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TW202016135A - Ｐｓｍａ結合劑及其用途 - Google Patents

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TW202016135A
TW202016135A TW108118091A TW108118091A TW202016135A TW 202016135 A TW202016135 A TW 202016135A TW 108118091 A TW108118091 A TW 108118091A TW 108118091 A TW108118091 A TW 108118091A TW 202016135 A TW202016135 A TW 202016135A
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seq
antibody
psma
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hcdr2
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TW108118091A
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格倫 安德森
塔米 布希
羅莎 卡多索
友善 戚
朱迪斯 康納
泰 汀
德瑞克 多明哥
約翰 瓊斯
柯林 凱恩
伯斯尼 馬特森
特雷莎 麥克德維特
吉兒 穆尼
理查 塔瓦多斯
弘 周
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美商健生生物科技公司
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Abstract

本發明係關於特異性結合PSMA、或PSMA及CD3之抗體，編碼該等抗體或片段之多核苷酸，及製造及使用上述者之方法。

Description

PSMA結合劑及其用途 序列表
本申請案含有序列表，其已經以ASCII格式藉由電子方式提交且其全文以引用方式併入本文中。該ASCII副本(建立於2019年4月30日)被命名為JBI5156WOPCT1_SL.txt且檔案大小為272,443位元組。
本文中提供之揭露係關於免疫特異性結合前列腺特異性膜抗原(prostate specific membrane antigen,PSMA)之單株抗體、免疫特異性結合PSMA及分化簇3(cluster of differentiation 3,CD3)之多特異性抗體、及生產及使用所述抗體之方法。
前列腺癌係在全世界男性中第二常見的癌症，且係癌症相關死亡的第六大主因。全球每年有大約1,100,000個新案例及300,000個死亡數，其構成所有癌症死亡的4百分比。經過評估，每6名男性中有1名將在其一生中經診斷患有該疾病。在美國，多於90%的前列腺癌是在局部或區域期時發現。在此等早期，5年存活率接近100%。然而，當癌症已經轉移時，5年存活率會下降至28%，而仍需要針對晚期前列腺癌之有效治療。
前列腺特異性膜抗原(PSMA)是一種高度表現於下列之第II型膜蛋白：前列腺上皮內瘤(prostatic intraepithelial neoplasia,PIN)，即其中一些前列腺細胞已開始看起來及表現異常的病況；原發性及轉移性前列腺癌[Bostwick DG,Pacelli A,Blute M,Roche P,Murphy GP.Prostate specific membrane antigen expression in prostatic intraepithelial neoplasia and adenocarcinoma：A study of 184 cases.Cancer 1998；82(11)：2256-2261.]。PSMA在癌組織中的表現與疾病期及格里森分數(Gleason score)相關[Kawakami M,Nakayama J.Enhanced expression of prostate-specific membrane antigen gene in prostate cancer as revealed by in situ hybridization.Cancer Res 1997；57(12)：2321-2324.]。在來自荷爾蒙難治性患者的前列腺癌細胞中，PSMA表現亦較高[Wright GL Jr,Grob BM,Haley C,Grossman K,Newhall K,Petrylak D,Troyer J,KonchubaA,Schellhammer PF,Moriarty R.Upregulation of prostate-specific membrane antigen after androgen-deprivation therapy.Urology 1996；48(2)：326-334.]，且增加的PSMA表現已經顯示為獨立的疾病復發標記[Mitsiades CS,Lembessis P,Sourla A,Milathianakis C,TsintavisA,Koutsilieris M.Molecular staging by RT-pCR analysis for PSA and PSMA in peripheral blood and bone marrow samples is an independent predictor of time to biochemical failure followingradical prostatectomy for clinically localized prostate cancer.Clin Exp Metastasis 2004；21(6)：495-505.]。高水平的PSMA表現與經手術治療之前列腺癌中的早期前列腺特異性抗原(PSA)復發相關。PSMA表現水平與疾病的侵略性相關，從而強力支持PSMA作為用於前列腺癌表徵及後續療法的優異目標。
用於前列腺癌的目前治療包括手術、輻射、及荷爾蒙療法。當前列腺癌生長(儘管藉由荷爾蒙療法降低睪固酮水平)時，治療選項受到限制。一般而言，將癌症疫苗西普鲁塞-T(sipuleucel-T)、放射性藥劑(諸如鐳-223氯化物)、二級荷爾蒙療法(諸如阿比特龍(abiraterone)或恩雜魯胺(enzalutamide))、及/或化療(歐洲紫杉醇(docetaxel)及卡巴他賽(cabazitaxel))按順序添加至荷爾蒙療法。雖然此等治療中各者可延緩癌症生長數個月並緩和疾病產生的症狀，但該疾病最終變得對彼等具抗性。此強調了對於針對PSMA表現性晚期前列腺癌之更為改善的治療及有效療法之需求。
本文提供免疫特異性結合至黑猩猩(Pan troglodytes,chimpanzee,chimp)、食蟹獼猴(Macaca fascicularis,cynomolgus monkey,macaque,cyno)、及/或人類PSMA之抗體及其抗原結合片段。亦描述能夠編碼所提供之PSMA特異性抗體及抗原結合片段的相關多核苷酸、表現所提供之抗體及抗原結合片段的細胞、以及相關聯之載體和經可偵測標示之抗體及抗原結合片段。此外，描述使用所提供抗體及抗原結合片段之方法。例如，PSMA特異性抗體及抗原結合 片段可用來診斷或監測PSMA表現性癌症(PSMA-expressing cancer)之進展、消退、或穩定；用來判定病患是否應該進行癌症治療；或者用來判定對象是否患有PSMA表現性癌症，並因而可能適合用PSMA特異性抗癌症治療劑來治療，PSMA特異性抗癌症治療劑諸如本文中所述之針對PSMA及CD3的多特異性(雙特異性、三特異性等)抗體。
本文進一步提供免疫特異性結合至PSMA及CD3之多特異性抗體及其多特異性抗原結合片段。亦描述能夠編碼所提供之PSMA x CD3多特異性抗體的相關多核苷酸、表現所提供之抗體的細胞、以及相關聯之載體和經可偵測標示之多特異性抗體。此外，描述使用所提供多特異性抗體之方法。例如，PSMA x CD3多特異性抗體可用來診斷或監測PSMA表現性癌症之進展、消退、或穩定；用來判定病患是否應該進行癌症治療；或者用來判定對象是否患有PSMA表現性癌症，並因而可能適合用PSMA特異性抗癌症治療劑來治療，PSMA特異性抗癌症治療劑諸如本文中所述之PSMA x CD3多特異性抗體。
PSMA特異性抗體
本發明提供一種經單離之抗體及其片段，其特異性結合黑猩猩(Pan troglodytes)、食蟹獼猴(Macaca fascicularis,cynomolgus monkey,macaque,cyno)、及/或人類PSMA，其包含分別為SEQ ID NO：31、42、及43之重鏈互補決定區1(HCDR1)、HCDR2、及HCDR3。
本發明提供一種經單離之抗體及其片段，其特異性結合黑猩猩、食蟹獼猴、及/或人類PSMA，其包含分別為SEQ ID NO：31、42、及43之HCDR1、HCDR2、及HCDR3，以及分別為SEQ ID NO：11、12、及13之輕鏈互補決定區1(LCDR1)、LCDR2、及LCDR3。
本發明提供一種經單離之抗體及其片段，其特異性結合黑猩猩、食蟹獼猴、及/或人類PSMA，其包含分別為SEQ ID NO：25、26、及27之HCDR1、HCDR2、及HCDR3。
本發明提供一種經單離之抗體及其片段，其特異性結合黑猩猩、食蟹獼猴、及/或人類PSMA，其包含分別為SEQ ID NO：25、26、及27之 HCDR1、HCDR2、及HCDR3，以及分別為SEQ ID NO：28、29、及30之LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
本發明提供一種經單離之抗體及其片段，其特異性結合黑猩猩、食蟹獼猴、及/或人類PSMA，其包含分別為SEQ ID NO：20、21、及22之HCDR1、HCDR2、及HCDR3。
本發明提供一種經單離之抗體及其片段，其特異性結合黑猩猩、食蟹獼猴、及/或人類PSMA，其包含分別為SEQ ID NO：20、21、及22之HCDR1、HCDR2、及HCDR3，以及分別為SEQ ID NO：23、12、及24之LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
本發明提供一種經單離之抗體及其片段，其特異性結合黑猩猩、食蟹獼猴、及/或人類PSMA，其包含分別為SEQ ID NO：14、15、及16之HCDR1、HCDR2、及HCDR3，或分別為SEQ ID NO：14、15、及16。
本發明提供一種經單離之抗體及其片段，其特異性結合黑猩猩、食蟹獼猴、及/或人類PSMA，其包含分別為SEQ ID NO：14、15、及16之HCDR1、HCDR2、及HCDR3，以及分別為SEQ ID NO：17、18、及19之LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
本發明提供一種經單離之抗體及其片段，其特異性結合黑猩猩、食蟹獼猴、及/或人類PSMA，其包含分別為SEQ ID NO：36、37、及38之HCDR1、HCDR2、及HCDR3。
本發明提供一種經單離之抗體及其片段，其特異性結合黑猩猩、食蟹獼猴、及/或人類PSMA，其包含分別為SEQ ID NO：36、37、及38之HCDR1、HCDR2、及HCDR3，以及分別為SEQ ID NO：39、40、及41之LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
本發明提供一種經單離之抗體及其片段，其特異性結合黑猩猩、食蟹獼猴、及/或人類PSMA，其包含分別為SEQ ID NO：122、123、及124之HCDR1、HCDR2、及HCDR3。
本發明提供一種經單離之抗體及其片段，其特異性結合黑猩猩、食蟹獼猴、及/或人類PSMA，其包含分別為SEQ ID NO：122、123、及124 之HCDR1、HCDR2、及HCDR3，以及分別為SEQ ID NO：23、12、及24之LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
本發明提供一種經單離之抗體及其片段，其特異性結合黑猩猩、食蟹獼猴(Macaca fascicularis,cynomolgus monkey,macaque,cyno)、及/或人類PSMA，其包含分別為SEQ ID NO：31、44、及45之重鏈互補決定區1(HCDR1)、HCDR2、及HCDR3。
本發明提供一種經單離之抗體及其片段，其特異性結合黑猩猩、食蟹獼猴(、及/或人類PSMA，其包含分別為SEQ ID NO：31、44、及45之HCDR1、HCDR2、及HCDR3，以及分別為SEQ ID NO：46、29、及27之輕鏈互補決定區1(LCDR1)、LCDR2、及LCDR3。
本發明提供一種經單離之抗體及其片段，其特異性結合黑猩猩、食蟹獼猴(Macaca fascicularis,cynomolgus monkey,macaque,cyno)、及/或人類PSMA，其包含分別為SEQ ID NO：36、37、及48之重鏈互補決定區1(HCDR1)、HCDR2、及HCDR3。
本發明提供一種經單離之抗體及其片段，其特異性結合黑猩猩、食蟹獼猴、及/或人類PSMA，其包含分別為SEQ ID NO：36、37、及48之HCDR1、HCDR2、及HCDR3，以及分別為SEQ ID NO：49、50、及51之輕鏈互補決定區1(LCDR1)、LCDR2、及LCDR3。
本發明提供一種經單離之抗體及其片段，其特異性結合黑猩猩、食蟹獼猴(Macaca fascicularis,cynomolgus monkey,macaque,cyno)、及/或人類PSMA，其包含分別為SEQ ID NO：36、37、及52之重鏈互補決定區1(HCDR1)、HCDR2、及HCDR3。
本發明提供一種經單離之抗體及其片段，其特異性結合黑猩猩、食蟹獼猴、及/或人類PSMA，其包含分別為SEQ ID NO：36、37、及52之HCDR1、HCDR2、及HCDR3，以及分別為SEQ ID NO：49、50、及51之輕鏈互補決定區1(LCDR1)、LCDR2、及LCDR3。
本發明提供一種經單離之抗體及其片段，其特異性結合黑猩猩、食蟹獼猴(Macaca fascicularis,cynomolgus monkey,macaque,cyno)、及/或 人類PSMA，其包含分別為SEQ ID NO：8、9、及10之重鏈互補決定區1(HCDR1)、HCDR2、及HCDR3。
本發明提供一種經單離之抗體及其片段，其特異性結合黑猩猩、食蟹獼猴、及/或人類PSMA，其包含分別為SEQ ID NO：8、9、及10之HCDR1、HCDR2、及HCDR3，以及分別為SEQ ID NO：11、12、及13之輕鏈互補決定區1(LCDR1)、LCDR2、及LCDR3。
本發明提供一種經單離之抗體及其片段，其特異性結合黑猩猩、食蟹獼猴(Macaca fascicularis,cynomolgus monkey,macaque,cyno)、及/或人類PSMA，其包含分別為SEQ ID NO：31、32、及33之重鏈互補決定區1(HCDR1)、HCDR2、及HCDR3。
本發明提供一種經單離之抗體及其片段，其特異性結合黑猩猩、食蟹獼猴、及/或人類PSMA，其包含分別為SEQ ID NO：31、32、及33之HCDR1、HCDR2、及HCDR3，以及分別為SEQ ID NO：34、12、及35之輕鏈互補決定區1(LCDR1)、LCDR2、及LCDR3。
本發明提供一種經單離之抗體及其片段，其特異性結合黑猩猩、食蟹獼猴(Macaca fascicularis,cynomolgus monkey,macaque,cyno)、及/或人類PSMA，其包含分別為SEQ ID NO：53、54、及55之重鏈互補決定區1(HCDR1)、HCDR2、及HCDR3。
本發明提供一種經單離之抗體及其片段，其特異性結合黑猩猩、食蟹獼猴(、及/或人類PSMA，其包含分別為SEQ ID NO：53、54、及55之HCDR1、HCDR2、及HCDR3，以及分別為SEQ ID NO：23、12、及35之輕鏈互補決定區1(LCDR1)、LCDR2、及LCDR3。
本發明亦提供一種經單離之抗體及其片段，其特異性結合黑猩猩、食蟹獼猴、及/或人類PSMA，其包含如本文中所述的某些HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3胺基酸序列。
本發明亦提供一種經單離之抗體及其片段，其特異性結合黑猩猩、食蟹獼猴、及/或人類PSMA，其包含如本文中所述的某些可變重鏈區(VH)及可變輕鏈區(VL)。
本發明亦提供一種特異性結合黑猩猩、食蟹獼猴、及/或人類PSMA的經單離之雙特異性PSMA/CD3抗體及其片段，其包含特異性結合PSMA之第一結構域及特異性結合CD3之第二結構域。
本發明亦提供一種特異性結合黑猩猩、食蟹獼猴、及/或人類PSMA的經單離之雙特異性PSMA/CD3抗體及其片段，其包含特異性結合PSMA之第一結構域及特異性結合CD3之第二結構域，其包含如本文中所述的某些HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、LCDR3、VH、VL、重鏈、或輕鏈胺基酸序列。
本發明亦提供一種經單離之雙特異性PSMA/CD3抗體及其片段，其包含特異性結合PSMA之第一結構域及特異性結合CD3之第二結構域，其中該第一結構域包含分別為SEQ ID NO：31、42、43、11、12、及13之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
本發明亦提供一種經單離之雙特異性PSMA/CD3抗體及其片段，其包含特異性結合PSMA之第一結構域及特異性結合CD3之第二結構域，其中該第一結構域包含分別為SEQ ID NO：25、26、27、28、29、及30之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
本發明亦提供一種經單離之雙特異性PSMA/CD3抗體及其片段，其包含特異性結合PSMA之第一結構域及特異性結合CD3之第二結構域，其中該第一結構域包含分別為SEQ ID NO：36、37、38、39、40、及41之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
本發明亦提供一種經單離之雙特異性PSMA/CD3抗體及其片段，其包含特異性結合PSMA之第一結構域及特異性結合CD3之第二結構域，其中該第一結構域包含分別為SEQ ID NO：20、21、22、23、12、及24之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
本發明亦提供一種經單離之雙特異性PSMA/CD3抗體及其片段，其包含特異性結合PSMA之第一結構域及特異性結合CD3之第二結構域，其中該第一結構域包含分別為SEQ ID NO：14、15、16、17、18、及19之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
本發明亦提供一種經單離之雙特異性PSMA/CD3抗體及其片段，其包含特異性結合PSMA之第一結構域及特異性結合CD3之第二結構域，其中該第一結構域包含分別為SEQ ID NO：122、123、124、23、12、及24之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
本發明亦提供一種經單離之雙特異性PSMA/CD3抗體及其片段，其包含特異性結合PSMA之第一結構域及特異性結合CD3之第二結構域，其中該第一結構域包含分別為SEQ ID NO：31、44、45、46、29、及47之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
本發明亦提供一種經單離之雙特異性PSMA/CD3抗體及其片段，其包含特異性結合PSMA之第一結構域及特異性結合CD3之第二結構域，其中該第一結構域包含分別為SEQ ID NO：36、37、48、49、50、及51之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
本發明亦提供一種經單離之雙特異性PSMA/CD3抗體及其片段，其包含特異性結合PSMA之第一結構域及特異性結合CD3之第二結構域，其中該第一結構域包含分別為SEQ ID NO：36、37、52、49、50、及51之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
本發明亦提供一種經單離之雙特異性PSMA/CD3抗體及其片段，其包含特異性結合PSMA之第一結構域及特異性結合CD3之第二結構域，其中該第一結構域包含分別為SEQ ID NO：8、9、10、11、12、及13之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
本發明亦提供一種經單離之雙特異性PSMA/CD3抗體及其片段，其包含特異性結合PSMA之第一結構域及特異性結合CD3之第二結構域，其中該第一結構域包含分別為SEQ ID NO：31、32、33、34、12、及35之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
本發明亦提供一種經單離之雙特異性PSMA/CD3抗體及其片段，其包含特異性結合PSMA之第一結構域及特異性結合CD3之第二結構域，其中該第一結構域包含分別為SEQ ID NO：53、54、55、23、12、及35之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
本發明亦提供一種經單離之雙特異性PSMA/CD3抗體及其片段，其包含特異性結合PSMA之第一結構域及特異性結合CD3之第二結構域，其中該第一結構域包含分別為SEQ ID NO：25、130、27、28、29、及30之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
本發明亦提供一種經單離之雙特異性PSMA/CD3抗體及其片段，其包含特異性結合PSMA之第一結構域及特異性結合CD3之第二結構域，其中該第一結構域包含分別為SEQ ID NO：25、130、27、131、29、及132之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
本發明亦提供一種經單離之雙特異性PSMA/CD3抗體及其片段，其包含特異性結合PSMA之第一結構域及特異性結合CD3之第二結構域，其中該第一結構域包含分別為SEQ ID NO：25、130、27、28、133、及132之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
本發明亦提供一種經單離之雙特異性PSMA/CD3抗體及其片段，其包含特異性結合PSMA之第一結構域及特異性結合CD3之第二結構域，其中該第一結構域包含分別為SEQ ID NO：25、134、27、28、29、及30之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
本發明亦提供一種經單離之雙特異性PSMA/CD3抗體及其片段，其包含特異性結合PSMA之第一結構域及特異性結合CD3之第二結構域，其中該第一結構域包含分別為SEQ ID NO：25、135、27、28、29、及136之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
本發明亦提供一種經單離之雙特異性PSMA/CD3抗體及其片段，其包含特異性結合PSMA之第一結構域及特異性結合CD3之第二結構域，其中該第一結構域包含分別為SEQ ID NO：25、135、27、28、29、及30之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
本發明亦提供一種經單離之雙特異性PSMA/CD3抗體及其片段，其包含特異性結合PSMA之第一結構域及特異性結合CD3之第二結構域，其中該第一結構域包含分別為SEQ ID NO：25、135、27、131、29、及132之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
本發明亦提供一種經單離之雙特異性PSMA/CD3抗體及其片段，其包含特異性結合PSMA之第一結構域及特異性結合CD3之第二結構域，其中該第一結構域包含分別為SEQ ID NO：25、135、27、28、133、及132之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
本發明亦提供一種經單離之雙特異性PSMA/CD3抗體及其片段，其包含特異性結合PSMA之第一結構域及特異性結合CD3之第二結構域，其中該第一結構域包含分別為SEQ ID NO：25、134、27、28、29、及136之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
本發明亦提供一種經單離之雙特異性PSMA/CD3抗體及其片段，其包含特異性結合PSMA之第一結構域及特異性結合CD3之第二結構域，其中該第一結構域包含分別為SEQ ID NO：25、134、27、131、29、及132之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
本發明亦提供一種經單離之雙特異性PSMA/CD3抗體及其片段，其包含特異性結合PSMA之第一結構域及特異性結合CD3之第二結構域，其中該第一結構域包含分別為SEQ ID NO：25、134、27、28、133、及132之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
本發明亦提供一種經單離之雙特異性PSMA/CD3抗體及其片段，其包含特異性結合PSMA之第一結構域及特異性結合CD3之第二結構域，其中該第一結構域包含分別為SEQ ID NO：25、137、27、28、133、及132之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
本發明亦提供一種經單離之雙特異性PSMA/CD3抗體及其片段，其包含特異性結合PSMA之第一結構域及特異性結合CD3之第二結構域，其中該第一結構域包含SEQ ID NO：74之重鏈可變區(VH)及SEQ ID NO：61之輕鏈可變區(VL)，且該第二結構域包含SEQ ID NO：104之VH及SEQ ID NO：105之VL。
本發明亦提供一種經單離之雙特異性PSMA/CD3抗體及其片段，其包含特異性結合PSMA之第一結構域及特異性結合CD3之第二結構域，其中該第一結構域包含SEQ ID NO：74之重鏈可變區(VH)及SEQ ID NO：61之輕 鏈可變區(VL)，且該第二結構域包含SEQ ID NO：152之VH及SEQ ID NO：153之VL。
本發明亦提供一種經單離之雙特異性PSMA/CD3抗體及其片段，其包含特異性結合PSMA之第一結構域及特異性結合CD3之第二結構域，其中該第一結構域包含SEQ ID NO：66之重鏈可變區(VH)及SEQ ID NO：67之輕鏈可變區(VL)，且該第二結構域包含SEQ ID NO：104之VH及SEQ ID NO：105之VL。
本發明亦提供一種經單離之雙特異性PSMA/CD3抗體及其片段，其包含特異性結合PSMA之第一結構域及特異性結合CD3之第二結構域，其中該第一結構域包含SEQ ID NO：66之重鏈可變區(VH)及SEQ ID NO：67之輕鏈可變區(VL)，且該第二結構域包含SEQ ID NO：152之VH及SEQ ID NO：153之VL。
本發明亦提供一種經單離之雙特異性PSMA/CD3抗體及其片段，其包含特異性結合PSMA之第一結構域及特異性結合CD3之第二結構域，其中該第一結構域包含SEQ ID NO：64之重鏈可變區(VH)及SEQ ID NO：65之輕鏈可變區(VL)，且該第二結構域包含SEQ ID NO：104之VH及SEQ ID NO：105之VL。
本發明亦提供一種經單離之雙特異性PSMA/CD3抗體及其片段，其包含特異性結合PSMA之第一結構域及特異性結合CD3之第二結構域，其中該第一結構域包含SEQ ID NO：64之重鏈可變區(VH)及SEQ ID NO：65之輕鏈可變區(VL)，且該第二結構域包含SEQ ID NO：152之VH及SEQ ID NO：153之VL。
本發明亦提供一種經單離之雙特異性PSMA/CD3抗體及其片段，其包含特異性結合PSMA之第一結構域及特異性結合CD3之第二結構域，其中該第一結構域包含SEQ ID NO：62之重鏈可變區(VH)及SEQ ID NO：63之輕鏈可變區(VL)，且該第二結構域包含SEQ ID NO：104之VH及SEQ ID NO：105之VL。
本發明亦提供一種經單離之雙特異性PSMA/CD3抗體及其片段，其包含特異性結合PSMA之第一結構域及特異性結合CD3之第二結構域， 其中該第一結構域包含SEQ ID NO：62之重鏈可變區(VH)及SEQ ID NO：63之輕鏈可變區(VL)，且該第二結構域包含SEQ ID NO：152之VH及SEQ ID NO：153之VL。
本發明亦提供一種經單離之雙特異性PSMA/CD3抗體及其片段，其包含特異性結合PSMA之第一結構域及特異性結合CD3之第二結構域，其中該第一結構域包含SEQ ID NO：75之重鏈可變區(VH)及SEQ ID NO：76之輕鏈可變區(VL)，且該第二結構域包含SEQ ID NO：104之VH及SEQ ID NO：105之VL。
本發明亦提供一種經單離之雙特異性PSMA/CD3抗體及其片段，其包含特異性結合PSMA之第一結構域及特異性結合CD3之第二結構域，其中該第一結構域包含SEQ ID NO：75之重鏈可變區(VH)及SEQ ID NO：76之輕鏈可變區(VL)，且該第二結構域包含SEQ ID NO：152之VH及SEQ ID NO：153之VL。
本發明亦提供一種經單離之雙特異性PSMA/CD3抗體及其片段，其包含特異性結合PSMA之第一結構域及特異性結合CD3之第二結構域，其中該第一結構域包含SEQ ID NO：160之重鏈可變區(VH)及SEQ ID NO：65之輕鏈可變區(VL)，且該第二結構域包含SEQ ID NO：104之VH及SEQ ID NO：105之VL。
本發明亦提供一種經單離之雙特異性PSMA/CD3抗體及其片段，其包含特異性結合PSMA之第一結構域及特異性結合CD3之第二結構域，其中該第一結構域包含SEQ ID NO：160之重鏈可變區(VH)及SEQ ID NO：65之輕鏈可變區(VL)，且該第二結構域包含SEQ ID NO：152之VH及SEQ ID NO：153之VL。
本發明亦提供一種免疫偶聯物(immunoconjugate)，其包含與治療劑或顯像劑連接的本發明之抗體或其抗原結合部分。
本發明亦提供一種醫藥組成物，其包含本發明之抗體及醫藥上接受之載劑。
本發明亦提供一種多核苷酸，其編碼本發明之抗體VH、抗體VL、或抗體VH及抗體VL。
本發明亦提供一種載體，其包含編碼本發明之抗體VH、抗體VL、或抗體VH及VL的多核苷酸。
本發明亦提供一種宿主細胞，其包含本發明之載體。
本發明亦提供一種生產本發明之抗體的方法，其包含在使該抗體表現之條件下培養本發明之宿主細胞，並且回收由該宿主細胞所生產之抗體。
本發明亦提供一種治療對象之PSMA過度表現性疾病及/或癌症的方法，其包含向有需要之對象投予治療有效量的本發明之經單離之抗體達一段足以治療該癌症的時間。
本發明亦提供一種套組，其包含本發明之抗體。
〔圖1〕顯示結合至LNCaP細胞之抗PSMA噬菌體淘選命中者的滴定曲線。
〔圖2〕顯示結合至黑猩猩PSMA表現性HEK細胞之抗PSMA噬菌體淘選命中者的滴定曲線。
〔圖3〕顯示結合至食蟹獼猴PSMA表現性HEK細胞之抗PSMA噬菌體淘選命中者的滴定曲線。
〔圖4〕顯示具有連續編號之SP34的胺基酸序列。AbM定義之CDR(K.R.Abhinandan and A.C.Martin,2008.Mol.Immunol.45,3832-3839)係劃有底線。Ser230係存在於木瓜酶(papain)切斷之Fab中的最後HC殘基。殘基231至455係來自IGHG3_MOUSE(小鼠IgG3，異構體2(isoform 2))。
〔圖5〕顯示VH之人類架構適應(Human Framework Adaptation,「HFA」)變異體(依出現順序分別為SEQ ID NO：104、102、115、及116)及VL之人類架構適應變異體(依出現順序分別為SEQ ID NO：103、117、及105)。編號係連續性；AbM定義之CDR係劃有底線；與SP34不同之殘基係以粗體強調；HFA變異體中之回復突變(back mutation)係粗體且劃有底線。圖式揭示分別為SEQ ID NO 128及129的sp34 VH及VL序列。
〔圖6〕顯示SP34 HFA變異體與初級人類T細胞之結合。
〔圖7〕顯示SP34 HFA變異體與食蟹獼猴初級T細胞之結合。
〔圖8〕顯示SP34 HFA變異體在體外活化初級人類T細胞。陰性對照組係以白色顯示而陽性對照組係以黑色顯示。
〔圖9〕顯示SP34 HFA變異體在體外活化初級食蟹獼猴T細胞。陰性對照組係以白色顯示而陽性對照組係以黑色顯示。非CD3e交叉反應性抗體G11作為額外陰性對照組。
〔圖10A及圖10B〕顯示藉由SP34 HFA變異體之結合與活化間的關聯性。將針對人類(圖10A)及食蟹獼猴(圖10B)之平均結合及CD69平均螢光強度(Mean Fluorescence Intensity,「MFI」)值相對於彼此作圖。
〔圖11A至圖11F〕顯示結合至LNCaP細胞之PSMA X CD3雙特異性抗體的滴定曲線。
〔圖12〕顯示結合至黑猩猩PSMA表現性HEK細胞之PSMA X CD3雙特異性抗體的滴定曲線。
〔圖13〕顯示結合至食蟹獼猴PSMA表現性HEK細胞之PSMA X CD3雙特異性抗體的滴定曲線。
〔圖14〕顯示結合至人類PSMA表現性HEK細胞之PSMA X CD3雙特異性抗體的滴定曲線。
〔圖15〕顯示在T細胞媒介之鉻釋放毒性檢定中，針對人類PSMA表現性HEK細胞之PSMA X CD3雙特異性抗體的滴定曲線。
〔圖16〕顯示在針對人類PSMA表現性HEK細胞的T細胞媒介之鉻釋放毒性檢定中，對PSMA X CD3雙特異性抗體的中親和力與高親和力CD3臂進行的比較。
〔圖17〕顯示在T細胞媒介之鉻釋放毒性檢定中，針對LNCaP細胞之PSMA X CD3雙特異性抗體的滴定曲線。
〔圖18〕顯示在T細胞媒介之鉻釋放毒性檢定中，針對石蟹獼猴PSMA表現性HEK細胞之PSMA X CD3雙特異性抗體的滴定曲線。
〔圖19A、圖19B、及圖19C〕顯示在T細胞媒介之凋亡蛋白酶3/7毒性檢定中，針對人類及食蟹獼猴PSMA表現性HEK細胞及LNCaP細胞之PS3B27及對照雙特異性抗體的滴定曲線。
〔圖20〕顯示藉由PS3B27之T細胞活化。
〔圖21〕顯示在PBMC人源化NSG小鼠中經PS3B27或對照雙特異性抗體處理之HEK293-PSMA異種移植物的腫瘤形成預防。
〔圖22〕顯示經PS3B27及對照雙特異性抗體處理的帶有HEK293-PSMA異種移植物之PBMC人源化NSG小鼠的平均體重。
〔圖23〕顯示PS3B27及對照雙特異性抗體在雄性CD1裸鼠中預防混合HEK293-PSMA/T細胞異種移植物之腫瘤形成的功效。
〔圖24〕顯示經PS3B27及對照雙特異性抗體治療/處理之帶有混合HEK293-PSMA/T細胞異種移植物的CD1雄性裸鼠之體重。
〔圖25〕顯示PSMB83(AKA「PSMM84」)Fab與人類PSMA ECD同二聚體結合的總體結構。
〔圖26〕顯示PSMA與PSMB83(AKA「PSMM84」)輕鏈的主要交互作用之放大圖。
〔圖27〕顯示PSMA與PSMB83(AKA「PSMM84」)重鏈的主要交互作用之放大圖。
〔圖28〕顯示對人類(SEQ ID NO：3)、小鼠(SEQ ID NO：157)、及食蟹獼猴(SEQ ID NO：2)PSMA之序列內的PSMB83(AKA「PSMM84」)之表位殘基進行的比較。將表位殘基加上陰影，且序列歧異係以劃底線顯示。
〔圖29〕顯示PSMB83(AKA「PSMM84」)之互補位殘基。將CDR劃底線，且將互補位殘基加上陰影。圖式依出現順序分別揭示SEQ ID NO 158及159。
〔圖30〕以PSMA與PSMB83(AKA「PSMM84」)之間形成的直接接觸顯示交互作用圖譜。凡得瓦(Van der Waals)交互作用係顯示為虛線，而H鍵係帶有箭頭的實線，指向主鏈原子。
〔圖31〕顯示相較於親本PSMB83的表現，衍生自PSMB83之抗PSMA Fab殖株的表現水平。將原始發光數相對於對數濃度作圖。
〔圖32〕顯示相較於親本PSMB83的結合，衍生自PSMB83之抗PSMA Fab殖株與人類PSMA的結合。將原始發光數相對於對數濃度作圖。
〔圖33〕顯示相較於親本PSMB83的結合，衍生自PSMB83之抗PSMA Fab殖株與食蟹獼猴PSMA的結合。將原始發光數相對於對數濃度作圖。
〔圖34〕顯示相較於親本PSMB83的結合，衍生自PSMB83之抗PSMA Fab殖株與人類PSMA的結合。將原始發光數以Fab表現水平標準化。
〔圖35〕顯示相較於親本PSMB83的結合，衍生自PSMB83之抗PSMA Fab殖株與食蟹獼猴PSMA的結合。將原始發光數以Fab表現水平標準化。
〔圖36〕顯示親和力成熟之PSMA×CD3雙特異性抗體之子集的LNCAP細胞結合。
〔圖37〕顯示親和力成熟之PSMA×CD3雙特異性抗體之子集的LNCAP細胞結合。
〔圖38〕顯示親和力成熟之PSMA×CD3雙特異性抗體的PSMA陰性PC3細胞結合結果。
〔圖39〕顯示PSMA×CD3親和力成熟之雙特異性Ab在功能性細胞殺滅檢定中的結果。
〔圖40〕顯示PS3B79在T細胞人源化NSG小鼠中之LnCAP AR.TB人類前列腺異種移植物中的抗腫瘤功效。每週兩次測量皮下LnCAP AR.TB腫瘤，並將結果呈現為平均腫瘤體積，以mm3±SEM表示(*,p<0.0001)。
〔圖41〕顯示PS3B90在T細胞人源化NSG小鼠中之LnCAP AR.TB人類前列腺異種移植物中的抗腫瘤功效。每週兩次測量皮下LnCAP AR.TB腫瘤，並將結果呈現為平均腫瘤體積，以mm3±SEM表示(*,p<0.001)。
〔圖42〕顯示PS3B72(PSMA x CD3)對於T細胞人源化NSG小鼠中所建立之患者衍生異種移植物LuCaP 86.2前列腺腫瘤模型的效應。每週兩次測量皮下LuCaP 86.2腫瘤，並將結果呈現為平均腫瘤體積，以mm3±SEM表示(*,p<0.0001)。
所有在本說明中引用、包括但不限於專利及專利申請文件之發表文獻在此全部併入作為參照。
吾人會理解到本說明書中所使用的用語僅用於描述特定實施例之目的，並且不意欲為限制性。除非另有定義，否則本文使用之所有技術及科學用語，均與具有本發明有關技藝之通常知識者所一般了解之意義相同。
雖然任何類似或等效於本文中所述者之方法及材料可用於測試本發明之實務中，本文中仍描述例示性材料及方法。在描述及請求本發明時，將使用下列用語。
於本說明書及隨附的申請專利範圍中，除非內文另有明確說明，否則單數形式的「一(a/an)」及「該(the)」皆包括複數指稱。因此，例如對於「一細胞(a cell)」之指稱包括兩或更多個細胞之組合與類似者。
「特異性結合(specific binding或specifically bind)」或「結合(bind)」係指抗體以比對其他抗原更大的親和力結合至抗原或抗原內之表位。一般而言，抗體以下列平衡解離常數(KD)結合至抗原或抗原內之表位：約5×10-8M或更低，例如約1×10-9M或更低、約1×10-10M或更低、約1×10-11M或更低、或約1×10-12M或更低，一般以小於其結合至非特異性抗原(例如BSA、酪蛋白)之KD至少一百倍的KD結合。解離常數可使用標準程序來測量。然而，特異性結合至抗原或抗原內之表位的抗體可對於其他相關抗原具有交叉反應性，例如對於來自其他物種(諸如人類或猴)的相同抗原(同源物(homolog))具有交叉反應性，該等猴例如食蟹獼猴(Macaca fascicularis,cynomolgus,cyno)或黑猩猩(Pan troglodytes,chimpanzee,chimp)。當單特異性抗體特異性結合一種抗原或一種表位時，雙特異性抗體特異性結合二種不同的抗原或二種不同的表位。
「抗體(antibody)」係以廣義的方式意指並包括免疫球蛋白分子，其包括單株抗體(包括鼠類、人類、人源化(humanized)、及嵌合單株抗體)、抗體片段、雙特異性或多特異性抗體、二聚體、四聚體、或多聚體抗體、單鏈抗體、域抗體、及任何其他包含具有所需特異性之抗原結合部位的免疫球蛋白分子之修飾組態。「全長抗體分子(full length antibody molecule)」包含藉由雙硫鍵互連之兩條重鏈(HC)及兩條輕鏈(LC)以及其多聚體(例如IgM)。各重鏈包含重鏈可變區(VH)及重鏈恆定區(包含域CH1、鉸鏈、CH2、及CH3)。每條輕鏈包含輕鏈可變區(VL)及輕鏈恆定區(CL)。VH及VL區可進一步細分成散佈於架構區(FR)的多個高變區，其被稱為互補決定區(CDR)。各VH及VL係由三個CDR及四個FR區段組成，按照下列順序從胺基至接基端排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、及FR4。
「互補決定區(complementarity determining region,CDR)」係抗體中的「抗原結合部位(antigen binding site)」。CDR可使用各種用語來定義：(i)互補決定區(CDR)，三個在VH(HCDR1、HCDR2、HCDR3)且三個在VL(LCDR1、LCDR2、LCDR3)，其係基於序列變異性(Wu and Kabat,(1970)J Exp Med 132：211-50；Kabat et al.,Sequences of Proteins of Immunological Interest,5th Ed.Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,Md.,1991)。(ii)「高變區(hypervariable region)」、「HVR」、或「HV」(三個在VH(H1,H2,H3)且三個在VL(L1,L2,L3))係指如Chothia及Lesk所定義在結構上高度可變之抗體可變域中的區域(Chothia and Lesk,(1987)Mol Biol 196：901-17)。國際免疫遺傳學(International ImMunoGeneTics,IMGT)資料庫(http：//www_imgt_org)提供了標準化編號及抗原結合部位的定義。CDR、HV、及IMGT描繪之間的對應性係描述於Lefranc et al.,(2003)Dev Comparat Immunol 27：55-77。如本文中所使用，用語「CDR」、「HCDR1」、「HCDR2」、「HCDR3」、「LCDR1」、「LCDR2」、及「LCDR3」包括由上述Kabat、Chothia、或IMGT中之任何方法定義的CDR，除非在說明書中另有明確說明。
免疫球蛋白可被分為下列五大類：IgA、IgD、IgE、IgG及IgM，視重鏈恆定域(constant domain)胺基酸序列而定。IgA及IgG係進一步被細分為同型IgA1、IgA2、IgG1、IgG2、IgG3及IgG4。任何脊椎動物物種的抗體輕鏈可被分為二種明確不同類型(即kappa(κ)與lambda(λ))中之一者，視其恆定域的胺基酸序列而定。
「抗體片段(antibody fragment)」或「抗原結合片段(antigen-binding fragment)」係指免疫球蛋白分子的一個部分，其保留重鏈及/或輕鏈抗原結合部位，諸如重鏈互補決定區(HCDR)1、2、及3、輕鏈互補決定區(LCDR)1、2、及3、重鏈可變區(VH)、或輕鏈可變區(VL)。抗體或抗原結合片段包括熟知的Fab、F(ab')2、Fd及Fv片段、以及由一個VH域所組成的域抗體(dAb)。VH及VL域可經由合成連接子連接在一起以形成各種類型的單鏈抗體設計，其中VH/VL域可進行分子內配對，或者在VH及VL域係由分開之單鏈抗體建構體所表現之情況下可進行分子間配對，以形成單價抗原結合位，諸如單鏈 Fv(scFv)或雙價抗體(diabody)；其描述於例如國際專利公開號WO1998/44001、WO1988/01649、WO1994/13804、及WO1992/01047中。
「單株抗體(monoclonal antibody)」係指每條重鏈及每條輕鏈為單一胺基酸組成的抗體群，除了可能的習知改變，例如從抗體重鏈去除C端離胺酸。單株抗體一般會結合一種抗原表位，除了雙特異性單株抗體會結合兩種不同的抗原表位。單株抗體在抗體群內可能有異源醣化。單株抗體可係單特異性或多特異性，或單價、二價、或多價。雙特異性抗體係包括在用語單株抗體中。
「經單離之抗體(isolated antibody)」係指實質上不含其他具有不同抗原特異性之抗體的抗體或抗體片段(例如，特異性結合PSMA的經單離之抗體實質上不含特異性結合PSMA以外之抗原的抗體)。在雙特異性PSMA X CD3抗體的情況下，該雙特異性抗體特異性結合PSMA及CD3兩者，且實質上不含特異性結合PSMA及CD3以外之抗原的抗體。「經單離之抗體(isolated antibody)」包含經單離成更高純度的抗體，例如為80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%純度的抗體。
「人源化抗體(humanized antibody)」係指抗原結合部位係衍生自非人類物種且可變區架構係衍生自人類免疫球蛋白序列的抗體。人源化抗體可在架構中包括取代，所以該架構可能不是所表現人類免疫球蛋白或人類免疫球蛋白生殖系基因序列的確切複製物。
「人類抗體(human antibody)」係指具有重鏈及輕鏈可變區的抗體，其中架構及抗原結合部位兩者皆衍生自人源序列。若該抗體含有恆定區或恆定區的一部分，則該恆定區亦衍生自人源序列。
如果該抗體的可變區係得自使用人類生殖系免疫球蛋白或重排(rearranged)免疫球蛋白基因的系統，則人類抗體包含「衍生自(derived from)」人源序列的重或輕鏈可變區。此等例示性系統係經展示在噬菌體上的人類免疫球蛋白基因庫(gene library)、及基因轉殖非人類動物(諸如帶有人類免疫球蛋白基因位點的小鼠或大鼠)，如本文中所述。「人類抗體(human antibody)」在與人類生殖系免疫球蛋白或重排免疫球蛋白基因比較時可能含有胺基酸差異， 此係由於例如天然發生之體細胞突變或在架構或抗原結合部位(或兩者)中刻意引入取代所致。一般而言，「人類抗體(human antibody)」係在胺基酸序列上與由人類生殖系免疫球蛋白或重排免疫球蛋白基因所編碼的胺基酸序列具有至少約80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同一性。在一些情況下，「人類抗體」可能含有自人類架構序列分析導出的共有架構序列，例如Knappik et al.,(2000)J Mol Biol 296：57-86中所述，或併入經展示在噬菌體上的人類免疫球蛋白基因庫的合成HCDR3，例如Shi et al.,(2010)J Mol Biol 397：385-96及國際專利公開號WO2009/085462中所述。
衍生自人類免疫球蛋白序列的人類抗體可使用諸如併入有合成CDR及/或合成架構之噬菌體展示(phage display)的系統來產生，或者可使其經受體外(in vitro)誘變以改良抗體性質，從而得到在體內(in vivo)不會由人類抗體生殖系貯庫(repertoire)表現的抗體。
抗原結合部位衍生自非人類物種的抗體不包括在「人類抗體」的定義中。
「重組(recombinant)」係指當來自不同來源的區段經連接以生產重組DNA、抗體、或蛋白質時，藉由重組手段來製備、表現、建立、或單離的DNA、抗體、及其他蛋白質。
「表位(epitope)」係指與抗體特異性結合的抗原部分。表位一般由分子部分(諸如胺基酸或多醣側鏈)之化學活性(諸如極性、非極性或疏水性)表面分群(grouping)所組成，並且可具有特定三維結構特性以及特定電荷特性。表位可包含形成構形空間單元之鄰接(contiguous)及/或不鄰接(discontiguous)胺基酸。關於不鄰接表位，來自抗原線性序列之相異部分的胺基酸會透過蛋白質分子的摺疊而在3維空間中緊密靠近。抗體「表位(epitope)」取決於用於識別該表位的方法。
「互補位(paratope)」係指與抗原特異性結合的抗體部分。互補位本質上可為線性的，或可為不連續的，其係藉由抗體的非連續胺基酸之間的空間關係而不是線性系胺基酸形成。「輕鏈互補位(light chain paratope)」及「重鏈互補位(heavy chain paratope)」，或者「輕鏈互補位胺基酸殘基(light chain paratope amino acid residue)」及「重鏈互補位胺基酸殘基(heavy chain paratope amino acid residue)」係分別指與抗原接觸的抗體輕鏈殘基及重鏈殘基，或者大致上，「抗體互補位殘基(antibody paratope residue)」係指與抗原接觸的抗體胺基酸。
「雙特異性(bispecific)」係指特異性結合二種不同抗原或相同抗原內兩個不同表位的抗體。雙特異性抗體可對於其他相關抗原具有交叉反應性，例如對於來自其他物種(諸如人類或猴)的相同抗原(同源物)，該等猴例如食蟹獼猴(Macaca fascicularis,cynomolgus,cyno)或黑猩猩，或者可以結合在二或更多種不同抗原之間共有的表位。
「多特異性(multispecific)」係指特異性結合二或更多種不同抗原或相同抗原內二或更多個不同表位之抗體。多特異性抗體可對於其他相關抗原具有交叉反應性，例如對於來自其他物種(諸如人類或猴)的相同抗原(同源物)，該等猴例如食蟹獼猴(Macaca fascicularis,cynomolgus,cyno)或黑猩猩，或者可以結合在二或更多種不同抗原之間共有的表位。
「變異體(variant)」係指藉由一或多個修改(例如一或多個取代、插入或缺失)而不同於參考多肽或參考多核苷酸的多肽或多核苷酸。
「載體(vector)」係指在生物系統內能夠被複製或者可在此等系統之間移動的多核苷酸。載體多核苷酸一般含有元件，諸如複製起點、多腺苷酸化信號或選擇標記，彼等發揮作用以促進這些多核苷酸在利用能夠複製載體的生物組分之生物系統(諸如細胞、病毒、動物、植物、及重構生物系統)中的複製或維持。載體多核苷酸可為DNA或RNA分子或其等之混成物、單股或雙股。
「表現載體(expression vector)」係指可在生物系統或重構生物系統中用以指引多肽轉譯的載體，該多肽係由存在於該表現載體中之多核苷酸序列所編碼。
「多核苷酸(polynucleotide)」係指包含以糖-磷酸主鏈或其他等效共價化學結構所共價連接之核苷酸鏈的分子。雙股及單股DNA及RNA為多核苷酸的典型實例。
「多肽(polypeptide)」或「蛋白質(protein)」係指包含至少二個以胜肽鍵連接之胺基酸殘基以形成多肽的分子。少於50個胺基酸的小型多肽可稱為「肽(peptide)」。
「流動式細胞測量術(flow cytometry)」係在通過至少一種雷射時，用以分析流體中粒子的物理及化學特徵的技術。將細胞組分螢光標示，然後藉由雷射激發以發射不同波長的光(Adan,et al,Critical Reviews in Biotechnology(2016)1549-7801)。
「抗獨特型(抗Id)抗體(anti-idiotypic(anti-Id)antibody)」係識別抗體之抗原決定位(例如互補位或CDR)的抗體。在所屬技術領域中通常已知的是生產或製備抗獨特型抗體之程序。(Lathey,J.et al Immunology 1986 57(1)：29-35)。抗Id抗體可為抗原阻斷或非阻斷的。抗原阻斷抗Id抗體可用於偵測樣本中的游離抗體(例如本文中所述之本發明之抗PSMA、抗CD3、或雙特異性PSMA X CD3抗體)。非阻斷抗Id抗體可用於偵測樣本中的總抗體(游離的、部分結合至抗原的、或完全結合至抗原的)。抗Id抗體可藉由以正在對其製備抗Id抗體的抗體來免疫動物而製備。在一些本文所述之實施例中，抗獨特型抗體係用於偵測樣本中治療性抗體(例如本文中所述之本發明之抗PSMA、抗CD3、或雙特異性PSMA X CD3抗體)的水平。
抗Id抗體亦可用作為免疫原(immunogen)，以在又另一種動物中誘導免疫反應，產生所謂的抗-抗Id抗體(anti-anti-Id antibody)。抗-抗Id的表位可與誘導該抗Id抗體的原始mAb之表位相同。因此，藉由使用抗mAb的獨特型決定子之抗體，可以識別表現具相同專一性之抗體的其它殖株。抗Id抗體可藉由任何合適的技術來變化(從而產生抗Id抗體變異體)及/或衍生化，諸如本文別處關於特異性結合PSMA或CD3的抗體或雙特異性PSMA X CD3抗體所述之技術。
PSMA係指前列腺特異性膜抗原。黑猩猩(Pan troglodytes，亦稱為chimpanzee或chimp)PSMA之胺基酸序列係顯示於SEQ ID NO：1中。在SEQ ID NO：1中，胞外域涵蓋殘基44至750，跨膜域涵蓋殘基20至43，且胞質域涵蓋殘基1至19。食蟹獼猴(Macaca fascicularis，亦稱為cynomolgus monkey、macaque、或cyno)PSMA之胺基酸序列係顯示於SEQ ID NO：2中。在SEQ ID NO：2中，胞外域涵蓋殘基44至750，跨膜域涵蓋殘基20至43，且胞質域涵蓋殘基1至19。人類PSMA之胺基酸序列係顯示於SEQ ID NO：3中。在SEQ ID NO：3中，胞外域涵蓋殘基44至750，跨膜域涵蓋殘基20至43，且胞質域涵蓋殘基1至19。
CD3係指T細胞抗原受體。在整份說明書中，「CD3特異性(CD3-specific)」係指特異性結合至T細胞受體複合物之抗體。更具體而言，該等抗體結合至CD3ε多肽，該等CD3ε多肽連同CD3-γ、CD3-δ、及CD3-ζ、以及T細胞受體αt/β及γ/δ異二聚體一起形成T細胞受體-CD3複合物。此複合物在將抗原辨識偶合至數種細胞內信號轉導路徑上扮演了重要角色。CD3複合物媒介信號轉導，導致T細胞活化及增生。CD3為免疫反應所需。
「與...組合(in combination with)」意指將二或更多種治療劑一起以混合物形式投予至對象，其係同時以單劑投予或以任何順序以單劑依序投予。
「過度表現(overexpress)」、「經過度表現(overexpressed)」、及「過度表現性(overexpressing)」可在相較於參考樣本時，互換地指具有可測量之更高水平的PSMA的樣本(諸如癌細胞、惡性細胞、或癌組織)。過度表現可以藉由基因擴增或藉由增加轉錄或轉譯引起。可以使用熟知的檢定，使用例如ELISA、免疫螢光、流動式細胞測量術、或放射免疫檢定來在活的或裂解的細胞上測量樣本中蛋白質的表現及過度表現。可以例如使用螢光原位雜交、南方墨點法(Southern blotting)、或PCR技術測量樣本中多核苷酸的表現及過度表現。當樣本中的蛋白質或多核苷酸的水平與參考樣本相比時高出至少1.5倍時，該蛋白質或多核苷酸經過度表現。參考樣本的選擇係熟知的。
「樣本(sample)」係指自對象單離出的類似流體、細胞、或組織的集合，以及存在於對象內的流體、細胞、或組織。例示性樣本屬生物流體(諸如血液、血清及漿膜液(serosal fluid)、血漿、淋巴液、尿液、唾液、囊液(cystic fluid)、淚滴、糞便、痰、分泌組織及器官的黏膜分泌物、陰道分泌物)、腹水(諸如與非實體腫瘤相關者)、胸膜腔、圍心腔、腹膜腔(peritoneal)、腹腔(abdominal)、及其他體腔的流體、藉由支氣管灌洗(bronchial lavage)收集的流體、與對象或生物來源接觸的液體溶液(例如細胞及器官培養 基，其包括細胞或器官條件培養基(conditioned medium)、灌洗液、及類似者)、組織活檢、細針穿刺、或手術切除的組織。
如本文中所使用，「癌細胞(cancer cell)」或「腫瘤細胞(tumor cell)」係指在體內、離體、或在組織培養物中具有自發或誘導之表型改變的癌性(cancerous)、癌前(pre-cancerous)、或轉形細胞。這些變化不一定涉及新遺傳物質的攝取。儘管轉化可能來自轉化病毒的感染及新基因體核酸的摻入或外源核酸的攝取，其亦可自發地發生或在暴露於致癌物後發生，從而突變內源基因。轉形/癌症的例子如下：在體外、體內、及離體的形態改變、細胞永生化、異常的生長控制、病灶形成、增生、惡性疾病、腫瘤特異性標記水平的調節、侵襲性、在合適的動物宿主(諸如裸鼠)中的腫瘤生長、及類似者(Freshney,Culture of Animal Cells：A Manual of Basic Technique(3rd ed.1994))。除非以其他方式說明，在本文中描述之任何數值諸如濃度或濃度範圍應理解為在所有情況下皆受到用語「約(about)」之修飾。因此，數值一般包括記載值之±10%。例如，濃度1mg/mL包括0.9mg/mL至1.1mg/mL。同樣地，濃度範圍1%至10%(w/v)包括0.9%(w/v)至11%(w/v)。如本文中所使用，明示使用之數值範圍包括所有可能的子範圍、在該範圍內之所有個別數值，包括在該等範圍內之整數及數值之分數，除非上下文以其他方式清楚指示。
「效應抗原(effector antigen)」係來自免疫系統之細胞的抗原，其可刺激或觸發細胞毒性、吞噬作用、抗原呈現、細胞介素釋放。此類效應抗原係來自(例如但不限於)T細胞及自然殺手(NK)細胞。針對效應抗原之合適特異性的實例包括但不限於針對T細胞的CD3或CD3次單元(諸如CD3ε)、及針對NK細胞的CD16。效應細胞之此類細胞表面分子適用於媒介細胞殺滅。效應細胞係免疫系統之細胞，其可刺激或觸發細胞毒性、吞噬作用、抗原呈現、細胞介素釋放。此類效應細胞係例如但不限於T細胞、自然殺手(NK)細胞、顆粒球、單核球、巨噬細胞、樹突細胞、及抗原呈現細胞。針對效應細胞之合適特異性的實例包括但不限於針對T細胞的CD2、CD3及CD3次單元(諸如CD3e)、CD5、CD28、及T細胞受體(TCR)之其他組分；針對NK細胞的CD16、CD16A、CD25、CD38、CD44、CD56、CD69、CD94、CD335(NKp46)、CD336、(NKp44)、CD337(NKp30)、NKp80、NKG2C及NKG2D、 DNAM、NCR；針對顆粒球的CD18、CD64、及CD89；針對單核球及巨噬細胞的CD18、CD32、CD64、CD89、及甘露糖受體；針對樹突細胞的CD64及甘露糖受體；以及CD35。在本發明之某些實施例中，效應細胞之該等特異性(即細胞表面分子)係適用於在雙特異性或多特異性分子結合至此類細胞表面分子後媒介細胞殺滅，從而誘導細胞溶解或細胞凋亡。
「雙特異性PSMA X CD3抗體(bispecific PSMA X CD3 antibody)」、「PSMA/CD3抗體(PSMA/CD3 antibody)」、「雙特異性抗PSMA X CD3抗體(bispecific anti-PSMA X CD3 antibody)」、或「抗PSMA/CD3抗體(anti-PSMA/CD3 antibody)」係指包含至少一個特異性結合PSMA之結合域及至少一個特異性結合CD3之結合域的分子。特異性結合PSMA及CD3的結構域一般係VH/VL對。雙特異性抗PSMA X CD3抗體就其與PSMA或CD3的結合而言可以是單價的。
「價(valent)」係指在分子中存在特異性針對抗原的特定數目的結合部位。因此，用語「單價(monovalent)」、「二價(bivalent)」、「四價(tetravalent)」、及「六價(hexavalent)」係指在分子中分別存在特異性針對抗原的一個、二個、四個及六個結合部位。「多價(multivalent)」係指在分子中存在二或更多個對抗原具特異性的結合部位。
「抗原特異性CD4+或CD8+ T細胞(antigen specific CD4+ or CD8+ T cell)」係指由特異性抗原或其免疫刺激性表位活化的CD4+或CD8+ T細胞。
「對象(subject)」包括任何人類或非人類動物。「非人類動物(nonhuman animal)」包括所有脊椎動物，例如哺乳動物及非哺乳動物，諸如非人類靈長類動物、綿羊、狗、貓、馬、牛、雞、兩棲類、爬蟲類等。除非另有說明，用語「患者(patient)」或「對象(subject)」可互換使用。
整份說明書中抗體恆定區中之胺基酸殘基編號係根據如Kabat et al.,Sequences of Proteins of Immunological Interest,5th Ed.Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,MD.(1991)中所述的EU索引(EU index)，除非另有明確說明。
習用一字母及三字母胺基酸代碼係於本文中使用且如表1所示。
Figure 108118091-A0202-12-0026-1
物質組成
本發明提供特異性結合PSMA之抗體及其片段、及特異性結合PSMA及CD3之多特異性抗體及其片段。本發明提供編碼本發明之抗體或其互補核酸的多肽及多核苷酸、載體、宿主細胞、以及製造及使用彼等之方法。
結合至PSMA之抗體及其片段結合至黑猩猩目標抗原。在一個實施例中，抗體及其片段結合至人類及食蟹獼猴PSMA目標抗原，其中親和力係在彼此之5倍內。換言之，抗體結合的差異係小於5倍。在此情況下，相同抗體分子可同時用於在靈長類動物中的PSMA安全性、活性及/或藥物動力學概況的臨床前評估，並作為人類的藥物。換言之，相同PSMA特異性分子可用於臨床前動物研究以及人類臨床研究。相較於物種特異性替代(surrogate)分子，此導致動物研究中高度相當的結果及大幅增加的預測能力。由於PSMA域具有跨物種特異性，即與人類及食蟹獼猴抗原具有反應性，本發明之抗體或其片段可同時用於在靈長類動物中的此等結合域之安全性、活性及/或藥物動力學概況的臨床前評估，並以相同形式作為人類的藥物。
本發明亦提供特異性結合至PSMA之多特異性抗體。根據本發明，可使用雙特異性(即雙功能性)抗體來接合兩種不同治療目標或執行兩種不同功能。此類抗體可用於例如招募朝向特定目標細胞之免疫效應細胞(例如T細胞或NK細胞)。各種基於抗體片段的分子係已知且正在探討用於例如癌症療法。本發明之多特異性抗體可係用於腫瘤細胞之雙靶向的三特異性抗體，即，此等抗體係三功能性結構，其可經設計以靶向腫瘤細胞上的兩種不同目標/表位，且其中第三功能係以高親和力結合至T細胞或NK細胞。靶向兩種不同腫瘤表位並接合T細胞或NK細胞的三特異性抗體，會裂解表現兩種目標的腫瘤細胞。此類分子可藉由所屬技術領域中已知的抗體形式產生，且經過完整描述。(WO20151842071,WO2015158636,WO2010136172,WO2013174873)。在本發明之三特異性抗體實施例中，多特異性抗體可對PSMA及在相同或其他腫瘤細胞上的第二種不同抗原具特異性，並額外對效應細胞(具體的是T細胞或NK細胞)具特異性。
本發明亦提供PSMA X「效應抗原」雙特異性抗體。在一個實施例中，PSMA X「效應抗原」雙特異性抗體之效應抗原係CD3。在本發明中已發現，產生PSMA X CD3雙特異性抗體是可能的，其中相同分子可用於臨床 前動物測試、以及臨床研究、及甚至在人類中的療法。這是歸因於PSMA X CD3雙特異性抗體之識別，除了分別結合至人類PSMA及人類CD3外，亦結合至黑猩猩及食蟹獼猴之抗原的同源物。本發明之PSMA X CD3雙特異性抗體可用來作為對抗各種疾病(包括但不限於癌症)的治療劑。鑒於上文，對於建構替代目標PSMA X CD3雙特異性抗體以用於在種系發生學(phylogenetically)遙遠(離人類)的物種中測試的需求會消失。因此，可在動物臨床前測試中使用與意欲在下列情況下投予至人類者相同的分子：臨床測試、以及其後市場核准及治療藥物投予。能夠使用與以後投予至人類者相同的用於臨床前動物測試之分子，幾乎消除或至少大幅降低臨床前動物測試中所獲得之數據對於人類情況具有有限適用性的危險。簡言之，使用與實際上將投予至人類者相同的分子而在動物中獲得的臨床前安全性數據，會大大確保數據對人類相關情況的適用性。相比之下，在使用替代分子的習知方法中，必須使該等替代分子分子適應於用於臨床前安全性評估之動物測試系統。因此，將用於人類療法的分子事實上與在藥物動力學參數及/或生物活性的臨床前測試中所使用的替代分子具不同序列，亦可能具不同結構，因此臨床前動物測試中所獲得之數據對於人類情況具有有限適用性/可轉移性。替代分子的使用需要全新建構體的建構、生產、純化、及表徵。此造成獲得該分子所需之額外開發成本及時間。總而言之，除了將用於人類療法之實際藥物之外，必須分開開發替代者，使得必須進行用於兩種分子的兩條開發線。因此，本發明之PSMA X CD3雙特異性抗體展現本文所述之跨物種特異性的主要優點在於，相同分子可用於人類及臨床前動物測試中的治療劑。
本發明之抗體及多特異性抗體的另一個主要優點為，其適用於在各種靈長類動物中的臨床前測試。藥物候選者在動物中的行為理想上應指示此藥物候選者在投予至人類後的預期行為。因此，自此類臨床前測試獲得的數據通常應該因而對人類情況具有高度預測能力。然而，如同最近對TGN1412(CD28單株抗體)進行的第I期臨床試驗的慘痛結果帶來的教訓，藥物候選物在靈長類物種中的作用可能不同於人類：在該抗體的臨床前測試中，用食蟹獼猴執行的動物研究中並未觀察到不良效應或僅觀察到有限的不良效應，而六名人類患者在該抗體投予後發展出多重器官衰竭(Lancet 368(2006),2206-7)。此等 驚人的非所欲負面事件之結果意味著將臨床前測試限制為僅一個(非黑猩猩靈長類動物)物種可能有所不足。所述抗體及多特異性抗體特異性結合黑猩猩及食蟹獼猴之PSMA的事實可能有助於克服上文提及之情況中所面臨的問題。因此，本發明提供在用於人類療法之藥物正進行開發及測試時在效應上減少物種差異的手段及方法。
使用本發明之抗體及多特異性抗體，亦不再需要使測試動物適應於意欲投予至人類的藥物候選者，諸如例如建立基因轉殖動物。本發明之PSMA抗體或多特異性抗體的跨物種特異性允許將抗體直接用於非黑猩猩靈長類動物中的臨床前測試，而無需對動物進行任何基因操縱。如所屬技術領域中具有通常知識者所熟知，其中使測試動物適應於藥物候選者的方法總是帶有風險，使得在臨床前安全性測試中所獲得的結果因動物的改變而對人類具較低代表性及預測性。例如，在基因轉殖動物中，由轉殖基因編碼的蛋白質通常經高度過度表現。因此，針對抗體對此蛋白質抗原之生物活性所獲得的數據對於人類(其中蛋白質係以遠遠更低的生理水平表現)的預測值可能受限。
使用展現跨物種特異性的本發明抗體的進一步優點在於，可避免將黑猩猩(瀕危物種)用於動物測試的事實。黑猩猩與人類的親緣關係最接近，且近來基於基因體定序數據而分至人(hominid)科中(Wildman et al.,PNAS 100(2003),7181)。因此，通常將用黑猩猩獲得的數據視為對人類具高度預測性。然而，歸因於其作為瀕危物種的狀態，可用於醫療實驗的黑猩猩數量係高度受限。如上所述，因此，維持使黑猩猩用於動物測試既代價高昂且有倫理問題。在臨床前測試期間，本發明抗體的使用同時避免倫理異議及財務負擔，而不損及所獲得之動物測試數據的品質(即適用性)。有鑑於此，本發明之特異性結合PSMA之抗體或多特異性抗體的使用為黑猩猩研究提供了合理替代物。
