TW457231B - Inhibition of matrix metalloproteases by 2(ω-aroylalkyl)-4-biaryl-4-oxobutyric - Google Patents

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457231 經濟部中央標隼局員工消費合作社印製 A 7 - 一— B7 五、發明説明（1 ) 發明背景 ' 發明範圍 ：— 本發明係關於酶抑制劑，更特定地説，'是關於新穎的對 抑制金屬蛋白酶有用的2 - ( ω -芳醯烷基）-4 -聯芳基-4 -氧基 丁酸化合物或其衍生物。 相關技藝説明 - 基質金屬蛋白酶（a.k.a.基質金屬内切蛋白酶，或稱MMPs) 是鋅内切蛋白酶系，包括，但不限於，間質膠原酶 a.k,a.MMP-1)，溶基質素（a.k.a.蛋白聚糖酶，轉移素（transin) 或MMP-3)，明膠酶A(a.k,a. 72 kDa-明膠酶或MMP-2)及明 膠酶B(a.k.a. 95 kDa-明膠酶或MMP-9)。此等MMPs係由各 種細胞，包括纖維細胞及軟骨細胞，與稱作TIMPs(金屬蛋 白酶的組織抑制劑）天然蛋白質性質的抑制劑一起分泌出 來。 所有此等MMPs都能凌壤關節軟骨或基底膜的結缔组織成 分每一種MMP都是以非活性的酶原形式分泌出，在發揮 其蛋白質分解活性前必須先行裂解。除了其基質破壞作用 外，有些MMP。如MMP-3，曾用作其他MMPs(如MMP-1及 MMP-9)的活體内激活劑（Ito, et al., Arch. Biochem. Buophys. 267. 211, 1988 ； Ogata, et al., J. Biol. Chem. 267. 3581， 1992)。所以過量的MMP-3可激發一連串的蛋白質分解活 動。因之，特定的MMP-3抑制劑應能限制其他不直接受此 抑制劑作用的MMPs的活動。 也有人報告，MMP-3能分裂，因而使其他蛋白酶，如彈 -4- ——.'----裝-- 1-\/ (請先閲讀背面之注意事項再>寫本頁)

—線 T 本紙張尺度逋用中國國家標準（CNS ) A4規格（2!〇X297公釐） 457231 A7 B7 經濟部中央裙準局貝工消費合作社印製 五、發明説明（2 ) 性蛋白酶；，的内生性抑制劑不被活化（Winyard，et al.，FEBS Letts. 2ϋ，91，1991) 〇是以MMP-3抑制劑能藉其改變内生 性抑制劑含量而影響其他破瓌性蛋白酶的活性。 一般認爲有些疾病係由過量的或不需要的基質破壞性金 屬蛋白酶活性所引起，專由MMPs與TIMPs的比例不平衡所 引起。此等疾病包括.：a)骨性關節-炎（Woessner, et al·，J. Biol. Chem., 259, 3633，1984 ; Phadke，J. Rheumatol. 10. 852， 1983) ’ b)類風濕關節炎（Mullins, et al‘，Biochim. Biophys. Acta 695. 117, 1983 ； Wolley, et al., Arthritis Rheum. 20, 1231, 1977 ； Gravallese, et al., Arthritis Rheum. 34：, 1076, 1991)，c)化膿性關節炎（Williams, et al.，Arthritis Rheum. 33. 533，1990)，d)腫瘤轉移（Reich, et al.，Cancer Res·, 48., 3307, 1988, and Matrisian, et al., Proc. Nat'l. Acad. Sci., USA 83_, 9413，1986)，e)牙周病（Overall，et al·, J. Peridontal Res. 22., 81，1987)，f)角膜潰癌（Burns, et al.，Invest. Ophthalmo ； Vis. Sci. 30., 1569，19'89)，g)蛋白尿（Baricos，et al., Biochem. J. 254, 60^ 1988)，h)由粥狀動脈硬化斑破裂 引起的冠狀動脈栓塞（Henney，et al.，Proc. JMat’l· Acad. Sci.， USA M，8154, 1991)，i)動脈瘤性主動脈疾病（Vine, et al.，:: Clin. Sci. 8i, 233, 1991)，j)生育控制（Woessner，et al.， Steroids ,51，491，1989)，k)營養不.良性表皮鬆弛大疱 (Kronberger, et al., Invest. Dermatol. 79., 208，1982)，及 1) 關節受傷後發生的退行性軟質損失，m)導致發炎反應的疾 病，由MMP活性引起的骨質減少，η)顳頷關節疾病，〇 )神 -5- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4il格（210X297公釐） 批衣— !- (請先閲讀背面之注意事項再本頁)

、1T τ u 457231 經濟部中央標準局員X消費合作社印製 五、發明説明（3 ) 經系統脱髓鞘疾病（chantry, et al.，J. Neutrocliem. 50., 688, 1988)。 關節疾病尤需新的治療。骨性關節炎（OA)，類風濕關節 炎（RA)及化膿性關節炎的初發性官能病變即爲關節軟骨損 失因而失去關節功能所致。雖則非類固醇藥物（NSAIDs)能 控制疼痛和腫脹，現在尚沒有明顯的醫藥劑能預防或減緩 此種軟骨損失。此等疾病的最後結果是完全失去關節功 能，只能藉關節置換手術治療。MMP抑制劑期忘能停止或 倒轉軟骨損失的進行，避免或延緩外科干擾。 在腫瘤轉移過程的幾個階段中蛋白酶是重要因素。於此 過程中，基底膜結構性蛋白質的蛋白酶解降解使原發部位 .的腫瘤得以擴散，由原發部_位侵入第二部位。而且，腫瘤 所致的血管生成是腫瘤生長所需，也有賴於蛋白酶解組織 的再塑。以各種類型的蛋白酶作交叉感染實驗，顯示基質 金屬蛋白酶，特別是明膠酶A及B (分別爲MMP - 2及MMP-9) 在此過程中扮演主要角色。有關此方面的參考見：Mullins, et al.; Biochim, Biophys. Acta 695, 177，1983 ； Ray. et al., Eur. Respir. J. 7, 2062, 1994 ; Birkedal-Hansen, et al., Crit. Rev. Oral Biol. Med.生，197, 1993。 此外，實驗（Moses, et al.，Science 248, 1408，1990)還顯 示，以天然的基質金屬蛋白酶抑制劑TIMP-2(—種蛋白質） 對細胞外基質降解的抑制可停止癌的生長（DeClerck, et al., Cancer Res. 701，1992)，並且顯示，TIMP-2抑制腫瘤引 起的血管生成。參考：DeClerck，et al.，Ann. Ν·Y. Acad. Sci. -6- (請先閲讀背面之注意事項再#寫本頁) 一 本紙張尺度適用中國國家標準（匚抓）八4規格（210\297公釐） 45723 1 at … -— B7 經濟部中央榇準局貝工消費合作社印製 五、發明説明（4 ) m，222, 1994。並且進一步顯示，於裸鼠，在腹腔内給予 合成的基質金屬蛋白酶抑制劑巴提瑪斯（batimastat)時，抑 制人結腸腫瘤的生長及原位擴散（Wang, et al,，Cancer Res. ϋ, 4726, 1994)，並延長帶有人卵巢癌移植物的鼠的存活期 (Davies et al., Cancer Res. 13, 2087, 1993)。有關此化合物 及相關化合物的使用見Brown，et al.，-WO-9321942 A2。 有幾個專利及專利申請聲稱金屬蛋白酶抑制劑在滯缓腫 瘤轉移、促使腫瘤退縮、抑制腫瘤細胞繁殖、減緩或預防 骨性關節炎所致的軟骨損失上的用途，或治療上述其他疾 病上的用途（例如，Levy，et al·，WO-9519965 Al : Beckett, et al., WO-9519956 Al ： Beckett, et al., WO-9519957 Al ； Beckett, et al., WO-9519961 Al ； Brown, et al., WO-9321942 A2 ； Crimmin, et al., WO-9421625 Al ； Dickens, et al., U.S. Pat. No. 4,599,361 ； Hughes, et al., U.S. Pat. No. 5,190,937 ； Broadhurst, et al., EP 574758 Al ； Broadhurst, et al,，EP 276436 ; and Myers，et al., EP 520573 Al)。此等專 利較佳的化合物有一肽架（backbone)，其一端有鋅複合基團 (異羥肘酸，硫醇，羧酸或以亞磷爲基礎的酸），並有各種 支鏈，這都是見於天然胺基酸的，並有新穎官能基團°此 類小肽常不易吸收，經口給予時生物利用率較低。而且這 些化合物都是很快蛋白酶曱代謝的，是以其半衰期很短。 舉例説，如巴提瑪斯（batimastat)，Brown，et al.，WO-9321942 A2所述的 化合物 ，只 能作 腹腔内 給予。 有些3-二苯醯基丙酸及4-二芳醯基丁酸在文獻中稱爲抗 (讀先閱讀背面之注1^項再¥寫本頁) 裝' 訂 -線 本紙浪尺度適用中國國家標準（CNS〉A4規格（210X297公釐） 4572 31 A7 - 一一 B7 五、發明説明（5 ) 發炎劑，抗血小板凝固劑，抗炎劑，抗增生劑，降血脂 劑，抗風濕劑，止痛劑，及降血膽固醇劑‘。無一例曾述及 對MMP的抑制，供作上述治療。有些有關的化合物也用作 k (請先閲讀资面之注意事項再：^寫本頁) 液體結晶的中間體。 特別是，Tomcufcik，et al.，US、Pat, No. 3,784,701 聲稱特 定的經取代的苯曱醯基丙酸用於治療發炎與疼痛。此等化 合物包括下面所示的3 -二苯磕基丙酸（a.k. a.芬布芬 (fenbufen)) °

*^τ 經濟部中央標準局員工消費合作社印製

Child，et al.，J. Pharm. Sci.,紐，466; 1977説明了幾種芬布 芬類以物的構造與活性間的.關係。此等化合物包括二苯基 環經取代的化合物或丙酸部分以苯基、._素、羥基或曱基 取代的化合物，或羧酸或羰基官能基團轉化而成的各種化 合物。但並未述及含4、經取代的，二苯基及經取代的丙酸部 分同時出現於一分子内的化合物。其説明中·認爲苯基（化合 物XLIX及LXXVII)及甲基（化合物XLVII)取代的化合物是非 活性的。 線 -8- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） 457231 A7 B7 五、發明説明（6 )

Kameo, et al., Chem. Pharm. Bull., 36. 2050, 19S8 及 Tomizawa，et al.，JP Pat· No. 62132825 A2説明一些烴取代 的3 -二苯醯基丙酸衍生物及其’類似物，包栝如下的化合 物，其中 X = H，4，-Br，4、C1，4，-CH3，或 2，-Br。雖説 明於丙酸部分有其他取代基的化合物，但此等化合物並不 含二苯基殘基。

(請先閲讀背面之注意事項再球寫本頁) -裝· 腺 經濟部中央標準局員工消費合作社印製

Cousse, et al., Eur. J. Med. Chem., 22., 45，1987説明如下 的以甲基.及亞曱基取代的3 -二苯醯基丙酸及3 -二苯醯基丙 婦酸，其中 X = H，Cl、Br，CH30，F，或NH。 -9- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2I0X297公釐） 4i7231 A7 B7 五、發明説明（7 )

也説明其對應的化合物，其中羰基以CH2OH或CH2取代。 Nichl, et al.，DE Pat. No. 1957750也説明一些上述亞甲基取 代的二苯醯基丙酸。 El-Hashash, et al., Revue Roum. Chim. 23_, 1581，1978説明 衍生自環氧-芳醯基丙.烯酸，包括如下的二苯基化合物 (未述及二苯部分發生取代的化合物）：

