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TW201706311A - 治療性抗體及其用途 - Google Patents

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TW201706311A TW105110157A TW105110157A TW201706311A TW 201706311 A TW201706311 A TW 201706311A TW 105110157 A TW105110157 A TW 105110157A TW 105110157 A TW105110157 A TW 105110157A TW 201706311 A TW201706311 A TW 201706311A
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Abstract

本發明係關於特異性地結合至BCMA(B細胞成熟抗原)及CD3(白血球分化簇3(Cluster of Differentiation 3))之抗體，例如全長抗體或其抗原結合片段。本發明亦關於包含BCMA抗體之抗體共軛物(例如抗體藥物共軛物)、包含BCMA抗體之組成物、及使用該BCMA抗體及其共軛物以治療與表現BCMA之細胞有關之病症(例如癌症或自體免疫疾病)的方法。本發明進一步關於特異性地結合至CD3及腫瘤細胞抗原之異源多聚體抗體(例如特異性地結合至CD3及BCMA之雙特異性抗體)。亦提供包含此異源多聚體抗體之組成物、製造及純化此異源二聚體抗體之方法、及其於診斷及治療之用途。

Description

治療性抗體及其用途
本發明係關於特異性地結合至BCMA(B細胞成熟抗原)及/或CD3(白血球分化簇3(Cluster of Differentiation 3))之抗體，例如全長抗體或其抗原結合片段。本發明亦關於包含BCMA抗體之抗體共軛物(例如抗體藥物共軛物)、包含BCMA抗體之組成物、及使用該BCMA抗體及其共軛物以治療與表現BCMA之細胞有關之病症(例如癌症或自體免疫疾病)的方法。本發明進一步關於特異性地結合至CD3及腫瘤細胞抗原之異源多聚體抗體(例如特異性地結合至CD3及BCMA之雙特異性抗體)。亦提供包含此異源多聚體抗體之組成物、製造及純化此異源二聚體抗體之方法、及其於診斷及治療之用途。
B細胞成熟抗原(BCMA、CD269、或TNFRSF17)為腫瘤壞死因子受體(TNFR)超家族的成員。BCMA經鑑定於含有t(4；16)易位之惡性人類T細胞淋巴瘤中。該基因於B-細胞系中選擇性地表現且於漿母細胞及漿細胞(分泌抗 體的細胞)中的最高表現。BCMA結合兩個配體，B-cell活化因子(BAFF)(亦稱為B-淋巴細胞刺激因子(BLyS)及APOL相關性白血球表現配體(TALL-1))及增殖誘導配體(APRIL)，親合力分別為1uM及16nM。將APRIL或BAFF結合至BCMA可促進涉及NF-κ B、Elk-1、c-Jun N端激酶及p38有絲分裂原活化蛋白激酶之傳訊級聯，其產生用於細胞存活及增殖的訊號。
BCMA亦於惡性B細胞及涉及B淋巴細胞的某些癌症包括多發性骨髓瘤(multiple myeloma)、漿細胞瘤(plasmacytoma)、何杰金氏淋巴瘤(Hodgkin’s lymphoma)、及慢性淋巴細胞性白血病(chronic lymphocytic leukemia)上表現。涉及漿母細胞之自體免疫疾病諸如全身性紅斑性狼瘡(SLE)及類風濕性關節炎中，產生BCMA表現性抗體的細胞分泌攻擊自身的的自體抗體。
至於多發性骨髓瘤(multiple myeloma)方面，在美國每年約有24,000新診斷出來的新病例，且此數目代表美國新診斷出之血液學癌症的約15%。每年平均11,000人因多發性骨髓瘤死亡，平均5年存活率約44%，且存活中值為50-55個月。目前多發性骨髓瘤的治療集中在漿細胞凋亡及/或降低破骨細胞活性(例如化學療法、沙利多邁(thalidomide)、雷利米得(lenalidomide)、雙膦酸酯類(bisphosphonates)、及/或蛋白酶體抑制劑諸如硼替左米(bortezomib)(VELCADE®)或卡菲左米(carfilzomib))。然而，多發性骨髓瘤仍是不能治癒的疾病且幾乎所有患者均 發展對這些藥劑的抗性且最終又復發。因此，多發性骨髓瘤的替代治療諸如使用抗BCMA拮抗劑包括抗體及其他免疫治療劑(例如雙特異性抗體或抗體藥物共軛物)將能製成優良的治療劑。
本文揭示之化合物係針對結合至BCMA及/或CD3之治療性抗體。亦提供包含BCMA之抗體共軛物(例如抗體藥物共軛物)。此外，亦提供異源多聚體抗體(例如雙特異性抗體)，其特異性地結合至CD3及腫瘤細胞抗原(例如特異性地結合至CD3及BCMA之雙特異性抗體)。
一方面，本發明提供經分離之抗體或其抗原結合片段，其特異性地結合至B細胞成熟抗原(BCMA)，其中該抗體包含重鏈可變(VH)區，其包含(i)VH互補決定區一(CDR1)，其包含序列SYX1MX2，其中X1為A或P；且X2為T、N、或S(SEQ ID NO：301)，GFTFX1SY，其中X1為G或S(SEQ ID NO：302)，或GFTFX1SYX2MX3，其中X1為G或S，X2為A或P；且X3為T、N、或S(SEQ ID NO：303)；(ii)VH CDR2，其包含序列AX1X2X3X4GX5X6X7X8YADX9X10KG，其中X1為I、V、T、H、L、A、或C；X2為S、D、G、T、I、L、F、M、或V；X3為G、Y、L、H、D、A、S、或M；X4為S、Q、T、A、F、或W；X5為G或T；X6為N、S、P、Y、W、或F；X7為S、T、I、L、T、A、R、V、K、G、或 C；X8為F、Y、P、W、H、或G；X9為V、R、或L；且X10為G或T(SEQ ID NO：305)、或X1X2X3X4X5X6，其中X1為S、V、I、D、G、T、L、F、或M；X2為G、Y、L、H、D、A、S、或M；X3為S、G、F、或W；X4為G或S；X5為G或T；且X6為N、S、P、Y、或W(SEQ ID NO：306)；及iii)VH CDR3，其包含序列VSPIX1X2X3X4，其中X1為A或Y；X2為A或S；且X3為G、Q、L、P、或E(SEQ ID NO：307)、或YWPMX1X2，其中X1為D、S、T、或A；且X2為I、S、L、P、或D(SEQ ID NO：308)；及/或(b)輕鏈可變(VL)區，其包含(i)VL CDR1，其包含序列X1X2X3X4X5X6X7X8X9X10X11X12，其中X1為R、G、W、A、或C；X2為A、P、G、L、C、或S；X3為S、G、或R；X4為Q、C、E、V、或I；X5為S、P、G、A、R、或D；X6為V、G、I、或L；X7為S、E、D、P、或G；X8為S、P、F、A、M、E、V、N、D、或Y；X9為I、T、V、E、S、A、M、Q、Y、H、R、或F；X10為Y或F；X11為L、W、或P；且X12為A、S、或G(SEQ ID NO：309)；(ii)VL CDR2，其包含序列X1ASX2RAX3，其中X1為G或D；X2為S或I；且X3為T或P(SEQ ID NO：310)；及(iii)VL CDR3，其包含序列QQYX1X2X3PX4T，其中X1為G、Q、E、L、F、A、S、M、K、R、或Y；X2為S、R、T、G、V、F、Y、D、A、H、V、E、K、或C；X3為W、F、或S；且X4為L或I(SEQ ID NO： 311)，或QQYX1X2X3PX4，其中X1為G、Q、E、L、F、A、S、M、R、K、或Y；X2為S、R、T、G、R、V、D、A、H、E、K、C、F、或Y；X3為W、S、或F；且X4為L或I(SEQ ID NO：312)。
另一方面，本發明提供經分離之抗體或其抗原結合片段，其特異性地結合至BCMA，其中該抗體包含：VH區，其包含SEQ ID NO：2、3、7、8、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、35、37、39、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、83、87、92、95、97、99、101、104、106、110、112、114、118、120、122、125、127、313、314、363、或365所示之VH序列的VH CDR1、VH CDR2、及VH CDR3；及/或VL區，其包含SEQ ID NO：1、4、5、6、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、34、36、38、40、41、43、45、47、49、51、53、55、57、59、61、63、65、67、69、71、73、75、77、79、317、81、82、84、85、86、88、89、90、91、93、94、96、98、100、102、103、105、107、108、109、111、113、115、116、117、119、121、123、124、126、128、315、316、或364所示之VL序列的VL CDR1、VL CDR2、及VL CDR3。一些實施態樣中，該VH區包含(i)VH CDR 1，其包含SEQ ID NO：150、151、152、156、或157；(ii)VH CDR2，其包含SEQ ID NO：169、154、194、159、195、196、162、 158、198、177、178、199、200、201、202、203、204、206、207、208、172、203、或204；及(iii)VH CDR3，其包含SEQ ID NO：155、161、197、205、或164；及/或其中該VL區包含(i)VL CDR1，其包含SEQ ID NO：209、271、273、275、251、277、260、279、245、283、285、287、290、292、235、297、或299；(ii)VL CDR2，其包含SEQ ID NO：221；及(iii)VL CDR3，其包含SEQ ID NO：225、272、274、276、278、280、281、282、284、286、288、289、291、293、294、229、296、298、或300。一些實施態樣中，該VH區包含SEQ ID NO：112所示之序列或不在CDR範圍內之殘基中具有一或數個保守胺基酸取代的變異體且/或該VL區包含SEQ ID NO：38所示之胺基酸序列或不在CDR範圍內之胺基酸中具有一或數個胺基酸取代之其變異體。一些實施態樣中，包含輕鏈，其包含SEQ ID NO：357所示之序列，及重鏈，其包含SEQ ID NO：358所示之序列。一些實施態樣中，該抗體包含VH區，該VH區由ATCC寄存編號PTA-122094的表現載體所產生。一些實施態樣中，該抗體包含VL區，該VL區由ATCC寄存編號PTA-122093的表現載體所產生。
另一方面，本發明提供經分離之抗體，其包含含有醯基給予體麩醯胺酸之標籤，該標籤在本發明BCMA抗體之特異性位置工程化。一些實施態樣中，該標籤包含選自由以下所組成之群組的胺基酸序列：Q、LQG、LLQGG (SEQ ID NO：318)、LLQG(SEQ ID NO：454)、LSLSQG(SEQ ID NO：455)、GGGLLQGG(SEQ ID NO：456)、GLLQG(SEQ ID NO：457)、LLQ、GSPLAQSHGG(SEQ ID NO：458)、GLLQGGG(SEQ ID NO：459)、GLLQGG(SEQ ID NO：460)、GLLQ(SEQ ID NO：461)、LLQLLQGA(SEQ ID NO：462)、LLQGA(SEQ ID NO：463)、LLQYQGA(SEQ ID NO：464)、LLQGSG(SEQ ID NO：465)、LLQYQG(SEQ ID NO：466)、LLQLLQG(SEQ ID NO：467)、SLLQG(SEQ ID NO：468)、LLQLQ(SEQ ID NO：469)、LLQLLQ(SEQ ID NO：470)、LLQGR(SEQ ID NO：471)、LLQGPP(SEQ ID NO：472)、LLQGPA(SEQ ID NO：473)、GGLLQGPP(SEQ ID NO：474)、GGLLQGA(SEQ ID NO：475)、LLQGPGK(SEQ ID NO：476)、LLQGPG(SEQ ID NO：477)、LLQGP(SEQ ID NO：478)、LLQP(SEQ ID NO：479)、LLQPGK(SEQ ID NO：480)、LLQAPGK(SEQ ID NO：481)、LLQGAPG(SEQ ID NO：482)、LLQGAP(SEQ ID NO：483)、及LLQLQG(SEQ ID NO：484)。
一變化中，本發明提供經分離之抗體，其包含含有醯基給予體麩醯胺酸之標籤，及本發明BCMA抗體位置222、340、或370的胺基酸修飾。一些實施態樣中，該胺基酸修飾為由離胺酸取代成精胺酸。
一些實施態樣中，本發明之BCMA抗體進一步包含連接子。一些實施態樣中，該連接子選自由以下所組成之 群組：Ac-Lys-Gly(乙醯基-離胺酸-甘胺酸)、胺基己酸、Ac-Lys-β-Ala(乙醯基-離胺酸-β-丙胺酸)、胺基-PEG2(聚乙二醇)-C2、胺基-PEG3-C2、胺基-PEG6-C2、Ac-Lys-Val-Cit-PABC(乙醯基-離胺酸-纈胺酸-瓜胺酸-p-胺基苄氧羰基)、胺基-PEG6-C2-Val-Cit-PABC、胺基己醯基-Val-Cit-PABC、[(3R,5R)-1-{3-[2-(2-胺基乙氧基)乙氧基]丙醯基}哌啶-3,5-二基]雙-Val-Cit-PABC、[(3S,5S)-1-{3-[2-(2-胺基乙氧基)乙氧基]丙醯基}哌啶-3,5-二基]雙-Val-Cit-PABC、腐胺、及Ac-Lys-腐胺。
另一方面，本發明提供如本文所述BCMA抗體或抗原結合片段之共軛物，其中該抗體或抗原結合片段係共軛至劑上，其中該劑選自由以下所組成之群組：細胞毒性劑、免疫調節劑、顯影劑、治療性蛋白、生物聚合物、及寡核苷酸。一些實施態樣中，該劑為細胞毒性劑，包括但不限於蒽環、奧利他汀(auristatin)、喜樹鹼(camptothecin)、考布他汀(combretastatin)、多拉司他汀(dolastatin)、倍癌黴素(duocarmycin)、烯二炔(enediyne)、格爾德黴素(geldanamycin)、吲哚啉并-苯並二氮雜環庚三烯二聚物(indolino-benzodiazepine dimer)、美坦素(maytansine)、嘌呤黴素(puromycin)、吡咯并苯並二氮雜環庚三烯二聚物(pyrrolobenzodiazepine dimer)、紫杉烷(taxane)、長春花生物鹼(vinca alkaloid)、微管溶素(tubulysin)、半星芒素(hemiasterlin)、司普力西歐他汀(spliceostatin)、普拉二烯內酯(pladienolide)、及其立體異 構物、同電子排列體、類似物、或衍生物。例如，該細胞毒性劑為MMAD(單基奧利他汀D(Monomethyl Auristatin D)、0101(2-甲基丙胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基-3-{[(1S)-2-苯基-1-(1,3-噻唑-2-基)乙基]胺基}丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺)、3377(N,2-二甲基丙胺醯基-N-{(1S,2R)-4-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-羧基-2-苯乙基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-2-甲氧基-1-[(1S)-1-甲基丙基]-4-側氧基丁基}-N-甲基-L-纈胺醯胺)、0131(2-甲基-L-proly-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-羧基-2-苯乙基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺)、或0121(2-甲基-L-proly-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-甲氧基-1-側氧基-3-苯基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺)。
一些實施態樣中，本發明提供共軛物，其包含下式：抗體-(含醯基給予體麩醯胺酸之標籤)-(連接子)-(細胞毒性劑)。一些實施態樣中，該含醯基給予體麩醯胺酸之標籤包含胺基酸序列LLQG(SEQ ID NO：319)及/或GGLLQGPP(SEQ ID NO：339)且其中該連接子包含乙醯基-離胺酸-纈胺酸-瓜胺酸-p-胺基苄氧羰基或胺基-PEG6-C2。一些實施態樣中，該共軛物選自由以下所組成之群 組：1)抗體-GGLLQGPP(SEQ ID NO：339)-(乙醯基-離胺酸-纈胺酸-瓜胺酸-p-胺基苄氧羰基(AcLys-VC-PABC))-0101；2)抗體-LLQG(SEQ ID NO：319)-胺基-PEG6-C2-0131；及3)抗體-LLQG(SEQ ID NO：319)-胺基-PEG6-C2-3377。一些實施態樣中，該共軛物進一步包含於抗體位置222由離胺酸經胺基酸取代成精胺酸。一些實施態樣中，該共軛物進一步包含於抗體位置N297Q或N297A的胺基酸取代。
另一方面，提供製造如本文所述之BCMA抗體之方法，其包含將宿主細胞於導致BCMA抗體產生之條件下培養，再將該BCMA抗體由宿主細胞或培養物中分離出來。
另一方面，本發明提供如本文所述之BCMA抗體或BCMA抗體共軛物於製造藥劑之用途，該藥劑係用於治療與BCMA表現有關的病症(例如癌症或自體免疫失調症)。一些實施態樣中，提供如本文所述之BCMA抗體或BCMA抗體共軛物於製造藥劑之用途，該藥劑係用於抑制腫瘤生長或進展。一些實施態樣中，提供如本文所述之BCMA抗體或BCMA抗體共軛物於製造藥劑之用途，該藥劑係用於抑制表現BCMA的惡性細胞之轉移。一些實施態樣中，提供如本文所述之BCMA抗體或BCMA抗體共軛物於製造藥劑之用途，該藥劑係用於誘導腫瘤消退。
另一方面，本發明提供經分離之抗體或其抗原結合片段，其特異性地結合至CD3，其中該抗體包含SEQ ID NO：320、322、324、326、328、330、345、347、349、351、444、354、356、378、442、380、382、384、386、388、390、392、394、396、398、或400所示之VH序列的VH CDR1、VH CDR2、及VH CDR3；及/或輕鏈可變(VL)區，其包含SEQ ID NO：319、321、323、325、327、329、344、346、348、350、352、355、377、443、445、379、381、383、385、387、389、391、393、395、397、或399所示之VL序列的VL CDR1、VL CDR2、及VL CDR3。一些實施態樣中，該抗體包含SEQ ID NO：324或388所示之VH序列的VH CDR1、VH CDR2、及VH CDR3；及/或輕鏈可變(VL)區，其包含SEQ ID NO：323或387所示之VL序列的VL CDR1、VL CDR2、及VL CDR3。一些實施態樣中，該VH區包含(i)VH互補決定區一(CDR1)，其包含SEQ ID NO：331、332、333、401、402、403、407、408、415、416、418、419、420、424、425、426、446、447、或448所示之序列；(ii)VH CDR2，其包含SEQ ID NO：334、336、337、338、339、404、405、409、410、411、412、413、414、417、418、421、422、427、428、449、或450所示之序列；及iii)VH CDR3，其包含SEQ ID NO：335、406、423、429、或451所示之序列；及/或輕鏈可變(VL)區，其包含(i)VL CDR1，其包含SEQ ID NO：340、343、430、431、435、或440、441所示之序列；(ii)VL CDR2，其包含SEQ ID NO：341、433、452、或436所示之序列；及(iii)VL CDR3，其包含SEQ ID NO：342、432、434、437、438、439、446、或453所示之序列。一些實施態樣中，該VH區包含(i)VH互補決定區一(CDR1)，其包含SEQ ID NO：331、332、333、401、407、或408所示之序列；(ii)VH CDR2，其包含SEQ ID NO：336、404、405、或417所示之序列；及iii)VH CDR3，其包含SEQ ID NO：335或406所示之序列；及/或輕鏈可變(VL)區，其包含(i)VL CDR1，其包含SEQ ID NO：343或441所示之序列；(ii)VL CDR2，其包含SEQ ID NO：341或436所示之序列；及(iii)VL CDR3，其包含SEQ ID NO：342或439所示之序列。一些實施態樣中，該抗體包含VH區，該VH區由ATCC寄存編號PTA-122513的表現載體所產生。一些實施態樣中，該抗體包含VL區，該VL區由ATCC寄存編號PTA-122512的表現載體所產生。
另一方面，提供經分離之抗體，其特異性地結合至CD3且與如本文所述之本發明抗-CD3抗體競爭。
另一方面，本發明提供雙特異性抗體，其中該雙特異性抗體為全長人類抗體，其包含雙特異性抗體之第一抗體可變結構域，該第一抗體可變結構域可藉由特異地結合至位在人類免疫效應細胞上的效應抗原而募集人類免疫效應細胞的活性，且包含雙特異性抗體之第二抗體可變結構域，該第二抗體可變結構域可特異性地結合至標靶抗原，其中該第一抗體可變結構域包含重鏈可變(VH)區，其包含SEQ ID NO：320、322、324、326、328、330、345、 347、349、351、444、354、356、378、442、380、382、384、386、388、390、392、394、396、398、或400所示之VH序列的VH CDR1、VH CDR2、及VH CDR3；及/或輕鏈可變(VL)區，其包含SEQ ID NO：319、321、323、325、327、329、344、346、348、350、352、355、377、443、445、379、381、383、385、387、389、391、393、395、397、或399所示之VL序列的VL CDR1、VL CDR2、及VL CDR3。一些實施態樣中，該第一抗體可變結構域包含重鏈可變(VH)區，其包含SEQ ID NO：SEQ ID NO：331、332、333、401、402、403、407、408、415、416、418、419、420、424、425、426、446、447、或448所示之VH序列的VH CDR1、VH CDR2、及VH CDR3；(ii)VH CDR2，其包含SEQ ID NO：334、336、337、338、339、404、405、409、410、411、412、413、414、417、418、421、422、427、428、449、或450所示之序列；及iii)VH CDR3，其包含SEQ ID NO：335、406、423、429、或451所示之序列；及/或輕鏈可變(VL)區，其包含(i)VL CDR1，其包含SEQ ID NO：340、343、430、431、435、或440、441所示之序列；(ii)VL CDR2，其包含SEQ ID NO：341、433、452、或436所示之序列；及(iii)VL CDR3，其包含SEQ ID NO：342、432、434、437、438、439、446、或453所示之序列。一些實施態樣中，該第一抗體可變結構域包含重鏈可變(VH)區，其包含SEQ ID NO：324或388所示之VH序列的 VH CDR1、VH CDR2、及VH CDR3；及/或輕鏈可變(VL)區，其包含SEQ ID NO：323或387所示之VL序列的VL CDR1、VL CDR2、及VL CDR3；且該第二抗體可變結構域包含重鏈可變(VH)區，其包含SEQ ID NO：112所示之VH序列的VH CDR1、VH CDR2、及VH CDR3；及/或輕鏈可變(VL)區，其包含SEQ ID NO：38所示之VL序列的VL CDR1、VL CDR2、及VL CDR3。
一些實施態樣中，該第二抗體可變結構域包含(a)重鏈可變(VH)區，其包含(i)VH互補決定區一(CDR1)，其包含序列SYX1MX2，其中X1為A或P；且X2為T、N、或S(SEQ ID NO：301)，GFTFX1SY，其中X1為G或S(SEQ ID NO：302)，或GFTFX1SYX2MX3，其中X1為G或S，X2為A或P；且X3為T、N、或S(SEQ ID NO：303)；(ii)VH CDR2，其包含序列AX1X3X3X4GX5X6X7X8YADX9X10KG，其中X1為I、V、T、H、L、A、或C；X2為S、D、G、T、I、L、F、M、或V；X3為G、Y、L、H、D、A、S、或M；X4為S、Q、T、A、F、或W；X5為G或T；X6為N、S、P、Y、W、或F；X7為S、T、I、L、T、A、R、V、K、G、或C；X8為F、Y、P、W、H、或G；X9為V、R、或L；且X10為G或T(SEQ ID NO：305)、或X1X2X3X4X5X6，其中X1為S、V、I、D、G、T、L、F、或M；X2為G、Y、L、H、D、A、S、或M；X3為S、G、F、或W；X4為G或S；X5為G或T；且X6為N、S、P、Y、或W (SEQ ID NO：306)；及iii)VH CDR3，其包含序列VSPIX1X2X3X4，其中X1為A或Y；X2為A或S；且X3為G、Q、L、P、或E(SEQ ID NO：307)、或YWPMX1X2，其中X1為D、S、T、或A；且X2為I、S、L、P、或D(SEQ ID NO：308)；及/或(b)輕鏈可變(VL)區，其包含(i)VL CDR1，其包含序列X1X2X3X4X5X6X7X8X9X10X11X12，其中X1為R、G、W、A、或C；X2為A、P、G、L、C、或S；X3為S、G、或R；X4為Q、C、E、V、或I；X5為S、L、P、G、A、R、或D；X6為V、G、或I；X7為S、E、D、或P；X8為S、P、F、A、M、E、V、N、D、或Y；X9為I、T、V、E、S、A、M、Q、Y、H、或R；X10為Y或F；X11為L、W、或P；且X12為A、S、或G(SEQ ID NO：309)；(ii)VL CDR2，其包含序列X1ASX2RAX3，其中X1為G或D；X2為S或I；且X3為T或P(SEQ ID NO：310)；及(iii)VL CDR3，其包含序列QQYX1X2X3PX4T，其中X1為G、Q、E、L、F、A、S、M、K、R、或Y；X2為S、R、T、G、V、F、Y、D、A、H、V、E、K、或C；X3為W、F、或S；且X4為L或I(SEQ ID NO：311)、或QQYX1X2X3PX4，其中X1為G、Q、E、L、F、A、S、M、R、K、或Y；X2為S、R、T、G、R、V、D、A、H、E、K、C、F、或Y；X3為W、S、或F；且X4為L或I(SEQ ID NO：312)。一些實施態樣中，該第二抗體可變結構域包含重鏈可變(VH)區，其包含(i)VH CDR1，其包含SEQ ID NO：150、151、152、 156、157、348、349、353、354、或355所示之序列；(ii)VH CDR2，其包含SEQ ID NO：169、154、194、159、195、196、162、158、198、177、178、199、200、201、202、203、204、206、207、208、172、203、204、350、351、356或357所示之序列；及(iii)VH CDR3，其包含SEQ ID NO：155、161、197、205、164、或352、或358所示之序列；且/或其中該輕鏈可變(VL)區包含(i)VL CDR1，其包含SEQ ID NO：209、271、273、275、251、277、260、279、245、283、285、287、290、292、235、297、299、或361所示之序列；(ii)VL CDR2，其包含SEQ ID NO：221、359或362所示之序列；及(iii)VL CDR3，其包含SEQ ID NO：211、225、272、274、276、278、280、281、282、284、286、288、289、291、293、294、229、296、298、300或360所示之序列。
一些實施態樣中，(a)該第一抗體可變結構域包含重鏈可變(VH)區，其包含(i)VH互補決定區一(CDR1)，其包含SEQ ID NO：331、332、333、401、407、或408所示之序列；(ii)VH CDR2，其包含SEQ ID NO：336、417、404、或405所示之序列；及iii)VH CDR3，其包含SEQ ID NO：335或406所示之序列；及/或輕鏈可變(VL)區，其包含(i)VL CDR1，其包含SEQ ID NO：343或441所示之序列；(ii)VL CDR2，其包含SEQ ID NO：341或436所示之序列；及(iii)VL CDR3，其包含SEQ ID NO：342或439所示之序列；且(b)該第二抗體可變結構域包含重鏈VH區，其包含重鏈可變(VH)區，該重鏈可變(VH)區包含(i)VH CDR1，其包含SEQ ID NO：151、156、或157所示之序列；(ii)VH CDR2，其包含SEQ ID NO：158或159所示之序列；及(iii)VH CDR3，其包含SEQ ID NO：155所示之序列；且/或其中該輕鏈可變(VL)區包含(i)VL CDR1，其包含SEQ ID NO：209所示之序列；(ii)VL CDR2，其包含SEQ ID NO：221所示之序列；及(iii)VL CDR3，其包含SEQ ID NO：225所示之序列。
一些實施態樣中，該雙特異性抗體之該第一及該第二抗體可變結構域均包含人類IgG2(SEQ ID NO：493)之鉸鏈區位置223、225、及228和CH3區位置409或368(EU編號方案)的胺基酸修飾。一些實施態樣中，本文所述之雙特異性抗體進一步包含人類IgG2之位置265的胺基酸修飾。
另一方面，本發明提供醫藥組成物，其包含本文所述之任何抗體(例如BCMA、CD3、或雙特異性)或其共軛物(例如BCMA抗體藥物共軛物)。
另一方面，本發明亦提供細胞系，其重組產生本文所述之任何抗體(例如BCMA、CD3、或雙特異性)或其共軛物(例如BCMA抗體藥物共軛物)。
另一方面，本發明亦提供核酸，其編碼本文所述之任何抗體(例如BCMA、CD3、或雙特異性)或其共軛物(例如 BCMA抗體藥物共軛物)。本發明亦提供核酸，其編碼本文所述任何這些抗體之重鏈可變區及/或輕鏈可變區。
本發明亦提供套組，其包含有效量之本文所述之任何抗體(例如BCMA、CD3、或雙特異性)或其共軛物(例如BCMA抗體藥物共軛物)。
本發明亦提供治療有此治療需求之個體的病症之方法(例如具有表現BCMA之惡性細胞的個體之腫瘤生長/進展之抑制；表現BCMA之惡性細胞的轉移之抑制；腫瘤消退之誘導)，其包含提供經分離之抗體(例如BCMA)或結合片段、本文所述之雙特異性抗體(BCMA-CD3雙特異性)、或其共軛物(例如BCMA抗體藥物共軛物)，再將該抗體或共軛物投予該個體。
亦提供治療與個體表現腫瘤抗原之惡性細胞有關的病症之方法，其包含將有效量之本發明醫藥組成物投予有此治療需求之個體。一些實施態樣中，該病症為癌症。一些實施態樣中，該癌症為B細胞相關性癌症，選自由以下所組成之群組：多發性骨髓瘤(multiple myeloma)、惡性漿細胞腫瘤(malignant plasma cell neoplasm)、何杰金氏淋巴瘤(Hodgkin’s lymphoma)、結節性淋巴細胞為主型何杰金氏淋巴瘤(nodular淋巴細胞predominant Hodgkin’s lymphoma)、卡勒氏病(Kahler’s disease)及骨髓瘤病(骨髓瘤tosis)、漿細胞白血病(plasma cell leukemia)、漿細胞瘤(plasmacytoma)、B細胞前淋巴細胞白血病(B-cell prolymphocytic leukemia)、髮樣細胞白血病(hairy cell leukemia)、B細胞非何杰金氏淋巴瘤(B-cell non-Hodgkin’s lymphoma)(NHL)、急性骨髓性白血病(acute myeloid leukemia)(AML)、慢性淋巴細胞性白血病(chronic lymphocytic leukemia)(CLL)、急性淋巴細胞性白血病(acute lymphocytic leukemia)(ALL)、慢性骨髓性白血病(chronic myeloid leukemia)(CML)、濾泡性淋巴瘤(follicular lymphoma)、伯基特氏淋巴瘤(Burkitt’s lymphoma)、邊緣區淋巴瘤(marginal zone lymphoma)、被套細胞淋巴瘤(mantle cell lymphoma)、大細胞淋巴瘤(large cell lymphoma)、前體B淋巴母細胞淋巴瘤(precursor B-lymphoblastic lymphoma)、骨髓性白血病(myeloid leukemia)、華氏巨球蛋白血症(Waldenstrom’s macroglobulienemia)、瀰漫性大B細胞淋巴瘤(diffuse large B cell lymphoma)、濾泡性淋巴瘤(follicular lymphoma)、邊緣區淋巴瘤(marginal zone lymphoma)、黏膜相關性淋巴組織淋巴瘤(mucosa-associated lymphatic tissue lymphoma)、小細胞淋巴細胞性淋巴瘤(small cell lymphocytic lymphoma)、被套細胞淋巴瘤(mantle cell lymphoma)、伯基特淋巴瘤(Burkitt lymphoma)、原發性縱隔(胸腺)大B細胞淋巴瘤(primary mediastinal(thymic)large B-cell lymphoma)、淋巴漿細胞淋巴瘤(lymphoplasmactyic lymphoma)、華氏巨球蛋白血症(Waldenström macroglobulinemia)、結內邊緣區B細胞淋巴瘤(nodal marginal zone B cell lymphoma)、脾邊緣區淋 巴瘤(splenic marginal zone lymphoma)、血管內大B細胞淋巴瘤(intravascular large B-cell lymphoma)、原發性滲出性淋巴瘤(primary effusion lymphoma)、淋巴瘤樣肉芽腫病(lymphomatoid granulomatosis)、富於T細胞/組織細胞大B細胞淋巴瘤(T cell/histiocyte-rich large B-cell lymphoma)、原發性中樞神經系統淋巴瘤(primary central nervous system lymphoma)、原發性皮膚瀰漫性大B細胞淋巴瘤(腿型)(primary cutaneous diffuse large B-cell lymphoma(leg type))、老年人之EBV陽性瀰漫性大B細胞淋巴瘤(EBV positive diffuse large B-cell lymphoma)、與發炎有關之瀰漫性大B細胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma)、血管內大B細胞淋巴瘤(intravascular large B-cell lymphoma)、ALK陽性大B細胞淋巴瘤(ALK-positive large B-cell lymphoma)、漿母細胞淋巴瘤(plasmablastic lymphoma)、HHV8相關性多中心型克斯特曼病(HHV8-associated multicentric Castleman disease)中產生之大B細胞淋巴瘤、特徵介於瀰漫性大B細胞淋巴瘤與伯基特淋巴瘤之間的未分類B細胞淋巴瘤、特徵介於瀰漫性大B細胞淋巴瘤與傳統何杰金氏淋巴瘤之間的未分類B細胞淋巴瘤、及其他B細胞相關性淋巴瘤。一些實施態樣中，該病症為自體免疫失調症，諸如全身性紅斑性狼瘡或類風濕性關節炎。
一些實施態樣中，本文所述之抗體包含恆定區。一些實施態樣中，本文所述之抗體為人類IgG1、IgG2或 IgG2△a、IgG3、或IgG4亞類者。一些實施態樣中，本文所述之抗體包含醣基化恆定區。一些實施態樣中，本文所述之抗體包含恆定區，該恆定區對一或多個Fc γ受體具有增加之結合親和力。
圖1A至圖1D描述本發明所選之抗BCMA抗體與人類BCMA之間的交互作用之雙重參比傳感圖連同擬合曲線。
圖2描述各種抗BCMA ADC包括P6E01_VHVL-AcLys-Val-Cit-PABC-Aur0101；P5A2_VHVL-AcLys-Val-Cit-PABC-Aur0101；P5C1_VHVL-AcLys-Val-Cit-PABC-Aur0101；P4G4-AcLys-Val-Cit-PABC-Aur0101；及P1A11-AcLys-Val-Cit-PABC-Aur0101於MM1S原位多發性骨髓瘤模型中之體內效力研究。NNC為陰性對照組之非BCMA抗體。“LCQ05”及“LCQ04”分別相當於含麩醯胺酸之轉麩醯胺酸酶標籤SEQ ID NO：474及475。
圖3描述抗BCMA ADC包括L3.PY/P6E01抗體與1)H7c/N297A/K222R-胺基-PEG6-C2-3377、2)N297Q/K222R-AcLys-Val-Cit-PABC-0101、3)LCQ05/K222R-AcLys-Val-Cit-PABC-0101、4)H7c/N297A/K222R-胺基-PEG6-C2-0131、及5)N297Q/K222R/LCQ05-AcLys-Val-Cit-PABC-Aur0101之共軛物於MM1S原位多發性骨髓瘤模型中之體內效力。NNC 為對照組之非BCMA抗體。“LCQ05”及H7c分別相當於含麩醯胺酸之轉麩醯胺酸酶標籤SEQ ID NO：474及SEQ ID NO：454。
圖4亦描述抗BCMA ADC包括L3.PY/P6E01抗體與1)H7c/N297A/K222R-胺基-PEG6-C2-3377、2)N297Q/K222R-AcLys-Val-Cit-PABC-Aur0101、3)LCQ05/K222R-AcLys-Val-Cit-PABC-Aur0101、4)H7c/N297A/K222R-胺基-PEG6-C2-0131、及5)N297Q/K222R/LCQ05-AcLys-Val-Cit-PABC-Aur0101之共軛物於MM1S原位多發性骨髓瘤模型中之體內效力。NNC為對照組之非BCMA抗體(抗體-N297Q/K222R-AcLys-VC-PABC-0101)。“LCQ05”及H7c分別相當於含麩醯胺酸之轉麩醯胺酸酶標籤SEQ ID NO：474及SEQ ID NO：454。
圖5亦描述抗BCMA ADC於MM1S原位多發性骨髓瘤模型中之體內效力。抗BCMA抗體COMBO_Rd4_0.6nM-C29(“Combo C29 DI)係共軛至H7c/N297A/K222R-胺基-PEG6-C2-131，劑量範圍由0.1mg/kg、0.38mg/kg、0.75mg/kg、1.5mg/kg，且與3mg/kg之NNC相比較，該NNC為對照組之非BCMA抗體(抗體-N297Q/K222R-AcLys-VC-PABC-0101)。H7c相當於含麩醯胺酸之轉麩醯胺酸酶標籤SEQ ID NO：454。
圖6A-圖6F描述抗CD3/抗CD20雙特異性抗體於石蟹獼猴(cynomolgus monkey)之體內效力。投予單一劑量之雙特異性抗體後的B細胞耗損以佔研究前計數之百分比顯 示。
圖7A-圖7F描述抗CD3/抗CD20雙特異性抗體於石蟹獼猴(cynomolgus monkey)之體內效力。CD8+ T細胞動力學係於投予單一劑量之雙特異性抗體後追蹤。
圖8A及圖8B描述抗CD3/抗CD20雙特異性抗體於石蟹獼猴(cynomolgus monkey)之體內效力。分析單價CD3抗體對T細胞動力學及增殖之效應。
圖9A-圖9D描述抗CD3/抗CD20雙特異性抗體於石蟹獼猴(cynomolgus monkey)之體內效力。分析抗CD3臂親和力對B細胞耗損之效應。
圖10A及10B顯示所選抗CD3抗體於人類及石蟹獼猴上具有胸腺嘧啶核苷引入之讀數。
圖11A-圖11D顯示所有人類抗EpCam_h2B4雙特異性抗體對體外設定均具有殺細胞活性。
圖12顯示單一劑量之人類抗BCMA/CD3雙特異性抗體於原位MM1.S骨髓瘤模型中以劑量依賴性方式導致腫瘤消退。
圖13顯示兩次劑量之人類抗BCMA/CD3雙特異性抗體於原位Molp8骨髓瘤模型中導致增強之腫瘤消退。
圖14顯示抗BCMA/CD3雙特異性抗體單獨地或與多發性骨髓瘤之照護標準劑(雷利米得(lenalidomide)或硼替左米(bortezomib))組合地使用於原位Molp8腫瘤模型中比起雷利米得(lenalidomide)與硼替左米(bortezomib)組合地使用更為有效。
圖15A-圖15C分別地顯示與抗BCMA/CD3雙特異性抗體單獨使用相比，卡菲左米(carfilzomib)、雷利米得(lenalidomide)、及阿黴素(doxorubicin)並不會對OPM2細胞上之抗BCMA/CD3雙特異性抗體的功能具有負面效應。
圖16顯示與每一種分子單獨地使用相比，當與卡菲左米(carfilzomib)及雷利米得(lenalidomide)組合時，抗BCMA/CD3雙特異性抗體之功能具有協同效應。
本文揭示之本發明提供特異性地結合至BCMA(例如人類BCMA)之抗體及抗體共軛物(例如抗體藥物共軛物)。本發明亦提供編碼這些抗體及共軛物之多核苷酸、包含這些抗體及共軛物之組成物、及製造這些抗體及共軛物之方法。此外。本文揭示之本發明提供特異性地結合至CD3(例如人類CD3)之抗體以及特異性地結合至CD3及腫瘤抗原(例如BCMA)之異源二聚體抗體(例如雙特異性抗體)。本發明亦提供編碼這些抗體之多核苷酸、包含這些抗體之組成物、及製造及使用這些抗體之方法。本發明進一步提供使用本文所述之抗體(例如BCMA、CD3、或雙特異性抗體)或其共軛物(BCMA抗體藥物共軛物)以治療個體之與惡性BCMA表現有關之病症，諸如癌症或自體免疫疾病。
一般技術
除非另有指定，否則本發明之操作將使用技術範圍內之分子生物學(包括重組技術)、微生物學、細胞生物學、生化學及免疫學的慣用技術。此類技術於文獻中充分說明，諸如Molecular Cloning：A Laboratory Manual,second edition(Sambrook et al.,1989)Cold Spring Harbor Press；Oligonucleotide Synthesis(M.J.Gait,ed.,1984)；Methods in Molecular Biology,Humana Press；Cell Biology：A Laboratory Notebook(J.E.Cellis,ed.,1998)Academic Press；Animal Cell Culture(R.I.Freshney,ed.,1987)；Introduction to Cell and Tissue Culture(J.P.Mather and P.E.Roberts,1998)Plenum Press；Cell and Tissue Culture：Laboratory Procedures(A.Doyle,J.B.Griffiths,and D.G.Newell,eds.,1993-1998)J.Wiley and Sons；Methods in Enzymology(Academic Press,Inc.)；Handbook of Experimental Immunology(D.M.Weir and C.C.Blackwell,eds.)；Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells(J.M.Miller and M.P.Calos,eds.,1987)；Current Protocols in Molecular Biology(F.M.Ausubel et al.,eds.,1987)；PCR：The Polymerase Chain Reaction,(Mullis et al.,eds.,1994)；Current Protocols in Immunology(J.E.Coligan et al.,eds.,1991)；Short Protocols in Molecular Biology(Wiley and Sons,1999)；Immunobiology(C.A.Janeway and P.Travers,1997)；Antibodies(P.Finch,1997)；Antibodies：a practical approach(D.Catty.,ed.,IRL Press,1988-1989)； Monoclonal antibodies：a practical approach(P.Shepherd and C.Dean,eds.,Oxford University Press,2000)；Using antibodies：a laboratory manual(E.Harlow and D.Lane(Cold Spring Harbor Laboratory Press,1999)；The Antibodies(M.Zanetti and J.D.Capra,eds.,Harwood Academic Publishers,1995)。
定義
“抗體”為免疫球蛋白分子，其可經由位在免疫球蛋白分子可變區中的至少一個抗原識別位特異結合至標靶諸如醣類、多核苷酸、脂肪、多肽等等。如本文所用，該術語不僅涵蓋完整之多株或單株抗體，亦涵蓋其片段(諸如Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv)、單鏈(ScFv)及結構域抗體(例如，包括鯊(shark)及駱駝科(camelid)抗體)、及包含抗體之融合蛋白，及包含抗原識別位之免疫球蛋白分子的任何其他修飾組態。抗體包括任何類別之抗體，諸如IgG、IgA、或IgM(或其亞類)、且抗體不必具有任何特定類別。依其重鏈恆定區之抗體胺基酸序列而定，免疫球蛋白可指派成不同的類別。有五種主要的免疫球蛋白類別：IgA、IgD、IgE、IgG、及IgM，且其中有一些可進一步分成亞類(同型)，例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1及IgA2。相應於該不同類別免疫球蛋白的重鏈恆定區分別稱為α、δ、ε、γ、及μ。不同類別之免疫球蛋白的亞單位結構及三維組態已詳知。
如本文所用，術語抗體之"抗原結合片段"或“抗原結合部分”意指完整抗體之一或多個片段，其保留特異性地結合至給定抗原(例如BCMA或CD3)的能力。抗體之抗原結合功能可藉由完整抗體之片段來進行。術語抗體之"抗原結合片段"範圍內所涵蓋之結合片段的實例包括Fab；Fab’；F(ab’)2；由VH及CH1結構域所組成之Fd片段；由抗體單臂之VL及VH結構域所組成之Fv片段；單一結構域抗體(dAb)片段(Ward et al.,Nature 341：544-546,1989)、及經分離之互補決定區(CDR)。
“優先地結合”或“特異性地結合”(本文中可交換地使用)至標靶(例如BCMA蛋白或CD3蛋白)之抗體、抗體共軛物、或多肽為技術中已充分理解之術語，且測定此特異性或優先性結合之方法亦為技術中詳知。比起其他細胞或物質，如果分子能更頻繁地、更快速地、具有更大持續時間地及/或具有更大親和力地與特定細胞或物質反應或聯合，則此分子被稱為顯現“特異性結合”或“優先性結合”。與結合至其他物質相比，如果抗體具更大親和力、抗體親抗原性、更輕易地、及/或具有更大持續時間地結合至標靶，則此抗體係“特異性地結合”或“優先地結合”至標靶。例如，特異性地或優先地結合至BCMA抗原決定位或CD3抗原決定位的抗體為與結合至其他BCMA抗原決定位、非BCMA抗原決定位、CD3抗原決定位、或非CD3抗原決定位相比，具有更大親和力、抗體親抗原性、更輕易地、及/或更大持續時間地結合此抗原決定位的抗體。 藉由閱讀此定義亦理解，例如，特異性地或優先地結合至第一標靶之抗體(或部分或抗原決定位)可能會或可能不會特異性地或優先地結合至第二標靶。就此而言，“特異性結合”或“優先性結合”未必需要(雖然其可包括)獨佔的結合。通常，但非必需地，提及的結合意指優先性結合。