本發明之特異性結合PSMA之抗體或多特異性抗體的又進一步優點在於，能夠在使用其作為動物臨床前測試的一部分(例如在藥物動力學動物研究過程中)時抽取多個血液樣本。非黑猩猩靈長類動物相較於較低等動物(例如小鼠)更加容易獲得多次血液抽取。多個血液樣本的抽取允許連續測試血液參數，以用於判定由本發明之特異性結合PSMA之抗體或多特異性抗體誘導的生物效應。此外，多個血液樣本的抽取使研究者能夠評估如本文中所定義 之本發明之特異性結合PSMA之抗體或多特異性抗體的藥物動力學概況。此外，反映在血液參數中之潛在副作用(其可由本發明之特異性結合PSMA之抗體或多特異性抗體誘導)可在該抗體投予過程期間所抽取的不同血液樣本中測量。
此允許判定如本文中所定義之本發明之結合PSMA之抗體或多特異性抗體的潛在毒性概況。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，特異性結合PSMA之經單離之抗體或其抗體片段具有下列性質中之一者、兩者、三者、四者、或五者：
a)以約25nM或更小的平衡解離常數(KD)結合黑猩猩PSMA胞外域(ECD)，其中該KD係使用ProteOn XPR36系統在+25℃下測量，
b)以20nM或更小的所計算EC50結合LNCaP細胞，並以40nM或更小的所計算EC50結合食蟹獼猴PSMA表現性HEK細胞，其中結合LNCaP細胞與結合食蟹獼猴PSMA表現性HEK細胞之間的所計算EC50之差異係小於5倍，且其中該所計算EC50係使用流動式細胞測量術在0℃下於全細胞結合檢定中測量，
c)以12nM或更小的平衡解離常數(KD)結合來自人類(SEQ ID NO：7)、黑猩猩(SEQ ID NO：4)、及食蟹獼猴(SEQ ID NO：5)之重組PSMA ECD，其中該KD係在+25℃下使用Proteon表面電漿共振檢定ProteOn XPR36系統來測量；
d)當在雙特異性抗體中與抗CD3抗體CD3B219配對時，展示T細胞媒介之LNCaP細胞、C42細胞、人類PSMA表現性HEK細胞、或食蟹獼猴PSMA表現性HEK細胞的殺滅，其中該T細胞媒介之殺滅係藉由鉻51或藉由凋亡蛋白酶3/7活化檢定來測量；或
e)識別構象表位，其中該表位包含人類PSMA(SEQ ID NO：3)之殘基I138、F235、P237、G238、D244、Y299、Y300、Q303、K304、E307、及K324-P326
例示性此類抗體或其片段係本文中所述之PSMA抗體PSMB119、PSMB120、PSMB121、PSMB122、PSMB123、PSMB87、 PSMB126、PSMB127、PSMB128、PSMB129、PSMB130、PSMB120、PSMB121、PSMB122、PSMB123、PSMB127、PSMB128、PSMB130、PSMB344、PSMB345、PSMB346、PSMB347、PSMB349、PSMB358、PSMB359、PSMB360、PSMB361、PSMB362、PSMB363、及PSMB365。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，特異性結合PSMA之經單離之PSMA抗體或其抗體片段以約30nM或更小的平衡解離常數(KD)結合黑猩猩PSMA ECD，其中該KD係使用ProteOn XPR36系統在+25℃下測量(如實例8中所述)。用於藉由使用Proteon之SPR測量親和力之檢定包括在室溫(例如25℃或接近25℃)下執行檢定的檢定，其中能夠結合至黑猩猩PSMA ECD之抗體係藉由抗Fc抗體(例如Jackson ImmunoResearch Laboratory目錄號109-005-098)捕捉於Proteon感測器晶片上達100RU左右之水平，接著注射重組PSMA ECD，並在50μl/min之流率下收集締合及解離數據。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，特異性結合PSMA之經單離之PSMA抗體或其抗體片段以20nM或更小的EC50結合LNCaP細胞，並以40nM或更小的EC50結合食蟹獼猴PSMA表現HEK細胞，其中結合LNCaP細胞與結合食蟹獼猴PSMA表現性HEK細胞之間的所計算EC50之差異係小於5倍，其中細胞結合係使用FACS測量(如實例7中所述)。用於藉由FACS測量全細胞結合之檢定係以每孔200,000個細胞之密度於冰上執行1小時。藉由FACS陣列流動式細胞儀，以經標示的二級抗體，例如以小鼠抗人類κ-RPE抗體(Life Technologies目錄號MH10514)，來偵測結合至全細胞的抗體量。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，特異性結合PSMA之經單離之抗體或其抗體片段以約12nM或更小的平衡解離常數(KD)結合人類、黑猩猩、及食蟹獼猴PSMA ECD，其中該KD係使用ProteOn XPR36系統在+25℃下測量(如實例8中所述)。用於藉由使用Proteon之SPR測量親和力之檢定包括在室溫(例如25℃或接近25℃)下執行檢定的檢定，其中能夠結合至黑猩猩PSMA ECD之抗體係藉由抗Fc抗體(例如Jackson ImmunoResearch Laboratory目錄號109-005-098)捕捉於Proteon 感測器晶片上達100RU左右之水平，接著注射重組PSMA ECD，並在50μl/min之流率下收集締合及解離數據。
如果在不同條件(例如滲透性、pH)下測量，則所測得之特定抗體/PSMA交互作用的親和力可能會有所變化。因此，親和力及其他結合參數(例如KD、Kon、Koff)之測量一般是以標準化條件及標準化緩衝液進行，諸如本文中所述之緩衝液。所屬領域中具有通常知識者將理解，在一般偵測極限內，親和力測量(例如使用Biacore 3000或ProteOn進行)的內部誤差(測量為標準偏差(SD))一般可在測量結果的5至33%內。因此，在KD上下文中的用語「約」反映了測定中的一般標準差。例如，1×10-9M之KD的一般SD係至多+0.33×10-9M。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，特異性結合PSMA之經單離之抗體或其抗體片段在雙特異性抗體中與抗CD3抗體CD3B219配對時，顯示T細胞媒介之人類PSMA表現性LNCaP細胞、C42細胞、人類PSMA表現性HEK細胞、或食蟹獼猴PSMA表現性HEK細胞的殺滅，其中該T細胞媒介之殺滅係藉由鉻51釋放來測量，並將目標細胞與預活化T細胞以5：1比培養18至24小時，或者藉由凋亡蛋白酶3/7活化檢定來測量(如實例6)。在一些實施例中，特異性結合PSMA之經單離之抗體或其抗體片段在雙特異性抗體中與抗CD3抗體CD3B219配對時，顯示EC50分別為約0.3至0.5nM或更小、及0.12至0.03nM或更小的T細胞媒介之人類PSMA表現性LNCaP細胞及C42細胞的殺滅，其中該T細胞媒介之殺滅係藉由凋亡蛋白酶3/7活化檢定來測量(如實例9)。將目標PSMA表現性細胞與預活化T細胞以1：3比培養18至24小時，而所添加之凋亡蛋白酶3/7受質的裂解會產生螢光DNA染料，其中螢光係限於細胞核。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，特異性結合PSMA之經單離之抗體或其抗體片段識別構象表位，其中該表位包含如X射線結晶學所判定之殘基I138、F235、P237、G238、D244、Y299、Y300、Q303、K304、E307、及K324-P326(如實例13中所述)。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體或其片段包含SEQ ID NO：60、62、64、66、68、70、72、74、75、77、79、160、138、139、或140之重鏈可變區(VH)內含的HCDR1、HCDR2、及HCDR3，其中HCDR1、HCDR2、及HCDR3係由Chothia、Kabat、或IMGT定義。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體或其片段包含SEQ ID NO：61、63、65、67、69、71、73、76、78、142、143、或144之輕鏈可變區(VL)內含的LCDR1、LCDR2、及LCDR3，其中LCDR1、LCDR2、及LCDR係由Chothia、Kabat、或IMGT定義。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含SEQ ID NO：8、14、20、25、31、36、46、53、或122之HCDR1；SEQ ID NO：9、15、21、26、32、37、42、44、54、123、130、134、135、或137之HCDR2；及SEQ ID NO：10、16、22、27、33、38、43、45、48、52、55、124之HCDR3。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含SEQ ID NO：11、17、23、28、34、39、46、49、或131之LCDR1；SEQ ID NO：12、18、29、40、50、或133之LCDR2；及SEQ ID NO：13、19、24、30、35、41、47、51、132、或136之LCDR3。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含SEQ ID NO：8、14、20、25、31、36、53、或122之HCDR1；SEQ ID NO：9、15、21、26、32、37、42、44、54、123、130、134、135、或137之HCDR2；SEQ ID NO：10、16、22、27、33、38、43、45、48、51、52、55、或124之HCDR3；SEQ ID NO：11、17、23、28、34、39、46、49、或131之LCDR1； SEQ ID NO：12、18、29、40、50、或133之LCDR2；及SEQ ID NO：13、19、24、30、35、41、47、51、132、或136之LCDR3。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含下列之HCDR1、HCDR2、及HCDR3：分別為SEQ ID NO：8、9、及10；分別為SEQ ID NO：14、15、及16；分別為SEQ ID NO：20、21、及22；分別為SEQ ID NO：25、26、及27；分別為SEQ ID NO：25、130、及27；分別為SEQ ID NO：25、134、及27；分別為SEQ ID NO：25、135、及27；分別為SEQ ID NO：25、137、及27；分別為SEQ ID NO：31、32、及33；分別為SEQ ID NO：36、37、及38；分別為SEQ ID NO：31、42、及43；分別為SEQ ID NO：31、44、及45；分別為SEQ ID NO：36、37、及48；分別為SEQ ID NO：36、37、及52；分別為SEQ ID NO：53、54、及55；或分別為SEQ ID NO：122、123、及124。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含下列之LCDR1、LCDR2、及LCDR3：分別為SEQ ID NO：11、12、及13；分別為SEQ ID NO：17、18、及19；分別為SEQ ID NO：23、12、及24；分別為SEQ ID NO：28、29、及30；分別為SEQ ID NO：28、29、及136； 分別為SEQ ID NO：28、133、及132；分別為SEQ ID NO：34、12、及35；分別為SEQ ID NO：39、40、及41；分別為SEQ ID NO：46、29、及47；分別為SEQ ID NO：49、50、及51；分別為SEQ ID NO：23、12、及35；或分別為SEQ ID NO：131、29、及132；
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含分別為SEQ ID NO：8、9、10、11、12、及13之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含分別為SEQ ID NO：14、15、16、17、18、及19之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含分別為SEQ ID NO：20、21、22、23、12、及24之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含分別為SEQ ID NO：122、123、124、23、12、及24之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含分別為SEQ ID NO：25、26、27、28、29、及30之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含分別為SEQ ID NO：31、32、33、34、12、及35之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含分別為SEQ ID NO：36、37、38、39、40、及41之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含分別為SEQ ID NO：36、37、38、49、50、及51之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含分別為SEQ ID NO：31、42、43、11、12、及13之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含分別為SEQ ID NO：31、44、45、46、29、及47之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含分別為SEQ ID NO：36、37、52、49、50、及51之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含分別為SEQ ID NO：53、54、55、23、12、及35之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含分別為SEQ ID NO：25、130、27、28、29、及30之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含分別為SEQ ID NO：25、130、27、131、29、及132之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含分別為SEQ ID NO：25、130、27、28、133、及132之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含分別為SEQ ID NO：25、134、27、28、29、及30之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含分別為SEQ ID NO：25、135、27、131、29、及132之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含分別為SEQ ID NO：25、135、27、28、29、及136之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含分別為SEQ ID NO：25、135、27、28、29、及30之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含分別為SEQ ID NO：25、135、27、131、29、及132之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含分別為SEQ ID NO：25、134、27、28、29、及136之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含分別為SEQ ID NO：25、134、27、131、29、及132之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含分別為SEQ ID NO：25、134、27、28、133、及132之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含分別為SEQ ID NO：25、137、27、28、133、及132之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含SEQ ID NO：60、62、64、66、68、70、72、74、75、77、79、160、138、139、或140之重鏈可變區(VH)。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含輕鏈可變區(VL)或SEQ ID NO：61、63、65、67、69、71、73、76、78、142、143、或144。
本發明之特異性結合PSMA之例示性抗體之VH、VL、HCDR、及LCDR序列係顯示於表2中。
表2提供本文中所述之一些PSMA特異性抗體實例的彙總：
Figure 108118091-A0202-12-0039-2
Figure 108118091-A0202-12-0040-3
Figure 108118091-A0202-12-0041-4
Figure 108118091-A0202-12-0042-5
Figure 108118091-A0202-12-0043-6
在一些實施例中提供一種包含重鏈之PSMA特異性抗體或其抗原結合片段，該重鏈包含表2中所述抗體之任一者的CDR1、CDR2、及CDR3。在一些實施例中提供一種包含重鏈及輕鏈之PSMA特異性抗體或其抗原結合片段，該重鏈包含表2中所述抗體之任一者的CDR1、CDR2、及CDR3，該輕鏈包含表2中所述抗體之任一者的CDR1、CDR2、及CDR3。在本文所述之一些實施例中，該PSMA特異性抗體或其抗原結合片段與包含重鏈及輕鏈之抗體或抗原結合片段競爭與PSMA之結合，該重鏈包含表2中所述抗體之任一者的CDR1、CDR2、及CDR3，該輕鏈包含表2中所述抗體之任一者的CDR1、CDR2、及CDR3。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含分別為SEQ ID NO：14、15、16、17、18、及19之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
在一些實施例中，抗體包含SEQ ID NO：62之VH及SEQ ID NO：63之VL。
在一些實施例中，抗體包含具有SEQ ID NO：84之重鏈(HC)及SEQ ID NO：85之輕鏈(LC)。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含分別為SEQ ID NO：20、21、22、23、12、及24之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
在一些實施例中，抗體包含SEQ ID NO：64之VH及SEQ ID NO：65之VL。
在一些實施例中，抗體包含SEQ ID NO：86之重鏈(HC)及SEQ ID NO：87之輕鏈(LC)。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含分別為SEQ ID NO：31、42、43、11、12、及13之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
在一些實施例中，抗體包含SEQ ID NO：74之VH及SEQ ID NO：61之VL。
在一些實施例中，抗體包含SEQ ID NO：96之重鏈(HC)及SEQ ID NO：83之輕鏈(LC)。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含分別為SEQ ID NO 25、26、27、28、29、及30之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
在一些實施例中，抗體包含SEQ ID NO：66之VH及SEQ ID NO：67之VL。
在一些實施例中，抗體包含SEQ ID NO：88之重鏈(HC)及SEQ ID NO：89之輕鏈(LC)。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含分別為SEQ ID NO 122、123、124、23、12、及24之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
在一些實施例中，抗體包含SEQ ID NO：160之VH及SEQ ID NO：65之VL。
在一些實施例中，抗體包含SEQ ID NO：125之重鏈(HC)及SEQ ID NO：91之輕鏈(LC)。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含分別為SEQ ID NO 8、9、10、11、12、及13之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
在一些實施例中，抗體包含SEQ ID NO：60之VH及SEQ ID NO：61之VL。
在一些實施例中，抗體包含SEQ ID NO：82之重鏈(HC)及SEQ ID NO：83之輕鏈(LC)。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含分別為SEQ ID NO 31、32、33、34、12、及35之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
在一些實施例中，抗體包含SEQ ID NO：70之VH及SEQ ID NO：71之VL。
在一些實施例中，抗體包含SEQ ID NO：92之重鏈(HC)及SEQ ID NO：93之輕鏈(LC)。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含分別為SEQ ID NO 36、37、38、39、40、及41之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
在一些實施例中，抗體包含SEQ ID NO：72之VH及SEQ ID NO：73之VL。
在一些實施例中，抗體包含SEQ ID NO：94之重鏈(HC)及SEQ ID NO：95之輕鏈(LC)。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含分別為SEQ ID NO 31、44、45、46、29、及47之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
在一些實施例中，抗體包含SEQ ID NO：75之VH及SEQ ID NO：76之VL。
在一些實施例中，抗體包含SEQ ID NO：97之重鏈(HC)及SEQ ID NO：98之輕鏈(LC)。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含分別為SEQ ID NO 36、37、48、49、50、及51之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
在一些實施例中，抗體包含SEQ ID NO：77之VH及SEQ ID NO：78之VL。
在一些實施例中，抗體包含SEQ ID NO：99之重鏈(HC)及SEQ ID NO：100之輕鏈(LC)。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含分別為SEQ ID NO 36、37、52、49、50、及51之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
在一些實施例中，抗體包含SEQ ID NO：79之VH及SEQ ID NO：78之VL。
在一些實施例中，抗體包含SEQ ID NO：101之重鏈(HC)及SEQ ID NO：100之輕鏈(LC)。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含分別為SEQ ID NO 53、54、55、23、12、及35之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
在一些實施例中，抗體包含SEQ ID NO：68之VH及SEQ ID NO：69之VL。
在一些實施例中，抗體包含SEQ ID NO：90之重鏈(HC)及SEQ ID NO：91之輕鏈(LC)。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含分別為SEQ ID NO 25、130、27、28、29、及30之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
在一些實施例中，抗體包含SEQ ID NO：138之VH及SEQ ID NO：67之VL。
在一些實施例中，抗體包含SEQ ID NO：145之重鏈(HC)及SEQ ID NO：89之輕鏈(LC)。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含分別為SEQ ID NO 25、130、27、131、29、及132之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
在一些實施例中，抗體包含SEQ ID NO：138之VH及SEQ ID NO：142之VL。
在一些實施例中，抗體包含SEQ ID NO：145之重鏈(HC)及SEQ ID NO：148之輕鏈(LC)。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含分別為SEQ ID NO 25、130、27、28、133、及132之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
在一些實施例中，抗體包含SEQ ID NO：138之VH及SEQ ID NO：143之VL。
在一些實施例中，抗體包含SEQ ID NO：145之重鏈(HC)及SEQ ID NO：149之輕鏈(LC)。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含分別為SEQ ID NO 25、134、27、28、29、及30之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
在一些實施例中，抗體包含SEQ ID NO：139之VH及SEQ ID NO：67之VL。
在一些實施例中，抗體包含SEQ ID NO：146之重鏈(HC)及SEQ ID NO：89之輕鏈(LC)。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含分別為SEQ ID NO 25、135、27、28、29、及136之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
在一些實施例中，抗體包含SEQ ID NO：140之VH及SEQ ID NO：144之VL。
在一些實施例中，抗體包含SEQ ID NO：147之重鏈(HC)及SEQ ID NO：150之輕鏈(LC)。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含分別為SEQ ID NO 25、135、27、28、29、及30之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
在一些實施例中，抗體包含SEQ ID NO：140之VH及SEQ ID NO：67之VL。
在一些實施例中，抗體包含SEQ ID NO：147之重鏈(HC)及SEQ ID NO：89之輕鏈(LC)。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含分別為SEQ ID NO 25、135、27、131、29、及132之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
在一些實施例中，抗體包含SEQ ID NO：140之VH及SEQ ID NO：143之VL。
在一些實施例中，抗體包含SEQ ID NO：147之重鏈(HC)及SEQ ID NO：148之輕鏈(LC)。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含分別為SEQ ID NO 25、135、27、28、133、及132之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
在一些實施例中，抗體包含SEQ ID NO：140之VH及SEQ ID NO：67之VL。
在一些實施例中，抗體包含SEQ ID NO：147之重鏈(HC)及SEQ ID NO：149之輕鏈(LC)。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含分別為SEQ ID NO 25、134、27、28、29、及136之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
在一些實施例中，抗體包含SEQ ID NO：139之VH及SEQ ID NO：144之VL。
在一些實施例中，抗體包含SEQ ID NO：146之重鏈(HC)及SEQ ID NO：150之輕鏈(LC)。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含分別為SEQ ID NO 25、134、27、131、29、及132之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
在一些實施例中，抗體包含SEQ ID NO：140之VH及SEQ ID NO：67之VL。
在一些實施例中，抗體包含SEQ ID NO：139之重鏈(HC)及SEQ ID NO：142之輕鏈(LC)。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含分別為SEQ ID NO 25、134、27、28、133、及132之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
在一些實施例中，抗體包含SEQ ID NO：139之VH及SEQ ID NO：143之VL。
在一些實施例中，抗體包含SEQ ID NO：146之重鏈(HC)及SEQ ID NO：149之輕鏈(LC)。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含分別為SEQ ID NO 25、137、27、28、133、及132之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
在一些實施例中，抗體包含SEQ ID NO：141之VH及SEQ ID NO：143之VL。
在一些實施例中，抗體包含SEQ ID NO：151之重鏈(HC)及SEQ ID NO：149之輕鏈(LC)。
在一些實施例中，抗體以小於約100nM的平衡解離常數(KD)結合人類PSMA ECD，可選地小於約50nM，例如小於約12nM，其中該KD係使用ProteOn XPR36系統在+25℃下測量。
在一些實施例中，抗體以小於約100nM的平衡解離常數(KD)結合食蟹獼猴PSMA ECD，可選地小於約50nM，例如小於約12nM，其中該KD係使用ProteOn XPR36系統在+25℃下測量。
在一些實施例中，抗體係屬於IgG4同型，當相較於野生型IgG4時可選地包含重鏈取代S228P、F234A、及L235A。
在一些實施例中，抗體包含SEQ ID NO：74之VH及SEQ ID NO：61之VL，且係屬於IgG4同型，當相較於野生型IgG4時可選地包含重鏈取代S228P、F234A、及L235A。
在一些實施例中，抗體係多特異性抗體，諸如雙特異性PSMA/CD3抗體。
抗體適合用於療法中，例如於治療癌症。
抗體適合用於治療，例如於治療實體腫瘤。
抗體適合用於療法中，例如於治療前列腺癌或去勢抗性前列腺癌(castration-resistant prostate cancer)。
抗體適合用於療法中，例如於治療前列腺上皮內瘤。
抗體適合用於療法中，例如於治療結腸直腸癌。
抗體適合用於療法中，例如於治療透明細胞腎癌。
抗體適合用於療法中，例如於治療胃癌。
抗體適合用於療法中，例如於治療腎細胞癌(RCC)(例如，腎臟透明細胞癌或腎臟乳突細胞癌)、或其轉移性病灶。
抗體適合用於療法中，例如於治療膀胱癌。
抗體適合用於療法中，例如於治療乳癌。
抗體適合用於療法中，例如於治療腎臟癌。
抗體適合用於療法中，例如於治療新生血管病症，諸如例如由實體腫瘤生長所表徵的癌症。
抗體適合用於療法中，例如於治療新生血管病症，諸如例如透明細胞腎癌(clear cell renal carcinoma,CCRCC)、結腸直腸癌、乳癌、膀胱癌、肺癌、及胰腺癌、以及各種其他非前列腺癌(包括但不限於腎、尿路上皮、肺、結腸、乳房、及往肝臟的腺癌)。
IgG類別在人類中係分成四種同型(isotype)：IgG1、IgG2、IgG3及IgG4。它們的Fc區之胺基酸序列具有超過95%的同源性，但鉸鏈區的胺基酸組成及結構顯示主要差異。Fc區媒介效應功能，諸如抗體依賴性細胞性細胞毒性(ADCC)及補體依賴性細胞毒性(CDC)。在ADCC中，抗體之Fc區結合至免疫效應細胞(諸如自然殺手細胞或巨噬細胞)表面上之Fc受體(FcgR)，導致吞噬或溶解標靶細胞。在CDC中，抗體藉由在細胞表面引發補體級聯反應(complement cascade)來殺滅標靶細胞。本文中所述之抗體包括具有所述可變域特性與任何IgG同型組合的抗體，包括其中Fc序列已經修飾以致使不同效應功能之經修飾版本。
在許多治療性抗體之應用中，Fc媒介之效應功能並非作用機制之一部分。這些Fc媒介之效應功能可能有害並且由於造成偏離機制毒性(off-mechanism toxicity)而可能造成安全風險。修改效應功能可藉由工程改造Fc區以降低其對FcgR或補體因子之結合來達成。IgG對於活化性(FcgRI、FcgRIIa、FcgRIIIa及FcgRIIIb)和抑制性(FcgRIIb)FcgR或補體之第一成分(C1q)的結合取決於位在鉸鏈區和CH2域中之殘基。已將突變引入IgG1、IgG2及IgG4中以降低或靜默Fc功能性。本文中所述之抗體可包括這些修飾。
在一個實施例中，抗體包含具有一或多個下列特性之Fc區：(a)在與親系Fc比較時效應功能有所降低；(b)對於Fcg RI、Fcg RIIa、Fcg RIIb、Fcg RIIIb及/或Fcg RIIIa之親和力降低、(c)對於FcgRI之親和力降低、(d)對於FcgRIIa之親和力降低、(e)對於FcgRIIb之親和力降低、(f)對於Fcg RIIIb之親和力降低、或(g)對於FcgRIIIa之親和力降低。
在一些實施例中，該等抗體或抗原結合片段係IgG、或其衍生物，例如IgG1、IgG2、IgG3、及IgG4同型。在抗體具有IgG4同型之一些實施例中，該抗體之Fc區中含有S228P、L234A、及L235A取代。在抗體具有IgG1同型之一些實施例中，該抗體之Fc區中含有S228P、L234A、及L235A取代。本文中所述之抗體可包括此等修飾。在一些實施例中，抗體具有IgG1同型。
在一些實施例中，抗體係屬於IgG4同型，當相較於野生型IgG4時包含重鏈取代S228P。
在一些實施例中，抗體係屬於IgG1同型，當相較於野生型IgG1時可選地包含重鏈取代L234A、G237A、P238S、H268A、V309L、A330S、及P331S。
除了所述之PSMA特異性抗體及抗原結合片段外，亦提供能夠編碼所述抗體及抗原結合片段之多核苷酸序列。亦提供包含所述多核苷酸之載體，如表現本文中所提供之PSMA特異性抗體或抗原結合片段的細胞。亦描述能夠表現所揭示載體之細胞。這些細胞可為哺乳動物細胞(諸如293F細胞、CHO細胞)、昆蟲細胞(諸如Sf7細胞)、酵母菌細胞、植物細胞、或細菌細胞(諸如E.coli)。所述抗體亦可藉由融合瘤細胞來生產。
同源抗體
在本文中、及在下列編號實施例中每一者的一些實施例中所述之本發明之特異性結合PSMA之抗體的變異體(包含表3所示之VH、VL、或VH及VL胺基酸序列)係在本發明之範疇內。例如，變異體可在VH及/或VL中包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個、十一個、十二個、十三個、十四個、或十五個胺基酸取代，只要相較於親本抗體時同源抗體保持或具有改善的功能性質。在一些實施例中，對本發明之VH或VL胺基酸序列的序列一致性可係約90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%。可選地，相較於親本抗體，變異體的任何變異不在該變異體的CDR內。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含SEQ ID NO：60、62、64、66、68、70、72、74、75、77、79、160、138、139、或140之VH，其中VH可選地具有一個、兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個、十一個、十二個、十三個、十四個、或十五個胺基酸取代。可選地，任何取代均不在CDR內。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含SEQ ID NO：61、63、65、67、69、71、73、76、78、142、143、或144之VL，其中VL可選地具有一個、兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個、十一個、十二個、十三個、十四個、或十五個胺基酸取代。可選地，任何取代均不在CDR內。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含SEQ ID NO：60之VH及SEQ ID NO：61之VL，其中VH、VL、或VH及VL兩者可選地包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個、十一個、十二個、十三個、十四個、或十五個胺基酸取代。可選地，任何取代均不在CDR內。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含SEQ ID NO：62之VH及SEQ ID NO：63之VL，其中VH、VL、或VH及VL兩者可選地包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個、十一個、十二個、十三個、十四個、或十五個胺基酸取代。可選地，任何取代均不在CDR內。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含SEQ ID NO：64之VH及SEQ ID NO：65之VL，其中VH、VL、或VH及VL兩者可選地包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個、十一個、十二個、十三個、十四個、或十五個胺基酸取代。可選地，任何取代均不在CDR內。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含SEQ ID NO：66之VH及SEQ ID NO：67之VL，其中VH、VL、或VH及VL兩者可選地包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個、十一個、十二個、十三個、十四個、或十五個胺基酸取代。可選地，任何取代均不在CDR內。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含SEQ ID NO：68之VH及SEQ ID NO：69之VL，其中VH、VL、或VH及VL兩者可選地包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個、十一個、十二個、十三個、十四個、或十五個胺基酸取代。可選地，任何取代均不在CDR內。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含SEQ ID NO：70之VH及SEQ ID NO：71之VL，其中VH、VL、或VH及VL兩者可選地包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個、十一個、十二 個、十三個、十四個、或十五個胺基酸取代。可選地，任何取代均不在CDR內。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含SEQ ID NO：72之VH及SEQ ID NO：73之VL，其中VH、VL、或VH及VL兩者可選地包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個、十一個、十二個、十三個、十四個、或十五個胺基酸取代。可選地，任何取代均不在CDR內。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含SEQ ID NO：74之VH及SEQ ID NO：61之VL，其中VH、VL、或VH及VL兩者可選地包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個、十一個、十二個、十三個、十四個、或十五個胺基酸取代。可選地，任何取代均不在CDR內。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含SEQ ID NO：75之VH及SEQ ID NO：76之VL，其中VH、VL、或VH及VL兩者可選地包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個、十一個、十二個、十三個、十四個、或十五個胺基酸取代。可選地，任何取代均不在CDR內。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含SEQ ID NO：77之VH及SEQ ID NO：78之VL，其中VH、VL、或VH及VL兩者可選地包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個、十一個、十二個、十三個、十四個、或十五個胺基酸取代。可選地，任何取代均不在CDR內。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含SEQ ID NO：79之VH及SEQ ID NO：78之VL，其中VH、VL、或VH及VL兩者可選地包含一個、 兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個、十一個、十二個、十三個、十四個、或十五個胺基酸取代。可選地，任何取代均不在CDR內。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含SEQ ID NO：160之VH及SEQ ID NO：65之VL，其中VH、VL、或VH及VL兩者可選地包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個、十一個、十二個、十三個、十四個、或十五個胺基酸取代。可選地，任何取代均不在CDR內。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含SEQ ID NO：138之VH及SEQ ID NO：67之VL，其中VH、VL、或VH及VL兩者可選地包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個、十一個、十二個、十三個、十四個、或十五個胺基酸取代。可選地，任何取代均不在CDR內。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含SEQ ID NO：138之VH及SEQ ID NO：142之VL，其中VH、VL、或VH及VL兩者可選地包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個、十一個、十二個、十三個、十四個、或十五個胺基酸取代。可選地，任何取代均不在CDR內。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含SEQ ID NO：138之VH及SEQ ID NO：143之VL，其中VH、VL、或VH及VL兩者可選地包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個、十一個、十二個、十三個、十四個、或十五個胺基酸取代。可選地，任何取代均不在CDR內。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含SEQ ID NO：139 之VH及SEQ ID NO：67之VL，其中VH、VL、或VH及VL兩者可選地包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個、十一個、十二個、十三個、十四個、或十五個胺基酸取代。可選地，任何取代均不在CDR內。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含SEQ ID NO：140之VH及SEQ ID NO：144之VL，其中VH、VL、或VH及VL兩者可選地包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個、十一個、十二個、十三個、十四個、或十五個胺基酸取代。可選地，任何取代均不在CDR內。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含SEQ ID NO：140之VH及SEQ ID NO：67之VL，其中VH、VL、或VH及VL兩者可選地包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個、十一個、十二個、十三個、十四個、或十五個胺基酸取代。可選地，任何取代均不在CDR內。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含SEQ ID NO：140之VH及SEQ ID NO：142之VL，其中VH、VL、或VH及VL兩者可選地包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個、十一個、十二個、十三個、十四個、或十五個胺基酸取代。可選地，任何取代均不在CDR內。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含SEQ ID NO：140之VH及SEQ ID NO：143之VL，其中VH、VL、或VH及VL兩者可選地包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個、十一個、十二個、十三個、十四個、或十五個胺基酸取代。可選地，任何取代均不在CDR內。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含SEQ ID NO：139之VH及SEQ ID NO：144之VL，其中VH、VL、或VH及VL兩者可選地包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個、十一個、十二個、十三個、十四個、或十五個胺基酸取代。可選地，任何取代均不在CDR內。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含SEQ ID NO：139之VH及SEQ ID NO：142之VL，其中VH、VL、或VH及VL兩者可選地包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個、十一個、十二個、十三個、十四個、或十五個胺基酸取代。可選地，任何取代均不在CDR內。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含SEQ ID NO：139之VH及SEQ ID NO：143之VL，其中VH、VL、或VH及VL兩者可選地包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個、十一個、十二個、十三個、十四個、或十五個胺基酸取代。可選地，任何取代均不在CDR內。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含SEQ ID NO：141之VH及SEQ ID NO：143之VL，其中VH、VL、或VH及VL兩者可選地包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個、十一個、十二個、十三個、十四個、或十五個胺基酸取代。可選地，任何取代均不在CDR內。
在本文中、及在下列編號實施例中每一者的一些實施例中所述之本發明之特異性結合PSMA的同源抗體具有下列性質中之一者、兩者、三者、四者、或五者：
a)以25nM或更小的平衡解離常數(KD)結合黑猩猩PSMA ECD，其中該KD係使用ProteOn XPR36系統在+25℃下測量，
b)以20nM或更小的所計算EC50結合LNCaP細胞，並以40nM或更小的所計算EC50結合食蟹獼猴PSMA表現性HEK細胞，其中結合LNCaP細胞與結合食蟹獼猴PSMA表現性HEK細胞之間的所計算EC50之差異係小於5倍，且其中該所計算EC50係使用流動式細胞測量術在0℃下於全細胞結合檢定中測量，
c)以12nM或更小的平衡解離常數(KD)結合來自人類(SEQ ID NO：7)、黑猩猩(SEQ ID NO：4)、及食蟹獼猴(SEQ ID NO：5)之重組PSMA ECD，其中該KD係在+25℃下使用Proteon表面電漿共振檢定ProteOn XPR36系統來測量；
d)當在雙特異性抗體中與抗CD3抗體CD3B219配對時，展示T細胞媒介之LNCaP細胞、C42細胞、人類PSMA表現性HEK細胞、或食蟹獼猴PSMA表現性HEK細胞的殺滅，其中該T細胞媒介之殺滅係藉由鉻51或藉由凋亡蛋白酶3/7活化檢定來測量；或
e)識別構象表位，其中該表位包含人類PSMA(SEQ ID NO：3)之殘基I138、F235、P237、G238、D244、Y299、Y300、Q303、K304、E307、及K324-P326
具有保守修飾的抗體
在一些本文所述之實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含：包含HCDR1、HCDR2、及HCDR3序列之VH；及包含LCDR1、LCDR2、及LCDR3序列之VL，其中該等CDR序列中之一或多者包含基於本文所述抗體(例如表2所示之抗體)之指定胺基酸序列、或其保守修飾，且其中該等抗體保留本發明之特異性結合PSMA之親本抗體的所欲功能性質。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含分別為SEQ ID NO：8、9、10、11、12、及13之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3、及其保守修飾。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含分別為SEQ ID NO：14、15、16、17、18、及19之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3、及其保守修飾。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含分別為SEQ ID NO：20、21、22、23、12、及24之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3、及其保守修飾。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含分別為SEQ ID NO：25、26、27、28、29、及30之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3、及其保守修飾。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含分別為SEQ ID NO：31、32、33、34、12、及35之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3、及其保守修飾。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含分別為SEQ ID NO：36、37、38、39、40、及41之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3、及其保守修飾。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含分別為SEQ ID NO：31、42、43、11、12、及13之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3、及其保守修飾。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含分別為SEQ ID NO：31、44、45、46、29、及47之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3、及其保守修飾。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含分別為SEQ ID NO：36、37、48、49、50、及51之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3、及其保守修飾。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含分別為SEQ ID NO：36、37、52、49、50、及51之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3、及其保守修飾。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含分別為SEQ ID NO：53、54、55、23、12、及35之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3、及其保守修飾。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含分別為SEQ ID NO：25、130、27、28、29、及30之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3、及其保守修飾。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含分別為SEQ ID NO：25、130、27、131、29、及132之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3、及其保守修飾。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含分別為SEQ ID NO：25、130、27、28、133、及132之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3、及其保守修飾。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含分別為SEQ ID NO：25、134、27、28、29、及30之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3、及其保守修飾。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含分別為SEQ ID NO：25、135、27、28、29、及136之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3、及其保守修飾。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含分別為SEQ ID NO：25、135、27、28、29、及30之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3、及其保守修飾。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含分別為SEQ ID NO：25、135、27、131、29、及132之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3、及其保守修飾。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含分別為SEQ ID NO：25、135、27、131、29、及132之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3、及其保守修飾。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含分別為SEQ ID NO：25、134、27、28、29、及136之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3、及其保守修飾。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含分別為SEQ ID NO：25、134、27、131、29、及132之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3、及其保守修飾。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含分別為SEQ ID NO：25、134、27、28、133、及132之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3、及其保守修飾。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含分別為SEQ ID NO：25、137、27、28、133、及132之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3、及其保守修飾。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體包含分別為SEQ ID NO：122、123、124、23、12、及24之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3、及其保守修飾。
在本文中、及在下列編號實施例中每一者的一些實施例中所述之本發明之具保守修飾之抗體具有下列性質中之一者、兩者、三者、四者、或五者：
a)以25nM或更小的平衡解離常數(KD)結合黑猩猩PSMA ECD，其中該KD係使用ProteOn XPR36系統在+25℃下測量，
b)以20nM或更小的所計算EC50結合LNCaP細胞，並以40nM或更小的所計算EC50結合食蟹獼猴PSMA表現性HEK細胞，其中結合LNCaP細胞與結合食蟹獼猴PSMA表現性HEK細胞之間的所計算EC50之差異係小於5倍，且其中該所計算EC50係使用流動式細胞測量術在0℃下於全細胞結合檢定中測量，
c)以12nM或更小的平衡解離常數(KD)結合來自人類(SEQ ID NO：7)、黑猩猩(SEQ ID NO：4)、及食蟹獼猴(SEQ ID NO：5)之重組PSMA ECD，其中該KD係在+25℃下使用Proteon表面電漿共振檢定ProteOn XPR36系統來測量；
d)當在雙特異性抗體中與抗CD3抗體CD3B219配對時，展示T細胞媒介之LNCaP細胞、C42細胞、人類PSMA表現性HEK細胞、或食蟹獼猴PSMA表現性HEK細胞的殺滅，其中該T細胞媒介之殺滅係藉由鉻51或藉由凋亡蛋白酶3/7活化檢定來測量；或
e)識別構象表位，其中該表位包含人類PSMA(SEQ ID NO：3)之殘基I138、F235、P237、G238、D244、Y299、Y300、Q303、K304、E307、及K324-P326
「保守修飾(conservative modification)」係指胺基酸修飾，其不會顯著影響或改變含該等胺基酸序列之抗體的結合特徵。保守修飾包括胺基酸 取代、添加(addition)及缺失(deletion)。保守取代係其中胺基酸被具有相似側鏈的胺基酸殘基取代的取代。具有相似側鏈之胺基酸殘基的家族已有明確界定，且包括具有以下者之胺基酸：酸性側鏈(如天冬胺酸、麩胺酸)、鹼性側鏈(如離胺酸、精胺酸、組胺酸)、非極性側鏈(如丙胺酸、纈胺酸、白胺酸、異白胺酸、脯胺酸、苯丙胺酸、甲硫胺酸)、不帶電極性側鏈(如甘胺酸、天冬醯胺酸、麩醯胺酸、半胱胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、酪胺酸、色胺酸)、芳族側鏈(如苯丙胺酸、色胺酸、組胺酸、酪胺酸)、脂族側鏈(如甘胺酸、丙胺酸、纈胺酸、白胺酸、異白胺酸、絲胺酸、蘇胺酸)、醯胺(如天冬醯胺酸、麩醯胺酸)、β分支側鏈(如蘇胺酸、纈胺酸、異白胺酸)、及含硫側鏈(半胱胺酸、甲硫胺酸)。此外，多肽中的任何天然殘基亦可經丙胺酸取代，如先前已針對丙胺酸掃描式誘變(alanine scanning mutagenesis)所描述者(MacLennan et al.,(1988)Acta Physiol Scand Suppl 643：55-67；Sasaki et al.,(1988)Adv Biophys 35：1-24)。本發明對於抗體的胺基酸取代可藉由例如PCR誘變的已知方法進行(美國專利第4,683,195號)。替代地，可產生變異體庫，例如使用隨機(NNK)或非隨機密碼子(例如DVK密碼子)，其編碼11種胺基酸(Ala、Cys、Asp、Glu、Gly、Lys、Asn、Arg、Ser、Tyr、Trp)。所得抗體變異體可使用本文中所述之檢定來測試其特性。
免疫偶聯物(immuuoconjugate)
「免疫偶聯物」係指偶聯至一或多個異源分子的本發明之抗體。
在一些實施例中，在本文中、及在下列編號實施例中每一者的一些實施例中所述之本發明之抗體係偶聯至一或多種細胞毒性劑。例示性此類細胞毒性劑包括化學治療劑或藥物、生長抑制劑、毒素(例如蛋白毒素、細菌、真菌、植物、或動物來源的酶促活性毒素(enzymatically active toxin)、或其片段)、及放射性同位素。
在一些實施例中，免疫偶聯物係抗體-藥物偶聯物(ADC)，其中本發明之抗體係偶聯至一或多種藥物，諸如類美登素(maytansinoid)(參見例如美國專利第5,208,020號、第5,416,06號)；澳瑞他汀(auristatin)(諸如單甲基澳 瑞他汀(monomethylauristatin)藥物部分DE及DF(MMAE及MMAF)(參見例如美國專利第5,635,483號及第5,780,588號、及第7,498,298號))、尾海兔素(dolastatin)、卡奇黴素(calicheamicin)、或其衍生物(參見例如美國專利第5,712,374號、第5,714,586號、第5,739,116號、第5,767,285號、第5,770,701號、第5,770,710號、第5,773,001號、及第5,877,296號；Hinman et al.,(1993)Cancer Res 53：3336-3342；及Lode et al.,(1998)Cancer Res 58：2925-2928)；蒽環類藥物(anthracycline)，諸如道諾黴素(daunomycin)或阿黴素(doxorubicin)(參見例如Kratz et al.,(2006)Current Med.Chem 13：477-523；Jeffrey et al.,(2006)Bioorganic & Med Chem Letters 16：358-362；Torgov et al.,(2005)Bioconj Chem 16：717-721；Nagy et al.,(2000)Proc Natl Acad Sci USA 97：829-834；Dubowchik et al,Bioorg.& Med.Chem.Letters 12：1529-1532(2002)；King et al.,(2002)J Med Chem 45：4336-4343；及美國專利第6,630,579號)、胺甲喋呤(methotrexate)、長春地辛(vindesine)、紫杉烷(taxane)(諸如歐洲紫杉醇(docetaxel)、紫杉醇(paclitaxel)、拉洛他賽(larotaxel)、替司他賽(tesetaxel)、及奧他賽(ortataxel))。
在一些實施例中，免疫偶聯物包含偶聯至酶促活性毒素的本文所述之本發明之抗體或其片段，諸如白喉A鏈、白喉毒素之非結合活性片段、外毒素A鏈(來自綠膿桿菌(Pseudomonas aeruginosa))、蓖麻毒素A鏈、雞母珠毒蛋白A鏈、莫迪素(modeccin)A鏈、α-帚曲霉素(alpha-sarcin)、油桐(Aleurites fordii)蛋白、石竹(dianthin)蛋白、美洲商陸(Phytolacca americana)蛋白(PAPI、PAPII、及PAP-S)、苦瓜(momordica charantia)抑制劑、麻瘋樹毒蛋白(curcin)、巴豆毒素(crotin)、肥皂草(sapaonaria officinalis)抑制劑、多花白樹毒蛋白(gelonin)、絲林黴素(mitogellin)、局限曲菌素(restrictocin)、酚黴素(phenomycin)、伊諾黴素(enomycin)、及新月毒素(tricothecene)。
在一些本文所述之實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，抗體係偶聯至放射性原子以形成放射偶聯物。各種放射性同位素可用於生產放射偶聯物。實例包括At211、1131、I125、Y90、Re186、Re188、Sm153、Bi212、P32、Pb212、及Lu之放射性同位素。當放射偶聯物用於偵測時，其可包含用於閃爍圖術研究的放射性原子，例如tc99m或1123，或 者包含用於核磁共振(NMR)成像(亦稱為磁共振成像(mri))的自旋標記，諸如同樣的碘-123、碘-131、銦-I1、氟-19、碳-13、氮-15、氧-17、釓、錳、或鐵。