(請先聞讀背面之注意事項再贫寫本頁) 裝. 訂 線 經濟部中央標準局員工消費合作社印製

Kitarrmra，et al., JP專利60209539號説明一些供生產液晶 體作爲中間體的二苯基化合物，包括：

-10- 本紙張尺度適用中囪國家標準（CNS ) A4規格（2I0X297公釐） 457231 A7 B7 五、發明説明（8 ) 其中R·是1-10個碳原子的娱'基。於此等中間體中二苯基並 未被取代。 111)^3,6131.,1)五1>31.>1〇‘2854475使用_如下的化合物作爲 >· 中間體（二苯基未經取代）.： - OH Ο

Sammour, et al.，Egypt. J. Chem. ϋ_，311, 1972及Couquelet, et al。Bull. Soc. Chim. Fr. £，31,96，1971説明一些二坡基胺 基取代的二笨酸基两酸v包括： (請先聞讀背面之注意事項再^寫本頁) 經濟部中央標準局員工消费合作社印製 . OH Ο ' 其中H1，R2 =烷基，苄基，Η，'或與氮共同成爲嗎啉基。 二苯基也未經取代。 還有人揭示一系列含二苯基的羧酸，可以如下化合物説 明，此等化合物抑制神經内切肽酶（ΝΕΡ24.11)，爲束縛於 膜上的鋅金屬蛋白酶（Stanton，et al.，Bioorg. Med. Chem. L.ett.生，539，1994 ; DeLombaert，et al·，Bioorg· Med. Chem. Lett. 4, 2175, 1994 "> DeLombaert, et al.} Bioorg. Med. Chem. Lett. 5., 145, 1995 ； DeLombaert, et al., Bioorg. Med. Chem. I Lett. 5, 151, 1995) «

-11 - 本纸張尺度適用中國國家榇準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 457231 A7 B7 五、發明説明（9 )

PhO-P PhO

有人報告含二苯基乙基甘胺酸的N -羧基烷基衍生物，如 下所示，爲溶基質素-1 (MMP-3)，72kDa明膠酶（MMP-2)及 膠原酶的抑制劑（Durette, et al.，WO-9529689)。

COjH —-----^----辦衣-- {請先閲讀背面之注意事項再敁寫本頁)

'1T —線 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 現在需要一種有效的MMP抑制劑，此抑制劑與前此技藝 已有的以肽爲基礎的化合物相比，有較好的生物利用率及 生物安定性，並適於對抗特定的MMPs目標。此種化合物 爲本發明的目'的。 有效的MMP抑制劑的開發會提供對由過量MMP活性引起 的疾病的新治療，包括骨性關節炎，類風濕關節炎、化膿 性關節炎.，腫瘤轉移，牙週病，角膜潰瘙，及蛋白尿。文 -12- 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ 297公釐） 457231 經濟部中央橾隼局員工消費合作社印製 A7 — B7五、發明説明（10 ) 獻中曾説明幾種MMPs抑制劑，包括硫醇（Beszant，et al.，J Med· Chem.处，403.ί>，1993)，異輕肪酸（Wahl, et al·，Bioorg Med. Chem. Lett. 5., 349, 1995 ； Conway, et al., J. Exp. Med 182, 449, 1995 Porter, et al., Bioorg, Med. Chem. Lett. 4 2741, 1994 ； Tomczuk, et al., Bioorg. Med. Chem. Lett. 5. 343, 1995 ； Castelhano, et al.} Bioorg. Med. Chem. Lett. 5. 1415, 1995)，以亞磷爲基礎的酸（Bird, et al., J. Med. Chem 17, 158, 1994 ； Morphy, et al., Bioorg. Med. Chem. Lett. 4 2747, 1994 ； Kortylewicz, et al., J. Med. Chem. 33., 263 1990)，及叛酸（Chapman, et al.，J_ Med. chem, 36, 4293 1993 ； Brown, et al. J. Med. Chem. 37., 674, 1994 ； Morphy et al.5 Bioorg. Med. Chem. Lett. 4, 2747, 1994 ： Stack, et al. Arch. Biochem. Biophys. 287. 240, 1991 ； Ye, et al., J. Med Chem. ΖΤ_, 206, 1994 ； Crobelny, et al.; Biochemistry 24. 6145, 1985 ； Mookhtiar, et al., Biochemistry 27., 4299, 1988)。但此等抑制劑一般含有肽支架，由於吸收不佳及快 速蛋白酶解所致的半衰期短的關係，其經口生物活性較 低。是以需要一種改良的ΜΜΙ»抑制劑。 本發明概述 本發明提供有基質金屬蛋白酶抑制活性的化合物。此等 化合物可用於抑制基質金屬蛋白酶，所以可治療由MMP s 引起的疾病。因之，本發明也提供治療此類疾病的醫藥組 合物及方法。 所述化合物係關於治療哺乳動物的方法，其包括給予哺 -13- (請先閱讀背面之注意事項再域寫本買) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS_) A4規格（2丨0X297公釐） 4 5 7 2 3 A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、發明説明（μ 乳動物以基質金屬蛋白酶抑制量的本發明化合物足供： a)減輕骨性關_節炎’類風濕關節炎，化膿性關節炎， 牙週病，角膜潰瘍，蛋白尿，動脈瘤性主動脈病，營養 不良性上皮鬆弛，大疱’導致發炎反應的疾病，由mmp 活性引起的骨質減少，顳頷關節疾病，神經系統脱髓鞘 疾病； _ )阻止腫瘤轉移或關節受傷後發生的退行性軟骨損 失； c) 降低由粥狀動脈硬化斑破裂引起的冠狀動脈栓塞； 或 d) 臨時減少生育力（即生育控制劑）。 本發明化合物也是供活體-内及活體外研究基質金屬蛋白 酶的功能及作用機轉的有用的科學研究工具。由於其MMp 抑制活性，此等化合物可用於調整MMp作用，由而使研究 人員觀察研究中的實驗系統中MMp活性減少所發生的影 響。 本發明化合物有如下的通式： (T) X A - B - D - E - G (L) 於上述通式α)中，（T)xA代表經取代 的或未經取代的芳 香族6-員環或含^2個N，〇，或s的雜芳香族員環。τ 代^一^多個取代基，其下標x代表此取代基的數目，Α代 表芳香環或雜芳香環，稱爲A環或A單位 。在A環上有N與 S或0時，此等雜原子以至少—個碳原子隔離。 取代基T係獨互選自包括齒素；燒基；南燒基；缔基， ★紙張尺度逋用中國' II「^---4 丨 — (請先閱讀背面之注意事項再磺寫本頁) 訂 ，線 (Γ Ά E! 7 ρ 第86106287號專利申請案 4 ^ ^ I中文説明書修正頁(87年5月） 五 '發明説明（12 ) 1———— 炔基；-(CH2)pQ，其中p是〇或1-4的整數；-烯基-Q中的缔 基部分含2 - 4個碳〇後二基團中的Q係選自包括芳基，雜芳 基，-CN，-CHO，-N〇2，-C02R2，-OCOR2，-SOR3， -SOR32，_CON(R2)2，_S02N(R2)2，-C(0)R2-，_N(R2)2， -N(R2)C(0)R2，-NR2C02R3，-NR2C(0)N(R2)2，-OR4， -SR4 ; R2表H，烷基，芳基，雜芳基，芳基烷基，或雜芳基· 烷基；R3代表烷基，芳基，雜芳基，芳基烷基，或雜芳基 烷基；R代表Η，烷基，芳基’雜芳基，芳基烷基，雜芳基 h基’婦基，块基’ _燒基，酿基，或伸跪基氧基或以 Η、坑基結束的聚伸乾基氧基，或苯基。聯於Q上的不飽和 基團或是爲Q的一部分的基團係至少由一個碳原子使Ν，〇 或S與Q隔離。Α環可以是未取代的或帶有達2個取代基τ 的。因之，下標X是〇，！，或2。 -- 於通式（L)中’ B代表芳香族6 -員環或含有1_2個]>1，0， 或S原子的雜芳香族5 - 6員環。稱爲b環或b單位。在b環上 有Ν與S或0時，此等雜原子以至少—個碳原子隔離。 於通式（L)中，D代表 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝-

*1T

C=N〇H 經濟部中央摞準局員工消費合作社印製

Cs

>；H r OH

H 於通式（L)中，E代表如下的基團

c D

(CH^7 -15- 本紙張尺度目家蘇（⑽）罐格「2hx297公嫠) 4572 31

Κ 經濟部中央標準局員X消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（13 ) 其中 r疋 0-2 ’ t是0,4 ’ z代表-s-，-S(0)-，-s(0)2-， -C(O)- ’ -Ν(112)ς(0)·，_〇c(〇)，或，&r7 是視 需要取代的胺基，醯胺，脲，碳酸酯...,.及視需要以選自 N，Ο，及S的雜原予取代的單_ ,雙_，或三-環形芳香族 基團。上式中的〇及(3是通式（L)中的單位，並非£單 位的一部分；此處只是顯示E單位如何聯於D及σ單位上。 當r = 0時，上述構造成爲如下的形式

G j

CH D-CHj、CHr(CHj)t2R7 於通式（L)中 ’ G代表-S03H ’ -CN，-Ρ03Η2，-Μ，

其中 Μ代表‘co2H ’ -CON(R")2，或-C02R.12，其中尺11代 表Η或1-4個碳的娱;基；.而R12代.表ι_4個碳的燒基.，rIs代 表天然出現於胺基酸上的1 9種非環形支鏈。， 特定的具體實施例包括有基質金屬蛋白酶抑制活性及如 下通式的化合物

>CR2\ 16- 本紙張尺度適用中國國家標举（CNS ) A4規格（210X297公釐）

4 5 7 2.3讀86ι〇6287號專利申請案 中文説明書修正頁(π年5月）

修玉 五、發明説明（14 其中 v 是1-4，W 是0-3，3^是〇_2，Z是選自-s-，-S(O)-， S(0)2- ’ -C(〇)- ’ „N(R2)c(〇)_，_〇c(〇) 〇R_〇，各 R20獨立是H，烷基，烷氧基，芳基氧基，_素.， _ C〇〇R2 ’ _CON(R2)2，SOR3 ’ S〇2R3 或 COR2，其中 R2 及 R3 之定義如上述。當y = 0時，所成的構造是線性烷基鏈；當 y=l時，形成四員的環（環丁基）；當y = 2時，形成五員的環(環戊基）。較佳是苯基環與（112〇、共同（即R7)是下列基團 之一：

~0~c

1 CHy -ς> ~CHj CHj /=\ CH, 人 ch3

Ο

. 11 1^— - I— ί I ri 111 ) --- - I - (. -: ,"r。 r 1 I - A靖先閱讀背面之注意事項再填寫本買) 經濟部中央標準局員工消費合作社邻製 本發明也關於以合成聲稱抑制劑的中間體。此等中間體 爲有如下通式的化合物：

-17- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4規格（ ^ ΙόΙΟ6287號專利申請案 中文説明書修正頁(87年5月） A1 87. 5. 29 #·; B1 ^ 3 Ι?ί 五、發明説明（ 15 其中μ代表ν+1，即4是^5，爲前述定義之R2或爲缔丙 基取代基且較佳是烯丙基取代基。 则述説明只是總結本發明的特定方面，絕非意爲，也絕 不可理解爲’對本發明的限制。此説明中所引用的所有專 利及其他公告全文於此一併附上供參考。 本發明詳述 更特定地説，本發明化合物是有基質金屬蛋白酶抑制活 性的物質，有如下的通式： (T)xA-B-D-E-G (L) 其中（T)x A代表經取代的或未經取代的芳香族基图或雜芳 香族基團，選自包括：

丁*

ir 丁κ Ο

U N R)

T

Pn- ---------策------訂------^ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) ". N、' θ

