WO2001074400A1

WO2001074400A1 - Transporters and drug delivery system by using the same

Info

Publication number: WO2001074400A1
Application number: PCT/JP2001/002882
Authority: WO
Inventors: Mitsuaki Kuwano; Masaki Nakagawa; Hiroshi Suhara
Original assignee: Santen Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Santen Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2000-04-03
Filing date: 2001-04-03
Publication date: 2001-10-11
Anticipated expiration: 2002-10-03
Also published as: CA2404737A1; US20030144247A1; AU2001244713A1; EP1279406A1; CN100479862C; CA2404737C; US7455855B2; KR100777195B1; KR20030009414A; CN1420790A; EP1279406A4

Description

送逢性物質およびそれを利用した薬物デリバリーシステム技術分野

本発明は、ポリアルキレングリコール若しくはその反応性誘導体、リン脂質および薬物を反応させて共有結合を形成する送達性に優れた物質であり、また、.該送達性物質を全身または局所に投与することで、身体の特定部位に長期間薬物を滞留させることを可能にする薬物デリバリーシステムに関する o 背景技術

網膜、視神経、硝子体等の内眼部における疾患には難治性疾患が多く、その効果的な治療法の開発が望まれている。眼疾患に対しては、薬物を点眼投与して治療するのがもっとも —般的であるが、網膜等の内眼部へは薬物はほとんど移行しない。このことが、内眼部における疾患の治療をより困難にしている。

そこで、薬物を直接身体の特定の部位に投与する方法が試みられ、例えば、薬物を含有させたリボソームやマイクロスフェアーを硝子体等の内眼部へ投与する技術が報告されている（特表平 6 — 5 0 8 3 6 9号、特開平 4 一 2 2 1 3 2 2号など） 0

しかし、リボソームを用いて薬物の放出を制御することは容易でなく、また、リボソームやマイクロスフェア一では粒子径が大きいために、例えば、硝子体などの内眼部に投与する場合には透明性を維持できなくなることがある。一方、薬物を経口投与する場合は、薬物が胃、小腸、大腸、肝臓等で吸収、代謝され易く、薬効を発揮させる程度の濃度になるまで特定部位に薬物を移行させることは困難である。このようなことから、生体内において長期に渡って薬物を有効に存在させることのできる送達性に優れた物質を創製し、該物質を利用した薬物デリバリーシステムを構築することは重要な課題である。発明の開示

本発明者らは、送達性物質およびそれを利用する薬物デリバリーシステムに焦点を当てて鋭意研究した結果、ポリェチレンダリコール若しくはその反応性誘導体、リン脂質および薬物を反応させて共有結合を形成する送達性に優れた物質を創製した。また、該送達性物質を硝子体内に投与すれば、これが網膜内および硝子体内に長期間滞留することから、かかる送達性物質およびそれを用いた全身または局所への薬物デリバリーシステムは、身体の様々な部位における疾患の治療に利用できることを見い出した。

本発明は、ポリアルキレングリコール若しくはその反応性誘導体、リン脂質および薬物を共有結合させた送達性物質、および該物質を全身または局所へ投与する薬物デリバリーシステムを提供するものである。本発明は、また、ポリアルキレングリコール若しくはその反応性誘導体、リン脂質および薬物が共有結合した送達性物質を、単独でまたは薬理学上許容される担体または添加剤との組み合わせで、医薬として有効な量で患者に全身または局所に投与する治療方法、さらに該物質の使用を提供するものである。本発明の送達性物質を全身または局所に投与すると、該物質が生体内のターゲット部位で長期間滞留するので、 1 回の投与で長期に渡り薬効を持続させることが可能となる。

本発明は、ポリアルキレングリコール若しくはその反応性誘導体、リン脂質および薬物が共有結合した下記一般式 [ 1 ] で表される送達性物質である。

(A^-X-Y→B) _n… - [ 1 ]

(式中、 Aおよび B は同一かまたは異なって薬物の残基を、 Xはポリアルキレングリコール若しくはその反応性誘導体の残基を、 Yはリン脂質骨格またはリン脂質の残基を、 mは 0 または 1以上の整数を、 n は 0 または 1 を表し、 mまたは n の少なくとも一方は 0でなく、 A、 B、 Xおよび Yは、いずれも共有結合している、すなわち、一は共有結合を表す。）ここで、ポリアルキレングリコールとは、 [一〇一アルキレン一 ] を繰り返し単位として含むポリマーであって、該ァルキレンは低級アルキル基又はヒドロキシ基で置換されていてもよく、好ましい例としては、該アルキレンが 2〜 3個の炭素鎖で形成されるものが挙げられ、より好ましい例としてはポリエチレングリコールまたはポリプロピレングリコールが挙げられる。また、ポリアルキレングリコールの反応性誘導体とは、ポリアルキレングリコールが薬物またはリン脂質と共有結合することができるように、ポリアルキレングリコールの末端を化学修飾したものをいう。該反応性誘導体の好ましい例としては、ポリアルキレングリコールの一方または両方の末端にアミノアルキル基、カルボキシアルキル基、メルカプトアルキル基、ヒドラジドアルキル基、マレイミドアルキル基、スルホニルアルキル基、ビニルスルホニルアルキル基、ビニルカルボニル基などを導入したものが挙げられ、より好ましい例としてはアミノエチル基、ァミノプロピル基、カルボキシメチル基、カルボキシェチル基、メルカプトェチル基、ヒドラジドメチル基を導入したものが挙げられる。

