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TWI378927B - Peptidomimetic protease inhibitors - Google Patents

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TWI378927B
TWI378927B TW099107489A TW99107489A TWI378927B TW I378927 B TWI378927 B TW I378927B TW 099107489 A TW099107489 A TW 099107489A TW 99107489 A TW99107489 A TW 99107489A TW I378927 B TWI378927 B TW I378927B
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Robert Edward Babine
Shu Hui Chen
Ivan Nmn Collado
Cristina Nmn Garcia-Paredes
John Irvin Glass
Ling Nmn Jin
Jason Eric Lamar
Iii Raymond Samuel Parker
Nancy June Snyder
Xicheng David Sun
Mark Joseph Tebbe
Frantz Victor
Q May Wang
Yvonne Yee Mai Yip
Deqi Guo
Original Assignee
Vertex Pharma
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Publication date
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Description

1378927 六、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明係針對擬肽化合物及其中間物，其製備，包括中 間物之立體選擇性合成方法，含有此擬肽化合物之醫藥組 合物，及此擬肽化合物或其組合物作為蛋白酶抑制劑，特 別是作為絲胺酸蛋白酶抑制劑，且更特別是作為c型肝炎 病毒（"HCV")NS3蛋白酶抑制劑之用途。此擬肽化合物， 作為HCVNS3蛋白酶抑制劑，特別可用於干擾C型肝炎病 毒之生命期，及用於治療或預防HCV感染，或與其有關聯 之生理學症狀。本發明亦針對組合治療之方法，使用擬肽 化合物或醫藥組合物或供其使用之套件與醫藥包裝，用於 抑制細胞中之HCV複製，或用於治療或預防病人中之HCV .屬舞.。根據本發明，彳皮包含作為醫藥組合物.者，係為包含 HCV絲胺酸蛋白酶之抑制劑，且併用具有抗-HCV活性之 干擾素；HCV絲胺酸蛋白酶之抑制劑，且併用不為干擾素 而具有抗-HC V活性之化合物；或HC V絲胺酸蛋白酶之抑 制劑，且併用具有抗-HCV活性之干擾素，及不為干擾素 而具有抗HCV活性之化合物。再者，本發明係針對製備對 掌性雙環脯胺酸酯中間物之立體選擇性方法，該中間物可 用於合成擬肽化合物。 【先前技術】 被HCV感染為一種令人嘆為觀止之人類醫療問題，且目 前被認為是大部份非A型、非B型肝炎病例之病因劑。 HCV被認為係以慢性方式感染3%世界人口 [A.Alberti等 143110.doc 1378927 人，”c型肝炎之自然歷史"’肝病學期刊，3i(補充”，i7_ 24(1999)]。僅在美國中之感染率，即為丨㈣或3百9十萬人 [M.J.Alter ’ "在美國中之〇型肝炎病毒感染"，肝病學期 刊，31(補充1)，88·91(1999)]。在受感染之所有病人中超 過70%會發展慢性感染，咸認其係為肝硬化與肝細胞癌之 一項主要原因[D.Lavanchy，"C型肝炎之全球監督與防治„， 病毒肝炎期刊，6, 35_47彳1999；)；]。
HCV之複製係涵蓋3〇1〇_3〇33胺基酸之多蛋白之基因組 編碼[Q.-L.Choo等人，"c型肝炎病毒之基因機體形成與多 樣性"，pr〇c. NatK Acad. Sci· USA，88)，2451 2455(i99i); N.Kato等人，"得自患有非A型、非B型肝炎之曰本病人之 人類c型肝炎病毒基因組之分子無性繁殖|,，比 Acad. Sci. USA, 87, 9524-9528(1990) ； A. 'Takamizawa# 人，”自人類載體單離之C型肝炎病毒基因組之結構與機體 形成"’ J. Virol.，65，1105_1113(1991)]。HCV 非結構（ns)
蛋白質係被假設會對病毒複製提供必須之催化手段。1^8蛋 白質係藉由多蛋白之蛋白分解分裂而衍生[R B_nschiager 等人，"c型肝炎病毒之非結構蛋白質3，會使得為在ns3/4 與NS4/5接合處分裂所需要之絲胺酸型蛋白酶編碼"，
Virol” 67, 3835-3844(1993) ; A.Grakoui等人，"c型肝炎病 毒編碼之絲胺酸蛋白酶之特徵鑒定：蛋白酶依存性多蛋白 刀裂位置之測定"，j. Vir〇1·, 67，2832 2843(1993); A.Grakoui等人，"C型肝炎病毒多蛋白分裂產物之表現與 識別"，J· Virol.，67，1385_1395(1993); L T〇mei等人， 143I10.doc 1378927 χ π圳肝炎病毒多蛋白所需要之絲胺酸蛋白酶"’ "NS3為處理^ 4〇17-4026(1993)]。事實上，NS3之最初 181 J. Virol.，67， ,戌毒多蛋白之殘基1027-1207)已被証實包含 個胺基酸（此痛鲁 ^ 说戽白酶功能部位’其會處理HCV多蛋白之所 NS3之絲胺 ^ &銮丨C.Lin等人，"C型肝炎病毒NS3絲胺酸蛋 有四個下游位置L ‘ >裂要求條件與處理動力學··，J. Virol·，68, 白酶：轉移刀 8147-8157(1994)] ^ a晳3(NS3)含有絲胺酸蛋白酶活性’其會幫助 HCVNS蛋白貞 ^I g每，且因此被認為是病毒複製與感染性所 處理大部份病# μI白酶之必要性，係推論自以下事實，在黃 必須的。NS3贫
μ务白酶上之突變’會降低病毒感染性[τ. J. 熱病病毒N S 3 I 得自黃熱病病毒之非結構蛋白質NS3之N· 证據，係為負責病毒多蛋白中之位置專一
Chambers 等人’ 末端功能部责& & 务白酶"’ Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 87, 分裂之絲胺酸贪 8898_8902U9_] °最近’已言正實SHCVNS3蛋白酶之活性 位置處之突變，可在黑猩猩模式中完全免除HCV感染 [C.M.Rice等人，"C型肝炎病毒編碼之酵素活性及在3’_非 轉譯區域中之保守RNA元素，係為活體内病毒複製所必須 的"，J. Virol” 74(4)2046-51(2000)] ° HCVNS3 絲胺酸蛋白 酶亦被認為是病毒複製所必須的’因其及其有關聯之輔因 子NS4A會幫助處理所有病毒酶。此處理似乎類似藉由人 類免疫不全病毒（"HIV”）天門冬胺醯基蛋白酶所進行者° 此外，HIV蛋白酶抑制劑在人體中作為有效抗病毒劑之經 証實用途，係証實在病毒生命期中插入蛋白酶蛋白質處理 143110.doc 1378927 階段，確實會造成治療活性劑。因此’此蛋白酶係為藥物 發現之吸引人標的。 數種可能之HCV蛋白酶抑制劑已被描述。PCT公報案號 WO00/09558, WOOO/09543, W099/64442, WO99/07733,
WO99/07734, W099/50230，WO98/46630，W098/17679 及 WO97/43310，美國專利案號5,990,276, M. Llinas-Brunet等 人，Bioorg· Med. Chem. Lett.,及，1713-1718(1998)，W. Han等人，Bioorg. Med. Chem. Lett.，10，711-713(2000)， R. Dunsdon等人，Bioorg. Med. Chem. Lett.，10, 1571-1579(2000), M. Llinas-Brunet等人，Bioorg. Med. Chem· Lett., 10, 2267-2270(2000)及 S.LaPlante 等人，Bioorg.
Med. Chem. Lett·，10，2271-2274(2000)，各描述可能之 HCVNS3蛋白酶抑制劑。很不幸地，目前沒有絲胺酸蛋白 酶抑制劑可有效作為抗-HCV劑。
事實上，除了干擾素-α、干擾素-α/三唑核驻組合及最近 之經PEG化之干擾素-α以外，並沒有抗-HCV治療劑。但 是，關於干擾素-α治療劑與干擾素-α/三β坐核嘗之持續回應 率，有很低（<50%)傾向，且藉由此等治療劑顯示之副作 用，有很顯著且嚴重之傾向[M. A. Walker，"C型肝炎病 毒：目前研究途徑與發展之综觀"，001\4，518-529(1999) ; D. Moradpour等人，"C型肝炎之現行與發展中 之療法"，£|!1\)1.〇38亡1*061^61<〇1.116卩3*〇1.,11，1199- 1202(1999); H. L. A. Janssen等人，”慢性病毒肝炎之α-干 擾素療法所伴隨之自殺”，J. Hepatol.，21，241-243 143110.doc 1378927 (1994);及P. F. Renauit等人，"α干擾素之副作用"，肝病 討論會9, 273-277,（1989)]。再者，干擾素療法只在少部份 (25/^)病例中引致長期減輕[〇 weiian(j,"在慢性c型肝炎 病毒感染中之干擾素療法"，FEMSMicr〇bi〇丨· Rev” Μ， 279-288(1994)] 〇前述關於干擾素_α療法之問題，甚至已 導致經PEG化之經衍化干擾素_α化合物作為經改良抗_hcv 治療劑之發展與臨床研究。 鑒於目刖關於抗-HCV治療劑之狀況，顯然仍需要更有 效且更良好被容許之療法。 再者’複雜擬肽化合物之合成，長久以來一直被大部份 合成有機方法之非立體選擇性質所阻擾。習知擬肽化合物 之對掌異構物之治療活性，會廣泛地改變。因此，提供此 種立體特異性合成方法，是極為有利的。 ^ Μ耵旱性万式合成 …X豕πΐ做肽资白酉每抑 劑合成之專-雙環脯胺酸酯中間物之先前嘗試，已遭遇 非對掌選擇性或非對映異構選擇性或長的涵蓋之合成 控’或不適合製備大量產物。因此，亦有需要一種以非 映異構選擇性方式及對掌里構上舍 j予八偁上虽含形式，以製備大量 環脯胺酸酯之方式。 【發明内容】 本發明係關於式1擬肽化合物
143M0.doc 1 其中： R0為一個鍵結或二氟亞甲基； R1為氫 ' 視情況經取代之脂族·、視情況經取代之戸 狀基團或視情況經取代之芳族基團； 长 、R與R9各獨立為視情況經取代之㈣基團、視情況經取 代之環狀基團或視情況經取代之芳族基團； R、R5及R7各獨立為（視情況經取代之脂族基團、視情 • 况經取代之環狀基團或視情況經取代之芳族基團）（視情況 經取代之亞f基或視情況經取代之次乙基）、視情況經取 代之（1,1_或I，2-)次環院基或視情況經取代之（1，1_或1，2_)次 雜環基； ’人
R R、R及R1G各獨立為氫或視情況經取代之脂族基 團； A 為經取代之單環狀氮雜環基或視情況經取代之多 Φ 環狀氮雜環基’或視情況經取代之多環狀氮雜環烯基，其 中不飽和性係在遠離帶有 部份基團之環之環中，且_c(〇)_n(r4)_r3_c(〇)c(〇)nr2r1 部份基團係連接於其上； L 為-C(〇)-、_OC(〇)·、_NRi〇c(〇)_、_s(〇)2_ 或-Nr1〇s(〇)2_ :及 π為0或1，或 其藥學上可接受之鹽或前體藥物，或此種化合物之溶劑 合物，其鹽或其前體藥物， 143110.doc 1378927 其條件是 〇
當為經取代之 _ 為視情況經取代之脂族，或至少 時’則L為-OC(O)-，且Rs 少一個R3 ' R5及r7為（視情 況經取代之脂族基團、視情況經取代之環狀基團或視情況 經取代之芳族基團）（視情況經取代之乙烷二基），或R4為視 情況經取代之脂族。 本發明亦提供一種具有下列化學式之化合物：
其中： 為氫、視情況經取代之脂族基團、視情況經取代之環 狀基團或視情況經取代之芳族基團； R及R9各獨立為視情況經取代之脂族基團、視情況經取 代之環狀基團或視情況經取代之芳族基團； R、R及R7各獨立為（視情況經取代之脂族基團、視情 况經取代之環狀基團或視情況經取代之芳族基團）（視情況 ’二取代之甲烧二基或視情況經取代之乙烧二基）； R、R6、R8及 Ri〇 各獨立為氫或視情況經取代之脂族美 〇 為經取代之單環狀氮雜環基或視情況經取代之多 椒狀氮雜環基、或視情況經取代之多環狀氮雜環烯基，复
1431 l〇.d〇Q 中不飽和性係在遠離帶有 R9-L-(N(R8)-R7-C(0)-)nN(R6)-R5-C(0)-N 部分基團之環之環中’且 部分基團係連接於其上； L為-C(0)-、-〇c(〇)-、·ΝΙΙιο(：(0)-、-S(0)2-或-NR10S(O)2- ;及 n為0或1，或 其醫藥上可接受之鹽或前體藥物，或此種化合物之溶劑合 物，其鹽或其前體藥物， 其條件是 Ο 為經取代之
時，則L為-〇C(0)-，且R 為視情況經取代之脂族，或至少一個R3、R5及R7為（視情 況經取代之脂族基團、視情況經取代之環狀基團或視情況 經取代之芳族基團）（視情況經取代之乙院二基），或R4為視 情況經取代之脂族。 本發明亦針對一種包含式1化合物之醫藥組合物，及使 用式1化合物以抑制HCV蛋白酶或治療或預防病人中之 HCV感染或與該感染有關聯生理學症狀之方法。 本發明亦針對立體選擇性方法，用以製備對掌性雙環脯 胺酸醋化合物，其係為可用於製備式1化合物之中間物。 此合成方法包括以下步驟： (a) 使式24化合物分裂與環化
143110.doc -11 - (24) 其中： 〇 為視情;兄經取代之環烷基或視情況經取代之_合 方基環烧基； R11 為-C02R13 ; R12為亞胺性甘胺醯亞胺加成物； R為酸保護基或視情況經取代之脂族基團； 於分裂與環化條件下進行，以形成式25化合物 其中：
(25)
R15為視情況經取代之脂族基團； R16為酸保護基、視情況經取代之芳基或視情況經取代 之脂族基團；及 (b)以酿胺保護基，保護式25化合物中之内醯胺部份 基團之氮，以形成式26化合物 I43tl0.doc -12. 1378927
其中： p°為醯胺保護基； R14係如本文中所述；及
(c) 使式26化合物 化合物 在還原條件下還原，以形成式27
其中： p。與R14均如本文中所述；及 (d)使切化合物，於去除保護條件下去除保護以 形成式28化合物
(26) 其中： R14係如本文中所述。 143110.doc 本發明亦針對上述合成方法，進_步包括以下步驟其 中式24化合物係經由以亞胺性甘賴亞胺化合物於心 化合物上達成Michael加成而製成
Q \r" (29) 其中： 況經取代之稍合
為視情況經取代之環烯基或視情 芳基環烯基； R^-co2R13 ; 其中： 式29化合物可經由使式29a化合物酯化而製成
(29a) 其中： ^為視情況經取代之環稀基或視情況經取代之稠合 芳基環烯基；
Rlla為-CHO、-COR15、-C=N或 _CONR15R15 ;及 R15係如本文中所述。 值得注意的是，熟諳此藝者將明瞭酮類之酯化作用可藉 由例如Bayer-Villiger反應而達成。將腈類與醯胺類轉化為 143110.doc 14· 1378927 酯類可經由例如水溶液水解’接著進一步酯化而達成。將 路類轉化為酷類可藉由例如醛之氧化作用，接著酯化而達 成。 本發明之另一方面為式1化合物，其中取代基係選自如 本文中定義之較佳或特定具體實施例之組合。 本發明之另一方面為式24_29化合物，其中取代基係選 自如本文中疋義之較佳或特定具體實施例之組合。 本發明之另一方面為醫藥組合物，其除了一或多種hcv 絲胺酸蛋白酶抑制劑以外，包含一或多種干擾素或會引致 顯示抗—HCV活性之干擾素產生之化合物，及/或一或多種 具有抗HCV活性之化合物，包括免疫調節化合物，譬如顯 示HCV抗病毒活性之免疫刺激細胞活素，及藥學上可 之載劑。 本發明之另-方面為在有需要之病人中治療或預防HCV 感染之方法，其包括對該病人投予藥學上有效量之組合， 此組合為—或多種HCV絲胺酸蛋白酶抑制劑；一或多種干 擾素或會引致顯示抗_HCV活性之干擾素產生之化合物； 及/或-或多種具有抗·HCV活性之化合物，包括免疫調節 化合物，譬如顯示HCV抗病毒活性之免疫刺激細胞活素。 本發明亦針對一或多種HCV絲胺酸蛋白酶抑制劑，且併 用一或多種干擾素或會引致顯示抗_HCV活性之干擾素產 生之&合物’及/或一或多種具有抗-HCV活性之化合物， 包括免疫調節化合物，譬如顯示HCV抗病毒活性之免疫刺 激細胞活素’於藥劑製備上之用途，該藥劑係在有兩要之 I431I0.doc • J5- 1378927 病人中用於治療或預防HCV感染。 本發明亦針對在病人中治療或預防Hcv感染之套件或醫 樂包裝，其中該套件或醫藥包裝包含許多個別容器其中 至；一個該容器含有—或多種HCV絲胺酸蛋白酶抑制劑 (單獨或併用藥學上可接受之載劑或稀釋劑），至少另一個 該容器含有一或多種干擾素或會引致顯示抗-HCV活性之 干擾素產生之化合物（單獨或併用藥學上可接受之載劑或 稀釋劑），及視情況，至少另一個該容器含有一或多種具 有抗-HCV活性之化合物（單獨或併用藥學上可接受之載劑 或稀釋劑），包括免疫調節化合物，譬如顯示HCV抗病毒 活性之免疫刺激細胞活素。 HCV絲胺酸蛋白酶抑制劑、干擾素或抗_HCVt合物在 任何前述應用中之量，可為藥學上有效量，亞臨床抗_ HCV有效量或其組合，只要Hcv絲胺酸蛋白酶抑制劑、干 擾素或會引致顯示抗-HCV活性之干擾素產生之化合物及/ 或抗-HCV化合物之最後組合，包含藥學上有效量之化合 物，有效用以治療或預防病人中之HCV感染即可。 【實施方式】 本文中所引用各專利文件及其他參考資料之内容，均以 其全文併於本文供參考。 當於上文及在整個本發明之說明文中使用時，下列縮 寫，除非另有指出，否則應明瞭係具有下述意義： 名稱 試劑或片段 ACN 乙腈 143] 10.doc -16- 1378927 AIBN 2,2'-偶氮雙異丁腈 BOC或Boc 胺基曱酸第三-丁酯 BOP 六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基參（二曱胺基）鎮 n-Bu3SnH 氫化三-正-丁基錫 t-Bu 第三-丁基
Cbz 胺基甲酸芊酯 對掌性PTC 對掌性相轉移觸媒
DAST 三氟化（二乙胺基）硫（Et2NSF3) DCC 二環碳化二亞胺 DCM 二氯曱烷（CH2C12) DIBAL-H 氫化二異丁基鋁 DIC 1，3-二異丙基碳化二亞胺 DIPEA 二異丙基乙胺 DMAP 4-(N，N-二甲胺基）吡啶 DMP試劑 Dess-Martin過蛾烧試劑
143110.doc -17- 1378927 DMF 二甲基甲醯胺 DMSO 二甲亞颯 EA 元素分析 EDCI 1-乙基-3-(3-二曱胺基丙基）碳化二亞胺HC1 eq 當量 Et 乙基 Et2〇 乙驗 EtOH 乙醇 EtOAc 醋酸乙酯 Et3Si 三乙基矽烷 FMOC 9-苐基曱氧羰基 H-Chg-OH 0 h2n 乂丫0H 〇 HOAt 1-羥基-7-氮苯并三唑 HOBT 1-羥基苯并三唑 HOSu N-羥基琥ίό醯胺 HPLC 高性能液相層析法 LAH H IS Sf Me 曱基 Mel 碘化曱烧 MeOH 甲醇
Me0C(0)Cl氣f酸甲酯 M0MC1 甲氧基氯化甲烷 143110.doc -18- 1378927
MOM 甲氧基甲基 MS 質量光譜 NaBH4 棚氛化鈉 Ν&2^4Η4〇6 酒石酸鈉 NMP N-曱基四氫p比0各酮 NMR 核磁共振 P- 聚合體鍵結 PyBOP 六氟磷酸笨并三唑-1-基-氧基參-四氳吡咯基-鎮 TBD 1,5,7-三氮雙環并[4.4.0]-癸-5-烯 RP-HPLC 逆相-高壓液相層析法 TBSC1 氣化第三-丁基二甲基矽烷 TCA 三氯醋酸 TFA 三氟醋酸 Tf20 三氟甲烷磺酸酐 THF 四氫吱喃 THP 四氫p底喃 TLC 薄層層析法 當於上文及在整個本發明之說明文中使用時，下列術 語，除非另有指出，否則應明瞭係具有下述意義：- ”酸生物電子等排體”係意謂與羧基具有化學與物理類似 性，產生廣泛類似生物學性質之基團（參閱Lipinski,醫藥化 學年報，"於藥物設計上之生物同電異素"，21，283 (1986) ; Yun，Hwahak Sekye，”生物同電異素之應用於新 穎藥物設計576-579,（1993) ; Zhao, Huaxue Tongbao， 143110.doc -19- 1378927 "鉛化合物在藥物設計上之生物電子等排體置換與發展” 34-3 8’（1995) ; Graham，Theochem，"應用於藥物設計之理 論研究：於生物電子等排體中之從頭電子分佈,，343，丨〇5_ 109,（1995))。舉例之酸生物電子等排體包括_c(〇)_nh〇h、 -C(0)-CH2〇H、-C(0)-CH2SH、-C(0)-NH-CN、磺酸基、 膦酸基、烷基石夤醯基胺甲醯基、四唑基、芳基續醯基胺甲 醯基、N-曱氧基胺甲醯基、雜芳基磺醯基胺曱醯基、3_羥 基-3-環丁烯-1，2-二酮、3,5-二酮基_ι，2,4-氧二唑啶基或羥 基雜芳基’譬如3·羥基異呤唑基、3·羥基-曱基吡唑基 等。 "酸性官能基"係意謂一種帶有酸性氫之部份基團。舉例 之酸官能基包括羧基(_C(0)0H)、-C(0)NHOH-、-C(〇)-CH2OH、 -C(0)-CH2SH、-C(0)_NH-CN、磺基、磷基、烷基磺醯基 胺甲醯基、四唑基、芳基磺醯基胺甲醯基、N_甲氧基胺甲 醯基、雜芳基磺醯基胺甲醯基、3·羥基·3·環丁烯·丨，2-二 _、3,5-二酮基-i，2,4_噁二唑烷基或羥基雜芳基如3_羥基 異噁唑基、3-羥基-1 _ f基吡唑基、咪唑基、巯基等，及適 當羥基’譬如芳族羥基，例如羥苯基。 "酸保護基"係意謂一種易於移除之基團，其係為此項技 藝中已知，用以保護羧基之酸性氫，以防止合成程序期間 不期望之反應，例如阻斷或保護酸官能基，而同時進行涉 及此化合物其他官能性位置之反應，並可選擇性移除。^ 種酸保護基係為熟請此藝者所習知，已被廣泛地使用於缓 基之保護’如在美國專利3,請，556與3,719 667中所述者， 143JJ0.doc 1378927 其揭示内容係併於本文供參考。關於適當酸保護基，可來 閱T· W. Green與P. G.M. Wuts "有機化學中之保護基，，J〇hn Wiley & Sons，1991。酸保護基亦包括如本文中定義之氫 化作用不安定酸保護基。舉例之酸保護基包括酯類，譬如 經取代與未經取代之C,·8低碳烷基，例如甲基、乙基、第 二-丁基、甲氧基甲基 '甲硫基甲基、2,2,2-三氣乙基等， 四氫哌喃基，經取代與未經取代之笨基烷基，譬如爷基， 及其經取代之衍生物，譬如烷氧基苄基或硝基芊基等，桂 皮基，二烷胺基烷基，例如二甲胺基乙基等，三甲基矽烷 基’經取代與未經取代之醯胺與醯胼，例如N，N_二甲胺、 7-硝基啕哚、肼、N-苯基肼等之醯胺與醯肼，醯氧基烷 基，譬如二▼基乙醯基氧基甲基或丙酿氧基曱基等，芳酿 基氧基烷基，譬如苯甲醯氧基乙基等，烷氧羰基烷基，譬 如曱氧羰基F基 '環己基氧基羰基甲基等，烷氧羰基氧基 烧基，譬如第三-丁氧羰基氧基曱基等，烷氧羰基胺基烷 基’譬如第三-丁氧羰基胺基甲基等，烷胺基羰基胺基烷 基，譬如甲胺基羰基胺基曱基等，醯基胺基烷基，譬如乙 醯胺基甲基等’雜環基羰基氧基烷基，譬如4_曱基六氫 吡畊基-羰基氧基曱基等’二烷胺基羰基烷基，譬如二甲 胺基羰基-甲基等’（5-(低碳烷基）-2-酮基-1，3-二氧伍圜烯-4-基）烷基，譬如（5-第三-丁基-2-酮基-1，3-二氧伍圜烯-4-基）曱基等’及（5-笨基-2-酮基-1,3-二氧伍圜烯-4-基）烷 基，譬如（5-苯基-2-酮基-1，3-二氧伍圜烯-4-基）曱基等。 "酸不安定性胺保護基"係意謂如本文中定義之胺保護 143110.doc 1378927 基，其可容易地經由以酸處理而被移除，同時對其他試劑 保持相對安定。較佳酸不安定之胺保護基為BOC。 "脂族"係意謂如本文中定義之烷基、烯基或炔基。 "脂族基團取代基”係意謂連接至如本文中定義之脂族基 團之取代基，包括芳基、雜芳基、羥基、烷氧基、環基氧 基、芳氧基、雜芳基氧基、醯基或其硫酮基類似物、環基 羰基或其硫酮基類似物、芳醯基或其硫酮基類似物、雜芳 醯基或其硫酮基類似物、醯氧基、環基羰基氧基、芳醯基 氧基、雜芳醯基氧基、鹵基、硝基、氰基、羧基（酸）、 -C(0)NH0H-、-C(0)-CH20H、-C(0)-CH2SH、-C(0)-NH-CN、 磺基、磷基、烷基磺醯基胺甲醯基、四唑基、芳基磺醯基 胺曱醯基、N-甲氧基胺甲醯基、雜芳基磺醯基胺曱醯基、 3-羥基-3-環丁烯-1,2-二酮、3,5-二酮基-1,2,4-噁二唑烷基 或羥基雜芳基如3-羥基異噁唑基、3-羥基-1-曱基吡唑基、 烷氧羰基、環基氧基羰基、芳氧基羰基、雜芳基氧基羰 基、烧基項醯基、環基確醯基、芳基項醯基、雜芳基續醯 基、统基亞續醯基、環基亞續醢基、芳基亞續醯基、雜芳 基亞磺醯基、烷硫基、環基硫基、芳基硫基、雜芳基硫 基、環基、芳基重氮基、雜芳基重氮基、硫醇、亞曱基 (H2C=)、酮基（0=)、硫酮基（S=)、、YWaNCCO)-、 yYncco)。-、yYnc^cony3-、yYnso，-或 YSOjNY1-，其中R2係如本文定義，Y1與Y2係獨立為氫、烷基、芳基 或雜芳基，及Υ3為烷基、環烷基、芳基或雜芳基，或關於 其中取代基為υ1υ2ν-之情況，則Υ1與Υ2之一可為如本文中 143110.doc -22· 1378927 定義之醯基、環基羰基、芳醯基、雜芳醯基、烷氧羰基、 環基氧基羰基、芳氧基羰基或雜芳基氧基羰基，而Y1與Y2 中之另一個係如先前定義，或關於其中取代基為 Y'Y^CCO)- 、 Y1Y2NC(0)0- 、 Y'Y2NC(0)NY3-或 yiYSNSOr之情況，Y1與Y2亦可和Y1與Y2所經過而連接之 Ν原子一起採用，而形成4至7員氮雜環基或氮雜環烯基。 酸性/醯胺脂族基團取代基係為羧基（酸）、-C(0)NH0H-、 -C(0)-CH20H、-C(0)-CH2SH、-C(0)-NH-CN、磺基、磷 基、烷基磺醯基胺曱醯基、四唑基、芳基磺醯基胺曱醯 基、N-甲氧基胺甲醯基、雜芳基磺醯基胺甲醯基、3-羥 基-3-環丁烯-1，2-二酮、3,5-二酮基-1，2,4-噁二唑烷基或羥 基雜芳基如3-羥基異噁唑基、3-羥基-1-甲基吡唑基及 Υ]Υ2Ν(：0-。非酸性極性脂族基團取代基為羥基、酮基 (0=)、硫酮基（S = )、醯基或其硫酮基類似物、環基羰基或 其硫酮基類似物、芳醯基或其硫酮基類似物、雜芳醯基或 其硫酮基類似物、烷氧羰基、環基氧基羰基、芳氧基羰 基、雜芳基氧基羰基、醯氧基、環基羰基氧基、芳醯基氧 基、雜芳醯基氧基、烷基磺醯基、環基磺醯基、芳基磺醯 基、雜芳基磺醯基、烷基亞磺醯基、環基亞磺醯基、芳基 亞磺醯基、雜芳基亞磺醯基、硫醇、、 Y'Y2NC(0)- 、 Υ!Υ2Ν0(Ο)Ο- 、 Y,Y2NC(0)NY3-或 Y1 y2nso2-。舉例之帶有脂族基團取代基之脂族基團，包 括曱氧基曱氡基、曱氧基乙氧基、乙氧基乙氧基，（甲氧 基-、芊氧基-、苯氧基-或乙氧基-)羰基（曱基或乙基），芊 143110.doc •23· 1378927 氧羰基、吡啶基甲氧基-羰基甲基、甲氧基乙基、乙氧基 甲基、正-丁氧基甲基、環戊基曱氧基乙基、苯氧基丙 基、苯氧基烯丙基、三氟甲基、環丙基-甲基、環戊基甲 基、羧基（甲基或乙基）、2_苯乙烯基、芊氧基、丨或2萘 基-甲氧基、4-吡啶基-曱基氧基、苄氧基乙基、3苄氧基 烯丙基、4-吡啶基甲基-氧基乙基、4_吡啶基曱基_氧基烯 丙基、苄基、2-苯乙基、莕基曱基、苯乙烯基、心苯基_ 1，3-戊二烯基、苯基_丙炔基、3_苯基丁 _2_炔基、吡啶 基乙炔基及喹啉-3-基乙炔基、4·吡啶基_乙炔基、4_吡啶 基乙烯基、嘧吩基乙烯基、吡啶基乙烯基、咪唑基-乙烯 基、吡畊基乙烯基、吡啶基戊烯基、吡啶基己烯基及吡啶 基庚烯基、P塞吩基-甲基、^比咬基甲基、咪唾基甲基、 吡啡基甲基、四氫哌喃基甲基、四氫哌喃基-甲基氧基曱 基等。 ’’醯基”係意謂H-CO-或（脂族或環基pc〇_，其中脂族基 團係如本文中所述。較佳醯基含有低碳烷基。舉例之酿基 包括甲醯基、乙醯基、丙醯基、2-曱基丙醯基、丁醯基、 棕摘酿基、丙烯酿基、丙快醯基、環己截基等。 "烯酿基"係意謂烯基-C0-基團，其中烯基係如本文定 義。 "烯基"係意謂含有一個碳-碳雙鍵之脂族烴基，且其可為 直鏈或分枝狀，具有約2至約15個碳原子在此鏈中。較佳 烤基具有2至約12個碳原子在此鏈中；且更佳為約2至約4 個碳原子在此鏈中。分枝狀係意謂一或多個低碳燒基，链 s H3ll0.doc . 24 - 1378927 如甲基、乙基或丙基，被連接至線性烯基鏈。"低碳烯基,, 係意謂約2至約4個碳原子在此鏈中，其可為直鏈或分枝 狀。舉例之烯基包括乙烯基、丙烯基、正-丁烯基、異，丁 烯基、3 -甲基丁-2-烯基、正-戊烯基、庚烯基 '辛烯基、 %己基丁烯基、癸烯基等。"經取代之烯基"意謂如上所述 之烯基經一或多個"脂族基團取代基"取代（較佳為丨至3 個），其可為相同或不同，且如本文所定義者。例舉之烯 基脂族基團取代基包括鹵素或環烷基團。 烯氧基"係意謂烯基-〇-基團，其中烯基係如本文中所 述。舉例之烯氧基包括烯丙氧基、3_丁烯基氧基等。 烷氧基"係意謂烷基-0-基團，其中烷基係如本文中所 述。舉例之烷氧基包括甲氧基、乙氧基、正_丙氧基、異· 丙氧基、正-丁氧基、庚氧基等。 "烷氧羰基”係意謂烷基-0-C0-基團，其中烷基係如本文 疋義。舉例之烷氧羰基包括甲氧羰基、乙氧羰基、第三_ 丁氧幾基等。 烷基"係意謂脂族烴基，其可為直鏈或分枝狀，具有約 1至約20個碳原子在此鏈中。較佳烷基具有1至約12個碳原 子在此鏈中，更佳為如本文中定義之低碳烷基。分枝狀係 意謂一或多個低碳烷基，譬如甲基、乙基或丙基，被連接 至線性烷基鏈。”低碳烷基"係意謂約丨至約4個碳原子在此 鏈中，其可為直鏈或分枝狀。"經取代之烷基"意謂如上所 述之烷基被一或多個”脂族取代基"（較佳為1至3個）取代， 其可為相同或不同，且如本文所定義者。 143110.doc *25- 1378927 "烷基亞磺醯基"係意謂烷基-so-基團，其中烷基係如上 文定義。較佳基團為其中烷基為低碳烷基者。 院基續酿基"係意謂烧基- S〇2_基團，其中院基係如上文 定義。較佳基團為其中院基為低碳院基者。 "烷基磺醯基胺曱醯基"係意謂炫基_S〇2-NH-C(=〇)-基 團’其中烷基係如本文中所述。較佳烷基磺醯基胺曱醯基 係為其中院基為低碳烧基者。 院硫基係意s胃烧基-S -基團’其中烧基係如本文中所 述。舉例之烷硫基包括甲硫基、乙硫基、異_丙硫基及庚 籲 硫基。 炔基'’係意謂含有一個碳-碳參鍵之脂族烴基’且其可為 直鏈或分枝狀’具有約2至約15個碳原子在此鏈中。較佳 炔基具有2至約12個碳原子在此鏈中；且更佳為約2至約4 個碳原子在此鏈中。分枝狀係意謂一或多個低碳烷基，譬 如曱基、乙基或丙基，被連接至線性炔基鏈。"低碳炔基" 係意谓約2至約4個碳原子在此鏈中，其可為直鏈或分枝 狀。此炔基可被一或多個_基取代。舉例之炔基包括乙炔 · 基、丙炔基、正-丁炔基、2_ 丁炔基、3_甲基丁炔基、正_ 戊炔基、庚炔基、辛炔基、癸炔基等。"經取代之炔基意 s胃如上所述之炔基經一或多個”脂族基團取代基”取代（較佳 為1至3個），其可為相同或不同，且如本文所定義者。 "胺保護基”係意謂易於移除之基團，其係為此項技藝中 已知，用以保護胺基或醯胺基之氮部份基團，以在合成程 序J間防止不期望之反應，並可選擇性地移除。胺/醯胺 143II0.doc • 26 -
1378927 保護基之利用，係為此項技藝中所習知，用以保護基團， 以在合成程序期間防止不期望反應，且許多此種保護基係 為已知，例如T. W. Greene與P. G. M· Wuts，有機合成之保 護基，第 2版（John Wiley & Sons，New York (1991))，併於 本文供參考。胺/醯胺保護基亦包括"酸不安定性胺/醯胺保 濩基與"氫化作用不安定性胺/醯胺保護基，舉例之胺/醯 胺保護基係為醯基，包括甲醯基、乙醯基、氯基乙醯基、 二氯基乙醯基、鄰-硝基苯基乙醯基、鄰_硝基苯氧基-乙醯 基、二氟乙醯基、乙醯乙醯基、4_氯基丁醯基' 異丁醯 基、鄰-硝基桂皮醯基、甲基吡啶醯基、醯基異硫氰酸 酯、胺基己醯基、苯甲醯基等，及醯氧基，包括甲氧羰 基' 9-第基甲氧羰基、2,2,2-三氟乙氧羰基、2-三曱基矽烷 基乙氧基羰基、乙烯基氧基羰基、烯丙氧基羰基、第三_ 丁氧羰基（BOC)、1，1-二甲基-丙炔基氧基羰基、苄氧羰基 (CBZ)、對-確基字氧幾基、2,4-二氣爷氧炭基等。 ••醯胺保護基"係意謂易於移除之基團，其係為此項技藝 中已知’用以保護醯胺基之氮部份基團，以在合成程序期 間防止不期望之反應’並可在其轉化成胺之後，選擇性地 移除。醯胺保護基之利用係為此項技藝中所習知，用以保 護基團，以在合成程序期間防止不期望之反應，且許多此 種保s蒦基係為已知’例如τ· W. Greene與P. G. Μ. Wuts，有 機合成之保s筻基’第2版（J〇hn Wiley & Sons, New York (1991)) ’併於本文供參考。醯胺保護基亦包括"酸不安定 性醯胺保護基”與"氫化作用不安定性醯胺保護基，％舉例 143110.doc •27· 1378927 之酿胺保護基係為鄰-端基桂皮醯基、甲基吡啶醯基、胺 基己酿基、苯曱酿基等，及醯氧基，包括甲氧羰基、9·第 基甲氧幾基' 2,2,2-三氟乙氧羰基、2·三甲基矽烷基乙氧 基羰基、乙烯基氧基羰基、烯丙氧基羰基、第三丁氧羰 基（BOC)、1，1-二甲基-丙炔基氧基羰基、苄氧羰基 (CBZ)、對-硝基芊氧羰基、2,4-二氯-苄氧羰基等。 ”胺基酸”係意謂一種選自包括如本文中定義之天然與非 天然胺基酸類之胺基酸。胺基酸亦意謂包括在α_碳處具有 L或D立體化學之胺基酸。較佳胺基酸為具有α•胺基者。胺 基酸可為中性、正或負，依側鏈中之取代基而定。"中性 胺基酸"係意謂含有未帶電荷之側鏈取代基之胺基酸。舉 例之中性胺基酸包括丙胺酸、纈胺酸、白胺酸、異白胺 酸、脯胺酸、苯丙胺酸、色胺酸、甲硫胺酸、甘胺酸、絲 胺酸、蘇胺酸及半胱胺酸。"正胺基酸"係意謂其中側鏈取 代基在生理pH下係為帶正電荷之胺基酸。舉例之正胺基酸 包括離胺酸、精胺酸及組胺酸。"負胺基酸"係意謂其中側 鏈取代基在生理pH下帶有淨負電荷之胺基酸。舉例之負胺 基酸包括天門冬胺酸與麩胺酸。較佳胺基酸為心胺基酸。 舉例之天然胺基酸為異白胺酸、脯胺酸、苯丙胺酸、色胺 酸、甲硫胺酸、甘胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、半胱胺酸'酪 胺馱、天冬素、麩醯胺、離胺酸、精胺酸、組胺酸 '天門 冬胺酸及麵胺酸。"非天然胺基酸"係意謂沒有核酸密碼子 之胺基酸。舉例之非天然胺基酸包括例如，如上文指出之 天然α_胺基酸之D-異構物；Aib(胺基丁酸）、pAib(3-胺基- 143110.doc 1378927 異丁酸）、Nva(正纈胺酸）、β-Ala、Aad(2-胺基己二酸）、 pAad (3-胺基己二酸）' Abu(2-胺基丁酸）、Gaba(y-胺基丁 酸）、Acp(6-胺基己酸）、Dbu(2,4-二胺基丁酸）、α-胺基庚 二酸、TMSA(三曱基矽烷基-Ala)、alle(別-異白胺酸）、 Nle(正白胺酸）、第三-Leu、Cit(瓜胺酸）、〇rn、DpHipj1-一胺基庚一酸）、Dpr(2,3 -二胺基丙酸）、α-或β-Nal、 Cha(環己基-Ala)、羥脯胺酸、Sar(肌胺酸）等；環狀胺基 酸；Na-烧基化胺基酸，譬如MeGly(Na-曱基甘胺酸）、 EtGly(Na-乙基甘胺酸）及EtAsn(Na-乙基天冬素）；及其中α-碳帶有兩個側鏈取代基之胺基酸。於本文中所使用天然與 非天然胺基酸及其殘基之名稱，係遵照由IUPAC委員會關 於有機化學之命名法’及IUPAC-IUB委員會關於生物化學 命名法，如在"α-胺基酸之命名法（建議，1974)„ .， Biochemistry，14(2)，（1975)所提出者中所建議之命名慣 例。在本專利說明書及隨文所附申請專利範圍中所採用之 胺基酸及其殘基之名稱與縮寫和其中所指出者不同之範圍 下，不同名稱與縮寫將會進行澄清。 胺基酸保護基"係意謂一種基團，其會保護胺基酸之酸 或胺部份，或在胺基酸側鏈上之其他反應性部份，例如羥 基或硫醇。關於胺基酸側鏈之”相應經保護衍生物”之實 例，可參閱T· W. Green與P. G. M. Wuts"有機化學中之保護 基"（John Wiley & Sons，i 991)。關於胺基酸中酸基之保護 基，係描述於本文中，例如在”酸性官能基"與”氫化作用 不安定性酸保護基"之段落中。關於胺基酸中胺基之保護 143110.doc •29· 1378927 基，係描述於本文中，例如在"胺保護基"、"酸不安定性 胺保護基"及"氫化作用不安定性胺保護基"之段落中。 胺基酸殘基"係意謂被併入本發明化合物中之個別胺基 酸單位。 '•胺基酸側鏈"係意謂在α-胺基酸_之胺基與羧基間之碳 上發現之取代基》舉例之α_胺基酸側鏈，對於纈胺酸、丙 胺酸及天門冬胺酸，個別包括異丙基、甲基及羧甲基。 胺基酸等效物”係意謂一種胺基酸，其可用以取代根據 本發明肽中之另一種胺基酸，而無任何可感覺得到之功能 損失。在施行此種改變時，類似胺基酸之取代，係以側鏈 取代基之相對類似性為基礎施行，例如關於大小、電荷、 親水性 '水療性及疏水性，如本文中所述。 "芳族基團”係意謂如本文中定義之芳基或雜芳基。舉例 之芳族基團包括苯基、齒基取代之苯基、氮雜芳基等。 Μ芳醯基”係意謂芳基_C〇·基團，其中芳基係如本文中所 述。舉例之芳醯基包括苯甲醯基、1_與2-莕甲醯基等。 ^基"係意謂芳族單環狀或多環狀環系統，具有約6至 約14個碳原子，較佳為約6至約1〇個碳原子。被芳基所涵 蓋者’係為稠合芳基環烯基、稠合芳基環烷基、稠合芳基 雜環烯基及稠合芳基雜環基，如本文中定義，當經過其芳 基部份基團結合時。此芳基係視情況被一或多個"環基取 代基取代’其可為相同或不同’且均如本文定義。舉例 之芳基包括苯基或莕基，或苯基經取代或萘基經取代。，， 經取代之爹基"意謂如上所述之芳基經一或多個"環基取代 I43110.doc 1378927 基"取代（較佳為1至3個），其可為相同或不同，且如本文所 定義者。 "芳基重氮基"係意謂芳基-重氮基，其中芳基與重氮基均 如本文定義。 "次芳基"係意謂視情況經取代之1,2-、1,3-、1，4-、二價 芳基，其中芳基係如本文定義。舉例之次芳基包括視情況 經取代之次笨基、次苔基及次氫茚基。特定次芳基為視情 況經取代次笨基》”經取代之次芳基”意謂如上所述之次芳 基經一或多個"環基取代基”（較佳為1至3個）取代，其可為 相同或相異，且如本文所定義者。 ”芳氧基”係意謂芳基-Ο-基團，其中芳基係如本文定 義。舉例之芳氧基包括苯氧基與2-莕氧基。 ”芳氧基羰基”係意謂芳基-O-CO-基團，其中芳基係如本 文定義。舉例之芳氧基羰基包括苯氧基羰基與莕氧基羰 基。 ”芳基磺醯基"係意謂芳基-so2-基團，其中芳基係如本文 定義。 "芳基磺醯基胺甲醯基”係意謂芳基-so2-nh-c(=o)-基 團，其中芳基係如本文中所述。舉例之芳基磺醯基胺甲醯 基為苯基磺醯基胺甲醯基。 "芳基亞磺醯基”係意謂芳基-SO-基團，其中芳基係如本 文定義。 '’芳基硫基"係意謂芳基-S-基團，其中芳基係如本文中所 述。舉例之芳基硫基包括苯硫基與茶基硫基。 143110.doc -31 - 1378927 "驗性氮原子"係意謂Sp2或Sp3雜化之氮原子，具有未結 合之電子對’其能夠被質子化。舉例之驗性氮原子包括視 情況經取代之亞胺基、視情況經取代之胺基及視情況經取 代之曱脒基。 "羧基"係意謂H0(0)C-(羧酸）基。 "偶合劑”係意謂一種會與羧基部份基團之羥基部份反 應’於是使其容易接受親核性攻擊之化合物。舉例之偶合 劑包括 DIC、EDCI、DCC#。 環稀基'係意s胃非芳族單-或多環狀環系統，具有約3至 _ 約10個碳原子，較佳為約5至約1 〇個碳原子，且其含有至 ,夕個故_《厌雙鍵。被環烯基所涵蓋者，係為稍合芳基環 烯基與稠合雜芳基環烯基，如本文中定義，當經過其環烯 基部份基團結合時。此環系統環之較佳環大小，係包含 約5至約6個環原子；且此種較佳環大小亦被稱為"低碳”。 "經取代之環烯基"意謂如上所述之環烯基被一或多個，，環 基取代基"取代（較佳為1至3個），其可為相同或不同，且係 如本文所定義者。舉例之單環狀環烯基包括環戊烯基、環鲁 己烯基、環庚烯基等。舉例之多環狀環烯基為正祜烯基。 環烷基"係意謂非芳族單-或多環狀環系統，具有約3至 約10個碳原子，較佳為約5至約1〇個碳原子。此環系統環 之較佳環大小，係包含約5至約6個環原子；且此種較佳環 大小亦被稱為"低碳"。被環烷基所涵蓋者，係為稠合芳基 環烧基與稠合雜芳基環烧基，如本文中定義，當經過其環 院基部份基團結合時。"經取代之環院基,,意謂如上所述之 1431 丨 0.d〇C .32. 1378927 %烷基被一或多個"環基取代基"取代（較佳為1至3個），其 可為相同或不同，且係如本文定義。舉例之單環狀環烷基 包括％戊基、環己基、環庚基等。舉例之多環狀環烷基包 括丨_十氫莕、正福基、金鋼烷-(丨-或〗·）基等。 ••人ί衣烷基"係意謂如本文中定義之二價環烷基，具有約 4至約8個碳原子。次環烷基之較佳環大小，包括約5至約6 個環原子；且此種較佳環大小亦被稱為"低碳"。於次環烷 基上之結合點，包括1，1_、i’2·、13_或14_結合樣式且 在合適之情況下，結合點之立體化學關係，係為順式或反 式。舉例之次環烷基包括（1山、丨^或^)次環己基與 0，1·或1，2-)次環戊基。"經取代之次環烷基”意謂如上所述 之次環烷基經一或多個"環基取代基"取代（較佳為丨至3 個）’其可為相同或不同，且如本文所定義者。 %狀"或”環基"係意謂如本文中定義之環烷基、環烯 基雜環基或雜環烯基。’’低碳”一詞，當伴隨著環狀一詞 使用時，係與本文關於環烧基' 環烯基、雜環基或雜環稀 基所指出者相同。 裱基氧基"係意謂環基_〇_基團，其中環基係如本文中 所述。舉例之環烧氧基包括環戊氧基、環己氧基、㈣基 氧基、五亞甲基硫化氧基、四氫㈣基氧基、四氫苯硫基 氧基、四氫吡咯基氧基、四氫呋喃基氧基或、氧雙環并 [2.2.1]庚烷基氧基、羥基四氫哌喃基氧基、羥 并[2.2·!]^基氧基p I" ”環基亞磺醯基"係意謂環基_S(〇)_基團，其中環基係如 143110.doc •33· 1378927 本文中所述。 · ••環基磺醯基"係意謂環基_s(0)2•基團，其中環基係如本 文中所述。 "環基硫基"係意謂環基-s_，其中環基係如本文中所述。 "重氮基”係意謂二價_n=n-基團。 "可置換之部份基團"係意謂一種基團，在與如本文中定 義之L有關聯之情況中，其易遭受到親核性攻擊，被單-或 一取代之胺部份基團置換，於一種有助於該攻擊之作用劑 例如偶合㈣在或不存在下…卜舉狀可置換部份基目鲁 包括經基、脂族氧基、商基、N_氧基玻王白酿亞胺、酿氧其 等》 土 "有效1"係意謂根據本發明之化合物/組合物有效產生所 要治療效果之量。 "稠合芳基環埽基”係意謂如本文中定義之稍合芳基與環 稀基。較佳稍合芳基環烯基係為其中之芳基為苯基，且環 稀基由約5至約6個環原子所組成者。作為變數之_合芳基 環稀基，可經過環系統之任何能夠結合之原子進行社人:φ ”經取代之稠合芳基環稀基，，意謂如上所述之稠合芳基環缔 基經一或多個”環基取代基"取代（較佳為〗至3個），其可為 相同或不同，且如本文所定義者。舉例之稠合芳基環稀基 包括1，2-二氫次莕基 '次茚基等。 "稠合芳基環烷基"係意謂如本文中定義之稠合芳基與環 烷基。較佳稠合芳基環烷基為其中之芳基為笨基，且較’ 基由約5至約6個環原子所組成者。作為變數之揭合芳基環 143110.doc -34· 1378927 ^代之系統之任何㈣結合之原子進行結合。” ^-或/ $基我基"意謂如上所述之稠合芳基環炫 ^或不Γ"環基取代基"取代（較佳為1至3個），其可為 包括i 2 3 4 ’且如本文所定義者。舉例之稠合芳基環烧基 〇祜i，2,3,4-四氫次莕基等。 =芳基雜環稀基"係意謂如本文中定義之稍合芳基與 雜以基。較佳稠合芳基雜環稀基為其令 且雜環烯基由％ s sθ7 土马本基 Π^ 個環原子所組成者。作為變數之稠 = 衣缔基’可經過環系統之任何能夠結合之原子進 行結合。在稠合芳基雜環埽基之雜環埽基部 字首之氮、氧4炉名益，总—μ , m名柄，係定義至少-個氮、氧或硫原 立’固別存在作為環原子。"經取代之料芳絲環婦基" 思谓如上所述之稍合芳基雜環浠基經一或多個，，環基取代 基"取代（較佳為1至3個），其可為相同或不同，且如本文所 定義者1以基雜料基之氮原子，可為驗性氮原子。 稍合芳基雜環烯基之雜環稀基部份之氮或硫原子，亦可視 情況被氧化成其相應之义氧化物、§_氧化物或Μ.二氧化 物。舉例之稠合芳基雜環烯基包括3H•二氫料基、出2 酮基如林基、2叫-_基異俩基、基' 3,4- 二氫料基、m異料基、3,4_:氫異料基等。 :’稠合芳基雜環基"係意謂如本文令定義之稠合芳基與雜 %基。較佳稠合芳基雜環基為其中之芳基為苯基且雜環 ，由約5至約6個環原子所組成者。作為變數之_合芳基雜 壤基’可經過環系統之任何能夠結合之原子進行結合。在 143110.doc •35- 稠合芳基雜縣之雜環基部份之前，作為字首之氮 硫名稱，4 A M ^ ^ :^義至少-個氮、氧或硫原子，個別存在作為 :就。"經取代之稠合芳基雜環基"意謂如上所述之稠合 方土雜環基經-或多個"環基取代基”取代(較佳為i至3 :二’其可為相同或不同，且如本文所定義者。稍合芳基 严衣土之氮原子，可為鹼性氮原子。稠合芳基雜環基之雜 ^基部份之氮或硫原子，亦可視情況被氧化成其相應之义 "物S_氧化物或S，S_二氧化物。舉例之稠合芳基雜環 基環系統包括二氫Μ基、1，2,3,4-四氫異如林、 四=喳啉、1Η-2,3·二氫異+朵·2_基、2,3_二氫笨并⑺異 引朵-2-基、ι，2,3,4-四氫苯并[g]異喳啉基_2_基等。 稠〇雜芳基環烯基”係意謂如本文中定義之稠合雜芳基 與環縣。較佳稍合雜芳基環烯基為其中之雜芳基為苯 基，且環烯基由約5至約6個環原子所組成者。作為變數之 稠合雜芳基環烯基，可經過環系統之任何能夠結合之原子 進行結合。在稠合雜芳基環烯基之雜芳基部份之前，作為 子首之氮、氧或硫名稱，係定義至少一個氮、氧或硫原 子，個別存在作為環原子。"經取代之稠合雜芳基環烯基" w明如上所述之稠合雜芳基環烯基經一或多個"環基取代 基"取代（較佳為1至3個），其可為相同或不同，且如本文所 定義者。稠合雜芳基環烯基之氮原子可為鹼性氮原子。稠 合雜芳基環稀基之雜芳基部份之氮原子，亦可視情況被氧 化成其相應之Ν-氧化物。舉例之稠合雜芳基環烯基包括 5,6-二氫喳啉基、5,6-二氫異喳啉基、5,6_二氫喳喏啉基、 143110.doc •36- 1378927 5,6-二氫4吐琳基' 4,5•二氫.苯并㈣基 苯并呤唑基等。 ’ 一_虱 ’:稠合雜芳基環炫基”係意謂如本文令定義之祠合雜芳基 與壞烷基。較佳稠合雜芳基 方巷衣沉基為其令之雜芳基由約5 至約6個㈣子所組成，而環貌基由約5至約6個環原子所 組成0作為變數之稠合雜菩其卢—甘 何能夠結合之原子:二:Γ基，可經過環系統之任 ._ 仃，，·°5。在稠合雜芳基環烷基之雜芳 基部伤之如，作為字首之氮'氧或硫名稱，係定義至少一 硫原1’個別存在作為環原子。”經取代之稠 二方以^ ^胃如上所述之，合料基環 =個”環基取代基"取代（較佳為⑴個），其可為相同或 為驗文所定義者。揭合雜芳基環院基之氮原子可 原子。稍合雜芳基環烧基之雜芳基部份之氮原 視情況被氧化成其相應之氧化物。舉例之稠合 =方基Μ基，包括5,6,7細氫料基、5,6,7,8_四氯異 …林基、5,6,7,8-四氫㈣啦基、5,6,7,8_四氫如坐基、 4’5,6,7-四氫-1Η·苯并咪唑其、 氧…氮心：^ 酮基等。 丨，3--風味唾-[4,5]·,比咬-ί α盘祠雜m基雜環締基 "係意謂如本文中定義之稍合雜芳 ^哀稀基。較佳稠合雜芳基雜環稀基為其中之雜芳基 至約6個環原子所組成，而雜環烯基由約5至約6個環 且成者。作為變數之揭合雜芳基雜環稀基，可經過 任何能夠結合之原子進行結合。在稍合雜芳基雜 143110.doc -37- 1378927 環稀基之雜芳基或雜環烯基部份之前，作為字首之氮、氧 或硫名稱’係定義至少一個氮、氧或硫原？，個別存在作 存環原子。"經取代之稠合雜芳基雜環稀基”意謂如上所述 之稠合雜芳基雜環烯基經一或多個"環基取代基”取代（較佳 為1至3個），其可為相同或不同，且如本文所定義者。稍 合雜芳基氮雜環稀基之氮原子，可為鹼性氮原+。稠合雜 芳基雜環基之雜芳基部份之氮或硫原+，亦可視情況被氧 化成其相應之N_氧化物。稍合雜芳基雜環基之雜芳基或雜 環基部份之氮或硫原子，亦可視情況被氧化成其相應之& 氧化物、S-氧化物或S，S_二氧化物。舉例之稍合雜芳基雜 核稀基’包括7’8_二氣[U]峰唆基、U二氫[2，？]·峰啶 基、6,7-二氫·3Η4。坐并[4,5_c风啶基2_二 氫嗉啶基、丨，2-二氫_2,6_嗉啶基等。 铜6雜芳基雜環|係、意謂如本文中定義之稍合雜芳基 與雜環基。較佳稠合雜芳基雜環基為其中之雜芳基由約5 至約6個環原子所組成，而雜環基由約5至約6個環原子所 組成者。作為變數之稠合雜芳基雜環基，可經過環系統之 任何旎夠結合之原子進行結合。在稠合雜芳基雜環基之 雜芳基或雜環基部份之前 作為字首之氮、氧或硫名 稱，係疋義至少一個氮、氧或硫原子，個別存在作為環 原子。經取代之稠合雜芳基雜環基"意謂如上所述之稠合 雜方基雜環基經一或多個"環基取代基"取代（較佳為丨至3 個）其可為相同或不同，且如本文所定義者。稠合雜芳 143110.doc -38 ‘ 1378927 基雜環基之U子以㈣氮原子。稠合㈣基雜環基之 雜芳基部份之氮或硫原+，亦可視情況被氧化成其相應之 N-氧化物。稠合雜芳基雜環基之雜芳基或雜環基部份之氮 或硫原子’亦可視情況被氧化成其相應之Ν·氧化物、s_氧 化物或S，S-二氧化物。舉例之稍合雜芳基雜環基，包括