抗體之“可變區”意指抗體輕鏈之可變區或抗體重鏈之可變區，單獨地或組合地。如同技術中已知，重鏈及輕鏈之可變區各自由被三個亦稱為高變區的互補決定區(CDR)連結的四個框架區(FR)所組成。每個鏈中的CDR均藉由FR緊靠著連接在一起，且連同來自其他鏈的CDR，促成抗體之抗原結合位的形成。有至少兩種測定CDR的技術：(1)以跨種序列可變性為基底之方法(亦即Kabat et al.Sequences of Proteins of Immunological Interest,(5th ed.,1991,National Institutes of Health,Bethesda MD))；及(2)以抗原-抗體複合物之結晶學研究為基底之方法(Al-lazikani et al.,1997,J.Molec.Biol.273：927-948)。如本文所用，CDR可意指藉由任一種方法或藉由兩種方法之組合所定義之CDR。
可變結構域之“CDR”為在可變區範圍內之胺基酸殘基，其係根據Kabat、Chothia、Kabat與Chothia二者之積聚、AbM、接觸、及/或構形定義或技術中詳知之任何CDR測定方法鑑定。抗體CDR經鑑定為起初已由Kabat等人定義之高變區。例如參見Kabat et al.,1992,Sequences of Proteins of Immunological Interest,5th ed., Public Health Service,NIH,Washington D.C.。CDR的位置亦經鑑定為起初由Chothia及其他人所說明的結構性迴圈結構。例如參見Chothia et al.,Nature 342：877-883,1989。CDR之其他鑑定方法包括“AbM定義”，其為Kabat與Chothia之折衷方法且係使用Oxford Molecular's AbM抗體建模軟體(現為Accelrys®)衍生，或以所觀察到之抗原接觸為基底之CDR的“接觸定義”，其於MacCallum et al.,J.Mol.Biol.,262：732-745,1996中提及。另一方法，在本文中稱之為CDR之“構形定義”中，CDR的位置經鑑定為是對於抗原結合造成焓貢獻的殘基。例如參見Makabe et al.,Journal of Biological Chemistry,283：1156-1166,2008。又其他的CDR邊界定義可以不必嚴格地遵循上述之一種方法，雖然依照預測或實驗發現特定殘基或殘基群或者甚至整體CDR並不會顯著地衝擊抗原結合，故可縮短或加長，但仍然與至少一部分之Kabat CDR重疊。如同本文所用，CDR可意指由技術中已知之任何方法包括方法之組合所定義之CDR。本文所用之方法可使用根據任何這些方法所定義之CDR。在任何給定之含有一個以上CDR的實施態樣方面，該些CDR可根據Kabat、Chothia、延伸、AbM、接觸、及/或構形定義之任一者來定義。
如本文所用，"單株抗體"意指得自實質均質型抗體族群之抗體，亦即包含該族的個別抗體是完全相同的，惟可小量地存在可能天然發生的突變。單株抗體具高度特異 性，針對單一抗原位。此外，與多株抗體製劑(其典型地包括針對不同決定位(抗原決定位)的不同抗體)不同，每一單株抗體係針對抗原上的單一決定位。修飾詞“單株”意指抗體的特性係得自實質均質型抗體族群，且不應解釋成需要藉由任何特定方法以製造抗體。例如，根據本發明所用之單株抗體可藉Kohler and Milstein,Nature 256：495,1975首先說明之雜交瘤法製得，或可藉重組DNA法諸如述於美國專利號碼4,816,567中者製得。單株抗體亦可由使用例如McCafferty et al.,Nature 348：552-554,1990中所述之技術所產生的噬菌體抗體文庫中分離出來。
如本文所用，"人源化"抗體意指非人類(例如鼠類)抗體形式，其為嵌合免疫球蛋白、免疫球蛋白鏈、或其片段(諸如Fv、Fab、Fab’、F(ab')2或抗體之其他抗原結合亞序列)，其含有衍生自非人類免疫球蛋白之最小序列。較佳地，人源化抗體為人類免疫球蛋白(接受者抗體)，其中來自接受者互補決定區(CDR)的殘基被來自具有期望特異性、親和力、及容量之非人類物種諸如小鼠、大鼠、或兔(捐贈者抗體)CDR的殘基所替代。一些情況下，人類免疫球蛋白之Fv框架區(FR)殘基被相應之非人類殘基所替代。此外，人源化抗體可包含在接受者抗體或輸入的CDR或框架序列中都未發現的殘基，但予以包括以進一步使抗體效能精煉及最適化。通常，人源化抗體會實質地包含所有之至少一個且典型地兩個可變結構域，其中所有或實質地所有之CDR區相當於非人類免疫球蛋白者且所有 或實質地所有之FR區為人類免疫球蛋白共有序列者。人源化抗體最適地亦會包含至少一部分之免疫球蛋白恆定區或結構域(Fc)，典型地係人類免疫球蛋白。較佳者為如同WO 99/58572所述地修飾之具有Fc區的抗體。其他人源化抗體形式具有一或多個CDR(CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2、或CDR H3)，其相關於原始抗體而被改變，其亦被稱為一或多個CDR“衍生自”一或多個來自原始抗體的CDR。
如本文所用，“人類抗體”意指抗體，其具有之胺基酸序列相當於人類所產生之抗體者且/或其已使用熟諳此術者已知或本文所揭示之製造人類抗體的技術製得。此人類抗體之定義包括抗體，其包含至少一個人類重鏈多肽或至少一個人類輕鏈多肽。一種此類實例為抗體，其包含鼠類輕鏈及人類重鏈多肽。人類抗體可使用技術中已知之各種技術製得。一實施態樣中，該人類抗體選自噬菌體文庫，其中彼噬菌體文庫表現人類抗體(Vaughan et al.,Nature Biotechnology,14：309-314,1996；Sheets et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.(USA)95：6157-6162,1998；Hoogenboom and Winter,J.Mol.Biol.,227：381,1991；Marks et al.,J.Mol.Biol.,222：581,1991)。人類抗體亦可藉將動物進行免疫處理而製得，其中人類免疫球蛋白基因座已被基因轉殖地引入以取代內源性基因座，例如小鼠其中之內源性免疫球蛋白基因已部分地或完全地去活化。此方法乃述於美國專利號碼5,545,807；5,545,806；5,569,825； 5,625,126；5,633,425；及5,661,016中。另外，人類抗體可藉將可產生針對標靶抗原的抗體之人類B淋巴細胞予以無限增殖化而製得(此B淋巴細胞可由個體或由cDNA之單一細胞選殖中復收，或者可於體外進行免疫處理)。例如參見Cole et al.Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy,Alan R.Liss,p.77,1985；Boerner et al.,J.Immunol.,147(1)：86-95,1991；及美國專利號碼5,750,373。
術語“嵌合抗體”旨在意指抗體，其中可變區序列衍生自一種物種而恆定區序列衍生自另一物種，諸如抗體，其中之可變區序列衍生自小鼠抗體而恆定區序列衍生自人類抗體。
衍語“多肽”、“寡肽”、“肽”及“蛋白”於本文中可交換地使用以意指任何長度之胺基酸鏈，較佳地為相對短者(例如10-100個胺基酸)。鏈可為直鏈或支鏈，其可包含經修飾之胺基酸，及/或可被非胺基酸所中斷。該術語亦涵蓋已天然地或藉介入法修飾之胺基酸鏈；例如二硫鍵之形成、醣基化、脂化、乙醯化、磷酸化、或任何其他操作或修飾諸如與標記組份共軛。亦包括在此定義內者為例如，含有一或多個胺基酸類似物(例如包括非天然胺基酸等等)之多肽，以及技術中已知之其他修飾。應理解的是，多肽可以單鏈或相聯鏈之形式存在。
“單價抗體”於每分子(例如IgG或Fab)包含一個抗原結合位。一些情況下，單價抗體可具有多於一個之抗原結 合位，但該些結合位來自不同抗原。
“單特異性抗體”於每分子(例如IgG)包含兩個完全相同之抗原結合位而使該兩個結合位與抗原上之完全相同的抗原決定位結合。故，彼等彼此競爭結合至一個抗原分子。天然發現的抗體大多數為單特異性。一些情況下，單特異性抗體亦可為單價抗體(例如Fab)
“雙價抗體”於每分子(例如IgG)包含兩個抗原結合位。一些情況下，該兩個結合位具有相同的抗原特異性。然而，雙價抗體可為雙特異性。
“雙特異性”或“雙重特異性”為具有兩個不同抗原結合位的雜交抗體。雙特異性抗體之該兩個抗原結合位結合至兩個不同的抗原決定位，其可駐留在同一或不同的蛋白標靶上。
“雙功能”為抗體，其在兩臂中具有完全相同之抗原結合位(亦即完全相同之胺基酸序列)，但結合位可各自識別兩種不同的抗原。
"異源多聚體"、"異源多聚體複合物"、或"異源多聚體多肽"為分子，其包含至少第一多肽及第二多肽，其中該第二多肽之胺基酸序列至少有一個胺基酸殘基不同於第一多肽。異源多聚體可包括藉由第一及第二多肽所形成之“異源二聚體”或者可形成高階三級結構，其中有除了第一及第二多肽以外的多肽存在。
"異源二聚體"、"異源二聚體蛋白"、“異源二聚體複合物”、或"異源多聚體多肽"為分子，其包含至少第一多肽 及第二多肽，其中該第二多肽之胺基酸序列至少有一個胺基酸殘基不同於第一多肽。
如本文所用，"鉸鏈區"、"鉸鏈序列"、及其變化包括技術中已知之意義，其闡述於(例如)Janeway et al.,ImmunoBiology：the immune system in health and disease,(Elsevier Science Ltd.,NY)(4th ed.,1999)；Bloom et al.,Protein Science(1997),6：407-415；Humphreys et al.,J.Immunol.Methods(1997),209：193-202中。
如本文所用，“免疫球蛋白樣鉸鏈區”、“免疫球蛋白樣鉸鏈序列”、及其變化意指免疫球蛋白樣或抗體樣分子(例如免疫黏附素)之鉸鏈區及鉸鏈序列。一些實施態樣中，該免疫球蛋白樣鉸鏈區可來自或衍生自任何IgG1、IgG2、IgG3、或IgG4亞型，或來自IgA、IgE、IgD或IgM，包括其嵌合形式，例如嵌合IgG1/2鉸鏈區。
如本文所用之“免疫效應細胞”或“效應細胞”意指在人類免疫系統之天然細胞全集(natural repertoire of cells)範圍內的細胞，其可被活化以影響標靶細胞的生存力。標靶細胞的生存力可包括細胞存活率、增殖力、及/或與其他細胞交互作用的能力。
本發明之抗體可使用技術中詳知之技術，例如重組技術、噬菌體展現技術、合成技術或此些技術之組合或技術中容易理解之其他技術(例如參見Jayasena,S.D.,Clin.Chem.,45：1628-50,1999及Fellouse,F.A.,et al,J.MoI.Biol.,373(4)：924-40,2007)製得。
如同技術中已知，本文中可交換地使用之“多核苷酸”或“核酸”意指任何長度之核苷酸鏈，且包括DNA及RNA。核苷酸可為去氧核糖核苷酸、核糖核苷酸、修飾核苷酸或鹼基及/或其類似物、或可藉DNA或RNA聚合酶併入鏈中的任何基質。多核苷酸可包含修飾核苷酸，諸如甲基化核苷酸及其類似物。如果存在，對核苷酸結構的修飾可在鏈之裝配(assembly of the chain)之前或之後進行。核苷酸之序列可被非核苷酸組份所中斷。多核苷酸可在聚合反應之後進一步修飾，諸如藉由與標記組份共軛。其他修飾型式包括(例如)“封端(caps)”、天然存在之核苷酸以類似物取代、核苷酸間的修飾諸如未帶電荷的鍵聯者(例如甲基膦酸酯、磷酸三酯、胺基磷酸酯、胺基甲酸酯等等)及帶電荷的鍵聯者(例如硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯等等)、含懸垂部分者諸如蛋白(例如核酸酶、毒素、抗體、訊號肽、多-L-離胺酸等等)、具嵌入劑者(例如吖啶、補骨脂內酯等等)、含螯合劑者(例如金屬、放射活性金屬、硼、氧化性金屬等等)、含烷基化劑者、具修飾鍵聯者(例如α變旋異構核酸等等)，以及多核苷酸之未修飾形式。此外，糖中慣常存在之任何羥基可(例如)被膦酸酯基、磷酸酯基替代、被標準保護基保護、或被活化以製得鍵結至額外核苷酸的額外鍵，或者可共軛至固體載體。5’及3’端OH可予磷酸化或以胺或具1至20個碳原子之有機封端基部分予以取代。其他羥基亦可予衍生化成標準保護基。多核苷酸亦可含有技術中一般已知之核糖或去氧核糖的類似 形式，例如，2’-O-甲基-，2’-O-烯丙基、2’-氟-或2’-疊氮基-核糖、碳環糖類似物、α-或β-變旋異構糖類、表異構糖類諸如阿拉伯糖、木糖或來蘇糖、吡喃糖、呋喃糖、景天酮庚糖、無環類似物及無鹼基核苷類似物諸如甲基核糖苷。一或多個磷酸二酯鍵可被替代之鍵聯基替代。這些替代之鍵聯基包括但不限於實施態樣，其中磷酸酯被P(O)S(“硫代酸酯(thioate)”)、P(S)S(“二硫代酸酯(dithioate)”)、(O)NR2(“胺基酸酯(amidate)”)、P(O)R、P(O)OR’、CO或CH2(“甲縮醛(formacetal)”)替代，其中R或R’各自獨立地為H或經取代或未經取代之烷基(1-20C)，隨意地含有醚(-O-)鍵、芳基、烯基、環烷基、環烯基或芳烴基(araldyl)。並非多核苷酸中的所有鍵聯必需是完全相同的。前述之說明適用於本文所提及之所有多核苷酸，包括RNA及DNA。
如同技術中已知，抗體之“恆定區”意指，單獨地或組合地，抗體輕鏈之恆定區或抗體重鏈之恆定區。
如本文所用，“實質地純”意指材料為至少50%純度(亦即不含污染物)，較佳地至少90%純度，更佳地至少95%純度，又更佳地至少98%純度，且最佳地至少99%純度。
“宿主細胞”包括個別細胞或細胞培養物，其可為或已經是用於多核苷酸插入之載體所用之接受者。宿主細胞包括單一宿主細胞的子代，且該子代因為天然、意外的、或蓄意的突變故可以不必完全地相同(於形態學中或於基因 組DNA補體中)於原始母細胞。宿主細胞包括於體內以本發明之多核苷酸轉染的細胞。
如同技術中已知，術語"Fc區"係用於定義免疫球蛋白重鏈之C端區。"Fc區"可為天然序列Fc區或變體Fc區。雖然免疫球蛋白重鏈之Fc區的邊界可能變化，但人類IgG重鏈Fc區通常經定義為由位置Cys226或由Pro230之胺基酸殘基延伸至其羧基端。Fc區中之殘基的編號為如同於Kabat中之EU索引者。Kabat et al.,Sequences of Proteins of Immunological Interest,5th Ed.Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,Md.,1991。免疫球蛋白之Fc區通常包含兩個恆定區，CH2及CH3。
如同技術中所用，"Fc受體"及“FcR”說明結合至抗體Fc區的受體。較佳之FcR為天然序列人類FcR。又，較佳FcR為結合IgG抗體(γ受體)者，且包括FcγRI、FcγRII、及FcγRIII亞類之受體，包括這些受體之對偶基因變體及交替剪接形式。FcγRII受體包括FcγRIIA("活化受體")及FcγRIIB("抑制受體")，彼等具有類似的胺基酸序列，而主要地在其細胞質結構域不同。FcR於Ravetch and Kinet,Ann.Rev.Immunol.,9：457-92,1991；Capel et al.,Immunomethods,4：25-34,1994；及de Haas et al.,J.Lab.Clin.Med.,126：330-41,1995中回顧。“FcR”亦包括新生兒受體，FcRn，其負責將母親IgG之轉移給胎兒(Guyer et al.,J.Immunol.,117：587,1976；及Kim et al., J.Immunol.,24：249,1994)。
如本文所用之與抗體有關之述語“競爭”意指第一抗體或其抗原結合片段(或部分)係以充分類似於第二抗體或其抗原結合部分的方式結合至抗原決定位，使得第二抗體存在下之第一抗體與其同族抗原決定位的結合結果比起第二抗體不存在下之第一抗體結合結果可察覺地降低。而替代方案(當第一抗體存在下之第二抗體結合至其抗原決定位的結果亦是可察覺地降低)可以但不必如此。亦即，第一抗體可抑制第二抗體至其抗原決定位之結合而第二抗體不需抑制第一抗體至其個別抗原決定位之結合。然而，當每一抗體可察覺地抑制另一抗體與其同族抗原決定位或配體之結合時，無論程度是相同、更大或更小，該些抗體被稱為是彼此“交互競爭”，其是為了其個別抗原決定位之結合。競爭及交互競爭的抗體均為本發明所涵蓋。無視於此競爭或交互競爭發生的機轉(例如位阻、構形變化、或結合至共同抗原決定位或其部分)，熟知技術者應理解，以本文所提供之教示為基準，此競爭及/或交互競爭抗體係涵蓋且可用於本文所揭示之方法。
“功能Fc區”具有天然序列Fc區之至少一種效應功能。例示之“效應功能”包括C1q結合；補體依賴性細胞毒性；Fc受體結合；抗體依賴性細胞媒介性細胞毒性；吞噬細胞作用；細胞表面受體(例如B細胞受體)之向下調節等等。此效應功能通常需要Fc區與結合結構域(例如抗體可變結構域)結合且可使用技術中已知之各種估測此抗體 效應功能的分析法評估。
“天然序列Fc區”包含之胺基酸序列完全相同於自然界發現之Fc區的胺基酸序列。“變體Fc區”包含之胺基酸序列由於至少一個胺基酸修飾而異於天然序列Fc區者，尚保留天然序列Fc區之至少一種效應功能。一些實施態樣中，與天然序列Fc區或與母多肽之Fc區相比，該變體Fc區具有天然序列Fc區或與母多肽之Fc區中之至少一個胺基酸取代，例如約一至約十個胺基酸取代，且較佳地，約一至約五個胺基酸取代。本文之變體Fc區與天然序列Fc區及/或與母多肽之Fc區相比，較佳地具有至少約80%序列一致性，最佳地至少約90%序列一致性，更佳地至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%、至少約99%序列一致性。
術語“效應功能”意指歸因於抗體Fc區的生物活性。抗體效應功能之實例包括但不限於抗體依賴性細胞媒介性細胞毒性(ADCC)、Fc受體結合、補體依賴性細胞毒性(CDC)、吞噬細胞作用、C1q結合及細胞表面受體(例如B細胞受體；BCR)的向下調節。例如參見美國專利號碼6,737,056。此效應功能通常需要Fc區與結合結構域(例如抗體可變結構域)結合且可使用技術中已知之用於估測此抗體效應功能的分析法評估。例示之效應功能之測量係經由Fcγ3及/或C1q結合。
如本文所用之“抗體依賴性細胞媒介性細胞毒性”或“ADCC”意指細胞媒介性反應，其中表現Fc受體(FcR)之 非特異性細胞毒性細胞(例如天然殺手(NK)細胞、嗜中性白血球、及巨噬細胞)認得標靶細胞上已結合之抗體且繼而導致標靶細胞的溶解。所關注之分子的ADCC活性可使用體外ADCC分析法諸如述於美國專利號碼5,500,362或5,821,337中者評估。用於此分析法之有用效應細胞包括周邊血液單核細胞(PBMC)及NK細胞。另外或者額外地，所關注之分子的ADCC活性可於體內例如於動物模型中諸如揭示於Clynes et al.,1998,PNAS(USA),95：652-656中者評估。
“補體依賴性細胞毒性”或“CDC”意指於補體存在下之標靶的溶解。補體活化路徑係藉由補體系統之第一組份(C1q)結合至與同族抗原複合的分子(例如抗體)開始。欲評估補體活性，可進行CDC分析法，例如如同述於Gazzano-Santoro et al.,J.Immunol.Methods,202：163(1996)者。
如本文所用，“治療”為得到有利或期望臨床結果之方法。有關本發明之目的方面，有利或期望之臨床結果包括但不限於一或多種下列者：減少贅瘤或癌性細胞之增殖(或破壞之)、抑制贅瘤細胞之轉移、BCMA相關性疾病(例如癌症或自體免疫疾病)之緩解、減低因為BCMA相關性疾病(例如癌症或自體免疫疾病)引起之症狀、提高罹患BCMA相關性疾病(例如癌症或自體免疫疾病)之生活品質、降低治療BCMA相關性疾病(例如癌症或自體免疫疾病)所需之其他藥物治療的劑量、延緩BCMA相關性疾病 (例如癌症或自體免疫疾病)之進展、治癒BCMA相關性疾病(例如癌症或自體免疫疾病)、及/或延長具有BCMA相關性疾病(例如癌症或自體免疫疾病)之患者的存活率。
“改良”意指與未投予BCMA抗體或BCMA抗體共軛物相比之一或多種症狀之減輕或改善。“改良”亦包括症狀持續時間之縮短或減少。
如本文所用，藥物、化合物或醫藥組成物之“有效劑量”或“有效量”為足以達成任一或多種有利或期望結果的量。在預防用途方面，有利或期望結果包括排除或減少風險、減輕嚴重性、或延緩疾病的開始包括疾病之生化、組織學及/或行為症狀、疾病發展期間呈現之其併發症及中間病理表型。在治療用途方面，有利或期望結果包括臨床結果，諸如各種BCMA相關性疾病或病症(諸如多發性骨髓瘤)之一或多種症狀之減少發生率或改良、降低治療該疾病所需之其他藥物治療的劑量、提高其他藥物治療的效應、及/或延緩患者之BCMA相關性疾病的進展。有效劑量可分一或多次投予。有關本發明之目的方面，藥物、化合物、或醫藥組成物之有效劑量為足以直接地或間接地完成預防性或治療性治療的量。如同臨床語義所知，藥物、化合物、或醫藥組成物之有效劑量可以連同或可以不連同其他藥物、化合物、或醫藥組成物而達成。故，在投予一或多種治療劑的上下文中，“有效劑量”可予考慮，且如果(連同一或多種其他劑)可能達到或者已達到期望結果，則單一劑可考慮以有效量給予。
“個體(individual)”或"個體(subject)"為哺乳動物，較佳地為人類。哺乳動物亦包括但不限於農場動物、運動動物、寵物、靈長類、馬、狗、貓、小鼠及大鼠。
如本文所用，"載體"意指建構，其可遞送且較佳地表現宿主細胞中所關注之一或多種基因或序列。載體之實例包括但不限於病毒載體、裸DNA或RNA表現載體、質粒、黏粒或噬菌體載體、與陽離子縮合劑有關之DNA或RNA表現載體、包膠囊於微脂粒中之DNA或RNA表現載體、及諸如生產細胞之某些真核細胞。
如本文所用，"表現調控序列"意指指引核酸轉錄之核酸序列。表現調控序列可為啟動子，諸如組成型或可誘導型啟動子、或為增強子。表現調控序列係可操作地連接至待轉錄之核酸序列。
如本文所用，"醫藥上可接受之載體"或"醫藥上可接受之賦形劑"包括任何材料，其當與活性成分組合時，容許成分保留生物活性且不與個體之免疫系統反應。實例包括但不限於任何標準之醫藥載體諸如磷酸鹽緩衝鹽水溶液、水、諸如油/水乳膠之乳膠、及各種型式之濕潤劑。用於氣溶膠或非經腸部投予之較佳稀釋劑為磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)或生理食鹽水(0.9%)。含此載體之組成物係藉已詳知之慣用方法調配(例如參見Remington's Pharmaceutical Sciences,18th edition,A.Gennaro,ed.,Mack Publishing Co.,Easton,PA,1990；及Remington,The Science and Practice of Pharmacy 21st Ed.Mack Publishing,2005)。
如本文所用之術語“含醯基給予體麩醯胺酸之標籤”或“麩醯胺酸標籤”意指含有一或多個Gln殘基之多肽或蛋白，該Gln殘基係作為轉麩醯胺酸酶胺接受體。例如參見WO2012059882及WO2015015448。
如本文所用，術語"kon"或“ka”意指抗體聯合至抗原的速率常數。特別地，速率常數(kon/ka及koff/kd)及平衡解離常數係使用全抗體(亦即雙價)及單體BCMA蛋白測量。
如本文所用，術語"koff"或“kd”意指抗體由抗體/抗原複合物中解離的速率常數。
如本文所用，術語"KD"意指抗體-抗原交互作用之平衡解離常數。
本文所提之“約”一個數值或參數乃包括(及說明)針對彼值或參數本身之實施態樣。例如，所提及之“約X”之說明乃包括“X”之說明。數字範圍乃包括定義彼範圍之數字。
應理解的是，在本文無論何處以語言“包括”描述實施態樣，亦提供以術語“由....所組成”及/或“基本上由....所組成”來描述另外類似之實施態樣。
當本發明之方面或實施態樣依據馬庫西群組(Markush group)或其他替代之群組說明時，本發明不僅涵蓋所列之整個群組作為一個整體，亦涵蓋該群組個別之每一成員及主群組之所有可能的子群組，且亦涵蓋缺乏一或多個群組成員之主群組。本發明亦設想到所請發明中任何群組成員 之一或多者的明確排除。
除非另有定義，否則本文所用之所有技術及科學術語均具有與本發明隸屬之熟知技術者一般理解者相同的意義。如有衝突，本專利說明書，包括定義，將會控制。在整個本專利說明書及申請專利範圍中，字"包含(comprise)"、或諸如"包含(comprises)"或"包含(comprising)"等變化應理解為意味著包括指定的整數或整數群組，但不排除任何其他整數或整數群組。除非上下文另有要求，否則單數術語應包括複數且複數術語應包括單數。
例示之方法及材料乃述於本文中，雖然與本文所述者類似或同等之方法及材料亦可用於本發明之操作或測試中。材料、方法、及實例僅供闡述而不意在限制。
BCMA抗體及其製造方法
本發明提供結合至BCMA之抗體(例如人類BCMA(例如SEQ ID NO：353或登錄號：Q02223-2))，其特徵在於下列之任一或多個特徵：(a)治療、預防、改良個體之與表現BCMA之惡性細胞有關之病症(例如B細胞相關性癌症諸如多發性骨髓瘤)的一或多個症狀；(b)抑制個體(該個體為具有表現BCMA之惡性腫瘤者)之腫瘤生長或進展；(c)抑制個體(該個體為具有表現BCMA之一或多個惡性細胞者)之表現BCMA的癌症(惡性)細胞之轉移；(f)誘導表現BCMA之腫瘤的消退(例如長期消退)；(d)於表 現BCMA之惡性細胞中發揮細胞毒性活性；及(e)阻斷BCMA與其他尚待鑑定之因子的交互作用。
一方面，提供經分離之抗體或其抗原結合片段，其特異性地結合至B細胞成熟抗原(BCMA)，其中該抗體包含(a)重鏈可變(VH)區，其包含(i)VH互補決定區一(CDR1)，其包含序列SYX1MX2，其中X1為A或P；且X2為T、N、或S(SEQ ID NO：301)，GFTFX1SY，其中X1為G或S(SEQ ID NO：302)，或GFTFX1SYX2MX3，其中X1為G或S，X2為A或P；且X3為T、N、或S(SEQ ID NO：303)；(ii)VH CDR2，其包含序列AX1X2X3X4GX5X6X7X8YADX9X10KG，其中X1為I、V、T、H、L、A、或C；X2為S、D、G、T、I、L、F、M、或V；X3為G、Y、L、H、D、A、S、或M；X4為S、Q、T、A、F、或W；X5為G或T；X6為N、S、P、Y、W、或F；X7為S、T、I、L、T、A、R、V、K、G、或C；X8為F、Y、P、W、H、或G；X9為V、R、或L；且X10為G或T(SEQ ID NO：305)、或X1X2X3X4X5X6，其中X1為S、V、I、D、G、T、L、F、或M；X2為G、Y、L、H、D、A、S、或M；X3為S、G、F、或W；X4為G或S；X5為G或T；且X6為N、S、P、Y、或W(SEQ ID NO：306)；及iii)VH CDR3，其包含序列VSPIX1X2X3X4，其中X1為A或Y；X2為A或S；且X3為G、Q、L、P、或E(SEQ ID NO：307)、或YWPMX1X2，其中X1為D、S、T、或A；且X2為I、S、L、P、或D (SEQ ID NO：308)；及/或輕鏈可變(VL)區，其包含(i)VL CDR1，其包含序列X1X2X3X4X5X6X7X8X9X10X11X12，其中X1為R、G、W、A、或C；X2為A、P、G、L、C、或S；X3為S、G、或R；X4為Q、C、E、V、或I；X5為S、P、G、A、R、或D；X6為V、G、I、或L；X7為S、E、D、P、或G；X8為S、P、F、A、M、E、V、N、D、或Y；X9為I、T、V、E、S、A、M、Q、Y、H、R、或F；X10為Y或F；X11為L、W、或P；且X12為A、S、或G(SEQ ID NO：309)；(ii)VL CDR2，其包含序列X1ASX2RAX3，其中X1為G或D；X2為S或I；且X3為T或P(SEQ ID NO：310)；及(iii)VL CDR3，其包含序列QQYX1X2X3PX4T，其中X1為G、Q、E、L、F、A、S、M、K、R、或Y；X2為S、R、T、G、V、F、Y、D、A、H、V、E、K、或C；X3為W、F、或S；且X4為L或I(SEQ ID NO：311)，或QQYX1X2X3PX4，其中X1為G、Q、E、L、F、A、S、M、R、K、或Y；X2為S、R、T、G、R、V、D、A、H、E、K、C、F、或Y；X3為W、S、或F；且X4為L或I(SEQ ID NO：312)。
另一方面，提供經分離之抗體或其抗原結合片段，其特異性地結合至BCMA，其中該抗體包含：VH區，其包含SEQ ID NO：2、3、7、8、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、35、37、39、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、83、87、92、95、97、99、101、104、106、 110、112、114、118、120、122、112、125、127、313、314、363、或365所示之VH序列的VH CDR1、VH CDR2、及VH CDR3；及/或VL區，其包含SEQ ID NO：1、4、5、6、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、34、36、38、40、41、43、45、47、49、51、53、55、57、59、61、63、65、67、69、71、73、75、77、79、317、80、81、82、84、85、86、88、89、90、91、93、94、96、98、100、102、103、105、107、108、109、111、113、115、116、117、119、121、123、124、126、128、315、316、或364所示之VL序列的VL CDR1、VL CDR2、及VL CDR3。
一些實施態樣中，提供抗體，其具有如表1所列之任一部分輕鏈序列及/或如表1所列之任一部分重鏈序列。
表1中，下面畫線的序列為根據Kabat之CDR序列而粗體字為根據Chothia之序列，惟重鏈CDR2序列除外，其Chothia CDR序列為下面畫線者，而Kabat CDR序列為粗體字者。
本發明亦提供針對BCMA之抗體的CDR部分(包括Chothia、Kabat CDR、及CDR接觸區)。CDR區的測定為熟諳此術者詳知。應理解的是，一些實施態樣中，CDR可為Kabat及Chothia CDR之組合(亦稱為"組合CR"或"延伸CDR")。一些實施態樣中，CDR為Kabat CDR。其他實施態樣中，CDR為Chothia CDR。換言之，在不只一個CDR之實施態樣中，CDR可為Kabat、Chothia、組合CDR之任一者、或其組合。表2提供本文所提供之CDR序列的實例。
一些實施態樣中，本發明提供抗體，其結合至BCMA且與如本文所述之抗體競爭，包括P6E01/P6E01、P6E01/H3.AQ、L1.LGF/L3.KW/P6E01； L1.LGF/L3.NY/P6E01、L1.GDF/L3.NY/P6E01、L1.LGF/L3.KW/H3.AL、L1.LGF/L3.KW/H3.AP、L1.LGF/L3.KW/H3.AQ、L1.LGF/L3.PY/H3.AP、L1.LGF/L3.PY/H3.AQ、L1.LGF/L3.NY/H3.AL、L1.LGF/L3.NY/H3.AP、L1.LGF/L3.NY/H3.AQ、L1.GDF/L3.KW/H3.AL、L1.GDF/L3.KW/H3.AP、L1.GDF/L3.KW/H3.AQ、L1.GDF/L3.PY/H3.AQ、L1.GDF/L3.NY/H3.AL、L1.GDF/L3.NY/H3.AP、L1.GDF/L3.NY/H3.AQ、L3.KW/P6E01、L3.PY/P6E01、L3.NY/P6E01、L3.PY/L1.PS/P6E01、L3.PY/L1.AH/P6E01、L3.PY/L1.FF/P6E01、L3.PY/L1.PH/P6E01、L3.PY/L3.KY/P6E01、L3.PY/L3.KF/P6E01、L3.PY/H2.QR、L3.PY/H2.DY、L3.PY/H2.YQ、L3.PY/H2.LT、L3.PY/H2.HA、L3.PY/H2.QL、L3.PY/H3.YA、L3.PY/H3.AE、L3.PY/H3.AQ、L3.PY/H3.TAQ、L3.PY/P6E01、L3.PY/L1.PS/H2.QR、L3.PY/L1.PS/H2.DY、L3.PY/L1.PS/H2.YQ、L3.PY/L1.PS/H2.LT、L3.PY/L1.PS/H2.HA、L3.PY/L1.PS/H2.QL、L3.PY/L1.PS/H3.YA、L3.PY/L1.PS/H3.AE、L3.PY/L1.PS/H3.AQ、L3.PY/L1.PS/H3.TAQ、L3.PY/L1.AH/H2.QR、L3.PY/L1.AH/H2.DY、L3.PY/L1.AH/H2.YQ、L3.PY/L1.AH/H2.LT、L3.PY/L1.AH/H2.HA、L3.PY/L1.AH/H2.QL、 L3.PY/L1.AH/H3.YA、L3.PY/L1.AH/H3.AE、L3.PY/L1.AH/H3.AQ、L3.PY/L1.AH/H3.TAQ、L3.PY/L1.FF/H2.QR、L3.PY/L1.FF/H2.DY、L3.PY/L1.FF/H2.YQ、L3.PY/L1.FF/H2.LT、L3.PY/L1.FF/H2.HA、L3.PY/L1.FF/H2.QL、L3.PY/L1.FF/H3.YA、L3.PY/L1.FF/H3.AE、L3.PY/L1.FF/H3.AQ、L3.PY/L1.FF/H3.TAQ、L3.PY/L1.PH/H2.QR、L3.PY/L1.PH/H2.HA、L3.PY/L1.PH/H3.AE、L3.PY/L1.PH/H3.AQ、L3.PY/L1.PH/H3.TAQ、L3.PY/L3.KY/H2.QR、L3.PY/L3.KY/H2.DY、L3.PY/L3.KY/H2.YQ、L3.PY/L3.KY/H2.LT、L3.PY/L3.KY/H2.HA、L3.PY/L3.KY/H2.QL、L3.PY/L3.KY/H3.YA、L3.PY/L3.KY/H3.TAQ、L3.PY/L3.KF/H2.DY、L3.PY/L3.KF/H2.YQ、L3.PY/L3.KF/H2.LT、L3.PY/L3.KF/H2.QL、L3.PY/L3.KF/H3.YA、L3.PY/L3.KF/H3.AE、L3.PY/L3.KF/H3.AQ、L3.PY/L3.KF/H3.TAQ、P5A2_VHVL、A02_Rd4_0.6nM_C06、A02_Rd4_0.6nM_C09、A02_Rd4_6nM_C16、A02_Rd4_6nM_C03、A02_Rd4_6nM_C01、A02_Rd4_6nM_C26、A02_Rd4_6nM_C25、A02_Rd4_6nM_C22、A02_Rd4_6nM_C19、A02_Rd4_0.6nM_C03、A02_Rd4_6nM_C07、A02_Rd4_6nM_C23、 A02_Rd4_0.6nM_C18、A02_Rd4_6nM_C10、A02_Rd4_6nM_C05、A02_Rd4_0.6nM_C10、A02_Rd4_6nM_C04、A02_Rd4_0.6nM_C26、A02_Rd4_0.6nM_C13、A02_Rd4_0.6nM_C01、A02_Rd4_6nM_C08、P5C1_VHVL、C01_Rd4_6nM_C24、C01_Rd4_6nM_C26、C01_Rd4_6nM_C10、C01_Rd4_0.6nM_C27、C01_Rd4_6nM_C20、C01_Rd4_6nM_C12、C01_Rd4_0.6nM_C16、C01_Rd4_0.6nM_C09、C01_Rd4_6nM_C09、C01_Rd4_0.6nM_C03、C01_Rd4_0.6nM_C06、C01_Rd4_6nM_C04、COMBO_Rd4_0.6nM_C22、COMBO_Rd4_6nM_C21、COMBO_Rd4_6nM_C10、COMBO_Rd4_0.6nM_C04、COMBO_Rd4_6nM_C25、COMBO_Rd4_0.6nM_C21、COMBO_Rd4_6nM_C11、COMBO_Rd4_0.6nM_C20、COMBO_Rd4_6nM_C09、COMBO_Rd4_6nM_C08、COMBO_Rd4_0.6nM_C19、COMBO_Rd4_0.6nM_C02、COMBO_Rd4_0.6nM_C23、COMBO_Rd4_0.6nM_C29、COMBO_Rd4_0.6nM_C09、COMBO_Rd4_6nM_C12、COMBO_Rd4_0.6nM_C30、COMBO_Rd4_0.6nM_C14、COMBO_Rd4_6nM_C07、COMBO_Rd4_6nM_C02、COMBO_Rd4_0.6nM_C05、COMBO_Rd4_0.6nM_C17、COMBO_Rd4_6nM_C22、COMBO_Rd4_0.6nM_C11、COMBO_Rd4_0.6nM_C29、P4G4、或P1A11。
一些實施態樣中，本發明提供抗體或抗原結合片段，其特異性地結合至BCMA，其中該抗體包含VH區，其包含SEQ ID NO：112所示之序列；及/或VL區，其包含SEQ ID NO：38所示之序列。一些實施態樣中，該抗體包含輕鏈，其包含序列 (SEQ ID NO：357)及重鏈，其包含序列 (SEQ ID NO：358)。
一些實施態樣中，本發明提供抗體或抗原結合片段， 其特異性地結合至BCMA，其中該抗體包含VH區，其包含SEQ ID NO：2、32、42、或78所示之序列；及/或VL區，其包含SEQ ID NO：6、16、43、或85所示之序列。
一些實施態樣中，本發明亦提供建基於CDR接觸區之針對BCMA抗體之抗體CDR部分。CDR接觸區為抗體的區域，其灌輸抗體針對抗原之特異性。通常，CDR接觸區包括CDR及游標區(Vernier zone)之殘基部分，彼等受約束以求維持抗體之適當環狀結構以與特異抗原結合。例如參見Makabe et al.,J.Biol.Chem.,283：1156-1166,2007。CDR接觸區的決定為熟諳此術者詳知。
如本文所述之BCMA抗體結合至BCMA(諸如人類BCMA(例如(SEQ ID NO：353))之結合親合力(KD)可為約0.002nM至約6500nM。一些實施態樣中，該結合親合力為約以下之任一者：6500nm、6000nm、5986nm、5567nm、5500nm、4500nm、4000nm、3500nm、3000nm、2500nm、2134nm、2000nm、1500nm、1000nm、750nm、500nm、400nm、300nm、250nm、200nM、193nM、100nM、90nM、50nM、45nM、40nM、35nM、30nM、25nM、20nM、19nm、18nm、17nm、16nm、15nM、10nM、8nM、7.5nM、7nM、6.5nM、6nM、5.5nM、5nM、4nM、3nM、2nM、1nM、0.5nM、0.3nM、0.1nM、0.01nM、或0.002nM。一些實施態樣中，該結合親和力小於約以下之任一者：6500nm、6000nm、5500nm、5000nm、4000nm、3000nm、2000nm、 1000nm、900nm、800nm、250nM、200nM、100nM、50nM、30nM、20nM、10nM、7.5nM、7nM、6.5nM、6nM、5nM、4.5nM、4nM、3.5nM、3nM、2.5nM、2nM、1.5nM、1nM、或0.5nM。
一些實施態樣中，本發明涵蓋組成物，包括醫藥組成物，其包含本文所述或藉方法製得且具有本所述特徵的抗體。如本文所用，組成物包含一或多種抗體，其結合至BCMA，及/或一或多種多核苷酸，其包含編碼一或多種這些抗體之序列。這些組成物可進一步包含適當賦形劑諸如醫藥上可接受之賦形劑包括緩衝液，其為技術中所詳知。
本發明亦提供製造任何這些抗體之方法。本發明之抗體可藉技術中已知之步驟製得。多肽可藉抗體之蛋白分解或其他降解反應、藉如上所述之重組方法(亦即單一或融合多肽)或藉化學合成法製得。抗體之多肽，尤其至多約50個胺基酸之較短多肽係便利地藉化學合成法製得。化學合成方法為技術中已知且為市售。例如，抗體可藉自動化多肽合成儀使用固相方法製得。亦參見美國專利號5,807,715；4,816,567；及6,331,415。
本發明亦涵蓋融合蛋白，其包含來自本發明抗體之一或多個片段或區域。一實施態樣中，所提供之融合多肽包含SEQ ID NO：1、4、5、6、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、34、36、38、40、41、43、45、47、49、51、53、55、57、59、61、63、65、67、69、71、73、75、77、79、317、81、82、 84、85、86、88、89、90、91、93、94、96、98、100、102、103、105、107、108、109、111、113、115、116、117、119、121、123、124、126、128、80、315、36、或364所示之可變輕鏈區的至少10個相連胺基酸及/或SEQ ID NOs：2、3、7、8、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、35、37、39、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、83、87、92、95、97、99、101、104、106、110、112、114、118、120、122、112、125、127、313、314、363、或365所示之可變重鏈區的至少10個相連胺基酸。其他實施態樣中，所提供之融合多肽包含可變輕鏈區之至少約10個、至少約15個、至少約20個、至少約25個、或至少約30個相連胺基酸及/或可變重鏈區之至少約10個、至少約15個、至少約20個、至少約25個、或至少約30個相連胺基酸。另一實施態樣中，該融合多肽包含輕鏈可變區及/或重鏈可變區，如同選自以下SEQ ID NO之任何序列配對所示者：1及2、1及3、4及2、5及2、6及2、4及7、4及8、4及3、9及8、9及3、10及7、10及8、10及3、11及7、11及8、11及3、12及3、13及7、13及8、14及3、15及2、16及2、17及2、18及2、19及2、20及2、21及2、22及2、23及2、16及24、16及25、16及26、16及27、16及28、16及29、16及30、16及31、16及3、16及32、16及2、18及24、18及25、18及26、18及27、18及28、18及29、 18及30、18及31、18及3、18及32、19及24、19及25、19及26、19及27、19及28、19及29、19及30、19及31、19及3、19及32、20及24、20及25、20及26、20及27、20及28、20及29、20及30、20及31、20及3、20及32、21及24、21及28、21及31、21及3、21及32、22及24、22及25、22及26、22及27、22及28、22及29、22及30、22及32、23及25、23及26、23及27、23及29、23及30、23及31、23及3、23及32、34及33、36及35、38及37、40及39、41及33、43及42、45及44、47及46、49及48、51及50、53及52、55及54、57及56、59及58、61及60、63及62、65及64、67及66、69及68、71及70、73及72、75及74、77及76、79及78、317及78、79及78、81及78、82及78、84及83、85及78、86及78、88及87、89及78、90及78、91及78、93及92、94及78、96及95、98及97、38及78、102及101、103及78、105及104、107及106、108及78、109及78、111及110、38及112、113及112、115及114、116及76、117及112、119及118、121及120、123及122、124及112、126及125、128及127、80及363、或364及365。另一實施態樣中，該融合多肽包含一或多個CDR。又其他實施態樣中，該融合多肽包含CDR H3(VH CDR3)及/或CDR L3(VL CDR3)。為本發明之目的，融合蛋白含有一或多種抗體及天然分子中未附接的其他胺基酸序列， 例如，源自其他區的異源或同源序列。例示之異源序列包括但不限於“標籤”諸如FLAG標籤或6His標籤。標籤為技術中已詳知。
本發明亦提供經分離之多核苷酸，其編碼本發明之抗體，及提供包含該多核苷酸之載體及宿主細胞。
一實施態樣中，多核苷酸包含序列，其編碼抗體P6E01/P6E01、P6E01/H3.AQ、L1.LGF/L3.KW/P6E01；L1.LGF/L3.NY/P6E01、L1.GDF/L3.NY/P6E01、L1.LGF/L3.KW/H3.AL、L1.LGF/L3.KW/H3.AP、L1.LGF/L3.KW/H3.AQ、L1.LGF/L3.PY/H3.AP、L1.LGF/L3.PY/H3.AQ、L1.LGF/L3.NY/H3.AL、L1.LGF/L3.NY/H3.AP、L1.LGF/L3.NY/H3.AQ、L1.GDF/L3.KW/H3.AL、L1.GDF/L3.KW/H3.AP、L1.GDF/L3.KW/H3.AQ、L1.GDF/L3.PY/H3.AQ、L1.GDF/L3.NY/H3.AL、L1.GDF/L3.NY/H3.AP、L1.GDF/L3.NY/H3.AQ、L3.KW/P6E01、L3.PY/P6E01、L3.NY/P6E01、L3.PY/L1.PS/P6E01、L3.PY/L1.AH/P6E01、L3.PY/L1.FF/P6E01、L3.PY/L1.PH/P6E01、L3.PY/L3.KY/P6E01、L3.PY/L3.KF/P6E01、L3.PY/H2.QR、L3.PY/H2.DY、L3.PY/H2.YQ、L3.PY/H2.LT、L3.PY/H2.HA、L3.PY/H2.QL、L3.PY/H3.YA、L3.PY/H3.AE、L3.PY/H3.AQ、L3.PY/H3.TAQ、L3.PY/P6E01、L3.PY/L1.PS/H2.QR、L3.PY/L1.PS/H2.DY、 L3.PY/L1.PS/H2.YQ、L3.PY/L1.PS/H2.LT、L3.PY/L1.PS/H2.HA、L3.PY/L1.PS/H2.QL、L3.PY/L1.PS/H3.YA、L3.PY/L1.PS/H3.AE、L3.PY/L1.PS/H3.AQ、L3.PY/L1.PS/H3.TAQ、L3.PY/L1.AH/H2.QR、L3.PY/L1.AH/H2.DY、L3.PY/L1.AH/H2.YQ、L3.PY/L1.AH/H2.LT、L3.PY/L1.AH/H2.HA、L3.PY/L1.AH/H2.QL、L3.PY/L1.AH/H3.YA、L3.PY/L1.AH/H3.AE、L3.PY/L1.AH/H3.AQ、L3.PY/L1.AH/H3.TAQ、L3.PY/L1.FF/H2.QR、L3.PY/L1.FF/H2.DY、L3.PY/L1.FF/H2.YQ、L3.PY/L1.FF/H2.LT、L3.PY/L1.FF/H2.HA、L3.PY/L1.FF/H2.QL、L3.PY/L1.FF/H3.YA、L3.PY/L1.FF/H3.AE、L3.PY/L1.FF/H3.AQ、L3.PY/L1.FF/H3.TAQ、L3.PY/L1.PH/H2.QR、L3.PY/L1.PH/H2.HA、L3.PY/L1.PH/H3.AE、L3.PY/L1.PH/H3.AQ、L3.PY/L1.PH/H3.TAQ、L3.PY/L3.KY/H2.QR、L3.PY/L3.KY/H2.DY、L3.PY/L3.KY/H2.YQ、L3.PY/L3.KY/H2.LT、L3.PY/L3.KY/H2.HA、L3.PY/L3.KY/H2.QL、L3.PY/L3.KY/H3.YA、L3.PY/L3.KY/H3.TAQ、L3.PY/L3.KF/H2.DY、L3.PY/L3.KF/H2.YQ、L3.PY/L3.KF/H2.LT、L3.PY/L3.KF/H2.QL、L3.PY/L3.KF/H3.YA、L3.PY/L3.KF/H3.AE、L3.PY/L3.KF/H3.AQ、 L3.PY/L3.KF/H3.TAQ、P5A2_VHVL、A02_Rd4_0.6nM_C06、A02_Rd4_0.6nM_C09、A02_Rd4_6nM_C16、A02_Rd4_6nM_C03、A02_Rd4_6nM_C01、A02_Rd4_6nM_C26、A02_Rd4_6nM_C25、A02_Rd4_6nM_C22、A02_Rd4_6nM_C19、A02_Rd4_0.6nM_C03、A02_Rd4_6nM_C07、A02_Rd4_6nM_C23、A02_Rd4_0.6nM_C18、A02_Rd4_6nM_C10、A02_Rd4_6nM_C05、A02_Rd4_0.6nM_C10、A02_Rd4_6nM_C04、A02_Rd4_0.6nM_C26、A02_Rd4_0.6nM_C13、A02_Rd4_0.6nM_C01、A02_Rd4_6nM_C08、P5C1_VHVL、C01_Rd4_6nM_C24、C01_Rd4_6nM_C26、C01_Rd4_6nM_C10、C01_Rd4_0.6nM_C27、C01_Rd4_6nM_C20、C01_Rd4_6nM_C12、C01_Rd4_0.6nM_C16、C01_Rd4_0.6nM_C09、C01_Rd4_6nM_C09、C01_Rd4_0.6nM_C03、C01_Rd4_0.6nM_C06、C01_Rd4_6nM_C04、COMBO_Rd4_0.6nM_C22、COMBO_Rd4_6nM_C21、COMBO_Rd4_6nM_C10、COMBO_Rd4_0.6nM_C04、COMBO_Rd4_6nM_C25、COMBO_Rd4_0.6nM_C21、COMBO_Rd4_6nM_C11、COMBO_Rd4_0.6nM_C20、COMBO_Rd4_6nM_C09、COMBO_Rd4_6nM_C08、COMBO_Rd4_0.6nM_C19、COMBO_Rd4_0.6nM_C02、COMBO_Rd4_0.6nM_C23、 COMBO_Rd4_0.6nM_C29、COMBO_Rd4_0.6nM_C09、COMBO_Rd4_6nM_C12、COMBO_Rd4_0.6nM_C30、COMBO_Rd4_0.6nM_C14、COMBO_Rd4_6nM_C07、COMBO_Rd4_6nM_C02、COMBO_Rd4_0.6nM_C05、COMBO_Rd4_0.6nM_C17、COMBO_Rd4_6nM_C22、COMBO_Rd4_0.6nM_C11、COMBO_Rd4_0.6nM_C29、P4G4、或P1A11之重鏈及/或輕鏈可變區。編碼所關注之抗體的序列可保持於宿主細胞內之載體中，然後可將宿主細胞擴增及冷凍以供將來使用。載體(包括表現載體)及宿主細胞乃進一步於本文中說明。
