dichroic bis (triphenylphosphine) palladium ( ⁇ ), tetrakis (triphenyl).
  • palladium complexes such as -lphosphine) palladium (0) and tris (dibenzylideneacetone) dipalladium (0) can be mentioned.
  • a phosphorus ligand preferably, for example, triphenylphosphine, trio-trinolephosphine, tricyclohexylphosphine, treater tributylphosphine, etc.
  • this reaction is carried out according to necessity, such as a halogenated metal or a quaternary ammonium salt, preferably, for example, copper iodide (1), lithium chloride, tetrafluorobutyl ammonium fluoride or acid salt.
  • Silver (I) or the like can also be added.
  • there may be a preferable result in the presence of a salt group and the base used in this case is not particularly limited as long as it is used in the coupling reaction like this reaction.
  • the reaction temperature should be a temperature sufficient to complete the coupling reaction, and is preferably room temperature to reflux of the solvent.
  • This reaction is preferably performed, for example, in an inert gas atmosphere, and more preferably, for example, in a nitrogen or argon atmosphere.
  • the reaction is complete in 1-24 hours and the progress of the reaction can be monitored by known chromatographic techniques.
  • this reaction is 1 to 24 Completing in time, the progress of the reaction can be monitored by known chromatographic techniques. Undesirable by-products can be removed by conventional chromatographic techniques or techniques known to those skilled in the art such as Z and crystallization.
  • Stille reaction preferably, for example, compound (4) (wherein Y represents a halogen atom such as a chlorine atom, a bromine atom or an iodine atom, or a sulfonate group such as a triflate group).
  • compound (4) wherein Y represents a halogen atom such as a chlorine atom, a bromine atom or an iodine atom, or a sulfonate group such as a triflate group.
  • compound (4) wherein Y represents a halogen atom such as a chlorine atom, a bromine atom or an iodine atom, or a sulfonate group such as a triflate group.
  • compound (5) wherein Y represents a trialkyltin group
  • the solvent to be used varies depending on the starting material, and is not particularly limited as long as it does not inhibit the reaction and dissolves the starting material to some extent.
  • the transition metal catalyst used is, for example, a palladium complex, preferably, for example, palladium acetate ( ⁇ ), dichroic bis (triphenylphosphine) palladium ( ⁇ ), tetrakis (triphenylphosphine) palladium (0 ), Tris (dibenzylideneacetone) dipalladium (0) and the like, and more preferably, for example, tetrakis (triphenylphosphine) palladium (0), tris (dibenzylideneacetone) di palladium (0). Palladium (0) etc. are mentioned.
  • This reaction is preferably performed, for example, in an inert gas atmosphere, and more preferably, for example, in a nitrogen or argon atmosphere.
  • the reaction temperature should be a temperature sufficient to complete the coupling reaction, and is preferably from room temperature to the reflux temperature of the solvent. Under preferred reaction conditions, the reaction is complete in 1-24 hours and the progress of the reaction can be monitored by known chromatographic techniques. Undesirable by-products can be removed by conventional chromatographic techniques or techniques known to those skilled in the art such as Z and crystallization.
  • this reaction may be carried out, for example, when Y of compound (4) is a trialkyltin group, Y of compound (5)
  • Examples of vii) include 1) amination reaction using a transition metal catalyst, or 2) amination reaction by nucleophilic substitution reaction.
  • compound (4) (wherein Y represents a chlorine atom, a bromine atom, a halogen atom such as an iodine atom, or a sulfonate group such as a triflate group).
  • Y represents a chlorine atom, a bromine atom, a halogen atom such as an iodine atom, or a sulfonate group such as a triflate group.
  • the solvent to be used is not particularly limited as long as it varies depending on the starting material and does not inhibit the reaction and dissolves the starting material to some extent.
  • the transition metal catalyst to be used is, for example, a palladium complex, and preferably, for example, palladium acetate ( ⁇ ), dichroic bis (triphosphine) palladium ( ⁇ ), tetrakis (triphenylphosphine) palladium (0 ), Tris (dibenzylideneacetone) dipalladium (0) and the like, and more preferable examples include tetrakis (triphenylphosphine) palladium (0), tris (dibenzylideneacetone), and the like. Examples include dipalladium (0).
  • a phosphorus ligand preferably, for example, triphenylphosphine, tri o-tolyl phosphine, treater butyl phosphine, 2- (ditertiary butyl phosphino) Biphenyl, 2,2,1bis (diphenylphosphino) -1,1,1, binaphthyl, 1,2-bis (diphenylphosphino) ethane or 1,1,1bis (diphenylphosphino) phenol ) Etc.
  • a phosphorus ligand preferably, for example, triphenylphosphine, tri o-tolyl phosphine, treater butyl phosphine, 2- (ditertiary butyl phosphino) Biphenyl, 2,2,1bis (diphenylphosphino) -1,1,1, binaphthyl, 1,2-bis (diphenylphosphino) ethane or 1,1,1bis (
  • a preferable result may be obtained in the presence of a base, and the base to be used is not particularly limited as long as it is used in this reaction-like coupling reaction.
  • sodium hydroxide is used.
  • This reaction is preferably performed, for example, in an inert gas atmosphere, and more preferably, for example, in a nitrogen or argon atmosphere.
  • the reaction temperature should be a temperature sufficient to complete the coupling reaction, It is preferably room temperature to the reflux temperature of the solvent.
  • reaction is complete in 1-24 hours and the progress of the reaction can be monitored by known chromatographic techniques. Undesirable by-products can be removed by conventional chromatographic techniques or techniques known to those skilled in the art such as Z and crystallization.
  • this reaction may be carried out, for example, when Y in compound (4) is an amino group, Y in compound (5) is a halogen atom such as a chlorine atom, bromine atom or iodine atom, or
  • the desired compound of the general formula (I) can be efficiently obtained even by a combination of a sulfonate group such as a rate group.
  • compound (4) (wherein Y represents a halogen atom such as a chlorine atom, a bromine atom or an iodine atom, or a sulfonate group such as a triflate group).
  • Y represents a halogen atom such as a chlorine atom, a bromine atom or an iodine atom, or a sulfonate group such as a triflate group.
  • a solvent in a solvent.
  • the solvent to be used varies depending on the starting material and is not particularly limited as long as it does not inhibit the reaction and dissolves the starting material to some extent.
  • acetonitrile, tetrahydrofuran, 1,4-dioxane examples include 1,2-dimethoxyethane, benzene, toluene, xylene, 1-methyl-2-pyridone, and N, N-dimethylformamide.
  • a preferable result may be given in the presence of a base, and the base to be used is not particularly limited as long as it is used in a coupling reaction like this reaction.
  • water is used.
  • reaction temperature should be a temperature sufficient to complete the coupling reaction, and is preferably room temperature to the reflux temperature of the solvent. Under preferred reaction conditions, the reaction is complete in 1 to 24 hours and the progress of the reaction can be monitored by known chromatographic techniques. Desirably, by-products can be removed by conventional chromatographic techniques or techniques known to those skilled in the art such as Z and crystallization. In addition, this reaction is carried out, for example, when Y of compound (4) is an amino group and Y of compound (5) is a salt.
  • a desired compound of the general formula (I) can be efficiently obtained by a combination of a halogen atom such as a 12 atom, bromine atom or iodine atom, or a sulfonate group such as a triflate group.
  • a halogen atom such as a 12 atom, bromine atom or iodine atom
  • a sulfonate group such as a triflate group.
  • compound (4) (wherein represents a halogen atom such as a chlorine atom, a bromine atom or an iodine atom, or a sulfonate group such as a triflate group),
  • compound (5) (where Y represents a hydroxyl group) in the presence of compound (4) as a solvent
  • Examples of the solvent to be used include a stirring method, and are not particularly limited as long as they vary depending on the starting materials and can dissolve the starting materials to some extent without inhibiting the reaction.
  • acetonitrile, tetrahydrofuran are used.
  • the transition metal catalyst to be used is, for example, a palladium complex, and preferably, for example, palladium acetate ( ⁇ ), dichroic bis (triphenylphosphine) palladium ( ⁇ ), tetrakis (triphenylphosphine) palladium (0) And known palladium complexes such as tris (dibenzylideneacetone) dipalladium (0), and more preferably, for example, tetrakis (triphenylphosphine) palladium (0), tris (dibenzylideneacetone) dipalladium ( 0) and the like.
  • palladium complex preferably, for example, palladium acetate ( ⁇ ), dichroic bis (triphenylphosphine) palladium ( ⁇ ), tetrakis (triphenylphosphine) palladium (0)
  • known palladium complexes such as tris (dibenzylideneacetone) dipalladium (0),
  • a phosphorus ligand preferably, for example, triphenylphosphine, tri -.- tolylphosphine, treater butylphosphine, 2- (ditertiary butylphosphine) is used.
  • Bifeninole 2, 2, 1 Bis (diphenylphosphino) 1, 1, 1 Binaphthyl, 1, 2-bis (diphenylphosphino) ethane, [2,-(Ditert-butylphosphino) ] -2-Dimethylamino 1,1'-binaphthyl or 1,1,1bis (diphenylphosphino) phenol etc.) may be added as appropriate.
  • a preferable result may be obtained in the presence of a base, and the base to be used is not particularly limited as long as it is used in a coupling reaction like this reaction.
  • This reaction is preferably performed, for example, in an inert gas atmosphere, and more preferably, for example, in a nitrogen or argon atmosphere.
  • the reaction temperature should be a temperature that is sufficient to complete the coupling reaction, and is preferably room temperature to the reflux temperature of the solvent. Under preferred reaction conditions, the reaction is complete in 1-24 hours The progress of the reaction can be monitored by a known chromatography technique. Undesirable by-products can be removed by conventional chromatographic techniques or techniques known to those skilled in the art such as Z and crystallization.
  • this reaction may be carried out, for example, when Y of compound (4) is a hydroxyl group and Y of compound (5)
  • compound (4) (wherein Y represents a halogen atom such as a chlorine atom, a bromine atom or an iodine atom, or a sulfonate group such as a triflate group). , 1.0-5.0 equivalents of compound (5) with respect to compound (4) (where Y is water
  • a solvent in a solvent.
  • the solvent used varies depending on the starting material, and is not particularly limited as long as it does not inhibit the reaction and dissolves the starting material to some extent.
  • acetonitrile, tetrahydrofuran, 1,4 dioxane, 1, Examples include 2-dimethoxyethane, benzene, toluene, xylene, 1-methyl-2-pyrrolidone, and N, N dimethylformamide.
  • a preferable result may be obtained in the presence of a base, and the base to be used is not particularly limited as long as it is used in a coupling reaction like this reaction.
  • Examples thereof include sodium, barium hydroxide, potassium fluoride, cesium fluoride, sodium carbonate, potassium carbonate, cesium carbonate, potassium phosphate, and sodium tertiary butoxide.
  • good results can be obtained by adding 0.1 to 10.0 equivalents of metal copper or copper halide (preferably, for example, copper chloride, copper iodide, etc.) to compound (4).
  • the reaction temperature should be a temperature sufficient to complete the coupling reaction, and is preferably room temperature to the reflux temperature of the solvent. Under preferred reaction conditions, the reaction is complete in 1 to 24 hours and the progress of the reaction can be monitored by known chromatographic techniques.
  • by-products can be removed by conventional chromatographic techniques or techniques known to those skilled in the art such as Z and crystallization.
  • this reaction may be performed, for example, by Y of compound (4) being a hydroxyl group and Y of compound (5) being a salt.
  • a desired compound of the general formula (I) can be efficiently obtained by a combination of a halogen atom such as a 12 atom, bromine atom or iodine atom, or a sulfonate group such as a triflate group.
  • Compound (4) can be produced by a known method described in International Publication No. WO2005Z115990. For example, it can be produced by the method of the following scheme.
  • a protective group such as a carboxyl group such as a group, an ethyl group, a benzyl group, an aryl group, a trifluoromethyl group, a tertiary butyl group, a methoxymethyl group or a tertiary butyldimethylsilyl group]
  • Compound (5) is commercially available, or when not commercially available, it can be synthesized, for example, by the method of the following scheme.
  • Sulfide group such as lupoxyl group, amino group, hydroxyl group, thiol, alkyne group such as azide, acetylene group, alkene group such as vinyl group, fluorine atom, chlorine atom, bromine atom, iodine atom, etc.
  • a sulfonate group such as a halogen atom or a triflate group is shown.
  • these functional groups may have a protective group as appropriate.
  • Compound (5) was prepared by coupling compound (d) and compound (e) according to [Step 5-1] to give compound (a), and then combining compound (a) and compound (c) with [Step 5— It can be prepared by coupling according to 2].
  • the compound (f) and the compound (c) are coupled according to [Step 5-2], led to the compound (b), and then the compound (b) and the compound (d) are cut according to [Step 5-1]. It can be similarly prepared by pulling.
  • the reaction i) comprises an acid halogenation reaction followed by a condensation reaction.
  • the halogenating agent used depends on the starting material, and in particular Although not limited, preferred are, for example, salt and salt, salt and oxalyl.
  • the solvent used varies depending on the starting material, and is not particularly limited as long as it does not inhibit the reaction and dissolves the starting material to some extent, but is preferably an inert solvent such as methylene chloride, toluene, tetrahydrofuran or the like. is there.
  • a catalytic amount of N, N-dimethylformamide or the like may be added as appropriate.
  • the reaction temperature should be a temperature that is sufficient to complete the reaction without promoting formation of undesirable by-products, and is preferably ice-cold to 100 ° C., for example. Under preferred reaction conditions, the reaction is complete in 1-24 hours and the progress of the reaction can be monitored by known chromatographic techniques. Undesirable by-products can be removed by conventional chromatographic techniques or techniques known to those skilled in the art such as Z and crystallization.
  • the obtained acid halide is converted into acid halide and acidogen in the presence of 1.0 to: LO. 0 equivalents of compound (e), compound (c) or compound (b) (where Y, Y or Y is an amino group or hydroxyl group)
  • the base to be used varies depending on the starting material and is not particularly limited, but preferably, for example, pyridine, lutidine, quinoline, isoquinoline, triethylamine, N, N-diisopropylethylamine, sodium hydroxide, hydroxide Potassium and the like.
  • the solvent used is not particularly limited as long as it does not inhibit the reaction and dissolves the starting materials to some extent, but preferably, for example, methylene chloride, toluene, tetrahydrofuran, 1,4-dioxane, water, etc., or The mixture.
  • a base may be used as a solvent.
  • the reaction temperature should be a temperature that is sufficient to complete the reaction without promoting formation of undesirable by-products, and is preferably ice-cold to 100 ° C., for example.
  • This reaction is completed in 1 to 24 hours, and the progress of the reaction can be monitored by a known chromatographic technique. Undesirable by-products can be removed by conventional chromatographic techniques or techniques known to those skilled in the art such as Z and crystallization. Further, in this reaction, even when the combination of the carboxyl group and the amino group or hydroxyl group is reversed, a desired coupling product can be obtained efficiently.
  • the compound (d), the compound (a), or the compound (f) (wherein Y, Y and Y represent a carboxyl group) and the compound (d) Compound (a) is In the presence of 1.0 to 2.0 equivalents of a condensing agent relative to compound (f), 0.5 to 2.0, etc. relative to compound (d), compound (a) or compound (f) Compound (e), compound (c) or compound (b) (wherein Y, Y, or Y represents an amino group or a hydroxyl group).
  • the condensing agent to be used varies depending on the starting material and is not particularly limited, but preferably, for example, 1,3-dicyclohexylcarbodiimide, 1-ethyl-3- (3, -dimethylaminopropyl) carbodiimide Benzotriazole-1-yloxytris (dimethylamino) phospho-hexafluorophosphate, and the like.
  • N-hydroxysuccinimide, N-hydroxybenzotriazole and the like may be added in an amount of 1.0 to 2.0 equivalents.
  • the solvent to be used varies depending on the starting material and the condensing agent to be used, and is not particularly limited as long as it does not inhibit the reaction and dissolves the starting material to some extent.
  • methylene chloride, 1, 2— Examples include halogen solvents such as dichloroethane or polar solvents such as tetrahydrofuran, N, N-dimethylformamide.
  • the reaction temperature should be a temperature that is sufficient to complete the reaction without promoting formation of undesirable by-products, and is preferably ice-cold to 100 ° C., for example. Under preferred reaction conditions, the reaction is complete in 1-24 hours and the progress of the reaction can be monitored by known chromatographic techniques. Undesirable by-products can be removed by conventional chromatographic techniques or techniques known to those skilled in the art such as Z and crystallization.
  • the reaction is easy to use and has the ability to stir.
  • the solvent used preferably in the presence of a solvent varies depending on the starting material and can dissolve the starting material to some extent without inhibiting the reaction. Is not particularly limited, but preferably, for example, jetyl ether, tetrahydrofuran, etc. It is.
  • the reaction temperature should be a temperature that is sufficient to complete the reaction without promoting the formation of the preferred! / ⁇ by-product, and is from room temperature to 100 ° C. Under preferred reaction conditions, the reaction is complete in 30 minutes to 24 hours, and the progress of the reaction can be monitored by known chromatographic techniques. Undesirable by-products can be removed by conventional chromatographic techniques or techniques known to those skilled in the art such as Z and crystallization.
  • reaction of iii) is carried out by reacting compound (f) (wherein Y represents a thiol group) and compound (c) (
  • the desired coupling compound can be obtained.
  • the technique to do is mentioned.
  • the metal catalyst used preferably includes, for example, copper (II) sulfate, copper iodide (1), copper bromide (I), copper (I) chloride and the like.
  • ascorbic acid sodium ascorbate may be added as appropriate in order to allow the reaction to proceed efficiently.
  • the solvent to be used varies depending on the starting material and the metal catalyst used, and is not particularly limited as long as it does not inhibit the reaction and dissolves the starting material to some extent.
  • reaction temperature should be a temperature sufficient to complete the coupling reaction, and is preferably room temperature to 150 ° C.
  • a preferable result may be obtained in the presence of a base, and the base to be used is not particularly limited as long as it is used in a coupling reaction like this reaction, but preferably, for example, triethylamine.
  • reaction is complete in 1-36 hours and the progress of the reaction can be monitored by known chromatographic techniques. Hope The minor by-products can be removed by conventional chromatographic techniques or techniques known to those skilled in the art such as z and crystallization.
  • this reaction involves reacting compound (f) (where Y represents an azide group) and compound (c)
  • Y represents an alkyne group.
  • a compound (a) (where Y
  • ⁇ represents an azide group.
  • a pulling grade can be obtained.
  • this reaction can efficiently obtain a desired coupling product even when the combination of an azide group and an alkyne group is reversed.
  • the solvent to be used varies depending on the starting material and is not particularly limited as long as it does not inhibit the reaction and dissolves the starting material to some extent.
  • acetonitrile, tetrahydrofuran, 1,4 dioxane, 1, Examples include 2-dimethoxyethane, benzene, toluene, xylene, 1-methyl 2-pyrrolidone, and N, N-dimethylformamide.
  • the transition metal catalyst to be used varies depending on the starting material and is not particularly limited, but is preferably, for example, a palladium complex, and more preferably, for example, palladium acetate ( ⁇ ), dichroic bis (triphenylphosphine) paradi Well-known noradium complexes such as um ( ⁇ ), tetrakis (triphenylphosphine) palladium (0), tris (dibenzylideneacetone) dipalladium (0) and the like can be mentioned.
  • a phosphorus ligand preferably, for example, triphenyl phosphine, tri-o-tolyl phosphine, treater butyl phosphine, 2- (di-tertiary butyl phosphino) Biphenyl, 2,2,1bis (diphenylphosphino) 1,1,1'-binaphthyl, 1,2-bis (diphenylphosphino) ethane or 1,1'-bis (diphenylphosphino) phthalcene) Etc.
  • a base to be used is not particularly limited as long as it is used in this reaction-like coupling reaction.
  • sodium hydroxide, barium hydroxide examples include potassium fluoride, cesium fluoride, sodium carbonate, potassium carbonate, cesium carbonate, potassium phosphate, and sodium tertiary butoxide.
  • This reaction is preferably performed, for example, in an inert gas atmosphere, and more preferably, for example, in a nitrogen or argon atmosphere.
  • the reaction temperature should be a temperature sufficient to complete the coupling reaction, and is preferably room temperature to the reflux temperature of the solvent. Under preferred reaction conditions, the reaction is complete in 1-24 hours and the progress of the reaction can be monitored by known chromatographic techniques. Undesirable by-products can be removed by conventional chromatographic techniques or techniques known to those skilled in the art such as Z and crystallization.
  • This reaction is carried out by reacting compound (f) (where Y is a chlorine atom, bromine atom, iodine atom, etc.)
  • Y is a halogen atom such as a chlorine atom, bromine atom or iodine atom, or a triflate group
  • ⁇ represents a halogen atom such as a chlorine atom, a bromine atom or an iodine atom, or a sulfonate group such as a triflate group
  • a desired coupling product can be obtained efficiently.
  • the desired coupling can be efficiently performed even in the combination of a leaving group such as a halogen atom such as a chlorine atom, a bromine atom or an iodine atom, or a sulfonate group such as a triflate group and an alkene group.
  • a leaving group such as a halogen atom such as a chlorine atom, a bromine atom or an iodine atom, or a sulfonate group such as a triflate group and an alkene group.
  • a grade can be obtained.
  • A4 is a solid phase carrier
  • the solid phase carrier is mixed with a solvent, homogenized, and then subjected to filtration, whereby a purification operation can be easily performed.
  • Q_ ⁇ XI people ⁇ + ⁇ 9 - ⁇ 2 - ⁇ 10 is about 1 '— 3 ] people ⁇ ⁇ ⁇ - ⁇ ⁇ — ⁇ - ⁇ ⁇ "- ⁇ 3 - ⁇ 12
  • ⁇ , ⁇ , ⁇ , ⁇ and ⁇ are hydrogen atom, fluorine atom, chlorine atom, bromine atom,
  • Halogen atoms such as iodine atoms, alkyltin groups such as trifluoromethanesulfonic acid ester groups and trimethyltin groups, alkyne groups such as boronic acid groups, boronic acid ester groups, and acetylene groups, alkene groups such as vinyl groups, and azides
  • a sulfide group such as a group, carboxyl group, amino group, hydroxyl group and thiol.
  • the above [General production method 2] shows an example of the preparation method of the general formula (I) as an alternative method. That is, the compound (4) and the compound (g) are condensed according to the method of [Step 1-3] and led to the compound (h), and according to the above [Step 5-1], the compound (h) and the compound ( This shows a method for producing a compound of general formula (I) by condensing compound (j) and compound (k) according to the above [Step 5-2] by condensing i) to compound (j). is there.
  • There are no particular limitations as long as the conditions are the same as in this step, and known methods described in many literatures can be used (for example, Y. Feng, “Bioorg. Med. Chem. Lett.”, 1998). , 8 ⁇ , p881-884).
  • the compound (g), compound (i), and compound (k) used in this step are commercially available, or commercially available raw materials are converted into protection / deprotection reactions known to those skilled in the art (for example, T. Greene et al., fprote ctive Groups in Organic Synthesis J (see John Wiley & Sons. Inc., New York, 1981).
  • 16 is a hydrogen atom, a fluorine atom, a chlorine atom, a bromine atom, a halogen atom such as an iodine atom, an alkyltin group such as a trifluoromethanesulfonic acid ester group or a trimethyltin group, a boronic acid group, a boronic acid ester group, or an acetylene group
  • an alkyne group such as alkene, a alkene group such as a bur group, a sulfide group such as an azide group, a carboxyl group, an amino group, a hydroxyl group, and a thiol.
  • the above [General production method 3] shows an example of the preparation method of the general formula (I) as an alternative method. That is, according to the above [Step 5-2], the compound (1) and the compound (m) are condensed and converted into the compound (n), and then the compound (n) is converted according to the above [Step 5-1].
  • This shows a method for producing a compound of general formula (I) by condensing with compound (h). If the conditions of this process There is no particular limitation, and known methods described in many literatures can be used (for example, PJ DeLaLuz, “: Bioconjugate Chem.”, 1995, 6 ⁇ , p558-566).
  • the compound (1) and compound) used in this step are commercially available, or commercially available raw materials are protected or protected using a protection / deprotection reaction known to those skilled in the art (for example, T. Greene et al., Rp ro tective It can be prepared by subjecting to uroups m Organic synthesisj (see John Wiley & Sons. Inc., -Yup York, 1981).
  • 8 protein can be analyzed using the compound for biological reagent of formula (I) or a salt thereof. That is, according to the present invention, a method for analyzing the production mechanism of A
  • a method for analyzing the production mechanism of A ⁇ protein is provided.
  • Ar is represented by the formula ( ⁇ ).
  • cells or cell components that are considered to contain a protein involved in the production mechanism of A ⁇ protein include cells or cell components known to produce ⁇
  • a photoaffinity labeling group When a photoaffinity labeling group is used as the protein labeling group, reversibly bound target protein and the photoaffinity labeling group are cross-linked by photoreaction by irradiating with light after incubating.
  • the biological reagent compound of formula (I) or a salt thereof to which the target protein is bound is used, for example, when piotin is used as A in the biological reagent compound of formula (I) or a salt thereof.
  • the target protein can be identified by subjecting the compound for biological reagent of formula (I) or a salt thereof to which the target protein is bound to Western blotting. In these methods, when a cleavable linker is used as A in the compound for biological reagent of formula (I) or a salt thereof, it is captured on an affinity column, etc.
  • the compound for biological reagent of the formula (I) or the salt thereof to which the collected target protein is bound can be released by cleaving the cleavable linker to release the portion to which the target protein is bound.
  • the target tank bonded to the compound for biological reagent of formula (I) or a salt thereof is substantially the same as described above. You can search for identification and analysis.
  • a solid phase carrier is used as A in the compound for biological reagent of formula (I) or a salt thereof.
  • the target column is obtained by affinity column chromatography using the compound for biological reagent of the formula (I) containing the solid phase carrier or a salt thereof as the affinity column.
  • the target protein can be identified by capturing and collecting the compound for biological reagent of formula (I) or its salt to which the protein is bound.
  • A is a single bond, and Ar, Ar, X, R 1 X, X and Ar are all substituted as a protein labeling group.
  • a compound for a biological reagent of the formula (I) or a salt thereof is used.
  • the affinity column chromatography using an avidin column in which avidin, streptavidin, etc. are bound to a carrier is added with the compound for biological reagent of formula (I) or a salt thereof bound to the target protein.
  • the compound for the biological reagent of formula (I) or the salt thereof bound to the target protein can be captured and collected.
  • an azide group is used as a group to be bonded to a solid phase carrier
  • a solid phase carrier having an acetylene group is used as a solid phase carrier, and they are reacted to form a target protein
  • Examples include a method in which a complex of a compound for biological reagent of formula (I) or a salt thereof is bound to a solid phase carrier, and then the solid phase carrier force is isolated. Even when a group to be bonded to a solid phase carrier other than the azide group is used, the reaction can be similarly performed using a solid phase carrier having a group to be bonded to the group.
  • a group that binds to a solid phase carrier such as an acetylene group or a vinyl group at the end of the molecule, which may be present in the biological reagent compound of formula (I) or a salt molecule thereof, is used.
  • a complex of the target protein and the biological reagent compound of formula (I) or a salt thereof is bound to the solid phase carrier by reacting with the solid phase carrier having a group that binds to the group.
  • An example is a method of isolating from a carrier.
  • Ar substituent group A1 in the compound for biological reagent of formula (I) or a salt thereof is a group that binds to a solid phase carrier, the solid phase having the group and the group that binds to the group.
  • the complex of the target protein and the compound for biological reagent of formula (I) or a salt thereof is bound to the solid phase carrier, and then the solid phase carrier force is isolated by can do.
  • the biological reagent compound represented by formula (1) which has a function of suppressing A protein production
  • a compound for a biological reagent or a salt thereof which is a compound for a biological reagent represented by the formula (1) and has no action to suppress A ⁇ protein production.
  • the same method is used for both biological reagent compounds or their salts, and the two are compared to identify the target protein, making the target protein more efficient and accurate. Can be identified.
  • Is a compound for a biological reagent which is a compound for a biological reagent and has no action to suppress A ⁇ protein production, or a salt thereof.
  • R 1 represents a C1-C6 alkyl group optionally substituted with a hydrogen atom or a hydroxyl group, and A, A, A and A have the above-mentioned meanings]
  • Such a compound include, for example, the following compounds.
  • the present invention provides a kit for analyzing the production mechanism of A
  • This kit contains other reagents for identifying and analyzing the target protein as necessary, for example, antibodies against gamma selector, beta selector, etc., and their constituents preserilin, dicastrin, etc. An antibody may be included. Further, it may contain a reagent for detecting a labeling group, a buffer solution, a surfactant and the like, which are usually used in an assembly system.
  • BW 300 manufactured by Fuji Silysia was used as a carrier unless otherwise specified.
  • LC MS High-pressure liquid chromatography that separates the target compound using mass spectrum.
  • the elution solvent used was a linear gradient system of 10% to 99% of 0.1% trifluoroacetic acid-containing water and 0.1% trifluoroacetic acid-containing acetonitrile.
  • Trinormal butylphosphine (2.06 mL) was added dropwise at ⁇ 20 ° C. to a solution of benzoyl chloride (2 g) in THF (30 mL). After the reaction solution was stirred at ⁇ 20 ° C. for 20 minutes, 4-ethylphenylmagnesium bromide (15 mL: 0.5M THF solution) was added to the reaction solution, and the reaction solution was further stirred at ⁇ 20 ° C. for 10 minutes. After stirring, the reaction solution was added to a mixed solution of 1N hydrochloric acid aqueous solution and jetyl ether, and the organic layer was partitioned. Jetyl ether was added to the water layer, and the organic layer was distributed.
  • the obtained organic layer was washed with water and saturated brine in that order, dried over anhydrous sodium sulfate, and concentrated under reduced pressure.
  • the residue was purified by silica gel column chromatography (elution solvent: ethyl acetate) to obtain 325 mg of the racemic isomer of the title compound.
  • the obtained racemate (325 mg) was fractionated with Daicel CHIRALCEL TM OD (2 cm X 25 cm: mobile phase; ethanol), and the title optically active substance (125 mg;> 99% ee) and retention time 7.6 min.
  • the title optically active substance (117 mg;> 99% ee ) having a retention time of 19.2 minutes was obtained.
  • the physical properties of the title optically active substance with a retention time of 7.6 minutes are as follows.
  • the physical properties of the title optically active substance with a retention time of 19.2 minutes are as follows.
  • ⁇ 9 ⁇ ' ⁇ ) 99 ⁇ ⁇ : ( ⁇ ⁇ ) g (10Q0) HPVN-H X , [H + + PV] 8I6 z / rai SPV-ISa
  • the obtained organic layer was washed with a mixed solution of saturated aqueous sodium hydrogen carbonate and saturated aqueous sodium chloride solution, dried over sodium sulfate, and concentrated under reduced pressure.
  • the residue was purified using silica gel chromatography (elution solvent: heptane acetate ethyl system) to obtain an alcohol form.
  • Water (10 mL) and p-toluenesulfonic acid monohydrate (500 mg) were sequentially added to a THF (90 mL) solution of the obtained alcohol, and the reaction solution was stirred at room temperature for 15 hours. Saturated aqueous sodium hydrogen carbonate was added to the reaction mixture, and the mixture was extracted 3 times with ethyl acetate.
  • a saturated aqueous solution of ammonium chloride was added to the reaction solution, the reaction vessel was removed from the cooling bath, and the mixture was extracted three times with ethyl acetate.
  • the obtained organic layer was washed with a mixed solution of saturated aqueous sodium hydrogen carbonate and saturated aqueous sodium chloride, dried over sodium sulfate, and concentrated under reduced pressure.
  • the residue was purified using silica gel chromatography (elution solvent: heptane-ethyl acetate system) to obtain an alcohol form.
  • the residue was purified using silica gel chromatography (elution solvent: heptane ethyl acetate system) to obtain a ketone body.
  • Tetraptyl ammonium fluoride (1M THF solution, 8 mL) was added to a THF (30 mL) solution of the ketone body obtained by the above operation, and the reaction solution was stirred at room temperature for 1.5 hours.
  • the solvent of the reaction solution was distilled off under reduced pressure, and the residue was purified by silica gel chromatography (elution solvent: heptane monoacetate system) to obtain 2.05 g of the title compound.
  • the physical properties of this product are as follows.
  • reaction solution was directly purified using silica gel chromatography (carrier: Chromatorex NH; elution solvent: heptane acetate ethyl THF system) to obtain 386 mg of the title compound.
  • carrier Chromatorex NH; elution solvent: heptane acetate ethyl THF system
  • the residue was purified by silica gel chromatography (elution solvent: heptane-ethyl acetate system) to obtain an aldehyde form.
  • acetone 5 mL
  • 2-methyl-2-butene 400 L
  • sodium dihydrogen phosphate dihydrate 55 mg
  • sodium chlorite 70 mg
  • sodium dihydrogen phosphate dihydrate 30 mg
  • sodium chlorite 35 mg
  • a saturated salt aqueous solution and chloroform were added to the reaction solution, and the organic layer was partitioned.
  • the obtained organic layer was washed successively with a mixed solution of hydrochloric acid (2N aqueous solution) and saturated aqueous sodium chloride solution, dried over sodium sulfate, and concentrated under reduced pressure.
  • Trimethylsilyl diazomethane (2M hexane solution, 500 ⁇ L) was added to a methanol (4 mL) solution of the residue obtained by the above operation, and the reaction solution was stirred at room temperature.
  • Trimethylsilyldiazomethane (2 ⁇ hexane solution) was added to the reaction solution until the disappearance of the raw material was confirmed by TLC (a total of 1.5 mL was added for 500 L, lmL).
  • a small amount of acetic acid was added to the reaction solution, and after confirming that the reaction solution became yellow solution transparent, saturated aqueous sodium hydrogen carbonate and ethyl acetate were added, and the organic layer was partitioned. The obtained organic layer was washed with saturated aqueous sodium hydrogen carbonate and saturated salt.
  • the mixture was washed successively with a mixed solution of aqueous sodium chloride, dried over magnesium sulfate and concentrated under reduced pressure.
  • N-Hydroxysuccinimidebiotin (20 mg) and triethylamine (25 ⁇ L) were successively added to a DMF (2 mL) solution of the obtained residue, and the reaction solution was stirred at room temperature for 1 hour. Further, triethylamine (25 L) was added to the reaction solution, and the reaction solution was stirred at room temperature for 12.5 hours. The reaction mixture was filtered, and the filtrate was purified by LC MS to give 8.7 mg of the title compound.
  • the physical properties of this product are as follows.
  • Example 25 6 yl) pentanoylamino 1 succinic acid ⁇ 4- ⁇ i4- i (S)-1— ⁇ 3— ⁇ ⁇ — “3 methoxy ( 4- methyl-iH-imidazole 1-yl) : Nyl ⁇ ( ⁇ ) -methylidene ⁇ — 2-oxopiperidine 1-yl ⁇ ethyl ⁇ benhanyl ⁇ benzyl ⁇ methylamide trifluoroacetate synthesis
  • the obtained crude product was neutralized with a small amount of saturated aqueous sodium hydrogen carbonate, and extracted three times with black mouth form to which a small amount of methanol was added.
  • the obtained organic layer was concentrated to obtain 9.4 mg of the title compound.
  • the physical properties of this product are as follows.

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Description

生物学的試薬用化合物
技術分野
[0001] 本発明は、生物学的試薬用化合物に関する。更に詳細には、アミロイドベータタン ク (A βタンパク)の生成機構を解明するために有用な生物学的試薬として利用で きる生物学的試薬用化合物、該生物学的試薬用化合物を用いた A j8タンパクの生 成機構を解明する方法、および該生物学的試薬用化合物を含む、 A βタンパクの生 成機構を解明するキットに関する。
背景技術
[0002] アルツハイマー病は、神経細胞の変性や、脱落とともに、老人班の形成および神経 原繊維変化を特徴とする疾患である。現在、アルツハイマー病の治療は、ァセチルコ リンエステラーゼ阻害剤に代表される症状改善剤による対症療法に限られていて、 病気の進行を抑制する根本療法剤は開発されて!、な、。アルツハイマー病の根本 療法剤の創出には、病態の発症原因を制御する方法の開発が必要である。
アルツハイマー病やダウン症等の神経変性疾患は Α βタンパクが原因となって老 人班の形成や神経原繊維変化を起こすと考えられて ヽる。アミロイド前駆体タンパク（ ΑΡΡ)の代謝産物である Α |8タンパクは、神経細胞の変性'脱落、さらには痴呆症状 の発現に大きくかかわると考えられている（例えば、非特許文献 1、 2参照)。 Α |8タン パクの主成分は、アミノ酸 40個力もなる Α β 40と C末が 2アミノ酸増えた Α β 42である 。これらの Α β 40および 42は、凝集性が高く（例えば、非特許文献 3参照）、老人班 の主要構成成分であり（例えば、非特許文献 3、 4、 5参照）、さらに、家族性アルッハ イマ一病で見られる ΑΡΡおよびプレセネリン遺伝子の変異は、これらの Α β 40およ び 42を増加させることが知られている（例えば、非特許文献 6、 7、 8参照)。したがつ て、 A j8 40および 42の産生を低下させる化合物は、アルツハイマー病の進行抑制 剤または予防薬として期待されて ヽる。
A j8は、 APPがベータセクレターゼにより切断され、続いてガンマセクレターゼによ り切り出されることにより産生する。このことより、 A β産生低下を目的として、ガンマセ クレターゼおよびベータセクレターゼの阻害剤の創出が試みられている。既に知られ ているこれらのセクレターゼ阻害剤の多くは、例えば L— 685, 458 (例えば、非特許 文献 9参照）、 LY— 411575 (例えば、非特許文献 10、 11、 12参照）等、ペプチドま たはペプチドミメティックである。
本発明者らは、 A β 40や 42の産生を抑制する新規な低分子化合物としてシンナミ ド化合物を既に提案している (特許文献 1参照)。このシンアミドィ匕合物は、 ΑΡΡ力 Α β 40や 42の産生を強力に抑制する化合物であり、アルツハイマー病に代表される Α に起因する疾患の治療剤または予防剤として期待されている。
[0003] 他方、最近にお 、ては、生化学的手法ある!/、は分子生物学的手法の代わりに低分 子化合物を生体成分であるタンパク質機能の解明に用いるケミカルジエネテイクス (c hemical genetics)的手法が、生物学的研究に重要な役割りを占めると考えられて いる。ケミカルジエネテイクス的手法では、生体機能システムの実行因子であるタンパ ク質に結合してその機能を阻害あるいは促進する低分子化合物を用いるため、タン ノ ク質の多様な機能を広く評価できると考えられている。
このようなケミカルジエネテイクス的手法の試みの一つとして、 A j8タンパクの生成を 阻害する薬理活性化合物を構成成分とする生物学的試薬を用いて、標的タンパク質 を解明することが提案されている（特許文献 2参照)。また、セクレターゼ阻害剤として 知られる上記した L 685, 458 (非特許文献 9参照）と、光親和性標識基およびピオ チンとからなる生物学的試薬を用いて、 L— 685, 458の標的タンパク質を検索した ことが報告されて ヽる (非特許文献 13参照)。
し力しながら、 A β 40や 42の産生を抑制する上記したシンナミドィ匕合物（特許文献 1)について、生物学的試薬を用いてその標的タンパク質を検索することは未だなさ れていない。
[0004] 非特許文献 l :Klein WL,外 7名， Alzheimer' s disease -affected brain : Pre sence oi oligomeric A β ligands ( DDLs suggests a molecular basi s for reversible memory loss, Proceeding National Academy of Scie nce USA 2003, Sep 2 ; 100 (18) , p. 10417—10422.
非特許文献 2 : Nitsch RM,外 16名， Antibodies against β -amyloid slow cognitive decline in Alzheimer's disease, Neuron, 2003, May 22 ;3 8, p. 547-554.
非特許文献 3： Jarrett JT,外 2名， The carboxy terminus of the β amyl oid protein is critical for the seeding of amyloid formation： Implica tions for the pathogenesis of Alzheimers' disease, Biochemistry, 199 3, 32(18), p.4693-4697.
特許文献 4 : Glenner GG,外 1名， Alzheimer's disease： initial report of the purification and characterization of a novel cerebrovascular a myloid protein, Biochemical and oiophysical research communication s, 1984, May 16, 120(3), p. 885— 890.
非特許文献 5 : Masters CL,外 5名， Amyloid plaque core protein in Alzh eimer disease and Down syndrome, Proceeding National Academy o f Science USA, 1985, Jun, 82(12), p.4245—4249.
非特許文献 6:Gouras GK,外 11名， Intraneuronal Αβ42 accumulation i n human brain, American Journal of Pathology, 2000, Jan, 156(1), p . 15-20.
非特許文献 7:Scheuner D,外 20名， Secreted amyloid β—protein simila r to that in the senile plaques of Alzheimer's disease is increase d in vivo by the presenilin 1 and 2 and APP mutations linked to familial Alzheimer's disease, Nature Medicine, 1996, Aug, 2(8) , p. 864-870.
非特許文献 8:Forman MS,外 4名， Differential effects of the Swedish mutant amyloid precursor protein on β― amyloid accumulation and secretion in neurons and nonneuronal cells, The Journal of Biolog ical Chemistry, 1997, Dec 19, 272(51), p. 32247-32253.
非特許文献 9: Shearman MS,外 9名， L— 685, 458, an Aspartyl Protease
Transition State Mimic, Is a Potent Inhibitor of Amyloid β— Prot ein Precursor y— Secretase Activity, Biochemistry, 2000, Aug 1, 39 (30) , p. 8698-8704.
非特許文献 10 : Shearman MS,外 6名， Catalytic Site -Directed γ— Seer etase Complex Inhibitors Do Not Discriminate Pharmacologically b etweeen Notch S3 and β— APP Clevages, Biochemistry, 2003, Jun 24, 42 (24) , p. 7580- 7586.
特許文献 ll :Lanz TA,外 3名， Studies of A j8 pharmacodynamics in the brain, cerebrospinal fluid, and plasma in young (plaque― free) Tg 2576 mice using the y— secretase inhibitor N2— [ (2S)— 2— (3, 5— difluorophenyl)— 2— hydroxyethanoyl]— Nl— [ (7S)—5— methyl— 6— ox o— 6, 7― dihydro― 5H― dibenzo [b, d] azepin— 7— yl]— L— alaninamide ( LY— 411575) , The journal of pharmacology and experimental thera peutics, 2004, Apr, 309 (1) , p. 49— 55.
非特許文献 12 : Wong GT,外 12名， Chronic treatment with the γ— seer etase inhibitor LY— 411, 575 inhibits β― amyloid peptide productio n and alters lymphopoiesis and intestinal cell differentiation, The j ournal of biological chemistry, 2004, Mar 26, 279 (13) , p. 12876— 12 882.
