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TW202039544A - 靶定ｂ細胞成熟抗原之嵌合抗原受體及其使用之方法 - Google Patents

靶定ｂ細胞成熟抗原之嵌合抗原受體及其使用之方法 Download PDF

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TW202039544A
TW202039544A TW108142941A TW108142941A TW202039544A TW 202039544 A TW202039544 A TW 202039544A TW 108142941 A TW108142941 A TW 108142941A TW 108142941 A TW108142941 A TW 108142941A TW 202039544 A TW202039544 A TW 202039544A
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TW
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seq
cells
car
amino acid
Prior art date
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TW108142941A
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東殷 張
阿隆 布拉庫瑪倫
希瑞爾 康圖
Original Assignee
美商艾洛基因醫療公司
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Publication date
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Abstract

本文提供BCMA CAR和CAR-T細胞、彼之製造方法及使用方法。於一些實施態樣中，提供用於治療和臨床管理有此需要之個體的多發性骨髓瘤之特定的給藥方案、重新給藥方案及具有淋巴清除之組合方案。

Description

靶定Ｂ細胞成熟抗原之嵌合抗原受體及其使用之方法
多發性骨髓瘤(multiple myeloma)(MM)為一種惡性腫瘤，其特徵在於同源漿細胞(clonal plasma cell)的累積。MM大部分仍然無法治癒，且大多數個體會隨著時間發展出抵抗力。 序列表
本申請案包含序列表，該序列表已經以ASCII格式以電子方式提交，且其全部內容以引用方式併入本文。該創建於2019年11月8日之ASCII副本被命名為AT-022-04TW_SL.txt且大小為398,670字節。
B細胞成熟抗原(BCMA、CD269或TNFRSF17)為腫瘤壞死因子受體(TNFR)超家族之成員且參與促生存(pro-survival)信號傳導。BCMA係在含有t(4；16)轉位之惡性人類T細胞淋巴瘤中被鑑定出。BCMA高度表現於所有階段之MM的正常和惡性漿細胞，以及某些其他漿細胞惡性腫瘤(例如DLBCL)中。BCMA亦表現在大多數或所有骨髓瘤細胞中，而不表現在非B細胞譜系中。
過繼性轉移經遺傳工程修飾之T細胞以識別與惡性腫瘤相關之抗原顯示出有望作為治療癌症之新方法。T細胞可經遺傳工程修飾以表現嵌合抗原受體(CAR)，該嵌合抗原受體為由抗原識別部分和T細胞活化結構域所組成之融合蛋白。
對於可有效治療MM(包括復發性(relapsed)/難治性(refractory)MM)之干預措施的醫學需求仍未被滿足。本文提供能解決該需求之方法和組成物。
本文提供與BCMA結合之嵌合抗原受體 (CAR)；以及用於治療多發性骨髓瘤(MM)(包括復發性和/或難治性MM)之給藥範式。
更具體地，於一態樣中，本文提供治療個體之MM的方法，該方法包含對該個體投予至少一個劑量之包含抗人BCMA CAR的同種異體嵌合抗原受體(CAR)-T細胞(BCMA CAR-T細胞)，其中該至少一個劑量為約7×10^6個細胞/劑量至約480×10^6個細胞/劑量。
於一些實施態樣中，該個體之體重≥50kg，且該方法包含投予至少一個劑量之BCMA CAR-T細胞，其中該劑量係在約20×10^6個細胞/劑量至約480×10^6個細胞/劑量之範圍內。於一些實施態樣中，該至少一個劑量為約20×10^6個細胞/劑量、約40×10^6個細胞/劑量、約120×10^6個細胞/劑量、約360×10^6個細胞/劑量、或約480×10^6個細胞/劑量。於一些實施態樣中，該至少一個劑量為約20×10^6個細胞/劑量至約40×10^6個細胞/劑量、約40×10^6個細胞/劑量至約120×10^6個細胞/劑量、約120×10^6個細胞/劑量至約360×10^6個細胞/劑量、或約360×10^6個細胞/劑量至約480×10^6個細胞/劑量。
於一些實施態樣中，該個體之體重＞50kg，且該方法包含投予至少一個劑量之BCMA CAR-T細胞，其中該劑量係在約20×10^6個細胞/劑量至約480×10^6個細胞/劑量之範圍內。於一些實施態樣中，該至少一個劑量為約20×10^6個細胞/劑量、約40×10^6個細胞/劑量、約160×10^6個細胞/劑量、約240×10^6個細胞/劑量、約320×10^6個細胞/劑量、或約480×10^6個細胞/劑量。於一些實施態樣中，該至少一個劑量為約20×10^6個細胞/劑量至約40×10^6個細胞/劑量、約40×10^6個細胞/劑量至約160×10^6個細胞/劑量、約160×10^6個細胞/劑量至約240×10^6個細胞/劑量、約240×10^6個細胞/劑量至約320×10^6個細胞/劑量、約160×10^6個細胞/劑量至約320×10^6個細胞/劑量、或約320×10^6個細胞/劑量至約480×10^6個細胞/劑量。
於一些實施態樣中，該個體之體重＜50kg，且該方法包含投予至少一個劑量之BCMA CAR-T細胞，其中該劑量係在約7×10^6個細胞/劑量至約360×10^6個細胞/劑量之範圍內。於一些實施態樣中，該至少一個劑量為約7×10^6個細胞/劑量、約14×10^6個細胞/劑量、約20×10^6個細胞/劑量、約80×10^6個細胞/劑量、約240×10^6個細胞/劑量、或約360×10^6個細胞/劑量。於一些實施態樣中，該至少一個劑量為約7×10^6或14×10^6個細胞/劑量至約20×10^6個細胞/劑量、約20×10^6個細胞/劑量至約80×10^6個細胞/劑量、約80×10^6個細胞/劑量至約240×10^6個細胞/劑量、或約240×10^6個細胞/劑量至約360×10^6個細胞/劑量。
於一些實施態樣中，該個體之體重≤50kg，且該方法包含投予至少一個劑量之BCMA CAR-T細胞，其中該劑量係在約14×10^6個細胞/劑量至約320×10^6個細胞/劑量之範圍內。於一些實施態樣中，該至少一個劑量為約14×10^6個細胞/劑量、約20×10^6個細胞/劑量、約80×10^6個細胞/劑量、約160×10^6個細胞/劑量、約200×10^6個細胞/劑量、或約320×10^6個細胞/劑量。於一些實施態樣中，該至少一個劑量為約14×10^6個細胞/劑量至約20×10^6個細胞/劑量、約20×10^6個細胞/劑量至約80×10^6個細胞/劑量、約80×10^6個細胞/劑量至約200×10^6個細胞/劑量、約80×10^6個細胞/劑量至約160×10^6個細胞/劑量、約160×10^6個細胞/劑量至約200×10^6個細胞/劑量、或約200×10^6個細胞/劑量至約320×10^6個細胞/劑量。
於一些實施態樣中，該個體尚未接受任何針對多發性骨髓瘤之先前療法。於一些實施態樣中，該個體已接受至少一種、二種或三種用於多發性骨髓瘤之先前療法。於一些實施態樣中，該給藥方案為第一線療法。於一些實施態樣中，該給藥方案為第二線療法。於一些實施態樣中，該給藥方案為第三線療法。於一些實施態樣中，該給藥方案為第四線療法。
於一些實施態樣中，該個體已接受先前之化療方案；先前之基於生物製劑的方案和/或先前之基於自體細胞療法的方案(例如幹細胞療法)。
於一些實施態樣中，該個體患有復發性MM。於一些實施態樣中，該個體患有難治性MM。於一些實施態樣中，該個體患有難治性MM和復發性MM。
於一些實施態樣中，該BCMA CAR-T細胞包含CAR，該CAR包含胞外結合結構域，該胞外結合結構域包含單鏈Fv片段(scFv)，其中該scFv包含重鏈可變(VH)區和輕鏈可變(VL)區，其中該VH區包含VH互補決定區1(VH CDR1)、VH互補決定區2(VH CDR2)和VH互補決定區3(VH CDR3)且該VL區包含VL互補決定區1(VL CDR1)、VL互補決定區2(VL CDR2)和VL互補決定區3(VL CDR3)，其中：(a) 該VH CDR1包含SEQ ID NO：150、151或152之胺基酸序列；該VH CDR2包含SEQ ID NO：153或154之胺基酸序列；該VH CDR3包含SEQ ID NO：155之胺基酸序列；該VL CDR1包含SEQ ID NO：209之胺基酸序列；該VL CDR2包含SEQ ID NO：221之胺基酸序列；且該VL CDR3包含SEQ ID NO：222之胺基酸序列；(b) 該VH CDR1包含SEQ ID NO：150、151或152之胺基酸序列；該VH CDR2包含SEQ ID NO：187或188之胺基酸序列；該VH CDR3包含SEQ ID NO：155之胺基酸序列；該VL CDR1包含SEQ ID NO：249之胺基酸序列；該VL CDR2包含SEQ ID NO：221之胺基酸序列；且該VL CDR3包含SEQ ID NO：225之胺基酸序列；(c) 該VH CDR1包含SEQ ID NO：150、151或152之胺基酸序列；該VH CDR2包含SEQ ID NO：165或166之胺基酸序列；該VH CDR3包含SEQ ID NO：155之胺基酸序列；該VL CDR1包含SEQ ID NO：226之胺基酸序列；該VL CDR2包含SEQ ID NO：221之胺基酸序列；且該VL CDR3包含SEQ ID NO：227之胺基酸序列；(d) 該VH CDR1包含SEQ ID NO：151、156或157之胺基酸序列；該VH CDR2包含SEQ ID NO：159或162之胺基酸序列；該VH CDR3包含SEQ ID NO：161之胺基酸序列；該VL CDR1包含SEQ ID NO：251之胺基酸序列；該VL CDR2包含SEQ ID NO：252之胺基酸序列；且該VL CDR3包含SEQ ID NO：253之胺基酸序列；(e) 該VH CDR1包含SEQ ID NO：151、156或157之胺基酸序列；該VH CDR2包含SEQ ID NO：190或191之胺基酸序列；該VH CDR3包含SEQ ID NO：161之胺基酸序列；該VL CDR1包含SEQ ID NO：262之胺基酸序列；該VL CDR2包含SEQ ID NO：252之胺基酸序列；且該VL CDR3包含SEQ ID NO：263之胺基酸序列；(f) 該VH CDR1包含SEQ ID NO：150、151或152之胺基酸序列；該VH CDR2包含SEQ ID NO：154或169之胺基酸序列；該VH CDR3包含SEQ ID NO：155之胺基酸序列；該VL CDR1包含SEQ ID NO：271之胺基酸序列；該VL CDR2包含SEQ ID NO：221之胺基酸序列；且該VL CDR3包含SEQ ID NO：272之胺基酸序列；(g) 該VH CDR1包含SEQ ID NO：129、130或131之胺基酸序列；該VH CDR2包含SEQ ID NO：139或140之胺基酸序列；該VH CDR3包含SEQ ID NO：134之胺基酸序列；該VL CDR1包含SEQ ID NO：217之胺基酸序列；該VL CDR2包含SEQ ID NO：210之胺基酸序列；且該VL CDR3包含SEQ ID NO：216之胺基酸序列；(h) 該VH CDR1包含SEQ ID NO：151、156或157之胺基酸序列；該VH CDR2包含SEQ ID NO：158或159之胺基酸序列；該VH CDR3包含SEQ ID NO：155之胺基酸序列；該VL CDR1包含SEQ ID NO：209之胺基酸序列；該VL CDR2包含SEQ ID NO：221之胺基酸序列；且該VL CDR3包含SEQ ID NO：225之胺基酸序列；或(i) 該VH CDR1包含SEQ ID NO：129、130或131之胺基酸序列；該VH CDR2包含SEQ ID NO：132或133之胺基酸序列；該VH CDR3包含SEQ ID NO：137之胺基酸序列；該VL CDR1包含SEQ ID NO：377之胺基酸序列；該VL CDR2包含SEQ ID NO：210之胺基酸序列；且該VL CDR3包含SEQ ID NO：214之胺基酸序列。
於一些實施態樣中，該BCMA CAR之scFv 的VH區包含：VH CDR1，其包含SEQ ID NO：150、151、或152之胺基酸序列；VH CDR2，其包含SEQ ID NO：153或154之胺基酸序列；和VH CDR3，其包含SEQ ID NO：155之胺基酸序列；且該scFv之VL區包含：VL CDR1，其包含SEQ ID NO：209之胺基酸序列；VL CDR2，其包含SEQ ID NO：221之胺基酸序列；和VL CDR3，其包含SEQ ID NO：222之胺基酸序列。
於一些實施態樣中，該BCMA CAR之scFv的VH區包含：VH CDR1，其包含SEQ ID NO：151、156或157之胺基酸序列；VH CDR2，其包含SEQ ID NO：158或159之胺基酸序列；和VH CDR3，其包含SEQ ID NO：155之胺基酸序列；且該scFv之VL區包含：VL CDR1，其包含SEQ ID NO：209之胺基酸序列；VL CDR2，其包含SEQ ID NO：221之胺基酸序列；和VL CDR3，其包含SEQ ID NO：225之胺基酸序列。
於一些實施態樣中，該BCMA CAR-T細胞包含CAR，該CAR包含SEQ ID NO：344所示之胺基酸序列。於一些該等實施態樣中，該CAR進一步包含CD20表位。於一些該等實施態樣中，該CD20表位包含SEQ ID NO：397或SEQ ID NO：398所示之胺基酸序列。
於一些實施態樣中，該BCMA CAR-T細胞包含CAR，該CAR包含：CD8α訊息胜肽，其具有SEQ ID NO：318之序列；VH區，其具有SEQ ID NO：112之序列；GS連接子，其具有SEQ ID NO：333之序列；VL區，其具有SEQ ID NO：38之序列；CD8α鉸鏈，其具有SEQ ID NO：320之序列；CD8α跨膜結構域，其具有SEQ ID NO：322之序列；4-1BB胞內信號傳導結構域，其具有SEQ ID NO：323之序列；和CD3ζ胞內信號傳導結構域，其具有SEQ ID NO：324之序列。