本文所述之本發明之抗體與細胞毒性劑的偶聯物可使用各種雙功能蛋白偶合劑來製造，諸如N-琥珀醯亞胺基-3-(2-吡啶基二硫基)丙酸酯(SPDP)、琥珀醯亞胺基-4-(N-馬來醯亞胺基甲基)環己烷-1-羧酸酯(SMCC)、亞胺基硫烷鹽(iminothiolane)(IT)、亞胺酯(imidoester)的雙官能衍生物(諸如己亞胺酸二甲酯(dimethyl adipimidate)HQ)、活性酯(active ester)(諸如雙琥珀醯亞胺辛二酸酯(disuccinimidyl suberate))、醛類(aldehyde)(諸如戊二醛)、雙疊氮化合物(諸如雙(對疊氮苯甲醯基)己二胺)、雙重氮衍生物(諸如雙(對重氮苯甲醯基)-乙二胺)、二異氰酸酯(諸如甲苯2,6-二異氰酸酯)、及雙活性氟化合物(諸如1,5-二氟-2,4-二硝苯)。例如，蓖麻毒素(ricin)免疫毒素可如Vitetta et al.,(1987)Science 238：1098中所述製備。經碳14標示之1-異硫氰基芐基-3-甲基二乙烯三胺五乙酸(MX-DTPA)係用於將放射性核苷酸與抗體偶聯的例示性螯合劑。見例如W094/11026。連接子(linker)可為促進細胞毒性藥物在細胞中釋放的「可切割連接子」。例如，可使用酸不穩定(acid-labile)連接子、肽酶敏感性連接子、光不穩定連接子、二甲基連接子、或含二硫化物(disulfide-containing)連接子(Chari et al.,(1992)Cancer Res 52：127-131；美國專利第5,208,020號)。
免疫偶聯物或ADC可用交聯劑試劑製備，諸如BMPS、EMCS、GMBS、HBVS、LC-SMCC、MBS、MPBH、SBAP、SIA、SIAB、SMCC、SMPB、SMPH、硫代(sulfo)-EMCS、硫代-GMBS、硫代-KMUS、硫代-MBS、硫代-SIAB、硫代-SMCC、及硫代-SMPB、及SVSB(琥珀醯亞胺基-(4-乙烯碸)苯甲酸酯)，其係市售可得(例如自Pierce Biotechnology,Inc.,Rockford,IL.,U.S.A)。
本發明的一個實施例，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，係一種免疫偶聯物，其包含與治療劑或顯像劑連接的本發明之特異性結合PSMA之抗體。
本發明的另一個實施例，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，係一種免疫偶聯物，其包含與治療劑或顯像劑連接的本發明之特異性結合CD3之抗體。
本發明的另一個實施例，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，係一種免疫偶聯物，其包含與治療劑或顯像劑連接的本發明之雙特異性PSMA/CD3抗體。
本發明之單特異性抗體的產生
在一些本文所述之實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之拮抗性抗體係人類抗體。
在一些本文所述之實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，本發明之特異性結合PSMA之拮抗性抗體係人源化抗體。
可使用各種技術產生本文中所述之本發明之單特異性抗體(例如特異性結合PSMA之抗體)。例如，Kohler and Milstein,Nature 256：495,1975之融合瘤法可用來產生單株抗體。在融合瘤法中，將小鼠或其他宿主動物(諸如倉鼠、大鼠、或猴)用人類、黑猩猩、或食蟹獼猴PSMA或CD3、或PSMA或CD3之片段(諸如PSMA或CD3之胞外域)來免疫化，接著使用標準方法將來自經免疫化動物之脾細胞與骨髓瘤細胞融合以形成融合瘤細胞(Goding,Monoclonal Antibodies：Principles and Practice,pp.59-103(Academic Press,1986))。對於從單一免疫化融合瘤細胞而來的集落進行篩選以生產具有所欲性質的抗體，該等所欲性質諸如結合特異性、交叉反應性或缺乏交叉反應性、及對抗原的親和力。
可使用各種宿主動物來生產在本文中、及在下列編號實施例中每一者的一些實施例中所述之本發明之PSMA抗體。例如，Balb/c小鼠可用於產生小鼠抗人類PSMA抗體。Balb/c小鼠及其他非人類動物中所製造之抗體可使用各種技術來人源化，以產生更近似人類的序列。
例示性人源化技術(包括人類受體架構選擇)為已知，且包括CDR移植(美國專利第5,225,539號)、SDR移植(美國專利第6,818,749號)、表面重塑(Resurfacing)(Padlan,(1991)Mol Immunol 28：489-499)、特異性決定殘 基表面重塑(Specificity Determining Residues Resurfacing)(美國專利公開號2010/0261620)、人類架構適應(美國專利第8,748,356號)、或超人源化(美國專利第7,709,226號)。在這些方法中，親本抗體的CDR被轉移到人類架構上，該人類架構可基於彼等與親本架構的整體同源性、基於CDR長度的相似性、或正則結構(canonical structure)同一性、或其組合來選擇。
可將人源化抗體進一步最佳化以改善其對所欲抗原的選擇性或親和力，此係由諸如在國際專利公開號WO1090/007861及WO1992/22653中所述之技術藉由併入經修改之架構支撐殘基以保存結合親和力(回復突變(backmutation))，或藉由在例如任何CDR引入變異以改善抗體之親和力。
在其基因體中帶有人體免疫球蛋白(Ig)基因位點的基因轉殖動物(諸如小鼠或大鼠)可用於產生針對目標蛋白之人類抗體，且係描述於例如美國專利第6,150,584號、國際專利公開號WO99/45962、國際專利公開號WO2002/066630、WO2002/43478、WO2002/043478、及WO1990/04036、Lonberg et al(1994)Nature 368：856-9；Green et al(1994)Nature Genet.7：13-21；Green & Jakobovits(1998)Exp.Med.188：483-95；Lonberg and Huszar(1995)Int Rev Immunol 13：65-93；Bruggemann et al.,(1991)Eur J Immunol 21：1323-1326；Fishwild et al.,(1996)Nat Biotechnol 14：845-851；Mendez et al.,(1997)Nat Genet 15：146-156；Green(1999)J Immunol Methods 231：11-23；Yang et al.,(1999)Cancer Res 59：1236-1243；Brüggemann and Taussig(1997)Curr Opin Biotechnol 8：455-458。可將此等動物中之內源性免疫球蛋白基因位點破壞或刪除，並且可使用同源或非同源重組、使用轉染色體(transchromosome)、或使用袖珍基因(minigene)將至少一個完整或部分人類免疫球蛋白基因位點插入該動物基因體中。可聘用諸如Regeneron(http：//_www_regeneron_com)、Harbour Antibodies(http：//_www_harbourantibodies_com)、Open Monoclonal Technology,Inc.(OMT)(http：//_www_omtinc_net)、KyMab(http：//_www_kymab_com)、Trianni(http：//_www.trianni_com)及Ablexis(http：//_www_ablexis_com)等公司來使用如上所述之技術提供針對所選抗原的人類抗體。
人類抗體可選自噬菌體展示庫，其中該噬菌體經工程改造以表現人類免疫球蛋白或其部分，諸如Fab、單鏈抗體(scFv)、或未配對或配對抗體 可變區(Knappik et al.,(2000)J Mol Biol 296：57-86；Krebs et al.,(2001)J Immunol Meth 254：67-84；Vaughan et al.,(1996)Nature Biotechnology 14：309-314；Sheets et al.,(1998)PITAS(USA)95：6157-6162；Hoogenboom and Winter(1991)J Mol Biol 227：381；Marks et al.,(1991)J Mol Biol 222：581)。本發明之抗體可例如從噬菌體展示庫(表現抗體重鏈及輕鏈可變區)單離為具有噬菌體pIX外殼蛋白的融合蛋白，如描述於Shi et al.,(2010)J Mol Biol 397：385-96及國際專利公開號WO09/085462)。該等庫可篩選出結合至人類及/或食蟹獼猴PSMA或CD3的噬菌體，且可進一步將所獲得之陽性殖株表徵，將Fab從殖株溶解物(lysate)單離出來，並表現為全長IgG。此類用於單離人類抗體的噬菌體展示方法係在例如下列中被描述：美國專利第5,223,409、5,403,484、5,571,698、5,427,908、5,580,717、5,969,108、6,172,197、5,885,793；6,521,404；6,544,731；6,555,313；6,582,915及6,593,081號。
免疫性抗原(immunogenic antigen)之製備及單株抗體生產可使用任何合適技術來執行，諸如重組蛋白質生產。免疫性抗原可以經純化的蛋白質或包括全細胞或細胞或組織抽出物的蛋白質混合物之形式向動物投予，或者抗原可由編碼該抗原或其部分的核酸於動物體內重新地(de novo)形成。
本發明之多特異性PSMA X CD3抗體的產生
本發明之多特異性PSMA X CD3抗體(例如包含特異性結合PSMA之第一結構域及特異性結合CD3之第二結構域的雙特異性抗體)可藉由將本文中經單離且經表徵之結合PSMA之VH/VL域與結合CD3之VH/VL域組合來產生。替代地，可使用來自公開可得之單特異性抗PSMA及抗CD3抗體之VH/VL域，且/或藉由將本文中所識別之結合PSMA或CD3之VH/VL域與公開可得之結合PSMA或CD3之VH/VL域混合匹配來將雙特異性PSMA X CD3抗體工程改造。
可用於將雙特異性PSMA X CD3分子工程改造之例示性抗PSMA抗體係例如在本文中及表2中者。例如，可將本發明之PSMA抗體之VH/VL域併入本文及表5中所述之包含結合CD3之VH/VL域的雙特異性抗體。例如，本文所述之CD3抗體CD3B217及CD3B219之VH/VL域可用於產生雙特異 性PSMA X CD3抗體。除了本文中所提供之抗體CD3B217及CD3B219的描述及表徵之外，抗體之更為詳細的描述可見於美國專利申請案公開號2016-0068605 A1，其以引用方式併入本文中。
同樣地，可用於將雙特異性PSMA X CD3分子工程改造之例示性抗CD3抗體係例如描述於國際專利公開號WO2005/048935、WO2004/106380、及WO2015095392中者。可將此等CD3 VH/VL域併入本文及表2中所述之包含結合PSMA之VH/VL域的雙特異性抗體。例如，本文所述之PSMA抗體PSMB119、PSMB120、PSMB121、PSMB122、PSMB123、PSMB87、PSMB126、PSMB127、PSMB128、PSMB129、PSMB130、PSMB120、PSMB121、PSMB122、PSMB123、PSMB127、PSMB128、PSMB130、PSMB344、PSMB345、PSMB346、PSMB347、PSMB349、PSMB358、PSMB359、PSMB360、PSMB361、PSMB362、PSMB363、及PSMB365之VH/VL域可用於產生雙特異性PSMA X CD3抗體。
可測試所產生之雙特異性PSMA X CD3抗體對於PSMA及CD3的結合、以及其所欲功能特徵，諸如T細胞媒介之PSMA表現性細胞(例如，LNCaP)的殺滅。
本發明之雙特異性抗體包含具有全長抗體結構的抗體。
「全長抗體(full length antibody)」係指具有兩個全長抗體重鏈及兩個全長抗體輕鏈之抗體。全長抗體重鏈(HC)係由熟知的重鏈可變域及恆定域VH、CH1、鉸鏈、CH2、及CH3組成。全長抗體輕鏈(LC)係由熟知的輕鏈可變域及恆定域VL及CL組成。全長抗體可在任一或兩個重鏈中缺乏C端離胺酸(K)。
「Fab臂(Fab-arm)」或「半分子(half molecule)」係指特異性結合抗原之一個重鏈-輕鏈對。
在本文中、及在下列編號實施例中每一者的一些實施例中所述之本發明之全長雙特異性抗體可使用例如兩個單特異性二價抗體之間的Fab臂交換(或半分子交換)來產生，其藉由於各半分子中之重鏈CH3界面引入取代以利於兩個具有不同特異性之抗體半分子的異二聚體在體外無細胞環境中或者使用共表現形成。該Fab臂交換反應係雙硫鍵異構化反應及CH3域之解離-締合 的結果。親本單特異性抗體的鉸鏈區中的重鏈雙硫鍵被還原。其中一個親本單特異性抗體所生成之游離半胱胺酸與第二親本單特異性抗體分子的半胱胺酸殘基形成重鏈間雙硫鍵，同時該等親本抗體的CH3域藉由解離-締合而釋出及重新形成。該等Fab臂之CH3域可經工程改造以利於異二聚化而非同二聚化。所得產物係具有兩個Fab臂或半分子之雙特異性抗體，該等Fab臂或半分子各自結合不同表位，即PSMA上的表位及CD3上的表位。
「同二聚化(homodimerization)」係指具有相同CH3胺基酸序列之兩個重鏈的交互作用。「同二聚體(homodimer)」係指具有兩個有相同CH3胺基酸序列之重鏈的抗體。
「異二聚化(heterodimerization)」係指具有不同CH3胺基酸序列之兩個重鏈的交互作用。「異二聚體(heterodimer)」係指具有兩個有不同CH3胺基酸序列之重鏈的抗體。
在一些實施例中，雙特異性抗體包括諸如下列的設計：Triomab/Quadroma(Trion Pharma/Fresenius Biotech)、鈕扣結構(Knob-in-Hole)(Genentech)、CrossMAb(Roche)、及靜電吸引(electrostatically-matched)(Chugai,Amgen,NovoNordisk,Oncomed)、LUZ-Y(Genentech)、鏈交換工程改造之域體(SEEDbody)(EMD Serono)、Biclonic(Merus)、及DuoBody(Genmab A/S)。
Triomab quadroma技術可用於產生本發明之全長雙特異性抗體。Triomab技術促進兩種親本嵌合抗體之間的Fab臂交換，一個親本mAb具有IgG2a，且第二親本mAb具有大鼠IgG2b恆定區，從而產出嵌合雙特異性抗體。
「鈕扣結構(knob-in-hole)」策略(請參見例如國際公開號WO 2006/028936)可用於產生本發明之全長雙特異性抗體。簡言之，在人類IgG中形成CH3域界面之選定胺基酸可在影響CH3域交互作用的位置處突變，以促進異二聚體形成。將具有小側鏈之胺基酸(孔)引入特異性結合第一抗原之抗體的重鏈中，並將具有大側鏈之胺基酸(鈕)引入特異性結合第二抗原之抗體的重鏈中。在共表現這兩個抗體之後，具有「孔」之重鏈與具有「鈕」之重鏈優先交互作用而導致異二聚體形成。形成鈕和孔之例示性CH3取代對係(表現為第一重鏈之第一CH3域中的經修飾位置/第二重鏈之第二CH3域中的經修飾位置)：T366Y/F405A、T366W/F405W、F405W/Y407A、T394W/Y407T、 T394S/Y407A、T366W/T394S、F405W/T394S及T366W/T366S_L368A_Y407V。
該CrossMAb技術可用於產生本發明之全長雙特異性抗體。CrossMAb除了利用「鈕扣結構」策略來促進Fab臂交換之外，尚使半臂之一中的CH1與CL域交換，以確保所生成之雙特異性抗體有正確的輕鏈配對(見例如美國專利第8,242,247號)。
可使用其他的交換(cross-over)策略，藉由在雙特異性抗體中的一個或兩個臂中的重鏈和輕鏈之間或在重鏈內交換可變或恆定結構域(或兩者)來產生本發明之全長雙特異性抗體。此等交換包括例如VH-CH1與VL-CL、VH與VL、CH3與CL、及CH3與CH1，如國際專利公開號WO2009/080254、2009/080251、WO2009/018386、及WO2009/080252中所述。
可使用其他策略，諸如使用靜電交互作用促進重鏈異二聚化，其係藉由取代一個CH3表面之帶正電荷殘基及第二CH3表面之帶負電荷殘基，如描述於美國專利公開號US2010/0015133；美國專利公開號US2009/0182127；美國專利公開號US2010/028637、或美國專利公開號US2011/0123532。在其他策略中，異二聚化可藉由下列取代來促進(表現為第一重鏈之第一CH3域中的經修飾位置/第二重鏈之第二CH3域中的經修飾位置)：L351Y_F405A_Y407V/T394W、T366I_K392M_T394W/F405A_Y407V、T366L_K392M_T394W/F405A_Y407V、L351Y_Y407A/T366A_K409F、L351Y_Y407A/T366V_K409F、Y407A/T366A_K409F、或T350V_L351Y_F405A_Y407V/T350V_T366L_K392L_T394W，如在美國專利公開號US2012/0149876或美國專利公開號US2013/0195849中所述。
LUZ-Y技術可用於產生本發明之雙特異性抗體。在此技術中，將白胺酸拉鍊添加至CH3域的C端，以驅動來自親本mAb的異二聚體組裝，其會在純化後被移除，如在Wranik et al.,(2012)J Biol Chem 287(52)：42221-9中所述。
SEEDbody技術可用於產生本發明之雙特異性抗體。SEEDbody在其恆定域中挑選經IgA殘基取代的IgG殘基以促進異二聚化，如在美國專利第US20070287170號中所述。
本發明亦提供特異性結合至PSMA之多特異性多功能性抗體。
根據本發明，此類特異性結合至PSMA之多特異性多功能性抗體可係用於腫瘤細胞之雙靶向的三特異性抗體，即，此等抗體係三功能性結構，其可經設計以靶向腫瘤細胞上的兩種不同目標/表位，且其中第三功能性係以高親和力結合至T細胞或NK細胞。靶向兩種不同腫瘤表位並接合T細胞或NK細胞的三特異性抗體，會裂解表現兩種目標的腫瘤細胞。此類分子可藉由所屬技術領域中已知的抗體形式產生，且經過完整描述。(WO20151842071,WO2015158636,WO2010136172,WO2013174873)。在本發明之三特異性實施例中，抗原結合多肽對PSMA及腫瘤細胞上的第二種不同抗原具雙特異性，並額外對效應細胞(具體的是T細胞或NK細胞)具特異性。
在本文中、及在下列編號實施例中每一者的一些實施例中所述之本發明之雙特異性抗體可在無細胞環境中體外產生，此係藉由在兩個單特異性同二聚體抗體之CH3區中引入非對稱突變，且在還原條件中(以讓雙硫鍵異構化)自兩個親本單特異性同二聚體抗體形成該雙特異性異二聚體抗體，其係根據描述於下列文獻中之方法：國際專利公開號WO2011/131746(DuoBody技術)。在該等方法中，第一單特異性二價抗體(例如，抗PSMA抗體)及第二單特異性二價抗體(例如，抗CD3抗體)經工程改造以在CH3域具有某些促進異二聚體穩定性之取代；該等抗體係在足以讓絞鏈區中之半胱胺酸進行雙硫鍵異構化的還原條件下一起培養；從而藉由Fab臂交換來產生該雙特異性抗體。培養條件可最佳地被回復為非還原性(non-reducing)。可使用之例示性還原劑係2-巰基乙胺(2-MEA)、二硫蘇糖醇(dithiothreitol,DTT)、二硫赤蘚醇(dithioerythritol,DTE)、麩胱甘肽、參(2-羧乙基)膦(TCEP)、L-半胱胺酸及β-巰基乙醇。舉例而言，可使用在至少20℃之溫度且有至少25mM之2-MEA存在下或於至少0.5mM之二硫蘇糖醇存在且在5至8之pH下(例如在7.0之pH下或在7.4之pH下)培養至少90min。
在一些本文所述之實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，包含特異性結合PSMA之第一結構域及特異性結合CD3之第二結構域的經單離之雙特異性抗體在抗體CH3恆定域中包含至少一個取代。
在一些本文所述之實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，抗體CH3恆定域中之至少一個取代係409R、F405L、或F405L及R409K取代，其中殘基編號係根據EU索引。
抗體域及編號係熟知的。「不對稱(asymmetrical)」係指抗體中兩個分開重鏈中的兩個CH3域中之不同取代。IgG1 CH3區一般係由IgG1上的殘基341至446(殘基編號係根據EU索引)組成。
在一些本文所述之實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，經單離之雙特異性PSMA X CD3抗體在抗體第一重鏈(HC1)中包含F405L取代，並在抗體第二重鏈(HC2)中包含409R取代。
在一些本文所述之實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，經單離之雙特異性PSMA X CD3抗體在HC1中包含S228P取代，並在HC2中包含S228P、F405L、及R409K取代，其中該抗體係屬於IgG4同型。
在一些本文所述之實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，HC1含有特異性結合PSMA之第一結構域，且HC2含有特異性結合CD3之第二結構域。
在一些本文所述之實施例中，本發明之雙特異性抗體在HC1及HC2中殘基位置350、366、368、370、399、405、407、或409(當殘基編號係根據EU索引時)處包含至少一個、兩個、三個、四個、五個、六個、七個、或八個不對稱取代。
在一些本文所述之實施例中，本發明之雙特異性抗體在HC1及HC2中殘基位置350、370、405、或409(當殘基編號係根據EU索引時)處包含至少一個、兩個、三個、或四個不對稱取代。
在一些本文所述之實施例中，本發明之雙特異性抗體在HC1及HC2中殘基位置405或409(當殘基編號係根據EU索引時)處包含至少一個不對稱取代。
在一些本文所述之實施例中，本發明之雙特異性抗體在HC1中包含409R或F405L取代，且在HC2中包含409R或F405L取代，其中殘基編號係根據EU索引。
在一些本文所述之實施例中，本發明之雙特異性抗體在HC1中包含F405L取代，且在HC2中包含409R取代。
在一些本文所述之實施例中，本發明之雙特異性抗體在HC1及HC2中殘基位置366、368、370、399、405、407、或409處包含至少一個不對稱取代，其中殘基編號係根據EU索引。
在一些本文所述之實施例中，HC1位置409具有Lys、Leu、或Met以外的胺基酸取代，且HC2位置405具有Phe以外的胺基酸取代。
在一些本文所述之實施例中，HC1位置405具有Phe以外的胺基酸取代，且HC2位置409具有Lys、Leu、或Met以外的胺基酸取代。
在一些本文所述之實施例中，HC1位置409具有Lys、Leu、或Met以外的胺基酸取代，且HC2位置405具有Phe、Arg、或Gly以外的胺基酸取代。
在一些本文所述之實施例中，HC1位置405具有Phe、Arg、或G1y以外的胺基酸取代，且HC2 CH3位置409具有Lys、Leu、或Met以外的胺基酸取代
在一些本文所述之實施例中，HC1 CH3在位置405處具有Phe且在位置409處具有Lys、Leu、或Met以外的胺基酸，且HC2在位置405處具有Phe以外的胺基酸且在位置409處具有Lys。
在一些本文所述之實施例中，HC1在位置405處具有Phe以外的胺基酸且在位置409處具有Lys，且HC2在位置405處具有Phe且在位置409處具有Lys、Leu、或Met以外的胺基酸。
在一些本文所述之實施例中，HC1在位置405處具有Phe且在位置409處具有Lys、Leu、或Met以外的胺基酸，且HC2在位置405處具有Phe、Arg、或Gly以外的取代且在位置409處具有Lys。
在一些本文所述之實施例中，HC1在位置405處具有Phe、Arg、或Gly以外的取代且在位置409處具有Lys，且HC2在位置405處具有Phe且在位置409處具有Lys、Leu、或Met以外的胺基酸。
在一些本文所述之實施例中，HC1在位置405處具有Phe且在位置409處具有Lys、Leu、或Met以外的胺基酸，且HC2在位置405處具有Leu且在位置409處具有Lys。
在一些本文所述之實施例中，HC1在位置405處具有Leu且在位置409處具有Lys，且HC2在位置405處具有Phe且在位置409處具有Lys、Leu、或Met以外的胺基酸。
在一些本文所述之實施例中，HC1在位置405處具有Phe且在位置409處具有Arg，且HC2在位置405處具有Phe、Arg、或Gly以外的胺基酸且在位置409處具有Lys。
在一些本文所述之實施例中，HC1在位置405處具有Phe、Arg、或Gly以外的胺基酸且在位置409處具有Lys，且HC2在位置405處具有Phe且在位置409處具有Arg。
在一些本文所述之實施例中，HC1在位置405處具有Phe且在位置409處具有Arg，且HC2在位置405處具有Leu且在位置409處具有Lys。
在一些本文所述之實施例中，HC1在位置405處具有Leu且在位置409處具有Lys，且HC2在位置405處具有Phe且在位置409處具有Arg。
在一些本文所述之實施例中，HC1在位置405處具有Phe且在位置409處具有Lys，且HC2在位置405處具有Leu且在位置409處具有Arg。
在一些本文所述之實施例中，HC1在位置405處具有Leu且在位置409處具有Arg，且HC2在位置405處具有Phe且在位置409處具有Lys。
在一些本文所述之實施例中，HC1在位置409處具有Lys、Leu、或Met以外的胺基酸，且HC2在位置409處具有Lys、在位置370處具有Thr、且在位置405處具有Leu。
在一些本文所述之實施例中，HC1在位置409處具有Lys、在位置370處具有Thr、且在位置405處具有Leu，且HC2在位置409處具有Lys、Leu、或Met以外的胺基酸。
在一些本文所述之實施例中，HC1在位置409處具有Arg，且HC2在位置409處具有Lys、在位置370處具有Thr、且在位置405處具有Leu。
在一些本文所述之實施例中，HC1在位置409處具有Lys、在位置370處具有Thr、且在位置405處具有Leu，且HC2在位置409處具有Arg。
在一些本文所述之實施例中，HC1在位置370處具有Lys、在位置405處具有Phe、且在位置409處具有Arg，且HC2在位置409處具有Lys、在位置370處具有Thr、且在位置405處具有Leu。
在一些本文所述之實施例中，HC1在位置409處具有Lys、在位置370處具有Thr、且在位置405處具有Leu，且HC2在位置370處具有Lys、在位置405處具有Phe、且在位置409處具有Arg。
在一些本文所述之實施例中，HC1在位置409處具有Lys、Leu、或Met以外的胺基酸，且HC2在位置407處具有Tyr、Asp、Glu、Phe、Lys、Gln、Arg、Ser、或Thr以外的胺基酸。
在一些本文所述之實施例中，HC1在位置407處具有Tyr、Asp、Glu、Phe、Lys、Gln、Arg、Ser、或Thr以外的胺基酸，且HC2在位置409處具有Lys、Leu、或Met以外的胺基酸。
在一些本文所述之實施例中，HC1在位置409處具有Lys、Leu、或Met以外的胺基酸，且HC2在位置407處具有Ala、Gly、His、Ile、Leu、Met、Asn、Val、或Trp。
在一些本文所述之實施例中，HC1在位置407處具有Ala、Gly、His、Ile、Leu、Met、Asn、Val、或Trp，且HC2在位置409處具有Lys、Leu、或Met以外的胺基酸。
在一些本文所述之實施例中，HC1在位置409處具有Lys、Leu、或Met以外的胺基酸，且HC2在位置407處具有Gly、Leu、Met、Asn、或Trp。
在一些本文所述之實施例中，HC1在位置407處具有Gly、Leu、Met、Asn、或Trp，且HC2在位置409處具有Lys、Leu、或Met以外的胺基酸。
在一些本文所述之實施例中，HC1在位置407處具有Tyr且在位置409處具有Lys、Leu、或Met以外的胺基酸，且HC2在位置407處具有Tyr、Asp、Glu、Phe、Lys、Gln、Arg、Ser、或Thr以外的胺基酸且在位置409處具有Lys。
在一些本文所述之實施例中，HC1在位置407處具有Tyr、Asp、Glu、Phe、Lys、Gln、Arg、Ser、或Thr以外的胺基酸且在位置409處具有Lys，且HC2在位置407處具有Tyr且在位置409處具有Lys、Leu、或Met以外的胺基酸。
在一些本文所述之實施例中，HC1在位置407處具有Tyr且在位置409處具有Lys、Leu、或Met以外的胺基酸，且HC2在位置407處具有Ala、Gly、His、Ile、Leu、Met、Asn、Val、或Trp且在位置409處具有Lys。
在一些本文所述之實施例中，HC1在位置407處具有Ala、Gly、His、Ile、Leu、Met、Asn、Val、或Trp且在位置409處具有Lys，且HC2 CH3在位置407處具有Tyr且在位置409處具有Lys、Leu、或Met以外的胺基酸。
在一些本文所述之實施例中，HC1 CH3在位置407處具有Tyr且在位置409處具有Lys、Leu、或Met以外的胺基酸，且HC2在位置407處具有Gly、Leu、Met、Asn、或Trp且在位置409處具有Lys。
在一些本文所述之實施例中，HC1在位置407處具有Gly、Leu、Met、Asn、或Trp且在位置409處具有Lys，且HC2在位置407處具有Tyr且在位置409處具有Lys、Leu、或Met以外的胺基酸。
在一些本文所述之實施例中，HC1在位置407處具有Tyr且在位置409處具有Arg，且HC2在位置407處具有Tyr、Asp、Glu、Phe、Lys、Gln、Arg、Ser、或Thr以外的胺基酸且在位置409處具有Lys。
在一些本文所述之實施例中，HC1在位置407處具有Tyr、Asp、Glu、Phe、Lys、Gln、Arg、Ser、或Thr以外的胺基酸且在位置409處具有Lys，且HC2在位置407處具有Tyr且在位置409處具有Arg。
在一些本文所述之實施例中，HC1在位置407處具有Tyr且在位置409處具有Arg，且HC2在位置407處具有Ala、Gly、His、Ile、Leu、Met、Asn、Val、或Trp且在位置409處具有Lys。
在一些本文所述之實施例中，HC1在位置407處具有Ala、Gly、His、Ile、Leu、Met、Asn、Val、或Trp且在位置409處具有Lys，且HC2在位置407處具有Tyr且在位置409處具有Arg。
在一些本文所述之實施例中，HC1 CH3在位置407處具有Tyr且在位置409處具有Arg，且HC2 CH3在位置407處具有Gly、Leu、Met、Asn、或Trp且在位置409處具有Lys。
在一些本文所述之實施例中，HC1在位置407處具有Gly、Leu、Met、Asn、或Trp且在位置409處具有Lys，且HC2在位置407處具有Tyr且在位置409處具有Arg。
在一些本文所述之實施例中，HC1在位置409處具有Lys、Leu、或Met以外的胺基酸，且HC2(i)在位置368處具有Phe、Leu、及Met以外的胺基酸，或者(ii)在位置370處具有Trp，或者(iii)在位置399處具有Asp、Cys、Pro、Glu、或Gln以外的胺基酸。
在一些本文所述之實施例中，HC1(i)在位置368處具有Phe、Leu、及Met以外的胺基酸，或者(ii)在位置370處具有Trp，或者(iii)在位置399處具有Asp、Cys、Pro、Glu、或Gln以外的胺基酸，且HC2在位置409處具有Lys、Leu、或Met以外的胺基酸。
在一些本文所述之實施例中，HC1在位置409處具有Arg、Ala、His、或Gly，且HC2(i)在位置368處具有Lys、Gln、Ala、Asp、Glu、Gly、His、Ile、Asn、Arg、Ser、Thr、Val、或Trp，或者(ii)在位置370處具有Trp，或者(iii)在位置399處具有Ala、Gly、Ile、Leu、Met、Asn、Ser、Thr、Trp、Phe、His、Lys、Arg、或Tyr。
在一些本文所述之實施例中，HC1(i)在位置368處具有Lys、Gln、Ala、Asp、Glu、Gly、His、Ile、Asn、Arg、Ser、Thr、Val、或Trp，或者(ii)在位置370處具有Trp，或者(iii)在位置399處具有Ala、Gly、Ile、Leu、Met、Asn、Ser、Thr、Trp、Phe、His、Lys、Arg、或Tyr，且HC2在位置409處具有Arg、Ala、His、或Gly。
在一些本文所述之實施例中，HC1在位置409處具有Arg，且HC2(i)在位置368處具有Asp、Glu、Gly、Asn、Arg、Ser、Thr、Val、或Trp，或者(ii)在位置370處具有Trp，或者(iii)在位置399處具有Phe、His、Lys、Arg、或Tyr。
在一些本文所述之實施例中，HC1(i)在位置368處具有Asp、Glu、Gly、Asn、Arg、Ser、Thr、Val、或Trp，或者(ii)在位置370處具有Trp，或者(iii)在位置399處具有Phe、His、Lys、Arg、或Tyr，且HC2在位置409處具有Arg。
在一些本文所述之實施例中，HC1包含409R取代或F405L取代，且HC2包含409R取代或F405L取代，其中殘基編號係根據EU索引。
在一些本文所述之實施例中，HC1包含F405L取代，且HC2包含409R取代。
一般會使用標準方法在DNA水準對諸如抗體之恆定域的分子進行取代。
本發明之抗體可經工程改造成各種熟知的抗體形式。
在一些實施例中，本發明之雙特異性抗體係雙價抗體(diabody)或交叉抗體(cross-body)。
在一些實施例中，雙特異性抗體包括重組類IgG雙靶向分子，其中該分子之兩側各含有至少兩種不同抗體之Fab片段或該Fab片段的一部分；IgG融合分子，其中全長IgG抗體係融合至額外Fab片段或Fab片段之部分；Fc融合分子，其中單鏈Fv分子或穩定化雙價抗體係融合至重鏈恆定域、Fc區或其部分；Fab融合分子，其中不同之Fab片段係融合在一起；基於ScFv之抗體及基於雙價抗體之抗體及重鏈抗體(例如，域抗體、奈米抗體)，其中不同單鏈Fv分子或不同雙價抗體或不同重鏈抗體(例如，域抗體、奈米抗體)係融合至彼此或融合至另一個蛋白質或載劑分子。
在一些實施例中，重組類IgG雙靶向分子包括雙靶向(Dual Targeting,DT)-Ig(GSK/Domantis)、二合一抗體(Two-in-one Antibody)(Genentech)、及mAb2(F-Star)。
在一些實施例中，IgG融合分子包括雙可變域(Dual Variable Domain,DVD)-Ig(Abbott)、Ts2Ab(MedImmune/AZ)及BsAb(Zymogenetics)、HERCULES(Biogen Idec)及TvAb(Roche)。
在一些實施例中，Fc融合分子包括ScFv/Fc融合(ScFv/Fc Fusions)(Academic Institution)、SCORPION(Emergent BioSolutions/Trubion, Zymogenetics/BMS)、及雙親和力重新靶向技術(Dual Affinity Retargeting Technology)(Fc-DART)(MacroGenics)。
在一些實施例中，Fab融合雙特異性抗體包括F(ab)2(Medarex/AMGEN)、Dual-Action或Bis-Fab(Genentech)、Dock-and-Lock(DNL)(ImmunoMedics)、Bivalent Bispecific(Biotecnol)及Fab-Fv(UCB-Celltech)。基於ScFv之抗體、基於雙價抗體之抗體、及域抗體包括雙特異性T細胞接合體(Bispecific T Cell Engager,BITE)(Micromet)、串聯雙價抗體(Tandem Diabody,Tandab)(Affimed)、雙親和力重新靶向技術(DART)(MacroGenics)、單鏈雙價抗體(Single-chain Diabody)(Academic)、類TCR抗體(TCR-like Antibodies)(AIT,ReceptorLogics)、人類血清白蛋白ScFv融合(Human Serum Albumin ScFv Fusion)(Merrimack)及COMBODY(Epigen Biotech)、雙靶向奈米抗體(Ablynx)、僅雙靶向重鏈域抗體(dual targeting heavy chain only domain antibody)。各種格式之雙特異性抗體已描述於例如Chames and Baty(2009)Curr Opin Drug Disc Dev 12：276及Nunez-Prado et al.,(2015)Drug Discovery Today 20(5)：588-594中。
多核苷酸、載體及宿主細胞
亦揭示編碼免疫特異性結合至PSMA之抗體或抗原結合片段的經單離之多核苷酸。該等能夠編碼本文中所提供之可變域區段的單離多核苷酸可被包括於相同(或不同)之載體上以生產抗體或抗原結合片段。
編碼重組抗原結合蛋白質之多核苷酸亦在本揭露之範疇內。在一些實施例中，所述多核苷酸(及彼等所編碼之肽)包括前導序列(leader sequence)。可採用所屬技術領域中所習知的任何前導序列。前導序列可包括但不限於限制部位(restriction site)或轉譯起始部位(translation start site)。
本文中所述之PSMA特異性抗體或抗原結合片段包括具有單一或多個胺基酸取代、缺失、或添加之變異體，該等變異體保留了所述PSMA特異性抗體或抗原結合片段的生物性質(例如，結合親和力或免疫效應活性)。在本發明之上下文中，下列符號係用來描述突變，除非另有指明；i)取代指定位置中之胺基酸係寫成例如K409R，其代表用精胺酸取代位置409中之離胺酸；且ii)在特定變異體中，使用特定三個或一個字母之代碼(包括代碼Xaa及X)來 指示任何胺基酸殘基。因此，用精胺酸取代位置409中之離胺酸被指稱為：K409R，或者用任何胺基酸殘基取代位置409中之離胺酸被指稱為K409X。在位置409中之離胺酸缺失的情況下，其係以K409*指示。當在肽同型或變異體之中的特定胺基酸殘基可能會有所變化，而且在各同型或變異體中或該等同型或變異體中任一者中的殘基受到取代的影響時，則該取代被指稱為例如409R，其意指對應於位置409之胺基酸經精胺酸取代。具有通常知識者可生產具有單一或多個胺基酸取代、缺失、或添加之變異體。
此等變異體可包括：(a)其中一或多個胺基酸殘基經保守或非保守胺基酸取代之變異體、(b)其中一或多個胺基酸經添加至多肽或自多肽刪除之變異體、(c)其中一或多個胺基酸包括取代基之變異體、及(d)其中多肽係與另一肽或多肽(諸如融合夥伴、蛋白質標籤、或其他化學部分，其可賦予多肽有用性質，諸如例如針對抗體之表位、多組胺酸序列、生物素部分、及類似者)融合之變異體。本文中所述之抗體或抗原結合片段可包括其中來自一個物種之保留性或非保留性位置之胺基酸殘基係經另一物種之對應殘基所取代的變異體。在其他實施例中，非保守性位置之胺基酸殘基係經保守性或非保守性殘基取代。用於獲得此等變異體之技術(包括基因(缺失、突變等)、化學、及酶技術)皆為所屬技術領域中具有通常知識者所習知。
本文中所述之PSMA特異性抗體或抗原結合片段可體現數種抗體同型，諸如IgM、IgD、IgG、IgA、及IgE。在一些實施例中，該抗體同型係IgG1、IgG2、IgG3、或IgG4同型，較佳為IgG1或IgG4同型。抗體或其抗原結合片段之特異性大部分是由CDR之胺基酸序列及排列來決定。因此，一種同型之CDR可轉移到另一種同型而不會改變抗原特異性。或者，已經建立使融合瘤從生產一種抗體同型轉換到生產另一種(同型轉換)而不會改變抗原特異性之技術。因此，此等抗體同型係在所述抗體或抗原結合片段之範疇內。
亦提供包含本文中所述之多核苷酸的載體。該等載體可為表現載體(expression vector)。含有編碼所關注之多肽的序列之重組表現載體因而被考慮為在本揭露之範疇內。該表現載體可含有一或多個額外序列，諸如但不限於調節序列(例如，啟動子、增強子)、選擇標記、及多腺核苷酸化信號。用於轉形廣泛各種宿主細胞之載體係廣為周知，並且包括但不限於質體、噬菌體 質體(phagemid)、黏質體(cosmid)、桿狀病毒、桿粒(bacmid)、人造細菌染色體(BAC)、人造酵母菌染色體(YAC)、以及其他細菌、酵母及病毒載體。
本實施方式之範疇內的重組表現載體包括編碼至少一種與合適調節元件可操作地連接之重組蛋白質的合成性、基因體性、或cDNA衍生性核酸片段。此類調節元件可包括轉錄啟動子、編碼合適mRNA核糖體結合位之序列、及控制轉錄和轉譯之終止的序列。表現載體(尤其是哺乳動物表現載體)亦可包括一或多種非轉錄元件，諸如複製起源、連接至待表現基因之合適啟動子及增強子、其他5'或3'側翼(flanking)非轉錄序列、5'或3'非轉譯序列(諸如必要的核糖體結合位)、多腺核苷酸化位點、剪切供體及受體位點、或轉錄終止序列。亦可納入賦予在宿主中複製之能力的複製起源。
在用來轉形脊椎動物細胞之表現載體中的轉錄及轉譯控制序列可由病毒來源提供。例示性載體可如以下文獻所述建構：Okayama and Berg,3 Mol.Cell.Biol.280(1983)。
在一些實施例中，抗體編碼序列或抗原結合片段編碼序列係置於強大組成性啟動子的控制之下，諸如下列基因的啟動子：次黃嘌呤磷酸核糖轉移酶(HPRT)、腺苷去胺酶、丙酮酸激酶、β肌動蛋白、人類肌凝蛋白、人類血紅素、人類肌肉肌酸、及其他。此外，許多病毒啟動子在真核細胞中組成性地發揮作用，並且適合搭配所述實施例使用。此等病毒啟動子包括但不限於巨細胞病毒(CMV)立即早期啟動子、SV40之早期及晚期啟動子、小鼠乳房腫瘤病毒(MMTV)啟動子、莫洛尼白血病病毒(Maloney leukemia virus)之長末端重複(LTR)、人類免疫不全病毒(HIV)、艾巴二氏病毒(EBV)、勞斯肉瘤病毒(RSV)、及其他反轉錄病毒、和單純皰疹病毒(Herpes Simplex Virus)之胸苷激酶啟動子。在一個實施例中，PSMA特異性抗體或其抗原結合片段編碼序列係置於誘導性啟動子的控制之下，諸如金屬硫蛋白啟動子、四環素誘導性啟動子、多西環素(doxycycline)誘導性啟動子、含有一或多種干擾素刺激回應元件(interferon-stimulated response elements,ISRE)之啟動子，諸如蛋白質激酶R 2',5'-寡腺苷酸合成酶、Mx基因、ADAR1、及類似者。
本文中所述之載體可含有一或多個內部核糖體進入位點(IRES)。將IRES序列納入融合載體中可有利於增強一些蛋白質之表現。在一些 實施例中，載體系統將包括一或多個多腺核苷酸化部位(例如SV40)，其可在任一前述核酸序列之上游或下游。載體組分可相鄰地連接，或者以提供用於表現基因產物之最佳間隔的方式來排列(即藉由在ORF之間引入「間隔子(spacer)」核苷酸)，或者以其他方式放置。調節元件(諸如IRES模體)亦可經排列以提供用於表現之最佳間隔。
該等載體可包含選擇標記，其為所屬技術領域中所廣為周知。選擇標記包括正向及負向選擇標記，例如抗生素抗藥性基因(例如新黴素抗藥性基因、潮黴素(hygromycin)抗藥性基因、康黴素(kanamycin)抗藥性基因、四環素抗藥性基因、青黴素抗藥性基因)、麩胺酸合成酶基因、HSV-TK、用於更昔洛韋(ganciclovir)選擇之HSV-TK衍生物、或用於6-甲基嘌呤選擇之細菌嘌呤核苷磷酸化酶基因(Gadi等人，7 Gene Ther.1738-1743(2000))。編碼選擇標記或選殖位點之核酸序列可在編碼所關注多肽或選殖位點之核酸序列的上游或下游。
本文中所述之載體可用來以編碼所述抗體或抗原結合片段之基因轉形各種細胞。例如，載體可用來產生PSMA特異性抗體或抗原結合片段生產細胞。因此，另一個態樣的特點在於經載體轉形的宿主細胞，該載體包含編碼特異性結合PSMA之抗體或其抗原結合片段(諸如本文中所描述及例示之抗體或抗原結合片段)的核酸序列。
許多用於將外來基因引入細胞之技術皆為所屬技術領域所習知，並且可用來建構重組細胞以依據本文中所描述及例示之各式實施例來實施所述之方法。所使用之技術應提供異源基因序列之穩定轉移至宿主細胞，以使該異源基因序列可由細胞後代所繼承及表現，並且使接受者細胞之必要發育及生理功能不受干擾。可使用之技術包括但不限於染色體轉移(例如，細胞融合、染色體媒介之基因轉移、微細胞媒介之基因轉移)、物理方法(例如，轉染、球形質體(spheroplast)融合、微注射、電穿孔、脂質體載劑)、病毒載體轉移(例如，重組DNA病毒、重組RNA病毒)及類似者(描述於Cline,29 Pharmac.Ther.69-92(1985))。磷酸鈣沉澱及聚乙二醇(PEG)誘導之細菌原生質體與哺乳動物細胞融合亦可用來轉形細胞。
適用於表現本文中所述之PSMA特異性抗體或抗原結合片段的細胞較佳為真核細胞，更佳為源自植物、囓齒動物、或人類之細胞，例如但不限於NSO、CHO、CHOK1、perC.6、Tk-ts13、BHK、HEK293細胞、COS-7、T98G、CV-1/EBNA、L細胞、C127、3T3、HeLa、NS1、Sp2/0骨髓瘤細胞、及BHK細胞系等。此外，抗體之表現可使用融合瘤細胞來達成。用於生產融合瘤之方法在所屬技術領域中已充分建立。
經本文中所述之表現載體轉形的細胞可針對本文中所述之抗體或抗原結合片段的重組表現來選擇或篩選。重組陽性細胞經擴增並針對展現所欲表型之次殖株(subclone)進行篩選，所欲表型諸如高表現水平、增強之生長性質、或產出例如由於蛋白質修飾或經修改之轉譯後修飾而具有所欲生化特徵之蛋白質的能力。這些表型可能是因為給定次殖株之固有性質或因為突變。突變可透過使用化學品、UV波長光、放射線、病毒、插入型致突變原、抑制DNA不匹配修復、或此等方法之組合來實現。
醫藥組成物/投予
本發明提供醫藥組成物，其包含本文中所述之本發明之抗體及醫藥上可接受之載劑。關於治療用途，本發明之抗體可被製備成醫藥組成物，其在醫藥上可接受之載劑中含有有效量的抗體作為活性成分。「載劑」係指與本發明之抗體一起投予的稀釋劑、佐劑、賦形劑、或媒劑。此等媒劑可為液體如水及油，包括來自石油、動物、蔬菜或合成來源者，諸如花生油、大豆油、礦物油、芝麻油及類似者。舉例而言，可使用0.4%鹽水及0.3%甘胺酸。這些溶液係無菌且通常不含顆粒物質。彼等可藉由習用、習知的滅菌技術(如過濾)來滅菌。該等組成物可含有如用以接近生理條件所需之醫藥上可接受的輔助物質，諸如pH調整及緩衝劑、穩定、增稠、潤滑及著色劑等。在此類醫藥配方中本發明之抗體之濃度可能會有所不同，從以重量計小於約0.5%，通常達以重量計至少約1%至多達以重量計15或20%，且可主要根據所需劑量、流體體積、黏度等，依據所選擇之特定投予模式來選擇。合適的媒劑及配方(包含其他的人類蛋白質，例如人類血清白蛋白)例如係描述於例如Remington：The Science and Practice of Pharmacy,21st Edition,Troy,D.B.ed.,Lipincott Williams and Wilkins,Philadelphia,PA 2006,Part 5,Pharmaceutical Manufactuiing pp 691-1092中，請特別參見pp.958-989。
本發明之抗體的治療用途之投予模式可以是將抗體遞送至宿主的任何合適途徑，諸如使用呈錠劑、膠囊、溶液、粉末、凝膠、顆粒的配方於腸胃外投予，例如皮內、肌內、腹膜內、靜脈內或皮下、肺部、經黏膜(口服、鼻內、陰道內，直腸)；並且被包含在注射器、植入裝置、滲透泵、藥筒、微型泵中；或所屬技術領域中具有通常知識者理解的其他方式，如在所屬技術領域中所習知者。舉例而言，特定點投予(Site specific administration)可藉由腫瘤內、關節內、支氣管內、腹腔內、囊內、軟骨內、腔內、體腔內、小腦內、側腦室內、結腸內、子宮頸內、胃內、肝內、心內、骨內、骨盆內、心包腔內、腹膜內、胸腔內、前列腺內、肺內、直腸內、腎內、視網膜內、椎管內、滑膜腔內、胸腔內、子宮內、血管內、膀胱內、病灶內、陰道、直腸、口腔、舌下、鼻內、或透皮遞送來實現。
在本文中、及在下列編號實施例中每一者的一些實施例中所述之本發明之抗體可藉由任何合適途徑投予至對象，例如腸胃外地藉由靜脈內(i.v.)輸注、或肌內或皮下或腹膜內的一次全劑量注射(bolus injection)。i.v.輸注可例如在15、30、60、90、120、180、或240分鐘內給予、或者在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、或12小時內給予。
給予個體之劑量係足以減輕或至少部分遏止所要治療之疾病(「治療有效量」)並且有時可為0.005mg至約100mg/kg，例如約0.05mg至約30mg/kg或約5mg至約25mg/kg、或約4mg/kg、約8mg/kg、約16mg/kg或約24mg/kg，或者例如約1、2、3、4、5、6、7、8、9或10mg/kg，但可甚至更高，例如約15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、30、40、50、60、70、80、90或100mg/kg。
亦可給予固定單位劑量，例如50、100、200、500、或1000mg，或者劑量可基於患者之表面積，例如500、400、300、250、200、或100mg/m2。通常可投予介於1與8次間的劑量(例如1、2、3、4、5、6、7或8次)以治療該患者，但亦可給予9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或更多次劑量。
在本文中、及在下列編號實施例中每一者的一些實施例中所述之本發明之抗體的投予可在一天、兩天、三天、四天、五天、六天、一週、兩週、三週、一個月、五週、六週、七週、兩個月、三個月、四個月、五個月、六個月或更久之後重覆進行。重覆治療過程亦為可能者，如為慢性投予。重覆投予可在相同劑量或在不同劑量下。例如，本文中所述之本發明之抗體可以8mg/kg或以16mg/kg以每週間隔投予持續8週，接著以8mg/kg或以16mg/kg每兩週投予持續另外16週，接著以8mg/kg或以16mg/kg藉由靜脈輸注每四週投予。
例如，在本文所述之本發明方法中、及在下列編號實施例中每一者的一些實施例中之抗體可以約0.1至100mg/kg的量作為日劑量，諸如0.5、0.9、1.0、1.1、1.5、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、40、45、50、60、70、80、90、或100mg/kg，每天提供、於開始治療後的第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、或40天中之至少一天提供、或者可替代地，於開始治療後的第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、或20週中之至少一週提供、或其任何組合，並使用每24、12、8、6、4、或2小時之單次或分次劑量、或其任何組合。
在本文所述之本發明方法中、及在下列編號實施例中每一者的一些實施例中之抗體亦可預防性投予以降低發展癌症之風險、延緩癌症進展事件之開始發生、及/或當癌症處於緩解時降低復發之風險。
本發明之抗體可凍乾貯存並在使用前於合適的載劑中重構。此技術已顯示對於習用蛋白質製劑為有效者並且可使用廣為人知之凍乾及重構技術。
使用PSMA特異性抗體之方法
PSMA係一種與前列腺癌相關的細胞膜抗原，其常經過度表現於下列者中：前列腺上皮內瘤(PIN)，即其中一些前列腺細胞已開始看起來及表現異常的病況；原發性及轉移性前列腺癌；及其他實體腫瘤之新生血管(例如 乳房、肺、膀胱、腎臟)。PSMA表現與疾病進展及格里森分數相關。PSMA表現於轉移性疾病、荷爾蒙難治性病例、及較高級病灶中增加，且其於雄性激素不敏感性腫瘤中經進一步上調
PSMA阻斷可抑制或減少在對象中之PSMA表現性癌細胞及腫瘤的生長。歸因於腫瘤新生血管中的PSMA表現，PSMA阻斷亦可具抗血管新生活性(Milowsky,et al.2007)。PSMA高度表現於前列腺上皮內瘤(最獲得確立的前列腺癌前兆)中，因此PSMA阻斷可調節PIN至前列腺癌的進展。
本文中所述之本發明的一個實施例，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，係一種抑制對象中腫瘤細胞生長之方法，其包含向該對象投予治療有效量的本發明之特異性結合PSMA之抗體。
本文中所述之本發明的另一個實施例，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，係一種抑制對象中腫瘤之新生血管形成或生長之方法，其包含向該對象投予治療有效量的本發明之特異性結合PSMA之抗體。
本文中所述之本發明的另一個實施例，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，係一種抑制對象中癌前狀態進展之方法，其包含向該對象投予治療有效量的本發明之特異性結合PSMA之抗體。
本文中所述之本發明的一個實施例，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，係一種藉由向有需要之對象投予本文中所述之本發明之特異性結合PSMA之抗體來治療癌症的方法。
本文中所述之本發明的一個實施例，且在下列每一個編號實施例的一些實施例中，係一種抑制對象中腫瘤細胞生長之方法，其包含向該對象投予治療有效量的本發明之特異性結合PSMA X CD3之雙特異性抗體。
本文中所述之本發明的另一個實施例，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，係一種抑制對象中腫瘤之新生血管形成或生長之方法，其包含向該對象投予治療有效量的本發明之特異性結合PSMA X CD3之雙特異性抗體。
本文中所述之本發明的另一個實施例，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，係一種抑制對象中癌前狀態進展之方法，其包含向該對象投予治療有效量的本發明之特異性結合PSMA X CD3之雙特異性抗體。
本文中所述之本發明的一個實施例，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，係一種藉由向有需要之對象投予本發明之特異性結合PSMA X CD3之雙特異性抗體來治療癌症的方法。
可用於本發明之方法中的例示性抗體係如本文中所述的特異性結合PSMA之抗體及雙特異性PSMA X CD3抗體。
可具單特異性或可為CD3雙特異性者之一部分的例示性PSMA抗體係抗體PSMB119、PSMB120、PSMB121、PSMB122、PSMB123、PSMB87、PSMB126、PSMB127、PSMB128、PSMB129、PSMB130、PSMB120、PSMB121、PSMB122、PSMB123、PSMB127、PSMB128、PSMB130、PSMB344、PSMB345、PSMB346、PSMB347、PSMB349、PSMB358、PSMB359、PSMB360、PSMB361、PSMB362、PSMB363、及PSMB365，該等抗體具有如本文中所述的VH及VL胺基酸序列及特徵。
在一些實施例中，在本文中所述之本發明之方法中使用的特異性結合PSMA之抗體係PSMB119、PSMB120、PSMB121、PSMB122、PSMB123、PSMB87、PSMB126、PSMB127、PSMB128、PSMB129、PSMB130、PSMB120、PSMB121、PSMB122、PSMB123、PSMB127、PSMB128、PSMB130、PSMB344、PSMB345、PSMB346、PSMB347、PSMB349、PSMB358、PSMB359、PSMB360、PSMB361、PSMB362、PSMB363、及PSMB365。此等抗體之VH及VL胺基酸序列係顯示於表2中。
在一些實施例中，在本文中所述之本發明之方法中使用的特異性結合PSMA之抗體包含SEQ ID NO：160之VH及SEQ ID NO：65之VL。
在一些實施例中，在本文中所述之本發明之方法中使用的特異性結合PSMA之抗體包含SEQ ID NO：79之VH及SEQ ID NO：78之VL。
在一些實施例中，在本文中所述之本發明之方法中使用的特異性結合PSMA之抗體包含SEQ ID NO：77之VH及SEQ ID NO：78之VL。
在一些實施例中，在本文中所述之本發明之方法中使用的特異性結合PSMA之抗體包含SEQ ID NO：75之VH及SEQ ID NO：76之VL。
在一些實施例中，在本文中所述之本發明之方法中使用的特異性結合PSMA之抗體包含SEQ ID NO：74之VH及SEQ ID NO：61之VL。
在一些實施例中，在本文中所述之本發明之方法中使用的特異性結合PSMA之抗體包含SEQ ID NO：72之VH及SEQ ID NO：73之VL。
在一些實施例中，在本文中所述之本發明之方法中使用的特異性結合PSMA之抗體包含SEQ ID NO：66之VH及SEQ ID NO：67之VL。
在一些實施例中，在本文中所述之本發明之方法中使用的特異性結合PSMA之抗體包含SEQ ID NO：64之VH及SEQ ID NO：65之VL。
在一些實施例中，在本文中所述之本發明之方法中使用的特異性結合PSMA之抗體包含SEQ ID NO：62之VH及SEQ ID NO：63之VL。
在一些實施例中，在本文中所述之本發明之方法中使用的特異性結合PSMA之抗體包含SEQ ID NO：60之VH及SEQ ID NO：61之VL。
在一些實施例中，在本文中所述之本發明之方法中使用的特異性結合PSMA之抗體包含SEQ ID NO：68之VH及SEQ ID NO：69之VL。
在一些實施例中，在本文中所述之本發明之方法中使用的特異性結合PSMA之抗體包含SEQ ID NO：70之VH及SEQ ID NO：71之VL。
在一些實施例中，在本文中所述之本發明之方法中使用的特異性結合PSMA之抗體包含SEQ ID NO：138之VH及SEQ ID NO：67之VL。
在一些實施例中，在本文中所述之本發明之方法中使用的特異性結合PSMA之抗體包含SEQ ID NO：138之VH及SEQ ID NO：142之VL。
在一些實施例中，在本文中所述之本發明之方法中使用的特異性結合PSMA之抗體包含SEQ ID NO：138之VH及SEQ ID NO：143之VL。
在一些實施例中，在本文中所述之本發明之方法中使用的特異性結合PSMA之抗體包含SEQ ID NO：62之VH及SEQ ID NO：63之VL。
在一些實施例中，在本文中所述之本發明之方法中使用的特異性結合PSMA之抗體包含SEQ ID NO：139之VH及SEQ ID NO：67之VL。
在一些實施例中，在本文中所述之本發明之方法中使用的特異性結合PSMA之抗體包含SEQ ID NO：140之VH及SEQ ID NO：144之VL。
在一些實施例中，在本文中所述之本發明之方法中使用的特異性結合PSMA之抗體包含SEQ ID NO：140之VH及SEQ ID NO：67之VL。
在一些實施例中，在本文中所述之本發明之方法中使用的特異性結合PSMA之抗體包含SEQ ID NO：140之VH及SEQ ID NO：142之VL。
在一些實施例中，在本文中所述之本發明之方法中使用的特異性結合PSMA之抗體包含SEQ ID NO：140之VH及SEQ ID NO：143之VL。
在一些實施例中，在本文中所述之本發明之方法中使用的特異性結合PSMA之抗體包含SEQ ID NO：139之VH及SEQ ID NO：144之VL。
在一些實施例中，在本文中所述之本發明之方法中使用的特異性結合PSMA之抗體包含SEQ ID NO：139之VH及SEQ ID NO：142之VL。
在一些實施例中，在本文中所述之本發明之方法中使用的特異性結合PSMA之抗體包含SEQ ID NO：139之VH及SEQ ID NO：143之VL。
在一些實施例中，在本文中所述之本發明之方法中使用的特異性結合PSMA之抗體包含SEQ ID NO：141之VH及SEQ ID NO：143之VL。在一些實施例中，在本文中所述之本發明之方法中使用的包含特異性結合PSMA之第一結構域及特異性結合CD3之第二結構域的雙特異性PSMA/CD3抗體在第一結構域中包含SEQ ID NO：62之VH及SEQ ID NO：63之VL，且在第二結構域中包含SEQ ID NO：104之VH及SEQ ID NO：105之VL。
在一些實施例中，在本文中所述之本發明之方法中使用的包含特異性結合PSMA之第一結構域及特異性結合CD3之第二結構域的雙特異性PSMA/CD3抗體在第一結構域中包含SEQ ID NO：64之VH及SEQ ID NO：65之VL，且在第二結構域中包含SEQ ID NO：104之VH及SEQ ID NO：105之VL。
在一些實施例中，在本文中所述之本發明之方法中使用的包含特異性結合PSMA之第一結構域及特異性結合CD3之第二結構域的雙特異性PSMA/CD3抗體在第一結構域中包含SEQ ID NO：66之VH及SEQ ID NO：67之VL，且在第二結構域中包含SEQ ID NO：104之VH及SEQ ID NO：105之VL。
在一些實施例中，在本文中所述之本發明之方法中使用的包含特異性結合PSMA之第一結構域及特異性結合CD3之第二結構域的雙特異性PSMA/CD3抗體在第一結構域中包含SEQ ID NO：75之VH及SEQ ID NO：76之VL，且在第二結構域中包含SEQ ID NO：104之VH及SEQ ID NO：105之VL。
在一些實施例中，在本文中所述之本發明之方法中使用的包含特異性結合PSMA之第一結構域及特異性結合CD3之第二結構域的雙特異性PSMA/CD3抗體在第一結構域中包含SEQ ID NO：74之VH及SEQ ID NO：61之VL，且在第二結構域中包含SEQ ID NO：104之VH及SEQ ID NO：105之VL。
在一些實施例中，在本文中所述之本發明之方法中使用的包含特異性結合PSMA之第一結構域及特異性結合CD3之第二結構域的雙特異性PSMA/CD3抗體在第一結構域中包含SEQ ID NO：160之VH及SEQ ID NO：65之VL，且在第二結構域中包含SEQ ID NO：104之VH及SEQ ID NO：105之VL。
癌症可係過度增生性病況或病症、實體腫瘤、新生血管、軟組織腫瘤、或轉移性病灶。
「癌症」意在包括所有類型的癌性生長或致癌過程、轉移組織或惡性轉化的細胞、組織或器官，不論組織病理學類型或侵襲階段。癌症的實例包括實體腫瘤、血液惡性疾病、軟組織腫瘤、及轉移病灶。例示性實體腫瘤包括惡性腫瘤，例如各種器官系統的肉瘤及癌(包括腺癌及鱗狀細胞癌)，諸如影響前列腺、肝、肺、乳房、淋巴、胃腸道(例如結腸)、生殖泌尿道(例如腎、尿路上皮細胞)、前列腺、及咽者。腺癌包括惡性腫瘤，例如大多數結腸癌、直腸癌、腎細胞癌、肝癌、非小細胞肺癌、小腸癌及食道癌。鱗狀細胞癌包括惡性腫瘤，例如在肺、食道、皮膚、頭部和頸部區域、口腔、肛門、及子宮頸中。
在一個實施例中，癌症係前列腺癌。
亦可使用本文所述之本發明之方法及抗體治療或預防前述癌症的轉移病灶。
其生長可使用在本文中所述之本發明之抗體抑制或減少的例示性癌症包括可能過度表現PSMA的癌症。例示性此類癌症包括前列腺癌或前列腺上皮內瘤、結腸直腸癌、胃癌、透明細胞腎癌、膀胱癌、肺癌、鱗狀細胞癌、神經膠質瘤、乳癌、腎臟癌、新生血管病症、透明細胞腎癌(CCRCC)、及胰腺癌、以及各種其他非前列腺癌(包括但不限於腎癌、尿路上皮癌、及往肝臟的腺癌)。難治性或復發性惡性腫瘤可使用本文所述之本發明之抗體治療。
可用本文中所述之本發明之抗體治療的例示性其他癌症係肛門癌、基底細胞癌、膽管癌、膀胱癌、骨癌、腦和CNS癌、輸卵管癌、陰道癌、外陰(vulva)癌、皮膚或眼內惡性黑色素瘤、星形食道癌(astro-esophageal cancer)、睾丸癌、卵巢癌、胰腺癌、直腸癌、子宮癌、原發性CNS淋巴瘤；中樞神經系統(CNS)的腫瘤、子宮頸癌、絨毛膜癌、直腸癌、結締組織癌、消化系統癌、子宮內膜癌、眼癌；上皮內瘤(intra-epithelial neoplasm)、腎臟癌、喉癌、肝癌；小細胞肺癌、神經母細胞瘤、口腔癌(例如唇、舌、口、及咽)、鼻咽癌、視網膜母細胞瘤、橫紋肌肉瘤、呼吸系統癌、肉瘤、甲狀腺癌、泌尿系統癌、肝癌、肛門區癌、輸卵管癌、陰道癌、外陰癌、小腸癌、內分泌系統癌、副甲狀腺癌、腎上腺癌、軟組織肉瘤、尿道癌、陰莖癌、兒童實體腫瘤、腫瘤血管生成、脊柱軸腫瘤(spinal axis tumor)、腦幹膠質瘤(brain stem glioma)、垂體腺瘤、卡波西氏肉瘤、Merkel氏細胞癌、表皮樣癌、鱗狀細胞癌、環境誘導的癌症(包括由石棉所誘發者)、以及其他癌和肉瘤、及所述癌症之組合。
患有包括表現PSMA的轉移癌之癌症的患者可用本文中所述之本發明之抗體治療。癌症可係前列腺癌或前列腺上皮內瘤、結腸直腸癌、胃癌、透明細胞腎癌、膀胱癌、肺癌、鱗狀細胞癌、神經膠質瘤、乳癌、腎臟癌、新生血管病症、透明細胞腎癌(CCRCC)、及胰腺癌、以及各種其他非前列腺癌(包括但不限於腎癌、尿路上皮癌、及往肝臟的腺癌)。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，對象具有實體腫瘤。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，對象具有前列腺腫瘤。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，實體腫瘤係結腸直腸癌。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，實體腫瘤係胃癌。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，實體腫瘤係肺癌。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，實體腫瘤係膀胱癌。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，實體腫瘤係鱗狀細胞癌。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，癌症係透明細胞腎癌(CCRCC)。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，實體腫瘤係乳癌。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，實體腫瘤係神經膠質瘤。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，實體腫瘤係前列腺癌或去勢抗性前列腺癌。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，實體腫瘤係腎臟癌。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，實體腫瘤係胰腺癌。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，實體腫瘤係往肝臟的腺癌。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，癌症係新生血管。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，癌症係腎癌。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，實體腫瘤係尿路上皮癌。