N tx

N τ 經 濟 部 t 央 標 準 局 員 工 消 費 合 作 社 印 製 其中R1代表H或.1 - 3個碳的烷基。A也可代表烷基’芳基， 雜芳基，芳基烷基，烷氧基烷基，羥基炔基’雜芳基烷 -18- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS > A4規格（210X297公釐） 457231 M B7 五、發明説明（Ί6 ) 以Η、Et、烯丙基V烷基' 或苯基 基，歸基，炔基，齒乾基， 基氧基，每一基團 終結。 醯基，伸燒基氧基，或聚伸燒 於整個本説明中，在户斤 + & g _、止Α ' Μ A # + 你不化學構造中，開放键表示此構 造聯於另一基團上的點。例如

在其R5C)是 時，其構造爲

經濟部中央標準局員工消费合作社印裝 ;於此等構造中，芳香環稱爲A環或A單位，每.一τ代表取 代基，稱爲T基圏或T單位。取代基了係獨立選自包括：鹵 素-F，-Cl，-Br ,及-I ; b10個碳的烷基；no個碳的 鹵烷基；2-10個碳的烯基；2_1()個碳的块基；·(cHjpQ， 其中p是〇或1-4的整數；及-烯基_Q，其中烯基部分含2_4 個碳。每一後二基團的Q係選自包括6 -1 〇個碳的芳基；含 至少一個N，0，或S雜原子的4-9個碳的雜芳基，-CN ; -CHO ; -N〇2 ; -C02R2 ； -OCOR2 ； - S OR3 ； -S02R3 ; -CON(R2)2 ； -S02N(R2)2 ; -C(0)R2~ ; -N(R2)2 , -N(R2)COR2 ; -NR2C02R3 i -N(R2)CON(R2)2 ； -chn4 ; -19- 本紙張尺度適用中國國家標车（CNS ) Α4规格（210 X 297公釐） 4572 3 1 五、發明説明（π ) A7 B7 _〇R4 ;及-SR4。R2，f，及汉4之定義如下述。 R2代表Η : 1-6彳固碳的烷基；6_1〇個碳的芳基；含4-9個 藏及至少一個Ν，〇，或s雜原子的雜芳基；芳基烷基，其 令芳基部分含6-10個碳，烷基部分含個碳；或雜芳基 境•基’其中雜芳基部分含4_9個碳及至少一個ν，〇 ’或s 雜原子而燒基部分含個碳。 . ’ 反3代表丄-4個竣的坡基；6· 1 〇個故的芳基；含4-9個凌 及至少一個Ν，0’或S雜原子的雜芳基；芳基烷基，其中 芳基部分含6-10個碳，烷基部分含1-4個碳；或雜芳基烷 基’其中雜芳基部分含4-9個碳及至少一個Ν，Ο，或S雜 原子而烷基部分含1-4個碳。 R4代表Η ; 1-12個破的烷基；6-10個竣的芳基；含4-9 個碳及至少一個Ν，0，或S雜原子的雜芳基；芳基烷基， 其中芳基部分含6-10個碳，烷基部分含ι_4個碳；雜芳基 烷基’其中雜芳基部分含4-9個碳及至少一個Ν，Ο，或S 舉原子而烷基部分含卜4個碳；2-12個碳的烯基；2-12個 碳的炔基；-(CqH2qO)rR5，其中q是1-3，r是1-3，R5是 Η，先決條件是q大於1，或R5是1-4個碳的燒基，或苯 _ I 基；._(CH2^^，其中’^^2-3，X 是鹵素；或-C(0)R2。 > | 聯於Q上的或是Q的一哪分的基團.上的任何不飽和係以至 | 少一個碳原子使N，0，或S與Q分離，而以X代表的取代 局 基的數ϋ爲0，1，或2。 員 J 取代基Τ可以是含乙炔的基團，有如下的通式： S R30(CH2)nC 作 社 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) •裝' 訂 .«I 1 in .

本紙張尺度適用中國國家操準（CNS ) A4規格（2丨0X297公釐） 457231 A7 __-；_- ~~~__B7___ 五、發明説明（18 ) 其中 η 是 1-4，R30 係選自包括：OH，MeO，N(n-Pr)2， CH3C02，CH3C02QC02，C02H，CHO，pix，3-HO-Ph，及

PhCH0 ’先決條件是在R3。是Ph或3-HO-Ph時，n = 0。 k 通式（L)中的B環是經取代的或未取代的芳香環或雜芳香 環’其中任何取代基是不使分子不適合於目標酶的活性 位’或擾亂A及B環相對構造以致被傷害的基图。此類基團 可以疋基團的一邵分（m〇ieties)，如低燒基，低處氧基， C N ’ Ν Ο2，廣素等，但並不限於此等基團。b也可以代表 貌基’芳基，雜芳基，芳基烷基，雜芳基烷基，烯基，決 基，由燒基，醯基，伸烷基氧基，或聚伸烷基氧基。 於通式（L)中，B代表下列芳香或雜芳香環基之一： 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製

457231 第86106287號專利申請案 中文説明書修正頁(87年5月）

五、發明説明（19-2(} 其中R 5之定義如上述。此等環稱爲B環或B單位 於通式（L)中，D代表下列基團之一： c=o

C=NOH

\ Ηρ、 / OH Η Η 於通式（L)中，E代表 .G {CH^7 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝·

S1T 經濟部中央標準局員工消費合作杜印製 -22-23 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2〖OX297公釐）

G r ,CH 經 濟 部 中 ά： 標 準 Λ 員 工 消 費 合 作 社 印 製 4 5 7 2 I &ι〇6287號專利申請案 中文説明書修正頁(87年5月） 五、發明説明（21 ) 基團’其中r是0-2 ’ t是0-4，Z代表-S-，-S(O)-， S.(0)2- ’ -C(O)- ’ -N(R2)C(0)-，-〇C(〇)- ’ 或 ，而 R7係選自包括I至1 2個碳的烷基；6至丨〇個碳·的芳基；含 4-9個碳及至少一個N，Ο，或S雜原子的雜芳基；芳基烷 基，其中芳基部分含6-12個疲，烷基部分含個碳：雜 芳基烷基’其中雜芳基部分含6 -1 2個碳及至少一個N， 0，或S雜原子而烷基部分含1 _4個碳〇於上.述構造中，D 及G疋通式（L)中的D及G卓位’並非E單位的一部分；此-f手 用以顯示E單位如何聯於D及G單位上。在r = 〇時，上述構 造成爲如下的形式 D-CH, CH.-iCH^R7 > - · 此外，任何T或R7基團的芳基或雜芳基部分可視需要帶 有達三個取代基，此等取代基選自包括 _ (CH2)y'C(R i)(R12)OH ’ -(CH2)y，ORn，-(CH2)y，SR"， -(CH2)y-S(0)R'1 » -(C H2)y'S(0)2R'1 > -(C H2 )y，S02N(Rn)2 ? -(CH2)y，N(R1])2，-(CH2)y，N(Rii)CORi2， 〇c(Rll)2〇_，其 中一個乳原予都聯於芳基環上，COR11， -(CH2)y.CON(Rn)2，-(CH2)y.C02R11 , -(CH2)y,〇CORn 5 -鹵素，-CHO， -CF3，-N02，-CN，及-R12 ’ 其中 y’ 是0-4 ; R11代表η或1-4個碳的烷基；r】2代表丨_4個碳的 烷基。 .、 於特定具體實施例中，視需要取代的R7基團可選自下述 -24 本紙張尺度適闲中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

tT e_ 4 5 7 2 3 1 五、發明説明（22 ) 基團之一： 經濟部中央標準局貝工消費合作社印裝 A7 B7

(請先聞讀背面之注意事項再敁鸡本頁) .裝. 訂 線 -25- 本紙張尺度適用中國國家橾準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 4572 31 A7 ―一 B7 五、發明説明（23 ) 經濟部中央標準局男工消費合作社印製

-26 - ----------暮-- (請先閱讀背面之注意事項再该寫本頁) -5

C 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐} 457231 A7 B7 五、發明説明（24 其中II是I-3，R1之定義如上述。 於通式α)中，义代表：§〇311，.„CN，_p〇3H2，—m，或 ο it •ίτέ卞或 經 濟 部 中 央 榡 .準 為 Ά 工 消 費 合 作 杜 印 製 其中 Μ 代表-C〇2H ’ -C0N(r11)2，.或:c〇2r12，其中 rU 及R12之定義如上述’似”代表19個非環形天然出現於胺 基酸的侧鍵。 、 、此等屬於通式（L)化合物的醫藥上可接受的鹽也在本發明 範圍内。 取代基T較佳是卣素，或OR4醚，其中R4較佳是卜12個 碳的烷基或芳烷基，其中芳基部分是6_10個碳而烷基部分 是1-4個碳。最佳是，T爲鹵素，在丁是〇汉4時，，R4是 個碳的烷基，或苄基。 下標X界定T取代基的數g，較佳是丨或2，最佳是丨，且 詞取代基係位於A環的4 -位。 ‘ · 應了解到，此處所謂"烷基"一詞意爲直鏈、支鏈、環形 或多環形物質。"自烷基"一詞意爲部分或完全齒素化的烷 基，如-(CH2)2a，-cf3，及-c6fI3。 於其.一個具體實施例中’本發明係關於通式（L)化合物， 其令至少一個A，B，T，及E單位含有雜芳香環。較佳的 含有雜芳香環的化合物是這樣的化合物，其中雜芳基是4_ 9個碳的5-6員的雜方基，在银爲5 -員的時含有〇，s，或 NR1，在環爲6 -員的時含有N。特佳的含有雜芳香環的化 27 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） —---------裝-- 1 W )/. (請先聞讀背面之注意事項再智寫本頁} ' -線(Γ 4 5 7 2 S牵106287號專利申請案 中文説明書修正頁(87年5月）五、發明説明（25)

合物是這樣的化合物，丨中至少A及B單位之—含有，塞吩 環。在A單位是喧吩環時，較佳是於2_位聯於b單位上，並 於5-位帶有取代基T。㈣單位是違吩料，較佳是分別經 由2-及5 -位聯於D及A單位上。 於通式（L)中，A&B環較佳分別是苯基或伸苯基，A環 較佳於距聯接Β環最遠處帶有τ取代基，d單位較佳是羰 基，且較佳是於E單位中，t^4 HC〇_，視需 要取代的JR7基團是下列基團之—

〇CH3 ch3

ο 經濟部中央橾準局員工消费合作社印製

I--------S »------訂------^ {請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) G較佳是羧酸’於距D單位的/?碳上聯於E單位。 特佳的具體實施例是有基質金屬蛋白酶抑制=性的有如 下通式的化合物

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公楚） 4 5 7 2 ；^186106287 號專利申請案 r~~___-- t文説明書修正頁(87年5月） β7 | §7： 5. 五、發明説明（ 其中v是1-4，W是0-3，y是0-2，每一 R20獨立是1-5個碳 的烷氧基，芳基氧基，卣素，-COOR2，-C(0)N(R2)2， S(0)R3，S(0)2R3及C(〇)R2，其中R2及R3之定義如前述。 最佳是，苯基環及（R2())w共同（即R7)是下列基團之一：

