TW202241436A

TW202241436A - 抗ｃｄ１９抗體及帕薩昔布（ｐａｒｓａｃｌｉｓｉｂ）之組合療法

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Publication number: TW202241436A
Application number: TW110144707A
Authority: TW
Inventors: 彼得藍莫爾
Original assignee: 美商英塞特公司
Priority date: 2020-11-30
Filing date: 2021-11-30
Publication date: 2022-11-01
Also published as: US20220241411A1; US20250090659A1; WO2022115762A1; CA3203587A1; EP4251138A1; JP2023551519A

Abstract

本發明描述了用於治療非霍奇金淋巴瘤、慢性淋巴球性白血病及急性淋巴母細胞白血病之抗CD19抗體及帕薩昔布(parsaclisib)之組合。

Description

抗CD19抗體及帕薩昔布(PARSACLISIB)之組合療法

非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin lymphoma)係成人最常見的血液惡性腫瘤。大多數非霍奇金淋巴瘤起源於B細胞，具有多種不同的組織學亞型，導致不同的臨床結果。除了非霍奇金淋巴瘤之病理分類外，基於其臨床特徵，通常亦將其歸類為惰性或侵襲性淋巴瘤。惰性淋巴瘤進展緩慢且因治療而緩解，但通常被視為不可治癒的。侵襲性淋巴瘤進展迅速但因治療而緩解，且通常可治愈。

瀰漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)係一種侵襲性且最常見的非霍奇金淋巴瘤，佔非霍奇金淋巴瘤的三分之一。DLBCL患者通常表現為迅速擴大的淋巴腫塊，通常有局部及全身症狀，以及發熱、反复盜汗及/或體重減輕。一些患者亦具有結外表現(例如皮膚、肝臟、胃、CNS及其他)。目前治療新診斷之晚期DLBCL患者之照護標準為免疫化學療法方案R-CHOP，該方案由抗CD20單株抗體利妥昔單抗(R)加CHOP (環磷酰胺、多柔比星、長春新鹼及潑尼松)化學療法組成。在用R-CHOP進行第一線治療後，約30%至40%之患者會復發或難以用R-CHOP治療且需要進一步治療。復發患者及患有未能因第一線治療緩解之疾病的患者(難治性患者)預後較差。

除了非霍奇金淋巴瘤之外，亦存在若干其他由B細胞失調引起的B細胞惡性腫瘤。慢性淋巴球性白血病係由B淋巴球異常蓄積引起的成人白血病。在慢性淋巴球性白血病中，惡性淋巴球可能看起來正常且成熟，但其無法有效應對感染。慢性淋巴球性白血病係成人中最常見的白血病形式。另一種類型之白血病，急性淋巴母細胞白血病之特徵在於骨髓中之惡性及未成熟白血球(亦稱為淋巴母細胞)的過度產生及持續增殖。急性淋巴母細胞白血病最常見於兒童期，發病高峰期為4-5歲。

本發明提供一種治療有需要之人類個體之非霍奇金淋巴瘤、慢性淋巴球性白血病或急性淋巴母細胞白血病的方法，該方法藉由向人類個體投與治療有效量之4-{3-[1-(4-胺基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基}吡咯啶-2-酮或其醫藥學上可接受之鹽，及與人類CD19結合之抗體，其中該抗體包含可變重(VH)域，該域包含VH互補決定區(CDR)1、VH CDR2及VH CDR3，其中：該VH CDR1包含胺基酸序列SYVMH (SEQ ID NO:6)；該VH CDR2包含胺基酸序列NPYNDG (SEQ ID NO:7)；且該VH CDR3包含胺基酸序列GTYYYGTRVFDY (SEQ ID NO:8)；且其中該抗體包含可變輕(VL)域，該域包含VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3，其中：該VL CDR1包含胺基酸序列RSSKSLQNVNGNTYLY (SEQ ID NO:9)；該VL CDR2包含胺基酸序列RMSNLNS (SEQ ID NO:10)；且該VL CDR3包含胺基酸序列MQHLEYPIT (SEQ ID NO:11)。

在一些實施例中，抗體之VH域包含胺基酸序列EVQLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGYTFTSYVMHWVRQAPGKGLEWIGYINPYNDGTKYNEKFQGRVTISSDKSISTAYMELSSLRSEDTAMYYCARGTYYYGTRVFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:4)，且抗體之VL域包含胺基酸序列DIVMTQSPATLSLSPGERATLSCRSSKSLQNVNGNTYLYWFQQKPGQSPQLLIYRMSNLNSGVPDRFSGSGSGTEFTLTISSLEPEDFAVYYCMQHLEYPITFGAGTKLEIK (SEQ ID NO:5)。

在一些實施例中，抗體包含重鏈及輕鏈，且其中重鏈包含以SEQ ID NO:2闡述之胺基酸序列且輕鏈包含以SEQ ID NO:3闡述之胺基酸序列。

在一些實施例中，人類個體患有非霍奇金淋巴瘤(例如，復發性/難治性非霍奇金淋巴瘤)。

在一些實施例中，非霍奇金淋巴瘤為瀰漫性大B細胞淋巴瘤(例如，復發性/難治性瀰漫性大B細胞淋巴瘤)。

在一些實施例中，非霍奇金淋巴瘤為濾泡性淋巴瘤(例如，復發性/難治性濾泡性淋巴瘤)。

在一些實施例中，非霍奇金淋巴瘤為小淋巴球性淋巴瘤(例如，復發性/難治性小淋巴球性淋巴瘤)。

在一些實施例中，非霍奇金淋巴瘤為黏膜相關淋巴組織淋巴瘤(例如，復發性/難治性黏膜相關淋巴組織淋巴瘤)。

在一些實施例中，非霍奇金淋巴瘤為邊緣區淋巴瘤(例如，復發性/難治性邊緣區淋巴瘤)。

在一些實施例中，非霍奇金淋巴瘤為伯基特氏淋巴瘤(例如，復發性/難治性伯基特氏淋巴瘤)。

在一些實施例中，非霍奇金淋巴瘤為套細胞淋巴瘤(例如，復發性/難治性套細胞淋巴瘤)。

在一些實施例中，人類個體患有慢性淋巴球性白血病(例如，復發性/難治性慢性淋巴球性白血病)。

在一些實施例中，人類個體患有急性淋巴母細胞白血病(例如，復發性/難治性急性淋巴母細胞白血病)。

在一些實施例中，抗體經靜脈內投與。在一些實施例中，抗體以9 mg/kg或12 mg/kg之劑量靜脈內投與。在一些實施例中，抗體至少每兩週一次以9 mg/kg或12 mg/kg之劑量經靜脈內投與。在一些實施例中，抗體根據以下時程以12 mg/kg之劑量經靜脈內投與：在第一個28天週期之第1、4、8、15及22天；在第二個28天週期之第1、8、15及22天；在第三個28天週期之第1、8、15及22天；及在第四個28天週期之第1及15天以及此後的其他28天週期之第1及15天。

在一些實施例中，4-{3-[1-(4-胺基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基}吡咯啶-2-酮或其醫藥學上可接受之鹽係經口投與。在一些實施例中，4-{3-[1-(4-胺基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基}吡咯啶-2-酮或其醫藥學上可接受之鹽係以1 mg、2.5 mg、5 mg、10 mg或20 mg之劑量經口投與。在一些實施例中，4-{3-[1-(4-胺基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基}吡咯啶-2-酮或其醫藥學上可接受之鹽係每天一次以1 mg、2.5 mg、5 mg、10 mg或20 mg之劑量經口投與。

在一些實施例中，4-{3-[1-(4-胺基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基}吡咯啶-2-酮或其醫藥學上可接受之鹽在第1至56天每天一次以20 mg之劑量經口投與，且隨後每天一次以2.5 mg之劑量經口投與。

在一些實施例中，抗體根據以下時程以12 mg/kg之劑量經靜脈內投與：在第一個28天週期之第1、4、8、15及22天；在第二個28天週期之第1、8、15及22天；在第三個28天週期之第1、8、15及22天；及在第四個28天週期之第1及15天以及此後的其他28天週期之第1及15天，且 4-{3-[1-(4-胺基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基}吡咯啶-2-酮或其醫藥學上可接受之鹽在第1至56天每天一次以20 mg之劑量經口投與，且隨後每天一次以2.5 mg之劑量經口投與。

除非另有定義，否則本文使用之所有技術及科學術語與本發明所屬領域之一般技術者通常理解的含義相同。儘管在本發明之實踐或測試中可使用與本文所述之彼等方法及材料相似或等效的方法及材料，但例示性方法及材料係在下文描述。本文中提及之所有公開案、專利申請案、專利及其他參考文獻均以引用之方式整體併入。在發生衝突時，以本申請案(包括定義)為準。材料、方法及實例僅為說明性的且不意欲為限制性的。

本發明之其他特徵及優勢將自以下實施方式及申請專利範圍中顯而易見。

相關申請案之交叉參考

本申請案主張2021年1月11日申請之國際申請案第PCT/US2021/012982號及2020年11月30日申請之美國臨時申請案第63/119,370號之優先權。在先申請案之內容以引用之方式整體併入本文。

抗CD19抗體與本文所述之4-{3-[1-(4-胺基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基}吡咯啶-2-酮或其醫藥學上可接受之鹽的組合可用於治療非霍奇金淋巴瘤、慢性淋巴球性白血病或急性淋巴母細胞白血病。抗CD19抗體

CD19在不同的B細胞源性血癌中廣泛且均勻地表現。CD19能夠增強對B細胞存活重要的B細胞受體信號傳導，且因此為旨在治療B細胞相關淋巴瘤及白血病之藥物的治療靶點。

人類CD19蛋白之胺基酸序列為： MPPPRLLFFLLFLTPMEVRPEEPLVVKVEEGDNAVLQCLKGTSDGPTQQLTWSRESPLKPFLKLSLGLPGLGIHMRPLAIWLFIFNVSQQMGGFYLCQPGPPSEKAWQPGWTVNVEGSGELFRWNVSDLGGLGCGLKNRSSEGPSSPSGKLMSPKLYVWAKDRPEIWEGEPPCLPPRDSLNQSLSQDLTMAPGSTLWLSCGVPPDSVSRGPLSWTHVHPKGPKSLLSLELKDDRPARDMWVMETGLLLPRATAQDAGKYYCHRGNLTMSFHLEITARPVLWHWLLRTGGWKVSAVTLAYLIFCLCSLVGILHLQRALVLRRKRKRMTDPTRRFFKVTPPPGSGPQNQYGNVLSLPTPTSGLGRAQRWAAGLGGTAPSYGNPSSDVQADGALGSRSPPGVGPEEEEGEGYEEPDSEEDSEFYENDSNLGQDQLSQDGSGYENPEDEPLGPEDEDSFSNAESYENEDEELTQPVARTMDFLSPHGSAWDPSREATSLGSQSYEDMRGILYAAPQLRSIRGQPGPNHEEDADSYENMDNPDGPDPAWGGGGRMGTWSTR (SEQ ID NO:1)。

他法西他單抗係一種針對人類CD19之IgG1-G2/κ Fc工程化單株抗體。已對他法西他單抗之恆定Fc區進行工程化以包括S239D及I332E (EU指數)取代，該等取代增強免疫系統對癌細胞的反應。工程化Fc增強了抗體依賴性細胞介導的細胞毒性(ADCC)及抗體依賴性細胞吞噬作用(ADCP)。他法西他單抗係描述於美國專利第8,524,867號中，該專利以全文引用之方式併入(在美國專利第8,524,867號中，他法西他單抗之完整重鏈為SEQ ID NO:87，且他法西他單抗之完整輕鏈為SEQ ID NO:106)。

他法西他單抗重鏈及輕鏈之胺基酸序列如下所示。可變重(VH)域及可變輕(VL)域之互補決定區(CDR) 1、2及3按自成熟VL及VH序列之N端至C端的順序顯示且均加底線及粗體。可變區為加底線的。由以下列出之重鏈(SEQ ID NO:2)及輕鏈(SEQ ID NO:3)組成之抗體稱為他法西他單抗。

他法西他單抗重鏈： EVQLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGYTFT SYVMHWVRQAPGKGLEWIGYI NPYNDGTKYNEKFQGRVTISSDKSISTAYMELSSLRSEDTAMYYCAR GTYYYGTRVFDYWGQGTLVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPDVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPEEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO:2)

他法西他單抗輕鏈： DIVMTQSPATLSLSPGERATLSC RSSKSLQNVNGNTYLYWFQQKPGQSPQLLIY RMSNLNSGVPDRFSGSGSGTEFTLTISSLEPEDFAVYYC MQHLEYPITFGAGTKLEIK RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO:3)

他法西他單抗之可變重(VH)域具有以下胺基酸序列： EVQLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGYTFT SYVMHWVRQAPGKGLEWIGYI NPYNDGTKYNEKFQGRVTISSDKSISTAYMELSSLRSEDTAMYYCAR GTYYYGTRVFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:4)

他法西他單抗之可變輕(VL)域具有以下胺基酸序列： DIVMTQSPATLSLSPGERATLSC RSSKSLQNVNGNTYLYWFQQKPGQSPQLLIY RMSNLNSGVPDRFSGSGSGTEFTLTISSLEPEDFAVYYC MQHLEYPITFGAGTKLEIK (SEQ ID NO:5)

