TWI841961B

TWI841961B - 嵌合抗原受體ｔ細胞療法

Info

Publication number: TWI841961B
Application number: TW111118020A
Authority: TW
Inventors: 萊茵沈恩加西亞; 維奇帕拉克斯
Original assignee: 美商凱特製藥公司
Priority date: 2021-05-14
Filing date: 2022-05-13
Publication date: 2024-05-11
Also published as: AU2022274608A1; WO2022241151A3; EP4337227A2; IL308227A; CA3217354A1; TW202506145A; KR20230173179A; US12357646B2; JP2024517956A; AU2022274608B2; WO2022241151A2; TW202245812A; US20220378830A1

Abstract

本揭露提供治療惡性疾病之方法，其包含投予有效劑量的免疫細胞療法（例如嵌合抗原受體基因修飾之T細胞免疫療法）；及用於製造此類免疫療法之方法。本揭露之一些態樣係關於判定患者對免疫細胞免疫療法之客觀反應的方法，其係基於在向患者投予免疫療法之前及之後的患者及產物屬性之水平。

Description

嵌合抗原受體T細胞療法

人類癌症就其本質而言包含了已發生基因或表觀遺傳轉化而變成異常癌細胞之正常細胞。在此過程中，癌細胞開始表現與正常細胞所表現者不同之蛋白質及其他抗原。身體之先天免疫系統可使用這些失常腫瘤抗原來特異性靶向及殺滅癌細胞。然而，癌細胞會採用各種機制來防止免疫細胞（諸如T及B淋巴球）成功靶向癌細胞。

人類T細胞療法仰賴經富集或經修飾人類T細胞以靶向及殺滅患者中之癌細胞。為了增加T細胞靶向及殺滅特定癌細胞之能力，已開發出方法來工程改造T細胞以表現將T細胞對準特定目標癌細胞之建構體。包含能夠與特定腫瘤抗原交互作用之結合域的嵌合抗原受體(chimeric antigen receptor, CAR)使T細胞能夠靶向並殺滅表現該特定腫瘤抗原之癌細胞。

需要理解CAR陽性T細胞之屬性及患者之免疫學狀態如何與免疫療法之臨床結果相關。

本文提供細胞（例如經工程改造T細胞）及/或其組成物之方法及用途，其用於治療患有疾病或病況之對象，該疾病或病況通常係或包括癌症或腫瘤，諸如白血病或淋巴瘤。在一些態樣中，在用一些方法治療之對象中，該等方法及用途相較於某些替代方法提供或達成改善之反應及/或更持久之反應或功效且/或降低毒性或其他副作用之風險。在一些實施例中，該等方法包含投予指定數目或相對數目的經工程改造細胞、投予所定義比率的特定細胞類型、治療特定患者群體（諸如具有特定風險概況、分期、及/或既往治療史者）、投予額外治療劑、及/或其組合。

亦提供涉及評估特定參數（例如特定生物標記或分析物之表現）之方法，該等特定參數可與諸如下列之結果相關：治療結果，包括反應，諸如完全反應(CR)或部分反應(PR)；或安全性結果，諸如投予細胞療法之後毒性之發展，例如神經毒性或CRS。亦提供基於參數（諸如生物標記或分析物之表現）之評估來評估反應之可能性及/或毒性風險之可能性的方法。

在一個態樣中，本揭露提供治療有需要之對象之表現腫瘤抗原之癌症的方法，其包含向對象投予治療有效量的CAR T細胞，該等CAR T細胞表現辨識腫瘤抗原之抗原結合分子。在一些實施例中，癌症係白血病或淋巴瘤。在一些實施例中，癌症係被套細胞淋巴瘤(MCL)。在一些實施例中，MCL在≥2線全身性療法之後係復發性或難治性的。在一些實施例中，癌症係（復發性/難治性）低惡性度非霍奇金氏淋巴瘤(Indolent Non-Hodgkin Lymphoma, iNHL)。在一些實施例中，癌症係濾泡淋巴瘤(FL)。在一些實施例中，癌症係邊緣區淋巴瘤(MZL)。在一些實施例中，對象患有MCL，其具有自首次含抗CD20之化學免疫療法起始後24個月內進展之高風險特性(MCL POD24)。在一些實施例中，癌症係iNHL，其具有在診斷後24個月內疾病進展之高風險特性(iNHL POD24)。在一些實施例中，腫瘤抗原係CD19。在一些實施例中，早期投予CAR T細胞治療。例如，CAR T細胞治療可作為第一線療法投予及/或在進展前投予。

以下實施例係本揭露之例示性且非限制性的： 1. 一種治療癌症、非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)之方法，其包含向對象投予治療有效量的針對腫瘤抗原之免疫細胞。 2. 如實施例1之方法，其中該對象處於疾病進展之高風險中。 3. 如實施例1或2之方法，其中該NHL係被套細胞淋巴瘤(MCL)或低惡性度NHL (iNHL)。 4. 如實施例1或2之方法，其中該iNHL係邊緣區淋巴瘤(MZL)或濾泡淋巴瘤(FL)。 5. 如實施例2之方法，其中若該對象在初始診斷之後24個月內顯示疾病進展，則該對象處於高風險中。 6. 如實施例2之方法，其中若該對象自首次含抗CD20之化學免疫療法起始後24個月內顯示疾病進展，則該對象處於高風險中。 7. 如實施例6之方法，其中該化學免疫療法包含烷化劑。 8. 如實施例1至7中任一項之方法，其中該等免疫細胞係作為第一、第二、第三、第四、第五、或第六線療法投予。 9. 如實施例1至8中任一項之方法，其中該等免疫細胞係選自腫瘤浸潤淋巴球(TIL)、NK細胞、自體T細胞、同種異體T細胞、及經工程改造之自體T細胞(engineered autologous T cell, eACT)、及其任何組合。 10. 如實施例9之方法，其中該等免疫細胞係CAR T細胞。 11. 如實施例10之方法，其中該CAR T細胞治療包含西卡思羅(axicabtagene ciloleucel)或布萊奧妥(brexucabtagene autoleucel)/KTE-X19。 12. 如實施例1、2、或9之方法，其中該等免疫細胞之該治療有效量或有效劑量係至少約10 ⁴個細胞、至少約10 ⁵個細胞、至少約10 ⁶個細胞、至少約10 ⁷個細胞、至少約10 ⁸個細胞、至少約10 ⁹個、或至少約10 ¹⁰個細胞。 13. 如實施例1、2、或9之方法，其中免疫細胞之該治療有效量或有效劑量係約10 ⁴個細胞、約10 ⁵個細胞、約10 ⁶個細胞、約10 ⁷個細胞、或約10 ⁸個細胞。 14. 如實施例1、2、或9之方法，其中免疫細胞之該治療有效量或有效劑量係約2 × 10 ⁶個細胞/kg、約3 × 10 ⁶個細胞/kg、約4 × 10 ⁶個細胞/kg、約5 × 10 ⁶個細胞/kg、約6 × 10 ⁶個細胞/kg、約7 × 10 ⁶個細胞/kg、約8 × 10 ⁶個細胞/kg、約9 × 10 ⁶個細胞/kg、約1 × 10 ⁷個細胞/kg、約2 × 10 ⁷個細胞/kg、約3 × 10 ⁷個細胞/kg、約4 × 10 ⁷個細胞/kg、約5 × 10 ⁷個細胞/kg、約6 × 10 ⁷個細胞/kg、約7 × 10 ⁷個細胞/kg、約8 × 10 ⁷個細胞/kg、或約9 × 10 ⁷個細胞/kg。 15. 如實施例1、2、或9之方法，其中該等免疫細胞之該治療有效量或有效劑量係在每kg體重約1 × 10 ⁶與約2 × 10 ⁶個免疫細胞之間至至多約1 x 10 ⁸個免疫細胞之最高劑量。 16. 如實施例1、2、或9之方法，其中免疫細胞之該治療有效劑量係在75與200 × 10 ⁶個免疫細胞之間。 17. 如實施例1至16中任一者之方法，其中該腫瘤抗原係選自腫瘤相關表面抗原、5T4、α胎兒蛋白(AFP)、B7-1 (CD80)、B7-2 (CD86)、BCMA、B-人類絨毛膜促性腺激素、CA-125、癌胚抗原(CEA)、CD123、CD133、CD138、CD19、CD20、CD22、CD23、CD24、CD25、CD30、CD33、CD34、CD4、CD40、CD44、CD56、CD8、CLL-1、c-Met、CMV特異性抗原、CS-1、CSPG4、CTLA-4、DLL3、雙唾液酸神經節苷脂GD2、管至上皮黏蛋白、EBV特異性抗原、EGFR變體III (EGFRvIII)、ELF2M、內皮糖蛋白、蝶素B2、表皮生長因子受體(EGFR)、上皮細胞黏附分子(EpCAM)、上皮腫瘤抗原、ErbB2 (HER2/neu)、纖維母細胞相關蛋白(fap)、FLT3、葉酸結合蛋白、GD2、GD3、神經膠質瘤相關抗原、醣神經鞘脂質、gp36、HBV特異性抗原、HCV特異性抗原、HER1-HER2、HER2-HER3組合、HERV-K、高分子量黑色素瘤相關抗原(HMW-MAA)、HIV-1套膜醣蛋白gp41、HPV特異性抗原、人類端粒酶反轉錄酶、IGFI受體、IGF-II、IL-11Rα、IL-13R-a2、流感病毒特異性抗原；CD38、胰島素生長因子(IGFl)-l、腸羧基酯酶、κ鏈、LAGA-la、λ鏈、拉薩病毒特異性抗原、凝集素反應性AFP、譜系特異性或組織特異性抗原（諸如CD3、MAGE、MAGE-A1）、主要組織相容性複合體(MHC)分子、呈現腫瘤特異性肽表位之主要組織相容性複合體(MHC)分子、M-CSF、黑色素瘤相關抗原、間皮素、MN-CA IX、MUC-1、mut hsp70-2、經突變p53、經突變ras、嗜中性球彈性蛋白酶、NKG2D、Nkp30、NY-ESO-1、p53、PAP、前列腺酶、前列腺特異性抗原(PSA)、前列腺癌腫瘤抗原-1 (PCTA-1)、前列腺特異性抗原蛋白、STEAP1、STEAP2、PSMA、RAGE-1、ROR1、RU1、RU2 (AS)、表面黏附分子、生存素及端粒酶、TAG-72、纖連蛋白之額外域A (EDA)及額外域B (EDB)及肌腱蛋白C之Al域(TnC Al)、甲狀腺球蛋白、腫瘤基質抗原、血管內皮生長因子受體-2 (VEGFR2)、病毒特異性表面抗原（諸如HIV特異性抗原，諸如HIV gpl20）、以及此等表面抗原之任何衍生物或變體。 18. 如實施例17之方法，其中該目標抗原係CD19。 19. 如實施例1或2之方法，其中該NHL係非特指型之（復發性或難治性）瀰漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)、原發性縱膈腔大B細胞淋巴瘤、高級別B細胞淋巴瘤、或由濾泡淋巴瘤引起之DLBCL。 20. 如實施例1至19中任一項之方法，其進一步包含將該對象用一或多種預調理劑預調理。 21. 如實施例20之方法，其中該對象係用投予烷化劑及/或基於鉑之藥劑預調理。 22. 如實施例21之方法，其中該等烷化劑係選自由下列所組成之群組：美法侖(melphalan)、氯芥苯丁酸(chlorambucil)、環磷醯胺(cyclophosphamide)、二氯甲基二乙胺(mechlorethamine)、氮芥(mustine) (HN2)、烏拉莫司汀(uramustine)、尿嘧啶氮芥(uracil mustard)、美法侖、氯芥苯丁酸、異環磷醯胺(ifosfamide)、苯達莫司汀(bendamustine)、卡莫司汀(carmustine)、洛莫司汀(lomustine)、鏈脲黴素(streptozocin)、烷基磺酸酯、白消安(busulfan)、噻替哌(thiotepa)或其類似物、及其任何組合。 23. 如實施例21之方法，其中該等基於鉑之預調理劑係選自由下列所組成之群組：鉑、順鉑(cisplatin)、卡鉑(carboplatin)、奈達鉑(nedaplatin)、奧沙利鉑(oxaliplatin)、沙鉑(satraplatin)、四硝酸三鉑(triplatin tetranitrate)、丙卡巴肼(procarbazine)、六甲蜜胺(altretamine)、三氮烯(triazene)、達卡巴仁(dacarbazine)、米托唑胺(mitozolomide)、替莫唑胺(temozolomide)、達卡巴仁、替莫唑胺、及其任何組合。 24. 如實施例20之方法，其中該等預調理劑包含環磷醯胺及氟達拉濱(fludarabine)。 25. 如實施例20至24中任一項之方法，其中該一或多種預調理劑之該投予係在該細胞療法之該投予前至少七天、至少六天、至少五天、至少四天、至少三天、至少兩天、或至少一天開始。

以下額外實施例係本揭露之例示性且非限制性的： 1. 一種治療有需要之對象之癌症的方法，其中該癌症係非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)、或復發性/難治性B前體急性淋巴母細胞白血病、或復發性/難治性B細胞非霍奇金氏淋巴瘤(R/R B-ALL)，其包含向該對象投予治療有效量的針對腫瘤抗原之免疫細胞；可選地其中該對象係小兒或青少年對象。 2. 如請求項1之方法，其中該對象處於疾病進展之高風險中。 3. 如請求項1或2之方法，其中該NHL係被套細胞淋巴瘤(MCL)或低惡性度NHL (iNHL)。 4. 如請求項1或2之方法，其中該iNHL係邊緣區淋巴瘤(MZL)或濾泡淋巴瘤(FL)。 5. 如請求項2之方法，其中若該對象在初始診斷之後24個月內顯示疾病進展，則該對象處於高風險中。 6. 如請求項2之方法，其中若該對象自首次含抗CD20之化學免疫療法起始後24個月內顯示疾病進展，則該對象處於高風險中。 7. 如請求項6之方法，其中該化學免疫療法包含烷化劑。 8. 如請求項1至7中任一項之方法，其中該等免疫細胞係作為第一、第二、第三、第四、第五、或第六線療法投予、及/或在疾病進展前投予。 9. 如請求項1至8中任一項之方法，其中該等免疫細胞係選自腫瘤浸潤淋巴球(TIL)、NK細胞、自體T細胞、同種異體T細胞、及經工程改造之自體T細胞(eACT)、及其任何組合。 10. 如請求項9之方法，其中該等免疫細胞係CAR T細胞。 11. 如請求項10之方法，其中該CAR T細胞治療包含西卡思羅或布萊奧妥/KTE-X-19。 12. 如請求項1、2、或9之方法，其中該等免疫細胞之該治療有效量或有效劑量係至少約10 ⁴個細胞、至少約10 ⁵個細胞、至少約10 ⁶個細胞、至少約10 ⁷個細胞、至少約10 ⁸個細胞、至少約10 ⁹個、或至少約10 ¹⁰個細胞。 13. 如請求項1、2、或9之方法，其中免疫細胞之該治療有效量或有效劑量係約10 ⁴個細胞、約10 ⁵個細胞、約10 ⁶個細胞、約10 ⁷個細胞、或約10 ⁸個細胞。 14. 如請求項1、2、或9之方法，其中免疫細胞之該治療有效量或有效劑量係約2 × 10 ⁶個細胞/kg、約3 × 10 ⁶個細胞/kg、約4 × 10 ⁶個細胞/kg、約5 × 10 ⁶個細胞/kg、約6 × 10 ⁶個細胞/kg、約7 × 10 ⁶個細胞/kg、約8 × 10 ⁶個細胞/kg、約9 × 10 ⁶個細胞/kg、約1 × 10 ⁷個細胞/kg、約2 × 10 ⁷個細胞/kg、約3 × 10 ⁷個細胞/kg、約4 × 10 ⁷個細胞/kg、約5 × 10 ⁷個細胞/kg、約6 × 10 ⁷個細胞/kg、約7 × 10 ⁷個細胞/kg、約8 × 10 ⁷個細胞/kg、或約9 × 10 ⁷個細胞/kg。 15. 如請求項1、2、或9之方法，其中該等免疫細胞之該治療有效量或有效劑量係在每kg體重約1 × 10 ⁶與約2 × 10 ⁶個免疫細胞之間至至多約1 x 10 ⁸個免疫細胞之最高劑量。 16. 如請求項1、2、或9之方法，其中免疫細胞之該治療有效劑量係在75與200 × 10 ⁶個免疫細胞之間。 17. 如請求項1至16中任一項之方法，其中該腫瘤抗原係選自腫瘤相關表面抗原、5T4、α胎兒蛋白(AFP)、B7-1 (CD80)、B7-2 (CD86)、BCMA、B-人類絨毛膜促性腺激素、CA-125、癌胚抗原(CEA)、CD123、CD133、CD138、CD19、CD20、CD22、CD23、CD24、CD25、CD30、CD33、CD34、CD4、CD40、CD44、CD56、CD8、CLL-1、c-Met、CMV特異性抗原、CS-1、CSPG4、CTLA-4、DLL3、雙唾液酸神經節苷脂GD2、管至上皮黏蛋白、EBV特異性抗原、EGFR變體III (EGFRvIII)、ELF2M、內皮糖蛋白、蝶素B2、表皮生長因子受體(EGFR)、上皮細胞黏附分子(EpCAM)、上皮腫瘤抗原、ErbB2 (HER2/neu)、纖維母細胞相關蛋白(fap)、FLT3、葉酸結合蛋白、GD2、GD3、神經膠質瘤相關抗原、醣神經鞘脂質、gp36、HBV特異性抗原、HCV特異性抗原、HER1-HER2、HER2-HER3組合、HERV-K、高分子量黑色素瘤相關抗原(HMW-MAA)、HIV-1套膜醣蛋白gp41、HPV特異性抗原、人類端粒酶反轉錄酶、IGFI受體、IGF-II、IL-11Rα、IL-13R-a2、流感病毒特異性抗原；CD38、胰島素生長因子(IGFl)-l、腸羧基酯酶、κ鏈、LAGA-la、λ鏈、拉薩病毒特異性抗原、凝集素反應性AFP、譜系特異性或組織特異性抗原（諸如CD3、MAGE、MAGE-A1）、主要組織相容性複合體(MHC)分子、呈現腫瘤特異性肽表位之主要組織相容性複合體(MHC)分子、M-CSF、黑色素瘤相關抗原、間皮素、MN-CA IX、MUC-1、mut hsp70-2、經突變p53、經突變ras、嗜中性球彈性蛋白酶、NKG2D、Nkp30、NY-ESO-1、p53、PAP、前列腺酶、前列腺特異性抗原(PSA)、前列腺癌腫瘤抗原-1 (PCTA-1)、前列腺特異性抗原蛋白、STEAP1、STEAP2、PSMA、RAGE-1、ROR1、RU1、RU2 (AS)、表面黏附分子、生存素及端粒酶、TAG-72、纖連蛋白之額外域A (EDA)及額外域B (EDB)及肌腱蛋白C之Al域(TnC Al)、甲狀腺球蛋白、腫瘤基質抗原、血管內皮生長因子受體-2 (VEGFR2)、病毒特異性表面抗原（諸如HIV特異性抗原，諸如HIV gpl20）、以及此等表面抗原之任何衍生物或變體。 18. 如請求項17之方法，其中該目標抗原係CD19。 19. 如請求項1或2之方法，其中該NHL係非特指型之（復發性或難治性）瀰漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)、原發性縱膈腔大B細胞淋巴瘤、高級別B細胞淋巴瘤、或由濾泡淋巴瘤引起之DLBCL。 20. 如請求項1至19中任一項之方法，其進一步包含將該對象用一或多種預調理劑預調理。 21. 如請求項20之方法，其中該對象係用投予烷化劑及/或基於鉑之藥劑預調理。 22. 如請求項21之方法，其中該等烷化劑係選自由下列所組成之群組：美法侖、氯芥苯丁酸、環磷醯胺、二氯甲基二乙胺、氮芥(HN2)、烏拉莫司汀、尿嘧啶氮芥、美法侖、氯芥苯丁酸、異環磷醯胺、苯達莫司汀、卡莫司汀、洛莫司汀、鏈脲黴素、烷基磺酸酯、白消安、噻替哌或其類似物、及其任何組合。 23. 如請求項21之方法，其中該等基於鉑之預調理劑選自由下列所組成之群組：鉑、順鉑、卡鉑、奈達鉑、奧沙利鉑、沙鉑、四硝酸三鉑、丙卡巴肼、六甲蜜胺、三氮烯、達卡巴仁、米托唑胺、替莫唑胺、達卡巴仁、替莫唑胺、及其任何組合。 24. 如請求項20之方法，其中該等預調理劑包含環磷醯胺及氟達拉濱。 25. 如請求項20至24中任一項之方法，其中該一或多種預調理劑之該投予係在該細胞療法之該投予前至少七天、至少六天、至少五天、至少四天、至少三天、至少兩天、或至少一天開始。 26. 如請求項1之方法，其中在使抗CD19 CAR T細胞療法治療之後，向該對象投予同種異體幹細胞療法(alloSCT)。 27. 如請求項1之方法，其中該對象具有高腫瘤負荷量。 28. 如請求項1之方法，其中托珠單抗(tocilizumab)係僅在細胞介素釋放症候群之背景下投予以管理神經性事件，且/或起始類固醇以管理2級神經性事件。

以下額外實施例係本揭露之例示性且非限制性的：

本揭露之一實施例係關於一種治療對象之復發性/難治性B前體急性淋巴母細胞白血病的方法，其包括向對象投予治療有效量的針對腫瘤抗原之免疫細胞，其中對象係小兒或青少年對象。

本揭露之一實施例係關於上述方法，其中免疫細胞之治療有效量係在每kg體重約1 × 10 ⁶與約2 × 10 ⁶個免疫細胞之間。

本揭露之一實施例係關於上述方法，其中免疫細胞係以在約40 ml至68 ml之間的總體積投予。

本揭露之一實施例係關於上述方法，其中免疫細胞係以在約40 ml之間的總體積投予。

本揭露之一實施例係關於上述方法，其中免疫細胞之治療有效量係每kg體重約1 × 10 ⁶個免疫細胞。

本揭露之一實施例係關於上述方法，其中免疫細胞係作為第一、第二、第三、第四、第五、或第六線療法投予、或在疾病進展前投予。

本揭露之一實施例係關於上述方法，其中腫瘤抗原係選自腫瘤相關表面抗原、5T4、α胎兒蛋白(AFP)、B7-1 (CD80)、B7-2 (CD86)、BCMA、B-人類絨毛膜促性腺激素、CA-125、癌胚抗原(CEA)、CD123、CD133、CD138、CD19、CD20、CD22、CD23、CD24、CD25、CD30、CD33、CD34、CD4、CD40、CD44、CD56、CD8、CLL-1、c-Met、CMV特異性抗原、CS-1、CSPG4、CTLA-4、DLL3、雙唾液酸神經節苷脂GD2、管至上皮黏蛋白、EBV特異性抗原、EGFR變體III (EGFRvIII)、ELF2M、內皮糖蛋白、蝶素B2、表皮生長因子受體(EGFR)、上皮細胞黏附分子(EpCAM)、上皮腫瘤抗原、ErbB2 (HER2/neu)、纖維母細胞相關蛋白(fap)、FLT3、葉酸結合蛋白、GD2、GD3、神經膠質瘤相關抗原、醣神經鞘脂質、gp36、HBV特異性抗原、HCV特異性抗原、HER1-HER2、HER2-HER3組合、HERV-K、高分子量黑色素瘤相關抗原(HMW-MAA)、HIV-1套膜醣蛋白gp41、HPV特異性抗原、人類端粒酶反轉錄酶、IGFI受體、IGF-II、IL-11Rα、IL-13R-a2、流感病毒特異性抗原；CD38、胰島素生長因子(IGFl)-l、腸羧基酯酶、κ鏈、LAGA-la、λ鏈、拉薩病毒特異性抗原、凝集素反應性AFP、譜系特異性或組織特異性抗原（諸如CD3、MAGE、MAGE-A1）、主要組織相容性複合體(MHC)分子、呈現腫瘤特異性肽表位之主要組織相容性複合體(MHC)分子、M-CSF、黑色素瘤相關抗原、間皮素、MN-CA IX、MUC-1、mut hsp70-2、經突變p53、經突變ras、嗜中性球彈性蛋白酶、NKG2D、Nkp30、NY-ESO-1、p53、PAP、前列腺酶、前列腺特異性抗原(PSA)、前列腺癌腫瘤抗原-1 (PCTA-1)、前列腺特異性抗原蛋白、STEAP1、STEAP2、PSMA、RAGE-1、ROR1、RU1、RU2 (AS)、表面黏附分子、生存素及端粒酶、TAG-72、纖連蛋白之額外域A (EDA)及額外域B (EDB)及肌腱蛋白C之Al域(TnC Al)、甲狀腺球蛋白、腫瘤基質抗原、血管內皮生長因子受體-2 (VEGFR2)、病毒特異性表面抗原（諸如HIV特異性抗原，諸如HIV gpl20）、以及此等表面抗原之任何衍生物或變體。

本揭露之一實施例係關於上述方法，其中目標抗原係CD19。

本揭露之一實施例係關於上述方法，其進一步包含將對象用一或多種預調理劑預調理，其中一或多種預調理劑係選自烷化劑及基於鉑之藥劑中之至少一者，其中等烷化劑係選自由下列所組成之群組：美法侖、氯芥苯丁酸、環磷醯胺、二氯甲基二乙胺、氮芥(HN2)、烏拉莫司汀、尿嘧啶氮芥、美法侖、氯芥苯丁酸、異環磷醯胺、苯達莫司汀、卡莫司汀、洛莫司汀、鏈脲黴素、烷基磺酸酯、白消安、噻替哌或其類似物、及其任何組合，且其中基於鉑之預調理劑係選自由下列所組成之群組：鉑、順鉑、卡鉑、奈達鉑、奧沙利鉑、沙鉑、四硝酸三鉑、丙卡巴肼、六甲蜜胺、三氮烯、達卡巴仁、米托唑胺、替莫唑胺、達卡巴仁、替莫唑胺、及其任何組合。

本揭露之一實施例係關於上述方法，其中預調理劑包含環磷醯胺及氟達拉濱。

本揭露之一實施例係關於上述方法，其中環磷醯胺係以在200 mg/m ²/天與2000 mg/m ²/天之間的劑量投予，且其中氟達拉濱係以在20 mg/m ²/天與900 mg/m ²/天之間的劑量投予。

本揭露之一實施例係關於上述方法，其中一或多種預調理劑之投予係在免疫細胞之投予前至少七天、至少六天、至少五天、至少四天、至少三天、至少兩天、或至少一天開始。

本揭露之一實施例係關於上述方法，其中對象有高腫瘤負荷量。

本揭露之一實施例係關於上述方法，其進一步包含下列中之至少一者：僅在細胞介素釋放症候群之背景下投予托珠單抗以管理神經性事件、及投予皮質類固醇以管理2級神經性事件。

本揭露之一實施例係關於上述方法，其中對象處於疾病進展之高風險中，其中若對象在初始診斷之後24個月內顯示疾病進展，則該對象處於高風險中。

本揭露之一實施例係關於上述方法，其中免疫細胞係選自腫瘤浸潤淋巴球(TIL)、NK細胞、自體T細胞、同種異體T細胞、及經工程改造之自體T細胞(eACT)、及其任何組合。

本揭露之一實施例係關於上述方法，其中免疫細胞係CAR T細胞。

本揭露之一實施例係關於一種治療有需要之對象之癌症的方法，其中該癌症係非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)、或復發性/難治性B前體急性淋巴母細胞白血病、或復發性/難治性B細胞非霍奇金氏淋巴瘤(R/R B-ALL)，其包含向該對象投予治療有效量的針對腫瘤抗原之免疫細胞，且其中該等免疫細胞係表現抗CD19嵌合抗原受體(CAR)之自體T細胞。

本揭露之一實施例係關於上述方法，其中癌症係NHL，且NHL係被套細胞淋巴瘤(MCL)或低惡性度NHL (iNHL)。

本揭露之一實施例係關於上述方法，其中iNHL係邊緣區淋巴瘤(MZL)或濾泡淋巴瘤(FL)。

本揭露之一實施例係關於上述方法，其中該癌症係NHL，且NHL係非特指型之（復發性或難治性）瀰漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)、原發性縱膈腔大B細胞淋巴瘤、高級別B細胞淋巴瘤、或由濾泡淋巴瘤引起之DLBCL。

相關申請案之交互參照

本申請案主張2021年5月14日申請之美國臨時專利申請案第63/188,916號、2021年9月27日申請之美國臨時專利申請案第63/248,941號、及2022年4月7日申請之美國臨時專利申請案第63/328,364號之優先權，其等各者之全文特此以引用方式併入本文中定義

為了更容易理解本揭露，以下先定義某些用語。下列用語及其他用語之額外定義係在本說明書中各處闡述。

如本說明書及隨附申請專利範圍中所使用，單數形式「一(a)」、「一(an)」、及「該(the)」皆包括複數指稱，除非上下文另有明確說明。

除非有具體陳述或自上下文中明顯可知，如本文中所使用，用語「或(or)」係理解為涵括性的且同時涵蓋「或(or)」與「及(and)」。

在本文中，將使用用語「及/或(and/or)」之處認為是具體揭露兩個指定特徵或組分之各者（包含或不包含另一者）。因此，如用於諸如「A及/或B」之詞組中的用語「及/或」在本文中係意欲包括A及B；A或B；A（單獨）；及B（單獨）。同樣地，如用於諸如「A、B、及/或C」之詞組中的用語「及/或」係意欲涵蓋下列態樣之各者：A、B、及C；A、B、或C；A或C；A或B；B或C；A及C；A及B；B及C；A（單獨）；B（單獨）；及C（單獨）。

如本文中所使用，用語「例如(e.g.,)」及「亦即(i.e.,)」僅作為示例使用而不意欲造成限制，且不應解讀為僅指本說明書中所明確列舉之項目。

用語「或更多(or more)」、「至少(at least)」、「多於(more than)」、及類似者（例如，「至少一(at least one)」係理解為包括但不限於至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19 20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149或150、200、300、400、500、600、700、800、900、1000、2000、3000、4000、5000或多於所述值。亦包括的是任何更大之數目或其間之分數。

相反地，用語「不多於(no more than)」包括少於所述值之各值。例如，「不多於100個核苷酸」包括100、99、98、97、96、95、94、93、92、91、90、89、88、87、86、85、84、83、82、81、80、79、78、77、76、75、74、73、72、71、70、69、68、67、66、65、64、63、62、61、60、59、58、57、56、55、54、53、52、51、50、49、48、47、46、45、44、43、42、41、40、39、38、37、36、35、34、33、32、31、30、29、28、27、26、25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、1、及0個核苷酸。亦包括的是任何更小之數目或其間之分數。

用語「複數(plurality)」、「至少二(at least two)」、「二或更多(two or more)」、「至少第二(at least second)」、及類似者係理解為包括但不限於至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19 20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149或150、200、300、400、500、600、700、800、900、1000、2000、3000、4000、5000或更多。亦包括的是任何更大之數目或其間之分數。

在本說明書各處，詞語「包含(comprising)」或諸如「comprises」或「comprising」之變型將理解為有意涵括所述元素、整數、或步驟、或元素組、整數組、或步驟組，但不排除任何其他元素、整數、或步驟、或元素組、整數組、或步驟組。應理解的是，在本文中以用語「包含」描述的態樣之處，亦另提供以用語「由…所組成(consisting of)」及/或「基本上由…所組成(consisting essentially of)」所描述之類似態樣。用語「由…所組成」排除申請專利範圍中未指定之任何元件、步驟、或成分。 In re Gray, 53 F.2d 520, 11 USPQ 255 (CCPA 1931); Ex parte Davis, 80 USPQ 448, 450 (Bd. App. 1948)（「由…所組成」定義為「除了通常與之相關之雜質以外，封閉申請專利範圍包括除所列者之外的材料」）。用語「基本上由…所組成」將申請專利範圍之範疇限制為指定材料或步驟「及不實質上影響所請發明之（多個）基本及新穎特徵者」。

除非具體陳述或自上下文明顯可知，如本文中所使用，用語「約(about)」係指值或組成，其係在針對該特定值或組成物之可接受誤差範圍內，如由所屬技術領域中具有通常知識者所判定，其將部分取決於該值或組成如何測量或判定，亦即測量系統之限制。例如，「約」或「大約(approximately)」可意指依據所屬技術領域中之實務在一或多於一個標準偏差內。「約」或「大約」可意指至多10%之範圍（亦即，±10%）。因此，「約」可理解為在大於或小於所述值10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%、0.5%、0.1%、0.05%、0.01%、或0.001%內。例如，約5 mg可包括介於4.5 mg與5.5 mg之間的任何量。此外，特別在關於生物系統或程序時，該用語可意指值的至多一個數量級或至多5倍。當本揭露中提供特定的值或組成時，除非另有陳述，「約」或「大約」之意義應假設為在針對特定值或組成之可接受誤差範圍內。

如本文中所述，任何濃度範圍、百分比範圍、比率範圍、或整數範圍係理解為涵括所述範圍內之任何整數值，並且在適當時亦涵括其分數（諸如整數之十分之一及百分之一），除非另有指示。

本文中所使用之單位、前綴、及符號係使用其國際單位制(SI)公認形式來提供。數字範圍涵括定義該範圍之數字。

除非另有定義，否則本文中所使用之所有技術及科學用語具有與本揭露所相關之技術領域中具有通常知識者一般理解者相同的意義。例如，Juo，「The Concise Dictionary of Biomedicine and Molecular Biology」，2nd ed., (2001), CRC Press；「The Dictionary of Cell & Molecular Biology」，5th ed., (2013), Academic Press；及「The Oxford Dictionary Of Biochemistry And Molecular Biology」，Cammack et al. eds., 2nd ed, (2006), Oxford University Press為所屬技術領域中具有通常知識者提供本揭露中所使用之許多用語的通用詞典。

「投予(administering)」係指使用所屬技術領域中具有通常知識者已知之任何各種方法及遞送系統，將劑實際引入至對象。用於本文所揭示之配方的例示性投予途徑包括靜脈內、肌內、皮下、腹膜內、脊椎、或其他腸胃外投予途徑，例如藉由注射或輸注。用於本文所揭示之組成物的例示性投予途徑包括靜脈內、肌內、皮下、腹膜內、脊椎、或其他腸胃外投予途徑，例如藉由注射或輸注。如本文中所使用，詞組「腸胃外投予(parenteral administration)」意指腸內及局部投予以外之投予模式（通常藉由注射），且包括但不限於靜脈內、肌內、動脈內、鞘內、淋巴內(intralymphatic)、病灶內、囊內、眶內、心內、皮內、腹膜內、經氣管(transtracheal)、皮下、表皮下(subcuticular)、關節內、囊下、蜘蛛膜下、脊椎內、硬膜外、及胸骨內注射及輸注、以及體內電穿孔。在一些實施例中，配方係經由非腸胃外途徑（例如，口服）來投予。其他非腸胃外途徑包括局部、上皮或黏膜投予途徑，例如，鼻內、陰道內、直腸、舌下、或局部。投予亦可執行例如一次、複數次、及/或在一或多個延長期間內。在一個實施例中，CAR T細胞治療係經由包含CAR T細胞之「輸注產物(infusion product)」投予。

用語「抗體(antibody)」(Ab)包括但不限於特異性結合至抗原之醣蛋白免疫球蛋白。大致上，抗體可包含由雙硫鍵所互連之至少兩個重(H)鏈及兩個輕(L)鏈、或其抗原結合分子。各H鏈包含重鏈可變區（在本文中縮寫為VH）及重鏈恆定區。重鏈恆定區包含三個恆定域，CH1、CH2、及CH3。各輕鏈包含輕鏈可變區（在本文中縮寫為VL）及輕鏈恆定區。輕鏈恆定區包含一個恆定域，CL。VH及VL區可進一步細分成稱為互補決定區(CDR)之高度可變區域，其間有稱為架構區(FR)之更具保留性區域。各VH及VL包含三個CDR及四個FR，以下列順序從胺基端排列到羧基端：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、及FR4。重鏈及輕鏈之可變區含有與抗原交互作用之結合域。Ab之恆定區可介導免疫球蛋白對宿主組織或因子之結合，包括免疫系統之各種細胞（例如，效應細胞）及典型補體系統之第一組分(C1q)。

抗體可包括例如單株抗體、重組生產之抗體、單特異性抗體、多特異性抗體（包括雙特異性抗體）、人類抗體、經工程改造抗體、人源化抗體、嵌合抗體、免疫球蛋白、合成抗體、包含兩個重鏈及兩個輕鏈分子之四聚體抗體、抗體輕鏈單體、抗體重鏈單體、抗體輕鏈二聚體、抗體重鏈二聚體、抗體輕鏈-抗體重鏈對、內抗體(intrabody)、抗體融合（在本文中有時稱為「抗體接合物(antibody conjugate)」)、異源接合物抗體、單域抗體、單價抗體、單鏈抗體或單鏈Fv (scFv)、駱駝化(camelized)抗體、親和抗體(affybody)、Fab片段、F(ab’)2片段、雙硫鍵連接之Fv (sdFv)、抗獨特型(anti-idiotypic)（抗Id）抗體（包括例如抗-抗Id抗體）、微抗體(minibody)、域抗體、合成抗體（在本文中有時稱為「抗體擬似物(antibody mimetic)」)、及任何上述者之抗原結合片段。在一些實施例中，本文所述之抗體係指多株抗體群。

「抗原結合分子(antigen binding molecule)」、「抗原結合部分(antigen binding portion)」、或「抗體片段(antibody fragment)」係指包含抗體之抗原結合部分（例如，CDR）的任何分子，該分子係衍生自該抗體。抗原結合分子可包括抗原互補決定區(CDR)。抗體片段之實例包括但不限於形成自抗原結合分子之Fab、Fab'、F(ab')2、及Fv片段、dAb、線性抗體、scFv抗體、及多特異性抗體。肽體(peptibody)（亦即，包含肽結合域之Fc融合分子）係合適抗原結合分子之另一個實例。在一些實施例中，抗原結合分子結合至腫瘤細胞上之抗原。在一些實施例中，抗原結合分子結合至涉及過度增生性疾病之細胞上的抗原或結合至病毒或細菌抗原。在一些實施例中，抗原結合分子結合至CD19。在進一步實施例中，抗原結合分子係特異性結合至抗原之抗體片段，包括一或多個其互補決定區(CDR)。在進一步實施例中，抗原結合分子係單鏈可變片段(scFv)。在一些實施例中，抗原結合分子包含親合性多聚體(avimer)或由其所組成。

「抗原」係指任何引起免疫反應或能夠由抗體或抗原結合分子所結合之分子。免疫反應可涉及抗體生產、或特定免疫機能健全細胞之活化、或兩者。所屬技術領域中具有通常知識者會輕易理解到，任何巨分子（包括實際上所有蛋白質或肽）皆可作為抗原。抗原可係內源表現的，亦即由基因體DNA表現，或可係重組表現的。抗原可對於某些組織（諸如癌細胞）具有特異性，或其可係廣泛表現的。此外，較大分子之片段可作為抗原。在一些實施例中，抗原係腫瘤抗原。

用語「中和(neutralizing)」係指結合至配體且防止或降低該配體之生物效應的抗原結合分子、scFv、抗體、或其片段。在一些實施例中，抗原結合分子、scFv、抗體、或其片段直接阻斷配體上之結合位點或另行透過間接方式改變配體結合之能力（諸如配體中之結構性或能量性改變）。在一些實施例中，抗原結合分子、scFv、抗體、或其片段防止其所結合之蛋白質執行生物功能。

用語「自體(autologous)」係指任何衍生自相同個體之材料，該材料之後會再重新引入至該個體。例如，本文中所述之經工程改造自體細胞療法(eACT™)方法涉及自患者收集淋巴球，接著將其工程改造以表現例如CAR建構體，然後再投予回至相同患者。

用語「同種異體(allogeneic)」係指衍生自一個個體之任何材料，接著將其引入相同物種之另一個體，例如同種異體T細胞移植。

在一個實施例中，CAR T細胞治療包括「西卡思羅治療」。「西卡思羅治療」係由以下所組成：單次輸注抗CD19 CAR轉導之自體T細胞，其係以2 x 10 ⁶個抗CD19 CAR T細胞/kg之目標劑量靜脈內投予。針對體重大於100 kg之對象，可投予2 x 10 ⁸個抗CD19 CAR T細胞之最大固定(flat)劑量。抗CD19 CAR T細胞係自體人類T細胞，其經工程改造以表現對CD19具有特異性之胞外單鏈可變片段(scFv)，該片段連接至胞內信號傳導部分，該胞內信號傳導部分包含來自串聯排列之CD28及CD3ζ (CD3-zeta)分子之信號傳導域，抗CD19 CAR載體建構體已在美國國家癌症研究所外科分部(NCI, IND 13871)設計、最佳化、及初步測試(Kochenderfer et al, J Immunother. 2009; 32(7):689-702; Kochenderfer et al, Blood. 2010;116(19):3875-86)。scFv係衍生自抗CD19單株抗體FMC63之可變區(Nicholson et al, Molecular Immunology. 1997;34(16-17):1157-65)。添加CD28共刺激分子之一部分，因為鼠類模型表明，此對於抗腫瘤效應及抗CD19 CAR T細胞之持續性係重要的(Kowolik et al, Cancer Res. 2006;66(22):10995-1004)。CD3ζ鏈之信號傳導域係用於T細胞活化。將此等片段選殖至基於鼠幹細胞病毒(MSGV1)之載體中，用以基因工程改造自體T細胞。CAR建構體係藉由反轉錄病毒載體轉導插入T細胞基因體中。簡言之，周邊血液單核細胞(peripheral blood mononuclear cell, PBMC)係藉由白血球分離術及Ficoll分離獲得。藉由在重組介白素2 (IL-2)存在下與抗CD3抗體培養來活化周邊血液單核細胞。將經刺激細胞用含有抗CD19 CAR基因之反轉錄病毒載體轉導，並在培養中增殖，以產生足夠的經工程改造T細胞用於投予。西卡思羅係對象特異性產品。

在一個實施例中，CAR T細胞治療包含KTE-X19，其係在美國及歐盟被核准用於治療復發性/難治性(R/R) MCL之自體抗CD19嵌合抗原受體(CAR) T細胞療法。（TECARTUS®（布萊奧妥）處方資訊。Kite Pharma, Inc; 2021；TECARTUS®（自體抗CD19轉導之CD3+細胞）產品特性之概述。Kite Pharma EU B.V.; 2021）。KTE-X19之製造程序相對於西卡思羅之製造程序進行修改，以透過CD4 ⁺/CD8 ⁺細胞之陽性富集來移除循環淋巴瘤細胞。

在一個實施例中，產品之特徵在於細胞組成。細胞可用針對CD3（泛T細胞標記）、CD14、CD19（B細胞標記）、CD45（泛白血球標記）、及CD56（活化及NK標記）之螢光接合抗體標示，並藉由流動式細胞測量術評估。細胞活力可使用活力染料（SYTOX近IR）之負染色評估。檢定之定量下限(lower limit of quantification, LLOQ)可係0.2%，且NK細胞及單核球之定量下限係5%。可判定NK細胞之百分比（NK細胞係CD45 ⁺、CD14 ^-、CD3 ^-、及CD56 ⁺；T細胞係CD45 ⁺、CD14 ^-、及CD3 ^-）。來自23批西卡思羅及97批KTE-X19之NK細胞之中位數百分比可分別係1.9%（範圍0.8%至3.2%）及0.1%（範圍0.0%至2.8%）。來自相同批次之西卡思羅及KTE-X19之CD3 ^-細胞雜質之中位數百分比可分別係2.4%（範圍0.9%至4.6%）及0.5%（範圍0.3%至3.9%）。KTE-X19（布萊奧妥，TECARTUS）及西卡思羅(YESCARTA)在細胞活力方面之結果可分別係≥ 72%及≥ 80%；在抗CD19 CAR表現方面之結果可分別係≥ 24%及≥ 15%；在IFN-γ生產方面可分別係≥ 190 pg/mL及≥ 520 pg/mL；且在CD3 ⁺細胞之百分比方面可分別係≥ 90%及≥ 85%。布萊奧妥可主要由CD3+ T細胞(99.3% ± 0.8%)構成，其可進一步劃分為CD4+ (37.9% ± 16.5%)及CD8+ (59.3% ±16.5%)亞群。

用語「轉導(transduction)」及「經轉導(transduced)」係指經由病毒載體將外部DNA引入至細胞中之程序（參見Jones等人，「Genetics: principles and analysis」，Boston: Jones & Bartlett Publ. (1998)）。在一些實施例中，載體係反轉錄病毒載體、DNA載體、RNA載體、腺病毒載體、桿狀病毒載體、艾司坦-巴爾(Epstein Barr)病毒載體、乳多泡病毒載體、牛痘病毒載體、單純疱疹病毒載體、腺病毒相關載體、慢病毒載體、或其任何組合。