非特許文献 13 :Li YM,外 17名、 Photoactivated γ—secretase inhibitorsdi rected to the active site covalently label presenilin 1, Nature, 200
0, Jun 8, 405 (6787) , p. 689— 694
特許文献 1：国際公開第 WO2005Z115990号パンフレット
特許文献 2 :国際公開第 WO00Z019210号パンフレット
発明の開示
発明が解決しょうとする課題
本発明の課題は、 A β 40や 42の産生を抑制する上記したシンナミドィ匕合物を構成 成分とする生物学的試薬用化合物を提供することにある。更に本発明の課題は、こ の生物学的試薬用化合物をケミカルプローブとして用いて、シンナミドィ匕合物の標的 タンパクを検索して Α βタンパクの産生機構を解析する方法を提供することにある。 更に本発明の課題は、 A |8タンパクの産生機構を解析するためのキットを提供するこ とにある。
課題を解決するための手段
[0006] 本発明者らは、上記の課題を解決することを目的として鋭意検討を行 ヽ、シンナミド 化合物を構成成分とする生物学的試薬用化合物を構築し、この生物学的試薬用化 合物を用いることにより、 Α タンパクの産生機構を解析できることを見出し、本発明 を完成した。
[0007] すなわち、本発明は、以下の 1)から 14)の生物学的試薬用化合物またはその塩に 関する。
1)式 (I)
[化 1]
Figure imgf000007_0001
[式中、
Arは、下記置換基群 A1から選択される 1ないし 3の置換基で置換されてもよいイミ ダゾリル基を示す；
Arは、下記置換基群 A2から選択される 1ないし 3の置換基で置換されてもよい、ピ
2
リジ-ル基、ピリミジ -ル基またはフエ二ル基を示し；
Xは、 c≡c または 一 C R 2— C R 3—
(ここにおいて、 R2および ITは、下記置換基群 A3から選択される置換基を示し、
は単結合または二重結合を示す)を示す；
R1は、下記置換基群 A4から選択される基を示し; Xは、タンパク質標識基またはタンパク質標識基を含む基で置換されてもよい、 C1
2
6アルキレン基 (該 C1 6アルキレン基は、ハロゲン原子、水酸基、シァノ基、 C3 —8シクロアルキル基、 C3— 8シクロアルコキシ基、ホルミル基、 C1 6アルキル基（ 該 C 1—6アルキル基は、水酸基で置換されていてもよぐまた、 C1 6アルキレン基 上の同一炭素原子に 1または 2置換することができ、 2つの該 C1 6アルキル基は結 合する炭素原子と共に環状基 (該環状基の環上メチレン基が 1の酸素原子で置換さ れてもよい）を形成することができる）を形成してもよい）、 C 1—6アルコキシ基、ァミノ 基 (該ァミノ基は、 C1— 6アルキル基で置換されてもよい）および置換基群 A5から選 択される 1な 、し 3の置換基で置換されてもょ 、5な 、し 14員非芳香族複素環基力も なる群力も選択される 1な 、し 3の置換基で置換されてもょ 、）を示し；
Xは、単結合、置換基群 A5から選択される置換基で置換されてもよいイミノ基、―
3
O または S を示し；
Arは、置換基群 A5から選択される 1ないし 3の置換基で置換されてもよい 6ないし
3
14員環芳香族炭化水素基または置換基群 A5から選択される 1ないし 3の置換基で 置換されてもょ 、5な 、し 14員環芳香族複素環基を示し；
あるいは、
R1および一 X—X— Ar力 X— CO— Nと一緒になつて、下記置換基群 A4か
2 3 3 1
ら選択される 1な 、し 4の置換基で置換されてもょ 、、式 (II)
[化 2]
Figure imgf000008_0001
[式中、 R4は置換基群 A3から選択される置換基を示し;
は単結合または二重結合を示し; Zは単結合、 CO 、一（CH ) n—(ここにおい て、 nは、 1ないし 3の整数を示す）または— CR¾6 (ここにおいて、 R5および R6は、下 記置換基群 A4から選択される置換基を示す)を示し; Zは、単結合、一 O 、 一 NR
2
CO—、— CONR―、— CSNR―、— NRCS— (ここにおいて、 Rは、下記置換基群 A4から選択される置換基を示す)または—S—を示し; Zは、単結合、下記置換基群
3
A4力も選択される置換基で置換されてもよいイミノ基、―（CH ) m— (ここにおいて、
2
mは、 1ないし 3の整数を示す）、 -CR7R8- (ここにおいて、 R7および R8は、下記置 換基群 A4力も選択される置換基を示す)または— O を示し; X は、
2、Xおよび Ar 3 3 前記の意味を有する。 ]で表される基を形成してもよい；
Aは、単結合、タンパク質標識基またはタンパク質標識基を含む基を示す； Aは、単結合またはリンカ一を示す；
2
Aは、単結合または開裂可能なリンカ一を示す；
3
Aは、水素原子、フィッシングタグ基、検出可能なマーカー、固相担体または固相
4
担体と結合させる基を示す；
置換基群 A1 :ハロゲン原子、シァノ基、ニトロ基、 C3— 8シクロアルキル基、 C2— 6 ァルケ-ル基、 C2— 6アルキ-ル基、 C1— 6アルコキシ基、 C3— 8シクロアルコキシ 基、ホルミル基、 C1 6アルキルカルボ-ル基および C 1—6アルキル基（該 C1 6 アルキル基は、ハロゲン原子、水酸基、シァノ基、 C1 6アルコキシ基、 C3— 8シク 口アルキル基、 C1 6アルキルカルボ-ル基からなる群から選択される 1ないし 3の 置換基で置換されてもよい)、タンパク質標識基、タンパク質標識基を含む基、および 固相担体と結合させる基；
置換基群 A2 :ハロゲン原子、水酸基、シァノ基、 C1 6アルコキシ基 (該 C1 6ァ ルコキシ基は、ハロゲン原子、シァノ基、 C1— 6アルコキシ基、 C2— 6ァルケ-ル基 、 C2— 6アルキ-ル基および C3— 8シクロアルキル基からなる群力 選択される 1な いし 3の置換基で置換されてもよい）、 C3— 8シクロアルコキシ基、 C2— 6ァルケ-ル ォキシ基、 C2— 6アルキ-ルォキシ基、タンパク質標識基およびタンパク質標識基を 含む基；
置換基群 A3 :ハロゲン原子、置換基群 A5から選択される 1ないし 3の置換基で置 換されてもょ ヽ 6な ヽし 14員芳香族炭化水素環基、置換基群 A5から選択される 1な V、し 3の置換基で置換されてもょ 、5な 、し 14員芳香族複素環基、 C1 - 6アルキル 基 (該 C1 6アルキル基は、ホルミル基、ハロゲン原子、水酸基、保護基を有する水 酸基、シァノ基、 C2— 6ァルケ-ル基、 C2— 6アルキ-ル基、 C3— 8シクロアルキル 基、 C1— 6アルコキシ基、 C1— 6アルキルチオ基、 C1 - 6アルキルスルフィエル基、 C1 6アルキルスルホ-ル基、 C1 6アルキルカルボ-ル基、アミノ基（該ァミノ基は 、 1ないし 5のハロゲン原子を適宜有する C1 6アルキル基で置換されてもよい）、置 換基群 A5から選択される 1な 、し 3の置換基で置換されてもょ 、6な 、し 14員芳香 族炭化水素環基、置換基群 A5から選択される 1ないし 3の置換基で置換されてもよ
V、5な 、し 14員芳香族複素環基、置換基群 A5から選択される 1な 、し 3の置換基で 置換されてもょ ヽ 6な ヽし 14員非芳香族炭化水素環基、置換基群 A5から選択される 1な!、し 3の置換基で置換されてもょ 、5な 、し 14員非芳香族複素環基および— X— A (ここにおいて、 Xは、イミノ基、—O または— S を示し、 Aは、置換基群 A5から 選択される 1な 、し 3の置換基で置換されてもょ 、、 6な 、し 14員芳香族炭化水素環 基または 5な ヽし 14員芳香族複素環基を示す)カゝらなる群カゝら選択される 1な ヽし 3 の置換基で置換されてもよい）、 C 1—6アルコキシ基、タンパク質標識基およびタン パク質標識基を含む基；
置換基群 A4 :水素原子、ハロゲン原子、水酸基、シァノ基、ニトロ基、 C3— 8シクロ アルキル基、 C2— 6ァルケ-ル基、 C2— 6アルキ-ル基、 C3— 8シクロアルコキシ基 、 C3— 8シクロアルキルチオ基、ホルミル基、 C1 6アルキルカルボ-ル基、 C1— 6 アルキルチオ基、 C1 6アルキルスルフィエル基、 C1 6アルキルスルホ-ル基、ヒ ドロキシィミノ基、 C 1—6アルコキシィミノ基、置換基群 A5から選択される 1ないし 3の 置換基で置換されてもよ 、C1— 6アルキル基、置換基群 A5から選択される 1な 、し 3の置換基で置換されてもよい C1— 6アルコキシ基、置換基群 A5から選択される 1な
V、し 2の置換基で置換されてもょ 、ァミノ基、置換基群 A5から選択される 1な 、し 2の 置換基で置換されてもよ 、力ルバモイル基、置換基群 A5から選択される 1な 、し 3の 置換基で置換されてもょ ヽ 6な ヽし 14員芳香族炭化水素環基、置換基群 A5から選 択される 1な 、し 3の置換基で置換されてもょ 、5な 、し 14員芳香族複素環基、置換 基群 A5から選択される 1な 、し 3の置換基で置換されてもょ 、6な 、し 14員非芳香 族炭化水素環基、置換基群 A5から選択される 1ないし 3の置換基で置換されてもよ い 5ないし 14員非芳香族複素環基、 C2— 6ァルケ-ルォキシ基、 C2— 6アルキ-ル ォキシ基、 C3— 8シクロアルキルスルフィエル基、 C3— 8シクロアルキルスルホ-ル 基、—X— A (ここにおいて、 Xおよび Aは、前記の意味を有する）、—CO— A (ここに おいて、 Aは、前記の意味を有する）、 =CH—A (ここにおいて、 Aは、前記の意味を 有する）、タンパク質標識基およびタンパク質標識基を含む基；
置換基群 A5 :ハロゲン原子、水酸基、シァノ基、ニトロ基、 C3— 8シクロアルキル基 、 C2— 6ァルケ-ル基、 C2— 6アルキ-ル基、 C3— 8シクロアルコキシ基、 C3— 8シ クロアルキルチオ基、ホルミル基、 C1 6アルキルカルボ-ル基、 C1 6アルキルチ ォ基、 C 1—6アルキルスルフィエル基、 C 1—6アルキルスルホ-ル基、ヒドロキシイミ ノ基、 C2— 6ァルケ-ルォキシ基、 C2— 6アルキ-ルォキシ基、 C3— 8シクロアルキ ルスルフィ-ル基、 C3— 8シクロアルキルスルホ-ル基、タンパク質標識基およびタ ンパク質標識基を含む基。 ]
で表される生物学的試薬用化合物またはその塩。
2)式（I)において、 Ar により構成される、下記式
Figure imgf000011_0001
[化 3]
Figure imgf000011_0002
[式中、 Ar、 Ar、 X、 R X、 Xおよび Arは、前記の意味を有する、但し、 Xは、
1 2 1 2 3 3 1
— C≡C—または一 CR2=CR3—を示すか、あるいは R1および一 X—X— Ar力
2 3 3
—X—CO— Nと一緒になつて、式 (Π)で表される基を形成する（但し、式 (Π)におい て、
は二重結合を示す]で表される部分は、アミロイドベータ (A β )タンパクの生成を抑制 する生物学的活性を発揮する、上記 1)の生物学的試薬用化合物またはその塩。 3)式 (II)で表される基力 置換基群 A5から選択される 1な 、し 4の置換基で置換さ れてもよい、下記式
[化 4]
Figure imgf000012_0001
[式中、 R9は、置換基群 A4から選択される置換基を示し、 R4、 X、 Xおよび Arは、
2 3 3 前記の意味を有する。 ]で表される環状基である、上記 1)または 2)の生物学的試薬 用化合物またはその塩。
4)式 (II)で表される基力 置換基群 A5から選択される 1な 、し 4の置換基で置換さ れてもよい、下記式
[化 5]
Figure imgf000012_0002
[式中、 R4、 X、 Xおよび Arは、前記の意味を有する。 ]で表される環状基である、
2 3 3
上記 3)の生物学的試薬用化合物またはその塩。
5) Arは、置換基群 A2から選択される 1ないし 3の置換基で置換されてもよい、フエ
2
-ル基を示す、上記 1)力 4)の 、ずれかの生物学的試薬用化合物またはその塩。
6)下記式
[化 6]
Figure imgf000013_0001
[式中、 R1Uは、水素原子、水酸基で置換されていてもよい C1— C6アルキル基を示 し、 A、 A、 Aおよび Aは、前記の意味を有する。 ]で表される生物学的試薬用化
1 2 3 4
合物である、上記 1)から 5)のいずれかの生物学的試薬用化合物またはその塩。
7)タンパク質標識基が、光親和性標識基である、上記 1)力も 6)のいずれかの生物 学的試薬用化合物またはその塩。
8)光親和性標識基が、ベンゾィル基、ォキシラン基、アジド基、カルボニルアジド基 、ジアジリジン基、エノン基、ジァゾ基、および-トロ基力も選ばれる、上記 7)の生物 学的試薬用化合物またはその塩。
9) Aのリンカ一が、 L4-L1-L2-L3- (ここにおいて、 L4は置換基を有してもよ
2
いへテロ環、 C1 20アルキレン基、 C2— 20ァルケ-レン基、および C2— 20アルキ 二レン基、 L1および L3はそれぞれ、単結合、—O—、—S—、 C1 6アルキル基で 置換されてもよい、 NH― OC(0)NH― NHC(0)0 NHC(0)NH NHC(O) C(0)NH C(O) または
[化 7]
Figure imgf000013_0002
(ここで、 R は、 C1— C6アルキル基を示す）を示し； L2は、単結合、一（CH CH O
2 2
)p (ここで、 pは 1から 20の整数を示す）または—（CH CH NH)q— (ここで、 qは 1
2 2
から 20の整数を示す）を示し; L3は、ハロゲン原子、水酸基、あるいはヘテロ環基で あってもよぐ L1および L3は、隣接する基と環を形成していてもよい）である、上記 1) から 8)の 、ずれかの生物学的試薬用化合物またはその塩。 10) Aの開裂可能なリンカ一が、 S— S 、—O Si— O または—糖残基—で
3
ある、上記 1)から 9)のいずれかの生物学的試薬用化合物またはその塩。
11) Aのフィッシングタグ基が、ピオチン、または 3— (4, 4ージフノレ才ロー 5, 7 ジ
4
メチル— 4H— 3 A, 4A—ジァザ— 4—ボラ― S—インダセン— 3 -ィル）プロピオ二 ル基である、上記 1)から 10)のいずれかの生物学的試薬用化合物またはその塩。
12) Aの検出可能なマーカーが、放射性標識基、蛍光標識基、化学発光基、重金
4
属イオン、アジド基またはピオチン基である、上記 1)から 10)のいずれかの生物学的 試薬用化合物またはその塩。
13)下記の化合物力 なる群力 選ばれる、上記 1)から 12)のいずれかの生物学 的試薬用化合物もしくはその塩。
1) 5- ( (3aR, 6S, 6aS)—2—ォキソへキサヒドロチェノ [3, 4 d]イミダゾールー 6 ィル)吉草酸 {2 { (E) 3— {4 {4 { (S) 1 {3— { 1 [3—メトキシー 4 一（4ーメチルー 1H—イミダゾールー 1一ィル）フエ-ル]一（E)—メチリデン }一 2— ォキソピペリジン— 1—ィル }ェチル }ベンゾィル }フエ-ル}アタリロイルァミノ }ェチル } アミド、
2) 5- [ (3aR, 6S, 6aS)—2 ォキソへキサヒドロチェノ [3, 4 d]イミダゾールー 6 ィル]吉草酸 { 1 {2— {2— {2— {2— {3 { (E) 3— {4 {4 { 1 {3— { 1 — [3—メトキシ— 4— (4—メチル—1H—イミダゾールー 1—ィル）フエ-ル]— (E) - メチリデン } 2 ォキソピペリジン 1ーィル }ェチル } 4 ベンゾィル }フエ-ル }ァ クリロイルァミノ }エトキシ }ェトキシ}エトキシ }ェチル }— 1H— [1, 2, 3]トリァゾール 4ーィルメチル }ァミド、
3) 5- [ (3aR, 6S, 6aS)—2—ォキソへキサヒドロチェノ [3, 4— d]イミダゾールー 6 ィル]吉草酸 {2— {2— {6 { (E) 3— {4 {4 { 1 {3— { 1 [3—メトキシ -4- (4ーメチルー 1H—イミダゾールー 1 ィル）フエ-ル]一（E)—メチリデン }ー2 —ォキソピペリジン— 1—ィル }ェチル }ベンゾィル }フエ-ル}アタリロイルァミノ }へキ
4) 1 - { (S) - 1 - {4- {4- { (E) - 3- {4- [3- (4, 4ージフノレオロー 5, 7 ジメ チル— 4H— 3a, 4a—ジァザ— 4—ボラ— s—インダセン— 3 -ィル）プロピオ-ル]ピ ペラジン }ー1ーィル}ー3—ォキソプロぺ-ル}べンゾィル}フェ-ル}ェチル}ー3—{
1— [3—メトキシ— 4— (4—メチルー 1H—イミダゾールー 1—ィル）フエ-ル]一（E) ーメチリデン }ピペリジン 2—オン、
5) 5- [ (3aR, 6S, 6aS)—2—ォキソへキサヒドロチェノ [3, 4— d]イミダゾールー 6 ィル]吉草酸 {2— {3— {4 { (E) 3— {4 {4 { 1 {3— { 1 [3—メトキシ -4- (4ーメチルー 1H—イミダゾールー 1 ィル）フエ-ル]一（E)—メチリデン }ー2 ーォキソピペリジン 1ーィル }ェチル }ベンゾィル }フエ-ル}アタリロイル}ピペラジン — 1 ィル } 3 ォキソプロピルジスルファ-ル }ェチル }ァミド、
6) (3aR, 6S, 6aS)— 6 {4 { (E)— 3— {4 {4 { 1 {3— { 1 [3—メト キシ— 4— (4—メチル—1H—イミダゾールー 1—ィル）フエ-ル]一（E)—メチリデン }— 2—ォキソピペリジン一 1—ィル }ェチル }ベンゾィル }フエ-ル}アタリロイル}ピぺ ラジン 1ーィル }ー5 ォキソペンチル}テトラヒドロチェノ [3, 4 d]イミダゾールー
2—オン、
7) 5- [ (3aR, 6S, 6aS)—2—ォキソへキサヒドロチェノ [3, 4— d]イミダゾールー 6 ィル]吉草酸 { 1 {6— {3— {4 {4 { 1 {3— [3—メトキシー 4一（4 メチル — 1H—イミダゾールー 1—ィル）フエ-ル]— (E)—メチリデン }— 2—ォキソピベリジ ン一 1—ィル }ェチル }ベンゾィル }フエ-ル }アタリロイルァミノ }へキシル }— 1 H— [ 1
, 2, 3]トリァゾール— 4—ィルメチル }アミド、
8) 5- ( (3aR, 6S, 6aS)—2 ォキソへキサヒドロチェノ [3, 4 d]イミダゾールー 6 ィル)吉草酸 4 {4 { (S) 1 {3— { 1 [3—メトキシー 4 4ーメチルー 1 H—イミダゾールー 1—ィル）フエ-ル]— (E)—メチリデン }— 2—ォキソピペリジン— 1ーィル }ェチル }ベンゾィル }ベンジルアミド、
9) 6- [5- ( (3aR, 6S, 6aS)—2 ォキソへキサヒドロチェノ [3, 4 d]イミダゾー ルー 6 ィル)ペンタノィルァミノ]吉草酸 4 {4 { (S) 1 {3— { 1 [3—メトキ シー4一（4ーメチルー 1H—イミダゾールー 1 ィル）フエ-ル]一（E)—メチリデン } - 2—ォキソピペリジン 1—ィル }ェチル }ベンゾィル }ベンジルアミド、
10) 5- ( (3aR, 6S, 6aS)—2—ォキソへキサヒドロチェノ [3, 4 d]イミダゾール 6 ィル)吉草酸 {4 {4 { (S) 1 {3— { 1 [3—メトキシー 4 4 メチル — 1H—イミダゾールー 1—ィル）フエ-ル]— (E)—メチリデン }— 2—ォキソピベリジ ン— 1—ィル }ェチル }ベンゾィル }ベンジル }メチルアミド、
11) 6- [5- ( (3aR, 6S, 6aS)— 2 ォキソへキサヒドロチェノ [3, 4 d]イミダゾ 一ルー 6 ィル）ペンタノィルァミノ]吉草酸 {4 {4 { (S) 1 {3— { 1 [3 メ トキシ— 4— (4—メチル—1H—イミダゾールー 1—ィル）フエ-ル]一（E)—メチリデ ン }— 2—ォキソピペリジン— 1—ィル }ェチル }ベンゾィル }ベンジル }メチルアミド、
12) {4— {4一 { (S) 1一 {3— { 1一 [3—メトキシー 4一（4ーメチルー 1H イミダゾ 一ルー 1—ィル）フエ-ル] - (E)—メチリデン }— 2—ォキソピペリジン一 1—ィル }ェ チル }ベンゾィル }— N— {2— [5— ( (3aR, 6S, 6aS)—2—ォキソへキサヒドロチェ ノ [3, 4— d]イミダゾールー 6—ィル）ペンタノィルァミノ]ェチル }ベンズァミド、
13) {4— {4 { (S)— 1 {3— { 1 [3—メトキシー 4 4ーメチルー 1H イミダゾ 一ルー 1—ィル）フエ-ル] - (E)—メチリデン }— 2—ォキソピペリジン一 1—ィル }ェ チル }ベンゾィル }—N— {2— {2— {2— [5—（（3aR, 6S, 6aS)— 2 ォキソへキサ ヒドロチェノ [3, 4 - d]イミダゾール一 6—ィル）ペンタノィルァミノ]エトキシ }ェトキシ} ェチル }べンズアミド、
14) 5- ( (3aR, 6S, 6aS)—2—ォキソへキサヒドロチェノ [3, 4 d]イミダゾール 6 ィル)吉草酸 {2— {3— {4 {4 {2 ヒドロキシー 1 { (S) 3— [3 （(R) —メトキシ） 4— (4—メチル 1H—イミダゾール一 1—ィル）]― (E)—ベンジリデン }— 5 メチル 2 ォキソピペリジン 1 ィル }ェチル }ベンゾィル }フエニル } (E )—アタリロイルァミノ）ェチル }ァミド、
15) 5- ( (3aR, 6S, 6aS)—2—ォキソへキサヒドロチェノ [3, 4 d]イミダゾール 6 ィル)吉草酸 [5— (3- {4- [ (R) -4- (2 ヒドロキシー1 { (S)—3—[3 —メトキシ一 4— (4—メチル 1 H イミダゾール 1 ィル）ベンジリデン]— 5 メチ ルー 2—ォキソピペリジン 1—ィル }ェチル）ベンゾィル]フエ-ル }アタリロイルァミノ )ペンチル]アミド、
16) 5- ( (3aR, 6S, 6aS)—2—ォキソへキサヒドロチェノ [3, 4 d]イミダゾール 6 ィル)吉草酸 { 1一（2— { 2— [2—（2 エトキシ)エトキシ]エトキシ }ェチル)ァ ミド } 3— {4— [4— ( (R)— 2 ヒドロキシ一 1— { (S)— 3— [1— [3—メトキシ一 4— (4ーメチルー 1H—イミダゾールー 1 ィル）フエ-ル]一（E)—メチリデン ]ー5—メチ ルー 2—ォキソピペリジン 1—ィル }ェチル）ベンゾィル]フエ-ル }アクリルアミド、お よび
17)l-{(S)-l-{4-{4-{(E)-3-{4-{3-[4, 4ージフルオロー 5—（1H —ピロール— 2—ィル） 4H— 3a, 4a ジァザ— 4 ボラ— s—インダセン— 3—ィ ル]プロピオ-ル}ピペラジン } 1ーィル } 3 ォキソプロべ-ル}ベンゾィル }フエ -ル }ェチル } 3— {1— [3—メトキシ— 4— (4—メチル 1 H イミダゾール 1— ィル）フエ-ル] - (E)—メチリデン }ピペリジン一 2—オン。
14)下記の化合物力 なる群力 選ばれる、上記 1)から 12)のいずれかの生物学 的試薬用化合物もしくはその塩。
1) 1 {(S) 1 [4一（4ーョードベンゾィル）フエ-ル]ェチル } 3— [1 [3—メ トキシ— 4— (4—メチル—1H—イミダゾールー 1—ィル）フエ-ル]一（E)—メチリデ ン]ピぺリジン 2—オン、
2) 1 {(R) 1 [4一（4ーョードベンゾィル）フエ-ル]ェチル }ー3—[1 [3—メ トキシ— 4— (4—メチル—1H—イミダゾールー 1—ィル）フエ-ル]一（E)—メチリデ ン]ピぺリジン 2—オン、
3) (E)一 3— {4一 [4一（（S)— 1一 {3— [1一 [3—メトキシー 4一 (4ーメチルー 1H —イミダゾールー 1—ィル）フエ-ル]一（E)—メチリデン]—2—ォキソピペリジン— 1 ーィル }ェチル）ベンゾィル]フエ-ルアクリル酸 ターシヤリブチルエステル、
4) ）ー？^ー{2—{2—[2—（2—ァジドェトキシ）ェトキシ]ェトキシ}ェチル } 3— {4一 {4一 { (S)一 1一 {3— {1一 [3—メトキシー 4一 （4ーメチルー 1H イミダゾール — 1—ィル）フエ-ル] (E) メチリデン }— 2—ォキソピペリジン— 1—ィル }ェチル } ベンゾィル }フヱ-ル}アクリルアミド、
5) ）ー？^ー（6—ァジドへキシル）ー3—{4 {4 {1 {3—{1 [3—メトキシー 4一（4ーメチルー 1H—イミダゾールー 1 ィル）フエ-ル]一（E)—メチリデン } 2— ォキソピペリジン 1ーィル }ェチル }ベンゾィル }フエ-ル}アクリルアミド、
6) 1 { (S) 1 [4一（4ーヒドロキシメチルベンゾィル）フエ-ル]ェチル }ー3— { 1— [3—メトキシ— 4— (4—メチルー 1H—イミダゾールー 1—ィル）フエ-ル]一（E) ーメチリデン }ピペリジン 2—オン、
7) {4— {4一 { (S) 1一 {3— { 1一 [3—メトキシー 4一 （4ーメチルー 1H イミダゾ 一ルー 1—ィル）フエ-ル] - (E)—メチリデン }— 2—ォキソピペリジン一 1—ィル }ェ チル }ベンゾィル }ベンジル }力ルバミン酸 t ブチルエステル、
8) 1 { (S) 1 [4一 （4 アミノメチルベンゾィル）フエ-ル]ェチル } 3— { 1一 [ 3—メトキシー 4一（4ーメチルー 1H—イミダゾールー 1一ィル）フエ-ル]一（E)—メチ リデン }ピペリジン一 2—オン、
9) {4一 {4一 { (S) 1一 {3— { 1一 [3—メトキシー 4一 （4ーメチルー 1H イミダゾ 一ルー 1—ィル）フエ-ル] - (E)—メチリデン }— 2—ォキソピペリジン一 1—ィル }ェ チル }ベンゾィル }ベンジル }メチルカルバミン酸 t ブチルエステル、
10) 3— {1— [3—メトキシ一 4— (4—メチル 1 H イミダゾール 1 ィル）フエ- ル]一 （E)—メチリデン }一 1一 { (S)— 1一 [4一 （4ーメチルァミノメチルベンゾィル）フ ェ -ル]ェチル }ピぺリジン— 2—オン、
11) 1一 {(S) 1一 [4一 （4一アジドメチルベンゾィル）フエ-ル]ェチル }一 3— { 1 — [3—メトキシ— 4— (4—メチル—1H—イミダゾールー 1—ィル）フエ-ル]— (E) - メチリデン }ピペリジン 2—オン、
12) 4-{4-{(S)-l-{3-{l- [3—メトキシー 4一（4ーメチルー 1H イミダゾ 一ルー 1—ィル）フエ-ル] - (E)—メチリデン }— 2—ォキソピペリジン一 1—ィル }ェ チル }ベンゾィル }安息香酸 メチルエステル、
13) 4-{4-{(S)-l-{3-{l- [3—メトキシー 4一（4ーメチルー 1H イミダゾ 一ルー 1—ィル）フエ-ル] - (E)—メチリデン }— 2—ォキソピペリジン一 1—ィル }ェ チル }ベンゾィル }安息香酸、および
14) (E) N— {2— {2— [2- (2 アジドエトキシ）エトキシ]エトキシ }ェチル } 3 -{4-{4-{ (R)—2 ヒドロキシ一 1— { (S)— 3— { 1— [3—メトキシ一 4— (4—メ チルー 1H—イミダゾールー 1 ィル）フエ-ル]一 （E)—メチリデン } 5—メチルー 2 ーォキソピペリジン 1ーィル }ェチル }ベンゾィル }フエ-ル}アクリルアミド。
更に、本発明は、以下の 15)から 18)の A |8タンパクの産成機構を解析する方法に 関する。 15) A |8タンパクの産生機構を解析する方法であって、
a) Α |8タンパクの産生機構に関与するタンパクを含むと考えられる細胞もしくは細胞 成分と、上記 1)から 14)のいずれかの生物学的試薬用化合物またはその塩とを接触 させて、
b)上記 1)から 14)の 、ずれかの生物学的試薬用化合物またはその塩と、 A βタンパ クの産生機構に関与する標的タンパクとの複合体を形成させ、次いで
c)形成された生物学的試薬用化合物と標的タンパク質の複合体を解析し、標的タン パク質を同定する
ことを含む、 A βタンパクの産生機構を解析する方法。
16)上記 1)から 14)の 、ずれかの生物学的試薬用化合物あって Α βタンパク産生 を抑制する作用を有する生物学的試薬用化合物またはその塩とともに、上記 1)から 14)のいずれかの生物学的試薬用化合物あって Α |8タンパク産生を抑制する作用を 有しない生物学的試薬用化合物またはその塩とを一緒に用いて、両者の生物学的 試薬用化合物またはその塩について同様の方法を行って、両者を比較して、標的タ ンパク質を同定することを含む、上記 15)の方法。
17) Α |8タンパク産生を抑制する作用を有しない生物学的試薬用化合物またはそ の塩が、式 (III)
[化 8]
Figure imgf000019_0001
[式中、 R1"は、水素原子、水酸基で置換されていてもよい C1— C6アルキル基を示 し、 A、 A、 Aおよび Aは、前記の意味を有する。 ]で表される生物学的試薬用化
1 2 3 4
合物またはその塩である、上記 16)の方法。
18)式 (I)で表される生物学的試薬用化合物または塩において、 Ar、 Ar、 X、 R
1 2 1
、 X、 Xおよび Arにより構成される、 A |8タンパク産生を抑制する生物学的活性を 発揮する部分の標的タンパクを検索して、 A |8タンパク産生の抑制機構を解析する、 上記 15)から 17)のいずれかの方法。
[0009] 更に、本発明は、以下の 19)のキットに関する。
19)上記 1)から 14)のいずれかの生物学的試薬用化合物またはその塩を含む、 A βタンパクの産生機構を解析するためのキット。
[0010] 更に、本発明は、以下の 20)から 22) Α |8タンパク産生を抑制する作用を有しない 生物学的試薬用化合物またはその塩に関する。
20)式（I)において、 X力 CR2— CR3 を示すか、あるいは R1および一 X— X
1 2 3
-Ar力 -X—CO— Nと一緒になつて、式 (II)で表される基を形成する（但し、式
3 1
(II)において、
は単結合を示す)、生物学的試薬用化合物であって A βタンパク産生を抑制する作 用を有しない生物学的試薬用化合物またはその塩。
21)式（III)
[化 9]
Figure imgf000020_0001
[式中、 は、水素原子、水酸基で置換されていてもよい C1— C6アルキル基を示 し、 A、 A、 Aおよび Aは、前記の意味を有する。 ]で表される生物学的試薬用化
1 2 3 4
合物またはその塩である、上記 20)の生物学的試薬用化合物またはその塩。
22)下記の化合物である、上記 20)または 21)の生物学的試薬用化合物もしくはそ の塩。
5) 5- ( (3aR, 6S, 6aS)—2—ォキソへキサヒドロチェノ [3, 4— d]イミダゾールー 6 ィル)吉草酸 {2—{ ）ー3—{4 {4 { 1 {3—[3—メトキシー4ー（4ーメチ ルー 1H—イミダゾールー 1—ィル）ベンジル]— 2—ォキソピペリジン一 1—ィル }ェチ ル}ベンゾィル }フ -ル}アタリロイルァミノ }ェチル }ァミド。
[0011] 以下に、本明細書において用いられている各置換基または基の定義について、ま た、本発明の生物学的試薬用化合物、 A j8タンパクの産生機構を解析する方法、 A タンパクの産生機構を解析するためのキットについて詳細に説明する。
[0012] 本明細書にぉ 、て、「ハロゲン原子」とは、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ 素原子等を示し、好ましくはフッ素原子、塩素原子、臭素原子である。
[0013] 「C1— 6アルキル基」とは、炭素数が 1ないし 6個のアルキル基を示し、好ましい基と しては、例えばメチル基、ェチル基、 n プロピル基、 i プロピル基、 n ブチル基、 i ブチル基、ターシャリーブチル基、 n ペンチル基、 i ペンチル基、ネオペンチル 基、 n—へキシル基、 1 メチルプロピル基、 1, 2—ジメチルプロピル基、 1 ェチル プロピル基、 1ーメチルー 2—ェチルプロピル基、 1ーェチルー 2—メチルプロピル基 、 1, 1, 2—卜リメチノレプロピノレ基、 1—メチノレブチノレ基、 2—メチノレブチノレ基、 1, 1— ジメチルブチル基、 2, 2 ジメチルブチル基、 2 ェチルブチル基、 1, 3 ジメチル ブチル基、 2—メチルペンチル基、 3—メチルペンチル基等の直鎖または分枝状アル キル基が挙げられる。
[0014] 「C1 6アルコキシ基」とは、炭素数 1ないしは 6個のアルキル基の、水素原子が酸 素原子に置換された基を示し、好ましい基としては、例えばメトキシ基、エトキシ基、 n プロポキシ基、 i—プロポキシ基、 n—ブトキシ基、 i—ブトキシ基、 sec ブトキシ基、 ターシャリーブトキシ基、 n—ペントキシ基、 i—ペントキシ基、 sec ペントキシ基、タ ーシャリーペントキシ基、 n—へキソキシ基、 i一へキソキシ基、 1, 2—ジメチルプロボ キシ基、 2—ェチルプロポキシ基、 1ーメチルー 2—ェチルプロポキシ基、 1 ェチル —2—メチルプロポキシ基、 1, 1, 2—トリメチルプロポキシ基、 1, 1, 2—トリメチルプ 口ポキシ基、 1, 1ージメチルブトキシ基、 2, 2—ジメチルブトキシ基、 2—ェチルブトキ シ基、 1, 3 ジメチルブトキシ基、 2—メチルペントキシ基、 3—メチルペントキシ基、 へキシルォキシ基等が挙げられる。
[0015] 「C 1—6アルキルスルホ-ル基」とは、炭素数 1ないしは 6個のアルキル基において 一つの水素原子がスルホニル基で置換された基を示し、好ましい基としては、例えば メタンスルホ-ル基、エタンスルホ-ル基等が挙げられる。
[0016] 「ァミノ基 (該ァミノ基は、 C1 6アルキル基で置換されてもよい）」とは炭素数 1ない しは 6個のアルキル基が置換してもよいアミノ基を示し、好ましい基としては、例えば アミノ基、メチルァミノ基、ェチルァミノ基、プロピルアミノ基、ジメチルァミノ基等が挙 げられる。
[0017] 「C2— 6ァルケ-ル基」とは、炭素数が 2ないし 6個のァルケ-ル基を示し、好ましい 基としては、例えばビュル基、ァリル基、 1 プロべ-ル基、イソプロべ-ル基、 1ーブ テン— 1—ィル基、 1—ブテン— 2—ィル基、 1—ブテン— 3—ィル基、 2 ブテン— 1 ーィル基、 2—ブテン 2—ィル基等の直鎖状または分枝鎖状のアルケニル基が挙 げられる。
[0018] 「C2— 6アルキ-ル基」とは、炭素数が 2ないし 6個のアルキ-ル基を示し、好ましい 基としては、例えばェチュル基、 1 プロピ-ル基、 2—プロピ-ル基、ブチニル基、 ペンチニル基、へキシュル基等の直鎖状または分子鎖状のアルキ-ル基が挙げら れる。
[0019] 「C3— 8シクロアルキル基」とは、炭素数 3ないし 8の環状アルキル基を示し、当該 基における好ましい基としては、例えばシクロプロピル基、シクロブチル基、シクロべ ンチル基、シクロへキシル基、シクロへプチル基、シクロォクチル基等が挙げられる。
[0020] 「C1 6アルキルチオ基」とは、炭素数 1ないしは 6のアルキル基において、 1つの 水素原子が硫黄原子に置換された基を示し、好ましい基としては、例えばメチルチオ 基、ェチルチオ基、 n プロピルチオ基、 i プロピルチオ基、 n—ブチルチオ基、 i ブチルチオ基、ターシャリーブチルチオ基、 n ペンチルチオ基、 i ペンチルチオ 基、ネオペンチルチオ基、 n—へキシルチオ基、 1 メチルプロピルチオ基等が挙げ られる。
[0021] 「C1 6アルキルスルフィエル基」とは、炭素数 1ないしは 6のアルキル基において、 1つの水素原子がスルフィエル基に置換された基を示し、好ましい基としては、例え ばメチルスルフィエル基、ェチルメチルスルフィ-ル基、 n—プロピルスルフィエル基、 i—プロピルスルフィエル基、 n—ブチルスルフィエル基、 iーブチルスルフィエル基、タ ーシャリーブチルスルフィエル基、 n—ペンチルスルフィエル基、 i—ペンチルスルフィ -ル基、ネオペンチルスルフィエル基、 n—へキシルスルフィエル基、 1 メチルプロ ピルスルフィエル基等が挙げられる。
[0022] 「C 1—6アルキルカルボ-ル基」とは、炭素数 1ないしは 6個のアルキル基において 一つの水素原子がカルボ-ル基で置換された基を示し、好ましい基としては、例えば ァセチル基、プロピオニル基、プチリル基等が挙げられる。
[0023] 「C3 - 8シクロアルコキシ基」とは、炭素数 3な!、し 8の環状アルキル基にお!、て、一 つの水素原子が酸素原子に置換された基を示し、当該基における好ましい基として は、例えばシクロプロポキシ基、シクロブトキシ基、シクロペントキシ基、シクロへキソキ シ基、シクロへプチロキシ基、シクロォクチ口キシ基等が挙げられる。
[0024] 「C3— 8シクロアルキルチオ基」とは、炭素数 3な!、し 8の環状アルキル基にお!、て 、一つの水素原子が硫黄原子に置換された基を示し、当該基における好ましい基と しては、例えばシクロプロピルチオ基、シクロプチルチオ基、シクロペンチルチオ基、 シクロへキシルチオ基、シクロへプチルチオ基、シクロォクチルチオ基等が挙げられ る。
[0025] 「C1 6アルコキシィミノ基」とは、ィミノ基の水素原子が C1 6アルコキシ基で置換 された基を示し、好ましい基としては、例えばメトキシィミノ基、エトキシィミノ基等が挙 げられる。
[0026] 「C2— 6ァルケ-ルォキシ基」とは、炭素数が 2ないし 6個のアルケ-ル基において 、一つの水素原子が酸素原子に置換された基を示し、好ましい基としては、例えばビ -ルォキシ基、ァリルォキシ基、 1 プロべ-ルォキシ基、イソプロべ-ルォキシ基、 1 —ブテン— 1—ィルォキシ基、 1—ブテン— 2—ィルォキシ基、 1—ブテン— 3—ィル ォキシ基、 2—ブテン 1 ィルォキシ基、 2—ブテン 2—ィルォキシ基等の直鎖状 または分枝鎖状のアルケニルォキシ基が挙げられる。
[0027] 「C2— 6アルキ-ルォキシ基」とは、炭素数 2ないし 6のアルキ-ル基において、一 つの水素原子が酸素原子に置換された基を示し、当該基における好ましい基として は、ェチュルォキシ基、 1 プロピ-ルォキシ基、 2—プロピ-ルォキシ基、ブチュル ォキシ基、ペンチニルォキシ基、へキシニルォキシ基等の直鎖状または分岐状アル キニルォキシ基等が挙げられる。 [0028] 「C3— 8シクロアルキルスルフィエル基」とは、炭素数 3な!、し 8の環状アルキル基に おいて、一つの水素原子がスルフィニル基に置換された基を示し、当該基における 好ましい基としては、例えばシクロプロピルスルフィエル基、シクロプチルスルフィエル 基、シクロペンチルスルフィ-ル基、シクロへキシルスルフィ-ル基、シクロへプチル スルフィエル基、シクロォクチルスルフィ -ル基等が挙げられる。
[0029] 「C3— 8シクロアルキルスルホ-ル基」とは、炭素数 3な!、し 8の環状アルキル基に おいて、一つの水素原子がスルホニル基に置換された基を示し、当該基における好 ましい基としては、例えばシクロプロピルスルホ-ル基、シクロプチルスルホ -ル基、 シクロペンチルスルホ -ル基、シクロへキシルスルホ -ル基、シクロへプチルスルホ- ル基、シクロォクチルスルホ -ル基等が挙げられる。
[0030] 「6な 、し 14員環式芳香族炭化水素環基」とは、炭素数 6な 、し 14の単環式、二環 式または三環式芳香族炭化水素環基を示し、当該基における好ましい基としては、 例えばフエ-ル基、インデュル基、ナフチル基、ァズレニル基、ヘプタレ-ル基、ビフ ェ-ル基、フルォレ -ル基、フエナレ -ル基、フエナントレ-ル基、アントラセ-ル基等 の単環式、二環式または三環式の 6な 、し 14員環式芳香族炭化水素環基が挙げら れる
[0031] 「5な 、し 14員芳香族複素環基」とは、炭素数 5な 、し 14の単環式、二環式または 三環式芳香族複素環基を示し、当該基における好ましい基としては、例えば、ピロリ ル基、ピリジル基、ピリダジニル基、ピリミジニル基、ピラジュル基、ビラゾリニル基、ィ ミダゾリル基、トリァゾリル基、テトラゾリル基、インドリル基、イソインドリル基、インドリジ -ル基、プリニル基、インダゾリル基、キノリル基、イソキノリル基、キノリジ -ル基、フタ ラジニル基、ナフチリジ-ル基、キノキサリニル基、キナゾリニル基、シンノリ-ル基、 プテリジ-ル基、イミダゾトリアジ-ル基、ビラジノピリダジニル基、アタリジ-ル基、フ ヱナントリジ-ル基、カルバゾリル基、ペリミジ -ル基、フエナント口リ-ル基、フエナシ ル基等の含窒素芳香族複素環基；チェ-ル基、ベンゾチェ-ル基等の含硫黄芳香 族複素環基;フリル基、ビラニル基、シクロペンタビラ-ル基、ベンゾフラ-ル基、イソ ベンゾフラニル基等の含酸素芳香族複素環基;チアゾリル基、イソチアゾリル基、ベ ンズチアゾリ-ル基、ベンズチアジアゾリル基、フエノチアジ-ル基、イソキサゾリル基 、フラザ-ル基、フエノキサジ-ル基、ビラゾロォキサゾリル基、イミダゾチアゾリル基、 チエノフリル基、フロピロリル基、ピリドォキサジ -ル基等の如く窒素原子、硫黄原子 および酸素原子力 なる群力 選ばれる 2個以上の異種原子を含んでなる芳香族複 素環基が挙げられる。
[0032] 「6ないし 14員非芳香族炭化水素環基」とは、 6ないしは 14個の環状の脂肪族炭化 水素基を示し、例えば、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロ へキシル基、シクロへプチル基、シクロォクチル基、スピロ [3. 4]ォクタ-ル基、デカ ン-ル基、インダニル基、 1ーァセナフテュル基、シクロペンタシクロオタテュル基、ベ ンゾシクロオタテニル基、インデュル基、テトラヒドロナフチル基、 6, 7, 8, 9ーテトラヒ ドロー 5H べンゾシクロヘプテュル基、 1, 4ージヒドロナフタレ-ル基等、 6ないし 1 4個の炭素原子からなる環状の脂肪族炭化水素基を意味する。
[0033] 「5な 、し 14員非芳香族複素環基」とは、 1)環を構成する原子の数が 5な 、し 14で あり、 2)環を構成する原子中に 1ないし 5個の、例えば窒素原子、 O または S 一等のへテロ原子を含有し、 3)環中に、一つまたは複数個の、カルボニル基、二重 結合または三重結合を含んで 、てもよく、 5な 、し 14員非芳香族複素単環基のみな らず、芳香族炭化水素環基と縮合する飽和複素環基、または芳香族複素環基と縮 合する飽和炭化水素環基もしくは飽和複素環基を示す。 5ないし 14員非芳香族複素 環基として具体的には例えばァゼチジュル環、ピロリジ -ル環、ピベリジ-ル環、ァゼ パ-ル環、ァゾ力-ル環、テトラヒドロフラ-ル環、テトラヒドロビラ-ル環、モルホリニ ル環、チオモルホリニル環、ピペラジ-ル環、チアゾリジ-ル環、ジォキサ-ル環、ィ ミダゾリ-ル環、チアゾリ-ル環、 1, 2—べンゾビラ-ル環、イソクロマ-ル環、クロマ ニル環、インドリニル環、イソインドリニル環、ァザインダニル基、ァザテトラヒドロナフ チル基、ァザクロマ-ル基、テトラヒドロべンゾフラ-ル基、テトラヒドロべンゾチェ-ル 基、 2, 3, 4, 5—テトラヒドローべンゾ [b]チェ-ル基、 3, 4 ジヒドロー 2H—ベンゾ[ b] [l, 4]ジォキセピ-ル基、インダン一 1 オンィル基、 6, 7 ジヒドロー 5H シク 口ペンタビラジ-ル基、 6, 7 ジヒドロー 5H—[1]ピリジ-ル基、 6, 7 ジヒドロー 5H — [1]ピリジ-ル基、 5, 6 ジヒドロー 4H シクロペンタ [b]チェ-ル基、 4, 5, 6, 7 ーテトラヒドローべンゾ [b]チェ-ル基、 3, 4 ジヒドロー 2H—ナフタレー 1 オンィ ル基、 2, 3 ジヒドローイソインドールー 1 オンィル基、 3, 4 ジヒドロー 2H—イソ キノリン一 1 オンィル基、 3, 4 ジヒドロー 2H べンゾ [1, 4]ォキサピ-ル基等を 意味する。
[0034] 「ヘテロ環基」とは、 5な 、し 14員芳香族複素環基または 5な 、し 14員非芳香族複 素環基を意味する。
[0035] 「保護基を有する水酸基」における好ま 、基としては、例えばメトキシメチルエーテ ル基、テトラヒドロビラ-ルエーテル基、ターシャリーブチルエーテル基、ァリルエーテ ル基、ベンゾエート基、アセテート基、ホルメート基、クロトネート基、 p フエ-ルペン ゾエート基、ピバロエート基、ターシャリーブチルジメチルシリル基、ターシャリーブチ ルジフヱ-ルシリル基、トリチル基、ベンジル基等が挙げられる。
[0036] 「タンパク質標識基」とはタンパク質のアミノ酸残基と化学的に不可逆結合する基を 意味する。このようなタンパク質標識基としては、例えば、光親和性標識基、化学親 和性基などが挙げられる。具体的には、例えば、光親和性標識基としては、ベンゾィ ル基、ベンゾフエノン基、アジド基、カルボ-ルアジド基、ジアジリジン基、エノン基、 ジァゾ基、ニトロ基等が挙げられる。化学親和性基としては、例えば、ハロゲン原子で 置換されたケトン基、力ルバモイル基あるいはエステル基、アルキルチオ基、ォキシラ ン基等が挙げられる。なかでも光親和性標識基が好ましぐ光親和性標識基としては 、特に、ベンゾフエノン基、ベンゾィル基、アジド基、カルボ-ルアジド基、ジアジリジ ン基、エノン基、ジァゾ基、ニトロ基などが好ましい。
[0037] 「タンパク質標識基を含む基」とは、上記したタンパク質標識基が、適当なリンカ一 ( 例えば、後述する Aついてのリンカ一など）、 6ないし 14員環芳香族炭化水素環基、
2
あるいは 5な 、し 14員環芳香族複素環基を介して置換された、あるいは直接置換さ れた、 C1 C6アルキル基、 CI— C6アルコキシ基、 C2— C6アルケ-ル基、 C2— C 6アルキニル基、フエ-ル基、ナフチル基、ベンゾィル基などが挙げられる。
[0038] 「固相担体と結合させる基」とは、官能基を有する固相担体と結合させることができ る基を意味する。例えば、固相担体がアミノ基を有する場合には、カルボニル基、ェ ステル基、カルボキシルキ基、イソシナネート基など力 固相担体がカルボキシル基 を有する場合は、アミノ基などが、固相担体がアルケニル基あるいはアルキニル基を 有する場合は、ハロゲン原子、メタンスルホネート基やアジド基など力 固相担体がハ ロゲン原子を有する場合は、アミノ基、水酸基、チオール基などが挙げられる。
[0039] 本明細書にぉ ヽて、置換基群 Al、置換基群 A2、置換基群 A3、置換基群 A4およ び置換基群 A5とは以下の基を示す。
[0040] 置換基群 A1は、ハロゲン原子、シァノ基、ニトロ基、 C3— 8シクロアルキル基、 C2 —6ァルケ-ル基、 C2— 6アルキ-ル基、 C1— 6アルコキシ基、 C3— 8シクロアルコ キシ基、ホルミル基、 C1 6アルキルカルボ-ル基および C1 6アルキル基（該 C1 6アルキル基は、ハロゲン原子、水酸基、シァノ基、 C1 6アルコキシ基、 C3— 8 シクロアルキル基および C1 6アルキルカルボ-ル基からなる群から選択される 1な いし 3の置換基で置換されてもよい)、タンパク質標識基、タンパク質標識基を含む基 および固相担体と結合させる基を示す。
[0041] 置換基群 A2は、ハロゲン原子、水酸基、シァノ基、 C1 6アルコキシ基 (該 C1 6 アルコキシ基は、ハロゲン原子、シァノ基、 C1— 6アルコキシ基、 C2— 6ァルケ-ル 基、 C2— 6アルキ-ル基および C3— 8シクロアルキル基からなる群力 選択される 1 ないし 3の置換基で置換されてもよい）、 C3— 8シクロアルコキシ基、 C2— 6ァルケ- ルォキシ基および C2— 6アルキ-ルォキシ基、タンパク質標識基およびタンパク質 標識基を含む基を示す。
[0042] 置換基群 A3は、ハロゲン原子、置換基群 A5から選択される 1ないし 3の置換基で 置換されてもょ ヽ 6な ヽし 14員芳香族炭化水素環基、置換基群 A5から選択される 1 な!、し 3の置換基で置換されてもょ 、5な 、し 14員芳香族複素環基、 C1— 6アルキ ル基 (該 C1 6アルキル基は、ホルミル基、ハロゲン原子、水酸基、保護基を有する 水酸基、シァノ基、 C2— 6ァルケ-ル基、 C2— 6アルキ-ル基、 C3— 8シクロアルキ ル基、 C1— 6アルコキシ基、 C1— 6アルキルチオ基、 C1— 6アルキルスルフィエル 基、 C1 6アルキルスルホ-ル基、 C1 6アルキルカルボ-ル基、アミノ基（該ァミノ 基は、 1ないし 5のハロゲン原子を適宜有する C1 6アルキル基で置換されてもよい )、置換基群 A5から選択される 1な 、し 3の置換基で置換されてもょ 、6な 、し 14員 芳香族炭化水素環基、置換基群 A5から選択される 1ないし 3の置換基で置換されて もよ!/、5な 、し 14員芳香族複素環基、置換基群 A5から選択される 1な 、し 3の置換 基で置換されてもょ ヽ 6な ヽし 14員非芳香族炭化水素環基、置換基群 A5から選択 される 1な 、し 3の置換基で置換されてもょ 、5な 、し 14員非芳香族複素環基および —X— A (ここにおいて、 Xは、イミノ基、—O または— S を示し、 Aは、置換基群 A 5から選択される 1な 、し 3の置換基で置換されてもょ 、、 6な 、し 14員芳香族炭化水 素環基または 5な 、し 14員芳香族複素環基を示す)力 なる群力 選択される 1な!、 し 3の置換基で置換されてもよい）および C 1—6アルコキシ基、タンパク質標識基お よびタンパク質標識基を含む基を示す。
