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WO2005116207A1 - テロメラーゼ阻害ｅｎａオリゴヌクレオチド - Google Patents

テロメラーゼ阻害ｅｎａオリゴヌクレオチド Download PDF

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WO2005116207A1
WO2005116207A1 PCT/JP2005/009664 JP2005009664W WO2005116207A1 WO 2005116207 A1 WO2005116207 A1 WO 2005116207A1 JP 2005009664 W JP2005009664 W JP 2005009664W WO 2005116207 A1 WO2005116207 A1 WO 2005116207A1
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WO
WIPO (PCT)
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formula
compound
group represented
group
acceptable salt
Prior art date
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Ceased
Application number
PCT/JP2005/009664
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English (en)
French (fr)
Inventor
Makoto Koizumi
Osamu Ando
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Sankyo Co Ltd
Original Assignee
Sankyo Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Sankyo Co Ltd filed Critical Sankyo Co Ltd
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Publication of WO2005116207A1 publication Critical patent/WO2005116207A1/ja
Priority to US11/604,630 priority patent/US20070117773A1/en
Anticipated expiration legal-status Critical
Ceased legal-status Critical Current

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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • C12N15/1137—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing against enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
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    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
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    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
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    • C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
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    • C12Y207/00—Transferases transferring phosphorus-containing groups (2.7)
    • C12Y207/07—Nucleotidyltransferases (2.7.7)
    • C12Y207/07049—RNA-directed DNA polymerase (2.7.7.49), i.e. telomerase or reverse-transcriptase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
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    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C12N2310/11—Antisense
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    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
    • C12N2310/323—Chemical structure of the sugar modified ring structure
    • C12N2310/3231—Chemical structure of the sugar modified ring structure having an additional ring, e.g. LNA, ENA

Definitions

  • the present invention provides a telomerase-inhibiting ENA oligonucleotide conjugate or a pharmacologically acceptable telomerase that suppresses the action of telomerase specifically expressed in cancer cells and is effective in treating and preventing diseases such as cancer.
  • Salts, pharmaceutical compositions containing them as an active ingredient, use of these compounds or pharmaceutically acceptable salts thereof for producing the pharmaceutical compositions, or those compounds or pharmaceutically acceptable salts thereof The present invention relates to a method for preventing or treating a disease, which comprises administering a pharmacologically effective amount of a salt to a warm-blooded animal (particularly a human).
  • telomeres The ends of chromosomes are called "telomeres". During cell division, telomeres shorten due to incomplete replication of chromosomal DNA during mitosis. When the telomeres reach a critical length, the remaining DNA becomes unstable and cells containing the shortened DNA typically enter senescence and eventually die. Such senescence and cell death are not observed in cells containing telomerase. Telomerase is a ribonucleoprotein enzyme that synthesizes one strand of telomeric DNA using the sequence contained in the RNA component of the enzyme as type III. Cells with telomerase activity typically do not undergo senescence and are therefore likely to remain immortal.
  • Telomerase activity was measured in skin, connective tissue, accumulated fat, breast, lung, stomach, spleen, ovary, cervix, uterus, kidney, bladder, colon, prostate, central nervous system, retina and blood tumor cell lines. It is found in more than 85% of all malignancies, and in most cases is not found in normal cells (Feng et al., 1995, Science, 269: 1236-1241; Kim et al. 1994, Science, 266: 2011-2014; and PCT Application No. 93/23572, published November 25, 1993).
  • telomere As a compound that inhibits telomerase, the following sequence that complementarily binds to a certain region of type I RNA in telomerase is used. 5 '-tagggttagacaa- 3' (SEQ ID NO: 1 in Sequence Listing)
  • each nucleoside is bonded with a thiophosphoramidate (hereinafter referred to as “compound
  • Non-Patent Document 1 Science, 269, 1236-1241 (1995)
  • Non-Patent Document 2 Science, 266, 2011-2014 (1994)
  • Patent document 1 W093 / 23572
  • Non-Patent Document 3 Cancer Research, 63, 3931-3939 (2003)
  • telomerase-related diseases such as cancer, and thus completed the present invention.
  • E1 represents a group represented by the formula R1-, a group represented by the formula R1-B6-, or a group represented by the formula R1-B5-B6-
  • E2 is a group represented by the formula -B7-R2, a group represented by the formula -B8-B9-R2, a group represented by the formula -B8-B10-B11-R2, a formula -B8-B10-B12-B13 A group represented by -R2, a group represented by the formula -B8-B10-B12-B14-B15-R2, a group represented by the formula -B8-B10-B12-B14-B16-B17-R2, or A group represented by the formula -B8-B10-B12-B14-B16-B18-B19-R2,
  • B4, B5 and B8 are the same or different
  • T S a general formula
  • B16 is the formula
  • C S (Hereinafter, referred to as “C S ”), a general formula C ′
  • B6, B10, B14 and B18 are the same or different
  • B11 represents a group represented by the following formula:
  • G (Hereinafter referred to as “G”), or a general formula G ′
  • V represents an integer of 1 to 5
  • B9, B13, B17 and B19 are the same or different
  • 3,4-DBB- (CH) -0-P ( 0) (OH) -0-
  • a B4, B5 and B8 are the same or different and T P or T s,
  • Bl, B2, B3 and B12 are the same or different and G p or G s,
  • B16 is C P or C s .
  • B6, B10, B14 and B18 are the same or different and A P or A s,
  • B4, B5 and B8 are the same or different T ep or T es,
  • Bl, B2, B3 and B12 are the same or different and is a G ep or G es,
  • B16 is C ep or C es .
  • B6, B10, B14 and B18 are the same or different and are A ep or A es ;
  • B11 is a G et
  • B9, B13, B17 and B19 are A et , and A compound wherein B7 is T et and a pharmacologically acceptable salt thereof,
  • Bl, B2, B3 and B12 are Ges .
  • B16 is a C es
  • B6, B10, B14 and B18 are A es compound, and a pharmacologically acceptable salt thereof,
  • Exemplified Compound No. 16 HO-G e2s -G e2s -G e2s -T e2s -T e2s -A e2s -G e2s -A e2s -C e2s -CH CH OH
  • Exemplified Compound No. 17 HO-G e2s -G e2s- G e2s -T e2s -T e2s -A e2s -G e2s -A e2s -CH CH OH
  • Exemplified Compound No. 18 HO- G e2 G e2s -G e2s -T e2s -T e2s -A e2 G e2s -CH CH OH
  • Exemplified Compound No. 55 HO-T e2p -A e2p -G e2p -G e2p -G e2p -T e2p -T e2p -A e2p -G e2p -A e2p -C e2p -A e2p- Exemplified Compound No. 56: HO-T e2p -A e2p --G e2p -G e2p -A e2p --A ep --A '
  • H Compound No. 99 HO-A els -G el Compound No. 100: HO-A els -G Compound No. 101: HO-A els -G Compound No. 102: HO-A els -G Compound No. 103: HO- Aels- G Exemplified Compound No. 104: HO- Gels- G Exemplified Compound No. 105: HO- Gels- G Exemplified Compound No. 106: HO- Gels- G Exemplified Compound No. 107: HO- Gels- G compound No. 108: HO-G els -G compound No. 109: HO-T elp -A elp -A elp -CH CH OH
  • Exemplary Compound No. 113 HO-T elp -A
  • Exemplary Compound No. 114 HO-T elp -A
  • Exemplary Compound No. 115 HO-T elp -A
  • Exemplary Compound No. 116 HO-A elp -G -CH CH OH
  • Illustrative compound number 153 H ⁇ —T e2s — A e2s — GG e2p — e2p _ r e2p _ r ⁇ e2p _Q e2
  • GCTGCATAGCTAGC and T represent a group having the chemical structure shown below.
  • more preferred compounds are Exemplified Compound Nos. 1 to 13, 19 to 31, 37 to 39, 73 to 79, and 145 to 158.
  • the conjugation product is a conjugation product of exemplified compound numbers 1 to 3, 13 to 15, 31 to 33, 43 to 45, 61 to 63, 73 to 75, 91 to 93, and 103 to 105.
  • the "pharmacologically acceptable salt” refers to a salt of the compound of the present invention, since the compound can be converted into a salt.
  • a salt is preferably a sodium salt or a potassium salt
  • Metal salts such as alkali metal salts such as lithium salts, alkaline earth metal salts such as calcium salts and magnesium salts, aluminum salts, iron salts, zinc salts, copper salts, nickel salts and cobalt salts;
  • Inorganic salts such as dimethyl salts, tert-octylamine salts, dibenzylamine salts, morpholine salts, glucosamine salts, phenylglycine alkyl ester salts, ethylenediamine salts, N-methyl dalkamine salts, guadin salts, getylamine salts, triethylamine Minamine salt, dicyclohexylamine salt, N, N, monodibenzylethylenediamine salt, chlorinated proforce salt,
  • the compound (I) of the present invention can also exist as a hydrate, and the present invention also includes those hydrates.
  • Another form of the present invention is a medicament containing the compound (I) of the present invention, preferably a medicament used for treatment and prevention of a disease involving telomerase, more preferably It is a drug used for the treatment and prevention of cancer.
  • the compound of the present invention strongly binds to telomerase RNA, and is useful for treatment and prevention of diseases associated with telomerase such as cancer.
  • the compound (I) of the present invention can be prepared according to the method described in the literature (Nucleic Acids Research, 12, 4539 (1984)) using a DNA synthesizer, for example, Model 392 by the phosphoramidite method of PerkinElmer Inc. Can be synthesized.
  • a commercially available reagent can be used for natural nucleosides.
  • W099 is used for nucleosides in which 1 to w are 1. / 14226,
  • WO It can be obtained according to the method described in 00/47599.
  • a reagent capable of reacting with three phosphorus to form a thioether for example, sulfur, tetraethylthiuram disulphide (TETD, Applied Biosystems), xanthan hydride or Using a Beaucage reagent (Glen Research), a thioate derivative can be obtained according to the method described in the literature (Tetarhedron Letters, 32, 3005 (1991), J. Am. Chem. Soc, 112, 1253 (1990)). it can.
  • the compound (I) having a 3,4-DBB group can be synthesized by the method described in JP-A-7-87892 or JP-A-11-199597. Further, the conjugated compound (I) having an acyloxyshethylthiophosphate group can be synthesized by the method described in JP-A-2004-182725.
  • the compound (I) of the present invention or a pharmacologically acceptable salt thereof exhibits telomerase inhibitory activity.
  • the compound (I) of the present invention has excellent pharmacokinetics such as absorption, distribution in the body and half-life in blood, and has low toxicity to organs such as kidney and liver. Therefore, the compound (1) of the present invention is useful, for example, as a medicament, and particularly useful as a medicament for treating or preventing various diseases involving telomerase (particularly, cancer).
  • the compound having the general formula (I) or a pharmacologically acceptable salt thereof may be used as such or as appropriate.
  • excipients eg, sugar derivatives such as lactose, sucrose, glucose, mannitol and sorbitol; starch derivatives such as corn starch, potato starch, ⁇ -starch and dextrin; Cellulose derivatives such as gum arabic; dextran; organic excipients such as pullulan; and silicate derivatives such as light anhydrous silicic acid, synthetic aluminum silicate, calcium silicate and magnesium metasilicate aluminate; hydrogen phosphate Inorganic excipients such as phosphates such as calcium carbonate; carbonates such as calcium carbonate; sulfates such as calcium sulfate; and lubricants (eg, stearic acid, calcium stearate, Metal stearate such as magnesium stearate; talc; colloidal silica; beeswax Waxes, such as oysters, gay tadpoles; boric acid; adipic acid; sodium s
  • excipients
  • Binders for example, hydroxypropylcellulose, hydroxypropylmethylcellulose, polyvinylpyrrolidone, macrogol, and the same compounds as the above-mentioned excipients
  • disintegrants for example, low-substituted hydroxypropyl
  • Cellulose derivatives such as cellulose, carboxymethylcellulose, carboxymethylcellulose calcium, and internally crosslinked carboxymethylcellulose sodium; and chemically modified starches such as carboxymethylstarch, sodium carboxymethylstarch, and crosslinked polyvinylpyrrolidone.
  • Emulsifiers eg, colloidal clays such as bentonite and veegum
  • metal hydroxides such as magnesium hydroxide and aluminum hydroxide
  • Anionic surfactants such as lithium and calcium stearate
  • cationic surfactants such as benzalcodium salt
  • non-ionic surfactants such as polyoxyethylene alkyl ether, polyoxyethylene sorbitan fatty acid ester, and sucrose fatty acid ester.
  • Ionic surfactants such as methylparaben and propylparaben; alcohols such as chlorobutanol, benzyl alcohol and phenylethyl alcohol; benzalco-dimethyl chloride; phenol) And phenols such as cresol; thimerosal; dehydroacetic acid; and sorbic acid.
  • flavoring agents for example, commonly used sweeteners, sour flavors, flavors and the like.
  • a colloidal dispersion system can be used in addition to the above.
  • Colloidal dispersion systems are expected to have the effect of increasing the stability of the compound in vivo and the effect of efficiently transporting the compound to specific organs, tissues or cells.
  • the colloid dispersion system is not limited as long as it is commonly used, but is based on polymer composites, nanocapsules, microspheres, beads, and lipids including oil-in-water emulsifiers, micelles, mixed micelles, and liposomes.
  • a plurality of ribosomes or artificial membranes of J cells having an effect of efficiently transporting a compound to a specific organ, tissue or cell
  • Mannino et al. Biotechniques, 1988,6,682; Blume and Cevc'Biochem et Biophys. Acta, 1990, 1029, 91; Lappalainen et al, Antiviral Res., 1994, 23, 119; Chonn and Cullis, Current Op. Biotech., 1995, 6, 698;).
  • Monomembrane ribosomes ranging in size from 0.2-0.4 ⁇ m, can encapsulate a significant proportion of the aqueous buffer containing macromolecules, and the compound is encapsulated in this aqueous inner membrane, Is transported to brain cells in a more active form (Fraley et al, Trends Biochem. Sci., 1981, 6, 77).
  • the composition of the ribosome is usually a complex of a lipid, especially a phospholipid, especially a phospholipid with a high phase transition temperature, with one or more steroids, especially cholesterol.
  • lipids useful for liposome production include phosphatidylglycerols, such as phosphatidylglycerol, phosphatidylcholine, phosphatidylserine, sphingolipids, phosphatidylethanolamine, celeb mouthside and gandarioside. Particularly useful is diasylphosphatidylglycerol, where the lipid moiety contains 14-18 carbon atoms, especially 16-18 carbon atoms, and is saturated (within the 14-18 carbon atom chain). Lacks a double bond).
  • Representative phospholipids include phosphatidylcholine, dipalmitoyl phosphatidylcholine, and distearoyl phosphatidylcholine.
  • the targeting of colloidal dispersions may be either passive or active. Passive targeting is achieved by taking advantage of the ribosome's natural tendency to distribute to cells in the reticulum of organs containing sinusoids. Active targeting, on the other hand, includes, for example, protein coats of viruses (Morishita et al., Proc. Natl. Acad. Sci. OJ. SA), 1993, 90, 8474), monoclonal antibodies (or appropriate binding portions thereof).
  • Binding specific ligands such as sugars, glycolipids or proteins (or appropriate oligopeptide fragments thereof) to ribosomes, or achieving distribution to organs and cell types other than the naturally occurring localized sites For example, a technique of modifying the ribosome by changing the composition of the ribosome can be used.
  • the surface of the targeted colloidal dispersion can be modified in various ways.
  • lipid groups can be incorporated into the liposome lipid bilayer in order to maintain the target ligand upon close association with the lipid bilayer.
  • Various linking groups can be used to link the lipid chain to the targeting ligand.
  • Target ligands that bind to specific cell surface molecules found predominantly on cells where delivery of the oligonucleotides of the invention are desired include, for example, (1) A liver, a growth factor or a suitable oligopeptide fragment thereof, or (2) found predominantly on a target cell, which is associated with a particular cellular receptor that is expressed predominantly by the desired cell. It can be a polyclonal or monoclonal antibody, or a suitable fragment thereof (eg, Fab; F (ab ') 2), which specifically binds to the antigenic epitope.
  • Two or more bioactive agents eg, compound (I) and another agent
  • Agents that increase the intracellular stability of the contents and Z or targeting can also be added to the colloidal dispersion.