2,3-二氫-观4 [3,4帅奎琳_2_基、υ，3,4四氫苯并 [bni，7]嗉啶-2-基、丨’2,3,4·四氫苯并[b][i6]喑啶_2基、 1，2,3,4-四-氫-9H-P比咬并[3,4帅5|噪_2基、以，^-四氮_ 9H4啶并[4,3-bH哚·2_基、2,3_二氫_m_吡咯并μ b]♦朵-2-基、1Η-2,3,4,5-四氫一氮七圜烯并[34bH哚_2· 基、出-2,3,4,5-四-氫一氮七園烯并[4,3_1)]十朵3基、出_ 2,3,4,5-四氫-氮七圜烯并[4,5_b]吲哚_2_基、5,6,7,8-四氫 [1，7]4 啶基、1，2,3,4·四氫[2,7]嗉啶基、2,3·二氫[14]二氧 陸圜烯并[2,3-b]峨啶基、2,3_二氫[M]二氧陸園烯并[2,3· b]吡啶基、3,4-二氫-2H小氧[4,6]二氮莕基、4,5,6,7_四氫_ 3H_咪唑并[4,5-C]吡啶基、6,7_二氫[5 8]二氮莕基、 1，2,3,4-四氫[1，5]-啼啶基、^3 4·四氫[16]嗉啶基、 1，2,3,4-四氫[1，7]喑啶基、四氫π，8]喑啶基、 1,2,3,4-四氫[2,6]喑啶基等。 "鹵基"係意謂氟基、氣基、溴基或碘基。較佳為氟基、 氣基或溴基’而更佳為氟基或氣基。 "雜芳醯基"係意謂雜芳*_c〇_基團，其中雜芳基係如本 文中所述。舉例之雜芳醯基包括硫苯甲醯基、菸鹼醯基、 吡咯-2-基羰基、1-與2-莕甲醯基、吡啶醯基等。 143110.doc •39· ”雜芳基”係意謂芳族單環狀或多環狀環系統，具有約5 =約14個碳科’較佳為約5至約職碳原子，其中在此 衣系統中之一或多個碳原子係為碳以外之雜元素，例如 :氧或瓜此娘系統較佳含有1至3個雜原子。此環系統 衣^較佳％大小’係包含約5至約6個環原子。被雜芳基所 涵蓋者’係為稠合雜芳基環稀基、稍合雜芳基環烧基、稠 合雜芳基雜環縣及稠合雜芳基雜環基，如本文中定義， 田工過其雜芳基部份基團結合時。經取代之"雜芳基"意味 如上所述之雜芳基被一或多個"環基取代基"取代（較佳為】 π) ’其可為相同或不同’且係如本文所定義者。於雜 芳基刖作為字首之氮、氧或硫名稱，係定義至少一個氮、 氧或硫原子，個別存在作為環原子。雜芳基之氮原子可為 驗性氮原子，且亦可視情況被氧化成其相應之N-氧化物。 舉例之雜芳基與經取代之雜芳基，包括吡畊基、噻吩基、 異嗓嗤基、以基、㈣基 ' 吱。占基、㈣基、^心塞 二唑基、。荅啡基，啉基、呔畊基、咪唑并[…]吡 咬、咪唾并基、笨并咬絲、氣♦朵基、笨并 咪。坐基、苯并，塞吩基”塞吩并咐咬基”墓吩并痛咬基吡 哈并口比咬基、咪唾并Μ基、笨并氮♦果基、三畊 基、笨并嘍唑基、呋喃基、咪唑基、…哚基、吲畊基、異 巧啥基、異如林基、異，塞„坐基、口号二峻基”比呼基、嗒畊 土比圭基、吡啶基、嘧啶基；吡咯基、<4唑淋基、峻ρ林 基、U3,4-噻二唑基、嘍唑基、喳吩基、三唑基等。較佳 雜方基為P比U井基。 143110.doc "雜芳基重氮基，，係意謂雜芳基_偶氫基· 偶氮基均如本文定義。 八史雜方基與 雜方一I係’意謂衍生自雜芳基之二價基圏，其 基係如本文中所述。舉例 ，方 啶二基。 ，方一基為視情況經取代之咐 "雜芳基俩基胺甲醒基"係意謂雜芳基·s〇2_n _ 土團，其中雜芳基係如本文中所述。 •’雜環稀基••係意謂非芳族單 衣狀或多環狀烴環系統，且 有、力？約1〇個碳原子，較佳為約5至約個碳原子， 在此環系統t之一或多個砝 、 .., '夕個石反原子為碳以外之雜元素，例如 =、^硫原子’且其含有至少—個碳_碳雙鍵或碳-氮雔 鍵。此環系統較佳含有1至3個 ^ 又 #大，丨、，^ a __'子°此環纟、《之較佳 ，二"約5至約6個環原子；且此種較佳環大小亦 ^冉:低石反。被雜環稀基所涵蓋者為稠合芳基雜環稀基 芳基雜環稀基，如本文中定義，當經過其雜環埽 ^ 團結合時°於雜環婦基之前作為字首之氮、氧或 係Ά義至少—個氮、氧或硫原子，個別存在作為 "經取代之雜環稀基”意謂如上所述之雜環稀基經 一或多個•，環基取代基"取代（較佳為⑴個），其可為相同 或不同’且如本文所定義者。雜環烯基之氮原子可為驗性 ，原子#環烯基之氮或硫原子，亦可視情況被氧化成其 相應之N-氧化物、8_氧化物或•二氧化物。舉例之單環 狀氮雜料基包括丨，2,3,4.四氫心、丨，2^比咬基、 1，4-二氫p比啶基、 ^ 上，么J，6·四虱吡啶、i，4,5,6_四氫·嘧啶、 143110.doc •41 - 13/6^2/ 2-一風吡咯基、3_二氫吡咯基、2•二氫咪唑基 嗤基等。舉例之氧雜環烯基包括3,4.二氫处心 呋痛基及氟基二氫呋哮基。舉例之多環狀轰雜虱 氧雙環扣.2屬料。 = 讀基為7_ 二氯苯硫基與二氣硫代㈣基。—歸基環包括 ，雜環基”係意言胃非㈣鮮單環狀或多環狀環 旦 有約3至約職碳原子，較佳為約5至約】〇個碳原；… ΓΓ㈣L中之一^個碳原子係為碳以外之雜元素1 祕班乳’硫m统較佳含有1至3個雜原子。此環系 二：之較佳環大小，係包含約5至約6個環原子；且此種較 万破稱為低石反。被雜環基所涵蓋者，係為稍合· 與稠合雜芳基雜環基，如本文中定義，當經過 氮^以份基團結合時。於雜環基之前，作為字首之 :在：或硫名稱，係定義至少—個氮、氧或硫原子個別 =為環原子。"經取代之雜環基”意謂如上所述之雜環 ^:或多個"環基取代基..取代（較佳為⑴個），其 =不同’且如本文所定義者。雜環基之氣原子可為驗 =原子。雜環基之氮或硫原子，亦可視情況被氧化成立 :二:-=、s·氣化物或s，s•二氧化物。舉例之單環 其基％，包括六氬峨咬基、四氬心基、六氫 :、嗎揭琳基、硫代嗎福淋基，塞咬咬基、以-二氧伍圜 土、1，4-二氧陸^、四氫呋味基、四氫苯硫基 '四氫硫 代瓜味基等。{3作為經取代之單環狀I雜環基時，係 143110.doc 直接或經過連結基，被至少一個取代基團取代，此部份基 團，為或涵盍，或係被如本文中定義之芳族基團取代；例 芳土雜芳基、芳氧基、雜芳基氧基、芳酿基或其硫嗣 2類似物、㈣醯基或其硫酮基類似物、㈣基氧基雜 芳醯基氧基、芳氧基羰基、雜芳基氧基幾基芳基磺醯 基'雜芳基續醯基'芳基亞續酿基、雜芳基亞崎酿基、芳 基二基、雜芳基硫基、芳基重氮基芳基重氮基、 Y Y N- ^ Y'Y2NC(〇)- . Y'Y2NC(〇)〇. , YiY2NC(〇)NY3.5t Y YNS02-，其中至少一個γ>γ2係為、涵蓋或係被芳基 或雜方基部份基團取代^較佳之連結基包括⑼、⑼· 、低碳统基、低钱氧基、低碳烯基、·〇、_s 、{_(〇)_ ^S(0):、·δ(0)2·、_nr80 (其中r80為氣、院基、環烧基、 ^ 芳烷基雜銥基或雜芳基）。特別較佳之連結基 為-c(0)-及-0C(O)·。"經取代之多環狀氮雜環基，意謂如上 所述之多環狀氮雜環基經_或多個"環基取代基,，取代（較佳 為1至3個）’其可為相同或不同’且如本文所定義者…'經 取代之多環狀氮雜環稀基"意謂如上所述之多環狀氮雜環 稀基經一或多個"環基取代基"取代（較佳為丨至3個），其可 為相同或不同，且如本文所定義者。 ’’次雜環基”係意謂如本文中定義之二價雜環基，具有約 4至約8個碳原子。次雜援发 > | 人雜％基之較佳環大小，係包含約5至 約6個環原子；且此種較佳環大小亦被稱為"低碳"。於次 環烧基上之結合點，包括u…，2_、丨，3•或“'结合樣 式，且在合適之情況下，結合點之立體化學關係，係為順 143110.doc •43- 1378927 式或反式。舉例之次雜環基包括〇1、】 ㈣基與（U-或次四氫吱择基。" ，）n ^ Α π取代之次雜環基" ^月如上所权次雜環基經―❹個,,環基 佳為1至3個），其可為相同或不同，且如本文所定義者 ”水合物"係意謂溶劑合物，其中溶#1分子為Η2〇β "氫化作用不安定性胺保護基·，係意謂如本文中定義之胺 保護基，其易於藉氫化作用移除，而同時對其他試劑保持 相對安定性。較佳氫化作用不安定性胺保護基為Cbz。 ”氫化作用不安；t性酸保護基"係意謂如本文中定義之酸 保護基，其易於藉氫化作用移除，而同時對其他試劑保持 相對安定性。較佳氫化作用不安定性酸保護基為芊基。 "吸濕性"係意謂吸著作用，其意謂水之吸取量或狀態足 以影嚮物質之物理或化學性質（J Swarbrick與J c 抓 編者’醫樂技術百科全書，10，33)。 ’’亞胺性甘胺醯亞胺衍生物"係意謂甘胺酸之亞胺性 Schiff氏鹼，其可用於合成α_胺基酸，天然與非天然兩 者。亞胺酯官能性可含有一或多個不對稱中心，其可在鍵 結形成程序期間幫助立體誘導。此外’此等亞胺性甘胺酿 亞胺衍生物可併入聚合體載體中，以幫助結合合成。亞胺 性甘胺醯亞胺衍生物可經由使甘胺酸酯與適當酮，於酸性 觸媒存在下縮合而製成《反應係藉助於水之移除。亞胺性 甘胺醯亞胺衍生物係為此項技藝中所習知，供使用於 Michael加成合成程序中，例如由Guillena, G等人，】〇rg
Chem. 2000，65，7310-7322所揭示者，併於本文供參考。 143110.doc • 44 - 1378927 根據本發明之亞胺性甘胺醯亞胺衍生物之特定實例包括 選自下式之一者
其中： 為過渡金屬，較佳為CU，更佳為CUU。
R15為視情況經取代之基團； R16為酸保護基，視情況經取代之芳基或視情況經取代 之脂族基團； R17為視情況經取代之芳基’視情況經取代之脂族基 團，
R18為氫、烷基或烷硫基；或視情況經取代之芳基； R17與R18係和該R17與R18所連接之碳一起採用 143110.doc -45· 1378927
(D為固相。 "亞胺性甘胺醯亞胺衍生之加成物”係意謂所形成之化合 物，其中對於Schiff氏鹼部份之氮與羰基部份基團之α_氫 係被移除，並用於形成供鍵結形成於其上之連接處。根據 本發明亞胺性甘胺酿亞胺衍生加成物之特定實例，包括選 自下式之一者
其中： R 、R及尺18係被定義為如在本文亞胺性甘胺醯亞胺衍 生物定義中所述者。 "N-氧基琥珀醯亞胺，，係意謂一種具有下列結構之部份基 9' " 團 ”N-氧化物”係意謂一種具有下列結構之部份基團。 •'病人’’包括人類及其他哺乳動物兩者。 "擬肽"係意謂-種聚合體’其包含胺基酸殘基，經過程 胺鍵結接合在一起。 143110.doc •46- 1378927 "藥學上可接受之酯"係指會在活體内水解之酯類且包 括易在人類體中分解而留下母體化合物或其鹽者。適當酯 基包括例如衍生自藥學上可接受之脂族羧酸類者，特別是 烷酸、烯酸、環烷酸及烷二酸，其中各烷基或烯基部份基 團可有利地具有不超過6個碳原子。舉例之酯類包括甲酸 酯、醋酸酯、丙酸酯、丁酸酯、丙烯酸酯、乙基琥珀酸酯 於本文中使用之"藥學上可接受之前體藥物,，，係指本發 明化合物之前體藥物，其在安全可靠醫療判斷範圍内係適 用於與人類及低等動物之組織接觸，而無不當毒性刺激 性、過敏性回應等，伴隨著合理利益/風險比，及對於其 所意欲之用途有效，以及在可能之情況下為本發明化合物 之兩性離子形式。"前體藥物"一詞係指會在活體内迅速地 轉炙，而產生上式母體化合物之化合物，例如經由在血液 中水解。可於活體内藉由代謝分裂而迅速地轉變之官能 φ 基，係構成與本發明化合物之羧基具有反應性之基團種 類。其包括但不限於以下基團，譬如烷醯基（譬如乙醯 基、丙醯基、丁醯基等），未經取代與經取代之芳醯基（譬 如苯甲醯基與經取代之苯甲醯基）、烷氧羰基（譬如乙氧羰 基）、三烷基矽烷基（譬如三甲基-與三乙基矽烷基）、與二 羧酸（譬如琥珀醯基）形成之單酯類等。由於本發明化合物 之可以代謝方式分裂之基團，易於在活體内分裂，故帶有 此種基團之化合物係充作前體藥物。帶有此等可以代謝方 式分裂基團之化合物，具有之優點是，其可顯示經改良之 1431J0.doc -47· 1378927 生物利用性，由於母體化合物所賦予之提高的溶解度及/ 或吸收速率所造成，而此係由於可以代謝方式分裂之基團 存在所致。充分討論係提供於前體藥物之設計，H.
Bundgaard 編著 ’ Elsevier (1985);酶學上之方法，K. Widder等人編著，大學出版社，42，309-396(1985);藥物 5又计與發展之教科書’ Kr〇gSgaar(j-Larsen與H. Bandged編 著’第5章；"前體藥物之設計與應用"m-ei (1991);先 進藥物傳輸回顧 ’ H.Bundgard，8，1-38，（1992) ; J. Pharm. Sci.，77, 285(1988) ; Chem. Pharm. Bull·，N. Nakeya等人， 32, 692(1984);作為新穎傳輸系統之前體藥物，T. mgUChi 與V_ Stella，14 A.C.S·論集系列，及藥物設計上之生物可逆 載體’ E.B.Roche編著’美國醫藥協會與Pergam〇n出版 社，1987，其係併於本文供參考。 ••藥學上可接受之鹽，，係指本發明化合物之相對無毒性無 機與有機酸加成鹽及鹼加成鹽，此等鹽可在化合物之最後 單離與純化期間當場製成。特定言之，酸加成鹽可經由個 別使已經純化之化合物，呈其自由態鹼形式，與適當有機 或無機酸反應’及單離如此形成之鹽而製成。舉例之酸加 成鹽，包括氫溴酸鹽、鹽酸鹽、硫酸鹽、酸性硫酸鹽、鱗 酸鹽、硝酸鹽、醋酸鹽、草酸鹽、戊酸鹽、油酸鹽、棕櫚 酸鹽、硬脂酸鹽、月桂酸鹽、硼酸鹽、苯曱酸鹽、乳酸 鹽、碟酸鹽、甲苯續睃鹽、檸檬酸鹽、順丁稀二酸鹽、反 丁烯二酸鹽、琥珀酸鹽、酒石酸鹽、莕酸鹽、曱烷磺酸 鹽、葡庚糖酸鹽、乳糖酸鹽、胺基磺酸鹽、丙二酸鹽、柳 143110.doc -48- 1378927 酸鹽、丙酸鹽、亞曱基-雙_β_羥基莕甲酸鹽、龍膽酸鹽、 羥乙磺酸鹽、二-對-甲苯甲醯基酒石酸鹽、甲烷磺酸鹽、 乙烷磺酸鹽'苯磺酸鹽 '對_甲苯磺酸鹽、環己基胺基磺 酸鹽及金雞納酸月桂基磺酸鹽等。參閱，例如SMBerge 等人，"醫藥鹽"，J. Pharm. Sci·，66，1-19(1977)，其係併
於本文供參考。鹼加成鹽亦可經由個別使已經純化之化合 物，呈其酸形式，與適當有機或無機鹼反應，及單離如此 形成之鹽而製成。鹼加成鹽包括藥學上可接受之金屬與胺 sin 鹽。適當金屬鹽包括鈉、鉀'鈣、鋇、辞、鎂及鋁鹽… 與鉀鹽為較佳。適當無機驗加成鹽係製自金屬驗，其包括 氫化納、氫氡化鈉、氫氧化鉀、氫氧化鈣、氫氧化鋁、氫 氧化裡、氫氡賴、氫氧化鋅等。適當胺驗加成鹽係製自 胺類’其具有足夠驗度以形成安定鹽’隸佳係包括常用 於醫藥化學之胺類’因其具有低毒性及對於醫藥用途之可 接受性。其係為氨、乙二胺、N_甲基葡萄糖胺、離胺
酸、精胺酸、鳥胺酸、膽鹼、Ν，Ν|·二节基乙二胺、氣普 魯：因、i乙醇胺、普魯卡因、Ν_苄基苯乙胺、二乙胺、 六氫吡畊、參(羥’基)_胺基甲烷、氫氧化四甲基銨、三乙 胺、二爷胺、麻黃胺、脫氫松香胺、Ν•乙基六氫㈣1 胺、四甲基銨、四乙基銨、甲胺、二甲胺、三甲胺、乙 胺’鹼性胺基酸’例如離胺酸與精胺酸，及二環己基胺 等。 "環基取代基"係意謂連接 基’其包括芳基、雜芳基、 至芳族或非芳族環系統之取代 羥基、烷氧基、環基氧基、芳 143110.doc -49- 1378927 氧基、雜芳基氧基、醯基或其硫酮基類似物、環基羰基或 其硫酮基類似物、芳醯基或其硫酮基類似物、雜芳醯基或 其硫酮基類似物、醯氧基、環基羰基氧基、芳醯基氧基、 雜芳醯基氧基、自基、硝基、氰基、羧基（酸）、-(：(0)>^0^1-、-C(0)-CH20H、-C(0)-CH2SH、-C(0)-NH-CN、磺基、 磷基、烷基磺醯基胺甲醯基、四唑基、芳基磺醯基胺甲醯 基、N-曱氧基胺曱醯基、雜芳基磺醯基胺甲醯基、3-羥 基-3-環丁烯-1，2-二酮、3,5-二酮基-1，2,4-噁二唑烷基或羥 基雜芳基如3 -經基異鳴°坐基、3 -經基-1 -甲基p比。坐基、烧氧 羰基、環基氧基羰基、芳氧基羰基、雜芳基氧基羰基、烷 基磺醯基、環基磺醯基、芳基磺醯基、雜芳基磺醯基、烷 基亞磺醯基、環基亞磺醯基、芳基亞磺醯基、雜芳基亞磺 醯基、烷硫基、環基硫基、芳基硫基、雜芳基硫基、環 基、芳基重氮基、雜芳基重氮基、硫醇、YWM-、 Y^^CCO)- 、 Y'Y2NC(0)0- 、 YWSNCCCONY3-或 YWMSOr，其中Y1、Y2及Y3獨立為氫、烷基、芳基或雜 芳基，或對其中取代基為υ1υ2ν-而言，則Υ1與Υ2之一可為 如本文中定義之醯基、環基羰基、芳醯基、雜芳醯基、烷 氧羰基、環基氧基羰基、芳氧基羰基或雜芳基氧基羰基， 而Υ1與Υ2中之另一個係如先前定義，或對其中取代基為 Y'Y^CCO)- 、 y】y2nc(o)o- 、 Y^NC^CONY3-或 Y1Y2NS02-而言，Y1與Y2亦可和該Y1與Y2經過其上而連接 之Ν原子，一起採用而形成4至7員氮雜環基或氮雜環烯 基。當環系統為飽和或部份飽和時，”環基取代基"進一步 143110.doc -50- 1378927 包括亞曱基（h2c=)、酮基（0=)及硫酮基（s=)。酸性/醯胺環 基取代基係為羧基（酸）、-C(0)NH0H-、-C(0)-CH20H、 -C(0)-CH2SH、-C(0)-NH-CN、磺基、磷基、烷基磺醯基 胺曱醯基、四唑基、芳基磺醯基胺曱醯基、N-甲氧基胺甲 醯基、雜芳基磺醯基胺甲醯基、3-羥基-3-環丁烯-1，2-二 酮、3,5-二酮基-1，2,4-噁二唑烷基或羥基雜芳基如3-羥基 異噁唑基、3-羥基-1-曱基吡唑基及YWhCO-。非酸性極 性環基取代基係為羥基、酮基（0=)、硫酮基（S=)、醯基或 其硫酮基類似物、環基羰基或其硫酮基類似物、芳醯基或 其硫酮基類似物、雜芳醯基或其硫酮基類似物、烷氧羰 基、環基氧基羰基、芳氧基羰基、雜芳基氧基羰基、醯氧 基、環基羰基氧基、芳醯基氧基、雜芳醯基氧基、烷基磺 臨基、環基橫酿基、芳基確醯基、雜芳基續醯基、烧基亞 磺醯基、環基亞磺醯基、芳基亞磺醯基、雜芳基亞磺醯 基、硫醇、YiY2N-、Y〗Y2NC(0)-、YWaNC^COO-、 υ'υ2ν(：(ο)νυ3-或yYnscv。 "溶劑合物”係意謂本發明化合物與一或多種溶劑分子之 物理締合作用。此物理締合作用包括氫鍵。於某些情況 中，溶劑合物能夠單離，例如當一或多個溶劑分子被併入 結晶性固體之晶格中時。”溶劑合物”涵蓋溶液相與可單離 之溶劑合物。舉例之溶劑合物包括水合物、乙醇化物、曱 醇化物等。 具體實施例 參考本文中所述之本發明，下文係為與其相關之特定且 143110.doc 51 1378927 較佳之具體實施例。 根據本發明之—項特定具體實施例，係為其中R。為一個 鍵結。 根據本發明之另—項特定具體實施例，係為其中二 氟亞甲基。 ” 根據本發明之-項特定具體實施例’係為其中r1為氣或 視情況經取代之低碳脂族基團。 根據本發明之另—項特定具體實施例，係為其中Ri為氮 或低故烧基。 根據本發明之-項較佳具體實施例，係為其中r1為氣。 根據本發明之一項特定具體實施例’係為其中r2為視情 況經取代之低碳脂族基團或視情況經取代之單環狀基團。 根據本發明之另一項特定具體實施例，係為其中R2為視 情況經取代之低钱基、視情況經取狀低碳烯基或視情 況經取代之單環狀環烷基。 根據本發明之另一項特定具體實施例，係為其中r2為羧 甲基、1·羧基-2-苯基乙基、環丙基、環丁基、丨環己基乙 基、1-苯基乙基、丁-2-基、1-峨啶·4_基乙基、丙烯_3基 或3-甲基丁-2-基；更佳為環丙基。 根據本發明之一項特定具體實施例’係為其中r3為視情 況經取代之低碳脂族基團亞曱基。 根據本發明之另一項特定具體實施例，係為其中R3為視 情況經鹵基取代之低碳（烷基或烯基）亞甲基。 根據本發明之一項較佳具體實施例，係為其中R3為丙基 I43M0.doc -52- 1378927 亞曱基、2,2-二氟乙基亞甲基、2,2,2_三氟亞曱基或丙烯-3-基亞甲基；更佳R3為丙基亞曱基或2,2二氟乙基亞甲 基；更佳R3為丙基亞曱基。 根據本發明之一項特定具體實施例，係為其中R4為氫或 視情況經取代之低碳脂族基團。 根據本發明之另一項特定具體實施例，係為其中R4為氣 或低碳烧基。 根據本發明之一項較佳具體實施例，係為其中R4為氫。 根據本發明之一項特定具體實施例，係為其中R5為視情 況經取代之低碳脂族基團亞甲基。 根據本發明之另一項特定具體實施例’係為其中R5為視 情況經（苯基、羧基、羧醯胺基或烷氧羰基）取代之低碳（烷 基或烯基）亞甲基。 根據本發明之一項較佳具體實施例，係為其中R5為甲基 亞甲基、異丙基亞甲基、第三-丁基亞甲基、丁 _2_基亞曱 基、丁基亞甲基、苄基亞甲基、3_甲基丁基亞曱基、2•甲 基丙基亞甲基、羧曱基亞甲基、羧醯胺基曱基亞甲基、芊 氧羰基甲基亞曱基、苄氧羰基丙基亞甲基或苯基丙烯_3基 亞曱基；更佳R5為異丙基亞甲基或第三·丁基_亞甲基。 根據本發明之一項特定具體實施例，係為其中R6為氳或 視情況經取代之低碳脂族基團。 根據本發明之另一項特定具體實施例，係為其中R6為氫 或低碳烷基。 根據本發明之一項較佳具體實施例，係為其中R6為氫。 143110.doc -53· 根據本發明之一項特定具體實施例，係為其中r7係視情 況經取代之低碳脂族基團亞Μ、視情況經取代之低碳環 狀基團亞Μ或視情I經取代之單環狀（芳基或雜芳基）亞 曱基。 根據本發明之另-項特定具體實施例，係為其中r7為視 障况I取代之低碳烷基亞曱基、視情況經取代之低碳環烷 基亞曱基或視情況經取代之苯基亞曱基。 根據本發明之—項較佳具體實施例，係為其中R7為甲基 亞甲基 '異丙基亞曱基、正_丙基亞甲基、苯基亞曱基、 環己基亞甲基、環戊基亞甲基、第三-丁基亞甲基、第二_ 丁基亞甲基、環己基曱基亞曱基或苯基曱基亞曱基；更佳 為異丙基亞曱基、環己基亞甲基、環戊基亞曱基、第三_ 丁基亞曱基或第二· 丁基亞甲基。 根據本發明之一項較佳具體實施例’亦為其中各R3、汉5 及R7為單取代之亞甲基。 根據本發明之一項較佳具體實施例，亦為其中R3為單取 代之亞曱基，且在連接至-C^CO-RG-qCO-NW部份基團之 碳上具有（S)組態。 根據本發明之一項特定具體實施例，係為其中R8為氫或 視情況經取代之低碳脂族基團。 根據本發明之另一項特定具體實施例，係為其中Μ為氫 或低兔烧基。 根據本發明之一項較佳具體實施例，係為其中r8為氫。 根據本發明之一項特定具體實施例，係為其中R9為梘情 U3110.doc • 54· 1378927 況經取代之低碳脂族基團或視情況經取代之單環狀芳族基 團。 根據本發明之另一項特定具體實施例，係為其中R9為視 情況經取代之低碳烷基或視情況經取代之單環狀雜芳基^ 根據本發明之另一項特定具體實施例，係為其中r9為視 情況經（羧基、（低碳烷基）s〇2NH_、（低碳烷基）HNC〇·、羥 基、笨基、雜芳基或（低碳烷基）0C(0)NH_)取代之低碳烷 基或視情況經取代之單環狀雜芳基。 根據本發明之另外一項較佳具體實施例，係為其中…為 被（單-或二-)Me0C(0)NH-取代之低碳燒基；更佳為丨，2_二 (MeOC(O)NH)乙基或 l_(Me〇C(0)NH)乙基。 根據本發明之一項較佳具體實施例，係為其中R9為經 (羧基、（低碳烷基）HNCO-或四唑基）取代之低碳烷基；更 佳3-羧基丙基、2_四唑·5_基丙基、3_(N_甲基羧醯胺基）丙 基或3-羧基_2,2_二曱基丙基；更佳為3羧基丙基、2四唑_ 5-基丙基或3-(N-曱基羧醯胺基）丙基。 根據本發明之另一項較佳具體實施例，係為其中R9為視 情況經取代之低碳烷基；更佳為丨羥基_2笨基乙基、曱 基、異丙基或第三-丁基；更佳為甲基、異丙基或第三_丁 基。 根據本發明之另一項較佳具體實施例，係為其中Μ係選 自包括 143110.doc •55-
ο NH
根據本發明之又再另一項較佳具體實施例，係為其中r 為吡畊基。 根據本發明之一項特定具體實施例，係為其中r1〇為氫 或視情況經取代之低碳脂族基團。 根據本發明之另一項特定具體實施例，係為其中Rl0為 氫或低碳烧基。 根據本發明之一項較佳具體實施例，係為其中Rl0為 143110.doc •56-
Ιό/^21
根據本發明之-項較佳具體實施例，係為其中1Q為 經取代之雜環基時，係為經取代之四μ哈基。 實施例，係為其中 〇為 根據本發明之一項較佳具體
經取代之單環狀氮雜環基時，係
X 〇^〇ΛΓ 為視情況經取代 之
Ν 或視情況經取代之& ，其中 〜為尺2’包括芳族部份基 團；更佳 經取代之 為視情況經取代 At9人。 0。 之 Ν- '0 ’進一步較佳為視情 況
視情況經取代之
其他較佳
或
143110.doc •57· 1378927 根據本發明之另-項較佳具體實施例，係為其中〇 當為視情況經取代之多環狀氮雜環基時1為視情況經取 .Ο 〇 代之;更佳為視情況經取代之〇。關於 特定取代基為羥基、氟基或酮基。 Ν 根據本發明之另一項較佳具體實施例，係為其中 當為視情隨取代之多環狀氮雜環烯基時，係為視情況經 取代之N;更佳為〇;進一步較佳為ϋ。 根據本發明之另一項較佳具體實施例，係為其中 當為視情況經取代之多環狀氮雜環烯基時，
承马視情況經 取代之 根據本發明之一項較佳具體實施例，係 /、中連接至 係 之-C(〇)-N(R4)-R3-C(O)R0C(O)NR2R】部份基團 連接對氮原子為α之碳。 根據本發明之一項較佳具體實施例，
你為其中I 為-C(0)-或-〇c(〇)_。 根據本發明之一項較佳具體實施例’係為其 ，、Τ Π Q 0 根據本發明之另一項較佳具體實施例，係為其中、 、'^ η 為 1。 H3110.doc 1378927 根據本發明之一項較佳具體實施例，係為其中R11為 -C02R13 〇 根據本發明之一項較佳具體實施例，係為其中R12為
根據本發明之一項特定具體實施例，係為其中R13為視 情況經取代之脂族基團。 根據本發明之另一項特定具體實施例，係為其中R13為 烧基。 根據本發明之一項較佳具體實施例，係為其中R13為低 碳烧基。 根據本發明之另一項較佳具體實施例，係為其中R13為 曱基。 根據本發明之一項較佳具體實施例，係為其中R14 為-co2r16。 根據本發明之一項特定具體實施例，係為其中R15為烷 基。 根據本發明之一項較佳具體實施例，係為其中R15為低 碳烧基。 根據本發明之一項較佳具體實施例，係為其中R15為曱 基。 根據本發明之一項特定具體實施例，係為其中R16為視 情況經取代之脂族。 143110.doc -59- 1378927 係為其中R16為 根據本發明之另一項特定具體實施例 烷基。 ’係為其中R16為低 ，係為其中H16為第 根據本發明之一項較佳具體實施例 碳燒基^ 根據本發明之一項輓佳具體實施例 二-Bu。 根據本發明之一項待定具體實施例，係為其中R】7為視 情況經取代之芳基。 根據本發明之一項铰佳具體實施例，係為其中r"為苯 根據本發明之一項待定具體實施例，係為其中尺〗8為視 情況經取代之芳基。 根據本發明之一項較佳具體實施例，係為其中rU為苯 基。 根據本發明之-項特定具體實施例，係為其中P。係選自 包括BOC、CBz及-C02烧基。 根據本發明之-項較佳具體實施例，係為其中p。為 涵蓋本文中所指稱之特定與較佳 應明瞭的是’本發明係 基團群之所有適當組合。
根據本發明之特定化合物 物 A-FH 係選自連續包括下列之化合 143110.doc 1378927
143110.doc -61 - 1378927
143110.doc •62- 1378927
143110.doc -63- 1378927
143110.doc • 64 · 1378927
143110.doc ·65· 1378927
143110.doc -66· (S' 1378927
143110.doc -67- 1378927
F
143110.doc -68 - 1378927
143110.doc ·69· 1378927
143110.doc -70- 1378927
143110.doc -71 - 1378927
BY, 143ll0.doc -72- 1378927
143110.doc ·73· 1378927
143110.doc *74- 1378927
143110.doc ·75· 1378927
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143110.doc •78 1378927
143110.doc •79- 1378927
143110.doc ·80· 1378927
DU,
143110.doc •81- 1378927
143110.doc -82- 1378927
ΕΚ, 143110.doc 83^ 1378927
ΕΝ,
ΕΟ,
ΕΡ, 143110.doc -84-
/ 1378927
EQ,
ES,
143110.doc 85- 1378927
143110.doc -86 - 1378927
143110.doc -87- 1378927
FH, 或其醫藥上可接受之鹽或前體藥物，或此種化合物之溶劑 合物，其鹽或其前體藥物。 較佳化合物為 S、U、BW、BX、BY、BZ、CE、CU、 CW、CY、DZ、EA、EC、EJ、FH、EW、EO、EZ、FG及 ΕΝ，其藥學上可接受之鹽或前體藥物，或此種化合物之 溶劑合物、其鹽或其前體藥物。 本發明另一較佳具體實施例係選自下列之化合物：
AN. 143110.doc -88- 1378927
143110.doc -89- 1378927
143110.doc -90· 1378927
143110.doc •91 - 1378927
F F
BL, 143110.doc -92- 1378927
143110.doc ·93· 1378927
143110.doc -94- 1378927
143110.doc -95- 1378927 1431I0.doc 1378927
143110.doc 97- 1378927
Ο 或其醫藥上可接受之鹽或前體藥物，或此種化合物之溶劑 合物’其鹽或其前體藥物。 本發明另一較佳具體實施例為下式之化合物：
或其醫藥上可接受之鹽或前體藥物，或此種化合物之溶劑 合物’其鹽或其前體藥物。 本發明另一較佳具體實施例為式1之化合物，其中： 為一個鍵結； R1為氫； R2為視情況經1至3個脂族基團取代基取代之低碳烷基； 或視情況經1至3個環狀基團取代基取代之低碳環烷基； R3及R5各獨立為視情況經1至3個脂族基團取代基取代之 亞甲基； R4、R6、R8及R丨0為氫； R7為經環烷基、低碳烷基或芳基取代之亞甲基；或經環 烷基、低碳烷基或芳基取代之（1，1-或1，2-)環烯基； R9為視情況經1至3個脂族基團取代基取代之低碳烷基； 143110.doc •98· 1378927 或視情況經1至3個環狀基團取代基取代之雜芳基；或視情 況經1至3個環狀基團取代基取代之雜環基； 為視情況經1至3個環狀基團取代基取代之單環狀 氮雜環基、多環狀氮雜環基、或多環狀氮雜環稀基；及 L為-C(〇)_、_OC(〇)… 本發明另—較佳具體實施例係選自由下列組成之群之化 合物：
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143110.doc • 100- S' 1378927
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CJ,
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DC. 143110.doc -110- 1378927
143110.doc -Ill - 1378927
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143110.doc 113· 1378927
EA,
143110.doc •114·
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EL,
EM,
EO, 143110.doc •115- 1378927
ES，
ET，
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EZ,
143110.doc •117·
1378927 或其醫藥上可接受之鹽或前體藥物，或此種化合物之溶劑 合物，其鹽或其前體藥物》 143110.doc -118- 1378927 本發明另一較佳具體實施例為式1之化合物，其中R9之 視情況經取代之脂族基團、視情況經取代之環狀基團或視 情況經取代之芳族基團係經至少一個雜芳基取代基取代。 本發明另一較佳具體實施例為式化合物，其中…之 視情況經取代之芳族基團為視情況經取代之雜芳基。 本發明另一較佳具體實施例為式丨之化合物，其中R9之 視情況經取代之脂族基團為視情況經取代之烷基雜芳基。 ^ 本發明另一較佳具體實施例為一化合物，其中R9之視情 況經取代之雜芳基團為視情況經一個環基取代基取代之 吡畊基 '四唑基、喳啉基、咪唑基、異吟唑基及吡咚基 (pyradonyl)。 本發明化合物係視情況以鹽提供。醫藥上可接受之鹽， 係為特別令人感興趣的，因其可用於投予前述化合物，以 供醫療目的使用。非醫藥上可接受之鹽，可用於製程中， 供單離與純化目的使用，而於一些情況中，係用於分離本 φ 發明化合物之立體異構物形式。後者對於製自光學活性胺 類之胺鹽，特別是真實的。 在本發明化合物含有羧基或足夠酸性生物電子等排體之 情況中’驗加成鹽可以形成，且僅只是較合宜形式以供使 用；而實際上’此鹽形式之使用，本性上係相當於自由態 酸形式之使用。 而且’在木發明化合物含有鹼性基團或足夠鹼性生物電 子等排體之情況中，酸加成鹽可以形成，且僅只是較合宜 形式’以供使用；而實際上，此鹽形式之使用，本性上係 143110.doc -119· 1378927 相當於自由態鹼形式之使用。 根據本發明方法之一項較佳具體實施例，係為治療患有 HCV感染或與該感染有關聯生理學病症之病人，其包括對 該病人投予藥學上有效量之式合物。 根據本發明治療方法之另一項較佳具體實施例，係為治 療患有HCV感染或與該感染有關聯生理學病症之病人，其 G括對該病人投予藥學上有效量之式丨化合物，且併用藥 學上有效量之另一種抗-HCV治療劑。
本發明之另一項目的係為提供醫藥組合物，其除了一或 多種HCV絲胺酸蛋白酶抑制劑以外，包含-或多種顯示 抗HCV活性之干擾素，及/或一或多種具有抗v活性之 化合物，包括免疫調節化合物，譬如顯示Hcv抗病毒活性 之免疫刺激細胞活素’及藥學上可接受之載劑或稀釋劑。 本發明之另一項目的係為提供一種醫藥組合物，其本身 且自行地’有效用於有利之組合療法，因其包含許多可根 據本發明使用之活性成份。
本發明亦提供套件或單一包裝’其係組合兩種或多種可 用於治療或預防病人中之HCV感染之活性成份。套件可提 供(單獨或併用藥學上可接受之稀釋劑或載劑)式“匕合物， 及另外之活性成份(單獨或併用稀釋劑或載劑)與其他 抗-HCV治療劑。 ’如迄今所使用 明之方法製備。 人中提供治療或 式1化合物可藉由應用或修改已知方法 或在文獻中所述者’或藉由此處根據本發 本發明之另一項目的係為在有需要之病 1431IO.doc -120- 1378927 預防HCV感染之方法，其包括對該病人投予藥學上有效量 之組合’此組合為一或多種Hcv絲胺酸蛋白酶抑制劑；： 或多種顯示抗-HCV活性之干擾素；及/或—或多種且 抗-HCV活性之化合物，包括免疫調節化合物譬如顯示 HCV抗病毒活性之免疫刺激細胞活素。 本發明之另-項目的係為—或多種卿絲胺酸蛋白酶抑 制劑’且併用一或多種顯示抗hcv活性之干擾素，及/或
-或多種具有A-HCV活性之化合物，包括免疫調節化合 物，譬如顯示HCV抗病毒活性之免疫刺激細胞活素，於藥 劑製備上之用it，該藥劑係在有需要之病人中用於治療或 預防HCV感染。 ’一
本發明之另-項目的係為在病人中治療或預防Μν感染 之套件或醫藥包裝，其中該套件或醫藥包裝包含許多個別 容器’其中至少一個該容器含有-或多種HCV絲胺酸蛋白 酶抑制劑’至少另-個該容器含有—或多種干擾素或會引 致顯示抗-HCV活性之干擾素產生之化合物（單獨或併用藥 學上可接受之載劑或稀釋劑），及視情況，至少另一個該 :器含有-或多種具有抗-HCV活性之化合物(單獨或併用 藥學上可接受之載劑或稀釋劑），包括免疫調節化合物， 譬如顯不HCV抗病毒活性之免疫刺激細胞活素。 本發明之又另一項目的係為提供一種抑制。型肝炎病毒 在細胞中複製之方法’纟包括使該細胞、c型肝炎病毒絲 胺酸蛋白酶抑制劑及視情況選用之干擾素或會引致具有 抗-C型肝炎病毒活性之干擾素產生之化合物接觸。 143110.doc • 121 · 1378927 HCV絲胺ι蛋白酶抑制齊！、干擾素或抗化合物在 任何前述應用中之量’彳為藥學上有效量、亞最適宜 杬-HCV有效f或其組合，只要Hcv蛋白酶抑制劑、干擾 素及/或抗-HCV化合物之最後組合包含藥學上有效量之化 合物，有效用於治療或預防病人中之HCV感染即可。 本發明之進一步目的係為提供一種製備對掌性雙環脯胺 酸酯化合物之方法，該化合物可用於製備式丨化合物。 本發明化合物之製備 本發明化合物之起始物質與中間物，可藉由應用或修改 已知方法製成，例如按參考實例中所述之方法或其顯著化 學等效方法。 本發明化合物可藉由應用或修改已知方法製成，其係意 謂迄今所使用或在文獻中所述之方法，例如由R c Lar〇ck 在综合有機轉變，VCH出版社（1989)中所述者。 一種式1化合物，其中變數及其 〇部份基图，均 如本文中所述，其可經由以適當氧化劑及在適當條件下， 處理式2化合物而製成，
143110.doc 122· 1378927 其中變數及其〇邹份基團，均如本文中所述。一種特 定氧化劑為DMP試劑。特定條件包括在適當有機溶劑譬如 二氣甲烷中’於約室溫下，進行氧化作用。 一種式2化合物，其中變數及其◦部份基團均如 本文t所述，其可經由以適當偶合劑及在適當條件下，使 式3化合物，其中變數及其1C3部份基團，均如本文中 籲 所述，與式4化合物偶合而製成，其中變數均如本文中所 述0
特定偶合劑與條件包括使用DIC與HOAt，在適當有機溶 劑譬如DMF中，於約〇°C下，或使用PyBop與DIPEA，在適 當有機溶劑譬如二氣曱烷中，於約室溫下。 一種式3化合物’其中變數及其
部份基團 ，均如 本文中所述，其可經由以適當偶合劑及在適當偶合條件 下，使式5化合物，其中變數均如本文中所述，與式6化合 143110.doc •123- 1378927 物偶合，其中p2為酸保護基 1378927
R
5
I
0H N、
1.偶合劑與6 條件 2.酸去除保護 ，劑與條件
而其〇部份基㈣如本文十所述，接著為適當去除保 護劑及在適當去除保護條件下製成。特^偶合劑盘條件， 包括使用肌或DCC與H0At，在適當有機溶劑譬如_或 二氯甲烷中’於約(TC至約室溫下。去除保護作用係使用 適當去除保護劑進行，其係依保護劑之性質，意即发在 酸、驗或氫化作用條件下是否可移除（不安定），及在進 去保護作用之化合物中之其他反應性部份基團Μ，意即 去除保護劑係經祕，以進行去保護作用，而不會影嚮1 =性部份基團，除非共同反應是所想要的。特定酸伴 低碳貌基；更特別是甲基m除保護劑 :無機驗，譬如驗金屬氮氧化物；更特別是二 :保護作用條件，係包括在醇性溶劑中，心 醇，於約室溫下進行去保護作用。 4乙 一種式5化合物，其中鸿°，且其他變數均如本文中所 143H0.doc /^21 述思即化σ物5 a，其可經由以適當去除保護劑及在適當 條件下，使式7化合物去除保護而製成， R6 Ο r“/N、R5\)P2 酸去除保護 劑與條件
OH
其中P2為酸保護基，且其他變數均如本文中所述。去除保 沒作用係使用適當去除保護劑進行其係依保護劑之性 $ ’意即其在酸、驗或氫化仙條件下，是否可移除（不 安定），及在進行去保護作用之化合物中之其他反應性部 伤基團而定，意即去除保護劑係經選擇，以進行去保護作 用，而不會影嚮其他反應性部份基團，除非共同反應是所 想要的。特定酸保護劑為。至。8低碳烷基；更特別是甲 基m除保護劑為無機驗，譬如驗金屬氫氧化物；更 特別是NaOH。特定去保護作用條件係包括在醇性溶劑 中’譬如甲醇或乙醇’於約室溫下進行去保護作用。 -種式7化合物’其中變數均如本文中所述，其可經由 以式9化合物’其中M為可置換之部份基團，且其他變數 均如本文中所述，在適當條件下，使式8化合物醯基化而 製成，其中變數岣如本文中所述。 143110.doc -125- 1378927
Rd-M + H J、Rl〇p2 9 偶合條件
R 特定偶合條件係使用DIC或DCC與HOAt，在適當有機溶 劑譬如DMF或二氣曱烷中，於約〇<t至約室溫下，或 Py膽與DIPEA ’在適當有機溶劑譬如_或二氯甲燒 中，於約至溫下，且較佳為後述條件。特定L為徵基。特 定Μ為羥基或N-氧基琥珀醯亞胺。 一種式5化合物’其中_ !，且其他變數均如本文中所 述’意即化合物5b’其可經由以適當去除保護劑及在適當 條件下’使式Π)化合物去除保護而製成，其中p2為酸保： 基’且其他變數均如本文中所述β Λ
R
、0P •Wn、r5 R8 0 10 酸去除保護 劑與條件
OH 其係依酸保 ’是否可移 去除保護作用係使用適當去除保護劍進行 «蒦劑之性質’意即在酸、驗或氫化作用條件 143110.doc -126- 1378927 除（不安定），及在進行去保護作用之化合物中之其他反應 性部份基團而定’意即去除保護劑係經選擇，以進行去保 護作用，而不會影嚮其他反應性部份基團，除非共同反應 是所想要的。特定酸保護劑為(^至^低碳烷基；更特別是 曱基。特疋去除保s蔓劑為無機驗，譬如驗金屬氫氧化物； 更特別是NaOH。特定去保護作用條件係包括在醇性溶劑 中，譬如曱醇或乙醇’於約室溫下進行去保護作用。 一種式10化合物，其中變數均如本文中所述，其可經由 以式9化合物’其中變數均如本文中所述，在適當條件 下，使式11化合物醯基化而製成，其中變數均如本文中所 述。 r9儿、+ 9 R8 Ο 11 偶合條件
