[go: up one dir, main page]

TW201508008A - 抗ｆｃｒｈ５抗體 - Google Patents

抗ｆｃｒｈ５抗體 Download PDF

Info

Publication number
TW201508008A
TW201508008A TW103121621A TW103121621A TW201508008A TW 201508008 A TW201508008 A TW 201508008A TW 103121621 A TW103121621 A TW 103121621A TW 103121621 A TW103121621 A TW 103121621A TW 201508008 A TW201508008 A TW 201508008A
Authority
TW
Taiwan
Prior art keywords
amino acid
seq
antibody
acid sequence
hvr
Prior art date
Application number
TW103121621A
Other languages
English (en)
Other versions
TWI725931B (zh
Inventor
艾倫Ｊ 二世 艾班斯
米瑞迪斯Ｃ 海森
喬安 宏格
珍妮佛Ｗ 強斯頓
提姆Ｔ 強提拉
吉 李
安佐Ｇ 波森
Original Assignee
建南德克公司
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 建南德克公司 filed Critical 建南德克公司
Publication of TW201508008A publication Critical patent/TW201508008A/zh
Application granted granted Critical
Publication of TWI725931B publication Critical patent/TWI725931B/zh

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/283—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against Fc-receptors, e.g. CD16, CD32, CD64
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/39558—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against tumor tissues, cells, antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6849—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a receptor, a cell surface antigen or a cell surface determinant
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6875—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody being a hybrid immunoglobulin
    • A61K47/6879—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody being a hybrid immunoglobulin the immunoglobulin having two or more different antigen-binding sites, e.g. bispecific or multispecific immunoglobulin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6889—Conjugates wherein the antibody being the modifying agent and wherein the linker, binder or spacer confers particular properties to the conjugates, e.g. peptidic enzyme-labile linkers or acid-labile linkers, providing for an acid-labile immuno conjugate wherein the drug may be released from its antibody conjugated part in an acidic, e.g. tumoural or environment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
    • A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
    • A61K51/04—Organic compounds
    • A61K51/08—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins
    • A61K51/10—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody
    • A61K51/1045—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody against animal or human tumor cells or tumor cell determinants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2896—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against molecules with a "CD"-designation, not provided for elsewhere
    • G01N33/575—
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Optics & Photonics (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

本發明提供抗FcRH5抗體及免疫結合物以及其使用方法。

Description

抗FCRH5抗體 【相關申請案】
本申請案根據35 U.S.C.§119主張2013年6月24日申請之美國臨時專利申請案第61/838,534號之權益，其揭露內容據此以全文引用的方式併入本文中。
【序列表】
本申請案含有已以ASCII格式電子提交且據此以全文引用的方式併入本文中之序列表。ASCII正文檔案於2014年6月9日創建，名為GNE-0413US_SL.txt且大小為67,909位元組。
本文提供抗FcRH5抗體(例如雙特異性抗體)及免疫結合物以及其使用方法。
Fc受體樣5(FcRL5，亦稱為FcRH5及IRTA2)屬於免疫球蛋白超家族(IgSF)之6個新近識別基因之家族。此基因家族與具有保守基因組結構、細胞外Ig域組成以及ITIM樣及ITAM樣信號傳導基序之Fc受體密切相關(Davis RS等人,Eur J Immunol(2005)35：674-80)。此家族之成員亦已稱為IFGP(來自Ig超家族，FcR，gp42)及SPAP(含有SH2域之磷酸酶錨蛋白)。已描述FcRH/IRTA受體家族之六個成員：FcRH1/IRTA5、FcRH2/IRTA4、FcRH3/IRTA3、FcRH4/IRTA1、FcRH5/IRTA2及FcRH6(Polson AG等人,Int.Immunol.(2006)18(9)：1363-1373)。所有FcRH/IRTA皆含有典型免疫受體酪胺酸基抑制性基序與『免疫受體酪胺酸基活化基序樣』信號傳導基序之某一組合。FcRH cDNA編碼具有多個含有一致免疫受體酪胺酸基活化及/或抑制性信號傳導基序之Ig樣細胞外域及細胞質域的I型跨膜醣蛋白。FcRH基因在結構上相關，且其蛋白質產物彼此共有28-60%細胞外 一致性。其亦與其最密切FcR相關物共有15-31%一致性。在不同FcRH之間存在高度同源性。
FcRH5之配位體未知，但FcRH5已牽涉於在抗原致敏之B細胞發育期間增強之增殖及下游同型表現中(Dement-Brown J.等人J Leukoc Biol(2012)91：59-67)。FcRH5基因座具有三種主要mRNA同功異型物(FcRH5a、FcRH5b及FcRH5c)。由此等轉錄物編碼之主要FcRH5蛋白同功異型物共有直至殘基560之共同胺基酸序列，該胺基酸序列之特徵在於具有共同信號肽及六個細胞外Ig樣域。FcRH5a表示具有759個胺基酸之分泌醣蛋白，其具有八個Ig樣域，繼之以在其C端處之13個獨特、主要呈極性之胺基酸。FcRH5b在胺基酸殘基560處不同於FcRH5a且延伸具有32個額外殘基之短鏈段，該鏈段之疏水性可與其經由GPI錨蛋白與質膜對接相容。FcRH5c為最長同功異型物，其序列在胺基酸746處不同於FcRH5a。FcRH5c編碼具有977個aa的I型跨膜醣蛋白，其具有九個具有八個潛在N-連結糖基化位點之細胞外Ig型域、23個胺基酸之跨膜域及104個胺基酸之細胞質域，具有三個具有ITIM一致序列之一致SH2結合基序。
FcRH基因在染色體1之1q21-23區域中之經典FcR基因FcγRI、FcγRII、FcγRIII及FcεRI中間叢集在一起。此區域含有1個與造血組織腫瘤中，尤其多發性骨髓瘤中之惡性表型相關之最常見次級染色體異常(Hatzivassiliou G.等人Immunity(2001)14：277-89)。FcRH5僅在B細胞譜系中表現，早在前B細胞即開始，但直至成熟B細胞階段方才達成完全表現。不同於大多數已知其他B細胞特異性表面蛋白質(例如CD20、CD19及CD22)，FcRH5繼續在漿細胞中表現，而其他B細胞特異性標記物經下調(Polson AG等人,Int Immunol(2006)18：1363-73)。此外，FcRH5 mRNA在具有1q21異常之多發性骨髓瘤細胞株中過度表現，如藉由寡核苷酸陣列所偵測(Inoue J.,Am J Pathol(2004)165：71-81)。表現樣式指示FcRH5可為用於治療多發性骨髓瘤之抗體基療法的目標。多發性骨髓瘤為一種特徵在於骨骼病變、腎衰竭、貧血及血鈣過高之漿細胞惡性疾病。其基本上不可由當前療法治癒。用於多發性骨髓瘤之當前藥物治療劑包括蛋白體抑制劑硼替佐米(bortezomib)(維爾科德(Velcade))、免疫調節劑來那度胺 (lenalidomide)(雷利米德(Revlimid))及類固醇地塞米松(dexamethasone)之組合。
FcRH5c特異性抗體基療法及偵測方法可特別有效，因為其並非識別FcRH5之可溶性同功異型物與FcRH5之膜同功異型物兩者的抗體，其特異性識別靶細胞之膜相關FcRH5。然而，僅FcRH5之末個Ig樣域(Ig樣域9)為在FcRH5之三種主要同功異型物之間有差異的獨特細胞外區域，且在FcRH5內之Ig樣域之間存在顯著同源性。此外，末個Ig樣域在FcRH1、FcRH2、FcRH3及FcRH5之間高度保守。特異性靶向FcRH5之任何抗體基療法皆將與其他FcRH具有最小交叉反應性以避免不利脫靶效應(off-target effect)(例如FcRH3係在正常NK細胞上表現)。此項技術中對有助於診斷及治療癌症，諸如FcRH5相關癌症之藥劑存在需要。
本文提供抗FcRH5抗體(包括雙特異性抗體)、免疫結合物及其使用方法。本文提供結合FcRH5c之細胞外域之同功異型物c特異性區域的經分離抗FcRH5抗體。在一些實施例中，同功異型物c特異性區域包含Ig樣域9。在一些實施例中，同功異型物c特異性區域包含SEQ ID NO：1之胺基酸743-850。
在一些實施例中，抗體包含：a)重鏈，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：38之HVR-H1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：62之HVR-H2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：86之HVR-H3；及/或b)輕鏈，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：2之HVR-L1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：14之HVR-L2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：26之HVR-L3。在一些實施例中，重鏈包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：50之HVR-H1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：74之HVR-H2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：98之HVR-H3。
在一些實施例中，抗體包含：a)重鏈，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：39之HVR-H1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：63之HVR-H2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：87之HVR-H3；及/或b)輕鏈，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：3之HVR-L1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：15之HVR-L2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：27之HVR-L3。在一些實施例中， 重鏈包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：51之HVR-H1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：75之HVR-H2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：99之HVR-H3。
在一些實施例中，抗體包含：a)重鏈，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：40之HVR-H1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：64之HVR-H2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：88之HVR-H3；及/或b)輕鏈，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：4之HVR-L1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：16之HVR-L2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：28之HVR-L3。在一些實施例中，重鏈包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：52之HVR-H1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：76之HVR-H2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：100之HVR-H3。
在一些實施例中，抗體包含：a)重鏈，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：41之HVR-H1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：65之HVR-H2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：89之HVR-H3；及/或b)輕鏈，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：5之HVR-L1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：17之HVR-L2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：29之HVR-L3。在一些實施例中，重鏈包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：53之HVR-H1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：77之HVR-H2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：101之HVR-H3。
在一些實施例中，抗體包含：a)重鏈，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：42之HVR-H1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：66之HVR-H2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：90之HVR-H3；及/或b)輕鏈，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：6之HVR-L1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：18之HVR-L2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：30之HVR-L3。在一些實施例中，重鏈包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：54之HVR-H1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：78之HVR-H2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：102之HVR-H3。
在一些實施例中，抗體包含：a)重鏈，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：43之HVR-H1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：67之HVR-H2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：91之HVR-H3；及/或b)輕鏈，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：7之HVR-L1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：19之HVR-L2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：31之HVR-L3。在一些實施例中，重鏈包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：55之HVR-H1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：79之HVR-H2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：103之HVR-H3。
在一些實施例中，抗體包含：a)重鏈，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：44之HVR-H1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：68之HVR-H2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：92之HVR-H3；及/或b)輕鏈，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：8之HVR-L1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：20之HVR-L2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：32之HVR-L3。在一些實施例中，重鏈包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：56之HVR-H1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：80之HVR-H2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：104之HVR-H3。
在一些實施例中，抗體包含：a)重鏈，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：45之HVR-H1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：69之HVR-H2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：93之HVR-H3；及/或b)輕鏈，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：9之HVR-L1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：21之HVR-L2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：33之HVR-L3。在一些實施例中，重鏈包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：57之HVR-H1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：81之HVR-H2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：105之HVR-H3。
在一些實施例中，抗體包含：a)重鏈，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：46之HVR-H1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：70之HVR-H2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：94之HVR-H3；及/或b)輕鏈，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：10之HVR-L1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：22之HVR-L2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：34之HVR-L3。在一些實施例中，重鏈包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：58之HVR-H1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：82之HVR-H2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：106之HVR-H3。
在一些實施例中，抗體包含：a)重鏈，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：47之HVR-H1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：71之HVR-H2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：95之HVR-H3；及/或b)輕鏈，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：11之HVR-L1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：23之HVR-L2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：35之HVR-L3。在一些實施例中，重鏈包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：59之HVR-H1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：83之HVR-H2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：107之HVR-H3。
在一些實施例中，抗體包含：a)重鏈，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：48之HVR-H1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：72之HVR-H2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：96之HVR-H3；及/或b)輕鏈，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：12之HVR-L1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：24之HVR-L2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：36之HVR-L3。在一些實施例中，重鏈包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：60之HVR-H1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：84之HVR-H2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：108之HVR-H3。
在一些實施例中，抗體包含：a)重鏈，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：49之HVR-H1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：73之HVR-H2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：97之HVR-H3；及/或b)輕鏈，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：13之HVR-L1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：25之HVR-L2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：37之HVR-L3。在一些實施例中，重鏈包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：61之HVR-H1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：85之HVR-H2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：109之HVR-H3。
在任何抗體之一些實施例中，抗體包含：a)與胺基酸序列SEQ ID NO：111具有至少95%序列一致性之VH序列及/或與胺基酸序列SEQ ID NO：110具有至少95%序列一致性之VL序列；b)與胺基酸序列SEQ ID NO：113具有至少95%序列一致性之VH序列及/或與胺基酸序列SEQ ID NO：112具有至少95%序列一致性之VL序列；c)與胺基酸序列SEQ ID NO：115具有至少95%序列一致性之VH序列及/或與胺基酸序列SEQ ID NO：114具有至少95%序列一致性之VL序列；d)與胺基酸序列SEQ ID NO：117具有至少95%序列一致性之VH序列及/或與胺基酸序列SEQ ID NO：116具有至少95%序列一致性之VL序列；e)與胺基酸序列SEQ ID NO：119具有至少95%序列一致性之VH序列及/或與胺基酸序列SEQ ID NO：118具有至少95%序列一致性之VL序列；f)與胺基酸序列SEQ ID NO：121具有至少95%序列一致性之VH序列及/或與胺基酸序列SEQ ID NO：120具有至少95%序列一致性之VL序列；g)與胺基酸序列SEQ ID NO：123具有至少95%序列一致性之VH序列及/或與胺基酸序列SEQ ID NO：122具有至少95%序列一致性之VL序列；h)與胺基酸序列SEQ ID NO：125具有至少95%序列一致性之VH序列及/或與胺基酸序列SEQ ID NO：124具有至少95%序列一致性之VL序列；i)與胺基酸序列SEQ ID NO：127具有至少95%序列一致性之VH序列及/或與胺基酸序列SEQ ID NO：126具有至少95%序列一致性之VL序列；j)與胺基酸序列SEQ ID NO：129具有至少95%序列一致性之VH序列及/或與胺基酸序列SEQ ID NO：128具有至少95%序列一致性之VL序列；k)與胺基酸序列SEQ ID NO：131具有至少95%序列一致性之VH序列及/或與胺基酸序列SEQ ID NO：130具有至少95%序列一致性之VL序列；l)與胺基酸序列SEQ ID NO：133具有至少95%序列一致性之VH序列及/或與胺基酸序列SEQ ID NO：132具有至少95%序列一致性之VL序列；或與胺基酸序列SEQ ID NO：135具有至少95%序列一致性之VH序列及/或與胺基酸序列SEQ ID NO：134具有至少95%序列一致性之VL序列。
在任何抗體之一些實施例中，抗體包含：a)VH序列SEQ ID NO：111及/或VL序列SEQ ID NO：110；b)VH序列SEQ ID NO：113及/或VL序列SEQ ID NO：112；c)VH序列SEQ ID NO：115及/或VL序列SEQ ID NO：114；d)VH序列SEQ ID NO：117及/或VL序列SEQ ID NO：116；e)VH序列SEQ ID NO：119及/或VL序列SEQ ID NO：118；f)VH序列SEQ ID NO：121及/或VL序列SEQ ID NO：120；g)VH序列SEQ ID NO：123及/或VL序列SEQ ID NO：122；h)VH序列SEQ ID NO：125及/或VL序列SEQ ID NO：124；i)VH序列SEQ ID NO：127及/或VL序列SEQ ID NO：126；j)VH序列SEQ ID NO：129及/或VL序列SEQ ID NO：128；k)VH序列SEQ ID NO：131及/或VL序列SEQ ID NO：130；l)VH序列SEQ ID NO：133及/或VL序列SEQ ID NO：132或m)VH序列SEQ ID NO：135及/或VL序列SEQ ID NO：134。