  • the amount of the compound (I) of the present invention or a pharmacologically acceptable salt thereof depends on the condition, age, etc.
  • the lower limit is lmg (preferably 30mg) per dose
  • the upper limit is 2000 mg (preferably 1500 mg)
  • Example 14 of JP-A-2000-297097 5'-0-dimethoxytrityl-2'-0,4-C-ethylene-6-N-benzoyladenosine-3-0. -(2-Cyanoethyl ⁇ , ⁇ -diisopropyl) phosphoramidite),
  • Example 27 (5-0-dimethoxytrityl-2-0,4-C-ethylene-2- 2--isobutyrylguanosine-3-0- ( 2-cyanoethyl ( ⁇ , ⁇ -diisopropyl) phosphoramidite),
  • Example 22 (5-0-dimethoxytrityl-2-0,4-C-ethylene-4- ⁇ -benzoyl-5-methylcytidine-3-0 -(2-cyanoethyl ⁇ , ⁇ -diisopropyl) phosphoramidite),
  • Example 9 (5 -O-dimethoxytrityl -2, -0,4, -C-ethylene-5-
  • the oligomer is also excised from the support, and the protecting group on the phosphorus atom, the cyanoethyl group, and the protecting group on the nucleobase are removed. did.
  • the solvent was distilled off under reduced pressure, and the remaining residue was subjected to reverse phase HPLC (LC-10VP, manufactured by Shimadzu Corporation, column (Merck, Chromolith Performance RP-18e (4.6 ⁇ 100 mm)), A solution: 5% acetonitrile, 0.1M triethylamine acetate.
  • Aqueous solution (TEAA), pH 7.0, B solution: acetonitrile, B%: 20% ⁇ 60% (10 min, linear gradient); 60 ° C; 2 ml / min; 254)) to remove dimethoxytrityl group
  • TEAA acetonitrile
  • B% 20% ⁇ 60% (10 min, linear gradient); 60 ° C; 2 ml / min; 254)
  • nucleotide sequence of this compound is a sequence complementary to nucleotide numbers 136-148 of Human telomerase RNA (GenBank accession No. U86046). (Example 2)
  • Example 2 having the target sequence in the same manner as the compound of Example 1 was synthesized using 1.2 mol of the same CPG as in Example 1.
  • reverse phase HPLC Shield-Coupled Device LC-10VP, column (Merck, Chromolith Performance RP-18e (4.6 x 100mm)
  • a solution 5% acetonitrile, 0.1M aqueous triethylamine acetate (TEAA), pH 7.0
  • B solution acetonitrile
  • B% 10% ⁇ 50% (10 min, linear gradient) at 60 ° C; 2 ml / min; 254 nm
  • the peak of the target compound having a dimethoxytrityl group was collected. .
  • the nucleotide sequence of the present compound is human telomerase RNA (GenBank accession No. U86046).
  • Example 3 having the target sequence in the same manner as the compound of Example 1 was synthesized using 1.2 mol of the same CPG as in Example 1.
  • reverse phase HPLC LC-10VP, Shimadzu Seisakusho, column (Merck, Chromolith Performance RP-18e (4.6 x 100mm)
  • a solution 5% acetone Tril, 0.1 M aqueous solution of triethylamine acetate (TEAA), pH 7.0
  • the peak of the target substance having a dimethoxytrityl group was collected.
  • the nucleotide sequence of the present compound is human telomerase RNA (GenBank accession No. U86046).
  • Example 4 having the target sequence similarly to the compound of Example 1 was synthesized using 1.2 mol of the same CPG as in Example 1.
  • reverse phase HPLC Shield-Coupled Device LC-10VP, column (Merck, Chromolith Performance RP-18e (4.6 x 100mm)
  • a solution 5% acetonitrile, 0.1M aqueous triethylamine acetate (TEAA), pH 7.0
  • B solution acetonitrile
  • B% 10% ⁇ 50% (10 min, linear gradient) at 60 ° C; 2 ml / min; 254 nm)
  • the peak of the target compound having a dimethoxytrityl group was collected. .
  • the nucleotide sequence of this compound is the same as that of Human telomerase RNA (GenBank accession No. U86046).
  • Example 5 having the target sequence in the same manner as the compound of Example 1 was synthesized using 1.2 mol of the same CPG as in Example 1.
  • reverse phase HPLC Shield-Coupled Device LC-10VP, column (Merck, Chromolith Performance RP-18e (4.6 x 100mm)
  • a solution 5% acetonitrile, 0.1M aqueous triethylamine acetate (TEAA), pH 7.0
  • B solution acetonitrile
  • B% 10% ⁇ 50% (10 min, linear gradient) at 60 ° C; 2 ml / min; 254 nm
  • the peak of the target compound having a dimethoxytrityl group was collected. .
  • the nucleotide sequence of the present compound is human telomerase RNA (GenBank accession No. U86046).
  • Example 6 having the target sequence similarly to the compound of Example 1 was synthesized using 1.2 mol of the same CPG as in Example 1.
  • reverse phase HPLC Shield-Coupled Device LC-10VP, column (Merck, Chromolith Performance RP-18e (4.6 x 100mm)
  • a solution 5% acetonitrile, 0.1M aqueous triethylamine acetate (TEAA), pH 7.0
  • B solution acetonitrile
  • B% 10% ⁇ 50% (10 min, linear gradient) at 60 ° C; 2 ml / min; 254 nm)
  • the peak of the target compound having a dimethoxytrityl group was collected. .
  • Example 7 having the target sequence in the same manner as the compound of Example 1 It was synthesized using PG 1.2 / z mol. After deprotection, reverse phase HPLC (Shimadzu LC-10VP, column (Merck, Chromolith Performance RP-18e (4.6 x 100mm)), A solution: 5% acetonitrile, 0.1M aqueous triethylamine acetate (TEAA), pH 7.0 , B solution: acetonitrile, B%: 10% ⁇ 50% (10 min, linear gradient) at 60 ° C; 2 ml / min; 254 nm), and the peak of the target compound having a dimethoxytrityl group was collected. .
  • Example 8 having the target sequence similarly to the compound of Example 1 was synthesized using 1.2 mol of Universal Q500 CPG (manufactured by Glen Research). After deprotection, reverse phase HPLC (LC-10VP manufactured by Shimadzu Corporation, column (Merck, Chromolith Performance RP-18e (4.6 ⁇ 100mm)), A solution: 5% acetonitrile, 0.1M aqueous triethylamine acetate (TEAA), pH 7.0, B solution: acetonitrile, B%: 10% ⁇ 50% (10 min, linear gradient) at 60 ° C; 2 ml / min; 254 nm), and the peak of the target compound having a dimethoxytrityl group was collected.
  • LC-10VP manufactured by Shimadzu Corporation, column (Merck, Chromolith Performance RP-18e (4.6 ⁇ 100mm)
  • a solution 5% acetonitrile, 0.1M aqueous triethylamine acetate (TEAA), pH 7.0
  • telomerase RNA GenBank accession No. U860436.
  • Example 9 having the target sequence in the same manner as the compound of Example 1 was synthesized using 2.7 mol of the same CPG as in Example 1. Finally, 6-0-[(3,4-dibenzyloxy) benzyl] -hexanediol-1-0- (2-cyanoethyl ⁇ , ⁇ -diisopropyl) phosphoramidite described in Example 13b of JP-A-11199597 was used. Condensed.
  • Example 10 having the target sequence in the same manner as the compound of Example 1 was synthesized using 2.7 mol of the same CPG as in Example 1. Finally, condensation of 6-0-[(3,4-dibenzyloxy) benzyl] -propanediol-1-0- (2-cyanoethyl ⁇ , ⁇ -diisopropyl) phosphoramidite described in Example 12b of JP-A-11199597 did.
  • the finally purified product was prepared by reverse-phase HPLC (LC-10VP, Shimadzu Seisakusho, column (Merck, Chromolith Performance RP-18e (4.6 x 100mm))
  • a solution 5% acetonitrile Solution, 0.1M aqueous solution of triethylamine acetate (TEAA), pH 7.0
  • the compound is a negative ion ES
  • the nucleotide sequence of the present compound is human telomerase RNA (GenBank accession No. U86046).
  • Example 11 having the target sequence similarly to the compound of Example 1 was synthesized using 2.7 mol of the same CPG as in Example 1. 5'-0-[(3,4-dibenzyloxy) benzyl] -thymidine-3, -0- (2-cyanoethyl ⁇ , ⁇ -diisopropyl) described in Example 12b of JP-A-7-87982 The phosphoramidite was finally condensed.
  • the nucleotide sequence of the present compound is human telomerase RNA (GenBank accession No. U86046).
  • Example 12 having the target sequence in the same manner as the compound of Example 1 was synthesized using 2.7 mol of the same CPG as in Example 1. 5′-0-[(3,4-Dibenzyloxy) benzyl] -thymidine-3-0- (2-cyanoethyl ⁇ , ⁇ -diisopropyl) phosphoramidite described in Example 12b of JP-A-7-87982 is finally condensed did.
  • the finally purified Hon-Dai-Dai product was prepared by ion-exchange HPLC (LC-10VP, Shimadzu Seisakusho, column (Toso Corp., DEAE-5PW (10 X 50mm))
  • a solution 20% acetonitrile Aqueous solution
  • B solution 20% acetonitrile 67 mM phosphate buffer 1.5 M potassium bromide aqueous solution pH 6.8
  • B% 10% ⁇ 60% (8 min, linear gradient); 60 ° C; 2 ml / min; 254 nm)
  • the compound is a negative ion
  • the nucleotide sequence of the present compound is human telomerase RNA (GenBank accession No. U86046).
  • Example 13 having the target sequence similarly to the compound of Example 1 was synthesized using 1.0 mol of the same CPG as in Example 1.
  • Phosphalink manufactured by Applied Biosystems
  • Phosphalink was used at the end of the condensation according to the attached protocol in order to introduce a thiophosphoric acid group at the 5 'end.
  • the nucleotide sequence of this compound is human telomerase RNA (Gene Bank accession No. U860
  • Example 13 The compound of Example 13 (18 A units) was dissolved in 0.8 mL of DMF, and diisopropylethylamine (4.96 ⁇ L) was added thereto, followed by 2- (stearoyloxy) ethyl bromide (Ackrman et al. J. Am. Chem. Soc, 78, (1956) 6025) A solution prepared by heating and dissolving 19 mg in 0.8 mL of DMF was added. 42 The reaction was performed at ° C for 4 days. After the completion of the reaction, the mixture was washed three times with 5 mL of n-hexane, 2 mL of water was added, and the precipitated insoluble material was removed by filtration with a membrane filter.
  • the final purified product was prepared by ion-exchange HPLC (LC-10VP, Shimadzu Seisakusho, column (Tosoichi Co., Ltd., DEAE-5PW (10 X 50 mm)), A solution: 20 % Acetonitrile aqueous solution, B solution: 20% acetonitrile 67 mM phosphate buffer 1.5 M potassium bromide aqueous solution pH 6.8 B%: 10% ⁇ 80% (10 min, linear gradient); 60 ° C; 2 ml / min; 254 nm) When eluted with, it was eluted at 8.23 minutes (3.9 A units). The compound was identified by negative ion ESI mass spectrometry.
  • the nucleotide sequence of this compound is human telomerase RNA (Gene Bank accession No. U860
  • the C a and T a portions are 4-N-benzoyl-3,-(trityl) amino-2 ′, 3′-dideoxy-5-methylcytidine 5 ′-(2-cyanoethyl ⁇ , ⁇ -diisopropyl Oral pill phosphoramidite) or 3 (trityl) amino-3, -deoxythymidine 5 (2-cyanoethyl ⁇ , ⁇ -diisopropyl phosphoramidite) in the literature (Nelson J.S. et al. J. Org. Chem. (1997) 62, 7278-7287).
  • CPG control pore glass
  • the oligomer is also excised from the support, and the protecting group on the phosphorus atom, the cyanoethyl group, and the protecting group on the nucleobase are removed. did.
  • the residue was dissolved in 2 ml of water, and desalted by gel filtration with Sephadex G-25 (15 X 300 mm). The fractions corresponding to the target substance were collected and evaporated, and the residue was dissolved in 1 ml of water and filtered through a 0.45 m filter (MILLIPORE, Ultrafree-MC) to obtain the target oligonucleotide.
  • MILLIPORE Ultrafree-MC
  • This compound is ion-exchange HPLC (LC-10VP, Shimadzu Seisakusho, column (Tosoichi, DE AE-5PW (10 X 50mm)), A solution: 20% aqueous solution of acetonitrile, B solution: 20% aqueous solution of acetonitrile 67mM phosphate buffer 1.5M potassium bromide aqueous solution pH6.8 B%: 20% ⁇ 40% (10min, linear gradient); 60 ° C; 2ml / min; 254nm) eluted at 5.92min . In addition, the compound was identified by negative ion ESI mass spectrometry (calculated value: 4216.71, measured value: 421.51).
  • the present compound has the same sequence as GRN163 described in Asai et al., 2003, Cancer Research 63, 3931-3939, and has a cytosine base as a 5-methylcytosine base.
  • nucleotide sequence of this compound is a sequence complementary to nucleotide numbers 136-148 of Human telomerase RNA (GenBank accession No. U86046).
  • RNA oligonucleotide having the sequence of RNAse (5, -UUGUCUAACCCUA-3,) was prepared so as to be present in the same solution.
  • the solution containing both chains was heated at 90 ° C for 5 minutes, and gradually cooled to room temperature.
  • the sample solution was measured using a spectrophotometer (Shimadzu UV-3100PC).
  • the sample was placed in a cell (cell thickness 10 mm, cylindrical jacket type) and heated with circulating water heated in an incubator (EKO, Haake FE2). While monitoring the temperature using a digital thermometer (SATO SK-1250MC), the temperature was increased from 20 ° C to 95 ° C, and the absorbance at 260 ° C was measured at 1 ° C intervals. The temperature at which the amount of change in absorbance per 1 ° C became the maximum was defined as Tm, and the compounds of Examples were evaluated. The results are shown in Table 1.
  • Compound of Example 6 71 Compound of Reference Example 1 (Compound A)
  • the compound of the Example exhibited a higher Tm value than Compound A. This means that it binds to telomerase more strongly than compound A, which is known to have telomerase inhibitory activity, suggesting that the compounds of the examples inhibit the enzyme activity of telomerase.
  • Example 1 The compound of Example 1 (approximately 3.6 nmol) or the compound A obtained in Reference Example 1 (approximately 3.6 nmol) was dissolved in 500 ⁇ L of a 20 mM aqueous sodium acetate solution ( ⁇ 5.0), and the solution was dissolved at 37 ° C. The mixture was heated, 73 L was sampled at a predetermined time, and 271 sodium borate aqueous solution (pH 9.18) was neutralized.
  • Example 1 As is clear from the figure, the compound of Example 1 was not hydrolyzed at all after about 100 hours, whereas 60% of compound A was observed after about 24 hours. Was done. The results indicated that the compound of Example 1 was extremely stable under the same acidic condition as the physiological condition in the endocytosed cells in comparison with Compound A.
  • a mixture of the compound of Example 1 in a digestible oil for example, soybean oil, cottonseed oil, or olive oil, is injected into gelatin with a positive displacement pump, and contains soft capsules containing 100 mg of the active ingredient. And washed and dried.
  • a digestible oil for example, soybean oil, cottonseed oil, or olive oil
  • Time elapsed time from the start of the test.
  • Residual amount Residual amount when the test start time is 100%.
  • the compound of the present invention strongly binds to telomerase RNA, and is useful for treatment and prevention of diseases associated with telomerase such as cancer.