「癌症(cancer)」係指一組廣泛的各種疾病，其特徵在於體內異常細胞不受控制的生長。不受調控的細胞分裂及生長會導致惡性腫瘤形成，惡性腫瘤會侵犯鄰近組織，且亦可能透過淋巴系統或血液流轉移至身體遠處部位。「癌症」或「癌症組織」可包括腫瘤。在本申請案中，用語癌症係與惡性疾病(malignancy)同義。可藉由本文所揭示之方法治療的癌症之實例包括但不限於免疫系統之癌症，包括淋巴瘤、白血病、骨髓瘤、及其他白血球惡性疾病。在一些實施例中，本文所揭示之方法可用於縮小衍生自例如下列之腫瘤的腫瘤大小：骨癌、胰臟癌、皮膚癌、頭頸癌、皮膚或眼內惡性黑色素瘤、子宮癌、卵巢癌、直腸癌、肛門部位癌、胃癌、睪丸癌、子宮癌、輸卵管癌、子宮內膜癌、子宮頸癌、陰道癌、外陰癌、多發性骨髓瘤、霍奇金氏病、非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)、原發性縱膈腔大B細胞淋巴瘤(PMBC)、瀰漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)、濾泡淋巴瘤(FL)、變化型濾泡淋巴瘤、脾邊緣區型淋巴瘤(SMZL)、食道癌、小腸癌、內分泌系統癌、甲狀腺癌、副甲狀腺癌、腎上腺癌、軟組織肉瘤、尿道癌、陰莖癌、慢性或急性白血病、急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、急性淋巴母細胞白血病(ALL)（包括非T細胞ALL）、慢性淋巴球性白血病(CLL)、兒童實體腫瘤、淋巴球性淋巴瘤、膀胱癌、腎臟或輸尿管癌、腎盂癌、中樞神經系統(CNS)贅瘤、原發性CNS淋巴瘤、腫瘤血管生成、脊柱腫瘤、腦幹神經膠質瘤、垂體腺瘤、卡波西氏肉瘤(Kaposi's sarcoma)、表皮樣癌、鱗狀細胞癌、T細胞淋巴瘤、環境誘導之癌症（包括由石棉誘導者）、其他B細胞惡性疾病、及該等癌症之組合。在一些實施例中，癌症係多發性骨髓瘤。在一些實施例中，癌症係NHL。特定癌症可能對化學或放射療法有反應或該癌症可能係難治性的。難治性癌症係指無法藉由外科介入來處理之癌症，並且該癌症一開始對化學或放射療法沒有反應或該癌症隨時間過去變得沒有反應。

如本文中所使用，「抗腫瘤效應(anti-tumor effect)」係指可呈現為腫瘤體積縮小、腫瘤細胞數目減少、腫瘤細胞增生減少、轉移數目減少、整體或無進展存活期增加、預期壽命增加、或與腫瘤相關之各種生理症狀改善的生物效應。抗腫瘤效應亦可指預防腫瘤發生，例如疫苗。

如本文中所使用，「細胞介素(cytokine)」係指一個細胞回應於與特異性抗原之接觸而釋出的非抗體蛋白質，其中該細胞介素與第二個細胞交互作用而介導該第二個細胞中之反應。如本文中所使用，「細胞介素」意欲指由一個細胞群釋放且作為細胞間介導物作用於另一細胞之蛋白質。細胞介素可由細胞所內源表現或投予至對象。細胞介素可由免疫細胞（包括巨噬細胞、B細胞、T細胞、及肥大細胞）釋放而傳播免疫反應。細胞介素可在受體細胞中誘導各種反應。細胞介素可包括體內恆定細胞介素、趨化因子、促發炎細胞介素、效應物、及急性期蛋白。例如，體內恆定細胞介素（包括介白素(IL) 7及IL-15）會促進免疫細胞存活及增生，而促發炎細胞介素可促進發炎反應。體內恆定細胞介素之實例包括但不限於IL-2、IL-4、IL-5、IL-7、IL-10、IL-12p40、IL-12p70、IL-15、及干擾素(IFN) γ。促發炎細胞介素之實例包括但不限於IL-1a、IL-1b、IL-6、IL-13、IL-17a、腫瘤壞死因子(TNF)-α、TNF-β、纖維母細胞生長因子(FGF) 2、顆粒球巨噬細胞群落刺激因子(GM-CSF)、可溶細胞間黏附分子1 (sICAM-1)、可溶血管黏附分子1 (sVCAM-1)、血管內皮生長因子(VEGF)、VEGF-C、VEGF-D、及胎盤生長因子(PLGF)。效應物之實例包括但不限於顆粒酶A、顆粒酶B、可溶性Fas配體(sFasL)、及穿孔素。急性期蛋白之實例包括但不限於C反應蛋白(CRP)及血清類澱粉蛋白A (SAA)。

「趨化因子(chemokine)」係一種細胞介素類型，其介導細胞趨化性或方向性移動。趨化因子之實例包括但不限於IL-8、IL-16、伊紅趨素、伊紅趨素-3、巨噬細胞衍生之趨化因子（MDC或CCL22）、單核球趨化蛋白1（MCP-1或CCL2）、MCP-4、巨噬細胞炎性蛋白1α (MIP-1α, MIP-1a)、MIP-1β (MIP-1b)、γ誘導蛋白10 (IP-10)、及胸腺及活化調節趨化因子（TARC或CCL17）。

如本文中所使用，「嵌合受體(chimeric receptor)」係指經工程改造表面表現之分子，其能夠辨識特定分子。包含能夠與特定腫瘤抗原交互作用之結合域的嵌合抗原受體(CAR)及經工程改造T細胞受體(TCR)讓T細胞能夠靶向及殺滅表現該特定腫瘤抗原之癌細胞。在一個實施例中，T細胞治療係基於經工程改造以表現嵌合抗原受體(CAR)或T細胞受體(TCR)之T細胞，其包含(i)抗原結合分子、(ii)共刺激域、及(iii)活化域。共刺激域可包含胞外域、跨膜域、及胞內域，其中胞外域包含可經截短之鉸鏈域。

治療劑（例如經工程改造CAR T細胞、小分子、說明書中所述之「藥劑」）之「治療有效量(therapeutically effective amount)」、「有效劑量(effective dose)」、「有效量(effective amount)」、或「治療有效劑量(therapeutically effective dosage)」係當單獨使用或與其他治療劑組合使用時保護對象免於疾病發作或促進疾病消退之任何量，其係藉由疾病症狀嚴重性降低、無疾病症狀期間之頻率及持續時間增加、或預防因罹患疾病之損傷或失能而獲得證明。此類用語可互換使用。治療劑促進疾病消退之能力可使用所屬技術領域中具有通常知識者已知之各種方法評估（諸如在臨床試驗期間之人類對象中、在預測於人類中功效之動物模型系統中），或藉由檢定藥劑在體外檢定中之活性評估。可藉由在已知的體外或體內（例如動物模型）系統中測試來憑經驗判定治療有效量及劑量方案。

用語「組合(combination)」係指呈一個劑量單位形式之固定組合或組合投予，其中本揭露之化合物及組合夥伴（例如以下所解釋之另一種藥物，亦稱為「治療劑」或「藥劑」）可同時獨立投予或在時間間隔內單獨投予，尤其在此等時間間隔使組合夥伴顯示協作（例如協同）效應之情況下。單一組分可包裝於套組中或單獨包裝。組分（例如粉末或液體）中之一或兩者可在投予之前回溶或稀釋至所欲劑量。如本文中所使用，用語「共投予(co-administration)」或「組合投予(combined administration)」或類似者意指涵蓋向有需要之單一對象（例如患者）投予所選組合夥伴，且意欲包括其中藥劑不一定藉由相同投予途徑或同時投予的治療方案。

用語「產物(product)」或「輸注產物(infusion product)」在本文中可互換使用，且係指向有需要之對象投予的T細胞組成物。一般而言，在CAR T細胞療法中，T細胞組成物係作為輸注產物投予。

如本文中所使用，用語「淋巴球(lymphocyte)」包括自然殺手(NK)細胞、T細胞、或B細胞。NK細胞係一種細胞毒性(cytotoxic)淋巴球類型，其代表先天免疫系統之主要組分。NK細胞會除去腫瘤及受病毒感染之細胞。其透過細胞凋亡或程式性細胞死亡之程序發揮作用。其等之所以稱為「自然殺手」是因為不需要活化即可殺滅細胞。T細胞在細胞介導之免疫性（無抗體涉及）中扮演主要角色。其T細胞受體(TCR)是自其他淋巴球類型使自身分化出來。胸腺（免疫系統之特化器官）主要負責T細胞之成熟。T細胞有六種類型，即：輔助T細胞（例如CD4+細胞）、細胞毒性T細胞（亦稱為TC、細胞毒性T淋巴球、CTL、T殺手細胞、細胞溶解T細胞、CD8+ T細胞、或殺手T細胞）、、記憶T細胞（(i)幹記憶TSCM細胞（如初始細胞）係CD45RO−、CCR7+、CD45RA+、CD62L+（L-選擇素）、CD27+、CD28+、及IL-7Rα+，但其亦表現大量的CD95、IL-2Rβ、CXCR3、及LFA-1，且顯示許多記憶細胞特有之功能屬性）；(ii)中央記憶TCM細胞表現L-選擇素及CCR7，其等分泌IL-2但不分泌IFNγ或IL-4；及(iii)效應記憶TEM細胞，然而其不表現L-選擇素或CCR7，但生產效應細胞介素（如IFNγ及IL-4））、調節T細胞（Treg、抑制性T細胞、或CD4+CD25+調節T細胞）、自然殺手T細胞(NKT)、及γδ T細胞。在另一方面，B細胞在體液免疫性（有抗體涉及）中扮演主要角色。其製造抗體及抗原且扮演抗原呈現細胞(APC)之角色，且在由抗原交互作用活化之後轉變成記憶B細胞。在哺乳動物中，未成熟B細胞係在骨髓中形成，因而得到其名稱。

在本揭露之上下文中，用語「TN」、「初始樣T (T naïve-like)」、及CCR7+CD45RA+實際上係指更像幹細胞樣記憶細胞而非典型(canonical)初始T細胞之細胞。因此，實例及申請專利範圍中提及之所有T _N係指僅藉由其CCR7+CD45RA+細胞之特徵實驗選擇之細胞，且應如此解釋。本揭露之上下文中之其較佳名稱係幹細胞樣記憶細胞，但其應稱為CCR7+CD45RA+細胞。對幹細胞樣記憶細胞的進一步表徵可例如使用以下中所述之方法進行：Arihara Y, Jacobsen CA, Armand P, et al. Journal for ImmunoTherapy of Cancer. 2019;7(1):P210。

用語「經基因工程改造(genetically engineered)」或「經工程改造(engineered)」係指修飾細胞基因體之方法，其包括但不限於缺失編碼或非編碼區或其部分、或插入編碼區或其部分。在一些實施例中，經修飾之細胞係淋巴球（例如T細胞），其可獲自患者或捐贈者。細胞可經修飾以表現外源建構體，諸如例如嵌合抗原受體(CAR)或T細胞受體(TCR)，其等係結合至細胞基因體中。

「免疫反應(immune response)」係指免疫系統細胞（例如，T淋巴球、B淋巴球、自然殺手(NK)細胞、巨噬細胞、嗜酸性球、肥大細胞、樹突細胞、及嗜中性球）及由任何這些細胞或肝臟所生產之可溶巨分子（包括Ab、細胞介素、及補體）的作用，其會導致對脊椎動物體內之侵犯病原體、受病原體所感染之細胞或組織、癌性或其他異常細胞、或（在自體性或病理性發炎之情況下）正常人類細胞或組織的選擇性靶向、結合、損傷、破壞、及/或消除。

用語「免疫療法(immunotherapy)」係指罹患疾病、或有感染疾病或遭受疾病再發之風險的對象藉由包含誘導、增強、抑制、或以其他方式修改免疫反應之方法的治療。免疫療法之實例包括但不限於T細胞療法。T細胞療法可包括過繼性T細胞療法、腫瘤浸潤淋巴球(TIL)免疫療法、自體細胞療法、經工程改造自體細胞療法(eACT™)、及同種異體T細胞移植。然而，所屬技術領域中具有通常知識者會認知到，本文中所揭示之調理方法會增強任何移植T細胞療法之有效性。T細胞療法之實例係描述於美國專利公開案第2014/0154228及2002/0006409號、美國專利第7,741,465號、美國專利第6,319,494號、美國專利第5,728,388號、及國際專利公開案第WO 2008/081035號。在一些實施例中，免疫療法包含CAR T細胞治療。在一些實施例中，CAR T細胞治療產品係經由輸注投予。

免疫療法之T細胞可來自所屬技術領域中已知之任何來源。例如，T細胞可體外分化自造血幹細胞群，或T細胞可獲自對象。T細胞可得自例如周邊血液單核細胞(PBMC)、骨髓、淋巴結組織、臍帶血、胸腺組織、來自感染部位之組織、腹水、胸膜積水、脾臟組織、及腫瘤。此外，T細胞可衍生自所屬技術領域中可得之一或多種T細胞系。T細胞亦可得自使用熟習技藝人士已知之多種技術（諸如FICOLL™分離及/或血球分離術）收集自對象的血液單元。用於T細胞療法之額外單離T細胞方法係揭示於美國專利公開案第2013/0287748號，其全文係以引用方式併入本文中。

用語「經工程改造自體細胞療法(engineered Autologous Cell Therapy)」或「eACT™」（亦稱為過繼性細胞轉移）係一種程序，藉此收集患者自身T細胞隨後對其進行基因改造以辨識並靶向在一或多種特定腫瘤細胞或惡性疾病之細胞表面上表現的一或多種抗原。T細胞可經工程改造以表現例如嵌合抗原受體(CAR)。CAR陽性(+) T細胞經工程改造以表現對連接至胞內信號傳導部分（包含至少一個共刺激域及至少一個活化域）之特定腫瘤抗原具有特異性的胞外單鏈可變片段(scFv)。CAR scFv可經設計以靶向例如CD19，其係由B細胞譜系中之細胞（包括所有正常B細胞及B細胞惡性疾病）表現的跨膜蛋白，包括但不限於非特指型之瀰漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)、原發性縱膈腔大B細胞淋巴瘤、高級別B細胞淋巴瘤、及由濾泡淋巴瘤、NHL、CLL、及非T細胞ALL引起之DLBCL。實例CAR T細胞療法及建構體係描述於美國專利公開案第2013/0287748、2014/0227237、2014/0099309、及2014/0050708號，並且這些參考文獻之全文係以引用方式併入本文中。

如本文中所使用，「患者(patient)」或「對象(subject)」包括任何罹患癌症（例如淋巴瘤或白血病）之人類。用語「對象(subject)」及「患者」在本文中可互換使用。

如本文中所使用，用語「體外細胞(in vitro cell)」係指任何離體培養之細胞。特定而言，體外細胞可包括T細胞。用語「體內(in vivo)」意指在患者內。

用語「肽(peptide)」、「多肽(polypeptide)」、及「蛋白/蛋白質(protein)」可互換使用，並且係指包含由肽鍵所共價連接之胺基酸殘基的化合物。蛋白質或肽含有至少兩個胺基酸，並且對於可包含蛋白質序列或肽序列之胺基酸數目上限沒有限制。多肽包括包含彼此由肽鍵所接合之二或更多個胺基酸的任何肽或蛋白質。如本文中所使用，該用語係同時指短鏈（在所屬技術領域中亦經常稱為例如肽、寡肽、及寡聚物）及長鏈（在所屬技術領域中通常稱為蛋白質，而蛋白質有許多類型）。「多肽」包括例如生物活性片段、實質上同源之多肽、寡肽、同二聚體、異二聚體、多肽之變體、經修飾多肽、衍生物、類似物、融合蛋白等。多肽包括自然肽、重組肽、合成肽、或其組合。

如本文中所使用，「刺激(stimulation)」係指由刺激分子與其同族配體之結合所誘導的初級反應，其中該結合介導信號轉導事件。「刺激分子(stimulatory molecule)」係T細胞上之分子（例如T細胞受體(TCR)/CD3複合物），其與抗原呈現T細胞上存在之同族刺激配體特異性結合。「刺激配體(stimulatory ligand)」係當存在於抗原呈現細胞（例如，APC、樹突細胞、B細胞、及類似者）上時可與T細胞上之刺激分子特異性結合的配體，藉以介導由該T細胞所致之初級反應，包括但不限於活化、起始免疫反應、增生、及類似者。刺激配體包括但不限於抗CD3抗體、裝載有肽之MHC第I型分子、超級促效劑抗CD2抗體、及超級促效劑抗CD28抗體。

如本文中所使用，「共刺激信號(costimulatory signal)」係指與初級信號（諸如TCR/CD3連接）組合時會導致T細胞反應之信號，諸如但不限於關鍵分子之增生及/或向上調控或向下調控。

如本文中所使用，「共刺激配體(costimulatory ligand)」包括抗原呈現細胞上特異性結合T細胞上之同族共刺激分子的分子。共刺激配體之結合提供介導T細胞反應之信號，包括但不限於增生、活化、分化、及類似者。除了刺激分子所提供之初級信號外，共刺激配體還會藉由結合T細胞受體(TCR)/CD3複合物與裝載有肽之主要組織相容性複合體(MHC)分子而誘導信號。共刺激配體可包括但不限於3/TR6、4-1BB配體、結合鐸(Toll)配體受體之促效劑或抗體、B7-1 (CD80)、B7-2 (CD86)、CD30配體、CD40、CD7、CD70、CD83、疱疹病毒進入介導劑(HVEM)、人類白血球抗原G (HLA-G)、ILT4、免疫球蛋白樣轉錄本(ILT) 3、可誘導共刺激配體(ICOS-L)、細胞間黏附分子(ICAM)、與B7-H3特異性結合之配體、淋巴毒素β受體、MHC第I型鏈相關蛋白A (MICA)、MHC第I型鏈相關蛋白B (MICB)、OX40配體、PD-L2、或程式性死亡(PD) L1。在某些實施例中，共刺激配體包括但不限於與T細胞上存在之共刺激分子特異性結合的抗體，諸如但不限於4-1BB、B7-H3、CD2、CD27、CD28、CD30、CD40、CD7、ICOS、與CD83特異性結合之配體、淋巴球功能相關抗原-1 (LFA-1)、自然殺手細胞受體C (NKG2C)、OX40、PD-1、或腫瘤壞死因子超家族成員14（TNFSF14或LIGHT）。

「共刺激分子(costimulatory molecule)」係與共刺激配體特異性結合之T細胞上之同源結合夥伴(partner)，從而介導T細胞之共刺激反應，諸如但不限於增生。共刺激分子包括但不限於4-1BB/CD137、B7-H3、BAFFR、BLAME (SLAMF8)、BTLA、CD33、CD45、CD100 (SEMA4D)、CD103、CD134、CD137、CD154、CD16、CD160 (BY55)、CD18、CD19、CD19a、CD2、CD22、CD247、CD27、CD276 (B7-H3)、CD28、CD29、CD3（α；β；δ；ε；γ；ζ）、CD30、CD37、CD4、CD4、CD40、CD49a、CD49D、CD49f、CD5、CD64、CD69、CD7、CD80、CD83配體、CD84、CD86、CD8α、CD8β、CD9、CD96 (Tactile)、CD11a、CD11b、CD11c、CD11d、CDS、CEACAM1、CRT AM、DAP-10、DNAM1 (CD226)、Fcγ受體、GADS、GITR、HVEM (LIGHTR)、IA4、ICAM-1、ICOS、Ig α (CD79a)、IL2R β、IL2R γ、IL7R α、整合素、ITGA4、ITGA6、ITGAD、ITGAE、ITGAL、ITGAM、ITGAX、ITGB2、ITGB7、ITGBl、KIRDS2、LAT、LFA-1、LIGHT（腫瘤壞死因子超家族成員14；TNFSF14）、LTBR、Ly9 (CD229)、淋巴球功能相關抗原-1 (LFA-1 (CD11a/CD18)、MHC第I型分子、NKG2C、NKG2D、NKp30、NKp44、NKp46、NKp80 (KLRF1)、OX40、PAG/Cbp、PD-1、PSGL1、SELPLG (CD162)、信號傳導淋巴球性活化分子、SLAM (SLAMF1; CD150; IPO-3)、SLAMF4 (CD244; 2B4)、SLAMF6 (NTB-A; Lyl08)、SLAMF7、SLP-76、TNF、TNFr、TNFR2、鐸配體受體、TRANCE/RANKL、VLA1、或VLA-6、或其片段、截短、或組合。

用語「降低(reducing)」及「減少(decreasing)」在本文中可互換使用，並且指示任何小於原始者之改變。「降低」及「減少」係相對用語，需要測量前後之間的比較。「降低」及「減少」包括完全耗盡。同樣地，用語「增加(increasing)」指示高於原始值之任何改變。「增加」、「較高(higher)」、及「較低(lower)」係相對用語，需要測量前後之間及/或參考標準之間的比較。在一些實施例中，參考值係得自一般群體者，其可係一般患者群體。在一些實施例中，參考值來自一般患者群體之四分位數分析(quartile analysis)。

對象之「治療(treatment/treating)」係指對該對象執行之任何類型的介入或程序或向該對象投予活性劑，其中目標為逆轉、減輕、改善、抑制、減緩、或預防與疾病相關之症狀、併發症或病況、或生物化學指標的發作、進展、發展、嚴重性、或再發。在一些實施例中，「治療」包括部分緩解。在另一實施例中，「治療」包括完全緩解。在一些實施例中，治療可係疾病預防性的，在此情況下，治療係在觀察到病況之任何症狀之前投予。如本文所使用，用語「疾病預防(prophylaxis)」意指對疾病或疾病狀態之預防或保護性治療。預防症狀、疾病、或疾病狀態可包括降低（例如減輕）疾病或疾病狀態之一或多種症狀，其係例如相對於參考水平（例如不投予治療之類似對象中之（多種）症狀）。預防亦可包括延緩疾病或疾病狀態之一或多種症狀之發作，其係例如相對於參考水平（例如在不投予治療之類似對象中（多種）症狀之發作）。在實施例中，疾病係本文所述之疾病。在一些實施例中，疾病係癌症。在一些實施例中，疾病狀態係CRS或神經毒性。在一些實施例中，改善或成功治療之指標包括判定未能在毒性分級量表（例如CRS或神經毒性分級量表）上表現出相關得分，諸如小於3之得分；或如本文所論述之分級量表上的分級或嚴重性之變化，諸如自4分變化至3分、或自4分變化至2、1、或0分。

如本文中所使用，用語「多功能T細胞(polyfunctional T cells)」係指每細胞共分泌至少兩種來自預指定檢測組合(panel)之蛋白質且與所生產之各蛋白質的量配合之細胞（亦即，所分泌蛋白質數量及以何強度分泌之組合）。在一些實施例中，單細胞功能概況係針對各個可評估的經工程改造T細胞群判定。概況可分類為效應組（顆粒酶B、IFN-γ、MIP-1α、穿孔素、TNF-α、TNF-β）、刺激組（GM-CSF、IL-2、IL-5、IL-7、IL-8、IL-9、IL-12、IL-15、IL-21）、調節組（IL-4、IL-10、IL-13、IL-22、TGF-β1、sCD137、sCD40L）、趨化組（CCL-11、IP-10、MIP-1β、RANTES）、及發炎組（IL-1b、IL-6、IL-17A、IL-17F、MCP-1、MCP-4）。在一些實施例中，各細胞之功能概況使得能夠計算其他度量，包括各樣本根據細胞多功能性之細分（亦即相對於非分泌或單功能細胞，分泌多種細胞介素之細胞的百分比）、及樣本依功能組之細分（亦即樣本中之細胞分泌哪些單功能及多功能組、及其等之頻率）。

如本文所使用，「骨髓細胞(myeloid cell)」係白血球之子群，其包括顆粒球、單核球、巨噬細胞、及樹突細胞。

如本文中所使用，用語「四分位數(quartile)」係統計用語，其描述基於數據值及其等與整組觀察結果之比較來將觀察結果區分為四個定義之區段。

如本文中所使用，用語「研究第0天(Study day 0)」係定義為對象接受第一次CAR T細胞輸注當天。研究第0天前一天將是研究第-1天。招募後及研究第-1天前之任何天將依序給予負整數值。

如本文中所使用，用語「持久反應(durable response)」係指在CAR T細胞輸注後在至少一年追蹤時仍有持續反應之對象。在一個實施例中，「反應持續時間(duration of response)」(DOR)僅為經歷客觀反應之對象定義，且係自第一次客觀反應至依據(Cheson et al, 2014)之疾病進展或疾病相關死亡（以先到者為準）的時間。

如本文中所使用，用語「復發(relapse)」係指達到完全反應(CR)或部分反應(PR)且隨後經歷疾病進展之對象。

如本文中所使用，用語「無反應(non-response)」係指在CAR T細胞輸注後從未經歷CR或PR之對象。

如本文中所使用，用語「客觀反應(objective response)」係指完全反應(CR)、部分反應(PR)、或無反應。其可依據修改之IWG惡性淋巴瘤反應標準評估(Cheson et al., J Clin Oncol. 2007;25(5):579-86)。

如本文中所使用，用語「完全反應(complete response)」係指疾病完全解除，其變為無法藉由放射造影及臨床實驗室評估來偵測到。在給定時間無癌症證據。

如本文中所使用，用語「部分反應(partial response)」係指腫瘤有大於30%之縮小但未完全解除。

如本文中所使用，「客觀反應率」(objective response rate, ORR)係依據國際工作小組(International Working Group, IWG) 2007標準判定(Cheson et al. J Clin Oncol. 2007; 25(5):579-86)。

如本文中所使用，「無進展存活期(progression-free survival, PFS)」可定義為自T細胞輸注日期至疾病進展或因任何原因死亡之日期的時間。進展係依據由IWG標準定義之試驗主持人對反應之評估來定義(Cheson et al., J Clin Oncol. 2007; 25(5):579-86)。

用語「整體存活期(overall survival, OS)」可定義為自T細胞輸注日期至因任何原因死亡之日期的時間。

如本文中所使用，CAR T細胞在周邊血液中之擴增及持續性可藉由qPCR分析監測，例如使用針對CAR之scFv部分（例如CD19結合域之重鏈）及其鉸鏈/CD28跨膜域的CAR特異性引子。替代地，其可藉由計數CAR細胞/血液體積單位來測量。

如本文中所使用，針對CAR T細胞之排定抽血可在CAR T細胞輸注前、第7天、第2週（第14天）、第4週（第28天）、第3個月（第90天）、第6個月（第180天）、第12個月（第360天）、及第24個月（第720天）。

如本文中所使用，「CAR T細胞峰值(peak of CAR T cell)」係定義為第0天後所達到的血清中CAR+ PBMC/µL之最大絕對數目。

如本文中所使用，「到達CAR T細胞峰值之時間」係定義為第0天至達到CAR T細胞峰值當天的天數。

如本文中所使用，「第0天至第28天CAR T細胞水平之曲線下面積(AUC)」係定義為CAR T細胞水平對第0天至第28天之排定訪視作圖中的曲線下面積。此AUC測量CAR T細胞隨時間之總水平。

如本文中所使用，針對細胞介素之排定抽血係在調理化學療法前或當天（第-5天）、第0天、第1天、第3天、第5天、第7天、每隔一天（如果有的話透過住院）、第2週（第14天）、及第4週（第28天）。

如本文中所使用，細胞介素之「基線(baseline)」係定義為調理化學療法前測量的最後一次值。

如本文中所使用，在第X天相對於基線之倍數變化係定義為

如本文中所使用，「基線後細胞介素峰值(peak of cytokine post baseline)」係定義為在基線（第-5天）後至至多第28天所達到之血清中最高細胞介素水平。

如本文中所使用，CAR T細胞輸注後的「到達細胞介素峰值之時間(time to peak of cytokine)」係定義為第0天至達到細胞介素之峰值當天的天數。

如本文中所使用，第-5天至第28天「細胞介素水平之曲線下面積(AUC)」係定義為細胞介素水平對第-5天至第28天之排定訪視作圖中的曲線下面積。此AUC測量細胞介素隨時間之總水平。假使細胞介素及CAR+ T細胞係在某些離散時間點測量，則可使用梯形法則估計AUC。

如本文中所使用，治療後出現之不良事件(treatment-emergent adverse event, TEAE)係定義為在第一劑量之調理化學療法時或之後發生的不良事件(adverse event, AE)。不良事件可用藥事管理的醫學詞典(Medical Dictionary for Regulatory Activities, MedDRA)第22.0版編碼，並使用美國國家癌症研究所(National Cancer Institute, NCI)不良事件通用術語標準(Common Terminology Criteria for Adverse Events, CTCAE)第4.03版分級。細胞介素釋放症候群(Cytokine Release Syndrome, CRS)事件可依據Lee及其同事在症候群水平上進行分級(Lee et al, 2014 Blood. 2014; 124(2):188-95。個別CRS症狀可依據CTCAE 4.03分級。神經性事件可用基於與CAR T免疫療法相關之已知神經毒性的搜尋策略來識別，如描述於例如Topp, MS et al. Lancet Oncology. 2015; 16(1):57-66。

本揭露之各種態樣係進一步詳細描述於以下小節。治療前屬性

血球分離術及免疫細胞（在此亦稱為經工程改造細胞，諸如T細胞）之治療前屬性及自患者樣本測量之患者免疫因子可用於評估臨床結果（包括反應及毒性）之機率。與臨床結果相關之屬性可係腫瘤相關參數（例如腫瘤負荷量、作為缺氧/細胞死亡標記之血清LDH、與腫瘤負荷量相關之發炎標記、及骨髓細胞活性）、T細胞屬性（例如T細胞合適性、功能性（特別是T1相關IFNγ生產）、及輸注之CD8 T細胞總數目）、及藉由早期時間點之血液中峰值CAR T細胞水平測量之CAR T細胞移植。

自T細胞屬性及患者治療前屬性推斷之資訊可用以判定、精進、或製備適用於治療惡性疾病（例如癌症）之治療有效劑量。此外，一些T細胞屬性及患者治療前屬性可用以判定患者在用經工程改造之嵌合抗原受體(CAR)免疫療法治療後是否會發展不良事件（例如神經毒性(NT)、細胞介素釋放症候群(CRS)）。因此，可判定有效的不良事件管理策略（例如，基於一或多個屬性之測得水平，投予托珠單抗、皮質類固醇療法、或用於毒性預防之抗癲癇藥物）。

在一些實施例中，治療前屬性係包含一或多種嵌合抗原受體之經工程改造T細胞之屬性。在一些實施例中，治療前屬性係T細胞轉導率、主要T細胞表型、CAR T細胞及T細胞亞群之數目、CAR T細胞之合適性、T細胞功能性、T細胞多功能性、分化的CAR+CD8+ T細胞之數目、CCR7+CD45RA+ T細胞之數目、CD4/CD8比率、共培養中之IFN-γ。

在一些實施例中，治療前屬性係自獲自患者（例如腦脊髓液(cerebrospinal fluid, CSF)、血液、血清、或組織活體組織切片）之樣本測量。在一些實施例中，一或多個治療前屬性係腫瘤負荷量、IL-6水平、或LDH水平。 T細胞合適性

在一些實施例中，固有細胞合適性係基於CAR T細胞在體外非特異性刺激期間擴增的能力（例如較短倍增時間）、CAR T細胞之分化狀態（有利的稚幼(juvenile)表型）、CAR T細胞群中之特化CAR T細胞亞群水平（例如CD8及初始樣CD8細胞（例如CD8+ CCR7+ CD45RA+ T細胞）在輸注產物中之數目）、及體內CAR T細胞擴增率來評估。

在一個實施例中，T細胞合適性係細胞快速擴增之能力。在經工程改造T細胞之背景下，在一個實施例中，T細胞合適性係經工程改造T細胞群在治療前擴增之速度的量度。如本文中所述，T細胞合適性係與臨床結果相關的經工程改造T細胞之屬性。在一些實施例中，T細胞合適性係藉由倍增時間或擴增率來測量。以製造程序期間之T細胞群倍增時間(DT)測量的T細胞「合適性」之例示性推導係顯示於下。

持續時間可定義為總製造時程減去三天（基本上是產物細胞在轉導後且在採集及冷凍保存之前的培養天數）。重組IL-2（在用例如抗CD3抗體非特異性刺激後）可用於驅使多株T細胞擴增朝向達到目標劑量。DT越短，經工程改造T細胞合適性越高。體外擴增率可使用下式來計算。擴增率 = ln(2)/倍增時間在上述情況下，擴增率係以「比率/天」或「/天」之單位來提供。

在一些實施例中，體內擴增率係藉由計數CAR細胞/血液體積單位來測量。在一些實施例中，體內擴增率係藉由CAR基因拷貝之數目/宿主DNA之µg來測量。在一些實施例中，體內擴增率係藉由計數CAR細胞/血液體積單位來測量。

如本文中所述，周邊血液中之較高CAR T細胞峰值擴增（通常在CAR T細胞輸注後2週內發生）可能與客觀反應及持久反應（定義為持續反應，最少追蹤1年）兩者皆相關。血液中之CAR T細胞峰值數目與反應相關。前28天內之累積CAR T細胞水平（如在血液中藉由曲線下面積(AUC)所測量）亦可與對療法之較佳客觀及持久反應相關。在一些實施例中，CAR T細胞水平係藉由計數每單位血液體積之CAR T細胞數目計算。在一個實施例中，周邊血液中之較高CAR T細胞峰值擴增意指峰值擴增值落在較高四分位數內。在一些實施例中，體內擴增率係藉由計數CAR細胞/血液體積單位來測量。在一些實施例中，體內擴增率係藉由CAR基因拷貝之數目/宿主DNA之µg來測量。

如本文中所述，治療前測量之固有T細胞擴增能力（如由產物倍增時間所測量）係產物T細胞合適性之主要屬性。相對於其他產物特性，DT與最終輸注袋中T細胞分化亞群之頻率最強烈相關。具體而言，DT與效應記憶T (TEM)細胞之頻率正相關且與初始樣T (TN)細胞之頻率負相關。在一個實施例中（例如西卡思羅），識別為CCR7+CD45RA+細胞之T _N細胞實際上係幹細胞樣記憶細胞而非典型初始T細胞。如本文中所述，基線腫瘤負荷量與最終輸注產物中之分化表型正相關。如本文中所述，產物組成及臨床性能與患者之治療前免疫狀態相關。因此，在一個實施例中，本揭露提供一種用CAR T細胞治療降低治療後腫瘤負荷量之方法，其包含投予輸注產物，該輸注產物包含相對於參考值在輸注產物中增加頻率的初始樣T (TN)細胞。在另一實施例中，本揭露提供一種預測或估計最終輸注產物之分化表型的方法，其包含測量患者中之基線腫瘤負荷量以獲得一值、及基於該值評估或估計分化表型。在一個實施例中，措施進一步包含基於該值製備最終產物中有效劑量的CAR T細胞。 T細胞表型

如本文所述，製造起始材料（血球分離術）中之T細胞表型可與T細胞合適性(DT)相關。似Tn及Tcm細胞（CCR7+細胞）之總%係與DT反向相關。Tem (CCR7- CD45RA-)細胞%係與DT直接相關。因此，在一些實施例中，治療前屬性係似Tn及Tcm細胞%。在一些實施例中，似Tn及Tcm細胞%係藉由CCR7+細胞百分比來判定。在一些實施例中，CCR7+細胞百分比係藉由流動式細胞測量術來測量。

在一些實施例中，治療前屬性係Tem (CCR7- CD45RA-)細胞%。在一些實施例中，Tem細胞%係藉由CCR7- CD45RA-細胞百分比來判定。在一些實施例中，CCR7- CD45RA-細胞百分比係藉由流動式細胞測量術來測量。

如本文所述，血球分離術產物中之效應記憶T細胞比例越大（在總CD3+ T細胞或CD4及CD8亞群內），產物倍增時間越長。如本文所述，起始材料中之T細胞表型越稚幼，則產物T細胞合適性越佳。如本文所述，CD27+CD28+ T _N細胞（其代表表現共刺激分子之T _N細胞免疫機能健全亞群）與產物倍增時間正相關。如本文所述，在血球分離術產物中相對於最終產物表型，所有主要表型組之間有直接相關性，包括CD3、CD4、及CD8亞群中由分化標記定義之T細胞亞群比例。如本文所述，具有CD25 ^hiCD4表現之T細胞（可能代表血球分離術材料中之調節T細胞）比例與產物中之CD8 T細胞輸出負相關。如本文所述，CAR T細胞治療後之腫瘤負荷量係與最終產物之分化表型正相關。 T1功能性

經工程改造T細胞可藉由其免疫功能特徵表徵。本揭露之方法提供測量離體細胞介素生產之水平。在一些實施例中，細胞介素係選自由下列所組成之群組：IFNγ、TNFa、IL-12、MIP1β、MIP1α、IL-2、IL-4、IL-5、及IL-13。在一些實施例中，T細胞功能性係藉由Th1細胞介素水平測量。

在一些實施例中，Th1細胞介素係選自由IFNγ、TNFa、及IL-12所組成之群組。在一些實施例中，T細胞功能性係藉由IFNγ生產水平測量。在一些實施例中，過量T細胞IFNγ（治療前屬性）及治療後T1活性係可用以判定患者是否將發展不良事件（例如神經毒性）之屬性。在一些實施例中，藉由在投予經工程改造CAR T細胞之前共培養來測量由經工程改造CAR T細胞生產之IFNγ水平。其他免疫細胞產物特性

在一些實施例中，向對象投予之免疫細胞產物具有與其功效相關之數種其他產物特性。在一些實施例中，產物特性係選自：每µL之CAR T細胞總數目、每µL之T細胞總數目、轉導率(%)、IFN-γ水平(pg/mL)、活力(%)、CD4/CD8比率；初始(CCR7+CD45RA+) T細胞(%)、中央記憶(CCR7+CD45RA–) T細胞(%)、(T _N+ T _CM)/(T _EM+ T _EFF)比率（T _CM，中央記憶T細胞；T _EFF，效應T細胞；T _EM，效應記憶T細胞；T _N，初始T細胞）。嵌合抗原受體

嵌合抗原受體(CAR)係經基因工程改造之受體。這些經工程改造受體可根據所屬技術領域中已知之技術插入免疫細胞中及由免疫細胞所表現，包括T細胞及其他淋巴球。使用CAR，可將單一受體程式化以辨識特異性抗原，且當結合至該抗原時活化免疫細胞以攻擊並破壞帶有該抗原之細胞。當這些抗原存在於腫瘤細胞上時，表現該CAR之免疫細胞即可靶向及殺滅該腫瘤細胞。嵌合抗原受體中可併入共刺激（信號傳導）域以增加其效力。參見美國專利第7,741,465、及6,319,494號，以及Krause et al.and Finney et al.(supra), Song et al., Blood 119:696-706 (2012)；Kalos et al., Sci. Transl. Med. 3:95 (2011)；Porter et al., N. Engl. J. Med. 365:725-33 (2011), and Gross et al., Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol. 56:59–83 (2016)。

在一些實施例中，包括截短鉸鏈域(truncated hinge domain, 「THD」)之共刺激域進一步包含免疫球蛋白家族之一些或全部成員，諸如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgD、IgE、IgM、或其片段。

在一些實施例中，THD係衍生自人類完整鉸鏈域（「CHD (complete hinge domain)」）。在其他實施例中，THD係衍生自共刺激蛋白之齧齒動物、小鼠、或靈長動物（例如，非人類靈長動物）CHD。在一些實施例中，THD係衍生自共刺激蛋白之嵌合CHD。

本揭露之CAR之共刺激域可進一步包含跨膜域及/或胞內信號傳導域。跨膜域可融合至CAR之胞外域。共刺激域同樣地可融合至CAR之胞內域。在一些實施例中，使用自然與CAR中之一個域相關的跨膜域。在一些情況下，跨膜域經選擇或修飾（藉由胺基酸取代）以避免此類域與相同或不同表面膜蛋白質之跨膜域結合，以最小化與受體複合物之其他成員的交互作用。跨膜域可衍生自自然或合成來源。若來源係自然的，則該域可衍生自任何膜結合或跨膜蛋白。特別用於本揭露之跨膜區可衍生自（亦即，包含）4-1BB/CD137、活化NK細胞受體、免疫球蛋白蛋白質、B7-H3、BAFFR、BLAME (SLAMF8)、BTLA、CD100 (SEMA4D)、CD103、CD160 (BY55)、CD18、CD19、CD19a、CD2、CD247、CD27、CD276 (B7-H3)、CD28、CD29、CD3δ、CD3ε、CD3γ、CD3ζ、CD30、CD4、CD40、CD49a、CD49D、CD49f、CD69、CD7、CD84、CD8、CD8α、CD8β、CD96 (Tactile)、CD11a、CD11b、CD11c、CD11d、CDS、CEACAM1、CRT AM、細胞介素受體、DAP-10、DNAM1 (CD226)、Fcγ受體、GADS、GITR、HVEM (LIGHTR)、IA4、ICAM-1、Ig α (CD79a)、IL-2R β、IL-2R γ、IL-7R α、可誘導T細胞共刺激劑(ICOS)、整合素、ITGA4、ITGA6、ITGAD、ITGAE、ITGAL、ITGAM、ITGAX、ITGB2、ITGB7、ITGBl、KIRDS2、LAT、LFA-1、與CD83特異性結合之配體、LIGHT、LTBR、Ly9 (CD229)、淋巴球功能相關抗原-1 (LFA-1; CD11a/CD18)、MHC第1型分子、NKG2C、NKG2D、NKp30、NKp44、NKp46、NKp80 (KLRF1)、OX-40、PAG/Cbp、程式性死亡-1 (PD-1)、PSGL1、SELPLG (CD162)、信號傳導淋巴球性活化分子（SLAM蛋白）、SLAM (SLAMF1; CD150; IPO-3)、SLAMF4 (CD244; 2B4)、SLAMF6 (NTB-A; Lyl08)、SLAMF7、SLP-76、TNF受體蛋白、TNFR2、TNFSF14、鐸配體受體、TRANCE/RANKL、VLA1、或VLA-6、或其片段、截短、或組合。

可選地，短連接子可在CAR之任何或一些胞外、跨膜、及胞內域之間形成連接。在一些實施例中，連接子可衍生自甘胺酸-甘胺酸-甘胺酸-甘胺酸-絲胺酸(SEQ ID NO: 2) (G4S)n或GSTSGSGKPGSGEGSTKG (SEQ ID NO: 1)之重複序列。在一些實施例中，連接子包含3至20個胺基酸及與GSTSGSGKPGSGEGSTKG (SEQ ID NO: 1)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同一之胺基酸序列。

本文所述之連接子亦可用作肽標籤。連接子肽序列可具有任何適當長度以連接一或多種所關注蛋白質，且較佳地經設計以足夠可撓，從而允許適當摺疊及/或其所連接之肽中之一或兩者的功能及/或活性。因此，連接子肽可具有不多於10、不多於11、不多於12、不多於13、不多於14、不多於15、不多於16、不多於17、不多於18、不多於19、或不多於20個胺基酸之長度。在一些實施例中，連接子肽包含至少3、至少4、至少5、至少6、至少7、至少8、至少9、至少10、至少11、至少12、至少13、至少14、至少15、至少16、至少17、至少18、至少19、或至少20個胺基酸之長度。在一些實施例中，連接子包含至少7個且不多於20個胺基酸、至少7個且不多於19個胺基酸、至少7個且不多於18個胺基酸、至少7個且不多於17個胺基酸、至少7個且不多於16個胺基酸、至少7個且不多於15個胺基酸、至少7個且不多於14個胺基酸、至少7個且不多於13個胺基酸、至少7個且不多於12個胺基酸、或至少7個且不多於11個胺基酸。在某些實施例中，連接子包含15至17個胺基酸，且在特定實施例中，包含16個胺基酸。在一些實施例中，連接子包含10至20個胺基酸。在一些實施例中，連接子包含14至19個胺基酸。在一些實施例中，連接子包含15至17個胺基酸。在一些實施例中，連接子包含15至16個胺基酸。在一些實施例中，連接子包含16個胺基酸。在一些實施例中，連接子包含3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、或20個胺基酸。

在一些實施例中，使用間隔域。在一些實施例中，間隔域係衍生自CD4、CD8a、CD8b、CD28、CD28T、4-1BB、或本文中所述之其他分子。在一些實施例中，間隔域可包括化學誘導二聚化因子(dimerizer)以在添加小分子時控制表現。在一些實施例中，不使用間隔物。

本揭露之經工程改造T細胞之胞內（信號傳導）域可提供向活化域之信號傳導，其接著活化免疫細胞之至少一種正常效應功能。T細胞之效應功能例如可係細胞溶解活性或輔助活性，包括細胞介素之分泌。

