TWI909710B - 苦瓜胜肽及其在抗血栓形成上的用途 - Google Patents

Abstract

本發明揭示一種苦瓜胜肽，該苦瓜胜肽可被用來抗血栓形成(anti-thrombosis)。

Description

苦瓜胜肽及其在抗血栓形成上的用途

本發明是有關於一種苦瓜胜肽及其在抗血栓形成(anti-thrombosis)上的用途。

血栓形成(thrombosis)是指血小板和纖維蛋白(fibrin)在血管中聚集而形成血栓(thrombus)的過程，血栓可能會導致動脈或靜脈的血管栓塞(embolism)而使器官或組織失去血液的供給，進而造成心肌梗塞與中風等疾病的發生。

臨床上通常會使用維他命K拮抗劑抗凝血劑(vitamin K antagonist anticoagulant)[諸如華法林(warfarin)、醋硝香豆素(acenocoumarol)與苯丙羥基香豆素(phenprocoumon)]來抑制血栓形成。然而，這些抗凝血劑的效用仍不甚理想，並可能會導致出血等副作用。因此，本領域的相關研究人員嘗試尋找具有內生性酵素[例如，可分解纖維蛋白的胞漿素(plasmin)，又被稱為纖維蛋白溶酶]的活性且可供用於抑制血栓形成的藥物。

發明概要

於本發明中，申請人意外地發現到，依據具有胰蛋白酶(trypsin)抑制活性的苦瓜胰島素受體-結合蛋白質(mcIRBP)的胺基酸序列並比對胰蛋白酶的切位所設計出的不同胜肽中，只有具有一如SEQ ID NO：1所示的胺基酸序列之胜肽能夠展現出優異的胞漿素活性(plasmin activity)，而被認為具有抗血栓形成(anti-thrombosis)的效用。

於是，在第一個方面，本發明提供一種苦瓜胜肽，其具有一如SEQ ID NO：1所示的胺基酸序列。

在第二個方面，本發明提供一如上所述的苦瓜胜肽供應用於製備一用來抗血栓形成之組成物的用途。

在第三個方面，本發明提供一種用於抗血栓形成的方法，其包括對一有此需要的個體投予一如上所述的苦瓜胜肽。

發明的詳細說明

要被瞭解的是：若有任何一件前案刊物在此被引述，該前案刊物不構成一個下述承認：在台灣或任何其他國家之中，該前案刊物形成本技藝中的常見一般知識之一部分。

為了這本說明書之目的，將被清楚地瞭解的是：文字“包含有(comprising)”意指“包含但不限於”，以及文字“包括(comprises)”具有一對應的意義。

除非另外有所定義，在本文中所使用的所有技術性與科學術語具有熟悉本發明所屬技藝的人士所共同瞭解的意義。一熟悉本技藝者會認知到許多與那些被描述於本文中者相似或等效的方法和材料，它們可被用於實施本發明。當然，本發明決不受到所描述的方法和材料之限制。

如本文中所使用的，“胜肽(peptide)”、“多肽(polypeptide)”和“蛋白質”等術語可被相互交換使用，且意指一種由胺基酸殘基所構成的聚合物，其中一或多個胺基酸殘基是天然存在的胺基酸(naturally occurring amino acids)或人造的化學仿效物(artificial chemical mimics)。

在本文中，胺基酸可以其全名、三個字母的縮寫以及單一字母符號來表示，這是本技藝中已詳知的。此外，依照胜肽標示的慣例，蛋白質的左端是N端(胺基端)，而右端是C端(羧基端)。

如本文中所使用的，術語“抗血栓形成(anti-thrombosis)”、“抑制血栓形成(inhibiting thrombosis)”、“減緩血栓形成(mitigating thrombosis)”以及“改善血栓形成(ameliorating thrombosis)”可被交替地使用。

本發明提供一種苦瓜胜肽，其具有一如SEQ ID NO：1所示的胺基酸序列。本發明提供一如上所述的苦瓜胜肽供應用於製備一用來抗血栓形成之組成物的用途。

依據本發明，該苦瓜胜肽可以是採用熟習此項技藝者所熟知的傳統化學合成方法或遺傳工程技術而被製得。在本發明的一個較佳具體例中，該苦瓜胜肽是委託源資國際生物科技股份有限公司而被製得。