讨疋堝贫餘忏係使 劑 譬如DMF或二氯曱烷中，於約〇〇c至約室溫下，或p 與DIPEA，在適當有機溶劑譬如DMF或二氣甲烷中， 室溫下；且較佳為後述條件。特定L為羰基。特定Μ 基或Ν-氧基琥珀醯亞胺。 一種式11化合物，其中變數均如本文中所述，其可 143110.doc -127- ’使式12化合物去除保 其他變數均如本文中所 以適當去除保護劑及在適當條件下 護而製成，其中pi為胺保護基，且 述。
妝太阼休谩條 R6 0
I\ VJ ΌΡ h、n，rV^、r5( R8 〇 11 去除保護作用係使用適當去除保護劑進行，其係依胺保 凌劑之性質，意即在酸、鹼或氫化作用條件下，是否可移 除（不安定），及在進行去保護作用之化合物中之其他反應 性部份基團而定，意即去除保護劑係經選擇，以進行去保 護作用，而不會影嚮其他反應性部份基團，除非共同反應 係為所想要的。特定胺保護劑為Cbz或BOC ;更特別是 Cbz。特定去除保護劑為酸，譬如hci或H2/Pd(〇H)2 ;更特 別是H2/Pd(OH)2。特定去保護作用條件係包括在醇性溶 劑，譬如甲醇或乙醇，或烷酸烷酯溶劑，譬如醋酸乙酿 中’於約室溫下’進行去保護作用。 一種式12化合物’其中變數均如本文中所述，其可經由 使式13化合物，其中變數均如本文中所述，與式14化合 物，其中變數均如本文中所述，在適當條件下偶合而製 成0 143110.doc -128- ^378927
R 〇 + Η〆%人。ρ2 14 偶合條件
特定偶合條件係使用HOAt/DIC與DIPEA，在適當有機溶 劑譬如THF中，於約室溫下。
式4化合物’其中變數均如本文中所述，其可經由以適 當去除保護劑及在適當條件下，使式化合物15去除保護而 製成’其中變數均如本文中所述。
去除保護條件
去除保護作用係使用適當去除保護劑進行，其係依胺保 護劑之性質，意即在酸、鹼或氫化作用條件下，是否可移 除（不安定），及在進行去保護作用之化合物中之其他反應 性部份基團而定，意即去除保護劑係經選擇，以進行去保 護作用，而不會影嚮其他反應性部份基團，除非共同反應 係為所想要的。特定胺保護劑為Cbz或BOC ;更特別是 Cbz。特定去除保護劑為酸，譬如hC丨或H2/pd(〇H)2 ;更特 別是H^PcKOH)2。特定去保護作用條件係包括在醇性溶劑 143110.doc -129· 1378927 譬如曱醇或乙醇，或烷酸烷酯溶劑，譬如醋酸乙酯中，於 約室溫下’進行去保護作用。 一種式15化合物，其中變數均如本文中所述，其可經由 使式16化合物’其中變數均如本文中所述，與式I?化合 物，其中變數均如本文中所述，在適當條件下偶合而製 成。
%，R, R2 17 偶合條件
,R， 特定胺保護劑為Cbz或BOC ;更特別是Cbz。特定偶合條 件係使用HOBT、PyBop及DIPEA，在適當有機溶劑譬如二 氣甲烷中，於約〇°C至約室溫下。 一種式16化合物，其中變數均如本文中所述’其可經由 以適當去除保護劑及在適當條件下，使式丨8化合物去除保 護而製成’其中其他變數均如本文中所述。 pS;R3YRVop2 R OH 0 18 酸去除保護劑 與條件
Yi：V0H 143110.doc •130· 16 1378927 去除保護作用係使用適當去除保護劑奸，其係依酸保 濩劑之性質，意即在酸、鹼或氫化作用 ’ Γ 疋否可移 除（不安定），及在進行去保護作用之化合物中之其他反應 性部份基團而定，意即去除保護劑係經選擇，以進行去保 護作用，而不會影嚮其他反應性部份基團，除非共:反】 係為所想要的。特定胺保護劑為Cbz。特定酸保護劑為 至〇8低碳烧基；更特別是甲基m除保^為” 鹼，譬如鹼金屬氫氧化物；更特別是Na0I^特定去保镬 作用條件係包括在醇性溶劑譬如甲醇或乙醇中，於約室溫 下進行去保護作用。 -種式18化合物’其中R。為—個鍵結，且其他變數均如 本文中所述’其可經由以式19化合物，其中變數均如本文 中所述，在適當條件下，保護式20化合物而製成，其中= 數均如本文_所述。
P'M 〇ρζ R" OH 20 保護條件 V丫 Vp2 R OH 〇 18 特定胺保護劑為Cbz或BOC。特定偶合條件係使用適者 有機溶劑，譬如二氣曱烷，於約0°C至約室溫下。 一種式20化合物，其中R4為氫，且其他變數均如本文中 143110.doc -131 - j37892^ 所述，其可經由以適當氫化劑及在適當條件下，使式21化 合物氫化而製成，其中變數均如本文中所述。
〇 0H 21 氫化條件
20 特定氫化劑為H2/Pd(OH)2。特定氫化條件，係包括在醇 性溶劑，譬如曱醇或乙醇，或烷酸烷酯溶劑，譬如醋酸乙 酯中’於約室溫下進行氫化作用。 種式20化合物’其中R為視情況經取代之脂族，日甘 他變數均如本文中所述，其可經由以化合物22(烷基化 劑）’其中R4為視情況經取代之脂族，且Q為可置換基團， 譬如齒根、曱苯項酸根或確酸根，在適當條件下，使化人 物20'燒基化而製成，其中變數均如本文中所述。
Q-R4 + Η'Ν^γ^〇ρ 〇〇 Η OH 適當烷基化劑包括脂族(齒化物、甲苯磺酸酯或磺酸 醋）。適纽基化條件包括在適當有機溶劑，譬如醇性溶 劑’例如甲醇或己醇’或含醚溶劑，例如醚或四氣呋： 143110.doc -132· 1378927 中，於約室溫至約回流下’進行烷基化作用。 一種式21化合物，其中變數均如本文中所述，其可經由 以式23化合物，其中R3'係獨立為視情況經取代之脂族基 團、視情況經取代之環狀基團或視情況經取代之芳族基 團，如本文中所述’在適當條件下，使式22化合物烷基化 而製成，其中變數係如本文中所述。
特定烷基化條件係包括使用強鹼，譬如第三-丁醇鉀， 在醇性溶劑，譬如甲醇或乙醇中，於約室溫下進行烷基 化。 一種式24化合物，其中變數均如本文中所述，其可經由 以亞胺性甘胺醯亞胺衍生物，在式29之Michael接受劑上 達成Michael加成而製成，其中變數係如本文中所述。
143110.doc •133- 1378927
Michael加成係包括適當非質子性極性溶劑、鹼金屬甲 醇鹼及適當溫度。關於Michael加成，可參閱Corey，E. J.; Noe, M. C. ; Xu，F, Tetrahedron Letter 1998，39，5347。關 於對掌性相轉移觸媒之合成，可參閱Corey，E. J. ; Noe, Μ. C. ; Xu，F. J. Am. Chem. Soc. 1997，119，12414。適當溶劑 包DCM、ACN或THF，依反應條件而定。適當鹼包括 CsOH、NaOH、KOH及LiOH。適當溫度範圍從約-78°C至 約0°C，更特別是在約-60°C下。可用於本發明之亞胺性甘 胺醯亞胺類，係描述本文中。較佳亞胺性甘胺醯亞胺為N-(二苯亞曱基）甘胺酸第三-丁酯。此外，Michael加成條件 可使用或未使用相轉移觸媒（PTC)(對掌性與非對掌性）而達 成。較佳PTC為溴化鄰-[9]烯丙基-N-9-蒽基曱基金雞尼丁 鹽。 一種式25化合物，其中變數均如本文中所述，其可經由 式24化合物之亞胺分裂與環化而製成。
分裂與環化條件
關於分裂與環化程序，可參閱Javidan，A. ; Schfer, K.; Pyne, S. Synlett 1996，100 ; Tatsukawa, A. ; Dan, M.; Ohbatake, M. ; Kawatake，K. ; Fukata，T. ; Wada，E.; 143110.doc -134- 1378927
Kanemase，S. ; Kakei, S. J· Org. Chem. 1993, 58，4221。分 裂與環化條件包括使用極性溶劑、酸試劑及約室溫至約 150°C之溫度。較佳條件包括使用EtOH、AcONa及 NH20H.HC1，及溫度為所使用溶劑之約沸點。
一種式26化合物，其中變數均如本文中所述，其可經由 以適當醯胺保護基，譬如BOC，保護式25醯胺化合物而製 成，其中變數均如本文中所述。其他適當保護基包括 CBz、-C02烷基。亦參閱Greene，T. W. ; P. G. M.有機合成 之保護基，Wiley, New York，1991，關.於其他胺保護基。 保護條件包括使用非質子性極性溶劑，有機鹼作為觸媒， 及溫度約0°C -100°C。較佳條件包括使用CAN、二曱胺基 吡啶，及溫度約室溫。
入 π Η (25) 保護條件
一種式2 7化合物，其中變數均如本文中所述，其可經由 使已經保護之式26化合物還原而製成，其中變數均如本文 中所述。
143110.doc .135- 丄378927 事實上完成兩次還原作用。第一次還原作用為醯胺成為 半胺醛，使用DIBALH或超氫化物[LiBEt3H]。第二次還原 作用為半胺醛成為胺’使用EhSiH與BF3 . 〇Et2。關於還 原條件’可參閱Collado, I; EzqUerra，j. ; Mate〇, a」；
Rubi〇, A·，J. 〇rg. Chem. 1998, 631995-2001，與 EzqUeera， J· · Pedregal, C. ； Yruretagoyena, B. ； Rubi〇5 A. ； Carreno, M· C. ； Escribano, A. ； Garcia Ruano, J. L. J. 〇rg. Chem. 1995, 60, 2925。關於使焦麩胺酸酯轉化成四氫吡咯之其他 常用條件，係為使用BH3 · SMe2。 一種式28化合物，其中變數均如本文中所述，其可經由 使式27化合物去除保護而製成，其中變數均如本文中所 述。
參閱 Gibson, F· G. ; Bermeier，S. c. ; Rap〇p〇rt，η·，j. 〇rg Chem· 1994, 59, 3216-3218，關於第三 丁酯存在下， 選擇性移除N_B0C保護基之條件。熟諳此藝者明瞭去除保 護條件係依保護基之選擇而定。例如，若使用cBz，則可 使用氫化作用或鹼性條件。較佳情況是，若使用b〇c，則 可使用醋酸乙酯中之i Ν Ηα。參閱Greene，T w ; p α M.有機合成之保護基（wiley，New Y〇rk，199l)。 本技藝中-般技術人士當知式3化合物可藉由使式5化合 143110.doc -136. 1378927 物與式28化合物在如上所述之條件下偶合而製備。 製備當R3、R5或R7為視情況經取代之乙烷二基部份基團 時之方法，包括熟諳此藝者所已知者，例如在"β-内醯胺 之有機化學"中所述之方法（由G. Georg編著，VCH出版公 司（1993)，例如第 240-241 與 303-305 頁）。 下列圖式1-11係舉例說明各種製備視情況經取代之多環 狀氮雜環基之方法。在下文圖式中之方法，亦可應用於包 含可相容類似取代基之其他視情況經取代之多環狀氮雜環 基0 圖式1
143110.doc •137· 1378927 圖式2
圖式3
h2 Pd(0H)2/C 143110.doc -138- 1378927 圖式4
圖式5
圖式6
圖式7
〇 OH 0 \ h2 J Pd(OHVCr boc2o ο
143110.doc -139- 1378927 圖式8
CH2l^n
MCPBA R3N3 或
圖式9
圖式10
cxxv
PyBOP HOBT
DIEA 98% 以D-酒石酸鹽 賭自Aldrich
143110.doc •140· 1378927 圖式11
包含一種含有一或多個氮環原子之基團，較佳為亞胺 (=N-)之式1化合物，可轉化成其相應之化合物，其中該基 團之一或多個氮環原子係被氧化成N-氧化物，較佳係經由 與過酸，例如過醋酸在醋酸中，或間-氣過氧苯甲酸於惰 性溶劑譬如二氯甲烷中，在溫度從約室溫至回流，較佳係 143110.doc -141 - 1378927 於高溫下反應。 在後文所述之反應中，可能必須保護反應性官能基，例 如搜基、胺基、亞胺基、硫基或鲮基，在想要其留在最後 產物中之情況下，係為避免其不期望地參與反應。習用保 護基可根據標準實務使用’關於實例可參閱^也⑽與ρ· G· M. Wuts，"有機化學中之保護基"（j〇hn冒…丫 & s〇ns (1991)) ; J. F. W. Me 〇mie，”有機化學中之保護基，， (Plenum 出版社，1973)。 反應混 自反應混合 按本文中所述製成之化合物，可藉習用方式 合物回收《例如，化合物可以下述方式回收 則在自反應昆合物館出溶劑後， 物顧出溶劑，或若必要 將殘留物傾倒至水中，接著以水不可溶混之有機溶劑萃 取’及自萃液餾出溶劑。此外’若需要，可將產物藉各種 習知技術進—步純化，譬如再結晶作用、再沉澱或各種層 析技術，特別是管柱層析或預備薄層層析法。 根據本發明之另-項特徵，本發明化合物可經由本發明 其他化合物之相互轉化而製成。 以下述作為相互轉化方法之實例，含有亞礙鍵結之式 化合物’可經由相應含有·s_鍵結之化合物之氧化作用6 製成。例如’此氧化作用可合宜地以下述方式進行，^ 與過氧酸反應，例如3_氣過苯甲酸，較佳係於惰性溶旁 中’例如二氣甲燒’較佳係在於或接近室溫，或者，利月 氯：氧單硫酸鉀，在媒質中，譬如經緩衝至約PH5之” 水浴液’在約(TC與室溫間之溫度下。此後述方法對於^ 143110.doc •142· 1378927 有酸不女疋基團之化合物，係為較佳的。 以下述作為相互轉化方法之另—項實例，含有减鍵結之 h化合物’可藉由相應含有_s_或亞楓鍵結之化合物之氧 化作用而製成。例如，此氧化作用可合宜地利用與過氧酸 之反應’例如3·氯過苯甲酸’較佳係則性溶劑中例如 二氯甲烷，較佳係在於或接近室溫進行。
應明瞭的是’此處關於芳基與雜芳基芳香性之指稱，係 包括任何高度地共振之不飽和環結構。或者雙鍵之安 置’在顯示之情況下，係表示關於所描繪化合物之一種可 能結構’但應明瞭係包括此化合物之其他共振狀態，以及 質子化與荷電物種，只有其中一種可能顯示。 應明瞭的是，本發明化合物可含有不對稱中心。此等不 對稱中心可獨立呈無論是…組態。熟諳此藝者將顯而易
見的是，某些本發明化合物亦可顯示幾何異構現象。應明 瞭的疋，本發明包括根據本發明化合物之個別幾何異構物 與立體異構物及其混合物，包括消旋混合物。此種異構物 可藉由應用或修改已知方法，與其混合物分離，例如層析 技術與再結晶技術，或其係個別地製自其中間物之適當異 構物。 對本文之目的而言，應明瞭的是，互變異構形式係包含 在特定基團例如硫酮基/巯基或酮基/羥基之敘述中。 酸加成鹽係以其中存在驗性官能基譬如胺基、貌胺基戋 二烷胺基之本發明化合物形成。藥學上可接受，意即無毒 性之酸加成鹽，係為較佳的。所選擇之鹽，係經最適宜地 143H0.doc •143· 1378927 選擇為可與習用醫藥媒劑相容，且適合口服或非經腸投 藥。本發明化合物之酸加成鹽，可藉由應用或修改已知方 法，經由自由態鹼與適當酸之反應而製成。例如，本發明 化合物之酸加成鹽，可以下述任一方式製成，使自由態鹼 /谷於a有適當之水或醇水溶液或其他適當溶劑中，並藉 由洛發溶液分離此鹽，或經由在有機溶劑中使自由態鹼與 酸反應，於此種情況中，鹽係直接分離，或可經由使溶液 濃縮而獲得。用於製備此種鹽之一些適當酸，係為鹽酸、 氫溴酸、磷酸、硫酸，各種有機羧酸及磺酸，譬如醋酸、 檸檬酸、丙酸、琥珀酸、苯甲酸、酒石酸、反丁烯二酸、 苯乙醇酸、抗壞血酸、蘋果酸、甲烷磺酸、甲苯磺酸、脂 肪酸類，己二酸鹽、海藻酸鹽、抗壞血酸鹽、天冬胺酸 鹽、苯磺酸鹽、苯曱酸鹽、環戊烷丙酸鹽、二葡萄糖酸 鹽、十二基硫酸鹽、酸性硫酸鹽、丁酸鹽、乳酸鹽、月桂 酸鹽、月桂基硫酸鹽、蘋果酸鹽、氫碘酸鹽、2_羥基-乙烷 磺酸鹽、甘油磷酸鹽、苦味酸鹽、三甲基醋酸鹽、雙羥萘 酸鹽、果膠酯酸鹽、過硫酸鹽、3_苯基丙酸鹽、硫氰酸 鹽、2-萘磺酸鹽、十一烷酸鹽、菸鹼酸鹽、半硫酸鹽、庚 糖酸鹽、己酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽及其他。 本發明化合物之酸加成鹽，可藉由應用或修改已知方 法，自其鹽再生。例如，本發明之母體化合物可經由以鹼 處理’例如碳酸氫鈉水溶液或氨水溶液，自其酸加成鹽再 生。 本發明化合物可藉由應用或修改已知方法，自其鹼加成 143110.doc 1378927 鹽再生。例如，本發明之母體化合物可以酸例如鹽酸處 理，自其鹼加成鹽再生。 鹼加成鹽可在本發明化合物含有羧基或足夠酸性生物電 子等排體之情況下形成。可用以製備鹼加成鹽之鹼類，包 括較佳為當與自由態酸合併時，會產生藥學上可接受之鹽 者，思即該鹽之陽離子在該鹽之醫藥劑量下，對病人為無 毋丨生，因此在自由態鹼中固有之有利抑制作用，不會被可 歸因於該陽離子之副作用而受損害。藥學上可接受之鹽， 包括衍生自驗金屬與驗土金屬鹽者，在本發明之範圍:包 括何生自下列驗者：氫化鈉、氫氧化納、氫氧化卸、氫氧 化弼、氫氧化紹、氫氧化鐘、氫氧化鎂、氣氧化辞、氧、 乙二胺、N-f基葡萄糖胺、離胺酸、精胺酸、烏胺酸、膽 =、N，N’·二笮基乙二胺、氣普魯卡因、二乙醇胺、普魯 :、Ν·:基苯乙胺、二乙胺、六氫^井、參㈣基)_胺 基甲烧、氫氧化四甲基銨等。 成化合物可合宜地在本發明方法期間，被製成或形 L物(例如水合物)。本發明化合物之水合物可一 1 也自水溶液/有機溶劑混合物，藉再結晶而製成，使；： 有機溶劑，譬如二氧陸園、四氫吱嗔或甲醇β 用之 起始物質與中間物可藉由應用或修改 如按參考實例中所述或其顯而易見之化學等效方法成，例 :發明化合物、其方法或製備法及其生物活 述貫例之檢視，而變得、自下 明，而非欲被視為限制本發明之範白圍。其僅破提出作為說 ί 43 J10.doc -145- 1378927 試樣係藉TLC、NMR、RP-HPLC或EA分析。 實例1-化合物A-E : 於化合物xi(310毫克’ 0.39毫莫耳）之DCM溶液（1〇毫升） 中’添加TFA(4毫升）。將此反應物於約室溫下擾拌5小 時。此時於真空中移除溶劑。將所形成之殘留物藉逆相 HPLC純化，獲得195毫克（68%)化合物a，
按照上述方法，並使用適當起始物質，製備下列連續化 合物B-E :
143110.doc •146- 1378927 實例2-化合物F-M : 於化合物xii(350毫克，0·56毫莫耳）之DCM溶液（10毫升） 中’添加DMP試劑（307毫克，0.73毫莫耳）。將反應物於約 室溫下攪拌2小時’然後以1 〇% Na2S03，使反應淬滅，歷 經3〇分鐘。接著將反應混合物以Et〇Ac(75毫升）萃取，並 以鹽水洗務。使有機層乾燥’及在真空中濃縮。將所形成 之殘留物以矽膠層析（80-90。/。EtOAc/己烷）純化，獲得248 毫克（71%)化合物f
、’、述方法，並使用適當起始物質，製備下列速續化 合物G-Μ :
143110.doc -147- 1378927
實例3-化合物N-R : 於化合物xix(~0.22毫莫耳）之DCM溶液（4毫升）中，添加 DMP試劑（146毫克’ 0.34毫莫耳）。於約室溫下攢;拌2小時 後’以10% NaJO3使反應淬滅。接著以DCM稀釋此反應 混合物。分離有機層，並以10% Na2S03洗滌兩次，及以鹽 籲 水洗蘇。使所形成之有機層脫水乾燥，並在真空中濃縮，
獲得殘留物，使其藉矽膠層析純化（5% EtOH/EtOAc)，以 提供78毫克（56%)所要之化合物N
143110.doc •148· 1378927
按照上述方法，並使用適當起始物質，製備下列連續化 合物0-R :
實例4-化合物S-W : 於化合物χχν(320毫克，〇.5毫莫耳）之DCM溶液（10毫升） 中’添加DMP試劑（272毫克，0.65毫莫耳）。將此反應物於 約室溫下攪拌2小時，並以1〇% Na2S〇3使反應淬滅，歷經 20分鐘。接著將所形成之混合物以EtOAc萃取。有機層以 鹽水洗務，脫水乾燥，及在真空中濃縮。將所形成之殘留 物藉矽膠層析純化（8〇% EtOAc/己烷），獲得170毫克（53%) 化合物S， 143110.doc -149- 1378927
按照上述方法，並使用適當起始物質’製備下列連續化 合物τ-w :
p <> 實例5-化合物X-AD : 於化合物xxvi(400毫克’ 0.6毫莫耳）之DCM溶液（20毫升） 中，添加DMP試劑（329毫克，0.78毫莫耳）。將此反應物於 約室溫下攪拌1.5小時，並以10% Na2S03使反應淬滅，歷 經20分鐘。接著將所形成之混合物，以Et〇Ac萃取。有機 層以鹽水洗滌’脫水乾燥，及在真空中濃縮。將所形成之 143110.doc -150- 1378927 殘留物藉矽膠層析純化（70-100% EtOAc/己烷），獲得210毫 克（53%)化合物X，
按照上述方法，並使用適當起始物質，製備下列連續化 合物Y-AD :
143110.doc • 151 - 1378927
貫例6-化合物aE-AI : 使化合物xxxiii(150毫克；0.076毫莫耳）溶於5毫升tfA 中’並攪拌兩天。產物藉RP-HPLC純化，產生40毫克（33% 產率）化合物AE，
按照上述方法，並使用適當起始物質，製備下列連續化 合物AF-AI:
143110.doc -152- 1378927
實例7-化合物AJ :
使化合物xxxviii(180毫克’ 0.21毫莫耳）溶於純TFA(5毫 升）中’並在約室溫下留置3天。此時，使反應混合物在真 空中濃縮，而得殘留物’使其藉逆相HPLC純化，獲得50 毫克（32%)化合物AJ，
實例8-化合物AK-AM :
使化合物xxxxiii(150毫克；0.16毫莫耳）溶於4.5毫升tfa 中，並攪拌三天。藉RP-HPLC純化產物，產生7〇毫克（54〇/〇 產率）化合物AK，
製備下列連續化 合物AL-AM : 143110.doc • 153 1378927
實例9_化合物： 使化合物lii(80毫克）溶於3毫升TF7^3毫升DCM*。將 此混合物於約至溫下攪拌5小時。藉蒸發移除溶劑。將所 形成之殘留物藉HPLC純化，產生62毫克（83%)化合物 AN，
實例10-化合物AO : 使化合物1^丨（160宅克；0.2毫莫耳）溶於5毫升DCM中， 並添加DMP試劑（170毫克；0.4毫莫耳）。將此混合物於約 室溫下攪拌三小時。藉蒸發移除溶劑，並使殘留物溶於 5〇%乙腈/水中，及藉由RP-HPLC純化，產生51毫克（32%) 化合物AO， 143110.doc -154- 1378927
實例11-化合物AP : 使化合物lix(162毫克；0.22毫莫耳）溶於8毫升DCM中， 並添加DMP試劑（189毫克；0·44毫莫耳）。將此混合物於約 室溫下搜拌3小時。藉蒸發移除溶劑，並藉rp_hplc純化 產物，產生41毫克（25%)化合物AP，
實例12-化合物AQ : 使化合物1χ(70毫克；0.09毫莫耳）溶於5毫升TFA與5毫升 DCM中。將此混合物於約室溫下授拌3小時。藉真空移除 溶劑，並使殘留物溶於㈣乙腈/水中，及康乾而產生化合 物AQ，為粉末，
143110.doc •155· 1378927 實例13-化合物AR-BG ·· 將化合物iXV1(223毫克，0.326毫莫耳）於TFA(5毫升）與 DCM (5毫升）之溶液中授拌4小時。μ⑼谬：2% w㈣ EtOAc_不完全轉化成較緩慢產物。在減壓下移除溶劑， 並使產物，東乾’獲得198毫克（97%)化合物ar，
按照上述方法， 合物AS-BG : 1 Ί Jt* 並使用適當起始物質，製備下列
143110.doc -156- 1378927
143110.doc -157- 1378927
實例14-化合物BH-BS : 使化合物lxxiii(150毫克，0.15毫莫耳）溶於DCM(3毫升 中。於此溶液中添加TFA(1.5毫升）。將所形成之溶液攪利 過夜。此時，使反應物在真空中濃縮，而得殘留物。藉超 相HPLC純化殘留物並 束乾’獲得60毫克（50%)化合物 1431I0.doc • 158. 1378927 BH，
按照上述方法，並使用適當起始物質 製備下列連續化 合物BI-BS :
143110.doc 159· 1378927
實例15-化合物BT-BU : 製備下列連 按照實例12之方法，並使用適當起始物質 續化合物BT-BU : 143110.doc •160- 1378927
實例16-化合物bv : 於化合物lxxvii(143毫克，0.21毫莫耳）之二氣曱烷溶液 (4.2毫升）中，添加DMP試劑（165毫克，0.39毫莫耳將此 反應物於約室溫下攪拌2小時’並以丨〇% Na2S03(水溶液） 使反應淬滅，歷經2〇分鐘。將所形成之混合物以Et〇Ac萃 取。有機層以鹽水洗滌，以MgS04脫水乾燥，及濃縮成黃 色油。藉矽膠層析（5% EtOH/EtOAc)純化，產生124毫克 (79%)化合物BV，
實例17-化合物BW-CA : 於化合物lxxxix(42〇毫克，0.62毫莫耳）之二氯甲烷溶液 (20毫升）中’添加DMP試劑（342毫克，0.81毫莫耳）。將此 反應物於約室溫下攪拌！小時，並以丨〇% NajO;使反應淬 I43110.doc • 161 · 1378927 滅，歷經20分鐘。接著將所形成之混合物以EtOAc萃取。 有機層以鹽水洗滌’脫水乾燥，及在真空中濃縮。將所形 成之殘留物藉矽膠層析純化（80% EtOAc/己烷），獲得208 毫克（50%)化合物BW，
按照上述方法，但使用適當起始物質，製備下列連續化 合物BX-CA : 143110.doc
-162- 1378927 實例18-化合物cb-CC : 於化合物lxxxvii(200毫克，0_3毫莫耳）之二氯曱烷溶液 (6.5毫升）中，添加〇ΜΡ試劑（227毫克，0.54毫莫耳）。將此 反應物於約室溫下授拌2小時，並以10% Na2S03(水溶液） 使反應淬滅，歷經20分鐘。將所形成之混合物以Et〇Ac萃 取°有機層以鹽水洗滌，以MgS04脫水乾燥，及濃縮成黃 色油。藉矽膠層析（5% EtOH/EtOAc)純化，產生138毫克 (70%)化合物CB，
按照上述方法，但使用適當起始物質，製備下列化合物 CC ：
實例19-化合物CD : 使化合物lxxxxviii(4〇毫克，〇.〇5毫莫耳）溶於TFA(3毫 升）中。將此溶液攪拌兩夜，及濃縮。於逆相HPLC上純化 殘留物，獲得25毫克（74%)化合物CD，
143110.doc • 163· 1378927 實例20-化合物CE : ，製備下列化 按照實例17之方法，並使用適當起始物質 合物CE :
實例21-化合物CF-CG : ，製備下列連 按照貫例14之方法’並使用適當起始物質 續化合物CF-CG :
實例22-化合物CH: ，製備下列化 按照貫例16之方法，並使用適當起始物質 合物CH :
1378927
實例23-化合物CI-CM 使化合物cxi(490毫克’ 0.75毫莫耳）溶於DCM(6毫升） 中。將DMP試劑（380毫克，0.9毫莫耳）添加至此溶液中， 並攪拌1小時。以1 0% NaaSO3溶液，使反應混合物淬滅， 接著將有機相以飽和NaHC〇3與鹽水洗滌。在濃縮有機相 之後’將所形成之殘留物，藉由7〇% Et〇Ac/己烷，以層析 方式純化，產生化合物CI(325毫克，66 。
按上述關於製備上述化合物之方法及相關於製備其 中間物之方法，但使用適當起始物質製備下列連續化合 物 CJ-CM: °
143110.doc •165-
實例24-化合物CN 1378927 於化合物CXviii(335毫克，〇46毫莫耳）之dcm/thf溶液 (3毫升/3毫升）中，添加DMP試劑（3〇〇毫克，〇69毫莫耳）。 將此反應混合物於室溫下攪拌2小時，並以1〇% Na2S〇3(水 浴液）使反應淬滅，歷經20分鐘。將所形成之混合物以 EtOAc萃取。有機相以鹽水洗滌，以MgS〇4脫水乾燥，及 濃縮而產生黃色油。藉矽膠層析（8〇% EtOAc/己烷）純化， 產生化合物CN(220毫克，67°/。）。
實例25-化合物CO-CR 於化合物cxix(164毫克，0.25毫莫耳）之DCM/THF溶液 0.5毫升/1.5毫升）中’添加DMP試劑（159毫克，0.38毫莫 耳）。將此反應混合物於室溫下攪拌2小時，並以1 〇% 143110.doc 1378927
NazSO3(水溶液）使反應淬滅，歷經2〇分鐘。將所形成之混 合物以EtOAc萃取。有機相以鹽水洗滌，以MgS04脫水乾 燥’及濃縮成黃色油。藉矽膠層析（7〇% EtOAc/己烷）純 化，產生化合物CO(1〇〇毫克，61°/〇)。
Γ
N # 按照上述關於製備上述化合物之方法，及相關於製備其 中間物之方法，但使用適當起始物質，製備下列連續化合 物 CP-CR :
實例26-化合物CS-CT 使化合物cxx溶於DCM(3毫升）中。將DMp試劑（18〇毫 143110.doc -167- 1378927 克，0·41毫莫耳）添加至溶液中，然後攪拌】小時。以ι〇% NaJO3使反應混合物淬滅，然後將有機相以飽和Ν&Ηα〇3 與鹽水洗蘇。在濃縮有機相之後，殘留物藉由1〇〇〇/〇 43.7%)。
EtOAc以層析方式純化，產生化合物cS(95毫克
按照上述關於製備上述化合物之方法，及相關於製備其 中間物之方法’但使用適當起始物質，製備下列化合物 CT ：
實例 27-化合物 cu、El、EK-EM、EO-EZ及 FA-FG 使化合物cxxviii(356毫克’ 0.52毫莫耳）溶於DCM(5毫 升）中。將DMP試劑（270毫克，0.63毫莫耳）添加至此溶液 中，並攪拌1小時。以10% Na2S03使反應混合物淬滅，接 著分離有機相，並以飽和NaHC〇3與鹽水洗滌。在濃縮有 機溶劑之後，殘留物藉由100% EtOAc以層析方式純化， 產生化合物CU(200毫克，56.3%)。熔點225-235°C » I43110.doc • 168 ·
1378927
按照上述關於製備上述化合物之方法，及相關於製備其 中間物之方法，但使用適當起始物質，製備下列連續化合 物 ΕΙ、ΕΚ-ΕΜ ' EO-EZ及 FA-FH : ·
EI,
EK
143110.doc -169- 1378927
143110.doc •170- 1378927
143110.doc -171 - 1378927
FB, 143110.doc -172- 1378927
143110.doc -173 - 1378927
實例28-化合物CV-DC 使化合物cxxx(330毫克，0.46毫莫耳）溶於〇(：]^(5毫升） 中。將DMP試劑（240毫克，0_56毫莫耳）添加至此溶液中， 並搜拌1小時。以10% NajO3使反應〉'昆合物淬滅，並將有 機相以飽和NaHCCb與鹽水洗滌。在濃縮有機相之後，將 所形成之殘留物藉由100% Et0Ac以層析方式純化，產生 化合物 cxxx (280毫克，85.9%)。
按照上述關於製倩上述化合物之方法，及相關於製備其 中間物之方法，但使用適當起始物質，製備下列連續化： 物 CW-DC: °
143110.doc • 174- 1378927
143110.doc -175- 1378927
實例29-化合物DD-DE 於化合*CXXXVni(4〇0毫克，ο.57毫莫耳）之dcm溶液（6 毫升）中，添加DMP試劑（362毫克，〇85毫莫耳）。將此反 應混合物於室溫下㈣2小時，並以】G% Na2S〇3(水溶液） 使反應淬滅，歷經20分鐘。以Et〇Ac萃取所形成之混合 物。將所萃取之有機相以鹽水洗滌，以MgS〇4脫水乾燥， 及濃縮而產生黃色油，藉由矽膠（7〇% Et〇Ac/己烷）純化， 產生化合物DD(201毫克，51%)。
按照上述關於製備上述化合物之方法，及相關於製備其 中間物之方法，但使用適當起始物質，製備下列化合物 DE :
實例30-化合物DF 使化合物cxxxxiii(165毫克，0.24毫莫耳）溶於DCM(5毫 升）中。將DMP試劑（125毫克，0.29毫莫耳）添加至此溶液 中’並攪拌1小時。以1〇% Na2S03使反應混合物淬滅，並 將有機相以飽和NaHC〇3與鹽水洗滌。在濃縮有機相之 143110.doc 176· 1378927 後，將所形成之殘留物藉由70% EtOAc/己烷，以層析方式 純化，產生化合物DF(108毫克，65.6%)。
於化合物cil(0_350克，0.516毫莫耳）在DCM(15毫升） 中’藉由冰浴冷卻之溶液内’添加Dmp試劑（0.281克， 0.671毫莫耳）。將混合物於室溫下攪拌2小時，然後以丨〇% NkSO3溶液，使反應淬滅並攪拌2〇分鐘。將所形成之混合 物以DCM (3x20毫升）萃取，並使有機萃液脫水乾燥 (MgS04)。在過渡以移除MgS〇4之後，使滤液濃缩，並藉 管柱層析純化(70%醋酸乙醋/己燒），產生最後化合物 DG(0.265克，76%) ’為白色固體。
按照上述關於製備上述化合 中間物之方;乂 之方法，及相關於製備 中間物之方去，但使用適當起妗 物DH-DJ : ° ，製備下列連續化 143110.doc -177. 1378927
及
實例32-化合物DK-DN 將化合物clx(108毫克，0.123毫莫耳）2DCM溶液以 DMP試劑（78毫克，0.185毫莫耳）處理。在室溫下攪拌^】、 時後，以EtOAc(50毫升）稀釋反應混合物，然後以1〇〇/。 NajO3使反應淬滅。在搜拌3〇分鐘後，分離有機相，並以 NaHC〇3與鹽水洗滌。使有機相脫水乾燥及在真空中濃 縮，獲得殘留物，將其藉矽膠層析純化（8〇% Et〇Ac/己 烷），產生化合物DK (84毫克，78%)。 143110.doc
按如、上述關於製備上述化合物之方法’及相關於製備其 中門物之方法，但使用適當起始物質製備下列化合物 .178· 1378927 DL-DN。
實例33-化合物DO-DS 將化合物clxii(174毫克，0.189毫莫耳）之EtOH溶液（1〇毫 升），使用Pd/C(3 0%當量，60毫克，10%鈀含量）氫化2 5小 時。然後，瀘出觸媒。將所形成之濾液在真空中濃縮，產 生殘留物，使其藉半預備逆相層析純化，並凍乾，而〜 合物DO, 70%產率。 侍化
143110.doc •179· 1378927 按照上述關於製備上述化合物之方法，及相關於製備其 中間物之方法，但使用適當起始物質，製備下列連續化合 物 DP-DS。
實例34-化合物CW : 使化合物clxiii(175毫克’ 〇·24毫莫耳）溶於dcM(3毫升） 143110.doc • 180 - 1378927 中。將DMP試劑（120毫克，0.28毫莫耳）添加至此溶液中， 並攪拌1小時。以10% NaJO3使反應淬滅，並以飽和 NaHC〇3與鹽水洗滌。藉由70% EtOAc純化，產生化合物 CW(134毫克，75%)。 實例35-化合物CY與DT-DX : 於clxxii(290毫克，0.43毫莫耳）之DCM溶液（15毫升） 中’添加DMP試劑（239毫克，0.56毫莫耳）。將反應物於室 溫下攪拌1小時，並以1〇% Na2S03使反應淬滅，歷經20分 鐘°接著將所形成之混合物以EtOAc萃取。有機層以鹽水 洗務’脫水乾燥，及在真空中濃縮。將所形成之殘留物藉 石夕膠層析純化（8-100% EtOAc/己烷），獲得化合物CY(l51 毫克，52%)。 按照上述關於製備上述化合物之方法，及相關於製備其 中間物之方法’但使用適當起始物質，製備下列連續化合 物 DT-DX 〇
143110.doc
1378927 實例36-化合物DY : 使化合物lxxxv(1.17毫莫耳）溶於dcm(5毫升）中。將 DMP試劑（545毫克’ 1.3毫莫耳）添加至此溶液中，並授掉1 小時。以P-Na2S〇3(1.5毫莫耳/克樹脂）使反應淬滅，並授 拌一小時。添加P_TBD清除劑樹脂*(2.5毫莫耳/克樹p )， 並攪拌45分鐘。過濾所形成之混合物，並藉由5〇% 純化，獲得化合物DY(440毫克，50.2%，歷經兩個步驟）。 *關於P-TBD清除劑樹脂之參考資料：JParl〇w等人， Tetrahedron， 55,6785-6796(1999)。
143110.doc •182- 1378927 實例37-化合物DZ : 使起始物質化合物clxxxxi(94毫克，〇 14毫莫耳）溶於 THF (10毫升），DCM(2〇毫升）之混合物中。然後，添加 DMP試劑（Π8毫克，0.28毫莫耳）。在室溫下攪拌2小時 後，將反應傾倒於含有Dri Solv THF(120毫升）之分液漏斗 中。將反應物以10% Na2S〇3(50毫升），然後以鹽水（75毫 升）洗滌。接著，使有機層分離’以]^0〇4脫水乾燥，及 在減壓下移除溶劑。於層析（矽膠：以5〇% Dri So丨v THF/ EtOAc，然後以4% MeOH/THF溶離）後，藉MS查核溶離 伤。使適當溶離份凍乾，產生化合物DZ(38.8毫克， 41%) 〇 Η
實例38-化合物ΕΛ-EB : 使起始化合物clxxxxv(185毫克’ 0.26毫莫耳）溶於 THF(20毫升）中。然後，添加DMP試劑（219毫克，0.52毫莫 耳）。在至溫下授拌1小時後。TLC顯示完全轉化成酮（5〇/0 MeOH/THF)。將反應物傾倒於含有Dri Solv THF(l2〇毫升） 之分液漏斗中。將反應物以10% Na2SO3(50毫升），然後以 鹽水（75毫升）洗務。接著’分離有機層’以Mg s〇4脫水乾 燥，及藉由減壓移除溶劑，產生殘留物，使其藉層析純化 143110.doc -183- 1378927 (矽膠：以 50% Dri Solv THF/EtOAc，然後以 4% Me〇H/THF溶離），及藉UV與MS查核溶離份。使適當溶離 份凍乾，產生化合物EA( 159毫克，88%)。
按照上述關於製備上述化合物之方法，及相關於製備其 中間物之方法，但使用適當起始物質，製備下列化合物 EB ：
實例39-化合物EC-ED : 於化合物clxxxxviii(0.341克，0.503毫莫耳）在DCM(15毫 升）中，於冰浴中冷卻之溶液内，添加DMP試劑（0.277克， 0.654毫莫耳）。將混合物於室溫下攪拌2小時，然後以1 0% Na2S03溶液使反應淬滅，並攪拌20分鐘。將所形成之混合 物以DCM(3x20毫升）萃取，並使有機萃液脫水乾燥 (MgS〇4)。在過濾以移除MgS04後，使濾液濃縮，並藉管 柱層析純化（70% EtOAc/己烷），獲得化合物EC(0.183克， 54%)，為白色固體。 143110.doc -184- 1378927
於製備上述化合物之方法，及相關於製備其 ，但使用適當起始物質，製備下列化合物 按照上述關 中間物之方法 ED ：
貫例40-化合物EE-EG :
使化合物ecii(29〇毫克’ 〇.37毫莫耳）溶於DCM(5毫升） 中。將DMP試劑（175毫克，〇_41毫莫耳）添加至此溶液中， 並授拌1小時。以P-NajCMi.S毫莫耳/克樹脂）使反應淬 滅’並搜拌1小時。將已淬滅之DMP試劑，以p_TBD(2 5毫 莫耳/克樹脂）清除’並攪拌1小時。在濃縮成殘留物之前， 將所形成之混合物過濾’以DCM沖洗。將所形成之殘留物 藉由50% EtOAc/hex純化’產生化合物EE(44〇毫克， 28%) 〇
143110.doc -185- 1378927 按照上述關於製備上述化合物之方法，及相關於·製備其 中間物之方法，但使用適當起始物質，製備下列化合物 EF-EG :
實例41-化合物EH :
於化合物cciii(140毫克，〇,2毫莫耳）之DCM溶液（3毫升） 中，添加DMP試劑（133毫克，〇.3毫莫耳）。將反應物於室 溫下授拌2小時，並以1〇。/。NazSCh(水溶液）使反應淬滅， 歷經20分鐘。將所形成之混合物以Et〇Ac萃取。有機層以 鹽水洗滌’以MgS〇4脫水乾燥’濃縮成黃色油，將其藉由 石夕膠（70% EtOAc/己烧）純化，並於凍乾後，產生化合物 EH(50毫克，38%)。
實例42·化合物EJ 使化合物ixxxiii(52〇毫克，1毫莫耳）溶於DCM(5毫升） 中。將PyBOP(624毫克1.2毫莫耳）添加至上述溶液中，並 143110,doc •186· 1378927 攪拌5分鐘。將在THF(5毫升）中之化合物cdviii(300毫克， 1.2毫莫耳）逐滴添加至此溶液中，接著為DIPEA(0.22毫 升，1.2毫莫耳）。將反應物於室溫及氮氣下攪拌過夜。此 時，將反應物以EtOAc稀釋，以飽和NaHC03與鹽水洗滌。 有機相以MgS04脫水乾燥，過濾及濃縮，而得粗製偶合中 間物cdix。
cdix 使此中間物cdix (〜1毫莫耳）溶於DCM(10毫升）中。將 Dess-Martin過蛾烧（466毫克，1·1毫莫耳）添加至此溶液 中。在室溫下攪拌1小時後，以聚合體結合之Na2SO3(740 毫克，1.5毫莫耳DMP/克樹脂）使反應淬滅，並攪拌45分 鐘。然後，將反應混合物以聚合體結合之TBD樹脂（440毫 克，2.5毫莫耳DMP/克樹脂）去雜。將所形成之混合物攪拌 45分鐘，然後過濾。在5% EtOH/ EtOAc中達成純化，產生 化合物EJ(245毫克，32%，歷經2個步驟）。.關於處理程序 之文獻參考資料，可參閱Tetrahedron 55 (1999) 6785-6796 °
143110.doc -187- 1378927 實例43-化合物ΕΝ 使中間化合物cdvii(4l5毫克’ 〇·59毫莫耳）溶於dCM(1〇 毫升）與THF(10毫升）中。添加t-BuOH(300微升），接著為 Dess-Martin過碘烷（750毫克，1.77毫莫耳將反應物搜掉 50分鐘’然後以P-Na2S(M1.5毫莫耳DMP/克樹脂）使反應 淬滅。於室溫下攪拌20分鐘後，以P_TBD(2.5毫莫耳DMP/ 克樹脂），使反應混合物去雜。攪拌1小時後，將所形成之 混合物過濾及濃縮。產物藉矽膠層析純化（5〇%至7〇0/。 53%) 〇
EtOAc/己烷），產生化合物EN(220毫克
對於下列化合物獲得質譜[M]，如下表！中所示 表1 LY# 實例 實測之質量 A 733.3 B 747.2 C 657.2 D 769.4 E 733.4 F 625.4 G 639.3 Η 661.4 I 643.4 J 707.3 K 641.3 I431I0.doc -188- 1378927
L Μ N Ο P Q R S Tu Vw X Yz AA AB AC AD AE AF AG
AI AJ AM AN AP AQ
AW 689.3 639.3 639.4 731.4 687.4 653.4 701.4 639.3 747.1 655.4 653.4 703.4 661.3 647.3 663.3 667.4 711.4 725.4 647.3 779.4 689.3 671.4 806.4 687.5 735.4 736.5 870.4 813.3 724.4 653.4 628.2 642.2 143110.doc -189 1378927 ΑΧ 614.2 AY 628.3 BD 570.3 BE 520.2 BF 534.3 BG 584.3 BU 890.3 BV 685.4 BW 679.3 BX 695.3 BY 697.3 BZ 787.4 CA 701.3 CB 669.4 CC 733.5 CD 643.3 CE 653.5 CH 749.4 Cl 653.3 CJ 717.5 CK 683.4 CL 669.3 CM 675.2 CN 717.2 CO 653.3 CP 683.3 CQ 669.3 CR 675.2 CT 661.8 CS 639.3 CU 679.2 CV 709.3
143110.doc -190·
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cw 743.3 cx 695.3 CY 665.2 cz 681.3 DA 695.3 DB 701.2 DC 673.3 DD 693.3 DE 757.4 DF 682.3 DG 676.3 DH 676.2 DI 692.5 DJ 605.2 DK 874.4 DL 924.5 DM 924.2 DN 952.7 DO 830 DP 842.5 DT 667.4 DU 639.2 DV 740.3 DW 684.2 DX 678.5 DY 749.3 DZ 685.3 EA 649.3 EB 700.3 EC 702.3 ED 730.3 EE 775.3 143110.doc •191 1378927 EF 749.3 EG 722.3 EH 665.2 El 796.4 EJ 744.3 ΕΚ 730.5 EL 730.5 EM 757.3 ΕΝ 703.5 EO 715.5 EP 679.2 EQ 651.3 ER 715.3 ES 668.5 ET 732.5 EU 743.3 EV 683.3 EW 750.4 EX 786.4 EY 744.5 EZ 780.4 FB 693.4 FC 655.3 FD 655.3 FE 774.4 FF 681.5 FG 667.5
獲得下列化合物之高解析度質譜（HRMS)，係如表2中所 示0 143110.doc -192 1378927 表2 實例 分子式 (M+l) 計算之MS (M+l) 實測之質量 (M+l) L C37H52N706 690.3979 690.3986 Μ C33H50N7O6 640.3822 640.3822 Ζ C32H48F2N706 664.3634 664.3627 ΑΒ C36H48F2N706 712.3634 712.3649 CE C34H52N706 654.3979 654.3967 ΕΝ C35H52N706F2 704.3947 704.3945 ΕΚ C37H63N608S 751.4428 750.4350 (M) EC C36H59N608 703.4395 703.4382 CA C35H50N7O6F2 702.3790 702.3801 EZ C40H55N8O6F2 781.4213 781.4196 • EU C36H52N706F2 716.3947 716.3929 CY C35H52N706 666.3979 666.3966 BX C37H58N706 696.4448 696.4432 s C33H50N7O6 640.3823 640.3831 BW C36H54N706 680.4136 680.4126 CU C36H54N706 680.4136 680.4128 EJ C40H57N8O6 745.4401 745.4417 EM C35H54N706 668.4136 668.4139 無 C41H58N706 744.4448 744.4691