他法西他單抗之VH CDR的胺基酸序列如下所列： VH CDR1：SYVMH (SEQ ID NO:6)； VH CDR2：NPYNDG (SEQ ID NO:7)；及 VH CDR3：GTYYYGTRVFDY (SEQ ID NO:8)。

他法西他單抗之VL CDR的胺基酸序列如下所列： VL CDR1：RSSKSLQNVNGNTYLY (SEQ ID NO:9)； VL CDR2：RMSNLNS (SEQ ID NO:10)；及 VL CDR3：MQHLEYPIT(SEQ ID NO:11)。

在某些實施例中，抗CD19抗體包括人類重鏈及輕鏈恆定區。在某些實施例中，重鏈恆定區包含CH1域及鉸鏈區。在一些實施例中，重鏈恆定區包含CH2域。在一些實施例中，重鏈恆定區包含CH3域。在一些實施例中，重鏈恆定區包含CH1、CH2及CH3域。若重鏈恆定區包括取代，則此類取代改變抗體之特性(例如，增加或減少以下中之一或多者：Fc受體結合、抗體醣基化、半胱胺酸殘基數、效應細胞功能或補體功能)。在某些實施例中，抗體為IgG抗體。在特定實施例中，抗體選自由IgG1、IgG2、IgG3及IgG4組成之群。

可例如藉由製備及表現編碼所述胺基酸序列之合成基因或藉由突變人類生殖系基因以提供編碼所述胺基酸序列之基因來製備抗體，諸如他法西他單抗。此外，可例如使用一或多種以下方法獲得此抗體及其他抗CD19抗體。

可藉由用來自人類Fv可變區之等效序列替換不直接參與抗原結合之Fv可變區序列來產生人類化抗體。用於產生人類化抗體之一般方法由以下各者提供：Morrison, S. L., Science,229:1202-1207 (1985)；Oi等 , BioTechniques,4:214 (1986)；以及US 5,585,089；US 5,693,761；US 5,693,762；US 5,859,205；以及US 6,407,213。彼等方法包括自重鏈或輕鏈中之至少一者分離、操作及表現編碼全部或部分免疫球蛋白Fv可變區之核酸序列。此類核酸之來源為熟習此項技術者熟知的，且例如可自以下各者獲得：如上所述之產生針對預定靶標之抗體的融合瘤、生殖系免疫球蛋白基因、或合成構築體。接著可將編碼人類化抗體之重組DNA選殖至適合之表現載體中。

人類生殖系序列例如描述於以下各者中：Tomlinson, I.A.等, J. Mol. Biol., 227:776-798 (1992)；Cook, G. P.等, Immunol. Today,16: 237-242 (1995)；Chothia, D.等, J. Mol. Bio. 227:799-817 (1992)；及Tomlinson等, EMBO J.,14:4628-4638 (1995)。V BASE目錄提供了人類免疫球蛋白可變區序列之綜合目錄(由Tomlinson, IA 等MRC Centre for Protein Engineering, Cambridge, UK編譯)。此等序列可用作人類序列之來源，例如框架區及CDR。亦可使用共同人類框架區，例如如美國專利第6,300,064號中所述。

亦可使用用於人類化抗體之其他方法。例如，其他方法可解釋抗體之三維結構、與結合決定簇在三維空間接近的框架位置以及免疫原性肽序列。參見例如WO 90/07861；美國專利第5,693,762號；第5,693,761號；第5,585,089號；第5,530,101號；及第6,407,213號；Tempest等(1991) Biotechnology9:266-271。另一種方法被稱為「人性化(humaneering)」且描述於例如US 2005-008625中。

抗體可包括人類Fc區，例如野生型Fc區或包括一或多個改變的Fc區。在一個實施例中，恆定區經改變，例如，人類IgG1恆定區經突變以包括S239D及/或I332E取代。抗體亦可具有穩定免疫球蛋白之兩條重鏈之間之二硫鍵的突變，諸如IgG4之鉸鏈區中之突變，如此項技術中所揭示(例如，Angal等(1993) Mol. Immunol.30:105-08)。亦參見例如U.S. 2005-0037000。

抗CD19抗體可呈全長抗體之形式，或呈抗CD19抗體之低分子量形式(例如，生物活性抗體片段或微抗體)，例如Fab、Fab'、F( ab') ₂、Fv、Fd、dAb、scFv及sc(Fv)2。本發明涵蓋之其他抗CD19抗體包括含有單一可變鏈，諸如VH或VL或其生物活性片段的單域抗體(sdAb)。參見例如Moller等, J. Biol. Chem., 285(49): 38348-38361 (2010)；Harmsen等, Appl. Microbiol. Biotechnol., 77(1):13-22 (2007)；U.S. 2005/0079574及Davies等(1996) Protein Eng., 9(6):531-7。像完整抗體一樣，sdAb能夠選擇性地結合特定抗原。sdAb之分子量僅為12-15 kDa，比普通抗體小得多，且甚至比Fab片段及單鏈可變片段更小。

本文提供了包含抗CD19抗體或其抗原結合片段及其一或多種酸性變異體之混合物的組合物，例如，其中酸性變異體之量為小於約80%、70%、60%、60%、50%、40%、30%、30%、20%、10%、5%或1%。亦提供包含抗CD19抗體或其抗原結合片段之組合物，該抗體或其抗原結合片段包含至少一個脫酰胺位點，其中組合物之pH為約5.0至約6.5，使得例如至少約90％之抗CD19抗體未脫酰胺(亦即，少於約10%之抗體經脫酰胺)。在某些實施例中，少於約5%、3%、2%或1%之抗體經脫酰胺。pH可為5.0至6.0，諸如5.5或6.0。在某些實施例中，組合物之pH為5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4或6.5。

「酸性變異體」為所關注多肽之變異體，其比所關注多肽酸性更強(例如，藉由陽離子交換層析測定)。酸性變異體之一個實例為脫酰胺變異體。

多肽分子之「脫酰胺」變異體為一種多肽，其中原始多肽之一或多個天冬酰胺殘基已轉化為天冬胺酸，亦即中性酰胺側鏈已轉化為具有整體酸性特徵的殘基。

如本文所用的關於包含抗CD19抗體或其抗原結合片段之組合物的術語「混合物」意指存在所需抗CD19抗體或其抗原結合片段及其一或多種酸性變異體。酸性變異體可主要包含脫酰胺之抗CD19抗體，以及少量的其他酸性變異體。

在某些實施例中，經突變以消除脫酰胺作用之抗體的結合親和力(K _D)、結合率(K _Don)及/或解離率(K _Doff)與野生型抗體相似，例如具有小於約5倍、2倍、1倍(100%)、50%、30%、20%、10%、5%、3%、2%或1%的差異。 雙特異性抗體

在某些實施例中，本文所述之抗CD19抗體或其抗原結合片段存在於雙特異性抗體中。雙特異性抗體為對至少兩種不同表位具有結合特異性之抗體。例示性雙特異性抗體可結合CD19蛋白之兩個不同表位。其他此類抗體可將CD19結合位點與另一種蛋白質之結合位點組合。雙特異性抗體可製備為全長抗體或其低分子量形式(例如，F(ab') ₂雙特異性抗體、sc(Fv)2雙特異性抗體、雙抗體雙特異性抗體)。

全長雙特異性抗體之傳統生產係基於兩個免疫球蛋白重鏈-輕鏈對之共表現，其中兩條鏈具有不同的特異性(Millstein等, Nature, 305:537-539 (1983))。在不同的方法中，具有所需結合特異性之抗體可變域與免疫球蛋白恆定域序列融合。將編碼免疫球蛋白重鏈融合物及(若需要)免疫球蛋白輕鏈之DNA插入單獨的表現載體中，且共轉染至適合之宿主細胞中。此為調整三個多肽片段之比例提供了更大的靈活性。然而，當至少兩條多肽鏈以相等比例之表現導致高產率時，可將兩條或所有三條多肽鏈之編碼序列插入至單一表現載體中。

根據美國專利第5,731,168號中描述之另一種方法，一對抗體分子之間的界面可經工程化以使自重組細胞培養物中回收之異二聚體的百分比最大化。較佳界面包含C _H3域之至少一部分。在此方法中，來自第一抗體分子界面之一或多個小胺基酸側鏈經較大側鏈(例如，酪胺酸或色胺酸)替換。藉由用較小胺基酸側鏈(例如丙胺酸或蘇胺酸)替換大胺基酸側鏈，在第二抗體分子之界面上產生與大側鏈相同或相似大小的補償「空腔」。此提供一種機制，用於增加異二聚體，而非其他非所要最終產物，諸如同二聚體的產率。

雙特異性抗體包括交聯或「雜結合物」抗體。例如，雜結合物中之抗體之一可與抗生物素蛋白偶聯，另一個與生物素偶聯。可使用任何方便的交聯方法製備雜結合物抗體。

「雙抗體」技術提供了一種製備雙特異性抗體片段之替代機制。片段包含藉由連接子連接至VL之VH，連接子過短以致不能在同一鏈上之兩個域之間配對。因此，一個片段之VH及VL域被迫與另一片段之互補VL及VH域配對，從而形成兩個抗原結合位點。 多價抗體

在某些實施例中，本文所述之抗CD19抗體或其抗原結合片段存在於多特異性抗體中。多價抗體可比二價抗體更快地被表現抗體所結合之抗原的細胞內化(及/或分解代謝)。本文所述之抗體可為具有三個或更多個抗原結合位點之多價抗體(例如，四價抗體)，其可藉由編碼抗體多肽鏈之核酸的重組表現而容易地產生。多價抗體可包含二聚化域及三個或更多個抗原結合位點。例示性二聚化域包含Fc區或鉸鏈區(或由其組成)。多價抗體可包含三個至約八個(例如，四個)抗原結合位點(或由其組成)。多價抗體視情況包含至少一條多肽鏈(例如，至少兩條多肽鏈)，其中多肽鏈包含兩個或更多個可變域。例如，多肽鏈可包含VD1-(X1) _n-VD2-(X2) _n-Fc，其中VD1為第一可變域，VD2為第二可變域，Fc為Fc區之多肽鏈，X1及X2代表胺基酸或肽間隔子，且n為0或1。 結合抗體

本文中揭示之抗體可為結合至各種分子之結合抗體，該等分子包括大分子物質，諸如聚合物(例如，聚乙二醇(PEG)、經PEG修飾之聚乙烯亞胺(PEI) (PEI-PEG)、聚麩胺酸(PGA) (N-(2-羥丙基)甲基丙烯酰胺(HPMA)共聚物)、玻尿酸、放射性物質(例如 ⁹⁰Y、 ¹³¹I)螢光物質、發光物質、半抗原、酶、金屬螯合物、藥物及毒素(例如卡奇黴素(calcheamicin)、 假單胞菌外毒素A、蓖麻毒蛋白(例如去醣基化蓖麻毒蛋白A鏈))。

在一個實施例中，為了提高抗CD19抗體之細胞毒性作用且因此提高其治療效果，抗體與劇毒物質，包括放射性同位素及細胞毒性劑結合。此等結合物可選擇性地將毒性負荷遞送至目標位點(亦即表現抗體識別之抗原的細胞)，而未被抗體識別之細胞則得以倖免。為了最大限度地減少毒性，結合物通常基於血清半衰期較短之分子進行工程化(因此，使用鼠類序列以及IgG3或IgG4同型)。

在某些實施例中，抗CD19抗體或其抗原結合片段用改善其在循環中，例如在血液、血清或其他組織中之穩定性及/或保留例如至少1.5、2、5、10或50倍的部分修飾。例如，抗CD19抗體或其抗原結合片段可與聚合物締合(例如，與其結合)，該聚合物例如為基本上非抗原性的聚合物，諸如聚環氧烷或聚環氧乙烷。適合之聚合物將在重量上顯著變化。可使用具有在約200至約35,000道爾頓(或約1,000至約15,000及2,000至約12,500)範圍內之數均分子量的聚合物。例如，抗CD19抗體或其抗原結合片段可與水溶性聚合物結合，該聚合物例如親水性聚乙烯聚合物，例如聚乙烯醇或聚乙烯吡咯啶酮。此類聚合物之實例包括聚環氧烷均聚物，諸如聚乙二醇(PEG)或聚丙二醇、聚氧乙烯化多元醇、其共聚物及其嵌段共聚物，限制條件為保持嵌段共聚物之水溶性。其他適用之聚合物包括聚氧化烯，諸如聚氧乙烯、聚氧丙烯以及聚氧乙烯及聚氧丙烯之嵌段共聚物；聚甲基丙烯酸酯；卡波姆；及支鏈或非支鏈多醣。

上述結合抗體可藉由對本文所述之抗體或其較低分子量形式進行化學修飾來製備。修飾抗體之方法為此項技術中熟知的(例如，US 5,057,313及US 5,156,840)。產生抗體之方法

抗體可在細菌或真核細胞中產生。一些抗體，例如Fab's可在細菌細胞，例如 大腸桿菌細胞中產生。抗體亦可在真核細胞，諸如轉化細胞株(例如，CHO、293E、COS)中產生。此外，抗體(例如，scFv's)可在酵母細胞，諸如 畢赤酵母 (Pichia)(參見例如Powers等, J Immunol Methods. 251:123-35 (2001))、 汉逊酵母 (Hanseula)或 酵母属 (Saccharomyces)中表現。為了產生所關注抗體，構築編碼抗體之多核苷酸，將其引入表現載體中，且接著在適合之宿主細胞中表現。使用標準分子生物學技術製備重組表現載體、轉染宿主細胞、選擇轉化體、培養宿主細胞及回收抗體。