なお、一般式 [ 1 ] において、 mが 0である場合、ポリアルキレングリコールの片方の末端に位置する 0 H墓は、アルキル基、ァシル基等で保護されていてもよい。

本発明において、ポリアルキレングリコール若しくはその反応性誘導体は、鎖状型、星型、枝分かれ型のいずれでもよく、ターゲッ卜部位における送達性物質の濃度、送達性物質をターゲット部位に存在させる期間等を考慮して適宜選択できる。星型、枝分かれ型のポリアルキレングリコール若しくはその反応性誘導体を用いることにより、 1つの送達性物質に複数個の薬物を共有結合させることが可能となる。

結合形態としては、薬物、ポリアルキレングリコール（反応性誘導体を含む）およびリン脂質が、薬物ーポリアルキレングリコール— リン脂質の形で結合していることが好ましい力く、ポリアルキレンダリコール— リン脂質一薬物の形で結合することもでき、また、薬物 -ポリアルキレングリコール一リン脂質一薬物の形で結合することもできる。

また、ポリアルキレングリコールの種類を選択することにより、ポリアルキレングリコールに複数個の薬物を結合させることができる。さらに、リン脂質に薬物を結合させることにより、送達性物質に複数個の薬物を結合させることができ本発明の送達性物質を構成するポリアルキレングリコール若しくはその反応性誘導体の分子量は、特に制限はなく、生体内の薬物デリバリー部位、共有結合する薬物の種類 · 性質、送達性物質の要求濃度、送達性物質を滞留させる期間等を考慮して適宜選択できるが、通常 5 0 0〜 2 0 0 0 0 0であり、より好ましくは 1 0 0 0〜 5 0 0 0 0である。

本発明において、ポリアルキレングリコール若しくはその反応性誘導体と共有結合させる薬物の化学構造は、特に制限はなく、ポリアルキレングリコール若しくはその反応性誘導体と結合し得る官能基を有しておればよい。好ましい例は、ヒドロキシ基、カルボキシル碁、カルボニル基、アミノ基、アルケニル基等を有する薬物である。薬物の種類としては、各種の疾患に対して治療効果若しくは予防効果を有する全身または局所用の薬物であれば特に制限はなく、例えば抗炎症薬、免疫抑制薬、抗ウィルス薬、抗菌薬、抗真菌薬、抗腫瘍薬、神経保護薬、血流改善薬、抗緑内障薬、鎮痛薬、麻酔薬、血管新生阻害薬、検査薬などが挙げられる。また、網膜、視神経、硝子体などの疾患の治療または予防に用いられる薬物の場合には、種々の原因による内眼部炎症、ウィルスや細菌の感染症、新生血管や網膜細胞の增殖変化を伴った増殖性硝子体網膜症、種々の原因による網膜出血、網膜剥離、網膜芽細胞種などに有効な薬物が挙げられる。例えば、内眼部手術に伴う炎症の場合には、リン酸べタメタゾン等の抗炎症薬が、自己免疫性ブドウ膜炎の場合には、シクロスポリン等の免疫抑制薬が、ウィルス性感染症の場合にはガンシク口ビル等の抗ウィルス薬が、術後感染症の場合にはオフロキサシン等の抗菌薬が、増殖性硝子体網膜症の場合には塩酸ドキソルビシン、カルムスチン等の抗腫瘍薬、眼科用の検査薬などが用いられる。

ポリアルキレングリコール若しくはその反応性誘導体と薬物を共有結合させるには、薬物の官能基とポリアルキレングリコール若しくはその反応性誘導体の官能基を考慮してこれらを化学反応させればよく、汎用される方法を用いてこれらを結合させることができる。ポリアルキレングリコールそのものを用いても共有結合を形成することができるが、その反応性誘導体を用いれば種々の薬物との共有結合を容易に形成することができる。例えばァミノ、チオール、カルボキシル、サクシ二ミジルカルボキシレート、エポキシド、アルデヒド、イソシァネート、マレイミド、ァクリレート、ビニルスルホン等の種々の官能基を有するポリアルキレングリコールの反応性誘導体が市販されているので、これらの反応性誘導体と官能基を有する薬物とを化学反応させて共有結合を形成することができる。

送達性物質において形成される共有結合としては、例えばエステル結合、アミド結合、エーテル結合、力ルバメート結合、ゥレア結合、チォゥレア結合、スルフィド結合、ジスルフィド結合、スルホン結合、カーボネート結合、炭素炭素結合などが挙げられる。薬物の官能基、ポリアルキレングリコール若しくはその反応性誘導体の官能基、リン脂質の官能基、生体内の滞留期間、患部の部位などを考慮して所望の共有結合を有する送達性物質を合成することができる。

本発明において、ポリアルキレングリコール若しくはその反応性誘導体と共有結合するリン脂質には、特に制限はないが、例えば下記一般式 [ 2 ] で示される化合物またはその塩が挙げられる。

(式中、 R ¹ および R ² は、同一または異なっていて、水素原子、. アルキル基、アルキルカルボニル基、アルケニル基またはアルケニルカルボニル基を、 Z はアミノアルキル基、ジアミノアルキル基、ヒドロキシアルキル基またはジヒドロキシアルキル基をそれぞれ示す。）