在任何抗體之一些實施例中，抗體為單株抗體。在任何抗體之一些實施例中，抗體為人類抗體、人類化抗體或嵌合抗體。在任何抗體之一些實施例中，抗體為結合FcRH5之抗體片段。在任何抗體之一些實施例中，抗體為IgG1、IgG2a或IgG2b抗體。
在任何抗體之一些實施例中，抗體具有以下特徵中一或多 者：a)與全長人類及石蟹獼猴FcRH5具有交叉反應性，b)不與FcRH1、FcRH2、FcRH3及/或FcRH4交叉反應，c)結合內源性FcRH5，d)不與FcRH5a交叉反應，及e)不與FcRH5之另一Ig樣域交叉反應。
在任何抗體之一些實施例中，抗體為雙特異性抗體。在一些實施例中，雙特異性抗體結合FcRH5及CD3。
在一些實施例中，提供一種編碼本文所述之抗體之經分離核酸。在一些實施例中，提供一種包含核酸之宿主細胞。在一些實施例中，提供一種產生本文所述之抗體之方法。在一些實施例中，方法包含培養包含編碼抗體之核酸之宿主細胞。
在一些實施例中，提供免疫結合物。在一些實施例中，免疫結合物包含抗FcRH5抗體及細胞毒性劑。在一些實施例中，抗FcRH5抗體結合FcRH5c之細胞外域之同功異型物c特異性區域。在一些實施例中，抗FcRH5抗體結合FcRH5c之Ig樣域9。在一些實施例中，免疫結合物具有式Ab-(L-D)p，其中：(a)Ab為本文所述之抗體；(b)L為連接子；(c)D為選自美登木素(maytansinoid)、奧里斯他汀(auristatin)、卡奇黴素(calicheamicin)、吡咯并苯并二氮呯及奈莫柔比星(nemorubicin)衍生物之藥物；且(d)p在1-8之範圍內。在一些實施例中，D為奧里斯他汀。在一些此等實施例中，D具有式DE
其中R2及R6各自為甲基，R3及R4各自為異丙基，R5為H，R7為第二丁基，各R8係獨立地選自CH3、O-CH3、OH及H；R9為H；且R18為-C(R8)2-C(R8)2-芳基。在一些實施例中，D為具有以下結構之MMAE：
在一些實施例中，D為式A吡咯并苯并二氮呯： 其中點線指示視情況在C1與C2或C2與C3之間存在雙鍵；R2係獨立地選自H、OH、=O、=CH2、CN、R、OR、=CH-RD、=C(RD)2、O-SO2-R、CO2R及COR，且視情況進一步選自鹵基或二鹵基，其中RD係獨立地選自R、CO2R、COR、CHO、CO2H及鹵基；R6及R9係獨立地選自H、R、OH、OR、SH、SR、NH2、NHR、NRR’、NO2、Me3Sn及鹵基；R7係獨立地選自H、R、OH、OR、SH、SR、NH2、NHR、NRR’、NO2、Me3Sn及鹵基；Q係獨立地選自O、S及NH；R11為H或R或其中Q為O、SO3M，其中M為金屬陽離子；R及R’係各自獨立地選自視情況經取代之C1-8烷基、C1-12烷基、C3-8雜環基、C3-20雜環基及C5-20芳基，且視情況就基團NRR’而言，R及R’連同其所連接之氮原子一起形成視情況經取代之4、5、6或7員雜環；R12、R16、R19及R17分別係如對於R2、R6、R9及R7所定義；R"為C3-12伸烷基，該鏈可間雜有一或多個雜原子及/或視情況經取代之芳族環；且X及X’係獨立地選自O、S及N(H)。在一些此等實施例中，D為 其中n為0或1。
在一些實施例中，D為奈莫柔比星衍生物。在一些實施例中，D具有選自以下之結構：
在一些實施例中，免疫結合物包含可由蛋白酶裂解之連接子。在一些實施例中，連接子包含val-cit二肽或Phe-高Lys二肽。在一些實施例中，免疫結合物包含酸不穩定性連接子。在一些此等實施例中，連接子包含腙。
在一些實施例中，免疫結合物具有選自以下之式：
其中S為硫原子；
在一些實施例中，p在2-5之範圍內。
在一些實施例中，提供醫藥調配物。在一些此等實施例中，醫藥調配物包含例如如本文所述之包含結合FcRH5之抗體的免疫結合物。在一些實施例中，抗FcRH5抗體結合FcRH5c之細胞外域之同功異型物c特異性區域。在一些實施例中，抗FcRH5抗體結合FcRH5c之Ig樣域9。在一些實施例中，醫藥調配物進一步包含另一治療劑。
在一些實施例中，提供治療患有FcRH5(例如FcRH5c)陽性癌症之個體之方法。在一些此等實施例中，方法包含投與包含免疫結合物之醫藥調配物，該免疫結合物包含例如如本文所述之結合FcRH5之抗體及/或FcRH5雙特異性抗體。在一些實施例中，FcRH5雙特異性抗體包含FcRH5結合臂及CD3結合臂。在一些實施例中，抗FcRH5抗體結合FcRH5c之細胞外域之同功異型物c特異性區域。在一些實施例中，抗FcRH5抗體結合FcRH5c之Ig樣域9。在一些實施例中，FcRH5陽性癌症為B細胞增生性病症。在一些實施例中，FcRH5陽性癌症為漿細胞贅瘤。在一些實施例中，漿細胞贅瘤為多發性骨髓瘤。在一些實施例中，方法包含向個體投與另一治療劑。
在一些實施例中，提供抑制FcRH5(例如FcRH5c)陽性細胞之增殖之方法。在一些實施例中，方法包含在容許抗體結合細胞表面上之FcRH5的條件下使細胞暴露於包含結合FcRH5之抗體及/或FcRH5雙特異性抗體之免疫結合物。在一些實施例中，FcRH5雙特異性抗體包含FcRH5 結合臂及CD3結合臂。在一些實施例中，抗FcRH5抗體結合FcRH5c之細胞外域之同功異型物c特異性區域。在一些實施例中，抗FcRH5抗體結合FcRH5c之Ig樣域9。在一些實施例中，結合FcRH5之抗體為本文所述之抗體。在一些實施例中，FcRH5陽性癌症為B細胞增生性病症。在一些實施例中，FcRH5陽性癌症為漿細胞贅瘤。在一些實施例中，漿細胞贅瘤為多發性骨髓瘤。在一些實施例中，方法包含向個體投與另一治療劑。
在一些實施例中，使結合FcRH5之抗體結合於標記。在一些實施例中，抗FcRH5抗體結合FcRH5c之細胞外域之同功異型物c特異性區域。在一些實施例中，抗FcRH5抗體結合FcRH5c之Ig樣域9。在一些實施例中，結合FcRH5之抗體為本文所述之抗體。在一些實施例中，標記為正子發射體。在一些實施例中，正子發射體為89Zr。
在一些實施例中，提供一種偵測生物樣品中之人類FcRH5之方法。在一些實施例中，方法包含使生物樣品與抗FcRH5抗體在容許該抗FcRH5抗體結合天然存在之人類FcRH5之條件下接觸，及偵測在該抗FcRH5抗體與該生物樣品中之天然存在之人類FcRH5之間是否形成複合物。在一些實施例中，抗FcRH5抗體結合FcRH5c之細胞外域之同功異型物c特異性區域。在一些實施例中，抗FcRH5抗體結合FcRH5c之Ig樣域9。在一些實施例中，抗FcRH5抗體為本文所述之抗體。
在一些實施例中，提供一種偵測FcRH5陽性癌症之方法。在一些此等實施例中，方法包含(i)向患有或懷疑患有FcRH5陽性癌症之受試者投與經標記抗FcRH5抗體，及(ii)偵測該受試者中之該經標記抗FcRH5抗體，其中偵測到該經標記抗FcRH5抗體指示在該受試者中存在FcRH5陽性癌症。在一些實施例中，抗FcRH5抗體結合FcRH5c之細胞外域之同功異型物c特異性區域。在一些實施例中，抗FcRH5抗體結合FcRH5c之Ig樣域9。在一些實施例中，抗FcRH5抗體為本文所述之抗體。
圖1(A)描繪FcRH5之三種主要同功異型物FcRH5a(IRTA2a；UniProt識別符Q96RD9-3)、FcRH5b(IRTA2b；UniProt識別符Q96RD9-4)及FcRH5c(IRTA2c；UniProt識別符Q96RD9-1)。對Ig樣域 進行編號且對應於UniProt識別符Q69RD9-1(SEQ ID NO：1)之胺基酸序列：Ig樣域1(aa(「胺基酸」)23-100)、Ig樣域2(aa 105-185)、Ig樣域3(aa 188-271)、Ig樣域4(287-373)、Ig樣域5(aa 380-466)、Ig樣域6(aa 490-555)、Ig樣域7(aa 568-652)、Ig樣域8(aa 658-731)及Ig樣域9(aa 754-835)。圖1(B)描繪FcRH5之一部分(SEQ ID NO：136)以及FcRH5c之FcRH5胺基酸735至977(SEQ ID NO：2)之結構及同源性。
圖2顯示FcRH5抗體在不同濃度下與用(A)人類FcRH5及(B)石蟹獼猴FcRH5轉染之SVT2細胞之結合。
圖3顯示FcRH5抗體與(A)EJM細胞或(B)用人類FcRH5轉染之OPM2細胞之結合，以及次選殖上清液(C)5A10.1、(D)5F1.1、(E)3G7.1及(F)6D2.2與內源性表現FcRH5之MOLP2細胞之結合。
圖4顯示(A)FcRH5次選殖上清液與用野生型FcRH5或(B)缺失4個膜鄰近細胞外域之突變FcRH5轉染之293細胞的結合。
圖5顯示根據ELISA的FcRH5抗體與FcRH5a之結合(A)，及(B)次選殖上清液與人類B細胞之結合。
圖6顯示FcRH5次選殖上清液與用(A)FcRH1、(B)FcRH2、(C)FcRH3或(D)FcRH4轉染之SVT2細胞之結合。
圖7顯示FcRH5抗體次選殖上清液與NK細胞之結合。
圖8顯示(A)FcRH5雙Fab、FcRH5-TDB(純系10A8)及(B)HER2-TDB及(C)FcRH5-雙Fab及(D)FcRH5-TDB對FcRH5轉染之293細胞的殺傷活性。
圖9顯示FcRH5雙Fab及FcRH5-TDB對MOLP-2細胞之(A)殺傷活性及(B)T細胞活化。
I.定義
如本文所用之術語「FcRH5」係指由加工細胞中之FcRH5前驅蛋白所產生之任何天然成熟FcRH5。除非另外指示，否則該術語包括來自任何脊椎動物來源之FcRH5，該脊椎動物來源包括哺乳動物，諸如靈長類動物(例如人類及石蟹獼猴(cynomolgus monkey))；及齧齒動物(例如小 鼠及大鼠)。該術語亦包括FcRH5之天然存在之變異體，例如拼接變異體或對偶基因變異體。在一些實施例中，人類FcRH5蛋白之胺基酸序列為FcRH5a(IRTA2a；UniProt識別符Q96RD9-3；759 aa)、FcRH5b(IRTA2b；UniProt識別符Q96RD9-4；592 aa)、FcRH5c(IRTA2c；UniProt識別符Q96RD9-1；977 aa(SEQ ID NO：1))、UniProt識別符Q96RD9-2(124 aa)及/或FcRH5d(IRTA2d；UniProt識別符Q96RD9-5；152 aa)。
術語「FcRH5之糖基化形式」係指藉由添加碳水化合物殘基而經轉譯後修飾的FcRH5之天然存在之形式。
相對於參照多肽序列之「胺基酸序列一致性百分比(%)」定義為在比對參照多肽序列與候選序列且必要時引入間隙以達成最大序列一致性百分比之後，且在不將任何保守性取代視為序列一致性之一部分的情況下，候選序列中與參照多肽序列中之胺基酸殘基一致的胺基酸殘基之百分比。可以此項技術中之技能範圍內之多種方式，例如使用可公開獲得之電腦軟體，諸如BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megalign(DNASTAR)軟體來比對以便測定胺基酸序列一致性百分比。熟習此項技術者可確定適用於比對序列之參數，包括在所比較之序列之全長範圍內達成最大比對所需之任何演算法。然而，出於本文目的，使用序列比較電腦程式ALIGN-2產生胺基酸序列一致性百分比值。ALIGN-2序列比較電腦程式由Genentech公司創造，且原始程式碼已與使用說明書一起在美國版權局(U.S.Copyright Office,Washington D.C.,20559)存檔，其中其以美國版權登記號TXU510087登記。ALIGN-2程式可公開自Genentech公司(South San Francisco,California)獲得，或可自原始程式碼編譯。ALIGN-2程式應編譯用於UNIX操作系統(包括數位UNIX V4.0D)。所有序列比較參數皆由ALIGN-2程式設定且不改變。
在採用ALIGN-2進行胺基酸序列比較之情形下，既定胺基酸序列A對於、與或相對於既定胺基酸序列B之胺基酸序列一致性百分比(或者可稱為既定胺基酸序列A對於、與或相對於既定胺基酸序列B具有或包含某一百分比之胺基酸序列一致性)係如下加以計算：100乘分數X/Y，其中X為藉由序列比對程式ALIGN-2在彼程式對A與B進行比對時評為一致匹配之胺基酸殘基數，且其中Y為B中之胺基酸 殘基總數。應瞭解當胺基酸序列A之長度不等於胺基酸序列B之長度時，A對於B之胺基酸序列一致性百分比將不等於B對於A之胺基酸序列一致性百分比。除非另外明確陳述，否則本文使用之所有胺基酸序列一致性百分比值皆係使用ALIGN-2電腦程式如前一段中所述來獲得。
術語「抗FcRH5抗體」及「結合FcRH5之抗體」係指能夠以足夠親和力結合FcRH5之抗體，從而該抗體適用作靶向FcRH5之診斷劑及/或治療劑。在一個實施例中，抗FcRH5抗體與無關非FcRH5蛋白之結合程度小於抗體與FcRH5之結合的約10%，如例如藉由放射免疫分析(RIA)所量測。在某些實施例中，結合FcRH5之抗體之解離常數(Kd)1μM、100nM、10nM、5Nm、4nM、3nM、2nM、1nM、0.1nM、0.01nM或0.001nM(例如10-8M或10-8M以下，例如10-8M至10-13M，例如10-9M至10-13M)。在某些實施例中，抗FcRH5抗體結合在來自不同物種之FcRH5間保守的FcRH5抗原決定基。在一些實施例中，抗FcRH5抗體結合FcRH5c之細胞外域之同功異型物c特異性區域。在一些實施例中，抗FcRH5抗體結合FcRH5c之Ig樣域9。
術語「抗體」在本文中係以最廣泛意義使用且涵蓋各種抗體結構，包括但不限於單株抗體、多株抗體、多特異性抗體(例如雙特異性抗體)及抗體片段，只要其展現所需抗原結合活性即可。
「抗體片段」係指除完整抗體以外之分子，其包含完整抗體之一部分且結合完整抗體所結合之抗原。抗體片段之實例包括但不限於Fv、Fab、Fab'、Fab’-SH、F(ab')2；雙功能抗體；線性抗體；單鏈抗體分子(例如scFv)；及由抗體片段形成之多特異性抗體。
術語「抗原決定基」係指抗體所結合之在抗原分子上之特定位點。
與參照抗體「結合相同抗原決定基之抗體」係指在競爭分析中將參照抗體與其抗原之結合阻斷50%或50%以上之抗體，且反之，參照抗體在競爭分析中將該抗體與其抗原之結合阻斷50%或50%以上。本文提供示範性競爭分析。
如本文所用之術語「單株抗體」係指自實質上均質之抗體群 體獲得之抗體，亦即除可能之變異抗體(例如含有天然存在之突變或在製備單株抗體製備物期間產生，此等變異體通常少量存在)之外，構成該群體之個別抗體相同及/或結合相同抗原決定基。與通常包括針對不同決定子(抗原決定基)之不同抗體之多株抗體製備物不同，單株抗體製備物之各單株抗體係針對抗原上之單個決定子。因此，修飾語「單株」指示抗體係獲自實質上均質之抗體群體的特徵，且不應解釋為需要藉由任何特定方法來產生抗體。舉例而言，欲根據本發明使用之單株抗體可藉由多種技術製備，該等技術包括但不限於融合瘤方法、重組DNA方法、噬菌體呈現方法及利用含有全部或一部分人類免疫球蛋白基因座之轉殖基因動物之方法，此等方法及製備單株抗體之其他示範性方法在本文中加以描述。
術語「全長抗體」、「完整抗體」及「全抗體」在本文中可互換使用且係指具有實質上與天然抗體結構類似之結構或具有含有如本文定義之Fc區之重鏈的抗體。
「裸抗體」係指未結合於異源部分(例如細胞毒性部分)或放射性標記之抗體。裸抗體可存在於醫藥調配物中。
「天然抗體」係指具有不同結構之天然存在之免疫球蛋白分子。舉例而言，天然IgG抗體為約150,000道爾頓(dalton)之雜四聚醣蛋白，由經二硫鍵鍵結之兩個相同輕鏈及兩個相同重鏈構成。自N端至C端，各重鏈具有可變區(VH)，亦稱為可變重域或重鏈可變域，隨後為三個恆定域(CH1、CH2及CH3)。類似地，自N端至C端，各輕鏈具有可變區(VL)，亦稱為可變輕域或輕鏈可變域，隨後為恆定輕(CL)域。抗體之輕鏈可基於其恆定域之胺基酸序列指定為稱為κ及λ之兩種類型中之一者。
術語「嵌合」抗體係指重鏈及/或輕鏈之一部分源於特定來源或物種，而重鏈及/或輕鏈之其餘部分源於不同來源或物種之抗體。
「人類抗體」為具有對應於由人類或人類細胞所產生或源於利用人類抗體譜系或其他人類抗體編碼序列之非人類來源之抗體胺基酸序列之胺基酸序列的抗體。人類抗體之此定義明確排除包含非人類抗原結合殘基之人類化抗體。
「人類化」抗體係指包含來自非人類HVR之胺基酸殘基及 來自人類FR之胺基酸殘基的嵌合抗體。在某些實施例中，人類化抗體將包含實質上全部至少一個且通常兩個可變域，其中全部或實質上全部HVR(例如CDR)對應於非人類抗體之HVR，且全部或實質上全部FR對應於人類抗體之FR。人類化抗體視情況可包含源於人類抗體之抗體恆定區之至少一部分。例如非人類抗體之抗體之「人類化形式」係指已進行人類化之抗體。
抗體之「類別」係指抗體重鏈所具有之恆定域或恆定區之類型。存在五個主要抗體類別：IgA、IgD、IgE、IgG及IgM，且此等類別中之若干類別可進一步分成子類(同型)，例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1及IgA2。對應於不同免疫球蛋白類別之重鏈恆定域分別稱為α、δ、ε、γ及μ。
術語「Fc區」在本文中用於定義免疫球蛋白重鏈之含有至少一部分恆定區之C端區域。該術語包括天然序列Fc區及變異型Fc區。在一個實施例中，人類IgG重鏈Fc區自Cys226或Pro230延伸至重鏈之羧基端。然而，Fc區之C端離胺酸(Lys447)可能存在或可能不存在。除非本文另外規定，否則Fc區或恆定區中之胺基酸殘基之編號係根據EU編號系統，亦稱為EU索引，如Kabat等人,Sequences of Proteins of Immunological Interest,第5版,Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,MD,1991中所述。
術語「可變區」或「可變域」係指抗體重鏈或輕鏈中涉及抗體與抗原結合之結構域。天然抗體之重鏈可變域及輕鏈可變域(分別為VH及VL)通常具有類似結構，其中各結構域包含四個保守構架區(FR)及三個高變區(HVR)。(參見例如Kindt等人,Kuby Immunology,第6版,W.H.Freeman and Co.,第91頁(2007)。)單一VH或VL域可足以賦予抗原結合特異性。此外，可分別使用來自結合特定抗原之抗體之VH或VL域篩檢互補VL或VH域之文庫來分離結合該特定抗原之抗體。參見例如Portolano等人,J.Immunol.150：880-887(1993)；Clarkson等人,Nature 352：624-628(1991)。
「構架」或「FR」係指除高變區(HVR)殘基以外之可變域殘基。可變域之FR通常由四個FR域組成：FR1、FR2、FR3及FR4。因此，HVR及FR序列通常按以下順序出現在VH(或VL)中： FR1-H1(L1)-FR2-H2(L2)-FR3-H3(L3)-FR4。
「人類一致構架」為代表在人類免疫球蛋白VL或VH構架序列之選擇中最常出現之胺基酸殘基的構架。一般而言，人類免疫球蛋白VL或VH序列係選自可變域序列之亞群。一般而言，序列亞群為如Kabat等人,Sequences of Proteins of Immunological Interest,第5版,NIH Publication 91-3242,Bethesda MD(1991),第1-3卷中之亞群。在一個實施例中，對於VL，亞群為如Kabat等人(同上)中之亞群κI。在一個實施例中，對於VH，亞群為如Kabat等人(同上)中之亞群III。
如本文所用之術語「高變區」或「HVR」係指抗體可變域中序列高變及/或形成結構確定之環(「高變環」)之各區域。一般而言，天然四鏈抗體包含六個HVR；三個在VH中(H1、H2、H3)，且三個在VL中(L1、L2、L3)。HVR通常包含來自高變環之胺基酸殘基及/或來自「互補決定區」(CDR)之胺基酸殘基，互補決定區具有最高序列可變性及/或涉及於抗原識別。示範性高變環存在於胺基酸殘基26-32(L1)、50-52(L2)、91-96(L3)、26-32(H1)、53-55(H2)及96-101(H3)處。(Chothia及Lesk,J.Mol.Biol.196：901-917(1987)。)示範性CDR(CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3、CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3)存在於L1之胺基酸殘基24-34、L2之胺基酸殘基50-56、L3之胺基酸殘基89-97、H1之胺基酸殘基31-35B、H2之胺基酸殘基50-65及H3之胺基酸殘基95-102處。(Kabat等人,Sequences of Proteins of Immunological Interest,第5版,Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,MD(1991)。)除VH中之CDR1之外，CDR通常包含形成高變環之胺基酸殘基。CDR亦包含作為接觸抗原之殘基的「特異性決定殘基」或「SDR」。SDR係含在CDR之稱為縮略CDR(abbreviated-CDR)或a-CDR之區域內。示範性a-CDR(a-CDR-L1、a-CDR-L2、a-CDR-L3、a-CDR-H1、a-CDR-H2及a-CDR-H3)存在於L1之胺基酸殘基31-34、L2之胺基酸殘基50-55、L3之胺基酸殘基89-96、H1之胺基酸殘基31-35B、H2之胺基酸殘基50-58及H3之胺基酸殘基95-102處。(參見Almagro及Fransson,Front.Biosci.13：1619-1633(2008)。)除非另外指示，否則HVR殘基及可變域中之其他殘基(例如FR殘基)在本文中係 根據Kabat等人(同上)加以編號。
出於本文之目的，「接受體人類構架」為以下構架，其包含源於如以下定義之人類免疫球蛋白構架或人類一致構架之輕鏈可變域(VL)構架或重鏈可變域(VH)構架的胺基酸序列。「源於」人類免疫球蛋白構架或人類一致構架之接受體人類構架可包含與人類免疫球蛋白構架或人類一致構架相同之胺基酸序列，或其可含有胺基酸序列變化。在一些實施例中，胺基酸變化數目為10處或10處以下、9處或9處以下、8處或8處以下、7處或7處以下、6處或6處以下、5處或5處以下、4處或4處以下、3處或3處以下，或2處或2處以下。在一些實施例中，VL接受體人類構架之序列與VL人類免疫球蛋白構架序列或人類一致構架序列一致。
「親和力」係指分子(例如抗體)之單個結合位點與其結合搭配物(例如抗原)之間非共價相互作用的強度總和。除非另外指示，否則如本文所用之「結合親和力」係指反映結合對(例如抗體與抗原)成員之間1：1相互作用的固有結合親和力。分子X對其搭配物Y之親和力通常可由解離常數(Kd)表示。親和力可藉由此項技術中已知之常用方法(包括本文所述者)加以量測。在下文中描述量測結合親和力之特定說明性及示範性實施例。
「親和力成熟」抗體係指在一或多個高變區(HVR)中具有一或多處改變之抗體，與不具有該等改變之親本抗體相比，該等改變改良該抗體對抗原之親和力。
「免疫結合物」為結合於一或多個異源分子(包括但不限於細胞毒性劑)之抗體。
如本文所用之術語「細胞毒性劑」係指抑制或阻止細胞功能及/或導致細胞死亡或破壞之物質。細胞毒性劑包括但不限於放射性同位素(例如At211、I131、I125、Y90、Re186、Re188、Sm153、Bi212、P32、Pb212及Lu之放射性同位素)；化學治療劑或藥物(例如甲胺喋呤(methotrexate)、阿德力黴素(adriamicin)、長春花生物鹼(長春新鹼(vincristine)、長春花鹼(vinblastine)、依託泊苷(etoposide))、小紅莓(doxorubicin)、美法侖(melphalan)、絲裂黴素C(mitomycin C)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、道諾黴素(daunorubicin)或其他嵌入劑)；生長抑制劑；酶及其片段，諸如核分解酶； 抗生素；細菌、真菌、植物或動物來源之毒素，諸如小分子毒素或酶活性毒素，包括其片段及/或變異體；及以下揭示之各種抗腫瘤劑或抗癌劑。
「效應功能」係指可歸因於抗體之Fc區之彼等生物活性，其隨抗體同型而變化。抗體效應功能之實例包括：C1q結合及補體依賴性細胞毒性(CDC)；Fc受體結合；抗體依賴性細胞介導之細胞毒性(ADCC)；吞噬作用；細胞表面受體(例如B細胞受體)下調；及B細胞活化。
「經分離抗體」為已與其自然環境之組分經分離抗體。在一些實施例中，將抗體純化至大於95%或99%純度，如藉由例如電泳(例如SDS-PAGE、等電聚焦(IEF)、毛細管電泳)或層析(例如離子交換或逆相HPLC)所測定。對於評定抗體純度之方法之評述，參見例如Flatman等人,J.Chromatogr.B 848：79-87(2007)。
「經分離核酸」係指已與其自然環境之組分經分離核酸分子。經分離核酸包括通常含有核酸分子之細胞中含有之核酸分子，但該核酸分子係存在於染色體外或存在於不同於其天然染色體位置之染色體位置處。
「編碼抗FcRH5抗體之經分離核酸」係指一或多個編碼抗體重鏈及輕鏈(或其片段)之核酸分子，包括在單個載體或各別載體中之此(此等)核酸分子及存在於宿主細胞中之一或多個位置處之此(此等)核酸分子。
如本文所用之術語「載體」係指能夠使其所連接之另一核酸增殖之核酸分子。該術語包括呈自我複製核酸結構形式之載體以及併入當中已引入有其之宿主細胞之基因組中的載體。某些載體能夠導引與其可操作地連接之核酸表現。此等載體在本文中稱為「表現載體」。
術語「宿主細胞」、「宿主細胞株」及「宿主細胞培養物」可互換使用且係指已引入有外源性核酸之細胞，包括此等細胞之子代。宿主細胞包括「轉型體」及「轉型細胞」，其包括初級轉型細胞及源於其之子代而不考慮繼代數目。子代在核酸內含物方面可能與母細胞不完全相同，而可能含有突變。本文包括具有與在原始轉型細胞中所篩檢或選擇相同之功能或生物活性之突變型子代。
如本文所用之「治療(treatment)」(及其語法變化形式，諸如「治療(treat)」或「治療(treating)」)係指試圖改變所治療個體之自然病程，且可為達成防治目的或在臨床病理過程中進行之臨床介入。合乎需要之治療作用包括但不限於防止疾病發生或復發、減輕症狀、減弱疾病之任何直接或間接病理學結果、防止轉移、降低疾病進展速率、改善或緩解疾病病況及緩和或改善預後。在一些實施例中，本文提供之抗體用於延遲疾病產生或減緩疾病進展。
術語「癌症」及「癌性」係指或描述哺乳動物之特徵通常在於細胞生長/增殖失調之生理學病狀。癌症之實例包括但不限於癌瘤、淋巴瘤(例如霍奇金氏(Hodgkin's)及非霍奇金氏淋巴瘤)、母細胞瘤、肉瘤及白血病。此等癌症之更特定實例包括鱗狀細胞癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺腺癌、肺鱗狀癌、腹膜癌、肝細胞癌、胃腸癌、胰腺癌、神經膠質瘤、子宮頸癌、卵巢癌、肝癌(liver cancer)、膀胱癌、肝細胞瘤、乳癌、結腸癌、結腸直腸癌、小腸癌、子宮內膜癌或子宮癌、唾液腺癌、腎癌、肝癌、前列腺癌、陰門癌、甲狀腺癌、肝癌(hepatic carcinoma)、白血病及其他淋巴球增生性病症及各種類型之頭頸部癌。
本文之「B細胞惡性疾病」包括非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)，包括低級/濾泡性NHL、小淋巴細胞性(SL)NHL、中級/濾泡性NHL、中級彌漫性NHL、高級免疫母細胞性NHL、高級淋巴母細胞性NHL、高級小非分裂細胞NHL、巨大腫塊疾病NHL、套膜細胞淋巴瘤、AIDS相關淋巴瘤及瓦爾登斯特倫氏巨球蛋白血症(Waldenstrom's Macroglobulinemia)、非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)、淋巴細胞佔優性霍奇金氏病(LPHD)、小淋巴細胞性淋巴瘤(SLL)、慢性淋巴細胞性白血病(CLL)、無痛NHL，包括復發無痛NHL及利妥昔單抗(rituximab)難治性無痛NHL；白血病，包括急性淋巴母細胞性白血病(ALL)、慢性淋巴細胞性白血病(CLL)、毛細胞白血病、慢性骨髓母細胞性白血病；套膜細胞淋巴瘤；及其他血液學惡性疾病。此等惡性疾病可用針對B細胞表面標記(諸如FcRH5，例如(FcRH5c))之抗體治療。此等疾病在本文中預期藉由投與針對B細胞表面標記(諸如FcRH5，例如(FcRH5c))之抗體加以治療，且包括投與未結合(「裸」)抗體或結合於如本 文揭露之細胞毒性劑之抗體。此等疾病在本文中亦預期藉由組合療法加以治療，該組合療法包括抗FcRH5抗體(包括FcRH5雙特異性抗體)或抗FcRH5抗體藥物結合物與同時或連續投與之另一抗體或抗體藥物結合物、另一細胞毒性劑、放射或其他治療的組合。
如本文所用之術語「非霍奇金氏淋巴瘤」或「NHL」係指除霍奇金氏淋巴瘤以外之淋巴系統癌症。霍奇金氏淋巴瘤可通常根據在霍奇金氏淋巴瘤中存在里德-斯特恩伯格細胞(Reed-Sternberg cell)而在非霍奇金氏淋巴瘤中不存在該等細胞來與非霍奇金氏淋巴瘤進行區分。由如本文所用之該術語涵蓋之非霍奇金氏淋巴瘤的實例包括將由熟習此項技術者(例如腫瘤學家或病理學家)根據此項技術中已知之分類流程，諸如如Color Atlas ofClinical Hematology(第3版),A.Victor Hoffbrand及John E.Pettit(編)(Harcourt Publishers有限公司,2000)中所述之修訂歐洲-美國淋巴瘤(Revised European-American Lymphoma，REAL)流程識別為此淋巴瘤之任何淋巴瘤。特別參見圖11.57、11.58及11.59中之清單。更特定實例包括但不限於復發或難治NHL、一線低級NHL、III/IV期NHL、化學療法抗性NHL、前驅B淋巴母細胞性白血病及/或淋巴瘤、小淋巴細胞性淋巴瘤、B細胞慢性淋巴細胞性白血病及/或前淋巴細胞性白血病及/或小淋巴細胞性淋巴瘤、B細胞前淋巴細胞性淋巴瘤、免疫細胞瘤及/或淋巴漿細胞性淋巴瘤、淋巴漿細胞性淋巴瘤、邊緣區B細胞淋巴瘤、脾邊緣區淋巴瘤、結外邊緣區--MALT淋巴瘤、結節性邊緣區淋巴瘤、毛細胞白血病、漿細胞瘤及/或漿細胞骨髓瘤、低級/濾泡性淋巴瘤、中級/濾泡性NHL、套膜細胞淋巴瘤、濾泡中心淋巴瘤(濾泡性)、中級彌漫性NHL、彌漫性大B細胞淋巴瘤、侵襲性NHL(包括侵襲性一線NHL及侵襲性復發NHL)、在自體幹細胞移植之後復發或為自體幹細胞移植所難治之NHL、原發性縱隔大B細胞淋巴瘤、原發性滲出性淋巴瘤、高級免疫母細胞性NHL、高級淋巴母細胞性NHL、高級小非分裂細胞NHL、巨大腫塊疾病NHL、伯基特氏淋巴瘤、前驅體(周邊)大顆粒淋巴細胞性白血病、蕈樣真菌病及/或塞紮萊症候群(Sezary syndrome)、皮膚(皮膚性)淋巴瘤、退行性大細胞淋巴瘤、血管中心淋巴瘤。
漿細胞病症由漿細胞純系之分裂或增殖不受控制所致。漿細 胞由活化之B淋巴細胞(亦即B細胞)產生。各B細胞產生一種稱為B細胞受體之獨特受體，排列在其細胞表面上，對外來物質(亦即抗原)具有特異性。當B細胞受體結合其同源抗原時，表現該受體之細胞被活化以再進入細胞週期中，從而自身產生許多純系複本。純系成熟成主要存在於骨髓中且特化以產生B細胞受體複本之漿細胞，該等B細胞受體複本作為抗體釋放至血流中。在漿細胞病症中，漿細胞或親本B細胞遭受導致細胞分裂及/或活性受抑制或對細胞分裂及/或活性之正常約束不敏感的遺傳損害。源於此等細胞之子代漿細胞為惡性的，因為其可無約束地分裂及/或產生過量相同免疫球蛋白(抗體)。產生之免疫球蛋白常不完整或具有可導致蛋白質(視特定病症而定，亦稱為單株蛋白質、M蛋白質、副蛋白質或澱粉狀蛋白質)在血清、組織或器官(尤其腎)中累積，從而導致器官功能障礙及/或衰竭之不正確構形。漿細胞病症包括意義未確定之單株γ球蛋白病變(MGUS)、多發性骨髓瘤(MM)、巨球蛋白血症、重鏈疾病及全身性輕鏈澱粉樣變性(AL)，該等病症係基於純系之增殖性質、骨髓涉及程度及表現之M蛋白質之類型進行區分。其他漿細胞病症為孤立性漿細胞瘤、髓外漿細胞瘤、多發性孤立性漿細胞瘤、漿細胞白血病、瓦爾登斯特倫氏巨球蛋白血症、B細胞非霍奇金淋巴瘤、B細胞慢性淋巴細胞性白血病。
術語「FcRH5陽性癌症」係指包含在表面上表現FcRH5之細胞之癌症。出於確定細胞是否在表面上表現FcRH5之目的，將FcRH5mRNA表現視為與FcRH5在細胞表面上表現相關聯。在一些實施例中，FcRH5 mRNA之表現係藉由選自原位雜交及RT-PCR(包括定量RT-PCR)之方法加以測定。或者，FcRH5在細胞表面上之表現可例如在諸如免疫組織化學、FACS等之方法中使用針對FcRH5之抗體來測定。在一些實施例中，FcRH5為FcRH5a、FcRH5b、FcRH5c、UniProt識別符Q96RD9-2及/或FcRH5d之一或多者。在一些實施例中，FcRH5為FcRH5c。
