TWI359153B - Il-17 antagonistic antibodies - Google Patents

Description

1359153 九、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明係關於IL-17結合分子，詳言之為人IL-17抗體，更 佳為人IL-17(亦稱為IL-17A)之人抗體，且係關於該等抗體 用於治療IL-17介導之疾病及病症之用途。 【先前技術】 存在於例如類風濕性關節炎（RA)中的T細胞衍生之細胞 激素IL-17充當前發炎性細胞激素，其尤其與IL-1及TNF-a 聯合（Chabaud Μ & Miossec P(1999) Arthritis Rheum 42, 963-970; Awane M 等人（1999) J. Immunol 162, 5 337-5 3 44)。IL-1 7誘導MMP之產生並下調TIMP(Jovanovic DV 等人（2001) J. Rheumatol. 28，712-718)，且 IL-1 及 IL-17 之阻斷對於活體内發炎及骨質破壞具有協同效應（Chabaud Μ & Miossec(2001) Arthritis Rheum 44, 1293-1303)。IL-17 之不當或過度產生與各種疾病及病症之病理學相關聯，諸 如類風濕性關節炎（Witowski等人，2004 Cell Mol Life Sci 61: 567-579)、骨關節炎、骨植體鬆動、急性移植排斥反應 (Antonysamy 等人，1999, J Immunol 162,577-584; van Kooten等人，1998，J Am Soc Nephrol 9, 1526-1534)、敗血 症、敗血性或内毒素性休克、過敏、哮喘（Molet等人，2001, J Allergy Clin Immunol 108,430-438)、骨質流失、牛皮癬 (Teunissen等人，1998, J Invest Dermatol 111，645-649)、局 部缺血、系統性硬化症（Kurasawa等人，2000，Arthritis Rheum 43, 2455-2463)、中風及其他發炎性病症。已提議將 103493.doc ⑧ 1359153 :例如參見 IL-17抗體用於IL-17介導之疾病及病症的治療中 W0 95/18826及其導言中之討論。 ' 【發明内容】 導之疾病及病症的 吾人現已製備出適用於治療IL-17介 改良之人IL-17抗體。

因此，本發明提供…结合分子，纟包含包括至少一個 免疫球蛋白重鏈可變域（Vh)之抗原結合位點，該免疫球蛋 白重鏈可變域依次包含高變區CDR1、〇〇112及cdr3，該 CDR1具有胺基酸序列 SEQIDN〇: 1(n_y_W M n)，該 cDR2 具有胺基酸序列 SEQ ID NO:2(A-I_N_Q_D_a_s_E_ K-Y-Y-V-G-S-V-K-G)且該CDR3具有胺基酸序列SEQ ID N0:3(D-Y-Y-D-I-L-T-D-Y-Y-I-H-Y-W-Y-F-D-L);或包含其 直系CDR等同物。

因此’本發明亦提供乩-丨了結合分子，其包含至少一個免 疫球蛋白輕鏈可變域（VL)，該免疫球蛋白輕鏈可變域依次 包含高變區CDR1'、CDR21及CDR3,，該CDR1，具有胺基酸序 列 SEQ ID NO: 4(R-A-S-Q-S-V-S-S-S-Y-L-A)，該 CDR2,具有 胺基酸序列 SEQ ID NO: 5(G-A-S-S-R-A-T)且該 CDR3'具有 胺基酸序列 SEQ ID NO:6(Q-Q-Y-G-S-S-P-C-T);或包含其 直系CDR·等同物》

在本發明之另一實施例中’本發明提供IL-17結合分子， 其包含包括至少一個免疫球蛋白重鏈可變域（VH)之抗原結 合位點，該免疫球蛋白重鏈可變域依次包含高變區 CDRl-x、CDR2-X及 CDR3-X，該 CDRl-x具有胺基酸序列 SEQ 103493.doc ⑧ 1359153 ID NO: 11(G-F-T-F-S_N-Y-W-M-N)，該 CDR2-X 具有胺基酸 序列 SEQ ID NO: 12(A-I_N-Q-D-G-S-E-K-Y-Y)且該 CDR3-X 具有胺基酸序列SEQIDNO:13(C-V-R-D-Y-Y-D· I-L-T-D-Y-Y-I-H-Y_W_Y-F-D-L-W-G);或包含其直系 CDR-x 等同物。 此外，本發明亦提供IL-17結合分子，其包含重鏈（VH)及 輕鏈（VL)可變域；該IL-17結合分子包含至少一個抗原結合 位點，其包含： # a)免疫球蛋白重鏈可變域（VH)，其依次包含高變區 CDIU、CDR2及CDR3，該CDR1具有胺基酸序列SEQ ID NO: 1，該CDR2具有胺基酸序列SEQ ID ΝΟ··2且該CDR3 具有胺基酸序列SEQ ID ΝΟ:3 ;或包含其直系CDR等同 物；及 b)免疫球蛋白輕鏈可變域（Vl)，其依次包含高變區 CDR1'、CDR2'及CDR3'，該CDR1'具有胺基酸序列SEQ ID NO:4，該CDR2'具有胺基酸序列SEQ ID NO:5且該 • CDR3'具有胺基酸序列SEQ ID NO:6 ;或包含其直系 CDR/等同物。 此外，本發明亦提供IL-17結合分子，其包含重鏈（VH)及 輕鏈（VL)可變域；該IL-17結合分子包含至少一個抗原結合 位點，其包含：

a)免疫球蛋白重鏈可變域（VH)，其依次包含高變區 CDRl-x、CDR2-X及 CDR3-X，該 CDRl-x具有胺基酸序 列SEQ ID ΝΟ:11，該CDR2-X具有胺基酸序列SEQ ID

103493.doc 1359153 >1〇:12且該0〇1134具有胺基酸序列8£(51〇1^〇:13;或 包含其直系CDR-x等同物；及 b)免疫球蛋白輕鏈可變域（vL)，其依次包含高變區 CDR1'、CDR2'及CDR3’，該CDR1 ·具有胺基酸序列sEq ID N0:4 ’該CDR2’具有胺基酸序列SEQ ID N0:5且該 CDR31具有胺基酸序列SEQ ID N0:6 ;或包含其直系 CDR/等同物。 除非另有所指’否則本文將任何多肽鏈描述為具有於N末 端開始且於C末端結束之胺基酸序列。當抗原結合位點包含 vH及VL區域時，此等可被定位於相同多肽分子上或較佳地各 區域可在不同鏈上，該vH區域為免疫球蛋白重鏈或其片段之 一部分且該VL為免疫球蛋白輕鏈或其片段之一部分。 "IL-17結合分子"意謂任何能夠單獨或與其他分子聯合而 結合至IL-1 7抗原之分子。參照陰性對照測試（其中使用不具 有相關特異性但為同型之抗體’例如抗CD25抗體），可由標 準方法（定性檢定）顯示結合反應，該等方法例如包括結合檢 定、競爭檢定或用於測定IL-17至其受體之結合之抑制作用 的生物檢定或任柯種類之結合檢定（亦參見實例丨）。 抗原結合分子之實例包括由B細胞或融合瘤所產生之抗 體及嵌合抗體、CDR移植抗體或人抗體或其任何片段，例 如F(ab’）2及Fab片段，以及單鏈或單一區域抗體。 單鏈抗體係由經由肽連接子共價結合的抗體之重鏈及輕 鍵之可變域組成，該肽連接子通常係由1〇至3〇個胺基酸、 較佳由15至25個胺基酸組成。因此，該結構不包括重鏈及 卓2鏈之惶疋部分且咸信小肽間隔基應比完整之恆定部分具 103493.doc _9_ ⑧ 1359153 有較少抗原性。"嵌合抬种"咅^ 敢《抗體意胡如下抗體：其中重鏈或輕 鏈或兩者之怪定區域兔人也.-JS ^ 马人來源，而重鏈及輕鏈之可變域均 為非人（例#鼠科）來源或雖為丨來源但衍生自不同人抗 體。"CDR移植抗體"意謂如下抗體：其中高變區⑷岡係衍 生自供體抗體’諸如非人(例如鼠科)抗體或不同之人抗體， 而免疫球蛋白之所有或大體上所有其他部分（例如怪定區 域及可變域之高度保守部分，意即構架區）係衍生自受體抗 體，例如人來源之抗體 '然而，CDR移植抗體可在構架區 • 中含有供體序列之少數胺基酸，例如在與高變區鄰接之構 架區部分中。"人抗體"意謂如下抗體：其中重鏈及輕鏈之 恆定區域及可變域均為人來源或大體上與人來源之序列相 同，其不必來自相同抗體且包括由小鼠產生之抗體，其中 鼠免疫球蛋白之可變及恆定部分基因已被其人對應物所置 換’例如EP 0546073 Bl、USP 5545806、USP 5 5 69825、USP 5625 126、USP5633425、USP 5661016、USP 5770429 ' EP 0 43 8474 B1及EP 0 463151 B1中以通用術語所描述。 • 本發明之尤其較佳之IL-17結合分子為人抗體，尤其為下 文實例1及2中所描述之AIN457抗體。 因此，在較佳嵌合抗體中重鏈及輕鏈之可變域均為人來 源，例如AIN4 5 7抗體之重鏈及輕鏈之可變域，其展示於SEq ID NO: 10中（=輕鏈之可變域’意即SEQ ID NO: 10之胺基酸1 至109)及SEQ ID NO: 8中（=重鏈之可變域，意即SEQ ID NO: 8之胺基酸1至127)。恆定區域較佳亦包含合適之人恆定區 域，例如”Sequences of Proteins of Immunological Interest"， Kabat E.A.等人，US Department of Health and Human 103493.doc •10-

Services, Public Health Service, National Institute of Health 中所描述e 高變區可與任何種類之構架區聯合，儘管該等構架區較 佳為人來源。合適之構架區在如上Kabat E. A.等人中有所描 述。較佳之重鏈構架為人重鏈構架，例如AIN457抗體之重 鏈構架。例如，其係依次由？111(3£〇101^0:8之胺基酸1至 30)、FR2(SEQ ID NO: 8 之胺基酸 36 至 49)、FR3(SEQ ID NO: 8之胺基酸67至98)及FR4(SEQ ID NO:8之胺基酸117至127) 區域組成。考慮到藉由X-射線分析所測定之AIN457之高變 區，另一較佳重鏈構架係依次由FRl-x(SEQ ID NO: 8之胺 基酸 1 至 25)、FR2-x(SEQ ID NO: 8 之胺基酸 36 至 49)、 FR3-x(SEQ ID NO: 8之胺基酸 61 至 95)及 FR4(SEQ ID NO: 8 之胺基酸119至127)區域組成。同樣地，輕鏈構架係依次由 FR1'(SEQ ID NO: 10 之胺基酸 1 至 23)、FR2，(SEQ ID NO: 1〇 之胺基酸36至50)、FR3，（SEQ ID NO: 10之胺基酸58至89) 及FR4'(SEQIDNO: 10之胺基酸99至109)區域組成。 因此，本發明亦提供IL-17結合分子，其包含至少一個抗 原結合位點，該抗原結合位點包含具有大體上與SEQ ID NO: 8中所示一致且始於位置1之胺基酸並終止於位置127 之胺基酸之胺基酸序列的第一域，或如上所述之第一域； 及具有大體上與SEQ ID NO: 10中所示一致且始於位置1之 胺基酸並終止於位置109之胺基酸之胺基酸序列的第二域。 為對抗在所有人中天然發現之蛋白質而培育之單株抗體 通常於非人系統（例如小鼠）中發育且如此通常為非人蛋白 103493.doc -11 · 1359153 質。作為其直接結果，由融合瘤產生之異源抗體當投與人 時會引起不良之免疫反應，其主要由異源免疫球蛋白之恆 定部分介導。由於其不可長時間投與，故明顯限制該等抗 體之使用。因此，尤其較佳使用單鏈抗體、單一區域抗體、 嵌合抗體、CDR移植抗體或特別為人抗體，當投與人時， 其可能不會引起實質上之同種異體反應。 鑒於上文，本發明之更佳IL-17結合分子係選自人抗IL-17 抗體，其包含 a) 至少一個免疫球蛋白重鏈或其片段，其包含（i)可變域， 其依次包含高變區CDR1、CDR2及CDR3或其直系CDR等同 物及（ii)人重鏈之恆定部分或其片段；該CDR1具有胺基酸 序列SEQ ID NO: 1，該CDR2具有胺基酸序列SEQ ID NO: 2 且該CDR3具有胺基酸序列SEQ ID NO: 3 ;及 b) 至少一個免疫球蛋白輕鏈或其片段，其包含⑴可變域， 其依次包含高變區且亦視情況為CDR11、CDR2'及CDR3'高 變區或其直系CDR1等同物及（ii)人輕鏈之恆定部分或其片 段；該CDR1'具有胺基酸序列SEQ ID NO: 4，該CDR21具有 胺基酸序列SEQ ID NO: 5且該CDE^具有胺基酸序列SEQ ID NO: 6。 或者，本發明之IL-17結合分子可選自單鏈結合分子，其 包含抗原結合位點，該抗原結合位點包含 a)第一域，其依次包含高變區CDR1、CDR2及CDR3或其直 系CDR等同物，該CDR1具有胺基酸序列SEQ ID NO: 1，該 CDR2具有胺基酸序列SEQ ID NO: 2且該CDR3具有胺基酸 103493.doc -12·

1359153 序列 SEQ ID NO: 3 ;及 b) 第二域，其包含高變區CDRl·、CDR2’及CDR3·或其直系 CDR·等同物，該CDR1·具有胺基酸序列SEQ ID NO: 4，該 CDR2’具有胺基酸序列SEQ ID NO: 5且該CDR3·具有胺基酸 序列 SEQ ID NO: 6 ;及 c) 肽連接子，其結合至第一域之N末端及第二域之C末端或 結合至第一域之C末端及第二域之N末端。 眾所周知，胺基酸序列中較小之改變（諸如少數乃至若干 胺基酸之缺失、增加或取代）可導致最初蛋白質之對偶基因 形式，其具有大體上相同之特性。 因而，術語"其直系CDR等同物”意謂IL-17結合分子，其 依次包含高變區CDRl;、CDR2i及CDR3i，（代替CDIH、CDR2 及CDR3)，其中 (i) 高變區CDRli與SEQ ID NO: 1中所顯示之高變區 CDR1相差3個、較佳為2個、更佳為1個胺基酸；且 (ii) 高變區CDR2i與SEQ ID NO: 2中所顯示之高變區 CDR2相差3個、較佳為2個、更佳為1個胺基酸；且 (iii) 高變區CDR3i與SEQ ID NO: 3中所顯示之高變區 CDR3相差3個、較佳為2個、更佳為1個胺基酸；且 (iv) 依次包含高變區CDRli、CDR2i&CDR3i之該分子在 5 0 nM、較佳為20 nM、更佳為10 nM、更佳為5 nM 之該分子濃度下能抑制1 nM(= 30 ng/ml)人IL-17之 活性的50%，該抑制活性係藉由人皮膚纖維母細胞 中hu-IL-17誘導之IL-6產生而量測。 103493.doc -13- 1359153 同樣地，術語”其直系CDR-x等同物"意謂IL-17結合分 子，其依次包含高變區CDRlrx、CDR2rx及CDR3rx，（代 替 CDRl-x、CDR2-X及 CDR3-X)，其中 (v) 高變區CDRlrx與SEQ ID NO: 11中所顯示之高變區 CDRl-x相差3個、較佳為2個、更佳為1個胺基酸； 且 (vi) 高變區CDR2rx與SEQ ID NO: 12中所顯示之高變區 CDR2-X相差3個、較佳為2個、更佳為1個胺基酸； 且 (vii) 高變區CDR3rx與SEQ ID NO: 13中所顯示之高變區 CDR3-X相差3個、較佳為2個、更佳為1個胺基酸； 且 (viii) 依次包含高變區CDRlrx、CDR2rx及CDR3rx之該 分子在50 nM、較佳為20 nM、更佳為10 nM、更佳 為5 nM之該分子濃度下能抑制1 nM(=30 ng/ml)人 IL-1 7之活性的50%，該抑制活性係藉由人皮膚纖維 母細胞中hu-IL-1 7誘導之IL-6產生而量測。 同樣地，術語"其直系CDR'等同物”意謂依次包含高變區 CDR1、、CDR2、及CDR3、之區域，其中 (i) 高變區CDRl'i與SEQ ID NO: 4中所顯示之高變區 CDR1'相差3個、較佳為2個、更佳為1個胺基酸；且 (ii) 高變區CDR2'i與SEQ ID NO: 5中所顯示之高變區 CDR2,相差3個、較佳為2個、更佳為1個胺基酸；且 (iii) 高變區CDR3'i與SEQ ID NO: 6中所顯示之高變區 103493.doc -14-