本發明亦涵蓋本發明抗體之scFv。單鏈可變區片段係藉將輕及/或重鏈可變區藉使用短連接肽製得(Bird et al.,Science 242：423-426,1988)。連接肽之實例為(GGGGS)3(SEQ ID NO：498)，其在一可變區的羧基端與另一可變區的胺基端之間橋連約3.5nm。其他序列之連接子已予設計及使用(Bird et al.,1988，同上)。連接子應為短的柔性多肽且較佳地由小於約20個之胺基酸殘基所組成。連接子可依次修飾以供額外之功能，諸如藥物之聯接或聯接至固體載體。單鏈變體可重組地或合成地製得。在scFv之合成製造方面，可使用自動化合成儀。在scFv之重組製造方面，可將編碼scFva之適當含多核苷酸的質粒引入適當宿主細胞中，該宿主細胞為真核諸如酵母菌、植物、昆蟲或哺乳動物細胞、或為原核諸如大腸桿菌(E.coli)。編碼所關注之scFv的多核苷酸可藉常規操作諸如多核苷酸之 接合而製成。所得scFv可使用技術中已知之標準蛋白純化技術分離出來。
亦涵蓋其他單鏈抗體形式諸如雙體或迷你抗體(minibody)。雙體為雙價、雙特異性抗體，其中重鏈可變(VH)及輕鏈可變(VL)結構域於單一多肽鏈上表現，但使用的連接子太短以致於不容許同一鏈上兩個結構域之間的配對，因此強迫結構域與另一鏈的互補結構域配對而產生兩個抗原結合位(例如參見Holliger,P.,et al.,Proc.Natl.Acad Sci.USA 90：6444-6448,1993；Poljak,R.J.,et al.,Structure 2：1121-1123,1994)。迷你抗體(minibody)包括融合至免疫球蛋白分子鉸鏈區及CH3結構域之天然抗體的VL及VH結構域。例如參見US5,837,821。
另一方面，本發明提供組成物(諸如醫藥組成物)，其包含本發明之任何多核苷酸。一些實施態樣中，組成物包含表現載體，該表現載體包含編碼本文所述任何抗體的多核苷酸。又其他實施態樣中，組成物包含以下SEQ ID NO：486及SEQ ID NO：485所示之任一或二種多核苷酸：COMBO_Rd4_0.6nM_C29重鏈可變區 (SEQ ID NO：486)
COMBO_Ra4_0.6nM_C29輕鏈可變區 (SEQ ID NO：485)
其他實施態樣中，組成物包含以下SEQ ID NO：488及SEQ ID NO：487所示之任一或二種多核苷酸：L3.PY/H3TAQ重鏈可變區 (SEQ ID NO：488)
L3.PY/H3TAQ重鏈可變區 (SEQ ID NO：487)
又其他實施態樣中，組成物包含以下SEQ ID NO：490及SEQ ID NO：489所示之任一種或全部二種多核苷酸：A02_Rd4_0.6nM_C01重鏈可變區 (SEQ ID NO：490)
A02_Rd4_0.6nM_C01輕鏈可變區 (SEQ ID NO：489)
其他實施態樣中，組成物包含以下SEQ ID NO：492及SEQ ID NO：491所示之任一種或全部二種核苷酸：A02_Rd4_0.6nM_C16重鏈可變區 (SEQ ID NO：492)
A02_Rd4_0.6nM_C16輕鏈可變區 (SEQ ID NO：491)。
表現載體、及多核苷酸組成物之投予乃進一步於本文中說明。
另一方面，本發明提供製造本文所述任何多核苷酸之方法。
互補於任何此序列之多核苷酸亦為本發明所涵蓋。多核苷酸可為單股(編碼或反義)或雙股，且可為DNA(基因 組、cDNA或合成)或RNA分子。RNA分子包括HnRNA分子，其含有內含子且以一對一方式相應於DNA分子，及包括mRNA分子，其並不含有內含子。額外之編碼或非編碼序列可(但不必)存在於本發明多核苷酸內，而多核苷酸可(但不必)連接至其他分子及/或載體材料。
多核苷酸可包含天然序列(亦即編碼抗體或其一部分之內源性序列)或者可包含此序列之變體。相對於天然免疫反應分子，多核苷酸變體含有一或多個取代、加入、缺失及/或插入而使得編碼多肽的免疫反應性不被減弱。對編碼多肽的免疫反應性之效應通常可如本文所述地評估。與編碼天然抗體或其一部分的多核苷酸序列相較，變體較佳地顯現至少約70%一致性、更佳地至少約80%一致性、又更佳地至少約90%一致性、且最佳地至少約95%一致性。
當兩個序列如以下所述地比對以實現最大對應性時，如果此兩個序列中的核苷酸或胺基酸序列相同，則稱此二多核苷酸或多肽序列為"完全相同"。兩個序列間的比較典型地係藉於比較窗口上比較序列之一致性及比較局部區域的序列類似性來進行。本文所用之“比較窗口”意指至少約20個相連位置，通常30至約75個、或40個至約50個相連位置之區段，其中序列可與相同數目之相連位置的參考序列於兩個序列經過最適化比對後相比較。
供比較用之序列的最適比對可使用Lasergene生物信息學軟體套件(DNASTAR,Inc.,Madison,WI)中的 Megalign程式、使用預設參數進行。此程式具體表現下列參考資料中所述之一些比對方案：Dayhoff,M.O.,1978,A model of evolutionary change in proteins-Matrices for detecting distant relationships.In Dayhoff,M.O.(ed.)Atlas of Protein Sequence and Structure,National Biomedical Research Foundation,Washington DC Vol.5,Suppl.3,pp.345-358；Hein J.,1990,Unified Approach to Alignment and Phylogenes pp.626-645 Methods in Enzymology vol.183,Academic Press,Inc.,San Diego,CA；Higgins,D.G.and Sharp,P.M.,1989,CABIOS 5：151-153；Myers,E.W.and Muller W.,1988,CABIOS 4：11-17；Robinson,E.D.,1971,Comb.Theor.11：105；Santou,N.,Nes,M.,1987,Mol.Biol.Evol.4：406-425；Sneath,P.H.A.and Sokal,R.R.,1973,Numerical Taxonomy the Principles and Practice of Numerical Taxonomy,Freeman Press,San Francisco,CA；Wilbur,W.J.and Lipman,D.J.,1983,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 80：726-730。
較佳地，"序列一致性百分比"係藉將兩個最適比對的序列於至少20個位置的比較窗口上比較而測知，其中與供兩個序列之最適比對的參考序列(其並不包含加入或缺失)相比，比較窗口中之一部分多核苷酸或多肽序列可包括20百分比或更低，通常5至15百分比、或10至12百分比之加入或缺失(例如裂隙)。百分比之計算係藉測量兩種序列均存在之完全相同之核酸鹼基或胺基酸殘基的位置 數以得匹配位置數，將匹配位置數除以參考序列之位置總數(亦即窗口大小)，再乘以100，即得序列一致性百分比。
變體亦可，或者另外地，實質同源於天然基因、或其部分或補體。此多核苷酸變體可於中度嚴格條件下雜交至編碼天然抗體(或互補序列)之天然存在DNA序列。
適當之“中度嚴格條件”包括於5 X SSC、0.5% SDS、1.0mM EDTA(pH 8.0)之溶液中預清洗；於50℃-65℃、5 X SSC雜交過夜；其後於65℃以含0.1%SDS之各2X、0.5X及0.2X SSC清洗20分鐘兩次。
如本文所用，"高度嚴格條件"或"高嚴格條件"為下列者：(1)使用低離子強度及高溫以供清洗，例如0.015M氯化鈉/0.0015M檸檬酸鈉/0.1%十二烷基硫酸鈉於50℃；(2)雜交期間使用變性劑諸如甲醯胺，例如，50%(v/v)甲醯胺連同0.1%牛血清白蛋白/0.1%Ficoll/0.1%聚乙烯基吡咯啶酮/50mM磷酸鈉緩衝液pH 6.5連同750mM氯化鈉、75mM檸檬酸鈉於42℃；或(3)使用50%甲醯胺、5 x SSC(0.75M NaCl、0.075M檸檬酸鈉)、50mM磷酸鈉(pH 6.8)、0.1%焦磷酸鈉、5 x鄧哈特溶液(Denhardt’s solution)、音波處理之鮭精DNA(50μg/ml)、0.1% SDS、及10%硫酸葡聚糖於42℃，及於42℃於0.2 x SSC(氯化鈉/檸檬酸鈉)中清洗及於50%甲醯胺於55℃清洗，其後以含EDTA之0.1 x SSC於55℃高度嚴格清洗。熟知技術者理解依照符合因子諸如探針長度等等之所 需而調整溫度、離子強度等等。
熟諳此術者應理解，因為基因密碼之退化性的結果，有許多核苷酸序列其編碼本文所述之多肽。這些多核苷酸中有一些帶有與任何天然基因之核苷酸序列的最小同源性。但是，因為密碼子使用之差異而有所變化之多核苷酸特別地為本發明所設想的。此外，包含本文所提供多核苷酸序列之對偶基因亦在本發明範圍內。對偶基因為內源性基因，其因為核苷酸之一或多個突變諸如缺失、加入及/或取代而改變。所得mRNA及蛋白可(但不必)具有改變的結構或功能。對偶基因可使用標準技術鑑定(例如雜交法、擴增法及/或資料庫序列比較法)。
本發明之多核苷酸可使用化學合成法、重組法、或PCR獲得。化學多核苷酸合成法為技術中已詳知且不必於本文中詳細說明。熟諳此術者可使用本文提供的序列及市售之DNA合成儀來製得期望之DNA序列。
在使用重組法製造多核苷酸方面，可將包含期望序列之多核苷酸插入適當載體中，接著可將該載體引入適當宿主細胞中以供複製及擴增，如同本文進一步討論。多核苷酸可藉技術中已知之任何方法插入宿主細胞中。細胞係藉將外源性多核苷酸藉直接攝取、細胞內吞作用、轉染法、F-配合或電穿孔法引入而轉型。一旦引入，該外源性多核苷酸可以非整合載體(諸如質粒)形式保持於細胞內或者整合至宿主細胞基因組中。所擴增之多核苷酸可由宿主細胞藉技術中詳知之方法分離出來。例如參見Sambrook et al.,1989。
另外，PCR容許DNA序列的再生。PCR技術為技術中詳知且述於美國專利號碼4,683,195、4,800,159、4,754,065及4,683,202、以及PCR：The Polymerase Chain Reaction,Mullis et al.eds.,Birkauswer Press,Boston,1994中。
RNA可藉使用經分離之DNA於適當載體中，再將其插入適當宿主細胞中而得。當細胞複製且DNA轉錄成RNA時，RNA可接著使用技術中詳知的方法分離出來，例如如同於Sambrook et al.,1989，同上所提及者。
適當之選殖載體可根據標準技術建構，或者可選自技術中可得之大量選殖載體中。雖然所選出之選殖載體可根據所欲使用的宿主細胞而變化，但可用之選殖載體通常具有自我複製的能力、可具有針對特定限制性核酸內切酶的單一標靶、及/或可帶有標記基因以可用於選擇含有載體之殖株。適當實例包括質粒及細菌病毒，例如pUC18、pUC19、Bluescript(例如pBS SK+)及其衍生物、mp18、mp19、pBR322、pMB9、ColE1、pCR1、RP4、噬菌體DNA、及穿梭載體諸如pSA3及pAT28。這些及許多其他選殖載體可由商業販售商諸如BioRad、Strategene、及Invitrogen得到。
表現載體通常為可複製之多核苷酸建構，其含有根據本發明之多核苷酸。這意味著表現載體必需可於宿主細胞中以游離基因體或以染色體DNA之完整部分的形式複 製。適當之表現載體包括(但不限定於)質粒、病毒載體，包括腺病毒、腺相關性病毒、反轉錄病毒、黏粒、及揭示於PCT公開號WO 87/04462中之表現載體。載體組份通常可包括但不限於一或多種下列者：信號序列；複製起點；一或多種標記基因；適當轉錄調控元件(諸如啟動子、增強子及終止子)。在表現(亦即轉譯)方面，通常亦需要一或多種轉譯調控元件諸如核糖體結合位、轉譯起始位及終止密碼子。
含有所關注多核苷酸之載體可藉任何一些適當方法包括電穿孔法、轉染法使用氯化鈣、氯化銣、磷酸鈣、DEAE-聚葡萄糖、或其他物質；基因槍轉化法；脂質轉染法；及感染法(例如其中載體為感染劑諸如疫苗病毒)引入宿主細胞中。引入性載體或多核苷酸之選擇通常依宿主細胞之特色而定。
本發明亦提供宿主細胞，其包含本文所述之任何多核苷酸。可過度表現異源DNA之任何宿主細胞均可用於達到分離出編碼所關注抗體、多肽或蛋白之基因的目的。哺乳動物宿主細胞之非限制性實例包括(但不限制於)COS、HeLa、及CHO細胞。亦參見PCT公開案號WO 87/04462。適當之非哺乳動物宿主細胞包括原核生物(諸如大腸桿菌(E.coli)或枯草桿菌(B.subtillis))及酵母菌(諸如釀酒酵母(S.cerevisae)、粟酒裂殖酵母(S.pombe)；或乳酸克魯維酵母(K.lactis))。較佳地，宿主細胞表現cDNA的程度約5倍地高於、更佳地10倍地高於、甚至 更佳地20倍地高於宿主細胞內如果存在之相應內源性抗體或蛋白者。篩選用於特異地結合至BCMA或BCMA結構域(例如結構域1-4)的宿主細胞係藉免疫分析法或FACS達成。過度表現所關注抗體或蛋白的細胞可被鑑定出。
本發明之代表性材料係於2015年4月15日寄存於美國菌種保存中心(American Type Culture Collection)(ATCC)。具有ATCC寄存編號PTA-122094之載體為編碼人源化BCMA抗體重鏈可變區之多核苷酸，而具有ATCC寄存編號PTA-122093之載體為編碼人源化BCMA抗體輕鏈可變區之多核苷酸。該寄存物係於國際承認用於專利程序的微生物寄存布達佩斯條約條款及其下之規章(布達佩斯條約)下進行。此保證寄存之活培養物由寄存日起維持30年。寄存物可由ATCC根據布達佩斯條約條款得到，且接受輝瑞公司(Pfizer,Inc.)與ATCC之間的協議，該協議保證在相關的美國專利發布時或在任何美國或外國申請案的公眾公開時，無論誰先，公眾可永久且未限制地得到寄存物之培養物的子代，且保證由獲得授權的美國專利商標局委員(U.S.Commissioner of Patents and Trademarks)根據35 U.S.C.Section 122及其隨後之委員規則(包括37 C.F.R.Section 1.14且特別參照886 OG 638)決定的個人可得到該子代。
本申請案的受讓人已同意，如果寄存物上的材料培養物在適當條件下培養時萬一死亡、丟失或被破壞，則要在 接到通知後立即更換另一相同的材料。所保存之材料的可得性不應解釋為對違反任何政府當局根據其專利法所授予的權利實施本發明的許可。
BCMA抗體共軛物
本發明亦提供如本文所述之BCMA抗體或其抗原結合片段之共軛物(或免疫共軛物)，其中該抗體或抗原結合片段係直接或間接地經由連接子共軛至用於標靶免疫療法(例如，抗體藥物共軛物)之劑(例如細胞毒性劑)。例如，細胞毒性劑可連接或共軛至如本文所述之BCMA抗體或其抗原結合片段以供將細胞毒性劑靶向局部遞送至腫瘤(例如表現BCMA之腫瘤)。
用於將細胞毒性劑或其他治療劑共軛至抗體之方法已述於各種公開案中。例如，可於抗體中經由離胺酸側鏈胺或經由藉將鍵間之二硫鍵還原而活化之半胱胺酸巰基進行化學修飾以供發生共軛反應。例如參見Tanaka et al.,FEBS Letters 579：2092-2096,2005，及Gentle et al.,Bioconjugate Chem.15：658-663,2004。於抗體之特異性位置工程化以供以界定之化學計量與特異性藥物共軛之反應性半胱胺酸殘基亦已說明。例如參見Junutula et al.,Nature Biotechnology,26：925-932,2008。使用含醯基給予體麩醯胺酸之標籤或內源性麩醯胺酸藉於轉麩醯胺酸酶及胺之存在下工程化之多肽(例如細胞毒性劑，其包含或附接至反應性胺)使具反應性(亦即形成作為醯基給予體之共 價鍵的能力)所進行之共軛作用亦於國際專利申請案WO2012/059882及WO2015015448中說明。
一些實施態樣中，如本文所述之BCMA抗體或共軛物包含含醯基給予體麩醯胺酸之標籤，其於抗體之特異性位置工程化(例如羧基端、胺基端、或於BCMA抗體之其他位置)。一些實施態樣中，該標籤包含胺基酸麩醯胺酸(Q)或胺基酸序列LQG、LLQGG(SEQ ID NO：318)、LLQG(SEQ ID NO：454)、LSLSQG(SEQ ID NO：455)、GGGLLQGG(SEQ ID NO：456)、GLLQG(SEQ ID NO：457)、LLQ、GSPLAQSHGG(SEQ ID NO：458)、GLLQGGG(SEQ ID NO：459)、GLLQGG(SEQ ID NO：460)、GLLQ(SEQ ID NO：461)、LLQLLQGA(SEQ ID NO：462)、LLQGA(SEQ ID NO：463)、LLQYQGA(SEQ ID NO：464)、LLQGSG(SEQ ID NO：465)、LLQYQG(SEQ ID NO：466)、LLQLLQG(SEQ ID NO：467)、SLLQG(SEQ ID NO：468)、LLQLQ(SEQ ID NO：469)、LLQLLQ(SEQ ID NO：470)、LLQGR(SEQ ID NO：471)、LLQGPP(SEQ ID NO：472)、LLQGPA(SEQ ID NO：473)、GGLLQGPP(SEQ ID NO：474)、GGLLQGA(SEQ ID NO：475)、LLQGPGK(SEQ ID NO：476)、LLQGPG(SEQ ID NO：477)、LLQGP(SEQ ID NO：478)、LLQP(SEQ ID NO：479)、LLQPGK(SEQ ID NO：480)、LLQAPGK(SEQ ID NO：481)、LLQGAPG(SEQ ID NO：482)、LLQGAP(SEQ ID NO：483)、及LLQLQG (SEQ ID NO：484)。
一些實施態樣中，如本文所述之BCMA抗體或共軛物包含含醯基給予體麩醯胺酸之標籤，其於抗體之特異性位置工程化，其中該標籤包含胺基酸序列GGLLQGPP(SEQ ID NO：474)或GGLLQGA(SEQ ID NO：475)，該胺基酸序列在BCMA抗體之輕鏈羧基端工程化。一些實施態樣中，如本文所述之BCMA抗體或共軛物包含含醯基給予體麩醯胺酸之標籤，其於抗體之特異性位置工程化，其中該標籤包含胺基酸序列LLQG(SEQ ID NO：454)，該胺基酸序列在BCMA抗體之重鏈中的殘基T135之後工程化。其他實施態樣中，如本文所述之BCMA抗體或共軛物包含含醯基給予體麩醯胺酸之標籤，其於抗體之特異性位置工程化，其中該標籤包含胺基酸序列LLQGA(SEQ ID NO：463)或LLQGPP(SEQ ID NO：472)，該胺基酸序列在BCMA抗體之重鏈羧基端工程化且其中位於重鏈羧基端之離胺酸殘基被刪除。一些實施態樣中，如本文所述之BCMA抗體或共軛物包含於BCMA抗體之位置297(EU編號方案)的胺基酸取代。例如，胺基酸天冬醯胺酸(N)可於BCMA抗體之位置297經麩醯胺酸(Q)或丙胺酸(A)取代。
亦提供經分離之抗體，其包含含醯基給予體麩醯胺酸之標籤及在抗體位置222、340、或370(EU編號方案)之胺基酸修飾，其中該修飾為胺基酸缺失、插入、取代、突變、或其任何組合。因此，一些實施態樣中，提供如本文 所述之BCMA抗體或共軛物，其包含含醯基給予體麩醯胺酸之標籤(例如Q、LQG、LLQGG(SEQ ID NO：318)、LLQG(SEQ ID NO：454)、LSLSQG(SEQ ID NO：455)、GGGLLQGG(SEQ ID NO：456)、GLLQG(SEQ ID NO：457)、LLQ、GSPLAQSHGG(SEQ ID NO：458)、GLLQGGG(SEQ ID NO：459)、GLLQGG(SEQ ID NO：460)、GLLQ(SEQ ID NO：461)、LLQLLQGA(SEQ ID NO：462)、LLQGA(SEQ ID NO：463)、LLQYQGA(SEQ ID NO：464)、LLQGSG(SEQ ID NO：465)、LLQYQG(SEQ ID NO：466)、LLQLLQG(SEQ ID NO：467)、SLLQG(SEQ ID NO：468)、LLQLQ(SEQ ID NO：469)、LLQLLQ(SEQ ID NO：470)、LLQGR(SEQ ID NO：471)、LLQGPP(SEQ ID NO：472)、LLQGPA(SEQ ID NO：473)、GGLLQGPP(SEQ ID NO：474)、GGLLQGA(SEQ ID NO：475)、LLQGPGK(SEQ ID NO：476)、LLQGPG(SEQ ID NO：477)、LLQGP(SEQ ID NO：478)、LLQP(SEQ ID NO：479)、LLQPGK(SEQ ID NO：480)、LLQAPGK(SEQ ID NO：481)、LLQGAPG(SEQ ID NO：482)、LLQGAP(SEQ ID NO：483)、及LLQLQG(SEQ ID NO：484))，該標籤在BCMA抗體的特異性位置(例如重鏈或輕鏈之羧基端、抗體重鏈之殘基T135或其他位置)共軛，及包含於抗體位置222、340、或370(EU編號方案)之胺基酸修飾。一些實施態樣中，該胺基酸修飾為將離胺酸取代成為精胺酸(例如K222R、K340R、或 K370R)。
一些實施態樣中，如本文所述之BCMA抗體或共軛物包含含醯基給予體麩醯胺酸之標籤，該標籤包含在BCMA抗體輕鏈之C端工程化的序列GGLLQGPP(SEQ ID NO：474)，及包含於抗體位置222(EU編號方案)由離胺酸經胺基酸取代成為精胺酸。一些實施態樣中，如本文所述之BCMA抗體或共軛物包含含醯基給予體麩醯胺酸之標籤，該標籤包含在BCMA抗體輕鏈之C端工程化的序列GGLLQGA(SEQ ID NO：475)，及包含於抗體位置222(EU編號方案)由離胺酸經胺基酸取代成為精胺酸。一些實施態樣中，如本文所述之BCMA抗體或共軛物包含含醯基給予體麩醯胺酸之標籤，該標籤包含在BCMA抗體重鏈之C端工程化的序列LLQGA(SEQ ID NO：463)，及包含於抗體位置222(EU編號方案)由離胺酸經胺基酸取代成為精胺酸。其中位於重鏈羧基端之離胺酸殘基被刪除。一些實施態樣中，如本文所述之BCMA抗體或共軛物包含含醯基給予體麩醯胺酸之標籤，該標籤包含在BCMA抗體重鏈之殘基T135之後工程化的序列LLQG(SEQ ID NO：454)，及包含於抗體位置222(EU編號方案)由離胺酸經胺基酸取代成為精胺酸。
一些實施態樣中，如本文所述之BCMA抗體或共軛物，其包含含醯基給予體麩醯胺酸之標籤，該標籤包含於BCMA抗體之位置297工程化之麩醯胺酸或於位置297由天冬醯胺酸(N)經胺基酸取代成另一胺基酸，及包含抗體 位置222(EU編號方案)由離胺酸經胺基酸取代成為精胺酸。例如，一些實施態樣中，如本文所述之BCMA抗體或共軛物包含含醯基給予體麩醯胺酸之標籤，該標籤包含在BCMA抗體輕鏈之C端工程化的序列GGLLQGPP(SEQ ID NO：474)、於BCMA抗體之位置297由天冬醯胺酸(N)經胺基酸取代成麩醯胺酸(Q)、及抗體位置222(EU編號方案)由離胺酸經胺基酸取代成為精胺酸。一些實施態樣中，如本文所述之BCMA抗體或共軛物包含含醯基給予體麩醯胺酸之標籤，該標籤包含在BCMA重鏈中之殘基T135之後工程化的序列LLQG(SEQ ID NO：454)、於BCMA抗體之位置297由天冬醯胺酸(N)經胺基酸取代成丙胺酸(A)、及抗體位置222(EU編號方案)由離胺酸經胺基酸取代成為精胺酸。
可共軛至本發明BCMA抗體或抗原結合片段之劑包括但不限於細胞毒性劑、免疫調節劑、顯影劑、治療性蛋白、生物聚合物、或寡核苷酸。
細胞毒性劑之實例包括但不限於蒽環、奧利他汀(auristatin)、多拉司他汀(dolastatin)、考布他汀(combretastatin)、倍癌黴素(duocarmycin)、吡咯并苯並二氮雜環庚三烯二聚物(pyrrolobenzodiazepine dimer)、吲哚啉并-苯並二氮雜環庚三烯二聚物(indolino-benzodiazepine dimer)、烯二炔(enediyne)、格爾德黴素(geldanamycin)、美坦素(maytansine)、嘌呤黴素(puromycin)、紫杉烷(taxane)、長春花生物鹼(vinca alkaloid)、喜樹鹼 (camptothecin)、微管溶素(tubulysin)、半星芒素(hemiasterlin)、司普力西歐他汀(spliceostatin)、普拉二烯內酯(pladienolide)、及其立體異構物、同電子排列體、類似物、或衍生物。
蒽環衍生自細菌鏈黴菌屬(Strepomyces)且已用於治療廣泛範圍之癌症，諸如白血病、淋巴瘤、乳癌、子宮癌、卵巢癌、及肺癌。例示之蒽環包括但不限於道諾紅黴素(daunorubicin)、阿黴素(doxorubicin)(亦即adriamycin)、表柔比星(epirubicin)、艾達黴素(idarubicin)、戊柔比星(valrubicin)、及米托蒽醌(mitoxantrone)。
多拉司他汀類(dolastatins)及其肽性類似物及衍生物奧利他汀類(auristatins)為高度有效之抗有絲分裂劑，其已顯示具有抗癌症及抗黴菌活性。例如參見美國專利號碼5,663,149及Pettit et al.,Antimicrob.Agents Chemother.42：2961-2965,1998。例示之多拉司他汀(dolastatins)及奧利他汀類(auristatins)包括但不限於多拉司他汀10(dolastatin 10)、奧利他汀E(auristatinE)、奧利他汀EB(auristatin EB)(AEB)、奧利他汀EFP(auristatin EFP)(AEFP)、MMAD(單甲基奧利他汀D(Monomethyl Auristatin D)或單甲基多拉司他汀10(Monomethyl dolastatin 10))、MMAE(單甲基奧利他汀F(Monomethyl auristatin F)或N-甲基纈胺酸-纈胺酸-海兔異白胺酸(dolaisoleuine)-海兔脯胺酸(dolaproline)-苯基丙胺酸)、MMAE(單甲基奧利他汀E(Monomethyl Auristatin E)或 N-甲基纈胺酸-纈胺酸-海兔異白胺酸(dolaisoleuine)-海兔脯胺酸(dolaproline)-降麻黃鹼)、5-苯甲醯基戊酸-AE酯(AEVB)、及其他新穎奧利他汀類(auristatins)(諸如述於美國公開案號2013/0129753中者)。一些實施態樣中，奧利他汀(auristatin)為具有下面結構之0101(2-甲基丙胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基-3-{[(1S)-2-苯基-1-(1,3-噻唑-2-基)乙基]胺基}丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺)：
一些實施態樣中，奧利他汀(auristatin)為具有下面結構之3377(N,2-二甲基丙胺醯基-N-{(1S,2R)-4-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-羧基-2-苯乙基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-2-甲氧基-1-[(1S)-1-甲基丙基]-4-側氧基丁基}-N-甲基-L-纈胺醯胺)：
一些實施態樣中，奧利他汀(auristatin)為具有下面結 構之0131-OMe(N,2-二甲基丙胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-3-{[(2S)-1-甲氧基-1-側氧基-3-苯基丙-2-基]胺基}-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺)：
其他實施態樣中，奧利他汀(auristatin)為具有下面結構之0131(2-甲基-L-proly-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-羧基-2-苯乙基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺)：
其他實施態樣中，奧利他汀(auristatin)為具有下面結構之0121(2-甲基-L-proly-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-甲氧基-1-側氧基-3-苯基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺)：
喜樹鹼(camptothecin)為細胞毒性喹啉生物鹼，其可抑制拓樸異構酶I。喜樹鹼(camptothecin)及其衍生物之實例包括但不限於拓樸替康(topotecan)及伊立替康(irinotecan)，及其代謝物諸如SN-38。
考布他汀類(combretastatins)為天然酚類，其於腫瘤中具有血管裂解性質。例示之考布他汀類(combretastatins)及其衍生物包括但不限於考布他汀A-4(combretastatin A-4)(CA-4)及奧瑞布林(ombrabulin)。
倍癌黴素(duocarmycin)及CC-1065為具有細胞毒性效力之DNA烷基化劑。參見Boger and Johnson,PNAS 92：3642-3649(1995)。例示之倍癌黴素(duocarmycin)及CC-1065包括但不限於(+)-倍癌黴素A(duocarmycin A)及(+)-倍癌黴素SA(duocarmycin SA)、(+)-CC-1065、及如同於國際專利申請案PCT/IB2015/050280中揭示之化合物包括但不限於具有下面結構之N~2~-乙醯基-L-離胺醯基-L-纈胺醯基-N~5~-胺甲醯基-N-[4-({[(2-{[({(1S)-1-(氯甲基)-3-[(5-{[(1S)-1-(氯甲基)-5-(膦醯氧基)-1,2-二氫-3H-苯并[e]吲哚-3-基]羰基}噻吩-2-基)羰基]-2,3-二氫-1H-苯并[e]吲哚-5-基}氧基)羰基](甲基)胺基}乙基)(甲基)胺甲醯基]氧基}甲基)苯基]-L-鳥胺醯胺： 具有下面結構之N~2~-乙醯基-L-離胺醯基-L-纈胺醯基-N~5~-胺甲醯基-N-[4-({[(2-{[({(8S)-8-(氯甲基)-6-[(3-{[(1S)-1-(氯甲基)-8-甲基-5-(膦醯氧基)-1,6-二氫吡咯并[3,2-e]吲哚-3(2H)-基]羰基}雙環[1.1.1]戊-1-基)羰基]-1-甲基-3,6,7,8-四氫吡咯并[3,2-e]吲哚-4-基}氧基)羰基](甲基)胺基}乙基)(甲基)胺甲醯基]氧基}甲基)苯基]-L-鳥胺醯胺： ，具有下面結構之N~2~-乙醯基-L-離胺醯基-L-纈胺醯基-N~5~-胺甲醯基-N-[4-({[(2-{[({(8S)-8-(氯甲基)-6-[(4- {[(1S)-1-(氯甲基)-8-甲基-5-(膦醯氧基)-1,6-二氫吡咯并[3,2-e]吲哚-3(2H)-基]羰基}五環[4.2.0.0~2,5~.0~3,8~.0~4,7~]辛-1-基)羰基]-1-甲基-3,6,7,8-四氫吡咯并[3,2-e]吲哚-4-基}氧基)羰基](甲基)胺基}乙基)(甲基)胺甲醯基]氧基}甲基)苯基]-L-鳥胺醯胺：
烯二炔類(enediynes)為一種抗腫瘤性細菌產物類別，其特徵在於九及十員環或者共軛三-雙-三鍵之環狀系統的存在。例示之烯二炔類(enediynes)包括但不限於卡奇黴素(calicheamicin)、埃斯培拉黴素(esperamicin)、恩西拉黴素(uncialamicin)、達拉黴素(dynemicin)、及其衍生物。
格爾德黴素類(geldanamycins)為苯醌安莎黴素抗生素(benzoquinone ansamycin antibiotic)，其結合至Hsp90(熱休克蛋白90)且已為已使用之抗腫瘤藥。例示之格爾德黴素類(geldanamycins)包括但不限於17-AAG(17-N-烯丙基胺基-17-脫甲氧基格爾德黴素)及17-DMAG(17-二甲胺基乙胺基-17-脫甲氧基格爾德黴素)。
半星芒素(hemiasterlin)及其類似物(例如HTI-286)結合至微管蛋白，裂解正常之微管動態學，且於化學計量下使微管解聚合化。
美坦素類(maytansines)或其衍生物類美坦素類(maytansinoids)可藉於有絲分裂期間經由抑制微管蛋白之聚合以抑制微管形成而抑制細胞增殖。參見Remillard et al.,science 189：1002-1005,1975。例示之美坦素類(maytansines)及類美坦素類(maytansinoids)包括但不限於美登素(mertansine)(DM1)及其衍生物以及安絲菌素(ansamitocin)。
吡咯并苯並二氮雜環庚三烯二聚物(pyrrolobenzodiazepine dimers)(PBDs)及吲哚啉并-苯並二氮雜環庚三烯二聚物(indolino-benzodiazepine dimers)(IGNs)為含有一或多種免疫功能基或其相等物之抗腫瘤劑，其結合至雙螺旋DNA。PBD及IGN分子係以天然產物安曲黴素(athramycin)為基底，且與DNA以序列選擇性方式交互作用，又較佳地為嘌呤-鳥嘌呤-嘌呤序列。例示之PBDs及其類似物包括但不限於SJG-136。
司普力西歐他汀類(spliceostatins)及普拉二烯內酯類(pladienolides)為抗腫瘤劑，其抑制剪接及與剪接體SF3b交互作用。司普力西歐他汀類(spliceostatins)包括但不限於司普力西歐他汀A(spliceostatin A)、FR901464、及具有下面結構之乙酸(2S,3Z)-5-{[(2R,3R,5S,6S)-6-{(2E,4E)-5-[(3R,4R,5R,7S)-7-(2-肼基-2-側氧基乙基)-4-羥基-1,6-二氧 雜螺[2.5]辛-5-基]-3-甲基戊-2,4-二烯-1-基}-2,5-二甲基四氫-2H-哌喃-3-基]胺基}-5-側氧基戊-3-烯-2-基酯： 。普拉二烯內酯類 (pladienolides)之實例包括但不限於普拉二烯內酯B(pladienolide B)、普拉二烯內酯D(pladienolide D)、或E7107。
紫杉烷類(taxanes)為雙萜類，其作為抗微管蛋白劑或有絲分裂抑制劑。例示之紫杉烷類(taxanes)包括但不限於太平洋紫杉醇(paclitaxel)(例如TAXOL®)及歐洲紫杉醇(docetaxel)(TAXOTERE®)。
微管溶素類(tubulysins)為由黏球菌(myxobacteria)菌型中分離出來的天然產物，其已顯示可使微管解聚合化且誘使有絲分裂停頓。例示之微管溶素類(tubulysins)包括但不限於微管溶素A(tubulysin A)、微管溶素B(tubulysin B)、及微管溶素D(tubulysin D)。
長春花生物鹼類(Vinca alkyloids)亦為抗微管蛋白劑。例示之長春花生物鹼類(Vinca alkyloids)包括但不限於長春新鹼(vincristine)、長春花鹼(vinblastine)、長春花鹼醯胺(vindesine)、及長春瑞濱(vinorelbine)。
因此，一些實施態樣中，細胞毒性劑選自由以下所組成之群組：MMAD(單甲基奧利他汀D(Monomethyl Auristatin D)、0101(2-甲基丙胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲 氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基-3-{[(1S)-2-苯基-1-(1,3-噻唑-2-基)乙基]胺基}丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺)、3377(N,2-二甲基丙胺醯基-N-{(1S,2R)-4-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-羧基-2-苯乙基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-2-甲氧基-1-[(1S)-1-甲基丙基]-4-側氧基丁基}-N-甲基-L-纈胺醯胺)、0131(2-甲基-L-proly-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-羧基-2-苯乙基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺)、0131-OMe(N,2-二甲基丙胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-3-{[(2S)-1-甲氧基-1-側氧基-3-苯基丙-2-基]胺基}-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基L-纈胺醯胺)、0121(2-甲基-L-proly-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-甲氧基-1-側氧基-3-苯基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺)、及乙酸(2S,3Z)-5-{[(2R,3R,5S,6S)-6-{(2E,4E)-5-[(3R,4R,5R,7S)-7-(2-肼基-2-側氧基乙基)-4-羥基-1,6-二氧雜螺[2.5]辛-5-基]-3-甲基戊-2,4-二烯-1-基}-2,5-二甲基四氫-2H-哌喃-3-基]胺基}-5-側氧基戊-3-烯-2-基酯。
一些實施態樣中，該劑為免疫調節劑。免疫調節劑之實例包括但不限於更昔洛韋(gancyclovier)、伊那西普 (etanercept)、他克艾司(tacrolimus)、西羅莫司(sirolimus)、沃克普林(voclosporin)、環孢靈素(cyclosporine)、雷帕黴素(rapamycin)、環磷醯胺(cyclophosphamide)、硫唑嘌呤(azathioprine)、馬替麥考分酯(mycophenolgate mofetil)、胺甲蝶呤(methotrextrate)、糖皮質激素(glucocorticoid)及其類似物、細胞激素、幹細胞生長因子、淋巴毒性、腫瘤壞死因子(TNF)、造血因子、介白素(例如介白素-1(IL-1)、IL-2、IL-3、IL-6、IL-10、IL-12、IL-18、及IL-21)、集落刺激因子(例如顆粒性白血球集落刺激因子(G-CSF)及顆粒性白血球巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF))、干擾素(例如干擾素-α、-β及-γ)、定名為“S 1因子”之幹細胞生長因子、紅血球生成素及血小板生成素、或其組合。
一些實施態樣中，該劑部分為顯影劑(例如螢光團或螯合劑)，諸如螢光素、若丹明(rhodamine)、鑭系元素螢光質、及其衍生物、或結合至螯合劑之放射性同位素。螢光團之實例包括但不限於異硫氰酸螢光素(FITC)(例如5-FITC)、亞醯胺螢光素(fluorescein amidite)(FAM)(例如5-FAM)、伊紅、羧基螢素素、赤蘚紅、Alexa Fluor®(例如Alexa 350、405、430、488、500、514、532、546、555、568、594、610、633、647、660、680、700、或750)、羧基四甲基若丹明(carboxytetramethylrhodamine)(TAMRA)(例如5,-TAMRA)、四甲基若丹明(tetramethylrhodamine)(TMR)、及磺醯若丹明 (sulforhodamine)(SR)(例如SR101)。螯合劑之實例包括但不限於1,4,7,10-四氮雜環十二烷-N,N',N",N'''-四乙酸(DOTA)、1,4,7-三氮雜環壬烷-1,4,7-三乙酸(NOTA)、1,4,7-三氮雜環壬烷，1-戊二酸-4,7-乙酸(deferoxamine)、二伸乙基三胺五乙酸(DTPA)、及1,2-雙(o-胺基苯氧基)乙烷-N,N,N',N'-四乙酸)(BAPTA)。
螢光團之實例包括但不限於異硫氰酸螢光素(FITC)(例如5-FITC)、亞醯胺螢光素(fluorescein amidite)(FAM)(例如5-FAM)、伊紅、羧基螢素素、赤蘚紅、Alexa Fluor®(例如Alexa 350、405、430、488、500、514、532、546、555、568、594、610、633、647、660、680、700、或750)、羧基四甲基若丹明(carboxytetramethylrhodamine)(TAMRA)(例如5,-TAMRA)、四甲基若丹明(tetramethylrhodamine)(TMR)、及磺醯若丹明(sulforhodamine)(SR)(例如SR101)。
一些實施態樣中，治療性或診斷性放射性同位素或其他標記(例如PET或SPECT標記)可引入該共軛至本文所述BCMA抗體或抗原結合片段之劑中。放射性同位素或其他標記之實例包括但不限於3H、11C、13N、14C、15N、15O、35S、18F、32P、33P、47Sc、51Cr、57Co、58Co、59Fe、62Cu、64Cu、67Cu、67Ga、68Ga、75Se、76Br、77Br、86Y、89Zr、90Y、94Tc、95Ru、97Ru、99Tc、103Ru、105Rh、105Ru、107Hg、109Pd、111Ag、111In、113In、121Te、122Te、123I、124I、125I、125Te、126I、131I、131In、133I、142Pr、 143Pr、153Pb、153Sm、161Tb、165Tm、166Dy、166H、167Tm、168Tm、169Yb、177Lu、186Re、188Re、189Re、197Pt、198Au、199Au、201Tl、203Hg、211At、212Bi、212Pb、213Bi、223Ra、224Ac、或225Ac。
一些實施態樣中，該劑為治療性蛋白包括但不限於毒素、荷爾蒙、酵素、及生長因子。
毒素蛋白(或多肽)之實例包括但不限於白喉(例如白喉A鏈)、假單胞菌外毒素及內毒素、蓖麻毒素(例如蓖麻毒素A鏈)、相思豆毒素(例如相思豆毒素A鏈)、莫迪素(modeccin)(例如莫迪素A鏈)、α-核糖毒素、三年桐蛋白(Aleurites fordii protein)、香石竹毒蛋白、核糖核酸酶(RNase)、DNase I、葡萄球菌腸毒素-A、商陸抗病毒蛋白、白樹毒素、白喉毒素、美洲商陸蛋白(Phytolaca americana protein)(PAPI、PAPII、及PAP-s)、苦瓜抑制劑(momordica charantia inhibitor)、麻瘋素毒蛋白、巴豆毒蛋白、肥阜草抑制劑(sapaonaria officinalis inhibitor)、絲林黴素(mitogellin)、局限曲黴素、酚徽素、伊諾黴素(neomycin)、單端孢黴烯、抑制劑胱胺酸結模體(ICK)肽(例如地中海果蠅毒素(ceratotoxins))、及芋螺毒素(例如KIIIA或SmIIIa)。
一些實施態樣中，該劑為生物可相容性聚合物。如本文所述之BCMA抗體或抗原結合片段可共軛至生物可相容性聚合物以增加血清半生期及生物活性及/或延長體內半生期。生物可相容性聚合物之實例包括水溶性聚合物諸 如聚乙二醇(PEG)或其衍生物及含兩性離子之生物可相容性聚合物(例如含磷酸膽鹼之聚合物)。
一些實施態樣中，該劑為寡核苷酸，諸如反義寡核苷酸。
另一方面，本發明提供如本文所述之抗體或抗原結合片段的共軛物，其中該共軛物包含下式：抗體-(含醯基給予體麩醯胺酸之標籤)-(連接子)-(細胞毒性劑)，其中該含醯基給予體麩醯胺酸之標籤係於抗體或抗原結合片段之特異性位置(例如重鏈或輕鏈之羧基端、抗體重鏈之殘基T135之後、或其他位置)工程化，其中該標籤係共軛至連接子(例如含一或多個反應性胺(例如一級胺NH2)之連接子)，且其中該連接子係共軛至細胞毒性劑(例如MMAD或其他奧利他汀類(auristatins)諸如0101、0131、或3377)。
含一或多個反應性胺之連接子的實例包括但不限於Ac-Lys-Gly(乙醯基-離胺酸-甘胺酸)、胺基己酸、Ac-Lys-β-Ala(乙醯基-離胺酸-β-丙胺酸)、胺基-PEG2(聚乙二醇)-C2、胺基-PEG3-C2、胺基-PEG6-C2(或胺基PEG6-丙醯基)、Ac-Lys-Val-Cit-PABC(乙醯基-離胺酸-纈胺酸-瓜胺酸-p-胺基苄氧羰基)、胺基-PEG6-C2-Val-Cit-PABC、胺基己醯基-Val-Cit-PABC、[(3R,5R)-1-{3-[2-(2-胺基乙氧基)乙氧基]丙醯基}哌啶-3,5-二基]雙-Val-Cit-PABC、[(3S,5S)-1-{3-[2-(2-胺基乙氧基)乙氧基]丙醯基}哌啶-3,5-二基]雙-Val-Cit-PABC、腐胺、或Ac-Lys-腐胺。