[0043] 置換基群 A4は、水素原子、ハロゲン原子、水酸基、シァノ基、ニトロ基、 C3— 8シ クロアルキル基、 C2— 6ァルケ-ル基、 C2— 6アルキ-ル基、 C3— 8シクロアルコキ シ基、 C3— 8シクロアルキルチオ基、ホルミル基、 C1 6アルキルカルボ-ル基、 C1 6アルキルチオ基、 C1 6アルキルスルフィエル基、 C1 6アルキルスルホ -ル基 、ヒドロキシィミノ基、 C 1—6アルコキシィミノ基、置換基群 A5から選択される 1ないし 3の置換基で置換されてもよい C 1—6アルキル基、置換基群 A5から選択される 1な いし 3の置換基で置換されてもよい C1—6アルコキシ基、置換基群 A5から選択され る 1な 、し 2の置換基で置換されてもょ 、ァミノ基、置換基群 A5から選択される 1な ヽ し 2の置換基で置換されてもょ ヽカルバモイル基、置換基群 A5から選択される 1な ヽ し 3の置換基で置換されてもょ ヽ 6な ヽし 14員芳香族炭化水素環基、置換基群 A5か ら選択される 1な 、し 3の置換基で置換されてもょ 、5な 、し 14員芳香族複素環基、 置換基群 A5から選択される 1な 、し 3の置換基で置換されてもょ 、6な 、し 14員非 芳香族炭化水素環基、置換基群 A5から選択される 1ないし 3の置換基で置換されて もよい 5ないし 14員非芳香族複素環基、 C2— 6ァルケ-ルォキシ基、 C2— 6アルキ -ルォキシ基、 C3— 8シクロアルキルスルフィエル基、 C3— 8シクロアルキルスルホ -ル基、—X— A (ここにおいて、 Xおよび Aは、前記の意味を有する）、—CO— A (こ こにおいて、 Aは、前記の意味を有する）および =CH— A (ここにおいて、 Aは、前記 の意味を有する）、タンパク質標識基およびタンパク質標識基を含む基を示す。
[0044] 置換基群 A5は、ハロゲン原子、水酸基、シァノ基、ニトロ基、 C3— 8シクロアルキル 基、 C2— 6ァルケ-ル基、 C2— 6アルキ-ル基、 C3— 8シクロアルコキシ基、 C3— 8 シクロアルキルチオ基、ホルミル基、 C1 6アルキルカルボ-ル基、 C1 6アルキル チォ基、 CI 6アルキルスルフィエル基、 C1 6アルキルスルホ-ル基、ヒドロキシィ ミノ基、 C2— 6ァルケ-ルォキシ基、 C2— 6アルキ-ルォキシ基、 C3— 8シクロアル キルスルフィエル基および C3— 8シクロアルキルスルホ-ル基、タンパク質標識基お よびタンパク質標識基を含む基を示す。
[0045] 次に、本発明の式 (I)の生物学的試薬用化合物またはその塩について説明する。
[0046] 式（I)において、 Ar、 Ar、 X、 R X、 Xおよび Arにより構成される、下記式
[化 10]
Figure imgf000029_0001
[式中、 Ar、 Ar、 X、 R X、 Xおよび Arは、前記の意味を有する、但し、 Xは、
1 2 1 2 3 3 1
— C≡C—または一 CR2=CR3—を示すか、あるいは R1および一 X—X— Ar力
2 3 3
—X—CO— Nと一緒になつて、式 (Π)で表される基を形成する（但し、式 (Π)におい て、
は二重結合を示す]で表される部分は、アミロイドベータタンパクの生成を抑制する生 物学的活性を発揮する部分であり、上記したシンナミドィ匕合物 (特許文献 1)に由来 するものである。本発明においては、 Ar に、置換
Figure imgf000029_0002
基として、タンパク質標識基、タンパク質標識基を含む基または固相担体と結合させ る基が置換されて 、てもよ 、。
[0047] 式 (I)の生物学的試薬用化合物またはその塩にぉ 、ては、 Arは、置換基群 A1か ら選択される 1ないし 3の置換基で置換されてもよいイミダゾリル基である。 Arは、置 換基群 A1から選択される 1ないし 2の置換基で置換されてもよいイミダゾリル基が好 ましぐ Arは、水素原子、ハロゲン原子、 C3— 8シクロアルキル基、 C2— 6ァルケ- ル基、 C2— 6アルキ-ル基および C1— 6アルキル基（該 C1— 6アルキル基は、 1な V、し 3のハロゲン原子で置換されてもょ 、）力も選択される 1な 、し 2の置換基で置換 されてもよいイミダゾリル基、または、タンパク質標識基として、アジド基で置換された イミダゾリル基がより好ましぐ Arは、水素原子、ハロゲン原子、 C3— 8シクロアルキ ル基および C1 6アルキル基力 選択される 1な!、し 2の置換基で置換されてもよ!ヽ イミダゾリル基が更に好まし 、。
[0048] 式 (I)の生物学試薬用化合物またはその塩にぉ 、ては、 Arは、置換基群 A2から
2
選択される 1ないし 3の置換基で置換されてもよい、ピリジ-ル基、ピリミジ -ル基また はフエ-ル基である。 Arは、水素原子、ハロゲン原子、シァノ基、水酸基、 C1— 6ァ
2
ルコキシ基（該 C1 6アルコキシ基は、 C2— 6ァルケ-ル基、 C2— 6アルキ-ル基 および C3— 8シクロアルキル基からなる群力 選択される 1ないし 3の置換基で置換 されてもよい）、 C2— 6ァルケ-ルォキシ基および C2— 6アルキ-ルォキシ基から選 択される 1ないし 3の置換基で置換されてもよい、ピリジ-ル基、ピリミジ -ル基または フエニル基、または、タンパク質標識基を有する基として、ォキシラン基を有するアル コキシ基が置換したピリジニル基、ピリミジニル基またはフエニル基がより好ましぐ Ar 力 水素原子、ハロゲン原子、シァノ基および C 1—6アルコキシ基力 選択される 1
2
ないし 3の置換基で置換されてもよい、ピリジ-ル基、ピリミジ -ル基またはフエ-ル基 が更に好ましい。
また、式 (I)の生物学試薬用化合物においては、 Arは、上記した置換基で置換さ
2
れてもよい、ピリジニル基、ピリミジニル基またはフエ-ル基のうちでも、特に、 Ar力
2 上記した置換基で置換されてもょ 、、フエ-ル基が好まし!/、。
[0049] 式 (I)の生物学的試薬用化合物においては、 Xは、 C≡C または CR2 = CR 3— (ここにおいて、 R2および R3は、置換基群 A3から選択される置換基を示す)であ る。 Xは、 CR21 = CR31— (ここにおいて、 R21は、水素原子、ハロゲン原子、 C1— 6アルキル基または C1 6アルコキシ基であり、 R31は、水素原子、ハロゲン原子、置 換基群 A5から選択される 1な 、し 3の置換基で置換されてもょ 、6な 、し 14員芳香 族炭化水素環基、置換基群 A5から選択される 1ないし 3の置換基で置換されてもよ V、5な 、し 14員芳香族複素環基または C1— 6アルキル基 (該 C1— 6アルキル基は、 ハロゲン原子、水酸基、シァノ基、 C3— 8シクロアルキル基、 C1 6アルキル基、 C1 6アルコキシ基、アミノ基 (該ァミノ基は、 1ないし 5のハロゲン原子を適宜有する C1 6アルキル基で置換されてもよ!、）、置換基群 A5から選択される 1な!、しは 3の置 換基で置換されてもょ ヽ 6な ヽし 14員芳香族炭化水素環基、置換基群 A5から選択 される 1な 、しは 3の置換基で置換されてもょ 、5な 、し 14員芳香族複素環基、置換 基群 A5から選択される 1な 、し 3の置換基で置換されてもょ 、5な 、し 14員非芳香 族複素環基および— O—A1 (ここにおいて、 A1は、置換基群 A5から選択される 1な V、し 3の置換基で置換されてもょ 、6な 、し 14員芳香族炭化水素環基または置換基 群 A5から選択される 1な 、し 3の置換基で置換されてもょ 、5な 、し 14員芳香族複 素環基を示す)から選択される置換)がより好ましい。 Xは、 CR22 = CR32— (ここに おいて、 R22は、水素原子またはハロゲン原子を示し、 R32は、水素原子、ハロゲン原 子、 C1 6アルキル基（該 C1 6アルキル基は、 C3— 8シクロアルキル基またはフエ -ル基で置換されてもよい）およびフエ二ル基カもなる群力 選択される 1の置換基を 示す）が更に好ましい。
[0050] 式 (I)の生物学的試薬用化合物においては、 R1は、置換基群 A4から選択される基 である。 R1は、水素原子または C 1—6アルキル基 (該 C 1—6アルキル基は、水酸基 、 C3— 8シクロアルキル基、 C3— 8シクロアルコキシ基、 C1— 6アルキルチオ基、アミ ノ基 (該ァミノ基は、 1ないし 5のハロゲン原子を適宜有する C1 6アルキル基で置換 されてもょ 、）、置換基群 A6から選択される 1な 、し 3の置換基で置換されてもょ 、6 な!、し 14員芳香族炭化水素環基、置換基群 A6から選択される 1な 、し 3の置換基 で置換されてもょ ヽ 5な ヽし 14員芳香族複素環基および置換基群 A6から選択され る 1な 、し 3の置換基で置換されてもょ 、5な 、し 14員非芳香族複素環基力もなる群 力も選択される 1な ヽし 3の置換基で置換されてもょ ヽ）が好まし ヽ。ここで置換基群 A6は、
水素原子、ハロゲン原子、 C1 6アルキル基（該 C1 6アルキル基は、 1ないし 5の ハロゲン原子で置換されてもよい）および C1 6アルコキシ基または 6ないし 14員芳 香族炭化水素環基を示す。
[0051] 式 (I)の生物学的試薬用化合物においては、 Xは、タンパク質標識基またはタンパ
2
ク質標識基を含む基で置換されて 、てもよ 、、 C1— 6アルキレン基 (該 C1— 6アルキ レン基は、ハロゲン原子、水酸基、シァノ基、 C3— 8シクロアルキル基、 C3— 8シクロ アルコキシ基、ホルミル基、 C1 6アルキル基 (該 C1 6アルキル基は、水酸基で置 換されていてもよぐまた、 C1 6アルキレン基上の同一炭素原子に 1または 2置換 することができ、 2つの該 C1 6アルキル基は結合する炭素原子と共に環状基 (該環 状基の環上メチレン基力^の酸素原子で置換されてもよい）を形成することができる） を形成してもよい）、 C1— 6アルコキシ基、アミノ基 (該ァミノ基は、 C1— 6アルキル基 で置換されてもょ ヽ）および置換基群 A5から選択される 1な ヽし 3の置換基で置換さ れてもよ 、5な 、し 14員非芳香族複素環基からなる群から選択される 1な 、し 3の置 換基で置換されてもよい）である。 Xは、 C1 6アルキル基 (該 C 1—6アルキル基は
2
、水酸基で置換されていてもよぐまた、 C1 6アルキレン基上の同一炭素原子に 1 または 2置換することができ、 2つの該 C1 6アルキル基は結合する炭素原子と共に 環状基 (該環状基の環上メチレン基カ^の酸素原子で置換されてもよい）を形成する ことができる）を形成してもよい）、またはタンパク質標識基として、ハロゲン原子で置 換された C 1—6アルキル基が好ましぐ特に、 Xは、 C1— 6アルキレン基 (該 C1— 6
2
アルキレン基は、 C1 6アルキル基 (該 C1 6アルキル基は、水酸基で置換されて もよ!/、)で置換されてもよ!、）が好まし!/、。
[0052] 式 (I)の生物学的試薬用化合物においては、 Xは、単結合、置換基群 A5から選択
3
される置換基で置換されてもよいイミノ基、—O または— S を示し、単結合、 o 一が好ましい。
[0053] 式 (I)の生物学的試薬用化合物においては、 Arは、置換基群 A5から選択される 1
3
な!、し 3の置換基で置換されてもょ 、6な 、し 14員環芳香族炭化水素基または置換 基群 A5から選択される 1な 、し 3の置換基で置換されてもょ 、5な 、し 14員環芳香 族複素環基を示し、ここで、該芳香族炭化水素基および該芳香族複素環基は、これ らの置換基とともに、または、これらの置換基に代って、タンパク質標識基またはタン ノ ク質標識基を含む基で置換されていてもよい。 Arは、置換基群 A5から選択され
3
る 1ないし 3の置換基で置換されてもよい、フエ-ル基、ナフチル基、フルォレニル基 、チェニル基、ピリジ-ル基、キノリニル基、イソキノリニル基、インドリル基、ベンゾチ ァゾリル基、ベンゾォキサゾリル基、フリル基が好ましい。
[0054] 式 (I)の生物学的試薬用化合物においては、 R1および X -X Ar力 —X— CO— Nと一緒になつて、置換基群 A4力 選択される 1ないし 4の置換基で置換され てもよい、式 (Π)
[化 11]
Figure imgf000033_0001
[式中、 R4は置換基群 A3から選択される置換基を示し;
は単結合または二重結合を示し; Zは、単結合、一 CO—、 一 （CH ) n—(ここにおい
1 2
て、 nは、 1ないし 3の整数を示す）または— CR¾6 (ここにおいて、 R5および R6は、下 記置換基群 A4から選択される置換基を示す)を示し; Zは、単結合、一 O—、 一 NR
2
CO—、— CONR―、— CSNR―、— NRCS— (ここにおいて、 Rは、下記置換基群 A4から選択される置換基を示す)または—S—を示し; Zは、単結合、下記置換基群
3
A4力も選択される置換基で置換されてもよいイミノ基、―（CH ) m— (ここにおいて、
2
mは、 1ないし 3の整数を示す）、 -CR7R8- (ここにおいて、 R7および R8は、下記置 換基群 A4力も選択される置換基を示す)または— O—を示し; X 、 Xおよび Arは、
2 3 3 前記の意味を有する。 ]で表される基を形成してもよく；
式 (Π)は、置換基群 A5から選択される 1な 、し 4の置換基で置換されてもょ 、、下 3己式
[化 12]
Figure imgf000034_0001
[式中、 R9は、置換基群 A4から選択される置換基を示し、 R4、 X、 Xおよび Arは、
2 3 3 前記の意味を有する。 ]で表される環状基が好ましぐ特に、式 (Π)が、置換基群 A5 から選択される 1な 、し 4の置換基で置換されてもょ ヽ、下記式
[化 13]
Figure imgf000034_0002
[式中、 R4、 X、 Xおよび Arは、前記の意味を有する。 ]で表される環状基が好まし
2 3 3
い。
式 (I)の生物学的試薬用化合物においては、 Ar、 Ar、 X、 R X、 Xおよび Ar
1 2 1 2 3 3 により構成される部分は、下記式
[化 14]
Figure imgf000034_0003
[式中、 R は、水酸基で置換されていてもよい C1— C6アルキル基を示し、 A、 A、 Aおよび Aは、前記の意味を有する。 ]で表される生物学的試薬用化合物における
3 4
対応する構成部分が好まし ヽ。
[0057] 式 (I)の生物学的試薬用化合物においては、 Aは、単結合、タンパク質標識基ま たはタンパク質標識基を含む基を示す。
[0058] 式 (I)の生物学的試薬用化合物においては、 Aは単結合またはリンカ
2 一を示す。リ ンカーとは、当該分野でよく知られており、一例として、通常の結合手 (例えば、エス テル、アミド、力ルバメート、エーテル、チォエーテル、ゥレア、アミン基等を有するァ ルキル基、ァリケ-ル基、アルキ-ル基を意味する。例えば、 -L4-L1 -L2-L3 - (ここにおいて、 L4は置換基を有しても良いヘテロ環、 C1 20アルキル基、 C2- 20ァルケ-ル基、および C2— 20アルキ-ル基、 L1および L3はそれぞれ、単結合、 一 O 、 一 S 、 一 NH 、 一 OC (0) N 、 一 NC (0) 0—、 一 NC (0) N 、 一 NC (O) —、 一C (0) N 、 一C (O) または
[化 15]
Figure imgf000035_0001
(ここで、 R は、 C1— C6アルキル基を示す）を示し； L2は、 C2— 20アルキレン基、 C2— 20ァルケ-ルン基または C2— 20アルキ-レン基、あるいは—（CH CH 0) p
2 2
- (ここで、 pは 1から 20の整数を示す）または—（CH CH NH) q- (ここで、 qは 1か
2 2
ら 20の整数を示す)を示し; L3は単結合、ハロゲン原子、水酸基、ヘテロ環基であつ てもよく、 L1および L3は、隣接する基と環を形成していてもよい）で表されるリンカ一 が好ましく挙げられる。ここで、 L3がへテロ環基である場合のへテロ環としては、例え ば、トリァゾールなどが挙げられる。 L1および L3が、隣接する基と環を形成していて もよい場合としては、例えば、ピぺラジン基などが挙げられる。
[0059] 式 (I)の生物学的試薬用化合物においては、 Aは単結合または開裂可能なリンカ
3
一を示す。開裂可能なリンカ一とは、当該生物学的試薬用化合物が標的タンパク質 と複合体を形成した後、その複合体から、フィッシングタグ基、検出可能なマーカー、 あるいは固相担体を含まない部分を、化学反応、酵素反応などによって開裂すること ができるリンカ一を意味する。リンカ一を開裂させるための化学反応、酵素反応は、 意図する結合の開裂に特異的であって、当該複合体上で意図しない反応が起こらな いよう選択する。このような開裂可能なリンカ一としては、例えば、 S— S―、 -0- Si— o 、一糖残基一などが挙げられる。ここで、一糖残基一としては、具体的には
、グルコース基、ガラクトース基等の単糖、あるいは、ラタトース等の二糖などが挙げら れる。
[0060] 式 (I)の生物学的試薬用化合物においては、 Aはフィッシングタグ基、検出可能な
4
マーカー、固相担体、または固相担体と結合させる基を示す。フィッシングタグ基とは 、当該生物学的試薬用化合物と標的タンパク質との複合体を、複合体を形成してい な 、タンパク質力 分離するために用いる基のことを意味する。フィッシングタグ基と しては、例えば、ピオチン、 3 - (4, 4—ジフルォロ一 5, 7—ジメチル一 4H— 3a, 4a -ジァザ 4—ボラ一 s—インダセン 3—ィル)プロピオ-ル基などが挙げられる。 検出可能なマーカーとは、放射性標識、蛍光標識、化学発光標識、重金属イオンな どを意味する。検出可能なマーカーとしては、例えば、 125I、 32P、 3H、 "Cなどの放射 性標識基；フルォレセイン、ローダミン、ダウンシル、ゥンベリフエロン、 7— -トロフラ ザ-ル、 3— (4, 4—ジフルォロ— 5, 7—ジメチル— 4H— 3a, 4a—ジァザ— 4—ボラ s—インダセン 3—ィル）プロピオ-ル基などの蛍光標識基;ルミフェリン、ルミノー ルなどの化学発光基；ランタノイド金属イオン、ラジウムイオンなどの重金属イオンなど が挙げられる。固相担体とは、官能基を有するリンカ一と結合させることができる固体 の担体を意味する。固相担体としては、ガラスビーズ、ガラスベット、マイクロタイター プレート、ァガロースビーズ、ァガロースベッド、ポリスチレンビーズ、ポリスチレンべッ ド、ナイロンビーズ、ナイロンベッドなどが挙げられる。
[0061] 式 (I)の生物学的試薬用化合物においては、例えば、 Aが単結合で、 Ar
1 1、 Ar
2、 X れもが、置換基として、タンパク質標識基またはタン
1 、 R1 X
2、 Xおよび Arのいず
3 3
パク質標識基を含む基を有しない場合には、 Aは固相担体または固相担体を結合
4
させる基であるのが、後述する A タンパクの生成機構を解明する方法において標 的タンパクを検索するのに好ましい。その場合に、 Aはリンカ一であるのが好ましい。
2
[0062] 本発明の式 (I)の生物学的試薬用化合物は塩の形態であってもよい。具体的には 、例えば、フッ化水素酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩等のハロゲンィ匕 水素酸塩;硫酸塩、硝酸塩、過塩素酸塩、リン酸塩、炭酸塩、重炭酸塩等の無機酸 塩;酢酸塩、シユウ酸塩、マレイン酸塩、酒石酸塩、フマル酸塩、クェン酸塩等の有 機カルボン酸塩;メタンスルホン酸塩、トリフルォロメタンスルホン酸塩、エタンスルホ ン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、トルエンスルホン酸塩、カンファースルホン酸塩等の 有機スルホン酸塩;ァスパラギン酸塩、グルタミン酸塩等のアミノ酸塩；四級ァミン塩； ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩;マグネシウム塩、カルシウム塩等のアル カリ土類金属塩などが挙げられる。
[0063] 式（1)で表される生物学的試薬用化合物またはその塩としては、 Aがフィッシング
4
タグ基として、ピオチンまたは 3— (4, 4—ジフルオロー 5, 7—ジメチルー 4H— 3a, 4 a ジァザ— 4—ボラ— s インダセン— 3 -ィル）プロピオ-ル基を有するものが特に 好ましぐ具体例として以下の化合物を挙げることができる。
[0064] 1) 5- ( (3aR, 6S, 6aS) 2 ォキソへキサヒドロチェノ [3, 4— d]イミダゾールー 6 ィル)吉草酸 {2 { (E) 3— {4 {4 { (S) 1 {3— { 1 [3—メトキシー 4 一（4ーメチルー 1H—イミダゾールー 1 ィル）フエ-ル]一（E)—メチリデン } 2— ォキソピペリジン— 1—ィル }ェチル }ベンゾィル }フエ-ル}アタリロイルァミノ }ェチル } アミド、
2) 5- [ (3aR, 6S, 6aS)—2 ォキソへキサヒドロチェノ [3, 4 d]イミダゾールー 6 ィル]吉草酸 { 1 {2— {2— {2— {2— {3 { (E) 3— {4 {4 { 1 {3— { 1 — [3—メトキシ— 4— (4—メチル—1H—イミダゾールー 1—ィル）フエ-ル]— (E) - メチリデン } 2 ォキソピペリジン 1ーィル }ェチル } 4 ベンゾィル }フエ-ル }ァ クリロイルァミノ }エトキシ }ェトキシ}エトキシ }ェチル }— 1H— [1, 2, 3]トリァゾール 4ーィルメチル }ァミド、
3) 5- [ (3aR, 6S, 6aS)—2—ォキソへキサヒドロチェノ [3, 4— d]イミダゾールー 6 ィル]吉草酸 {2— {2— {6 { (E) 3— {4 {4 { 1 {3— { 1 [3—メトキシ -4- (4ーメチルー 1H—イミダゾールー 1 ィル）フエ-ル]一（E)—メチリデン }ー2 —ォキソピペリジン— 1—ィル }ェチル }ベンゾィル }フエ-ル}アタリロイルァミノ }へキ 4) 1 - { (S) - 1 - {4- {4- { (E) - 3- {4- [3- (4, 4ージフノレオロー 5, 7 ジメ チル— 4H— 3a, 4a—ジァザ— 4—ボラ— s—インダセン— 3 -ィル）プロピオ-ル]ピ ペラジン }ー1ーィル}ー3—ォキソプロぺ-ル}べンゾィル}フェ-ル}ェチル}ー3—{
1— [3—メトキシ— 4— (4—メチルー 1H—イミダゾールー 1—ィル）フエ-ル]一（E) ーメチリデン }ピペリジン 2—オン、
5) 5- [ (3aR, 6S, 6aS)—2—ォキソへキサヒドロチェノ [3, 4— d]イミダゾールー 6 ィル]吉草酸 {2— {3— {4 { (E) 3— {4 {4 { 1 {3— { 1 [3—メトキシ -4- (4ーメチルー 1H—イミダゾールー 1 ィル）フエ-ル]一（E)—メチリデン }ー2 ーォキソピペリジン 1ーィル }ェチル }ベンゾィル }フエ-ル}アタリロイル}ピペラジン — 1 ィル } 3 ォキソプロピルジスルファ-ル }ェチル }ァミド、
6) (3aR, 6S, 6aS)— 6 {4 { (E)— 3— {4 {4 { 1 {3— { 1 [3—メト キシ— 4— (4—メチル—1H—イミダゾールー 1—ィル）フエ-ル]一（E)—メチリデン }— 2—ォキソピペリジン一 1—ィル }ェチル }ベンゾィル }フエ-ル}アタリロイル}ピぺ ラジン 1ーィル }ー5 ォキソペンチル}テトラヒドロチェノ [3, 4 d]イミダゾールー
2—オン、
7) 5- [ (3aR, 6S, 6aS)—2—ォキソへキサヒドロチェノ [3, 4— d]イミダゾールー 6 ィル]吉草酸 { 1 {6— {3— {4 {4 { 1 {3— [3—メトキシー 4一（4 メチル — 1H—イミダゾールー 1—ィル）フエ-ル]— (E)—メチリデン }— 2—ォキソピベリジ ン一 1—ィル }ェチル }ベンゾィル }フエ-ル }アタリロイルァミノ }へキシル }— 1 H— [ 1
, 2, 3]トリァゾール— 4—ィルメチル }アミド、
8) 5- ( (3aR, 6S, 6aS)—2 ォキソへキサヒドロチェノ [3, 4 d]イミダゾールー 6 ィル)吉草酸 4 {4 { (S) 1 {3— { 1 [3—メトキシー 4 4ーメチルー 1 H—イミダゾールー 1—ィル）フエ-ル]— (E)—メチリデン }— 2—ォキソピペリジン— 1ーィル }ェチル }ベンゾィル }ベンジルアミド、
9) 6- [5- ( (3aR, 6S, 6aS)—2 ォキソへキサヒドロチェノ [3, 4 d]イミダゾー ルー 6 ィル)ペンタノィルァミノ]吉草酸 4 {4 { (S) 1 {3— { 1 [3—メトキ シー4一（4ーメチルー 1H—イミダゾールー 1 ィル）フエ-ル]一（E)—メチリデン } - 2—ォキソピペリジン 1—ィル }ェチル }ベンゾィル }ベンジルアミド、 10) 5- ( (3aR, 6S, 6aS)—2—ォキソへキサヒドロチェノ [3, 4 d]イミダゾール 6 ィル)吉草酸 {4 {4 { (S) 1 {3— { 1 [3—メトキシー 4 4 メチル — 1H—イミダゾールー 1—ィル）フエ-ル]— (E)—メチリデン }— 2—ォキソピベリジ ン— 1—ィル }ェチル }ベンゾィル }ベンジル }メチルアミド、
11) 6- [5- ( (3aR, 6S, 6aS)— 2 ォキソへキサヒドロチェノ [3, 4 d]イミダゾ 一ルー 6 ィル）ペンタノィルァミノ]吉草酸 {4 {4 { (S) 1 {3— { 1 [3 メ トキシ— 4— (4—メチル—1H—イミダゾールー 1—ィル）フエ-ル]一（E)—メチリデ ン }— 2—ォキソピペリジン— 1—ィル }ェチル }ベンゾィル }ベンジル }メチルアミド、
12) {4— {4一 { (S) 1一 {3— { 1一 [3—メトキシー 4一（4ーメチルー 1H イミダゾ 一ルー 1—ィル）フエ-ル] - (E)—メチリデン }— 2—ォキソピペリジン一 1—ィル }ェ チル }ベンゾィル }— N— {2— [5— ( (3aR, 6S, 6aS)—2—ォキソへキサヒドロチェ ノ [3, 4— d]イミダゾールー 6—ィル）ペンタノィルァミノ]ェチル }ベンズァミド、
13) {4— {4 { (S)— 1 {3— { 1 [3—メトキシー 4 4ーメチルー 1H イミダゾ 一ルー 1—ィル）フエ-ル] - (E)—メチリデン }— 2—ォキソピペリジン一 1—ィル }ェ チル }ベンゾィル }—N— {2— {2— {2— [5—（（3aR, 6S, 6aS)— 2 ォキソへキサ ヒドロチェノ [3, 4 - d]イミダゾール一 6—ィル）ペンタノィルァミノ]エトキシ }ェトキシ} ェチル }べンズアミド、
14) 5- ( (3aR, 6S, 6aS)—2—ォキソへキサヒドロチェノ [3, 4 d]イミダゾール 6 ィル)吉草酸 {2— {3— {4 {4 {2 ヒドロキシー 1 { (S) 3— [3 （(R) —メトキシ） 4— (4—メチル 1H—イミダゾール一 1—ィル）]― (E)—ベンジリデン }— 5 メチル 2 ォキソピペリジン 1 ィル }ェチル }ベンゾィル }フエニル } (E )—アタリロイルァミノ）ェチル }ァミド、
15) 5- ( (3aR, 6S, 6aS)—2—ォキソへキサヒドロチェノ [3, 4 d]イミダゾール 6 ィル)吉草酸 [5— (3- {4- [ (R) -4- (2 ヒドロキシー1 { (S)—3—[3 —メトキシ一 4— (4—メチル 1 H イミダゾール 1 ィル）ベンジリデン]— 5 メチ ルー 2—ォキソピペリジン 1—ィル }ェチル）ベンゾィル]フエ-ル }アタリロイルァミノ )ペンチル]アミド、
16) 5- ( (3aR, 6S, 6aS)—2—ォキソへキサヒドロチェノ [3, 4 d]イミダゾール 6 ィル)吉草酸 {1一（2— { 2— [2—（2 エトキシ)エトキシ]エトキシ }ェチル)ァ ミド } 3— {4— [4— ((R)— 2 ヒドロキシ一 1— {(S)— 3— [1— [3—メトキシ一 4— (4ーメチルー 1H—イミダゾールー 1 ィル）フエ-ル]一（E)—メチリデン ]ー5—メチ ルー 2—ォキソピペリジン 1—ィル }ェチル）ベンゾィル]フエ-ル }アクリルアミド、お よび
17)l-{(S)-l-{4-{4-{(E)-3-{4-{3-[4, 4ージフルオロー 5—（1H —ピロール— 2—ィル） 4H— 3a, 4a ジァザ— 4 ボラ— s—インダセン— 3—ィ ル]プロピオ-ル}ピペラジン } 1ーィル } 3 ォキソプロべ-ル}ベンゾィル }フエ -ル }ェチル } 3— {1— [3—メトキシ— 4— (4—メチル 1 H イミダゾール 1— ィル）フエ-ル] - (E)—メチリデン }ピペリジン一 2—オン。
[0065] 式（1)で表される生物学的試薬用化合物またはその塩の、他の好ましい具体例とし て以下の化合物を挙げることができる。
[0066] 1)1 {(S) 1 [4一（4ーョードベンゾィル）フエ-ル]ェチル }ー3—[1 [3—メ トキシー 4一（4ーメチルー 1H—イミダゾールー 1 ィル）フエ-ル]一（E)—メチリデ ン]ピぺリジン 2—オン、
2) 1 {(R) 1 [4一（4ーョードベンゾィル）フエ-ル]ェチル }ー3—[1 [3—メ トキシー 4一（4ーメチルー 1H—イミダゾールー 1 ィル）フエ-ル]一（E)—メチリデ ン]ピぺリジン 2—オン、
3) (E)一 3— {4一 [4一（（S)— 1一 {3— [1一 [3—メトキシー 4一 (4ーメチルー 1H —イミダゾールー 1—ィル）フエ-ル]一（E)—メチリデン]—2—ォキソピペリジン— 1 ーィル }ェチル）ベンゾィル]フエ-ルアクリル酸 ターシヤリブチルエステル、
4) ）ー？^ー{2—{2—[2—（2—ァジドェトキシ）ェトキシ]ェトキシ}ェチル } 3— {4 {4 { (S) 1 {3— {1 [3—メトキシー 4 4ーメチルー 1H イミダゾール — 1—ィル）フエ-ル] (E) メチリデン }— 2—ォキソピペリジン— 1—ィル }ェチル } ベンゾィル }フヱ-ル}アクリルアミド、
5) ）ー？^ー（6—ァジドへキシル）ー3—{4 {4 {1 {3—{1 [3—メトキシー 4一（4ーメチルー 1H—イミダゾールー 1 ィル）フエ-ル]一（E)—メチリデン } 2— ォキソピペリジン 1ーィル }ェチル }ベンゾィル }フエ-ル}アクリルアミド、 6) 1 { (S) 1 [4一（4ーヒドロキシメチルベンゾィル）フエ-ル]ェチル }ー3— { 1— [3—メトキシ— 4— (4—メチルー 1H—イミダゾールー 1—ィル）フエ-ル]一（E) ーメチリデン }ピペリジン 2—オン、
7) {4— {4 { (S) 1 {3— { 1 [3—メトキシー 4 4ーメチルー 1H イミダゾ 一ルー 1—ィル）フエ-ル] - (E)—メチリデン }— 2—ォキソピペリジン一 1—ィル }ェ チル }ベンゾィル }ベンジル }力ルバミン酸 t ブチルエステル、
8) 1 { (S) 1 [4一（4 アミノメチルベンゾィル）フエ-ル]ェチル } 3— { 1一 [ 3—メトキシー 4一（4ーメチルー 1H—イミダゾールー 1一ィル）フエ-ル]一（E)—メチ リデン }ピペリジン一 2—オン、
9) {4 {4 { (S) 1 {3— { 1 [3—メトキシー 4 4ーメチルー 1H イミダゾ 一ルー 1—ィル）フエ-ル] - (E)—メチリデン }— 2—ォキソピペリジン一 1—ィル }ェ チル }ベンゾィル }ベンジル }メチルカルバミン酸 t ブチルエステル、
10) 3— {1— [3—メトキシ一 4— (4—メチル 1 H イミダゾール 1 ィル）フエ- ル]一（E)—メチリデン }一 1一 { (S)— 1一 [4一（4ーメチルァミノメチルベンゾィル）フ ェ -ル]ェチル }ピぺリジン— 2—オン、
11) 1 {(S) 1 [4 4 アジドメチルベンゾィル）フエ-ル]ェチル } 3— { 1 — [3—メトキシ— 4— (4—メチル—1H—イミダゾールー 1—ィル）フエ-ル]— (E) - メチリデン }ピペリジン 2—オン、
12) 4-{4-{(S)-l-{3-{l- [3—メトキシー 4一（4ーメチルー 1H イミダゾ 一ルー 1—ィル）フエ-ル] - (E)—メチリデン }— 2—ォキソピペリジン一 1—ィル }ェ チル }ベンゾィル }安息香酸 メチルエステル、
13) 4-{4-{(S)-l-{3-{l- [3—メトキシー 4一（4ーメチルー 1H イミダゾ 一ルー 1—ィル）フエ-ル] - (E)—メチリデン }— 2—ォキソピペリジン一 1—ィル }ェ チル }ベンゾィル }安息香酸、および
14) (E) N— {2— {2— [2- (2 アジドエトキシ）エトキシ]エトキシ }ェチル } 3 -{4-{4-{ (R)—2 ヒドロキシ一 1— { (S)— 3— { 1— [3—メトキシ一 4— (4—メ チルー 1H—イミダゾールー 1 ィル）フエ-ル]一（E)—メチリデン } 5—メチルー 2 ーォキソピペリジン 1ーィル }ェチル }ベンゾィル }フエ-ル}アクリルアミド。 [0067] 以下に本発明の一般式 (I)の生物学的試薬用化合物の製造方法について説明す る。
一般式 (I)
[0068] [化 16]
Figure imgf000042_0001
[式中、 Ar、 Ar、 Ar、 X、 X、 X、 R、 A、 A、 Aおよび Aは前記と同じ意味を
1 2 3 1 2 3 1 1 2 3 4
示す。 ]で表される化合物は、例えば以下の一般的製造法 1ないし 3の方法に従って 合成される。なお、都合よく本発明の化合物を製造するにあたり各工程で好適な当 業者に公知の保護基（例えば、 T. Greeneら、「Protective Groups in Organic Synthesis」（John Wiley & Sons. Inc.、ニューヨーク、 1981年を参照）を選 定し適宜保護反応工程及び脱保護反応工程を含むことは ヽうまでもな!ヽ。
[0069] [一般的製造法 1]
本発明に係る一般式 (I)の化合物の代表的な [一般的製造法 1]につ 、て以下に説 明する。
[0070] [化 17] -A4
Figure imgf000042_0002
カップリング
[XS1 -3]
R1
[式中、 Ar、 Ar、 Ar、 X、 X、 X、 R、 A、 A、 Aおよび Aは前記と同じ意味を
1 2 3 1 2 3 1 1 2 3 4
有し、また Y、 Yは水素原子、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子等のハ ロゲン原子、トリフルォロメタンスルホン酸エステル基、トリメチルすず基等のアルキル すず基、ボロン酸基、ボロン酸エステル基、アセチレン基等のアルキン基、ビニル基 等のアルケン基、アジド基、カルボキシル基、アミノ基、水酸基を示す。 ]
上記 [一般的製造法 1]は [工程 1— 3]に従 、、化合物 (4)と化合物 (5)を縮合するこ とにより一般式 (I)の化合物を製造する方法の一例である。
[0071] [一般式 (I)の化合物の調製]
一般式 (I)の化合物は、 [工程 1— 3]に従 、化合物 (4)と化合物（5)を縮合すること により調製することができる。すなわち、 [工程 1— 3]は、出発原料によって異なるが、 本反応様の条件であれば特に限定はされず、多くの文献に記載されている公知の手 法を用いることができる。例えば、 i)カルボン酸ィ匕合物を酸ハロゲンィ匕物に変換後、 該酸ハロゲンィ匕合物と塩基性条件でアミンィ匕合物とを反応させる手法 (例えば「日本 化学会編新実験化学講座 (第 14卷)有機化合物の合成と反応 [II]」、丸善株式会社 、 1978年、 pi 142— 1145に記載）、 ii)縮合剤を使用してカルボン酸ィ匕合物とアミン 化合物とを反応させる手法 (例えば「有機化学実験の手引き [4]」、化学同人、 1990 年、 p27— 52に記載）、 iii)溝呂木— Heck反応（例えば R. F. Heck, 「Org. React ions.」、 1982年、 27卷、 p. 345を参照）、 iv)鈴木—宫浦反応（例えば A. Suzuki 、 rchem. Rev.」、 1995年、 95卷、 p. 2457を参照）、 v)菌頭反応（例えば K. Son ogashira、 「Comprehensive Organic Synthesis」、 1991牛、 3 、 p. 521を参 照）、 vi) Stilleカップリング反応（例え ί . K. Stille、 「Angew. Chem. Int. Ed. E ngl.」、 1986年、 25卷、 p. 508を参照）、 vii)アミノィ匕反応（例えば S. L. Buckwal d、 「J. Org. Chem.」、 1996年、 61卷、 p. 1133— 1135を参照）及び（例えば I. A . Perillo、 「Synth. Commun.」、 2001年、 31卷、 p. 685— 695を参照） viii)ァリ ールエーテル化反応（例えば S. L. Buckwald, 「J. Am. Chem. Soc.」、 2001年 、 123卷、 p. 10770— 10771を参照）等が挙げられる。
[0072] i)は酸ハロゲン化反応とそれに続く縮合反応力もなる。
酸ハロゲン化反応とは、化合物 (4) (ここにおいて、 Yはカルボキシル基を示す。 ) を酸ハロゲン化物に変換する手法である。本反応で使用される溶媒および反応温度 は、出発原料により異なり特に限定されるものではないが、本反応様の条件であれば 特に限定はされず、公知の手法を用いることができる。好ましくは、例えば、化合物（
4)を、化合物（4)に対し 1. 0〜 10等量の塩ィ匕チォ -ル、塩ィ匕ォキサリル等の塩素化 剤を用いて溶媒中攪拌する手法が挙げられる。また効率よく反応を進行させるのに、 適宜触媒量の N, N—ジメチルホルムアミド等を添加してもよい。使用する溶媒として は、出発原料により異なり、特に限定されるものではないが、好ましくは、例えば、塩 ィ匕メチレン、トルエン、テトラヒドロフラン等の不活性溶媒である。反応温度は好ましく ない副生成物の形成を促進することなく反応を完結させるのに足りる温度とすべきで あり、好ましくは氷冷〜 100°Cである。この反応は 1〜24時間で完了し、反応の進行 は公知のクロマトグラフィー技術で監視できる。望ましくない副生成物は慣用のクロマ トグラフィー技術または Zおよび結晶化等当業者に公知の技術で除くことができる。 続く縮合反応は、該酸ハロゲンィ匕物を、酸ハロゲンィ匕物に対して 1. 0〜： LO. 0等量 の塩基存在下、酸ノヽロゲンィ匕物に対して 0. 5- 2. 0等量の化合物（5) (ここにおい て、 Y
2はァミノ基、水酸基を示す。）とを溶媒中攪拌する方法が挙げられる。使用され る塩基は、出発原料により異なり特に限定されるものではないが、好ましくは、例えば
、ピリジン、ルチジン、キノリン、イソキノリン、トリエチルァミン、 N, N—ジイソプロピル ェチルァミン、水酸化ナトリウム、水酸ィ匕カリウム等である。使用される溶媒は、反応を 阻害せず出発原料をある程度溶解するものであれば特に限定されな!、が、好ましく は、例えば、塩化メチレン、トルエン、テトラヒドロフラン、 1、 4—ジォキサン、水等、ま たは、その混合物である。また、塩基を溶媒として使用する場合もある。反応温度は 好ましくない副生成物の形成を促進することなく反応を完結させるのに足りる温度と すべきであり、好ましくは氷冷〜 100°Cである。この反応は 1〜24時間で完了し、反 応の進行は公知のクロマトグラフィー技術で監視できる。望ましくな 、副生成物は慣 用のクロマトグラフィー技術または Zおよび結晶化等当業者に公知の技術で除くこと ができる。
また、本反応は、例えば、化合物 (4)の Yがァミノ基、水酸基で、化合物（5)の Y
1 2 力カルボキシル基の組み合わせであっても、効率よく所望の一般式 (I)の化合物を得 ることがでさる。
ii)の場合、化合物 (4) (ここにお 、て、 Yはカルボキシル基を示す。 )を、化合物 (4 )に対して 1. 0- 2. 0当量の縮合剤の存在下、化合物 (4)に対して、 0. 5- 2. 0当 量の化合物（5) (ここにおいて、 Yはアミノ基を示す。）とを溶媒中攪拌する手法が挙
2
げられる。使用する縮合剤としては、出発原料により異なり特に限定されるものではな いが、好ましくは、例えば、 1, 3—ジシクロへキシルカルボジイミド、 1—ェチル— 3— (3'—ジメチルァミノプロピル）カルボジイミド、または、ベンゾトリアゾール—1—ィル ォキシトリス（ジメチルァミノ）ホスホ-ゥムへキサフルォロりん酸塩等である。効率よく 反応を進行させるために、好ましくは、例えば、 N—ヒドロキシスクシンイミド、 N—ヒド ロキシベンゾトリアゾール等を、化合物 (4)に対して 1. 0- 2. 0当量添加する場合も ある。使用する溶媒としては、出発原料、使用する縮合剤により異なり、また反応を阻 害せず出発物質をある程度溶解するものであれば特に限定されないが、好ましくは、 例えば、塩化メチレン、 1, 2—ジクロロェタン等のハロゲン溶媒またはテトラヒドロフラ ン、 N、 N—ジメチルホルムアミド等の極性溶媒である。反応温度は好ましくない副生 成物の形成を促進することなく反応を完結させるのに足りる温度とすべきであり、好ま しくは、例えば、氷冷〜 100°Cである。好ましい反応条件では、この反応は 1〜24時 間で完了し、反応の進行は公知のクロマトグラフィー技術で監視できる。望ましくない 副生成物は慣用のクロマトグラフィー技術または Zおよび結晶化等当業者に公知の 技術で除くことができる。
また、本反応は、例えば、化合物 (4)の Yがァミノ基、化合物（5)の Yがカルボキ
1 2
シル基の組み合わせであっても、効率よく所望の一般式 (I)の化合物を得ることがで きる。
iii)は溝呂木— Heck反応を用いた縮合反応である。溝呂木— Heck反応の場合、 好ましくは、例えば、化合物 (4) (ここにおいて、 Yは塩素原子、臭素原子、よう素原 子等のハロゲン原子、または、トリフレート基等のスルホン酸エステル基を示す。）を、 化合物 (4)に対して 0. 01〜0. 2当量の遷移金属触媒存在下、化合物 (4)に対して 1. 0〜5. 0等量の化合物（5) (ここにおいて、 Yはアルケン基を示す。）とを溶媒中
2
攪拌する手法が挙げられる。使用する溶媒としては、出発原料、使用する遷移金属 触媒により異なり、また反応を阻害せず出発物質をある程度溶解するものであれば 特に限定されないが、好ましくは、例えば、ァセトニトリル、テトラヒドロフラン、 1, 4— ジォキサン、 1, 2—ジメトキシェタン、ベンゼン、トルエン、キシレン、 1ーメチルー 2— ピロリドン、 N, N—ジメチルホルムアミド等が挙げられる。使用する遷移金属触媒とし ては、好ましくは、例えば、パラジウム錯体であり、より好ましくは、例えば、酢酸パラジ ゥム（Π)、ジクロロビス（トリフエ-ルホスフィン)パラジウム（Π)、テトラキス（トリフエ-ル ホスフィン)パラジウム（0)、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（0)等の公知 のパラジウム錯体が挙げられる。また、効率よく反応が進行させるために、燐配位子（ 好ましくは、例えば、トリフエ-ルホスフィン、トリ一 o—トリールホスフィン、トリ一ターシ ャリーブチルホスフィン、 2—（ジ—ターシャリーブチルホスフイノ）ビフエ-ル等）等を 適宜添加場合がある。また、塩基の存在下で好ましい結果を与えることもあり、使用 する塩基としては、本反応様のカップリング反応で使用されるものであれば特に限定 されないが、好ましくは、例えば、トリェチルァミン、 N, N—ジイソプロピルェチルアミ ン、 N, N—ジシクロへキシルメチルァミン、テトラプチルアンモ -ゥムクロリド等が挙げ られる。反応温度はカップリング反応を完結させるのに足りる温度とすべきであり、好 ましくは、例えば、室温〜 150°Cである。本反応は、好ましくは、不活性ガス雰囲気下 で行い、より好ましくは、例えば、窒素またはアルゴン雰囲気下で行う。好ましい反応 条件では、この反応は 1〜24時間で完了し、反応の進行は公知のクロマトグラフィー 技術で監視できる。望ましくない副生成物は慣用のクロマトグラフィー技術または Z および結晶化等当業者に公知の技術で除くことができる。
また、本反応は、例えばィ匕合物 (4)の Yがアルケン基、化合物（5)の Yが塩素原
1 2 子、臭素原子、よう素原子等のハロゲン原子、または、トリフレート基等のスルホン酸 エステル基の組み合わせでも、効率よく所望の一般式 (I)の化合物を得ることができ る。
iv)は鈴木—宫浦反応を用いた縮合反応である。鈴木—宫浦反応の場合、好ましく は、例えば、化合物 (4) (ここにおいて、 Yは塩素原子、臭素原子、よう素原子等の ハロゲン原子、またはトリフレート基等のスルホン酸エステル基を示す。）を、化合物（ 4)に対して 0. 01〜0. 5当量の遷移金属触媒存在下、化合物 (4)に対して 1. 0- 2 . 0当量の化合物（5) (ここにおいて、 Yはボロン酸またはボロン酸エステル等を示す
2
。；)とを溶媒中攪拌する手法が挙げられる。使用する溶媒としては、出発原料、使用 する遷移金属触媒により異なり、また反応を阻害せず出発物質をある程度溶解する ものであれば特に限定されないが、好ましくは、例えば、ァセトニトリル、テトラヒドロフ ラン、 1, 4 ジォキサン、 1, 2 ジメトキシェタン、ベンゼン、トノレェン、キシレン、 1 メチル—2—ピロリドン、 N, N ジメチルホルムアミド、水等、またはそれらの混合溶 媒が挙げられる。使用する遷移金属触媒としては、好ましくは、例えば、公知のパラ ジゥム錯体であり、より好ましくは、例えば、酢酸パラジウム (Π)、ジクロ口ビス（トリフエ -ルホスフィン)パラジウム（Π)、テトラキス（トリフエ-ルホスフィン）パラジウム（0)、トリ ス（ジベンジリデンアセトン)ジパラジウム（0)等の公知のパラジウム錯体が挙げられる 。また、効率よく反応を進行させるために、燐配位子 (好ましくは例えばトリフエニルホ スフイン、トリー o トリルホスフィン、トリシクロへキシルホスフィン、トリーターシャリーブ チルホスフィン等)等を適宜添加してもよ ヽ。また効率よく反応を進行させるために、 例えば、 4級アンモ-ゥム塩、好ましくは、例えば、塩ィ匕テトラプチルアンモ-ゥム、臭 化テトラプチルアンモ-ゥム等を適宜添加してもよ ヽ。本反応は塩基の存在下にお ヽ て好ましい結果を得ることができ、この際、使用する塩基としては、出発原料、使用す る溶媒等により異なり特に限定されるものではないが、好ましくは、例えば、水酸化ナ トリウム、水酸化バリウム、フッ化カリウム、フッ化セシウム、炭酸ナトリウム、炭酸力リウ ム、炭酸セシウム、リン酸カリウム等が挙げられる。反応温度はカップリング反応を完 結させるのに足りる温度とすべきであり、好ましくは、例えば、室温〜溶媒の還流であ る。本反応は、好ましくは、例えば、不活性ガス雰囲気下で行い、より好ましくは、例 えば、窒素またはアルゴン雰囲気下で行う。好ましい反応条件では、この反応は 1〜 24時間で完了し、反応の進行は公知のクロマトグラフィー技術で監視できる。好まし い反応条件では、この反応は 1〜24時間で完了し、反応の進行は公知のクロマトグ ラフィー技術で監視できる。望ましくない副生成物は慣用のクロマトグラフィー技術ま たは Zおよび結晶化等当業者に公知の技術で除くことができる。
また、本反応は、例えばィ匕合物（4)の Yがボロン酸またはボロン酸エステル基であ り、化合物（5)の Yが塩素原子、臭素原子、よう素原子等のハロゲン原子、またはトリ
2
フレート基等のスルホン酸エステル基の組み合わせでも、効率よく所望の一般式 (I) の化合物を得ることができる。 v)は菌頭反応を用いた縮合反応である。菌頭反応の場合、好ましくは、例えば、化 合物 (4) (ここにおいて、 Yは塩素原子、臭素原子、よう素原子等のハロゲン原子、ま たはトリフレート基等のスルホン酸エステル基を示す。）を、化合物 [4]に対して 0. 01 〜0. 5当量の遷移金属触媒存在下、化合物 (4)に対して 1. 0当量以上の化合物（5 ) (ここにおいて、 Yはアセチレン基を示す。）とを溶媒中攪拌する手法が挙げられる
2
。使用する溶媒としては、出発原料、使用する遷移金属触媒により異なり、また反応 を阻害せず出発物質をある程度溶解するものであれば特に限定されないが、好まし くは、例えば、ァセトニトリル、テトラヒドロフラン、 1, 4—ジォキサン、 1, 2—ジメトキシ ェタン、ベンゼン、トルエン、キシレン、 1ーメチルー 2—ピロリドン、 N, N—ジメチルホ ルムアミド、ジメチルスルホキシド等が挙げられ、より好ましくは、例えば、テトラヒドロフ ラン、 1, 4—ジォキサン、 1—メチル—2—ピロリドン、 N, N—ジメチルホルムアミド等 が挙げられる。使用する遷移金属触媒としては、好ましくは、例えば、公知のパラジゥ ム錯体であり、より好ましくは、例えば、酢酸パラジウム (Π)、ジクロ口ビス（トリフエ-ル ホスフィン)パラジウム（Π)、テトラキス（トリフエ-ルホスフィン)パラジウム（0)、トリス（ ジベンジリデンアセトン)ジパラジウム（0)等の公知のパラジウム錯体が挙げられる。ま た、効率よく反応を進行させるために、燐配位子 (好ましくは例えばトリフエ-ルホスフ イン、トリー o—トリノレホスフィン、トリシクロへキシルホスフィン、トリーターシャリーブチ ルホスフィン等)等を適宜添加してもよい。また、本反応は必要に応じて、ハロゲンィ匕 金属または四級アンモ-ゥム塩等、好ましくは、例えば、ヨウ化銅 (1)、塩化リチウム、 フッ化テトラプチルアンモ -ゥムまたは酸ィ匕銀 (I)等を添加することもできる。また、塩 基の存在下で好ましい結果を与えることがあり、この際使用する塩基は、本反応様の カップリング反応で使用されるものであれば特に限定されないが、好ましくは、例えば
、ジェチルァミン、トリエチルァミン、 N, N—ジイソプロピルェチルァミン、ピぺリジン、 ピリジン等が挙げられる。反応温度はカップリング反応を完結させるのに足りる温度と すべきであり、好ましくは室温〜溶媒の還流である。本反応は、好ましくは、例えば、 不活性ガス雰囲気下で行い、より好ましくは、例えば、窒素またはアルゴン雰囲気下 で行う。好ましい反応条件では、この反応は 1〜24時間で完了し、反応の進行は公 知のクロマトグラフィー技術で監視できる。好ましい反応条件では、この反応は 1〜24 時間で完了し、反応の進行は公知のクロマトグラフィー技術で監視できる。望ましくな い副生成物は慣用のクロマトグラフィー技術または Zおよび結晶化等当業者に公知 の技術で除くことができる。