於一些實施態樣中，該BCMA CAR-T細胞包含CAR，該CAR包含：CD8α訊息胜肽，其具有SEQ ID NO：318之序列；VH區，其具有SEQ ID NO：112之序列；GS連接子，其具有SEQ ID NO：333之序列；VL區，其具有SEQ ID NO：38之序列；CD20表位，其具有SEQ ID NO：398之序列；CD8α鉸鏈，其具有SEQ ID NO：320之序列；CD8α跨膜結構域，其具有SEQ ID NO：322之序列；4-1BB胞內信號傳導結構域，其具有SEQ ID NO：323之序列；和CD3ζ胞內信號傳導結構域，其具有SEQ ID NO：324之序列。
於一些實施態樣中，該BCMA CAR-T細胞包含CAR，該CAR包含：CD8α訊息胜肽，其具有SEQ ID NO：318之序列；VH區，其具有SEQ ID NO：33之序列；GS連接子，其具有SEQ ID NO：333之序列；VL區，其具有SEQ ID NO：34之序列；CD8α鉸鏈，其具有SEQ ID NO：320之序列；CD8α跨膜結構域，其具有SEQ ID NO：322之序列；4-1BB胞內信號傳導結構域，其具有SEQ ID NO：323之序列；和CD3ζ胞內信號傳導結構域，其具有SEQ ID NO：324之序列。
於一些實施態樣中，該BCMA CAR-T細胞包含CAR，該CAR包含：CD8α訊息胜肽，其具有SEQ ID NO：318之序列；VH區，其具有SEQ ID NO：33之序列；GS連接子，其具有SEQ ID NO：333之序列；VL區，其具有SEQ ID NO：34之序列；CD20表位，其具有SEQ ID NO：398之序列；CD8α鉸鏈，其具有SEQ ID NO：320之序列；CD8α跨膜結構域，其具有SEQ ID NO：322之序列；4-1BB胞內信號傳導結構域，其具有SEQ ID NO：323之序列；和CD3ζ胞內信號傳導結構域，其具有SEQ ID NO：324之序列。
於一些實施態樣中，該BCMA CAR-T細胞包含CAR，該CAR包含胞外結合結構域，該胞外結合結構域包含單鏈Fv片段(scFv)，其中該scFv包含VH區和VL區，其中該VH和VL區之組合係選自表1中所呈現之組合。於一些實施態樣中，該BCMA CAR-T細胞包含CAR，該CAR包含胞外配體結合結構域、第一跨膜結構域和胞內信號傳導結構域，其中該胞外結構域包含scFv，該scFv包含重鏈可變(VH)區和輕鏈可變(VL)區，該重鏈可變(VH)區包含表1中SEQ ID NO：33、72、39、76、83、92、25、112或8所示之序列；該輕鏈可變(VL)區包含表1中SEQ ID NO：34、73、40、77、84、93、18、38或80所示之序列，其中該第一跨膜結構域包含CD8α鏈跨膜結構域且其中該胞內信號傳導結構域包含CD3ζ信號傳導結構域和/或4-1BB信號傳導結構域。於一些實施態樣中，該VH包含SEQ ID NO：33且該VL包含SEQ ID NO：34。於一些實施態樣中，該VH包含SEQ ID NO：112且該VL包含SEQ ID NO：38。
於一些實施態樣中，該CAR-T細胞缺乏CD52。於一些實施態樣中，該CAR-T細胞缺乏TCRα和/或TCRβ。於一些實施態樣中，該CAR-T細胞不表現安全開關。於一些實施態樣中，該細胞之基因型為TCRαβ- 和CD52+/- 。
於一些實施態樣中，該個體在投予該至少一個劑量之前接受第一淋巴清除(lymphodepletion)方案。於一些實施態樣中，該第一淋巴清除方案包含投予氟達拉濱(fludarabine)和環磷醯胺(cyclophosphamide)。於一些實施態樣中，該第一淋巴清除方案包含投予氟達拉濱、環磷醯胺和抗CD52抗體。於一些實施態樣中，該第一淋巴清除方案包含投予抗CD52抗體。於一些實施態樣中，該第一淋巴清除方案包含僅投予抗CD52抗體。於一些實施態樣中，氟達拉濱之投予劑量為約30mg/m2 /天；環磷醯胺之投予劑量為約300mg/m2 /天；且CD52抗體之投予劑量為約10至約13mg/天、約13至20mg/天、約13至30mg/天、或約20至30mg/天。於一些實施態樣中，該第一淋巴清除方案係在投予該至少一個劑量之前約1至15天之間開始。於一些實施態樣中，該第一淋巴清除方案係在1、2、3、4或5天之過程中投予。於一些實施態樣中，在3天之過程中，該第一淋巴清除方案係在投予該至少一個劑量之前5天投予。於一些實施態樣中，在3天之過程中，該第一淋巴清除方案係在投予該至少一個劑量之前7天投予。
於一些實施態樣中，該個體接受該CAR-T細胞之後續劑量。
於另一態樣中，本文提供包含BCMA CAR-T細胞之配製劑。於一實施態樣中，該配製劑包含溶液，該溶液含有約5%二甲亞碸(DMSO)和14×10^6個細胞/mL。於另一實施態樣中，該細胞係配製在CryoStor®Basal Solution和CryoStor®CS10之1：1混合物(其導致二甲亞碸之最終濃度為5%)中，其中該配製劑之劑量強度為14×10^6個細胞/mL，其中該細胞之基因型為BCMA-CAR+_TCRαβ-_CD52+/-，且其中該BCMA CAR-T細胞包含CAR，該CAR包含胞外配體結合結構域、二個利妥昔單抗結合結構域、第一跨膜結構域和胞內信號傳導結構域，其中該胞外結構域包含scFv，該scFv包含重鏈可變(VH)區和輕鏈可變(VL)區，該重鏈可變(VH)區包含表1之SEQ ID NO：33、72、39、76、83、92、25、112或8所示之序列；該輕鏈可變(VL)區包含表1之SEQ ID NO：34、73、40、77、84、93、18、38或80所示之序列，其中該第一跨膜結構域包含CD8α鏈跨膜結構域且其中該胞內信號傳導結構域包含CD3ζ信號傳導結構域和/或4-1BB信號傳導結構域。
詳細說明
本揭示內容提供嵌合抗原受體(CAR)和包含與BCMA特異性結合之CAR的免疫細胞(例如T細胞)(CAR-T細胞)，以及用於治療MM(包括難治性/復發性MM)的給藥方案。本揭示內容亦提供編碼這些CAR之多核苷酸、包含這些CAR-T細胞之組成物，以及製造和使用這些CAR和CAR-T細胞的方法。
本揭示內容提供與BCMA(例如人BCMA，Uniprot登錄編號：Q02223-2)結合之CAR。本文提供之BCMA特異性CAR包括單鏈CAR和多鏈CAR。該CAR有能力利用單株抗體之抗原結合特性，以非MHC限制性方式，將T細胞特異性和反應性重新對準BCMA。該非MHC限制性抗原識別賦予表現CAR之T細胞不倚賴抗原加工而能識別抗原的能力，從而繞過腫瘤逃逸之主要機制。I.BCMA 特定 CAR
於一些實施態樣中，本文提供之CAR包含胞外配體結合結構域(例如單鏈可變片段(scFv))、跨膜結構域和胞內信號傳導結構域。於一些實施態樣中，該胞外配體結合結構域、跨膜結構域和胞內信號傳導結構域係在一個多肽中，即，在單鏈中。本文亦提供多鏈CAR和多肽。於一些實施態樣中，該多鏈CAR包含：第一多肽(其包含跨膜結構域和至少一個胞外配體結合結構域)及第二多肽(其包含跨膜結構域和至少一個胞內信號傳導結構域)，其中該多肽組裝在一起以形成多鏈CAR。
於一些實施態樣中，BCMA特異性多鏈CAR係基於IgE之高親和力受體(FcεRI)。表現在肥大細胞和嗜鹼性粒細胞上之FcεRI觸發過敏反應。FcεRI為四聚體複合物，其係由單一α亞單位、單一β亞單位和二個藉由二硫鍵連接之γ亞單位所組成。該α亞單位含有IgE結合結構域。該β和γ亞單位含有介導信號轉導之ITAM。於一些實施態樣中，該FcRα鏈之胞外結構域缺失並被BCMA特異性胞外配體結合結構域替代。於一些實施態樣中，該多鏈BCMA特異性CAR包含與BCMA、CD8α鉸鏈和FcMAβ鏈之ITAM特異性結合的scFv。於一些實施態樣中，該CAR可包含或可不包含FcRγ鏈。於一些實施態樣中，存在二份利妥昔單抗模擬表位之副本(例如CPYSNPSLC(SEQ ID NO：397)；亦參見WO 2016/120216，其全部內容以引用方式併入本文)。示例性構建體顯示於第21圖中。
如本文所提供者，該BCMA CAR之胞外配體結合結構域包含scFv，該scFv包含靶的抗原特異性單株抗體之輕鏈可變(VL)區和重鏈可變(VH)區，該輕鏈可變區(VL)和重鏈可變區(VH)係藉由彈性連接子連接。單鏈可變區片段係藉由使用短連接肽連接輕鏈和/或重鏈可變區來製造(Bird 等人, Science 242:423-426, 1988)。連接肽之一種實例為具有胺基酸序列(GGGGS)3(SEQ ID NO：333)之GS連接子，其橋接介於一個可變區之羧基端和另一可變區之胺基端之間約3.5nm。現已設計和使用具有其他序列之連接子(Bird等人，1988，同上)。在一般情況下，連接子可為短的、有彈性之多肽且較佳為由約20個或更少之胺基酸殘基所組成。連接子可再經修飾以實現其他功能，諸如連接藥物或連接固體支持物。該單鏈變體可經重組或合成產生。為了合成產生scFv，可使用自動合成儀。為了重組產生scFv，可將含有編碼scFv之多核苷酸的合適質粒引入合適之宿主細胞中，該宿主細胞或為真核的(諸如酵母、植物、昆蟲或哺乳動物細胞)，或為原核的(諸如大腸桿菌)。編碼該所欲scFv之多核苷酸可藉由常規操作，諸如連結多核苷酸來製造。所得之scFv可使用本技藝已知之標準蛋白質純化技術分離。
於一些實施態樣中，本文提供BCMA CAR，其中該CAR包含胞外結合結構域，該胞外結合結構域包含單鏈Fv片段(scFv)，其中該scFv包含重鏈可變(VH)區和輕鏈可變(VL)區，其中該VH區包含VH互補決定區1(VH CDR1)、VH互補決定區2(VH CDR2)和VH互補決定區3(VH CDR3)且該VL區包含VL互補決定區1(VL CDR1)、VL互補決定區2(VL CDR2)和VL互補決定區3(VL CDR3)，其中：(a) 該VH CDR1包含選自由下列所組成之群組的序列：SEQ ID NO：129、130、131、150、151、152、156、157、301、302、303、381、382、386、387和388；(b)該VH CDR2包含選自由下列所組成之群組的序列：SEQ ID NO：132、133、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、153、154、158、159、160、162、163、165、166、167、168、169、171、172、174、175、176、177、178、179、180、181、183、184、185、186、187、188、190、191、192、193、194、195、196、198、199、200、201、202、203、204、206、207、208、304、305、306、383、384、389和390；(c) 該VH CDR3包含選自由下列所組成之群組的序列：SEQ ID NO：134、135、136、137、148、149、155、161、164、170、173、182、189、197、205、307、308、385和391；(d) 該VL CDR1包含選自由下列所組成之群組的序列：SEQ ID NO：209、212、215、217、218、219、223、226、228、230、232、235、238、239、241、243、245、246、247、249、250、251、254、257、260、262、265、266、267、269、270、271、273、275、277、279、283、285、287、290、292、295、297、299、309、377、415和417；(e)該VL CDR2包含選自由下列所組成之群組的序列：SEQ ID NO：210、221、252、310、392和395；及(f) 該VL CDR3包含選自由下列所組成之群組的序列：SEQ ID NOS：211、213、214、216、220、222、224、225、227、229、231、233、234、236、237、240、242、244、248、253、255、256、258、259、261、263、264、268、272、274、276、278、280、281、282、284、286、288、289、291、293、294、296、298、300、311、312、393和416。
於一些實施態樣中，本文提供BCMA CAR，其中該CAR包含胞外配體結合結構域，該胞外配體結合結構域包含：VH區，該VH區包含具有下列所示之VH序列的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3：SEQ ID NO：2、3、7、8、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、35、37、39、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、83、87、92、95、97、99、101、104、106、110、112、114、76、118、120、122、125、127、313、314或413；和/或VL區，該VL區包含具有下列所示之VL序列的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3：SEQ ID NO：1、4、5、6、9、10、11、12、13、15、16、17、18、19、20、21、22、23、34、36、38、40、41、43、45、47、49、51、53、57、59、61、63、65、67、69、71、73、75、77、79、317、81、82、84、85、86、88、89、90、91、93、94、96、98、100、102、103、105、107、108、109、111、113、115、116、117、119、121、123、124、126、128、315、316或414。於一些實施態樣中，該VH和VL係藉由彈性連接子連接在一起。於一些實施態樣中，該彈性連接子包含SEQ ID NO：333所示之胺基酸序列。
