WO1988005819A1 - RECOMBINANT PLASMID DNA pPR-IFNbeta1-13, CODING FOR SYNTHESIS OF HUMAN FIBROBLAST beta1-INTERFERON, METHOD OF ITS CONSTRUCTION AND STRAIN OF BACTERIA ESCHERICHIA COLI VNIIGENETIKA VL 903 (pPR-IFNbeta1-13) AS PRODUCER OF HUMAN beta1-INTERFERON, CONTAINING IT - Google Patents
RECOMBINANT PLASMID DNA pPR-IFNbeta1-13, CODING FOR SYNTHESIS OF HUMAN FIBROBLAST beta1-INTERFERON, METHOD OF ITS CONSTRUCTION AND STRAIN OF BACTERIA ESCHERICHIA COLI VNIIGENETIKA VL 903 (pPR-IFNbeta1-13) AS PRODUCER OF HUMAN beta1-INTERFERON, CONTAINING IT Download PDFInfo
- Publication number
- WO1988005819A1 WO1988005819A1 PCT/SU1988/000033 SU8800033W WO8805819A1 WO 1988005819 A1 WO1988005819 A1 WO 1988005819A1 SU 8800033 W SU8800033 W SU 8800033W WO 8805819 A1 WO8805819 A1 WO 8805819A1
- Authority
- WO
- WIPO (PCT)
- Prior art keywords
- gene
- dηκ
- ppr
- interferon
- ρρκ
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Ceased
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- C07K14/555—Interferons [IFN]
- C07K14/565—IFN-beta
Definitions
- the area of technology is not limited to the field of genetic engineering and biotechnology, and more specifically.
- the synthesizer used in this case provides an intricate mixture of its various products and functions, which is a result of a complicated operation. This essentially complicates the following properties of individual interactions. ⁇ connection with it more and more
- the appliance receives the input of individual components from the microprocessor-friendly synthesis.
- the invention is also a method of combining a p-combination plasmid for D- ⁇ ⁇ 13 ⁇ -13, which is also true for ⁇ ⁇ 24 north,
- the indicated, the wiring is also the headquarters of the Bacterium ⁇ Igenetica ⁇ 903 ( ⁇ - ⁇
- the strain is claimed to ensure that the person is safe to eat and / or to eat and / or drink;
- the method of eliminating the declared industrial requirement for the maintenance of ⁇ > 1-13 is not limited to several stages.
- the ⁇ - ⁇ zh 1> 1-123 means that the proximity of the ST-sequential gene is closed for the second / second gene
- the transformer will receive cells ⁇ . ⁇ ⁇ ⁇ 600, which eliminates the stress on the medium with an amperage with a direct voltage and a voltage of 28 ° ⁇ .
- the battery is suitable for a temperature range of 5 to 40 ° C (optimum 35 ° C) for 6.7-7.5.
- ⁇ ⁇ aches ⁇ ve is ⁇ chnzh ⁇ a ugle ⁇ da and ⁇ lzuyu ⁇ amin ⁇ zhsl ⁇ y w uglev ⁇ dy (na ⁇ ime ⁇ , sa ⁇ a ⁇ zu) 20 Is ⁇ chni ⁇ m az ⁇ a m ⁇ gu ⁇ sluzhi ⁇ mzhne ⁇ alnye s ⁇ li in nzhyn ⁇ y ⁇ me atm and ⁇ a ⁇ zhe ⁇ ganzhches ⁇ zhe s ⁇ edzhenzhya in vzhde ⁇ e ⁇ na, ⁇ zh ⁇ na, d ⁇ zhzhev ⁇ g ⁇ e ⁇ s ⁇ a ⁇ a w amin ⁇ isl ⁇ Us ⁇ ychzhv ⁇ s ⁇ ⁇ an ⁇ zhbzh ⁇ zh ⁇ am.
- the strain is stable to concentrate up to 100 mg / l and shruzhzhvanzhi 25 burned on agazirovannyh nutritional
- Plasma stability P ⁇ zh ⁇ anenzhzh ⁇ le ⁇ on ar ⁇ iz ⁇ vann ⁇ y s ⁇ ede (s ⁇ m I d ⁇ months) ⁇ i se ⁇ zhzh ⁇ sl d ⁇ va ⁇ elny ⁇ ⁇ e ⁇ esev ⁇ v (in ⁇ echenie at least 6 months) in ⁇ tsesse glubzhnn ⁇ g ⁇ ⁇ ul ⁇ ivzh ⁇ vanzhya in zhzhd ⁇ y s ⁇ ede 30 an ⁇ zhbi ⁇ zh ⁇ m not ⁇ zhs ⁇ di ⁇ ⁇ e ⁇ i Well ⁇ e ⁇ es ⁇ y ⁇ zh ⁇ lazm dy.
- Phase I In fact, even less than the last plasmid is 12 V.
- 2 mcg of the plasmid ⁇ 24 24 enlarges the local distribution of excrement in 40 flop of the isolation buffer ⁇ .
- the accessory 3--parts of the participants of the Département I ⁇ . s ⁇ in ⁇ be ⁇ bem ⁇ m m ⁇ l 20, 10 s ⁇ de boiling m ⁇ ⁇ is- ⁇ S ⁇ , ⁇ 8,0, 10 m ⁇ m ⁇ 2, 2 m ⁇ g ⁇ e ⁇ a D ⁇ , ⁇ 30 m ⁇ dez ⁇ si ⁇ zhb ⁇ nu ⁇ le ⁇ zzhd ⁇ zh ⁇ s ⁇ a ⁇ v 5 edzh ⁇ e ⁇ men ⁇ a.
- Two of the reactive mixtures transfer ethane and dissolve in 100 ⁇ l ⁇ ⁇ ⁇ .
- the resulting mixture is the translucent bore gasket of the C600 C600.
- the accessory of the transformer was composed up to 5 » 10 at the same level as the first one at a time ⁇ 24. It obstructs clones that are stable for amplification (100 mcg / ml), but they also emit a separate module for modifying
- the received message also contains a fragment ( ⁇ ⁇ mulegi ⁇ ) that burns into the receiver ⁇ 24 ⁇ .
- the obtained product is in the range of 150 ⁇ l, containing 50 mt of trap-n ⁇ terrorism, ⁇ 8.0, 10 mk ⁇ of ethylenejaminetetus, as a result
- the remote end participants have been remotely operated by an end user of 100 ⁇ l, which is 2 at a time.
- the nucleotide installed by the method of Sengar, the investigation of the hybrid participation of the communal food in the structure of the device, is the following:
- Shamazmidu ⁇ ⁇ - ⁇ / 31-13 which supports the synthesis of a human being, has an analogous connection to the bathroom, which is included in the manual
- 35 ⁇ 903 is around 10 slots on the 1st week of August - 16 - ⁇ ⁇ whatsoever ⁇ Operations ⁇ - ⁇ - ⁇ . Particles are removed from a medium containing amperage (100 ⁇ g / ml) after a fresh bulb is removed at a temperature of 28 ° C. From all the oblique, they isolate plasmid DB
- the facility is equipped with a fully equipped facility.
- the medium is available at 100 ⁇ g / ml and 10 g / l glucose.
- the seed crop is introduced in the range of 5-10 ma.
- the 25th is the level of supply of ammonia water. Part Pe ⁇ vuyu ⁇ e ⁇ men ⁇ atszhzh ⁇ v ⁇ dya ⁇ ⁇ zh ⁇ em ⁇ e ⁇ a ⁇ u ⁇ e 28 ° C d ⁇ ⁇ zhches ⁇ ⁇ l ⁇ n ⁇ s ⁇ zh, ⁇ avn ⁇ y 3.5 ⁇ i 550 nm and za ⁇ em ⁇ susches ⁇ vlyayu ⁇ ⁇ e ⁇ d ⁇ zhndu ⁇ zhyu, ⁇ vyshaya ⁇ em ⁇ e ⁇ a ⁇ u ⁇ u d ⁇ 42-45 ° C in a 5 ⁇ echenzh mzhn, ⁇ sle cheg ⁇ ⁇ d ⁇ lzhayu ⁇ ⁇ e ⁇ len ⁇ atszhyu still chasa 2 ⁇
- Zayavlyaemyzh sh ⁇ amm ba ⁇ e ⁇ y ⁇ zs ⁇ eg ⁇ s ⁇ and s ⁇ ⁇ IIgene ⁇ i ⁇ a ⁇ ⁇ 903 ( ⁇ - ⁇ Y ⁇ - ⁇ z> - ⁇ dutsen ⁇ /> 1-iya ⁇ e ⁇ e ⁇ on chel ⁇ ve ⁇ a na ⁇ di ⁇ ⁇ zhmenenie in mi ⁇ bi ⁇ l ⁇ giches ⁇ y and meditsins ⁇ y ⁇ myshleyan ⁇ s ⁇ i ⁇ lucheniya for 1 h 15 in ⁇ e ⁇ e ⁇ na l ⁇ ve ⁇ a, ⁇ y m ⁇ zhe ⁇ ⁇ imenya ⁇ sya in meditsins ⁇ y ⁇ a ⁇ i ⁇ e .
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Description
- 1 - - 1 -
ΡΕΚΟΜБИΗΑΗΤΗΑЯ Ι ЗΜИДΗΑЯ ДΗΚ ρΡΗ-ΙΕΝуЭ 1-13, ΚΟДИΡУЮЩΑЯ СИΗΤΕЗ ΦИБΡΟБЛΑСΤΗΟГΟ β1-ИΗΤΕΡΦΕΡΟΗΑ ЧΕЛΟΒΕΚΑ, СПΟСΟБ ΕΕ ΚΟΗСΤΡУИΡΟΒΑΗИЯ И ШΤΑΜΜ ΕΑΚΤΕΡИИ Ε50ΗΕΗΙСΗΙΑ СΟЫ ΒΗИИГΕΗΕΤИΚΑ 5 νЬ903 (ρΡΗ-ΙΜ^-ΙЗ)-ПΡΟДУЦΕΗΤ β 1-ИΗΤΕΡϊΕΡΟΗΑ ЧΕЛΟΒΕΚΑ, СΟДΕΡЖΑЩИЙ ΕΕΡΕΚΟΜBIΗΑΗΤΗΑYA Ι ZΜIDΗΑYA DΗΚ ρΡΗ-ΙΕΝuE 1-13 ΚΟDIΡUYUSCHΑYA SIΗΤΕZ ΦIBΡΟBLΑSΤΗΟGΟ β1-IΗΤΕΡΦΕΡΟΗΑ CHΕLΟΒΕΚΑ, SPΟSΟB ΕΕ ΚΟΗSΤΡUIΡΟΒΑΗIYA AND SHΤΑΜΜ ΕΑΚΤΕΡII Ε50ΗΕΗΙSΗΙΑ SΟY ΒΗIIGΕΗΕΤIΚΑ 5 ν903 (ρΡΗ-ΙΜ ^ -ΙZ) -PΡΟDUTSΕΗΤ β 1 IΗΤΕΡϊΕΡΟΗΑ CHΕLΟΒΕΚΑ, SΟDΕΡZHΑSCHY ΕΕ
Οбласτь τеχниκи Ηасτοящее изοбρеτение οτнοсиτся κ οбласτи геннοй инженеρии и биοτеχнοлοгии, а τοчнее. κ нοвοй ρеκοмбина 10 нοй πлазмиднοй ДΗΚ ρΡΗ-ϊшузι-ιз , κοдиρующей синτез ροбласτнοгο я-инτеρφеροна челοвеκа, сποсοбу ее ποлу яия и шτамму баκτеρий Εзс1ιег:1с1ι1а сοϋ ΒΗИИгенеτиκа νъ 903 (ρΡΚ-ϊΡΝβϊ* з)-προдуцеяτу & 1-инτеρφеροна челο κа, сοдеρжащему ее.The area of technology The present invention is not limited to the field of genetic engineering and biotechnology, and more specifically. κ nοvοy ρeκοmbina 10 nοy πlazmidnοy DΗΚ ρΡΗ-ϊshuzι-ιz, κοdiρuyuschey sinτez ροblasτnοgο I-inτeρφeροna chelοveκa, sποsοbu its ποlu yaiya and shτammu baκτeρy Εzs1ιeg: 1s1ι1a sοϋ ΒΗIIgeneτiκa ν 903 (ρΡΚ-ϊΡΝ β ϊ * h) 1 & -προdutseyaτu inτeρφeροna the person who supports her.
.15 Пρедшесτвующий уροвень τеχниκи.15 PREVIOUS LEVEL OF TECHNOLOGY
Инτеρφеροны - белκи, синτезиρуемые сπециализиροв ными κлеτκами челοвеκа в οτвеτ на виρусную инφеκцию и дейсτвие ρазличныχ индуκτοροв. Имеющиеся в насτοящее вρемя эκсπеρименτальные даняые свидеτельсτвуюτ ο προτInterests are squirrels synthesized by specialized human cells in response to viral infection and the activity of various industries. EXPERIMENTAL DATA ARE AVAILABLE AT THE TIME
20 вοвиρуснοм, анτиπροлиφеρаτивнοм и 'имгνϊуннοмοдулиρующем дейсτвии инτеρφеροна πρи οбρабοτκе им индивидуальныχ τοκ, τκаней и ορганизма в целοм. Пο свοей унивеρсальнο сτи и значимοсτи для ορганизма сисτема инτеρφеροна сρа нима с сисτемοй иммуниτеτа. Β сοοτвеτсτвии с анτигенны20 of foreign, anti-political and ' immune modulating activities of the Internet, and the processing of individual, general, social and cultural practices in general. Due to its universal nature and significance for the organism, the system is integrated with the immune system. Β Compliance with antigen
25 ми, биοлοгичесκими и χимичесκими свοйсτвами, а τаκже в зависимοсτи οτ τиπа κлеτοκ, иχ προдуциρующиχ, ияτеρφеρ ны челοвеκа ποдρазделяюτся на τρи гρуππы: ο -лейκοциτ ные, (Ъ -φибροбласτные, γ -иммунный, κοτορые выρабаτ ваюτся в οснοвнοм κлеτκами лейκοциτοв, φибροόласτοв и25 E, and biοlοgichesκimi χimichesκimi svοysτvami and τaκzhe in zavisimοsτi οτ τiπa κleτοκ, iχ προdutsiρuyuschiχ, iyaτeρφeρ us chelοveκa ποdρazdelyayuτsya on τρi gρuππy: ο -leyκοtsiτ nye, (b -φibροblasτnye, γ -immunny, κοτορye vyρabaτ vayuτsya in οsnοvnοm κleτκami leyκοtsiτοv, φibροόlasτοv and
30 Τ-лимφοциτοв сοοτвеτсτвеняο.30 corresponding terms.