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Abstract

　テロメラーゼの働きを抑制し、テロメラーゼが関与している疾患の治療に有効である新規ENAアンチセンス化合物を提供することを目的とする。 　一般式 E1-B1-B2-B3-B4-E2　（I） （式中、E1は式R1-で表される基等を示し、E2は式-B7-R2で表される基等を示し、B4、B5及びB8は同一又は異なってTp等を示し、B1、B2、B3及びB12は同一又は異なってGp等を示し、B16はCp等を示し、B6、B10、B14及びB18は同一又は異なってAp等を示す。）で表わされる化合物、及び、その薬理学上許容される塩。

Description

テロメラーゼ阻害 ENAオリゴヌクレオチド
技術分野
[0001] 本発明は、癌細胞で特異的に発現しているテロメラーゼの働きを抑制し、癌などの 疾患の治療 ·予防に有効であるテロメラーゼ阻害 ENAオリゴヌクレオチドィ匕合物又は その薬理上許容しうる塩、それらを有効成分として含有する医薬組成物、該医薬組 成物を製造するためのそれら化合物又はその薬理上許容しうる塩の使用、或はそれ ら化合物又はその薬理上許容しうる塩の薬理的な有効量を温血動物 (特にヒト）に投 与する疾病の予防方法又は治療方法に関する。
背景技術
[0002] 染色体の末端は「テロメァ」と呼ばれる。細胞分裂時に、テロメァは、有糸分裂の間 における染色体 DNAの不完全な複製のために短くなる。テロメァがある臨界的長さ に達すると、残存する DNAは不安定になり、短くなつた DNAを含む細胞は、典型的 には老化に入り、最終的には死滅する。このような老化および細胞死はテロメラーゼ を含有する細胞では観察されない。テロメラーゼは、本酵素の RNA成分内に含有さ れる配列を铸型として用い、テロメリック DNAの一方の鎖を合成するリボ核蛋白質酵 素である。テロメラーゼ活性を有する細胞は、典型的には老化を受けず、従って不死 を維持できると考えられる。テロメラーゼ活性は、皮膚、結合組織、蓄積脂肪、乳房、 肺、胃、脾臓、卵巣、頸部、子宮、腎臓、膀胱、結腸、前立腺、中枢神経系、網膜お よび血液腫瘍細胞系を含めた、全ての悪性腫瘍のうち 85%を超えるもので見出され ており、正常細胞においては、ほとんどの場合、見出されていない（Fengら、 1995、 Sc ience, 269 : 1236- 1241； Kimら、 1994、 Science, 266 : 2011- 2014;および 1993年 11月 2 5日に公開された PCT出願 93/23572号参照)。
[0003] 従ってテロメラーゼを阻害する化合物は癌などを有効に治療し、また、予防し得ると 考えられている。
[0004] 一方、テロメラーゼを阻害する化合物として、テロメラーゼ内の铸型 RNAの一定の 領域で相補的に結合する下記の配列 5' - tagggttagacaa- 3' (配列表の配列番号 1)
を有し、各ヌクレオシド間がチォホスホロアミデートで結合したィ匕合物（以下、「化合物
A」という。）が知られている（Asaiら、 2003, Cancer Research 63, 3931-3939)。
非特許文献 1 : Science, 269, 1236-1241 (1995)
非特許文献 2 : Science, 266, 2011-2014 (1994)
特許文献 1： W093/23572号公報
非特許文献 3 : Cancer Research, 63, 3931-3939 (2003)
発明の開示
発明が解決しょうとする課題
[0005] これまでに知られている化合物 Aは活性及び安定性が充分では無力つた。従ってよ り活性及び安定性が向上したィ匕合物が期待されていた。
課題を解決するための手段
[0006] 本発明者は、テロメラーゼの働きを抑制する物質にっ 、て検討した結果、一般式 (I
)を有する化合物が強力にテロメラーゼ RNAに結合することを見出し、癌などのテロ メラーゼの関与する疾患の治療に有用であることを見出し、本発明を完成した。
[0007] 即ち、本発明は、下記一般式 (I)
E1-B1-B2-B3-B4-E2 (I)
(式中、 E1は式 R1-で表される基、式 R1-B6-で表される基、又は、式 R1-B5-B6-で表 される基を示し、
E2は式- B7-R2で表される基、式- B8-B9-R2で表される基、式- B8-B10-B11-R2で表 される基、式- B8-B10-B12-B13-R2で表される基、式- B8-B10-B12-B14-B15-R2で 表される基、式- B8-B10-B12-B14-B16-B17-R2で表される基、又は、式- B8-B10-B 12-B14-B 16-B 18- B 19- R2で表される基を示し、
B4、 B5及び B8は同一又は異なって式
[0008] [化 1]
Figure imgf000004_0001
[0009] で表される基 (以下、「ΤΡ」と表記する。 )、式
[0010] [化 2]
Figure imgf000004_0002
[0011] で表される基 (以下、「TS」と表記する。）、一般式 Tep
[0012] [化 3]
Figure imgf000004_0003
[0013] (式中、 1は 1乃至 5の整数を示す。）で表される基、又は、一般式 Tes [0014] [化 4]
Figure imgf000004_0004
[0015] (式中、 mは 1乃至 5の整数を示す。）で表される基を示し
Bl、 B2、 B3及び B12は同一又は異なって式 [0016] [化 5]
Figure imgf000005_0001
[0017] で表される基 (以下、「GP」と表記する。）、式
[0018] [化 6]
Figure imgf000005_0002
[0019] で表される基（以下、「 」と表記する。）、 -般式 G'
[0020] [化 7]
Figure imgf000005_0003
[0021] (式中、 nは 1乃至 5の整数を示す。）で表される基、又は、一般式 G' [0022] [化 8]
Figure imgf000005_0004
[0023] (式中、 0は 1乃至 5の整数を示す。）で表される基を示し、 B16は式
[0024] [化 9]
Figure imgf000006_0001
[0025] で表される基 (以下、 rcPjと表記する。 )、式
[0026] [化 10]
Figure imgf000006_0002
[0027] で表される基 (以下、「CS」と表記する。 )、一般式 C'
[0028] [化 11]
Figure imgf000006_0003
[0029] (式中、 pは 1乃至 5の整数を示す。）で表される基、又は、 -般式 [0030] [化 12]
Figure imgf000006_0004
[0031] (式中、 qは 1乃至 5の整数を示す。）で表される基を示し、
B6、 B10、 B14及び B18は同一又は異なって式
[0032] [化 13]
Figure imgf000007_0001
[0033] で表される基 (以下、「AP」と表記する。 )、式
[0034] [化 14]
Figure imgf000007_0002
[0035] で表される基 (以下、「AS」と表記する。 )、一般式 Aep
[0036] [化 15]
Figure imgf000007_0003
[0037] (式中、 sは 1乃至 5の整数を示す。）で表される基、又は、一般式 A' [0038] [化 16]
Figure imgf000007_0004
[0039] (式中、 tは 1乃至 5の整数を示す。）で表される基を示し、 B11は式
[0040] [化 17]
Figure imgf000008_0001
[0041] で表される基 (以下、「G と表記する。 )、又は一般式 G' [0042] [化 18]
Figure imgf000008_0002
[0043] (式中、 uは 1乃至 5の整数を示す。）で表される基を示し、 B15は式
[0044] [化 19]
Figure imgf000008_0003
[0045] で表される基 (以下、 rc'jと表記する。 )、又は、一般式 Cet [0046] [化 20]
Figure imgf000008_0004
[0047] (式中、 Vは 1乃至 5の整数を示す。）で表される基を示し、 B9、 B13、 B17及び B19は同一又は異なって、式 [0048] [化 21]
Figure imgf000009_0001
[0049] で表される基 (以下、「 」と表記する。）、又は、一般式 A' [0050] [化 22]
Figure imgf000009_0002
[0051] (式中、 wは 1乃至 5の整数を示す。）で表される基を示し、 B7は式
[0052] [化 23]
Figure imgf000009_0003
[0053] で表される基 (以下、「f」と表記する。 )、又は、 -般式 T' [0054] [化 24]
Figure imgf000009_0004
[0055] (式中、 Xは 1乃至 5の整数を示す。）で表される基を示し、 R1は水酸基、式
[0056] [化 25]
Figure imgf000010_0001
で表される基（以下、「3,4- DBB」と表記する。 )、 3,4- DBB- (CH ) - 0- P(=0)(OH)- 0-
2 3
基、 3,4- DBB- (CH ) - 0- P(=S)(OH)- 0-基、 3,4- DBB- (CH ) - 0- P(=0)(OH)- 0-基、
2 3 2 6
3,4- DBB- (CH ) - 0- P(=S)(OH)- 0-基、 C H C(0)0(CH ) SP(=0)(OH)- 0-基、 C H
2 6 15 31 2 2 16
C(0)0(CH ) SP(=0)(OH)- 0-基、 C H C(0)0(CH ) SP(=0)(OH)- 0-基、 C H C(
33 2 2 17 35 2 2 18 37
0)0(CH ) SP(=0)(OH)— O—基、又 ίま、 C H C(0)0(CH ) SP(=0)(OH)— O—基を示し、
2 2 19 39 2 2
R2iま水素原子、 -P(=0)(OH)-0-CH -CH—OH基、又 ίま、 P(=S)(OH)— O— CH— CH -
2 2 2 2
OH基を示す。
但し、 B4、 B5及び B8が同一又は異なって TP又は Tsであり、
Bl、 B2、 B3及び B12が同一又は異なって Gp又は Gsであり、
B16が CP又は Csであり、
B6、 B10、 B14及び B18が同一又は異なって AP又は Asであり、
B11が であり、
B15が であり、
B9、 B13、 B17及び B19が であり、かつ、
B7が である場合は除かれる。）
を有する化合物、及び、その薬理学上許容される塩である。
上記一般式 (I)で表される化合物、及び、その薬理学上許容される塩において、好 適に〖ま、
(1) B4、 B5及び B8が同一又は異なって Tep又は Tesであり、
Bl、 B2、 B3及び B12が同一又は異なって Gep又は Gesであり、
B16が Cep又は Cesであり、
B6、 B10、 B14及び B18が同一又は異なって Aep又は Aesであり、
B11が Getであり、
B15が Cetであり、
B9、 B13、 B17及び B19が Aetであり、かつ、 B7が Tetである化合物、及びその薬理学上許容される塩であり、
(2) B4、 B5及び B8が Tesであり、
Bl、 B2、 B3及び B12が Gesであり、
B16が Cesであり、
B6、 B10、 B14及び B18が Aesである化合物、及びその薬理学上許容される塩であり、
(3) E1が式 R1-B5-B6-で表される基である化合物、及びその薬理学上許容される塩 であり、
(4) E1が式 R1-B6-で表される基である化合物、及びその薬理学上許容される塩であ り、
(5) E1が式 R1で表される基である化合物、及びその薬理学上許容される塩であり、
(6) E2が式- B8-B10-B12-B14-B16-B18-B19-R2で表される基である化合物、及び その薬理学上許容される塩であり、
(7) E2が式- B8-B10-B12-B14-B16-B17-R2で表される基である化合物、及びその 薬理学上許容される塩であり、
(8) E2が式- B8-B10-B12-B14-B-15-R2で表される基である化合物、及びその薬理 学上許容される塩であり、
(9) E2が式- B8-B10-B12-B13-R2で表される基である化合物、及びその薬理学上許 容される塩であり、
(10) E2が式- B8-B 10-B 11-R2で表される基である化合物、及びその薬理学上許容 される塩であり、
(11) E2が式- B8-B9-R2で表される基である化合物、及びその薬理学上許容される 塩であり、
(12) E2が式- B7-R2で表される基である化合物、及びその薬理学上許容される塩で あり、
(13) R1が水酸基である化合物、及びその薬理学上許容される塩であり、
(14) R2力 P(=0)(OH)— 0— CH— CH—OH基、又 ίま、 P(=S)(OH)— 0— CH— CH—OH基
2 2 2 2 である化合物、及びその薬理学上許容される塩であり、
(15)尺2が-？(=3)(0!"[)-0-0"[ -CH -OH基である化合物、及びその薬理学上許容さ れる塩であり、
(16) 1、 m、 n、 o、 p、 q、 r、 s、 t、 u、 v、 w及び xが同一又は異なって 1又は 2である化合 物、及びその薬理学上許容される塩であり、
(17) 1、 m、 n、 o、 p、 q、 r、 s、 t、 u、 v、 w及び xが同一であって 1又は 2である化合物、及 び、その薬理学上許容される塩であり、
(18) 1、 m、 n、 o、 p、 q、 r、 s、 t、 u、 v、 w及び xが 2である化合物、及び、その薬理学上 許容される塩である。
さらに好適には、下記 (ィ匕合物群）
(化合物群）
r e2s r e2s r e2s ^e2s ^e2s ^e2s 厂 e2s ^e2s 例示化合物番号 1 :ΗΟ- - AE2S-
2S-CH CH OH
2 2
r e2s _Te2S_Te2S_Ae2S_Ge2S_Ae2S_ce2S_Ae2s_c 例示化合物番号 2 : HO- - AE2S-
H CH OH
2 2
例示化合物番号 3 :
Figure imgf000012_0001
OH
2
例示化合物番号 4:
例示化合物番号 5 :
例示化合物番号 6:
例示化合物番号 7:
例示化合物番号 8:
Figure imgf000012_0002
H CH OH
2 2
厂 e2s 厂 e2s 厂 e2s
例示化合物番号 9: HO- -AE2S- - r2s — Te2s— Ae2s— Ge2s—八 51—厂 e s—八 H H
OH
2
例示化合物番号 10： HO-AE2S-GE2S-GE2S-GE2S-TE2S-TE2S-AE2S-GE2S-AE2S-CE2S-CH CH O
2 2
H
例示化合物番号 11 :HO- AE2S- GE2S- GE2S- GE2S- TE2S- TE2S- AE2S- GE2S- AE2S- CH CH OH
2 2 例示化合物番号 12 :HO- AE2S- GE2S- GE2S- GE2S- TE2S- TE2S- AE2S- GE2S- CH CH OH
2 2 例示化合物番号 13 :HO- AE2S- GE2S- GE2S- GE2S- TE2S- TE2S- AE2S- CH CH OH 例示化合物番号 14： HO-Ge2s-Ge2s-Ge2s-Te2s-Te2s-Ae2s-Ge2s-Ae2s-Ce2s-Ae2s-Ae2s-CH C
H OH
例示化合物番号 15： HO-Ge2s-Ge2s-Ge2s-Te2s-Te2s-Ae2s-Ge2s-Ae2s-Ce2s-Ae2s-CH CH 0
H
例示化合物番号 16： HO-Ge2s-Ge2s-Ge2s-Te2s-Te2s-Ae2s-Ge2s-Ae2s-Ce2s-CH CH OH 例示化合物番号 17： HO-Ge2s-Ge2s-Ge2s-Te2s-Te2s-Ae2s-Ge2s-Ae2s-CH CH OH 例示化合物番号 18 : HO- Ge2 Ge2s- Ge2s- Te2s- Te2s- Ae2 Ge2s- CH CH OH
例示化合物番号 19 : HO- Te2s - Ae2s- Ge2s-Ge2s-Ge2s- Te2s - Te2s- Ae2s-Ge2s-Ae2s- Ce2s - Ae2s-A e2t- H
例示化合物番号 ： -ce2s- 例示化合物番号 21 : ： —し - "Lr - - 例示化合物番号 ：
例示化合物番号 ： - - 例示化合物番号 ： ~Lr - 例示化合物番号 ： —了 例示化合物番号 丁
-し - 例示化合物番号 G
27： HO-Ae2s- - Ge2s- r e2s - - Ge2s- - Ae2s- - Ae: 2 H 例示化合物番号 G
28： HO-Ae2s- -Ae2s- - Ge2s- - Ae2s- -ce2t- Ή 例示化合物番号 厂 /-j
29： HO-Ae2s- -Te2s- - Ae2s- - Ge2s- - Ae2t- H
例示化合物番号 厂 丁
30： HO-Ae2s- - Ae2s- - Ge2t- H 例示化合物番号 ： 厂 丁