於一些實施態樣中，本揭示內容之CAR 包含胞外配體結合結構域，該胞外配體結合結構域具有如表1中所列之任一部分輕鏈序列和/或表1中所列之任一部分重鏈序列。表1中，該下方劃線之序列為根據Kabat之CDR序列，該粗體之序列為根據Chothia者，但下列重鏈CDR2序列除外(其中該Chothia CDR序列下方劃線，而該Kabat CDR序列為粗體)：P5A2_VHVL、A02_Rd4_0.6nM_C06、A02_Rd4_0.6nM_C09、A02_Rd4_6nM_C16、A02_Rd4_6nM_C03、A02_Rd4_6nM_C01、A02_Rd4_6nM_C26、A02_Rd4_6nM_C25、A02_Rd4_6nM_C22、A02_Rd4_6nM_C19、A02_Rd4_0.6nM_C03、A02_Rd4_6nM_C07、A02_Rd4_6nM_C23、A02_Rd4_0.6nM_C18、A02_Rd4_6nM_C10、A02_Rd4_6nM_C05、A02_Rd4_0.6nM_C10、A02_Rd4_6nM_C04、A02_Rd4_0.6nM_C26、A02_Rd4_0.6nM_C13、A02_Rd4_0.6nM_C01、A02_Rd4_6nM_C08、P5C1_VHVL、C01_Rd4_6nM_C24、C01_Rd4_6nM_C26、C01_Rd4_6nM_C10、C01_Rd4_0.6nM_C27、C01_Rd4_6nM_C20、C01_Rd4_6nM_C12、C01_Rd4_0.6nM_C16、C01_Rd4_0.6nM_C09、C01_Rd4_6nM_C09、C01_Rd4_0.6nM_C03、C01_Rd4_0.6nM_C06、C01_Rd4_6nM_C04、COMBO_Rd4_0.6nM_C22、COMBO_Rd4_6nM_C21、COMBO_Rd4_6nM_C10、COMBO_Rd4_0.6nM_C04、COMBO_Rd4_6nM_C25、COMBO_Rd4_0.6nM_C21、COMBO_Rd4_6nM_C11、COMBO_Rd4_0.6nM_C20、COMBO_Rd4_6nM_C09、COMBO_Rd4_6nM_C08、COMBO_Rd4_0.6nM_C19、COMBO_Rd4_0.6nM_C02、COMBO_Rd4_0.6nM_C23、COMBO_Rd4_0.6nM_C29、COMBO_Rd4_0.6nM_C09、COMBO_Rd4_6nM_C12、COMBO_Rd4_0.6nM_C30、COMBO_Rd4_0.6nM_C14、COMBO_Rd4_6nM_C07、COMBO_Rd4_6nM_C02、COMBO_Rd4_0.6nM_C05、COMBO_Rd4_0.6nM_C17、COMBO_Rd4_6nM_C22、和COMBO_Rd4_0.6nM_C11。
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本文亦提供與BCMA結合之CAR之胞外配體結合結構域的CDR部分(包括Chothia、Kabat CDR和CDR接 觸區)。CDR區之測定完全在本技藝之技術範圍內。應理解的是，於一些實施態樣中，CDR可為Kabat和Chothia CDR之組合(亦稱為“組合的CR”或“延伸之CDR”)。於一些實施態樣中，該CDR為Kabat CDR。於其他實施態樣中，該CDR為Chothia CDR。換句話說，於具有一個以上之CDR的實施態樣中，該CDR可為Kabat、Chothia、組合CDR或彼之組合的其中任一者。表2A和表2B提供本文所提供之CDR序列的實例。
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於一些實施態樣中，該BCMA CAR包含胞外配體結合結構域、第一跨膜結構域和胞內信號傳導結構域，其中該胞外結構域包含單鏈Fv片段(scFv)，該scFv包含重鏈可變(VH)區和輕鏈可變區(VL)，該VH區包含三個互補決定區(CDR)，該CDR包含表1之SEQ ID NO：33、72、39、76、83、92、25、112或8所示之序列；該VL區包含三個CDR，該CDR包含表1之SEQ ID NO：34、73、40、77、84、93、18、38或80所示之序列，其中該第一跨膜結構域包含CD8α鏈跨膜結構域，且其中該胞內信號傳導結構域包含CD3ζ信號傳導結構域和/或4-1BB信號傳導結構域。
於一些實施態樣中，該BCMA CAR之胞外結合區包含VH區和VL區，該VH區包含SEQ ID NO：112所示之胺基酸序列，而該VL區包含SEQ ID NO：38所示之胺基酸序列。
於一些實施態樣中，該BCMA CAR之胞外結合區包含VH區和VL區，該VH區包含SEQ ID NO：33所示之胺基酸序列，而該VL區包含SEQ ID NO：34所示之胺基酸序列。
於一些實施態樣中，該BCMA CAR之胞外結合區包含VH區和VL區，該VH區包含：VH CDR1，其包含SEQ ID NO：150、151或152所示之胺基酸序列；VH CDR2，其包含SEQ ID NO：153或154所示之胺基酸序列；和VH CDR3，其包含SEQ ID NO：155所示之胺基酸序列；該VL區包含：VL CDR1，其包含SEQ ID NO：209所示之胺基酸序列；VL CDR2，其包含SEQ ID NO：221所示之胺基酸序列；和VL CDR3，其包含SEQ ID NO：222所示之胺基酸序列。
於一些實施態樣中，該BCMA CAR之胞外結合區包含VH區和VL區，該VH區包含：VH CDR1，其包含SEQ ID NO：151、156或157所示之胺基酸序列；VH CDR2，其包含SEQ ID NO：158或159所示之胺基酸序列；和VH CDR3，其包含SEQ ID NO：155所示之胺基酸序列；該VL區包含：VL CDR1，其包含SEQ ID NO：209所示之胺基酸序列；VL CDR2，其包含SEQ ID NO：221所示之胺基酸序列；和VL CDR3，其包含SEQ ID NO：225所示之胺基酸序列。
如本文所描述之BCMA特異性CAR與BCMA (諸如人BCMA(例如SEQ ID NO：354)結合的結合親和力(KD )可為約0.002至約6500nM。於一些實施態樣中，該結合親和力約為下列任一者：6500nm、6000nm、5986nm、5567nm、5500nm、4500nm、4000nm、3500nm、3000nm、2500nm、2134nm、2000nm、1500nm、1000nm、750nm、500nm、400nm、300nm、250nm、200nM、193nM、100nM、90nM、50nM、45nM、40nM、35nM、30nM、25nM、20nM、19nm、18nm、17nm、16nm、15nM、10nM、8nM、7.5nM、7nM、6.5nM、6nM、5.5nM、5nM、4nM、3nM、2nM、1nM、0.5nM、0.3nM、0.1nM、0.01nM或0.002nM。於一些實施態樣中，該結合親和力約小於下列任一者：6500nm、6000nm、5500nm、5000nm、4000nm、3000nm、2000nm、1000nm、900nm、800nm、250nM、200nM、100nM、50nM、30nM、20nM、10nM、7.5nM、7nM、6.5nM、6nM、5nM、4.5nM、4nM、3.5nM、3nM、2.5nM、2nM、1.5nM、1nM或0.5nM。
根據本揭示內容之CAR的胞內信號傳導結構域係負責在胞外配體結合結構域與靶的結合後之胞內信號傳導，從而導致免疫細胞活化和免疫反應。胞內信號傳導結構域有能力活化其中表現CAR之免疫細胞的至少一種正常效應子功能。例如，T細胞之效應子功能可為細胞溶解活性或輔助細胞活性，包括分泌細胞因子。
於一些實施態樣中，用於CAR之胞內信號傳導結構域可為(例如，但不限於)該T細胞受體和共受體(其與T細胞受體協同作用以在抗原受體接合後起始信號轉導)之細胞質序列，以及這些序列之任何衍生物或變體和具有相同功能能力之任何合成序列。胞內信號傳導結構域包括二種不同類別之細胞質信號傳導序列：啟動抗原依賴性初級活化之序列及那些以無關抗原之方式作用以提供第二信號或共刺激信號之序列。主要細胞質信號傳導序列可包含信號傳導基序，該基序被稱為免疫受體酪胺酸活化基序ITAM。ITAM為明確定義之信號傳導基序，其係在各種受體之細胞質內尾端找到，作為syk/zap70類酪胺酸激酶之結合位點。用於本揭示內容之ITAM的實例可包括從下列群組衍生之非限制性實例：TCRζ、FcRγ、FcRβ、FcRε、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD5、CD22、CD79a、CD79b和CD66d。於一些實施態樣中，該CAR之胞內信號傳導結構域可包含CD3ζ信號傳導結構域，該CD3ζ信號傳導結構域具有與SEQ.ID NO：324所示之胺基酸序列具有至少約70%，較佳為至少80%，更佳為至少90%、95%、97%或99%序列同一性的胺基酸序列。於一些實施態樣中，本揭示內容之CAR的胞內信號傳導結構域包含共刺激分子之結構域。
於一些實施態樣中，本揭示內容之CAR的胞內信號傳導結構域包含選自由下列所組成之群組之共刺激分子的一部分：41BB(GenBank：AAA53133)和CD28 (NP_006130.1)之片段。於一些實施態樣中，本揭示內容之CAR的胞內信號傳導結構域包含與SEQ.ID NO：323和SEQ.ID NO：327所示之胺基酸序列具有至少70%，較佳為至少80%，更佳為至少90%、95%、97%或99%之序列同一性的胺基酸序列。
CAR係表現在細胞之表面膜上。因此，CAR可包含跨膜結構域。本文揭示之CAR的合適跨膜結構域具有以下能力：(a)表現在細胞表面，該細胞較佳為免疫細胞，例如，但不限於淋巴細胞或天然殺手(NK)細胞，和(b)與配體結合結構域和胞內信號傳導結構域交互作用，以指導免疫細胞之細胞反應針對預定之靶的細胞。該跨膜結構域可源自天然或合成來源。該跨膜結構域可源自任何與膜結合的蛋白質或跨膜蛋白。作為非限制性實例之跨膜多肽可為T細胞受體之亞單位(諸如α、β、γ或δ)、構成CD3複合物之多肽、IL-2受體p55(α鏈)、p75(β鏈)或γ鏈、Fc受體之亞單位鏈，特別是Fcγ受體III或CD蛋白。或者，該跨膜結構域可為合成的且可主要包含疏水性殘基，諸如白胺酸和纈胺酸。於一些實施態樣中，該跨膜結構域係源自人CD8α鏈(例如NP_001139345.1)。該跨膜結構域可進一步在胞外配體結合結構域和該跨膜結構域之間包含莖結構域。一個莖結構域可包含至多300個胺基酸，較佳為10至100個胺基酸且最佳為25至50個胺基酸。莖區可源自全部或部分之天然產生的分子，諸如全部或部分之CD8、CD4或CD28的胞外區，或源自全部或部分之抗體恆定區。或者，該莖結構域可為對應於天然產生之莖序列的合成序列，或可全部為合成之莖序列。於一些實施態樣中，該莖結構域為人CD8α鏈之一部分(例如NP_001139345.1)。於另一特定之實施態樣中，該跨膜和鉸鏈結構域包含一部分人CD8α鏈，較佳地，其包含與選自由SEQ ID NO：318所組成之群組的胺基酸序列具有至少70%，較佳為至少80%，更佳為至少90%、95%、97%或99%之序列同一性的胺基酸序列。於一些實施態樣中，本文所揭示之CAR可包含與BCMA特異結合之胞外配體結合結構域、CD8α人鉸鏈和跨膜結構域、CD3ζ信號傳導結構域，以及4-1BB信號傳導結構域。
表3提供可用於本文所揭示之CAR中之示例性結構域序列。
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於另一態樣中，本揭示內容提供編碼本文所描述之任何CAR和多肽的多核苷酸。多核苷酸可藉由本技藝已知之程序製造和表現。
於另一態樣中，本揭示內容提供包含本揭示內容之任何細胞的組成物(諸如醫藥組成物)。Ⅱ . 經工程處理之免疫細胞
本揭示內容提供經工程處理之免疫細胞，其包含本文所描述之任何BCMA CAR多核苷酸。於一些實施態樣中，該BCMA CAR係與慢病毒載體引入免疫細胞中。於一些實施態樣中，該慢病毒載體為整合入受體免疫細胞中之自行去活化的慢病毒載體。於一些實施態樣中，該BCMA CAR係以轉基因之形式經由質粒載體引入免疫細胞中。於一些實施態樣中，該質粒載體亦可含有，例如用於鑑定和/或選擇接受該載體之細胞的選擇標記。於一些實施態樣中，該CAR可使用非病毒方法引入免疫細胞中。
第21圖中顯示一種示例性載體構建體。
WO/2016/166630(其全部內容以引用方式併入本文)中描述產生表現本文所提供之任何BCMA CAR的經工程處理之免疫細胞的方法。
本文提供根據上述任一方法取得之經分離的免疫細胞。能夠表現異源DNA之任何免疫細胞均可用於表現所欲之CAR的目的中。於一些實施態樣中，該免疫細胞為T細胞。於一些實施態樣中，免疫細胞可源自，例如，但不限於幹細胞。該幹細胞可為成年幹細胞、非人類胚胎幹細胞，更特別地，非人類幹細胞、臍帶血幹細胞、祖細胞、骨髓幹細胞、誘導性多能幹細胞、全能幹細胞或造血幹細胞。代表性之人類細胞為CD34+細胞。該經分離之細胞亦可為樹突狀細胞、殺手樹突狀細胞、肥大細胞、NK細胞、B細胞或T細胞，該T細胞係選自由下列所組成之群組：發炎性T淋巴細胞、細胞毒性T淋巴細胞、調節性T淋巴細胞或輔助性T淋巴細胞。於一些實施態樣中，該細胞可源自由下列所組成之群組：CD4+T淋巴細胞和CD8+T淋巴細胞。
於一些實施態樣中，根據本發明之經分離的細胞包含一個選自由下列所組成之群組的去活化之基因：CD52、GR、PD-1、CTLA-4、LAG3、Tim3、BTLA、BY55、TIGIT、B7H5、LAIR1、SIGLEC10、2B4、HLA、TCRα和TCRβ和/或表現CAR、多鏈CAR和/或pTα轉基因。於一些實施態樣中，該經分離之細胞包含編碼包含多鏈CAR之多肽的多核苷酸。於一些實施態樣中，根據本揭示內容之經分離的細胞包含二個選自由下列所組成之群組的去活化之基因：CD52和GR、CD52和TCRα、CDR52和TCRβ、GR和TCRα、GR和TCRβ、TCRα和TCRβ、PD-1和TCRα、PD-1和TCRβ、CTLA-4和TCRα、CTLA-4和TCRβ、LAG3和TCRα、LAG3和TCRβ、Tim3和TCRα、Tim3和TCRβ、BTLA和TCRα、BTLA和TCRβ、BY55和TCRα、BY55和TCRβ、TIGIT和TCRα、TIGIT和TCRβ、B7H5和TCRα、B7H5和TCRβ、LAIR1和TCRα、LAIR1和TCRβ、SIGLEC10和TCRα、SIGLEC10和TCRβ、2B4和TCRα、2B4和TCRβ和/或表現CAR、多鏈CAR和pTα轉基因。
基因去活化可藉由本技藝之技術熟習人士所實踐之方法進行。該方法包括，但不限於使用鋅指、TALEN®和基於CRISPR/Cas之系統來進行基因去活化。
於一些實施態樣中，該含有BCMA CAR之免疫細胞具有去活化之CD52基因。於一些實施態樣中，僅將一份該CD52基因之副本去活化。
於一些實施態樣中，該含有BCMA CAR之免疫細胞具有去活化之TCRα基因。
於一些實施態樣中，該含有BCMA CAR之免疫細胞具有去活化之TCRβ基因。
於一些實施態樣中，使用TALEN®將基因去活化。於該等實施態樣中，使用TALEN®將基因去活化的效率並非100%，且所產生之TCRαβ陰性T細胞係在冷凍保存之前藉由消耗殘餘之TCRαβ陽性T細胞富集。然而，CD52陰性細胞未經純化而導致具有不同頻率之CD52陰性細胞(通常係在60至80%之間)的細胞產物。因此，於一些實施態樣中，本揭示內容之BCMA CAR-T細胞的基因型為BCMA-CAR+_TCRαβ-_CD52+/-T細胞。
於一些實施態樣中，藉由將TCRα基因和/或TCRβ基因去活化，使根據本揭示內容之TCR在細胞中不起作用。於一些實施態樣中，提供取得源自個體之經修飾之細胞的方法，其中該細胞可獨立於該主要組織相容性複合體(MHC)信號傳導途徑增殖。本揭示內容之範圍包含容易藉由本方法獲得之經修飾的細胞，該經修飾之細胞可獨立於MHC信號傳導途徑增殖。本揭示內容之經修飾的細胞可用於治療有需要對抗宿主抗移植物(HvG)排斥和移植物抗宿主疾病(GvHD)的個體。因此，本揭示內容之範圍包含治療有需要對抗宿主抗移植物(HvG)排斥和移植物抗宿主疾病(GvHD)之個體的方法，該方法包含藉由對該個體投予有效量之經修飾的細胞來治療該個體，該經修飾之細胞包含去活化的TCRα和/或TCRβ基因。