CH,

CH,

Br

OCHj och3 ch3 CHj

ch3 ch3

CHv OCH? o (请先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -丨裝

、1T 本發明也關於合成某些聲抑制劑的有用的中間體。此等 中間體爲有如下通式的化合物

經濟部中央標準局貝工消費合作社邱裝 其令^丨巧，W爲R2或歸两基取代基，且較佳是缔丙基 取代基（在後述構造中_稱爲Al 1)。 本發明最佳的化合物如下表所示； -29- --—- 本紙乐尺度適用中國國家標牟（CNS > A4規格（210X；J97公釐） 457231 at 一 B7 經濟部中央榇準局貝工消費合作社印製 五、發明説明（27 ) - I) 41-氣-r -氧基-氧基-4·苯基丁基）-[1，1’ -二 苯基]-4 - 丁崞’ · - II) 4·-氯-Γ -氧基- -氧基-3-苯基丙基）-[1，1'_二 苯基]-4-丁酸， III) 4·-氯-r 氧基-氧基-5-苯基戊基）-[、1，1'-二 苯基]-4-丁酸， - IV) 4·-氯-r -氧基-從- (6 -氧基-6_苯基己基）二 苯基]-4-丁酸，. V) 4·-氣-7"-氧基-汉-[4 -氧基-4-(2,4,6-三甲氧基苯基） " 丁基]二苯基]-4-丁酸， VI) 4，-氯-，_氧基_“-[4-氧基-4-(2,4,6-三甲基苯基）丁 基二苯基]-4-丁酸， VII) 4'-氯-r -氧基-Λ-[4 -氧基- 4- (4-苯氧基苯基）丁基] [1，1、二苯基]·4-丁酸， VIII) 4，-氯-α-[4-(4 -甲基苯基）‘4-氧基丁基）_r_氧基_ [1，1，-二苯基]-4-.丁.酸， . IX) α -[4-(4 -溴苯基）-4 -氧基丁基]-4'·氣-r -氧基_ 二苯基]-4-丁酸， X) , 4'-氯-α-[4-(4 -甲氧基苯基）-4-氧基丁基]_.r -氧基 -[1,1·-二苯基]-4-丁酸， XI) 4、氣-α，[4-(3,4-二甲基苯基）-4-氧基丁基;] r -氧 基-[1，1、二苯基]-4-丁酸， XII) 4·-氣·α-[4-(2,4-二甲氧基苯基）-4-氧基丁基]-r-氧基-[1，1'-二苯基]-4-丁酸， ~ 30 - ， 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS > A4規格（210X297公楚） 457231 A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、發明説明（雄） ΧΠΙ) 4、氯_ α - [4-[4-(l，l-二甲基乙基）苯基]-4-氧基丁 基]氧基-」1，厂-二苯基]-4 -丁酸， XIV) 4、氣-乙基苯基）.-4-氧基丁基）-r-氧基_ Π，1 二苯基]-4 - 丁酸， XV) 4'-氯[4-(1-甲基乙基）苯基]-4-氧基丁基卜 r-氧基-[1，1·-二苯基]-4-丁酸，及 XVI) 4、氣-Λ - [4-(2 -甲氧基苯基）-4-氧基丁基）-r -氡基 -Π , 1 二苯基]-4- 丁酸。 精於此技藝者會了解，本發明許多化合物是以對映體或 非鏡像立體異構物形式存在，此技藝並知道此類立體異構 物一般在生物系統中展現不同的活性。本發明包括所有對 MMP有抑制活性的立體異構物，不論其立體異構形式爲 何’也包括立體異構物的混合物，於此混合物中有至少有 —種是有抑制活性的。 本發明化合物可以已知化學反應及工序製備。下述一般 製備方法可供精於此技藝者合成此等抑制劑，更詳細的實 例見下述實驗段所述的工作例。 -丨 此等化合物可如方案I所示製備，以ω-取代的燒基芳基 _CI ’其中取代基X代表離去基，與丙二酸酿cii在有驗之 存在下反應生成對應的丙二酸酯CIII。合適的離去基包 括，但不限於，鹵素，磷酸醋，及磺酸酯。合適的鹼包 括’但不限於，氫氧化物，烷基氧化物，或氳化鈉、以取 化的溴乙酿苯CIV在有鹼之存在下處理取代的丙二酸酯 CIII ’製得經取代的丙二酸醋c v。游丙二酸醋c V去保 ___ -31 - 1度適用中關家^0叫八4祕（2敝297公釐)---- ----------赛-- J/ }, (請先閲讀背面之注意事項再初it本頁j -訂 -線 457231 A7 B7 五、發明説明（29 護，一般生成二酸CVI，有時本也β & “ 時去保邊後再使幾酸cvn行取 竣基化。必要時，去複基化可藉立加- - J褙在溶劑，如甲芡成1 4 -二 哼烷，内加熱完成。 T本或， _ 方案1

X---- Λ^τ^Χ 〇 CI cn D ιΓγ-0~Λ II 0 On

(R' I - I - ； ； 私衣-- ^ ♦ ->) (請先閱讀背面之注意事項再填緣本頁) 訂

經濟部中央標準局員工消费合作社印製 二輯CV之去保護有賴於除去（R2)基團。例如，武（烯丙 基酯）cvin之去保護可藉甩鈀催化劑在有適宜的親核劑， 如胺’两二酸酯陰離子’或i化物，之存在下處理完成， 如方案2所示。 ’ -32 - 本紙張尺度適用中國國家擦卒（CNS ) a4規格（2ΐ〇χ297公釐） 457231 A7 〜— B7五、發明説明（3〇 ) 方案2

% 許多取代的ω -取代的烷基芳基酮CI是市場上可購得的， 一般是漠化物或氯化物。此等酮也可以在任何已知方法， 包括方案3所示方法，合成。經取代的芳基CIX以鹵酸（C X') 行Friedel-Crafts酿化即直接製成所需銅C 1。或者，以鹵酸 鹵化物CX與Ν,Ο -二甲基羥基胺反應生成對應的睦胺，再 以芳基格雷格納試劑（Grignard reagent)或芳基錢CXIII反 應，製成酮CI。内酯可用芳基親核劑CXII打開生成羥基酮 CXV。羥基酮CXV與南素化源，如或soci2，反應生 成酮CI。羥基酮CXV也可轉化成對應的羧酸酯碎磺酸酯。 芳基酮（CXVII及CI)之互相轉化可用適宜的親核劑X2取代離 去基（X1)完成。最佳是，在XkBr，C1時，在芬克斯坦 (Finkelstein)條件下完成。 (請先閱讀背面之注意事項再本頁) •裝. 訂 線 經濟部t央標準局肩工消費合作社印製 -33- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公葱） 457231 A7 … — Β7五、發明説明) 方案 3

(請先閱讀背面之注意事項异本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印裝 本發明化合物適宜的醫藥上可接受的鹽包括與有機或無 機鹼所成的加成鹽。由此等鹼所衍生的形成鹽的離子可以 是金屬離子，例如錯，驗金屬離子，如納或_離子，驗土 金屬離子，如鈣或鎂離子，或腠鹽離子，其中有許多是此 技藝已知的。其例包括銨鹽，芳基烷基胺如二苄基胺及 Ν,Ν-二芊基伸乙基二胺，低烷基胺如甲基胺，三級丁基 胺，普魯卡因，低烷基六氩吡啶如Ν-乙基六.氫吡啶，環烷 基胺如環己基胺或二環己基胺，1-金剛烷基胺，Ν,Ν1-雙 苄基乙二胺，或由胺基酸如精.胺酸或賴胺酸等所衍生的 鹽。此等生理上可接受的鹽，如鈉或鉀鹽及胺基酸鹽，可 作醫學作用，且也是較佳的。 -34- 本紙張尺度適用中國國家標準{ CNS ) A4規格（210X^7公釐） 457231 A7 B7 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 五、發明説明（於 此等鹽及其他並非生理上可接受的鹽可用於分離或純化 下述目的所用的產物。例如，使用市場上可購得的對映體 上的純胺，如〇)-辛可寧（cinchonine)於合適的溶劑内可生 成本發明化合物的單一對映體的鹽結晶，將相反的對映體 留於溶液内，此法即爲通常所謂的”經典解析由於本發 明特定化合物的一種對映體的生理效果通常較其對映體爲 大，此活性異構物即可以結晶方式純化出或留於液體相 内。此類鹽係以本發明化合物的酸的形式與等量的能供廯 鹼性離子的鹼在能沉澱出鹽的介質内反應製成，或於水性 介負内製備然後再康乾。而游離態的酸的形式可用鹽以習 用的中和技術製備，例如用硫酸氫鉀，鹽酸等。 現已發現本發明化合物抑制基質金屬蛋白酶MMP_ 3， MMP-9及MMP-2，所以可用於治療或預防於背景段所述的 疾病。由於其他的前面未列出的MMPs與列出的MMPs有高 度共同性’特別是在催化部位，可以設想本發明化合物對 其他的MMPs也有不同程度的抑制。現已顯示，改變分子 中聯芳基部分上的取代基，以及改變聲稱化合物上的丙酸 或丁酸鏈上的取代基會影響前列MMPs的相對抑制性。所 以，，這一類的化合物可藉選擇特定的取代基加以"調整,，， 以使與特定病理情況有關的MMPs的抑制得到加強，而不 影響無關的MMPs。 治療由基質金屬蛋白酶引起的疾病的方法可實行於展現 此疾病的哺乳動物，包括人。 本發明抑制劑可使用於獸及人。作此目的使用時，可用 -35 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2丨0X297公釐） (請先聞讀背面之注意事項#,填寫本頁) -裝_ .訂 457231 A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、發明説明（33 ) 於醫藥组合物，此组合物含有活性成分及一或多種醫藥上 可接受的載劑，稀釋劑，填充劑，結合劑，及其他賦形 劑，視給予方式及劑形而定。 抑制劑的給予可以是精於此技藝者所知的任何適宜的方 式。適宜的非經腸給予的例包括靜脈内給予，關節内給 予，皮下給予，及肌肉内給予。靜脈内给予可用以取得血 漿内藥物濃度高峰的快速調整。藥物半衰期的改進及使藥 物達於關節腔内可藉將藥物包於脂質體之助。藉於結合於. 特定滑液大分子上的脂質體外面加配位體，可改進脂質體 達於關節腔的性質。或者，肌肉内、關節内、或皮下長效 注射液，不管是否將藥物包裹微球體（例如含聚（DL-丙交 酯-共-乙交酯的微球體）内，_可用以使藥物延長釋出。'爲使 劑形方便使用，可用腹腔内植入儲器及隔，如可從 Pharmacia 購得的 Percuseal system。使用注射筆（injector 卩6!13)(例如]^0乂0卩111或(3-卩611)或無針的注射器（例如由別0〗6〇1：， Mediject,或Becton Dickinson各得者）也可更方便並減少病 人痛苦。使用可植入的系，使藥物經由一管子投送入滑液 腔，可準備地控制藥物的釋出。此類例包括皮下植入的滲 透泵，此泵可從ALZA購得，如ALZET滲透泵。 將藥物加於生物粘性顆粒載劑内（<200微米），如含纖維 素，聚丙稀酸醋或polycarbophil的生物枯性顆粒載劑，再 同時使用合適的吸附增強劑，如磷酯質或醯基肉鹼，可作 經鼻投送 可購得的系統包括DanBiosys及Scios Nova所發 展出的系統。 -36- c請先閱讀背面之注意事項#.却寫本頁) -裝