在一些本文所述之本發明實施例中，且在下列編號實施例中每一者的一些實施例中，實體腫瘤係腦癌。
在一些本文所述之實施例中，對象具有表現PSMA的腫瘤。
在一些本文所述之實施例中，對象在腫瘤組織中具有腫瘤浸潤T淋巴球(TIL)。
「數量增加(increased number)」係指當與對照組相比時在個體中有統計顯著的增加。「數量增加」係指例如在使用PSMA抗體或其他治療劑的治療前及治療後，對象(例如患者)中TIL的數目有統計顯著的增加。
在一些本文所述之實施例中，對象的干擾素-γ(IFN-γ)表現或活性增加。
在一些本文所述之實施例中，對象已用抗PSMA抗體治療。
在一些本文所述之實施例中，對象難以用抗PSMA抗體治療。
本文所述之本發明之任何PSMA或雙特異性PSMA X CD3抗體可用於本發明之方法中。
如本文中所述之抗體及其片段亦可以組合療法投予，即，與待治療之疾病或病況的其他相關治療劑組合。因此，在一個實施例中，含抗體之藥劑係與一或多種額外治療劑(諸如化學治療劑)組合。在一些實施例中，其他治療劑係放射性藥劑(諸如鐳-223氯化物)、二級荷爾蒙療法(諸如阿比特龍或恩雜魯胺)、及/或化療(歐洲紫杉醇及卡巴他賽)。此類組合式投予可為同時、分開或依序(以任何順序)進行。針對同時投予，藥劑可視情況而定以一個組成物或以分開的組成物投予。化學治療劑(例如歐洲紫杉醇、卡鉑(carboplatin)、氟達拉濱(fludarabine))、阿比特龍、荷爾蒙療法(例如氟他胺(flutamide)、比卡魯胺(bicalutamide)、尼魯米特(nilutamide)、醋酸環丙孕酮、酮康唑(ketoconazole)、胺魯米特(aminoglutethimide)、阿巴瑞克(abarelix)、地加瑞克(degarelix)、亮丙瑞林(leuprolide)、戈舍瑞林(goserelin)、曲普瑞林(triptorelin)、布舍瑞林(buserelin)、ARN-509)、絲胺酸或酪胺酸激酶抑制劑(例如PI3激酶抑制劑SF1126)(例如拉帕替尼(lapatanib)))、多激酶抑制劑(例如索拉非尼(sorafenib)、舒尼替尼(sunitinib))、VEGF抑制劑(例如貝伐單抗(bevacizumab))、TAK-700、癌症疫苗(例如BPX-101、PEP223)、基於李斯特菌(Listeria)的疫苗、來那度胺(lenalidomide)、TOK-001、IGF-1受體抑制劑(例如西妥木單抗(cixutumumab))、TRC105、極光A激酶(Aurora A kinase)抑制劑(例如MLN8237)、蛋白酶體抑制劑(例如硼替佐米(bortezomib))、OGX-011、放射免疫療法(例如HuJ591-GS)、HDAC抑制劑(例如丙戊酸(valproic acid)、SB939、LBH589)、羥氯喹(hydroxychloroquine)、mTOR抑制 劑(例如依維莫司(everolimus))、乳酸多韋替尼(dovitinib lactate)、二吲哚基甲烷、依法韋侖(efavirenz)、OGX-427、金雀異黃酮(genistein)、IMC-3G3、巴非替尼(bafetinib)、CP-675,206、放射療法、手術、或其組合。
在一個實施例中，提供一種用於治療涉及對象中表現PSMA之細胞的病症之方法，該方法包含向有需要之對象投予治療有效量的雙特異性抗體或片段(諸如本文中所述之PSMA x CD3雙特異性抗體)及進行放射性療法。在一個實施例中，提供一種用於治療或預防癌症之方法，該方法包含向有需要之對象投予治療有效量的雙特異性抗體或片段(諸如本文中所述之PSMA x CD3抗體)及進行放射性療法。放射性療法可包含放射線照射或者提供給病患相關聯之放射性藥品投予。放射線源可位於受治療病患外部或內部(放射線治療例如可為體外放射治療(external beam radiation therapy,EBRT)或近程放射治療(brachytherapy,BT)之形式)。可用於實施此等方法之放射性元素包括例如鐳、銫-137、銥-192、鋂-241、金-198、鈷-57、銅-67、鎝-99、碘-123、碘-131、及銦-111。
本文所述之本發明之抗體可與疫苗組合投予。
例示性疫苗係免疫性試劑(immunogenic agent)，例如癌細胞、純化的腫瘤抗原(包括重組蛋白、抗原表位、胜肽及碳水化合物分子)、透過基因治療遞送給患者的腫瘤抗原、細胞、及用編碼免疫刺激細胞介素的基因轉染的細胞。可使用的例示性疫苗包括黑色素瘤抗原之肽(諸如gp100、MAGE抗原、Trp-2、MART1、及/或酪胺酸酶之肽)、或經轉染以表現細胞介素GM-CSF的腫瘤細胞、基於DNA的疫苗、基於RNA的疫苗、基於李斯特菌(Listeria)的疫苗、及基於病毒轉導的疫苗、肽、或前列腺抗原(例如PSMA、STEAP1、PSCA)、癌症疫苗西普鲁塞-T、或肺癌抗原之肽。癌症疫苗可以是預防性或治療性的。
已設計出許多實驗策略用於針對腫瘤之疫苗接種(請參見Rosenberg,S.,2000,Development of Cancer Vaccines,ASCO Educational Book Spring：60-62；Logothetis,C.,2000,ASCO Educational Book Spring：300-302；Khayat,D.2000,ASCO Educational Book Spring：414-428；Foon,K.2000,ASCO Educational Book Spring：730-738；亦請參見Restifo,N.and Sznol,M.,Cancer Vaccines,Ch.61,pp.3023-3043 in DeVita,V.et al.(eds.),1997,Cancer：Principles and Practice of Oncology.Fifth Edition)。在這些策略之一中，使用自體或同種異體的腫瘤細胞製備疫苗。當該些腫瘤細胞經轉導以表現GM-CSF時，這些細胞疫苗已被顯示是最有效的。GM-CSF已經顯示為腫瘤疫苗接種之抗原呈現的有效活化劑(Dranoff et al.,(1993)Proc Natl Acad Sci U.S.A.90：3539-43)。
本文所述之本發明之抗體可與在腫瘤中或腫瘤上表現的一種或一組重組蛋白及/或胜肽組合投予以產生對這些蛋白質的免疫反應。這些蛋白質通常被免疫系統視為自身抗原，因此對它們是耐受的(tolerant)。腫瘤抗原亦可包括端粒酶蛋白，其係合成染色體端粒所必需的，且在超過85%的人類癌症中表現並僅在有限數量的體細胞組織中表現(Kim et al.,(1994)Science 266：2011-2013)。腫瘤抗原也可以是在癌細胞中或癌細胞上表現的「新抗原」，其係體細胞突變的結果，該體細胞突變改變蛋白質序列或產生兩個不相關序列之融合蛋白(例如費城染色體中的bcr-abl)，或B細胞腫瘤的獨特型。腫瘤抗原可為前列腺特異性抗原(PSA)、間皮素(mesothelin)、前列腺特異性膜抗原(PSMA)、滑膜肉瘤(synovial sarcoma)X2(SSX2)、NKX3.1、前列腺酸性磷酸酶(PAP)、或表皮生長因子受體之抗原表位、或EGFR變異體特有的肽，例如在腫瘤細胞上過度表現之眾所周知的EGFRvIII。
其他腫瘤疫苗可包括來自涉及人類癌症的病毒(例如人類乳突病毒(HPV)、肝炎病毒(HBV和HCV)及卡波西氏皰疹肉瘤病毒(KHSV)、及Epstein-Barr二氏病毒(EBV))的蛋白質。可與本文所述之本發明之抗體組合使用的另一種形式的腫瘤特異性抗原係從腫瘤組織本身單離之純化的熱休克蛋白(HSP)。HSP含有來自腫瘤細胞的蛋白質片段，並且會高效遞送至抗原呈現細胞以誘發腫瘤免疫力(Suot and Srivastava(1995)Science 269：1585-1588；Tamura et al.,(1997)Science 278：117-120)。
樹突細胞(DC)係可用於引發抗原特異性反應的有效抗原呈現細胞。DC可離體產生且載有各種蛋白質及肽抗原以及腫瘤細胞萃取物(Nestle et al.,(1998)Nature Medicine 4：328-332)。DC亦可透過遺傳手段轉導以表現這些腫瘤抗原。DC亦已經直接融合至腫瘤細胞以用於免疫化目的(Kugler et al., (2000)Nature Medicine 6：332-336)。作為一種疫苗接種的方法，DC免疫可與本文所述之本發明之抗體有效地組合以活化更有效的抗腫瘤反應。
在一些本文所述之實施例中，本發明之特異性結合PSMA之抗體或本發明之雙特異性PSMA X CD3抗體係與包含前列腺特異性抗原之肽片段、或編碼前列腺特異性抗原之肽片段之載體的腫瘤疫苗組合投予。
本文所述之本發明之抗體可與標準照護癌症治療組合施用。
本文所述之本發明之抗體可與標準照護癌症化療方案組合施用。在這些情況下，可能可減少投予的化學治療試劑的劑量(Mokyr et al.,(1998)Cancer Research 58：5301-5304)。
在一些本文所述之實施例中，本發明之抗體可與一或多種其他抗體分子、化療、其他抗癌療法(例如標靶抗癌療法或溶瘤藥物)、細胞毒性劑、細胞介素、手術及/或放射程序組合施用。
可與本文中所述之本發明之抗體組合投予的例示性細胞毒性劑包括荷爾蒙抑制劑、抗微管劑(antimicrotubule agent)、拓樸異構酶抑制劑、抗代謝物(anti-metabolite)、有絲分裂抑制劑、烷化劑、蒽環類藥物(anthracycline)、長春花生物鹼類(vinca alkaloid)、嵌入劑、能夠干擾信號轉導路徑的試劑、促進細胞凋亡的試劑、蛋白酶體抑制劑、及放射線(例如局部或全身幅照)。
標準照護治療劑包括安美達錠(anastrozole)(Arimidex®)、比卡魯胺(Casodex®)、博來黴素硫酸鹽(bleomycin sulfate)(Blenoxane®)、白消安(busulfan)(Myleran®)、白消安注射劑(Busulfex®)、卡培他濱(capecitabine)(Xeloda®)、N4-戊氧羰基-5-去氧-5-氟胞苷、卡鉑(Paraplatin®)、卡莫司汀(carmustine)(BiCNU®)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)(Leukeran®)、順鉑(Platinol®)、克拉屈濱(cladribine)(Leustatin®)、環磷醯胺(Cytoxan®或Neosar®)、阿糖胞苷(cytarabine)、胞嘧啶阿拉伯醣(cytosine arabinoside)(Cytosar-U®)、阿糖胞苷脂質體注射劑(DepoCyt®)、達卡巴仁(dacarbazine)(DTIC-Dome®)、放線菌素(dactinomycin)(放線菌素D(Actinomycin D)，Cosmegan)、道諾黴素鹽酸鹽(daunorubicin hydrochloride)(Cerubidine®)、道諾黴素檸檬酸鹽脂質體注射劑(DaunoXome®)、地塞米松(dexamethasone)、歐洲紫杉醇(Taxotere®)、阿黴素鹽酸鹽(doxorubicin hydrochloride)(Adriamycin®, Rubex®)、依託泊苷(etoposide)(Vepesid®)、氟達拉濱磷酸鹽(fludarabine phosphate)(Fludara®)、5-氟尿嘧啶(Adrucil®,Efudex®)、氟他胺(Eulexin®)、替扎他濱(tezacitibine)、吉西他濱(gemcitabine)(二氟去氧胞苷)、羥基脲(Hydrea®)、艾達黴素(idarubicin)(Idamycin®)、異環磷醯胺(ifosfamide)(IFEX®)、愛萊諾迪肯(irinotecan)(Camptosar®)、L-天冬醯胺酸酶(ELSPAR®)、亞葉酸鈣(leucovorin calcium)、美法侖(melphalan)(Alkeran®)、6-巰嘌呤(Purinethol®)、胺甲喋呤(Folex®)、米托蒽醌(mitoxantrone)(Novantrone®)、Mylotarg、紫杉醇(Taxol®)、鳳凰(phoenix)(釔90/MX-DTPA)、噴司他丁(pentostatin)、聚苯丙生(polifeprosan)20與卡莫司汀植入物(Gliadel®)、他莫昔芬檸檬酸鹽(tamoxifen citrate)(Nolvadex®)、替尼泊苷(teniposide)(Vumon®)、6-硫鳥嘌呤、噻替哌(thiotepa)、替拉扎明(tirapazamine)(Tirazone®)、用於注射之拓撲替康鹽酸鹽(topotecan hydrochloride)(Hycamptin®)、長春鹼(vinblastine)(Velban®)、長春新鹼(vincristine)(Oncovin®)、長春瑞濱(vinorelbine)(Navelbine®)、依鲁替尼(ibrutinib)、艾代拉里斯(idelalisib)、及本妥昔單抗維多汀(brentuximab vedotin)。
例示性烷化劑包括氮芥子氣、伸乙亞胺衍生物、烷基磺酸鹽、亞硝基脲(nitrosourea)、及三氮烯：尿嘧啶氮芥(uracil mustard)(Aminouracil Mustard®,Chlorethaminacil®,Demethyldopan®,Desmethyldopan®,Haemanthamine®,Nordopan®,Uracil Nitrogen Mustard®,Uracillost®,Uracilmostaza®,Uramustin®,Uramustine®)、氮芥(chlormethine)(Mustargen®)、環磷醯胺(Cytoxan®,Neosar®,Clafen®,Endoxan®,Procytox®,RevimmuneTM)、異環磷醯胺(Mitoxana®)、美法侖(Alkeran®)、苯丁酸氮芥(Leukeran®)、哌泊溴烷(pipobroman)(Amedel®,Vercyte®)、三乙烯三聚氰胺(triethylenemelamine)(Hemel®,Hexalen®,Hexastat®)、三乙烯硫代磷醯胺(triethylenethiophosphoramine)、替莫唑胺(temozolomide)(Temodar®)、噻替哌(Thioplex®)、白消安(Busilvex®,Myleran®)、卡莫司汀(BiCNU®)、洛莫司汀(lomustine)(CeeNU®)、鏈脲佐菌素(streptozocin)(Zanosar®)、及達卡巴仁(DTIC-Dome®)。額外例示性烷化劑包括：奧沙利鉑(Eloxatin®)；替莫唑胺(Temodar®及Temodal®)；放線菌素(亦稱為放線菌素D、Cosmegan®)；美法侖(亦稱 為L-PAM、L-溶肉瘤素、及苯丙胺酸氮芥、Alkeran®)；六甲蜜胺(Altretamine)(亦稱為六甲基三聚氰胺(HMM)、Hexalen®)；卡莫司汀(BiCNU®)；苯達莫司汀(bendamustine)(Treanda®)；白消安(Busulfex®及Myleran®)；卡鉑(Paraplatin®)；洛莫司汀(亦稱為CCNU、CeeNU®)；順鉑(亦稱為CDDP、Platinol®、及Platinol®-AQ)；苯丁酸氮芥(Leukeran®)；環磷醯胺(Cytoxan®及Neosar®)；達卡巴仁(亦稱為DTIC、DIC、及咪唑甲醯胺、DTIC-Dome®)；六甲蜜胺(Altretamine)(亦稱為六甲基三聚氰胺(HMM)、Hexalen®)；異環磷醯胺(Ifex®)；潑尼莫司汀(prednumustine)；丙卡巴肼(procarbazine)(Matulane®)；甲基二(氯乙基)胺(Mechlorethamine)(亦稱為氮芥子氣、氮芥(mustine)、及甲基二(氯乙基)胺鹽酸鹽(mechloroethamine hydrochloride)、Mustargen®)；鏈脲佐菌素(Zanosar®)；噻替哌(亦稱為硫代磷醯胺(thiophosphoamide)、TESPA、及TSPA、Thioplex®)；環磷醯胺(Endoxan®,Cytoxan®,Neosar®,Procytox®,Revimmune®)；及苯達莫司汀HCl(Treanda®)。
例示性蒽環類藥物(anthracyclines)包括例如阿黴素(doxorubicin)(Adriamycin®及Rubex®)；博來黴素(Lenoxane®)；道諾黴素(道諾黴素鹽酸鹽、道諾黴素(daunomycin)、及紅比黴素鹽酸鹽(rubidomycin hydrochloride)、Cerubidine®)；道諾黴素脂質體(道諾黴素檸檬酸鹽脂質體、DaunoXome®)；米托蒽醌(DHAD,Novantrone®)；表柔比星(EllenceTM)；艾達黴素(Idamycin®,Idamycin PFS®)；絲裂黴素C(Mutamycin®)；格爾德黴素(geldanamycin)；除莠黴素(herbimycin)；近灰黴素(ravidomycin)；及去乙醯近灰黴素(desacetylravidomycin)。
可與本發明之抗體組合使用的例示性長春花生物鹼類包括酒石酸長春瑞濱(vinorelbine tartrate)(Navelbine®)、長春新鹼(Oncovin®)、及長春地辛(Eldisine®)；長春鹼(亦稱為硫酸長春鹼(vinblastine sulfate)、長春花鹼(vincaleukoblastine)及VLB、Alkaban-AQ®、及Velban®)；及長春瑞濱(Navelbine®)。
可與本發明之抗體組合使用、單獨使用、或與其他免疫調節劑組合使用的例示性蛋白酶體抑制劑係硼替佐米(Velcade®)；卡非佐米(carfilzomib)(PX-171-007，即(S)-4-甲基-N一((S)-1-(((S)-4-甲基-1-((R)-2-甲基 環氧乙烷-2-基)-1-側氧戊-2-基)胺基)-1-側氧-3-苯基丙-2-基)-2-((S)-2-(2-嗎啉基乙醯胺基)-4-苯基丁醯胺基)-戊醯胺)；馬瑞佐米(marizomib)(NPI-0052)；檸檬酸依沙佐米(ixazomib citrate)(MLN-9708)；德蘭佐米(delanzomib)(CEP-18770)；及O-甲基-N-[(2-甲基-5-噻唑基)羰基]-L-絲胺醯基-O-甲基-N-[(1S)-2-[(2R)-2-甲基-2-環氧乙烷基]-2-側氧-1-(苯甲基)乙基]-L-絲胺醯胺(ONX-0912)。
在一些本文所述之實施例中，本發明之抗體係與絲胺酸或酪胺酸激酶抑制劑(例如受體酪胺酸激酶(RTK)抑制劑)組合投予。例示性酪胺酸激酶抑制劑包括表皮生長因子(EGF)路徑抑制劑(例如表皮生長因子受體(EGFR)抑制劑)、血管內皮生長因子(VEGF)路徑抑制劑(例如血管內皮生長因子受體(VEGFR)抑制劑(例如VEGFR-1抑制劑、VEGFR-2抑制劑、VEGFR-3抑制劑))、血小板衍生生長因子(PDGF)路徑抑制劑(例如血小板衍生生長因子受體(PDGFR)抑制劑(例如PDGFR-β抑制劑))、RAF-1抑制劑、KIT抑制劑及RET抑制劑。在一些實施例中，第二治療劑係阿西替尼(axitinib)(AG013736)、伯舒替尼(bosutinib)(SKI-606)、西地尼布(cediranib)(RECENTINTM,AZD2171)、達沙替尼(dasatinib)(SPRYCEL®,BMS-354825)、厄洛替尼(erlotinib)(TARCEVA®)、吉非替尼(gefitinib)(IRESSA®)、伊馬替尼(imatinib)(Gleevec®,CGP57148B,STI-571)、拉帕替尼(lapatinib)(TYKERB®,TYVERB®)、來他替尼(lestaurtinib)(CEP-701)、來那替尼(neratinib)(HKI-272)、尼羅替尼(nilotinib)(TASIGNA®)、司馬沙尼(semaxanib)(司馬西尼(semaxinib)、SU5416)、舒尼替尼(sunitinib)(SUTENT®,SU11248)、托西尼布(toceranib)(PALLADIA®)、凡德他尼(vandetanib)(ZACTIMA®,ZD6474)、瓦他拉尼(vatalanib)(PTK787,PTK/ZK)、曲妥珠單抗(trastuzumab)(HERCEPTIN®)、貝伐單抗(bevacizumab)(AVASTIN®)、利妥昔單抗(rituximab)(RITUXAN®)、西妥昔單抗(cetuximab)(ERBITUX®)、帕尼單抗(panitumumab)(VECTIBIX®)、蘭尼單抗(ranibizumab)(Lucentis®)、尼羅替尼(nilotinib)(TASIGNA®)、索拉非尼(sorafenib)(NEXAVAR®)、阿來組單抗(alemtuzumab)(CAMPATH®)、吉妥單抗奧佐米星(gemtuzumab ozogamicin)(MYLOTARG®)、ENMD-2076、PCI-32765、AC220、乳酸多韋替尼(TKI258,CHIR-258)、BIBW 2992(TOVOKTM)、SGX523、PF-04217903、PF-02341066、PF-299804、BMS-777607、ABT-869、 MP470、BIBF 1120(VARGATEF®)、AP24534、JNJ-26483327、MGCD265、DCC-2036、BMS-690154、CEP-11981、替沃紮尼(tivozanib)(AV-951)、OSI-930、MM-121、XL-184、XL-647、XL228、AEE788、AG-490、AST-6、BMS-599626、CUDC-101、PD153035、培利替尼(pelitinib)(EKB-569)、凡德他尼(vandetanib)(zactima)、WZ3146、WZ4002、WZ8040、ABT-869(利尼伐尼(linifanib))、AEE788、AP24534(普納替尼(ponatinib))、AV-951(替沃紮尼)、阿西替尼、BAY 73-4506(瑞戈非尼(regorafenib))、布立尼布丙胺酸鹽(brivanib alaninate)(BMS-582664)、布立尼布(BMS-540215)、西地尼布(AZD2171)、CHIR-258(多韋替尼)、CP 673451、CYC116、E7080、Ki8751、馬賽替尼(masitinib)(AB1010)、MGCD-265、二磷酸莫替沙尼(motesanib diphosphate)(AMG-706)、MP-470、OSI-930、鹽酸帕唑帕尼(Pazopanib Hydrochloride)、PD173074、甲苯磺酸索拉非尼(Sorafenib Tosylate)(Bay 43-9006)、SU 5402、TSU-68(SU6668)、瓦他拉尼、XL880(GSK1363089,EXEL-2880)。所選之酪胺酸激酶抑制劑係選自舒尼替尼(sunitinib)、厄洛替尼(erlotinib)、吉非替尼(gefitinib)、或索拉非尼(sorafenib)。在一些實施例中，EGFR抑制劑係雙特異性EGFRc-Met抗體(EM-1 mAb)，其包含SEQ ID NO：249、250、251、及252之重鏈及輕鏈(US2014/0141000)。
在一些實施例中，本發明之抗體係與血管內皮生長因子(VEGF)受體抑制劑組合投予，該等受體抑制劑包括貝伐單抗(Avastin®)、阿西替尼(Inlyta®)；布立尼布丙胺酸鹽(BMS-582664，(S)-((R)-1-(4-(4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基氧基)-5-甲基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三
Figure 108118091-A0202-12-0102-40
-6-基氧基)丙-2-基)2-胺基丙酸酯)；索拉非尼(Nexavar®)；帕唑帕尼(Votrient®)；蘋果酸舒尼替尼(sunitinib malate)(Sutent®)；西地尼布(AZD2171,CAS 288383-20-1)；Vargatef(BIBF1120,CAS 928326-83-4)；弗雷替尼(foretinib)(GSK1363089)；替拉替尼(telatinib)(BAY57-9352,CAS 332012-40-5)；阿帕替尼(apatinib)(YN968D1,CAS 811803-05-1)；伊馬替尼(Gleevec®)；普納替尼(AP24534,CAS 943319-70-8)；替沃紮尼(AV951,CAS 475108-18-0)；瑞戈非尼(BAY73-4506,CAS 755037-03-7)；瓦他拉尼二鹽酸鹽(Vatalanib dihydrochloride)(PTK787,CAS 212141-51-0)；布立尼布(BMS-540215,CAS 649735-46-6)；凡德他尼(Caprelsa®或AZD6474)；二磷酸 莫替沙尼(AMG706，CAS 857876-30-3，N-(2,3-二氫-3,3-二甲基-1H-吲哚-6-基)-2-[(4-吡啶基甲基)胺基]-3-吡啶羧醯胺，描述於PCT公開號WO 02/066470)；多韋替尼二乳酸(dovitinib dilactic acid)(TKI258,CAS 852433-84-2)；利尼伐尼(linfanib)(ABT869,CAS 796967-16-3)；卡博替尼(cabozantinib)(XL184,CAS 849217-68-1)；來他替尼(CAS 111358-88-4)；N-[5-[[[5-(1,1-二甲基乙基)-2-
Figure 108118091-A0202-12-0103-41
唑基]甲基]硫基]-2-噻唑基]-4-哌啶甲醯胺(BMS38703,CAS 345627-80-7)；(3R,4R)-4-胺基-1-((4-((3-甲氧苯基)胺基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三
Figure 108118091-A0202-12-0103-42
-5-基)甲基)哌啶-3-醇(BMS690514)；N-(3,4-二氯-2-氟苯基)-6-甲氧-7-[[(3aα,5β,6aα)-八氫-2-甲環戊[c]吡咯-5-基]甲氧基]-4-喹唑啉胺(XL647,CAS 781613-23-8)；4-甲-3-[[1-甲-6-(3-吡啶基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基]胺基]-N-[3-(三氟甲基)苯基]-苯甲醯胺(BHG712,CAS 940310-85-0)；及阿柏西普(aflibercept)(Eylea®)。
例示性VEGF抑制劑包括結合至與下列相同的表位之單株抗體：藉由融合瘤ATCC HB 10709所產生的單株抗VEGF抗體A4.6.1；根據Presta et al.,(1997)Cancer Res 57：4593-4599產生的重組人源化抗VEGF單株抗體。在一個實施例中，抗VEGF抗體係貝伐單抗(BV)，其亦稱為rhuMAb VEGF或AVASTIN®。其包含突變人類IgG1架構區及抗原結合互補決定區(來自阻斷人類VEGF與其受體之結合的鼠類抗hVEGF單株抗體A.4.6.1)。貝伐單抗及其他人源化抗VEGF抗體係進一步描述於美國專利第6,884,879號中。額外抗VEGF抗體包括G6或B20系列抗體(例如G6-31、B20-4.1)，如國際專利公開號WO2005/012359及WO2005/044853中所述。至於額外抗體，參見下列文獻：美國專利第7,060,269號、第6,582,959號、第6,703,020號、第6,054,297號、WO98/45332、WO 96/30046、WO94/10202、EP 0666868B1、美國專利申請公開號US2006009360、US20050186208、US20030206899、US20030190317、US20030203409、及US20050112126；及Popkov et al.,(2004)Journal of Immunological Methods 288：149-164。其他抗體包括結合至人類VEGF上的功能性表位之抗體，該功能性表位包含殘基F17、M18、D19、Y21、Y25、Q89、191、K101、E103、及C104，或者替代地包含殘基F17、Y21、Q22、Y25、D63、183、及Q89。
在一些本文所述之實施例中，本發明之抗體係與PI3K抑制劑組合投予。在一個實施例中，PI3K抑制劑係PI3K之δ和γ異構體的抑制劑。在另一個實施例中，PI3K抑制劑係PI3K之β異構體的抑制劑。可使用的例示性PI3K抑制劑係被描述於例如WO 2010/036380、WO 2010/006086、WO 09/114870、WO 05/113556、GSK 2126458、GDC-0980、GDC-0941、Sanofi XL147、XL756、XL147、PF-46915032、BKM 120、CAL-101、CAL 263、SF1126、PX-886、及雙重PI3K抑制劑(例如Novartis BEZ235)。
在一些本文所述之實施例中，本發明之抗體係與mTOR抑制劑組合投予，例如一或多種選自下列之一或多者的mTOR抑制劑：雷帕黴素(rapamycin)、坦西莫司(temsirolimus)(TORISEL®)、AZD8055、BEZ235、BGT226、XL765、PF-4691502、GDC0980、SF1126、OSI-027、GSK1059615、KU-0063794、WYE-354、Palomid 529(P529)、PF-04691502、或PKI-587、達弗莫司(ridaforolimus)(正式名稱為地磷莫司(deferolimus)，(1R,2R,4S)-4-[(2R)-2[(1R,9S,12S,15R,16E,18R,19R,21R,23S,24E,26E,28Z,30S,32S,35R)-1,18-二羥基-19,30-二甲氧基-15,17,21,23,29,35-六甲基-2,3,10,14,20-五側氧-11,36-二氧雜-4-氮雜三環[30.3.1.04,9]三十六烷-16,24,26,28-四烯-12-基]丙基]-2-甲氧基環己基二甲基次磷酸酯，亦稱為AP23573及MK8669，並描述於PCT公開號WO 03/064383)；依維莫司(everolimus)(Afinitor®或RAD001)；雷帕黴素(rapamycin)(AY22989,Sirolimus®)；西馬普莫(simapimod)(CAS 164301-51-3)；坦西莫司(emsirolimus)，(5-{2,4-雙[(3S)-3-甲基嗎啉-4-基]吡啶并[2,3-d]嘧啶-7-基}-2-甲氧苯基)甲醇(AZD8055)；2-胺-8-[反4-(2-羥乙氧基)環己基]-6-(6-甲氧-3-吡啶基)-4-甲基吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(PF04691502,CAS 1013101-36-4)；及N2-[1,4-二側氧-4-[[4-(4-側氧-8-苯-4H-1-苯并哌喃-2-基)嗎啉鎓-4-基]甲氧基]丁基]-L-精胺醯基甘胺醯基-L-α-天冬胺醯基-L-絲胺酸-(SEQ ID NO：237)內鹽(SF1126,CAS 936487-67-1)、及XL765。
在一些本文所述之實施例中，本發明之抗體係與BRAF抑制劑組合投予，例如GSK2118436、RG7204、PLX4032、GDC-0879、PLX4720、及甲苯磺酸索拉非尼(Bay 43-9006)。
在一些本文所述之實施例中，本發明之抗體係與免疫調節劑組合投予。靶向免疫檢查點(諸如程式性細胞死亡蛋白1(PD1)、程式性細胞死亡1配體1(PDL1)、及細胞毒性T淋巴球抗原4(CTLA4))已藉由阻斷免疫抑制性信號，並使患者能夠產生有效抗腫瘤反應，而在多種癌症中達到顯著效益。在一些實施例中，本發明之抗體係與抗PD1(例如尼沃魯單抗(nivolumab))、抗PDL(例如MDX-1105)、或抗CTLA4(例如伊匹單抗(ipilimumab))組合投予。促效性CD40抗體(稱為αCD40)或CD40配體刺激免疫反應及靶向腫瘤的能力意味著，此類試劑有望成為癌症免疫治療劑。在一些實施例中，本發明之抗體係與抗CD40(例如SGN-40、CP-870,893)或抗CD40L(例如BG9588)組合投予。
在一些本文所述之實施例中，本發明之抗體係與MEK抑制劑組合投予。
在一些本文所述之實施例中，與MEK抑制劑組合投予的本發明之抗體係用於治療前列腺癌、黑色素瘤、結腸直腸癌、非小細胞肺癌、卵巢癌、乳癌、前列腺癌、胰腺癌、血液惡性疾病、或腎細胞癌。在某些實施例中，腫瘤組織或癌細胞具有BRAF突變(例如BRAF V600E突變)、BRAF野生型、KRAS野生型、或活化KRAS突變。癌症可處於早期、中期、或晚期。可以組合使用任何MEK抑制劑，其包括ARRY-142886、G02442104(亦稱為GSK1120212)、RDEA436、RDEA119/BAY 869766、AS703026、G00039805(亦稱為AZD-6244或司美替尼(selumetinib))、BIX 02188、BIX 02189、CI-1040(PD-184352)、PD0325901、PD98059、U0126、GDC-0973([3,4-二氟-2-[(2-氟-4-碘苯基)胺基]苯基][3-羥基-3-(25)-2-哌啶基-1-吖呾基]-甲酮)、G-38963、G02443714(亦稱為AS703206)、或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物。MEK抑制劑的額外實例係揭示於WO 2013/019906、WO 03/077914、WO 2005/121142、WO 2007/04415、WO 2008/024725、及WO 2009/085983中。
在一些本文所述之實施例中，本發明之抗體係與JAK2抑制劑組合投予，例如CEP-701、INCB18424、CP-690550(他索替尼(tasocitinib))。
在一些本文所述之實施例中，本發明之抗體係與紫杉醇或紫杉醇試劑組合投予，例如TAXOL®、結合蛋白質的紫杉醇(protein-bound paclitaxel) (例如ABRAXANE®)。例示性紫杉醇試劑包括與奈米顆粒白蛋白結合的紫杉醇(ABRAXANE，由Abraxis Bioscience銷售)、與二十二碳六烯酸結合的紫杉醇(DHA紫杉醇、Taxoprexin，由Protarga銷售)、與聚麩胺酸鹽結合的紫杉醇(PG紫杉醇、聚麩胺酸紫杉醇(paclitaxel poliglumex)、CT-2103、XYOTAX，由Cell Therapeutic銷售)、腫瘤活化型前藥(TAP)、ANG105(結合三個紫杉醇分子的Angiopep-2，由ImmunoGen銷售)、紫杉醇EC-1(與erbB2識別肽EC-1結合的紫杉醇；參見Li et al.,Biopolymers(2007)87：225-230)、及與葡萄糖偶聯的紫杉醇(例如2'-紫杉醇2-葡萄哌喃糖苷琥珀酸甲酯，參見Liu et al.,(2007)Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 17：617-620)。
在一些本文所述之實施例中，本發明之抗體係與細胞免疫療法(例如Provenge(例如西普鲁塞(sipuleucel)))組合投予，並可選地與環磷醯胺組合投予。
可與本發明之抗體組合使用來治療前列腺癌的例示性治療劑包括化學治療劑(例如歐洲紫杉醇、卡鉑、氟達拉濱)、阿比特龍、荷爾蒙療法(例如氟他胺、比卡魯胺、尼魯米特、醋酸環丙孕酮、酮康唑、胺魯米特、阿巴瑞克、地加瑞克、亮丙瑞林、戈舍瑞林、曲普瑞林、布舍瑞林)、酪胺酸激酶抑制劑(例如雙激酶抑制劑(例如拉帕替尼))、多激酶抑制劑(例如索拉非尼、舒尼替尼)、VEGF抑制劑(例如貝伐單抗)、TAK-700、癌症疫苗(例如BPX-101、PEP223)、來那度胺、TOK-001、IGF-1受體抑制劑(例如西妥木單抗)、TRC105、極光A激酶抑制劑(例如MLN8237)、蛋白酶體抑制劑(例如硼替佐米)、OGX-011、放射免疫療法(例如HuJ591-GS)、HDAC抑制劑(例如丙戊酸、SB939、LBH589)、羥氯喹、mTOR抑制劑(例如依維莫司)、乳酸多韋替尼、二吲哚基甲烷、依法韋侖、OGX-427、金雀異黃酮、IMC-3G3、巴非替尼、CP-675,206、ARN-509、放射療法、手術、或其組合。
可與本發明之抗體組合使用來治療胰腺癌的例示性治療劑包括化學治療劑，例如紫杉醇或紫杉醇試劑(例如紫杉醇配方(諸如TAXOL)、以白蛋白穩定的奈米顆粒紫杉醇配方(例如ABRAXANE)或脂質體紫杉醇配方)；吉西他濱(gemcitabine)(例如單獨吉西他濱或與AXP107-11的組合)；其他的化學治療劑，諸如奧沙利鉑(oxaliplatin)、5-氟尿嘧啶、卡培他濱 (capecitabine)、盧比替康(rubitecan)、表柔比星鹽酸鹽(epirubicin hydrochloride)、NC-6004、順鉑、歐洲紫杉醇(docetaxel)(例如TAXOTERE)、絲裂黴素(mitomycin)C、異環磷醯胺；干擾素；酪胺酸激酶抑制劑(例如EGFR抑制劑(例如厄洛替尼(erlotinib)、帕尼單抗(panitumumab)、西妥昔單抗(cetuximab)、尼妥珠單抗(nimotuzumab)))；HER2/neu受體抑制劑(例如曲妥珠單抗(trastuzumab))；雙激酶抑制劑(例如伯舒替尼(bosutinib)、塞卡替尼(saracatinib)、拉帕替尼(lapatinib)、凡德他尼(vandetanib))；多激酶抑制劑(例如索拉非尼(sorafenib)、舒尼替尼(sunitinib)、XL184、帕唑帕尼(pazopanib))；VEGF抑制劑(例如貝伐單抗(bevacizumab)、AV-951、布立尼布(brivanib))；放射免疫療法(例如XR303)；癌症疫苗(例如GVAX、存活素(survivin)胜肽)；COX-2抑制劑(例如塞來考昔(celecoxib))；IGF-1受體抑制劑(例如AMG 479、MK-0646)；mTOR抑制劑(例如依維莫司、坦西莫司)；IL-6抑制劑(例如CNTO 328)；週期蛋白依賴性激酶抑制劑(例如P276-00、UCN-01)；改變能量代謝導向(Altered Energy Metabolism-Directed,AEMD)化合物(例如CPI-613)；HDAC抑制劑(例如伏立諾他(vorinostat))；TRAIL受體2(TR-2)促效劑(例如克那圖單抗(conatumumab))；MEK抑制劑(例如AS703026、司美替尼(selumetinib)、GSK1120212)；Raf/MEK雙激酶抑制劑(例如RO5126766)；Notch傳訊抑制劑(例如MK0752)；單株抗體-抗體融合蛋白(例如L19IL2)；薑黃素(curcumin)；HSP90抑制劑(例如坦螺旋黴素(tanespimycin)、STA-9090)；rIL-2；地尼白介素(denileukin diftitox)；拓樸異構酶1抑制劑(例如愛萊諾迪肯(irinotecan)、PEP02)；斯他汀類藥物(statin)(例如辛伐他汀(simvastatin))；因子VIIa抑制劑(例如PCI-27483)；AKT抑制劑(例如RX-0201)；缺氧活化的前藥(例如TH-302)；鹽酸二甲雙胍，即γ-分泌酶抑制劑(例如R04929097)；核糖核苷酸還原酶抑制劑(例如3-AP)；免疫毒素(例如HuC242-DM4)；PARP抑制劑(例如KU-0059436、維利帕尼(veliparib))；CTLA-4抑制劑(例如CP-675,206、伊匹單抗)；AdV-tk療法；蛋白酶體抑制劑(例如硼替佐米(Velcade)、NPI-0052)；噻唑烷二酮(thiazolidinedione)(例如吡格列酮(pioglitazone))；NPC-1C；極光激酶抑制劑(例如R763/AS703569)、CTGF抑制劑(例如FG-3019)；siG12D LODER； 以及放射療法(例如螺旋斷層療法(tomotherapy)、立體定位放射、質子療法)、手術、及其組合。在某些實施例中，紫杉醇或紫杉醇試劑與吉西他濱(gemcitabine)之組合可與本發明之抗體一起使用。
可與本發明之抗體組合使用來治療小細胞肺癌的例示性治療劑包括化學治療劑(例如依託泊苷、卡鉑、順鉑、奧沙利鉑、愛萊諾迪肯、拓撲替康(topotecan)、吉西他濱、脂質體SN-38、苯達莫司汀、替莫唑胺、貝洛替康(belotecan)、NK012、FR901228、夫拉平度(flavopiridol))；酪胺酸激酶抑制劑(例如EGFR抑制劑(例如厄洛替尼、吉非替尼、西妥昔單抗、帕尼單抗)；多激酶抑制劑(例如索拉非尼、舒尼替尼)；VEGF抑制劑(例如貝伐單抗、凡德他尼)；癌症疫苗(例如GVAX)；Bcl-2抑制劑(例如奧利默森鈉(oblimersen sodium)、ABT-263)；蛋白酶體抑制劑(例如硼替佐米(Velcade)、NPI-0052)、紫杉醇或紫杉醇試劑；歐洲紫杉醇(docetaxel)；IGF-1受體抑制劑(例如AMG 479)；HGF/SF抑制劑(例如AMG 102、MK-0646)；氯喹(chloroquine)；極光激酶抑制劑(例如MLN8237)；放射免疫療法(例如TF2)；HSP90抑制劑(例如坦螺旋黴素(tanespimycin)、STA-9090)；mTOR抑制劑(例如，依維莫司)；Ep-CAM/CD3雙特異性抗體(例如MT110)；COX-2抑制劑(例如CX-4945)；HDAC抑制劑(例如貝林司他(belinostat))；SMO拮抗劑(例如BMS 833923)；肽癌症疫苗、及放射療法(例如強度調控放射療法(IMRT)、低分次性放射療法、缺氧導引放射療法(hypoxia-guided radiotherapy))、手術、及其組合。
可與本發明之抗體組合使用來治療非小細胞肺癌的例示性治療劑包括化學治療劑(例如長春瑞濱、順鉑、歐洲紫杉醇、培美曲塞二鈉(pemetrexed disodium)、依託泊苷、吉西他濱、卡鉑、脂質體SN-38、TLK286、替莫唑胺、拓撲替康、培美曲塞二鈉、阿扎胞苷(azacitidine)、愛萊諾迪肯、喃氟啶-吉美拉西-奧替拉西鉀(tegafur-gimeracil-oteracil potassium)、沙帕他濱(sapacitabine))；酪胺酸激酶抑制劑(例如EGFR抑制劑(例如厄洛替尼、吉非替尼、西妥昔單抗、帕尼單抗、耐昔妥珠單抗(necitumumab)、PF-00299804、尼妥珠單抗(nimotuzumab)、RO5083945))、MET抑制劑(例如PF-02341066、ARQ 197)、PI3K激酶抑制劑(例如XL147、GDC-0941)、 Raf/MEK雙激酶抑制劑(例如RO5126766)、PI3K/mTOR雙激酶抑制劑(例如XL765)、SRC抑制劑(例如達沙替尼)、雙重抑制劑(例如BIBW 2992、GSK1363089、ZD6474、AZD0530、AG-013736、拉帕替尼、MEHD7945A、利尼伐尼)、多激酶抑制劑(例如索拉非尼、舒尼替尼、帕唑帕尼、AMG 706、XL184、MGCD265、BMS-690514、R935788)、VEGF抑制劑(例如恩度(endostar)、內皮抑素(endostatin)、貝伐單抗、西地尼布、BIBF 1120、阿西替尼、替沃紮尼、AZD2171)、癌症疫苗(例如BLP25脂質體疫苗、GVAX、重組DNA、及表現L523S蛋白的腺病毒)、Bcl-2抑制劑(例如奧利默森鈉)、蛋白酶體抑制劑(例如硼替佐米、卡非佐米、NPI-0052、MLN9708)、紫杉醇或紫杉醇試劑、歐洲紫杉醇、IGF-1受體抑制劑(例如西妥木單抗、MK-0646、OSI 906、CP-751,871、BIIB022)、羥氯喹、HSP90抑制劑(例如坦螺旋黴素、STA-9090、AUY922、XL888)、mTOR抑制劑(例如依維莫司、坦西莫司、達弗莫司)、Ep-CAM/CD3雙特異性抗體(例如MT110)、CK-2抑制劑(例如CX-4945)、HDAC抑制劑(例如MS 275、LBH589、伏立諾他、丙戊酸、FR901228)、DHFR抑制劑(例如普拉曲沙(pralatrexate))、類視色素(例如貝沙羅汀(bexarotene)、維A酸(tretinoin))、抗體-藥物偶聯物(例如SGN-15)、雙膦酸酯(例如唑來磷酸(zoledronic acid))、癌症疫苗(例如貝拉金普-L(belagenpumatucel-L))、低分子量肝素(LMWH)(例如亭紮肝素(tinzaparin)、依諾肝素(enoxaparin))、GSK1572932A、褪黑激素、塔乳鐵蛋白(talactoferrin)、地美司鈉(dimesna)、拓撲異構酶抑制劑(例如胺柔比星(amrubicin)、依託泊苷、卡侖尼替星(karenitecin))、奈非那韋(nelfinavir)、西侖吉肽(cilengitide)、ErbB3抑制劑(例如MM-121、U3-1287)、存活素(survivin)抑制劑(例如YM155、LY2181308)、甲磺酸艾日布林(eribulin mesylate)、COX-2抑制劑(例如塞來昔布(celecoxib))、培非格司亭(pegfilgrastim)、Polo樣激酶1(Polo-like kinase 1)抑制劑(例如BI 6727)、TRAIL受體2(TR-2)促效劑(例如CS-1008)、CNGRC肽(SEQ ID NO：225)-TNFα偶聯物、二氯乙酸酯(DCA)、HGF抑制劑(例如SCH 900105)、SAR240550、PPAR-γ促效劑(例如CS-7017)、γ-分泌酶抑制劑(例如RO4929097)、表觀遺傳治療(epigenetic therapy)(例如5-阿扎胞苷)、硝化甘油、MEK抑制劑(例如AZD6244)、週 期蛋白依賴性激酶抑制劑(例如UCN-01)、膽固醇-Fus1、抗微管蛋白劑(例如E7389)、法尼基(farnesyl)-OH-轉移酶抑制劑(例如洛那法尼(lonafarnib))、免疫毒素(例如BB-10901、SS1(dsFv)PE38)、磺達肝癸(fondaparinux)、血管破壞劑(例如AVE8062)、PD-L1抑制劑(例如MDX-1105、MDX-1106)、β-葡聚糖、NGR-hTNF、EMD 521873、MEK抑制劑(例如GSK1120212)、埃博黴素(epothilone)類似物(例如伊沙匹隆(ixabepilone))、紡錘體驅動蛋白(kinesin-spindle)抑制劑(例如4SC-205)、端粒靶向劑(例如KML-001)、P70路徑抑制劑(例如LY2584702)、AKT抑制劑(例如MK-2206)、血管生成抑制劑(例如來那度胺)、Notch傳訊抑制劑(例如OMP-21M18)、如在US2014/0141000A1中所述之EGFR/c-Met雙特異性抗體EM-1、放射療法、手術、及其組合。
可與本發明之抗體組合使用來治療卵巢癌的例示性治療劑包括化學治療劑(例如紫杉醇或紫杉醇試劑；歐洲紫杉醇(docetaxel)；卡鉑(carboplatin)；吉西他濱(gemcitabine)；阿黴素(doxorubicin)；拓撲替康(topotecan)；順鉑(cisplatin)；愛萊諾迪肯、TLK286、異環磷醯胺、奧拉帕尼(olaparib)、奧沙利鉑、美法侖、培美曲塞二鈉(pemetrexed disodium)、SJG-136、環磷醯胺、依託泊苷、地西他濱(decitabine)；飢餓肽(ghrelin)拮抗劑(例如AEZS-130)、免疫療法(例如APC8024、奧戈伏單抗(oregovomab)、OPT-821)、酪胺酸激酶抑制劑(例如EGFR抑制劑(例如厄洛替尼)、雙重抑制劑(例如E7080)、多激酶抑制劑(例如AZD0530、JI-101、索拉非尼、舒尼替尼、帕唑帕尼)、ON 01910.Na)、VEGF抑制劑(例如貝伐單抗、BIBF 1120、西地尼布、AZD2171)、PDGFR抑制劑(例如IMC-3G3)、紫杉醇、拓樸異構酶抑制劑(例如卡侖尼替星、愛萊諾迪肯)、HDAC抑制劑(例如丙戊酸、伏立諾他)、葉酸受體抑制劑(例如法利珠單抗(farletuzumab))、血管生成素(angiopoietin)抑制劑(例如AMG 386)、埃博黴素類似物(例如伊沙匹隆)、蛋白酶體抑制劑(例如卡非佐米)、IGF-1受體抑制劑(例如OSI906、AMG 479)、PARP抑制劑(例如維利帕尼、AG014699、依尼帕瑞(iniparib)、MK-4827)、極光激酶抑制劑(例如MLN8237、ENMD-2076)、血管生成抑制劑(例如來那度胺)、DHFR抑制劑(例如普拉曲沙(pralatrexate))、放射免 疫治療劑(例如Hu3S193)、斯他汀類藥物(例如洛伐他汀(lovastatin))、拓撲異構酶1抑制劑(例如NKTR-102)、癌症疫苗(例如p53合成長肽疫苗、自體OC-DC疫苗)、mTOR抑制劑(例如坦西莫司、依維莫司)、BCR/ABL抑制劑(例如伊馬替尼)、ET-A受體拮抗劑(例如ZD4054)、TRAIL受體2(TR-2)促效劑(例如CS-1008)、HGF/SF抑制劑(例如AMG 102)、EGEN-001、Polo樣激酶1抑制劑(例如BI 6727)、γ-分泌酶抑制劑(例如RO4929097)、Wee-1抑制劑(例如MK-1775)、抗微管蛋白劑(例如長春瑞濱、E7389)、免疫毒素(例如地尼白介素(denileukin diftitox))、SB-485232、血管破壞劑(例如AVE8062)、整合素抑制劑(例如EMD 525797)、紡錘體驅動蛋白抑制劑(例如4SC-205)、Revlimid、HER2抑制劑(例如MGAH22)、ErrB3抑制劑(例如MM-121)、放射療法、及其組合。
可與本發明之抗體組合使用來治療腎癌(例如腎細胞癌(RCC)或轉移性RCC)的例示性治療劑包括基於免疫的策略(例如介白素-2或干擾素-α)、標靶劑(例如VEGF抑制劑，諸如對VEGF的單株抗體，例如貝伐單抗(Rini et al.,(2010)J Clin Oncol 28(13)：2137-2143))；VEGF酪胺酸激酶抑制劑，諸如舒尼替尼、索拉非尼、阿西替尼、及帕唑帕尼(綜述於Pal et al.,(2014)Clin Advances in Hematology & Oncology 12(2)：90-99中)；RNAi抑制劑、或VEGF傳訊的下游介質之抑制劑，例如哺乳動物雷帕黴素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)之抑制劑(例如依維莫司及坦西莫司)(Hudes et al.,(2007)N Engl J Med 356(22)：2271-2281,Motzer et al.,(2008)Lancet 372：449-456)。
PSMA特異性抗體套組
本文中所述者係包括所揭示之PSMA特異性抗體或其抗原結合片段的套組。所述套組可用來進行使用本文中所提供之PSMA特異性抗體或抗原結合片段之方法、或者所屬領域中具有通常知識者已知的其他方法。在一些實施例中，所述套組可包括本文中所述之抗體或抗原結合片段、及用於偵測生物樣本中PSMA之存在的試劑。因此，所述套組可包括本文中所述之抗體(或其抗原結合片段)之一或多者及用於容納未使用時之該抗體或片段之容器、該 抗體或片段之使用說明、固定至固相撐體(solid support)之抗體或片段、及/或該抗體或片段之可偵測標示形式，如本文中所述。
本發明的一個實施例係一種套組，其包含本發明之特異性結合PSMA之抗體。
本發明的另一個實施例一種套組，其包含本發明之雙特異性PSMA X CD3抗體，該抗體包含特異性結合PSMA之第一結構域、及特異性結合CD3之第二結構域。
該套組可用於治療用途及用作為診斷套組。
套組可用於偵測生物樣本中PSMA、CD3、或PSMA及CD3的存在。
在一些實施例中，該套組包含本文所述之本發明之抗體及用於檢測該抗體的試劑。該套組可包括一或多種其他元件，包括：使用說明書；其他試劑，例如標記、治療劑、或用於將抗體與標記或治療劑或放射防護組合物螯合(或偶合)的試劑；用於製備投予用抗體的裝置或其他材料；醫藥上可接受的載劑；及用於投予至對象的裝置或其他材料。
在一些實施例中，該套組包含在容器中的本發明之抗體及使用該套組的說明書。
在一些實施例中，該套組中的抗體被標記。
在一些實施例中，套組包含抗PSMA抗體PSMB119、PSMB120、PSMB121、PSMB122、PSMB123、PSMB87、PSMB126、PSMB127、PSMB128、PSMB129、PSMB130、PSMB120、PSMB121、PSMB122、PSMB123、PSMB127、PSMB128、PSMB130、PSMB344、PSMB345、PSMB346、PSMB347、PSMB349、PSMB358、PSMB359、PSMB360、PSMB361、PSMB362、PSMB363、及PSMB365。
在一些實施例中，套組包含雙特異性PSMA X CD3抗體、PS3B22、PS3B23、PS3B25、PS3B27、PS3B28、或PS3B30。
偵測PSMA、或PSMA及CD3之方法
本文中所述之本發明的一個實施例係一種在樣本中偵測PSMA之方法，其包含獲得該樣本、使該樣本與本發明之特異性結合PSMA的拮抗性抗體接觸、及偵測該樣本中結合至PSMA的抗體。
本文中所述之本發明的一個實施例係一種在樣本中偵測PSMA及CD3之方法，其包含獲得該樣本、使該樣本與本發明之包含特異性結合PSMA之第一結構域及特異性結合CD3之第二結構域的雙特異性抗體接觸、及偵測該樣本中結合至PSMA及CD3的抗體。
在一些本文所述之實施例中，樣本可衍生自尿液、血液、血清、血漿、唾液、腹水、循環細胞、循環腫瘤細胞、非為組織相關聯之細胞(即游離細胞)、組織(例如手術切除之腫瘤組織、活檢切片(包括細針穿刺))、組織標本、及類似者。
可使用已知方法偵測本文中所述之本發明之結合至PSMA、或PSMA及CD3的抗體。例示性方法包括使用螢光或化學發光標記或放射性標記直接標記該抗體，或將本發明之抗體附接至易於偵測的部分，諸如生物素、酶、或表位標籤。例示性標記及部分係釕、111In-DOTA、111In-二乙烯三胺五乙酸(DTPA)、辣根過氧化酶、鹼性磷酸酶及β-半乳糖苷酶、多組胺酸(HIS標籤)、吖啶染料、花青(cyanine)染料、螢光酮(fluorone)染料、
Figure 108118091-A0202-12-0113-43
(oxazin)染料、啡啶染料、玫瑰紅染料、及Alexafluor®染料。
本發明之抗體可在各種檢定中使用以偵測樣本中的PSMA、或PSMA及CD3。例示性檢定係西方墨點分析、放射免疫檢定、表面電漿共振、免疫沉澱法、平衡透析、免疫擴散法、電致化學發光(ECL)免疫檢定、免疫組織化學法、螢光活化細胞分選(FACS)或ELISA檢定。
實施例
1)一種經單離之重組抗PSMA抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或抗原結合片段(i)結合至表現重組黑猩猩(Pan troglodytes)PSMA之細胞，其中與細胞之該結合係藉由流動式細胞測量術來測量，且(ii)以約30 nM或更小之親和力結合重組黑猩猩PSMA胞外域(SEQ ID NO：4)，其中該親和力係藉由Proteon XPR36表面電漿共振檢定來測量。
2)實施例1之抗體，其中該抗體具有下列性質中之一者、二者、三者、或四者：
a)以20nM或更小的所計算EC50結合LNCaP細胞，並以40nM或更小的所計算EC50結合食蟹獼猴PSMA表現性HEK細胞，其中結合LNCaP細胞與結合食蟹獼猴PSMA表現性HEK細胞之間的所計算EC50之差異係小於5倍，且其中該所計算EC50係使用流動式細胞測量術在0℃下於全細胞結合檢定中測量，
b)以12nM或更小的平衡解離常數(KD)結合來自人類(SEQ ID NO：7)、黑猩猩(SEQ ID NO：4)、及食蟹獼猴(SEQ ID NO：5)之重組PSMA ECD，其中該KD係在+25℃下使用Proteon表面電漿共振檢定ProteOn XPR36系統來測量；
c)當在雙特異性抗體中與抗CD3抗體CD3B219配對時，展示T細胞媒介之LNCaP細胞、C42細胞、人類PSMA表現性HEK細胞、或食蟹獼猴PSMA表現性HEK細胞的殺滅，其中該T細胞媒介之殺滅係藉由鉻51或藉由凋亡蛋白酶3/7活化檢定來測量；或
d)識別構象表位，其中該表位包含人類PSMA(SEQ ID NO：3)之殘基I138、F235、P237、G238、D244、Y299、Y300、Q303、K304、E307、及K324-P326
3)實施例2之抗體，其包含分別為SEQ ID NO：14、15、16、17、18、及19之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
4)實施例2之抗體，其包含分別為SEQ ID NO：20、21、22、23、12、及24之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
5)實施例2之抗體，其包含分別為SEQ ID NO：25、26、27、28、29、及30之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
6)實施例2之抗體，其包含分別為SEQ ID NO：36、37、38、39、40、及41之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
7)實施例2之抗體，其包含分別為SEQ ID NO：31、42、43、11、12、及13之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
8)實施例2之抗體，其包含分別為SEQ ID NO：31、44、45、46、29、及47之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
9)實施例2之抗體，其包含分別為SEQ ID NO：36、37、48、49、50、及51之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
10)實施例2之抗體，其包含分別為SEQ ID NO：36、37、52、49、50、及51之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
11)實施例2之抗體，其包含分別為SEQ ID NO：8、9、10、11、12、及13之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
12)實施例2之抗體，其包含分別為SEQ ID NO：31、32、33、34、12、及35之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
13)實施例2之抗體，其包含分別為SEQ ID NO：53、54、55、23、12、及35之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
14)實施例2之抗體，其包含分別為SEQ ID NO：122、123、124、23、12、及24之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
15)實施例2之抗體，其包含SEQ ID NO：60、62、64、66、68、70、72、74、75、77、79、或160之重鏈可變區(VH)。
16)實施例15之抗體，其包含SEQ ID NO：61、63、65、67、69、71、73、61、76、或78之輕鏈可變區(VL)。
17)實施例15之抗體，其包含SEQ ID NO：62之VH及SEQ ID NO：63之VL。
18)實施例15之抗體，其包含SEQ ID NO：64之VH及SEQ ID NO：65之VL。
19)實施例15之抗體，其包含SEQ ID NO：66之VH及SEQ ID NO：67之VL。
20)實施例15之抗體，其包含SEQ ID NO：72之VH及SEQ ID NO：73之VL。
21)實施例15之抗體，其包含SEQ ID NO：74之VH及SEQ ID NO：61之VL。
22)實施例15之抗體，其包含SEQ ID NO：75之VH及SEQ ID NO：76之VL。
23)實施例15之抗體，其包含SEQ ID NO：77之VH及SEQ ID NO：78之VL。
24)實施例15之抗體，其包含SEQ ID NO：79之VH及SEQ ID NO：78之VL。
25)實施例15之抗體，其包含SEQ ID NO：160之VH及SEQ ID NO：65之VL。
26)實施例15之抗體，其包含SEQ ID NO：60之VH及SEQ ID NO：61之VL。
27)實施例15之抗體，其包含SEQ ID NO：68之VH及SEQ ID NO：69之VL。
實施例15之抗體，其包含SEQ ID NO：70之VH及SEQ ID NO：71之VL。
28)一種經單離之重組抗PSMA抗體或其抗原結合片段，其包含分別為SEQ ID NO：31、42、43、11、12、及13之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
29)實施例28之抗體，其中該抗體包含SEQ ID NO：74之VH及SEQ ID NO：61之VL。
30)一種經單離之重組抗PSMA抗體或其抗原結合片段，其包含分別為SEQ ID NO：14、15、16、17、18、及19之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
31)實施例30之抗體，其中該抗體包含SEQ ID NO：62之VH及SEQ ID NO：63之VL。
32)一種經單離之重組抗PSMA抗體或其抗原結合片段，其包含分別為SEQ ID NO：25、26、27、28、29、及30之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
33)實施例32之抗體，其中該抗體包含SEQ ID NO：66之VH及SEQ ID NO：67之VL。
34)一種經單離之重組抗PSMA抗體或其抗原結合片段，其包含分別為SEQ ID NO：36、37、38、39、40、及41之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
35)實施例34之抗體，其中該抗體包含SEQ ID NO：72之VH及SEQ ID NO：73之VL。
36)一種經單離之重組抗PSMA抗體或其抗原結合片段，其包含分別為SEQ ID NO：122、123、124、23、12、及24之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
37)實施例36之抗體，其中該抗體包含SEQ ID NO：160之VH及SEQ ID NO：65之VL。
38)一種經單離之重組抗PSMA抗體或其抗原結合片段，其包含分別為SEQ ID NO：8、9、10、11、12、及13之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
39)實施例38之抗體，其中該抗體包含SEQ ID NO：60之VH及SEQ ID NO：61之VL。
40)一種經單離之重組抗PSMA抗體或其抗原結合片段，其包含分別為SEQ ID NO：20、21、22、23、12、及24之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
41)實施例40之抗體，其中該抗體包含SEQ ID NO：64之VH及SEQ ID NO：65之VL。
42)一種經單離之重組抗PSMA抗體或其抗原結合片段，其包含分別為SEQ ID NO：31、32、33、34、12、及35之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
43)實施例42之抗體，其中該抗體包含SEQ ID NO：70之VH及SEQ ID NO：71之VL。
44)一種經單離之重組抗PSMA抗體或其抗原結合片段，其包含分別為SEQ ID NO：31、44、45、46、29、及47之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
45)實施例44之抗體，其中該抗體包含SEQ ID NO：75之VH及SEQ ID NO：76之VL。
46)一種經單離之重組抗PSMA抗體或其抗原結合片段，其包含分別為SEQ ID NO：36、37、48、49、50、及51之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
47)實施例46之抗體，其中該抗體包含SEQ ID NO：77之VH及SEQ ID NO：78之VL。
48)一種經單離之重組抗PSMA抗體或其抗原結合片段，其包含分別為SEQ ID NO：36、37、52、49、50、及51之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
49)實施例48之抗體，其中該抗體包含SEQ ID NO：79之VH及SEQ ID NO：78之VL。
50)一種經單離之重組抗PSMA抗體或其抗原結合片段，其包含分別為SEQ ID NO：53、54、55、23、12、及35之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
51)實施例50之抗體，其中該抗體包含SEQ ID NO：68之VH及SEQ ID NO：69之VL。
52)一種經單離之重組抗PSMA抗體或其抗原結合片段，其包含分別為SEQ ID NO：25、130、27、28、29、及30之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
53)實施例52之抗體，其中該抗體包含SEQ ID NO：138之VH及SEQ ID NO：67之VL。
54)一種經單離之重組抗PSMA抗體或其抗原結合片段，其包含分別為SEQ ID NO：25、130、27、131、29、及132之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