若欲在細菌細胞(例如 大腸桿菌)中表現抗體，則表現載體應具有允許載體在細菌細胞中擴增的特徵。此外，當使用諸如JM109、DH5α、HB101或XL1-Blue等 大腸桿菌作為宿主時，載體必須具有可允許在 大腸桿菌中有效表現之啟動子，例如lacZ啟動子(Ward等, 341:544-546 (1989)、araB啟動子(Better等, Science, 240:1041-1043 (1988))，或T7啟動子。此類載體之實例包括例如M13系列載體、pUC系列載體、pBR322、pBluescript、pCR-Script、pGEX-5X-1 (Pharmacia)、「QIAexpress system」(QIAGEN)、pEGFP及pET (當使用此表現載體時，宿主較佳為表現T7 RNA聚合酶之BL21)。表現載體可含有用於抗體分泌之信號序列。為了產生至 大腸桿菌之周質中， pelB信號序列(Lei等, J. Bacteriol., 169:4379 (1987))可用作抗體分泌之信號序列。對於細菌表現，可使用氯化鈣方法或電穿孔方法將表現載體引入細菌細胞中。

若抗體欲在動物細胞，諸如CHO、COS及NIH3T3細胞中表現，則表現載體包括在此等細胞中表現所必需的啟動子，例如SV40啟動子(Mulligan 等 , Nature, 277:108 (1979))、MMLV-LTR啟動子、EF1α啟動子(Mizushima 等, Nucleic Acids Res., 18:5322 (1990))，或CMV啟動子。除了編碼免疫球蛋白或其域之核酸序列之外，重組表現載體可攜帶額外序列，諸如調節載體在宿主細胞中之復制的序列(例如，複製起點)及選擇標記基因。選擇標記基因有助於選擇載體所引入之宿主細胞(參見例如美國專利第4,399,216號、第4,634,665號及第5,179,017號)。例如，通常，選擇標記基因賦予載體所引入之宿主細胞對諸如G418、潮黴素或甲胺喋呤等藥物的耐受性。具有選擇標記之載體的實例包括pMAM、pDR2、pBK-RSV、pBK-CMV、pOPRSV及pOP13。

在一個實施例中，抗體係在哺乳動物細胞中產生。用於表現抗體之例示性哺乳動物宿主細胞包括中國倉鼠卵巢(CHO細胞) (包括 dhfr ^-CHO 細胞，其描述於Urlaub及Chasin (1980) Proc. Natl. Acad. Sci. USA77:4216-4220中，與例如Kaufman及Sharp (1982) Mol. Biol.159:601-621中所述之DHFR選擇標記一起使用)、人胚胎腎293細胞(例如293、293E、293T)、COS細胞、NIH3T3細胞、淋巴細胞株，例如NS0骨髓瘤細胞及SP2細胞，以及來自轉殖基因動物，例如轉殖基因哺乳動物的細胞。例如，該細胞為乳腺上皮細胞。

在抗體表現之例示性系統中，藉由磷酸鈣介導之轉染將編碼抗CD19抗體(例如他法西他單抗)之抗體重鏈及抗體輕鏈的重組表現載體引入 dhfr ^-CHO細胞中。在重組表現載體內，抗體重鏈及輕鏈基因各自與增強子/啟動子調節元件(例如，源自SV40、CMV、腺病毒及其類似者，例如CMV增強子/AdMLP啟動子調節元件或SV40增強子/AdMLP啟動子調節元件)連接以驅動基因之高水準轉錄。重組表現載體亦帶有一個 DHFR基因，該基因允許使用甲胺喋呤選擇/擴增來選擇已用載體轉染之CHO細胞。培養選擇之轉化宿主細胞以允許表現抗體重鏈及輕鏈，且自培養基中回收抗體。

抗體亦可由轉殖基因動物產生。例如，美國專利第5,849,992號描述了一種在轉殖基因哺乳動物之乳腺中表現抗體的方法。構築之轉殖基因包括乳汁特異性啟動子及編碼所關注抗體之核酸以及分泌信號序列。由此類轉殖基因哺乳動物之雌性產生的乳汁包括分泌在其中之所關注抗體。抗體可自乳汁中純化，或在一些應用中直接使用。亦提供包含一或多種本文所述之核酸的動物。

本發明之抗體可自宿主細胞內部或外部(諸如培養基)分離且純化為基本上純的及均質的抗體。抗體純化常用的分離及純化方法可用於抗體之分離及純化，且不限於任何特定方法。可藉由例如管柱層析、過濾、超濾、鹽析、溶劑沉澱、溶劑萃取、蒸餾、免疫沉澱、SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳、等電聚焦、透析及重結晶等適當選擇及組合來分離及純化抗體。層析包括例如親和層析、離子交換層析、疏水層析、凝膠過濾、反相層析及吸附層析(Strategies for Protein Purification and Characterization: A Laboratory Course Manual. Daniel R. Marshak等編, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1996)。層析可使用液相層析，諸如HPLC及FPLC進行。用於親和層析之管柱包括蛋白A管柱及蛋白G管柱。使用蛋白A管柱之管柱的實例包括Hyper D、POROS及Sepharose FF (GE Healthcare Biosciences)。本發明亦包括使用此等純化方法高度純化的抗體。抗體醫藥組合物及投與

可將本文所述之抗CD19抗體或其抗原結合片段調配成醫藥組合物，用於向個體投與，例如以治療本文所述之病症。通常，醫藥組合物包括醫藥學上可接受之載劑。如本文所用，「醫藥學上可接受之載劑」包括生理上相容的任何及所有溶劑、分散介質、包衣、抗細菌劑及抗真菌劑、等滲劑及吸收延遲劑，及其類似物。組合物可包括醫藥學上可接受之鹽，例如酸加成鹽或鹼加成鹽(參見例如Berge, S.M. 等. (1977) J. Pharm. Sci. 66:1-19)。

醫藥調配係一項完善的技術，且進一步描述於例如下列者中：Gennaro (編), Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 第20版, Lippincott, Williams & Wilkins (2000) (ISBN: 0683306472)；Ansel等, Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, 第7 版, Lippincott Williams & Wilkins Publishers (1999) (ISBN: 0683305727)；及Kibbe (編), Handbook of Pharmaceutical Excipients American Pharmaceutical Association, 第3 版 (2000) (ISBN: 091733096X)。

可藉由多種方法將抗CD19抗體或其抗原結合片段投與至個體，例如有需要之個體，例如人類個體。對於許多應用，投與途徑為以下之一：靜脈內注射或輸注(IV)、皮下注射(SC)、腹膜內(IP)或肌內註射。亦可能使用關節內遞送。亦可使用其他非經腸投與模式。此類模式之實例包括：動脈內、鞘內、囊內、眶內、心內、皮內、經氣管、皮下、關節內、囊下、蛛網膜下、脊柱內及硬膜外及胸骨內註射。在一些情況下，投與可為經口投與。

抗體或其抗原結合片段之投與途徑及/或模式亦可針對個別情況定制，例如藉由監測個體，例如使用斷層攝影成像，例如以使腫瘤可視化。

抗體或其抗原結合片段可作為固定劑量或以mg/kg患者體重劑量投與。亦可選擇劑量以減少或避免產生針對抗CD19抗體之抗體。調整劑量方案以提供所需反應，例如治療反應或組合治療效果。通常，可使用一定劑量之抗CD19抗體以向個體提供生物可用量的藥劑。例如，可投與約9 mg/kg至約12mg/kg範圍內的劑量。在特定實施例中，以約9 mg/kg或約12 mg/kg之劑量向需要用抗CD19抗體治療之個體投與抗體。關於劑量(dose)或劑量(dosage)，術語「約」旨在表示所述劑量之±10%的範圍，例如，約3 mg/kg之劑量將介於2.7 mg/kg與3.3 mg/kg患者體重之間。

如本文所用，劑量單位形式或「固定劑量」或「平劑量」係指適合作為待治療個體之單位劑量的物理離散單元；各單元含有預定量之活性化合物，該活性化合物經計算以與所需醫藥載劑結合且視情況與其他藥劑結合產生所需治療效果。可給予單劑量或多劑量。或者或另外，抗體可經由連續輸注投與。例示性固定劑量包括約675 mg、約900 mg、約1200 mg及約1800 mg。關於劑量(dose)或劑量(dosage)，術語「約」旨在表示所述劑量之±10%的範圍，例如，約375 mg之劑量將介於337.5 mg與412.5 mg之間。

抗CD19抗體或其抗原結合片段劑量可例如在足以涵蓋至少2個劑量、3個劑量、5個劑量、10個劑量或更多個劑量之時段(一個療程)內以週期性間隔投與，例如每天一次或兩次，或每週約一至四次(例如，每週至少兩次)，或每週一次、每兩週一次(每兩週)、每三週一次、每月一次，持續約1至12週。可能影響有效治療個體所需之劑量及時間的因素包括例如疾病或病症之嚴重性、調配物、遞送途徑、先前的治療、個體之總體健康狀況及/或年齡，以及存在之其他疾病。此外，用治療有效量之化合物治療個體可包括單次治療，或較佳可包括一系列治療。

例示性給藥方案包含每2週一次以約675 mg之固定劑量投與抗CD19抗體或其抗原結合片段。另一例示性給藥方案包含每2週一次以約900 mg之固定劑量投與抗CD19抗體或其抗原結合片段。另一例示性給藥方案包含每2週一次以約1200 mg之固定劑量投與抗CD19抗體或其抗原結合片段。另一例示性給藥方案包含每2週一次以約1800 mg之固定劑量投與抗CD19抗體或其抗原結合片段。

例示性基於體重之給藥方案包含每週至少兩次以約12 mg/kg之劑量投與抗CD19抗體或其抗原結合片段，例如，根據以下時程：在第一個28天週期之第1、4、8、15及22天；在第二個28天週期之第1、8、15及22天；在第三個28天週期之第1、8、15及22天；及在第四個28天週期之第1及15天以及此後的其他28天週期之第1及15天。

醫藥組合物可包括「治療有效量」之本文所述之抗CD19抗體或其抗原結合片段。此類有效量可基於所投與藥劑之效果，或使用多於一種藥劑時，基於藥劑之組合效果來確定。藥劑之治療有效量亦可根據諸如以下之因素而變化：個體之疾病狀態、年齡、性別及體重，以及化合物在個體中引起所需反應，例如改善至少一種病症參數或改善至少一種病症症狀之能力。治療有效量亦為組合物之任何毒性或有害作用被治療有益作用超過的量。帕薩昔布

本申請案提供投與4-{3-[1-(4-胺基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基}吡咯啶-2-酮(「帕薩昔布」或「INCB050465」)或其醫藥學上可接受之鹽與抗CD19抗體或其抗原結合片段之組合的方法。

在一些實施例中，投與之化合物為： (S)-4-(3-((S)-1-(4-胺基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基)吡咯啶-2-酮； (R)-4-(3-((S)-1-(4-胺基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基)吡咯啶-2-酮； (S)-4-(3-((R)-1-(4-胺基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基)吡咯啶-2-酮；或 (R)-4-(3-((R)-1-(4-胺基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基)吡咯啶-2-酮；或其醫藥學上可接受之鹽。

在一些實施例中，投與之化合物為4-{3-[1-(4-胺基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基}吡咯啶-2-酮之醫藥學上可接受之鹽。

在一些實施例中，投與之化合物係選自下列者之醫藥學上可接受之鹽： (S)-4-(3-((S)-1-(4-胺基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基)吡咯啶-2-酮； (R)-4-(3-((S)-1-(4-胺基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基)吡咯啶-2-酮； (S)-4-(3-((R)-1-(4-胺基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基)吡咯啶-2-酮；或 (R)-4-(3-((R)-1-(4-胺基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基)吡咯啶-2-酮。

在一些實施例中，投與之化合物為( R)-4-(3-(( S)-1-(4-胺基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基)吡咯啶-2-酮之醫藥學上可接受之鹽。

在一些實施例中，投與之化合物為( R)-4-(3-(( S)-1-(4-胺基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基)吡咯啶-2-酮鹽酸鹽。

在一些實施例中，鹽為1:1化學計量比之( R)-4-(3-(( S)-1-(4-胺基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基)吡咯啶-2-酮與鹽酸。

在一些實施例中，鹽為結晶的。

在一些實施例中，4-{3-[1-(4-胺基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基}吡咯啶-2-酮之鹽酸鹽具有：至少一個、兩個、三個、四個或五個XRPD峰，就2-θ而言，選自約11.3°、約16.4°、約21.0°、約23.0°、約28.1°、約31.2°及約32.8°；至少兩個XRPD峰，就2θ而言，選自約11.3°、約16.4°、約21.0°、約23.0°、約28.1°、約31.2°及約32.8°；至少三個XRPD峰，就2θ而言，選自約11.3°、約16.4°、約21.0°、約23.0°、約28.1°、約31.2°及約32.8°；在一些實施例中，4-{3-[1-(4-胺基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基}吡咯啶-2-酮之鹽酸鹽具有至少四個XRPD峰，就2-θ而言，選自約11.3°、約16.4°、約21.0°、約23.0°、約28.1°、約31.2°及約32.8°。在一些實施例中，4-{3-[1-(4-胺基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基}吡咯啶-2-酮之鹽酸鹽具有所有列出之XRPD峰，就2-θ而言，在約11.3°、約16.4°、約21.0°、約23.0°、約28.1°、約31.2°及約32.8°處。在一些實施例中，4-{3-[1-(4-胺基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基}吡咯啶-2-酮之鹽酸鹽的DSC熱譜圖在約207℃處具有吸熱峰。