、1T 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） 457231 A7 --- -- ' — _ B7 五、發明説明（34 ) 與本申請書前面背景段所述的各種肽化合物相較，本發 明化合物値得注意的性質是此蕖化合物的經口給予活性。 輕口投送可藉將藥物加於鍵、塗覆的鍵、糖衣鍵、硬及軟 明膠膠囊、溶液、乳液、或懸浮液内達成。經口投送也可 藉將藥物加於腸衣勝囊内達成，此種膠囊可使藥物釋入蛋 白酶活性較低的結腸内。此類例包括分別由ALZA&Scherer Drug Delivery Systems 購得的 〇ROS_CT/0smeiTM 及 PULSINCAP™系統。其他系統使用由結腸細菌氮還原酶降 解的氮交聯聚合物，或對pH敏感的聚丙烯酸酯聚合物，此 種聚合物在結腸内pH增高時會被活化。上述系統可與各種 易購得的吸收增強劑合用。 經直腸投送可藉將藥加於塞劑内達成。 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 ^ : -z裝丨| (請先閲讀背面之注^ίκ項再"寫本頁) 本發明化合物可藉加各種精於此技藝者所知的治療上爲 惰性的、無機的或有機的載劑製成上述的調配物。此類载 劑的例包括，但不限於，乳糖，玉米澱粉或其衍生物，滑 石粉，植物油，蠟，脂肪，多元醇如聚乙二醇，水，蔬. 糖，醇’甘油等。爲幫助調配物的穩定，或爲幫助活性成 分的生物利用率，或爲在經口給予時使調配物有較好的味 道及氣味，調配物内也可加各種防腐劑，乳化劑，分散 劑，矯味劑，濕滑劑，抗氧化劑，甘味劑，增色劑，安定 劑，鹽，緩衝劑等。 1ΒΠ 此醫藥組合物的使用量視賦形劑及所治的病而定。需要 量可由精於此技藝者所知的方案決定。或者，也可以測得 的目標酶的量計算需要量，此目標酶是治療疾病必須抑制 —— _ 37 本紙張^1適用；關家縣（CNS ) A4祕（2IGX297公釐) ----~~~~ -- 457231 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 --— _二_H：________Β7 五、發明獅（35 ) ~~~~~ --- 的。 本發明基質金屬.蛋白酶不僅可用於治療前述的生理上的 疾病，也可用於金屬蛋白酶的純化及試驗基質金屬蛋白酶 活性。此#活性試驗可用&然的或合成㈣製劑於活體外 進行，也可用，例如，動物模型於活體内進行，此動物模 型中可自然地發現不正常的破壞性酶（使用基因突變的動物 或基因轉移的動物），或是給予外生性劑或以外科破壞關節 穩定所致而有不正常的破壞性酶。 下述實例只是説明性的，不能認爲是對本發明的限制。 實例 通法： 所有反應，除非另有説明、都是於火燄乾燥的或爐乾燥 的玻璃器内在乾氬氣的正壓下且是用磁性攪拌進行。敏感 液體及溶液是用注射筒或管穿過橡皮隔引入反應器内。除 非另有説明’減壓濃縮指使用Buchi迴轉蒸發器約15毫米汞 柱進行。球-球濃縮係用Aldrich Kugelrohr儀器進行，此情 況下的溫度意爲爐溫度。 材料: 使用商業級試劑及溶劑，不進一步純化，唯四氫57夫喃 (THF)及1，2，甲氧基乙烷（DME)係以鉀作雙蒸餾，乙醚係用 二苯基嗣羰游基鈉蒸餾，CH2C12係用CaH蒸餾。 色譜分析： 分析性薄層色譜分析（TLC)係於Whatman上完成，此儀器 有預塗覆的以玻璃爲底的二氧化矽膠60 A F-254 250微米 _-38- 本紙張尺度4用中關家標ϋ cis ) A4規格（21GX297公釐) {請先閲讀背面之注意事項再餐寫本頁) .ί I I -I Hi . .裝· -3 —Βϊπ^~^"ΙΠ~^τ.Ε1ΓιΓ7. .1 4 5 7 2 31 A7 B7 經濟部中央標準局男工消贽合作社印製 五、發明説明（36 ) 板。板之目測係以如下技術之一完成：（a)紫外線照明，（b) 曝露於碘氣下，（c)將板浸入10%的磷鉬酸於乙醇内之溶液 中，然後加熱，（d)將板浸入硫酸鈽溶液内，然後加熱，（e) 將板浸入2，4 -二硝基苯肼的酸性醇溶液中，然後加熱。 柱色譜分析係用230-400網眼的EM Science二氧化矽膠完 成。旋轉色譜分析用預铸Si〇2板Alltech於Harrison研究用 Chromatotron上完成。 ， 儀器: 溶點（mp)以Thomas-Hoover溶，點儀測定，未作校訂。 質子（Ή)核磁共振（NMR)譜係用General Electric GN-OMEGA 300 (300 MHz)分光計測定，用 Me3Si (0.00)或殘 餘質子化的溶劑（CHC13 (d 7.24)作標準。碳（13C) NMR譜 辕用 General Electric GN-OMEGA 3 00(75 MHz)分光計測 定，以溶劑（CDC13 β 77.0)作標準。下述實驗中合成的所 有的化合物都作NMR分析，每一例的光譜都與設想的構造 一致0 液體鈽二級離子質譜（MS)，新型的快速離子撞擊（FAB)使 用Kratos Concept 1-H分光計取得。所有下述實例都用低解 析質譜（LRMS)分析，也有許多實例用高解析質譜（HRMS) 分析。每一例的譜都與設想的構造一致。 通論: 於多步驟方法中，序列步骤以數字表示。 實例1_5-化合物Ι-V之製備 步驟1.丙二醢二烯丙酿於丙二酸（100克，0.96莫耳）於烯丙 -39- ----------抑衣-- *' {請先閱讀背面之注意事項再接寫本頁) -訂 —線 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4规格（210x297公釐） 4 572 31 第86106287號專利申請案 中文說明書修正頁(89年11月） A7 B7

經濟部中央標隼局員工消費合作社印製 五、發明説明（37) 醇（250毫升）内之溶液加H2SO4(0.25毫升），此混合物於7 0 °C加熱1 2小時將所得溶液減壓濃縮至約1 〇 〇毫.升，用己 烷（500毫升）烯釋。此溶液用飽和K2C〇3溶液（250毫升）及飽 和NaCl溶液（250毫升）洗，乾燥（Na2S04)，減壓濃縮。將所 得油體蒸餾，製得丙二酸二烯丙酯（156克，88%)，為無色 油體；沸點 85°C(0.01 毫米汞柱）；WNMRtCDCb) <5 3.40 (s, 2H), 4.60 (m, 4H), 5.20 (m, 2H), 5.30 (m, 2H), 5.85 (m, 2H) ； l3C NMR (CDC13) 6 41.2, 68.5 (2C), 118.5 (2C), i 13 1.3 (2C)，165.9 (2C)-製成之化合物以下式表示： ; 0 0 ： 步驟2. 4 -溴丙基苽某酮：於A1C13(8.0克，0.60毫莫耳）於 無水苯（100毫升）内之泥樣物中於0°c加4 -溴丁酿氣（5.8毫 升）。此混合物於0°C攪拌2小時，此時TLC分析顯示醯氣已 消耗完。將混合物升至室溫，用冰-水混合物（100毫升）處 理，減壓濃縮。殘餘物於CHC13(150毫升）及水（150毫升）間 分離。有機相用飽和NaCl溶液（150毫升）洗，乾燥 ] (Na2S 〇4)，減壓濃縮1得黃色油禮（1 〇. 5克，92%)，不需純 化即可使用。製成之化合物以下式表示：

步騾3. 2-ί4 -笨基- 4-1某丁某）丙二酸二烯丙酿:於KaH -40- 本紙浪尺度通用中國國家標準（CNS > A4現格（210X 297公釐） {請先閲讀背面之注意事項士4寫本頁) -裝· 訂 457231 A7 B7 五、發明説明（38 (60%，於礦物油内，〇_〇21克）於無水THF(3 5毫升）内之泥樣 物中加丙二酸二晞两酯（4·3克，25毫莫耳）‘。形成之泥樣物 於室溫撥拌30分鐘，然後加4 -溴丙基笨基酮（4.6克，5.0毫 莫耳）。此混合物於回流溫度加熱1 8小時，冷至室溫，用 1Μ的Η#。4溶液（1 〇毫升）酸化，'生成之混合物用ch2C12 (2x100毫升）萃取。合併之有機相相繼用的H3P〇4(1〇〇毫 升）及飽和NaC丨溶液（50毫升）洗，乾燥（MgS04)，減壓濃縮 (Kugelrohr, 80°C ’ 4毫米汞柱），得粗製油體，再用旋轉色 譜分析（Si02，梯度由1% EtOAc/己烷至25% EtOAc/己烷）純 化，製得.所需丙二酸酯（2.1克），爲無色.油體，含少量4 -溴 丙基苯基酮。所得化合物（如下所示）直接用於下一步驟， 不必純化。 ' (請先閲讀背面之注項再"'寫本頁) .裝· 訂

經濟部中央標準局員工消費合作社印製 步驟4. 2-(4 -苯基-4 -氧基丁基）-2_(2-(4_(4 -氣苯基）苯 基）-2 -氧基）乙基丙二酸二烯丙酯•將NaH (60%，礦物油内 的’ 0·88克，2.2毫莫耳）用己烷（2x5毫升）洗，然後用2~ (4 -苯基-4-氧基丁基）丙二酸二埽丙酯（0.74克）於DME(5毫 升）内之溶液處理，所得混合物.於室溫攪拌3 0分鐘。所得 泥樣物再用1-(4-(4-氣苯基）苯基）-2:溴乙烷-1-酮（0.60克） 及NaI(0.3〇克）於DME(1.5毫升）内之溶液處理。此混合物於 室溫攪拌過夜，然後減壓濃縮。殘餘物於CH2Cl2(l〇〇毫升） 及水（100.毫升）間分哔。'將有機相乾燥（MgS04)，減壓濃 -41 私紙浪尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規择（210X297公釐） 經濟部中央標準局員工消费合作社印製 45723 1 A7 _ .. --- B7 五、發明説明（39 ) 縮’得棕色油體’再用旋轉色譜分析（Si〇2，梯度由1% EtOAc/己燒至5〇% EtOAc/己娱1)純化，製）导所需產物，爲 無色油體（0.72克，64%)。製成之化合物·以下式表示：

步驟5, 2-(4-苯基-4-氧基丁基）-2-(2-(4-(4-氣笨基）笨 基）-2 -氧基）丙二酸:於2-(4 -苯基-4-氧基丁基）-2-(2-(4-(4 -氣苯基）冬基）-2-'氧基乙基）丙二酸二婦丙醋（0.70克) 於1，4-二呤烷（12.5毫升）内之溶液中加1^(??113)4(0.028克） 及吡咯烷（120微升），此生成之溶液於室溫攪拌1小時，此 時TLC (10% MeOH/CH2Cl2)顯示起始物質已消耗。將所得 .混合物鉀壓濃縮。將殘餘物溶於EtOAc(2 5毫升）内，相繼 用水（25毫升）及1M的H3P〇4(25,毫升）洗，乾燥（MgS04)， 減壓濃縮，得有機固體（〇.5ί克），再重結.，晶（EtOAc/己 烷），製得淺棕色固體（0.27克，45%)，構造式如下：

步騍6. 2-(2-(4-(4-氣苯基）苯基）-2-氧基乙基）-6-苯基-6-氧基己酸：將2-(4-苯基-4-氧基丁基）-2-(2-(4-(4 -氣 苯基）苯基）-2-氧基乙基）丙二酸（0.26克）於二哼烷（5 5毫升） 内之溶液.於回流溫度加熱過夜，然後冷至室溫’減壓濃 -42- 本紙浪尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（2)0Χ297公釐） ---ΓI-：---裝I- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 ήΐ 457231 A7 B7 五、發明説明（40 ) ' 縮，得棕色油體，再結晶（EtOAc/己烷）製得所需產物，爲 淺黃色固體（0.11 4，44%) : TLC (10% MeOH/CH2Cl2) R；f 0.56 ; NMR (DMSO) ό' 1.64-1.71 (ni； 4H); 2.88-2.90 (m> 1H), 3.05-3.10 (m, 2H), 3.16 (dd, J=4.0, 18.0 Hz, 1H), 3.44 (dd, J=9.6, 18.0 Hz, 1H), 7.50-7.66 (tn, 5H)/ 7.78-7.86 (m, 4H)，7.98 (dm，J=7.0 Hz, 2H)，8.07 (d, J=8.5 Hz, 2H), 12..2 (br s, 1H) ； 13C NMR (DMSO) <ί. 21.9 (2C), 31.6, 38.2 (2C), 127.4 (2C), 129.2 (4C), 129.3 (2C), 129.6 (2C), 133.6, 133.8, 136.0, 137.2, 138.2, 143.7, 176.7, 198.5, 200.3 ； LRMS m/z (豐度）435 (M++H, 100)，437 (38)。所得化合物有如下構 造： ----------裝-- JΓ ,. (請先鬩讀背面之注意事項再^寫本頁〕