術語「FcRH5陽性細胞」係指在表面上表現FcRH5之細胞。在一些實施例中，FcRH5為FcRH5a、FcRH5b、FcRH5c、UniProt識別符Q96RD9-2及/或FcRH5d之一或多者。在一些實施例中，FcRH5為FcRH5c。
例如醫藥調配物之藥劑之「有效量」係指在一定劑量下且持 續一段必需時間有效達成所需治療性或防治性結果之量。
「個體」或「受試者」為哺乳動物。哺乳動物包括但不限於馴養動物(例如母牛、綿羊、貓、狗及馬)、靈長類動物(例如人類及非人類靈長類動物，諸如猴)、兔及齧齒動物(例如小鼠及大鼠)。在某些實施例中，個體或受試者為人類。
術語「藥品說明書」用於指慣常包括在治療性產品之商業包裝中之說明書，其含有關於與使用此等治療性產品相關之適應症、用法、劑量、投藥、組合療法、禁忌症及/或警告的資訊。
術語「醫藥調配物」係指以下製劑，其呈允許當中所含之活性成分之生物活性有效之形式，且不含對調配物所將投與之受試者有不可接受毒性之其他組分。
「醫藥學上可接受之載劑」係指醫藥調配物中除活性成分以外之對受試者無毒的成分。醫藥學上可接受之載劑包括但不限於緩衝劑、賦形劑、穩定劑或防腐劑。
「烷基」為含有正鏈碳原子、二級碳原子、三級碳原子或環碳原子之C1-C18烴。實例為甲基(Me、-CH3)、乙基(Et、-CH2CH3)、1-丙基(n-Pr、正丙基、-CH2CH2CH3)、2-丙基(i-Pr、異丙基、-CH(CH3)2)、1-丁基(n-Bu、正丁基、-CH2CH2CH2CH3)、2-甲基-1-丙基(i-Bu、異丁基、-CH2CH(CH3)2)、2-丁基(s-Bu、第二丁基、-CH(CH3)CH2CH3)、2-甲基-2-丙基(t-Bu、第三丁基、-C(CH3)3)、1-戊基(正戊基、-CH2CH2CH2CH2CH3)、2-戊基(-CH(CH3)CH2CH2CH3)、3-戊基(-CH(CH2CH3)2)、2-甲基-2-丁基(-C(CH3)2CH2CH3)、3-甲基-2-丁基(-CH(CH3)CH(CH3)2)、3-甲基-1-丁基(-CH2CH2CH(CH3)2)、2-甲基-1-丁基(-CH2CH(CH3)CH2CH3)、1-己基(-CH2CH2CH2CH2CH2CH3)、2-己基(-CH(CH3)CH2CH2CH2CH3)、3-己基(-CH(CH2CH3)(CH2CH2CH3))、2-甲基-2-戊基(-C(CH3)2CH2CH2CH3)、3-甲基-2-戊基(-CH(CH3)CH(CH3)CH2CH3)、4-甲基-2-戊基(-CH(CH3)CH2CH(CH3)2)、3-甲基-3-戊基(-C(CH3)(CH2CH3)2)、2-甲基-3-戊基(-CH(CH2CH3)CH(CH3)2)、2,3-二甲基-2-丁基(-C(CH3)2CH(CH3)2)、3,3-二甲基-2-丁基(-CH(CH3)C(CH3)3)。如本文所用之術語「C1-C8烷基」係指具有 1至8個碳原子之直鏈或分支鏈飽和或不飽和烴。代表性「C1-C8烷基」包括但不限於-甲基、-乙基、-正丙基、-正丁基、-正戊基、-正己基、-正庚基、-正辛基、-正壬基及-正癸基；而分支鏈C1-C8烷基包括但不限於-異丙基、-第二丁基、-異丁基、-第三丁基、-異戊基、2-甲基丁基，不飽和C1-C8烷基包括但不限於-乙烯基、-烯丙基、-1-丁烯基、-2-丁烯基、-異丁烯基、-1-戊烯基、-2-戊烯基、-3-甲基-1-丁烯基、-2-甲基-2-丁烯基、-2,3-二甲基-2-丁烯基、1-己基、2-己基、3-己基、-乙炔基、-丙炔基、-1-丁炔基、-2-丁炔基、-1-戊炔基、-2-戊炔基、-3-甲基-1-丁炔基。C1-C8烷基可未經取代或經一或多個包括但不限於以下之基團取代：-C1-C8烷基、-O-(C1-C8烷基)、-芳基、-C(O)R'、-OC(O)R'、-C(O)OR'、-C(O)NH2、-C(O)NHR'、-C(O)N(R')2、-NHC(O)R'、-SO3R'、-S(O)2R'、-S(O)R'、-OH、-鹵素、-N3、-NH2、-NH(R')、-N(R')2及-CN；其中各R'係獨立地選自H、-C1-C8烷基及芳基。
如本文所用之術語「C1-C12烷基」係指具有1至12個碳原子之直鏈或分支鏈飽和或不飽和烴。C1-C12烷基可未經取代或經一或多個包括但不限於以下之基團取代：-C1-C8烷基、-O-(C1-C8烷基)、-芳基、-C(O)R'、-OC(O)R'、-C(O)OR'、-C(O)NH2、-C(O)NHR'、-C(O)N(R')2、-NHC(O)R'、-SO3R、-S(O)2R'、-S(O)R'、-OH、-鹵素、-N3、-NH2、-NH(R')、-N(R')2及-CN；其中各R'係獨立地選自H、-C1-C8烷基及芳基。
如本文所用之術語「C1-C6烷基」係指具有1至6個碳原子之直鏈或分支鏈飽和或不飽和烴。代表性「C1-C6烷基」包括但不限於-甲基、-乙基、-正丙基、-正丁基、-正戊基及-正己基；而分支鏈C1-C6烷基包括但不限於-異丙基、-第二丁基、-異丁基、-第三丁基、-異戊基及2-甲基丁基；不飽和C1-C6烷基包括但不限於-乙烯基、-烯丙基、-1-丁烯基、-2-丁烯基及-異丁烯基、-1-戊烯基、-2-戊烯基、-3-甲基-1-丁烯基、-2-甲基-2-丁烯基、-2,3-二甲基-2-丁烯基、1-己基、2-己基及3-己基。C1-C6烷基可未經取代或經一或多個如上文對於C1-C8烷基所述之基團取代。
如本文所用之術語「C1-C4烷基」係指具有1至4個碳原子之直鏈或分支鏈飽和或不飽和烴。代表性「C1-C4烷基」包括但不限於-甲基、-乙基、-正丙基、-正丁基；而分支鏈C1-C4烷基包括但不限於-異丙基、-第 二丁基、-異丁基、-第三丁基；不飽和C1-C4烷基包括但不限於-乙烯基、-烯丙基、-1-丁烯基、-2-丁烯基及-異丁烯基。C1-C4烷基可未經取代或經一或多個如上文對於C1-C8烷基所述之基團取代。
「烴氧基」為以單鍵鍵結於氧之烷基。示範性烴氧基包括但不限於甲氧基(-OCH3)及乙氧基(-OCH2CH3)。「C1-C5烴氧基」為具有1至5個碳原子之烴氧基。烴氧基可未經取代或經一或多個如上文對於烷基所述之基團取代。
「烯基」為具有至少一個不飽和位點(亦即碳-碳sp 2 雙鍵)且含有正鏈碳原子、二級碳原子、三級碳原子或環碳原子之C2-C18烴。實例包括但不限於：乙烯或乙烯基(-CH=CH2)、烯丙基(-CH2CH=CH2)、環戊烯基(-C5H7)及5-己烯基(-CH2CH2CH2CH2CH=CH2)。「C2-C8烯基」為具有至少一個不飽和位點(亦即碳-碳sp 2 雙鍵)且含有2至8個正鏈碳原子、二級碳原子、三級碳原子或環碳原子之烴。
「炔基」為具有至少一個不飽和位點(亦即碳-碳sp參鍵)且含有正鏈碳原子、二級碳原子、三級碳原子或環碳原子之C2-C18烴。實例包括但不限於：乙炔基(-C≡CH)及炔丙基(-CH2C≡CH)。「C2-C8炔基」為具有至少一個不飽和位點(亦即碳-碳sp參鍵)且含有2至8個正鏈碳原子、二級碳原子、三級碳原子或環碳原子之烴。
「伸烷基」係指具有1-18個碳原子且具有藉由自母體烷烴之同一碳原子或兩個不同碳原子移除兩個氫原子所獲得之兩個單價基團中心的飽和分支鏈或直鏈或環狀烷基。典型伸烷基包括但不限於：亞甲基(-CH2-)、1,2-乙基(-CH2CH2-)、1,3-丙基(-CH2CH2CH2-)、1,4-丁基(-CH2CH2CH2CH2-)及其類似基團。
「C1-C10伸烷基」為具有式-(CH2)1-10-之直鏈飽和烷基。C1-C10伸烷基之實例包括亞甲基、伸乙基、伸丙基、伸丁基、伸戊基、伸己基、伸庚基、伸辛基、伸壬基及伸癸基。
「伸烯基」係指具有2-18個碳原子且具有藉由自母體烯烴之同一碳原子或兩個不同碳原子移除兩個氫原子所獲得之兩個單價基團中心的不飽和分支鏈或直鏈或環狀烷基。典型伸烯基包括但不限於：1,2-乙烯 基(-CH=CH-)。
「伸炔基」係指具有2-18個碳原子且具有藉由自母體炔烴之同一碳原子或兩個不同碳原子移除兩個氫原子所獲得之兩個單價基團中心的不飽和分支鏈或直鏈或環狀烷基。典型伸炔基包括但不限於：乙炔(-C≡C-)、炔丙基(-CH2C≡C-)及4-戊炔基(-CH2CH2CH2C≡C-)。
「芳基」係指碳環芳族基團。芳基之實例包括但不限於苯基、萘基及蒽基。碳環芳族基團或雜環芳族基團可未經取代或經一或多個包括但不限於以下之基團取代：-C1-C8烷基、-O-(C1-C8烷基)、-芳基、-C(O)R'、-OC(O)R'、-C(O)OR'、-C(O)NH2、-C(O)NHR'、-C(O)N(R')2、-NHC(O)R'、-S(O)2R'、-S(O)R'、-OH、-鹵素、-N3、-NH2、-NH(R')、-N(R')2及-CN；其中各R'係獨立地選自H、-C1-C8烷基及芳基。
「C5-C20芳基」為在碳環芳環中具有5至20個碳原子之芳基。C5-C20芳基之實例包括但不限於苯基、萘基及蒽基。C5-C20芳基可如上文對於芳基所述經取代或未經取代。「C5-C14芳基」為在碳環芳環中具有5至14個碳原子之芳基。C5-C14芳基之實例包括但不限於苯基、萘基及蒽基。C5-C14芳基可如上文對於芳基所述經取代或未經取代。
「伸芳基」為如以下結構中所示，具有兩個共價鍵且可呈鄰位、間位或對位組態之芳基： 其中苯基可未經取代或經至多四個包括但不限於以下之基團取代：-C1-C8烷基、-O-(C1-C8烷基)、-芳基、-C(O)R'、-OC(O)R'、-C(O)OR'、-C(O)NH2、-C(O)NHR'、-C(O)N(R')2、-NHC(O)R'、-S(O)2R'、-S(O)R'、-OH、-鹵素、-N3、-NH2、-NH(R')、-N(R')2及-CN；其中各R'係獨立地選自H、-C1-C8烷基及芳基。
「芳基烷基」係指一個鍵結於碳原子(通常為末端或sp3碳原子)之氫原子經芳基置換的無環烷基。典型芳基烷基包括但不限於苯甲基、2-苯基乙-1-基、2-苯基乙烯-1-基、萘基甲基、2-萘基乙-1-基、2-萘基乙烯-1- 基、萘并苯甲基、2-萘并苯基乙-1-基及其類似基團。芳基烷基包含6至20個碳原子，例如芳基烷基之烷基部分(包括烷基、烯基或炔基)為1至6個碳原子且芳基部分為5至14個碳原子。
「雜芳基烷基」係指一個鍵結於碳原子(通常為末端或sp3碳原子)之氫原子經雜芳基置換的無環烷基。典型雜芳基烷基包括但不限於2-苯并咪唑基甲基、2-呋喃基乙基及其類似基團。雜芳基烷基包含6至20個碳原子，例如雜芳基烷基之烷基部分(包括烷基、烯基或炔基)為1至6個碳原子且雜芳基部分為5至14個碳原子以及1至3個選自N、O、P及S之雜原子。雜芳基烷基之雜芳基部分可為具有3至7個環成員(2至6個碳原子)之單環或具有7至10個環成員(4至9個碳原子及1至3個選自N、O、P及S之雜原子)之雙環，例如：雙環[4,5]、[5,5]、[5,6]或[6,6]系統。
「經取代之烷基」、「經取代之芳基」及「經取代之芳基烷基」分別意謂一或多個氫原子各自獨立地經取代基置換之烷基、芳基及芳基烷基。典型取代基包括但不限於-X、-R、-O-、-OR、-SR、-S-、-NR2、-NR3、=NR、-CX3、-CN、-OCN、-SCN、-N=C=O、-NCS、-NO、-NO2、=N2、-N3、NC(=O)R、-C(=O)R、-C(=O)NR2、-SO3 -、-SO3H、-S(=O)2R、-OS(=O)2OR、-S(=O)2NR、-S(=O)R、-OP(=O)(OR)2、-P(=O)(OR)2、-PO3、-PO3H2、-C(=O)R、-C(=O)X、-C(=S)R、-CO2R、-CO2、-C(=S)OR、-C(=O)SR、-C(=S)SR、-C(=O)NR2、-C(=S)NR2、-C(=NR)NR2，其中各X獨立地為鹵素：F、Cl、Br或I；且各R獨立地為-H、C2-C18烷基、C6-C20芳基、C3-C14雜環、保護基或前藥部分。如上所述之伸烷基、伸烯基及伸炔基亦可類似地經取代。
「雜芳基」及「雜環」係指一或多個環原子為雜原子(例如氮、氧及硫)之環系統。雜環基團包含3至20個碳原子及1至3個選自N、O、P及S之雜原子。雜環可為具有3至7個環成員(2至6個碳原子及1至3個選自N、O、P及S之雜原子)之單環或具有7至10個環成員(4至9個碳原子及1至3個選自N、O、P及S之雜原子)之雙環，例如：雙環[4,5]、[5,5]、[5,6]或[6,6]系統。
示範性雜環例如描述於Paquette,Leo A.,「Principles of Modern Heterocyclic Chemistry」(W.A.Benjamin,New York,1968)，特定言之 第1、3、4、6、7及9章；「The Chemistry of Heterocyclic Compounds,A series of Monographs」(John Wiley & Sons,New York,1950年至今)，特定言之第13、14、16、19及28卷；及J.Am.Chem.Soc.(1960)82：5566中。
雜環之實例包括例如(而不限於)吡啶基、二氫吡啶基、四氫吡啶基(哌啶基)、噻唑基、四氫噻吩基、硫氧化四氫噻吩基、嘧啶基、呋喃基、噻吩基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、四唑基、苯并呋喃基、噻萘基、吲哚基、吲哚烯基、喹啉基、異喹啉基、苯并咪唑基、哌啶基、4-哌啶酮基、吡咯啶基、2-吡咯啶酮基、吡咯啉基、四氫呋喃基、雙-四氫呋喃基、四氫哌喃基、雙-四氫哌喃基、四氫喹啉基、四氫異喹啉基、十氫喹啉基、八氫異喹啉基、吖基、三嗪基、6H-1,2,5-噻二嗪基、2H,6H-1,5,2-二噻嗪基、噻吩基、噻嗯基、哌喃基、異苯并呋喃基、烯基、基、啡噁噻基、2H-吡咯基、異噻唑基、異噁唑基、吡嗪基、噠嗪基、吲哚嗪基、異吲哚基、3H-吲哚基、1H-吲唑基、嘌呤基、4H-喹嗪基、酞嗪基、啶基、喹噁啉基、喹唑啉基、啉基、喋啶基、4aH-咔唑基、咔唑基、β-咔啉基、啡啶基、吖啶基、嘧啶基、啡啉基、啡嗪基、啡噻嗪基、呋呫基、啡噁嗪基、異唍基、唍基、咪唑啶基、咪唑啉基、吡唑啶基、吡唑啉基、哌嗪基、吲哚啉基、異吲哚啉基、啶基、嗎啉基、噁唑啶基、苯并三唑基、苯并異噁唑基、羥吲哚基、苯并噁唑啉基及靛紅醯基。
舉例而言而不限於，碳鍵結型雜環係在以下位置處鍵結：吡啶之2、3、4、5或6位；噠嗪之3、4、5或6位；嘧啶之2、4、5或6位；吡嗪之2、3、5或6位；呋喃、四氫呋喃、硫呋喃、噻吩、吡咯或四氫吡咯之2、3、4或5位；噁唑、咪唑或噻唑之2、4或5位；異噁唑、吡唑或異噻唑之3、4或5位；氮丙啶之2或3位；氮雜環丁烷之2、3或4位；喹啉之2、3、4、5、6、7或8位；或異喹啉之1、3、4、5、6、7或8位。更通常，碳鍵結型雜環包括2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、5-吡啶基、6-吡啶基、3-噠嗪基、4-噠嗪基、5-噠嗪基、6-噠嗪基、2-嘧啶基、4-嘧啶基、5-嘧啶基、6-嘧啶基、2-吡嗪基、3-吡嗪基、5-吡嗪基、6-吡嗪基、2-噻唑基、4-噻唑基或5-噻唑基。
舉例而言而不限於，氮鍵結型雜環係在以下位置處鍵結：氮 丙啶、氮雜環丁烷、吡咯、吡咯啶、2-吡咯啉、3-吡咯啉、咪唑、咪唑啶、2-咪唑啉、3-咪唑啉、吡唑、吡唑啉、2-吡唑啉、3-吡唑啉、哌啶、哌嗪、吲哚、吲哚啉、1H-吲唑之1位；異吲哚或異吲哚啉之2位；嗎啉之4位；及咔唑或β-咔啉之9位。更通常，氮鍵結型雜環包括1-氮丙啶基、1-氮雜環丁烷基、1-吡咯基、1-咪唑基、1-吡唑基及1-哌啶基。
「C3-C8雜環」係指芳族或非芳族C3-C8碳環，其中一至四個環碳原子係獨立地經來自由O、S及N組成之群之雜原子置換。C3-C8雜環之代表性實例包括但不限於苯并呋喃基、苯并噻吩、吲哚基、苯并吡唑基、香豆素基、異喹啉基、吡咯基、噻吩基、呋喃基、噻唑基、咪唑基、吡唑基、三唑基、喹啉基、嘧啶基、吡啶基、吡啶酮基、吡嗪基、噠嗪基、異噻唑基、異噁唑基及四唑基。C3-C8雜環可未經取代或經至多七個包括但不限於以下之基團取代：-C1-C8烷基、-O-(C1-C8烷基)、-芳基、-C(O)R'、-OC(O)R'、-C(O)OR'、-C(O)NH2、-C(O)NHR'、-C(O)N(R')2、-NHC(O)R'、-S(O)2R'、-S(O)R'、-OH、-鹵素、-N3、-NH2、-NH(R')、-N(R')2及-CN；其中各R'係獨立地選自H、-C1-C8烷基及芳基。
「C3-C8雜環基」係指以上定義之C3-C8雜環基團，其中雜環基團之一個氫原子經一鍵置換。C3-C8雜環基可未經取代或經至多六個包括但不限於以下之基團取代：-C1-C8烷基、-O-(C1-C8烷基)、-芳基、-C(O)R'、-OC(O)R'、-C(O)OR'、-C(O)NH2、-C(O)NHR'、-C(O)N(R')2、-NHC(O)R'、-S(O)2R'、-S(O)R'、-OH、-鹵素、-N3、-NH2、-NH(R')、-N(R')2及-CN；其中各R'係獨立地選自H、-C1-C8烷基及芳基。
「C3-C20雜環」係指芳族或非芳族C3-C8碳環，其中一至四個環碳原子係獨立地經來自由O、S及N組成之群之雜原子置換。C3-C20雜環可未經取代或經至多七個包括但不限於以下之基團取代：-C1-C8烷基、-O-(C1-C8烷基)、-芳基、-C(O)R'、-OC(O)R'、-C(O)OR'、-C(O)NH2、-C(O)NHR'、-C(O)N(R')2、-NHC(O)R'、-S(O)2R'、-S(O)R'、-OH、-鹵素、-N3、-NH2、-NH(R')、-N(R')2及-CN；其中各R'係獨立地選自H、-C1-C8烷基及芳基。
「C3-C20雜環基」係指以上定義之C3-C20雜環基團，其中雜 環基團之一個氫原子經一鍵置換。
「碳環」意謂具有3至7個碳原子之呈單環形式或具有7至12個碳原子之呈雙環形式之飽和或不飽和環。單環碳環具有3至6個環原子，更通常具有5或6個環原子。雙環碳環具有例如排列成雙環[4,5]、[5,5]、[5,6]或[6,6]系統之7至12個環原子或排列成雙環[5,6]或[6,6]系統之9或10個環原子。單環碳環之實例包括環丙基、環丁基、環戊基、1-環戊-1-烯基、1-環戊-2-烯基、1-環戊-3-烯基、環己基、1-環己-1-烯基、1-環己-2-烯基、1-環己-3-烯基、環庚基及環辛基。
「C3-C8碳環」為3員、4員、5員、6員、7員或8員飽和或不飽和非芳族碳環。代表性C3-C8碳環包括但不限於-環丙基、-環丁基、-環戊基、-環戊二烯基、-環己基、-環己烯基、-1,3-環己二烯基、-1,4-環己二烯基、-環庚基、-1,3-環庚二烯基、-1,3,5-環庚三烯基、-環辛基及-環辛二烯基。C3-C8碳環基團可未經取代或經一或多個包括但不限於以下之基團取代：-C1-C8烷基、-O-(C1-C8烷基)、-芳基、-C(O)R'、-OC(O)R'、-C(O)OR'、-C(O)NH2、-C(O)NHR'、-C(O)N(R')2、-NHC(O)R'、-S(O)2R'、-S(O)R'、-OH、-鹵素、-N3、-NH2、-NH(R')、-N(R')2及-CN；其中各R'係獨立地選自H、-C1-C8烷基及芳基。
「C3-C8碳環基」係指以上定義之C3-C8碳環基團，其中碳環基團之一個氫原子經一鍵置換。
「連接子」係指包含共價鍵或一系列原子之使抗體共價連接於藥物部分之化學部分。在各種實施例中，連接子包括二價基團，諸如烴二基、芳二基、雜芳二基、諸如以下之部分：-(CR2)nO(CR2)n-、烴氧基之重複單元(例如聚伸乙基氧基、PEG、聚亞甲基氧基)及烷基胺基之重複單元(例如聚伸乙基胺基，JeffamineTM)；及二酸酯及醯胺，包括丁二酸酯、丁二醯胺、二乙醇酸酯、丙二酸酯及己醯胺。在各種實施例中，連接子可包含一或多個胺基酸殘基，諸如纈胺酸、苯丙胺酸、離胺酸及高離胺酸。
術語「對掌性」係指分子具有與鏡像搭配物不可重疊之性質，而術語「非對掌性」係指分子可重疊於其鏡像搭配物上。
術語「立體異構物」係指具有相同化學組成，但在原子或基 團於空間中之排列方面不同之化合物。
「非鏡像異構物」係指具有兩個或兩個以上對掌性中心且分子不互為鏡像之立體異構物。非鏡像異構物具有不同物理性質，例如熔點、沸點、光譜性質及反應性。非鏡像異構物之混合物可在諸如電泳及層析之高解析度分析程序下分離。
「鏡像異構物」係指化合物之兩個互為不可重疊鏡像之立體異構物。
本文使用之立體化學定義及慣例通常遵循S.P.Parker編,McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms(1984)McGraw-Hill Book公司,New York；及Eliel,E.及Wilen,S.,Stereochemistry of Organic Compounds(1994)John Wiley & Sons公司,New York。許多有機化合物以光學活性形式存在，亦即其能夠使平面偏振光之平面旋轉。在描述光學活性化合物時，字首D及L或R及S用於表示分子圍繞其對掌性中心之絕對組態。字首d及l或(+)及(-)用於指定由化合物所致之平面偏振光旋轉方向，其中(-)或l意謂化合物為左旋化合物。字首為(+)或d之化合物為右旋化合物。對於既定化學結構，此等立體異構物為相同的，例外之處為其互為鏡像。特定立體異構物亦可稱為鏡像異構物，且此等異構物之混合物常稱為鏡像異構混合物。鏡像異構物之50：50混合物稱為外消旋混合物或外消旋物，其可在化學反應或製程中不存在立體選擇或立體特異性時存在。術語「外消旋混合物」及「外消旋物」係指兩種鏡像異構物質之缺乏光學活性之等莫耳混合物。
「離去基團」係指可經另一官能基取代之官能基。某些離去基團在此項技術中為熟知的，且實例包括但不限於鹵基(例如氯基、溴基、碘基)、甲烷磺醯基(甲磺醯基)、對甲苯磺醯基(甲苯磺醯基)、三氟甲基磺醯基(三氟甲磺酸酯基)及三氟甲基磺酸酯基。
術語「保護基」係指通常用於在使化合物上之其他官能基反應時阻隔或保護特定官能基之取代基。舉例而言，「胺基保護基」為連接於胺基之阻隔或保護化合物中之胺基官能基的取代基。適合胺基保護基包括但不限於乙醯基、三氟乙醯基、第三丁氧基羰基(BOC)、苯甲基氧基羰基 (CBZ)及9-茀基亞甲基氧基羰基(Fmoc)。對於保護基及其使用之一般性描述，參見T.W.Greene,Protective Groups in Organic Synthesis,John Wiley & Sons,New York,1991或後期版本。
如熟習此項技術者所瞭解，在本文中提及「約」某一數值或參數包括(且描述)有關彼數值或參數本身之實施例。舉例而言，關於「約X」之描述包括對「X」之描述。
應瞭解本文所述之態樣及實施例包括「由態樣及實施例組成」及/或「基本上由態樣及實施例組成」。除非另外指示，否則如本文所用，單數形式「一」及「該」包括複數個提及物。
II.組合物及方法
本文提供結合FcRH5之抗體(包括雙特異性抗體)及包含此等抗體之免疫結合物。抗體及免疫結合物可例如適用於診斷或治療FcRH5陽性癌症。在一些實施例中，抗FcRH5抗體結合FcRH5c之細胞外域之同功異型物c特異性區域。在一些實施例中，抗FcRH5抗體結合FcRH5c之Ig樣域9。
在不受理論束縛下，對本發明之抗體之準確抗原的選擇係由至少三個重要考慮因素驅動。首先，對與除FcRH5c以外之FcRH5同功異型物(諸如同功異型物a及同功異型物b)之交叉反應性存在少許需要至不需要以避免所得治療劑結合非靶分子且因此降低其有效性。如圖1中所說明，FcRH5之域9為三種同功異型物之間的獨特序列之一實例。其次，對與除FcRH5以外之FcRH家族成員(諸如FcRH1、FcRH2、FcRH3及FcRH4)之交叉反應性存在少許需要至不需要。此具有困難，因為許多FcRH家族成員中之末個Ig樣域具有通常高度保守性質。但由於同時需要FcRH5同功異型物c特異性，故而追尋結合末個Ig樣域之抗體。最後，對於欲用於使用雙特異性抗體形式來起使大結構(諸如T細胞及腫瘤細胞)緊密鄰近作用之治療分子中的抗體，已知腫瘤抗原決定基接近細胞膜為更有效的(參見例如Bluemel等人Cancer Immunol Immunother.(2010)59：1197-1209)。有時描述為動力學分離理論，鄰近細胞膜定位的FcRH5之域9在此情形下為合乎需要之抗原標靶。為滿足此等考慮因素且如以下詳細所述，開發本發明抗體 之某些實施例。
本文提供結合FcRH5c之細胞外域之同功異型物c特異性區域的經分離抗FcRH5抗體。在一些實施例中，同功異型物c特異性區域包含Ig樣域9。在一些實施例中，Ig樣域9亦稱為Ig樣C2型8。在一些實施例中，同功異型物c特異性區域包含SEQ ID NO：1之胺基酸754-835。在一些實施例中，同功異型物c特異性區域包含SEQ ID NO：1之胺基酸752-834。在一些實施例中，同功異型物c特異性區域包含SEQ ID NO：1之胺基酸743-850。在一些實施例中，同功異型物c特異性區域包含SEQ ID NO：1之胺基酸745-851。在一些實施例中，同功異型物c特異性區域包含來自N端及/或C端邊界之約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15個胺基酸之任一者。在一些實施例中，同功異型物c特異性區域包含自約SEQ ID NO：1之750、751、752、753或754之任一者至約SEQ ID NO：1之830、831、832、833、834、835或836之任一者的胺基酸。在一些實施例中，抗體結合FcRH5c及/或同功異型物c特異性區域之親和力5nM或4nM或3nM或2nM或1nM，且視情況0.0001nM或0.001nM或0.01nM。
在任何抗體之一些實施例中，抗體具有以下特徵中一或多者：a)與全長人類及石蟹獼猴FcRH5具有交叉反應性(亦即結合全長人類FcRH5且結合全長石蟹獼猴FcRH5)，b)不與FcRH1、FcRH2、FcRH3及/或FcRH4顯著交叉反應(亦即不顯著結合FcRH1、FcRH2、FcRH3及/或FcRH4)，c)結合內源性FcRH5，d)不與FcRH5a交叉反應(亦即不顯著結合FcRH5a)，及e)不與FcRH5之另一Ig樣域交叉反應(亦即不顯著結合FcRH5之另一Ig樣域)。測定結合能力之方法在此項技術中為已知的且以下加以描述。
在本文中及在一些實施例中提供包含以下之抗體：a)重鏈，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：38之HVR-H1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：62之HVR-H2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：86之HVR-H3；及/或b)輕鏈，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：2之HVR-L1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：14之HVR-L2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：26之HVR-L3。 在一些實施例中，重鏈包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：50之HVR-H1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：74之HVR-H2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：98之HVR-H3。在一些實施例中，抗體包含與胺基酸序列SEQ ID NO：111具有至少約90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之任一者之VH序列及/或與胺基酸序列SEQ ID NO：110具有至少約90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之任一者之VL序列。在一些實施例中，抗體包含VH序列SEQ ID NO：111及/或VL序列SEQ ID NO：110。在任何抗體之一些實施例中，抗體包含1C8.1之六個HVR。在一些實施例中，抗體包含1C8.1之VH域及VL域。在一些實施例中，抗體結合FcRH5c之細胞外域之同功異型物c特異性區域(例如Ig樣域9)。在一些實施例中，抗體與全長人類及石蟹獼猴FcRH5具有交叉反應性。在一些實施例中，抗體不與FcRH1、FcRH2、FcRH3及/或FcRH4顯著交叉反應。在一些實施例中，抗體結合內源性FcRH5。在一些實施例中，抗體結合B細胞。在一些實施例中，抗體不顯著結合NK細胞及/或單核細胞。
在本文中及在一些實施例中提供包含以下之抗體：a)重鏈，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：39之HVR-H1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：63之HVR-H2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：87之HVR-H3；及/或b)輕鏈，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：3之HVR-L1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：15之HVR-L2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：27之HVR-L3。在一些實施例中，重鏈包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：51之HVR-H1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：75之HVR-H2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：99之HVR-H3。在一些實施例中，抗體包含與胺基酸序列SEQ ID NO：113具有至少約90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之任一者之VH序列及/或與胺基酸序列SEQ ID NO：112具有至少約90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之任一者之VL序列。在一些實施例中，抗體包含與胺基酸序列SEQ ID NO：135具有至少約90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之任一者之VH序列及/或與胺 基酸序列SEQ ID NO：134具有至少約90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之任一者之VL序列。在一些實施例中，抗體包含VH序列SEQ ID NO：113及/或VL序列SEQ ID NO：112。在一些實施例中，抗體包含VH序列SEQ ID NO：135及/或VL序列SEQ ID NO：134。在任何抗體之一些實施例中，抗體包含1G7.2之六個HVR。在一些實施例中，抗體包含1G7.2之VH域及VL域。在任何抗體之一些實施例中，抗體包含1G7.2’之六個HVR。在一些實施例中，抗體包含1G7.2’之VH域及VL域。在一些實施例中，抗體結合FcRH5c之細胞外域之同功異型物c特異性區域(例如Ig樣域9)。在一些實施例中，抗體與全長人類及石蟹獼猴FcRH5具有交叉反應性。在一些實施例中，抗體不與FcRH1、FcRH2、FcRH3及/或FcRH4顯著交叉反應。在一些實施例中，抗體結合內源性FcRH5。在一些實施例中，抗體結合B細胞。在一些實施例中，抗體不顯著結合NK細胞及/或單核細胞。在一些實施例中，抗體不與FcRH5a顯著交叉反應。