中間物實例1-化合物ii 於化合物i(8.1克，24.4毫莫耳）之乙醇溶液（40毫升）中， 在-10°C下添加NaBH4(924毫克，24.4毫莫耳）。
將反應物在該溫度下攪拌30分鐘，然後以AcOH(3毫升） 使反應淬滅。將反應混合物以EtOAc(250毫升）稀釋，並以 NaHC03與鹽水洗滌。使有機層脫水乾燥，及在真空中濃 縮，產生殘留物，將其藉矽膠層析純化（50% EtOAc/己 烷），以提供7.85克（97%)化合物ii， 143110.doc •193- 1378927
中間物實例2-化合物iii 於化合物ii(4.48克，13.4毫莫耳）之THF溶液（70毫升） 中，在0°C下添加NaH(699毫克，60°/o，17.42毫莫耳）》在 該溫度下攪拌40分鐘後，添加純Mel(l.25毫升，20.1毫莫 耳）。將此反應物於約室溫下授摔過夜。此時，小心地以 飽和NH4C1溶液，在o°c下’使反應淬滅。將反應混合物以 Et20與EtOAc萃取。有機層以水與鹽水洗滌，並以Na2S04 脫水乾燥。將如此獲得之有機層在真空中濃縮，以提供黃 酸酯化合物iii，
中間物實例3-化合物iv 使黃酸酯化合物iii(〜13.4毫莫耳）溶於甲苯（1〇〇毫升） 中。於此溶液中添加AIBN(216毫克，i 34毫莫耳）。將所 形成之溶液以乾燥氮脫氣，然後以n_BU3SnH(5 4毫升， 20·1毫莫耳）處理。將反應混合物在9〇〇c下加熱3小時。此 時，使反應物冷卻至室溫，及在真空中濃縮。將所形成之 143110.doc 1378927 殘留物以石夕膠層析純化（15-20% EtOAc/己烷），提供2 8克 (得自化合物ii，整體為66〇/〇)化合物iv，
中間物實例4-化合物v 於化合物iv(l克，3.15毫莫耳）之乙醇溶液（21毫升）中， 在氮氣流下’添加Pd(OH)2/c(655毫克，2〇%，〇 %毫莫 耳）。使所形成之反應混合物接受標準氫化作用（15大氣 壓）。5小時後，移除氫來源，並將反應物過濾。於真空中 濃縮瀘、液，提供自由態胺化合物v，
中間物實例5-化合物vi 於化合物vii(629毫克，1·95毫莫耳）iDCM溶液（1〇毫升） 中，在約室溫下
添加HOAt(265毫克，丨.95毫莫耳），及接著為在dcm中 之上MDCC溶液（1.95毫升，丨.95毫莫耳）。攪拌川分鐘後， 143110.doc -195· 1378927 將化合物v(l,5毫莫耳）之DCM溶液（3毫升）添加至上述H〇At 活化之酸中。將此反應物於約室溫下攪拌過夜。此時，使 反應物經過矽藻土過濾。將濾液以Et〇Ac(75毫升）稀釋， 並以水及鹽水洗滌。使有機層脫水乾燥，及在真空中濃 縮。所形成之殘留物藉矽膠層析純化（70_80% EtOAc/己 烷）’而得620毫克（85%)化合物vi，
中間物實例6-化合物viii 於化合物vi(615毫克’ 1.26毫莫耳）之乙醇溶液（1〇毫升） 中，添加2 N NaOH水溶液（1.26毫升，2.52毫莫耳）。將反 應物在約室溫下授摔過仪’然後使用Dowex酸性樹脂，酸 化至pH3。將固體濾除’並使濾液在真空中濃縮，而得殘 留物，使其再溶解於1 : 1CH3CN/H20f。使此溶液接受冷 凍乾燥，提供495毫克（85%)化合物viii，
中間物實例7-化合物ix 於化合物viii(230毫克，0.5毫莫耳）之DCM溶液（10毫升） 中，添加PyBOP(417毫克，0.8毫莫耳）。將此反應物於約 室溫下攪拌30分鐘。然後，於此溶液中添加化合物x(263 143110.doc •196· 1378927 毫克，0.75毫莫耳）之THF溶液（5.25毫升），及接著
為DIPEA(0.174毫升，1毫莫耳）。將反應物於約室溫下 攪拌過夜，然後以水（30毫升），使反應淬滅，歷經30分 鐘。將反應混合物以EtOAc( 100毫升）萃取。有機層以鹽水 洗滌並脫水乾燥，及在真空中濃縮，而得殘留物，使其經 由矽膠層析純化（5% EtOH/EtOAc)，獲得〜400毫克（100%) 化合物ix，
中間物實例8-化合物xi 於化合物ix(396毫克，0·5毫莫耳）之DCM溶液（10毫升） 中，添加DMP試劑（278毫克，0.65毫莫耳）。將反應物於約 室溫下攪拌卜】、時，然後以10% Na2S03使反應淬滅，歷經 30分鐘。接著將反應混合物以EtOAc(75毫升）萃取，及以 鹽水洗滌。使有機層脫水乾燥，及在真空中濃縮。將所形 成之殘留物以矽膠層析（70% EtOAc/己烷）純化，獲得320 毫克（81°/〇)化合物xi， 143110.doc -197-
1378927 中間物實例9-化合物xii 於化合物viii(230毫克，0.5毫莫耳）之DCM溶液（1〇毫升） 中，添加PyBOP(417毫克，〇_8毫莫耳）。將反應物於約室 /m下授拌3 〇为鐘。然後’於此溶液中添加化合物h i丨（1 4 〇 毫克’ 0.75毫莫耳）之THF溶液（3.5毫升）
及接著為DIPEA(0.174毫升’ 1毫莫耳）。將此反應物於 約室溫下攪拌過夜，然後以水（30毫升）使反應淬滅，歷經 3〇分鐘。將反應混合物以EtOAc(75毫升）萃取。有機層以 鹽水洗滌並脫水乾燥，及在真空中濃縮’而得殘留物，使 其經由矽膠層析純化（5% EtOH/EtOAc)，以定量產率獲得 化合物xii，
中間物實例10-化合物i 143110.doc 1378927 於化合物i(5克，15.1毫莫耳）之甲醇溶液（3〇毫升）中添 加（B0C)20(3.3 克，15.1 毫莫耳）與 H2/Pd(〇H)2/c(l 6 克， 10% Pd含量）。將反應物於約室溫下攪拌2小時，然後經過 矽藻土過濾兩次。將矽藻土床以DCM沖洗。使合併之減液 在真空中濃縮，產生油狀殘留物’將其藉矽膠層析純化 (400/〇£1〇八<:/己烷），獲得3.8克（85%)化合物1·，
中間物實例11-化合物Π· 於化合物i'(3.7克，12.5毫莫耳）之甲醇溶液（丨丨丨毫升） 中，在0°C下，添加NaBH4(0.805克，21毫莫耳）》在〇°c 下’攪拌2.5小時後，於真空中慢慢地蒸發反應溶劑，產 生殘留物，將其以EtOAc稀釋。然後’將此溶液以水洗務 兩次。水層以EtOAc萃取。將合併之有機層以MgS04脫水 乾燥’及過慮’並在真空中濃縮，產生殘留物，將其以層 析純化，提供3.76克（99%)化合物ii·，
中間物實例12-化合物xiv 於化合物ii，（3.76克，12.3毫莫耳）之〇0厘溶液（180毫升） 143110.doc •199- 1378927 中，在0°C下添加DMAP(5克，40.1毫莫耳），接著為Tf20(4 毫升，23.7毫莫耳）。將反應物在0°C下攪拌1小時，及在約 室溫下，再攪拌1.5小時。然後，將反應混合物以5% NaHC03洗滌兩次，並以MgS04脫水乾燥。使如此獲得之 有機層在真空中濃縮，提供粗製三氟甲烷磺酸鹽。使所形 成之三氟曱烷磺酸鹽（2.7克，6毫莫耳）溶於DCM(120毫升） 中。於此溶液中添加DMAP(2.5克，20.5毫莫耳）。將所形 成之反應混合物加熱至回流過夜。此時，使反應物冷卻至 室溫，並以5% NaHC03洗滌兩次。將反應混合物以MgS04 脫水乾燥，過濾，及在真空中濃縮，產生褐色油狀殘留 物，使其純化（1% MeOH/DCM)獲得500毫克（30%)化合物
中間物實例13 -化合物xv 使化合物xiv(5 00毫克，1.8毫莫耳）溶於二氧陸圜中之4 N HC1(6.75毫升）内。將反應物於約室溫下攪拌〜4小時。此 時，於真空中移除溶劑。將所形成之殘留物以乙醚滴定兩 次，以幾乎定量產率獲得化合物xv之HC1鹽，
143110.doc -200· 1378927 中間物實例14-化合物xvi
於化合物vii(579毫克，1.8毫莫耳）之THF溶液（7毫升） 中，添加H〇At(245毫克，1.8毫莫耳）與DCC(1.8毫升，1 Μ 在DCM中）。形成懸浮液。在約室溫下攪拌15分鐘後，將 化合物χν(1.8毫莫耳）與DIPEA(0_63毫升，3.6毫莫耳）之 THF溶液（6毫升）添加至上述懸浮液中。稍後添加另外之 DIPEA(0.8毫升）。將反應混合物於約室溫下攪拌過夜。此 時，將如此形成之白色固體濾出。以THF沖洗白色固體。 將合併之濾液與洗液在真空中濃縮，而得粗產物，將其藉 矽膠層析純化（100% EtOAc)，提供665毫克（76%)化合物 xvi 1
中間物實例15 -化合物xvii
於7(665毫克，1.37毫莫耳）之乙醇溶液（8毫升）中，在 0°C下添加1 N NaOH水溶液（2.4毫莫耳）。將反應物在約室 溫下攪拌過夜，然後使用Dowex酸性樹脂酸化至pH3。將 固體過濾。使所形成之濾液在真空中濃縮，而得淡黃色殘 留物，使其再溶解於1 : 1CH3CN/H20中，及凍乾而得.467 毫克（74%)化合物xvii，
143110.doc -201 - 1378927 中間物實例16-化合物xix 將化合物xvii(100毫克，0.22毫莫耳）之DCM溶液（4毫升） 以PyBop(207毫克，0,4毫莫耳）在約室溫下處理20分鐘。此 時，將上述溶液以化合物xviii(65毫克，0.32毫莫耳）之 THF溶液（2.6毫升），接著以DIPEA(0.076毫升）處理。
於約室溫下攪拌7小時後，以水使反應淬滅。將反應混 合物以DCM(60毫升）稀釋。分離有機層，並以鹽水洗滌兩 次，且以MgS〇4脫水乾燥。過濾，濃縮及矽膠層析（5%
EtOH/ EtOAc)，獲得 148 毫克（〜100%)化合物 xix。
中間物實例1 7 -化合物XX 於N-Cbz-L-纈胺酸（14.4克，57.2毫莫耳）之丁1^溶液（100 毫升）中，添加ΗΟΒΤ(7·72克，57.2毫莫耳）與丑〇(：1(10.98 克，57.2毫莫耳）。於約室溫下攪拌20分鐘後，將含有第 三-L-白胺酸曱酯鹽酸鹽（10.4克，57.2毫莫耳）之THF溶液 (50毫升）與DIPEA (11.9毫升，68.7毫莫耳）加入上述溶液 中。將此反應物於約室溫下攪拌過夜。於標準水溶液處理 及矽膠層析（30% EtOAc/己烷）後，獲得14克（64%)化合物 143110.doc • 202- XX °
1378927 中間物實例18-化合物χχi 於χχ(6·71克，17.7毫莫耳）之甲醇溶液（8〇毫升）中添加 (於Ν2氣流下）Pd/C(1.88克’ 10% pd含量）。使反應容器， 在約室溫下接受氫化作用（1大氣壓H2)過夜。此時，將反 應混合物經過矽藻土墊過濾’及在真空中濃縮，以提供其 相應之粗製自由態胺，供下一步驟使用。將此胺（〜丨7.7毫 莫耳）之THF溶液’添加至THF(46毫升）與DMF(5毫升）之溶 液中’其中含有2-吡》井羧酸（2.85克，23毫莫耳）、Hobbit (3.12克，23毫莫耳）及£0(：1(4.41克，23毫莫耳）。然後， 於所形成之混合物中，添加DIPEA(3.08克，17.7毫莫耳）。 將反應物在約室溫下攪拌過夜，然後以水使反應淬滅。將 反應混合物以EtO Ac萃取。有機層以鹽水洗滌，及在真空 中濃縮’以提供殘留物’使其藉石夕膠層析純化 EtOAc/己烷）’以提供3·9克（63%)化合物xxi，
中間物實例19-化合物χχϋ 143110.doc -203 - 1378927 於化合物xxi(4.67克，13.34毫莫耳）之甲醇溶液（40毫升） 中’添加2 N NaOH(10毫升’ 20毫莫耳）。將此反應物於約 室溫下攪拌2小時。此時，將另一數量之2 n NaOH(3.3毫 升’ 6.67毫莫耳）添加至此反應混合物中。於約室溫下攪拌 過夜後’使用酸性樹脂將反應物酸化至pH3 ^然後將反應 物過濾，並在真空中濃縮濾液，產生殘留物，使其溶於 1 : 1CH3CN/H20中，以供凍乾。獲得4 15克（93%)化合物 xxii。
中間物實例20-化合物XX出 將化合物xxii(917毫克’ 2.73毫莫耳）之1^]^溶液（1〇毫 升）WHOAt(371毫克’ 2.73毫莫耳）與DCC(2.73毫升，1 Μ ’ 2.73毫莫耳）處理。在攪拌3〇分鐘後，將反應混合物以 化合物ν (500毫克，2.73毫莫耳）之THF溶液（1〇毫升）處 理。於約室溫下攪拌過夜後，過濾白色固體（腺）^在真空 中濃縮濾液，而得殘留物，將其藉矽膠層析純化（6〇_7〇% EtOAc/己烷）’以提供l〇6克（77%)化合物xxiii，
中間物實例21 -化合物XXiv 將化合物XXiii(1.06克，2.U毫莫耳）之乙醇溶液（2〇毫升） 143110.doc •204- 1378927 以2 N NaOH(2.11毫升’ 4.23毫莫耳）處理。於約室溫下攪 拌過夜後，以酸性樹脂使反應混合物酸化至pH3。遽除固 體。將所形成之濾液在真空中濃縮，而得殘留物，使其康 乾，獲得〜1克（100%)化合物xxiv，
中間物實例22-化合物xxv 將化合物xxiv(236.7毫克’ 〇.5毫莫耳）之dcm溶液（10毫 升）以PyB〇p(417毫克’ 〇‘8毫莫耳）處理。於約室溫下攪拌 2〇i鐘後，將反應混合物以化合物毫克，0.75毫 莫耳）之DMF溶液（5.6毫升）’接著以DIpEA(〇 174毫升，1 毫莫耳）處理。於約室溫下攪拌8小時後，以水使反應淬 滅，並以EtOAc萃取。將所形成之有機層以鹽水洗滌，並 乾燥，及在真空中濃縮，獲得殘留物，將其藉矽膠層析純 化（5。/。£1〇11/丑1〇八£〇而得〜3 2〇毫克（1〇〇%)化合物^乂，
中間物實例23-化合物xxvi 將化合物XXiV(355毫克，0.75毫莫耳）之DCM溶液（15毫 升）以PyBop(622宅克’ 1.2毫莫耳）處理。於約室溫下搜摔 143110.doc - 205 - 1378927 20分鐘後，將反應混合物以化合物χχνπ·(ΐ56毫克，0.75毫 莫耳）之THF溶液（10毫升），接著以Dipea(0.26毫升，1.5毫 莫耳）處理。
於約室溫下攪拌過夜後’以水使反應淬滅，並以EtOAc 萃取。將所形成之有機層以鹽水洗滌並乾燥，及在真空中 濃縮’獲得殘留物，藉矽膠層析純化（2% EtOH/EtOAc)而 得〜400毫克（80%)化合物xxvi，
中間物實例24-5-氰基戊酸甲酯 使氰化鉀（4克，61.44毫莫耳）溶於70毫升水與200毫升曱 醇中。於此溶液中’添加10克（51 ·2毫莫耳）5-溴基戊酸曱 酯添加’並使混合物回流過夜。將反應混合物濃縮至乾 燥。於此殘留物中，添加100毫升EtOAc以萃取產物。將有 機物質以水洗滌三次，脫水乾燥及濃縮，產生5 37克 (74%)5-氰基戊酸曱酯，為油狀物。 中間物實例25-5-四唑-5·基戊酸曱酯 使5-氰基戊酸甲酯（4.8克，34毫莫耳）溶於曱笨中，添加 143H0.doc -206· 1378927 二乙基氣化銨（14克，i〇2毫莫耳）與疊氮化鈉（6.63，i〇2毫 莫耳）。將混合物加熱至回流過夜。使反應混合物冷卻至 室溫，添加水，以自有機物質中萃取（3χ1〇〇毫升）5四唑_ 5-基戊酸曱酯。於水相中，添加濃11(：丨，以調整1)11至2。將 產物以EtOAc(3x50毫升），自水溶液萃取。合併有機相， 脫水乾燥及濃縮，產生4.25克（68°/。）5-四唑-5-基戊酸甲 m ° 中間物實例26-5-[N-(l，l-二曱基苄基）四唑基]戊酸甲酯 使5-四唑-5-基戊酸甲酯（4.23克，23毫莫耳）與三氣醋酸 (8.69克，53毫莫耳）溶於5〇毫升（^(：13甲。將〇1-曱基苯乙烯 (2.72,23毫莫耳）逐滴加入溶液中，並將反應混合物於約室 溫下攪拌過夜。將反應混合物以Et〇Ac稀釋至2〇〇毫升，並 將有機層以10% KOH水溶液及鹽水洗滌。使有機層脫水乾 燥’濃縮。產物藉急驟式管柱層析純化，產生66克 (95%)5-[Ν-(1，1-二曱基芊基）四唑_5_基]戊酸曱酯。 中間物貫例27-5-[Ν-(1，1-二甲基苄基）四唑_5_基]戊酸 使5-[Ν-(1，1-二甲基芊基）四唑_5_基]戊酸甲酯（6 6克， 21.8毫莫耳谷於甲醇（1〇〇毫升）中，並添加毫升i N NaOH水溶液。將混合物攪拌過夜，及濃縮，以移除甲 醇。使殘留物溶於水（100毫升）中，並藉由添加相同當量之 1 N HC1水溶液，使溶液中和。產物以Et〇Ac萃取（3χ5〇毫 升）。使有機相乾燥及濃縮，產生4 75克 甲基芊基）四唑-5-基]戊酸。 中間物貫例28-化合物XXviii I43II0.doc -207- 1378927 使5-[>1-(1，卜二曱基_基）四唑-5-基]戊酸（4.75克，16.5 毫莫耳）溶於DCM(1〇〇毫升）中，添加4.8克（24.8毫莫 耳）EDCI與6毫升DIPEA。添加N-羥基琥珀醯亞胺（3·8克， 3 3毫莫耳）至混合物中。將反應混合物於約室溫下搜拌三 小時。將混合物以DCM稀釋至200毫升’並將此溶液以水 洗蘇三次。使有機物質乾燥及濃縮，產生4.79克（75%)化 合物 xxviii，
中間物實例29-化合物xxix 使二肽H-Val-Val-OH(3.22克，14.9毫莫耳）懸浮於5〇毫升 N，N-二曱基曱醯胺（DMF)中，並在添加3.4毫升（18.63毫莫 耳）二異丙基乙胺（DIPEA)之後，添加4.75克（12·42毫莫耳） 化合物xxviii。使混合物溫熱至40°C，並授拌過夜。在高 真空下蒸發溶劑。使殘留物溶於EtOAc中，並以i N 1^(：1與 鹽水洗滌，產生5.52克（91%)化合物xxix，
143110.doc 208· 1378927 中間物實例30-化合物xxx 使1.6克（3.29毫莫耳）化合物乂乂1乂溶於20毫升〇〇^中，添 加THF中之3.3毫升1 M DCC溶液。於混合物中添加500毫 克（2.73毫莫耳）化合物ν。將此混合物於約室溫下攪拌過 夜。將混合物以EtOAc稀釋至100毫升，並以1 N HC1、 NaHC〇3及鹽水洗務。藉管柱層析純化（50% EtOAc/己 烧），產生1.02克（5 8%)化合物xxx，
XXX 中間物實例3 1 -化合物xxxi 使化合物χχχ(1·02克，1.57毫莫耳）溶於10毫升MeOH 中，並添加2毫升1 N NaOH水溶液。將混合物攪拌過夜。 藉蒸發移除甲醇，並使殘留物溶於水中，且以2毫升HC1中
和。在以EtOAc萃取之後，獲得100克（〜100%)化合物 xxxi °
中間物實例32-化合物xxxii 使化合物xxxi(300毫克，0.48毫莫耳）與PyBop(300毫 143110.doc - 209 - 1378927 克，0.58毫莫耳）溶於10毫升DCM中。於此溶液中，添加 化合物x(201毫克，0.58毫莫耳），然後添加DIPEA(104微 升）。將此混合物於約室溫下攪拌過夜。然後，將反應混 合物以EtOAc稀釋至100毫升，並以1 N HC1洗滌兩次，以 NaHC03兩次，及以鹽水三次。使有機物質脫水乾燥，及 濃縮。殘留物藉管柱層析純化（100% EtOAc)產生450毫克 (98%)化合物 xxxii，
中間物實例33-化合物xxxiii 使化合物xxxii360毫克（0.38毫莫耳）溶於8毫升DCM中， 並添加240毫克（0.57毫莫耳）DMP試劑。將此混合物於約室 溫下攪拌三小時。將混合物以EtOAc稀釋至50毫升，並以 鹽水洗滌三次。產物藉管柱層析純化（25%乙醇/EtOAc)產 生300毫克（83%)化合物xxxiii，
中間物實例34-化合物xxxiv 143110.doc -210- 1378927 於χχχν(790毫克，2·80毫莫耳）之DCM溶液（10毫升）中， 添加？丫6〇?(1.7克，3.36毫莫耳）與11〇1)1^(450毫克，3.36毫
使所形成之溶液冷卻至〇°C，並以（s)-a-(4-吡啶基）乙胺 (410毫克，3.36毫莫耳）之DCM溶液（3毫升）處理。接著添 加DIPEA (0.5毫升，3.30毫莫耳）。將反應物在約室溫下攪 拌過夜。此時，將反應混合物以EtOAc稀釋。將整體以飽 和NaHC03與鹽水洗滌。使如此獲得之有機層乾燥，及在 真空中濃縮。所形成之殘留物藉矽膠層析純化（5% EtOH/ EtOAc)，以提供630毫克（58%)化合物xxxiv，
註：（s)-a-(4-吡啶基）乙胺係經由鹼洗（1 N NaOH)及接著 EtOAc萃取，得自其D-酒石酸鹽。回收率為89%。 中間物實例35-化合物xxxvi 於化合物xxxiv(630毫克，1.64毫莫耳）之曱醇溶液（15毫 升）中，在N2下，添加Pd/C(150毫克，10%鈀含量）。將反 應物於H2下攪拌過夜。使反應混合物經過Celite®521墊片 過濾。在真空中濃縮濾液，提供420毫克（〜100%)化合物 xxxvi 5 143110.doc 211 -
1378927 中間物實例36-化合物xxxvii 於化合物xxxi(270毫克，0.43毫莫耳）之DCM溶液（3毫升） 中，添加PyBop(270毫克，0.52毫莫耳）。接著添加化合物 xxxvi(160毫克，0.64毫莫耳）與DIPEA(0.09毫升，0.52毫莫 耳）。將此反應物於約室溫下攪拌過夜。此時，將反應物 以EtOAc稀釋，並以0.1 N HC1，接著以飽和NaHC03及鹽 水洗滌。使所形成之有機層脫水乾燥，及濃縮，而得化合 物xxxvii (總質量430毫克），以供下一步驟使用
中間物實例37-化合物xxxviii 於化合物xxxvii(370毫克，0.43毫莫耳）之DCM溶液（3毫 升）中，添加DMP試劑（280毫克，0.65毫莫耳）。將此反應 物於約室溫下攪拌2小時，然後以10% Na2S03使反應淬 滅。在攪拌30分鐘後，將反應物以EtOAc萃取。有機層以 飽和NaHC03與鹽水洗滌。使所形成之有機層乾燥，及在 143110.doc -212- 1378927 真空中濃縮，獲得殘留物，使其藉矽膠層析純化（5% EtOH/EtOAc)，提供1 80毫克（49%，歷經2-步驟）化合物 xxxviii，
中間物實例38-化合物xxxx 使化合物xxix(2.5克，5毫莫耳）溶於40毫升DCM中，將 5.1毫升1 Μ在THF中之DCC溶液添加至此溶液中。於此混 合物中，添加1.08克（3.53毫莫耳）化合物XXXix。將此混合 物於約室溫下攪拌過夜。
將混合物以EtOAc稀釋至100毫升，相繼以1 N HC1、 NaHC03及鹽水洗滌，然後藉管柱層析純化（80% EtOAc/己 烧），產生2.59克（95%)化合物xxxx，
143110.doc -213 - 1378927 中間物實例39-化合物xxxxi 使化合物χχχχ(2·59克，3.35毫莫耳）溶於20毫升Me〇H 中，並添加4毫升1 N NaOH水溶液。將混合物攪拌過夜， 然後迴轉蒸發而留下殘留物。使殘留物溶於水中，並以2 毫升HC1中和。然後，將已中和之溶液以EtOAc萃取，產 生2.49克（〜100%)化合物xxxxi，
中間物實例40-化合物xxxxii 使化合物xxxxi(847毫克，1.16毫莫耳）與724毫克（1.39毫 莫耳）PyBop溶於10毫升DCM中。於此溶液中，添加化合物 xiii(260毫克，1.39毫莫耳），然後添加DIPEA(209微升）。 將此混合物於約室溫下攪拌過夜。接著，將反應混合物以 EtOAc稀釋至100毫升，並以1 N HC1洗滌兩次，以NaHC03 兩次，及以鹽水三次。使有機物質脫水乾燥及濃縮。使殘 留物藉管柱層析純化（5%乙醇/EtOAc)，產生930毫克（86%) 化合物xxxxii，
1431I0.doc -214 1378927 中間物實例41 -化合物xxxxiii 使化合物xxxxii(350毫克，0.38毫莫耳）溶於10毫升DCM 中，並添加242毫克（0.57毫莫耳）DMP試劑。將此混合物於 約室溫下攪拌三小時。將混合物以EtOAc稀釋至50毫升， 並以鹽水洗滌三次。使產物藉管柱層析純化（100% EtOAc) 產生180毫克（51%)化合物xxxxiii，
中間物實例42-化合物χχχχν 使H-Val-Val-OH(5克，23毫莫耳）懸浮於100毫升DMF 中，添加化合物xxxxiv(8.3克，27_6毫莫耳），
然後添加6.2毫升（35.5毫莫耳）DIPEA。將混合物於40°C 下攪拌兩天。在高真空下移除溶劑，並使殘留物溶於100 毫升EtOAc中，並以1 N HC1洗滌三次，及以鹽水兩次。獲 得9.14克（990/〇)化合物乂乂乂乂乂。
143110.doc -215- 1378927 中間物實例43-化合物xxxxvi 使化合物xxxxv(2.8克，7毫莫耳）與954毫克（7毫莫 耳）HOAt溶於100毫升DCM中。添加7毫升1 M DCC/DCM。 於此反應混合物中，添加化合物xxxix(2.1 5克），並將此反 應混合物於約室溫下攪拌過夜。使混合物濃縮至乾涸，並 使殘留物溶於EtOAc中，及藉管柱層析純化（100% EtOAc) 產生4.57克（95%)化合物乂父父父¥1，
中間物實例44-化合物xxxxvii 使化合物xxxxvi(4.57克，6.65毫莫耳）溶於10毫升TFA與 1 0毫升DCM中。將此混合物於約室温下攪拌4小時。藉真 空移除溶劑，並使殘留物溶於50 : 50乙腈/水中，及凍 乾，產生粉末化合物xxxxvii，
中間物實例45-化合物xxxxviii 使化合物乂乂\乂¥丨丨（1克，1.59毫莫耳）與990毫克（2.28毫莫 143110.doc -216- 1378927 耳）PyBop溶於20毫升DCM中，並添加1.6毫升1 Μ在THF中 之曱胺。將此混合物於約室溫下攪拌4小時。將反應混合 物以EtOAc稀釋至100毫升，並以1 N HC卜NaHC03及鹽水 洗滌。殘留物藉急驟式管柱層析純化（10% EtOH/EtOAc)產 生1克（98%)化合物xxxxviii，
中間物實例46-化合物xxxxix 使化合物xxxxviii(l克，1.55毫莫耳）溶於10毫升MeOH 中，並添加2毫升1 N NaOH。將此混合物於約室溫下攪拌 過夜。藉蒸發移除溶劑。使殘留物溶於水中，中和並以 EtOAc萃取，產生960毫克（98%)化合物xxxxix，
中間物實例47-化合物li 使化合物xxxxix(315毫克，0.5毫莫耳）與312毫克（0.6毫 莫耳）PyBop溶於10毫升DCM中。添加化合物1(56毫克， 0.6毫莫耳）與108微升DIPEA。 143110.doc -217- 1378927
將混合物在約室溫下攪拌過夜，並以EtOAc稀釋至100 毫升，及以1 N HC1 ' NaHC03及鹽水洗滌。藉管柱層析純 化（15% EtOH/EtOAc)產生 400 毫克（92%)化合物 li，
中間物實例48-化合物lii 使化合物li(400毫克，0.46毫莫耳）溶於1〇毫升DCM中， 並添加292毫克（0‘69毫莫耳）DMP試劑。將此混合物於約室 溫下攪拌3小時。藉蒸發移除溶劑，並藉Rp_HpLC純化產 物’產生130毫克（32%)化合物lii，
中間物實例49-化合物liii 使化合物XXXXix(21〇毫克，0.33毫莫耳）與2〇8毫克（〇4毫 莫耳）PyB〇P溶於10毫升DCM中。添加化合物xiH(i54毫 克0·83毫莫耳）至此溶液中，接著添加DIPEA(72微升， 143110.doc -218· (S) 1378927 0.4毫莫耳）。將此混合物於約室溫下攪拌過夜。將反應混 合物以EtOAc稀釋至100毫升，以1 N HC1、NaHC03及鹽水 洗滌，然後藉急驟式管柱層析純化（10% EtOH/EtOAc)產生 250毫克（95%)化合物liii，
中間物實例50-化合物liv 使化合物xxxxv(755毫克，1.88毫莫耳）與255毫克（1.88毫 莫耳）HOAt溶於20毫升DCM中。添加1.88毫升1 Μ DCC/DCM。於反應混合物中，添加化合物ν(288毫克），並 將此反應混合物於約室溫下攪拌2小時。使混合物濃縮至 乾酒，並使殘留物溶於EtOAc中，及藉管柱層析純化（80% EtOAc/己烷），產生800毫克（90%)化合物liv，
中間物實例51-化合物lv 使化合物丨iv(800毫克，1.41毫莫耳）溶於10毫升MeOH 中，並添加2毫升NaOH。將此混合物於約室溫下攪拌過 143110.doc -219- 1378927 夜。藉真空移除溶劑’並使殘留物溶於水中，及以2毫升丄 N HC1中和。將產物以Et〇Ac萃取。蒸發萃取溶劑，獲得 760 毫克（~100%)lv，
中間物貫例5 2 ·化合物1 v i i
使化合物lv(760毫克，1.41毫莫耳）與88〇毫克（1 69毫莫 耳）PyBop溶於5毫升DCM*。將化合物lvi(53〇毫克，2 12 毫莫耳）添加至此溶液中，然後添加〇 31毫升DIpEA。 將此混合物於約室溫下攪拌過夜。將反應混合物以 EtOAc稀釋至1〇〇毫升，以i N HC1、NaH(：〇3及鹽水洗滌，春 然後藉急驟式管柱層析純化〇〇〇% Et〇Ac)產生870毫克 (80%)化合物 Ivii，
中間物實例53·化合物iviii 143110.doc •220- (S) 1378927 使化合物lvii(35〇毫克，Ο.45毫莫耳）溶於5毫升TFA與5 毫升DCM中，並將此混合物於約室溫下搜拌3小時。藉蒸 發移除溶劑，並藉RP-HPLC純化產物，產.生220毫克（69%) 化合物1 v i i i，
中間物實例54-化合物lix 使化合物lviii(200毫克’ 0.28毫莫耳）與218毫克（0.42毫 莫耳）PyBop溶於5毫升DCM中。添加甲胺（0.28毫升，2M， 在THF中）。將此混合物於約室溫下攪拌過夜。將混合物以 EtOAc稀釋至1〇〇毫升，以1 N HC1 ' NaHC03及鹽水洗蘇， 然後藉管柱層析純化（I5% EtOH/EtOAc)產生168毫克 (79%)lix，
中間物實例55-化合物lx 使化合物lviii(200毫克，0.26毫莫耳）溶於4毫升DCM 中’並添加165毫克（0·39毫莫耳）DMP試劑。將此混合物於 143110.doc •221 · 1378927 約室溫下攪拌3小時。藉蒸發移除溶劑。使殘留物溶於 50%乙腈/水中’並藉由RP-HPLC過濾純化，產生140毫克 (70%)化合物ιχ，
中間物實例56·化合物ii · 使化合物i(4克，12.1毫莫耳）之DCM(30毫升）與EtOH(30 毫升）溶液，於N2下冷卻至-l〇°C »添加NaBH4(458毫克， 12.1毫莫耳），並將此溶液於_i〇°c下授拌5〇分鐘。 TLC(5 0% EtOAc/己烷）顯示全部轉化成較緩慢之流動點。 以冰，然後以冷飽和NH4C1溶液（10毫升），使反應小心地 淬滅。將混合物傾倒於DCM(300毫升）中。將有機層以飽 和NH4C1溶液（60毫升）洗務一次，及以鹽水兩次（60毫升）。 然後使有機層分離’以Mg S〇4脫水乾燥，及在真空中濃 籲 縮，產生3.5克化合物ii(87%) 中間物實例57-化合物lxi 在裝有Η]氣之250毫升圓底燒瓶中，使化合物丨丨（3 5克， 10.5毫莫耳）之含乙醇溶液（50毫升）接受標準氫化條件[2〇0/〇 Pd(〇H)2/C(1.47克’ 2.1毫莫耳）]’在約室溫下歷經5小時。 經過矽藻土濾出觸媒，並以DCM洗滌《然後，在減壓下移 除溶劑，產生2克（96%)化合物lxi， 143110.doc •222· 1378927
中間物實例58-化合物ixii 在惰性大氣下，將化合物lxi(2〇〇毫克，i毫莫耳）、化合 物 lxiii
lxiii
OH
(233毫克，1.1毫莫耳）、jjQAtQ羥基_7氮苯并三 唑）（156毫克’ 1.15毫莫耳）在無水dmF(6毫升）中之溶液， 攪拌20分鐘。然後，使溫度降至，接著添加Dic(〇 18 毫升，1.15毫莫耳）。將反應物在約室溫下攪拌過夜。將此 溶液以EtOAc稀釋，然後以i Ν Ηα洗滌兩次，以飽和
NaHCCb水溶液兩次，及以鹽水洗滌。分離有機層，以
MgS〇4脫水乾燥，及在減壓下移除溶劑，將殘留物藉層析 (矽膠：70% EtOAc/DCM)純化，以45%產率獲得化合物 lxii。
OH
中間物實例59-化合物lxiv 將在二氧陸園（6毫升）中之化合物lxii(777毫克，2毫莫 耳）溶液與0.5 M NaOH(6毫升），於約室溫下攪拌5小時。 143110.doc •223 · 1378927 藉TLC (100% EtOAc)檢視，顯示完全轉化成一個光點，在 起點處。將反應物以冰浴冷卻下來，接著添加1 N HC1(4 毫升）。然後添加固體NaCl，並將整體混合物以EtOAc萃取 兩次（2x1 50毫升）。然後，合併有機萃液，以MgS〇4脫水 乾燥，及在減壓下移除溶劑，以92%產率獲得化合物 lxiv 0
OH
中間物實例60-化合物lxv 在惰性大氣下，將化合物x(203毫克，0.58毫莫耳）、化 合物lxiv(276毫克，0.775毫莫耳）、HOAt(l-羥基-7-氮苯并 三唑）（126毫克，0.93毫莫耳）在無水DMF(6毫升）中之溶 液，攪拌20分鐘。然後，使溫度降至0°C，接著添加 DIC(0.14毫升，0.93毫莫耳）。將反應物在約室溫下攪拌過 夜。將溶液以EtOAc稀釋，然後以1 N HC1洗滌兩次，以飽 和NaHC〇3水溶液兩次，及以鹽水洗滌。分離有機層，以 MgS〇4脫水乾燥，及在減壓下移除溶劑。將殘留物藉層析 純化（矽膠：50% EtOAc/DCM 至 80 : 19 : lEtOAC/DCM/ MeOH)，以62%產率獲得化合物lxv。 143110.doc -224- (Bj 1378927
中間物實例61-化合物lxvi 在惰性大氣下，於化合物lxv(287毫克，0.42毫莫耳）在 無水DCM(15毫升）中之溶液内，添加DMP試劑（605毫克，
1.43毫莫耳）。將反應物在約室溫下攪拌2小時。（註-DMP 試劑之量與反應時間加倍，係為確保兩個醇基完全被氧化 成其相應之酮基）。藉TLC(矽膠：2% MeOH/EtOAc)檢視， 顯示完全轉化成較快速產物。將反應物以DCM稀釋（1 50毫 升），然後以10%亞硫酸鈉水溶液洗滌兩次（2X5 0毫升），以 飽和NaHC〇3水溶液兩次，及以鹽水洗條。分離有機層， 以MgS〇4脫水乾燥，及在減壓下移除溶劑。將殘留物藉層
析純化（矽膠：50% EtOAC/DCM至 80 : 19 : lEtOAC/DCM/ MeOH)，以77%產率獲得化合物lxvi。
中間物實例62-化合物lxvii 於L-3苯基乳酸（2克，12毫莫耳）之DCM溶液（60毫升） 中，添加PyBop(7.5克，14.4毫莫耳）。於此溶液中，添加 143110.doc •225 - 1378927 含有L-纈胺酸曱酯HC1(2.4克，14.4毫莫耳）與DIPEA(2.6毫 升’ 14.4毫莫耳）之DCM溶液（20毫升將所形成之反應混 合物於約室溫下攪拌過夜。此時，將反應物以EtOAc稀釋 (30毫升）’以NaHCO3(30毫升）與鹽水（15毫升）洗滌。將有 機層以NajO4乾燥，過濾及濃縮。於矽膠上，在50% EtOAc/己烧中，達成純化，獲得2.97克（89%)化合物 lxvii，
Ixvii 中間物實例63-化合物lxviii 使化合物1χνϋ(2·97克，10.6毫莫耳）溶於〇〇^1(50毫升）
中，並以冰浴冷卻。於此溶液中添加TBSCl(2.1克，13.8毫 莫耳）’接著為咪唑（0.94克，13.8毫莫耳）。將所形成之溶 液授拌過夜。然後’將反應物以EtOAc(50毫升）稀釋，以 NaHC03與鹽水洗滌。將有機層以Na2S04脫水乾燥，過濾 及濃縮。在20% EtOAc/己炫中，於石夕膠上，達成純化，獲 得3.79克（90%)化合物1乂丫出。
中間物實例64·化合物lxix 於化合物lxviii(3.78克，9·6毫莫耳）之曱醇（5〇毫升）溶液 中’添加1 N NaOH水溶液（14.4毫升，14.4毫莫耳）。將所 143110.doc 226- CSj 1378927 形成之溶液攪拌過夜。於真空中部份移除溶劑。然後，使 用1 N HC1水溶液，使反應混合物之pH值降至3。將此溶液 以EtOAc與鹽水稀釋。將所要之產物以EtOAc萃取（3x50毫 升）。合併有機層，以Na2S04脫水乾燥，過濾及濃縮，而 得3.5克（96%)化合物1乂1乂，
Ixix 中間物實例65-化合物lxx
於含有化合物lxix(l.l克，2.9毫莫耳）之〇01^1(15毫升）溶 液中，添加11〇八1(0.44克，3.2毫莫耳），接著為〇(：(：(3.2毫 升，3.2毫莫耳）在DCM中之1 Μ溶液。於約室溫下攪拌20 分鐘後，添加化合物xxxix(970毫克，3.2毫莫耳）之 DCM(15毫升）溶液。將此反應物於N2下攪拌過夜。然後， 將反應物以EtOAc(30毫升）稀釋，經過矽膠墊過濾，以0.1 N HC1、NaHC03及鹽水洗滌。將有機層以Na2S04乾燥，過 濾，及在真空中濃縮。在50% EtOAc/己烷中，於矽膠上， 達成純化，獲得1.5克（77%)化合物lxx，
中間物實例66-化合物lxxi 143110.doc -227- 1378927 於化合物xx(1.5克，2.4毫莫耳）之甲醇溶液（3〇毫升）中， 添加1 N NaOH水溶液（3_6毫升，3·6毫莫耳）。將所形成之 溶液攪拌過夜。此時，部份移除溶劑，並使用丨N 溶液，使反應混合物之pH值調整至3。然後，將反應物以 EtOAc (50毫升）與鹽水（20毫升）稀釋。將水層以Et〇Ac萃取 (3x50毫升）。將有機層合併，以Na2S〇4脫水乾燥過濾及 濃縮’提供i.3克（92%)化合物1χχί，
中間物實例67-化合物lxxii 於含有化合物lxxi(180毫克，〇.28毫莫耳）之DCM(2毫升） 溶液内，添加PyBop(175毫克，0.34毫莫耳）與〇1叩八(〇〇6 毫升，0.34毫莫耳），接著為化合物415〇毫克，〇41毫莫 耳）之DCM溶液（3毫升p將所形成之溶液，於沁下攪拌過 仪。然後，將反應物以EtOAc(30毫升）稀釋，以 鹽水洗滌《將有機層以NajO4脫水乾燥，過濾及濃縮。在 loo% Et〇Ac中，於矽膠上達成純化，獲得27〇毫克（98%) 化合物lxxii， 143110.doc 1378927
中間物實例68-化合物lxxiii
於化合物lxxii(270毫克，0.27毫莫耳）2DCM(3毫升）溶 液中，添加DMP試劑（140毫克，〇·33毫莫耳）。於約室溫下 授拌1.5小時後，以1 〇% NasSO3使反應淬滅（1 〇毫升ρ將反 應物以EtOAc稀釋（30毫升）並攪拌10分鐘。有機層以 NaHC〇3與鹽水洗蘇。將有機層以NaJO4乾燥，過渡及濃 縮。在60% EtOAc/己烷中’達成純化，獲得！5〇毫克（56%) 化合物lxxiii，
中間物實例69-化合物lxi 於化合物Π(3·5克，10.5毫莫耳）之乙醇溶液（50毫升）中， 在氮氣流下，添加Pd(OH)2/C(1.47克，20% Pd含量，2_1毫 莫耳）。使反應物在1大氣壓力下，接受氫化作用。於完成 143110.doc •229· 1378927 時，將觸媒經過矽藻土墊過濾，並以二氣曱烷洗滌。在真 空中濃縮濾液，而得2克（96%)化合物lxi。
中間物實例70·化合物lxxW 於化合物vii(9.1克，28.2毫莫耳）之DMF溶液（6〇毫升） 中，添加HOAt(4克，29·4毫莫耳）與13_雙丙基碳化二亞胺 (3.7克，29.4毫莫耳）。於約室溫下攪拌3〇分鐘後，將化合 物lxi(5.1克，25.6毫莫耳）之]01^17溶液（1()毫升）添加至上述 溶液中。將此反應物於約室溫下攪拌過夜。此時，濾除白 色固體。在真空中濃縮濾液，而得殘留物，將其藉矽膠層 析純化，獲得9.5克（670/〇)化合物ixxiv，
中間物實例71 ·化合物ΐχχν 於化合物1χχιν(1.5克，3毫莫耳）在無水THF(25毫升）中之 溶液内，在約室溫下，添加EtiPr2N(〇 78毫升，4 5毫莫 耳）。使混合物冷卻至ot：，並以逐滴方式添加m〇mci(i 5 毫升丨9.7毫莫耳）。使反應物溫熱至室溫，並攪拌過夜。 然後，將此溶液以醚稀釋，並以水洗滌（3次”將水層進— 步以醚萃取，並使所有之有機層以MgS〇4脫水乾燥，然後 濃縮而得黃色油。藉矽膠層析（Et〇Ac/己烷5/2)，以4〇%產 率，分離化合物Ixxv所要之異構物，且明顯地分離非對映 異構物。 ' 143110.doc -230-
中間物實例72-化合物lxxvi 於化合物lxxv(502毫克，0.9毫莫耳）在EtOH(5毫升）中之 溶液内，在0°C下逐滴添加2 N NaOH水溶液（0.9毫升，1.8 毫莫耳）。使反應物溫熱至室溫，並攪拌過夜。於皂化作 用完成時，以Dowex50W8X-200酸性樹脂，使溶液酸化至 pH3。濾除固體，並在真空中濃縮所形成之濾液，而得油 狀殘留物，使其凍乾而得370毫克（80%)化合物lxxvi，
中間物實例73-化合物lxxvii 將化合物lxxvi(110毫克，0.21毫莫耳）之二氯甲烷溶液（4 毫升）以PyBop(200毫克，0.38毫莫耳）處理。於約室溫下攪 拌30分鐘後，在反應混合物中添加化合物xiii(60毫克， 0.32毫莫耳）之THF溶液（3_2毫升），接著為EtiPr2N。於攪拌 過夜後，在約室溫下以水使反應淬滅，並以EtOAc萃取。 將所形成之有機層以鹽水洗滌並以MgS04脫水乾燥，然後 濃縮成黃色油。藉矽膠層析純化（5% EtOH/EtOAc)產生143 毫克（1 00%)化合物lxxvii， 143110.doc -231 -
1378927 中間物貫例74-化合物lxxviii 於H-CHg-OH2(5克，19·4毫莫耳）之THF溶液（50毫升） 中’添加 HOBt(2.63 克 ’ 19.4毫莫耳）與 EDCI(3.72克，19.4 毫莫耳）。於約室溫下攪拌20分鐘後，將含有第三_L-白胺 酸曱酯鹽酸鹽（19.4毫莫耳）與DIPEA(6.75毫升，38.8毫莫 耳）之THF(19毫升）與DMF(10毫升）溶液，添加至上述溶液 中。將反應物於約室溫下攪拌過夜。標準水溶液處理及矽 膠層析（15-20% EtOAc/己烷），獲得2·27克（30%)化合物 lxxviii，
lxxviii 中間物實例75-化合物Ixxix 於化合物lxxviii(2.27克，5.9l毫莫耳）之THF溶液（12毫 升）中，添加二氧陸圜中之4 N HC1溶液（7 38毫升，29 5毫 莫耳）。將反應物於約室溫下攪拌過夜。此時，在減壓下 移除溶劑，產生化合物lxxix ,將其直接使用於下一反應。 143110.doc -232- 1378927
_間物實例76-化合物lxxx 於化合物lxxix(5.9毫莫耳）之thF溶液中，添加含有2_ 吡畊羧酸（878毫克’ 7.08毫莫耳）、H〇Bt(957毫克，7.08毫
莫耳）及EDCI(1·36束，7.〇8毫莫耳）之THF(2〇毫升）溶液。 然後，在所形成之混合物中，添加DIPEA(2 05毫升，η 8 毫莫耳）。將反應物在約室溫下攪拌過夜，然後以水使反 應泮滅。將反應混合物以EtOAc萃取。有機層以鹽水洗 滌，及在真空中濃縮，以提供殘留物，將其藉矽膠層析純
化（40-50% EtOAc/己烷），
以提供1克（36%)化合物丨乂灯， 中間物實例77-化合物lxxxi 於化合物lxxx(l克，2.56毫莫耳）之甲醇溶液（2〇毫升） 中’添加2 N NaOH(3.2毫升’ 6.4毫莫耳）。將此反應物於 約室溫下攪拌過夜。此時’使用5 N HC1，使反應物酸化 至pH3。將反應物以EtOAc稀釋（75毫升），並以水及鹽水洗 滌。使如此獲得之有機層脫水乾燥，及在真空中濃縮，獲 得殘留物，使其溶於1 : lCH3CN/H2〇中，以供冷;東乾燥。 143110.doc •233 · 1378927 總計獲得〜1克（100%)化合物lxxxi。 1378927
Ixxxi 中間物實例78-化合物lxxxii 將化合物lxxxi(2.56毫莫耳）之二氣甲烷溶液（1〇毫升）以 HOAt(348毫克，2.56毫莫耳）及DCC(2 %毫升，！ M，2 56 毫莫耳）處理。在攪拌3〇分鐘後，將反應混合物以化合物 ν(2·56毫莫耳）之THF溶液（5毫升）處理。於約室溫下撥拌過 夜後，藉過濾移除白色固體（脲）。在真空中濃縮濾液，而 知·殘留物’使其藉石夕膠層析純化，提供1 4克（丨〇〇%)化合 物 lxxxii，
lxxxii
中間物實例79-化合物ΙχχχίΠ 將化合物1χχχΠ(1.4克，2.58毫莫耳）之乙醇溶液（15毫升） 以2NNaOH(2.58毫升，5.17毫莫耳）處理β於約室溫下攪 拌過夜後，以酸性樹脂使反應混合物酸化至ρΗ3。濾除固 體。將所开> 成之;慮液在真空中濃縮，而得殘留物，使其束 乾’獲得1.32克（〜100%)化合物lxxxiii， 143110.doc •234· 1378927
中間物實例80-化合物Ιχχχίν 將化合物lxxxiii(360毫克，0.7毫莫耳）之二氯曱烷溶液 (15毫升）以PyB〇p(582毫克’ 1.12毫莫耳）處理。於約室溫 下攪拌20分鐘後’將反應混合物以化合物xiii(195 6毫克， 1.05毫莫耳）之THF溶液（10毫升），接著以DIpEA(〇 25毫 升，1.40毫莫耳）處理。於約室溫下攪拌過夜後，以水使反 應淬滅，並以EtOAc萃取。將所形成之有機層以鹽水洗 滌，並乾燥，及在真空中濃縮，獲得殘留物，使其藉矽膠 層析純化（3% EtOH/EtOAc) ’而得42〇毫克（88%)化合物 lxxxiv ，
中間物實例81-化合物ii"， 使無水二氱曱烷與醚（20毫升：2〇毫升）之混合物，於 A(氣體）下冷卻至78t：。於此溶液中，添加τία4(ι m，在 二氣甲烷中，Η)毫升，U)毫莫耳），然後添MMeLi〇4 Μ，在醚中，7.丨毫升，10毫莫耳），接著於_7^c下再攪拌 3〇分鐘。將化合物i(2克，6毫莫耳）在1〇毫升二氯曱烷中之 143110.doc •235- 1378927 溶液，逐滴添加至該混合物中，於相同溫度下歷經1 5分 鐘。將此溶液慢慢溫熱至_4〇。(：，歷經10分鐘，然後在〇°C 下攪拌2小時。藉由將混合物傾倒至水/醚混合物（1 : 1) 中，使反應淬滅，然後使液層分離。將水層進一步以醚萃 取兩次。將全部有機層以水、鹽水洗滌，並以MgS04脫水 乾燥，然後濃縮成黃色油。藉矽膠層析（EtOAc/己烷2/1)， 分離所要之化合物ii"’，83%。