-訂 經濟部中央標準局貝工消費合作社印策 以類似方式製得的其他有如下基本構，造的例包括:

〇 C〇，H 〇 化合物编號 At V TLC(Rf)a 羥基 13CNMR(d ) Π CeHs 1 0.43 177.2, 199.1,200.5 ΙΠ C6H5 3 0.54 176.7, 198.6, 200.5 IV CeHs 1 4 , 0.27b 179.3,197.8(2C) V 2,4,6-(CH3〇)3C6H2 2 0.49 180.6, 197.9, 204.4 -43- 本纸張尺度適用中國國家摞準（CNS ) Α4規格（210x297公楚） 457231 A7 B7 五、發明説明（41 a T L C 溶劑系統爲 1 〇% MeOH/C H 2 ci2， b5% MeOH/CH2Cl2。 實例6-7-化合物VI及VII之貧借 免#.1. 2-(4-(2,4,6-三甲基苯基、)-4-氧基丁盖、丙二酸二烯 m :於NaH(60%，於礦物油内，0.36克）及Nal(0.55克）於 無水THF(37毫升）内之泥樣物中加丙二酸二晞丙酯（3 2克， 18.5毫莫耳）^將此形成之泥樣物於室溫攪拌3〇分鐘，然後 加4-溴-1-(2,4,6-三甲基苯基）-1- 丁酮（1.〇克，3 7毫莫 耳）。此混合物於^回流溫.度加熱1 8小時，冷.至室溫，用1 μ 的H3P〇J^、^(i〇毫升）酸化。此.混合物再以cjj2ci2(2xl00 毫升）萃取。合併之有機相相繼用1 M H3P04溶液（loo.毫升） 及飽和NaCl溶液（50毫升.）洗，乾燥（MgS04)，、減壓濃縮 (Kugekohr，80°C，（4毫米汞柱）），得粗製油體，再用旋轉 色错分析（Si02 ’梯度由1% EtOAc/己稼至5〇/0 EtOAc/己燒） 純化’製得起始溴化物（0 34克）’再製成所需產物（〇 36 克）。生成之化合物之構造如下所示，不必純化以實例j步 驟4方法使用。 ----------^-- ί, ί .). (諳先閱讀背面之注$項再，>寫本頁) 訂 經濟部中央標準局負工消f合作社印製 〇 .

以類似方式製得的其他有如下基本構造的例包括 -Γ τ -44 卜紙張尺度顧中_家標準（CNS)祕胁Q χ 297公着） 457231 A7 B7 五、發明説明（42 )

化合物编號 Ar V -TLC(Rf)a 羥基 13CNMR(tn VI 2,4,6-(ΟΗ3)3〇6Η2 2 0.57a 176.6,198.5, 210.2 νπ 4-(〇6Η5〇)〇6Η4 2 0.30b 180.0, 197.7, 198.6 aTLC 溶劑系統爲 10% MeOH/CH2Cl2， b5% MeOH/CH2CI2。 經濟部中央揉準局員工消費合作社印康 實例8-1 5-化合物VIII及XVir龆借 步骤1. 4 -破-1-(4 -曱基苯基）-1-丁明將Nal(7*49克）及4 -氣-1 - (4 -曱基苯基）-1-丁酮（4.9克）於2-丁酮（25毫升）内之 混合物於回流溫度加熱1 8小時，冷至室溫，過濾移除固 體。濾過‘物作減壓濃縮，殘餘物於己烷（250毫升）及水（250 毫升）間分開。有機相相繼用飽和NaHS03溶液（100毫升）及 飽和NaCl溶液（1 〇〇毫升）洗，然後乾燥（MgS04)，減壓濃 酸，製得所需產物，爲灰白色固體（3.2克，44%)。生成之 化合物有.如下構造：

不必純化.以實例步驟4方法使用 -45- t紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2丨0X297公釐} 457231 A7 B7 五、發明説明（43..) 以類似方式製得的其他有如下基本構造的例包括‘:

化合物編號 Ar V TLC(Rf)a 羥基 13CNMR〇 ) νπι 4-(CH3)C6H4 2 0.51 176.6, 198.5, 199.9 IX 4-BrC6H4 2 0.41 179.9, 198.0, 198.9 X 4-(CH30)C6H4 2 0.42 180.1, 197.8, 198.7 XT 3,4-(CH3)2C6H3 2 0.43 1S0.2, 198.0, 200.0 XU 2,4-(CH30)2C6H3 2 , • 0.32 1S0.1, 198.0, 200.2 Xffl 4-((^3)30^6¾ 2 0.43 180.1, 197.8, 199.7 XIV * i 4-(C2H5^C6H4 2 0.49 179.2, 197.8, 199.7 XV C > 4-((CH3)2CH)C6H4 2 0.40 180.7, 197.8, 199.7 TLC 溶劑系統爲 10% MeOH/C H2 Cl2_ (請先閱讀背面之注意事項再¥;寫本頁) .裝- 訂 經濟部中央標準局貝工消費合作杜印製 實例1 6 -化合物X VI之製備 步驟1. N-甲基-N-曱氧基-4-氣丁醯胺:於N，Ο _二曱基羥 基胺鹽酸鹽（9.8克）於吡啶（250毫升）内之溶液中加4 -氯丁 醯氯（5.6毫升），此混.合物於室_溫攪拌3天。將所混合物減 壓濃縮，溶於CH2C12内，相繼用飽和NaHC03溶液（100毫 升），水（1〇〇毫升），1M的η3ρο4(ιοο毫升），及飽和和 NaCl溶液（100毫升）洗，.乾燥（MgS04)，濃縮。.所得橘色油 體作旋轉色譜分析（Si02，梯度由1% EtOAc/己烷至50% -46 *· 本紙浪尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 經濟部中夬標準局貝工消費合作社印製 457231 A7 -— B7 五、發明説明（44 )

EtOAc/己娱·）純化’製得所需產物（如下所示），爲黃色油體 (2·7，32%)。 0

Me 步.驟g· 4_氣- l- (2 -甲氧基苯基丁酮：將Mg(2:3克）及 破（6晶體）在氬氣下火燄乾燥產生紫色光霧。·再使其冷卻， 加THF(10毫升），再加2-溴茴香酿（3毫升）於THF(20毫升） 内之溶液。在原始反應停止後，加2 -溴茴香醚（8.3毫升）於 THF(3 0毫升）内之溶液，此混合物於回流加熱2小時，再冷 至室溫。 於N -甲基-N -甲氧基-4 -氣丁醯胺（1.24克）於THF(75毫升） 内之混合物内於0 °C加格雷納試劑（約1.44M，6.25毫升）， 此混合物於0 °C擻拌3天。再.於室溫反應6小時後，加飽和 NH4C1溶液（100毫升）及水（1 〇〇毫升）使反應停止，分離各

J T 相。水相用C'H2 Cl2( 2x 100毫升）萃取。合併之有機相用飽 和NaCl溶液（100毫升）洗，乾燥(MgS04)，減壓濃縮’得橘 色油體（1.24克）。此粗製酮作旋轉色譜分析（Si02，梯度由2% EtOAc/己烷至1 〇 〇/0 EtOAc/己烷）純化，製得所需產物’爲 無色油體（0.3〇克，19%)。不必純化以實例8步驟1方法使 用。所得化合物如下所示：

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210x297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再域寫本頁} 裝· :--Π.Ι 457231 A7 B7 五、發明説明（45 ) 以類似方式製得的其他有如下基本構造的例包括：