1359153 CDR3,相差3個、較佳為2個、更佳為1個胺基酸；且 (iv)依次包含高變區CDR1\、CDR2\及CDR3'ii該分子 在50nM、較佳為20 nM、更佳為10 nM、更佳為5 nM 之該分子濃度下能抑制1 nM(=30 ng/ml)人IL-17之 活性的50%，該抑制活性係藉由人皮膚纖維母細胞 中hu-IL-17誘導之IL-6產生而量測。 或者，本發明之IL-17結合分子可為包含至少一個抗原結 合位點之IL -1 7結合分子，該抗原結合位點包含至少一個免 疫球蛋白重鏈可變域（VH)，其依次包含 a) 高變區 CDR1(SEQ ID NO: 1)、CDR2(SEQ ID NO: 2)及 CDR3(SEQ ID NO: 3);或 b) 高變區 CDRli、CDR2i、CDR3i，該高變區 CDRli與 SEQ ID NO:l中所顯示之高變區CDR1相差3個、較佳為2個、更佳為 1個胺基酸；該高變區CDR2i與SEQ ID NO: 2中所顯示之高 變區CDR2相差3個、較佳為2個、更佳為1個胺基酸；且該 高變區CDR3i與SEQ ID NO: 3中所顯示之高變區CDR3相差 3個、較佳為2個、更佳為1個胺基酸；且 依次包含高變區CDRlx、CDR2x&CDR3xi該結合IL-17分子 在50 nM、較佳為20 nM、更佳為10 nM、更佳為5 nM之該 分子濃度下能抑制1 nM(=30 ng/ml)人IL-17之活性的50%， 該抑制活性係藉由人皮膚纖維母細胞中hu-IL-1 7誘導之 IL-6產生而量測。 同樣地，本發明之IL-1 7結合分子可為包含至少一個抗原 結合位點之IL-17結合分子’該抗原結合位點包含至少一個 103493.doc -15 - 1359153 免疫球蛋白重鏈可變域（vH)，其依次包含 a) 高變區 CDRl-x(SEQ ID NO·· 11)、CDR2-x(SEQ ID NO: 12) 及 CDR3-x(SEQ ID NO: 13);或 b) 高變區 CDRli-x ' CDR2rx、CDR3rx，該高變區 CDRli_x 與SEQ ID NO: 11中所顯示之高變區CDRl-x相差3個、較佳 為2個、更佳為1個胺基酸；該高變區CDR2rx與SEQ ID NO: 12中所顯示之高變區CDR2-X相差3個、較佳為2個、更佳為1 個胺基酸；且該高變區CDR3i-x與SEQIDNO:13中所顯示之 高變區CDR3-X相差3個、較佳為2個、更佳為1個胺基酸；且 依次包含高變區CDRlrx、CDR2rx及CDR3rx之該結合 IL-17分子在50 nM、較佳為20 nM、更佳為10 nM、更佳為5 nM之該分子濃度下能抑制1 nM(=30 ng/ml)人IL-17之活性 的5 0%，該抑制活性係藉由人皮膚纖維母細胞中hu-IL-17誘 導之IL-6產生而量測。 同樣地，本發明之IL-17結合分子可為包含至少一個抗原 結合位點之IL-17結合分子，該抗原結合位點包含至少一個 免疫球蛋白輕鏈可變域（VL)，其依次包含 a) 高變區 CDR'1(SEQ ID NO: 4)、CDR'2(SEQ ID NO: 5)及 CDR，3(SEQ ID NO: 6);或 b) 高變區 CDRl'i、CDR2'i、CDR3、，該高變區 CDR'lj與 SEQ ID NO: 4中所顯示之高變區CDR'l相差3個、較佳為2個、更 佳為1個胺基酸；該高變區CDR'2i與SEQ ID NO: 5中所顯示 之高變區CDR'2相差3個、較佳為2個、更佳為1個胺基酸； 且該高變區CDR'3i與SEQ ID NO: 6中所顯示之高變區 103493.doc -16-

1359153 CDR'3相差3個、較佳為2個、更佳為1個胺基酸；且 依次包含高變區CDR'li、CDR，2i及CDR，3ii該結合IL-17分 子在50 nM、較佳為20 nM、更佳為10 nM、更佳為5 nM之 該分子濃度下能抑制1 nM(=30 ng/ml)人IL-17之活性的 50%，該抑制活性係藉由人皮膚纖維母細胞中hu-IL-17誘導 之IL-6產生而量測。 或者，本發明之IL-17結合分子可為包含重鏈（VH)及輕鏈 (VL)可變域之IL-17結合分子且該IL-17結合分子包含至少 一個抗原結合位點，其包含： a) 免疫球蛋白重鏈可變域（VH)，其依次包含高變區 CDR1(SEQ ID NO: 1)、CDR2(SEQ ID NO: 2)及 CDR3(SEQ ID NO: 3);及 免疫球蛋白輕鏈可變域（VL)，其依次包含高變區CDR1'(SEQ ID NO: 4)、CDR2’(SEQ ID NO: 5)及CDR3'(SEQ ID NO: 6);或 b) 免疫球蛋白重鏈可變域（VH)，其依次包含高變區CDRlj、 CDR2i及CDR3i ’該高變區CDRli與SEQ ID NO: 1中所顯示 之高變區CDR1相差3個、較佳為2個、更佳為1個胺基酸； 6玄向變區CDR2i與SEQ ID NO: 2中所顯示之高變區CDR2相 差3個、較佳為2個、更佳為1個胺基酸；且該高變區CDR3; 與SEQ ID NO: 3中所顯示之高變區CDR3相差3個、較佳為2 個、更佳為1個胺基酸；及 免疫球蛋白輕鏈可變域（vL) ’其依次包含高變區、 CDR2’i及CDR3V該高變區cdriaseq ID N0: 4中所顯示 之高變區CDR'l相差3個、較佳為2個、更佳為丨個胺基酸； l〇3493.d( -17- 1359153 該高變區001^2丨與SEQ ID NO: 5中所顯示之高變區CDR2 相差3個、較佳為2個、更佳為1個胺基酸；且該高變區CDR'3i 與SEQ IDN0:6中所顯示之高變區CDR’3相差3個、較佳為2 個、更佳為1個胺基酸；且 b)中所定義之依次包含高變區CDRli、CDR2i、CDR3i、 CDR'li、CDR'2i及CDR'3i的該結合IL-17分子在50 nM、較佳 為20 nM、更佳為10 nM、更佳為5 nM之該分子濃度下能抑 制1 nM(=30 ng/ml)人IL-17之活性的50%，該抑制活性係藉 由人皮膚纖維母細胞中hu-IL-17誘導之IL-6產生而量測。 或者，本發明之IL-17結合分子可為包含重鏈（VH)及輕鏈 (VL)可變域之IL-17結合分子且該IL-17結合分子包含至少 一個抗原結合位點*其包含： a) 免疫球蛋白重鏈可變域（VH)，其依次包含高變區 CDRl-x(SEQ ID NO: 11)、CDR2-x(SEQ ID NO: 12)及 CDR3-x(SEQ ID NO: 13);及 免疫球蛋白輕鏈可變域（VL)，其依次包含高變區CDR1’（SEQ ID NO: 4)、CDR2，（SEQ ID NO: 5)及 CDR3，（SEQ ID NO: 6);或 b) 免疫球蛋白重鏈可變域（VH)，其依次包含高變區 CDRlrx、CDR2rx及 CDR3rx，該高變區 CDRlrx與 SEQ ID NO: 11中所顯示之高變區CDRl-x相差3個、較佳為2個、更 佳為1個胺基酸；該高變區CDR2rx與SEQ ID NO·. 12中所顯 示之高變區CDR2-X相差3個、較佳為2個、更佳為1個胺基 酸；且該高變區CDR3rx與SEQ ID NO:13中所顯示之高變區 CDR3-X相差3個、較佳為2個、更佳為1個胺基酸；及 103493.doc -18- 1359153 免疫球蛋白輕鏈可變域（Vl)，其依次包含高變區CDRh、 CDR2’^ CDR3 V 該高變區 SEQ ID N〇: 4 中所顯示 之高變區CDR«1相差3個、較佳為2個、更佳為丨個胺基酸； 該高變區CDR，2#SEQ ID NO: 5中所顯示之高變區CDR，2 相差3個、較佳為2個、更佳為1個胺基酸；且該高變區cDR，3i 與SEQ ID NO·· 6中所顯示之高變區CDR'3相差3個、較佳為2 個、更佳為1個胺基酸；且 b)中所定義之依次包含高變區CDRli、CDR2i、CDRI、 CDR 1;、CDR%及CDR’3M該結合IL-17分子在50 nM、較佳 為20 nM、更佳為i〇 nM、更佳為5 nM之該分子濃度下能抑 制1 nM(=3 0 ng/ml)人IL-17之活性的50%，該抑制活性係藉 由人皮膚纖維母細胞中hu-IL-Ι7誘導之IL-6產生而量測。 IL 1 7至其受體之結合的抑制作用可在各種檢定中便利 地測試’包括下文中所描述之該等檢定。術語"在相同程度 上"意謂在本文所參考之檢定中之一種中（見實例1 )，參照物 及等同物分子在統計基礎上展示出基本上相同的江-丨了抑 制活性。例如，當如實例i中所述檢定時，就人IL_i 7對於 藉由人皮膚纖維母細胞中人IL-17誘導之IL-6產生的抑制作 用而言，本發明之IL_17結合分子通常具有+厂χ5内之1(：5〇， 意即小於1 0 nM ’更佳為9、8、7、6、5、4、3或2 nM，較 佳與相應參照分子之IC5〇大體上相同。 或者，所使用之檢定可為以可溶性IL-17受體（例如實例i 之人IL- 1 7 R/Fc構築體）及本發明之il- 1 7結合分子競爭性抑 制IL -1 7之結合的檢定。 103493.doc •19- 1359153 人IL-17抗體最佳包含 a) 至少一個重鏈，其包含具有大體上與SEQ ID NO: 8中所 示之胺基酸序列一致且始於位置1之胺基酸並終止於位置 127之胺基酸之胺基酸序列的可變域及人重鏈之恆定部 分；及 b) 至少一個輕鏈，其包含具有大體上與SEQIDNO:10中所 示之胺基酸序列一致且始於位置1之胺基酸並終止於位置 109之胺基酸之胺基酸序列的可變域及人輕鏈之恆定部 分。 人重鏈之恆定部分可為γ丨、γ2、γ3、γ4、μ、αι、α2、§或ε 型’較佳為γ型’更佳為γ 1型’然而，人輕鍵之恆定部分可 為κ或λ型（其包括λ!、λ2及λ3亞型）’但較佳為]<:型。所有此等 恆定部分之胺基酸序列在Kab at等人（上文）中給出。 本發明之結合分子之結合物（例如酶或毒素或放射性同 位素結合物）亦包括於本發明之範疇内。 若本文中未另列出，則"多肽"包括任何肽或蛋白質，其 包含經由肽鍵彼此連接之胺基酸且具有始末端並終止 於C末端之胺基酸序列。本發明之多肽較佳為單株抗體，更 佳為嵌合（亦稱為v移植）單株抗體或人源化（亦稱為（：〇11移 植）單株抗體，最佳為例如可由實例丨中舉例說明之技術所 獲得之完全人抗體。人源化（CDR移植）單株抗體或完全人單 株抗體可包括或不包括引入受體抗體之構架（FR)序列中之 進一步突變作用。 本文所使用之多肽的官能衍生物包括與本發明之多肽— 103493.doc •20· 1359153 樣具有定性生物活性之分子’意即具有結合至人il i7之能 力。官能衍生物包括根據本發明之多肽的片段及肽類： 物。片段包含根據本發明之多狀之序列内的區域，例如規 定序列内的區域。使用術語"衍生物"來定義胺基酸序列變 異體及根據本發明之多肽的共價修飾，例如規定序列之共 價修飾。根據本發明之多肽（例如輕鏈及重鏈之高變區之規 定序列）的官能衍生物較佳具有至少約65%、更佳為至少約 75%、更佳為至少約85%、最佳為至少約％、％、w、μ ' 99%與根據本發明之多肽（例如規定序列）之胺基酸序列同 源的全部序列，並大體上保持結合人江_17或例如中和人皮 膚纖維母細胞中IL-17誘導之IL-6產生的能力。 術語"共價修飾"包括以有機蛋白質或非蛋白質衍生劑對 根據本發明之多肽（例如規定序列之多肽）或其片段所進行 之修飾、與異源多肽序列之融合及轉譯後修飾。經共價修 飾之多肽（例如規定序列之經共價修飾之多肽）藉由交聯仍 具有結合人IL-17或例如中和人皮膚纖維母細胞中比_17誘 導之IL-6產生的能力。共價修飾傳統上藉由將靶胺基酸殘 基與能與所選側鏈或末端殘基反應之有機衍生劑反應而引 入，或藉由在所選重組宿主細胞中起作用之轉譯後修飾的 控制機制而引入。某些轉譯後修飾為重組宿主細胞作用於 經表現多肽之結果。麩醯胺醯基及天冬醯胺醯基殘基常常 在轉譯後脫醯胺基而成為相應之麩胺醯基及天冬胺醯基。 或者，此等殘基在弱酸條件下被脫去醯胺基。其他轉譯後 修飾包括脯胺酸及離胺酸之羥基化作用；絲胺醯基、酪胺 103493.doc •21· 1359153 酸或蘇胺醯基殘基之羥基的磷酸化作用；離胺酸、精胺酸 及組胺酸侧鏈之（X-胺基之甲基化作用，例如參見Τ E. Creighton, Proteins: Structure and Molecular Properties, W. H. Freeman & Co” San Francisco，第 79-86 頁（1983)。共價 修飾例如包括包含根據本發明之多肽（例如規定序列之多 肽）及其胺基酸序列變異體（諸如免疫黏附素）的融合蛋白質 以及與異源訊號序列之N末端融合。 關於天然多肽及其官能衍生物之"同源性”在本文中定義 如下：在對準序列且必要時引入間隙以達成最大同源性百 分比之後，候選序列中與相應天然多肽之殘基一致的胺基 酸殘基的百分比，且不將任何保守性取代視為序列一致性 之一部分。N或C末端之延長或插入均不應被解釋為減少一 致性或同源性。對準之方法及電腦程式為人所熟知。 "胺基酸”係指所有天然存在之L-a-胺基酸且包括D_胺基 酸。該等胺基酸可由熟知之單字母或三字母名稱而加以識 別。 術語"胺基酸序列變異體"係指與根據本發明之多肽（例如 規定序列之多肽）相比在其胺基酸序列中具有某些差異的 分子。根據本發明之多肽（例如規定序列之多肽）之胺基酸序 列變異體仍具有結合人IL·丨7或例如中和人皮膚纖維母細 胞中IL-17誘導之il-6產生的能力。取代性變異體為彼等變 異體’其在根據本發明之多肽（例如規定序列之多肽）中至少 一個胺基酸殘基被移除且於相同位置上插入不同之胺基 酸。此等取代可為其中在分子中僅取代一個胺基酸之單一 103493.doc •22· 1359153 取代’或者可為其中在相同分子中取代兩個或兩個以上胺 基酸之多取代。插人性變異體為在根據本發明之多狀（例如 規定序列之多肽）之特定位置的胺基酸直接鄰接處插入— 或多個胺基酸的彼等變異體。與胺基酸直接鄰接意謂連接 至該胺基酸之α-羧基或α_胺基官能基。缺失性變異體為在 根據本發明之多肽（例如規定序列之多肽）中移除一或多個 胺基酸的彼等變異體。缺失性變異體通常在分子之特定區 域内缺失一個或兩個胺基酸。 本發明之IL-17結合分子可由重組DNA技術產生。鑒於 此，應構建一或多個編碼結合分子之DNA分子，將其置於適 當之控制序列下並轉移至合適之宿主生物體中用於表現。 本文因此以極其一般之方式提供 (1) DNA分子，其編碼本發明之單一區域IL_17結合分子、 本發明之單鏈IL-17結合分子、包含本文所定義之重鏈 及輕鏈之IL-17結合分子或本發明之IL-i 7結合分子之 片段；及 (π)本發明之DNA分子以重組方式用於產生本發明之 IL-17結合分子的用途β 因此’本發明提供編碼上述IL-17結合分子之DNA分子。 此外’本發明提供包含大體上與SEq ID NO: 7或SEQ ID NO: 9同源之DNA分子的DNA構築體。 此外，本發明提供包含兩個Dna分子之DNA構築體，其 中一個DNA分子大體上與SEQ ID NO: 7同源或為其直系 DNAH等同物且另一個〇ΝΑ分子大體上與SEQ ID NO: 9同 103493.doc •23· 1359153 源或為其直系DNAl等同物。 現在的技術狀態使得熟習此項技術者能合成由本文提供 之資訊所給出的本發明之DNA分子，該資訊意即高變區之 胺基酸序列及編碼其之DNA序列。用於構建可變域基因之 方法在例如EPA 239 400中有所描述並可簡要概括如下：對 編碼具有任何特異性之MAb可變域的基因進行選殖。確定 編碼構架區及高變區之DNA段並移除編碼高變區之DNA段 從而使得編碼構架區之DNA段與合適之限制性位點在接合 點上融合在一起。限制性位點可在適當位置上藉由以標準 程序使DNA分子突變而產生。藉由DNA合成來製備雙股合 成CDR序列盒，該DNA合成係根據編碼SEQ ID NO: 1(CDR1)、SEQ ID NO: 2(CDR2)、 SEQ ID NO: 3(CDR3)、 SEQ ID NO: 4(CDR1，）、SEQ ID NO: 5(CDR2，）、SEQ ID NO: 6(CDR6')、SEQ ID NO: ll(CDRl-x)、SEQ ID NO: 12(CDR2-x)、SEQIDNO: 13(CDR3-x)之序列。此等序列盒 具有黏性末端使得其可在構架區之接合點處進行結合。 此外，使用來自於可產生之融合瘤細胞株的mRN A以獲得 編碼本發明之IL- 1 7結合分子之DNA構築體是不必要的。因 而PCT申請案WO 90/07861給出以重組DNA技術產生抗體 之全面指導，該重組DNA技術僅由關於基因之核苷酸序列 之書面資訊給出。該方法包含合成許多寡核苷酸，以PCR 方法擴增其且將其拼接以得到所要之DNA序列。 包含合適之啟動子或編碼重鏈及輕鏈恆定部分之基因的 表現載體係公開可獲得的。因而，本發明之DNA分子一經 103493.doc -24-