於一些實施態樣中，該免疫細胞係經工程處理以對一或多種化療藥物具有抗性。該化療藥物可為，例如嘌呤核苷酸類似物(PNA)，而使該免疫細胞適合與過繼性免疫療法和化學療法組合以治療癌症。示例性PNA包括，例如單獨或組合之氯法拉濱(clofarabine)、氟達拉濱(fludarabine)和阿糖胞苷(cytarabine)。PNA係由脫氧胞苷激酶(dCK)代謝成單磷酸、二磷酸和三磷酸PNA。彼之三磷酸形式與ATP競爭合成DNA，作為促凋亡劑，且為參與生產三核苷酸之核糖核苷酸還原酶(RNR)的有效抑制劑。本文提供包含去活化之dCK基因的BCMA特異性CAR-T細胞。於一些實施態樣中，該dCK基因剔除細胞係藉由使用多核苷酸轉染T細胞(例如藉由mRNA之電穿孔)來製造，該多核苷酸編碼針對dCK基因之特異性TAL-核酸酶。該dCK剔除之BCMA特異性CAR-T細胞對PNA(包括，例如氯法拉濱和/或氟達拉濱)具有抗性，並維持T細胞對表現BCMA之細胞的細胞毒性活性。
於一些實施態樣中，本揭示內容之經分離的細胞或細胞株可包含pTα或其功能變體。於一些實施態樣中，經分離之細胞或細胞株可藉由將該TCRα基因去活化而進行進一步之遺傳修飾。
於一些實施態樣中，該CAR-T細胞包含編碼安全開關之多核苷酸，諸如，例如RQR8。參見，例如WO2013153391A，其全部內容以引用方式併入本文。在包含該多核苷酸之CAR-T細胞中，該安全開關多肽表現在CAR-T細胞之表面。於一些實施態樣中，該安全開關多肽包含SEQ ID NO：342所示之胺基酸序列。
CPYSNPSLCSGGGGSELPTQGTFSNVSTNVSPAKPTTT ACPYSNPSLCSGGGGSP APRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLS LVITLYCNHRNRRRVCKCPRPVV (SEQ ID NO: 342)
該安全開關多肽還亦可在胺基端包含訊息胜肽。於一些實施態樣中，該安全開關多肽包含SEQ ID NO：400所示之胺基酸序列。
MGTSLLCWMALCLLGADHADACPYSNPSLCSGGGG SELPTQGTFSNVSTNVSPAKPTTTACPYSNPSLCSGGGGSPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNHRNRRRVCKCPRPVV (SEQ ID NO: 400)
當該安全開關多肽表現在CAR-T細胞表面時，利妥昔單抗與該多肽之R表位結合導致該細胞溶解。每一表現在該細胞表面之多肽可與一個以上之利妥昔單抗分子結合。該多肽之每一R表位可與單獨之利妥昔單抗分子結合。BCMA特異性CAR-T細胞之除去可在體內發生，例如藉由對個體投予利妥昔單抗。除去該轉移之細胞的決定可能起源於在該個體中檢測到歸因於該轉移之細胞的不良作用，諸如，例如當檢測到不能接受之毒性程度時。
於一些實施態樣中，該CAR-T細胞在該scFv內包含選定之表位，其具有可被特異抗體識別之特異性。參見，例如2016年1月25日提交之PCT申請案PCT/EP2016/051467，WO2016/120216，“mAb-DRIVEN CHIMERIC ANTIGEN RECEPTOR SYSTEMS FOR SORTING/DEPLETING ENGINEERED IMMUNE CELLS” (其全部內容以引用方式併入本文)。該等表位促成分選和/或消耗該CAR-T細胞。該表位可選自任何數量之本技藝已知的表位。於一些實施態樣中，該表位可為被核准用於醫學用途的單株抗體之靶的，諸如，例如，但不限於可被利妥昔單抗識別之CD20表位。於一些實施態樣中，該表位包含SEQ ID NO：397所示之胺基酸序列。
CPYSNPSLC(SEQ ID NO：397)
於一些實施態樣中，該表位係位於CAR內。例如，但不限於：該表位可位於CAR之scFv和鉸鏈之間。於一些實施態樣中，可在CAR中使用藉由連接子分開的同一表位的二個實例。例如，該包含SEQ ID NO：398所示之胺基酸序列的多肽可用於CAR內之位於輕鏈可變區和鉸鏈之間的位置。
GSGGGGSCPYSNPSLCSGGGGSCPYSNPSLCSGGGGS (SEQ ID NO: 398)
於一些實施態樣中，該表位特異性抗體可與細胞毒性藥物軛合。亦可能藉由使用經工程處理之抗體來提高CDC細胞毒性，該經工程處理之抗體上係經移植該補體系統之組成分。於一些實施態樣中，可藉由使用可識別該表位之抗體消耗該CAR-T細胞以調節該細胞之活化。Ⅲ . 治療應用
藉由上述方法獲得之經分離的細胞或源自該等經分離之細胞的細胞株可作為藥物。於一些實施態樣中，該等藥物可用於治療MM。於一些實施態樣中，該MM為難治性MM。於一些實施態樣中，該MM為復發性MM。於一些實施態樣中，該MM為難治性/復發性MM。
於一些實施態樣中，該個體尚未接受任何用於多發性骨髓瘤之先前療法。於一些實施態樣中，該個體已接受至少一種，二種或三種用於多發性骨髓瘤之先前療法。於一些實施態樣中，本文提供之給藥方案為一線療法。於一些實施態樣中，本文提供之給藥方案為二線療法。於一些實施態樣中，本文提供之給藥方案為三線療法。於一些實施態樣中，本文提供之給藥方案為四線療法。於一些實施態樣中，該個體患有復發性MM。於一些實施態樣中，該個體患有難治性MM。於一些實施態樣中，該個體患有難治性MM和復發性MM。
於一些實施態樣中，根據本揭示內容之經分離的細胞或源自該經分離之細胞的細胞株可用於製備用於治療有此需要之個體的癌症之藥物。
本文亦提供用於治療個體之方法。於一些實施態樣中，該方法包含對有此需要之個體提供本揭示內容之免疫細胞。於一些實施態樣中，該方法包含對有此需要之個體投予本揭示內容之經轉化的免疫細胞之步驟。該個體可為男性或女性、成年、青少年或兒童。於一些實施態樣中，該個體為人類個體。
於一些實施態樣中，本揭示內容之T細胞可經歷體內T細胞擴增並可持續一段延長之時間。
本揭示內容之治療方法可為改善、治癒或預防性。本揭示內容之方法可為自體免疫療法之一部分或同種異體免疫療法治療之一部分。本揭示內容特別適合用於同種異體免疫療法。來自供體之T細胞可使用標準方案轉化為非同種異體反應性細胞並依需要複製，從而產生可投予一或多名個體之CAR-T細胞。該等CAR-T細胞療法可製成可以“現成的”治療產品之形式取得。第17和18圖描述自體CAR-T療法之侷限性及同種異體療法之優點。
可以本揭示內容之方法使用之細胞描述於前述章節。治療可以用於治療被診斷患有MM之個體。本揭示內容亦包括成人腫瘤/癌症和兒科腫瘤/癌症。於一些實施態樣中，該治療可與一或多種選自下列群組之針對MM的療法組合：抗體療法、化學療法、細胞因子療法、樹突細胞療法、基因療法、激素療法、雷射光療法和放射療法。
於一些實施態樣中，可對經歷免疫抑制治療之個體投予治療。實際上，本揭示內容較佳為依賴已被製成對至少一種免疫抑制劑具有抗性的細胞或細胞群，該細胞或細胞群係由於編碼該等免疫抑制劑之受體的基因被去活化而對該等免疫抑制劑具有抗性。於該態樣中，該免疫抑制治療應有助於在個體內選擇和擴增根據本揭示內容之T細胞。
根據本揭示內容之細胞或細胞群可以任何方便的方式投予，包括藉由氣霧吸入、注射、攝入、輸注、植入或移植。本文所描述之組成物可藉由靜脈內或淋巴內注射經由皮下、皮內、瘤內、結節內、髓內、肌肉內途徑，或經由腹腔內途徑投予個體。於一實施態樣中，本揭示內容之細胞組成物較佳為藉由靜脈內注射投予。
於一些實施態樣中，本揭示內容之經工程處理的表現BCMA CAR之免疫細胞係配製成用於輸注。於一些實施態樣中，該細胞係在包含約5%DMSO之溶液中配製。於一實施態樣中，在包含約5%DMSO之溶液中配製14×10^6個BCMA-CAR-T細胞/mL。於進一步之實施態樣中，該配製劑包含CryoStor®Basal Solution和CryoStor®CS10之1：1的混合物(其導致5%二甲亞碸之最終濃度)。於一些實施態樣中，該配製劑之劑量強度為14×10^6個BCMA-CAR-T細胞/mL。於一些實施態樣中，該配製之藥物產品係在2mL之封閉系統小瓶中供給，該封閉系統小瓶具有整體之瓶塞，標稱體積為1mL。
於一些實施態樣中，本揭示內容之BCMA CAR-T細胞為BCMA-CAR+_TCRαβ-_CD52+/-T細胞且被配製成用於輸注之懸浮液。於一些實施態樣中，該BCMA-CAR+_TCRαβ-_CD52+/-T細胞係配製在包含CryoStor®Basal Solution和CryoStor®CS10之1：1的混合物(其導致5%二甲亞碸之最終濃度)中。於一些實施態樣中，該配製劑之劑量強度為14×10^6個BCMA-CAR+_TCRαβ-_CD52+/-T細胞/mL。IV. 淋巴清除
於一些實施態樣中，在第一和/或隨後之BCMA CAR-T細胞劑量之前對該個體投予淋巴清除(LD)方案。於一些實施態樣中，該淋巴清除方案係與第一和/或隨後之CAR-T細胞劑量同時投予個體。於一些實施態樣中，該淋巴清除方案係在投予第一和/或隨後之BCMA CAR-T細胞劑量之前、期間和/或之後投予。
合適之LD方案描述於本文中和/或為本技藝所已知。於一些實施態樣中，LD係在輸注CAR-T之前、同時或之後開始。投予LD之劑量和投予時點可根據BCMA CAR-T之第一或後續劑量進行調整。於一些實施態樣中，LD之持續時間為約3至5天。於一些實施態樣中，LD結束和開始投予CAR-T之間的時間窗為約2天至約2週。於一些實施態樣中，在投予一定劑量之CAR-T細胞之前約15至7天開始LD。於一些實施態樣中，在投予CAR-T細胞劑量之前約19至5天開始LD。於一些實施態樣中，在投予CAR-T細胞劑量之前約3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20天開始LD。於一些實施態樣中，LD方案之持續時間為約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14天。於一些實施態樣中，在LD結束後約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14天投予一定劑量之CAR-T細胞。
於一些實施態樣中，LD方案包含投予一或多種化療藥物。
於一些實施態樣中，LD方案包含投予抗CD52抗體，諸如識別人類分化(CD)52抗原群之抗體，該抗原為表現在大多數淋巴樣細胞之細胞表面糖蛋白。如本文所使用之CD52單株抗體為針對21-28kD細胞表面糖蛋白CD52的抗體。CD52為在至少95%之全部人類外周血淋巴細胞和單核細胞/巨噬細胞上呈現的豐富分子(每一細胞約5×105 個抗體結合位點)。用於本文所描述之方法和組成物中之示例性CD52抗體包括，例如阿崙單抗(alemtuzumab)。於一些實施態樣中，CD52抗體包含如下列表4中所示之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3序列。
Figure 02_image113
於一些實施態樣中，CD52抗體包含VH和/或VL，該VH和/或VL包含下列表5中所示之序列。
Figure 02_image115
Figure 02_image117
於一些實施態樣中，CD52抗體包含VH，該VH具有SEQ ID NO：408之序列或具有與SEQ ID NO：408具有至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性之序列。於一些實施態樣中，CD52抗體包含VL，該VL具有SEQ ID NO：410之序列，或具有與SEQ ID NO：410具有至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性之序列。於一些實施態樣中，CD52抗體包含具有SEQ ID NO：408 之序列的VH和具有SEQ ID NO：410之序列的VL。於一些實施態樣中，CD52抗體包含由SEQ ID NO：409之DNA序列編碼的VH和由SEQ ID NO：411之DNA序列編碼的VL。
於一些實施態樣中，該抗CD52抗體為重組之人化IgG1κ單株抗體(mAb)。於一些實施態樣中，該抗CD52抗體為阿崙單抗。阿崙單抗為針對該21-28 kD細胞表面糖蛋白CD52之源自重組DNA的人化單株抗體。參見，例如Saif 等人,Pediatr Transplant 2015 Mar;19(2):211-8。於一些實施態樣中，該抗CD52抗體包含一或多個從阿崙單抗之CDR分離或衍生的CDR序列。於一些實施態樣中，該抗CD52抗體包含SEQ ID NO：408之序列，或與SEQ ID NO：408具有至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性之序列。於一些實施態樣中，該抗CD52抗體包含SEQ ID NO：410之序列，或與SEQ ID NO：410具有至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性之序列。於一些實施態樣中，該抗CD52抗體包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：402 之序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：403之序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：404之序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：405之序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：406之序列；和/或LCDR3，其包含SEQ ID NO：407之序列。於一些實施態樣中，該抗CD52抗體包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：402之序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：403之序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：404之序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：405之序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：406之序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：407之序列；其中該抗CD52抗體包含SEQ ID NO：408和/或SEQ ID NO：410之序列，或與SEQ ID NO：408和/或SEQ ID NO：410具有至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%之序列同一性的序列。