55)實施例54之抗體，其中該抗體包含SEQ ID NO：138之VH及SEQ ID NO：142之VL。
56)一種經單離之重組抗PSMA抗體或其抗原結合片段，其包含分別為SEQ ID NO：25、130、27、28、133、及132之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
57)實施例56之抗體，其中該抗體包含SEQ ID NO：138之VH及SEQ ID NO：143之VL。
58)一種經單離之重組抗PSMA抗體或其抗原結合片段，其包含分別為SEQ ID NO：25、134、27、28、29、及30之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
59)實施例58之抗體，其中該抗體包含SEQ ID NO：139之VH及SEQ ID NO：167之VL。
60)一種經單離之重組抗PSMA抗體或其抗原結合片段，其包含分別為SEQ ID NO：25、135、27、28、29、及136之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
61)實施例60之抗體，其中該抗體包含SEQ ID NO：140之VH及SEQ ID NO：144之VL。
62)一種經單離之重組抗PSMA抗體或其抗原結合片段，其包含分別為SEQ ID NO：25、135、27、28、29、及30之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
63)實施例62之抗體，其中該抗體包含SEQ ID NO：140之VH及SEQ ID NO：167之VL。
64)一種經單離之重組抗PSMA抗體或其抗原結合片段，其包含分別為SEQ ID NO：25、135、27、131、29、及132之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
65)實施例64之抗體，其中該抗體包含SEQ ID NO：140之VH及SEQ ID NO：142之VL。
66)一種經單離之重組抗PSMA抗體或其抗原結合片段，其包含分別為SEQ ID NO：25、135、27、28、133、及132之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
67)實施例66之抗體，其中該抗體包含SEQ ID NO：140之VH及SEQ ID NO：143之VL。
68)一種經單離之重組抗PSMA抗體或其抗原結合片段，其包含分別為SEQ ID NO：25、134、27、28、29、及136之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
69)實施例68之抗體，其中該抗體包含SEQ ID NO：139之VH及SEQ ID NO：144之VL。
70)一種經單離之重組抗PSMA抗體或其抗原結合片段，其包含分別為SEQ ID NO：25、134、27、131、29、及132之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
71)實施例70之抗體，其中該抗體包含SEQ ID NO：139之VH及SEQ ID NO：142之VL。
72)一種經單離之重組抗PSMA抗體或其抗原結合片段，其包含分別為SEQ ID NO：25、134、27、28、133、及132之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
73)實施例72之抗體，其中該抗體包含SEQ ID NO：139之VH及SEQ ID NO：143之VL。
74)一種經單離之重組抗PSMA抗體或其抗原結合片段，其包含分別為SEQ ID NO：25、137、27、28、133、及132之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
75)實施例74之抗體，其中該抗體包含SEQ ID NO：141之VH及SEQ ID NO：143之VL。
76)實施例1至75中任一者之抗體，其中該抗體係人類抗體或人源化抗體。
77)實施例76之抗體，其中該抗體係屬於IgG4或IgG1同型。
78)實施例77之抗體，其在該抗體Fc中包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、或十個取代。
79)實施例77之抗體，其包含
a)L234A、L235A、G237A、P238S、H268A、A330S、及P331S取代；
b)V234A、G237A、P238S、H268A、V309L、A330S、及P331S取代；
c)F234A、L235A、G237A、P238S、及Q268A取代；
d)L234A、L235A、或L234A及L235A取代；
e)F234A、L235A、或F234A及L235A取代；或
f)V234A取代，其中殘基編號係根據EU索引。
80)實施例79之抗體，其包含S228P、F234A、及L235A取代，其中殘基編號係根據EU索引。
81)實施例1至80中任一者之抗體，其中該抗體係雙特異性。
82)實施例76之抗體，其中該抗體特異性結合PSMA，且特異性結合CD3、CD5、CD28、CD16、CD16A、CD25、CD38、CD44、CD56、CD69、CD94、CD335(NKp46)、CD336、(NKp44)、CD337(NKp30)、NKp80、NKG2C及NKG2D、DNAM、NCR、CD18、CD89、CD18、CD32、CD64、CD64、及CD35。
83)一種醫藥組成物，其包含實施例1至82中任一者之抗體及醫藥上接受之載劑。
84)一種多核苷酸，其編碼實施例15之抗體VH、實施例16之抗體VL、或實施例15及16之抗體VH及抗體VL。
85)一種多核苷酸，其編碼實施例28至75中任一者之抗體VH、抗體VL、或抗體VH及抗體VL。
86)一種載體，其包含實施例84之多核苷酸。
87)一種載體，其包含實施例85之多核苷酸。
88)一種宿主細胞，其包含實施例86之載體。
89)一種宿主細胞，其包含實施例87之載體。
90)一種生產實施例1之抗體的方法，其包含在使該抗體表現之條件下培養實施例89之宿主細胞、及回收由該宿主細胞所生產之該抗體。
91)一種治療對象之癌症的方法，其包含有需要之該對象投予治療有效量的實施例1至82中任一者之經單離之抗體達一段足以治療該癌症的時間。
92)實施例91之方法，其中該癌症係實體腫瘤、惡性疾病、或腫瘤新生血管。
93)實施例92之方法，其中該實體腫瘤係前列腺癌或結腸直腸癌、胃癌、透明細胞腎癌、膀胱癌、肺癌、鱗狀細胞癌、神經膠質瘤、乳癌、腎臟癌、新生血管病症、透明細胞腎癌(CCRCC)、胰腺癌、腎癌、尿路上皮癌、及往肝臟的腺癌。
94)實施例93之方法，其中該前列腺癌係難治性前列腺癌、前列腺上皮內瘤、雄性激素非依賴性前列腺癌、惡性前列腺癌。
95)實施例90至94中任一者之方法，其中該抗體係與第二治療劑組合投予。
96)實施例95之方法，其中該第二治療劑係用於治療該實體腫瘤、或惡性疾病、或腫瘤新生血管之標準照護藥物。
97)實施例96之方法，其中該第二治療劑係荷爾蒙抑制劑、抗微管劑、激酶抑制劑、免疫調節劑、拓樸異構酶抑制劑、抗代謝物、有絲分裂抑制劑、烷化劑、蒽環類藥物、長春花生物鹼類、嵌入劑、能夠干擾信號轉導路徑的試劑、促進細胞凋亡的試劑、蛋白酶體抑制劑、或放射線。
98)實施例96之方法，其中該第二治療劑係疫苗。
99)實施例98之方法，其中該疫苗係多肽或其片段、或編碼在腫瘤細胞上表現的該多肽或其片段之DNA或RNA。
100)實施例99之方法，其中該多肽係PSMA、間皮素、EGFR、或EGFRvIII。
101)實施例95之方法，其中該第二治療劑係同時、依序、或分開投予。
102)實施例91至101中任一者之方法，其中該對象係以放射療法治療，或正以放射療法治療。
103)實施例91至101中任一者之方法，其中該對象已經歷過手術，或將經歷手術。
104)實施例46至58中任一者之方法，其中該經單離之抗體包含SEQ ID NO：66之VH及SEQ ID NO：67之VL。
105)實施例1至82中任一者之抗體，其係用於療法中。
106)一種抗獨特型抗體，其結合至實施例1至82中任一者之抗體。
107)一種雙特異性抗體，其包含特異性結合PSMA之第一結構域、及特異性結合CD3之第二結構域，其中該第一結構域包含：
a)分別為SEQ ID NO：31、42、43、11、12、及13之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3；
b)分別為SEQ ID NO：14、15、16、17、18、及19之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3；
c)分別為SEQ ID NO：25、26、27、28、29、及30之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3；
d)分別為SEQ ID NO：36、37、38、39、40、及41之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3；
e)分別為SEQ ID NO：122、123、124、23、12、及24之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3；
f)分別為SEQ ID NO：8、9、10、11、12、及13之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3；
g)分別為SEQ ID NO：14、15、16、17、18、及19之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3；
h)分別為SEQ ID NO：20、21、22、23、12、及24之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3；
i)分別為SEQ ID NO：31、32、33、34、12、及35之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3；
j)分別為SEQ ID NO：31、44、45、46、29、及47之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3；
k)分別為SEQ ID NO：36、37、48、49、50、及51之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3；
l)分別為SEQ ID NO：53、54、55、23、12、及35之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3；
m)分別為SEQ ID NO：25、130、27、28、29、及30之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3；
n)分別為SEQ ID NO：25、130、27、131、29、及132之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3；
o)分別為SEQ ID NO：25、130、27、28、133、及132之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3；
p)分別為SEQ ID NO：25、134、27、28、29、及30之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3；
q)分別為SEQ ID NO：25、135、27、28、29、及136之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3；
r)分別為SEQ ID NO：25、135、27、28、29、及30之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3；
s)分別為SEQ ID NO：25、135、27、131、29、及132之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3；
t)分別為SEQ ID NO：25、135、27、28、133、及132之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3；
u)分別為SEQ ID NO：25、134、27、28、29、及136之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3；
v)分別為SEQ ID NO：25、134、27、131、29、及132之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3；
w)分別為SEQ ID NO：25、134、27、28、133、及132之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3；或
x)分別為SEQ ID NO：25、137、27、28、133、及132之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
108)實施例107之雙特異性抗體，其中該第一結構域包含：
a)分別為SEQ ID NO：31、42、43、11、12、及13之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3，以及SEQ ID NO：74之VH及SEQ ID NO：61之VL；
b)分別為SEQ ID NO：14、15、16、17、18、及19之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3，以及SEQ ID NO：62之VH及SEQ ID NO：63之VL；
c)分別為SEQ ID NO：25、26、27、28、29、及30之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3，以及SEQ ID NO：66之VH及SEQ ID NO：67之VL；
d)分別為SEQ ID NO：36、37、38、39、40、及41之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3，以及SEQ ID NO：72之VH及SEQ ID NO：73之VL；
e)分別為SEQ ID NO：122、123、124、23、12、及24之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3，以及SEQ ID NO：160之VH及SEQ ID NO：65之VL；
f)分別為SEQ ID NO：8、9、10、11、12、及13之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3，以及SEQ ID NO：60之VH及SEQ ID NO：61之VL；
g)分別為SEQ ID NO：14、15、16、17、18、及19之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3，以及SEQ ID NO：62之VH及SEQ ID NO：63之VL；
h)分別為SEQ ID NO：20、21、22、23、12、及24之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3，以及SEQ ID NO：64之VH及SEQ ID NO：65之VL；
i)分別為SEQ ID NO：31、32、33、34、12、及35之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3，以及SEQ ID NO：70之VH及SEQ ID NO：71之VL；
j)分別為SEQ ID NO：31、44、45、46、29、及47之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3，以及SEQ ID NO：75之VH及SEQ ID NO：76之VL；
k)分別為SEQ ID NO：36、37、48、49、50、及51之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3，以及SEQ ID NO：77之VH及SEQ ID NO：78之VL；
l)分別為SEQ ID NO：53、54、55、23、12、及35之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3，以及SEQ ID NO：68之VH及SEQ ID NO：69之VL；
m)分別為SEQ ID NO：25、130、27、28、29、及30之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3，以及SEQ ID NO：138之VH及SEQ ID NO：67之VL；
n)分別為SEQ ID NO：25、130、27、131、29、及132之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3，以及SEQ ID NO：138之VH及SEQ ID NO：142之VL；
o)分別為SEQ ID NO：25、130、27、28、133、及132之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3，以及SEQ ID NO：138之VH及SEQ ID NO：143之VL；
p)分別為SEQ ID NO：25、134、27、28、29、及30之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3，以及SEQ ID NO：139之VH及SEQ ID NO：167之VL；
q)分別為SEQ ID NO：25、135、27、28、29、及136之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3，以及SEQ ID NO：140之VH及SEQ ID NO：144之VL；
r)分別為SEQ ID NO：25、135、27、28、29、及30之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3，以及SEQ ID NO：140之VH及SEQ ID NO：167之VL；
s)分別為SEQ ID NO：25、135、27、131、29、及132之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3，以及SEQ ID NO：140之VH及SEQ ID NO：142之VL；
t)分別為SEQ ID NO：25、135、27、28、133、及132之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3，以及SEQ ID NO：140之VH及SEQ ID NO：143之VL；
u)分別為SEQ ID NO：25、134、27、28、29、及136之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3；以及SEQ ID NO：139之VH及SEQ ID NO：144之VL；
v)分別為SEQ ID NO：25、134、27、131、29、及132之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3，以及SEQ ID NO：139之VH及SEQ ID NO：142之VL；
w)分別為SEQ ID NO：25、134、27、28、133、及132之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3，以及SEQ ID NO：139之VH及SEQ ID NO：143之VL；或
x)分別為SEQ ID NO：25、137、27、28、133、及132之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3，以及SEQ ID NO：141之VH及SEQ ID NO：143之VL。
109)一種經單離之雙特異性PSMA/CD3抗體，其包含：第一結構域，該第一結構域(i)結合至表現重組黑猩猩PSMA之細胞，其中與細胞之該結合係藉由流動式細胞測量術來測量，且(ii)以約30nM或更小之親和力結合重組黑猩猩PSMA胞外域(SEQ ID NO：4)，其中該親和力係藉由Proteon表面電漿共振檢定來測量；及特異性結合CD3之第二結構域。
110)實施例109之雙特異性PSMA X CD3抗體，其中該抗體
a)以20nM或更小的所計算EC50結合LNCaP細胞，並以40nM或更小的所計算EC50結合食蟹獼猴PSMA表現性HEK細胞，其中結合LNCaP細胞與結合食蟹獼猴PSMA表現性HEK細胞之間的所計算EC50之差異係小於5倍，且其中該所計算EC50係使用流動式細胞測量術在0℃下於全細胞結合檢定中測量，
b)以12nM或更小的平衡解離常數(KD)結合來自人類(SEQ ID NO：7)、黑猩猩(SEQ ID NO：4)、及食蟹獼猴(SEQ ID NO：5)之重組PSMA ECD，其中該KD係在+25℃下使用Proteon表面電漿共振檢定ProteOn XPR36系統來測量；
c)展示T細胞媒介之LNCaP細胞、C42細胞、人類PSMA表現性HEK細胞、或食蟹獼猴PSMA表現性HEK細胞的殺滅，其中該T細胞媒介之殺滅係藉由鉻51或藉由凋亡蛋白酶3/7活化檢定來測量；或
d)識別構象表位，其中該表位包含人類PSMA(SEQ ID NO：3)之殘基I138、F235、P237、G238、D244、Y299、Y300、Q303、K304、E307、及K324-P326。
111)實施例109之雙特異性PSMA X CD3抗體，其中該抗體結合至T細胞。
112)實施例109之雙特異性PSMA X CD3抗體，其中該第一結構域包含
a)分別為SEQ ID NO：14、15、及16之重鏈互補決定區1(HCDR1)、HCDR2、及HCDR3；及分別為SEQ ID NO：17、18、及19之輕鏈互補決定區1(LCDR1)、LCDR2、及LCDR3；
b)分別為SEQ ID NO：20、21、及22之HCDR1、HCDR2、及HCDR3，以及分別為SEQ ID NO：23、12、及24之LCDR1、LCDR2、及LCDR3；
c)分別為SEQ ID NO：25、26、及27之HCDR1、HCDR2、及HCDR3，以及分別為SEQ ID NO：28、29、及30之LCDR1、LCDR2、及LCDR3；
d)分別為SEQ ID NO：31、44、及45之HCDR1、HCDR2、及HCDR3，以及分別為SEQ ID NO：46、29、及47之LCDR1、LCDR2、及LCDR3；
e)分別為SEQ ID NO：31、42、及43之HCDR1、HCDR2、及HCDR3，以及分別為SEQ ID NO：11、12、及13之LCDR1、LCDR2、及LCDR3；或
f)分別為SEQ ID NO：122、123、及124之HCDR1、HCDR2、及HCDR3，以及分別為SEQ ID NO：23、12、及24之LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
113)實施例109之雙特異性PSMA X CD3抗體，其中該第一結構域包含下列之HCDR1、HCDR2、及HCDR3：
a)分別為SEQ ID NO：14、15、及16；
b)分別為SEQ ID NO：20、21、及22；
c)分別為SEQ ID NO：25、26、及27；
d)分別為SEQ ID NO：31、44、及45；
e)分別為SEQ ID NO：31、42、及43；或
f)分別為SEQ ID NO：122、123、及124。
114)實施例109之雙特異性PSMA X CD3抗體，其中該第一結構域包含下列之LCDR1、LCDR2、及LCDR3：
a)分別為SEQ ID NO：17、18、及19；
b)分別為SEQ ID NO：23、12、及24；
c)分別為SEQ ID NO：28、29、及30；
d)分別為SEQ ID NO：46、29、及47；
e)分別為SEQ ID NO：11、12、及13；或
f)分別為SEQ ID NO：23、12、及24。
115)實施例109之雙特異性PSMA X CD3抗體，其中
a)該第一結構域包含SEQ ID NO：62之重鏈可變區(VH)及SEQ ID NO：63之輕鏈可變區(VL)，且該第二結構域包含SEQ ID NO：104之VH及SEQ ID NO：105之VL
b)該第一結構域包含SEQ ID NO：64之VH及SEQ ID NO：65之VL，且該第二結構域包含SEQ ID NO：104之VH及SEQ ID NO：105之VL；
c)該第一結構域包含SEQ ID NO：66之VH及SEQ ID NO：67之VL，且該第二結構域包含SEQ ID NO：104之VH及SEQ ID NO：105之VL；
d)該第一結構域包含SEQ ID NO：75之VH及SEQ ID NO：76之VL，且該第二結構域包含SEQ ID NO：104之VH及SEQ ID NO：105之VL；
e)該第一結構域包含SEQ ID NO：74之VH及SEQ ID NO：61之VL，且該第二結構域包含SEQ ID NO：104之VH及SEQ ID NO：105之VL；
f)該第一結構域包含SEQ ID NO：160之VH及SEQ ID NO：65之VL，且該第二結構域包含SEQ ID NO：104之VH及SEQ ID NO：105之VL。
116)實施例109之雙特異性PSMA X CD3抗體，其包含第一重鏈(HC1)、第一輕鏈(LC1)、第二重鏈(HC2)、及第二輕鏈(LC2)，其中該HC1及該LC1包含下列之胺基酸序列：
a)分別為SEQ ID NO：84及85；
b)分別為SEQ ID NO：86及87；
c)分別為SEQ ID NO：88及89；
d)分別為SEQ ID NO：125及91；
e)分別為SEQ ID NO：94及95；或
f)分別為SEQ ID NO：96及83。
117)實施例116之雙特異性PSMA X CD3抗體，其中該HC2及該LC2分別包含SEQ ID NO：110及111。
118)實施例109之雙特異性PSMA X CD3抗體，其包含下列之HC1、LC1、HC2、及LC2：
a)分別為SEQ ID NO：84、85、110、及111；
b)分別為SEQ ID NO：86、87、110、及111；
c)分別為SEQ ID NO：88、89、110、111；
d)分別為SEQ ID NO：125、91、110、及111；
e)分別為SEQ ID NO：94、95、110、及111；
f)分別為SEQ ID NO：96、83、110、及111。
119)實施例109至118中任一者之雙特異性PSMA X CD3抗體，其中該抗體係人類抗體或人源化抗體。
120)實施例119之雙特異性PSMA X CD3抗體，其中該抗體係屬於IgG1、IgG2、IgG3、或IgG4同型。
121)實施例120之雙特異性PSMA X CD3抗體，其中該抗體係屬於IgG1或IgG4同型。
122)實施例120或121之雙特異性PSMA X CD3抗體，其在抗體Fc中具有一個、兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、或十個取代。
123)實施例121之雙特異性PSMA X CD3抗體，其包含：
a)L234A、L235A、G237A、P238S、H268A、A330S、及P331S取代；
b)V234A、G237A、P238S、H268A、V309L、A330S、及P331S取代；
c)F234A、L235A、G237A、P238S、及Q268A取代；
d)L234A、L235A、或L234A及L235A取代；
e)F234A、L235A、或F234A及L235A取代；
f)V234A取代；或
g)S228P、F234A、及L235A取代，其中殘基編號係根據EU索引。
124)實施例109至123中任一者之雙特異性PSMA X CD3抗體，其在抗體CH3恆定域中包含至少一個取代。
125)實施例124之雙特異性PSMA X CD3抗體，其中在該抗體CH3恆定域中之該取代係409R、F405L、或F405L/R409K取代，其中殘基編號係根據EU索引。
126)實施例124之雙特異性PSMA X CD3抗體，其中該抗體包含
a)在該HC1中之F405L取代，以及在該HC2中之409R取代，其中該抗體係屬於IgG1同型；b)在該HC1中之V234A、G237A、P238S、H268A、V309L、A330S、P331S、及F405L取代，以及在該HC2 中之V234A、G237A、P238S、H268A、V309L、A330S、P331S、及409R取代，其中該抗體係屬於IgG1同型；或
b)在該HC1中之S228P取代，以及在該HC2中之S228P、F405L、及R409K取代，其中該抗體係屬於IgG4同型。
127)一種醫藥組成物，其包含實施例109至126中任一者之雙特異性PSMA X CD3抗體及醫藥上接受之載劑。
128)一種多核苷酸，其編碼實施例118之雙特異性PSMA X CD3抗體HC1、LC1、HC2、或LC2。
129)一種載體，其包含編碼實施例128之HC1、LC1、HC2、LC2、HC1及LC1、或HC2及LC2的多核苷酸。
130)一種經單離之宿主細胞，其包含實施例129之載體。
131)一種生產實施例118之雙特異性PSMA X CD3抗體之方法，其包含在使該抗體表現之條件下培養實施例130之宿主細胞、及回收並純化由該宿主細胞所生產之該雙特異性PSMA X CD3抗體。
132)一種生產實施例118之雙特異性PSMA X CD3抗體之方法，其包含：
a)將單特異性二價PSMA抗體及單特異性二價CD3抗體以約1：1莫耳比之混合物組合，該單特異性二價PSMA抗體具有兩個相同的HC1及兩個相同的LC1，該單特異性二價CD3抗體具有兩個相同的HC2及兩個相同的LC2；
b)將還原劑引入該混合物中；
c)將該混合物培養約九十分鐘至約六小時；
d)移除該還原劑；且
e)純化包含該HC1、該LC1、該HC2、及該LC2之該雙特異性PSMA X CD3抗體。
133)實施例132之方法，其中該還原劑係2-巰基乙醇胺(2-MEA)。
134)實施例133之方法，其中
h)該2-MEA係以約25mM至約75mM的濃度存在；且
i)在約25℃至約37℃之溫度下執行該培養步驟。
135)一種治療對象之癌症的方法，其包含向有需要之該對象投予治療有效量的實施例109至126中任一者之經單離之PSMA X CD3雙特異性抗體達一段足以治療該癌症的時間。
136)實施例135之方法，其中該癌症係實體腫瘤、惡性疾病、或腫瘤新生血管。
137)實施例136之方法，其中該實體腫瘤係前列腺癌或結腸直腸癌、胃癌、透明細胞腎癌、膀胱癌、肺癌、鱗狀細胞癌、神經膠質瘤、乳癌、腎臟癌、新生血管病症、透明細胞腎癌(CCRCC)、胰腺癌、腎癌、尿路上皮癌、及往肝臟的腺癌。
138)實施例137之方法，其中該前列腺癌係難治性前列腺癌、前列腺上皮內瘤、雄性激素非依賴性前列腺癌、惡性前列腺癌。
139)實施例135至138中任一者之方法，其中該抗體係與第二治療劑組合投予。
140)實施例139之方法，其中該第二治療劑係用於治療該實體腫瘤、或惡性疾病、或腫瘤新生血管之標準照護藥物。
141)實施例139之方法，其中該第二治療劑係荷爾蒙抑制劑、抗微管劑、拓樸異構酶抑制劑、抗代謝物、有絲分裂抑制劑、烷化劑、蒽環類藥物、長春花生物鹼類、嵌入劑、能夠干擾信號轉導路徑的試劑、促進細胞凋亡的試劑、蛋白酶體抑制劑、或放射線。
142)實施例139之方法，其中該第二治療劑係疫苗。
143)實施例142之方法，其中該疫苗係多肽或其片段、或編碼在腫瘤細胞上表現的該多肽或其片段之DNA或RNA。
144)實施例143之方法，其中該多肽係PSMA、間皮素、EGFR、或EGFRvIII。
145)實施例139之方法，其中該第二治療劑係同時、依序、或分開投予。
146)實施例135至145中任一者之方法，其中該對象係以放射療法治療，或正以放射療法治療。
147)實施例135至145中任一者之方法，其中該對象已經歷過手術，或將經歷手術。
148)實施例135至145中任一者之方法，其中該雙特異性PSMA X CD3抗體之該第一結構域包含SEQ ID NO：66之VH、及VL或SEQ ID NO：67，且該雙特異性PSMA X CD3抗體之該第二結構域包含SEQ ID NO：104之VH及SEQ ID NO：105之VL。
149)實施例109至126中任一者之抗體，其係用於療法中。
150)一種抗獨特型抗體，其結合至實施例109至126中任一者之抗體。
實例1：材料 產生PSMA細胞系
使用自行開發之(in-house)具有CMV啟動子之表現載體並使用標準分子生物技術，來產生呈現全長黑猩猩PSMA(H2Q3K5_PANTR,SEQ ID NO：1)或全長食蟹獼猴PSMA(EHH56646.1,SEQ ID NO：2)之表現載體，其用於作為篩選工具以評估抗PSMA前導(lead)。將載體使用標準方法暫時轉染至於懸浮液中的HEK293F細胞。將經轉染之293F懸浮細胞接種於生長培養基(加上血清)中以變成貼附狀態，並進行選擇以用於穩定的質體整合。藉由連續稀釋來選擇單一細胞群，並藉由FACS來定量PSMA表面受體表現，其使用PSMAL抗體(Center)親和力純化兔多株抗體(目錄號OAAB02483，Aviva Systems Biology)作為一級抗體，並使用R-PE抗兔二級抗體(目錄號111-116-144，Jackson ImmunoResearch Laboratories,Inc.)及兔多株IgG(目錄號SC-532，Santa Cruz Biotechnology)作為同型對照組。
使用含有全長人類PSMA(FOLH1_HUMAN,SEQ ID NO：3)的慢病毒(Genecopoeia，目錄號EX-G0050-Lv105-10)、及嘌呤黴素(puromycin)以用於選擇PSMA陽性細胞，來產生人類PSMA表現性細胞系。將呈PSMA陰性的HEK293F細胞(ATCC)用慢病毒粒子轉導，以過度表現人類PSMA。在轉導後，藉由處理匯集細胞來選擇陽性表現PSMA及抗性標記的細胞，該等匯集細胞生長於DMEM+10% HI FBS(Life Technologies)中並補充有不同濃度的嘌呤黴素(Life Technologies)。
除了HEK產生的細胞系外，數種市售細胞系係用於噬菌體淘選及結合及細胞毒性檢定。LNCaP殖株FGC細胞(ATCC目錄號CRL-1740)係市 售可得的人類前列腺癌細胞系。C4-2B細胞原本是在MD Anderson開發，且係衍生自在體內生長並轉移至骨髓的LNCaP FGC(Thalmann,et al 1994,Cancer Research 54,2577-81)。
產生可溶性PSMA ECD蛋白
使用自行開發之具有CMV啟動子之表現載體並使用標準分子生物技術，來產生重組黑猩猩PSMA胞外域(ECD)蛋白(黑猩猩PSMA ECD，SEQ ID NO：4)以用於淘選並評估抗PSMA前導。使用自行開發之具有CMV啟動子之表現載體並使用標準分子生物技術，來選殖具有N端信號序列(SEQ ID NO：56)、N端Avi標籤(SEQ ID NO：57)、及6-His標籤(SEQ ID NO：58)的黑猩猩PSMA ECD基因片段(SEQ ID NO：1之胺基酸44至750)，並將其暫時表現於293Expi細胞(Invitrogen)。製備cDNA，其係使用基因合成技術(美國專利第6,670,127號；美國專利第6,521,427號)。收穫上清液並藉由離心加以澄清。使用兩步驟純化程序來純化蛋白質：1)以HisTrap HP管柱(GE Healthcare)進行的IMAC純化；及2)粒徑篩析純化(Superdex 200,Ge Healthcare)，其中洗提緩衝液係達爾伯克磷酸鹽緩衝液、鈣、鎂(Thermofisher,#14040)，其含有0.5mM ZnCl2以穩定PSMA二聚化。將含有所關注蛋白質的流份匯集，並以A280判定蛋白質濃度。將此材料用於結合及親和力測量，並將其稱為PSMG8。
黑猩猩PSMA ECD亦經生物素化(biotinylated)以用於淘選。自行建立BirA質體，其經共轉染至哺乳動物細胞中以將含有Avi標籤的蛋白質生物素化。將BirA編碼區(SEQ ID NO：59)融合至來自小鼠IgG重鏈之信號肽(SEQ ID NO：80)，並將ER滯留信號KDEL(「KDEL」經揭示為SEQ ID NO：156)添加至C端以產生BirA(SEQ ID NO：112)。將建構基因選殖至受CMV啟動子控制的表現載體中。為了生產生物素化PSMA抗原，將PSMA質體DNA以4倍過量(w/w)添加至BirA質體中以成為轉染混合物。
藉由BirA表現建構體的共轉染，經由Avi標籤來執行黑猩猩PSMA ECD蛋白的生物素化，並使用兩步驟純化程序來純化所得分泌蛋白：1)以HisTrap HP管柱(GE Healthcare)進行的IMAC純化；及2)粒徑篩析純化(Superdex 200,Ge Healthcare)，其中洗提緩衝液係達爾伯克磷酸鹽緩衝液、 鈣、鎂(Thermofisher,#14040)，其含有0.5mM ZnCl2以穩定PSMA二聚化。該蛋白質在用於噬菌體淘選研究之前先針對內毒素進行測試。
如先前針對黑猩猩PSMA ECD所述，將對應於SEQ ID NO：2之胺基酸44至750且具有N端信號(SEQ ID NO：56)、N端Avi-(SEQ ID NO：57)、及6His(SEQ ID NO：58)標籤的重組食蟹獼猴PSMA胞外域(ECD)蛋白(食蟹獼猴PSMA ECD，SEQ ID NO：5)選殖並表現。藉由BirA表現建構體的共轉染，經由Avi標籤來執行食蟹獼猴PSMA ECD蛋白的生物素化，並藉由使用IMAC HisTrap HP管柱(GE Healthcare)及MonoAvidin管柱的兩步驟純化來純化所得分泌蛋白。該蛋白質在用於噬菌體淘選研究之前先針對內毒素進行測試。亦將此材料用於結合及親和力測量，並將其稱為PSMG1。
使用自行開發之具有CMV啟動子之表現載體並使用標準分子生物技術，來選殖並表現具有IgG1 Fc(SEQ ID NO：81)之第二種重組食蟹獼猴PSMA ECD蛋白(食蟹獼猴PSMA Fc，SEQ ID NO：6)。將食蟹獼猴PSMA Fc蛋白暫時表現於293HEK-expi細胞中。將在HEK293 Expi細胞中的PSMG3暫時轉染，於轉染後5天收穫，藉由離心(30min,6000rpm)加以澄清，並進行過濾(0.2μ PES膜，Corning)。用Octet儀器(ForteBio)來判定IgG的相對量，其係使用經加標(spiked)於用過的培養基(spent medium)中的純化已知IgG(相同的同型)以產生標準曲線。
以每ml樹脂~30mg蛋白質的相對濃度，將澄清食蟹獼猴PSMA Fc上清液裝載於平衡(dPBS,pH 7.2)HiTrap MabSelect Sure蛋白質A管柱(GE Healthcare)上。在過裝載之後，用dPBS(pH7.2)洗滌管柱，且將蛋白質用10倍管柱體積的0.1M乙酸鈉(pH 3.5)洗提。將峰流份匯集，用2M Tris(pH 7)中和，並過濾(0.2μ)。將經中和的蛋白質以dPBS的3次更換(含有Ca2+、Mg2+、及0.5mM ZnCl2，pH 7.2)，在4℃下透析整夜。次日，將樣本自透析移除，過濾(0.2μ)，並藉由BioTek SynergyHTTM分光光度計於280nm之吸光度判定蛋白質濃度。藉由SDS-PAGE與分析型粒徑篩析HPLC(Dionex HPLC系統)，評估純化蛋白質的品質。使用LAL檢定(Pyrotell-T,Associates of Cape Cod)測量內毒素水平。將純化蛋白質儲存在4℃下。
如先前針對黑猩猩及食蟹獼猴PSMA ECD蛋白所述，將對應於SEQ ID NO：3之胺基酸44至750且具有N端Avi及6His(SEQ ID NO：58)標籤的重組人類PSMA胞外域(ECD)蛋白(人類PSMA ECD，SEQ ID NO：7)選殖、表現並純化。
實例2：識別抗黑猩猩及抗人類PSMA Fab
用重組蛋白進行淘選。重新(de novo)人類Fab-pIX庫[Shi,L.,et al J Mol Biol,2010.397(2)：p.385-396.WO 2009/085462]係由VH1-69、3-23、及5-51重鏈庫與四種人類VL生殖系基因(A27、B3、L6、O12)庫配對組成，其第一溶液淘選係使用交替淘選方法來執行，其中根據製造商的規程在經生物素化黑猩猩PSMA ECD塗覆之Strepavidin珠(Invitrogen目錄號112.05D，批號62992920)上進行一輪噬菌體捕捉，隨後根據製造商的規程在經食蟹獼猴PSMA-Fc塗覆之ProtG珠(Invitrogen，目錄號10003D)上進行噬菌體捕捉，接著根據製造商的規程在經生物素化黑猩猩PSMA ECD塗覆之Sera-mag Double Speed Neutravidin磁珠(Thermo，目錄號7815-2104-011150)上進行噬菌體捕捉。此淘選產出兩個命中者：PSMB18及PSMB25。
針對抗PSMA Fab的全細胞淘選。使用來自上述黑猩猩ECD淘選實驗的第1輪輸出或新鮮的重新噬菌體庫作為輸入，在全細胞上執行額外淘選實驗。簡言之，根據所屬技術領域中已知之標準規程，藉由輔助噬菌體感染來生產噬菌體，並藉由PEG/NaCl沉澱來濃縮。在4℃下輕輕搖盪整夜，使噬菌體庫經預清除(pre-cleared)於未轉染之親本HEK293F細胞上。在PEG/NaCl沉澱之後，將經預清除之庫與黑猩猩PSMA表現性HEK293細胞或LNCAP細胞在輕輕搖盪下於4℃下培養2hr。利用Fieoll梯度執行未結合噬菌體的移除及噬菌體結合細胞的回收，隨後進行數個洗滌步驟，將帶有結合噬菌體的細胞與1mL的TG-1大腸桿菌培養物在無攪動下於37℃下培養30分鐘。將所得混合物接種於LB-卡本西林(Carbenicillin)-1%葡萄糖盤上，並在37℃下生長整夜。接著，重複該程序以進行後續淘選輪次。
將噬菌體Fab-pIX轉換為Fab-His以用於產生大腸桿菌上清液。使用標準程序將所得噬菌體Fab-pIX命中者轉換為Fab-His。自經噬菌體淘選的 大腸桿菌單離出質體DNA(Plasmid Plus Maxi套組，Qiagen目錄號12963)，並使其經受NheI/SpeI限制性消化。將所得5400bp與100bp片段於0.8%瓊脂糖凝膠上分開，且5400bp片段經凝膠純化(MinElute PCR純化套組，Qiagen目錄號28006)。使用T4連接酶使經純化的5400bp帶自行連接，並使所得產物(編碼Fab-his融合)轉形回TG-1大腸桿菌菌株並進行殖株性單離。藉由用1mM IPTG誘導培養物整夜，自殖株產生Fab-His上清液。在將整夜培養物離心之後，澄清上清液已準備好以用於下游檢定中。為了判定不同Fab-his上清液的相對表現水平，對經連續稀釋的上清液執行抗κ(Southern Biotech目錄號2061-05)ELISA。所有經測試的殖株皆展示類似的Fab-his表現(數據未顯示)。
來自大腸桿菌之Fab-his融合的細胞結合。基於細胞之結合檢定經設計以評估來自大腸桿菌上清液之個別Fab-his融合對PSMA表現性細胞的結合能力。在pIX切除後，自所有淘選實驗之第3輪輸出單離出個別Fab殖株。測試Fab殖株對黑猩猩及食蟹獼猴PSMA表現性HEK細胞的結合、以及對在LNCaP細胞上之人類PSMA的結合。簡言之，將PSMA表現性細胞以每孔200,000個之密度等分至V底盤(CoStar 3357)中，並與表現Fab片段的上清液(100μl)於冰上培養1小時。將細胞用含有2% FBS之PBS洗滌兩次，並在冰上用小鼠抗人類κ-RPE抗體(Life Technologies目錄號MH10514)染色1小時。將細胞用含有2% FBS之PBS洗滌兩次，並再懸浮於100μL的相同洗滌緩衝液中。在BD FACS陣列流動式細胞儀上讀盤。在FlowJo軟體中分析FACS數據，其係藉由使用前向散射及側向散射進行活的健康細胞群之圈選(gating)，並接著分析此圈選內細胞的PE染色。計算平均螢光強度(mean fluorescence intensity,MFI)，並將其匯出至Microsoft Excel中。當Fab殖株所展示之對全部三種物種之PSMA(食蟹獼猴、黑猩猩、人類)的結合皆為背景之
Figure 108118091-A0202-12-0138-44
3倍，且未展示出與HEK293細胞系的結合時，將該等Fab殖株標示為「初步陽性(preliminary positive)」。將Fab定序並繼續選殖至哺乳動物表現載體中以用於再篩選。自哺乳動物細胞表現Fab上清液與PSMA表現性細胞系的結合，選擇真陽性者。
哺乳動物Fab的製備。為了將大腸桿菌Fab轉換為哺乳動物表現Fab，根據製造商的規程來利用In-Fusion HD選殖(ClonTech目錄號638918)。簡言之，將已通過初級篩選且將變為哺乳動物Fab形式的殖株之核苷酸序列載 入「InFu Primer Finder v1.2.3」程式(自行開發的軟體)中，該軟體針對至huKappa_muIgGSP及huG1 Fab表現載體的In-Fusion選殖，產生清單列出用於產生PCR片段的同型特異性PCR引子。此等載體係基於pcDNA3.1而自行開發的載體且具有CMV啟動子。在In-fusion程序後，使用標準規程將大腸桿菌殖株單離出來，驗證其序列，並將其轉染至HEK293細胞中。在5天後，收穫來自轉染的20ml上清液，以製備用於確認與PSMA表現性細胞系之結合的哺乳動物PSMA Fab。
以哺乳動物上清液形式自全細胞淘選再篩選命中者。使用先前所述之全細胞結合檢定，執行對哺乳動物表現Fab上清液的確認。測試Fab與黑猩猩、食蟹獼猴、及人類PSMA(LNCaP細胞)的結合，以及沒有與親本HEK細胞系結合的相對篩選。表3顯示結合至PSMA表現性細胞之哺乳動物Fab上清液的命中概況。許多來自大腸桿菌上清液的命中者並未用哺乳動物表現蛋白質進行確認。PSMB47顯示與食蟹獼猴PSMA表現性細胞的高度結合、以及與黑猩猩PSMA表現性細胞的部分結合，但未顯示與表現人類PSMA之LNCaP細胞的結合。PSMB55顯示類似概況，但與LNCaP細胞具部分結合。PSMB68至PSMB79結合至LNCaP細胞，但未結合至黑猩猩或食蟹獼猴PSMA表現性細胞。哺乳動物Fab上清液PSMB51、PSMB55、及PSMB56結合至全部三種細胞系。PSMB49、PSMB50、及PSMB53顯示更多的黑猩猩或食蟹獼猴結合。M58顯示些微的黑猩猩及食蟹獼猴結合。
Figure 108118091-A0202-12-0139-8
Figure 108118091-A0202-12-0140-9
Figure 108118091-A0202-12-0141-10
Figure 108118091-A0202-12-0142-11
Figure 108118091-A0202-12-0143-12
Figure 108118091-A0202-12-0144-13
Figure 108118091-A0202-12-0145-14
哺乳動物表現Fab之劑量反應曲線。一旦哺乳動物表現Fab殖株經確認係以純Fab上清液與PSMA表現性細胞系陽性結合，則將上清液藉由Octet或蛋白質凝膠針對蛋白質濃度進行標準化，並完成劑量反應曲線以確認PSMA 結合(使用先前所述之規程)。圖1至圖3針對展示結合至全部三種PSMA表現性細胞的命中者顯示其滴定曲線。圖1顯示抗PSMA淘選命中者對LNCaP細胞的滴定曲線。圖2顯示抗PSMA淘選命中者對黑猩猩PSMA HEK細胞的滴定曲線。圖3顯示抗PSMA淘選命中者對食蟹獼猴PSMA HEK細胞的滴定曲線。將PSMG5(食蟹獼猴PSMA，GenBank：EHH56646.1)或PSMG9(黑猩猩PSMA，NCBI參考序列：XP_016777253.1)選殖至受CMV啟動子控制的哺乳動物表現載體(在HindII與EcoRI位點之間)中，以用於細胞系產生。使用Lipofectamine LTX試劑將經工程改造之DNA轉染至293F細胞中，接著進行遺傳黴素(geneticin)選擇以選擇PSMA(PSMG5或PSMG9)陽性細胞。在選擇之後，藉由使用FACS，利用抗PSMA抗體(Aviva目錄號OAAB02483-PSMG9)或抗PSMA Fab(PSMB18-Janssen Internal)來篩選細胞並加以分類。選擇經FACS分類的PSMG5殖株11、23、25、及32，以及PSMG9殖株2、10、11、12、20、及24，並被移交以進行篩選。PSMG5及PSMG9序列係提供於下文。在跨及表現不同物種之PSMA的細胞系下，比較命中者之中的結合概況。使用PSMB51上清液作為跨實驗的陽性對照。數種命中者因在CDR中具N-連接醣基化位點，因結合至PSMA陰性親本HEK細胞系，或者因缺乏與PSMA陽性細胞系的結合，而失去優先性。剩餘十一種Fab命中者，並將10種命中者選殖至人類IgG4-PAA重鏈建構體中且用於產生PSMAxCD3雙特異性抗體。此等命中者顯示在彼此之3倍內的跨物種結合，並變為雙特異性抗體形式來測試PSMA陽性目標之T細胞重定向殺滅。用於各命中者之淘選抗原係顯示於表4中。
PSMG5(SEQ ID NO：126)
Figure 108118091-A0202-12-0146-15
Figure 108118091-A0202-12-0146-16
Figure 108118091-A0202-12-0147-17
PSMG9(SEQ ID NO：127)
Figure 108118091-A0202-12-0147-18
Figure 108118091-A0202-12-0147-19
Figure 108118091-A0202-12-0147-20
Figure 108118091-A0202-12-0148-21
抗PSMA mAb的製備最終將總共12種展示出結合至全部三種PSMA表現性細胞的殖株轉換為mAb IgG4，該mAb IgG4具有Fc取代S228P、F234A、及L235A(PAA)同型(藉由限制選殖)。簡言之，將對應於Fab殖株(已通過初始篩選)的建構體用HindIII及ApaI消化。將經凝膠純化之片段連接至自行開發之具有CMV啟動子的表現載體中，以產生人類IgG4-PAA表現。此允許快速產生雙特異性抗體。使用先前所述之自行開發之表現載體來表現用於各PSMA mab之重鏈及輕鏈，其中將兩載體暫時共轉染至293Expi或CHO細胞系中以表現mAb。自噬菌體淘選產生的跨物種陽性PSMA Fab之CDR序列係顯示於下表5中。所選擇Fab之VH及VL序列係顯示於下表6中。自該等Fab產生之mAb之重鏈及輕鏈序列係顯示於表7中。
Figure 108118091-A0202-12-0148-22
Figure 108118091-A0202-12-0149-23
Figure 108118091-A0202-12-0150-24
Figure 108118091-A0202-12-0151-25
產生包含VH及VL區之單特異性抗PSMA抗體PSMB119，其具有SEQ ID NO：79之VH、及SEQ ID NO：78之VL、及具有S228P、F234A、及L235A取代之IgG4恆定區。產生包含VH及VL區之單特異性抗PSMA抗體PSMB120，其具有SEQ ID NO：77之VH、及SEQ ID NO：78之VL、及具有S228P、F234A、及L235A取代之IgG4恆定區。產生包含VH及VL區之單特異性抗PSMA抗體PSMB121，其具有SEQ ID NO：75之VH、及SEQ ID NO：76之VL、及具有S228P、F234A、及L235A取代之IgG4恆定區。產生包含VH及VL區之單特異性抗PSMA抗體PSMB122，其具有SEQ ID NO：74之VH、及SEQ ID NO：61之VL、及具有S228P、F234A、及L235A取代之IgG4恆定區。產生包含VH及VL區之單特異性抗PSMA抗體PSMB123，其具有SEQ ID NO：72之VH、及SEQ ID NO：73之VL、及具有S228P、F234A、及L235A取代之IgG4恆定區。產生包含VH及VL區之單特異性抗PSMA抗體PSMB124，其具有SEQ ID NO：70之VH、及SEQ ID NO：71之VL、及具有S228P、F234A、及L235A取代之IgG4恆定區。產生包含VH及VL區之單特異性抗PSMA抗體PSMB126，其具有SEQ ID NO：68之VH、及SEQ ID NO：69之VL、及具有S228P、F234A、及L235A取代之IgG4恆定區。產生包含VH及VL區之單特異性抗PSMA抗體PSMB127，其具有SEQ ID NO：66之VH、及SEQ ID NO：67之VL、及具有S228P、F234A、及L235A取代之IgG4恆定區。產生包含VH及VL區之單特異性抗PSMA抗體PSMB128(Alt.Fab ID：PSMB84)，其具有SEQ ID NO：64之VH、及SEQ ID NO：65之VL、及具有S228P、F234A、及L235A取代之IgG4恆定區。產生包含VH及VL區之單特異性抗PSMA抗體PSMB129，其具有SEQ ID NO：60之VH、及SEQ ID NO：61之VL、及具有S228P、F234A、及L235A取代之IgG4恆定區。產生包含VH及VL區之單特異性抗PSMA抗體PSMB130，其具有SEQ ID NO：62之 VH、及SEQ ID NO：63之VL、及具有S228P、F234A、及L235A取代之IgG4恆定區。
Figure 108118091-A0202-12-0152-26
Figure 108118091-A0202-12-0153-27
Figure 108118091-A0202-12-0154-28
Figure 108118091-A0202-12-0155-29
Figure 108118091-A0202-12-0155-30
Figure 108118091-A0202-12-0156-31
Figure 108118091-A0202-12-0157-32
Figure 108118091-A0202-12-0158-33
Figure 108118091-A0202-12-0159-34
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Figure 108118091-A0202-12-0161-36
Figure 108118091-A0202-12-0162-37
Figure 108118091-A0202-12-0163-38
Figure 108118091-A0202-12-0164-39
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Figure 108118091-A0202-12-0166-550
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Figure 108118091-A0202-12-0168-552
如先前針對重組黑猩猩PSMA ECD所述，使用ProteOn XPR36系統(BioRad)，藉由表面電漿共振(SPR)來測量親本PSMA mAb PSMB123(Fab PSMB55)、PSMB127(Fab PSMB83)、及PSMB130(Fab PSMB86)與人類、黑猩猩、及食蟹獼猴PSMA ECD的交互作用。此等mab之各者對人類、黑猩猩、及食蟹獼猴PSMA ECD的結合親和力之彙總係顯示於表18中。此等mAb以與雙特異性抗體類似的親和力來結合目標。
Figure 108118091-A0202-12-0168-553
實例3：抗CD3抗體SP34之人類架構適應
抗CD3鼠類抗體SP34係藉由人類架構適應法來人源化(Fransson,et al,JMB,2010 398(2)：214-31)。SP34之VH及VL序列係顯示於下文及圖4中，其中輕鏈之殘基1至215及重鏈之殘基1至230係直接衍生自電子密度圖，而殘基231至455係衍生自IGHG3_MOUSE(小鼠IgG3，異構體2)。
SP34之VH(SEQ ID NO：128)
Figure 108118091-A0202-12-0169-554
Figure 108118091-A0202-12-0169-555
SP34之VL(SEQ ID NO：129)
Figure 108118091-A0202-12-0169-557
Figure 108118091-A0202-12-0169-556
將四種不同重鏈與三種不同輕鏈組合，以產生12種人源化變異體。
SP34人化及親和力成熟 人類生殖系之選擇
選出四個人類重鏈可變區序列及三個輕鏈可變區序列的矩陣以供測試。人類生殖系之選擇僅根據在架構區(FR)中對於SP34之整體序列相似性。此選擇中未考慮CDR序列、或者其長度或正則結構(canonical structure)。
針對重鏈最接近的匹配者是人類GL IGHV3-72及IGHV3-73。選出另一個GL IGHV3-23，因為其在人類B細胞貯庫(B-cell repertoire)中具有高出現頻率。
針對輕鏈最接近的匹配者是人類λ GL IGLV7-43(即7a)、IGLV7-46(即7b)及IGLV1-51(即1b)。IGLV7-46實際上和IGLV7-43相同，但具有Ala在位置2之好處，即如在SP34中。
所選出之J區如下：重鏈為IGHJ1；λ輕鏈為IGLJ3
回復突變
為了保存CDR-H3之構形，必須保留VL中數個架構位置中的殘基，尤其是位置Val38、Gly48、及Gly51。將這些「回復突變(back mutation)」加入人化計畫中。
在突變計畫中將重鏈之位置57處之Asn截短至Gly以容許必要的彈性，並且可能改善穩定性(藉由降低非甘胺酸相關之局部結構應變(local structural strain))而又不會影響結合。
在人化設計中還考慮數種其他因素。首先，人類GL IGLV7-46及IGLV7-43在位置59引入具有不理想之氧化電位的Trp。兩個其他GL在此位置具有Gly，其對應於小鼠序列。因而，Gly59保存在IGLV7-46及IGLV7-43二種變異體中。最後，VH之位置49的Ala可能是必要的。而且，位置99之殘基(SP34中之Val)可能影響抗原結合。為了測試此等位置，將回復突變引入一些變異體中(圖5)
HFA矩陣
HFA矩陣(表8)係由四種VH變異體及三種VL變異體組成(圖5)。針對HFA之目的，使用AbM CDR定義(K.R.Abhinandan and A.C.Martin,2008.Mol.Immunol.45,3832-3839)。
VH之變異體：
CD3H141(SEQ ID NO：104)：具有小鼠CDR之IGHV3-72*01+Gly49Ala
Figure 108118091-A0202-12-0170-558
Figure 108118091-A0202-12-0170-559
CD3H142(SEQ ID NO：102)：具有小鼠CDR之IGHV3-23*01+Ser49Ala
Figure 108118091-A0202-12-0171-563
Figure 108118091-A0202-12-0171-560
CD3H143(SEQ ID NO：115)：具有小鼠CDR之IGHV3-23*01+Ser49Ala、Ala99Val
Figure 108118091-A0202-12-0171-562
Figure 108118091-A0202-12-0171-561
CD3H144(SEQ ID NO：116)：具有小鼠CDR之IGHV3-73*01+Asn57Gly
Figure 108118091-A0202-12-0171-565
Figure 108118091-A0202-12-0171-564
VL之變異體：
CD3L63(SEQ ID NO：103)：具有小鼠CDR之IGLV7-46*01+F38V、A48G、Y51G、W59G
Figure 108118091-A0202-12-0171-566
Figure 108118091-A0202-12-0171-567
CD3L64(SEQ ID NO：117)：具有小鼠CDR之IGLV1-51*01+Y38V、L48G、Y51G
Figure 108118091-A0202-12-0171-569
Figure 108118091-A0202-12-0171-568
CD3L66(SEQ ID NO：105)：具有小鼠CDR之IGLV7-43*01+F38V、A48G、Y51G、W59G
Figure 108118091-A0202-12-0172-571
Figure 108118091-A0202-12-0172-572
Figure 108118091-A0202-12-0172-570
將胺基酸序列反向轉譯為DNA，且使用基因合成技術製備cDNA(美國專利第6,670,127號；美國專利第6,521,427號)。使用自行開發之具有CMV啟動子之表現載體並使用標準分子生物技術，將重鏈(HC)可變區次選殖至含有L234A、L235A、及F405L突變之人類IgG1-AA Fc上。使用自行開發之具有CMV啟動子之表現載體並使用標準分子生物技術，將輕鏈(LC)可變區次選殖至人類Lambda(λ)恆定區上。將所得質體轉染至Expi293F細胞(Invitrogen)，然後使mAb表現。純化係使用Protein A管柱(hiTrap MAbSelect SuRe管柱)藉由標準方法來執行。在洗提之後，將匯集物透析至D-PBS(pH 7.2)。抗體之VH及VL序列係顯示於表9中。
Figure 108118091-A0202-12-0173-573
Figure 108118091-A0202-12-0174-574
Figure 108118091-A0202-12-0175-575
Figure 108118091-A0202-12-0176-576
Figure 108118091-A0202-12-0177-577
實例4：人源化抗CD3命中者與初級T細胞之內源性細胞結合
測試所得抗CD3抗體小組對於初級人類T細胞上之細胞表面CD3ε的結合。為了進行此測試，使用多株抗人類二級抗體將來自表現上清液之抗體的結合視覺化並藉由流動式細胞測量術加以分析。簡言之，抗CD3抗體對於細胞表面CD3ε之結合係使用初級人類T淋巴球藉由流動式細胞測量術來評估，而淋巴球係藉由負向選擇來純化(Biological Specialty,Colmar,USA)。將表現上清液或經純化之抗體之分別在培養基或FACS緩衝液(BD BioSciences)中標準化至10μg/ml。將2×105個細胞等分至96孔圓底盤(CoStar)之孔中以供標示。將表現上清液中的抗體添加至細胞，並在4℃下培養45min。在1300rpm下離心 3min並移除上清液後，在4℃並遠離直射光下，使50μL的抗人類IgG(H+L)Alexa Fluor 647二級抗體(Life technologies Inc.)以10μg/mL的最終濃度與細胞培養30min。接著洗滌並再懸浮於30μL FAC緩衝液(BD BioSciences)中。使用ForeCyt軟體在Intellicyt HTFC系統上執行樣本收集。在分析結合之前，使用綠色或紅色可固定活/死染料(Life Technologies Inc.)並分別使用前向/側向散射面積及高度參數，將存活單一細胞圈選出來。使用平均螢光強度值，將圖形產生在GraphPad Prism版本5中。
雖然運行的是滴定系列，但為清楚起見將中間濃度呈現在圖6中。兩種自行開發之噬菌體衍生抗體(具有與治療抗體相同之Fc區)係用作為對照組：G11(HC SEQ ID NO：118，LC SEQ ID NO：119，一種非食蟹獼猴交叉反應性促效性抗體)係用作為陽性對照組，且CD3B94(HC-SEQ ID NO：120，LC-SEQ ID NO：121，一種非結合體/非促效性抗體)係用來評估非特異性結合。商業SP34抗體並未在此測定中用作為比較物，因為其係小鼠抗體並且使用不同之二級偵測試劑會阻礙與受測變異體之直接比較。
數據展示出人源化抗CD3命中小組內的結合潛力陣列，其中兩個抗體(CD3B144,CD3B152)顯示完全喪失與人類T細胞之結合。其餘抗體顯示的結合潛力範圍可使用G11結合作為任意閾值來廣泛分成強和弱結合體。使用這些參數，從變異體小組中識別出七種強結合體和七種弱結合體(圖6)。
接著測試抗CD3命中者與初級食蟹獼猴CD4+ T細胞之結合分析，以評估交叉反應性的保留。使用來自食蟹獼猴周邊血液之經純化之CD4+ T細胞(Zen Bio,Triangle Research Park,USA)。測定規程類似於上述者。由於G11不與食蟹獼猴CD3ε交叉反應，因此在此檢定中使用CD3B124(一種自行開發之嵌合SP34衍生抗體，其具有SP34之VH及VL，並具有鼠類架構及人類IgG1 Fc)作為陽性對照組(圖7)。有趣的是，數個變異體顯示比起在人類細胞中所見到者下降之結合潛力。這包括結合有所降低的強結合體CD3B150、CD3B151及CD3B154，以及不再能偵測到超過背景值之結合的數個弱結合體。此結合之喪失與特定免疫球蛋白鏈無關，意味著重鏈與輕鏈之組合在交叉反應性的喪失中扮演角色。總而言之，這些測定讓保留人類與食蟹獼猴CD3ε間之物種交叉反應性的變異體得以被識別出來。
實例5：人源化抗CD3命中者在初級T細胞中之功能性分析
結合分析證明人源化抗CD3命中小組對於人類及食蟹獼猴T細胞顯示一範圍的結合潛力。為了調查各變異體經由CD3ε交聯誘導活化之能力，於磁珠偶聯抗體存在下將初級T細胞培養整夜。隔天，收穫細胞並且用抗CD69抗體標示以測量活化(圖8)。人源化抗CD3抗體係藉由以10μg/mL之抗體培養整夜而與蛋白質A塗覆之磁珠(SpheroTech,Lake forest,USA)結合。隔天，將2×105個初級人類T細胞以三重複接種於圓底細胞培養盤，然後加入2×105個經塗覆磁珠。在37℃下培養整夜後，收穫細胞並用抗CD69 Alexa Fluor® 488抗體(殖株FN50；Biolegend)標示以評估此活化標記之向上調控作用。樣本收集及分析係如以上針對結合所述者執行。運行數種陰性對照組，包括僅有T細胞、T細胞加上未經塗覆磁珠、及T細胞加上經同型對照組(CD3B94)塗覆之磁珠。所有這些皆顯示與未染色T細胞相當之類似平均螢光強度值，表示在此測定中之背景值很低。運行數個陽性對照組以供比較，包括OKT3(US5929212)及市售之SP34-2抗體。
接著在相同檢定中測試人源化抗CD3命中者活化初級食蟹獼猴CD4+ T細胞(Zen Bio,Triangle Research Park,USA)之能力(圖9)。已經描述FN50抗CD69抗體對於非人類蛋白質具有交叉反應性，因而可用來測試這些細胞的活化。
人類及食蟹獼猴之活化數據與結合數據相關聯，其中命中小組顯示一範圍的活化潛力。多個強結合體在與市售之SP34-2相比時，顯示出相等或更高程度的活化人類T細胞之能力。數個變異體顯示低於SP34-2之活化潛力，而一些結合體未顯示CD69刺激的跡象。無法活化僅見於顯示無或弱結合之變異體，並且所有強結合體皆顯示某種程度的活化，意味著對於人類(圖10A)及食蟹獼猴(圖10B)兩者之結合與活化潛力間有關聯性。