一些實施態樣中，該共軛物為1)抗體-GGLLQGPP(SEQ ID NO：474)-AcLys-VC-PABC-0101；2)抗體-AcLys-VC-PABC-0101且包含N297Q；3)抗體-GGLLQGPP(SEQ ID NO：474)-AcLys-VC-PABC-0101且包含N297Q；4)抗體-LLQG(SEQ ID NO：454)-胺基-PEG6-C2-0131且包含N297A；5)抗體-LLQG(SEQ ID NO：454)-胺基-PEG6-C2-3377且包含N297A；6)抗體-GGLLQGA(SEQ ID NO：475)-AcLys-VC-PABC-0101。一些實施態樣中，該含醯基給予體麩醯胺酸之標籤(包含例如GGLLQGPP(SEQ ID NO：474)或GGLLQGA(SEQ ID NO：475))係於抗體輕鏈之C端工程化。其他實施態樣中，該含醯基給予體麩醯胺酸之標籤(例如LLQGA(SEQ ID NO：463)或LLQGPP(SEQ ID NO：472))係於抗體重鏈之C端工程化，其中位於C端之離胺酸殘基被刪除。一些實施態樣中，該含醯基給予體麩醯胺酸之標籤(包含例如LLQG(SEQ ID NO：454))係於抗體重鏈之殘基T135之後工程化或者替代抗體重鏈中之胺基酸殘基E294-N297。抗體之實例包括但不限於P6E01/P6E01、P6E01/H3.AQ、L1.LGF/L3.KW/P6E01；L1.LGF/L3.NY/P6E01、L1.GDF/L3.NY/P6E01、L1.LGF/L3.KW/H3.AL、L1.LGF/L3.KW/H3.AP、L1.LGF/L3.KW/H3.AQ、L1.LGF/L3.PY/H3.AP、L1.LGF/L3.PY/H3.AQ、L1.LGF/L3.NY/H3.AL、L1.LGF/L3.NY/H3.AP、L1.LGF/L3.NY/H3.AQ、L1.GDF/L3.KW/H3.AL、 L1.GDF/L3.KW/H3.AP、L1.GDF/L3.KW/H3.Q、L1.GDF/L3.PY/H3.AQ、L1.GDF/L3.NY/H3.AL、L1.GDF/L3.NY/H3.AP、L1.GDF/L3.NY/H3.AQ、L3.KW/P6E01、L3.PY/P6E01、L3.NY/P6E01、L3.PY/L1.PS/P6E01、L3.PY/L1.AH/P6E01、L3.PY/L1.FF/P6E01、L3.PY/L1.PH/P6E01、L3.PY/L3.KY/P6E01、L3.PY/L3.KF/P6E01、L3.PY/H2.QR、L3.PY/H2.DY、L3.PY/H2.YQ、L3.PY/H2.LT、L3.PY/H2.HA、L3.PY/H2.QL、L3.PY/H3.YA、L3.PY/H3.AE、L3.PY/H3.AQ、L3.PY/H3.TAQ、L3.PY/P6E01、L3.PY/L1.PS/H2.QR、L3.PY/L1.PS/H2.DY、L3.PY/L1.PS/H2.YQ、L3.PY/L1.PS/H2.LT、L3.PY/L1.PS/H2.HA、L3.PY/L1.PS/H2.QL、L3.PY/L1.PS/H3.YA、L3.PY/L1.PS/H3.AE、L3.PY/L1.PS/H3.AQ、L3.PY/L1.PS/H3.TAQ、L3.PY/L1.AH/H2.QR、L3.PY/L1.AH/H2.DY、L3.PY/L1.AH/H2.YQ、L3.PY/L1.AH/H2.LT、L3.PY/L1.AH/H2.HA、L3.PY/L1.AH/H2.QL、L3.PY/L1.AH/H3.YA、L3.PY/L1.AH/H3.AE、L3.PY/L1.AH/H3.AQ、L3.PY/L1.AH/H3.TAQ、L3.PY/L1.FF/H2.QR、L3.PY/L1.FF/H2.DY、L3.PY/L1.FF/H2.YQ、L3.PY/L1.FF/H2.LT、L3.PY/L1.FF/H2.HA、L3.PY/L1.FF/H2.QL、L3.PY/L1.FF/H3.YA、 L3.PY/L1.FF/H3.AE、L3.PY/L1.FF/H3.AQ、L3.PY/L1.FF/H3.TAQ、L3.PY/L1.PH/H2.QR、L3.PY/L1.PH/H2.HA、L3.PY/L1.PH/H3.AE、L3.PY/L1.PH/H3.AQ、L3.PY/L1.PH/H3.TAQ、L3.PY/L3.KY/H2.QR、L3.PY/L3.KY/H2.DY、L3.PY/L3.KY/H2.YQ、L3.PY/L3.KY/H2.LT、L3.PY/L3.KY/H2.HA、L3.PY/L3.KY/H2.QL、L3.PY/L3.KY/H3.YA、L3.PY/L3.KY/H3.TAQ、L3.PY/L3.KF/H2.DY、L3.PY/L3.KF/H2.YQ、L3.PY/L3.KF/H2.LT、L3.PY/L3.KF/H2.QL、L3.PY/L3.KF/H3.YA、L3.PY/L3.KF/H3.AE、L3.PY/L3.KF/H3.AQ、L3.PY/L3.KF/H3.TAQ、P5A2_VHVL、A02_Rd4_0.6nM_C06、A02_Rd4_0.6nM_C09、A02_Rd4_6nM_C16、A02_Rd4_6nM_C03、A02_Rd4_6nM_C01、A02_Rd4_6nM_C26、A02_Rd4_6nM_C25、A02_Rd4_6nM_C22、A02_Rd4_6nM_C19、A02_Rd4_0.6nM_C03、A02_Rd4_6nM_C07、A02_Rd4_6nM_C23、A02_Rd4_0.6nM_C18、A02_Rd4_6nM_C10、A02_Rd4_6nM_C05、A02_Rd4_0.6nM_C10、A02_Rd4_6nM_C04、A02_Rd4_0.6nM_C26、A02_Rd4_0.6nM_C13、A02_Rd4_0.6nM_C01、A02_Rd4_6nM_C08、P5C1_VHVL、C01_Rd4_6nM_C24、C01_Rd4_6nM_C26、 C01_Rd4_6nM_C10、C01_Rd4_0.6nM_C27、C01_Rd4_6nM_C20、C01_Rd4_6nM_C12、C01_Rd4_0.6nM_C16、C01_Rd4_0.6nM_C09、C01_Rd4_6nM_C09、C01_Rd4_0.6nM_C03、C01_Rd4_0.6nM_C06、C01_Rd4_6nM_C04、COMBO_Rd4_0.6nM_C22、COMBO_Rd4_6nM_C21、COMBO_Rd4_6nM_C10、COMBO_Rd4_0.6nM_C04、COMBO_Rd4_6nM_C25、COMBO_Rd4_0.6nM_C21、COMBO_Rd4_6nM_C11、COMBO_Rd4_0.6nM_C20、COMBO_Rd4_6nM_C09、COMBO_Rd4_6nM_C08、COMBO_Rd4_0.6nM_C19、COMBO_Rd4_0.6nM_C02、COMBO_Rd4_0.6nM_C23、COMBO_Rd4_0.6nM_C29、COMBO_Rd4_0.6nM_C09、COMBO_Rd4_6nM_C12、COMBO_Rd4_0.6nM_C30、COMBO_Rd4_0.6nM_C14、COMBO_Rd4_6nM_C07、COMBO_Rd4_6nM_C02、COMBO_Rd4_0.6nM_C05、COMBO_Rd4_0.6nM_C17、COMBO_Rd4_6nM_C22、COMBO_Rd4_0.6nM_C11、COMBO_Rd4_0.6nM_C29、P4G4、或P1A11。
一變化中，該共軛物進一步包含於位置222由離胺酸經胺基酸取代成精胺酸。因此，例如，該共軛物為1)抗體-GGLLQGPP(SEQ ID NO：474)-AcLys-VC-PABC-0101且包含K222R；2)抗體-AcLys-VC-PABC-0101且包含N297Q及K222R；3)抗體-GGLLQGPP(SEQ ID NO：474)-AcLys-VC-PABC-0101且包含N297Q及K222R；4)抗體-LLQG (SEQ ID NO：454)-胺基-PEG6-C2-0131且包含N297A及K222R；5)抗體-LLQG(SEQ ID NO：454)-胺基-PEG6-C2-3377且包含N297A及K222R；及6)抗體-GGLLQGA(SEQ ID NO：475)-AcLys-VC-PABC-0101且包含K222R。一些實施態樣中，該含醯基給予體麩醯胺酸之標籤(包含例如GGLLQGPP(SEQ ID NO：474)或GGLLQGA(SEQ ID NO：475))係於抗體輕鏈之C端工程化。其他實施態樣中，該含醯基給予體麩醯胺酸之標籤(例如LLQGA(SEQ ID NO：473)或LLQGPP(SEQ ID NO：472))係於抗體重鏈之C端工程化，其中位於C端之離胺酸殘基被刪除。一些實施態樣中，該含醯基給予體麩醯胺酸之標籤(包含例如LLQG(SEQ ID NO：454))係於抗體重鏈之殘基T135之後工程化或者替代抗體重鏈中之胺基酸殘基E294-N297。抗體之實例包括但不限於P6E01/P6E01、P6E01/H3.AQ、L1.LGF/L3.KW/P6E01；L1.LGF/L3.NY/P6E01、L1.GDF/L3.NY/P6E01、L1.LGF/L3.KW/H3.AL、L1.LGF/L3.KW/H3.AP、L1.LGF/L3.KW/H3.AQ、L1.LGF/L3.PY/H3.AP、L1.LGF/L3.PY/H3.AQ、L1.LGF/L3.NY/H3.AL、L1.LGF/L3.NY/H3.AP、L1.LGF/L3.NY/H3.AQ、L1.GDF/L3.KW/H3.AL、L1.GDF/L3.KW/H3.AP、L1.GDF/L3.KW/H3.AQ、L1.GDF/L3.PY/H3.AQ、L1.GDF/L3.NY/H3.AL、L1.GDF/L3.NY/H3.AP、L1.GDF/L3.NY/H3.AQ、L3.KW/P6E01、L3.PY/P6E01、L3.NY/P6E01、 L3.PY/L1.PS/P6E01、L3.PY/L1.AH/P6E01、L3.PY/L1.FF/P6E01、L3.PY/L1.PH/P6E01、L3.PY/L3.KY/P6E01、L3.PY/L3.KF/P6E01、L3.PY/H2.QR、L3.PY/H2.DY、L3.PY/H2.YQ、L3.PY/H2.LT、L3.PY/H2.HA、L3.PY/H2.QL、L3.PY/H3.YA、L3.PY/H3.AE、L3.PY/H3.AQ、L3.PY/H3.TAQ、L3.PY/P6E01、L3.PY/L1.PS/H2.QR、L3.PY/L1.PS/H2.DY、L3.PY/L1.PS/H2.YQ、L3.PY/L1.PS/H2.LT、L3.PY/L1.PS/H2.HA、L3.PY/L1.PS/H2.QL、L3.PY/L1.PS/H3.YA、L3.PY/L1.PS/H3.AE、L3.PY/L1.PS/H3.AQ、L3.PY/L1.PS/H3.TAQ、L3.PY/L1.AH/H2.QR、L3.PY/L1.AH/H2.DY、L3.PY/L1.AH/H2.YQ、L3.PY/L1.AH/H2.LT、L3.PY/L1.AH/H2.HA、L3.PY/L1.AH/H2.QL、L3.PY/L1.AH/H3.YA、L3.PY/L1.AH/H3.AE、L3.PY/L1.AH/H3.AQ、L3.PY/L1.AH/H3.TAQ、L3.PY/L1.FF/H2.QR、L3.PY/L1.FF/H2.DY、L3.PY/L1.FF/H2.YQ、L3.PY/L1.FF/H2.LT、L3.PY/L1.FF/H2.HA、L3.PY/L1.FF/H2.QL、L3.PY/L1.FF/H3.YA、L3.PY/L1.FF/H3.AE、L3.PY/L1.FF/H3.AQ、L3.PY/L1.FF/H3.TAQ、L3.PY/L1.PH/H2.QR、L3.PY/L1.PH/H2.HA、L3.PY/L1.PH/H3.AE、L3.PY/L1.PH/H3.AQ、L3.PY/L1.PH/H3.TAQ、 L3.PY/L3.KY/H2.QR、L3.PY/L3.KY/H2.DY、L3.PY/L3.KY/H2.YQ、L3.PY/L3.KY/H2.LT、L3.PY/L3.KY/H2.HA、L3.PY/L3.KY/H2.QL、L3.PY/L3.KY/H3.YA、L3.PY/L3.KY/H3.TAQ、L3.PY/L3.KF/H2.DY、L3.PY/L3.KF/H2.YQ、L3.PY/L3.KF/H2.LT、L3.PY/L3.KF/H2.QL、L3.PY/L3.KF/H3.YA、L3.PY/L3.KF/H3.AE、L3.PY/L3.KF/H3.AQ、L3.PY/L3.KF/H3.TAQ、P5A2_VHVL、A02_Rd4_0.6nM_C06、A02_Rd4_0.6nM_C09、A02_Rd4_6nM_C16、A02_Rd4_6nM_C03、A02_Rd4_6nM_C01、A02_Rd4_6nM_C26、A02_Rd4_6nM_C25、A02_Rd4_6nM_C22、A02_Rd4_6nM_C19、A02_Rd4_0.6nM_C03、A02_Rd4_6nM_C07、A02_Rd4_6nM_C23、A02_Rd4_0.6nM_C18、A02_Rd4_6nM_C10、A02_Rd4_6nM_C05、A02_Rd4_0.6nM_C10、A02_Rd4_6nM_C04、A02_Rd4_0.6nM_C26、A02_Rd4_0.6nM_C13、A02_Rd4_0.6nM_C01、A02_Rd4_6nM_C08、P5C1_VHVL、C01_Rd4_6nM_C24、C01_Rd4_6nM_C26、C01_Rd4_6nM_C10、C01_Rd4_0.6nM_C27、C01_Rd4_6nM_C20、C01_Rd4_6nM_C12、C01_Rd4_0.6nM_C16、C01_Rd4_0.6nM_C09、C01_Rd4_6nM_C09、C01_Rd4_0.6nM_C03、 C01_Rd4_0.6nM_C06、C01_Rd4_6nM_C04、COMBO_Rd4_0.6nM_C22、COMBO_Rd4_6nM_C21、COMBO_Rd4_6nM_C10、COMBO_Rd4_0.6nM_C04、COMBO_Rd4_6nM_C25、COMBO_Rd4_0.6nM_C21、COMBO_Rd4_6nM_C11、COMBO_Rd4_0.6nM_C20、COMBO_Rd4_6nM_C09、COMBO_Rd4_6nM_C08、COMBO_Rd4_0.6nM_C19、COMBO_Rd4_0.6nM_C02、COMBO_Rd4_0.6nM_C23、COMBO_Rd4_0.6nM_C29、COMBO_Rd4_0.6nM_C09、COMBO_Rd4_6nM_C12、COMBO_Rd4_0.6nM_C30、COMBO_Rd4_0.6nM_C14、COMBO_Rd4_6nM_C07、COMBO_Rd4_6nM_C02、COMBO_Rd4_0.6nM_C05、COMBO_Rd4_0.6nM_C17、COMBO_Rd4_6nM_C22、COMBO_Rd4_0.6nM_C11、COMBO_Rd4_0.6nM_C29、或P4G4、或P1A11。
CD3抗體及其製造方法
本發明提供結合至CD3之抗體(例如人類CD3(SEQ ID NO：502；或登錄號：NM_000733.3)。
一方面，提供經分離之抗體或其抗原結合片段，其特異性地結合至CD3，其中該抗體包含SEQ ID NO：320、322、324、326、328、330、345、347、349、351、444、354、356、378、442、380、382、384、386、388、390、392、394、396、398、或400所示之VH序列的VH CDR1、VH CDR2、及VH CDR3；及/或輕鏈可變(VL)區， 其包含SEQ ID NO：319、321、323、325、327、329、344、346、348、350、352、355、377、443、445、379、381、383、385、387、389、391、393、395、397、或399所示之VL序列的VL CDR1、VL CDR2、及VL CDR3。
另一方面，提供經分離之抗體或其抗原結合片段，其特異性地結合至CD3，其中該VH區包含(i)VH互補決定區一(CDR1)，其包含SEQ ID NO：331、332、333、401、402、403、407、408、415、416、418、419、420、424、425、426、446、447、或448所示之序列；(ii)VH CDR2，其包含SEQ ID NO：334、336、337、338、339、404、405、409、410、411、412、413、414、417、418、421、422、427、428、449、或450所示之序列；及iii)VH CDR3，其包含SEQ ID NO：335、406、423、429、或451所示之序列；及/或輕鏈可變(VL)區，其包含(i)VL CDR1，其包含SEQ ID NO：340、343、430、431、435、或440、441所示之序列；(ii)VL CDR2，其包含SEQ ID NO：341、433、452、或436所示之序列；及(iii)VL CDR3，其包含SEQ ID NO：342、432、434、437、438、439、446、或453所示之序列。
一些實施態樣中，提供抗體，其具有如表3所列之任一部分輕鏈序列及/或如表3所列之任一部分重鏈序列。
表3中，下面畫線的序列為根據Kabat之CDR序列而粗體字為根據Chothia之序列。
本發明亦提供針對CD3之抗體的CDR部分(包括Chothia、Kabat CDR、及CDR接觸區)。CDR區的測定為 熟諳此術者詳知。應理解的是，一些實施態樣中，CDR可為Kabat及Chothia CDR之組合(亦稱為"組合CR"或"延伸CDR")。一些實施態樣中，CDR為Kabat CDR。其他實施態樣中，CDR為Chothia CDR。換言之，在不只一個CDR之實施態樣中，CDR可為Kabat、Chothia、組合CDR之任一者、或其組合。表4提供本文所提供之CDR序列的實例。
本發明亦提供經分離之多核苷酸，其編碼本發明之抗體，及提供包含該多核苷酸之載體及宿主細胞。
一實施態樣中，多核苷酸包含序列，其編碼抗體h2B4、h2B4-VH-wt VL_TK、h2B4-VH-hnps VL_TK、h2B4-VH-yaes VL_TK、h2B4-VH-yads VL_TK、h2B4-VH-yaps VL_TK、h2B4-VH-hnps VL_TK-S55Y、h2B4-VH-hnps VL_TK-S105Q、h2B4-vH-hnps VL_TK-S55Y/S105Q、2B4、h2B4-11、1C10、1A4、7A3、25A8、16G7、h25A8-B5、h25A8-B8、h25A8-B12、h25A8-B13、h25A8-C5、h25A8-C8、h25A8-D13、h25A8-E13、h25A8-F13、或h25A8-G13之重鏈及/或輕鏈可變區。編碼所關注之抗體的序列可保持於宿主細胞內之載體中，然後可將宿主細胞擴增及冷凍以供將來使用。載體(包括表現載體)及宿主細胞乃進一步於本文中說明。
本發明亦涵蓋融合蛋白，其包含來自本發明抗體之一或多個片段或區域。一實施態樣中，所提供之融合多肽包含SEQ ID NO：319、321、323、325、327、329、344、346、348、350、445、352、355、443、377、379、381、383、385、387、389、391、393、395、397、或399所示之可變輕鏈區的至少10個相連胺基酸及/或SEQ ID NO：320、322、324、326、328、330、345、347、349、351、354、356、444、442、378、380、382、384、386、388、390、392、394、396、398、或400所示之可變重鏈區的至少10個相連胺基酸。其他實施態樣中，所提供之融合 多肽包含可變輕鏈區之至少約10個、至少約15個、至少約20個、至少約25個、或至少約30個相連胺基酸及/或可變重鏈區之至少約10個、至少約15個、至少約20個、至少約25個、或至少約30個相連胺基酸。另一實施態樣中，該融合多肽包含輕鏈可變區及/或重鏈可變區，如同選自以下SEQ ID NO之任何序列配對所示者：319及320、321及322、323及324、325及326、327及328、329及330、344及345、346及347、348及349、350及351、445及444、352及354、355及356、443及442、377及378、379及380、381及382、383及384、385及386、387及388、389及390、391及392、393及394、395及396、397及398、或399及400。另一實施態樣中，該融合多肽包含一或多個CDR。又其他實施態樣中，該融合多肽包含CDR H3(VH CDR3)及/或CDR L3(VL CDR3)。為本發明之目的，融合蛋白含有一或多種抗體及天然分子中未附接的其他胺基酸序列，例如，源自其他區的異源或同源序列。例示之異源序列包括但不限於“標籤”諸如FLAG標籤或6His標籤。標籤為技術中已詳知。
融合多肽可藉技術中已知之方法例如合成地或重組地產生。典型地，本發明之融合蛋白係藉使用本文所述之重組方法製備編碼彼等之表現多核苷酸製得，雖然彼等亦可藉技術中已知之其他方法包括(例如)化學合成法製得。
本發明CD3抗體之代表性材料係於2015年9月11日寄存於美國菌種保存中心(American Type Culture Collection)(ATCC)。具有ATCC寄存編號PTA-122513之載體為編碼人源化CD3抗體重鏈可變區之多核苷酸，而具有ATCC寄存編號PTA-122512之載體為編碼人源化CD3抗體輕鏈可變區之多核苷酸。該寄存物係於國際承認用於專利程序的微生物保存布達佩斯條約條款及其下之規章(the provisions of the Budapest Treaty on the International Recognition of the Deposit of Microorganisms for the Purpose of Patent Procedure and Regulations thereunder(布達佩斯條約))下進行。此保證寄存之活培養物由寄存日起維持30年。寄存物可由ATCC根據布達佩斯條約條款得到，且接受輝瑞公司(Pfizer,Inc.)與ATCC之間的協議，該協議保證在相關的美國專利發布時或在任何美國或外國申請案的公眾公開時，無論誰先，公眾可永久且未限制地得到寄存物之培養物的子代，且保證由獲得授權的美國專利商標局委員(U.S.Commissioner of Patents and Trademarks)根據35 U.S.C.Section 122及其隨後之委員規則(包括37 C.F.R.Section 1.14且特別參照886 OG 638)決定的個人可得到該子代。
本申請案的受讓人已同意，如果寄存物上的材料培養物在適當條件下培養時萬一死亡、丟失或被破壞，則要在接到通知後立即更換另一相同的材料。所保存之材料的可得性不應解釋為對違反任何政府當局根據其專利法所授予的權利實施本發明的許可。
雙特異性抗體及製造方法
雙特異性抗體(單株抗體，其具有針對至少兩種不同抗原之結合親和力)可使用本文所揭示之抗體製得。製造雙特異性抗體之方法於技術中已知(例如參見Suresh et al.,Methods in Enzymology 121：210,1986)。傳統地，雙特異性抗體之重組製造係以兩個免疫球蛋白重鏈-輕鏈配對之共同表現為基底，而兩個重鏈具有不同的特異性(Millstein and Cuello,Nature 305,537-539,1983)。
根據一種製造雙特異性抗體之方法，係將具有期望結合特異性(抗體-抗原組合位)之抗體可變結構域融合至免疫球蛋白之恆定區序列。此融合較佳地係與免疫球蛋白重鏈恆定區融合，包含至少一部分的鉸鏈、CH2及CH3區。較佳地具有第一重鏈恆定區(CH1)，其含有供輕鏈結合所需的部位，存在於至少一個所述融合物中。編碼免疫球蛋白重鏈融合物及(如有需要)免疫球蛋白輕鏈之DNA係插至個別之表現載體中，再共轉染至適當宿主有機體中。當用於建構中的不相等比例的三個多肽鏈提供最適產量時，此在調整實施態樣中三個多狀片段的相互比例方面提供了很大的彈性。然而，當至少兩個多肽鏈以相等比值表現導致高產量時或者當該比值不具特定意義時，則有可能的將二個或全部三個多肽鏈的編碼序列插至一個表現載體中。
一方法中，雙特異性抗體係由在一臂中具有第一結合特異性的雜交免疫球蛋白重鏈、及另一臂中的免疫球蛋白重鏈-輕鏈對(提供第二結合特異性)所組成。此不對稱的結 構，僅一半之雙特異性分子中具有免疫球蛋白輕鏈，使期望之雙特異性化合物容易地由不期望之免疫球蛋白鏈組合物中分離出。此方法乃述於PCT公開案號WO 94/04690中。
另一方法中，雙特異性抗體係由一臂之第一鉸鏈區的胺基酸修飾所組成，且第一鉸鏈區之此經取代/替代之胺基酸具有與另一臂之第二鉸鏈區的相應胺基酸相反的電荷。此方法乃述於國際專利申請案號PCT/US2011/036419(WO2011/143545)中。
另一方法中，期望之異源多聚體或異源二聚體蛋白(例如雙特異性抗體)之形成係藉由改變或工程化第一與第二免疫球蛋白樣Fc區(例如鉸鏈區及/或CH3區)之間的界面而提高。此方法中，雙特異性抗體可由CH3區組成，其中CH3區包含第一CH3多肽及第二CH3多肽，彼等一起交互作用以形成CH3界面，其中CH3界面內的一或多個胺基酸使同源二聚物之形成去穩定化且未靜電地不利於同源二聚物之形成。此方法乃述於國際專利申請案號PCT/US2011/036419(WO2011/143545)中。
另一方法中，雙特異性抗體可使用含麩醯胺酸之肽標籤(工程化至針對抗原決定位(例如BCMA)之抗體)於一臂及使用另一肽標籤(例如含Lys之肽標籤或反應性內源性Lys)(工程化至針對第二抗原決定位的第二抗體)於另一臂、於轉麩醯胺酸酶之存在下產生。此方法乃述於國際專利申請案號PCT/IB2011/054899(WO2012/059882)中。
本發明之另一方面，如本文所述之異源二聚體蛋白 (例如雙特異性抗體)包含全長人類抗體，其中異源二聚體蛋白之第一抗體可變結構域可藉由特異地結合至位在人類免疫效應細胞上的效應抗原而募集人類免疫效應細胞的活性，且其中異源二聚體蛋白之第二抗體可變結構域可特異性地結合至標靶抗原。一些實施態樣中，該人類抗體具有IgG1、IgG2、IgG3、或IgG4亞型。一些實施態樣中，該異源二聚體蛋白包含免疫惰性Fc區。
人類免疫效應細胞可為技術中已知之任何各種免疫效應細胞。例如，免疫效應細胞可為人類淋巴樣細胞系的成員，包括但不限於T cell(例如細胞毒性T細胞)、B細胞、及天然殺手(NK)細胞。免疫效應細胞亦可為(例如但不限於)人類骨髓細胞系之成員，包括但不限於單核細胞、嗜中性顆粒性白血球、及樹狀細胞。此免疫效應細胞可於標靶細胞上具有細胞毒性或細胞凋亡效應且於藉由效應抗原之結合而活化後具有其他期望效應。
效應抗原為抗原(例如蛋白或多肽)，其於人類免疫效應細胞上表現。可藉由異源二聚體蛋白(例如異源二聚體抗體或雙特異性抗體)而結合之效應抗原的實例包括但不限於人類CD3(或CD3(分化簇)複合物)、CD16、NKG2D、NKp46、CD2、CD28、CD25、CD64、及CD89。
標靶細胞可為對人類而言是天然或外來的細胞。天然標靶細胞中，細胞可能已轉型成惡性細胞或者經過病理修飾(例如經病毒、瘧原蟲、或細菌感染之天然標靶細胞)。外來標靶細胞中，細胞為入侵之病原體，諸如細 菌、瘧原蟲、或病毒。
標靶抗原係於疾病病症(例如炎性疾病、增殖疾病(例如癌症)、免疫失調症、神經疾病、神經退化性疾病、自體免疫疾病、傳染疾病(例如病毒感染或寄生蟲感染)、過敏反應、移植物對抗宿主疾病或宿主對抗移植物疾病)之標靶細胞上表現。標靶抗原不是效應抗原。標靶抗原之實例包括但不限於BCMA、EpCAM(上皮細胞黏附分子)、CCR5(化學激素受體第5型)、CD19、HER(人類上皮生長因子受體)-2/neu、HER-3、HER-4、EGFR(上皮生長因子受體)、PSMA、CEA、MUC-1(黏液素)、MUC2、MUC3、MUC4、MUC5AC、MUC5B、MUC7、CIhCG、Lewis-Y、CD20、CD33、CD30、神經節苷脂GD3、9-O-乙醯基-GD3、GM2、Globo H、岩藻糖基GM1、Poly SA、GD2、碳酸酐酶IX(Carboanhydrase IX)(MN/CA IX)、CD44v6、Shh(音蝟因子)、Wue-1、漿細胞抗原、(膜結合)IgE、MCSP(黑色素瘤硫酸軟骨素蛋白多糖)、CCR8、TNF-α先質、STEAP、間皮素、A33抗原、PSCA(攝護腺幹細胞抗原)、Ly-6；橋粒芯蛋白4、E-丐黏附素新表位(E-cadherin neoepitope)、胎兒乙醯膽鹼受體、CD25、CA19-9標記、CA-125標記MIS(曲勒氏管抑制物質(Muellerian Inhibitory Substance))受體第II型、sTn(唾液酸化之Tn抗原；標籤-72)、FAP(纖維母細胞活化抗原)、內皮唾液酸蛋白(endosialin)、EGFRvIII、LG、SAS及CD63。
一些實施態樣中，如本文所述之異源二聚體蛋白(例如雙特異性抗體)包含全長人類抗體，其中異源二聚體蛋白之第一抗體可變結構域可藉由特異地結合至位在人類免疫效應細胞上的效應抗原(例如CD3抗原)而募集人類免疫效應細胞的活性，其中異源二聚體蛋白之第二抗體可變結構域可特異性地結合至標靶抗原(例如CD20抗原或EpCAM)，其中異源二聚體蛋白之第一及第二抗體可變結構域包含於人類IgG2(SEQ ID NO：493)之鉸鏈區位置223、225、及228(例如(C223E或C223R)、(E225R)、及(P228E或P228R))及於CH3區位置409或368(例如K409R或L368E(EU編號方案))的胺基酸修飾。
一些實施態樣中，異源二聚體蛋白之第一及第二抗體可變結構域包含於人類IgG1(SEQ ID NO：494)之鉸鏈區位置221及228(例如(D221R或D221E)及(P228R或P228E))及於CH3區位置409或368(例如K409R或L368E(EU編號方案))的胺基酸修飾。
一些實施態樣中，異源二聚體蛋白之第一及第二抗體可變結構域包含於人類IgG4(SEQ ID NO：495)之鉸鏈區位置228(例如(P228E或P228R))及於CH3區位置409或368(例如R409或L368E(EU編號方案))的胺基酸修飾。
另一實施態樣中，異源二聚體蛋白之第一抗體可變結構域包含VH區，其包含SEQ ID NO：320、322、324、326、328、330、345、347、349、351、444、354、356、378、442、380、382、384、386、388、390、392、394、 396、398、或400所示之VH序列的VH CDR1、VH CDR2、及VH CDR3；及/或輕鏈可變(VL)區，其包含SEQ ID NO：319、321、323、325、327、329、344、346、348、350、352、355、377、443、445、379、381、383、385、387、389、391、393、395、397、或399所示之VL序列的VL CDR1、VL CDR2、及VL CDR3，異源二聚體蛋白之第二抗體可變結構域包含VH區，其包含SEQ ID NO：2、3、7、8、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、35、37、39、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、83、87、92、95、97、99、101、104、106、110、112、114、118、120、122、125、127、313、314、363、或365所示之VH序列；及/或VL區，其包含SEQ ID NO：1、4、5、6、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、34、36、38、40、41、43、45、47、49、51、53、55、57、59、61、63、65、67、69、71、73、75、77、79、317、81、82、84、85、86、88、89、90、91、93、94、96、98、100、102、103、105、107、108、109、111、113、115、116、117、119、121、123、124、126、128、315、or 364所示之VL序列的VL CDR1、VL CDR2、及VL CDR3。
另一實施態樣中，第一抗體可變結構域包含重鏈可變(VH)區，其包含SEQ ID NO：324或388所示之VH序列的VH CDR1、VH CDR2、及VH CDR3；及/或輕鏈可變 (VL)區，其包含SEQ ID NO：323或387所示之VL序列的VL CDR1、VL CDR2、及VL CDR3；且第二抗體可變結構域包含重鏈可變(VH)區，其包含SEQ ID NO：112所示之VH序列的VH CDR1、VH CDR2、及VH CDR3；及/或輕鏈可變(VL)區，其包含SEQ ID NO：38所示之VL序列的VL CDR1、VL CDR2、及VL CDR3。
本發明中可用之抗體可涵蓋單株抗體、多株抗體、抗體片段(例如Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv、Fc等等)、嵌合抗體、雙特異性抗體、異源共軛抗體、單鏈(ScFv)、其突變體、融合蛋白包括抗體部分(例如結構域抗體)、人源化抗體、及免疫球蛋白分子之其他修飾組態，其包含所需特異性之抗原識別位，包括抗體之醣基化變體、抗體之胺基酸序列變體、及共價修飾抗體。抗體可為鼠科、大鼠、人類、或任何其他來源(包嵌合或人源化抗體)。
一些實施態樣中，如本文所述之BCMA或CD3抗體為單株抗體。例如，BCMA或CD3抗體為人源化單株抗體或嵌合單株抗體。
一些實施態樣中，抗體包含修飾恆定區，諸如(例如但不限於)具有增加誘發免疫反應潛能的恆定區。例如，恆定區可修飾成具有增加對Fc γ受體諸如FcγRI、FcγRIIA、或FcγIII之親和力。
一些實施態樣中，抗體包含修飾恆定區，諸如恆定區，其為免疫惰性，亦即具有減低誘發免疫反應之潛能者。一些實施態樣中，恆定區係如同Eur.J.Immunol., 29：2613-2624,1999；PCT申請案號PCT/GB99/01441；及/或英國專利申請案號98099518所述地修飾。Fc可為人類IgG1、人類IgG2、人類IgG3、或人類IgG4。Fc可為含有突變A330P331至S330S331之人類IgG2(IgG2△a)，其中胺基酸殘基係參照野生型IgG2序列編號。Eur.J.Immunol.,29：2613-2624,1999。一些實施態樣中，抗體包含IgG4之恆定區，其包含以下之突變(Armour et al.,Molecular Immunology 40 585-593,2003)：E233F234L235至P233V234A235(IgG4△c)，其中其編號係參照野生型IgG4。又另一實施態樣中，Fc為人類IgG4 E233F234L235至P233V234A235連同缺失G236(IgG4△b)。另一實施態樣中，Fc為含有鉸鏈穩定化突變S228至P228之任何人類IgG4 Fc(IgG4、IgG4△b或IgG4△c)(Aalberse et al.,Immunology 105,9-19,2002)。另一實施態樣中，Fc可為去醣基化Fc。
一些實施態樣中，恆定區係藉將寡醣附接殘基(諸如Asn297)進行突變及/或側接作為恆定區中醣基化識別序列之一部分的殘基予以去醣基化。一些實施態樣中，針對N-連接醣基化地將恆定區酵素性地去醣基化。可針對N-連接醣基化地將恆定區予以酵素性地去醣基化或者於缺乏醣基化之宿主細胞中表現而將恆定區予以去醣基化。
一些實施態樣中，恆定區具有修飾恆定區，其移除或減低Fc γ受體之結合。例如，Fc可為含有突變D265之人類IgG2，其中胺基酸殘基係參照野生型IgG2序列(SEQ ID NO：493)編號。因此，一些實施態樣中，恆定區具有修飾恆定區，該修飾恆定區具有SEQ ID NO：496所示之序列：
一些實施態樣中，恆定區具有修飾恆定區，該修飾恆定區具有SEQ ID NO：497所示之序列：
一種測定抗體抗體至BCMA或CD3之結合親和力的方法係藉測量抗體之單功能Fab片段的結合親和力。欲得 單功能Fab片段，抗體(例如，IgG)可以木瓜酶裂解或重組地表現。抗體之BCMA Fab片段的親和力可藉備有預固定化鏈親和素感應器晶片(SA)或抗小鼠Fc或抗人類Fc之表面電漿子共振(BiacoreTM3000TM表面電漿子共振(SPR)系統，BiacoreTM,INC,Piscataway NJ)使用HBS-EP運行緩衝液(0.01M HEPES，pH 7.4，0.15NaCl，3mM EDTA，0.005% v/v表面活性劑P20)測定。生物素化或Fc融合人類BCMA可稀釋至HBS-EP緩衝液中成小於0.5μg/mL之濃度，再使用可變之接觸時間注射橫跨個別晶片通道，以達兩種抗原密度範圍，50-200應答單元(RU)以供詳細的動力學研究或800-1,000RU以供篩選分析。再生研究已顯示，25mM NaOH之25% v/v乙醇液可有效地移除結合之Fab，同時超過200次注射保持BCMA於晶片上的活性。典型地，將純化Fab樣品之系列稀釋液(橫跨濃度為0.1-10x估計的KD)以100μL/分鐘之速注入1分鐘，且容許最高為2小時之解離時間。Fab蛋白之濃度係藉ELISA及/或SDS-PAGE電泳法使用已知濃度之Fab(藉胺基酸分析法測知)作為標準劑測定。動力學解離速率(kon)及解離速率(koff)係藉將數據全局地擬合至1：1 Langmuir結合模型(Karlsson,R.Roos,H.Fagerstam,L.Petersson,B.(1994)Methods Enzymology 6.99-110)使用BIAevaluation程式同時地得到。平衡解離常數(KD)值係由koff/kon計算出。此擬案(protocol)適用於測定抗體對任何BCMA包括人類BCMA、其他哺乳動物BCMA(諸如小鼠BCMA、大 鼠BCMA、或靈長類BCMA)、以及不同形式BCMA(例如醣基化BCMA)之親和力。抗體之結合親和力通常於25℃測量，但亦可於37℃測量。
如本文所述之抗體可藉技術中已知之方法製得。在製造雜交瘤細胞系方面，宿主動物之免疫化路徑及程序通常與如本文進一步所述之確立且慣用之抗體刺激及製造技術一致。人類及小鼠抗體之一般製造技術為技術中已知及/或述於本文中。
預期任何哺乳動物個體包括人類或由其中製造抗體的細胞可予操作以作為製造哺乳動物包括人類及雜交瘤細胞系的基準。典型地，將一些免疫體原包括本文所述者由腹膜內、肌內、經口、皮下、足底、及/或皮內接種予宿主動物。
雜交瘤可由淋巴細胞及無限增殖化之骨髓瘤細胞中使用Kohler,B.and Milstein,C.,Nature 256：495-497,1975之一般體細胞雜交技術或如Buck,D.W.,et al.,In Vitro,18：377-381,1982所修飾地製得。可得之骨髓瘤細胞系包括但不限於X63-Ag8.653及來自美國加州聖地牙哥沙克學院細胞分佈中心(the Salk Institute,Cell Distribution Center,San Diego,Calif.,USA)者可用於此雜交技術中。通常，此技術包含使用融合劑諸如聚乙二醇或藉熟諳此術者詳知之電性方法將骨髓瘤細胞與淋巴樣細胞融合。融合後，將細胞由融合介質中分離出，再於選擇性生長培養基諸如次黃嘌呤-胺喋呤-胸腺嘧啶核苷(HAT)培養基中生長 以排除未雜交化之母細胞。本文所述之任何培養基(補充或未補充血清)均可用於培養可分泌單株抗體之雜交瘤。作為細胞融合技術之另一替代方法方面，EBV無限增殖化B細胞可用以製造本發明之單株抗體。如有需要，將雜交瘤擴增及次選殖，再藉慣用之免疫分析步驟(例如放射免疫分析法、酵素免疫分析法、或螢光免疫分析法)以分析上層液之抗免疫體原活性。
可作為抗體來源之雜交瘤涵蓋母雜交瘤之所有衍生物、子代細胞，該母雜交瘤可製造對BCMA、CD3、或其部分具特異性的單株抗體。
製造此抗體之雜交瘤可使用已知之步驟於體外或體內生長。如有需要，單株抗體可藉慣用之免疫球蛋白純化步驟諸如硫酸銨沈澱法、凝膠電泳法、透析法、層析法、及超過濾法由培養基或體液中分離出來。如存在不期望之活性，則可將其移除，例如藉將製備劑於由附接至固相之免疫體原所製成之吸附劑上運行，再將期望抗體由免疫體原中洗提出或釋出。將宿主動物以含有標靶胺基酸序列且使用雙功能或衍生化劑例如馬來醯亞胺基苯甲醯基磺基琥珀醯亞胺酯(經由半胱胺酸殘基共軛)、N-羥基琥珀醯亞胺(經由離胺酸殘基)、戊二醛、琥珀酸酐、SOCl2、或R1N=C=NR(其中R及R1為不同之烷基)共軛至在待免疫物種中具有免疫體原性的蛋白質(例如鑰孔蟲戚血藍蛋白、血清白蛋白、牛甲狀腺球蛋白、或大豆胰蛋白酶抑制劑)之人類BCMA或CD3或片段予以免疫化，可得抗體族群 (例如單株抗體)。
如有需要，受關注之抗體(單株或多株)可予定序，且多核苷酸序列可接著選殖至用於表現或繁殖之載體中。編碼所關注抗體之序列可保持宿主細胞內之載體中，然後可將宿主細胞擴增及冷凍以供將來使用。重組單株抗體於細胞培養物中之製造可經由藉技術中已知之方法進行B細胞抗體基因之選殖來進行。例如參見Tiller et al.,J.Immunol.Methods 329,112,2008；美國專利號碼7,314,622。
替代方案中，多核苷酸序列可用於基因操作以將抗體“人源化”或改善抗體之親和力或其他特徵。例如，恆定區可工程化成更幾乎類似於人類恆定區以避免該抗體用於臨床試驗或於人類體內治療時產生免疫反應。可能合乎需要的是將抗體序列進行基因操作以得到對BCMA或CD3之更大親和力且得到更大之抑制BCMA之效力。
有四種一般步驟可將單株抗體予以人源化。這些為：(1)測定起始抗體輕及重鏈可變結構域之核苷酸及預測胺基酸序列(2)設計人源化抗體，亦即決定人源化過程期間使用何種抗體框架區(3)真正的人源化方法/技術及(4)人源化抗體之轉染及表現。例如參見美國專利號碼4,816,567；5,807,715；5,866,692；6,331,415；5,530,101；5,693,761；5,693,762；5,585,089；及6,180,370。
包含衍生自非人類免疫球蛋白之抗原結合位的一些“人源化”抗體分子已予說明，包括嵌合抗體，其具有融合 至人類恆定區之齧齒類或修飾齧齒類V區及其相關CDR。例如參見Winter et al.Nature 349：293-299,1991,Lobuglio et al.Proc.Nat.Acad.Sci.USA 86：4220-4224,1989,Shaw et al.J Immunol.138：4534-4538,1987，及BroWn et al.Cancer Res.47：3577-3583,1987。其他參考資料說明齧齒類CDR在與適當人類抗體恆定區融合之前先嫁接至人類支撐框架區(FR)。例如參見Riechmann et al.Nature 332：323-327,1988,Verhoeyen et al.Science 239：1534-1536,1988，及Jones et al.Nature 321：522-525,1986。其他參考資料說明被重組工程化之齧齒類框架區所支撐之齧齒類CDR。例如參見歐洲專利公開案號0519596。這些“人源化”分子被設計成對齧齒類抗人類抗體分子之不期望免疫反應最小化，此不期望免疫反應限制了這些部分於人類接受者中的治療應用之持續時間及有效性。例如，可將抗體恆定區工程化以使其成為免疫惰性(例如不會誘發補體溶解)。例如參見PCT公開案號PCT/GB99/01441；英國專利申請案號9809951.8。亦可使用之將抗體人源化的其他方法揭示於Daugherty et al.,Nucl.Acids Res.19：2471-2476,1991，及於美國專利號碼6,180,377；6,054,297；5,997,867；5,866,692；6,210,671；及6,350,861；及PCT公開案號WO 01/27160中。
有關於以上所討論之人源化抗體的一般原理亦可應用至用於例如狗、貓、靈長類、馬及牛之客製化抗體。此外，本文所述之將抗體人源化的一或多方面可予結合，例 如CDR嫁接、框架突變及CDR突變。
一變化中，完全人類抗體可藉使用市售之已工程化以表現特異性人類免疫球蛋白的市售小鼠而得。經設計以產生更期望(例如完全人類抗體)或更強健免疫反應之基因轉殖動物亦可用於產生人源化或人類抗體。此技術之實例為得自Abgenix,Inc.(Fremont,CA)之XenomouseTM及得自Medarex,Inc.(Princeton,NJ)之HuMAb-Mouse®及TC MouseTM。
另一替代方案中，抗體可重組地製得且使用技術中已知之任何方法表現。另一替代方案中，抗體可藉噬菌體展現技術重組地製得。例如參見美國專利號碼5,565,332；5,580,717；5,733,743；及6,265,150；及Winter et al.,Annu.Rev.Immunol.12：433-455,1994。另外，噬菌體展現技術(McCafferty et al.,Nature 348：552-553,1990)可於體外由來自未免疫化給予體之免疫球蛋白可變(V)結構域基因全集來用以製造人類抗體或抗體片段。根據此技術，將抗體V結構域基因於框內選殖至絲狀噬菌體諸如M13或fd之主要或次要外套蛋白基因中，且於噬菌體表面上以功能性抗體片段展現。因為絲狀微粒含有噬菌體基因組之單股DNA拷貝，故以抗體之功能性質為基準進行選擇亦導致選出編碼顯現彼些性質之抗體的基因。因此，噬菌體模仿B細胞的一些性質。噬菌體展現可於各種格式中進行：例如回顧參見Johnson,Kevin S.and Chiswell,David J.,Current Opinion in Structural Biology 3：564-571, 1993。V-基因區段之一些來源可用於噬菌體展現。Clackson et al.,Nature 352：624-628,1991由衍生自免疫化小鼠脾的V基因小型隨機組合文庫中分離出各種不同之抗唑酮抗體。來自未免疫化人類給予體之V基因全集可建構，且針對各種不同抗原(包括自身抗原)之抗體基本上可遵循Mark et al.,J.Mol.Biol.222：581-597,1991，或Griffith et al.,EMBO J.12：725-734,1993所述之技術分離出來。天然免疫反應中，抗體基因高速率地累積突變(體細胞高度突變)。所引入的一些改變將賦予更高之親和力，而展現高親和力表面免疫球蛋白的B細胞乃在隨後之抗原挑戰期間優先地複製及分化。此天然過程可藉使用稱之為“鏈改組(chain shuffling)”的技術(Marks et al.,Bio/Technol.10：779-783,1992)模仿。此方法中。藉噬菌體展現所得之“初次”人類抗體的親和力可藉連續地將重及輕鏈V區基因以得自未免疫化給予體之V結構域基因之天然存在變體(全集)的全集替代而改善。此技術得以製得具有pM-nM親和力範圍的抗體及抗體片段。製造極大噬菌體抗體全集的策略(亦稱為“最極端文庫(the mother-of-all libraries)”)已由Waterhouse et al.,Nucl.Acids Res.21：2265-2266,1993說明。基因改組亦可用以由齧齒類抗體中衍生人類抗體，此處人類抗體具有與起始齧齒類抗體類似的親和力及特異性。根據此方法(其亦稱為“抗原決定位印模”)，藉噬菌體展現技術所得之齧齒類抗體的重或輕鏈V結構域基因被人類V結構域基因全集替代，產生齧 齒類-人類嵌合體。對抗原之選擇導致能夠恢復功能性抗原結合位(亦即可管理(印模)配偶體選擇之抗原決定位)之人類可變區的分離。當重覆此過程以替換餘留之齧齒類V結構域時，得到人類抗體(參見PCT公開案號WO 93/06213)。不像傳統之藉CDR嫁接法進行齧齒類抗體之人源化一般，此技術提供完全人類抗體，其沒有齧齒類起源之框架或CDR殘基。
抗體可如下地重組地製得：首先將抗體及製造抗體的細胞由宿主動物中分離出來，得到基因序列，再使用此基因序列以於宿主細胞(例如CHO細胞)中重組地表現抗體。可使用之另一方法係於植物(例如菸草)或基因轉殖乳中表現抗體序列。已揭示於植物或乳中重組地表現抗體之方法。例如參見Peeters,et al.Vaccine 19：2756,2001；Lonberg,N.and D.Huszar Int.Rev.Immunol 13：65,1995；及Pollock,et al.,J Immunol Methods 231：147,1999。製造抗體衍生物例如人源化、單鏈等等之方法於技術中已知。
免疫分析法及流式細胞儀分選技術諸如螢光活化細胞分選法(FACS)亦可用以分離對BCMA、CD3、或所關注腫瘤抗原具特異性的抗體。