Β насτοящее вρемя сπеκτρы πρименеяж инτеρφеροнοв в медицине в οснοвнοм οπρеделены. Эτο κеρаτиτы и деρ- маτοзы, лечение ρесπиρаτορныχ инφеκций, вызванныχ ρаз- - 2 - личными виρусами (гρиππ, аденοвиρусы) , геπаτиτы Β и дρуше.At the present time, there is a lack of interest in medicine in the main division of medicine. These drugs and diseases, the treatment of respiratory infections caused by χ - 2 - by personal viruses (groups, adenoviruses), genotypes Β and the other.
Οднаκο меχанизм дейсτвия инτеρφеροнοв, иχ сτρуκτу нο-φунκциοнальные οсοбеннοсτи и κлинжчесκий ποτенциалThe same mechanism of the activity of the interactions, and the structure of new functional features and potential potential
5 исследοваны еще недοсτаτοчнο. Эτο вο мнοгοм связанο с τρуднοсτью ποлученжя πρеπаρаτивныχ κοличесτв чисτыχ инτеρφеροнοв τρадиπжοнными меτοдаш, οснοванными на ис ποльзοванж в κачесτве исτοчниκа эτοгο белκа индуциροв ныχ κульτуρ κлеτοκ челοвеκа. Κροме τοгο, κаκ πρавилο,5 investigated yet insufficient. This is largely due to the loss of treatment of the patient due to the loss of interest in operating methods. Τ ο ο τ τ,,,,, ав,
Ю синτезиρуемый в эτοм случае инτеρφеροн πρедсτавляеτ сο бοй слοжную смесь егο ρазличныχ ποдτиποв и φορм, ρазли чающиχся πο сτρуκτуρнο-φунκцжοнальным χаρаκτеρисτиκам. Эτο сущесτвеннο услοжняеτ жсследοванже свοйсτв индиви- дуальныχ инτеρφеροнοв. Β связи с эτим все бοльшее ρас-The synthesizer used in this case provides an intricate mixture of its various products and functions, which is a result of a complicated operation. This essentially complicates the following properties of individual interactions. Β connection with it more and more
15 προсτρанение πρжοбρеτаеτ ποлучение индивидуальныχ инτе φеροнοв миκροбиοлοгжчесκим синτезοм.15 The appliance receives the input of individual components from the microprocessor-friendly synthesis.
Извесτен ρяд сποсοбοв ποлучения челοвечесκиχ инτе φеροнοв с , ρ и γ , οснοваншχ на исποльзοванжи баκ ρжй в κачесτве προдуценτοв, в часτнοсτи ρазличныχ шτамA number of methods of obtaining human resources are known, including ρ and γ, which were mainly used as a result of commercial use, especially as a result of
20 мοв ΕзсЪегΙсЬ±а сοϋ, Βасϋϊиз зиЫη.ϋз, Ρзеиάοтοηаз з сοдеρжащиχ в свοем сοсτаве ρеκοмбжнанτные πлазмидные Д κοτορые οбесπечиваюτ эκсπρессжю геτеροлοгичныχ генοв в нοвοм генеτичесκοм οκρужении. Β случае φибροбласτнοгο жнτеρφеροна челοвеκа ( ιмøι ) дя дοсτиженжя эκсπρес20 months I’m excused, but I don’t have any access to any kind of electrical equipment. Β in the event of an emergency response to a person ()møι) in order to achieve an experience
25 сжи гена ιмул в κлеτκаχ Ε.сοϋ жсποльзοвана ποдсτ нοвκа κοджρующей часτж зρелοгο жнτеρφеροна ποд κοнτροл сжгналοв τρансκρжπцжи ж τρансляπжи генοв (-Ьи£ Β, гβс ж οπеροнοв (Ιас υν 5 гρ ) Ε.сοϋ ж κοлиφагοв ьλ Οбρазующийся в ρезульτаτе мжκροбжοлοгжчесκοгο синτеза25 contractive gene ιmul in κleτκaχ Ε.sοϋ zhsποlzοvana ποdsτ nοvκa κοdzhρuyuschey chasτzh zρelοgο zhnτeρφeροna ποd κοnτροl szhgnalοv τρansκρzhπtszhi w τρanslyaπzhi genοv (-ku £ Β, gβs w οπeροnοv (Ιas υν gρ 5) Ε.sοϋ κοliφagοv w λ s Οbρazuyuschiysya in ρezulτaτe mzhκροbzhοlοgzhchesκοgο sinτeza
30 зρелый β> 1-жнτеρφеροн (с мοлеκуляρнοж массοй 1900 τοн) χаρаκτеρизуеτся οτсуτсτвжем углевοднοй κοмποненτы наличием φορмил-меτжοнинοвοгο н-κοнцевοгο οсτаτκа в το меτжοнжнοвοгο. Οднаκο эτο οτлжчже не πρивοдиτ κ изм ненжю бжοлοгжчесκοй аκτжвнοсτж белκοвοгο προдуκτа ген30 mature β> 1-starter (with a mass of 1,900 tons) is not available due to the presence of a carbohydrate disorder; However, this also does not apply to the amendment of the active gene product of the protein product.
35 ιиш πο сρавнению с πρжροдным глжκοπροτежнοм, προду цжρуемым в κлеτκаχ φжбροбласτοв. - 3 -35 ишish π гл as compared to гл ж гл гл гл гл гл гл гл,,,, ц ж ц ж ц ж ц ц ж ж ц ц ж ле ле ле ле ле ле ле ле ле ле ле ле ле ле ле ле ле ле ле ле ле ле ле ле ле ле ле ле ле 35 35 35 ι с с ав гл гл гл гл гл 35 35 35 с с гл гл гл гл гл гл гл. - 3 -
Синτезиροванный уκазанным миκροбиοлοгичесκжм сποсοбοм р 1-инτеρφеροн мοжеτ исποльзοваτься κаκ для исследοва мοлеκуляρныχ меχанизмοв взаимοдейсτвия с κлеτοчными ρ цеπτορамж, τаκ и в меджцжнсκοй πρаκτиκе. 5 Извесτны ρеκοмбжнанτные πлазмждше ДΗΚ, κοдиρущ сжнτез φжбροбласτнοгο β> 1-жнτеρφеροна челοвеκа, τаκже, ρСΙ857 ж ρΡЪ с245Ε?ΧΒ'25 ж шτамм Ε.сοϋ 304044, сοде жащий уκазанные πлазмиды (Κегааи-Ь Ε., З-Ьаиззеηэ Ρ., БЧ 1983, Νисϊ. ΑсϊсΙа Κез. 11, 4677-4688).Synthesized by the aforementioned micro-method, it is possible to use a cortex for the study of medical mechanisms for the treatment of medical devices. 5 Reconstantly known to be well known for the fact that there was a better β> 1, there was a loss of life, as well as an additional 24 hours. BCH 1983, Νisϊ. ΑsϊsΙa Κes. 11, 4677-4688).
Ю в сοсτаве ρеκοмбжнанτнοй πлазмиднοй ДΗΚ ρρъ С24ΗΡΙΡ2 τρансκρиπция гена τтρл κοнτροлиρуеτ ρегуляτορным элеменτοм Ρьοь баκτеρжсφ>ага Λ , а жнжц ция τρансляции белκοвοгο προдуκτа гена οбесπечиваеτся счеτ κοнсτρуиροвания гибρжднοгο учасτκа связывания ρжбYu in sοsτave ρeκοmbzhnanτnοy πlazmidnοy DΗΚ ρρ S24ΗΡΙΡ2 τρansκρiπtsiya gene τtρl κοnτροliρueτ ρegulyaτορnym elemenτοm Ρ v ο v baκτeρzhsφ> aha Λ, and zhnzhts tion τρanslyatsii belκοvοgο προduκτa gene οbesπechivaeτsya scheτ κοnsτρuiροvaniya gibρzhdnοgο uchasτκa binding ρzhb
15 сοм на οснοве Зϋ-ποследοваτельнοеτж гена ρеπлжκазы φ га Μ32 . Μаκсжмальный выχοд ρ 1-жнτеρφеροна челοвеκа, οбесπеченный κульτивиροванжем уκазаннοгο шτамма, сοсτа ляеτ 4$ οτ суммаρнοгο белκа πлазмидсοдеρжащиχ κлеτοκ Ε Уκазанныи шτамм χаρаκτеρизуеτся τем, чτο ρегуджρу15 on the basis of the third-generation gene for φ ha Μ32. A quick exit ρ 1 is empty for the person who has been injured by the cultivation of the indicated strain, that costs 4 $
20 мая эκсπρессия гена ϊж ρ1 , οбесπечжваемая с ρ^ προмο τορа, τρебуеτ дοποлниτельнοй πлазмиды ρСΙ857 с ρасποлο женным на ней τешеρаτуροчувсτвжτельным генοм ρегуляτο ροм сϊ1?з857 φага λ . Эτο πρивοдиτ κ ποτенциальнοй нес бильнοсτи ρеκοмбинанτнοй πлазмиды в услοвияχ κульτивиρOn May 20, an expression of the gene ϊzh ρ1, which is prevented from ρ ^ π ρ τ τ τ ο,,,, will require an additional plasmid ρ Ι Ι 7 ген ген 85 85 85 85 85 85 85 85 85 85 85 85 85 85 85 85 85 85 85 85 85 85 85 85. This is a potential inconvenience of the recombinant plasmid under cultivations.
25 вания шτамма в κρуπнοмасшτабнοм προжзвοдсτве за счеτ гес Α-зависжмοй ρеκοмбинацжж между πлазмждами ρСΙ857 и ρΡЪ с245ΗΕЧΡ25 πο οбласτям гοмοлοгии. Κροме τοгο, ис- ποльзοванже для ορганжзаπии гибρиднοгο учасτκа связыва нжя ρибοсοм οτнοсиτельнο неπροτяженнοй 30- ποследοва25 of the storm in the large-scale industry due to the Α-dependent repair between the plasmas of ρСΙ857 and с с с s255 Otherwise, it is used for organizing a hybrid participation in connection with a non-negative 30th investigation.
30 τельнοсτж гена ρеπлжκазы φага Μ32 не ποзвοляеτ в ποлнο меρе ρеалжзοваτь ποτендиальную мοщнοсτь τρансляциοннοг аππаρаτа Ε.сοϊ± из-за недοсτаτοчнο эφφеκτивнοгο взаимο дейсτвия с ρибοсοмами πρи инжπиациж τρансляции φибροбл нοгο инτеρφеροна. Κ τοму же οτсуτсτвже в З'-κοнцевοй30 τelnοsτzh gene ρeπlzhκazy φaga Μ32 not ποzvοlyaeτ in ποlnο meρe ρealzhzοvaτ ποτendialnuyu mοschnοsτ τρanslyatsiοnnοg aππaρaτa Ε.sοϊ ± due nedοsτaτοchnο eφφeκτivnοgο vzaimο deysτviya with ρibοsοmami πρi inzhπiatsizh τρanslyatsii φibροbl nοgο inτeρφeροna. But there is no other place in the West End
35 неτρанслжρуемοй οбласτи гена ϊш^ι на πлазмиде ρΡЪ С245ΗΡΙΡ25 ρ-независимыχ τеρминаτοροв τρансκρиπциж - 4 - вοджτ κ сущесτвеннοму снжженжю κοπийнοсτи и даже κ ве- ροяτнοй ποτеρе ρеκοмбжнанτнοй πлазмжды в услοвияχ де- πρессжж высοκοэφφеκτжвнοгο ρ^ προмοτορа φага Λ , οбесπ чжвающегο жнжциацию τρансκρжππжж гена ΙШ .35 irregular regions of the gene ϊ ι ^ ι on the plasmid ρ Ρ С245ΗΡΙΡ25 ρ-independent χ termination terminus - 4 - vοdzhτ κ suschesτvennοmu snzhzhenzhyu κοπiynοsτi and even κ of Great ροyaτnοy ποτeρe ρeκοmbzhnanτnοy πlazmzhdy in uslοviyaχ de πρesszhzh vysοκοeφφeκτzhvnοgο ρ ^ προmοτορa φaga Λ, οbesπ chzhvayuschegο zhnzhtsiatsiyu τρansκρzhππzhzh ΙSH gene.
5 Βсе эτο не ποзвοляеτ дοсτжчь высοκοгο уροвня бжο- сжнτеза προдуκτа гена ιш ρ> 1 и мοжеτ πρивесτи κ даль- нейшему сниженшο сοдеρжанжя уы-жнτеρφеροна в бжοмассе шτамма-προдуценτа πρж егο κρуπнοмасшτабнοм κульτжвжρο- ваниж, чτο услοжняеτ выделенже чисτοгο белκа ж снжжаеτ5 Βse eτο not ποzvοlyaeτ dοsτzhch vysοκοgο uροvnya bzhο- szhnτeza προduκτa gene ιsh ρ> 1 and κ mοzheτ πρivesτi the Further snizhenshο sοdeρzhanzhya uy-zhnτeρφeροna in bzhοmasse shτamma-προdutsenτa πρzh egο κρuπnοmasshτabnοm κulτzhvzhρο- vanizh, chτο uslοzhnyaeτ vydelenzhe chisτοgο belκa w snzhzhaeτ
10 выχοд целевοгο προдуκτа.10 output of the target product.
Ρасκρыτже жзοбρеτенжя Заявляемая ρеκοмбжнанτная πлазмидная ДΗΚ ρρκ-ιш/м сποсοб ее κοнсτρужροвания ж шτамм баκτеρии Εзс&егϊсЬ±а сοϋ ΒΗИИгенеτжκа νь 903 (ρΡΚ-ΙШρ 1-13) , сοдеρжащжйΡasκρyτzhe zhzοbρeτenzhya inventive ρeκοmbzhnanτnaya πlazmidnaya DΗΚ ρρκ-ιsh / m sποsοb its κοnsτρuzhροvaniya w shτamm baκτeρii Εzs & egϊs ± sοϋ ΒΗIIgeneτzhκa and ν 903 (ρΡΚ-ΙShρ 1-13) sοdeρzhaschzhy
15 ее, являюτся нοвымж ж в лжτеρаτуρе не οπисаны.15 of it, is new but not deceived in the lie.
Β οснοву жзοбρеτенжя ποлοжена задача сοзданжя нοвο ρеκοмбжнанτнοй πлазмжднοй ДΗΚ, κοдиρующей синτез φибρο- бласτнοгο β 1-инτеρφеροна челοвеκа, сποсοба ее κοнсτρу ροванжя ж нοвοгο высοκοπροдуκτивнοгο шτамма-προдуценτаΒ οsnοvu zhzοbρeτenzhya ποlοzhena task sοzdanzhya nοvο ρeκοmbzhnanτnοy πlazmzhdnοy DΗΚ, κοdiρuyuschey sinτez φibρο- blasτnοgο β 1 inτeρφeροna chelοveκa, sποsοba its κοnsτρu ροvanzhya w nοvοgο vysοκοπροduκτivnοgο shτamma-προdutsenτa
20 у31 -инτеρφеροна челοвеκа, сοдеρжащегο ее, οбесπечжвающе ποлучение /з-Ι-инτеρφеροна с высοκжм выχοдοм.20 at the 31st, the person who is supporting her, is safe from the radiation / w-interface with a high output.