1359153 製備’便可便利地轉移至適當之表現載體中。編碼單鍵抗 體之DNA分子亦可由標準方法製備，例如w〇 88/1649中所 描述。 與CDR等同物之狀況類似，術語"其直系dnAh等同物"意 謂代表編碼本發明之IL_17結合分子之重鏈或其片段的第 一 DNA構築體，且包含： a) 編碼可變域之第-部分，該可變域選擇性地包含構架區 及高變S，該等高變區依次為CDRli、⑶叫及⑶叫，該 CDRli與SEQ ID NO: 1中所顯示之高變區⑶以至少5〇%同 源、較佳至少60、70、80、85或90%同源、更佳至少95%同 源；該CDR2i與SEQ ID NO: 2中所顯示之高變區CDR2至少 50%同源、較佳至少60、7〇、8〇、85或9〇%同源更佳至少 95%同源且該CDR3i與SEQ m N〇: 3中所顯示之高變區 CDR3至少50%同源、較佳至少60、7〇、8〇、85或9〇%同源、 更佳至少9 5 %同源；此第一部分始於編碼可變域第一胺基 酸之密碼子並終止於編碼可變域最後胺基酸之密碼子；及 b) 編碼重鏈恆定部分或其片段之第二部分，其始於編碼重 鏈恆定部分之第一胺基酸的密碼子並終止於編碼恆定部分 或其片段之最後胺基酸的密碼子並接著以終止密碼子終 止；及 c) 編碼可單獨存在或與其他多肽組合之多肽的該dNA構築 體，其在50 nM、較佳為20 nM、更佳為1〇 nM、更佳為5 nM 之該分子濃度下抑制1 nM(=30 ng/ml)人IL-17之活性的 5 0%，該抑制活性係藉由人皮膚纖維母細胞中hu_IL_17誘導 103493.doc -25- 1359153 之IL-6產生而量測。 同樣地，術語"其直系DNAH-x等同物"意謂代表編碼本發 明之IL-17結合分子之重鏈或其片段的第一替代性dNA構 築體，且包含： a)編碼可變域之第一部分，該可變域選擇性地包含構架區 及高變區，該等Λ變區依次為CDRlrx、CDR2rX及 CDR3i-x，該CDRlrx與SEQ ID NO: 11中所顯示之高變區 CDR1至少50%同源、較佳至少60、70、80、85或90%同源、 鲁 更佳至少95%同源；該CDRL-x與SEQ ID NO: I2中所顯示之 兩變區CDR2至少50%同源、較佳至少60、70、80、85或90% 同源、更佳至少95%同源且該CDR3i-x與SEQ ID NO: 13中所 顯示之高變區CDR3至少50%同源、較佳至少60、70、80、 85或90%同源、更佳至少95%同源；此第一部分始於編碼可 變域第一胺基酸之密碼子並終丰於編碼可變域最後胺基酸 之密碼子；及 φ b)編碼重鏈恆定部分或其片段之第二部分，其始於編碼重 鍵丨互疋部分之第一胺基酸的密碼子並終止於編碼恆定部分 或其片段之最後胺基酸的密碼子並接著以終止密碼子終 止；及 C)’、烏碼可單獨存在或與其他多肽組合之多肽的該DNA構築 體其在50 nM、較佳為2〇 nM、更佳為1〇 nM、更佳為5 nM 之該刀子濃度下抑制1 nM(=3〇 ng/ml)人IL_17之活性的 〇 /〇該抑制活性係藉由人皮膚纖維母細胞中hu-IL-17誘導 之IL-6產生而量測。 103493.doc • 26· 1359153 此等DNA構築體較佳編碼選擇性地包含構架區及高變區 之可變域，該等高變區依次為CDR1、CDR2及CDR3，該 CDR1具有SEQ ID NO: 1之胺基酸序列，該CDR2具有SEQ ID NO: 2之胺基酸序列且該CDR3具有SEQ ID NO: 3之胺基 酸序列。此等DNA構築體更佳編碼選擇性地包含構架區及 高變區之可變域，該等高變區依次為CDRl-x、CDR2-X及 CDR3-X，該CDRl-x具有SEQ ID NO: 11之胺基酸序列，該 CDR2-X具有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列且該CDR3-X具有 SEQ ID NO: 13之胺基酸序列。此第一部分更佳編碼具有大 體上與SEQ ID NO: 8中所顯示之胺基酸序列一致且始於位 置1之胺基酸並終止於位置127之胺基酸之胺基酸序列的可 變域。該第一部分更佳具有如SEQ ID NO: 7中所顯示的始 於位置1之核苷酸並終止於位置381之核苷酸的核苷酸序 列。該第二部分亦較佳編碼人重鏈之恆定部分，更佳為人γΐ 鏈之恆定部分。此第二部分可為基因組來源之DNA片段（包 含内含子）或cDNA片段（不含内含子）。 同樣地，術語”其直系DNAl等同物"意謂代表編碼本發明 之IL-17結合分子之輕鏈或其片段的第二DNA構築體，且包 含： a)編碼可變域之第一部分，該可變域選擇性地包含構架區 及高變區，該等高變區為CDR3/並視情況為CDRli’及 CDR2i'，該CDRli'與SEQ ID NO: 4中所顯示之高變區CDR1’ 至少50%同源、較佳至少60、70、80、85或90%同源、更佳 至少95%同源；該CDR2/與SEQ ID NO: 5中所顯示之高變區 103493.doc -27-

1359153 CDR21至少50%同源、較佳至少60、70、80、85或90〇/〇同源、 更佳至少95%同源且該CDR3/與SEQ ID NO: 6中所顯示之 高變區CDR3·至少50%同源、較佳至少60、70、80、85或9〇〇/0 同源、更佳至少95%同源；此第一部分始於編碼可變域第 一胺基酸之密碼子並終止於編碼可變域最後胺基酸之密碼 子；及 b) 編碼輕鏈恆定部分或其片段之第二部分，其始於編碼輕 鏈但定部分之第一胺基酸的密碼子並終止於編碼恆定部分 或其片段之最後胺基酸的密碼子並接著以終止密碼子終 止；及 c) 編碼可單獨存在或與其他多肽組合之多肽的該構築 體，其在50 nM、較佳為20 nM、更佳為1 〇 nM、更佳為5 nM 之該分子濃度下抑制1 nM( = 3 0 ng/ml)人IL-17之活性的 5 0%，該抑制活性係藉由人皮膚纖維母細胞中hu_IL_丨7誘導 之IL-6產生而量測。 此第二DNA構築體較佳編碼選擇性地包含構架區及高變 區的可變域’該等高變區依次為CDR1'、CDR2,及CDR3'， 該CDR1，具有SEQ ID NO: 4之胺基酸序列，該CDR21具有 SEQ ID NO: 5之胺基酸序列且該CDR3,具有SEQ ID NO: 6 之胺基酸序列。此第二DNA構築體之第一部分更佳編碼具 有大體上與SEQ ID NO: 10中所顯示之胺基酸序列相同且 始於位置1之胺基酸並終止於位置1〇9之胺基酸之胺基酸序 列的可變域。該第一部分更佳具有如SEQ ID NO: 9中所顯 示的始於位置1之核苷酸並终止於位置327之核苷酸之核苷 103493.doc -28- 1359153 酸序列。該第二部分亦較佳編碼人輕鏈之恆定部分，更佳 為人K鏈之怪定部分。 較佳一起使用第一及第二DNA構築體，但亦可分別使用。 本發明亦包括IL-17結合分子，其中改變CDR1、CDR2、 CDR3、CDRl-x、CDR2-X、CDR3-X、CDR1'、CDR2'或 CDR3' 或構架之胺基酸殘基中的一或多個（通常僅為少數（例如1 -4 個））；例如藉由突變，如相應DNA序列之定位突變。本發 明包括編碼該等經改變之IL-1 7結合分子之DNA序列。詳言 之，本發明包括IL-17結合分子，其中一或多個CDR1·或 CDR2,之殘基已經自SEQ ID NO: 4(對於CDR1，）及SEQ ID NO: 5(對於CDR2')中所顯示之殘基改變。 在第一及第二DNA構築體中，第一及第二部分可由内含 子分離，且可便利地將強化子定位於第一與第二部分之間 的内含子中。已轉錄而未轉譯之該強化子的存在可輔助有 效之轉錄作用。在特定實施例中，第一及第二DNA構築體 包含有利地為人來源之重鏈基因之強化子。 各DNA構築體均置於合適控制序列之控制下.，詳言之在 合適啟動子之控制下。可使用任何種類之啟動子，其限制 條件為其適合於DNA構築體將轉移至其中以用於表現的宿 主生物體。 所要抗體可在細胞培養中或轉殖基因動物中產生。合適 之轉殖基因動物可根據標準方法獲得，其包括將置於合適 控制序列下之第一及第二DNA構築體微量注射入卵中，將 如此製備之印轉移入適當之假孕雌性動物中並選擇後代以 103493.doc -29-