如本文所述之抗體可結合至許多不同的載體。載體可為活性及/或惰性、已詳知之載體實例包括聚丙烯、聚苯乙烯、聚乙烯、聚葡萄糖、耐綸、澱粉酶、玻璃、天然及修飾纖維素、聚丙烯醯胺、瓊脂糖、及磁鐵礦。供本發明 目的之載體的特性可為可溶性或不可溶性。熟諳此術者知道用於結合抗體之其他適當載體，或者能夠使用常規實驗法來確定此。一些實施態樣中，載體包含靶向心肌的部分。
編碼單株抗體之DNA可使用慣用之步驟(例如藉使用寡核苷酸探針，其可特異性地結合至編碼單株抗體重及輕鏈之基因)輕易地分離出及定序。雜交瘤細胞充作此DNA的較佳來源。一旦分離出，DNA可置於表現載體(諸如揭示於PCT公開案號WO 87/04462之表現載體)中，然後轉染至宿主細胞諸如大腸桿菌(E.coli)細胞、猿猴COS細胞、中國倉鼠卵巢(CHO)細胞、或並未另行製造免疫球蛋白之骨髓瘤細胞中，以於重組宿主細胞中得到合成之單株抗體。例如參見PCT公開案號WO 87/04462。DNA亦可藉以人類重及輕鏈恆定區之編碼序列替代同源性鼠序列，Morrison et al.,Proc.Nat.Acad.Sci.81：6851,1984，或藉將所有或部分之非免疫球蛋白多肽之編碼序列共價接合至免疫球蛋白編碼序列進行修飾。以此方式，可製得“嵌合”或“雜交”抗體，其具有本文單株抗體之結合特異性。
如本文所述之受關注BCMA或腫瘤抗原之抗體可使用技術中已知之方法鑑定或特徵化，藉以偵測及/或測量BCMA或其他腫瘤抗原表現程度之減低。一些實施態樣中，BCMA抗體係藉將候選劑與BCMA培育，再監測結合力及/或伴隨之BCMA表現程度之減低進行鑑定。結合分析法可以純化之BCMA多肽，或以天然表現或轉染表 現BCMA多肽之細胞進行。一實施態樣中，結合分析法為競爭性結合分析法，其中係估測候選抗體與已知之BCMA抗體競爭結合BCMA之能力。此分析法可以各種格式進行，包括ELISA格式。
初步鑑定後，候選BCMA、CD3、或腫瘤抗原之抗體可進一步藉生物分析法(已知用於測試靶向之生物活性)證實及精鍊。另外，生物分析法可用於直接地篩選候選者。用於鑑定及特徵化抗體之一些方法乃詳細述於實例中。
BCMA、CD3、或其他腫瘤抗原之抗體可使用技術中詳知之方法特徵化。例如，一方法為鑑定其所結合之抗原決定位，或“抗原決定位作圖(epitope mapping)”。有許多技術中已知之方法可用於將蛋白質上之抗原決定位所在位置作圖及特徵化，包括解析抗體-抗原複合物之晶體結構、競爭分析法、基因片段表現分析法、及合成肽為基礎之分析法，例如如同於Chapter 11 of Harlow and Lane,Using Antibodies,a Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,New York,1999中所述者。額外實例中，抗原決定位作圖可用以測得抗體所結合之序列。抗原決定位作圖可由市面各種來源獲得，例如，Pepscan Systems(Edelhertweg 15,8219 PH Lelystad,The Netherlands)。抗原決定位可為線性抗原決定位亦即含於單伸之胺基酸中，或為藉胺基酸之三維交互作用所形成之構形抗原決定位(其可不必要含於單伸中)。各種長度之狀(例如至少4-6個胺基酸長)可分離出或合成 (例如重組地)且連同BCMA、CD3、或其他腫瘤抗原之抗體用於結合分析。另一實例中，BCMA、CD3、或其他腫瘤抗原之抗體所結合之抗原決定位可於系統篩選法中藉使用衍生自BCMA、CD3、或其他腫瘤抗原序列的重疊肽，再測定被BCMA、CD3、或其他腫瘤抗原之抗體結合的結合力而測知。根據基因片段表現分析法，將編碼BCMA、CD3、或其他腫瘤抗原之開放閱讀框隨機地或藉特異性基因建構法予以片段化，再測定BCMA、CD3、或其他腫瘤抗原之表現片段與待測試抗體之反應性。基因片段可例如藉PCR製得，然後於體外於放射活性胺基酸之存在下轉錄及轉譯成蛋白質。然後藉免疫沈澱法及凝膠電泳法測定抗體與放射活性標記BCMA、CD3、或其他腫瘤抗原片段之結合力。某些抗原決定位亦可藉使用於噬菌體微粒(噬菌體文庫)表面上展現之大隨基肽序列文庫進行鑑定。另外，可於簡易結合分析法中測試精煉之重疊肽片段文庫結合至測試抗體之結合力。額外實例中，可進行抗原結合結構域之突變形成法、結構域交換實驗及丙胺酸掃描式突變形成法以鑑定供抗原決定位結合所需要、足夠、及/或必要之殘基。例如，結構域交換實驗可使用突變體BCMA、CD3、或其他腫瘤抗原進行，其中BCMA、CD3、或其他腫瘤抗原蛋白之各種片段已被來自其他物種(例如小鼠)BCMA的序列、或密切相關但抗原性有區別之蛋白(例如Trop-1)所替代(交換)。藉由評估抗體結合至突變體BCMA、CD3、或其他腫瘤抗原之結合力，可評估特定 BCMA、CD3、或其他腫瘤抗原片段對抗體結合之重要性。
可用以將BCMA、CD3、或其他腫瘤抗原之抗體特徵化之又另一方法為使用已知結合至相同抗原(亦即BCMA、CD3、或其他腫瘤抗原上之各種片段)之其他抗體進行之競爭分析法，以測定BCMA、CD3、或其他腫瘤抗原之抗體是否結合至與其他抗體相同的抗原決定位。競爭分析法為熟諳此術者已詳知。
表現載體可用於BCMA、CD3、或其他腫瘤抗原之抗體的直接表現。熟諳此術者熟悉表現載體之投予以於體內得到外源性蛋白之表現。例如參見美國專利號碼6,436,908；6,413,942；及6,376,471。表現載體之投予包括局部或全身投予，包括注射、口服、粒子槍或插入導管投予、及局部投予。另一實施態樣中，表現載體係直接投予交感神經幹或神經節、或至冠狀動脈、心房、心室、或心包中。
含表現載體或次基因組多核苷酸之治療性組成物的靶向遞送亦可使用。受體媒介性DNA遞送技術乃述於例如，Findeis et al.,Trends Biotechnol.,1993,11：202；Chiou et al.,Gene Therapeutics：Methods And Applications Of Direct Gene Transfer,J.A.Wolff,ed.,1994；Wu et al.,J.Biol.Chem.,263：621,1988；Wu et al.,J.Biol.Chem.,269：542,1994；Zenke et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,87：3655,1990；及Wu et al.,J.Biol.Chem.,266：338, 1991中。基因治療擬案中，含多核苷酸之治療性組成物係以約100ng至約200mg範圍之DNA供局部投予。基因治療擬案基間亦可使用約500ng至約50mg、約1μg至約2mg、約5μg至約500μg、及約20μg至約100μg濃度範圍的DNA。治療性多核苷酸及多肽可使用基因遞送載劑遞送。基因遞送載劑可為病毒或非病毒起源(一般參見Jolly,Cancer Gene Therapy,1：51,1994；Kimura,Human Gene Therapy,5：845,1994；Connelly,Human Gene Therapy,1995,1：185；及Kaplitt,Nature Genetics,6：148,1994)。此編碼序列之表現可使用內源性哺乳動物或異源性啟動子誘導。編碼序列之表現可為組成型或調節型。
用於遞送期望多核苷酸及於期望細胞中表現的以病毒為基底之載體於技術中已詳知。例示之以病毒為基底之載體包括但不限於重組反轉錄病毒(例如參見PCT公開案號WO 90/07936；WO 94/03622；WO 93/25698；WO 93/25234；WO 93/11230；WO 93/10218；WO 91/02805；美國專利號碼5,219,740及4,777,127；GB專利號2,200,651；及歐洲專利號0 345 242)、以阿爾發病毒為基底之載體(例如辛德比斯病毒載體(Sindbis virus vector)、塞姆利基森林病毒(Semliki forest virus)(ATCC VR-67；ATCC VR-1247)、羅斯河病毒(Ross River virus)(ATCC VR-373；ATCC VR-1246)及委內瑞拉馬腦炎病毒(ATCC VR-923；ATCC VR-1250；ATCC VR 1249；ATCC VR-532))、及腺相關性病毒(AAV)載體(例如參見PCT公開 案號WO 94/12649,WO 93/03769；WO 93/19191；WO 94/28938；WO 95/11984及WO 95/00655)。亦可使用如同Curiel,Hum.Gene Ther.,1992,3：147所述之連接至被殺腺病毒的DNA的投予。
亦可使用非病毒遞送載劑及方法，包括但不限於單獨地連接至或未連接至被殺腺病毒之聚陽離子縮合DNA(例如參見Curiel,Hum.Gene Ther.,3：147,1992)；配體連接性DNA(例如參見Wu,J.Biol.Chem.,264：16985,1989)；真核生物細胞遞送載劑細胞(例如參見美國專利號碼5,814,482；PCT公開案號WO 95/07994；WO 96/17072；WO 95/30763；及WO 97/42338)及與細胞膜之核酸電荷中和或融合。亦可使用裸露DNA。例示之裸露DNA引入法述於PCT公開案號WO 90/11092及美國專利號碼5,580,859中。可作為基因遞送載劑之微脂粒述於美國專利號碼5,422,120；PCT公開案號WO 95/13796；WO 94/23697；WO 91/14445；及EP 0524968中。其他方法述於Philip,Mol.Cell Biol.,14：2411,1994及於Woffendin,Proc.Natl.Acad.Sci.,91：1581,1994中。
一些實施態樣中，本發明涵蓋組成物，其包括醫藥組成物，該醫藥組成物包含本文所述或藉本文所述方法製得且具有本文所述特徵之抗體。如本文所用，組成物包含包含一或多種抗體，其結合至CD3及腫瘤抗原(例如BCMA)，及/或一或多種多核苷酸，其包含編碼一或多種這些抗體之序列。這些組成物可進一步包含適當賦形劑諸 如醫藥上可接受之賦形劑包括緩衝液，其為技術中所詳知。
本發明亦提供製造任何這些抗體之方法。本發明之抗體可藉技術中已知之步驟製得。多肽可藉抗體之蛋白分解或其他降解反應、藉如上所述之重組方法(亦即單一或融合多肽)或藉化學合成法製得。抗體之多肽，尤其至多約50個胺基酸之較短多肽係便利地藉化學合成法製得。化學合成方法為技術中已知且為市售。例如，抗體可藉自動化多肽合成儀使用固相方法製得。亦參見美國專利號5,807,715；4,816,567；及6,331,415。
異源共軛抗體(包含兩個共價接合之抗體)亦在本發明之範圍內。此抗體已用於使免疫系統細胞靶向針對不期望細胞(美國專利號碼4,676,980)，且用於治療HIV感染(PCT公開案號WO 91/00360及WO 92/200373；EP 03089)。異源共軛抗體可使用任何便利之交聯方法製得。適當之交聯劑及技術為技術中所詳知，且述於美國專利號碼4,676,980中。
嵌合或雜交抗體亦可使用已知之合成蛋白化學法於體外製得，包括涉及交聯劑者。例如，免疫毒素可使用二硫鍵交換反應或藉形成硫醚鍵而建構。用於此目的之適當試劑實例包括亞胺基硫醇酯(iminothiolate)及4-巰基丁醯亞胺酸甲酯(methyl-4-mercaptobutyrimidate)。
重組人源化抗體中，Fcγ部分可予修飾以避免與Fcγ受體及補體及免疫系統之交互作用。製備此抗體之技術述 於WO 99/58572中。例如，恆定區可工程化成更類似於人類恆定區以避免該抗體用於臨床試驗或於人類體內治療時產生免疫反應。例如參見美國專利號碼5,997,867及5,866,692。
本發明涵蓋對本文所述之本發明變體之抗體及多肽的修飾，包括不會顯著地影響彼等性質之功能同等性抗體及具有增強或降低活性及/或親和力之變體。例如，胺基酸序列可予突變以得到對BCMA及/或CD3具有期望結合親和力之抗體。多肽之修飾於技術中為常規操作且不必詳細述於本文中。修飾多肽之實例包括具有胺基酸殘基之保守性取代的多肽、不會顯著不利地改變功能活性之胺基酸的一或多個缺失或加入、或者其使多肽對其配體之親和力完善(增強)、或化學類似物之使用。
胺基酸序列之插入包括長度範圍由一個殘基至含有一百或更多殘基之多肽的胺基端及/或羧基端融合，以及單一或多重胺基酸殘基之序列內插人。終端插入的實例包括具有N端甲硫胺醯基殘基的抗體或融合至抗原決定位標籤的抗體。抗體分子之其他插入變體包括將可增加抗體於血液循環中半生期的酵素或多肽融合至抗體之N端或C端。
取代之變體於抗體分子中具有至少一個胺基酸殘基被移除且於其位置插入不同的殘基。最受關注之供取代性突變形成的部位包括高變區，但亦可考慮FR改變。保守性取代乃示於表5中標題“保守性取代”之下者。如果此取代 導致生物活性之改變，則可引入表5中標示為“例示取代”或如下文有關胺基酸類別更進一步所述地進行更實質改變，且進行產物之篩選。
抗體生物學性質中之實質修飾係藉由選擇取代而達成，該選擇取代對維持(a)取代區域中多肽骨架的結構，例如，片層或螺旋構形，(b)分子於標靶部位的電荷或疏水性，或(c)側鏈的大小的效應方面的差異顯著。天然存在之胺基酸殘基以共同之側鏈性質為基準分成以下群組：(1)非極性：正白胺酸、Met、Ala、Val、Leu、Ile；(2)極性不帶電荷：Cys、Ser、Thr、Asn、Gln；(3)酸性(帶負電荷)：Asp、Glu；(4)鹼性(帶正電荷)：Lys、Arg；(5)影響鏈取向的殘基：Gly、Pro；及(6)芳族：Trp、Tyr、Phe、His。
非保守性取代係藉以這些類別中之一種類別的成員交換另一類別的成員而製得。
未涉及保持抗體適當構形的任何半胱胺酸殘基亦可經取代，通常以絲胺酸取代，以改善分子的氧化穩定性及防止反常之交聯。相反地，半胱胺酸鍵可加至抗體中以改善其穩定性，尤其當該抗體為抗體片段諸如Fv片段時。
胺基酸修飾的範圍可由改變或修飾一或多個胺基酸到完全重設計一個區，諸如可變區。可變區的改變可改變結合親和力及/或特異性。一些實施態樣中，只有一個至五個保守性胺基酸取代於CDR結構域內進行。其他實施態樣中，只有一個至三個保守性胺基酸取代於CDR結構域內進行。又其他實施態樣中，CDR結構域為CDR H3及/或CDR L3。
修飾亦包括醣基化及非醣基化多肽，以及具有其他轉譯後修飾的多肽，諸如不同糖類之醣基化、乙醯化、及磷酸化。抗體在其恆定區的保守位置醣基化(Jefferis and Lund,Chem.Immunol.65：111-128,1997；Wright and Morrison,TibTECH 15：26-32,1997)。免疫球蛋白之寡醣側鏈影響蛋白質的功能(Boyd et al.,Mol.Immunol.32：1311-1318,1996；Wittwe and Howard,Biochem.29：4175-4180,1990)及醣蛋白之部分與部分之間的分子內交互作用，其可影響醣蛋白之構形及呈現之三維表面(Jefferis and Lund,supra；Wyss and Wagner,Current Opin.Biotech.7：409-416,1996)。寡醣亦可以特異性識別結構為基礎將給定之醣蛋白靶向某些分子。抗體之醣基化亦已報告可影響抗體依賴性細胞之細胞毒性(ADCC)。尤其，具有β(1,4)-N-乙醯基葡萄糖胺基轉移酶III(GnTIII)之四環素調節性表現之CHO細胞，二等分GlcNAc之醣基轉移酶催化性形成，經報告具有改善之ADCC活性(Umana et al.,Mature Biotech.17：176-180,1999)。
抗體之醣基化典型地為N連接性或O連接性。N連接性意指醣類部分附接至天冬醯胺酸殘基的側鏈。三肽序列天冬醯胺酸-X-絲胺酸、天冬醯胺酸-X-蘇胺酸、及天冬醯胺酸-X-半胱胺酸(其中X為除了脯胺酸以外之任何胺基酸)為用於將醣類部分酵素附接至天冬醯胺酸側鏈之識別序列。因此，這些三肽序列於多肽中之存在可產生潛在之醣基化部位。O連接性醣基化意指糖類N-乙醯基半乳糖 胺、半乳糖、或木糖之一者附接至羥基胺基酸，更常為絲胺酸或蘇胺酸，雖然5-羥基脯胺酸或5-羥基離胺酸亦可使用。
醣基化部位加至抗體中的方法係便利地藉改變胺基酸序列使其含有一或多個上述三肽序列(用於N連接性醣基化的部位)而完成。此改變亦可藉將一或多個絲胺酸或蘇胺酸殘基(用於O連接性醣基化的部位)加至初始抗體序列中或進行取代而製得。
抗體之醣基化樣式亦可改變而不會改變根本的核苷酸序列。醣基化大幅地依用以表現抗體的宿主細胞而定。既然用於表現重組醣蛋白例如抗體以作為潛在療法之細胞型式鮮少為天然細胞，故抗體醣基化模式的變化是可預期的(例如參見Hse et al.,J.Biol.Chem.272：9062-9070,1997)。
除了宿主細胞的選擇之外，抗體之重組製造期間影響醣基化的因素亦包括生長模式、培養基配方、培養物密度、加氧作用、pH、純化方案等等。有各種方法已被提出於特定宿主有機體中達成改變醣基化樣式，包括引入或過度表現某些涉及寡醣製造的酵素(美國專利號碼5,047,335；5,510,261及5,278,299)。醣基化、或某些醣基化型式，可由醣蛋白中酵素性地移除，例如使用醣苷內切酶H(Endo H)、N-醣苷酶F、醣苷內切酶F1、醣苷內切酶F2、醣苷內切酶F3。此外，重組宿主細胞在處理某些多醣型式中可基因工程化成具有缺陷。這些及類似的技術 於技術中已詳知。
一種修飾方法包括使用技術中已知之偶合技術，包括但不限於酵素方法、氧化取代及螯合。修飾可例如用於免疫分析法之標記的附接。修飾多肽係使用技術中已確立之步驟製得且可使用技術中已知之標準分析法篩選，其中有一些乃述於下文及實例中。
本發明之一些實施態樣中，抗體包含經修飾之恆定區，諸如具有增加對人類Fc γ受體親和力之恆定區，為免疫惰性或部分惰性，例如並不會誘發補體媒介性溶解、不會刺激抗體依賴性細胞媒介性細胞毒性(ADCC)、或其不會活化巨噬細胞；或於一或多種下列者中具有減低之活性(與未修飾之抗體相比)：誘發補體媒介性溶解、刺激抗體依賴性細胞媒介性細胞毒性(ADCC)、或活化小神經膠質細胞。恆定區之不同修飾可用於達到最適程度及/或組合之效應功能。例如參見Morgan et al.,Immunology 86：319-324,1995；Lund et al.,J.Immunology 157：4963-9 157：4963-4969,1996；Idusogie et al.,J.Immunology 164：4178-4184,2000；Tao et al.,J.Immunology 143：2595-2601,1989；及Jefferis et al.,Immunological Reviews 163：59-76,1998。一些實施態樣中，恆定區係如同Eur.J.Immunol.,1999,29：2613-2624；PCT專利申請案號PCT/GB99/01441；及/或英國專利申請案號9809951.8所述地修飾。其他實施態樣中，抗體包含人類重鏈IgG2恆定區，其包含下列之突變：A330P331至 S330S331(胺基酸係參照野生型IgG2序列編號)。Eur.J.Immunol.,1999,29：2613-2624。又其他實施態樣中，針對N-連接醣基化地將恆定區去醣基化。一些實施態樣中，恆定區係藉將醣基化胺基酸殘基進行突變或側接作為恆定區中識別序列之一部分的殘基予以針對N-連接醣基化地去醣基化。例如，N-醣基化部位N297可突變成A、Q、K、或H。參見Tao et al.,J.Immunology 143：2595-2601,1989；及Jefferis et al.,Immunological Reviews 163：59-76,1998。一些實施態樣中，針對N-連接醣基化地將恆定區去醣基化。可針對N-連接醣基化地將恆定區予以酵素性地(諸如藉酵素PNGase移除醣類)去醣基化或者於缺乏醣基化之宿主細胞中表現而將恆定區予以去醣基化。
其他的抗體修飾包括已如同於PCT公開案號WO 99/58572所述地修飾之抗體。這些抗體除了針對標靶分子之結合結構域之外，亦包含效應結構域，該效應結構域具有實質地同源於所有或部分之人類免疫球蛋白重鏈恆定區的胺基酸序列。這些抗體可結合標靶分子而不會誘發顯著的補體依賴性溶解、或標靶之細胞媒介性破壞。一些實施態樣中，效應結構域可特異性地結合FcRn及/或FcγRIIb。這些典型地以衍生自二或多個人類免疫球蛋白重鏈CH2結構域之嵌合結構域為基底。依此方式修飾之抗體特別適用於慢性抗體療法，以避免慣用抗體療法之發炎及其他不利反應。
本發明包括親和力成熟之實施態樣。例如，親和力成 熟之抗體可藉技術中已知之步驟製得(Marks et al.,Bio/Technology,10：779-783,1992；Barbas et al.,Proc Nat.Acad.Sci,USA 91：3809-3813,1994；Schier et al.,Gene,169：147-155,1995；Yelton et al.,J.Immunol.,155：1994-2004,1995；Jackson et al.,J.Immunol.,154(7)：3310-9,1995,Hawkins et al.,J.Mol.Biol.,226：889-896,1992；及PCT公開案號WO2004/058184)。
下列方法可用以調節抗體之親和力且將CDR特徵化。一種將抗體CDR特徵化及/或改變(諸如改善)多肽諸如抗體之結合親和力的方法稱為"文庫掃描式突變形成法"。通常，文庫掃描式突變形成法之運作如下。使用技術認可之方法，將CDR之一或多個胺基酸位置以二或多個(諸如3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、或20個)胺基酸替代。此產生小型的殖株文庫(一些實施態樣中，每個分析的胺基酸位置一個文庫)，每一者具有二或多個成員之複雜性(如果二或多個胺基酸於每一位置經取代)。通常，文庫亦包括包含天然(未經取代)胺基酸之殖株。篩選每一文庫中小數目殖株例如約20-80個殖株(依文庫之複雜性而定)之針對標靶多肽(或其他結合標靶)的親和力，且鑑定具有增加的、相同的、降低的、或無結合力之候選者。測定結合親和力之方法於技術中已詳知。結合親和力可使用BiacoreTM表面電漿子共振分析法測定，其偵測約2倍或更大之結合親和力差異。當起始抗體已以相對高之親和力(例如KD約10nM或 更低)結合時，BiacoreTM特別有用。使用BiacoreTM表面電漿子共振進行之篩選己述於本文之實例中。
結合親和力可使用Kinexa Biocensor、閃爍接近分析法、ELISA、ORIGEN免疫分析法(IGEN)、螢光淬滅法、螢光轉移法、及/或酵母菌展現法測定。結合親和力亦可使用適當之生物分析法篩選。
一些實施態樣中，使用技術認可之突變形成法(其中有一些述於本文中)將CDR的每一個胺基酸位置以所有20個天然胺基酸替代(一些實施態樣中，一次一個)。此產生小型的殖株文庫(一些實施態樣中，每個分析的胺基酸位置一個文庫)，每一者具有20個成員之複雜性(如果所有20個胺基酸於每一位置經取代)。
一些實施態樣中，待篩選之文庫包括二或多個位置之取代，其可在同一CDR中或在二或多個CDR中。因此，文庫可包含於一個CDR中之二或多個位置的取代。文庫可包含於二或多個CDR中之二或多個位置的取代。文庫可包含3、4、5、或多個位置之取代，該位置於二、三、四、五或六個CDR中發現。此取代可使用低重疊性密碼子製得。例如參見Balint et al.,Gene 137(1)：109-18,1993之表2。
CDR可為CDRH3及/或CDRL3。CDR可為一或多個CDRL1、CDRL2、CDRL3、CDRH1、CDRH2、及/或CDRH3。CDR可為Kabat CDR、Chothia CDR、或延伸CDR。
可將具有改善結合力之候選者定序，藉此鑑定可導致親和力改善之CDR取代突變體(亦稱為"改善型"取代)。亦可將結合之候選者定序，藉以鑑定保持結合之CDR取代。
可進行多回合之篩選。例如，具有改善結合力之候選者(每一者包含於一或多個CDR之一或多個位置之胺基酸取代)亦可用於第二文庫之設計，該第二文庫於每一經改善的CDR位置至少含有初始及經取代胺基酸(亦即位在取代突變體顯現經改善結合力之CDR的胺基酸位置)。此文庫之製備、及篩選或選擇乃進一步討論於下。
文庫掃描式突變形成法亦提供將CDR特徵化之方法，在具有經改善結合力、相同結合力、降低結合力或無結合力之殖株頻率範圍內亦提供與每一胺基酸位置對於抗體-抗原複合物之穩定性的重要性有關的訊息。例如，如果CDR位置當改變成全部20個胺基酸時仍保留結合力，則彼位置經鑑定為不太可能是抗原結合所需者。相反地，如果CDR位置在僅小百分比的取代中仍保留結合力時，則彼位置經鑑定為是對CDR功能具重要性的位置。故，文庫掃描式突變形成法產生有關於可改變成許多不同胺基酸(包括所有20個胺基酸)之位置、及不可改變或僅可改變成少許胺基酸之CDR位置的訊息。
具有改善之親和力的候選者可組合於第二文庫中，其包括經改善之胺基酸、於彼位置之初始胺基酸、且可進一步包括於彼位置之額外取代，依所期望之文庫的複雜性或 依使用期望篩選法或選擇法所允許之文庫的複雜性而定。此外，如有需要，相鄰之胺基酸位置可隨機化成至少二或多個胺基酸。相鄰胺基酸之隨機化可允許突變CDR中之額外構形彈性，其可接著允許或促進較大數量之改善型突變的引入。文庫亦可包含在第一回合篩選中並未顯示改善之親和力的位置之取代。
使用技術中已知之任何方法來篩選第二文庫之具有改善及/或改變之結合親和力的文庫成員，包括使用BiacoreTM表面電漿子共振分析法篩選，及使用技術中已知之用於選擇之方法選擇，包括噬菌體展現法、酵母菌展現法、及核糖體展現法。
本發明亦提供組成物，其包含共軛至(例如連接至)可促進偶合至固體載體(諸如生物素或抗生物素蛋白)之劑的抗體。為簡單起見，就一般對於提及之抗體所了解，這些方法應用在本文所述之任何BCMA抗體實施態樣。軛合通常意指如本文所述地將這些組份連接。連接(其通常將這些組份至少鄰近締合地固定以供投予)可以許多方式達成。例如，劑與抗體之間的直接反應在當每一者均具有可與其他者反應的取代基時是可行的。例如，一者上之親核基諸如胺基或巰基，可與其他者上之含羰基基團諸如酐或醯鹵、或與含良好脫離基(例如鹵化物)之烷基反應。
另一方面，本發明提供製造本文所述任何多核苷酸之方法。
互補於任何此序列之多核苷酸亦為本發明所涵蓋。多 核苷酸可為單股(編碼或反義)或雙股，且可為DNA(基因組、cDNA或合成)或RNA分子。RNA分子包括HnRNA分子，其含有內含子且以一對一方式相應於DNA分子，及包括mRNA分子，其並不含有內含子。額外之編碼或非編碼序列可(但不必)存在於本發明多核苷酸內，而多核苷酸可(但不必)連接至其他分子及/或載體材料。
多核苷酸可包含天然序列(亦即編碼抗體或其一部分之內源性序列)或者可包含此序列之變體。相對於天然免疫反應分子，多核苷酸變體含有一或多個取代、加入、缺失及/或插入而使得編碼多肽的免疫反應性不被減弱。對編碼多肽的免疫反應性之效應通常可如本文所述地評估。與編碼天然抗體或其一部分的多核苷酸序列相較，變體較佳地顯現至少約70%一致性、更佳地至少約80%一致性、又更佳地至少約90%一致性、且最佳地至少約95%一致性。
當兩個序列如以下所述地比對以實現最大對應性時，如果此兩個序列中的核苷酸或胺基酸序列相同，則稱此二多核苷酸或多肽序列為"完全相同"。兩個序列間的比較典型地係藉於比較窗口上比較序列之一致性及比較局部區域的序列類似性來進行。本文所用之“比較窗口”意指至少約20個相連位置，通常30至約75個、或40個至約50個相連位置之區段，其中序列可與相同數目之相連位置的參考序列於兩個序列經過最適化比對後相比較。
供比較用之序列的最適比對可使用Lasergene生物信 息學軟體套件(DNASTAR,Inc.,Madison,WI)中的Megalign程式、使用預設參數進行。此程式具體表現下列參考資料中所述之一些比對方案：Dayhoff,M.O.,1978,A model of evolutionary change in proteins-Matrices for detecting distant relationships.In Dayhoff,M.O.(ed.)Atlas of Protein Sequence and Structure,National Biomedical Research Foundation,Washington DC Vol.5,Suppl.3,pp.345-358；Hein J.,1990,Unified Approach to Alignment and Phylogenes pp.626-645 Methods in Enzymology vol.183,Academic Press,Inc.,San Diego,CA；Higgins,D.G.and Sharp,P.M.,1989,CABIOS 5：151-153；Myers,E.W.and Muller W.,1988,CABIOS 4：11-17；Robinson,E.D.,1971,Comb.Theor.11：105；Santou,N.,Nes,M.,1987,Mol.Biol.Evol.4：406-425；Sneath,P.H.A.and Sokal,R.R.,1973,Numerical Taxonomy the Principles and Practice of Numerical Taxonomy,Freeman Press,San Francisco,CA；Wilbur,W.J.and Lipman,D.J.,1983,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 80：726-730。
較佳地，"序列一致性百分比"係藉將兩個最適比對的序列於至少20個位置的比較窗口上比較而測知，其中與供兩個序列之最適比對的參考序列(其並不包含加入或缺失)相比，比較窗口中之一部分多核苷酸或多肽序列可包括20百分比或更低，通常5至15百分比、或10至12百分比之加入或缺失(例如裂隙)。百分比之計算係藉測量兩 種序列均存在之完全相同之核酸鹼基或胺基酸殘基的位置數以得匹配位置數，將匹配位置數除以參考序列之位置總數(亦即窗口大小)，再乘以100，即得序列一致性百分比。
變體亦可，或者另外地，實質同源於天然基因、或其部分或補體。此多核苷酸變體可於中度嚴格條件下雜交至編碼天然抗體(或互補序列)之天然存在DNA序列。
適當之“中度嚴格條件”包括於5 X SSC、0.5% SDS、1.0mM EDTA(pH 8.0)之溶液中預清洗；於50℃-65℃、5 X SSC雜交過夜；其後於65℃以含0.1%SDS之各2X、0.5X及0.2X SSC清洗20分鐘兩次。
如本文所用，"高度嚴格條件"或"高嚴格條件"為下列者：(1)使用低離子強度及高溫以供清洗，例如0.015M氯化鈉/0.0015M檸檬酸鈉/0.1%十二烷基硫酸鈉於50℃；(2)雜交期間使用變性劑諸如甲醯胺，例如，50%(v/v)甲醯胺連同0.1%牛血清白蛋白/0.1% Ficoll/0.1%聚乙烯基吡咯啶酮/50mM磷酸鈉緩衝液pH 6.5連同750mM氯化鈉、75mM檸檬酸鈉於42℃；或(3)使用50%甲醯胺、5 x SSC(0.75M NaCl、0.075M檸檬酸鈉)、50mM磷酸鈉(pH 6.8)、0.1%焦磷酸鈉、5 x鄧哈特溶液(Denhardt’s solution)、音波處理之鮭精DNA(50μg/ml)、0.1% SDS、及10%硫酸葡聚糖於42℃，及於42℃於0.2 x SSC(氯化鈉/檸檬酸鈉)中清洗及於50%甲醯胺於55℃清洗，其後以含EDTA之0.1 x SSC於55℃高 度嚴格清洗。熟知技術者理解依照符合因子諸如探針長度等等之所需而調整溫度、離子強度等等。
熟諳此術者應理解，因為基因密碼之退化性的結果，有許多核苷酸序列其編碼本文所述之多肽。這些多核苷酸中有一些帶有與任何天然基因之核苷酸序列的最小同源性。但是，因為密碼子使用之差異而有所變化之多核苷酸特別地為本發明所設想的。此外，包含本文所提供多核苷酸序列之對偶基因亦在本發明範圍內。對偶基因為內源性基因，其因為核苷酸之一或多個突變諸如缺失、加入及/或取代而改變。所得mRNA及蛋白可(但不必)具有改變的結構或功能。對偶基因可使用標準技術鑑定(例如雜交法、擴增法及/或資料庫序列比較法)。
本發明之多核苷酸可使用化學合成法、重組法、或PCR獲得。化學多核苷酸合成法為技術中已詳知且不必於本文中詳細說明。熟諳此術者可使用本文提供的序列及市售之DNA合成儀來製得期望之DNA序列。
在使用重組法製造多核苷酸方面，可將包含期望序列之多核苷酸插入適當載體中，接著可將該載體引入適當宿主細胞中以供複製及擴增，如同本文進一步討論。多核苷酸可藉技術中已知之任何方法插入宿主細胞中。細胞係藉將外源性多核苷酸藉直接攝取、細胞內吞作用、轉染法、F-配合或電穿孔法引入而轉型。一旦引入，該外源性多核苷酸可以非整合載體(諸如質粒)形式保持於細胞內或者整合至宿主細胞基因組中。所擴增之多核苷酸可由宿主細胞 藉技術中詳知之方法分離出來。例如參見Sambrook et al.,1989。
另外，PCR容許DNA序列的再生。PCR技術為技術中詳知且述於美國專利號碼4,683,195、4,800,159、4,754,065及4,683,202、以PCR：The Polymerase Chain Reaction,Mullis et al.eds.,Birkauswer Press,Boston,1994中。
RNA可藉使用經分離之DNA於適當載體中，再將其插入適當宿主細胞中而得。當細胞複製且DNA轉錄成RNA時，RNA可接著使用技術中詳知的方法分離出來，例如如同於Sambrook et al.,1989，同上所提及者。
適當之選殖載體可根據標準技術建構，或者可選自技術中可得之大量選殖載體中。雖然所選出之選殖載體可根據所欲使用的宿主細胞而變化，但可用之選殖載體通常具有自我複製的能力、可具有針對特定限制性核酸內切酶的單一標靶，且/或可帶有標記基因以可用於選擇含有載體之殖株。適當實例包括質粒及細菌病毒，例如pUC18、pUC19、Bluescript(例如pBS SK+)及其衍生物、mp18、mp19、pBR322、pMB9、ColE1、pCR1、RP4、噬菌體DNA、及穿梭載體諸如pSA3及pAT28。這些及許多其他選殖載體可由商業販售商諸如BioRad、Strategene、及Invitrogen得到。
表現載體通常為可複製之多核苷酸建構，其含有根據本發明之多核苷酸。這意味著表現載體必需可於宿主細胞 中以游離基因體或以染色體DNA之完整部分的形式複製。適當之表現載體包括(但不限定於)質粒、病毒載體，包括腺病毒、腺相關性病毒、反轉錄病毒、黏粒、及揭示於PCT公開號WO 87/04462中之表現載體。載體組份通常可包括但不限於一或多種下列者：信號序列；複製起點；一或多種標記基因；適當轉錄調控元件(諸如啟動子、增強子及終止子)。在表現(亦即轉譯)方面，通常亦需要一或多種轉譯調控元件諸如核糖體結合位、轉譯起始位及終止密碼子。
含有所關注多核苷酸之載體可藉任何一些適當方法包括電穿孔法、轉染法使用氯化鈣、氯化銣、磷酸鈣、DEAE-聚葡萄糖、或其他物質；基因槍轉化法；脂質轉染法；及感染法(例如其中載體為感染劑諸如疫苗病毒)引入宿主細胞中。引入性載體或多核苷酸之選擇通常依宿主細胞之特色而定。
本發明亦提供宿主細胞，其包含本文所述之任何多核苷酸。可過度表現異源DNA之任何宿主細胞均可用於達到分離出編碼所關注抗體、多肽或蛋白之基因的目的。哺乳動物宿主細胞之非限制性實例包括(但不限制於)COS、HeLa、及CHO細胞。亦參見PCT公開案號WO 87/04462。適當之非哺乳動物宿主細胞包括原核生物(諸如大腸桿菌(E.coli)或枯草桿菌(B.subtillis))及酵母菌(諸如釀酒酵母(S.cerevisae)、粟酒裂殖酵母(S.pombe)；或乳酸克魯維酵母(K.lactis))。較佳地，宿主細胞表現 cDNA的程度約5倍地高於、更佳地10倍地高於、甚至更佳地20倍地高於宿主細胞內如果存在之相應內源性抗體或蛋白者。篩選用於特異地結合至BCMA或BCMA結構域(例如結構域1-4)的宿主細胞係藉免疫分析法或FACS達成。過度表現所關注抗體或蛋白的細胞可被鑑定出。
使用雙特異性抗體之方法[治療之應用]
本發明之抗體(例如BCMA、CD3、或雙特異性)及抗體共軛物(例如BCMA抗體藥物共軛物)可用於各種應用包括但不限於治療性治療法及診斷性治療法中。
一方面，本發明提供治療個體之與BCMA表現有關的病症之方法。一些實施態樣中，該治療個體之與BCMA表現有關的病症之方法包含將有效量之含有如本文所述BCMA抗體或BCMA抗體共軛物之組成物(例如醫藥組成物)投予有此需求之個體。與BCMA表現有關的病症包括但不限於異常BCMA表現、經改變或反常BCMA表現、表現BCMA之惡性細胞、及增殖性失調症(例如癌症)或自體免疫失調症。
另一方面，本發明提供治療B細胞相關性癌症或表現腫瘤抗原的惡性細胞之方法。一些實施態樣中，提供治療有此治療需求之個體的B細胞相關性癌症之方法，其包含a)提供如本文所述之雙特異性抗體，及b)將該雙特異性抗體投予該患者。一些實施態樣中，提供治療個體之表現 腫瘤抗原的惡性細胞之方法，其包含將有效量之包含如本文所述雙特異性抗體之醫藥組成物投予有此治療需求之個體。
因此，一些實施態樣中，提供治療個體的癌症之方法，其包含將有效量之包含如本文所述抗體(例如BCMA、或CD3-BCMA雙特異性抗體)或BCMA抗體共軛物之組成物投予有此治療需求之個體。如本文所用，癌症可為B細胞相關性癌症包括但不限於多發性骨髓瘤(multiple myeloma)、惡性漿細胞腫瘤(malignant plasma cell neoplasm)、何杰金氏淋巴瘤(Hodgkin’s lymphoma)、結節性淋巴細胞為主型何杰金氏淋巴瘤(nodular lymphocyte predominant Hodgkin’s lymphoma)、卡勒氏病(Kahler’s disease)及骨髓瘤病(Myelomatosis)、漿細胞白血病(plasma cell leukemia)、漿細胞瘤(plasmacytoma)、B細胞前淋巴細胞白血病(B-cell prolymphocytic leukemia)、髮樣細胞白血病(hairy cell leukemia)、B細胞非何杰金氏淋巴瘤(B-cell non-Hodgkin’s lymphoma)(NHL)、急性骨髓性白血病(acute myeloid leukemia)(AML)、慢性淋巴細胞性白血病(chronic lymphocytic leukemia)(CLL)、急性淋巴細胞性白血病(acute lymphocytic leukemia)(ALL)、慢性骨髓性白血病(chronic myeloid leukemia)(CML)、濾泡性淋巴瘤(follicular lymphoma)、伯基特氏淋巴瘤(Burkitt’s lymphoma)、邊緣區淋巴瘤(marginal zone lymphoma)、被套細胞淋巴瘤(mantle cell lymphoma)、大細胞淋巴瘤 (large cell lymphoma)、前體B淋巴母細胞淋巴瘤(precursor B-lymphoblastic lymphoma)、骨髓性白血病(myeloid leukemia)、華氏巨球蛋白血症(Waldenstrom’s macroglobulienemia)、瀰漫性大B細胞淋巴瘤(diffuse large B cell lymphoma)、濾泡性淋巴瘤(follicular lymphoma)、邊緣區淋巴瘤(marginal zone lymphoma)、黏膜相關性淋巴組織淋巴瘤(mucosa-associated lymphatic tissue lymphoma)、小細胞淋巴細胞性淋巴瘤(small cell lymphocytic lymphoma)、被套細胞淋巴瘤(mantle cell lymphoma)、伯基特淋巴瘤(Burkitt lymphoma)、原發性縱隔(胸腺)大B細胞淋巴瘤(primary mediastinal(thymic)large B-cell lymphoma)、淋巴漿細胞淋巴瘤(lymphoplasmactyic lymphoma)、華氏巨球蛋白血症(Waldenström macroglobulinemia)、結內邊緣區B細胞淋巴瘤(nodal marginal zone B cell lymphoma)、脾邊緣區淋巴瘤(splenic marginal zone lymphoma)、血管內大B細胞淋巴瘤(intravascular large B-cell lymphoma)、原發性滲出性淋巴瘤(primary effusion lymphoma)、淋巴瘤樣肉芽腫病(lymphomatoid granulomatosis)、富於T細胞/組織細胞大B細胞淋巴瘤(T cell/histiocyte-rich large B-cell lymphoma)、原發性中樞神經系統淋巴瘤(primary central nervous system lymphoma)、原發性皮膚瀰漫性大B細胞淋巴瘤(腿型)(primary cutaneous diffuse large B-cell lymphoma(leg type))、老年人之EBV陽性瀰漫性大B細 胞淋巴瘤(EBV positive diffuse large B-cell lymphoma)、與發炎有關之瀰漫性大B細胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma)、血管內大B細胞淋巴瘤(intravascular large B-cell lymphoma)、ALK陽性大B細胞淋巴瘤(ALK-positive large B-cell lymphoma)、漿母細胞淋巴瘤(plasmablastic lymphoma)、HHV8相關性多中心型克斯特曼病(HHV8-associated multicentric Castleman disease)中產生之大B細胞淋巴瘤、特徵介於瀰漫性大B細胞淋巴瘤與伯基特淋巴瘤之間的未分類B細胞淋巴瘤、特徵介於瀰漫性大B細胞淋巴瘤與傳統何杰金氏淋巴瘤之間的未分類B細胞淋巴瘤、及其他B細胞相關性淋巴瘤。
一些實施態樣中，提供抑制具有表現BCMA之惡性細胞的個體之腫瘤生長或進展之方法，其包含將有效量之如本文所述之BCMA抗體、CD3-BCMA雙特異性抗體、或BCMA抗體共軛物投予有此抑制需求之個體。其他實施態樣中，提供抑制個體之表現BCMA之細胞的轉移之方法，其包含將有效量之包含如本文所述BCMA抗體、CD3-BCMA雙特異性抗體、或BCMA抗體共軛物之組成物投予有此抑制需求之個體。其他實施態樣中，提供誘導個體之惡性細胞的腫瘤消退之方法，其包含將有效量之包含如本文所述BCMA抗體、CD3-BCMA雙特異性抗體、或BCMA抗體共軛物之組成物投予有此誘導需求之個體。
一些實施態樣中，提供治療個體的自體免疫失調症之 方法，其包含將有效量之包含如本文所述BCMA抗體、CD3-BCMA雙特異性抗體、或BCMA抗體共軛物之組成物投予有此治療需求之個體。
如本文所用，自體免疫失調症包括但不限於全身性紅斑性狼瘡、類風濕性關節炎、糖尿病(第I型)、多發性硬化、愛迪生氏病(Addison’s disease)、乳糜瀉、皮肌炎、葛瑞夫茲氏病(Graves’ disease)、橋本氏甲狀腺炎、重症肌無力、惡性貧血、反應性關節炎、修格連氏症候群(Sjogren syndrome)、急性瀰漫性腦脊髓炎、無γ球蛋白血症、肌萎縮性側索硬化症、僵直性脊椎炎、抗磷脂症候群、抗合成酶症候群、異位性過敏、異位性皮膚炎、自體免疫性腸病變、自體免疫性溶血性貧血、自體免疫性肝炎、自體免疫性內耳病、自體免疫性淋巴增殖症候群、自體免疫性周邊神經病變、自體免疫性胰臟炎、自體免疫性多內分泌症候群、自體免疫性黃體素皮膚炎、自體免疫性血小板減少性紫斑症、自體免疫性蕁麻疹、自體免疫性葡萄膜炎、貝塞特氏病(Bechet’s disease)、卡斯爾曼氏病(Castleman’s disease)、冷凝集素病、克隆氏病(Crohn’s disease)、皮肌炎、嗜伊紅性筋膜炎、胃腸道類天疱瘡、古帕斯捷氏症候群(Goodpasture’s syndrome)、格林-巴利症候群(Guillain-Barré syndrome)、化膿性汗腺炎、特發性血小板減少性紫斑症、猝睡症、尋常型天疱瘡、惡性貧血、多發性肌炎、原發性膽汁性肝硬化、復發性多軟骨炎、風濕熱、顯動脈炎、橫貫性脊髓炎、潰瘍性結腸炎、 未分化型結締組織疾病、血管炎、及華格納氏肉芽腫(Wegener’s granulomatosis)。
另一方面，本發明提供有效量之組成物(例如醫藥組成物)，其包含如本文所述之抗體(例如BCMA或CD3-BCMA雙特異性)或BCMA抗體共軛物，該抗體(例如BCMA或CD3-BCMA雙特異性)或BCMA抗體共軛物用於治療有此治療需求之個體之與BCMA表現有關的病症(例如癌症或自體免疫失調症)。一些實施態樣中，提供有效量之組成物(例如醫藥組成物)，其包含如本文所述之抗體(例如BCMA或CD3-BCMA雙特異性)或BCMA抗體共軛物，該抗體(例如BCMA或CD3-BCMA雙特異性)或BCMA抗體共軛物用於抑制具有表現BCMA之惡性細胞的個體之腫瘤生長或進展。一些實施態樣中，提供有效量之組成物(例如醫藥組成物)，其包含如本文所述之抗體(例如BCMA或CD3-BCMA雙特異性)或BCMA抗體共軛物，該抗體(例如BCMA或CD3-BCMA雙特異性)或BCMA抗體共軛物用於抑制有此抑制需求之個體之表現BCMA的惡性細胞之轉移。一些實施態樣中，提供有效量之組成物(例如醫藥組成物)，其包含如本文所述之抗體(例如BCMA或CD3-BCMA雙特異性)或BCMA抗體共軛物，該抗體(例如BCMA或CD3-BCMA雙特異性)或BCMA抗體共軛物用於誘導具有表現BCMA之惡性細胞的個體之腫瘤消退。
另一方面，本發明提供如本文所述之抗體(例如 BCMA或CD3-BCMA雙特異性)或BCMA抗體共軛物，其係用於治療有此治療需求之個體之與BCMA表現有關的病症(例如癌症或自體免疫失調症)。一些實施態樣中，提供如本文所述之抗體(例如BCMA或CD3-BCMA雙特異性)或BCMA抗體共軛物，其係用於抑制具有表現BCMA之惡性細胞的個體之腫瘤生長或進展。一些實施態樣中，提供如本文所述之抗體(例如BCMA或CD3-BCMA雙特異性)或BCMA抗體共軛物，其係用於抑制有此抑制需求之個體之表現BCMA的惡性細胞之轉移。一些實施態樣中，提供如本文所述之抗體(例如BCMA或CD3-BCMA雙特異性)或BCMA抗體共軛物，其係用於誘導具有表現BCMA之惡性細胞的個體之腫瘤消退。
另一方面，本發明提供使用如本文所述之抗體(例如BCMA或CD3-BCMA雙特異性)或BCMA抗體共軛物於製造醫藥之用途，該醫藥用於治療與BCMA表現有關的病症(例如癌症或自體免疫失調症)。一些實施態樣中，提供使用如本文所述之抗體(例如BCMA或CD3-BCMA雙特異性)或BCMA抗體共軛物於製造醫藥之用途，該醫藥用於抑制腫瘤生長或進展。一些實施態樣中，提供使用如本文所述之抗體(例如BCMA或CD3-BCMA雙特異性)或BCMA抗體共軛物於製造醫藥之用途，該醫藥用於抑制表現BCMA之惡性細胞的轉移。一些實施態樣中，提供使用如本文所述之抗體(例如BCMA或CD3-BCMA雙特異性)或BCMA抗體共軛物於製造醫藥之用途，該醫藥用於 誘導腫瘤消退。
另一方面，提供偵測、診斷、及/或監測與BCMA表現有關的病症之方法。例如，如本文所述之抗體(例如BCMA或CD3-BCMA雙特異性)可以可偵測之部分諸如顯影劑及酵素-基質標記進行標記。如本文所述之抗體亦可用於體內診斷分析法諸如體內造影法(例如PET或SPECT)、或染色試劑。
一些實施態樣中，本文所述之方法進一步包含將個體以額外之治療形式治療之步驟。一些實施態樣中，該額外之治療形式為額外之抗癌症療法，包括但不限於化學療法、放射、手術、荷爾蒙療法、及/或額外之免疫療法。