vi)は Stille反応を用いた縮合反応である。 Stille反応の場合、好ましくは、例えば 、化合物 (4) (ここにおいて、 Yは塩素原子、臭素原子、よう素原子等のハロゲン原 子、またはトリフレート基等のスルホン酸エステル基を示す。）を、化合物（4)に対して 0. 01〜0. 5当量の遷移金属触媒存在下、化合物 (4)に対して 1当量以上の化合物 (5) (ここにおいて、 Yはトリアルキルすず基を示す。）とを溶媒中攪拌する手法が挙
2
げられる。また、効率よく反応を進行させるために、化合物 (4)に対して 0. 1〜5. 0当 量のハロゲン化銅 (I)または Zおよび塩化リチウムを適宜用いることも好まし 、。使用 する溶媒としては、出発原料により異なり、また反応を阻害せず出発物質をある程度 溶解させるものであればとくに限定されないが、好ましくは、例えば、トルエン、キシレ ン、 N, N—ジメチルホルムアミド、 N, N—ジメチルァセトアミド、 1ーメチルー 2—ピロ リドン、ジメチルスルホキシド等が挙げられる。使用する遷移金属触媒は、例えば、パ ラジウム錯体であり、好ましくは、例えば、酢酸パラジウム (Π)、ジクロ口ビス（トリフエ- ルホスフィン)パラジウム（Π)、テトラキス（トリフエ-ルホスフィン)パラジウム（0)、トリス (ジベンジリデンアセトン)ジパラジウム (0)等の公知のパラジウム錯体が挙げられ、よ り好ましくは、例えば、テトラキス（トリフエ-ルホスフィン)パラジウム (0)、トリス (ジベン ジリデンアセトン)ジパラジウム (0)等が挙げられる。本反応は、好ましくは、例えば、 不活性ガス雰囲気下で行い、より好ましくは、例えば、窒素またはアルゴン雰囲気下 で行う。反応温度はカップリング反応を完結させるのに足りる温度とすべきであり、好 ましくは室温〜溶媒の還流温度である。好ましい反応条件では、この反応は 1〜24 時間で完了し、反応の進行は公知のクロマトグラフィー技術で監視できる。望ましくな い副生成物は慣用のクロマトグラフィー技術または Zおよび結晶化等当業者に公知 の技術で除くことができる。
また、本反応は、例えば、化合物 (4)の Yがトリアルキルすず基、化合物（5)の Y
1 2 が塩素原子、臭素原子、よう素原子等のハロゲン原子、またはトリフレート基等のスル ホン酸エステル基の組み合わせでも、効率よく所望の一般式 (I)の化合物を得ること ができる。
vii)は、 1)遷移金属触媒を用いたアミノ化反応、あるいは、 2)求核置換反応による アミノ化反応が挙げられる。
1)の場合、好ましくは、例えば、化合物 (4) (ここにおいて、 Yは塩素原子、臭素原 子、よう素原子等のハロゲン原子、またはトリフレート基等のスルホン酸エステル基を 示す。）を、化合物 (4)に対して 0. 01〜0. 2当量の遷移金属触媒存在下、化合物（ 4)に対し 1当量以上の化合物（5) (ここにおいて、 Yはアミノ基を示す。）とを溶媒中
2
攪拌する手法が挙げられる。使用する溶媒としては、出発原料により異なり、また反 応を阻害せず出発物質をある程度溶解させるものであればとくに限定されないが、好 ましくは、例えば、ァセトニトリル、テトラヒドロフラン、 1, 4 ジォキサン、 1, 2 ジメト キシェタン、ベンゼン、トルエン、キシレン、 1—メチル 2—ピロリドン、 N, N ジメチ ルホルムアミド等が挙げられる。使用する遷移金属触媒としては、例えば、パラジウム 錯体であり、好ましくは、例えば、酢酸パラジウム (Π)、ジクロ口ビス（トリフエ-ルホスフ イン)パラジウム（Π)、テトラキス（トリフエ-ルホスフィン）パラジウム（0)、トリス（ジベン ジリデンアセトン)ジパラジウム (0)等の公知のパラジウム錯体が挙げられ、より好まし くは、例えば、テトラキス（トリフエ-ルホスフィン)パラジウム（0)、トリス（ジベンジリデン アセトン)ジパラジウム（0)等が挙げられる。また、効率よく反応を進行させるために、 好ましくは、例えば、燐配位子 (好ましくは、例えば、トリフエニルホスフィン、トリ o— トリールホスフィン、トリーターシャリーブチルホスフィン、 2—(ジ ターシャリーブチル ホスフイノ）ビフエ-ル、 2, 2，一ビス（ジフエ-ルホスフイノ）一 1, 1，一ビナフチル、 1, 2—ビス（ジフエ-ルホスフイノ）ェタンまたは 1, 1，一ビス（ジフエ-ルホスフイノ）フエ口 セン等)等を適宜添加することもある。また、塩基の存在下で好ましい結果を与えるこ ともあり、使用する塩基としては、本反応様のカップリング反応で使用されるものであ れば特に限定されないが、好ましくは、例えば、水酸化ナトリウム、水酸化バリウム、フ ッ化カリウム、フッ化セシウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸セシウム、リン酸カリ ゥム、ナトリウムターシャリーブトキシド等が挙げられる。本反応は、好ましくは、例えば 、不活性ガス雰囲気下で行い、より好ましくは、例えば、窒素またはアルゴン雰囲気 下で行う。反応温度はカップリング反応を完結させるのに足りる温度とすべきであり、 好ましくは室温〜溶媒の還流温度である。好ましい反応条件では、この反応は 1〜2 4時間で完了し、反応の進行は公知のクロマトグラフィー技術で監視できる。望ましく ない副生成物は慣用のクロマトグラフィー技術または Zおよび結晶化等当業者に公 知の技術で除くことができる。また、本反応は、例えば、化合物 (4)の Yがァミノ基、 化合物（5)の Yが塩素原子、臭素原子、よう素原子等のハロゲン原子、またはトリフ
2
レート基等のスルホン酸エステル基の組み合わせでも、効率よく所望の一般式 (I)の 化合物を得ることができる。
2)の場合、好ましくは、例えば、化合物 (4) (ここにおいて、 Yは塩素原子、臭素原 子、よう素原子等のハロゲン原子、またはトリフレート基等のスルホン酸エステル基を 示す。）を、化合物 (4)に対して 1. 0- 5. 0等量の化合物（5) (ここにおいて、 Yはァ
2 ミノ基を示す。）を溶媒中攪拌する手法が挙げられる。使用する溶媒としては、出発原 料により異なり、また反応を阻害せず出発物質をある程度溶解させるものであればと くに限定されないが、好ましくは、例えば、ァセトニトリル、テトラヒドロフラン、 1, 4—ジ ォキサン、 1, 2—ジメトキシェタン、ベンゼン、トルエン、キシレン、 1ーメチルー 2—ピ 口リドン、 N, N—ジメチルホルムアミド等が挙げられる。また、塩基の存在下で好まし い結果を与えることもあり、使用する塩基としては、本反応様のカップリング反応で使 用されるものであれば特に限定されないが、好ましくは、例えば、水酸ィ匕ナトリウム、 水酸化バリウム、フッ化カリウム、フッ化セシウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸 セシウム、リン酸カリウム、ナトリウムターシャリーブトキシド等が挙げられる。反応温度 はカップリング反応を完結させるのに足りる温度とすべきであり、好ましくは室温〜溶 媒の還流温度である。好ましい反応条件では、この反応は 1〜24時間で完了し、反 応の進行は公知のクロマトグラフィー技術で監視できる。望ましくな 、副生成物は慣 用のクロマトグラフィー技術または Zおよび結晶化等当業者に公知の技術で除くこと ができる。また、本反応は、例えば、化合物 (4)の Yがァミノ基、化合物（5)の Yが塩
1 2 素原子、臭素原子、よう素原子等のハロゲン原子、またはトリフレート基等のスルホン 酸エステル基の組み合わせでも、効率よく所望の一般式 (I)の化合物を得ることがで きる。
viii)は、 1)遷移金属触媒を用いたァリールエーテル化反応、あるいは、 2)求核置 換反応によるァリールエーテルィ匕反応が挙げられる。
1)の場合、好ましくは、例えば、化合物 (4) (ここにおいて、 は塩素原子、臭素原 子、よう素原子等のハロゲン原子、またはトリフレート基等のスルホン酸エステル基を 示す。）を、化合物 (4)に対して 0. 01〜0. 2当量の遷移金属触媒存在下、化合物（ 4)に対して 2当量以上の化合物（5) (ここにおいて、 Yは水酸基を示す。）を溶媒中
2
攪拌する手法が挙げられる、使用する溶媒としては、出発原料により異なり、また反 応を阻害せず出発物質をある程度溶解させるものであればとくに限定されないが、好 ましくは、例えば、ァセトニトリル、テトラヒドロフラン、 1, 4 ジォキサン、 1, 2 ジメト キシェタン、ベンゼン、トルエン、キシレン、 1—メチル 2—ピロリドン、 N, N ジメチ ルホルムアミド等が挙げられる。使用する遷移金属触媒は、例えば、パラジウム錯体 であり、好ましくは、例えば、酢酸パラジウム（Π)、ジクロ口ビス（トリフエ-ルホスフィン） パラジウム（Π)、テトラキス（トリフエ-ルホスフィン)パラジウム（0)、トリス（ジベンジリデ ンアセトン)ジパラジウム (0)等の公知のパラジウム錯体が挙げられ、より好ましくは、 例えば、テトラキス（トリフエ-ルホスフィン)パラジウム（0)、トリス（ジベンジリデンァセ トン)ジパラジウム (0)等が挙げられる。また、効率よく反応を進行させるために、例え ば、燐配位子 (好ましくは、例えば、トリフエ-ルホスフィン、トリ—。—トリールホスフィ ン、トリーターシャリーブチルホスフィン、 2—（ジ一ターシャリーブチルホスフイノ）ビフ ェニノレ、 2, 2，一ビス（ジフエ-ルホスフイノ）一 1, 1，一ビナフチル、 1, 2—ビス（ジフ ェ-ルホスフイノ）ェタン、 [2， - (ジ一ターシヤリブチルホスフイノ）]— 2—ジメチルアミ ノー 1, 1 'ービナフチルまたは 1, 1，一ビス（ジフエ-ルホスフイノ）フエ口セン等）等を 適宜添加することもある。また、塩基の存在下で好ましい結果を与えることもあり、使 用する塩基としては、本反応様のカップリング反応で使用されるものであれば特に限 定されないが、好ましくは、例えば、水酸化ナトリウム、水酸化バリウム、フッ化カリウム 、フッ化セシウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸セシウム、リン酸カリウム、ナトリ ゥムターシャリーブトキシド等が挙げられる。本反応は、好ましくは、例えば、不活性ガ ス雰囲気下で行い、より好ましくは、例えば、窒素またはアルゴン雰囲気下で行う。反 応温度はカップリング反応を完結させるのに足りる温度とすべきであり、好ましくは室 温〜溶媒の還流温度である。好ましい反応条件では、この反応は 1〜24時間で完了 し、反応の進行は公知のクロマトグラフィー技術で監視できる。望ましくない副生成物 は慣用のクロマトグラフィー技術または Zおよび結晶化等当業者に公知の技術で除 くことができる。また、本反応は、例えば、化合物 (4)の Yが水酸基、化合物（5)の Y
1 2 が塩素原子、臭素原子、よう素原子等のハロゲン原子、またはトリフレート基等のスル ホン酸エステル基の組み合わせでも、効率よく所望の一般式 (I)の化合物を得ること ができる。
2)の場合、好ましくは、例えば、化合物 (4) (ここにおいて、 Yは塩素原子、臭素原 子、よう素原子等のハロゲン原子、またはトリフレート基等のスルホン酸エステル基を 示す。）を、化合物 (4)に対して 1. 0- 5. 0等量の化合物（5) (ここにおいて、 Yは水
2 酸基を示す。）とを溶媒中攪拌する手法が挙げられる。使用される溶媒としては、出 発原料により異なり、また反応を阻害せず出発物質をある程度溶解させるものであれ ばとくに限定されないが、好ましくは、例えば、ァセトニトリル、テトラヒドロフラン、 1, 4 ジォキサン、 1, 2—ジメトキシェタン、ベンゼン、トルエン、キシレン、 1ーメチルー 2 —ピロリドン、 N, N ジメチルホルムアミド等が挙げられる。また、塩基の存在下で好 ましい結果を与えることもあり、使用する塩基としては、本反応様のカップリング反応 で使用されるものであれば特に限定されないが、好ましくは、例えば、水酸化ナトリウ ム、水酸化バリウム、フッ化カリウム、フッ化セシウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭 酸セシウム、リン酸カリウム、ナトリウムターシャリーブトキシド等があげられる。場合に よっては、金属銅あるいはハロゲン化銅 (好ましくは、例えば、塩化銅、ヨウ化銅等）を 化合物 (4)に対して 0. 1〜10. 0当量添加することで、良い結果を与える。反応温度 はカップリング反応を完結させるのに足りる温度とすべきであり、好ましくは室温〜溶 媒の還流温度である。好ましい反応条件では、この反応は 1〜24時間で完了し、反 応の進行は公知のクロマトグラフィー技術で監視できる。望ましくな 、副生成物は慣 用のクロマトグラフィー技術または Zおよび結晶化等当業者に公知の技術で除くこと ができる。また、本反応は、例えば、化合物 (4)の Yが水酸基、化合物（5)の Yが塩
1 2 素原子、臭素原子、よう素原子等のハロゲン原子、またはトリフレート基等のスルホン 酸エステル基の組み合わせでも、効率よく所望の一般式 (I)の化合物を得ることがで きる。 [化合物 (4)の調製]
化合物（4)は、国際公開第 WO2005Z115990号パンフレットに記載の公知の方 法によって製造することができる。例えば、下記スキームの方法で製造することができ る。
[化 18] ― ATj
Figure imgf000054_0001
[式中、 Ar、 Ar、 Ar、 X、 X、 X、 Yおよび R1は、前記の意味を有し、 Vはメチル
1 2 3 1 2 3 1
基、ェチル基、ベンジル基、ァリル基、トリフエ-ルメチル基、ターシャリーブチル基、 メトキシメチル基またはターシャリーブチルジメチルシリル基等のカルボキシル基等の 保護基を示す]
上記の反応スキームにおいて、脱保護およびアミド化反応は、それ自体公知の方 法であり、国際公開第 WO2005Z115990号パンフレットに記載の通常の方法によ り実施できる。
[0081] [化合物（5)の調整]
化合物（5)は市販されているカゝ、または、市販されていない場合は、例えば、下記 スキームの方法により合成することができる。
[0082] [化 19]
Figure imgf000054_0002
[式中、 A、 A、 Aおよび Yは前記と同じ意味を有し、 Yないし Yは水素原子、力
2 3 4 2 3 8 ルポキシル基、アミノ基、水酸基、チオール等のスルフイド基、アジド、アセチレン基 等のアルキン基、ビニル基等のアルケン基、フッ素原子や塩素原子、臭素原子、ヨウ 素原子等のハロゲン原子、トリフレート基等のスルホネート基等を示す。あるいは、こ れらの官能基は適宜保護基有してもよい。 ]
化合物（5)は、化合物 (d)と化合物 (e)を [工程 5— 1]に従いカップリングし、化合 物 (a)とした後、化合物 (a)と化合物 (c)を [工程 5— 2]に従いカップリングするにより 調製することができる。あるいは、化合物 (f)と化合物 (c)を [工程 5— 2]に従いカップ リングし、化合物 (b)に導いた後、化合物 (b)と化合物 (d)を [工程 5— 1]に従いカツ プリングすることにより同様に調製することができる。
[0083] すなわち、 [工程 5— 1]および [工程 5— 2]のカップリング反応は、出発原料によつ て異なるが、本反応様の条件であれば特に限定はされず、多くの文献に記載されて いる公知の手法を用いることができる。例えば、 i)カルボン酸ィ匕合物を酸ノ、ロゲンィ匕 物に変換後、該酸ハロゲン化合物と塩基性条件でァミン化合物とを反応させる手法（ 例えば「日本化学会編新実験化学講座 (第 14卷)有機化合物の合成と反応 [II]」、 丸善株式会社、 1978年、 pi 142— 1145に記載）、 ii)縮合剤を使用してカルボン酸 化合物とアミンィ匕合物とを反応させる手法 (例えば「有機化学実験の手引き [4]」、化 学同人、 1990年、 p27— 52に記載）、 iii)ジスルフイド結合生成反応を用いる手法（ 例えば M. Ohtani, 「J. Org. Chem.」、 1991年、 56卷、 p. 5475を参照）、 iv) Hu isgen 1 , 3— dipolar cycloadditionを用いる手法（例えば K. B. Sharplessゝ 「A ngew. Chem. Int. Ed.」、 2002年、 41卷、 p. 2596を参照）、 v)固相 Heck反応（ 例えば D. J. Macquarrie, 「J. Mater. Chem. 」、 1997年、 7卷、 p. 2201を参照） 等が挙げられる。
[0084] i)の反応は、酸ハロゲン化反応とそれに続く縮合反応からなる。
酸ハロゲン化反応の場合、好ましくは、例えば、化合物（d)、化合物（a)、または、 化合物（f) (ここにおいて、 Y、 Yおよび Yはカルボキシル基を示す。）をィ匕合物（d)
3 5 8
、化合物（a)あるいは化合物 (f)に対して 1. 0〜10等量のハロゲン化剤とを溶媒中 攪拌する方法が挙げられる。使用するハロゲン化剤は、出発原料により異なり、特に 限定されないが、好ましくは、例えば、塩ィ匕チォ -ル、塩ィ匕ォキサリル等である。使用 される溶媒は、出発原料により異なり、また反応を阻害せず出発物質をある程度溶解 させるものであればとくに限定されないが、好ましくは、例えば、塩化メチレン、トルェ ン、テトラヒドロフラン等の不活性溶媒である。効率よく反応を進行させるために、適宜 触媒量の N, N—ジメチルホルムアミド等を添加する場合もある。反応温度は好ましく ない副生成物の形成を促進することなく反応を完結させるのに足りる温度とすべきで あり、好ましくは、例えば、氷冷〜 100°Cである。好ましい反応条件では、この反応は 1〜24時間で完了し、反応の進行は公知のクロマトグラフィー技術で監視できる。望 ましくない副生成物は慣用のクロマトグラフィー技術または Zおよび結晶化等当業者 に公知の技術で除くことができる。
続く縮合反応は、得られた酸ハロゲン化物を、酸ハロゲンィ匕物に対して 1. 0〜： LO. 0等量の塩基存在下、酸ノ、ロゲンィ匕物に対して 0. 5- 2. 0等量の化合物（e)、化合 物（c)あるいは化合物（b) (ここにおいて、 Y、 Y、もしくは Yはァミノ基あるいは水酸
4 6 7
基を示す。）とを溶媒中攪拌する方法が挙げられる。使用される塩基は、出発原料に より異なり、特に限定されないが、好ましくは、例えば、ピリジン、ルチジン、キノリン、 イソキノリン、トリェチルァミン、 N, N—ジイソプロピルェチルァミン、水酸ィ匕ナトリウム 、水酸化カリウム等である。使用される溶媒は、反応を阻害せず出発原料をある程度 溶解するものであれば特に限定されないが、好ましくは、例えば、塩化メチレン、トル ェン、テトラヒドロフラン、 1、 4—ジォキサン、水等、または、その混合物である。また、 塩基を溶媒として使用する場合もある。反応温度は好ましくない副生成物の形成を 促進することなく反応を完結させるのに足りる温度とすべきであり、好ましくは、例えば 、氷冷〜 100°Cである。この反応は 1〜24時間で完了し、反応の進行は公知のクロ マトグラフィー技術で監視できる。望ましくない副生成物は慣用のクロマトグラフィー 技術または Zおよび結晶化等当業者に公知の技術で除くことができる。また、本反応 は、カルボキシル基と、アミノ基または水酸基の組み合わせが逆の場合でも、効率よ く所望のカップリング成績体を得ることができる。
ii)の場合、好ましくは、例えば、化合物（d)、化合物（a)、または、化合物 (f) (ここに おいて、 Y、 Yおよび Yはカルボキシル基を示す。）を、化合物（d)、化合物（a)ある いは化合物 (f)に対して 1. 0〜2. 0等量の縮合剤の存在下、化合物（d)、化合物（a )あるいは化合物 (f)に対して 0. 5- 2. 0等量の化合物（e)、化合物（c)あるいは化 合物 (b) (ここにおいて、 Y、 Y、もしくは Yはァミノ基あるいは水酸基を示す。）とを
4 6 7
溶媒中攪拌する方法が挙げられる。使用する縮合剤としては、出発原料により異なり 特に限定されるものではないが、好ましくは、例えば、 1, 3—ジシクロへキシルカルボ ジイミド、 1—ェチル— 3— (3，—ジメチルァミノプロピル）カルボジイミド、ベンゾトリア ゾール— 1—ィルォキシトリス（ジメチルァミノ）ホスホ-ゥムへキサフルォロりん酸塩等 である。効率よく反応を進行させるために、好ましくは、例えば、 N—ヒドロキシスクシ ンイミド、 N—ヒドロキシベンゾトリアゾール等を 1. 0当量から 2. 0当量添加する場合も ある。使用する溶媒としては、出発原料、使用する縮合剤により異なり、また反応を阻 害せず出発物質をある程度溶解するものであれば特に限定されないが、好ましくは、 例えば、塩化メチレン、 1, 2—ジクロロェタン等のハロゲン溶媒またはテトラヒドロフラ ン、 N、 N—ジメチルホルムアミド等の極性溶媒が挙げられる。反応温度は好ましくな い副生成物の形成を促進することなく反応を完結させるのに足りる温度とすべきであ り、好ましくは、例えば、氷冷〜 100°Cである。好ましい反応条件では、この反応は 1 〜24時間で完了し、反応の進行は公知のクロマトグラフィー技術で監視できる。望ま しくない副生成物は慣用のクロマトグラフィー技術または Zおよび結晶化等当業者に 公知の技術で除くことができる。
また、本反応は、カルボキシル基とアミノ基または水酸基の組み合わせが逆の場合 であっても、効率よく所望のカップリング成績体を得ることができる。
iii)の場合、好ましくは、例えば、化合物（d) (ここにお 、て、 Yはチオール基を示
3
す。）を、化合物（d)に対して 1. 0〜3. 0当量のビス（1ーメチルー 1H—テトラゾール —5—ィル)ジスルフイド等と処理し、活性ジスルフイド化合物にした後、得られた活性 ジスルフイド化合物を、これに対して 1. 0〜3. 0当量の化合物（e) (ここにおいて、 Y
4 はチオール基を示す。）と反応させる手法を挙げることができる。本反応は、操作性' 攪拌能率の観点力 溶媒の存在下に行うことが好ましぐ使用する溶媒としては、出 発原料により異なり、また反応を阻害せず出発物質をある程度溶解するものであれ ば特に限定されないが、好ましくは、例えば、ジェチルエーテル、テトラヒドロフラン等 である。反応温度は好ましくな!/ヽ副生成物の形成を促進することなく反応を完結させ るのに足りる温度とすべきであり、室温〜 100°Cである。好ましい反応条件では、この 反応は 30分〜 24時間で完了し、反応の進行は公知のクロマトグラフィー技術で監視 できる。望ましくない副生成物は慣用のクロマトグラフィー技術または Zおよび結晶化 等当業者に公知の技術で除くことができる。
iii)の反応は、化合物 (f) (ここにおいて、 Yはチオール基を示す。）と化合物（c) (
8
ここにおいて、 Yはチオール基を示す。）の組み合わせ、化合物（a) (ここにおいて、
6
Yはチオール基を示す。）と化合物（c) (ここにおいて、 Yはチオール基を示す。）の
5 6
組み合わせ、あるいは、化合物 (b) (ここにおいて、 Yはチオール基を示す。）と化合
4
物（d) (ここにおいて、 γはチオール基を示す。）の組み合わせにおいても、効率よく
3
所望のカップリング化合物を得ることができる。
iv)の場合、好ましくは、例えば、化合物（d) (ここにおいて、 Yはアジド基を示す。 )
3
を、化合物 ）に対して 0. 01〜1当量の金属触媒存在下、化合物（d)に対して 1. 0 〜5. 0等量の化合物 (e) (ここにおいて、 Yはアルキン基を示す。）とを溶媒中攪拌
4
する手法が挙げられる。使用する金属触媒としては、好ましくは、例えば、硫酸銅 (II) 、ヨウ化銅 (1)、臭化銅 (I)および塩化銅 (I)などが挙げられる。また、効率よく反応を 進行させるために、ァスコルビン酸ゃァスコルビン酸ナトリウムを適宜添加することも ある。使用する溶媒としては、出発原料、使用する金属触媒により異なり、また反応を 阻害せず出発物質をある程度溶解するものであれば特に限定されないが、好ましく は、例えば、水、ァセトニトリル、テトラヒドロフラン、 1, 4—ジォキサン、 1, 2—ジメトキ シェタン、メタノール、ターシヤリブチルアルコール、ジクロロメタン、 1ーメチルー 2— ピロリドン、 N, N—ジメチルホルムアミド等が挙げられる。反応温度はカップリング反 応を完結させるのに足りる温度とすべきであり、好ましくは室温〜 150°Cである。また 、塩基の存在下で好ましい結果を与えることもあり、使用する塩基としては、本反応様 のカップリング反応で使用されるものであれば特に限定されないが、好ましくは、例え ば、トリエチルァミン、 N, N—ジイソプロピルェチルァミン、 N, N—ジシクロへキシル メチルァミン、 2, 6—ルチジン等が挙げられる。好ましい反応条件では、この反応は 1 〜36時間で完了し、反応の進行は公知のクロマトグラフィー技術で監視できる。望ま しくない副生成物は慣用のクロマトグラフィー技術または zおよび結晶化等当業者に 公知の技術で除くことができる。
また、本反応は、化合物 (f) (ここにおいて、 Yはアジド基を示す。）と化合物 (c) (こ
8
こにおいて、 Yはアルキン基を示す。）の組み合わせ、化合物（a) (ここにおいて、 Y
6 5 はアジド基を示す。）と化合物（c) (ここにおいて、 Yはアルキン基を示す。）の組み合
6
わせ、あるいは、化合物 (b) (ここにおいて、 γはアルキン基を示す。）と化合物（d) (
4
ここにおいて、 γはアジド基を示す。）の組み合わせにおいても、効率よく所望のカツ
3
プリング成績体を得ることができる。
また、本反応は、アジド基とアルキン基の組み合わせが逆の場合においても、効率よ く所望のカップリング成績体を得ることもできる。
V)の場合、好ましくは、例えば、化合物（d) (ここにおいて、 Yは塩素原子、臭素原
3
子、よう素原子等のハロゲン原子、またはトリフレート基等のスルホン酸エステル基を 示す。）を、化合物 ）に対して 0. 1〜1. 0当量の遷移金属触媒存在下、化合物 (d) に対して 1. 0〜5. 0等量の化合物（e) (ここにおいて、 Yはアルケン基を示す。）とを
4
溶媒中攪拌する手法が挙げられる。使用する溶媒としては、出発原料により異なり、 また反応を阻害せず出発物質をある程度溶解させるものであればとくに限定されな いが、好ましくは、例えば、ァセトニトリル、テトラヒドロフラン、 1, 4 ジォキサン、 1, 2 —ジメトキシェタン、ベンゼン、トルエン、キシレン、 1—メチル 2—ピロリドン、 N, N ージメチルホルムアミド等が挙げられる。使用する遷移金属触媒としては、出発原料 により異なり、特に限定されないが、好ましくは、例えば、パラジウム錯体であり、より 好ましくは、例えば、酢酸パラジウム (Π)、ジクロ口ビス（トリフエ-ルホスフィン)パラジ ゥム（Π)、テトラキス（トリフエ-ルホスフィン)パラジウム（0)、トリス（ジベンジリデンァセ トン)ジパラジウム (0)等の公知のノラジウム錯体が挙げられる。また、効率よく反応を 進行させるために、好ましくは、例えば、燐配位子 (好ましくは、例えば、トリフエニル ホスフィン、トリー o トリールホスフィン、トリーターシャリーブチルホスフィン、 2—(ジ —ターシャリーブチルホスフイノ）ビフエ-ル、 2, 2， 一ビス（ジフエ-ルホスフイノ）一 1 , 1 '—ビナフチル、 1, 2—ビス（ジフエ-ルホスフイノ）ェタンまたは 1 , 1 '—ビス（ジフ ヱニルホスフイノ)フ 口セン等)等を適宜添加することもある。また、塩基の存在下で 好ましい結果を与えることもあり、使用する塩基としては、本反応様のカップリング反 応で使用されるものであれば特に限定されないが、好ましくは、例えば、水酸化ナトリ ゥム、水酸化バリウム、フッ化カリウム、フッ化セシウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、 炭酸セシウム、リン酸カリウム、ナトリウムターシャリーブトキシド等が挙げられる。本反 応は、好ましくは、例えば、不活性ガス雰囲気下で行い、より好ましくは、例えば、窒 素またはアルゴン雰囲気下で行う。反応温度はカップリング反応を完結させるのに足 りる温度とすべきであり、好ましくは室温〜溶媒の還流温度である。好ましい反応条 件では、この反応は 1〜24時間で完了し、反応の進行は公知のクロマトグラフィー技 術で監視できる。望ましくない副生成物は慣用のクロマトグラフィー技術または Zおよ び結晶化等当業者に公知の技術で除くことができる。
本反応は、化合物 (f) (ここにおいて、 Yは塩素原子、臭素原子、よう素原子等のハ
8
ロゲン原子、またはトリフレート基等のスルホン酸エステル基を示す。）と化合物（C) ( ここにおいて、 Yはアルケン基を示す。）との組み合わせ、化合物（a) (ここにおいて
6
、 Yは塩素原子、臭素原子、よう素原子等のハロゲン原子、またはトリフレート基等の
5
スルホン酸エステル基を示す。）と化合物（c) (ここにおいて、 Yはアルケン基を示す
6
。）の組み合わせ、あるいは、化合物 (b) (ここにおいて、 γは塩素原子、臭素原子、 よう素原子等のハロゲン原子、またはトリフレート基等のスルホン酸エステル基を示す
。；)と化合物（d) (ここにおいて、 Yはアルケン基を示す。）の組み合わせにおいても、
3
効率よく所望のカップリング成績体を得ることができる。
また、塩素原子、臭素原子、よう素原子等のハロゲン原子、またはトリフレート基等の スルホン酸エステル基等の脱離基とアルケン基の逆の組み合わせにお 、ても、効率 よく所望のカップリング成績体を得ることができる。
さらに、 A4が固相担体の場合は、反応が完結した後、固相担体を溶媒と混合し、 均一化させた後、濾過する操作を繰り返すことにより、簡便に精製操作を行うことがで きる。
本工程で使用される化合物 (d)、化合物 (c)、化合物 (f)および化合物 (e)は市販 されているか、市販されている原料を、当業者公知の保護'脱保護反応 (例えば、 T. Greeneら、 [Protective Groups in Organic SvnthesisJ (John Wiley & Sons. Inc. 、ニューヨーク、 1981年を参照）に付すことにより調製することができる。
[0089] [一般的製造法 2]
本発明に係る一般式 (I)の化合物の代表的な [一般的製造法 2]につ 、て以下に説 明する。
[0090] [化 20]
0 カップリング o
Q_^XI人 ^ + Υ9-Α2-Υ10 は程1'— 3 ] 人 Ν Χ^-Α^—ΑΖ-Υ Υ"-Α3-Υ12
(g) ( （り
(4) W
I カップリング
工程 5 - 1 ]
Figure imgf000061_0001
[式中、 Ar、 Ar、 Ar、 X、 X、 X、 R、 A、 A、 Aおよび Aは前記と同じ意味を
1 2 3 1 2 3 1 1 2 3 4
有し、 Υ , Υ , Υ , Υ および Υ は水素原子、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、
9 10 11 12 13
ヨウ素原子等のハロゲン原子、トリフルォロメタンスルホン酸エステル基、トリメチルす ず基等のアルキルすず基、ボロン酸基、ボロン酸エステル基、アセチレン基等のアル キン基、ビニル基等のアルケン基、アジド基、カルボキシル基、アミノ基、水酸基，チ オール等のスルフイド基を示す。 ]
[0091] [一般式 (I)の化合物の調製]
上記 [一般的製造法 2]は別法として一般式 (I)の調製法の一例を示すものである。 すなわち、前記 [工程 1— 3]の方法に従い、化合物 (4)と化合物 (g)を縮合し、化合 物 (h)に導き、前記 [工程 5— 1]に従い、化合物 (h)と化合物 (i)を縮合し、化合物 (j )とし、前記 [工程 5— 2]に従い、化合物 (j)と化合物 (k)を縮合することにより一般式 (I)の化合物を製造する方法を示すものである。本工程様の条件であれば特に限定 はされず、多くの文献に記載されている公知の手法を用いることができる（例えば、 Y . Feng,「Bioorg. Med. Chem. Lett. 」、 1998年、 8卷、 p881— 884)。
本工程で使用される化合物 (g)、化合物 (i)、化合物 (k)は市販されているか、市販 されている原料を、当業者公知の保護 ·脱保護反応 (例えば、 T. Greeneら、 fprote ctive Groups in Organic SynthesisJ (John Wiley & Sons. Inc.、ニュ 一ヨーク、 1981年を参照）に付すことにより調製することができる。
[0092] [一般的製造法 3]
本発明に係る一般式 (I)の化合物の代表的な [一般的製造法 3]につ 、て以下に説 明する。
[0093] [化 21]
Figure imgf000062_0001
(I) (m)
I カップリング
[工程 5— 2 ]
Figure imgf000062_0002
( ) カツプリング
[工程 5— 1]
Figure imgf000062_0003
CD
[式中、 Ar、Ar、Ar、X、X、X、R、A、A、A、A、Y は前記と同じ意味を
1 2 3 1 2 3 1 1 2 3 4 10 有し、 Y Y
14、 15 ,および Y
16は、水素原子、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素 原子等のハロゲン原子、トリフルォロメタンスルホン酸エステル基、トリメチルすず基等 のアルキルすず基、ボロン酸基、ボロン酸エステル基、アセチレン基等のアルキン基 、ビュル基等のアルケン基、アジド基、カルボキシル基、アミノ基、水酸基，チオール 等のスルフイド基を示す。 ]
[0094] [一般式 (I)の化合物の調製]
上記 [一般的製造法 3]は別法として一般式 (I)の調製法の一例を示すものである。 すなわち、前記 [工程 5 - 2]に従 、、化合物 (1)と化合物 (m)を縮合し、化合物 (n)に 変換後、化合物 (n)を、前記 [工程 5— 1]に従い、前記化合物 (h)と縮合することによ り、一般式 (I)の化合物を製造する方法を示すものである。本工程様の条件であれば 特に限定はされず、多くの文献に記載されている公知の手法を用いることができる（ 例えば、 P. J. DeLaLuz、「： Bioconjugate Chem. 」、 1995年、 6卷、 p558~ 566
) o
本工程で使用される化合物 (1)、および、化合物 )は市販されているか、市販さ れている原料を、当業者公知の保護 ·脱保護反応 (例えば、 T. Greeneら、 rprotec tive uroups m Organic synthesisj (John Wiley & Sons. Inc. 、 -ュ ~~ ヨーク、 1981年を参照）に付すことにより調製することができる。
[0095] 本発明では、式 (I)の生物学的試薬用化合物またはその塩を利用して、 A |8タンパ クの産生機構を解析することができる。すなわち、本発明により、 A |8タンパクの産生 機構を解析する方法であって、
a) A |8タンパクの生成機構に関与するタンパクを含むと考えられる細胞もしくは細胞 成分と、本発明の式 (I)の生物学的試薬用化合物またはその塩とを接触させて、 b)式 (I)の生物学的試薬用化合物と、 A βタンパクの生成機構に関与する標的タン パクとの複合体を形成させ、次いで
c)形成された生物学的試薬用化合物と標的タンパクとの複合体を解析し、標的タン パク質を同定する
ことを含む、 A βタンパクの産成機構を解析する方法が提供される。
この方法により、式（ΠΙ)で表される、 Ar により構
Figure imgf000063_0001
成される、 A |8タンパク生成を抑制する生物学的活性を発揮する化合物、すなわち、 シンナミドィ匕合物の標的タンパクを検索して、 A |8タンパク産生の抑制機構を解析す ることがでさる。
[0096] ここで用いる、 A βタンパクの産生機構に関与するタンパクを含むと考えられる細胞 あるいは細胞成分としては、 Α |8タンパクを産生することが知られている細胞あるいは 細胞成分が挙げられる。具体的には、そのような細胞自体あるいは細胞を破壊して 得られる細胞膜の懸濁液を用いるのが好まし 、。その細胞あるいは懸濁液と式 (I)の 生物学的試薬用化合物またはその塩とを混合して、インキュベートすることにより、式 (I)の生物学的試薬用化合物またはその塩が、 A βタンパクの生成機構に関与する 標的タンパクと可逆的に結合する。そして、式 (I)の生物学的試薬用化合物またはそ の塩におけるタンパク質標識基と、可逆結合した標的タンパクとが、更に非可逆な共 有結合する。タンパク質標識基として、光親和性標識基を用いた場合には、インキュ ペートした後に、光照射することにより、可逆的結合した標的タンパク質と光親和性標 識基とが光反応によりクロスリンクする。次いで、標的タンパク質が結合した式 (I)の生 物学的試薬用化合物またはその塩を、例えば、式 (I)の生物学的試薬用化合物また はその塩における Aとしてピオチンを用いた場合には、アビジン、ストレプトアビジン
4
などを結合したァガロースゲルと混合して、標的タンパクが結合した式 (I)の生物学 的試薬用化合物またはその塩を捕捉、採取し、次いで、適当な緩衝液で処理して、 ァガロースゲル力 遊離させ、標的タンパクが結合した式 (I)の生物学的試薬用化合 物またはその塩をウェスタンブロッテイングに付して、標的タンパクの同定を行うことが できる。これらの方法の際に、式 (I)の生物学的試薬用化合物またはその塩における Aとして開裂可能なリンカ一を使用した場合には、ァフィユティーカラムなどに捕捉、
3
採取された標的タンパクが結合した式 (I)の生物学的試薬用化合物またはその塩を 、開裂可能なリンカ一を開裂させることにより、標的タンパクが結合した部分を遊離さ せることちでさる。
式 (I)の生物学的試薬用化合物またはその塩における Aとして、ピオチン以外の
4
他のフィッシングタグ基ある 、は固相担体と結合させる基を用いた場合も、上記したと ほぼ同様にして、式 (I)の生物学的試薬用化合物またはその塩に結合した標的タン ノ クの同定や解析などの検索を行うことができる。
[0097] 式 (I)の生物学的試薬用化合物またはその塩における Aとして、検出可能なマー
4
カーを用いた場合には、 A βタンパクの生成機構に関与するタンパクを含むと考えら れる細胞あるいは細胞成分と、式 (I)の生物学的試薬用化合物またはその塩とを接 触させた後に、標的タンパクが結合した式 (I)の生物学的試薬用化合物またはその 塩を、例えば、二次元電気泳動に付し、その後に、 Αの標識基に基いて、標的タン
4
パクの単離 Z分離'同定を行うことができる。
[0098] 式 (I)の生物学的試薬用化合物またはその塩における Aとして、固相担体を用い
4
た場合には、固相担体を含む式 (I)の生物学的試薬用化合物またはその塩をァフィ ユティーカラムとして利用した、ァフィユティーカラムクロマトグラフィーにより、標的タ ンパクが結合した式 (I)の生物学的試薬用化合物またはその塩を捕捉、採取して、標 的タンパクの同定を行うことができる。この方法は、式 (I)において、 Aが単結合で、 Ar、 Ar、 X、 R1 X、 Xおよび Arのいずれもが、置換基として、タンパク質標識基
1 2 1 2 3 3
またはタンパク質標識基を含む基を有しな!/ヽ、式 (I)の生物学的試薬用化合物また はその塩を用いた場合にも、同様に採用できる。あるいは、アビジン、ストレプトァビジ ンなどを担体に結合したアビジンカラムを用いたァフィユティーカラムクロマトグラフィ 一に、標的タンパクが結合した式 (I)の生物学的試薬用化合物またはその塩を付し て、標的タンパクが結合した式 (I)の生物学的試薬用化合物またはその塩を捕捉、 採取することちできる。
[0099] 式 (I)の生物学的試薬用化合物またはその塩における Aとして、固相担体と結合さ
4
せる基を用いた場合には、例えば、固相担体と結合させる基としてアジド基を用い、 固相担体として、アセチレン基を有する固相担体を用いて、それらを反応させて、標 的タンパク質と式 (I)の生物学的試薬用化合物またはその塩との複合体を固相担体 に結合させ、次いで固相担体力 単離する方法が挙げられる。アジド基以外の他の 固相担体と結合させる基を用いた場合にも、その基と結合する基を有する固相担体 とを用いて、同様に、行うことができる。
式 (I)の生物学的試薬用化合物またはその塩における A力 水素原子である場合
4
には、式 (I)の生物学的試薬用化合物またはその塩分子中に存在し得る、例えば、 分子末端部分のアセチレン基やビニル基などの固相担体と結合する基を利用し、そ の基と結合する基を有する固相担体とを反応させて、標的タンパク質と式 (I)の生物 学的試薬用化合物またはその塩との複合体を固相担体に結合させ、次 、で固相担 体から単離する方法が挙げられる。あるいは、式 (I)の生物学的試薬用化合物または その塩における、 Arの置換基群 A1が固相担体と結合する基である場合には、その 基と、それに結合する基を有する固相担体とを反応させることによって、同様に、標 的タンパク質と式 (I)の生物学的試薬用化合物またはその塩との複合体を固相担体 に結合させ、次 、で固相担体力 単離することができる。
[0100] 上記した本発明の A |8タンパクの産生機構を解析する方法においては、式（1)で 表される生物学的試薬用化合物あって A タンパク産生を抑制する作用を有する生 物学的試薬用化合物またはその塩とともに、式（1)で表される生物学的試薬用化合 物あって A βタンパク産生を抑制する作用を有しない生物学的試薬用化合物または その塩とを一緒に用いて、両者の生物学的試薬用化合物またはその塩について同 様の方法を行って、両者を比較して、標的タンパク質を同定することにより、標的タン ノ ク質をより効率良ぐ正確に同定できる。
式（I)において、 X力 CR2— CR3 を示すか、あるいは R1および一 X—X— A
1 2 3 r力 -X—CO— Nと一緒になつて、式 (II)で表される基を形成する（但し、式 (Π)
3 1
において、
は単結合を示す)化合物が、生物学的試薬用化合物であって A βタンパク産生を抑 制する作用を有しない生物学的試薬用化合物またはその塩である。
Α タンパク産生を抑制する作用を有しない生物学的試薬用化合物またはその塩 としては、式 (III)
[化 22]
Figure imgf000066_0001
[式中、 R1"は、水素原子、水酸基で置換されていてもよい C1— C6アルキル基を示 し、 A、 A、 Aおよび Aは、前記の意味を有する。 ]で表される生物学的試薬用化
1 2 3 4
合物またはその塩が好ま U、。
このような化合物の好ましい具体例としては、例えば、以下の化合物が挙げられる。 5- ( (3aR, 6S, 6aS)— 2 ォキソへキサヒドロチェノ [3, 4 d]イミダゾールー 6 ィル）吉草酸 [2—（3— {4 [4一（1 {3— [3—メトキシー 4一（4ーメチルー 1H —イミダゾールー 1—ィル）ベンジル]— 2—ォキソピペリジン— 1—ィル }ェチル）ベン ゾィル]フエ-ル}アタリロイルァミノ）ェチル]アミド、
[0102] 更に、本発明では、式（1)の生物学的試薬用化合物またはその塩を含む、 A |8タン ノ クの産成機構を解析するためのキットが提供される。このキットには、必要に応じて 、標的タンパクを同定や解析するための他の試薬、例えば、ガンマセレクターゼ、ベ ータセレクターゼなどに対する抗体、それらの構成成分であるプレセ二リン、二カスト リンなどに対する抗体を含んでいてもよい。また、アツセィ系に通常用いられる、標識 基を検出するための試薬、緩衝液、界面活性剤などを含んでいてもよい。
発明を実施するための最良の形態
[0103] 以下、本発明を実施例および試験例により更に詳細に説明するが、本発明はこれ らの実施例および試験例によって何ら制限されるものではない。
[0104] 以下の実施例においては下記の略号を使用する。
DMF :N, N ジメチルホルムアミド
THF:テトラヒドロフラン
EDC : 1—ェチルー 3—（3 ジメチルァミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩
HOBT: 1ーヒドロキシベンゾトリァゾーノレ
IPEA：ジイソプロピルェチルァミン
TEA:トリエチノレアミン
t:ターシャリ
sec :セカンダリ
DMSO：ジメチルスルホキシド
クロマトグラフィーに関して、特に記載のない場合は、担体として冨士シリシァ製 BW 300を用いた。
LC MS :マススペクトルを用いて目的化合物を分取する高圧液体クロマトグラフィ 一。溶出溶媒として、 0. 1%トリフルォロ酢酸含有水と 0. 1%トリフルォロ酢酸含有ァ セトニトリルの 10%から 99%のリニアグラジェントシステムを用いた。
[0105] 実施例 1および実施例 2
1 ί (S) 1一「4一（4 ョードベンゾィル）フエニル Ίェチル } 3 ί 1一「3 メトキ シ— 4—〔4 レ 1 H イミダゾーノレ 1 ィル）フエ-ル 1— ί E)_—メチリデン L ピぺリジン一 2 オンおよび 1一 i (R) 1一「4一 （4一ョードベンゾィル）フエニル 1ェ チル }ー3— ー「3 メトキシー4ー （4ーメチル 1 H イミダゾール 1 ィル）フェ -ル Ί (E) -メチリデン }ピペリジン— 2—オンの合成
[0106] [化 23]
Figure imgf000068_0001
[0107] 1一（4 ェチルベンゾィル）ー4 ョードベンゼンの合成
4 ョード塩化ベンゾィル（2g)の THF (30mL)溶液に、トリノルマルブチルホスフィ ン（2. 06mL)を— 20°Cで滴下した。その反応液を— 20°Cで 20分撹拌した後、反応 液に 4 ェチルフエ-ル臭化マグネシウム（15mL : 0. 5M THF溶液）を加え、さら に、反応液を 10分間— 20°Cで撹拌した後、反応液を 1規定塩酸水溶液とジェチル エーテルの混合液に加え、有機層を分配した。水層にジェチルエーテルをカ卩え、有 機層を分配した。有機層を合わせて、飽和炭酸ナトリウム水溶液および飽和食塩水 の順で洗浄し、得られた有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧下濃縮した。残 渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (溶出溶媒:ヘプタン 酢酸ェチル系）で精製 し、標題ィ匕合物を 2. l lg得た。このものの物性値は以下の通りである。
— NMR (CDCl ) δ (ppm) : 1. 29 (t, J = 8. OHz, 3H) , 2. 74 (q, J = 8. OHz,
3
2H) , 7. 32 (dd, J = 6. 8, 2. OHz, 2H) , 7. 51 (dd, J = 6. 8, 2. OHz, 2H) , 7. 72 (dd, J = 6. 8, 2. OHz, 2H) , 7. 84 (dd, J = 6. 8, 2. OHz, 2H) .
[0108] 「4一 （1一アジドエチル）フエニル Ί一 （4一ョードフエニル）メタノンの合成
1一（4ーェチノレべンゾィノレ） 4 ョードベンゼン（500mg)と N ブロモサクシイミ ド（292mg)の四塩化炭素（70mL)溶液に、 2, 2' ーァゾビスイソブチ口-トリル（14 . 7mg)を室温で加え、その反応液を窒素気流下 100°Cで 12時間攪拌した。この反 応液を室温に戻した後、溶媒を減圧下濃縮した。得られた残渣に DMSO (3mL)と アジィ匕ナトリウム（116mg)を加え、その混合物を室温で 3時間攪拌した。反応液に水 とジェチルエーテルを加え、有機層を分配した。得られた有機層を飽和食塩水で洗 浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧下濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロ マトグラフィー (溶出溶媒:ヘプタン—酢酸ェチル系）で精製し、標題ィ匕合物を 490m g得た。このものの物性値は以下の通りである。
— NMR(CDCl) δ (ppm) :1.29(d, J = 6.8Hz, 3H), 4.72(q, J = 6.8Hz
3
, 1H), 7.45(dd, J = 6.8, 1.6Hz, 2H), 7.52(dd, J = 6.4, 2.0Hz, 2H), 7 .79(dd, J = 6.8, 1.6Hz, 2H), 7.86 (dd, J = 6.4, 2.0Hz, 2H) .
[0109] 「4一（1一アミノエチル）フエニル Ί一（4一ョードフエニル）メタノンの合成
[4一（1 アジドエチル）フエ-ル]一（4 ョードフエ-ル）メタノン（490mg)の THF (20mL)溶液に、トリフエ-ルホスフィン（5 lOmg)と水（lmL)を室温でカ卩え、その反 応液を 60°Cで 2時間攪拌した。この反応液を室温まで戻した後、飽和炭酸水素ナトリ ゥム水溶液と酢酸ェチルを加え、有機層を分配した。有機層を飽和食塩水で洗浄し 、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧下濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトダラ フィー (溶出溶媒:クロ口ホルム—メタノール系）で精製し、標題ィ匕合物を 398mg得た 。このものの物'性値は以下の通りである。
'H-NMRCDMSO-d ) δ (ppm) :1.27(d, J = 6.4Hz, 3H), 4.06(q, J = 6.
6
4Hz, 1H), 7.49(dd, J = 6.8, 1.6Hz, 2H), 7.55(dd, J = 6.4, 2. OHz, 2H ), 7.68 (dd, J = 6.8, 1.6Hz, 2H), 7.95(dd, J = 6.4, 2. OHz, 2H) .