リン脂質としては、毒性が低く、安全性に優れているものであれば、特に制限はなく、例えば大豆レシチン、卵黄レシチン、ホスファチジルエタノールァミン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジン酸、合成レシチン等が挙げられる。一般式 [ 2 ] で示される化合物中の R ¹ および R ² としては、例えばラウロイル基、ミリストィル基、パルミ卜ィル基、ステアロイル基、ォレオイル基、リノレオイル基などのアルキルカルボニル基（アルカノィル基）や、薬物の残基などが、また、 Z としては、例えばアミノエチル基、ヒドロキシェチル基または 2， 3 —ジヒドロキシプロピル基などが挙げられる。

ポリアルキレングリコール若しくはその反応性誘導体とリン脂質が共有結合するためには、リン脂質は反応活性の官能基を有することが好ましい。リン脂質の官能基は、特に制限されないが、例えばホスファチジルエタノールァミンにおけるァミノ基、ホスファチジルグリセロールにおける水酸基、ホスファチジルセリンにおけるカルボキシル基等の反応活性を有する官能基である。特に好ましいリン脂質はホスファチジルエタノールァミンである。

ポリアルキレンダリコール若しくはその反応性誘導体とリン脂質を共有結合させる方法としては、酸無水物を用いる方法、塩化シァヌルを用いる方法、カルボジィミドを用いる方法、ダルタルアルデヒドを用いる方法などがあり、これらから最良の方法を適宜選択してポリアルキレンダリコール若しくはその反応性誘導体を有する化合物とリン脂質を共有結合させることができる。

リン脂質と共有結合させることのできる薬物の化学構造は、特に制限はないが、リン脂質と結合し得る官能基を有しておればよい。薬物の種類としては、例えばポリアルキレンダリコール若しくはその反応性誘導体と共有結合させる薬物として前記した薬物が挙げられる。また、リン脂質と共有結合させる薬物は、ポリアルキレンダリコール若しくはその反応性誘導体と共有結合させる薬物と同一の薬物であっても、異なる薬物であってもよく、疾患、症伏、薬効等を考慮して薬物を適宜組み合わせることができる。

本発明の送達性物質は、種々の方法により製造することができる。例えば、下式に示すように化合物 [ A ] を N— ヒドロキシコハク酸イミドと、縮合剤（例えば N， N ' — ジシクロへキシルカルポジイミド）の存在下で反応させれば、化合物 [ B ] の活性エステル体が得られる。次いで、化合物 [ B ] の活性エステル部分にアミノ基を有するリン脂質を反応させると、化合物 [ C ] のアミド体が得られる。化合物 [ C ] のアミド体の保護基として導入していた t —ブトキシカルボニルを酸性下で脱保護し、化合物 [ C ] を化合物 [ D ] のアミン体に導き、このアミン体に活性カルボニル体（例えば、イソチオシァネート）を反応させることにより、本発明の送達性物質 [ E ] を得ることができる

o人。 [A]

[B]

[C]

[D]

9

差替え用紙（^則 26) (式中、 R ¹ および R ² は前記と同意義であり、 t は 1以上の整数を表す。）

本発明の送達性物質を全身または局所に投与すれば、送達性物質が身体の特定の部位に滞留し、代謝されることが少ないので、当該部位において薬物が徐々に放出されることによつて長期に渡って疾患の治療，予防効果を発揮する。また、身体の特定の部位に滞留した本発明の送達性物質自体が疾患の治療 · 予防効果を発揮することもある。したがって、本発明の薬物デリバリ一システムは、特にこれまで治療の困難で

9, 1

差替え用紙（^則 26) あった身体の特定部位の治療を 1 回の投与で長期に渡って治療することを可能とする。

本発明の薬物デリバリーシステムは、本発明の送達性物質を全身または局所に投与することによって、身体の特定部位における種々の疾患の治療または予防のために利用できる。具体的疾患としては、種々の原因による炎症、ウィルスや細菌の感染症、免疫不全、腫瘍、新生血管や網膜細胞の増殖変化を伴った增殖性硝子体網膜症、視神経疾患、網膜出血、網膜剥離、網膜芽細胞腫などが挙げられる。また、種々の検査薬が共有結合した送達性物質を全身または局所に投与して、各種の検査を行うことができる。

送達性物質中の薬物含有率は、当該薬物の有効濃度を経時的に維持するのに適当な含有率とすることが望ましい。

本発明の効果は、後述の眼内滞留性試験で詳細に説明するが、モデル薬物としてフルォレセインを共有結合させた送達性物質について、硝子体内注入後の内眼部（硝子体及び網膜）における当該送達性物質の滞留性を検討した結果、本発明の送達性物質は、硝子体ばかりでなく網膜においても、長期間 ( 5 6 日以上）に渡つて滞留することが明らかとなつた。また、視神経保護作用を有することが報告されている Di zoci l p ine (薬物）単独と、 Di zoci l pine を共有結合した送達性物質とをそれぞれ硝子体内に注入した後、薬物の眼内動態を比絞検討したところ、硝子体、網脈絡膜および視神経における本発明の送達性物質の濃度は Di zoci l pine 単独を用いた場合よりも 1 0 0倍以上も高く、消失半减期も著しく延長されることが明らかとなった。