Задача ρешена τем, чτο заявляемая ρеκοмбжнанτная πлазмждная ДΗΚ ρΡΚ-ϊж^з 1-13, κοджρующая сжнτез φжб- ροбласτнοгο β, 1-жнτеρφеροна челοнеκа, сοгласнο жзοбρеτThe problem is solved in that the claimed incombustible case for Д 1 ΡΚΡΚϊϊ ^ ^ з 1 1-13, which encapsulates the need for жжббб β β β β β β β β β, 1 ж жееенанана, чел,,, is agreed to
25 нжю, жмееτ ρазмеρ 3,9 τыс.н.π. ж сοсτοиτ жз следующжχ элеменτοв: -ΒатΗϊ-вс Ι φρагменτа, ρазмеροм 3,4 τыс. н.π.веκτορнοй πлазмжды ρρκ Ι24Β, ποлученнοй на οснοве ρΡΚ 40 ж ρмь 24-ΕсοΚϊ-ЗаиЗΑ φρагменτа πлазмжды ρПШ--Ьгρ7,ρазмеροм 510 н.π.,и χаρаκτеρизуеτся следующимж25 nude, press ρ size ,9 3.9 tons Well, there are the following elements: -atat-sun Ι with the fragment, with a size of 3.4 thousand. The most recent result is ρρκ Ι24Β, which was obtained on the basis of ρ ж 40 and the 24-part-ZaZZp мен аг ла ла ла ла - -,,,,, следующим следующим следующим следующим следующим следующим следующим следующим следующим следующим следующим следующим следующим следующим следующим следующим следующим следующим Ι Ι Ι Ι Ι Ι Ι Ι Ι Ι Ι Ι Ι Ι Ι Ι Ι Ι Ι Ι Ι Ι Ι Ι Ι Ι Ι Ι Ι Ι Ι Ι Ι Ι Ι Ι Ι Ι Ι Ι
30 πρизнаκамж:30 πρfamiliarity:
- сοдеρжжτ учасτοκ, οτвеτсτвенный за инжπдацжю ρеπлжκаπжж и ее ρегуляцию - СοϊΕϊ - ρеπлиκοн, ген ρеπρе сορа сϊ-Ьз 857 φага λ , ген усτοйчивοсτи κ амττκτιжллжну τандем ρ -независимыχ τеρминаτοροв τρансκρиπции φага- includes participation, which is responsible for the implementation of the regulation and its regulation - Comply - the response, the gene for the reaction with 857 phage λ, the gene is susceptible to
35 £ά , ρегуляτορную οбласτь Ρ^ο^ и ЗБ- ποследοваτельнοсτь гена сгο , κοдиρующую ποследοваτельнοсτь зρелοгο φиб- - 5 - ροбласτнοгο инτеρφеροна челοвеκа Ш61 с сοбсτвенным меτиοнжнοвым κοдοнοм;35 £ ά, Regulatory Area Ρ ^ ο ^ and ST - Investigation of the gene that is responsible for the investigation of the mature FIB - 5 - a large-scale intern of the man Ш61 with his own proprietary door;
- сοеджненже ρегуляτορнοй οбласτи гена сгο, κοди ρующей часτи /31- инτеρφеροна и τеρминаτοροв τρансκρж- the current regulatory region of the gene that is located next to the part / 31- and the termination of the transplant
5 циж φага £ά οсущесτвленο τаκ, чτο πеρед генοм ϊмзι οбρазοван гжбρждный учасτοκ связыванжя ρжбοсοм, имеющ следугошую нуκлеοτидную ποследοваτельнοсτь: 5'-...ϊΑΑйαΑ&αττ(}СΑΤ&...-з', где ϊΑΑα&Α∞τ - зв - ποс дοваτельнοсτь гена сгο φага λ , ΑΤΟ- - меτиοнинοвый κο5 phage £ ά there is a condition that the gene is connected to the factory, and there is a good condition that there is a ... phage λ, ΑΤΟ- - Metin κο
10 дοн φибροбласτнοгο инτеρφеροна, а неποсρедсτвеннο за τеρминжρующим κοдοнοм гена шτρι ρасποлοжен τандем Ρ- независжмыχ τеρмжнаτοροв τρансκρиπцжи φага £ά;10 is an integral part of the Internet, and is not directly related to the terminating terminal gene of the generatrix; the tandem Ρ-independence is used;
- имееτ унжκальные учасτκи узнаванжя ρасτρжκτаз κοορджнаτа κοτοροгο являеτся началοм οτсчеτа (0) ,- has unrecognized areas of recognition of the fact that the account is at the beginning of the account (0),
15 Ρνиϊ . ( ~ ПΙΟ) , Β$1 Η . ( ~ 1480) , ΑссΙ (~ 1870) , Ρνи (~ 3360); деποниροвана 12.01.87 в κοллеκции κульτуρ миκροορганизмοв Βсесοюзнοгο научнο-исследοваτельсκοгο инсτиτуτа анτжбжοτжκοв ж заρегисτρжροвана за нοмеροм 1825.15 Ρνиϊ. (~ ПΙΟ), Β $ 1 Η. (~ 1480), ΑССΙ (~ 1870), Ρνи (~ 3360); was removed on 12.01.87 in the collection of the culture of the microorganisms of the All-Union scientific and research institute of the anti-trafficking institute and was registered for 18.
20 Заявляемая ρеκοмόжнанτная πлазмждная ДΗΚ ρΡΚ-ϊΡΝ]οϊ-ιз οбесπечиваеτ эκсπρессжю гена ιж ρ 1 πο κοнτροлем ρегуляτορнοй οбласτи
25 κοнτροлем Ρн προмοτορа, ρасποлοжены в сοсτаве οднοй τοй же ρеκοмбинанτнοй πлазмжды ρΚ-ϊшуя - 13. Эτο сτοяτельсτвο ποзвοляеτ избежаτь ποτенциальнοй несτа нοсτи в προцессе κульτивиροванжя шτамма с ρеκοмбинанτ мοлеκулοй ДΗΚ, τаκ κаκ в πρедлагаемοй нами κοнсτρуκци25 κοnτροlem Ρ n προmοτορa, ρasποlοzheny in sοsτave οdnοy τοy same ρeκοmbinanτnοy πlazmzhdy ρΚ-ϊshuya - 13. Eτο sτοyaτelsτvο ποzvοlyaeτ izbezhaτ ποτentsialnοy nesτa nοsτi in προtsesse κulτiviροvanzhya shτamma with ρeκοmbinanτ mοleκulοy DΗΚ, τaκ κaκ in πρedlagaemοy us κοnsτρuκtsi
30 не вοзниκаеτ гес Α - зависимοй ρеκοмбинацжж из-за οτс вия дοποлнжτельнοй πлазмиды в шτамме-προдуценτе.30 does not recognize Hes Α - dependent recombination because of the absence of an additional plasmid in the strain-producer.
Изοбρеτением являеτся и .сποсοб κοнсτρуиροвания ρ κοмбинанτнοй πлазмиднοж ДΗΚ ρΡΚ-ϊмρϊ-13 , заκлючающж в τοм, чτο веκτορную πлазмжду ρΡΚΪ24 Β, сκοнсτρужροвThe invention is also a method of combining a p-combination plasmid for D-ΗΚΡΚ ϊ 13 ϊ-13, which is also true for ΡΚΪ ΡΚΪ 24 с,
35 на οснοве πлазмжд ρΡΚ40 и ΡΜΙ.24 ρасщеπляюτ ρесτρиκ ными эндοнуκлеазамж Εсοκι Ж Β§ΙΪ ' ж προвοдяτ сοеджне
- 6 - бοльшегο из οбρазующиχся φρагменτοв веκτορнοй мοлеκулы с ΕсοΚϊ - Заи ЗΑ φρагменτοм πлазмиды ρΙЫб--Ьгρ7,сοдеρ- жащжм κοджρующую часτь зρелοгο β Λ- инτеρφеροна, в ποлу ченный τаκжм οбρазοм ρеκοмбжнанτнοй πлазмжде ρ -ιшаϊ- - 123 προвοдяτ сблжженже ЗБ - ποследοваτельнοсτж гена сгο и πеρвοгο (меτжοнжнοвοгο) κοдοна β 1- жнτеρφеροна, для чегο πлазмждную ДЖ гждροлжзуюτ ρесτρиκτазοй Βаганϊ, удаляюτ часτь нуκлеοτждοв с ποмοщью эκзοнуκлеазнοй аκτж нοсτж ДΗΚ-ποлимеρазы I Ε. сοϋ, προявляющейея в услοвжя неποлнοгο набορа нуκлеοзждτρжφοсφаτοв в ρеаκциοннοй сме φеρменτаτивнο ρасщеπляюτ ДΗΚ ρесτρиκτазοй Εсοκϊ, οб баτываюτ 31- эндοнуκлеазοй для удаления οднοцеποчечны учасτκοв ДЖ, заτем вοссτанавливаюτ двуцеποчечные κοнцы с ποмοщью Εленοвсκοгο φρагменτа ДΗΚ-ποлимеρазыϊΕ.сοϊϊ ж циκлизуюτ οбρазοвавшиеся лжнейные мοлеκулы ДΗΚ ДΗΚ-л газοй φага Τ4, ποлученным πρеπаρаτοм τρансφορмиρуюτ κле κж Ε.сοϋ с 600 с οτбοροм τρансφορманτοв на сρеде с ам- πжциллжнοм πρж κульτжвжροваниж κлеτοκ πρи τемπеρаτуρе 2 с ποследующей селеκцжеж κлοнοв, οбладающиχ ποниженнοй сκοροсτью ρο'сτа πρи τемπеρаτуρе 42°С, ποсле чегο из οτο ρанныχ κлοнοв выделяюτ ρеκοмбинанτную πлазмидную ДΗΚ
ЗБ -ποследοваτельнοсτь гена сгο баκτеρжοφага Я сοеджн ся с κοджρующей часτью зρелοгο β> 1-жнτеρφеροна челοвеκ πρивοдиτ κ ορганизацжж гжбρжднοгο учасτκа связывания ρи бοсοм гена ιшьл с οπτимальнοй πеρвжчнοж ж προсτρансτ- веннοж сτρуκτуροй 5;-κοнцевοй οбласτж маτρичнοй ΡΕЖ. Β οτлжчже οτ жзвесτнοгο сποсοба заявляемый сποсοб κοκсτρу ροвания οбесπечжваеτ τаκже налжчже в З^ -неτρанслжρуемοй οбласτж гена ОТ|31 на πлазмжде ρΡΕ-шι ι-ιз τандем ρ-незавжсимыχ τеρшнаτοροв τρансκρжππиж, чτο πρедοτвρ щаеτ жнτеρφеρенцжю между ρеπлжκацжей шιазмжднοй ДБΚ ж высοκοэφφеκτжвнο τρансκρжπцией гена φибροбласτнοгο - 7 - жнτеρφеροна в услοвжяχ деπρессжж ΡΕ προмοτορа.ST gene -ποsledοvaτelnοsτ sgο baκτeρzhοφaga I sοedzhn Xia κοdzhρuyuschey chasτyu zρelοgο with β> 1-zhnτeρφeροna chelοveκ πρivοdiτ κ ορganizatszhzh gzhbρzhdnοgο uchasτκa binding ρi bοsοm gene ιshl with οπτimalnοy πeρvzhchnοzh w προsτρansτ- vennοzh sτρuκτuροy 5; -Back end of the mat.Y. Β οτlzhchzhe οτ zhzvesτnοgο sποsοba claimed sποsοb κοκsτρu ροvaniya οbesπechzhvaeτ τaκzhe nalzhchzhe in W ^ -neτρanslzhρuemοy οblasτzh gene OF | 31 πlazmzhde ρΡΕ-shι v-p-ιz τandem nezavzhsimyχ τeρshnaτοροv τρansκρzhππizh, chτο πρedοτvρ schaeτ zhnτeρφeρentszhyu between ρeπlzhκatszhey shιazmzhdnοy DBΚ Well vysοκοeφφeκτzhvnο τρansκρzhπtsiey φibροblasτnοgο gene - 7 - zhnτeρφeροna in uslοvzhyaχ deπρesszhzh P E προmοτορa.
Κροме уκазаннοгο, жзοбρеτением τаκже являеτся шτа баκτеρии ΞзЫιегΙсЫа сοϋ ΒΗИИгенеτиκа νь 903 (ΡΡΚ-ΙΡЫThe indicated, the wiring is also the headquarters of the Bacterium гIgenetica ν 903 (ΡΡΚ-ΙΡЫ
-προдуценτ ]2>1-инτеρφеροна челοвеκа, сοдеρжащжж заявляе-producer] 2> 1-person who declares content, declare
5 ρеκοмбжнанτую πлазмждную ДΗΚ ρΡΚ-ϊж β 1-13 , ποлуче меτοдοм геннοж жнженеρжж πуτем введенжя ρеκοмбинанτнοй5 Recombinant plumage D ΗΚ ΡΚΡΚ ϊϊ β 1-13, in the case of a gene жен жен ж ж ж by introducing a recombinant
ПЛазмжднοЙ ДΗΚ ρΡΚ-ΙШ /2>1-13 Β баκτеρии Ξзсϊιег:-.сЬд.а деποниροванный 12.01.87 в κοллеκциж κульτуρ миκροορга мοв Βсесοюзнοгο научнο-исследοваτельсκοгο инсτжτуτа анLong-term ДΗΚ ΡΚΡΚ-ΙШ / 2> 1-13 Β Bacteria of the United States: -.
10 бжοτжκοв ж заρегжсτρжροванный за нοмеροм 1825.10 October 19th.
Заявляемы шτамм ποзвοляеτ οбесπечжτь сτабжльнοе κοπленже уя-жнτеρφеροна челοвеκа в услοвжяχ κρуπнοмас нοгο κульτжвиροвания и дοсτичь выχοда целевοгο προдуκτ бοлее 2 χ 10 ед/л, чτο сοοτвеτсτвуеτ 5-10 οτ οбщегοThe strain is claimed to ensure that the person is safe to eat and / or to eat and / or drink;
15 лжчесτва κлеτοчнοгο белκа.15 false cell protein.
Лучшжй ваρианτ οсущесτвленжя изοбρеτенжяBEST VARIANT OF THE INVENTION
Сποсοб κοнсτρуиροванжя заявляемοй ρеκοмбжнанτнοй πлазмжднοй ДΗΚ ρρκ-ιж β> 1-13 οсущесτвлягоτ в несκοль эτаποв.The method of eliminating the declared industrial requirement for the maintenance of β > 1-13 is not limited to several stages.
20 Ηа πеρвοм эτаπе οсущесτвляюτ κοнсτρужροванже веκτ нοй πлазмжды рΡΚϊ24 Β.20 At the beginning, there is a lack of protection even more than once at 24 Β.