1359153 表現所要抗體。 π田細胞培養中產生抗體鏈時，應首先將DNA構築體插入 • n㈣14中或兩個分離但相容之表現載體中，較佳為 後一種可能性。 因此’本發明亦提供可在原核或真核細胞株中複製之表 現載體’其包含上述DNA構g體中之至少一個。 含有DNA構築體之各表現載體接著轉移入合適之宿主生 鲁 &體中。當DNA構築體在兩個表現載體上分別插入時，其 可破分別轉移（意即每個細胞對應一種載體類型）或共轉 移較佳為後-種可能性。合適之宿主生物體可為細菌、 酵母或哺乳動物細胞株，較佳為後者。哺乳動物細胞株更 佳為淋巴來源，例如骨髓瘤、融合瘤或正常永生化B細胞， 其便利地不表現任何内源抗體重鏈或輕鏈。 對於哺乳動物細胞中之表現而言，較佳使江_17結合分子 編褐序列整合入宿主細胞DNA中之允許或協助m结合 • 分子高程度表現的基因座β。il-17結合分子編碼序列在其 中整合入該等有利基因座中的細胞可在其所表現之比“7 結合分子之含量的基礎上加以鑑別及選擇。可使用任何合 適之可選擇標記以製備含有IL_丨7結合分子編碼序列之宿 主細胞；例如，可使用dhfr基因/甲胺喋呤或等同物選擇系 統。用於表現本發明之江_17結合分子之替代系統包括基於 GS之擴增/選擇系統，諸如Ep 〇256〇55 B、Ep b及 歐洲專利申請案89303964.4中所描述之系統。 本發明之進一步態樣提供用於〗L _丨7結合分子產物之製 103493.doc 1359153 程，其包含（1)培養以上文所定義之表現載體轉型之生物體 及（ii)自培養物中回收IL-17結合分子。 為本忒明起見’若抗體可在與AIN457抗體大體上相同之 程度上抑制IL-17結合至其受體，則該抗體"可如AIN457 一 樣抑制IL-17之結合"’其中"在相同程度上”具有如上所定義 之含義。 AIN457抗體具有對IL-i7之結合親和性，其高於先前所報 告之對於抗IL· 17抗體、詳言之為對於任何抗人江_17抗體之 親和性。因而AIN457對於至IL_17之結合而言具有約〇 188± 0.036 nM之解離平衡常數Kd(例如由實例2中所示之 BIAcore測疋）。此咼結合親和性使得ain457抗體尤其適於 治療應用。 在本說明中，短語"IL-17介導性疾病，，包含其中IL_17在疾 病或醫學病狀中直接或間接起一定作用的所有疾病及醫學 病狀，包括疾病或病狀之起因、發展、進展、持續或病理。 在本說明中，短語"治療"係指預防性治療以及治療性或 疾病調節性治療，包括治療處於感染疾病危險中或懷疑已 感染疾病之患者以及治療生病或已經診斷出患有疾病或醫 學病狀之患者，並包括抑制臨床復發。 在本文中被稱作本發明之抗體的為：如上所定義之具有 對於人IL-1 7之結合特異性的il- 17結合分子，詳言之為可抑 制IL-17結合至其受體的抗體；及在5〇 nM、較佳為2〇 nM、 更佳為1 0 nM、更佳為5 nM之該分子濃度下能抑制j nM(= 30ng/ml)人IL-17之活性的50〇/(^IL_17抗體，該抑制活性係 103493.doc •31- 1359153 由人皮膚纖維母細胞中hu-IL-17誘導之IL-6產生而量測。 本發明之抗體較佳為人抗體，最佳為AIN457抗體或其直 系等同物。 本發明之抗體阻斷IL-17對其靶細胞之效應且因而適用 於治療IL-17介導之疾病及病症。本發明之抗體之此等及其 他藥理學活性可在例如以下所描述之標準測試方法中得到 證明。 以初級人纖維母細胞中和介白素-6之IL-17依賴性產生： 初級人（皮膚）纖維母細胞中IL-6之產生係取決於 IL-17(Hwang SY 等人，（2004) Arthritis Res Ther; 6: R120-128)。 簡而言之，在不同濃度的本發明之抗體或具有Fc部分之 人IL-17受體的存在下以重組IL-17刺激人皮膚纖維母細 胞。使用嵌合抗CD25抗體SimUlect®(巴利昔（basiliximab)) 作為陰性對照。刺激16 h之後取上清液並藉由ELISA檢定 IL-6。當如上進行測試（意即該抑制活性係由人皮膚纖維母 細胞中hu-IL-17誘導之IL-6產生而量測）時，對於il-6產生之 抑制作用（在1 nM人IL-17存在下）而言，本發明之抗體通常 具有約50 nM或更少（例如約〇.〇1至約5〇 nM)之ic5()。對於如 上所定義之IL-6產生之抑制作用而言，本發明之抗體較佳

具有約20 nM或更少、更佳為約1〇 nM或更少、更佳為約5 nM 或更少、更佳為約2 nM或更少、更佳為約i nM或更少之. IC50。 如以上檢定中所指出’本發明之抗體強有力地阻斷IL-1 7 103493.doc ⑧ -32- 1359153 之效應。因此，本發明之抗體具有如下之醫藥學效用： 本發明之抗體適用於預防及治療IL_i7介導之疾病或醫 學病狀，例如發炎性病狀、過敏及過敏性病狀、過敏反應、 自體免疫疾病、嚴重感染及器官或組織移植排斥反應。 例如，可將本發明之抗體用於治療心臟、肺、心_肺組合、 肝、腎、胰腺、皮膚或角膜移植之接受者，包括同種異體 移植排斥反應或異源移植排斥反應，並用於預防移植物抗 宿主型疾病，諸如下列骨髓移植及器官移植之相關動脈硬 化。 本發明之抗體尤其適用於治療、預防或改善自體免疫疾 病及發炎性病狀’詳言之為具有包括自體免疫組份之病原 學的發炎性病狀，諸如關節炎（例如類風濕性關節炎、慢性 進育型關節炎及變形性關節炎）及風濕性疾病，包括發炎性 病狀及風濕性疾病，其包括骨質流失、發炎性疼痛、包括 強直！·生脊椎炎之脊椎關節病、萊特症候群（汉^^ syndrome)、反應性關節炎、牛皮癬性關節炎及腸病性關節 炎、過敏（包括氣管過敏及皮膚過敏）及過敏反應。本發明之 抗體可應用之特異性自體免疫疾病包括自體免疫血液學病 症(例如包括溶血性貧血、再生不良性貧血、純紅細胞性貧 血及特發性小板減少）、全身性紅斑狼瘡、發炎性肌肉病 症夕發&軟骨炎、硬皮病 '韋格納肉牙腫病⑽卿打 granulomatosis)、皮肌炎、慢性活動性肝炎、重症肌無力、 牛皮癖、史蒂芬強森症候群（加彻^嶋、特 發月s肪4自體免疫發炎性腸病（例如包括潰癌性結腸 103493.doc •33· 1359153 炎、克羅恩氏症（Crohn's disease)及大腸急躁症）、内分泌性 眼病、葛瑞夫茲氏病（Graves disease)、類肉瘤病' 多發性 硬化症、原髮型膽汁性肝硬化、幼年型糖尿病（1型糖尿病）、 葡萄膜炎（前葡萄膜炎及後葡萄膜炎）、乾躁性角膜結膜炎及 春季型角膜結膜炎、間質性肺纖維化、牛皮癣性關節炎及 絲球體腎炎（伴有或不伴有腎病症候群，例如包括特發性腎 病症候群或極微變化型腎病）、腫瘤、多發性硬化、皮膚及 角膜發炎性疾病、肌炎、骨植體鬆動、諸如動脈硬化 '糖 尿病及血脂異常之代謝障礙。 本發明之抗體亦適用於治療、預防或改善哮喘、支氣管 炎、塵肺症、肺氣腫及其他阻塞性或發炎性氣管疾病。 本發明之抗體適用於治療由IL_17介導或涉及α·η產生 之不良急性及超急性發炎性反應或由江_17所致之tnf釋放 增多’例如急性感染，如敗血性休克（例如内毒素性休克及 成人呼吸奢迫症候群)、腦膜炎、肺炎；及重度灼傷；且適 用於治療與病態釋放有關、由感染、癌症或器官功能 障礙所致之惡病質或體質耗弱症候群’尤其為與娜相關 之惡病質，例如與HIV感染有關或由脚感染所致。 *本：明之抗體尤其適用於治療骨代謝疾病，包括骨關節 火、月質疏鬆及其他發炎性關節炎性皮療、及—般包 齡相關性骨質流失之骨質流失且詳言之為牙周疾病。 對於此等適應症，適當之劑量 ^ ,, y , 罝耄…、疑問將視下列因素而 k化，例如待使用之本發明之 w敗μ 特疋抗體、宿主、投藥模式 及所治療病狀之性質及嚴重性。鈇 置性然而，在預防性使用中， 103493.doc -34- 1359153 一般指出在每公斤體重約〇·05 mg至約1 〇 mg、更通常為每 公斤體重約0.1 mg至約5 mg之劑量下可獲得滿意的結果。 預防性使用之給藥頻率通常在每週約一次直至每3個月約 一次之範圍内，更通常地在每2週約一次直至每1〇週約一次 之範圍内’例如每4至8週一次。本發明之抗體係便利地非 經腸、靜脈内（例如肘前靜脈或其他周邊靜脈内）、肌肉内或 皮下投與。預防性治療通常包含每月一次至每2至3個月一 次或以更小頻率投與本發明之抗體。 本發明之抗體可作為單獨活性成份或與其他藥物（例如 免疫抑制劑或免疫調節劑或其他消炎劑，如用於上文所提 及之疾病的治療或預防）聯合（例如作為其他藥物之佐劑或 與其他藥物組合）而投與。例如，可將本發明之抗體與下列 藥物組合使用：DMARD，例如金製劑、柳氮續胺β比咬 (sulphasalazine)、抗瘧疾藥物、甲胺喋呤（meth〇trexate)、 D-青黴胺（D-penicmamine)、硫唑嘻呤（azathioprine)、黴酚 酉义（mycophenolic acid)、環孢靈 A(cyclosporine A)、他克莫 司（tacrolimus)、西羅莫司（sir〇Hmus)、二甲胺四環素 (minocycline)、來氟米特（iefiun〇mide)、糖皮質激素類；每 調神經碟酸酶抑制劑，例如環孢靈A或FK 506 ;淋巴細胞再 循環調節劑，例如FTY720及FTY720類似物；mTOR抑制劑， 例如雷帕黴素（rapamycin)、4〇_〇_(2_羥乙基）雷帕黴素、 CCI779、ABT578、AP23573 或 TAFA-93 ;具有免疫抑制特 性之子囊黴素（ascomycin)，例如ABT-281、ASM981等；皮 質類固醇類；環磷醯胺；硫唑嘌呤；曱胺喋呤；來氟米特； 103493.doc •35· 1359153 咪唑立賓（mizoribine);黴酚酸；黴酚酸嗎啉乙酯 (myco-pheno-late mofetil) ; 15-脫氧史柏胍淋 (15-deoxyspergualine)或其免疫抑制同系物、類似物或衍生 物；免疫抑制單株抗體’例如白血球受體之單株抗體，例 如 MHC、CD2、CD3、CD4、CD7、CD8、CD25、CD28、 CD40、CD45、CD58、CD80、CD86或其配位體；其他免疫 調節化合物，例如具有CTLA4或其突變體之細胞外區域之 至少一部分（例如CTLA4或其突變體與非CTLA4蛋白質序 列（例如CTLA4Ig，例如指定之ATCC 68629)或其突變體（例 如LEA29Y)連接之至少一個細胞外部分）的重組結合分 子；黏附分子抑制劑，例如LFA-1拮抗劑、ICAM-1或-3拮 抗劑、VCAM-4拮抗劑或VLA-4拮抗劑；或化學治療劑，例 如太平洋紫杉醇（paclitaxel)、吉西他濱（gemcitabine)、順氣 氨鉑（cisplatinum)、阿黴素（doxorubicin)或5-氟尿嘧啶 (5-fluorouracil);抗TNF劑，例如TNF之單株抗體，例如英 利昔單抗（infliximab)、阿達木單抗（adalimumab)、CDP870 或TNF-RI或TNF-RII之受體構築體，例如依那西普 (Etanercept)、PEG-TNF-RI ;前發炎性細胞激素之阻斷劑、 IL-1阻斷劑（例如阿那白滯素（Anakinra)或IL-1捕獲劑、 AAL160 ' ACZ 885)、IL-6阻斷劑；向化性激動素類阻斷劑， 例如蛋白酶（例如金屬蛋白酶）、抗IL-15抗體、抗IL-6抗體、 抗CD20抗體之抑制劑或活化劑、NSAID類，諸如阿斯匹林 或抗感染劑（清單不限於所提及之藥劑）。 根據上文，在另一態樣中本發明提供： 103493.doc • 36· 1359153 如上敎義之方法，其包含共同投與（例如相伴或依次） 治療有效量之江-17結合分子（例如本發明之抗體）及至少一 種第二藥用物質，該第二藥用物質為免疫抑制/免疫調節 樂、消炎化學治療藥或抗感染藥，例如以上所指出者。 或治療組合，例如套組，其包含治療有效量之肌·…士 合分子，例如本發明之抗體，及似少—種第二藥用物質， 其係選自免疫抑制/免疫調節藥、消炎化學治療藥或抗感染

藥’例如以上所指出者。該套組可包含對於其投藥之指導。 當聯合其他免疫抑制/免疫調節治療、消炎化學治療或抗 感染治療來投與本發明之抗體時，共同投與之組合化合物 之劑量毫無疑問將視共同使用之藥物的類型(例如其為 DMARD、抗TNF、IL_ 1阻斷劑或其他）、所使用之特異性藥 物、所治療之病狀等而變化。 ’、 可以習知方式製造本發明之醫藥組合物。較佳以束乾形 式提供根據本發明之組合物。將其溶解於合適的例如注射 用無函水或無囷緩衝生理越此夕> &也♦丨丄 —^ 巧王垤孤水之水性載劑中以用於即刻投 樂。若考慮到想要構成更大體積的溶液以用於輸注投藥而 不是用於快速注射投藥，則有利的是在調配時將人血清白 蛋白或患者之自身加肝墙脂血併入鹽水中。或者，皮下仏 予調配物。過量的該生理學上之惰性蛋白質的存在可㈣ 由於吸附於輸注溶液所使用之容器壁及管壁上而造成之 體敎。若使用白蛋白，則合適濃度為鹽水溶液之〇5至4: 重量％。其他調配物包含液體或;東乾調配物。 在以下實例中以說明方式進-步描述本發明。 103493.doc

-37. 1359153 【實施方式】 實例 使用所設計的用以表現人IgG/κ族群而非鼠免疫球蛋白 族群（Fishwild 等人，1996，Nat Biotechnol·，14，845-85 1)之 轉殖基因小鼠來產生人IL-17抗體。以標準融合瘤技術將來 自此等小鼠之B細胞永生化並獲得鼠融合瘤細胞，其分泌人 IgG/κ 抗體 AIN457。 實例1 :產生融合瘤、純化抗體、選擇AIN457抗體 產义重，麵人几-/7(7^几-/7>)/重組11111[-17係在大腸桿菌中 於包涵體中產生並以習知技術重新折疊（自身產生，無載體 (大腸桿菌；Novartis Pharma，批次 BM-E3 14 1/98);或講買 (無載體，大腸桿菌；R&D Systems #317-IL/CF))，或者作 為HEK.EBNA中所分泌且部分糖基化之蛋白質（重組 huIL-17，無載體（來自於經轉染之HEK/EBNA細胞的IL-17 APP-C6 ； Novartis Pharma，批次 Εη·Ε-3382/82. ; 0.28 mg/ml);重組huIL-17，無載體（來自於經轉染之HEK/EBNA 細胞的 IL-17 APP-C4 ; Novartis Pharma ，批次 En.E-3382/83 ; 0.29 mg/ml))。後一種形式以C末端4個胺基 酸之延長為特徵，該延長用於藉由免疫親和層析法自培養 物上清液中迅速純化。在此狀況下，根據製造者之指導 (Pharmacia)，將培養物上清液以10 mg/ml樹脂之密度裝載 至合適尺寸之與CNBr活化瓊脂糖4B偶合之特異性固定化 抗標籤抗體的管柱上。在以PBS清洗基線之後，以pH 2.7之 100 mM甘胺酸溶離結合之huIL-17,並即刻以稀NaOH中和。 103493.doc -38·

1359153 huIL-17與透孔螺血藍蛋白（KLH)偶合：m在大腸桿蛰說 HEK.EBNA中產生之huIL-17與以過量同雙官能性交聯劑 辛二酸二琥拍醯亞胺酯（DSS)預活化之KLH偶合。以2 ml H20 將 20 mg 凍乾 Imject® 海水培養物 KLH(Pierce # 77600)簡 短復水以得到pH為7.2的10 mg/ml含有磷酸鹽緩衝鹽水 (PBS)之溶液。將400 μΐ 250 mM之二甲亞砜（DMSO)中之 DSS添加至此溶液中並在室溫下攪拌混合物約1小時（並非 所有試劑均溶解且形成一些沉澱物）。在簡短離心及過濾 (0.45 μιη)之後，接著將溶液於PBS中之精細葡聚糖凝膠 025(?1^1*111&(^3)(流動速率2 1111/111丨11)上脫鹽，以1.5 1118/1111生 成約 11 mg活化之 KLH(Bradford)。將 1 ml活化之 KLH(1.5 mg)與1 ml束乾的來源於大腸桿菌之huIL-17(批次 BM-E314 1/98)的9 mg/ml水溶液混合。溶液保持澄清並在室 溫下培育2小時。所得複合物之濃度為1.4 mg/ml(由Bradford 量測）。將 1 ml 活化之 KLH(1.5 mg)與 1 ml HEK.EBNA huIL-17(約3 mg溶於水中，批次En.E-33 82/83)混合。溶液保 持澄清並在室溫下培育2小時。濃度（Bradford)為2.9 mg/m卜 龙瘦根據表1所報告之方案使基因工程小鼠27340(雌 性；MEDAREX Inc，Aimandale，NJ)免疫，其中鼠免疫球蛋 白之可變部分及恆定部分之基因係由其人對應物（基因型 Tg 碼 221100-TgH(CMD)++ ； TgN(Hcp7) 11952+ ；