本文所述之化合物，包括其鹽可使用已知的有機合成技術來製備，且可根據許多可能的合成途徑中之任一者來合成。在一些實施例中，化合物可如美國專利第9,199,982號、第9,932,341號及第10,336,759號中所述來製備，該等專利中之每一者以引用之方式整體併入本文中。

製備本文所述化合物之反應可在適合之溶劑中實施，該等溶劑可由熟習有機合成技術者容易地選擇。適合之溶劑在進行反應之溫度( 例如，可在溶劑之冷凍溫度至溶劑之沸騰溫度範圍內的溫度)下可基本上不與起始物質(反應物)、中間物或產物反應。給定反應可在一種溶劑或超過一種溶劑之混合物中進行。根據特定反應步驟，熟習此項技術者可選擇用於特定反應步驟之適合溶劑。

本文所述之化合物之製備可涉及各種化學基團之保護及去保護。熟習此項技術者可容易地確定保護及去保護之需要以及適當保護基團之選擇。保護基團之化學可見於例如T. W. Greene及P. G. M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 第3版, Wiley & Sons, Inc., New York (1999)中，該文獻以引用之方式整體併入本文中。

反應可根據業內已知之任何適合方法進行監測。舉例而言，產物形成可藉由波譜手段(諸如核磁共振譜(例如， ¹H或 ¹³C)、紅外光譜、分光光度法(例如，UV-可見光)、質譜)或藉由層析方法(諸如高效液相層析(HPLC)、液相層析-質譜(LCMS)或薄層層析(TLC))來監測。熟習此項技術者可藉由多種方法純化化合物，該等方法包括高效液相層析(HPLC) ( 「 Preparative LC-MS Purification: Improved Compound Specific Method Optimization 」Karl F. Blom, Brian Glass, Richard Sparks, Andrew P. Combs J. Combi. Chem.2004, 6(6), 874-883，其全部內容以引用之方式併入本文)及正相矽膠層析。

在一些實施例中，本文所述之鹽及組合物為基本上分離的。「基本上分離」意謂鹽或化合物與形成或偵測到該化合物之環境至少部分地或基本上分離。部分分離可包括例如富含本文所述之鹽的組合物。基本上分離可包括含有至少約50重量%、至少約60重量%、至少約70重量%、至少約80重量%、至少約90重量%、至少約95重量%、至少約97重量%、或至少約99重量%本文所述之鹽或其鹽之組合物。分離化合物及其鹽之方法係此項技術中習用的。經標記化合物及分析方法

本發明之方法進一步包括使用同位素標記之帕薩昔布或其醫藥學上可接受之鹽。「同位素標記之」或「放射性標記之」化合物係本發明之化合物，其中一或多個原子經具有與通常在自然界中發現之(亦即天然存在之)原子質量或質量數不同之原子質量或質量數的原子置換或取代。可摻入本發明之化合物中之適合放射性核種包括但不限於 ²H (對於氘亦寫為D)、 ³H (對於氚亦寫為T)、 ¹¹C、 ¹³C、 ¹⁴C、 ¹³N、 ¹⁵N、 ¹⁵O、 ¹⁷O、 ¹⁸O、 ¹⁸F、 ³⁵S、 ³⁶Cl、 ⁸²Br、 ⁷⁵Br、 ⁷⁶Br、 ⁷⁷Br、 ¹²³I、 ¹²⁴I、 ¹²⁵I及 ¹³¹I。舉例而言，本發明之化合物中之一或多個氫原子可經氘原子置換(例如，本文所述之化合物之烷基的一或多個氫原子可視情況經氘原子取代，諸如–CD ₃經–CH ₃取代)。

本文所呈現化合物之一或多個組成原子可經天然或非天然豐度之原子之同位素置換或取代。在一些實施例中，化合物包括至少一個氘原子。在一些實施例中，化合物包括兩個或更多個氘原子。在一些實施例中，化合物包括1-2、1-3、1-4、1-5或1-6個氘原子。在一些實施例中，化合物中之所有氫原子可經氘原子置換或取代。

在一些實施例中，連接至本文所述之化合物之碳原子的1、2、3、4、5、6、7或8個氫原子視情況經氘原子置換。

將同位素納入有機化合物中之合成方法係此項技術中已知的(Deuterium Labeling in Organic Chemistry, Alan F. Thomas (New York, N.Y., Appleton-Century-Crofts, 1971；The Renaissance of H/D Exchange, Jens Atzrodt, Volker Derdau, Thorsten Fey及Jochen Zimmermann, Angew. Chem. Int. Ed. 2007, 7744-7765；The Organic Chemistry of Isotopic Labelling, James R. Hanson, Royal Society of Chemistry, 2011)。經同位素標記之化合物可用於各種研究，諸如NMR光譜、代謝實驗及/或分析。

用較重同位素(諸如氘)取代可提供由更高代謝穩定性產生的某些治療優點，例如 活體內半衰期延長或劑量需求降低，且因此可在一些情況下可為較佳的。(參見例如A. Kerekes等 J . Med. Chem.2011, 54, 201-210；R. Xu等 J . Label Compd. Radiopharm.2015, 58, 308-312)。具體而言，一或多個代謝位點處之取代可提供一或多種治療優勢。

摻入本發明放射性標記化合物中之放射性核種將取決於該放射性標記化合物之具體應用。舉例而言，對於 活體外PI3K標記及競爭分析，摻入 ³H、 ¹⁴C、 ⁸²Br、 ¹²⁵I、 ¹³¹I或 ³⁵S之化合物可為有用的。對於放射成像應用， ¹¹C、 ¹⁸F、 ¹²⁵I、 ¹²³I、 ¹²⁴I、 ¹³¹I、 ⁷⁵Br、 ⁷⁶Br或 ⁷⁷Br可為有用的。

應理解，「放射性標記之化合物」或「標記之化合物」係已摻入至少一種放射性核種之化合物。在一些實施例中，放射性核素選自由 ³H、 ¹⁴C、 ¹²⁵I、 ³⁵S及 ⁸²Br組成之群。

本發明可進一步包括將放射性同位素摻入本發明之化合物中之合成方法。將放射性同位素摻入有機化合物中之合成方法係此項技術中熟知的，且熟習此項技術者將容易地識別適用於本發明之化合物的方法。帕薩昔布醫藥調配物及投與

帕薩昔布或其醫藥學上可接受之鹽可以醫藥組合物之形式投與。該等組合物可以藥學領域中熟知之方式製備，且可藉由多種途徑投與，其取決於需要局部治療或全身治療以及欲治療之區域。投與可為局部(包括透皮、表皮、眼及黏膜，包括鼻內、陰道及直腸遞送)、經肺(例如，藉由吸入或吹入粉末或氣溶膠，包括藉由噴霧器；氣管內或鼻內)、經口或非經腸。非經腸投與包括靜脈內、動脈內、皮下、腹膜內、肌內或注射或輸注；或顱內(例如鞘內或腦室內)投與。非經腸投與可呈單次推注劑量之形式，或可為例如藉由連續灌注泵。用於局部投與之醫藥組合物及調配物可包括透皮貼片、軟膏、洗劑、乳膏、凝膠、滴劑、栓劑、噴霧劑、液體及粉劑。習用醫藥載劑、水性、粉末或油性基質、增稠劑及其類似物可為必需的或合意的。

本發明亦包括含有作為活性成分之帕薩昔布或其醫藥學上可接受之鹽以及一或多種醫藥學上可接受之載劑(賦形劑)的醫藥組合物。在一些實施例中，該組合物適合於局部投與。在製備本發明之組合物中，通常將活性成分與賦形劑混合，用賦形劑稀釋或以例如膠囊、小藥囊、紙或其他容器之形式封裝於此類載劑中。當賦形劑用作稀釋劑時，其可為固體、半固體或液體材料，該材料用作活性成分之媒劑、載劑或介質。因此，組合物可呈以下形式：錠劑、丸劑、粉劑、口含錠、小藥囊、扁囊劑、酏劑、懸浮液、乳液、溶液、糖漿、氣霧劑(作為固體或處於液體介質中)、含有例如至多10重量%活性化合物之軟膏、軟明膠膠囊及硬明膠膠囊、栓劑、無菌可注射溶液及無菌包裝粉劑。

在製備調配物時，可研磨活性化合物以提供適當粒子尺寸，之後將其與其他成分組合。若活性化合物基本上不溶，則可將其研磨至小於200目之粒徑。若活性化合物基本上係水溶性的，則可藉由研磨來調節粒徑，以在調配物中提供基本上均勻之分佈，例如約40目。

本發明之化合物可使用已知的研磨程序(諸如濕研磨)研磨以獲得適合於錠劑形成及適合於其他調配物類型之粒徑。本發明化合物之細分(奈米粒子)製劑可藉由此項技術中已知之方法製備，例如參見國際申請案第WO 2002/000196號。

適合賦形劑之一些實例包括乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、澱粉、阿拉伯膠、磷酸鈣、藻酸鹽、黃蓍膠、明膠、矽酸鈣、微晶纖維素、聚乙烯吡咯啶酮、纖維素、水、糖漿及甲基纖維素。該等調配物可另外包括：潤滑劑，諸如滑石、硬脂酸鎂及礦物油；濕潤劑；乳化劑及懸浮劑；防腐劑，諸如羥基苯甲酸甲酯及羥基苯甲酸丙酯；甜味劑；及調味劑。本發明之組合物可藉由採用此項技術中已知之程序調配以便在向患者投與之後提供活性成分之快速、持續或延遲釋放。

組合物可調配成單位劑型。術語「單位劑型」係指適合作為用於人類個體及其他哺乳動物之單位劑量之物理上離散的單位，每一單位含有經計算產生所需治療效應之預定量的活性物質以及適合之醫藥賦形劑。

為了製備固體組合物(諸如錠劑)，將主要活性成分與醫藥賦形劑混合以形成含有本發明之化合物之均質混合物的固體預調配物組合物。當將該等預調配組合物稱為均質時，通常將活性成分均勻地分散在整個組合物中，使得該組合物可容易地細分為同等有效之單位劑型，諸如錠劑、丸劑及膠囊。然後將此固體預調配物細分為上述類型之單位劑型。

可將本發明之錠劑或丸劑包覆或以其他方式混合以提供具有延長作用之優點的劑型。例如，錠劑或丸劑可包含內部劑量及外部劑量組分，後者呈位於前者之上之包膜形式。該兩種組分可由腸溶層分開，該腸溶層用於抵抗胃中之崩解且允許內部組分完整地進入十二指腸或延遲釋放。多種材料可用於此類腸溶層或包衣，此類材料包括多種聚合酸及聚合酸與諸如蟲膠、鯨蠟醇及乙酸纖維素等材料的混合物。

可摻入本發明之化合物及組合物以經口投與或藉由注射投與之液體形式包括水溶液、適當調味之糖漿、水性或油性懸浮液及具有食用油諸如棉籽油、芝麻油、椰子油或花生油之調味乳液、以及酏劑及類似藥物媒劑。

用於吸入或吹入之組合物包括在醫藥學上可接受之水性或有機溶劑或其混合物中之溶液及懸浮液、及粉末。液體或固體組合物可含有如前文所述之適合之醫藥學上可接受之賦形劑。在一些實施例中，藉由經口或經鼻呼吸途徑投與組合物以產生局部或全身作用。組合物可藉由使用惰性氣體霧化。霧化溶液可直接自霧化裝置吸入，或者霧化裝置可連接至面罩、氧气帐或間歇性正壓呼吸機。溶液、懸浮液或粉末組合物可自以適當方式遞送調配物之裝置經口或經鼻投與。

向患者投與之化合物或組合物之量將根據所投與之藥物、所投與之目的(諸如預防或治療)、患者之狀況、投與方式等而變化。在治療應用中，可以足以治癒或至少部分阻止疾病及其併發症之症狀的量向已經罹患疾病之患者投與組合物。有效劑量將取決於所治療之疾病狀況以及主治醫生根據諸如疾病之嚴重程度、患者之年齡、體重及一般狀況等因素所作出之判斷。

向患者投與之組合物可呈上文所述之醫藥組合物的形式。此等組合物可藉由習知滅菌技術進行滅菌，或可進行無菌過濾。可包裝水溶液以按原樣使用或將其凍乾，將經凍乾製劑在投與前與無菌水性載劑組合。化合物製劑之pH通常將在3與11之間，更佳為5至9，且最佳為7至8。應理解，使用某些前述賦形劑、載劑或穩定劑將使得形成醫藥鹽。

本發明之化合物之治療劑量可根據例如進行治療之具體用途、化合物之投與方式、患者之健康及狀況以及處方醫師之判斷而變化。本發明之化合物在醫藥組合物中之比率或濃度可根據許多因素而變化，該等因素包括劑量、化學特徵(例如疏水性)及投與途徑。例如，本發明之化合物可在含有約0.1至約10% w/v化合物之水性生理緩衝溶液中提供，以用於非經腸投與。