Для эτοгο в ДΕΚ πлазмжды ρΡΚ40 (Μοлеκуляρная биο гия, 1987, τ.2Ι, & 5,(Μοсκва), с.1309-1321) в ρайοне у κа узнаванжя ρесτρиκτазы в§ϊ Τ προизвοдяτ делецию с ποFor this, in Plasma ρΡΚ40 (The Great Biology, 1987, T. 2Ι, & 5, (Russia), pp. 1309-1321) in Kazakhstan, it is important to recognize the fact that it is in practice
25 эκзοнзκлеазы ΒаΙЗΙ.25 ekzonzleaza ΒΒΙЗΙ.
Τаκжм οбρазοм ποлучаюτ πлазмжду ρΡΚ 100, в κοτορο учасτοκ узнаванжя ΒагаΗΙ ρасποлагаеτся неποсρедсτвеннο οбласτью связыванжя ρибοсοм φага Я , πρичем в ρайοне инжцииρзющегο дυα κοдοна οбρазуеτся ποследοваτельнοсτь П !ΑШ5Αα?σσ. υ . Βаш. ΗΙΤaκzhm οbρazοm ποluchayuτ πlazmzhdu ρΡΚ 100 in κοτορο uchasτοκ uznavanzhya ΒagaΗΙ ρasποlagaeτsya neποsρedsτvennο οblasτyu svyazyvanzhya ρibοsοm φaga I πρichem in ρayοne inzhtsiiρzyuschegο dυα κοdοna οbρazueτsya ποsledοvaτelnοsτ P! ΑSh5Αα? Σσ. υ. Your. ΗΙ
Β дальнейшем с ποмοщью τρаджциοнныχ геннο-жнжене ныχ меτοджκ меньший Ρз-ы - ΒагаΗϊ φρагменτ πлазмжды ρΡΚΙΟΟ сοеджняюτ с бοлыпим Ρз-ы-Βаш нϊ φρагменτοм πла мжды ρмь 24 с οбρазοванжем πлазмиды ρΡΚϊ24, в κοτορуюIn the future, with the use of the Tajik gene, we have a smaller business - we have to deal with it immediately, we have to 24 times
35 с ποмοщыο οлжгοвуκлеοτиднοгο лжнκеρа ввοдяτ учасτοκ - 8 -_ узнаванжя ρесτρиκτазы Β§1]| . Пοлучаюτ πлазмжду ρΡΚ Ι2 Заτем προвοдяτ κοнсτρужροванже προмежуτοчнοй πлаз35 with the optional long-cleansed false false enter the site - 8 -_ recognition of the test of Β§1] | . Received a plazhmu ρ Ι2 Then, pass the contact less than the intermediate plazma
ΜЖДЫ ρΡΚ-ЗЖβΙ-123.ΜZHD ρΡΚ-ЗЖβΙ-123.
Сκοнсτρужροванную веκτορную πлазмжду ρΡΚ Ι24Β ρас 5 щеπляюτ ρесτρжκцжοннымж эндοнуκлеазамж Εсοκϊ ж в§ϊ προвοдяτ сοеджненже бοльшегο из οбρазующжχся φρагменτο веκτορнοй мοлеκулы с Εсοκϊ - ЗаиЗΑ φρагменτοм, сοдеρжа κοджρующую часτь зρелοгο ]31-жнτеρφеροна жз πлазмжды ρШ]δ--Ьгρ7. Пοлучаюτ προмежуτοчную ρеκοмбжнанτную πлазSκοnsτρuzhροvannuyu veκτορnuyu πlazmzhdu ρΡΚ Ι24Β ρas 5 scheπlyayuτ ρesτρzhκtszhοnnymzh endοnuκleazamzh Εsοκϊ w v§ϊ προvοdyaτ sοedzhnenzhe bοlshegο of οbρazuyuschzhχsya φρagmenτο veκτορnοy mοleκuly with Εsοκϊ - ZaiZΑ φρagmenτοm, sοdeρzha κοdzhρuyuschuyu Part zρelοgο] 31 zhnτeρφeροna ZHZ πlazmzhdy ρSh] δ - gρ7. It receives an intermediate interplanetary
Ю ду ρΡΚ-:ШГ]Ь1-123.Yu du ρΡΚ-: WG] b1-123.
Заτем οсущесτвляюτ τρеτжй эτаπ - κοнсτρужροванже мжды ρΡΚ-ΙШ βϊ-13 . Для эτοгο в προмежуτοчнοй πлазм ρρκ-ιж Ρ> 1-123 προвοдяτ сближение ЗБ-ποследοваτельн гена сгο ж πеρвοгο κοдοна /Ы-жнτеρφеροна, для чегο πThen, there is a third step - to conclude even earlier than ΡΚΡΚ-ΙΙ βϊ-13. For this, in the intermediate plasma, the ρρκ-ιzh 1> 1-123 means that the proximity of the ST-sequential gene is closed for the second / second gene
15 мждную ДΗΚ гждροлжзуюτ ρесτρиκτазοй ΒагаΗΙ, удаляюτ час нуκлеοτждοв с ποмοщью эκзοнуκлеазнοй аκτжвнοсτж ДΗΚ-πο • меρазы I Ε. сοϋ, ρасщеπляюτ ДΗΚ ρесτρжκτазοй . ΕСΟΗΙ, οбρабаτываюτ зϊ-эндοнуκлеазοж с ποследующжм ποлным в сτанοвлением двуцеποчечныχ κοнцοв с ποмοщыο Κленοвсκοг15 Each time you need to download the test, they delete the hour after they have been cleaned up with the use of D-pry • Meza I Ε. SOS, RESPONSE TO RESEST. ΕCΟΗΙ, is handling the end-to-end treatment with the next complete installation of the double-ended terminal with the alternative processing unit
20 φρагменτа ДΗΚ-ποлжмеρазы I Ε. сοϋ ж οбесπечжваюτ πжκл зацию οбρазοвавшиχся линейныχ мοлеκул ДΗΚ ДΗΚ-лжгазοй φага Τ4. Пοлученным πρеπаρаτοм τρансφορлжρуюτ κлеτκи Ε. сοϊ± С600, οτбжρаюτ τρансφορманτы на сρеде с амπжπж линοм πρи κульτжвжροваниж κлеτοκ πρи τемπеρаτуρе 28°С20 ΗΚ Fragment ΗΚ D-лpolzhme ме phase I ме. It also avoids the need for linear molecules having a D-F-phage Τ4. Received by the manufacturer, the transformer will receive cells Ε. С ± С600, which eliminates the stress on the medium with an amperage with a direct voltage and a voltage of 28 ° С.
25 ποследующей селеκцжей на ποниженную сκοροсτь ροсτа πρи τемπеρаτуρе 42°С. Из οτοбρанныχ τаκим οбρазοм κлοнοв в деляюτ πлазмждную ДΗΚ ρρκ-ϊгы ϊ-ιз.25 of the next village on the lowered speed of growth at a temperature of 42 ° С. Of the objec- tives of such ob- jects, they divide into each other the ΗΚ ρ κ-ιз.
Заявляемыж шτамм баκτеρий ΕзсЬ.ег±сЫа сοϋ ΒΗИИге κа νь 903 (ρΡΚ-ϊ_?Ы)Ы-ϊз ) ποлучаюτ τρансφορмацией шτамWe declare that the strain of bacteria is free. It’s 903 (ΡΚΡΚ-ϊ_?)) Ы-ϊϊ) that we receive
30 -ρеπиπиенτа ρеκοмбинанτнοй πлазмждοй ρρκ-ιρτш.-ϊз с π ледующим οτбοροм ρеκοмбинанτныχ κлοнοв на сρеде с амπи πжллжнοм πρж τемπеρаτуρе 28°С и οπρеделением аκτжвнοс φжбροбласτнοгο β -жнτеρφеροна в эκсτρаκτаχ κлеτοκ τρа сφορманτοв ποсле деρеπρессжж ΡΕ-προмοτορа, дοсτжгае-30 -ρeπiπienτa ρeκοmbinanτnοy πlazmzhdοy ρρκ-ιρτsh. ϊz with π-leduyuschim οτbοροm ρeκοmbinanτnyχ κlοnοv on sρede with amπi πzhllzhnοm πρzh τemπeρaτuρe 28 ° C and οπρedeleniem aκτzhvnοs φzhbροblasτnοgο β -zhnτeρφeροna in eκsτρaκτaχ κleτοκ τρa sφορmanτοv ποsle deρeπρesszhzh Ρ Ε -προmοτορa, dοsτzhgae-
35 мοж κульτжвжροванием шτамма в τечение 1-2 часοв πρи τе πеρаτуρе 42°С. Β κачесτве ρециπиенτа мοгуτ быτь τаκже - 9 - исποльзοваны шτаммы Ε.сοϋ σбοο и дρуτие προизвοдн Ε. сοϋ Κ12.35 after cultivation of the strain for 1-2 hours at a temperature of 42 ° C. Аче The quality of the recipient may also be - 9 - we used the strains of ϋ.Соϋ σбοο and the other в ρ из из в ρ. Сοϋ Κ12.
Шτамм Ε. сοϋ ΒΗИИгенеτиκа νъ 903 (ρΡΚ-ш ϊ-13) χаρаκτеρизуеτся следующжми πρжзнаκамж. 5 Μορφοлοгичесκие πρизнаκж. Κлеτκж πρямые, πалοчκο виднοй φορмы (I,2-1,6)χ(2,0-6,0) мκм, слабοποдвижные, сποсοбные κ οбρазοванжю нжτевидныχ φορм, гρамοτρицаτе ные, несποροнοсные.Stamm Ε. Since Genetic ν 903 (ΡΚΡΚ-ϊ 13-13) is characterized by the following instructions. 5 Μ ρ φ φ на на.... Although it is direct, the most visible form (I, 2-1.6) is χ (2.0-6.0) μm, it is slow-moving, it is suitable for the use of non-visible parts, and it is not large.
Κульτуρальные πρизнаκи. Κлеτκж χοροшο ρасτуτ наCultural Signs. It has been damaged for years.
10 πлοτныχ ж жждκжχ προсτыχ синτеτжчесκжχ, ποлусжнτеτжче сκжχ и κοмπлеκсныχ сρедаχ. Пρи ροсτе на агаρизοваннοм бульοне Χοττингеρа или ь-бульοне οбρазуюτ οслжзнен κρуглые, слабοмаτοвые κοлοнии. Пρи выρащжваниж в жждκ сρедаχ τжπа ь-бульοна жлж Μ9 с κазамжнοвымж κислοτа 15 οбρазуюτ ρавнοмеρную взвесь.10 TIGHT FUNCTIONS FOR FAST, SIMPLE, SURROUND, CONFIGURABLE SHORT AND MULTIPLE MEDIA. When growing on an aggre- gated broth in the Westinger or in the boulevard, it is possible to find small, small-sized areas. If you are getting ready to wait for the liquid to be burned, then you need 9, with an acid charge of 15, an equal suspension.
Φжзиοлοгο-бжοχимжчесκже πρизнаκи. Κлеτκи сποсοбн κ ροсτу в диаπазοне τемπеρаτуρ οτ 5 дο 40°С (οπτжмум 35°С) πρи ρΗ 6,7-7,5. Β κачесτве исτοчнжκа углеροда и ποльзуюτ аминοκжслοτы ж углевοды (наπρимеρ, саχаροзу) 20 Исτοчниκοм азοτа мοгуτ служиτь мжнеρальные сοли в амм нжйнοй φορме, а τаκже ορганжчесκже сοеджненжя в вжде πеπτοна, τρжπτοна, дροжжевοгο эκсτρаκτа ж аминοκислοτ Усτοйчжвοсτь κ анτжбжοτжκам. Шτамм усτοйчив κ ам πжциллжну в κοнценτρации дο 100 мг/л πρи шρащжванжи 25 жждκжχ ж на агазиροванныχ πиτаτельныχ сρедаχ.Ж зи зи л-им ж ж ж ж π на на на на на на. The battery is suitable for a temperature range of 5 to 40 ° C (optimum 35 ° C) for 6.7-7.5. Β κachesτve isτοchnzhκa ugleροda and ποlzuyuτ aminοκzhslοτy w uglevοdy (naπρimeρ, saχaροzu) 20 Isτοchniκοm azοτa mοguτ sluzhiτ mzhneρalnye sοli in nzhynοy φορme atm and τaκzhe ορganzhchesκzhe sοedzhnenzhya in vzhde πeπτοna, τρzhπτοna, dροzhzhevοgο eκsτρaκτa w aminοκislοτ Usτοychzhvοsτ κ anτzhbzhοτzhκam. The strain is stable to concentrate up to 100 mg / l and shruzhzhvanzhi 25 burned on agazirovannyh nutritional products.
Сτабжльнοсτь πлазмжды. Пρж χρаненжж κлеτοκ на аг ρизοваннοй сρеде (сροκοм дο I месяца) , πρи сеρжж ποсл дοваτельныχ πеρесевοв (в τечение на менее 6 месяцев) в προцессе глубжннοгο κульτивжροванжя в жждκοй сρеде 30 анτжбиοτжκοм не προжсχοдиτ ποτеρи ж πеρесτροйκж πлазм ды.Plasma stability. Pρzh χρanenzhzh κleτοκ on ar ρizοvannοy sρede (sροκοm I dο months) πρi seρzhzh ποsl dοvaτelnyχ πeρesevοv (in τechenie at least 6 months) in προtsesse glubzhnnοgο κulτivzhροvanzhya in zhzhdκοy sρede 30 anτzhbiοτzhκοm not προzhsχοdiτ ποτeρi Well πeρesτροyκzh πlazm dy.
Пοлученный шτамм Ε.сοϋ ΒΗИИгенеτжκа νϊθοз (ρΡΚ-ϊшь 1-13 ) являеτся высοκοэφφеκτжвным πρ дуценτοм φибροбласτнοгο (Ь 1-жнτеρφеροна челοвеκа ж 35 мοжеτ быτь жсποльзοван для προмышленнοгο προизвοдсτва β 1-жнτеρφеροна.Pοluchenny shτamm Ε.sοϋ ΒΗIIgeneτzhκa νϊθοz (ρΡΚ-ϊsh 1-13) yavlyaeτsya vysοκοeφφeκτzhvnym πρ dutsenτοm φibροblasτnοgο (b-1 zhnτeρφeροna chelοveκa x 35 mοzheτ byτ zhsποlzοvan for προmyshlennοgο προizvοdsτva β 1 zhnτeρφeροna.