[0110] 5 クロロー 2— il—「3 メトキシー 4— (4ーメチルー 1H—イミダゾールー 1 ィル) フ -ル Ί (E)ーメチリデン }吉苣酸 一「4一（4 ョードベンゾィル）フ ニル Ίェ チル 1アミドの合成
5 クロ口一 2— {1— [3—メトキシ一 4— (4—メチル 1 H イミダゾール 1 ィル )フ -ル] - (E)—メチリデン }吉草酸 トリフルォロ酢酸塩（300mg)と [4— (1—ァ ミノェチル）フエ-ル]一（4ーョードフヱ-ル）メタノン（352mg)の DMF(lOmL)溶液 に、 EDC(384mg)、 HOBT(271mg)および IPEA(0.582mL)を順次加え、その 反応溶液を室温で 12時間攪拌した。反応液に酢酸ェチルおよび水を加え、有機層 を分配した。得られた有機層を飽和塩ィ匕アンモ-ゥム水溶液および飽和食塩水の順 で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧下濃縮した。残渣をシリカゲルカラムク 口マトグラフィー (溶出溶媒：ヘプタン：酢酸ェチル 1： 3)で精製することにより、標題ィ匕 合物を 366mg得た。このものの物性値は以下の通りである。
— NMR(CDCl) δ (ppm) :1.62(d, J = 6.8Hz, 3H), 1.97— 2.04 (m, 2
3
H), 2.29 (s, 3H), 2.74 (m, 2H), 3.59(t, J = 6.4Hz, 2H), 3.85 (s, 3H), 5.29(dq, J = 8.0, 6.8Hz, IH), 6.56(d, J = 8.0Hz, IH), 6.93— 6.97( m, 3H), 7.24 (dd, J = 6.8, 2.0Hz, 2H), 7.47— 7.53 (m, 4H), 7.71 (s, IH), 7.76 (dd, J=12.0, 8.4Hz, 2H), 7.84(dd, J = 6.8, 2.0Hz, 2H) . 1 i(S) 1一「4一（4 ョードベンゾィル）フエニル Ίェチル } 3 一「3 メトキ シー4一（4ーメチルー 1H—イミダゾールー 1 ィル）フエニル Ί (E)ーメチリデン } ピぺリジン一 2 オンおよび 1一 ί (R) 1一「4一（4一ョードベンゾィル）フエニル Ίェ チル 1 3—{1ー「3 メトキシー4ー（4ーメチル 1 Η イミダゾール 1 ィル）フェ ニル Ί (Ε)ーメチリデン }ピペリジン 2—オンの合成
5 クロ口一 2— {1— [3—メトキシ一 4— (4—メチル 1 Η イミダゾール 1 ィル )フ ニル]一（Ε)—メチリデン }吉草酸 {1 [4一（4 ョードベンゾィル）フ ニル] ェチル }アミド (410mg)の DMF (5mL)溶液を 0°Cに冷却し、その反応液に水素化 ナトリウム (40%ミネラルオイル含有、 36.8mg)をカ卩え、その反応液を室温で 1時間 攪拌した。この反応液に飽和塩ィ匕アンモ-ゥム水溶液と酢酸ェチルを加え、有機層 を分配した。得られた有機層を水および飽和食塩水の順で洗浄し、無水硫酸ナトリウ ムで乾燥後、減圧下濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (溶出溶媒： 酢酸ェチル)で精製することにより、標題ィ匕合物のラセミ体を 325mg得た。得られた ラセミ体（325mg)をダイセル製 CHIRALCEL™ OD (2cm X 25cm：移動相；エタ ノール）にて分取し、保持時間 7.6分の標題光学活性体（125mg; >99%ee)およ び保持時間 19.2分の標題光学活性体（117mg;>99%ee)を得た。保持時間 7.6 分の表題光学活性体の物性値は以下の通りである。
— NMR(CDCl) δ (ppm) :1.63(d, J = 7.2Hz, 3H), 1.75 (m, IH), 1.8
3
7(m, IH), 2.30 (s, 3H), 2.78 (m, IH), 2.86 (m, IH), 2.99 (m, IH), 3 .32 (m, IH), 3.87(s, 3H), 6.31(q, J = 7.2Hz, IH), 6.95(s, IH), 7.05 (s, IH), 7.06 (d, J = 8.0Hz, IH), 7.26 (d, J = 8.0Hz, IH), 7.47 (d, J=8 .4Hz, 2H), 7.52(dd, J = 6.8, 1.6Hz, 2H), 7.73 (s, 1H), 7.77(d, J = 8
.4Hz, 2H), 7.84(dd, J = 6.8, 1.6Hz, 2H), 7.91 (s, 1H) .
保持時間 19.2分の標題光学活性体の物性値は以下の通りである。
— NMR(CDCl) δ (ppm) :1.63(d, J = 7.2Hz, 3H), 1.75 (m, 1H), 1.8
3
7(m, 1H), 2.30 (s, 3H), 2.78 (m, 1H), 2.86 (m, 1H), 2.99 (m, 1H), 3 .32 (m, 1H), 3.87(s, 3H), 6.31(q, J = 7.2Hz, 1H), 6.95(s, 1H), 7.05 (s, 1H), 7.06 (d, J = 8.0Hz, 1H), 7.26 (d, J = 8.0Hz, 1H), 7.47 (d, J=8 .4Hz, 2H), 7.52(dd, J = 6.8, 1.6Hz, 2H), 7.73 (s, 1H), 7.77(d, J = 8 .4Hz, 2H), 7.84(dd, J = 6.8, 1.6Hz, 2H), 7.91 (s, 1H) .
[0112] 実施例 3
(£)ー3—{4 {4 {(5)—1 {3—{1ー「3—メトキシー4ー（4ーメチルー111ーィ ミダゾ一ルー 1 ィル）フエニル Ί一（E)—メチリデン } 2—ォキソピペリジン 1ーィ ル }ェチル }ベンゾィル }フエニル }アクリル酸 ターシヤリブチルエステルの合成
[0113] [化 24]
Figure imgf000071_0001
[0114] 1 {(3)—1 [4ー（4ーョードべンゾィル）フェ-ル]ェチル}ー3—{1 [3—メト キシ— 4— (4—メチル—1H—イミダゾールー 1—ィル）フエ-ル]一（E)—メチリデン }ピペリジン— 2—オン（30mg)とアクリル酸ターシヤリブチルエステル（69.3 L)お よび TEA(19.9 L)の DMF (750 L)溶液に、酢酸パラジウム（2.13mg)および トリオルトトリルホスフィン（5.79mg)を順次カ卩え、その反応液を窒素気流下 70°Cで 1 時間攪拌した。その混合物を室温に戻した後、飽和塩ィ匕アンモニア水溶液と酢酸ェ チルを加え、有機層を分配した。得られた有機層を水および飽和食塩水の順で洗浄 し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧下濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグ ラフィー（担体：クロマトレックス NH；溶出溶媒ヘプタン：酢酸ェチル 1： 1)で精製する ことにより、標題ィ匕合物を 24mg得た。このものの物性値は以下の通りである。
— NMR(CDCl) δ (ppm) :1.55 (s, 9H), 1.63(d, J = 7.2Hz, 3H), 1.75
3
(m, 1H), 1.86 (m, 1H), 2.31 (s, 3H), 2.79 (m, 1H), 2.86 (m, 1H), 3. 01 (m, 1H), 3.31 (m, 1H), 3.86 (s, 3H), 6.31(q, J = 7.2Hz, 1H), 6.47 (d, J=16. OHz, 1H), 6.93 (s, 1H), 7.04 (s, 1H), 7.05(d, J = 8.0Hz, 1H ), 7.25(d, J = 8. OHz, 1H), 7.47(d, J = 8.4Hz, 2H), 7.60(d, J = 8.4Hz , 2H), 7.62(d, J=16. OHz, 1H), 7.70— 7.84 (m, 5H), 7.90 (s, 1H) .
[0115] 実施例 4
5-((3aR.6S.6aS)—2—ォキソへキサヒドロチエノ「3.4— dlイミダゾール一 6— ィル)古苣酴 { 1 {3 Π 「3ーメトキシー 4ー（
4ーメチルー 1H—イミダゾールー 1 ィル）フエニル Ί一（E)—メチリデン } 2—ォキ ソピペリジン 1ーィル }ェチル }ベンゾィル }フエ二ル}ァクリロイルァミノ 1ェチル }アミ トリフルォロ酢酸塩
[0116] [化 25]
Figure imgf000072_0001
[0117] (E)— 3— {4— {4— {(S)— 1— {3— {1— [3—メトキシ一 4— (4—メチル 1H—ィ ミダゾ一ルー 1—ィル）フエ-ル]— (E)—メチリデン }— 2—ォキソピペリジン— 1—ィ ル}ェチル }ベンゾィル }フエ-ル}アクリル酸 ターシヤリブチルエステル（15mg)の 塩化メチレン（0.5mL)溶液に、 0°Cでトリフルォロ酢酸（0.5mL)をカ卩え、その反応 液を室温で 1時間攪拌した。反応液を減圧下濃縮し、トルエンを加え、再度減圧下濃 縮した。得られた残渣の DMF(0.8mL)溶液に、ピオチン エチレンジァミン臭化 水素酸塩（17.4mg)と EDC(18.2mg)と HOBT(16mg)および IPEA(0.2mL) を順次加え、その反応液を室温で 12時間撹拌した。この反応液に飽和塩ィ匕アンモ- ゥム水溶液と酢酸ェチルを加え、有機層を分配した。得られた有機層を水および飽 和食塩水の順で洗浄し、減圧下濃縮した。残渣を LC— MSで精製することにより、標 題化合物を 9.2mg得た。このものの物性値は以下の通りである。
— NMR(CD OD) δ (ppm) :1.38— 1.42 (m, 2H), 1.51— 1.81 (m, 4H)
3
, 1.67(d, J = 7.2Hz, 3H), 1.90 (m, 1H), 2.21 (m, 2H), 2.43 (s, 3H), 2 .66 (m, 1H), 2.85 (m, 3H), 3.05— 3.20 (m, 2H), 3.29— 3.45 (m, 6H) , 3.95 (s, 3H), 4.25 (m, 1H), 4.43 (m, 1H), 6.16(q, J = 7.2Hz, 1H), 6 .74(d, J=16.0Hz, 1H), 7.22(dd, J = 8.0, 1.2Hz, 1H), 7.32(d, J=l. 2Hz, 1H), 7.52-7.65 (m, 6H), 7.71— 7.82 (m, 6H), 9.16(d, J=l.6 Hz, 1H).
ESI - MS;m/z 844[M++H].
[0118] 実施例 5
5-((3aR.6S.6aS)—2—ォキソへキサヒドロチエノ「3.4— dlイミダゾール一 6— ィル)古苣酴 ί2 「3ーメトキシー 4 （4ーメチルー
1H—イミダゾールー 1 ィル）ベンジル Ί 2—ォキソピペリジン 1ーィル }ェチル } ベンゾィル 1フエニル 1ァクリロイルァミノ 1ェチル 1アミド トリフルォロ酢酸塩
[0119] [化 26]
Figure imgf000073_0001
5 クロロー 2—「3 メトキシー 4 （4ーメチルー 1H—イミダゾールー 1 ィル）ベン ジル，吉苣酸 トリフルォロ酢酸塩の合成
5 クロ口一 2— {1— [3—メトキシ一 4— (4—メチル 1 H イミダゾール 1 ィル )フヱ-ル]一（E)—メチリデン }吉草酸 トリフルォロ酢酸塩（500mg)のメタノール（1 OmL)溶液に、パラジウム炭素（11.8mg)を加え、その混合液を水素気流下室温で 2時間攪拌した。反応液をセライトろ過し、ろ液を減圧下濃縮することにより、標題ィ匕 合物を 484mg得た。このものの物性値は以下の通りである。
— NMR(DMSO d ) δ (ppm) :1.59— 1.80 (m, 4H), 2.33(s, 3H), 2.
6
70-2.74 (m, 1H), 2.84(dd, J=13.6, 6. OHz, 1H), 2.93(dd, J=13.6,
8.4Hz, 1H), 3.55 (s, 3H), 3.62— 3.67 (m, 2H), 6.99(dd, J = 8.0, 1.2
Hz, 1H), 7.21(d, J=l.2Hz, 1H), 7.47(d, J = 8. OHz, 1H), 7.70 (s, 1H
), 9.30(d, J=l.6Hz, 1H).
ESI - MS;m/z 337[M++H].
[0121] 5-((3aR.6S.6aS)—2—ォキソへキサヒドロチエノ「3.4— dlイミダゾール一 6— ィル)古苣酴 ί2 「3ーメトキシー 4 （4ーメチルー
1H—イミダゾールー 1 ィル）ベンジル Ί 2—ォキソピペリジン 1ーィル 1ェチル } ベンゾィル 1フエニル 1ァクリロイルァミノ 1ェチル 1アミド トリフルォロ酢酸塩
実施例 1と同様にして 5 クロ口一 2— [3—メトキシ一 4— (4—メチル 1H—イミダ ゾールー 1 ィル）ベンジル]吉草酸 トリフルォロ酢酸塩（150mg)と [4一（1ーァミノ ェチル）フエ-ル ]一（4 ョードフエ-ル)メタノン（176mg)から標題化合物を 17.3 mg得た。このものの物'性値は以下の通りである。
— NMR(CD OD) δ (ppm) :1.38— 1.45(m, 2H), 1.51— 1.78 (m, 6H)
3
, 1.60(d, J = 7.2Hz, 3H), 1.90 (m, 1H), 2.22 (m, 2H), 2.43 (s, 3H), 2 .66 (m, 1H), 2.74— 3.07 (m, 4H), 3.13— 3.30 (m, 3H), 3.34— 3.45 ( m, 5H), 3.92 (s, 3H), 4.24 (m, 1H), 4.44 (m, 1H), 6.15(q, J = 7.2Hz, 1H), 6.73(d, J=16. OHz, 1H), 7.05(d, J = 8. OHz, 1H), 7.22 (s, 1H), 7.40— 7.54 (m, 4H), 7.60(d, J=16. OHz, 1H), 7.70— 7.81 (m, 6H), 9 .09 (d, J = 2. OHz, 1H).
ESI - MS;m/z 846[M++H].
[0122] 実施例 6
(E) N— ί2— ί2—「2—（2 アジドエトキシ）エトキシ Ίエトキシ }ェチル } 3— ί4
4 ~((S)- 1— j3— jl—丄3—メ キシ— 4— (4—メチル 1 H ィ ゾール― 1 ィル）フエニル Ί一（E)—メチリデン } 2—才キソピペリジン 1ーィル }ェチル }ベ ンゾィル}フヱニル 1アクリルアミドの合成
[化 27]
Figure imgf000075_0001
(E) 3— {4一 {4一 {(S) 1一 {3— {1一 [3—メトキシー 4一 （4ーメチルー 1H— イミダゾールー 1—ィル）フエ-ル]— (E)—メチリデン }— 2—ォキソピペリジン— 1— ィル }ェチル }ベンゾィル }フエ-ルアクリル酸 ターシヤリブチルエステル（37mg)の 塩化メチレン（lmL)溶液に、トリフルォロ酢酸（lmL)を加え、その反応液を室温で 3 0分間攪拌した。反応液を減圧下濃縮した後、トルエンを加え、再度減圧下濃縮した 。得られた残渣の DMF(2mL)溶液に、 1—アミノー 11—アジドー 3, 6, 9 トリオキ サゥンデカン（19mg)と IPEA(0.06mL)と HOBT(16mg)および EDC(23mg)を 加え、その反応液を室温で 11時間撹拌した。この反応液に飽和重曹水と酢酸ェチ ルを加え、有機層を分配した。得られた有機層を硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧 下濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（担体:クロマトレックス NH;溶出 溶媒:酢酸ェチル→酢酸ェチル:メタノール 5:1)で精製し、標題ィ匕合物を 33mg得 た。このものの物'性値は以下の通りである。
ESI-MS;m/z389[l/2M++H]. — NMR(CDC1 ) δ (ppm) :1.63 (d, d
3
=7.2Hz, 3H), 1.68-1.92 (m, 3H), 2.31 (s, 3H), 2.73— 2.92 (m, 2H ), 2.96-3.05 (m, 1H), 3.28— 3.36 (m、 1H), 3.39(t, J = 5.2Hz, 2H), 3.59-3.73 (m, 13H), 3.87(s, 3H), 6.31(q, J = 7.2Hz, 1H), 6.46 (brt , J = 5.2Hz, 1H), 6.55(d, J=15.6Hz, 1H), 6.94(brs, 1H), 7.05(brs, 1H), 7.06(brd, J = 8.0Hz, 1H), 7.26(d, J = 8.0Hz, 1H), 7.47(d, J = 8. 0Hz, 2H), 7.61(d, J = 8.0Hz, 2H), 7.68(d, J=15.6Hz, 1H), 7.73 (brs , 1H), 7.79(d, J = 8.0Hz, 2H), 7.81(d, J = 8.0Hz, 2H), 7.91 (brs, 1H) [0124] 実施例 7
5—「（3aR. 6S. 6aS)— 2 ォキソへキサヒドロチェノ「3. 4— dlイミダゾールー 6— ィル，吉 酸 { 「3ーメ トキシー 4一（4ーメチルー 1H—イミダゾールー 1 ィル）フエ-ル Ί (E)ーメチリデ ン } 2 ォキソピペリジン 1 ィル }ェチル } 4 ベンゾィル }フエ-ル Iァクリロイ ルァミノ }エトキシ }エトキシ }ェトキシ}ェチル } 1H—「1. 2. 3Ίトリァゾールー 4ーィ ルメチル 1アミド トリフルォロ酢酸塩の合成
[0125] [化 28]
Figure imgf000076_0001
(E)— N— 12— 12— [2— (2 アジドエトキシ）エトキシ]エトキシ }ェチル } 3— { 4 {4 { 1 {3—{ 1 [3—メトキシー4ー（4ーメチルー111ーィミダゾールー1ーィ ル）フエニル]一（E)—メチリデン } 2—才キソピペリジン 1ーィル }ェチル }ベンゾ ィル }フエ-ル}アクリルアミド（22mg)および 5— [ (3aR, 6S, 6aS)— 2—ォキソへキ サヒドロチェノ [3, 4 d]イミダゾール— 6—ィル]吉草酸 2 プロピ-ルアミド（CAS # 773888— 45— 2、 8mg)のターシヤリブタノール（0. 5mL)と水（0. 5mL)の混合 溶液に、ァスコルビン酸ナトリウム（1M水溶液、 0. 03mL)と硫酸銅（1M水溶液、 0. OlmL)を加え、その反応液を室温で 11時間攪拌した。反応液に濃アンモニア水（1 mL)を加え、その溶液を LC— MSで精製することにより、標題ィ匕合物を 33mg得た。 このものの物'性値は以下の通りである。
ESI— MS ;m/z529 [l/2M+ +H] . NMR (CD OD) δ (ppm) : 1. 40— 1
3
. 50 (m, 2H) , 1. 56— 1. 65 (m, 2H) , 1. 68 (d, J = 7. 2Hz, 3H) , 1. 70—1. 9 9(m, 4H), 2.30-2.55(brs, 3H), 2.68— 3.20 (m, 6H), 3.33— 3.44 (m , 4H), 3.51-3.70 (m, 13H), 3.88— 3.94 (m, 2H), 3.95(s, 3H), 4.28 —4.35 (m, 1H), 4.45—4.60 (m, 3H), 6.23(q, J = 7.2Hz, 1H), 6.71 (d , J=15.2Hz, 1H), 7. 18(brd, J = 7.6Hz, 1H), 7.20(brs, 1H), 7.50 (d, J =7.6Hz, 2H), 7.45-7.55 (m, 5H), 7.61(d, J=15.2Hz, 1H), 7.66 (d , J = 7.6Hz, 2H), 7.75-7.89 (m, 5H), 8.13(brs, 1H) .
[0126] 実施例 8
5—「（3aR.6S.6aS)— 2 ォキソへキサヒドロチェノ「3.4— dlイミダゾールー 6— ィル，吉 酸 { 「3ーメトキシー 4 （4ーメチルー iH—イミダゾールー 1 ィル）フエニル， E)—メチリデン } 2— ォキソピペリジン 1ーィル }ェチル }ベンゾィル }フエ二ル}ァクリロイルァミノ 1へキシ ルカルバモイル } チルジスルフて-ル} チル }ァ 、 トリフルォロ酢酸塩の合成
[0127] [化 29]
Figure imgf000077_0001
ί6— ί (E)— 3— ί4 ί4 il ί3— il 3 メトキシー 4 4ーメチルー 1H—ィ ミダゾ一ルー 1 ィル）フエニル Ί一（Ε)—メチリデン } 2—ォキソピペリジン 1ーィ ル}ェチル }ベンゾィル }フエニル }ァクリロイルァミノ }へキシル }力ルバミン酸 ターシ ヤリブチルエステルの合成
）ー3—{4 {4 {1 {3—{1 [3—メトキシー4ー（4ーメチルー111ーィミダゾ 一ルー 1—ィル）フエ-ル] - (Ε)—メチリデン }— 2—ォキソピペリジン一 1—ィル }ェ チル }ベンゾィル }フエ-ルアクリル酸 ターシヤリブチルエステル（39mg)の塩化メチ レン（2mL)溶液に、トリフルォロ酢酸（lmL)を加え、その反応液を室温で 30分間攪 拌した。反応液を減圧下濃縮した後、トルエンを加え、再度減圧下濃縮した。得られ た残渣の DMF (2mL)溶液に、 （6 ァミノへキシル）カルノ ミン酸 ターシヤリブチル エステル（20mg)と IPEA(0. 07mL)と HOBT(17mg)および EDC (24mg)を加え 、その反応液を室温で 19時間撹拌した。この反応液に飽和重曹水と酢酸ェチルを 加え、有機層を分配した。得られた有機層を減圧下濃縮し、残渣をシリカゲルカラム クロマトグラフィー（担体：クロマトレックス NH；溶出溶媒：酢酸ェチル→酢酸ェチル： メタノール 5： 1)で精製し、標題ィ匕合物を 2 lmg得た。このものの物性値は以下の通 りである。
ESI-MS ;m/z774[M+ +H] .
[0128] (E)—N—（6 ァミノへキシル）ー3—ί4 ί4ー ーί3— ー「3 メトキシー4ー（ 4ーメチルー 1H—イミダゾールー 1 ィル）フエニル Ί一（E)—メチリデン } 2—ォキ ソピペリジン 1ーィル }ェチル }ベンゾィル }フエ-ル}アクリルアミド 二トリフルォロ 酢酸塩の合成
{6 { (E) 3— {4一 {4一 { 1一 {3— { 1一 [3—メトキシー 4一（4ーメチルー 1H—ィ ミダゾ一ルー 1—ィル）フエ-ル]— (E)—メチリデン }— 2—ォキソピペリジン— 1—ィ ル}ェチル }ベンゾィル }フエ-ル}アタリロイルァミノ }へキシル }力ルバミン酸 ターシ ヤリブチルエステル（21mg)のクロ口ホルム（lmL)溶液にトリフルォロ酢酸（lmL)を 加え、その反応液を室温で 2時間攪拌した。反応液を減圧下濃縮した後、トルエンを 加え、再度減圧下濃縮することにより、標題ィ匕合物を 24mg得た。このものの物性値 は以下の通りである。
ESI - MS ;m/z338 [l/2M+ +H] .
[0129] 5—「（3aR. 6S. 6aS)— 2 ォキソへキサヒドロチェノ「3. 4— dlイミダゾールー 6— ィル，吉 酸 { 「3ーメトキシー 4 一（4ーメチルー 1H—イミダゾールー 1 ィル）フエニル Ί一（E)—メチリデン } 2— ォキソピペリジン 1ーィル }ェチル }ベンゾィル }フエ二ル}ァクリロイルァミノ }へキシ ルカルバモイル 1ェチルジスルファ-ル 1ェチル 1アミド トリフルォロ酢酸塩の合成 ）ー？^ー（6—ァミノへキシル）ー3—{4 {4 { 1 {3—{ 1 [3—メトキシー4 (4ーメチルー 1H—イミダゾールー 1 ィル）フエ-ル]一（E)—メチリデン } 2—才 キソピペリジン 1ーィル }ェチル }ベンゾィル }フエ-ル}アクリルアミド 二トリフルォ 口酢酸塩（24mg)と 2, 5 ジォキソ— 1— {3— {2— — [(3aR, 6S, 6aS)— 2—ォ キソへキサヒドロチェノ [3, 4— d]イミダゾール 6—ィル]ペンタノィルァミノ }ェチル ジスルファ-ル }プロピオ-ルォキシ }ピロリジン 3 スルホネート ナトリウム塩（18 mg)の DMF(lmL)溶液に、 IPEA(0.02mL)をカ卩え、その反応液を室温で 20時 間攪拌した。反応液を LC— MSで精製することにより、標題ィ匕合物 13mgを得た。こ のものの物'性値は以下の通りである。
ESI— MS;m/z533[l/2M++H]. NMR(CD OD) δ (ppm) :1.37— 1
3
.50 (m, 4H), 1.52—1.65 (m, 4H), 1.68(d, J = 6.8Hz, 3H), 1.76— 1.9 8(m, 2H), 2.23(t, J = 6.4Hz, 2H), 2.47(s, 3H), 2.61(t, J = 7.6Hz, 2 H), 2.73(d, J=12.8Hz, 1H), 2.82(t, J = 6.8Hz, 2H), 2.85— 2.88 (m , 4H), 3.04— 3.12(m, 1H), 3.15— 3.24 (m, 3H), 3.31— 3.37 (m, 9H) , 3.38— 3.45 (m, 1H), 3.50(t, J = 6.0Hz, 2H), 3.96 (s, 3H), 4.31 (dd , J = 8.0, 4.4Hz, 1H), 4.50(dd, J = 8.0, 4.4Hz, 1H), 6.22(q, J = 6.8H z, 1H), 6.71(d, J=15.6Hz, 1H), 7.19(brd, J = 8.0Hz, 1H), 7.21(brs, 1H), 7.44(brs, 1H), 7.48(d, J = 8.0Hz, 1H), 7.50(d, J = 8.0Hz, 2H), 7.59(d, J=15.6Hz, 1H), 7.67(d, J = 8.0Hz, 2H), 7.79— 7.86 (m, 5H ), 9.01(d, J=l.2Hz, 1H).
[0130] 実施例 9
1 - i (S) - 1 - (4- (4- i (E) -3- (4- Γ3- (4.4 ジフノレオ口一 5.7 ジメチ ルー 4H— 3a.4a—ジァザ一 4—ボラ一 s—インダセン一 3 -ィル）プロピオニル Ίピぺ ラジン } 1 ィル } 3—ォキソプロぺニル }ベンゾィル }フエ二ル}ェチル } 3— 一「3 メトキシー4一（4ーメチルー 1H—イミダゾールー 1 ィル）フエニル Ί (E) メチリデン }ピペリジン 2—オン トリフルォロ酢酸塩の合成
[0131] [化 30]
Figure imgf000080_0001
4 {(£)ー3—{4 {4 {(5)—1 {3—{1ー「3 メトキシー4ー（4ーメチルー111 イミダゾールー 1 ィル）フエニル Ί一（E)—メチリデン } 2—才キソピペリジン 1 ィル }ェチル }ベンゾィル }フエニル }ァクリロイル }ピぺラジン— 1—カルボン遞 タ
Figure imgf000080_0002
）ー3—{4 {4 {(3)—1 {3—{1 [3—メトキシー4ー（4ーメチルー111 イミダゾールー 1—ィル）フエ-ル]— (E)—メチリデン }— 2—ォキソピペリジン— 1— ィル }ェチル }ベンゾィル }フエ-ルアクリル酸 ターシヤリブチルエステル（6 lg)の塩 ィ匕メチレン（2mL)溶液に、トリフルォロ酢酸（lmL)を加え、その反応液を室温で 1. 5時間攪拌した。反応液を減圧下濃縮した後、トルエンを加え、再度減圧下濃縮した 。得られた残渣の DMF(2mL)溶液に、 1—ピぺラジンカルボン酸 ターシヤリブチル エステノレ (32mg)と IPEA (0.09mL)と HOBT (23mg)および EDC (33mg)を加え 、その反応液を室温で 4時間撹拌した。この反応液に飽和重曹水と酢酸ェチルを加 え、有機層を分配した。得られた有機層を減圧下濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロ マトグラフィー（担体：クロマトレックス NH；溶出溶媒：ヘプタン ·酢酸ェチル 1： 1→酢 酸ェチル→酢酸ェチル：メタノール 9:1)で精製し、標題化合物を 42mg得た。この ものの物'性値は以下の通りである。
ESI-MS;m/z744[M++H]. 'H-NMRCCDCl ) δ (ppm) :1.49 (s, 9H),
3
1.63(d, J = 6.8Hz, 3H), 1.67—1.80 (m, 1H), 1.82—1.92 (m, 1H), 2. 30 (s, 3H), 2.72-2.92 (m, 2H), 2.96— 3.04 (m, 1H), 3.27— 3.36 (m , 1H), 3.45-3.56 (m, 4H), 3.60— 3.78 (m, 4H), 3.86 (s, 3H), 6.30 ( q, J = 6.8Hz, 1H), 6, 93(brs, 1H), 6.97(d, J=15.2Hz, 1H), 7.04(brs, 1H), 7.05(brd, J = 8.4Hz, 1H), 7.25(d, J = 8.4Hz, 1H), 7.46(d, J = 8. 4Hz, 2H), 7.61(d, J = 8.4Hz, 2H), 7.71(d, J = 0.8Hz, 1H), 7.72 (d, J = 15.2Hz, 1H), 7.78(d, J = 8.4Hz, 2H), 7.80(d, J = 8.4Hz, 2H), 7.9 0(brs, 1H).
[0133] 3 一「3 メトキシ一 4一 （4一メチル一 1H—イミダゾール一 1一ィル）フエニル Ί一
(E)—メチリデン } -l-((S)-l-(4-(4-r(E)—3—ォキソ 3—ピぺラジン一 1ーィルプロぺニル 1ベンゾィル }フエ二ル}ェチル }ピペリジン 2—オン 二トリフル ォロ酢酸塩の合成
4一 {(E) 3— {4一 {4一 {(S) 1一 {3— {1一 [3—メトキシー 4一 （4ーメチルー 1 H—イミダゾールー 1—ィル）フエ-ル]— (E)—メチリデン }— 2—ォキソピペリジン— 1—ィル }ェチル }ベンゾィル }フエ-ル}アタリロイル}ピペラジン一 1—カルボン酸 タ ーシヤリブチルエステル（42mg)のクロ口ホルム（lmL)溶液に、トリフルォロ酢酸（1 mL)を加え，その反応液を室温で 1時間攪拌した。反応液を減圧下濃縮した後、トル ェンを加え、再度減圧下濃縮することにより、標題ィ匕合物を 50mg得た。このものの 物性値は以下の通りである。
ESI - MS;m/z323[l/2M++H].
[0134] 1 - i (S) - 1 - (4- (4- i (E) -3- (4- Γ3- (4.4 ジフノレオ口一 5.7 ジメチ ルー 4H— 3a.4a—ジァザ一 4—ボラ一 s—インダセン一 3 -ィル）プロピオ-ル Ίピぺ ラジン}ー1ーィル}ー3—ォキソプロぺニル}べンゾィル}フェニル}ェチル}ー3—{1 一「3 メトキシー4一（4ーメチルー 1H—イミダゾールー 1 ィル）フエ-ル Ί (E) メチリデン }ピペリジン 2—オン トリフルォロ酢酸塩の合成
3— {1— [3—メトキシ— 4— (4—メチル 1 H イミダゾール 1 ィル）フエ-ル] - (E)—メチリデン } 1 { (S) 1— {4— {4 [ (E)—3—ォキソ 3 ピぺラジン 1ーィルプロべ-ル]ベンゾィル }フエ-ル}ェチル }ピペリジンー2—オン 二トリフ ルォロ酢酸塩（12mg)と 3— (4, 4 ジフルオロー 5, 7 ジメチルー 4H— 3a, 4a— ジァザー4 ボラ s—インダセンー3 ィル）プロピオン酸 2, 5 ジォキソピロリジ ン— 1—ィル エステル（5mg)の DMF(0.5mL)溶液に、 IPEA(0.03mL)を加え 、その反応液を室温で 21時間攪拌した。反応液を LC— MSで精製することにより、 標題化合物 5.3mgを得た。このものの物性値は以下の通りである。
Figure imgf000082_0001
§ΰ / fH二 ベ S—べ; ^fi ^エ { -ェ { / 、ベ:^ [ / ΰ 1 /
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) S · ε '(HI 'ra)ox Έ-οο ·ε '(Η '^)LS 'ζ- ΐ 'ζ '(Ηε <s)s9 'ζ '(Ηε 's)s
'Ζ '(HS <S)9S 'Ζ '(HI 'ra)Q6 ·ΐ— 8 Ί '(ΗΙ ^)28 Ί-69 Ί '(HS 'ΖΗ8
·9 = Γ'Ρ)99 ·ΐ:(υ Μ) g ( 10Q0)HPVN-HX ,[H++PV]8I6z/raiSPV-ISa
686090/.00Zdf/X3d 08 6 6εΐ/·00Ζ OAV へキサヒドロチェノ [3, 4-d]イミダゾール 6—ィル]ペンタノィルァミノ }ェチルジス ルファ-ル }プロピオ-ルォキシ }ピロリジン— 3—スルホネート ナトリウム塩（9mg)の DMF(0.5mL)溶液に、 IPEA(0.03mL)をカ卩え、その反応液を室温で 21時間攪 拌した。反応液を LC— MSで精製することにより、標題ィ匕合物 7mgを得た。このもの の物性値は以下の通りである。
ESI— MS;m/z517[l/2M++H]. NMR(CDC1 ) δ (ppm) :1.39— 1.
3
47 (m, 2H), 1.54—1.65 (m, 3H), 1.65(d, J = 6.8Hz, 3H), 1.67—1.82 (m, 2H), 1.84—1.96 (m, 1H), 2.20(t, J = 7.2Hz, 2H), 2.44 (s, 3H), 2 .70(d, J=12.8Hz, 1H), 2.78— 2.93 (m, 7H), 2.97(t, J = 7.2Hz, 2H) , 3.02— 3.10 (m, 1H), 3.12— 3.19 (m, 1H), 3.35— 3.43 (m, 1H), 3.4 8(t, J = 6.4Hz, 2H), 3.61— 3.83 (m, 8H), 3.93 (s, 3H), 4.28 (dd, J = 8 .0, 4.4Hz, 1H), 4.48 (dd, J = 8.0, 4.4Hz, 1H), 6.19(q, J = 6.8Hz, 1H ), 7.15(d, J=16.0Hz, 1H), 7.16(brd, J = 6.8Hz, 1H), 7.19(brs, 1H), 7.42(brs, 1H), 7.46(d, J = 6.8Hz, 1H), 7.48(d, J = 8.0Hz, 2H), 7.66 (d, J=16.0Hz, 1H), 7.71(d, J = 8.0Hz, 2H), 7.79(d, J = 8.0Hz, 2H), 7.80(d, J = 8.0Hz, 2H), 7.81(brs, 1H), 8.99(d, J=l.2Hz, 1H) .
[0137] 実施例 11
(3aR.6S.6aS)— 6— i4 i(E)— 3— i4 i4 il i3— il一「3—メトキシ -4- (4ーメチルー 1H—イミダゾールー 1 ィル）フエニル Ί一（E)—メチリデン }ー2 ーォキソピペリジン 1ーィル }ェチル }ベンゾィル }フエ二ル}ァクリロイル}ピペラジン 1ーィル } 5 ォキソペンチル}テトラヒドロチェノ「3.4— (1Ίイミダゾールー 2—ォ ン トリフルォロ酢酸塩の合成
[0138] [化 32]
Figure imgf000084_0001
3— {1— [3—メトキシ— 4— (4—メチル 1 H イミダゾール 1 ィル）フエ-ル] - (E)—メチリデン } 1— { 1— {4— {4— [ (E) 3 ォキソ 3 ピぺラジン一 1 ィルプロべ-ル]ベンゾィル }フエ-ル}ェチルピペリジン 2—オン 二トリフルォロ酢 酸塩（25mg)と 5— [(3aR, 6S, 6aS)—2—ォキソへキサヒドロチェノ [3, 4 d]イミ ダゾールー 6 ィル]吉草酸 2, 5 ジォキソピロリジン 1ーィル エステル（lOmg )の DMF(lmL)溶液に、 IPEA(0.05mL)をカ卩え、その反応液を室温で 21時間攪 拌した。反応液を LC— MSで精製することにより、標題ィ匕合物 20mgを得た。このも のの物性値は以下の通りである。
ESI-MS;m/z436[l/2M++H]. Η— NMR(CDC1 ) δ (ppm) :1.46— 1.
3
75 (m, 2H), 1.60—1.67 (m, 2H), 1.69(d, J = 7.2Hz, 3H), 1.70—1.83 (m, 3H), 1.87-1.98 (m, IH), 2.44— 2.49 (m, 5H), 2.75(d, J=12.8 Hz, IH), 2.8-2.90 (m, 2H), 2.94 (dd, =12.8, 5.2Hz, IH), 3.05— 3 . 13 (m, IH), 3.18-3.24 (m, IH), 3.37— 3.46 (m, IH), 3.62— 3.84 ( m, 8H), 3.96 (s, 3H), 4.33(dd, J = 8.0, 4.8Hz, IH), 4.52(dd, J = 8.0 , 4. OHz, IH), 6.22(q, J = 7.2Hz, IH) , 7. 17(d, J=15.6Hz, IH), 7. 19 (brd, J = 8. OHz, IH), 7.21(brs, IH), 7.44(brs, IH), 7.49(d, J = 8. OH z, IH), 7.51(d, J = 7.2Hz, 2H), 7.69(d, J=15.6Hz, IH), 7.73(d, J = 7.2Hz, 2H), 7.82(d, J = 7.2Hz, 2H), 7.83(d, J = 7.2Hz, 2H), 7.84 (b rs, IH), 9.01(d, J=l.6Hz, IH) .
実施例 12
(E)—N— (6—アジドへキシル）ー3— ί4 ί4一 ί3— 一「3—メトキシー 4 丄 4 -メチル 1H ゾール 1 ィル)フ -ル Ί (Ε) -メチ i^ 、ン L— 2 ォ キソピぺ ジン— 1ーィル }ェチル }ベンゾィル }フエ二ル}アクリルアミドの合成
[化 33]
Figure imgf000085_0001
）ー3—{4 {4 {1 {3—{1 [3—メトキシー4ー（4ーメチルー111ーィミダゾ 一ルー 1—ィル）フエ-ル] - (E)—メチリデン }— 2—ォキソピペリジン一 1—ィル }ェ チル }ベンゾィル }フエ-ルアクリル酸 ターシヤリブチルエステル（56mg)の塩化メチ レン（lmL)溶液に、トリフルォロ酢酸（lmL)を加え、その反応液を室温で 1時間間 攪拌した。反応液を減圧下濃縮した後、トルエンを加え、再度減圧下濃縮した。得ら れた残渣の DMF(2mL)溶液に、 6 アジドへキシルァミン（CAS No.349553— 73— 7、 25mg)と IPEA(0. lmL)と HOBT(36mg)および EDC(51mg)を加え、 その反応液を室温で 3時間撹拌した。この反応液に飽和重曹水と酢酸ェチルを加え 、有機層を分配した。得られた有機層を減圧下濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマ トグラフィー（担体：クロマトレックス NH；溶出溶媒：ヘプタン：酢酸ェチル 1： 1→酢 酸ェチル→酢酸ェチル：メタノール 9:1)で精製し、標題化合物を 45mg得た。この ものの物'性値は以下の通りである。
ESI-MS;m/z700[M++H]. — NMR(CDC1 ) δ (ppm) :1.36— 1.47 (
3
m, 4H), 1.56-1.62 (m, 4H), 1.63(d, J = 7.2Hz, 3H), 1.67—1.80 (m , 1H), 1.81-1.92 (m, 1H), 2.30 (s, 3H), 2.72— 2.82 (m, 1H), 2.83 -2.91 (m, 1H), 2.97— 3.03 (m, 1H), 3.27(t, J = 7.2Hz, 2H), 3.29— 3.36 (m, 1H), 3.41(q, J = 7.2Hz, 2H), 3.86 (s, 3H), 5.80(brt, J = 5.6 Hz, 1H), 6.30(q, J = 7.2Hz, 1H) , 6.49(d, J=15.6Hz, 1H) , 6.93(brs, 1H), 7.04(brs, 1H), 7.05(brd, J = 8.4Hz, 1H), 7.25(d, J = 8.4Hz, 1H ), 7.46(d, J = 8.4Hz, 2H), 7.58(d, J = 8.4Hz, 2H), 7.67(d, J=15.6H z, 1H), 7.72(brs, 1H), 7.77(d, J = 8.4Hz, 2H), 7.79(d, J = 8.4Hz, 2H ), 7.90(brs, 1H).
[0141] 実施例 13
5—「（3aR.6S.6aS)— 2 ォキソへキサヒドロチェノ「3.4— dlイミダゾールー 6— ィル Ί吉苣酸 ί6— ί3— ί4 ί4一 ί3— ί「3—メトキシー 4一（4ーメチルー 1H—イミダゾールー 1 ィル）フエニル Ί一（Ε)—メチリデン } 2—才キソピペリジン — 1—ィル }ェチル }ベンゾィル }フエニル Iァクリロイルアミノ }へキシル }— 1H—「 1.2 .3Ίトリァゾールー 4ーィルメチル }ァミド トリフルォロ酢酸塩の合成
[0142] [化 34]
Figure imgf000086_0001
）ー？^ー（6—ァジドへキシル）ー3—{4 {4 {1 {3—{1 [3—メトキシー4 一（4ーメチルー 1H—イミダゾールー 1 ィル）フエ-ル]一（Ε)—メチリデン } 2— ォキソピペリジン一 1—ィル }ェチル }ベンゾィル }フエ-ル}アクリルアミド（15mg)お よび 5—[(3aR, 6S, 6aS)—2 ォキソへキサヒドロチェノ [3, 4 d]イミダゾールー 6—ィル]吉草酸 2 プロピ-ルアミド（CAS# 773888—45— 2、 6mg)の DMSO (0.9mL)と水（0.9mL)の混合溶液に、ァスコルビン酸ナトリウム（1M水溶液、 0.2 mL)と硫酸銅（1M水溶液、 0.2mL)を加え、その反応液を 37°Cで 3日間攪拌した。 反応液に濃アンモニア水（10mL)とクロ口ホルム（10mL)およびメタノール（lmL)を 加え、有機層を分配した。得られた有機層を濃縮し、 DMFに希釈後、 LC— MSで精 製することにより、標題ィ匕合物を 10mg得た。このものの物性値は以下の通りである。 ESI-MS ;m/z491 [1/2M++H] . NMR(CD OD) δ (ppm) :1.36— 1
3
.48 (m, 6H), 1.55— 1.67 (m, 4H), 1.69(d, J = 6.8Hz, 3H), 1.70—1.8 5(m, 2H), 1.87-1.98 (m, 3H), 2.24(brt, J = 7.2Hz, 2H), 2.46 (s, 3H ), 2.73(d, J=12.8Hz, 1H), 2.77— 2.85 (m, 3H), 3.03— 3.13 (m, 1H) , 3.14-3.21 (m, 1H), 3.28— 3.37 (m, 3H), 3.38— 3.46 (m, 1H), 3.9 8(s, 3H), 4.27-4.32 (m, 1H), 4.38(brt, J = 7.2Hz, 2H), 4.43 (s, 2H) , 4.48-4.52 (m, 1H), 6.21(q, J = 6.8Hz, 1H), 6.70(d, J=15.6Hz, 1 H), 7.19(brd, J = 8.4Hz, 1H), 7.23(brs, 1H), 7.47— 7.54 (m, 4H), 7 .59(d, J=15.6Hz, 1H), 7.68(d, J = 8.0Hz, 2H), 7.74 (s, 1H), 7.81 (d , J = 8.4Hz, 4H), 7.84 (s, 1H), 9.06 (s, 1H) .
[0143] 実施例 14
l-((S)-l-r4-(4-ヒドロキシメチルベンゾィル）フエニル Ίェチル } 3— 一「 3 メトキシー4一（4ーメチルー 1H—イミダゾールー 1一ィル）フエ-ル Ί一（E)—メチ リデン 1ピぺリ_ジン 2—オンの合成
[0144] [ィ匕 35]
Figure imgf000087_0001
1一（4 ジエトキシメチルフエニル）エタノールの合成
窒素雰囲気下、 4 （ジエトキシメチル）ベンズアルデヒド（5mL)の THF(50mL) 溶液に、氷浴下、メチルマグネシウムブロミド（0.96M THF溶液， 28mL)をカ卩えた 。その後、反応液を氷浴から外し、 15分間室温で撹拌を続けた。反応液に飽和塩化 アンモ-ゥム水溶液を加え、酢酸ェチルで 2回抽出した。得られた有機層を飽和塩 化ナトリウム水溶液で洗浄後、硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下濃縮した。残渣をシリ 力ゲルクロマトグラフィー (溶出溶媒：ヘプタン 酢酸ェチル系）を用いて精製し、標 題化合物 5.21gを得た。このものの物性値は以下の通りである。
— NMR(DMSO) δ (ppm) :1. 10—1.18 (m, 6H), 1.31 (d, J = 6.4Hz, 3 H), 3.41— 3.58 (m, 4H), 4.66—4.74 (m, 1H), 5. 14(d, J=4.4Hz, 1H ), 5.45 (s, 1H), 7.30— 7.38 (m, 4H) .
[0145] 1一（4ージエトキシメチルフエニル）エタノンの合成 窒素雰囲気下、 1一（4ージエトキシメチルフエ-ル）エタノール（4. 52g)のジクロ口 メタン（lOOmL)溶液に、 4 メチルモルホリンー4ーォキシド（3. 8g)およびテトラプ 口ピルアンモ-ゥム ぺルルテナート（380mg)を順次カ卩え、その反応液を 1時間室 温で撹拌した。反応液に少量の 2—プロピルアルコールをカ卩え、その反応液をしばら く撹拌した。反応液に酢酸ェチルを加え、その混合溶液をセライト濾過し、濾液を減 圧下濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー (溶出溶媒:ヘプタン 酢酸ェチ ル系）を用いて精製し、標題化合物 4. 41gを得た。このものの物性値は以下の通り である。
— NMR (DMSO) δ (ppm) : 1. 10—1. 18 (m, 6H) , 2. 58 (s, 3H) , 3. 42— 3. 60 (m, 4H) , 5. 56 (s, 1H) , 7. 52— 7. 56 (m, 2H) , 7. 94— 7. 98 (m, 2H) 4一（（R)— 1ーヒドロキシェチル）ベンズアルデヒドの合成
窒素雰囲気下、 1一（4ージエトキシメチルフヱ-ル）エタノン（4. 41g)の THF (200 mL)溶液に、氷冷下、（S)— 2—メチル CBS—ォキサザボロリジン（CASNo. 133 261— 83— 3、 1M トルエン溶液、 2. 2mL)およびボラン—THF 複合体（1M T HF溶液， 20mL)を順次加え、その反応液を 5分間撹拌した。反応液に飽和重曹水 と酢酸ェチルを加え、氷浴から外し、有機層を分配した。得られた有機層を飽和重曹 水と飽和塩化ナトリウム水溶液の混合溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧 下濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー (溶出溶媒:ヘプタン 酢酸ェチル 系）を用いて精製し、アルコール体を得た。得られたアルコール体の THF (90mL) 溶液に、水（10mL)および p トルエンスルホン酸一水和物（500mg)を順次加え、 その反応液を室温で 15時間撹拌した。反応液に飽和重曹水を加え、酢酸ェチルで 3回抽出した。得られた有機層を飽和重曹水と飽和塩ィ匕ナトリウム水溶液の混合溶 液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧下濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグ ラフィー (溶出溶媒:ヘプタン—酢酸ェチル系）を用いて精製し、標題化合物 2. 77g を得た。このものの物'性値は以下の通りである。
— NMR (CDCl ) δ (ppm) : 1. 53 (d, J = 6. 8Hz, 3H) , 5. 00 (q, J = 6. 4Hz
3
, 1H) , 7. 52- 7. 58 (m, 2H) , 7. 85— 7. 91 (m, 2H) , 10. 01 (s, 1H) . [0147] 4一「（R) 1一（t一ブチルジメチルシラニルォキシ）ェチル Ίベンズアルデヒドの合成 窒素雰囲気下、 4— ( (R)—1—ヒドロキシェチル）ベンズアルデヒド（2. 27g)の D MF (20mL)溶液に、イミダゾール（1. 6g)および tーブチルジメチルクロロシラン（3. Og)を順次加え、その反応液を 15. 5時間室温で撹拌した。その後、イミダゾール（1 . Og)および t—プチルジメチルクロロシラン（1. 5g)を順次追加し、更に 2時間室温 で撹拌した。反応液に飽和重曹水を加え、酢酸ェチルで 2回抽出した。得られた有 機層を水および飽和塩ィ匕ナトリウム水溶液で順次洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥 後、減圧下濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー (溶出溶媒:ヘプタン 酢 酸ェチル系）を用いて精製し、標題化合物 4. 00gを得た。このものの物性値は以下 の通りである。
— NMR (CDC1 ) δ (ppm) : 0. 00— 0. 08 (m, 6H) , 0. 92 (s, 9H) , 1. 44 (d
3
, J = 6. 4Hz, 3H) , 4. 94 (q, J = 6. 4Hz, 1H) , 7. 51 (d, J = 8. 0Hz, 2H) , 7. 8 6 (d, J = 8. 0Hz, 2H) , 10. 01 (s, 1H) .
[0148] 「4— ( (R)—1—ヒドロキシェチル）フエニル Ί -「4— (テトラヒドロピラン一 2—ィルォ キシメチル)フエ-ル Ίメタノンの合成
窒素雰囲気下、 2— (4 ブロモベンジルォキシ）テトラヒドロピラン（CAS No. 171 00— 68—4、 2. lg)の THF (40mL)溶液に、 78。C下、 sec ブチルリチウム（1. 01M シクロへキサン一へキサン溶液、 9. 2mL)を滴下し、その温度で 30分間撹拌 した。 4 [ (R) 1一（t ブチルジメチルシラ -ルォキシ）ェチル]ベンズアルデヒド（ 2. 0g)の THF (7mL)溶液を反応液に加え、その反応液を— 78°Cで 25分間撹拌し た。反応液に飽和塩ィ匕アンモ-ゥム水溶液を加え、反応容器を冷却浴から外し、そ の混合物を酢酸ェチルで 3回抽出した。得られた有機層を飽和重曹水と飽和塩ィ匕ナ トリウム水溶液の混合溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧下濃縮した。残 渣をシリカゲルクロマトグラフィー (溶出溶媒：ヘプタン 酢酸ェチル系）を用いて精 製することによりアルコール体を得た。窒素雰囲気下、上記の操作で得られたアルコ ール体のジクロロメタン（50mL)溶液に、 4 メチルモルホリンー4ーォキシド（1. 16 g)およびテトラプロピルアンモ-ゥム ぺルルテナート（130mg)を順次カ卩え、その反 応液を室温で 13時間撹拌した。反応液に少量の 2 プロピルアルコールを加え、そ の反応液をしばらく撹拌した。反応液に酢酸ェチルを加え、その溶液をセライト濾過（ 酢酸ェチルで洗净)し、濾液を減圧下濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ 溶出溶媒:ヘプタン 酢酸ェチル系）を用いて精製することにより、ケトン体を得た。 上記の操作で得られたケトン体の THF (30mL)溶液に、テトラプチルアンモ-ゥムフ ルオリド（1M THF溶液、 8mL)を加え、その反応液を室温で 1.5時間撹拌した。反 応液の溶媒を減圧下留去し、残渣をシリカゲルクロマトグラフィー (溶出溶媒:ヘプタ ン一酢酸ェチル系）を用いて精製することにより、標題化合物 2.05gを得た。このも のの物性値は以下の通りである。
— NMR(CDCl) δ (ppm) :1.44— 1.98 (m, 9H), 3.53— 3.62 (m, 1H),
3
3.88-3.98 (m, 1H), 4.60(d, J=12.8Hz, 1H), 4.75(t, J = 3.6Hz, 1H) , 4.88(d, J=12.8Hz, 1H), 5.00(q, J = 6.4Hz, 1H), 7.46— 7.52 (m, 4 H), 7.76-7.82 (m, 4H) .