另擇地，該苦瓜胜肽亦可利用本技藝中所慣用的分離純化方法而從天然來源中被分離純化出來。

依據本發明，該組成物可以是一食品組成物(food composition)，例如，呈一食品添加物(food additive)的形式，其可以被添加至一可食性材料(edible material)中以製備一供人類或動物食用的食品產品。依據本發明，該食品產品的種類可包括，但不限於：奶粉(milk powder)、發酵乳(fermented milk)、優格(yogurt)、乳酪(butter)、飲料(beverages)(例如，茶、咖啡)、機能性飲料(functional beverages)、麵製品(flour product)、烘焙食品(baked foods)、甜點(confectionery)、糖果(candies)、發酵食品(fermented foods)、動物飼料(animal feeds)、保健食品(health foods)、嬰兒食品(infant food)，以及膳食補充品(dietary supplements)。

依據本發明，該組成物亦可以是一藥學組成物(pharmaceutical composition)。

依據本發明，該藥學組成物可呈一適合於非經腸道投藥(parenteral administration)、口服投藥(oral administration)或局部投藥(topical administration)之劑型(dosage form)。

依據本發明，該藥學組成物可進一步包含有一被廣泛地使用於藥物製造技術之藥學上可接受的載劑(pharmaceutically acceptable carrier)。例如，該藥學上可接受的載劑可包含一或多種選自於下列的試劑：溶劑(solvent)、緩衝液(buffer)、乳化劑(emulsifier)、懸浮劑(suspending agent)、分解劑(decomposer)、崩解劑(disintegrating agent)、分散劑(dispersing agent)、黏結劑(binding agent)、賦形劑(excipient)、安定劑(stabilizing agent)、螯合劑(chelating agent)、稀釋劑(diluent)、膠凝劑(gelling agent)、防腐劑(preservative)、潤濕劑(wetting agent)、潤滑劑(lubricant)、吸收延遲劑(absorption delaying agent)、脂質體(liposome)以及類似之物。有關這些試劑的選用與數量是落在熟習此項技術之人士的專業素養與例行技術範疇內。

依據本發明，該藥學組成物可利用熟習此技藝者所詳知的技術而被製造成一適合於非經腸道投藥的劑型[包括注射品(injection)，例如，無菌的水性溶液(sterile aqueous solution)或分散液(dispersion)]，且以一選自於由下列所構成的群組中的途徑來投藥：腹腔內注射(intraperitoneal injection)、胸膜內注射(intrapleural injection)、肌肉內注射(intramuscular injection)、靜脈內注射(intravenous injection)、動脈內注射(intraarterial injection)、關節內注射(intraarticular injection)、滑液內注射(intrasynovial injection)、椎管內注射(intrathecal injection)、顱內注射(intracranial injection)、表皮內注射(intraepidermal injection)、皮下注射(subcutaneous injection)、皮內注射(intradermal injection)、病灶內注射(intralesional injection)、以及舌下投藥(sublingual administration)。

依據本發明，該藥學組成物可利用熟習此技藝者所詳知的技術而被製造成一適合於口服投藥的劑型，這包括，但不限於：無菌的粉末、錠劑(tablet)、片劑(troche)、口含錠(lozenge)、丸劑(pellet)、膠囊(capsule)、分散性粉末(dispersible powder)或細顆粒(granule)、溶液、懸浮液(suspension)、乳劑(emulsion)、糖漿(syrup)、酏劑(elixir)、濃漿(slurry)以及類似之物。

依據本發明，該藥學組成物可利用熟習此技藝者所詳知的技術而被製造成一適合於局部地施用於皮膚上的外部製劑(external preparation)，這包括，但不限於：乳劑(emulsion)、凝膠(gel)、軟膏(ointment)、乳霜(cream)、貼片(patch)、擦劑(liniment)、粉末(powder)、氣溶膠(aerosol)、噴霧(spray)、乳液(lotion)、乳漿(serum)、糊劑(paste)、泡沫(foam)、滴劑(drop)、懸浮液(suspension)、油膏(salve)以及繃帶(bandage)。

本發明亦提供一種用於抗血栓形成的方法，其包括對一有此需要的個體投予(administering)一如上所述的苦瓜胜肽。較佳地，該個體具有或被懷疑具有胞漿素原缺少症(hypoplasminogenemia)、中風(stroke)、心肌梗塞(myocardial infarction)，以及它們的組合。

如本文中所使用的，術語“投予”以及“投藥(administration)”可被交換地使用，並且意指藉由任何合適的途徑來對一個體導入(introducing)、提供(providing)或遞送(delivering)一預定的活性成分以執行其預期的效用。