31 HO-Ae2s- -Te2s- - Ae2t_ Ή
例示化合物番号 厂
32： HO-Ge2s- -Ae2s- - Ae2s- -ce2s- -Ae2s- 例示化合物番号 厂 rj
33： HO-Ge2s- -Te2s- -Ae2s- - Ae2s- -Ae2t- Ή 例示化合物番号 厂
34： HO-Ge2s- -Te2s- ハ
-Ae2s- -Ae2s- -Ce2t- Ή
例示化合物番号 35： 厂 丁
HO-Ge2s- -Te2s- -Ae2s- -Ae2t- Ή 例示化合物番号 36： HO-Ge2s- - Ae2s - - Ge2t_ Ή
例示化合物番号 ハ
37： HO-Te2p- -Ae2p- - Ge2p- _T - Ae2p -Ge¾ - Ae2p — C Ae2p-CH CH OH
2 2
例示化合物番号 38 : HO- Te2p- Ae2p- Ge2p- Ge2p- Ge2p- Te2p - Te2p- Ae2p- Ge2p- Ae2p - Ce2p - Ae2p CH CH OH
2 2
例示化合物番号 39:HO- Te2p- Ae2p- Ge2p- Ge2p- Ge2p- Te2p - Te2p- Ae2p- Ge2p- Ae2p - Ce2p- CH CH OH
2
例示化合物番号 40： HO- Te2p- Ae2p- Ge2p- Ge2p- Ge2p- Te2p- Te2p- Ae2p- Ge2p- Ae2p- CH CH
2 2
OH
例示化合物番号 41 :HO- Te2p- Ae2p-Ge2p- Ge2p-Ge2p-Te2p- Te2p-Ae2p-Ge2p- CH CH OH 例示化合物番号 42 :HO-Te2p-Ae2p-Ge2p-Ge2p-Ge2p-Te2p-Te2p-Ae2p-CH CH OH 例示化合物番号 43 : HO- Te2p- Ae2p- Ge2p- Ge2p- Ge2p- Te2p-Te2p- CH CH OH
2 2
例示化合物番号 44 : HO-Ae2p- Ge2p-Ge2p-Ge2p-Te2p- Te2p-Ae2p-Ge2p- Ae2p-Ce2p- Ae2p- Ae2p - CH CH OH
2 2
例示化合物番号 45 : HO-Ae2p-Ge2p-Ge2p- Ge2p-Te2p-Te2p-Ae2p-Ge2p-Ae2p-Ce2p- Ae2p- CH 2
CH OH
2
例示化合物番号 46： HO-Ae2p-Ge2p-Ge2p-Ge2p-Te2p-Te2p-Ae2p-Ge2p-Ae2p-Ce2p-CH CH
2 2
OH
例示化合物番号 47： HO-Ae2p-Ge2p-Ge2p-Ge2p-Te2p-Te2p-Ae2p-Ge2p-Ae2p-CH 2 CH 2 OH 例示化合物番号 48： HO-Ae2p-Ge2p-Ge2p-Ge2p-Te2p-Te2p-Ae2p-Ge2p-CH 2 CH OH 例示化合物番号49 : HO- Ae2p - Ge2p- Ge2p- Ge2p- Te2p- Te2p- Ae2p- CH CH OH
2 2
例示化合物番号 50:HO- Ge2p- Ge2p- Ge2p- Te2p-Te2p- Ae2p- Ge2p- Ae2p- Ce2p- Ae2p- Ae2p- CH 2
CH OH
2
例示化合物番号 51： HO- Ge2p - Ge2p- Ge2p- Te2p- Te2p - Ae2p- Ge2p- Ae2p- Ce2p - Ae2p- CH CH
2 2
OH
例示化合物番号 52： HO-Ge2p-Ge2p-Ge2p-Te2p-Te2p-Ae2p-Ge2p-Ae2p-Ce2p-CH CH OH
2 2 例示化合物番号 53： HO-Ge2p-Ge2p-Ge2p-Te2p-Te2p-Ae2p-Ge2p-Ae2p-CH CH OH
2 2 例示化合物番号 54: H〇-Ge2p - Ge2p-Ge2p- Te2p- Te2p - Ae2p- Ge2p-CH CH OH
2 2
例示化合物番号 55 : HO- Te2p - Ae2p- Ge2p- Ge2p- Ge2p - Te2p- Te2p- Ae2p- Ge2p - Ae2p- Ce2p- Ae2p- 例示化合物番号 56： HO-Te2p -Ae2p- -Ge2p -Ge2p - Ae2p- -Ae p- -A'
ΓΊ
例示化合物番号 57： HO-Te2p- -Ae2p- - Ge2p- - Ae2p- - Ae2p- -ce2t- -H 例示化合物番号 Qe2p Qe2p
58： HO-Te2p- -Ae2p- -Ge2p- _Qe2p
- Ae2p- - Ae2t- -H 例示化合物番号 59： HO-Te2p- -Ae2p- - Ge2p- - Ae2p- _Ge2t- -H
例示化合物番号 e2p
60： HO-Te2p- «- e2p
-Ae2p- -Ge2p - -Ge2p - - Ae2t_ H
例示化合物番号 e2p
61： HO-Te2p- -Ae2p- - Ge2p- - Ge2p — Te2p- H
例示化合物番号 Qe2p
62： HO-Ae2p- -Ge2p _Te2p— - Α 一 Ge2p— -Ae2p- - A -A£
Γΐ
e2p—
例示化合物番号 e2p
63： HO-Ae2p- e2p—
- Ge2p- — Te2p— e2p—
- Ae2p- - Ae2p- - Ae2t- Ή e2p—
例示化合物番号 e2p
64： HO-Ae2p- e2p—
-Ge2p- - Ae2p- -Ae2p- -ce2t- Ή 例示化合物番号 65： e¾»
HO-Ae2p- - Ge2p- - Ae2p- - Ae2t_ Ή
e2p_
例示化合物番号 e¾) _, e2 _
66： HO-Ae2p- — Τ。2ρ—
-Ge2p- -Ae2p- -Ge2t- Ή
e2p—
例示化合物番号 e¾>
67： HO-Ae2p- -Ge2p- —Te2p一 -Ae2t- H
e2p—
例示化合物番号 e2p _^e2p
68： HO-Ge2p- e2p— e2p—
-Ae2p- -Ae2p- -Ae2p- -Ae2t- H 例示化合物番号 69： HO-Ge2p- -Ae2p- -Ae2p- -Ae2t- H 例示化合物番号 70： HO-Ge2p- -Ae2p - -Ae2p- - ce2t- H
例示化合物番号 71 : HO-Ge2p- -Ae2p - Ge2P_ -Ae2t- H
例示化合物番号 72： HO-Ge2p- Ae2p - ■Ge2t- H
例示化合物番号 73 : HO- Tels- Aels- Gels- Gels-GeI Tel Tels- Ael Gels- AeIs-Cel Aels - A els-CH CH OH
例示化合物番号 74:HO-Tels-Aels- Gels- Gels- Gels - Tels-Tels-Aels-Gels- Aels- Cels- Aels-C H CH OH
例示化合物番号 75： HO-Tels-Aels-Gels-Gels-Gels-Tels-Tels-Aels-Gels-Aels-Cels-CH C
H OH
例示化合物番号 76： HO- Tels- Aels- Gels- Gels-Gels- Tels- Tels- Aels- Gel Aels- CH CH O
H
例示化合物番号77： HO-Tels- Aels- Gels- Gels- Gels- Tels-Tels- Aels- Gels- CH CH OH 例示化合物番号 78:HC T IS Is
- Ael Ge ls-G° ls-Ge -A -CH CH OH 例示化合物番号 79:H Is 丁6 Is
〇-Te - Ae ls-G° ls-Ge ls-Ge -CH CH OH
例示化合物番号 80
Figure imgf000016_0001
CH CH OH
例示化合物番号 81
Figure imgf000016_0002
C H OH
例示化合物番号 Is 丁6 Is
82:HO-Ae - Ge ls-G° ls-G° ls-Ae ls- Gels- Aels- Cels- CH CH O H
Is ^-,e: is
例示化合物番号 ls_ els_Aels_CH CH QH
83:H〇-Ae _Ge ls-G° ls-Ge ls - Ae
例示化合物番号 84
例示化合物番号 85:
Figure imgf000016_0003
IS
例示化合物番号 86:HO-Ge Ls 丁61
- Ge ls-G° s-AeI ls-Ge ls- Aels- Cels- Aels- Ael CH C H OH
例示化合物番号 87:
Figure imgf000016_0004
CH O H
is
例示化合物番号 88:H〇-Ge - Ge ls-G° s-AeI S-Ge ls— Aels— Cels - CH CH OH 例示化合物番号 89: CH OH 例示化合物番号 90:
Figure imgf000016_0005
CH OH
例示化合物番号 91:HO-Tel - Ael Gel s 丁61
Gel Gel s- Aels- Gels- Aels- Cel Aels- A elt-H
例示化合物番号 92:
Figure imgf000016_0006
s el; s 厂 el; s r el
例示化合物番号 s r el
93:HO-Tel -Ael S-Gel S-Aels-Gels-Aels-Celt-H s el; s el; s ^-,el
例示化合物番号 94:HO-Tel Ael S-Gel s- Aels- Gels - Aelt- H 例示化合物番号 95:HO-Tel ■Ael S-Gel: S-Gel r e]
s- Aels- Ge" - H
s el:
例示化合物番号 s r el
96:HO-Tel •Ael し Gel:し Gel S-Tel: し Aelt- H
s eh s r el;
例示化合物番号 97: -Tel Ael し Geliし Gel; 一 H
例示化合物番号 98：
Figure imgf000016_0007
H 例示化合物番号 99： HO-Aels-Gel 例示化合物番号 100： HO-Aels-G 例示化合物番号 101： HO-Aels-G 例示化合物番号 102： HO-Aels-G 例示化合物番号 103： HO-Aels-G 例示化合物番号 104： HO-Gels-G 例示化合物番号 105： HO-Gels-G 例示化合物番号 106： HO-Gels-G 例示化合物番号 107： HO-Gels-G 例示化合物番号 108： HO-Gels-G 例示化合物番号 109： HO-Telp-Aelp -Aelp-CH CH OH
2 2
例示化合物番号 110： HO-Telp-A -CH CH OH
2 2
例示化合物番号 111： HO-Telp-A CH OH
2 2
例示化合物番号 112： HO-Telp-A OH
例示化合物番号 113： HO-Telp-A 例示化合物番号 114： HO-Telp-A 例示化合物番号 115： HO-Telp-A 例示化合物番号 116： HO-Aelp-G -CH CH OH
2 2
例示化合物番号 117 : H〇-Aelp-G CH OH
2 2
例示化合物番号 118： HO-Aelp-G OH
例示化合物番号 119： HO-Aelp-G 例示化合物番号 120 OH
Figure imgf000018_0001
丁
例示化合物番号 121 HO-Ael P-Gel P-Gel P-Gel P-A( CH CH OH
2 2
示化合物番号 122 HO- Gel p-GeI P-Gel r el 丁
例 P-Ael P-G'
CH OH
Figure imgf000018_0002
OH
丁 el
例示化合物番号 124 HO- p_Aelp_celp_CH ^ QH
-GeI p-GeI p-GeI P-Ael p-GeI
2 2 例示化合物番号 125 HO- -GeI p-GeI p-GeI P-Ael p-GeI P-Aelp-CH CH OH
2 2 例示化合物番号 126 HO- -Gel p-GeI P-Gel r el Tel P-Ael P-Gel P-CH CH OH
Figure imgf000018_0003
- Aelt- H
Figure imgf000018_0004
-H
例示化合物番号 129
例示化合物番号 130
Figure imgf000018_0005
例示化合物番号 131 HO- P-Ael P-Gel P-Gel p-GeI - Gelt- H 例示化合物番号 132
例示化合物番号 133
例示化合物番号 134
Figure imgf000018_0006
-H
示化合物番号 135
Figure imgf000018_0007
Figure imgf000018_0008
示化合物番号 138 HO- -Ael P-Gel P-Gel p-GeI P-Ael H
Figure imgf000018_0009
例示化合物番号 140 HO- -Gel p-GeI p-GeI 丁 P-Ael p-GeI P-Aelp- - celp- -Aelp- - Ael H el _
例示化合物番号 141 HO- - Gel p-GeI p-GeI T P-Ael p-GeI - celp- - Aelt- Ή
_
例示化合物番号 142 HO- -GeI p- Ge】 p-GeI P-Ael p-GeI - celt_ Ή 例示化合物番号 143： HO-Gelp-Gelp-Gelp-Telp-Telp-Aelp-Gelp-Aelt-H 例示化合物番号 144： HO-Gelp-Gelp-Gelp-Telp-Telp-Aelp-Gelt-H 例示化合物番号 145 : 3,4-DBB-(CH ) - 0- P(=S)(OH)- 0- Te2s- Ae2s- G
S-Te2s-Ae2s-Ge2s-Ae2s-Ce2s-Ae2s-Ae2s-CH CH OH
例示化合物番号 146: 3，4- DBB- (CH ) - O- P(=S)(OH)- O- Te2s- Ae2s- G
J_J 例示化合物番号 147 : 3,4-DBB-(CH ) - 0-P(=S)(OH)-〇-Te2s-Ae2s-G
S-Te2s-Ae2s-Ge2s-Ae2s-Ce2s-Ae2s-Ae2s-CH CH OH
例示化合物番号 148 : 3,4- DBB- (CH ) - O- P(=S)(OH)- O- Te2 Ae2s- G
― 1 — A —し — A —し — A —A H
_ 厂
例示化合物番号 149： 3,4-DBB-Ts
Ce2s- Ae2s- Ae2s- CH CH OH
例示化合物番号 150： 3,4-DBB-Ts
Ce2s-Ae2s-Ae2t-H
— A 厂 丁 例示化合物番号 151 : 3,4-DBB-Ts
Ae2s- Ae2s- CH CH OH
厂 ry
例示化合物番号 152： 3,4-DBB-Ts
Ae2s-Ae2t-H
例示化合物番号 153 :H〇— Te2s— Ae2s— G Ge2p— e2p_r e2p_r ^e2p_Qe2
-A -CH CH OH
例示化合物番号 154
- Ae2t- H
例示化合物番号 155 HO-Te2s-Ae2s- — Ae2s— CH CH OH
例示化合物番号 156 HO-Te2s-Ae2s-
- Ae2t- H
例示化合物番号 157 HO-Te2s-Ae2s- - Ae2s- CH CH OH CH CH〇H
()( )(Xo C H CooCH spOOIoTA GG GT TA GA C-l-I¾¾¾W¾¾&¾¾¾¾
Figure imgf000020_0001
例示化合物番号 168:
C H C(0)0(CH ) SP(0)(0H)- O- Te Ae Ge Ge Ge Te Te Ae Ge Ae C
16 33 2 2
e2s . e2s . e2t 例示化合物番号 169:
C H C(0)0(CH ) SP(0)(0H)- O- Te2s- Ae2s- Ge2s- Ge2s- Ge2s- Te2s- Te2s- Ae2s- Ge2s- Ae2s- C
15 31 2 2
e2s-Ae2s-Ae2s-CH CH OH
2 2
例示化合物番号 170:
C H C(0)0(CH ) SP(〇)(〇H)- O- Te2s- Ae2s- Ge2s- Ge2s- Ge2s- Te2s- Te2s- Ae2s- Ge2s- Ae2s- C
15 31 2 2
e2s . e2s . e2t yj より選択される化合物、及び、その薬理学上許容される塩である。
[0059] なお、上記及び本明細書中において Gelt Celt Aelt Telt Aelp Gelp Celp Telp Aels els els mels e2t e2t . e2t me2t . e2p e2p e2p rx-1e2p . e2s e2s e2s me2s G C T G C A T A G C T A G C 、及ひ、 T は下記に示す化学構造を有する基を表す。
[0060] [化 26]
Figure imgf000022_0001
Figure imgf000022_0002
Figure imgf000022_0003
Figure imgf000022_0004
[0061] [化 27]
Figure imgf000023_0001
Figure imgf000023_0002
Figure imgf000023_0003