在本文中及在一些實施例中提供包含以下之抗體：a)重鏈，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：40之HVR-H1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：64之HVR-H2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：88之HVR-H3；及/或b)輕鏈，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：4之HVR-L1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：16之HVR-L2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：28之HVR-L3。在一些實施例中，重鏈包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：52之HVR-H1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：76之HVR-H2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：100之HVR-H3。在一些實施例中，抗體包含與胺基酸序列SEQ ID NO：115具有至少約90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之任一者之VH序列及/或與胺基酸序列SEQ ID NO：114具有至少約90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之任一者之VL序列。在一些實施例中，抗體包含VH序列SEQ ID NO：115及/或VL序列SEQ ID NO：114。在任何抗體之一些實施例中，抗體包含2H7.3之六個HVR。在一些實施例中，抗體包含2H7.3之VH域及VL域。在一些實施例中，抗體結合FcRH5c之細胞外域之同功 異型物c特異性區域(例如Ig樣域9)。在一些實施例中，抗體與全長人類及石蟹獼猴FcRH5具有交叉反應性。在一些實施例中，抗體不與FcRH1、FcRH3及/或FcRH4顯著交叉反應。在一些實施例中，抗體結合內源性FcRH5。在一些實施例中，抗體結合B細胞。在一些實施例中，抗體不顯著結合NK細胞及/或單核細胞。
在本文中及在一些實施例中提供包含以下之抗體：a)重鏈，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：41之HVR-H1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：65之HVR-H2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：89之HVR-H3；及/或b)輕鏈，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：5之HVR-L1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：17之HVR-L2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：29之HVR-L3。在一些實施例中，重鏈包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：53之HVR-H1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：77之HVR-H2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：101之HVR-H3。在一些實施例中，抗體包含與胺基酸序列SEQ ID NO：117具有至少約90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之任一者之VH序列及/或與胺基酸序列SEQ ID NO：116具有至少約90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之任一者之VL序列。在一些實施例中，抗體包含VH序列SEQ ID NO：117及/或VL序列SEQ ID NO：116。在任何抗體之一些實施例中，抗體包含3A4.2之六個HVR。在一些實施例中，抗體包含3A4.2之VH域及VL域。在一些實施例中，抗體結合FcRH5c之細胞外域之同功異型物c特異性區域(例如Ig樣域9)。在一些實施例中，抗體與全長人類及石蟹獼猴FcRH5具有交叉反應性。在一些實施例中，抗體不與FcRH1、FcRH2、FcRH3及/或FcRH4顯著交叉反應。在一些實施例中，抗體結合內源性FcRH5。在一些實施例中，抗體結合B細胞。在一些實施例中，抗體不顯著結合NK細胞及/或單核細胞。
在本文中及在一些實施例中提供包含以下之抗體：a)重鏈，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：42之HVR-H1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：66之HVR-H2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：90之HVR-H3；及/或b)輕鏈，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：6之HVR-L1、含有胺基酸序列 SEQ ID NO：18之HVR-L2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：30之HVR-L3。在一些實施例中，重鏈包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：54之HVR-H1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：78之HVR-H2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：102之HVR-H3。在一些實施例中，抗體包含與胺基酸序列SEQ ID NO：119具有至少約90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之任一者之VH序列及/或與胺基酸序列SEQ ID NO：118具有至少約90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之任一者之VL序列。在一些實施例中，抗體包含VH序列SEQ ID NO：119及/或VL序列SEQ ID NO：118。在任何抗體之一些實施例中，抗體包含3B12.1.1之六個HVR。在一些實施例中，抗體包含3B12.1.1之VH域及VL域。在一些實施例中，抗體結合FcRH5c之細胞外域之同功異型物c特異性區域(例如Ig樣域9)。在一些實施例中，抗體與全長人類及石蟹獼猴FcRH5具有交叉反應性。在一些實施例中，抗體不與FcRH1、FcRH2、FcRH3及/或FcRH4顯著交叉反應。在一些實施例中，抗體結合內源性FcRH5。在一些實施例中，抗體結合B細胞。在一些實施例中，抗體不顯著結合NK細胞及/或單核細胞。在一些實施例中，抗體不與FcRH5a顯著交叉反應。
在本文中及在一些實施例中提供包含以下之抗體：a)重鏈，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：43之HVR-H1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：67之HVR-H2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：91之HVR-H3；及/或b)輕鏈，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：7之HVR-L1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：19之HVR-L2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：31之HVR-L3。在一些實施例中，重鏈包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：55之HVR-H1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：79之HVR-H2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：103之HVR-H3。在一些實施例中，抗體包含與胺基酸序列SEQ ID NO：121具有至少約90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之任一者之VH序列及/或與胺基酸序列SEQ ID NO：120具有至少約90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之任一者之VL序列。在一些實施例中，抗體包含 VH序列SEQ ID NO：121及/或VL序列SEQ ID NO：120。在任何抗體之一些實施例中，抗體包含3C10之六個HVR。在一些實施例中，抗體包含3C10之VH域及VL域。在一些實施例中，抗體結合FcRH5c之細胞外域之同功異型物c特異性區域(例如Ig樣域9)。在一些實施例中，抗體與全長人類及石蟹獼猴FcRH5具有交叉反應性。在一些實施例中，抗體不與FcRH1、FcRH2、FcRH3及/或FcRH4顯著交叉反應。在一些實施例中，抗體結合內源性FcRH5。在一些實施例中，抗體結合B細胞。在一些實施例中，抗體不顯著結合NK細胞及/或單核細胞。
在本文中及在一些實施例中提供包含以下之抗體：a)重鏈，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：44之HVR-H1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：68之HVR-H2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：92之HVR-H3；及/或b)輕鏈，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：8之HVR-L1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：20之HVR-L2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：32之HVR-L3。在一些實施例中，重鏈包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：56之HVR-H1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：80之HVR-H2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：104之HVR-H3。在一些實施例中，抗體包含與胺基酸序列SEQ ID NO：123具有至少約90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之任一者之VH序列及/或與胺基酸序列SEQ ID NO：122具有至少約90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之任一者之VL序列。在一些實施例中，抗體包含VH序列SEQ ID NO：123及/或VL序列SEQ ID NO：122。在任何抗體之一些實施例中，抗體包含3F10之六個HVR。在一些實施例中，抗體包含3F10之VH域及VL域。在一些實施例中，抗體結合FcRH5c之細胞外域之同功異型物c特異性區域(例如Ig樣域9)。在一些實施例中，抗體與全長人類及石蟹獼猴FcRH5具有交叉反應性。在一些實施例中，抗體不與FcRH1、FcRH2、FcRH3及/或FcRH4顯著交叉反應。在一些實施例中，抗體結合內源性FcRH5。在一些實施例中，抗體結合B細胞。在一些實施例中，抗體不顯著結合NK細胞及/或單核細胞。在一些實施例中，抗體不與FcRH5a顯著交叉反應。
在本文中及在一些實施例中提供包含以下之抗體：a)重鏈，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：45之HVR-H1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：69之HVR-H2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：93之HVR-H3；及/或b)輕鏈，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：9之HVR-L1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：21之HVR-L2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：33之HVR-L3。在一些實施例中，重鏈包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：57之HVR-H1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：81之HVR-H2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：105之HVR-H3。在一些實施例中，抗體包含與胺基酸序列SEQ ID NO：125具有至少約90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之任一者之VH序列及/或與胺基酸序列SEQ ID NO：124具有至少約90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之任一者之VL序列。在一些實施例中，抗體包含VH序列SEQ ID NO：125及/或VL序列SEQ ID NO：124。在任何抗體之一些實施例中，抗體包含3G3之六個HVR。在一些實施例中，抗體包含3G3之VH域及VL域。在一些實施例中，抗體結合FcRH5c之細胞外域之同功異型物c特異性區域(例如Ig樣域9)。在一些實施例中，抗體與全長人類及石蟹獼猴FcRH5具有交叉反應性。在一些實施例中，抗體不與FcRH1、FcRH2、FcRH3及/或FcRH4顯著交叉反應。在一些實施例中，抗體結合內源性FcRH5。在一些實施例中，抗體結合B細胞。在一些實施例中，抗體不顯著結合NK細胞及/或單核細胞。在一些實施例中，抗體不與FcRH5a顯著交叉反應。
在本文中及在一些實施例中提供包含以下之抗體：a)重鏈，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：46之HVR-H1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：70之HVR-H2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：94之HVR-H3；及/或b)輕鏈，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：10之HVR-L1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：22之HVR-L2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：34之HVR-L3。在一些實施例中，重鏈包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：58之HVR-H1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：82之HVR-H2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：106之HVR-H3。在一些實施例中，抗體包含與胺基酸序列SEQ ID NO：127具有至少約90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之任一者之VH序列及/或與胺基酸序列SEQ ID NO：126具有至少約90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之任一者之VL序列。在一些實施例中，抗體包含VH序列SEQ ID NO：127及/或VL序列SEQ ID NO：126。在任何抗體之一些實施例中，抗體包含3G7.1.5之六個HVR。在一些實施例中，抗體包含3G7.1.5之VH域及VL域。在一些實施例中，抗體結合FcRH5c之細胞外域之同功異型物c特異性區域(例如Ig樣域9)。在一些實施例中，抗體與全長人類及石蟹獼猴FcRH5具有交叉反應性。在一些實施例中，抗體不與FcRH1、FcRH2、FcRH3及/或FcRH4顯著交叉反應。在一些實施例中，抗體結合內源性FcRH5。在一些實施例中，抗體結合B細胞。在一些實施例中，抗體不顯著結合NK細胞及/或單核細胞。
在本文中及在一些實施例中提供包含以下之抗體：a)重鏈，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：47之HVR-H1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：71之HVR-H2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：95之HVR-H3；及/或b)輕鏈，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：11之HVR-L1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：23之HVR-L2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：35之HVR-L3。在一些實施例中，重鏈包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：59之HVR-H1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：83之HVR-H2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：107之HVR-H3。在一些實施例中，抗體包含與胺基酸序列SEQ ID NO：129具有至少約90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之任一者之VH序列及/或與胺基酸序列SEQ ID NO：128具有至少約90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之任一者之VL序列。在一些實施例中，抗體包含VH序列SEQ ID NO：129及/或VL序列SEQ ID NO：128。在任何抗體之一些實施例中，抗體包含5A10.1.3之六個HVR。在一些實施例中，抗體包含5A10.1.3之VH域及VL域。在一些實施例中，抗體結合FcRH5c之細胞外域之同功異型物c特異性區域(例如Ig樣域9)。在一些實施例中，抗體與全長人類及石蟹獼猴FcRH5具有交叉反應性。在一些實施例中，抗 體不與FcRH1、FcRH2、FcRH3及/或FcRH4顯著交叉反應。在一些實施例中，抗體結合內源性FcRH5。在一些實施例中，抗體結合B細胞。在一些實施例中，抗體不顯著結合NK細胞及/或單核細胞。
在本文中及在一些實施例中提供包含以下之抗體：a)重鏈，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：48之HVR-H1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：72之HVR-H2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：96之HVR-H3；及/或b)輕鏈，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：12之HVR-L1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：24之HVR-L2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：36之HVR-L3。在一些實施例中，重鏈包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：60之HVR-H1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：84之HVR-H2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：108之HVR-H3。在一些實施例中，抗體包含與胺基酸序列SEQ ID NO：131具有至少約90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之任一者之VH序列及/或與胺基酸序列SEQ ID NO：130具有至少約90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之任一者之VL序列。在一些實施例中，抗體包含VH序列SEQ ID NO：131及/或VL序列SEQ ID NO：130。在任何抗體之一些實施例中，抗體包含5F1.1.5之六個HVR。在一些實施例中，抗體包含5F1.1.5之VH域及VL域。在一些實施例中，抗體結合FcRH5c之細胞外域之同功異型物c特異性區域(例如Ig樣域9)。在一些實施例中，抗體與全長人類及石蟹獼猴FcRH5具有交叉反應性。在一些實施例中，抗體不與FcRH1、FcRH2、FcRH3及/或FcRH4顯著交叉反應。在一些實施例中，抗體結合內源性FcRH5。在一些實施例中，抗體結合B細胞。在一些實施例中，抗體不顯著結合NK細胞及/或單核細胞。在一些實施例中，抗體不與FcRH5a顯著交叉反應。
在本文中及在一些實施例中提供包含以下之抗體：a)重鏈，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：49之HVR-H1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：73之HVR-H2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：97之HVR-H3；及/或b)輕鏈，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：13之HVR-L1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：25之HVR-L2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：37之 HVR-L3。在一些實施例中，重鏈包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：61之HVR-H1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：85之HVR-H2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：109之HVR-H3。在一些實施例中，抗體包含與胺基酸序列SEQ ID NO：133具有至少約90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之任一者之VH序列及/或與胺基酸序列SEQ ID NO：132具有至少約90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之任一者之VL序列。在一些實施例中，抗體包含VH序列SEQ ID NO：133及/或VL序列SEQ ID NO：132。在任何抗體之一些實施例中，抗體包含6D2之六個HVR。在一些實施例中，抗體包含6D2之VH域及VL域。在一些實施例中，抗體結合FcRH5c之細胞外域之同功異型物c特異性區域(例如Ig樣域9)。在一些實施例中，抗體與全長人類及石蟹獼猴FcRH5具有交叉反應性。在一些實施例中，抗體不與FcRH1、FcRH2、FcRH3及/或FcRH4顯著交叉反應。在一些實施例中，抗體結合內源性FcRH5。在一些實施例中，抗體結合B細胞。在一些實施例中，抗體不顯著結合NK細胞及/或單核細胞。
在本文提供之另一態樣中，根據任何以上實施例之抗FcRH5抗體為單株抗體，包括嵌合抗體、人類化抗體或人類抗體。在一個實施例中，抗FcRH5抗體為抗體片段，例如Fv、Fab、Fab’、scFv、微型雙功能抗體或F(ab’)2片段。在另一實施例中，抗體為實質上全長抗體，例如IgG1抗體或如本文定義之其他抗體類別或同型。
在另一態樣中，本發明提供一種與本文提供之抗FcRH5抗體結合相同抗原決定基之抗體。在某些實施例中，提供結合FcRH5c之細胞外域之同功異型物c特異性區域的抗體，該區域來自SEQ ID NO：1之胺基酸754-835、在SEQ ID NO：1之胺基酸754-835內或與SEQ ID NO：1之胺基酸754-835重疊。
在任何抗FcRH5抗體之一些實施例中，基於HEK細胞株分析(HEK細胞用為TCR觸發所必需之信號傳導組分重構，如James及Valle,Nature 487：64-69(2012)中所述，該文獻以全文引用的方式併入本文中)，FcRH5抗體，特別是FcRH5雙特異性(例如抗CD3/抗FcRH5雙特異性)抗 體可具有單一或組合特徵。在一些實施例中，單一或組合特徵可包括腫瘤細胞間期/免疫突觸、Lck介導之TCR磷酸化、ZAP70活性(包括磷酸化狀態及定位)、CD58活性(包括定位及結合)、β2Ar活性(包括定位及結合)、CAAX活性(包括定位及結合)、CD45活性(包括定位)、pMHC活性(包括定位)、及/或TCR活性及觸發特徵。
在另一態樣中，根據任何以上實施例之抗FcRH5抗體可併 有單一或呈組合形式之如以下(a)-(e)及/或章節1-7中所述之任何特徵。
(a)結合FcRH5c之細胞外域之同功異型物c特異性區域
確定抗FcRH5抗體是否結合FcRH5c之細胞外域之同功異型物c特異性區域的方法在此項技術中為已知的。在一些實施例中，抗FcRH5抗體結合FcRH5c之細胞外域之同功異型物c特異性區域可藉由在293細胞及/或SVT2細胞中表現具有N端及C端缺失之FcRH5多肽，及如實例中所述藉由FACS測試抗體與截短多肽之結合來確定。在一些實施例中，相對於與在293細胞中表現之全長FcRH5之結合，抗體與截短多肽之結合之實質性降低(70%降低)或消除指示抗體不結合彼截短多肽。
在一些實施例中，同功異型物c特異性區域包含Ig樣域9。在一些實施例中，Ig樣域9亦稱為Ig樣C2型8。在一些實施例中，同功異型物c特異性區域包含SEQ ID NO：1之胺基酸754-835。在一些實施例中，同功異型物c特異性區域包含SEQ ID NO：1之胺基酸752-834。在一些實施例中，同功異型物c特異性區域包含SEQ ID NO：1之胺基酸743-850。在一些實施例中，同功異型物c特異性區域包含SEQ ID NO：1之胺基酸745-851。在一些實施例中，同功異型物c特異性區域包含來自N端及/或C端邊界之約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15個胺基酸之任一者。在一些實施例中，同功異型物c特異性區域包含自約SEQ ID NO：1之750、751、752、753或754之任一者至約SEQ ID NO：1之830、831、832、833、834、835或836之任一者的胺基酸。在一些實施例中，FcRH5為人類FcRH5。在一些實施例中，FcRH5為人類FcRH5或石蟹獼猴FcRH5。
(b)與人類及石蟹獼猴FcRH5交叉反應(結合)之親和力 5 nM或 4nM或 3nM或 2nM或 1nM，且視情況 0.0001nM或 0.001nM或 0.01nM
測定結合親和力之方法在此項技術中為已知的。在一些實施例中，可根據例如如實例中所述之BIAcore®分析、ELISA、Facs及IHC測定結合親和力。
在一些實施例中，抗FcRH5抗體結合人類及/或石蟹獼猴FcRH5之親和力約為以下任一者：5nM或4nM或3nM或2nM或1nM。在一些實施例中，抗FcRH5抗體結合人類及/或石蟹獼猴FcRH5之親和力為約5。在一些實施例中，抗FcRH5抗體結合人類及/或石蟹獼猴FcRH5之親和力為約4nM。在一些實施例中，抗FcRH5抗體結合人類及/或石蟹獼猴FcRH5之親和力為約3nM。在一些實施例中，抗FcRH5抗體結合人類及/或石蟹獼猴FcRH5之親和力為約2nM。在一些實施例中，FcRH5為人類FcRH5。在一些實施例中，FcRH5為石蟹獼猴FcRH5。
(c)不與FcRH1、FcRH2、FcRH3及/或FcRH4交叉反應(不結合)
測定結合之方法在此項技術中為已知的。在一些實施例中，可根據例如如實例中所述之BIAcore®分析、Facs、ELISA及IHC測定結合親和力。
在一些實施例中，抗FcRH5抗體結合FcRH5之親和力比結合FcRH1、FcRH2、FcRH3及/或FcRH4之親和力大超過約以下任一者：2、5、10、20、50、100、500或1000倍。在一些實施例中，FcRH為人類FcRH。
(d)不與FcRH5a交叉反應(不結合)
測定結合之方法在此項技術中為已知的。在一些實施例中，可根據例如如實例中所述之BIAcore®分析、Facs、ELISA及IHC測定結合親和力。
在一些實施例中，抗FcRH5抗體結合FcRH5c之親和力比結合FcRH5a之親和力大超過約以下任一者：2、5、10、20、50、100、500或1000倍。在一些實施例中，FcRH為人類FcRH。
(e)不與FcRH5之另一Ig樣域交叉反應(不結合)
測定結合之方法在此項技術中為已知的。在一些實施例中，可根據例如如實例中所述之BIAcore®分析、Facs、ELISA及IHC測定結合親和力。
在一些實施例中，抗FcRH5抗體結合FcRH5之Ig樣域9之親和力比結合FcRH5之Ig樣域1、2、3、4、5、6、7及/或8之親和力大超過約以下任一者：2、5、10、20、50、100、500或1000倍。在一些實施例中，FcRH為人類FcRH。在一些實施例中，Ig樣域為Ig樣域1(SEQ ID NO：1之aa 23-100)、Ig樣域2(SEQ ID NO：1之aa 105-185)、Ig樣域3(SEQ ID NO：1之aa 188-271)、Ig樣域4(SEQ ID NO：1之287-373)、Ig樣域5(SEQ ID NO：1之aa 380-466)、Ig樣域6(SEQ ID NO：1之aa 490-555)、Ig樣域7(SEQ ID NO：1之aa 568-652)、Ig樣域8(SEQ ID NO：1之aa 658-731)。
結合分析及其他分析
在一個態樣中，測試抗FcRH5抗體對其抗原之結合活性。舉例而言，在某些實施例中，測試抗FcRH5抗體結合在細胞表面上表現之FcRH5之能力。FACS分析可用於此測試。
在一示範性競爭分析中，在包含結合FcRH5之第一經標記抗體及測試其與該第一抗體競爭結合FcRH5之能力之第二未標記抗體的溶液中培育經固定FcRH5。第二抗體可存在於融合瘤上清液中。作為對照，在包含第一經標記抗體而非第二未標記抗體之溶液中培育經固定FcRH5。在容許第一抗體結合FcRH5之條件下培育之後，移除過量未結合抗體，且量測與經固定FcRH5締合之標記之量。若相對於對照樣品，與經固定FcRH5締合之標記之量在測試樣品中得以實質上降低，則彼指示第二抗體與第一抗體競爭結合FcRH5。在某些實施例中，經固定FcRH5存在於細胞表面上或自在其表面上表現FcRH5之細胞獲得之膜製備物中。
在一個態樣中，純化抗FcRH5抗體可進一步藉由一系列分析加以表徵，該等分析包括但不限於N端定序、胺基酸分析、非變性尺寸排阻高壓液相層析(HPLC)、質譜分析、離子交換層析及木瓜蛋白酶消化。在一個實施例中，涵蓋具有一些而非所有效應物功能之改變抗體，該等效應物功能使該改變抗體成為合乎抗體之活體內半衰期重要但某些效應物功能(諸如補體及ADCC)不必要或有害之許多應用需要的候選物。在某些實施例中，量測抗體之Fc活性以確保僅維持所要性質。可進行活體外及/或活體內細胞毒性分析以確認CDC及/或ADCC活性之降低/去除。舉例而言，可 進行Fc受體(FcR)結合分析以確保抗體缺乏FcγR結合性(因此可能缺乏ADCC活性)，但保留FcRn結合能力。用於介導ADCC之初級細胞NK細胞僅表現Fc(RIII，而單核細胞表現Fc(RI、Fc(RII及Fc(RIII。FcR在造血細胞上之表現概述於Ravetch及Kinet,Annu.Rev.Immunol.9：457-92(1991)之第464頁上之表3中。用以評估相關分子之ADCC活性之活體外分析的一實例描述於美國專利第5,500,362號或第5,821,337號中。適用於此等分析之效應細胞包括周邊血液單核細胞(PBMC)及自然殺手(NK)細胞。或者或另外，可例如在動物模型(諸如Clynes等人PNAS(USA)95：652-656(1998)中揭露之動物模型)中於活體內評估相關分子之ADCC活性。亦可進行C1q結合分析以確認抗體不能結合C1q且因此缺乏CDC活性。為評估補體活化，可進行例如如Gazzano-Santoro等人,J.Immunol.Methods 202：163(1996)中所述之CDC分析。亦可使用此項技術中已知之方法對FcRn結合及活體內清除率/半衰期進行測定。