これらの試験結果より、本発明のポリアルキレングリコール若しくはその反応性誘導体およびノまたはリン脂質と共有

1 0 結合させる薬物を適宜選択することにより、全身または局所の種々の疾患を少ない投与回数で有効に治療することが可能となる。また、本発明の薬物デリバリーシステムを用いれば、網膜、視神経、硝子体をはじめ身体の特定の部位に送達性物

/

質を効率よく滞留させることができるので、ポリアルキレングリコール若しくはその反応性誘導体、リン脂質等と共有結合させる薬物の量を低減することが可能となり、副作用の軽減効果も発揮できる。

本発明の送達性物質は、生体内の特定の部位に効率よく滞留するので、局部の疾患の治療に特に有効であり、その製剤形態は、特に限定されないが、注射剤、輸液、錠剤、钦膏剤、乳剤、懸濁剤などが挙げられる。例えば眼部の疾患に対しては点眼剤、注射剤、灌流液、イオントフォレーシス、 .針なし注射等の各種の剤型、投与方法を利用できる。本発明の薬物デリバリーシステムにおける送達性物質は、汎用される処方により、その投与方法（眼内投与など）に適した製剤形態に調製できる。例えば、注射剤は、具体的調製例を実施例の項で説明するが、前記の製造方法で製造した送達性物質を B S S ( Ba l anced Sa l t So l ut ion) 溶液、グリセリン溶液、ヒアルロン酸溶液.などに溶解させて調製することができ、必要に応じ安定化剤、等張化剤、緩衝剤、 pH調節剤、保存剤などを適宜添加することができる。

安定化剤としては、例えばェデト酸、ェデト酸ナトリウム等を挙げることができる。等張化剤としては、例えばグリセリン、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、塩化ナトリウム、塩化カリウム、ソノレビトール、マンニトール等を挙げることができる。緩衝剤としては、例えばクェン酸、ホウ酸、リン酸水素ナトリウム、氷酢酸、トロメタモール、ィプシロン- アミノカプロン酸等を挙げることができる。 pH 調節剤としては、例えば塩酸、クェン酸、リン酸、酢酸、水酸化ナトリウム、水酸化力リウム、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナ卜リゥム等を挙げることができる。保存剤としては、例えばソルビン酸、ソルビン酸カリウム、塩化べンザルコニゥム、塩化べンゼトニゥム、パラォキシ安息香酸エステル、安息香酸ナトリウム、ジブチルヒドロキシトルエン、クロロブタノール、ダルコン酸クロルへキシジン等を挙げろことがでさる。図面の簡単な説明

図 1 は、硝子体組織における経時的濃度変化（ 2 1 日間）を示すグラフである。

図 2 は、網脈絡膜組織における経時的濃度変化（2 1 日間）を示すグラフである。

図 3 は、視神経組織における経時的濃度変化（ 2 1 日間）を示すグラフである。発明を実施するための最良の形態

以下に実施例を挙げて本発明を説明するが、これらの実施例は本発明の理解を助けるためのものであって、発明の範囲を限定するものではない。

a . 送達性物質の製造

本発明の薬物デリバリーシステムに使用できる送達性物質の製造例を以下に示す。

実施例 1

( 1 ) 送達性物質 A ：

①ポリエチレングリコール（分子量 5 0 0 0 ) の一方の末端

2 アルコールの水素原子がチォゥレイドエチルで置換され、他方の末端アルコールの水素原子がカルボニルェチルで置換されたもの、

②フルォレセインおよび

③ L — α — ジステアロイルホスファチジルエタノールアミンを共有結合させたもの [化学式 6 ]

ポリエチレンダリコール（分子量 5 0 0 0 ) の一方の末端アルコールの水素原子がフルォレセィニルチオウレイドェチルで置換され、他方の末端アルコールの水素原子がサクシ二ミジルォキシカルボニルェチルで置換された活性エステル体 ( F 1 u 0 r - Ν Η S - 5 k) [日本油脂社製] ( 0. 2 0 g、約 4 0 ^ m o 1 ) と L— a — ジステアロイルホスファチジルェタノ一ルァミン（ 6 1 m g、 8 2 ju m o l ) に塩化メチレン（ 1 0 m l ) 、クロ口ホルム（ 5 m l ) 、トリェチルァミン（ 2 5 ^ 1、 0. 1 8 mm o l ) を加え、一夜室温で攪拌後、トシル酸（ 4 0 m g , 0. 2 1 ram o l ) を加え、減圧濃縮した。これに 2 —プロパノール（ 5 m l ) を加え、室温で 3 0分間攪拌後、結晶を濾取し、その結晶にメタノ一ル（ 1 0 m l ) を加えて不溶物を濾去した。濾液を減圧濃縮し、残留物に 2 —プロパノールを加えて濾取すると、送達性物質 A 1 5 1 m gがオレンジ色結晶として得られた。

m p : 5 6. 5 - 6 4. 5 °C

I R ( K B r , c m-つ： 2 8 8 6、 1 7 4 1、 1 6 1 1、 1 4 6 8、 1 3 4 4

3

(2) 送達性物質 B ：

①ポリエチレングリコール（分子量 5 0 0 0) の末端アルコ —ルの一方の水素原子がチォゥレイドエチルで置換され、他方の水素原子がカルボニルェチルで置換されたもの、