一些實施態樣中，該額外之治療形式包含投予除了如本文所述之抗體(例如BCMA或CD3-BCMA雙特異性)或BCMA抗體共軛物以外的一或多種治療劑之步驟。此一或多種治療劑可為化學治療劑，包括但不限於第二抗體(例如抗VEGF(血管內皮生長因子)抗體(例如AVASTIN®)、抗HER2抗體(例如HERCEPTIN®)、抗CD25抗體、抗CD33抗體、抗CD20抗體(例如RITUXAN®)、抗黏蛋白樣醣蛋白抗體、抗TNF抗體、及/或表皮生長因子受體(EGFR)抗體(例如ERBITUX®))、血管生成抑制劑、細胞毒性劑(例如蒽環類(例如道諾紅黴素(daunorubicin)、阿黴素(doxorubicin)、表柔比星(epirubicin)、艾達黴素(idarubicin)、戊柔比星(valrubicin)、及米托蒽醌(mitoxantrone))、紫杉烷(taxane)(例如太平洋紫杉醇 (paclitaxel)及歐洲紫杉醇(docetaxel))、多拉司他汀(dolastatin)、倍癌黴素(duocarmycin)、烯二炔(enediyne)、格爾德黴素(geldanamycin)、美坦素(maytansine)、嘌呤黴素(puromycin)、長春花生物鹼(vinca alkaloid)(例如長春新鹼(vincristine))、拓樸異構酶抑制劑(例如伊妥波苷(etoposide))、微管溶素(tubulysin)、嘧啶類似物(例如氟尿嘧啶(fluorouracil))、含鉑劑(例如順鉑(cisplatin)、卡鉑(carboplatin)、及奧沙利鉑(oxaliplatin))、烷基化劑(例如米爾法蘭(melphalan)、環磷醯胺(cyclophosphamide)、或卡莫司汀(carmustine))及半星芒素(hemiasterlin))、免疫調節劑(例如普賴松(prednisone)及雷利米得(lenalidomide)(REVLIMID®))、抗發炎劑(例如地塞米松(dexamethasone))、芳香酶抑制劑(例如阿那曲唑(anastrozole)、伊西美坦(exemestane)、來曲唑(letrozole)、伏氯唑(vorozole)、福美司坦(formestane)、或睾內酯(testolactone))、蛋白酶體抑制劑(例如硼替左米(bortezomib)諸如VELCADE®([(1R)-3-甲基-1-[[(2S)-1-側氧基-3-苯基-2-[(吡基羰基)胺基]丙基]胺基]丁基]酸或卡菲左米(carfilzomib))，及其他劑諸如泰莫西芬(tamoxifen)。
例如，一些實施態樣中，提供治療多發性骨髓瘤之方法，其包含將有效量之組成物投予有此治療需求之患者，該組合物包含如本文所述之抗體(例如BCMA或CD3-BCMA雙特異性)或BCMA抗體共軛物及一或多種其他治 療劑諸如化學治療劑(例如阿黴素(doxorubicin)或卡菲左米(carfilzomib))或沙利多邁(thalidomide)或其衍生物(例如雷利米得(lenalidomide)(REVLIMID®))。一些實施態樣中，該一或多種其他治療劑選自由以下所組成之群組：硼替左米(bortezomib)(例如VELCADE®)、米爾法蘭(melphalan)、普賴松(prednisone)、阿黴素(doxorubicin)、雷利米得(lenalidomide)、沙利多邁(thalidomide)、普賴松(prednisone)、卡莫司汀(carmustine)、伊妥波苷(etoposide)、順鉑(cisplatin)、環磷醯胺(cyclophosphamide)、卡菲左米(carfilzomib)、及長春新鹼(vincristine)。一些實施態樣中，該其他治療劑為硼替左米(bortezomib)(例如VELCADE®)、米爾法蘭(melphalan)、雷利米得(lenalidomide)(REVLIMID®)、卡菲左米(carfilzomib)、阿黴素(doxorubicin)、或普賴松(prednisone)。因此，提供治療多發性骨髓瘤之方法，其包含將有效量之組成物投予有此治療需求之患者，該組合物包含如本文所述之抗體(例如BCMA或CD3-BCMA雙特異性)或BCMA抗體共軛物及一或多種選自由以所組成之群組的其他治療劑：硼替左米(bortezomib)、雷利米得(lenalidomide)、卡菲左米(carfilzomib)、及阿黴素(doxorubicin)。一些實施態樣中，該患者為復發或對先前之多發性骨髓瘤療法反應不佳。
抗體(例如BCMA或CD3-BCMA雙特異性)或BCMA抗體共軛物可經由任何適當路徑投予個體。熟諳此術者應 該理解的是，本文所述之實例不意在限制而是可利用之技術的闡述。因此，一些實施態樣中，抗體(例如BCMA或CD3-BCMA雙特異性)或BCMA抗體共軛物係根據已知之方法投予個體，諸如靜脈內(例如以團注方式)或藉於一段時間連續輸注、藉肌內、腹膜內、腦脊髓內、顱內、經皮、皮下、關節內、舌下、滑膜內、經由吹入法、鞘內、經口、吸入法或局部路徑。投予可為全身性，例如靜脈內投予、或局部化。市售之液體配方用之噴霧器包括噴射噴霧器及超音波噴霧器可用於投予。液體配方可直接噴霧，而凍乾粉末可於再構成後噴霧。另外，抗體(例如BCMA或CD3-BCMA雙特異性)或BCMA抗體共軛物可使用氟碳化物配方及計定劑量吸入器予以氣溶膠化、或以凍乾及磨碎粉末形式吸入。
一實施態樣中，抗體(例如BCMA或CD3-BCMA雙特異性)或BCMA抗體共軛物係經由部位特異性或靶向局部遞送技術投予。部位特異性或靶向局部遞送技術之實例包括各種抗體(例如BCMA或CD3-BCMA雙特異性)或BCMA抗體共軛物之各種可植入式儲庫來源、或局部遞送導管諸如輸注導管、留置導管或針導管、合成移植物、外膜包套(adventitial wrap)、分流器及支架或其他可植入裝置、部位特異性載體、直接注射、或直接應用。例如參見PCT公開案號WO 00/53211及美國專利號碼5,981,568。
抗體(例如BCMA或CD3-BCMA雙特異性)或BCMA抗體共軛物之各種配方可用於投予。一些實施態樣中，抗 體(例如BCMA或CD3-BCMA雙特異性)或BCMA抗體共軛物可以純形式投予。一些實施態樣中，抗體(例如BCMA或CD3-BCMA雙特異性)或BCMA抗體共軛物及醫藥上可接受之賦形劑可於任何配方中。醫藥上可接受之賦形劑為技術中已知，且為相對惰性物質，其可促進藥理學有效物質之投予。例如，賦形劑可提供形式或一致性、或者作為稀釋劑。適當之賦形劑包括但不限於穩定劑、濕潤劑及乳化劑、用於變化滲透壓之鹽、成膠囊劑、緩衝液、及皮膚穿透增強劑。賦形劑以及用於非經腸部及不是非經腸部藥物遞送的配方示於Remington,The Science and Practice of Pharmacy 21st Ed.Mack Publishing,2005中。
一些實施態樣中，這些劑係調配以供藉由注射(例如腹膜內、靜脈內、皮下、肌內等等)投予。因此，這些劑可與醫藥上可接受之載劑諸如鹽水、林格氏溶液(Ringer’s solution)、右旋糖溶液等等組合。特定之劑量攝服方案，亦即劑量、時間安排及重覆性，會依特定之個體及彼個體之病史而定。
如本文所述之抗體(例如BCMA或CD3-BCMA雙特異性)或BCMA抗體共軛物可使用任何適當方法包括注射法(例如腹膜內、靜脈內、皮下、肌內等等)投予。抗體(例如BCMA或CD3-BCMA雙特異性)或BCMA抗體共軛物亦可如本文所述地經由吸入法投予。通常，在抗體(例如BCMA或CD3-BCMA雙特異性)及BCMA抗體共軛物之投予方面，最初的候選劑量可為約2mg/kg。為供本發明之 目的，典型之每日劑量範圍可為約任何之下列者：3μg/kg至30μg/kg至300μg/kg至3mg/kg、至30mg/kg、至100mg/kg或更高，依上述因素而定。例如，可使用約1mg/kg、約2.5mg/kg、約5mg/kg、約10mg/kg、及約25mg/kg之劑量。在數天或更長期間之重覆投予方面，依病症而定，治療係持續進行直至症狀之期望抑制發生或直至達成足夠之治療程度例如抑制或延緩腫瘤生長/進展或癌症細胞的轉移為止。例示之投藥方案包含投予約2mg/kg之最初劑量，其後約1mg/kg抗體(例如BCMA或CD3-BCMA雙特異性)或BCMA抗體共軛物之每週維持劑量或其後每隔週約1mg/kg之維持劑量。其他例示之投藥方案包含投予增加之劑量(例如最初劑量為1mg/kg，再每星期或更長時間地逐漸增加至一或多種更高之劑量)。亦可依熟練者欲達到的藥物動力學衰減樣式而使用其他投藥方案。例如，一些實施態樣中，考慮一星期投藥一至四次。其他實施態樣中，考慮每個月或每兩個月或每三個月投藥一次。此治療之進展輕易地藉由慣用之技術及分析法監測。投藥方案(包括所用之抗體(例如BCMA或CD3-BCMA雙特異性)或BCMA抗體共軛物)可隨著時間而變化。
欲供本發明之目的，抗體(例如BCMA或CD3-BCMA雙特異性)或BCMA抗體共軛物之適當劑量將依所用之抗體(例如BCMA或CD3-BCMA雙特異性)或BCMA抗體共軛物(或其組成物)、待治療之症狀型式及嚴重性、該劑是 否係投予以供治療之目的、先前療法、患者之臨床史及對劑之反應、患者對所投予劑之清除率、及主治醫師的判斷而定。臨床醫師典型地會投予抗體(例如BCMA或CD3-BCMA雙特異性)或BCMA抗體共軛物直至劑量達到期望的結果為止。劑量及/或頻率可在治療過程期間變化。經驗考量諸如半生期，通常促成劑量的決定。例如，可與人類免疫系統諸如人源化抗體或全人類抗體相容的抗體可用以延長抗體半生期且避免抗體被宿主的免疫系統攻擊。投予頻率可在治療過程期間決定及調整，且通常(但非必要)以症狀之治療及/或抑制及/或改良及/或延緩例如腫瘤生長之抑制或延緩等等為基準。另外，抗體(例如BCMA或CD3-BCMA雙特異性)或BCMA抗體共軛物之持續釋放配方可能適當。用於達成持續釋放之各種配方及裝置於技術中已知。
一實施態樣中，抗體(例如BCMA或CD3-BCMA雙特異性)或BCMA抗體共軛物之劑量可於已給予一或多次抗體(例如BCMA或CD3-BCMA雙特異性)或BCMA抗體共軛物投予之個體中經驗地決定。個體係給予漸增劑量的抗體(例如BCMA或CD3-BCMA雙特異性)或BCMA抗體共軛物。欲評估效力，可遵循疾病的指標。
根據本發明方法之抗體(例如BCMA或CD3-BCMA雙特異性)或BCMA抗體共軛物之投予可為連續性或間歇性的，依例如接受者之生理條件(無論投予目的是否為治療性或預防性)、及熟練者已知之其他因素而定。抗體(例如 BCMA或CD3-BCMA雙特異性)或BCMA抗體共軛物之投予可在預選定之期間實質地為連續性或者可為一系列的間隔劑量。
一些實施態樣中，可存在一種以上之抗體(例如BCMA或CD3-BCMA雙特異性)或BCMA抗體共軛物。可存在至少一種、至少二種、至少三種、至少四種、至少五種不同的或更多種抗體(例如BCMA或CD3-BCMA雙特異性)或BCMA抗體共軛物。通常，彼些抗體(例如BCMA或CD3-BCMA雙特異性)或BCMA抗體共軛物可具有不會不利地互相影響之互補活性。例如，可使用一或多種下列抗體：針對BCMA或CD3上之一個抗原決定位的第一BCMA或CD3抗體及針對BCMA或CD3上之不同抗原決定位的第二BCMA或CD3抗體。
根據本發明所用之抗體(例如BCMA或CD3-BCMA雙特異性)或BCMA抗體共軛物之治療性配方係藉將具有期望純度之抗體與隨意之醫藥上可接受之載體、賦形劑或穩定劑(Remington,The Science and Practice of Pharmacy 21st Ed.Mack Publishing,2005)混合製備成凍乾配方或水性溶液形式以供貯存。可接受之載體、賦形劑、或穩定劑在所用之劑量及濃度下對接受者無毒性，且可包含緩衝液諸如磷酸鹽、檸檬酸鹽、及其他有機酸；鹽類諸如氯化鈉；抗氧化劑包括抗壞血酸及甲硫胺酸；防腐劑(諸如十八烷基二甲基苄基氯化銨；六甲基氯化銨；氯化烷基二甲基苄基銨、氯化苯索寧(benzethonium chloride)；酚、丁 基或苄基醇；對羥基苯甲酸烷酯諸如對羥基苯甲酸甲酯或丙酯；兒茶酚；間苯二酚；環己醇；3-戊醇；及m-甲酚)；低分子量(少於約10個殘基)多肽；蛋白質諸如血清白蛋白、明膠、或免疫球蛋白；親水性聚合物諸如聚乙烯基吡咯啶酮；胺基酸諸如甘胺酸、麩醯胺酸、天冬醯胺酸、組胺酸、精胺酸、或離胺酸；單醣、雙醣、及其他碳水化合物包括葡萄糖、甘露糖、或糊精；螯合劑諸如EDTA；糖類諸如蔗糖、甘露糖醇、海藻糖或山梨糖醇；鹽形成性抗衡離子諸如鈉；金屬複合物(例如鋅-蛋白複合物)；及/或非離子性表面活性劑諸如TWEENTM、PLURONICSTM或聚乙二醇(PEG)。
含有抗體(例如BCMA或CD3-BCMA雙特異性)或BCMA抗體共軛物之微脂粒係藉技術中已知之方法諸如Epstein,et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 82：3688,1985；Hwang,et al.,Proc.Natl Acad.Sci.USA 77：4030,1980；及美國專利號碼4,485,045及4,544,545中所述之方法製備。具有提高循環時間的微脂粒揭示於美國專利號碼5,013,556中。特別可用之微脂粒可藉逆相蒸發法以包含磷脂醯膽鹼、膽固醇及PEG衍生性磷脂醯乙醇胺(PEG-PE)之脂肪組成物產生。將微脂粒通過具有界定孔徑之濾器擠壓，得具有期望直徑之微脂粒。
活性成分亦可以膠態藥物遞送系統(例如微脂粒、白蛋白微球、微乳膠、奈米微粒及奈米膠囊)或聚乳膠形式截留在(例如)藉由凝聚技術或藉由介面聚合作用製得之微 膠囊例如分別為羥甲基纖維素或明膠微膠囊及聚(甲基丙烯酸甲酯)微膠囊中。此技術揭示於Remington,The Science and Practice of Pharmacy 21st Ed.Mack Publishing,2005中。
可製備持續釋放型製劑。適當之持續釋放型製劑的實例包括含有抗體之固體疏水性聚合物的半透性基質，此基質為定形製品形式，例如薄膜或微膠囊。持續釋放型基質之實例包括聚酯、水凝膠(例如，聚(2-羥乙基-甲基丙烯酸酯)、或聚(乙烯醇))、聚交酯(美國專利號碼3,773,919)、L-麩胺酸及7-L-麩胺酸乙酯之共聚物、不可降解之乙烯-乙酸乙烯酯、可降解之乳酸-羥乙酸共聚物諸如LUPRON DEPOT TM(由乳酸羥乙酸共聚物及乙酸柳菩林(leuprolide acetate)所組成之注射用微球)、乙酸異丁酯蔗糖酯、及聚-D-(-)-3-羥基丁酸。
用於體內投予之配方必需為無菌。此係藉(例如)通過無菌過濾膜過濾而輕易完成。治療性抗體(例如BCMA或CD3-BCMA雙特異性)或BCMA抗體共軛物組成物通常置於具有無菌進入端口之容器例如具有可藉由皮下注射針刺破之塞子的靜脈內溶液袋或小玻璃瓶中。
根據本發明之組成物可為單位劑型諸如片劑、丸劑、膠囊、粉末、顆粒、溶液或懸浮液、或坐藥，用於經口、非經腸部或直腸部投予、或藉吸入法或吹入法投予。
在製備固體組成物諸如片劑方面，主要活性成分係與醫藥載體例如慣用之壓片成分諸如玉米澱粉、乳糖、蔗 糖、山梨糖醇、滑石、硬脂酸、硬脂酸鎂、磷酸二鈣或樹膠、及其他醫藥稀釋劑例如水混合以形成含有本發明化合物或其無毒性醫藥上可接受之鹽的均質型混合物之固體預調配組成物。當提及這些預調配組成物為均質時，意指活性成分係均勻地分散在整個組成物中以使該組成物可輕易地次分成同等有效之單位劑型諸如片劑、丸劑及膠囊。此固體預調配組成物繼而次分成含有0.1至約500mg本發明活性成分之上述型式的單位劑型。新穎組成物之片劑或丸劑可予包衣或者另行化合以提供得到延長作用優勢之劑型。例如，片劑或丸劑可包含內部劑量或外部劑量組份，後者為包封前者之包封形式。兩種組份可藉由腸衣層分離，此腸衣層用以抵抗於胃中之崩解，而允許內部組份完整地通過十二指腸或等待延緩釋出。有各種材料可用於此腸溶層或包衣，此材料包括一些聚合酸以及聚合酸與諸如蟲膠、鯨蠟醇及乙酸纖維素等材料之混合物。
適當之表面活性劑包括(尤其)非離子劑諸如聚氧乙烯山梨糖醇酐(例如TweenTM 20、40、60、80或85)及其他山梨糖醇酐(例如SpanTM 20、40、60、80或85)。具有表面活性劑的組成物便利地包含0.05至5%之表面活性劑，且可在0.1至2.5%之間。應理解，如有需要，可加入其他成份例如甘露糖醇或其他醫藥上可接受之載劑。
適當乳膠可使用市售之脂肪乳膠諸如IntralipidTM、LiposynTM、InfonutrolTM、LipofundinTM及LipiphysanTM製得。活性成分可溶於預混合之乳膠組成物中或者另外其 可溶於油(例如大豆油、紅花子油、棉花子油、芝麻油、玉米油或杏仁油)中，且於與磷脂(例如卵磷脂、大豆磷脂或大豆卵磷脂)及水混合後形成乳膠。應理解，其他成分例如甘油或葡萄糖可加入以調節乳膠之滲性。適當乳膠典型地含有最高20%之油，例如，在5至20%之間。脂肪乳膠可包含0.1至1.0μm之間、尤其0.1至0.5μm之間的脂肪小滴，且具有5.5至8.0範圍之pH。
乳膠組成物可為藉將抗體(例如BCMA或CD3-BCMA雙特異性)或BCMA抗體共軛物與IntralipidTM或其組份(大豆油、卵磷脂、甘油及水)混合所製得者。
用於吸入或吹入之組成物包括於醫藥上可接受之水性或有機溶劑中的溶液及懸浮液、或其混合物、及粉末。液體或固體組成物可含有以上提及之適當醫藥上可接受之賦形劑。一些實施態樣中，組成物係藉口或鼻呼吸路徑投予以達局部或全身效應。於較佳地無菌醫藥上可接受之溶劑中的組成物可藉由氣體之使用進行噴霧。噴霧之溶液可由噴霧裝置中直接呼吸入或者噴霧裝置可附接至面罩、帷幕或間歇性正壓呼吸機。溶液、懸浮液或粉末組成物可由遞送配方之裝置中以適當方式投予，較佳地經口或鼻部投予。
組成物
本發明方法所用之組成物包含有效量之如本文所述之抗體(例如BCMA或CD3-BCMA雙特異性)或BCMA抗體 共軛物。此組成物以及如何調配之實例亦述於稍早之文節及下文中。一些實施態樣中，組成物包含一或多種抗體(例如BCMA或CD3-BCMA雙特異性)或BCMA抗體共軛物。例如，BCMA抗體或CD3-BCMA雙特異性抗體可識別人類BCMA或CD3-BCMA。一些實施態樣中，BCMA或CD3-BCMA抗體為人類抗體、人源化抗體、或嵌合抗體。一些實施態樣中，BCMA抗體或CD3-BCMA抗體包含恆定區，該恆定區可誘發期望免疫反應諸如抗體媒介性溶解作用或ADCC。其他實施態樣中，BCMA抗體或CD3-BCMA抗體包含恆定區，該恆定區並不會誘發不想或不期望之免疫反應諸如抗體媒介性溶解作用或ADCC。
應理解，組成物可包含一種以上之抗體(例如BCMA或CD3-BCMA雙特異性)或BCMA抗體共軛物(例如BCMA抗體或CD3-BCMA雙特異性抗體之混合物，其可識別BCMA或CD3及BCMA之不同抗原決定位)。其他例示之組成物包含一種以上之BCMA抗體、CD3-BCMA抗體、或BCMA抗體共軛物，彼等可識別相同之抗原決定位，或者包含不同物種之BCMA抗體、CD3-BCMA雙特異性抗體、或BCMA抗體共軛物，彼等係結合至BCMA(例如人類BCMA)或CD3及BCMA(人類CD3及BCMA)之不同抗原決定位。
本發明中所用之凍乾配方或水性溶液形式之組成物可進一步包含醫藥上可接受之載體、賦形劑、或穩定劑(Remington：The Science and practice of Pharmacy 21st Ed.,2005,Lippincott Williams and Wilkins,Ed.K.E.Hoover。可接受之載體、賦形劑、或穩定劑在劑量及濃度下對接受者無毒性，且可包含緩衝液諸如磷酸鹽、檸檬酸鹽、及其他有機酸；抗氧化劑包括抗壞血酸及甲硫胺酸；防腐劑(諸如十八烷基二甲基苄基氯化銨；六甲基氯化銨；氯化烷基二甲基苄基銨、氯化苯索寧(benzethonium chloride)；酚、丁基或苄基醇；對羥基苯甲酸烷酯諸如對羥基苯甲酸甲酯或丙酯；兒茶酚；間苯二酚；環己醇；3-戊醇；及m-甲酚)；低分子量(少於約10個殘基)多肽；蛋白質諸如血清白蛋白、明膠、或免疫球蛋白；親水性聚合物諸如聚乙烯基吡咯啶酮；胺基酸諸如甘胺酸、麩醯胺酸、天冬醯胺酸、組胺酸、精胺酸、或離胺酸；單醣、雙醣、及其他碳水化合物包括葡萄糖、甘露糖、或糊精；螯合劑諸如EDTA；糖類諸如蔗糖、甘露糖醇、海藻糖或山梨糖醇；鹽形成性抗衡離子諸如鈉；金屬複合物(例如鋅-蛋白複合物)；及/或非離子性表面活性劑諸如TWEENTM、PLURONICSTM或聚乙二醇(PEG)。醫藥上可接受之賦形劑進一步於本文中說明。
套組
本發明亦提供用於本方法之套組。本發明之套組包括一或多種容器，這些容器包含如本文所述之BCMA抗體、CD3-BCMA雙特異性抗體、或BCMA抗體共軛物及根據本文所述之任何本發明方法所用之說明書。通常，這 些說明書包含BCMA抗體、CD3-BCMA雙特異性抗體、或BCMA抗體共軛物之投予以達到上述治療性治療之說明。
有關於如本文所述之BCMA抗體、CD3-BCMA雙特異性抗體、或BCMA抗體共軛物的使用說明書通常包括達到所欲治療之有關於劑量、投藥計劃、及投予路徑的訊息。容器可為單位劑量、成批包裝(例如多劑量包裝)或亞單位劑量。本發明套組中提供的說明書典型地為在標記或包裝插件上的書面說明書(例如套組中包括的紙張)，但機器可讀的說明書(例如磁碟或貯存光碟上帶有之說明書)亦可接受。
本發明之套組於適當包裝中。適當的包裝包括但不限於小玻璃瓶、瓶、罐、撓性包裝(例如密封聚酯薄膜(Mylar)或塑膠袋)等等。亦考慮者為用於與特定裝置諸如吸入器、鼻部投予裝置(例如霧化器)或輸注裝置諸如迷你泵組合使用之包裝。套組可具有無菌進入端口(例如容器可為具有可藉由皮下注射針刺破之塞子的靜脈內溶液袋或小玻璃瓶)。容器亦可具有無菌進入端口(例如容器可為具有可藉由皮下注射針刺破之塞子的靜脈內溶液袋或小玻璃瓶)。組成物中之至少一種活性劑為BCMA抗體、CD3-BCMA雙特異性抗體、或BCMA抗體共軛物。容器可進一步包含第二種醫藥活性劑。
套組可隨意地提供額外的組份諸如緩衝液及解說訊息。通常，套組包含容器及在該容器上或與該容器相關之 標記或包裝插件。
下列提供之實例僅供闡述之目的而不意在以任何方式限制本發明。事實上，除了本文所展示及說明之外的本發明之各種修飾將由熟諳此術者根據前述說明而顯見，且其落在附加之申請專利範圍之範圍內。
實例 實例1：hBCMA/人類IgG交互作用於25℃及/或37℃之動力學及親和力的測定
此實例係測定各種抗BCMA抗體於25℃及37℃之動力學及親和力。
所有實驗均於Bio-Rad Proteon XPR36表面電漿子共振生物感測器(Bio-Rad,Hercules,CA)上進行。一批抗BCMA抗體係使用胺偶合法於Bio-Rad GLC感應器晶片上類似於Abdiche,et al.,Anal.Biochem.411,139-151(2011)所述地製得。用於固定化的分析溫度為25℃且運行緩衝液為HBS-T+(10mM HEPES，150mM NaCl，0.05% Tween-20，pH 7.4)。藉以30μL/min之流速注入1mM ECD與0.25mM NHS之混合物3分鐘以將通道在分析物(水平)方向活化。藉將IgG以配體(垂直)方向、以20μg/mL濃度於10mM乙酸鹽pH 4.5緩衝液(30μg/mL)中注入1.5分鐘以將IgG固定於活化之斑點上。藉以30μL/min之流速在分析物方向注入3分鐘之1M乙醇胺pH 8.5以將活化之表面阻斷。
用於hBCMA結合分析之於補充1mg/mL BSA之HBS-T+運行緩衝液中的分析溫度為37℃或25℃。動力學滴定法係如同Abdiche等人所述地用於交互作用分析。將hBCMA(人類BCMA)分析物使用一系列由低至高濃度的注射以分析物方向注入。所用之濃度為0.08nM、0.4nM、2nM、10nM及50nM(5員系列，使用5倍的稀釋因數且最高濃度為50nM)。用於給定分析物稀釋的締合時間為兩分鐘。於注入50nM hBCMA後立即地監測解離作用2小時。在注入hBCMA分析物之前，將緩衝液使用相同之締合及解離時間於hBCMA分析物循環下注入5次以製得用於雙參照目的之緩衝液空白組感應圖(如同Myszka,J.Mol.Recognit.12,279-284(1999)所述之雙參照)。
將感應圖進行雙參比，再擬合至BIAevaluation軟體版本4.1.1(GE Lifesciences,Piscataway,NJ)之1：1 Langmuir與質量輸送(Langmuir with mass transport)動力學滴定模型。感應圖及擬合示於圖1中，本發明各種抗BCMA抗體之動力學及親和力參數示於表6A-6C中。
實例2：人類抗BCMA抗體對BCMA陽性腫瘤細胞之流式細胞術
此實例證實BCMA陽性腫瘤細胞藉由本發明各種BCMA抗體之結合力。
於小鼠IgG2a中表現之人類抗hBCMA的結合力係於表現BCMA的細胞(KMS12BM、L363、MM1S及KMS12PE)上藉流速細胞術評估。將250,000個細胞與0.5ug抗體於100uL結合緩衝液(PBS(磷酸鹽緩衝鹽水)+0.2% BSA(牛血清白蛋白))中培育，其後與Alex Fluor 647共軛之抗小鼠IgG(Biolegend)培育。表7展示BCMA陽性腫瘤細胞上藉各種BCMA抗體(例如Combo_Rd4_0.6nM_C29、A02_Rd4_6nM_C01、A02_Rd4_6nM_C16及P6E01/H3TAQ)呈現之MFI(螢光強度)。
實例3：抗BCMA ADC於BCMA陽性細胞中之細胞毒性
此實例闡述抗BCMA ADC於BCMA陽性細胞中之效力。
人類抗BCMA(L3.PY/P6E01、L3.PY/H3.TAQ、Combo_Rd4_0.6nM_C29、A02_Rd4_6nM_C01、及 A02_Rd4_6nM_C16)抗體係以經含麩醯胺酸之轉麩醯胺酸酶(“Q”)標籤工程化之人類IgG1亞型表現(例如LCQ05、H7c、N297A、N297Q、N297A/H7c、N297Q/LCQ05)以供藥物抗體比值(DAR)為2、4、及6。分別地，TG17相當於SEQ ID NO：472(LLQGPP)；LCQ05相當於SEQ ID NO：474(GGLLQGPP)、H7c相當於SEQ ID NO：454(LLQG)，且與AcLys-Val-Cit-PABC-Aur0101(乙醯基-離胺酸-纈胺酸-瓜胺酸-p-胺基苄氧羰基)、胺基-PEG6-C2-Aur3377、或胺基-PEG6-C2-Aur0131如表8所指定地共軛。一情況下，轉麩醯胺酸酶標籤可於輕鏈、重鏈、或輕及重鏈之組合處工程化。其他情況下，轉麩醯胺酸酶標籤(例如Q)係於抗體部位，諸如於人類IgG(EU編號方案)之位置297工程化。例如，將本發明BCMA抗體之野生型胺基酸天冬醯胺酸(N)於位置297以麩醯胺酸或丙胺酸取代(N297Q或N297A)。接著抗BCMA抗體軛合至Aur0101、Aur3377、及Aur0131之作用係經由於特異部位(例如抗體之重鏈或輕鏈之羧基端或胺基端、位置297、或於其他部位)帶有標靶麩醯胺酸或麩醯胺酸標籤之抗BCMA抗體與酬載之含胺衍生物(例如MMAD,Aur0101、Aur3377、或Aur0131)之間的微生物轉麩醯胺酸酶催化性轉醯胺基反應而達成。一些情況下，於位置222、340、或370(根據EU編號方案)之野生型胺基酸離胺酸被胺基酸精胺酸替代(“K222R”、“K340R”、或“K370R”)。例如，K222R取代經發現具有導致更均質抗體及酬載共軛物、較 佳之抗體與酬載間的分子間交聯、及/或顯著降低與抗體輕鏈C端上之麩醯胺酸標籤的鏈間交聯之驚人效應。
於轉醯胺基反應中，抗體上之麩醯胺酸作為醯基給予體，而含胺化合物作為醯基接受體(胺給予體)。將濃度1-150μM之純化抗BCMA抗體與5-100莫耳過量之醯基接受體(範圍在5μM-15mM之間)於0.23-0.55%(w/v)茂原鏈輪絲菌(Streptoverticillium mobaraense)轉麩醯胺酸酶(ACTIVATM,Ajinomoto,Japan)之存在下、於10-1000mM NaCl、及25mM MES,HEPES[4-(2-羥乙基)-1-哌乙磺酸]或Tris HCl緩衝液中、於pH範圍6.2-8.8培育。反應條件予以調整成供個別醯基接受體衍生物所用，且最適功效及特異性典型地於33μM抗體、0.67mM衍生物、及0.378%(w/v)轉麩醯胺酸酶於75mM NaCl、25mM Tris HCl、pH 8.5中觀察到。於攝氏20-37度培育1-24小時後，將抗體於丁基瓊脂糖高效能(Butyl Sepharose High Performance)(Butyl HP)樹脂(GE Healthcare,Waukesha,WI)上使用熟諳此術者已知之標準層析法諸如GE Healthcare市售之疏水性交互作用層析法純化。
然後將表現標靶(MM1.S、KMS12BM及L363)之細胞以3000個細胞/孔之量種於清澈底之盤上。將細胞以4倍系列稀釋之抗體藥物共軛物一式三份地處理。處理後96小時藉CellTiter-Glo®冷光細胞生存力分析法96(CellTiter-Glo® Luminescent Cell Viability Assay 96)(Promega,Madison WI)測定細胞生存力。相對細胞生存力 係以佔未經處理對照組之百分比測得。EC50藉Prism軟體計算出。表8顯示經由轉麩醯胺酸酶標籤及連接子共軛至細胞毒性劑0101、3377、及0131的本發明所有人類抗BCMA抗體均於表現BCMA的細胞中展現殺細胞活性。
實例4：抗BCMA ADC於原位多發性骨髓瘤模型中誘導腫瘤消退
此實例闡述抗BCMA ADC於MM1S原位多發性骨髓瘤模型中之體內效力。
BCMA ADC之體內效力研究係於原位模型中以表現螢光素酶及GFP(綠螢光蛋白)之多發性骨髓瘤細胞系MM1.S進行。將一千萬個MM1.S LucGFP細胞經由尾靜脈由靜脈內注射至6-8星期大之雌性CB17/SCID動物中。D-螢光素(Regis Technologies,Morton Grove,IL)(每隻動物200uL，15mg/mL)由腹膜內注入，其後以異氟醚(isofluorane)麻醉，繼而之全身生物冷光造影法(BLI)能夠監測腫瘤之負荷。藉由腫瘤細胞所表現之螢光素酶與螢光素之間的交互作用所發射的生物冷光信號乃藉使用IVIS Spectrum CT(Perkin Elmer,MA)成像補獲且使用Living Image 4.4(Caliper Life Sciences,Alameda,CA)以總流量(光子/秒)定量。當所有動物總流量達到平均1-3E6時，將動物隨機分群，將單一劑量之於抗體輕鏈C端與1)LCQ05/K222R-vc0101共軛之人類抗BCMA抗體及對照組共軛物經由尾靜脈團注法投予。當動物顯現後肢麻痺時將其殺死(terminate)，MM1.S原位模型之終點。圖2展示單一劑量3mg/kg之各種人類抗BCMA ADC抑制腫瘤進展之結果與陰性對照組(NNC)相比，包括P6E01/P6E01-AcLys-Val-Cit-PABC-Aur0101；P5A2_VHVL-AcLys-Val-Cit-PABC-Aur0101；P5C1_VHVL-AcLys-Val-Cit-PABC- Aur0101；P4G4-AcLys-Val-Cit-PABC-Aur0101；及P1A11-AcLys-Val-Cit-PABC-Aur0101。
此研究證實以BCMA-ADC處理可抑制多發性骨髓瘤之進展。
實例5：抗BCMA ADC於原位多發性骨髓瘤模型中誘導腫瘤消退及抑制
此實例亦闡述抗BCMA ADC於MM1.S原位多發性骨髓瘤模型中之體內效力。
BCMA ADC之體內效力研究係於原位模型中以表現螢光素酶及GFP之多發性骨髓瘤細胞系MM1.S進行。將一千萬個MM1.S LucGFP細胞經由尾靜脈由靜脈內注射至6-8星期大之雌性CB17/SCID動物中。D-螢光素(Regis Technologies,Morton Grove,IL)(每隻動物200uL，15mg/mL)由腹膜內注入，其後以異氟醚(isofluorane)麻醉，繼而之全身生物冷光造影法(BLI)能夠監測腫瘤之負荷。藉由腫瘤細胞所表現之螢光素酶與螢光素之間的交互作用所發射的生物冷光信號乃藉使用IVIS Spectrum CT(Perkin Elmer,MA)成像補獲且使用Living Image 4.4(Caliper Life Sciences,Alameda,CA)以總流量(光子/秒)定量。當所有動物總流量達到平均1-3E6時，將動物隨機分群；1)H7c/N297A/K222R-胺基-PEG6-C2-3377，2)N297Q/K222R-AcLys-Val-Cit-PABC-Aur0101，3)LCQ05/K222R-AcLys-Val-Cit-PABC-Aur0101，4) H7c/N297A/K222R-胺基-PEG6-C2-0131，5)N297Q/K222R/LCQ05-AcLys-Val-Cit-PABC-Aur0101，及6)對照組共軛物LCQ04/K222R-AcLys-Val-Cit-PABC-Aur0101。將單一劑量之人類抗BCMA ADC及對照組共軛物經由尾靜脈團注法投予。當動物顯現後肢麻痺時將其殺死，MM1.S原位模型之終點。圖3顯示單一劑量之與1)H7c/N297A/K222R-胺基-PEG6-C2-0131及2)H7c/N297A/K222R-胺基-PEG6-C2-3377共軛之人類抗BCMA L3.PY/P6E01抗體可導致腫瘤消退。單一劑量之與1)N297Q/K222R-AcLys-Val-Cit-PABC-Aur0101、2)LCQ05/K222R-AcLys-Val-Cit-PABC-Aur0101、及3)N297Q/K222R/LCQ05-AcLys-Val-Cit-PABC-Aur0101共軛之人類抗BCMA L3.PY/P6E01抗體可導致腫瘤之抑制。
因此，此研究證實以BCMA-ADC處理可誘導多發性骨髓瘤之消退及抑制多發性骨髓瘤之進展。
實例6：抗BCMA ADC於原位多發性骨髓瘤模型中誘導腫瘤抑制
此實例亦闡述抗BCMA ADC於KMS12BM原位多發性骨髓瘤模型中之體內效力。
BCMA ADC之體內效力研究係於原位模型中以表現螢光素酶及GFP之多發性骨髓瘤細胞系KMS12BM進行。將6-8星期大之NSG動物以100cGy照射，於照射後24小時，將一千萬個KMS12BM LucGFP經由尾靜脈進行 靜脈內注射。D-螢光素(Regis Technologies,Morton Grove,IL)(每隻動物200uL，15mg/mL)由腹膜內注入，其後以異氟醚(isofluorane)麻醉，繼而之全身生物冷光造影法(BLI)能夠監測腫瘤之負荷。藉由腫瘤細胞所表現之螢光素酶與螢光素之間的交互作用所發射的生物冷光信號乃藉使用IVIS Spectrum CT(Perkin Elmer,MA)成像補獲且使用Living Image 4.4(Caliper Life Sciences,Alameda,CA)以總流量(光子/秒)定量。當所有動物總流量達到平均5E6時，將動物隨機分群；1)H7c/N297A/K222R-胺基-PEG6-C2-3377、2)N297Q/K222R-AcLys-Val-Cit-PABC-Aur010、3)LCQ05/K222R-AcLys-Val-Cit-PABC-Aur0101、4)H7c/N297A/K222R-胺基-PEG6-C2-0131、5)N297Q/K222R/LCQ05-AcLys-Val-Cit-PABC-Aur0101、及6)對照組共軛物LCQ04/K222R-AcLys-Val-Cit-PABC-Aur0101。將單一劑量之人類抗BCMA ADC及對照組共軛物經由尾靜脈團注法投予。當動物降低15%以上之總體重時將其殺死，KMS12BM原位模型之終點。圖4顯示單一劑量之與1)H7c/N297A/K222R-胺基-PEG6-C2-3377、2)N297Q/K222R-AcLys-Val-Cit-PABC-Aur0101、3)LCQ05/K222R-AcLys-Val-Cit-PABC-Aur0101、4)H7c/N297A/K222R-胺基-PEG6-C2-0131、及5)N297Q/K222R/LCQ05-AcLys-Val-Cit-PABC-Aur0101共軛之人類抗BCMA L3.PY/P6E01抗體可導致腫瘤抑制。
因此，此研究進一步證實以BCMA-ADC處理可誘導 多發性骨髓瘤之消退及抑制多發性骨髓瘤之進展。
實例7：抗BCMA ADC於MM1S原位模型中之劑量反應曲線
此實例進一步闡述抗BCMA ADC於MM1S原位多發性骨髓瘤模型中之體內效力。
BCMA ADC之體內效力研究係於原位模型中以表現螢光素酶及GFP之多發性骨髓瘤細胞系MM1.S進行。將一千萬個MM1.S LucGFP細胞經由尾靜脈由靜脈內注射至6-8星期大之雌性CB17/SCID動物中。D-螢光素(Regis Technologies,Morton Grove,IL)(每隻動物200uL，15mg/mL)由腹膜內注入，其後以異氟醚(isofluorane)麻醉，繼而之全身生物冷光造影法(BLI)能夠監測腫瘤之負荷。藉由腫瘤細胞所表現之螢光素酶與螢光素之間的交互作用所發射的生物冷光信號乃藉使用IVIS Spectrum CT(Perkin Elmer,MA)成像補獲且使用Living Image 4.4(Caliper Life Sciences,Alameda,CA)以總流量(光子/秒)定量。當所有動物總流量達到平均1.2E6時，將動物隨機分群；1)0.1mg/kg H7c/N297A/K222R-胺基-PEG6-C2-0131、2)0.38mg/kg H7c/N297A/K222R-胺基-PEG6-C2-0131、3)0.75mg/kg H7c/N297A/K222-胺基-PEG6-C2-0131、4)1.5mg/kg H7c/N297A/K222R-胺基-PEG6-C2-0131、及5)3mg/kg對照組共軛物N297Q/K222R-AcLys-VC-0101。將單一劑量之人類抗BCMA ADC及對照組共軛物經由尾靜 脈團注法投予。當動物顯現後肢麻痺時將其殺死，MM1.S原位模型之終點。圖5顯示單一劑量之與以上群組1)-4)共軛之人類抗BCMA COMBO_Rd4_0.6nM_C29抗體以0.1mg/kg開始可導致腫瘤消退且以0.75mg/kg開始可導致腫瘤抑制最高至100天。
因此，此研究證實以BCMA-ADC處理可誘導多發性骨髓瘤之腫瘤消退及腫瘤抑制。
實例8：異源二聚體抗體之產生及純化
此實例說明本發明異源二聚體抗體之產生及純化。
將人類特異性抗CD3抗體之可變區轉殖至分別含有下列突變221R、228R、及K409R；或223R、225R、228R、及K409R之人類IgG1或IgG2△A中，且稱之為hIgG1 RRR或IgG2△A-RRRR。
將抗標靶抗體之可變區轉殖至分別含有下列突變221E、228E、L368E或223E,、225E、228E及L368E之人類IgG1或IgG2△A中，且稱之為hIgG1EEE或hIgG2△A-EEEE。
異源二聚體係如同國際專利申請案案號PCT/US2011/036419(WO2011/143545)所述地藉將具有hIgG1 RRR或IgG2△A-RRRR突變之抗CD3 IgG1或IgG2△A與具有hIgG1EEE或hIgG2△A-EEEE突變之抗標靶抗體於含1mM或2mM GSH之PBS中、於37℃培育24小時而製得。異源二聚體係如下所述地藉離子交換層 析法予以純化。
所有異源二聚體均藉由離子交換層析法純化。簡言之，Fc-異源及Fc-同源二聚物之分析型離子交換分離法係於備有弱陽離子交換DIONEX Propac WCX-10G(4x50mm)管柱之Agilent 1100四元泵LC系統(Agilent 1100 quaternary pump LC system)(Agilent Inc,Santa Clara,CA,USA)上進行。將蛋白質注入於5%緩衝液A(20mM MES pH 5.4)中，再以25%至75%緩衝液B(20mM MES pH 5.4及500mM NaCl)於20分鐘期間以1ml/min流速梯度洗提。較大規模之Fc-異源二聚體純化作用係於備有弱陽離子交換DIONEX Propac WCX-10G(4x250mm)管柱之Akta Explorer(GE)上進行。將蛋白質注入於5%緩衝液A(20mM MES pH 5.4)中，再以15%至75%緩衝液B(20mM MES pH 5.4及500mM NaCl)於60分鐘期間以1ml/min流速梯度洗提。
實例9：hCD3/人類IgG交互作用於25℃及/或37℃之動力學及親和力之測定
此實例測定各種抗CD3抗體於25℃及37℃之動力學及親和力。
所有實驗均於Bio-Rad Proteon XPR36表面電漿子共振生物感測器(Bio-Rad,Hercules,CA)上進行。一批抗CD3抗體係使用胺偶合法於Bio-Rad GLC感應器晶片上類似於Abdiche,et al.,Anal.Biochem.411,139-151(2011) 所述地製得。用於固定化的分析溫度為25℃且運行緩衝液為HBS-T+(10mM HEPES，150mM NaCl，0.05% Tween-20，pH 7.4)。藉以30μL/min之流速注入1mM ECD與0.25mM NHS之混合物3分鐘以將通道在分析物(水平)方向活化。藉將IgG以配體(垂直)方向、以20μg/mL濃度於10mM乙酸鹽pH 4.5緩衝液(30μg/mL)中注入1.5分鐘以將IgG固定於活化之斑點上。藉以30μL/min之流速在分析物方向注入1M乙醇胺pH 8.5以將活化之表面阻斷。
用於hCD3結合分析之於補充1mg/mL BSA之HBS-T+運行緩衝液中的分析溫度為37℃或25℃。動力學滴定法係如同Abdiche等人所述地用於交互作用分析。將hCD3(人類CD3)分析物使用一系列由低至高濃度的注射以分析物方向注入。所用之濃度為0.08nM、0.4nM、2nM、10nM及50nM(5員系列，使用5倍的稀釋因數且最高濃度為50nM)。用於給定分析物稀釋的締合時間為兩分鐘。於注入50nM hCD3後立即地監測解離作用2小時。在注入hCD3分析物之前，將緩衝液使用相同之締合及解離時間於hCD3分析物循環下注入5次以製得用於雙參照目的之緩衝液空白組感應圖(如同Myszka,J.Mol.Recognit.12,279-284(1999)所述之雙參照)。
將感應圖進行雙參比，再擬合至BIAevaluation軟體版本4.1.1(GE Lifesciences,Piscataway,NJ)之1：1 Langmuir與質量輸送(Langmuir with mass transport)動力 學滴定模型。本發明各種抗CD3抗體之動力學及親和力參數示於表9中。
實例10：人類抗CD3雙特異性抗體對B細胞及CD8+ T細胞之流式細胞術
此實例證實抗CD3-抗CD20雙特異性抗體於CD20+細胞中之效力。
石蟹獼猴(cynomolgus monkey)研究係於查爾斯河實驗室(Charles River Laboratories,Preclinical Services Nevada)根據實驗動物照護及使用委員會(the Institutional Animal Care and Use Committee)進行。將雙特異性抗 CD20/h2B4抗體經由靜脈內團注方式以500ug/kg、100ug/kg、20ug/kg、2ug/kg、0.2ug/kg或0.02ug/kg之劑量投予動物(n=2)。每日兩次及於每個血液收集時間點觀察動物。將用於流式細胞術及細胞激素分析的血液由未用於靜脈內給藥之周邊血管收集至K2EDTA管中。
效力係藉以流速細胞術測量周邊血液之B細胞及T細胞而測得。於指定之時間點收集全血且保持於4℃直至分析為止。以ACK緩衝液(Gibco)將紅血球於室溫溶解5分鐘，且藉離心法將白血球丸化。將細胞於4℃以含有可識別石蟹獼猴CD19(Beckman Coulter)、CD45、CD4、CD8、Ki67(BD Biosciences)之螢光標記抗體的雞尾酒混合物於PBS+2% FBS中染色1小時。在Ki67分析方面，將細胞首先以CD4及CD8染色，然後在Ki67之細胞內染色之前，根據製造商之教示以BD cyotfix/cytoperm套組(BD Biosciences)固定/可滲透化。BD LSRII流式細胞儀上之細胞的獲取係於染色後立即進行。
所得B細胞計數係以佔研究前B細胞計數的百分比繪圖於圖6A-6F中。單一劑量即使低至2ug/kg之劑量後可達到延長之B細胞耗損。B細胞耗損在所有劑量下均可見。耗損效應的持續時間為劑量依賴性。
所得CD8+ T細胞計數係以佔研究前CD8+ T細胞計數的百分比繪圖於圖7A-7F中。最初之再局部化之後，研究期間之T細胞值恢復至基線值或更高。
實例11：人類抗CD3雙特異性抗體對CD8+ T細胞之流式細胞術
此實例證實單價抗CD3抗體對T細胞動力學及活化作用之效力。
藉如同實例3所述地進行石蟹獼猴(cynomolgus monkey)研究及以流式細胞術測量周邊血液中之T細胞以測定效力。將抗CD20/h2B4或NNC(非特異性抗體)/h2B4以0.2ug/kg由靜脈內每星期地投予石蟹獼猴(cynomolgus monkey)(n=2)。與CD20標靶雙特異性抗體相比，NNC/h2B4對血液中之藉流式細胞術測量之CD8+ T細胞動力學具有極少至無效應。Ki67用於作為T細胞活化作用之標記。
所得T細胞計數係以佔研究前CD8+ T細胞計數的百分比繪圖於圖8A及8B中。投予CD20/h2B4雙特異性抗體之石蟹獼猴(cynomolgus monkey)中，Ki67+ T細胞增加且於投予後之第3天至第7天之間達到高峰，顯示T細胞活化。然而，投予NNC/h2B4之石蟹獼猴(cynomolgus monkey)中，Ki67+ T細胞未增加。
實例12：人類抗CD3雙特異性抗體對B細胞之流式細胞術
此實例證實抗CD3臂親和力對B細胞耗損之效應。
藉如同實例10所述地進行石蟹獼猴(cynomolgus monkey)研究及以流式細胞術測量周邊血液中之T細胞以 測定效力。雙特異性抗體係以具有不同親和力之一個抗CD20臂配對4個抗CD3抗體臂製得。以0.2ug/kg單一劑量靜脈內投予後，藉流式細胞術測量周邊血液中的B細胞以測定效力。
圖9A-9D中，所得B係以佔研究前B細胞計數的百分比繪圖。B細胞耗損之效力與抗CD3臂親和力相互關聯。
實例13：雙特異性抗體對T-Cell媒介性殺BCMA陽性細胞作用的體外研究
此實例闡述抗BCMA/CD3 hIgG2△A雙特異性於BCMA陽性細胞的體外細胞活性。
人類抗BCMA(P5A2、A02_Rd4_0.6nM_C01、A02_Rd4_6nM_C16、P5C1、C01_Rd4_6nM_C12、COMBO_Rd4_0.6nM_C22、Combo_Rd4_0.6nM_C29、L3PY/H3TAQ及A02_Rd4_6nM_C01)及人類抗CD3(H2B4)抗體係如同實例8所述地以經過EEEE工程化供雙特異性交換之人類IgG2dA表現。
來自PBMC之CD3+ T細胞係使用泛T細胞分離套組，人類(Pan T Cell Isolation kit,human)(Miltenyi,San Diego CA)進行陰性選擇。將表現標靶(KMS12PE、L363及Molp8)之細胞及CD3+ T細胞分別以20000及100000個細胞/孔之量種於清澈之U底盤上。將細胞以10倍系列稀釋之雙特異性抗體一式三份地處理。細胞死亡係於處理 後20小時藉CytoTox 96®非放射活性細胞毒性分析法(Non-Radioactive Cytotoxicity Assay)(CytoTox 96® Non-Radioactive Cytotoxicity Assay)(Promega,Madison WI)測定。細胞毒性係以佔未處理效應加上標靶對照孔之百分比測得。EC50以Prism軟體計算出。表10顯示所有人類抗BCMA_H2B4雙特異性抗體於表現BCMA之細胞中均展現殺細胞活性。
UND為未測；N/A為EC50無法測定。
實例14：小鼠雜交瘤選殖性抗CD3抗體之體外特徵化
此實例闡述由選殖自小鼠雜交瘤之抗CD3於人類/石蟹獼猴PBMC細胞中之體外T細胞活化/增殖作用以供抗體之篩選。
人類抗CD3抗體係選殖自免疫化小鼠，以小鼠IgG1 表現，且藉蛋白A親和力珠粒純化。人類/石蟹獼猴周邊血液單核細胞(hu/cyPBMC)係由得自本地血庫之血液濾器中藉Ficoll(Density：1.083g/mL,GE)密度梯度離心法製得。紅血球藉於LCK緩衝液(155mM NH4Cl、10mM KHCO3、100mM EDTA；Gibco)中、於室溫培育3分鐘移出。將細胞以600g之速離心5分鐘。將含溶解紅血球之上層液丟棄，再將PBMC於50ml 1xPBS/1% BSA/1mM EDTA中清洗兩次。將丸粒化之細胞於培養基，X-VIVO-15，無血清之培養基(Lonza)中調整至每毫升107個細胞，再將PBMC以每孔106(100ul)之量種至圓底96孔式組熾培養皿。將所選之抗體以10倍系列稀釋之每毫升由1000ng至1ng以供與人類PBMC混合及以5倍系列稀釋之每毫升由5000ng至200ng以供與石蟹獼猴PBMC混合。欲藉3H-胸腺嘧啶核苷併入法分析PBMC T細胞增殖，乃將2日培養物一式三份地進行。培養之最後16小時，將3H-胸腺嘧啶核苷(0.5mCi/孔)加入，再測量併入作用。將細胞採收及溶解，將DNA補獲至玻璃纖維濾器上。藉於閃爍β計數器上計數測得放射活性(cpm)以測量增殖作用。