分別選擇具有高及中親和力的兩種抗CD3抗體(CD3B146及CD3B147)，以用於製備具有PSMA特異性抗體之雙特異性抗體。以IgG4 PAA GenMab形式(Labrijn et al,2013)製備這兩種抗CD3抗體，其中靶向親本(PSMA)含有409R GenMab突變(IgG4之天然胺基酸)，而殺滅親本(CD3)含有F405L GenMab突變及R409K。單特異性抗CD3抗體經表現為IgG4，其Fc區中具有Fc取代S228P、F234A、L235A、F405L、及R409K(CD3臂)(根據EU索引編號)。使用自行開發之具有CMV啟動子之表現載體並使用標準分子生物技術，將重鏈(HC)可變區次選殖至含有S228P、F234A、L235A、F405L、及R409K突變之人類IgG4-PAA Fc上。使用自行開發之具有CMV啟動子之表現載體並使用標準分子生物技術，將輕鏈(LC)可變區次選殖至人類Lambda(λ)恆定區上。將所得質體轉染至Expi293F細胞(Invitrogen)，然後使mAb表現。使用標準純化方法來純化抗CD3抗體：蛋白質A管柱，其使用100mM NaAc(pH3.5)的洗提緩衝液、及2M Tris(pH 7.5)及150mM NaCl的中和緩衝液。使用PD10(Sephadex G25M)管柱將mAb去鹽，並將匯集物透析至D-PBS (pH 7.2)。
產生包含VH及VL區之單特異性抗CD3抗體CD3B217，其具有SEQ ID NO：102之VH、及SEQ ID NO：103之VL、及具有S228P、F234A、L235A、F405L、及R409K取代之IgG4恆定區。CD3B217包含SEQ ID NO：108之重鏈及SEQ ID NO：109之輕鏈。產生包含VH及VL區之單特異性抗CD3抗體CD3B219，其具有SEQ ID NO：104之VH、及SEQ ID NO：105之VL、及具有S228P、F234A、L235A、F405L、及R409K取代之IgG4恆定區。CD3B219包含SEQ ID NO：110之重鏈及SEQ ID NO：111之輕鏈。
實例6.製備PSMA X CD3雙特異性抗體
PSMAxCD3雙特異性抗體的形成需要兩個親本mAb，一個針對靶向臂(例如PSMA)，且一個針對效應臂(例如CD3)。將PSMA mAb與中親和力CD3B217(VH SEQ ID NO：102,VL SEQ ID NO：103)CD3臂及高親和力CD3B219(VH SEQ ID NO：104,VL SEQ ID NO：105)CD3臂組合。此等親本mAb係呈GenMab形式(Labrijn et al,2013)，其中靶向親本(PSMA)含有409R GenMab突變(IgG4之天然胺基酸)，而殺滅親本(CD3)含有F405L GenMab突變及R409K突變。單特異性抗CD3抗體經表現為IgG4，其Fc區中具有Fc取代S228P、F234A、L235A、F405L、及R409K(CD3臂)(根據EU索引編號)。單特異性抗體係在CMV啟動子下經表現於HEK細胞系中。
使用蛋白質A管柱來純化親本PSMA及CD3抗體，其使用100mM NaAc(pH3.5)的洗提緩衝液、及2M Tris(pH 7.5)及150mM NaCl的中和緩衝液。使用PD10(Sephadex G25M)管柱將mAb去鹽，並將其透析至D-PBS(pH 7.2)緩衝液中。
純化後，將親本PSMA抗體與所欲親本CD3抗體在還原條件下於75mM半胱胺-HCl中混合，並在31℃下培養4h。基於莫耳比來進行重組反應，其中將設定量的PSMA(例如，10mg、或~67.8奈莫耳)與CD3抗體(例如，~71.8奈莫耳)組合，其中以PSMA抗體的6%過量添加CD3抗體。PSMA抗體儲備液的濃度自0.8至6mg/mL而有所變化，且各配對之重組反應的體積亦會有所變化。隨後將重組物對PBS透析以移除還原劑。用過量的CD3抗體(比)執行雙特異性抗體反應，以最小化重組後剩餘的未反應PSMA親本抗體之量。在親本mAb的部分還原後，將還原劑經由整夜透析至PBS中來移除。
在重組反應中所生產的最終雙特異性抗體、連同所使用的親本mAb(即PSMA、CD3、或空)係列於表10中，其中序列係列於表11及表12中。
所選之PSMA命中者亦與非殺滅臂(空)配對，以產生出於測試目的之陰性對照組。針對對照雙特異性抗體，產生B2M1(呈IgG4 PAA形式的RSV抗體，VH SEQ ID NO：106，VL SEQ ID NO：107)，將其純化，並與CD3臂CD3B219-F405L、R409K組合以產生CD3B288(CD3 X空)，或與PSMA臂PSMB162、PSMB126、PSMB130組合以分別產生PS3B37、PS3B39、及PS3B40(PSMA X空)。
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產生包含VH及VL區之單特異性抗CD3抗體CD3B217，其具有SEQ ID NO：102之VH、及SEQ ID NO：103之VL、及具有S228P、F234A、L235A、F405L、及R409K取代之IgG4恆定區。CD3B217包含SEQ ID NO：108之重鏈及SEQ ID NO：109之輕鏈。產生包含VH及VL區之單特異性抗CD3抗體CD3B219，其具有SEQ ID NO：104之VH、及SEQ ID NO：105之VL、及具有S228P、F234A、L235A、F405L、及R409K取代之IgG4恆定區。CD3B219包含SEQ ID NO：110之重鏈及SEQ ID NO：111之輕鏈。作為對照組，產生包含VH及VL區之單特異性抗RSV抗體(衍生自B21M)，其具有SEQ ID NO：106之VH、及SEQ ID NO：107之VL、及具有S228P、F234A、L235A、或F234A、L235A、 R409K、F405L之IgG4恆定區，以當作雙特異性抗體之空臂(null arm)而與CD3或PSMA臂任一者搭配。
雙特異性抗體PS3B2包含mAb CD3B217-F405L、R409K之CD3結合臂及mAb PSMB120之PSMA結合臂。雙特異性抗體PS3B3包含mAb CD3B217-F405L、R409K之CD3結合臂及mAb PSMB121-R409之PSMA結合臂。雙特異性抗體PS3B4包含mAb CD3B217-F405L、R409K之CD3結合臂及mAb PSMB122-R409之PSMA結合臂。雙特異性抗體PS3B5包含mAb CD3B217-F405L、R409K之CD3結合臂及mAb PSMB123-R409之PSMA結合臂。雙特異性抗體PS3B7包含mAb CD3B217-F405L、R409K之CD3結合臂及mAb PSMB58-R409之PSMA結合臂。雙特異性抗體PS3B8包含mAb CD3B217-F405L、R409K之CD3結合臂及mAb PSMB126-R409之PSMA結合臂。雙特異性抗體PS3B9包含mAb CD3B217-F405L、R409K之CD3結合臂及mAb PSMB127-R409之PSMA結合臂。雙特異性抗體PS3B10包含mAb CD3B217-F405L、R409K之CD3結合臂及mAb PSMB128-R409之PSMA結合臂。雙特異性抗體PS3B11包含CD3B217-F405L、R409K之CD3結合臂及mAb PSMB129-R409之PSMA結合臂。雙特異性抗體PS3B12包含CD3B217-F405L、R409K之CD3結合臂及mAb PSMB130-R409之PSMA結合臂。
雙特異性抗體PS3B19包含mAb CD3B219-F405L、R409K之CD3結合臂及mAb PSMB119-R409之PSMA結合臂。雙特異性抗體PS3B20包含mAb CD3B219-F405L、R409K之CD3結合臂及mAb PSMB120-R409之PSMA結合臂。雙特異性抗體PS3B21包含mAb CD3B219-F405L、R409K之CD3結合臂及mAb PSMB121-R409之PSMA結合臂。雙特異性抗體PS3B22包含mAb CD3B219-F405L、R409K之CD3結合臂及mAb PSMB122-R409之PSMA結合臂。雙特異性抗體PS3B23包含mAb CD3B219-F405L、R409K之CD3結合臂及mAb PSMB123-R409之PSMA結合臂。雙特異性抗體PS3B24包含mAb CD3B219-F405L、R409K之CD3結合臂及mAb PSMB124-R409之PSMA結合臂。雙特異性抗體PS3B25包含mAb CD3B219-F405L、R409K之CD3結合臂及mAb PSMB165-R409之PSMA結合臂。雙特異性抗體PS3B26包含mAb CD3B219-F405L、R409K之CD3結合臂及mAb PSMB126-R409之PSMA結合臂。雙特異性抗體 PS3B27包含CD3B219-F405L、R409K之CD3結合臂及mAb PSMB127-R409之PSMA結合臂。雙特異性抗體PS3B28包含CD3B219-F405L、R409K之CD3結合臂及mAb PSMB128-R409之PSMA結合臂。雙特異性抗體PS3B29包含CD3B219-F405L、R409K之CD3結合臂及mAb PSMB129-R409之PSMA結合臂。雙特異性抗體PS3B30包含CD3B219-F405L、R409K之CD3結合臂及mAb PSMB130-R409之PSMA結合臂。
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實例7.細胞結合之表徵
測試PSMA X CD3雙特異性抗體與PSMA陽性細胞系LNCAP、人類PSMA-HEK、黑猩猩PSMA-HEK、及食蟹獼猴PSMA-HEK的結合。為了評估PSMA雙特異性抗體的結合能力，利用細胞結合檢定(先前所述)。簡言之，以已知濃度的雙特異性抗體結合PSMA表現性腫瘤細胞，並藉由抗人類κ輕鏈PE偶聯的偵測試劑(Invitrogen)偵測所結合抗體。平均螢光強度(MFI)係所結合雙特異性抗體的量度。將MFI轉換為相對EC50。EC50係常用的劑量反應曲線，其中半最大有效濃度或EC50點係定義為曲線的反曲點。藉由測量雙特異性結合之細胞及已知濃度來判定EC50。高濃度導致最大目標抗原結合，即完全結合飽和度。然後，將劑量反應曲線稀釋直到背景者或無雙特異性結合者。此曲線的反曲點反映EC50點。所計算EC50係藉由下列判定：在EC50點處取得雙特異性抗體的ug/ml量，並基於雙特異性抗體的MW，將該ug/ml量轉換為莫耳濃度值。將雙特異性抗體針對蛋白質濃度標準化，然後將其與相同數量的表現人類或食蟹獼猴PSMA的細胞培養。藉由流動式細胞測量術收集在各濃度下的MFI，並將其依據濃度變動來作圖。將數據經由log10轉換，然後加以作圖。進行結合曲線的非線性迴歸以判定EC50。使用此等相對值以將與目標細胞的PSMA結合評級。表12含有全細胞結合研究(使用LNCaP、食蟹獼猴、及黑猩猩PSMA表現性細胞系)的相對EC50結合值。
圖11顯示所有所製備之雙特異性抗體的LNCAP結合。結合數據意味著觀察到3種結合族群：1)強結合、2)中結合、及3)弱/無結合。PSMA X空臂雙特異性抗體維持與LNCAP細胞的結合(圖11E)，但空X CD3臂雙特異性抗體並未觀察到結合(圖11F)。具有相同PSMA臂的中親和力及高親和力CD3臂雙特異性抗體以類似程度結合。至於其餘檢定，僅使用為陽性LNCaP結合體的雙特異性抗體來評估與黑猩猩PSMA-HEK(圖12)、食蟹獼猴PSMA-HEK(圖13)、人類PSMA-HEK(圖14)、或親本HEK293(數據未顯示)的結合活性。就各細胞系而言，測試高親和力或中親和力CD3結合體。hPSMA-HEK結合數據意味著LNCaP與此細胞系之間可能有細微差異；然而，結合顯然呈現相同整體順序。衍生自LNCaP淘選的PS3B19似乎以與hPSMA-HEK細胞相同的強度結合。雙特異性抗體在黑猩猩PSMA HEK上顯示廣大範圍的結合概況。有趣的是，在黑猩猩PSMA HEK細胞系上淘選的命中者具有較強的結合概況，而在LNCaP上淘選的命中者顯示較弱的結合。此實驗中沒有觀察到與親本HEK細胞的結合(數據未顯示)。
在重組而成為雙特異性抗體之後，數種殖株一致地表現優於其他者且進行跨物種結合。此等雙特異性抗體係PS3B21、PS3B22、PS3B26、PS3B27、PS3B28、及PS3B30，其等對應於mAb PSMB121、PSMB122、PSMB126、PSMB127、PSMB128、及PSMB130。基於細胞之結合EC50及所計算EC50係顯示於表13中。
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所有雙特異性抗體維持結合PSMA陽性細胞系的能力。其中數種抗體與黑猩猩及食蟹獼猴PSMA表現性細胞結合良好，但與LNCaP細胞僅有微弱結合。LNCAP結合EC50的範圍係在0.5nM至864nM，而食蟹獼猴PSMA表現性HEK結合EC50的範圍係在0.9至128nM，且黑猩猩PSMA HEK結合的範圍係在36至0.3nM(表12)。基於細胞結合EC50，其中數種抗PSMA雙特異性抗體符合針對人類PSMA的20nM或更緊密結合的標準，且符合針對食蟹獼猴PSMA的50nM或更緊密結合的標準。
實例8.藉由Proteon及Biacore的親和力表徵
為了進一步評估抗體，對自細胞結合檢定繼續進行的命中者測量黑猩猩PSMA ECD締合及解離速率。使用ProteOn XPR36系統(BioRad)，藉由表面電漿共振(SPR)，研究PSMAxCD3雙特異性mAb與目標(重組黑猩猩PSMA)的交互作用。生物感測器表面係藉由使用胺偶合化學的製造商說明書，將抗人類IgG Fc(Jackson ImmunoResearch Laboratory，目錄號109-005-098)偶合至GLC晶片(BioRad，目錄號176-5011)之經修飾藻酸鹽聚合物層表面而製備。將大約4400RU(反應單位)的抗人類IgG Fc抗體固定化。在25℃下於運行緩衝液(DPBS+0.03%P20+100μg/ml BSA)中執行動力學實驗。為了執行動力學實驗，捕捉100RU的雙特異性抗體，接著以範圍在3.7nM至300nM(以3倍連續稀釋)的濃度注射分析物(重組黑猩猩PSMA ECD)。以50μL/min監測締合相3分鐘，隨後進行15分鐘的緩衝液流(解離相)。晶片表面 係用兩次18秒的100mM磷酸(H3PO4，Sigma，目錄號7961)以100μL/min的脈衝而再生。
將所收集之數據使用ProteOn Manager軟體處理。首先，用間點將數據針對背景校正。接著，數據之雙參考減法係藉由使用緩衝液注射用於分析物注射來執行。使用Langmuir 1：1結合模型執行數據之動力學分析。各雙特異性抗體的結果係以ka(結合速率)、kd(解離速率)、及KD(平衡解離常數)的格式記述。結果係顯示於表14至表18中。
結果：
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就大部分而言，Proteon結合與細胞結合一致。然而，雙特異性抗體之一者並未顯示與重組黑猩猩PSMA ECD的結合，雖然其結合至表現在HEK細胞之細胞表面上的黑猩猩PSMA。此抗體(即PS3B26)僅為細胞的結合體，而自後續結合實驗剔除。其中一種陽性結合體PS3B23顯示雙相結合，而並未充分擬合至1：1結合模型。其中十種雙特異性抗體在藉由Proteon的條件下係對於重組黑猩猩PSMA ECD的陽性結合體，且其親合力係藉由BIACORE進一步提供概況。
藉由Biacore之與重組黑猩猩PSMA的結合使用Biacore 3000光學生物感測器(Biacore-GE Healthcare)，來執行使用表面電漿共振(SPR)的親和力測量。生物感測器表面係藉由使用胺偶合化學的製造商說明書，將抗人類IgG Fc(Jackson ImmunoResearch Laboratory，目錄號109-005-098)偶合至CM-5晶片(Biacore，目錄號BR-1000-12)之羧甲基化葡聚糖(carboxymethylated dextran)表面而製備。將大約16,000RU(反應單位)的抗人類IgG Fc抗體固定化於四個流動槽之各者。在25℃下於運行緩衝液(DPBS+0.03%P20+100μg/ml BSA)中執行動力學實驗。於運行緩衝液中製備抗原稀釋液(重組黑猩猩PSMA，為在3倍連續稀釋下自1.2至300nM或3.7至900nM的濃度)。約100RU 的PSMAxCD3雙特異性mAb經捕捉於感測器晶片的流動槽2至4上。使用流動槽1作為參考表面。在捕捉PSMAxCD3雙特異性mAb之後，以50μl/min進行3或5分鐘的抗原(重組黑猩猩PSMA)注射(締合相)，接著進行15或20分鐘的緩衝液流(解離相)。晶片表面係藉由兩次18秒的100mM磷酸(H3PO4，Sigma，目錄號7961)以50μl/min的注射而再生。
將收集的數據使用BIAevaluation軟體(Biacore)處理。首先，數據的雙參考減法係藉由從分析物注射之已扣除參考之曲線減去由緩衝液注射所產生的曲線來執行。數據的動力學分析係使用Langmuir 1：1結合模型搭配全域擬合(global fit)來執行。各PSMAxCD3雙特異性mAb的結果係以ka(結合速率)、kd(解離速率)、及KD(平衡解離常數)的格式記述。
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藉由Proteon之所有結合至黑猩猩PSMA ECD的雙特異性抗體經由Biacore亦會進行結合。藉由Biacore的結合親和力略微較弱。
實例9.在功能性細胞殺滅檢定中評估PSMA x CD3雙特異性Ab
使用T細胞媒介之細胞毒性檢定作為雙特異性抗體活性之功能性篩選。測試雙特異性抗體裂解過度表現人類PSMA之HEK細胞以及人類前列腺癌細胞系LNCAP的能力。此外，測試雙特異性抗體殺滅食蟹獼猴PSMA HEK細胞的能力以確認物種交叉反應性。
使用鉻51釋放檢定測量個別雙特異性抗體的細胞毒性。藉由鉻釋放於培養基中的量作為在活化T細胞存在下的細胞裂解結果，測量細胞毒性。將釋放量與僅目標細胞中的自發性鉻釋放、及在利用Triton-X的條件下經由總目標細胞裂解的最大釋放進行比較。
將來自多個供體的人類全T細胞(CD3+)用經OKT3塗覆之燒瓶(1ug/ml)及20U/ml的IL-2預活化整夜。將T細胞洗滌2x。將目標細胞系用鉻51標示達1小時。將T細胞及目標細胞以5：1比培養18至24小時，然後收穫並分析培養上清液。所有點皆以三重複運行並記述為三重複之細胞毒性平均值及SEM。使用自10ug/ml至0,00001ug/ml的雙特異性抗體稀釋液。
圖15顯示所有PSMAxCD3雙特異性抗體之針對hPSMA-HEK細胞的T細胞媒介之殺滅。針對此實驗，測試中親和力及高親和力CD3臂雙特異性抗體。細胞殺滅對大多數高親和力CD3臂分子而言是明顯的，其中數種雙特異性抗體在最低測試濃度下顯示殺滅。PS3B9係唯一在較低濃度下顯示顯著細胞殺滅的中親和力雙特異性抗體。圖16顯示數對雙特異性抗體之T細胞媒介之殺滅。此數據清楚呈現，高親和力CD3結合雙特異性抗體產生最多細胞殺滅，且此等係進一步細胞殺滅實驗之對象。
圖17顯示具高親和力CD3臂之PSMAxCD3雙特異性抗體針對LNCAP細胞產生的細胞殺滅數據。PS3B25、PS3B27、PS3B28、PS3B30、PS3B23、及PSB22皆具有T細胞重定向活性。PS3B29在最高濃度下顯示對hPSMA-HEK細胞(但未對LNCAP)的活性，此意味著由於其係弱PSMA結合體，故其無法在PSMA表現水平低時結合良好。相比之下，PS3B25、PS3B27、 及PS3B28顯示最高的LNCAP腫瘤細胞裂解。針對RSV蛋白之由PSMB125及空臂組成的雙特異性抗體PS3B38，由於無法結合T細胞，因而未具有如所預期的細胞溶解活性。
為了確認食蟹獼猴PSMA T細胞重定向功能，針對食蟹獼猴PSMA-HEK細胞裂解對雙特異性抗體進行測試，其係顯示於圖18。所測試的所有雙特異性抗體皆能夠將表現食蟹獼猴PSMA的細胞殺滅，其中PS3B27及PS3B28具有最高活性。自先前的細胞結合研究，此等抗PSMA臂對於食蟹獼猴PSMA相較於人類PSMA具有更高的親和力，而且此項觀察亦反映於食蟹獼猴PSMA目標細胞殺滅中。測試PS3B27及PS3B30對親本HEK細胞系的殺滅，且其等並未將HEK親本細胞系裂解(數據未顯示)。
選擇PSMA抗體PSMB127及PSMB130(分別產生PSMAxCD3雙特異性抗體PS3B27及PS3B30)用於進一步分析。PS3B27及PS3B30殺滅人類及食蟹獼猴PSMA目標兩者，並且具有高親和力CD3臂。PS3B27以實質上相同的~14.6nM之EC50結合人類PSMA表現性細胞系，而食蟹獼猴的為~9.9nM。PS3B30以大約5至6倍的親合力差異結合人類PSMA，其中EC50為~8至8.5nM，而食蟹獼猴PSMA的為~37.8至57nM。雖然人類結合與食蟹獼猴結合之間的差異可能大於5倍，但是PS3B27對人類及食蟹獼猴目標兩者皆顯示功能性殺滅。
如先前針對重組黑猩猩PSMA ECD所述，使用ProteOn XPR36系統(BioRad)，藉由表面電漿共振(SPR)來重複PS3B27與重組黑猩猩PSMA ECD的交互作用，並研究PS3B27與重組食蟹獼猴PSMA ECD及人類PSMA ECD的交互作用。結合至黑猩猩、食蟹獼猴、及人類PSMA ECD之動力學及親和力彙總係顯示於表20中。此雙特異性抗體以實質上相同的親和力結合所有目標。
Figure 108118091-A0202-12-0233-632
Figure 108118091-A0202-12-0234-633
在凋亡蛋白酶檢定中評估雙特異性抗體PS3B27。使用第二細胞毒性檢定測量PS3B27的T細胞媒介之殺滅。凋亡蛋白酶細胞毒性檢定經由活性凋亡蛋白酶3/7裂解螢光受質以間接測量細胞殺滅。受質裂解會導致螢光DNA染料的螢光限制於細胞核。在整個檢定過程中，使用能夠在相同座標處精確將(多個)孔成像的電動10X物鏡，以在各孔中進行重複的螢光測量。基於所界定的大小限制，且/或透過使用二級標記，來識別目標細胞群。
冷凍全CD3+ T細胞(購自Biological Specialty Corporation,Colmar,PA)係藉由自正常健康供體的負向選擇來單離。將表現PSMA的前列腺癌細胞(LNCaP,C42)培養於具有10% HI FBS+補充物的RPMI 1640(購自Life Technologies)中。
依照製造商指南，將T細胞及目標細胞以3：1的效應物與目標比(E：T)於無酚紅RPMI+10% FBS及補充物(Life Technologies)中組合，其不具有選擇試劑，並將0.6uL的NucView凋亡蛋白酶試劑(Essen Bioscience)添加至各mL的細胞。將總體積0.1mL的細胞添加至透明96孔平底盤(BD Falcon)的適當孔中。以在無酚紅RPMI中2X最終濃度製備PS3B27(CD3xPSMA)、CD3B288(CD3x空)、或PS3B46(PSMAx空)雙特異性抗體(如上文所指示來製備)，並將0.1mL的化合物添加至各孔中。在室溫下培養30分鐘以最小化在孔邊緣處的細胞聚集之後，將盤轉移至Zoom Incucyte儀器(Essen Bioscience)。Incucyte儀器位於設定在37℃、5% CO2下的加濕培養箱中。
依照製造商指南，為各測試細胞系設計在Incucyte上的處理定義。每六個小時進行測量，直到觀察到凋亡蛋白酶信號趨於穩定，且接著自含有最高濃度的(多種)測試化合物之(多個)孔中的最大信號連續三或更多次降低。
在檢定完成後，使用適當的處理定義分析各盤。將原始螢光數據自Incucyte Zoom軟體匯出，並貼到GraphPad Prism(GraphPad Software,Inc.,La Jolla,CA)中。藉由在GraphPad中計算各孔的曲線下面積(AUC)，來判定凋亡 蛋白酶3/7活性。AUC值係依據Log10nM化合物之變動加以作圖。依照非線性迴歸分析(4參數擬合(4 parameter fit)、普通最小平方(least ordinary squares))，來記述各劑量曲線之EC50，單位為奈莫耳濃度(nM)。各檢定含有最少三個生物性重複，且各細胞系係以五名健康供體測試。使用非線性迴歸模型，以非臨床統計進一步分析數據。實例圖係顯示於圖19中。所計算結果係見於表21中。
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實例10.藉由PS3B27在PSMA陽性細胞系中之T細胞活化
純化全CD3+ T細胞係由Biological SpecialtyCorporation自正常的健康供體獲得(其係藉由負向選擇經白血球分離(leukapheresed)的白血球)，並將其儲存於-80℃下或液態氮中直到準備使用為止。以3：1的效應物：目標比，將初始(naïve)未活化T細胞與目標細胞及CD3xPSMA雙特異性抗體或空對照組(CD3x空或PSMAx空)組合。在48小時培養後，藉由三明治酶聯免疫吸附檢定(ELISA)(Meso Scale Discovery)分析上清液的細胞介素分泌。利用流動式細胞測量術(藉由將T細胞針對CD45、CD8、CD25染色，以及活/死近IR染色)，來測量T細胞活化標記CD25的表現。先在總細胞群上進行圈選(FSC-A對SSC-A)以排除碎屑及細胞聚集，以判定CD8+/CD25+之群。藉由活/死染色的排除，將細胞圈選子集針對經判定為活的細胞進一步縮小。然後，將活細胞針對CD45+/CD8+細胞進行圈選。最後，識別出CD8+/CD25+陽性子集。藉由將CD8+/CD25+的百分比相對於雙特異性抗體或對照組Log10nM作圖，接著進行 非線性迴歸(4參數擬合、最小平方法)，以導出PS3B27或對照組的EC50(圖20)。所有數據分析皆在GraphPad Prism中執行。
實例11.在經PBMC人源化NSG小鼠中預防HEK293-PSMA異種移植物之腫瘤形成的抗腫瘤功效
所有體內實驗係根據實驗動物照護與使用指南(The Guide for the Care and Use of Laboratory Animals)執行，且由Janssen R & D,Spring House,PA的動物照護與使用委員會(Institutional Animal Care and Use Committee)核准。
藉由使用於雄性NSG小鼠(NOD.Cg-Prkdc scid IL2rg tmlWjl /SzJ或NOD SCID γ,Jackson Laboratories,Bar Harbor,ME)中所接種的人類供體周邊血液單核細胞(PBMC)預防HEK293-PSMA人類異種移植物的腫瘤形成(疾病預防模型)，評估PS3B27(PSMA x CD3雙特異性抗體)的功效。在腫瘤細胞植入之前7天，將小鼠以1×107個人類PBMC於側尾靜脈進行靜脈內(iv)注射。隨後將小鼠於右後側腹皮下(sc)植入1×107個HEK293-PSMA細胞。從腫瘤植入日開始，在第0、3、5、7、及10天(q2d至q3d)，將PBS(磷酸鹽緩衝液)對照、PS3B27、CD3B288(CD3 x空)、或PS3B46(PSMA x空)以0.4mg/kgiv投予總共5劑。
使用下式計算腫瘤體積：腫瘤體積(mm3)=(a×b2/2)；其中「a」代表由卡尺測量所判定之腫瘤長度，且「b」代表寬度，且在整個研究期間每週監測兩次。腫瘤生長抑制百分比(TGI)係定義為治療組與對照(PBS)組的平均腫瘤體積之間的差異，計算方式為TGI=[((TVc-TVt)/TVc)*100]，其中TVc係給定對照組之平均腫瘤體積，且TVt係治療組之平均腫瘤體積。如NCI標準所定義，將
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60% TGI視為具生物顯著性(Johnson,et al(2001)Br J Cancer 84(10)1424-31)。當達到1500mm3的最大腫瘤體積時，將動物自研究移除。
植入人類PBMC在小鼠中最終導致移植物抗宿主病(GvHD)，其中所植入供體T細胞變得活化並浸潤宿主組織，導致體重減輕、器官衰竭、及不可避免地死亡。為了監測GvHD的發作及嚴重性，每週記錄體重兩次並以克數(g)表示。使用下式計算體重變化百分比：體重變化=[((Bt-B0)/B0)*100]，其中 Bt係於給定研究日的體重，且B0係治療起始時的體重。當動物持續的體重減輕大於初始體重的20%時，則將其視為瀕死狀態並自研究移除。
統計顯著性係使用Graph Pad Prism軟體(第6版)以使用鄧奈特(Dunnett)多重比較檢定的多重比較，使用單因子ANOVA來評估。PS3B27治療有效延緩HEK293-PSMA腫瘤形成及腫瘤生長(圖21)。在研究第16天(在最後治療性處理後6天)，在PBS處理組的八隻小鼠中有七隻可偵測到小型但可觸知的HEK293-PSMA腫瘤，而在PS3B27治療組的八隻中僅一隻小鼠具有腫瘤。在CD3B288治療組中，八隻小鼠中有五隻具有可觸知的腫瘤，而在PS3B46組中，八隻小鼠中有兩隻具有小型腫瘤。在治療/處理中止後27天(腫瘤植入後第37天)，當各組具有最少7隻動物時，評估腫瘤生長抑制。相較PBS處理對照組，PSMA x CD3雙特異性抗體(PS3B27)治療組中的腫瘤生長受到90%抑制(n=8/組，p<0.001)。相較於PBS對照組，PSMA x空雙特異性抗體(PS3B46)亦以統計顯著方式抑制腫瘤形成及生長(TGI=42%,n=7)(p<0.05)，但基於NCI標準[1]，並未將其視為具生物顯著效應。
接受PBMC的動物組最終因GvHD進展受害(succumb)，然而在目前研究中的體重減輕係屬輕微。在經0.4mg/kg PS3B27治療相較於經PBS處理之動物的平均體重之間並未觀察到顯著差異，如圖22所示，直到腫瘤植入後第37天(p>0.05)。因此，PS3B27媒介之T細胞重定向並未進一步促成GvHD相關之體重減輕。
儘管在目前研究中的體重減輕相當微小，偶發的GvHD相關死亡獲得注意。在腫瘤植入後第30天，在PSMA x空雙特異性抗體PS3B46組中，有一隻小鼠由於過度的GvHD相關(>20%)體重減輕而將其安樂死。在腫瘤植入後第42天，在PBS組(n=1)、及PSMA x空雙特異性抗體PS3B46組(n=2)中發現額外的GvHD相關死亡，且將數隻額外的小鼠自研究移除，這是因為達到1500mm3腫瘤體積終點，此時終止整個研究。
實例12.PS3B27在雄性CD1裸鼠中預防混合HEK293-PSMA/T細胞異種移植物之腫瘤形成的功效
在混合異種移植物模型中評估PS3B27的功效，其中將人類CD3+全T細胞及腫瘤細胞共注射至雄性CD1裸鼠(NU-Foxn1nu,Charles River Laboratories,Wilmington,MA)中。
將人類PSMA x人類CD3雙特異性抗體PS3B27、或對照雙特異性抗體每2至3天(q2d或q3d)以iv投予總共5劑(如所指示)。在整個研究期間每週監測小鼠(體重及腫瘤卡尺測量)兩次。基於25g體重，將以μg/隻動物表示的藥物劑量轉換為mg/kg(實例：10μg/隻動物=0.4mg/kg)。將以mg/kg投予的藥物劑量，基於體重進行10mL/kg給藥(實例：25g小鼠=0.25mL)。
使用下式計算腫瘤體積：腫瘤體積(mm3)=(a×b2/2)；其中「a」代表由卡尺測量所判定之腫瘤長度，且「b」代表寬度，且在整個研究期間每週監測兩次。腫瘤生長抑制百分比(TGI))係定義為治療組與對照(PBS)組的平均腫瘤體積之間的差異，計算方式為TGI=[((TVc-TVt)/TVc)*100]，其中TVc係給定對照組之平均腫瘤體積，且TVt係治療組之平均腫瘤體積。如NCI標準所定義，將
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60% TGI視為具生物顯著性[1]。當達到1500mm3的最大腫瘤體積時，將動物自研究移除。
由於缺乏CD3臂對於對應小鼠抗原的交叉反應性，無法針對宿主組織中CD3結合評估PS3B27的耐受性。然而，與腫瘤細胞一起注射的T細胞確實會表現人類CD3且可結合PS3B27及CD3X空對照組。使用下式計算體重變化百分比：體重變化=[((Bt B0)/B0)*100]，其中Bt係於給定研究日的體重，且B0係治療起始時的體重。
統計顯著性係使用Graph Pad Prism軟體(第6版)以使用鄧奈特(Dunnett)多重比較檢定的多重比較，使用單因子ANOVA來評估。
在雄性CD1裸鼠(ELNref：CD3-PSMA-2013-00003)中，藉由預防混合異種移植物的腫瘤形成來評估PS3B27的功效，該等混合異種移植物以1：5的效應物與目標比含有HEK293-PSMA細胞及活化且擴增的CD3陽性全T細胞。持續12天在含有IL-2的培養基中使用T細胞活化/擴增套組(Miltenyi Biotech,Auburn,CA，目錄號130-091-441、130-097-743)，在體外活化並擴增T細胞。將小鼠於右後側腹以sc植入於50% Cultrex(Trevigen,Gaithersburg,MD，目錄號3433-005-01)及50%無血清RPMI 1640培養基中的每隻小鼠5×106個HEK293- PSMA細胞及1×106個活化且擴增的T細胞之混合物。從腫瘤植入的相同日開始，在第0、2、4、7、及9天(q2d至q3d)依體重iv投予PBS、0.005至0.5mg/kg的PS3B27、0.5mg/kg的CD3B288(CD3 x空雙特異性抗體)、或0.5mg/kg的PS3B46(PSMA x空雙特異性抗體)總共5劑。(n=10/組)。亦評估以ip投予用PS3B27進行的治療(數據未顯示)。在PBS對照組中，各在第46天及第49天因過度腫瘤負荷而將一隻動物移除。將腫瘤體積數據作圖(直到第64天)，其後因腫瘤體積過大而將一半對照組動物自研究移除。
如圖23所示，在治療/處理中止後55天期間(直到第64天)，評估腫瘤形成及生長。相較於PBS對照組，以PS3B27進行的治療在第64天於所有劑量(0.005、0.05、或0.5mg/kg)下皆顯著地抑制腫瘤形成並延緩生長，而分別導致73%、81%、及82%的TGI(分別為p<0.001、P<0.0001、P<0.001)。藉由ip投予進行的PS3B27治療顯示與iv投予類似的功效(數據未顯示)。經CD3B288(CD3 x空雙特異性抗體)或PS3B46(PSMA x空雙特異性抗體)治療的動物，分別在第64天以51%及38% TGI(分別為p<0.05、p=不顯著)顯示一些抗腫瘤活性，然而基於60% TGI的NCI標準，並未將此視為具生物顯著性，其證實需要雙特異性抗體的CD3及PSMA結合兩者以達到功效。
在研究過程期間體重沒有減輕，然而相較於經PBS處理，以0.5及0.005mg/kg經PS3B27治療的動物之體重增加幅度顯著較低(分別為p<0.001、p<0.0001，圖24)，但此可能歸因於此等動物中的腫瘤負荷較低。
實例13.人類PSMA ECD與雙特異性抗體PS3B27之抗PSMA Fab臂結合的晶體結構
PSMA係在細胞表面上表現的同二聚體蛋白質。PSMA係每單體750個殘基的第II型整合醣蛋白，其包含具肽酶活性的大型ECD域(705個殘基)、單次跨TM域、及短的19個殘基胞內域。判定人類PSMA之胞外區(ECD)與雙特異性抗體PS3B27之抗PSMA Fab臂結合的晶體結構，其解析度達3.15Å，以更加了解PSMA與抗體之間的組合部位。
將人類PSMA之胞外區(殘基44至750)表現於High FiveTM昆蟲細胞中，其具有N端gp67信號肽，接著是可切割的六組胺酸標籤(SEQ ID NO： 158)。藉由三步驟程序，自上清液純化所分泌的蛋白質，該三步驟程序包含初始Ni2+-NTA親和性捕捉、TEV媒介之組胺酸標籤切割以及隨後的反親和層析(inverse affinity chromatography)步驟、及最終粒徑篩析層析步驟。將純化PSMA-ECD於液態氮中急速冷凍並儲存在-80℃下於10mM HEPES(pH 7.4)、150mM NaCl、2mM CaCl2、0.1mM ZnCl2中。
使PSMB83之Fab(其係雙特異性抗體PS3B27中的親本抗PSMA Fab臂)表現於HEK293 Expi細胞中，其具有六組胺酸標籤(SEQ ID NO：158)，然後使用親和(HisTrap,GE Healthcare)及粒徑篩析層析(SEC-300,Phenomenex Yarra)進行純化。將Fab儲存在4℃下於50mM NaCl、20mM Tris(pH 7.4)中。
藉由三步驟程序製備人類PSMA ECD/PSMB83 Fab複合物。首先，將Fab緩衝液交換為20mM MES(pH 6.0)、150mM NaCl。接著，將Fab及PSMA混合(相對於PSMA單體為1.5莫耳過剩Fab)並在4℃下培養整夜，同時透析至20mM MES(pH 6.0)中。最後，將複合物於20mM MES(pH 6.0)中結合至monoS 5/50管柱，並用NaCl梯度洗提。
在20℃下使用坐滴蒸氣擴散(sitting drop vapor-diffusion)方法，並使用Mosquito LCP機器人(TTP Labtech)，來獲得適用於X射線繞射之晶體。以微晶種及最初為7.3mg/mL的PSMA/Fab複合物，使PSMB83 Fab與人類PSMA ECD結合之晶體自18% PEG 3kDa、0.2M(NH4)2SO4、0.1M Tris(pH 8.5)生長。以最初為8.8mg/mL的Fab，自25% PEG 3kDa、0.2M LiCl、0.1M乙酸鹽(pH 4.5)獲得游離PSMB83 Fab的晶體。
藉由用Phaser(Phaser Crystallographic Software,University of Cambridge)進行分子置換(MR)來解析結構。用於PSMB83 Fab結構之MR搜索模型係PDB代碼4M6O。使用PSMA(PDB代碼：2C6G)及PSMB83 Fab(在1.93Å解析度下的結構；數據未顯示)之晶體結構作為MR搜索模型，來解析PSMA/Fab複合物結構。用PHENIX(Adams,et al,2004)精修結構，並使用COOT(Emsley and Cowtan,2004)進行模型調整。所有其他結晶學計算皆用CCP4程式套組(Collaborative Computational Project Number 4,1994)來執行。用PyMol(PyMOL Molecular Graphics System,Version 1.4.1,Schrödinger,LLC.)產生所有分子圖形並使用Kabat定義判定互補決定區(CDR)。
PSMA/Fab結構包括Fab輕鏈殘基1至211、Fab重鏈殘基1至224(除了殘基138至146，其係無序)、及PSMA殘基56至750(該等PSMA殘基對應於蛋白酶域(殘基56至116及352至590)、頂部域(殘基117至351)、及螺旋域(殘基591至750))、以及每個PSMA二聚體次單元的十種可能N-連接聚醣中之七種(在Asn-76、-121、-140、-195、-459、-476、及-638)。PSMA活性位點位於三個域之間的界面處，且其含有：兩個鋅原子，其藉由組胺酸(H377及H553)及麩胺酸/天冬胺酸(D387、催化性E424、E425、及D453)殘基配位；及水分子。晶體不對稱單元含有一個PSMA二聚體，其中各次單元以類似方式與PSMB83 Fab結合。Fab/PSMA組合部位係由電子密度圖充分界定，該電子密度圖允許進行可靠的結合殘基定位。Fab及PSMA分子係在圖25至圖30中依序編號。
PSMB83表位、互補位、及交互作用。PSMB83(其係雙特異性抗體PS3B27中的親本抗PSMA Fab臂)會識別PSMA頂部域中的構形及不連續之表位(圖25)。被Fab埋藏之PSMA表面積係大約700Å2。具體而言，PSMB83表位殘基係I138、F235、P237、G238、D244、Y299、Y300、Q303、K304、E307、及K324-P326。螺旋α7(殘基Y299-E307)係表位的普遍區域，其跨及Fab重鏈及輕鏈CDR進行結合。在螺旋之一端處，Y299及Y300與Fab殘基Y57H、W94L、及PSMA殘基F235及P237形成芳族簇，同時在另一螺旋端處，E307與R91L及氫鍵Y32L形成鹽橋。圖26及圖27顯示PSMA與PSMB83輕鏈及重鏈的主要交互作用。PSMB83表位殘基在人類與食蟹獼猴之間為保守的(圖28)，且雙特異性抗體PS3B27展示出以類似親合力結合至人類及食蟹獼猴PSMA。相比之下，預期人類至小鼠的G238A、且特別是Y300D表位突變會降低PSMB83對於小鼠(相較於人類)PSMA的結合親和力。Y300D突變會破壞與N59H的氫鍵接觸、及與W94L的π重疊交互作用。PSMB83互補位係由來自所有CDR(除了CDR-L2及CDR-H1)的殘基組成(圖29)。具體而言，互補位殘基係輕鏈S30L、Y32L、R91L、S92L、W94L、以及重鏈G56H-N59H、K65H、G66H、Y101H、V107H、及D109H。圖30顯示PSMA與PSMB83之間的交互作用接觸。表位的可接觸位置促進PS3B27雙特異性抗體中的PSMB83 Fab臂與膜結合PSMA之結合，同時另一個Fab臂仍與T細胞膜中的CD3結合。預期PSMB83不 會抑制PSMA酶活性(由於抗體在遠離活性位點處結合)且不會在PSMA中造成可能影響酶功能的任何顯著結構變化，諸如將活性位點封閉的環移動、或催化性殘基(PSMA分子在Fab結合及未結合(Barinka et al,2007)結構中之Cα疊合之0.3Å的RMSD)的位移
實例14.抗PSMA親和力成熟
對來自兩個PSMA親和力成熟庫的抗PSMA Fab噬菌體殖株執行親和力成熟，以識別結合親和力相較於親本PSMB127(Fab ID=PSMB83)增加的抗體。兩個庫係針對PSMB127的親和力成熟而產生。在第一庫中，重鏈CDR1及CDR2係根據表22(PH9H9L1)中的設計隨機化。將H-CDR3片段自pDR000024032進行PCR擴增，並用SacII+XhoI消化。將此片段選殖至PH9H9L1/PH9L3庫中。將此轉形至大腸桿菌MC1061F的細胞中，並產生展示此Fab庫的噬菌體。在第二庫中，輕鏈CDR係根據表25(PH9L3L3)中的設計隨機化。將來自PSMB83之重鏈(PSMH360)進行PCR擴增，並用NcoI+XhoI消化。將此片段選殖至PH9L3L3庫DNA(ELN：De Novo 2010噬菌體庫SRI-021)中。將此轉形至大腸桿菌MC1061F的細胞中，並產生展示此Fab庫的噬菌體。
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針對生物素化人類PSMA ECD執行三輪的PSMA親和力成熟Fab-pIX庫的溶液淘選。根據製造商的規程，將噬菌體結合抗原捕捉於Neutravidin珠(GE HealthCare Life Science目錄號78152104011150)上，隨後以1x PBST(0.05% tween 20)充分洗滌，並與未標示PSMA ECD在生物素化抗原為500倍莫耳過剩的條件下培養一小時。此淘選產出下列殖株：PSMXP46R3_59H09、PSMXP46R3_59H06、PSMXP46R3_59E03、PSMXP46R3_59C09、PSMXP46R3_59H01、PSMXP46R3_59F11、及PSMXP46R3_59F07。
為了判定抗PSMA Fab植株的表現水平，將96孔Maxisorb盤用抗人類Fd IgG在4C下塗覆整夜，將其洗滌，然後用3%乳汁-PBS-0.05% Tween阻斷1小時。將噬菌體上清液樣本以2倍連續稀釋進行11次於阻斷緩衝液中的稀釋，而最終孔為空白。將100ul的此等溶液捕捉於經塗覆之盤上1小時。將盤洗滌，然後添加100ul的抗F(ab’)2-HRP抗體達1小時。將盤洗滌，然後用100ul的過氧化酶試劑顯色，並在Envision上讀取發光(圖31)。
為了判定抗PSMA Fab殖株與人類及食蟹獼猴重組蛋白質的結合，將96孔Maxisorb盤用100ul的5ug/ml Neutravidin在4C下塗覆整夜將盤洗滌，然後用3%乳汁-PBS-0.05% Tween阻斷1小時。在室溫下，將重組生物素化人類及食蟹獼猴PSMA蛋白以2.5ug/ml捕捉1小時。將盤洗滌，然後將100ul的經2倍連續稀釋的Fab上清液在RT下捕捉1小時。將盤洗滌，然後將其與200ul 0.3%乳汁(於PBST中)培養2.5小時以洗去一些弱親和力Fab。然後，與新鮮200ul 0.3%乳汁(於PBST中)另外培養30分鐘以移除更弱的親和力Fab。將盤洗滌，然後添加100ul的抗F(ab’)2-HRP抗體達1小時。將盤洗滌，然後用100ul的過氧化酶試劑顯色，並在Envision上讀取發光(圖32及圖33)。圖31展示親本Fab與親和力成熟之Fab具類似蛋白質表現。y軸值代表偵測試劑的發光，其相當於在稀釋曲線上的Fab蛋白之豐度(abundance)；發光讀數愈高，孔中蛋白質愈多，其隨著連續兩倍稀釋而減少。在具有親和力成熟Fab的孔中有較多蛋白質，但其相對於親本的增加幅度係至多五倍，如EC50值(其係給出半最大反應的蛋白質濃度)所展示。此等數據展示出圖32及圖33中的PSMA結合概況差異並非因為Fab濃度的差異。
圖32展示相對於親本抗PSMA Fab(PSMB83)，親和力成熟之Fab與人類重組抗原的結合改善。再次，圖中y軸代表發光值。在此情況下，愈大值意指愈多Fab結合至人類PSMA蛋白。此係結合的量度，這是因為增加的Fab濃度(沿著x軸)會產生較高的發光值。親本Fab在此等條件下具可忽略的結合，如甚至在高濃度下信號缺乏所展示(沿著x軸的空心圓圈)。親和力成熟之Fab在測試濃度上觀察到結合，其相當於對於人類PSMA蛋白的較強結合能力。考慮到親本Fab與人類PSMA蛋白的結合為零，無法產生EC50。
圖33展示相對於親本抗PSMA Fab(PSMB83)，親和力成熟之Fab與食蟹獼猴重組抗原的結合改善。再次，圖中y軸代表發光值。在此情況下，愈大值意指愈多Fab結合至食蟹獼猴PSMA蛋白。此係結合的量度，這是因為增加的Fab濃度(沿著x軸)會產生較高的發光值。親本Fab在此等條件下具可忽略的結合，如甚至在高濃度下信號缺乏所展示(沿著x軸的空心圓圈)。親和力成熟之Fab在測試濃度上觀察到結合，其相當於對於人類PSMA蛋白的較強結合能力。考慮到親本Fab與人類PSMA蛋白的結合為零，無法產生EC50以用於直接比較。
整體而言，相對於親本抗PSMA mAb(PSMB127)，噬菌體之Fab結合概況展示出與人類及食蟹獼猴重組抗原的結合改善。此改善並非歸因於Fab表現概況的差異，如圖34及圖35所展示，其顯示經標準化至Fab表現水平的親和力成熟Fab的結合。將自ELISA篩選識別的前五個Fab候選者以單株抗體形式，生產於IgG4 PAA上。表24列出後續的Mab識別符，且表25及表26提供序列資訊。
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將3種不同HC與4種不同LC以矩陣形式組合以擴增命中者的多樣性(表26)。考慮到PSMH860之CDR2中的甲硫胺酸為轉譯後風險，用M64L產生新序列並將其識別為PSMH865。PSMH865與PSML160配對以產生Mab PSMB365。表27及表28提供序列資訊。
Figure 108118091-A0202-12-0252-649
Figure 108118091-A0202-12-0252-648
Figure 108118091-A0202-12-0253-650
Figure 108118091-A0202-12-0254-651
Figure 108118091-A0202-12-0255-652
Figure 108118091-A0202-12-0255-653
Figure 108118091-A0202-12-0256-654
Figure 108118091-A0202-12-0257-655
Figure 108118091-A0202-12-0258-656
Figure 108118091-A0202-12-0259-657
Figure 108118091-A0202-12-0260-658
表29提供所有用於親和力成熟命中者之CDR。
Figure 108118091-A0202-12-0260-659
Figure 108118091-A0202-12-0261-660
Figure 108118091-A0202-12-0262-661
實例15.產生親和力成熟之PSMA×CD3雙特異性抗體
產生兩種類型的親和力成熟之PSMA×CD3雙特異性抗體，一種針對靶向臂(例如親和力成熟之抗PSMA)，該靶向臂與下列重組：高親和力CD3臂[CD3B219(VH SEQ ID NO：104,VL SEQ ID NO：105；HC SEQ ID NO：110,LC SEQ ID NO：111)]、或低親和力CD3臂(稱為CD3B376)[CD3B376(VH SEQ ID NO：152,VL SEQ ID NO：153；HC SEQ ID NO：154,LC SEQ ID NO：155)]。
Figure 108118091-A0202-12-0262-662
Figure 108118091-A0202-12-0263-663
Figure 108118091-A0202-12-0264-664
此等親本mAb係呈GenMab形式(Labrijn et al,2013)，其中靶向親本(PSMA)含有409R GenMab突變(IgG4之天然胺基酸)，而殺滅親本(CD3)含有F405L GenMab突變及R409K突變。單特異性抗CD3抗體經表現為IgG4，其Fc區中具有Fc取代S228P、F234A、L235A、F405L、及R409K(CD3臂)(根據EU索引編號)。靶向親本(PSMA)係在具有Fc取代S228P、F234A、L235A的人類IgG4上。單特異性抗體係在CMV啟動子下經表現於HEK細胞系中。
使用蛋白質A管柱來純化親本PSMA及CD3抗體，其使用100mM NaAc(pH3.5)的洗提緩衝液、及2.5M Tris(pH 7.2)的中和緩衝液。使用經中和的親本mAb來製造PSMAxCD3雙特異性抗體。將一部分的親本mab進一步緩衝液交換為D-PBS(pH 7.2)緩衝液，以進行分析測量及檢定。
如實例6中所述，在純化後，執行受控Fab臂交換以製造雙特異性抗體。
在重組反應中所生產的最終雙特異性抗體、連同所使用的親本mAb(即PSMA、CD3、或空)係列於表27及表28中。
所選之PSMA命中者亦與非殺滅臂(空)配對，以產生出於測試目的之陰性對照組。針對對照雙特異性抗體，產生B2M1(呈IgG4 PAA形式的RSV抗體)，將其純化，並與CD3臂CD3B219-F405L、R409K組合以產生CD3B288(CD3×空)，或與PSMA臂PSMB122、PSMB126、PSMB130組合以分別產生PS3B37、PS3B39、及PS3B40(PSMA×空)。將此等PSMA特異性親和力成熟之Mab與CD3B219及CD3B376交叉混合(crossed)(如上文方法)以產生表31所示之雙特異性抗體。
〔表31.〕產生親和力成熟之PSMA×CD3雙特異性抗體(自親和力成熟之PSMB127產生)
Figure 108118091-A0202-12-0265-665
 PS3B90 PSMB365 146 149 CD3B376 154 155
測試PSMA×CD3雙特異性抗體與PSMA陽性細胞系(LNCAP)、與PSMA陰性細胞(PC3)的結合。為了評估PSMA雙特異性抗體的結合能力，利用細胞結合檢定(先前所述)。將雙特異性抗體針對蛋白質濃度標準化，然後將其與相同數量的表現人類或食蟹獼猴PSMA的細胞培養。藉由流動式細胞測量術收集在各濃度下的MFI，並將其依據濃度變動來作圖。將數據經由log10轉換，然後加以作圖。進行結合曲線的非線性迴歸以判定EC50。
使用此等相對值以將與目標細胞的PSMA結合評級。圖36至圖38顯示所有所製備之雙特異性抗體的LNCAP結合。在圖38中，建構體皆未展示出與PSMA陰性細胞系的結合。在圖36及圖37中，所有親和力成熟之命中者透過向左偏移的曲線展示出增加的結合親和力，並展示出相較於親本Mab(PS2B27)增加的cMax。
如先前針對重組黑猩猩PSMA ECD所述，使用ProteOn XPR36系統(BioRad)，藉由表面電漿共振(SPR)來研究親和力成熟之雙特異性抗體與重組食蟹獼猴PSMA ECD及人類PSMA ECD的交互作用。所有雙特異性抗體皆以實質上相同的親和力(對於人類PSMA ECD之KD範圍在0.05nM至0.27nM，而對於食蟹獼猴PSMA ECD之KD範圍在0.05nM至0.23nM)結合兩目標。
實例16.在功能性細胞殺滅檢定中評估PSMA x CD3親和力成熟之雙特異性Ab
基於上述數據(親和力測量及序列同一性)，將三種PSMA抗體PSMB347、PSMB360、及PSMB365，與CD3B219或CD3B376作為雙特異性抗體，進一步表徵其媒介PSMA特異性重定向T細胞之細胞毒性的能力。使用凋亡蛋白酶細胞毒性檢定來測量T細胞媒介之殺滅，該凋亡蛋白酶細胞毒性檢定經由活性凋亡蛋白酶3/7裂解螢光受質以間接測量細胞殺滅。受質裂解會導致螢光DNA染料的螢光限制於細胞核。在整個檢定過程中，使用能夠在相同座標處精確將(多個)孔成像的電動10X物鏡，以在各孔中進行重複的螢光測量。基於所界定的大小限制，且/或透過使用二級標記，來識別目標細胞群。冷凍全CD3+ T細胞(購自Biological Specialty Corporation,Colmar,PA)係藉由自正常 健康供體的負向選擇來單離。將表現PSMA的前列腺癌細胞(LNCaP,C42)培養於具有10% HI FBS+補充物的RPMI 1640(購自Life Technologies)中。
依照製造商指南，將T細胞及目標細胞以3：1的效應物與目標比(E：T)於無酚紅RPMI+10% FBS及補充物(Life Technologies)中組合，其不具有選擇試劑，並將0.6uL的NucView凋亡蛋白酶試劑(Essen Bioscience)添加至各mL的細胞。將總體積0.1mL的細胞添加至透明96孔平底盤(BD Falcon)的適當孔中。以在無酚紅RPMI中2X最終濃度製備PS3B27(CD3xPSMA)、CD3B288(CD3x空)、或PS3B46(PSMAx空)雙特異性抗體(如上文所指示來製備)，並將0.1mL的化合物添加至各孔中。在室溫下培養30分鐘以最小化在孔邊緣處的細胞聚集之後，將盤轉移至Zoom Incucyte儀器(Essen Bioscience)。Incucyte儀器位於設定在37℃、5% CO2下的加濕培養箱中。
依照製造商指南，為各測試細胞系設計在Incucyte上的處理定義。每六個小時進行測量，直到觀察到凋亡蛋白酶信號趨於穩定，且接著自含有最高濃度的(多種)測試化合物之(多個)孔中的最大信號連續三或更多次降低。如圖39中所示之數據，PS3B80、PS3B79、PS3B89、PS3B90、PS3B63、及PS3B72的曲線向左偏移，其指示相較於PS3B27增加的效力。如所預期，空臂對照組未誘導細胞死亡。
實例17.在人源化NSG小鼠中預防LnCaP異種移植物之腫瘤形成的抗腫瘤功效
以用人類T細胞於腹膜內(ip)進行人源化的雄性NOD.Cg-Prkdcscid Il2rgtmlWjl/SzJ(NSG)小鼠中所建立之3D LnCaP AR.TB人類前列腺癌異種移植物，評估PS3B79及PS3B90的功效。在第36、39、43、47、50、53、56、60、及63天(q3d至q4d)，以2.5及5mg/kg之PS3B79及PS3B90或空×CD3B376抗體對照給藥，總共8劑。在腫瘤植入後第53天，即每組剩餘九(9)隻動物時的研究最後日期，計算腫瘤生長抑制(%TGI)。相較於空×CD3對照組，針對在5mg/kg下具有42% TGI的PS3B79(二因子ANOVA，採Bonferroni檢定，*p<0.0001，圖40)，且針對在2.5及5mg/kg下分別具有53%及33%的PS3B90(二因子ANOVA，採Bonferroni檢定，*p<0.001，圖41)，觀察到統計上顯著的腫瘤生 長抑制。因此，與高親和力PSMA結合臂PSMB360及PSMB365呈雙特異性形式時，CD3B376能夠在體內誘導T細胞活化及細胞毒性並導致腫瘤生長抑制。
實例18.PSMAxCD3在T細胞人源化NSG小鼠中所建立之患者衍生異種移植物LuCaP 86.2前列腺腫瘤模型中的功效
以用人類全T細胞於腹膜內(ip)進行人源化的雄性NOD.Cg-Prkdcscid Il2rgtmlWjl/SzJ(NSG)小鼠中所建立之患者衍生異種移植物(PDX)LuCaP86.2前列腺腫瘤模型，評估PS3B72的抗腫瘤功效。在腫瘤植入後第45、49、52、56、59、63、66、70、73、及77天(q3d至q4d)，以0.5及5mg/kg之PS3B72或空xCD3抗體對照給藥，總共10劑。在腫瘤植入後第83天，即每組剩餘全部十隻動物時的研究最後日期，計算腫瘤生長抑制(%TGI)。相較於空×CD3對照組，針對在0.5及5mg/kg兩者下分別具有108%及101% △TGI的PSMAxCD3(線性混合效應(linear mixed-effect)分析，使用FDR調整，*p<0.0001，圖42)，觀察到統計上顯著的腫瘤生長抑制。在5週給藥期間結束時，觀察到10隻完全消退(complete regression,CR)者中有9隻係在0.5mg/kg下的PSMAxCD3組。此9隻小鼠保持無腫瘤狀態直到研究終止。在研究終止時，觀察到10隻CR者中有4隻係在5mg/kg下的PS3B72組。當在沒有T細胞人源化的情況下將小鼠以5mg/kg用PS3B72給藥時，未觀察到抗腫瘤功效。
<110> 安德森，格倫 馬克(ANDERSON,GLENN MARK) 布希，泰咪(BUSH,TAMMY) 卡多梭，羅沙 瑪麗亞(CARDOSO,ROSA MARIA) 池，艾倫(CHI,ELLEN) 康納，朱迪絲 安(CONNOR,JUDITH ANN) 丁，泰光(DINH,THAI QUANG) 多明哥，德瑞克．萊蒙(DOMINGO,DERRICK LEMON) 瓊斯，約翰 邁克爾(JONES,JOHN MICHAEL) 凱恩，柯林(KANE,COLLEEN) 馬特森，伯達妮 凱(MATTSON,BETHANY KAY) 麥克德維特，特蕾莎 瑪麗(MCDEVITT,THERESA MARIE) 穆尼，吉兒 瑪麗(MOONEY,JILL MARIE) 塞奧佐羅斯，理查 史蒂芬(TAWADROS,RICHARD STEPHEN) 周，洪咪咪(ZHOU,HONG MIMI)
<120> PSMA結合劑及其用途
<130> JBI5156WOPCT1
<140>
<141>
<150> 62/676,099
<151> 2018-05-24
<160> 162
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 750
<212> PRT
<213> 黑猩猩(Pan troglodytes)
<400> 1
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<210> 2
<211> 750
<212> PRT
<213> 食蟹獼猴(Macaca fascicularis)
<400> 2
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<210> 3
<211> 750
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 3
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<210> 4
<211> 749
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：具有純化標籤的黑猩猩PSMA之合成胞外域」
<400> 4
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<210> 5
<211> 749
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：具有純化標籤的食蟹獼猴PSMA之合成胞外域」
<400> 5
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<210> 6
<211> 967
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：具有食蟹獼猴PSMA、純化標籤、及人類Fc之合成嵌合蛋白質」
<400> 6
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Figure 108118091-A0202-12-0292-693
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Figure 108118091-A0202-12-0296-697
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<210> 7
<211> 749
<212> PRT
<213> 人工序列
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<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：具有純化標籤的人類PSMA之合成胞外域」
<400> 7
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Figure 108118091-A0202-12-0299-701
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<210> 8
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：PSMM110之合成HC CDR 1」
<400> 8
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：PSMM110之合成HC CDR 2」
<400> 9
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<210> 10
<211> 16
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<213> 人工序列
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<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：PSMM110之合成HC CDR 3」
<400> 10
Figure 108118091-A0202-12-0302-706
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<213> 人工序列
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<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：PSMM110、52之合成LC CDR 1」
<400> 11
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<213> 人工序列
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<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：PSMM110、85、57、52、81之合成LC CDR 2」
<400> 12
Figure 108118091-A0202-12-0303-709
<210> 13
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<213> 人工序列
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<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：PSMM110、52之合成LC CDR 3」
<400> 13
Figure 108118091-A0202-12-0303-710
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<213> 人工序列
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<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：PSMM87之合成HC CDR 1」
<400> 14
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<211> 17
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<213> 人工序列
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<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：PSMM87之合成HC CDR 2」
<400> 15
Figure 108118091-A0202-12-0304-713
<210> 16
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：PSMM87之合成HC CDR 3」
<400> 16
Figure 108118091-A0202-12-0304-714
<210> 17
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：PSMM87之合成LC CDR 1」
<400> 17
Figure 108118091-A0202-12-0305-715
<210> 18
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<213> 人工序列
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<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：PSMM87之合成LC CDR 2」
<400> 18
Figure 108118091-A0202-12-0305-716
<210> 19
<211> 9
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<213> 人工序列
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<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：PSMM87之合成LC CDR 3」