在一些實施例中，本文提供之方法包含： i) 以約3 mg/天至約20 mg/天之第一劑量向人類個體投與帕薩昔布或其醫藥學上可接受之鹽，持續約2週至約12週的第一時段；及 ii) 以第二劑量向人類個體投與帕薩昔布或其醫藥學上可接受之鹽，該第二劑量為： (a) 約2.5 mg/天或更少；或 (b) 約50 mg/週或更少；且其中在第一時段之後發生的第二時段內投與第二劑量。

在一些實施例中，第一劑量中之每一者作為單一的、每日一次的劑量投與。

在一些實施例中，第一劑量中之每一者作為單一的、每日一次的經口劑量投與。

在一些實施例中，第一劑量為約20 mg/天。

在一些實施例中，第一劑量為約20 mg/天且作為單一的、每日一次的劑量投與。

在一些實施例中，第一劑量為約20 mg/天且作為單一的、每日一次的經口劑量投與。

在一些實施例中，第一劑量為約10 mg/天。

在一些實施例中，第一劑量為約10 mg/天且作為單一的、每日一次的劑量投與。

在一些實施例中，第一劑量為約10 mg/天且作為單一的、每日一次的經口劑量投與。

在一些實施例中，第一劑量為約5 mg/天。

在一些實施例中，第一劑量為約5 mg/天且作為單一的、每日一次的劑量投與。

在一些實施例中，第一劑量為約5 mg/天且作為單一的、每日一次的經口劑量投與。

在一些實施例中，第一時段為約3週至約11週，例如約8週至約12週、約4週至約10週、約5週至約9週或約8週至約9週。在一些實施例中，第一時段為約2週、約3週、約4週、約5週、約6週、約7週、約8週、約9週、約10週、約11週或約12週。

在一些實施例中，第一時段為約8週至約9週。

在一些實施例中，第一時段為約8週(或56天)。

在一些實施例中，第一時段為約9週。

在一些實施例中，第一劑量在第一時段期間降低。

在一些實施例中，第二劑量中之每一者作為單一的、每日一次的劑量投與。

在一些實施例中，第二劑量中之每一者作為單一的、每週一次的劑量投與。

在一些實施例中，第二劑量中之每一者作為單一的、每日一次的經口劑量投與。

在一些實施例中，第二劑量中之每一者作為單一的、每週一次的經口劑量投與。

在一些實施例中，第二劑量為約5.0 mg/天或更少，例如約5.0 mg/天、約4.0 mg/天、約3.0 mg/天、約2.5 mg/天、約2.0 mg/天、約1.75 mg/天、約1.5 mg/天、約1.25 mg/天或約1.0 mg/天。

在一些實施例中，第二劑量為約2.5 mg/天至約7.5 mg/天。

在一些實施例中，第二劑量為約3.0 mg/天至約7.0 mg/天。

在一些實施例中，第二劑量為約4.0 mg/天至約6.0 mg/天。

在一些實施例中，第二劑量為約2.5 mg/天。

在一些實施例中，第二劑量為約2.5 mg/天且作為單一的、每日一次的劑量投與。

在一些實施例中，第二劑量為約2.5 mg/天且作為單一的、每日一次的經口劑量投與。

如本文所用，當提及可量測值，諸如量、劑量、持續時間及其類似者時，「約」意欲涵蓋±10%的變化。適應症

本文所述之抗CD19抗體或其抗原結合片段(例如，他法西他單抗)及帕薩昔布或其醫藥學上可接受之鹽可組合使用以治療有需要之人類個體的非霍奇金淋巴瘤。在一些實施例中，非霍奇金淋巴瘤係選自由以下組成之群：濾泡性淋巴瘤、小淋巴球性淋巴瘤、黏膜相關淋巴組織淋巴瘤、邊緣區淋巴瘤、瀰漫性大B細胞淋巴瘤、伯基特氏淋巴瘤及套細胞淋巴瘤。在一些實施例中，非霍奇金淋巴瘤為複發性/難治性瀰漫性大B細胞淋巴瘤。

另一態樣包含本文所述之抗CD19抗體或其抗原結合片段(例如，他法西他單抗)及帕薩昔布或其醫藥學上可接受之鹽的組合，用於治療非霍奇金淋巴瘤。在一些實施例中，非霍奇金淋巴瘤係選自由以下組成之群：濾泡性淋巴瘤、小淋巴球性淋巴瘤、黏膜相關淋巴組織淋巴瘤、邊緣區淋巴瘤、瀰漫性大B細胞淋巴瘤、伯基特氏淋巴瘤及套細胞淋巴瘤。在一些實施例中，非霍奇金淋巴瘤為複發性/難治性瀰漫性大B細胞淋巴瘤。

另一態樣包含本文所述之抗CD19抗體或其抗原結合片段(例如，他法西他單抗)及帕薩昔布或其醫藥學上可接受之鹽的組合，用於製造供治療非霍奇金淋巴瘤用的藥劑。在一些實施例中，非霍奇金淋巴瘤係選自由以下組成之群：濾泡性淋巴瘤、小淋巴球性淋巴瘤、黏膜相關淋巴組織淋巴瘤、邊緣區淋巴瘤、瀰漫性大B細胞淋巴瘤、伯基特氏淋巴瘤及套細胞淋巴瘤。在一些實施例中，非霍奇金淋巴瘤為複發性/難治性瀰漫性大B細胞淋巴瘤。

本文所述之抗CD19抗體或其抗原結合片段(例如，他法西他單抗)及帕薩昔布或其醫藥學上可接受之鹽可組合使用以治療有需要之人類個體的慢性淋巴球性白血病。

另一態樣包含本文所述之抗CD19抗體或其抗原結合片段(例如，他法西他單抗)及帕薩昔布或其醫藥學上可接受之鹽的組合，用於治療慢性淋巴球性白血病。

另一態樣包含本文所述之抗CD19抗體或其抗原結合片段(例如，他法西他單抗)及帕薩昔布或其醫藥學上可接受之鹽的組合，用於製造供治療慢性淋巴球性白血病用的藥劑。

本文所述之抗CD19抗體或其抗原結合片段(例如，他法西他單抗)及帕薩昔布或其醫藥學上可接受之鹽可組合使用以治療有需要之人類個體的急性淋巴母細胞白血病。

另一態樣包含本文所述之抗CD19抗體或其抗原結合片段(例如，他法西他單抗)及帕薩昔布或其醫藥學上可接受之鹽的組合，用於治療急性淋巴母細胞白血病。

另一態樣包含本文所述之抗CD19抗體或其抗原結合片段(例如，他法西他單抗)及帕薩昔布或其醫藥學上可接受之鹽的組合，用於製造供治療急性淋巴母細胞白血病用的藥劑。

在一些實施例中，在投與抗CD19抗體或其抗原結合片段之前投與帕薩昔布或其醫藥學上可接受之鹽。

在一些實施例中，在投與抗CD19抗體或其抗原結合片段之後投與帕薩昔布或其醫藥學上可接受之鹽。

在一些實施例中，同時或一起投與抗CD19抗體或其抗原結合片段及帕薩昔布或其醫藥學上可接受之鹽。

以下為本發明實踐之實例。其不應被解釋為以任何方式限製本發明之範疇。實例

提供以下實例以更好地說明所主張之發明且不應被解釋為限製本發明之範疇。就提及特定材料而言，其僅為說明之用，且不意欲限製本發明。熟習此項技術者在不行使發明能力及不脫離本發明之範疇的情況下，可開發出等效方法或反應物。實例1：他法西他單抗及帕薩昔布之組合的細胞毒性

他法西他單抗及帕薩昔布(INCB050465)單獨及組合的細胞毒性係在非霍奇金淋巴瘤(NHL)、慢性淋巴球性白血病(CLL)或急性淋巴母細胞白血病(ALL)細胞株中測試，該細胞株係選自Ramos (伯基特氏淋巴瘤)、MEC-1 (CLL)、HG-3 (CLL)、CII (CLL)、Su-DHL6 (DLBCL)、U2932 (DLBCL)、JVM-2 (套細胞淋巴瘤)及BALL-1 (ALL)。

將NHL、CLL或ALL細胞用0.3、1、3或10 µM帕薩昔布(單獨帕薩昔布組及他法西他單抗及帕薩昔布組合組)預處理7天。將單獨他法西他單抗組用DMSO預處理相同的時段。

使用EasySep™人類NK細胞分離套組(STEMCELL Technologies)從來自多個供體之人類原代PBMC中分離NK細胞且冷凍。將NK細胞解凍且在添加及不添加2 µM來那度胺之情況下在補充有2 IU/ml IL-2之培養基中培養72小時。

在帕薩昔布處理7天后，將NHL、CLL或ALL 細胞用10 µM CFSE標記，且與使用及不使用來那度胺預處理之NK細胞在不同濃度之他法西他單抗存在下共培養4-16小時。效應細胞與目標細胞之比為2:1。按照相同程序在未用帕薩昔布處理之NHL、CLL或ALL細胞中評估單獨他法西他單抗之細胞毒性。他法西他單抗之劑量為10點1:10稀釋，最高濃度從15 µg/ml開始。培育4-16小時後，將細胞用DAPI或替代細胞活力染料染色，且藉由流動式細胞測量術量測以評估細胞毒性。資料表示為死細胞百分比，且由NK供體分開。

使用以下對照：(i) NHL、CLL或ALL細胞+ DMSO + NK細胞，以及(ii) NHL、CLL或ALL細胞+ DMSO。

組合指數(CI)係基於等效線方法(isobol method)計算的(Ting-Chao Chou, 2010, Cancer Res. 70(2))。CI＜1被視為協同有效的。實例2：他法西他單抗與帕薩昔布組合治療患有非霍奇金淋巴瘤之個體的研究

此為一項開放標籤、多中心臨床研究，旨在評估他法西他單抗-帕薩昔布組合療法對患有復發性/難治性(R/R)瀰漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)之個體的療效。

僅經活檢證實患有DLBCL，包括根據2016年WHO淋巴腫瘤分類之以下診斷之一的參與者才有資格納入研究：DLBCL、NOS，包括GBC型、ABC型。

參與者必須至少有1個可二維量測之病灶。在篩選時，參與者必須至少有1個最大橫向直徑≥ 1.5 cm且最大垂直直徑≥ 1.0 cm之病灶。最遲在治療時必須確認該病灶為PET陽性。

參與者之ECOG (東部腫瘤協作組)機能狀態必須為0至2。

參與者在篩選時必須具有以下實驗室標準： a. 嗜中性球絕對計數(ANC) ≥ 1.5 × 10 ⁹/L (除非如由近期骨髓穿刺及骨髓活檢證實繼發於DLBCL骨髓受累，在此情況下嗜中性球絕對計數(ANC) ≥ 1.0 × 10 ⁹/L)。 b. 血小板計數≥ 75 × 10 ⁹/L (除非如由近期骨髓穿刺及骨髓活檢證實繼發於DLBCL骨髓受累，在此情況下血小板計數≥ 50 × 10 ⁹/L)。 c. 血清總膽紅素＜ 1.5 ×正常上限(ULN)，除非繼發於吉爾伯特氏症候群(Gilbert’s syndrome)或記錄的淋巴瘤肝臟受累。若總膽紅素≤ 5 × ULN，則可包括患有吉爾伯特氏症候群或有記錄的淋巴瘤肝臟受累之參與者。 d. 丙胺酸轉胺酶(ALT)、天冬胺酸轉胺酶(AST)及鹼性磷酸酶≤ 3 × ULN，或在記錄的肝臟受累之情況下，＜ 5 × ULN。 e. 使用標準Cockcroft及Gault公式量測或計算之血清肌酐清除率必須≥ 40 mL/分鐘。

參與者必須患有復發性或難治性DLBCL。

參與者必須接受過至少1個但不超過3個先前用於治療DLBCL之全身性治療方案。至少1個先前治療方案必須包括CD20靶向治療(例如，利妥昔單抗(rituximab))。