[0062] 上記化合物群において、更に好適な化合物は例示化合物番号 1乃至 13、 19乃至 31、 37乃至 39、 73乃至 79、及び、 145乃至 158のィ匕合物であり、更により好適なィ匕 合物は、例示化合物番号 1乃至 3、 13乃至 15、 31乃至 33、 43乃至 45、 61乃至 63 、 73乃至 75、 91乃至 93、及び、 103乃至 105のィ匕合物である。
[0063] 「その薬理学上許容される塩」とは、本発明の化合物は、塩にすることができるので 、その塩をいい、そのような塩としては、好適にはナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩 のようなアルカリ金属塩、カルシウム塩、マグネシウム塩のようなアルカリ土類金属塩、 アルミニウム塩、鉄塩、亜鉛塩、銅塩、ニッケル塩、コバルト塩等の金属塩;アンモニ ゥム塩のような無機塩、 tーォクチルァミン塩、ジベンジルァミン塩、モルホリン塩、グ ルコサミン塩、フエ-ルグリシンアルキルエステル塩、エチレンジァミン塩、 N—メチル ダルカミン塩、グァ-ジン塩、ジェチルァミン塩、トリエチルァミン塩、ジシクロへキシ ルァミン塩、 N, N，一ジベンジルエチレンジァミン塩、クロ口プロ力イン塩、プロ力イン 塩、ジエタノールアミン塩、 N—べンジルーフエネチルァミン塩、ピぺラジン塩、テトラ メチルアンモ -ゥム塩、トリス（ヒドロキシメチル)ァミノメタン塩のような有機塩等のアミ ン塩;弗化水素酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、沃化水素酸塩のようなハロゲン原子 化水素酸塩、硝酸塩、過塩素酸塩、硫酸塩、燐酸塩等の無機酸塩;メタンスルホン 酸塩、トリフルォロメタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩のような低級アルカンスル ホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、 p-トルエンスルホン酸塩のようなァリールスルホン 酸塩、酢酸塩、りんご酸塩、フマール酸塩、コハク酸塩、クェン酸塩、酒石酸塩、蓚酸 塩、マレイン酸塩等の有機酸塩;及び、グリシン塩、リジン塩、アルギニン塩、オル- チン塩、グルタミン酸塩、ァスパラギン酸塩のようなアミノ酸塩を挙げることができる。
[0064] なお、本発明の化合物 (I)は、水和物としても存在することができ、本発明は、それ らの水和物をも包含する。
[0065] 又、本発明の別の形態は、本発明の化合物 (I)を含有する医薬であり、好ましくは、 テロメラーゼが関与している疾患の治療及び予防に用いる医薬であり、更に好ましく は、癌の治療及び予防に用いる医薬である。
発明の効果
[0066] 本発明の化合物は、強力にテロメラーゼ RNAに結合し、癌などのテロメラーゼが関 与して!/、る疾患の治療及び予防に有用である。
発明を実施するための最良の形態
[0067] 本発明の化合物（I)は、 DNA合成機、例えばパーキンエルマ一社のホスホロアミダ イト法によるモデル 392などを用いて文献（Nucleic Acids Research, 12, 4539(1984)) 記載の方法に準じて合成することができる。
[0068] その際に用いられるホスホロアミダイト試薬は、天然型のヌクレオシドについては巿 販の試薬を用いることができ、その他のヌクレオシドについて、 1乃至 wが 1であるヌク レオシドにつ 、ては W099/14226、 1乃至 wが 2乃至 5であるヌクレオシドにつ!/、て WO 00/47599に記載の方法にしたがって得ることができる。
[0069] 又、所望により、チォエート化する場合は、 3かのリンに反応してチォエーテルを形 成する試薬、例えば、硫黄、テトラエチルチウラムジスルフイド (TETD、アプライドバ ィォシステムズ社）、キサンタンヒドリド又は Beaucage試薬（Glen Research社）を用い、 文献（Tetarhedron Letters, 32, 3005(1991)、 J. Am. Chem. Soc, 112, 1253(1990))記 載の方法に準じてチォエート誘導体を得ることができる。
[0070] 3,4-DBB基を有する化合物（I)は、特開平 7_87892または特開平 11-199597記載の 方法により合成することができる。また、ァシルォキシェチルチオリン酸基を有するィ匕 合物 (I)は、特開 2004-182725記載の方法により合成することができる。
[0071] 本発明の化合物 (I)又はその薬理学上許容される塩は、テロメラーゼの抑制活性を 示す。又、本発明の化合物 (I)は、吸収、体内分布、血中半減期などの体内動態に 優れ、腎臓、肝臓等の臓器に対する毒性も低い。従って、本発明の化合物 (1)、は、 例えば医薬として有用であり、特に種々のテロメラーゼが関与している疾患 (特に癌） を治療若しくは予防する医薬として有用である。
[0072] 本発明の化合物を、上記疾患の予防薬又は治療薬として使用する場合には、前記 一般式 (I)を有する化合物、又は、その薬理学上許容される塩を、それ自体あるいは 適宜の薬理学的に許容される、賦形剤、希釈剤等と混合し、錠剤、カプセル剤、顆粒 剤、散剤若しくはシロップ剤等により経口的に、又は、注射剤、坐剤、貼付剤、若しく は、外用剤等により非経口的に投与することができる。
[0073] これらの製剤は、賦形剤（例えば、乳糖、白糖、葡萄糖、マン-トール、ソルビトール のような糖誘導体；トウモロコシデンプン、バレイショデンプン、 α澱粉、デキストリンの ような澱粉誘導体；結晶セルロースのようなセルロース誘導体；アラビアゴム；デキスト ラン;プルランのような有機系賦形剤;及び、軽質無水珪酸、合成珪酸アルミニウム、 珪酸カルシウム、メタ珪酸アルミン酸マグネシウムのような珪酸塩誘導体；燐酸水素力 ルシゥムのような燐酸塩;炭酸カルシウムのような炭酸塩;硫酸カルシウムのような硫 酸塩等の無機系賦形剤を挙げることができる。）、滑沢剤 (例えば、ステアリン酸、ステ アリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウムのようなステアリン酸金属塩；タルク；コ ロイドシリカ；ビーズワックス、ゲィ蝌のようなワックス類；硼酸；アジピン酸；硫酸ナトリウ ムのような硫酸塩；グリコール；フマル酸；安息香酸ナトリウム； DLロイシン；ラウリル硫 酸ナトリウム、ラウリル硫酸マグネシウムのようなラウリル硫酸塩;無水珪酸、珪酸水和 物のような珪酸類;及び、上記澱粉誘導体を挙げることができる。）、結合剤 (例えば、 ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリ ドン、マクロゴール、及び、前記賦形剤と同様の化合物を挙げることができる。）、崩壊 剤（例えば、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロース、 カルボキシメチルセルロースカルシウム、内部架橋カルボキシメチルセルロースナトリ ゥムのようなセルロース誘導体；カルボキシメチルスターチ、カルボキシメチルスター チナトリウム、架橋ポリビニルピロリドンのような化学修飾されたデンプン 'セルロース 類を挙げることができる。）、乳化剤（例えば、ベントナイト、ビーガムのようなコロイド性 粘土；水酸化マグネシウム、水酸化アルミニウムのような金属水酸化物；ラウリル硫酸 ナトリウム、ステアリン酸カルシウムのような陰イオン界面活性剤;塩ィ匕ベンザルコユウ ムのような陽イオン界面活性剤；及び、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオ キシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステルのような非イオン界面 活性剤を挙げることができる。）、安定剤 (メチルパラベン、プロピルパラベンのような パラォキシ安息香酸エステル類；クロロブタノール、ベンジルアルコール、フエニルェ チルアルコールのようなアルコール類；塩化ベンザルコ-ゥム；フエノール、クレゾ一 ルのようなフエノール類；チメロサール；デヒドロ酢酸；及び、ソルビン酸を挙げることが できる。）、矯味矯臭剤 (例えば、通常使用される、甘味料、酸味料、香料等を挙げる ことができる。）、希釈剤等の添加剤を用いて周知の方法で製造される。
本発明の化合物を患者へ導入する方法については、上記に加えてコロイド分散系 を用いることができる。コロイド分散系は化合物の生体内の安定性を高める効果や、 特定の臓器、組織又は細胞へ化合物を効率的に輸送する効果が期待される。コロイ ド分散系は、通常用いられるものであれば限定しないが、高分子複合体、ナノカプセ ル、ミクロスフエア、ビーズ、及び水中油系の乳化剤、ミセル、混合ミセル及びリポソ一 ムを包含する脂質をベースとする分散系を挙げる事ができ、好ましくは、特定の臓器 、組織又は細胞へ化合物を効率的に輸送する効果のある、複数のリボソーム、人工 膜の, Jヽ胞である (Mannino et al. , Biotechniques , 1988,6 , 682 ;Blume and Cevc'Biochem .et Biophys .Acta,1990,1029,91; Lappalainen et al, Antiviral Res., 1994,23, 119;Chonn and Cullis, Current Op.Biotech., 1995,6,698；)。
[0075] 0.2-0.4 μ mのサイズ範囲をとる単膜リボソームは、巨大分子を含有する水性緩衝 液のかなりの割合を被包化し得、化合物はこの水性内膜に被胞化され、生物学的に 活性な形態で脳細胞へ輸送される（Fraley et al, Trends Biochem.Sci., 1981,6,77 )。 リボソームの組成は、通常、脂質、特にリン脂質、とりわけ相転移温度の高いリン脂質 を 1種又はそれ以上のステロイド、特にコレステロールと通常複合したものである。リ ポソーム生産に有用な脂質の例は、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルコリ ン、ホスファチジルセリン、スフインゴ脂質、ホスファチジルエタノールァミン、セレブ口 シド及びガンダリオシドのようなホスファチジルイ匕合物を包含する。特に有用なのはジ ァシルホスファチジルグリセロールであり、ここでは脂質部分が 14-18の炭素原子、特 に 16-18の炭素原子を含有し、飽和している（14-18の炭素原子鎖の内部に二重結 合を欠いている)。代表的なリン脂質は、ホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスファ チジルコリン及びジステアロイルホスファチジルコリンを包含する。
[0076] リボソームを包含するコロイド分散系の標的化は、受動的又は能動的のいずれかで あってもよい。受動的な標的化は、洞様毛細血管を含有する臓器の網内系細胞へ分 布しょうとするリボソーム本来の傾向を利用することによって達成される。一方、能動 的な標的化は、例えば、ウィルスのタンパク質コート（Morishita et al.,Proc.Natl.Acad. Sci.OJ.S.A.), 1993,90,8474 )、モノクローナル抗体（又はその適切な結合部分）、糖、 糖脂質又はタンパク質 (又はその適切なオリゴペプチドフラグメント）のような特定のリ ガンドをリボソームへ結合させること、又は天然に存在する局在部位以外の臓器及び 細胞型への分布を達成するためにリボソームの組成を変えることによってリボソーム を修飾する手法等を挙げる事ができる。標的化されたコロイド分散系の表面は様々な やり方で修飾され得る。リボソームで標的したデリバリーシステムでは、脂質二重層と の緊密な会合にぉ 、て標的リガンドを維持するために、リボソームの脂質二重層へ 脂質基が取込まれ得る。脂質鎖を標的リガンドと結びつけるために様々な連結基が 使用され得る。本発明のオリゴヌクレオチドのデリバリーが所望される細胞の上に支 配的に見出される特定の細胞表面分子に結合する標的リガンドは、例えば、（1 )デ リバリーが所望される細胞によって支配的に発現される特定の細胞受容体と結合し ている、ホルモン、成長因子又はその適切なオリゴペプチドフラグメント、又は（2 )標 的細胞上で支配的に見出される抗原性ェピトープと特異的に結合する、ポリクローナ ル又はモノクローナル抗体、又はその適切なフラグメント（例えば、 Fab ； F (ab') 2 ) 、であり得る。 2種又はそれ以上の生物活性剤 (例えば、化合物 (I)とその他の薬剤） は、単一のリボソーム内部で複合し、投与することもできる。内容物の細胞内安定性 及び Z又は標的化を高める薬剤をコロイド分散系へ追加することも可能である。
[0077] 本発明化合物 (I)又はその薬理学上許容される塩の使用量は症状、年齢等により 異なる力 経口投与の場合には、 1回当り下限 lmg (好適には、 30mg)、上限 2000m g (好適には、 1500mg)を、静脈内投与の場合には、 1回当り下限 0. 5mg (好適には 5mg)、上限 500mg (好適には、 250mg)を成人に対して、 1日当り 1乃至 6回症状に に応じて投与することが望まし 、。
[0078] 以下、実施例、参考例及び試験例をあげて、本発明をさらに詳しく説明する。
実施例
[0079] (実施例 1)
Hつ 厂 厂 T ト丁 厂ト τ ^ j^- 成 (例示化合物番号 1)
核酸自動合成機（パーキンエルマ一社製 ABI model 394 DNA/RNA synthesizer) を用い、 1 molスケールで行った。各合成サイクルにおける溶媒、試薬、ホスホロァ ミダイトの濃度は天然オリゴヌクレオチド合成の場合と同じものを用いた。硫ィ匕は 0.3 %キサンタンヒドリド /ピリジン：ァセトニトリル = 1 : 9 (v/v) (900秒）を用い、その他の溶 媒、試薬はアプライドバイシステムズ社製のものを用いた。非天然型のホスホロアミダ イトは特開 2000— 297097の実施例 14(5 ' -0-ジメトキシトリチル- 2 ' - 0,4 - C-ェチ レン- 6-N-ベンゾィルアデノシン- 3 - 0-(2-シァノエチル Ν,Ν-ジイソプロピル)ホスホ ロアミダイト)、実施例 27 (5 - 0-ジメトキシトリチル- 2 - 0,4 - C-エチレン- 2- Ν-イソブ チリルグアノシン- 3 -0-(2-シァノエチル Ν,Ν-ジイソプロピル)ホスホロアミダイト)、実 施例 22 (5 -0-ジメトキシトリチル -2 - 0,4 -C-エチレン- 4-Ν-ベンゾィル -5-メチルシ チジン- 3 -0-(2-シァノエチル Ν,Ν-ジイソプロピル)ホスホロアミダイト）、実施例 9 (5 -O-ジメトキシトリチル -2， - 0,4， -C-エチレン- 5-メチルゥリジン- 3， - 0-(2-シァノエチ ル Ν,Ν-ジイソプロピル)ホスホロアミダイト）、の化合物を用いた。固相担体として、ジ メトキシトリチルエチレングリコールで修飾されたコントロールドポアグラス（CPG) (特 開平 7 - 87982の実施例 12bに記載)を 1.2 mol用 V、、表記の化合物を合成した。
[0080] 目的配列を有する保護されたオリゴヌクレオチド類縁体を濃アンモニア水で処理す ることによってオリゴマーを支持体力も切り出すとともに、リン原子上の保護基シァノエ チル基と核酸塩基上の保護基をはずした。溶媒を減圧下留去し、残った残渣を逆相 HPLC (島津製作所製 LC— 10VP、カラム（Merck, Chromolith Performance RP- 18e ( 4.6 X 100mm))、 A溶液： 5%ァセトニトリル、 0.1M酢酸トリェチルァミン水溶液 (TEAA), p H 7.0、 B溶液：ァセトニトリル、 B%: 20%→ 60%(10min, linear gradient)； 60°C； 2 ml/min ;254 應）にて精製し、 ジメトキシトリチル基を有する目的物のピークを集めた。水を 加え、減圧下留去することで、 TEAAを除いた。 80%酢酸水溶液（200 1)を加え、 20 分放置することで、ジメトキシトリチル基の脱保護を行った。溶媒を留去したのちィォ ン交換 HPLC (島津製作所製 LC— 10VP、カラム (東ソ一株式会社， DEAE- 5PW (10 X 50mm))、 A溶液： 20%ァセトニトリル水溶液、 B溶液： 20%ァセトニトリル 67mMリン酸 バッファー 1.5M臭化カリウム水溶液 pH6.8 B%: 20%→ 70%(10min, linear gradient) ;6 0°C ;2 ml/min ;254 應）にて精製し、 目的物のピークを集めた。減圧下溶媒を留去後 、水 2mlに溶かし、 Sephadex G-25 (15 X 300mm)でゲルろ過による脱塩を行った。 目 的物にあたる分画を集め、留去したのち残渣を lmlの水に溶解し、 0.45 mのフィルタ 一（MILLIPORE, Ultrafree- MC)でろ過し、 目的とするオリゴヌクレオチドを得た。本化 合物は、イオン交換 HPLC (島津製作所製 LC— 10VP、カラム (東ソ一株式会社， DE AE-5PW (10 X 50mm))、 A溶液： 20%ァセトニトリル水溶液、 B溶液： 20%ァセトニトリル 67mMリン酸バッファー 1.5M臭化カリウム水溶液 pH6.8 B%: 20%→ 70%(10min, linear gradient) ;60°C ; 2 ml/min ;254 nm)で分析すると、 6.39分に溶出された（26.4 A uni