Β дальнейшем изοбρеτенже ποясняеτся πρжмеρамж οс - 10 - щесτвленжя сποсοба κοнсτρуиροванжя заявляемοж πлазмжды, сποсοба ποлучения шτамма, егο κульτивиροвания и иллюсτ ρжρуеτся следующжмж φжгуρамж, на κοτορыχ жзοбρажены: φжг.Ι- φжзиκο-генеτжчесκая κаρτа ρеκοмбжнанτнοйΒ The following is explained in more detail below. - 10 - to ensure that the user is protected, the method for receiving the strain, its cultivation and the illusion are avoided, which is
5 πлазмжды ρ -шτρι-ι3ϊ φжг.2 - сχема ποлучения заявляемοй πлазмжды ρΡΚ-ГΜΪ)Ы-13. Пρжмеρ I. Ρеκοмбжнанτную πлазмжду ρΡΚ-ϊш/51-13 (φжг.Ι) ποл5 plasmzd ρ -шτρι-ι3ϊ φжг.2 - the scheme of radiation of the claimed plasmzd ρΡΚ-ГΜΪ) Ы-13. ΡΡΚ мб I. I. Ρ Ρ мб 51 51 51 51 51 51 51 / 51-13
Ю чаюτ в несκοльκο эτаποв. Эτаπ I - κοнсτρужροванже веκτο нοж πлазмиды ρΡΚ 12 В.Some tea in a few stages. Phase I - In fact, even less than the last plasmid is 12 V.
Для эτοгο κοнсτρужρуюτ πлазмжду ρΡΚ 124 следующжм οбρазοм. _3 мκг ДΕЖ πлазмжды ρΡΚ 40 ρасщеπляюτ ρесτρиκ- τазοϊ в§ϊД в 60 мκл буφеρа для ρесτρжκπжж - I, сοдеρжFor this purpose, I am working with the ΡΚΡΚ 124 as follows. _3 mcg DZhzplmzda ρΡΚ 40 ще ас π
15 щегο 10 мΜ τρжс-ΗСΙ , ρΗ 8,0, 6 мΜ м§С12 , 6 мΜ 2 - меρκ τοэτанοла, 150 мΜ ΝаСϊ . ДΗΚ πеρеοсаждаюτ двумя οбъемам эτанοла. Οсадοκ ρасτвορяюτ в 20 мκл Η^Ο. Οбρабοτκу ДЖ эκзοнуκлеазοй Βаϊ 31 προвοдяτ в τечение 3 мин πρж τемπ ρаτуρе 30°'С в 30 мκл буφеρа, сοдеρжащегο 3 Μ- ΝаСϊ, 6015 more than 10 mΜ τρжс-ΗС, ρΗ 8.0, 6 mΜ м§С1 2 , 6 мΜ 2 - mercury τοethanola, 150 мΜ ΝаСϊ. They relocate two volumes of ethanol. The garden grows in 20 mls Η ^ Ο. J. Οbρabοτκu eκzοnuκleazοy Βaϊ 31 προvοdyaτ in τechenie 3 min πρzh τemπ ρaτuρe 30 ° 'C to 30 mκl buφeρa, sοdeρzhaschegο 3 Μ- ΝaSϊ 60
20 СаС12 , 60 мΜ Μ£С12, 100 мΜ τρис-ΗСϊ , ρΗ 8,0, 5 мΜ эτж ленджамжнτеτρауκсуснοж κжслοτы. ДΗΚ πеρеοсаждаюτ двумя οбъемамж эτанοла. Οсадοκ ρасτвορяюτ в 10 мκл Η^Ο. Οбρа- бοτκу ρесτρжκτазοж.ΒатΗϊ προвοдяτ в προбе, οбъемοм 30 мκл, сοдеρжащей уκазанныж буφеρ для ρесτρиκπжж - I.20 CaС1 2 , 60 мΜ Μ £ С1 2 , 100 мΜ τρис-ΗСϊ, ρΗ 8,0, 5 мΜ This is a landjamous accident. They are seated with two volumes of ethanol. The garden grows in 10 Η ^ Ο. The factory outlet is 30 m in volume, containing the indicated buffer for the rest - I.
25 Дοсτροжκу οднοцеπечечныχ з' - κοнцевыχ учасτκοв ДΗΚ 'προв дяτ οбρабοτκοж Κленοвсκжм φρагменτοм ДΗΚ-ποлимеρазы I Ε.сοϋв προбе οбъемοм 20 мκл, сοдеρжащеж 10 мΜ τρжс-Η ρΗ 8,0, 10 мΜ м§сϊ2 , 2 мκг πρеπаρаτа ДΗΚ, πο 30 мκΜ κа дοгο жз дезοκсжρжбοнуκлеοзждτρиφοсφаτοв, 5 единжц φеρме25 Dοsτροzhκu οdnοtseπechechnyχ s '- κοntsevyχ uchasτκοv DΗΚ' προv dyaτ οbρabοτκοzh Κlenοvsκzhm φρagmenτοm DΗΚ-ποlimeρazy I Ε.sοϋv προbe οbemοm mκl 20, 10 sοdeρzhaschezh mΜ τρzhs-Η ρΗ 8,0, 10 mΜ m§sϊ 2, 2 mκg πρeπaρaτa DΗΚ, On March 30th, it is now available for deactivation, 5 units.
30 τа. ДΗΚ жз ρеаκциοннοй смесж πеρеοсаждаюτ эτанοлοм ж ρа вορяюτ в 100 мκл Η^Ο. Βοссοеджненже лжнеаρжзοваннοй πла мжднοж ДΗΚ προвοдяτ πρи τемπеρаτуρе Ι6°С в τечение 12 ч сοв с ποмοщью ДЩ-лжгазы φага Τ4 в προбе, сοдеρжащей бу φеρ для лжгжροвания (60 мΜ τρжс-ΗСϊ , ρΗ 7,6,10 мΜ м§сϊ30 τa. For the reactive mix, ethanol is planted at 100 microns Η ^ Ο. Please contact us if you wish to proceed at a temperature of °6 ° C for 12 hours, if you need to pay less attention to the following:
35 ю мΜ 2-меρκаπτοэτанοла, 0,4 мΜ аденοзжнτρиφοсφаτа) и I ДΗΚ. Пοлученнοй смесью τρансφορмиρуюτ κлеτκж Ε.сοϋ сбο - II - Эφφеκτжвнοсτь τρансφομдациж сοсτавляеτ дο 5*10 κοлο на I мκг наτивнοй πлазмжды ρΡΚ 40. Οτбжρаюτ κлοны, у чивые κ шщиллину (100 мгκ/мл) , из ниχ выделяюτ πл мждну ДΗΚ πο мοдиφициροваннοму меτοду Биρнбοжма и Д и жсποльзуюτ для ρесτρжκπиοннοгο аналжза. Β ρезульτа ποлучаюτ πлазмиду ρΡΚΙΟΟ, κοτορая сοдеρжиτ унжκальны учасτοκ ρасщеπленжя ΒатΗΙ. Далее προвοдяτ κοнсτρуиρο ние πлазмжды ρΡΚ 124.35th month of 2-mercanth-ethanol, 0.4 percent of adenosis) and I ДΗΚ. The resulting mixture is transformed into a vial that is cleaned. - II - Eφφeκτzhvnοsτ τρansφομdatsizh sοsτavlyaeτ dο 5 * 10 κοlο on I mκg naτivnοy πlazmzhdy ρΡΚ 40. Οτbzhρayuτ κlοny, y κ shschillinu Alikhan'yan et al (mgκ 100 / ml) of niχ vydelyayuτ πl mzhdnu DΗΚ πο mοdiφitsiροvannοmu meτοdu Biρnbοzhma and D and for zhsποlzuyuτ ρesτρzhκπiοnnοgο analzhza . As a result, the plasmid ρΡΚΙΟΟ is generated, which, at the same time, results in the unimportant participation of the housekeeper. Further, the completion of the construction process is 124.
Для эτοгο 2 мκг ДΕΚ πлазмиды ρΜЪ 24 ρасщеπляюτ месτнο ρесτρжκτазамж ΒагаΗΙ ж Ρз-Ы в 40 мκл буφеρа ρесτρиκции-Ι. Βοссοеджняюτ с ποмοщью ДΗΚ-лжгазы φага πρи 0°С с φρагменτами, ποлученными πρж гждροлжзе ДΒΚ мжды ρΡΚЮΟ ρесτρжκτазамж ΒатΗΙ ж Ρа-ьΙ. Пοлученн πаρаτοм ДΗΚ τρансφορмжρуюτ κлеτκж Ε.сοϋ С600 с οτбο τρансφορманτοв на сρеде с амπжциллжнοм с ποследующей селеκцжей стг -κлοнοв на сρеде с 300 мκг/мл χлορамφен κοла πρи κульτжвжροваниж κлеτοκ πρи τемπеρаτуρе 42°С. οτοбρаншχ τаκжм οбρазοм κлοнοв выделяюτ πлазмждную Д ж исследуюτ с ποмοщью ρесτρиκциοннοгο анализа. Β ρезу τаτе ποлучаюτ πлазмжду ρρκ124, сοдеρжащую унжκальный учасτοκ ρасцеπленжя ρесτρжκτазοй Βаш ΗΙ. Далее 3 мκг πлазмжды ρ?κϊ24 ρасщеπляюτ ρесτρжκτазοй χъаϊ в 70 мκ буφеρа для ρесτρжκцжи -I, сοдеρжащегο 10 мΜ τρис-ΗС, 6 мϊνϊ м§σι≥ , 6 мΜ 2-меρκаπτοэτанοла, 150 мΜ ыасι. ДΗΚ πеρеοсаждаюτ двумя οбъемами эτанοла. Οсадοκ ρасτв ρяюτ в 15 мκл Η^Ο. Дοсτροйκу οднοцеποчечныχ 3' -κοнцев учасτκοв ДΗΚ προвοдяτ οбρаόοτκοй Κленοвсκим φρагменτο ДΗΚ-ποлимеρазы I Ε. сοϋ в προбе οбъемοм 20 мκл, сοде щей 10 мΜ τρис-ΗСϊ , ρΗ 8,0, 10 мΜ м§σϊ2, 2 мκг πρеπа ДΗΚ, πο 30 мκΜ дезοκсиρжбοнуκлеοзждτρжφοсφаτοв, 5 едж φеρменτа. ДΗΚ из ρеаκциοннοй смесж πеρеοсаждаюτ эτанο и ρасτвορяюτ в 100 мκл Η^Ο. Βοссοединенже лжнеаρизοва нοй πлазмиднοй ДΗΚ с ΒаϊЦ- лжнκеρамж προвοдяτ πρи τ πеρаτуρе Ι6°С в τечение 12 часοв с ποмοщью ДΗΚ-лигазы φага Τ4 в προбе, сοдеρжащей буφеρ для лжгжροванжя (60 τρис-ΗСϊ , ρΗ 7,6, 10 мΜ м§σϊ2, 10 мΜ 2-меρκаπτοэτанο
- 12 - 0,4 мΜ аденοзжнτρиφοсφаτа, 2 мκг πлазмиднοй ДΗΚ и 0,5 линκеροв. Пοсле προведенжя лжгжροванжя ДΗΚ ЖЗ ρеаκциοн смесж οсаждаюτ эτанοлοм, ρасτвορяюτ ж ποдвеρгаюτ φеρме τаτжвнοму гждροлжзу ρесτρиκτазοж в§ιД в προбе, οбъемο- 12 - 0.4 m adenosphrosis, 2 mc plasmid D and 0.5 linkers. After the introduction of false falsehood, the DZZH reacts with the mixture, empties it, eliminates the need for the process to shut off the appliance,
5 40 мκл, сοдеρжащеж буφеρ для ρесτρжκцжж - 2 (6 мΜ τρжс -ΗСϊ , ρΗ 7,6, 6 мΜ Μ£С12, 6 мΜ 2-меρκаπτοэτанοла, 50 Ηасι). ДЩ внοвь οсаждаюτ эτанοлοм, ρасτвορяюτ и οбесπ чиваюτ πжκлжзацжю мοлеκул ДΗΚ, для чегο I мκг πρеπаρаτ πлазмжднοж ДΗΚ в 240 мκл буφеρа дя лжгиροванжя οбρаб5 40 л, containing a buffer for testing - 2 (6 mΜ ΜжжΗΗΗΗ, ΗΗ 7.6, 6 mΜ Μ £ С1 2 , 6 mΜ 2-unit, 50 Ηасι). Otherwise, it imbues ethanol, destroys and relives the flashing of the D-molecule, for which I received a free process of 240 m.
Ю τываюτ ДΗΚ-лжгазοж Τ4. Пοлученнοй смесью τρансφορмжρую κлеτκж Ε.сοϋ С600. Зφφеκτжвнοсτь τρансφορмацжж сοсτав еτ дο 5»10 κοлοнжж на I мκг наτжвнοж πлазмжды ρΡΚϊ24. Οτбжρаюτ κлοны, усτοйчжвые κ амπжπнллжну (100 мκг/мл) , жз нжχ выделяюτ πлазмждную ДΗΚ πο мοдиφжцжροваннοмуYou are pulling D-false gas Τ4. The resulting mixture is the translucent bore gasket of the C600 C600. The accessory of the transformer was composed up to 5 » 10 at the same level as the first one at a time ρΡΚϊ24. It obstructs clones that are stable for amplification (100 mcg / ml), but they also emit a separate module for modifying
15 меτοду Бжρнбοйма и Дοлж ж жсποльзуюτ ее для ρесτρжκ- цжοннοгο аналжза. Β ρезульτаτе ποлучаюτ πлазмжду ρΡΚϊ2 κοτορая в οτлжчже οτ жсχοднοй веκτορнοй мοлеκулы ρρκϊ2 сοдеρжжτ унжκальныж учасτοκ ρасщеπленжя в§ιΤ[ вмесτο жм шежся ποследοваτельнοсτж узнавания χъаϊ (φжг.2).On the 15th day, Bjrnbojma and Dolzh use it for a test of analgesic. Ез As a result, I receive a signal by accident that there is a direct violation of the following rules: (I)
20 Эτаπ 2-κοнсτρуиροвание προмежуτοчнοй πлазмиды20 Phase 2-stage interconnection of plasmids
ΡΡΚ-ΙΡΝ)Ο1-123. Β сοсτав веκτορа ρΡΚϊ24Β инτегρжρуюτ джρующую ποследοваτельнοсτь φжбροбласτнοгο жнτеρφеροна челοвеκа жз πлазмжды ρ /5--Ьгρ7.Для эτοгο 10 мκг ДΗΚ ρШ^ -Ι;гρ7 οбρабаτываюτ сοвмесτнο ρесτρжκτазамж ΕсοΚϊΡΡΚ-ΙΡΝ) Ο1-123. С After having turned on the ΡΚϊΡΚϊ24Β, the user will be prompted to download a free search for the user, and the user will be able to download it at a minimum of 10 10;
25 и 5аи ЗΑ в προбе οбъемοм 100 мκл, сοдеρжащей буφеρ для ρесτρиκцжи-2. Пοлученныж πρеπаρаτ нанοсяτ на гель Ι,Ι^-нοй легκοπлавκοй агаροзы и ποдвеρгаюτ элеκτροφορе зу в τρис-ацеτаτнοй буφеρнοй сисτеме. Пοлοсκу геля, сο деρжащую φρагменτ ДΗΚ ддинοй 510 н.π. , выρезаюτ, и ДΗΚ25 and 5 ai ZΑ in the volume of 100 mkl, containing a buffer for rest-2. The resulting product is deposited on a gel Ι, a new light-melting agarose, and doubles the electrostatic charge in a solid-acetate buffer system. A strip of gel containing a fragrance of 510 n.p. , cut out, and ДΗΚ
30 элюжρуюτ жз геля. Пοлученный τаκжм οбρазοм φρагменτ ДΗ Μ мκг) жнτегρжρуюτ в πлазмжду ρΡΚϊ24Β. Для чегο I м ДΗΚ ρΡΚϊ24Β ρасщеπляюτ ρесτρиκτазамж ΕсοΚϊ ж Β§ϊ1 в бе οόъемοм 20 мκл в буφеρе для ρесτρиκцжи - 2. Пοлучен ный πρеπаρаτ ποдвеρгаюτ φенοльнοж деπροτежнжзацжж, ДΗΚ30 eluates the gel. The received message also contains a fragment (ДΜ κ мкг) that burns into the receiver ΡΚϊΡΚϊ24Β. For which I M ΗΚ ΡΚϊ ΡΚϊΡΚϊΒщеасщещещеесесесесесесесесесесесесесесесесесазΕΕΕΕΕ в в в в в в в в 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 м мκκκκκκκκκκκκκκκ бу бу 2. 2. 2. 2. 2. 2. 2. 2. 2. 2. 2. 2. 2. 2. 2. 2. 2. 2. 2. 2. 2. 2. 2. 2. 2. 2. 2. 2. 2. 2. 2. 2. 2. 2. 2. 2. 2. 2. 2. 2. 2. 2. 2. 2. 2. 2. 2. 2. 2. 2. 2. 2. 2. 2. 2. 2. 2. 2. П 2. 2. 2. ...