參與者必須自體幹細胞移植(ASCT)失敗，或研究者認為目前不符合對DLBCL參與者進行高劑量化學療法(HDC)以及後續ASCT的條件。

若以下任何標準適用，則參與者將被排除在研究之外： 1. 根據WHO 2016淋巴腫瘤分類之任何其他組織學類型的淋巴瘤，例如原發性縱隔B細胞淋巴瘤(PMBL)、伯基特氏淋巴瘤、不可分類型B細胞淋巴瘤，其特徵介於DLBCL與經典霍奇金淋巴瘤(灰區淋巴瘤)之間；原發性滲出性淋巴瘤；原發性皮膚DLBCL，腿型；血管內B細胞淋巴瘤。 2. 既往非血液惡性腫瘤病史，以下情況除外： a. 以治愈為目的進行治療，且在篩選前超過2年無活動性疾病之證據的惡性腫瘤。 b. 經充分治療之惡性黑色素瘤，目前無疾病證據或充分控制的非黑色素瘤性皮膚癌。 c. 經充分治療之原位癌，目前無疾病證據。 3. 需要對危及生命之室性心律失常進行持續維持治療的充血性心衰竭。 4. 具有以下任一者之參與者： a. 已知C型肝炎測試結果(HCV抗體血清學測試)呈陽性及HCV RNA測試呈陽性。血清學陽性的參與者必須在當地接受過HCV RNA測試，且在HCV RNA測試結果呈陰性之情況下符合資格。 b. 已知的慢性HBV感染陽性測試結果(由HBsAg陽性定義)。若不可偵測到HBV DNA (當地測試結果)，則可包括隱匿性或既往HBV感染(定義為HBsAg陰性及總HBcAb陽性)的參與者，前提條件為該等參與者願意接受持續的DNA測試。可根據機構指南進行抗病毒預防。接種疫苗之後或之前(但B型肝炎已治癒)具有HBsAb保護性滴度的參與者符合條件。 c. 已知對HIV呈血清陽性或有活動性HIV病毒感染史。 d. 篩選時已知活動性細菌、病毒、真菌、分枝桿菌或其他感染。 e. 已知的CNS淋巴瘤受累—現在或過去的病史。 f. 具有臨床顯著的心血管、CNS及/或其他全身性疾病的病史或證據，研究者認為該等疾病會妨礙參與研究或損害參與者給予知情同意的能力。 g. 半乳糖不耐受、拉普(Lapp)乳糖酶缺乏或葡萄糖-半乳糖吸收不良等罕見遺傳問題之病史或證據。 h. 間質性肺病之病史或證據。 i. 在研究治療前21天內接種活疫苗。 j. 在簽署知情同意書(ICF)之前最多30天內進行大手術，除非參與者在簽署ICF時康復。 k. 在第1週期開始前14天內的任何抗癌及/或研究性療法。 l. 胃腸道異常，包括無法接受經口研究治療、需要靜脈營養或既往外科手術影響吸收。 m. 懷孕或哺乳期。中斷母乳喂養的女性參與者能夠參加研究。其必須在研究過程中以及最後一劑研究治療藥物後的3個月內避免母乳喂養。 5. 在研究期間使用或預期使用任何受限藥物，包括在研究治療投與日期前14天或5個半衰期(以較長者為準)內使用強效CYP3A4抑制劑或誘導劑。 6. 如下之參與者： a. 在第1天給藥前14天內未停止CD20靶向療法、化學療法、放射線療法、研究性抗癌療法或其他淋巴瘤特異性療法。 b. 研究者認為，未從既往療法之不良毒性作用中充分恢復。 c. 先前使用CD19靶向療法(例如，CD19-CAR-T療法、其他CD19 mAb，包括雙特異性及ADC)進行治療。 d. 之前接受過選擇性PI3Kδ或泛PI3K抑制劑(例如艾代里拉斯(idelalisib)、考班昔布(copanlisib)、杜維昔布(duvelisib))及/或布魯頓酪胺酸激酶抑制劑(例如依魯替尼(ibrutinib))治療。 e. 對與他法西他單抗、IMiD及/或研究治療調配物中所含之賦形劑(一水檸檬酸、聚山梨醇酯20、脫水檸檬酸鈉及二水海藻糖)具有相似生物或化學組成的化合物有過敏史。 f. 在簽署ICF前≤ 3個月內進行了ASCT。具有更遠ASCT病史之參與者必須在參加研究之前表現出完全的血液學恢復。 g. 之前經歷過同種異體幹細胞移植。 h. 同時治療其他抗癌或實驗性治療。

他法西他單抗方案：對於研究之前3個週期，各週期(第1-3週期)由在週期之第1天、第8天、第15天及第22天以12 mg/kg靜脈內輸注他法西他單抗組成。此外，在第1週期之第4天投與負荷劑量。此後，每兩週投與他法西他單抗，且在各重複28天週期之第1天及第15天進行輸注，直至停藥。若需要將他法西他單抗之起始劑量降低1個劑量水準，則較低劑量水準為每週一次9 mg/kg。

帕薩昔布方案：參與者在第1天至第56天每天自行經口帕薩昔布，隨後服用2.5 mg劑量，直至停藥。帕薩昔布之起始劑量為在第1天至第56天每天一次20 mg，隨後每天一次2.5 mg。若需要將帕薩昔布降低1個劑量水準，則取決於當前的劑量水準。第1天至第56天之較低劑量水準如下：20 mg每天一次可減少至10 mg每天一次或10 mg每天一次可減少至5 mg每天一次。

研究之終點包括： a. 他法西他單抗與帕薩昔布之組合的治療時出現的不良事件(TEAE)之發生率及嚴重程度以及劑量限制性毒性(DLT)之發生率， b. 作為帕薩昔布組合治療之一部分，他法西他單抗之藥物動力學(PK)分析， c. 研究者根據淋巴瘤之緩解標準報告的客觀緩解率(ORR)， d. 研究者根據淋巴瘤之緩解標準報告的完全緩解率(CRR)， e. 研究者根據淋巴瘤之緩解標準的無進展存活期(PFS)，以及 f. 緩解持續時間(DOR)，定義為在達成完全緩解(CR)/完全代謝緩解(CMR)或部分緩解(PR)/部分代謝緩解(PMR)之參與者中從首次記錄CR/CMR或PR/PMR至首次記錄病情進展或因任何原因死亡(以先發生者為準)之日的時間，如由IRC根據國際工作組指南，根據淋巴瘤緩解標準所確定。實例3：他法西他單抗與帕薩昔布組合治療患有復發/難治性非霍奇金淋巴瘤或慢性淋巴球性白血病之個體的研究

此為一項開放標籤、多中心臨床研究，旨在評估他法西他單抗-帕薩昔布組合療法對患有複發性/難治性(R/R)非霍奇金淋巴瘤或慢性淋巴球性白血病之個體的療效。

參與者患有R/R B細胞惡性腫瘤，包括R/R瀰漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)、R/R套細胞淋巴瘤(MCL)、R/R濾泡性淋巴瘤(FL)、R/R邊緣區淋巴瘤(MZL)，或R/R慢性淋巴球性白血病(CLL)/小淋巴球性淋巴瘤 (SLL)。

僅滿足以下所有標準，參與者才有資格參與研究： 1. 同意時年齡≥ 18歲的男性及女性。 2. 能夠理解且願意簽署書面ICF且遵守所有研究問診及程序。 3. 經組織學證實的以下類型的R/R B細胞惡性腫瘤： a. 群組1：未另外指定的DLBCL、富含T細胞/組織細胞之大B細胞淋巴瘤、老年人的艾-巴二氏(Epstein-Barr)病毒陽性DLBCL、3b級FL、具有MYC及BCL2及/或BCL6重排之高級B細胞淋巴瘤(雙擊或三擊淋巴瘤)、從早期診斷之低級淋巴瘤(諸如FL、MZL、CLL)向DLBCL之組織學轉變。 b. 群組2：記錄了細胞週期蛋白D1或t(11;14)之過度表現的MCL c. 群組3：FL 1、2及3a級 d. 群組4：MZL，包括淋巴結外、淋巴結及脾亞型 e. 群組5：CLL或SLL 4. 願意接受研究之活檢要求，包括切口、切除或核心針淋巴結或組織活檢(或具有來自最近活檢之存檔淋巴結或組織)，且在適當情況下接受骨髓活檢/抽吸物收集。 5. 接受過以下至少2種既往全身性治療方案： a. 群組1及2 (DLBCL、MCL)：之前必須接受過至少1種包括抗CD20抗體之既往化學免疫療法方案的治療。此包括諸如化學療法加利妥昔單抗或奧比妥珠單抗(obinutuzumab)等治療，有或無利妥昔單抗或奧比妥珠單抗維持。注意：在既往療法中必須至少接受過6劑抗CD20化學免疫療法。 b. 群組3及群組4 (FL、MZL)：之前必須接受過至少1種包括抗CD20抗體之既往化學免疫療法或免疫療法方案的治療。此包括諸如利妥昔單抗或奧比妥珠單抗單藥療法或化學療法加利妥昔單抗或奧比妥珠單抗等治療，有或無利妥昔單抗或奧比妥珠單抗維持。注意：在既往療法中必須至少接受過6劑抗CD20單藥療法。 c. 群組5 (CLL/SLL)：之前必須接受過至少1種既往全身性療法，包括BTK抑制劑方案或包括抗CD20抗體之化學免疫療法方案的治療。 6. 復發性、進展性或難治性NHL或CLL： a. 復發性：在因既往療法之完全緩解(CR)緩解後病情進展(PD)。 b. 進展性：在因既往療法之PR緩解或病情穩定後PD。 c. 難治性：在最後一次既往療法前達成低於PR，或在PD前達成持續＜6個月的CR或PR。 7. 對於群組1至4及群組5/SLL：放射學可量測的淋巴結腫大或結外淋巴樣惡性腫瘤(定義為存在≥ 1個病灶，經量測，最長橫徑為＞ 1.5 cm，且最長垂直徑為≥ 1.0 cm，如藉由CT或MRI所評估。 8. ECOG機能狀態為0至2。 9. 預期壽命＞ 3個月。 10. LVEF (左心室射血分數) ≥ 50%。 11. 篩選時之實驗室結果如下： a. 血紅蛋白水準≥ 8 g/dL (除非如由最近的骨髓穿刺及骨髓活檢證實繼發於NHL/CLL骨髓受累)。 b. ANC ≥ 1.5 × 109/L (除非如由最近的骨髓穿刺及骨髓活檢證實繼發於NHL/CLL骨髓受累)。 c. 血小板計數≥ 75 × 109/L (除非如由最近的骨髓穿刺及骨髓活檢證實繼發於NHL/CLL骨髓受累)。 d. 總血清膽紅素水準≤ 1.5 × ULN，或在吉爾伯特氏症候群或記錄的淋巴瘤肝臟受累之情況下，≤ 5 × ULN。 e. ALT、AST及鹼性磷酸酶水準≤ 3 × ULN，或在記錄的肝臟受累之情況下，≤ 5 × ULN。 f. 使用標準Cockcroft及Gault公式(Cockcroft及Gault 1976)量測或計算的血清肌酐清除率≥ 50 mL/min。 12. 願意根據以下標準避免懷孕或生育孩子。 a. 有生育潛力的男性參與者必須同意採取適當的預防措施，以避免在篩選至研究治療之最後一次給藥後6個月內生育孩子(至少99%確定性)，且在此期間必須避免捐獻精子。 b. 有生育潛力的女性參與者必須在篩選時血清妊娠測試呈陰性，且必須同意採取適當的預防措施，以避免在篩選至研究治療之最後一次給藥後90天(或當地法規要求時，則為180天)內懷孕(至少99%確定性)。該等女性參與者亦必須同意在整個研究治療期間定期進行尿妊娠測試。該等女性參與者亦必須在研究過程中以及研究治療之最後一次給藥後3個月內避免母乳喂養及捐獻卵母細胞。 c. 無生育潛力(亦即，子宮切除術及/或雙側卵巢切除術或≥ 12個月的閉經且年齡至少為50歲)之女性參與者符合條件。因化學療法/放射線療法導致閉經至少12個月之女性參與者被認為有生育潛力，且應同意使用適當避孕措施。

若以下任何標準適用，則參與者將被排除在研究之外： 1. 根據WHO 2016淋巴腫瘤分類之任何其他組織學類型的淋巴瘤，例如原發性縱隔B細胞淋巴瘤、伯基特氏淋巴瘤、不可分類型B細胞淋巴瘤，其特徵介於DLBCL與經典霍奇金淋巴瘤(灰區淋巴瘤)之間；原發性滲出性淋巴瘤；原發性皮膚DLBCL，腿型；血管內B細胞淋巴瘤。 2. CNS淋巴瘤(原發性及繼發性)之病史或證據。 3. 在研究治療之首次給藥(C1D1)前30天或5個半衰期(以較大者為準)內的任何抗癌及/或研究性療法(例如，化學療法、放射線療法、手術、免疫療法、生物療法、激素療法或腫瘤栓塞)。 4. 在C1D1之前大手術之毒性及/或併發症的恢復不足(＞ 1級)。 5. 在研究期間使用或預期使用任何禁用藥物，包括在C1D1之前的14天或5個半衰期(以較長者為準)內使用強效CYP3A4抑制劑或誘導劑。 6. 在C1D1之前6個月內進行過同種異體幹細胞移植，或在3個月內進行過ASCT。 7. 先前使用CD19靶向療法(例如，CD19-CAR-T療法、其他CD19 mAb，包括雙特異性及抗體-藥物結合物)或PI3K抑制劑進行治療。 8. 在開始研究治療之7天內用大於生理劑量(潑尼松等效劑量＞ 10 mg/天)之皮質類固醇治療。 9. 在C1D1之6個月內，有臨床顯著的心髒病，包括不穩定型心絞痛、急性心肌梗塞、紐約心臟協會II至IV級充血性心衰竭、不受控心律失常及/或心臟傳導問題。 10. 臨床顯著的併發、不受控醫學病況，包括但不限於腎、肝、血液、GI、內分泌、肺、神經、腦或精神疾病。 11. 研究開始後3年內目前或既往患有其他惡性腫瘤，治癒的基底或鱗狀細胞皮膚癌、淺表性膀胱癌、前列腺上皮內腫瘤或子宮頸原位癌除外。 12. 活動性移植物抗宿主病。 13. 在C1D1之6個月內有中風或顱內出血史。 14. 在C1D1之30天內需要全身性抗生素、抗真菌或抗病毒治療的慢性或當前活動性傳染病。 15. 以下任一者： a. 已知C型肝炎測試結果(HCV抗體血清學測試)呈陽性及HCV RNA測試結果呈陽性。血清學陽性的參與者必須在當地接受過HCV RNA測試，且在HCV RNA測試結果呈陰性之情況下符合資格。 b. 已知的慢性HBV感染陽性測試結果(由HBsAg陽性定義)。若不可偵測到HBV DNA (當地測試結果)，則可包括隱匿性或既往HBV感染(定義為HBsAg陰性及總HBcAb陽性)的參與者，前提條件為該等參與者願意接受持續的DNA測試。可根據機構指南進行抗病毒預防。接種疫苗之後或之前(但B型肝炎已治癒)具有HBsAb保護性滴度的參與者符合條件。 c. 已知對HIV呈血清陽性或有活動性HIV病毒感染史。 16. 無法吞嚥及保留經口藥物、吸收不良症候群、嚴重影響胃腸道功能之疾病、胃或小腸完全切除、潰瘍性結腸炎、有症狀的發炎性腸病或部分或完全腸梗阻。 17. 對與他法西他單抗、帕薩昔布及/或研究治療調配物中所含之賦形劑具有相似生物或化學組成的化合物有過敏史。 18. 嚴重過敏反應史，包括過敏性及中毒性表皮壞死松解症。 19. 間質性肺病之病史或證據。 20. 在C1D1之前30天內接觸過活疫苗接種，或在治療期間預期需要進行此類疫苗接種。 21. 目前懷孕或哺乳。 22. 根據研究者的判斷，任何會引起下列者之病況：干擾研究之完全參與，包括投與研究治療及參加要求的研究問診；對參與者構成重大風險；或乾擾研究資料的解釋。