1.抗體親和力
在某些實施例中，本文提供之抗體之解離常數(Kd)1μM、100nM、10nM、1nM、0.1nM、0.01nM或0.001nM，且視情況為10-13M。(例如10-8M或10-8M以下，例如10-8M至10-13M，例如10-9M至10-13M)。
在一些實施例中，Kd可如以下分析所述，藉由用相關抗體之Fab型式及其抗原進行放射性標記抗原結合分析(RIA)來量測。Fab對抗原之溶液結合親和力可藉由在一滴定系列之未標記抗原存在下，使Fab與最小濃度之(125I)標記抗原平衡，接著用抗Fab抗體塗佈之盤捕捉所結合抗原來量測(參見例如Chen等人,J.Mol.Biol.293：865-881(1999))。為建立分析條件，可將MICROTITER®多孔盤(Thermo Scientific)用含5μg/ml捕捉抗Fab抗體(Cappel Labs)之50mM碳酸鈉(pH 9.6)塗佈隔夜，且隨後在室溫(約23℃)下用含2%(w/v)牛血清白蛋白之PBS阻斷2-5小時。在非吸附盤(Nunc #269620)中，將100pM或26pM[125I]-抗原與相關Fab之連續稀釋液混合(例如與Presta等人,Cancer Res.57：4593-4599(1997)中對抗VEGF抗體Fab-12之評估一致)。接著將相關Fab培育隔夜；然而，培育可持續較長時期(例如 約65小時)以確保達到平衡。此後，可將混合物轉移至捕捉盤中以在室溫下培育(例如1小時)。接著可移除溶液且用含0.1%聚山梨醇酯20(TWEEN-20®)之PBS將盤洗滌八次。當盤已乾燥時，每孔可添加150μL閃爍體(MICROSCINT-20TM；Packard)，且可在TOPCOUNTTM γ計數器(Packard)上對盤持續10分鐘計數。可選擇各Fab之達成小於或等於最大結合之20%的濃度以用於競爭性結合分析中。
根據另一實施例，使用BIACORE®-2000或BIACORE®-3000(BIAcore公司,Piscataway,NJ)，用固定之抗原CM5晶片在約10反應單位(RU)下在25℃下使用表面電漿子共振分析來量測Kd。簡言之，可根據供應商說明書用N-乙基-N’-(3-二甲基胺基丙基)-碳化二亞胺鹽酸鹽(EDC)及N-羥基丁二醯亞胺(NHS)活化羧甲基化葡聚糖生物感測器晶片(CM5，BIACORE公司)。可用10mM乙酸鈉(pH 4.8)將抗原稀釋至5μg/ml(約0.2μM)，隨後在流速5μL/min下注射以達成約10反應單位(RU)之偶合蛋白質。在注射抗原之後，可注射1M乙醇胺以阻斷未反應基團。對於動力學量測，可在25℃下在流速約25μL/min下注射Fab於含0.05%聚山梨醇酯20(TWEEN-20TM)界面活性劑之PBS(PBST)中之兩倍連續稀釋液(0.78nM至500nM)。可藉由同時擬合締合及解離感測器圖，使用簡單一對一朗繆爾結合模型(BIACORE®評估軟體第3.2版)計算締合速率(k締合)及解離速率(k解離)。平衡解離常數(Kd)係計算為比率k解離/k締合。參見例如Chen等人,J.Mol.Biol.293：865-881(1999)。若由以上表面電漿子共振分析獲得之締合速率超過106M-1 s-1，則可藉由使用螢光淬滅技術來測定締合速率，該技術量測在如在分光計(諸如停流配備分光光度計(Aviv Instruments)或具有攪拌比色皿之8000系列SLM-AMINCOTM分光光度計(ThermoSpectronic))中量測之遞增濃度之抗原存在下，在25℃下於PBS(pH 7.2)中之20nM抗抗原抗體(Fab形式)之螢光發射強度(激發=295nm；發射=340nm，16nm帶通)的增加或降低。
2.抗體片段
在某些實施例中，本文提供之抗體為抗體片段。抗體片段包括但不限於Fab、Fab’、Fab’-SH、F(ab’)2、Fv及scFv片段及下述其他片段。 對於某些抗體片段之評述，參見Hudson等人Nat.Med.9：129-134(2003)。對於scFv片段之評述，參見例如Pluckthün,The Pharmacology of Monoclonal Antibodies,第113卷,Rosenburg及Moore編,(Springer-Verlag,New York),第269-315頁(1994)；亦參見WO 93/16185；及美國專利第5,571,894號及第5,587,458號。對於包含結合抗原決定基殘基之補救受體且活體內半衰期增加之Fab及F(ab')2片段之論述，參見美國專利第5,869,046號。
微型雙功能抗體為可為二價或雙特異性之具有兩個抗原結合位點之抗體片段。參見例如EP 404,097；WO 1993/01161；Hudson等人,Nat.Med.9：129-134(2003)；及Hollinger等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90：6444-6448(1993)。微型三功能抗體及微型四功能抗體亦描述於Hudson等人,Nat.Med.9：129-134(2003)中。
單域抗體為包含抗體之全部或一部分重鏈可變域或全部或一部分輕鏈可變域之抗體片段。在某些實施例中，單域抗體為人類單域抗體(Domantis公司,Waltham,MA；參見例如美國專利第6,248,516 B1號)。
抗體片段可藉由各種技術製備，包括但不限於蛋白水解消化完整抗體以及如本文所述，藉由重組宿主細胞(例如大腸桿菌(E.coli)或噬菌體)產生。
3.嵌合及人類化抗體
在某些實施例中，本文提供之抗體為嵌合抗體。某些嵌合抗體例如描述於美國專利第4,816,567號；及Morrison等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,81：6851-6855(1984))中。在一個實例中，嵌合抗體包含非人類可變區(例如源於小鼠、大鼠、倉鼠、兔或非人類靈長類動物(諸如猴)之可變區)及人類恆定區。在另一實例中，嵌合抗體為「類別轉換」抗體，其中類別或子類已自親本抗體之類別或子類發生改變。嵌合抗體包括其抗原結合片段。
在某些實施例中，嵌合抗體為人類化抗體。通常，非人類抗體經人類化以降低對人類之免疫原性，同時保留親本非人類抗體之特異性及親和力。一般而言，人類化抗體包含一或多個可變域，其中例如CDR之HVR(或其部分)源於非人類抗體，且FR(或其部分)源於人類抗體序列。人 類化抗體視情況亦將包含至少一部分人類恆定區。在一些實施例中，人類化抗體中之一些FR殘基經來自非人類抗體(例如HVR殘基所來源之抗體)之相應殘基取代，例如以恢復或改良抗體特異性或親和力。
人類化抗體及其製備方法例如評述於Almagro及Fransson,Front.Biosci.13：1619-1633(2008)中，且進一步例如描述於Riechmann等人,Nature 332：323-329(1988)；Queen等人,Proc.Nat’l Acad.Sci.USA 86：10029-10033(1989)；美國專利第5,821,337號、第7,527,791號、第6,982,321號及第7,087,409號；Kashmiri等人,Methods 36：25-34(2005)(描述SDR(a-CDR)移植)；Padlan,Mol.Immunol.28：489-498(1991)(描述「表面重塑」)；Dall’Acqua等人,Methods 36：43-60(2005)(描述「FR改組」)；及Osbourn等人,Methods 36：61-68(2005)及Klimka等人,Br.J.Cancer,83：252-260(2000)(描述FR改組之「引導選擇」方法)中。
可用於人類化之人類構架區包括但不限於：使用「最佳擬合」方法選擇之構架區(參見例如Sims等人J.Immunol.151：2296(1993))；源於輕鏈或重鏈可變區之特定子組之人類抗體的一致序列之構架區(參見例如Carter等人Proc.Natl.Acad.Sci.USA,89：4285(1992)；及Presta等人J.Immunol.,151：2623(1993))；人類成熟(體細胞突變)構架區或人類生殖系構架區(參見例如Almagro及Fransson,Front.Biosci.13：1619-1633(2008))；及由篩檢FR文庫獲得之構架區(參見例如Baca等人,J.Biol.Chem.272：10678-10684(1997)及Rosok等人,J.Biol.Chem.271：22611-22618(1996))。
4.人類抗體
在某些實施例中，本文提供之抗體為人類抗體。人類抗體可使用此項技術中已知之各種技術來產生。人類抗體一般性地描述於van Dijk及van de Winkel,Curr.Opin.Pharmacol.5：368-74(2001)及Lonberg,Curr.Opin.Immunol.20：450-459(2008)中。
人類抗體可藉由向已經修改以回應於抗原攻擊而產生完整人類抗體或具有人類可變區之完整抗體之轉殖基因動物投與免疫原來製備。此等動物通常含有全部或一部分人類免疫球蛋白基因座，其置換內源 性免疫球蛋白基因座或存在於染色體外或隨機整合至動物之染色體中。在此等轉殖基因小鼠中，內源性免疫球蛋白基因座通常已不活化。對於自轉殖基因動物獲得人類抗體之方法之評述，參見Lonberg,Nat.Biotech.23：1117-1125(2005)。亦參見例如描述XENOMOUSETM技術之美國專利第6,075,181號及第6,150,584號；描述HUMAB®技術之美國專利第5,770,429號；描述K-M MOUSE®技術之美國專利第7,041,870號及描述VELOCIMOUSE®技術之美國專利申請公開案第US 2007/0061900號)。來自由此等動物產生之完整抗體之人類可變區可例如藉由與不同人類恆定區組合而進一步修飾。
人類抗體亦可藉由基於融合瘤之方法製備。用於產生人類單株抗體之人類骨髓瘤及小鼠-人類異源骨髓瘤細胞株已有描述。(參見例如Kozbor J.Immunol.,133：3001(1984)；Brodeur等人,Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications,第51-63頁(Marcel Dekker公司,New York,1987)；及Boerner等人,J.Immunol.,147：86(1991)。)經由人類B細胞融合瘤技術產生之人類抗體亦描述於Li等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,103：3557-3562(2006)中。其他方法包括例如描述於美國專利第7,189,826號(描述自融合瘤細胞株產生單株人類IgM抗體)及Ni,Xiandai Mianyixue,26(4)：265-268(2006)(描述人類-人類融合瘤)中之方法。人類融合瘤技術(三源融合瘤技術)亦描述於Vollmers及Brandlein,Histology and Histopathology,20(3)：927-937(2005)及Vollmers及Brandlein,Methods and Findings in Experimental and Clinical Pharmacology,27(3)：185-91(2005)中。
人類抗體亦可藉由分離自人類來源噬菌體呈現文庫選擇之Fv純系可變域序列來產生。此等可變域序列可接著與所要人類恆定域組合。用於自抗體文庫選擇人類抗體之技術在以下描述。
5.文庫來源之抗體
本文提供之抗體可藉由篩檢組合文庫中具有一或多種所要活性之抗體來分離。舉例而言，此項技術中已知多種用於產生噬菌體呈現文庫及篩檢此等文庫中具有所要結合特徵之抗體之方法。此等方法例如評述於Hoogenboom等人Methods in Molecular Biology 178：1-37(O’Brien等人 編,Human Press,Totowa,NJ,2001)中，及例如進一步描述於McCafferty等人,Nature 348：552-554；Clackson等人,Nature 352：624-628(1991)；Marks等人,J.Mol.Biol.222：581-597(1992)；Marks及Bradbury,Methods in Molecular Biology 248：161-175(Lo編,Human Press,Totowa,NJ,2003)；Sidhu等人,J.Mol.Biol.338(2)：299-310(2004)；Lee等人,J.Mol.Biol.340(5)：1073-1093(2004)；Fellouse,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 101(34)：12467-12472(2004)；及Lee等人,J.Immunol.Methods 284(1-2)：119-132(2004)中。
在某些噬菌體呈現方法中，藉由聚合酶鏈反應(PCR)分別選殖VH及VL基因之譜系且隨機重組於噬菌體文庫中，可接著篩檢該等文庫中之抗原結合噬菌體，如Winter等人,Ann.Rev.Immunol.,12：433-455(1994)中所述。噬菌體通常呈現呈單鏈Fv(scFv)片段形式或呈Fab片段形式之抗體片段。來自經免疫來源之文庫提供對免疫原具有高親和力之抗體而無需構築融合瘤。或者，可選殖(例如自人類選殖)天然譜系以提供單一來源之針對廣泛範圍之非自體抗原以及自體抗原的抗體而不進行任何免疫，如Griffiths等人,EMBO J,12：725-734(1993)所述。最後，天然文庫亦可藉由以下方式合成製備：自幹細胞選殖未重排V基因區段，及使用含有隨機序列之PCR引子以編碼高度可變CDR3區及在活體外達成重排，如Hoogenboom及Winter,J.Mol.Biol.,227：381-388(1992)所述。描述人類抗體噬菌體文庫之專利公開案包括例如：美國專利第5,750,373號、及美國專利公開案第2005/0079574號、第2005/0119455號、第2005/0266000號、第2007/0117126號、第2007/0160598號、第2007/0237764號、第2007/0292936號及第2009/0002360號。
自人類抗體文庫分離之抗體或抗體片段在本文中被視為人類抗體或人類抗體片段。
6.多特異性抗體
在某些實施例中，本文提供之抗體為多特異性抗體，例如雙特異性抗體。多特異性抗體為對至少兩個不同位點具有結合特異性之單株抗體。在某些實施例中，一個結合特異性係針對FcRH5且另一個係針對任何其他抗原。在某些實施例中，一個結合特異性係針對FcRH5且另一個係 針對CD3。參見例如美國專利第5,821,337號。在某些實施例中，雙特異性抗體可結合FcRH5之兩個不同抗原決定基。雙特異性抗體亦可用於使細胞毒性劑定位於表現FcRH5之細胞。雙特異性抗體可製備成全長抗體或抗體片段。
在一些實施例中，FcRH5抗體為FcRH5雙特異性抗體。雙特異性抗體為對至少兩種不同抗原決定基具有結合特異性之抗體。示範性雙特異性抗體可結合如本文所述之FcRH5蛋白之兩種不同抗原決定基。其他此等抗體可組合有FcRH5結合位點與另一蛋白質之結合位點。或者，抗FcRH5臂可與結合白血球上之觸發分子(諸如T細胞受體分子(例如CD3)或IgG之Fc受體(FcγR)，諸如FcγRI(CD64)、FcγRII(CD32)及FcγRIII(CD16))之臂組合以便使細胞防禦機制集中並定位於FcRH5表現細胞。雙特異性抗體亦可用於使細胞毒性劑定位於表現FcRH5之細胞。此等抗體具有FcRH5結合臂及結合細胞毒性劑(例如皂素(saporin)、抗干擾素α、長春花生物鹼、篦麻毒素(ricin)A鏈、甲胺蝶呤(methotrexate)或放射性同位素半抗原)之臂。雙特異性抗體可製備成全長抗體或抗體片段(例如F(ab)2雙特異性抗體)。在一些實施例中，抗FcRH5抗體結合FcRH5c之細胞外域之同功異型物c特異性區域。在一些實施例中，抗FcRH5抗體結合FcRH5c之Ig樣域9。
在一些實施例中，FcRH5雙特異性抗體包含第一臂，其中該第一臂結合FcRH5；及第二臂，其中該第二臂結合Fc。FcRH5雙特異性抗體之第二臂可為此項技術中已知之任何抗Fc抗體。舉例而言，WO 96/16673描述一種雙特異性抗ErbB2/抗FcγRIII抗體且美國專利第5,837,234號揭露一種雙特異性抗ErbB2/抗FcγRI抗體。雙特異性抗ErbB2/Fcα抗體顯示於WO98/02463中。在一些實施例中，抗FcRH5抗體結合FcRH5c之細胞外域之同功異型物c特異性區域。在一些實施例中，抗FcRH5抗體結合FcRH5c之Ig樣域9。
在一些實施例中，FcRH5雙特異性抗體包含第一臂，其中該第一臂結合FcRH5；及第二臂，其中該第二臂結合CD3。FcRH5雙特異性抗體之第二臂可為此項技術中已知之任何抗CD3抗體。美國專利第5,821,337號及第6,407,213號教示雙特異性抗ErbB2/抗CD3抗體。已描述 結合CD3抗原上之抗原決定基及第二抗原決定基之其他雙特異性抗體。參見例如美國專利第5,078,998號(抗CD3/腫瘤細胞抗原)；美國專利第5,601,819號(抗CD3/IL-2R；抗CD3/CD28；抗CD3/CD45)；美國專利第6,129,914號(抗CD3/惡性B細胞抗原)；美國專利第7,112,324號(抗CD3/CD19)；美國專利第6,723,538號(抗CD3/CCR5)；美國專利第7,235,641號(抗CD3/EpCAM)；美國專利第7,262,276號(抗CD3/卵巢腫瘤抗原)；及美國專利第5,731,168號(抗CD3/CD4IgG)，該等專利以全文引用的方式併入本文中。在一些實施例中，第二臂之抗CD3抗體為以下任一者中所述之抗體：WO 2005/118635、WO2007/042261、WO2008/119567、US5929212、US6750325、US6491916、US7994289、US7993641、US6706265、US5585097、US5968509、US5932448、US6129914、US7381803、US5834597及US7862813，該等專利以全文引用的方式併入本文中。在一些實施例中，抗FcRH5抗體結合FcRH5c之細胞外域之同功異型物c特異性區域。在一些實施例中，抗FcRH5抗體結合FcRH5c之Ig樣域9。
用於製備多特異性抗體之技術包括但不限於重組共表現具有不同特異性之兩對免疫球蛋白重鏈-輕鏈(參見Milstein及Cuello,Nature 305：537(1983))；WO 93/08829及Traunecker等人,EMBO J.10：3655(1991))及「孔中鈕(knob-in-hole)」工程改造(參見例如美國專利第5,731,168號)。多特異性抗體亦可藉由以下方式來製備：工程改造用於製備抗體Fc雜二聚分子之靜電牽引效應(WO 2009/089004A1)；交聯兩個或兩個以上抗體或片段(參見例如美國專利第4,676,980號及Brernan等人,Science,229：81(1985))；使用白胺酸拉鍊以產生雙特異性抗體(參見例如Kostelny等人,J.Immunol.,148(5)：1547-1553(1992))；使用「微型雙功能抗體」技術來製備雙特異性抗體片段(參見例如Hollinger等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,90：6444-6448(1993))；及使用單鏈Fv(sFv)二聚體(參見例如Gruber等人,J.Immunol.,152：5368(1994))；及如例如Tutt等人J.Immunol.147：60(1991)中所述製備三特異性抗體。
本文亦包括具有三個或三個以上功能性抗原結合位點之工程改造抗體，包括「章魚抗體(Octopus antibody)」(參見例如US 2006/0025576A1)。
本文之抗體或片段亦包括「雙重作用性FAb」或「DAF」，其包含結合FcRH5以及另一不同抗原之抗原結合位點(參見例如US 2008/0069820)。
根據一種不同方法，使具有所要結合特異性之抗體可變域(抗體-抗原結合位點)融合於免疫球蛋白恆定域序列。較佳地，融合物具有Ig重鏈恆定域，包含鉸鏈、CH2及CH3區之至少一部分。較佳的是使第一重鏈恆定區(CH1)含有存在於至少一個融合物中之為輕鏈鍵結所必需之位點。將編碼免疫球蛋白重鏈融合物及必要時免疫球蛋白輕鏈之DNA插入各別表現載體中，且共轉染至適合宿主細胞中。此提供在用於構築中之不等比率之三個多肽鏈提供最佳產率之所要雙特異性抗體時的實施例中，調整三種多肽片段之相互比例的更大靈活性。然而，當以相等比率表現至少兩個多肽鏈會產生高產率時或當比率對所要鏈組合之產率不具有顯著影響時，有可能將兩個或全部三個多肽鏈之編碼序列插入單一表現載體中。
在一些實施例中，雙特異性抗體由一個臂中之具有第一結合特異性之雜交免疫球蛋白重鏈、及另一臂中之雜交免疫球蛋白重鏈-輕鏈對(提供第二結合特異性)構成。發現此不對稱結構有助於使所要雙特異性化合物與非所要免疫球蛋白鏈組合分離，因為僅在雙特異性分子之一半中存在免疫球蛋白輕鏈提供一種容易分離方式。此方法揭露於WO 94/04690中。對於產生雙特異性抗體之其他詳情，參見例如Suresh等人,Methods in Enzymology 121：210(1986)。
根據美國專利第5,731,168號中所述之另一方法，一對抗體分子之間的界面可經工程改造以使自重組細胞培養物回收之雜二聚體之百分比最大化。較佳界面包含CH3域之至少一部分。在此方法中，來自第一抗體分子之界面之一或多個小胺基酸側鏈用較大側鏈(例如酪胺酸或色胺酸)置換。藉由用較小胺基酸側鏈(例如丙胺酸或酥胺酸)置換大胺基酸側鏈來在第二抗體分子之界面上產生尺寸與大側鏈相同或類似之補償「空穴」。此提供一種用於使雜二聚體之產率增加超過其他非所要最終產物(諸如均二聚體)之機制。根據此方法產生之雙特異性抗體在本文中稱為「突起進入空穴中 (protuberance-into-cavity)」抗體。
雙特異性抗體包括交聯或「雜結合物」抗體。舉例而言，可使雜結合物中之一種抗體偶合於抗生蛋白，而使另一抗體偶合於生物素。此等抗體已例如經提出以使免疫系統細胞靶向非所要細胞(美國專利第4,676,980號)，及用於治療HIV感染(WO 91/00360、WO 92/200373及EP 03089)。可使用任何適宜交聯方法製備雜結合物抗體。適合交聯劑在此項技術中為熟知的，且連同許多交聯技術一起揭露於美國專利第4,676,980號中。
用於自抗體片段產生雙特異性抗體之技術亦已描述於文獻中。舉例而言，可使用化學鍵聯製備雙特異性抗體。Brennan等人,Science 229：81(1985)描述一種其中蛋白水解裂解完整抗體以產生F(ab')2片段之程序。在二硫醇錯合劑亞砷酸鈉存在下還原此等片段以使鄰近二硫醇穩定且防止分子間二硫化物形成。接著使產生之Fab'片段轉化成硫硝基苯甲酸酯(TNB)衍生物。接著藉由用巰基乙胺還原使一種Fab'-TNB衍生物再轉化成Fab'-硫醇且與等莫耳量之另一Fab'-TNB衍生物混合以形成雙特異性抗體。產生之雙特異性抗體可用作用於選擇性固定酶之試劑。
來自大腸桿菌之Fab'-SH片段可直接回收且化學偶合以形成雙特異性抗體。Shalaby等人,J.Exp.Med.175：217-225(1992)描述完全人類化雙特異性抗體F(ab)2分子之產生。各Fab'片段各別地自大腸桿菌分泌且經受活體外定向化學偶合以形成雙特異性抗體。由此形成之雙特異性抗體能夠結合過度表現ErbB2受體之細胞及正常人類T細胞，以及觸發人類細胞毒性淋巴細胞針對人類乳房腫瘤標靶之溶解活性。
亦已描述用於直接自重組細胞培養物製備及分離雙特異性抗體片段之各種技術。舉例而言，已產生使用白胺酸拉鍊之雙特異性抗體。Kostelny等人,J.Immunol.148(5)：1547-1553(1992)。藉由基因融合使來自Fos及Jun蛋白之白胺酸拉鍊肽連接於兩種不同抗體之Fab'部分。在鉸鏈區處還原抗體均二聚體以形成單體且接著再氧化以形成抗體雜二聚體。此方法亦可用於產生抗體均二聚體。由Hollinger等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90：6444-6448(1993)描述之「微型雙功能抗體」技術已提供一種用於製備雙特異性抗體片段之替代性機制。片段包含藉由連接子連接於VL之VH，該 連接子過短以致不允許在同一鏈上之兩個域之間配對。因此，迫使一個片段之VH及VL域與另一片段之互補VL及V域配對，藉此形成兩個抗原結合位點。亦已報導用於藉由使用單鏈Fv(sFv)二聚體製備雙特異性抗體片段之另一策略。參見Gruber等人,J.Immunol.,152：5368(1994)。
涵蓋超過兩價之抗體。舉例而言，可製備三特異性抗體。Tutt等人,J.Immunol.147：60(1991)。
8.抗體變異體
在某些實施例中，涵蓋本文提供之抗體之胺基酸序列變異體。舉例而言，可能需要改良抗體之結合親和力及/或其他生物性質。抗體之胺基酸序列變異體可藉由將適當修飾引入編碼抗體之核苷酸序列中或藉由肽合成來製備。此等修飾包括例如抗體之胺基酸序列內之殘基的缺失及/或插入及/或取代。可對缺失、插入及取代進行任何組合以獲得最終構築體，其限制條件為最終構築體具有所要特徵，例如抗原結合性。
a)取代、插入及缺失變異體
在某些實施例中，提供具有一或多個胺基酸取代之抗體變異體。用於取代性突變誘發之相關位點包括HVR及FR。保守性取代展示於表1中之標題「較佳取代」下。更實質性變化提供於表1中之標題「示範性取代」下，且如以下關於胺基酸側鏈類別進一步所述。胺基酸取代可引入相關抗體中且篩檢具有所要活性(例如維持/改良之抗原結合性、降低之免疫原性或改良之ADCC或CDC)之產物。
可根據共同側鏈性質對胺基酸分組：(1)疏水性：正白胺酸、Met、Ala、Val、Leu、Ile；(2)中性親水性：Cys、Ser、Thr、Asn、Gln；(3)酸性：Asp、Glu；(4)鹼性：His、Lys、Arg；(5)影響鏈定向之殘基：Gly、Pro；(6)芳族：Trp、Tyr、Phe。
非保守性取代將需要將此等類別之一之成員更換成另一類別。
一種類型之取代變異體涉及取代親本抗體(例如人類化或人類抗體)之一或多個高變區殘基。一般而言，選用於進一步研究之所得變異體相對於親本抗體將在某些生物性質方面具有改變(例如改良)(例如親和力增加、免疫原性降低)及/或將實質上保留親本抗體之某些生物性質。一示範性取代變異體為親和力成熟抗體，其可例如使用基於噬菌體呈現之親和力成熟技術(諸如本文所述者)便利地產生。簡言之，使一或多個HVR殘基突變且使變異型抗體呈現在噬菌體上並針對特定生物活性(例如結合親和力)加以篩檢。
可在HVR中進行改變(例如取代)例如以改良抗體親和力。可在HVR「熱點」(亦即由在體細胞成熟過程期間以高頻率經受突變之密碼子編碼之殘基)(參見例如Chowdhury,Methods Mol.Biol.207：179-196(2008))及/或SDR(a-CDR)中進行此等改變，且測試所得變異型VH或VL之結合親和力。藉由構築二級文庫並自其進行再選擇來達成親和力成熟已例如描述 於Hoogenboom等人Methods in Molecular Biology 178：1-37(O’Brien等人編,Human Press,Totowa,NJ,(2001)。)中。在親和力成熟之一些實施例中，藉由多種方法(例如易出錯PCR、鏈改組或寡核苷酸定向突變誘發)中之任一者將多樣性引入選用於成熟之可變基因中。接著產生二級文庫。接著篩檢文庫以識別具有所要親和力之任何抗體變異體。引入多樣性之另一方法涉及HVR定向方法，其中使若干HVR殘基(例如一次4-6個殘基)隨機化。可例如使用丙胺酸掃描突變誘發或模型化來特異性識別抗原結合中涉及之HVR殘基。特定言之，通常以CDR-H3及CDR-L3為標靶。
在某些實施例中，取代、插入或缺失可發生在一或多個HVR內，只要此等改變不實質上降低抗體結合抗原之能力即可。舉例而言，可在HVR中進行不實質上降低結合親和力之保守性改變(例如如本文提供之保守性取代)。此等改變可在HVR「熱點」或SDR以外。在以上提供之變異型VH及VL序列之某些實施例中，各HVR未改變或含有不超過一個、兩個或三個胺基酸取代。
一種適用於識別抗體之可作為突變誘發標靶之殘基或區域的方法稱為「丙胺酸掃描突變誘發」，如Cunningham及Wells(1989)Science,244：1081-1085所述。在此方法中，識別某一殘基或一組靶殘基(例如帶電荷殘基，諸如arg、asp、his、lys及glu)且置換為中性或帶負電荷胺基酸(例如丙胺酸或聚丙胺酸)以確定抗體與抗原之相互作用是否受到影響。可在對初始取代顯示功能敏感性之胺基酸位置上引入進一步取代。或者或另外，使用抗原-抗體複合物之晶體結構來識別抗體與抗原之間的接觸點。此等接觸殘基及相鄰殘基可作為取代候選物而靶向或消除。可篩檢變異體以確定其是否含有所要性質。
胺基酸序列插入包括長度在一個殘基至含有一百個或一百個以上殘基之多肽之範圍內的胺基末端及/或羧基末端融合、以及具有單一或多個胺基酸殘基之序列內插入。末端插入之實例包括具有N端甲硫胺醯基殘基之抗體。抗體分子之其他插入變異體包括抗體之N端或C端與增加抗體之血清半衰期之酶(例如用於ADEPT)或多肽的融合。
b)糖基化變異體
在某些實施例中，改變本文提供之抗體以增加或降低抗體糖基化之程度。對抗體添加糖基化位點或使抗體缺失糖基化位點可藉由改變胺基酸序列以使得產生或移除一或多個糖基化位點來便利地達成。
當抗體包含Fc區時，可改變與其連接之碳水化合物。由哺乳動物細胞產生之天然抗體通常包含通常藉由N-鍵聯連接於Fc區之CH2域之Asn297的分支雙觸角寡醣。參見例如Wright等人TIBTECH 15：26-32(1997)。寡醣可包括各種碳水化合物，例如甘露糖、N-乙醯基葡糖胺(GlcNAc)、半乳糖及唾液酸、以及連接於雙觸角寡醣結構之「主幹」中之GlcNAc的海藻糖。在一些實施例中，可對本文提供之抗體中之寡醣進行修飾以產生具有某些改良性質之抗體變異體。
在一個實施例中，提供具有缺乏(直接或間接)連接於Fc區之海藻糖之碳水化合物結構的抗體變異體。舉例而言，海藻糖在此抗體中之量可為1%至80%、1%至65%、5%至65%或20%至40%。如藉由MALDI-TOF質譜法所量測，藉由相對於連接於Asn297之所有糖結構(例如複合、雜合及高甘露糖結構)之總和計算Asn297上之糖鏈內海藻糖的平均量來測定海藻糖之量，如例如WO 2008/077546中所述。Asn297係指位於Fc區中約位置297(Fc區殘基之Eu編號)上之天冬醯胺殘基；然而，Asn297亦可由於抗體中之微小序列變化而位於位置297之上游或下游約±3個胺基酸處，亦即在位置294與300之間。此等海藻糖基化變異體可具有改良之ADCC功能。參見例如美國專利公開案第US 2003/0157108號(Presta,L.)；第US 2004/0093621號(Kyowa Hakko Kogyo有限公司)。與「去海藻糖基化」或「海藻糖缺乏」抗體變異體相關之公開案之實例包括：US 2003/0157108；WO 2000/61739；WO 2001/29246；US 2003/0115614；US 2002/0164328；US 2004/0093621；US 2004/0132140；US 2004/0110704；US 2004/0110282；US 2004/0109865；WO 2003/085119；WO 2003/084570；WO 2005/035586；WO 2005/035778；WO2005/053742；WO2002/031140；Okazaki等人J.Mol.Biol.336：1239-1249(2004)；Yamane-Ohnuki等人Biotech.Bioeng.87：614(2004)。能夠產生去海藻糖基化抗體之細胞株之實例包括缺乏蛋白質海藻糖基化作用之Lec13 CHO細胞(Ripka等人Arch.Biochem.Biophys. 249：533-545(1986)；美國專利申請案第US 2003/0157108 A1號,Presta,L；及WO 2004/056312 A1，Adams等人,尤其在實例11中)及基因剔除細胞株，諸如α-1,6-海藻糖基轉移酶基因,FUT8,基因剔除CHO細胞(參見例如Yamane-Ohnuki等人Biotech.Bioeng.87：614(2004)；Kanda,Y.等人,Biotechnol.Bioeng.,94(4)：680-688(2006)；及WO2003/085107)。