②フルォレセィンおよび

③ L— α—ジォレオイルホスファチジルエタノールァミンを共有結合させたもの

m ρ ： 4 9. 0 - 5 1. 0 °C

I R (K B r , c m-¹) : 2 8 8 9 1 7 4 1 1 6 1 3 1 4 6 8 1 3 4 4

( 3 ) 送達性物質 C ： ①ポリエチレングリコール（分子量 1 0 0 0 ) の末端アルコールの一方の水素原子がチォゥレイドェチルで置換され、他方の水素原子がカルボ二ルェチルで置換されたもの、

②フルォレセィンおよび

③ L— α—ジステアロイノレホスファチジルエタノールァミンを共有結合させたもの

m ρ ： 5 5. 0 - 6 5. 0 °C

I R (K B r , c m-¹) : 3 3 1 3 2 9 1 7 2 8 5 0 1 7 4 8 1 6 1 7 1 5 4 0 1 4 6 8 1 3 4 9

(4) 送達性物質 D ：

14

差替え用紙（規則 26) ①ポリエチレングリコール (分子量 1 0 0 0 0 ) の末端アルコールの一方の水素原子がチォゥレイドェチルで置換され、他方の水素原子が力ルポ二ルェチルで置換されたもの

②フルォレセインおよび

③ L — α— ジステアロイルホスファチジルエタノールアミンを共有結合させたもの

m ρ ： 5 5. 0 - 6 0. 0 °c

I R ( K B r , c m-¹) ： 2 8 8 5 s 7 4 5、 1 6 1 4、 1 4 6 8、 1 3 4 3

( 5 ) 送達性物質 E ：

①ポリエチレングリコール (分子量 5 0 0 0 ) の末端ァノレコ —ルの一方の水素原子がチォゥレイドエチルで置換され、他方の水素原子がカルボニルェチルで置換さ 7れたもの、

②フルォレセインおよび 7

4

③ L一一ジミリストィルホスファチジルエタノールアミン

1

を共有結合させたもの 6 m p ： 6 5. 0 - 7 5. 0 。C 1

8 I R ( K B r， c m-¹) ： 2 8 8 6 s

1 4 6 7、 1 3 4 4 実施例 2

送達性物質 F ：

①ポリエチレングリコール（分子量 5 0 0 0 ) の両末端アルコールの水素原子がカルボニルェチルで置換されたもの、

② （±) — 3 , 4 — ジヒドロ一 2 — [ 5 —メトキシ一 2 —

[ 3 - [ 2 — ( 3， 4 ーメチレンジォキシ）フエノキシェチルァミノ ] プロボキシ] フエニル] ー 4 ーメチルー 3 —ォキ

15 リー 2 H - 、 4一べンゾチアジンおよび

③ L一 α—ジステアロイルホスファチジルエタノールァミンを共有結合させた.もの [化学式 7 ]

(±) — 3 , 4 — ジヒドロ一 2 — [ 5 — メトキシ一 2 —

[ 3— [2— ( 3， 4—メチレンジォキシ）フエノキシェチルァミノ ] プロボキシ] フエニル] 一 4一メチル一 3 —ォキ、ト 2 Η— , 4 -ベンゾチアジンーシユウ酸塩 [この化合物は、特開昭 6 2 - 1 2 3 1 8 1号公開公報にその製造方法が開示されている。 ] ( 5 4 m g、 8 8 m 0 1 ) にクロ口ホルム（5 m l ) を加え、室温で攪拌した。卜リエチルァミン（ 0. 0 4 m 1、 0. 3 m. m 0 1 ) 、次いで、ポリェチレンダリコール（分子量 5 0 0 0 ) の一方の末端アルコールの水素原子が L一 ;— ジステアロイルホスファチジルォキシェチルアミノカルボニルェチルで置換され、他方の末端アルコールの水素原子がサクシニミジルォキシカルボニルェチルで置換された活性エステル体（D S P E— NH S— 5 00 0)

[日本油脂社製] (0. 3 0 g、約 5 0 μπι 0 1 ) を加えた。一時間後パラトルエンスルホン酸一水和物（ 0. 2 0 g、 1. 1 m m 0 1 ) を加え、減圧濃縮した。これに 2—プロパノ一ル（ 2.0 m 1 ) を加え、室温で 1 5分間攪拌後、不溶物を濾取すると、送達性物質 F 0. 2 8 gが無色結晶として得られた。

m p ： 5 1. 7 - 5 6. 1 °C

I R ( K B c m ) 2 8 8 7、 1 7 4 2、 1 4 6 7、

16 _Μ〜^ορ

実施例 3

送達性物質 G ：

①ポリエチレングリコール（分子量 5 0 0 0 ) の両末端アルコールの水素原子をカルボニルェチルで置換したもの、

② [ 5 R， 1 0 S ] - ( + ) 一 5 —メチル一 1 0 , 1 1 — ジヒドロ一 ^ 一ジベンゾ [ ^， ] シクロヘプテン一 5， 1

0 —ィミンおよび

③ L— α —ジステアロイルホスファチジルエタノールァミンを共有結合させたもの [化学式 8 ]