TgH(JKD)++ ; TgN(KC05)9272 + (亦參見 Sherie L. Morrison， 1 994，Nature,第 368卷，第 812-813 頁；Nils Lonberg等人， 1994, Nature,第368卷，第856-859頁）加以官能性置換。 103493.doc -39- ⑧ 1359153 表1.免疫方案 免疫原 免疫劑量 及途徑 與 KLH偶合之 huIL-17(BM-E3141 每隻 25 ，古 /98)，其與Gerbu佐劑中之下兩處；蜋^ huIL-17(BM-E3 141/98) 1:1混合 積/小鼠中添加 佐劑100 μΐ 與 KLH 偶合之 huIL-17(BM-E3141 每隻 25μβ,虫 /98) ’其與Gerbu佐劑中的與KLH下兩處；油體 偶合之 huIL-17(En.E-3382積/小鼠中^加 /83)1:1混合 佐劑100 μΐ huIL-17(BM-E3141/98)，其與每，10pg，皮 Gerbu佐劑中之huIL-17(En.E-下兩處；總體 33 82/83)1:1混合 積/小鼠中Ϊ加

佐劑100 μΐ

收集血清用於 ELISA huIL-17(BM-E3141/98)-其與每隻 20 ，皮

Gerbu佐劑中的與KLH偶合之下兩處；總體 huIL-17(En.E-3382/83)1:1 混合 積 Μ、鼠中 i 加 佐劑100 μΐ 與 KLH偶合之 huIL-17(BM-E3141 每隻 20 pg，皮 /98)，其與Gerbu佐劑中的與KLH下兩處；總體 偶合之huIL-17(En.E-3382/83) 積/小鼠中&加 1:1混合 佐劑ΙΟΟμΙ huIL-17(BM-E3141/98)，其與每隻 2〇Hg，皮 Gerbu佐劑中之huIL-17(En.E- 下兩處；總體 33 82/83) 1:1混合 積/小鼠中添加

天 曰期 0 07.06.01 14 21.06.01 (第1次增 加） 28 05.07.01 (第2次增 加） 35 12.07.01 42 19.07.01 (第3次增 加） 63 09.08.01 (第4次增 加） 91 06.09.01 (第5次增 加） 99 14.09.01 117 02.10.01 118 03.10.01 119 04.10.01 120 05.10.01

佐劑100 μΐ 收集血清用於 ELISA huIL-17(En.E-33 82/83) 1〇 Hg/小鼠，靜 與 KLH偶合之 huIL-17(En.E-3382 脈内 /83) 1〇 Pg/小鼠，腹 膜内 與 KLH 偶合之 huIL-17(En.E- 3382 10 pg/小鼠，腹 /83) 膜内 與 KLH偶合之 huIL-17(En.E- 3382 10 pg/小鼠，腹 /83). 膜内 融合 在免疫實驗程序開始之後的第35及99天獲得血清樣本， 以用於藉由酶聯結免疫吸附劑分析法（ELISA)量測抗 103493.doc -40- 1359153 huIL17抗體之含量。 產差潑合瘤.·在第120天，藉由吸入C02將小鼠27340殺 死。使用PEG 4000將總脾細胞（ΙχΙΟ8)與ΡΑΙ-0細胞（5χ107個 細胞）融合。將融合細胞塗於720個孔（1 ml/孔）中，該等孔含 有在HAT培養基（RPMI 1640，其含有2 g/Ι碳酸氫鈉、5χ10·5 Μ/β-巯基乙醇、ΙΟ·4 Μ次黃嘌呤、1.6χ10_5 Μ胸苷、4χ10_7 Μ 胺基蝶呤、10%熱活化之FCS及50 pg/ml慶大黴素 (Gentamycin))中之小鼠腹膜細胞（Balb/c小鼠）滋養層。在第 14天，將HAT培養基換成HT培養基，意即不含胺基蝶呤之 HAT培養基。於第10天開始篩選並持續2週。在最初所塗之 720個孔中，684個孔（95%)對融合瘤之生長呈陽性。收集上 清液並在ELISA中使用得自大腸桿菌及HEK/EBNA之 huIL-17來篩選huIL-17反應性MAb。記錄52個初始孔對於抗 huIL-17抗體之存在呈陽性。選殖28個融合瘤且將剩餘融合 瘤冷凍。在4x96孔微量滴定盤中於HT培養基及小鼠腹膜細 胞滋養層中進行選殖。以每孔中0.5個細胞/1 00 μΐ塗布融合 瘤。用顯微鏡觀察孔之生長，且在陽性孔中餵養1 00 μΐ ΗΤ 培養基。第二天，在huIL-17特異性ELIS Α中測試上清液之 抗體產生。在選殖後，大多數經選殖融合瘤保持分泌抗 huIL-17特異性單株抗體（MAb)的能力。 衣:邀之羞兰及.轉/6 .·將所選純系在無血清培養基（5 ml) 中轉移入25 cm2 TC(TC :組織培養）燒瓶中。融合瘤在無血 清培養基中逐漸擴大至75 cm2 TC燒瓶及滚動燒瓶。藉由蛋 白質A親和層析法純化所有包括NVP-AIN457- 103493.doc •41 - 1359153 NX(340-110-28意即小鼠號-融合瘤號-純系號）的不同抗 111111^17 1^八1?。調節培養物上清液至？117.3並裝載於合適尺 寸之 ProteinASepharose4fastflow(Pharmacia)管柱上。在 以pH 7.3之100 mM磷酸鹽緩衝液清洗基線之後，以50 mM 檸檬酸鹽pH 2.7及140 mM NaCl溶離結合之抗體。即刻中和 溶離份（pH 7.0)並無菌過濾。藉由在280 nm處之吸收使用 1.35吸收單位（AU)/mg之因子測定蛋白質濃度。 抗huIL-17 MAb對於藉由人皮膚纖維母細胞中huIL-17誘 箏之產至的##活尨.·在補充有2% FCS、胰島素（5 pg/ml)、huFGF-驗性（0.1 pg/ml)及慶大黴素（50 pg/ml)之 FBM中培養人皮膚纖維母細胞。使用胰蛋白酶/EDTA溶液 將該等纖維母細胞自塑料上分離。將纖維母細胞分配入96 孔微量滴定盤中，密度為lxlO4個細胞/孔並在補充有1% FCS之FBM中。使得纖維母細胞黏附於盤上隔夜。第二天早 晨移除培養基並添加新鮮的補充有1% FCS之FBM、 huIL-17(3 0至500 ng/ml之不同濃度範圍）及融合瘤上清液 (1 /5最終稀釋度）或經純化抗體直至200 μΐ之最終體積。培育 24 h之後收集培養物上清液並藉由ELISA量測huIL-6產生。 用於偵測抗huIL-Π抗體之ELISA:屯ElAShUm定盤}l 塗布 PBS 0.02% NaN3 中之重組huIL-17(100 μΐ/孔，3 pg/ml ; 批次BM-E3141/98或En.E-33 82/82)並在室溫下培育隔夜。第 二天，在37°C 下以 300 μ1 之 PBS/2%BSA/0.02%NaN3封閉微 量滴定盤2 h。接著將盤以PBS/ 0.05% Tween 20/ 0.02% NaN3清洗4次。添加小鼠27340之血清稀釋液（第35天之最終 103493.doc -42· 1359153 稀釋度範圍：1/100至1/3200;第99天之最終稀釋度範圍： 1/200至1/12800 ; 100 μΐ/孔）或融合瘤之培養物上清液（最終 稀釋度1··3; 100 μΐ/孔）。在室溫下培育隔夜之後，將盤以PBS/ 0.05% Tween 20/ 0.02% NaN3清洗4次。以 1/20000之最終稀 釋度添加生物素結合之小鼠抗hu-IgG、Fc片段特異性抗體 (100 μΐ/孔）。在室溫下使樣本反應4 h。清洗之後（4次），以 1/8000之最終稀釋度添加鹼性磷酸酶結合之抗生蛋白鏈菌 素（100 μΐ/孔）。在室溫下歷時40分鐘後，再次將盤清洗4次 並添加基質（二乙基胺基緩衝液中之對硝基苯基磷酸鹽，pH 為9.8 ; 150 μΐ/孔）。視反應之發展而定，在3〇或45分鐘後使 用405及490 nm之濾光器在微量讀數器（Bi〇_Racj)中對盤進 行讀數。 用於偵測抗體同型之ELISA :铬培秦物厶清液^⑽，最 終稀釋度1 /5)添加至塗布有huIL-17之微量滴定盤（見上）的 孔中’並在室溫下培育隔夜以用於揭示MAb的同型》清洗 (4次）之後，在室溫下歷時4小時添加1 〇〇 μι/孔之生物素結合 之小鼠MAb抗人IgGl (最終稀釋度i/1〇〇〇)、IgG2(最終稀釋 度1/1000)、IgG3(最終稀釋度1./1000)、IgG4(最終稀釋度 1/2000)或抗人κ輕鏈（最終稀釋度1/1〇〇〇)。作為對照使用 生物素結合之大鼠抗小鼠λ 1及λ2輕鏈特異性MAb(最終稀 釋度1/1000)。隨後根據先前所描述，清洗並添加鹼性磷酸 酶結合之抗生蛋白鏈菌素（1〇〇 μΐ ;最終稀釋度1/8〇〇〇)。在 清洗（4次）之後，添加基質（二乙基胺基緩衝液中之對硝基苯 基磷酸鹽；100 μΐ)。視反應之發展而定，在3〇或45分鐘後 103493.doc •43· 1359153 使用405及490 nm之濾光器在微量讀數器（Bio-Rad)中對盤 進行讀數。 苈於#堇至之五L/SJ ··用PBS 0_02% NaN3中之抗 huIL-6 小鼠 MAb(來自 R&D 系統之 MAB206 ; 100 μΐ/孔，4 pg/rnl)塗布ELISA微量滴定盤並在室溫下培育隔夜。第二 天，在 37°C 下以 300 μΐ之 PBS/ 2% BSA/ 0.02% NaN3封閉微 量滴定盤2 h。接著將盤以PBS/ 0.05% Tween 20/ 0.02% N aN 3清洗4次。添加人皮膚纖維母細胞之培養物上清液（最 終稀釋度1:3 ; 100 μΐ/孔）。為建立滴定曲線，以1:2之稀釋 步驟將 huIL-6(100 μΐ/孔）由 400 pg/ml滴定至 3.1 pg/ml。在室 溫下培育隔夜之後，將盤以PBS/ 0.05% Tween 20/ 0.02% NaN3清洗4次。添加生物素結合之山羊抗huIL-6抗體 (BAP206 ； R&D Systems)(25 ng/ml ； 100 μΐ/孔）。在室溫下 使樣本反應4 h。清洗之後（4次），以1/8000之最終稀釋度添 加鹼性磷酸酶結合之抗生蛋白鏈菌素（1 00 μΐ/孔）。在室溫下 歷時40分鐘後，再次將盤清洗4次並添加基質（二乙基胺基 緩衝液中之對硝基苯基磷酸鹽，pH為9.8 ; 150 μΐ/孔）。在 30分鐘後使用405及490 nm之濾光器在微量讀數器 (Bio-Rad)中對盤進行讀數。 診禀：報告作為原始〇. D.值或作為藉助於重複值計算之％ 抑制率的數值。報告作為均值土SEM之額外資料。藉由使用 三次曲線擬合用huIL-6標準曲線量測培養物上清液中之 huIL-6濃度。 結果 I03493.doc -44- 1359153 小鼠27340之血清滴度： 表2.抗huIL-17血清滴度（小鼠27340) 友清稀釋度 O.D.值(均值±SEM) 天 huIL-17批次 1:100 1:200 1:400 1:800 1:1600 1:3200 1:6400 1:12800 35 大腸桿菌 1.795 1.524 1.167 0.854 0.615 0.378 ±0.022 ±0.006 ±0.015 ±0.013 ±0.005 ±0.032 HEK/EBNA 2.180 1.875 1.577 1.313 1.031 0.728 士 0.041 ±0.005 ±0.047 ±0.016 ±0.011 ±0_003 99 大腸桿菌 2.130 1.913 1.635 1.494 1.125 0.810 0.559 ±0.078 ±0.075 ±0.041 ±0.066 ±0.001 ±0.070 ±0.021 HEK/EBNA 2.029 1.925 1.716 1.524 1.259 0.970 0.706 ±0.005 ±0.030 ±0.012 ±0.004 士 0.018 ±0.036 土 0.002

*用來自於大腸桿菌（BM-E3141/98)或HEK/EBNA細胞 (Εη·Ε-3382/82)之 huIL-17(3 pg/ml)塗布微量滴定盤。 在ELISA中分析小鼠27340之血清中在第35天及第99天 對於兩種不同huIL-17製劑而言抗huIL-17抗體的存在（表 2)。結果顯示小鼠27340之血清滴度在第35天與第99天之間 增加約4倍且認可兩種huIL-1 7製劑。 潑合瘤上潦放在五ZJ又4户的，結合：使用兩種重組huIL-17 製劑（前者來自於大腸桿菌（BM-E3 141/98)，後者來自於 HEK/EBNA細胞（En.E-3 3 82/82))，在 ELISA 中測試 684個上 清液中抗huIL-1 7抗體的存在。記錄52個上清液對於抗 huIL-17抗體之存在呈陽性（表3)。在少數狀況下觀察到與一 種或另一種製劑的較佳結合《在28個隨後選殖之融合瘤下 劃線。 103493.doc -45-