進一步提供具有二等分寡醣之抗體變異體，例如其中連接於抗體之Fc區之雙觸角寡醣係由GlcNAc二等分。此等抗體變異體可具有降低之海藻糖基化及/或改良之ADCC功能。此等抗體變異體之實例例如描述於WO 2003/011878(Jean-Mairet等人)；美國專利第6,602,684號(Umana等人)；及US 2005/0123546(Umana等人)中。亦提供在連接於Fc區之寡醣中具有至少一個半乳糖殘基之抗體變異體。此等抗體變異體可具有改良之CDC功能。此等抗體變異體例如描述於WO 1997/30087(Patel等人)；WO 1998/58964(Raju,S.)；及WO 1999/22764(Raju,S.)中。
c)Fc區變異體
在某些實施例中，可將一或多個胺基酸修飾引入本文提供之抗體之Fc區中，藉此產生Fc區變異體。Fc區變異體可包含在一或多個胺基酸位置上包含胺基酸修飾(例如取代)之人類Fc區序列(例如人類IgG1、IgG2、IgG3或IgG4 Fc區)。
在某些實施例中，本發明涵蓋具有一些而非所有效應功能之抗體變異體，該等效應功能使該抗體變異體成為抗體之活體內半衰期較為重要但某些效應功能(諸如補體及ADCC)不必要或有害之應用所需要的候選物。可進行活體外及/或活體內細胞毒性分析以確認CDC及/或ADCC活性之降低/去除。舉例而言，可進行Fc受體(FcR)結合分析以確保抗體缺乏FcγR結合性(因此可能缺乏ADCC活性)，但保留FcRn結合能力。用於介導ADCC之初級細胞NK細胞僅表現Fc(RIII，而單核細胞表現Fc(RI、Fc(RII及Fc(RIII。FcR在造血細胞上之表現概述於Ravetch及Kinet,Annu.Rev.Immunol.9：457-492(1991)第464頁上之表3中。評估相關分子之ADCC活性之活體外分析的非限制性實例描述於美國專利第5,500,362號(參見例如Hellstrom,I.等人Proc.Nat’l Acad.Sci.USA 83：7059-7063(1986))及 Hellstrom,I等人,Proc.Nat’l Acad.Sci.USA 82：1499-1502(1985)；美國專利第5,821,337號(參見Bruggemann,M.等人,J.Exp.Med.166：1351-1361(1987))中。或者，可採用非放射性分析方法，(參見例如用於流動式細胞測量術之ACTITM非放射性細胞毒性分析(CellTechnology公司Mountain View,CA)；及CytoTox 96®非放射性細胞毒性分析(Promega,Madison,WI)。適用於此等分析之效應細胞包括周邊血液單核細胞(PBMC)及自然殺手(NK)細胞。或者或另外，相關分子之ADCC活性可例如在動物模型，諸如Clynes等人Proc.Nat’l Acad.Sci.USA 95：652-656(1998)中揭露之動物模型中進行活體內評估。亦可進行C1q結合分析以確認抗體不能結合C1q且因此缺乏CDC活性。參見例如WO 2006/029879及WO 2005/100402中之C1q及C3c結合ELISA。為評估補體活化，可進行CDC分析(參見例如Gazzano-Santoro等人,J.Immunol.Methods 202：163(1996)；Cragg,M.S.等人,Blood 101：1045-1052(2003)；及Cragg,M.S.及M.J.Glennie,Blood 103：2738-2743(2004))。亦可使用此項技術中已知之方法對FcRn結合及活體內清除率/半衰期進行測定(參見例如Petkova,S.B.等人,Int’l.Immunol.18(12)：1759-1769(2006))。
效應功能降低之抗體包括Fc區殘基238、265、269、270、297、327及329中之一或多者經取代之抗體(美國專利第6,737,056號)。此等Fc突變體包括在胺基酸位置265、269、270、297及327中之兩者或兩者以上處具有取代之Fc突變體，包括殘基265及297取代成丙胺酸之所謂「DANA」Fc突變體(美國專利第7,332,581號)。
與FcR之結合改良或削弱之某些抗體變異體已有描述。(參見例如美國專利第6,737,056號；WO 2004/056312及Shields等人,J.Biol.Chem.9(2)：6591-6604(2001)。)
在某些實施例中，抗體變異體包含具有一或多個改良ADCC之胺基酸取代(例如在Fc區之位置298、333及/或334(EU殘基編號)處之取代)之Fc區。
在一些實施例中，在Fc區中進行導致C1q結合及/或補體依賴性細胞毒性(CDC)改變(亦即改良或削弱)之改變，例如如美國專利第 6,194,551號、WO 99/51642及Idusogie等人J.Immunol.164：4178-4184(2000)中所述。
半衰期增加且與負責將母體IgG轉移至胎兒之新生兒Fc受體(FcRn)(Guyer等人,J.Immunol.117：587(1976)及Kim等人,J.Immunol.24：249(1994))之結合改良的抗體描述於US2005/0014934A1(Hinton等人)中。彼等抗體包含其中具有一或多個改良Fc區與FcRn之結合之取代的Fc區。此等Fc變異體包括在以下一或多個Fc區殘基處具有取代之變異體：238、256、265、272、286、303、305、307、311、312、317、340、356、360、362、376、378、380、382、413、424或434，例如Fc區殘基434之取代(美國專利第7,371,826號)。
亦參見Duncan及Winter,Nature 322：738-40(1988)；美國專利第5,648,260號；美國專利第5,624,821號；及WO 94/29351，涉及Fc區變異體之其他實例。
d)半胱胺酸工程改造抗體變異體
在某些實施例中，可能需要產生半胱胺酸工程改造抗體，例如「硫基單抗(thioMAb)」，其中抗體之一或多個殘基經半胱胺酸殘基取代。在特定實施例中，經取代殘基存在於抗體之可及位點處。藉由用半胱胺酸取代彼等殘基，反應性硫醇基藉此定位在抗體之可及位點處且可用於使抗體結合於其他部分(諸如藥物部分或連接子-藥物部分)以產生免疫結合物，如本文進一步所述。在某些實施例中，任一或多個以下殘基可經半胱胺酸取代：輕鏈之V205(Kabat編號)；重鏈之A118(EU編號)；及重鏈Fc區之S400(EU編號)。可如例如美國專利第7,521,541號中所述來產生半胱胺酸工程改造抗體。
e)抗體衍生物
在某些實施例中，本文提供之抗體可經進一步修飾以含有此項技術中已知且容易獲得之其他非蛋白質部分。適於使抗體衍生化之部分包括但不限於水溶性聚合物。水溶性聚合物之非限制性實例包括但不限於聚乙二醇(PEG)、乙二醇/丙二醇之共聚物、羧甲基纖維素、葡聚糖、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯啶酮、聚-1,3-二氧雜環戊烷、聚-1,3,6-三噁烷、乙烯/順丁烯 二酸酐共聚物、聚胺基酸(均聚物或無規共聚物)、及葡聚糖或聚(n-乙烯基吡咯啶酮)聚乙二醇、聚丙二醇均聚物、聚環氧丙烷/環氧乙烷共聚物、聚氧乙基化多元醇(例如甘油)、聚乙烯醇及其混合物。聚乙二醇丙醛由於其在水中之穩定性而可具有製造優勢。該聚合物可具有任何分子量，且可分支或未分支。連接於抗體之聚合物之數目可變化，且若連接一個以上聚合物，則其可為相同或不同分子。一般而言，用於衍生化之聚合物之數目及/或類型可基於包括但不限於欲改良之抗體之特定性質或功能、抗體衍生物是否將在確定條件下用於療法中等考慮因素加以確定。
在另一實施例中，提供抗體與可藉由曝露於輻射而選擇性加熱之非蛋白質部分的結合物。在一個實施例中，非蛋白質部分為碳奈米管(Kam等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 102：11600-11605(2005))。輻射可具有任何波長，且包括但不限於不損害普通細胞但會將非蛋白質部分加熱至鄰近於抗體-非蛋白質部分之細胞被殺死之溫度的波長。
B.重組方法及組合物
可使用例如如美國專利第4,816,567號中所述之重組方法及組合物來產生抗體。在一個實施例中，提供編碼本文所述之抗FcRH5抗體之經分離核酸。此核酸可編碼包含抗體之VL之胺基酸序列及/或包含抗體之VH之胺基酸序列(例如抗體之輕鏈及/或重鏈)。在另一實施例中，提供一或多種包含此核酸之載體(例如表現載體)。在另一實施例中，提供一種包含此核酸之宿主細胞。在一個此實施例中，宿主細胞包含(例如已用以下轉型)：(1)包含編碼包含抗體之VL之胺基酸序列及包含抗體之VH之胺基酸序列的核酸之載體，或(2)包含編碼包含抗體之VL之胺基酸序列的核酸之第一載體及包含編碼包含抗體之VH之胺基酸序列的核酸之第二載體。在一個實施例中，宿主細胞為真核的，例如中國倉鼠卵巢(CHO)細胞或淋巴樣細胞(例如Y0、NS0、Sp20細胞)。在一個實施例中，提供一種製備抗FcRH5抗體之方法，其中該方法包含在適於表現該抗體之條件下培養如以上提供之包含編碼該抗體之核酸的宿主細胞，及視情況自該宿主細胞(或宿主細胞培養基)回收該抗體。
對於重組產生抗FcRH5抗體，分離編碼例如如上所述之抗 體之核酸且將其插入一或多種載體中以用於進一步在宿主細胞中選殖及/或表現。此核酸可易於使用習知程序(例如藉由使用能夠特異性結合編碼抗體之重鏈及輕鏈之基因之寡核苷酸探針)進行分離及定序。
適於選殖或表現抗體編碼性載體之宿主細胞包括本文所述之原核或真核細胞。舉例而言，抗體可在細菌中產生，特定言之當不需要糖基化及Fc效應功能時。對於抗體片段及多肽在細菌中之表現，參見例如美國專利第5,648,237號、第5,789,199號及第5,840,523號。(亦參見Charlton,Methods in Molecular Biology,第248卷(B.K.C.Lo編,Humana Press,Totowa,NJ,2003),第245-254頁，描述抗體片段在大腸桿菌中之表現。)在表現之後，抗體可自細菌細胞糊狀物分離於可溶性部分中且可進一步純化。
除原核生物之外，諸如絲狀真菌或酵母之真核微生物亦為適於抗體編碼性載體之選殖或表現寄主，包括糖基化路徑已經「人類化」，從而產生具有部分或完全人類糖基化型態之抗體之真菌及酵母菌株。參見Gerngross,Nat.Biotech.22：1409-1414(2004)；及Li等人,Nat.Biotech.24：210-215(2006)。
適於表現糖基化抗體之宿主細胞亦源於多細胞生物體(無脊椎動物及脊椎動物)。無脊椎動物細胞之實例包括植物及昆蟲細胞。已識別眾多可連同昆蟲細胞一起使用之桿狀病毒株，尤其用於轉染草地黏蟲(Spodoptera frugiperda)細胞。
植物細胞培養物亦可用作寄主。參見例如美國專利第5,959,177號、第6,040,498號、第6,420,548號、第7,125,978號及第6,417,429號(描述用於在轉殖基因植物中產生抗體之PLANTIBODIESTM技術)。
脊椎動物細胞亦可用作寄主。舉例而言，適合於懸浮生長之哺乳動物細胞株可為適用的。適用哺乳動物宿主細胞株之其他實例為經SV40轉型之猴腎CV1細胞株(COS-7)；人類胚腎細胞株(如例如Graham等人,J.Gen Virol.36：59(1977)中所述之293或293細胞)；幼小倉鼠腎細胞(BHK)；小鼠賽托利細胞(sertoli cell)(如例如Mather,Biol.Reprod.23：243-251(1980)中所述之TM4細胞)；猴腎細胞(CV1)；非洲綠猴腎細胞(VERO-76)；人類子宮頸癌細胞(HELA)；犬腎細胞(MDCK；布法羅大鼠(buffalo rat)肝細 胞(BRL 3A)；人類肺細胞(W138)；人類肝細胞(Hep G2)；小鼠乳腺腫瘤(MMT 060562)；如例如Mather等人,Annals N.Y.Acad.Sci.383：44-68(1982)中所述之TRI細胞；MRC5細胞；及FS4細胞。其他適用哺乳動物宿主細胞株包括中國倉鼠卵巢(CHO)細胞，包括DHFR-CHO細胞(Urlaub等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77：4216(1980))；及骨髓瘤細胞株，諸如Y0、NS0及Sp2/0。對於適於抗體製造之某些哺乳動物宿主細胞株之評述，參見例如Yazaki及Wu,Methods in Molecular Biology,第248卷(B.K.C.Lo編,Humana Press,Totowa,NJ),第255-268頁(2003)。
C.分析
可藉由此項技術中已知之各種分析來識別、篩檢或表徵本文提供之抗FcRH5抗體之物理/化學性質及/或生物活性。
在一個態樣中，可例如藉由已知方法，諸如ELISA、BIACore®、FACS或西方墨點法(Western blot)來測試本文提供之抗體之抗原結合活性。
在另一態樣中，競爭分析可用於識別與本文所述之任何抗體競爭結合FcRH5之抗體。在某些實施例中，該種競爭性抗體結合由本文所述之抗體所結合之同一抗原決定基(例如線性或構形抗原決定基)。定位抗體所結合之抗原決定基之詳述示範性方法提供於Morris(1996)「Epitope Mapping Protocols,」Methods in Molecular Biology第66卷(Humana Press,Totowa,NJ)中。
在一示範性競爭分析中，在包含結合FcRH5之第一經標記抗體(例如本文所述之任何抗體)及要測試與第一抗體競爭結合FcRH5之能力之第二未標記抗體的溶液中培育經固定FcRH5。第二抗體可存在於融合瘤上清液中。作為對照，在包含第一經標記抗體而無第二未標記抗體之溶液中培育經固定FcRH5。在容許第一抗體結合FcRH5之條件下培育之後，移除過量未結合抗體，且量測與經固定FcRH5締合之標記之量。若相對於對照樣品，與經固定FcRH5締合之標記之量在測試樣品中實質上降低，則指示第二抗體與第一抗體競爭結合FcRH5。參見Harlow及Lane(1988)Antibodies：A Laboratory Manual第14章(Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor,NY)。在一些實施例中，FcRH5為FcRH5c。在一些實施例中，抗FcRH5抗體結合FcRH5c之細胞外域之同功異型物c特異性區域。在一些實施例中，抗FcRH5抗體結合FcRH5c之Ig樣域9。
D.免疫結合物
本文亦提供包含結合於一或多種細胞毒性劑之本文抗FcRH5抗體之免疫結合物，該等細胞毒性劑為諸如化學治療劑或藥物、生長抑制劑、毒素(例如蛋白質毒素；細菌、真菌、植物或動物來源之酶活性毒素；或其片段)或放射性同位素(亦即放射性結合物)。在一些實施例中，抗FcRH5抗體結合FcRH5c之細胞外域之同功異型物c特異性區域。在一些實施例中，抗FcRH5抗體結合FcRH5c之Ig樣域9。
免疫結合物允許藥物部分靶向傳遞至腫瘤，且在一些實施例中，允許在腫瘤中細胞內累積，其中全身性投與未結合藥物可對正常細胞造成不可接受程度之毒性(Polakis P.(2005)Current Opinion in Pharmacology 5：382-387)。
抗體-藥物結合物(ADC)因使有效細胞毒性藥物靶向抗原表現性腫瘤細胞(Teicher,B.A.(2009)Current Cancer Drug Targets 9：982-1004)，藉此藉由使功效增至最大且使脫靶毒性降至最低來增強治療指數(Carter,P.J.及Senter P.D.(2008)The Cancer Jour.14(3)：154-169；Chari,R.V.(2008)Acc.Chem.Res.41：98-107)而為組合抗體與細胞毒性藥物兩者之性質之靶向化學治療分子。
本文提供之ADC化合物包括具有抗癌活性之化合物。在一些實施例中，ADC化合物包括結合(亦即共價連接)於藥物部分之抗體。在一些實施例中，抗體經由連接子共價連接於藥物部分。本文提供之抗體-藥物結合物(ADC)將有效劑量之藥物選擇性傳遞至腫瘤組織，藉此可達成較高選擇性(亦即較低有效劑量)，同時增加治療指數(「治療窗」)。
抗體-藥物結合物(ADC)之藥物部分(D)可包括具有細胞毒性或細胞抑制作用之任何化合物、部分或基團。藥物部分可藉由包括但不限於微管蛋白結合、DNA結合或插入、及抑制RNA聚合酶、蛋白質合成及/或拓撲異構酶(topoisomerase)之機制來賦予其細胞毒性及細胞抑制效應。示 範性藥物部分包括但不限於美登木素、多拉司他汀(dolastatin)、奧里斯他汀、卡奇黴素、吡咯并苯并二氮呯(PBD)、奈莫柔比星及其衍生物、PNU-159682、蒽環黴素(anthracycline)、倍癌黴素(duocarmycin)、長春花生物鹼、紫杉烷(taxane)、新月毒素(trichothecene)、CC1065、喜樹鹼(camptothecin)、依利奈法德(elinafide)及其具有細胞毒性活性之立體異構物、電子等排體、類似物及衍生物。以下進一步詳細論述此等免疫結合物之非限制性實例。
1.示範性抗體-藥物結合物
抗體-藥物結合物(ADC)化合物之一示範性實施例包含靶向腫瘤細胞之抗體(Ab)、藥物部分(D)、及使Ab連接於D之連接子部分(L)。在一些實施例中，抗體經由一或多個胺基酸殘基(諸如離胺酸及/或半胱胺酸)連接於連接子部分(L)。
一示範性ADC具有式I：Ab-(L-D)p I
其中p為1至約20。在一些實施例中，可結合於抗體之藥物部分之數目受限於遊離半胱胺酸殘基之數目。在一些實施例中，藉由本文所述之方法將遊離半胱胺酸殘基引入抗體胺基酸序列中。示範性式I之ADC包括但不限於具有1、2、3或4個工程改造半胱胺酸胺基酸之抗體(Lyon,R.等人(2012)Methods in Enzym.502：123-138)。在一些實施例中，一或多個遊離半胱胺酸殘基在不使用工程改造下已存在於抗體中，在該情況下，現存遊離半胱胺酸殘基可用於使抗體結合於藥物。在一些實施例中，使抗體暴露於還原條件，隨後進行抗體結合以產生一或多個遊離半胱胺酸殘基。在一些實施例中，抗FcRH5抗體結合FcRH5c之細胞外域之同功異型物c特異性區域。在一些實施例中，抗FcRH5抗體結合FcRH5c之Ig樣域9。
a)示範性連接子
「連接子」(L)為可用於使一或多個藥物部分(D)連接於抗體(Ab)以形成式I抗體-藥物結合物(ADC)之雙官能或多官能部分。在一些實施例中，可使用具有可供共價連接於藥物及抗體之反應性官能基之連接子來製備抗體-藥物結合物(ADC)。舉例而言，在一些實施例中，抗體(Ab)之半 胱胺酸硫醇可與連接子或藥物-連接子中間物之反應性官能基形成鍵以製備ADC。
在一個態樣中，連接子具有能夠與存在於抗體上之遊離半胱胺酸反應以形成共價鍵之官能基。非限制性示範性此等反應性官能基包括順丁烯二醯亞胺、鹵基乙醯胺、α-鹵基乙醯基、活化酯(諸如丁二醯亞胺酯、4-硝基苯酯、五氟苯酯、四氟苯酯)、酸酐、酸氯化物、磺醯氯、異氰酸酯及異硫氰酸酯。參見例如Klussman等人(2004),Bioconjugate Chemistry 15(4)：765-773之第766頁之結合方法及本文中之實例。
在一些實施例中，連接子具有能夠與存在於抗體上之親電子基團反應之官能基。示範性此等親電子基團包括但不限於醛及酮羰基。在一些實施例中，連接子之反應性官能基之雜原子可與抗體上之親電子基團反應且與抗體單元形成共價鍵。非限制性示範性此等反應性官能基包括但不限於醯肼、肟、胺基、肼、硫縮胺基脲、肼羧酸酯及芳基醯肼。
連接子可包含一或多種連接子組分。示範性連接子組分包括6-順丁烯二醯亞胺基己醯基(「MC」)、順丁烯二醯亞胺基丙醯基(「MP」)、纈胺酸-瓜胺酸(「val-cit」或「vc」)、丙胺酸-苯丙胺酸(「ala-phe」)、對胺基苯甲基氧基羰基(「PAB」)、N-丁二醯亞胺基4-(2-吡啶基硫基)戊酸酯(「SPP」)及4-(N-順丁烯二醯亞胺基甲基)環己烷-1甲酸酯(「MCC」)。各種連接子組分在此項技術中為已知的，其中一些在以下描述。
連接子可為有助於釋放藥物之「可裂解連接子」。非限制性示範性可裂解連接子包括酸不穩定連接子(例如包含腙)、蛋白酶敏感性(例如肽酶敏感性)連接子、光不穩定連接子或含有二硫化物之連接子(Chari等人,Cancer Research 52：127-131(1992)；US 5208020)。
在某些實施例中，連接子具有下式II：-Aa-Ww-Yy- II
其中A為「延伸子單元」，且a為整數0至1；W為「胺基酸單元」，且w為整數0至12；Y為「間隔子單元」，且y為0、1或2。包含式II連接子之ADC具有式I(A)：Ab-(Aa-Ww-Yy-D)p，其中Ab、D及p係如上對 於式I所定義。此等連接子之示範性實施例描述於美國專利第7,498,298號中，該專利以引用的方式明確併入本文中。
在一些實施例中，連接子組分包含使抗體連接於另一連接子 組分或藥物部分之「延伸子單元」(A)。以下展示非限制性示範性延伸子單元(其中波形線指示與抗體、藥物或其他連接子組分共價連接之位點)：
在一些實施例中，連接子組分包含「胺基酸單元」(W)。在一些此等實施例中，胺基酸單元允許連接子由蛋白酶裂解，藉此有助於在暴露於細胞內蛋白酶(諸如溶酶體酶)時自免疫結合物釋放藥物(Doronina等人(2003)Nat.Biotechnol.21：778-784)。示範性胺基酸單元包括但不限於二肽、三肽、四肽及五肽。示範性二肽包括但不限於纈胺酸-瓜胺酸(vc或val-cit)、丙胺酸-苯丙胺酸(af或ala-phe)；苯丙胺酸-離胺酸(fk或phe-lys)；苯丙胺酸-高離胺酸(phe-homolys)；及N-甲基-纈胺酸-瓜胺酸(Me-val-cit)。示範性三肽包括但不限於甘胺酸-纈胺酸-瓜胺酸(gly-val-cit)及甘胺酸-甘胺酸-甘胺酸(gly-gly-gly)。胺基酸單元可包含天然存在之胺基酸殘基及/或次要胺基酸及/或非天然存在之胺基酸類似物，諸如瓜胺酸。胺基酸單元可針對由特定酶(例如腫瘤相關蛋白酶、組織蛋白酶B、C及D、或纖維蛋白溶酶(plasmin)蛋白酶)酶促裂解進行設計及最佳化。
通常，肽型連接子可藉由在兩個或兩個以上胺基酸及/或肽 片段之間形成肽鍵來製備。此等肽鍵可例如根據液相合成方法製備(例如E.Schröder及K.Lübke(1965)「The Peptides」,第1卷,第76-136頁,Academic Press)。
在一些實施例中，連接子組分包含使抗體直接或經由延伸子單元及/或胺基酸單元連接於藥物部分之「間隔子單元(Y)」。間隔子單元可為「自我分解型」或「非自我分解型」。「非自我分解型」間隔子單元為間隔子單元之一部分或全部在ADC裂解後仍然保持結合於藥物部分之間隔子單元。非自我分解型間隔子單元之實例包括但不限於甘胺酸間隔子單元及甘胺酸-甘胺酸間隔子單元。在一些實施例中，腫瘤細胞相關蛋白酶酶促裂解含有甘胺酸-甘胺酸間隔子單元之ADC會導致甘胺酸-甘胺酸-藥物部分自ADC之其餘部分釋放。在一些此等實施例中，甘胺酸-甘胺酸-藥物部分在腫瘤細胞中經受水解步驟，由此自藥物部分裂解甘胺酸-甘胺酸間隔子單元。
「自我分解型」間隔子單元允許釋放藥物部分。在某些實施例中，連接子之間隔子單元包含對胺基苯甲基單元。在一些此等實施例中，對胺基苯甲醇經由醯胺鍵連接於胺基酸單元，且在苯甲醇與藥物之間形成胺基甲酸酯、胺基甲酸甲酯或碳酸酯(Hamann等人(2005)Expert Opin.Ther.Patents(2005)15：1087-1103)。在一些實施例中，間隔子單元包含對胺基苯甲基氧基羰基(PAB)。在一些實施例中，包含自我分解型連接子之ADC具有結構：
其中Q為-C1-C8烷基、-O-(C1-C8烷基)、-鹵素、-硝基或-氰基；m為在0至4之範圍內之整數；X可為一或多個其他間隔子單元或可不存在；且p在1至約20之範圍內。在一些實施例中，p在1至10、1至7、1至5、或1至4之範圍內。非限制性示範性X間隔子單元包括： 及；其中R1及R2係獨立地選自H 及C1-C6烷基。在一些實施例中，R1及R2各自為-CH3。
自我分解型間隔子之其他實例包括但不限於在電子方面與PAB基團類似之芳族化合物，諸如2-胺基咪唑-5-甲醇衍生物(美國專利第7,375,078號；Hay等人(1999)Bioorg.Med.Chem.Lett.9：2237)及鄰胺基苯甲基縮醛或對胺基苯甲基縮醛。在一些實施例中，可使用在醯胺鍵水解時經歷環化之間隔子，諸如經取代及未經取代之4-胺基丁酸醯胺(Rodrigues等人(1995)Chemistry Biology 2：223)、經適當取代之雙環[2.2.1]及雙環[2.2.2]環系統(Storm等人(1972)J.Amer.Chem.Soc.94：5815)及2-胺基苯基丙酸醯胺(Amsberry等人(1990)J.Org.Chem.55：5867)。藥物與甘胺酸殘基之α-碳之鍵聯為可適用於ADC中之自我分解型間隔子之另一實例(Kingsbury等人(1984)J.Med.Chem.27：1447)。
在一些實施例中，連接子L可為用於經由分支多官能連接 子部分使一個以上藥物部分共價連接於抗體之樹枝型連接子(Sun等人(2002)Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 12：2213-2215；Sun等人(2003)Bioorganic & Medicinal Chemistry 11：1761-1768)。樹枝狀連接子可增加藥物與抗體之莫耳比，亦即裝載量，此與ADC之效能相關。因此，當抗體僅攜帶一個反應性半胱胺酸硫醇基時，眾多藥物部分可經由樹枝狀連接子進行連接。
非限制性示範性連接子在下文展示在式I之ADC之上下文中：
；其中R1及R2係獨立地選自H及C1-C6烷基。在一些實施例中，R1及R2各自為-CH3。
Phe-高Lys-PAB-Ab；其中n為0至12。在一些實施例中，n為2至10。在一些實施例中，n為4至8。
其他非限制性示範性ADC包括結構： 其中X為： Y為： 各R獨立地為H或C1-C6烷基；且n為1至12。
在一些實施例中，連接子係經調節溶解性及/或反應性之基團取代。作為一非限制性實例，諸如磺酸酯基(-SO3 -)或銨之帶電荷取代基可增加連接子試劑之水溶性且有助於連接子試劑與抗體及/或藥物部分之偶合反應，或有助於Ab-L(抗體-連接子中間物)與D、或D-L(藥物-連接子中間物)與Ab之偶合反應，視用於製備ADC之合成途徑而定。在一些實施例中，連接子之一部分偶合於抗體且連接子之一部分偶合於藥物，且接著使Ab-(連接子部分)a偶合於藥物-(連接子部分)b以形成式I之ADC。
本文提供之化合物明確涵蓋但不限於用以下連接子試劑製 備之ADC：雙-順丁烯二醯亞胺基-三氧基乙二醇(BMPEO)、N-(β-順丁烯二醯亞胺基丙基氧基)-N-羥基丁二醯亞胺酯(BMPS)、N-(ε-順丁烯二醯亞胺基己醯基氧基)丁二醯亞胺酯(EMCS)、N-[γ-順丁烯二醯亞胺基丁醯基氧基]丁二醯亞胺酯(GMBS)、1,6-己烷-雙-乙烯基碸(HBVS)、丁二醯亞胺基4-(N-順丁烯二醯亞胺基甲基)環己烷-1-羧基-(6-醯胺基己酸酯)(LC-SMCC)、間順丁烯二醯亞胺基苯甲醯基-N-羥基丁二醯亞胺酯(MBS)、4-(4-N-順丁烯二醯亞胺基苯基)丁酸醯肼(MPBH)、3-(溴乙醯胺基)丙酸丁二醯亞胺基酯(SBAP)、碘乙酸丁二醯亞胺基酯(SIA)、(4-碘乙醯基)胺基苯甲酸丁二醯亞胺基酯(SIAB)、N-丁二醯亞胺基-3-(2-吡啶基二硫基)丙酸酯(SPDP)、N-丁二醯亞胺基-4-(2-吡啶基硫基)戊酸酯(SPP)、4-(N-順丁烯二醯亞胺基甲基)環己烷-1-甲酸丁二醯亞胺基酯(SMCC)、4-(對順丁烯二醯亞胺基苯基)丁酸丁二醯亞胺基酯(SMPB)、6-[(β-順丁烯二醯亞胺基丙醯胺基)己酸]丁二醯亞胺基酯(SMPH)、亞胺基硫雑環戊烷(IT)、磺酸基-EMCS、磺酸基-GMBS、磺酸基-KMUS、磺酸基-MBS、磺酸基-SIAB、磺酸基-SMCC及磺酸基-SMPB及丁二醯亞胺基-(4-乙烯基碸)苯甲酸酯(SVSB)，且包括雙-順丁烯二醯亞胺試劑：二硫基雙順丁烯二醯亞胺基乙烷(DTME)、1,4-雙順丁烯二醯亞胺基丁烷(BMB)、1,4-雙順丁烯二醯亞胺基-2,3-二羥基丁烷(BMDB)、雙順丁烯二醯亞胺基己烷(BMH)、雙順丁烯二醯亞胺基乙烷(BMOE)、BM(PEG)2(以下展示)及BM(PEG)3(以下展示)；亞胺基酯之雙官能衍生物(諸如二亞胺代己二酸二甲酯鹽酸鹽)、活性酯(諸如辛二酸二丁二醯亞胺基酯)、醛(諸如戊二醛)、雙-疊氮基化合物(諸如雙(對疊氮基苯甲醯基)己烷二胺)、雙-重氮衍生物(諸如雙-(對重氮苯甲醯基)-伸乙基二胺)、二異氰酸酯(諸如甲苯2,6-二異氰酸酯)及雙活性氟化合物(諸如1,5-二氟-2,4-二硝基苯)。在一些實施例中，雙-順丁烯二醯亞胺試劑允許抗體中之半胱胺酸之硫醇基連接於含硫醇藥物部分、連接子或連接子-藥物中間物。可與硫醇基反應之其他官能基包括但不限於碘乙醯胺、溴乙醯胺、乙烯基吡啶、二硫化物、吡啶基二硫化物、異氰酸酯及異硫氰酸酯。
某些適用連接子試劑可自各種商業來源，諸如Pierce Biotechnology公司(Rockford,IL)、Molecular Biosciences公司(Boulder,CO)獲得，或可根據此項技術中(例如Toki等人(2002)J.Org.Chem.67：1866-1872；Dubowchik等人(1997)Tetrahedron Letters,38：5257-60；Walker,M.A.(1995)J.Org.Chem.60：5352-5355；Frisch等人(1996)Bioconjugate Chem.7：180-186；US 6214345；WO 02/088172；US 2003130189；US2003096743；WO 03/026577；WO 03/043583；及WO 04/032828)中所述之程序合成。
碳-14-標記之1-異硫氰酸酯基苯甲基-3-甲基二伸乙基三胺五乙酸(MX-DTPA)為一種用於使放射性核苷酸結合於抗體之示範性螯合劑。參見例如WO94/11026。
b)藥物部分
(1)美登素(Maytansine)及美登木素
在一些實施例中，免疫結合物包含結合於一或多個美登木素分子之抗體。美登木素為美登素之衍生物，且為藉由抑制微管蛋白聚合而起作用之有絲分裂抑制劑。美登素最初自東非灌木齒葉美登木(Maytenus serrata)分離(美國專利第3896111號)。隨後，發現某些微生物亦產生美登木素，諸如美登醇及C-3美登醇酯(美國專利第4,151,042號)。合成美登木素例如揭示於美國專利第4,137,230號；第4,248,870號；第4,256,746號；第4,260,608號；第4,265,814號；第4,294,757號；第4,307,016號；第4,308,268號；第4,308,269號；第4,309,428號；第4,313,946號；第4,315,929號；第4,317,821號；第4,322,348號；第4,331,598號；第4,361,650號；第4,364,866號；第4,424,219號；第4,450,254號；第4,362,663號；及第4,371,533號中。
美登木素藥物部分為抗體-藥物結合物中之有吸引力之藥物 部分，因為其：(i)相對容易藉由發酵或化學修飾或衍生化發酵產物來製備得到，(ii)易受適用於經由非二硫化物連接子結合於抗體之官能基衍生化，(iii)在血漿中穩定，及(iv)對多種腫瘤細胞株有效。
適用作美登木素藥物部分之某些美登木素在此項技術中為已知的且可根據已知方法自天然來源分離或使用遺傳工程改造技術產生(參見例如Yu等人,(2002)PNAS 99：7968-7973)。美登木素亦可根據已知方法合成製備。
美登木素藥物部分包括但不限於具有諸如以下之經修飾芳環的美登木素藥物部分：C-19-去氯(美國專利第4256746號)(例如藉由用氫化鋰鋁還原安絲菌素(ansamytocin)P2來製備)；C-20-羥基(或C-20-去甲基)+/-C-19-去氯(美國專利第4361650號及第4307016號)(例如藉由使用鏈黴菌(Streptomyces)或放線菌(Actinomyces)進行去甲基化或使用LAH進行去氯來製備)；及C-20-去甲氧基、C-20-醯氧基(-OCOR)、+/-去氯(美國專利第4,294,757號)(例如藉由使用醯氯化物進行醯化來製備)以及在芳環之其他位置處具有修飾者。