窒素雰囲気下、 [ 5 R, 1 0 S ] 一（ + ) — 5 —メチル— 1 0， 1 1 ージヒドロ一ージべンゾ [ ] シクロへプテン一 5 , 1 0 —ィミン [Dizocilpine ] マレイン酸塩 ( 0. 1 2 g、 0. 3 6 m m o 1 ) に塩化メチレン（ 6. 4 m 1 ) を加え、室温で攪拌した。トリヱチルァミン（ 0. 1 8 m 1、 1. 3 m m 0 1 ) 、次いで、ポリエチレングリコール（分子量 5 0 0 0 ) の一方の末端アルコールの水素原子が L — α — ジステアロイルホスファチジルォキシェチルァミノカルボニルェチルで置換され、他方の末端アルコールの水素原子がサクシニミジルォキシカルボニルェチルで置換された活性エステル体（D S P E— N H S — 5 0 0 0 ) [日本油脂社製] ( 1. 9 g、約 0. 3 2 mm 0 1 ) を加え、一夜攪拌した。反応溶液を減圧濃縮した後、これに 0. 1 N塩酸（ 1 0 0 m l ) を加え、クロ口ホルム（ 1 0 0 m l ) で 3回抽出した後、抽出液を無水硫酸ナトリゥムで乾燥し、減圧濃縮後、

17

差替え用紙（規則 26) 残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィ一で分離精製し、生じた結晶をジェチルェ一テルで濾取すると、送達性物質 G 0. 2 7 gが無色結晶として得られた。

m p ： 5 2. 4 - 5 6. 9 °C

I R (K B r， c m-¹) : 3 4 3 4、 2 8 8 5、 1 7 4 2、 1 7 1 5、 1 4 6 7、 1 3 4 4、 1 1 4 9、 1 1 2 0

b. 製剤例（注射剤）

送達性物質 G 3 0 m gに滅菌した 2. 6 %グリセリン溶液 1 0 m Lを加え、この液を攪拌しながら 6 0 °Cに加温し、送達性物質 Gを溶解させた注射液を調製した。本発明の送達性物質の種類および添加物の混合比を適宜変更するこどにより、所望の注射液を得ることができる。

c . フルオロフォトメトリー法による眼内滞留試験

蛍光色素を含有する送達性物質 Aおよび Bを用いて、以下の方法で眼内滞留試験を行った。

送達性物質の調製：

送達性物質 A、 B各 3 6 m gに滅菌した 2. 6 %グリセリン溶液 1 0 m Lを加え、この液を攪拌しながら 6 0 °Cに加温し、送達性物質 Aを溶解させて注射液と送達性物質 Bを溶解させた注射液を調製した。また、比較のために、送達性物質 A、 Bの代わりにフルォレセインナトリウムを用い、上記と同様の操作をして、フルォレセインナトリウム 1 0〃 gZm Lの注射液を調製した。

投与方法及び測定方法：

18

差替え甩紙（規則 2© 1 ) 塩酸ケ夕ミン水溶液（ 5 O m g/m L) と塩酸キシラジン水溶液（ 5 0 m g Zm L) の 7 ： 3混合溶液を白色家ゥサギに筋肉内投与しこれを麻酔した。

2 ) 両眼にトロピカミド（ 0. 5 %) 塩酸フヱニレフリン ( 0. 5 %) 点眼液を点眼し両眼とも散瞳させた。

3) 両眼を塩酸ォキシブプロ力イン（0. 5 %) 点眼液で眼表面麻酔した。

4) 眼毛様体扁平部より 3 0 G針の注射器を用いて、上記各注射液を硝子体中央部に投与した。

5 ) 硝子体内 ¾与直後、投与後 1、 4、 7、 1.5、 3 5および 5 6日後にフルオロフォトメトリー装置を用いて、経時的に眼内蛍光強度を測定し、検量線を作成して硝子体および網膜における濃度推移を求め、それぞれの半減期を算出した。なお、眼内蛍光強度を測定する前にも、上記 1 ) と 2 ) の操作を行った。送達性物質 Aおよび B、並びにフルォレセィンナトリゥムの硝子体内における半減期を表 1に、また、これらの網膜内における半減期を表 2に示す。なお、表 1および表 2中の数値は、各 3例の平均値である。

表 1

(表中の値は、硝子体注入後 3 5 日間のデータからモー

19 メント法を用いて算出した値である。）

表 2

(表中の値は、硝子体注入後 1 〜、5 6 日間のデータをモーメント法を用いて算出した値である。）

考察：

表 1 から明らかなように、送達性物質 Aおよび Bの硝子体内における半,減期は 5 . 0 〜 7 . 0 日であるのに対し、フルォレセインナトリゥムのそれは 5時間未満にすぎない。このことから、本発明の送達性物質は硝子体内における滞留期間を顕著に延長することがわかる。また、表 2から明らかなように、送達性物質 Aおよび Bの網膜における半減期は 1 6 . 5 - 1 9 . 5 日であるのに対し、フルォレセインナトリウムのそれは 2 . 4時間未満にすぎない。このことから、硝子体内に投与した本発明の送達性物質は網膜に移行して網膜内で長期間滞留していることがわかる。

d . 放射性同位体を用いた眼内滞留試験

送達性物質 Gの内眼部（硝子体、網膜、視神経等）における滞留効果を検討するために、以下の方法で放射性同位体を用いた眼内滞留試験を行った。

薬液調製：

送達性物質 Gを 9 m g秤取り、 5 m L メスフラスコ内で 2 . 6 %グリセリン溶液に溶解させ、全量を 5 m L とした。また、別の試験管に送達性物質 Gをトリチヴム [ ³ H ] で置換した