<400> 19
Figure 108118091-A0202-12-0305-717
<210> 20
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<213> 人工序列
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<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：PSMM85之合成HC CDR 1」
<400> 20
Figure 108118091-A0202-12-0306-718
<210> 21
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<213> 人工序列
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<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：PSMM85之合成HC CDR 2」
<400> 21
Figure 108118091-A0202-12-0306-719
<210> 22
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<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：PSMM85之合成HC CDR 3」
<400> 22
Figure 108118091-A0202-12-0306-720
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<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：PSMM85、81之合成LC CDR 1」
<400> 23
Figure 108118091-A0202-12-0307-721
<210> 24
<211> 7
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<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：PSMM85之合成LC CDR 3」
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Figure 108118091-A0202-12-0307-722
<210> 25
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：PSMM84之合成HC CDR 1」
<400> 25
Figure 108118091-A0202-12-0307-723
<210> 26
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：PSMM84之合成HC CDR 2」
<400> 26
Figure 108118091-A0202-12-0308-725
<210> 27
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：PSMM84之合成HC CDR 3」
<400> 27
Figure 108118091-A0202-12-0308-726
<210> 28
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：PSMM84之合成LC CDR 1」
<400> 28
Figure 108118091-A0202-12-0308-1033
<210> 29
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：PSMM84、50之合成LC CDR 2」
<400> 29
Figure 108118091-A0202-12-0309-728
<210> 30
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：PSMM84之合成LC CDR 3」
<400> 30
Figure 108118091-A0202-12-0309-729
<210> 31
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：PSMM57、52、50之合成HC CDR 1」
<400> 31
Figure 108118091-A0202-12-0309-727
<210> 32
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：PSMM57之合成HC CDR 2」
<400> 32
Figure 108118091-A0202-12-0310-730
<210> 33
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：PSMM57之合成HC CDR 3」
<400> 33
Figure 108118091-A0202-12-0310-731
<210> 34
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：PSMM57之合成LC CDR 1」
<400> 34
Figure 108118091-A0202-12-0311-732
<210> 35
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：PSMM57、81之合成LC CDR 3」
<400> 35
Figure 108118091-A0202-12-0311-733
<210> 36
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：PSMM56、25、18之合成HC CDR 1」
<400> 36
Figure 108118091-A0202-12-0311-734
<210> 37
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：PSMM56、25、18之合成HC CDR 2」
<400> 37
Figure 108118091-A0202-12-0312-735
<210> 38
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：PSMM56之合成HC CDR 3」
<400> 38
Figure 108118091-A0202-12-0312-736
<210> 39
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：PSMM56之合成LC CDR 1」
<400> 39
Figure 108118091-A0202-12-0312-737
<210> 40
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：PSMM56之合成LC CDR 2」
<400> 40
Figure 108118091-A0202-12-0313-738
<210> 41
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：PSMM56之合成LC CDR 3」
<400> 41
Figure 108118091-A0202-12-0313-739
<210> 42
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：PSMM52之合成HC CDR 2」
<400> 42
Figure 108118091-A0202-12-0313-740
<210> 43
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：PSMM52之合成HC CDR 3」
<400> 43
Figure 108118091-A0202-12-0314-742
<210> 44
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：PSMM50之合成HC CDR 2」
<400> 44
Figure 108118091-A0202-12-0314-743
<210> 45
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：PSMM50之合成HC CDR 3」
<400> 45
Figure 108118091-A0202-12-0314-741
<210> 46
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：PSMM50之合成LC CDR 1」
<400> 46
Figure 108118091-A0202-12-0315-745
<210> 47
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：PSMM50之合成LC CDR 3」
<400> 47
Figure 108118091-A0202-12-0315-746
<210> 48
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：PSMM25之合成HC CDR 3」
<400> 48
Figure 108118091-A0202-12-0315-744
<210> 49
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：PSMM25、18之合成LC CDR 1」
<400> 49
Figure 108118091-A0202-12-0316-747
<210> 50
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：PSMM25、18之合成LC CDR 2」
<400> 50
Figure 108118091-A0202-12-0316-748
<210> 51
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：PSMM25、18之合成LC CDR 3」
<400> 51
Figure 108118091-A0202-12-0317-749
<210> 52
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：PSMM18之合成HC CDR 3」
<400> 52
Figure 108118091-A0202-12-0317-750
<210> 53
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：PSMM81之合成HC CDR 1」
<400> 53
Figure 108118091-A0202-12-0317-751
<210> 54
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：PSMM81之合成HC CDR 2」
<400> 54
Figure 108118091-A0202-12-0318-753
<210> 55
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：PSMM81之合成HC CDR 3」
<400> 55
Figure 108118091-A0202-12-0318-754
<210> 56
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：合成信號序列」
<400> 56
Figure 108118091-A0202-12-0318-1034
<210> 57
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：合成Avi標籤」
<400> 57
Figure 108118091-A0202-12-0319-756
<210> 58
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：合成6xHis標籤」
<400> 58
Figure 108118091-A0202-12-0319-757
<210> 59
<211> 321
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：合成BirA蛋白序列」
<400> 59
Figure 108118091-A0202-12-0319-755
Figure 108118091-A0202-12-0320-758
Figure 108118091-A0202-12-0321-759
<210> 60
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：合成PSMM110 VH」
<400> 60
Figure 108118091-A0202-12-0322-760
<210> 61
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：合成PSMM110 VL」
<400> 61
Figure 108118091-A0202-12-0323-761
<210> 62
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：合成PSMM87VH」
<400> 62
Figure 108118091-A0202-12-0323-762
Figure 108118091-A0202-12-0324-763
<210> 63
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：合成PSMM87 VL」
<400> 63
Figure 108118091-A0202-12-0324-764
Figure 108118091-A0202-12-0325-765
<210> 64
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：合成PSMM85 VH」
<400> 64
Figure 108118091-A0202-12-0325-766
Figure 108118091-A0202-12-0326-767
<210> 65
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：合成PSMM85 VL」
<400> 65
Figure 108118091-A0202-12-0326-1035
Figure 108118091-A0202-12-0327-769
<210> 66
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：合成PSMM84 VH」
<400> 66
Figure 108118091-A0202-12-0327-770
Figure 108118091-A0202-12-0328-771
<210> 67
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：合成PSMM84 VL」
<400> 67
Figure 108118091-A0202-12-0328-772
Figure 108118091-A0202-12-0329-774
<210> 68
<211> 126
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：合成PSMM81 VH」
<400> 68
Figure 108118091-A0202-12-0329-773
Figure 108118091-A0202-12-0330-775
<210> 69
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：合成PSMM81 VL」
<400> 69
Figure 108118091-A0202-12-0330-1036
<210> 70
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：合成多肽」
<400> 70
Figure 108118091-A0202-12-0331-1037
<210> 71
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：合成PSMM57 VL」
<400> 71
Figure 108118091-A0202-12-0332-778
<210> 72
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：合成PSMM56 VH」
<400> 72
Figure 108118091-A0202-12-0333-779
<210> 73
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：合成PSMM56 VL」
<400> 73
Figure 108118091-A0202-12-0333-780
Figure 108118091-A0202-12-0334-781
<210> 74
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：合成PSMM52 VH」
<400> 74
Figure 108118091-A0202-12-0334-782
Figure 108118091-A0202-12-0335-783
<210> 75
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：合成PSMM50 VH」
<400> 75
Figure 108118091-A0202-12-0335-784
Figure 108118091-A0202-12-0336-785
<210> 76
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：合成PSMM50 VL」
<400> 76
Figure 108118091-A0202-12-0336-786
Figure 108118091-A0202-12-0337-787
<210> 77
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：合成PSMM25 VH」
<400> 77
Figure 108118091-A0202-12-0337-1038
Figure 108118091-A0202-12-0338-789
<210> 78
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：合成PSMM25 VL」
<400> 78
Figure 108118091-A0202-12-0338-1039
Figure 108118091-A0202-12-0339-791
<210> 79
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：合成PSMM18 VH」
<400> 79
Figure 108118091-A0202-12-0339-792
Figure 108118091-A0202-12-0340-793
<210> 80
<211> 19
<212> PRT
<213> 家鼷鼠(Mus musculus)
<400> 80
Figure 108118091-A0202-12-0340-795
<210> 81
<211> 222
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 81
Figure 108118091-A0202-12-0340-794
Figure 108118091-A0202-12-0341-796
<210> 82
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：合成PSMM169 HC」
<400> 82
Figure 108118091-A0202-12-0342-797
Figure 108118091-A0202-12-0343-798
Figure 108118091-A0202-12-0344-799
<210> 83
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：合成PSMM169 LC」
<400> 83
Figure 108118091-A0202-12-0344-800
Figure 108118091-A0202-12-0345-801
Figure 108118091-A0202-12-0346-802
<210> 84
<211> 446
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：合成PSMM170 HC」
<400> 84
Figure 108118091-A0202-12-0346-803
Figure 108118091-A0202-12-0347-804
Figure 108118091-A0202-12-0348-805
<210> 85
<211> 215
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：合成PSMM170 LC」
<400> 85
Figure 108118091-A0202-12-0349-806
Figure 108118091-A0202-12-0350-807
<210> 86
<211> 452
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：合成PSMM168 HC」
<400> 86
Figure 108118091-A0202-12-0350-808
Figure 108118091-A0202-12-0351-809
Figure 108118091-A0202-12-0352-810
Figure 108118091-A0202-12-0353-811
<210> 87
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：合成PSMM168 LC」
<400> 87
Figure 108118091-A0202-12-0353-812
Figure 108118091-A0202-12-0354-813
<210> 88
<211> 451
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：合成PSMM167 HC」
<400> 88
Figure 108118091-A0202-12-0355-814
Figure 108118091-A0202-12-0356-815
Figure 108118091-A0202-12-0357-816
<210> 89
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：合成PSMM167 LC」
<400> 89
Figure 108118091-A0202-12-0357-817
Figure 108118091-A0202-12-0358-818
Figure 108118091-A0202-12-0359-820
<210> 90
<211> 453
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：合成PSMM166 HC」
<400> 90
Figure 108118091-A0202-12-0359-819
Figure 108118091-A0202-12-0360-821
Figure 108118091-A0202-12-0361-822
<210> 91
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：合成PSMM166 LC」
<400> 91
Figure 108118091-A0202-12-0362-823
Figure 108118091-A0202-12-0363-824
<210> 92
<211> 446
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：合成PSMM164 HC」
<400> 92
Figure 108118091-A0202-12-0363-825
Figure 108118091-A0202-12-0364-826
Figure 108118091-A0202-12-0365-827
Figure 108118091-A0202-12-0366-828
<210> 93
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：合成PSMM164 LC」
<400> 93
Figure 108118091-A0202-12-0366-829
Figure 108118091-A0202-12-0367-830
<210> 94
<211> 445
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：合成PSMM163 HC」
<400> 94
Figure 108118091-A0202-12-0367-831
Figure 108118091-A0202-12-0368-832
Figure 108118091-A0202-12-0369-833
Figure 108118091-A0202-12-0370-834
<210> 95
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：合成多肽」
<400> 95
Figure 108118091-A0202-12-0370-835
Figure 108118091-A0202-12-0371-836
<210> 96
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：合成PSMM162 HC」
<400> 96
Figure 108118091-A0202-12-0372-837
Figure 108118091-A0202-12-0373-838
Figure 108118091-A0202-12-0374-839
<210> 97
<211> 450
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：合成PSMM161 HC」
<400> 97
Figure 108118091-A0202-12-0374-840
Figure 108118091-A0202-12-0375-841
Figure 108118091-A0202-12-0376-842
Figure 108118091-A0202-12-0377-843
<210> 98
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：合成PSMM161 LC」
<400> 98
Figure 108118091-A0202-12-0377-844
Figure 108118091-A0202-12-0378-845
<210> 99
<211> 446
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：合成PSMM160 HC」
<400> 99
Figure 108118091-A0202-12-0379-1040
Figure 108118091-A0202-12-0380-847
Figure 108118091-A0202-12-0381-848
<210> 100
<211> 220
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：合成PSMM160 LC」
<400> 100
Figure 108118091-A0202-12-0381-849
Figure 108118091-A0202-12-0382-850
Figure 108118091-A0202-12-0383-851
<210> 101
<211> 446
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：合成PSMM159 HC」
<400> 101
Figure 108118091-A0202-12-0383-1041
Figure 108118091-A0202-12-0384-853
Figure 108118091-A0202-12-0385-854
<210> 102
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：合成CD38217 VH」
<400> 102
Figure 108118091-A0202-12-0386-1042
<210> 103
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：合成CD38217 VL」
<400> 103
Figure 108118091-A0202-12-0387-1043
<210> 104
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：合成CD38219 VH」
<400> 104
Figure 108118091-A0202-12-0387-857
Figure 108118091-A0202-12-0388-858
<210> 105
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：合成CD38219 VL」
<400> 105
Figure 108118091-A0202-12-0388-859
Figure 108118091-A0202-12-0389-860
<210> 106
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：合成B2M1 VH」
<400> 106
Figure 108118091-A0202-12-0389-861
Figure 108118091-A0202-12-0390-862
<210> 107
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：合成B2M1 VL」
<400> 107
Figure 108118091-A0202-12-0390-1044
Figure 108118091-A0202-12-0391-864
<210> 108
<211> 452
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：合成CD3B217 HC」
<400> 108
Figure 108118091-A0202-12-0391-1045
Figure 108118091-A0202-12-0392-1046
Figure 108118091-A0202-12-0393-867
Figure 108118091-A0202-12-0394-868
<210> 109
<211> 215
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：合成CD3B217 LC」
<400> 109
Figure 108118091-A0202-12-0394-1047
Figure 108118091-A0202-12-0395-870
<210> 110
<211> 452
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：合成CD3B219 HC」
<400> 110
Figure 108118091-A0202-12-0395-1048
Figure 108118091-A0202-12-0396-872
Figure 108118091-A0202-12-0397-873
Figure 108118091-A0202-12-0398-874
<210> 111
<211> 215
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：合成CD3B219 LC」
<400> 111
Figure 108118091-A0202-12-0398-875
Figure 108118091-A0202-12-0399-876
<210> 112
<211> 346
<212> PRT
<213> 大腸桿菌(Escherichia coli)
<400> 112
Figure 108118091-A0202-12-0400-877
Figure 108118091-A0202-12-0401-878
Figure 108118091-A0202-12-0402-879
<210> 113
<211> 455
<212> PRT
<213> 家鼷鼠(Mus musculus)
<400> 113
Figure 108118091-A0202-12-0402-880
Figure 108118091-A0202-12-0403-881
Figure 108118091-A0202-12-0404-882
<210> 114
<211> 215
<212> PRT
<213> 家鼷鼠(Mus musculus)
<400> 114
Figure 108118091-A0202-12-0404-883
Figure 108118091-A0202-12-0405-884
Figure 108118091-A0202-12-0406-885
<210> 115
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：合成CD3H143」
<400> 115
Figure 108118091-A0202-12-0406-1049
Figure 108118091-A0202-12-0407-887
<210> 116
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：合成CD3H144」
<400> 116
Figure 108118091-A0202-12-0407-888
Figure 108118091-A0202-12-0408-889
<210> 117
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：合成CD3L64」
<400> 117
Figure 108118091-A0202-12-0408-890
<210> 118
<211> 447
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：合成G11重鏈」
<400> 118
Figure 108118091-A0202-12-0409-1050
Figure 108118091-A0202-12-0410-892
Figure 108118091-A0202-12-0411-893
<210> 119
<211> 213
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：合成G11輕鏈」
<400> 119
Figure 108118091-A0202-12-0411-1051
Figure 108118091-A0202-12-0412-895
Figure 108118091-A0202-12-0413-896
<210> 120
<211> 450
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：合成CD3B94重鏈」
<400> 120
Figure 108118091-A0202-12-0413-897
Figure 108118091-A0202-12-0414-898
Figure 108118091-A0202-12-0415-899
<210> 121
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：合成CD3B94輕鏈」
<400> 121
Figure 108118091-A0202-12-0416-900
Figure 108118091-A0202-12-0417-901
<210> 122
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：合成肽」
<400> 122
Figure 108118091-A0202-12-0417-902
<210> 123
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：合成肽」
<400> 123
Figure 108118091-A0202-12-0418-904
<210> 124
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：合成肽」
<400> 124
Figure 108118091-A0202-12-0418-905
<210> 125
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：合成多肽」
<400> 125
Figure 108118091-A0202-12-0418-903
Figure 108118091-A0202-12-0419-906
Figure 108118091-A0202-12-0420-907
Figure 108118091-A0202-12-0421-908
<210> 126
<211> 750
<212> PRT
<213> 食蟹獼猴(Macaca fascicularis)
<400> 126
Figure 108118091-A0202-12-0421-909
Figure 108118091-A0202-12-0422-910
Figure 108118091-A0202-12-0423-911
Figure 108118091-A0202-12-0424-912
Figure 108118091-A0202-12-0425-913
<210> 127
<211> 750
<212> PRT
<213> 黑猩猩(Pan troglodytes)
<400> 127
Figure 108118091-A0202-12-0425-914
Figure 108118091-A0202-12-0426-915
Figure 108118091-A0202-12-0427-916
Figure 108118091-A0202-12-0428-917
Figure 108118091-A0202-12-0429-918
<210> 128
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：合成多肽」
<400> 128
Figure 108118091-A0202-12-0430-919
<210> 129
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：合成多肽」
<400> 129
Figure 108118091-A0202-12-0431-920
<210> 130
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：合成肽」
<400> 130
Figure 108118091-A0202-12-0432-1052
<210> 131
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：合成肽」
<400> 131
Figure 108118091-A0202-12-0432-922
<210> 132
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：合成肽」
<400> 132
Figure 108118091-A0202-12-0432-923
<210> 133
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：合成肽」
<400> 133
Figure 108118091-A0202-12-0433-925
<210> 134
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：合成肽」
<400> 134
Figure 108118091-A0202-12-0433-926
<210> 135
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：合成肽」
<400> 135
Figure 108118091-A0202-12-0433-924
Figure 108118091-A0202-12-0434-927
<210> 136
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：合成肽」
<400> 136
Figure 108118091-A0202-12-0434-928
<210> 137
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：合成肽」
<400> 137
Figure 108118091-A0202-12-0434-929
<210> 138
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：合成多肽」
<400> 138
Figure 108118091-A0202-12-0435-930
<210> 139
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：合成多肽」
<400> 139
Figure 108118091-A0202-12-0436-931
<210> 140
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：合成多肽」
<400> 140
Figure 108118091-A0202-12-0437-932
<210> 141
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：合成多肽」
<400> 141
Figure 108118091-A0202-12-0437-1053
Figure 108118091-A0202-12-0438-934
<210> 142
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：合成多肽」
<400> 142
Figure 108118091-A0202-12-0438-935
Figure 108118091-A0202-12-0439-936
<210> 143
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：合成多肽」
<400> 143
Figure 108118091-A0202-12-0439-937
Figure 108118091-A0202-12-0440-938
<210> 144
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：合成多肽」
<400> 144
Figure 108118091-A0202-12-0440-939
Figure 108118091-A0202-12-0441-940
<210> 145
<211> 451
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：合成多肽」
<400> 145
Figure 108118091-A0202-12-0441-1054
Figure 108118091-A0202-12-0442-942
Figure 108118091-A0202-12-0443-943
Figure 108118091-A0202-12-0444-944
<210> 146
<211> 451
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：合成多肽」
<400> 146
Figure 108118091-A0202-12-0444-945
Figure 108118091-A0202-12-0445-946
Figure 108118091-A0202-12-0446-947
<210> 147
<211> 451
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：合成多肽」
<400> 147
Figure 108118091-A0202-12-0447-948
Figure 108118091-A0202-12-0448-949
Figure 108118091-A0202-12-0449-950
<210> 148
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：合成多肽」
<400> 148
Figure 108118091-A0202-12-0450-951
Figure 108118091-A0202-12-0451-952
<210> 149
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：合成多肽」
<400> 149
Figure 108118091-A0202-12-0451-953
Figure 108118091-A0202-12-0452-954
<210> 150
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：合成多肽」
<400> 150
Figure 108118091-A0202-12-0452-955
Figure 108118091-A0202-12-0453-956
Figure 108118091-A0202-12-0454-957
<210> 151
<211> 451
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：合成多肽」
<400> 151
Figure 108118091-A0202-12-0454-958
Figure 108118091-A0202-12-0455-959
Figure 108118091-A0202-12-0456-960
<210> 152
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：合成多肽」
<400> 152
Figure 108118091-A0202-12-0457-961
<210> 153
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：合成多肽」
<400> 153
Figure 108118091-A0202-12-0458-962
<210> 154
<211> 466
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：合成多肽」
<400> 154
Figure 108118091-A0202-12-0459-963
Figure 108118091-A0202-12-0460-964
Figure 108118091-A0202-12-0461-965
<210> 155
<211> 239
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：合成多肽」
<400> 155
Figure 108118091-A0202-12-0462-966
Figure 108118091-A0202-12-0463-967
<210> 156
<211> 4
<212> PRT
<213> 未知
<220>
<221> 來源
<223> /註=「未知者說明：『KDEL』家族模體肽」
<400> 156
Figure 108118091-A0202-12-0463-969
<210> 157
<211> 752
<212> PRT
<213> 家鼷鼠(Mus musculus)
<400> 157
Figure 108118091-A0202-12-0463-968
Figure 108118091-A0202-12-0464-970
Figure 108118091-A0202-12-0465-971
Figure 108118091-A0202-12-0466-972
Figure 108118091-A0202-12-0467-973
<210> 158
<211> 227
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：合成多肽」
<400> 158
Figure 108118091-A0202-12-0468-974
Figure 108118091-A0202-12-0469-975
<210> 159
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：合成多肽」
<400> 159
Figure 108118091-A0202-12-0469-976
Figure 108118091-A0202-12-0470-977
Figure 108118091-A0202-12-0471-978
<210> 160
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：合成多肽」
<400> 160
Figure 108118091-A0202-12-0471-1055
<210> 161
<211> 1410
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：合成多核苷酸」
<400> 161
Figure 108118091-A0202-12-0472-980
Figure 108118091-A0202-12-0473-981
<210> 162
<211> 699
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列說明：合成多核苷酸」
<400> 162
Figure 108118091-A0202-12-0473-982
Figure 108118091-A0202-12-0474-983

Claims (150)

  1. 一種經單離之重組抗PSMA抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或抗原結合片段(i)結合至表現重組黑猩猩(Pan troglodytes)PSMA之細胞，其中與細胞之該結合係藉由流動式細胞測量術來測量，且(ii)以約30nM或更小之親和力結合重組黑猩猩PSMA胞外域(SEQ ID NO：4)，其中該親和力係藉由Proteon XPR36表面電漿共振檢定來測量。
  2. 如請求項1所述之抗體，其中該抗體具有下列性質中之一者、二者、三者、或四者：
    e)以20nM或更小的所計算EC50結合LNCaP細胞，並以40nM或更小的所計算EC50結合食蟹獼猴(Macaca fascicularis)PSMA表現性HEK細胞，其中結合LNCaP細胞與結合食蟹獼猴PSMA表現性HEK細胞之間的所計算EC50之差異係小於5倍，且其中該所計算EC50係使用流動式細胞測量術在0℃下於全細胞結合檢定中測量，
    f)以12nM或更小的平衡解離常數(KD)結合來自人類(SEQ ID NO：7)、黑猩猩(SEQ ID NO：4)、及食蟹獼猴(SEQ ID NO：5)之重組PSMA ECD，其中該KD係在+25℃下使用Proteon表面電漿共振檢定ProteOn XPR36系統來測量；
    g)當在雙特異性抗體中與抗CD3抗體CD3B219配對時，展示T細胞媒介之LNCaP細胞、C42細胞、人類PSMA表現性HEK細胞、或食蟹獼猴PSMA表現性HEK細胞的殺滅，其中該T細胞媒介之殺滅係藉由鉻51或藉由凋亡蛋白酶3/7活化檢定來測量；或
    h)識別構象表位(conformational epitope)，其中該表位包含人類PSMA(SEQ ID NO：3)之殘基I138、F235、P237、G238、D244、Y299、Y300、Q303、K304、E307、及K324-P326。
  3. 如請求項2所述之抗體，其包含分別為SEQ ID NO：14、15、16、17、18、及19之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
  4. 如請求項2所述之抗體，其包含分別為SEQ ID NO：20、21、22、23、12、及24之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
  5. 如請求項2所述之抗體，其包含分別為SEQ ID NO：25、26、27、28、29、及30之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
  6. 如請求項2所述之抗體，其包含分別為SEQ ID NO：36、37、38、39、40、及41之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
  7. 如請求項2所述之抗體，其包含分別為SEQ ID NO：31、42、43、11、12、及13之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
  8. 如請求項2所述之抗體，其包含分別為SEQ ID NO：31、44、45、46、29、及47之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
  9. 如請求項2所述之抗體，其包含分別為SEQ ID NO：36、37、48、49、50、及51之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
  10. 如請求項2所述之抗體，其包含分別為SEQ ID NO：36、37、52、49、50、及51之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
  11. 如請求項2所述之抗體，其包含分別為SEQ ID NO：8、9、10、11、12、及13之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
  12. 如請求項2所述之抗體，其包含分別為SEQ ID NO：31、32、33、34、12、及35之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
  13. 如請求項2所述之抗體，其包含分別為SEQ ID NO：53、54、55、23、12、及35之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
  14. 如請求項2所述之抗體，其包含分別為SEQ ID NO：122、123、124、23、12、及24之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
  15. 如請求項2所述之抗體，其包含SEQ ID NO：60、62、64、66、68、70、72、74、75、77、79、或160之重鏈可變區(VH)。
  16. 如請求項15所述之抗體，其包含SEQ ID NO：61、63、65、67、69、71、73、61、76、或78之輕鏈可變區(VL)。
  17. 如請求項15所述之抗體，其包含SEQ ID NO：62之VH及SEQ ID NO：63之VL。
  18. 如請求項15所述之抗體，其包含SEQ ID NO：64之VH及SEQ ID NO：65之VL。
  19. 如請求項15所述之抗體，其包含SEQ ID NO：66之VH及SEQ ID NO：67之VL。
  20. 如請求項15所述之抗體，其包含SEQ ID NO：72之VH及SEQ ID NO：73之VL。
  21. 如請求項15所述之抗體，其包含SEQ ID NO：74之VH及SEQ ID NO：61之VL。
  22. 如請求項15所述之抗體，其包含SEQ ID NO：75之VH及SEQ ID NO：76之VL。
  23. 如請求項15所述之抗體，其包含SEQ ID NO：77之VH及SEQ ID NO：78之VL。
  24. 如請求項15所述之抗體，其包含SEQ ID NO：79之VH及SEQ ID NO：78之VL。
  25. 如請求項15所述之抗體，其包含SEQ ID NO：160之VH及SEQ ID NO：65之VL。
  26. 如請求項15所述之抗體，其包含SEQ ID NO：60之VH及SEQ ID NO：61之VL。
  27. 如請求項15所述之抗體，其包含SEQ ID NO：68之VH及SEQ ID NO：69之VL。
    如請求項15所述之抗體，其包含SEQ ID NO：70之VH及SEQ ID NO：71之VL。
  28. 一種經單離之重組抗PSMA抗體或其抗原結合片段，其包含分別為SEQ ID NO：31、42、43、11、12、及13之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
  29. 如請求項28所述之抗體，其中該抗體包含SEQ ID NO：74之VH及SEQ ID NO：61之VL。
  30. 一種經單離之重組抗PSMA抗體或其抗原結合片段，其包含分別為SEQ ID NO：14、15、16、17、18、及19之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
  31. 如請求項30所述之抗體，其中該抗體包含SEQ ID NO：62之VH及SEQ ID NO：63之VL。
  32. 一種經單離之重組抗PSMA抗體或其抗原結合片段，其包含分別為SEQ ID NO：25、26、27、28、29、及30之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
  33. 如請求項32所述之抗體，其中該抗體包含SEQ ID NO：66之VH及SEQ ID NO：67之VL。
  34. 一種經單離之重組抗PSMA抗體或其抗原結合片段，其包含分別為SEQ ID NO：36、37、38、39、40、及41之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
  35. 如請求項34所述之抗體，其中該抗體包含SEQ ID NO：72之VH及SEQ ID NO：73之VL。
  36. 一種經單離之重組抗PSMA抗體或其抗原結合片段，其包含分別為SEQ ID NO：122、123、124、23、12、及24之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
  37. 如請求項36所述之抗體，其中該抗體包含SEQ ID NO：160之VH及SEQ ID NO：65之VL。
  38. 一種經單離之重組抗PSMA抗體或其抗原結合片段，其包含分別為SEQ ID NO：8、9、10、11、12、及13之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
  39. 如請求項38所述之抗體，其中該抗體包含SEQ ID NO：60之VH及SEQ ID NO：61之VL。
  40. 一種經單離之重組抗PSMA抗體或其抗原結合片段，其包含分別為SEQ ID NO：20、21、22、23、12、及24之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
  41. 如請求項40所述之抗體，其中該抗體包含SEQ ID NO：64之VH及SEQ ID NO：65之VL。
  42. 一種經單離之重組抗PSMA抗體或其抗原結合片段，其包含分別為SEQ ID NO：31、32、33、34、12、及35之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
  43. 如請求項42所述之抗體，其中該抗體包含SEQ ID NO：70之VH及SEQ ID NO：71之VL。
  44. 一種經單離之重組抗PSMA抗體或其抗原結合片段，其包含分別為SEQ ID NO：31、44、45、46、29、及47之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
  45. 如請求項44所述之抗體，其中該抗體包含SEQ ID NO：75之VH及SEQ ID NO：76之VL。
  46. 一種經單離之重組抗PSMA抗體或其抗原結合片段，其包含分別為SEQ ID NO：36、37、48、49、50、及51之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
  47. 如請求項46所述之抗體，其中該抗體包含SEQ ID NO：77之VH及SEQ ID NO：78之VL。
  48. 一種經單離之重組抗PSMA抗體或其抗原結合片段，其包含分別為SEQ ID NO：36、37、52、49、50、及51之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
  49. 如請求項48所述之抗體，其中該抗體包含SEQ ID NO：79之VH及SEQ ID NO：78之VL。
  50. 一種經單離之重組抗PSMA抗體或其抗原結合片段，其包含分別為SEQ ID NO：53、54、55、23、12、及35之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
  51. 如請求項50所述之抗體，其中該抗體包含SEQ ID NO：68之VH及SEQ ID NO：69之VL。
  52. 一種經單離之重組抗PSMA抗體或其抗原結合片段，其包含分別為SEQ ID NO：25、130、27、28、29、及30之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
  53. 如請求項52所述之抗體，其中該抗體包含SEQ ID NO：138之VH及SEQ ID NO：67之VL。
  54. 一種經單離之重組抗PSMA抗體或其抗原結合片段，其包含分別為SEQ ID NO：25、130、27、131、29、及132之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
  55. 如請求項54所述之抗體，其中該抗體包含SEQ ID NO：138之VH及SEQ ID NO：142之VL。
  56. 一種經單離之重組抗PSMA抗體或其抗原結合片段，其包含分別為SEQ ID NO：25、130、27、28、133、及132之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
  57. 如請求項56所述之抗體，其中該抗體包含SEQ ID NO：138之VH及SEQ ID NO：143之VL。
  58. 一種經單離之重組抗PSMA抗體或其抗原結合片段，其包含分別為SEQ ID NO：25、134、27、28、29、及30之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
  59. 如請求項58所述之抗體，其中該抗體包含SEQ ID NO：139之VH及SEQ ID NO：167之VL。
  60. 一種經單離之重組抗PSMA抗體或其抗原結合片段，其包含分別為SEQ ID NO：25、135、27、28、29、及136之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
  61. 如請求項60所述之抗體，其中該抗體包含SEQ ID NO：140之VH及SEQ ID NO：144之VL。
  62. 一種經單離之重組抗PSMA抗體或其抗原結合片段，其包含分別為SEQ ID NO：25、135、27、28、29、及30之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
  63. 如請求項62所述之抗體，其中該抗體包含SEQ ID NO：140之VH及SEQ ID NO：167之VL。
  64. 一種經單離之重組抗PSMA抗體或其抗原結合片段，其包含分別為SEQ ID NO：25、135、27、131、29、及132之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
  65. 如請求項64所述之抗體，其中該抗體包含SEQ ID NO：140之VH及SEQ ID NO：142之VL。
  66. 一種經單離之重組抗PSMA抗體或其抗原結合片段，其包含分別為SEQ ID NO：25、135、27、28、133、及132之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
  67. 如請求項66所述之抗體，其中該抗體包含SEQ ID NO：140之VH及SEQ ID NO：143之VL。
  68. 一種經單離之重組抗PSMA抗體或其抗原結合片段，其包含分別為SEQ ID NO：25、134、27、28、29、及136之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
  69. 如請求項68所述之抗體，其中該抗體包含SEQ ID NO：139之VH及SEQ ID NO：144之VL。
  70. 一種經單離之重組抗PSMA抗體或其抗原結合片段，其包含分別為SEQ ID NO：25、134、27、131、29、及132之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
  71. 如請求項70所述之抗體，其中該抗體包含SEQ ID NO：139之VH及SEQ ID NO：142之VL。
  72. 一種經單離之重組抗PSMA抗體或其抗原結合片段，其包含分別為SEQ ID NO：25、134、27、28、133、及132之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
  73. 如請求項72所述之抗體，其中該抗體包含SEQ ID NO：139之VH及SEQ ID NO：143之VL。
  74. 一種經單離之重組抗PSMA抗體或其抗原結合片段，其包含分別為SEQ ID NO：25、137、27、28、133、及132之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