中間物貫例82-化合物1χi1 於化合物ii”’（1.7克，5毫莫耳）中添加ι〇重量〇/〇 Pd/C⑺53 克，0.5毫莫耳），接著添MMe0H(17毫升”使氫氣溢流經 過反應混合物’並保持氫氣，以在1大氣壓下反應過夜。 然後’將反應混合物過遽及濃縮，而得929毫克（87。/〇)化合 物lxi'，為無色油。
中間物實例83-化合物Ιχχχν 於化合物xxii(l克，3毫莫耳）之THF溶液（16毫升）中在 約室溫下添加HOAt(0.41克 烧之1 Μ 3¾莫耳），及接著為二氣甲
分鐘後， 143ll0.doc -236- 1378927 HOAt活化之酸中。將反應物於約室溫下授拌過夜。此 時，使反應物經過矽藻土過濾。將濾液以Et〇Ac(丨2〇毫升） 稀釋，並以水，然後以鹽水洗滌。使有機層脫水乾燥及濃 縮成黃色油，使其藉矽膠層析純化（100% EtOAc)，產生1 克（65%)化合物Ιχχχν，
lxxxv
中間物實例84-化合物ΐχχχνί 於化合物lxxxv(920毫克，1.7毫莫耳）之乙醇溶液（8毫升） 中，添加2 N NaOH水溶液（1.7毫升，3.4毫莫耳將反應 物在約室溫下攪拌過夜，然後藉由D〇weU^性樹脂，酸化 至pH3。濾除固體，並使濾液濃縮，獲得無色油，使其再 溶解於1 : lCH3CN/H2〇中，並凍乾而提供800毫克（93%)化 合物lxxxvi。HPLC顯示單一產物峰。
Ο lxxxvi 中間物實例85-化合物lxxxvii 於化合物lxxxvi(150毫克，0.3毫莫耳）之二氣曱烷溶液㈠ 毫升）中，添加PyB〇P(250毫克’ 0.47毫莫耳將此溶液於 約室溫下攪拌30分鐘。然後，於此溶液中添加化合物 xiH(84毫克，0.45毫莫耳）之THF(45毫升）溶液，接著為 毫升，0.6毫莫耳將此反應物於約室溫下攪 143110.doc •237· 1378927 拌過夜，然後以水（25毫升）使反應淬滅，歷經30分鐘。接 著以EtOAc萃取混合物。將所形成之有機層以鹽水洗滌， 並以]^§804脫水乾燥，然後濃縮成黃色油。藉矽膠層析純 化（5% EtOH/ EtOAc)產生 200 毫克（100%)化合物 lxxxvii，
中間物實例86-化合物lxxxix 使化合物lxxxviii，N-Cbz-L-纈胺酸（2.5克，9.9毫莫耳）溶 於THF(30毫升）中。
添加£0(：1(2.29克，11.9毫莫耳）與11081(1.62克，11_9毫 莫耳），並將混合物攪拌五分鐘。在THF(23.9毫升）中添加 L-第三-白胺酸曱酯鹽酸鹽（2:17克，11.9毫莫耳），接著為 DIPEA(2.1毫升）。將反應混合物於氮氣下攪拌過夜。將反 應混合物以醋酸乙酯稀釋，以1 N HC1、飽和碳酸氫鈉及 鹽水洗滌。將有機相以硫酸鈉脫水乾燥，過濾及濃縮。使 濃縮殘留物在25%醋酸乙酯/己烷中純化，而得1.1克（29%) 化合物lxxxix， I431I0.doc • 238 · 1378927
中間物實例87-化合物lxxxx 使化合物lxxxix在標準條件下，使用甲醇（0.3 Μ)與1 N NaOH (1.5當量）水解，而得1.03克（95%)化合物lxxxx，
中間物實例88-化合物lxxxxi
使化合物lxxxx(385毫克，1.06毫莫耳）溶於二氣甲烷（3毫 升）中。添加DCC(1_4毫莫耳），接著為HOAt(190毫克，1.4 毫莫耳）。然後，在二氣甲烷（3毫升）中添加化合物v(260毫 莫耳）。將所形成之混合物於氮氣下攪拌過夜。將反應物 以醋酸乙酯稀釋，經過矽膠過濾及濃縮。使殘留物在50% 醋酸乙@旨/己烧中純化，而得440毫克（80%)化合物lxxxxi，
中間物實例89-化合物lxxxxii 使化合物lxxxxi在標準條件下，使用乙醇（0.3 Μ)與1 N Na〇H (1.5當量）水解，而得390毫克化合物lxxxxii， 143110.doc -239-
1378927 中間物實例90-化合物lxxxxiii 使化合物lxxxxii(350毫克，0.7毫莫耳）溶於二氣曱烷（3 毫升）中。添加PyBOP(480毫克，0_91毫莫耳），接著為化 合物xiii (170毫克，0.91毫莫耳）。添加DIPEA(0.16毫升， 0.91毫莫耳），並將反應混合物攪拌過夜。使反應混合物濃 縮，並在100%醋酸乙酯中純化，而得420毫克（90%)化合 物 lxxxxiii，
中間物實例9 1 -化合物lxxxxi v 使用10% Pd/C(l°/。莫耳），在甲醇中，於氫氣下，使化合 物lxxxxiii氫化，而得335毫克（100%)化合物lxxxxiv，
中間物實例92-化合物lxxxxv 使1H-四唑-5-醋酸乙酯（5克，32毫莫耳）溶於氣仿（80毫 升）中。添加三氯醋酸（12.03克，73.65毫莫耳），接著為a曱 143110.doc -240- 1378927 基苯乙烯（3.78克，32毫莫耳）。將反應混合物攪拌過夜。 隔天，以醋酸乙酯稀釋此溶液，以10% KOH及鹽水洗滌。 使有機相以硫酸鎂脫水乾燥，過濾及濃縮，而得8克（96%) 相應經N-保護之四唑-5-醋酸乙酯。使用乙醇（0.3 M)與1 N NaOH(3當量），使此物質接受標準水解條件，而得7克 (99%)化合物 lxxxxv，
lxxxxv 中間物實例93-化合物lxxxxvi 使化合物1χχχχν(3·62克，14.7毫莫耳）溶於二氣曱烷（50 毫升）中。添加EDCI(4_32克，22.1毫莫耳）與DIPEA(5.1毫 升，29.4毫莫耳），並攪拌五分鐘。添加N-羥基琥珀醯亞胺 (3.38克，29.4毫莫耳），並攪拌三小時。將反應物以二氣 曱烷稀釋，並以水洗滌三次。有機相以硫酸鈉脫水乾燥， 過渡及濃縮，而得3.66克（73%)化合物lxxxxvi，
中間物實例94-化合物lxxxxvii 使化合物lxxxxiv(335毫克，0.62毫莫耳）與化合物 lxxxxvi(343毫克，1毫莫耳）溶於二氣曱烧（6毫升）中。添加 143110.doc • 241 - 1378927 DIPEA(0.17毫升，1毫莫耳），並將反應混合物攪拌過夜。 將反應物以醋酸乙酯稀釋，以飽和碳酸氫鈉、鹽水洗滌， 及濃縮。使殘留物在5%乙醇/醋酸乙酯中純化，獲得80毫 克（16%)化合物 Ixxxxvii，
中間物實例95-化合物lxxxxviii 使化合物lxxxxvii(80毫克，0.11毫莫耳）溶於二氯甲院（3 毫升）中。添加DMP試劑（55毫克，0.13毫莫耳）並攪拌一小 時。將反應混合物以醋酸乙S旨稀釋，並以1 〇%亞硫酸納溶 液，使反應淬滅。有機相以飽和碳酸氫鈉及鹽水洗滌。使 有機相濃縮，並將所形成之殘留物在1 00%醋酸乙酯中純 化，而得40毫克（48%)化合物lxxxxviii，
中間物實例96-化合物xxxix 使化合物ic，N-Cbz-4-羥基Pro甲酯 143110.doc •242· 1378927
OH
OMe (2.1克，7.9毫莫耳，以定量產率製自化合物(：，>1-(^2-4-羥基Pro)溶於DCM(25毫升）中。
OH
c 將CDI(1.54克，9·5毫莫耳）與DIPEA(1·7毫升，9.5毫莫 耳）添加至該溶液中，並攪拌10分鐘。將1,2,3,4-四氫異 喳啉（TIQ) (1.2毫升，9.5毫莫耳）逐滴添加至反應混合物 中，並攪拌五小時。有機相以水、1 N HC1及鹽水洗滌。 在使有機相濃縮之後，藉由40% EtOAc/己烷，使所形成之 殘留物以層析方式純化，產生化合物ci，N-Cbz-4-TIQ羰基 氧基-Pro曱酯（2.5克，75%)。
ci 使化合物ci(2_5克，5.9毫莫耳）溶於MeOH(75毫升）中。 將此溶液以N2溢流，並添加Pd/C(10%，300毫克）。將反應 混合物以H2溢流，並攪拌過夜。使反應混合物經過矽藻土 過渡，及濃縮，產生化合物xxxix，4-(TIQ-幾基氧基）-Pro甲 143110.doc -243 - 1378927 酯（1.49克，83%)。 中間物實例97-化合物vii 使化合物cii，N-吡畊-2-基羰基_Val_Val曱酯（1〇 9克，32 4 毫莫耳）溶於THF(80毫升）中，然後添加NaOH水溶液（48.6 毫升，48.6毫莫耳）。
將所形成之混合物攪拌48小時，然後添加另外之 NaOH(16.3毫升’ 16.3毫莫耳），並將混合物加熱至4〇。〇， 歷經三小時。然後’使反應混合物之pH值降至3，並將水 相以EtOAc萃取，然後濃縮，產生粗製化合物vii，N_吡畊-2-基羰基-Val-Val 酸（10.6 克，1〇〇°/0)。 中間物實例98-化合物ciii 使化合物cii(4.1克’ 12.7毫莫耳）溶於DCM(20毫升）中。 將HOAt(1.73克，12.7毫莫耳）與〇(：0(12.7毫莫耳）添加至此 溶液中’並將此溶液搜拌一小時。將化合物xxxix(3.22 克’ 10.6毫莫耳）添加至DCM中之反應混合物（1〇毫升）内。 將所形成之混合物於N 2下授:拌過夜。使反應混合物經過石夕 膠過濾及濃縮。所形成之殘留物藉矽膠層析純化（50%至 80% EtOAc/己烷梯度液），產生化合物ciii，N-吡畊-2-基羰 基-乂丑1-¥&1-4-(丁1()羰基氧基）-?]：〇甲酯（5.27克，81.70/〇)。 143110.doc -244- 1378927
中間物實例99-化合物civ
使化合物ciii(65〇毫克，1.29毫莫耳）溶於THF(5毫升） 中。將NaOH水溶液（1.42毫升，1.42毫莫耳）添加至溶液 中，然後攪拌過夜。使溶液之pH值降至3，並分離有機 相’及濃縮，產生殘留物。殘留物使用逆相HPLC在乙猜/ 水中純化，產生化合物civ，N-吡畊-2-基羰基-Vai_Vai_4_ (TIQ赘基氧基）-Pro酸（600毫克，95%)。
中間物實例100-化合物cv 使N-Boc-L-第三-白胺酸（2.3克，1〇毫莫耳）與!_第三_白 胺酸甲酯鹽酸鹽（2克，U毫莫耳）合併在DMF(3〇毫升）中。 然後，將恥八1(1.6克，11.5毫莫耳）添加至溶液中。將所形 成之混合物於Μ:下攪拌2〇分鐘，然後降至〇<t，於其中添 加DIC (1.8毫升，u 5毫莫耳）與2,4,6_三甲基吡啶⑴毫 升，11毫莫耳）。將所形成之溶液攪拌過夜，且溫熱至室 143110.doc -245 - 1378927 溫。將反應混合物以EtOAc稀釋，並將有機相以】N HC1、 飽和NaHC〇3及鹽水洗條。在濃縮有機相之後，將所形成 之殘留物藉由20%-30%EtOAC/己烷梯度液，以層析方式純 化，產生化合物cv(3.3克，92%)。
中間物實例101-化合物cvi 使用二氧陸圜（40毫升）與〇·5 N NaOH(37毫升，1 8.4毫莫 耳）’使化合物cv(3.3克’ 9.2毫莫耳）水解，產生化合物 cvi(2.9克，92%)。
中間物實例102-化合物cvii 使化合物cvi(2克’5.8毫莫耳）與化合物v(1克，5.5毫莫 耳）溶於〇]\^(20毫升）中。然後，將]9[〇八4832毫克，6.6毫 莫耳）與DIC(1.1毫升，6.6毫莫耳）添加至該溶液中。將所 形成之溶液於A下攪拌過夜。將反應混合物以EtOAc稀 釋’並將有機相以1 N HC1 '飽和NaHC03及鹽水洗滌。在 濃縮有機相之後，將所形成之殘留物，藉由2Q%-.30% EtOAc/己烷梯度液’以層析方式純化’產生化合物 cvii(2.4克，810/〇)。 143110.doc -246- 1378927
中間物實例103·化合物cviii 使化合物cvii(2.4克，4.72毫莫耳）溶於£>(：：]^(1〇毫升） 中。將TFA(10毫升）添加至溶液中。將所形成之溶液攪拌4 小時。使反應混合物濃縮，溶於Et〇Ac中，然後將有機相 以1 N NaOH與鹽水洗滌。使有機相濃縮，產生化合物cWii (1.084克，56.1°/〇)。
中間物實例104-化合物Cix 使2-吡畊羧酸（181毫克，丨.46毫莫耳）與化合物cviH(54i 毫克，1.325毫莫耳）溶於DMF〇5毫升）中。將H〇At(2〇7毫 克，1.52¾莫耳）與DIC(〇24毫升，丨52毫莫耳）添加至該溶 液中。將所形成之溶液於A下攪拌過夜。將反應混合物以
EtOAc稀釋，並將有機相以！ N HCi、飽和NaHc〇3及鹽水 洗滌。在濃縮有機相之後，將所形成之殘留物，藉由2〇%_ 30%-35%Et〇Ac/己烷梯度液，以層析方式純化產生化合 物 cix(430毫克，63。/〇)。 143110.doc -247-
1378927 中間物實例105-化合物cx 使用EtOH(7毫升）與1 N NaOH(4.7毫升，4·7毫莫耳），使 化合物cix水解，產生化合物cx(700毫克，91.6%)。
中間物實例106-化合物cxi 使化合物cx(690毫克，1 ·42毫莫耳）溶於DCM(9毫升） 中。然後，將PyBOP(890毫克，1.7毫莫耳）添加至溶液 中，接著添加化合物xiii'(320毫克，1.7毫莫耳）。
於所形成之混合物中添加DIPEA(0.3毫升，1.7毫莫耳）。 將反應混合物於N2下攪拌過夜。然後，將反應混合物以 EtOAc稀釋，以飽和NaHC03與鹽水洗滌。在濃縮有機相之 後，將所形成之殘留物藉由100% EtOAc以層析方式純 化，產生化合物cxi(490毫克，52.7%)。 143110.doc -248- 1378927
中間物實例1 〇 7-化合物iv 使化合物cxii(1.2克，3·〇6毫莫耳）溶於Me〇H(12毫升） 中。
在以N2徹底溢流後’添加10重量❶/。pd(〇H)2/碳（〇 6 克）’並使混合物氫化過夜，藉TLC(3 0% EtOAc/己烷）註實 完全反應混合物。藉過濾，使溶液與固體物質分離，並濃 縮成其相應之經去除保護化合物cxiii，為無色油（1 〇〇%)
將其使用於下一步驟，無需進一步純化。 使2-吡啫羧酸（400毫克，3.2毫莫耳，1.1當量）溶於DCM/ 丁册（4毫升/4毫升）中，然後添加11〇八1(440毫克，3.2毫莫 耳）與DCC(343毫升’ 1 μ，DCM)。在室溫下攪拌20分鐘 後，使先前獲得之化合物cxiii(〇.96克，3.2毫莫耳）溶於 DCM (6.4毫升）中，並添加至該經活化之混合物中。於室 143110.doc •249· 1378927 溫下攪拌過夜後，使反應混合物經過矽藻土過濾，並使化 合物cxiv藉管柱層析純化（30% EtOAc/己烷）
產生白色固體（0.8克，80%)。 中間物實例108-化合物cxv 使化合物cxiv(0.8克，2.2毫莫耳）溶於MeOH( 10毫升） 中，然後添加2 N NaOH(水溶液）(3.3毫升，6.6毫莫耳）。 將此溶液在室溫下攪拌過夜，此時反應混合物之完成係藉 TLC (50% EtOAc/己烷）指示。藉5 N HC1酸化至pH3及以 EtOAc稀釋後，接著為有機相之萃取。將已萃取之有機相 以鹽水洗滌，並以MgS04脫水乾燥，於濃縮後產生化合物 cxv (0.74,95%) °
中間物實例109-化合物cxvi 於化合物cxv(0.74克，2.1毫莫耳）之DCM溶液（6毫升） 中，在室溫下添加HOAt(290毫克，2.1毫莫耳），接著添加 DCM中之1 M DCC溶液（2.2毫升，2.2毫莫耳）。在室溫下 攪拌30分鐘後，將化合物乂（2.1毫莫耳）之丁1^溶液（10.5毫 升，0.2 Μ)添加至上述HOAt活化之酸中。將反應混合物在 143110.doc 250 · 1378927 至/皿下攪拌過仪。此時’使反應混合物經過矽藻土過濾。 將遽液以Et〇AM12〇毫升）稀釋’並以水及鹽水洗蘇。使 有機相乾燥，及濃縮成黃色油，使其藉矽膠層析純化（5〇% EtOAc/己垸），產生化合物cxvi(〇m克，66%)。
中間物實例110-化合物cxvii 於化合物Cxvi(0.7克，14毫莫耳）2Et〇H溶液中，添加2 < NaOi^K /奋液（2毫升，4毫莫耳）。將反應混合物於室溫下 攪拌過仗，然後藉由5 N HC1酸化至，並以稀 釋’接著萃取有機相。冑已萃取之有機相以鹽水洗蘇，並 以MgSCU脫水乾燥，於濃縮後，產生化合物cxvii(95%)。
中間物實例m-化合物cxviii 於化合物cvii(3〇〇毫克，〇6毫莫耳）之DCM/THF溶液（1〇 毫升/ 2毫升）中，添加pyB〇p(416毫克，〇 8毫莫耳）。將此 溶液於室溫下攪拌3〇分鐘。然後，於此溶液中添加化合物 —Vi，(200毫克，〇8毫莫耳），接著為mpEA(〇 22毫升， 1.2毫莫耳）。 143l10.doc -251 - 1378927 2ν
Η 將反應混合物在室溫下攪拌過夜，然後以水（25毫升）使 反應淬滅，歷經30分鐘。接著以EtOAc萃取混合物。將所 形成之有機相以鹽水洗滌，並以MgS04脫水乾燥，然後濃 縮’產生黃色油。藉矽膠層析純化（3_5% EtOH/EtOAc)產 生化合物cxviii(335毫克，76%)。
中間物實例112-化合物cxix 於化合物cxvii(340毫克’ 0.6毫莫耳）之DCM溶液（1〇毫 升）中’添加PyB〇P(470毫克，0.9毫莫耳）。將此溶液於室 溫下授拌30分鐘。然後，於此溶液中添加化合物^^，(丨7〇 宅克’ 0·9毫莫耳）’接者為DIPEA(0.24毫升，1.2毫莫 耳）。將反應混合物在室溫下攪拌過夜，然後以水（25毫升） 使反應淬滅’歷經30分鐘。然後，以EtOAc萃取混合物。 將所形成之有機相以鹽水洗滌，並以]^§304脫水乾燥，然 後濃縮成黃色油。藉矽膠層析純化（3_5% EtOH/EtOAc)產 生化合物cxix(164毫克，36%)。 H3ll0.doc -252· 1378927
中間物實例113-化合物χχ 使1^-(^2-1^-纈胺酸（6.28克，25毫莫耳）溶於1)(^(3〇毫 升）中。將HOBT(3.38克，25毫莫耳）與DCC(25毫升，1 Μ /谷液）添加至此溶液中，並授拌五分鐘。將L第三白胺酸 甲酯鹽酸鹽（25毫升，1 Μ溶液）添加至此混合物中，並於 Ν2下攪拌過夜。將反應混合物以EtOAc稀釋，以1 Ν HC1、飽和NaHC〇3及鹽水洗滌。將有機相以Na2s〇4脫水 乾燥，過濾及濃縮。殘留物藉由20%-30% EtOAc/己烷，以 層析方式純化，產生化合物χχ(2·96克，3 1 %)。 中間物實例114-化合物xxi 使用10% Pd/C(800毫克），在MeOH(40毫升）中，於H2 下，使化合物χχ(2·95克，7.8毫莫耳）氫化，產生下列相應 自由態胺（1.9克，100%)。
今 使2-吡ρ井羧酸（970毫克，7.8毫莫耳）溶於DCM(20毫升） 中。將PyBOP(4.06克，7.8毫莫耳）添加至此溶液中。將自 由態胺（1.9克’7.8毫莫耳）在〇0^(15毫升）中，添加至該溶 液中，接著忝加DIPEA(1.36毫升’ 7·8毫莫耳）》將所形成 之混合物於A下攪拌過夜。將反應混合物以EtOAc稀釋， 143110.doc -253 · 1378927 並將有機相以飽和NaHC〇3與鹽水洗滌。在濃縮有機相之 後’將殘留物藉由30%-40。/〇 EtOAc/己烷，以層析方式純 化，產生化合物xxi(2.07克，75.8%)。
中間物實例115-化合物χχϋ 使用MeOH(20毫升）與1 N NaOH(3當量），使化合物xxi水 解，產生化合物xxii(1.82克，93.9%)。
中間物實例116-化合物xxiii 使化合物xxii(895毫克，2.66毫莫耳）溶於〇〇\4(10毫升） 中。將DCC(3.2毫莫耳）添加至此溶液中，然後添加 H〇At(435毫克，3·2毫莫耳）。接著添加THF(16毫升）中之 化合物v(3.2毫莫耳）。將所形成之混合物於N2下攪拌過 夜。將反應混合物以EtOAc稀釋，經過矽膠過濾及濃縮。 將所形成之殘留物，藉由50% EtOAc/己烷，以層析方式純 化’產生化合物xxiii(730毫克，54.8%)» 中間物實例117-化合物χχίv 使用EtOH(5毫升）與1 N NaOH(l_5當量），使化合物xxiii 水解，產生化合物xxiv(690毫克，100°/〇)。 中間物實例118-化合物exx 143110.doc -254- 使化合物xxiv(245毫克，0.52毫莫耳）溶於DCM(3毫升） 中。將PyBOP(330毫克，0.62毫莫耳）添加至該溶液中，然 後添加化合物xiii'( 120毫克，0.62毫莫耳）。於所形成之混 合物中，添加DIPEA(0.11毫升，0.62毫莫耳）。將反應混合 物於N2下攪拌過夜。將反應混合物以EtOAc稀釋，並將有 機相以飽和NaHC03與鹽水洗滌。在濃縮有機相之後，將 殘留物藉由5% EtOH/EtOAc，以層析方式純化，產生化合 物 cxx(220 毫克，60%)。
中間物實例119-化合物xiii' 使 Boc-NVA-OH(24.96 克，114.9毫莫耳）溶於 THF(200 毫 升）中。將CDI(22,35克，137.8毫莫耳）分次添加至該溶液 中，並將此溶液攪拌30分鐘。
使N，0-二曱基羥胺鹽酸鹽（12.33克，126.4毫莫耳）溶於 DMF (50毫升）中，然後將DIPEA(22毫升，126.4毫莫耳）添 加至該溶液中。將DMF溶液在室溫下攪拌20分鐘，然後添 加至THF溶液中。將所形成之混合物於N2下攪拌度過週 末。使反應混合物在真空中濃縮成100毫升總體積。將此 143110.doc -255 - 1378927 有機相以1 N HCl、飽和NaHC03及鹽水洗滌。使有機相濃 縮’產生粗製化合物cxxi(25.3克）。
將LAH(l〇7.3毫莫耳）於Nz下，添加至乾燥i升圓底燒瓶 内’在lMEhO溶液中。使此溶液降至〇〇c，然後，逐滴添 加Et2〇(100毫升）中之化合物cxxi(97.5毫莫耳）。於添加完 成時’將所形成之混合物攪拌30分鐘，在下，藉由慢 ’ 1¾添加EtOAc(50毫升）’接著慢慢添加5% KHSO4(50毫升） 溶液’使反應混合物淬滅。將此混合物攪拌3〇分鐘◊有機 相以1 N HC卜飽和NaHC〇3及鹽水洗滌。使有機相濃縮， 產生粗製化合物cxxii(22_：2 8克）。
使化合物cxxii溶於MeOH(l〇〇毫升）中。使Na2S2〇4(16 82 克，96.6毫莫耳）溶於水（100毫升）中，然後添加至化合物 cxxii在0 C下之溶液中。將此混合物健存於冷藏室（5〇c )中 過夜。將水（1〇〇毫升）中之KCN(7.53克，9毫莫耳）添加 至反應混合物中’並在室溫下攪拌15小時。將化合物以 丑文0八£；萃取（3乂100毫升）。有機相以鹽水洗滌（3乂5〇亳升）， 以MgS〇4脫水乾燥’過濾及濃縮，產生粗製化合物 cxxiii(l5.86克）。 I43HO.doc -256- 1378927
使化合物cxxiii(15.86克）溶於二氧陸圜（100毫升）中。將 濃HC1(3 7%，100毫升）添加至此溶液中，接著為曱苯醚（10 毫升），並建立回流（110°C )。將反應物攪拌1.5小時。當反 應混合物冷卻至室溫時，於真空中移除溶劑，產生無水糊 劑。使殘留物在高真空下乾燥過夜，產生粗製化合物 cxxiv °
使化合物cxxiv(69.6毫莫耳）溶於DMF(60毫升）與THF(60 毫升）中。將N-(芊基氧基羰基氧基）琥ίέ醯亞胺（17.33克， 69.6毫莫耳）添加至混合物中，接著添加DIPEA( 12.1毫升， 69.6毫莫耳）。將反應混合物於乂下攪拌過夜。使混合物濃 縮至減少之體積（50毫升），並以EtOAc稀釋。有機相以0.1 N HC1 (2x100毫升）及鹽水洗滌，產生化合物cxxv(17.5 克，54.2%，歷經五個步驟）。
OH CXXV 使化合物cxxv(5.66克，20.14毫莫耳）溶於DCM(60毫升） 143110.doc -257- 1378927 中。將 PyBOP(12.57 克，24.2 毫莫耳）與 ΗΟΒΤ(3.27 克， 24.2毫莫耳）添加至此溶液中，並攪拌五分鐘。使所形成之 混合物降至0°C，然後添加環丙基胺（1.67毫升，24.2毫莫 耳）與DIPEA(4.2毫升，24.2毫莫耳）。將反應混合物攪拌過 夜，溫熱至室溫。將反應混合物以0」N HC1、飽和 NaHC03及鹽水洗滌。然後，使有機相濃縮，並使用70% EtOAc/己烧，以層析方式純化，產生化合物cxxvi(3.1 8 克，49.3%)。
使用10% Pd/C(600毫克），在MeOH(70毫升）中，使化合 物〇乂乂乂丨（3.18克，9.94毫莫耳）氫化。將反應混合物於112下 攪拌過夜，經過矽藻土過濾及濃縮，產生粗製化合物 xiii，（2.1 克，100%)。
中間物實例120-化合物cxxvii 使N-Cbz-L-環己基甘胺酸（3克，10.3毫莫耳）溶於 DCM(36毫升）中。將HOAt(1.5克，11.28毫莫耳）與 DCC(11.28毫升，11.28毫莫耳）添加至此溶液中，並攪拌五 分鐘。將L-第三-白胺酸甲酯鹽酸鹽（103毫升，1 Μ溶液， 143110.doc -258 · 1378927 10.3毫莫耳）添加至此混合物中’並於N2下搜拌過夜。使反 應混合物經過矽藻土過濾’以EtOAc沖洗，及濃縮成殘留 物，將其使用20°/。-30% EtOAc/己烷，以層析方式純化，產 生化合物 cxxvii(2.2克，52%)。
中間物實例12 1 -化合物lxxix’ 使用 20% Pd(OH)2/C(l 克），在MeOH(15毫升）中，於h2 下’使化合物cxxvii(2_2克，5.2毫莫耳）氫化，產生化合物 lxxix，（1.4克，98%)。
中間物實例122-化合物1χXX 使2-p比畊羧酸（360毫克，2.9毫莫耳）溶於DCM(10毫升） 中。將PyB0P(1.81克，3.5毫莫耳）添加至該溶液中。然 後’將THF(10毫升）中之化合物ixxix，（825毫克，2 9毫莫 耳）添加至該溶液中，接著添加DIPEA(〇.5毫升，2.9毫莫 耳）。將所形成之混合物於N2下攪拌過夜《以EtOAc稀釋反 應混合物’並將有機相以飽和NaHC03鹽水洗滌。將有機 相之濃縮所形成之殘留物，藉由3〇% EtOAc/己烷，以層析 143110.doc 259 - 1378927 方式純化，產生化合物1χχχ(780毫克，69%)。 中間物實例123-化合物lxxxi 使用MeOH(10毫升）與1 N NaOH(3當量），使化合物lxxx 水解，產生化合物lxxxi(615毫克，81.8%)。 中間物實例124-化合物lxxxii 使化合物lxxxi(610毫克，1.6毫莫耳）溶於DCM(10毫升） 中。然後，將DCC(1.94毫升，1.94毫莫耳）添加至該溶液 中，接著添加HOAt(270毫克，1·94毫莫耳）。然後，將 THF( 19.4毫升）中之化合物ν( 1.94毫莫耳）添加至該溶液 中。將所形成之混合物於Ν2下攪拌兩夜。將反應混合物以 EtOAc稀釋，經過矽膠過濾及濃縮。將所形成之殘留物藉 由40% EtOAc/己烷，以層析方式純化，產生化合物 lxxxii(450毫克，83.4%)° 中間物實例125-化合物lxxxiii 使用EtOH(10毫升）與1 N NaOH(3當量），使化合物lxxxi 水解，產生化合物lxxxiii(650毫克’ 99%)。 中間物實例126-化合物cxxviii 使化合物lxxxiii(400毫克，0.78毫莫耳）溶於DCM(5毫升） 中。將PyBOP(610毫克，1.2毫莫耳）添加至該溶液中，接 著為化合物xiii’(230毫克，1.2毫莫耳）。於所形成之混合物 中，添加DIPEA(0.2毫升，1.2毫莫耳）。將反應混合物於N2 下攪拌過夜。將反應混合物以EtOAc稀釋，並將有機相以 飽和NaHC03鹽水洗滌。在濃縮有機相之後，將殘留物藉 由100% EtOAc至5% EtOH/EtOAc梯度液，以層析方式純 143110.doc •260· 1378927 化，產生化合物cxxviii(365毫克，68.7%)。
中間物實例127-化合物cxxx
使化合物lxxxiii(365毫克，0.7毫莫耳）溶於DCM(5毫升） 中。將PyBOP(440毫克，0.84毫莫耳）添加至該溶液中，接 著添加THF(8.4毫升）中之化合物cxxix(0.84毫莫耳）。
於所形成之混合物中，添加DIPEA(0.1毫升，0.84毫莫 耳）。將反應混合物於N2下攪拌過夜。以EtOAc稀釋反應混 合物，並將有機相以飽和NaHC03鹽水洗滌。在濃縮有機 相之後，將所形成之殘留物藉由100% EtOAc，以層析方 式純化，產生化合物cxxx(350毫克，70%)。
中間物實例128-化合物〇乂乂乂1 143110.doc -261 - 1378927 使化合物cxxv(2.54克，9.05毫莫耳）溶於00^(30毫升） 中。將PyBOP(5.65 克，10_9 毫莫耳）與 ΗΟΒΤ(1·47 克，10.9 毫莫耳）添加至該溶液中，並攪拌五分鐘。使所形成之混 合物降至0°C，於其中添加（S)-(+)-3·曱基-2-丁胺（1.27毫 升，10.9毫莫耳）與01?£八（1.9毫升，10.9毫莫耳）。將反應 混合物攪拌過夜，並温熱至室溫。將有機相以〇. 1 N HC1、 飽和NaHC03鹽水洗滌。在濃縮有機相之後，將所形成之 殘留物藉由30% EtOAc/己烷，以層析方式純化，產生化合 物 cxxxi(1.44克，45·5〇/〇)°
中間物實例129-化合物cxxix 使用10% Pd/C(500毫克），在MeOH(40毫升）中，使化合 物〇乂乂\丨（1.3克，3.7毫莫耳）氫化。將反應混合物於112下攪 拌過夜。使反應混合物經過矽藻土過濾，並使有機相濃 縮，產生粗製化合物cxxix(800毫克，100%)。
中間物實例130-化合物cxxxiv 使化合物cxxxii(1.6克，3.7毫莫耳）溶於MeOH(12毫升） 143110.doc -262- 1378927 中ο
以Ν2徹底溢流後，添加10重量。/〇 Pd(OH)2/碳（0.74克）， 並使混合物氫化過夜，此時藉TLC(30% EtOAc/己烷）証實 完全反應混合物。藉過濾使溶液自固體物質分離，及濃 縮，產生化合物cxxxiii，為無色油（1 00%)，將其使用於下
使2-吡啡羧酸（400毫克，3·2毫莫耳，1.1當量）溶於 DCM/THF (4毫升/4毫升）中，然後添加HOAt(440毫克，3.2 毫莫耳）與DCC(3.3毫升，1 Μ，在DCM中）。在室溫下攪拌 20分鐘後，使先前獲得之化合物cxxxiii(0.96克，3.2毫莫 耳）溶於DCM (6.4毫升）中，並添加至經活化之混合物中。 在室溫下攪拌2天後，使反應混合物經過矽藻土過濾，及 濃縮成殘留物，使其藉管柱層析純化（50°/。EtOAc/己烷）， 產生化合物cxxxiv，為白色固體（1.06克，83%)。
cxxxiv 143110.doc •263- 1378927 中間物實例13 1 -化合物cxxxv 使化合物cxxxiv(1.06克，2.6毫莫耳）溶於1^6〇11(10毫升） 中，然後添加2 N NaOH(水溶液）(4毫升，8毫莫耳）。將此 溶液在室溫下攪拌過夜，此時藉TLC(50% EtOAc/己烷）指 示完成水解作用。藉由5 N HC1使溶液酸化至pH3，以 EtOAc稀釋，然後萃取有機相。將已萃取之有機相以鹽水 洗滌，並以MgS04脫水乾燥，於濃縮後產生化合物 cxxxv( 100%) °
中間物實例132-化合物cxxxvi 於化合物cxxxv(1.44克，3.7毫莫耳）之〇0\1溶液（8毫升） 中，在室溫下，添加HOAt(500毫克，3.7毫莫耳），然後添 加DCM中之1 M DCC溶液（3.7毫升，3_7毫莫耳）。在室溫 下攪拌30分鐘後，將化合物ν(3.7毫莫耳）之THF溶液（18.5 毫升，0.2 Μ)添加至上述HOAt活化之酸中。將反應混合物 在室溫下攪拌過夜。使反應混合物經過矽藻土過濾。濾液 以EtOAc(120毫升）稀釋，並以水及鹽水洗滌。使有機相脫 水乾燥及濃縮，產生黃色油，使其藉矽膠層析純化（70% EtOAc/己烧），產生化合物cxxxvi(l克，7 1 %)。 143110.doc -264-
1378927 中間物實例133-化合物〇乂乂乂¥^ 於化合物cxxxvi(l克，1.8毫莫耳）之EtOH溶液（8毫升） 中，添加2 N NaOH水溶液（2.7毫升，5_4毫莫耳）。將反應 混合物於室溫下攪拌過夜，然後藉由5 N HC1酸化至pH3， 以EtOAc稀釋，然後萃取有機相。將已萃取之有機相，以 鹽水洗滌，並以MgS04脫水乾燥，於濃縮後，產生化合物 cxxxvii(88%) °
中間物實例13 3-化合物cxxxviii 於化合物cxxxvii(350毫克，0.6毫莫耳）之DCM溶液（10毫 升）中，添加PyBOP(450毫克，0.86毫莫耳）。將此溶液於 室溫下攪拌3 0分鐘。然後，於此溶液中添加化合物 xiii'(160毫克，0_86毫莫耳），接著為DIPEA(0.23毫升，1.3 毫莫耳）。將反應混合物在室溫下攪拌過夜，然後以水（25 毫升）使反應淬滅，歷經30分鐘。然後，以EtOAc萃取混合 物。將已萃取之有機相以鹽水洗滌，並以MgS04脫水乾 燥，然後濃縮，產生黃色油。藉矽膠層析純化（5% EtOH/ 143110.doc •265 · 1378927
EtOAc)產生化合物cxxxviii(407毫克，88%)。
P 中間物實例134-化合物cxxxix 使5-曱基異哼唑-3-羧酸（200毫克，2.05毫莫耳）溶於 DCM(5毫升）中。將PyBOP(1.07克，2.05毫莫耳）添加至該 溶液中。將DCM(5毫升）中之化合物lxxix'(582毫克，2.05 毫莫耳）添加至該溶液中，接著添加DIPEA(0.36毫升，2.05 毫莫耳）。將所形成之混合物於N2下攪拌過夜。以EtOAc稀 釋反應混合物，並將有機相以飽和NaHC03與鹽水洗滌。 使有機相濃縮，並將所形成之殘留物藉由30% EtOAc/己 院，以層析方式純化，產生化合物cxxxix(495毫克， 61.4%)。
中間物實例13 5-化合物cxxxx 使用MeOH(10毫升）與1 N NaOH(3當量）使化合物cxxxix 水解，產生化合物cxxxx(430毫克，90%)。 143110.doc -266-
1378927 中間物實例13 6-化合物cxxxxi 使化合物cxxxx(3 80毫克，1毫莫耳）溶於DCM(5毫升） 中。然後，將DCC(1.2毫莫耳）添加至該溶液中，接著添加 HOAt (165毫克，1.2毫莫耳）。接著添加THF(12毫升）中之 化合物v(l .2毫莫耳）。將所形成之混合物於N2下攪拌過 夜。將反應混合物以EtOAc稀釋，經過矽膠過濾及濃縮。 將所形成之殘留物藉由35% EtOAc/己烷，以層析方式純 化，產生化合物cxxxxi(320毫克，58%)。
中間物實例13 7-化合物cxxxxii 使用EtOH( 10毫升）與1 N NaOH(3當量），使化合物 cxxxxi水解，產生化合物cxxxxii(730毫克，94.3%) 〇
143110.doc •267- 1378927 中間物實例13 8-化合物cxxxxiii 使化合物cxxxxii(240毫克，0.46毫莫耳）溶於DCM(5毫 升）中。然後，將PyBOP(295毫克，0.56毫莫耳）添加至該 溶液中，接著添加化合物xiii，（110毫克，0.56毫莫耳）。於 所形成之混合物中，添加DIPEA(0.1毫升，0.56毫莫耳）。 將反應混合物於N2下攪拌兩夜。以EtOAc稀釋反應混合 物’並將有機相以飽和NaHC03與鹽水洗滌。在濃縮有機 相之後，將所形成之殘留物藉由90% EtOAc/己烷，以層析 方式純化，產生化合物cxxxxiii(168毫克，53%)。
中間物實例139-化合物cxxxxiv 於NaOH溶液（2 N ’ 42.1毫升，84.2毫莫耳）中，在5°C 下，添加L-丙胺酸（5.00克，56.1毫莫耳）。在攪拌1〇分鐘 後，同時逐滴添加氯甲酸甲酯（6.5毫升，84.2毫莫耳）與 NaOH(2 N ’ 42.1毫升，84.2毫莫耳）。將此溶液於冰浴中 授拌2小時’然後在室溫下1小時。將混合物以Et2〇洗務 (2x50毫升），以5 N HC1使水層中和至pH〜2，並以以0八〇萃 取（3x50毫升）。將已萃取之有機相以鹽水洗滌，藉MgS〇4 脫水乾燥及濃縮，產生化合物cxxxxi，N_甲氧羰基_L_丙胺 酸（4.54克，54%)，為無色油。 143110.doc -268-
1378927 中間物實例140-化合物cxxxxvi 將化合物cxxxxv(3.57克，9.44毫莫耳）在THF中之溶液，
於5°(：下，以110入41.28克，9.44毫莫耳）處理，然後添加 DCC(9.50毫升，9.50毫莫耳）。於冰浴中攪拌45分鐘後， 添加化合物v( 104毫升，10.4毫莫耳）在THF中之溶液。將 混合物在室溫下攪拌過夜。使混合物冷卻至5°C，並以飽 和NaHC03使反應淬滅。在過濾以移除已沉澱之DCU後， 使混合物溶於EtOAc(100毫升）中，以飽和NaHC03、鹽水 洗滌，然後藉MgS04脫水乾燥，及濃縮成殘留物，藉由矽 膠管柱層析純化（25% EtOAc/己烷），產生化合物 cxxxxvi(2_91克，57%)，為膠黏泡泳物。
中間物實例141-化合物cviii 於N2氣流，在藉由冰浴冷卻之化合物cxxxxvi於 MeOH(25毫升）中之溶液内，慢慢添加Pd/C。使混合物在1 大氣壓下氫化過夜。藉過濾移除觸媒，將濾液與5毫升 143110.doc -269- 1378927 DMF合併’及在真空下乾燥’產生化合物cviii。 中間物實例142-化合物cxxxxvii 於化合物cxxxxiv(0.298克，2.03毫莫耳）與11〇八1(0.276 克，2·03毫莫耳）在THF中，於冰浴中冷卻之溶液内，以 DCC(2.05毫升，2.05毫莫耳）處理。於冰浴中攪拌〇.5小時 後，添加化合物cviii在THF中之溶液，然後添加 DIPEA(0.39毫升’ 2.2亳莫耳）。將混合物在室溫下攪拌過 夜，然後在冰浴中冷卻’並以飽和NaHC03使反應淬滅。 過濾已沉澱之DCU，並使濾液溶於EtOAc(100毫升）中。有 機相以飽和NaHC03、鹽水洗滌，然後藉MgS04脫水乾 燥。在移除有機溶劑後，使殘留物藉矽膠管柱層析純化 (60% EtOAc/己烷），產生化合物 cxxxxvii(0.47 克，48%)， 為膠黏泡沫物》
中間物實例143-化合物cxxxxviii 於化合物cxxxxvii(0.47克，0.847毫莫耳）在EtOH(5毫升） 中之溶液内，在5°C下添加NaOH(2 N，1.31毫升，2.62毫 莫耳）。將混合物於室溫下攪拌4小時。以HC1(1N)使溶液 酸化至pH〜2，並藉迴轉式蒸發移除EtOH。將混合物以 EtOAc萃取（3x30毫升），並將合併之萃液以鹽水洗條，然 後藉MgS04脫水乾燥》移除溶劑，並使殘留物在真空下乾 燥，產生化合物cxxxxviii(0.366克，82%)，為膠黏泡泳 143110.doc •270· 1378927 物。
中間物實例144-化合物cil
使化合物cxxxxviii(0.366克，0.718毫莫耳）在DCM中之 溶液，在冰浴中冷卻，並以PyBOP(0.599克，1·15毫莫耳） 處理。在室溫下攪拌0.5小時後，將混合物藉冰浴冷卻， 並以化合物χϋΓ(0·200克，1.08毫莫耳）在THF中之溶液， 及DIPEA(0.250毫升，1.44毫莫耳）處理。將混合物在室溫 下攪拌過夜，然後以NH4C1溶液使反應淬滅。使溶劑濃 縮，並使混合物溶於EtOAc( 1 00毫升）中。有機相以飽和 NaHC〇3、鹽水洗滌，然後藉MgS04脫水乾燥。在移除有 機溶劑後，將殘留物藉管柱層析純化（5% EtOH/EtOAc)， 產生化合物cil(0.35克，72%)
中間物實例145-化合物cxxi 於N-Boc-Nva-OH(化合物1)(8.68克，40毫莫耳）之THF溶 液（85毫升）中，添加CDI(7.79克，48毫莫耳）。在室溫下攪 拌30分鐘後，將上述溶液以含有Ν,Ο-二曱基羥胺鹽酸鹽 143110.doc -271 - 1378927 (4.25克，44毫莫耳）之DMF溶液（25毫升）及DIPEA(7.66毫 升，44毫莫耳）處理。將反應混合物於室溫下攪拌過夜。 然後，使反應混合物在真空中濃縮。將所形成之殘留物以 EtOAc稀釋（300毫升）。將此溶液相繼以0.1 N HC1(50毫 升）、飽和NaHCO3(3x50毫升）及鹽水洗滌。使有機相在真 空中濃縮，產生殘留物，將其以矽膠層析純化（40% EtOAc/己炫）成為化合物cxxi(9.38克，94%)。 中間物實例146-化合物cxxii 於經冷卻至0°C之化合物cxxi(9.38克，31.9毫莫耳）之 Et2〇溶液（50毫升）中，添加（慢慢地）LAH(34.7毫升，1 Μ，34.7毫莫耳）。在LAH添加期間，使燒瓶之反應溫度保 持低於5°C。於添加完成時，將EtOAc(20毫升）添加至反應 物中，以使過量LAH淬滅。然後以逐滴方式添加KHS04水 溶液（5%，20毫升），以保持溫度低於5°C。分離有機相， 然後相繼以1 N HCl(3x30毫升）、飽和NaHCO3(3x30毫升） 及鹽水洗滌。使有機相濃縮，並在真空中乾燥，產生粗製 化合物 cxxii (5.18克，69%)。 中間物實例147-化合物cl 於Zn(2.75克，42毫莫耳）之THF(25毫升）懸浮液中，在回 流下添加0.2毫升Et0C(0)CF2Br。接著慢慢添加化合物 cxxii (3.05 克，15.0 毫莫耳）與 Et0C(0)CF2Br(4.84 毫升， 37.5毫莫耳）之THF溶液（25毫升）。於兩種試劑添加完成 時，使反應混合物進一步回流3 0分鐘。使反應混合物冷卻 至室溫，並以DCM(200毫升）稀釋。將有機相以1 N KHS04 143110.doc -272- 1378927 洗滌。使有機相濃縮，並在真空中乾燥，產生殘留物，使 其藉矽膠層析純化（20% EtOAc/己烷），產生化合物cK2 78 克，57%) 〇
BocHN
cl
此衣備法基本上係與由Thaisrivongs等人，J. Med. Chem.，29, 2080-2087(1986)所揭示者相同。 中間物實例148-化合物cli 將化合物cl(2.78克，8.53毫莫耳）之THF溶液（40毫升）， 以1 N NaOH(12.8毫升，12.8毫莫耳）處理。在室溫下搜拌 過夜後，於真空中部份移除溶劑。將殘留反應混合物以水 (50毫升）稀釋，及凍乾，產生粗製化合物cH(2 82克， >100%) ’為其鈉鹽。
1 FF
BocHN
此製備法基本上係與由Thaisrivongs等人，J. Med.
Chem·，29, 2080-2087 (1986)所揭示者相同。 中間物實例149-化合物clii 將粗製化合物cli(5l6毫克，I.6〗毫莫耳）之DCM溶液（1〇 毫升），以HOBT(436毫克，3.23毫莫耳）及DIc(〇.328毫 升，2.09毫莫耳）處理。在室溫下攪拌3〇分鐘後，將反應混 143110.doc -273 - 1378927 合物以含有甘胺酸芊酯-TsOH鹽（815毫克，2·42毫莫耳）之 DCM溶液（5毫升）及DIPEA(0.422毫升，2.42毫莫耳）處理。 在室溫下攪拌12小時後，以水使反應混合物淬滅，並以 EtOAc萃取。使有機相脫水乾燥，及在真空中濃縮，並藉 石夕勝層析純化（4〇% EtOAc/己烷），產生化合物cm(495毫 克，69%)。 化合物 clii之1H NMR (400 MHz, CDC13) : δ 7.29-7.21 (m, 5H), 5.16 (bs, 2H), 4.89 (bs, 1H), 4.20-3.90 (m, 4H), 3-80 (bs, 1H), 1.75-1.42 (m, 4H), 1.38 (s, 9H), 0.87 (m, 3H).
BocHN 自粗製化合物cli開始，Cliii(83%)與cliv(50%)係以關於 化合物clii所述之相同方法製成。 化合物 cliii之1H NMR (400 MHz, CDC13) : δ 7.49 (bs， 1H), 7.34-7.24 (m, 5H), 5.13 (ABq, J=12.2 Hz, J'=23.9 Hz, 2H)，4.88 (bd，J=8.8 Hz，1H)，4.53 (m，1H)，3.98-3.91 (m， 2H)，3.82 (m，1H)，1.65-1.20 [m，16H，包含單峰在 1.37 (9H)], 0.86 (t, J=7.3 Hz, 3H).
143110.doc •274- 化合物 cliv之1H NMR (400 MHz，CDC13) : δ 7.60-7.0 (m l〇H), 5.30-5.00 (m, 2H), 5.00-4.75 (m, 2H), 4.15-3.70 (m5 3H)，3.30-3.00 (m，2H)，1.75-1.20 [m，13H，包含單峰在 136 (9H)], 0.86 (bs, 3H).
中間物實例15 0-化合物civ 於粗製化合物cli(l克，3.13毫莫耳）之001^(10毫升）與 THF (5毫升）溶液中，添加h〇BT(634毫克，4_69毫莫耳）與 EDCI (781毫克，4.07毫莫耳），及接著為（s)-a-曱基芊胺 (0.604毫升，4.69毫莫耳）。將反應混合物於室溫下攪拌過 仗’然後以水使反應淬滅。將反應混合物以EtOAc萃取。 有機相以鹽水洗滌，並藉Na2s〇4脫水乾燥。使有機相在真 空中濃縮，產生殘留物，使其藉矽膠層析純化（2〇% EtOAc/己烷），產生化合物dv(459毫克，37%)。化合物civ 之1H NMR (400 MHz, CDC13) : δ 7.32-7.21 (m，6H)，5.00 (m, 1H), 4.75 (m, 1H), 3.94 (m, 2H), 3.70 (m, 1H), 1.65-1.15 [m，16H’ 包含雙峰在 151 (j=6.8 Hz, 3H)，單峰在 1.39 (9H)], 0.82 (m, 3H).