在某些實施例中，合適的胞內信號傳導域包括（亦即，包含）但不限於4-1BB/CD137、活化NK細胞受體、免疫球蛋白蛋白質、B7-H3、BAFFR、BLAME (SLAMF8)、BTLA、CD100 (SEMA4D)、CD103、CD160 (BY55)、CD18、CD19、CD19a、CD2、CD247、CD27、CD276 (B7-H3)、CD28、CD29、CD3δ、CD3ε、CD3γ、CD30、CD4、CD40、CD49a、CD49D、CD49f、CD69、CD7、CD84、CD8、CD8α、CD8β、CD96 (Tactile)、CD11a、CD11b、CD11c、CD11d、CDS、CEACAM1、CRT AM、細胞介素受體、DAP-10、DNAM1 (CD226)、Fcγ受體、GADS、GITR、HVEM (LIGHTR)、IA4、ICAM-1、Ig α (CD79a)、IL-2R β、IL-2R γ、IL-7R α、可誘導T細胞共刺激劑(ICOS)、整合素、ITGA4、ITGA6、ITGAD、ITGAE、ITGAL、ITGAM、ITGAX、ITGB2、ITGB7、ITGBl、KIRDS2、LAT、與CD83特異性結合之配體、LIGHT、LTBR、Ly9 (CD229)、Lyl08)、淋巴球功能相關抗原-1 (LFA-1; CD11a/CD18)、MHC第1型分子、NKG2C、NKG2D、NKp30、NKp44、NKp46、NKp80 (KLRF1)、OX-40、PAG/Cbp、程式性死亡-1 (PD-1)、PSGL1、SELPLG (CD162)、信號傳導淋巴球性活化分子（SLAM蛋白）、SLAM (SLAMF1; CD150; IPO-3)、SLAMF4 (CD244; 2B4)、SLAMF6 (NTB-A)、SLAMF7、SLP-76、TNF受體蛋白、TNFR2、TNFSF14、鐸配體受體、TRANCE/RANKL、VLA1、或VLA-6、或其片段、截短、或組合。抗原結合分子

合適CAR結合至抗原（諸如細胞表面抗原）之方式可為納入與該所靶向抗原交互作用之抗原結合分子。在一些實施例中，抗原結合分子係其抗體片段，例如一或多個單鏈抗體片段（「scFv」）。scFv係具有抗體重鏈及輕鏈之連結在一起之可變區的單鏈抗體片段。參見美國專利第7,741,465號及第6,319,494號、以及Eshhar et al., Cancer Immunol Immunotherapy (1997) 45: 131-136。scFv保有親系抗體與目標抗原特異性交互作用之能力。scFv可用於嵌合抗原受體中，因為其等可經工程改造而表現為單鏈之一部分連同其他CAR組分。 Id.亦參見Krause et al., J. Exp. Med., Volume 188, No. 4, 1998 (619–626)；Finney et al., Journal of Immunology,1998, 161: 2791–2797。將會體認到，抗原結合分子一般係包含在CAR之胞外部分內，使得其能夠辨識及結合至所關注之抗原。在本揭露之範圍內已設想到雙特異性及多特異性CAR，其等具有對多於一個所關注目標之特異性。

在一些實施例中，多核苷酸編碼包含（截短）鉸鏈域及特異性結合至目標抗原之抗原結合分子的CAR。在一些實施例中，目標抗原係腫瘤抗原。在一些實施例中，抗原係選自腫瘤相關表面抗原，諸如5T4、α胎兒蛋白(AFP)、B7-1 (CD80)、B7-2 (CD86)、BCMA、B-人類絨毛膜促性腺激素、CA-125、癌胚抗原(CEA)、CD123、CD133、CD138、CD19、CD20、CD22、CD23、CD24、CD25、CD30、CD33、CD34、CD4、CD40、CD44、CD56、CD8、CLL-1、c-Met、CMV特異性抗原、CS-1、CSPG4、CTLA-4、DLL3、雙唾液酸神經節苷脂GD2、管至上皮黏蛋白、EBV特異性抗原、EGFR變體III (EGFRvIII)、ELF2M、內皮糖蛋白、蝶素B2、表皮生長因子受體(EGFR)、上皮細胞黏附分子(EpCAM)、上皮腫瘤抗原、ErbB2 (HER2/neu)、纖維母細胞相關蛋白(fap)、FLT3、葉酸結合蛋白、GD2、GD3、神經膠質瘤相關抗原、醣神經鞘脂質、gp36、HBV特異性抗原、HCV特異性抗原、HER1-HER2、HER2-HER3組合、HERV-K、高分子量黑色素瘤相關抗原(HMW-MAA)、HIV-1套膜醣蛋白gp41、HPV特異性抗原、人類端粒酶反轉錄酶、IGFI受體、IGF-II、IL-11Rα、IL-13R-a2、流感病毒特異性抗原；CD38、胰島素生長因子(IGFl)-l、腸羧基酯酶、κ鏈、LAGA-la、λ鏈、拉薩病毒特異性抗原、凝集素反應性AFP、譜系特異性或組織特異性抗原（諸如CD3、MAGE、MAGE-A1）、主要組織相容性複合體(MHC)分子、呈現腫瘤特異性肽表位之主要組織相容性複合體(MHC)分子、M-CSF、黑色素瘤相關抗原、間皮素、MN-CA IX、MUC-1、mut hsp70-2、經突變p53、經突變ras、嗜中性球彈性蛋白酶、NKG2D、Nkp30、NY-ESO-1、p53、PAP、前列腺酶、前列腺特異性抗原(PSA)、前列腺癌腫瘤抗原-1 (PCTA-1)、前列腺特異性抗原蛋白、STEAP1、STEAP2、PSMA、RAGE-1、ROR1、RU1、RU2 (AS)、表面黏附分子、生存素(surviving)及端粒酶、TAG-72、纖連蛋白之額外域A (EDA)及額外域B (EDB)及肌腱蛋白C之Al域(TnC Al)、甲狀腺球蛋白、腫瘤基質抗原、血管內皮生長因子受體-2 (VEGFR2)、病毒特異性表面抗原（諸如HIV特異性抗原，諸如HIV gpl20）、以及此等表面抗原之任何衍生物或變體。

本揭露係藉由以下實例進一步說明，其不應解讀為進一步限制。除上述方法外、或作為上述方法之組合，本申請案所提供之揭露可用於各種方法中。下列係可衍生自本申請案中所提供之揭露的例示性方法之彙編。經工程改造免疫細胞及用途

在一個實施例中，本揭露之細胞可透過獲自對象之T細胞獲得。T細胞可得自例如周邊血液單核細胞、骨髓、淋巴結組織、臍帶血、胸腺組織、來自感染部位之組織、腹水、胸膜積水、脾臟組織、腫瘤、或體外分化。此外，T細胞可衍生自所屬技術領域中可得之一或多種T細胞系。T細胞亦可得自使用熟習技藝人士已知之多種技術（諸如FICOLL™分離及/或血球分離術）收集自對象的血液單元。在一些實施例中，將藉由血球分離術收集之細胞洗滌以移除血漿部分，並置於適當緩衝劑或培養基中以用於後續處理。在一些實施例中，細胞係用PBS洗滌。如將理解的是，可使用洗滌步驟，諸如藉由使用半自動順流(flow through)離心機，例如CobeTM 2991細胞處理機、Baxter CytoMate™、或類似者。在一些實施例中，經洗滌細胞係再懸浮於一或多種生物相容緩衝劑、或其他有或無緩衝劑之鹽水溶液中。在一些實施例中，血球分離術樣本之非所欲組分係經移除。用於T細胞療法之單離T細胞之額外方法係揭示於美國專利公開案第2013/0287748號，其全文以引用方式併入本文中。

在一些實施例中，T細胞係單離自PBMC，方式為溶解紅血球及去除單核球，例如藉由使用透過PERCOLL™梯度之離心。在一些實施例中，特定T細胞亞群（諸如CD4+、CD8+、CD28+、CD45RA+、及CD45RO+ T細胞）係藉由所屬技術領域中已知之正向或負向選擇技術進一步單離。例如，藉由負向選擇之T細胞群富集可用針對負向選擇細胞特有之表面標記的抗體之組合達成。在一些實施例中，可使用經由負向磁性免疫黏附或流動式細胞測量術之細胞分選及/或選擇，其使用針對存在於負向選擇細胞上之細胞表面標記的單株抗體混合物。例如，為了藉由負向選擇來富集CD4+細胞，單株抗體混合物一般包括針對CD8、CD11b、CD14、CD16、CD20、及HLA-DR之抗體。在一些實施例中，使用流動式細胞測量術及細胞分選來單離用於本揭露之所關注細胞群。

在一些實施例中，PBMC係使用本文中所述之方法直接用於對免疫細胞（諸如CAR）進行基因修飾。在一些實施例中，在單離PBMC後，將T淋巴球進一步單離，並且在基因修飾及/或擴增前或後將細胞毒性及輔助T淋巴球分選為初始、記憶、及效應T細胞亞群。

在一些實施例中，CD8+細胞係進一步分選為初始、中央記憶、及效應細胞，其係藉由識別與此等類型的CD8+細胞中之各者相關之細胞表面抗原。在一些實施例中，中央記憶T細胞之表型標記之表現包括CCR7、CD3、CD28、CD45RO、CD62L、及CD127之表現，且對顆粒酶B呈陰性。在一些實施例中，中央記憶T細胞係CD8+、CD45RO+、及CD62L+ T細胞。在一些實施例中，效應T細胞對CCR7、CD28、CD62L、及CD127呈陰性且對顆粒酶B及穿孔素呈陽性。在一些實施例中，CD4+ T細胞係進一步分選為亞群。例如，CD4+輔助T細胞可分選為初始、中央記憶、及效應細胞，其係藉由識別具有細胞表面抗原之細胞群。

在一些實施例中，使用已知方法單離後將免疫細胞（例如T細胞）基因修飾，或者在將免疫細胞基因修飾前先將其體外活化及擴增（或在先驅細胞之情況下將其分化）。在另一個實施例中，將免疫細胞（例如T細胞）用本文中所述之嵌合抗原受體（例如，用包含一或多個編碼CAR之核苷酸序列的病毒載體轉導）基因修飾然後將其體外活化及/或擴增。用於活化及擴增T細胞之方法係所屬技術領域中已知的且描述於例如美國專利第6,905,874；第6,867,041號；及6,797,514號；及PCT公開案第WO 2012/079000號，其內容全文特此以引用方式併入本文中。大致上，此類方法包括使PBMC或經單離T細胞在具有適當細胞介素（諸如IL-2）之培養基中與刺激劑及共刺激劑（諸如抗CD3及抗CD28抗體，通常附接至珠或其他表面）接觸。附接至相同珠之抗CD3及抗CD28抗體作為「代理(surrogate)」抗原呈現細胞(APC)。一個實例係Dynabeads®系統，用於生理活化人類T細胞之CD3/CD28活化劑/刺激劑系統。在其他實施例中，使用諸如描述於美國專利第6,040,177號及第5,827,642號及PCT公開案第WO 2012/129514號中之方法，將T細胞用餵養細胞及適當抗體及細胞介素活化及刺激以增生，其內容全文特此以引用方式併入本文中。在一些實施例中，T細胞係獲自捐贈者對象。在一些實施例中，捐贈者對象係罹患癌症或腫瘤之人類患者。在一些實施例中，捐贈者對象係未罹患癌症或腫瘤之人類患者。

在一個實施例中，本揭露提供一種製造具有改善臨床功效及/或降低毒性之免疫療法產品的方法。在一些實施例中，免疫療法產品包含血液細胞。在一些實施例中，將自對象收集之血液細胞洗滌，以例如移除血漿部分，並將細胞置於適當緩衝劑或培養基中以用於後續處理步驟。在一些實施例中，將細胞用磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)洗滌。在一些實施例中，洗滌溶液缺乏鈣、及/或鎂、及/或許多或所有二價陽離子。在一些實施例中，根據製造商的說明，在半自動「順流」離心機（例如Cobe 2991細胞處理機、Baxter）中完成洗滌步驟。在一些實施例中，根據製造商的說明，藉由切向流過濾(tangential flow filtration, TFF)完成洗滌步驟。在一些實施例中，在洗滌之後將細胞再懸浮於各種生物相容緩衝劑（諸如例如無Ca++Mg++之PBS）中。在某些實施例中，移除血液細胞樣本之組分，且將細胞直接再懸浮於培養基中。

在一些實施例中，該等方法包括基於密度之細胞分離方法，諸如藉由將紅血球裂解且透過Percoll或Ficoll梯度離心，自周邊血液製備白血球。在一些實施例中，該等方法包括白血球分離術。

在一些實施例中，選擇步驟之至少一部分包括將細胞與選擇試劑培養。與一或多種選擇試劑培養，例如作為選擇方法之一部分，該等選擇方法可使用一或多種選擇試劑執行，以基於一或多個特定分子在細胞中或細胞上之表現或存在來選擇一或多種不同細胞類型，該特定分子諸如表面標記，例如表面蛋白質、細胞內標記、或核酸。在一些實施例中，可使用任何已知方法，其使用一或多種選擇試劑，以基於此類標記分離。在一些實施例中，一或多種選擇試劑導致為基於親和力或免疫親和力之分離的分離。例如，在一些實施例中，選擇包括與一或多種試劑培養，以用於基於細胞之表現、或一或多種標記（一般係細胞表面標記）之表現水平將細胞及細胞群分離，例如藉由與特異性結合至此類標記之抗體或結合夥伴培養，接著通常進行洗滌步驟及將已結合抗體或結合夥伴之細胞與未與抗體或結合夥伴結合之細胞分離。

在此類程序之一些實施例中，將一定體積的細胞與一定量的所欲基於親和力之選擇試劑混合。基於免疫親和力之選擇可使用任何系統或方法進行，該系統或方法導致在被分離的細胞與特異性結合至細胞上之標記的分子（例如固體表面（例如粒子）上之抗體或其他結合夥伴）之間的有利能量交互作用。在一些實施例中，方法係使用粒子（諸如珠，例如磁珠）進行，該等粒子塗佈有特異於細胞之標記的選擇劑（例如抗體）。粒子（例如珠）可在容器（諸如管或袋）中與細胞培養或混合，同時振盪或混合，其中細胞密度與顆粒（例如珠）比率恆定，以幫助促進能量上有利的交互作用。在其他情況下，方法包括細胞之選擇，其中選擇之全部或一部分係在腔室的內腔中，例如在離心旋轉下進行。在一些實施例中，細胞與選擇試劑（諸如基於免疫親和力之選擇試劑）之培養係在腔室中執行。

在一些實施例中，藉由在腔室的腔中進行此類選擇步驟或其部分（例如與抗體包覆的粒子（例如磁珠）培養），使用者能夠控制某些參數，諸如各種溶液之體積、處理期間溶液之添加及其定時，其可提供與其他可用方法相比的優點。例如，在培養期間減小腔中液體體積之能力可增加在選擇中所使用之粒子（例如珠試劑）之濃度，且因此增加溶液之化學勢，而不影響腔中細胞之總數目。其繼而可增強正在處理之細胞與用於選擇之粒子之間的成對交互作用。在一些實施例中，在腔室中進行培養步驟，例如當與本文所述之系統、電路系統、及控制相關時，允許使用者在培養期間以所欲次數實現溶液之攪動，其亦可改善交互作用。

在一些實施例中，選擇步驟之至少一部分係在腔室中執行，其包括將細胞與選擇試劑培養。在此類程序之一些實施例中，將一定體積的細胞與一定量的所欲基於親和力之選擇試劑混合，該量遠少於當在管或容器中進行類似選擇以根據製造商的說明選擇相同數目的細胞及/或相同體積的細胞時通常所採用之量。在一些實施例中，使用一定量的一種或多種選擇試劑，該量不超過5%、不超過10%、不超過15%、不超過20%、不超過25%、不超過50%、不超過60%、不超過70%、或不超過80%的用於在基於管或容器的培養中根據製造商的說明對相同數量的細胞及/或相同體積的細胞進行細胞選擇的相同選擇試劑的量。

在一些實施例中，為了細胞之選擇，例如基於免疫親和力之細胞選擇，細胞在組成物中於腔室中培養，該組成物亦含有具有選擇試劑之選擇緩衝劑，該選擇試劑諸如特異性結合至其所欲富集及/或耗盡之細胞上之表面標記之分子，但不結合在組成物中之其他細胞上之分子，諸如抗體，其可選地偶聯至支架，諸如聚合體或表面，例如珠，例如磁珠，諸如偶聯至特異於CD4及CD8之單株抗體之磁珠。在一些實施例中，如上所述，選擇試劑，相較於當在具有振盪或旋轉的管中進行選擇時通常使用的或為實現相同數目之細胞或相同體積之細胞的大約相同或類似選擇效率所必需的選擇試劑的量，以基本上小於（例如，不超過該量的5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、或80%）的量在腔室的腔中添加至細胞中。在一些實施例中，藉由向細胞及選擇試劑中添加選擇緩衝劑來進行培養，以藉由例如10 mL至200 mL之試劑培養來實現目標體積，諸如至少或約至少10 mL、20 mL、30 mL、40 mL、50 mL、60 mL、70 mL、80 mL、90 mL、100 mL、150 mL、或200 mL。在一些實施例中，在添加至細胞中之前將選擇緩衝劑及選擇試劑預混合。在一些實施例中，選擇緩衝劑及選擇試劑係分開添加至細胞中。在一些實施例中，選擇培養係在週期性溫和混合條件下進行，其可有助於促進能量上有利的交互作用，且因此允許使用較少總選擇試劑，同時實現高選擇效率。在一些實施例中，與選擇試劑培養之總持續時間係剛好或約5分鐘至6小時，諸如30分鐘至3小時，例如至少或約至少30分鐘、60分鐘、120分鐘、或180分鐘。

在一些實施例中，培養通常係在混合條件下進行，諸如在旋轉之存在下，通常以相對低之力或速度，諸如低於用於沉澱細胞之速度，諸如從或從約600 rpm至1700 rpm（例如，剛好或約或至少600 rpm、1000 rpm、或1500 rpm或1700 rpm），諸如在剛好從或從約80 g至l00 g（例如，剛好或約或至少80 g、85 g、90 g、95 g、或100 g）之腔室或其他容器之樣本或壁處之RCF。在一些實施例中，使用重複的旋轉間隔以如此低的速度進行旋轉，隨後係一段休息期，諸如旋轉及/或休息1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10秒，諸如以大約1或2秒旋轉，隨後係休息大約5、6、7、或8秒。

在一些實施例中，此種程序係在與腔室成一體的完全封閉之系統內進行。在一些實施例中，該程序（並且在一些實施例中還有一或多個額外步驟，諸如洗滌含有細胞之樣本（諸如血球分離術樣本）之前一洗滌步驟）係以自動化方式進行，使得細胞、試劑、及其他組分在合適的時間被吸入至腔室並從腔室被推出並且實現離心，以便使用自動化程序在單個封閉系統中完成洗滌及結合步驟。

在一些實施例中，在培養及/或混合細胞與選擇試劑(reagent)及/或試劑(reagents)之後，對所培養之細胞進行分離以基於特定試劑(reagent)或試劑(reagents)之存在或不存在來選擇細胞。在一些實施例中，分離係在相同封閉系統中執行，其中執行細胞與選擇試劑之培養。在一些實施例中，在與選擇試劑培養之後，將所培養之細胞（包括其中結合有選擇試劑之細胞）轉移至用於基於免疫親和力之細胞分離之系統中。在一些實施例中，用於基於免疫親和力之分離之系統係或含有磁分離柱。

在一些實施例中，單離方法包括基於一或多種特定分子（諸如表面標記，例如表面蛋白質、細胞內標記、或核酸）在細胞中之表現或存在來分離不同的細胞類型。在一些實施例中，可使用任何已知的基於此類標記之分離方法。在一些實施例中，分離係基於親和力或免疫親和力之分離。例如，在一些實施例中，單離包括基於細胞之表現、或一或多種標記（一般係細胞表面標記）之表現水平將細胞及細胞群分離，例如藉由與特異性結合至此類標記之抗體或結合夥伴培養，接著通常進行洗滌步驟及將已結合抗體或結合夥伴之細胞與未與抗體或結合夥伴結合之細胞分離。此類分離步驟可基於正向選擇，其中保留已結合試劑之細胞以供進一步使用；及/或負向選擇，其中保留未與抗體或結合夥伴結合之細胞。在一些實例中，兩部分均被保留以供進一步使用。

在一些實施例中，在沒有特異性識別異質群中之細胞類型的抗體可用之情況下，負向選擇可係特別有用的，使得最好基於由除所欲群以外之細胞表現的標記進行分離。

分離不一定導致100%富集或移除特定細胞群或表現特定標記之細胞。例如，對特定類型細胞（諸如表現標記之細胞）之正向選擇或富集係指增加此類細胞之數量或百分比，但不一定導致不表現標記之細胞完全缺失。同樣，特定類型細胞（諸如表現標記之細胞）之負向選擇、移除、或耗盡係指減少此類細胞之數量或百分比，但不一定導致所有此類細胞之完全移除。

在一些實例中，進行多輪分離步驟，其中對來自一個步驟之正向或負向選擇之部分進行另一分離步驟，諸如隨後的正向或負向選擇。在一些實例中，單個分離步驟可同時耗盡表現多種標記之細胞，諸如藉由與複數種抗體或結合夥伴培養細胞，每一種抗體或結合夥伴對針對負向選擇之標記具有特異性。同樣，藉由與在各種細胞類型上表現之複數種抗體或結合夥伴培養細胞，可同時正向選擇多種細胞類型。

例如，在一些實施例中，藉由正向或負向選擇技術來單離T細胞之特定亞群，諸如呈陽性或表現高水平之一或多種表面標記之細胞，例如CD28+、CD62L+、CCR7+、CD27+、CD127+、CD4+、CD8+、CD45RA+、及/或CD45RO+T細胞。例如，可使用抗CD3/抗CD28接合磁珠（例如DYNABEADS® M-450 CD3/CD28 T細胞擴增器）來正向選擇CD3+、CD28+T細胞。在一些實施例中，針對具有初始表型之T細胞(CD45RA+ CCR7+)富集細胞群。

在一些實施例中，藉由正向選擇富集特定細胞群或藉由負向選擇耗盡特定細胞群，藉此進行單離。在一些實施例中，藉由與一或多種抗體或其他結合劑培養細胞來實現正向或負向選擇，該一或多種抗體或其他結合劑分別與在正向或負向選擇之細胞上所表現或以相對較高水平（標記高）表現之一或多種表面標記（標記+）特異性結合。

在特定實施例中，對生物樣本，例如PBMC或其他白血球之樣本進行CD4+ T細胞之選擇，其中負向及正向部分兩者均得到保留。在某些實施例中，CD8+ T細胞係選自負向部分。在一些實施例中，對生物樣本進行CD8+ T細胞之選擇，其中負向及正向部分兩者均得到保留。在某些實施例中，CD4+ T細胞係選自負向部分。

在一些實施例中，藉由負向選擇在非T細胞（注入B細胞、單核球、或其他白血球細胞，諸如CD14）上表現之標記，將T細胞與PBMC樣本分離。在一些實施例中，使用CD4+或CD8+選擇步驟來分離CD4+輔助及CD8+細胞毒性T細胞。藉由對在一或多種初始、記憶、及/或效應T細胞亞群上表現或以相對較高程度表現之標記進行正向或負向選擇，可將此類CD4+及CD8+群進一步分類為亞群。

在一些實施例中，諸如藉由基於與相應亞群相關之表面抗原之正向或負向選擇，對於初始、中央記憶、效應記憶、及/或中央記憶幹細胞，進一步富集或耗盡CD8+細胞。在一些實施例中，進行針對中央記憶T (TCM)細胞之富集以增加功效，諸如改善投予後之長期存活、擴增、及/或移植，在一些實施例中其在此類亞群中係特別穩健的。在一些實施例中，組合TcM富集之CD8+T細胞及CD4+T細胞進一步增強功效。在一些實施例中，富集具有初始表型之T細胞(CD45RA+ CCR7+)增強功效。在實施例中，記憶T細胞存在於CD8+周邊血液淋巴球之CD62L+及CD62L亞群中。PBMC可富集或耗盡CD62L CD8+及/或CD62L+CD8+部分，諸如使用抗CD8及抗CD62L抗體。

在一些實施例中，對中央記憶T (TCM)細胞之富集係基於CD45RO、CD62L、CCR7、CD28、CD3、及/或CD127之陽性或高表面表現；在一些實施例中，其係基於表現或高度表現CD45RA及顆粒酶B之細胞的負向選擇。在一些實施例中，藉由耗盡表現CD4、CD 14、CD45RA之細胞、以及正向選擇或富集表現CD62L之細胞來進行為TCM細胞富集CD8+群之單離。在一個實施例中，對中央記憶T (TCM)細胞之富集係從基於CD4表現而選擇的細胞的負向部分開始進行的，對該負向部分進行基於CD 14及CD45RA之表現的負向選擇、以及基於CD62L之正向選擇。此類選擇在一些實施例中係同時進行的，而在其他實施例中係按順序（按任一順序）進行。在一些實施例中，用於製備CD8+細胞群或亞群之相同的基於CD4表現之選擇步驟亦用於產生CD4+細胞群或亞群，使得來自基於CD4之分離之正向及負向部分兩者均被保留並用於方法之後續步驟中，可選地在一或多個進一步的正向或負向選擇步驟之後。在特定實例中，對PBMC或其他白血球之樣本進行CD4+細胞之選擇，其中負向及正向部分兩者均得到保留。然後對負向部分進行基於CD14及CD45RA或CD19之表現之負向選擇、以及基於中央記憶T細胞（諸如CD62L或CCR7）之標記特性之正向選擇，其中正向及負向選擇係以任一順序進行。

CD4+輔助T細胞係藉由識別具有細胞表面抗原之細胞群而被分選為初始、中央記憶、及效應細胞。CD4+淋巴球可藉由標準方法獲得。在一些實施例中，初始CD4+T淋巴球係CD45RO、CD45RA+、CD62L+、CD4+T細胞。在一些實施例中，中央記憶CD4+細胞係CD62L+及CD45RO+。在一些實施例中，效應CD4+細胞係CD62L及CD45RO。在一些實施例中，具有初始表型之T細胞係CD45RA+ CCR7+。

在一個實例中，為了藉由負向選擇來富集CD4+細胞，單株抗體混合物一般包括針對CD14、CD20、CD11b、CD16、HLA-DR、及CD8之抗體。在一些實施例中，抗體或結合夥伴與固體支持物或基質（諸如磁珠或順磁性珠）結合，以允許分離用於正向及/或負向選擇之細胞。例如，在一些實施例中，使用免疫磁性（或親和力磁性）分離技術將細胞及細胞群分離或單離。在一些實施例中，將待分離細胞之樣本或組成物與小的、可磁化或磁響應材料一起培養，該材料諸如磁響應粒子或微粒，諸如順磁性珠（例如，諸如Dynal珠或MACS珠）。磁響應材料（例如粒子）通常直接或間接附著於結合夥伴（例如抗體），該結合夥伴特異性結合至存在於所欲分離（例如需要負向或正向選擇）之細胞、多個細胞、或細胞群上之分子（例如表面標記）。

在一些實施例中，該磁性粒子或珠包含與特異性結合成員結合之磁響應材料，諸如抗體或其他結合夥伴。在磁分離方法中使用了許多眾所周知的磁響應材料。培養通常係在此種條件下進行，其中抗體或結合夥伴、或分子（諸如二級抗體或其他試劑，其特異性結合至此類附著於磁性粒子或珠的抗體或結合夥伴）藉此特異性結合至細胞表面分子（若存在於樣本內之細胞上）。在一些實施例中，將樣本置於磁場中，並且其上附著有磁響應或可磁化粒子的細胞將被吸引至磁體上並與未標示之細胞分離。對於正向選擇，被磁體吸引之細胞被保留；對於負向選擇，未被吸引之細胞（未標示之細胞）被保留。在一些實施例中，在相同選擇步驟中進行正向及負向選擇之組合，其中將正向及負向部分保留並進一步處理或進行進一步的分離步驟。在一些實施例中，磁響應粒子包被有初級抗體或其他結合夥伴、二級抗體、凝集素、酶、或卵白素(streptavidin)。在某些實施例中，磁性粒子經由對一或多種標記具有特異性之初級抗體塗層而附著於細胞。在某些實施例中，細胞而非珠上標示有初級抗體或結合夥伴，接著添加細胞型特異性二級抗體或其他結合夥伴（例如卵白素）包被之磁性粒子。在某些實施例中，卵白素包被之磁性粒子與生物素化的初級或二級抗體聯合使用。在一些實施例中，使磁響應粒子附著於隨後將被培養(incubate)、培養(culture)及/或工程改造之細胞；在一些實施例中，使粒子附著於細胞以對患者投予。在一些實施例中，將可磁化或磁響應粒子從細胞中移除。用於從細胞中移除可磁化粒子之方法係已知的，且包括例如使用競爭性非標示抗體、及可磁化粒子或與可裂解連接子接合之抗體。在一些實施例中，可磁化粒子係可生物降解的。

在一些實施例中，基於親和力之選擇係經由磁活化細胞分選(magnetic-activated cell sorting, MACS) (Miltenyi Biotec, Auburn, CA)。磁活化細胞分選(MACS)系統能夠高純度地選擇附著有磁化粒子之細胞。在某些實施例中，以一種模式操作MACS，其中在施加外部磁場後，按順序洗脫非靶及靶種類。亦即，附著於磁化粒子之細胞被保持在適當位，而未附著之種類被洗脫。然後，在該第一洗脫步驟完成之後，以某種方式釋放被捕獲在磁場中並被阻止洗脫之種類，使得它們可被洗脫及重新獲得。在某些實施例中，非靶細胞被標示並從異質細胞群中耗盡。

在一些實施例中，使用進行方法之單離、細胞製備、分離、處理、培養(incubation)、培養(culture)、及/或調配步驟中之一或多者之系統、裝置、或設備來進行分離或單離。在一些實施例中，系統係用於在封閉或無菌環境中執行該等步驟中之每一步驟，例如以盡量減少錯誤、使用者操作及/或污染。在一個實例中，系統係如國際專利申請案公開號W02009/072003、或US 20110003380 Al中描述之系統。在一些實施例中，系統或設備以整合或自含式系統及/或以自動化或可程式化方式進行例如單離、處理、工程改造、及調配步驟中之一或多者。在一些實施例中，系統或設備包括與系統或設備通訊之電腦及/或電腦程式，其允許使用者對處理、單離、工程改造、及調配步驟進行程式化、控制、評估其等之結果、及/或調整其等之各種實施例。在一些實施例中，使用CliniMACS系統(Miltenyi Biotec)進行分離及/或其他步驟，例如，用於在封閉及無菌系統中進行臨床規模水平之細胞自動化分離。組分可包括集成微型電腦、磁分離單元、蠕動泵、及各種夾管閥。在一些實施例中，集成電腦控制儀器之ah組件，並指導系統以標準化順序執行重複程序。在一些實施例中，磁分離單元包括可移動永磁體及用於選擇柱之保持器。蠕動泵控制整個管組之流速，並與夾管閥一起確保緩衝劑在系統中之受控流動以及細胞之持續懸浮。

在一些實施例中，CliniMACS系統使用以無菌、非致熱溶液形式提供之抗體偶聯之可磁化粒子。在一些實施例中，在用磁性粒子標示細胞之後，洗滌細胞以移除過量粒子。然後將細胞製備袋連接至管組，其繼而被連接至含有緩衝劑之袋及細胞收集袋。管組由預組裝之無菌管組成，包括預柱及分離柱，且僅供單次使用。在分離程式啟動之後，系統會自動將細胞樣本施加至分離柱。經標示之細胞被保留在柱內，而未標示之細胞藉由一系列洗滌步驟被移除。在一些實施例中，用於本文所述方法之細胞群係未標示的且不保留在柱中。在一些實施例中，用於本文所述方法之細胞群被標示且保留在柱中。在一些實施例中，用於本文所述方法之細胞群在移除磁場後從柱中被洗脫，並收集在細胞收集袋中。

在某些實施例中，使用CliniMACS Prodigy系統(Miltenyi Biotec)進行分離及/或其他步驟。在一些實施例中，CliniMACS Prodigy系統配備有細胞處理單元，其允許藉由離心對細胞進行自動化洗滌及分離(fractionation)。CliniMACS Prodigy系統亦可包括板載攝像機及影像識別軟體，該板載攝像機及影像識別軟體藉由辨別源細胞產物之宏觀層來識別最佳細胞分離終點。例如，周邊血液自動分離成紅血球、白血球細胞、及血漿層。CliniMACS Prodigy系統亦可包括集成細胞培養腔室，用於完成細胞培養規程，諸如，例如細胞分化及擴增、抗原負載、及長期細胞培養。輸入端口可允許培養基之無菌移除及補充，且可使用集成顯微鏡來監測細胞。

在一些實施例中，藉由流動式細胞測量術來收集及富集（或耗盡）本文所述之細胞群，其中用多個細胞表面標記染色之細胞被攜帶在流體流中。在一些實施例中，藉由製備規模（螢光激發細胞分選(fluorescence-activated cell sorting, FACS)）-分選來收集及富集（或耗盡）本文所述之細胞群。在某些實施例中，藉由將微機電系統(microelectromechanical system, MEMS)晶片與基於FACS之偵測系統組合使用來收集及富集（或耗盡）本文所述之細胞群（參見例如WO 2010/033140, Cho et al. (2010) Lab Chip 10, 1567-1573；及Godin et al. (2008) J Biophoton. l(5):355-376）。在兩種情況下，細胞均可用多個標記標示，允許以高純度將界限明確之T細胞亞群單離。

在一些實施例中，抗體或結合夥伴係用一或多種可偵測標記來標示，以促進用於正向及/或負向選擇之分離。例如，分離可基於與螢光標示之抗體之結合。在一些實例中，基於對一或多種細胞表面標記具有特異性之抗體或其他結合夥伴之結合之細胞分離係在流體流中進行，諸如藉由螢光激活細胞分選(FACS)，包括製備規模(FACS)及/或微機電系統(MEMS)晶片，例如與流動式細胞測量偵測系統組合。此類方法允許基於多個標記同時進行正向及負向選擇。

在一些實施例中，製備方法包括用於在單離、培養、及/或工程改造之前或之後冷凍，例如低溫保存細胞之步驟。在一些實施例中，冷凍及後續解凍步驟移除細胞群中之顆粒球，且在一定程度上移除單核球。在一些實施例中，將細胞懸浮於冷凍溶液中，例如在洗滌步驟以移除血漿及血小板後。在一些實施例中，可使用各種已知的冷凍溶液及參數中之任一者。一個實例涉及使用含有20%二甲基亞碸(dimethylsulfoxide, DMSO)及8%人血清白蛋白(human serum albumin, HSA)、或其他合適的細胞冷凍培養基之PBS。然後使用培養基將其1:1稀釋，使得DMSO與HSA之最終濃度分別係10%與4%。然後通常將細胞以每分鐘1°之速率冷凍至-80℃，並儲存在液氮儲罐之氣相中。

在一些實施例中，單離及/或選擇導致經富集T細胞，例如CD3+ T細胞、CD4+ T細胞、及/或CD8+ T細胞之一或多種輸入組成物。在一些實施例中，從單個生物樣本中單離、選擇、富集、或獲得二或更多種分離的輸入組成物。在一些實施例中，從自相同對象採集、獲取、及/或獲得之分離的生物樣本中單離、選擇、富集、及/或獲得分離的輸入組成物。

在某些實施例中，一或多種輸入組成物係或包括經富集T細胞之組成物，其包括至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、至少99.5%、至少99.9%、或剛好或約100%的CD3+ T細胞。在一個實施例中，經富集T細胞之輸入組成物基本上係由CD3+ T細胞組成。

在某些實施例中，一或多種輸入組成物係或包括經富集CD4+ T細胞之組成物，其包括至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、至少99.5%、至少99.9%、或剛好或約100%的CD4+ T細胞。在某些實施例中，CD4+ T細胞之輸入組成物包括少於40%、少於35%、少於30%、少於25%、少於20%、少於15%、少於10%、少於5%、少於1%、少於0.1%、或少於0.01%的CD8+ T細胞，及/或不含CD8+ T細胞，及/或不含或基本上不含CD8+ T細胞。在一些實施例中，經富集T細胞之組成物基本上係由CD4+ T細胞組成。

在某些實施例中，一或多種組成物係或包括CD8+ T細胞之組成物，其係或包括至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、至少99.5%、至少99.9%、或剛好或約100%的CD8+ T細胞。在某些實施例中，CD8+ T細胞之組成物含有少於40%、少於35%、少於30%、少於25%、少於20%、少於15%、少於10%、少於5%、少於1%、少於0.1%、或少於0.01%的CD4+ T細胞，及/或不含CD4+ T細胞，及/或不含或基本上不含CD4+ T細胞。在一些實施例中，經富集T細胞之組成物基本上係由CD8+ T細胞組成。

在一些實施例中，在基因工程改造之前或與基因工程改造相關地培養(incubate)及/或培養(culture)細胞。培養(incubation)步驟可包括培養(culture)、培育(cultivation)、刺激、活化、及/或增殖(propagation)。培養(incubation)及/或工程改造可在培養容器中進行，諸如用於培養(culture)或培育細胞之單元、腔室、孔、柱、管、管組、閥、小瓶、培養皿、袋、或其他容器。在一些實施例中，組成物或細胞係在刺激條件或刺激劑之存在下培養。此類條件包括經設計用於誘導群中細胞之增生、擴增、活化、及/或存活，模擬抗原暴露，及/或為基因工程改造（諸如為引入重組抗原受體）而準備細胞之條件。條件可包括以下一或多種：特定培養基、溫度、氧含量、二氧化碳含量、時間、藥劑，例如營養物、胺基酸、抗生素、離子、及/或刺激因子，諸如細胞介素、趨化因子、抗原、結合夥伴、融合蛋白、重組可溶性受體，及經設計用於活化細胞之任何其他藥劑。

在一些實施例中，刺激條件或藥劑包括一或多種藥劑，例如配體，其能夠刺激或活化TCR複合物之細胞內信號傳導域。在一些實施例中，藥劑在T細胞中接通或啟動TCR/CD3細胞內信號級聯。此類藥劑可包括抗體，諸如對TCR具有特異性之抗體，例如抗CD3。在一些實施例中，刺激條件包括一或多種藥劑，例如配體，其能夠刺激共刺激受體，例如抗CD28。在一些實施例中，此類藥劑及/或配體可與固體支持物（諸如珠）、及/或一或多種細胞介素結合。可選地，擴增方法可進一步包含向培養基中添加抗CD3及/或抗CD28抗體（例如，以至少約0.5 ng/mL之濃度）之步驟。在一些實施例中，刺激藥劑包括IL-2、IL-15、及/或IL-7。在一些實施例中，IL-2濃度係至少約10個單位/mL。在一些實施例中，培養係根據Riddell et al.的美國專利第6,040,177號、Klebanoff et al. (2012) J Immunother. 35(9): 651— 660、Terakura et al. (2012) Blood. 1:72-82、及/或Wang et al. (2012) J Immunother. 35(9):689-701中所描述之技術來實施。

在一些實施例中，T細胞係藉由向培養起始之組成物中添加飼養細胞而擴增，諸如非分裂周邊血液單核細胞(PBMC)，（例如，使得所得細胞群對於待擴增之初始群中之每一個T淋巴球而含有至少約5、10、20、或40或更多個PBMC飼養細胞）；及培養培養物（例如，持續足以擴增T細胞數目之時間）。在一些實施例中，非分裂飼養細胞可包含γ輻照之PBMC飼養細胞。在一些實施例中，用約3000至3600拉德範圍內之γ射線照射PBMC以防止細胞分裂。在一些實施例中，在添加T細胞群之前將飼養細胞添加至培養基中。

在一些實施例中，刺激條件包括適於人T淋巴球生長之溫度，例如，至少約25攝氏度，通常至少約30攝氏度，並且通常剛好或約37攝氏度。可選地，培養可進一步包含添加非分裂的EBV轉化的淋巴母細胞(LCL)作為飼養細胞。LCL可使用約6000至10,000拉德範圍內之γ射線來照射。在一些實施例中，以任何合適的量（諸如LCL飼養細胞與初始T淋巴球係至少約10:1之比率）提供LCL飼養細胞。

在實施例中，抗原特異性T細胞（諸如抗原特異性CD4+及/或CD8+T細胞）係藉由用抗原刺激初始或抗原特異性T淋巴球而獲得。例如，藉由從受感染的對象中單離T細胞並使用相同的抗原在體外刺激細胞，可產生針對巨細胞病毒抗原之抗原特異性T細胞系或克隆株。

在一些實施例中，在一或多種刺激條件或刺激劑存在下之培養之至少一部分係在離心腔室之內腔中，例如在離心旋轉下（諸如國際公開號WO2016/073602中所述）進行。在一些實施例中，在離心腔室中進行之培養之至少一部分包括與一或多種試劑混合以誘導刺激及/或活化。在一些實施例中，在離心腔室中將細胞（諸如所選擇的細胞）與刺激條件或刺激劑混合。在此類程序之一些實施例中，將一定體積的細胞與一定量的一或多種刺激條件或藥劑混合，該刺激條件或藥劑之量遠小於在細胞培養板或其他系統中進行類似刺激時通常所採用之量。

在一些實施例中，刺激劑，相較於當在腔室內例如在具有週期性振盪或旋轉的管或袋中不混合而進行選擇時通常使用的或為實現相同數目之細胞或相同體積之細胞的大約相同或類似選擇效率所必需的刺激劑的量，以基本上小於（例如，不超過該量的5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、或80%）的量在腔室的腔中添加至細胞。在一些實施例中，藉由向細胞及刺激劑中添加培養緩衝劑來進行培養，以藉由例如10 mL至200 mL之試劑培養來實現目標體積，諸如至少或約至少或約或10 mL、20 mL、30 mL、40 mL、50 mL、60 mL、70 mL、80 mL、90 mL、100 mL、150 mL、或200 mL。在一些實施例中，在添加至細胞中之前將培養緩衝劑及刺激劑預混合。在一些實施例中，培養緩衝劑及刺激劑係分開添加至細胞中。在一些實施例中，刺激培養係在週期性溫和混合條件下進行，其可有助於促進能量上有利的交互作用，且因此允許使用較少總刺激劑，同時實現細胞之刺激及活化。

在一些實施例中，培養之總持續時間（例如用刺激劑）係在或約在1小時與96小時、1小時與72小時、1小時與48小時、4小時與36小時、8小時與30小時、或12小時與24小時之間，諸如至少或約至少6小時、12小時、18小時、24小時、36小時、或72小時。在一些實施例中，進一步培養之時間係在或約在1小時與48小時、4小時與36小時、8小時與30小時、或12小時與24小時（含）。

在一些實施例中，刺激條件包括用一或多種細胞介素及/或在一或多種細胞介素之存在下培養(incubate)、培養(culture)、及/或培育(cultivate)經富集T細胞之組成物。在特定實施例中，一或多種細胞介素係重組細胞介素。在一些實施例中，一或多種細胞介素係人重組細胞介素。在某些實施例中，一或多種細胞介素結合至及/或能夠結合至由T細胞表現及/或對於T細胞為內源性之受體。在特定實施例中，一或多種細胞介素係或包括細胞介素之4-α-螺旋束家族之成員。在一些實施例中，細胞介素之4-α-螺旋束家族之成員包括但不限於介白素-2 (IL-2)、介白素-4 (IL-4)、介白素-7 (IL-7)、介白素-9 (IL-9)、介白素12 (IL-12)、介白素15 (IL-15)、顆粒球聚落刺激因子(G-CSF)、及顆粒球巨噬細胞株刺激因子(GM-CSF)。在一些實施例中，刺激例如在轉導之前導致細胞之活化及/或增生。

在一些實施例中，與所提供之方法、用途、製品或組成物結合使用之經工程改造細胞（諸如T細胞）係已被基因工程改造以表現重組受體之細胞，例如本文所述之CAR或TCR。在一些實施例中，藉由引入、遞送或轉移編碼重組受體及/或其他分子之核酸序列來對細胞進行工程改造。在一些實施例中，用於生產經工程改造細胞之方法包括將編碼重組受體（例如，抗CD19 CAR）之多核苷酸引入至細胞（例如，諸如經刺激或活化細胞）中。在特定實施例中，重組蛋白係重組受體，諸如所述任一者。在細胞中引入編碼重組蛋白（諸如重組受體）之核酸分子可使用許多已知載體中之任一種來進行。此類載體包括病毒及非病毒系統，包括慢病毒及γ逆轉錄病毒系統，以及基於轉位子之系統，諸如PiggyBac或基於Sleeping Beauty之基因轉移系統。例示性方法包括用於轉移編碼受體之核酸之方法，包括經由病毒，例如逆轉錄病毒或慢病毒、轉導、轉位子、及電穿孔。在一些實施例中，工程改造產生經富集T細胞之一或多種經工程改造之組成物。