化合物編號 At V , TLC(Rf)a 羥基 13CNMR((J ) XVI 2-(CH30)C6H4 2 0.34 176.8, 197.9, 202.5 TL C 溶劑系統爲 10% MeOH/C H2 Cl2 (請先聞讀背面之注意事項弃¾寫本頁) -裝. 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 實例1 7 本發明化合物之.生物學鑑定 MMP抑制之P218猝滅熒火鑑走 P218猝滅的熒光鑑定（顯·微熒光計輪廓鑑定）是Knight等於 FEBS Lett. 296, 263, 1992最初就樣品池内相關物質及各種 基質金屬蛋白酶（MM?s)所述的鑑定的，改進。此鑑定是用每 —發明化合物及三種MMPs(MMP-3，MMP-9和MMP-2)作 平行分析，使用9 6凹的微滴定碟及Hamilton AT®公作站 (workstation) 0 P21.8熒光團基質：P218爲合成的被作用物，於N-端位置含 有4-乙醯基-7-甲氧基香豆素（MCA)基團，其内有3-[2,4-二硝基苯基]-L - 2,3 -二胺基丙醯基（DPA)。此爲Knight (1992)所報告的用作基質金屬酶被作用物的多肽的改良。 一旦P218多肽被裂解（於Ala-Leu鍵的推定截除位）後，MCA » > - 基的熒光，即可以熒光計測出，·於328毫微米興奮並於3 93亳 -48- -1Τ 本紙張尺度逋用中國國家樣準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 457231 A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、發明説明（46 ) 微米發射。目前有BACHEM Bioscience，Inc.生產P218，專門 供應Bayer Corporation。P218的構造是： H-MCA-Pro-Lys-Pro-Leu-Ala-Leu-DPA-Ala-Arg-NH2 (分子 量 1332_2) 重组人CHO溶基質素（MMP-3) 重组人 CHO Pro-MMP-3 · Houseley, et al·，J. Biol. Chem. 268. 4481, 1993説明人 CHO pro-溶基質素-257 (pro-MMP-3) 的表現於純化。 pro-MMP-3的活化：於5 mM Tris, pH 7.5，5 mM CaCh，25 mM NaCl，及0.005% Brij-35 (MMP-3 活化緩衝液）内 1·72μΜ 的pro-MMP-3可藉TPCK(N-甲苯磺醯基-(L) -苯丙胺酸氯甲 基酮）膜蛋白酶（1 : 100重量/重量與pro-MMP-3的比）於25 °C培養3 0分鐘活化。此反應可藉加大豆胰蛋白酶抑制劑 (SBTI ; 5 : 1重量/重量與膜蛋白酶濃度比）停止。此活化方 法導致45kDa活性MMP-3的生成，此活化的MMP-3仍含酶 的C -端部分。 人重组膠原酶A(MMP-2)的製備 重组人 pro-MMP-2 :依據 Fridman, et al.，J. Biol. Chem. 267'. 15398，1992，.所述方法使用牛痘表現系統製備人膠原 酶A(pro-MMP-2)。 pro-MMP-2之活化：將252毫克/毫升的pro-MMP-2以25 mM的 Iris 溶液，pH 7.5，5 mM CaCl2，150 mM NaCl，及 0,005% Brij-35 (MMP-2活化缓衝液）以1 : 5 _釋至終濃度 爲50微克/毫升。製成10 mM(3.5毫升/毫升）的於0.05NaOH -49 - 本紙張尺度適用军國國家標準（CNS > A4規格(210X297公釐） ' (請先閲讀背面之注意事項再：^寫本頁) 457231 A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、發明説明（47 ) 内的醋酸對位胺基苯基汞（ΑΡΜΑ)。以1 /2 0反應容積加 ΑΡΜΑ溶液，使ΑΡΪ^Α終濃度爲0.5 mM，此酶於3 7 °C培養 3 0分鐘。以2公升MMP-2活化緩衝液透析活化的MMP- 2 (1 5毫升）二次（透析膜先以MMP-2活化緩衝液内含有〇.ι〇/0 BSA處理1分鐘，再用H2〇徹底洗）。用Centriconi農縮器（濃 縮 '器也先用MMP- 2活化緩衝液内含有0.1 % BS A處理1分 鐘，再用H20洗，再用MMP-2活化緩衝液洗）濃縮g每，再 稀釋，再濃縮，重覆二次。用MMP-2活化緩衝液將酶稀釋 至7.5毫升（原始容積的Ό.5倍）。 人重組膠原酶B (MMP- 9)的製備 重組人 pro-MMP-9 : Wilhelm., et al·，J. Biol, chem, 264. 17213，1989，説明人膠原膠B(pro-MMP-9)衍生自 U937cDNA，用桿狀病毒蛋白質表現系統表現爲全長形 式。此酶原係用 Hibbs，et al., J. Biol. Chem· 2493, 1984 所述方法純化e Pro-MMP-9 之活化：將 50 mM Tris，pH 7.4，10 mM CaCl2，150 mM NaCl，及0.005% Brij-35 (MMP-9活化緩衝 液）内的Pro-MMP-2 (20 pg/ml)與0.5 mM醋酸對位胺基苯基 汞（ΑΡΜΑ)於3 7 Ό下共置培養3.5 λ!、時使活化。以相同的緩 衝液對此酶進行透析除去ΑΡΜΑ。 儀器裝設 Hamilton Microlab AT Plus : ΜΜΡ輪廓鑑定係以 Hamilton Microlab AT Plus®全自動完成。給Hamilton設計的程式是： (1)以100% DMSO内的2.5mM的儲液自動稀釋至1 1種可能的 -50- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4^洛（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再"寫本頁〕 45723 1 A7 B7 經濟部中央標隼局員工消費合作社印製 五、發明説明（48 ) 抑制劑；（2)分佈被作用物於9 6凹Cytoflour碟内，再分佈 抑制劑至此碟内；（3 )加單一酶至碟内並混合以開使反應。 於加被作用物的點重新開始此程式，自動给另外的酶製成 另外的碟，重新混合稀釋的抑制劑，再加酶開始反應。這 樣，用相同的抑制劑稀釋液完成MMP鑑定。 Millipore Cytoflour II :經培養後，於 Cytoflour II 费:光計 碟讀數計上讀碟，於340毫微米興奮，於395毫微米發射， 放大倍數定於80。 缓衝液 顯微熒火計反應還衝液（MRB):供顯微熒光計鑑定用的 試驗化合物稀釋液，酶，及P218被作用物係以顯微熒光計 反應缓衝液製成，此緩衝液> 含50 mM 2-(N-嗎啉基）乙烷 磺酸（MES)，pH 6.5，10 mM CaCl2，150 mM NaCI，0.005% Brij-35及 1% DMSO。_ 方法 MMP顯微熒光計輪廓鑑定：此鑑定係用被作用物P218終 濃度爲6 μΜ及約0.5至0.8 nM的MMP以不同的藥物濃度完 成=> 將Hamilton設計成在鑑定中能由2.5 mM儲液（100% DMSO)至1 0倍化合物終濃度系列稀釋達1 1種化合物。開始 時，儀器投送不同量的顯微熒光劑反應緩衝液（MRB)至1毫 升Marsh稀釋試管的9 6隻試管架。然後此儀器由樣品架取 20微升抑制劑（2.5 mM)與Marsh架上A排内的緩衝液混合， 製成50μΜ的藥物濃度。再將抑制劑系列稀釋成1 0，5， 1，0.2，0.05及0·01 μΜ。樣品架上的1號位只含DMS0供鑑 -51 - 本紙張尺度適用t國國家標隼（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） ： (請先閱讀背面之注意事項再'續寫本頁} 4 572 31 Α7 Β7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、發明説明（49 ) 定中11只有酶"的凹使用，這樣，從A排至Η排的第1列不含 抑制劑。儀器然後分佈1〇7微升Ρ218被作用物（8.2μΜ ,於 MRB内）至單一 96凹的cytoflour微滴定碟。儀器重混合，並 將14.5微升稀釋的化合物由Marsh架的A排至G排載入微滴 定碟的對應的排。（H排代表"背景"排，只給予39.5微升 MRB ’不給予藥物或酶）。每一凹（η排（"背景排”）除外）内 由BSA處理過的試劑儲液槽加2 5微升適宜的酶（酶終濃度的 5.86倍）開始反應0 (酶儲液槽先以5〇 mM Tris(pH 7.5，含 150 mM NaCl)内的1 %的BSA於室溫處理1小時，再以h20 徹底洗過，於室溫乾燥）。 在將酶加入並混合後，將碟蓋上，於3 7，C培養25分鐘。 以相同方式，藉Hamilton程式將P218被作用物分佈至微滴 疋碟’然後再與藥物混合並由相同的Marsh架分佈至微滴定 碟，試驗其他的酶。然後將要試驗的第二（或第三，等）種 MMP由試劑架分佈至微滴定碟並混合，再蓋起，培養。所 有的其他的MMP都以此法試驗a 顯微费光計鑑定中的IC50測定：將Cyt〇fl〇ur π產生的數 據由輸出1’csv"檔案複製於主Excel散佈頁（spreadsheet)。 自動計算由幾種不同的MMPs取得的數據（每一 MMP- 9 6凹 的碟）。比較含化合物的凹的水解量（水解2 5分鐘產生的熒 光單位）與1列”只含酶"的凹的水甲量就每一藥物濃度測出 抑制百分比。減去背景，以下述公式計算抑制百分比： ((對照値-治療値）/對照値）x i 〇 〇 就抑制劑濃度5，！，〇·5，o.i , 〇 〇2，〇 〇〇5及〇〇〇1μΜ藥物 I紙張尺度適财i國家標準( 2獻·^^--- 抽农— •C :· {請先閱讀背面之注意事項再¥寫本頁} 訂 」：：二一： 13Π 457231 A7 B7 五、發明説明（5〇 ) 測定出抑制百分比。以 數抑制劑滚度比較麥得I C 5 〇値

，抑2百分㈣職”分析與對 表I 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 -翔 本 化合物 _ 1 ---^ 據 AyflVAP ， 1V11VJ.X - J ^.ICsoCnM^ 65.0 MMP-9 MMP-2 ^»^ΪΡ5〇(ηΜ) 65 7 II 96.0 127 9.97 III 一 ^ * —60 61.1 52.4 --^7.52 IV 109 175 V 71.7 132 ----34· 1 VI 39.6 1310 —. v * X 3 ft VII 367 65.7 1 u VIII 69.1 108 1 o 〇 IX 125 131 28 ^ X 122 145 ———r 0 ^ 25 1 XI 104 105 48.3 XII 115 225 25.1 XIII 222 167 71.6 XIV 89 126 29.4 XV 130 133 35.7 XVI 48.2 152 26.2 精於此技藝者由此説明或此處所揭示的本發明的實行會 了解到其他具體實施例。此説明及實例只是舉例説明性 質，下述申請專利範圍説明本發明的眞範圍及_精神。 53- i«張^度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） :---—择衣-- t r.· (請先閱讀背面之注意事項再破窝本頁) •訂

--IU

Claims (1)

1. 45723邊 801〇6287號專利申請案 部 中文申請專利範圍修正本(9〇年6月）gs8 經濟部中央標準局負工消費合作社印裝 丙-、卞請專利範圍 ! Λ. 1. 一種如下通式之基質 I 修.T: . ί 金廣4伽白_^4^_制"在 化合物

   Ζ

   -(R20)w 其中 v為1至4 ; X為0至2 ; w為〇至3 ; Z為羰基； T係獨立選自包括下列之群組： -F ’ -Cl，-Br及-I，且 R2()係獨立選自包括Η，1至5個碳之烷基，1至5個碳之 烷氧基，苯氧基及函素； 及其醫藥上可接受之鹽類》 2.根據申請專利範圍第丨項之基質金屬蛋白酶抑制性化合 物’其中Τ為Cl，X為1，V為1至4，且

   (Π2〇)ν 係選自包括下列之群組 尽紙炊尺度通用尹國國家梯準（CNS ) Α4规格（210X297公釐 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本I) 訂 •-MX I一13:¾ 457231 A8 B8 C8 D8 經濟部中央梂率局貝工消費合作社印氧 六、申請專利範圍 jXCH3 -CHch, 、^^ ch3 h3c \ h3c H3C0 _^Q^〇CH3 -CK：3 ch3 h3co and — H3C Ο 3. —種用於抑制基質金屬蛋白酶活性的醫藥組合物，其包 括抑制基質金屬蛋白酶有效量的根據申請專利範圍第^项 之化合物。 4. 一種用於抑制基質金屬蛋白酶活性的醫藥組合物，其包 括抑制基質金屬蛋白酶有效量的根據申請專利範圍第2項 之化合物。 5· —種具有基質金屬蛋白酶抑制活性的醫藥組合物，其含 有根據申請專利範園第1項之化合物及醫藥上可接受的載 劑。 6，一種具有基質金屬蛋白酶抑制活性的醫藥組合物，其含 有根據申請專利範圍第2項之化合物及醫藥上可接受的栽 劑。 7.根據申請專利範園第3項之醫藥組合物，其中該基質金屬 蛋白酶活性之抑制係足以： -2- 本紙張疋渡通用中國國家橾準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 裝 訂 /冰 (請先閎讀背面之注意事項再填M-本頁) 457231 ABCD 經濟部中央標率局舅工消费合作社印製 六、申請專利範圍 a) 減輕骨性關節炎’類風濕關節炎，化膿性關節炎，牙 週病’角膜潰瘍’蛋白尿，動脈瘤性主動脈病，營養不 良性上皮鬆弛，大癌’導致發炎反應的疾病，由MMP活 性調節的骨質減少，顳頷關節疾病，神經系統脫髓鞘疾病， b) 阻止腫瘤轉移或關節受傷後發生的退行性軟骨損失； c) 降低由粥狀動物硬化斑破裂引起的冠狀動脈栓塞；或 d) 控制生育》 8. 根據申請專利範圍第4項之醫藥組合物，其中該基質金屬 蛋白酶活性之抑制係足以： a) 減輕骨性關節炎*類風濕關節炎，化膿性關節炎，牙 週病’角膜溃瘍，蛋白尿，動脈瘤性主動脈病，營養不 良性上皮鬆弛’大癌’導致發炎反應的疾病，由MMP活 性調節的骨質減少’顧領關節疾病’神經系統脫髓鞘疾 病， b) 阻止腫瘤轉移或關節受傷後發生的退行性軟骨損失； c )降低由粥狀動物硬化斑破裂引起的冠狀動脈栓塞；或 d)控制生育。 9. 根據申請專利範圍第8項之醫藥組合物，其中該組成物係 施予人。 10. 根據申請專利範圍第8項之醫藥组合物，其中該效果是減 輕骨性關節炎。 11 ·根據申諳專利範圍第8項之醫藥组合物，其中該效果是阻 止腫瘤轉移。 -3- --------i------IT------Tp (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度逋用令國國家梯準（CNS ) Α4规格（210x297公釐） 457231 as C8 D8 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 六、申請專利範圍 12.—種下式化合物