圖10A及10B顯示所選之抗CD3 1A4、1C10、2B4、及7A3抗體對人類及石蟹獼猴PBMC(周邊血液單核細胞)具有胸腺嘧啶核苷併入讀數。表11顯示藉Biacore測量之其KD。體外特徵化顯示CD3 1C10及2B4抗體類似於陽性對照組SP34抗CD3抗體(BD Biosciences)。
實例15：雙特異性抗體對T細胞媒介性殺死作用之體外研究
此實例闡述抗EpCam/CD3雙特異性於SW480混合健康捐贈者分離出之泛T細胞中的體外細胞毒性。
A：抗CD抗體h2B4-1d、TK、hnpsTK、及yaesTK
人類抗CD3(h2B4-1d(或h2B4)、h2B4-TK(或h2B4-VH-wt VL_TK)、h2B4-hnpsTK(或h2B4-VH-hnps VL_TK)、及h2B4-yaesTK(or h2B4-VH-yaes VL_TK))抗體及人類抗EpCam抗體係如同實例8所述地以經過RRRR或EEEE工程化供雙特異性交換之人類IgG2dA表現。
選擇SW480以作為用於殺細胞分析法中之標靶細胞系且將效應細胞及人類T細胞由人類周邊血液單核細胞 (huPBMC)中純化。將標靶及效應細胞種於96孔式圓底盤內之含5%胎牛血清(FBS)之細胞培養基中。標靶細胞數保持恆定於2x104個細胞/孔。將10倍系列稀釋之每毫升由3ug至3pg之雙特異性抗體一式三份地加至細胞中。總反應體積為200uL。將反應培育48及72小時。在細胞毒性之分析方面，藉CytoTox 96®非放射活性細胞毒性分析套組(CytoTox 96® Non-Radioactive Cytotoxicity Assay kit)(Promega,G1780)定量測量乳酸鹽脫氫酶(LDH)，此為一種細胞溶解後釋出的穩定性細胞溶質酵素。將盤於Vmax動力學微盤讀數器(Molecular Devices)上、於490nM讀數。光學密度值係較正介質背景及標靶與效應細胞之自發性溶解。特異性細胞毒性根據下式計算出：[%特異性溶解=樣品-E+T混合對照組之490nM讀出數)/(總T溶解-介質對照組之490nM讀出數)x100%]
圖11A及11B顯示所有人類抗EpCam_h2B4雙特異性抗體對體外設定均具有殺細胞活性，且抗體媒介性T細胞活化作用係藉由T細胞活化標記監測。表12A展示其EC50。表12B展示於對雙特異性抗體格式之Biacore KD。
B：抗CD抗體m25A8、h25A8-B12、及h25A8-B13
人類抗CD3 h2B4(h2B4_1d)及h25A8(m25A8、h25A8-B12、及h25A8-B13)及人類抗EpCam抗體係如同實例8所述地以經過RRRR或EEEE工程化供雙特異性交換之人類IgG2dA表現。
圖11C及11D顯示所有人類抗EpCam_抗CD3雙特異性抗體對體外設定均具有殺細胞活性，且抗體媒介性T細胞活化作用係藉由T細胞活化標記監測。表12C顯示體外殺細胞之EC50。表12D展示於37℃對雙特異性抗體格式之Biacore動力學。表12E展示使用SEC-MALS(粒徑排阻層析法連同多角度光散射法)及DSC(差示掃描熱量分析法)之體外特徵化。
實例16：雙特異性抗體對原發性骨髓瘤患者樣品之T細胞媒介性殺死作用的體外研究
此實例闡述體外抗BCMA/CD3雙特異性於原發性骨髓瘤細胞中之體外細胞毒性。
人類抗BCMA(P5A2、A02_Rd4_0.6nM_C01、A02_Rd4_6nM_C16、Combo_Rd4_0.6nM_C29、及P6E01L3PY/H3TAQ)及人類抗CD3(h2B4)抗體係如同實例8所述地以經過RRRR或EEEE工程化供雙特異性交換之人類IgG2dA表現。
將得骨髓瘤患者之總骨髓單核細胞以導致3000-5000個骨髓瘤細胞/孔之總骨髓單核細胞數種於清澈U底盤中。將細胞以10倍系列稀釋之雙特異性抗體處理。處理之五天後，藉流式細胞術使用對抗CD138及CD38之抗體(Biolegend,CA)以測定總活細胞。將細胞與抗體於4°於PBS+0.5% FBS中培育30分鐘。將細胞清洗，於4°將Fixable Viability Dye eFluor 780(eBioscience,Inc.,CA)之PBS液加至細胞中30分鐘。於BD流式細胞儀上獲得細胞之前，將細胞清洗，再將CountBright絕對計數珠粒(CountBright Absolute Counting Beads)(Molecular Probes,OR)加入。使用計數珠粒以經處理相對於未經處理孔之活細胞計數來測定活細胞百分比。EC50以Prism軟體計算出。
表13A顯示所有人類抗BCMA_h2B4雙特異性抗體對骨髓瘤患者樣品均具有殺細胞活性且患者T細胞為功能性效應細胞。表13B顯示一種抗BCMA雙特異性對具有不同效應對標靶(E：T)比值的多發性骨髓瘤患者樣品之殺死 作用。
實例17：得自石蟹獼猴(cynomolgus monkey)之分泌抗體的細胞經投予抗BCMA/CD3雙特異性抗體後之ELISPOT
此實例闡述石蟹獼猴(cynomolgus monkey)中分泌IgG的細胞以抗BCMA/CD3雙特異性抗體處理後之耗損。
將100ug/kg及300ug/kg之雙特異性抗BCMA_CD3抗體(h2B4-VH-hnps VL_TK)、A02_Rd4_0.6nM_C01/H2B4及Combo_Rd4_0.6nM_C29/H2B兩次劑量地於第1天及第8天以靜脈內團注方式投予石蟹獼猴(cynomolgus monkey)(n=2)。每日兩次地及於每個血液收集時點觀察動物。於 第-6、4及10天採樣周邊血液單核細胞(PBMC)。骨髓樣品於第10天當檢驗動物屍體時採收。
將血液收集至含肝素鈉及密度梯度之Becton Dickinson® CPTTM細胞製備管(Becton Dickinson® CPTTM Cell Preparation Tube)中，然後於離心後於梯度介面處收集PBMC。
藉以約5mL 100%胎牛血清(FBS)沖洗以收集骨髓(得自股骨)樣品，然後藉將沖洗之骨髓懸浮於50mL緩衝液中以製得單一細胞懸浮液。
使用Cellometer Vision來計數細胞，再以完全RPMI 1640培養基調整PBMC至5 x 106個細胞/mL及骨髓細胞至2 x 106個細胞/mL之濃度。使用得自Mabtech(#3850-2HW-Plus)之ELISpotBASIC套組來計數分泌IgG的細胞。簡言之，將PBMC或骨髓細胞以特定濃度一式三份地加至孔中(PBMC為5 x 105/孔，且骨髓細胞為2 x 105/孔)，然後將細胞於盤中系列稀釋。培育過夜後，將盤清洗，再將生物素化之偵測抗體加入。將盤培育2小時，再將抗生物素蛋白鏈菌素-HRP加入1小時。使用TMB基質溶液顯現IgG斑點，再使用ImmunoSpot成像分析儀系統(ImmunoSpot Imaging Analyzer system)(CTL)及ImmunoSpot 5.1軟體來計數。數據以一式三份樣品之分泌IgG細胞平均數(+/- SD)表示。
所得之於PBMC及於骨髓中之分泌IgG的細胞計數分別列於表14A及14B中。抗BCMA/CD3雙特異性抗體於 PBMC中與投藥前相比，及骨髓與載劑及陰性對照組相比，均可見到分泌IgG之細胞的耗損。劑量依賴性效應可見於骨髓中。
實例18：抗BCMA/CD3雙特異性於MM1.S腫瘤模型中誘導腫瘤消退及抑制
此實例闡述於原位MM1.S骨髓瘤模型中之腫瘤消退及抑制。
BCMA雙特異性之體內效力係以表現螢光素酶及GFP 之MM1.S原位模型進行。在腫瘤細胞注射之前一天，將小鼠使用RS 2000生物學研究照射機(RS 2000 Biological Research Irradiator)(RAD Source Technolgies,GA)以100cGy照射。將五百萬個MM1.S LucGFP細胞經由尾靜脈進行靜脈內注射至6至8星期大之雌性Nod/Scid/IL2Rg-/-(NSG)動物中。D-螢光素(Regis Technologies,Morton Grove,IL)(每隻動物200uL，15mg/mL)由腹膜內注入，其後以異氟醚(isofluorane)麻醉，繼而之全身生物冷光造影法(BLI)能夠監測腫瘤之負荷。藉由腫瘤細胞所表現之螢光素酶與螢光素之間的交互作用所發射的生物冷光信號乃藉使用IVIS Spectrum CT(Perkin Elmer,MA)成像補獲且使用Living Image 4.4(Caliper Life Sciences,Alameda,CA)以總流量(光子/秒)定量。當所有動物總流量達到平均15E6時，以團注方式由尾靜脈將2千萬個來自PBMC之擴增T細胞注射予動物。簡言之，將購自AllCells(Alameda,CA)之泛T細胞以人類T細胞活化/擴增套組(human T Cell Activation/Expansion Kit)(Miltenyi,San Diego,CA)活化。三天後，每兩天將15U/mL之IL2(ebioscience,San Diego,CA)加入直至第11天為止。將細胞採收，將活化/擴增珠粒磁性移出，再將細胞清洗且再懸浮於PBS中。T細胞注射後一天，如上所述地將小鼠造影，再將動物隨機分成每七隻為一組之群組；0.03mg/kg及0.3mg/kg之A02_Rd4_0.6nM_C01及0.03mg/kg、0.1mg/kg及0.3 mg/kg之Combo_Rd4_0.6nM_C29。將單一劑量之人類抗BCMA/CD3(h2B4-VH-wt VL_TK)雙特異性及陰性(NNC)對照組雙特異性抗體經由尾靜脈團注法投予。當動物顯現後肢麻痺時將其宰殺，MM1.S原位模型之終點。圖12顯示單一劑量之人類抗BCMA/CD3雙特異性抗體以劑量依賴性方式導致腫瘤消退。
實例19：兩次劑量之抗BCMA/CD3雙特異性於侵襲性Molp8腫瘤模型中誘導腫瘤消退
此實例闡述兩次劑量之抗BCMA/CD3雙特異性抗體於原位Molp8骨髓瘤模型中之腫瘤消退。
BCMA雙特異性之體內效力係以表現螢光素酶及GFP之Molp8原位模型進行。將二百萬個Molp8 LucGFP細胞經由尾靜脈進行靜脈內注射至6至8星期大之雌性NSG動物中。D-螢光素(Regis Technologies,Morton Grove,IL)(每隻動物200uL，15mg/mL)由腹膜內注入，其後以異氟醚(isofluorane)麻醉，繼而之全身生物冷光造影法(BLI)能夠監測腫瘤之負荷。藉由腫瘤細胞所表現之螢光素酶與螢光素之間的交互作用所發射的生物冷光信號乃藉使用IVIS Spectrum CT(Perkin Elmer,MA)成像補獲且使用Living Image 4.4(Caliper Life Sciences,Alameda,CA)以總流量(光子/秒)定量。當所有動物總流量達到平均25E6時，將其隨機分成每群七隻的三群組；1)Combo_Rd4_0.6nM_C29，0.3mg/kg，2) Combo_Rd4_0.6nM_C29，0.3mg/kg，兩次劑量及3)NNC_2B4，0.3mg/kg，兩次劑量。如實例18所述地以團注方式由尾靜脈將2千萬個擴增T細胞注射予動物。T細胞注射之兩天後，將雙特異性抗體投予小鼠。當動物顯現降低15%以上之體重時將其宰殺，Molp8原位模型之終點。圖13顯示兩次劑量之人類抗BCMA/CD3(h2B4-VH-wt VL_TK)雙特異性抗體導致增加之腫瘤消退。
實例20：抗BCMA/CD3雙特異性與多發性骨髓瘤之標準照護的組合於原位Molp8腫瘤模型中
此實例證實抗BCMA/CD3雙特異性抗體當與硼替左米(bortezomib)或雷利米得(lenalidomide)組合時並無抗拒效應(opposing effect)，而抗BCMA/CD3雙特異性抗體比起硼替左米(bortezomib)及雷利米得(lenalidomide)之組合具有較佳效力。
BCMA雙特異性之體內效力係以表現螢光素酶及GFP之Molp8原位模型進行。將二百萬個Molp8 LucGFP細胞經由尾靜脈進行靜脈內注射至6至8星期大之雌性NSG動物中。D-螢光素(Regis Technologies,Morton Grove,IL)(每隻動物200uL，15mg/mL)由腹膜內注入，其後以異氟醚(isofluorane)麻醉，繼而之全身生物冷光造影法(BLI)能夠監測腫瘤之負荷。藉由腫瘤細胞所表現之螢光素酶與螢光素之間的交互作用所發射的生物冷光信號乃藉使用IVIS Spectrum CT(Perkin Elmer,MA)成像補獲且使用 Living Image 4.4(Caliper Life Sciences,Alameda,CA)以總流量(光子/秒)定量。於第7天如實例18所述地以團注方式由尾靜脈將2千萬個擴增T細胞注射予動物。T細胞注射之兩天後，將小鼠造影再隨機分成每群七隻小鼠之五群組，每群之總流量平均為17E6：1)Combo_Rd4_0.6nM_C29，0.3mg/kg，2)Combo_Rd4_0.6nM_C29，0.3mg/kg及1mg/kg硼替左米(bortezomib)，3)Combo_Rd4_0.6nM_C29,0.3mg/kg及50mg/kg雷利米得(lenalidomide)，4)1mg/kg硼替左米(bortezomib)及50mg/kg雷利米得(lenalidomide)及5)載劑。抗BCMA/CD3(於PBS中)係經由團注方式由尾靜脈注入，硼替左米(bortezomib)(於PBS中)係經由腹膜內注射投予且雷利米得(lenalidomide)(30% PEG400/5%丙二醇/0.5% Tween80)經由經口灌胃法投予。載劑由30% PEG400/5%丙二醇/0.5% Tween80所組成，其係經由經口灌胃法投予。當動物顯現降低15%以上之體重時將其宰殺，Molp8原位模型之終點。圖14顯示抗BCMA/CD3(h2B4-VH-hnps VL-TK)雙特異性抗體與硼替左米(bortezomib)或雷利米得(lenalidomide)之組合並不會對於抗BCMA/CD3雙特異性抗體的效力產生負面效應。此模型中，抗BCMA/CD3雙特異性抗體單獨地或與雷利米得(lenalidomide)或硼替左米(bortezomib)之組合比起雷利米得(lenalidomide)及硼替左米(bortezomib)之組合更為有效。
實例21：抗BCMA/CD3雙特異性與雷利米得(lenalidomide)、卡菲左米(carfilzomib)或阿黴素(doxorubicin)之組合對OPM2細胞系之體外研究
此實例闡述當抗BCMA/CD3雙特異性抗體與卡菲左米(carfilzomib)、阿黴素(doxorubicin)、及雷利米得(lenalidomide)組合時之抗BCMA/CD3雙特異性抗體對T細胞功能之活性與雙特異性抗體單獨使用時相比並無不利效應。
來自PBMC之CD3+ T細胞係使用泛T細胞分離套組，人類(Pan T Cell Isolation kit,human)(Miltenyi,San Diego CA)進行陰性選擇。將OPM2細胞及CD3+ T細胞分別以20000及100000個細胞/孔之量種於清澈之U底盤中。將OPM2及CD3+ T細胞首先以標準照護於37°培育二小時。將1.56nM卡菲左米(carfilzomib)及6.25nM阿黴素(doxorubicin)於含0.02% DMSO之PBS中稀釋。將雷利米得(lenalidomide)以195nM於含0.1% DMSO之PBS中稀釋。將細胞以10倍系列稀釋之雙特異性抗體處理。處理之三天後，藉流式細胞術使用對抗CD138、CD4、及CD8之抗體(Biolegend)以測定總活細胞。將細胞與抗體於4°於PBS+0.5% FBS中培育30分鐘。將細胞清洗，於4°將Fixable Viability Dye eFluor 780(eBioscience,Inc.,CA)之PBS液加至細胞中30分鐘。於BD流式細胞儀上獲得細胞之前，將細胞清洗，再將CountBright絕對計數珠粒(CountBright Absolute Counting Beads)(Molecular Probes,OR)加入。使用計數珠粒以經處理相對於未經處理孔之活細胞計數來測定活細胞百分比。圖15A、15B、及15C分別顯示卡菲左米(carfilzomib)、雷利米得(lenalidomide)、及阿黴素(doxorubicin)不會使Combo_Rd4_0.6nM_C29-CD3(h2B4-VH-hnps VL-TK)雙特異性抗體對OPM2細胞之功能具有負面效應。
實例22：抗BCMA/CD3雙特異性與雷利米得(lenalidomide)及卡菲左米(carfilzomib)之組合對KMS12BM細胞系之體外研究
此實例闡述抗BCMA/CD3雙特異性當與卡菲左米(carfilzomib)及雷利米得(lenalidomide)組合使用時與每種分子單獨使用時相比，抗BCMA/CD3雙特異性功能之協同效應。
來自PBMC之CD3+ T細胞係使用泛T細胞分離套組，人類(Pan T Cell Isolation kit,human)(Miltenyi,San Diego CA)進行陰性選擇。將KMS12BM細胞及CD3+ T細胞分別以20000及100000個細胞/孔之量種於清澈之U底盤中。將細胞以0.017nM抗BCMA/CD3雙特異性與卡菲左米(carfilzomib)及一個濃度範圍之雷利米得(lenalidomide)組合地處理。將1.25nM卡菲左米(carfilzomib)於含0.02% DMSO之PBS中稀釋。將雷利米得(lenalidomide)由4uM開始4倍稀釋地於含0.1% DMSO之PBS中稀釋。處理之三天後，藉流式細胞術使用對抗 CD138、CD4、及CD8之抗體(Biolegend,CA)以測定總活細胞。將細胞與抗體於4°於PBS+0.5% FBS中培育30分鐘。將細胞清洗，於4°將Fixable Viability Dye eFluor 780(eBioscience,Inc.,CA)之PBS液加至細胞中30分鐘。於BD流式細胞儀上獲得細胞之前，將細胞清洗，再將CountBright絕對計數珠粒(CountBright Absolute Counting Beads)(Molecular Probes,OR)加入。使用計數珠粒以經處理相對於未經處理孔之活細胞計數來測定活細胞百分比。圖16顯示於測試之濃度下，卡菲左米(carfilzomib)、雷利米得(lenalidomide)、及抗BCMA/CD3(h2B4-VH-hnps VL-TK)雙特異性抗體具有極少之單一劑細胞毒性功能。當全部三種劑組合時，協同效應可於劑量依賴性雷利米得(lenalidomide)濃度、於KMS12BM細胞中觀察到。
雖然已揭示之教示已參照各種應用、方法、套組、及組成物說明，但應理解，在不脫離本文之教示及以下之申請專利範圍前提下可進行各種改變及修改。前述實例係提供以較佳地闡述所揭示之教示而不意在限制本文呈現之教示範圍。雖然本教示已經由這些例示之實施態樣說明，但熟諳此術者輕易理解這些例示之實施態樣可以有許多變化和修改而不必有過度實驗。所有之此些變化和修改均在本教示範圍內。
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前述之說明及實例係詳述本發明之某些具體實施態樣及說明本發明人所考慮之最佳模式。然而應理解，無論於內文中前述內容是如何詳細地呈現，本發明可以許多方式操作且本發明應根據附加之申請專利範圍及其任何同等物進行解釋。
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<212> PRT
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<220>
<223> 合成建構體
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<223> 合成建構體
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<212> PRT
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<220>
<223> 合成建構體
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<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成建構體
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (3)..(3)
<223> Xaa is A or P
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(5)
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成建構體
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(5)
<223> Xaa is G or S
<400> 302
<210> 303
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成建構體
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(5)
<223> Xaa is G or S
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (8)..(8)
<223> Xaa is A or P
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> Xaa is T,N,or S
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<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成建構體
<400> 304
<210> 305
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成建構體
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa is I,V,T,H,L,A,or C
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (3)..(3)
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<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (4)..(4)
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<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(5)
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<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (7)..(7)
<223> Xaa is G or T
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (8)..(8)
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<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (9)..(9)
<223> Xaa is S,T,I,L,T,A,R,V,K,G,or C
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> Xaa is F,Y,P,W,H,or G
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (14)..(14)
<223> Xaa is V,R,or L
<220>
<221> MISC. FEATURE
<222> (15)..(15)
<223> Xaa is G or T
<400> 305
<210> 306
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成建構體
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> Xaa is S,V,I,D,G,T,L,F,or M
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa is G,Y,L,H,D,A,S,or M
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (3)..(3)
<223> Xaa is S,G,F,or W
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (4)..(4)
<223> Xaa is G or S
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(5)
<223> Xaa is G or T
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (6)..(6)
<223> Xaa is N,S,P,Y,or W
<400> 306
<210> 307
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成建構體
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(5)
<223> Xaa is A or Y
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (6)..(6)
<223> Xaa is A or S
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (7)..(7)
<223> Xaa is G,Q,L,P,or E
<400> 307
<210> 308
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成建構體
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(5)
<223> Xaa is D,S,T,or A
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (6)..(6)
<223> Xaa is I,S,L,P,or D
<400> 308
<210> 309
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成建構體
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> Xaa is R,G,W,A,or C
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa is A,P,G,L,C,or S
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (3)..(3)
<223> Xaa is S,G,or R
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (4)..(4)
<223> XaaiSQ,C,E,V,or I
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(5)
<223> Xaa is S,P,G,A,R,or D
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (6)..(6)
<223> Xaa is V,G,I,or L
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (7)..(7)
<223> Xaa is S,E,D,P,or G
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (8)..(8)
<223> Xaa is S,P,F,A,M,E,V,N,D,or Y
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (9)..(9)
<223> Xaa is I,T,V,E,F,S,A,M,Q,Y,H,or R
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> Xaa is Y or F
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (11)..(11)
<223> Xaa is L,W,or P
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (12)..(12)
<223> Xaa is A,S,or G
<400> 309
<210> 310
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成建構體
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> Xaa is G or D
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (4)..(4)
<223> Xaa is S or I
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (7)..(7)
<223> Xaa is T or P
<400> 310
<210> 311
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成建構體
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> Xaa is Q or K
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa is H or Y
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (4)..(4)
<223> Xaa is G,N,or P
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(5)
<223> Xaa is S,W,or Y
<400> 311
<210> 312
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成建構體
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (4)..(4)
<223> Xaa is G,Q,E,L,F,A,S,M,K,R,or Y
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(5)
<223> Xaa is S,R,T,G,V,F,Y,D,A,H,V,E,K,or C
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (6)..(6)
<223> Xaa is W,F,or S
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (8)..(8)
<223> Xaa is L or I
<400> 312
<210> 313
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成建構體
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (30)..(30)
<223> Xaa is G or S
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (33)..(33)
<223> Xaa is A or P
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (35)..(35)
<223> Xaa is T,N,or S
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (51)..(51)
<223> Xaa is I,V,T,H,L,A,or C
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (52)..(52)
<223> Xaa is S,D,G,T,I,L,F,M,or V
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (53)..(53)
<223> Xaa is G,Y,L,H,D,A,S,or M
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (54)..(54)
<223> Xaa is S,Q,T,A,F,or W
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (56)..(56)
<223> Xaa is G or T
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (57)..(57)
<223> Xaa is N,S,P,Y,W,or F
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (58)..(58)
<223> Xaa is S,T,I,L,T,A,R,V,K,G,or C
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (59)..(59)
<223> Xaa is F,Y,P,W,H,or G
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (63)..(63)
<223> Xaa is V,R,or L
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (64)..(64)
<223> Xaa is G or T
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (103)..(103)
<223> Xaa is A or Y
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (104)..(104)
<223> Xaa is A or S
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (105)..(105)
<223> Xaa is G,Q,L,P,or E
<400> 313
<210> 314
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成建構體
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (30)..(30)
<223> Xaa is G or S
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (33)..(33)
<223> Xaa is A or P
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (35)..(35)
<223> Xaa is T,N,or S
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (51)..(51)
<223> Xaa is I,V,T,H,L,A,or C
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (52)..(52)
<223> Xaa is S,D,G,T,I,L,F,M,or V
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (53)..(53)
<223> Xaa is G,Y,L,H,D,A,S,or M
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (54)..(54)
<223> Xaa is S,Q,T,A,F,or W
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (56)..(56)
<223> Xaa is G or T
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (57)..(57)
<223> Xaa is N,S,P,Y,W,or F
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (58)..(58)
<223> Xaa is S,T,I,L,T,A,R,V,K,G,or C
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (59)..(59)
<223> Xaa is F,Y,P,W,H,or G
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (63)..(63)
<223> Xaa is V,R,or L
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (64)..(64)
<223> Xaa is G or T
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (103)..(103)
<223> Xaa is D,S,T,or A
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (104)..(104)
<223> Xaa is I,S,L,P,or D
<400> 314
<210> 315
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成建構體
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (24)..(24)
<223> Xaa is R,G,W,A,or C
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (25)..(25)
<223> Xaa is A,P,G,L,C,or S
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (26)..(26)
<223> Xaa is S,G,or R
<220>
<221> MISC_FEATURE
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<223> Xaa is Q,C,E,V,or I
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (28)..(28)
<223> Xaa is S,P,G,A,R,or D
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (29)..(29)
<223> Xaa is V,G,I,or L
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (30)..(30)
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<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (31)..(31)
<223> Xaa is S,P,F,A,M,E,V,N,D,or Y
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (32)..(32)
<223> Xaa is I,T,V,E,S,A,M,Q,Y,H,R,or F
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (33)..(33)
<223> Xaa is Y or F
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (34)..(34)
<223> Xaa is L,W,or P
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (35)..(35)
<223> Xaa is A,S,or G
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (51)..(51)
<223> Xaa is G or D
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (54)..(54)
<223> Xaa is S or I
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (57)..(57)
<223> Xaa is T or P
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (90)..(90)
<223> Xaa is Q or K
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (91)..(91)
<223> Xaa is H or Y
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (93)..(93)
<223> Xaa is G,N,or P
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (94)..(94)
<223> Xaa is S,W,or Y
<400> 315
<210> 316
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成建構體
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (24)..(24)
<223> Xaa is R,G,W,A.or C
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (25)..(25)
<223> Xaa is A,P,G,L,C,or S
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (26)..(26)
<223> Xaa is S,G,or R
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (27)..(27)
<223> Xaa is Q,C,E,V,or I
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (28)..(28)
<223> Xaa is S,L,P,G,A,R,or D
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (29)..(29)
<223> Xaa is V,G,or I
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (30)..(30)
<223> Xaa is S,E,D,or P
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (31)..(31)
<223> Xaa is S,P,F,A,M,E,V,N,D,or Y
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (32)..(32)
<223> Xaa is I,T,V,E,S,A,M,Q,Y,H,or R
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (33)..(33)
<223> Xaa is Y or F
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (34)..(34)
<223> Xaa is L,W,or P
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (35)..(35)
<223> Xaa is A,S,or G
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (51)..(51)
<223> Xaa is G or D
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (54)..(54)
<223> Xaa is S or I
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (57)..(57)
<223> Xaa is T or P
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (93)..(93)
<223> Xaa is G,Q,E,L,F,A,S,M,R,K,or Y
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (94)..(94)
<223> Xaa is S,R,T,G,R,V,D,A,H,E,K,C,F,or Y
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (95)..(95)
<223> Xaa is W,S,or F
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (97)..(97)
<223> Xaa is L or I
<400> 316
<210> 317
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成建構體
<400> 317
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成建構體
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成建構體
<400> 319
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成建構體
<400> 320
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<212> PRT
<213> 人工序列
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<223> 合成建構體
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<212> PRT
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<223> 合成建構體
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<212> PRT