他法西他單抗方案：對於研究之前3個週期，各週期(第1-3週期)由在週期之第1天、第8天、第15天及第22天以12 mg/kg靜脈內輸注他法西他單抗組成。此後，每兩週投與他法西他單抗，且在各重複28天週期之第1天及第15天進行輸注，直至停藥。

帕薩昔布方案：參與者在8週內每天自行經口帕薩昔布，隨後服用2.5 mg劑量，直至停藥。帕薩昔布之起始劑量為每天一次20 mg，持續8週，隨後每天一次2.5 mg。

研究之終點包括： a. TEAE之發生率及嚴重程度以及DLT之發生率。 b. ORR，定義為根據研究者評估具有最佳CR/CMR或PR/PMR緩解之參與者的百分比。 c. 他法西他單抗與帕薩昔布組合給予時的PK參數。C _谷(亦即，給藥前)、C _最大、t _最大、C _最小及AUC _t將藉由描述性統計來概括。 d. CRR，定義為根據研究者評估具有最佳CR/CMR緩解之參與者的百分比。 e. DOR，定義為在達成CR/CMR或PR/PMR之參與者中，從首次記錄到CR/CMR或PR/PMR至首次記錄到病情進展或因任何原因死亡(以先發生者為準)之日的時間。 f. PFS，定義為從研究治療之首次給藥之日至首次記錄到病情進展或因任何原因死亡(以先發生者為準)的時間。 g. OS，定義為從研究治療之首次給藥之日至因任何原因死亡的時間。 h. 產生針對他法西他單抗之特定ADA (抗藥物抗體)之參與者的百分比。 i. 藉由蛋白質體學及流動式細胞測量術分析周邊血液中之細胞介素及免疫細胞群及亞群的動態組成。 j. 使用RNA表現特徵分析腫瘤微環境。 k. 使用次世代定序(NGS)分析周邊血液中之CD19及其他突變。 l. 分析RNA表現譜、RNA剪接模式及DNA突變/插入缺失/單核苷酸多態性。 m. 在根據聚合酶鏈反應或NGS緩解後評估MRD (微小殘留病)。實例4：他法西他單抗及帕薩昔布之組合之細胞毒性的 活體外分析

他法西他單抗及帕薩昔布(INCB050465)單獨及組合的細胞毒性在以下細胞株中進行了測試：MEC-1 (CLL)、MEC-2 (CLL)、JVM-2 (套細胞淋巴瘤)、WSU-NHL、Pfeiffer、Su-DHL4及Su-DHL6。

將目標細胞用0.3至20 µM範圍內之不同劑量的帕薩昔布預處理7天(單獨帕薩昔布組以及他法西他單抗及帕薩昔布組合組)。將單獨他法西他單抗組用DMSO預處理相同的時段。

使用EasySep™人類NK細胞分離套組(STEMCELL Technologies)從來自多個供體之人類原代PBMC中分離NK細胞且冷凍。在ADCC分析前24小時，將NK細胞解凍且在補充有2 IU/ml IL-2 (Peprotech)之培養基中培養隔夜。

在所有實驗中使用以下對照：(i)目標細胞+無抗體之NK細胞；(ii)目標細胞+ NK 細胞+ huIgG1同型對照抗體；及(iii)單獨的目標細胞。

帕薩昔布處理7天后，收穫目標細胞且用0.1 µM CellTrace™ Far Red Cell Proliferation染料(ThermoFisher C34564)標記，且在不同濃度之他法西他單抗存在下與NK細胞共培養4小時。效應細胞與目標細胞之比為2:1。藉由調節抑制劑處理之細胞中的E:T比，包括了由帕薩昔布引起的對目標細胞之增殖抑制作用。

按照相同程序在用DMSO處理之細胞中評估單獨他法西他單抗之細胞毒性。他法西他單抗之劑量為10點1:10稀釋，最高濃度從1 µg/ml開始。培育4小時後，細胞用Zombie Violet可固定細胞活力染料(Biolegend 423114)染色且藉由流動式細胞測量術量測以評估細胞毒性。資料表示為死目標細胞之百分比減去來自「僅目標細胞」孔之細胞死亡百分比以減除背景。使用之NK細胞來自兩個健康的人類供體。

他法西他單抗在Mec1及JVM2細胞中以劑量依賴性方式顯示ADCC活性。除了單獨的他法西他單抗及帕薩昔布處理外，他法西他單抗及帕薩昔布之組合亦在JVM2細胞中顯示出進一步的ADCC活性，但在Mec1細胞中未顯示。分析了來自兩個單獨進行之實驗的資料，以評估他法西他單抗及帕薩昔布在JVM2細胞中之潛在協同活性。在兩個實驗中，選定劑量之他法西他單抗及帕薩昔布均在JVM2細胞中表現出協同作用，如由協同評分＞10所示。參見圖1A-1B，在各實驗中使用Bliss協同模型來評估協同。使用SynergyFinder 2.0 (https://synergyfinder.fimm.fi)來計算協同評分。協同評分＞10被視為協同有效。

除了ADCC細胞毒性外，亦藉由在不存在NK細胞之情況下用他法西他單抗及帕薩昔布之基質給藥處理目標細胞來評估他法西他單抗及帕薩昔布對細胞增殖的影響。在24小時、48小時及72小時後，藉由一式兩份地向含有100 µl經處理細胞之孔中加入100 µl Cell titer Glo來評估增殖。資料呈現為RLU，其與細胞增殖成正比。Pfeiffer及WSU-NHL細胞對帕薩昔布處理敏感，且其增殖被帕薩昔布處理以時間及劑量依賴性方式抑制。Mec2及JVM2細胞對他法西他單抗處理敏感，且其增殖被他法西他單抗以時間及劑量依賴性方式抑制。SuDHL4及SuDHL6細胞對他法西他單抗及帕薩昔布處理均不敏感。未觀測到他法西他單抗及帕薩昔布之組合的協同作用。實例5：在小鼠淋巴瘤模型中使用抗CD19抗體及帕薩昔布之組合的 活體內功效研究

用5×10 ⁵個A20鼠類淋巴瘤細胞對雌性Balb/c小鼠進行皮下接種以形成側腹腫瘤。當腫瘤達到大約100 mm ³時，將小鼠隨機分成4組進行給藥(N=10隻小鼠/組)。給藥組如下：(1)媒劑(5%二甲基乙酰胺+95%甲基纖維素)-每天兩次經口投與；(2)鼠類抗CD19抗體(獲自Absolute Antibody之12014B35) - 150 mg，每週一次腹膜內投與；(3)帕薩昔布(INCB050465) - 3 mg/kg，每天兩次經口投與；及(4)鼠類抗CD19抗體+帕薩昔布。

每週量測兩次腫瘤體積。當每組之平均腫瘤體積達到2000 mm ³時，研究得出結論。如根據體重評估，所有劑量均為耐受的。百分比腫瘤生長抑制(TGI %)計算如下：[1-(測試組之平均腫瘤體積)/(媒劑組之平均腫瘤體積)]×100。腫瘤生長延遲(TGD)係由在給藥停止後，給藥組之平均腫瘤體積達到媒劑組之最終平均腫瘤體積所需的天數(大致)確定。

用抗CD19抗體及帕薩昔布組合治療對TGI之影響大於基於單一藥物活性預期之影響，表明與該組合相關之協同作用。參見圖2。與媒劑治療組相比，僅抗CD19抗體+帕薩昔布組合治療組顯示出TGI的統計顯著差異。參見表1。在組合組與帕薩昔布組之TGI之間未發現統計差異。表1：治療對腫瘤生長抑制百分比的影響

治療	TGI (%)	統計顯著性 ( 相對於媒劑之 p 值 )
媒劑	-	-
抗CD19抗體	-	0.333
帕薩昔布	26.6	0.523
組合	53.5	0.020

用抗CD19抗體及帕薩昔布組合治療對TGD之影響大於基於單一藥物活性預期之影響，表明與該組合相關之協同作用。參見圖3及表2。表2：治療對腫瘤生長延遲的影響

治療	TGD ( 天 )
媒劑	-
抗CD19抗體	-
帕薩昔布	1.4
組合	3.0

其他實施例

雖然本發明已經結合其詳細描述進行了描述，但前述描述旨在說明而非限製本發明之範疇，本發明之範疇由所附申請專利範圍之範疇限定。其他態樣、優點及修改在以下申請專利範圍之範疇內。

圖1A為描繪在實驗#1中在他法西他單抗(tafasitamab) (0.00001 µg/ml 至1 µg/ml之1:10稀釋)及帕薩昔布(parsaclisib) (0、0.3、1、3、10或20 µM)之不同濃度下，使用Bliss協同模型針對JVM2 細胞中之ADCC活性計算之協同得分的圖。圖1B為描繪在實驗#2中在他法西他單抗(0.00001 µg/ml 至1 µg/ml之1:10稀釋)及帕薩昔布(0、0.3、1、3、10或20 µM)之不同濃度下，使用Bliss協同模型針對JVM2 細胞中之ADCC活性計算之協同得分的圖。圖2為描述以下治療對腫瘤生長抑制之作用的圖：(1)媒劑；(2)鼠類抗CD19抗體；(3)帕薩昔布(INCB050465)；及(4)鼠類抗CD19抗體+帕薩昔布(「組合」)。圖3為描述以下治療對腫瘤生長延遲之作用的圖：(1)媒劑；(2)鼠類抗CD19抗體；(3)帕薩昔布(INCB050465)；(4)鼠類抗CD19抗體+帕薩昔布(「組合」)。