在某些實施例中，經刺激T細胞之一或多種組成物係或包括經富集T細胞之兩種分離的經刺激組成物。在一些實施例中，經富集T細胞之兩種分離的組成物係分別經工程改造，例如已從相同生物樣本選擇、單離、及/或富集之經富集T細胞之兩種分離的組成物。在某些實施例中，兩種分離的組成物包括經富集CD4+ T細胞之組成物。在一些實施例中，該兩種分離的組成物包括經富集CD8+ T細胞之組成物。在一些實施例中，經富集CD4+ T細胞及經富集CD8+ T細胞之兩種分開的組成物係分別經基因工程改造。在一些實施例中，為CD4+ T細胞及CD8+ T細胞兩者富集相同組成物，且其等係經一起基因工程改造。

在一些實施例中，包含經工程改造T細胞之組成物包含醫藥上可接受之載劑、稀釋劑、溶解劑、乳化劑、保存劑、及/或佐劑。在一些實施例中，組成物包含賦形劑。「醫藥上可接受之載劑(pharmaceutically acceptable carrier)」係指醫藥配方中活性成分以外之成分，其對對象無毒。醫藥上可接受之載劑包括但不限於緩衝劑、賦形劑、穩定劑、或防腐劑。

在一些實施例中，組成物係經選擇以用於腸胃外遞送、用於吸入、或用於透過消化道遞送（諸如口服）。此等醫藥上可接受組成物之製備係在所屬技術領域中具有通常知識者之能力內。在一些實施例中，緩衝劑係用以將組成物維持在生理pH或在稍低pH，一般在約5至約8之pH範圍內。在一些實施例中，當設想腸胃外投予時，組成物係呈包含本文中所述組成物（有或無額外治療劑）的無熱原、腸胃外可接受水溶液之形式，其在醫藥上可接受之媒劑中。在一些實施例中，用於腸胃外注射之媒劑係無菌蒸餾水，將本文所述之組成物（具有或不具有至少一種額外治療劑）於其中調配為無菌等張溶液並妥善保存。在一些實施例中，製備涉及所欲分子與聚合化合物（諸如聚乳酸或聚乙醇酸）、珠、或微脂體（其提供產物之控制或持續釋放）之配方，其接著經由長效儲存式注射(depot injection)遞送。在一些實施例中，使用可植入藥物遞送裝置來引入所欲分子。

在一些實施例中，治療有需要之對象之癌症的方法包含T細胞療法。在一些實施例中，本文中所揭示之T細胞療法係經工程改造自體細胞療法(eACT™)。根據此實施例，該方法可包括自患者收集血液細胞。然後可將經單離血液細胞（例如，T細胞）工程改造以表現本文中所揭示之CAR。在特定實施例中，CAR T細胞係投予至患者。在一些實施例中，CAR T細胞治療患者中之腫瘤或癌症。在一些實施例中，CAR T細胞縮小腫瘤或癌症大小。

在一些實施例中，用於T細胞療法之捐贈者T細胞係獲自患者（例如用於自體T細胞療法）。在其他實施例中，用於T細胞療法之捐贈者T細胞係獲自不是該患者之對象。在某些實施例中，T細胞係腫瘤浸潤淋巴球(TIL)、經工程改造自體T細胞(eACT™)、同種異體T細胞、異源T細胞、或其任何組合。

在一些實施例中，經工程改造T細胞係以治療有效量來投予。例如，經工程改造T細胞之治療有效量可係至少約10 ⁴個細胞、至少約10 ⁵個細胞、至少約10 ⁶個細胞、至少約10 ⁷個細胞、至少約10 ⁸個細胞、至少約10 ⁹個、或至少約10 ¹⁰個。在另一個實施例中，T細胞之治療有效量係約10 ⁴個細胞、約10 ⁵個細胞、約10 ⁶個細胞、約10 ⁷個細胞、或約10 ⁸個細胞。在一些實施例中，T細胞之治療有效量係約2 × 10 ⁶個細胞/kg、約3 × 10 ⁶個細胞/kg、約4 × 10 ⁶個細胞/kg、約5 × 10 ⁶個細胞/kg、約6 × 10 ⁶個細胞/kg、約7 × 10 ⁶個細胞/kg、約8 × 10 ⁶個細胞/kg、約9 × 10 ⁶個細胞/kg、約1 × 10 ⁷個細胞/kg、約2 × 10 ⁷個細胞/kg、約3 × 10 ⁷個細胞/kg、約4 × 10 ⁷個細胞/kg、約5 × 10 ⁷個細胞/kg、約6 × 10 ⁷個細胞/kg、約7 × 10 ⁷個細胞/kg、約8 × 10 ⁷個細胞/kg、或約9 × 10 ⁷個細胞/kg。

在一些實施例中，經工程改造活T細胞之治療有效量係在每kg體重約1 × 10 ⁶與約2 × 10 ⁶個經工程改造活T細胞之間至至多約1 × 10 ⁸個經工程改造活T細胞之最高劑量。在一些實施例中，經工程改造T細胞係抗CD19 CART T細胞。在一些實施例中，抗CD19 CAR T細胞係西卡思羅產品。在一些實施例中，抗CD19 CAR T細胞係布萊奧妥產品，亦稱為KTE-X19。治療方法

本文中所揭示之方法可用以治療對象中之癌症、縮小腫瘤大小、殺滅腫瘤細胞、預防腫瘤細胞增生、預防腫瘤生長、自患者中消除腫瘤、預防腫瘤復發、預防腫瘤轉移、在患者中誘導緩解、或其任何組合。在一些實施例中，方法誘導完全反應。在其他實施例中，方法誘導部分反應。

可治療之癌症包括未形成血管、尚未實質上形成血管、或已形成血管之腫瘤。癌症亦可包括實體或非實體腫瘤。在一些實施例中，癌症係血液癌症。在一些實施例中，癌症係白血球細胞者。在其他實施例中，癌症係漿細胞者。在一些實施例中，癌症係白血病、淋巴瘤、或骨髓瘤。在一些實施例中，癌症係急性淋巴母細胞白血病(ALL)（包括非T細胞ALL）、急性淋巴樣白血病(ALL)、及噬血球性淋巴組織細胞增生症(HLH)、B細胞前淋巴球白血病、B細胞急性淋巴樣白血病(「BALL」)、母細胞性漿細胞樣樹突細胞贅瘤、Burkitt氏淋巴瘤、慢性淋巴球性白血病(CLL)、慢性骨髓性白血病(CML)、慢性骨髓白血病(CML)、慢性或急性肉芽腫病、慢性或急性白血病、瀰漫性大B細胞淋巴瘤、瀰漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)、濾泡淋巴瘤、濾泡淋巴瘤(FL)、毛細胞白血病、噬血球性症候群（巨噬細胞活化症候群(MAS)、霍奇金氏病、大細胞肉芽腫、白血球黏附缺乏症、惡性淋巴增生病況、MALT淋巴瘤、被套細胞淋巴瘤(MCL)、邊緣區淋巴瘤(MZL)、意義不明單株免疫球蛋白增高症(MGUS)、多發性骨髓瘤、骨髓化生不良及骨髓化生不良症候群(MDS)、骨髓疾病（包括但不限於急性骨髓白血病(AML)）、非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)、漿細胞增生性病症（例如無症狀骨髓瘤（燜燃型多發性骨髓瘤或無痛骨髓瘤））、漿母細胞淋巴瘤、漿細胞樣樹突細胞贅瘤、漿細胞瘤（例如漿細胞惡液質；孤立性骨髓瘤；孤立性漿細胞瘤；髓外漿細胞瘤；及多發性漿細胞瘤）、POEMS症候群（Crow-Fukase氏症候群；Takatsuki氏症；PEP症候群）、原發性縱膈腔大B細胞淋巴瘤(PMBC)、小細胞或大細胞濾泡淋巴瘤、脾邊緣區淋巴瘤(SMZL)、全身性類澱粉蛋白輕鏈類澱粉變性症、T細胞急性淋巴樣白血病(「TALL」)、T細胞淋巴瘤、變化型濾泡淋巴瘤、Waldenstrom氏巨球蛋白血症、或其組合。

在一些實施例中，癌症係骨髓瘤。在一些實施例中，癌症係多發性骨髓瘤。在一些實施例中，癌症係白血病。在一些實施例中，癌症係急性骨髓白血病。

在一些實施例中，癌症係非霍奇金氏淋巴瘤。在一些實施例中，癌症係復發性/難治性NHL。在一些實施例中，癌症係被套細胞淋巴瘤。

在一些實施例中，癌症係晚期低惡性度非霍奇金氏淋巴瘤(indolent non-Hodgkin lymphoma, iNHL)，包括濾泡淋巴瘤(FL)及邊緣區淋巴瘤(MZL)。在一些實施例中，患者在≥2種前線療法（包括具有烷化劑之抗CD20單株抗體）之後患有復發性/難治性疾病。在一些實施例中，患者可已接受PI3K抑制劑。在一些實施例中，患者（亦）可已接受自體幹細胞移植。在一些實施例中，患者經歷白血球分離術以獲得T細胞以用於CAR T細胞製造，接著在第-5天、第-4天、及第-3天投予使用500 mg/m ²/天環磷醯胺及30 mg/m ²/天氟達拉濱之調理化學療法；在第0天，患者可以2×10 ⁶個CAR T細胞/kg之目標劑量接受單次靜脈內輸注CAR T細胞療法（例如西卡思羅）。在一些實施例中，可在稍後期間給予額外輸注。在一些實施例中，若患者在初始投予之後第3個月評估時有反應後出現進展，則患者可接受使用CAR T細胞治療（例如西卡思羅）之再治療。在一些實施例中，患者可接受橋接療法。橋接療法之實例包括地塞米松、利妥昔單抗(Rituximab)、依託泊苷(Etoposide)、卡鉑、異環磷醯胺、苯達莫司汀-利妥昔單抗、苯達莫司汀、甲基潑尼松龍(Methylprednisolone)、米托蒽醌(Mitoxantrone)、環磷醯胺、氟達拉濱、依魯替尼(ibrutinib)。在一些實施例中，患者經歷CRS。在一些實施例中，CRS係使用本申請案（包括實例）中所述之任一規程管理。在一些實施例中，CRS係用托珠單抗、皮質類固醇、及/或升壓劑管理。

在一些實施例中，癌症係復發性/難治性低惡性度非霍奇金氏淋巴瘤，且治療有需要之對象之方法包含向對象投予治療有效量的CAR T細胞作為再治療，其中該對象先前已接受使用CAR T細胞之第一次治療。在一些實施例中，使用CAR T細胞之第一次治療可已作為第一線療法或第二線療法投予，可選地其中淋巴瘤係R/R濾泡淋巴瘤(FL)或邊緣區淋巴瘤(MZL)，且可選地其中先前的前線療法包括與烷化劑組合之抗CD20單株抗體。在一些實施例中，調理療法包含在第-5天、第-4天、及第-3天之氟達拉濱30 mg/m ²IV及環磷醯胺500 mg/m ²IV。在一些實施例中，CAR T細胞治療包含在第0天之單次IV輸注2 × 10 ⁶個CAR T細胞/kg。在一些實施例中，投予至少約10 ⁴個細胞、至少約10 ⁵個細胞、至少約10 ⁶個細胞、至少約10 ⁷個細胞、至少約10 ⁸個細胞、至少約10 ⁹個、或至少約10 ¹⁰個CAR T細胞。在另一個實施例中，T細胞之治療有效量係約10 ⁴個細胞、約10 ⁵個細胞、約10 ⁶個細胞、約10 ⁷個細胞、或約10 ⁸個細胞。在一些實施例中，T細胞之治療有效量係約2 × 10 ⁶個細胞/kg、約3 × 10 ⁶個細胞/kg、約4 × 10 ⁶個細胞/kg、約5 × 10 ⁶個細胞/kg、約6 × 10 ⁶個細胞/kg、約7 × 10 ⁶個細胞/kg、約8 × 10 ⁶個細胞/kg、約9 × 10 ⁶個細胞/kg、約1 × 10 ⁷個細胞/kg、約2 × 10 ⁷個細胞/kg、約3 × 10 ⁷個細胞/kg、約4 × 10 ⁷個細胞/kg、約5 × 10 ⁷個細胞/kg、約6 × 10 ⁷個細胞/kg、約7 × 10 ⁷個細胞/kg、約8 × 10 ⁷個細胞/kg、或約9 × 10 ⁷個細胞/kg。在一些實施例中，CAR T細胞係抗CD19 CAR T細胞。在一些實施例中，CAR T細胞係西卡思羅CAR T細胞。在一些實施例中，CAR T細胞係布萊奧妥/KTE-X19。在一些實施例中，再治療資格標準包括在第3個月疾病評估時具有後續進展之CR或PR之反應；藉由局部審查，進展活體組織切片中無CD19喪失之證據；及/或在使用CAR T細胞之第一次治療下，無4級CRS或神經性事件或危及生命之毒性。在一些實施例中，治療方法係CLINICAL TRIAL-2臨床試驗(NCT02601313)之後的方法。在一些實施例中，治療方法係CLINICAL TRIAL-5臨床試驗(NCT03105336)之後的方法。在一些實施例中，治療方法係CLINICAL TRIAL-1 (NCT02348216)臨床試驗之後的方法，其詳細描述於Neelapu, SS et al. 2017, N Engl J Med2017; 377(26):2531-44)及Locke, et al. Lancet Oncol.2019; 20:31-42。

在一些實施例中，癌症係NHL，且CAR T細胞治療係作為第一線療法來投予。在一些實施例中，癌症係LBCL。在一些實施例中，LBCL係具有 MYC及 BCL2及/或 BCL6易位之高風險/高級LBCL或在招募前之任何時間IPI評分≥ 3之DLBCL。在一些實施例中，第一線療法包含與抗CD20單株抗體及含蒽環類藥物(anthracycline)之方案組合的CAR T細胞治療。在一些實施例中，先投予CAR T細胞治療。在一些實施例中，先投予抗CD20單株抗體/含蒽環類藥物之方案。在一些實施例中，治療係相隔至少2週、至少4週、至少6週、至少1個月、至少2個月、至少3個月、至少4個月、至少5個月、少於一年等投予。在一些實施例中，該方法進一步包含在白血球分離術之後投予且在起始調理化學療法之前完成的橋接療法。在一些實施例中，額外納入標準包括年齡≥18歲及ECOG PS 0至1。在一些實施例中，調理療法包含在第-5天、第-4天、及第-3天之氟達拉濱30 mg/m ²IV及環磷醯胺500 mg/m ²IV。其他例示性有益預調理治療方案係描述於美國臨時專利申請案62/262,143及62/167,750及美國專利第9,855,298號及第10,322,146號中，其等之全文特此以引用方式併入本文中。這些描述了例如調理有需要T細胞療法之患者之方法，包含向該患者投予指定有益劑量的環磷醯胺（介於200 mg/m ²/天與2000 mg/m ²/天之間）及指定劑量的氟達拉濱(fludarabine)（介於20 mg/m ²/天與900 mg/m ²/天之間）。一種此類劑量療程涉及治療患者，包含在向該患者投予治療有效量的經工程改造T細胞前先每天向該患者投予約500 mg/m ²/天的環磷醯胺及約60 mg/m ²/天的氟達拉濱持續三天。另一實施例包含在T細胞投予前第-4天、第-3天、及第-2天的血清環磷醯胺及氟達拉濱，在該段時間的劑量係每天500 mg/m ²體表面積的環磷醯胺及每天30 mg/m ²體表面積的氟達拉濱。另一實施例包含在T細胞投予前第-2天的環磷醯胺及第-4、-3、及-2天的氟達拉濱，在該段時間期間劑量係900 mg/m ²體表面積的環磷醯胺及每天25 mg/m ²體表面積的氟達拉濱。在另一實施例中，調理包含在T細胞投予前第-5、-4、及-3天的環磷醯胺及氟達拉濱，在該段時間期間劑量係每天500 mg/m ²體表面積的環磷醯胺及每天30 mg/m ²體表面積的氟達拉濱。其他預調理實施例包含每天200至300 mg/m ²體表面積的環磷醯胺及每天20至50 mg/m ²體表面積的氟達拉濱之劑量，持續三天。CLINICAL TRIAL-1 (NCT02348216)臨床試驗詳細描述於實例以及Neelapu, SS et al. 2017, N Engl J Med2017; 377(26):2531-44)及Locke, et al. Lancet Oncol.2019; 20:31-42。

在一些實施例中，治療方法包含與其他治療劑或治療（例如，放射、減積(debulking)）組合來投予免疫細胞。在一些實施例中，包括額外治療劑或治療以管理不良事件。在一些實施例中，包括額外治療劑或治療以改善細胞治療之治療功效。在一些實例中，其等實現兩者。在下文及本說明書中其他地方提供可與免疫細胞一同（在其之前、之後、及/或與其並行）使用之治療劑之實例。

在一些實施例中，方法進一步包含投予化學治療劑。在一些實施例中，所選化學治療劑係淋巴球清除(lymphodepleting)（預調理）化學治療劑。有益的預調理治療療程，連同相關有益生物標記係描述於美國臨時專利申請案第62/262,143及62/167,750號及美國專利第9,855,298及10,322,146號，其等之全文特此以引用方式併入本文中。這些描述了例如調理有需要T細胞療法之患者之方法，包含向該患者投予指定有益劑量的環磷醯胺（介於200 mg/m ²/天與2000 mg/m ²/天之間）及指定劑量的氟達拉濱(fludarabine)（介於20 mg/m ²/天與900 mg/m ²/天之間）。一種此類劑量療程涉及治療患者，包含在向該患者投予治療有效量的經工程改造T細胞前先每天向該患者投予約500 mg/m ²/天的環磷醯胺及約60 mg/m ²/天的氟達拉濱持續三天。另一調理實施例包含在第-5天、-4天、及-3天的500 mg/m ²/天的環磷醯胺及30 mg/m ²/天的氟達拉濱，持續3天。另一實施例包含在T細胞投予前第-4天、第-3天、及第-2天的血清環磷醯胺及氟達拉濱，在該段時間的劑量係每天500 mg/m ²體表面積的環磷醯胺及每天30 mg/m ²體表面積的氟達拉濱。另一實施例包含在T細胞投予前第-2天的環磷醯胺及第-4、-3、及-2天的氟達拉濱，在該段時間期間劑量係900 mg/m ²體表面積的環磷醯胺及每天25 mg/m ²體表面積的氟達拉濱。在另一實施例中，調理包含在T細胞投予前第-5、-4、及-3天的環磷醯胺及氟達拉濱，在該段時間期間劑量係每天500 mg/m ²體表面積的環磷醯胺及每天30 mg/m ²體表面積的氟達拉濱。另一實施例包含每天300 mg/m ²的環磷醯胺持續3天、及每天30 mg/m ²的氟達拉濱持續3天。另一實施例包含在T細胞投予前2至7天提供3天的氟達拉濱(30 mg/m ²)及環磷醯胺(300 mg/m ²)。另一實施例包含在第-7至-2天一次的3000 mg/m ²環磷醯胺。另一實施例包含在每天300 mg/m ²的環磷醯胺持續3天、以及每天30 mg/m ²的氟達拉濱持續3天，最後一天是第-7至-2天。

在一些實施例中，抗原結合分子、經轉導（或以其他方式經工程改造）細胞（諸如CAR）、及化學治療劑係以有效治療對象中之疾病或病況之量來投予。

在一些實施例中，包含本文中所揭示之免疫細胞（例如，CAR表現免疫效應細胞）的組成物可與任何數目之其他化學治療劑及/或放射結合（在免疫細胞投予之前、之後、及/或與其並行）投予。化學治療劑之實例包括烷化劑，諸如噻替哌(thiotepa)及環磷醯胺(CYTOXAN™)；烷基磺酸酯，諸如白消安(busulfan)、英丙舒凡(improsulfan)、及哌泊舒凡(piposulfan)；氮丙啶，諸如苯唑多巴(benzodopa)、卡波醌(carboquone)、美妥多巴(meturedopa)、及優瑞多巴(uredopa)；伸乙亞胺及甲基蜜胺(methylamelamine)，包括六甲蜜胺(altretamine)、三伸乙基蜜胺(triethylenemelamine)、三伸乙基磷醯胺(trietylenephosphoramide)、三伸乙基硫代磷醯胺(triethylenethiophosphaoramide)及三羥甲基蜜胺(trimethylol melamine)；氮芥(nitrogen mustard)，諸如氯芥苯丁酸、萘氮芥(chlornaphazine)、氯磷醯胺(cholophosphamide)、雌氮芥(estramustine)、異環磷醯胺(ifosfamide)、二氯甲基二乙胺(mechlorethamine)、二氯甲基二乙胺氧化物鹽酸鹽、美法侖(melphalan)、新恩比興(novembichin)、苯芥膽甾醇(phenesterine)、潑尼氮芥(prednimustine)、氯乙環磷醯胺(trofosfamide)、尿嘧啶氮芥(uracil mustard)；亞硝基脲(nitrosurea)，諸如卡莫司汀(carmustine)、氯脲黴素(chlorozotocin)、福莫司汀(fotemustine)、洛莫司汀(lomustine)、尼莫司汀(nimustine)、雷莫司汀(ranimnustine)；抗生素，諸如阿克拉黴素(aclacinomysins)、放線菌素(actinomycin)、安麯黴素(authramycin)、偶氮絲胺酸、博萊黴素、放線菌素C (cactinomycin)、卡奇黴素(calicheamicin)、卡拉比星(carabicin)、洋紅黴素(carminomycin)、嗜癌黴素(carzinophilin)、色黴素(chromomycin)、放線菌素D (dactinomycin)、道諾黴素(daunorubicin)、地托比星(detorubicin)、6-重氮-5-側氧基-L-正白胺酸、阿黴素(doxorubicin)、依索比星(esorubicin)、艾達黴素(idarubicin)、麻西羅黴素(marcellomycin)、絲裂黴素(mitomycin)、黴酚酸(mycophenolic acid)、諾加黴素(nogalamycin)、橄欖黴素(olivomycin)、培洛黴素(peplomycin)、泊非黴素(potfiromycin)、嘌呤黴素(puromycin)、奎拉黴素(quelamycin)、羅多比星(rodorubicin)、鏈黑菌素(streptonigrin)、鏈脲黴素(streptozocin)、殺結核菌素(tubercidin)、烏苯美司(ubenimex)、淨司他丁(zinostatin)、佐柔比星(zorubicin)；抗代謝物，諸如胺甲喋呤及5-氟脲嘧啶(5-FU)；葉酸類似物，諸如二甲葉酸(denopterin)、胺甲喋呤、蝶羅呤(pteropterin)、曲美沙特(trimetrexate)；嘌呤類似物，諸如氟達拉濱、6-巰嘌呤、硫咪嘌呤(thiamiprine)、硫鳥嘌呤(thioguanine)；嘧啶類似物，諸如環胞苷(ancitabine)、阿紮胞苷(azacitidine)、6-硫唑脲嘧啶、卡莫氟(carmofur)、阿糖胞苷(cytarabine)、二去氧尿苷、去氧氟尿苷(doxifluridine)、依諾他濱(enocitabine)、氟尿苷(floxuridine)、5-FU；雄性激素，諸如卡魯睪酮(calusterone)、屈他雄酮丙酸酯(dromostanolone propionate)、環硫雄醇(epitiostanol)、美雄烷(mepitiostane)、睪內酯(testolactone)；抗腎上腺劑，諸如胺麩精(aminoglutethimide)、米托坦(mitotane)、曲洛司坦(trilostane)；葉酸補充劑，諸如夫羅林酸(frolinic acid)；醋葡醛內酯(aceglatone)；醛磷醯胺糖苷(aldophosphamide glycoside)；胺基乙醯丙酸(aminolevulinic acid)；安吖啶(amsacrine)；倍曲布西(bestrabucil)；比生群(bisantrene)；依達曲沙(edatraxate)；得弗伐胺(defofamine)；地美可辛(demecolcine)；地吖醌(diaziquone)；埃夫咪辛(elformithine)；依利醋銨(elliptinium acetate)；依託格魯(etoglucid)；硝酸鎵；羥基尿素；蘑菇多糖(lentinan)；氯尼達明(lonidamine)；米托胍腙(mitoguazone)；米托蒽醌(mitoxantrone)；莫哌達醇(mopidamol)；二胺硝吖啶(nitracrine)；噴司他汀(pentostatin)；凡那明(phenamet)；吡柔比星(pirarubicin)；鬼臼酸(podophyllinic acid)；2-乙基醯肼(2-ethylhydrazide)；丙卡巴肼(procarbazine)；多醣K (PSK)；雷佐生(razoxane)；西索菲蘭(sizofiran)；鍺螺胺(spirogermanium)；細交鏈孢菌酮酸(tenuazonic acid)；三亞胺醌(triaziquone)；2,2',2''-三氯三乙胺；烏拉坦(urethan)；長春地辛(vindesine)；達卡巴仁；甘露莫司汀(mannomustine)；二溴甘露醇(mitobronitol)；二溴衛矛醇(mitolactol)；哌泊溴烷(pipobroman)；伽托辛(gacytosine)；阿拉伯糖苷（「Ara-C」）；環磷醯胺；噻替派；類紫杉醇，例如太平洋紫杉醇(paclitaxel) (TAXOL™, Bristol-Myers Squibb)及多西紫杉醇(doxetaxel) (TAXOTERE®, Rhone-Poulenc Rorer)；氯芥苯丁酸；吉西他濱；6-硫鳥嘌呤；巰嘌呤；甲胺喋呤；鉑類似物，諸如順鉑及卡鉑；長春鹼；鉑；依託泊苷(VP-16)；依弗醯胺；絲裂黴素C (mitomycin C)；米托蒽醌(mitoxantrone)；長春新鹼(vincristine)；長春瑞濱(vinorelbine)；溫諾平(navelbine)；諾安托(novantrone)；替尼泊苷；道諾黴素(daunomycin)；胺喋呤；截瘤達(xeloda)；伊班膦酸鹽(ibandronate)；CPT-11；拓撲異構酶(topoisomerase)抑制劑RFS2000；二氟甲基鳥胺酸(DMFO)；視黃酸衍生物，諸如Targretin™（貝沙羅汀(bexarotene)）、Panretin™（阿利維A酸(alitretinoin)）；ONTAK™（地尼介白素(denileukin diftitox)）；埃斯培拉黴素(esperamicin)；卡培他濱；及以上任一者之醫藥上可接受之鹽、酸或衍生物。在一些實施例中，包含本文中所揭示之CAR表現免疫效應細胞的組成物可與抗荷爾蒙劑結合投予，抗荷爾蒙劑作用為調控或抑制對腫瘤之荷爾蒙作用，諸如抗雌激素，包括例如泰莫西芬(tamoxifen)、雷洛昔芬(raloxifene)、芳香酶抑制4(5)-咪唑、4-羥基泰莫昔芬(4-hydroxytamoxifen)、曲沃昔芬(trioxifene)、克沃昔芬(keoxifene)、LY117018、奧那司酮(onapristone)、及托瑞米芬(toremifene) (Fareston)；及抗雄性激素，諸如氟他胺(flutamide)、尼魯米特(nilutamide)、比卡魯胺(bicalutamide)、柳菩林(leuprolide)、及戈舍瑞林(goserelin)；及以上任一者之醫藥上可接受之鹽、酸或衍生物。若適當，亦投予化學治療劑之組合，包括但不限於CHOP（亦即環磷醯胺(Cytoxan®)、阿黴素（羥基阿黴素）、長春新鹼(Oncovin®)、及潑尼松）、R-CHOP（CHOP加利妥昔單抗）、及G-CHOP（CHOP加阿托珠單抗(obinutuzumab)）。

在一些實施例中，化學治療劑係與經工程改造免疫細胞之投予同時投予或在經工程改造免疫細胞之投予後一週內投予。在其他實施例中，化學治療劑係在經工程改造細胞或核酸之投予後1至4週、或1週至1個月、1週至2個月、1週至3個月、1週至6個月、1週至9個月、或1週至12個月投予。在一些實施例中，化學治療劑係在投予細胞或核酸前至少1個月投予。在一些實施例中，方法進一步包含投予二或更多種化學治療劑。

各種額外治療劑可與本文所述之組成物結合使用（在T細胞投予之前、之後、及/或與其並行）。例如，可能有用的額外治療劑包括PD-1抑制劑，諸如納武單抗(OPDIVO®)、派姆單抗(KEYTRUDA®)、西米普利單抗(Libtayo)、皮地利珠單抗(pidilizumab) (CureTech)、及阿特珠單抗(Roche)；及PD-L1抑制劑，諸如阿特珠單抗、德瓦魯單抗、及阿維魯單抗。

適用於與本文所揭示之組成物及方法組合（在T細胞投予之前、之後、及/或與其並行）之額外治療劑包括但不限於依魯替尼(ibrutinib) (IMBRUVICA®)、奧法木單抗(ofatumumab) (ARZERRA®)、利妥昔單抗(RITUXAN®)、貝伐珠單抗(bevacizumab) (AVASTIN®)、曲妥珠單抗(trastuzumab) (HERCEPTIN®)、曲妥珠單抗恩他新(trastuzumab emtansine) (KADCYLA®)、伊馬替尼(imatinib) (GLEEVEC®)、西妥昔單抗(cetuximab) (ERBITUX®)、帕尼單抗(panitumumab) (VECTIBIX®)、卡妥索單抗(catumaxomab)、替伊莫單抗(ibritumomab)、奧法木單抗、托西莫單抗(tositumomab)、本妥昔單抗(brentuximab)、阿侖單抗(alemtuzumab)、吉妥珠單抗(gemtuzumab)、埃羅替尼(erlotinib)、吉非替尼(gefitinib)、凡德他尼(vandetanib)、阿法替尼(afatinib)、拉帕替尼(lapatinib)、來那替尼(neratinib)、阿西替尼(axitinib)、馬賽替尼(masitinib)、帕唑帕尼(pazopanib)、舒尼替尼(sunitinib)、索拉非尼(sorafenib)、托西尼布(toceranib)、來他替尼(lestaurtinib)、阿西替尼、西地尼布(cediranib)、樂伐替尼(lenvatinib)、尼達尼布(nintedanib)、帕唑帕尼、瑞戈非尼(regorafenib)、司馬沙尼(semaxanib)、索拉非尼、舒尼替尼、替沃紮尼(tivozanib)、托西尼布、凡德他尼(vandetanib)、恩曲替尼(entrectinib)、卡博替尼(cabozantinib)、伊馬替尼、達沙替尼(dasatinib)、尼羅替尼(nilotinib)、普納替尼(ponatinib)、拉多替尼(radotinib)、博舒替尼(bosutinib)、來他替尼、魯索替尼(ruxolitinib)、帕瑞替尼(pacritinib)、考比替尼(cobimetinib)、司美替尼(selumetinib)、曲美替尼(trametinib)、比美替尼(binimetinib)、艾樂替尼(alectinib)、色瑞替尼(ceritinib)、克唑替尼(crizotinib)、阿柏西普(aflibercept)、脂肪肽(adipotide)、地尼白介素(denileukin diftitox)、mTOR抑制劑（諸如依維莫司(everolimus)及替西羅莫司(temsirolimus)）、刺蝟蛋白抑制劑（諸如索尼德吉(sonidegib)及維莫德吉(vismodegib)）、CDK抑制劑（諸如CDK抑制劑（帕博西尼(palbociclib)））、GM-CSF、CSF1、GM-CSFR、或CSF1R之抑制劑、加上抗胸腺細胞球蛋白、朗齊魯單抗、及嗎里木單抗。

在一個實施例中，GM-CSF抑制劑係選自朗齊魯單抗；奈米路單抗(namilumab) (AMG203)；GSK3196165/MOR103/奧替利單抗(otilimab) (GSK/MorphoSys)；KB002及KB003 (KaloBios)；MT203（Micromet及Nycomed）；MORAb-022/吉斯魯單抗(gimsilumab) (Morphotek)；或其任一者之生物相似藥(biosimilar)；E21R；及小分子。在一個實施例中，CSF1抑制劑係選自RG7155、PD-0360324、MCS110/拉妥珠單抗、或其任一者之生物相似藥版本；及小分子。在一個實施例中，GM-CSFR抑制劑及CSF1R抑制劑係選自嗎里木單抗（原CAM-3001；MedImmune, Inc.）；卡比拉單抗(cabiralizumab) (Five Prime Therapeutics)；LY3022855 (IMC-CS4)(Eli Lilly)，艾瑪圖單抗(emactuzumab)，亦稱為RG7155或RO5509554；FPA008 (Five Prime/BMS)；AMG820 (Amgen)；ARRY-382 (Array Biopharma)；MCS110 (Novartis)；PLX3397 (Plexxikon)；ELB041/AFS98/TG3003 (ElsaLys Bio, Transgene)、SNDX-6352 (Syndax)；其任一者之生物相似藥版本；及小分子。

在一些實施例中，藥劑藉由注射投予，例如靜脈內或皮下注射、眼內注射、眼周(periocular)注射、視網膜下注射、玻璃體內注射、經中隔(trans-septal)注射、鞏膜下注射、脈絡膜內注射、前房內(intracameral)注射、結膜下(subconjectval)注射、結膜下(subconjuntival)注射、眼球筋膜下(sub-Tenon’s)注射、眼球後注射、眼球周注射、或後鞏膜旁(posterior juxtascleral)遞送。在一些實施例中，其係藉由腸胃外、肺內、及鼻內投予，且若需要局部治療，則係藉由病灶內投予。腸胃外輸注包括肌內、靜脈內、動脈內、腹膜內、或皮下投予。

在一些實施例中，治療進一步包含橋接療法，該療法係在調理與本文所揭示之組成物之間的療法、或在白血球分離術之後投予且在起始調理化學療法之前完成的療法。在一些實施例中，橋接療法包含CHOP、G-CHOP、R-CHOP（利妥昔單抗、環磷醯胺、阿黴素、長春新鹼、及潑尼松龍(prednisolone)）、皮質類固醇、苯達莫司汀、鉑化合物、蒽環類藥物、及/或磷酸肌醇3-激酶(PI3K)抑制劑。在一些實施例中，PI3K抑制劑係選自杜維昔布(duvelisib)、艾德昔布(idelalisib)、維奈托克(venetoclax)、皮克昔布(pictilisib) (GDC‐0941)、考班昔布(copanlisib)、PX‐866、布帕昔布(buparlisib) (BKM120)、皮拉昔布(pilaralisib) (XL‐147)、GNE‐317、艾培昔布(alpelisib) (BYL719)、INK1117、GSK2636771、AZD8186、SAR260301、及泰斯昔布(taselisib) (GDC‐0032)。在一些實施例中，AKT抑制劑係哌立福新(perifosine)、MK‐2206。在一個實施例中，mTOR抑制劑係選自依維莫司、西羅莫司(sirolimus)、替西羅莫司(temsirolimus)、利達福莫司(ridaforolimus)。在一些實施例中，雙重PI3K/mTOR抑制劑係選自BEZ235、XL765、及GDC‐0980。在一些實施例中，PI3K抑制劑係選自杜維昔布(duvelisib)、艾德昔布(idelalisib)、維奈托克(venetoclax)、皮克昔布(pictilisib) (GDC‐0941)、考班昔布(copanlisib)、PX‐866、布帕昔布(buparlisib) (BKM120)、皮拉昔布(pilaralisib) (XL‐147)、GNE‐317、艾培昔布(alpelisib) (BYL719)、INK1117、GSK2636771、AZD8186、SAR260301、及泰斯昔布(taselisib) (GDC‐0032)。

在一些實施例中，橋接療法包含阿卡替尼(acalabrutinib)、貝倫妥單抗維多汀(brentuximab vedotin)、考班昔布鹽酸鹽(copanlisib hydrochloride)、奈拉濱(nelarabine)、貝利司他(belinostat)、苯達莫司汀鹽酸鹽(bendamustine hydrochloride)、卡莫司汀、博萊黴素硫酸鹽(bleomycin sulfate)、硼替佐米(bortezomib)、贊魯替尼(zanubrutinib)、卡莫司汀、氯芥苯丁酸、考班昔布鹽酸鹽、地尼白介素(denileukin diftitox)、地塞米松、阿黴素鹽酸鹽、杜維昔布(duvelisib)、普拉曲沙(pralatrexate)、阿托珠單抗(obinutuzumab)、替坦異貝莫單抗(ibritumomab tiuxetan)、依魯替尼、艾德昔布、重組干擾素α-2b、羅米地辛(romidepsin)、來那度胺(enalidomide)、二氯甲基二乙胺鹽酸鹽、胺甲喋呤(methotrexate)、莫格利珠單抗(mogamulizumab)-kpc、普瑞沙福(prerixafor)、奈拉濱、阿托珠單抗、地尼白介素、派姆單抗、普樂沙福(plerixafor)、保納珠單抗維多汀(polatuzumab vedotin)-piiq、莫格利珠單抗-kpc、潑尼松、利妥昔單抗、透明質酸酶(hyaluronidase)、羅米地辛、硼替佐米、維奈托克、硫酸長春花鹼(vinblastine sulfate)、伏立諾他(vorinostat)、贊魯替尼、CHOP、COPP、CVP、EPOCH、R-EPOCH、HYPER-CVAD、ICE、R-ICE、R-CHOP、R-CVP、及相同者之組合。

在一些實施例中，細胞免疫療法係與以降低腫瘤負荷量為目的使用之減積(debulking)療法結合投予。在一個實施例中，減積療法將在白血球分離術之後且在投予調理化學療法或細胞輸注之前投予。減積療法之實例包括下列：

類型	建議方案 ^a	時機/清除(washout)
R-CHOP	第1天利妥昔單抗375 mg/m2、第1天阿黴素50 mg/m2、第1天至第5天潑尼松100 mg、第1天環磷醯胺750 mg/m2、第1天長春新鹼1.4 mg/m2	應在白血球分離術/招募之後投予且應完成在調理化學療法開始前至少14天
R-ICE	第1天利妥昔單抗375 mg/m2 第2天異環磷醯胺5 g/m2 24h-CI 第2天最大劑量800 mg之卡鉑AUC5、第1天至第3天依託泊苷100 mg/m2 /d
R-GEMOX	第1天利妥昔單抗375 mg/m2、第2天吉西他濱1000 mg/m2、第2天奧沙利鉑(oxaliplatin) 100 mg/m2
R-GDP	第1天（或第8天）利妥昔單抗375 mg/m2 第1天及第8天吉西他濱1 g/m2、第1天至第4天地塞米松40 mg、第1天順鉑75 mg/m2（或第1天卡鉑AUC5）
放射療法 ^b	依據當地標準，至多20至30 Gy	應在白血球分離術/招募之後投予且應完成在調理化學療法開始前至少5天

縮寫：AUC，曲線下面積 ^a可使用其他減積治療選項，與醫療監測員討論。根據當地標準，可使用用水合、止吐、美司鈉、生長因子支持、及腫瘤溶解疾病預防之支持性照護。允許多於1個循環。 ^b至少1個目標病灶應保持在輻射場外，以允許腫瘤測量

在一些實施例中，包含免疫細胞（例如經工程改造CAR T細胞）之組成物係與消炎劑（在免疫細胞投予之前、之後、及/或與其並行）一起投予。消炎劑或藥物包括但不限於類固醇及糖皮質素（包括倍他米松(betamethasone)、布地奈德(budesonide)、地塞米松、乙酸氫化可體松、氫化可體松、氫化可體松、甲基潑尼松龍、潑尼松龍、潑尼松、曲安西龍(triamcinolone)）、非類固醇消炎藥(NSAIDS)，包括阿司匹靈、布洛芬(ibuprofen)、萘普生(naproxen)、胺甲喋呤(methotrexate)、柳氮磺吡啶(sulfasalazine)、來氟米特(leflunomide)、抗TNF藥品、環磷醯胺、及黴酚酸酯(mycophenolate)。例示性NSAID包括布洛芬、萘普生、萘普生鈉、Cox-2抑制劑、及唾液酸化物(sialylate)。例示性止痛劑包括乙醯胺酚、羥考酮(oxycodone)、鹽酸普帕西芬之曲馬多(tramadol)。例示性糖皮質素包括可體松、地塞米松、氫化可體松、甲基潑尼松龍、潑尼松龍、或潑尼松。例示性生物反應調節劑包括針對細胞表面標記（例如CD4、CD5等）之分子、細胞介素抑制劑（諸如TNF拮抗劑（例如依那西普(etanercept) (ENBREL®)、阿達木單抗(adalimumab) (HUMIRA®)、及英夫利昔單抗(infliximab) (REMICADE®)））、趨化因子抑制劑、及黏附分子抑制劑。生物反應調節劑包括單株抗體以及分子之重組形式。例示性DMARD包括硫唑嘌呤、環磷醯胺、環孢素、胺甲喋呤、青黴胺、來氟米特、柳氮磺吡啶、羥氯奎寧、Gold（口服（金諾芬(auranofin)）及肌內）、及米諾環素(minocycline)。

在一些實施例中，本文所述之組成物係與細胞介素（在T細胞投予之前、之後、或與其並行）結合投予。細胞介素之實例係淋巴激素、單核因子(monokines)、及傳統多肽荷爾蒙。細胞介素中包括係生長荷爾蒙，諸如人類生長荷爾蒙、N-甲硫胺醯基人類生長荷爾蒙、及牛生長荷爾蒙；副甲狀腺荷爾蒙；甲狀腺素；胰島素；前胰島素；鬆弛素；前鬆弛素(prorelaxin)；醣蛋白荷爾蒙，諸如濾泡刺激素(FSH)、甲狀腺刺激素(TSH)、及黃體激素(LH)；肝生長因子(HGF)；纖維母細胞生長因子(FGF)；泌乳素；胎盤泌乳原；密拉氏管抑制物質；小鼠促性腺素相關肽；抑制素；活化素；血管內皮生長因子；整合素；促血小板生成素(thrombopoietin) (TPO)；神經生長因子(NGF)，諸如NGF-β；血小板生長因子；轉化生長因子(TGF)，諸如TGF-α及TGF-β；似胰島素生長因子-I及-II；紅血球生成素(EPO, Epogen®, Procrit®)；骨誘導因子；干擾素，諸如干擾素α、β、及γ；群落刺激因子(CSF)，諸如巨噬細胞-CSF (M-CSF)；顆粒球-巨噬細胞-CSF (GM-CSF)；及顆粒球-CSF (G-CSF)；介白素(IL)，諸如IL-1、IL-1α、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-11、IL-12；IL-15，腫瘤壞死因子，諸如TNF-α或TNF-β；及其他多肽因子，包括LIF及kit配體(KL)。如本文中所使用，用語細胞介素包括來自自然來源或重組T細胞培養物之蛋白質、及初始序列細胞介素之生物活性等效物。

在一些實施例中，細胞之投予及額外治療劑之投予係在同一天進行，間隔不超過36小時、間隔不超過24小時、間隔不超過12小時、間隔不超過6小時、間隔不超過4小時、間隔不超過2小時、或間隔不超過1小時、或間隔不超過30分鐘進行。在一些實施例中，細胞之投予及額外治療劑之投予係在剛好或約0與剛好或約48小時之間、在剛好或約0與剛好或約36小時之間、在剛好或約0與剛好或約24小時之間、在剛好或約0與剛好或約12小時之間、在剛好或約0與剛好或約6小時之間、在剛好或約0與剛好或約2小時之間、在剛好或約0與剛好或約1小時之間、在剛好或約0與剛好或約30分鐘之間、在剛好或約30分鐘與剛好或約48小時之間、在剛好或約30分鐘與剛好或約36小時之間、在剛好或約30分鐘與剛好或約24小時之間、在剛好或約30分鐘與剛好或約12小時之間、在剛好或約30分鐘與剛好或約6小時之間、在剛好或約30分鐘與剛好或約4小時之間、在剛好或約30分鐘與剛好或約2小時之間、在剛好或約30分鐘與剛好或約1小時之間、在剛好或約1小時與剛好或約48小時之間、在剛好或約1小時與剛好或約36小時之間、在剛好或約1小時與剛好或約24小時之間、在剛好或約1小時與剛好或約12小時之間、在剛好或約1小時與剛好或約6小時之間、在剛好或約1小時與剛好或約4小時之間、在剛好或約1小時與剛好或約2小時之間、在剛好或約2小時與剛好或約48小時之間、在剛好或約2小時與剛好或約36小時之間、在剛好或約2小時與剛好或約24小時之間、在剛好或約2小時與剛好或約12小時之間、在剛好或約2小時與剛好或約6小時之間、在剛好或約2小時與剛好或約4小時之間、在剛好或約4小時與剛好或約48小時之間、在剛好或約4小時與剛好或約36小時之間、在剛好或約4小時與剛好或約24小時之間、在剛好或約4小時與剛好或約12小時之間、在剛好或約4小時與剛好或約6小時之間、在剛好或約6小時與剛好或約48小時之間、在剛好或約6小時與剛好或約36小時之間、在剛好或約6小時與剛好或約24小時之間、在剛好或約6小時與剛好或約12小時之間、在剛好或約12小時與剛好或約48小時之間、在剛好或約12小時與剛好或約36小時之間、在剛好或約12小時與剛好或約24小時之間、在剛好或約24小時與剛好或約48小時之間、在剛好或約24小時與剛好或約36小時之間、或在剛好或約36小時與剛好或約48小時之間進行。在一些實施例中，細胞及額外治療劑係同時投予。