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<223> 合成建構體
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<212> PRT
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<223> 合成建構體
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<212> PRT
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<223> 合成建構體
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<223> 合成建構體
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<223> 合成建構體
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<212> PRT
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<223> 合成建構體
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<212> PRT
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<220>
<223> 合成建構體
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<212> PRT
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<223> 合成建構體
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<220>
<223> 合成建構體
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<212> PRT
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<212> PRT
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<220>
<223> 合成建構體
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成建構體
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<212> PRT
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<220>
<223> 合成建構體
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<212> PRT
<213> 人工序列
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<212> PRT
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<220>
<223> 合成建構體
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<223> 合成建構體
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<212> PRT
<213> 智人
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<220>
<223> 合成建構體
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<212> PRT
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<220>
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<212> PRT
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<220>
<223> 合成建構體
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<212> PRT
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<212> PRT
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<220>
<223> 合成建構體
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<212> PRT
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<212> PRT
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<220>
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<212> PRT
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<220>
<223> 合成建構體
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<212> PRT
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<220>
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<220>
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<212> PRT
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<220>
<223> 合成建構體
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<220>
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<220>
<223> 合成建構體
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<220>
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<212> PRT
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<220>
<223> 合成建構體
<400> 380
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成建構體
<400> 381
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成建構體
<400> 382
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成建構體
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<212> PRT
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<220>
<223> 合成建構體
<400> 384
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成建構體
<400> 385
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成建構體
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<212> PRT
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<211> 7
<212> PRT
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<220>
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<400> 501
<210> 502
<211> 198
<212> PRT
<213> 智人
<400> 502

Claims (55)

  1. 一種經分離之抗體或其抗原結合片段，其特異性地結合至B細胞成熟抗原(BCMA)，其中該抗體包含(a)重鏈可變(VH)區，其包含(i)VH互補決定區一(CDR1)，其包含序列SYX1MX2，其中X1為A或P；且X2為T、N、或S(SEQ ID NO：301)，GFTFX1SY，其中X1為G或S(SEQ ID NO：302)，或GFTFX1SYX2MX3，其中X1為G或S，X2為A或P；且X3為T、N、或S(SEQ ID NO：303)；(ii)VH CDR2，其包含序列AX1X2X3X4GX5X6X7X8YADX9X10KG，其中X1為I、V、T、H、L、A、或C；X2為S、D、G、T、I、L、F、M、或V；X3為G、Y、L、H、D、A、S、或M；X4為S、Q、T、A、F、或W；X5為G或T；X6為N、S、P、Y、W、或F；X7為S、T、I、L、T、A、R、V、K、G、或C；X8為F、Y、P、W、H、或G；X9為V、R、或L；且X10為G或T(SEQ ID NO：305)、或X1X2X3X4X5X6，其中X1為S、V、I、D、G、T、L、F、或M；X2為G、Y、L、H、D、A、S、或M；X3為S、G、F、或W；X4為G或S；X5為G或T；且X6為N、S、P、Y、或W(SEQ ID NO：306)；及iii)VH CDR3，其包含序列VSPIX1X2X3X4，其中X1為A或Y；X2為A或 S；且X3為G、Q、L、P、或E(SEQ ID NO：307)、或YWPMX1X2，其中X1為D、S、T、或A；且X2為I、S、L、P、或D(SEQ ID NO：308)；及/或(b)輕鏈可變(VL)區，其包含(i)VL CDR1，其包含序列X1X2X3X4X5X6X7X8X9X10X11X12，其中X1為R、G、W、A、或C；X2為A、P、G、L、C、或S；X3為S、G、或R；X4為Q、C、E、V、或I；X5為S、P、G、A、R、或D；X6為V、G、I、或L；X7為S、E、D、P、或G；X8為S、P、F、A、M、E、V、N、D、或Y；X9為I、T、V、E、S、A、M、Q、Y、H、R、或F；X10為Y或F；X11為L、W、或P；且X12為A、S、或G(SEQ ID NO：309)；(ii)VL CDR2，其包含序列X1ASX2RAX3，其中X1為G或D；X2為S或I；且X3為T或P(SEQ ID NO：310)；及(iii)VL CDR3，其包含序列QQYX1X2X3PX4T，其中X1為G、Q、E、L、F、A、S、M、K、R、或Y；X2為S、R、T、G、V、F、Y、D、A、H、V、E、K、或C；X3為W、F、或S；且X4為L或I(SEQ ID NO：311)，或QQYX1X2X3PX4，其中X1為G、Q、E、L、F、A、S、M、R、K、或Y；X2為S、R、T、G、R、V、D、A、H、E、K、C、F、或 Y；X3為W、S、或F；且X4為L或I(SEQ ID NO：312)。
  2. 一種經分離之抗體或其抗原結合片段，其特異性地結合至BCMA，其中該抗體包含：VH區，其包含SEQ ID NO：2、3、7、8、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、35、37、39、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、83、87、92、95、97、99、101、104、106、110、112、114、118、120、122、125、127、313、314、363、或365所示之VH序列的VH CDR1、VH CDR2、及VH CDR3；及/或VL區，其包含SEQ ID NO：1、4、5、6、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、34、36、38、40、41、43、45、47、49、51、53、55、57、59、61、63、65、67、69、71、73、75、77、79、317、80、81、82、84、85、86、88、89、90、91、93、94、96、98、100、102、103、105、107、108、109、111、113、115、116、117、119、121、123、124、126、128、315、316、或364所示之VL序列的VL CDR1、VL CDR2、及VL CDR3。
  3. 如申請專利範圍第2項之抗體或抗原結合片段，其中該VH區包含(i)VH CDR1，其包含SEQ ID NO：150、151、152、156、或157；(ii)VH CDR2，其包含SEQ ID NO：169、154、194、159、195、196、162、158、198、 177、178、199、200、201、202、203、204、206、207、208、172、203、或204；及(iii)VH CDR3，其包含SEQ ID NO：155、161、197、205、或164；且/或其中該VL區包含(i)VL CDR1，其包含SEQ ID NO：209、271、273、275、251、277、260、279、245、283、285、287、290、292、235、297、或299；(ii)VL CDR2，其包含SEQ ID NO：221；及(iii)VL CDR3，其包含SEQ ID NO：225、272、274、276、278、280、281、282、284、286、288、289、291、293、294、229、296、298、或300。
  4. 如申請專利範圍第3項之抗體或抗原結合片段，其中該VH區包含(i)VH CDR1，其包含SEQ ID NO：151、156、或157；(ii)VH CDR2，其包含SEQ ID NO：158或159；及(iii)VH CDR3，其包含SEQ ID NO：155；且/或其中該VL區包含(i)VL CDR1，其包含SEQ ID NO：209；(ii)VL CDR2，其包含SEQ ID NO：221；及(iii)VL CDR3，其包含SEQ ID NO：225。
  5. 如申請專利範圍第4項之抗體或抗原結合片段，其中該VH區包含SEQ ID NO：112所示之序列或不在CDR範圍內之殘基中具有一或數個保守胺基酸取代的變異體且/或該VL區包含SEQ ID NO：38所示之胺基酸序列或不在CDR範圍內之胺基酸中具有一或數個胺基酸取代之其變異體。
  6. 如申請專利範圍第5項之抗體或抗原結合片段， 其中該抗體包含輕鏈，其包含SEQ ID NO：357所示之序列，及重鏈，其包含SEQ ID NO：358所示之序列。
  7. 如申請專利範圍第3項之抗體或抗原結合片段，其中該抗體包含VH區，該VH區由ATCC寄存編號PTA-122094的表現載體所產生。
  8. 如申請專利範圍第4項之抗體或抗原結合片段，其中該抗體包含VL區，該VL區由ATCC寄存編號PTA-122093的表現載體所產生。
  9. 一種經分離之抗體，其特異性地結合至BCMA且與申請專利範圍第4至6項中任一項之抗體競爭。
  10. 一種醫藥組成物，其包含治療有效量之申請專利範圍第1至9項中任一項之抗體或抗原結合片段及醫藥上可接受之載體。
  11. 一種經分離之多核苷酸，其包含編碼申請專利範圍第1至9項中任一項之抗體的核苷酸序列。
  12. 一種載體，其包含申請專利範圍第11項之多核苷酸。
  13. 一種經分離之宿主細胞，其重組產生申請專利範圍第1至9項中任一項之抗體或抗原結合片段。
  14. 一種製造抗體之方法，其包含將申請專利範圍第13項之宿主細胞於導致抗體產生之條件下培養，再將該抗體由宿主細胞或培養物中分離出來。
  15. 一種如申請專利範圍第1至9項中任一項之抗體或抗原結合片段於製造藥劑之用途，該藥劑係用於治療與 個體表現BCMA之細胞有關的病症。
  16. 如申請專利範圍第15項之用途，其中該病症為癌症。
  17. 如申請專利範圍第16項之用途，其中該癌症為B細胞相關性癌症，選自由以下所組成之群組：多發性骨髓瘤(multiple myeloma)、惡性漿細胞腫瘤(malignant plasma cell neoplasm)、何杰金氏淋巴瘤(Hodgkin’s lymphoma)、結節性淋巴細胞為主型何杰金氏淋巴瘤(nodular lymphocyte predominant Hodgkin’s lymphoma)、卡勒氏病(Kahler’s disease)及骨髓瘤病(Myelomatosis)、漿細胞白血病(plasma cell leukemia)、漿細胞瘤(plasmacytoma)、B細胞前淋巴細胞白血病(B-cell prolymphocytic leukemia)、髮樣細胞白血病(hairy cell leukemia)、B細胞非何杰金氏淋巴瘤(B-cell non-Hodgkin’s lymphoma)(NHL)、急性骨髓性白血病(acute myeloid leukemia)(AML)、慢性淋巴細胞性白血病(chronic lymphocytic leukemia)(CLL)、急性淋巴細胞性白血病(acute lymphocytic leukemia)(ALL)、慢性骨髓性白血病(chronic myeloid leukemia)(CML)、濾泡性淋巴瘤(follicular lymphoma)、伯基特氏淋巴瘤(Burkitt’s lymphoma)、邊緣區淋巴瘤(marginal zone lymphoma)、被套細胞淋巴瘤(mantle cell lymphoma)、大細胞淋巴瘤(large cell lymphoma)、前體B淋巴母細胞淋巴瘤(precursor B-lymphoblastic lymphoma)、骨髓性白血病 (myeloid leukemia)、華氏巨球蛋白血症(Waldenstrom’s macroglobulienemia)、瀰漫性大B細胞淋巴瘤(diffuse large B cell lymphoma)、濾泡性淋巴瘤(follicular lymphoma)、邊緣區淋巴瘤(marginal zone lymphoma)、黏膜相關性淋巴組織淋巴瘤(mucosa-associated lymphatic tissue lymphoma)、小細胞淋巴細胞性淋巴瘤(small cell lymphocytic lymphoma)、被套細胞淋巴瘤(mantle cell lymphoma)、伯基特淋巴瘤(Burkitt lymphoma)、原發性縱隔(胸腺)大B細胞淋巴瘤(primary mediastinal(thymic)large B-cell lymphoma)、淋巴漿細胞淋巴瘤(lymphoplasmactyic lymphoma)、華氏巨球蛋白血症(Waldenström macroglobulinemia)、結內邊緣區B細胞淋巴瘤(nodal marginal zone B cell lymphoma)、脾邊緣區淋巴瘤(splenic marginal zone lymphoma)、血管內大B細胞淋巴瘤(intravascular large B-cell lymphoma)、原發性滲出性淋巴瘤(primary effusion lymphoma)、淋巴瘤樣肉芽腫病(lymphomatoid granulomatosis)、富於T細胞/組織細胞大B細胞淋巴瘤(T cell/histiocyte-rich large B-cell lymphoma)、原發性中樞神經系統淋巴瘤(primary central nervous system lymphoma)、原發性皮膚瀰漫性大B細胞淋巴瘤(腿型)(primary cutaneous diffuse large B-cell lymphoma(leg type))、老年人之EBV陽性瀰漫性大B細胞淋巴瘤(EBV positive diffuse large B-cell lymphoma)、與發炎有關之瀰漫性大B細胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma)、血管內大B細胞淋巴瘤(intravascular large B-cell lymphoma)、ALK陽性大B細胞淋巴瘤(ALK-positive large B-cell lymphoma)、漿母細胞淋巴瘤(plasmablastic lymphoma)、HHV8相關性多中心型克斯特曼病(HHV8-associated multicentric Castleman disease)中產生之大B細胞淋巴瘤、特徵介於瀰漫性大B細胞淋巴瘤與伯基特淋巴瘤之間的未分類B細胞淋巴瘤、特徵介於瀰漫性大B細胞淋巴瘤與傳統何杰金氏淋巴瘤之間的未分類B細胞淋巴瘤、及其他B細胞相關性淋巴瘤。
  18. 一種如申請專利範圍第1至9項中任一項之抗體或抗原結合片段於製造藥劑之用途，該藥劑係用於抑制具有表現BCMA之惡性細胞的個體之腫瘤生長或進展。
  19. 一種如申請專利範圍第1至9項中任一項之抗體或抗原結合片段於製造藥劑之用途，該藥劑係用於抑制個體之表現BCMA的惡性細胞之轉移。
  20. 一種如申請專利範圍第1至9項中任一項之抗體或抗原結合片段於製造藥劑之用途，該藥劑係用於誘導具有表現BCMA之惡性細胞的個體之腫瘤消退。
  21. 如申請專利範圍第15項之用途，其中該病症為自體免疫失調症。
  22. 如申請專利範圍第21項之用途，其中該自體免疫失調症為全身性紅斑性狼瘡或類風濕性關節炎。
  23. 一種經分離之抗體或其抗原結合片段，其特異性地結合至CD3，其中該抗體包含SEQ ID NO：320、322、 324、326、328、330、345、347、349、351、444、354、356、378、442、380、382、384、386、388、390、392、394、396、398、或400所示之VH序列的VH CDR1、VH CDR2、及VH CDR3；及/或輕鏈可變(VL)區，其包含SEQ ID NO：319、321、323、325、327、329、344、346、348、350、352、355、377、443、445、379、381、383、385、387、389、391、393、395、397、或399所示之VL序列的VL CDR1、VL CDR2、及VL CDR3。
  24. 如申請專利範圍第23項之抗體或抗原結合片段，其中該抗體包含SEQ ID NO：324或388所示之VH序列的VH CDR1、VH CDR2、及VH CDR3；及/或輕鏈可變(VL)區，其包含SEQ ID NO：323或387所示之VL序列的VL CDR1、VL CDR2、及VL CDR3。
  25. 如申請專利範圍第23項之抗體或抗原結合片段，其中該VH區包含(i)VH互補決定區一(CDR1)，其包含SEQ ID NO：331、332、333、401、402、403、407、408、415、416、418、419、420、424、425、426、446、447、或448所示之序列；(ii)VH CDR2，其包含SEQ ID NO：334、336、337、338、339、404、405、409、410、411、412、413、414、417、418、421、422、427、428、449、或450所示之序列；及iii)VH CDR3，其包含SEQ ID NO：335、406、423、429、或451所示之序列；及/或輕鏈可變(VL)區，其包含(i)VL CDR1，其包含SEQ ID NO：340、343、430、431、435、或440、441所示之序 列；(ii)VL CDR2，其包含SEQ ID NO：341、433、452、或436所示之序列；及(iii)VL CDR3，其包含SEQ ID NO：342、432、434、437、438、439、446、或453所示之序列。
  26. 如申請專利範圍第25項之抗體或抗原結合片段，其中該VH區包含(i)VH互補決定區一(CDR1)，其包含SEQ ID NO：331、332、333、401、407、或408所示之序列；(ii)VH CDR2，其包含SEQ ID NO：336、404、405、或417所示之序列；及iii)VH CDR3，其包含SEQ ID NO：335或406所示之序列；及/或輕鏈可變(VL)區，其包含(i)VL CDR1，其包含SEQ ID NO：343或441所示之序列；(ii)VL CDR2，其包含SEQ ID NO：341或436所示之序列；及(iii)VL CDR3，其包含SEQ ID NO：342或439所示之序列。
  27. 一種經分離之抗體，其特異性地結合至CD3且與申請專利範圍第23項之抗體競爭。
  28. 一種醫藥組成物，其包含申請專利範圍第23至26項中任一項之抗體。
  29. 一種經分離之多核苷酸，其包含編碼申請專利範圍第23至26項中任一項之抗體的核苷酸序列。
  30. 一種載體，其包含申請專利範圍第29項之多核苷酸。
  31. 一種經分離之宿主細胞，其重組產生申請專利範圍第23至26項中任一項之抗體或抗原結合片段。
  32. 一種製造抗體之方法，其包含將申請專利範圍第31項之宿主細胞於導致抗體產生之條件下培養，再將該抗體由宿主細胞或培養物中分離出來。
  33. 一種雙特異性抗體，其中該雙特異性抗體為全長人類抗體，其包含雙特異性抗體之第一抗體可變結構域，該第一抗體可變結構域可藉由特異地結合至位在人類免疫效應細胞上的效應抗原而募集人類免疫效應細胞的活性，且包含雙特異性抗體之第二抗體可變結構域，該第二抗體可變結構域可特異性地結合至標靶抗原，其中該第一抗體可變結構域包含重鏈可變(VH)區，其包含SEQ ID NO：320、322、324、326、328、330、345、347、349、351、444、354、356、378、442、380、382、384、386、388、390、392、394、396、398、或400所示之VH序列的VH CDR1、VH CDR2、及VH CDR3；及/或輕鏈可變(VL)區，其包含SEQ ID NO：319、321、323、325、327、329、344、346、348、350、352、355、377、443、445、379、381、383、385、387、389、391、393、395、397、或399所示之VL序列的VL CDR1、VL CDR2、及VL CDR3。
  34. 如申請專利範圍第33項之雙特異性抗體，其中該第一抗體可變結構域包含重鏈可變(VH)區，其包含SEQ ID NO：SEQ ID NO：331、332、333、401、402、403、407、408、415、416、418、419、420、424、425、426、446、447、或448所示之VH序列的VH CDR1、VH CDR2、及VH CDR3；(ii)VH CDR2，其包含SEQ ID NO：334、336、337、338、339、404、405、409、410、411、412、413、414、417、418、421、422、427、428、449、或450所示之序列；及iii)VH CDR3，其包含SEQ ID NO：335、406、423、429、或451所示之序列；及/或輕鏈可變(VL)區，其包含(i)VL CDR1，其包含SEQ ID NO：340、343、430、431、435、或440、441所示之序列；(ii)VL CDR2，其包含SEQ ID NO：341、433、452、或436所示之序列；及(iii)VL CDR3，其包含SEQ ID NO：342、432、434、437、438、439、446、或453所示之序列。
  35. 如申請專利範圍第34項之雙特異性抗體，其中該第一抗體可變結構域包含重鏈可變(VH)區，其包含SEQ ID NO：324或388所示之VH序列的VH CDR1、VH CDR2、及VH CDR3；及/或輕鏈可變(VL)區，其包含SEQ ID NO：323或387所示之VL序列的VL CDR1、VL CDR2、及VL CDR3；且該第二抗體可變結構域包含重鏈可變(VH)區，其包含SEQ ID NO：112所示之VH序列的VH CDR1、VH CDR2、及VH CDR3；及/或輕鏈可變(VL)區，其包含SEQ ID NO：38所示之VL序列的VL CDR1、VL CDR2、及VL CDR3。
  36. 一種雙特異性抗體，其中該雙特異性抗體為全長人類抗體，其包含雙特異性抗體之第一抗體可變結構域，該第一抗體可變結構域可藉由特異地結合至位在人類免疫 效應細胞上的效應抗原而募集人類免疫效應細胞的活性，且包含雙特異性抗體之第二抗體可變結構域，該第二抗體可變結構域可特異性地結合至標靶抗原，其中該第一抗體可變結構域包含a.重鏈可變(VH)區，其包含(i)VH互補決定區一(CDR1)，其包含SEQ ID NO：331、332、333、401、402、403、407、408、415、416、418、419、420、424、425、426、446、447、或448所示之序列；(ii)VH CDR2，其包含SEQ ID NO：334、336、337、338、339、404、405、409、410、411、412、413、414、417、418、421、422、427、428、449、或450所示之序列；及iii)VH CDR3，其包含SEQ ID NO：335、406、423、429、或451所示之序列；及/或b.輕鏈可變(VL)區，其包含(i)VL CDR1，其包含SEQ ID NO：340、343、430、431、435、或440、441所示之序列；(ii)VL CDR2，其包含SEQ ID NO：341、433、452、或436所示之序列；及(iii)VL CDR3，其包含SEQ ID NO：342、432、434、437、438、439、446、或453所示之序列。
  37. 如申請專利範圍第36項之雙特異性抗體，其中該第二抗體可變結構域包含 a.重鏈可變(VH)區，其包含(i)VH互補決定區一(CDR1)，其包含序列SYX1MX2，其中X1為A或P；且X2為T、N、或S(SEQ ID NO：301)，GFTFX1SY，其中X1為G或S(SEQ ID NO：302)，或GFTFX1SYX2MX3，其中X1為G或S，X2為A或P；且X3為T、N、或S(SEQ ID NO：303)；(ii)VH CDR2，其包含序列AX1X2X3X4GX5X6X7X8YADX9X10KG，其中X1為I、V、T、H、L、A、或C；X2為S、D、G、T、I、L、F、M、或V；X3為G、Y、L、H、D、A、S、或M；X4為S、Q、T、A、F、或W；X5為G或T；X6為N、S、P、Y、W、或F；X7為S、T、I、L、T、A、R、V、K、G、或C；X8為F、Y、P、W、H、或G；X9為V、R、或L；且X10為G或T(SEQ ID NO：305)、或X1X2X3X4X5X6，其中X1為S、V、I、D、G、T、L、F、或M；X2為G、Y、L、H、D、A、S、或M；X3為S、G、F、或W；X4為G或S；X5為G或T；且X6為N、S、P、Y、或W(SEQ ID NO：306)；及iii)VH CDR3，其包含序列VSPIX1X2X3X4，其中X1為A或Y；X2為A或S；且X3為G、Q、L、P、或E(SEQ ID NO：307)、或YWPMX1X2，其中X1為D、S、T、或A；且X2為I、S、L、P、或D(SEQ ID NO： 308)；及/或b.輕鏈可變(VL)區，其包含(i)VL CDR1，其包含序列X1X2X3X4X5X6X7X8X9X10X11X12，其中X1為R、G、W、A、或C；X2為A、P、G、L、C、或S；X3為S、G、或R；X4為Q、C、E、V、或I；X5為S、L、P、G、A、R、或D；X6為V、G、或I；X7為S、E、D、或P；X8為S、P、F、A、M、E、V、N、D、或Y；X9為I、T、V、E、S、A、M、Q、Y、H、或R；X10為Y或F；X11為L、W、或P；且X12為A、S、或G(SEQ ID NO：309)；(ii)VL CDR2，其包含序列X1ASX2RAX3，其中X1為G或D；X2為S或I；且X3為T或P(SEQ ID NO：310)；及(iii)VL CDR3，其包含序列QQYX1X2X3PX4T，其中X1為G、Q、E、L、F、A、S、M、K、R、或Y；X2為S、R、T、G、V、F、Y、D、A、H、V、E、K、或C；X3為W、F、或S；且X4為L或I(SEQ ID NO：311)、或QQYX1X2X3PX4，其中X1為G、Q、E、L、F、A、S、M、R、K、或Y；X2為S、R、T、G、R、V、D、A、H、E、K、C、F、或Y；X3為W、S、或F；且X4為L或I(SEQ ID NO：312)。
  38. 如申請專利範圍第36項之雙特異性抗體，其中該第二抗體可變結構域包含重鏈可變(VH)區，其包含(i) VH CDR1，其包含SEQ ID NO：150、151、152、156、157、348、349、353、354、或355所示之序列；(ii)VH CDR2，其包含SEQ ID NO：169、154、194、159、195、196、162、158、198、177、178、199、200、201、202、203、204、206、207、208、172、203、204、350、351、356或357所示之序列；及(iii)VH CDR3，其包含SEQ ID NO：155、161、197、205、164、或352、或358所示之序列；及/或其中該輕鏈可變(VL)區包含(i)VL CDR1，其包含SEQ ID NO：209、271、273、275、251、277、260、279、245、283、285、287、290、292、235、297、299、或361所示之序列；(ii)VL CDR2，其包含SEQ ID NO：221、359或362所示之序列；及(iii)VL CDR3，其包含SEQ ID NO：211、225、272、274、276、278、280、281、282、284、286、288、289、291、293、294、229、296、298、300或360所示之序列。
  39. 如申請專利範圍第38項之雙特異性抗體，其中該a.第一抗體可變結構域包含重鏈可變(VH)區，其包含(i)VH互補決定區一(CDR1)，其包含SEQ ID NO：331、332、333、401、407、或408所示之序列；(ii)VH CDR2，其包含SEQ ID NO：336、417、404、或405所示之序列；及iii)VH CDR3，其包含SEQ ID NO：335或406所示之序列；及/或輕鏈可變(VL)區，其包含(i)VL CDR1，其包含SEQ ID NO：343或441所示之序列；(ii)VL CDR2，其包含SEQ ID NO：341或436所示之序列；及(iii)VL CDR3，其包含SEQ ID NO：342或439所示之序列；且該b.第二抗體可變結構域包含重鏈VH區，其包含重鏈可變(VH)區，該重鏈可變(VH)區包含(i)VH CDR1，其包含SEQ ID NO：151、156、或157所示之序列；(ii)VH CDR2，其包含SEQ ID NO：158或159所示之序列；及(iii)VH CDR3，其包含SEQ ID NO：155所示之序列；且/或其中該輕鏈可變(VL)區包含(i)VL CDR1，其包含SEQ ID NO：209所示之序列；(ii)VL CDR2，其包含SEQ ID NO：221所示之序列；及(iii)VL CDR3，其包含SEQ ID NO：225所示之序列。
  40. 如申請專利範圍第33至39項中任一項之雙特異性抗體，其中該異源二聚體蛋白之該第一及該第二抗體可變結構域均包含人類IgG2(SEQ ID NO：493)之鉸鏈區位置223、225、及228和CH3區位置409或368(EU編號方案)的胺基酸修飾。
  41. 如申請專利範圍第40項之雙特異性抗體，其進一步包含人類IgG2之位置265的胺基酸修飾。
  42. 一種核酸，其編碼申請專利範圍第33至41項中任一項之抗體。
  43. 一種載體，其包含申請專利範圍第42項之核酸。
  44. 一種宿主細胞，其包含申請專利範圍第42項之核酸或申請專利範圍第43項之載體。
  45. 如申請專利範圍第33至39項中任一項之雙特異性抗體，其係作為藥劑。
  46. 如申請專利範圍第45項之雙特異性抗體，其中該藥劑係用於治療B細胞相關性癌症，該B細胞相關性癌症選自由以下所組成之群組：多發性骨髓瘤(multiple myeloma)、惡性漿細胞腫瘤(malignant plasma cell neoplasm)、何杰金氏淋巴瘤(Hodgkin’s lymphoma)、結節性淋巴細胞為主型何杰金氏淋巴瘤(nodular lymphocyte predominant Hodgkin’s lymphoma)、卡勒氏病(Kahler’s disease)及骨髓瘤病(Myelomatosis)、漿細胞白血病(plasma cell leukemia)、漿細胞瘤(plasmacytoma)、B細胞前淋巴細胞白血病(B-cell prolymphocytic leukemia)、髮樣細胞白血病(hairy cell leukemia)、B細胞非何杰金氏淋巴瘤(B-cell non-Hodgkin’s lymphoma)(NHL)、急性骨髓性白血病(acute myeloid leukemia)(AML)、慢性淋巴細胞性白血病(chronic lymphocytic leukemia)(CLL)、急性淋巴細胞性白血病(acute lymphocytic leukemia)(ALL)、慢性骨髓性白血病(chronic myeloid leukemia)(CML)、濾泡性淋巴瘤(follicular lymphoma)、伯基特氏淋巴瘤(Burkitt’s lymphoma)、邊緣區淋巴瘤(marginal zone lymphoma)、被 套細胞淋巴瘤(mantle cell lymphoma)、大細胞淋巴瘤(large cell lymphoma)、前體B淋巴母細胞淋巴瘤(precursor B-lymphoblastic lymphoma)、骨髓性白血病(myeloid leukemia)、華氏巨球蛋白血症(Waldenstrom’s macroglobulienemia)、瀰漫性大B細胞淋巴瘤(diffuse large B cell lymphoma)、濾泡性淋巴瘤(follicular lymphoma)、邊緣區淋巴瘤(marginal zone lymphoma)、黏膜相關性淋巴組織淋巴瘤(mucosa-associated lymphatic tissue lymphoma)、小細胞淋巴細胞性淋巴瘤(small cell lymphocytic lymphoma)、被套細胞淋巴瘤(mantle cell lymphoma)、伯基特淋巴瘤(Burkitt lymphoma)、原發性縱隔(胸腺)大B細胞淋巴瘤(primary mediastinal(thymic)large B-cell lymphoma)、淋巴漿細胞淋巴瘤(lymphoplasmactyic lymphoma)、華氏巨球蛋白血症(Waldenström macroglobulinemia)、結內邊緣區B細胞淋巴瘤(nodal marginal zone B cell lymphoma)、脾邊緣區淋巴瘤(splenic marginal zone lymphoma)、血管內大B細胞淋巴瘤(intravascular large B-cell lymphoma)、原發性滲出性淋巴瘤(primary effusion lymphoma)、淋巴瘤樣肉芽腫病(lymphomatoid granulomatosis)、富於T細胞/組織細胞大B細胞淋巴瘤(T cell/histiocyte-rich large B-cell lymphoma)、原發性中樞神經系統淋巴瘤(primary central nervous system lymphoma)、原發性皮膚瀰漫性大B細胞淋巴瘤(腿型)(primary cutaneous diffuse large B-cell lymphoma(leg type))、老年人之EBV陽性瀰漫性大B細胞淋巴瘤(EBV positive diffuse large B-cell lymphoma)、與發炎有關之瀰漫性大B細胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma)、血管內大B細胞淋巴瘤(intravascular large B-cell lymphoma)、ALK陽性大B細胞淋巴瘤(ALK-positive large B-cell lymphoma)、漿母細胞淋巴瘤(plasmablastic lymphoma)、HHV8相關性多中心型克斯特曼病(HHV8-associated multicentric Castleman disease)中產生之大B細胞淋巴瘤、特徵介於瀰漫性大B細胞淋巴瘤與伯基特淋巴瘤之間的未分類B細胞淋巴瘤、特徵介於瀰漫性大B細胞淋巴瘤與傳統何杰金氏淋巴瘤之間的未分類B細胞淋巴瘤、及其他B細胞相關性淋巴瘤。
  47. 一種如申請專利範圍第33至41項中任一項之雙特異性抗體於製造藥劑之用途，該藥劑係用於治療有此治療需求之個體的B細胞相關性癌症，其中該治療包含：a.提供根據申請專利範圍第33至41項中任一項之雙特異性抗體；及b.將該雙特異性抗體投予該患者。
  48. 一種醫藥組成物，其包含申請專利範圍第33至41項中任一項之雙特異性抗體。
  49. 一種如申請專利範圍第33至41項中任一項之雙特異性抗體於製造藥劑之用途，該藥劑係用於治療個體之與表現腫瘤抗原的惡性細胞有關之病症。
  50. 如申請專利範圍第49項之用途，其中該病症為 癌症。
  51. 如申請專利範圍第50項之用途，其中該癌症為B細胞相關性癌症，選自由以下所組成之群組：多發性骨髓瘤(multiple myeloma)、惡性漿細胞腫瘤(malignant plasma cell neoplasm)、何杰金氏淋巴瘤(Hodgkin’s lymphoma)、結節性淋巴細胞為主型何杰金氏淋巴瘤(nodular lymphocyte predominant Hodgkin’s lymphoma)、卡勒氏病(Kahler’s disease)及骨髓瘤病(Myelomatosis)、漿細胞白血病(plasma cell leukemia)、漿細胞瘤(plasmacytoma)、B細胞前淋巴細胞白血病(B-cell prolymphocytic leukemia)、髮樣細胞白血病(hairy cell leukemia)、B細胞非何杰金氏淋巴瘤(B-cell non-Hodgkin’s lymphoma)(NHL)、急性骨髓性白血病(acute myeloid leukemia)(AML)、慢性淋巴細胞性白血病(chronic lymphocytic leukemia)(CLL)、急性淋巴細胞性白血病(acute lymphocytic leukemia)(ALL)、慢性骨髓性白血病(chronic myeloid leukemia)(CML)、濾泡性淋巴瘤(follicular lymphoma)、伯基特氏淋巴瘤(Burkitt’s lymphoma)、邊緣區淋巴瘤(marginal zone lymphoma)、被套細胞淋巴瘤(mantle cell lymphoma)、大細胞淋巴瘤(large cell lymphoma)、前體B淋巴母細胞淋巴瘤(precursor B-lymphoblastic lymphoma)、骨髓性白血病(myeloid leukemia)、華氏巨球蛋白血症(Waldenstrom’s macroglobulienemia)、瀰漫性大B細胞淋巴瘤(diffuse large B cell lymphoma)、濾泡性淋巴瘤(follicular lymphoma)、邊緣區淋巴瘤(marginal zone lymphoma)、黏膜相關性淋巴組織淋巴瘤(mucosa-associated lymphatic tissue lymphoma)、小細胞淋巴細胞性淋巴瘤(small cell lymphocytic lymphoma)、被套細胞淋巴瘤(mantle cell lymphoma)、伯基特淋巴瘤(Burkitt lymphoma)、原發性縱隔(胸腺)大B細胞淋巴瘤(primary mediastinal(thymic)large B-cell lymphoma)、淋巴漿細胞淋巴瘤(lymphoplasmactyic lymphoma)、華氏巨球蛋白血症(Waldenström macroglobulinemia)、結內邊緣區B細胞淋巴瘤(nodal marginal zone B cell lymphoma)、脾邊緣區淋巴瘤(splenic marginal zone lymphoma)、血管內大B細胞淋巴瘤(intravascular large B-cell lymphoma)、原發性滲出性淋巴瘤(primary effusion lymphoma)、淋巴瘤樣肉芽腫病(lymphomatoid granulomatosis)、富於T細胞/組織細胞大B細胞淋巴瘤(T cell/histiocyte-rich large B-cell lymphoma)、原發性中樞神經系統淋巴瘤(primary central nervous system lymphoma)、原發性皮膚瀰漫性大B細胞淋巴瘤(腿型)(primary cutaneous diffuse large B-cell lymphoma(leg type))、老年人之EBV陽性瀰漫性大B細胞淋巴瘤(EBV positive diffuse large B-cell lymphoma)、與發炎有關之瀰漫性大B細胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma)、血管內大B細胞淋巴瘤(intravascular large B-cell lymphoma)、ALK陽性大B細胞淋巴瘤(ALK- positive large B-cell lymphoma)、漿母細胞淋巴瘤(plasmablastic lymphoma)、HHV8相關性多中心型克斯特曼病(HHV8-associated multicentric Castleman disease)中產生之大B細胞淋巴瘤、特徵介於瀰漫性大B細胞淋巴瘤與伯基特淋巴瘤之間的未分類B細胞淋巴瘤、特徵介於瀰漫性大B細胞淋巴瘤與傳統何杰金氏淋巴瘤之間的未分類B細胞淋巴瘤、及其他B細胞相關性淋巴瘤。
  52. 一種如申請專利範圍第37至41項中任一項之雙特異性抗體於製造藥劑之用途，該藥劑係用於抑制具有表現BCMA之惡性細胞的個體之腫瘤生長或進展。
  53. 一種如申請專利範圍第37至41項中任一項之雙特異性抗體於製造藥劑之用途，該藥劑係用於抑制個體之表現BCMA的惡性細胞之轉移。
  54. 一種如申請專利範圍第37至41項中任一項之雙特異性抗體於製造藥劑之用途，該藥劑係用於誘導具有表現BCMA之惡性細胞的個體之腫瘤消退。
  55. 一種如申請專利範圍第37至41項中任一項之雙特異性抗體於製造藥劑之用途，該藥劑係用於治療有此治療需求之個體的多發性骨髓瘤，其中該治療包括將有效量之包含如申請專利範圍第37至41項中任一項之雙特異性抗體的醫藥組成物及一或多種選自由硼替左米(bortezomib)、雷利米得(lenalidomide)、卡菲左米(carfilzomib)、及阿黴素(doxorubicin)所組成之群組的其他治療劑投予該個體。
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