  75. 如請求項74所述之抗體，其中該抗體包含SEQ ID NO：141之VH及SEQ ID NO：143之VL。
  76. 如請求項1至75中任一項所述之抗體，其中該抗體係人類抗體或人源化抗體。
  77. 如請求項76所述之抗體，其中該抗體係屬於IgG4或IgG1同型。
  78. 如請求項77所述之抗體，其在該抗體Fc中包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、或十個取代。
  79. 如請求項77所述之抗體，其包含
    a)L234A、L235A、G237A、P238S、H268A、A330S、及P331S取代；
    b)V234A、G237A、P238S、H268A、V309L、A330S、及P331S取代；
    c)F234A、L235A、G237A、P238S、及Q268A取代；
    d)L234A、L235A、或L234A及L235A取代；
    e)F234A、L235A、或F234A及L235A取代；或
    f)V234A取代，其中殘基編號係根據EU索引。
  80. 如請求項79所述之抗體，其包含S228P、F234A、及L235A取代，其中殘基編號係根據EU索引。
  81. 如請求項1至80中任一項所述之抗體，其中該抗體係雙特異性。
  82. 如請求項76所述之抗體，其中該抗體特異性結合PSMA，且特異性結合CD3、CD5、CD28、CD16、CD16A、CD25、CD38、CD44、CD56、CD69、CD94、CD335(NKp46)、CD336、(NKp44)、CD337(NKp30)、NKp80、NKG2C及NKG2D、DNAM、NCR、CD18、CD89、CD18、CD32、CD64、CD64、及CD35。
  83. 一種醫藥組成物，其包含如請求項1至82中任一項所述之抗體及醫藥上接受之載劑。
  84. 一種多核苷酸，其編碼如請求項15所述之抗體VH、如請求項16所述之抗體VL、或如請求項15及16所述之抗體VH及抗體VL。
  85. 一種多核苷酸，其編碼如請求項28至75中任一項所述之抗體VH、抗體VL、或抗體VH及抗體VL。
  86. 一種載體，其包含如請求項84所述之多核苷酸。
  87. 一種載體，其包含如請求項85所述之多核苷酸。
  88. 一種宿主細胞，其包含如請求項86所述之載體。
  89. 一種宿主細胞，其包含如請求項87所述之載體。
  90. 一種生產如請求項1所述之抗體的方法，其包含在使該抗體表現之條件下培養如請求項89所述之宿主細胞、及回收由該宿主細胞所生產之該抗體。
  91. 一種治療對象之癌症的方法，其包含向有需要之該對象投予治療有效量的如請求項1至82中任一項所述之經單離之抗體達一段足以治療該癌症的時間。
  92. 如請求項91所述之方法，其中該癌症係實體腫瘤、惡性疾病、或腫瘤新生血管。
  93. 如請求項92所述之方法，其中該實體腫瘤係前列腺癌或結腸直腸癌、胃癌、透明細胞腎癌、膀胱癌、肺癌、鱗狀細胞癌、神經膠質瘤、乳癌、腎臟癌(kidney cancer)、新生血管病症、透明細胞腎癌(CCRCC)、胰腺癌、腎癌(renal cancer)、尿路上皮癌、及往肝臟的腺癌(adenocarcinaoma to the liver)。
  94. 如請求項93所述之方法，其中該前列腺癌係難治性前列腺癌、前列腺上皮內瘤、雄性激素非依賴性前列腺癌、惡性前列腺癌。
  95. 如請求項90至94中任一項所述之方法，其中該抗體係與第二治療劑組合投予。
  96. 如請求項95所述之方法，其中該第二治療劑係用於治療該實體腫瘤、或惡性疾病、或腫瘤新生血管之標準照護藥物。
  97. 如請求項96所述之方法，其中該第二治療劑係荷爾蒙抑制劑、抗微管劑(antimicrotubule agent)、激酶抑制劑、免疫調節劑、拓樸異構酶抑制劑、抗代謝物(anti-metabolite)、有絲分裂抑制劑、烷化劑、蒽環類藥物 (anthracycline)、長春花生物鹼類(vinca alkaloid)、嵌入劑、能夠干擾信號轉導路徑的試劑、促進細胞凋亡的試劑、蛋白酶體抑制劑、或放射線。
  98. 如請求項96所述之方法，其中該第二治療劑係疫苗。
  99. 如請求項98所述之方法，其中該疫苗係多肽或其片段、或編碼在腫瘤細胞上表現的該多肽或其片段之DNA或RNA。
  100. 如請求項99所述之方法，其中該多肽係PSMA、間皮素(mesothelin)、EGFR、或EGFRvIII。
  101. 如請求項95所述之方法，其中該第二治療劑係同時、依序、或分開投予。
  102. 如請求項91至101中任一項所述之方法，其中該對象係以放射療法治療，或正以放射療法治療。
  103. 如請求項91至101中任一項所述之方法，其中該對象已經歷過手術，或將經歷手術。
  104. 如請求項46至58中任一項所述之方法，其中該經單離之抗體包含SEQ ID NO：66之VH及SEQ ID NO：67之VL。
  105. 如請求項1至82中任一項所述之抗體，其係用於療法中。
  106. 一種抗獨特型抗體，其結合至如請求項1至82中任一項所述之抗體。
  107. 一種雙特異性抗體，其包含特異性結合PSMA之第一結構域、及特異性結合CD3之第二結構域，其中該第一結構域包含：
    a)分別為SEQ ID NO：31、42、43、11、12、及13之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3；
    b)分別為SEQ ID NO：14、15、16、17、18、及19之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3；
    c)分別為SEQ ID NO：25、26、27、28、29、及30之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3；
    d)分別為SEQ ID NO：36、37、38、39、40、及41之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3；
    e)分別為SEQ ID NO：122、123、124、23、12、及24之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3；
    f)分別為SEQ ID NO：8、9、10、11、12、及13之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3；
    g)分別為SEQ ID NO：14、15、16、17、18、及19之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3；
    h)分別為SEQ ID NO：20、21、22、23、12、及24之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3；
    i)分別為SEQ ID NO：31、32、33、34、12、及35之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3；
    j)分別為SEQ ID NO：31、44、45、46、29、及47之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3；
    k)分別為SEQ ID NO：36、37、48、49、50、及51之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3；
    l)分別為SEQ ID NO：53、54、55、23、12、及35之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3；
    m)分別為SEQ ID NO：25、130、27、28、29、及30之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3；
    n)分別為SEQ ID NO：25、130、27、131、29、及132之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3；
    o)分別為SEQ ID NO：25、130、27、28、133、及132之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3；
    p)分別為SEQ ID NO：25、134、27、28、29、及30之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3；
    q)分別為SEQ ID NO：25、135、27、28、29、及136之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3；
    r)分別為SEQ ID NO：25、135、27、28、29、及30之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3；
    s)分別為SEQ ID NO：25、135、27、131、29、及132之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3；
    t)分別為SEQ ID NO：25、135、27、28、133、及132之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3；
    u)分別為SEQ ID NO：25、134、27、28、29、及136之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3；
    v)分別為SEQ ID NO：25、134、27、131、29、及132之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3；
    w)分別為SEQ ID NO：25、134、27、28、133、及132之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3；或
    x)分別為SEQ ID NO：25、137、27、28、133、及132之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
  108. 如請求項107所述之雙特異性抗體，其中該第一結構域包含：
    a)分別為SEQ ID NO：31、42、43、11、12、及13之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3，以及SEQ ID NO：74之VH及SEQ ID NO：61之VL；
    b)分別為SEQ ID NO：14、15、16、17、18、及19之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3，以及SEQ ID NO：62之VH及SEQ ID NO：63之VL；
    c)分別為SEQ ID NO：25、26、27、28、29、及30之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3，以及SEQ ID NO：66之VH及SEQ ID NO：67之VL；
    d)分別為SEQ ID NO：36、37、38、39、40、及41之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3，以及SEQ ID NO：72之VH及SEQ ID NO：73之VL；
    e)分別為SEQ ID NO：122、123、124、23、12、及24之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3，以及SEQ ID NO：160之VH及SEQ ID NO：65之VL；
    f)分別為SEQ ID NO：8、9、10、11、12、及13之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3，以及SEQ ID NO：60之VH及SEQ ID NO：61之VL；
    g)分別為SEQ ID NO：14、15、16、17、18、及19之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3，以及SEQ ID NO：62之VH及SEQ ID NO：63之VL；
    h)分別為SEQ ID NO：20、21、22、23、12、及24之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3，以及SEQ ID NO：64之VH及SEQ ID NO：65之VL；
    i)分別為SEQ ID NO：31、32、33、34、12、及35之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3，以及SEQ ID NO：70之VH及SEQ ID NO：71之VL；
    j)分別為SEQ ID NO：31、44、45、46、29、及47之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3，以及SEQ ID NO：75之VH及SEQ ID NO：76之VL；
    k)分別為SEQ ID NO：36、37、48、49、50、及51之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3，以及SEQ ID NO：77之VH及SEQ ID NO：78之VL；
    l)分別為SEQ ID NO：53、54、55、23、12、及35之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3，以及SEQ ID NO：68之VH及SEQ ID NO：69之VL；
    m)分別為SEQ ID NO：25、130、27、28、29、及30之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3，以及SEQ ID NO：138之VH及SEQ ID NO：67之VL；
    n)分別為SEQ ID NO：25、130、27、131、29、及132之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3，以及SEQ ID NO：138之VH及SEQ ID NO：142之VL；
    o)分別為SEQ ID NO：25、130、27、28、133、及132之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3，以及SEQ ID NO：138之VH及SEQ ID NO：143之VL；
    p)分別為SEQ ID NO：25、134、27、28、29、及30之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3，以及SEQ ID NO：139之VH及SEQ ID NO：167之VL；
    q)分別為SEQ ID NO：25、135、27、28、29、及136之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3，以及SEQ ID NO：140之VH及SEQ ID NO：144之VL；
    r)分別為SEQ ID NO：25、135、27、28、29、及30之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3，以及SEQ ID NO：140之VH及SEQ ID NO：167之VL；
    s)分別為SEQ ID NO：25、135、27、131、29、及132之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3，以及SEQ ID NO：140之VH及SEQ ID NO：142之VL；
    t)分別為SEQ ID NO：25、135、27、28、133、及132之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3，以及SEQ ID NO：140之VH及SEQ ID NO：143之VL；
    u)分別為SEQ ID NO：25、134、27、28、29、及136之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3；以及SEQ ID NO：139之VH及SEQ ID NO：144之VL；
    v)分別為SEQ ID NO：25、134、27、131、29、及132之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3，以及SEQ ID NO：139之VH及SEQ ID NO：142之VL；
    w)分別為SEQ ID NO：25、134、27、28、133、及132之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3，以及SEQ ID NO：139之VH及SEQ ID NO：143之VL；或
    x)分別為SEQ ID NO：25、137、27、28、133、及132之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3，以及SEQ ID NO：141之VH及SEQ ID NO：143之VL。
  109. 一種經單離之雙特異性PSMA/CD3抗體，其包含：第一結構域，該第一結構域(i)結合至表現重組黑猩猩PSMA之細胞，其中與細胞之該結合係藉由流動式細胞測量術來測量，且(ii)以約30nM或更小之親和力結合重組黑猩猩PSMA胞外域(SEQ ID NO：4)，其中該親和力係藉由Proteon表面電漿共振檢定來測量；及特異性結合CD3之第二結構域。
  110. 如請求項109所述之雙特異性PSMA X CD3抗體，其中該抗體
    e)以20nM或更小的所計算EC50結合LNCaP細胞，並以40nM或更小的所計算EC50結合食蟹獼猴PSMA表現性HEK細胞，其中結合LNCaP細胞與結合食蟹獼猴PSMA表現性HEK細胞之間的所計算EC50之差異係小於5倍，且其中該所計算EC50係使用流動式細胞測量術在0℃下於全細胞結合檢定中測量，
    f)以12nM或更小的平衡解離常數(KD)結合來自人類(SEQ ID NO：7)、黑猩猩(SEQ ID NO：4)、及食蟹獼猴(SEQ ID NO：5)之重組PSMA ECD，其中該KD係在+25℃下使用Proteon表面電漿共振檢定ProteOn XPR36系統來測量；
    g)展示T細胞媒介之LNCaP細胞、C42細胞、人類PSMA表現性HEK細胞、或食蟹獼猴PSMA表現性HEK細胞的殺滅，其中該T細胞媒介之殺滅係藉由鉻51或藉由凋亡蛋白酶3/7活化檢定來測量；或
    h)識別構象表位，其中該表位包含人類PSMA(SEQ ID NO：3)之殘基I138、F235、P237、G238、D244、Y299、Y300、Q303、K304、E307、及K324-P326。
  111. 如請求項109所述之雙特異性PSMA X CD3抗體，其中該抗體結合至T細胞。
  112. 如請求項109所述之雙特異性PSMA X CD3抗體，其中該第一結構域包含
    g)分別為SEQ ID NO：14、15、及16之重鏈互補決定區1(HCDR1)、HCDR2、及HCDR3；及分別為SEQ ID NO：17、18、及19之輕鏈互補決定區1(LCDR1)、LCDR2、及LCDR3；
    h)分別為SEQ ID NO：20、21、及22之HCDR1、HCDR2、及HCDR3，以及分別為SEQ ID NO：23、12、及24之LCDR1、LCDR2、及LCDR3；
    i)分別為SEQ ID NO：25、26、及27之HCDR1、HCDR2、及HCDR3，以及分別為SEQ ID NO：28、29、及30之LCDR1、LCDR2、及LCDR3；
    j)分別為SEQ ID NO：31、44、及45之HCDR1、HCDR2、及HCDR3，以及分別為SEQ ID NO：46、29、及47之LCDR1、LCDR2、及LCDR3；
    k)分別為SEQ ID NO：31、42、及43之HCDR1、HCDR2、及HCDR3，以及SEQ ID NO：11、12、及13之LCDR1、LCDR2、及LCDR3；或
    l)分別為SEQ ID NO：122、123、及124之HCDR1、HCDR2、及HCDR3，以及SEQ ID NO：23、12、及24之LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
  113. 如請求項109所述之雙特異性PSMA X CD3抗體，其中該第一結構域包含下列之HCDR1、HCDR2、及HCDR3：
    g)分別為SEQ ID NO：14、15、及16；
    h)分別為SEQ ID NO：20、21、及22；
    i)分別為SEQ ID NO：25、26、及27；
    j)分別為SEQ ID NO：31、44、及45；
    k)分別為SEQ ID NO：31、42、及43；或
    l)分別為SEQ ID NO：122、123、及124。
  114. 如請求項109所述之雙特異性PSMA X CD3抗體，其中該第一結構域包含下列之LCDR1、LCDR2、及LCDR3：
    g)分別為SEQ ID NO：17、18、及19；
    h)分別為SEQ ID NO：23、12、及24；
    i)分別為SEQ ID NO：28、29、及30；
    j)分別為SEQ ID NO：46、29、及47；
    k)分別為SEQ ID NO：11、12、及13；或
    l)分別為SEQ ID NO：23、12、及24。
  115. 如請求項109所述之雙特異性PSMA X CD3抗體，其中
    g)該第一結構域包含SEQ ID NO：62之重鏈可變區(VH)及SEQ ID NO：63之輕鏈可變區(VL)，且該第二結構域包含SEQ ID NO：104之VH及SEQ ID NO：105之VL
    h)該第一結構域包含SEQ ID NO：64之VH及SEQ ID NO：65之VL，且該第二結構域包含SEQ ID NO：104之VH及SEQ ID NO：105之VL；
    i)該第一結構域包含SEQ ID NO：66之VH及SEQ ID NO：67之VL，且該第二結構域包含SEQ ID NO：104之VH及SEQ ID NO：105之VL；
    j)該第一結構域包含SEQ ID NO：75之VH及SEQ ID NO：76之VL，且該第二結構域包含SEQ ID NO：104之VH及SEQ ID NO：105之VL；
    k)該第一結構域包含SEQ ID NO：74之VH及SEQ ID NO：61之VL，且該第二結構域包含SEQ ID NO：104之VH及SEQ ID NO：105之VL；
    l)該第一結構域包含SEQ ID NO：160之VH及SEQ ID NO：65之VL，且該第二結構域包含SEQ ID NO：104之VH及SEQ ID NO：105之VL。
  116. 如請求項109所述之雙特異性PSMA X CD3抗體，其包含第一重鏈(HC1)、第一輕鏈(LC1)、第二重鏈(HC2)、及第二輕鏈(LC2)，其中該HC1及該LC1包含下列之胺基酸序列：
    g)分別為SEQ ID NO：84及85；
    h)分別為SEQ ID NO：86及87；
    i)分別為SEQ ID NO：88及89；
    j)分別為SEQ ID NO：125及91；
    k)分別為SEQ ID NO：94及95；或
    l)分別為SEQ ID NO：96及83。
  117. 如請求項116所述之雙特異性PSMA X CD3抗體，其中該HC2及該LC2分別包含SEQ ID NO：110及111。
  118. 如請求項109所述之雙特異性PSMA X CD3抗體，其包含下列之HC1、LC1、HC2、及LC2：
    g)分別為SEQ ID NO：84、85、110、及111；
    h)分別為SEQ ID NO：86、87、110、及111；
    i)分別為SEQ ID NO：88、89、110、111；
    j)分別為SEQ ID NO：125、91、110、及111；
    k)分別為SEQ ID NO：94、95、110、及111；
    l)分別為SEQ ID NO：96、83、110、及111。
  119. 如請求項109至118中任一項所述之雙特異性PSMA X CD3抗體，其中該抗體係人類抗體或人源化抗體。
  120. 如請求項119所述之雙特異性PSMA X CD3抗體，其中該抗體係屬於IgG1、IgG2、IgG3、或IgG4同型。
  121. 如請求項120所述之雙特異性PSMA X CD3抗體，其中該抗體係屬於IgG1或IgG4同型。
  122. 如請求項120或121所述之雙特異性PSMA X CD3抗體，其在抗體Fc中具有一個、兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、或十個取代。
  123. 如請求項121所述之雙特異性PSMA X CD3抗體，其包含：
    a)L234A、L235A、G237A、P238S、H268A、A330S、及P331S取代；
    b)V234A、G237A、P238S、H268A、V309L、A330S、及P331S取代；
    c)F234A、L235A、G237A、P238S、及Q268A取代；
    d)L234A、L235A、或L234A及L235A取代；
    e)F234A、L235A、或F234A及L235A取代；
    f)V234A取代；或
    g)S228P、F234A、及L235A取代，其中殘基編號係根據EU索引。
  124. 如請求項109至123中任一項所述之雙特異性PSMA X CD3抗體，其在抗體CH3恆定域中包含至少一個取代。
  125. 如請求項124所述之雙特異性PSMA X CD3抗體，其中在該抗體CH3恆定域中之該取代係409R、F405L、或F405L/R409K取代，其中殘基編號係根據EU索引。
  126. 如請求項124所述之雙特異性PSMA X CD3抗體，其中該抗體包含
    a)在該HC1中之F405L取代，以及在該HC2中之409R取代，其中該抗體係屬於IgG1同型；
    b)在該HC1中之V234A、G237A、P238S、H268A、V309L、A330S、P331S、及F405L取代，以及在該HC2中之V234A、G237A、P238S、H268A、V309L、A330S、P331S、及409R取代，其中該抗體係屬於IgG1同型；或
    b)在該HC1中之S228P取代，以及在該HC2中之S228P、F405L、及R409K取代，其中該抗體係屬於IgG4同型。
  127. 一種醫藥組成物，其包含如請求項109至126中任一項所述之雙特異性PSMA X CD3抗體及醫藥上接受之載劑。
  128. 一種多核苷酸，其編碼如請求項118所述之雙特異性PSMA X CD3抗體HC1、LC1、HC2、或LC2。
  129. 一種載體，其包含編碼如請求項128所述之HC1、LC1、HC2、LC2、HC1及LC1、或HC2及LC2的多核苷酸。
  130. 一種經單離之宿主細胞，其包含如請求項129所述之載體。
  131. 一種生產如請求項118所述之雙特異性PSMA X CD3抗體的方法，其包含在使該抗體表現之條件下培養如請求項130所述之宿主細胞、及回收並純化由該宿主細胞所生產之該雙特異性PSMA X CD3抗體。
  132. 一種生產如請求項118所述之雙特異性PSMA X CD3抗體之方法，其包含：
    a)將單特異性二價PSMA抗體及單特異性二價CD3抗體以約1：1莫耳比之混合物組合，該單特異性二價PSMA抗體具有兩個相同的HC1及兩個相同的LC1，該單特異性二價CD3抗體具有兩個相同的HC2及兩個相同的LC2；
    b)將還原劑引入該混合物中；
    c)將該混合物培養約九十分鐘至約六小時；
    d)移除該還原劑；及
    e)純化包含該HC1、該LC1、該HC2、及該LC2之該雙特異性PSMA X CD3抗體。
  133. 如請求項132所述之方法，其中該還原劑係2-巰基乙醇胺(2-MEA)。
  134. 如請求項133所述之方法，其中
    h)該2-MEA係以約25mM至約75mM的濃度存在；且
    i)在約25℃至約37℃之溫度下執行該培養步驟。
  135. 一種治療對象之癌症的方法，其包含向有需要之該對象投予治療有效量的如請求項109至126中任一項所述之經單離之PSMA X CD3雙特異性抗體達一段足以治療該癌症的時間。
  136. 如請求項135所述之方法，其中該癌症係實體腫瘤、惡性疾病、或腫瘤新生血管。
  137. 如請求項136所述之方法，其中該實體腫瘤係前列腺癌或結腸直腸癌、胃癌、透明細胞腎癌、膀胱癌、肺癌、鱗狀細胞癌、神經膠質瘤、乳癌、腎臟癌、新生血管病症、透明細胞腎癌(CCRCC)、胰腺癌、腎癌、尿路上皮癌、及往肝臟的腺癌。
  138. 如請求項137所述之方法，其中該前列腺癌係難治性前列腺癌、前列腺上皮內瘤、雄性激素非依賴性前列腺癌、惡性前列腺癌。
  139. 如請求項135至138中任一項所述之方法，其中該抗體係與第二治療劑組合投予。
  140. 如請求項139所述之方法，其中該第二治療劑係用於治療該實體腫瘤、或惡性疾病、或腫瘤新生血管之標準照護藥物。
  141. 如請求項139所述之方法，其中該第二治療劑係荷爾蒙抑制劑、抗微管劑、拓樸異構酶抑制劑、抗代謝物、有絲分裂抑制劑、烷化劑、蒽環類藥物、長春花生物鹼類、嵌入劑、能夠干擾信號轉導路徑的試劑、促進細胞凋亡的試劑、蛋白酶體抑制劑、或放射線。
  142. 如請求項139所述之方法，其中該第二治療劑係疫苗。
  143. 如請求項142所述之方法，其中該疫苗係多肽或其片段、或編碼在腫瘤細胞上表現的該多肽或其片段之DNA或RNA。
  144. 如請求項143所述之方法，其中該多肽係PSMA、間皮素、EGFR、或EGFRvIII。
  145. 如請求項139所述之方法，其中該第二治療劑係同時、依序、或分開投予。
  146. 如請求項135至145中任一項所述之方法，其中該對象係以放射療法治療，或正以放射療法治療。
  147. 如請求項135至145中任一項所述之方法，其中該對象已經歷過手術，或將經歷手術。
  148. 如請求項135至145中任一項所述之方法，其中該雙特異性PSMA X CD3抗體之該第一結構域包含SEQ ID NO：66之VH、及VL或SEQ ID NO：67，且該雙特異性PSMA X CD3抗體之該第二結構域包含SEQ ID NO：104之VH及SEQ ID NO：105之VL。
  149. 如請求項109至126中任一項所述之抗體，其係用於療法中。
  150. 一種抗獨特型抗體，其結合至如請求項109至126中任一項所述之抗體。
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Families Citing this family (38)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US12466897B2 (en) 2011-10-10 2025-11-11 Xencor, Inc. Heterodimeric human IgG1 polypeptides with isoelectric point modifications
US10738132B2 (en) 2013-01-14 2020-08-11 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
US10858417B2 (en) 2013-03-15 2020-12-08 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
IL252467B (en) 2014-11-26 2022-06-01 Xencor Inc Heterodimeric antibodies that bind cd3 and cd38
TN2017000223A1 (en) 2014-11-26 2018-10-19 Xencor Inc Heterodimeric antibodies that bind cd3 and tumor antigens
US10259887B2 (en) 2014-11-26 2019-04-16 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind CD3 and tumor antigens
CA3029328A1 (en) 2016-06-28 2018-01-04 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind somatostatin receptor 2
EP3824906A1 (en) 2016-12-21 2021-05-26 Amgen Inc. Anti-tnf alpha antibody formulations
US11312770B2 (en) 2017-11-08 2022-04-26 Xencor, Inc. Bispecific and monospecific antibodies using novel anti-PD-1 sequences
US10982006B2 (en) 2018-04-04 2021-04-20 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind fibroblast activation protein
JP7530299B2 (ja) 2018-05-24 2024-08-07 ヤンセン バイオテツク，インコーポレーテツド 抗ｃｄ３抗体及びその使用
EP3956022A1 (en) * 2019-04-19 2022-02-23 Janssen Biotech, Inc. Methods of treating prostate cancer with an anti- psma/cd3 antibody
AU2020259405A1 (en) * 2019-04-19 2021-09-23 Janssen Biotech, Inc. Methods of treating renal cancer with an anti- PSMA/CD3 antibody
PH12021552791A1 (en) 2019-05-10 2022-09-05 Janssen Biotech Inc Macrocyclic chelators and methods of use thereof
US11919956B2 (en) 2020-05-14 2024-03-05 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind prostate specific membrane antigen (PSMA) and CD3
US12227593B2 (en) 2020-05-20 2025-02-18 Janssen Biotech, Inc. Site-specific conjugation of glycosylated monoclonal antibodies with transglutaminase
JP7787101B2 (ja) 2020-05-20 2025-12-16 ヤンセン バイオテツク，インコーポレーテツド グリコシル化Ｆｃドメインを含むタンパク質の部位特異的コンジュゲーションのための方法
US12460001B2 (en) 2020-05-27 2025-11-04 Janssen Biotech, Inc. Proteins comprising CD3 antigen binding domains and uses thereof
JP2023532807A (ja) 2020-07-08 2023-07-31 ラヴァ・セラピューティクス・エヌ・ヴイ Ｐｓｍａ及びガンマ－デルタｔ細胞受容体に結合する抗体
KR20230166150A (ko) 2020-08-19 2023-12-06 젠코어 인코포레이티드 항-cd28 조성물
US20230310599A1 (en) * 2020-09-02 2023-10-05 Genmab A/S Antibody therapy
WO2022060901A1 (en) 2020-09-16 2022-03-24 Amgen Inc. Methods for administering therapeutic doses of bispecific t-cell engaging molecules for the treatment of cancer
UY39510A (es) 2020-11-10 2022-05-31 Janssen Biotech Inc Compuestos macrocíclicos y métodos para usarlos
JP2024506831A (ja) 2021-01-28 2024-02-15 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド サイトカイン放出症候群を治療するための組成物及び方法
KR20230137393A (ko) * 2021-01-28 2023-10-04 얀센 바이오테크 인코포레이티드 Psma 결합 단백질 및 이의 용도
US11739144B2 (en) 2021-03-09 2023-08-29 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind CD3 and CLDN6
KR20230154311A (ko) 2021-03-10 2023-11-07 젠코어 인코포레이티드 Cd3 및 gpc3에 결합하는 이종이량체 항체
US20240209115A1 (en) 2021-04-29 2024-06-27 Amgen Inc. Methods for reducing low molecular weight species of recombinantly-produced proteins
US20230073821A1 (en) * 2021-08-27 2023-03-09 International Business Machines Corporation Antigen-binding proteins targeting coronavirus (cov) variants
WO2023084397A1 (en) 2021-11-09 2023-05-19 Janssen Biotech, Inc. Macrocyclic compounds and diagnostic uses thereof
EP4430040A1 (en) 2021-11-09 2024-09-18 Janssen Biotech, Inc. Macrocyclic compounds and methods of making the same
WO2023152581A1 (en) * 2022-02-09 2023-08-17 Janssen Biotech, Inc. Method of treating cancer with psmaxcd3 antibody
CA3252619A1 (en) 2022-02-23 2023-08-31 Xencor, Inc. Anti-CD28 and anti-PSMA antibodies
JP2025509892A (ja) 2022-03-21 2025-04-11 アムジェン インコーポレイテッド 前立腺癌の治療のためのｔ細胞エンゲージ分子を用いた併用療法
CN118922449A (zh) * 2022-04-11 2024-11-08 江苏恒瑞医药股份有限公司 特异性结合psma和cd28的抗原结合分子及其医药用途
CN120456931A (zh) * 2022-12-22 2025-08-08 詹森药业有限公司 制备抗体-多核苷酸缀合物的方法
KR20250158048A (ko) 2023-03-03 2025-11-05 아스널 바이오사이언시스, 인크. Psma 및 ca9을 표적으로 하는 시스템
WO2025096433A1 (en) * 2023-10-30 2025-05-08 Eureka Therapeutics, Inc. Constructs targeting prostate-specific membrane antigen (psma) and uses thereof

Family Cites Families (95)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US541606A (en) 1895-06-25 Sealed package
US4683195A (en) 1986-01-30 1987-07-28 Cetus Corporation Process for amplifying, detecting, and/or-cloning nucleic acid sequences
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
WO1988001649A1 (en) 1986-09-02 1988-03-10 Genex Corporation Single polypeptide chain binding molecules
US5606040A (en) 1987-10-30 1997-02-25 American Cyanamid Company Antitumor and antibacterial substituted disulfide derivatives prepared from compounds possessing a methyl-trithio group
US5770701A (en) 1987-10-30 1998-06-23 American Cyanamid Company Process for preparing targeted forms of methyltrithio antitumor agents
US5223409A (en) 1988-09-02 1993-06-29 Protein Engineering Corp. Directed evolution of novel binding proteins
GB8823869D0 (en) 1988-10-12 1988-11-16 Medical Res Council Production of antibodies
IL162181A (en) 1988-12-28 2006-04-10 Pdl Biopharma Inc A method of producing humanized immunoglubulin, and polynucleotides encoding the same
US5208020A (en) 1989-10-25 1993-05-04 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
GB8928874D0 (en) 1989-12-21 1990-02-28 Celltech Ltd Humanised antibodies
US6150584A (en) 1990-01-12 2000-11-21 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US5427908A (en) 1990-05-01 1995-06-27 Affymax Technologies N.V. Recombinant library screening methods
US6172197B1 (en) 1991-07-10 2001-01-09 Medical Research Council Methods for producing members of specific binding pairs
GB9015198D0 (en) 1990-07-10 1990-08-29 Brien Caroline J O Binding substance
US6255458B1 (en) 1990-08-29 2001-07-03 Genpharm International High affinity human antibodies and human antibodies against digoxin
US6582959B2 (en) 1991-03-29 2003-06-24 Genentech, Inc. Antibodies to vascular endothelial cell growth factor
US20030206899A1 (en) 1991-03-29 2003-11-06 Genentech, Inc. Vascular endothelial cell growth factor antagonists
WO1994004679A1 (en) 1991-06-14 1994-03-03 Genentech, Inc. Method for making humanized antibodies
JP4124480B2 (ja) 1991-06-14 2008-07-23 ジェネンテック・インコーポレーテッド 免疫グロブリン変異体
DE69233782D1 (de) 1991-12-02 2010-05-20 Medical Res Council Herstellung von Autoantikörpern auf Phagenoberflächen ausgehend von Antikörpersegmentbibliotheken
DE69233803D1 (de) 1992-10-28 2011-03-31 Genentech Inc Verwendung von vaskulären Endothelwachstumsfaktor-Antagonisten
ATE139900T1 (de) 1992-11-13 1996-07-15 Idec Pharma Corp Therapeutische verwendung von chimerischen und markierten antikörper gegen menschlichen b lymphozyt beschränkter differenzierung antigen für die behandlung von b-zell-lymphoma
US5635483A (en) 1992-12-03 1997-06-03 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Tumor inhibiting tetrapeptide bearing modified phenethyl amides
DK0672142T3 (da) 1992-12-04 2001-06-18 Medical Res Council Multivalente og multispecifikke bindingsproteiner samt fremstilling og anvendelse af disse
US5780588A (en) 1993-01-26 1998-07-14 Arizona Board Of Regents Elucidation and synthesis of selected pentapeptides
US5773001A (en) 1994-06-03 1998-06-30 American Cyanamid Company Conjugates of methyltrithio antitumor agents and intermediates for their synthesis
IL117645A (en) 1995-03-30 2005-08-31 Genentech Inc Vascular endothelial cell growth factor antagonists for use as medicaments in the treatment of age-related macular degeneration
AUPO591797A0 (en) 1997-03-27 1997-04-24 Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation High avidity polyvalent and polyspecific reagents
US5712374A (en) 1995-06-07 1998-01-27 American Cyanamid Company Method for the preparation of substantiallly monomeric calicheamicin derivative/carrier conjugates
US5714586A (en) 1995-06-07 1998-02-03 American Cyanamid Company Methods for the preparation of monomeric calicheamicin derivative/carrier conjugates
US20020032315A1 (en) 1997-08-06 2002-03-14 Manuel Baca Anti-vegf antibodies
ATE501170T1 (de) 1997-04-07 2011-03-15 Genentech Inc Verfahren zur herstellung humanisierter antikörper durch randomisierte mutagenese
US6884879B1 (en) 1997-04-07 2005-04-26 Genentech, Inc. Anti-VEGF antibodies
NZ500078A (en) 1997-04-07 2001-10-26 Genentech Inc Humanized anti-VEGF antibodies and their use in inhibiting VEGF-induced angiogenesis in mammals
US6670127B2 (en) 1997-09-16 2003-12-30 Egea Biosciences, Inc. Method for assembly of a polynucleotide encoding a target polypeptide
ATE294860T1 (de) 1997-09-16 2005-05-15 Egea Biosciences Llc Methoden zur kompletten chemischen synthese und zusammensetzung von genen und genomen
US6818749B1 (en) 1998-10-31 2004-11-16 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Variants of humanized anti carcinoma monoclonal antibody cc49
US6703020B1 (en) 1999-04-28 2004-03-09 Board Of Regents, The University Of Texas System Antibody conjugate methods for selectively inhibiting VEGF
DK1242438T3 (da) 1999-12-29 2007-02-12 Immunogen Inc Cytotoksiske midler omfattende modificerede doxorubiciner og daunorubiciner og deres terapeutiske anvendelse
US6596541B2 (en) 2000-10-31 2003-07-22 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of modifying eukaryotic cells
EP1916303B1 (en) 2000-11-30 2013-02-27 Medarex, Inc. Nucleic acids encoding rearranged human immunoglobulin sequences from transgenic transchromosomal mice
US6995162B2 (en) 2001-01-12 2006-02-07 Amgen Inc. Substituted alkylamine derivatives and methods of use
EP1539233B1 (en) 2001-07-12 2011-04-27 FOOTE, Jefferson Super humanized antibodies
EP2407473A3 (en) 2002-02-01 2012-03-21 ARIAD Pharmaceuticals, Inc Method for producing phosphorus-containing compounds
SI2275102T1 (sl) 2002-03-13 2015-12-31 Array Biopharma, Inc. N3 alkilirani benzimidazol derivati kot MEK inhibitorji
US20050186208A1 (en) 2003-05-30 2005-08-25 Genentech, Inc. Treatment with anti-VEGF antibodies
AU2004242845B2 (en) 2003-05-31 2011-06-02 Amgen Research (Munich) Gmbh Human-anti-human CD3 binding molecules
WO2005044853A2 (en) 2003-11-01 2005-05-19 Genentech, Inc. Anti-vegf antibodies
US20050106667A1 (en) 2003-08-01 2005-05-19 Genentech, Inc Binding polypeptides with restricted diversity sequences
PT2489364E (pt) 2003-11-06 2015-04-16 Seattle Genetics Inc Compostos de monometilvalina conjugados com anticorpos
EP2397189B1 (en) 2003-11-14 2015-03-18 Brigham and Women's Hospital, Inc. Methods of modulating immunity
RS55551B1 (sr) 2004-05-13 2017-05-31 Icos Corp Hinazolinoni kao inhibitori humane fosfatidilinozitol 3-kinaze delta
SI1761528T1 (sl) 2004-06-11 2008-06-30 Japan Tobacco Inc 5-amino-2,4,7-triokso-3,4,7,8-tetrahidro-2H-pirido(2,3-D)pirimidinski derivati in sorodne spojine za zdravljenje raka
US20060009360A1 (en) 2004-06-25 2006-01-12 Robert Pifer New adjuvant composition
MX2007002856A (es) 2004-09-02 2007-09-25 Genentech Inc Metodos para el uso de ligandos receptores de muerte y anticuerpos c20.
WO2006106905A1 (ja) 2005-03-31 2006-10-12 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha 会合制御によるポリペプチド製造方法
DE102005028778A1 (de) 2005-06-22 2006-12-28 SUNJÜT Deutschland GmbH Mehrlagige Folie mit einer Barriere- und einer antistatischen Lage
WO2007004415A1 (ja) 2005-07-01 2007-01-11 Murata Manufacturing Co., Ltd. 多層セラミック基板およびその製造方法ならびに多層セラミック基板作製用複合グリーンシート
PT1999154E (pt) 2006-03-24 2013-01-24 Merck Patent Gmbh Domínios proteicos heterodiméricos modificados
US20090182127A1 (en) 2006-06-22 2009-07-16 Novo Nordisk A/S Production of Bispecific Antibodies
JP5448818B2 (ja) 2006-08-21 2014-03-19 ジェネンテック， インコーポレイテッド アザベンゾフラニル化合物および使用方法
KR20100058509A (ko) 2007-07-31 2010-06-03 메디뮨 엘엘씨 다중특이적 에피토프 결합 단백질 및 이의 용도
US8748356B2 (en) 2007-10-19 2014-06-10 Janssen Biotech, Inc. Methods for use in human-adapting monoclonal antibodies
CL2008003810A1 (es) 2007-12-19 2009-05-22 Genentech Inc Compuestos derivados de 5-anilino imidazol[1,5-a]piridina o pirazina, inhibidores de la actividad mek quinasa; composiciones farmaceuticas que los contienen; y su uso para tratar trastornos hiperproliferativos y una enfermedad inflamatoria.
CA2710373A1 (en) 2007-12-19 2009-07-09 Ping Tsui Design and generation of human de novo pix phage display libraries via fusion to pix or pvii, vectors, antibodies and methods
US8227577B2 (en) 2007-12-21 2012-07-24 Hoffman-La Roche Inc. Bivalent, bispecific antibodies
US8242247B2 (en) 2007-12-21 2012-08-14 Hoffmann-La Roche Inc. Bivalent, bispecific antibodies
US9266967B2 (en) 2007-12-21 2016-02-23 Hoffmann-La Roche, Inc. Bivalent, bispecific antibodies
US20090162359A1 (en) 2007-12-21 2009-06-25 Christian Klein Bivalent, bispecific antibodies
WO2009114870A2 (en) 2008-03-14 2009-09-17 Intellikine, Inc. Kinase inhibitors and methods of use
WO2010006086A2 (en) 2008-07-08 2010-01-14 Intellikine, Inc. Kinase inhibitors and methods of use
CA2738429C (en) 2008-09-26 2016-10-25 Intellikine, Inc. Heterocyclic kinase inhibitors
CA2738565C (en) 2008-10-01 2023-10-10 Micromet Ag Cross-species-specific psmaxcd3 bispecific single chain antibody
WO2010045340A1 (en) 2008-10-14 2010-04-22 Centocor Ortho Biotech Inc. Methods of humanizing and affinity-maturing antibodies
WO2010129304A2 (en) 2009-04-27 2010-11-11 Oncomed Pharmaceuticals, Inc. Method for making heteromultimeric molecules
PE20120540A1 (es) 2009-05-27 2012-05-09 Hoffmann La Roche Anticuerpos triespecificos o tetraespecificos
ES2989108T3 (es) 2010-04-20 2024-11-25 Genmab As Proteínas que contienen FC de anticuerpos heterodiméricos y métodos para producir las mismas
AU2011325833C1 (en) 2010-11-05 2017-07-13 Zymeworks Bc Inc. Stable heterodimeric antibody design with mutations in the Fc domain
KR20190133790A (ko) 2011-08-01 2019-12-03 제넨테크, 인크. Pd-1 축 결합 길항제 및 mek 억제제를 사용하는 암 치료 방법
AU2012332021B8 (en) 2011-11-04 2017-10-12 Zymeworks Bc Inc. Stable heterodimeric antibody design with mutations in the Fc domain
EP2855531A1 (en) 2012-05-24 2015-04-08 F. Hoffmann-La Roche AG Multispecific antibodies
KR20250054125A (ko) 2012-11-21 2025-04-22 얀센 바이오테크 인코포레이티드 이중특이성 EGFR/c-Met 항체
EP3192812B1 (en) 2013-12-17 2020-05-27 Genentech, Inc. Anti-cd3 antibodies and methods of use
EP2930188A1 (en) 2014-04-13 2015-10-14 Affimed Therapeutics AG Trifunctional antigen-binding molecule
AP2016009586A0 (en) 2014-05-29 2016-11-30 Macrogenics Inc Tri-specific binding molecules and methods of use thereof
EP3722315A1 (en) 2014-09-05 2020-10-14 Janssen Pharmaceutica NV Cd123 binding agents and uses thereof
BR112017023829A2 (pt) * 2015-05-06 2018-07-31 Janssen Biotech Inc agentes de ligação biespecíficos de antígeno de membrana específico da próstata (psma) e usos dos mesmos
HK1253005A1 (zh) * 2015-05-06 2019-06-06 Janssen Biotech, Inc. 前列腺特异性膜抗原结合iii型纤连蛋白结构域
JOP20160154B1 (ar) * 2015-07-31 2021-08-17 Regeneron Pharma أجسام ضادة مضاد لل psma، وجزيئات رابطة لمستضد ثنائي النوعية الذي يربط psma و cd3، واستخداماتها
MA43959A (fr) 2016-02-03 2018-12-12 Amgen Res Munich Gmbh Constructions d'anticorps impliquant des cellules t bispécifiques psma et cd3
WO2018042071A1 (en) 2016-08-30 2018-03-08 Nokia Technologies Oy Controlling transmission of information on radio links used in aggregation
AU2018388467B2 (en) 2017-12-18 2025-01-09 Janssen Biotech, Inc. Radiolabeling of polypeptides
JP7395508B2 (ja) * 2018-05-16 2023-12-11 ヤンセン バイオテツク，インコーポレーテツド 癌を治療する方法及びｔ細胞リダイレクト治療薬の有効性を向上させる方法
JP7530299B2 (ja) 2018-05-24 2024-08-07 ヤンセン バイオテツク，インコーポレーテツド 抗ｃｄ３抗体及びその使用

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