1359153

表3.培養物上清液之ELIS A反應性 融合瘤 (序號） HuIL-17批次 * 大腸桿菌 O.D.值 HEK/EBA O.D.值 1 1.935/1.830 ND 3 1.928/1.928 2.026/1.956 5 1.386/1.471 2.099/2.042 59, 1.917/2.078 2.342/2.384 66 1.629/1.619 ND 104 2.650/2.716 2.439/2.366 106 1.329/1.371 1.362/1.465 110 2.355/2.363 2.425/2.497 112 0.789/0.857 1.154/1.208 116 1.656/1.652 ND 128 1.244/1.669 0.714/0.695 142 1.192/1.322 0.847/0.810 173 1.899/2.108 1.966/2.023 182 0.948/0.903 0.874/0.866 190 2.249/2.084 2.150/2.139 196 1.406/1.305 1.797/1.752 216 1.120/1.146 1.114/1.128 234 1.890/1.990 ND 277 1.674/1.640 ND 285 0.678/0.789 0.735/0.784 298 2.475/2.677 2.340/2.358 305 1.721/1.789 0.602/0.634 319 1.111/1.073 1.223/1.202 328 1.738/1.762 1.869/1.835 343 2.478/2.702 2.302/2.448 373 1.200/1.194 1.212/1.233 融合瘤 (序號） HuIL-17批次 * 大腸桿菌 O.D.值 HEK/EBh O.D.值 386 1.780/1.812 2.002/1.905 435 2.194/2.139 2.221/2.169 439 1.180/1.236 1.442/1.470 444 1.034/1.066 1.166/1.138 450 2.060/2.209 2.079/2.237 477 1.392/1.348 1.515/1.524 496 2.131/2.078 2.569/2.798 504 1.755/1.559 ND 543 2.332/2.455 2.370/2.381 544 1.145/1.196 1.187/1.201 548 0.728/0.750 0.891/0.909 552 0.824/0.811 0.969/0.943 557 2.241/2.326 2.347/2.483 564 0.628/0.675 0.808/0.820 566 1.092/1.068 1.239/1.152 577 1.018/0.928 1.226/1.206 597 0.781/0.821 1.117/1.121 612 1.935/1.777 2.033/1.989 622 2.121/2.230 2.592/2.277 627 1.000/1.077 1.203/1.209 649 1.335/1.389 1.311/1.337 658 1.218/1.297 1.415/1.437 674 1.112/1.087 1.134/1.127 686 1.447/1.549 1.730/1.646 705 1.899/1.803 1.870/1.872 720 2.249/2.420 2.383/2.385 *用來自於大腸桿菌（BM-E3141/98)或HEK/EBNA細胞 (En.E-3382/82)之重組huIL-17(3 pg/ml)塗布盤。上清液在 1/3之最終稀釋度下進行測試。 103493.doc -46· ⑧. 1359153 融合瘤純系培養物上清液在ELISA中的結合：表4今m示 11個融合瘤純系之上清液在ELISA中的反應性，其保持抗 huIL-17 MAb之最佳產生。選擇純系（以黑體突出顯示）用於 在滾動瓶中產生約1公升用於抗體純化及分析之上清液。除 衍生自融合瘤第5號之產生huIgG3ic抗體的純系以外，所有 其他純系產生huIgGlK MAb，評定為同型特異性單株抗體。 表4.培養物上清液對於hu-IL-1 7之ELIS A反應性。

純系 (序號） 上清液* O.D.值 純系 (序號） 上清液* O.D.值 純系 (序號） 上清液* O.D.值 3-2 2.198/1.940 106-1 1.244/1.306 543-4 1.003/0.913 3-20 1.909/1.939 106-2 1.203/1.138 543-16 0.795/0.717 3-21 1.873/1.812 106-3 1.176/1.166 557-6 0.879/0.940 5-18 1.240/1.168 110-7 1.535/1.393 557-36 0.980/0.925 5-22 1.340/1.396 110-28 1.376/1.370 557-37 1.104/1.109 5-29 1.316/1.354 305-21 1.484/1.518 622-2 0.923/0.894 5-31 1.227/1.302 305-38 1.669/1.858 622-5 1.070/1.032 5-40 1.364/1.543 343-1 1.351/1.375 622-6 0.980/0.953 104-2 1.385/1.299 439-80 2.506/2.543 658-2 0.744/0.744 104-4 1.085/1.044 450-13 1.568/1.610 658-6 0.769/0.772 104-9 1.488/1.304 450-23 1.658/1.667 658-16 0.741/0.758 104-11 1.670/1.380 543-1 1.074/0.991 * 用來自於 HEK/EBNA細胞（En.E-3382/82)之重組 huIL-17(3 pg/ml)塗布微量滴定盤。 培#勒淨淡之户和活沒.·測試培養物上清液中由重組 huIL-17刺激之人皮膚纖維母細胞所致之IL-6產生的抑制作 用。如表5中所示，大多數培養物上清液顯示出抑制活性。 103493.doc • 47- ⑧ 1359153

表5·培養物上清液對藉由人皮膚纖維母細胞中huIL-17誘導 之IL-6產生的抑制作用對IL-6產生之抑制率（〇/〇) 純系 (序號） 作為刺激物使用之huIL-17的量（ng/ml) 3-20 5-40 104-11 106.1 110-28 305-38 343-1 450-23 543.4 622.2 658-16 62.5 125 86.3 75.0 23.3 41.4 47.7 48.5 61.6 19.8 99.8 92.5 47.2 47.1 96.8 102.4 51.7 48.5 -6.0 -12.0 34.0 23.2 34.4 27.7 250 500 33.1 23.2 20.3 19.0 22.2 16.3 5.7 9.8 88.6 61.3 36.6 23.7 90.5 66.4 47.5 26.6 -6.5 -7.1 20.3 18.4 12.7 18.8 d/A^/5之尹;^活尨’用於產生發展候選物AIN457(本發明

之較佳實施例）之純系110_28的選擇係基於在BIAc〇RE 2000上對經純化抗體之中和活性及親和力的量測（見以下 實例2)。 /

實例2 . AIN457以非常高之親和力與重組人IL17(huIL17) 結合；KD為I22 ± 22 pM(BIAcore)且中和藉由人皮膚纖維 母細胞中huIL-17誘導之人比-6產生；在1.87 nM huIL-17 之滚度下，ICS0為2.1 ±〇.l nM a)方法 試劑：一般實驗室試劑可購自Merck或Sigma且為可獲得 之最高純度等級；專業試劑之來源詳述於下。 103493.doc .48- ⑧ 1359153 蛋白質：藉由用重組人IL-17免疫MEDAREX轉殖基因小 乳’且接著遵循產生細胞株之標準方案以蛋白質A瓊脂糖層 析法自其中純化所分泌之物質（基本如實例1中所述），可產 生單株抗體。將AIN457作為無菌過濾溶液在4。(：下儲存於5〇 mM檸檬酸鈉pH 7.0及140 mM NaCl中。在20 mM檸檬酸納 MO mM磷酸鹽缓衝液pH 7及150 mM NaCl之無菌儲備溶液 或以1M Tris-鹼調節至？115.5之2〇111]^乙酸的無菌儲備溶液 中獲得重組人AIN457(批次KB03303A)。濃度通常在2 mg/ml範圍内並在 BIA 緩衝液（20 mM HEPES pH 7.4，150 mM NaCl，0.05% v/v Tween-20)中將其稀釋至 5 ng/ml之最 終濃度以用於Biacore實驗。 自身產生重組人IL-17 ;批次En/E 3882/83 ; 0.29 mg/m卜 BIAcore 量測 藉由使用光學生物傳感器BIAcore 2000(BIAc〇re AB， Ups alia, Sweden，詳細内容見Lit. HS 1，2)之表面電漿共振 量測進行動力學結合參數及交叉反應性等級的測定。此技 術允許無標記型測定配位體與受體之結合（kQn)及解離（kQff) 的微觀速率常數。因此特別適於表現抗體-抗原相互作用之 特徵。此技術為 ELISA 量測（Van Regenmortel, Dev Biol (Basel). 2003; 112:141-51.)之補充且在許多態樣中優於 ELISA量測。以兩種方式進行重組IL-17與IL-17抗體AIN457 之結合研究。在標準方案中，以先前固定至CM-5 BIAcore 傳感器晶片（研究級）上之抗人Fey抗體（Jackson Immunochemicals ;目錄號 1 09-005-098)捕捉 AIN457。進行 103493.doc -49- 1359153

Fey捕捉抗體與BIAcore所提供之"胺偶合套組"(BIAcore，目 錄號BR-1000-50)之共價結合》通常使3000 RU之捕捉抗體 吸附至活化之葡聚糖表面，該葡聚糖表面具有10 mM Ac緩 衝液pH 4.5中之30 pg/ml抗FcY抗體溶液，流動速率為5 μΐ/min，從而導致約250 RU之AIN457固定。作為準則，1000 RU對應於1 ng/mm2之質量轉移。或者IL-17(第3.2部分；表 4) ’ AIN457抗體無需捕捉抗體而直接偶合至晶片表面。將 結果與表9中所描述之方案比較（見下文）。 b)結果 IL_17/ AIN457複合物之結合動力學 一旦在活體内形成複合物，平衡解離常數KD可對複合物 之穩定性做出一些判斷。因此吾人已測定人IL-17結合至經 固定之AIN45 7抗體的動力學常數，並已由此等資料推導出 6玄過程之KD。表3顯示當使用BIA evaluation 3.0軟體將2個實 驗之曲線與蘭格谬爾模型（Langmuir model)擬合時，所獲得 之資料的摘要。儘管該抗體毫無疑問為二價，但該結合可 作為1:1事件處理，其中在表面顯示之單獨抗體結合位點變 為由單體IL-17分子佔據。此實驗顯示抗體-向化性激動素複 合物之極快聯合以及非常慢之解離動力學。當個別處理感 應圖時（如BIAevaluation中所表明，並非全面處理），獲得最 佳資料擬合。因而，在將滴定系列組合後，吾人由12個感 應圖獲得均值值 k〇n= (4_1 ± 0.1) xlO5 1/Ms ; koff= (3.8 土 〇.5)xl〇·4 i/s ;及 kd= 122 ± 22 pM。 103493.doc -50- 1359153 表3.重组人il-17與NVP-AIN457之1:1結合之動力學常數 濃度[ηΜ] kon[l/ms] k〇ff[l/s] Κ〇[Μ] 實驗IL-314 2 3.31E + 05 3.36E-05 1.02E-10 試驗1 4 1.28E+05 3.78E-05 2.95E-10 8 3.79E+05 1.86E-05 4.90E-11 12 3.60E + 05 3.00E-05 8.33Ε-Π 16 3.52E + 05 5.70E-05 1.62E-1 〇 20 3.52E+05 4.15E-05 1.18E-10 2 1.23E + 06 1.97E-05 1.60E-11 試驗2 4 4.11E+05 1.20E-05 2.92E-11 8 3.78E-K15 4.54E-05 1.20E-1 〇 12 3.46E + 05 5.13E-05 1.48E-10 16 3.17E + 05 5.95E-05 1.88E-10 20 3.34E + 05 5.01E-05 1.50E-10 均值 4.10E + 05 3.80E-05 1.22E-10 n=l 2 SEM 7.73E+04 4.51E-06 2.21E-11 平均KD由單獨條目（豎直）計算而得，而非藉由應用方程Kd= k〇ff/kon計鼻而得0 對於在重組細胞（KB03303A)中所產生之AIN457而言，親 ® 和力量測係/刀別對於來自於人、钱、恆河猴及獼猴之IL-17 細胞激素進行。Biacore量測之實驗詳細内容與以上對於 ΜΑΒΙ 10-28抗體所描述的相同。進行兩個獨立試驗，在各 試驗中測試6個IL-1 7濃度。人il- 1 7之濃度為2、4、8、丨2、 16、20 ηΜ且所有其他物種之IL_17濃度為1〇、2〇、3〇、4〇、 50、60nM。完整之資料分析得到n==12個對於各江_17物種 之獨立量測。報告KD以及SEM。 103493.doc -51 - 1359153 表4·概要：重组人、狨、恆河猴及獼猴iL_17與 NVP-AIN457(KB03303A)1:1結合之動力學常數 物種 KD网 均值 試驗1+2 SEM 人 0.227 nM +/- 0.03 nM 狨 1.2 nM +/-0.1 nM 恆河猴 9 nM +/- 1 nM 獼猴 6 nM +/- 0.7 nM 猴 # 在以下表5至8中給出對於抗體KB03303A之BIAcore分析 的全組資料，其係關於kQn、及個別IL-17物種》 表5.4JL-17與AIN457(KB03303A)1:1結合之動力學常數 濃度[nM] kon[l/Ms] koff[l/s] KD[M] 實例 IL-366/ IL-365 2 3.37E + 05 6.43E-05 1.91E-10 試驗1 4 2.59E + 05 7.76E-05 2.99E-10 8 2.12E + 05 5.21E-05 2.46E-10 12 2.18E+05 7.38E-05 3.38E-10 16 2.02E+05 7.15E-05 3.54E-10 20 1.92E + 05 8.04E-05 4.20E-10 2 5.50E + 05 7.01E-05 1.27E-10 試驗2 4 3.22E + 05 3.30E-05 1.02E-10 8 2.85E + 05 4.73E-05 1.66E-10 12 2.86E + 05 4.84E-05 1.69E-10 16 2.61E + 05 3.09E-05 1.18E-10 20 2.58E + 05 4.90E-05 1.90E-10 均值 2.82E + 05 5.82E-05 2.27E-10 n=12 SEM 2.77E+04 4.91E-06 3.00E-11 103493.doc •52·

1359153 表6.基11^-17與ΑΙΝ457(ΚΒ03303Α)1:1結合之動力學常數 濃度[ηΜ] kon[l/Ms] koff[l/s] KD[M] 實例 IL-366/ IL-365 10 ηΜ 8.89Ε + 04 7.96Ε-05 8.95Ε-10 試驗1 20 ηΜ 1.11Ε + 05 8.69Ε-05 7.82Ε-10 30 ηΜ 9.82Ε + 04 1.15Ε-04 1.17Ε-09 40 ηΜ 9.92Ε + 04 1.16Ε-04 1.17Ε-09 50 ηΜ 9.81Ε + 04 1.19Ε-04 1.21Ε-09 10 ηΜ 8.83Ε + 04 9.98Ε-05 1.13Ε-09 試驗2 20 ηΜ 1.10Ε + 05 1.28Ε-04 1.17Ε-09 30 ηΜ 9.70Ε+04 1.52Ε-04 1.57Ε-09 40 ηΜ 9.66Ε + 04 1.31Ε-04 1.36Ε-09 50 ηΜ 9.52Ε + 04 1.59Ε-04 1.67Ε-09 均值 9.83Ε + 04 1.19Ε-04 1.21Ε-09 n=10 SEM 2.36Ε + 03 8.09Ε-06 ±0.1 表7.恆河猴IL-17與ΑΙΝ457(ΚΒ03303Α)1:1結合之動力學常 數

濃度[ηΜ] kon[l/Ms] koff[l/s] KD[M] 實例 IL-366/ IL-365 10 1.70E +05 3.89E-04 2.28E-09 試驗1 20 6.73E + 04 4.94E-04 7.34E-09 30 5.86E + 04 3.54E-04 6.04E-09 40 3.27E + 04 4.05E-04 1.24E-08 50 4.05E + 04 4.55E-04 1.12E-08 60 3.50E + 04 4.60E-04 1.31E-08 10 5.47E + 04 3.85E-04 7.04E-09 試驗2 20 4.62E + 04 2.74E-04 5.93E-09 30 4.30E + 04 3.51E-04 8.16E-09 40 3.76E + 04 3.66E-04 9.74E-09 50 3.60E + 04 4.32E-04 1.20E-08 60 3.44E + 04 4.24E-04 1.23E-08 均值 5.47E + 04 3.99E-04 8.96E-09 n=12 SEM 1.09E + 04 1.72E-05 9.70E-10 103493.doc -53 - 1359153 表8.彌猴IL-17輿ΑΙΝ457(ΚΒ03303Α)1:1結合之動力學常數 濃度[nM] kon[l/Ms] koff[l/s] KD[M]實例 IL-366/ IL-365 5 nM 3.27E+05 3.60E-04 1.10E-09 試驗1 10 nM 1.79E + 05 4.02E-04 2.24E-09 15 nM 1.03E + 05 5.67E-04 5.50E-09 20 nM 1.10E + 05 5.23E-04 4.75E-09 25 nM 9.23E + 04 5.78E-04 6.26E-09 30 nM 9.05E + 04 7.14E-04 7.89E-09 5 nM 7.18E + 04 5.08E-04 7.08E-09 試驗2 10 nM 9.70E + 04 6.69E-04 6.90E-09 15 nM 1.03E + 05 7.66E-04 7.41E-09 20 nM 1.02E + 05 7.32E-04 7.17E-09 25 nM 1.02E + 05 7.47E-04 7.34E-09 30 nM 1.00E + 05 8.34E-04 8.32E-09 均值 1.23E+05 6.17E-04 6.00E-09 n=10 SEM 1.99E + 04 4.34E-05 6.52E-10