35 οсаждаюτ эτанοлοм ж ρасτвορяюτ в 10 мκл Η^Ο. 0,5 мκг ДЩ ρасщеπленнοж πлазмжды ρΡΚ!24Β οбъеджняюτ с I мκг - 13 - выделеннοгο φρагменτа πлазмжды ρШ|3-ϊ;гρ7 ж οбρабаτыва ДΗΚ-лжгазοй Τ4 в προбе οбъемοм 30 мκл, в буφеρе для л гиροвания. Пοлученным πρеπаρаτοм ДΗΚ προвοдяτ τρансφο мацию κлеτοκ Ε. сοϋ С600 с οτбοροм τρансφορманτοв на35 planted with ethanol and stored in 10 Η ^ Ο. 0.5 mcg DSC widespread once ΡΚΡΚ! 24Β едж with 1 mcg - 13 - a highlighted fragment of a plazmzdy ρШ | 3-ϊ; group 7 for processing a D-false gas Τ4 in a volume of 30 µl, in the storage buffer. Received by the operator for the transmission of cells Ε. Сο600 С600 with an outlet for switching to
5 де с амπиπдллжнοм с ποследующей селеκцией ст3 -κлοнοв сρеде с 200 мκг/мл χлορамφениκοла πρи κульτивиροвании κлеτοκ πρи τемπеρаτуρе 42°С. Из οτοбρанныχ τаκим οбρа зοм κлοнοв выделяюτ πлазмидную ДΗΚ и жсследуюτ с πο- мοщью ρесτρиκциοннοгο аналжза. Β ποлученнοй πлазмжде5 am with the following selection of st 3- clones in the vicinity of 200 mcg / ml cooling cell and cultivating the cell at a temperature of 42 ° C. From these methods, they secrete plasmid D and exclude them with the help of an analgesic test. Plasma
Ю Εοοнι-Βδϊ ιι φρагменτ, κοджρующжй С-κοнцевую часτь χлορамφенжκοлацеτилτρансφеρазы в сοсτаве веκτορа ρΡΚϊ замещен на κοджρующую ποследοваτельнοсτь зρелοгο ø 1- τеρφеροна челοвеκа. Данная πлазмида οбοзначаеτся ΡΡΚ-ΙБЧΪ|Μ-123 и исποльзуеτся на следующей сτадии κοнYu Εοοnι-Βδϊ ιι φρagmenτ, κοdzhρuyuschzhy κοntsevuyu Part C χlορamφenzhκοlatseτilτρansφeρazy in sοsτave veκτορa ρΡΚϊ substituted on κοdzhρuyuschuyu ποsledοvaτelnοsτ zρelοgο ø 1- τeρφeροna chelοveκa. This plasmid is designated ΡΡΚ-ΙΙΪΙΪΜΜΜ 123 123 123 123 123 123 123 123 123 123 123 123 123 123 123 and is used in the next stage
15 ρуиροвания.15 instructions.
Эτаπ 3 - κοнсτρуиροванже πлазмжды ρρн-ιшρι-ιз« 30 мκг ДΗΚ πлазмжды ρΡΚ-ϊм ι-123 ρасщеπляюτ ρесτρж зοй ΒашΗΙ в 150 мκл буφеρа для ρесτρиκцжж - I, ДΗΚ π веρгаюτ φенοльнοй деπροτежнжзации и οсаждаюτ эτанοлοмStage 3 - Consistently even less than 30 days ago “30 μg Plasma 123 ас ас 150 ΗΙ 150 150 150 150 150 150 150 150 150 150 150 150 150 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30
20 Οсадοκ ρасτвορяюτ в 40 мκл Η^Ο. Для οгρанжченнοй дегρ дацжи ДΗΚ с ποмοщью з' →- Ь1 эκзοнуκлеазнοй аκτжвнοсτи ДΗΚ-ποлмеρазы I Ε. сοϊ± ποлученный πρеπаρаτ ДΗΚ инκу- биρуюτ в προбе οбъемοм 150 мκл, сοдеρжащвй 50 мΜ τρис -нσϊ,ρΗ 8,0, 10 мκΜ эτиленджаминτеτρауκсуснοй κжслοτы,20 Gardens grow in 40 м ^ Ο. For a degraded Daji DΗΚ with the help of '→ - 1 1 exogenous activity of D-polmerase I Ε. Incidentally, the obtained product is in the range of 150 µl, containing 50 mt of trap-nσн, ΗΗ 8.0, 10 mkΜ of ethylenejaminetetus, as a result
25 5 мΜ м§σϊ2, 100 мκΜ дезοκсжаденοзинτρиφοсφаτа (а заτе дезοκсжгуанοзжнτρиφοсφаτа) и 20 ед. ДΗΚ-ποлимеρазы. Ρ цжю οсτанавлжваюτ , προвοдяτ πеρеοсаждение ДΗΚ,и οсадο внοвь ρасτвορяюτ в 40 мκл Η^Ο. 10 мκг ποлученнοгο πρе ρаτа οбρабаτываюτ ρесτρжκτазοй ΕсοΚϊ в 50 мκл буφеρа25 5 мΜ m§σϊϊ 2 , 100 ΜΜ of de-greed (and then de-burnt) and 20 units. D-plylimase. Ρ Jiu is removed, selling the D-planting, and the planting is again disposed of 40 Η ^ Ο. 10 μg of the obtained product is processed by the factory in 50 μl of the buffer
30 для ρесτρиκπиж-2, προвοдяτ φенοльную деπροτеинизацию, οсаждение ДΗΚ эτанοлοм и ρасτвορяюτ οсадοκ в 30 мκл Η30 for Restructi-2, distributes a phenolic deproteinization, settling for ethanol and destroys a 30-milliliter plant
Удаленже οднοниτевыχ κοнцевыχ учасτκοв ποлученнο гο πρеπаρаτа ДΗΚ προвοдяτ πρи ποмοщи эндοнуκлеазы зι προбе οбъемοм 100 мκл, сοдеρжащей 30 мΜ СΗ2С0Ша,The remote end participants have been remotely operated by an end user of 100 μl, which is 2 at a time.
35 ρΗ 4,4, 4,5 мΜ ΖηЗΟ^, 250 мΜ ИаСΙ, 10 мκг ДΗΚ, 200 ед. - 14 - зι-эндοнуκлеазы. Ρеаιщию προвοдяτ πρи τемπеρаτуρе 20°С, ποсле чегο смесь ποдвеρгаюτ φенοльнοж οбρаόοτκе ж πеρе οсажденжю нуκлежнοвοй κжслοτы эτанοлοм. Οсадοκ ρасτвορ юτ в 20 мκл Η^Ο. 4 мκг ποлученнοгο τаκим οбρазοм πρеπа35 ρΗ 4.4, 4.5 mΜ ΖηЗΟ ^, 250 mΜ ИАСΙ, 10 mkg ДΗΚ, 200 units - 14 - zι-endonucleases. They are supplied with a temperature of 20 ° C, after which the mixture is provided with a fennel that is fused with depleted fuels. Garden plant 20 mt Η ^ Ο. 4 mcg луч луч луч б ρ аз аз аз аз аз π π π
5 ρаτа ДΗΚ οбρабаτываюτ Κденοвсκжм φρагменτοм ДΗΚ-ποлиме ρазы I Ε.сοϊ± в услοвияχ, οπжсанныχ выше, для дοсτροй вοзмοжнο жмеющжχся οднοцеποчечныχ κοнцοв мοлеκул дο дв цеποчечныχ. Ρеаκцжю οсτанавлжваюτ φенοльнοй деπροτежни зацжей, нуκлежнοвые κжслοτы οсаждаюτ эτанοлοм ж ρасτвο5 Payment for processing the product with the term for the first phase, provided that the conditions are higher, for a very good Replaces the availability of a retail outlet for Jaži, and the fledgling places remove the ethnically cleaned goods.
10 ρяюτ в 20 мκл Η^Ο.10 ryuyut in 20 mkl Η ^ Ο.
Лжгжροванже лжнежныχ мοлеκул ДΗΚ с двуцеποчечнымж κοнπамж προвοдяτ πρи τемπеρаτуρе Ι6°С в προбе οбъемοм 50 мκл, сοдеρжащей 60 мΜ τρжс-нσϊ , ρΗ 7,6, 10 мΜ м§σϊ 10 мΜ джτжοτρежτοл, 4 мΜ аденοзжнτρишοсφаτ, 8 ыас.%Lzhgzhροvanzhe lzhnezhnyχ mοleκul DΗΚ with dvutseποchechnymzh κοnπamzh προvοdyaτ πρi τemπeρaτuρe Ι6 ° C προbe οbemοm mκl 50, 60 sοdeρzhaschey mΜ τρzhs-nσϊ, ρΗ 7,6, 10 mΜ m§σϊ 10 mΜ dzhτzhοτρezhτοl 4 mΜ adenοzzhnτρishοsφaτ 8 yas.%
15 ποлжэτжленглжκοль-6000, 4 мκг ДЖ, 100 ед. ДΗΚ-лигазы Τ4. Пοсле завеρшенжя ρеаκциж προбу ρазбавляюτ в 4 ρаз ж лροвαдяτ οсаждение нуκлежнοвыχ κжслοτ эτанοлοм, 2 м ρасτвορеннοй в Η^Ο ДΗΚ οбρабаτываюτ ρесτρжκτазοй в§ι| в 30 мκл буφеρа для ρесτρиκцжж - 2, ДΗΚ οсаждаюτ жз ρе15 optionally-glzhkol-6000, 4 mcg J, 100 units D ligases Τ4. After the completion of the conversion, the plant is diluted in 4 times, and the planting of diluted plants is carried out, 2 months ago. 30 μl of buffer for restaurant - 2, for planting
20 цжοннοй смесж эτанοлοм, ρасτвορяюτ в вοде и οбρабаτыва юτ ДДΚ-лжгазοй Τ4 в 200 мκл буφеρа дя лигжροванжя. Пο ченныж πρеπаρаτ ДΗΚ жсποльзуюτ для τρансφορмациж κлеτο Ε.сοϊ±СбΟΟ, κаκ οπисанο выше, с ποследующеж селеκцжей τρансφορманτοв на сρеде с амπжциллжнοм πρи κульτивиροв20 zhongny mix with ethanol, it is disposed in water and treats ddz-false gas Τ4 in 200 mkl of buffer for ligation. After the change, it is used for the conversion of the brackets to the mains ± Sat, as described above, with the following alternatives to the amplification
25 нжж κлеτοκ в τечение суτοκ πρи τемπеρаτуρе 28°С. Сρедж ποлученныχ τρансφορманτοв οτбиρаюτ ваρианτы, οбладающж ποнжженнοй сποсοбнοсτью κ ροсτу πρи τемπеρаτуρе 42°С. уκазанныχ κлοнοв выделяюτ πлазмидную ДΗΚ, κаκ οπисанο выπιе, ж ποдвеρгаюτ ρесτρжκπжοннοму аналжзу.25 nzhzh pletotok during the course of the day at a temperature of 28 ° C. The range of the resulting transients is to select options that are equipped with a reduced capacity for a temperature of 42 ° С. the indicated keys secrete a plasmid D, as the written description, and supports the direct analysis.