於一些實施態樣中，LD包含僅投予CD52抗體。
於一些實施態樣中，LD包含投予聯合療法。於一些實施態樣中，該組合包括：氟達拉濱(總劑量為約90至150mg/m2 )和環磷醯胺(總劑量為約1000至4000mg/m2 )，加上或不加上抗CD52藥物(例如抗CD52抗體，諸如包含SEQ ID NO：408和/或SEQ ID NO：410之序列的抗體)(總劑量為約0.3至約1mg/kg，或固定劑量為約30mg至約40mg、約25mg至約60mg、約60mg至約90mg、或約100mg至約120mg)。於一些實施態樣中，該組合包括：氟達拉濱(約30mg/m2 )和環磷醯胺(總劑量為約500至600mg/m2 )，加上或不加上抗CD52藥物(例如CD52抗體)(總劑量為約0.3至約1mg/kg，或固定劑量為約30mg至約40mg、約25至約60mg、約60mg至約90mg、或約100mg至約120mg)。於一些實施態樣中，該組合包括：氟達拉濱(約30mg/m2 )和環磷醯胺(約300mg/m2 )，加上或不加上抗CD52藥物(例如CD52抗體)(總劑量為約0.3至約1mg/kg，或固定劑量為約30mg至約40mg、約20mg至約30mg、約25mg至約60mg、約60mg至約90mg、或約100mg至約120mg)。於一些實施態樣中，該組合包括：氟達拉濱(約90mg/m2 )和環磷醯胺(約900mg/m2 )，加上或不加上抗CD52藥物(例如CD52抗體)(總劑量為約0.3至約1mg/kg，或固定劑量為約30mg至約40mg、約20mg至約30mg、約25mg至約60mg、約60mg至約90mg、或約100mg至約120mg)。於一些實施態樣中，該組合包括：氟達拉濱(約90mg/m2 )和環磷醯胺(約1500mg/m2 )，且加上或不加上抗CD52藥物(例如CD52抗體，約1mg/kg)。於一些實施態樣中，該組合包括：氟達拉濱(約150g/m2 )和環磷醯胺(約130mg/kg)，加上或不加上抗CD52藥物(例如抗CD52抗體，總劑量為約0.3至約1mg/kg，或固定劑量為約30mg至約40mg、約25至約60mg、約60mg至約90mg、或約100mg至約120mg)。於一些實施態樣中，該組合包括：氟達拉濱(約150g/m2 )和環磷醯胺(約120mg/kg或約130mg/kg)，加上或不加上抗CD52藥物(例如抗CD52抗體，總劑量為約0.3至約1mg/kg，或固定劑量為約30mg至約40mg、約25至約60mg、或約100mg至約120mg)。於一些實施態樣中，該組合包括：氟達拉濱(約30mg/m2 /天)和環磷醯胺(約300mg/m2 /天)，加上或不加上抗CD52藥物(例如抗CD52抗體，約13mg/天)。於一些實施態樣中，該組合包括：氟達拉濱(約30mg/m2 /天)和環磷醯胺(約300mg/m2 /天)，加上或不加上抗CD52藥物(例如抗CD52抗體，約10mg/天)。於一些實施態樣中，該組合包括：環磷醯胺和抗CD52藥物(例如抗CD52抗體)。於一些實施態樣中，以上這些劑量係在一天之中投予。於一些實施態樣中，以上這些劑量係在數天內投予。
於一些實施態樣中，氟達拉濱和環磷醯胺係在第一天投予，而該抗CD52抗體(例如，包含SEQ ID NO：408和/或SEQ ID NO：410之序列的抗體)係在第二天投予。於一些實施態樣中，氟達拉濱和環磷醯胺係在第一天投予CAR-T細胞之前投予且抗CD52抗體(例如，包含SEQ ID NO：408和/或SEQ ID NO：410之序列的抗體)係在第二天投予；其中第二天為投予CAR-T細胞之同一天，或者第二天係在投予CAR-T細胞之後。於一些實施態樣中，氟達拉濱和環磷醯胺係在第一天投予，CAR-T細胞係在第二天投予且抗CD52抗體(例如，包含SEQ ID NO：408和/或SEQ ID NO：410之序列的抗體)係在第二天之後至少約1、約2、約3、約4、約5、約6、約7、約8、約9、約10、約11或約12週投予。於一些實施態樣中，氟達拉濱和環磷醯胺係在投予CAR-T細胞之前投予且抗CD52抗體(例如，包含SEQ ID NO：408和/或SEQ ID NO：410之序列的抗體)係在投予CAR-T細胞之後至少約1、約2、約3、約4、約5、約6、約7、約8、約9、約10、約11或約12週投予。
於一些實施態樣中，淋巴清除方案包含投予氟達拉濱和環磷醯胺(FC)。於一些實施態樣中，淋巴清除方案包含投予氟達拉濱和抗CD52抗體(例如，包含SEQ ID NO：408和/或SEQ ID NO：410之序列的抗體)(FA)。於一些實施態樣中，淋巴清除方案包含投予環磷醯胺和抗CD52抗體(例如，包含SEQ ID NO：408和/或SEQ ID NO：410之序列的抗體)(CA)。於一些實施態樣中，淋巴清除方案包含投予氟達拉濱、環磷醯胺和抗CD52抗體(例如，包含SEQ ID NO：408和/或SEQ ID NO：410之序列的抗體)(FCA)。
在CAR-T細胞之第一或第二/隨後劑量之前對特定淋巴清除方案藥物和劑量之選擇可基於患者之血液學分析和血液學恢復來測定。在重新給藥之情況下，第二淋巴清除方案可較第一淋巴清除方案之強度強一些或低一些(例如，基於在第一個劑量後淋巴細胞、嗜中性粒細胞的恢復及病毒再活化)。例如，在重新給藥時，若淋巴細胞和嗜中性粒細胞之量很高，則可能使用強力或積極手段之淋巴清除方案。或者，在重新給藥時，若淋巴細胞量少，則可能使用較弱或較不積極之淋巴清除方案。於一些實施態樣中，若重新給藥時胚細胞之數目高，則使用強力或積極手段之淋巴清除方案。於一些實施態樣中，若重新給藥時之胚細胞數目少，則使用較弱或較不積極之淋巴清除方案。
於一些實施態樣中，在重新給藥時可應用增加強度之LD方案(使用或不使用抗CD52藥物)。於一些實施態樣中，在重新給藥時可應用降低強度之LD方案，例如在3-4級淋巴細胞減少的情況下(使用或不使用抗CD52藥物)。
於一些實施態樣中，氟達拉濱/環磷醯胺(FC)或氟達拉濱/環磷醯胺/抗CD52抗體(FCA)之淋巴清除方案的組成分係同時投予；於其他實施態樣中，該組成分係連續投予。於一些實施態樣中，該氟達拉濱/環磷醯胺(FC)或氟達拉濱/環磷醯胺/抗CD52抗體(FCA)之淋巴清除方案的組成分係在第-5天、第-4天和第-3天同時投予。於一些實施態樣中，氟達拉濱/環磷醯胺(FC)之淋巴清除方案的組成分係在投予該抗CD52抗體之前投予。於一些實施態樣中，氟達拉濱/環磷醯胺(FC)係在第-7天、第-6天和第-5天投予後，接著在第-4天和第-3天投予抗CD52抗體(A)。於一些實施態樣中，氟達拉濱/環磷醯胺(FC)係在第-7天、第-6天和第-5天投予，接著在第-5天、第-4天和第-3天投予抗CD52抗體(A)。於一些實施態樣中，該個體係在CAR-T細胞療法之第一個劑量之前接受FC方案；及在CAR-T細胞療法重新給藥之前接受FCA方案。於一些實施態樣中，該個體係在CAR-T細胞療法之第一個劑量前接受FCA方案；及在CAR-T細胞療法重新給藥之前接受第二FCA方案。
表6A、6B、6C、6D、6E、6F和6G中提供示例性LD方案。表6A至6G中，時間表下方所指明之時點係相對於投予CAR-T細胞之劑量的時點(D0)(以天計)。負數表示在投予CAR-T細胞之前的天數(在D0)。表 6A
淋巴清除 劑量 總劑量
氟達拉濱 30mg/m2 /天 90mg/m2
環磷醯胺 500mg/m2 /天 1500mg/m2
抗CD52抗體 (可選擇的) 0.2mg/kg/天 1mg/kg
表 6B
淋巴清除 劑量 途徑
氟達拉濱 30mg/m2 /天 IV，在15-30分鐘內
環磷醯胺 500mg/m2 /天 IV，在1小時內
抗CD52抗體 8mg/天 IV
表 6C
淋巴清除 劑量 途徑
氟達拉濱 30mg/m2 /天 IV，在15-30分鐘內
環磷醯胺 500mg/m2 /天 IV，在1小時內
抗CD52抗體 6mg/天 IV
表 6D
淋巴清除 劑量 總劑量
氟達拉濱 30mg/m2 /天 90mg/m2
環磷醯胺 300mg/m2 /天 900mg/m2
抗CD52抗體 (可選擇的) 13mg/天 39mg
表 6E
淋巴清除 劑量 總劑量
氟達拉濱 30mg/m2 /天 90mg/m2
環磷醯胺 300mg/m2 /天 900mg/m2
抗CD52抗體 (可選擇的) 10毫克/天 30mg
表 6F
淋巴清除 劑量 總劑量
氟達拉濱 30mg/m2 /天 90mg/m2
環磷醯胺 300mg/m2 /天 900mg/m2
抗CD52抗體 30mg/天 90mg
表 6G
淋巴清除 劑量 總劑量
氟達拉濱 30mg/m2 /天 90mg/m2
環磷醯胺 300mg/m2 /天 900mg/m2
抗CD52抗體 30mg/天 60mg
V. 給藥方案
於一些實施態樣中，本揭示內容之同種異體BCMA CAR-T細胞係使用固定劑量投予。於其他實施態樣中，同種異體BCMA CAR-T細胞係使用劑量分帶法投予。例如，可使用劑量分帶法來避免廣泛的CAR-T細胞暴露之風險。於一些實施態樣中，可使用重量帶。例如，但不限於：＜66kg之個體可投予X劑量，而≥66kg之個體可投予約1.33X劑量。於一些實施態樣中，≥50kg之個體可投予一個劑量，而≤50kg之個體可投予不同劑量。
用於具有復發性/難治性MM之個體的同種異體BCMA CAR-T細胞之第一劑量的示例性劑量水準提供於表7A中。該指定為“-1”之劑量水準僅依需要投予。
Figure 02_image119
於一些實施態樣中，對其體重≥50kg之個體投予一定劑量之本揭示內容的同種異體BCMA CAR-T細胞，其中該劑量範圍為約20×10^6個細胞/劑量至約480×10^6個細胞/劑量。於一些實施態樣中，該BCMA CAR-T細胞為BCMA-CAR+ _TCRαβ- _CD52+/- T細胞。於一些實施態樣中，該BCMA CAR-T細胞為BCMA-1 CAR -T細胞(描述於實施例1中)。
於一些實施態樣中，對其體重≥50kg 之個體投予一定劑量之本揭示內容的同種異體BCMA CAR-T細胞，其中該劑量範圍為約20×10^6個細胞/劑量至約40×10^ 10^6個細胞/劑量、約40×10^6個細胞/劑量至約120×10^6個細胞/劑量、約120×10^6個細胞/劑量至約360×10^6個細胞/劑量、或約360×10^6個細胞/劑量至約480×10^6個細胞/劑量。於一些實施態樣中，該BCMA CAR-T細胞為BCMA-CAR+ _TCRαβ- _CD52+/- T細胞。於一些實施態樣中，該BCMA CAR-T細胞為BCMA-1 CAR-T細胞。
於一些實施態樣中，對其體重＜50kg之個體投予一定劑量之本揭示內容的同種異體BCMA CAR-T細胞，其中該劑量範圍為約7×10^6個細胞/劑量至約360×10^10^6個細胞/劑量。於一些實施態樣中，該BCMA CAR-T細胞為BCMA-CAR+ _TCRαβ- _CD52+/- T細胞。於一些實施態樣中，該BCMA CAR-T細胞為BCMA-1 CAR-T細胞。
於一些實施態樣中，對其體重＜50kg之個體投予一定劑量之本揭示內容的同種異體BCMA CAR-T細胞，其中該劑量範圍為約7×10^6個細胞/劑量或14×10^6個細胞/劑量至約20×10^10^6個細胞/劑量、約20×10^6個細胞/劑量至約80×10^6個細胞/劑量、約80×10^6個細胞/劑量至約240×10^6個細胞/劑量、或約240×10^6個細胞/劑量至約360×10^6個細胞/劑量。於一些實施態樣中，該BCMA CAR-T細胞為BCMA-CAR+ _TCRαβ- _CD52+/- T細胞。於一些實施態樣中，該BCMA CAR-T細胞為BCMA-1 CAR-T細胞。
表7B中提供用於具有復發性/難治性MM個體之用於同種異體BCMA CAR-T細胞之第一劑量的可供選擇之示例性劑量水準。該中間劑量水準及被指定為“4”和“-1”之劑量水準僅依需要投予。
Figure 02_image121
於一些實施態樣中，對其體重＞50kg之個體投予一定劑量之本揭示內容的同種異體BCMA CAR-T細胞，其中該劑量範圍為約20×10^6個細胞/劑量至約480×10^6個細胞/劑量。於一些實施態樣中，該BCMA CAR-T細胞為BCMA-CAR+ _TCRαβ- _CD52+/- T細胞。於一些實施態樣中，該BCMA CAR-T細胞為BCMA-1 CAR-T細胞(描述於實施例1中)。
於一些實施態樣中，對其體重＞50kg之個體投予一定劑量之本揭示內容的同種異體BCMA CAR-T細胞，其中該劑量範圍為約20×10^6個細胞/劑量至約40×10^6個細胞/劑量、約40×10^6個細胞/劑量至約160×10^6個細胞/劑量、約160×10^6個細胞/劑量至約320×10^6個細胞/劑量、約160×10^6個細胞/劑量至約240×10^6個細胞/劑量、約240×10^6個細胞/劑量至約320×10^6個細胞/劑量、約240×10^6個細胞/劑量至約480×10^6個細胞/劑量、或約320×10^6個細胞/劑量至約480×10^6個細胞/劑量。於一些實施態樣中，該BCMA CAR-T細胞為BCMA-1 CAR-T細胞。於一些實施態樣中，該BCMA CAR-T細胞為BCMA-CAR+ _TCRαβ- _CD52+/- T細胞。
於一些實施態樣中，對其體重≤50kg之個體投予一定劑量之本揭示內容的同種異體BCMA CAR-T細胞，其中該劑量範圍為約14×10^6個細胞/劑量至約320×10^6個細胞/劑量。於一些實施態樣中，該BCMA CAR-T細胞為BCMA-CAR+ _TCRαβ- _CD52+/- T細胞。於一些實施態樣中，該BCMA CAR-T細胞為BCMA-1 CAR-T細胞。
於一些實施態樣中，對其體重≤50kg之個體投予一定劑量之本揭示內容的同種異體BCMA CAR-T細胞，其中該劑量範圍為約14×10^6個細胞/劑量至約20×10^6個細胞/劑量、約20×10^6個細胞/劑量至約80×10^6個細胞/劑量、約80×10^6個細胞/劑量至約160×10^6個細胞/劑量、約80×10^6個細胞/劑量至約200×10^6個細胞/劑量、約160×10^6個細胞/劑量至約200×10^6個細胞/劑量、約200×10^6個細胞/劑量至約320×10^6個細胞/劑量、約160×10^6個細胞/劑量至約320×10^6個細胞/劑量、或約200×10^6個細胞/劑量至約320×10^6個細胞/劑量。於一些實施態樣中，該BCMA CAR-T細胞為BCMA-CAR+ _TCRαβ- _CD52+/- T細胞。於一些實施態樣中，該BCMA CAR-T細胞為BCMA-1 CAR-T細胞。
於一些實施態樣中，對其體重＞50kg之個體投予一定劑量之本揭示內容的同種異體BCMA CAR-T細胞，其中該劑量為約40×10^6個細胞/劑量、160×10^6個細胞/劑量、或320×10^6個細胞/劑量。於一些實施態樣中，若在劑量水準3下觀察到毒性或為了測定較低之有效劑量，則投予約240×10^6個細胞/劑量之中間劑量(或介於劑量水準1或劑量水準3之間的另一劑量水準)。於一些實施態樣中，若在劑量水準3見到不足之效力參數，則投予為480×10^6個細胞/劑量之劑量水準(劑量水準4)(第20圖)。於一些實施態樣中，該BCMA CAR-T細胞為BCMA-CAR+ _TCRαβ- _CD52+/- T細胞。於一些實施態樣中，該BCMA CAR-T細胞為BCMA-1 CAR-T細胞。