隨後評估經純化AIN457(批次En/E-10333/53 ; 0.54 mg/ml)對於huIL-17之抑制活性。表6中顯示IC50值。在此等 實驗中，包括huIL-17R/Fc及小鼠抗huIL-17 MAb作為陽性 對照及Simulect作為陰性對照。

表 9·與 IL-17R/FC 及小鼠抗 huIL-17 MAb AIN457(R&D 系 統）相比之由人抗huIL-17 MAb AIN457對huIL-17之中和。

AIN457 IL-17 R/Fc MAB 317 IC5〇±SEM ic5〇±sem ic5〇±sem (n=3. (n=3) (n=3) 1.87 nM(30 ng/ml)下 之重組huIL-17 2.071 ±0.116 nM 1.713±0.305 nM 12.226±2.050 nM *均值及SEM係由三個不同且獨立之實驗計算而來。 總之，AIN457取消由人皮膚纖維母細胞引起之huIL-6之 103493.doc -54-

1359153 IL-17依賴性分泌。其效能可與huIL-17R/Fc之效能相當且高 於可購得之小鼠抗huIL-17 MAb的效能。應注意有趣的是觀 察到AIN457比IL-17R/FC具有更完全之抑制作用。 實例3:重鏈及輕鏈胺基酸定序之純度及部分胺基酸序列 及區之胺基末端廢基駿序列：藉由埃德曼降解 (Edman (^呂^(1&1^〇11)確定兩個抗11^-17八抗體純系110-7(見 表4)及110-28(見表4)之重鏈及輕鏈的最初48個胺基酸殘 基。對於兩個純系而言，胺基酸序列係相同的。藉由破裂 分析尋找GeneBank且將所發現之最同源之DNA序列用於設 計選殖引子。 厂i及h區之分子選產.·根據廠家之方案（Quiagen Hilden Germany)用RNeasy Midi Kit由2χ 107個融合瘤細胞（純系 110-7、純系110-2 8)製備總RNA。將總RNA在 200 μl無RNase 水中溶離且於- 80°C下儲存。用M-MLV逆轉錄酶（Promega， Madison，WI)、寡-dT引子、PCR核苷酸混合物（dNTP)及 RNAsin抑制劑（Roche, Mannheim)進行第一股cDNA合成。 將5 pg總RNA與1 μΐ寡-dT引子（0.5 pg/μΐ)混合，並添加無 RNase水至最終體積為36 μΐ。將混合物在70°C下培育10分鐘 並接著在冰上儲存。在冰上時添加以下試劑：1 〇 μΐ 5 xRT 緩衝液、2 μΐ dNTP(各 10 mM)、2 μΐ RNasin及 1 μΐ M-MLV 逆轉錄酶。在42°C下將反應進行1小時。

以40 μΐ之總體積使用4 μΐ cDNA模板、2 μΐ各自為10 μΜ 之各引子（見下文及用於總結之表10及11)、20 μΐ 2xQiamix(含有緩衝液、dNTP、TAQ聚合酶）及 1 μΐ Pwo DNA 103493.doc -55- 1359153 聚合酶組裝PCR反應。將PCR條件設置為35個循環：94°C下 歷時15秒，55°C下歷時20秒且72°C下歷時30秒。將PCR產物 次選殖入pCR4-TOPO-Zero(Stragagene，La Jolla, Ca.)選殖 載體中。使用引子 MV432(SEQ ID NO: 21)、MV433(SEQ ID NO: 22)、MV434(SEQ ID NO: 23)、MV435(SEQ ID NO: 14) 及載體DNA中之標準引子，由各反應挑選若干純系且以 SolviasAG(Basel)减定核苷酸序列。 使用引子對MV416(SEQ ID NO: 15)/#265(SEQ ID NO: 16)及 MV418(SEQ ID NO: 17)/#265(SEQ ID NO: 16)擴增編 碼重鏈之cDN A。該等引子覆蓋與以下重鏈胺基酸位置對應 之核苷酸序列：MV416位置-19/-13(訊號肽）；MV418位置 + 1/+7 ; #265位置+253/+259。位置+1為成熟蛋白質之第一 胺基酸。 使用引子對MV417(SEQ ID NO: 18)/#223(SEQ ID NO: 19)及 MV419(SEQ ID NO: 20)/#223(SEQ ID NO: 19)擴增編 碼輕鏈之cDNA。該等引子覆蓋與以下輕鏈胺基酸位置對應 之核苷酸序列：MV417位置-20/-14(訊號肽）；MV4 19位置 + 1/+7 ; #223位置+210/+215。此方法允許對各免疫球蛋白 鏈進行兩個獨立PCR擴增，從而導致兩個獨立建立之DNA 序列。 結果及討論 藉由DNA定序顯示來自於兩個融合瘤（110-7及110-28，見 上表4)之編碼重鏈及輕鏈之經選殖PCR產物的特徵。使用5 及6個獨立序列以組裝輕鏈及重鏈序列。輕鏈cDNA均相同 103493.doc -56- ⑧ 1359153 且覆蓋整個編碼序列（胺基酸位置-20至+215)。重鏈cDNA 在每一 cDNA中均具有2個不同的錯配。此等被由起始密碼 子延伸至恆定區1後之鉸鏈區末端（胺基酸位置-19至+238) 的最终序列排除在外。兩個融合瘤之序列相同。選擇由融 合瘤110-28所獲得之cDNA並用於所有進一步之表現工 作。SEQ ID NO: 7(AIN457 之重鏈之 cDNA)、SEQ ID NO: 8(AIN457之重鏈之胺基酸序列）、SEQ ID NO: 9(AIN457之 輕鏈之cDNA)及SEQ ID NO: 10(AIN457之胺基酸序列）顯示 編碼AIN457之輕鏈及重鏈之DNA序列，以及用於PCR擴增 及DNA定序之引子之蛋白質序列及位置。該等DNA序列已 經在PlasNova中登記，入藏登記號NPL003 689用於重鏈且入 藏登記號NPL003690用於輕鏈。 藉由cDNA選殖所發現之胺基酸序列與先前藉由經純化 之免疫球蛋白重鏈及輕鏈之埃德曼降解所獲得的胺基酸序 列相同，表明已選殖正確之cDNA。 表10·輕鏈之核苷酸及胺基酸序列

編碼可變域之胺基酸序列為黑體且以標有下劃線。表明 用於選殖之寡核苷酸引子（標有下劃線）。 KV417 ACCATCGAAACtXC^iSCGGAGCTrCTCrTCCTCCTGCrACTCTCaCTOCCAGAT^CCACC

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•223 GTCCCSGACTCGAGCOGCCagrCTXTCTOSAAGrTCTCCCCXCTCACAATC 〇OtSSiVt KS?NR6&C* -

表11.重鏈之核苷酸及胺基酸序列 編碼可變域之胺基酸序列為黑體且標有下劃線。表明用 於選殖及定序之寡核苷酸引子。

lOTlfi ACamaSAATrQCGOCTGAGCTOGGTnTCCTTGTTCCTATTTTAGftAgGTGTCCACTOT 1 --------+-------------------4 €0 tgstaccitaaccccsmtcgacccaaaag<mcaacgataaaatcttccacacgtoaca TMELGLSWVPLVAXLPOVKC -

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GGCCGACAGGATGTCAGGAGTCCTGAGATGAGGGAGTCGTOGCACCACrCGCACaaGAGG • 60- 103493.doc 1359153 £尽3_ •‘ , _--··_+··-------+--------------------呤·_····‘_♦ 7切 取43S TCQ^COAftCCCGTOgOTCtQG^TCtAGACPTTOCACrrACTCrrCGGgrqmVTOOTyL·

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GTCGA〇yW3ACAGTTQAGCCCAAXTCITGTCACAAAACrCACACftTGCCCACCOTOCCCA

72X 780 fiiS €^^?ΰΤΤ〇Γ^ΐ〇Αλ〇Τ〇ΧΜΤ·ΓΑ5Α&α^ΤΓΟΤΓΤΓ〇Α〇Τ〇ΤσΤΛ€005Τΰσα^3〇(Χη7

781 --- 7e3 ATT 實例4 :抗人IL-17A單株抗體AIN457之Fab片段的三維結構 為確定互補判定區（CDR)之構形及AIN457之抗原結合位 點之結構，產生Fab片段、將其結晶且藉由蛋白質結晶學確 定其X射線結構。 方法：藉由自整個抗體之木瓜酵素裂解產生NVP-AIN457 之Fab片段，且以蛋白質a層析法接著以尺寸排除層析法進 行純化。接著在 10 mM Tris-HCl pH 7.4、25 mM NaC卜 5 mM TCEP中藉由超濾將經純化之物質濃縮至20 mg/ml。在19°C 下於懸滴中，以蒸氣擴散技術由2.0 Μ硫酸銨、5% PEG 400、0.1 M Na MES pH 6.5中生長晶體。其在空間群P2A2! 中’具有單位晶胞尺寸&=9〇 3 A、b=106.7 A、c=131.4 A且 每一不對稱單位中有2個Fab分子。在收集X射線資料之前， 使用 Lusty(J. Appl. Cryst· (1999) 32，106-112)之方法將 AIN457 Fab之單晶與戊二醛交聯並接著轉移至含有2.0 Μ Li2S04、20/〇 PEG 400及 0.1 M Na MES pH 6.5之溶液中。隨 後將結晶固定於冷凍回壞中並在95 K下急速冷凍以用於資 料收集。記錄1 80個對應於各自1.0度振盪之繞射影像。繞射 103493.doc -61 - ⑧. 1359153 資料以HKL程式組處理。藉由分子置換將結構確定至2.5 A 之解析度。接著藉由扭轉角動力學及使用程式CNX之能量 最小化法改進該結構。 結果：兩個AIN457 Fab分子係存在於晶體之不對稱單位 中，其中包含在蛋白質-蛋白質中的兩個Fab分子之H-CDR3 回環與對稱相關之Fab的H-CDR3回環相接觸。兩個Fab分子 表現不同的彎角，但具有另外基本相同之CDR回環構形（見 關於CDR回環之胺基酸序列之表12)。H-CDR1回環採用預 ® · 期之HI: 1典型結構，而H-CDR2回環之構形與典型結構 H2:3A之構形匹配。AIN457抗體之H-CDR3回環格外長，其 包含介於Kabat位置94(Arg H98)與101(Asp H115)之間的18 個殘基。其顯示典型的凸出軀幹結構，該結構係由介於位 置94之Arg侧鏈（Arg H98)與位置H101之Asp缓酸醋基團 (Asp H115)之間的鹽橋及介於Trp H117之側鏈與Phe H114 之主鏈羰基之間的Η-鍵結相互作用得以穩定。H-CDR3回環 _ 之頭部具有長的扭曲β髮夾結構，在其基部具有第二β凸出 且在其頂部具有Γ型β回轉。ΑΙΝ457 H-CDR3回環之顯著特 徵為其極高之芳族殘基含量：6個酪胺酸、2個色胺酸、1個 苯丙胺酸。由於所有其他CDR回環各自貢獻1個以上之酪胺 酸，所以ΑΙΝ457之抗原組合位點擁有總共11個酪胺酸。 L-CDR1及L-CDR2回環之構形分另ij對應於典型結構L1:0及 L2:l。與H-CDR3相比，L-CDR3回環較短（6個殘基）且顯示 出普遍觀察到之典型結構L3 :1，在其頂端具有順式脯胺酸 (Pro L96)，在Kabat位置90具有麩醯胺酸（Gin L91)且在 103493.doc -62-

1359153

Kabat 位置 97具有蘇胺酸（ThrL98)。然而，AIN457 L-CDR3 回環之極異常特徵在於順式脯胺酸（Cys L97)後方存在有半 胱胺酸殘基。Cys L97之側鏈在位於VL-VH介面且由Trp H112、Tip H47及Tyr L92殘基界定之淺凹陷處的底部。 表12 :

輕鏈 〇 L-CDR1 Kabat定義 R-A-S-Q-S-V-S-S-S-Y-L-A Chothia/ X射線定義 R-A-S-Q-S-V-S-S-S-Y-L-A 〇 L-CDR2 Kabat定義 G-A-S-S-R-A-T Chothia/ X射線定義 G-A-S-S-R-A-T 〇 L-CDR3 Kabat定義 Q-Q-Y-G-S-S-P-C-T Chothia/ X射線定義 Q-Q-Y-G-S-S-P-C-T 重鏈 〇 H-CDR1 Kabat定義 N-Y-W-M-N Chothia/ X射線定義 G-F-T-F-S-N-Y-W-M-N o H-CDR2 Kabat定義 A-1-N-Q-D-G-S-E-K-Y-Y-V-G-S-V-K-G Chothia/ X射線定義 A-1-N-Q-D-G-S-E-K-Y-Y 〇 H-CDR3 Kabat定義 D-Y-Y-D-1-L-T-D-Y-Y-l-H-Y-W-Y-F-D-L Chothia/ X射線定義 C-V-R-D-Y-Y-D-I-L-T-D-Y-Y-1-H-Y-W- Y-F-D-L-W-G 表1 : AIN457單株抗體之高變區之胺基酸序列係基於 Kabat定義且使用Chothia及合作者之方法以X光分析來確 定。以黑體突出之胺基酸為CDR回環的一部分，而以簡單 字體所顯示之彼等為抗體框架之一部分。 【圖式簡單說明】 圖1.AIN457 Fab之X光結構 突出顯示互補決定區之AIN457 Fab(C□痕跡）可變域之特 103493.doc -63 · 1359153 寫圖。為說明AIN457之抗原組合位點格外富有酪胺酸殘基 之事實，顯示所有由CDR回環所貢獻之酪胺酸側鏈。亦顯 示（箭頭）在Vl-Vh介面之Cys L97之側鏈。 圓2.AIN457 Fab之X光結構，全圖 AIN457 Fab之凡得瓦爾表面表示圖。輕鏈及重鏈分別塗 為淺灰及深灰。CDR回環以不同顏色突出。注意伸出抗體 之抗原組合位點之所要回環H-CDR3回環的存在。

103493.doc 64- 1359153 <210> 2 <211> 17 <212> PRT <213> 人工 <220> <223> CDR2 of AIN457 <220> <221> DOMAIN <222> (1) " (17)

<223> CDR2 = AIM57之重鏈之高變區2 <400> 2

Ala lie Asn Gin Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Tyr Val Gly Ser Val Lys 15 10 15

Gly <210> 3 <211> 18 <212> PRT <213> 人工 <220> <223> CDR3 Of AIN457

<220> 103493 1359153 <221> DOMAIN <222> ⑴"（18> <223> CDR3 = AIN457之重鐽之髙變區3 <400> 3

Asp Tyr Tyr Asp lie Leu Thr Asp Tyr Tyr lie His Tyr Trp Tyr Phe 1 5 10 15

Asp Leu

<210> 4 <211> 12 <212> PRT <213> 人工 <220> <223> CDR11 of AIN457 <220> <221> DOMAIN <222> (1). • (12) <223> CDRl， =AIN457之輕鍵之髙變區1 <400> 4 Arg Ala Ser Gin Ser Val Ser Ser Ser Tyr Leu Ala 1 5 10