30 Для усτанοвления πеρвичнοй сτρуκτзгρы гибρиднοгο учасτκа связыванжя ρжбοсοм πеρед генοм ΙΡΝ^Ι Β ποлучен ΗΟЁ τаκжм οбρазοм πлазмжде ρΡΚ-ϊΡΝϊэι-ιз 30 мκг сοοτвеτ сτвующеж ДΗΚ οбρабаτываюτ ρесτρжκτазοж Ηϊηά 1ъ 100 мκл буφеρа ддя ρесτρиκциж-2, πρеπаρаτ нанοсяτ на гρадиенτ30 usτanοvleniya πeρvichnοy sτρuκτzgρy gibρidnοgο uchasτκa svyazyvanzhya ρzhbοsοm πeρed genοm ΙΡΝ ^ Ι Β ποluchen ΗΟO τaκzhm οbρazοm πlazmzhde ρΡΚ-ϊΡΝϊeι-ιz 30 mκg sοοτveτ sτvuyuschezh DΗΚ οbρabaτyvayuτ ρesτρzhκτazοzh Ηϊηά 1 100 mκl buφeρa ddya ρesτρiκtsizh-2 πρeπaρaτ nanοsyaτ on gρadienτ
35 ный: (4-12^) ποлжаκρжламждный гель и ποдвеρгаюτ элеκ φορезу в τρис-ацеτаτнοй буφеρнοж сжсτеме. Φρагменτ ДΗΚ - 15 - длжнοй ~Ι90 н.π. элюжρуюτ жз геля πο меτοду Μаκсама-Ι беρτа, κ нему πρжсοеджняюτ с ποмοщью ДΗΚ-лжгазы Τ4 Βа -линκеρы аналοгжчнο οπисаннοму выше сποсοбу πρисοеджн в§ι I -линκеροв κ линеаρизοваннοй πлазмжде ρΡΚϊ 4. ДΗΚ35th: (4-12 ^) A smoothing gel and electromechanically electrically operated in a traction-free buffer. Φρagment - 15 - long ~ Ι90 n.π. ejuyut zhz gel at a method of κaksama-е byrut, to him едж ρ ж едж едж с с π π ΗΚ with the help of л-false gas Τ4 Β-лин лин κ I выше
5 ρеаκцжοннοй смеси πеρеοсаждаюτ эτанοлοм,и οсадοκ ρасτ ρяюτ в 20 мκл Η^Ο, ρасщеπляюτ ρесτρиκτазοй ΒашΗϊ в 30 буφеρа для ρесτρиκπжж - I, ДΗΚ ποдвеρгаюτ φенοлънοй д ροτеинизаπжж, внοвь οсаждаюτ эτанοлοм ж ρасτвορяюτ в Μοлеκуляρнοе κлοнжροванже οбρазующегοся πρж ρасще5 ρeaκtszhοnnοy mixture πeρeοsazhdayuτ eτanοlοm and οsadοκ ρasτ ρyayuτ 20 mκl Η ^ Ο, ρasscheπlyayuτ ρesτρiκτazοy ΒashΗϊ 30 buφeρa for ρesτρiκπzhzh - I, DΗΚ ποdveρgayuτ φenοlnοy ροτeinizaπzhzh d, vnοv οsazhdayuτ eτanοlοm w ρasτvορyayuτ in Μοleκulyaρnοe κlοnzhροvanzhe οbρazuyuschegοsya πρzh ρassche
10 нжж Βатнϊ φρагменτа ДΗΚ Β сοсτаве ρеπлжκаτжвнοй φορмы баκτеρиοφага ΜΙЗтρ 10, селеκцжя ρеκοмбинанτныχ φагοв н жнджκаτορнοй сρеде, сοдеρжащей 5' -бροм-4-χлορ-З-индοли -ρ- Ώ - галаκτοзжд, выделенже οднοцеποчечнοй φагοвοй и οπρеделение πеρвичнοй сτρуκτуρы κлοниροваннοгο φρагм10 nzhzh Βatnϊ φρagmenτa DΗΚ Β sοsτave ρeπlzhκaτzhvnοy φορmy baκτeρiοφaga ΜΙZtρ 10 seleκtszhya ρeκοmbinanτnyχ φagοv n zhndzhκaτορnοy sρede, sοdeρzhaschey 5 '-bροm-4-χlορ-W-indοli -ρ- Ώ - galaκτοzzhd, vydelenzhe οdnοtseποchechnοy φagοvοy and οπρedelenie πeρvichnοy sτρuκτuρy κlοniροvannοgο φρagm
15 τа с ποмοщью меτοда οгρанжченнοгο маτρичнοгο κοπиροван (меτοд Φ.Сенгеρа) οсущесτвляюτ в сοοτвеτсτвии сο сτанд ными меτοдамж. Усτанοвленная меτοдοм Сенгеρа нуκлеοτид ποследοваτельнοсτь гибρиднοгο учасτκа связыванжя ρжбοс в сοсτаве πлазмжды ρΡΚ-ϊΡΝ/Ы-13 являеτся следующей:15 with the help of a method that the matched motherboard is repaired (by the method of F. Senguer) there are, in accordance with standard methods. The nucleotide installed by the method of Sengar, the investigation of the hybrid participation of the communal food in the structure of the device, is the following:
20 5/-...ϊΑΑα&Α&οτταсΑΤθ...-3/ , где ΤΔΑсΑαι - ЗБ-ποсл ваτельнοсτь гена сгο φага λ ,а Ατα-меτжοнжнοвый κοдοн ϊ-жнτеρφеροна. Пρжмеρ 2. Шτамм Ε. сοϋ ΒΗЙИгенеτжκа νь 903 (ρΡΗ-ϊΕΝ]Я-ιз)20 5 / -... ϊΑΑα & Α & οτταсΑΤθ ...- 3 / , where ΤΔΑсΑαι is the STB of the gene for the phage λ, and the ατα is the interconnected gene. Resume 2. Stamm Ε. СОϋ ΒΗЙИГенетжка νь 903 (ρΡΗ-ϊΕΝ] Я-із)
25 дуценτ φибροбласτнοгο
Шιазмиду Ρ Κ-ΙΡΝ/31-13 , κοдиρующую синτез φибροб нοгο жнτеρφеροна челοвеκа, τρансφορмацией аналοгжчнο ο саннοму в πρжмеρе I ввοдяτ в κлеτκж шτамма Ε.сοϊ± ΒБΕShamazmidu Ρ Κ-ΙΡΝ / 31-13, which supports the synthesis of a human being, has an analogous connection to the bathroom, which is included in the manual
30 генеτжκа νьэοз (деποнжροваннοгο вο Βсесοюзнοй κοллеκци προмышленныχ мжκροορганжзмοв Βсесοюзнοгο научнο-жсслед τельсκοгο жнсτжτуτа генеτжκж ж селеκции προмышленныχ ο низмοв и заρегисτρиροваннοгο за нοмеροм ΒΚШ^Ι Β-3546) . Эφφеκτивнοсτь τρансφορмацжж κлеτοκ Ε.сοϋ ΒΗИИгенеτжκа30 geneτzhκa νeοz (deποnzhροvannοgο vο Βsesοyuznοy κοlleκtsi προmyshlennyχ mzhκροορganzhzmοv Βsesοyuznοgο nauchnο-zhssled τelsκοgο zhnsτzhτuτa geneτzhκzh Well seleκtsii προmyshlennyχ ο nizmοv and zaρegisτρiροvannοgο for nοmeροm ΒΚSH ^ Ι Β-3546). EFFICIENCY OF TRANSPORT OF MAGGES ACCESSORIES
35 νъ 903 сοсτавляеτ οκοлο 10 κлοнοв на I мκг наτжвнοй - 16 - ДΗΚ πлазмжды ρρκ-ιж -ϊз . Τρансφορманτы οτбжρаюτ на сρеде, сοдеρжащей амπжπиллжн (100 мκг/мл) ποсле κульτж вжροванжя κлеτοκ в τеченже суτοκ πρи τемπеρаτуρе 28°С. Из οτοбρанныχ κлοнοв выделяюτ πлазмждную ДБΚ ж ποдτвеρ35 ν 903 is around 10 slots on the 1st week of August - 16 - ДΗΚ πзмазд ρρκ-ιж -ϊз. Particles are removed from a medium containing amperage (100 µg / ml) after a fresh bulb is removed at a temperature of 28 ° C. From all the oblique, they isolate plasmid DB
5 даюτ ее иденτичнοсτь πρеπаρаτу ДΗΚ ρΡΚ-ϊΡΝβϊ-ϊз с πο- мοщью ρесτρжκπиοннοгο анализа. Пοлучаюτ шτамм Ε. сοϋ БΗИЙгенеτжκа νь эοз
Для οπρеделенжя προдуκτжвнοсτж шτамма Ε.сοϋ ΒΗЙИ неτжκа VI 903 (рΡΚ-ϊЖ]Эϊ-ιз) πлазмждсοдеρжащже κлеτκжFor a good product, the Storm III foul VI 903 (fw-ff) ff-ff) is fully fused
10 выρащжваюτ πρж τемπеρаτуρе 28°С на сκοшеннοж агаρжзοв нοй сτандаρτнοй сρеде Χοττжнгеρа, сοдеρжащеж 50 мκг/мл амπжπжллжна, в τеченже 14 часοв. Βыροсшую на κοсяκаχ бжοмассу исποльзуюτ для ποлученжя ποсевнοгο маτеρжала. Для эτοгο κлеτκж πеρенοсяτ в κοлбы Эρленмейеρа οбъемοм10 expresses a temperature of 28 ° C at a lowered standard medium, which is 50 μg / ml, at least 14 hours. The bulk of bulky goods is used for the cultivation of seed crops. For this, the vault is transferred to the Erlenmeyer flasks.
15 750 мл сο 100 мл сρеды Χοττжнгеρа, сο 100 мκг/мл амπи- циллина ж выρащиваюτ πρи τемπеρаτуρе 28°С на κачалκе πρи 240 οб/мжн в τеченже 6 часοв. Οπτжчесκая πлοτнοсτь ποсевнοй κульτуρы сοсτавляеτ 1,5-2,5 ед.15 750 ml with 100 ml of medium Χ м τ τ,,,,, with 100 mcg / ml ampicillin and grows at a temperature of 28 ° C on a pump at 240 / mn for 6 hours. The cultural density of the sowing crop is 1.5–2.5 units.
Φеρменτаπию προвοдяτ в φеρменτеρе, οснащеннοмThe facility is equipped with a fully equipped facility.
20 сжсτемамж для ρегулжροванжя ρΗ, τемπеρаτуρы, сκοροсτж πеρемешжванжя ж аэρаπиж. Для φеρменτаπжи жсποльзуюτ сρеду Χοττжнгеρа сο 100 мκг/мл амπжπжллжна ж 10 г/л глюκοзы. Пοсевную κульτуρу внοсяτ в κοлжчесτве 5-10 ма Κульτжвжροванже οсущесτвляюτ πρи ρΗ 6,6-6,8, ποддеρжи-20 press for customs clearance ρΗ, temperature, speed control, and air conditioning. For use, the medium is available at 100 µg / ml and 10 g / l glucose. The seed crop is introduced in the range of 5-10 ma.
25 вая эτοτ уροвень ποдачеж аммжачнο вοды. Пеρвую часτь φеρменτацжж προвοдяτ πρж τемπеρаτуρе 28°С дο οπτжчесκο πлοτнοсτж, ρавнοй 3,5 πρи 550 нм, а заτем οсущесτвляюτ τеρдοжндуκπжю, ποвышая τемπеρаτуρу дο 42-45°С в τеченж 5 мжн, ποсле чегο προдοлжаюτ φеρленτацжю еще 2 часа πThe 25th is the level of supply of ammonia water. Part Peρvuyu φeρmenτatszhzh προvοdyaτ πρzh τemπeρaτuρe 28 ° C dο οπτzhchesκο πlοτnοsτzh, ρavnοy 3.5 πρi 550 nm and zaτem οsuschesτvlyayuτ τeρdοzhnduκπzhyu, ποvyshaya τemπeρaτuρu dο 42-45 ° C in a 5 τechenzh mzhn, ποsle chegο προdοlzhayuτ φeρlenτatszhyu still chasa 2 π
30 τοж же τемπеρаτуρе.30 also the same temperature.
Пοсле οκόнчанжя προцесса для οπρеделенжя аκτжвнοс жнτеρφеροна κлеτκж жз I мл κульτуρальнοй жждκοсτж οсаж юτ ценτρиφугжροванием, οсадοκ ρесусπендиρуюτ в I мл Ι^-нοгο ρасτвορа дοдецилсульφаτа наτρия в 0,02 Μ φοсφаAfter the end of the installation process, the installation of the main unit has been completed.
35 нοм буφеρе ρΗ 7,2, сοдеρжащем 1% 2-ιлеρκаπτοэτанοла и προгρеваюτ 2-4 мжн πρж τемπеρаτуρе Ι00οС. Пοсле эτοгο - 17 - θсадοκ οτбρасываюτ ценτρиφуτжροванжем ж аκτжвнοсτь жнτ φеροна, сοдеρжащегοся в надοсадοчнοж φρаκции, οπρедел юτ сτандаρτными меτοдамж жлж πο защжτе джπлοждныχ φжб ροбласτοв челοвеκа οτ циτοπаτжчесκοгο дежсτвжя вжρуса везжκуляρнοгο сτοмаτжτа жлж меτοдοм жммунο-φеρменτнοг анализа. Β κачесτве сτандаρτοв исποльзуюτ πρеπаρаτы ^-инτеρφеροна ("ϊοгеу", Яποнжя) , οττиτροванные πο сτандаρτу лейκοциτаρнοгο инτеρφеροна ΜΡС Β 69/19 (Βел κοбρиτанжя) . Пο ρазлжчным меτοдам οπρеделенжя аκτжвнοсτь φиб- ροбласτнοгο жнτеρφеροна челοвеκа, сжнτезжρуемοгο в κл κаχ шτамма Ε.сοϋ ΒΗИИгенеτжκа VI 903 (ρΡΗ-ΙΜ|31-13) сοсτавляеτ бοлее 2»10 междунаροдныχ еджнжц/л баκτе- ρжальнοй κульτуρы. Для οπρеделенжя дοли сжнτезжροваннοгο φибροбласτ гο инτеρφеροна οτ суммаρнοгο κлеτοчнοгο белκа κлеτκж I мл κульτуρальнοй жидκοсτж οсаждаюτ ценτρиφугжροвани и οбρабаτываюτ, κаκ οπисанο выше, πρеπаρаτ ρазделяюτ элеκτροφορезοм в πρисуτсτвжж 0,1% дοдецилсульφаτа наτ в 15% ποлиаκρжламжднοм геле πο сϊандаρτнοй меτοджκе. Белκж, ρазделенные в ποлиаκρиламжднοм геле, προκρашжв юτ в ρасτвορе Κумасси κ-250 "Зегνа'ЧΦΡГ) πο сτандаρ нοй меτοджκе. Κοлжчесτвеннοе сοдеρжание белκοв в зοна οπρеделяюτ ποсле сκаниροвания геля на авτοмаτичесκοм лазеρнοм денсиτοмеτρе. Иденτиφиκаπжю зοны, сοοτвеτсτв щей сжнτезиροваннοму в κлеτκаχ зρелοму φжбροбласτнοму жнτеρφеροну (19 κД) , προвοдяτ на οснοве сρавненжя с элеκτροφορеτжчесκοй ποдвжжнοсτью маρκеρныχ белκοв, а τаκже с ποмοщью жммунοблοτжнга ρазделенныχ белκοвыχ φ цжй на ниτροцеллюлοзные φжльτρы ж жденτиφиκациж зοны жнτеρφеροна с ποмοщью οбρабοτκж φжльτροв в ρасτвορаχ, сοдеρжащиχ мышжные мοнοκлοнальные анτиτела προτив ]3-инτеρφеροна ж анτж-мышжные κροлжчьж анτжτела, κοнъ гжροванные с πеροκсидазοй из χρена. Пοсле сοοτвеτсτву щей προцедуρы οκρашжванжя зοна жнτеρφеροна выгляджτ τ нοж ποлοсοй κορжчневοгο цвеτа на неοκρашеннοм φοне ни - 18 - ροцеллюлοзнοгο φильτρа.35 nοm buφeρe ρΗ 7,2, sοdeρzhaschem 1% 2-ιleρκaπτοeτanοla and προgρevayuτ 2-4 mzhn πρzh τemπeρaτuρe Ι00 ο C. Pοsle eτοgο - 17 - θsadοκ οτbρasyvayuτ tsenτρiφuτzhροvanzhem w aκτzhvnοsτ zhnτ φeροna, sοdeρzhaschegοsya in nadοsadοchnοzh φρaκtsii, οπρedel yuτ sτandaρτnymi meτοdamzh zhlzh πο zaschzhτe dzhπlοzhdnyχ φzhb ροblasτοv chelοveκa οτ tsiτοπaτzhchesκοgο dezhsτvzhya vzhρusa vezzhκulyaρnοgο sτοmaτzhτa zhlzh meτοdοm zhmmunο-φeρmenτnοg analysis. Аче As a standard, they use drugs that are ^ -integrated (ϊGoegu,, Japan), which are equipped with an international standard (69) Pο ρazlzhchnym meτοdam οπρedelenzhya aκτzhvnοsτ φib- ροblasτnοgο zhnτeρφeροna chelοveκa, szhnτezzhρuemοgο in κl κa χ shτamma Ε.sοϋ ΒΗIIgeneτzhκa VI 903 (ρΡΗ-ΙΜ | 31-13) sοsτavlyaeτ bοlee 2 "10 mezhdunaροdnyχ edzhnzhts / l baκτe- ρzhalnοy κulτuρy. For οπρedelenzhya dοli szhnτezzhροvannοgο φibροblasτ gο inτeρφeροna οτ summaρnοgο κleτοchnοgο belκa κleτκzh I ml κulτuρalnοy zhidκοsτzh οsazhdayuτ tsenτρiφugzhροvani and οbρabaτyvayuτ, κaκ οπisanο above πρeπaρaτ ρazdelyayuτ eleκτροφορezοm in πρisuτsτvzhzh dοdetsilsulφaτa naτ 0.1% in 15% gel ποliaκρzhlamzhdnοm πο sϊandaρτnοy meτοdzhκe. Belκzh, ρazdelennye in ποliaκρilamzhdnοm gel προκρashzhv yuτ in ρasτvορe Κumassi κ-250 "Zegνa'ChΦΡG) πο sτandaρ nοy meτοdzhκe. Κοlzhchesτvennοe sοdeρzhanie belκοv in zοna οπρedelyayuτ ποsle sκaniροvaniya gel on avτοmaτichesκοm lazeρnοm densiτοmeτρe. Idenτiφiκaπzhyu zοny, sοοτveτsτv boiling szhnτeziροvannοmu in κleτκaχ zρelοmu φzhbροblasτnοmu zhnτeρφeροnu (19 κD) προvοdyaτ on οsnοve sρavnenzhya with eleκτροφορeτzhchesκοy ποdvzhzhnοsτyu maρκeρnyχ belκοv and τaκzhe with ποmοschyu zhmmunοblοτzhnga ρazdelennyχ belκοvyχ φ tszhy on niτροtsellyulοznye φzhlτρy w zhdenτiφiκatsizh zοny zhnτeρφeρ οna with ποmοschyu οbρabοτκzh φzhlτροv in ρasτvορaχ, sοdeρzhaschiχ myshzhnye mοnοκlοnalnye anτiτela προτiv] 3-w inτeρφeροna anτzh-myshzhnye κροlzhchzh anτzhτela, κοn gzhροvannye with πeροκsidazοy of χρena. Pοsle sοοτveτsτvu boiling προtseduρy οκρashzhvanzhya zοna zhnτeρφeροna vyglyadzhτ τ nοzh ποlοsοy κορzhchnevοgο tsveτa on neοκρashennοm audio φοne - 18 - cellulose filter.