該細胞或細胞群可在一或多個劑量中投予。於一些實施態樣中，該有效量之細胞可以單劑量之形式投予。於一些實施態樣中，該有效量之細胞可以一個以上之劑量形式在一段時間內投予。投予時點係由醫師判斷並取決於該個體之臨床狀況。該細胞或細胞群可從任何來源獲得，諸如血庫或供體。雖然個體之需求有所不同，測定用於特定疾病或病況之指定細胞類型之有效量的最佳範圍係在本技藝之技術範圍內。有效量意指提供治療或預防益處之量。該投予之劑量大致上將取決於該接受者之年齡、健康狀況和體重、同時進行之治療的種類(若有的話)、治療之頻率和所需效果之性質。於一些實施態樣中，經由腸胃道外投予有效量之細胞或包含那些細胞之組成物。於一些實施態樣中，投予可為靜脈內投予。於一些實施態樣中，投予可藉由直接注射在腫瘤內進行。
於本揭示內容之一些實施態樣中，可將細胞聯同(例如之前、同時或之後)任何數量之相關治療方式投予個體，該相關治療方式包括，但不限於使用作用劑進行治療，諸如使用用於MS個體之單株抗體療法、CCR2拮抗劑(例如INC-8761)、抗病毒療法、西多福韋(cidofovir)和介白素-2、阿糖胞苷(亦稱為ARA-C)或那他昔單抗(nataliziimab)治療、或用於牛皮癬個體之依法西單抗(efaliztimab)治療、或用於PML個體之其他治療。於一些實施態樣中，BCMA特異性CAR-T細胞係聯同下列一或多者投予個體：抗PD-1抗體(例如納武魯單抗(nivolumab)、派姆單抗(pembrolizumab)或PF-06801591)、抗PD-L1抗體(例如阿維魯單抗(avelumab)、阿特珠單抗(atezolizumab)或杜伐魯單抗(durvalumab))、抗OX40抗體(例如PF-04518600)、抗4-1BB抗體(例如PF-05082566)、抗MCSF抗體(例如PD-0360324)、抗GITR抗體和/或抗TIGIT抗體。於一些實施態樣中，本揭示內容之BCMA特異性CAR-T細胞係聯同抗PD-L1抗體阿維魯單抗投予個體。於進一步之實施態樣中，本揭示內容之T細胞可與下列群組組合使用：化學療法、放射線、免疫抑制劑，諸如環孢菌素、硫唑嘌呤、甲胺蝶呤、黴酚酸酯和FK506、抗體、或其他免疫消融劑，諸如CAMPATH、抗CD3抗體或其他抗體療法、細胞毒素、氟達立濱、環孢菌素、FK506、雷帕黴素、黴酚酸(mycoplienolic acid)、類固醇、FR901228、細胞因子和/或放射線。這些藥物抑制鈣依賴性磷酸酶鈣調磷酸酶(calcineurin)(環孢菌素和FK506)或抑制p70S6激酶(其對生長因子誘導之信號傳導很重要)(雷帕黴素)(Henderson, Naya 等人, 1991；Liu, Albers 等人, 1992；Bierer, Hollander 等人, 1993)。於進一步之實施態樣中，本揭示內容之細胞組成物係聯同(例如之前、同時或之後)下列群組投予個體：骨髓移植、使用任一化療劑(諸如氟達拉濱)之T細胞消融療法、體外放射線療法(XRT)、環磷醯胺、或抗體，諸如OKT3或CAMPATH。於一些實施態樣中，本揭示內容之細胞組成物係在B細胞消融療法(諸如與CD20反應之藥物，例如利妥昔單抗)之後投予。例如，於一實施態樣中，個體可接受使用高劑量化學療法之標準治療，然後進行外周血幹細胞移植。於某些實施態樣中，在移植後，個體接受輸注本揭示內容之擴增的免疫細胞。於一些實施態樣中，擴增之細胞係在手術之前或之後投予。VI. 使用 CAR-T 細胞再治療的方法
本文亦提供使用BCMA CAR-T細胞進行再治療(重新給藥)的方法。特別是，該方法涉及對已接受第一劑量之個體投予一或多個後續之細胞劑量和/或投予第一及一或多個後續劑量。該劑量通常以特定量並根據特定之時間參數投予。於一些實施態樣中，該方法通常涉及投予第一細胞劑量，從而減少疾病負擔，隨後相對於該第一劑量在特定之時間窗期間投予後續之細胞劑量或隨後對已接受該等第一劑量之個體投予後續劑量。於一些實施態樣中，接著再投予之另外的後續劑量係，例如在相對於該後續劑量之相同或相似的時間窗口內投予。於一些實施態樣中，設計投予之細胞數量和該多個劑量之時點以改善一或多種結果，諸如降低對該個體之毒性的可能性或程度、改善該個體對投予之細胞的暴露和/或該投予之細胞的持久性和/或改善治療效力。亦提供包含該細胞及經設計以在該等給藥方案之後投予的製品。
於一些再治療(重新給藥)之實施態樣案中，對其體重＞50kg之個體投予本揭示內容之同種異體BCMA CAR-T細胞的追加劑，其中該劑量範圍為約20×10^6個細胞/劑量至約480×10^6個細胞/劑量。於一些實施態樣中，該BCMA CAR-T細胞為BCMA-CAR+ _TCRαβ- _CD52+/- T細胞。於一些實施態樣中，該BCMA CAR-T細胞為BCMA-1 CAR-T細胞(描述於實施例1中)。
於一些再治療(重新給藥)之實施態樣案中，對其體重＞50kg之個體投予本揭示內容之同種異體BCMA CAR-T細胞的追加劑，其中該劑量為約20×10^6個細胞/劑量至約40×10^6個細胞/劑量、約40×10^6個細胞/劑量至約160×10^6個細胞/劑量、約160×10^6個細胞/劑量至約320×10^6個細胞/劑量、約160×10^6個細胞/劑量至約240×10^6個細胞/劑量、約240×10^6個細胞/劑量至約320×10^6個細胞/劑量、約240×10^6個細胞/劑量至約480×10^6個細胞/劑量、約320×10^6個細胞/劑量至約480×10^6個細胞/劑量。於一些實施態樣中，該BCMA CAR-T細胞為BCMA-1 CAR-T細胞。於一些實施態樣中，該BCMA CAR-T細胞為BCMA-CAR+ _TCRαβ- _CD52+/- T細胞。
於一些再治療(重新給藥)之實施態樣案中，對其體重＞50kg之個體投予本揭示內容之同種異體BCMA CAR-T細胞的追加劑，其中該劑量為約40×10^6個細胞/劑量、160×10^6個細胞/劑量、或320×10^6個細胞/劑量。於一些實施態樣中，若在劑量水準3觀察到毒性或為了測定較低之有效劑量，則投予約240×10^6個細胞/劑量之中間劑量(或介於劑量水準1或劑量水準3之間的另一劑量水準)。於一些實施態樣中，若在劑量水準3下見到不足之效力參數，則投予為480×10^6個細胞/劑量之劑量水準(劑量水準4)(第20圖)。於一些實施態樣中，該BCMA CAR-T細胞為BCMA-CAR+ _TCRαβ- _CD52+/- T細胞。於一些實施態樣中，該BCMA CAR-T細胞為BCMA-1 CAR-T細胞。
於一些再治療(重新給藥)之實施態樣案中，對其體重≥50kg之個體投予本揭示內容之同種異體BCMA CAR-T細胞的追加劑，其中該劑量為約20×10^6個細胞/劑量至約480×10^6個細胞/劑量。於一些實施態樣中，該BCMA CAR-T細胞為BCMA-CAR+ _TCRαβ- _CD52+/- T細胞。於一些實施態樣中，該BCMA CAR-T細胞為BCMA-1 CAR-T細胞(描述於實施例1中)。
於一些再治療(重新給藥)之實施態樣案中，對其體重≥50kg之個體投予本揭示內容之同種異體BCMA CAR-T細胞的追加劑，其中該劑量範圍為約20×10^6個細胞/劑量至約40×10^6個細胞/劑量、約40×10^6個細胞/劑量至約120×10^6個細胞/劑量、約120×10^6個細胞/劑量至約360×10^6個細胞/劑量、或約360×10^6個細胞/劑量至約480×10^6個細胞/劑量。於一些實施態樣中，該BCMA CAR-T細胞為BCMA-CAR+ _TCRαβ- _CD52+/- T細胞。於一些實施態樣中，該BCMA CAR-T細胞為BCMA-1 CAR-T細胞。
於一些再治療(重新給藥)之實施態樣案中，對其體重≤50kg之個體投予本揭示內容之同種異體BCMA CAR-T細胞的追加劑，其中該劑量範圍為約14×10^6個細胞/劑量至約320×10^6個細胞/劑量。於一些實施態樣中，該BCMA CAR-T細胞為BCMA-CAR+ _TCRαβ- _CD52+/- T細胞。於一些實施態樣中，該BCMA CAR-T細胞為BCMA-1 CAR-T細胞。
於一些再治療(重新給藥)之實施態樣案中，對其體重≤50kg之個體投予本揭示內容之同種異體BCMA CAR-T細胞的追加劑，其中該劑量範圍為約14×10^6個細胞/劑量至約20×10^6個細胞/劑量、約20×10^6個細胞/劑量至約80×10^6個細胞/劑量、約80×10^6個細胞/劑量至約160×10^6個細胞/劑量、約80×10^6個細胞/劑量至約200×10^6個細胞/劑量、約160×10^6個細胞/劑量至約200×10^6個細胞/劑量、約200×10^6個細胞/劑量至約320×10^6個細胞/劑量、約160×10^6個細胞/劑量至約320×10^6個細胞/劑量或約200×10^6個細胞/劑量至約320×10^6個細胞/劑量。於一些實施態樣中，該BCMA CAR-T細胞為BCMA-CAR+ _TCRαβ- _CD52+/- T細胞。於一些實施態樣中，該BCMA CAR-T細胞為BCMA-1 CAR-T細胞。
於一些再治療(重新給藥)之實施態樣案中，對其體重＜50kg之個體投予本揭示內容之同種異體BCMA CAR-T細胞的追加劑，其中該劑量範圍為約7×10^6個細胞/劑量至約360×10^6個細胞/劑量。於一些實施態樣中，該BCMA CAR-T細胞為BCMA-CAR+ _TCRαβ- _CD52+/- T細胞。於一些實施態樣中，該BCMA CAR-T細胞為BCMA-1 CAR-T細胞。
於一些再治療(重新給藥)之實施態樣案中，對其體重＜50kg之個體投予本揭示內容之同種異體BCMA CAR-T細胞的追加劑，其中該劑量範圍為約7×10^6或約14×10^6個細胞/劑量至約20×10^10^6個細胞/劑量、約20×10^6個細胞/劑量至約80×10^6個細胞/劑量、約80×10^6個細胞/劑量至約240×10^6個細胞/劑量、或約240×10^6個細胞/劑量至約360×10^6個細胞/劑量。於一些實施態樣中，該BCMA CAR-T細胞為BCMA-CAR+ _TCRαβ- _CD52+/- T細胞。於一些實施態樣中，該BCMA CAR-T細胞為BCMA-1 CAR-T細胞。Ⅶ . 套組和製品
本揭示內容亦提供用於所揭示之方法中的套組和製品。本揭示內容之套組包括一或多個容器(例如玻璃瓶)和根據本文所描述之任一揭示方法的使用說明，該一或多個容器包含編碼BCMA特異性CAR之多核苷酸或經工程處理之免疫細胞(例如BCMA-1 CAR-T細胞，例如BCMA-CAR+ _TCRαβ- _CD52+/- T細胞)，該經工程處理之免疫細胞包含編碼如本文所描述之BCMA特異性CAR的多核苷酸。於一些實施態樣中，該經工程處理之免疫細胞係配製在包含約5%DMSO之溶液中。此外，該經工程處理之免疫細胞可以冷凍狀態提供。
於一些實施態樣中，本文提供另外之小瓶，該小瓶包含CD52抗體之單位劑量(其可以冷凍狀態或包含緩衝介質之室溫溶液形式提供)、氟達拉濱和/或環磷醯胺。
通常，本文提供之這些說明書包含關於投予用於上述治療性治療之經工程處理的免疫細胞之描述。關於如本文所描述之經工程處理之免疫細胞的使用說明書一般包括關於用於預期治療之劑量、給藥時間表和投予途徑的信息。該容器可為單位劑量、散裝包裝(例如多劑量包裝)或亞單位劑量。本揭示內容之套組中提供之說明書通常為在標籤或仿單(例如包含在該套組中之紙張)上的書面說明，但機器可讀之說明(例如磁碟或光碟上所攜帶之說明)亦可接受。
本揭示內容之套組係在合適之包裝中。合適之包裝包括，但不限於小瓶、瓶子、廣口瓶、軟質包裝(例如密封之Mylar聚酯薄膜或塑料袋)等。亦考慮用於與特定裝置(諸如輸注裝置，諸如微型泵)組合使用之包裝。套組可具有無菌之進入口(例如該容器可為靜脈注射溶液袋或具有可被皮下注射針刺穿之塞子的小瓶)。該容器亦可具有無菌之進入口(例如該容器可為靜脈注射溶液袋或具有可被皮下注射針刺穿之塞子的小瓶)。該組成物中之至少一種活性劑為BCMA抗體。該容器可進一步包含第二醫藥上活性之作用劑。
套組可視需要地提供額外組分，諸如緩衝液和解釋性信息。通常，該套組包含容器和在該容器上或與該容器結合之標籤或仿單。
下列實施例僅用於說明，而不意圖以任何方式限制本揭示內容之範圍。實際上，除了本文中所顯示和描述者外，根據前述內容，本揭示內容之各種修飾對本技藝之技術熟習人士而言將是顯明的且係在所附之申請專利範圍內。實施例 實施例 1 ： BCMA-1 之生產和測試
第1至16圖描述BCMA-1之生產和測試。BCMA-1為同種異體T細胞，其包含表現BCMA CAR之經整合的自行去活化之第三代重組慢病毒載體。該BCMA CAR包含scFv，其中該CAR之scFV為表1中之P5A2。該scFV包含VH和VL，其中該VH包含SEQ ID NO：33所示之胺基酸序列且該VL包含SEQ ID NO：34所示之胺基酸序列。該CAR之胞外區亦包含2個可被利妥昔單抗識別之模擬表位。
該BCMA CAR-T細胞之基因型為BCMA-CAR+ _TCRαβ- _CD52+/- 。該細胞可配製在包含5%DMSO之溶液中。於一實施態樣中，該細胞係在CryoStor®Basal Solution和CryoStor®CS10之1：1的混合物(其導致5%二甲亞碸之終濃度)中配製成用於輸注之懸浮液，且該所產生之配製劑的劑量強度為14×10^6個BCMA-CAR+ _TCRαβ- _CD52+/- T細胞/mL。
第2圖顯示由利妥昔單抗介導之安全開關可檢測和消耗(使用利妥昔單抗)本揭示內容之含BCMA的CAR-T細胞。將BCMA-1細胞與兔子補體和利妥昔單抗一起培育。3小時後，將表現CAR之細胞染色。該圖形顯示活CAR+細胞之百分比(平均值+/-SEM)。(第2圖)
藉由將BCMA-1效應細胞與穩定表現螢光素酶之靶細胞以增加之E：T比例共同培養，以在玻管內評估針對表現BCMA之細胞株測試之BCMA-1的細胞毒性，並在24小時後測量殘留之螢光素酶活性，使用BCMA陰性REH細胞作為對照細胞株。與未經轉導之對照T細胞(三角形)相比較，BCMA-1(圓形)顯示出針對表現BCMA之細胞具有劑量依賴性細胞毒性，但對於對照細胞(REH)並無明顯滅殺作用。BCMA-1和非基因編輯之BCMA-1(空心圓圈)的滅殺活性相當。圖形代表相對於單獨培養之靶細胞的細胞溶解百分比(第6圖)。顯示之結果為3個供體的平均值+/-SEM。陰性細胞毒性值(由分析過程中之靶細胞生長或增強之螢光素酶信號所導致)繪製為0%細胞溶解。
第16圖顯示BCMA-1之scFV在組織交叉反應性研究中並未顯示脫靶結合，表明在臨床設置中脫靶結合之風險低或不存在。在13個人體組織中進行測試。CAR之胞外結構域與人IgG2dA D265A融合(突變以防止Fc結合)。該方法之研發係用於對過表現BCMA之細胞株進行最佳染色。人體組織中並未觀察到染色。