美登木素藥物部分亦包括具有諸如以下之修飾的美登木素藥物部分：C-9-SH(美國專利第4424219號)(例如藉由使美登醇與H2S或P2S5反應來製備)；C-14-烴氧基甲基(去甲氧基/CH2OR)(US 4331598)；C-14-羥甲基或醯氧基甲基(CH2OH或CH2OAc)(美國專利第4450254號)(例如自土壤絲菌(Nocardia)製備)；C-15-羥基/醯氧基(US 4364866)(例如藉由鏈黴菌使美登醇轉化來製備)；C-15-甲氧基(美國專利第4313946號及第4315929號)(例如自滑桃樹(Trewia nudlflora)分離)；C-18-N-去甲基(美國專利第4362663號及第4322348號)(例如藉由用鏈黴菌對美登醇進行去甲基化來製備)；及4,5-去氧(US 4371533)(例如藉由用三氯化鈦/LAH還原美登醇來製備)。
美登木素化合物上之許多位置適用作鍵聯位置。舉例而言，可藉由使用習知偶合技術與羥基反應來形成酯鍵。在一些實施例中，反應可發生在具有羥基之C-3位置、經羥甲基修飾之C-14位置、經羥基修飾之C-15位置及具有羥基之C-20位置處。在一些實施例中，在美登醇或美登醇類似物之C-3位置處形成鍵聯。
美登木素藥物部分包括具有以下結構者：
其中波形線指示美登木素藥物部分之硫原子與ADC之連接子的共價連接。各R可獨立地為H或C1-C6烷基。使醯胺基連接於硫原子之伸烷基鏈可為甲烷基、乙烷基或丙基，亦即m為1、2或3(US 633410；US 5208020；Chari等人,(1992)Cancer Res.52：127-131；Liu等人,(1996)Proc.Natl.Acad.Sci USA 93：8618-8623)。
美登木素藥物部分之所有立體異構物皆預期用於本文提供之ADC，亦即在對掌性碳處R及S組態之任何組合(US 7276497；US 6913748；US 6441163；US 633410(RE39151)；US 5208020；Widdison等人,(2006)J.Med.Chem.49：4392-4408，其以全文引用的方式併入本文中)。在一些實施例中，美登木素藥物部分具有以下立體化學：
美登木素藥物部分之示範性實施例包括但不限於具有以下結構之DM1；DM3；及DM4：
其中波形線指示藥物之硫原子與抗體-藥物結合物之連接子(L)的共價連接。
其他示範性美登木素抗體-藥物結合物具有以下結構及縮寫(其中Ab為抗體且p為1至約20。在一些實施例中，p為1至10，p為1至7，p為1至5，或p為1至4)：
DM1經由BMPEO連接子連接於抗體之硫醇基之示範性抗體-藥物結合物具有以下結構及縮寫：
其中Ab為抗體；n為0、1或2；且p為1至約20。在一些實施例中，p為1至10，p為1至7，p為1至5，或p為1至4。
含有美登木素之免疫結合物、其製備方法及其治療用途例如 揭示於美國專利第5,208,020號及第5,416,064號；US 2005/0276812 A1；及歐洲專利EP 0 425 235 B1中，該等專利之揭示內容以引用的方式明確併入本文中。亦參見Liu等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 93：8618-8623(1996)；及Chari等人,Cancer Research 52：127-131(1992)。
在一些實施例中，抗體-美登木素結合物可藉由使抗體化學連接於美登木素分子而不顯著削弱抗體或美登木素分子之生物活性來製備。參見例如美國專利第5,208,020號(其揭示內容以引用的方式明確併入本文中)。在一些實施例中，每個抗體分子結合有平均3-4個美登木素分子之ADC在增強對靶細胞之細胞毒性方面已顯示出功效而不負面影響抗體之功能或溶解性。在一些情況下，甚至每個抗體分子一個毒素分子預期亦會使細胞毒性增強超過使用裸抗體。
用於製備抗體-美登木素結合物之連接基團包括例如本文所述者及以下文獻中所揭示者：美國專利第5208020號；歐洲專利0 425 235 B1；Chari等人,Cancer Research 52：127-131(1992)；US 2005/0276812 A1；及US 2005/016993 A1，該等文獻之揭示內容以引用的方式明確併入本文中。
(2)奧里斯他汀及多拉司他汀
藥物部分包括多拉司他汀、奧里斯他汀及其類似物及衍生物(US 5635483；US 5780588；US 5767237；US 6124431)。奧里斯他汀為海洋軟體動物化合物多拉司他汀-10之衍生物。儘管不意欲受任何特定理論束縛，但多拉司他汀及奧里斯他汀已經顯示會干擾微管動力學、GTP水解以及核及細胞分裂(Woyke等人,(2001)Antimicrob.Agents and Chemother.45(12)：3580-3584)且具有抗癌(US 5663149)及抗真菌活性(Pettit等人,(1998)Antimicrob.Agents Chemother.42：2961-2965)。多拉司他汀/奧里斯他汀藥物部分可經由肽藥物部分之N(胺基)端或C(羧基)端連接於抗體(WO 02/088172；Doronina等人,(2003)Nature Biotechnology 21(7)：778-784；Francisco等人,(2003)Blood 102(4)：1458-1465)。
示範性奧里斯他汀實施例包括US 7498298及US 7659241中揭示之N端連接型單甲基奧里斯他汀藥物部分DE及DF，該等專利之揭示內容以全文引用的方式明確併入本文中：
其中DE及DF之波形線指示與抗體或抗體-連接子組分共價連接之位點，且獨立地在各位置處：R2係選自H及C1-C8烷基；R3係選自H、C1-C8烷基、G3-C8碳環、芳基、C1-C8烷基-芳基、C1-C8烷基-(C3-C8碳環)、C3-C8雜環及C1-C8烷基-(C3-C8雜環)；R4係選自H、C1-C8烷基、C3-C8碳環、芳基、C1-C8烷基-芳基、C1-C8烷基-(C3-C8碳環)、C3-C8雜環及C1-C8烷基-(C3-C8雜環)；R5係選自H及甲基；或R4與R5共同形成碳環且具有式-(CRaRb)n-，其中Ra及Rb係獨立地選自H、C1-C8烷基及C3-C8碳環且n係選自2、3、4、5及6；R6係選自H及C1-C8烷基；R7係選自H、C1-C8烷基、C3-C8碳環、芳基、C1-C8烷基-芳基、C1-C8烷基-(C3-C8碳環)、C3-C8雜環及C1-C8烷基-(C3-C8雜環)；各R8係獨立地選自H、OH、C1-C8烷基、C3-C8碳環及O-(C1-C8烷基)；R9係選自H及C1-C8烷基；R10係選自芳基或C3-C8雜環；Z為O、S、NH或NR12，其中R12為C1-C8烷基；R11係選自H、C1-C20烷基、芳基、C3-C8雜環、-(R13O)m-R14或-(R13O)m-CH(R15)2；m為1-1000範圍內之整數；R13為C2-C8烷基；R14為H或C1-C8烷基； R15在每次出現時皆獨立地為H、COOH、-(CH2)n-N(R16)2、-(CH2)n-SO3H或-(CH2)n-SO3-C1-C8烷基；R16在每次出現時皆獨立地為H、C1-C8烷基或-(CH2)n-COOH；R18係選自-C(R8)2-C(R8)2-芳基、-C(R8)2-C(R8)2-(C3-C8雜環)及-C(R8)2-C(R8)2-(C3-C8碳環)；且n為0至6範圍內之整數。
在一個實施例中，R3、R4及R7獨立地為異丙基或第二丁基且R5為-H或甲基。在一示範性實施例中，R3及R4各自為異丙基，R5為-H，且R7為第二丁基。
在另一實施例中，R2及R6各自為甲基，且R9為-H。
在另一實施例中，R8在每次出現時皆為-OCH3。
在一些實施例中，R3及R4各自為異丙基，R2及R6各自為甲基，R5為-H，R7為第二丁基，R8在每次出現時皆為-OCH3，且R9為-H。
在一個實施例中，Z為-O-或-NH-。
在一個實施例中，R10為芳基。
在一示範性實施例中，R10為-苯基。
在一示範性實施例中，當Z為-O-時，R11為-H、甲基或第三丁基。
在一個實施例中，當Z為-NH時，R11為-CH(R15)2，其中R15為-(CH2)n-N(R16)2，且R16為-C1-C8烷基或-(CH2)n-COOH。
在另一實施例中，當Z為-NH時，R11為-CH(R15)2，其中R15為-(CH2)n-SO3H。
具有式DE之一示範性奧里斯他汀實施例為MMAE，其中波形線指示與抗體-藥物結合物之連接子(L)之共價連接：
具有式DF之一示範性奧里斯他汀實施例為MMAF，其中波形線指示與抗體-藥物結合物之連接子(L)之共價連接：
其他示範性實施例包括在五肽奧里斯他汀藥物部分之C端處具有苯丙胺酸羧基修飾之單甲基纈胺酸化合物(WO 2007/008848)及在五肽奧里斯他汀藥物部分之C端處具有苯丙胺酸側鏈修飾之單甲基纈胺酸化合物(WO 2007/008603)。
包含MMAE或MMAF及各種連接子組分之式I之ADC之非限制性示範性實施例具有以下結構及縮寫(其中「Ab」為抗體；p為1至約8，「Val-Cit」為纈胺酸-瓜胺酸二肽；且「S」為硫原子)：
包含MMAF及各種連接子組分之式I之ADC之非限制性示範性實施例進一步包括Ab-MC-PAB-MMAF及Ab-PAB-MMAF。包含藉由不可蛋白水解裂解之連接子連接於抗體之MMAF的免疫結合物已經顯示具有與包含藉由可蛋白水解裂解之連接子連接於抗體之MMAF之免疫結合物 類似的活性(Doronina等人,(2006)Bioconjugate Chem.17：114-124)。在一些此等實施例中，咸信藉由抗體在細胞中之降解來實現藥物釋放。
通常，基於肽之藥物部分可藉由在兩個或兩個以上胺基酸及/或肽片段之間形成肽鍵來製備。此等肽鍵可例如根據液相合成法製備(參見例如E.Schröder及K.Lübke,「The Peptides」,第1卷,第76-136頁,1965,Academic Press)。在一些實施例中，奧里斯他汀/多拉司他汀藥物部分可根據以下之方法製備：US 7498298；US 5635483；US 5780588；Pettit等人,(1989)J.Am.Chem.Soc.111：5463-5465；Pettit等人,(1998)Anti-Cancer Drug Design 13：243-277；Pettit,G.R.等人,Synthesis,1996,719-725；Pettit等人,(1996)J.Chem.Soc.Perkin Trans.1 5：859-863；及Doronina(2003)Nat.Biotechnol.21(7)：778-784。
在一些實施例中，具有式DE之奧里斯他汀/多拉司他汀藥物部分(諸如MMAE)及具有式DF之奧里斯他汀/多拉司他汀藥物部分(諸如MMAF)及其藥物-連接子中間物及衍生物(諸如MC-MMAF、MC-MMAE、MC-vc-PAB-MMAF及MC-vc-PAB-MMAE)可使用以下文獻中所述之方法製備且接著結合於相關抗體：US 7498298；Doronina等人,(2006)Bioconjugate Chem.17：114-124；及Doronina等人,(2003)Nat.Biotech.21：778-784。
(3)卡奇黴素
在一些實施例中，免疫結合物包含結合於一或多個卡奇黴素分子之抗體。卡奇黴素家族之抗生素及其類似物能夠在低於皮莫耳濃度下引起雙股DNA斷裂(Hinman等人,(1993)Cancer Research 53：3336-3342；Lode等人,(1998)Cancer Research 58：2925-2928)。卡奇黴素具有細胞內作用位點，但在某些情況下不易於跨越質膜。因此，在一些實施例中，此等藥劑經由抗體介導之內化達成之細胞攝取可極大增強其細胞毒性作用。製備具有卡奇黴素藥物部分之抗體-藥物結合物之非限制性示範性方法例如描述於US 5712374；US 5714586；US 5739116；及US 5767285中。
(4)吡咯并苯并二氮呯
在一些實施例中，ADC包含吡咯并苯并二氮呯(PBD)。在一 些實施例中，PDB二聚體識別且結合於特定DNA序列。天然產物安麯黴素(anthramycin)(一種PBD)最初在1965年得到報導(Leimgruber等人,(1965)J.Am.Chem.Soc.,87：5793-5795；Leimgruber等人,(1965)J.Am.Chem.Soc.,87：5791-5793)。從此，許多天然存在之PBD及PBD類似物已得到報導(Thurston等人,(1994)Chem.Rev.1994,433-465)，包括三環PBD骨架之二聚體(US 6884799；US 7049311；US 7067511；US 7265105；US 7511032；US 7528126；US 7557099)。在不意欲受任何特定理論束縛下，咸信二聚體結構會賦予適當之三維形狀以與B型DNA之小溝具等螺旋性(isohelicity)，從而在結合位點處引起適貼配合(Kohn,Antibiotics III.Springer-Verlag,New York,第3-11頁(1975)；Hurley及Needham-VanDevanter,(1986)Acc.Chem.Res.,19：230-237)。攜帶C2芳基取代基之二聚PBD化合物已經顯示適用作細胞毒性劑(Hartley等人,(2010)Cancer Res.70(17)：6849-6858；Antonow(2010)J.Med.Chem.53(7)：2927-2941；Howard等人,(2009)Bioorganic and Med.Chem.Letters 19(22)：6463-6466)。
已使PBD二聚體結合於抗體且所得ADC經顯示具有抗癌性質。PBD二聚體上之非限制性示範性鍵聯位點包括五員吡咯并環、PBD單元之間的系鏈及N10-C11亞胺基團(WO 2009/016516；US 2009/304710；US 2010/047257；US 2009/036431；US 2011/0256157；WO 2011/130598)。
ADC之非限制性示範性PBD二聚體組分具有式A：
以及其鹽及溶劑合物，其中：波形線指示與連接子共價連接之位點；點線指示視情況在C1與C2或C2與C3之間存在雙鍵；R2係獨立地選自H、OH、=O、=CH2、CN、R、OR、=CH-RD、=C(RD)2、O-SO2-R、CO2R及COR，且視情況進一步選自鹵基或二鹵基，其中RD係獨立地選自R、CO2R、COR、CHO、CO2H及鹵基； R6及R9係獨立地選自H、R、OH、OR、SH、SR、NH2、NHR、NRR'、NO2、Me3Sn及鹵基；R7係獨立地選自H、R、OH、OR、SH、SR、NH2、NHR、NRR'、NO2、Me3Sn及鹵基；Q係獨立地選自O、S及NH；R11為H或R，或其中Q為O、SO3M，其中M為金屬陽離子；R及R'係各自獨立地選自視情況經取代之C1-8烷基、C1-12烷基、C3-8雜環基、C3-20雜環及C5-20芳基，且視情況對於基團NRR'，R及R'連同其所連接之氮原子一起形成視情況經取代之4員、5員、6員或7員雜環；R12、R16、R19及R17分別係如對於R2、R6、R9及R7所定義；R"為C3-12伸烷基，該鏈可間雜有一或多個雜原子(例如O、S、N(H)、NMe)及/或芳環(例如苯或吡啶)，該等環視情況經取代；且X及X'係獨立地選自O、S及N(H)。
在一些實施例中，R及R'係各自獨立地選自視情況經取代之C1-12烷基、C3-20雜環及C5-20芳基，且視情況對於基團NRR'，R及R'連同其所連接之氮原子一起形成視情況經取代之4員、5員、6員或7員雜環。
在一些實施例中，R9及R19為H。
在一些實施例中，R6及R16為H。
在一些實施例中，R7及R17均為OR7A，其中R7A為視情況經取代之C1-4烷基。在一些實施例中，R7A為Me。在一些實施例中，R7A為Ch2Ph，其中Ph為苯基。
在一些實施例中，X為O。
在一些實施例中，R11為H。
在一些實施例中，在各單體單元中之C2與C3之間存在雙鍵。
在一些實施例中，R2及R12係獨立地選自H及R。在一些實施例中，R2及R12獨立地為R。在一些實施例中，R2及R12獨立地為視情況經取代之C5-20芳基或C5-7芳基或C8-10芳基。在一些實施例中，R2及R12獨立地為視情況經取代之苯基、噻吩基、萘基、吡啶基、喹啉基或異喹啉基。 在一些實施例中，R2及R12係獨立地選自=O、=CH2、=CH-RD及=C(RD)2。在一些實施例中，R2及R12各自為=CH2。在一些實施例中，R2及R12各自為H。在一些實施例中，R2及R12各自為=O。在一些實施例中，R2及R12各自為=CF2。在一些實施例中，R2及/或R12獨立地為=C(RD)2。在一些實施例中，R2及/或R12獨立地為=CH-RD。
在一些實施例中，當R2及/或R12為=CH-RD時，各基團可獨立地具有以下所示之任一組態：
在一些實施例中，=CH-RD係呈組態(I)。
在一些實施例中，R"為C3伸烷基或C5伸烷基。
在一些實施例中，ADC之示範性PBD二聚體組分具有式A(I)之結構： 其中n為0或1。
在一些實施例中，ADC之示範性PBD二聚體組分具有式A(II)之結構： 其中n為0或1。
在一些實施例中，ADC之示範性PBD二聚體組分具有式A(III)之結構： 其中RE及RE"係各自獨立地選自H或RD，其中RD係如上所定義；且其中n為0或1。
在一些實施例中，n為0。在一些實施例中，n為1。在一些實施例中，RE及/或RE"為H。在一些實施例中，RE及RE"為H。在一些實施例中，RE及/或RE"為RD，其中RD為視情況經取代之C1-12烷基。在一些實施例中，RE及/或RE"為RD，其中RD為甲基。
在一些實施例中，ADC之示範性PBD二聚體組分具有式A(IV)之結構： 其中Ar1及Ar2各自獨立地為視情況經取代之C5-20芳基；其中Ar1與Ar2可相同或不同；且其中n為0或1。
在一些實施例中，ADC之示範性PBD二聚體組分具有式A(V)之結構： 其中Ar1及Ar2各自獨立地為視情況經取代之C5-20芳基；其中Ar1與Ar2可相同或不同；且其中n為0或1。
在一些實施例中，Ar1及Ar2係各自獨立地選自視情況經取代之苯基、呋喃基、噻吩基及吡啶基。在一些實施例中，Ar1及Ar2各自獨 立地為視情況經取代之苯基。在一些實施例中，Ar1及Ar2各自獨立地為視情況經取代之噻吩-2-基或噻吩-3-基。在一些實施例中，Ar1及Ar2各自獨立地為視情況經取代之喹啉基或異喹啉基。喹啉基或異喹啉基可經由任何可用環位置結合於PBD核心。舉例而言，喹啉基可為喹啉-2-基、喹啉-3-基、喹啉-4-基、喹啉-5-基、喹啉-6-基、喹啉-7-基及喹啉-8-基。在一些實施例中，喹啉基係選自喹啉-3-基及喹啉-6-基。異喹啉基可為異喹啉-1-基、異喹啉-3-基、異喹啉-4-基、異喹啉-5-基、異喹啉-6-基、異喹啉-7-基及異喹啉-8-基。在一些實施例中，異喹啉基係選自異喹啉-3-基及異喹啉-6-基。
ADC之其他非限制性示範性PBD二聚體組分具有式B：
以及其鹽及溶劑合物，其中：波形線指示與連接子共價連接之位點；連接於OH之波形線指示S或R組態；RV1及RV2係獨立地選自H、甲基、乙基及苯基(該苯基可視情況經氟基取代，特定言之在4位上經取代)及C5-6雜環基；其中RV1與RV2可相同或不同；且n為0或1。
在一些實施例中，RV1及RV2係獨立地選自H、苯基及4-氟苯基。
在一些實施例中，連接子可連接在PBD二聚體藥物部分之各個位點中之一者上，包括B環之N10亞胺、C環之C-2內向/外向位或連接A環之系鏈單元(參見以下結構C(I)及C(II))。
ADC之非限制性示範性PBD二聚體組分包括式C(I)及C(II)：
式C(I)及C(II)係以其N10-C11亞胺形式顯示。示範性PBD藥物部分亦包括甲醇胺以及經保護之甲醇胺形式，如下表中所示：
其中：X為CH2(n=1至5)、N或O；Z及Z'係獨立地選自OR及NR2，其中R為含有1至5個碳原子之一級、二級或三級烷基鏈；R1、R'1、R2及R'2係各自獨立地選自H、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C5-20芳基(包括經取代之芳基)、C5-20雜芳基、-NH2、-NHMe、-OH及-SH，其中，在一些實施例中，烷基、烯基及炔基鏈包含至多5個碳原子；R3及R'3係獨立地選自H、OR、NHR及NR2，其中R為含有1至5個碳原子之一級、二級或三級烷基鏈；R4及R'4係獨立地選自H、Me及OMe；R5係選自C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C5-20芳基(包括經鹵基、硝基、氰基、烴氧基、烷基、雜環基取代之芳基)及C5-20雜芳基，其中，在一些實施例中，烷基、烯基及炔基鏈包含至多5個碳原子；R11為H、C1-C8烷基或保護基(諸如乙醯基、三氟乙醯基、第三丁氧基羰基(BOC)、苯甲基氧基羰基(CBZ)、9-茀基亞甲基氧基羰基(Fmoc)或包含自我分解性單元之部分，諸如纈胺酸-瓜胺酸-PAB)；R12為H、C1-C8烷基或保護基； 其中R1、R'1、R2、R'2或R12中之一者之氫或A環之間的-OCH2CH2(X)nCH2CH2O-間隔子之氫經連接於ADC之連接子的鍵置換。
ADC之示範性PDB二聚體部分包括但不限於(波形線指示與連接子共價連接之位點)：PBD二聚體；包含PBD二聚體之ADC之非限制性示範性實施例具有以下結構：
PBD二聚體-val-cit-PAB-Ab；
PBD二聚體-順丁烯二醯亞胺-縮醛-Ab；
PBD二聚體-Phe-高Lys-PAB-Ab，其中：n為0至12。在一些實施例中，n為2至10。在一些實施例中，n為4至8。在一些實施例中，n係選自4、5、6、7及8。
PBD二聚體-val-cit-PAB-Ab及PBD二聚體-Phe-高Lys-PAB-Ab之連接子可為蛋白酶所裂解，而PBD二聚體-順丁烯二醯亞胺-縮醛之連接子具有酸不穩定性。
PBD二聚體及包含PBD二聚體之ADC可根據此項技術中已知之方法製備。參見例如WO 2009/016516；US 2009/304710；US 2010/047257；US 2009/036431；US 2011/0256157；WO 2011/130598。
(5)蒽環黴素
在一些實施例中，ADC包含蒽環黴素。蒽環黴素為展現細胞毒性活性之抗生素化合物。儘管不意欲受任何特定理論束縛，但研究已指示蒽環黴素可藉由許多不同機制起作用來殺死細胞，該等機制包括：1)藥物分子嵌入細胞之DNA中，藉此抑制DNA依賴性核酸合成；2)藉由藥物產生自由基，該等自由基接著與細胞巨分子反應以對細胞造成破壞，及/或3)藥物分子與細胞膜相互作用(參見例如C.Peterson等人,「Transport And Storage Of Anthracycline In Experimental Systems And Human Leukemia」,Anthracycline Antibiotics In Cancer Therapy；N.R.Bachur,「Free Radical Damage」(同上),在第97-102頁)。由於蒽環黴素之細胞毒性潛力，其已用於治療眾多癌症，諸如白血病、乳癌、肺癌、卵巢腺癌及肉瘤(參見例如P.H-Wiernik,Anthracycline：Current Status And New Developments,第11頁)。
非限制性示範性蒽環黴素包括小紅莓、表柔比星(epirubicin)、伊達比星(idarubicin)、柔紅黴素(daunomycin)、奈莫柔比星及其衍生物。已製備並研究道諾黴素及小紅莓之免疫結合物及前藥(Kratz等人,(2006)Current Med.Chem.13：477-523；Jeffrey等人,(2006)Bioorganic & Med.Chem.Letters 16：358-362；Torgov等人,(2005)Bioconj.Chem.16：717-721；Nagy等人,(2000)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 97：829-834；Dubowchik等人,(2002)Bioorg.& Med.Chem.Letters 12：1529-1532；King等人,(2002)J.Med.Chem.45：4336-4343；EP 0328147；US 6630579)。抗體-藥物結合物BR96-小紅莓與腫瘤相關抗原Lewis-Y特異性反應且已在I期及II期研究中進行評估(Saleh等人,(2000)J.Clin.Oncology 18：2282-2292；Ajani等人,(2000)Cancer Jour.6：78-81；Tolcher等人,(1999)J.Clin.Oncology 17：478-484)。
PNU-159682為奈莫柔比星之一種有效代謝物(或衍生物)(Quintieri等人,(2005)Clinical Cancer Research 11(4)：1608-1617)。奈莫柔比星為小紅莓之一種在小紅莓之糖苷胺基上具有2-甲氧基(N-嗎啉基)之半合成類似物且已處於臨床評估中(Grandi等人,(1990)Cancer Treat.Rev.17：133；Ripamonti等人,(1992)Brit.J.Cancer 65：703)，包括針對肝細胞癌之II/III期試驗(Sun等人,(2003)Proceedings of the American Society for Clinical Oncology 22,Abs1448；Quintieri(2003)Proceedings of the American Association of Cancer Research,44：第1版,Abs 4649；Pacciarini等人,(2006)Jour.Clin.Oncology 24：14116)。
包含奈莫柔比星或奈莫柔比星衍生物之非限制性示範性ADC顯示於式Ia中：
其中R1為氫原子、羥基或甲氧基且R2為C1-C5烴氧基；或其醫藥學上可接受之鹽；L1及Z一起為如本文所述之連接子(L)；T為如本文所述之抗體(Ab)；且m為1至約20。在一些實施例中，m為1至10、1至7、1至5或1至4。
在一些實施例中，R1及R2均為甲氧基(-OMe)。
另一包含奈莫柔比星或奈莫柔比星衍生物之非限制性示範性ADC顯示於式Ib中：
其中R1為氫原子、羥基或甲氧基且R2為C1-C5烴氧基；或其醫藥學上可接受之鹽；L2及Z一起為如本文所述之連接子(L)；T為如本文所述之抗體(Ab)；且m為1至約20。在一些實施例中，m為1至10、1至7、1至5或1至4。
在一些實施例中，R1及R2均為甲氧基(-OMe)。
在一些實施例中，含奈莫柔比星ADC之奈莫柔比星組分為PNU-159682。在一些此等實施例中，ADC之藥物部分可具有以下結構中之一者： 其中波形線指示與連接子(L)之連接。
包括PNU-159682之蒽環黴素可經由若干鍵聯位點及包括本文所述之連接子之多種連接子(US 2011/0076287；WO2009/099741；US 2010/0034837；WO 2010/009124)結合於抗體。
包含奈莫柔比星及連接子之示範性ADC包括但不限於：
PNU-159682-順丁烯二醯亞胺縮醛-Ab；
PNU-159682-val-cit-PAB-Ab；
PNU-159682-val-cit-PAB-間隔子-Ab；
PNU-159682-val-cit-PAB-間隔子(R1R2)-Ab，其中：R1及R2係獨立地選自H及C1-C6烷基；以及
PNU-159682-順丁烯二醯亞胺-Ab。
PNU-159682-順丁烯二醯亞胺縮醛-Ab之連接子具有酸不穩定性，而PNU-159682-val-cit-PAB-Ab、PNU-159682-val-cit-PAB-間隔子-Ab及PNU-159682-val-cit-PAB-間隔子(R1R2)-Ab之連接子可為蛋白酶所裂解。
(6)其他藥物部分
藥物部分亦包括格爾德黴素(geldanamycin)(Mandler等人,(2000)J.Nat.Cancer Inst.92(19)：1573-1581；Mandler等人,(2000)Bioorganic & Med.Chem.Letters 10：1025-1028；Mandler等人,(2002)Bioconjugate Chem.13：786-791)；及酶活性毒素及其片段，包括但不限於白喉(diphtheria)A鏈、白喉毒素之非結合活性片段、外毒素(exotoxin)A鏈(來自綠膿桿菌(Pseudomonas aeruginosa))、篦麻毒素(ricin)A鏈、相思子毒素(abrin)A鏈、莫迪素(modeccin)A鏈、α-帚麴菌素(alpha-sarcin)、油桐(Aleurites fordii)蛋白質、康乃馨(dianthin)蛋白質、美洲商陸(Phytolaca americana)蛋白質(PAPI、PAPII及PAP-S)、苦瓜(momordica charantia)抑制劑、麻瘋樹毒蛋白(curcin)、巴豆毒素(crotin)、肥皂草(sapaonaria officinalis)抑制劑、白樹素(gelonin)、有絲分裂素(mitogellin)、局限麴菌素(restrictocin)、酚黴素(phenomycin)、伊諾黴素(enomycin)及黴菌毒素(tricothecenes)。參見例如WO 93/21232。
藥物部分亦包括具有核分解活性之化合物(例如核糖核酸酶或DNA核酸內切酶)。
在某些實施例中，免疫結合物可包含高度放射性原子。多種放射性同位素可用於產生放射性結合抗體。實例包括At211、I131、I125、Y90、 Re186、Re188、Sm153、Bi212、P32、Pb212及Lu之放射性同位素。在一些實施例中，當使用免疫結合物進行偵測時，其可包含用於閃爍攝影研究之放射性原子，例如Tc99或I123；或用於核磁共振(NMR)成像(亦稱為磁共振成像，MRI)之自旋標記，諸如鋯-89、碘-123、碘-131、銦-111、氟-19、碳-13、氮-15、氧-17、釓、錳或鐵。鋯-89可與各種金屬螯合劑錯合且結合於抗體例如以用於PET成像(WO 2011/056983)。
放射性標記或其他標記可以已知方式併入免疫結合物中。舉例而言，肽可生物合成或使用包含例如一或多個氟-19原子以替代一或多個氫之適合胺基酸前驅體加以化學合成。在一些實施例中，諸如Tc99、I123、Re186、Re188及In111之標記可經由抗體中之半胱胺酸殘基加以連接。在一些實施例中，釔-90可經由抗體之離胺酸殘基加以連接。在一些實施例中，可使用IODOGEN法(Fraker等人,(1978)Biochem.Biophys.Res.Commun.80：49-57)併入碘-123。「Monoclonal Antibodies in Immunoscintigraphy」(Chatal,CRC Press 1989)描述某些其他方法。
在某些實施例中，免疫結合物可包含結合於前藥活化酶之抗體。在一些此等實施例中，前藥活化酶將前藥(例如肽基化學治療劑，參見WO 81/01145)轉化成活性藥物，諸如抗癌藥物。在一些實施例中，此等免疫結合物適用於抗體依賴性酶介導之前藥療法(「ADEPT」)中。可結合於抗體之酶包括但不限於鹼性磷酸酶，其適用於將含磷酸酯前藥轉化成遊離藥物；芳基硫酸酯酶，其適用於將含硫酸酯前藥轉化成遊離藥物；胞嘧啶去胺酶，其適用於將無毒5-氟胞嘧啶轉化成抗癌藥物5-氟尿嘧啶；蛋白酶，諸如沙雷氏菌(serratia)蛋白酶、嗜熱菌蛋白酶(thermolysin)、枯草桿菌蛋白酶(subtilisin)、羧基肽酶及組織蛋白酶(諸如組織蛋白酶B及L)，其適用於將含肽前藥轉化成遊離藥物；D-丙胺醯基羧基肽酶，其適用於轉化含有D-胺基酸取代基之前藥；碳水化合物裂解酶，諸如β-半乳糖苷酶及神經胺糖酸苷酶，其適用於將糖基化前藥轉化成遊離藥物；β-內醯胺酶，其適用於將經β-內醯胺衍生化之藥物轉化成遊離藥物；及青黴素(penicillin)醯胺酶，諸如青黴素V醯胺酶及青黴素G醯胺酶，其適用於將在胺氮處分別經苯氧乙醯基或苯基乙醯基衍生化之藥物轉化成遊離藥物。在一些實施例中，可藉 由此項技術中熟知之重組DNA技術使酶共價結合於抗體。參見例如Neuberger等人,Nature 312：604-608(1984)。
c)藥物負載量
藥物負載量由p表示，即式I分子中每個抗體所對應之藥物部分之平均數目。藥物負載量可在每個抗體1至20個藥物部分(D)之範圍內。式I之ADC包括結合有一定範圍(1至20個)之藥物部分之抗體的集合。由結合反應獲得之ADC製備物中每個抗體所對應之藥物部分之平均數目可藉由諸如質譜、ELISA分析及HPLC之習知方式來表徵。亦可測定用p表示之ADC的定量分佈。在一些情況下，可藉由諸如逆相HPLC或電泳之方式自具有其他藥物負載量之ADC分離、純化及表徵p為某一值之均質ADC。