          <![CDATA[<110> 美商英塞特公司(INCYTE CORPORATION)]]>
          <![CDATA[<120> 抗CD19抗體及帕薩昔布之組合療法]]>
          <![CDATA[<130> 20443-0713WO2]]>
          <![CDATA[<140> 110144707]]>
          <![CDATA[<141> 2021-11-30]]>
          <![CDATA[<150> PCT/US2021/012982]]>
          <![CDATA[<151> 2021-01-11]]>
          <![CDATA[<150> 63/119,370]]>
          <![CDATA[<151> 2020-11-30]]>
          <![CDATA[<160> 11    ]]>
          <![CDATA[<170> PatentIn version 3.5]]>
          <![CDATA[<210> 1]]>
          <![CDATA[<211> 556]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 智人(Homo sapiens)]]>
          <![CDATA[<400> 1]]>
          Met Pro Pro Pro Arg Leu Leu Phe Phe Leu Leu Phe Leu Thr Pro Met 
          1               5                   10                  15      
          Glu Val Arg Pro Glu Glu Pro Leu Val Val Lys Val Glu Glu Gly Asp 
                      20                  25                  30          
          Asn Ala Val Leu Gln Cys Leu Lys Gly Thr Ser Asp Gly Pro Thr Gln 
                  35                  40                  45              
          Gln Leu Thr Trp Ser Arg Glu Ser Pro Leu Lys Pro Phe Leu Lys Leu 
              50                  55                  60                  
          Ser Leu Gly Leu Pro Gly Leu Gly Ile His Met Arg Pro Leu Ala Ile 
          65                  70                  75                  80  
          Trp Leu Phe Ile Phe Asn Val Ser Gln Gln Met Gly Gly Phe Tyr Leu 
                          85                  90                  95      
          Cys Gln Pro Gly Pro Pro Ser Glu Lys Ala Trp Gln Pro Gly Trp Thr 
                      100                 105                 110         
          Val Asn Val Glu Gly Ser Gly Glu Leu Phe Arg Trp Asn Val Ser Asp 
                  115                 120                 125             
          Leu Gly Gly Leu Gly Cys Gly Leu Lys Asn Arg Ser Ser Glu Gly Pro 
              130                 135                 140                 
          Ser Ser Pro Ser Gly Lys Leu Met Ser Pro Lys Leu Tyr Val Trp Ala 
          145                 150                 155                 160 
          Lys Asp Arg Pro Glu Ile Trp Glu Gly Glu Pro Pro Cys Leu Pro Pro 
                          165                 170                 175     
          Arg Asp Ser Leu Asn Gln Ser Leu Ser Gln Asp Leu Thr Met Ala Pro 
                      180                 185                 190         
          Gly Ser Thr Leu Trp Leu Ser Cys Gly Val Pro Pro Asp Ser Val Ser 
                  195                 200                 205             
          Arg Gly Pro Leu Ser Trp Thr His Val His Pro Lys Gly Pro Lys Ser 
              210                 215                 220                 
          Leu Leu Ser Leu Glu Leu Lys Asp Asp Arg Pro Ala Arg Asp Met Trp 
          225                 230                 235                 240 
          Val Met Glu Thr Gly Leu Leu Leu Pro Arg Ala Thr Ala Gln Asp Ala 
                          245                 250                 255     
          Gly Lys Tyr Tyr Cys His Arg Gly Asn Leu Thr Met Ser Phe His Leu 
                      260                 265                 270         
          Glu Ile Thr Ala Arg Pro Val Leu Trp His Trp Leu Leu Arg Thr Gly 
                  275                 280                 285             
          Gly Trp Lys Val Ser Ala Val Thr Leu Ala Tyr Leu Ile Phe Cys Leu 
              290                 295                 300                 
          Cys Ser Leu Val Gly Ile Leu His Leu Gln Arg Ala Leu Val Leu Arg 
          305                 310                 315                 320 
          Arg Lys Arg Lys Arg Met Thr Asp Pro Thr Arg Arg Phe Phe Lys Val 
                          325                 330                 335     
          Thr Pro Pro Pro Gly Ser Gly Pro Gln Asn Gln Tyr Gly Asn Val Leu 
                      340                 345                 350         
          Ser Leu Pro Thr Pro Thr Ser Gly Leu Gly Arg Ala Gln Arg Trp Ala 
                  355                 360                 365             
          Ala Gly Leu Gly Gly Thr Ala Pro Ser Tyr Gly Asn Pro Ser Ser Asp 
              370                 375                 380                 
          Val Gln Ala Asp Gly Ala Leu Gly Ser Arg Ser Pro Pro Gly Val Gly 
          385                 390                 395                 400 
          Pro Glu Glu Glu Glu Gly Glu Gly Tyr Glu Glu Pro Asp Ser Glu Glu 
                          405                 410                 415     
          Asp Ser Glu Phe Tyr Glu Asn Asp Ser Asn Leu Gly Gln Asp Gln Leu 
                      420                 425                 430         
          Ser Gln Asp Gly Ser Gly Tyr Glu Asn Pro Glu Asp Glu Pro Leu Gly 
                  435                 440                 445             
          Pro Glu Asp Glu Asp Ser Phe Ser Asn Ala Glu Ser Tyr Glu Asn Glu 
              450                 455                 460                 
          Asp Glu Glu Leu Thr Gln Pro Val Ala Arg Thr Met Asp Phe Leu Ser 
          465                 470                 475                 480 
          Pro His Gly Ser Ala Trp Asp Pro Ser Arg Glu Ala Thr Ser Leu Gly 
                          485                 490                 495     
          Ser Gln Ser Tyr Glu Asp Met Arg Gly Ile Leu Tyr Ala Ala Pro Gln 
                      500                 505                 510         
          Leu Arg Ser Ile Arg Gly Gln Pro Gly Pro Asn His Glu Glu Asp Ala 
                  515                 520                 525             
          Asp Ser Tyr Glu Asn Met Asp Asn Pro Asp Gly Pro Asp Pro Ala Trp 
              530                 535                 540                 
          Gly Gly Gly Gly Arg Met Gly Thr Trp Ser Thr Arg 
          545                 550                 555     
          <![CDATA[<210> 2]]>
          <![CDATA[<211> 451]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221> 來源]]>
          <![CDATA[<223> /附註=「人工序列之描述：合成多肽」]]>
          <![CDATA[<400> 2]]>
          Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 
                      20                  25                  30          
          Val Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 
                  35                  40                  45              
          Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Ile Ser Ser Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Gly Thr Tyr Tyr Tyr Gly Thr Arg Val Phe Asp Tyr Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 
                  115                 120                 125             
          Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 
                          165                 170                 175     
          Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 
                      180                 185                 190         
          Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 
                  195                 200                 205             
          Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 
              210                 215                 220                 
          Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Pro Asp Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 
                          245                 250                 255     
          Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 
                      260                 265                 270         
          Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 
                  275                 280                 285             
          His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe 
              290                 295                 300                 
          Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Glu 
                          325                 330                 335     
          Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 
                      340                 345                 350         
          Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 
              370                 375                 380                 
          Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 
          385                 390                 395                 400 
          Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 
                          405                 410                 415     
          Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 
                      420                 425                 430         
          His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 
                  435                 440                 445             
          Pro Gly Lys 
              450     
          <![CDATA[<210> 3]]>
          <![CDATA[<211> 219]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221> 來源]]>
          <![CDATA[<223> /附註=「人工序列之描述：合成多肽」]]>
          <![CDATA[<400> 3]]>
          Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
          Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Gln Asn Val 
                      20                  25                  30          
          Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser 
                  35                  40                  45              
          Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Arg Met Ser Asn Leu Asn Ser Gly Val Pro 
              50                  55                  60                  
          Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile 
          65                  70                  75                  80  
          Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Met Gln His 
                          85                  90                  95      
          Leu Glu Tyr Pro Ile Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 
                      100                 105                 110         
          Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 
                  115                 120                 125             
          Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 
              130                 135                 140                 
          Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 
                          165                 170                 175     
          Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 
                      180                 185                 190         
          Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 
                  195                 200                 205             
          Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 
              210                 215                 
          <![CDATA[<210> 4]]>
          <![CDATA[<211> 121]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221> 來源]]>
          <![CDATA[<223> /附註=「人工序列之描述：合成多肽」]]>
          <![CDATA[<400> 4]]>
          Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 
                      20                  25                  30          
          Val Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 
                  35                  40                  45              
          Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Ile Ser Ser Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Gly Thr Tyr Tyr Tyr Gly Thr Arg Val Phe Asp Tyr Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120     
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          <![CDATA[<221> 來源]]>
          <![CDATA[<223> /附註=「人工序列之描述：合成多肽」]]>
          <![CDATA[<400> 5]]>
          Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
          Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Gln Asn Val 
                      20                  25                  30          
          Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser 
                  35                  40                  45              
          Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Arg Met Ser Asn Leu Asn Ser Gly Val Pro 
              50                  55                  60                  
          Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile 
          65                  70                  75                  80  
          Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Met Gln His 
                          85                  90                  95      
          Leu Glu Tyr Pro Ile Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 
                      100                 105                 110         
          <![CDATA[<210> 6]]>
          <![CDATA[<211> 5]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221> 來源]]>
          <![CDATA[<223> /附註=「人工序列之描述：合成肽」]]>
          <![CDATA[<400> 6]]>
          Ser Tyr Val Met His 
          1               5   
          <![CDATA[<210> 7]]>
          <![CDATA[<211> 6]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
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          <![CDATA[<221> 來源]]>
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          <![CDATA[<400> 7]]>
          Asn Pro Tyr Asn Asp Gly 
          1               5       
          <![CDATA[<210> 8]]>
          <![CDATA[<211> 12]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
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          Gly Thr Tyr Tyr Tyr Gly Thr Arg Val Phe Asp Tyr 
          1               5                   10          
          <![CDATA[<210> 9]]>
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          Arg Ser Ser Lys Ser Leu Gln Asn Val Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr 
          1               5                   10                  15      
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          <![CDATA[<212> PRT]]>
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          Arg Met Ser Asn Leu Asn Ser 
          1               5           
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          <![CDATA[<400> 11]]>
          Met Gln His Leu Glu Tyr Pro Ile Thr 
          1               5

Claims

一種治療有需要之人類個體之非霍奇金淋巴瘤、慢性淋巴球性白血病或急性淋巴母細胞白血病的方法，該方法包含向該人類個體投與治療有效量之4-{3-[1-(4-胺基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基}吡咯啶-2-酮或其醫藥學上可接受之鹽，及與人類CD19結合之抗體，其中該抗體包含可變重(VH)域，該域包含VH互補決定區(CDR)1、VH CDR2及VH CDR3，其中：該VH CDR1包含胺基酸序列SYVMH (SEQ ID NO:6)；該VH CDR2包含胺基酸序列NPYNDG (SEQ ID NO:7)；且該VH CDR3包含胺基酸序列GTYYYGTRVFDY (SEQ ID NO:8)；且其中該抗體包含可變輕(VL)域，該域包含VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3，其中：該VL CDR1包含胺基酸序列RSSKSLQNVNGNTYLY (SEQ ID NO:9)；該VL CDR2包含胺基酸序列RMSNLNS (SEQ ID NO:10)；且該VL CDR3包含胺基酸序列MQHLEYPIT (SEQ ID NO:11)。
如請求項1之方法，其中該VH域包含胺基酸序列EVQLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGYTFTSYVMHWVRQAPGKGLEWIGYINPYNDGTKYNEKFQGRVTISSDKSISTAYMELSSLRSEDTAMYYCARGTYYYGTRVFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:4)，且該VL域包含胺基酸序列DIVMTQSPATLSLSPGERATLSCRSSKSLQNVNGNTYLYWFQQKPGQSPQLLIYRMSNLNSGVPDRFSGSGSGTEFTLTISSLEPEDFAVYYCMQHLEYPITFGAGTKLEIK (SEQ ID NO:5)。
如請求項1之方法，其中該抗體包含重鏈及輕鏈，且其中該重鏈包含以SEQ ID NO:2闡述之胺基酸序列且該輕鏈包含以SEQ ID NO:3闡述之胺基酸序列。
如請求項1至3中任一項之方法，其中該人類個體患有非霍奇金淋巴瘤。
如請求項4之方法，其中該非霍奇金淋巴瘤為瀰漫性大B細胞淋巴瘤。
如請求項5之方法，其中該瀰漫性大B細胞淋巴瘤為複發性/難治性瀰漫性大B細胞淋巴瘤。
如請求項4之方法，其中該非霍奇金淋巴瘤為濾泡性淋巴瘤。
如請求項4之方法，其中該非霍奇金淋巴瘤為小淋巴球性淋巴瘤。
如請求項4之方法，其中該非霍奇金淋巴瘤為黏膜相關淋巴組織淋巴瘤。
如請求項4之方法，其中該非霍奇金淋巴瘤為邊緣區淋巴瘤。
如請求項4之方法，其中該非霍奇金淋巴瘤為伯基特氏淋巴瘤。
如請求項4之方法，其中該非霍奇金淋巴瘤為套細胞淋巴瘤。
如請求項1至3中任一項之方法，其中該人類個體患有慢性淋巴球性白血病。
如請求項1至3中任一項之方法，其中該人類個體患有急性淋巴母細胞白血病。
如請求項1至14中任一項之方法，其中該抗體係經靜脈內投與。
如請求項1至14中任一項之方法，其中該抗體以9 mg/kg或12 mg/kg之劑量經靜脈內投與。
如請求項1至14中任一項之方法，其中該抗體至少每兩週一次以9 mg/kg或12 mg/kg之劑量經靜脈內投與。
如請求項1至14中任一項之方法，其中該抗體根據以下時程以12 mg/kg之劑量經靜脈內投與：在第一個28天週期之第1、4、8、15及22天；在第二個28天週期之第1、8、15及22天；在第三個28天週期之第1、8、15及22天；及在第四個28天週期之第1及15天以及此後的其他28天週期之第1及15天。
如請求項1至18中任一項之方法，其中4-{3-[1-(4-胺基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基}吡咯啶-2-酮或其醫藥學上可接受之鹽係經口投與。
如請求項1至18中任一項之方法，其中4-{3-[1-(4-胺基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基}吡咯啶-2-酮或其醫藥學上可接受之鹽係以1 mg、2.5 mg、5 mg、10 mg或20 mg之劑量經口投與。
如請求項1至18中任一項之方法，其中4-{3-[1-(4-胺基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基}吡咯啶-2-酮或其醫藥學上可接受之鹽係每天一次以1 mg、2.5 mg、5 mg、10 mg或20 mg之劑量經口投與。
如請求項1至18中任一項之方法，其中4-{3-[1-(4-胺基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基}吡咯啶-2-酮或其醫藥學上可接受之鹽在第1至56天每天一次以20 mg之劑量經口投與，且隨後每天一次以2.5 mg之劑量經口投與。
如請求項1至14中任一項之方法，其中該抗體根據以下時程以12 mg/kg之劑量經靜脈內投與：在第一個28天週期之第1、4、8、15及22天；在第二個28天週期之第1、8、15及22天；在第三個28天週期之第1、8、15及22天；及在第四個28天週期之第1及15天以及此後的其他28天週期之第1及15天，且其中4-{3-[1-(4-胺基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基}吡咯啶-2-酮或其醫藥學上可接受之鹽在第1至56天每天一次以20 mg之劑量經口投與，且隨後每天一次以2.5 mg之劑量經口投與。