260 ts) ( l max(H O) =257 nm) 0また、化合物は、負イオン ESI質量分析により同定した（
2
計算値: 4916.10、測定値: 4916. 09)。
[0081] 本化合物の塩基配列は、 Human telomerase RNA(GenBank accession No. U86046 )のヌクレオチド番号 136-148に相補的な配列である。 [0082] (実施例 2)
HO— Te2s— Ae2s— Ge2s— Ge2s— Ge2s— Te2s— Te2s— Ae2s— Ge2s— Ae2s— Ce2s— Ae2s— CH CH OHの合成 (
2 2
例示化合物番号 2)
実施例 1の化合物と同様に目的配列を有する実施例 2の化合物を実施例 1と同じ C PG 1.2 molを用いて合成した。脱保護後、逆相 HPLC (島津製作所製 LC— 10VP、 カラム（Merck, Chromolith Performance RP— 18e (4.6 X 100mm))、 A溶液： 5%ァセトニ トリル、 0.1M酢酸トリェチルァミン水溶液 (TEAA), pH 7.0、 B溶液：ァセトニトリル、 B%: 10%→ 50%(10min, linear gradient)60°C； 2 ml/min;254 nm)にて精製し、ジメトキシトリ チル基を有する目的物のピークを集めた。
[0083] ジメトキシトリチル基の脱保護を行 ヽ、イオン交換 HPLC (島津製作所製 LC - 10VP 、カラム（東ソ一株式会社， DEAE-5PW (10 X 50mm))、 A溶液： 20%ァセトニトリル水溶 液、 B溶液： 20%ァセトニトリル 67mMリン酸バッファー 1.5M臭化カリウム水溶液 pH6 .8 B%: 20%→ 70%(10min, linear gradient) ; 60°C； 2 ml/min;254 nm)にて精製し、 目的 物のピークを集めた。 Sephadex G-25 (15 X 300mm)でゲルろ過による脱塩を行った。 また、最終的に精製した本ィ匕合物は、イオン交換 HPLC (島津製作所製 LC— 10VP、 カラム（東ソ一株式会社， DEAE-5PW (10 X 50mm))、 A溶液： 20%ァセトニトリル水溶 液、 B溶液： 20%ァセトニトリル 67mMリン酸バッファー 1.5M臭化カリウム水溶液 pH6 .8 B%: 20%→ 70%(10min, linear gradient) ; 60°C； 2 ml/min;254 nm)で分析すると、 5.7 3分に溶出された（11.5 A units) ( λ max(H O) =259 nm)。また、化合物は、負ィォ
260 2
ン ESI質量分析により同定した (計算値： 4544.79、測定値： 4543.92)。
[0084] 本化合物の塩基配列は、 Human telomerase RNA(GenBank accession No. U86046
)のヌクレオチド番号 137-148に相補的な配列である。
[0085] (実施例 3)
HO-Te2s-Ae2s-Ge2s-Ge2s-Ge2s-Te2s-Te2s-Ae2s-Ge2s-Ae2s-CH CH OHの合成（例示化合
2 2
物番号 4)
実施例 1の化合物と同様に目的配列を有する実施例 3の化合物を実施例 1と同じ C PG 1.2 molを用いて合成した。脱保護後、逆相 HPLC (島津製作所製 LC— 10VP、 カラム（Merck, Chromolith Performance RP— 18e (4.6 X 100mm))、 A溶液： 5%ァセトニ トリル、 0.1M酢酸トリェチルァミン水溶液 (TEAA), pH 7.0、 B溶液：ァセトニトリル、 B%: 10%→ 50%(10min, linear gradient)60°C； 2 ml/min;254 nm)にて精製し、ジメトキシトリ チル基を有する目的物のピークを集めた。
[0086] ジメトキシトリチル基の脱保護を行 、、イオン交換 HPLC (島津製作所製 LC - 10VP 、カラム（東ソ一株式会社， DEAE-5PW (10 X 50mm))、 A溶液： 20%ァセトニトリル水溶 液、 B溶液： 20%ァセトニトリル 67mMリン酸バッファー 1.5M臭化カリウム水溶液 pH6 .8 B%: 20%→ 70%(10min, linear gradient) ; 60°C； 2 ml/min;254 nm)にて精製し、 目的 物のピークを集めた。 Sephadex G-25 (15 X 300mm)でゲルろ過による脱塩を行った。 また、最終的に精製した本ィ匕合物は、イオン交換 HPLC (島津製作所製 LC— 10VP、 カラム（東ソ一株式会社， DEAE-5PW (10 X 50mm))、 A溶液： 20%ァセトニトリル水溶 液、 B溶液： 20%ァセトニトリル 67mMリン酸バッファー 1.5M臭化カリウム水溶液 pH6 .8 B%: 20%→ 70%(10min, linear gradient) ; 60°C； 2 ml/min;254 nm)で分析すると、 4.5 4分に溶出された（6.88 A units) ( λ max(H O) =254 nm)。また、化合物は、負ィォ
260 2
ン ESI質量分析により同定した (計算値 : 3812.16、測定値: 3811.17)。
[0087] 本化合物の塩基配列は、 Human telomerase RNA(GenBank accession No. U86046
)のヌクレオチド番号 139-148に相補的な配列である。
[0088] (実施例 4)
HO-Te2s-Ae2s-Ge2s-Ge2s-Ge2s-Te2s-Te2s-Ae2s-CH CH OHの合成 (例示化合物番号 6)
2 2
実施例 1の化合物と同様に目的配列を有する実施例 4の化合物を実施例 1と同じ C PG 1.2 molを用いて合成した。脱保護後、逆相 HPLC (島津製作所製 LC— 10VP、 カラム（Merck, Chromolith Performance RP— 18e (4.6 X 100mm))、 A溶液： 5%ァセトニ トリル、 0.1M酢酸トリェチルァミン水溶液 (TEAA), pH 7.0、 B溶液：ァセトニトリル、 B%: 10%→ 50%(10min, linear gradient)60°C； 2 ml/min;254 nm)にて精製し、ジメトキシトリ チル基を有する目的物のピークを集めた。
[0089] ジメトキシトリチル基の脱保護を行 、、イオン交換 HPLC (島津製作所製 LC - 10VP 、カラム（東ソ一株式会社， DEAE-5PW (10 X 50mm))、 A溶液： 20%ァセトニトリル水溶 液、 B溶液： 20%ァセトニトリル 67mMリン酸バッファー 1.5M臭化カリウム水溶液 PH6 .8 B%: 20%→ 70%(10min, linear gradient)； 60°C； 2 ml/min;254 nm)にて精製し、 目的 物のピークを集めた。 Sephadex G-25 (15 X 300mm)でゲルろ過による脱塩を行った。 また、最終的に精製した本ィ匕合物は、イオン交換 HPLC (島津製作所製 LC— 10VP、 カラム（東ソ一株式会社， DEAE-5PW (10 X 50mm))、 A溶液： 20%ァセトニトリル水溶 液、 B溶液： 20%ァセトニトリル 67mMリン酸バッファー 1.5M臭化カリウム水溶液 pH6 .8 B%: 20%→ 70%(10min, linear gradient) ; 60°C； 2 ml/min;254 nm)で分析すると、 5.5 3分に溶出された（8.73 A units) ( λ max(H O) =260 nm)。また、化合物は、負ィォ
260 2
ン ESI質量分析により同定した (計算値： 3053.53、測定値： 3053.09)。
[0090] 本化合物の塩基配列は、 Human telomerase RNA(GenBank accession No. U86046
)のヌクレオチド番号 141-148に相補的な配列である。
[0091] (実施例 5)
HO-Te2s-Ae2s-Ge2s-Ge2s-Ge2s-Te2s-Te2s-CH CH OHの合成 (例示化合物番号 7)
2 2
実施例 1の化合物と同様に目的配列を有する実施例 5の化合物を実施例 1と同じ C PG 1.2 molを用いて合成した。脱保護後、逆相 HPLC (島津製作所製 LC— 10VP、 カラム（Merck, Chromolith Performance RP— 18e (4.6 X 100mm))、 A溶液： 5%ァセトニ トリル、 0.1M酢酸トリェチルァミン水溶液 (TEAA), pH 7.0、 B溶液：ァセトニトリル、 B%: 10%→ 50%(10min, linear gradient)60°C； 2 ml/min;254 nm)にて精製し、ジメトキシトリ チル基を有する目的物のピークを集めた。
[0092] ジメトキシトリチル基の脱保護を行 、、イオン交換 HPLC (島津製作所製 LC - 10VP 、カラム（東ソ一株式会社， DEAE-5PW (10 X 50mm))、 A溶液： 20%ァセトニトリル水溶 液、 B溶液： 20%ァセトニトリル 67mMリン酸バッファー 1.5M臭化カリウム水溶液 pH6 .8 B%: 20%→ 70%(10min, linear gradient) ; 60°C； 2 ml/min;254 nm)にて精製し、 目的 物のピークを集めた。 Sephadex G-25 (15 X 300mm)でゲルろ過による脱塩を行った。 また、最終的に精製した本ィ匕合物は、イオン交換 HPLC (島津製作所製 LC— 10VP、 カラム（東ソ一株式会社， DEAE-5PW (10 X 50mm))、 A溶液： 20%ァセトニトリル水溶 液、 B溶液： 20%ァセトニトリル 67mMリン酸バッファー 1.5M臭化カリウム水溶液 pH6 .8 B%: 20%→ 70%(10min, linear gradient) ; 60°C； 2 ml/min;254 nm)で分析すると、 7.1 0分に溶出された（8.92 A units) ( λ max(H O) =255 nm)。また、化合物は、負ィォ
260 2
ン ESI質量分析により同定した (計算値： 2682.22、測定値： 2682.10)。 [0093] 本化合物の塩基配列は、 Human telomerase RNA(GenBank accession No. U86046
)のヌクレオチド番号 142-148に相補的な配列である。
[0094] (実施例 6)
HO-Te2s-Ae2s-Ge2s-Ge2s-Ge2s-Te2s-Te2s-Ae2s-Ge2s-CH CH OHの合成 (例示化合物番
2 2
号 5)
実施例 1の化合物と同様に目的配列を有する実施例 6の化合物を実施例 1と同じ C PG 1.2 molを用いて合成した。脱保護後、逆相 HPLC (島津製作所製 LC— 10VP、 カラム（Merck, Chromolith Performance RP— 18e (4.6 X 100mm))、 A溶液： 5%ァセトニ トリル、 0.1M酢酸トリェチルァミン水溶液 (TEAA), pH 7.0、 B溶液：ァセトニトリル、 B%: 10%→ 50%(10min, linear gradient)60°C； 2 ml/min;254 nm)にて精製し、ジメトキシトリ チル基を有する目的物のピークを集めた。
[0095] ジメトキシトリチル基の脱保護を行 、、イオン交換 HPLC (島津製作所製 LC - 10VP 、カラム（東ソ一株式会社， DEAE-5PW (10 X 50mm))、 A溶液： 20%ァセトニトリル水溶 液、 B溶液： 20%ァセトニトリル 67mMリン酸バッファー 1.5M臭化カリウム水溶液 pH6 .8 B%: 20%→ 70%(10min, linear gradient) ; 60°C； 2 ml/min;254 nm)にて精製し、 目的 物のピークを集め、 Sephadex G-25 (15 X 300mm)でゲルろ過による脱塩を行った。ま た、最終的に精製した本ィ匕合物は、イオン交換 HPLC (島津製作所製 LC— 10VP、力 ラム（東ソ一株式会社， DEAE-5PW (10 X 50mm))、 A溶液： 20%ァセトニトリル水溶液、 B溶液： 20%ァセトニトリル 67mMリン酸バッファー 1.5M臭化カリウム水溶液 pH6.8 B %: 20%→ 70%(10min, linear gradient)； 60°C； 2 ml/min;254 nm)で分析すると、 7.67分 に溶出された（19.5 A units) ( λ max(H O) =259 nm)。また、化合物は、負イオン ES
260 2
I質量分析により同定した (計算値： 3440.85、測定値： 3439.47)。
[0096] 本化合物の塩基配列は、 Human telomerase RNA(GenBank accession No. U86046
)のヌクレオチド番号 140-148に相補的な配列である。
[0097] (実施例 7)
HO-Ae2s-Ge2s-Ge2s-Ge2s-Te2s-Te2s-Ae2s-Ge2s-Ae2s-CH CH OHの合成 (例示化合物番
2 2
号 11)
実施例 1の化合物と同様に目的配列を有する実施例 7の化合物を実施例 1と同じ C PG 1.2 /z molを用いて合成した。脱保護後、逆相 HPLC (島津製作所製 LC— 10VP、 カラム（Merck, Chromolith Performance RP— 18e (4.6 X 100mm))、 A溶液： 5%ァセトニ トリル、 0.1M酢酸トリェチルァミン水溶液 (TEAA), pH 7.0、 B溶液：ァセトニトリル、 B%: 10%→ 50%(10min, linear gradient)60°C； 2 ml/min;254 nm)にて精製し、ジメトキシトリ チル基を有する目的物のピークを集めた。
[0098] ジメトキシトリチル基の脱保護を行 、、イオン交換 HPLC (島津製作所製 LC - 10VP 、カラム（東ソ一株式会社， DEAE-5PW (10 X 50mm))、 A溶液： 20%ァセトニトリル水溶 液、 B溶液： 20%ァセトニトリル 67mMリン酸バッファー 1.5M臭化カリウム水溶液 pH6 .8 B%: 20%→ 70%(10min, linear gradient) ; 60°C； 2 ml/min;254 nm)にて精製し、 目的 物のピークを集めた。 Sephadex G-25 (15 X 300mm)でゲルろ過による脱塩を行った。 また、最終的に精製した本ィ匕合物は、イオン交換 HPLC (島津製作所製 LC— 10VP、 カラム（東ソ一株式会社， DEAE-5PW (10 X 50mm))、 A溶液： 20%ァセトニトリル水溶 液、 B溶液： 20%ァセトニトリル 67mMリン酸バッファー 1.5M臭化カリウム水溶液 pH6 .8 B%: 20%→ 70%(10min, linear gradient) ; 60°C； 2 ml/min;254 nm)で分析すると、 7.6 0分に溶出された（18.6 A units) ( λ max(H O) =257 nm)。また、化合物は、負ィォ ン ESI質量分析により同定した (計算値： 3449.86、測定値： 3449.42)。
[0099] 本化合物の塩基配列は、 Human telomerase RNA(GenBank accession No. U86046
)のヌクレオチド番号 139-147に相補的な配列である。
[0100] (実施例 8)
Hつ 厂 厂 T T _j^-^ ^U-一、ィレ 合物番号 19
実施例 1の化合物と同様に目的配列を有する実施例 8の化合物を universa卜 Q 500 CPG(Glen Research製） 1.2 molを用いて合成した。脱保護後、逆相 HPLC (島津 製作所製 LC— 10VP、カラム（Merck, Chromolith Performance RP- 18e (4.6 X 100mm ))、 A溶液： 5%ァセトニトリル、 0.1M酢酸トリェチルァミン水溶液 (TEAA), pH 7.0、 B溶 液：ァセトニトリル、 B%: 10%→ 50%(10min, linear gradient)60°C； 2 ml/min;254 nm)に て精製し、ジメトキシトリチル基を有する目的物のピークを集めた。
[0101] ジメトキシトリチル基の脱保護を行い、イオン交換 HPLC (島津製作所製 LC— 10VP 、カラム（東ソ一株式会社， DEAE-5PW (10 X 50mm))、 A溶液： 20%ァセトニトリル水溶 液、 B溶液： 20%ァセトニトリル 67mMリン酸バッファー 1.5M臭化カリウム水溶液 pH6 .8 B%: 20%→ 70%(10min, linear gradient) ; 60°C； 2 ml/min;254 nm)にて精製し、目的 物のピークを集めた。 Sephadex G-25 (15 X 300mm)でゲルろ過による脱塩を行った。 また、最終的に精製した本ィ匕合物は、イオン交換 HPLC (島津製作所製 LC— 10VP、 カラム（東ソ一株式会社， DEAE-5PW (10 X 50mm))、 A溶液： 20%ァセトニトリル水溶 液、 B溶液： 20%ァセトニトリル 67mMリン酸バッファー 1.5M臭化カリウム水溶液 pH6 .8 B%: 20%→ 70%(10min, linear gradient) ; 60°C； 2 ml/min;254 nm)で分析すると、 9.5 5分に溶出された（18.6 A units) ( λ max(H O) =264 nm)。また、化合物は、負ィォ