在一些實施例中，藥劑係以從或從約30 mg至5000 mg，諸如50 mg至1000 mg、50 mg至500 mg、50 mg至200 mg、50 mg至100 mg、100 mg至1000 mg、100 mg至500 mg、100 mg至200 mg、200 mg至1000 mg、200 mg至500 mg、或500 mg至1000 mg之劑量投予。在一些實施例中，藥劑係以0.5 mg/kg至100 mg/kg、1 mg/kg至50 mg/kg、1 mg kg至25 mg/kg、1 mg/kg至10 mg/kg、1 mg/kg至5 mg/kg、5 mg/kg至100 mg/kg、5 mg/kg至50 mg/kg、5 mg/kg至25 mg/kg、5 mg/kg至10 mg/kg、10 mg/kg至100 mg/kg、10 mg/kg至50 mg/kg、10 mg/kg至25 mg/kg、25 mg/kg至100 mg/kg、25 mg/kg至50 mg/kg至50 mg/kg至100 mg/kg之劑量投予。在一些實施例中，藥劑各以1 mg/kg至10 mg/kg、2 mg kg/至8 mg/kg、2 mg/kg至6 mg/kg、2 mg/kg至4 mg/kg、或6 mg/kg至8 mg/kg之劑量投予。在一些態樣中，藥劑係以至少1 mg/kg、2 mg/kg、4 mg/kg、6 mg/kg、8 mg/kg、10 mg/kg、或更高之劑量投予。測量反應及效力

在一些實施例中，本文中所述之方法可向對象提供臨床效益。在一些實施例中，至少1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、或95%的患者達到臨床效益。在一些實施例中，大約1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、0%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、或95%及其間之任何未列舉%的患者達到臨床效益。在一些實施例中，反應率係1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、9.5%、10.5%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、31%、32%、33%、34%、35%、36%、37%、38%、39%、40%、41%、42%、43%、44%、45%、46%、47%、48%、49%、50%、51%、52%、53%、54%、25 55%、56%、57%、58%、59%、60%、61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、或100%、或1%與100%之間的一些其他未列舉百分比及範圍。在一些實施例中，反應率係介於0%至10%、10%至20%、20%至30%、30%至40%、40%至50%、50%至60%、60%至70%、70%至80%、80%至90%、或90%至100%之間。在一些實施例中，反應率係介於0%至1.%、1%至1.5%、1.5%至2%、2%至3%、3%至4%、4%至5%、5%至6%、6%至7%、7%至8%、8%至9%、9%至10%、10%至15%、15%至20%、20至25%、25%至30%、35至40%、依此類推直到95%至100%之間。

臨床效益可係客觀反應或持久臨床反應，其定義為在1年之中位數追蹤時間時的持續反應。在一些實施例中，反應、血液中之CAR T細胞水平、或免疫相關因子係藉由在投予經工程改造CAR T細胞後約1天、約2天、約3天、約4天、約5天、約6天、或約7天時的追蹤判定。在一些實施例中，反應、血液中之CAR T細胞水平、或免疫相關因子係藉由在投予經工程改造CAR T細胞後約1週、約2週、約3週、或約4週時的追蹤判定。在一些實施例中，反應、血液中之CAR T細胞水平、及/或免疫相關因子係藉由在投予經工程改造CAR T細胞後約1個月、約2個月、約3個月、約4個月、約5個月、約6個月、約7個月、約8個月、約9個月、約10個月、約11個月、約12個月、約13個月、約14個月、約15個月、約16個月、約17個月、約18個月、約19個月、約20個月、約21個月、約22個月、約23個月、或約24個月時的追蹤判定。在一些實施例中，反應、血液中之CAR T細胞水平、及/或免疫相關因子係藉由在投予經工程改造CAR T細胞後約1年、約1.5年、約2年、約2.5年、約3年、約4年、或約5年時的追蹤判定。監測

在一些實施例中，嵌合受體T細胞免疫療法之投予在認證健康健康照護設施發生。

在一些實施例中，本文所揭示之方法包含在輸注後在認證健康照護設施針對CRS及神經毒性之徵象及症狀及對CAR T細胞治療之其他不良反應至少每天監測患者持續7天。在一些實施例中，神經毒性之症狀係選自腦病變、頭痛、震顫、暈眩、失語、譫妄、失眠、及焦慮。在一些實施例中，不良反應之症狀係選自由下列所組成之群組：發燒、低血壓、心搏過速、缺氧、及發冷，包括心律不整（包括心房顫動及心室性心搏過速）、心跳停止、心臟衰竭、腎功能衰竭、微血管滲漏症候群、低血壓、缺氧、器官毒性、噬血球性淋巴組織球增生症/巨噬細胞活化症候群(HLH/MAS)、癲癎、腦病變、頭痛、震顫、暈眩、失語、譫妄、失眠、焦慮、急性過敏、嗜中性球低下合併發燒、血小板減少症、嗜中性球減少症、及貧血。在一些實施例中，指示患者在輸注後留在認證健康照護設施附近至少4週。臨床結果

在一些實施例中，臨床結果係完全反應。在一些實施例中，臨床結果係持久反應。在一些實施例中，臨床結果係完全反應。在一些實施例中，臨床結果係無反應。在一些實施例中，臨床結果係部分反應。在一些實施例中，臨床結果係客觀反應。在一些實施例中，臨床結果係存活。在一些實施例中，臨床結果係復發。

在一些實施例中，客觀反應(OR)係依據修改之IWG惡性淋巴瘤反應標準(Cheson, 2007)判定且藉由IWG惡性淋巴瘤反應標準(Cheson et al. Journal of Clinical Oncology 32, no. 27 (September 2014) 3059-3067)判定。反應持續時間(DOR)僅為經歷客觀反應之對象定義，且係自第一次客觀反應至依據(Cheson et al, 2014)之疾病進展或疾病相關死亡（以先到者為準）的時間。評估依據Lugano反應分類標準(Lugano Response Classification Criteria)由試驗主持人評估的無進展存活期(PFS)。嚴重不良反應之預防或管理

在一些實施例中，本揭露提供基於一或多種屬性之水平來預防不良反應之發展或降低不良反應之嚴重性的方法。在一些實施例中，細胞療法係與一或多種預防不良事件、延緩不良事件之發生、減少不良事件之症狀、治療不良事件的藥劑一起投予，不良事件包括細胞介素釋放症候群及神經毒性。在一個實施例中，藥劑已描述於上。在其他實施例中，藥劑係描述於下。在一些實施例中，藥劑係在投予細胞之前、之後、或與其並行，藉由本說明書中之其他地方所述之方法及劑量中之一者投予。在一個實施例中，向可能易患疾病但尚未被診斷出患有該疾病之對象投予（多種）藥劑。

在此方面，所揭示方法可包含投予「疾病預防有效量(prophylactically effective amount)」的托珠單抗、皮質類固醇療法、及/或用於毒性預防之抗癲癎藥物。在一些實施例中，該方法包含投予GM-CSF、CSF1、GM-CSFR、或CSF1R之抑制劑、朗齊魯單抗、嗎里木單抗、細胞介素、及/或抗發炎劑。藥理及/或生理效應可係疾病預防，亦即該效應完全或部分預防其疾病或症狀。「疾病預防有效量」可指在必要劑量下及期間內有效達到所欲疾病預防結果（例如，預防不良反應發作）之量。

在一些實施例中，該方法包含在任何對象中管理不良反應。在一些實施例中，不良反應係選自由下列所組成之群組：細胞介素釋放症候群(CRS)、神經毒性、高敏感性反應、嚴重感染、血球減少、及低伽瑪球蛋白血症(hypogammaglobulinemia)。

在一些實施例中，不良反應之徵象及症狀係選自由下列所組成之群組：發燒、低血壓、心搏過速、缺氧、及發冷，包括心律不整（包括心房顫動及心室性心搏過速）、心跳停止、心臟衰竭、腎功能衰竭、微血管滲漏症候群、低血壓、缺氧、器官毒性、噬血球性淋巴組織球增生症/巨噬細胞活化症候群(HLH/MAS)、癲癎、腦病變、頭痛、震顫、暈眩、失語、譫妄、失眠、焦慮、急性過敏、嗜中性球低下合併發燒、血小板減少症、嗜中性球減少症、及貧血。

在一些實施例中，已基於本申請案中所述之生物標記中之一或多者識別及選擇患者。在一些實施例中，已藉由臨床表現（例如毒性症狀之存在及級別）簡單地識別及選擇患者。細胞介素釋放症候群(CRS)

在一些實施例中，該方法包含預防或降低嵌合受體治療中之CRS嚴重性。在一些實施例中，經工程改造免疫細胞（例如，CAR T細胞）在投予至患者後係去活化。

在一些實施例中，該方法包含基於臨床表現識別CRS。在一些實施例中，該方法包含評估及治療發燒、缺氧、及低血壓之其他原因。經歷≥ 2級CRS（例如，低血壓、對輸液無反應、或需要補充氧合之缺氧）之患者應使用連續心臟遙測(cardiac telemetry)及脈搏血氧測定(pulse oximetry)來進行監測。在一些實施例中，針對經歷嚴重CRS之患者，則考慮執行心臟超音波檢查以評估心臟功能。針對嚴重或威脅生命之CRS，則可考慮加護支持性療法。

在一些實施例中，該方法包含在輸注後在認證健康照護設施針對CRS之徵象及症狀至少每天監測患者持續7天。在一些實施例中，該方法包含在輸注後針對CRS之徵象及症狀監測患者4週。在一些實施例中，方法包含建議患者假使在任何時候發生CRS之徵象及症狀則尋求立即醫療照顧。在一些實施例中，方法包含在CRS之最初徵象時依指示使用支持性照護之機構治療、托珠單抗、或托珠單抗及皮質類固醇。神經毒性(NT)

在一些實施例中，該方法包含針對神經毒性之徵象及症狀監測患者。在一些實施例中，方法包含排除神經症狀之其他原因。經歷≥ 2級神經毒性之患者應使用連續心臟遙測及脈搏血氧測定來進行監測。針對嚴重或威脅生命之神經毒性提供加護支持性療法。在一些實施例中，神經毒性之症狀係選自腦病變、頭痛、震顫、暈眩、失語、譫妄、失眠、及焦慮。不良事件之管理

在一些實施例中，細胞治療係在投予一或多種治療及/或預防（疾病預防性）不良事件之一或多種症狀之藥劑（例如類固醇）或治療（例如減積）之前、期間/並行、及/或之後投予。「疾病預防有效量」係指有效達到所欲疾病預防結果所需之劑量及時間的量。在一個實施例中，疾病預防有效量係用於在疾病之前或疾病之早期階段的對象中。在一個實施例中，疾病預防有效量將小於治療有效量。在一些實施例中，基於本說明書中本文所述之標記中之一或多者之表現，選擇患者進行不良事件管理。在一個實施例中，將不良事件治療或疾病預防投予至將接受、正接受、或已接受細胞療法之任何患者。

在一些實施例中，管理不良事件之方法包含在輸注後在認證健康照護設施針對神經毒性之徵象及症狀至少每天監測患者持續7天。在一些實施例中，該方法包含在輸注後針對神經毒性及/或CRS之徵象及症狀監測患者4週。

在一些實施例中，本揭露提供兩種管理對象中之不良事件之方法，該等對象接受使用類固醇及（多種）抗IL6/抗IL-6R抗體之CAR T細胞治療。在一個實施例中，方法描述於圖46中。在一個實施例中，本揭露提供群組4中之早期類固醇介入與較在群組1+2中所觀察者低的嚴重CRS及神經性事件比率相關。在一個實施例中，本揭露提供群組4中較早使用類固醇與中位數累積可體松等效劑量為群組1+2之大約15%相關，其意味著較早使用類固醇可能減少整體類固醇暴露。因此，在一個實施例中，本揭露提供一種不良事件管理之方法，其中若3天後且對於所有≥1級神經性事件沒有改善，則起始皮質類固醇療法以管理所有1級CRS病例。在一個實施例中，若3天後且對於所有≥2級神經性事件沒有改善，則對所有1級CRS病例起始托珠單抗。在一個實施例中，本揭露提供一種減少在CAR T細胞投予之後接受不良事件管理之患者中整體類固醇暴露的方法，該方法包含若3天後且對於所有≥1級神經性事件沒有改善，則起始皮質類固醇療法以管理所有1級CRS病例；及/或若3天後且對於所有≥2級神經性事件沒有改善，則對所有1級CRS病例起始托珠單抗。在一個實施例中，皮質類固醇及托珠單抗係以選自表12中例示之方案投予。在一個實施例中，本揭露提供早期使用類固醇與嚴重感染之風險增加、CAR T細胞擴增減少、或腫瘤反應降低不相關。

在一個實施例中，本揭露支持左乙拉西坦(levetiracetam)疾病預防在CAR T細胞癌症治療中之安全性。在一個實施例中，癌症係NHL。在一個實施例中，癌症係R/R LBCL，且患者接受西卡思羅。因此，在一個實施例中，本揭露提供一種管理用免疫細胞（例如，CAR T細胞）治療之患者中之不良事件的方法，其包含向患者投予疾病預防劑量的抗癲癇藥物。在一些實施例中，患者自CAR T細胞治療（在調理之後）之第0天開始且若在中止疾病預防性左乙拉西坦之後發生神經性事件，則亦在≥2級神經毒性發作時接受左乙拉西坦（例如每天兩次750 mg口服或靜脈內）。在一個實施例中，若患者未經歷任何≥2級神經毒性，則將左乙拉西坦逐漸減量並按照臨床指示中止。在一個實施例中，左乙拉西坦疾病疾病預防係與任何其他不良事件管理規程組合。

在一個實施例中，本揭露提供經受群組4之不良管理規程的患者中之CAR T細胞水平與群組1+2者相當。在一個實施例中，本揭露提供與CAR相關發炎事件相關之發炎性細胞介素（例如IFNγ、IL-2、及GM-CSF）之數值水平在群組4中較在群組1+2中低。因此，本揭露提供一種減少CAR T細胞治療相關發炎事件而不影響CAR T細胞水平的方法，其包含向患者投予群組4之不良事件管理規程。本揭露亦提供一種藉由CAR T細胞療法後之免疫細胞來降低細胞介素生產之方法，其包含向患者投予群組4之不良事件管理規程。在一個實施例中，此效應係在不影響CAR T細胞擴增及反應率之情況下獲得。在一個實施例中，患者患有R/R LBCL。在一個實施例中，CAR T細胞治療係抗CD19 CAR T細胞治療。在一個實施例中，CAR T細胞治療包含西卡思羅。

在一個實施例中，本揭露提供在西卡思羅後針對不良事件管理早期或疾病預防性使用托珠單抗減少≥3級細胞介素釋放症候群，但增加≥3級神經性事件。因此，本揭露提供一種用於如圖56中所描述之CAR T細胞療法中之不良事件管理的方法。在一個實施例中，患者自第0天開始接受左乙拉西坦（每天兩次750 mg口服或靜脈內）。在≥2級神經性事件發作時，將左乙拉西坦劑量增加至每天兩次1000 mg。若患者未經歷任何≥2級神經性事件，則將左乙拉西坦逐漸減量並按照臨床指示中止。患者亦在第2天接受托珠單抗（1小時內8 mg/kg IV [不超過800 mg]）。在患有共病症或年齡較大之患者中發生2級CRS時，或在≥3級CRS之情況下，可能建議進一步的托珠單抗（±皮質類固醇）。對於經歷≥2級神經性事件之患者，起始托珠單抗，且對於患有共病症或年齡較大之患者，或若發生任何≥3級神經性事件，且儘管使用托珠單抗，但症狀仍惡化，則添加皮質類固醇。

在一個實施例中，本揭露提供疾病預防性使用類固醇似乎將嚴重CRS及NE之比率降低至與西卡思羅投予後早期使用類固醇類似的程度。因此，本揭露提供一種用於CAR T細胞療法中之不良事件管理之方法，其中患者在第0天（在西卡思羅輸注前）、第1天、及第2天接受地塞米松10 mg PO。亦在1級NE、及當在3天支持性照護之後未觀察到改善時的1級CRS之情況下開始投予類固醇。若在24小時支持性照護之後未觀察到改善，則亦針對≥ 1級CRS投予托珠單抗。

在一個實施例中，本揭露提供使用中和且/或耗盡GM-CSF之抗體的CAR T細胞療法之不良事件管理預防或減少經治療患者中之治療相關CRS及/或NE。在一個實施例中，抗體係朗齊魯單抗。

在一些實施例中，藉由投予係IL-6或IL-6受體(IL-6R)之拮抗劑或抑制劑之一或多種藥劑來管理不良事件。在一些實施例中，藥劑係中和IL-6活性之抗體，諸如結合至IL-6或IL-6R之抗體或抗原結合片段。例如，在一些實施例中，藥劑係或包含托珠單抗（阿替珠單抗(atlizumab)）或沙利魯單抗(sarilumab)、抗IL-6R抗體。在一些實施例中，藥劑係美國專利第8,562,991號中所述之抗IL-6R抗體。在一些情況下，靶向IL-6之藥劑係抗TL-6抗體，諸如司妥昔單抗(siltuximab)、艾西莫單抗(elsilimomab)、ALD518/BMS-945429、思魯庫單抗(sirukumab) (CNTO 136)、CPSI-2634、ARGX 109、FE301、FM101、或奧諾奇單抗(olokizumab) (CDP6038)、及其組合。在一些實施例中，藥劑可藉由抑制配體-受體交互作用中和IL-6活性。在一些實施例中，IL-6/IL-6R拮抗劑或抑制劑係IL-6突變蛋白(mutein)，諸如美國專利第5591827號中所述者。在一些實施例中，係IL-6/IL-6R之拮抗劑或抑制劑之藥劑係小分子、蛋白質或肽、或核酸。

在一些實施例中，可用於管理不良反應及其症狀之其他藥劑包括細胞介素受體或細胞介素之拮抗劑或抑制劑。在一些實施例中，細胞介素或受體係IL-10、TL-6、TL-6受體、IFNy、IFNGR、IL-2、IL-2R/CD25、MCP-1、CCR2、CCR4、MIP13、CCR5、TNFα、TNFR1，諸如TL-6受體(IL-6R)、IL-2受體(IL-2R/CD25)、MCP-1 (CCL2)受體（CCR2或CCR4）、TGF-β受體（TGF-βI、II、或III）、IFN-γ受體(IFNGR)、MIP1P受體（例如CCR5）、TNFα受體（例如TNFR1）、IL-1受體(IL1-Ra/IL-1RP)、或IL-10受體(IL-10R)、IL-1、及IL-1Rα/IL-1β。在一些實施例中，藥劑包含司妥昔單抗、沙利魯單抗、奧諾奇單抗(CDP6038)、艾西莫單抗、ALD518/BMS-945429、思魯庫單抗(CNTO 136)、CPSI-2634、ARGX 109、FE301、或FM101。在一些實施例中，藥劑係細胞介素之拮抗劑或抑制劑，諸如轉化生長因子β (TGF-β)、介白素6 (TL-6)、介白素10 (IL-10)、IL-2、MIP13 (CCL4)、TNFα、IL-1、干擾素γ (IFN-γ)、或單核球趨化蛋白I (MCP-1)。在一些實施例中，其係靶向細胞介素受體者（例如抑制細胞介素受體或係其拮抗劑），細胞介素受體諸如TL-6受體(IL-6R)、IL-2受體(IL-2R/CD25)、MCP-1 (CCL2)受體（CCR2或CCR4）、TGF-β受體（TGF-β I、II、或III）、IFN-γ受體(IFNGR)、MIP1P受體（例如CCR5）、TNFα受體（例如TNFR1）、IL-1受體(IL1-Ra/IL-1RP)、或IL-10受體(IL-10R)、及其組合。在一些實施例中，藥劑係在投予細胞之前、之後、或與其並行，藉由本說明書中之其他地方所述之方法及劑量中之一者投予。

在一些實施例中，藥劑係以剛好或約1 mg/kg至10 mg/kg、2 mg/kg至8 mg/kg、2 mg/kg至6 mg/kg、2 mg/kg至4 mg/kg、或6 mg/kg至8 mg/kg（各包括範圍端點）之劑量投予，或藥劑係以至少或至少約或約2 mg/kg、4 mg/kg、6 mg/kg、或8 mg/kg之劑量投予。在一些實施例中，以約1 mg/kg至12 mg/kg（諸如剛好或約10 mg/kg）之劑量投予。在一些實施例中，藥劑係藉由靜脈內輸注投予。在一個實施例中，藥劑係托珠單抗。在一些實施例中，（多種）藥劑（例如，特別是托珠單抗）係在投予細胞之前、之後、或與其並行，藉由本說明書中之其他地方所述之方法及劑量中之一者投予。

在一些實施例中，該方法包含基於臨床表現識別CRS。在一些實施例中，該方法包含評估及治療發燒、缺氧、及低血壓之其他原因。若觀察到或疑似CRS，則可根據規程A中之建議管理，其亦可與本揭露之其他治療組合使用，包括CSF/CSFR1軸之中和或減少。經歷≥ 2級CRS（例如，低血壓、對輸液無反應、或需要補充氧合之缺氧）之患者應使用連續心臟遙測(cardiac telemetry)及脈搏血氧測定(pulse oximetry)來進行監測。在一些實施例中，針對經歷嚴重CRS之患者，則考慮執行心臟超音波檢查以評估心臟功能。針對嚴重或威脅生命之CRS，則可考慮加護支持性療法。在一些實施例中，可使用托珠單抗之生物相似藥或等效物代替本文所揭示之方法中之托珠單抗。在其他實施例中，可使用另一抗IL6R代替托珠單抗。

在一些實施例中，不良事件係根據以下規程（規程A）管理：

CRS 級別 (a)	托珠單抗	皮質類固醇
1 級症狀僅需要對症治療（例如發熱、噁心、疲勞、頭痛、肌痛、不適）。	N/A	N/A
2 級症狀需要中度介入且對其有反應。需氧量小於40% FiO ₂、或對流體或低劑量的一種升壓劑有反應之低血壓、或2級器官毒性 (b)。	在1小時內投予托珠單抗 (c)8 mg/kg IV（不超過800 mg）。若對IV流體或增加補充氧氣無反應，則按需要每8小時重複托珠單抗。 24小時期間限制最多3劑；若CRS之徵象及症狀無臨床改善，則最多共4劑。	若在開始托珠單抗之後24小時內無改善，則依據3級管理。
3 級症狀需要積極介入且對其有反應。需氧量大於或等於40% FiO ₂、或需要高劑量或多種升壓劑之低血壓、或3級器官毒性、或4級轉胺酶升高(transaminitis)。	依據2級	每天兩次投予甲基潑尼松龍1 mg/kg IV或等效地塞米松（例如每6小時10 mg IV）。繼續使用皮質類固醇直到事件係1級或以下，接著在3天內逐漸減量。若未改善，則依4級管理。
4 級危及生命之症狀。需要呼吸器支持、連續靜脈-靜脈血液透析(continuous veno-venous hemodialysis, CVVHD)、或 4級器官毒性（排除轉胺酶升高）。	依據2級	每天投予甲基潑尼松龍1000 mg IV，持續3天；若改善，則如上管理。若無改善或若病況惡化，則考慮替代免疫抑制劑。

(a) Lee DW et al., (2014)。細胞介素釋放症候群之診斷及管理之目前概念。Blood. 2014 Jul 10; 124(2): 188–195。 (b)關於神經毒性之管理，參照表 2。 (c)關於細節，參照ACEMTRA®（托珠單抗）處方資訊， https://www.gene.com/download/pdf/actemra_prescribing.pdf（最後一次訪問係2017年10月18日）。初始美國核准係指示在 2010年。神經毒性

在一些實施例中，該方法包含針對神經毒性之徵象及症狀監測患者。在一些實施例中，方法包含排除神經症狀之其他原因。經歷≥ 2級神經毒性之患者應使用連續心臟遙測及脈搏血氧測定來進行監測。針對嚴重或威脅生命之神經毒性提供加護支持性療法。考慮非鎮靜、抗癲癇藥物（例如左乙拉西坦）以用於任何≥2級神經毒性的癲癇預防。以下治療可與本揭露之其他治療組合使用，包括CSF/CSFR1軸之中和或減少。

在一些實施例中，不良事件係根據以下規程（規程B）管理：

分級評估	並行CRS	無並行CRS
2 級	依據上表（規程A）投予托珠單抗以管理2級CRS。若在開始托珠單抗之後24小時內無改善，若尚未服用其他類固醇，則每6小時投予地塞米松10 mg IV。繼續使用地塞米松直到事件係1級或以下，接著在3天內逐漸減量。	每6小時投予地塞米松10 mg IV。繼續使用地塞米松直到事件係1級或以下，接著在3天內逐漸減量。
考慮非鎮靜、抗癲癇藥物（例如左乙拉西坦）以用於癲癇預防。
3 級	依據（規程A）投予托珠單抗以管理2級CRS。此外，投予地塞米松10 mg IV與第一劑托珠單抗及每6小時之重複劑量。繼續使用地塞米松直到事件係1級或以下，接著在3天內逐漸減量。	每6小時投予地塞米松10 mg IV。繼續使用地塞米松直到事件係1級或以下，接著在3天內逐漸減量。
考慮非鎮靜、抗癲癇藥物（例如左乙拉西坦）以用於癲癇預防。
4 級	依據（規程A）投予托珠單抗以管理2級CRS。每天投予甲基潑尼松龍1000 mg IV與第一劑托珠單抗，且每天繼續投予甲基潑尼松龍1000 mg IV，再持續2天；若改善，則如上管理。	每天投予甲基潑尼松龍1000 mg IV，持續3天；若改善，則如上管理。
考慮非鎮靜、抗癲癇藥物（例如左乙拉西坦）以用於癲癇預防。

皮質類固醇之額外安全性管理策略

在1級時投予皮質類固醇及/或托珠單抗可被視為疾病預防性的。可在所有規程中在所有CRS及NE嚴重性級別時提供支持性照護。

在用於管理與CRS相關之不良事件的規程之一個實施例中，托珠單抗及/或皮質類固醇係如下投予：1級CRS：無托珠單抗；無皮質類固醇；2級CRS：托珠單抗（僅在共病症或年齡較大之情況下）；及/或皮質類固醇（僅在共病症或年齡較大之情況下）；3級CRS：托珠單抗；及/或皮質類固醇；4級CRS：托珠單抗；及/或皮質類固醇。在用於管理與CRS相關之不良事件的規程之另一實施例中，托珠單抗及/或皮質類固醇係如下投予：1級CRS：托珠單抗（若3天之後無改善）；及/或皮質類固醇（若3天之後無改善）；2級CRS：托珠單抗；及/或皮質類固醇；3級CRS：托珠單抗；及/或皮質類固醇；4級CRS：托珠單抗；及/或高劑量的皮質類固醇。

在用於管理與NE相關之不良事件的規程之一個實施例中，托珠單抗及/或皮質類固醇係如下投予：1級NE：無托珠單抗；無皮質類固醇；2級NE：無托珠單抗；無皮質類固醇；3級NE：托珠單抗；及/或皮質類固醇（僅在對標準劑量的托珠單抗無改善下）；4級NE：托珠單抗；及/或皮質類固醇。

在用於管理與NE相關之不良事件的規程之另一實施例中，托珠單抗及/或皮質類固醇係如下投予：1級NE：無托珠單抗；及/或皮質類固醇；2級NE：托珠單抗；及/或皮質類固醇；3級NE：托珠單抗；及/或高劑量的皮質類固醇；4級NE：托珠單抗；及/或高劑量的皮質類固醇。

在一個實施例中，皮質類固醇治療係在CRS級別≥ 2時起始，且托珠單抗係在CRS級別≥ 2時起始。在一個實施例中，皮質類固醇治療係在CRS級別≥ 1時起始，且托珠單抗係在CRS級別≥ 1時起始。在一個實施例中，皮質類固醇治療係在NE級別≥ 3時起始，且托珠單抗係在CRS級別≥ 3時起始。在一個實施例中，皮質類固醇治療係在CRS級別≥ 1時起始，且托珠單抗係在CRS級別≥ 2時起始。在一些實施例中，在第2天投予疾病預防性使用之托珠單抗可降低≥ 3級CRS之比率。

在一個實施例中，不良事件可藉由包含規程C之方法管理：

CRS級別	托珠單抗劑量 ^a	皮質類固醇劑量 ^a
1	若在支持性照護24小時之後無改善，則1小時內8 mg/kg ^b；按需要每4至6小時重複	地塞米松10 mg ×1 若3天之後無改善
2	1小時內8 mg/kg ^b；按需要每4至6小時重複	地塞米松10 mg ×1
3	依據2級	每天兩次甲基潑尼松龍1 mg/kg IV或等效的地塞米松劑量
4	依據2級	甲基潑尼松龍1000 mg/d IV，持續3天
NE級別	托珠單抗劑量	皮質類固醇劑量
1	N/A	地塞米松10 mg ×1
2	僅在並行CRS之情況下；1小時內8 mg/kg；按需要每4至6小時重複	地塞米松10 mg 4 ×/天
3	依據2級	每天一次甲基潑尼松龍1 g
4	依據2級	每天兩次甲基潑尼松龍1 g

^a依試驗主持人判斷在症狀改善時逐漸減少療法； ^b不超過800 mg；AE，不良事件；CRS，細胞介素釋放症候群；IV，靜脈內；N/A，不適用；NE，神經性事件

任何皮質類固醇可適用於此用途。在一個實施例中，皮質類固醇係地塞米松。在一些實施例中，皮質類固醇係甲基潑尼松龍。在一些實施例中，兩者係組合投予。在一些實施例中，糖皮質素包括合成及非合成糖皮質素。例示性糖皮質素包括但不限於：阿氯米松(alclomethasone)、阿爾孕酮(阿爾孕酮)、倍氯米松(beclomethasone)（例如，二丙酸倍氯米松）、倍他米松(betamethasone)（例如，17戊酸倍他米松、倍他米松乙酸鈉、倍他米松磷酸鈉、戊酸倍他米松）、布地奈德(budesonide)、氯倍他索(clobetasol)（例如，丙酸氯倍他索）、氯倍他松(clobetasone)、氯可托龍(clocortolone)（例如，新戊酸氯可托龍）、氯潑尼醇(cloprednol)、皮質脂酮(corticosterone)、可體松(cortisone)、及氫化可體松（例如，乙酸氫化可體松）、可的伐唑(cortivazol)、地夫可特(deflazacort)、地奈德(desonide)、去羥米松(desoximetasone)、地塞米松(dexamethasone)（例如，21-磷酸地塞米松、乙酸地塞米松、地塞米松磷酸鈉）、二氟拉松(diflorasone)（例如，二乙酸二氟拉松）、二氟可龍(diflucortolone)、二氟潑尼酯(difluprednate)、甘草次酸(enoxolone)、氟紮可特(fluazacort)、氟氯奈德(flucloronide)、氟氫可體松(fludrocortisone)（例如，乙酸氟氫可體松）、氟米松(flumethasone)（例如，新戊酸氟米松）、氟尼縮松(flunisolide)、氟輕鬆(fluocinolone)（例如，氟輕鬆丙酮化合物）、氟欣諾能(fluocinonide)、氟可丁(fluocortin)、氟可龍(fluocortolone)、氟米龍(fluorometholone)（例如，乙酸氟米龍）、氟培龍(fluperolone)（例如，乙酸氟培龍）、氟潑尼定(fluprednidene)、氟潑尼龍(flupredni solone)、氟氫縮松(flurandrenolide)、氟替卡松(fluticasone)（例如，丙酸氟替卡松）、福莫可他(formocortal)、哈西奈德(halcinonide)、鹵倍他索(halobetasol)、鹵米松(halometasone)、鹵潑尼松(halopredone)、氫可松胺酯(hydrocortamate)、氫化可體松(hydrocortisone)（例如，21-丁酸氫化可體松、醋丙氫化可體松、乙酸氫化可體松、丁丙酸氫化可體松(hydrocortisone buteprate)、丁酸氫化可體松、環戊丙酸氫化可體松、半琥珀酸氫化可體松、丙丁氫化可體松、氫化可體松磷酸鈉、氫化可體松琥珀酸鈉、戊酸氫化可體）、依碳酸氯替潑諾(loteprednol etabonate)、馬潑尼酮(mazipredone)、甲羥松(medrysone)、甲潑尼松(meprednisone)、甲基潑尼松龍(methylpredni solone)（醋丙甲基潑尼松龍、乙酸甲基潑尼松龍、半琥珀酸甲基潑尼松龍、甲基潑尼松龍琥珀酸鈉）、莫米他松(mometasone)（例如，糠酸莫米他松）、帕拉米松(paramethasone)（例如，乙酸帕拉米松）、潑尼卡酯(prednicarbate)、潑尼松龍(prednisolone)（例如，25–二乙胺乙潑尼松龍、潑尼松龍磷酸鈉、21-半琥珀酸潑尼松龍、乙酸潑尼松龍；法呢酸潑尼松龍、半琥珀酸潑尼松龍、潑尼松龍-21（β-D-葡糖苷酸）、間硫苯甲酸潑尼松龍、司替酸潑尼松龍、第三丁基乙酸潑尼松龍(dexamethasone tebutate)、四氫鄰苯二甲酸潑尼松龍）、潑尼松(prednisone)、潑尼松龍戊酸酯(prednival)、潑尼立定(prednylidene)、利美索龍(rimexolone)、替可的松(tixocortol)、曲安西龍(triamcinolone)（例如，曲安奈德(triamcinolone acetonide)、苯曲安奈德(triamcinolone acetonide)、己曲安奈德(triamcinolone hexacetonide)、21棕櫚酸曲安西龍丙酮化合物(triamcinolone acetonide 21 palmitate)、二乙酸曲安西龍(triamcinolone diacetate)）。此等糖皮質素及其鹽係詳細論述於例如Remington's Pharmaceutical Sciences, A. Osol, ed., Mack Pub. Co., Easton, Pa. (16th ed. 1980)及Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 22nd Edition, Lippincott Williams & Wilkins, Philadelphia, Pa. (2013)及任何其他版本中，其特此以引用之方式併入本文中。在一些實施例中，糖皮質素係選自可體松、地塞米松、氫化可體松、甲基潑尼松龍、潑尼松龍、及潑尼松中。在一實施例中，糖皮質素係地塞米松。在其他實施例中，類固醇係鹽皮質素。任何其他類固醇可用於本文所提供之方法中。

一或多種皮質類固醇可以任何劑量及投予頻率投予，該劑量及投予頻率可依不良事件（例如CRS及NE）之嚴重性/級別進行調整。表1及表2分別提供用於管理CRS及NE之劑量方案的實例。在另一實施例中，皮質類固醇投予包含每天1至4次口服或IV地塞米松10 mg。另一實施例，有時稱為「高劑量」皮質類固醇，包含每天單獨投予IV甲基潑尼松1 g、或與地塞米松組合投予。在一些實施例中，一或多種皮質類固醇係以每天1至2 mg/kg之劑量投予。

皮質類固醇可以有效改善與不良事件（諸如與CRS或神經毒性）相關之一或多種症狀的任何量投予。皮質類固醇（例如糖皮質素）可例如以每劑量剛好或約0.1與100 mg、0.1至80 mg、0.1至60 mg、0.1至40 mg、0.1至30 mg、0.1至20 mg、0.1至15 mg、0.1至10 mg、0.1至5 mg、0.2至40 mg、0.2至30 mg、0.2至20 mg、0.2至15 mg、0.2至10 mg、0.2至5 mg、0.4至40 mg、0.4至30 mg、0.4至20 mg、0.4至15 mg、0.4至10 mg、0.4至5 mg、0.4至4 mg、1至20 mg、1至15 mg、或1至10 mg之間的量向70 kg成人對象投予。一般而言，皮質類固醇（諸如糖皮質素）係以每劑量剛好或約0.4與20 mg之間的量、例如以剛好或約0.4 mg、0.5 mg、0.6 mg、0.7 mg、0.75 mg、0.8 mg、0.9 mg、1 mg、2 mg、3 mg、4 mg、5 mg、6 mg、7 mg、8 mg、9 mg、10 mg、11 mg、12 mg、13 mg、14 mg、15 mg、16 mg、17 mg、18 mg、19 mg、或20 mg的量向普通成人對象投予。

在一些實施例中，皮質類固醇可例如以剛好或約0.001 mg/kg（對象）、0.002 mg/kg、0.003 mg/kg、0.004 mg/kg、0.005 mg/kg、0.006 mg/kg、0.007 mg/kg、0.008 mg/kg、0.009 mg/kg、0.01 mg/kg、0.015 mg/kg、0.02 mg/kg、0.025 mg/kg、0.03 mg/kg、0.035 mg/kg、0.04 mg/kg、0.045 mg/kg、0.05 mg/kg、0.055 mg/kg、0.06 mg/kg、0.065 mg/kg、0.07 mg/kg、0.075 mg/kg、0.08 mg/kg、0.085 mg/kg、0.09 mg/kg、0.095 mg/kg、0.1 mg/kg、0.15 mg/kg、0.2 mg/kg、0.25 mg/kg、0.30 mg/kg、0.35 mg/kg、0.40 mg/kg、0.45 mg/kg、0.50 mg/kg、0.55 mg/kg、0.60 mg/kg、0.65 mg/kg、0.70 mg/kg、0.75 mg/kg、0.80 mg/kg、0.85 mg/kg、0.90 mg/kg、0.95 mg/kg、1 mg/kg、1.05 mg/kg、1.1 mg/kg、1.15 mg/kg、1.20 mg/kg、1.25 mg/kg、1.3 mg/kg、1.35 mg/kg、或1.4 mg/kg之劑量向普通成人對象（一般體重為約70 kg至75 kg）投予。

通常而言，皮質類固醇投予之劑量取決於具體皮質類固醇，因為不同皮質類固醇之間存在效力差異。一般理解的是，藥物效力不同，且因此劑量可能不同，以獲得等效效應。各種糖皮質素之效力及投予途徑的等效性係熟知的。與等效類固醇給藥（以非時間治療方式）相關之資訊可見於British National Formulary (BNF) 37, March 1999。

在一些實施例中，不良事件係藉由以下規程管理：患者自投予T細胞療法之第0天開始接受左乙拉西坦（每天兩次750 mg口服或靜脈內）；在≥2級神經性事件發作時，將左乙拉西坦劑量增加至每天兩次1000 mg；若患者未經歷任何≥2級神經性事件，則將左乙拉西坦逐漸減量並按照臨床指示中止；患者亦在第2天接受托珠單抗（1小時內8 mg/kg IV [不超過800 mg]）；在患有共病症或年齡較大之患者中發生2級CRS時，或在≥3級CRS之情況下，可能建議進一步的托珠單抗（±皮質類固醇）；對於經歷≥2級神經性事件之患者，起始托珠單抗，且對於患有共病症或年齡較大之患者，或若發生任何≥3級神經性事件，且儘管使用托珠單抗，但症狀仍惡化，則添加皮質類固醇。在一些實施例中，若在中止疾病預防性左乙拉西坦之後發生神經性事件，則左乙拉西坦係疾病預防性投予且在≥2級神經毒性發作時投予，且/或若患者未經歷任何≥2級神經毒性，則將左乙拉西坦逐漸減量並中止。

在一些實施例中，不良事件係藉由以下規程管理：患者在第0天（在T細胞療法輸注前）、第1天、及第2天接受地塞米松10 mg PO；亦在1級NE、及當在3天支持性照護之後未觀察到改善時的1級CRS之情況下開始投予類固醇；若在24小時支持性照護之後未觀察到改善，則亦針對≥ 1級CRS投予托珠單抗。繼發性惡性疾病

在一些實施例中，使用免疫細胞（例如CAR T細胞）（例如CD19導向）或其他經基因修飾之自體T細胞免疫療法治療之患者可能發展繼發性惡性疾病。在某些實施例中，用CAR T細胞（例如CD19導向）或其他經基因修飾之同種異體T細胞免疫療法治療之患者可能發展繼發性惡性疾病。在一些實施例中，該方法包含針對繼發性惡性疾病進行終生監測。實例實例1

本實例提供臨床試驗CLINICAL TRIAL-2之分析結果。CLINICAL TRIAL-2臨床試驗之研究設計概述於圖1中。此處提供關於CLINICAL TRIAL-2中在診斷後24個月內有及無疾病進展(POD24)之患者之安全性及功效結果以及藥物動力學概況之報告。初始診斷後24個月內之疾病進展(POD24)係患有被套細胞淋巴瘤(MCL)之患者預後不良之指標。(Visco C, et al. Br J Haematol.2019; 185:940-944)。在對患MCL患者之回顧性分析中，有POD24之患者自進展之時起的中位數整體存活期(OS)係12個月，相比較而言，無POD24之患者未達到12個月。KTE-X19，一種自體抗CD19嵌合抗原受體(CAR) T細胞療法，在美國及歐盟被核准用於治療復發性/難治性(R/R) MCL。（TECARTUS®（布萊奧妥）處方資訊。Kite Pharma, Inc; 2021; TECARTUS®（自體抗CD19轉導之CD3+細胞）產品特性之概述。Kite Pharma EU B.V.;2021）。關鍵2期CLINICAL TRIAL-2研究評估了對1–5前療法為R/R之患MCL患者中的KTE-X19，包括Bruton酪胺酸激酶抑制劑(BTKi)。(Wang M, et al. N Engl J Med.2020; 382:1331-1342)。在CLINICAL TRIAL-2 (N=60)中之中位追蹤17.5個月後，客觀反應率(ORR)係92%，完全反應(CR)率係67%。(Wang M, et al. Blood.2020; 136 (Suppl 1):20–22)。在數據截止時，48%的所有患者及70%的CR患者處於持續反應。細胞介素釋放症候群(CRS)及神經性事件(NE)大部分係可逆的（N=68名經治療患者）。15%的患者顯示出≥3級CRS，而31%的患者具有≥3級NE。兩名患者顯示出5級不良事件(AE)，其中僅一例與KTE-X19相關。較長期追蹤未觀察到新的安全性信號。(Wang M, et al. N Engl J Med.2020;382:1331-1342; Wang M, et al. Blood.2020;136(Suppl 1):20–22)。

符合條件之患者年齡≥ 18歲，患有經病理學證實的被套細胞淋巴瘤(MCL)，有細胞週期蛋白D1超表現或t(11; 14)之存在的文檔記錄，且對於用於MCL之1-5個前方案係復發性/難治性的。先前療法包括含蒽環類藥物或苯達莫司汀之化學療法、抗CD20單株抗體、及依魯替尼或阿卡替尼。所有患者皆接受先前BTKi。儘管患者一定有先前BTKi療法，但並不要求將其作為在進入研究之前的最後一線療法，且患者不需要對BTKi療法具有難治性。符合條件之患者之絕對淋巴球計數≥100/µL。在CD19 CAR-T輸注後之6週內經歷了自體SCT或有既往CD19靶向治療或同種異體SCT之患者被排除在外。所有患者均經歷了白血球分離術，以獲得用於CD19 CAR-T細胞治療製造之細胞。患者接受了可選的橋接療法，包括地塞米松（20至40 mg或同等）、依魯替尼（每天口服560 mg(PO)）、或阿卡替尼（每天兩次100 mg PO）。KTE-X19之製造程序相對於西卡思羅之製造程序進行修改，以透過CD4 ⁺/CD8 ⁺細胞之陽性富集來移除循環淋巴瘤細胞。此產物在本文中稱為「CAR T細胞」。在第0天單次靜脈內輸注CD19 CAR-T細胞之2 × 10 ⁶個CAR T細胞/kg之前，在第-5天、第-4天、及第-3天投予使用氟達拉濱（30 mg/m ²/天）及環磷醯胺（500 mg/m ²/天）之調理化學療法。

在本實例中，對用KTE-X19治療的所有68名患者報告了安全性結果、藥理學概況、及產物屬性。在60名經治療且追蹤≥1年（中位數17.5個月）之患者中報告功效結果。數據係以數據截止日期2019年12月31日提出。

患者基線特性總結於表1。高風險疾病特性在有及無POD24之患者中係常見的。有POD24之患者具有較高的腫瘤負荷量及乳酸脫氫酶(LDH)水平，且更具有海蕾型MCL，其表明此等患者可能比無POD24之患者更不健康。有POD24之患者具有比無POD24之患者高的風險的疾病特性（高腫瘤負荷、高LDH含量、及海蕾MCL）。表1.依POD24狀態之基線特性。