civ 143110.doc • 275 · 1378927 中間物實例151-化合物civi 使化合物clv(220毫克’ 0.55毫莫耳）溶於二氧陸圜（1〇毫 升）中之4 N HC1内。將反應混合物於室溫下檀拌2小時， 然後在真空中濃縮，獲得粗製化合物clvi(〜100%)，為其 HC1 鹽。
心照關於製備化合物clvi所述之程序，化合物civii，civiii 及clix係以幾乎定量產率，製自粗製化合物cU。
八 C02Bn
中間物實例152-化合物clx 將化合物vii之HC1鹽（96毫克，0.144毫莫耳）之DCM溶液 (4毫升）’以PyBOP(120毫克，0.23毫莫耳）及DIpEA(〇」毫 143110.doc • 276· 1378927 升〇·576毫莫耳）處理。在室溫下攪拌30分鐘後，將溶液 以含有化合物clv(〇 288毫莫耳）之THF溶液（4毫升）及 DIPEA(0.2毫升，lil52毫莫耳）處理。將反應混合物在室溫 下攪拌過夜。然後，將反應混合物以Et〇Ac(5〇毫升）稀 釋，接著將有機相以NaHC〇3與鹽水洗滌。使有機相在真 空中濃縮’並使殘留物藉矽膠層析純化（8〇% EtOAc/己 炫）’產生化合物clx(l 1 3毫克，89%)。
中間物實例153-化合物clxi 將化合物vii(l4〇毫克，0.235毫莫耳）之DCM溶液（6毫 升），以PyBOP(196毫克，0.376毫莫耳）處理30分鐘。然 後’將化合物clvii(〜0.47毫莫耳）之THF溶液（6毫升）與 DIPEA(0.327毫升，1.88毫莫耳）添加至上述溶液中。將反 應混合物在室溫下攪拌過夜，並以水使反應淬滅（3〇分 鐘）。將反應混合物以Et〇Ac(50毫升）萃取。有機相以 NaHC03與鹽水洗務。將合併之水層以Et〇Ac(50毫升）逆萃 取。使合併之有機相脫水乾燥’及在真空中濃縮❶將所形 成之殘留物藉矽膠層析純化（80-l〇〇Et〇Ac/己烷），產生化 合物 clxi(104毫克，48°/〇)。 143110.doc -277- 丄378927
ΟΟ^Βπ 中間物實例154-化合物clxii 於化合物clxi(280毫克，0.304毫莫耳）之DCM溶液（1〇毫 升）中，添加DMP試劑（193毫克，〇.456毫莫耳）。將反應混 合物於室溫下攪拌3小時，並以10% Na2S〇3使反應泮滅。 有機相以NaHC〇3與鹽水洗滌《使所形成之有機相脫水乾 燥’及在真空中濃縮’產生殘留物，使其以矽膠層析純化 (80-100% EtOAc/己烷），產生化合物cixh(271毫克， 97%) 〇
C02Bn 中間物實例155-化合物clxiii 使化合物lxxxiii(220毫克，〇·43毫莫耳）溶於DCM(5毫升） 中。將PyBOP(270毫克’ 〇·51毫莫耳）添加至該DCM溶液 中，並攪拌5分鐘。將THF(5.1毫升）中之化合物xxxvi，（〇 51 毫莫耳）逐滴添加至此溶液中。將DIPEA(0.〇9毫升，0.51毫 莫耳）添加至反應混合物中，並於N2下攪拌過夜。隔天， 將反應混合物以EtO Ac稀釋’以飽和NaHCO]洗條，以雖水 143110.doc -278- 1378927 洗滌。藉由70%至90% EtOAc/己烷梯度液純化，產生化合 物 clxiii(180毫克，56%)。
中間物實例156-化合物〇：1\丨？ 使化合物cxxv(2.09克’ 7.4毫莫耳）溶於DCM(20毫升） 中。將PyBOP(4.64克，8.9毫莫耳）與HOBt(1.2克，8.9毫莫 耳）添加至此溶液中，並攪拌五分鐘。使所形成之混合物 降至〇它，於其中添加8(-)-〇1-甲基苄胺（1.15毫升，8.9毫莫 耳）與DIPEA (1·55毫升，8.9毫莫耳）。將反應物攪拌過 夜，且溫熱至室溫。將反應混合物以〇. 1 N HC1、飽和 NaHC〇3及鹽水洗滌。藉由30% EtOAc/己烷純化，產生化 合物 clxiv(1.6克，56.3%)。
中間物實例15 7-化合物xxxvi' 使用10% Pd/C(3 00毫克），在MeOH(5 0毫升）中，使化合 物clxiv(1.48克’ 3.8毫莫耳）氫化。將反應混合物於h2下搜 拌過夜。使反應混合物經過矽藻土過濾，及濃縮，而得化 143110.doc •279- 1378927 合物 xxxvi'(895 毫克，94.2%)。 中間物實例158-化合物clxvi : 於化合物clXV(2克，8.2毫莫耳）之DCM溶液（15毫升）中， 添加HOAt(l_34克，9_84毫莫耳）與Dcc(9 84毫升，j M， 9.84毫莫耳）。
0 clxv 在室溫下攪拌20分鐘後，將含有第三_L_白胺酸甲酯_鹽 酸鹽（9.84毫莫耳）之THF溶液（9.84毫升）及DIPEA(1.72毫 升’ 9.84毫莫耳）添加至上述溶液中。然後，在室溫下添加 〇]\4八？（1克’8.2毫莫耳）。將反應物在室溫下搜拌過夜。按 照標準水溶液處理’及矽膠層析（20% EtOAc/己烷），獲得 化合物 clxvi(1.75克，58%)。
中間物實例159-化合物clxvii : 於化合物clxvi(1.75克，4.73毫莫耳）之丁1^溶液（35亳升） 中，添加二氧陸圜中之4 N HC1溶液（11.8毫升，47.3毫莫 耳）。將反應物在室温下授掉過夜。此時，在減壓下移除 溶劑，產生粗製clxvii(〜100%)，使其再溶於DMF中，並直 接使用於下一反應。 143ll0.doc -280- 1378927
中間物實例160-化合物(^乂出： 在含有2-吡畊羧酸（447毫克，3.6毫莫耳）、PyB〇p(1 87 克’ 3.6毫莫耳）之DCM溶液（15毫升）中，添加化合物 clxvii(8ll毫克，3毫莫耳）之DMF溶液（is毫升卜然後，在 所形成之混合物中，添加DIPEA(0.63毫升，3.6毫莫耳）。 將反應物於室溫下攪拌過夜，然後以水使反應淬滅。將反 應混合物以EtOAc萃取。有機層以鹽水洗滌，及在真空中 濃縮，以提供殘留物，使其藉矽膠層析純化（4〇% Et〇Ac/ 己烧）’產生化合物clxviii(0.93克，82%)。
中間物實例16 1 -化合物clxix : 於化合物clxvui(0.93克，2.47毫莫耳）之]^〇11溶液（10毫 升）中，添加2 N NaOH(3.71毫升，7.41毫莫耳）。將反應物 在室溫下攪拌過夜。然後，使用丨Ν Ηα，使反應物酸化 至pH3。將反應物以Et〇Ac(75毫升）稀釋，並以水及鹽水洗 滌。使如此獲得之有機層脫水乾燥，及在真空中濃縮，獲 得化合物clxix(〜1〇〇%)。 143110.doc -281 - 1378927
中間物貫例162-化合物clxx : 將化合物clxix(2.47毫莫耳）之DCM溶液（10毫升）以H〇At (436毫克，3.21毫莫耳）及DCC(3.2毫升，！ M，3 2毫莫耳） 處理。在攪拌30分鐘後，將反應混合物以化合物v(499毫 克’ 2.72毫莫耳）之THF溶液（13.6毫升）處理。在室溫下搜 拌過夜後’將白色固體（脲）過濾。在真空中濃縮濾液，而 得殘留物’使其藉矽膠層析純化’產生化合物clxx(〇 99 克，76%)。
中間物實例163-化合物clxxi : 將化合物clxx(0.99克，1.88毫莫耳）之Et0H溶液（2〇毫升） 以2NNaOH(2.81毫升，5.63毫莫耳）處理β在室溫下攪拌 過夜後’以1 N HC1，使反應混合物酸化至pH3。將反應混 合物以EtOAc(75毫升）萃取。使有機層脫水乾燥，及在真 空中濃縮，獲得化合物clxxi(772毫克，82%)。
clxxi 143110.doc -282- 1378927 中間物實例164-化合物clxxi :
將化合物clxxi(290毫克，0.58毫莫耳）之DCM溶液（10毫 升）以PyBOP(484毫克，0.93毫莫耳）處理。在室溫下攪拌 20分鐘後，將反應混合物以化合物xiii'(140毫克，0.75毫 莫耳）之THF溶液（7.5毫升），接著以DIPEA(0_13毫升，0.75 毫莫耳）處理。於室溫下攪拌過夜後，以水使反應淬滅， 並以EtOAc萃取。將所形成之有機層以鹽水洗滌，並脫水 乾燥及在真空中濃縮。所形成之殘留物藉矽膠層析純化 (5% EtOH/EtOAc)，產生化合物clxxii290 毫克（75%)。
中間物實例165-化合物clxxiv : 使化合物lxxxiii(600毫克，1.17毫莫耳）溶於DCM(4毫升） 中。添加PyBOP(670毫克，1.3毫莫耳），攪拌五分鐘，並 冷卻至0°C。將THF(13毫升）中之化合物clxxiii(333毫克， 1.3毫莫耳）逐滴添加至此溶液中。
H0N
OH clxxiii 將DIPEA(0.23毫升，1.3毫莫耳）添加至反應混合物中， 並使其溫熱至環境溫度，且攪拌兩夜。隔天，使反應物濃 縮，並藉由2% EtOH/EtOAc純化，獲得粗製化合物 143110.doc -283 - 1378927 clxxiv(900毫克，超過 100%)。
中間物實例166-化合物clxxxv : 使化合物cxxv(3_01克，⑺夕毫莫耳”容於]^]^“*#) 中，並使溫度降至-78°C。將PyBOP(6.1克，11.7毫莫耳）與 HOBT (1.58克’ 11.7毫莫耳）添加至此溶液中，接著為 (S)-(+)-l-環己基乙胺，化合物clxxv(1.74毫升，11.7毫莫耳） 與01?£八(2.1毫升，11.7毫莫耳）。將所形成之混合物於室 溫下攪拌過夜。隔天，將反應混合物以EtOAc稀釋，以〇. 1 N HC1、飽和NaHC〇3及鹽水洗滌。將產物以40% EtOAc/ 己烷純化，獲得2克（47.8%)化合物(：15()^1。
中間物實例1 67-化合物clxxiii : 使用10% Pd/C(500毫克），在MeOH(40毫升）中，使化合 物clxxvi(2克，5.13毫莫耳）氫化。將反應混合物於H2下搜 拌過夜。使反應混合物經過石夕薄土過遽，及濃縮而得化合 物 clxxiii(1.31 克，99.8%)。 中間物實例168-化合物clxxix : 143110.doc - 284 - 1378927 在圓底燒瓶中，於惰性大氣下，使化合物clxxvii[(S)-(-) -2-酮基-1，5·咪唑啉二羧酸丨芊酯](29〇毫克，1」毫莫耳）溶 於無水DMF(6毫升）中。
clxxvii 添加H0At(151毫克，i.2毫莫耳），並將反應物於室溫下 攪拌25分鐘。然後，於冰浴中使反應冷卻下來。然後，添 加DIC (0.2毫升，〇·16克，1 2毫莫耳），接著添加無水 〇]\4?(4毫升）中之化合物(：1乂5^丨丨丨（1毫莫耳，43 5毫克）。使反 應物慢慢升至室溫，並攪拌2天。然後，將反應物傾倒在 含有120毫升EtOAc之分液漏斗中，並以1 ν HC1(50毫升） 洗務2次’及以鹽水洗滌1次。分離有機層，以MgS〇4脫水 乾燥。在減壓下蒸發溶劑，並使殘留物於矽膠上藉層析純 化（負載於DCM中，並以30%，然後50% EtOAc/DCM，然 後2¾ MeOH/EtOAc溶離），產生產物cixxix(434毫克， 64%) °
143110.doc •285- 1378927 中間物貫例169-化合物clxxx : 使起始物質clxxix(434毫克，0.64毫莫耳）溶於二氧陸圜 (6毫升）與0.5 M NaOH水溶液（4毫升，3當量）中。反應係操 作過夜。在100% EtOAc(使用PMA染色）之TLC顯示除了預
期之酸產物在起點以外’有較快速流動之產物。以1 N HC1使反應混合物酸化至ph2，然後以EtOAc萃取2X。將固 體NaCI添加至水溶液中，以幫助萃取。然後，將有機萃液 合併，以MgS〇4脫水乾燥，及在減壓下蒸發。MS顯示cBZ 基團係被水解移除。將所形成之化合物clxxx(定量產率）使 用於下一步驟中。
中間物實例170-化合物Clxxxi : 在圓底燒瓶中’於惰性大氣下’使化合物clxxx(279毫 克，0.54毫莫耳）溶於無aDMF(6毫升）中。添加H〇At(82* 克’ 0.65¾莫耳），並將反應物於室溫下授拌25分鐘。然 後’使反應於冰浴中冷卻下來。接著添加Dic(〇. 11毫升， 0.65毫莫耳）’然後添加無水dmf(4毫升）中之化合物 χιιι'(0.7毫莫耳）。使反應物慢慢升至室溫，並擾拌21小 時。然後’將反應物傾倒在含有12〇毫升EtOAc之分液漏斗 中’並以1 N HC1(50毫升）洗滌2次，及以鹽水1次。分離有 1431I0.doc U/8927 機層，以MgS〇4脫水乾燥。藉減壓蒸發溶劑，並使產物於 石夕膠上藉層析純化（負載於DCM中，並以5〇0/〇 Et〇Ac/己 烧’然後3% MeOH/EtOAc，然後20% EtOH/EtOAc溶離）。 移除溶劑後’使殘留物再溶解於Dri Solv THF中，及過濾 以移除任何石夕膠。然後，移除溶劑，產生化合物 clxxxi(434毫克，64%產率）。
中間物實例171-化合物Clxxxiii : 在圓底燒瓶中，於惰性大氣下，使6_羥基p比咳敌酸（丨53 毫克，1，1毫莫耳）溶於無水DMF(6毫升）中。
添加HOAt(151毫克，1.2毫莫耳），然後將反應物於室溫 下擾拌2 5分鐘。接著於冰浴中使反應冷卻下來。然後，添 加DIC(0.2毫升，0.16克，1_2毫莫耳），接著添加無水 DMF(4毫升）中之化合物elxXxii(i.〇毫莫耳，435毫克）。
I431l0.doc -287· 1378927 使反應物慢慢升至室溫，並攪拌2天。然後，將反應物 傾倒在含有120毫升EtOAc之分液漏斗中，並以1 N HC1(50 毫升）洗滌2次，及以鹽水1次。分離有機層，以MgS04脫 水乾燥。藉減壓溶劑蒸發，並使產物於矽膠上藉層析純化 (負載於DCM中，以30%，然後50% EtOAc/DCM，接著2% MeOH/EtOAc溶離），產生戶斤收集之化合物clxxxiii(3 1 4毫 克，56%)。
中間物實例172-化合物clxxxiv : 使起始物質clxxxiii(314毫克，0.56毫莫耳）溶於二氧陸 圜（5毫升）與0.5 M NaOH(3.4毫升，3當量）中。此反應係操 作過夜。在100% EtOAc中之TLC(使用UV)顯示完全轉化成 緩慢流動之酸產物，在起點。以1 N HC1使反應物酸化至 pH2，然後以EtOAc萃取2次。將固體NaCl添加至水溶液 中，以幫助萃取。然後，將有機萃液合併，以MgS04脫水 乾燥，接著在減壓下蒸發，產生化合物clxxxiv(0.5毫莫 耳，89%)，將其使用於下一步驟中。
clxxxiv 143110.doc •288 - 1378927 中間物實例173-化合物clxxxv : 在圓底燒瓶中，於惰性大氣下，使酸化合物clxxxiv(265 毫克’ 0.5¾莫耳）溶於無水DMF(6毫升）中。添加HOAT (75,6毫克，0.6¾莫耳），並將反應物於室溫下.授拌25分 鐘。然後’於冰浴_使反應冷卻下來。然後，添加 DIC(0.1耄升，0.6毫莫耳）’接著添加無水DMF(4毫升）中 之化合物xiii'(0.65毫莫耳）。使反應物慢慢升至室溫，並授 拌21小時。然後，將反應物傾倒在含有Et〇Ac(丨2〇毫升）之 分液漏斗中’並以1 N HC1(50毫升）洗滌2次，及以鹽水1 次。分離有機層，以MgS04脫水乾燥。藉減壓溶劑蒸發， 並使產物於矽膠上藉層析純化（負載於DCM中，以50% EtOAc/己烷，然後以純EtOAc，接著以4% MeOH/EtOAc溶 離）’產生產物化合物clxxxv (185毫克，52%)。
clxxxv '
V 中間物實例174-化合物cxxxxiv· 於D-丙胺酸（5克，56.1毫莫耳）在1 N NaOH(152毫升， 152毫莫耳）中之溶液内，在〇°C下，添加MeOC(0)Cl(6.5毫 升，84.2毫莫耳）在乙醚（30毫升）中之溶液。將混合物於冰 浴中攪拌3小時，然後以1 N NaOH調整至pH9。在室溫下 攪拌1小時後，將混合物以醚洗滌（3x50毫升），以5 N HC1 酸化至pH~2，以EtOAc萃取（5x50毫升）。將有機萃液以 143110.doc -289· 1378927 水、鹽水洗滌，然後脫水乾燥（MgS04)。移除溶劑，產生 化合物。\\乂丨乂，1^-曱氧幾基-0-丙胺酸，為無色油（6.48克， 79%) °
中間物實例175-化合物clxxxvi : 於N-曱氧羰基-D-丙胺酸（0.193克，1.31毫莫耳）與 HOAt(0.177克，1.31毫莫耳）在DCM(10毫升）中，於冰浴中 冷卻之溶液内，以DCC(1.31毫升，1.31毫莫耳）處理。於 冰浴中攪拌0.5小時後，添加所製成化合物clxxxii(0.88毫 莫耳）在THF(8.8毫升）_之溶液。使混合物溫熱至室溫，並 攪拌過夜，然後於冰浴中冷卻，並以飽和NaHC03溶液， 使反應淬滅。過濾沉澱物，並使濾液溶於EtOAc( 1 00毫升） 中。將有機層以飽和NaHC03溶液鹽、水洗滌，然後脫水 乾燥（MgS04)。移除溶劑後，使殘留物藉矽膠管柱層析純 化（60% EtOAc/己烧），產生化合物clxxxvi，為膠黏泡床物 (0.321 克，68%) °
中間物實例176-化合物clxxxvii : 於化合物clxxxvi(0.321克，0.597毫莫耳）在EtOH(5毫升） 143110.doc -290- 1378927 中之溶液内’於5C下，添加2N NaOH(l .05毫升，2.1毫莫 耳）。將合物於室溫下攪拌4小時。以1 N HC1使溶液酸 化至pH〜2 ’並藉迴轉式蒸發移除EtOH。將混合物以Et0Ac 萃取（3x30毫升），並將合併之萃液以鹽水洗滌，然後脫水 乾燥（MgS〇4)。移除溶劑，並使殘留物在真空下乾燥，獲 得化合物clxxxvii，為膠黏泡沫物（〇 235克，77%)。
中間物貫例177-化合物clxxxviii : 使化合物clxxxvii(0.363克，0.712毫莫耳）在DCM(10毫
升）中之溶液，在冰浴中冷卻，並以PyB〇p(〇 594克，丨 毫莫耳）處理。在室溫下攪拌〇.5小時後，使混合物於冰浴 中冷卻，並以化合物xiii'(l.l毫莫耳）在丁^以丨丨毫升）中之 溶液，及DIPEA(0.249毫升，1.42毫莫耳）處理。將混合物 在室溫下攪拌過夜’並以NH4C1溶液，使反應淬滅。使溶 劑濃縮’並使混合物溶於EtOAc( 1 〇〇毫升）中。將有機層以 飽和NaHC〇3溶液、鹽水洗滌’然後脫水乾燥（MgS〇4) ^移 除溶劑後’使殘留物藉管柱層析純化（5% EtOH/EtOA(〇， 獲得 clxxxviii(0_341 克，71%)。 中間物實例178-化合物clxxxix : 使二胺基丙酸（3克’28.7毫莫耳）溶於lMNaOH(86.2毫 143110.doc -291 - 1378927 升，86·2毫莫耳）中，並冷卻至0°C，然後添加Et20(25毫 升）中之Me0C(0)Cl(5.54毫升，71.75毫莫耳）。將所形成之 混合物攪拌過夜，溫熱至室溫。使反應混合物之pH值降至 2，並將水層以EtOAc萃取3次。將萃液合併，並以Na2S04 脫水乾燥，過慮及濃縮，產生化合物clxxxix(3.09克， 48.9%)。 0
clxxxix 、〇 中間物實例179-化合物cc : 使化合物clxxxix(340毫克，1.55毫莫耳）溶於DCM(4毫 升）中。添加DCC(1.7毫莫耳）與HOAt(235毫克，1.7毫莫 耳），接著為DCM(3.4毫升）中之化合物clxxxii(l，7毫莫 耳）。將反應混合物攪拌過夜。隔天，使反應混合物經過 矽膠墊片過濾，及濃縮。在75% EtOAc/己烷中達成純化， 獲得化合物clxxxx(715毫克，72.4%)。
中間物實例1 80-化合物clxxxxi : 在標準條件下，使用EtOH(4毫升）與1 N NaOH(3當量）， 143110.doc -292- 1378927 使化合物clxxxx(715毫克’ 1.12毫莫耳）水解，產生化合物 clxxxxi (600毫克，88.0°/。）°
中間物實例18 1 -化合物clxxxxii :
使化合物clxxxxi(550毫克’ 0.9毫莫耳）溶於DCM(8毫升） 中。添加PyBOP(675毫克，1.3毫莫耳），接著為thF(1.3毫 升）中之化合物xiii，（1.3毫莫耳）。添加DIPEA(0.23毫升， 1 ·3毫莫耳），並將所形成之溶液攪拌過夜。隔天，將反應 物以EtOAc稀釋，以飽和NaHC〇3，然後以鹽水洗蘇，接著 濃縮’產生殘留物。使所形成之殘留物藉由5% EtOH/ EtOAc純化’產生化合物clxxxxii(290毫克，4 1.5%)。
中間物貫例182-化合物clxxxxiii : 在標準條件下’使用MeOH(60毫升）與1 n NaOH(52.8毫 升’ 3當量）’使Cbz_環己基甘胺酸第三白胺酸甲酯（7 36 克’ 17.6毫莫耳）水解，回收所產生之中間物cixxxxHi 143110.doc -293 - (92%) °1378927
OH 中間物實例183-化合物clxxxxiv : 使化合物clxxxxiii(3.82克，9.46毫莫耳）溶於0〇]^(30毫 升）中。添加DCM(11_35毫升）中之DCC(11.35毫莫耳），接 著添加110八1(1.54克，11.35毫莫耳）。將所形成之混合物攪 拌五分鐘，並添加THF(40毫升）中之化合物ν(9·46毫莫 耳）。將所形成之混合物攪拌過夜。隔天，將反應混合物 以EtOAc稀釋，以1 N HC1，飽和NaHC03，然後以鹽水洗 滌，接著濃縮，產生殘留物。使所形成之殘留物藉由20% 至30%梯度液，於石夕膠上純化，獲得化合物clxxxxiv(3.03 克，56.3%)。
中間物實例1 83-化合物clxxxii : 使用10% Pd/C(500毫克），在MeOH(30.毫升）中，於H2 下，使化合物clxxxxiv(3.03克，5.33毫莫耳）氫化4小時， 產生化合物clxxxii(2.3克，99%)。 中間物實例184-化合物clxxxxv : 143110.doc -294 - 1378927 於1-胺基-1-環己烷羧酸（2.86克，20毫莫耳）在1^^〇11(40 毫升）中之溶液内，在0°C下逐滴添加S0C12(3毫升）。使混 合物慢慢溫熱至室溫，然後回流5小時。接著將醚添加至 該透明溶液令，並分離沉澱物。使固體在真空下進一步乾 燥，產生化合物clxxxxv(95%)，為白色粉末。 0
中間物實例18 5-化合物。1乂乂义乂¥1:
藉由添加DCM中之HOAt(l.l克，8毫莫耳）與DCC(8毫 升，1 M)，使2-吡畊羧酸（1克，8毫莫耳，1當量）溶於 DCM(15毫升）中。在室溫下攪拌20分鐘後，將化合物 clxxxxv( 1 ·3克，8毫莫耳）添加至該經活化之混合物中。添 加DIPEA(2毫升，12毫莫耳），接著為DMAP(1.5克，12毫 莫耳）。在室溫下攪拌3天後，使反應混合物經過矽藻土過 遽，濃縮，並將所要之產物clxxxxvi藉管柱層析純化（50°/〇 EtOAc/己烷），為黃色油（2_1克，100%)。
中間物實例18 6-化合物<:1\乂乂乂乂^: 藉由添加2 N NaOH(水溶液）（12毫升，24毫莫耳），使化 合物clxxxxvi(1.06克，2_6毫莫耳）溶於MeOH(30毫升）中。 在TLC(50% EtOAc/己烷）顯示完全水解之前，將此溶液在 143110.doc - 295 - 1378927 室溫下攪拌過夜。該溶液以5 N HC1酸化至pH3，並以 EtOAc稀釋之後，萃取有機層。接著以鹽水洗滌有機層， 並使用MgS04脫水乾燥，於濃縮後，以84%產率獲得化合 物 clxxxxvii 0
中間物實例1 87-化合物clxxxxviii : 使化合物clxxxxvii (1.6克，6.4毫莫耳）溶於DCM(18毫 升）中，且接著在室溫下添加HOAt(0_96克，7毫莫耳）與 DCC(7毫升，1 Μ，在DCM中）。在室溫下攪拌20分鐘後， 將L-第三-白胺酸曱酯鹽酸鹽（7毫升，1 Μ在THF中）添加至 經活化之混合物中。接著添加DIPEA(1.2毫升，7毫莫 耳），及隨後添加〇1^人？（1_2克，9.8毫莫耳）。在室溫下攪 拌3天後，使反應混合物經過矽藻土過濾，藉管柱層析純 化並濃縮產生化合物clxxxxviii(60% EtOAc/己烧），為白色 固體（1.74克，72%)。
clxxxxviii 中間物實例188-化合物cic : 使化合物clxxxxviii(1.74克，4.6毫莫耳）溶於MeOH(22毫 升）中，並添加2 N NaOH(水溶液）（7毫升，14毫莫耳）。在 143110.doc -296- 1378927 TLC(50% EtOAc/己烷）顯示完全水解之前，將此溶液在室 溫下攪拌過夜。該溶液以5 N HC1酸化至pH3，並以Et〇Ac 稀釋之後，萃取有機層。接著以鹽水洗滌有機層，並使用 MgS〇4脫水乾燥，於濃縮後產生化合物cic(i〇0%)e
中間物實例189-化合物cc : 於化合物cic(1.5克，4.1毫莫耳）之DCM溶液（15毫升） 中’在室溫下，添加11〇八1(610毫克，4.5毫莫耳），接著為 DCM中之1 M DCC溶液（4.5毫升’ 4.5毫莫耳）。在室溫下 攪拌30分鐘後，接著添加化合物ν(4毫莫耳）之THF溶液（2〇 毫升’ 0.2 M)。將反應物在室溫下攪拌過夜。然後，使反 應物經過碎漢土過滤。使德液濃縮成黃色油，使其藉石夕膠 層析純化（50% EtOAc/己烧）’產生化合物cc (66〇毫克， 3 2%) °
中間物實例190-化合物cci : 於化合物cc (600毫克，1.13毫莫耳）之以〇11溶液（6毫升） 中，添加2 N NaOH(1.7毫升，3.4毫莫耳）。將反應物在室 溫下攪拌2小時，然後藉5 N HC1酸化至pH3。然後，將混 143110.doc -297- 1378927 合物以EtOAc稀釋，接著萃取有機層。接著，將有機層以 鹽水洗滌，然後以MgS〇4脫水乾燥，於濃縮後，產生化合 物 cci(92%)。
中間物實例191-化合物ccii : 於cci(310毫克’ 0·62毫莫耳）之dcm溶液（8毫升）中，添 籲 加PyBOP(420毫克’ 0.8毫莫耳）。將此溶液於室溫下攪拌 30分鐘。然後’於此溶液中添加thf中之化合物Xiii，（8* 升，0.1 Μ) ’接著添加〇ΙΡΕΑ(0.23毫升，1.3毫莫耳）。將 反應物在室溫下攪拌過夜’然後以水（25毫升）使反應淬滅 30分鐘。然後以EtOAc萃取混合物。將所形成之有機層以 鹽水洗蘇’然後在濃縮之前’以MgS04脫水乾燥，產生黃 色油。藉矽膠層析純化EtOH/EtOAc)產生化合物 ccii(140毫克，33%) 〇 φ
中間物實例192-化合物cciv 於化合物cciii、（n_二苯亞甲基）·甘胺酸第三·丁酯（6 克’ 0.0206毫莫耳）與對掌性PTC(1.08克，〇.0〇2〇6毫莫耳） 在無水DCM(48毫升）令之溶液内，於n2大氣及_60°c下， 143110.doc -298· 添加CsOH H2〇(6.9克，0.0412毫莫耳）。於反應混合物中 逐滴添加10毫升DCM中之1-羧基-1-環戊烯曱酯（5 2毫升， 0.0412毫莫耳）。將混合物在_6〇°C下攪拌4天，然後以200 毫升EtsO稀釋’並添加15毫升飽和NH4C1水溶液。分離液 相’並將有機相以1 5毫升水及15毫升鹽水洗滌。將水相以 100毫升EhO萃取。合併有機相，並以Na2S04水乾燥。藉 由移除溶劑，獲得粗產物，溶於1 〇〇毫升Et〇H中，然後添 加 NH20H.HC1(1.43 克，0.0206 毫莫耳）與 NaOAc(1.68 克， 0.0206毫莫耳）。使混合物回流48小時。然後，移除溶劑， 並將所獲得之粗製殘留物直接藉急驟式層析純化，以3〇%_ 5 0% EtOAc/己烷溶離，產生化合物cciv(65〇/〇)，為白色固 體。C12H19N03(MW=225.29) ; MS : m/z (M++l)=226.5。 對掌異構物過量：1 8%ee ’藉對掌性HPLC測得。
中間物貫例193-化合物ccv 於化合物cciv(2克，0.0088毫莫耳）在60毫升ACN中之溶 液内’添加催化量之DMAP(〇.216克，0.0017毫莫耳），及 二礙酸二-第三-丁酯（2_49克，〇〇11毫莫耳）在3〇毫升ACN 中之溶液。將混合物在室溫下攪拌14小時，然後以100毫 升DCM稀釋，並以飽和NaHC03(l〇毫升）及以鹽水（1〇毫升） 洗滌。有機相以NaaSO4脫水乾燥。蒸發溶劑，產生粗產 143110.doc -299· 1378927 物，使其在矽膠管柱上純化，以15% Et〇Ac/己烷溶離，獲 得化合物CCV (86%)，為白色固體。Ci7H27n〇5，MW= 325.40，MS : m/z (Μ++1)=326·2
中間物貫例194-化合物ccvi 於化合物ccv(1.7克，0.0052毫莫耳）在50毫升THF(0.14 Μ)中之溶液内’在_78。〇下，添加mBAL_H(7 8毫升， 0.0078毫莫耳）》將混合物攪拌1小時，然後添加丨〇毫升 MeOH »將混合物以25毫升EtOAc及25毫升飽和酒石酸鈉 水溶液稀釋’然後於室溫下攪拌一小時。分離液相，並將 水相以50毫升EtOAc萃取一次。將有機相合併，並以 NajO4脫水乾燥。蒸發溶劑，獲得粗製殘留物，使用之而 無需任何純化。使粗製物溶於25毫升DCM中，添加Et3Si (0.84毫升’ 0.0052毫莫耳），然後使混合物在_78»c下冷 卻’接著逐滴添加BF3〇Et2(0.71毫升，0.0061毫莫耳）。30 分鐘後，添加Et3Si(0.84毫升）與BF3〇Et2(〇 ?1毫升），並將 混合物攪拌2小時至-78°C。接著’以飽和NaHC03水溶液 (10毫升）使反應淬滅，並以DCM萃取（2x20毫升）。合併有 機相’並以NajO4脫水乾燥。蒸發溶劑，獲得粗製殘留 物’使其藉急驟式層析純化’以13。/。EtOAc/己烷溶離，產 生化合物 ccvi(87%)。C17H29N04，MW=311.42，MS : m/z 143110.doc •300· 1378927 (M++l)=312.6 Ο 、人C02tBu
BOC ccvi 中間物實例195-化合物ccvii
使化合物ccvi(0.5克，0.0016毫莫耳）溶於EtOAc中之8毫 升1 N HC1(經由使無水HC1起泡至無水EtOAc中，然後以另 外之EtOAc稀釋至1N而製成）中。將混合物在室溫下授拌6 小時。於真空中移除溶劑’並使所形成之沉澱物溶於Et2〇 中。將混合物攪拌1 5分鐘後，在減壓下移除溶劑。將所形 成之白色固體以Et20洗滌，並藉過濾分離化合物ccvii(〇 27 克 ’ 80% 產率），C12H21N02 ’ MW 211.15，MS : m/z (M++l)=212.6
H-HCI ccvii 中間物實例196-化合物v 於化合物CCXVi(〇.23〇克，〇·74毫莫耳）在CH2Cl2(3 7毫升） 中之溶液内，添加TFA(2.85毫升）。將混合物攪拌過夜， 然後於真空中移除溶劑至乾酒，並使殘留物溶於細(7 5 毫升）中。使混合物在crc下冷_，並逐滴添加s〇ci2(〇 22 毫升，2,96毫莫耳）’然後回流2小時。於減壓下移除 143110.doc -301. 1378927
EtOH，並使殘留物溶於CH2Ch(10毫升）中。將所形成之溶 液以飽和NaHC〇3水溶液（5毫升）洗條兩次。分離液相，並 使有機相以N a2 S 04脫水乾餘，及在真空中移除溶劑，產生 化合物 v(80%)為油。Ci〇Hi7N〇2 ’ M. W. : 183.25，MS : m/z(M++l)=184.2 中間物實例197-化合物cd 使1-芊基咪唑（6克’ 37.9毫莫耳）溶於Et2〇(18〇毫升）中。 使所形成之溶液降至-60°C，並以n-BuLi(1.6 Μ，24毫升） 處理。將反應物授拌30分鐘，然後使c〇2起泡通過混合物 1 5分鐘。將沉殿物過濾’以ει；2〇沖洗，然後溶於h2〇中。 以5 N HC1使此水溶液酸化至pH=3。於冷凍乾燥後，分離 所要之產物cd，為白色固體。
中間物實例198-化合物cdi 將化合物丨(9.25克’27.9毫莫耳）之〇〇]^溶液（100毫升）， 在〇(3下’以〇八8丁(9.2毫升’69.8毫莫耳）處理。在室溫下 授拌過夜後’以冰使反應淬滅，並以DCM(200毫升）萃 取。將有機層以鹽水洗滌，及在真空中濃縮。使殘留物以 石夕膠層析純化（30% EtOAc/己烷），產生8.5克（86%)所要之 氟化中間物。使一部份此中間物（4 5克，14 2毫莫耳）溶於 143110.doc •302· 1378927
EtOH(75毫升）中。使此溶液接受標準氫化條件，使用 卩£1(〇11)2/(：(2.98克，20%?0含量，4.26毫莫耳）。於室溫下 攪拌過夜後，使反應混合物經過矽藻土過濾。在真空中濃 縮濾液，產生化合物cdi(2_5克，96%)。
Ο 0 cdi 中間物實例199-化合物cdii
於化合物cd(890毫克，4.4毫莫耳）溶於00\4(15毫升）中 之溶液内，添加HOBT(595毫克，4.4毫莫耳）與DCC(4.4毫 莫耳，1 Μ在DCM中），並攪拌20分鐘。將ixxix\990毫 克，3.5毫莫耳）之DCM溶液（15毫升）添加至此混合物中。 將所形成之混合物於氮氣下攪拌過夜。將反應混合物以 EtOAc稀釋，以飽和NaHC03與鹽水洗滌。使有機層在真空 中濃縮，而得殘留物，使其在30% EtOAc/己烷中純化，產 生化合物cdii(666毫克，41%)。
中間物實例20 0-化合物cdiii 143110.doc -303 - 1378927 化合物cdiii係於標準水解條件下’使用甲醇（i〇毫升）與1 N NaOH(3當量），製自化合物cdi。回收565毫克化合物 cdiii (88%) 〇
中間物實例201-化合物cdiv 使化合物cdiii(1.24毫莫耳）溶於DCM(5毫升）中。添加 DCC (1.6毫莫耳，1MDCM)，接著為HOAT(1.6毫莫耳）。 將所形成之混合物攪拌20分鐘，並逐滴添加THF(8毫升）中 之化合物cdi(1.6毫莫耳）。將反應物攪拌過夜。過濾反應 物’並以EtOAc沖洗。將合併之有機層以飽和NaHC03、鹽 水洗滌，以MgS04脫水乾燥，及濃縮。在30% EtOAc/己烷 中達成純化，產生化合物cdiv(565毫克，70%)。
1431l0.doc • 304 1378927 中間物實例202-cdv 化合物cdv(565毫克，〇·86毫莫耳）係於標準水解條件 下，使用乙醇（10毫升）與i N Na〇H(3當量），製自化合物 cdiv。回收490毫克（91%)化合物C(jv。
中間物實例203-cdvi
使化合物cdvi(490毫克，0.78毫莫耳）溶於DCM(1〇毫升） 中。將PyBOP(520毫克，1毫莫耳）添加至該DCM溶液中， 接著為xiii(186毫克’ 1毫莫耳）之THF溶液（1〇毫升）。將 DIEA(0.18毫升，1毫莫耳）添加至反應混合物中，並於氣 氣下攪拌過夜。隔天，將反應物以EtOAc稀釋，以飽和 NaHC〇3與鹽水洗滌。在100% EtOAc中達成純化，產生化 合物 cdvi(478毫克，77%)。
cdvi 143110.doc •305- 1378927 中間物實例204-cdvii 使用Pd(OH)2/C(20%，以乾重為基準，1〇〇毫克）在 MeOH(40毫升）中，使化合物cdw(478毫克，〇 6毫莫耳）氫 化《將反應混合物於氫下攪拌過夜。此時，使反應混合物 經過矽藻土過濾及濃縮，產生化合物cdvii(417毫克， 98%)。
中間物實例205-cdx 使化合物cxxv(購自Albanyl分子研究公司，ι·5克，5·2毫 莫耳）溶於DCM(15毫升）中。將PyB〇p(2 7克，5 2毫莫耳） 與HOBT(700^克，5.2毫莫耳）添加至此溶液中。將（_)·α_ (4-吡啶基）乙胺（640毫克，5.2毫莫耳）之THF溶液（15毫升） 添加至上述溶液中，接著為DIEA(0.93毫升，5.2毫莫耳;^ · (-)-α-(4-ρ比咬基）乙胺’係得自㈠_a_(4_j^咬基）乙胺之酒石 酸鹽（Aldrich) ’其方式是與1 N NaOH(2當量）攪拌1小時， 接著以EtOAc萃取（3x)(70%回收）。 將反應物於室溫下攪拌過夜。將反應混合物以飽和 NaHC03與鹽水洗滌。使產物在5% Et〇H/Et〇Ac中純化， 產生2克（99%)中間化合物cdx。 143110.doc •306·
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cdx 中間物實例206-cdviii
使用10% Pd/C(500毫克）在MEOH(50毫升）中，使化合物 cdx(2克，5.2毫莫耳）氫化。將反應混合物於氫下攪拌過 夜。使產物經過矽藻土過濾，及濃縮，而得化合物 cdviii(l _3 克，98.%)。
藥理學 根據本發明之化合物，如本文中所述，可用於抑制HCV 蛋白酶，因此亦可用於抑制HCV複製。 因此，此處本發明係針對抑制HCV蛋白酶之方法，其包 括使抗-HCV蛋白酶抑制量之式1化合物與包含HCV蛋白酶 之組合物接觸。 此處之又另一發明係針對一種抑制HCV複製之方法，其 包括使HCV與有效量之式1化合物接觸。再者，此處之另 一發明係針對一種治療患有或遭受HCV感染之病人之方 法，其包括對該病人投予藥學上有效量之式1化合物。於 本文中指稱治療HCV感染，應明瞭係包括預防療法，以防 止或抑制感染，以及治療已建立之急性或慢性HCV感染或 143110.doc •307 - 1378927 與HCV感染有關聯之生理學症狀，以基本上㈣“之病 人，抑制感染程度（量），或改善與其有關聯之生理學症 狀。"有效量"係意欲說明本發明化合物之量，在合理生物 學判斷之範圍内有效，適用於與人類及其他哺乳動物之細 胞接觸，而無不當毒性、刺激性、過敏性回應#，且在治 療HCV感染上，伴隨著合理利益/風險比，及因此產生所 要之治療效果。 本文中所討論之生理學症狀，包括一部份，但並非所有 其令抗-HCV治療被認為正當之可能臨床狀況。在此領域 中有經驗者，係極明瞭需要任一種抗_HCV治療之狀況。 本發明之一個特定方面，係提供根據本發明之化合物係 欲以醫藥組合物之形式投藥，惟此化合物可單獨投藥。 "醫藥組合物"係意謂一種組合物，其包含式i化合物，及 至 >、種成伤，選自包括藥學上可接受之載劑、稀釋劑、 塗層、佐劑、賦形劑或媒劑，譬如防腐劑、填料、崩解 劑、潤濕劑、乳化劑、乳化安定劑、懸浮劑、等渗劑、增 甜劑' 矯味劑、芳香劑、著色劑、抗細菌劑、抗真菌劑、 其他治療劑、潤滑劑、吸附延遲或促進劑及分配劑，依投 藥模式與劑量形式之性質而定。此等組合物可呈現片劑、 丸劑、顆粒、粉末、水溶液或懸浮液、可注射溶液、酏劑 或糖黎·形式。舉例之懸浮劑包括乙氧基化異硬脂基醇類' 聚氧化乙稀花楸醇及花楸聚糖酯類、微晶性纖維素、偏氫 氧 此土、填脂及西黃箸樹膠，或此等物質之混合 物舉例之用以防止微生物作用之抗細菌劑與抗真菌劑， 143110.doc 1378927
包括對經基笨甲酸酉旨類、氣丁醇、齡、花楸酸等。舉例之 等渗劑，包括糖類、氣化鈉等。舉例之延長吸收之吸附延 遲劑’包括單硬脂酸铭與明膠。舉例之加強吸收之吸附促 進d a括一甲亞颯及相關類似物。舉例之載劑、稀釋 劑、溶劑、媒劑、促溶劑、乳化劑及乳化安定劑，包括 水、亂仿、庶糖、乙醇、異丙醇、碳酸乙酷、醋酸乙酷、 芊醇、四氫呋喝甲醇、笨甲酸字醋、多元醇、丙二醇、 1’3 丁一帛#油、聚乙二醇、二曱基曱醯胺、丁你⑽⑧ 60、Span® 80、鯨蠟硬脂基醇、十四烷醇、單硬脂酸甘油 酯及月桂基硫酸鈉、花楸聚糖之脂肪酸醋類、植物油（譬 如棉軒油、尼生油、玉米胚芽油、撤境油、萬麻油及芝麻 油），及可注射有機醋類，譬如油酸乙醋等，或此等物質 之適當混合物。舉例之賦形劑，包括乳糖、乳糖、轉樣酸 納、碳㈣、填酸二辦。舉例之崩解劑，包括澱粉、海藻 酸類及某些複雜石夕酸鹽。舉例之潤滑劑，包括硬脂酸鎖、 月桂基硫酸鈉、滑石，以及高分子量聚乙二醇。 ，、他…療劑可與本發明化合物合併使用，包括其他抗_ =cv劑。一些舉例之已知抗_赠劑，包括免疫調節劑， 。如α β·或干擾素，經PEG化之衍生干擾素α化合 物’其他抗病毒劑’譬如三„坐核菩與金剛胺；㈣肝炎蛋 白酶之其他抑制劑；在Hcv生命期_其他標的之抑制劑， 解累旋酶、聚合酶、金屬蛋白酶、内部核糖體進入 ::或廣效抗病毒化合物’譬如νχ_497, 一種細胞纖維核 4早磷酸鹽脫氫酶（IMPDH)之抑制劑，被美國專利 I43ll0.doc 1378927 5’807,876所涵蓋；或其組合。可與本發明化合物併用之么 療劑可分別、同時或順序投藥， 在醫藥組合物中，式1化合物以外之物質之選擇，通常 係根據活性化合物之化學性質，譬如溶解度，特定投藥模 式，及在醫藥實務中欲被遵守之規定作決定。例如，賦形 劑，譬如乳糖、檸檬酸鈉、碳酸鈣、磷酸二鈣，及崩解 劑，言如版粉、海藻酸及某些複合矽酸鹽，與潤滑劑，孽 如硬脂酸鎂、月桂基琉酸鈉及滑石併用，可用於製備片 劑。 此等醫藥組合物可以各式各樣形式呈現，譬如月劑、丸 劑、顆粒、粉末、水溶液或懸浮液、可注射溶液、酏劑或 糖漿。 "液體劑量形式"係意謂欲被投予病人之活性化合物劑 量，係呈液體形式，例如藥學上可接受之乳化液、溶液、 懸泮液、糖漿及酏劑。除了活性化合物以外，液體劑量形 式可含有常用於此項技藝中之惰性稀釋劑，譬如溶劑 '促 溶劑及乳化劑。 亦可採用固體組合物，在軟性與硬質充填明膠膠囊中， 作為填料，使用之賦形劑譬如乳糖或牛奶糖，以及高分子 量聚乙二醇等β 备使用含水懸洋液時，其可含有乳化劑或有助於懸浮之 作用劑。 礼化醫藥組合物之油相，可以已知方式，自已知成份構 成雖然此相可以僅包含乳化劑（另稱為乳化作用劑 143110.doc •310· 1378927 (emulgent)) ’但一般期望包含至少一種乳化劑與脂肪或 油，或與脂肪及油兩者之混合物。較佳係包含親水性乳化 劑，以及充作安定劑之親脂性乳化劑。亦較佳係包含油與 脂肪。乳化劑與安定劑一起或未使用安定劑，構成乳化用 蠟，而與油及脂肪一起之方式，係構成乳化軟膏基料，其 係形成乳膏配方之油性分散相。 若需要，乳膏基料之水相，可包括例如至少3〇% 多 # 羥醇，意即具有兩個或多個羥基之醇，譬如丙二醇、丁烷 込3-二醇、甘露醇、花楸醇、甘油及聚乙二醇（包括PEG 400)及其混合物。局部配方可能期望包含會加強活性成份 吸收或浸透經過皮膚或其他受感染區域之化合物。 供配方用之適當油類或脂肪類，其選擇係以達成所要之 美觀性質為基礎。因此，乳膏較佳應為不油腻、非污染性 及可洗滌之產物，具有適當稠度，以避免自管件或其他容 器滲漏。可使用直鏈或分枝鏈、單_或二元烷基酯類，譬 • 如肉丑寇酸二異丙酯 '油酸癸酯、棕櫚酸異丙酯、硬脂酸 丁酯、棕櫚酸2-乙基己酯，或分枝鏈酯類之掺合物，稱為 Crodamol CAP。其可單獨或合併使用，依所需要之性質而 疋或者，可使用咼炼點脂質，譬如白色軟性石壤及/或 液態石壞或其他礦油。 貫用上，本發明之化合物/醫藥組合物可以適當配方， 藉由局部或系統投藥，投予人類與動物，包括口腔、吸 入、直腸、鼻、面頰、舌下、陰道、結腸、非經腸（包括 皮下、肌内、靜脈内、皮内、鞘内及硬膜外）、腦池内及 143110.doc •311 · 1378927 腹膜腔内。應明瞭的是，較佳途徑可隨著例如接受者之 狀而改變。 ι "藥學上可接受之劑量形式”係指本發明化合物之劑量形 式且包括例如片劑、糖衣键、粉末、醜劑、糖漿，液體 製劑’包括懸浮液’喷霧劑、吸入片劑、錠劑、乳化液' 溶液、顆粒、膠囊及拴劑，以及注射用之液體製劑，包脂 質體！劑。技術與調配方法可一般性地參閱最新版之 Remingt〇n氏醫藥科學，Mack出版公司（Easton，PA)。 ”適於口服投藥之配方”可料連續單位呈現，譬如膠 囊、爲囊劑或片劑’各含有預定量之活性成份；成為粉末 或顆粒；成為溶液或懸浮液，在水性液體或非水性液體 中；或成為油在水中型液體乳化液，或水在油中型液體乳 化液。活性成份亦可呈現為大丸劑、舔劑或糊劑。 片劑可藉由壓縮或模製製成，視情況使用一或多種辅助 成伤。壓縮片冑可經由將呈自纟流動形式之活性成份，譬 如粉末或顆粒，在適當機H中壓縮而製成，視情況與黏合 劑、潤滑劑、惰性稀释劑、防腐齊卜表面活性或分散劑混 口。模製片劑可經由將已使用惰性液體稀釋劑濕潤之粉末 狀化合物之混合物，在適當機器中模製而製成。此等月劑 可視情況經塗覆或刻劃，並可經調配，以提供其中活性成 份之緩慢或受控釋出。 供直腸投藥之固體k合物，包括根據已知方法調配且含 有至少一種本發明化合物之检劑。 若需要且為更有效分佈，可將此等化合物微包膠在於或 •43ll0.doc ^/8927 連附至緩k釋出或標的傳輸系統，譬如生物可相容、生物 可降解之聚合體基質（例如聚（d，丨-内交酷共乙交醋））、月旨 質體及微球體，及藉由被稱為皮下或肌内積貯之技術以 皮下方式或肌内方式注射，以提供此等化合物之連續緩慢 釋出，歷，經2週或較長時間。此等化合物可經$菌，例: L過細菌保留濾器過濾，或經由在無菌固體組合物形式中 播入殺菌劑，其可在即將使用之前，溶於無菌水或某些其 他無菌可注射媒質中。 ” "適用於鼻或吸入投藥之配方"係意謂呈適合以鼻方式或 : 方式彳又予病人形式之配方。此配方可含有載劑，呈 粉末形式，具有粒子大小例如在1至5〇〇微米之範圍内（包 括粒子大小在20與500微米間之範圍内，呈 匕 譬如观米，35微米等）。以載劑為液體，以=鼻里喷 霧劑或以鼻滴劑供投藥之適當配方，係包含活性成份之水 性或油性溶液。適於氣溶膠投藥之配方，可根據習用方法 製成’並可與其他治療劑—起傳輸。吸人療 由經計量之劑量吸入器投藥。 地错 適於口服技藥之配方"係意謂呈適合經口投予病人形式 之配方。此等配方可呈現不連續單位’譬如膠囊、扁囊劑 或片劑’各含有預定量之活性成份；成為粉末或顆粒；成 為溶液或懸浮液，在水性液體或非水性液體中；或成為油 在水中型液體乳化液，或水在油中型液體乳化液^活性成 份亦可呈現為大丸劑、舔劑或糊劑。 "適於非經腸投藥之配方"係意謂呈適合以非經腸方式投 143110.doc -313· 1378927 予病人形式之配方 之配方。此等配方係為無菌 的，且包括乳化
整之卩11值。
一般溫度下為固體， 發明化合物與適當無刺激性賦形劑或 聚乙二醇或拴劑蠟混合而製成，其在 但在體溫下為液體，因此會在直腸或 陰道腔中熔解，並釋出活性成份。 適於系統投藥之配方"係意謂呈適合以系統方式投予病 人形式之配方。此配方較佳係藉由注射投藥，包括經由肌 肉、靜脈内、腹膜腔内及皮下。對注射而言，係將本發明 化合物調配在液體溶液中，較佳係在生理學上可相容之緩 衝劑中，譬如Hank氏溶液或林格氏溶液。此外，可將此等 化合物調配成固體形式，並在即將使用之前再溶解或懸 浮。經凍乾形式亦包括在内。系統投藥亦可藉由經黏膜或 經皮方式’或此等化合物可經口投藥。對於經黏膜或經皮 投藥而言，係於配方中使用對於欲被滲透之障壁適合之浸 透劑。此種浸透劑係為此項技藝中一般已知的，且包括例 如供經黏膜投藥用之膽汁鹽與梭鏈孢酸衍生物。此外，可 使用清潔劑以幫助滲透。經黏膜投藥可經由使用例如鼻喷 霧劑或栓劑。對口服投藥而言，可將化合物調配成習用口 143110.doc -314· 1378927 服投藥形式，譬如膠囊、片劑及補藥。 "適用於局部投藥之配方，，係意謂呈適合以局部方 病人形式之配方。此配方可呈現為局 又
末、喷霧劑及吸入藥、凝嶋醇系)'乳膏，二: 項技藝中—般已知的，或被摻人基料中，以供塗敷於= ^其允許受控釋出化合物經過經皮障壁。當經調配在軟 膏中時，活性成份可與無論是石蝶或水可溶混之軟膏基料 -起採用。或者，活性成份可與油在水中型乳膏基料一 起調配在乳膏中。適合局部投予眼睛之配方，包括滴眼 劑，其中係使活性成份溶解或懸浮於適當載劑中，尤其是 供活性成份用之水性溶劑。適合局部投予嘴巴之配方，包 括錠m含活性成份，在續味基料中，通常為斧糖盘 阿拉伯膠或西黃f樹膠；軟錠劑，其包含活性成份，在惰 !·生基料中’譬如明膠與甘油’或蔗糖與阿拉伯冑；及漱口 水’其包含活性成份，在適當液體載劑中。
"固體劑量形式"係意謂本發明化合物之劑量形式為固體 形式’例如膠囊 '片劑、丸劑、粉末、糖衣鍵或顆粒。在 此種固體劑量形式中，係將本發明化合物與至少一種惰性 習用賦形劑（或載劑）譬如檸檬酸鈉或磷酸二鈣，或下述物 質互混’⑷填料或增量劑，例如澱粉、乳糖 '蔗糖、葡萄 糖、甘露醇及矽酸，（b)黏合劑，例如羧曱基纖維素、海藻 酸鹽、明膠、聚乙烯基四氫吡咯酮、蔗糖與阿拉伯膠，（c) 保濕劑，例如甘油，（d)崩解劑，例如瓊脂、碳酸鈣、馬鈴 薯或木薯澱粉、海藻酸、某些複合矽酸鹽及碳酸鈉，（e)溶 143110.doc •315- 1378927 解阻滯劑：例如石，，⑴吸收加速劑，例如四級敍化合 物’（g)潤濕劑，例如錄壤醇與單硬脂酸甘油酿，⑻吸附 劑，例如高嶺土與膨土’⑴潤滑劑，例如滑石、硬脂酸 鈣、硬脂酸鎮、固體聚乙二醇、月桂基硫酸鈉⑴遮光 劑’類衝劑’及以延遲方式在腸道之某—部份釋出本發 明化合物之作用劑。 活性成份在本發明組合物中之實際劑量程度，可以改 變’以獲得活性成份之量，其係針對特定組合物與投藥方 法，對病人有效獲得所要之治療回應。因此，對特定病人 所選擇之劑量程度係依所要之治療效果、投藥途徑 '所要 之治療期間、疾病之病因學與嚴重性、病人之症狀、重 里、性別、飲食與年齡、各活性成份之種類及功效、吸收 率' 代謝及/或排泄及其他因素而定。 以單一或分離劑量投予病人之本發明化合物之總日服劑 量，其量可為例如每天約O.OOi至約1〇〇毫克/公斤體重且 較佳為0.01至10毫克/公斤/天.例如，在成人中’此劑量 通常為每天藉由吸入約0.01至約100，較佳為約〇 01至約1〇 毫克/公斤體重，每天藉口服投藥為約〇 〇1至約1〇〇，較佳 為0.1至70’更尤其是0.5至10毫克/公斤體重，及每天藉靜 脈内投藥為約〇.〇1至約50，較佳為〇.〇1至10毫克/公斤體 重°活性成份在組合物中之百分比，可以改變，惟其應構 成某一比例’以致將獲得適當劑量。劑量單位組合物可含 有其約數之量，其可用以構成曰服劑量。顯而易見的是， 數個單位劑量形式可大約同時投藥。劑量可按需要而頻繁 143110.doc • 316- 1378927 地投藥，以獲得所要之治療效果。有些病人可對較高或較 低劑量迅速地回應，及可發現遠為較弱之維持足夠劑量。 對其他病人可能必須在每天丨至4份劑量之比率下有長期 治療，根據各特定病人之生理學需要量而定。而對於其他 病人更不用說了，其將必須開立每天不大於一或兩份劑 量0 此等配方可藉製藥技藝中所習知之任何方法，以單位劑 ϊ:形式製成。此種方法包括使活性成份與構成一或多種輔 助成份之載劍產生結合之㈣。一般而t，此等配方係經 由均勻且密切地使活性成份與液體載劑或細分固體载劑或 兩者產生結合，然後若必要則使產物成形而製成。 此等配方可呈現於單位劑量或多劑量容器中，例如密封 安瓿瓶與具有彈性塞子之小玻瓶，並可儲存於凍乾條件 下，在即將使用之前，僅需要添加無菌液體載劑，例如注 射用水。臨時注射溶液與懸浮液可製自前文所述種類之無 菌粉末、顆粒及片劑。 在本發明範圍内之化合物，根據文獻及下文所述之試 驗，顯示顯著藥理學活性，咸信該試驗結果係與在人類及 其他哺乳動物中之藥理學活性有關聯。 活體外酶檢測程序 HCVNS3絲胺酸蛋白酶之抑制 HCVNS3蛋白酶功能部位係按以前所述進行表現與純化 (Vertex，PCT公報W0 98/17679;其係併於本文供參考）。 供NS3蛋白酶用之產色肽受質硝基醯基苯 143110.doc •317- 1378927 胺，及NS4A輔因子片段（-KKGSVVIVGRIVLSGK-)，係由 美國肽公司（Ca)定製合成。使用分光光度測定檢測，並以 EDVVAbuC-對-硝基醯基苯胺作為受質，測試本發明化合 物抑制HCVNS3蛋白酶活性之能力。此檢測係在96-井微滴 定板上，使用具有動力學能力之Spectra Max 250讀取器 (分子裝置，Sunnyvale，CA)操作。EDVVAbuC-對-硝基醯 基苯胺（500 μΜ)受質，藉由已純化HCVNS3蛋白酶（0.5 μΜ)之分裂，係於3 0°C下，在測試化合物不存在或存在 下，在緩衝劑中施行，其中含有30 μΜ NS4A片段，46 mM Hepes，pH8.0，92 mM NaCl, 18%甘油，5 mM DTT 及 7.5% DMSO。監測此反應關於pNA(對-硝基苯胺）在405毫微米下 之釋出。 動力學參數，包括Vmax, Km& Vmax/Km，其測定係在如上 述之條件下施行。Ki值係計算自速率對[抑制劑]圖形，在 固定濃度之酶與受質下，藉由數據對Morrison方程式關於 緊密結合競爭性抑制之非線性最小平方吻合[J.F. Morris on, Biochim. Biophys. Acta.，185，269-286 (1969)]。Prism程 式（GraphPad軟體公司）係使用於此程序。 於本文中揭示之HCV絲胺酸蛋白酶抑制劑，可與直接顯 示或間接引出抗-HCV活性之其他分子合併使用，以預防 病人感染HC V或治療已遭感染之病人。”抗-HC V活性”一 詞，係指一種分子，當存在時，完全抑制或降低HCV病毒 粒子蓄積之能力，與此種分子不存在下之HCV病毒粒子蓄 積作比較，及/或一種分子降低或改善與病人中之HCV感 143110.doc •318· 1378927 染或發病有關聯症狀或病徵之能力。具有抗_HCv活性之 分子’包括會使HCV感染或複製中之一或多個步驟瓦解 者’以及會在宿主細胞中引起免疫調節與抗增生作用者。 具有抗-HCV活性之分子，可抑制HCV專一複製事件，譬 如但不限於HCV導引之核酸或蛋白質合成。具有抗-hcv 活性分子可發生作用之HCV複製階段，包括細胞進入（例 如連附；穿透）；HCV基因組之脫殼與釋出；HCV基因組 之複製（例如，病毒RNA基因組任一股線之複製；病毒信 使RNA之轉錄）；HCV蛋白質之轉譯；HCV蛋白質之轉譯 後變性（例如蛋白分解之分裂作用；糖基化作用）；病毒蛋 白質之胞内輪送；病毒粒子成份之組裝；及,毒粒子之釋 出（例如出芽）。具有抗病毒活性之分子之種類包括但不 限於可溶性受體德夸菌素與抗受體抗體；離子通道阻斷 劑、衣殼安定劑及融合蛋白質抑制劑；病毒聚合酶、反轉 錄酶、解螺旋酶、引導RNA合成酶或整合酶之抑制劑；反 有意義寡核：y：酸與核糖酵素；免疫調節與免疫刺激劑，包 括細胞活素，譬如干擾素，以及肽催動劑，類固醇，及古 典藥物，譬如左旋四咪唑；調節蛋白質之抑制劑；蛋白酶 抑制劑，組裝蛋白質抑制劑；及抗病毒抗體與細胞毒性淋 巴細胞。"抗-HCV有效量"或”藥學上有效量”一詞，係指如 本文中所揭示化合物或化合物組合之量，有效降低或改善 病人中與HCV感染有關聯或與相關病因有關聯之症狀或病 徵，或降低活體外或活體内之病毒含量。活體外應用包括 下述之複製子檢測系統，其中該等量對於降低HCV複製子 143110.doc •319- 1378927 RNA蓄積及/或其中所含基因編碼之蛋白質蓄積係有效 者。 思如使用於本文中所揭示之組合物與組合治療方法中之 具有抗-HCV活性之化合物，包括但不限於免疫調節分 子，包括免疫刺激細胞活素，及其他已知具有HCV抗病毒 活性之化合物’譬如各種抗病毒核苷與核苷酸。 意欲與本文中所揭示之HCV絲胺酸蛋白酶抑制劑合併使 用之免疫調節分子，包括但不限於干擾素_a2B(Intr〇nA，
Schering Plough) ; Rebatron (Schering Plough，干擾素 _ 籲 α2Β + :°坐核菩）；經PEG化之干擾素a(RecJdy，K. R.等人， 與干擾素a:2a比較，在患有慢性C型肝炎之非硬變病人 中’經PEG化之（40-kd)干擾素a-2a之功效與安全性，肝病 學期刊 ’ 33, 433-438 (2001));同感干擾素（Ka〇，j η.，
Chen Ρ· J.，Lai，Μ. Y. & Chen，D. S·，同感干擾素在慢性 c 型肝炎治療上之功效 ’ j· Gastroenterol. Hepatol· 15，1418_ 1423 (2000));干擾素_a2A(R〇feron A ; Roche);類淋巴胚 細胞或"天然”干擾素；干擾素T(Clayette，P.等人，iFN-τ， _ 一種具有抗反轉錄酶病毒活性之新穎干擾素類型L Path〇1
Biol· (Paris) 47, 553-559 (1999));間白血球活素 2 (Davis， G. L.，Nelson，D· R. & Reyes，G. R.，C型肝炎處理之未來選 擇性’肝病討論會，19，103-112 (1999));間白血球活素6 (Davis，G. L.，Nelson, D. R. & Reyes，G· R.，C型肝炎處理 之未來選擇性’肝病討論會，i9，103-112 (1999));間白
血球活素 12 (Davis, G. L.，Nelson，D· R. & Reyes, G. R.，C 143110.doc -320-
1378927 型肝炎處理之未來選擇性，肝病討論會，19, l〇3_112 (1999));三唑核甚；及會加強類型1輔助τ細胞回應發展之 化合物（Davis，G. L.，Nelson, D. R. & Reyes, G. R·，C型肝 炎處理之未來選擇性，肝病討論會，19，103-112 (1999) )。干優素可藉由施加直接抗病毒作用及/或藉由改 變對感染之免疫回應，而改善病毒感染。干擾素之抗病毒 作用，通常係經過病毒穿透或脫殼之抑制，病毒RNA之合 成’病毒蛋白質之轉譯及/或病毒組裝與釋出作媒介。
會刺激干優素在細胞甲合成之化合物（Tazulakh〇va，E B” Parshina，Ο. V.，Gusev, T. S. & Ershov, F. I_，在新穎干 擾素誘生劑之篩檢、分析及臨床應用上之俄國經驗，j
Interferon Cytokine Res. 21，65-73))，係包括但不限於雙 股RNA，單獨或與托伯拉黴素（t〇bramyCin)複合，及依米 奎莫得（Imiquimod)(3M醫藥）（Sauder，D. N.，依米奎莫得之 免疫調節與藥理學性質，J. Am. Acad. Dermatol. 43, S6_ll (2000) ) 〇 已知具有或可由於非免疫調節機制而具有HCV抗病毒活 性之其他化合物，包括但不限於三唑核：y： (ICN醫藥）；纖 維核苷51-單磷酸脫氫酶抑制劑（VX_497，其係由Vertex醫 藥所發展）’金剛胺與金剛烧乙胺（Y〇un〇ssi, Α. μ與 Perillo, R_ Ρ· ’金剛胺、金剛烷乙胺、烏索去氧膽酸、 NS AID，單獨或併用α干擾素，在慢性c型肝炎治療上之角 色’肝病討論會，19，95-102 (1999)) ; LY217896(美國專 利 4,835，168)(Colacino，J· M.等人，1，3,4-〇塞二唑 _2-基氛 143110.doc 321 · 1378927 胺（LY217896)及其納鹽之抗流行性感冒病毒活性評估抗 微生物劑與化學療法，34, 2156_2163 (i99G)) ·及9·經基亞 胺基-6-f氧基{心·二甲基^二以㈣从心八氮菲小 叛酸甲醋；6-甲氧基_Ma•二甲基·9(4甲基制小基亞 胺基）1,2,3,4,43,9，1〇，丨〇3_八氫_菲小羧酸甲酿鹽酸鹽；卜 (2-氯-苯基）·3-(2,2-聯苯基-乙基）_膽（美國專利6，127,422)。 關於前述分子之配方、劑量及投藥途徑，係無論是陳述 於下文所引用之參考資料中，或為此項技藝中所習知，譬 如揭示於F. G. Hayden，Goodman & Gilman之治療學之藥理 學基礎，第九版，Hardman等人編著，Mc Graw_Hi丨丨，New York (1996)，第5〇章，第1191_1223頁，及其中引述之參 考資料。或者，一旦顯示HCV抗病毒活性之化合物已被確 認，則該化合物之藥學上有效量，可使用熟練技師所習知 之技術測得《應指出者為例如Benet等人，G〇〇dman & Gilman之治療學之藥理學基礎，第九版，Hardman等人編 著 ’ Me Graw-Hill，New York (1996)，第 1章，第 3-27 頁， 及其中引述之參考資料。因此，此種化合物之適當調配 法 '劑量範圍及劑量服用法，可容易地藉由例行方法測 得。 本發明之藥物組合’可提供予一種細胞或多種細胞，或 予人類病患，無論是呈個別藥學上可接受之配方，同時或 相繼地投予，含有一種以上治療劑之配方，或藉由單一藥 劑與多重藥劑配方之各種配合。但是，經投予後，此等藥 物組合係形成諸成偷之抗_HCV有效量。 M3110.doc •322 · 1378927 目前有很大數目之其他免疫調節劑與免疫刺激劑可使用 於本發明方法中，包括：
AA-2G
金鋼烷基醯胺二肽 腺替脫胺酶，Enzon 佐劑，Alliance 佐劑，Ribi 佐劑，Vaxcel Adjuvax agelasphin-11 AIDS療法，Chiron 藻聚葡糖，SRI algammulin, Anutech Anginlyc
抗細胞因子，Yeda Anticort 抗胃泌素-17免疫原，Ap 抗原傳輸系統，Vac
抗原配方，IDBC antiGnRH免疫原，Aphton
Antiherpin
Arbidol azarole
Bay-q-893 9 143110.doc - 323 - 1378927
Bay-r-1005 BCH-1393
Betafectin
Biostim BL-001 BL-009
Broncostat
Cantastim CDRI-84-246 cefodizime 化學細胞活素抑制劑，ICOS CMV肽，霍普（Hope)市 CN-5888 細胞活素釋出劑，St DHEAS, Paradigm
DISCTA-HSV
J07B
101A
101Z ditiocarb 納 ECA-10-142 ELS-1 内毒素，Novartis FCE-20696 143110.doc - 324 - 1378927 FCE-24089 FCE-24578 FLT-3配位體，Immunex FR-900483 FR-900494 FR-901235 FTS-Zn G-蛋白質，Cadus
gludapcin glutaurine 糖磷肽 GM-2 GM-53
GMDP
生長因子疫苗，EntreM H-BIG, NABI H-CIG, NABI HAB-439 幽門螺旋桿菌疫苗 濕疹專一免疫因子 HIV療法，UnitedBiomed
HyperGAM+CF
ImmuMax
ImmunBCG - 325 - 143110.doc 1378927 免疫療法，Connective 免疫調節劑，Evans 免疫調節劑，Novacell imreg-1 imreg-2
Indomune 纖維核嘗pranobex 干擾素，Dong-A(a2) 干擾素，Genentech(y) 干擾素，Novartis(a) 間白血球活素-12, Genetic sins 間白血球活素-15, Immunex 間白血球活素-16, Re sear chC or ISCAR-1
J005X L-644257 licomarasminic 酸
LipoTher LK-409 LK-410 LP-2307 LT(R1926) LW-50020 MAF, Shionogi - 326- 143110.doc 1378927 MDP衍生物，Merck
met-腦啡肽，TNI 曱基呋喃基丁内脂
MIMP mirimostim 混合菌苗，Tem MM-1 moniliastat
MPLA，Ribi MS-705 murabutide murabutide, Vacsyn 胞壁醯基二肽衍生物 胞壁醯基肽衍生物 myelopid
-563 NACOS-6 NH-765 NISV, Proteus NPT-16416 NT-002 PA-485 PEFA-814 月太，Scios -327 143110.doc 1378927 肽聚醋，Pliva Perthon, Advanced Plant PGM衍生物，Pliva 醫藥計劃編號1099 ;編號1426 ;編號1549 ;編號1585 ;編 號1607 ;編號1710 ;編號1779 ;編號2002 ;編號2060 ;編 號2795 ;編號3088 ;編號3111 ;編號3345 ;編號3467 ;編 號3668 ;編號3998 ;編號3999 ;編號4089 ;編號4188 ;編 號4451 ;編號4500 ;編號4689 ;編號4833 ;編號494 ;編 號5217 ;編號530 ; pidotimod pimelautide pinafide PMD-589 鬼臼素，Conpharm POL-509
poly-ICLC poly-ICLC, Yamasa Shoyu
polyA-polyU