[0149] N-t-ブチルカルボアルコキシ 4 -トロベンゼンスルホンアミドの合成
4 -トロベンゼンスルホンアミド（10g)のジクロロメタン（lOOmL)溶液に、トリェチ ルァミン（10.4mL)と 4ージメチルァミノピリジン（605mg)およびジー t—ブチル ジ カルボキシレート（13.5g)を順次加え、その反応液を室温で 30分間撹拌した。反応 液に酸性になるまで塩酸（1N 水溶液）を加え、その溶液をジェチルエーテルで 4回 抽出した。得られた有機層を飽和塩ィ匕ナトリウム水溶液で洗浄し、硫酸マグネシウム で乾燥後、減圧下濃縮した。残渣をトリチレーシヨン (使用溶媒: 40%ジェチルエー テル—へキサン溶液)を用いて精製し、標題ィ匕合物 14.62gを得た。このものの物性 値は以下の通りである。
— NMR(CDCl) δ (ppm) :1.41 (s, 9H), 8.21— 8.26 (m, 2H), 8.37—
3
8.42 (m, 2H).
[0150] i(S) 1一「4一（4ーヒドロキシメチルベンゾィル）フエニル Ίェチル }力ルバミン酸 t ブチルエステルの合成
窒素雰囲気下、 [4— ((R)— 1ーヒドロキシェチル)フエ-ル] [4 （テトラヒドロピ ランー2 ィルォキシメチル）フエ-ル]メタノン（1.54g)の THF(20mL)溶液に、ジ クロロメタン（20mL)、 N—t—ブチルカルボアルコキシー4一二トロベンゼンスルホン アミド（2. Og)およびトリフエ-ルホスフィン（2. 4g)を順次カ卩え、反応液を 0°Cに冷却 した。その反応液に、 0°C下、ジイソプロピル ァゾジカルボキシラート（1. 85mL)を 5 分間で滴下し、反応液を室温で 14時間撹拌した。反応液の溶媒を減圧下留去し、 得られた残渣をシリカゲルクロマトグラフィー (溶出溶媒:ヘプタン 酢酸ェチル系）を 用いて精製することにより、スルホンアミド体を得た。上記の操作で得られたスルホン アミド体の DMF (30mL)溶液に、水酸化リチウム一水和物（760mg)およびメルカプ ト酢酸 (600 L)を順次加え、その反応液を 3. 5時間室温で撹拌した。反応液に飽 和重曹水と酢酸ェチルを加え、有機層を分配した。得られた有機層を水、飽和重曹 水および飽和塩ィ匕ナトリウム水溶液で順次洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧 下濃縮することにより、力ルバミン酸エステル体を得た。
上記の操作で得られた力ルバミン酸体のメタノール（50mL)溶液に、（1R)— (―) - 10—カンファースルホン酸（l lOmg)を加え、その反応液を室温で終夜撹拌した。 反応液に飽和重曹水と酢酸ェチルを加え、有機層を分配した。得られた有機層を飽 和塩ィ匕ナトリウム水溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧下濃縮した。残渣を シリカゲルクロマトグラフィー（担体：クロマトレックス NH；溶出溶媒：ヘプタン 酢酸ェ チル系）、シリカゲルクロマトグラフィー（溶出溶媒:ヘプタン 酢酸ェチル系）を用い て精製し、標題化合物 1. 00gを得た。このものの物性値は以下の通りである。
— NMR (CDCl ) δ (ppm) : 1. 30— 1. 51 (m, 12H) , 4. 78—4. 94 (m, 4H)
3
, 7. 38- 7. 44 (m, 2H) , 7. 46— 7. 51 (m, 2H) , 7. 75— 7. 83 (m, 4H) . i (S) 1 i4一「4一（t ブチルフエ二ルシラニルォキシメチル）ベンゾィル Ίフエ二 ル}ェチル }力ルバミン酸 t ブチルエステルの合成
{ (S)— 1 [4一（4ーヒドロキシメチルベンゾィル）フエ-ル]ェチル }力ルバミン酸 t -ブチルエステル（ 1. 00g)の DMF ( 15mL)溶液に、イミダゾール（400mg)および tーブチルジフエ-ルクロロシラン（950 μ L)を順次加え、その反応液を室温で 20時 間撹拌した。反応液に飽和重曹水と酢酸ェチルを加え、有機層を分配した。得られ た有機層を水および飽和塩ィ匕ナトリウム水溶液で順次洗浄し、硫酸マグネシウムで 乾燥後、減圧下濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー (溶出溶媒:ヘプタン —酢酸ェチル系）を用いて精製し、標題化合物 1. 47gを得た。このものの物性値は 以下の通りである。
— NMR (CDCl ) δ (ppm) : 1. 12 (s, 9H) , 1. 36— 1. 62 (m, 12H) , 4. 81
3
-4. 92 (m, 4H) , 7. 36— 7. 48 (m, 10H) , 7. 67— 7. 72 (m, 4H) , 7. 76— 7 . 81 (m, 4H) .
1一 i (S) 1一「4一 （4一ヒドロキシメチルベンゾィル）フエニル Ίェチル }一 3 一「 3 メトキシー4一（4ーメチルー 1H—イミダゾールー 1 ィル）フエニル Ί一（E)—メチ リデン }ピペリジン 2—オンの合成
{ (S)— 1一 {4 [4一 （t一ブチルフエ-ルシラ -ルォキシメチル）ベンゾィル]フエ- ル}ェチル }力ルバミン酸 t ブチルエステル（537mg)のジクロロメタン（12mL)溶 液に、トリフルォロ酢酸 (4mL)を加え、その反応液を室温で 1時間撹拌した。反応液 にクロ口ホルムをカ卩え、氷冷下、水酸化ナトリウム（5N 水溶液， 10mL)と少量の飽 和重曹水を加えた。反応液を室温に戻し、クロ口ホルムで 3回抽出し、得られた有機 層を飽和塩ィ匕ナトリウム水溶液で洗浄した。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥後、減 圧下濃縮した。窒素雰囲気下、上記の操作で得られた残渣の DMF (lOmL)溶液に 、 5 クロ口一 2— { 1— [3—メトキシ一 4— (4—メチル 1 H イミダゾール 1 ィル )フヱ-ル]一（E)—メチリデン }吉草酸 トリフルォロ酢酸塩（500mg)、 N, N ジィ ソプロピルェチルァミン（480 μ L)、 1 ヒドロキシベンゾトリアゾール（245mg)およ び 1—ェチル—3— (3 ジメチルァミノプロピル）カルボジイミド 塩酸塩（350mg)を 加え、その反応液を室温で 4時間撹拌した。反応液に飽和重曹水と酢酸ェチルを加 え、有機層を分配した。得られた有機層を飽和塩ィ匕ナトリウム水溶液で洗浄し、硫酸 マグネシウムで乾燥後、減圧下濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（担体： クロマトレックス NH；溶出溶媒：ヘプタン 酢酸ェチル系）を用いて精製することによ り、シンナミド体を得た。窒素雰囲気下、上記の操作で得られたシンナミド体の DMF (lOmL)溶液に、 0°C下、水素化ナトリウム (40%ミネラルオイル含有， 43mg)をカロえ 、その反応液を 30分間撹拌した。反応液に飽和塩ィ匕アンモ-ゥム水溶液とクロロホ ルムを加え、有機層を分配した。得られた有機層を飽和塩ィ匕ナトリウム水溶液で洗浄 し、硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧下濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィ 一（担体：クロマトレックス NH；溶出溶媒：ヘプタン 酢酸ェチル系）を用いて精製す ることにより、力ルバミン酸エステル体を得た。上記の操作で得られた力ルバミン酸ェ ステル体の THF(lOmL)溶液に、テトラプチルアンモ -ゥムフルオリド（1M THF溶 液， 850 L)を加え、その反応液を室温で 10時間撹拌した。反応液を直接シリカゲ ルクロマトグラフィー（担体：クロマトレックス NH；溶出溶媒：ヘプタン 酢酸ェチル THF系）を用いて精製し、標題ィ匕合物 386mgを得た。このものの物性値は以下の通 りである。
ESI— MS;m/z536[M++H], 558[M++Na]. NMR(CDC1 ) δ (ppm)
3
:1.56-1.93 (m, 5H), 2.32(s, 3H), 2.70— 2.92 (m, 2H), 2.94— 3.04 (m, 1H), 3.25-3.36 (m, 1H), 3.87(s, 3H), 4.82(s, 2H), 6.31(q, J = 6.8Hz, 1H), 6.92-7.08 (m, 3H), 7.24— 7.30 (m, 1H), 7.43— 7.53( m, 4H), 7.75-7.84 (m, 5H), 7.89— 7.93 (m, 1H) .
[0153] 実施例 15
(4一 {4一 {(S) 1一 ί3 il一「3 メトキシー 4一（4一メチル一 1 H イミダゾール 1 ィル）フエニル Ί一（E)—メチリデン } 2—ォキソピペリジン 1ーィル }ェチル } ベンゾィル }_ベンジル }力ルバミン酸 t -ブチルエステルの合成
[0154] [化 36]
Figure imgf000093_0001
N-(4-(4-((S)-l-(3-(l-「3 メトキシー4一（4ーメチノレー 1H—イミダゾ 一ルー 1 ィル）フエニル Ί一（E)—メチリデン } 2—才キソピペリジン 1ーィル }ェ チル }ベンゾィル }ベンジル}ホルムアミドの合成
窒素雰囲気下、 1 { (S)— 1 [4一（4ーヒドロキシメチルベンゾィル）フ ニル]ェ チル }ー3—{1 [3—メトキシー4ー（4ーメチル 1 H イミダゾール 1 ィル）フェ -ル]一（E)—メチリデン }ピペリジンー2—ォン（531118)のジクロロメタン（5111 溶液 に、 0°C下、トリェチルァミン (45 μ L)とメタンスルホユルクロリド（18 μ L)を順次加え 、その反応液を 25分間撹拌した。反応液に飽和塩ィ匕アンモ-ゥム水溶液を加え、反 応容器を氷浴から外した後、クロ口ホルムを加え、有機層を分配した。得られた有機 層を硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧下濃縮することにより、メシル体を得た。窒素 雰囲気下、上記の操作で得られたメシル体の DMF(3mL)溶液に、ジホルムイミド ナトリウム塩（35mg)を加え、その反応液を室温で 20時間撹拌した。反応液に飽和 重曹水とクロ口ホルムを加え、有機層を分配した。得られた有機層を飽和塩化ナトリウ ム水溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧下濃縮した。残渣をメタノール (5mL)に溶解させ、室温で 1時間撹拌した。反応液の溶媒を減圧留去し、得られた 残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（担体：クロマトレックス NH；溶出溶媒： THF)を用 いて精製し、標題ィ匕合物 50mgを得た。このものの物性値は以下の通りである。
ESI— MS;m/z563[M++H], 585[M++Na]. NMR(CDC1 ) δ (ppm)
3
:1.50-1.92 (m, 5H), 2.30 (s, 3H), 2.72— 2.92 (m, 2H), 2.94— 3.04 (m, 1H), 3.26-3.36 (m, 1H), 3.86 (s, 3H), 4.52—4.63 (m, 2H), 5.9 2(brs, 1H), 6.31(q, J = 7.2Hz, 1H), 6.92— 7.08 (m, 4H), 7.38— 7.50 (m, 4H), 7.70-7.84 (m, 5H), 7.89— 7.93 (m, 1H), 8.35 (s, 1H). i4 i4 i(S)— 1 i3— il 3 メトキシー 4 4 メチル 1 H イミダゾール 1 ィル）フエニル Ί一（E)—メチリデン } 2—ォキソピペリジン 1ーィル }ェチル } ベンゾィル 1ベンジル 1力ルバミン酸 t ブチルエステルの合成
N- {4- {4 { (S) 1 {3— {1 [3—メトキシー 4一（4ーメチルー 1H イミダゾ 一ルー 1—ィル）フエ-ル] - (E)—メチリデン }— 2—ォキソピペリジン一 1—ィル }ェ チル }ベンゾィル }ベンジル }ホルムアミド（8mg)のァセトニトリル（0.5mL)溶液に、ト リエチルァミン（6 、 4ージメチルァミノピリジン（2mg)およびジー t—ブチル ジカ ルポキシレート（5mg)を順次加え、その反応液を室温で 1.5時間撹拌した。その後 、ジ— t—ブチル ジカルボキシレート（10mg)を追カ卩し、反応液を室温で 16時間撹 拌した。反応液に水と酢酸ェチルを加え、有機層を分配した。得られた有機層を飽 和塩ィ匕ナトリウム水溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧下濃縮した。得 られた残渣のメタノール (4mL)溶液に、炭酸カリウム（25mg)をカ卩え、その反応液を 室温で 30分間撹拌した。反応液に水と酢酸ェチルを加え、有機層を分配した。得ら れた有機層を水、飽和塩化ナトリウム水溶液で順次洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥 後、減圧下濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（担体:クロマトレックス NH; 展開溶媒:ヘプタン—酢酸ェチル系）を用いて精製し、標題化合物 2.5mgを得た。 このものの物'性値は以下の通りである。
ESI-MS;m/z635[M++H], 657[M++Na]. — NMR(CDC1 ) δ (ppm)
3
:1.48 (s, 9H), 1.54-1.92 (m, 5H), 2.30 (s, 3H), 2.71— 2.93 (m, 2H) , 2.93-3.04 (m, 1H), 3.25— 3.36 (m, 1H), 3.86 (s, 3H), 4.41(d, J = 5.6Hz, 2H), 4.96 (brs, 1H), 6.31(q, J = 7.2Hz, 1H), 6.91— 7.29 (m, 4H), 7.36-7.50 (m, 4H), 7.68— 7.82 (m, 5H), 7.89— 7.93 (m, 1H) .
[0156] 実施例 16
1 i(S) 1一「4一（4 アミノメチルベンゾィル）フ ニル Ίェチル 1 3 ί 1一「3— メトキシー4一（4ーメチルー 1H—イミダゾールー 1 ィル）フエニル Ί一（Ε)—メチリデ ン 1ピぺリジン 2—オン 二トリフルォロ酢酸塩の合成
[0157] [化 37]
Figure imgf000095_0001
{4- {4 { (S) 1 {3— {1 [3—メトキシー 4一（4ーメチルー 1H イミダゾール — 1—ィル）フエ-ル] (Ε) メチリデン }— 2—ォキソピペリジン— 1—ィル }ェチル } ベンゾィル }ベンジル }力ルバミン酸 t—ブチルエステル（12mg)のジクロロメタン（3 mL)溶液に、トリフルォロ酢酸（lmL)をカ卩え、その反応液を室温で 1.5時間撹拌し た。反応液に少量のクロ口ホルムとトルエン（9mL)を加え、減圧下溶媒を留去した。 得られた残渣を LC— MSで精製することにより、標題ィ匕合物 10.6mgを得た。このも のの物性値は以下の通りである。
ESI-MS;m/z535[M++H], 259.5[1/2M+—NH +H]. 'H-NMRCCD
2
OD) δ (ppm) :1.67(d, J = 7.2Hz, 3H), 1.70—1.83 (m, 1H), 1.83— 1.
3
93 (m, 1H), 2.43 (s, 3H), 2.77— 2.94 (m, 2H), 3.04— 3. 14 (m, 1H), 3 .39-3.50 (m, 1H), 3.95 (s, 3H), 4.23 (s, 2H), 6.15(q, J = 7.2Hz, 1H ), 7.18-7.26 (m, 1H), 7.29— 7.34 (m, 1H), 7.48— 7.66 (m, 6H), 7. 74-7.88 (m, 5H), 9.12— 9.18 (m, 1H) .
[0158] 実施例 17
{4 {4 {(S)— 1一（3— 一「3 メトキシー 4一（4ーメチルー 1H イミダゾール 1 ィル）フエニル Ί E)—メチリデン } 2—才キソピペリジン 1ーィル }ェチル } ベンゾィル }ベンジル }メチルカルバミン酸 t ブチルエステルの合成
[0159] [化 38]
Figure imgf000096_0001
{4- {4 { (S) 1 {3— {1 [3—メトキシー 4 4ーメチルー 1H イミダゾール — 1—ィル）フエ-ル] (E) メチリデン }— 2—ォキソピペリジン— 1—ィル }ェチル } ベンゾィル }ベンジル }力ルバミン酸 t—ブチルエステル（llmg)の DMF(1.5mL) 溶液に、ヨウ化メチル（6 L)をカ卩え、氷冷下、その反応液に水素化ナトリウム (40% ミネラルオイル含有、 lmg)を加えた。反応液を 20分間撹拌した後、反応液に少量の 水素化ナトリウム (40%ミネラルオイル含有)を追加し、反応液を 45分撹拌した。さら に、反応液にヨウ化メチル（10 L)を追加し、その反応液を 40分間撹拌した。反応 液に飽和塩ィ匕アンモ-ゥム水溶液とクロ口ホルムを加え、有機層を分配した。得られ た有機層を飽和塩ィ匕ナトリウム水溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧下 濃縮した。得られた残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（担体：クロマトレックス NH；展 開溶媒:ヘプタン—酢酸ェチル系）を用いて精製し、標題化合物 7.8mgを得た。こ のものの物'性値は以下の通りである。
ESI - MS;m/z649[M+ + H], 671[M++Na].
— NMR(CDCl) δ (ppm) :1.39— 1.57 (m, 9H), 1.57—1.97 (m, 5H),
3
2.31 (s, 3H), 2.70-3.05 (m, 6H), 3.23— 3.38 (m, 1H), 3.87(s, 3H) , 4.45-4.57 (m, 2H), 6.27— 6.36 (m, 1H), 6.90— 7.09 (m, 3H), 7.2 3-7.29 (m, 1H), 7.29— 7.38 (m, 2H), 7.43-7.52 (m, 2H), 7.68— 7 .83 (m, 5H), 7.89— 7.93 (m, 1H) .
[0160] 実施例 18
3 一「3 メトキシ 4一（4 メチル 1H—イミダゾール 1 ィル）フエニル Ί (E)ーメチリデン } 1 i(S)— 1一「4一（4ーメチルァミノメチルベンゾィル）フエニル Ίェチル }ピぺリジン 2—オン 二トリフルォロ酢酸塩の合成
[0161] [化 39]
Figure imgf000097_0001
実施例 16と同様の方法により、 4 {4 { (S)— 1 {3— { 1 [3—メトキシー4一 ( 4ーメチルー 1H—イミダゾールー 1 ィル）フエ-ル]一（E)—メチリデン } 2—ォキ ソピペリジン 1ーィル }ェチル }ベンゾィル }ベンジル }メチルカルバミン酸 tーブチ ルエステル（8mg)から、標題ィ匕合物 10.5mgを得た。このものの物性値は以下の通 りである。
ESI-MS;m/z275[l/2M++H], 549[Μ++Η]. Η— NMR(CD OD) δ (p
3 pm) :1.67(d, J = 7.2Hz, 3H), 1.70—1.83 (m, 1H), 1.83— 1.96 (m, 1H ), 2.43 (s, 3H), 2.77(s, 3H), 2.80— 2.96 (m, 2H), 3.04— 3. 15 (m, 1 H), 3.40-3.50 (m, 1H), 3.95 (s, 3H), 4.30 (s, 2H), 6.15(q, J = 7.2H z, 1H), 7.07-7.35 (m, 2H), 7.50— 7.67 (m, 6H), 7.78— 7.91 (m, 5H ), 9.10-9.19 (m, 1H) .
[0162] 実施例 19
1 ί (S)— 1一「4一（4 アジドメチルベンゾィル）フエニル Ίェチル 1 3 ί 1一「3 ーメトキシー4一（4ーメチルー 1H—イミダゾールー 1 ィル）フエニル Ί一（Ε)—メチリ デン } ぺ Uジン 2—オンの合成
[0163] [化 40]
Figure imgf000098_0001
i (S) 1一「4一（4一アジドメチルベンゾィル）フエニル Ίェチル }力ルバミン酸 tーブ チルエステルの合成
窒素雰囲気下、 { (S)— 1 [4一（4ーヒドロキシメチルベンゾィル）フ ニル]ェチル }力ルバミン酸 t—ブチルエステル（255mg)とトリエチルァミン（200 /z L)のジクロ口 メタン（7mL)溶液に、 0°C下、メタンスルホユルクロリド（85 L)をカ卩え、その反応液 を 20分間撹拌した。反応液に、飽和塩ィ匕アンモ-ゥム水溶液とクロ口ホルムをカロえ、 有機層を分配した。得られた有機層を飽和塩ィ匕ナトリウム水溶液で洗浄し、硫酸マグ ネシゥムで乾燥後、減圧下濃縮した。窒素雰囲気下、上記の操作で得られた残渣の DMF (7mL)溶液に、アジ化ナトリウム（lOOmg)をカ卩え、その反応液を室温で 3. 5 時間撹拌した。反応液に飽和重曹水と酢酸ェチルを加え、有機層を分配した。得ら れた有機層を水および飽和塩ィ匕ナトリウム水溶液で順次洗浄し、硫酸マグネシウム で乾燥後、減圧下濃縮した。得られた残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（担体:クロ マトレックス NH ;溶出溶媒:ヘプタン—酢酸ェチル系）を用いて精製し、標題ィ匕合物 273mgを得た。このものの物性値は以下の通りである。
— NMR (CDCl 3) δ (ppm) : 1. 30— 1. 52 (m, 12H) , 4. 46 (s, 2H) , 4. 76
—4. 96 (m, 2H) , 7. 39— 7. 46 (m, 4H) , 7. 75— 7. 84 (m, 4H) .
1 i (S) 1一「4一（4 アジドメチルベンゾィル）フエニル Ίェチル } 3 一「3 ーメトキシー4一（4ーメチルー 1H—イミダゾールー 1 ィル）フエニル Ί一（E)—メチリ デン }ピぺリジン 2—オンの合成
{ (S)— 1 [4一（4 アジドメチルベンゾィル）フエ-ル]ェチル }力ルバミン酸 tーブ チルエステル（273mg)のジクロロメタン（4. 5mL)溶液に、トリフルォロ酢酸（1. 5m L)を加え、その反応液を室温で 1時間撹拌した。反応液にクロ口ホルム、水酸化ナト リウム（5N 水溶液， 6mL)および少量の飽和重曹水を加え、有機層を分配した。得 られた有機層を飽和塩ィ匕ナトリゥム水溶液で洗浄し、有機層を硫酸マグネシウムで乾 燥後、減圧下濃縮した。窒素雰囲気下、上記の操作で得られた残渣の DMF (6mL) 溶液に、 5 クロ口一 2— { 1— [3—メトキシ一 4— (4—メチル 1H—イミダゾールー 1 ィル）フ -ル]一（E)—メチリデン }吉草酸 トリフルォロ酢酸塩（330mg)、 N, N —ジイソプロピルェチルァミン（310 μ L)、 1 ヒドロキシベンゾトリアゾール（160mg) および 1ーェチルー 3—（3 ジメチルァミノプロピル）カルボジイミド 塩酸塩（230m g)を加え、その反応液を室温で 4時間撹拌した。反応液に飽和重曹水と酢酸ェチル を加え、有機層を分配した。得られた有機層を飽和塩ィ匕ナトリウム水溶液で洗浄し、 硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧下濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ 溶出溶媒:ヘプタン—酢酸ェチル系）を用いて精製した。これ以上精製することなく 次の反応に用いた。
窒素雰囲気下、上記の操作で得られた残渣全量を DMF (5mL)に溶解させ、反応 容器を氷浴を用いて冷却した。その反応液に水素化ナトリウム (40%ミネラルオイル 含有， 30mg)をカ卩え、 30分間撹拌した。反応液に飽和塩ィ匕アンモ-ゥム水溶液をカロ え、反応容器を氷浴から外し、クロ口ホルムで 4回抽出した。得られた有機層を硫酸マ グネシゥムで乾燥し、濾過後、減圧下濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ 担体：クロマトレックス NH；溶出溶媒：クロ口ホルム メタノール系）、シリカゲルクロマ トグラフィー（溶出溶媒:クロ口ホルム一メタノール系）およびシリカゲルクロマトグラフィ 一（担体：クロマトレックス NH；溶出溶媒：ヘプタン— THF系）を用いて精製し、標題 化合物の精製物 160mgを得た。このものの物性値は以下の通りである。
ESI— MS ;m/z561 [M+ +H] , 583 [M+ +Na] . NMR(CDC1 ) δ (ppm)
3
: 1. 52—1. 94 (m, 5H) , 2. 30 (s, 3H) , 2. 70— 2. 94 (m, 2H) , 2. 94— 3. 05 (m, 1H) , 3. 26— 3. 38 (m, 1H) , 3. 86 (s, 3H) , 4. 46 (s, 2H) , 6. 32 (q, J = 7. 2Hz, 1H) , 6. 91— 7. 09 (m, 3H) , 7. 22— 7. 32 (m, 1H) , 7. 40— 7. 54 ( m, 4H) , 7. 69— 7. 86 (m, 5H) , 7. 88— 7. 95 (m, 1H) .
実施例 20
4一 ί4一 i (S)— 1一 ί3— 一「3 メトキシー 4一（4ーメチルー 1H イミダゾールー 1 ィル）フエニル Ί (E)—メチリデン } 2—才キソピペリジン 1ーィル }ェチル }ベ ンゾィル}安息香酸 メチルエステル トリフルォロ酢酸塩の合成 [化 41]
Figure imgf000100_0001
4一「4一（（S) 1一 t一ブチルォキシカルボニルアミノエチル）ベンゾィル Ί安息呑酸 メチルエステルの合成
窒素雰囲気下、 { (S)— 1 [4一（4ーヒドロキシメチルベンゾィル）フ ニル]ェチル }力ルバミン酸 t ブチルエステル（167mg)のジクロロメタン（5mL)溶液に、 4ーメ チルモルホリン— 4—ォキシド（85mg)およびテトラプロピルアンモ-ゥム ペルルテ ナート（10mg)を順次加え、その反応液を 2. 5時間室温で撹拌した。反応液に少量 の 2—プロピルアルコールをカ卩え、しばらく撹拌後、酢酸ェチルをカ卩え、セライト濾過（ 酢酸ェチルで洗净)し、濾液を減圧下濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ 溶出溶媒:ヘプタン 酢酸ェチル系）を用いて精製することにより、アルデヒド体を得 た。上記の操作により得たアルデヒド体のアセトン（5mL)溶液に、水（3mL)、 2—メ チルー 2 ブテン（400 L)、リン酸二水素ナトリウム 二水和物（55mg)および亜塩 素酸ナトリウム（70mg)を順次加え、その反応液を室温で 1. 5時間撹拌した。その後 、リン酸二水素ナトリウム 二水和物（30mg)および亜塩素酸ナトリウム（35mg)を順 次追加し、その反応液を更に室温で 11. 5時間撹拌した。反応液に飽和塩ィ匕アンモ -ゥム水溶液とクロ口ホルムを加え、有機層を分配した。得られた有機層を塩酸（2N 水溶液）と飽和塩化ナトリウム水溶液の混合溶液で順次洗浄し、硫酸ナトリウムで乾 燥後、減圧下濃縮した。上記の操作により得た残渣のメタノール (4mL)溶液に、トリ メチルシリルジァゾメタン（2M へキサン溶液， 500 μ L)を加え、その反応液を室温 で撹拌した。 TLCで原料の消失を確認するまで、反応液にトリメチルシリルジァゾメタ ン（2Μ へキサン溶液）を追カ卩した（500 L, lmLで計 1. 5mL追カ卩した)。反応液 に少量の酢酸を加え、反応液が黄色溶液力 透明になるのを確認した後、飽和重曹 水と酢酸ェチルを加え、有機層を分配した。得られた有機層を飽和重曹水と飽和塩 化ナトリウム水溶液の混合溶液で順次洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧下 濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー (溶出溶媒:ヘプタン 酢酸ェチル系） を用いて精製し、標題ィ匕合物 118mgを得た。このものの物性値は以下の通りである — NMR(CDCl) δ (ppm) :1.34— 1.52 (m, 12H), 3.97(s, 3H), 4.74
3
—4.97 (m, 2H), 7.78— 7.46 (m, 2H), 7.75— 7.87 (m, 4H), 8.12— 8. 17(m, 2H).
[0167] 4 i4—i(S)—l— i3— ー「3 メトキシー4ー（4ーメチルー111ーィミダゾールー 1 ィル）フエニル Ί (E)—メチリデン } 2—才キソピペリジン 1ーィル }ェチル }ベ ンゾィル 1安息呑酸 メチルエステルの合成
実施例 19と同様の方法により、 4 [4— ((S) 1 t—ブチルォキシカルボ-ルァ ミノエチル）ベンゾィル]安息香酸 メチルエステル（118mg)から、標題化合物 146 mgを得た。このものの物性値は以下の通りである。
— NMR(CDCl) δ (ppm) :1.50— 1.94 (m, 5H), 2.38 (s, 3H), 2.69—
3
2.90 (m, 2H), 2.97— 3.05 (m, 1H), 3.28— 3.37 (m, 1H), 3.88 (s, 3H) , 3.97(s, 3H), 6.31(q, J = 7.2Hz, 1H) , 6.94— 7.11 (m, 4H), 7.44— 7 .53 (m, 2H), 7.76— 7.88 (m, 4H), 7.88— 8.06 (m, 2H), 8.11— 8.19( m, 2H) .
[0168] 4 i4 i(S)— 1 i3— il 3 メトキシー 4 4 メチル 1H イミダゾール 1 ィル）フエニル Ί (E)—メチリデン } 2—才キソピペリジン 1ーィル }ェチル }ベ ンゾィル}安息香酸 メチルエステル トリフルォロ酢酸塩の合成
4—{4—{(S)—l— {3—{l— [3—メトキシー4一（4ーメチルー 1H—イミダゾール — 1—ィル）フエ-ル] (E) メチリデン }— 2—ォキソピペリジン— 1—ィル }ェチル } ベンゾィル }安息香酸 メチルエステル（9mg)を LC— MSで精製することにより、標 題化合物 5.7mgを得た。このものの物性値は以下の通りである。
ESI - MS;m/z564[M++H].
[0169] 実施例 21
4— i4— S)_ 1—丄3 丄 1— 3—メトキシ 4— (4—メチル 1H—イミグゾール— 1 ィル）フエニル Ί (E)—メチリデン } 2—才キソピペリジン 1ーィル }ェチル }ベ ンゾィル 息 #酸 トリフルォロ i¾酸塩の合成
[0170] [化 42]
Figure imgf000102_0001
4-{4-{(S)-l-{3-{l- [3—メトキシー4一（4ーメチルー 1H—イミダゾール — 1—ィル）フエ-ル] (E) メチリデン }— 2—ォキソピペリジン— 1—ィル }ェチル } ベンゾィル }安息香酸 メチルエステル（1 lmg)の THF (2mL)溶液に、水酸化ナトリ ゥム（1N 水溶液， 100 L)をカ卩え、その反応液を室温で 26時間撹拌した。その後 、反応液にメタノール (0.5mL)を加え、その反応液を室温で 24時間撹拌した。反応 液の溶媒を減圧下留去し、得られた残渣のメタノール（2mL)溶液に、水酸化ナトリウ ム（1N 水溶液， 100 L)をカ卩え、その反応液を室温で 66時間撹拌した。反応液に トリフルォロ酢酸（16 を加え、その溶液を LC— MSで精製することにより、標題 化合物 8.2mgを得た。このものの物性値は以下の通りである。
ESI - MS;m/z550[M++H].
[0171] 実施例 22
5-((3aR.6S.6aS)—2—ォキソへキサヒドロチェノ「3.4— d，イミダゾールー 6— ィル)吉苣酸 4 ί4 i(S) 1 ί3— 一「3 メトキシー 4一（4ーメチルー 1H— イミダゾールー 1 ィル）フエニル Ί Ε)—メチリデン } 2—才キソピペリジン 1 ィル }ェチル }ベンゾィル }ベンジルアミド トリフルォロ酢酸塩の合成
[0172] [化 43]
Figure imgf000102_0002
l-((S)-l-r4-(4-ヒドロキシメチルベンゾィル）フエニル Ίェチル } 3— 一「 3 メトキシー4一（4ーメチルー 1H—イミダゾールー 1 ィル）フエニル Ί一（E)—メチ リデン }ピペリジン 2—オンの合成
実施例 14と同様の方法により得られた 1 { (S)— 1 [4 4ーヒドロキシメチルべ ンゾィル）フエ-ル]ェチル } 3— {1— [3—メトキシ— 4— (4—メチル 1 H イミダ ゾールー 1一ィル）フエ-ル]一（E)—メチリデン }ピペリジンー2—ォン（2401118)をダ イセル製 CHIRALPAK™ IA (2cm X 25cm：移動相；エタノール）にて分取し、保 持時間 27分の標題ィ匕合物の光学活性体 194mgを得た。このものの物性値は以下 の通りである。
ESI— MS;m/z536[M++H], 558[M++Na]. NMR(CDC1 ) δ (ppm)
3
:1. 56— 1. 93 (m, 5H), 2. 32(s, 3H), 2. 70— 2. 92 (m, 2H), 2. 94— 3.04
(m, 1H), 3. 25— 3. 36 (m, 1H), 3.87(s, 3H), 4.82(s, 2H), 6. 31(q, J =
6. 8Hz, 1H), 6. 92-7.08 (m, 3H), 7. 24— 7. 30 (m, 1H), 7.43— 7. 53( m, 4H), 7. 75-7.84 (m, 5H), 7.89— 7. 93 (m, 1H) .
5-((3aR. 6S.6aS)—2—ォキソへキサヒドロチエノ「3.4— dlイミダゾール一 6— ィル)古苣酴 ι— 「3ーメトキシー 4 （4ーメチルー 1H イミダゾールー 1 ィル）フエ-ル Ί E)—メチリデン 1—2—ォキソピペリジン 1 ィル }ェチル }ベンゾィル }ベンジルアミド トリフルォロ酢酸塩の合成
実施例 15と同様の方法により、 1— {(S)— 1— [4— (4 ヒドロキシメチルベンゾィ ル）フエ-ル]ェチル }ー3—{1 [3—メトキシー4ー（4ーメチル 1 H イミダゾール 1 ィル）フエ-ル]一（E)—メチリデン }ピペリジン 2—オンの光学活性体（100 mg)から {4 {4 {(S) 1 {3— {1 [3—メトキシー 4一（4ーメチルー 1H イミ ダゾールー 1 ィル）フエ-ル] E)—メチリデン } 2—才キソピペリジン 1ーィル }ェチル }ベンゾィル }ベンジル }力ルバミン酸 t ブチルエステルの粗生成物 6 lmg を得た。上記の操作によって得られた {4 {4- { (S)—1 {3— {1 [3—メトキシ -4- (4ーメチルー 1H—イミダゾールー 1 ィル）フエ-ル]一（E)—メチリデン }ー2 —ォキソピペリジン— 1—ィル }ェチル }ベンゾィル }ベンジル }力ルバミン酸 t—ブチ ルエステルの粗生成物 5mgのジクロロメタン（3mL)溶液に、トリフルォロ酢酸（lmL) を加え、その反応液を室温で 1時間撹拌した。反応液に少量のクロ口ホルムとトルェ ン（5mL)をカ卩え、減圧下濃縮した。得られた残渣の DMF (1. 5mL)溶液に、 N ヒ ドロキシスクシイミドビォチン（lOmg)およびトリェチルァミン（10 μ L)を順次カロえ、室 温で 10時間撹拌した。反応液を濾過後、濾液を LC MSで精製することにより、標 題化合物 4. 8mgを得た。このものの物性値は以下の通りである。
ESI - MS ;m/z381 [l/2M+ +H] .
[0174] 実施例 23
6—「5—（（3aR. 6S. 6aS)— 2 ォキソへキサヒドロチェノ「3. 4— dlイミダゾール 6 ィル)ペンタノィルァミノ Ί吉苣酸 4 ί4 i (S)— 1 ί3— 一「3 メトキシ -4- (4ーメチルー 1H—イミダゾールー 1一ィル）フエニル Ί一（Ε)—メチリデン }ー2 ーォキソピペリジン 1ーィル }ェチル }ベンゾィル }ベンジルアミド トリフルォロ酢酸 の^^
[0175] [化 44]
Figure imgf000104_0001
実施例 15と同様の方法により、 1— { (S)— 1— [4— (4 ヒドロキシメチルベンゾィ ル）フエ-ル]ェチル }ー3—{ 1 [3—メトキシー4ー（4ーメチル 1 Η イミダゾール 一 1一ィル）フエ-ル]一（Ε)—メチリデン }ピペリジン一 2—オンの光学活性体（100 mg)から {4 {4 { (S) 1 {3— { 1 [3—メトキシー 4一（4ーメチルー 1H イミ ダゾールー 1 ィル）フエ-ル]一（E)—メチリデン } 2—才キソピペリジン 1ーィル }ェチル }ベンゾィル }ベンジル }力ルバミン酸 t ブチルエステルの粗精製物 6 lmg を得た。上記の操作によって得られた {4 {4 { (S)—1 {3— { 1 [3—メトキシ -4- (4ーメチルー 1H—イミダゾールー 1一ィル）フエ-ル]一（E)—メチリデン }ー2 —ォキソピペリジン— 1—ィル }ェチル }ベンゾィル }ベンジル }力ルバミン酸 t—ブチ ルエステルの粗精製物（7mg)のジクロロメタン（3mL)溶液に、トリフルォロ酢酸（lm L)をカ卩え、その反応液を室温で 1時間撹拌した。反応液に少量のクロ口ホルムとトル ェン（5mL)をカ卩え、減圧下溶媒を留去した。得られた残渣の DMF (1. 5mL)溶液 に、 PIERCE製 NHS— LC— BIOTIN ( 15mg)およびトリェチルァミン（ 15 L)を順 次加え、その反応液を室温で 1時間撹拌した。反応液を濾過後、濾液を LC MSで 精製することにより、標題化合物 7. 7mgを得た。このものの物性値は以下の通りであ る。
ESI - MS ;m/z438 [l/2M+ +H] .
[0176] 実施例 24
5- ( (3aR. 6S. 6aS)—2—ォキソへキサヒドロチエノ「3. 4— dlイミダゾール一 6— ィル)古苣酴 ί4 ί4 US) ί ί3 Π 「3 メトキシー 4 4ーメチルー 1 H イミダゾールー 1 ィル）フエ-ル Ί一（E)—メチリデン 1—2—ォキソピペリジン 1 ーィル }ェチル }ベンゾィル }ベンジル }メチルアミド トリフルォロ酢酸塩の合成
[0177] [化 45]
Figure imgf000105_0001
実施例 15と同様の方法により、 1— { (S)— 1— [4— (4 ヒドロキシメチルベンゾィ ル）フエ-ル]ェチル } 3— { 1— [3—メトキシ— 4— (4—メチルイ 1 H ミダゾール 1 ィル）フエ-ル] E)—メチリデン }ピペリジン 2—オンの光学活性体（100 mg)から {4 {4 { (S) 1 {3— { 1 [3—メトキシー 4一（4ーメチルー 1H イミ ダゾールー 1 ィル）フエ-ル]一（E)—メチリデン } 2—才キソピペリジン 1ーィル }ェチル }ベンゾィル }ベンジル }力ルバミン酸 t ブチルエステルの粗生成物 6 lmg を得た。上記の操作によって得られた {4 {4 { (S)—1 {3— { 1 [3—メトキシ -4- (4ーメチルー 1H—イミダゾールー 1一ィル）フエ-ル]一（E)—メチリデン }ー2 —ォキソピペリジン— 1—ィル }ェチル }ベンゾィル }ベンジル }力ルバミン酸 t—ブチ ルエステルの粗生成物（50mg)から、実施例 17と同様の方法により、 4- {4- { (S) — 1— {3— { 1— [3—メトキシ— 4— (4—メチルー 1H—イミダゾールー 1—ィル）フエ -ル]一（E)—メチリデン } 2—才キソピペリジン 1ーィル }ェチル }ベンゾィル }ベ ンジル }メチルカルバミン酸 t ブチルエステルの粗精製物 47mgを得た。上記の操 作によって得られた 4 {4 { (S) 1 {3— { 1 [3—メトキシー4一（4ーメチルー 1H—イミダゾールー 1 ィル）フエ-ル]一（E)—メチリデン } 2—才キソピペリジン 1 ィル }ェチル }ベンゾィル }ベンジル }メチルカルバミン酸 t ブチルエステル の粗精製物（1 lmg)のジクロロメタン (3mL)溶液に、トリフルォロ酢酸（lmL)を加え 、その反応液を室温で 1. 5時間撹拌した。反応液に少量のクロ口ホルムとトルエン（5 mL)をカ卩え、減圧下溶媒を留去した。得られた残渣の DMF (2mL)溶液に、 N—ヒド ロキシスクシイミドビォチン（20mg)およびトリェチルァミン（25 μ L)を順次加え、その 反応液を室温で 1時間撹拌した。さらに、反応液にトリェチルァミン（25 L)を加え、 反応液を室温で 12. 5時間撹拌した。反応液を濾過後、濾液を LC MSで精製する ことにより、標題化合物 8. 7mgを得た。このものの物性値は以下の通りである。
ESI— MS ;m/z388 [l/2M+ +H] .
[0178] 実施例 25 6 ィル)ペンタノィルァミノ 1吉苣酸 ί4· - i4- i (S) - 1— ί3— ί ΐ—「3 メトキシ （4ーメチルー iH—イミダゾールー 1 —ィル）フエ:ニル Ί (Ε)—メチリデン }— 2 ーォキソピペリジン 1ーィル }ェチル }ベンハノイル}ベンジル }メチルアミド トリフルォ 口酢酸塩の合成
[0179] [化 46]
Figure imgf000106_0001
実施例 15と同様の方法により、 1 { (S)— 1 [4 4ーヒドロキシメチルベンゾィ ル）フエ-ル]ェチル }ー3—{ 1 [3—メトキシー4ー（4ーメチル 1 H イミダゾール 1 ィル）フエ-ル]一（E)—メチリデン }ピペリジン 2—オンの光学活性体（100 mg)から {4 {4 { (S) 1 {3— { 1 [3—メトキシー 4一（4ーメチルー 1H イミ ダゾールー 1 ィル）フエ-ル]一（E)—メチリデン } 2—才キソピペリジン 1ーィル }ェチル }ベンゾィル }ベンジル }力ルバミン酸 t ブチルエステルの粗精製物 6 lmg を得た。上記の操作によって得られた {4 {4 { (S)—1 {3— { 1 [3—メトキシ -4- (4ーメチルー 1H—イミダゾールー 1 ィル）フエ-ル]一（E)—メチリデン }ー2 —ォキソピペリジン— 1—ィル }ェチル }ベンゾィル }ベンジル }力ルバミン酸 t—ブチ ルエステルの粗精製物（50mg)から、実施例 17と同様の方法により、 4— {4— { (S) — 1— {3— { 1— [3—メトキシ— 4— (4—メチルー 1H—イミダゾールー 1—ィル）フエ -ル]一（E)—メチリデン }一 2—才キソピペリジン一 1ーィル }ェチル }ベンゾィル }ベ ンジル }メチルカルバミン酸 t ブチルエステルの粗精製物 47mgを得た。上記の操 作によって得られた 4 {4 { (S) 1 {3— { 1 [3—メトキシー4一（4ーメチルー 1H—イミダゾールー 1一ィル）フエ-ル]一（E)—メチリデン }一 2—才キソピペリジン 1 ィル }ェチル }ベンゾィル }ベンジル }メチルカルバミン酸 t ブチルエステル の粗精製物（12mg)のジクロロメタン（3mL)溶液に、トリフルォロ酢酸（lmL)を加え 、その反応液を室温で 1時間撹拌した。反応液に少量のクロ口ホルムとトルエン（5m L)をカ卩え、減圧下溶媒を留去した。得られた残渣の DMF (2mL)溶液に、 PIERCE 製 NHS— LC— BIOTIN (26mg)およびトリェチルァミン（100 /z L)を順次加え、そ の反応液を室温で 12時間撹拌した。反応液を濾過後、濾液を LC— MSで精製する ことにより、標題化合物 7. 8mgを得た。このものの物性値は以下の通りである。
ESI - MS ;m/z445 [l/2M+ +H] .
実施例 26
{4一 ί4一 i (S)— 1一 ί3— 一「3 メトキシー 4一（4ーメチルー 1H イミダゾール 1 ィル）フエニル Ί一（Ε)—メチリデン } 2—才キソピペリジン 1ーィル }ェチル } べンゾィル}ーN—ί2—「5—（（3aR. 6S. 6aS)—2 ォキソへキサヒドロチェノ「3. 4 (1Ίイミダゾールー 6—ィル）ペンタノィルァミノ Ίェチル }ベンズァミド トリフルォロ 酢酸塩の合成 [化 47]
Figure imgf000108_0001
実施例 20と同様の方法により、 4 {4 { (S) 1 {3— { 1 [3—メトキシー4一 ( 4ーメチルー 1H—イミダゾールー 1 ィル）フエ-ル]一（E)—メチリデン } 2—ォキ ソピペリジン 1ーィル }ェチル }ベンゾィル }安息香酸 メチルエステル（ 135mg)を ダイセル製 CHIRALPAK™ OJ— H (2cm X 25cm:移動相；エタノール）にて分取 し、保持時間 36分の 4 {4 { (S)— 1 {3— { 1 [3—メトキシー4一（4ーメチルー 1H—イミダゾールー 1 ィル）フエ-ル]一（E)—メチリデン } 2—才キソピペリジン 1ーィル }ェチル }ベンゾィル }安息香酸 メチルエステルの光学活性体の粗精製 物 58mgを得た。上記の操作により得られた 4— {4— { (S)—1— {3— { 1— [3—メト キシ— 4— (4—メチル—1H—イミダゾールー 1—ィル）フエ-ル]一（E)—メチリデン }一 2—ォキソピペリジン一 1ーィル }ェチル }ベンゾィル }安息香酸 メチルエステル の粗精製物（l lmg)のメタノール（2mL)溶液に、水酸ィ匕ナトリウム（1N 水溶液， 10 0 /z L)を加え、その反応液を室温で 26. 5時間撹拌した。反応液に水酸化ナトリウム (1N 水溶液， 100 L)を加え、その反応液を室温で更に 23. 5時間撹拌した。反 応液に塩酸（2N 水溶液， 100 L)を加え、その溶液を減圧下濃縮した。残渣にト ルェンを加え、その溶液を減圧下濃縮乾固させる操作を 2回行った。得られた残渣 の DMF (2mL)溶液に、 N, N ジイソプロピルェチルァミン（200 L)、ピオチン— エチレンジァミン 臭化水素酸塩（17mg)、 1—ヒドロキシベンゾトリアゾール（8mg) および 1ーェチルー 3—（3 ジメチルァミノプロピル）カルボジイミド 塩酸塩（12mg) を順次加え、その反応液を室温で 63. 5時間撹拌した。反応液を濾過後、濾液を LC MSで精製することにより得られた粗精製物に、少量の飽和重曹水を加え、中和後 、その溶液を少量のメタノールをカ卩えたクロ口ホルムで 3回抽出した。得られた有機層 を濃縮後、 LC— MSで精製することにより標題ィ匕合物 11. 9mgを得た。このものの物 性値は以下の通りである。
ESI - MS ;m/z410[l/2M+ +H] .
[0182] 実施例 27
{4 ί4 i (S)— 1 ί3— 一「3 メトキシー 4一（4ーメチルー 1H イミダゾール 1 ィル）フエニル Ί一（Ε)—メチリデン } 2—才キソピペリジン 1ーィル }ェチル } ベンゾィル }— Ν— ί2— ί2— ί2—「5— ( (3aR. 6S. 6aS)—2—ォキソへキサヒドロ チエノ「 3. 4— dlイミダゾール 6—ィル）ペンタノィルァミノ Ίエトキシ }エトキシ }ェチ ル}ベンズアミド の合成
[0183] [化 48]
Figure imgf000109_0001
実施例 20と同様の方法により得られた 4 {4 { (S) 1 { 3— { 1 [3—メトキシ -4- (4ーメチルー 1H—イミダゾールー 1一ィル）フエ-ル]一（E)—メチリデン }ー2 ーォキソピペリジン 1ーィル }ェチル }ベンゾィル }安息香酸 メチルエステル（135 mg)をダイセル製 CHIRALPAK™ OJ— H (2cmX 25cm:移動相；エタノール）に て分取し、保持時間 36分の 4 {4 { (S)— 1 {3— { 1 [3—メトキシー 4一（4ーメ チルー 1H—イミダゾールー 1 ィル）フエ-ル]一（E)—メチリデン } 2—ォキソピぺ リジン 1ーィル }ェチル }ベンゾィル }安息香酸 メチルエステルの光学活性体の粗 精製物 58mgを得た。上記の操作により得られた 4 {4 { (S)— 1 {3— { 1 [3 ーメトキシー4一（4ーメチルー 1H—イミダゾールー 1 ィル）フエ-ル]一（E)—メチリ デン } 2—ォキソピペリジン 1ーィル }ェチル }ベンゾィル }安息香酸 メチルエス テルの粗精製物（13mg)のメタノール（2mL)溶液に、水酸ィ匕ナトリウム（1N 水溶液 , 100 L)を加え、その反応液を室温で 51時間撹拌した。反応液に水酸化ナトリウ ム（1N 水溶液， 100 /z L)をカ卩え、その反応液を室温で更に 21. 5時間撹拌した。 反応液に塩酸（2N 水溶液， 100 L)をカ卩え、減圧下溶媒を留去した。残渣にトル ェンを加え、その混合物を減圧下濃縮乾固させた。得られた残渣の DMF (2mL)溶 液に、 N, N ジイソプロピルェチルァミン（200 μ L)、 PIERCE製 EZ— LINK™ B IOTIN PEO— AMINE (18mg)、 1 ヒドロキシベンゾトリアゾール（lOmg)および 1—ェチル 3— (3 ジメチルァミノプロピル）カルボジイミド 塩酸塩（14mg)を順 次加え、その反応液を室温で 65時間撹拌した。反応液を濾過後、濾液を LC— MS で精製した。得られた粗精製物を少量の飽和重曹水で中和し、少量のメタノールを 加えたクロ口ホルムで 3回抽出した。得られた有機層を濃縮することにより、標題化合 物 9. 4mgを得た。このものの物性値は以下の通りである。
ESI - MS ;m/z454[l/2M+ +H] .