	有POD24 (n=33)	無POD24 (n=35)
中位數年齡（範圍），歲	65 (38–75)	66 (50–79)
≥65歲，n (%)	18 (55)	21 (60)
男性，n (%)	29 (88)	28 (80)
MCL 形態，n (%)
典型	16 (48)	24 (69)
多形	2 (6)	2 (6)
海蕾	11 (33)	6 (17)
中等/ 高風險MIPI ，n (%)	16 (48)	22 (63)
中位數腫瘤負荷量 ^a （範圍），mm ²	2255 (260–14,390)	1380 (293–16,878)
結外疾病，n (%)	17 (52)	21 (60)
LDH ≥1.5 × ULN, n (%)	8 (24)	3 (9)
Ki-67 增生指數，n (%)	n=23	n=26
≥30%	19 (83)	21 (81)
≥50%	17 (74)	17 (65)
*TP53* 突變，n/n (%)	3/20 (15)	3/16 (19)
先前療法之中位數數目（範圍）	3 (2–5)	3 (1–5)
≥3種先前療法，n (%)	29 (88)	26 (74)
先前BTKi ，n (%)	33 (100)	35 (100)
依魯替尼	28 (85)	30 (86)
阿卡替尼	7 (21)	9 (26)
兩者	2 (6)	4 (11)
先前蒽環類藥物，n (%)	22 (67)	27 (77)
先前阿糖胞苷，n (%)	21 (64)	18 (51)
先前苯達莫司汀，n (%)	19 (58)	18 (51)
先前自體SCT ，n (%)	12 (36)	17 (49)
骨髓受累，n (%)	13 (39)	24 (69)

整體反應率（ORR；CR及部分反應）係藉由獨立放射學審查委員會依據Lugano分類進行評估。Cheson BD et al., Journal of clinical oncology2014;32:3059-68。在有及無POD24之患者中ORR係相似的，在無POD24之患者中CR率略高（圖2）。在中位數為17.5個月之追蹤後，KTE-X19在有及無POD24之患者中提供了高CR率。微量殘存疾病（MRD；10 ^-5敏感性）係藉由次世代定序進行評估，如先前所報告。Wang M, et al. New Engl J Med. 2020;382:1331-1342。在第4週對有可用樣本之患者進行了MRD評估。在患者中亦觀察到類似的MRD陰性率，患者有(75%；N=9/12)及無(79%；n=15/19) POD24。

與功效相關之次要終點包括反應持續時間(DOR)、無進展存活期(PFS)、及整體存活期(OS)。（圖3）。在有POD24之患者中，中位數無進展存活期(PFS)係11.3個月(95% CI, 6.0–NE)。與無POD24之患者相比，中位數PFS在有POD24之患者中似乎更短。兩組中均未達到反應持續時間(DOR)及OS之中位數（圖3）。

有及無POD24之患者之安全性概況通常係相似的。≥3級不良事件之發生率在有及無POD24之患者中通常係相似的（表2）。血小板減少症及嗜中性球減少症之發生率在有POD24之患者中比在無POD24之患者中似乎更高。感染之發生率在無POD24之患者中比在有POD24之患者中似乎更高。兩組中均無5級細胞介素釋放症候群、KTE-X19相關繼發性惡性疾病、或複製機能健全逆轉錄病毒之病例。表2.有及無POD24之患者中不良事件之概述。

AE ^a	有POD24 (n=33)	無POD24 (n=35)
任何AE ，n (%)	33 (100)	35 (100)
任何級別≥3	32 (97)	35 (100)
≥3級嗜中性球減少症	30 (91)	28 (80)
≥3級血小板減少症	20 (61)	16 (46)
≥3級貧血	18 (55)	18 (51)
≥3級感染	8 (24)	15 (43)
CRS ，n (%)	31 (94)	31 (89)
≥3級	3 (9)	7 (20)
中位數發作時間，天	3	2
中位數持續時間，天	8	12
任何神經性事件，n (%)	23 (70)	20 (57)
≥3級	9 (27)	12 (34)
中位數發作時間，天	7	7
中位數持續時間，天	10	15

^aCRS係依據Lee DW, et al. Blood. 2014; 124:188-195分級。CRS及其他所有AE之症狀係依據美國國家癌症研究所之不良事件通用術語標準第4.03版進行分級。AE，不良事件；CRS，細胞介素釋放症候群；有POD24，在初始診斷之後＜24個月疾病進展；無POD24，在初始診斷之後≥24個月疾病進展。

使用先前描述之方法分析血液中之產物屬性及CAR T細胞水平。Locke FL, et al. Mol Ther.2017; 25:285-295。KTE-X19產品特性在有及無POD24之患者中係相似的（表 3）。有POD24之患者似乎比無POD24之患者有更低的CAR T細胞擴增。在有POD24之患者中，中位數峰值CAR T細胞水平及中位數曲線下面積(AUC)係53.4個細胞/µL（範圍，0.2–2566）及583.4個細胞/µL ×天數（範圍，1.8–27,743.6；圖4）。無POD24之患者具有112.4個細胞/µL（範圍，0.2–2589）及1588.3個細胞/µL ×天數（範圍，3.8–27,238.7）之中位數峰值CAR T細胞水平及中位數AUC。表3.依POD24狀態之KTE-X19產品特性。

中位數特性（範圍）	有POD24 (n=33)	無POD24 (n=35)
轉導率，%	59.0 (34.0−82.4)	57.2 (32.0−77.1)
CD4/CD8 比率	0.7 (0.04−3.7)	0.7 (0.3−2.7)
CCR7+CD45RA+ T 細胞，%	26.4 (0.3−80.7)	20.3 (3.2−78.1)
CCR7+ T cells ，%	41.3 (2.6−88.5)	37.1 (16.0−88.8)
CCR7− 效應+ 效應記憶T 細胞，%	58.9 (11.4−97.4)	62.9 (11.1−84.1)
(CCR7+ T 細胞)/(CCR7− 效應+ 效應記憶T 細胞) 比率	0.7 (0.03−7.8)	0.6 (0.2−8.0)
共培養之IFN-γ ，pg/mL	6291.0 (492.0−1.8×10 ⁴)	7120.0 (424.0−2.0×10 ⁴)

在有可用數據之功效可評估患者中，在12個月時，在8/11 (73%)有POD24之患者及7/15(47%)無POD24之患者中可偵測到B細胞（圖5）。用經CD19指導的CAR T細胞療法進行的早期干預可有益於具有已知高風險因素之MCL患者，諸如POD24。(Visco C, et al. Br J Haematol. 2019; 185:940-944)。實例2

此實例提供臨床試驗CLINICAL TRIAL-5之分析結果，其係西卡思羅在復發性/難治性(R/R)低惡性度非霍奇金氏淋巴瘤患者中之2期、多中心、單臂研究(R/R iNHL; NCT03105336)。CLINICAL TRIAL-5臨床試驗之研究設計概述於圖6中。西卡思羅(axi-cel)係一種自體抗CD19嵌合抗原受體(CAR) T細胞療法，其在美國(US)被核准用於≥2線全身性療法後治療患有復發性/難治性(R/R) FL之成人，且在美國及歐盟被核准用於≥2線全身性療法後治療患有R/R大B細胞淋巴瘤(LBCL)之成人。（YESCARTA®（西卡思羅）製備資訊。Kite Pharma, Inc;2021; YESCARTA®（西卡思羅）[產品特性概述]。阿姆斯特丹，荷蘭：Kite Pharma EU B.V.; 2018）。

自起始含抗CD20之化學免疫療法起之24個月內之進展(POD24)係患有低惡性度非霍奇金氏淋巴瘤(iNHL)之患者存活差之風險因素。(Casulo C and Barr P. Blood.2019; 133(14):1540-154; Casulo C, et al. J Clin Oncol.2015; 33(23): 2516–2522)。大約20%患有濾泡淋巴瘤(FL)之患者具有POD24。在來自National LymphoCare Study之觀測分析中，早期進展之FL患者之5年整體存活(OS)率(50%)低於無早期進展(90%)之患者。此為一份關於CLINICAL TRIAL-5中有及無POD24之患者在更長追蹤時間後的安全性及功效結果以及藥物動力學/藥效學概況之報告。

患有濾泡淋巴瘤(FL)（1-3a級）或邊緣區淋巴瘤（MZL；結的或結外）之成人在≥2線療法（包括抗CD20 mAb加烷化劑）及ECOG 0 – 1之後患有R/R疾病。患者經歷了白血球分離術，然後進行調理療法（在第-5天、第-4天、及第-3天靜脈內氟達拉濱（30 mg/m ²體表面積）及環磷醯胺（500 mg/m ²體表面積）），並在第0天以2 × 10 ⁶個CAR T細胞/kg單次輸注西卡思羅。主要終點係藉由中央審查所得之客觀反應率(ORR)（完全反應(CR) +部分反應(PR)）(依據Lugano分類；Cheson BD, et al. J Clin Oncol. 2014; 32(27):3059-3068. doi:10.1200/JCO.2013.54.8800)。次要終點包括完全反應(CR)率（依據Lugano分類；Cheson, et al. J Clin Oncol. 2014）、反應持續時間(DOR)（DOR僅為經歷客觀反應之對象定義，且係自第一次客觀反應至依據(Cheson et al, 2014)之疾病進展或疾病相關死亡（以先到者為準）的時間）、無進展存活期(PFS)（PFS定義為自西卡思羅輸注日期至依據(Cheson et al, 2014)之疾病進展或因任何原因死亡之日期之時間）、整體存活期(OS)（OS定義為自西卡思羅輸注至死亡日期之時間）、不良事件(AE)之發生率、及血液中之CAR T細胞與血清中之細胞介素之水平。當≥80名經治療之FL患者進行≥12個月追蹤時，主要功效分析發生。主要分析中之中位數追蹤係17.5個月(Jacobson et al. ASH 2020.#700)，92%的患者有反應（76%完全反應[CR]率）。患有FL之患者比患有MZL之患者(41%)具有更低的≥3級神經性事件率(NE; 15%)。在主要分析中，在17.5個月中位數追蹤後，整體反應率(ORR)在有及無POD24之患者中相似地高（93%對92%）。

當≥80名經治療之FL患者進行≥18個月追蹤時，更新功效分析發生。截至數據截止日（2020年9月14日），功效可評估患者包括≥80名經治療之FL患者及經治療之MZL患者，經治療之FL患者在西卡思羅輸注之後進行≥18個月的追蹤，經治療之MZL患者在西卡思羅輸注之後進行≥4週的追蹤。在POD24分析(N=129)中包括經西卡思羅治療之FL或MZL患者及在抗CD20 mAb +烷化劑之後進展的可用數據。

基線特性在有及無POD24之患者中通常係相似的（表 4）。在可評估的FL患者中，藉由產物直徑之和(SPD)所得之中位數腫瘤負荷量在數值上在有及無POD24之患者中係相似的（2303 mm ²對2839 mm ²）。在可評估的MZL患者中，有POD24之患者中之中位數SPD似乎高於無POD24之患者中之中位數SPD（2028 mm ²對954 mm ²）。表4.基線疾病特性。

特性	有POD24 (n=81)	無POD24 (n=48)
疾病類型，n (%)
FL	68 (84)	40 (83)
MZL	13 (16)	8 (17)
中位數年齡（範圍），歲	60 (34–78)	62 (42–79)
≥65歲，n (%)	26 (32)	18 (38)
男性，n (%)	42 (52)	32 (67)
III-IV 期疾病， n (%)	67 (83)	45 (94)
≥3 FLIPI ，n/n (%)	30/68 (44)	17/40 (43)
高腫瘤體積（GELF 標準），n (%) ^a	41 (51)	21 (44)
先前療法之中位數數目（範圍）	3 (1–10) ^b	3.5 (2–8)
≥3，n (%)	49 (60)	36 (75)
先前PI3Ki 療法，n (%)	22 (27)	17 (35)
先前來那度胺，n (%)	25 (31)	19 (40)
先前自體SCT ，n (%)	16 (20)	11 (23)
難治性疾病，n (%) ^c	62 (77)	30 (63)

^a疾病負荷，如藉由GELF標準所定義：≥3個結點位之受累（每個≥3 cm直徑）；任何結點的或結外腫瘤塊≥7 cm直徑；B症狀；脾腫大；胸膜積水或腹膜腹水；血球減少；或白血病。 ^b在需要≥2種前線療法之規程修訂前，在CLINICAL TRIAL-5中招募了3名有1種前線療法之FL患者。 ^c在完成最近一次先前治療後6個月內進展之iNHL患者。FL，濾泡淋巴瘤；FLIPI，濾泡淋巴瘤國際預後指數；GELF，濾泡淋巴瘤調查管理指南；MZL；邊緣區淋巴瘤；PI3Ki，磷酸肌醇3-激酶抑制劑；POD24，自起始含第一抗CD20之化學免疫療法後＜24個月疾病進展；SCT，幹細胞移植。

與功效相關之次要終點包括反應持續時間(DOR)、無進展存活期(PFS)、及整體存活期(OS)。整體反應率（ORR；CR及部分反應）係藉由獨立放射學審查委員會依據Lugano分類進行評估。Cheson BD et al., Journal of clinical oncology2014; 32:3059-68。ORR在有及無POD24之功效可評估患者中係相似的（圖 7 ；表5）。在分別17.1個月及17.5個月之中位數追蹤後，有及無POD24之患者未達到估計中位數反應持續時間(DOR)（圖8A、圖8B、圖8C；表 5）。在數據截止時，在52%的有POD24之功效可評估患者及70%的無POD24之功效可評估患者中反應持續進行。18個月DOR率在有及無POD24之患者中分別係60%及78%。在有及無POD24之患者中未達到中位數無進展存活期(PFS)及中位數OS（圖 8B 、圖8C ；表5）。18個月PFS率在有及無POD24之患者中分別係55%及84%。18個月OS率分別係85%及94%。表5.依POD24狀態之FL及MZL患者之中的功效結果。

參數	濾泡淋巴瘤	邊緣區淋巴瘤
有POD24 (n=49)	無POD24 (n=29)	有POD24 (n=12)	無POD24 (n=8)
ORR ，n (%)	46 (94)	28 (97)	10 (83)	6 (75)
CR	38 (78)	26 (90)	7 (58)	6 (75)
PR	8 (16)	2 (7)	3 (25)	0 (0)
中位數DOR (95% CI) ，月	NR (14.5–NE)	NR (20.8–NE)	11.1 (1.9–NE)	NR (10.6–NE)
18-mo率(95% CI)，%	63.9 (47.2–76.6)	78.2 (53.3–90.8)	NE (NE–NE)	75.0 (12.8–96.1)
中位數PFS (95% CI) ，月	NR (13.1–NE)	NR (23.5–NE)	9.2 (2.8–NE)	NR (11.8–NE)
18-mo率(95% CI)，%	59.8 (43.7–72.6)	85.3 (65.4–94.2)	30.7 (5.1–62.6)	75.0 (12.8–96.1)
中位數OS (95% CI) ，月	NR (31.6–NE)	NR (NE–NE)	NR (13.7–NE)	NR (18.7–NE)
18-mo率(95% CI)，%	85.7 (72.4–92.9)	93.1 (75.1–98.2)	76.4 (30.9–94.0)	100.0 (NE–NE)

CR，完全反應；DOR，反應持續時間；FL，濾泡淋巴瘤；Mo，月；MZL，邊緣區淋巴瘤；ND，未完成/未定義；NE，不可評估；NR，未達到； OS，整體存活期；PFS，無進展存活期；POD24，自起始含第一抗CD20之化學免疫療法後＜24個月疾病進展；PR，部分反應。

≥3級不良事件之發生率在有及無POD24之患者中通常係相似的（表 6）。3名有POD24之患者發生5級事件，包括在細胞介素釋放症候群(CRS)之背景下的1個事件；無POD24之患者未發生5級事件。1名有POD24之患者發生了4級CRS。2名有POD24之患者發生了4級神經性事件。在無POD24之患者中，未發生4級CRS與神經性事件。

藉由使用先前所描述的方法分析了血液中的CAR T細胞水平、血清中的細胞介素水平、及產物屬性、以及其等與臨床結果之關聯。Locke FL, et al. Mol Ther.2017; 25:285-295。

在患有FL之功效可評估患者中，中位數峰值CAR T細胞水平在有及無POD24之患者中係相似的（分別係36.9個細胞/µL及34.5個細胞/µL；圖 9A）。多個中位數AUC在有及無POD24之患者中亦係相似的(分別係422.5個細胞/µL ×天數及407.6個細胞/µL ×天數。（圖 9B）。CCL17 (TARC)及CCL22 (MDC)之預處理水平在有POD24之患者中比在無POD24之患者中高。與西卡思羅毒性相關之生物標記之峰值水平似乎在有及無POD24之所有經治療患者中係大致相似的（表7）。組間之藥物動力學/藥效學發現在MZL患者中係相似的。表7.依POD24狀態之FL患者中的峰值細胞介素水平。

峰值細胞介素水平（範圍）	有POD24 (n=68)	無POD24 (n=40)	P 值
IL-6 ，pg/mL	15.0 (1.6 ^a–976.0 ^b)	13.0 (1.6 ^a–976.0 ^b)	.7574
IL-2 ，pg/mL	3.2 (0.9 ^a–90.6)	2.7 (0.9 ^a–63.7)	.6181
IFN-γ ，pg/mL	122.8 (7.5 ^a–1876.0 ^b)	67.8 (7.5 ^a–1545.1)	.0789
顆粒酶B ，pg/mL	7.8 (1.0 ^a–1062.7)	8.2 (1.0 ^a–449.4) ^c	.9447
CXCL10 ，pg/mL	1001.9 (264.4–2000.0 ^b)	1093.2 (165.9–2000.0 ^b)	.5385
IL-10 ，pg/mL	10.7 (0.7 ^a–331.5)	7.4 (0.7 ^a–66.5)	.2255
TNF-α ，pg/mL	4.6 (1.6–62.7)	4.1 (0.7 ^a–11.0)	.1644
IL-1RA ，pg/mL	1202.0 (221.0–9000.0 ^b)	982.5 (239.0–9000.0 ^b)	.2983
GM-CSF ，pg/mL	1.9 ^a(1.9 ^a–23.2)	1.9 ^a(1.9 ^a–34.1)	.7177
CCL2 (MCP-1) ，pg/mL	790.1 (249.3–1500.0 ^b)	829.2 (249.4–1500.0 ^b)	.9975
IL-15 ，pg/mL	33.8 (9.3–93.3)	34.5 (12.0–104.3)	.5908
鐵蛋白，ng/mL	720.2 (86.4–5237.8)	658.9 (91.3–3459.9)	.4900
SAA ，pg/mL	1.5×10 ⁸(1.5×10 ⁶–1.4×10 ^9b)	1.7×10 ⁸(4.9×10 ⁶–1.4×10 ^9b)	.9695
CRP ，mg/L	68.3 (3.9–496.0 ^b)	71.2 (2.9–377.8)	.8164

P值係使用Wilcoxon秩和檢定計算。 ^a所用檢定之定量下限。 ^b所用檢定之定量上限。 ^c沒有2名FL患者在峰值處的數據。CCL，趨化因子（C-C模體）配體；CRP，C反應蛋白；CXCL，C-X-C模體趨化因子配體；FL，濾泡淋巴瘤；GM-CSF，顆粒球巨噬細胞群落刺激因子；IFN，干擾素；IL，介白素；MCP-1，單核球趨化蛋白1；POD24，自起始含有第一抗CD20之化學免疫療法起＜24個月疾病進展；RA，受體拮抗劑；SAA，血清類澱粉蛋白A；TNF，腫瘤壞死因子。

在更廣泛的CLINICAL TRIAL-5群體中，有西卡思羅後復發的可用數據之14名患者（13名FL；1名MZL）中，100%有可偵測CD19。在來自有及無POD24之患者之所有可評估活體組織切片中確認了可偵測CD19。西卡思羅產品特性在有及無POD24之患者中通常係相似的（表 8）。表8.依POD24狀態之FL患者中的西卡思羅產品特性。

特性（範圍）	有POD24 (n=68)	無POD24 (n=40)
No. CCR7+CD45RA+ T 細胞，10 ⁶	38.5 (6.4–268.6) ^a	46.6 (1.1–296.6) ^a
CD4/CD8 比率	0.7 (0.1–31.3) ^a	0.8 (0.1–13.1) ^a
轉導率，%	60.5 (18.0–86.0)	60.5 (26.0–77.0)
共培養中之IFN-γ ，pg/mL	5511.0 (753.0–1.9×10 ⁴)	6315.0 (1267.0–1.8×10 ⁴)

^a基於可用數據：有POD24，n=57；無POD24，n=36（CCR7+CD45RA+細胞）且n=35（CD4/CD8比率）。Axi-cel，西卡思羅；FL，濾泡淋巴瘤；IFN，干擾素；POD24，自起始含第一抗CD20之化學免疫療法後＜24個月疾病進展。

西卡思羅在有POD24 iNHL之患者中顯示出高持續反應率。儘管兩組中均未達到PFS之中位數，但第18個月時的估計PFS率在有POD24之患者中似乎比在無POD24之患者中低。在FL患者中，觀察到先前與復發相關之分析物之預處理水平（CC17 [TARC]及CCL22 [MDC] (Plaks V, et al. AACR 2021.#CT036)）在有POD24之患者中比在無POD24之患者中更高，可能導致18個月PFS率之差異。安全性概況在有及無POD24之患者中相似地可管理。在FL患者中，治療後藥物動力學及藥效學概況在有及無POD24之患者中似乎在很大程度上係相當的。西卡思羅對於患有POD24 iNHL之患者（一種患有特別高風險疾病之群體）而言可能係有希望的選擇。實例3

本實例的特徵在於兩種抗CD19 CAR T療法、KTE-X19、及西卡思羅。KTE-X19之製造程序相對於西卡思羅之製造程序進行修改，以透過CD4 ⁺/CD8 ⁺細胞之陽性富集來移除循環淋巴瘤細胞。細胞係用針對CD3（泛T細胞標記）、CD14、CD19（B細胞標記）、CD45（泛白血球標記）、及CD56（活化及NK標記）之螢光接合抗體標示，並藉由流動式細胞測量術評估。細胞活力係使用活力染料之負染色(SYTOX near-IR)來評估。檢定之定量下限(lower limit of quantification, LLOQ)係0.2%且NK細胞及單核球之定量下限係5%。判定NK細胞之百分比（NK細胞係CD45 ⁺、CD14 ^-、CD3 ^-、及CD56 ⁺；T細胞係CD45 ⁺、CD14 ^-、及CD3 ^-）。來自23批西卡思羅及97批KTE-X19之NK細胞之中位數百分比分別係1.9%（範圍0.8%至3.2%）及0.1%（範圍0.0%至2.8%）。來自相同批次之西卡思羅及KTE-X19之CD3 ^-細胞雜質之中位數百分比分別係2.4%（範圍0.9%至4.6%）及0.5%（範圍0.3%至3.9%）。KTE-X19（布萊奧妥，TECARTUS）及西卡思羅(YESCARTA)在細胞活力方面之結果分別係≥ 72%及≥ 80%；在抗CD19 CAR表現方面分別係≥ 24%及≥ 15%；在IFN-γ生產方面分別係≥ 190 pg/mL及≥ 520 pg/mL；且在CD3 ⁺細胞之百分比方面分別係≥ 90%及≥ 85%。布萊奧妥主要由CD3+ T細胞(99.3% ± 0.8%)構成，其可進一步劃分為CD4+ (37.9% ± 16.5%)及CD8+ (59.3% ±16.5%)亞群。循環淋巴瘤細胞之存在可能在製造故障中起作用，且亦在抗CD19 CAR T細胞在離體製造期間之耗竭中起作用。實例4

本實例引用了CLINICAL TRIAL-4 (NCT02625480)之3年結果，其係一項評估KTE-X19（自體抗CD19嵌合抗原受體(CAR) T細胞療法（如上所述））在患有復發性/難治性(R/R) B細胞急性淋巴母細胞白血病（B-ALL；所有經治療患者之中位數追蹤：36.1個月）之小兒/青少年患者中之安全性及功效之1/2期多中心研究。在1期為接受1×10 ⁶個嵌合抗原受體(CAR) T細胞/kg較低劑量之患者探索了兩種配方，一種配方之總體積係40 mL，且另一種配方之體積係68 mL。該40 mL配方意欲在冷凍/解凍程序期間維持細胞密度及細胞活力。針對體重＞100 kg之患者，投予2×10 ⁸或1×10 ⁸個抗CD19 CAR T細胞之最大固定劑量。主要終點係劑量限制毒性(DLT)之發生率。在招募的31名患者中，向24名（中位數年齡13.5歲，範圍3至20歲）投予了KTE-X19，且中位數追蹤係36.1個月。未觀測到DLT。所有經治療患者均有≥3級不良事件，通常係低血壓(50%)及貧血(42%)。在所有經治療之2×10 ⁶、1×10 ⁶（68 mL配方）、及1×10 ⁶（40 mL配方）個CAR T細胞/kg組中，3級細胞介素釋放症候群之比率分別係33%、75%、27%、及22%；21%、25%、27%、及11%的患者分別經歷了≥3級神經性事件。在所有經治療之2×10 ⁶、1×10 ⁶(68 mL)、及1×10 ⁶（40 mL配方）個CAR T細胞/kg組中，整體完全緩解(CR)率（CR及伴不完全血液學恢復之CR）分別係67%、75%、64%、及67%。整體MRD陰性率在反應者中係100%。在1×10 ⁶(40 mL)組中（推薦的2期劑量），未達到中位數緩解持續時間及整體存活期。患有R/R B-ALL之小兒/青少年患者在KTE-X19單次劑量後，以可管理安全性概況實現了高MRD陰性緩解率。2期以1×10 ⁶個CAR T細胞/kg (40 mL)劑量正在進行。

在CLINICAL TRIAL-4之1期部分，符合條件之患者年齡≤21歲，體重≥6 kg，且僅患有R/R B-ALL，定義為對於第一線治療係難治性的、在≥2線全身性治療後R/R、或在alloSCT後R/R（若該患者在招募時距alloSCT≥100天且在招募前停用免疫抑制藥物≥4週）。允許使用蘭妥莫單抗(blinatumomab)進行先前治療。劑量限制毒性(DLT)定義如下：若不歸因於基礎疾病，則4級血液學毒性持續超過30天（淋巴球減少症除外）；所有KTE-X19相關之3級非血液學毒性持續＞7天；以及所有KTE-X19相關之4級非血液學毒性，不考慮持續時間，除了表9中提及之例外情況。在白血球分離術後允許進行指定的橋接化學療法，並在起始調理化學療法前完成至少7天或5個半衰期（以較短者為準），該調理化學療法係由在第-4天、-3天、及-2天靜脈內(IV)氟達拉濱25 mg/m ²/天、以及在第-2天IV環磷醯胺之單次劑量900 mg/m ²組成。在第0天以目標劑量2×10 ⁶或1×10 ⁶個CAR T細胞/kg投予KTE-X19之單次IV輸注。輸注後需要住院至少7天。所有完成第3個月訪視之患者在長期追蹤內，每3個月至第18個月，從第24個月至第60個月每6個月，然後每年一次直至15年，追蹤其等之存活及疾病狀態。若患者撤回對進一步追蹤之同意、失訪、或死亡，則可將其從研究中移除。依據規程不需要同種異體幹細胞移植(alloSCT)，但依據試驗主持人之判斷允許。額外 1期納入標準

有＞5%骨髓母細胞之形態學疾病： 1.篩選時Lansky或Karnofsky體能狀態≥80% 2.若患有費城染色體陽性疾病之患者對酪胺酸激酶抑制劑療法不耐受，或者若儘管使用了至少兩種不同的酪胺酸激酶抑制劑(TKI)治療，但仍患有R/R疾病，則該等患者亦符合條件 3.在先前用蘭妥莫單抗治療之患者中，需要CD19表現≥90%之白血病母細胞 4.絕對嗜中性球計數(ANC) ≥500/µL，除非主要試驗主持人認為血球減少係由於基礎白血病引起的，且使用白血病療法可能可逆 5.血小板計數≥50,000/µL，除非主要試驗主持人認為血球減少係由於基礎白血病引起的，且使用白血病療法可能可逆 6.絕對淋巴球計數≥100/µL 7.適當的腎、肝、肺、及心臟功能定義為： a.肌酸酐廓清率（如藉由Cockcroft Gault或Schwartz估計）≥60 cc/min b.血清丙胺酸轉胺酶及天門冬胺酸轉胺酶≤5×正常值上限(ULN) c.總膽紅素≤1.5×ULN，在患有Gilbert氏症候群之患者中除外 d.左心室縮短分率≥30%或左心室射出分率≥50%，如藉由心臟超音波檢查確定無心包膜積液之證據，且無臨床意義的心律不整 e.無臨床顯著之胸膜積水 f.室內空氣中基線氧飽和度＞92% 8.具生育能力的女性（定義為有第一次月經）之血清或尿液妊娠測試必須係陰性額外 1期排除標準 1.根據世界衛生組織分類之Burkitt白血病/淋巴瘤或慢性骨髓性白血病淋巴母細胞危象 2.除了非黑色素瘤皮膚癌或原位癌之外的惡性疾病史，除非無疾病≥3年 3.對胺基糖苷或本研究中使用的任何藥劑有嚴重過敏反應史 4.任何中樞神經系統(CNS)病症之病史或存在，諸如癲癇發作、腦血管缺血/出血、失智、小腦疾病、任何CNS受累之自身免疫性疾病、後部可逆性腦病變症候群(posterior reversible encephalopathy syndrome)、或腦水腫 a.每mm3＜5個白血球且有神經性改變(CNS-2)之腦脊液樣本中之可偵測到的腦脊髓母細胞、或每mm3≥5個白血球且有或無神經性改變(CNS-3)之腦脊液樣本中之可偵測到的腦脊液母細胞 5.與骨髓衰竭相關之伴發性遺傳症候群史，諸如Fanconi氏貧血、Kostmann氏症候群、或Shwachman-Diamond症候群 6.招募後12個月內有心肌梗塞、心臟血管成形術或支架置入術、不穩定型心絞痛、或其他臨床意義的心臟病史 7.招募後6個月內有症狀性深靜脈血栓或肺栓塞史 8.原發性免疫缺陷 9.已知感染HIV、B型肝炎、或C型肝炎病毒。若依據定量聚合酶連鎖反應(PCR)及/或核酸偵測無法偵測出病毒載量，則允許有B型肝炎或C型肝炎史 10.存在無法控制、或需要IV抗菌劑進行管理之真菌、細菌、病毒、或其他感染。若對積極治療有反應且諮詢了Kite Medical Monitor後，則允許有單純性尿路感染及非複雜的細菌性咽炎 11.先前藥物治療 a.招募前1週內或5個半衰期內（以較短者為準）挽救性全身療法（包括化學療法、用於Ph+ ALL之TKI、及蘭妥莫單抗） b.除蘭妥莫單抗以外的先前CD19導向療法 c.接受了先前CD19導向療法的不良事件4級神經性事件或4級CRS（依據Lee et al 2014）之通用術語標準史 d.在招募前6個月內阿侖單抗、在招募前3個月內氯法拉濱或克拉屈濱、在招募前3週內PEG-天門冬醯胺酶 e.在招募前28天內供體淋巴球輸注 f.在招募前4週內用於移植物抗宿主病(GVHD)之任何藥物（例如鈣調磷酸酶抑制劑、胺甲喋呤、黴酚酸酯(mycophenolate)、雷帕黴素、沙利竇邁）或在招募前4週內使用的免疫抑制抗體（例如抗CD20、抗腫瘤壞死因子、抗介白素6、或抗介白素6受體） g.在招募前從任何先前全身性抑制/刺激免疫檢查點分子療法起必須經過至少3個半衰期（例如伊匹單抗、納武單抗、派姆單抗、阿特珠單抗、OX40促效劑、4-1BB促效劑） h.必須在招募前避免藥理學劑量的皮質類固醇療法（氫化可體松≥0.7 mg/kg/天或皮質類固醇之等效劑量）及其他免疫抑制藥物7天 12.存在任何留置線或引流管（例如經皮腎造口術管、留置Foley導管、膽道引流管、或胸膜/腹膜/心包導管）。允許Ommaya儲液囊及專用中心靜脈接入導管，諸如Port-a-Cath或Hickman導管 13.藉由Glucksberg標準之急性GVHD II-IV級或藉由國際骨髓移植登記指數之嚴重程度B-D；在招募前4週內需要全身治療之急性或慢性GVHD 14.活疫苗在招募前≤4週 15.由於製備性化學療法對胎兒或嬰兒之潛在危險影響，懷孕或哺乳之具生育能力的女性 16.從同意之日起至完成KTE-X19後6個月期間不願意實施節育措施之具生育能力的男女兩性患者 17.依據試驗主持人之判斷，對象不可能完成規程要求之所有研究訪視或程序，包括追蹤訪視、或遵守參與之研究要求 18.過去2年內有導致終末器官損傷或需要全身性免疫抑制/全身性疾病調節劑之自體免疫疾病（例如Crohns、類風溼性關節炎、全身性紅斑狼瘡）史。

研究設計及治療如下：1期目的係評估KTE-X19之安全性，並基於劑量限制毒性(DLT)之發生率及整體安全性概況判定KTE-X19之推薦2期劑量(RP2D)。DLT定義為：若不歸因於基礎疾病，則4級血液學毒性持續超過30天（淋巴球減少症除外）；所有KTE-X19相關之3級非血液學毒性持續＞7天；以及所有KTE-X19相關之4級非血液學毒性，不考慮持續時間，除了表9中提及之例外情況。在白血球分離術後允許進行指定的橋接化學療法，並在起始調理化學療法前完成至少7天或5個半衰期（以較短者為準），該調理化學療法係由在第-4天、-3天、及-2天靜脈內(IV)氟達拉濱25 mg/m ²/天、以及在第-2天IV環磷醯胺之單次劑量900 mg/m2組成。在第0天以目標劑量2×10 ⁶或1×10 ⁶個CAR T細胞/kg投予KTE-X19之單次IV輸注。輸注後需要住院至少7天。所有完成第3個月訪視之患者在長期追蹤內，每3個月至第18個月，從第24個月至第60個月每6個月，然後每年一次直至15年，追蹤其等之存活及疾病狀態。若患者撤回對進一步追蹤之同意、失訪、或死亡，則可將其從研究中移除。依據規程不需要同種異體幹細胞移植(alloSCT)，但依據試驗主持人之判斷允許。表9.劑量限制毒性之標準

DLT定義為在KTE-X19輸注後前28天內發作之下列KTE-X19相關事件：

● 若不歸因於基礎疾病，則4級血液學毒性持續超過30天（淋巴球減少症除外）

● 無論持續時間如何，所有持續＞7天之KTE-X19相關3級非血液學毒性及所有KTE-X19相關4級非血液學毒性均被視為DLT，以下除外： ○ 失語/言語障礙症或意識模糊/認知障礙在2週內至少消退至1級或基線，且在4週內至少消退至基線 ○ 發熱3或4級 ○ KTE-X19輸注（與KTE-X19輸注相關）後2小時內發生的即發性過敏反應，其在採用標準療法輸注KTE-X19之24小時內可逆至2級或以下 ○ 腎毒性，需要透析≤7天 ○ 用於氣道保護之插管（若≤7天） ○ TLS，包括可歸因於TLS（例如電解質異常、腎功能、高尿酸血症）之相關表現 ○ 3級轉胺酶、鹼性磷酸酶、膽紅素或其他肝功能測試升高，前提係在14天內消退(resolution)至≤2級 ○ 4級暫時性血清肝酶異常，前提係在72小時內消退至≤3級 ○ 低伽瑪球蛋白血症3或4級 ○ 3級噁心及/或厭食

● 歸因於CRS之不良事件將映射至整體CRS分級評估以判定DLT ○ 持續時間＞7天之所有3級CRS之發生及所有4級CRS之發生均被視為DLT，因上文舉出之例外情況所導致的CRS之發生除外

CRS，細胞介素釋放症候群；DLT，劑量限制毒性；TLS，腫瘤溶解症候群。

在以2×10 ⁶個CAR T細胞/kg之起始劑量治療的前3名患者中評估了DLT。招募一名額外患者以接受2×10 ⁶個CAR T細胞/kg。在對患者進行輸注後持續28天之追蹤後，安全性審查小組評估了安全性數據，且後續患者接受了1×10 ⁶個CAR T細胞/kg來評估減輕CRS及NE之風險以改進風險:效益比率之潛能。(Shah BD et al., J Clin Oncol 37:abstr 7006, 2019；Shah BD et al., Blood In Press, 2021.)為了進一步優化風險:效益比率，以1×10 ⁶個CAR T細胞/kg將第二群組患者之劑量配方從68 mL修改為40 mL。鑒於此小兒研究群體中之預期患者體重，40 mL配方旨在提供比68 mL配方更高的細胞密度，以減少最終產物體積更低之潛在風險。患者經歷了白血球分離術以獲得用於CAR T細胞製造之細胞，隨後接受了後續調理化學療法；使用新鮮白血球分離術材料進行CAR T細胞製造。在白血球分離術與調理化學療法之間允許有指定的橋接化學療法（表10）。表10.橋接化學療法

預先定義之橋接化學療法方案*
長春新鹼 ^†	每週IV 1.5 mg/m ²（最大劑量2 mg）× 4次劑量，每天地塞米松6 mg/m ²× 5天
減毒VAD	每週IV長春新鹼1.5 mg/m ²（最大劑量2 mg）× 4次劑量，每天地塞米松6 mg/m ²× 5天，且阿黴素50 mg/m ²IV × 1次劑量（僅第一週）
巰嘌呤(6-MP)	每天一次PO 50 mg/m ²/劑量（睡前空腹投予以改善吸收）
減毒FLAG ^‡	依據試驗主持人之判斷，每天氟達拉濱25 mg/m ²IV，接著每天阿糖胞苷2 g/m ²IV，總共持續2至5天；G-CSF 5 µg/kg SC或IV於化學療法結束後的第二天開始，持續至ANC恢復至＞1000/µL×連續2天、或直至調理化學療法開始之前一天，以先到者為準
羥基尿素	在15 mg/kg/天與50 mg/kg/天之間滴定之劑量（四捨五入至最接近的500- mg膠囊，並作為每日單次口服劑量連續給藥）
環磷醯胺及依託泊苷	在第1-5天每日IV環磷醯胺440 mg/m ²，且在第1-5天每日依託泊苷100 mg/m ²

*允許患有Ph+ ALL及Ph樣ALL之患者組合使用TKI與上述任何方案； ^†對於不能耐受長春新鹼之患者，可使用另一種生物鹼。 ^‡在投予FLAG化學療法期間，應避免並行鞘內注射胺甲喋呤治療。ALL，急性淋巴母細胞白血病；ANC，絕對嗜中性球計數；FLAG，氟達拉濱、高劑量阿糖胞苷、及G-CSF；G-CSF，顆粒球群落刺激因子；IV，靜脈內；Ph，費城染色體；PO，口服；SC，皮下；TKI，酪胺酸激酶抑制劑；VAD，長春新鹼、阿黴素、及地塞米松。

在第0天以各別目標劑量2×10 ⁶或1×10 ⁶個CAR T細胞/kg（68 mL或40 mL配方）投予KTE-X19。輸注後需要住院至少7天，然後在預先規定的時間點進行反應評估。所有完成第3個月訪視之患者在長期追蹤內，每3個月至第18個月，從第24個月至第60個月每6個月，然後每年一次直至15年，追蹤其等之存活及疾病狀態。若患者撤回對進一步追蹤之同意、失訪、或死亡，則可將其從研究中移除。依據規程不需要同種異體幹細胞移植(alloSCT)，但依據試驗主持人之判斷允許。

接受1×10 ⁶個CAR T細胞/kg (40 mL)之患者按照經修訂毒性管理指南進行治療：若係在細胞介素釋放症候群(CRS)之背景下，則僅針對神經性事件(NE)投予托珠單抗，且針對2級NE起始類固醇，然而針對1×10 ⁶個CAR T細胞/kg (68 mL)群組，在原先的毒性管理指南中係針對3級NE而起始的（表11）。表11.原始及經修訂神經毒性管理指南。

NE 級別	原始管理指南	經修訂管理指南
1 級	支持性照護及評估 ● 支持性照護 ● 按照臨床指示進行的神經檢查及額外檢查	支持性照護及評估 ● 支持性照護 ● 密切監視神經狀態 ● 考慮預防性左乙拉西坦*
	托珠單抗 ● N/A	托珠單抗 ● N/A
	皮質類固醇 ● N/A	皮質類固醇 ● 地塞米松10 mg IV x 1 ● 若2天後未改善，則重複地塞米松
2 級	支持性照護及評估 ● 神經檢查、腦MRI、及CSF評估；按照臨床指示考慮EEG ● 考慮預防性抗癲癇藥	支持性照護及評估 ● 按照指示進行的連續心臟遙測及脈搏血氧測定 ● 密切監視神經狀態，利用一系列神經檢查（包括眼底檢查及Glasgow Coma評分）。考慮神經學諮詢 ● 進行腦成像（例如MRI）、EEG、及腰椎穿刺（以開放壓）（若無禁忌症）
托珠單抗 ● 對於患有共病（例如≥2級CRS）之患者，考慮1小時內IV托珠單抗8 mg/kg（不超過800 mg）	托珠單抗 ● 對於患有並行CRS之患者，1小時內投予IV托珠單抗8 mg/kg（不超過800 mg）；若對IV流體或增加補充氧氣無反應，則按需要每8小時重複，最多24小時內3劑；若CRS之徵象及症狀無臨床改善，則最多共4劑
皮質類固醇 ● N/A	皮質類固醇 ● 地塞米松10 mg IV每天4次 ● 若改善，則繼續使用皮質類固醇直到事件係1級或以下，接著依臨床需要迅速減量 ● 若未改善，則依下文中的適當級別管理；考慮與醫療監測員聯絡
3 級	支持性照護及評估 ● 依據2級 ● 使用連續心臟遙測及脈搏血氧測定進行監測	支持性照護及評估 ● 在受監護的照顧或加護病房(ICU)中管理
托珠單抗 ● 考慮1小時內IV托珠單抗8 mg/kg（不超過800 mg）；若症狀未穩定或改善，則每4至6小時進行重複	托珠單抗 ● 依據2級
皮質類固醇 ● 考慮皮質類固醇（例如每6小時地塞米松10 mg IV或甲基潑尼松龍1 mg/kg BID）用於儘管使用了托珠單抗但仍惡化之症狀	皮質類固醇 ● 甲基潑尼松龍1000 mg IV 每天一次 ● 若改善，則繼續使用皮質類固醇直到事件係1級或以下，接著依臨床需要迅速減量 ● 若未改善，則依下文中的適當級別管理；考慮與醫療監測員聯絡
4 級	支持性照護及評估 ● 依據2級 ● 使用連續心臟遙測及脈搏血氧測定進行監測	支持性照護及評估 ● 依據3級 ● 可能需要機械通氣
托珠單抗 ● 若先前未投予，則依據3級投予托珠單抗	托珠單抗 ● 依據2級
皮質類固醇 ● 投予皮質類固醇（例如甲基潑尼松龍1 g/d × 3天，隨後250 mg BID × 2天，接著125 mg BID × 2天，接著60 mg BID × 2天）	皮質類固醇 ● 甲基潑尼松龍1000 mg IV每天兩次 ● 繼續使用皮質類固醇直到事件係1級或以下，接著依臨床需要迅速減量 ● 若未改善，則考慮每天3次1 g甲基潑尼松龍或替代療法 ^†；醫療監測員聯絡

*預防性左乙拉西坦適用於所有級別。 ^†替代療法之起始應與醫療監測員討論，且包括（但不限於）阿那白滯素(anakinra)、司妥昔單抗、魯索替尼、環磷醯胺、靜脈內免疫球蛋白、及抗胸腺細胞球蛋白。 BID，每天兩次；CRS，細胞介素釋放症候群；CSF，腦脊髓液；EEG，腦電圖；ICU，加護病房；IV，靜脈內；MRI，核磁共振影像結果及評估