103493 1359153 <210> 5 <211> 7 <212> PRT <213> 人工 <220> <223> AIN457 之 CDR2

<220> <221> DOUGIN <222> (1) . ·⑺ <223> CDR2’ = AIN457之輕鍵之髙變區 <400> 5 Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr 1 5

<210> 6 <211> 9 <212> PRT <213> 人工 <220> <223 > CDR3' of AIN457 <220> <221> DOMAIN <222> (1) .. (9) <223> CDR3’ = AIN457輕鏈之高變區3 103493 -4- 1359153 <400> 6

Gin Gin Tyx Gly Ser Ser Pro Cys Thr 1 5 <2X0> 7 <211> 381 <212> DNA <213> 智人

<220> <221> CDS <222> (1).. (381)

<223> AIN457之重鏈域之DNA <400> 7 gag gtg cag ttg gtg gag tct ggg gga ggc ttg gtc cag cct ggg ggg 48

Olu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Qly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15

tcc ctg aga etc tcc tgt gca gcc tct gga ttc acc ttt agt aac tat 96

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 tgg atg aac tgg gtc ege cag get cca ggg aaa ggg ctg gag tgg gtg 144

Trp Met Asn Trp Val Arg Gin Ala Pro Qly Lye Qly Leu Glu Trp Val 35 40 45 103493 1359153 gcc gcc ata aac caa gat gga agt gag aaa tac tat gtg ggc tct gtg 192

Ala Ala lie Asn Gin Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Tyr Val Gly Ser Val 50 55 60 aag ggc cga ttc acc ate tcc aga gac aac gcc aag aac tea ctg tat 240

Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 ctgr caa atg aac age ctg aga gtc gag gac aeg get gtg t&t tac tgt 288

Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Val Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 gtg agg gac tat tac gat att ttg acc gat tat tac ate cac tat tgg 336

Val Arg Asp Tyr Tyr Aep lie Leu Thr Asp Tyr Tyr lie His Tyr Trp 100 105 110 tac ttc gat etc tgg ggc cgt ggc acc ctg gtc act gtc tec tea 381

Tyr Phe Asp Lbu Trp Gly Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 125

<210> B <211> 127 <212> PRT <213> 智人 <400> 8

Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 103493 1359153 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser A&n Tyr 20 25 30

Trp Met Asn Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45

Ala Ala lie Asn Gin Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Tyr Val Gly* Ser Val 50 55 60

Lye Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyx 65 70 75 80

Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Val Olu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Val Arg Asp Tyr Tyr Asp lie Leu Thr Asp Tyr Tyr lie His Tyx Trp 100 105 110

Tyr Phe Asp Leu Trp Gly Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 9 <211> 327 <212> DNA 103493 1359153 <213>智人 <220> <221> CDS <222> (1)-.(327)

<223> AIN457之輕鏈之可變部分的DNA <400> 9 gaa att gtg ttg acg cag tct cca ggc acc ctg tct ttg tct cca ggg 48

Olu lie Val Leu Thr Gin Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

gaa aga gcc acc etc tcc tgc agg gcc agt cag agt gtt age age age 96

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser GXn Ser Val Ser Ser Ser 20 25 30 tac tta gcc tgg tac cag cag aaa cct ggc cag get ccc agg etc etc 144

Tyr Leu Ala Trp Tyx Gin Gin Lys Pro Gly Qizi Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45

ate tat ggt gca tec age agg gcc act ggc ate cca gac agg ttc agt 192

He Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly lie Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 ggc agt ggg tct ggg aca gac ttc act etc acc ate age aga ctg gag 240

Gly Ser Gly Ser Qly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Arg Leu Glu 65 70 75 80 103493 1359153 cct gaa gat ttt gca gtg tat tac tgt cag cag tat ggt age tea ccg 288

Pro Glu Asp Pile Ala Val Tyr Tyr Cys Gin Gin Tyr Gly Ser Ser Pro 85 90 95 tgc acc ttc ggc caa ggg aca ega ctg gag att aaa ega 327

Cys Thr Phe Gly Gin Gly Thr Arg Leu 6lu lie Lys Arg 100 105

<210> 10 <211> 109

<212> PRT <213>智人 <400> 10

Glu lie Val Leu Thr Gin Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 15 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gin Ser Val Ser Ser Ser 20 25 30

Tyr Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gla Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45 lie Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly lie Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 103493 -9-

1359153

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Arg lieu Glu 65 70 75 80

Pro Glu Aep Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gin Gin Tyr Gly Ser Ser Pro 85 90 95

Cys Thr Phe Qly Gin Oly Thr Arg Leu Glu lie Lys Arg 100 105

<210> 11 <211> 10 <212> PRT <213> 人工 <220> <223> CDRl-x of AIN457 <220> <221> DOMAIN <222> (1) " (10)

<223> CDRl-x = AIN457之重鏈之高變域x <400> 11

Gly Phe Thr Phe Ser iVsn Tyr Trp Met Asn 15 10 <210> 12 <211> 11 103493 -10·

1359153

<212> PRT <213> 人工 * <220> <223> AIN457 之 CDR2-X <220> <221> domain <222> (1)..(11)

<223> CDR2-X = AIN457之重鏈x之高變域 <400> 12

Alet lie Asn Glzx Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Tyr 15 10 <210> 13 <211> 23 <212> PRT <213> 人工 <220> <223> CDR2-X = AIN457重鏈x之髙變域

<220> <221> domain <222> (1)..(23) <223> CDR3-X = AIN457 重鏈之髙變域 x <400> 13 -11 - 103493 1359153

Hia Tyx 15

Cys Val Arg Asp Tyr Tyx Asp lie Leu Thr Asp Tyr Tyr lie 15 10

Trp Tyx Phe Asp Leu Trp Gly 20 <210> 14 <211> 20 <212> DNA <213> 人工

<220> <223>用於選殖AIN457之重鏈的引子 <220> <221> primer—bind <222> (1) . . (20) <223> MV432 <400> 14 gactattacg atattttgac

<210> 15 <211> 20 <212> DNA <213>人工 <220> <223>用於選殖AIN457之重鏈的引子 -12- 103493 1359153 <220> <221> primer_bind <222> (1) ..(20) <223> MV433 <400> 15 gcctccacca agggcccatc 20

<210> 16 <211> 20 <212> DNA <213> 人工 <220> <223>用於選殖AIN457之重鏈的引子 <220> < 2 21> primer一bind <222> (1) . . (20) <223> MV434 <400> 16 tggttcccgg gtagccagaa 20 <210> 17

<211> 20 <212> DNA 103493 -13 -

1359153 <213>人工 <220> <223>用於選殖AIM57之重鏈的引子 <220> <221> primer一bind <222> (1). . (20) <223> MV435 <400> 17

ccacctgttc tctcaactcg 20 <210> 18 <211> 24 <212> DNA <213>人工 <220>

<223> AIN457 重鏈之 PCR

<220> <221> primer一bind <222> (1)“（24) <223> MV416 <400> 18 accatggaat tggggctgag ctgg 24 103493 -14-

1359153

<210> 19 <211> 26 <212> DNA. <213> 人工 <220> <223> AIN457 重鏈之 PCR <220> <221> primer_bind <222> (1}..(26}

<223> #265 <400> 19 gagtgtgtac gggtggcacg ggtatt 26 <210> 20 <211> 21 <212> DKA. <213>人工

<220> <223> AIN457 重鏈之 PCR <220> <221> primer_bind <222> (1)..(21) <223> MV418 -15 - 103493 1359153

<400> 20 gaggtgcagt tggtggagtc 21 <210> 21 <211> 24 <212> DNA <213> 人工 <220> <223> AIN457輕鏈之PCR <220> <221> primer_bind <222> (1)..(24) <223> MV417 <400> 21 accatggaaa ccccagcgga gctt 24 <210> <211> <212> <213> <220> <223> 22 22 DNA 人工

AIN457輕鏈之PCR 103493 16- <220> 1359153 <221> primer_bind <222> (1) .. (22) <223> #223 <400> 22 gaagttgtcc cctctcacaa tc 22 <210> 23

<211> 21 <212> DNA <213>人工 <220> <223> AIN457 輕鏈之 PCR <220> <221> primer 一bind <222> (1)..(21) <223> MV419

<400> 23 gaaattgtgt tgacgcagtc t 21 103493 -17-

Claims (1)

1. 第094126471號專利申請案 中文申|蒼_專才彳故圍替換本(丨⑽年9 十、申請專利範圍： ，一 1. 一種IL-17結合抗體或其片段，其包含重鏈（VH)及輕鏈 (VL)可變域；其中該IL-17結合抗體或其片段包含至少一 個抗原結合位點，該位點包含： a) 免疫球蛋白重鏈可變域（VH)，其依次包含高變區 CDR1、CDR2及CDR3，該CDR1具有胺基酸序列SEQ ID NO: 1，該CDR2具有胺基酸序列SEQ ID NO: 2 且該CDR3具有胺基酸序列SEQ ID NO: 3 ;或包含其 直系CDR等同物；及 b) 免疫球蛋白輕鏈可變域（VL)，其依次包含高變區 CDR1'、CDR2'及CDR3,，該CDR1，具有胺基酸序列 SEQ ID NO: 4，該CDR2’具有胺基酸序列SEQ ID NO: 5且該CDR3’具有胺基酸序列SEQ ID NO: 6 ;或 包含其直系CDR'等同物， 其中包含一或多個直系等同物之VH域與a)所指定之包含 CDR1、CDR2及CDR3之VH域具有至少95%之全部序列同 源性，且包含一或多個直系等同物之VL域與b)所指定之包 含CDR1·、CDR2·及CDR3·之VL域具有至少95%之全部序列 同源性，且其中包含一或多個直系等同物之IL-17結合抗 體或其片段在小於5 nM濃度下能抑制1 nM人IL-17之活性 的50%，其中該抑制活性係藉由人皮膚纖維母細胞中 hu-IL-17誘導之IL-6產生而量測，且 其中高變區係依據Kabat定義。 2. —種IL-17結合抗體或其片段，其包含重鏈（VH)及輕鏈 103493-1000923.doc 1359153 (V〇可變域；其中該IL-17結合抗體或其片段包含至少一 個抗原結合位點，該位點包含： a) 免疫球蛋白重鏈可變域（VH)，其依次包含高變區 CDRl-x、CDR2-X 及 CDR3-X，該 CDRl-x具有胺基酸 序列SEQ ID NO: 1卜該CDR2-X具有胺基酸序列SEQ ID NO: 12且該CDR3-X具有胺基酸序列SEQ ID NO: 13 ;或包含其直系CDR-x等同物；及 b) 免疫球蛋白輕鏈可變域（VL)，其依次包含高變區 CDR1'、CDR21及CDR3'，該CDR1，具有胺基酸序列 _ SEQ ID NO: 4，該CDR2·具有胺基酸序列SEQ ID NO:5且該CDR3'具有胺基酸序列SEQIDNO:6;或 包含其直系CDR'等同物， 其中包含一或多個直系等同物之VH域與a)所指定之包含 €0尺1-乂、€0112-\及€0113-乂之¥}^域具有至少95%之全部序 列同源性，且包含一或多個直系等同物之VL域與b)所指定 之包含CDR1'、CDR2'及CDR3'之VL域具有至少95%之全部 序列同源性，且其中包含一或多個直系等同物之IL-1 7結 籲 合抗體或其片段在小於5 nM濃度下能抑制1 nM人IL-17之 活性的50%，其中該抑制活性係藉由人皮膚纖維母細胞中 hu-IL-17誘導之IL-6產生而量測，且 其中高變區係依據Chothia定義。 3. 如請求項1或2之IL-17結合抗體或其片段，其為人抗體。 4. 一種IL-17結合抗體或其片段，其包含至少一個抗原結合 位點，該位點包含以下任一： 103493-1000923.doc S 1359153 (a) 具有與SEq id NO: 8中所顯示之序列至少95%同源之 胺基酸序列的第一域’其始於位置1之胺基酸並終止 於位置127之胺基酸；或 (b) 具有與SEQ ID NO: 8中所顯示之序列至少95%同源之 胺基酸序列的第一域，其始於位置丨之胺基酸並終止 於位置127之胺基酸，及具有與SEq ID N〇: 1〇中所顯 示之序列至少95%同源之胺基酸序列的第二域，其始 於位置1之胺基酸並終止於位置1〇9之胺基酸， 且在小於5 nM濃度下能抑制1 nM人il-17之活性的500/〇， 其中該抑制活性係藉由人皮膚纖維母細胞中1^_虬_17誘 導之IL-6產生而量測。 5. —種DNA構築體，其編碼如請求項1至4中任一項之 結合抗體或其片段β 6. 7. 8. 9. 一種能在原核或真核細胞株中複製的表現載體其包含 至少一個如請求項5之DNA構築體。 一種在原核或真核細胞株中複製的兩個相容表現載體 組，一載體編碼根據請求項丨至3中任—項之至少一個 m結合抗體或其片段之Vh域’及—栽體編碼根據請求 項1至3中任一項之至少一個IL·17結合抗體或其片段之vL 域。 -種製造IL-17結合抗體或其片段之方法，其包含⑴培養 以如請求項6之表現載體或如請求項7之表現載體組轉型 的生物體，並（ii)自該培養物中回收該IL-17結合分子。 一種如請求項⑴中任—項之IL_17結合抗體或其片段之 103493-1000923.doc 1359153 用途，其係用以製造藥劑。 10. -種如請求項1至4之IL-17結合抗體或其片段之用途，其 係用以製造用於治療IL-17介導之疾病或病症的藥劑。 11. 如請求項10之用途，其中該疾病或病症為骨關節炎、類 風濕性關節炎、骨質疏鬆症或其他發炎性關節炎性皮疹。 12. —種醫藥組合物，其包含如請求項1至4中任一項之IL-17 結合抗體或其片段與醫藥學上可接受之賦形劑、稀釋劑 或載劑。 13. 如請求項1之IL-17結合抗體或其片段，其包含： φ a) 免疫球蛋白重鏈可變域（VH)，其依次包含高變區 CDRKDR2及CDR3,該CDR1具有胺基酸序列SEQ ID NO: 1，該CDR2具有胺基酸序列SEQ ID NO: 2且 該CDR3具有胺基酸序列SEQ ID NO: 3 ;及 b) 免疫球蛋白輕鏈可變域（VL)，其依次包含高變區 CDR11、CDR2'及CDR3·，該CDR1·具有胺基酸序列 SEQ ID NO: 4，該CDR2'具有胺基酸序列SEQ ID NO: 5且該CDR3'具有胺基酸序列SEQ ID NO: 6。 _ 14. 如請求項2之IL-17結合抗體或其片段，其包含： a) 免疫球蛋白重鏈可變域（VH)，其依次包含高變區 CDRl-x、CDR2-X 及 CDR3-X，該 CDRl-x 具有胺基酸 序列SEQ ID NO: 11，該CDR2-X具有胺基酸序列SEQ ID NO: 12且該CDR3-X具有胺基酸序列SEQ ID NO: 13 ;及 b) 免疫球蛋白輕鏈可變域（VL)，其依次包含高變區 103493-1000923.doc S 1359153 CDRl·、CDR2·及CDR3,，該CDR11具有胺基酸序列 SEQ ID NO: 4，該CDR2·具有胺基酸序列SEQ ID NO: 5且該CDR3'具有胺基酸序列SEQ ID NO: 6。 15.如請求項13或14之IL-17結合抗體或其片段，其為人抗 體。

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