[0184] 実施例 28
5- ( (3aR. 6S. 6aS)— 2- -ォキソへキサヒドロチェノ「3. 4- -dlイミダゾ一ル- —6— ィル)吉苣酸 ί 2 ί (R) 4— ί 2 ヒドロキシ一 1 - - S) - 3- -「3 - -メトキ シー4 （4ーメチルー 1H—イミダゾールー 1 ィル） Ί (Ε) ベンジリデ 'ント - 5- メチル 2—ォキソピペリジ — 1—ィル }ェチル }ベンゾィル 1フエ二ル}— (E) —ァク リロイルァミノ チル }ァミド トリフルォロ酢酸塩
[0185] [化 49]
Figure imgf000110_0001
4 （4 ブロモフエニル） 2. 2—ジメチルー「1. 3Ίジォキソランの合成
1— (4—ブロモフエ-ル）エタン— 1, 2 ジオール（3. 8g ;CAS92093 - 23- 7) の DMF (30mL)溶液に、 2, 2 ジメトキシプロパン（2mL)と p—トルエンスルホン酸 1水和物（306mg)を加えた。その反応液を室温で 18時間撹拌した後、反応液に飽 和炭酸水素ナトリウム水溶液と酢酸ェチルを加え、有機層を分配した。得られた有機 層を水および飽和食塩水の順で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧下濃縮 した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (溶出溶媒:ヘプタン 酢酸ェチル系
)で精製し、標題ィ匕合物を 3.63g得た。このものの物性値は以下の通りである。
— NMR(CDCl) δ (ppm) :1.48 (s, 3H), 1.54 (s, 3H), 3.65(dd, J = 8.
3
0, 7.6Hz, 1H), 4.29(dd, J = 8.0, 6.0Hz, 1H), 5.02(dd, J = 7.6, 6. OH z, 1H), 7.24 (m, 2H), 7.47 (m, 2H) .
[0186] 「4— (2.2 ジメチルー「1.3Ίジォキソランー4 ィル）フエニル Ί一（4 ョードフエ ニル）メタノンの合成
マグネシウム（340mg)の THF(lOmL)懸濁液に、 4一（4 ブロモフエ-ル）—2, 2 ジメチルー [1, 3]ジォキソラン（3.6g)の THF(18mL)溶液を室温で 18分かけ て滴下した。その混合液を 80度で 2時間加熱還流した後、室温に戻すことにより、約 0.5Mのグリニア試薬を調整した。次にそのグリニア試薬（28mL)THF溶液にビス（ 2 ジメチルアミノエチル）エーテル（2.64mL)を 0°Cで滴下し、その混合液を 0°Cで 15分間攪拌した。その混合液に、 4 ョード塩ィ匕ベンゾィル（3.54g)の THF(12m L)溶液を 0°Cで 20分かけて滴下し、その反応液を 0°Cで 1時間攪拌した。反応液に 飽和塩ィ匕アンモ-ゥム水溶液と酢酸ェチルを加え、有機層を分配した。得られた有 機層を飽和塩ィ匕アンモ-ゥム水溶液および飽和食塩水の順で洗浄し、無水硫酸マ グネシゥムで乾燥後、減圧下濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (溶 出溶媒：ヘプタン 酢酸ェチル系）で粗精製した後、結晶化 (ヘプタン 酢酸ェチル 系）させ、標題ィ匕合物を 1.57g得た。このものの物性値は以下の通りである。
— NMR(CDCl) δ (ppm) :1.51 (s, 3H), 1.57(s, 3H), 3.73(t, J = 8.0
3
Hz, 1H), 4.37(dd, J = 8.0, 6.4Hz, 1H), 5.15(dd, J = 8.0, 6.4Hz, 1H) , 7.46-7.51 (m, 4H), 7.76 (m, 2H), 7.84 (m, 2H) .
[0187] 「4一（1.2 ジヒドロキシェチル）フエニル Ί一（4 ョードフエニル）メタノンの合成
[4- (2, 2 ジメチルー [1, 3]ジォキソランー4 ィル）フエ-ル ]一（4 ョードフエ -ル)メタノン（lg)の THF(12mL)溶液に、トリフルォロ酢酸（3mL)と水（3mL)をカロ えた。その反応液を室温で 12時間撹拌した後、反応液に飽和炭酸水素ナトリウム水 溶液と酢酸ェチルを加え、有機層を分配した。得られた有機層を、水および飽和食 塩水の順で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧下濃縮した。残渣をヘプタン 酢酸ェチル系で結晶化させ、濾別して、標題ィ匕合物を 884.3mg得た。このものの 物性値は以下の通りである。
— NMR(CDC1 ) δ (ppm) :2.03 (brs, 1H), 2.65(d, J = 3.6Hz, 1H), 3.
3
68 (m, 1H), 3.84 (m, 1H), 4.92(brd, J = 7.6Hz, 1H), 7.48— 7.52 (m, 4H), 7.78 (m, 2H), 7.84 (m, 2H) .
[0188] 「4一（1 アミノー 2 ヒドロキシェチル）フエニル Ί一（4 ョードフエニル）メタノンの合 成
[4-(1, 2 ジヒドロキシェチル）フエ-ル]一（4 ョードフエ-ル）メタノン（400mg )のァセトニトリル（5mL)溶液に、硫酸（0.569mL)を加え、その反応液を 100度で 2時間加熱還流した。反応液を室温に戻し、水（8mL)をカ卩え、さらに 100度で 2時間 加熱還流した。反応液を室温に戻した後、アルカリ性になるまで、反応液に 5N水酸 化ナトリウム水溶液を加えた。この混合物にジェチルエーテルを加え、有機層を分配 した。得られた水層にジクロロメタンを加えて有機層を分配した。集められた有機層（ ジクロロメタン）を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧下濃縮す ることにより、標題ィ匕合物を 144.9mg得た。このものの物性値は以下の通りである。
— NMR(CDC1 ) δ (ppm) :1.94 (brs, 2H), 3.59(dd, J=10.4, 7.6Hz,
3
1H), 3.79 (dd, J=10.4, 4.4Hz, 1H), 4.12(dd, J = 7.6, 4.4Hz, 1H), 7 .44— 7.52 (m, 4H), 7.75 (m, 2H), 7.84 (m, 2H) .
[0189] (S)— 5 クロ口一 2— il—「3 メトキシ 4— (4 メチル 1H イミダゾール - 1
ィル）フエニル Ί (E)ーメチリデン } 4 メチル吉苣酸 ί 2 ヒドロキシー 1一「4 一（4 ョードベンゾィル）フ ニル Ίェチル }アミドの合成
(S)—5 クロ口一 2— {1— [3—メトキシ一 4— (4—メチル 1H—イミダゾールー 1 —ィル)フ -ル]— (Ε)—メチリデン }— 4—吉草酸 塩酸塩（150mg)と [4— (1— ァミノ一 2 ヒドロキシェチル）フエ-ル]一（4—ョードフエ-ル）メタノン（ 144mg)の D MF(5mL)溶液に、 EDC(224mg)、 HOBT(158mg)および IPEA(0.339mL) を順次加え、その反応溶液を室温で 12時間攪拌した。反応液に酢酸ェチルおよび 水を加え、有機層を分配した。得られた有機層を飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナ トリウムで乾燥し、減圧下濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (溶出溶 媒:酢酸ェチル)で精製することにより、標題ィ匕合物を 200. lmg得た。このものの物 性値は以下の通りである。
ESI-MS;m/z 698[M++H].
(S)-l-( (R)— 2 ヒドロキシ一 1—「4— (4 ョードベンゾィル）フエニル，ェチル } 3 一「3 メトキシ 4一（4 メチル 1H—イミダゾール 1 ィル）フエニル Ί (E)ーメチリデン } 5 メチルビペリジン 2 オンおよび（S)— l i(S)— 2 ヒ ドロキシ 1一「4一（4 ョードベンゾィル）フエニル Ίェチル } 3 一「3 メトキシ -4- (4ーメチルー 1H—イミダゾールー 1 ィル）フエニル Ί一（E)—メチリデン }ー5 メチルビペリジン 2—オンの合成
(S)—5 クロ口一 2— {1— [3—メトキシ一 4— (4—メチル 1H—イミダゾールー 1 ィル）フ ニル]一（E)—メチリデン } 4 メチル吉草酸 {2 ヒドロキシー 1 [4 一（4 ョードベンゾィル）フエ-ル]ェチル }アミド（200mg)の DMF (3mL)溶液を 0 °Cに冷却し、その反応液に水素化ナトリウム (40%ミネラルオイル含有、 17.2mg)を 加え、その反応液を室温で 1時間攪拌した。この反応液に水と酢酸ェチルを加え、有 機層を分配した。得られた有機層を水および飽和食塩水の順で洗浄し、無水硫酸ナ トリウムで乾燥後、減圧下濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (担体： クロマトレックス NH；溶出溶媒:酢酸ェチル)で精製することによりラセミ体を 108mg 得た。得られたラセミ体（108mg)をダイセル製 CHIRALCEL™ OD—H (2cm X 2 5cm:移動相；エタノール）にて分取し、保持時間 14.7分の表題光学活性体（28.5 mg;>99%ee)および保持時間 27.1分の標題光学活性体（23.6mg;>99%ee) を得た。保持時間 14.7分の表題光学活性体の物性値は以下の通りである。
— NMR(CDCl) δ (ppm) :1.00(d, J = 6.4Hz, 3H), 1.95 (m, 1H), 2.3
3
0(s, 3H), 2.40(ddd, J=15.6, 12.0, 2.8Hz, 1H), 2.98(dd, J=15.6, 4 .0Hz, 1H), 3.16 (m, 2H), 3.85 (s, 3H), 4.20(dd, J=12.0, 9.2Hz, 1H ), 4.30 (dd, J=12.0, 5.2Hz, 1H), 6.00(dd, J = 8.4, 5.2Hz, 1H), 6.9 3(s, 1H), 7.01 (s, 1H), 7.02(d, J = 8.4Hz, 1H), 7.25(d, J = 8.4Hz, 2H ), 7.44(d, J = 8.4Hz, 2H), 7.51 (dd, J = 8.4, 2.0Hz, 2H), 7.72(s, 1H) , 7.77(d, J = 8.4Hz, 2H), 7.83(dd, J = 8.4, 2.0Hz, 2H), 7.87(s, 1H) 保持時間 27.1分の表題光学活性体の物性値は以下の通りである。
— NMR(CDC1 ) δ (ppm) :0.95(d, J = 6.8Hz, 3H), 2.06 (m, 1H), 2.3
3
0(s, 3H), 2.36 (m, 1H), 2.82(dd, J=12.4, 9.6Hz, 1H), 2.97(dd, J=l 6.0, 4.0Hz, 1H), 3.28 (dd, J=12.4, 6.4Hz, 1H), 3.85 (s, 3H), 4.25 ( m, 2H), 5.83(t, J = 6.4Hz, 1H), 6.93 (s, 1H), 7.01 (s, 1H), 7.02 (d, J =8.4Hz, 1H), 7.25(d, J = 8.4Hz, 2H), 7.45(d, J = 8.4Hz, 2H), 7.51 (dd, J = 8.4, 2.0Hz, 2H), 7.72 (s, 1H), 7.77(d, J = 8.4Hz, 2H), 7.84 ( dd, J = 8.4, 2. OHz, 2H), 7.88 (s, 1H) .
(E) -3-i4- i4-i (R) 2 ヒドロキシ一 1— ί (S)— 3— ί 1—「3 メトキシ一 4— (4 ーメチルー 1H—イミダゾールー 1 ィル）フエニル Ί一（Ε)—メチリデン } 5 メチル 2—ォキソピペリジン 1ーィル }ェチル }ベンゾィル }フエ-ル}アクリル酸 ターシ ヤリブチルエステルの合成
(S)— 1— { (R)— 2 ヒドロキシ— 1— [4— (4 ョードベンゾィル）フエ-ル]ェチル }— 3— {1— [3—メトキシ— 4— (4—メチル—1H—イミダゾールー 1—ィル）フエ-ル ] （Ε)—メチリデン } 5—メチルビペリジンー2 オン（107mg)、アクリル酸ターシ ヤリブチルエステル（236 μ L)および TEA (67.8 μ L)の DMF(3mL)溶液に、酢酸 パラジウム（7.27mg)およびトリオルトトリルホスフィン（19.7mg)を順次加え、その 混合物を窒素気流下 70°Cで 3時間攪拌した。その混合物を室温に戻した後、飽和 塩ィ匕アンモニア水溶液と酢酸ェチルを加え、有機層を分配した。得られた有機層を 水および飽和食塩水の順で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下濃縮した。 残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（担体：クロマトレックス NH；溶出溶媒：酢酸 ェチル)で精製することにより、標題ィ匕合物を 85.7mg得た。このものの物性値は以 下の通りである。
— NMR(CDCl) δ (ppm) :1.00(d, J = 6.4Hz, 3H), 1.55 (s, 9H), 1.94
3
(m, 1H), 2.30 (s, 3H), 2.40 (m, 1H), 2.98(dd, J=15.2, 3.6Hz, 1H), 3. 16(d, J = 8. OHz, 2H), 3.85 (s, 3H), 4.21 (dd, J=12.0, 9.2Hz, 1H) , 4.31 (dd, J=12.0, 5.2Hz, 1H), 6.00(dd, J = 8.4, 4.8Hz, 1H), 6.86 (d, J=16.4Hz, 1H), 6.93(s, 1H), 7.01 (s, 1H), 7.02(d, J = 8.4Hz, 1H ), 7.25(d, J = 7.2Hz, 2H), 7.44(d, J = 8.4Hz, 2H), 7.59(d, J = 8.4Hz , 2H), 7.61(d, J=16.4Hz, 1H), 7.72(s, 1H), 7.77— 7.81 (m, 4H), 7. 88 (s, 1H). ィル）吉苣酸 {2—{3—{4ー{(!^)ー4ー{2—ヒドロキシー1- -US) - 3- -「3- -メトキ シー4一（4ーメチルー 1H—イミダゾールー 1一ィル） Ί一（E) —ベンジリ -5- メチル 2—ォキソピペリジン 1ーィル }ェチル }ベンゾィル )フエ二ル} (E) —ァク リロイルァミノ チル }ァミド トリフルォロ酢酸塩
(E) -3-{4- {4— { (R) 2 ヒドロキシ一 1— { (S)— 3— {1— [3—メトキシ一 4— ( 4ーメチルー 1H—イミダゾールー 1 ィル）フエ-ル]一（E)—メチリデン } 5—メチ ルー 2—ォキソピペリジン 1ーィル }ェチル }ベンゾィル }フエ-ル}アクリル酸 ター シヤリブチルエステル（15mg)の塩化メチレン（0.5mL)溶液に、 0°Cでトリフルォロ 酢酸 (0.5mL)を加え、その反応液を室温で 1時間攪拌した。反応液を減圧下濃縮 した後、トルエンを加え、再度減圧下濃縮した。得られた残渣の DMF(0.8mL)溶 液に、ピオチン エチレンジァミン臭化水素酸塩（13. lmg)、EDC(13. lmg)、H OBT(9.2mg)および IPEA(0.2mL)を順次カ卩え、その反応液を室温で 6時間撹 拌した。この反応液を LC— MS (溶出溶媒:水—ァセトニトリル—トリフルォロ酢酸系） で精製することにより、標題ィ匕合物を 10.6mg得た。このものの物性値は以下の通り である。
— NMR(CD OD) δ (ppm) :1.03(d, J = 6.8Hz, 3H), 1.40—1.46 (m, 2
3
H), 1.53— 1.74 (m, 4H), 1.93 (m, 1H), 2.22 (m, 2H), 2.44 (s, 3H), 2 .50 (m, 1H), 2.66(d, J=12.4Hz, 1H), 2.86(dd, J=12.4, 5.6Hz, 1H) , 2.97 (m, 1H), 3.15(m, 1H), 3.25— 3.31 (m, 3H), 3.35— 3.39 (m, 2 H), 3.43— 3.46 (m, 2H), 3.95 (s, 3H), 4.12—4.24 (m, 3H), 6.01 (dd , J = 8.8, 5.6Hz, 1H), 6.74(d, J=16.0Hz, 1H), 7.22(d, J = 8.0Hz, 1 H), 7.31 (s, 1H), 7.51— 7.64 (m, 6H), 7.70— 7.82 (m, 6H), 9.15(s, 1H). ESI - MS;m/z 874[M++H].
[0193] 実施例 29
5-((3aR.6S.6aS)—2—ォキソへキサヒドロチェノ「3.4— d，イミダゾールー 6— ィル)吉 酸 — {3— {4— R)— 4— {2—ヒドロキシ— s 「3ーメトキ シ 4 4 メチル 1H イミダゾール 1 ィル）ベンジリデン Ί 5 メチル 2 ーォキソピペリジン 1ーィル }ェチル }ベンゾィル }フエ二ル}ァクリロイルァミノ }ペン チル 1アミド' トリフルォロ酢酸塩
[0194] [化 50]
Figure imgf000116_0001
(E)-3-{4-{4-{ (R)—2 ヒドロキシ一 1 { (S)—3— 11— [3—メトキシ一 4 - (4—メチル 1H—イミダゾールー 1—ィル）フエ-ル]— (E)—メチリデン } 5—メ チル 2—ォキソピペリジン 1ーィル }ェチル }ベンゾィル }フエニル }アクリル酸 タ ーシヤリブチルエステル（15mg)の塩化メチレン（0.5mL)溶液に、 0°Cでトリフルォ 口酢酸 (0.5mL)を加え、反応液を室温で 1時間攪拌した。反応液を減圧下濃縮した 後、残渣にトルエンを加え、その混合物を減圧下濃縮した。残渣の DMF(0.8mL) 溶液に、 5—(ピオチンアミド）ペンチルァミン（14.9mg)、EDC(13. lmg)、HOBT (9.2mg)および IPEA(0.2mL)を順次カ卩え、その反応液を室温で 15時間撹拌し た。この反応液を LC— MSで精製することにより、標題ィ匕合物を 10. lmg得た。この ものの物'性値は以下の通りである。
— NMR(CD OD) δ (ppm) :1.03(d, J = 6.4Hz, 3H), 1.36— 1.46 (m, 5
3
H), 1.52—1.73 (m, 9H), 1.94 (m, 1H), 2.20(t, J = 7.2Hz, 2H), 2.44 (s, 3H), 2.50 (m, 1H), 2.68(d, J=12.4Hz, 1H), 2.86— 3.02 (m, 3H) , 3.13— 3.23 (m, 4H), 3.95 (s, 3H), 4.14(dd, J=ll.2, 9.2Hz, 1H), 4 .22(dd, J=ll.2, 5.6Hz, 1H), 4.22—4.30 (m, 1H), 4.45—4.49 (m, 1 H), 6.01 (dd, J = 9.2, 5.6Hz, 1H), 6.74(d, J=16. OHz, 1H), 7.22 (dd , J = 8.0, 1.2Hz, 1H), 7.31(d, J=l.2Hz, 1H), 7.51— 7.64 (m, 6H), 7 .70-7.82 (m, 6H), 9. 15(s, 1H) .
ESI - MS;m/z 916[M++H].
[0195] 実施例 30
(E)— N ί2— ί2—「2—（2 アジドエトキシ）エトキシ Ίエトキシ }ェチル } 3— ί4 — ί4— i(R)— 2 ヒドロキシ一 1— i(S)— 3— 一「3 メトキシ一 4— (4 メチル -1H-イミダゾール 1 ィル）フエ-ル Ί (E) メチリデン } 5 メチル 2—ォ キソピペリジン 1ーィル }ェチル }ベンゾィル }フエ二ル}アクリルアミド トリフルォロ 酢酸塩の合成
[0196] [化 51]
Figure imgf000117_0001
(E) 3— {4— {4— { (R)—2 ヒドロキシ一 1 { (S) 3— { 1— [3—メトキシ一 4 - (4—メチル 1H—イミダゾールー 1—ィル）フエ-ル]— (E)—メチリデン } 5—メ チル 2—ォキソピペリジン 1ーィル }ェチル }ベンゾィル }フエニル }アクリル酸 タ ーシヤリブチルエステル（22mg)の塩化メチレン（0.5mL)溶液に、 0°Cでトリフルォ 口酢酸 (0.5mL)を加え、反応液を室温で 1時間攪拌した。反応液を減圧下濃縮した 後、残渣にトルエンを加え、再度減圧下濃縮した。得られた残渣の DMF(lmL)溶 液に、 1—ァミノ一 11—アジド一 3, 6, 9 トリオキサゥンデカン（14.5mg)、EDC(l 9.2mg)、 HOBT(13.5mg)および IPEA(0.25mL)を順次加え、その反応液を 室温で 12時間撹拌した。この反応液を LC— MSで精製することにより、標題化合物 を 19.8mg得た。このものの物'性値は以下の通りである。
'H-NMRCCD OD) δ (ppm) :1.03(d, J = 6.8Hz, 3H), 1.94 (m, 1H), 2. 44 (s, 3H), 2.50 (m, IH), 2.98 (m, IH), 3.16 (m, IH), 3.35 (m, 3H), 3.45-3.55 (m, 3H), 3.58— 3.75 (m, 12H), 3.95 (s, 3H), 4.14 (dd, J = 11.6, 9.2Hz, IH), 4.22(dd, J=ll.6, 5.2Hz, IH), 6.01(dd, J = 9.2 , 5.2Hz, IH), 6.78 (d, J=16. OHz, IH), 7.21(dd, J = 8.0, 0.8Hz, IH) , 7.30(d, J = 0.8Hz, IH), 7.50— 7.65 (m, 6H), 7.69— 7.85 (m, 6H), 9 . 15 (s, IH).
ESI - MS;m/z 806[M++H].
実施例 31
5-((3aR.6S.6aS)—2—ォキソへキサヒドロチェノ「3.4— d，イミダゾールー 6— ィル) ^ \\-\2-\2-\2- (2_ヱトキシ)ヱトキシ Ίヱトキシ 1ェチル 1アミ w
— 3— ί4— ί4— ί (R)— 2 ヒドロキシ一 1— ί (S)— 3— il—「3 メトキシ一 4— (4 ーメチルー 1H—イミダゾールー 1 ィル）フエニル Ί一（Ε)—メチリデン } 5 メチル 2—ォキソピペリジン 1ーィル }ェチル }ベンゾィル }フエ-ル Iアクリルアミド トリフ ルォロ酢酸塩
[化 52]
Figure imgf000118_0001
(Ε)— Ν— 12— 12— [2— (2 アジドエトキシ）エトキシ]エトキシ }ェチル } 3— { 4 -{4-{ (R)—2 ヒドロキシ一 1— { (S)— 3— { 1— [3—メトキシ一 4— (4—メチル 1 Η イミダゾール 1 ィル）フエ-ル] (E)—メチリデン } 5—メチル 2—ォ キソピペリジン 1ーィル }ェチル }ベンゾィル }フエ-ル}アクリルアミド トリフルォロ 酢酸塩（13.7mg)の THF(2mL)溶液に、室温でトリフ -ルホスフィン（5.9mg)と 水 (0. ImL)を加え、その混合物を 80°Cで 2時間加熱攪拌した。反応液を減圧下濃 縮した後、残渣にトルエンを加え、再度その混合物を減圧下濃縮した。得られた残渣 の DMF(0.5mL)溶液に、 IPEA(0.05mL)および N ヒドロキシスクシンイミドビォ チン（10.2mg)を加え、その反応液を室温で 1時間攪拌した。原料の残存を確認後 、再び N—ヒドロキシスクシンイミドビォチン（10.2mg)を反応液に加え、その反応液 を室温で 12時間攪拌した。この反応液を LC— MSで精製することにより、標題化合 物を 5. lmg得た。このものの物'性値は以下の通りである。
— NMR(CD OD) δ (ppm) :1.03(d, J = 6.8Hz, 3H), 1.42—1.48 (m, 3
3
H), 1.55-1.77 (m, 5H), 1.94 (m, 1H), 2.44 (s, 3H), 2.50 (m, 1H), 2 .96 (m, 1H), 3.14 (m, 1H), 3.34— 3.44 (m, 5H), 3.45— 3.56 (m, 5H) , 3.58-3.72 (m, 12H), 3.95 (s, 3H), 4.15(dd, J=ll.6, 9.2Hz, 1H), 4.23(dd, J=ll.6, 5.2Hz, 1H), 6.01 (dd, J = 9.2, 5.2Hz, 1H), 6.78 (d , J=15.6Hz, 1H), 7.21(dd, J = 8.0, 1.2Hz, 1H), 7.30(d, J=l.2Hz, 1 H), 7.50-7.61 (m, 6H), 7.70— 7.86 (m, 6H), 9. 15 (s, 1H).
ESI-MS;m/z 504[1/2M++H].
[0198] 実施例 32
1— ί (S)— 1— ί4— ί4— ί (E)— 3— ί4— ί3—「4.4 ジフノレオ口一 5— (1Η ピロ 一ルー 2—ィル） -4H-3a.4a ジァザ一 4 ボラ一 s—インダセン一 3—ィル Ίプロ ピオニル }ピぺラジン } 1 ィル } 3 ォキソプロぺニル }ベンゾィル }フエニル }ェ チル 1 3—{1ー「3 メトキシー4ー（4ーメチル 1 H イミダゾール 1 ィル）フェ ニル Ί (E)ーメチリデン }ピペリジン 2—オン トリフルォロ酢酸塩の合成
[0199] [化 53]
Figure imgf000119_0001
[0200] 3—{1 [3—メトキシー4ー（4ーメチルー111ーィミダゾールー1ーィル）フ (E)—メチリデン } 1 { (S) 1— {4— {4 [ (E)—3—ォキソ 3 ピぺラジン一 1ーィルプロべ-ル]ベンゾィル }フエ-ル}ェチル }ピペリジンー2—オン 二トリフル ォロ酢酸塩 (20mg)と 3— [4, 4 ジフルォロ 5— ( 1H ピロール - 2 ィル） - 4 H-3a, 4a ジァザ— 4 ボラ— s—インダセン— 3—ィル]プロピオン酸 2, 5 ジ ォキソピロリジン— 1—ィル エステル（5mg)の DMF(0.5mL)溶液に、 IPEA(0.0 5mL)を加え、その反応液を室温で 6時間攪拌した。反応液を LC— MSで精製する ことにより、標題ィ匕合物 12mgを得た。このものの物性値は以下の通りである。
ESI— MS;m/z955[M++H]. NMR(CDC1 ) δ (ppm) :1.68(d, J = 7.
3
2Hz, 3H), 1.72-1.85 (m, 1H), 1.87— 2.00 (m, 1H), 2.46 (s, 3H), 2. 77-2.91 (m, 4H), 3.03— 3.12(m, 1H), 3.31— 3.44 (m, 3H), 3.56— 3.77 (m, 8H), 3.96 (s, 3H), 6.22(q, J=7.2Hz, 1H), 6.31(d, J=4. OH z, 1H), 6.34-6.42 (m, 1H), 6.88(d, J=4.0Hz, 1H), 6.96(d, J=4.4 Hz, 1H), 7.04(brd, J=15.6Hz, 1H), 7.08— 7.24 (m, 5H), 7.39 (brs, 1H), 7.47(d, J = 8.0Hz, 1H), 7.50(d, J = 8.0Hz, 2H), 7.66(d, J=15. 6Hz, 1H), 7.71(d, J = 8.0Hz, 2H), 7.80 (brs, 1H), 7.81(d, J = 8.0Hz, 2H), 7.83(d, J = 8.0Hz, 2H), 8.96(d, J=l.6Hz, 1H), 10.5 (brs, 1H) . 試験例 1
ラット )1台仔脳由 神経細q焙着に: ける A Bペプチド定量
Π)ラット初代神終細qの谘着
胎生 18日齢の Wistar系ラット（日本チヤ一ルス'リバ一株式会社，神奈川）より大脳 皮質由来神経細胞を単離し培養に供した。具体的には、エーテル麻酔下、妊娠ラッ トより無菌的に胎仔を摘出した。胎仔より^ I を摘出し、氷冷 Leibovitz' s L-15 medium (Invitrogen社， Carlsbad, CA, USA,カタログ番号 11415— 064あるい は Sigma— Aldrich社， St. Louis, MO, USA,カタログ番号 L1518など）に浸し た。その摘出脳から、実体顕微鏡下で大脳皮質を分離した。分離した大脳皮質組織 片を、 0.25% トリプシン（Invitrogen社，カタログ番号 15050— 065)および 150u nit/mL DNase I (Sigma— Aldrich社，カタログ番号 D5025)を含有する酵素 溶液中で、 37°C、 30分間処理することにより、細胞を分散させた。この際、酵素反応 は同量の非働化済みゥマ血清を加えることにより停止させた。この酵素処理溶液を 1 , 500rpmにて 5分間遠心分離し、上清を除いた。得られた細胞塊に培地を 5〜： LOm Lカロえた。培地は、 Neurobasal™ medium (Invitrogen社，カタログ番号 21103 — 049)に 2% B- 27 supplement (Invitrogen社，カタログ番号 17504— 044) と 25 /z M 2 メルカプトエタノール (以下 2— ME,和光純薬工業株式会社，大阪， カタログ番号 139— 06861)と 0. 5mM L グルタミン（Invitrogen社，カタログ番 号 25030 -081)および 1 % antibiotic - antimycotic溶液（Invitrogen社，カタ ログ番号 15240-062)を添カ卩したもの（NeurobasalZB - 27/2- ME培地）を用 いた。但し、アツセィの際は、 2— MEのみを添カ卩しない培地（NeurobasalZB— 27 培地）を用いた。培地が加えられた細胞塊を、緩やかにピペッティングすることにより 、細胞を再分散させた。この細胞分散液を、 40 mナイロンメッシュ（セルストレイナ 一, Becton Dickinson Labware社, Franklin Lakes, NJ, USA,カタロク番 号 35— 2340)でろ過し、細胞塊を除くことにより、神経細胞懸濁液を得た。この神経 細胞懸濁液を培地にて希釈し、予め poly— L lysineある!/、は poly— D— lysineに てコーティングされた 96穴培養プレート（以下の方法で 96穴培養プレート (Becton Dickinson Labware社，カタログ番号 35— 3075)に poly— L— lysineコートを施 し 7こ ¾の、める ヽ i^Biocoat cell environments poly— D— lysine cell war e 96 -well plate (Becton Dickinson Labware社，カタログ番号 35— 6461) )に初期細胞密度が 5 X 105cellsZcm2になるように 100 μ LZwellにて播種した。 P oly—L— lysineコーティングは以下のように行った。 150mM ホウ酸 buffer (pH 8 . 5)を用いて 100 /z gZmLの poly— L— lysine (Sigma— Aldrich社，カタログ番号 P2636)溶液を無菌的に調製した。その溶液を 100 LZwellにて 96穴培養プレー トに添加し、室温、 1時間以上、あるいは 4°C、ー晚以上、インキュベートした。その後 、コーティングした 96穴培養プレートは、滅菌水を用いて 4回以上洗浄した後、乾燥 させる力、あるいは無菌リン酸緩衝食塩水ある 、は培地などを用いてすす 、だ後に、 細胞播種に用いた。播種した細胞は、 37°C、 5% COインキュベータ一中にて 1日
2
間培養した後、培養上清全量を新鮮な NeurobasalZB 27Z2 ME培地と交換 し、引き続き 3日間培養した。 [0202] (2)化合物添加
培養 4日目に薬物添加を以下の通りに行った。培養上清全量を抜き取り、 Neurob asalZB— 27培地を 180 μ LZwellカ卩えた。試験化合物のジメチルスルホキシド（以 下 DMSO)溶液を NeurobasalZB— 27培地にて最終濃度の 10倍になるように希 釈した。この希釈液を 20 LZwell添カ卩し、よく混和した。最終 DMSO濃度は 1%以 下とした。また対照群には DMSOのみを添カ卩した。
[0203] (3)サンプリング
化合物添加後 3日間培養し、培養上清全量を回収した。得られた培養上清は、 A β χ— 42測定用 ELISAサンプルとして、希釈せずに ELISAに供した。
[0204] (4)細胞牛.存の評価
細胞生存は以下の方法で MTTアツセィにより評価した。培養上清回収後の wellに 37°Cに温めた培地を 100 /z LZwell加え、さらに Dulbecco' s phosphate buffe red saline (以下 D— PBS (—）， Sigma— Aldrich社，カタログ番号 D8537)に溶 解した 8mgZmLの MTT(Sigma—Aldrich社，カタログ番号 M2128)溶液を 8 μ L /wellにて添カロした。この 96穴培養プレートを、 37°C、 5% COインキュベーター
2
中にて 20分間インキュベートした。そこへ MTT溶解バッファーを 100 μ LZwell加え 、 37°C、 5% COインキュベータ一中にて MTTフオルマザン結晶をよく溶解させた
2
後、各 wellの 550nmの吸光度を測定した。 MTT溶解バッファ一は以下の通りに調 製した。 N, N'—ジメチルホルムアミド (和光純薬工業株式会社，カタログ番号 045 — 02916)と蒸留水を 250mLずつ混合した溶液に、 100g ドデシル硫酸ナトリウム（ ラウリル硫酸ナトリウム，以下 SDS,和光純薬工業株式会社，カタログ番号 191— 07 145)を溶解した。さらに、この溶液に濃塩酸および酢酸をそれぞれ 350 L添加す ることにより、溶液の最終 pHを約 4. 7に調整した。
測定の際、細胞を播種しな ヽ wellに培地と MTT溶液のみをカ卩えたものをバックグ ラウンドとして設定した。各測定値は、以下の数式に従い、バックグラウンドを差し引き 、対照群 (薬物処理しなかった群）に対する比率 (％ of CTRL)を算出し、細胞生 存活性を比較，評価した。
[0205] % of CTRL= (A550 sample— A550 bkg) / (A550 CTRL— A550 b kg) X 100
(A550— sample：サンプル wellの 550nm吸光度、 A550— bkg：ノックグラウンド w ellの 550nm吸光度、 A550— CTRL：対照群 wellの 550nm吸光度）
[0206] (5) Α 42 ELISA
Α β 42 ELISAは、株式会社免疫生物研究所（群馬）の Human Amyloid bet a (1 -42) Assay Kit (カタログ番号 17711または 27711)、あるいは和光純薬 工業株式会社（大阪）の HumanZRat j8 Amyloid (42) ELISA Kit Wako (力 タログ番号 290— 62601 )を用いた。方法はメーカ一推奨のプロトコール（添付文書 に記載の方法）にて行った。但し A |8 42検量線は、ラット Α |8 1—42ペプチド（Calbi ochem社， San Diego, CA, USA,カタログ番号 171596)を用いて作成した。各 サンプルについて対照群の培養上清中 A |8 42濃度に対する百分率（％ of CTRL )を算出し、続いて各試験化合物の IC 値を算出した。結果は、表 1に示す。
50
[0207] [表 1] 試験化合物 A 42産生低下作用 IC50 ( μ )
実施例 1 0. 02
実施例 2 0. 33
実施例 3 0. 08
実施例 4 0. 36
実施例 5 >30
実施例 6 0. 22
実施例 9 0. 15
実施例 12 0. 16
実施例 1S 0. 2
実施例 16 0. 29
実施例 17 0. 095
実施例 18 0. 27
実施例 19 0. 24
実施例 28 0. 29
実施例 29 0. 23
実施例 30 0. 18 [0208] (6)表 1の結果力 分力るように、本発明の生物学的試薬用化合物は、 A 42産生 低下作用が確認された。したがって、本発明の式 (I)の生物学的試薬用化合物また はその塩は、 A |8 42産生低下作用を有するので、本発明によれば、 A |8産生機構の 解析に有用な試薬を、さらに特にアルツハイマー病、ダウン症等の A |8が原因となる 神経変性疾患の治療剤または予防剤の作用機序の解析に有用な試薬を提供するこ とがでさる。
[0209] 実施例 33
親. 票 ,験による票 の
( HEK293細朐の培着
HEK293細胞（American Type Culture Collection, Manassas, VA, US A,カタログ番号 CRL— 1573)は、 225cm2培養フラスコ（Corning社， Corning, N Y, USA,カタログ番号 3001)を用いて 37°C、 5% COインキュベータ一中にて培
2
養した。培地 ίま、 Dulbecco' s modified Eagle' s medium (； gma— Aldrich社 ，カタログ番号 D6429)〖こ 10% 非働化済みゥシ胎児血清 (JRH Biosciences社， Lenexa, KS, USA,カタログ番号 12103)および 1% ペニシリン—ストレプトマイ シン溶液 (Invitrogen社，カタログ番号 15140— 122)を添カ卩したものを用いた。
[0210] (2)可溶化蹬画分の調製
Nature Cell Biology 2003年 5卷 486頁【こ記載の方法【こ準じて、 HEK293糸田 胞からその可溶化膜画分を調製した。具体的には、 HEK293細胞を培養フラスコよ り回収し、氷冷 D— PBS (―) (Invitrogen社，カタログ番号 14190— 144)で 3回洗 浄した後、 1フラスコ当たり約 ImLの氷冷 homogenization buffer (10mM MOP S, pH 7. 0, lOmM KC1, Complete (Roche Diagnostics社， Penzberg, Ge rmany,カタログ番号 1697498) )で懸濁した。 Dounce homogenizerを用いて H EK293細胞をホモジナイズした後、 1, OOO X gにて 4°C、 15分間遠心分離し、上清 を分取した。この上清を 100, OOO X gにて 4°C、 1時間遠心分離し、沈渣 (膜画分)を 分取した。この沈渣に 1フラスコ当たり約 50 Lの氷冷 lysis buffer (150mM タエ ン酸ナトリウム， pH 6. 4, 1% CHAPSO (Sigma— Aldrich社，カタログ番号 C46 95) , Complete)を添カ卩し、 4°C、 1時間緩やかに回転させて攪拌した。これを 100, OOO X gにて 4°C、 1時間遠心分離し、上清 (可溶ィ匕膜画分)を分取した。
[0211] 可溶化膜画分の蛋白定量は、 Micro BCA™ Protein Assay Reagent Kit
(Pierce Biotechnology社， Rockford, IL, USA,カタログ番号 23235)を用い て行った。方法はメーカー推奨のプロトコール (添付文書に記載の方法）にて行った 氷冷 lysis buffer中に懸淘 せた 50% streptavidin— agarose (immunoPure (登録商標) immobilized streptavidin, Pierce Biotechnology社,カタロク番 号 20349)を lmg膜蛋白当たり 10 /z Lの割合で可溶ィ匕膜画分に添加し、 4°C、 1時 間以上穏やかに回転させて攪拌した。これを 12, OOO X gにて 4°C、 1分間遠心分離 し、上清 (前処置済み可溶ィ匕膜画分)を分取した。これに lysis bufferを添加して混 和し、 6mg膜蛋白 ZmLの前処置済み可溶ィ匕膜画分を調製した。
[0212] (3) ^ ,^w
試験化合物（実施例 4および 5の生物学的試薬用化合物）を DMSOにて溶解し、 1 OmM DMSO溶液を調製した。これに 4倍濃度の反応 buffer (450mM クェン酸 ナトリウム， ρΗ 6. 4, 0. 4mg/mL ゥシ血清アルブミン， 40mM ジチオスレイト ール（以下 DTT) , 2mgZmL L— α—ホスファチジルコリン， 3 X Complete)を 6 . 25倍量、蒸留水を 17. 75倍量添加して混和し、最終濃度の 4倍濃度 (400 M) の化合物を含有する反応 buffer (4倍濃度の化合物溶液)を調製した。媒体として最 終濃度の 4倍濃度 (4%)の DMSOを含有する反応 buff erを調製した。
6mg膜蛋白 ZmLの前処置済み可溶ィ匕膜画分に、 4倍濃度の反応 bufferを 0. 75 倍量、蒸留水を 1. 25倍量添加して混和し、 2mg膜蛋白 ZmLの前処置済み可溶ィ匕 膜画分を含有する反応 bufferを調製した。これに 4倍濃度の化合物溶液ある ヽは媒 体を 1Z3量添加して混和し、これを反応液とした。この反応液は、 1. 5mg膜蛋白 Z mLの前処置済み可溶ィ匕膜画分に加えて、 100 Mの化合物あるいは 1% DMSO を含有する。
反応液を遮光条件下、 37°C、 30分間インキュベートした。光親和性標識は、 Stmt alinker (登録商標） 2400 UV crosslinker(Stratagene社， La Jolla, CA, US A,カタログ番号 400676)および 5本の紫外線ランプ（15W, 365nm, UVP社， Up land, CA, USA,カタログ番号 34— 0009— 02)を用いて、氷冷条件下、 90分間 行った。この際、 30分間毎に反応液を穏やかに攪拌した。
[0213] (4)標的分子の精製
透析チューブ（SnakeSkin™ dialysis tubing, 3. 5K MWCO, Pierce Biot echnology社，カタログ番号 68035)を用いて、光親和性標識を行った反応液を透 析 buffer (50mM Tris— HC1, pH 8. 0, 150mM NaCl, 1% IGEPAL (登録 商標） CA— 630, 0. 5% デォキシコール酸ナトリウム， 0. 1% SDS, 10mM DT T, protease inhibitor cocktail(Sigma— Aldrich社，カタログ番号 P2714) )に 対して遮光条件下、 4°C、 6時間以上、 2回透析した。透析済みの反応液に氷冷 mod ified RIPA buffer (50mM Tris— HC1, pH 8. 0, 150mM NaCl, 1% IGE PAL (登録商標） CA— 630, 0. 5% デォキシコール酸ナトリウム， 0. 1% SDS, 5 X Complete)を 0. 25倍量添カ卩し、混和した。これを 1, 885 X gにて 4°C、 15分間 遠心分離し、上清を分取した。この上清に lmg膜蛋白当たり約 20 μ Lの 50% stre ptavidin—agaroseを添カ卩し、これを遮光条件下、 4°C、ー晚緩やかに回転させて攪 拌した。これを 12, OOO X gにて 4°C、 2分間で遠心分離し、沈渣 (ゲル)を分取した。 ゲルを約 10倍量の氷冷 RIPA buffer (50mM Tris— HC1, pH 8. 0, 150mM NaCl, 1% IGEPAL (登録商標） CA— 630, 0. 5% デォキシコール酸ナトリウム , 0. 1% SDS, Complete)で 3回洗浄した。洗浄後、再度 12, 000 X g T4。C、 2 分間遠心分離し、沈渣 (ゲル）を分取した。ゲルに同量の溶出 buffer (125mM Tri s-HCl, pH 6. 8, 4% SDS, 20% glycerol)を添カ卩し、混和した。これを 98°C 、 5分間加熱処理し、攪拌した後、 12, OOO X gにて 4°C、 2分間遠心分離し、上清（ 精製物)を分取した。
[0214] (5) Western blot解析
SDS sample buffer (62. 5mM Tris— HC1, pH 6. 8, 2% SDS, 10% グリセロール， 0. 1% ブロモフエノールブルー）を用いて調製した HEK293細胞可 溶化物 (5 g蛋白 Zレーン)、および光親和性標識実験、続いて標的分子の精製で 得た精製物（9 /z LZレーン)を 98°C、 5分間加熱処理し、電気泳動に供した。電気 泳動は、 NuPAGE (登録商標） Novex 12% Bis -Tris gel(Invitrogen社，カタ ログ番号 NP0343BOX)および NuPAGE (登録商標） MES SDS running buff er(Invitrogen社，カタログ番号 NP0002)、あるいは NuPAGE (登録商標） Novex 4- 12% Bis-Tris gel(Invitrogen社，カタログ番号 NP0323BOX)および N uP AGE (登録商標） MOPS SDS running buffer (Invitrogen社，カタログ番 号 NP0001)を用いた。方法はメーカー推奨のプロトコール (添付文書に記載の方法 )にて行った。
[0215] トランスファ一は、ニトロセルロースメンブレン（Protran (登録商標） BA85, Schleic her & Schuell社， Dassel, Germany,カタログ番号 10401191)、 NuPAGE ( 登録商標） transfer buffer (Invitrogen社，カタログ番号 NP0006 - 1)および Xc ell II™ blot module (Invitrogen社，カタログ番号 EI9051)を用いた。方法はメ 一力一推奨のプロトコール (添付文書に記載の方法）にて行った。
メンブレンのブロッキングは、 5% スキムミルク含有 TTBS (20mM Tris— HC1, p H 7. 6, 137mM NaCl, 0. 1% Tween (登録商標） 20)を blocking bufferと して用いて、室温にて振動させながら 1時間行った。以下の γ— secretase構成成分 に反応する抗体を blocking bufferにて希釈し、一次抗体溶液として用いて、メンブ ランを 4°Cにて振動させながら一晩反応させた。
[0216] A. Presenilin 1 (以下 PS1) N— terminal fragment (以下 NTF)検出用：抗 PS 1ZN末端抗体 (免疫動物：ゥサギ，使用濃度 ^ /z gZmL, Zymed社， South San Francisco, CA, USA,カタログ番号 71— 1300)
[0217] B. PS1 C- terminal fragment (以下 CTF)検出用：抗 PSlZLoop抗体（免疫 動物：ゥサギ，使用濃度 ^ /z gZmL, Zymed社，カタログ番号 51—4200)
[0218] C. PS2 CTF検出用：抗 PS2ZLoop抗体 (免疫動物：ゥサギ，使用濃度： 2 gZ mL, Zymed社，カタログ番号 34— 4400)
[0219] D. Nicastrin検出用：抗 NicastrinZC末端抗体 (免疫動物：ゥサギ，使用濃度： 1, 000倍希釈， Sigma— Aldrich社，カタログ番号 N1660)
[0220] E. APH— laL検出用：抗 APH— laLZC末端抗体 (免疫動物：ゥサギ，使用濃度： 1, 000倍希釈， Covance社， Berkeley, CA, USA,カタログ番号 PRB— 550P) F. PEN— 2検出用：抗 PEN— 2ZN末端抗体 (免疫動物：ゥサギ，使用濃度：： g ZmL, Zymed社，カタログ番号 36— 7100)
[0221] メンブレンを TTBSで洗浄した後、 blocking bufferにて 2, 000倍希釈した horse radish peroxidase標識饥1クサ3 τίΠι体、 Amersham Biosciences社, Buckingha mshire, UK,カタログ番号 NA934)を二次抗体溶液として用いて、メンブレンを室 温にて振動させながら 1時間反応させた。メンブレンを TTBSで洗浄した後、 ECL™
Western blotting detection reagents (Amersham Biosciences社,カタ口 グ番号 PRN2106)あるいは ECL Plus™ Western blotting detection reag ents (Amersham Biosciences社，カタログ番号 PRN2132)で化学発光させ、フ イルム（Hyperfilm™ ECL™, Amersham Biosciences社，カタログ番号 RPN2 103K)を感光させた。フィルムを現像した後、カラーイメージスキャナにてバンドをデ ジタル画像として取り込んだ。
分子量マーカーとして MultiMark (登録商標） multi— colored standard (Invitr ogen社，カタログ番号 LC5725)あるいは Full Range Rainbow™ protein mo lecular weight markers (Amersham Biosciences社,カタログ番号 PRN800 )を用いて、分子量マーカーと比較したゲル移動度から、見かけ上の分子量を見積も り、 γ— secretaseの各構成成分に対応するバンドを同定した。
光親和性標識実験による標的分子の同定の結果を図 1に示す。
[0222] (6)図 1に示す結果から、実施例 4の生物学的試薬用化合物が結合する γ— secret ase構成成分として、 PS1 NTF (図 1A)が同定された。
したがって、本発明の式 (I)の生物学的試薬用化合物またはその塩は、標的分子 の同定に使用できるので、本発明によれば、 A 産生機構の解析に有用な試薬を、 さらに特にアルッノヽイマ一病、ダウン症等の A |8が原因となる神経変性疾患の治療 剤または予防剤の作用機序の解析に有用な試薬を提供することができる。
[0223] 実施例 34
親.禾ロ'附票 験における競合阳 ,験
(1)実施例 33と同様の方法で、 HEK293細胞の培養、可溶化膜画分の調製、光親 和性標識実験、標的分子の精製および Western blot解析を行った。
但し、光親和性標識実験では実施例 4の生物学的試薬用化合物および γ - secre tase阻害剤 L— 685, 458 (自社合成品）について、最終濃度の 8倍濃度（800 M) の化合物を含有する反応 buffer (8倍濃度の化合物溶液)を調製した。媒体として最 終濃度の 8倍濃度（8%)の DMSOを含有する反応 bufferを調製した。これらを用い て、媒体あるいは 100 /z M L— 685, 458の存在下、 100 Mの実施例 4の生物学 的試薬用化合物を用いた光親和性標識実験を行った。 Western blot解析は、一 次抗体として抗 PS1ZN末端抗体を用いて行い、 PS1 NTFへの実施例 4の生物学 的試薬用化合物の結合に対する L— 685, 458の競合阻害作用を評価した。
光親和性標識実験における競合阻害試験の結果を図 2に示す。
[0224] (2)図 2に示す結果から、実施例 4の生物学的試薬用化合物の PS1 NTF結合部 位は γ—secretase阻害剤の結合部位とは異なることが判明した。
したがって、式 (I)の生物学的試薬用化合物またはその塩は、結合部位の解析に 使用できるので、本発明によれば、 A 産生機構の解析に有用な試薬を、さらに特 にアルツハイマー病、ダウン症等の A |8が原因となる神経変性疾患の治療剤または 予防剤の作用機序の解析に有用な試薬を提供することができる。
月の カ
[0225] 以上から明らかなとおり、本発明の式 (I)の生物学的試薬用化合物またはその塩は
A |8タンパクの生成機構に関与する標的タンパク分子の同定に使用できるので、本 発明によれば、 A 産生機構の解析に有用な試薬を、さらに特にアルッノ、イマ一病 、ダウン症等の A が原因となる神経変性疾患の治療剤または予防剤の作用機序の 解析に有用な試薬を提供することができる。また、式 (I)の生物学的試薬用化合物ま たはその塩は、アルッノヽイマ一病、ダウン症等の A |8が原因となる神経変性疾患の 治療剤または予防剤の結合部位の解析に使用できる。
産業上の利用可能性
[0226] 本発明の式 (I)の生物学的試薬用化合物またはその塩は、 A βタンパクの生成機 構に関与する標的タンパク分子の同定に使用でき、また、アルツハイマー病、ダウン 症等の Α βが原因となる神経変性疾患の治療剤または予防剤の作用機序の解析な どに使用できる。 図面の簡単な説明
[図 1]光親和性標識実験による標的分子の同定の結果を示す図である。 Western b lot解析において、一次抗体として、 （A)抗 PS1ZN末端抗体、（B)抗 PSlZLoop 抗体、（C)抗 PS2ZLoop抗体、（D)抗 NicastrinZC末端抗体、（E)抗 APH— la LZC末端抗体あるいは (F)抗 PEN— 2ZN末端抗体を用いた。実施例 4の生物学 的試薬用化合物は PS1 NTFに結合した。 レーン 1:HEK293細胞可溶ィ匕物 レ ーン 2:媒体 (精製物） レーン 3:実施例 4の生物学的試薬用化合物（100 M) (精 製物） レーン 4:実施例 5の生物学的試薬用化合物（100/zM) (精製物）
[図 2]光親和性標識実験における競合阻害試験の結果を示す図である。 Western blot解析において、一次抗体として抗 PS1ZN末端抗体を用いた。 γ— secretase 阻害剤 L— 685, 458の存在下、 PS1 NTFに対する実施例 4の生物学的試薬用化 合物の結合は、阻害を受けなかった。 レーン 1:HEK293細胞可溶化物 レーン 2: レーン 3:媒体 Z媒体存在下 (精製物） レーン 4:実施例 4の生物学的試薬用化 合物（100 M)Z媒体存在下 (精製物） レーン 5:実施例 4の生物学的試薬用化合 ¾(100^Μ)/100^Μ 685, 458存在下（精製物）

Claims

請求の範囲
式 (I)
Figure imgf000131_0001
[式中、
Arは、下記置換基群 A1から選択される 1ないし 3の置換基で置換されてもよいイミ ダゾリル基を示す；
Arは、下記置換基群 A2から選択される 1ないし 3の置換基で置換されてもよい、ピ
2