1期主要終點係DLT在DLT可評估組中之發生率，其包括以2×10 ⁶個CAR T細胞/kg劑量使用KTE-X19治療之前3名患者。次要終點包括安全性、整體CR率(CR+CRi)、緩解持續時間(DOR)、MRD陰性率、alloSCT率、OS、及無復發存活期(RFS)。不良事件（包括細胞介素釋放症候群(CRS)及神經性事件(NE)之個體症狀）係根據NCI不良事件(AE)通用術語標準第4.03版進行分級。CRS係根據Lee at al., Blood. 2014; 124(2):188-195之經修改標準進行分級。整體反應係在骨髓及周邊血液液評估之後由試驗主持人進行判定，如下表所詳述。(Cheson BD et al., J Clin Oncol. 2007;25(5):579-586.)在第28天及第2個月與第3個月進行骨髓評估及反應評估。在接受橋接化學療法之患者中，在橋接化學療法結束時與第-4天（+/- 2天）之間需要額外骨髓抽吸物。對於患有髓外疾病之患者，依據經修訂國際工作小組惡性淋巴瘤標準中之髓外及CNS疾病反應標準來評估反應，如下表所詳述。(Cheson BD et al., J Clin Oncol. 2007;25(5):579-586.)使用如下標記以0.01%之敏感性藉由流動式細胞測量術(Neogenomics)測試微量殘存疾病(MRD)：CD3、CD9、CD10、CD13/CD33、CD19、CD20、CD34、CD38、CD45、CD58、及CD71。(Gupta S et al., Leukemia. 2018;32(6):1370-1379; Borowitz MJ et al., Blood. 2015;126(8):964-971; Bruggemann M et al., Hematology Am Soc Hematol Educ Program. 2017;2017(1):13-21.) MRD陰性依據標準評估被定義為MRD ＜10 ^-4。對在第28天及第2個月與第3個月採集之一部分骨髓抽吸物進行MRD分析。作為探索性終點，對產物、血液、及腫瘤樣本進行轉化分析，以評估KTE-X19在小兒R/R B-ALL中之藥物動力學及藥效學概況。先前已描述藥物動力學及藥效學評估以及與臨床結果之關聯。(Locke FL et al., Mol Ther. 2017;25(1):285-295.)整體疾病反應如表12中所述。表12.整體疾病反應分類。

反應	BM		周邊血液*		CNS EMD		非CNS EMD ^§
CR	≤5% ^‡	及	ANC ≥1000且Plt ≥100,000	及	CNS-1 ^#	及	CR
CRi	ANC ≥1000且Plt ＜100,000 或 ANC ＜1000且Plt ≥100,000
CRh	ANC ≥500且Plt ≥50,000 但不係CR
無母細胞之發育不全或再生障礙性BM	不符合CR、CRi、或CRh標準之任何值
PR	符合CR、CRi、CRh、或無母細胞之發育不全或再生障礙性骨髓之所有標準	及	PR
復發	＞5% ^‡	或	存在循環白血病 ^**	或	CNS-2或CNS-3	或	PD
無反應	進行所有必需的評估，未能達到任何反應類別所需標準
未知	評估未完成、不完整、或不確定注意：若疾病反應評估之任何單一要素顯示復發，則整體疾病反應可評估為「復發性疾病」，不需要評估疾病反應評估之其他未知要素

*Plt及ANC之單位係µL。每次進行BM評估時，均應評估ANC及Plt值。若未完成，則用於反應評估之ANC及Plt值可以係從BM結果之前7天的任何時間至BM結果之後的任何時間。 ^§在進行非CNS EMD評估之患者中，用於評估整體疾病反應之成像及骨髓結果必須在彼此之30天內。 ^‡藉由BM中之形態學所得之母細胞。 ^#對於實現CR之患者，在第28天或在首次假定反應時（以較早者為準）。 ^**藉由形態學，無循環白血病係＜1%循環母細胞。藉由形態學，循環白血病係≥1%循環母細胞。若藉由形態學母細胞≥1%，且沒有白血病之其他證據，則應進行流動或分子研究，以確認母細胞係白血病。ANC，絕對嗜中性球計數；BM，骨髓；CNS，中樞神經系統；CR，完全緩解；CRh，伴部分血液學恢復之完全緩解反應；CRi，伴不完全血液學恢復之完全緩解反應；EMD，髓外疾病；PD，疾病進展；Plt，血小板；PR，部分反應。結果患者

在2016年2月17日與2018年8月1日之間，招募31名患者並經歷了白血球分離術。對於所有經治療患者，從白血球分離術至KTE-X19產物釋放之中位數時間係14.0天（範圍，9.0-–20.0），從白血球分離術至遞送至研究部位係16.5天（範圍，12.0–23.0），且從白血球分離術至輸注係27.0天（範圍，18.0–41.0）。數據截止係在2020年9月9日。在招募的31名患者中，24名(77%)接受了調理化學療法且隨後給藥。七名患者因以下原因未給藥：不良事件（AE；n=1)、產物不可用(n=3)、因AE而不符合條件(n=1)、產物不可用及不符合條件(n=1)、及死亡(n=1)。二十四名患者接受調理化學療法，接著接受KTE-X19；4名患者接受了2×10 ⁶個CAR T細胞/kg劑量，11名患者接受了1×10 ⁶個CAR T細胞/kg (68 mL)劑量配方，且9名患者接受了1×10 ⁶個CAR T細胞/kg (40 mL)劑量配方。所有經治療患者之中位數追蹤係36.1個月（範圍，24.0-53.9）。經治療患者之中位數年齡係13.5歲（範圍，3-20）；42%的患者已接受≥3種前線療法；29%有原發性難治性疾病；25%在alloSCT之後係R/R；且篩選時中位數骨髓母細胞係44%（範圍，6至99；表13）。在招募之前，6名(25%)患者已接受過先前alloSCT治療，8名(33%)患者接受過先前蘭妥莫單抗治療，其中包括3名(13%)患者接受了蘭妥莫單抗作為最後一次先前治療，且1名(4%)患者患有髓外疾病。在招募的31名患者中，30名(97%)依據規程接受橋接療法，其中就在淋巴球清除化學療法前執行新的基線疾病評估。對所有給藥的24名患者進行了安全性分析及功效分析。表13.患者特性

特性	2×10 ⁶ 個細胞/kg (n=4)	1×10 ⁶ 個細胞/kg ， 68 mL (n=11)	1×10 ⁶ 個細胞/kg ， 40 mL (n=9)	整體 (N=24)
中位數年齡，歲（範圍）	11.5 (8-18)	12 (4-17)	14 (3-20)	13.5 (3-20)
性別，n (%)男性女性	2 (50) 2 (50)	8 (73) 3 (27)	5 (56) 4 (44)	15 (63) 9 (38)
Lansky 評分，n (%)80 90 100	0 1 (25) 2 (50)	1 (9) 6 (55) 2 (18)	0 4 (44) 2 (22)	1 (4) 11 (46) 6 (25)
Karnofsky 評分，n (%)80 90 100	0 0 1 (25)	2 (18) 0 0	1 (11) 2 (22) 0	3 (13) 2 (8) 1 (4)
前線療法之數目，n (%)≤2 ≥3	2 (50) 2 (50)	5 (45) 6 (55)	7 (78) 2 (22)	14 (58) 10 (42)
先前蘭妥莫單抗，n (%)	0	5 (45)	3 (33)	8 (33)
先前奧英妥珠單抗，n (%)	0	1 (9)	0	1 (4)
先前幹細胞移植，n (%)	1 (25)	4 (36)	1 (11)	6 (25)
難治性子群預招募，n (%)對於≥第2線療法係復發或難治性 alloSCT後復發性或難治性原發性難治性	2 (50) 1 (25) 1 (25)	3 (27) 4 (36) 4 (36)	6 (67) 1 (11) 2 (22)	11 (46) 6 (25) 7 (29)
篩選時之中位數BM 母細胞，% （範圍）	57 (41-99)	28 (7-98)	58 (6-97)	44 (6-99)
中位數預調理BM 母細胞，% （範圍）	85 (49-100)	6 (0-89)	44 (1-82)	37 (0-100)

安全性

在接受2×10 ⁶個CAR T細胞/kg之3名DLT可評估患者中，未觀測到DLT。所有經治療患者(n=24)經歷了至少一個≥3級AE，通常係低血壓(50%)及貧血（42%；表14）。71%的患者中發生了任何級別之嚴重AE。42%的患者中發生了≥3級感染。表14.不良事件

n (%)*	2×10 ⁶ 個細胞/kg (n=4)	1×10 ⁶ 個細胞/kg ， 68 mL (n=11)	1×10 ⁶ 個細胞/kg ， 40 mL (n=9)	所有患者 (N=24)
任何級別	級別 ≥3	任何級別	級別 ≥3	任何級別	級別 ≥3	任何級別	級別 ≥3
任何不良事件	4 (100)	4 (100)	11 (100)	11 (100)	9 (100)	9 (100)	24 (100)	24 (100)
發熱	4 (100)	3 (75)	11 (100)	3 (27)	8 (89)	2 (22)	23 (96)	8 (33)
低血壓	4 (100)	4 (100)	8 (73)	6 (55)	6 (67)	2 (22)	18 (75)	12 (50)
頭痛	2 (50)	0	8 (73)	2 (18)	7 (78)	0	17 (71)	2 (8)
貧血	1 (25)	1 (25)	3 (27)	3 (27)	7 (78)	6 (67)	11 (46)	10 (42)
噁心	2 (50)	2 (50)	5 (45)	1 (9)	4 (44)	0	11 (46)	3 (13)
低鉀血症	3 (75)	2 (50)	3 (27)	1 (9)	4 (44)	3 (33)	10 (42)	6 (25)
嘔吐	0	0	4 (36)	0	6 (67)	0	10 (42)	0
嗜中性球計數減少	0	0	3 (27)	3 (27)	6 (67)	6 (67)	9 (38)	9 (38)
心搏過速	0	0	4 (36)	1 (9)	5 (56)	0	9 (38)	1 (4)
高血壓	3 (75)	2 (50)	4 (36)	0	1 (11)	0	8 (33)	2 (8)
嗜中性白血球低下合併發燒	1 (25)	1 (25)	3 (27)	3 (27)	3 (33)	3 (33)	7 (29)	7 (29)
腹痛	1 (25)	0	3 (27)	0	2 (22)	0	6 (25)	0
意識模糊狀態	0	0	4 (36)	0	2 (22)	0	6 (25)	0
便秘	0	0	4 (36)	0	2 (22)	0	6 (25)	0
食慾降低	1 (25)	1 (25)	2 (18)	0	3 (33)	2 (22)	6 (25)	3 (13)
疲勞	0	0	3 (27)	0	3 (33)	0	6 (25)	0
低伽瑪球蛋白血症	0	0	2 (18)	0	4 (44)	0	6 (25)	0
低鎂血症	2 (50)	0	1 (9)	0	3 (33)	0	6 (25)	0
血小板計數減少	2 (50)	2 (50)	2 (18)	2 (18)	2 (22)	2 (22)	6 (25)	6 (25)
白血球計數減少	1 (25)	1 (25)	2 (18)	2 (18)	3 (33)	2 (22)	6 (25)	5 (21)
咳嗽	0	0	3 (27)	0	2 (22)	0	5 (21)	0 (0)
低磷血症	1 (25)	0	2 (18)	1 (9)	2 (22)	1 (11)	5 (21)	2 (8)
缺氧	1 (25)	1 (25)	3 (27)	1 (9)	1 (11)	1 (11)	5 (21)	3 (13)
疼痛	2 (50)	0	1 (9)	0	2 (22)	0	5 (21)	0 (0)

*表包括在所有患者之≥20%中發生之任何級別之不良事件。

在所有經治療患者(n=24)中，21名患者(88%)報告有CRS，其中根據經修改Lee分級標準，有8名患者(33%)經歷≥3級CRS（表15）。Lee DW et al., Blood 124:188-95, 2014.未發生4級或5級CRS事件。最常見的≥3級CRS症狀係低血壓(50%)及發熱(25%)。分別在13%及8%的患者中觀測到任何級別及≥3級的缺氧。KTE-X19輸注後CRS中位數發作時間及持續時間分別係5天（範圍，1-14）及7天，所有事件均已解決。 表15. 細胞介素釋放症候群及神經性事件

n (%)	2×10 ⁶ 個細胞/kg (n=4)	1×10 ⁶ 個細胞/kg ， 68 mL (n=11)	1×10 ⁶ 個細胞/kg ， 40 mL (n=9)	所有患者 (N=24)
類固醇	1 (25)	4 (36)	5 (56)	10 (42)
托珠單抗	3 (75)	6 (55)	6 (67)	15 (63)
用於治療CRS 之升壓劑	3 (75)	4 (36)	2 (22)	9 (38)
不良事件，n (%)*	任何級別	≥3 級	任何級別	≥3 級	任何級別	≥3 級	任何級別	≥3 級
CRS ^†,‡	4 (100)	3 (75)	9 (82)	3 (27)	8 (89)	2 (22)	21 (88)	8 (33)
發熱	3 (75)	3 (75)	9 (82)	2 (18)	5 (56)	1 (11)	17 (71)	6 (25)
低血壓	4 (100)	4 (100)	8 (73)	6 (55)	4 (44)	2 (22)	16 (67)	12 (50)
頭痛	1 (25)	0	3 (27)	0	3 (33)	0	7 (29)	0
心搏過速	0	0	2 (18)	1 (9)	4 (44)	0	6 (25)	1 (4)
發冷	0	0	0	0	3 (33)	0	3 (13)	0
嗜中性白血球低下合併發燒	0	0	0	0	3 (33)	3 (33)	3 (13)	3 (13)
缺氧	1 (25)	1 (25)	1 (9)	0	1 (11)	1 (11)	3 (13)	2 (8)
竇性心搏過速	0	0	3 (27)	0	0	0	3 (13)	0
神經性事件 ^‡,§	1 (25)	1 (25)	9 (82)	3 (27)	6 (67)	1 (11)	16 (67)	5 (21)
意識模糊狀態	0	0	4 (36)	0	2 (22)	0	6 (25)	0 (0)
腦病變	1 (25)	1 (25)	1 (9)	1 (9)	2 (22)	1 (11)	4 (17)	3 (13)
失語	1 (25)	1 (25)	1 (9)	0	1 (11)	0	3 (13)	1 (4)
嗜睡	0	0	2 (18)	1 (9)	1 (11)	0	3 (13)	1 (4)
震顫	0	0	2 (18)	0	1 (11)	0	3 (13)	0 (0)
天數（範圍）
CRS
中位數發作時間	2 (1-4)	6 (3-14)	7 (1-9)	5 (1-14)
中位數持續時間	10.5	7	8	7
神經性事件
中位數發作時間	7 (7-7)	9 (4-14)	10 (3-60)	9.5 (3-60)
中位數持續時間	NA ^\|\|	8	11	8

*包括在所有患者的≥10%中發生之CRS症狀及神經性事件。 ^†細胞介素釋放症候群根據Lee et al. Blood, 2014提出之經修改分級系統進行分類。

在所有經治療患者中，16名患者(67%)報告了任何級別的NE，且5名患者(21%)發生了≥3級事件，其中腦病變(13%)係最常見的≥3級事件（表15）。一名接受了1×106個CAR T細胞/kg (68 mL)劑量之患者發生了一件4級完全可逆NE（腦水腫）；對於該事件，患者使用地塞米松、甘露醇、氯化鈉、及托珠單抗進行了治療。不存在5級NE。總體而言，NE中位數發作時間係輸注後9.5天（範圍，3-60），且NE之中位數持續時間係8天。16名患者中有14名(88%) NE消退。剩餘兩名患者因AE (n=1)或進行性疾病(n=1)死亡時，其NE仍在進行中。

在所有經治療患者中，42%接受了類固醇，63%接受了托珠單抗，且46%接受了升壓劑（表15）。相對於根據原始指南使用2×10 ⁶個CAR T細胞/kg治療之4名患者及使用1×10 ⁶個CAR T細胞/kg (68 mL)治療之11名患者，根據經修訂毒性管理，在使用1×10 ⁶個CAR T細胞/kg (40 mL)劑量治療之9名患者中觀測到整體安全性有提高。在接受2×10 ⁶個CAR T細胞/kg之患者中，相較於27%及22%接受1×10 ⁶個CAR T細胞/kg之患者（分別係68 mL及40 mL），75%經歷了≥3級CRS。在25%的接受2×10 ⁶個CAR T細胞/kg之患者，和在27%的接受1×10 ⁶個CAR T細胞/kg (68 mL)之患者中觀測到≥3級NE，但在接受1×10 ⁶個CAR T細胞/kg (40 mL)之患者中，≥3級NE最低(11%)。此外，與2×10 ⁶個CAR T細胞/kg劑量群組相比，NE及CRS中位數發作時間在1×10 ⁶個CAR T細胞/kg劑量群組中似乎有延遲。

在研究中死亡之8名患者(33%)中，6名死於進展性疾病（中位數係KTE-X19輸注後190.5天），2名患者死於被認為與KTE-X19無關之AE（除5級B-ALL以外），包括播散性白黴菌病（n=1，KTE-X19輸注後第15天）及大腸桿菌敗血症（n=1，KTE-X19輸注後第409天）。在死亡之患者中，3名患者接受了2×10 ⁶個CAR T細胞/kg，4名患者接受了1×10 ⁶個CAR T細胞/kg (68 mL)，1名患者接受了1×10 ⁶個CAR T細胞/kg (40 mL)。在任何時候皆無患者測出呈具複製能力(replication-competent)之反轉錄病毒或抗CD19 CAR抗體陽性。功效

中位數追蹤時間係36.1個月（範圍，24.0-53.9）時，所有經治療患者(n=24)均可進行功效評估。由試驗主持人評估之整體緩解率係67%，29%的患者(n=7)達到CR，38%達到CRi（n=9；表16）。在2×10 ⁶、1×10 ⁶(68 mL)、及1×10 ⁶(40 mL)個CAR T細胞/kg劑量組中，CR+CRi率分別係75%、64%、及67%。各劑量水平中從輸注到CR+CRi之中位數時間係30天（範圍，26-113天）。在16名CR+CRi患者中，整體MRD陰性率係100%。總共十六名患者(67%)接受alloSCT作為後續鞏固性療法，在2×10 ⁶、1×10 ⁶(68 mL)、及1×10 ⁶(40 mL)個CAR T細胞/kg劑量組中分別包括2、8、及6名患者。達到CR+CRi之16名患者中有十四名(88%)（在2×10 ⁶、1×10 ⁶[68 mL]、及1×10 ⁶[40 mL]個CAR T細胞/kg劑量組中分別係2、7、及5名）經歷了後續alloSCT。該等患者中兩名在後續alloSCT前復發；在繼續進行alloSCT之前，均接受了鞏固性化學療法。在達到CR+CRi但未接受後續alloSCT之2名患者中，1名死於進展性疾病，1名失訪。未實現任何反應之2名患者繼續進行後續alloSCT，並實現了CR作為他們對alloSCT的反應。所有經治療患者之中位數移植時間係KTE-X19後2.3個月（範圍，1.4-24.9）。表16.緩解率及微量殘存疾病狀態

反應類別，n (%)	2×10 ⁶ 個細胞/kg (n=4)	1×10 ⁶ 個細胞/kg ， 68 mL (n=11)	1×10 ⁶ 個細胞/kg ， 40 mL (n=9)	整體 (N=24)
整體完全緩解率完全緩解伴不完全血液學恢復之完全緩解	3 (75) 0 3 (75)	7 (64) 3 (27) 4 (36)	6 (67) 4 (44) 2 (22)	16 (67) 7 (29) 9 (38)
伴部分血液學恢復之完全緩解	0	1 (9)	0	1 (4)
無母細胞之發育不全/ 再生障礙性骨髓	0	0	1 (11)	1 (4)
無反應	0	1 (9)	1 (11)	2 (8)
未知或不可評估	1 (25)	2 (18)	1 (11)	4 (17)
整體MRD 陰性率*	3 (75)	8 (73)	7 (78)	18 (75)
*在第28天及第2個月與第3個月以0.01%之敏感性藉由流動式細胞測量術來評估MRD陰性。在同種異體幹細胞移植或新抗癌療法之後的MRD結果不包括在內。MRD，微量殘存疾病。

在審查了後續alloSCT之後，達到KTE-X19後的CR+CRi之16名患者之中位數DOR係7.2個月(95% CI, 4.1–14.2)，且在2×10 ⁶、1×10 ⁶(68 mL)、及1×10 ⁶(40 mL)個CAR T細胞/kg劑量組中分別係4.1個月、10.7個月、及未達到。中位數DOR係14.2個月(95% CI, 3.9–NE)，無需審查後續alloSCT及酪胺酸激酶抑制劑之恢復。接受KTE-X19後之後續alloSCT之14名CR+CRi患者中之中位數DOR係10.7個月(95% CI, 7.2–14.2)。所有經治療患者(n=24)之中位數RFS係5.2個月(95% CI, 0.0–17.8)。1×10 ⁶個CAR T細胞/kg (40 mL)組未達到中位數RFS，且在2×10 ⁶及1×10 ⁶(68 mL)個細胞/kg群組中分別係5.2個月(95% CI, 0.0–5.2)及9.1個月(95% CI, 0.0–17.8)。在繼續進行後續alloSCT之16名患者中，中位數RFS係9.1個月(95% CI, 9.1–17.8)。在所有經治療患者中且在1×10 ⁶個CAR T細胞/kg劑量組中均未達到中位數OS，且2×10 ⁶個CAR T細胞/kg劑量組之中位數OS係8.0個月。1×10 ⁶個細胞/kg (40 mL)劑量之24個月OS率對於1×10 ⁶個細胞/kg (40 mL)劑量而言係87.5% (95% CI, 38.7–98.1)，且對於1×10 ⁶個細胞/kg (68 mL)劑量而言係72.7% (95% CI, 37.1–90.3)。整體而言，截至數據截止日，經治療患者中有33%(8/24)死亡，1名患者因完全同意撤銷而中止，1名患者失訪。截至數據截止日，剩餘的58%患者(14/24)仍活著並繼續接受追蹤，其等均在KTE-X19之後接受了後續alloSCT。基於安全性及功效數據分析，根據經修訂毒性管理，RP2D係1×10 ⁶個KTE-X19細胞/kg（40 mL配方）。轉化分析

藉由聚合酶連鎖反應(PCR)測量並以血液中CAR基因拷貝數目/µg DNA表現之周邊血液中之CAR T細胞擴增在所有劑量組中均被觀測到，到第14天達到的峰值CAR T細胞水平，隨後後續CAR T細胞收縮至基線（表 17）。在KTE-X19輸注後3個月，所有劑量組中均無法藉由PCR在血液中偵測到中位數CAR T細胞水平（表 17）。中位數峰值CAR基因拷貝數/µg DNA血液在1×10 ⁶個CAR T細胞/kg劑量群組中相似，但在2×10 ⁶個CAR T細胞/kg群組中更高（圖 10A）。達到CR+CRi之患者血液中的峰值血液CAR基因拷貝數/µg DNA趨向高於無反應者，MRD陰性與MRD陽性的患者亦係如此（圖 10C）。與有≤2級NE的患者相比，有≥3級NE的患者血液中CAR基因拷貝數/µg DNA趨向更高（圖 10D），而在此有限樣本量中，高級別或低級別CRS之患者的血液中峰值CAR基因拷貝數/µg DNA無明顯差異。血液中的中位數峰值CAR基因拷貝數/µg DNA在16名沒有先前蘭妥莫單抗之患者中係5.16×10 ⁴（範圍，0至2.40×10 ⁵），在8名沒有先前蘭妥莫單抗之患者中係6.15×10 ³（範圍，0至2.49×10 ⁵）。表17.隨時間推移之血液中CAR基因拷貝數。

血液中每µg DNA 之CAR 基因拷貝數	2×10 ⁶	1×10 ⁶ 68 mL	1×10 ⁶ 40 mL
基線中位數範圍	(n=4) 0 0–0	(n=11) 0 0–0	(n=9) 0 0–0
第7 天中位數範圍	(n=4) 62,600 13,000 – 232,000	(n=11) 4374 0 – 133,000	(n=9) 10,800 0–249,000
第2 週中位數範圍	(n=4) 73,600 2414–173,000	(n=10) 7249.5 0–240,000	(n=8) 25,200 2325–40,100
第4 週中位數範圍	(n=3) 17,200 243–51,800	(n=10) 680 0–4617	(n=8) 453.6 0–37,800
第8 週中位數範圍	(n=1) 0 0–0	(n=3) 607.5 105–972	(n=7) 0 0–13,200
第3 個月中位數範圍	(n=3) 0 0–0	(n=8) 0 0–162	(n=5) 0 0–113
第6 個月中位數範圍	(n=3) 0 0–0	(n=9) 0 0–510	(n=3) 0 0–0
第9 個月中位數範圍	(n = 0) - -	(n = 7) 0 0–0	(n = 4) 0 0–0
第12 個月中位數範圍	(n=1) 0 0–0	(n=7) 0 0–0	(n=0) - -
第15 個月中位數範圍	(n=1) 0 0–0	(n=6) 0 0–0	(n=3) 0 0–0
第18 個月中位數範圍	(n=1) 0 0–0	(n=4) 0 0–0	(n=0) - -

多種關鍵血清細胞介素、趨化因子、及促發炎生物標記之峰值水平到第7天出現。與峰值CAR擴增相應，與1×10 ⁶個CAR T細胞/kg相比，以2×10 ⁶個CAR T細胞/kg給藥的患者中一些血清分析物趨向更高(介白素[IL]-2、IL-5、IL-6、IL-8、IL-10、IL-15、IL-16、鐵蛋白、顆粒酶B、細胞間黏附分子1 [ICAM-1]、干擾素γ[IFN-γ]、及腫瘤壞死因子α[TNF-α]（圖 11 ；表18）。表18.在基線處及在輸注後峰值處選擇血清生物標記

		2×10 ⁶ 個細胞/kg (n=4)	1×10 ⁶ 個細胞/kg ，68 mL (n=11)	1×10 ⁶ 個細胞/kg ，40 mL (n=9)
功能		基線	峰值	基線	峰值	基線	峰值
體內恆定/ 增生性	IL-15 ，pg/mL
中位數	14.9	72.0	3.3	23.2	7.3	38.2
範圍	7.5–24.2	53.5–116.9	1.4*–14.5	6.6–91.1	1.4*–26.6	13.6–65.7
IL-2 ，pg/mL
中位數	0.9*	47.8	0.9*	16.6	0.9*	8.3
範圍	0.9–0.9	20.8–163.3	0.9*–2.1	0.9*–690.4	0.9–0.9	0.9*–101.1
促發炎	IL-6 ，pg/mL
中位數	9.8	976.0 ^†	1.6*	90.8	1.6*	23.3
範圍	1.6*–32.6	976.0 ^†–976.0 ^†	1.6*–13.5	1.6*–976.0 ^†	1.6*–13.9	6.7–976.0 ^†
CRP ，mg/L
中位數	62.2	261.7	4.5	39.7	23.2	115.8
範圍	2.8–379.1	149.7–496.0 ^†	1.2–200.4	5.0–300.1	0.4–135.5	42.3–496.0 ^†
SAA ，mg/L
中位數	7.5×10 ⁷	2.7×10 ⁸	3.9×10 ⁶	4.9×10 ⁷	1.0×10 ⁷	5.8×10 ⁸
範圍	1.1×10 ⁷–6.3×10 ⁸	1.6×10 ⁸–1.4×10 ^9†	7.4×10 ⁵–1.1×10 ⁸	3.5×10 ⁶–1.2×10 ⁹	8.9×10 ⁵–9.9×10 ⁸	9.9×10 ⁶–1.4×10 ^9†
IL-5 ，pg/mL
中位數	6.3*	23.6	6.3*	6.3*	6.3*	6.3*
範圍	6.3–6.3	23.1–43.8	6.3*–56.8	6.3*–73.7	6.3–6.3	6.3–6.3
鐵蛋白，ng/mL
中位數	3528.4	2.5×10 ^4†	2104.0	5915.8	876.1	5745.9
範圍	2169.1–6570.4	1.4×10 ⁴–2.5×10 ^4†	595.0–2.5×10 ^4†	1084.8–2.5×10 ^4†	83.3–4567.7	1116.1–3.2×10 ^4†
IL-1RA ，pg/mL
中位數	307.8	3366.7	292.3	2223.8	148.7	1677.4
範圍	132.9–1368.5	847.3–4000.0 ^†	31.2–695.4	300.1–4000.0 ^†	77.6–684.0	91.9–9000.0 ^†
IL-2Ra ，ng/mL
中位數	2.3	29.9	3.9	11.9	2.2	16.5
範圍	1.2–6.6	11.2–56.3	0.1–71.6	3.1–60.8	1.6–100.0 ^†	2.4–100.0 ^†
TNF-α ，pg/mL
中位數	3.6	30.7	3.6	11.1	1.6	5.2
範圍	2.6–8.7	14.0–70.2	1.6–9.2	2.9–34.0	0.7*–4.9	1.7–31.3
ICAM-1 ，ng/mL
中位數	1046.1	4868.8	622.5	1398.2	1018.0	1875.9
範圍	674.1–1440.2	1626.2–7723.4	290.3–1991.8	591.9–7204.9	264.4–2656.5	749.2–5906.3
VCAM-1 ，ng/mL
中位數	778.0	3417.8	1040.7	1615.3	1254.0	2565.3
範圍	643.6–1553.8	823.6–4125.8	450.9–2406.4	859.1–2778.1	514.2–3460.0	807.5– 5594.2
免疫調節	GM-CSF ，pg/mL
中位數	1.9*	130.6	1.9*	1.9*	1.9*	1.9*
範圍	1.9–1.9	42.1–1500.0 ^†	1.9–1.9	1.9*–468.9	1.9–1.9	1.9*–97.9
IFN-γ ，pg/mL
中位數	7.5*	1876.0 ^†	7.5*	725.7	7.5*	1876.0 ^†
範圍	7.5*–15.2	633.5–1876.0 ^†	7.5*–291.9	42.4–1876.0 ^†	7.5*–61.6	7.5*–1876.0 ^†
IL-16 ，pg/mL
中位數	57.9	521.7	141.40	212.5	97.80	242.0
範圍	19.1*–78.1	112.7–2502.0	69.5–375.8	117.9–629.5	44.9–112.4	104.2–3414.2
趨化因子	IL-10 ，pg/mL
中位數	1.90	124.9	0.70*	42.3	0.70*	47.0
範圍	0.70*–17.6	16.7–466.0 ^†	0.70*–58.4	3.2–466.0 ^†	0.70*–6.20	1.8–466.0 ^†
IL-8 ，pg/mL
中位數	72.5	750.0†	21.1	108.0	17.8	105.4
範圍	45.9–371.6	428.2–750.0†	4.6–108.7	14.2–750.0†	10.5–106.2	45.6–750.0†
CXCL10 ，pg/mL
中位數	307.7	2000.0 ^†	217.2	2000.0 ^†	205.7 ^‡	2000.0 ^†,‡
範圍	107.7–331.6	2000.0 ^†–2000.0 ^†	78.0–1034.5	487.4–2000.0 ^†	72.9–475.1	277.6–2000.0 ^†
MCP-1 ，pg/mL
中位數	913.3	1500.0 ^†	554.5	1500.0 ^†	525.6 ^‡	1500.0 ^†,‡
範圍	623.5–1500.0 ^†	1500.0 ^†–1500.0 ^†	289.7–1366.7	671.2–1500.0 ^†	318.7– 942.1	1197.8–1500.0 ^†
效應	顆粒酶B ，pg/mL
中位數	1.0*	599.1	1.0*	19.4	1.0*	49.2
範圍	1.0–1.0	31.4–1.0×10 ^4†	1.0*–33.4	1.0*–166.1	1.0*–65.9	1.0*–5477.4

分析物VCAM-1及IL-16之峰值血清水平與≥3級CRS相關。在≥3 NE之對象中未觀測到此類關聯，其可能係由於≥3 NE之患者數量少所致（表 19）。表19.血清生物標記與細胞介素釋放症候群及神經性事件之關聯。

		細胞介素釋放症候群	神經性事件
功能	峰值- 中位數（範圍）	≥3 級	級別 0–2	P 值	≥3 級	0-2 級	P 值
(n=8)	(n=16)	(n=5)	(n=19)
體內恆定/ 增生性	IL-15，pg/mL	52.4 (13.6–116.9)	36.4 (6.6–91.1)	0.3123	57.4 (13.6–116.9)	34.9 (6.6–78.5)	0.1355
IL-2，pg/mL	47.8 (2.1–163.3)	8.7 (0.9*–690.4)	0.1112	35.3 (2.1–124.0)	9.0 (0.9*–690.4)	0.3741
促發炎。	IL-6，pg/mL	817.1 (6.7–976.0 ^†)	71.1 (1.6*–976.0 ^†)	0.4026	976.0 ^†(6.7–976.0 ^†)	90.8 (1.6*–976.0 ^†)	0.3137
CRP，mg/L	139.4 (5.0–496.0 ^†)	81.8 (9.2–300.1)	0.2838	129.2 (18.1–496.0 ^†)	99.5 (5.0–300.1)	0.6187
SAA，pg/mL	5.10×10 ⁸(3.85×10 ⁶–1.38×10 ^9†)	1.01×10 ⁸(3.48×10 ⁶–1.38×10 ^9†)	0.1679	1.22×10 ⁹(1.49×10 ⁷–1.38×10 ^9†)	1.61×10 ⁸(3.48×10 ⁶–1.38×10 ^9†)	0.2859
IL-5，pg/mL	14.7 (6.3*–26.2)	6.3* (6.3*–73.7)	0.4014	6.3* (6.3*–42.0)	6.3* (6.3*–73.7)	0.7031
鐵蛋白，ng/mL	16,800 (1084.8–2.5×10 ^4†)	5921.0 (1116.1–31,600 ^†)	0.3902	10,800 (3046.8–2.5×10 ^4†)	6096.1 (1084.8–3.2×10 ^4†)	0.6952
IL-1RA，pg/mL	1906.6 (395.0-9000.0 ^†)	2298.7 (91.9-4000.0 ^†)	0.5193	2223.8 (395.0–4000.0 ^†)	2373.6 (91.9–9000.0 ^†)	0.9716
IL-2Ra，ng/mL	19.6 (3.5–56.3)	12.7 (2.4–100.0 ^†)	0.5005	18.6 (8.0–34.7)	13.4 (2.4–100.0 ^†)	0.5456
TNF-α，pg/mL	12.2 (2.8–40.8)	9.1 (1.7–70.2)	0.5607	12.5 (2.8–40.8)	9.8 (1.7–70.2)	0.7223
ICAM-1，ng/mL	2758.8 (1398.2–7723.4)	1516.6 (591.9–7204.9)	0.0708	1611.1 (1347.7–6890.6)	1717.2 (591.9–7723.4)	0.8311
VCAM-1，ng/mL	2813.8 (1836.7–5101.9)	1401.9 (807.4–5594.2)	0.0156	1836.7 (963.9–5101.9)	1883.6 (807.4–5594.2)	0.6697
免疫調節	GM-CSF，pg/mL	52.7 (1.9*–198.0)	1.9* (1.9*–1500.0 ^†)	0.2335	63.3 (1.9*–100.5)	1.9* (1.9*–1500.0 ^†)	0.3312
IFN-γ，pg/mL	1876.0 ^†(42.4–1876.0 ^†)	720.6 (7.5*–1876.0 ^†)	0.4041	1876.0 ^†(81.2–1876.0 ^†)	725.7 (7.5*–1876.0 ^†)	0.3525
IL-16，pg/mL	500.6 (144.7–2502.0)	213.9 (104.2–3414.2)	0.0466	231.0 (152.6–2502.0)	265.8 (104.2–3414.2)	0.8870
趨化因子	IL-10，pg/mL	85.8 (6.6–466.0 ^†)	41.3 (1.8–466.0 ^†)	0.3421	143.4 (9.1–466.0 ^†)	47.0 (1.8–466.0 ^†)	0.2550
IL-8，pg/mL	413.0 (14.2–750.0 ^†)	106.4 (24.3–750.0 ^†)	0.3709	750.0 ^†(45.6–750.0 ^†)	107.4 (14.2–750.0 ^†)	0.1236
CXCL10，pg/mL	2000.0 ^†(705.0–2000.0 ^†)	2000.0 ^†(277.6–2000.0 ^†)	0.7982	2000.0 ^†(1080.4–2000.0 ^†)	2000.0 ^†(277.6–2000.0 ^†)	0.5072
MCP-1，pg/mL	1500.0 ^†(823.3–1500.0 ^†)	1500.0 ^†(671.2–1500.0 ^†)	1.0000	1500.0 ^†(1197.8–1500.0 ^†)	1500.0 ^†(671.2–1500.0 ^†)	0.6357
效應	顆粒酶B，pg/mL	164.7 (11.5–10,000.0 ^†)	40.4 (1.0*–5477.4)	0.0803	35.9 (19.4–10,000.0 ^†)	49.2 (1.0*– 5477.4)	0.6691

*值代表所用檢定之定量下限。 ^†值代表所用檢定之定量上限。CRP，C反應蛋白；CXCL，C-X-C模體趨化因子配體；GM-CSF，顆粒球巨噬細胞群落刺激因子；IFN-γ，干擾素γ；ICAM，細胞間黏附分子；IL，介白素；Ip，干擾素γ誘導蛋白；MCP，單核球引誘蛋白；Rα，受體α；Ra，受體拮抗劑；SAA，血清類澱粉蛋白A；TNF-α，腫瘤壞死因子α；VCAM，血管細胞黏附分子。

不同劑量水平之產物特性相似（表 20）。產物中分化較低的CCR7+ T細胞之水平在患有CR+CRi之患者中較高，且在MRD陰性患者中趨向更高（表 21）。表20.依劑量之產物特性。

中位數特性（範圍）	2×10 ⁶ (n=4)	1×10 ⁶ ， 68 mL (n=11)	1×10 ⁶ ， 40 mL (n=9)
T 細胞亞群，%
初始	32.6 (12.7-67.2)	53.0 (1.7-93.1)	38.6 (3.8-75.3)
中央記憶	15.4 (10.4-23.2)	9.1 (3.3-54.2)	11.9 (1.6-56.7)
效應	15.7 (4.9-20.1)	8.6 (1.1-72.0)	10.4 (1.9-66.1)
效應記憶	36.1 (4.6-57.8)	10.8 (2.1-74.7)	14.6 (3.1-61.5)
CD4 ，%	36.2 (12.4-63.9)	38.3 (8.3-80.4)	40.1 (16.5-56.9)
CD8 ，%	63.9 (35.3-87.6)	61.7 (19.3-91.7)	56.6 (43.1-82.8)
CD4/CD8 比率	0.6 (0.1-1.8)	0.6 (0.1-4.2)	0.7 (0.2-1.3)
CCR7+ ，%	48.0 (23.1–90.4)	73.8 (17.3–96.6)	80.2 (6.8–89.4)
共培養之IFN-γ 生產(pg/mL)*	4325.0 (2145.0-8299.0)	5234.0 (42.0-19,500.0)	7341.0 (2824.0-13,500.0)
轉導，%	49.9 (31.1-66.5)	67.7 (33.6-87.8)	49.0 (32.0-72.0)
活力，%	90.3 (83.6–95.0)	91.0 (76.0–97.0)	91.0 (87.0–94.0)

*使用與KTE-X19產物細胞以1:1比率混合之Toledo細胞進行共培養實驗。使用合格ELISA在培養後24小時在細胞培養基中測定IFN-γ。ELISA，酶聯免疫吸附檢定；IFN-γ，干擾素γ。

該產物概況似乎亦呈神經毒性水平較高之趨勢，但與CRS無關。CD4與CD8 T細胞之比率與反應或毒性無關。表21.依反應、MRD狀態、細胞介素釋放症候群、及神經性事件之產物特性。

中位數特性（範圍）	完全緩解(CR+CRi) (n=16)	無反應 (n=8)
CCR7+，%	81.0 (9.7–96.6)	38.0 (6.8–87.4)
CD4/CD8比率	0.7 (0.1–1.8)	0.5 (0.1–4.2)
中位數特性（範圍）	MRD 陰性 (n=18)	MRD 陽性 (n=3)
CCR7+，%	81.0 (9.7–96.6)	18.8 (6.8–82.3)
CD4/CD8比率	0.7 (0.1–1.8)	0.2 (0.1–0.5)
中位數特性（範圍）	≥3 級CRS (n=8)	≤2 級CRS (n=16)
CCR7+，%	78.2 (38.7–92.0)	73.2 (6.8–96.6)
CD4/CD8比率	0.7 (0.4–1.8)	0.6 (0.1–4.2)
中位數特性（範圍）	≥3 級NE (n=5)	≤2 級NE (n=19)
CCR7+，%	86.9 (57.2–92.0)	69.4 (6.8–96.6)
CD4/CD8比率	0.7 (0.5–1.6)	0.6 (0.1–4.2)

CR，完全緩解；Cri，伴不完全血液學恢復之完全緩解；CRS，細胞介素釋放症候群；MRD，微量殘存疾病；NE，神經性事件。

在CLINICAL TRIAL-4的1期，在DLT可評估的R/R B-ALL小兒或青少年患者中，未使用KTE-X19觀測到DLT。儘管在2×10 ⁶個CAR T細胞/kg之初始劑量下未觀測到DLT，但在第二群組患者中探索到使用68 mL配方的1×10 ⁶個CAR T細胞/kg之較低劑量，以努力進一步改善風險:效益比，且給藥及毒性管理在第三群組中使用40 mL配方及經修訂毒性管理以1×10 ⁶個CAR T細胞/kg得到進一步優化。這導致1×10 ⁶個CAR T細胞/kg (40 mL)劑量水平之風險:效益比更為優化，CRS及NE顯著改善。此外，儘管所有配方之MRD陰性率均≥73%，但在接受1×10 ⁶個CAR T細胞/kg (40 mL)之患者中，MRD陰性率及CR率單獨係最高的。在對所有經治療患者追蹤36.1個月後，在1×10 ⁶個CAR T細胞/kg (40 mL)群組中仍未達到DOR、RFS、及OS之中位數，且24個月OS率係87.5%，潛在地表明患有R/R B-ALL的小兒/青少年患者中使用最佳劑量/配方之KTE-X19之有意義的反應持久性。

在患有R/R B-ALL的小兒/青少年患者中，抗CD19 CAR T細胞療法後之alloSCT的作用仍未得到充分理解；在成年群體中進行的研究已提供了有些矛盾的結果。(Park JH et al., N Engl J Med 378:449-459, 2018; Hay KA et al., Blood 133:1652-1663, 2019)。在本研究中，在36.1個月中位數追蹤（所有經治療患者的中位數）後，以1×10 ⁶個CAR T細胞/kg (40 mL)之RP2D治療的患者中，未達到在後續alloSCT時審查之DOR及OS之中位數。在達到CR+CRi之16名患者中十四名(88%)（包括以RP2D治療的5名）接受alloSCT作為後續療法。依據規程不需要alloSCT，但依據試驗主持人之判斷允許。雖然CLINICAL TRIAL-4不係被設計用於評估後續療法之後的結果，但鑒於大多數有反應之患者繼續進行KTE-X19之後的alloSCT，在不審查包括alloSCT在內的後續治療之情形下進行的DOR評估顯示出有利的中位數14.2個月。此外，對後續alloSCT進行審查之中位數RFS係5.2個月，但未進行審查之中位數RFS係9.1個月，表明了KTE-X19後alloSCT之潛在有利影響。先前曾有報告稱，無alloSCT病史但在抗CD19 CAR T細胞療法之後接受了鞏固性alloSCT之患有R/R CD19+ ALL的小兒及年輕成人患者隨著≥1年追蹤而趨向於改善的無白血病存活期。(Summers C. et al., Blood 132:967-967, 2018.)。在最近發表的一項針對R/R B-ALL兒童及年輕成人中抗CD19 CAR T細胞療法之I期研究中，75%的MRD陰性有反應患者繼續進行alloSCT，追蹤4.8年之中位數OS係alloSCT後70.2個月，alloSCT後5年無事件存活率係61.9%，且alloSCT後復發的累積發生率僅為9.5%。(Shah NN. et al., Journal of Clinical Oncology 0:JCO.20.02262.)該等數據表明，後續alloSCT可能對維持小兒R/R B-ALL中CAR T細胞療法之後的緩解係重要的。對小兒及年輕成人患者之回顧性評述發現，與使用未經修飾alloSCT者相比，CAR T細胞療法之後CD34選擇的T細胞耗盡的alloSCT可能導致移植相關之死亡率及OS改善。(Fabrizio VA et al., Bone Marrow Transplant 55:2160-2169, 2020.) CLINICAL TRIAL-4中之中位數血液CAR T細胞水平在輸注後3個月在所有劑量中均無法偵測出，alloSCT之中位數時間係2.3個月，鑒於整體患者人數少且後續alloSCT率高，應考慮到CAR T細胞持續性與反應持久性之間的關聯。在替三丁香核糖核酸(tisagenlecleucel)的研究中，且與我們的研究形成對比，在少數有反應之患者(12%至13%)中以短中位數追蹤13.1個月進行後續alloSCT，而接受替三丁香核糖核酸之有反應之患者中有大約40%已經復發，主要係CD19陰性白血病，儘管有持續的CAR T細胞。(Maude SL et al, N Engl J Med 378:439-448, 2018; Grupp SA et al, Blood 132:895-895, 2018; Pasquini MC et al., Blood Adv 4:5414-5424, 2020.)。