260 2
ン ESI質量分析により同定した (計算値： 4776.00、測定値： 4775.23)。
[0102] 本化合物の塩基配列は、 Human telomerase RNA(GenBank accession No. U86046
)のヌクレオチド番号 136-148に相補的な配列である。
[0103] (実施例 9)
3,4-DBB-(CH ) -0-P(=S)(OH)-0-Te2s-Ae2s-Ge2s-Ge2s-Ge2s-Te2s-Te2s-Ae2s-Ge2s-Ae2s-
2 6
Ce2s-Ae2s-Ae2s-CH CH OHの合成（例示化合物番号 147)
2 2
実施例 1の化合物と同様に目的配列を有する実施例 9の化合物を実施例 1と同じ C PG 2.7 molを用いて合成した。特開平 11 199597の実施例 13b記載の 6-0-[(3,4- ジベンジルォキシ)ベンジル] -へキサンジオール- 1-0-(2-シァノエチル Ν,Ν-ジイソ プロピル)ホスホロアミダイトを最後に縮合した。脱保護後、逆相 HPLC (島津製作所 製 LC— 10VPゝカラム（Merck, Chromolith Performance RP- 18e (4.6 X 100mm))、 A溶 液： 5%ァセトニトリル、 0.1M酢酸トリェチルァミン水溶液 (TEAA), pH 7.0、 B溶液：ァセ トニトリル、 B%: 10%→ 50%(8min, linear gradient)60°C； 2 ml/min;254 nm)にて精製し、 3,4-DBB基を有する目的物のピークを集めた。
[0104] また、最終的に精製した本ィ匕合物は、逆相 HPLC (島津製作所製 LC— 10VP、カラ ム（Merck, Chromolith Performance RP— 18e (4.6 X 100mm))、 A溶液： 5%ァセトニトリ ル水溶液、 0.1M酢酸トリェチルァミン水溶液 (TEAA), pH 7.0、 B溶液：ァセトニトリル、 B%: 10%→ 50%(8min, linear gradient)； 60°C； 2 ml/min;254 nm)で分析すると、 8.33分 に溶出された（34.8 A units) ( λ max(H O) =258 nm)。また、化合物は、負イオン ES I質量分析により同定した (計算値： 5414.69、測定値： 5414.48)
[0105] 本化合物の塩基配列は、 Human telomerase RNA(GenBank accession No. U86046
)のヌクレオチド番号 137-148に相補的な配列である。
[0106] (実施例 10)
3,4-DBB-(CH ) -0-P(=S)(OH)-0-Te2s-Ae2s-Ge2s-Ge2s-Ge2s-Te2s-Te2s-Ae2s-Ge2s-Ae2s-
Ce2s-Ae2s-Ae2s-CH CH OHの合成（例示化合物番号 145)
実施例 1の化合物と同様に目的配列を有する実施例 10の化合物を実施例 1と同じ CPG 2.7 molを用いて合成した。特開平 11 199597の実施例 12b記載の 6-0-[(3,4 -ジベンジルォキシ)ベンジル] -プロパンジオール- 1-0- (2-シァノエチル Ν,Ν-ジイソ プロピル)ホスホロアミダイトを最後に縮合した。脱保護後、逆相 HPLC (島津製作所 製 LC— 10VPゝカラム（Merck, Chromolith Performance RP- 18e (4.6 X 100mm)) A溶 液： 5%ァセトニトリル、 0.1M酢酸トリェチルァミン水溶液 (TEAA), pH 7.0 B溶液：ァセ トニトリル、 B%: 10%→ 50%(8min, linear gradient)60°C； 2 ml/min;254 nm)にて精製し、 3,4-DBB基を有する目的物のピークを集めた。
[0107] また、最終的に精製した本ィ匕合物は、逆相 HPLC (島津製作所製 LC— 10VP、カラ ム（Merck, Chromolith Performance RP— 18e (4.6 X 100mm)) A溶液： 5%ァセトニトリ ル水溶液、 0.1M酢酸トリェチルァミン水溶液 (TEAA), pH 7.0 B溶液：ァセトニトリル、 B%: 10%→ 50%(8min, linear gradient)； 60°C； 2 ml/min;254 nm)で分析すると、 7.52分 に溶出された（28.4 A units) ( λ max(H O) =258 nm)。また、化合物は、負イオン ES
I質量分析により同定した (計算値： 5372.61、測定値： 5372.40)
[0108] 本化合物の塩基配列は、 Human telomerase RNA(GenBank accession No. U86046
)のヌクレオチド番号 137-148に相補的な配列である。
[0109] (実施例 11)
Figure imgf000036_0001
の合成 (例示化合物番号 151)
実施例 1の化合物と同様に目的配列を有する実施例 11の化合物を実施例 1と同じ CPG 2.7 molを用いて合成した。特開平 7— 87982の実施例 12b記載の 5' - 0-[(3,4- ジベンジルォキシ)ベンジル] -チミジン- 3， - 0-(2-シァノエチル Ν,Ν-ジイソプロピル） ホスホロアミダイトを最後に縮合した。脱保護後、逆相 HPLC (島津製作所製 LC— 10 VP、カラム（Merck, Chromolith Performance RP- 18e (4.6 X 100mm)) A溶液： 5%ァセ トニトリル、 0.1M酢酸トリェチルァミン水溶液 (TEAA), pH 7.0 B溶液：ァセトニトリル、 B%: 10%→ 50%(8min, linear gradient)60°C； 2 ml/min;254 nm)にて精製し、 3,4- DBB 基を有する目的物のピークを集めた。
[0110] また、最終的に精製した本ィ匕合物は、逆相 HPLC (島津製作所製 LC— 10VP、カラ ム（Merck, Chromolith Performance RP— 18e (4.6 X 100mm)) A溶液： 5%ァセトニトリ ル水溶液、 0.1M酢酸トリェチルァミン水溶液 (TEAA), pH 7.0 B溶液：ァセトニトリル、 B%: 10%→ 50%(8min, linear gradient)； 60°C； 2 ml/min;254 nm)で分析すると、 7.30分 に溶出された（42.9 A units) ( λ max(H O) =258 nm)。また、化合物は、負イオン ES
260 2
I質量分析により同定した (計算値： 5538.75、測定値： 5538.30)
[0111] 本化合物の塩基配列は、 Human telomerase RNA (GenBank accession No. U86046
)のヌクレオチド番号 137-148に相補的な配列である。
[0112] (実施例 12)
3,4— DBB- T— T — A G T — T — A — A — A —A - -CH CH
2 2
OHの合成 (例示化合物番号 150)
実施例 1の化合物と同様に目的配列を有する実施例 12の化合物を実施例 1と同じ CPG 2.7 molを用いて合成した。特開平 7— 87982の実施例 12b記載の 5' - 0-[(3,4- ジベンジルォキシ)ベンジル] -チミジン- 3 - 0-(2-シァノエチル Ν,Ν-ジイソプロピル） ホスホロアミダイトを最後に縮合した。脱保護後、逆相 HPLC (島津製作所製 LC— 10 VP、カラム（Merck, Chromolith Performance RP- 18e (4.6 X 100mm)) A溶液： 5%ァセ トニトリル、 0.1M酢酸トリェチルァミン水溶液 (TEAA), pH 7.0 B溶液：ァセトニトリル、 B%: 10%→ 40%(8min, linear gradient)60°C； 2 ml/min;254 nm)にて精製し、 3,4- DBB 基を有する目的物のピークを集めた。
[0113] また、最終的に精製した本ィ匕合物は、イオン交換 HPLC (島津製作所製 LC— 10VP 、カラム（東ソ 株式会社， DEAE-5PW (10 X 50mm)) A溶液： 20%ァセトニトリル水溶 液、 B溶液： 20%ァセトニトリル 67mMリン酸バッファー 1.5M臭化カリウム水溶液 pH6 .8 B%: 10%→ 60%(8min, linear gradient) ; 60°C； 2 ml/min;254 nm)で分析すると、 8.23 分に溶出された（33.2 A units) ( λ max(H Ο) =259 nm)。また、化合物は、負イオン
ESI質量分析により同定した (計算値: 5176.45、測定値: 5175.63)。
[0114] 本化合物の塩基配列は、 Human telomerase RNA(GenBank accession No. U86046
)のヌクレオチド番号 137-149に相補的な配列である。
[0115] (実施例 13)
Hつ )( )(θΗχ つ— — 厂 厂 T 厂 ト丁
CH OHの合成 (例示化合物番号 159)
実施例 1の化合物と同様に目的配列を有する実施例 13の化合物を実施例 1と同じ CPG 1.0 molを用いて合成した。但し、 5'末端にチォリン酸基を導入するために、フ ォスフアリンク (アプライドバイオシステムズ製)を添付のプロトコールに従って、縮合の 最後に用いた。脱保護後、逆相 HPLC (島津製作所製 LC— 10VP、カラム (Merck, C hromolith Performance RP- 18e (4.6 X 100mm))、 A溶液： 5%ァセトニトリル、 0.1M酢酸 トリェチルァミン水溶液 (TEAA), pH 7.0、 B溶液：ァセトニトリル、 B%: 0%→ 80%(10 min, linear gradient)60°C； 2 ml/min;254 nm)にて精製し、 目的物のピーク^^めた。
[0116] 最終的に精製した本ィ匕合物は、イオン交換 HPLC (島津製作所製 LC— 10VP、カラ ム（東ソ一株式会社， DEAE- 5PW (10 X 50 mm))、 A溶液： 20%ァセトニトリル水溶液、 B 溶液： 20%ァセトニトリル 67mMリン酸バッファー 1.5 M臭化カリウム水溶液 pH 6.8 B %: 10%→ 80%(8 min, linear gradient)； 60°C； 2 ml/min;254 nm)で分析すると、 7.27分 に溶出された（33.6 A units) ( λ max(H O) =259 nm)。また、本化合物は、負イオン
ESI質量分析により同定した (計算値： 5012.26、測定値： 5011.54)。
[0117] 本化合物の塩基配列は、 Human telomerase RNA(Gene Bank accession No. U860
46)のヌクレオチド番号 136-148に相補的な配列である。
[0118] (実施例 14)
C H C(0)0(CH ) SP(0)(OH)-0-Te2s-Ae2s-Ge2s-Ge2s-Ge2s-Te2s-Te2s-Ae2s-Ge2s-Ae2s-C e2s-Ae2s-Ae2s-CH CH OHの合成 (例示化合物番号 161)
実施例 13の化合物 (18 A units)を DMF 0.8 mL〖こ溶解し、ジイソプロピルェチルァ ミン (4.96 μ L)をカ卩えた後、 2— (stearoyloxy)ethyl bromide (Ackrman et al. J. Am. Che m.Soc, 78, (1956) 6025) 19 mgを DMF 0.8 mLに加熱し溶解した溶液を加えた。 42 °Cで 4日間反応させた。反応終了後、 n-へキサン 5 mLで 3回洗浄し、水 2 mLを加え、 析出した不溶物をメンブランフィルターでろ過して除いたのち、逆相 HPLC (島津製作 所製 LC— 10VPゝカラム（Merck, Chromolith Performance RP- 18e (4.6 X 100mm))、 A 溶液： 5%ァセトニトリル、 0.1M酢酸トリェチルァミン水溶液 (TEAA), pH 7.0、 B溶液：ァ セトニトリル、 B%: 0%→ 30%(10 min), 30%→ 80%(5 min), 60°C ;2 ml/min;254 nm)にて 精製し、 目的物のピークを集めた。
[0119] 最終的に精製した本ィ匕合物は、イオン交換 HPLC (島津製作所製 LC— 10VP、カラ ム（東ソ一株式会社， DEAE- 5PW (10 X 50 mm))、 A溶液： 20%ァセトニトリル水溶液、 B 溶液： 20%ァセトニトリル 67mMリン酸バッファー 1.5 M臭化カリウム水溶液 pH 6.8 B %: 10%→ 80%(10 min, linear gradient)； 60°C； 2 ml/min;254 nm)で分析すると、 8.23分 に溶出された (3.9 A units)。また、本化合物は、負イオン ESI質量分析により同定し
260
た（計算値： 5322.33、測定値： 5322.80)。
[0120] 本化合物の塩基配列は、 Human telomerase RNA(Gene Bank accession No. U860
46)のヌクレオチド番号 136-148に相補的な配列である。
[0121] (参考例 1)
化合物 Aの合成
核酸自動合成機（パーキンエルマ一社製 ABI model 394 DNA/RNA synthesizer) を用い、 1 molスケールで行った。各合成サイクルにおける溶媒、試薬、ホスホロァ ミダイトの濃度は天然オリゴヌクレオチド合成の場合と同じとし、脱トリチルイ匕は 3%ジ クロ口酢酸/ジクロロメタン溶媒（80秒間）、カップリングは 4,5-ジシァノイミダゾール /ァ セトニトリル溶媒（Chem Genes社製、 900秒）、硫化は 0.3%キサンタンヒドリド /ピリジン ：ァセトニトリル = 1 : 9 (v/v) (900秒)を用い、その他の溶媒、試薬はアプライドバイシス テムズ社製のものを用いた。 Aa,Ga部分の非天然型のホスホロアミダイトは、 6-N-ベン ゾィル -3， -(トリチル)ァミノ- 2， ,3， -ジデォキシアデノシン 5， -(2-シァノエチル Ν,Ν-ジ イソプロピルホスホロアミダイト)、または、 2- Ν-イソブチリル- 3，- (トリチル)ァミノ- 2，,3' -ジデォキシグアノシン 5， -(2-シァノエチル Ν,Ν-ジイソプロピルホスホロアミダイト)を Τ ransgenomic社力も購入し、それぞれ用いた。 Ca,Ta部分は、 4- N-ベンゾィル -3， - (トリ チル)ァミノ- 2' , 3' -ジデォキシ- 5-メチルシチジン 5' - (2-シァノエチル Ν,Ν-ジィソプ 口ピルホスホロアミダイト)、または、 3 (トリチル)ァミノ- 3，-デォキシチミジン 5 (2-シ ァノエチル Ν,Ν-ジイソプロピルホスホロアミダイト)を文献（NelsonJ.S. et al. J. Org. C hem. (1997) 62, 7278-7287)に従って合成した。固相担体は、 3 (トリチル)ァミノ- 3，- デォキシチミジンが 5，位でコハク酸を介して結合したコントロールポアグラス（CPG)を 文献（NelsonJ.S. et al. J. Org. Chem. (1997) 62, 7278-7287)に従って合成し用い、 表記の化合物をトリチル OFFで合成した。
[0122] 目的配列を有する保護されたオリゴヌクレオチド類縁体を濃アンモニア水で処理す ることによってオリゴマーを支持体力も切り出すとともに、リン原子上の保護基シァノエ チル基と核酸塩基上の保護基をはずした。溶媒を減圧下留去し、残った残渣をィォ ン交換 HPLC (島津製作所製 LC— 10VP、カラム (東ソ一株式会社， DEAE- 5PW (10 X 50mm))、 A溶液： 20%ァセトニトリル水溶液、 B溶液： 20%ァセトニトリル 67mMリン酸 バッファー 1.5M臭化カリウム水溶液 pH6.8 B%: 20%→ 40%(10min, linear gradient) ;6 0°C ;2 ml/min;254應）にて精製し、 目的物のピークを集めた。減圧下溶媒を留去後 、水 2mlに溶かし、 Sephadex G-25 (15 X 300mm)でゲルろ過による脱塩を行った。 目 的物にあたる分画を集め、留去したのち残渣を lmlの水に溶解し、 0.45 mのフィルタ 一（MILLIPORE, Ultrafree- MC)でろ過し、 目的とするオリゴヌクレオチドを得た。本化 合物は、イオン交換 HPLC (島津製作所製 LC— 10VP、カラム (東ソ一株式会社， DE AE-5PW (10 X 50mm))、 A溶液： 20%ァセトニトリル水溶液、 B溶液： 20%ァセトニトリル 67mMリン酸バッファー 1.5M臭化カリウム水溶液 pH6.8 B%: 20%→ 40%(10min, linear gradient) ;60°C ; 2 ml/min;254 nm)で分析すると、 5.92分に溶出された。また、化合 物は、負イオン ESI質量分析により同定した (計算値 :4216.71、測定値: 4215.81)。