2 0 化合物（以下「送達性物質 G [³ H] 」という） 3 7 M B q Zm Lのトルエン /エタノール溶液（ 1 : 1 ) 2 0 0 を入れ、窒素気流下でトルエン Zエタノールを留去した。この試験管に、先に調製した 5 m Lの送達性物質 Gの溶液を加えて撹拌し、投与液とした。

—方、 [ 5 R, 1 0 S ] — ( + ) — 5 —メチル一 1 0， 1 1 — ジヒドロー 5 -ジベンゾ [ <5， ά シクロヘプテン一 5 , 1 0 —ィミンマレイン酸塩（以下「比較物質 X」という） 0. 9 6 m gを秤取り、 1 0 m L メスフラスコ内で 2. 6 %グリセリン溶液に溶解させ、全量を 1 0 m L とした。また、別の試験管に比較物質 Xをトリチウム [³ H] で置換した化合物（以下「比較物質 X [³ H] 」という） 3 7 M B q Zm Lのエタノール溶液を 4 0 0 μ L入れ、窒素気流下でェ夕ノールを留去した。この試験管に、先に調製した 1 O m L の比較物質 Xの溶液を加えて撹拌し、投与液とした。なお、調製に際しては、すべて滅菌した器具を用いた。

硝子体内への注入：

日本白色ゥサギに、塩酸ケタミン水溶液と塩酸キシラジン水溶液の 7 ： 3混合溶液を l m L Z k gの割合で筋肉内注射し，これを麻酔した。つぎに、両眼を塩酸ォキシブプロカイン（ 0. 5 %) 点眼液で眼表面麻酔した後、各被験物質の投与液（ 1 0 0 μ 1 / e y e ) を 3 0 G針を用いて硝子体に注入した。注入は、網膜に針を刺さないように、針にストッパ一をつけて行った。表 3に各投与液の濃度、投与量等を示す。

2 表 3

試料採取：

投与後所定日経てから、ペントバルビタールナトリウム水溶液（ 5 0 m g /m L ) 5 m Lを日本白色ゥサギの耳静脈に投与しこれを麻酔致死させた。眼球を約 1 O m Lの生食で洗浄した後、目頭または目尻にハサミを入れて眼球の周囲を切り、眼球を摘出した。.眼球を生理食塩水で 2回洗浄し、過剰の水分を紙で拭き取った。眼球結膜を取り除いた後、房水を

1 m L シリンジを用いて約 0. 2 m L採取した。次に、眼球を液体窒素に浸し凍結させ、力ミソリで赤道部分で 2分割し、前部より硝子体、水晶体、虹彩，毛様体、及び角膜、後部より硝子体、網脈絡膜、視神経を採取した。

測定用試料の調製：

採取した硝子体、網脈絡膜および視神経の湿重量を測定した。測定後、これらを組織溶解剤を用いて溶解させた後、液体シンチレ一夕一を加えた。

標準放射能試料の調製：

送達性物質 G [³ H] 投与液'および比較物質 X [³ H] 投与液をそれぞれ 1 0 0 0倍希釈して、これらを標準放射能試料とした。

定量方法：

調製した測定試料および標準放射能試料の放射能濃度を液体シンチレーシヨンカウンターで測定した。各標準放射能試

22 料の放射能より、被験物質 1 n g当たりの放射活性 A ( d p m/ p m o 1 ) を求め、次式より各組織中放射能濃度を算出した。各組織試料中の放射能（dpnt) / A (dpm/pmol) 組織中放射能獰度

組織湿重量（g)

(ptnol eq. / g) 薬物動態パラメーターの算出：

硝子体内に注入後 1〜 2 1 日間の眼内組織における各被験物質濃度推移から、モーメント法により消失半減期を算出した。送達性物質 Gおよび比較物質 Xの硝子体内注入後の硝子体、網脈絡膜および視神経における各濃度推移をそれぞれ図 1、図 2および図 3に示す。また、送達性物質 Gおよび比較物質 Xの硝子体および網膜における半減期をそれぞれ表 4および表 5に示す。なお、表 4および表 5中の数値は、各 3例の平均値である。

表 4

23 考察：

図 1〜 3から明らかなように、送達性物質 Gを硝子体に投与した場合に、当該送達性物質が硝子体、網脈絡膜および視神経などの後眼部に移行して長期間に渡って高濃度で滞留している。また、表 4および表 5より、送達性物質の半減期は、比較物質 Xの半減期よりも 6 ~ 1 0倍程度延長されることがわかる。本発明の送達性物質は、ポリアルキレングリコール若しくはその反応性誘導体、リン脂質および薬物を反応させて共有結合を形成する送達性に優れた物質である。そして、本発明の送達性物質を利用する薬物デリバリーシステムは、硝子体、網膜、視神経などの後眼部に送達性物質を長期間滞留させることができる。したがって、本発明の送達性物質を全身または局所に投与する薬物デリバリーシステムは、 1 回の投与で身体の特定部位の種々の疾患を長期に渡って治療または予防することを可能とする。産業上の利用可能性

本発明は、ポリアルキレンダリコール若しくはその反応性誘導体、リン脂質および薬物を反応させて共有結合を形成する送逢性に優れた物質およびこれを用いる薬物デリバリ一システムを提供するものである。