儘管試驗設計與患者群體中的差異排除了直接的試驗對試驗比較，但最近對蘭妥莫單抗（亦靶向CD19）的研究顯示出在小兒R/R B-ALL中的中位數OS僅為7.7個月，與成人ALL中的結果相似。(Kantarjian H et al, N Engl J Med 376:836-847, 2017.)此外，對於蘭妥莫單抗，使用後續alloSCT進行的鞏固顯示出改善的結果（進行與未進行後續alloSCT之患者的12個月RFS率分別係：70%對30%）。(Locatelli F et al, Blood 136:24-25, 2020.)此外，使用蘭妥莫單抗之緩解率在有較低基線腫瘤負荷量（＜50%基線處的母細胞；56% CR）之小兒患者中比在有較高腫瘤負荷量（≥50%基線處的母細胞；33% CR）之小兒患者中更高。(von Stackelberg A et al., J Clin Oncol 34:4381-4389, 2016.)在CLINICAL TRIAL-4中，緩解率與基線骨髓母細胞之間沒有明顯關聯，因為在基線腫瘤負荷量中有＞ 5至≤25%、＞ 25至≤50%、＞ 50至≤75%、及＞ 75至100%母細胞之患者中CR率分別係89%、25%、100%、及50%。然而，每個四分位數中的患者人數少、以及基線處的中位數腫瘤負荷量相對高限制了解釋（圖 12）。這與另一項採用CD19導向的CAR T細胞療法之小兒及年輕成人研究一致，且基於疾病負荷量之反應率沒有差異。(Gardner RA et al., Blood 129:3322-3331, 2017.)來自CLINICAL TRIAL-4的數據表明，與所報告之採用蘭妥莫單抗的結果相比，KTE-X19有可能在有高疾病負荷量患者之患者中提供更良好的功效。在CLINICAL TRIAL-4中，在採用先前蘭妥莫單抗的患者中似乎觀察到CR+CRi率降低之趨勢。

CLINICAL TRIAL-4中的AE概況與先前抗CD19 CAR T細胞療法之研究一致。對於接受了KTE-X19的24名患者，從白血球分離術到遞送至研究部位之中位數時間係16.5天。相比之下，替三丁香核糖核酸從收到經白血球分離之產物到遞送至研究部位之中位數通量時間係23天。(Tyagarajan S et al., Mol Ther Methods Clin Dev 16:136-144, 2020.) CLINICAL TRIAL-4中經治療患者之快速周轉時間支持在快速增生的ALL設定中之可行性。隨著RP2D之確立，CLINICAL TRIAL-4已過渡到研究的2期部分。

對於早期復發或患有5年OS率為21%至28%之原發性難治性疾病之患者，R/R小兒ALL中未滿足的醫療需求最高。(Sun W et al., Leukemia 32:2316-2325, 2018; Crotta A et al., Curr Med Res Opin 34:435-440, 2018; Nguyen K et al., Leukemia 22:2142-50, 2008; Rheingold SR et al., Journal of Clinical Oncology 37:10008-10008, 2019; Oskarsson T et al., Haematologica 101:68-76, 2016; Schrappe M et al., N Engl J Med 366:1371-81, 2012.)此外，在當初始及後來線的療法結束時患有MRD陽性疾病之患者中，治療相關發病率及死亡率之風險比在患有無法檢出之MRD.3之患者中高3-5倍。為了解決該演變的未滿足醫療需求，進一步修訂CLINICAL TRIAL-4以擴大資格標準，包括患有MRD陽性疾病之患者及早期首次復發（≤18個月）之患者。此外，對患有R/R NHL（彌漫性大B細胞淋巴瘤、Burkitt氏淋巴瘤、及原發性縱隔B細胞淋巴瘤）之小兒患者開放第二群組。實例5

進行了一項開放標籤、全球性、多中心之3期研究，以評估在患有復發性或難治性彌漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)之成人患者中西卡思羅的安全性及有效性對第二線療法之當前護理標準（基於鉑之救助組合化學療法方案，隨後在對救助化學療法有反應之患者中採用高劑量療法及自體幹細胞移植）。在本研究中，使359名患者隨機化(1:1)以接受單次輸注西卡思羅或當前護理標準的第二線療法。主要終點係無事件存活期(EFS)，其被定義為從隨機化到依據Lugano分類的疾病進展（參見Cheson et al, J Clin Oncol. 2014 Sep 20;32(27):3059-68.）、開始新淋巴瘤療法、或因任何原因死亡中之最早日期之時間。關鍵次要終點包括客觀反應率(ORR)及整體存活期(OS)。其他次要終點包括經修改無事件存活期、無進展存活期(PFS)及反應持續時間(DOR)。招募該研究中的患者年齡範圍係從22歲到81歲，其中30%的患者年齡超過65歲。本實例中描述的研究評估了在復發性或難治性LBCL成人患者中，與第二線護理標準(SOC)相比，細胞療法西卡思羅之一次性輸注。該研究SOC臂係2步驟程序：在初始復發後，重新引入免疫化學療法，且若患者有反應並能耐受進一步治療，則繼續進行高劑量化學療法加幹細胞移植。關鍵納入標準： 1. 經組織學證實的大B細胞淋巴瘤，包括由WHO 2016定義之以下類型（參見Swerdlow et al Blood. 2016 May 19;127(20):2375-90. doi: 10.1182/blood-2016-01-643569. Epub 2016年3月15日.Review.）非特指型之DLBCL (ABC/GCB) 有或無MYC及BCL2及/或BCL6重排之HGBL 由FL引起之DLBCL T細胞/組織細胞豐富型大B細胞淋巴瘤與慢性炎症相關之DLBCL 原發性皮膚DLBCL腿型艾司坦-巴爾病毒(EBV) + DLBCL 2. 第一線化學免疫療法後之復發性或難治性疾病難治性疾病被定義為對第一線療法沒有完全緩解；不耐受第一線療法之個體被排除。進行性疾病(PD)作為對第一線療法之最佳反應疾病穩定(SD)作為至少4個週期之第一線療法後之最佳反應（例如，4個週期之R-CHOP）部分反應(PR)作為在療法之至少6個週期且經活體組織切片證實之殘留疾病或疾病進展≤ 12個月之後的最佳反應復發性疾病被定義為對第一線療法完全緩解，然後第一線治療之經活體組織切片證實之復發≤ 12個月 3. 個體必須已接受充分的第一線療法，最低限度包括：抗CD20單株抗體，除非試驗主持人判定腫瘤係CD20陰性；及含蒽環類藥物之化學療法方案 4. 沒有中樞神經系統被淋巴瘤累及之已知病史或疑似病史 5. 美國東岸癌症臨床研究合作組織(ECOG)體能狀態係0或1 6. 藉由如下證明之充分骨髓功能：絕對嗜中性球計數(ANC) ≥ 1000/uL 血小板≥ 75,000/uL 絕對淋巴球計數≥ 100/uL 7. 藉由如下證明之適當的腎、肝、心臟、及肺功能：肌酸酐廓清率(Cockcroft Gault) ≥ 60 mL/min 血清丙胺酸轉胺酶/天門冬胺酸轉胺酶(ALT/AST) ≤ 2.5正常上限(ULN) 總膽紅素≤ 1.5 mg/dl 心臟射出分率≥ 50%，如藉由心臟超音波檢查(ECHO)，且無臨床意義的心律不整無臨床顯著之胸膜積水室內空氣中基線氧飽和度＞ 92% 關鍵排除標準係： 1. 除了非黑色素瘤皮膚癌或原位癌（例如子宮頸、膀胱、乳房）之外的惡性疾病史，除非無疾病≥3年 2. 接受了一線以上的DLBCL療法 3. 自體或同種異體幹細胞移植病史 4. 存在無法控制、或需要靜脈內抗菌劑進行管理之真菌、細菌、病毒、或其他感染。 5. 人類免疫缺乏病毒(HIV)或B型肝炎（HBsAg陽性）或C型肝炎病毒（抗HCV陽性）傳染之已知病史。若存在經治療B型肝炎或C型肝炎之陽性病史，則依據聚合酶連鎖反應(PCR)及/或核酸偵測，病毒載量一定無法偵測出。 6. 患有可偵測腦脊液惡性細胞或已知腦轉移瘤、或者有腦脊液惡性細胞或腦轉移瘤病史之個體。 7. 非惡性中樞神經系統(CNS)病症之病史或存在諸如癲癇發作、腦血管缺血/出血、失智、小腦疾病、或任何CNS受累之自身免疫性疾病 8. 存在任何留置線或引流管。允許專用中心靜脈接入導管，諸如Port-a-Cath或Hickman導管。 9. 招募後12個月內有心肌梗塞、心臟血管成形術或支架置入術、不穩定型心絞痛、紐約心臟學會II級或以上鬱血性心臟衰竭、或其他臨床意義的心臟病史 10. 招募後6個月內有症狀性深靜脈血栓或肺栓塞史 11. 自身免疫疾病史，過去2年內需要全身性免疫抑制及/或全身性疾病調節劑 12. 抗CD19或CAR-T療法史或先前隨機化史

相比於第二線復發性或難治性大B細胞淋巴瘤(LBCL)中的護理標準(SOC)，本研究的初步分析顯示出西卡思羅之優勢。本研究符合無事件存活期（EFS；風險比0.398， p＜0.0001）之主要終點、以及客觀反應率(ORR)之關鍵次要終點。整體存活期(OS)之中期分析顯示出傾向於西卡思羅之趨勢，但數據不成熟，且可能有必要進行額外分析及/或研究。

本研究之安全性結果與用於在第三線設定中治療LBCL之西卡思羅的已知安全性概況相一致。百分之六的患者經歷了CRS 3級或以上，且21%的患者經歷了神經性事件3級或以上。在該第二線設定中未識別到新的安全性問題。

在來自本研究之西卡思羅產物中評估T細胞表型，使用經驗證之流動式細胞測量術方法並分析T細胞分化之已知表面標記、CCR7及CD45RA。藉由細胞介素釋放症候群(CRS)及神經性事件之級別對度量進行分析。P值係藉由Kruskal−Wallis檢定獲得。

表22顯示與＞= 2 CRS事件（與1級及無事件相比）之發生相關的輸注中央記憶T細胞(CCR7+ CD45RA-)總數，而表23顯示與＞= 3級神經性事件（與2級、1級及無事件相比）之發生相關的輸注效應記憶及效應T細胞(CCR7-)總數。該等數據揭示出西卡思羅中之不同T細胞亞群與毒性之間的關聯性有差異。表22：與＞= 2級CRS事件（與1級、及無事件相比）之發生相關的輸注中央記憶T細胞(CCR7+ CD45RA-)總數（細胞數目x 10 ⁶）

CRS等級	細胞數目	CRS等級	細胞數目
G0/1 CRS	105.1090714	G2+ CRS	64.70288696
G0/1 CRS	44.39781818	G2+ CRS	47.67126389
G0/1 CRS	11.60596491	G2+ CRS	49.89705882
G0/1 CRS	93.14148148	G2+ CRS	73.5803125
G0/1 CRS	40.0555102	G2+ CRS	57.39428571
G0/1 CRS	29.86883721	G2+ CRS	62.20373333
G0/1 CRS	64.48509804	G2+ CRS	147.2090566
G0/1 CRS	24.13728	G2+ CRS	57.61320755
G0/1 CRS	36.66526316	G2+ CRS	41.8787234
G0/1 CRS	105.3589474	G2+ CRS	96.82043478
G0/1 CRS	100.7322034	G2+ CRS	91.324
G0/1 CRS	69.54385965	G2+ CRS	34.66536585
G0/1 CRS	72.03763636	G2+ CRS	11.83756364
G0/1 CRS	63.31	G2+ CRS	81.08571429
G0/1 CRS	55.233	G2+ CRS	39.47432143
G0/1 CRS	37.55630508	G2+ CRS	68.521125
G0/1 CRS	15.52191549	G2+ CRS	51.26907937
G0/1 CRS	35.49304348	G2+ CRS	84.41125926
G0/1 CRS	9.4646875	G2+ CRS	65.30644068
G0/1 CRS	101.1441475	G2+ CRS	74.8638
G0/1 CRS	21.20516129	G2+ CRS	31.15601351
G0/1 CRS	59.7279661	G2+ CRS	51.48457674
G0/1 CRS	179.0171429	G2+ CRS	69.38697826
G0/1 CRS	59.61142857	G2+ CRS	102.3616216
G0/1 CRS	117.2214815	G2+ CRS	66.65454545
G0/1 CRS	0	G2+ CRS	63.631
G0/1 CRS	44.681	G2+ CRS	83.748
G0/1 CRS	21.46720588	G2+ CRS	86.4552
G0/1 CRS	57.22428571	G2+ CRS	49.14088235
G0/1 CRS	53.57647059	G2+ CRS	38.9559375
G0/1 CRS	26.64675	G2+ CRS	68.7344
G0/1 CRS	23.29811321	G2+ CRS	72.45356364
G0/1 CRS	13.2847	G2+ CRS	55.0386383
G0/1 CRS	0	G2+ CRS	50.86759615
G0/1 CRS	28.45086207	G2+ CRS	47.33752941
G0/1 CRS	24.02475	G2+ CRS	25.02073171
G0/1 CRS	93.49166667	G2+ CRS	48.58530909
G0/1 CRS	36.34605	G2+ CRS	51.67795652
G0/1 CRS	55.51101818	G2+ CRS	38.07707143
G0/1 CRS	104.4293878	G2+ CRS	57.528
G0/1 CRS	22.31538462	G2+ CRS	85.11624
G0/1 CRS	30.26928814	G2+ CRS	22.68664407
G0/1 CRS	47.64658824	G2+ CRS	41.40792727
G0/1 CRS	52.37572131	G2+ CRS	74.85
G0/1 CRS	24.89569811	G2+ CRS	140.0704762
G0/1 CRS	22.4	G2+ CRS	33.39571429
G0/1 CRS	10.211625	G2+ CRS	49.50695652
G0/1 CRS	26.2695082	G2+ CRS	81.20114286
G0/1 CRS	106.6921739	G2+ CRS	65.856
G0/1 CRS	99.25963636	G2+ CRS	77.50638806
G0/1 CRS	52.61556	G2+ CRS	39.91534615
G0/1 CRS	131.97552	G2+ CRS	66.5345625
G0/1 CRS	23.56614815	G2+ CRS	89.66511628
G0/1 CRS	38.9345098	G2+ CRS	20.23266667
G0/1 CRS	42.94646154	G2+ CRS	93.61635556
G0/1 CRS	11.0416	G2+ CRS	65.85565574
G0/1 CRS	68.11234043	G2+ CRS	80.91237931
G0/1 CRS	52.997	G2+ CRS	42.94
G0/1 CRS	46.33659574	G2+ CRS	53.53225532
G0/1 CRS	46.26167442	G2+ CRS	32.41942
G0/1 CRS	26.23636364	G2+ CRS	232.1469388
G0/1 CRS	173.95	G2+ CRS	36.98
G0/1 CRS	99.47504348	G2+ CRS	18.5059875
G0/1 CRS	42.87966667	G2+ CRS	43.69334694
G0/1 CRS	63.51958209	G2+ CRS	34.55847458
G0/1 CRS	38.84	G2+ CRS	56.145
G0/1 CRS	24.15665672	G2+ CRS	99.41438596
G0/1 CRS	37.93671429	G2+ CRS	35.10257143
G0/1 CRS	56.60745763	G2+ CRS	21.6138
G0/1 CRS	38.44285714	G2+ CRS	34.1048
G0/1 CRS	107.4675	G2+ CRS	29.94642857
G0/1 CRS	32.25333333	G2+ CRS	44.9085
G0/1 CRS	84.03316364	G2+ CRS	33.306
G0/1 CRS	90.02608696	G2+ CRS	2.003021212
G0/1 CRS	21.59020408	G2+ CRS	61.26689655
G0/1 CRS	149.3085714	G2+ CRS	86.92625
G0/1 CRS	42.345	G2+ CRS	15.96617647
G0/1 CRS	23.53391304	G2+ CRS	70.55878261
G0/1 CRS	19.16684211	G2+ CRS	28.21065789
G0/1 CRS	108.1845797	G2+ CRS	64.00625
G0/1 CRS	16.13410909	G2+ CRS	48.68237288
G0/1 CRS	29.07253521	G2+ CRS	44.70967742

表23：與＞= 3級神經性事件（與2級、1級、及無事件相比）之發生相關的輸注效應記憶及效應T細胞(CCR7-)總數（細胞數目x 10 ⁶）

NE等級	細胞數目	NE等級	細胞數目
G0/1/2 NE	100.3846261	G3+ NE	176.7537778
G0/1/2 NE	196.778375	G3+ NE	146.1102128
G0/1/2 NE	153.7058824	G3+ NE	131.0783158
G0/1/2 NE	169.75375	G3+ NE	48.68070175
G0/1/2 NE	119.6286429	G3+ NE	220.0852174
G0/1/2 NE	188.496	G3+ NE	177.7879365
G0/1/2 NE	91.35017544	G3+ NE	106.5877119
G0/1/2 NE	293.4514286	G3+ NE	127.6444068
G0/1/2 NE	133.2696296	G3+ NE	179.36925
G0/1/2 NE	133.2881633	G3+ NE	70.55454545
G0/1/2 NE	112.8724528	G3+ NE	143.8769818
G0/1/2 NE	58.49313953	G3+ NE	100.3750962
G0/1/2 NE	116.3784314	G3+ NE	262.550878
G0/1/2 NE	159.8301887	G3+ NE	151.6158
G0/1/2 NE	177.6772	G3+ NE	146.8330182
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G0/1/2 NE	211.5659615

實例6

本實例提供上文實例4之額外及追蹤結果。

1期探索了兩種劑量水平及配方；主要終點係劑量限制毒性(DLT)之發生率。在招募的31名患者中，向24名（中位數年齡13.5歲，範圍3-20；中位數追蹤36.1個月）投予了KTE-X19。未觀測到DLT。所有經治療患者均有≥3級不良事件，通常係低血壓(50%)及貧血(42%)。在所有經治療之2×10 ⁶、1×10 ⁶（68 mL配方）、及1×10 ⁶（40 mL配方）個CAR T細胞/kg組中，3級細胞介素釋放症候群比率分別係33%、75%、27%、及22%；21%、25%、27%、及11%的患者分別經歷了≥3級神經性事件。在所有經治療之2×10 ⁶、1×10 ⁶(68 mL)、及1×10 ⁶(40 mL)個CAR T細胞/kg組中，整體完全緩解(CR)率（包括伴不完全血液學恢復之CR）分別係67%、75%、64%、及67%。整體微量殘存疾病(MRD)陰性率在反應者中係100%；88%的反應者經歷了後續同種異體幹細胞移植(alloSCT)。在1×10 ⁶(40 mL)組中（推薦的2期劑量），未達到以alloSCT審查之中位數緩解持續時間及中位數整體存活期。患有R/R B-ALL之小兒/青少年患者在KTE-X19單次劑量後，以可管理安全性實現了高MRD陰性緩解率。2期以1×10 ⁶個CAR T細胞/kg (40 mL)劑量正在進行。結果患者

在2016年2月17日與2018年8月1日之間，招募31名患者並經歷了白血球分離術。對於所有經治療患者，從白血球分離術至KTE-X19產物釋放之中位數時間係14.0天（範圍，9.0-–20.0），從白血球分離術到遞送至研究部位係16.5天（範圍，12.0–23.0），且從白血球分離術至輸注係27.0天（範圍，18.0–41.0）。在招募的31名患者中，24名(77%)接受了調理化學療法且隨後給藥。七名患者因以下原因未給藥：不良事件（AE；n=1）、不成功產物生產(n=3)、因AE而不符合條件(n=1)、不成功產物生產及不符合條件(n=1)、及死亡(n=1)。二十四名患者接受調理化學療法，接著接受KTE-X19；4名患者接受了2×10 ⁶個CAR T細胞/kg劑量，11名患者接受了1×10 ⁶個CAR T細胞/kg (68 mL)劑量配方，且9名患者接受了1×10 ⁶個CAR T細胞/kg (40 mL)劑量配方。所有經治療患者之中位數追蹤係36.1個月（範圍，24.0-53.9）。經治療患者之中位數年齡係13.5歲（範圍，3-20）；42%的患者已接受≥3種前線療法；29%有原發性難治性疾病；25%在alloSCT之後係R/R；且篩選時中位數骨髓母細胞係44%（範圍，6至99）。在招募之前，6名(25%)患者已接受過先前alloSCT治療，8名(33%)患者接受過先前蘭妥莫單抗治療，包括3名(13%)患者接受了蘭妥莫單抗作為最後一次先前治療，且1名(4%)患者患有髓外疾病。在招募的31名患者中，30名(97%)依據規程接受橋接療法，其中就在淋巴球清除化學療法前執行新的基線疾病評估。安全性

在接受2×10 ⁶個CAR T細胞/kg之3名DLT可評估患者中，未觀測到DLT。所有經治療患者(n=24)經歷了至少一個≥3級AE、最常見低血壓(50%)、及貧血(42%)。71%的患者中發生了任何級別之嚴重AE。42%的患者中發生了≥3級感染。

在24名經治療患者中有21名(88%)報告了CRS，其中根據經修訂Lee分級標準，有8名(33%)經歷≥3級CRS。33未發生4級或5級CRS事件。最常見的≥3級CRS症狀係低血壓(50%)及發熱(25%)。分別在13%及8%的患者中觀測到任何級別及≥3級的缺氧。KTE-X19輸注後CRS中位數發作時間及持續時間分別係5天（範圍，1-14）及7天，所有事件均已解決。

在所有經治療患者中，16名患者(67%)報告了任何級別的NE，且5名患者(21%)發生了≥3級事件，其中腦病變(13%)係最常見的≥3級事件。接受了1×10 ⁶個CAR T細胞/kg (68 mL)之患者發生了一件4級完全可逆NE（腦水腫）；對於該事件之管理，患者使用地塞米松、甘露醇、氯化鈉、及托珠單抗進行了治療。不存在5級NE。總體而言，NE中位數發作時間係輸注後9.5天（範圍，3-60），從首次CRS消退到首次NE發作之中位數時間係4天（範圍，-3至52 [4名患者中首次NE發作之後首次CRS消退]），且NE之中位數持續時間係8天。16名患者中有14名(88%) NE消退。剩餘兩名患者因AE (n=1)或進行性疾病(n=1)死亡時，其NE仍在進行中。在經歷了NE的16名患者中十名(63%)有並行CRS。

在所有經治療患者中，42%接受了類固醇，63%接受了托珠單抗，46%接受了升壓劑。相對於根據原始指南使用2×10 ⁶個CAR T細胞/kg治療之4名患者及使用1×10 ⁶個CAR T細胞/kg (68 mL)治療之11名患者，根據經修訂毒性管理，在使用1×10 ⁶個CAR T細胞/kg (40 mL)劑量治療之9名患者中觀測到整體安全性有提高。在接受2×10 ⁶個CAR T細胞/kg之患者中，相較於27%及22%接受1×10 ⁶個CAR T細胞/kg之患者（分別係68 mL及40 mL），75%經歷了≥3級CRS。在25%的接受2×10 ⁶個CAR T細胞/kg之患者，和在27%的接受1×10 ⁶個CAR T細胞/kg (68 mL)之患者中觀測到≥3級NE，但在接受1×10 ⁶個CAR T細胞/kg (40 mL)之患者中，≥3級NE最低(11%)。此外，與2×10 ⁶個CAR T細胞/kg劑量群組相比，NE及CRS中位數發作時間在1×10 ⁶個CAR T細胞/kg劑量群組中似乎有延遲。

在研究中死亡之8名患者(33%)中，6名死於進展性疾病（中位數係KTE-X19輸注後190.5天），2名患者死於被認為與KTE-X19無關之AE（除5級B-ALL以外），包括播散性白黴菌病（n=1，KTE-X19輸注後第15天）及大腸桿菌敗血症（n=1，KTE-X19輸注後第409天）。在死亡之患者中，3名患者接受了2×10 ⁶個CAR T細胞/kg，4名患者接受了1×10 ⁶個CAR T細胞/kg (68 mL)，1名患者接受了1×10 ⁶個CAR T細胞/kg (40 mL)。在任何時候皆無患者測出呈具複製能力之反轉錄病毒或抗CD19 CAR抗體陽性。功效

中位數追蹤時間係36.1個月（範圍，24.0-53.9），所有經治療患者(n=24)均可進行功效評估。由試驗主持人評估之整體緩解率係67%，29%的患者(n=7)達到CR，38%達到CRi (n=9)。在2×10 ⁶、1×10 ⁶(68 mL)、及1×10 ⁶(40 mL)個CAR T細胞/kg劑量組中，CR+CRi率分別係75%、64%、及67%。各劑量水平中從輸注到CR+CRi之中位數時間係30天（範圍，26-113天）。在16名CR+CRi患者中，整體MRD陰性率係100%。總共十六名患者(67%)接受alloSCT作為後續鞏固性療法，在2×10 ⁶、1×10 ⁶(68 mL)、及1×10 ⁶(40 mL)個CAR T細胞/kg劑量組中分別包括2、8、及6名患者。達到CR+CRi之16名患者中十四名(88%)（2×10 ⁶、1×10 ⁶[68 mL]、及1×10 ⁶[40 mL]個CAR T細胞/kg劑量組中分別係2、7、及5名）經歷了後續alloSCT。此外，實現伴部分血液學恢復之CR(n=1)及無母細胞之發育不全/再生障礙性骨髓(n=1)之患者兩者均繼續進行alloSCT；其等隨後實現CR。所有經治療患者之中位數移植時間係KTE-X19後2.3個月（範圍，1.4-24.9）。在達到CR+CRi但未接受後續alloSCT之2名患者中，1名死於進展性疾病，1名失訪。

在審查了後續alloSCT之後，達到KTE-X19後的CR+CRi之16名患者之中位數DOR係7.2個月(95% CI, 4.1–14.2)，且在2×10 ⁶、1×10 ⁶(68 mL)、及1×10 ⁶(40 mL)個CAR T細胞/kg劑量組中分別係4.1個月、10.7個月、及未達到。在不審查後續alloSCT及酪胺酸激酶抑制劑之恢復的情況下，中位數DOR係14.2個月（95% CI, 3.9-不可估計）。接受KTE-X19後之後續alloSCT之14名CR+CRi患者中之中位數DOR係10.7個月(95% CI, 7.2–14.2)。所有經治療患者(n=24)之中位數RFS係5.2個月(95% CI, 0.0–17.8)。1×10 ⁶個CAR T細胞/kg (40 mL)組未達到中位數RFS，且在2×10 ⁶及1×10 ⁶(68 mL)個細胞/kg群組中分別係5.2個月(95% CI, 0.0–5.2)及9.1個月(95% CI, 0.0–17.8)。在繼續進行後續alloSCT之16名患者中，中位數RFS係9.1個月(95% CI, 9.1–17.8)。在所有經治療患者中且在兩個1×10 ⁶個CAR T細胞/kg劑量組中均未達到中位數OS，且2×10 ⁶個CAR T細胞/kg劑量組之中位數OS係8.0個月。24個月OS率對於1×10 ⁶個細胞/kg (40 mL)劑量而言係87.5% (95% CI, 38.7–98.1)，對於1×10 ⁶個細胞/kg (68 mL)劑量而言係72.7% (95% CI, 37.1–90.3)。整體而言，截至數據截止日，24名經治療患者中有8名(33%)死亡，1名因同意撤銷而中止，1名失訪。截至數據截止日，剩餘14名患者(58%)仍活著並繼續接受追蹤，其等均在KTE-X19之後接受了後續alloSCT。

基於安全性及功效數據分析，根據經修訂毒性管理，RP2D係1×10 ⁶個KTE-X19細胞/kg（40 mL配方）。轉化分析

藉由聚合酶連鎖反應(PCR)測量並以血液中CAR基因拷貝數目/µg DNA表現之周邊血液中之CAR T細胞擴增在所有劑量組中均被觀測到，到第14天達到的峰值CAR T細胞水平，隨後後續CAR T細胞收縮至基線。在KTE-X19輸注後3個月，所有劑量組中均無法藉由PCR在血液中偵測到中位數CAR T細胞水平。中位數峰值CAR基因拷貝數/µg DNA血液在1×10 ⁶個CAR T細胞/kg劑量群組中相似，但在2×10 ⁶個CAR T細胞/kg群組中更高。達到CR+CRi之患者血液中的峰值血液CAR基因拷貝數/µg DNA趨向高於無反應者，MRD陰性與MRD陽性的患者亦係如此。與有≤2級NE的患者相比，有≥3級NE的患者血液中CAR基因拷貝數/µg DNA趨向更高，而在此有限樣本量中，高級別或低級別CRS之患者的血液中峰值CAR基因拷貝數/µg DNA無明顯差異。血液中的中位數峰值CAR基因拷貝數/µg DNA在16名沒有先前蘭妥莫單抗之患者中係5.16×10 ⁴（範圍，0至2.40×10 ⁵），在8名沒有先前蘭妥莫單抗之患者中係6.15×10 ³（範圍，0至2.49×10 ⁵）。

多種關鍵血清細胞介素、趨化因子、及促發炎生物標記之峰值水平到第7天出現。與峰值CAR擴增相應，與1×10 ⁶個CAR T細胞/kg相比，以2×10 ⁶個CAR T細胞/kg給藥的患者中一些血清分析物趨向更高(介白素[IL]-2、IL-5、IL-6、IL-8、IL-10、IL-15、IL-16、鐵蛋白、顆粒酶B、細胞間黏附分子1 [ICAM-1]、干擾素γ[IFN-γ]、及腫瘤壞死因子α[TNF-α]。

分析物VCAM-1及IL-16之峰值血清水平與≥3級CRS相關。在≥3 NE之對象中未觀測到此類關聯，其可能係由於≥3 NE之患者數量少所致。不同劑量水平之產物特性相似。產物中分化較低的CCR7+ T細胞之水平在患有CR+CRi之患者中較高，且在MRD陰性患者中呈上升趨勢。該產物概況似乎亦呈神經毒性水平較高之趨勢，但與CRS無關。CD4與CD8 T細胞之比率與反應或毒性無關。論述

在Clinical Trial-4的1期，在DLT可評估的R/R B-ALL小兒或青少年患者中，未使用KTE-X19觀測到DLT。儘管在2×10 ⁶個CAR T細胞/kg之初始劑量下未觀測到DLT，但在第二群組患者中探索到使用68 mL配方的1×10 ⁶個CAR T細胞/kg之較低劑量，以努力進一步改善風險:效益比，且給藥及毒性管理在第三群組中使用40 mL配方及經修訂毒性管理以1×10 ⁶個CAR T細胞/kg得到進一步優化。這導致1×10 ⁶個CAR T細胞/kg (40 mL)劑量水平之風險:效益比更為優化，CRS及NE顯著改善。此外，儘管所有配方之MRD陰性率均≥73%，但在接受1×10 ⁶個CAR T細胞/kg (40 mL)之患者中，MRD陰性率及CR率單獨係最高的。重要的是，在1×10 ⁶個CAR T細胞/kg (40 mL)群組中之9名患者中，未達到DOR、RFS、及OS之中位數，大多數反應者(5/6 [83%])繼續進行後續alloSCT。認識到小群組的局限性，然而該組中的24個月OS率係87.5%。該等結果潛在地表明患有R/R B-ALL的小兒/青少年患者中使用最佳劑量/配方之KTE-X19隨後進行後續alloSCT之有意義的反應持久性。

在患有R/R B-ALL的小兒/青少年患者中，抗CD19 CAR T細胞療法後之alloSCT的作用仍未得到充分定義；在成年群體中進行的研究已提供了有些矛盾的結果。在本研究中，以1×10 ⁶個CAR T細胞/kg (40 mL)之RP2D治療的患者中，未達到在後續alloSCT時審查之DOR及OS之中位數。在達到CR+CRi之16名患者中十四名(88%)（包括以RP2D治療的5名）接受alloSCT作為後續療法。依據規程不需要alloSCT，但依據試驗主持人之判斷允許。Clinical Trial -4不是被設計用於在後續療法之後評估結果；然而，依據試驗主持人的決定，大多數有反應之患者繼續進行KTE-X19後的alloSCT。

在不審查包括alloSCT之後續療法之情況下，對Clinical Trial -4中DOR之評估顯示出14.2個月之良好中位數。此外，對後續alloSCT進行審查之中位數RFS係5.2個月，但未進行審查之中位數RFS係9.1個月。先前曾有報告稱，無alloSCT病史但在抗CD19 CAR T細胞療法之後接受了鞏固性alloSCT之患有R/R CD19+ ALL的小兒及年輕成人患者隨著≥1年追蹤而趨向於改善的無白血病存活期。在最近發表的一項針對R/R B-ALL兒童及年輕成人中抗CD19 CAR T細胞療法之1期研究中，其中75%的MRD陰性有反應患者繼續進行alloSCT，追蹤4.8年之中位數OS係alloSCT後70.2個月，alloSCT後5年無事件存活率係61.9%，alloSCT後復發的累積發生率僅為9.5%。有趣的是，對小兒及年輕成人患者之回顧性評述發現，與使用未經修飾alloSCT者相比，CAR T細胞療法之後CD34選擇的T細胞耗盡的alloSCT可能導致移植相關之死亡率及OS改善。

本文提供的數據支持KTE-X19在延長患有R/R B-ALL之小兒/青少年患者的反應持久性及存活期方面有希望的潛在作用，特別係若隨後進行alloSCT。

儘管試驗設計與患者群體中的差異排除了直接的試驗對試驗比較，但最近對蘭妥莫單抗（亦靶向CD19）的研究顯示出在小兒R/R B-ALL中的中位數OS僅為7.7個月，與成人ALL中的結果相似。40此外，對於蘭妥莫單抗，使用後續alloSCT進行的鞏固已顯示出改善的結果（進行與未進行後續alloSCT之患者的12個月RFS率分別係70%對30%）。此外，使用蘭妥莫單抗之緩解率在有較低基線腫瘤負荷量（＜50%母細胞；56% CR）之小兒患者中比在有較高腫瘤負荷量（≥50%母細胞；33% CR）之小兒患者中更高。在Clinical Trial-4中，緩解率與基線骨髓母細胞之間沒有明顯關聯，因為在基線處有＞ 5至≤25%、＞ 25至≤50%、＞ 50至≤75%、及＞ 75至100%母細胞之患者中CR率分別係89%、25%、100%、及50%。這與另一項採用CD19導向的CAR T細胞療法之小兒及年輕成人研究一致，且基於疾病負荷量之反應率沒有差異。來自Clinical Trial -4的數據表明，與所報告之採用蘭妥莫單抗的結果相比，KTE-X19有可能在有高疾病負荷量患者中提供更良好的功效。在Clinical Trial -4中，在採用先前蘭妥莫單抗的患者中似乎觀察到CR+CRi率降低之趨勢。

Clinical Trial -4中的AE概況與先前抗CD19 CAR T細胞療法之研究一致。對於接受了KTE-X19的患者，從白血球分離術到遞送至研究部位之中位數時間係16.5天。相比之下，對於用於B-ALL患者的前37種商業化製造的替三丁香核糖核酸產物，所報告的中位數通量時間係從收到白血病分離產物到遞送至臨床部位之23天。Clinical Trial -4中經治療患者之快速周轉時間支持在快速增生的ALL設定中之可行性。

對於早期復發或患有5年OS率為21%至28%之原發性難治性疾病之患者，R/R小兒ALL中未滿足的醫療需求最高。2, 4, 8, 43-45此外，在當初始及後來線的療法結束時患有MRD陽性疾病之患者中，治療相關發病率及死亡率之風險比在患有無法檢出之MRD.3之患者中高3-5倍。

為了解決該演變的未滿足醫療需求，進一步修訂Clinical Trial-4以擴大資格標準，包括患有MRD陽性疾病之患者及首次早期復發（≤18個月）之患者。此外，對患有R/R NHL（彌漫性大B細胞淋巴瘤、Burkitt氏淋巴瘤、及原發性縱隔B細胞淋巴瘤）之小兒患者開放第二群組。在對小兒R/R B-ALL進行的登記試驗中，在經美國食品與藥品管理局/歐洲藥品管理局核准或研究性藥劑中，Clinical Trial-4係第一個報告3年以上追蹤且為陽性結果之CAR T細胞療法試驗。

在本申請案中引用的所有出版物、專利、專利申請案及其他文檔全文特此以引用方式併入本文中，以相同程度用於所有目的，如同每個單獨的出版物、專利、專利申請案或其他文檔被單獨提及而以引用方式併入本文，用於所有目的。雖然已說明及描述了各種具體實施例/態樣，但應當理解的係，在不脫離本揭露之精神及範圍的情況下可進行各種變更。

無

〔圖1〕. CLINICAL TRIAL-2臨床試驗之設計。a在白血球分離術之後投予且在起始調理化學療法之前≥5天完成；橋接後需要PET-CT。b骨髓活體組織切片係在篩選時進行，且若呈陽性，則不進行，或若不確定，則需要活體組織切片以確認CR。AE，不良事件；CAR，嵌合抗原受體；CR，完全反應；CRS，細胞介素釋放症候群；IV，靜脈內；MCL，被套細胞淋巴瘤；ORR，客觀反應率；PO，口服；R/R，復發性/難治性。〔圖2〕.藉由IRRC評估有及無MCL POD24之患者的ORR。藉由IRRC根據Lugano分類評估。 ⁷ ^a一名患者不可評估。CR，完全反應；IRRC，獨立放射學審查委員會(Independent Radiology Review Committee)；ORR，客觀反應率；PD，疾病進展；有POD24，在初始診斷之後＜24個月疾病進展；無POD24，在初始診斷之後≥24個月疾病進展；PR，部分反應；SD，疾病穩定。〔圖3A〕、〔圖3B〕、及〔圖3C〕.依MCL POD24狀態之反應持續時間(DR) (3A)、無進展存活期(PFS)(3B)、及整體存活期(OS) (3C)。 ^a在有反應之患者中。DOR，反應持續時間；NE，不可評估；OS，整體存活期；PFS，無進展存活期；有POD24，在初始診斷之後＜24個月疾病進展；無POD24，在初始診斷之後≥24個月疾病進展。〔圖4〕.有及無MCL POD24之患者的CAR T細胞擴增。〔圖5〕.在有及無MCL POD24之患者之中隨時間推移之可偵測B細胞。〔圖6〕.CLINICAL TRIAL-5臨床試驗之設計。 ^a自最後一次療法完成起疾病穩定（無復發）＞1年之患者不符合條件。 ^b單藥劑抗CD20抗體不計入符合條件之治療線。 ^c截至數據截止日，功效可評估患者包括≥80名經治療之FL患者及經治療之MZL患者，經治療之FL患者在axi-cel輸注之後進行≥18個月的追蹤，經治療之MZL患者在axi-cel輸注之後進行≥4週的追蹤。Axi-cel，西卡思羅；CAR，嵌合抗原受體；FL，濾泡淋巴瘤；iNHL，低惡性度非霍奇金氏淋巴瘤；IV，靜脈內；mAb，單株抗體；MZL，邊緣區淋巴瘤；POD24，自起始含第一抗CD20之化學免疫療法後＜24個月疾病進展；R/R，復發性/難治性。〔圖7〕.藉由IRRC評估有及無iNHL POD24之患者的ORR。藉由IRRC根據Lugano分類評估。(Cheson BD, et al. J Clin Oncol.2014;32:3059-68)。 ^a在報告為ND的5名患者之中，4名（1名FL無POD24；3名MZL）依據IRRC在基線及基線後無疾病，但被試驗主持人認為患有疾病；1名有FL及POD24之患者在第一疾病評估之前死亡。CR，完全反應；FL，濾泡淋巴瘤；IRRC，獨立放射學審查委員會(Independent Radiology Review Committee)；MZL，邊緣區淋巴瘤；ND，未完成/未定義；ORR，整體反應率；iNHL POD24，自起始含第一抗CD20之化學免疫療法後＜24個月疾病進展；PD，疾病進展；PR，部分反應；SD，疾病穩定。〔圖8A〕、〔圖8B〕、及〔圖8C〕.依iNHL POD24狀態之DOR (8A)、PFS (8B)、及OS (8C)。DOR，反應持續時間；FL，濾泡淋巴瘤；Mo，月；MZL，邊緣區淋巴瘤；NE，不可評估；NR，未達到；OS，整體存活期；PFS，無進展存活期；POD24，自起始含第一抗CD20之化學免疫療法後＜24個月疾病進展。〔圖9A〕、〔圖9B〕、及〔圖9C〕.依iNHL POD24狀態之CAR T細胞擴增（9A及9B）及患有FL之患者的治療前血清分析物(9C)。 P值係使用Wilcoxon秩和檢定計算。 ^a2名FL患者在再治療之前沒有數據。AUC _0-28，在第0天與第28天之間的曲線下面積；CAR，嵌合抗原受體；CCL，趨化因子（C-C模體）配體；FL，濾泡淋巴瘤；LOQ，定量極限；MDC，巨噬細胞衍生之趨化因子；POD24，自起始含第一抗CD20之化學免疫療法後＜24個月疾病進展；TARC；胸腺及活化調節趨化因子。〔圖10A〕、〔圖10B〕、〔圖10C〕、〔圖10D〕、及〔圖10E〕.CAR基因拷貝數/µg DNA之AUC (10A)、反應(10B)、MRD率(10C)、及毒性（10D及10E）之間的關聯。〔圖11〕.隨時間推移之額外細胞介素及發炎標記水平。CRP，C反應蛋白；CXCL10，C-X-C模體趨化因子配體10；GM-CSF，顆粒球巨噬細胞群落刺激因子；IL，介白素；MCP，單核球引誘蛋白；Rα，受體α；Ra，受體拮抗劑；SAA，血清類澱粉蛋白A；VCAM，血管細胞黏附分子。〔圖12〕.整體緩解率之子群分析。BM，骨髓；ORR，整體緩解率；SCT，幹細胞移植。

Claims

一種針對腫瘤抗原之免疫細胞之用途，其係用於製備治療個體之復發性/難治性B前體急性淋巴母細胞白血病的藥物，其中該個體係小兒或青少年個體，其中該等免疫細胞係用於以每kg體重1×10⁶個與2×10⁶個免疫細胞之間的量投與，其中該等免疫細胞係用於以40ml至68ml之間的總體積投與，及其中該腫瘤抗原係CD19。
如請求項1之用途，其中該等免疫細胞係用於以40ml的總體積投與。
如請求項1之用途，其中該等免疫細胞係用於以每kg體重1×10⁶個免疫細胞之量投與。
如請求項1之用途，其中該等免疫細胞係作為第一、第二、第三、第四、第五、或第六線療法、或在疾病進展之前投與。
如請求項1之用途，其中該治療進一步包含將該個體用一或多種預調理劑預調理，其中該一或多種預調理劑係選自烷化劑及基於鉑之藥劑中之至少一者，其中該等烷化劑係選自由下列所組成之群組：美法侖(melphalan)、氯芥苯丁酸(chlorambucil)、環磷醯胺(cyclophosphamide)、二氯甲基二乙胺(mechlorethamine)、氮芥(mustine)(HN2)、烏拉莫司汀(uramustine)、尿嘧啶氮芥(uracil mustard)、美法侖、氯芥苯丁酸、異環磷醯胺(ifosfamide)、苯達莫司汀(bendamustine)、卡莫司汀(carmustine)、洛莫司汀(lomustine)、鏈脲黴素(streptozocin)、烷基磺酸酯、白消安(busulfan)、噻替哌(thiotepa)或其類似物、及其任何組合，且其中該等基於鉑之預調理劑係選自由下列所組成之群組：鉑、順鉑(cisplatin)、卡鉑(carboplatin)、奈達鉑(nedaplatin)、奧沙利鉑(oxaliplatin)、沙鉑(satraplatin)、四硝酸三鉑(triplatin tetranitrate)、丙卡巴肼(procarbazine)、六甲蜜胺(altretamine)、三氮烯(triazene)、達卡巴仁(dacarbazine)、米托唑胺(mitozolomide)、替莫唑胺(temozolomide)、達卡巴仁、替莫唑胺、及其任何組合。
如請求項5之用途，其中該等預調理劑包含環磷醯胺及氟達拉濱(fludarabine)。
如請求項5之用途，其中該環磷醯胺係用於以200mg/m²/天與2000mg/m²/天之間的劑量投與，且其中該氟達拉濱係用於以20mg/m²/天與900mg/m²/天之間的劑量投與。
如請求項5之用途，其中該一或多種預調理劑之投與係在該投與細胞療法之前至少七天、至少六天、至少五天、至少四天、至少三天、至少兩天、或至少一天開始。
如請求項1之用途，其中該個體具有高腫瘤負荷量。
如請求項1之用途，其中該治療進一步包含下列中之至少一者：僅在細胞介素釋放症候群之背景下投與托珠單抗(tocilizumab)以管理神經性事件、及投與皮質類固醇以管理2級神經性事件。
如請求項1之用途，其中該個體處於疾病進展之高風險中，其中若該個體在初始診斷後24個月內顯示疾病進展，則該個體處於高風險中。
如請求項1之用途，其中該等免疫細胞選自腫瘤浸潤淋巴球(TIL)、NK細胞、自體T細胞、同種異體T細胞、及經工程改造之自體T細胞(eACT)及其任何組合。
如請求項1之用途，其中該等免疫細胞係CAR T細胞。