[0123] 本化合物は、 Asaiら、 2003, Cancer Research 63, 3931- 3939に記載された GRN163 と同配列を有し、シトシン塩基を 5-メチルシトシン塩基としたものである。
[0124] 本化合物の塩基配列は、 Human telomerase RNA(GenBank accession No. U86046 )のヌクレオチド番号 136-148に相補的な配列である。
[0125] (試験例 1)融解温度測定試験
実施例の化合物を融解温度 (Tm)測定用溶液（10 mMリン酸ナトリウム緩衝液 (pH 7.2) )に溶解し、実施例の化合物の最終濃度が 3.4 Mになるように、さらにテロメラ ーゼ RNAの配列（5， -UUGUCUAACCCUA-3， )を有する RNAオリゴヌクレオチド (3.4 M)が同液に存在するように調製した。両鎖が入った溶液（1.1 mL)を 90°Cで 5分間 加温し、室温まで徐冷した。サンプル溶液は分光光度計（島津 UV-3100PC)を用い て測定した。サンプルはセル（セル厚 10 mm,円筒ジャケット型）内に入れ、インキュべ 一ター（EKO製、 Haake FE2)で加温した循環水により加温した。温度はデジタル温 度計（SATO SK-1250MC)を使用してモニターしながら、 20°Cから 95°Cまで上昇させ 、 1°C間隔で 260應における吸光度を測定した。 1°Cあたりの吸光度の変化量が最大 になる温度を Tmとし、実施例の化合物を評価した。その結果を表 1に示す。
[0126] (表 1)各化合物の融解温度 試験化合物 Tm (°C) 実施例 1の化合物 85
実施例 2の化合物 87
実施例 3の化合物 74
実施例 4の化合物 62
実施例 5の化合物 52
実施例 6の化合物 71 参考例 1の化合物 (化合物 A) 実施例の化合物は、化合物 Aに比べ、高い Tm値を示した。このことは、テロメラーゼ 阻害活性を持つことが知られる化合物 Aよりもテロメラーゼに強く結合することを意味 し、実施例の化合物はテロメラーゼの酵素活性を阻害することが示唆される。
[0127] (試験例 2) pH 5.0でのオリゴヌクレオチドの安定性試験
実施例 1の化合物 (約 3.6 nmol)または、参考例 1で得たィ匕合物 A (約 3.6 nmol)を 500 μ Lの 20 mM酢酸ナトリウム水溶液 (ρΗ 5.0)に溶解し、 37°Cで加温し、一定時間に 73 Lをサンプリングし、 27 1のホウ酸ナトリウム水溶液 (pH 9.18)をカ卩ぇ中和した。こ れらをイオン交換 HPLC (島津製作所製 LC— 10VP、カラム (東ソ一株式会社， DEAE -5PW (10 X 50mm))、 A溶液： 20%ァセトニトリル水溶液、 B溶液： 20%ァセトニトリル 67 mMリン酸バッファー 1.5 M臭化カリウム水溶液 pH 6.8 B%: 20%→ 70%(10 min, linea r gradient) ;60°C ; 2 ml/min;254 nm)で分析し、反応前の HPLCチャート上のそれぞ れの化合物の面積値 (A)と反応後の面積値 (B)の比（B/A X 100)オリゴヌクレオチド の残存率（％)とした。結果を図 1に示した。
[0128] 図より明らかであるように実施例 1の化合物は約 100時間後においても全く加水分 解されることはな力つたのに対し、化合物 Aは、約 24時間後 60%の分解が観察された。 この結果より、実施例 1の化合物は化合物 Aと比較し、エンドサイトースで取り込まれ た細胞内での生理的条件と同様の酸性条件下で、極めて安定であることが分力つた
[0129] (製剤例 1)ソフトカプセル剤
消化性油状物、例えば、大豆油、綿実油又はオリーブ油中に入れた、実施例 1の 化合物の混合物を調製し、正置換ポンプでゼラチン中に注入して、 100 mgの活性成 分を含有するソフトカプセルを得、洗浄後、乾燥する。
[0130] (製剤例 2)錠剤
常法に従って、 100 mgの実施例 2の化合物、 0.2 mgのコロイド性二酸化珪素、 5 mg のステアリン酸マグネシウム、 275 mgの微結晶性セルロース、 11 mgのデンプン及び 98.8 mgのラクト—スを用いて製造する。
[0131] 尚、所望により、剤皮を塗布する。
[0132] (製剤例 3)懸濁剤
5 ml中に、 100 mgの実施例 1の化合物、 100 mgのナトリウムカルボキシ基メチルセ ルロ—ス、 5 mgの安息香酸ナトリウム、 1.0 gのソルビト—ル溶液（日本薬局方）及び 0 .025 mlのバニリンを含有するように製造する。
[0133] (製剤例 4)注射剤
1.5重量％の実施例 2の化合物を、 10容量％のプロピレングリコール中で撹拌し、次 いで、注射用水で一定容量にした後、滅菌して製造した。
[0134] (製剤例 5)注射剤 N— ( a—トリメチルアンモ-オアセチル）一ジドデシルー D—グルタメートクロリド（ 最終濃度 30nmol/ml)、ジラウロイルホスファチジルコリン (最終濃度 60nmol/ml)、及 び、ジォレオイルホスファチジルエタノールァミン（最終濃度 60nmol/ml)、及び、 1.5 重量％の実施例 2の化合物、及び、を、 10容量％のプロピレングリコール中で撹拌し、 次いで、注射用水で一定容量にした後、滅菌して製造した。
図面の簡単な説明
[0135] [図 1]試験例 2における安定性試験結果。
符号の説明
[0136] 時間：試験開始からの経過時間。
残存量:試験開始時を 100%としたときの残存量。
産業上の利用可能性
[0137] 本発明の化合物は、強力にテロメラーゼ RNAに結合し、癌などのテロメラーゼが関 与して!/、る疾患の治療及び予防に有用である。

Claims

請求の範囲
下記一般式 (I)
E1-B1-B2-B3-B4-E2 (I)
(式中、 E1は式 R1-で表される基、式 R1-B6-で表される基、又は、式 R1-B5-B6-で表 される基を示し、
E2は式- B7-R2で表される基、式- B8-B9-R2で表される基、式- B8-B10-B11-R2で表 される基、式- B8-B10-B12-B13-R2で表される基、式- B8-B10-B12-B14-B15-R2で 表される基、式- B8-B10-B12-B14-B16-B17-R2で表される基、又は、式- B8-B10-B 12-B14-B 16-B 18- B 19- R2で表される基を示し、
B4、 B5及び B8は同一又は異なって式
[化 1]
Figure imgf000044_0001
で表される基 (以下、「τρ」と表記する。）、式
[化 2]
Figure imgf000044_0002
で表される基 (以下、「TS」と表記する。）、一般式 Tep
[化 3]
Figure imgf000045_0001
(式中、 1は 1乃至 5の整数を示す。）で表される基、又は、一般式 Tes [化 4]
Figure imgf000045_0002
(式中、 mは 1乃至 5の整数を示す。）で表される基を示し、
Bl、 B2、 B3及び B12は同一又は異なって式
[化 5]
Figure imgf000045_0003
で表される基 (以下、「GP」と表記する。）、式
Figure imgf000045_0004
で表される基 (以下、「 」と表記する。）、一般式 Gep [化 7]
Figure imgf000046_0001
(式中、 nは 1乃至 5の整数を示す。）で表される基、又は、一般式 G' [化 8]
Figure imgf000046_0002
(式中、 0は 1乃至 5の整数を示す。）で表される基を示し、
B16は式
[化 9]
Figure imgf000046_0003
で表される基 (以下、「 」と表記する。）、式
[化 10]
Figure imgf000046_0004
で表される基 (以下、「 」と表記する。）、一般式 cep
[化 11]
Figure imgf000047_0001
(式中、 pは 1乃至 5の整数を示す。）で表される基、又は、一般式 C [化 12]
Figure imgf000047_0002
(式中、 qは 1乃至 5の整数を示す。）で表される基を示し、
B6、 B10、 B14及び B18は同一又は異なって式
[化 13]
Figure imgf000047_0003
で表される基 (以下、「AP」と表記する。）、式
[化 14]
Figure imgf000047_0004
で表される基 (以下、「 」と表記する。）、一般式 A
Figure imgf000048_0001
(式中、 sは 1乃至 5の整数を示す。）で表される基、又は、一般式 A' [化 16]
Figure imgf000048_0002
(式中、 tは 1乃至 5の整数を示す。）で表される基を示し、
B11は式
[化 17]
Figure imgf000048_0003
で表される基 (以下、「 」と表記する。）、又は一般式 G'
[化 18]
Figure imgf000048_0004
(式中、 uは 1乃至 5の整数を示す。）で表される基を示し、 B15は式
[化 19]
Figure imgf000049_0001
で表される基 (以下、「 」と表記する。）、又は、一般式 Cet [化 20]
Figure imgf000049_0002
(式中、 Vは 1乃至 5の整数を示す。）で表される基を示し、 B9、 B13、 B17及び B19は同一又は異なって、式
[化 21]
Figure imgf000049_0003
で表される基 (以下、「 」と表記する。）、又は、一般式 Aet [化 22]
Figure imgf000049_0004
(式中、 wは 1乃至 5の整数を示す。）で表される基を示し、 B7は式
[化 23]
Figure imgf000050_0001
で表される基 (以下、「 」と表記する。）、又は、一般式 T'
[化 24]
Figure imgf000050_0002
(式中、 Xは 1乃至 5の整数を示す。）で表される基を示し、
R1は水酸基、式
[化 25]
Figure imgf000050_0003
で表される基（以下、「3,4- DBB」と表記する。）、 3,4- DBB- (CH ) - 0- P(=0)(OH)- 0-
2 3
基、 3,4- DBB- (CH ) - 0- P(=S)(OH)- 0-基、 3,4- DBB- (CH ) - 0- P(=0)(0H)- 0-基、
2 3
3,4- DBB- (CH ) - 0- P(=S)(0H)- 0-基、 C H C(0)0(CH ) SP(=0)(0H)- 0-基、 C H
31 2 2
C(0)0(CH ) SP(=0)(0H)- 0-基、 C H C(0)0(CH ) SP(=0)(0H)- 0-基、 C H C(
33 2 2 17 35 2 2 18 37
0)0(CH ) SP(=0)(0H)— 0—基、又 ίま、 C H C(0)0(CH ) SP(=0)(OH)— O—基を示し、
2 2 19 39 2 2
R2iま水素原子、 -P(=0)(OH)-0-CH -CH—OH基、又 ίま、 P(=S)(OH)— O— CH— CH -
2 2 2 2
OH基を示す。
但し、 B4、 B5及び B8が同一又は異なって TP又は Tsであり、
Bl、 B2、 B3及び B12が同一又は異なって Gp又は Gsであり、
B16が CP又は Csであり、 B6、 B10、 B14及び B18が同一又は異なって Ap又は Asであり、
B11が であり、
B15が であり、
B9、 B13、 B17及び B19が であり、かつ、
B7が である場合は除かれる。）
を有する化合物、及び、その薬理学上許容される塩。
[2] B4、 B5及び B8が同一又は異なって Tep又は Tesであり、
Bl、 B2、 B3及び B12が同一又は異なって Gep又は Gesであり、
B16が Cep又は Cesであり、
B6、 B10、 B14及び B18が同一又は異なって Aep又は Aesであり、
B11が Getであり、
B15が Cetであり、
B9、 B13、 B17及び B19が Aetであり、かつ、
B7が Tetである請求の範囲第 1項に記載の化合物、及びその薬理学上許容される塩
[3] B4、 B5及び B8が Tesであり、
Bl、 B2及び B12が Gesであり、
B16が Cesであり、
B6、 B10、 B14及び B18が Aesである請求の範囲第 1項又は第 2項に記載の化合物、 及びその薬理学上許容される塩。
[4] E1が式 R1-B5-B6-で表される基である請求の範囲第 1項乃至第 3項の何れ力 1項 に記載の化合物、及びその薬理学上許容される塩。
[5] E1が式 R1-B6-で表される基である請求の範囲第 1項乃至第 3項の何れか 1項に記 載の化合物、及びその薬理学上許容される塩。
[6] E1が式 R1で表される基である請求の範囲第 1項乃至第 3項の何れか 1項に記載の 化合物、及びその薬理学上許容される塩。
[7] E2が式- B8-B 10-B 12-B 14-B 16-B 18-B 19-R2で表される基である請求の範囲第 1 項乃至第 6項の何れか 1項に記載の化合物、及びその薬理学上許容される塩。 [8] E2が式- B8-B10-B12-B14-B16-B17-R2で表される基である請求の範囲第 1項乃 至第 6項の何れか 1項に記載の化合物、及びその薬理学上許容される塩。
[9] E2が式- B8-B10-B12-B14-B15-R2で表される基である請求の範囲第 1項乃至第 6 項の何れか 1項に記載の化合物、及びその薬理学上許容される塩。
[10] E2が式- B8-B10-B12-B13-R2で表される基である請求の範囲第 1項乃至第 6項の 何れか 1項に記載の化合物、及びその薬理学上許容される塩。
[11] E2が式- B8-B10-B11-R2で表される基である請求の範囲第 1項乃至第 6項の何れ 力 1項に記載の化合物、及びその薬理学上許容される塩。
[12] E2が式- B8-B9-R2で表される基である請求の範囲第 1項乃至第 6項の何れ力 1項 に記載の化合物、及びその薬理学上許容される塩。
[13] E2が式- B7-R2で表される基である請求の範囲第 1項乃至第 6項の何れ力 1項に記 載の化合物、及びその薬理学上許容される塩。
[14] R1が水酸基である請求の範囲第 1項乃至第 13項の何れか 1項に記載の化合物、 及びその薬理学上許容される塩。
[15] R2が- P(=0)(OH)- 0- CH2- CH2- OH基、又は、 - P(=S)(OH)- 0- CH2- CH2- OH基で ある請求の範囲第 1項乃至第 14項の何れ力 1項に記載の化合物、及びその薬理学 上許容される塩。
[16] R2が- P(=S)(OH)-0- CH2-CH2-OH基である請求の範囲第 1項乃至第 14項の何れ 力 1項に記載の化合物、及びその薬理学上許容される塩。
[17] 1、 m、 n、 o、 p、 q、 r、 s、 t、 u、 v、 w及び xが同一又は異なって 1又は 2である請求の範 囲第 1項乃至第 16項の何れか 1項に記載の化合物、及び、その薬理学上許容され る塩。
[18] 1、 m、 n、 o、 p、 q、 r、 s、 t、 u、 v、 w及び xが同一であって 1又は 2である請求の範囲第 1項乃至第 16項に記載の化合物、及び、その薬理学上許容される塩。
[19] 1、 m、 n、 o、 p、 q、 r、 s、 t、 u、 v、 w及び xがいずれも 2である請求の範囲第 1項乃至第 16項に記載の化合物、及び、その薬理学上許容される塩。
[20] 特許請求の第第 1項乃至第 19項のいずれか 1項に記載の化合物を有効成分とし て含有する医薬。 [21] 請求の範囲第 1項乃至第 19項のいずれか 1項に記載の化合物を有効成分として含 有する、テロメラーゼが関与して 、る疾患の予防剤又は治療剤。
[22] 請求の範囲第 1項乃至第 19項のいずれか 1項に記載の化合物を有効成分として含 有する、癌の予防剤又は治療剤。
[23] 請求の範囲第 1項乃至第 19項のいずれか 1項に記載の化合物を有効成分として含 有する、テロメラーゼ阻害剤。
[24] 医薬組成物を製造するための、請求の範囲第 1項乃至第 19項のいずれか 1項に記 載の化合物又はその薬理上許容しうる塩の使用。
[25] 請求の範囲第 1項乃至第 19項のいずれか 1項に記載の化合物又はその薬理上許 容しうる塩の薬理的な有効量を温血動物に投与するテロメラーゼが関与している疾 患の予防方法又は治療方法。
[26] 請求の範囲第 1項乃至第 19項のいずれか 1項に記載の化合物又はその薬理上許 容しうる塩の薬理的な有効量を温血動物に投与する癌の予防方法又は治療方法。
[27] 請求の範囲第 1項乃至第 19項のいずれか 1項に記載の化合物又はその薬理上許 容しうる塩の薬理的な有効量を温血動物に投与するテロメラゼー阻害方法。
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