   其中 v 是 1 - 4 ; w 是 0 - 3 ; Z為羰基； 各R2G獨立為Η，I至5個碳的烷基，1至5個碳的烷氧 基，苯氧基及_素；且 R21表烯丙基或1至6個碳的烷基。 4 本紙張尺度適用中國國家梯準（CNS ) Α4規格（210X25»7公釐） (请先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 Ά E! 7 ρ 第86106287號專利申請案 4 ^ ^ I中文説明書修正頁(87年5月） 五 '發明説明（12 ) 1———— 炔基；-(CH2)pQ，其中p是〇或1-4的整數；-烯基-Q中的缔 基部分含2 - 4個碳〇後二基團中的Q係選自包括芳基，雜芳 基，-CN，-CHO，-N〇2，-C02R2，-OCOR2，-SOR3， -SOR32，_CON(R2)2，_S02N(R2)2，-C(0)R2-，_N(R2)2， -N(R2)C(0)R2，-NR2C02R3，-NR2C(0)N(R2)2，-OR4， -SR4 ; R2表H，烷基，芳基，雜芳基，芳基烷基，或雜芳基· 烷基；R3代表烷基，芳基，雜芳基，芳基烷基，或雜芳基 烷基；R代表Η，烷基，芳基’雜芳基，芳基烷基，雜芳基 h基’婦基，块基’ _燒基，酿基，或伸跪基氧基或以 Η、坑基結束的聚伸乾基氧基，或苯基。聯於Q上的不飽和 基團或是爲Q的一部分的基團係至少由一個碳原子使Ν，〇 或S與Q隔離。Α環可以是未取代的或帶有達2個取代基τ 的。因之，下標X是〇，！，或2。 -- 於通式（L)中’ B代表芳香族6 -員環或含有1_2個]>1，0， 或S原子的雜芳香族5 - 6員環。稱爲b環或b單位。在b環上 有Ν與S或0時，此等雜原子以至少—個碳原子隔離。 於通式（L)中，D代表 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝- *1T C=N〇H 經濟部中央摞準局員工消費合作社印製 Cs >；H r OH H 於通式（L)中，E代表如下的基團 c D

   (CH^7 -15- 本紙張尺度目家蘇（⑽）罐格「2hx297公嫠) 4 5 7 2.3讀86ι〇6287號專利申請案 中文説明書修正頁(π年5月）

   修玉 五、發明説明（14 其中 v 是1-4，W 是0-3，3^是〇_2，Z是選自-s-，-S(O)-， S(0)2- ’ -C(〇)- ’ „N(R2)c(〇)_，_〇c(〇) 〇R_〇，各 R20獨立是H，烷基，烷氧基，芳基氧基，_素.， _ C〇〇R2 ’ _CON(R2)2，SOR3 ’ S〇2R3 或 COR2，其中 R2 及 R3 之定義如上述。當y = 0時，所成的構造是線性烷基鏈；當 y=l時，形成四員的環（環丁基）；當y = 2時，形成五員的環(環戊基）。較佳是苯基環與（112〇、共同（即R7)是下列基團 之一：

   ~0~c

   1 CHy -ς> ~CHj CHj /=\ CH, 人 ch3

   Ο

   . 11 1^— - I— ί I ri 111 ) --- - I - (. -: ,"r。 r 1 I - A靖先閱讀背面之注意事項再填寫本買) 經濟部中央標準局員工消費合作社邻製 本發明也關於以合成聲稱抑制劑的中間體。此等中間體 爲有如下通式的化合物：

   -17- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4規格（ ^ ΙόΙΟ6287號專利申請案 中文説明書修正頁(87年5月） A1 87. 5. 29 #·; B1 ^ 3 Ι?ί 五、發明説明（ 15 其中μ代表ν+1，即4是^5，爲前述定義之R2或爲缔丙 基取代基且較佳是烯丙基取代基。 则述説明只是總結本發明的特定方面，絕非意爲，也絕 不可理解爲’對本發明的限制。此説明中所引用的所有專 利及其他公告全文於此一併附上供參考。 本發明詳述 更特定地説，本發明化合物是有基質金屬蛋白酶抑制活 性的物質，有如下的通式： (T)xA-B-D-E-G (L) 其中（T)x A代表經取代的或未經取代的芳香族基图或雜芳 香族基團，選自包括：

   丁*

   ir 丁κ Ο

   U N R)

   T Pn- ---------策------訂------^ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) ". N、' θ N tx

   N τ 經 濟 部 t 央 標 準 局 員 工 消 費 合 作 社 印 製 其中R1代表H或.1 - 3個碳的烷基。A也可代表烷基’芳基， 雜芳基，芳基烷基，烷氧基烷基，羥基炔基’雜芳基烷 -18- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS > A4規格（210X297公釐） 457231 第86106287號專利申請案 中文説明書修正頁(87年5月）

   五、發明説明（19-2(} 其中R 5之定義如上述。此等環稱爲B環或B單位 於通式（L)中，D代表下列基團之一： c=o C=NOH \ Ηρ、 / OH Η Η 於通式（L)中，E代表 .G {CH^7 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝· S1T 經濟部中央標準局員工消費合作杜印製 -22-23 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2〖OX297公釐） G r ,CH 經 濟 部 中 ά： 標 準 Λ 員 工 消 費 合 作 社 印 製 4 5 7 2 I &ι〇6287號專利申請案 中文説明書修正頁(87年5月） 五、發明説明（21 ) 基團’其中r是0-2 ’ t是0-4，Z代表-S-，-S(O)-， S.(0)2- ’ -C(O)- ’ -N(R2)C(0)-，-〇C(〇)- ’ 或 ，而 R7係選自包括I至1 2個碳的烷基；6至丨〇個碳·的芳基；含 4-9個碳及至少一個N，Ο，或S雜原子的雜芳基；芳基烷 基，其中芳基部分含6-12個疲，烷基部分含個碳：雜 芳基烷基’其中雜芳基部分含6 -1 2個碳及至少一個N， 0，或S雜原子而烷基部分含1 _4個碳〇於上.述構造中，D 及G疋通式（L)中的D及G卓位’並非E單位的一部分；此-f手 用以顯示E單位如何聯於D及G單位上。在r = 〇時，上述構 造成爲如下的形式 D-CH, CH.-iCH^R7 > - · 此外，任何T或R7基團的芳基或雜芳基部分可視需要帶 有達三個取代基，此等取代基選自包括 _ (CH2)y'C(R i)(R12)OH ’ -(CH2)y，ORn，-(CH2)y，SR"， -(CH2)y-S(0)R'1 » -(C H2)y'S(0)2R'1 > -(C H2 )y，S02N(Rn)2 ? -(CH2)y，N(R1])2，-(CH2)y，N(Rii)CORi2， 〇c(Rll)2〇_，其 中一個乳原予都聯於芳基環上，COR11， -(CH2)y.CON(Rn)2，-(CH2)y.C02R11 , -(CH2)y,〇CORn 5 -鹵素，-CHO， -CF3，-N02，-CN，及-R12 ’ 其中 y’ 是0-4 ; R11代表η或1-4個碳的烷基；r】2代表丨_4個碳的 烷基。 .、 於特定具體實施例中，視需要取代的R7基團可選自下述 -24 本紙張尺度適闲中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) tT e_ 4 5 7 2 S牵106287號專利申請案 中文説明書修正頁(87年5月）五、發明説明（25)

   合物是這樣的化合物，丨中至少A及B單位之—含有，塞吩 環。在A單位是喧吩環時，較佳是於2_位聯於b單位上，並 於5-位帶有取代基T。㈣單位是違吩料，較佳是分別經 由2-及5 -位聯於D及A單位上。 於通式（L)中，A&B環較佳分別是苯基或伸苯基，A環 較佳於距聯接Β環最遠處帶有τ取代基，d單位較佳是羰 基，且較佳是於E單位中，t^4 HC〇_，視需 要取代的JR7基團是下列基團之—

   〇CH3 ch3

   ο 經濟部中央橾準局員工消费合作社印製

   I--------S »------訂------^ {請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) G較佳是羧酸’於距D單位的/?碳上聯於E單位。 特佳的具體實施例是有基質金屬蛋白酶抑制=性的有如 下通式的化合物

   本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公楚） 4 5 7 2 ；^186106287 號專利申請案 r~~___-- t文説明書修正頁(87年5月） β7 | §7： 5. 五、發明説明（ 其中v是1-4，W是0-3，y是0-2，每一 R20獨立是1-5個碳 的烷氧基，芳基氧基，卣素，-COOR2，-C(0)N(R2)2， S(0)R3，S(0)2R3及C(〇)R2，其中R2及R3之定義如前述。 最佳是，苯基環及（R2())w共同（即R7)是下列基團之一：

   CH,

   CH,

   Br

   OCHj och3 ch3 CHj

   ch3 ch3

   CHv OCH? o (请先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -丨裝

   、1T 本發明也關於合成某些聲抑制劑的有用的中間體。此等 中間體爲有如下通式的化合物

   經濟部中央標準局貝工消費合作社邱裝 其令^丨巧，W爲R2或歸两基取代基，且較佳是缔丙基 取代基（在後述構造中_稱爲Al 1)。 本發明最佳的化合物如下表所示； -29- --—- 本紙乐尺度適用中國國家標牟（CNS > A4規格（210X；J97公釐） 4 572 31 第86106287號專利申請案 中文說明書修正頁(89年11月） A7 B7

   經濟部中央標隼局員工消費合作社印製 五、發明説明（37) 醇（250毫升）内之溶液加H2SO4(0.25毫升），此混合物於7 0 °C加熱1 2小時將所得溶液減壓濃縮至約1 〇 〇毫.升，用己 烷（500毫升）烯釋。此溶液用飽和K2C〇3溶液（250毫升）及飽 和NaCl溶液（250毫升）洗，乾燥（Na2S04)，減壓濃縮。將所 得油體蒸餾，製得丙二酸二烯丙酯（156克，88%)，為無色 油體；沸點 85°C(0.01 毫米汞柱）；WNMRtCDCb) <5 3.40 (s, 2H), 4.60 (m, 4H), 5.20 (m, 2H), 5.30 (m, 2H), 5.85 (m, 2H) ； l3C NMR (CDC13) 6 41.2, 68.5 (2C), 118.5 (2C), i 13 1.3 (2C)，165.9 (2C)-製成之化合物以下式表示： ; 0 0 ： 步驟2. 4 -溴丙基苽某酮：於A1C13(8.0克，0.60毫莫耳）於 無水苯（100毫升）内之泥樣物中於0°c加4 -溴丁酿氣（5.8毫 升）。此混合物於0°C攪拌2小時，此時TLC分析顯示醯氣已 消耗完。將混合物升至室溫，用冰-水混合物（100毫升）處 理，減壓濃縮。殘餘物於CHC13(150毫升）及水（150毫升）間 分離。有機相用飽和NaCl溶液（150毫升）洗，乾燥 ] (Na2S 〇4)，減壓濃縮1得黃色油禮（1 〇. 5克，92%)，不需純 化即可使用。製成之化合物以下式表示：

   步騾3. 2-ί4 -笨基- 4-1某丁某）丙二酸二烯丙酿:於KaH -40- 本紙浪尺度通用中國國家標準（CNS > A4現格（210X 297公釐） {請先閲讀背面之注意事項士4寫本頁) -裝· 訂 45723邊 801〇6287號專利申請案 部 中文申請專利範圍修正本(9〇年6月）gs8 經濟部中央標準局負工消費合作社印裝 丙-、卞請專利範圍 ! Λ. 1. 一種如下通式之基質 I 修.T: . ί 金廣4伽白_^4^_制"在 化合物

   Ζ

   -(R20)w 其中 v為1至4 ; X為0至2 ; w為〇至3 ; Z為羰基； T係獨立選自包括下列之群組： -F ’ -Cl，-Br及-I，且 R2()係獨立選自包括Η，1至5個碳之烷基，1至5個碳之 烷氧基，苯氧基及函素； 及其醫藥上可接受之鹽類》 2.根據申請專利範圍第丨項之基質金屬蛋白酶抑制性化合 物’其中Τ為Cl，X為1，V為1至4，且

   (Π2〇)ν 係選自包括下列之群組 尽紙炊尺度通用尹國國家梯準（CNS ) Α4规格（210X297公釐 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本I) 訂 •-MX I一13:¾