リジ-ル基、ピリミジ -ル基またはフエ二ル基を示し；
Xは、 c≡c または
- C R 2 - C R 3 - (ここにおいて、 R2および R3は、下記置換基群 A3から選択される置換基を示し、
は単結合または二重結合を示す)を示す；
R1は、下記置換基群 A4から選択される基を示し；
Xは、タンパク質標識基またはタンパク質標識基を含む基で置換されてもよい、 C1
2
6アルキレン基 (該 C1 6アルキレン基は、ハロゲン原子、水酸基、シァノ基、 C3 —8シクロアルキル基、 C3— 8シクロアルコキシ基、ホルミル基、 C1— 6アルキル基（ 該 C 1—6アルキル基は、水酸基で置換されていてもよぐまた、 C1 6アルキレン基 上の同一炭素原子に 1または 2置換することができ、 2つの該 C1 6アルキル基は結 合する炭素原子と共に環状基 (該環状基の環上メチレン基が 1の酸素原子で置換さ れてもよい）を形成することができる）を形成してもよい）、 C 1—6アルコキシ基、ァミノ 基 (該ァミノ基は、 CI— 6アルキル基で置換されてもよい）および置換基群 A5から選 択される 1な 、し 3の置換基で置換されてもょ 、5な 、し 14員非芳香族複素環基から なる群力も選択される 1な 、し 3の置換基で置換されてもょ 、）を示し；
Xは、単結合、置換基群 A5から選択される置換基で置換されてもよいイミノ基、―
3
O または S を示し；
Arは、置換基群 A5から選択される 1ないし 3の置換基で置換されてもよい 6ないし
3
14員環芳香族炭化水素基または置換基群 A5から選択される 1ないし 3の置換基で 置換されてもょ 、5な 、し 14員環芳香族複素環基を示し；
あるいは、
R1および一 X—X— Ar力 X— CO— Nと一緒になつて、下記置換基群 A4か
2 3 3 1
ら選択される 1な 、し 4の置換基で置換されてもょ 、、式 (II)
[化 2]
Figure imgf000132_0001
[式中、 R4は置換基群 A3から選択される置換基を示し；
は単結合または二重結合を示し; Zは単結合、一 CO 、 一 （CH ) n—(ここにおい
1 2
て、 nは、 1ないし 3の整数を示す）または— CR¾6 (ここにおいて、 R5および R6は、下 記置換基群 A4から選択される置換基を示す)を示し; Zは、単結合、一 O 、 一 NR
2
CO—、— CONR―、— CSNR―、— NRCS— (ここにおいて、 Rは、下記置換基群 A4から選択される置換基を示す)または—S—を示し; Zは、単結合、下記置換基群
3
A4力も選択される置換基で置換されてもよいイミノ基、―（CH ) m— (ここにおいて、
2
mは、 1ないし 3の整数を示す）、 -CR7R8- (ここにおいて、 R7および R8は、下記置 換基群 A4力も選択される置換基を示す)または— O を示し; X 、 Xおよび Arは、 前記の意味を有する。 ]で表される基を形成してもよい；
Aは、単結合、タンパク質標識基またはタンパク質標識基を含む基を示す； Aは、単結合またはリンカ一を示す；
2
Aは、単結合または開裂可能なリンカ一を示す；
3
Aは、水素原子、フィッシングタグ基、検出可能なマーカー、固相担体または固相
4
担体と結合させる基を示す；
置換基群 A1 :ハロゲン原子、シァノ基、ニトロ基、 C3— 8シクロアルキル基、 C2— 6 ァルケ-ル基、 C2— 6アルキ-ル基、 C1— 6アルコキシ基、 C3— 8シクロアルコキシ 基、ホルミル基、 C1 6アルキルカルボ-ル基および C 1—6アルキル基（該 C1 6 アルキル基は、ハロゲン原子、水酸基、シァノ基、 C1 6アルコキシ基、 C3— 8シク 口アルキル基、 C1 6アルキルカルボ-ル基からなる群から選択される 1ないし 3の 置換基で置換されてもよい)、タンパク質標識基、タンパク質標識基を含む基、および 固相担体と結合させる基；
置換基群 A2 :ハロゲン原子、水酸基、シァノ基、 C1 6アルコキシ基 (該 C1 6ァ ルコキシ基は、ハロゲン原子、シァノ基、 C1— 6アルコキシ基、 C2— 6ァルケ-ル基 、 C2— 6アルキ-ル基および C3— 8シクロアルキル基からなる群力 選択される 1な いし 3の置換基で置換されてもよい）、 C3— 8シクロアルコキシ基、 C2— 6ァルケ-ル ォキシ基、 C2— 6アルキ-ルォキシ基、タンパク質標識基およびタンパク質標識基を 含む基；
置換基群 A3 :ハロゲン原子、置換基群 A5から選択される 1ないし 3の置換基で置 換されてもょ ヽ 6な ヽし 14員芳香族炭化水素環基、置換基群 A5から選択される 1な V、し 3の置換基で置換されてもょ 、5な 、し 14員芳香族複素環基、 C1— 6アルキル 基 (該 C1 6アルキル基は、ホルミル基、ハロゲン原子、水酸基、保護基を有する水 酸基、シァノ基、 C2— 6ァルケ-ル基、 C2— 6アルキ-ル基、 C3— 8シクロアルキル 基、 C1— 6アルコキシ基、 C1— 6アルキルチオ基、 C1— 6アルキルスルフィエル基、 C1 6アルキルスルホ-ル基、 C1 6アルキルカルボ-ル基、アミノ基（該ァミノ基は 、 1ないし 5のハロゲン原子を適宜有する C1 6アルキル基で置換されてもよい）、置 換基群 A5から選択される 1な 、し 3の置換基で置換されてもょ 、6な 、し 14員芳香 族炭化水素環基、置換基群 A5から選択される 1ないし 3の置換基で置換されてもよ
V、5な 、し 14員芳香族複素環基、置換基群 A5から選択される 1な 、し 3の置換基で 置換されてもょ ヽ 6な ヽし 14員非芳香族炭化水素環基、置換基群 A5から選択される 1な!、し 3の置換基で置換されてもょ 、5な 、し 14員非芳香族複素環基および— X— A (ここにおいて、 Xは、イミノ基、—O または— S を示し、 Aは、置換基群 A5から 選択される 1な 、し 3の置換基で置換されてもょ 、、 6な 、し 14員芳香族炭化水素環 基または 5な ヽし 14員芳香族複素環基を示す)カゝらなる群カゝら選択される 1な ヽし 3 の置換基で置換されてもよい）、 C 1—6アルコキシ基、タンパク質標識基およびタン パク質標識基を含む基；
置換基群 A4 :水素原子、ハロゲン原子、水酸基、シァノ基、ニトロ基、 C3— 8シクロ アルキル基、 C2— 6ァルケ-ル基、 C2— 6アルキ-ル基、 C3— 8シクロアルコキシ基 、 C3— 8シクロアルキルチオ基、ホルミル基、 C1 6アルキルカルボ-ル基、 C1— 6 アルキルチオ基、 C1 6アルキルスルフィエル基、 C1 6アルキルスルホ-ル基、ヒ ドロキシィミノ基、 C 1—6アルコキシィミノ基、置換基群 A5から選択される 1ないし 3の 置換基で置換されてもよ 、C1— 6アルキル基、置換基群 A5から選択される 1な 、し 3の置換基で置換されてもよい C1— 6アルコキシ基、置換基群 A5から選択される 1な
V、し 2の置換基で置換されてもょ 、ァミノ基、置換基群 A5から選択される 1な 、し 2の 置換基で置換されてもよ 、力ルバモイル基、置換基群 A5から選択される 1な 、し 3の 置換基で置換されてもょ ヽ 6な ヽし 14員芳香族炭化水素環基、置換基群 A5から選 択される 1な 、し 3の置換基で置換されてもょ 、5な 、し 14員芳香族複素環基、置換 基群 A5から選択される 1な 、し 3の置換基で置換されてもょ 、6な 、し 14員非芳香 族炭化水素環基、置換基群 A5から選択される 1ないし 3の置換基で置換されてもよ い 5ないし 14員非芳香族複素環基、 C2— 6ァルケ-ルォキシ基、 C2— 6アルキ-ル ォキシ基、 C3— 8シクロアルキルスルフィエル基、 C3— 8シクロアルキルスルホ-ル 基、—X— A (ここにおいて、 Xおよび Aは、前記の意味を有する）、—CO— A (ここに おいて、 Aは、前記の意味を有する）、 =CH—A (ここにおいて、 Aは、前記の意味を 有する）、タンパク質標識基およびタンパク質標識基を含む基；
置換基群 A5 :水素原子、ハロゲン原子、水酸基、シァノ基、ニトロ基、 C3— 8シクロ アルキル基、 C2— 6ァルケ-ル基、 C2— 6アルキ-ル基、 C3— 8シクロアルコキシ基 、 C3— 8シクロアルキルチオ基、ホルミル基、 C1 6アルキルカルボ-ル基、 C1— 6 アルキルチオ基、 C1 6アルキルスルフィエル基、 C1 6アルキルスルホ-ル基、ヒ ドロキシィミノ基、 C2— 6ァルケ-ルォキシ基、 C2— 6アルキ-ルォキシ基、 C3— 8 シクロアルキルスルフィエル基、 C3— 8シクロアルキルスルホ-ル基、タンパク質標識 基およびタンパク質標識基を含む基。 ]
で表される生物学的試薬用化合物またはその塩。
式（I)において、 Ar により構成される、下記式
Figure imgf000135_0001
[化 3]
[ は、
Figure imgf000135_0002
— C≡C—または一 CR2=CR3—を示すか、あるいは R1および一 X—X— Ar力
2 3 3
—X—CO— Nと一緒になつて、式 (Π)で表される基を形成する（但し、式 (Π)におい て、
は二重結合を示す]で表される部分は、アミロイドベータ (A β )タンパクの生成を抑制 する生物学的活性を発揮する、請求項 1の生物学的試薬用化合物またはその塩。 式 (Π)で表される基力 置換基群 Α5から選択される 1ないし 4の置換基で置換され てもよい、下記式
[化 4]
Figure imgf000136_0001
[式中、 R9は、置換基群 A4から選択される置換基を示し、 R4、 X 、 Xおよび Arは、
2 3 3 前記の意味を有する。 ]で表される環状基である、請求項 1または 2の生物学的試薬 用化合物またはその塩。
式 (Π)で表される基力 置換基群 A5から選択される 1ないし 4の置換基で置換され てもよい、下記式
[化 5]
Figure imgf000136_0002
[式中、 R4、 X、 Xおよび Arは、前記の意味を有する。 ]で表される環状基である、
2 3 3
請求項 3の生物学的試薬用化合物またはその塩。
[5] Arは、置換基群 A2から選択される 1な 、し 3の置換基で置換されてもょ 、、フエ-
2
ル基を示す、請求項 1から 4の 、ずれかの生物学的試薬用化合物またはその塩。
[6] 下記式
[化 6]
Figure imgf000137_0001
[式中、 R1Uは、水素原子、水酸基で置換されていてもよい C1— C6アルキル基を示 し、 A 、 A 、 Aおよび Aは、前記の意味を有する。 ]で表される生物学的試薬用化
1 2 3 4
合物である、請求項 1から 5の 、ずれかの生物学的試薬用化合物またはその塩。
[7] タンパク質標識基が、光親和性標識基である、請求項 1から 6のいずれかの生物学 的試薬用化合物またはその塩。
[8] 光親和性標識基が、ベンゾィル基、アジド基、カルボニルアジド基、ジアジリジン基 、エノン基、ジァゾ基、および-トロ基力 選ばれる、請求項 7の生物学的試薬用化合 物またはその塩。
[9] Aのリンカ一が、 L4-L1 -L2-L3- (ここにおいて、 L4は置換基を有してもよい
2
ヘテロ環、 C1 20アルキレン基、 C2— 20ァルケ-レン基、および C2— 20アルキ- レン基、 L1および L3はそれぞれ、単結合、—O—、—S—、 C1— 6アルキル基で置 換されてもよい、 NH 、 一 OC (0) NH 、 一 NHC (0) 0—、 一 NHC (0) NH— 、 一 NHC (O) —、 一C (0) NH 、 一C (O) または
[化 7]
Figure imgf000137_0002
(ここで、 R は、 C1— C6アルキル基を示す）を示し； L2は、単結合、一（CH CH O
2 2
) p (ここで、 pは 1から 20の整数を示す）または—（CH CH NH) q— (ここで、 qは 1
2 2
から 20の整数を示す）を示し; L3は、ハロゲン原子、水酸基、あるいはヘテロ環基で あってもよぐ L1および L3は、隣接する基と環を形成していてもよい）である、請求項 1から 8のいずれかの生物学的試薬用化合物またはその塩。
[10] Aの開裂可能なリンカ一が、一 S— S―、 一O Si— O または一糖残基一である
3
、請求項 1から 9の 、ずれかの生物学的試薬用化合物またはその塩。
[11] Aのフィッシングタグ基力 ピオチン、または 3— (4, 4 ジフルオロー 5, 7 ジメチ
4
ル— 4H— 3 A, 4A—ジァザ— 4—ボラ― S—インダセン— 3 -ィル）プロピオ-ル基 である、請求項 1から 10のいずれかの生物学的試薬用化合物またはその塩。
[12] Aの検出可能なマーカーが、放射性標識基、蛍光標識基、化学発光基、重金属ィ
4
オン、アジド基またはピオチン基である、請求項 1から 10のいずれかの生物学的試薬 用化合物またはその塩。
[13] 下記の化合物力もなる群力 選ばれる、請求項 1から 12のいずれかの生物学的試 薬用化合物もしくはその塩。
1) 5- ( (3aR, 6S, 6aS)—2—ォキソへキサヒドロチェノ [3, 4 d]イミダゾールー 6 ィル)吉草酸 {2 { (E) 3— {4 {4 { (S) 1 {3— { 1 [3—メトキシー 4 一（4ーメチルー 1H—イミダゾールー 1一ィル）フエ-ル]一（E)—メチリデン }一 2— ォキソピペリジン— 1—ィル }ェチル }ベンゾィル }フエ-ル}アタリロイルァミノ }ェチル } アミド、
2) 5- [ (3aR, 6S, 6aS)—2 ォキソへキサヒドロチェノ [3, 4 d]イミダゾールー 6 ィル]吉草酸 { 1 {2— {2— {2— {2— {3 { (E) 3— {4 {4 { 1 {3— { 1 — [3—メトキシ— 4— (4—メチル—1H—イミダゾールー 1—ィル）フエ-ル]— (E) - メチリデン } 2 ォキソピペリジン 1ーィル }ェチル } 4 ベンゾィル }フエ-ル }ァ クリロイルァミノ }エトキシ }ェトキシ}エトキシ }ェチル }— 1H— [1, 2, 3]トリァゾール 4ーィルメチル }ァミド、
3) 5- [ (3aR, 6S, 6aS)—2—ォキソへキサヒドロチェノ [3, 4— d]イミダゾールー 6 ィル]吉草酸 {2— {2— {6 { (E) 3— {4 {4 { 1 {3— { 1 [3—メトキシ -4- (4ーメチルー 1H—イミダゾールー 1 ィル）フエ-ル]一（E)—メチリデン }ー2 —ォキソピペリジン— 1—ィル }ェチル }ベンゾィル }フエ-ル}アタリロイルァミノ }へキ
4) 1 - { (S) - 1 - {4- {4- { (E) - 3- {4- [3- (4, 4ージフノレオロー 5, 7 ジメ チル— 4H— 3a, 4a—ジァザ— 4—ボラ— s—インダセン— 3 -ィル）プロピオ-ル]ピ ペラジン }ー1ーィル}ー3—ォキソプロぺ-ル}べンゾィル}フェ-ル}ェチル}ー3—{
1— [3—メトキシ— 4— (4—メチルー 1H—イミダゾールー 1—ィル）フエ-ル]一（E) ーメチリデン }ピペリジン 2—オン、
5) 5- [ (3aR, 6S, 6aS)—2—ォキソへキサヒドロチェノ [3, 4— d]イミダゾールー 6 ィル]吉草酸 {2— {3— {4 { (E) 3— {4 {4 { 1 {3— { 1 [3—メトキシ -4- (4ーメチルー 1H—イミダゾールー 1 ィル）フエ-ル]一（E)—メチリデン }ー2 ーォキソピペリジン 1ーィル }ェチル }ベンゾィル }フエ-ル}アタリロイル}ピペラジン — 1 ィル } 3 ォキソプロピルジスルファ-ル }ェチル }ァミド、
6) (3aR, 6S, 6aS)— 6 {4 { (E)— 3— {4 {4 { 1 {3— { 1 [3—メト キシ— 4— (4—メチル—1H—イミダゾールー 1—ィル）フエ-ル]一（E)—メチリデン }— 2—ォキソピペリジン一 1—ィル }ェチル }ベンゾィル }フエ-ル}アタリロイル}ピぺ ラジン 1ーィル }ー5 ォキソペンチル}テトラヒドロチェノ [3, 4 d]イミダゾールー
2—オン、
7) 5- [ (3aR, 6S, 6aS)—2—ォキソへキサヒドロチェノ [3, 4— d]イミダゾールー 6 ィル]吉草酸 { 1 {6— {3— {4 {4 { 1 {3— [3—メトキシー 4一（4 メチル — 1H—イミダゾールー 1—ィル）フエ-ル]— (E)—メチリデン }— 2—ォキソピベリジ ン一 1—ィル }ェチル }ベンゾィル }フエ-ル }アタリロイルァミノ }へキシル }— 1 H— [ 1
, 2, 3]トリァゾール— 4—ィルメチル }アミド、
8) 5- ( (3aR, 6S, 6aS)—2 ォキソへキサヒドロチェノ [3, 4 d]イミダゾールー 6 ィル)吉草酸 4 {4 { (S) 1 {3— { 1 [3—メトキシー 4 4ーメチルー 1 H—イミダゾールー 1—ィル）フエ-ル]— (E)—メチリデン }— 2—ォキソピペリジン— 1ーィル }ェチル }ベンゾィル }ベンジルアミド、
9) 6- [5- ( (3aR, 6S, 6aS)—2 ォキソへキサヒドロチェノ [3, 4 d]イミダゾー ルー 6 ィル)ペンタノィルァミノ]吉草酸 4 {4 { (S) 1 {3— { 1 [3—メトキ シー4一（4ーメチルー 1H—イミダゾールー 1 ィル）フエ-ル]一（E)—メチリデン } - 2—ォキソピペリジン 1—ィル }ェチル }ベンゾィル }ベンジルアミド、
10) 5- ( (3aR, 6S, 6aS)—2—ォキソへキサヒドロチェノ [3, 4 d]イミダゾール 6 ィル)吉草酸 {4 {4 { (S) 1 {3— { 1 [3—メトキシー 4 4 メチル — 1H—イミダゾールー 1—ィル）フエ-ル]— (E)—メチリデン }— 2—ォキソピベリジ ン— 1—ィル }ェチル }ベンゾィル }ベンジル }メチルアミド、
11) 6- [5- ( (3aR, 6S, 6aS)— 2 ォキソへキサヒドロチェノ [3, 4 d]イミダゾ 一ルー 6 ィル）ペンタノィルァミノ]吉草酸 {4 {4 { (S) 1 {3— { 1 [3 メ トキシ— 4— (4—メチル—1H—イミダゾールー 1—ィル）フエ-ル]一（E)—メチリデ ン }— 2—ォキソピペリジン— 1—ィル }ェチル }ベンゾィル }ベンジル }メチルアミド、
12) {4— {4一 { (S) 1一 {3— { 1一 [3—メトキシー 4一（4ーメチルー 1H イミダゾ 一ルー 1—ィル）フエ-ル] - (E)—メチリデン }— 2—ォキソピペリジン一 1—ィル }ェ チル }ベンゾィル }— N— {2— [5— ( (3aR, 6S, 6aS)—2—ォキソへキサヒドロチェ ノ [3, 4— d]イミダゾールー 6—ィル）ペンタノィルァミノ]ェチル }ベンズァミド、
13) {4— {4 { (S)— 1 {3— { 1 [3—メトキシー 4 4ーメチルー 1H イミダゾ 一ルー 1—ィル）フエ-ル] - (E)—メチリデン }— 2—ォキソピペリジン一 1—ィル }ェ チル }ベンゾィル }—N— {2— {2— {2— [5—（（3aR, 6S, 6aS)— 2 ォキソへキサ ヒドロチェノ [3, 4 - d]イミダゾール一 6—ィル）ペンタノィルァミノ]エトキシ }ェトキシ} ェチル }べンズアミド、
14) 5- ( (3aR, 6S, 6aS)—2—ォキソへキサヒドロチェノ [3, 4 d]イミダゾール 6 ィル)吉草酸 {2— {3— {4 {4 {2 ヒドロキシー 1 { (S) 3— [3 （(R) —メトキシ） 4— (4—メチル 1H—イミダゾール一 1—ィル）]― (E)—ベンジリデン }— 5 メチル 2 ォキソピペリジン 1 ィル }ェチル }ベンゾィル }フエニル } (E )—アタリロイルァミノ）ェチル }ァミド、
15) 5- ( (3aR, 6S, 6aS)—2—ォキソへキサヒドロチェノ [3, 4 d]イミダゾール 6 ィル)吉草酸 [5— (3- {4- [ (R) -4- (2 ヒドロキシー1 { (S)—3—[3 —メトキシ一 4— (4—メチル 1 H イミダゾール 1 ィル）ベンジリデン]— 5 メチ ルー 2—ォキソピペリジン 1—ィル }ェチル）ベンゾィル]フエ-ル }アタリロイルァミノ )ペンチル]アミド、
16) 5- ( (3aR, 6S, 6aS)—2—ォキソへキサヒドロチェノ [3, 4 d]イミダゾール 6 ィル)吉草酸 { 1一（2— { 2— [2—（2 エトキシ)エトキシ]エトキシ }ェチル)ァ ミド } 3— {4— [4— ( (R)— 2 ヒドロキシ一 1— { (S)— 3— [1— [3—メトキシ一 4— (4ーメチルー 1H—イミダゾールー 1 ィル）フエ-ル]一（E)—メチリデン ]ー5—メチ ルー 2—ォキソピペリジン 1—ィル }ェチル）ベンゾィル]フエ-ル }アクリルアミド、お よび
17)l-{(S)-l-{4-{4-{(E)-3-{4-{3-[4, 4ージフルオロー 5—（1H —ピロール— 2—ィル） 4H— 3a, 4a ジァザ— 4 ボラ— s—インダセン— 3—ィ ル]プロピオ-ル}ピペラジン } 1ーィル } 3 ォキソプロべ-ル}ベンゾィル }フエ -ル }ェチル } 3— {1— [3—メトキシ— 4— (4—メチル 1 H イミダゾール 1— ィル）フエ-ル] - (E)—メチリデン }ピペリジン一 2—オン。
下記の化合物力もなる群力も選ばれる、請求項 1から 12のいずれかの生物学的試 薬用化合物もしくはその塩。
1) 1 {(S) 1 [4一（4ーョードベンゾィル）フエ-ル]ェチル } 3— [1 [3—メ トキシ— 4— (4—メチル—1H—イミダゾールー 1—ィル）フエ-ル]一（E)—メチリデ ン]ピぺリジン 2—オン、
2) 1 {(R) 1 [4一（4ーョードベンゾィル）フエ-ル]ェチル }ー3—[1 [3—メ トキシ— 4— (4—メチル—1H—イミダゾールー 1—ィル）フエ-ル]一（E)—メチリデ ン]ピぺリジン 2—オン、
3) (E)一 3— {4一 [4一（（S)— 1一 {3— [1一 [3—メトキシー 4一 (4ーメチルー 1H —イミダゾールー 1—ィル）フエ-ル]一（E)—メチリデン]—2—ォキソピペリジン— 1 ーィル }ェチル）ベンゾィル]フエ-ルアクリル酸 ターシヤリブチルエステル、
4) ）ー？^ー{2—{2—[2—（2—ァジドェトキシ）ェトキシ]ェトキシ}ェチル } 3— {4一 {4一 { (S)一 1一 {3— {1一 [3—メトキシー 4一 （4ーメチルー 1H イミダゾール — 1—ィル）フエ-ル] (E) メチリデン }— 2—ォキソピペリジン— 1—ィル }ェチル } ベンゾィル }フヱ-ル}アクリルアミド、
5) ）ー？^ー（6—ァジドへキシル）ー3—{4 {4 {1 {3—{1 [3—メトキシー 4一（4ーメチルー 1H—イミダゾールー 1 ィル）フエ-ル]一（E)—メチリデン } 2— ォキソピペリジン 1ーィル }ェチル }ベンゾィル }フエ-ル}アクリルアミド、
6) 1 { (S) 1 [4一（4ーヒドロキシメチルベンゾィル）フエ-ル]ェチル }ー3— { 1— [3—メトキシ— 4— (4—メチルー 1H—イミダゾールー 1—ィル）フエ-ル]一（E) ーメチリデン }ピペリジン 2—オン、
7) {4— {4一 { (S) 1一 {3— { 1一 [3—メトキシー 4一（4ーメチルー 1H イミダゾ 一ルー 1—ィル）フエ-ル] - (E)—メチリデン }— 2—ォキソピペリジン一 1—ィル }ェ チル }ベンゾィル }ベンジル }力ルバミン酸 t ブチルエステル、
8) 1 { (S) 1 [4一（4 アミノメチルベンゾィル）フエ-ル]ェチル } 3— { 1一 [ 3—メトキシー 4一（4ーメチルー 1H—イミダゾールー 1一ィル）フエ-ル]一（E)—メチ リデン }ピペリジン一 2—オン、
9) {4一 {4一 { (S) 1一 {3— { 1一 [3—メトキシー 4一（4ーメチルー 1H イミダゾ 一ルー 1—ィル）フエ-ル] - (E)—メチリデン }— 2—ォキソピペリジン一 1—ィル }ェ チル }ベンゾィル }ベンジル }メチルカルバミン酸 t ブチルエステル、
10) 3— {1— [3—メトキシ一 4— (4—メチル 1 H イミダゾール 1 ィル）フエ- ル]一（E)—メチリデン }一 1一 { (S)— 1一 [4一（4ーメチルァミノメチルベンゾィル）フ ェ -ル]ェチル }ピぺリジン— 2—オン、
11) 1一 {(S) 1一 [4一（4一アジドメチルベンゾィル）フエ-ル]ェチル }一 3— { 1 — [3—メトキシ— 4— (4—メチル—1H—イミダゾールー 1—ィル）フエ-ル]— (E) - メチリデン }ピペリジン 2—オン、
12) 4-{4-{(S)-l-{3-{l- [3—メトキシー 4一（4ーメチルー 1H イミダゾ 一ルー 1—ィル）フエ-ル] - (E)—メチリデン }— 2—ォキソピペリジン一 1—ィル }ェ チル }ベンゾィル }安息香酸 メチルエステル、
13) 4-{4-{(S)-l-{3-{l- [3—メトキシー 4一（4ーメチルー 1H イミダゾ 一ルー 1—ィル）フエ-ル] - (E)—メチリデン }— 2—ォキソピペリジン一 1—ィル }ェ チル }ベンゾィル }安息香酸、および
14) (E) N— {2— {2— [2- (2 アジドエトキシ）エトキシ]エトキシ }ェチル } 3 -{4-{4-{ (R)—2 ヒドロキシ一 1— { (S)— 3— { 1— [3—メトキシ一 4— (4—メ チルー 1H—イミダゾールー 1 ィル）フエ-ル]一（E)—メチリデン } 5—メチルー 2 ーォキソピペリジン 1ーィル }ェチル }ベンゾィル }フエ-ル}アクリルアミド。
A βタンパクの産生機構を解析する方法であって、
a) Α |8タンパクの産生機構に関与するタンパクを含むと考えられる細胞もしくは細胞 成分と、請求項 1から 14のいずれかの生物学的試薬用化合物またはその塩とを接触 させて、
b)請求項 1から 14のいずれかの生物学的試薬用化合物またはその塩と、 A |8タンパ クの産生機構に関与する標的タンパクとの複合体を形成させ、次いで
c)形成された生物学的試薬用化合物と標的タンパク質の複合体を解析し、標的タン パク質を同定する
ことを含む、 A βタンパクの産生機構を解析する方法。
[16] 請求項 1から 14の 、ずれかの生物学的試薬用化合物あって Α βタンパク産生を抑 制する作用を有する生物学的試薬用化合物またはその塩とともに、請求項 1から 14 のいずれかの生物学的試薬用化合物あって Α |8タンパク産生を抑制する作用を有し ない生物学的試薬用化合物またはその塩とを一緒に用いて、両者の生物学的試薬 用化合物またはその塩について同様の方法を行って、両者を比較して、標的タンパ ク質を同定することを含む、請求項 15の方法。
[17] A タンパク産生を抑制する作用を有しない生物学的試薬用化合物またはその塩 が、式 (III)
[化 8]
Figure imgf000143_0001
[式中、 R1"は、水素原子、水酸基で置換されていてもよい C1— C6アルキル基を示 し、 A、 A、 Aおよび Aは、前記の意味を有する。 ]で表される生物学的試薬用化
1 2 3 4
合物またはその塩である、請求項 16の方法。
[18] 式 (I)で表される生物学的試薬用化合物または塩において、 Ar
Figure imgf000143_0002
、 Xおよび Arにより構成される、 A |8タンパク産生を抑制する生物学的活性を発揮
3 3
する部分の標的タンパクを検索して、 Α タンパク産生の抑制機構を解析する、請求 項 15力ら 17の!、ずれかの方法。
[19] 請求項 1から 14の 、ずれかの生物学的試薬用化合物またはその塩を含む、 Α βタ ンパクの産生機構を解析するためのキット。
[20] 式（I)において、 X力 CR2— CR3 を示すか、あるいは R1および一 X—X— A
1 2 3 r力 -X—CO— Nと一緒になつて、式 (II)で表される基を形成する（但し、式 (Π)
3 1
において、
は単結合を示す)、生物学的試薬用化合物であって A βタンパク産生を抑制する作 用を有しない生物学的試薬用化合物またはその塩。
Figure imgf000144_0001
[式中、 R1"は、水素原子、水酸基で置換されていてもよい C1— C6アルキル基を示 し、 A 、 A 、 Aおよび Aは、前記の意味を有する。 ]で表される生物学的試薬用化
1 2 3 4
合物またはその塩である、請求項 20の生物学的試薬用化合物またはその塩。 下記の化合物である、請求項 20または 21の生物学的試薬用化合物もしくはその 塩：
5 - ( (3aR, 6S, 6aS)— 2 ォキソへキサヒドロチェノ [3, 4 d]イミダゾールー 6 一ィル)吉草酸 { 2 { (E) 一 3— {4一 {4一 { 1一 { 3— [3—メトキシー 4一 （4一メチル - 1H—イミダゾールー 1—ィル）ベンジル]— 2—ォキソピペリジン一 1—ィル }ェチル }ベンゾィル }フヱ-ル}アタリロイルァミノ }ェチル }ァミド。
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Cited By (39)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2010038686A1 (ja) 2008-09-30 2010-04-08 エーザイ・アール・アンド・ディー・マネジメント株式会社 新規な縮合アミノジヒドロチアジン誘導体
WO2010098488A1 (en) 2009-02-26 2010-09-02 Eisai R&D Management Co., Ltd. Aryl imidazole compounds and their use as beta amyloid production inhibitors
WO2010098495A1 (en) 2009-02-26 2010-09-02 Eisai R&D Management Co., Ltd. Imidazolylpyrazine derivatives
US7897627B2 (en) 2007-12-21 2011-03-01 Hoffmann-La Roche Inc. Heteroaryl derivatives as orexin receptor antagonists
US7923450B2 (en) 2008-01-11 2011-04-12 Hoffmann-La Roche Inc. Modulators for amyloid beta
WO2012039371A1 (ja) 2010-09-22 2012-03-29 エーザイ・アール・アンド・ディー・マネジメント株式会社 シクロプロパン化合物
US8188101B2 (en) 2008-11-06 2012-05-29 Astrazeneca Ab Dihydropyridopyrimidines for the treatment of AB-related pathologies
US8288403B2 (en) 2008-11-10 2012-10-16 Hoffmann-La Roche Inc. Heterocyclic gamma secretase modulators
US8389717B2 (en) 2008-10-09 2013-03-05 Hoffmann-La Roche Inc. Modulators for amyloid beta
WO2013051639A1 (ja) 2011-10-07 2013-04-11 エーザイ・アール・アンド・ディー・マネジメント株式会社 ピラゾロキノリン誘導体
US8486967B2 (en) 2010-02-17 2013-07-16 Hoffmann-La Roche Inc. Heteroaryl substituted piperidines
EP2615090A1 (en) 2009-02-26 2013-07-17 Eisai R&D Management Co., Ltd. Nitrogen-containing fused heterocyclic compounds and their use as beta amyloid production inhibitors
WO2013115162A1 (ja) 2012-01-31 2013-08-08 エーザイ・アール・アンド・ディー・マネジメント株式会社 シタキセンタン誘導体
WO2013115163A1 (ja) 2012-01-31 2013-08-08 エーザイ・アール・アンド・ディー・マネジメント株式会社 パロキセチン誘導体
WO2013191144A1 (ja) 2012-06-21 2013-12-27 エーザイ・アール・アンド・ディー・マネジメント株式会社 新規インダンスルファミド誘導体
WO2014129477A1 (ja) 2013-02-20 2014-08-28 エーザイ・アール・アンド・ディー・マネジメント株式会社 単環ピリジン誘導体
WO2014133022A1 (ja) 2013-02-28 2014-09-04 エーザイ・アール・アンド・ディー・マネジメント株式会社 テトラヒドロイミダゾ［１，５－ｄ］［１，４］オキサゼピン誘導体
WO2014163146A1 (ja) 2013-04-05 2014-10-09 エーザイ・アール・アンド・ディー・マネジメント株式会社 ピリジニルピラゾロキノリン化合物
WO2014195323A1 (en) 2013-06-04 2014-12-11 Acturum Life Science AB Pyrimidine compounds and their use as gamma secretase modulators
WO2014195322A1 (en) 2013-06-04 2014-12-11 Acturum Life Science AB Triazole compounds and their use as gamma secretase modulators
US8962834B2 (en) 2008-02-22 2015-02-24 Hoffmann-La Roche Inc. Modulators of amyloid beta
WO2015098853A1 (ja) 2013-12-25 2015-07-02 エーザイ・アール・アンド・ディー・マネジメント株式会社 （６Ｓ，９ａＳ）－Ｎ－ベンジル－６－［（４－ヒドロキシフェニル）メチル］－４，７－ジオキソ－８－（｛６－［３－（ピペラジン－１－イル）アゼチジン－１－イル］ピリジン－２－イル｝メチル）－２－（プロプ－２－エン－１－イル）－オクタヒドロ－１Ｈ－ピラジノ［２，１－ｃ］［１，２，４］トリアジン－１－カルボキサミド化合物
US9611254B2 (en) 2013-06-04 2017-04-04 Acturum Life Science AB Triazole compounds and their use as gamma secretase modulators
JP2017512834A (ja) * 2014-03-19 2017-05-25 アミディス・ダイアグノスティックス・インコーポレイテッド アミロイド標的剤及びその使用方法
WO2018009627A1 (en) 2016-07-07 2018-01-11 Bristol-Myers Squibb Company Spiro-fused cyclic ureas as inhibitors of rock
US9938288B1 (en) 2017-04-05 2018-04-10 President And Fellows Of Harvard College Macrocyclic compound and uses thereof
WO2018187331A1 (en) 2017-04-05 2018-10-11 President And Fellows Of Harvard College Macrocyclic compound and uses thereof
WO2019049869A1 (ja) 2017-09-07 2019-03-14 エーザイ・アール・アンド・ディー・マネジメント株式会社 五環式化合物
WO2019099646A1 (en) 2017-11-15 2019-05-23 President And Fellows Of Harvard College Macrocyclic compounds and uses thereof
US10344038B2 (en) 2015-04-30 2019-07-09 President And Fellows Of Harvard College Chromium-mediated coupling and application to the synthesis of halichondrins
WO2019151241A1 (ja) 2018-01-31 2019-08-08 エーザイ・アール・アンド・ディー・マネジメント株式会社 Ａｌｄｈ２活性化剤
US10392400B2 (en) 2016-11-11 2019-08-27 President And Fellows Of Harvard College Palladium-mediated ketolization
US10556910B2 (en) 2014-06-30 2020-02-11 President And Fellows Of Harvard College Synthesis of halichondrin analogs and uses thereof
WO2020179780A1 (ja) 2019-03-05 2020-09-10 エーザイ・アール・アンド・ディー・マネジメント株式会社 五環式複素環化合物
WO2022014680A1 (ja) 2020-07-17 2022-01-20 エーザイ・アール・アンド・ディー・マネジメント株式会社 置換ピペリジン化合物及びその用途
US11498892B2 (en) 2017-07-06 2022-11-15 President And Fellows Of Harvard College Fe/Cu-mediated ketone synthesis
US11548898B2 (en) 2017-07-06 2023-01-10 President And Fellows Of Harvard College Synthesis of halichondrins
CN117561264A (zh) * 2021-04-14 2024-02-13 勃林格殷格翰国际有限公司 作为TRPA1抑制剂的3H,4H,5H,6H,7H‐嘧啶并[4,5-b][1,4]噁嗪-4,6-二酮衍生物
US12478693B2 (en) 2018-05-31 2025-11-25 Amydis, Inc. Compositions and methods for detection of traumatic brain injury

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2003524601A (ja) * 1998-09-30 2003-08-19 エラン ファーマシューティカルズ，インコーポレイテッド 生物学的試薬およびβ−アミロイドペプチドの生成機構の決定法
WO2005115990A1 (ja) * 2004-05-26 2005-12-08 Eisai R & D Management Co., Ltd. シンナミド化合物
JP2006053092A (ja) * 2004-08-13 2006-02-23 Fuji Photo Film Co Ltd バイオセンサー

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2003524601A (ja) * 1998-09-30 2003-08-19 エラン ファーマシューティカルズ，インコーポレイテッド 生物学的試薬およびβ−アミロイドペプチドの生成機構の決定法
WO2005115990A1 (ja) * 2004-05-26 2005-12-08 Eisai R & D Management Co., Ltd. シンナミド化合物
JP2006053092A (ja) * 2004-08-13 2006-02-23 Fuji Photo Film Co Ltd バイオセンサー

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
KORNILOVA A.Y., PNAS, vol. 102, no. 9, 2005, pages 3230 - 3235, XP003019709 *
LI Y.-M., NATURE, vol. 405, no. 6787, 2000, pages 689 - 694, XP001026218 *

Cited By (55)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7897627B2 (en) 2007-12-21 2011-03-01 Hoffmann-La Roche Inc. Heteroaryl derivatives as orexin receptor antagonists
US7923450B2 (en) 2008-01-11 2011-04-12 Hoffmann-La Roche Inc. Modulators for amyloid beta
US8962834B2 (en) 2008-02-22 2015-02-24 Hoffmann-La Roche Inc. Modulators of amyloid beta
WO2010038686A1 (ja) 2008-09-30 2010-04-08 エーザイ・アール・アンド・ディー・マネジメント株式会社 新規な縮合アミノジヒドロチアジン誘導体
US8389717B2 (en) 2008-10-09 2013-03-05 Hoffmann-La Roche Inc. Modulators for amyloid beta
US8188101B2 (en) 2008-11-06 2012-05-29 Astrazeneca Ab Dihydropyridopyrimidines for the treatment of AB-related pathologies
US8288403B2 (en) 2008-11-10 2012-10-16 Hoffmann-La Roche Inc. Heterocyclic gamma secretase modulators
WO2010098495A1 (en) 2009-02-26 2010-09-02 Eisai R&D Management Co., Ltd. Imidazolylpyrazine derivatives
EP2615090A1 (en) 2009-02-26 2013-07-17 Eisai R&D Management Co., Ltd. Nitrogen-containing fused heterocyclic compounds and their use as beta amyloid production inhibitors
WO2010098488A1 (en) 2009-02-26 2010-09-02 Eisai R&D Management Co., Ltd. Aryl imidazole compounds and their use as beta amyloid production inhibitors
US8486967B2 (en) 2010-02-17 2013-07-16 Hoffmann-La Roche Inc. Heteroaryl substituted piperidines
WO2012039371A1 (ja) 2010-09-22 2012-03-29 エーザイ・アール・アンド・ディー・マネジメント株式会社 シクロプロパン化合物
WO2013051639A1 (ja) 2011-10-07 2013-04-11 エーザイ・アール・アンド・ディー・マネジメント株式会社 ピラゾロキノリン誘導体
WO2013115162A1 (ja) 2012-01-31 2013-08-08 エーザイ・アール・アンド・ディー・マネジメント株式会社 シタキセンタン誘導体
WO2013115163A1 (ja) 2012-01-31 2013-08-08 エーザイ・アール・アンド・ディー・マネジメント株式会社 パロキセチン誘導体
WO2013191144A1 (ja) 2012-06-21 2013-12-27 エーザイ・アール・アンド・ディー・マネジメント株式会社 新規インダンスルファミド誘導体
WO2014129477A1 (ja) 2013-02-20 2014-08-28 エーザイ・アール・アンド・ディー・マネジメント株式会社 単環ピリジン誘導体
WO2014133022A1 (ja) 2013-02-28 2014-09-04 エーザイ・アール・アンド・ディー・マネジメント株式会社 テトラヒドロイミダゾ［１，５－ｄ］［１，４］オキサゼピン誘導体
WO2014163146A1 (ja) 2013-04-05 2014-10-09 エーザイ・アール・アンド・ディー・マネジメント株式会社 ピリジニルピラゾロキノリン化合物
US9718805B2 (en) 2013-06-04 2017-08-01 Acturum Life Science AB Triazole compounds and their use as gamma secretase modulators
WO2014195322A1 (en) 2013-06-04 2014-12-11 Acturum Life Science AB Triazole compounds and their use as gamma secretase modulators
US9439904B2 (en) 2013-06-04 2016-09-13 Acturum Life Science AB Pyrimidine compounds and their use as gamma secretase modulators
US9611254B2 (en) 2013-06-04 2017-04-04 Acturum Life Science AB Triazole compounds and their use as gamma secretase modulators
WO2014195323A1 (en) 2013-06-04 2014-12-11 Acturum Life Science AB Pyrimidine compounds and their use as gamma secretase modulators
WO2015098853A1 (ja) 2013-12-25 2015-07-02 エーザイ・アール・アンド・ディー・マネジメント株式会社 （６Ｓ，９ａＳ）－Ｎ－ベンジル－６－［（４－ヒドロキシフェニル）メチル］－４，７－ジオキソ－８－（｛６－［３－（ピペラジン－１－イル）アゼチジン－１－イル］ピリジン－２－イル｝メチル）－２－（プロプ－２－エン－１－イル）－オクタヒドロ－１Ｈ－ピラジノ［２，１－ｃ］［１，２，４］トリアジン－１－カルボキサミド化合物
JP2017512834A (ja) * 2014-03-19 2017-05-25 アミディス・ダイアグノスティックス・インコーポレイテッド アミロイド標的剤及びその使用方法
JP7124006B2 (ja) 2014-03-19 2022-08-23 アミディス・ダイアグノスティックス・インコーポレイテッド アミロイド標的剤及びその使用方法
JP2020143086A (ja) * 2014-03-19 2020-09-10 アミディス・ダイアグノスティックス・インコーポレイテッド アミロイド標的剤及びその使用方法
US10556910B2 (en) 2014-06-30 2020-02-11 President And Fellows Of Harvard College Synthesis of halichondrin analogs and uses thereof
US11155562B2 (en) 2014-06-30 2021-10-26 President And Fellows Of Harvard College Synthesis of halichondrin analogs and uses thereof
US11220513B2 (en) 2015-04-30 2022-01-11 President And Fellows Of Harvard College Chromium-mediated coupling and application to the synthesis of halichondrins
US10344038B2 (en) 2015-04-30 2019-07-09 President And Fellows Of Harvard College Chromium-mediated coupling and application to the synthesis of halichondrins
US10633392B2 (en) 2015-04-30 2020-04-28 President And Fellows Of Harvard College Chromium-mediated coupling and application to the synthesis of halichondrins
WO2018009627A1 (en) 2016-07-07 2018-01-11 Bristol-Myers Squibb Company Spiro-fused cyclic ureas as inhibitors of rock
US10844073B2 (en) 2016-11-11 2020-11-24 President And Fellows Of Harvard College Palladium-mediated ketolization
US10392400B2 (en) 2016-11-11 2019-08-27 President And Fellows Of Harvard College Palladium-mediated ketolization
US9938288B1 (en) 2017-04-05 2018-04-10 President And Fellows Of Harvard College Macrocyclic compound and uses thereof
US11725015B2 (en) 2017-04-05 2023-08-15 President And Fellows Of Harvard College Macrocyclic compound and uses thereof
US12421248B2 (en) 2017-04-05 2025-09-23 President And Fellows Of Harvard College Macrocyclic compound and uses thereof
US10954249B2 (en) 2017-04-05 2021-03-23 President And Fellows Of Harvard College Macrocyclic compound and uses thereof
EP4119563A2 (en) 2017-04-05 2023-01-18 President And Fellows Of Harvard College Macrocyclic compound and uses thereof
WO2018187331A1 (en) 2017-04-05 2018-10-11 President And Fellows Of Harvard College Macrocyclic compound and uses thereof
US11498892B2 (en) 2017-07-06 2022-11-15 President And Fellows Of Harvard College Fe/Cu-mediated ketone synthesis
US11548898B2 (en) 2017-07-06 2023-01-10 President And Fellows Of Harvard College Synthesis of halichondrins
WO2019049869A1 (ja) 2017-09-07 2019-03-14 エーザイ・アール・アンド・ディー・マネジメント株式会社 五環式化合物
EP4403560A2 (en) 2017-11-15 2024-07-24 President And Fellows Of Harvard College Macrocyclic compounds and uses thereof
US11407762B2 (en) 2017-11-15 2022-08-09 President And Fellows Of Harvard College Macrocyclic compounds and uses thereof
US11814398B2 (en) 2017-11-15 2023-11-14 President And Fellows Of Harvard College Macrocyclic compounds and uses thereof
WO2019099646A1 (en) 2017-11-15 2019-05-23 President And Fellows Of Harvard College Macrocyclic compounds and uses thereof
WO2019151241A1 (ja) 2018-01-31 2019-08-08 エーザイ・アール・アンド・ディー・マネジメント株式会社 Ａｌｄｈ２活性化剤
US12478693B2 (en) 2018-05-31 2025-11-25 Amydis, Inc. Compositions and methods for detection of traumatic brain injury
WO2020179780A1 (ja) 2019-03-05 2020-09-10 エーザイ・アール・アンド・ディー・マネジメント株式会社 五環式複素環化合物
US11479552B2 (en) 2020-07-17 2022-10-25 Eisai R&D Management Co., Ltd. Substituted piperidine compounds and their use
WO2022014680A1 (ja) 2020-07-17 2022-01-20 エーザイ・アール・アンド・ディー・マネジメント株式会社 置換ピペリジン化合物及びその用途
CN117561264A (zh) * 2021-04-14 2024-02-13 勃林格殷格翰国际有限公司 作为TRPA1抑制剂的3H,4H,5H,6H,7H‐嘧啶并[4,5-b][1,4]噁嗪-4,6-二酮衍生物

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