在9個人體組織中之免疫組織化學染色的結果–進行三次信號放大以增加信號。在扁桃體、淋巴結、脾組織中檢測到預期信號。乳房、胰腺、輸卵管、前列腺、膀胱組織中沒有上皮結合。因此，意外結合之風險被認為是低或不存在。實施例 2 ：第 1 期研究，設計 A
第19圖顯示出用於治療難治性/復發性MM之第1期研究(設計A)的概述。設計A之設計包括：淋巴細胞清除期：在治療前3至5天，氟達拉濱(flu)30mg/m2 /天IV；環磷醯胺(cy)300mg/m2 /天IV；和CD52抗體13mg/天IV；和治療期(第0天)，其包括從20×10^6個細胞至80×10^6個細胞IV(用於≥50kg個體之遞增劑量)或7×10^6個細胞至360×10^6個細胞IV(用於＜50kg個體)。
納入標準可包括下列一或多者： 在≥3次先前MM方案後為可測量之MM 誘導+/-ASCT+/-維持為1個方法 接受先前之PI、IMiD和CD38抑制(除非禁忌)且每一方案至少2個連續週期，除非PD為最佳反應 最近之方案無效。 ECOG PS 0-1 足夠之器官功能 在LD前有5次消除半衰期清洗 4週mAb BCMA表現可用於選擇患者。
表8中提供在第1期設計A中之用於BCMA-1遞增的劑量分帶水準。
Figure 02_image123
劑量遞增通常將藉由3+3設計控制；每一劑量水準可接受來自至少二個不同供體之細胞；最多可以測試五個劑量水準。表8中該起始劑量記為劑量水準1，於一些實施態樣中，若指明，該個體可以接受-1之劑量水準。
復發之患者可使用來自不同供體之BCMA CAR-T細胞重新給藥，例如使用20mg CD52抗體進行調節。實施例 3 ：第 1 期研究，設計 B
第19圖顯示用於治療難治性/復發性MM之第1期研究(設計B)的概述。該設計B之設計包括：淋巴細胞清除期：在治療前3至5天，氟達拉濱(flu)30mg/m2 /天IV；環磷醯胺(cy)300mg/m2 /天IV；和CD52抗體13mg/天IV；和治療期(第0天)，其包括20×10^6個細胞至80×10^6個細胞IV(用於≥50kg個體)或7×10^6個細胞至360×10^6個細胞IV(用於＜50kg之個體)之遞增劑量。
納入標準可包括下列一或多者：
1.如多發性骨髓瘤中之反應和最小殘留疾病評估之IMWG共識標準所定義的復發性/難治性多發性骨髓瘤(R/R MM)之記錄診斷。
2.個體具有包括一或多項下列標準之可測量的疾病： a.血清M蛋白≥0.5g/dL b.尿M蛋白≥200mg/24小時， c.若血清FLC比例異常，涉及之血清游離輕鏈(FLC)水準≥10mg/dL(100mg/L)。
3.患者已接受至少≥3次先前之MM方案： a.使用或不使用造血幹細胞移植誘導以及使用或不使用維持療法被視為單一方案。 b.接受先前之蛋白酶體抑制劑、免疫調節劑和抗CD38抗體(除非禁忌)，每一方案至少連續2個週期(除非慢性病為該方案之最佳反應)。 c.最近之治療方案無效。
4.美國東岸癌症臨床研究合作組織(ECOG)體能狀態為0或1。
一個治療週期被視為是1次淋巴清除和1個治療期之組合。
該研究的一個目的為評估BCMA-1之MTD，和/或建立其RP2D。
於一些實施態樣中，該研究包括二個部分：劑量遞增和劑量擴增。
在劑量遞增部分中，在3+3設計中繼替之患者群可接受BCMA-1之遞增劑量。在每個劑量水準下，可先使用BCMA-1治療第一個患者並觀察28天，然後再治療後續患者。通常，在輸注BCMA-1後的前28天內將嚴密監測所有患者之劑量限制性毒性(DLT)。BCMA-1之目標DLT率為＜33%。可研究介於DL1和DL3之間的中間劑量水準(表9)。可執行使用2種不同之重量帶的給藥策略，該2種不同之重量帶係基於在一般人群中觀察到的重量變化。體重≤50kg之患者可接受較體重＞50kg之患者低33%至50%的劑量。第1期，設計B中之臨時BCMA-1遞增劑量水準提供於表9中。可依需要投予中間劑量水準、劑量水準-4和劑量水準-1。
Figure 02_image125
劑量遞增通常係藉由3+3設計控制；每一劑量水準可接受來自至少二個不同供體之細胞；最多可測試五個劑量水準。該起始劑量在表9中被標記為劑量水準1，於一些實施態樣中，若有指示，個體可接受劑量水準-1、劑量水準4或中間劑量水準(如表9中所示)。
因此，在設計B中，可在第0天經由靜脈內(IV)輸注約5分鐘來投予BCMA-1。可研究對體重＞50kg之患者投予40×10^6個、160×10^6個和320×10^6個同種異體CAR T細胞之遞增劑量。用於體重≤50kg之患者的對應劑量為20×10^6個、80×10^6個和200×10^6個同種異體CAR T細胞。
識別人CD52抗原之抗CD52人IgG1單株抗體可作為淋巴清除方案之一部分。
可在第-5天、第-4天和第-3天經由靜脈內(IV)輸注在4小時內投予劑量為13mg/天之抗CD52抗體並同時投予氟達拉濱(30mg/m2 /天)和/或環磷醯胺(300mg/m2 /day)或單獨投予抗體。在有毒性之情況下，計劃投予10mg/天之較低劑量。可投予氟達拉濱(30mg/m2 /天)3天。
從第一個患者納入(enrol)到最後一個患者完成，該1期研究之總持續時間為約48個月。
該劑量擴增部分可包括加入該計畫書中的其他分群(cohort)，以使用適當之BCMA-1調節方案表徵R2PD。在根據劑量遞增之調查結果所選擇之劑量水準下和調節方案中評估每組12名，至多3組之患者。
當所有接受BCMA-1治療之患者從最初輸注BCMA-1開始已追蹤至少24個月、已撤回對任何進一步接觸之同意書、失去追蹤或死亡時，研究可以結束，除非該研究更早被試驗委託者(sponsor)終止。
在復發之患者中可使用來自不同供體之BCMA CAR-T細胞重新給藥，使用，例如20mgCD52抗體進行調節。 實施例4：第2期研究
第2期可涉及使用具有來自第1期設計A或設計B之可接受的毒性的最高劑量測試另外之包括6至12名個體的分群(或是RP2D-產生約20%之來自第1期之劑量限制性毒性的劑量水準；或是高於RP2D劑量之劑量水準)。個體可接受不包括flu/cy之CD52抗體；在CAR-T細胞治療前可投予劑量為〜40mg(13mg/天×3天)之CD52抗體，並在CAR-T細胞治療後第7、14和21天重複投予13mg/天之劑量。
儘管已經參考各種應用、方法和組成物描述所揭示之教示內容，應理解的是，在不脫離本文之教示內容和以下之申請專利範圍的情況下可進行各種變化和修改。前述實例係用於更清楚地說明所揭示之教示內容，並非意圖限制本文所呈現之教示內容的範圍。儘管本教示內容已就這些示例性實施態樣加以描述，本技藝之技熟習人士將輕易理解可對這些示例性實施態樣進行多種變化和修改而無需過多的實驗。所有該等變化和修改都在當前之教示內容的範圍內。
本文所引用之所有參考文獻，包括專利、專利申請案、論文、教科書等，以及其中所引用之參考文獻，在尚未被納入之程度下，其全部內容以引用方式併入本文。在該併入之一或多項文獻和類似資料與本申請案不同或矛盾的事件(包括，但不限於所定義之術語、術語用法、所描述之技術等)中以本申請案為準。
前文之描述和實施例詳述本發明之某些具體實施態樣，並描述本發明者考量之最佳模式。然而，應理解的是，無論前述內容多麼詳細地出現在文本中，本發明可以多種方式實行且本發明應根據所附之申請專利範圍及其任何等效項來解釋。
[第 1 圖 ]顯示本揭示內容之含BCMA的CAR-T細胞。該CAR具有藉由利妥昔單抗和抗BCMA scFv活化之功能性開關。該經修飾之T細胞進一步具有降低之CD52表現(以將排斥最小化)和T細胞受體基因(TCRα和/或TCRβ)表現(以避免GvHD，移植物抗宿主疾病)。
[第 2 圖 ]顯示該由利妥昔單抗介導之開關使得本揭示內容之含BCMA的CAR-T細胞能夠被檢測和消耗(使用利妥昔單抗)。
[第 3 圖 ]顯示本揭示內容之含BCMA scFV的CAR-T細胞(BCMA-1)，其內源性CD52基因被敲落(knock down)/剔除(knock out)而對CD52抗體治療具有抗性。
[第 4 圖 ]顯示靶細胞中之BCMA的表現。
[第 5 圖 ]顯示本揭示內容之含BCMA scFV的CAR-T細胞(BCMA-1)，其顯示靶的依賴性擴增且在反複刺激之後保持酶活性。
[第 6 圖 ]顯示本揭示內容之含BCMA scFV的CAR-T細胞(BCMA-1)，其顯示特異之細胞毒性活性。該非基因編輯之BCMA-1係指不包含敲落/剔除之CD52和/或TCRα和/或TCRβ的CAR-T細胞。
[第 7 圖 ]顯示本揭示內容之含BCMA scFV的CAR-T細胞(BCMA-1)具有不會被可溶性BCMA抑制之劑量依賴性細胞毒性活性。
[第 8 至 11A 和 11B 圖 ]本揭示內容之含BCMA scFV的CAR-T細胞(BCMA-1)在原位腫瘤模型中顯示具抗腫瘤效力並可使用利妥昔單抗耗盡。第 8 圖 顯示本揭示內容之含BCMA scFV的CAR-T細胞(BCMA-1)在MM.1S模型中之活性。第 9 圖 顯示本揭示內容之含BCMA scFV的CAR-T細胞(BCMA-1)在第二個劑量後之腫瘤根除效果。第 10 圖 顯示本揭示內容之含BCMA scFV的CAR-T細胞(BCMA-1)輔以IL-7/IL-15在小鼠中之抗腫瘤效果。使用MOLP-8動物模型。對NSG小鼠(N=10)投予5×106 個MM.1S細胞或2×106 MOLP-8個細胞。細胞因子係經由AAV介導之基因遞送提供。結果以平均值±SEM顯示。第 11A 至 11B 圖 顯示利妥昔單抗在模型中耗盡本揭示內容之含BCMA scFV的CAR-T細胞(BCMA-1)(第 11B 圖 )，並廢除抗腫瘤活性(第 11A 圖 )。
[第 12 至 15 圖 ]描繪本揭示內容之BCMA CAR-T細胞-具體而言，本揭示內容之含BCMA scFV的CAR-T細胞(BCMA-1)可在保存抗腫瘤活性之GMP樣條件下製造。第 12 圖 顯示用於本揭示內容之BCMA CAR-T細胞的示例性同種異體CAR-T製造過程。第 13 圖 顯示本揭示內容之含BCMA scFV的CAR-T細胞(BCMA-1)之高存活力和擴增。第 14 圖 顯示TCRαβ陰性細胞之有效富集。MACS：經磁性活化之細胞分選系統(Miltenyi Biotec)。第 15 圖 顯示不同劑量之本揭示內容之含BCMA scFV的CAR-T細胞(BCMA-1)在MM.1S原位腫瘤模型中的高抗腫瘤效果。
[第 16 圖 ]顯示BCMA-1 scFv在組織交叉反應性研究中未顯示脫靶結合，此表明在臨床環境中脫靶結合之風險低或不存在。
[第 17 圖 ]描述自體CAR-T療法之侷限性。
[第 18 圖 ]描述同種異體CAR-T療法之優點。
[第 19 圖 ]顯示第1期(設計A或B)研究之圖解。
[第 20 圖 ]顯示第1期，設計B研究之圖解。
[第 21 圖 ]顯示本揭示內容之示例性載體元件/構建體的示意圖。
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Claims (51)

  1. 一種治療個體之多發性骨髓瘤之方法，其包含對該個體投予至少一個劑量之包含抗人BCMA CAR的同種異體嵌合抗原受體(CAR)-T細胞(BCMA CAR-T細胞)，其中該至少一個劑量為約7×10^6個細胞/劑量至約480×10^6個細胞/劑量。
  2. 如請求項1之方法，其中該個體之體重≥50kg，且該方法包含投予至少一個劑量之BCMA CAR-T細胞，其中該劑量係在約20×10^6個細胞/劑量至約480×10^6個細胞/劑量之範圍內。
  3. 如請求項2之方法，其中該至少一個劑量為約20×10^6個細胞/劑量、約40×10^6個細胞/劑量、約120×10^6個細胞/劑量、約360×10^6個細胞/劑量、或約480×10^6個細胞/劑量。
  4. 如請求項2之方法，其中該至少一個劑量為約20×10^6個細胞/劑量至約40×10^6個細胞/劑量、約40×10^6個細胞/劑量至約120×10^6個細胞/劑量、約120×10^6個細胞/劑量至約360×10^6個細胞/劑量、或約360×10^6個細胞/劑量至約480×10^6個細胞/劑量。
  5. 如請求項1之方法，其中該個體之體重＜50kg，且該方法包含投予至少一個劑量之BCMA CAR-T細胞，其中該劑量係在約7×10^6個細胞/劑量至約360×10^6個細胞/劑量之範圍內。
  6. 如請求項5之方法，其中該至少一個劑量為約7×10^6個細胞/劑量、約14×10^6個細胞/劑量、約20×10^6個細胞/劑量、約80×10^6個細胞/劑量、約240×10^6個細胞/劑量、或約360×10^6個細胞/劑量。
  7. 如請求項5之方法，其中該至少一個劑量為約7×10^6或14×10^6個細胞/劑量至約20×10^6個細胞/劑量、約20×10^6個細胞/劑量至約80×10^6個細胞/劑量、約80×10^6個細胞/劑量至約240×10^6個細胞/劑量、或約240×10^6個細胞/劑量至約360×10^6個細胞/劑量。
  8. 如請求項1之方法，其中該個體之體重＞50kg，且該方法包含投予至少一個劑量之BCMA CAR-T細胞，其中該劑量係在約20×10^6個細胞/劑量至約480×10^6個細胞/劑量之範圍內。
  9. 如請求項8之方法，其中該至少一個劑量為約20×10^6個細胞/劑量、約40×10^6個細胞/劑量、約160×10^6個細胞/劑量、約240×10^6細胞/劑量、約320×10^6個細胞/劑量、或約480×10^6個細胞/劑量。
  10. 如請求項8之方法，其中該至少一個劑量為約20×10^6個細胞/劑量至約40×10^6個細胞/劑量、約40×10^6個細胞/劑量至約160×10^6細胞/劑量、約160×10^6個細胞/劑量至約240×10^6個細胞/劑量、約240×10^6個細胞/劑量至約320×10^6個細胞/劑量、約160×10^6個細胞/劑量至約320×10^6個細胞/劑量、或約320×10^6個細胞/劑量至約480×10^6個細胞/劑量。
  11. 如請求項1之方法，其中該個體之體重≤50kg，且該方法包含投予至少一個劑量之BCMA CAR-T細胞，其中該劑量係在約14×10^6個細胞/劑量至約320×10^6個細胞/劑量之範圍內。
  12. 如請求項11之方法，其中該至少一個劑量為約14×10^6個細胞/劑量、約20×10^6個細胞/劑量、約80×10^6個細胞/劑量、約160×10^6個細胞/劑量、約200×10^6個細胞/劑量、或約320×10^6個細胞/劑量。
  13. 如請求項12之方法，其中該至少一個劑量為約14×10^6個細胞/劑量至約20×10^6個細胞/劑量、約20×10^6個細胞/劑量至約80×10^6個細胞/劑量、約80×10^6個細胞/劑量至約200×10^6個細胞/劑量、約80×10^6個細胞/劑量至約160×10^6個細胞/劑量、約160×10^6個細胞/劑量至約200×10^6個細胞/劑量、或約200×10^6個細胞/劑量至約320×10^6個細胞/劑量。
  14. 如請求項1至13中任一項之方法，其中該多發性骨髓瘤為難治性多發性骨髓瘤(refractory multiple myeloma)。
  15. 如請求項1至14中任一項之方法，其中該多發性骨髓瘤為復發性多發性骨髓瘤(relapsed multiple myeloma)。