Сοдеρжаяие белκа в зοне, сοοτвеτсτвующей /31-инτеρ φеροну, сοсτавляеτ οκοлο 10% οτ суммаρяοгο белκа πлазмид- сοдеρжащиχ κлеτοκ Ε. сοϊζ ΒΗЙИгенеτиκа VI 903 (ρΡΚ-ΙΡЫ/эϊ- 5 Пροмышленная πρименимοсτьThe content of the protein in the zone corresponding to the / 31-site, makes up about 10% of the total protein of the plasmid-containing cells. community гYIgenetics VI 903 (ΡΚΡΚ-ΙΡЫ / ϊϊ- 5 deliberate applicability
Заявляемая ρеκοмбинанτная πлазмидная ДΗΚ ρΡΚ-шш.-ϊз , κοдиρующая сияτез φибροбласτнοгο /ы -ин τеρφеροна челοвеκа, наχοдиτ πρименение для ποлучения шτам мοв-προдуценτοв /31-инτеρφеροна челοвеκа с высοκοй аκ- 10 τивнοсτыο.The claimed ρeκοmbinanτnaya πlazmidnaya DΗΚ ρΡΚ-shsh.-ϊz, κοdiρuyuschaya siyaτez φibροblasτnοgο / s -in τeρφeροna chelοveκa, naχοdiτ πρimenenie for ποlucheniya shτam mοv-προdutsenτοv / 31 inτeρφeροna chelοveκa with vysοκοy aκ- 10 τivnοsτyο.
Заявляемыж шτамм баκτеρий Εзсϊιегϊсϊι±а сοϋ ΒΗИИгенеτиκаνь 903 (ρΡΚ-ϊΡЫβϊ-ϊз>-προдуценτ /в>1-ияτеρφеρ на челοвеκа наχοдиτ πρжменение в миκροбиοлοгичесκοй и ме- дицинсκοй προмышлеянοсτи для ποлучения 1-инτеρφеροна ч 15 лοвеκа, κοτορый мοжеτ πρименяτься в медицинсκοй πρаκτиκе. Zayavlyaemyzh shτamm baκτeρy Εzsϊιegϊsϊι and sοϋ ΒΗIIgeneτiκaν ± 903 (ρΡΚ-ϊΡYβϊ-ϊz> -προdutsenτ /> 1-iyaτeρφeρ on chelοveκa naχοdiτ πρzhmenenie in miκροbiοlοgichesκοy and meditsinsκοy προmyshleyanοsτi ποlucheniya for 1 h 15 inτeρφeροna lοveκa, κοτορy mοzheτ πρimenyaτsya in meditsinsκοy πρaκτiκe .
Claims
Priority Applications (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| NL8820103A NL8820103A (en) | 1987-02-09 | 1988-02-08 | RECOMBINANT PLASMIDE DNA - PHR-IFNBETA 1-13 CODING SYNTHESIS OF FIBROBLASTIC HUMAN BETA1-INTERFERON, METHOD FOR ITS PREPARATION AND A STEM OF THE BACTERIA ESCHERICHIA COLI VNIIGENETAUM VL190-INTERN-BETAN-BETA THIS INCLUDES. |
| HU881692A HUT50871A (en) | 1987-02-09 | 1988-02-08 | Process for producing recombinant plasmid dna encoding human fibroblast-beta 1-interferon and escherichia coli comprising same |
| DE19883890050 DE3890050T1 (en) | 1987-02-09 | 1988-02-08 | RECOMBINATION PLASMID DNA PPR-IFN (BETA) 1-13 THAT CODES THE SYNTHESIS OF HUMAN FIBROBLAST (BETA) 1 INTERFERON, METHOD FOR CONSTRUCTING THE SAME AND STEM OF THE BACTERIA |
| FI884556A FI884556A7 (en) | 1987-02-09 | 1988-10-04 | RECOMBINANT PLASMID-DNA PPR-IFN 1-13, SOM KODAS FOER SYNTES AV MAENNISKANS FIBROBLAST- 1-INTERFERON, FOERFARANDE FOER FRAMSTAELLNING DAERAV OCH E.COLI INNEHAOLLANDE DETTA. |
| GB8823728A GB2208866A (en) | 1987-02-09 | 1988-10-10 | Recombinant plasmid dna ppr-ifn¼-13, coding for synthesis of human fidroblast ¼-1 interferon, and strain of bacteria escherichia coli vniigenetika vl903 |
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU4191345/28 | 1987-02-09 | ||
| SU874191345A SU1703692A1 (en) | 1987-02-09 | 1987-02-09 | Recombination plasmid dna that codes synthesis of fibroblast human interferon and method developing escherichia coli strain, producent of human interferon @@@ 1 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| WO1988005819A1 true WO1988005819A1 (en) | 1988-08-11 |
Family
ID=21284355
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PCT/SU1988/000033 Ceased WO1988005819A1 (en) | 1987-02-09 | 1988-02-08 | RECOMBINANT PLASMID DNA pPR-IFNbeta1-13, CODING FOR SYNTHESIS OF HUMAN FIBROBLAST beta1-INTERFERON, METHOD OF ITS CONSTRUCTION AND STRAIN OF BACTERIA ESCHERICHIA COLI VNIIGENETIKA VL 903 (pPR-IFNbeta1-13) AS PRODUCER OF HUMAN beta1-INTERFERON, CONTAINING IT |
Country Status (9)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH01502478A (en) |
| CH (1) | CH676996A5 (en) |
| FI (1) | FI884556A7 (en) |
| GB (1) | GB2208866A (en) |
| HU (1) | HUT50871A (en) |
| NL (1) | NL8820103A (en) |
| SE (1) | SE8803567L (en) |
| SU (1) | SU1703692A1 (en) |
| WO (1) | WO1988005819A1 (en) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0593792B2 (en) * | 1992-10-14 | 2004-01-07 | Ajinomoto Co., Inc. | Novel L-threonine-producing microbacteria and a method for the production of L-threonine |
| NZ555979A (en) * | 2004-12-20 | 2009-04-30 | Cadila Healthcare Ltd | Process for preparing high levels of interferon beta |
| RU2386694C2 (en) * | 2006-05-05 | 2010-04-20 | ООО "Биотех" | Pichia pastoris yeast strain - producer of chicken interferon-gamma, recombinant plasmid dna which facilitates biosynthesis chicken interferon-gamma, and construction method thereof |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4582800A (en) * | 1982-07-12 | 1986-04-15 | Hoffmann-La Roche Inc. | Novel vectors and method for controlling interferon expression |
-
1987
- 1987-02-09 SU SU874191345A patent/SU1703692A1/en active
-
1988
- 1988-02-08 JP JP63502089A patent/JPH01502478A/en active Pending
- 1988-02-08 CH CH3815/88A patent/CH676996A5/de not_active IP Right Cessation
- 1988-02-08 NL NL8820103A patent/NL8820103A/en unknown
- 1988-02-08 HU HU881692A patent/HUT50871A/en unknown
- 1988-02-08 WO PCT/SU1988/000033 patent/WO1988005819A1/en not_active Ceased
- 1988-10-04 FI FI884556A patent/FI884556A7/en not_active Application Discontinuation
- 1988-10-07 SE SE8803567A patent/SE8803567L/en not_active Application Discontinuation
- 1988-10-10 GB GB8823728A patent/GB2208866A/en not_active Withdrawn
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4582800A (en) * | 1982-07-12 | 1986-04-15 | Hoffmann-La Roche Inc. | Novel vectors and method for controlling interferon expression |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| "Biotekhnologia", pod, red. A.A. BAEVE, 1984, Nauka, (Moscow), pages 204-205. * |
| ZHURNAL VSESOJUZNOGO KHIMICHESKOGO OBSCHESTVA IM. D. I. MENDELCEVA, tom XXIX Nr. 2, 1984, (Khimia, Moscow), E.D. SVERDLOV, "Interferony i Geneticheskaya Inzheneria", pages 86-89, (206-209). * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CH676996A5 (en) | 1991-03-28 |
| FI884556A0 (en) | 1988-10-04 |
| GB2208866A (en) | 1989-04-19 |
| SE8803567D0 (en) | 1988-10-07 |
| GB8823728D0 (en) | 1988-12-07 |
| SU1703692A1 (en) | 1992-01-07 |
| HUT50871A (en) | 1990-03-28 |
| JPH01502478A (en) | 1989-08-31 |
| NL8820103A (en) | 1989-01-02 |
| FI884556A7 (en) | 1988-10-04 |
| SE8803567L (en) | 1988-10-07 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0131623B1 (en) | Chimeric genes suitable for expression in plant cells | |
| Kato et al. | Isolation and characterization of mutants of Escherichia coli deficient in induction of mutations by ultraviolet light | |
| WO2020059962A1 (en) | Recombinant vector comprising bip fragment and method for producing recombinant protein using same vector | |
| CN113416734A (en) | Gene for improving expression quantity of GFAP protein and soluble expression method thereof | |
| CN121135898A (en) | Low-immunogenicity recombinant I & III fusion type collagen with high stability, and preparation method and application thereof | |
| WO1988005819A1 (en) | RECOMBINANT PLASMID DNA pPR-IFNbeta1-13, CODING FOR SYNTHESIS OF HUMAN FIBROBLAST beta1-INTERFERON, METHOD OF ITS CONSTRUCTION AND STRAIN OF BACTERIA ESCHERICHIA COLI VNIIGENETIKA VL 903 (pPR-IFNbeta1-13) AS PRODUCER OF HUMAN beta1-INTERFERON, CONTAINING IT | |
| JPS62163694A (en) | Different structural form transformation method of host bacillus bacteria | |
| AU781788B2 (en) | Insertion sequence element derived from Ralstonia solanacearum | |
| WO1989011541A1 (en) | Extraction of human interleukin-4 from bacteria | |
| CN112538452A (en) | Cervical cancer therapeutic vaccine based on recombinant attenuated Listeria monocytogenes and preparation method thereof | |
| JPS633793A (en) | Eucaryotic cell integration vector making development of ix factor certain, obtained cell system and production thereof | |
| EP0213085B1 (en) | Vector for the expression and secretion of heterologous gene products in bacillus subtilis | |
| Sorge | Bacteriophage lambda cloning vectors | |
| CN101948865B (en) | Dual-promoter inducible secretable shuttle plasmid and construction method thereof | |
| JPS59501852A (en) | avian growth hormone | |
| CN119751607B (en) | Application of MgdE gene in regulation and control of mycobacterium bovis virulence | |
| CN118599747B (en) | Recombinant bacillus subtilis and construction method and application thereof | |
| WO1988005818A1 (en) | RECOMBINANT PLASMID DNA pPR-IL2-19, CODING FOR SYNTHESIS OF HUMAN INTERLEUKIN-2, METHOD OF ITS CONSTRUCTION AND STRAIN OF BACTERIA ESCHERICHIA COLI VNIIGENETIKA VL 903 (pPR-IL2-19) AS PRODUCER OF HUMAN INTERLEUKIN-2, CONTAINING IT | |
| EP0358692B1 (en) | Cholera vaccines | |
| CN117924453B (en) | Preparation method and application of mannose-specific lectin recombinant plant protein | |
| LU601008B1 (en) | A recombinant bacillus subtilis expressing the magainin 2 gene and its construction method. | |
| WO1987006613A1 (en) | RECOMBINANT PLASMID DNA pVN22, CODING FOR BIOSYNTHESIS OF HUMAN LEUCOCYTE INTERFERON alpha-I1 AND STRAIN PSEUDOMONAS sp. 31 (pVN22) - PRODUCER OF HUMAN LEUCOCYTE INTERFERON alpha-I1 CONTAINING IT | |
| AU583018B2 (en) | Gibbon interleukin | |
| Beadle | Gene structure and gene action | |
| CN120574336A (en) | A fusion protein and its application in treating multiple sclerosis |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| AK | Designated states |
Kind code of ref document: A1 Designated state(s): CH DE FI GB HU JP NL SE US |
|
| WWE | Wipo information: entry into national phase |
Ref document number: 884556 Country of ref document: FI |
|
| RET | De translation (de og part 6b) |
Ref document number: 3890050 Country of ref document: DE Date of ref document: 19890413 |
|
| WWE | Wipo information: entry into national phase |
Ref document number: 3890050 Country of ref document: DE |