如本文中所使用的，術語“個體(subject)”意指任何感興趣的哺乳類動物，諸如人類(humans)、猴子(monkeys)、牛(cows)、綿羊(sheep)、馬(horses)、豬(pigs)、山羊(goats)、狗(dogs)、貓(cats)、小鼠(mice)以及大鼠(rats)。

依據本發明，該苦瓜胜肽的投藥劑量與投藥次數會視下列因素而變化：要被治療的疾病之嚴重性，投藥途徑，以及要被治療的個體之年齡、身體狀況與反應。一般而言，該苦瓜胜肽可呈單一劑量或是分成數個劑量的形式來投藥。在本發明的一個較佳具體例中，該苦瓜胜肽每天被投藥1次。較佳實施例之詳細說明

本發明將就下面的實施例來做進一步說明，但應瞭解的是，該等實施例僅是供例示說明用，而不應被解釋為本發明的實施上的限制。實施例 實施例 1. 篩選具有抗血栓形成 (anti-thrombosis) 效用的苦瓜 (Momordica charantia) 胜肽

在本實驗中，申請人參考Akazawa S.I. et al. (2017), J. Biosci. Bioeng., 125(2):155-159當中所述的方法來進行胞漿素活性(plasmin activity)的分析，以篩選具有抗血栓形成效用的苦瓜胜肽。 實驗方法： A 、   苦瓜胜肽的製備：

首先，申請人依據苦瓜胰島素受體-結合蛋白質(mcIRBP)[NCBI參考序列(NCBI Reference Sequence)：XP_022137472.1]的胺基酸序列並比對胰蛋白酶(trypsin)的切位而設計出如下面表1所示的苦瓜胜肽，接著，委託源資國際生物科技股份有限公司來進行合成。 表1.   苦瓜胜肽的胺基酸序列

	胺基酸序列	SEQ ID NO：
苦瓜胜肽1	VICKDVGIFIK	1
苦瓜胜肽2	FDESTR	2

B 、   抗血栓形成試驗：

將100 μL的苦瓜胜肽1與2 (10 mg/mL，配於PBS)分別與100 μL的S-2251 (H-D-Val-Leu-Lys-p-nitroanilide)(DiaPharma, Cat. No. S820332)(5 mM，配於PBS)，進行混合並於37℃下進行培育歷時30分鐘，繼而以分光光度計來量測於405 nm的波長下的吸光值(OD₄₀₅)，以偵測由S-2251的水解所釋出的p-硝基苯胺(p-nitroaniline)之存在。另外，將PBS拿來進行相同的實驗以作為對照。若所測得的吸光值(OD₄₀₅)越高，代表胞漿素活性越高。 結果：

圖1顯示各個苦瓜胜肽與S-2251培育後所測得的吸光值(OD₄₀₅)。從圖1可見，與PBS相較之下，苦瓜胜肽2所測得的吸光值沒有明顯的差異，苦瓜胜肽1所具者則有顯著的提升，這表示：苦瓜胜肽2幾乎不具有胞漿素活性，而苦瓜胜肽1具有優異的胞漿素活性。因此，申請人認為，苦瓜胜肽1具有用於製備抗血栓形成之產品的高潛力。

於本說明書中被引述之所有專利和文獻以其整體被併入本案作為參考資料。若有所衝突時，本案詳細說明(包含界定在內)將佔上風。

雖然本發明已參考上述特定的具體例被描述，明顯地在不背離本發明之範圍和精神之下可作出很多的修改和變化。因此意欲的是，本發明僅受如隨文檢附之申請專利範圍所示者之限制。

無

本發明的上述以及其它目的、特徵與優點，在參照以下的詳細說明與較佳實施例和隨文檢附的圖式後，將變得明顯，其中： 圖1顯示各個苦瓜胜肽與S-2251培育後所測得的吸光值(OD₄₀₅)。

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Claims (5)

1. 一種苦瓜胜肽，其由一如SEQ ID NO：1所示的胺基酸序列組成。
2. 一種如請求項1所述的苦瓜胜肽供應用於製備一用來抗血栓形成之組成物的用途。
3. 如請求項2所述的用途，其中，該組成物是食品組成物或藥學組成物。
4. 如請求項3所述的用途，其中，該藥學組成物進一步包含有藥學上可接受的載劑。
5. 如請求項3所述的用途，其中，該藥學組成物是呈一供口服投藥、非經腸道投藥或局部投藥的劑型。