2 4

Claims

請求の範囲

1 . ポリアルキレングリコール若しくはその反応性誘導体、リン脂質および薬物が共有結合した送達性物質。

2 . ポリアルキレングリコール若しくはその反応性誘導体、リン脂質および薬物が共有結合した下記一般式

[ 1 ] で表される送達性物質。

(A^-X-Y-{B) _n ··. ··· [ 1 J

(式中、 Aおよび B は同一かまたは異なって薬物の残基を、 Xはポリアルキレングリコール若しくはその反応性誘導体の残基を、 Yはリン脂質骨格またはリン脂質の残基を、 mは 0 または 1以上の整数を、 n ほ 0、 1 または 2を表し、 mおよび nの少なくとも一方は 0でなく、 A、 B、 Xおよび Yはいずれも共有結合している。）

3 . ポリアルキレングリコール若しくはその反応性誘導体の分子量が 5 0 0〜2 0 0 0 0 0である請求項 1記載の送達性物質。

4 . ，薬物が、抗炎症薬、免疫抑制薬、抗ウィルス薬、抗菌薬、抗真菌薬、抗腫瘍薬、神経保護薬、血流改善薬、抗緑内障薬、鎮痛薬、麻酔薬、血管新生阻害薬または検査薬である請求項 1記載の送達性物質。

5 . リン脂質が、下記一般式 [ 2 ] で表されるリン化合物またはその塩である請求項 1記載の送達性物質。

2 5 (式中、 R ¹ および R ² は、同一または異なって、水素原子、アルキル基、アルキルカルボニル基、アルケニル基またはァルケニルカルボニル基を、 Z はァミノアルキル基、ジァミノアルキル基、ヒドロキシアルキル基またはジヒドロキンアルキル基をそれぞれ示す。）

6 . R ¹ および R ² のうちの少なくとも一方が、ラウロイル基、ミリストィル基、ノ、。ルミトイル基、ステア口ィル基、ォレオイル基またはリノレオイル基である請求項 5 記載の送達性物質。

7 . Zが、アミノエチル基、ヒドロキシェチル基または 2 , 3 — ジヒドロキシプロピル基である請求項 5記載の送達性物質。

8 . 送達性物質における共有結合が、エステル結合、アミド結合、エーテル結合、力ルバメート'結合、ゥレア結合、チォゥレア結合、スルフィド結合、ジスルフィド結合、スルホン結合、カーボネート結合または炭素—炭素結合である請求項 1記載の送達性物質。

9 . ポリアルキレングリコール若しくはその反応性誘導体、リン脂質および薬物を反応させて共有結合を形成した送達性物質を全身または局新に投与することを特徵とする薬物デリバリ一システム。

1 0 . ポリアルキレングリコール若しくはその反応性誘導体、リン脂質および薬物を反応させて共有結合を形成した送達性物質.を点眼投与することを特徴とする薬物デリバリーシステム。

1 1 . ポリアルキレングリコール若しくはその反応性誘導体、リン脂質および薬物を反応させて共有結合を形成した送達性物質を硝子体内に投与することを特徴とする硝子

2 6 体、網膜または視神経への薬物デリバリーシステム。

1 2 . 薬物が、抗炎症薬、免疫抑制薬、抗ウィルス薬、抗菌薬、抗真菌薬、抗腫瘍薬、神経保護薬、血流改善薬、抗緑内障薬、鎮痛薬、麻酔薬、血管新生阻害薬または検査薬である請求項 9記載の薬物デリバリーシステム。

1 3 . 薬物が、眼疾患の治療または予防のための薬物である請求項 1 0記載の薬物デリバリーシステム。

1 4 · 薬物が、網膜、視神経若しぐは硝子体疾患の治療または予防のための薬物である請求項 1 1記載の薬物デリバリーシステム。

1 5 . ポリアルキレングリコール若しくはその.反応性誘導体、リン脂質および薬物が共有結合した送達性物質を、単独でまたは薬理学上許容される担体または添加剤との組み合わせで、医薬とじて有効な量で患者に全身または局所に投与する治療方法。

1 6 . ポリアルキレングリコール若しくはその反応性誘導体、リン脂質および薬物が共有結合した送達性物質を、単独でまたは薬理学上許容される担体または添加剤との組み合わせで、医薬として有効な量で点眼投与する眼疾患治療方法。

1 7 . ポリアルキレングリコール若しくはその反応性誘導体、リン脂質および薬物が共有結合した送達性物質を、単独でまたは薬理学上許容される担体または添加剤との組み合わせで、医薬として有効な量で硝子体内に投与する硝子体、網膜または視神経の疾患治療方法。

1 8 . 薬物が、抗炎症剤、免疫抑制剤、抗ウィルス剤、抗菌剤、抗真菌剤、抗腫瘍剤抗炎症薬、免疫抑制薬、抗ウィルス薬、抗菌薬、抗真菌薬、抗腫瘍薬、神経保護薬剤、

2 7 血流改善薬剤、抗緑内障薬剤、鎮痛薬剤、麻酔薬剤、血管新生阻害薬剤または検査薬である請求項 1 5記載の治療方法。

1 9 . 薬物が、眼疾患の治療または予防のための薬物である請求項 1 6記載の治療方法。

2 0 . 薬物が、網膜、視神経若しくは硝子体疾患の治療または¹予防のための薬物である請求項 1 7記載の治療方法 ο

2 8