多醣A
蛋白質 A, BerloxBioscience PS34WO 假單胞菌屬MAbs，Teijin
Psomaglobin PTL-78419 143110.doc -328 1378927
Pyrexol pyriferone
Retrogen
Retropep RG-003
Rhinostat rifamaxil RM-06
Rollin romurtide RU-40555 RU-41821 風療抗體’ R e s C o S-27609 SB-73
SDZ-280-636 SDZ-MRL-953 SK&F-107647 SL04 SL05 SM-4333
Solutein SRI-62-834 SRL-172 - 329- 143110.doc 1378927 ST-570 ST-789 staphage溶胞產物
Stimulon 抑制素 T-150R1
T-LCEF tabilautide
temurtide
Theradigm-HB V
Theradigm-HPV
Theradigm-HSV THF, Pharm&Upjohn THP, Yeda thymalfasin
胸腺激素溶離份 thymocartin thymolymphotropin thymopentin thymopentin類似物 thymopentin,Peptech 胸腺素溶離份5，a thymostimulin thymotrinan 143110.doc - 330 -
1378927 TMD-232 TO-115 轉移因子，Viragen tuftsin, Selavo ubenimex
Ulsastat ANGG- CD-4 +
Collag+ COLSF+ COM+ DA-A+ GAST- GF-TH+
GP-120-IF + IF-A+ IF-A-2 + IF-B + IF-G + IF-G-1B + IL-2 + IL-12+ IL-15+ 143110.doc -331 1378927 IM+ LHRH- LIPCOR+ LYM-B + LYM-NK+ LYM-T+ OPI + PEP + PHG-MA+ RNA-SYN-SY-CW-TH-A-1 + TH-5 + TNF +
UN 可用於本發明之代表性核苷與核站酸化合物，包括但不 限於： (+)-順式-5-氟基羥基-甲基）-[1,3-氧硫伍圜-5-基]胞 嘧啶； (-)-2'-去氧-31-硫胞嘧啶核驻-5·-三磷酸（3TC); (-)-順式-5-氟基-1-[2-(羥基-曱基）-[1，3-氧硫伍圜-5-基]胞嘧 啶（FTC); (-)-2'，3、二去氧-3匕硫胞嘧啶核甞[(-)-SddC]; 1-(2'-去氧-2’-氟-β-D-阿拉伯呋喃糖基）-5-蛾基胞嘧啶 143110.doc - 332- (FIAC)； 去氧- 2’-氟- β-D·阿拉伯咕咕姑^ 』徂1曰夭喃糖基）-5_碘基胞嘧啶三磷 酸（FIACTP); M2’-去氧-2’- HD-阿拉伯呋喃糖基）巧_甲基尿嘧啶 (FMAU)； Ι-β-D-呋喃核糖基·三唑_3鲮醯胺； ，3去氧3 H5·曱基-去氧胞嘴咬核：y：(FddMeCyt); 2’，3·-二去氧_3，_氯基甲基-去氧胞嘧啶核 苷（ClddMeCyt); 2’，3’-二去氧-3，_胺基_5_甲基去氧胞嘧啶核 苷（AddMeCyt); 2’’3’·二去氧-3’-敦基·5_甲基·胞喊咬核嘗（FddMe 2，3 -一去氧-3 _氣基_5-甲基·胞嘧啶核苷（clddMeCyt); 2，3 -—去氧-3 -胺基-5-甲基-胞嘧啶核芬（八(1(11^(：”）； 2，3'-一去氧-3’-敗基胸:y： (FddThd); 2’，3’-二去氧-p-L-5-氟基胞嘧啶核苷（p_L Fddc); 2，3 - 一去氧i-P_L-5 -硫胞嘴咬核嘗； 2'，3_二去氧·βυ-胞嘧啶核苷（β-L-ddC); 9-(1,3-二羥基-2-丙氧基甲基）鳥嘌呤； 2'-去氧-3’-p塞-5-氟基胞嘧啶； 3·-胺基-5-甲基-去氧胞嘧啶核：y；(AddMeCyt); 2-胺基-l，9-[(2-羥曱基]_(羥甲基）乙氧基]曱基卜6H_嘌呤_ 6-酮（gancyclovir); 二醋酸2-[2-(2-胺基·9Η·嘌呤·9-基）乙基]-l，3 -丙烷二基酯 143110.doc •333 · 1378927
(famciclovir) I 2-胺基-1，9-二氫_9_[(2_羥基-乙氧基）曱基]6H_嘌呤-6-酮 (acyclovir); 9-(4-經基-3-羥曱基-丁-i•基）鳥嘌呤（pencicl〇vir); 9-(4-羥基-3-羥甲基-丁-丨_基）_6_去氧鳥嘌呤二醋酸鹽 (famciclovir); 3'·疊氮基·3’·去氧胸腺嘧啶核苷（AZT); 3'-氣基-5-甲基·去氧胞嘧啶核苷（clddMecyt); 9-(2-膦酸基·甲氧基乙基）_2，，6、二胺基嘌呤_2，，3，二去氧核 糖核苷； 9-(2-膦酸基曱氧基乙基）腺嘌呤（pmea); 阿環維爾（acyclovir)三磷酸（ACVTP); D·碳環族-2，-脫氧鳥益（CdG); 一去氧-胞嘴咬核嘗； —去氧-胞嚷咬（ddC); 二去氧_鳥嘌呤（ddG); 二去氧-纖維核：y：(ddI); E-5-(2-溴基乙烯基）_2，_去氧脲苷三磷酸； 氟-阿拉伯呋喃糖基-碘尿嘧啶； 1 (2 -去氧氟基阿拉伯呋喃糖基）_5碘尿嘧咬 (FIAU)； 史塔五定（stavudine); 9 β D-阿拉伯吱喃糖基·9H嘌吟冬胺單水合物（Μ Α广 β队阿拉伯呋喃糖基_9H_嘌呤_6胺-5,單磷酸鹽單水合 1431 l〇.d〇c 1378927 物（Ara-AMP); 2-去氧-3'-硫-5-氟基胞嘴咬核智：； 2'，3'-二去氧-鳥嘌呤；及 2'，3'-二去氧-鳥嘌呤核糖钻。 製備可用於本發明之核：y：與核：y：酸之合成方法，係為此 項技藝中所習知’如在ActaBiochim.Pol.,43,25-36(1996); Swed_核甞核甞酸15 361_378(1996);合成丨^牝^ 1479(1995) ; Carbohyd. Chem.27,242-276(1995) ; Chem.核 甞核苷酸3,421-535(1994广 Ann· ReportsinMed.Chem，大學 出版杜；及 Exp.〇pin.lnvest.Drugs4 95_115(1995)中所揭示 者0 於上文引述之參考資料中所述之化學反應，係一般性地 以其最廣義應用於製備本發明化合物之觀點作揭示。有 時’此等反應可能不能如所述應用於被包含在本文中所揭
示化合物範圍内之每-種化合物。會發生此種情況之化合 物，將容易地被熟諸此藝者察覺。在所有此種情況中，任 :反應均可成功地藉熟諳此藝者所已知之習用修正法施 打’例如，藉由干擾基團之適當保護，藉由改變成替代之 習用試劑，藉由反應條件之例行修正黧 Μ丁U正等，或本文中所揭示 之其他反應或者其他習用反應，將 應用於製備相應之本 發明化合物。在所有製備方法中， 所有起始物質均為已 知，或可容易地製自已知起始物質。 雖然通常採用核：y：類似物本身作為— 土 ^丄 句仇病母劑，但有時必 須使核苷酸（核苷磷酸）轉化成核苷， 幫助其輸送越過細 143110.doc -335· 1378927 胞膜。能夠進入細胞中之以化學方式改質之核芬酸， 容 例為S-1-3-羥基-2-膦酸基甲氧基丙基胞喷咬 (HPMPC’Gilead Science)。為酸類之本發明核苷與核菩酸 化合物’可形成鹽。其實例包括與鹼金屬或鹼土金屬擘如 鈉、鉀、鈣或鎂之鹽，或與有機鹼之鹽，或鹼性四級録 鹽° 可用於本發明組合療法之免疫調節劑與免疫刺激劑，可 以低於此項技藝中習用之量投藥。例如，典型上係將干擾 素a投予人類，用於治療HCV感染，其量為約1χ1〇δ個單位/ 人’每週三次，至約ΙΟχΙΟ6個單位/人，每週三次（81111〇11等 人，肝病學期刊，25 : 445-448(1997)^在本發明之方法 與組合物中，此劑量之範圍可在約〇 1χ1〇6個單位/人，每 週三次，至約7.5χ10δ個單位/人，每週三次；更佳為約 0.5χ106個單位/人，每週三次，至約5χ1〇6個單位/人，每週 三次；最佳為約1χ1〇6個單位/人，每週三次，至約3以〇6個 單位/人，每週三次。於本發明Hcv絲胺酸蛋白酶抑制劑 存在下，由於免疫調節劑與免疫刺激劑之加強之c型肝炎 病毒抗病毒有效性，故可採用減少量之此等免疫調節劑/ 免疫刺激劑，於本文令所揭示之方法與組合物中。類似 地由於本發明HCV絲胺酸蛋白酶抑制劑之c型肝炎病毒 抗病毒有效性在免疫調節劑與免疫刺激劑存在下有所加 強，故於本文所揭不之方法與組合物中可採用減少量之此 等HCV絲胺酸蛋白酶抑制劑。此種減少之量可藉由例行監 測受感染而接受治療之病人中之。型肝炎病毒滴定度而測 143110.doc 1378927 得這可藉由例如監測病人血清中之HCvrna，藉由槽縫 沾吸點沾吸或RT_PCR技術，或藉由度量表面或其 原進行病人可在採用本文令所揭示之HCV絲胺酸蛋 白酶抑制劑及其他具有抗-HCV活性之化合物（例如核答及/ 或核菩k抗病毒劑）之組合療法期間，以類似方式監測， 以測定S合併使用_，每—種之最低有效劑量。 在本文中所揭示之組合治療方法中，核#或核替酸抗病 # 4化合物或其混合物，可投予人類，其量之範圍為約〇1 毫克/人/天至約5〇〇毫克/人/天；較佳為約1〇毫克/人/天至 約3〇〇毫克/人/天；更佳為約25毫克/人/天至約2〇〇毫克/人/ 天，又更佳為約50毫克/人/天至約15〇毫克/人/天；且最佳 係在約1毫克/人/天至約50毫克/人/天之範圍内。 化合物之劑量可以單一劑量或以成比例之多重亞劑量投 予病人。於後述情況中，劑量單位組合物可含有此種其約 數之量，以構成日服劑量。每天之多劑量亦可增加總日服 φ 劑量，若這是開立藥物之人員所想要的。 以本發明化合物及/或組合物治療患有HCV感染病人之 服用法，係根據多種因素作選擇，包括病人之年齡、體 重 '性別 '飲食及醫療狀態，感染之嚴重性，投藥途徑， 藥理學考量，譬如所採用特定化合物之活性、功效、藥物 動力學及毒物學作用形態，及是否利用藥物傳輸系統。於 本文中所揭示藥物組合之投藥，通常應持續歷經數週至數 月或數年期間，直到病毒滴定度達到可接受之程度這顯 示感染已被控制或根除。接受本文中所揭示藥物組合治療 143110.doc -337· 1378927 之病人，可例行性地藉由度量病人血清中之肝炎病毒rna 進行監測’其方式是槽縫沾吸、點沾吸或RT-PCR技術， 或藉由度量血清中之C型肝炎病毒抗原，譬如表面抗原， 以測定治療之有效性❶藉此等方法所獲得數據之連續分 析’允許修正治療期間之治療服用法，因此係投予各成份 在組合中之最適宜量’且因此亦可測得治療延續時間。因 此’治療服用法/服藥時間表可在治療過程中合理地修 正，以致使用於組合中一起顯示令人滿意抗_c型肝炎病毒 有效性之各抗病毒化合物之最低量係被投予，且因此在組 合中之此種抗病毒化合物之投藥，係僅持續長達必須成功 地治療感染之時間。 本發明係涵蓋本文中所揭示之HCV絲胺酸蛋白酶抑制 劑’與前述及類似型式之具有抗_HCV活性之化合物，以 各種組合，以治療或預防病人中之HCV感染之用途。例 如，一或多種HCV絲胺酸蛋白酶抑制劑可併用：一或多種 具有抗-HCV活性之干擾素或干擾素衍生物；一或多種具 有抗-HCV活性之非干擾素化合物；或一或多種具有抗'_ HCV活性之干擾素或干擾素衍生物，與一或多種且
HCV有效之量存在， 意即與此種HCV絲胺酸蛋白 作用，故當 -有效或抗-白酶抑制劑 143110.doc •338 · 1378927 及具有抗-HCV活性之化合物，當以藥學上有效量使用時 作比較，若單獨使用時，在病人中完全抑制或降低Hcv病 毋粒子之蓄積及/或降低或改善與HCV感染或病因有關聯 症狀或病徵上，提供減少醫藥有效性之量。此外，本發明 係涵蓋如前述HCV絲胺酸蛋白酶抑制劑與具有抗_Ης：ν活 性之化合物之組合，以治療或預防HCV感染之用途，其中 一或多種此等抑制劑或化合物，係以藥學上有效量存在， 鲁 而其他係以亞臨床藥學上有效或抗Hcv有效之量存在， 此係由於其加成或增效作用。於本文中使用之"加成作用" 一詞，係說明兩種（或更多種）醫藥活性劑之合併作用，其 係等於各藥劑單獨給予作用之總和。增效作用係為其中兩 種（或更多種）醫藥活性劑之合併作用，大於各藥劑單獨給 予作用之總和。 實例42 C型肝炎病毒（HCV)感染之現行標準療法，係以免疫調 • 節劑α-干擾素治療（慢性C型肝炎：流行疾病管理，美國國 豕衛生研究所，衛生與人類服務部門，1999)。此療法在 大部份HCV病人中無效，其顯示無論是沒有回應或甚至在 長期干擾素治療後復發。此外，有嚴重副作用伴隨著干擾 素療法。 鑒於對新穎更有效抗病毒藥物以治療HCV感染病人之迫 切需要，本案發明人已發展出一系列化合物，以抑制 之絲胺酸蛋白酶（HCV病毒蛋白質NS3與NS4A之複徵）。此 等化合物可單獨，彼此一起，及與其他種類之用以治療或 143110.d〇c • 339 · 1378927 預防HCV感染之化合物合併使用。此實例係描述測試三種 代表性HCV絲胺酸蛋白酶抑制劑，意即化合物CU、化合 物EP及化合物EC，單獨及併用一組干擾素之個別成員（干 擾素a-2B(Schering-Plough)，干擾素a-2A(PBL生物醫學實 驗室，New Brunswick，NJ)，干擾素β(研究診斷劑公司， Flanders, NJ)及羊干擾素τ(研究診斷劑公司，Flanders， NJ))，在HCV亞基因組RNA複製子檢測（複製子檢測）中， 以測定兩種化合物是否協力發生作用以減少HCVRNA蓄 積。複製子檢測係度量HCV亞基因組RNA(複製子RNA)在 藥物治療兩天後，留在複製子細胞中之量（Lohmann等人， Science2 85 : 110-113 (1999))，相對於複製子 RNA在未經 處理之細胞中之量。在此項檢測中，化合物作為HCV抗病 毒藥物之功效，係直接正比於抑制複製子RNA蓄積之程 度。 將兩種藥物以組合方式在活體外複製子檢測系統中測 試，以測定當一起使用時，其是否顯示加成或增效抗-HCV活性。複製子檢測係被採用作為活體外HCV感染之替 代模式，以評估免疫調節劑之合併作用，例如干擾素-α2Β((插入序列A) ; Schering Plough)，與HCV絲胺酸蛋白 酶抑制劑，例如化合物CU。如下文所示，當使用正式數 學增效測定法度量，以分析其在複製子檢測中降低 HCVRNA含量之能力時，其結果証實此兩種類型之藥物有 明顯增效抗-HCV作用。 複製子檢測 143110.doc -340- 1378927 採用含有自身複製HCV亞基因組RNA(複製子）之細胞系 之複製子檢測，係描述於Lohmann等人，Science285 : 1 10-113 (1999)中。使用於本文所述實驗中之複製子之順 序，其基因銀行登記號碼，在此參考資料中係被列示為 AJ242654。此論文揭示之方法，係關於RNA從複製子 cDNA之活體外轉錄，複製子RNA藉由電擊穿孔之轉移感 染至Huh7細胞中，及使用抗生素G418選擇含有複製子 RNA之細胞。Huh7細胞為肝細胞瘤細胞系，得自FoxChase 癌症研究中心（Philadelphia)之William Mason博士。此等細 胞係公開地可得自FoxChase，且已被廣泛地描述於科學文 獻（Nakabayashi 等人，CancerRes.42 : 3858-3863(1982)) 中。在本文所述之實驗中，係將所有模板DNA在RNA電擊 穿孑L至Huh7紐胞中之前，經由以DNase多重處理（三次連續 處理），移離活體外轉錄複製子RNA製劑。 複製子檢測係按下文詳述施行。簡言之，係將複製子細 胞置於96井盤中，其密度為每井10,000個細胞，並於37°C 下培養。細胞係在補充1 0%牛胎兒血清、麩醯胺、非必須 胺基酸及抗生素G418(0.25毫克/毫升）之DMEM(Dulbecco之 最少必須培養基）中培養。於過夜培養後，將培養基以含 有2°/。牛胎兒血清，及不同濃度之絲胺酸蛋白酶抑制劑， 譬如化合物CU，及/或干擾素，譬如干擾素-α2Β(插入序列 A，Schering Plough)之DMEM置換。每一種化合物係在六 至八種不同濃度下測試。對濃度範圍之一個極端，係選擇 高濃度化合物，其會在兩天處理後，造成幾乎完全抑制複 143110.doc -341 - 1378927 製子RNA蓄積。自此等起始濃度，進行連續稀釋，因此在 複製子檢測中測試之濃度範圍，係包括化合物為高度有效 下之濃度’以及沒有顯著作用下之濃度。各HCV絲胺酸蛋 白酶抑制劑濃度’係在無任何外加干擾素下，以及添加 至八種不同干擾素劑量下測試》同樣地，干擾素係在無任 何外加HCV絲胺酸蛋白酶抑制劑下測試。使用化合物進行 48小時培養後’將培養基自板移除，並使用由Qjagen公司 (Valencia，CA)所製造之RNeasy-96套件，自細胞令萃取出 全部細胞RNA。然後，將此RNA藉定量RT-PCR或Taq Man · ⑧（應用生物系統，FosterCity，CA)分析。Taq Man® R_T- PCR標的為在複製子RNA中之新黴素抗藥性基因。板係經 设st ’因此各藥物處理試樣有5個複製物，而未經處理試 樣有16個複製物。這允許在定量rT_PCr數據中有較大統 計可信度》 複製子檢測數據之分析，產生兩個數值，其可用於評估 潛在HCV抗病毒劑之功效。在所測試之各化合物濃度中， 癱 係測定兩天治療期間因化合物所造成抑制複製子rNA蓄積 w 之程度’相對於複製子RNA在未經處理細胞中之量。其係 以抑制百分比作報告。當在—範圍之濃度下藉由細胞處理 所產生之一系列數據點已被獲得時，即產生1(：：5()值，意即 HCV複製子RNA蓄積被該化合物減少50%下之化合物濃 度。經過HCV絲胺酸蛋白酶抑制劑在複製子檢測中之重複 測試’測定出IC5〇具有百分比變易係數（〇/〇cv或ioo〇/〇xic50/ 平均ICw中之標準偏差）為約2〇%。IC5〇為用以將此項檢測 143110.doc -342·
1378927 中測試之個別化合物分等級之數值，以其作為HCV抗病毒 劑之功效為基礎。簡易IC5〇測定不適合用以評估使用於組 合中之化合物利用性。使用不同干擾素與絲胺酸蛋白酶抑 制劑之所有組合，所產生數據陣列之最有效分析，需要評 估百分比抑制作用’如表4中所示，使用下文所述之數學 方法’其係經設計以測定組合治療是否為催動性、加成性 或增效性》 複製子檢測之細節係如下述。 HCV複製子RNA在HCV複製子檢測中，使用Taq Man® RT-PCR定量分析之程序 此複製子檢測係用以度量潛在HCV抗病毒化合物抑制 HCV亞基因組RNA複製子分子在Huh7細胞系中蓄積之能力 (Lohmann等人’亞基因組c型肝炎病毒RNA在肝細胞瘤細 胞系中之複製’ Science285，110-113 (1999))。此檢測包含 二種操作組份.（1)複製子細胞維護，檢測板設立及化合物 施用；（2)全部細胞RNA自複製子細胞之萃取；及（3)即時 RT-PCR (Taq Man®)以度量複製子RNA於各試樣中之量。 複製子檢測需要施行至少4天；但是，此程序可中斷，並 使試樣在兩步驟之間冷凍。各檢測組份係描述於下文。 1.複製子細胞維護，檢測板設立及化合物施用 1.1複製子細胞系維護 使用於複製子檢測中之細胞系，係按Lohmann等人所述 製成（亞基因組C型肝炎病毒RN A在肝細胞瘤細胞系中之複 製’ Science285，110-113 (1999))。在將含有複製子細胞之 143110.doc - 343 · 1378927 150平方么刀細胞培養燒瓶（c〇star)於37。〇與5% c〇2下培養 且變成融合後，將細胞在新的15〇平方公分細胞培養燒瓶 中稀釋1 . 10v/v。培養基為含有1〇%牛胎兒血清（FBS)、ιχ 非必須胺基酸（ΝΕΑΑ)、ΐχ麩醯胺（Glu)及〇 25毫克/毫升 G418之DMEM。進行二個序列繼代，每次允許細胞變成融 合’接著將細胞稀釋至新的15〇平方公分細胞培養燒瓶 中。然後’將此等被稱為"原始細胞”之細胞，分成數液 份’並儲存以供未來使用於複製子檢測中。進行Taq Man® 為基礎之分析，以測定每細胞之HCV複製子基因組數目， 其顯現出每細胞有〜150份複製之複製子存在。這是以複製 子RNA之複製份數對人類ap〇B基因之兩倍複製份數（單倍 體基因組數目）之比例為基礎。 1 · 1.1將原始細胞儲存於液態N2中。對使用於複製子檢 測中之細胞而言’係在2 0次序列繼代後，將細胞捨棄，並 使新批次自液態N2儲存中復活。 1.2將細胞覆蓋於96-井盤中供複製子檢測 U.l. 為製備96-井板，使含複製子之細胞之75%融合 75平方公分燒瓶進行胰蛋白酶化，並再懸浮於1〇毫升培養 基A中。胰蛋白酶化係以下述方式進行，移除培養基，添 加1毫升胰蛋白酶-EDTA 0.25% w/v，然後移除胰蛋白 酶-EDTA。5-10分鐘後，使細胞自燒瓶釋出，並再懸浮於 培養基中。 1.2.2. 使用血球計，計數細胞’並將細胞濃度調整至 105個細胞/毫升。 143110.doc -344· 1378927 1.2.3. 使用Impact2多通道吸量管（Matrix)，將各井以 100微升細胞懸浮液接種，但絕不從單一細胞懸浮液覆蓋 超過四個96-井板。 1.2.4. 將96-井板在37°C下培養過夜。 1·3·化合物稀釋並施加至複製子細胞盤 1.3.1· 使HCV絲胺酸蛋白酶抑制劑化合物溶於二甲亞 砜（DMSO)中，至最後濃度為20 mM。使干擾素懸浮於含 有0.1%w/v牛血清白蛋白之磷酸鹽緩衝鹽水溶液中。 1.3.2. 以DMSO將此20 mM化合物溶液稀釋至1 mM。 1.3.3. 將已溶於DMSO中之50微升化合物，添加至1〇 毫升培養基B*(化合物濃度為5 mM，而DMSO濃度現在為 0.5%)，或將20微升1 化合物與30微升DMSO添加至1〇 毫升培養基B中（化合物濃度為2 μΜ)。 1.3.4. 化合物稀釋至最後濃度係經由將化合物/培養基 Β溶液與培養基C(含有0.5% DMSO)混合而完成。化合物之 序列一至五稀釋液’係以培養基C在2毫升聚丙烯96-井板 塊中施行’以獲得所要之最後化合物濃度。 1.3.5. 將細胞板移離37°C培養器，並在蓋子之頂部右 角落及底部右側上作標記。將培養基倒出96_井板。 1-3·6·將得自96_井稀釋板塊各井之100微升化合物/培 養基溶液，使用Impact2吸量管，添加至％井細胞板。 13.7.根據表3，將1〇〇微升培養基c添加至所有未經 處理之井中，以測試化合物，在無論是1、3或6種不同濃 度下 Untx係指與在經處理細胞中相同濃度下添加之模 143110.doc •345- 1378927 倣處理細胞（DMSO) ; "Con."係指化合物濃度。 表3 2種化合物，6種濃度，5種複製物
化合物1 化合物2 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 A untx untx untx untx Untx untx untx untx untx untx B con.l con.l con.l con.l con.l con.l con.l con.l con.l con.l C con.2 con.2 con.2 con.2 con.2 con.2 con.2 con.2 con.2 con.2 D con.3 con.3 con.3 con.3 con.3 con.3 con.3 con.3 con.3 con.3 E con.4 con.4 con.4 con.4 con.4 con.4 con.4 con.4 con.4 con.4 F con. 5 con. 5 con.5 con.5 con.5 con.5 con.5 con.5 con.5 con.5 G con.6 con.6 con.6 con.6 con.6 con.6 con.6 con.6 con.6 con.6 H untx untx untx untx Untx untx untx untx untx untx 4種化合物，3種濃度，5種複製物 化合物1 化合物2 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 A untx untx untx untx Untx untx untx untx untx untx B con.l con.l con.l con.l con.l con.l con.l con.l con.l con.l C con.2 con.2 con.2 con.2 con.2 con.2 con.2 con.2 con.2 con.2 D con.3 con.3 con.3 con.3 con.3 con.3 con.3 con.3 con.3 con.3 E con.l con.l con.l con.l con.l con.l con.l con.l con.l con.l F con.2 con.2 con.2 con.2 con.2 con.2 con.2 con.2 con.2 con.2 G con.3 con.3 con.3 con.3 con.3 con.3 con.3 con.3 con.3 con.3 H untx untx untx untx Untx untx untx untx untx untx 化合物3 化合物4 143110.doc -346- 1378927
16種化合物，1種濃度，4種複製物 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 A untx cpdl cpd2 cpd3 cpd4 cpd5 cpd6 cpd7 cpd8 untx B untx cpdl cpd2 cpd3 cpd4 cpd5 cpd6 cpd7 cpd8 untx C untx cpdl cpd2 cpd3 cpd4 cpd5 cpd6 cpd7 cpd8 untx D untx cpdl cpd2 cpd3 cpd4 cpd5 cpd6 cpd7 cpd8 untx E untx cpd9 cpdlO cpdll cpdl 2 cpdl 3 cpdl 4 cpdl 5 cpdl 6 untx F untx cpd9 cpdlO cpdll cpdl 2 cpdl 3 cpdl 4 cpdl 5 cpdl 6 untx G untx cpd9 cpdlO cpdll cpdl 2 cpdl 3 cpdl 4 cpdl 5 cpdl 6 untx Η untx cpd9 cpdlO cpdll cpdl 2 cpdl 3 cpdl 4 cpdl 5 cpdl 6 untx 12種化合物，1種濃度，5種複製物 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 A untx untx untx untx Untx untx untx untx untx untx B cpdl cpdl cpdl cpdl cpdl cpd7 cpd7 cpd7 cpd7 cpd7 C cpd2 cpd2 cpd2 cpd2 cpd+2 cpd8 cpd8 cpd8 cpd8 cpd8 D cpd3 cpd3 cpd3 cpd3 cpd3 cpd9 cpd9 cpd9 cpd9 cpd9 E cpd4 cpd4 cpd4 cpd4 cpd4 cpdlO cpdlO cpdlO cpdlO cpdlO F cpd5 cpd5 cpd5 cpd5 cpd5 cpdll cpdll cpdll cpdll cpdll G cpd6 cpd6 cpd6 cpd6 cpd6 cpdl2 cpdl 2 cpdl 2 cpdl 2 cpdl 2 H untx untx untx untx Untx untx untx untx untx untx 143110.doc -347· 1378927 I·4.將板在37°C下培養48小時，然後使其接受RNA萃取 表4
用於細胞培養與化合物設立之設備與供應源之摘述 8通道Impact2吸量管，1250微升 目錄編號2004 Matrix 2毫升聚丙烯深井板塊，96-井，無菌 目錄編號4222 Matrix 25毫升試劑儲槽，無菌 目錄編號8096 Matrix 1250微升X-tra長吸量管端 目錄編號8255 Matrix 96-井板 目錄編號3595 Costar 血球計 明亮線條改良型 NeubauerO. 1 毫米深 Reichert DMEM 目錄編號51444-79P JRH L-麩醯胺(Glu) 目錄編號12403-010 GIBCO-BRL 非必須胺基酸(NEAA) 目錄編號11140-050 GIBCO-BRL 牛胎兒血清(FBS) 目錄編號16250-078 GIBCO-BRL G418 目錄編號55-0273 invitrogen DMSO 目錄編號D-2650 Sigma 培養基A DMEM，10%FBS, 1XNEAA，lXGlu, 0.25毫克/毫升G418 培養基B DMEM, 2% FBS, 1XNEAA, lXGlu 培養基C DMEM, 2% FBS, 1XNEAA, lXGlu, 0.5% DMSO 膜蛋白酶-EDTA0.25% GIBCO-BRL 143110.doc -348- 1378927 2.全部細胞RNA自複製子細胞之萃取 2.1引進 此程序之目標是從活體外組織培養試樣中萃取RNA，以 致病毒或細胞RNA係定量地回收，且足夠純以藉由定量 HCVRT-PCR檢測進行分析。 為允許偵測RNA萃取效率上之偏差，將標準量之牛病毒 性腹瀉病毒（BVDV)，一種具有部份類似HCV之RNA病 毒，在RNA萃取之前，添加至各細胞試樣中。因此，在最 後多重RT-PCR反應中檢出之BVDVRNA含量，在所有井中 應為一致，在與複製子檢測有關聯之變化性範圍内。此 RNA萃取效率内部控制，係進一步討論於下文Taq Man®段 落中。 所使.用之RNA萃取方式，係為由Qiagen公司（Valencia, CA)所產生之RNeasy-96方法。此方法採用96支以矽石基料 之微小管柱，置於可與96-井組織培養操作相容之陣列 中。此RNA萃取技術為Boom方法之修正，其中所有細胞 蛋白質與核酸，包括核酸酶，係首先以強促溶鹽（胍硫氰 酸鹽）變性。在此環境中，核酸對矽石（在微小管柱圓盤中 之材料）具有強親和力；但是，蛋白質及其他污染物不會 結合至矽石，且會通過管柱。在以促溶/乙醇溶液洗滌管 柱後，使試樣部份乾燥，然後小體積水，使核酸釋離管 柱。 為減少在回收HCVRNA時之變化性，應小心進行管柱洗 滌與部份乾燥條件。少量乙醇存在於管柱上，會污染最後 143110.doc •349- 1378927 RNA，及干擾RT-PCR偵測系統。在此程序之所有階段 中’均需要留心’因為起始試樣可能是生物危險的，促溶 鹽為高度腐蝕性’且成為硫氰酸鹽，若使其與酸性環境接 觸’其可產生有毒氰化物氣體。 表5
HCVRNA萃取程序所需要設備與供應源之摘述 RNeasy 96 套件(24) 目錄編號74183 Qiagen QIAvac% 歧管 目錄編號19504 Qiagen 離心機4-15C，供2x96板用，6000x克 目錄編號81010 Qiagen 板轉子，供2x96板用 目錄編號81031 Qiagen 200標準純度乙醇 8通道Impact2吸量管，250微升 目錄編號2002 Matrix 8通道Impact2吸量管，1250微升 目錄編號2004 Matrix 2毫升聚丙烯深井板塊，96-井，無菌 目錄編號4222 Matrix 25毫升試劑儲槽，無菌 目錄編號8096 Matrix 1250微升X-tra長吸量管端 目錄編號8255 Matrix 200微升吸量管端 目錄編號7275 Matrix 不含血清MEM培養基 目錄編號11095-80 GIBCOBRL 2.2程序： 2.2.1細胞溶解 2.2.1.1.製備溶胞缓衝劑：對一個96-井板，添加150微 升β-酼基乙醇（β-ΜΕ)與1微升BVDV儲備液（於添加前’使 儲備液渦旋）至15毫升RLT缓衝劑（RNeasy套件之一種成 143110.doc • 350- 1378927 份，Qiagen)中。此儲備液係經由以bVdv感染MDBK細胞 (牛腎臟細胞’ #CCL-22，可得自美國培養物類型收集處 (Manassas VA))而製成，並在尖峰細胞病變作用下採集培 養物（CPE)。此儲備液具有感染滴定度為大約lxl〇7pfu/毫 升。這在Taq Man®檢測中，獲得BVDV低限循環（Ct)為約 22。BVDV儲備液係儲存於-80°C冷束庫中。 2_2.1.2.將細胞以150微升不含血清之MEM培養基洗滌 (程序4，在8通道電子吸量管P1250上：充填1250, Disp 150x8)。將150微升溶胞緩衝劑添加至各井（相同程序）。 .2.2 · 1 · 3 ·立即萃取RN A，或使細胞在_ 8 〇。〇下冷;東。 2.2.2. 製備供RNA萃取之試劑與物料。 2.2.2.1. 記下RPE與RNeasy 96套件之批號。 2.2.2.2. RPE :將720毫升1〇〇%乙醇添加至一瓶rpe (Qiagen)中’並充分混合；在使用之前，將RpE瓶一直充 分振盛。 2.2.2.3. 70〇/〇乙醇：將150毫升焦碳酸二乙酯（DEPC)水添 加至3 50毫升1 〇〇%乙醇中，並充分混合。
2.2.3. 以RNeasy 96套件製備RNA 2.2.3.1.使冷凍之試樣在室溫下解凍4〇分鐘。同時，對 各板’使一支管柱之萃取對照物解凍（萃取對照物： RNeasy萃取對照物為一組8支管子，全部連接在一起。各 官子内部為170微升細胞溶胞產物，具有某一比例之HCV 陽性與陰性細胞《從頂部至底部，為兩組各為低、中、高 及零數目之對照物。（參閱下文擬案之段落2 3)。 143110.doc •351 · 1378927 2.2.3.2. 以吸量管吸取100微升上下五次，使試樣混合。 將全部試樣轉移至2毫升Matrix方形井板塊之管柱1-10(程 序1在P250上：混合1〇〇χ5，充填170，沖洗）。 2.2.3.3. 將150微升複製子標準物轉移至管柱11(無試樣 在管柱12中）。 2.2.3.4. 將150微升70%乙醇（EtOH)添加至各試樣（程序4 在 P1250 上：充填 1250, Displ50)。 2.2.3.5. 將以適當板號標記之RNeasy 96板，置於真空歧 管中。將溶胞產物/EtOH混合並轉移至RNeasy 96板（程序1 在P1250上：混合200，次數5，充填330，及沖洗）。將任 何未使用之井，以透明膠帶（由Qiagen提供）密封，通常為 管柱12。 2.2.3.6. 施加真空（大約800毫巴）以裝填試樣至微小管 柱。 2.2.3.7. 將 RNeasy-96板以 1000微升RW1 緩衝劑（Qiagen)/ 井洗滌（程序2在P1250上：充填1000，Disp 1000)。 2.2.3.8. 施加真空至濾器，經過Rwi緩衝劑，並排空流 經物。 2.2.3.9. 將RNeasy-96板以1000微升RPE缓衝劑/井洗滌 (程序2在P1250上）。 2·2.3·10· 對濾器施加真空，經過RPE缓衝劑。 2.2.3.11.重複步驟 2,2.3.9 2·2·3.12. 對濾器施加真空，經過RPE緩衝劑’保持所 施加之真空3分鐘。 I43I10.doc -352 - 1378927 2.2.3.13. 使RNeasy 96板乾燥：將RNeasy-96板置於收 集微試管掛架（由Qiagen提供）上，以所提供之Airpore膠帶 覆盖並將此早元在6000x克下離心10分鐘（Qiagen Sigma 離心機；4-15。〇。 2.2.3.15.自 RNeasy 96-井板溶離出 RNA :將 RNeasy- 96板轉移至新的收集微試管掛架之頂部。將7〇微升不含 RNase之水添加至各井之中間（程序3在？125〇上：充填 850，Disp70)。 2.2.3.16，在室溫下培養1分鐘’然後將新的AirPore膠 帶放置在板上。 2.2.3.17. 然後，將此單元在6000X克下，於Sigma4_ 15C離心機中離心4分鐘。度量所溶離之體積，係在28微升 與50微升之間。 2.2.3.18. 將RNeasy-96板拋棄，並將收集試管掛架以 Qiagen提供之罩蓋密封（每片條8個）〇 2.2.3.19. 將已溶離之RNA儲存於-80°C下，或立即在 Taq Man®檢測中分析。 2.3萃取對照物製備 第1天 2.3.1.1·將2·5χ107個會產生複製子之細胞，平敷在丨％ 平方公分組織培養燒瓶（Τ_15〇)中。 2.3.1.2.將2.0x1 〇6個Huh7細胞平敷在75平方公分組織培 養燒瓶（T-75)t。 2.3.1.3在37°C下培養過夜。 J43110.doc -353 - 丄〇/的27 第2天 2.3.1.4.以溶胞緩衝劑，使細胞溶解。 3.1.5.自Huh7與會產生複製子之細胞，移除上層清 液並以10毫升不含血清之培養基（MEM)洗務單層。 2·3.1.6·添加30毫升溶胞緩衝劑（具有i微升bvdv儲備液 /15毫升溶胞緩衝劑）至1^117細胞中，藉由重複以吸量管吸 取進行混合，及將細胞溶胞產物放置在5〇毫升圓錐形底之 組織培養離心管中。 2·3.1.7.將1〇.5毫升溶胞緩衝劑添加至會產生複製子之· 細胞中，藉由重複以吸量管吸取進行混合，及將細胞溶胞 產物放置在15毫升圓錐形底之組織培養離心管中。 2.3.2. 對於高萃取標準物：取170微升會產生複製子之 細胞溶胞產物液份，成為兩個MatrixO.75毫升試管掛架之 橫列5與6。 2.3.3. 對於中等萃取標準物：將1.〇毫升會產生複製子 之細胞溶胞產物’添加至9毫升Huh7溶胞產物中，並充分 混合。取170微升此混合物之液份，至兩個MatrixO.75毫升 籲 試管掛架之橫列3與4中。 2.3.4. 對於低萃取標準物：將50微升會產生複製子之 細胞溶胞產物’添加至10宅升Huh 7溶胞產物中，並充分混 合。取170微升此混合物之液份，至兩個Matrix0.75毫升試 管掛架之橫列1與2。 2.3.5. 零萃取對照物：取170微升Huh7細胞溶胞產物 之液份，至兩個MatrixO.75毫升試管掛架之橫列7與8。 143110.doc •354- 1378927 2.3.6. 將對照物儲存於-80°C下。 3. Taq Man®RT-PCR與數據分析 3.1引進：使用即時定量RT-PCR，以度量HCV複製子RNA 於各試樣中之量。此項技術亦被稱為PCR系V核酸酶檢 測，及Taq Man®。分析儀器為應用生物系統7700 Prism順 序偵測系統（應用生物系統公司，FosterCity,CA)。此儀器基 本上為時間-多重雷射-引致之螢光光譜儀，與熱循環器聯 結。其係監測PCR放大區，在整個PCR程序過程中，於96-井試樣盤之各井中之蓄積。 3.'2. BVDV内部對照物之利用：如前一段落中所指出者， 係將内部正對照物摻入每一試樣中。其係充作RNA萃取效 率之度量物，且若試樣含有污染物，則其証實會抑制Taq Man® PCR。在施加溶胞緩衝劑至細胞之前，將BVDV與 促溶細胞溶胞缓衝劑混合。雖然正對照物係在每一試樣 中，但BVDV内部正對照物檢測，僅在HCV複製子RNA檢 測數據落在所預期範圍之外時才施行，這指出試樣可能有 問題。此7700能夠在相同試管中，利用標記兩種不同螢光 報告染料之偵測探測物，同時監測兩個不同PCR放大區之 蓄積（··多重化"）。引出試樣板BVDV内部正對照物之Taq Man®分析之特定規範，係描述在關於數據分析之段落 (3.6)中。 3.3 HCV複製子RNATaq Man®探測物與引物。由於在複 製子中編碼之新黴素抗藥性基因（neo)中，所預期之基因安 定性及一般缺乏RNA二級結構，故採用會結合在該區域中 143110.doc -355 - 1378927 之引物與探測物。複製子RNA之此片段，係自8001鹼基對 複製子之鹼基342-1193延伸（順序識別碼：1): 301 gtgcttgcga gtgccccggg aggtctcgta gaccgtgcac catgagcacg aatcctaaac 361 ctcaaagaaa aaccaaacgt aacaccaacg ggcgcgccat gattgaacaa gatggattgc 421 acgcaggttc tccggccgct tgggtggaga ggctattcgg ctatgactgg gcacaacaga 481 caatcggctg ctctgatgcc gccgtgttcc ggctgtcagc gcaggggcgc ccggttcttt 541 ttgtcaagac cgacctgtcc ggtgccctga atgaactgca ggacgaggca gcgcggctat 601 cgtggctggc cacgacgggc gtcccttgcg cagctgtgct cgacgttgtc actgaagc卯 661 gaagggactg gctgctattg ggcgaagtgc cggggcagga tctcctgtca tctcaccttg 721 ctcctgccga gaaagtatcc atcatggctg atgcaatgcg gcggctgcat acgcttgatc 781 cggctacctg cccattcgac caccaagcga aacatcgcat cgagcgagca cgtactcgga 841 tggaagccgg tcttgtcgat caggatgatc tggacgaaga gcatcagggg ctcgcgccag 901 ccgaactgtt cgccaggctc aaggcgcgca tgcccgacgg cgaggatctc gtcgtgaccc
961 atggcgatgc ctgcttgccg aatatcatgg tggaaaatgg CCGCTTTTCT GGATTCATCG #向引物 1021 aCTGTGGCCG GCTGGGTGTG Gcggaccgct atcaggacat agcgttggct acccgtgata
TagMai/探測物 1081 ttgctgaaga gcTTGGCGGC OAATGOGctg accgcttcct cgtgctttac ggtatcgccg 逆向物 1141 ctcccgattc gcagcgcatc gccttctatc gccttcttga cgagttcttc tgagtttaaa 3.4.程序 3.4.1. 製備ΝΕΟ與BVDVRT-PCR之1 x主混合物之方法 表6 製備RT-PCR10-板主混合物之設備與供應源之摘述 設備與供應源 定購編號 供應商 0.5-10微升吸量管 2247005-12000 系列 Eppendorf 2-20微升吸量管 2247015-92000 系列 Eppendorf 10-100微升吸量管 2247020-52000 系列 Eppendorf 50-200微升吸量管 2247025-62000 系列 Eppendorf 100-1000微升吸量管 2247030-22000 系列 Eppendorf 1250微升Matrix尖端 目錄編號8255 Matrix 200微升Matrix尖端 目錄編號7275 Matrix 10微升ART尖端 目錄編號2140 分子生物產物 20微升ART尖端 目錄編號2149P 分子生物產物 -356- 143110.doc 1378927 100微升ART尖端 目錄编號2065E 分子生物產物 200微升ART尖端 目錄编號2069 分子生物產物 1000微升ART尖端 目錄編號2079E 分子生物產物 電子吸量管，Impact2 目錄編號2001 Matrix 1.5毫升不含RNase微試管 目錄编號12450 Ambion 14毫升聚丙烯試管 目錄編號352059 Falcon 25毫升試劑儲槽 目錄編號8096 Matrix 96-井反應板 目錄編號N801-0560 應用生物系統 光學罩蓋片條 目錄編號N801-0935 應用生物系統 用後即棄無菌長袍 目錄編號9515-E Baxter 試劑 定購編號 供應商 酸 0.1NHC1 Fisher RNAseZap 目錄編號9780 Ambion RNAse去除劑 目錄編號7005 分子生物產物 10-pak，EZRT-PCR核芯試劑套 件，5x反應緩衝劑，25 mM 醋酸錳，去氧NTP 目錄編號403028 應用生物系統 VICNEO探測物，2 μΜ (=10χ)，每液份550微升 目錄編號450003，定製， 5'-VIC-CTGTGGCCGGCT GGGTGTGG-TAMRA-3' (順序識別碼：2) 應用生物系統 VICBVDV探測物，2 μΜ (=10χ)，每液份550微升 (Vertex) 目錄編號450003，定製， 5'-VIC-CCCTCG TCCAC GTGGCAT CTCGA-TAM RA-3'(順序識別碼：3) 應用生物系統 143110.doc -357 - 1378927 ΝΕΟ正向引物，3 μΜ(=1〇Χ) 正向/逆向引物混合物，每液 份550微升 目錄編號4304972，定 製，5'-CCGCTTTTCTG GATTCATCG-3·(順序識 別碼：4) 一, ·Ί 應用生物系統 ΝΕΟ逆向引物，3 μΜ (=〗0x) 正向/逆向引物混合物，每液 份550微升 目錄編號4304972，定 製，5'-CCCATTCGCCG CCAA-31 (順序識別碼：5) 應用生物系統 BVDV正向引物，3μΜ (=10χ)正向/逆向引物混合 物，每液份550微升 定製，5'-CAGGGTAGTC GTCAGTGGTTC G-3'(順 序識別碼：6)，Ι.ΟμΜ等 級w/凝膠純化 Oligos 等 BVDV逆向引物，3 μΜ (=1 Οχ)正向/逆向引物混合 物，每液份550微升 定製，5，-GGCCTCTGCA GCACCCTATC-3'(順序識 別碼：7)，1.0 μΜ等級w/ 凝膠純化 Oligos 等 NEORNA標準物 活體外轉錄之RNA，使用T7RNA聚合酶，得 自含有HCV複製子RNA之新基因部份之質 粒。以轉錄本之已知分子量，及已純化轉錄 溶液之UV-吸光率為基礎，將此活體外轉錄之 RNA定量。將此RNA稀釋、分成數液份及儲 存在-80°C下。針對各TaqMan(^^j，使個別 液份解凍。 欲被測試之RNA試樣，係單 離自HCV複製子細胞(此擬案 之段落2)，10微升/96-井板 不含核酸酶之水(未經DEPC 處理） 目錄編號9930 Ambion 3.4.2. 製備主混合物用之試劑 3.4.2.1.根據下文兩個步驟清理工作台，並以RNAse去 除劑擦栻吸量管。 RNAseZap(Ambion, Austin, TX) 143110.doc -358- 1378927 RNAse去除劑（分子生物產物（SanDiego，CA)) 3.4.2.2. 打開核芯EZRT-PCR試劑（應用生物系統），並將 5x缓衝劑置於冰上’使已冷凍之試劑，在室溫下解凍約1 5 分鐘，然後將其置於冰上。一個EZRT-PCR試劑套件，可 用以分析兩個96-井RNA萃取物。 3.4.2.3. 自-20°C，取用一支2 μΜνΐ(：探測物試管（ΝΕΟ或 BVDV，每試管550微升），並放置在冰上。 3.4.2.4. 自-20°C，取用一支3 μΜ正向/逆向引物混合物 試管（ΝΕΟ或B VDV ’每試管550微升），並放置在冰上。 3_4.2.5·自_8〇°C ’取用一支標準RNA轉錄本（1〇8複製物 /10微升）之試管（3 0微升），並放置在冰上。 3.4.2.6.取用一支室溫Amb ion水之試管。 3.4.3. 供一個96-井板反應用之主混合物之組裝 3.4.3 · 1.使用1毫升吸量管’轉移5χ緩衝劑（應用生物系 統）至1 4毫升試管；所添加之總體積為丨丨〇〇微升。 3.4.3.2.使用1毫升吸量管’將25 mM Mn(OAc)2(應用生 物系統）添加至14毫升試管中；所添加之總體積為66微 升。 3.4.3.3..使用200微升吸量管，將165微升1〇 mM dATp添 加至14毫升试管中。對1〇 mM dCTp、2〇 dUTP& 1〇 mM dGTP進行相同作業β 3.4.3.4. 使用1毫升吸量管，添加55〇微升ι〇χ3 μΜ正向/ 逆向引物混合物。 3.4.3.5. 使用1毫升吸量管，添加55〇微升ι〇χ2 探測 143110.doc •359 - 1378927 物0 3.4.3.6. 使用1毫升吸量管，添加220微升rTth DNA聚合 酶（應用生物系統）。 3.4.3.7. 使用100微升吸量管，添加55微升Amp Erase UNG (應用生物系統）。 3.4.3.8. 使用1毫升吸量管，添加605微升Ambion H20至 14毫升試管中；最後體積為總共4400微升。 3.4.3.9. 轉移4400微升主混合物至25毫升試劑儲槽。 3.4.3.10. 對全部96井，使用8-通道吸量管，每井分配 _ 40微升。 3.4.3.11. 使用8 -通道吸量管，一管柱接著一管柱，從管 柱1至管柱11 ’轉移10微升經萃取之未知試樣，至反應板 之井中。轉移後，將各管柱封端。 3.4.3.12. 添加270微升AmbionH20至30微升1 〇8複製物/ 10微升RNA轉錄本中’供使用於標準曲線，並混合。目前 有HCV複製子定量標準rna/ΙΟ微升之1〇7個複製物。 3.4.4. 安裝ABI7700以供各操作使用 修 3.4.4.1每次操作之前’再次靴式啟動ABI7700用之電 腦’及重建桌上》 3.4.4.2自硬碟機關閉及移除任何多餘程式；將資料超 轉至廢棄處。 3.4.4.3開啟順序偵測器vl.7程式（SDS軟體）。 3.4.4.5開啟"複製子檢測操作，，名摺。 3.4.4.6開啟"複製子檢測"模板。被程式化至模板中之 143110.doc -360·
1378927 熱循環器條件如下： 階段1 : 50°C2分鐘 階段2 : 60°C 30分鐘 階段3 : 95t5分鐘 階段4 : 951 15秒 階段5 : 60°C60秒 P白·^又4 - 5之循環重複次數：4 〇 模板儀器：診斷：高階選擇： 選擇視圖：顯示器mse。 選擇視圖：顯示器最良好吻合。 選擇雜項：參考染料ROX。 3.4.4.7在"複製子檢測操作"名摺中”儲存並非"以其本 身儲存”）檔案。 ' 3·4·4·8顯示安裝：按操作 3.5於一次操作後，使用SDS軟體，準備ABI77〇〇數據。 3·5·1.將檢測板移離ΑΒΙ7700，並拋棄而未曾打開。 這大為降低關於PCR交又污染之實驗室問題。 3'5,2·數據係使用順序偵測器系統軟體V1.7分析。 3'5·3·低限含量係首先使用預設裝置設定。 3·5·4·數據捨棄規範：可將數據點或一系列之整個板 捨棄。若與擬案已有顯著偏差，試劑失效或不幸事故，或 ΑΒΙ7700操作故障，則可將數據拋棄。對於來自顯然正常 操作之任何數據點之排除，必須符合一或多個此等規範。 3.5·4.1.低限循環計算。正常地使用SDS軟體之預設 143110.doc •361 · 1378927 值右最蜋試樣之Ct低於15，則按需要將低限值終止極限 改變成較低數值，以致使最高濃度試樣之Ct大於終止值。 在施行此改變後，更新計算值。 3.5.3.2. 當與藉由新RNA標準物之分析所產生線條之斜 率與y-轴截距之平均值，顯示有偏差時，考慮捨棄整個異 常Taq Man®操作。此等數值可接受之範圍為： 、 斜率值應在3.0與3·6之間 y-截距循環應在36與41循環之間。 3.5.3.3. 由極端Rn/ARn顯示迷行之個別丁叫Man⑧井，可 售 在數據分析之前刪除，因此其不會影嚮SDS軟體計算。 3.5.3.4. 檢查與記錄無模板對照物Ct值，並確認其高於 任何化合物處理試樣Ct為>7 〇Ct(>丨〇〇χ)。 3·5·5·將HCVRNA標準Ct值與先前結果比較。 3.5.6. 將HCVRNA標準曲線與先前結果比較。 3.5.7. 若迷行擴大作用在個別井中很顯著，則確認及 記下此等井。 3.5.8. 將此"結果"檔案輸出，並從7700電腦轉移至另 鲁 一部電腦，以使用MicrosoftExcel進行分析。 3.5.9. 於所使用試劑製劑或稀釋上之任何下列改變， 均作報告。 來自貝方之新探測物或引物合成。 新探測物或引物稀釋與液份。 新標準RNA轉錄本製劑。 新標準RNA轉錄本稀釋與液份。 143110.doc -362- 1378927 新BVDV病毒製劑。 新管柱11標準製劑。 3.6 Taq Man®數據分析 3.6.1. 將 Taq Man® HCVCt數與得自 Taq Man®結果檔 案之複製數，複製與貼放至適當細胞複製子檢測數據分析 Microsoft Excel巨集指令中，並操作此巨集。 3.6.2. 從巨集表單複製Taq Man®結果表至另一表單， 輸入化合物序號及批號。 3.6.3自此excel表單，計算化合物抑制活性之平均、標 準偏差及百分比CV，以及在5個複製物及無化合物對照組 中所有稀釋點之HCV複製數、HCVCt數及BVDV Ct數（若可 取得時）。 3.6.4. 關於BVDV對照Taq Man®之數據排除與施行之 規範。檢查所有計算值。數據點或一系列整個板可以捨 棄。若與擬案有顯著偏差，試劑失效或不幸事故，或 ABI7700操作故障，則數據可以拋棄。關於來自顯然正常 操作之任何數據點之排除，則必須符合一或多個此等規 範。抑制百分比之標準偏差，在活性化合物中應低於 30%。HCV複製數之％CV，應低於30%。所有試樣之 HCVCt之標準偏差，應低於0.5 ;這在大部份試樣中通常為 約0.1至0.3。若HCVCt標準偏差大於0.5，則返回原始數據 表，並檢查5次複製物之Ct數。若任一個井之Ct數，與5個 複製物之平均Ct數，差別2Ct，則此井應自分析中省略。 若大於3個井（並非在相同管柱上）具有不尋常Ct數，則應進 143110.doc •363 - 1378927 行BVDVTaq Man⑧内部對照物檢測。若BVDV數據顯示不 規則性，則化合物應再一次測試。 3.6.5. IC5〇計算：將平均抑制與標準偏差之數據複製 與貼放至具有可變斜率計算器之S形劑量回應中，其係使 用非線性回歸方法。使用此項工具，利用兩種方法計算 IC50 :僅使頂部固定在1〇〇%抑制下，或使頂部固定在 100%抑制下，且底部在0%抑制下。然後對各化合物，報 告賦予最明顯吻合之方法。最可信賴之IC5〇，係來自具有 最低標準誤差之計算值。若計算自此兩種曲線吻合選擇性 之IC5〇，顯示超過一倍差異，或若IC50SD大於IC5〇，則化 合物應在調整濃度下，再一次測試。 HCV絲胺酸蛋白酶抑制劑與干擾素組合作用之計算 HCV絲胺酸蛋白酶抑制劑（HSPI)與干擾素在組合中之作 用，可在複製子檢測中評估，其方式是於不同含量之干擾 素存在下，產生HSPI之劑量回應曲線，或於不同含量之 HSPI存在下，測定干擾素之劑量回應曲線。其目的係為評 估，與若兩種藥物對於RNA產生加成作用所預期者比較， 是否有較多或較少抑制病毒RNA蓄積之作用。更明確言 之，係使用Lowe之加成性定義（（1 928) Die Quantitation Probleme der Pharmakologic, Ergebn. Physiol·，27, 47-187)。其係定義如下。令DE，1NF為會造成作用E之干擾素濃 度，及令DE，HSP1為會造成作用E之蛋白酶抑制劑濃度。則 由下列關係式，定義無交互作用或Lowe加成性，其中INF 之濃度D1與HSPI之濃度D2之組合，會產生作用E。 (I)1378927 ι=-Α_+_Α_
Dejnf D£hspi 增效或拮坑作用之程度，係、以等作用曲線或等效 點表示。組合（m，D2)為在圖表上之_個點，#中轴為干 擾素與HSPI之濃度（圖2)β會產生作用程度£之所有此種組 合’係形成Ε作用等效線"Deinf，〇)與(〇,為在等 效線上之點，即必須是此種情況。當滿足加成關係⑴時， 等效線為連接點（De斯，〇)與（〇 De Hspi)之直線。 凹口朝上之等效線表示增安丈’而日口朝下之等效線表示 拮抗作用。按照Berenbau mM. C.((1985)藥劑組合之預期 作用：-般解答 eJT. Theor. Biol.，114, 413-431)與 Greco,
Park及Rustom (1 99〇)定量藥物增效作用之新途徑應用至順 式-一胺一氯基翻與ij-D•阿拉伯呋喃糖基胞嘧啶之組合， 癌症研究（CancerResearch) 50，5318-5327)之指引，增加一 項至（1)，以說明增效或拮抗作用。此方程式係定義一個回 應表面，其可在所有治療組合中吻合百分比對照值。來自 此吻合回應表面之輪廓圖形，係為等效線。 此回應表面模式係對各化合物假定S形劑量回應，由（2) 定義。 (2)
E £* =--- + Β
1/C50 J 143110.doc -365 - (3) 1378927 獲得單獨活性E特定程度之濃度，係設定為（3) £一5
De.hspi = /C50, e~b
一 E+B 對於會產生回應程度E之藥物之每一組合而言，為滿足 Greco等人（1990)之模式，則藥物之組合作用必須滿足方程 式⑷ IC50
INF
[INF] E-B a[INFMHSPn 1C50hspi
[HSP1] E-B -E + B (4) /C50,„F /C50
HSPI
E-B 參數α係度量交互作用之量。零值α係意謂無交互作用或 加成性，因為當α=〇時，方程式減為（1)。在給予IC5〇、HU1 斜率（m)、最大值（Emax)及最小值（b)下，此方程式可以解 出，而得由於任何治療組合[INF]與[HSPI]所造成之作用。 因此’此方程式係定義回應表面。設若一個實驗，盆中 [INF]與[HSPI]係經改變，則此等參數可使用非線性加權最 小平方回歸以選擇。參數α可與增效度量值8產生關聯 (Hewlett，Ρ. S. (1969)藥物混合物功效之度量，生物統計 學，25，477-487) ’其係直接取自50%作用下之等效線。s 為沿著與軸呈45度之線條，自源點至界定加成性之等效線 之距離，對自源點至吻合數據之等效線之距離之比例 143110.doc •366- 1378927 (S=ON/〇M ’ 參閱圖 3) » 此關係為 tx=4(S2-S)。 上文關於吻合回應表面及測定具有其有意義程度之增效 參數α ’係遵照Greco等人（1990)所討論之方法，以評估在 一系列實驗尹，測試HSPI併用數種不同干擾素之增效程 度。但是’仍需要將具有較低計數之觀察值加權，超過具 有較高計數者。此等計數係直接與對照物百分比有關聯， 其係為作用E。利用Carroll，R. J.與Rupert, D.中所述之方 法（（1988)(於回歸上之轉換與加權，chapinan與Hall，New
York) ’可明瞭井對井變化性’係隨著平均對照物百分比 值之平方而增加。因此，此等觀察值係以一除以已被平方 之吻合對照物百分比值（E)作加權。用以分析此等實驗之 方差與加權，係與藉由研究人員探查關於分析放射配位體 檢測之方法所發現之變化性關係一致（Finney，D.】.， (1976) ’放射配位體檢測，生物統計學，32，72^40，及 Dudley, R. A. Edwards, P., Ekinsm, R. P., McKinzie, I.G.M., Raab，G. M·，Rodbard，D.及 R0dgers，R.P.C_ (1985)，免疫檢 測數據處理之指弓丨，臨床化學，31/8，1264_1271)。 結果 在一項最初實驗中，係測試^^乂絲胺酸蛋白酶抑制劑化 合物CU，涵蓋之濃度範圍從3 μΜ至〇 123 μΜ，意即2^倍 犯圍。干擾素-α2Β濃度係從每試樣3〇單位，改變至每試樣 0.0096單位，意即3125倍範圍。如表7中所示，當作為單 一藥物治療使用時，化合*cu顯示冗⑼為〜“ μΜ，而干 擾素IC50為2.19U。在複製子檢測之精密度内，其係為大約 143110.doc -367- 1378927 20%，添加干擾素-(x2B會造成以劑量依存方式，增加複製 子RNA蓄積之抑制。例如，以0.333 μΜ化合物CU治療細 胞，會造成複製子RNA蓄積之28%抑制。0.333 μΜ化合物 CU，其係為IC5〇劑量之71% (0.469 μΜ)，與0.24U之干擾 素-α2Β，其係為干擾素-a2BIC5〇之11% (2.05 μΜ)，以其組 合治療細胞，會造成複製子RNA蓄積之49°/◦抑制。因此， 一個IC5〇劑量之71%，併用另一個之11%，會造成複製子 RNA蓄積之49%抑制。以直覺方式判定組合治療是否為協 乘性、加成性或拮抗性，則吾人將預期若組合治療之作用 僅為加成性，為獲得複製子RNA蓄積之49%抑制，所需要 IC5Q劑量之合併分率係為98%。吾人之實驗結果証實，複 製子RNA蓄積之抑制程度，係使用71%加上11%達成，意 即IC5〇劑量之82%，而非如組合治療加成作用所預測之 98%。因此，在此等化合物濃度下，此作用顯示係為協乘 的，因為獲得HCV複製子RNA之49%抑制所使用之各化合 物IC5〇劑量之分率劑量，係小於各化合物單獨所需者，其 將需要98%之IC50劑量。此組合治療之結果係示於表7 中，並以圖形方式示於圖1中。 表7 以化合物CU與干擾素-α2Β，個別或組合治療48小時後， 複製子RNA蓄積之抑制 143110.doc -368 - 1378927 干擾素-α2Β(單位） 化合物CU 30 U 6U 1.2 U 0.24 U 0.048 U 0.0096 U ου (濃度） 3μΜ 99% 99% 99% 99% 98% 98% 98% 1 μΜ 99% 98% 96% 95% 92% 93% 88% 0.333 μΜ 94% 87% 66% 49% 33% 27% 28% 0.1111 μΜ 93% 79% 46% 29% 12% 15% 11% 0.0370 μΜ 92% 78% 44% 21% 2% 7% 8% 0.0123 μΜ 92% 78% 44% 20% 19% 19% 5% ΟμΜ 89% 73% 38% 16% 8% 12% 0% 如前所述，經由利用活體外複製子檢測及由該檢測所得 數據之簡易加成性分析所衍生之此等初步結果，証實複製 子細胞以HCV絲胺酸蛋白酶抑制劑與干擾素之組合治療， 會產生至少加成之抗病毒作用，且多半為協乘之抗病毒作 用。 前述數據已使用上述正式數學工具再分析，以測定HCV 絲胺酸蛋白酶抑制劑CU與干擾素α-2Β間之關係，是否為增 效、加成或拮抗。再分析之數據係以數字方式顯示於表8 中，並以圖形方式示於圖4中。 表8摘錄含複製子之細胞，以本發明之各種HCV絲胺酸 蛋白酶抑制劑及數種不同干擾素，個別或組合治療48小時 後，在複製子檢測中所獲得之進一步結果。吾人指出，於 複製子檢測中測得之HCV複製子RNA抑制值之標準差為約 20%。化合物係經廣泛濃度測試，在較低之化合物濃度下 並未造成顯著之HCV複製子RNA濃度抑制。由於該檢測之 標準差為約20%，某些數據點會產生負數。在特定實驗中 143110.doc -369- 1378927 之負抑制數表示在經化合物處理之樣本中平均有較經偽處 理之樣本中為多之HCV複製子RNA分子。 表8 以HCV絲胺酸蛋白酶抑制劑及不同干擾素，個別或組合治 療48小時後，複製子RNA蓄積之抑制 實驗1 IFN α-2Β (單位） 30.00 6.00 1.20 0.24 0.048 0.0096 0.000 0.000 89% 73% 38% 16% 8% 12% 0% 化合物 0.012 92% 78% 44% 20% 19% 19% 5% CU 0.037 92% 78% 44% 21% 2% 7% 8% 0.111 93% 79% 46% 29% 12% 15% 11% (μΜ) 0.333 94% 87% 66% 49% 33% 27% 28% 1.000 99% 98% 96% 95% 92% 93% 88% 3.000 99% 99% 99% 99% 98% 98% 98%
實驗2 IFN α-2Α (單位） 30 6 1.2 0.24 0.048 0.0096 0
0 86% 61% 27% 4% -7% 5% 0% 化合物 0.0123 87% 66% 17% -23% 8% 8% 10% CU 0.37 85% 62% 13% -2% 0% Λ% 1% (μΜ) 0.1111 87% 68% 37% 20% -6% 12% 10% 0.333 92% 77% 58% 41% 26% 25% 44% 1 98% 96% 90% 86% 84% 83% 85% 3 99% 99% 98% 98% 98% 98% 98% 143110.doc -370.