  16. 如請求項1至13中任一項之方法，其中該多發性骨髓瘤為難治性和復發性多發性骨髓瘤。
  17. 如請求項1至13中任一項之方法，其中該個體未曾接受任何用於多發性骨髓瘤之先前療法。
  18. 如請求項1至13中任一項之方法，其中該個體已接受至少一種、二種或三種用於治療多發性骨髓瘤之先前療法。
  19. 如請求項1至18中任一項之方法，其中該BCMA CAR-T細胞包含CAR，該CAR包含胞外結合結構域，該胞外結合結構域包含單鏈Fv片段(scFv)，其中該scFv包含重鏈可變(VH)區和輕鏈可變(VL)區，其中該VH區包含VH互補決定區1(VH CDR1)、VH互補決定區2(VH CDR2)和VH互補決定區3(VH CDR3)且該VL區包含VL互補決定區1(VL CDR1)、VL互補決定區2(VL CDR2)和VL互補決定區3(VL CDR3)，其中： (a) 該VH CDR1包含SEQ ID NO：150、151或152之胺基酸序列；該VH CDR2包含SEQ ID NO：153或154之胺基酸序列；該VH CDR3包含SEQ ID NO：155之胺基酸序列；該VL CDR1包含SEQ ID NO：209之胺基酸序列；該VL CDR2包含SEQ ID NO：221之胺基酸序列；且該VL CDR3包含SEQ ID NO：222之胺基酸序列； (b) 該VH CDR1包含SEQ ID NO：150、151或152之胺基酸序列；該VH CDR2包含SEQ ID NO：187或188之胺基酸序列；該VH CDR3包含SEQ ID NO：155之胺基酸序列；該VL CDR1包含SEQ ID NO：249之胺基酸序列；該VL CDR2包含SEQ ID NO：221之胺基酸序列；且該VL CDR3包含SEQ ID NO：225之胺基酸序列； (c) 該VH CDR1包含SEQ ID NO：150、151或152之胺基酸序列；該VH CDR2包含SEQ ID NO：165或166之胺基酸序列；該VH CDR3包含SEQ ID NO：155之胺基酸序列；該VL CDR1包含SEQ ID NO：226之胺基酸序列；該VL CDR2包含SEQ ID NO：221之胺基酸序列；且該VL CDR3包含SEQ ID NO：227之胺基酸序列； (d) 該VH CDR1包含SEQ ID NO：151、156或157之胺基酸序列；該VH CDR2包含SEQ ID NO：159或162之胺基酸序列；該VH CDR3包含SEQ ID NO：161之胺基酸序列；該VL CDR1包含SEQ ID NO：251之胺基酸序列；該VL CDR2包含SEQ ID NO：252之胺基酸序列；且該VL CDR3包含SEQ ID NO：253之胺基酸序列； (e) 該VH CDR1包含SEQ ID NO：151、156或157之胺基酸序列；該VH CDR2包含SEQ ID NO：190或191之胺基酸序列；該VH CDR3包含SEQ ID NO：161之胺基酸序列；該VL CDR1包含SEQ ID NO：262之胺基酸序列；該VL CDR2包含SEQ ID NO：252之胺基酸序列；且該VL CDR3包含SEQ ID NO：263之胺基酸序列； (f) 該VH CDR1包含SEQ ID NO：150、151或152之胺基酸序列；該VH CDR2包含SEQ ID NO：154或169之胺基酸序列；該VH CDR3包含SEQ ID NO：155之胺基酸序列；該VL CDR1包含SEQ ID NO：271之胺基酸序列；該VL CDR2包含SEQ ID NO：221之胺基酸序列；且該VL CDR3包含SEQ ID NO：272之胺基酸序列； (g) 該VH CDR1包含SEQ ID NO：129、130或131之胺基酸序列；該VH CDR2包含SEQ ID NO：139或140之胺基酸序列；該VH CDR3包含SEQ ID NO：134之胺基酸序列；該VL CDR1包含SEQ ID NO：217之胺基酸序列；該VL CDR2包含SEQ ID NO：210之胺基酸序列；且該VL CDR3包含SEQ ID NO：216之胺基酸序列； (h) 該VH CDR1包含SEQ ID NO：151、156或157之胺基酸序列；該VH CDR2包含SEQ ID NO：158或159之胺基酸序列；該VH CDR3包含SEQ ID NO：155之胺基酸序列；該VL CDR1包含SEQ ID NO：209之胺基酸序列；該VL CDR2包含SEQ ID NO：221之胺基酸序列；且該VL CDR3包含SEQ ID NO：225之胺基酸序列；或 (i) 該VH CDR1包含SEQ ID NO：129、130或131之胺基酸序列；該VH CDR2包含SEQ ID NO：132或133之胺基酸序列；該VH CDR3包含SEQ ID NO：137之胺基酸序列；該VL CDR1包含SEQ ID NO：377之胺基酸序列；該VL CDR2包含SEQ ID NO：210之胺基酸序列；且該VL CDR3包含SEQ ID NO：214之胺基酸序列。
  20. 如請求項19之方法，其中該VH區包含：VH CDR1，其包含SEQ ID NO：150、151、或152之胺基酸序列；VH CDR2，其包含SEQ ID NO：153或154之胺基酸序列； 和VH CDR3，其包含SEQ ID NO：155之胺基酸序列；且該VL區包含：VL CDR1，其包含SEQ ID NO：209之胺基酸序列；VL CDR2，其包含SEQ ID NO：221之胺基酸序列；和VL CDR3，其包含SEQ ID NO：222之胺基酸序列。
  21. 如請求項19之方法，其中該VH區包含：VH CDR1，其包含SEQ ID NO：151、156或157之胺基酸序列；和VH CDR2，其包含SEQ ID NO：158或159之胺基酸序列；和VH CDR3，其包含SEQ ID NO：155之胺基酸序列；且該VL區包含：VL CDR1，其包含SEQ ID NO：209之胺基酸序列；VL CDR2，其包含SEQ ID NO：221之胺基酸序列；和VL CDR3，其包含SEQ ID NO：225之胺基酸序列。
  22. 如請求項1至18中任一項之方法，其中該BCMA CAR-T細胞包含CAR，該CAR包含胞外結合結構域，該胞外結合結構域包含單鏈Fv片段(scFv)，其中該scFv包含VH區和VL區，其中該VH和VL區之組合係選自表1中所呈現之組合。
  23. 如請求項1至18中任一項之方法，其中該BCMA CAR-T細胞包含CAR，該CAR包含胞外結合結構域、第一跨膜結構域和胞內信號傳導結構域，其中該胞外結構域包含scFv，該scFv包含重鏈可變(VH)區，該重鏈可變(VH)區包含表1中之SEQ ID NO：33、72、39、76、83、92、25、112 或8所示之序列；及輕鏈可變(VL)區，該輕鏈可變(VL)區包含表1中之SEQ ID NO：34、73、40、77、84、93、18、38或80中所示之序列，其中該第一跨膜結構域包含CD8α鏈跨膜結構域且其中該胞內信號傳導結構域包含CD3ζ信號傳導結構域和/或4-1BB信號傳導結構域。
  24. 如請求項23之方法，其中該VH包含SEQ ID NO：33且該VL包含SEQ ID NO：34。
  25. 如請求項23之方法，其中該VH包含SEQ ID NO：112且該VL包含SEQ ID NO：38。
  26. 如請求項1至18中任一項之方法，其中該BCMA CAR-T細胞包含CAR，該CAR包含SEQ ID NO：344中所示之胺基酸序列。
  27. 如請求項26之方法，其中該CAR 進一步包含CD20表位。
  28. 如請求項27之方法，其中該CD20表位包含SEQ ID NO：397或SEQ ID NO：398中所示之胺基酸序列。
  29. 如請求項1至18中任一項之方法，其中該BCMA CAR-T細胞包含CAR，該CAR包含具有SEQ ID NO：318之序列的CD8α訊息胜肽；VH區，其具有SEQ ID NO：112之序列；GS連接子，其具有SEQ ID NO：333之序列；VL區，其具有SEQ ID NO：38之序列；CD8α鉸鏈，其具有SEQ ID NO：320之序列；CD8α跨膜結構域，其具有SEQ ID NO：322之序列；4-1BB胞內信號傳導結構域，其具有SEQ ID NO：323之序列；和CD3ζ胞內信號傳導結構域，其具有SEQ ID NO：324之序列。
  30. 如請求項1至18中任一項之方法，其中該BCMA CAR-T細胞包含CAR，該CAR包含具有SEQ ID NO：318之序列的CD8α訊息胜肽；VH區，其具有SEQ ID NO：112之序列；GS連接子，其具有SEQ ID NO：333之序列；VL區，其具有SEQ ID NO：38之序列；CD20表位，其具有SEQ ID NO：398之序列；CD8α鉸鏈，其具有SEQ ID NO：320之序列；CD8α跨膜結構域，其具有SEQ ID NO：322之序列；4-1BB胞內信號傳導結構域，其具有SEQ ID NO：323之序列；和CD3ζ胞內信號傳導結構域，其具有SEQ ID NO：324之序列。
  31. 如請求項1至18中任一項之方法，其中該BCMA CAR-T細胞包含CAR，該CAR包含具有SEQ ID NO：318之序列的CD8α訊息胜肽；VH區，其具有SEQ ID NO：33之序列；GS連接子，其具有SEQ ID NO：333之序列；VL區，其具有SEQ ID NO：34之序列；CD8α鉸鏈，其具有SEQ ID NO：320之序列；CD8α跨膜結構域，其具有SEQ ID NO：322之序列；4-1BB胞內信號傳導結構域，其具有SEQ ID NO：323之序列；和CD3ζ胞內信號傳導結構域，其具有SEQ ID NO：324之序列。
  32. 如請求項1至18中任一項之方法，其中該BCMA CAR-T細胞包含CAR，該CAR包含具有SEQ ID NO：318之序列的CD8α訊息胜肽；VH區，其具有SEQ ID NO：33之序列；GS連接子，其具有SEQ ID NO：333之序列；VL區，其具有SEQ ID NO：34之序列；CD20表位，其具有SEQ ID NO：398之序列；CD8α鉸鏈，其具有SEQ ID NO：320之序列；CD8α跨膜結構域，其具有SEQ ID NO：322之序列；4-1BB胞內信號傳導結構域，其具有SEQ ID NO：323之序列；和CD3ζ胞內信號傳導結構域，其具有SEQ ID NO：324之序列。
  33. 如請求項1至32中任一項之方法，其中該CAR-T細胞缺乏CD52。
  34. 如請求項1至30中任一項之方法，其中該CAR-T細胞缺乏TCRα和/或TCRβ。
  35. 如請求項1至34中任一項之方法，其中該細胞之基因型為TCRαβ- 和CD52+/- 。
  36. 如請求項1至32中任一項之方法，其中該CAR-T細胞不表現安全開關(safety switch)。
  37. 如請求項1至32中任一項之方法，其中該CAR-T細胞表現利妥昔單抗(rituximab)表位。
  38. 如請求項1至37中任一項之方法，其中該個體在投予該至少一個劑量之前接受第一淋巴清除(lymphodepletion)方案。
  39. 如請求項38之方法，其中該第一淋巴清除方案包含投予氟達拉濱(fludarabine)和環磷醯胺(cyclophosphamide)。
  40. 如請求項38之方法，其中該第一淋巴清除方案包含投予氟達拉濱、環磷醯胺和抗CD52抗體。
  41. 如請求項38之方法，其中該第一淋巴清除方案包含投予抗CD52抗體。
  42. 如請求項38之方法，其中該第一淋巴清除方案包含僅投予抗CD52抗體。
  43. 如請求項38之方法，其中氟達拉濱之投予劑量為約30mg/m2 /天；環磷醯胺之投予劑量為約300mg/m2 /天；且該CD52抗體之投予劑量為約10至約13mg/天。
  44. 如請求項40之方法，其中氟達拉濱之投予劑量為約30mg/m2 /天；環磷醯胺之投予劑量為約300mg/m2 /天；且該CD52抗體之投予劑量為約13至約30mg/天、約13至20mg/天、約13至30mg/天、或約20至30mg/天。
  45. 如請求項44之方法，其中該CD52抗體之投予劑量為約13mg/天、約20mg/天、或約30mg/天。
  46. 如請求項38至45中任一項之方法，其中在投予該至少一個劑量之前約1至15天之間開始該第一淋巴清除方案。
  47. 如請求項38至46中任一項之方法，其中該第一淋巴清除方案係在1、2、3、4或5天之過程中投予。
  48. 如請求項36至47中任一項之方法，其中，在3天之過程中，該第一淋巴清除方案係在投予該至少一個劑量之前5天投予。
  49. 如請求項1至48中任一項之方法，其中該個體接受該CAR-T細胞之後續劑量。
  50. 一種包含BCMA CAR-T細胞之配製劑，其中該細胞係在包含約5%二甲亞碸之溶液中配製，其中該配製劑之劑量強度為14×10^6個細胞/mL，其中該細胞之基因型為BCMA-CAR+_TCRαβ-_CD52+/-，且其中該BCMA CAR-T細胞包含CAR，該CAR包含胞外配體結合結構域、二個利妥昔單抗結合結構域、第一跨膜結構域和胞內信號傳導結構域，其中該胞外結構域包含scFv，該scFv包含重鏈可變(VH)區，該重鏈可變(VH)區包含表1之SEQ ID NO：33、72、39、76、83、92、25、112或8中所示之序列；及輕鏈可變(VL)區，該輕鏈可變(VL)區包含表1之SEQ ID NO：34、73、40、77、84、93、18、38或80中所示之序列，其中該第一跨膜結構域包含CD8α鏈跨膜結構域且其中該胞內信號傳導結構域包含CD3ζ信號傳導結構域和/或4-1BB信號傳導結構域。
  51. 一種包含BCMA CAR-T細胞之配製劑，其中該細胞係在CryoStor®Basal Solution和CryoStor®CS10之1：1混合物中配製，該CryoStor®Basal Solution和CryoStor®CS10之1：1混合物導致最終濃度5%之二甲亞碸，其中該配製劑之劑量強度為14×10^6個細胞/mL，其中該細胞之基因型為BCMA-CAR+_TCRαβ-_CD52+/-，且其中該BCMA CAR-T細胞包含CAR，該CAR包含胞外配體結合結構域、二個利妥昔單抗結合結構域、第一跨膜結構域和胞內信號傳導結構域，其中該胞外結構域包含scFv，該scFv包含重鏈可變(VH)區，該重鏈可變(VH)區包含表1之SEQ ID NO：33、72、39、76、83、92、25、112或8中所示之序列；及輕鏈可變(VL)區，該輕鏈可變(VL)區包含表1之SEQ ID NO：34、73、40、77、84、93、18、38或80中所示之序列，其中該第一跨膜結構域包含CD8α鏈跨膜結構域且其中該胞內信號傳導結構域包含CD3ζ信號傳導結構域和/或4-1BB信號傳導結構域。
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