1378927 實驗3 化合物CU (μΜ) 3 1.5 0.75 0.375 0.1875 0.0938 0.0469 0.0234 0 0 98% 93% 62% 23% 12% -2% A% -2% 0 0.049 98% 95% 10% 39% 12% 2% 6% 9% 3% 干擾素 0.123 98% 95% 70% 43% 15% 7% 2% 5% 2% α-2Β 0.307 98% 95% 73% 46% 16% 14% 7% 19% •3% (單位） 0.768 98% 95% 82% 56% 43% 34% 28% 32% 28% 1.920 98% 98% 87% 71% 51% 54% 49% 52% 45% 4.8 99% 98% 92% 82% 74% 71% 69% 71% 59% 12.0 99% 98% 96% 89% 87% 85% 85% 85% 80% 30.0 99% 99% 98% 95% 93% 92% 92% 93% 89%
實驗4 化合物CU (μΜ)
3 1.5 0.75 0.375 0.1875 0.0938 0.0469 0.0234 0 0 98% 94% 74% 38% 17% 3% -1% 6% 0% 0.049 98% 93% 60% 22% 29% 21% -9% -6% 6% 干擾素 0.123 98% 93% 67% 29% 21% 12% 3% 2% -8% ar~2A 0.307 98% 93% 66% 29% '22% 4% .-3% -4% 10% (單位） 0.768 98% 95% 67% 46% 24% 21% 20% 9% 15% 1.920 98% 96% 73% 48% 43% 44% 27% 33% 29% 4.8 98% 97% 82% 61% 61% 59% 52% 55% 43% 12.0 99% 98% 91% 75% 76% 72% 71% 74% 73% 30.0 99% 98% 96% 89% 86% 85% 84% 84% 83% -371 · 143110.doc 1378927 實驗5 化合物CU ( μΜ) 3 1.5 0.75 0.375 0.1875 0.0938 0.0469 0.0234 0 98% 95% 65% 24% -1% •14% -14% •12% 0 97% 95% 72% 41% 17% 11% 12% 6% 17% 97% 95% 71% 40% 31% 18% 18% 11% 4% 98% 96% 75% 44% 38% 25% 34% 18% 17% 98% 96% 82% 61% 42% 37% 25% 26% 36% 98% 97% 84% 64% 59% 61% 56% 51% 53% 98% 98% 90% 79% 72% 68% 65% 68% 68% 98% 98% 93% 87% 80% 80% 74% 77% 82% 98% 98% 95% 92% 86% 87% 86% 86% 87% 0.0 0.9375 1.875 羊干擾素3.75 Τ (單位）7.5 15 30 60 120 實驗6 化合物EC ( μΜ) 3 1.5 0.75 0.375 0.1875 0.0938 0.0469 0.0234 0 0 96% 93% 81% 56% 29% 23% 19% 1% 0 0.0492 96% 92% 80% 60% 31% 15% 19% 29% 6% 干擾素 0.1229 96% 94% 78% 58% 32% 13% 20% 20% 4% α-2Β 0.3072 97% .95% 82% 60% 38% 32% 34% 42% 23% (單位） 0.768 97% 95% 87% 66% 43% 41% 46% 43% 25% 1.92 98% 97% 90% 73% 62% 51% 54% 58% 47% 4.8 98% 97% 94% 87% 76% 73% 78% 76% 69% 12-0 98% 98% 96% 92% 86% 86% 86% 85% 84% 30.0 98% 98% 96% 96% 93% 92% 92% 95% 91% 372 - 143110.doc 1378927 實驗7 化合物EC ( μΜ)
3.0 1.5 0.75 0375 0.1875 0.0938 0.0469 0.02344 0 0 96% 92% 81% 47% 28% 17% -1% •8% 0 0.0492 96% 93% 78% 58% 21% 8% -12% 10% •17% 干擾素 0.1229 95% 93% 79% 64% 14% 5% 14% 1% -22% α-2Α 0.3072 95% 91% 80% 64% 22% 15% 5% 2% -5% (單位） 0.768 96% 95% 81% 64% 34% 21% 19% 20% 4% 1.92 96% 95% 88% 78% 44% 41% 19% 33% 21% 4.8 97% 95% 91% 85% 60% 58% 60% 53% 49% 12.0 97% 97% 95% 91% 77% 72% 76% 70% 71% 30.0 98% 98% 97% 94% 91% 86% 85% 85% 84% 實驗8 化合物CU ( μΜ) 3.0 1.5 0.75 0.375 0.1875 0.0938 0.0469 0.02344 0 0 97% 95% 77% 34% 16% 6% -7% 0% 0 0.2344 98% 97% 83% 49% 31% 19% -21% -7% 1% 干擾素/9 0.4688 98% 96% 84% 56% 39% 27% 10% -3% 21% (單位） 0.9375 98% 97% 91% 73% 54% 42% 31% 15% 30% 1.875 98% 98% 95% 80% 65% 58% 65% 60% 60% 3.75 98% 98% 91% 92% 86% 81% 77% 73% 79% 7.5 99% 98% 98% 96% 93% 93% 93% 90% 92% 15.0 99% 99% 99% 97% 97% 96% 97% 95% 96% 30.0 99% 99% 99% 99% 98% 99% 98% 98% 97% 143110.doc -373 · 1378927 實驗9 化合物EP ( μΜ) 8 4 2 1 0.5 0.25 0.125 0.0625 0 0 94% 96% 96% 92% 64% 36% 23% 8% 0 干擾素 0.0492 95% 96% 96% 91% 67% 25% 28% 8% 3% α-2Β 0.1229 95% 97% 96% 91% 65% 44% 4% 11% 4% (單位） 0.3072 95% 97% 96% 91% 71% 46% 20% 8% 20% 0.7680 96% 97% 97% 93% 75% 49% 36% 24% 24% 1.92 96% 97% 97% 94% 82% 67% 49% 52% 54% 4.8 96% 98% 97% 96% 90% 79% 75% 75% 70% 12 97% 98% 98% 97% 94% 89% 89% 87% 83% 30 97% 98% 98% 98% 96% 94% 94% 95% 92% 實驗10 三唑核苷（μΜ) 200 80 32 12.8 S.12 2.048 0.8192 0.3277 0 0 85% 62% 43% 3% -8% -17% -22% -6% 0 干擾素 0.0492 87% 66% 48% 44% 11% -4% -10% 11% -7% os2B 0.1229 84% 64% 53% 40% 26% -12% -5% 11% -9% (單位） 0.3072 86% · 70% 62% 44% 28% 1% 6% 14% 7% 0.7680 90% 80% 72% 65% 38% 30% 28% 44% 29% 1.92 93% 85% 77% 76% 61% 57% 58% 50% 46% 4.8 96% 92% 87% 83% 82% 74% 71% 77% 72% 12 97% 95% 93% 91% 90% 89% 90% 89% 85% 30 98% 97% 96% 95% 94% 94% 93% 95% 94% 374 - 143110.doc u 如圖4-13中所示，1 ，、乂 S形方式描繪表8中之數據，使 用上述數學方法作圖，用以度量增效作用，關於所測試 HCV絲胺酸蛋白酶抑制劑與干擾素之所有組合之等效線曲 線，均為凹口朝上，這表示在複製子檢測中治療之抗病毒 作用，係為增效的。此等結果係表列於表9中其顯示組 合治療增效之相對程度’及個別使用抗病毒化合物之％。 值。於表9中之主要構件為讀，及用於測定之值。。一 詞為對各組合治療之等效線最大轉折之度量。α值為零， 表π加成性’負值表不括抗作用，而如在上文所示絲 胺酸蛋白酶抑制劑與干擾素组合治療之情況中，大於一之 數值表示增效作用。《參數愈大，增效作用愈大。如表9中 關於HCV絲胺酸蛋白自轉制劑與干擾素之組合所示即使 忽視各實驗中之有意義程度，以對於平均α值為〇(無交互 作用）之9次實驗為基礎之丨試驗，具有ρ值為〇〇〇〇14,這 表示其結果是高度顯著的。 本分析中所用之協乘性計算法係基於Grec〇 Rust〇m之方 法（（1990)將一種定量藥物協乘性之新方法應用於順式-二 胺二氯鉑與阿拉伯糖基呋喃糖基胞嘧啶之組合，癌 症研究，50，531 8-5327)，其為評估使用HCV複製子檢測 所產生之實驗數據之理想工具。尚有其他應用於抗病毒化 合物研究之方法，例如Pritchard&shipman(pritchard，Μ Ν.及Shipman，C. jr. (1990)"分析藥物-藥物交互作用之三維 模型（總覽）"，抗病毒研究14 ·· 181_2〇6)。將其協乘性計算 方法應用於表8令所示數據，亦顯示以HCV絲胺酸蛋白酶 143110.doc •375· 1378927 抑制劑與干擾素之組合治療複製子細胞，會導致HCV複製 子RNA蓄積之協乘性抑制（數據未示）。 表9 組合治療增效作用之相對程度及個別使用之抗病毒化合物 之IC5〇值 絲胺酸 蛋白酶 抑制劑 干擾素 ICsoINT (單位） IC50HSPI (_ a (SE)1 P-值 a>0 實驗1 化合物CU IFNa-2B 2.05 0.469 0.477(0.09) <0.0001 實驗2 化合物CU IFNa-2A 3.72 0.446 0.770(0.12) <0.0001 實驗3 化合物CU IFNa-2B 2.36 0.587 0.730(0.08) <0.0001 實驗4 化合物CU IFNa-2A 5.67 0.633 0.438(0.08) <0.0001 實驗5 化合物CU IFNt 13.22 0.605 0.328(0.07) <0.0001 實驗6 化合物EC IFNa-2B 2.53 0.384 0.516(0.10) <0.0001 實驗7 化合物EC IFNa-2A 5.50 0.312 1.24(0.20) <0.0001 實驗8 化合物CU IFNP 1.82 0.466 0.551(0.09) <0.0001 實驗9 化合物EP IFNa-2B 3.06 0.426 0.490(0.12) <0.0001 實驗10 三唑核苷 IFNa-2B 1.22 145 -0.24(0.067) 0.0004 \SE)標準誤差 使用本發明HCV絲胺酸蛋白酶抑制劑與干擾素，評估 抗-HCV藥物治療增效性質之另一種度量方式，是使用上 述相同方法，以在複製子檢測中評估對於HCV之現行標準 143110.doc 076- &療法，意即干擾素α-2Β併用三唑核：y：。表1〇之最後一 仃，顯示干擾素α_2Β與三唑核笛混合物之α參數係為負 這表示有少置拮抗作用在此兩種藥物之間。這進一步 強調在本文令揭示之組合治療，採用本發明HCV絲胺酸蛋 a白酶抑制劑儿併用干擾素之重要性，係在於此等治療藥品 月白地產生增效作用，然而使用於HCV之標準組合療法 (干擾素α·2Β併用三唑核:y：)在複製子檢測中並非增效性。 採用本發明HCV絲胺酸蛋白酶抑制劑加上干擾素，對三 坐核I加上干擾素之組合治療，在複製子檢測中之前文比 較，係明白地顯示前者為增效性，而後者則不是。使用複 製子檢測所獲得之實驗結果顯示，若干擾素與Hcv絲胺酸 蛋白酶抑制劑合併使用，則與當干擾素α_2Β與三唑核苷合 併使用時所需要者相較，遠為較低劑量之干擾素是有效 的。複製子檢測為一種有用模式系統，其中係為測試潛在 抗-HCV化合物，且目前廣泛地被倚賴作為化合物抗_HCV 活性之有效預測方式。應指出的是，例如Blight等人 (2〇00)在細胞培養物中HCVRNA複製之有效引發，
Science8 ; 290 : 1972-1974，及 Chung 等人（2001)C 型肝炎 病毒複製係直接被IFN-α在全長二元表現系統中抑制，
Proc. Nat. Acad. Sci· U.S.A. 98(17): 9847-52。單獨之三 °坐核苷’在降低HCV複製子rna於複製子檢測中之蓄積 上’係為最低限度地有效（表8實驗丨〇，及表9最後一行）。 此結果係顯然與活體内研究衝突，其中當獨自使用時，三 嗤核甞對於HCV治療’未有顯著治療價值。對照上而言， 143110.doc -377- 1378927 在複製子檢測中，矯正如下文所討論之細胞毒性，三唑核 苷具有IC5Q為145 μΜ。此結果可解釋為明瞭複製子檢測允 許評估高三唑核苷濃度，而由於活體内細胞毒性，故其在 人類治療上是不可能的（ChutaputtiA.(2000)C型肝炎抗病毒 劑之不利作用及其他安全方面，胃腸病學與肝病學期刊， 15 Suppl : E156-63)。 此評估必然需要評估三唑核苷之細胞毒性。此種毒性係 發生在病人中，及在細胞檢測中（Shiffman M. L.，Verbeke S. B.，Kimball Ρ_ Μ. (2000) α-干擾素併用三唑核苷，在以 有絲分裂原方式刺激之人類淋巴細胞中，會加強增生抑 制，而非細胞活素產生，抗病毒研究，48(2) : 91-9)。在 本文所揭示之實驗中，於複製子檢測中之三唑核苷細胞毒 性，係以兩種方式觀察與度量。在測定複製子細胞存活力 之ΧΤΤ代謝檢測（Roehm Ν. W., Rodgers G. Η·, Hatfield S. M., Glasebrook A. L· (1991)—種利用四銼鹽XTT對於細胞 增生與存活力之經改良比色檢測，免疫方法期刊， 142(2) : 25 7-65)，及在經處理對未經處理細胞中，於複製 子檢測中，度量甘油搭-3-磷酸脫氫酶（GAPDH)mRNA含量 之 Taq Man⑧定量 RT-PCR檢測（Brink N., Szamel M., Young A. R·, Wittem Κ· P., Bergemann J. (2000)在 UV-照射人類皮 膚中，於活體内之 IL-Ιβ，IL-10, IL-lOr, TNFcx 及 IL-7mRNA 含量之比較定量，發炎研究期刊，49(6) : 2906)兩者中， 發現顯著三唑核苷所引致之細胞毒性，但按下述改正。假 定GAPDH mRNA(其係為一種構成上表現之管理基因）之含 143110.doc -378 - 1378927 量，在所有存活細胞中均為相同。自以轉錄抑制劑放線菌 素D處理之細胞中之GAPDH mRNA含量之度量值，得知 GAPDH mRNA之半生期只有數小時（數據未示出）。因此， 如由其他人使用Taq Man®技術測定mRNA在人類細胞中之 含量所達成者，假設GAPDH mRNA含量，在任何特定試 樣中，係與存活細胞數（VCN)成正比，具有關係式為 VCN=2A(40-CtGAPDH mRNA)。VCN係對各複製子檢測試
樣井進行計算，然後吾人將特定井之HCV複製子RNA複製 數，除以該井之VCN。一旦計算後，使用此比例代替HC V 複製數，以計算抑制（"平均抑制使用比例"；圖14.A)。無 需針對此細胞毒性校正複製子檢測數據，將此種細胞毒性 讀取為HCVRNA複製子蓄積之偽陽性抑制。在複製子檢測 中，假定HCVRNA複製子蓄積所度量之抑制，係為 HCVRNA複製子蓄積之實際抑制與HCVRNA複製子蓄積之 表觀抑制（由於細胞毒性所致）之總和。以細胞毒性之XTT 與Taq Man® GAPDH mRNA度量值之密切關係為基礎，進 一步假定，因複製子檢測所測試之化合物所造成之 GAPDH mRNA蓄積之抑制，係為由於細胞毒性所致 HCVRNA複製子蓄積之表觀抑制之可信賴度量。因此，化 合物在複製子檢測中，經一般細胞毒性校正之真實 抗-HCV活性，可經由將各試樣中度量之HCV複製子RNA 分子數目，除以VCN作估計，因此正規化成為各試樣中存 活細胞之數目。使用此方法，圖14.A顯示在複製子檢測 中，真實三唑核甞抗-HCV活性之估計（"平均抑制使用比例"）。 143110.doc - 379- 1378927 三唑核苷ICso之估計’係最良 取民好地使用此方法計算而得。 於圖14.A中，，，平均最初抑制，，係說明三唾㈣之未經校正 %。，其係大約80μΜ，然而計算自"平均抑制使用比例，曲 線之經校正IC5。值’係為大約145 應注意的是，在 HCVRNA複製子蓄積之經校正與經度量抑制之間，由於干 擾素㈣治療所造成之差異⑷4.Β)，鑒於複製子㈣％ cv之〜鳩，㈣為無意義的。類似干擾素α 2Β，在本發 明實例中測試之HCV絲胺酸蛋白酶抑制劑，在所採用之濃 度下，並未顯示顯著細胞毒性。此係使用χττ檢測測定， 其中各種化合物之TC5。值為：cu=64 7 μΜ，Ερ>ι〇 _及 EC>50 μΜβ此等TCs〇值係大於表9中所示之IC5。值2〇14〇 倍。因此，此等化合物之細胞毒性，在複製子檢測中，於 此檢測之精密度内，對於HCVRNA蓄積未具有顯著作用， 因為此種細胞毒性僅發生在HCV絲胺酸蛋白酶抑制劑濃度 顯著大於在複製子檢測中所測試者之情況下。 關於HCV絲胺酸蛋白酶抑制劑與干擾素個別與組合功效之 結論 本發明HCV絲胺酸蛋白酶抑制劑與各種干擾素，當單獨 使用於HCV複製子檢測中時，其抗·Η(：ν活性係示於構成 表8之個別實驗之攔與行中，其僅採用一種抗病毒劑。表9 列出針對各抗病毒化合物，當單獨測試時所度量之 值。經由使用活體外複製子檢測，所衍生之前述結果，亦 言正實複製子細胞以本發明之HCV絲胺酸蛋白酶抑制劑與各 種干擾素之組合治療，會產生增效抗病毒作用。完全預 I43110.doc -380- 1378927 期’此等作用將轉化成活體内有效性。
採用本發明HCV絲胺酸蛋白酶抑制劑之組合療法，具有 勝過單一藥物療法之數種主要優點。首先，與若單獨使用 時所可能使用者相較，可使用較低劑量之個別藥物，以施 订治療，則吾人將預期降低與治療有關聯之毒性及副作 用。這在干擾素治療之情況中，是特別重要的，其中副作 用很嚴重，且顯示係與投予病人之劑量成正比。前述數據 指出’可將一定劑量（如於1(：95水平之cu)之HCV絲胺酸蛋 白酶抑制劑與一定劑量（如於IC5〇水平）之干擾素α併用，其 結果為較在無高劑量干擾素α之逆向副作用存在下由hcv 絲胺酸蛋白酶抑制劑單獨所達成者更為有效之治療。組合 療法之第二個主要利益’是因為兩種藥物獨立發生作用， 會抵抗治療之突變型HCV菌株，只有較少發展機會。抗藥 性之發展’係為RNA病毒，例如HCV之主要顧慮。由於其 高突變率’故此種病毒可迅速地適應環境壓力。組合療法 之第三個利益，可為降低成本，此係由於有效治療所需要 之治療劑量較低所致。 可採用於本文所揭示方法中之其他免疫調節劑，包括例 如α干擾素2Α ’同感干擾素，τ干擾素，干擾素十三^坐核 ^(Rebatrcm)，經PEG化之干擾素，及干擾素基因表現之啟 動子。完全預期的是，當併用HCV絲胺酸蛋白酶抑制劑， 譬如於本文中揭示者，此等化合物之抗_HCv活性將會改 良。由於已知干擾素在活體内及在複製子檢測中係為活性 的，故預期本發明之HCV絲胺酸蛋白酶抑制劑於活體内亦 143110.doc •381 - 1378927 為活性的’且更重要的是，當併用干擾素，其免疫系統刺 激子或其他具有HCV抗病毒活性之化合物（其係藉由抑制 HCV絲胺酸蛋白酶以外之機制發生作用）時，能夠引出增 效活性。 HCV之最良好現行療法，係採用干擾素α與核苷類似物 三。坐核芬。此治療僅為最低限度有效，且會造成減少病人 順應性之顯著副作用（慢性c型肝炎：流行疾病管理，美國 國家衛生研究所，衛生與人類服務部門，1999)。此外，
在移植病人中，三唑核#_干擾素組合作用並不明瞭，且 事實上可能比單獨之干擾素更差（慢性c型肝炎：流行疾病 管理’美國國家衛生研究所，衛生與人類服務部門， 1999)。
上文呈現之結果，註實當干擾素與新穎種類之HCV抗病 毒劑’本發明之一種絲胺酸蛋白酶抑制劑，一起使用時， 有增效組合作用。吾人完全預期’於本文中所揭示之活體 外結果’肖目前單獨使用干擾素所可能達成者相較，合導 致HCV病人之更有效治療。干擾素之亞治療劑量，可使病 人之免疫系統活動，以更良好地與病切鬥，1絲胺酸蛋 白酶抑制劑可直接攻擊病毒’經由不同機制作用，以雔叉 狀攻擊，處理病毒。HCV感染之治療，因此可在對病：降 低成本下達成，此係以減少副作 作用及所必須藥劑之較低支 :為硯點’因有效HCV抗病毒治療僅需要較少之兩種藥 物。 本發明可在未偏離其精神或基本牯 个特質下，以其他特定形 143110.doc -382. 1378927 式具體表現。 【圖式簡單說明】 本發明之上述與其他方面、特徵及優點，將自下文詳述 並搭配附圖而更為明瞭，其全部僅為說明而給予，並非本 發明之限制，其中： 圖1顯示含複製子之細胞，以化合物CU與干擾素义⑸個 別或合併處理48小時後，HCV複製子RNA蓄積之抑制。
圖2係以圖形方式說明藉由使用於組合中之化合物所顯 示之等效線凹度，根據Greco、Park及Rustom之增效計算 方法（（1990)—種定量藥物增效作用之新穎研究途徑於順 式-二胺二氯鉑與1 -β-D-阿拉伯呋喃糖基胞嘧啶組合上之廡 用’癌症研究（CancerResearch)，50，53 18-5327)，其係為 拮抗、加成及增效。
圖3顯示α與在等效線中之曲率量間之幾何關係。於e= 50%作用程度下之假設等效線，係以直線等效線顯示，其 係為在加成性上所預期的。Μ為線y=x與假設等效線之交 點。N為線y=x與直線等效線之交點。〇為原點（〇,〇)。8給 予等效線中曲率量之度量值，其中S=〇N/〇M。〇N為〇至N 之距離，而〇M為〇至Μ之距離。參數(1係藉由等式a=4(s2_ S)而與S產生關聯。 圖4顯示使用Greco等人如前文出處之方法，對於化合物 CU與干擾素a_2B(schering-Plough)之組合，使用實驗i中 各化合物之6種稀釋液之等效線計算值。 圖5顯示使用Greco等人如前文出處之方法，對於化合物 143110.doc •383 - 1378927 CU與干擾素α_2Α之組合，使用實驗2各化合物之6種稀釋 液之等效線計算值。 圖6顯示使用Greco等人如前文出處之方法，對於化合物 CU與干擾素a_2B(Schering-Plough)之組合，使用實驗3各 化合物之8種稀釋液之等效線計算值。 圖7顯示使用Greco等人如前文出處之方法，對於化合物 CU與干擾素a_2A之組合，使用實驗4各化合物之8種稀釋 液之等效線計算值。 圖8顯示使用Greco等人如前文出處之方法，對於化合物 CU與得自羊之干擾素τ之組合，使用實驗$各化合物之8種 稀釋液之等效線計算。 圖9顯示使用Greco等人如前文出處之方法，對於化合物 EC與干擾素01_23(3〇1^1>丨1^-?1〇1^11)之組合，使用實驗6各 化合物之8種稀釋液之等效線計算值。 圖10顯示使用Greco等人如前文出處之方法，對於化合 物EC與干擾素a_2A之組合，使用實驗7各化合物之8種稀 釋液之等效線計算值。 圖11顯示使用Greco等人如前文出處之方法，對於化合 物CU與干擾素β之組合，使用實驗8各化合物之8種稀釋液 之等效線計算值。 圖12顯示使用Greco等人如前文出處之方法，對於化合 物EP與干擾素a_2B(schering-Plough)之組合，使用實驗9 各化合物之8種稀釋液之等效線計算值。 圖13顯示使用Greco等人如前文出處之方法，對於三唾 143110.doc -384- 1378927 核嘗與干擾素α-2Β(Schering-Plough)之組合，使用實驗10 各化合物之8種稀釋液之等效線計算值。 圖14顯示抑制因為以無論是單獨之（Α)三唑核苷或單獨 之（Β)干擾素α-2Β處理複製子細胞所造成之HCV複製子 RNA蓄積。在兩個板面中，係顯示所度量之抑制，以及針 對化合物之細胞毒性所校正之抑制。
143110.doc 385 · 1378927 序列表
<110>美商維泰克斯製藥公司 <120>擬肽蛋白酶抑制劑 <130> 223306/00-131/120312 <140> US 10/344,112 <141> 2004-12-17 <150> PCT/US01/026008 <151> 2001-08-31 <150> US 60/229398 <151> 2000-08-31 <150> US 60/277641 <151> 2001-03-21 <170> Patentln version 3.5 <210> 1 <211> 900 <212> DNA <213> 未知 <220> <223〉HCV Replicon RNA TaqMan 探針及引子 <400> 1 gtgcttgcga gtgccccggg aggtctcgta gaccgtgcac catgagcacg aatcctaaac ctcaaagaaa aaccaaacgt aacaccaacg ggcgcgccat gattgaacaa gatggattgc acgcaggttc tccggccgct tgggtggaga ggctattcgg ctatgactgg gcacaacaga caatcggctg ctctgatgcc gccgtgttcc ggctgtcagc gcaggggcgc ccggttcttt ttgtcaagac cgacctgtcc ggtgccctga atgaactgca ggacgaggca gcgcggctat cgtggctggc cacgacgggc gttccttgcg cagctgtgct cgacgttgtc actgaagcgg gaagggactg gctgctattg ggcgaagtgc cggggcagga tctcctgtca tctcaccttg ctcctgccga gaaagtatcc atcatggctg atgcaatgcg gcggctgcat acgcttgatc cggctacctg cccattcgac caccaagcga aacatcgcat cgagcgagca cgtactcgga tggaagccgg tcttgtcgat caggatgatc tggacgaaga gcatcagggg ctcgcgccag ccgaactgtt cgccaggctc aaggcgcgca tgcccgacgg cgaggatctc gtcgtgaccc atggcgatgc ctgcttgccg aatatcatgg tggaaaatgg ccgcttttct ggattcatcg actgtggccg gctgggtgtg gcggaccgct atcaggacat agcgttggct acccgtgata ttgctgaaga gcttggcggc gaatgggctg accgcttcct cgtgctttac ggtatcgccg ctcccgattc gcagcgcatc gccttctatc gccttcttga cgagttcttc tgagtttaaa 143110·序列表.doc 60 120 180 240 300 360 420 480 540 600 660 720 780 840 900 1378927 <210〉 2 <211> 20 <212> DNA <213> 未知 <220> <223> HCV Replicon RNA TaqMan 探針及引子 <400> 2 ctgtggccgg ctgggtgtgg <210> 3 <211〉 23 <212> DNA <213〉未知 <220> <223> HCV Replicon RNA TaqMan 探針及弓| 子 <400> 3 ccctcgtcca cgtggcatct cga <210〉 4 <211> 20 <212> DNA <213> 未知 <220> <223> HCV Replicon RNA TaqMan 探針及弓丨子 <400> 4 ccgcttttct ggattcatcg <210> 5 <211> 15 <212> DNA <213> 未知 <220〉 <223> HCV Replicon RNA TaqMan 探針及引子 <400> 5 cccattcgcc gccaa <210〉 6 <211> 22 <212> DNA <213〉未知 <220> <223> HCV Replicon RNA TaqMan 探針及弓丨子 <400> 6 cagggtagtc gtcagtggtt eg 143110-序列表.doc 1378927 <210> 7 <211> 20 <212> DNA <213> 未知 <220> <223> HCV Replicon RNA TaqMan 探針及引子 <400> 7 ggcctctgca gcaccctatc
143Π0·序列表.doc

Claims (1)

1378927
第099107489號專利申請案 中文申請專利範圍替換本(101年7月） 七、申請專利範圍· — 1. 一種具有下列結構式之化合物，
R1為氫、視情況經取代之脂族基團、視情況經取代之 環狀基團或視情況經取代之芳族基團；
R2與R9各獨立為視情況經取代之脂族基團、視情況經 取代之環狀基團或視情況經取代之芳族基團； R、R及R7各獨立為亞甲基或次乙基，其經一個選自 由視情況經取代之脂族基團、視情況經取代之環狀基團 或視情況經取代之芳族基團組成之群的取代基取代，及 其中該亞甲基或次乙基進一步視情況經一個脂族基團取 代基取代；
R4、R6及R8各獨立為氫或視情況經取代之脂族基團；〇ν〇Γ Λ 為經取代之J或經取代之A
N 其中Ar為 包含芳族基團/取代基之R2 ; N- L 為-C(O)--NR丨0S(0)2-， 團；及 -〇〇(〇). , -nr10 其中R10為氫或視情 c(o)-、-s(o)2-或 況經取代之脂族基 η為0或1， 其中 143110-1010725.doc 1378927 視情況經取代之脂族基團為視情況經一或多個脂族基 團取代基取代之烷基、烯基或炔基； 視情況經取代之環狀基團為視情況經一或多個環基取 代基取代之環烷基、環烯基、雜環基或雜環烯基團； 視情況經取代之芳族基團為視情況經一或多個環基取 代基取代之芳基或雜芳基團； 視情況經取代之（1，1 -或1，2 -)次環烷基為視情況經一或 多個環基取代基取代之（1，1_或1，2_)次環烷基； 視情況經取代之（1，1-或1，2-)次雜環基為視情況經一或 多個環基取代基取代之（1，1-或1，2_)次雜環基；且 其中： 月曰族基團取代基表示方基、雜芳基、經基、烧氧基、 環基氧基、芳氧基 '雜芳氧基、酿基或其硫嗣類似物、 環基幾基或其硫_類似物、芳酿基或其硫網類似物、雜 芳酿基或其硫酮類似物、醯氧基、環基羰氧基、芳醢氧 基、雜芳醯氡基、鹵素、硝基、氰基、羧基（酸）、 -C(0)NH0H- ^ -C(0)-CH20H ^ -C(0)-CH2SH ^ -C(O)-NH-CN、磺酸基、膦酸基、烷基磺醯基胺甲醯基、四唑 基、芳基磺醯基胺曱醯基' N-曱氧基胺曱醯基、雜芳基 磺酿基胺曱醯基、3·羥基-3-環丁烯-1，2-二_、3,5-二酮 基-1，2,4-嘮二唑烷基或羥基雜芳基（如3_羥基異噚唑基及 3-羥基-1-甲基吡唑基）、烷氧基羰基、環基氧基羰基 '芳 氧基羰基、雜芳氧基羰基 '烷基磺醯基、環基磺醯基、 芳基磺酿基、雜芳基磺醯基、烷基亞磺醯基、環基亞磺 143I10-1010725.doc 1378927 方泰亞碩醞基 ，丞亞磺醯基、烷硫基、環基 硫基、芳硫基、雜芳硫基、環基、芳基重氮基、雜芳美 重氮基、硫醇、亞甲基（H則、_基則、硫調i ㈣、㈣ Ν·、γ竹c(〇)·、y1y2nc(〇)〇·、 yVncwnyUYnscv或Y3S〇2NYl•，其中以
處所定義者，γ,及γ2各獨立為氣、院基、芳基或雜芳 基，且Υ3為烧基、我基、芳基或雜芳基；或#該取代 基為Υϋ時，Υ1及Υ2之—可為醯基、環基幾基、芳酿 基、雜芳基1氧基隸、環基氧基㈣、芳氧基幾 基或雜芳氡基羰基，如此處所定義者，且其餘¥|及^如 前述所定義者；或當該取代基為Y1Y2NC(0)、 丫4~(：(0)〇-、Y1Y2NC(0)NY3.或 γ1γ2Νδ〇2 時，…及 Y2亦可與連接Y1及Y2之N原子—起形成一個4至7員氮雜 環基或氮雜環烯基；
%基取代基表不芳基、雜芳基、羥基、烷氧基環基 氧基、芳氡基、雜芳氧基、醯基或其硫酮類似物環基 羰基或其硫酮類似物、芳酿基或其硫酮類似物'雜芳醯 基或其硫酮類似物、醯氧基、環基羰氧基、芳醯氧基、 雜芳醯氧基、鹵素、硝基、氰基、羧基（酸）、酸生物電 子等排體、烷氧基羰基、環基氧基羰基、芳氧基羰基、 雜芳氧基羰基、烷基磺酿基、環基磺醯基、芳基磺醯 基、雜芳基磺醯基、烷基亞磺醞基、環基亞磺醯基、芳 基亞磺酿基、雜芳基亞磺醯基、烷硫基、環基硫基、芳 硫基、雜芳硫基、環基、芳基重氮基、雜芳基重氮基、 143110-1010725.doc 1378927 硫醇、γΐγ2Ν_、YWhqo)· ' y1y2nc(〇)〇 、 yVnqc^ny3-或 yYnscv，其中 Yi ' Υ2&γ3各獨立 為氫、烷基、芳基或雜芳基；或當該取代基為γ1γ2Ν· 時，Υ1及Υ2之一可為醢基、環基羰基、芳醯基、雜芳醯 基、烷氧基羰基、環基氧基羰基、芳氧基羰基或雜芳氧 基羰基，如此處所定義者，且其餘γΐ及Υ2如前述所定義 者；或當該取代基為YiYWcXO)-、γ>γ2Ν(〇 、 YVNCWNY3-或 YYNSh-時’ Υΐγ2亦可與連接 γ1 及Υ2之Ν原子一起形成一個4至7員氮雜環基或氮雜環烯春 基；或當環系統為飽和或部分飽和時，「環基取代基」 進一步包括亞甲基（ΗΑ=)、酮基（〇=)及硫酮基（s=); 芳基表示6至14個碳原子的芳族單環狀或多環狀環系 統； 環烷表基示3至1〇個碳原子的非芳族單或多環狀環系 統； 環烯基表示3至10個碳原子的非芳族單或多環狀環系 統，其包含至少一個碳·碳雙鍵； 鲁 環基表示環烷基、環烯基、雜環基或雜環烯基； 雜環基表示約3至約1 〇個碳原子的非芳族飽和單環狀 或多環狀環系統，其中環系統中的一或多個碳原子為碳 以外之雜元素； 雜環烯基表示約3至約10個碳原子的非芳族單環狀或 夕環狀尨環系統’其中環系統中的一或多個碳原子為碳 X外之雜元素，且其包含至少一個碳-碳雙鍵或碳氮 143110-1010725.doc 1378927 鍵；及 雜芳基表示約5至約14個破原子的芳族單環狀或多環 狀環系統’其中環系統中的一或多個碳原子為碳以外之 雜元素；或 其醫藥上可接受之鹽或前體藥物，或此種化合物、其 鹽或其前體藥物之溶劑合物。 2. 根據申請專利範圍第1項之化合物，其中尺2為丨缓基2 苯基乙基、環丙基、羧甲基、環丁基、丨_苯基乙基、丁 _ 2 -基、Ι-p比咬-4-基乙基或丙稀-3-基。 3. 根據申請專利範圍第1或2項之化合物，其中r3為視情，兄 經取代之低碳脂族亞曱基。 4. 根據申請專利範圍第3項之化合物，其中R3為視情況經 鹵基取代之低碳（烷基或烯基）亞甲基。 5. 根據申請專利範圍第4項之化合物，其中R3為丙基亞甲 基' 2,2-二氟乙基亞甲基、2,2,2-三氟亞曱基或丙歸_3基 亞甲基。 6. 根據申請專利範圍第5項之化合物，其中R3為丙基亞甲 基或2,2-二氟乙基亞甲基。 7. 根據申請專利範圍第1或2項之化合物，其中R5為視情況 經取代之低碳脂族亞曱基。 8. 根據申請專利範圍第7項之化合物，其中R5為視情況經 (苯基、幾基、叛酿胺基或燒氧叛基）取代之低碳（烧基或 烯基）亞曱基。 9. 根據申請享利範圍第8項之化合物，其中R5為曱基亞曱 143110-1010725.doc ^/8927 基、異丙基亞甲基、第三-丁基亞甲基'丁-2_基亞甲 基、丁基亞甲基 '芊基亞甲基、3-甲基丁基亞甲基、2_ 甲基丙基亞曱基、羧甲基亞甲基、羧醯胺基子基亞甲 基、芊氧羰基甲基亞甲基、苄氧羰基丙基亞甲基或笨基 内烯-3·基亞甲基。 10.根據申請專利範圍第1或2項之化合物，其中R7為視情況 經取代之低碳脂族亞曱基或視情況經取代之低碳環狀基 團亞甲基。 土 U.根據申請專利範圍第10項之化合物，其中R7為視情況經 取代之低碳烷基亞甲基或視情況經取代之低碳環燒基亞 甲基。 土 12.根據申請專利範圍第丨丨項之化合物，其中R7為異丙美亞 甲基或環己基亞甲基。 根據申請專利範圍第！或2項之化合物，其 六r «•為視情況 經（鼓基、（低碳烷基）HNCO-、羥基、笨基或雜芳其）取 代之低碳烧基’或視情況經取代之單環狀雜芳其。 14·根據申請專利範圍第i 3項之化合物，其中9 八苟異丙基或 第三·丁基。 15.根據申請專利範圍第1或2項之化合物，其中9 六Y汉係選自包 括
143110-1010725.doc 16.
根據申晴專利範圍第1或2項之化合物，其中： Rl為氫； R2為視情況經1至3個脂族基團取代基取代之低碳烷 基，或視情況經1至3個環基取代基取代之低碳環烷基； R3及R5各獨立為視情況經i至3個脂族基團取代基取代 之亞甲基； R4、R6、R8及R丨0為氫； R為經環烧基、低碳烧基或芳基取代之亞曱基，或視 情況經環烷基、低碳烷基或芳基取代之（1，1_或1，2·)環烯 基； R9為 視情況經1至3個脂族基團取代基取代之低碳烷基，或 視情況經1至3個環狀基團取代基取代之雜芳基，或 143110-I010725.doc 1378927 視情況經1至3個環狀基團取代基取代之雜環基團；及 L為-C(0)-或-0C(0)-。 17_根據申請專利範圍第1項之化合物’其係選自由以下所 組成之群·
AN, AO, BH,
BN, 143110-1010725.doc 丄
18.
η
El, 其醫藥上可扭ν 钱跫之鹽或前體藥物，或此種化合物、其 鹽 或其前體藥物之溶劑合物。 據申月專利範圍第1或2項之化合物，其中R9之視情況 、、星取代之知族基團、視情況經取代之環狀基團或視情況 經取代之芳族基團係經至少一個雜芳基取代。 143I10-1010725.doc 1378927 19. 根據申請專利範圍第丨6項之化合物，其中R9之視情況經 取代之脂族基團、視情況經取代之環狀基團或視情況經 取代之芳族基團係經至少一個雜芳基取代。 20. 根據申請專利範圍第！或2項之化合物，其中R9之視情況 經取代之芳族基團係視情況經取代之雜芳基。 21. 根據申請專利範圍第16項之化合物，其中r9之視情況經 取代之芳族基團係視情況經取代之雜芳基。 22·根據申請專利範圍第18項之化合物，其中r9之視情況經 取代之脂族基團係視情況經取代之烷基。 23 _根據申請專利範圍第19項之化合物，其中R9之視情況經 取代之脂族基團係視情況經取代之烷基。 143110-1010725.doc 10-
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