對於一些抗體-藥物結合物，p可受限於抗體上連接位點之數目。舉例而言，當連接物為如以上某些示範性實施例中之半胱胺酸硫醇時，抗體可僅具有一個或具有若干個半胱胺酸硫醇基，或可僅具有一個或具有若干個可藉以連接連接子之具有足夠反應性之硫醇基。在某些實施例中，較高藥物負載量(例如p>5)可導致某些抗體-藥物結合物聚集、不溶、毒性或細胞滲透性喪失。在某些實施例中，ADC之平均藥物負載量在1至約8；約2至約6；或約3至約5之範圍內。實際上，已顯示對於某些ADC，最佳藥物部分/抗體比率可小於8，且可為約2至約5(US 7498298)。
在某些實施例中，使少於理論最大值之藥物部分在結合反應期間結合於抗體。抗體可含有例如不與藥物-連接子中間物或連接子試劑反應之離胺酸殘基，如下文所論述。一般而言，抗體並非含有許多可連接於藥物部分之遊離及反應性半胱胺酸硫醇基；實際上，抗體中之大多數半胱胺酸硫醇殘基以二硫橋鍵形式存在。在某些實施例中，可用諸如二硫蘇糖醇(DTT)或三羰基乙基膦(TCEP)之還原劑，在部分或完全還原條件下還原抗體，以產生反應性半胱胺酸硫醇基。在某些實施例中，使抗體經受變性條件以暴露反應性親核基團，諸如離胺酸或半胱胺酸。
ADC之負載量(藥物/抗體比率)可以不同方式加以控制，且例如藉由以下來控制：(i)限制藥物-連接子中間物或連接子試劑相對於抗體之莫耳過量，(ii)限制結合反應時間或溫度，及(iii)部分或完全限制用於半胱 胺酸硫醇修飾之還原性條件。
應瞭解當一個以上親核基團與藥物-連接子中間物或連接子試劑反應時，則所得產物為分佈有一或多個連接於抗體之藥物部分之ADC化合物的混合物。每個抗體所對應之藥物之平均數目可藉由對抗體具有特異性且對藥物具有特異性之雙重ELISA抗體分析自混合物計算。可藉由質譜識別混合物中之個別ADC分子且藉由HPLC(例如疏水性相互作用層析)分離(參見例如McDonagh等人,(2006)Prot.Engr.Design & Selection 19(7)：299-307；Hamblett等人,(2004)Clin.Cancer Res.10：7063-7070；Hamblett,K.J.等人,「Effect of drug loading on the pharmacology,pharmacokinetics,and toxicity of an anti-CD30 antibody-drug conjugate」,摘要第624號,American Association for Cancer Research,2004 Annual Meeting,2004年3月27-31日,Proceedings of the AACR,第45卷,2004年3月；Alley,S.C.等人,「Controlling the location of drug attachment in antibody-drug conjugates」,摘要第627號,American Association for Cancer Research,2004Annual Meeting,2004年3月27-31日,Proceedings of the AACR,第45卷,2004年3月)。在某些實施例中，具有單一負載量值之均質ADC可藉由電泳或層析自結合混合物中分離。
d)某些製備免疫結合物之方法
式I之ADC可採用熟習此項技術者已知之有機化學反應、條件及試劑，藉由多種途徑製備，包括：(1)使抗體之親核基團與二價連接子試劑反應以經由共價鍵形成Ab-L，隨後與藥物部分D反應；及(2)使藥物部分之親核基團與二價連接子試劑反應以經由共價鍵形成D-L，隨後與抗體之親核基團反應。經由後一途徑製備式I之ADC之示範性方法描述於US 7498298中，該專利以引用的方式明確併入本文中。
抗體上之親核基團包括但不限於：(i)N端胺基，(ii)側鏈胺基，例如離胺酸，(iii)側鏈硫醇基，例如半胱胺酸，及(iv)糖羥基或胺基(在抗體經糖基化的情況下)。胺基、硫醇基及羥基具有親核性且能夠與包括以下之連接子部分及連接子試劑上之親電子基團反應形成共價鍵：(i)活性酯，諸如NHS酯、HOBt酯、鹵代甲酸酯及酸鹵化物；(ii)烷基及苯甲基鹵 化物，諸如鹵乙醯胺；及(iii)醛、酮、羧基及順丁烯二醯亞胺基團。某些抗體具有可還原鏈間二硫化物，亦即半胱胺酸橋。可藉由用諸如DTT(二硫蘇糖醇)或三羰基乙基膦(TCEP)之還原劑處理以使抗體完全或部分還原來使抗體具有與連接子試劑結合之反應性。各半胱胺酸橋因此將在理論上形成兩個反應性硫醇親核體。其他親核基團可經由例如藉由使離胺酸殘基與2-亞胺基硫雑環戊烷(特勞特氏試劑(Traut's reagent))反應，從而使得胺轉化成硫醇以修飾離胺酸殘基而引入抗體中。反應性硫醇基亦可藉由引入一個、兩個、三個、四個或四個以上半胱胺酸殘基來引入抗體中(例如藉由製備包含一或多個非天然半胱胺酸胺基酸殘基之變異抗體來達成)。
本文提供之抗體-藥物結合物亦可藉由抗體上之親電子基團(諸如醛或酮羰基)與連接子試劑或藥物上之親核基團之間的反應來產生。連接子試劑上之適用親核基團包括但不限於醯肼、肟、胺基、肼、硫半卡腙、肼羧酸酯及芳基醯肼。在一個實施例中，抗體經修飾以引入能夠與連接子試劑或藥物上之親核取代基反應之親電子部分。在另一實施例中，糖基化抗體之糖可例如用過碘酸鹽氧化試劑氧化以形成可與連接子試劑或藥物部分之胺基反應之醛基或酮基。所得亞胺希夫鹼(Schiff base)基團可形成穩定鍵聯，或可例如藉由硼氫化物試劑還原以形成穩定胺鍵聯。在一個實施例中，使糖基化抗體之碳水化合物部分與半乳糖氧化酶或偏過碘酸鈉反應可在抗體中產生可與藥物上之適當基團反應之羰基(醛及酮)(Hermanson,Bioconjugate Techniques)。在另一實施例中，可使含有N端絲胺酸或酥胺酸殘基之抗體與偏過碘酸鈉反應，從而產生醛而非第一胺基酸(Geoghegan及Stroh,(1992)Bioconjugate Chem.3：138-146；US 5362852)。可使該種醛與藥物部分或連接子親核體反應。
藥物部分上之示範性親核基團包括但不限於：胺、硫醇、羥基、醯肼、肟、肼、硫半卡腙、肼羧酸酯及芳基醯肼基團，其能夠與包括以下之連接子部分及連接子試劑上之親電子基團反應形成共價鍵：(i)活性酯，諸如NHS酯、HOBt酯、鹵代甲酸酯及酸鹵化物；(ii)烷基及苯甲基鹵化物，諸如鹵乙醯胺；(iii)醛、酮、羧基及順丁烯二醯亞胺基團。
可用於製備ADC之非限制性示範性交叉連接子試劑在本文 中描述於標題為「示範性連接子」之部分中。使用此等交叉連接子試劑來連接兩個部分(包括蛋白質部分及化學部分)之方法在此項技術中為已知的。在一些實施例中，可例如藉由重組技術或肽合成來製備包含抗體及細胞毒性劑之融合蛋白。重組DNA分子可包含編碼結合物之抗體及細胞毒性部分之區域，該等區域彼此鄰近或由編碼不破壞結合物之所需性質之連接子肽的區域分開。
在另一實施例中，抗體可結合於「受體」(諸如抗生蛋白鏈菌素(streptavidin))以用於腫瘤預靶向中，其中向患者投與抗體-受體結合物，隨後使用清除劑自循環中移除未結合之結合物且接著投與結合於細胞毒性劑(例如藥物或放射性核苷酸)之「配體」(例如抗生蛋白)。
E.用於診斷及偵測之方法及組合物
在某些實施例中，本文提供之任何抗FcRH5抗體皆適用於偵測FcRH5(例如FcRH5)在生物樣品中之存在。如本文所用之術語「偵測」涵蓋定量或定性偵測。在某些實施例中，生物樣品包含細胞或組織。在某些實施例中，此等組織包括正常組織及/或相對於其他組織在較高含量下表現FcRH5之癌性組織，例如B細胞及/或B細胞相關組織。在一些實施例中，抗FcRH5抗體結合FcRH5c之細胞外域之同功異型物c特異性區域。在一些實施例中，抗FcRH5抗體結合FcRH5c之Ig樣域9。
在一個態樣中，本文提供偵測FcRH5在生物樣品中之存在之方法。在某些實施例中，方法包含使生物樣品與抗FcRH5抗體在容許該抗FcRH5抗體結合FcRH5之條件下接觸，及偵測在該抗FcRH5抗體與FcRH5之間是否形成複合物。在一個態樣中，本發明提供一種診斷與FcRH5表現增加相關之病症之方法。在某些實施例中，方法包含使測試細胞與抗FcRH5抗體接觸；藉由偵測該抗FcRH5抗體與FcRH5之結合來測定該測試細胞之FcRH5表現量(定量或定性)；及比較該測試細胞之FcRH5表現量與對照細胞(例如與該測試細胞具有相同組織來源之正常細胞或在與該種正常細胞類似之含量下表現FcRH5之細胞)之FcRH5表現量，其中相較於該對照細胞，該測試細胞之FcRH5表現量較高指示存在與FcRH5表現增加相關之病症。在某些實施例中，測試細胞係自懷疑患有與FcRH5表現增加相 關之病症之個體獲得。在某些實施例中，病症為細胞增生性病症，諸如癌症或腫瘤。在一些實施例中，FcRH5為FcRH5c。在一些實施例中，抗FcRH5抗體結合FcRH5c之細胞外域之同功異型物c特異性區域。在一些實施例中，抗FcRH5抗體結合FcRH5c之Ig樣域9。
可使用本文所述之抗體診斷之示範性細胞增生性病症包括B細胞病症及/或B細胞增生性病症，包括但不限於淋巴瘤、多發性骨髓瘤非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)、侵襲性NHL、復發侵襲性NHL、復發無痛NHL、難治NHL、難治無痛NHL、慢性淋巴細胞性白血病(CLL)、小淋巴細胞性淋巴瘤、白血病、毛細胞白血病(HCL)、急性淋巴細胞性白血病(ALL)及套膜細胞淋巴瘤。
在一個實施例中，提供一種用於診斷或偵測方法中之抗FcRH5抗體。在另一態樣中，提供一種偵測FcRH5在生物樣品中之存在之方法。在某些實施例中，方法包含使生物樣品與如本文所述之抗FcRH5抗體在容許該抗FcRH5抗體結合FcRH5之條件下接觸，及偵測在該抗FcRH5抗體與該生物樣品中之FcRH5之間是否形成複合物。此方法可為活體外或活體內方法。在一個實施例中，抗FcRH5抗體用於選擇適於用抗FcRH5抗體進行之療法之受試者，例如當FcRH5為用於選擇患者之生物標記時。在另一實施例中，生物樣品為細胞或組織(例如生檢材料)。在一些實施例中，抗FcRH5抗體結合FcRH5c之細胞外域之同功異型物c特異性區域。在一些實施例中，抗FcRH5抗體結合FcRH5c之Ig樣域9。
在另一實施例中，例如出於對癌症進行診斷、預測或分級；確定適當療程；或監測癌症對療法之反應之目的，在活體內使用抗FcRH5抗體例如藉由活體內成像來偵測受試者之FcRH5陽性癌症。此項技術中已知之一種用於活體內偵測之方法為免疫正電子發射斷層攝影術(免疫PET)，如例如van Dongen等人,The Oncologist 12：1379-1389(2007)及Verel等人,J.Nucl.Med.44：1271-1281(2003)中所述。在此等實施例中，提供一種用於偵測受試者之FcRH5陽性癌症之方法，該方法包括向患有或懷疑患有FcRH5陽性癌症之受試者投與經標記抗FcRH5抗體，及偵測該受試者體內之該經標記抗FcRH5抗體，其中偵測到該經標記抗FcRH5抗體指示在該受 試者體內存在FcRH5陽性癌症。在某些此等實施例中，經標記抗FcRH5抗體包含結合於諸如68Ga、18F、64Cu、86Y、76Br、89Zr及124I之正子發射體之抗FcRH5抗體。在一特定實施例中，正子發射體為89Zr。在一些實施例中，抗FcRH5抗體結合FcRH5c之細胞外域之同功異型物c特異性區域。在一些實施例中，抗FcRH5抗體結合FcRH5c之Ig樣域9。
在其他實施例中，診斷或偵測方法包括使固定於基質之第一抗FcRH5抗體與欲測試FcRH5之存在之生物樣品接觸，使該基質暴露於第二抗FcRH5抗體，及偵測該第二抗FcRH5是否結合於該第一抗FcRH5抗體與該生物樣品中之FcRH5之間的複合物。基質可為任何支撐性介質，例如玻璃、金屬、陶瓷、聚合珠粒、載片、晶片及其他基質。在某些實施例中，生物樣品包含細胞、血液或組織(例如生檢材料)。
可根據任何以上實施例診斷或偵測之示範性病症包括FcRH5陽性癌症，諸如FcRH5陽性B細胞增生性疾病、FcRH5陽性漿細胞贅瘤及FcRH5陽性多發性骨髓瘤。在一些實施例中，藉由抗FcRH5免疫組織化學(IHC)或原位雜交(ISH)偵測FcRH5陽性癌症。在一些實施例中，FcRH5陽性癌症為根據偵測FcRH5 mRNA之逆轉錄酶PCR(RT-PCR)分析，表現FcRH5之癌症。在一些實施例中，RT-PCR為定量RT-PCR。
在某些實施例中，提供經標記抗FcRH5抗體。在一些實施例中，抗FcRH5抗體結合FcRH5c之細胞外域之同功異型物c特異性區域。在一些實施例中，抗FcRH5抗體結合FcRH5c之Ig樣域9。標記包括但不限於可直接偵測之標記或部分(諸如螢光標記、發色標記、電子密集標記、化學發光標記及放射性標記)以及例如經由酶促反應或分子相互作用間接偵測之部分，諸如酶或配體。示範性標記包括但不限於放射性同位素32P、14C、125I、3H及131I；螢光團，諸如稀土金屬螯合物或螢光素(fluorescein)及其衍生物；若丹明(rhodamine)及其衍生物；丹醯基；傘形酮(umbelliferone)；螢光素酶，例如螢火蟲螢光素酶及細菌螢光素酶(美國專利第4,737,456號)；螢光素(luciferin)；2,3-二氫酞嗪二酮；辣根過氧化酶(HRP)；鹼性磷酸酶；β-半乳糖苷酶；葡糖澱粉酶；溶菌酶；醣氧化酶，例如葡萄糖氧化酶、半乳糖氧化酶及葡萄糖-6-磷酸去氫酶；雜環氧化酶，諸如尿酸酶(uricase)及黃嘌 呤氧化酶，以及採用過氧化氫來氧化染料前驅體之酶(諸如HRP、乳過氧化酶或微過氧化酶)；生物素/抗生蛋白；自旋標記；噬菌體標記；穩定自由基；及其類似標記。在另一實施例中，標記為正子發射體。正子發射體包括但不限於68Ga、18F、64Cu、86Y、76Br、89Zr及124I。在一特定實施例中，正子發射體為89Zr。
F.醫藥調配物
如本文所述之抗FcRH5抗體或免疫結合物之醫藥調配物係藉由混合具有所需純度之此抗體或免疫結合物與一或多種視情況選用之醫藥學上可接受之載劑(Remington's Pharmaceutical Sciences,第16版,Osol,A.編(1980))而製備成凍乾調配物或水溶液形式。醫藥學上可接受之載劑通常在所用劑量及濃度下對接受者無毒，且包括但不限於：緩衝劑，諸如磷酸鹽、檸檬酸鹽及其他有機酸；抗氧化劑，包括抗壞血酸及甲硫胺酸；防腐劑(諸如氯化十八烷基二甲基苯甲基銨；氯化六羥季銨；氯化苯甲烴銨；苄索氯銨；苯酚、丁醇或苯甲醇；對羥基苯甲酸烴酯，諸如對羥基苯甲酸甲酯或對羥基苯甲酸丙酯；兒茶酚(catechol)；間苯二酚；環己醇；3-戊醇；及間甲酚)；低分子量(少於約10個殘基)多肽；蛋白質，諸如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水性聚合物，諸如聚乙烯吡咯啶酮；胺基酸，諸如甘胺酸、麩醯胺酸、天冬醯胺、組胺酸、精胺酸或離胺酸；單醣、二醣及其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合劑，諸如EDTA；糖，諸如蔗糖、甘露糖醇、海藻糖或山梨糖醇；成鹽相對離子，諸如鈉；金屬錯合物(例如Zn-蛋白質錯合物)；及/或非離子界面活性劑，諸如聚乙二醇(PEG)。本文之示範性醫藥學上可接受之載劑進一步包括間質藥物分散劑，諸如可溶性中性活性玻尿酸酶醣蛋白(sHASEGP)，例如人類可溶性PH-20玻尿酸酶醣蛋白，諸如rHuPH20(HYLENEX®，Baxter International公司)。某些示範性sHASEGP(包括rHuPH20)及使用方法描述於美國專利公開案第2005/0260186號及第2006/0104968號中。在一個態樣中，sHASEGP與一或多種其他葡糖胺聚糖酶，諸如軟骨素酶(chondroitinase)組合。在一些實施例中，抗FcRH5抗體結合FcRH5c之細胞外域之同功異型物c特異性區域。在一些實施例中，抗FcRH5抗體結合FcRH5c之Ig樣域9。
示範性凍乾抗體或免疫結合物調配物描述於美國專利第6,267,958號中。水性抗體或免疫結合物調配物包括美國專利第6,171,586號及WO2006/044908中所述者，後者調配物包括組胺酸-乙酸鹽緩衝劑。
本文之調配物亦可含有一種以上如為所治療之特定適應症所必需之活性成分，較佳為具有不會對彼此產生不利影響之補充活性的活性成分。
可例如藉由凝聚技術或藉由界面聚合將活性成分截留於所製備之微膠囊中，例如分別於膠狀藥物傳遞系統(例如脂質體、白蛋白微球體、微乳液、奈米粒子及奈米膠囊)中或於巨乳液中之羥甲基纖維素或明膠-微膠囊及聚(甲基丙烯酸甲酯)微膠囊。此等技術揭示於Remington's Pharmaceutical Sciences,第16版,Osol,A.編(1980)中。
可製備持續釋放製劑。持續釋放製劑之適合實例包括含有抗體及/或免疫結合物之固體疏水性聚合物之半透性基質，該等基質呈成形物品，例如薄膜或微膠囊形式。
欲用於活體內投藥之調配物通常無菌。可易於例如藉由經無菌過濾膜過濾來達成無菌。
G.治療方法及組合物
本文提供之任何抗FcRH5抗體(例如FcRH5雙特異性抗體)及/或免疫結合物皆可用於方法，例如治療方法中。在一些實施例中，抗FcRH5抗體結合FcRH5c之細胞外域之同功異型物c特異性區域。在一些實施例中，抗FcRH5抗體結合FcRH5c之Ig樣域9。
在一個態樣中，本文提供之抗FcRH5抗體(例如FcRH5雙特異性抗體)及/或免疫結合物用於抑制FcRH5陽性細胞之增殖之方法中，該方法包含在容許該抗FcRH5抗體(例如FcRH5雙特異性抗體)及/或免疫結合物結合該細胞之表面上之FcRH5(例如FcRH5c)的條件下使該細胞暴露於該抗FcRH5抗體(例如FcRH5雙特異性抗體)及/或免疫結合物，藉此抑制該細胞之增殖。在某些實施例中，方法為活體外或活體內方法。在其他實施例中，細胞為B細胞增生性病症。在某些實施例中，細胞增生性病症與FcRH5(例如FcRH5c)之表現及/或活性增加相關。舉例而言，在某些實施例 中，B細胞增生性病症與B細胞之表面上之FcRH5的表現增加相關。在某些實施例中，B細胞增生性病症為腫瘤或癌症。在一些實施例中，B細胞增生性病症為漿細胞贅瘤。在一些實施例中，漿細胞贅瘤為多發性骨髓瘤、漿細胞瘤及/或MGUS。欲用本發明之抗體及/或免疫結合物治療之B細胞增生性病症的實例包括但不限於淋巴瘤、多發性骨髓瘤非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)、侵襲性NHL、復發侵襲性NHL、復發無痛NHL、難治NHL、難治無痛NHL、慢性淋巴細胞性白血病(CLL)、小淋巴細胞性淋巴瘤、白血病、毛細胞白血病(HCL)、急性淋巴細胞性白血病(ALL)及/或套膜細胞淋巴瘤。
可藉由許多方法分析各種生物標記在樣品中之存在，其中許多方法在此項技術中為已知的且由熟練技術人員所瞭解，該等方法包括但不限於免疫組織化學(「IHC」)、西方墨點分析、免疫沈澱、分子結合分析、ELISA、ELIFA、螢光活化細胞分選(「FACS」)、MassARRAY、蛋白質組學、基於血液之定量分析(如例如血清ELISA)、生物化學酶活性分析、原位雜交、南方分析、北方分析、全基因組定序、聚合酶鏈反應(「PCR」)(包括定量即時PCR(「qRT-PCR」))及其他擴增型偵測方法(諸如分支DNA、SISBA、TMA及其類似方法)、RNA-Seq、FISH、微陣列分析、基因表現譜分析及/或基因表現系列分析(「SAGE」)，以及可藉由蛋白質、基因及/或組織陣列分析進行之廣泛多種分析中之任一者。用於評估基因及基因產物狀態之典型方案例如見於Ausubel等人編,1995,Current Protocols In Molecular Biology,第2單元(北方墨點法)、第4單元(南方墨點法)、第15單元(免疫墨點法)及第18單元(PCR分析)中。亦可使用多重免疫分析，諸如可自Rules Based Medicine或Meso Scale Discovery(「MSD」)獲得之免疫分析。
可使用可自Promega(Madison,WI)購得之CellTiter-GloTM發光細胞活力分析來分析在活體外對細胞增殖之抑制作用。彼分析基於對存在之ATP進行定量來測定培養物中之活細胞數，ATP為具有代謝活性之細胞之指示物。參見Crouch等人,(1993)J.Immunol.Meth.160：81-88；美國專利第6602677號。分析可以96孔或384孔形式進行，從而使得可進行自動高通量篩檢(HTS)。參見Cree等人,(1995)AntiCancer Drugs 6：398-404。分析程序涉及向培養細胞中直接添加單一試劑(CellTiter-Glo®試劑)。此會導致 細胞溶解及產生藉由螢光素酶反應所產生之發光信號。發光信號與存在之ATP之量成比例，存在之ATP之量與培養物中存在之活細胞數成正比。資料可由光度計或CCD攝影機成像裝置記錄。發光輸出值係表示為相對光單位(RLU)。
在另一態樣中，提供一種用作藥物之抗FcRH5抗體(例如FcRH5雙特異性抗體)及/或免疫結合物。在其他態樣中，提供一種用於治療方法中之抗FcRH5抗體(例如FcRH5雙特異性抗體)及/或免疫結合物。在某些實施例中，提供一種用於治療FcRH5(例如FcRH5c)陽性癌症之抗FcRH5抗體(例如FcRH5雙特異性抗體)及/或免疫結合物。在某些實施例中，本文提供用於治療患有FcRH5(例如FcRH5c)陽性癌症之個體之方法中的抗FcRH5抗體(包括FcRH5雙特異性抗體)及/或免疫結合物，該方法包括向該個體投與有效量之該抗FcRH5抗體及/或免疫結合物。在一些實施例中，抗FcRH5抗體結合FcRH5c之細胞外域之同功異型物c特異性區域。在一些實施例中，抗FcRH5抗體結合FcRH5c之Ig樣域9。在一個此實施例中，該方法進一步包括向該個體投與有效量之至少一種例如如下所述之其他治療劑。
在另一態樣中，本文提供抗FcRH5抗體(例如FcRH5雙特異性抗體)及/或免疫結合物用於製造或製備藥物之用途。在一個實施例中，該藥物係用於治療FcRH5(例如FcRH5c)陽性癌症。在另一實施例中，該藥物係用於治療FcRH5(例如FcRH5c)陽性癌症之方法中，該方法包括向患有FcRH5(例如FcRH5c)陽性癌症之個體投與有效量之該藥物。在一個此實施例中，該方法進一步包括向該個體投與有效量之至少一種例如如下所述之其他治療劑。在一些實施例中，抗FcRH5抗體結合FcRH5c之細胞外域之同功異型物c特異性區域。在一些實施例中，抗FcRH5抗體結合FcRH5c之Ig樣域9。
在另一態樣中，在另一態樣中，本文提供用於治療FcRH5(例如FcRH5c)陽性癌症之方法。在一個實施例中，該方法包括向患有此FcRH5(例如FcRH5c)陽性癌症之個體投與有效量之抗FcRH5抗體(例如FcRH5雙特異性抗體)及/或免疫結合物。在一個此實施例中，該方法進一步 包括向該個體投與有效量之至少一種如下所述之其他治療劑。在一些實施例中，抗FcRH5抗體結合FcRH5c之細胞外域之同功異型物c特異性區域。在一些實施例中，抗FcRH5抗體結合FcRH5c之Ig樣域9。
根據任何以上實施例之FcRH5陽性癌症可為例如FcRH5陽性B細胞增生性病症、FcRH5陽性漿細胞贅瘤及/或FcRH5陽性多發性骨髓瘤。在一些實施例中，藉由抗FcRH5免疫組織化學(IHC)或原位雜交(ISH)偵測FcRH5陽性癌症。在一些實施例中，FcRH5陽性癌症為根據偵測FcRH5mRNA之逆轉錄酶PCR(RT-PCR)分析，表現FcRH5之癌症。在一些實施例中，RT-PCR為定量RT-PCR。
在任何以上實施例之一些實施例中，個體可為人類。
在另一態樣中，本文提供包含本文提供之任何抗FcRH5抗體及/或免疫結合物之例如用於以上任何治療方法中的醫藥調配物。在一個實施例中，醫藥調配物包含本文提供之任何抗FcRH5抗體(例如雙特異性抗體)及/或免疫結合物及醫藥學上可接受之載劑。在另一實施例中，醫藥調配物包含本文提供之任何抗FcRH5抗體(例如雙特異性抗體)及/或免疫結合物及至少一種例如如下所述之其他治療劑。
本文提供之抗體(例如雙特異性抗體)及/或免疫結合物可單獨或與其他藥劑組合用於療法中。以上所述之此等組合療法涵蓋組合投藥(其中兩種或兩種以上治療劑包括在同一或各別調配物中)，及單獨投藥，在該情況下，可在投與其他治療劑及/或佐劑之前、同時及/或之後投與本文提供之抗體或免疫結合物。本文提供之抗體及/或免疫結合物亦可與放射療法組合使用。
本文提供之抗體(包括雙特異性抗體)及/或免疫結合物(及任何其他治療劑)可藉由任何適合方式投與，包括非經腸、肺內及鼻內投藥，且在需要用於局部治療時，包括病變內投藥。非經腸輸注包括肌肉內、靜脈內、動脈內、腹膜內或皮下投藥。可藉由任何適合途徑進行給藥，例如藉由注射，諸如靜脈內或皮下注射進行給藥，在某種程度上視投藥為短期抑或長期而定。本文涵蓋各種給藥時程，包括但不限於單次投藥或歷經各個時間點多次投藥、快速注射投藥及脈衝輸注。
將以符合優良醫學規範之方式對本文提供之抗體(例如雙特 異性抗體)及/或免疫結合物進行調配、給藥及投藥。在此情形下考慮之因素包括所治療之特定病症、所治療之特定哺乳動物、個別患者之臨床病狀、病症之病因、藥劑傳遞部位、投藥方法、投藥時程及醫學從業者已知之其他因素。抗體(例如雙特異性抗體)及/或免疫結合物無需但視情況與一或多種當前用於預防或治療所述病症之藥劑一起調配。此等其他藥劑之有效量視調配物中存在之抗體或免疫結合物之量、病症或治療類型及以上論述之其他因素而定。此等藥劑係通常以與本文所述相同之劑量及用如本文所述之投藥途徑，或以本文所述劑量之約1%至99%，或以憑經驗/臨床上確定為適當之任何劑量且藉由憑經驗/臨床上確定為適當之任何途徑加以使用。
為預防或治療疾病，本文提供之抗體(例如雙特異性抗體)及/或免疫結合物(當單獨或與一或多種其他額外治療劑組合使用時)之適當劑量將視欲治療疾病之類型、抗體或免疫結合物之類型、疾病之嚴重性及病程、投與抗體(例如雙特異性抗體)及/或免疫結合物係出於預防目的抑或治療目的、先前療法、患者之臨床病史及對抗體或免疫結合物之反應及主治醫師之判斷而定。抗體(例如雙特異性抗體)及/或免疫結合物適合一次性或歷經一系列治療向患者投與。視疾病之類型及嚴重性而定，約1μg/kg至15mg/kg(例如0.1mg/kg-10mg/kg)之抗體或免疫結合物可為用於向患者投與之初始候選劑量，無論是例如藉由一或多次分開投藥，或是藉由連續輸注投藥。視以上提及之因素而定，一種典型日劑量可能在約1μg/kg至100mg/kg或100mg/kg以上之範圍內。對於歷經數天或更長時間之重複投藥，視病狀而定，治療將通常持續直至對疾病症狀產生所需抑制作用為止。抗體(例如雙特異性抗體)及/或免疫結合物之一種示範性劑量將在約0.05mg/kg至約10mg/kg之範圍內。因此，可向患者投與約0.5mg/kg、2.0mg/kg、4.0mg/kg或10mg/kg之一或多種劑量(或其任何組合)。此等劑量可間歇投與，例如每週或每三週一次(例如以使患者接受約兩劑至約二十劑，或例如約六劑抗體)。最初可投與較高之起始劑量，接著可投與一或多種較低劑量。然而，其他給藥方案可能適用。此療法之進展易於藉由習知技術及分析加以監測。
應瞭解任何以上調配物或治療方法皆可使用本文提供之免疫結合物與抗FcRH5抗體兩者進行。在一些實施例中，抗FcRH5抗體結合FcRH5c之細胞外域之同功異型物c特異性區域。在一些實施例中，抗FcRH5抗體結合FcRH5c之Ig樣域9。
H.製品
在本文提供之另一態樣中，提供一種含有適用於治療、預防及/或診斷上述病症之物質的製品。該製品包含容器及在該容器上或與該容器相伴之標籤或藥品說明書。適合容器包括例如瓶、小瓶、注射器、靜脈內溶液袋等。容器可由諸如玻璃或塑膠之多種材料形成。容器容納單獨或與有效治療、預防及/或診斷病症之另一組合物組合之組合物且可具有無菌存取口(例如容器可為具有可由皮下注射針刺穿之塞的靜脈內溶液袋或小瓶)。組合物中之至少一種活性劑為本文提供之抗體或免疫結合物。標籤或藥品說明書指示組合物用於治療所選病狀。此外，該製品可包含(a)含有組合物之第一容器，其中該組合物包含本文提供之FcRH5抗體(例如雙特異性抗體)及/或FcRH5免疫結合物；及(b)含有組合物之第二容器，其中該組合物包含另一細胞毒性劑或其他治療劑。本文提供之此實施例中之製品可進一步包含指示組合物可用於治療特定病狀之藥品說明書。或者或另外，製品可進一步包含第二(或第三)容器，其包含醫藥學上可接受之緩衝液，諸如注射用抑菌水(BWFI)、磷酸鹽緩衝生理食鹽水、林格氏溶液(Ringer's solution)或右旋糖溶液。其可進一步包括自商業及使用者觀點看來合乎需要之其他物質，包括其他緩衝劑、稀釋劑、過濾器、針及注射器。在一些實施例中，抗FcRH5抗體結合FcRH5c之細胞外域之同功異型物c特異性區域。在一些實施例中，抗FcRH5抗體結合FcRH5c之Ig樣域9。
III.實例
以下為本發明之方法及組合物之實例。應瞭解鑑於以上提供之一般性描述，可實施各種其他實施例。
材料及方法
免疫原(E11-flag)
使用標準方案將人類FcRH5c(SEQ ID NO：1)之胺基酸 745-850選殖至哺乳動物表現載體pRK5.NT.Flag中且在CHO細胞中短暫表現。使用抗flag及尺寸排阻層析在S200 Superdex管柱上純化具有N端Flag表現標籤之重組蛋白。
開發及表徵小鼠抗FcRH5 E11抗體
經由足墊注射用與MPL+TDM(Ribi)佐劑混合之2μg人類FcRH5 E11 ECD蛋白(SEQ ID NO：1之胺基酸殘基743-850)(Genentech,South San Francisco,CA)免疫Balb/c小鼠(Charles River,Hollister,CA)。小鼠接受9次劑量，隨後在融合之前3天經由足墊及IV途徑用單獨PBS進行融合前加強免疫。
收集膕淋巴結，且經由電融合(Harvard Apparatus,Holliston,MA)使來自血清根據ELISA皆顯示與免疫蛋白之強烈結合效價且顯示與用人類FcRH5 E11 ECD轉染之SVT2細胞之強烈FACS反應性之此等小鼠的淋巴細胞與X63-Ag8.653小鼠骨髓瘤細胞(美國菌種中心(American Type Culture Collection),Rockville,MD)融合。在37℃、7% CO2下，在培養基C(StemCell Technologies,Vancouver,BC,Canada)中將融合細胞培育隔夜，隨後再懸浮於含有0.01mg/ml FITC標記之抗小鼠IgG(Jackson ImmunoResearch,West Grove,PA)之半固體培養基D(StemCell Technologies)中且接種至Omniwell盤(Thermo Fisher Scientific,Rochester,NY)中。在接種之後9天，使用Clonepix FL(Genetix,New Milton,Hampshire,UK)選擇螢光菌落且轉移至含有培養基E(StemCell Technologies)之96孔盤中。在挑選之後7天，藉由ELISA針對抗小鼠IgG(MP Biomedicals,Santa Ana,CA)篩檢上清液。
擴增根據ELISA顯示小鼠IgG表現之融合瘤且藉由FACS針對過度表現全長人類FcRH5、石蟹獼猴FcRH5及人類FcRH5 E11 ECD之SVT2細胞加以篩檢。藉由使用FACSAria(BD,Franklin Lakes,NJ)進行單細胞揀選來次選殖強烈FACS陽性純系。擴增在一或兩輪次選殖之後顯示最高相關ELISA及FACS結合之最終純系以在生物反應器(Integra Biosciences,Chur,Switzerland)中進行大規模生產。接著如先前所述(Hongo等人2000)，藉由蛋白質A親和層析純化上清液。
產生雙Fab
藉由在鉸鏈半胱胺酸殘基處使抗FcRH5 Mab之Fab’交聯於抗CD3(UCHT1.v9)Mab之Fab’來產生雙Fab。為自融合瘤Ab產生Fab’2片段，使用不同消化條件：具有mIgG1同型之Ab用1：50(w/w)胃蛋白酶在37℃下在pH 3.5下消化1-2小時；小鼠IgG2a Ab用溶素C肽鏈內切酶在37℃下，在11：500(w/w)比率、pH 8下消化2-4小時；且小鼠IgG2b Ab用溶素C在37℃下，在1：100(w/w)比率下消化隔夜。在所有情況下，皆藉由用SP管柱捕捉且用10管柱體積之線性梯度(0-100%)之1M氯化鈉溶離來自反應混合物分離F(ab’)2片段。在以上提及之消化條件下，mIgG1及mIgG2b產生在鉸鏈中含有3個半胱胺酸殘基之F(ab’)2片段，而來自mIgG2a之F(ab’)2顯示在鉸鏈中具有2個半胱胺酸殘基。為產生具有單一反應性Cys之Fab’，使用兩種不同方法。對於含有奇數(3)個鉸鏈半胱胺酸之片段(mIgG1及mIgG2b)，在室溫下在25mM乙酸鈉(pH 5)、150mM氯化鈉、2mM EDTA、2mM TCEP中還原分離之F(ab’)22-6小時。在還原步驟完成之後，將樣品稀釋至0.2mg/ml，藉由添加Tris(pH 8)來使pH值上升至7.5且添加5mM去氫抗壞血酸(DHAA)以驅動半胱胺酸之再氧化。在室溫下培育隔夜之後，藉由用過量NEM探測以及藉由質譜分析法分析MW移動來評估還原之硫醇之存在。在確認每個分子僅存在一個反應性半胱胺酸之後，藉由凝膠過濾純化Fab’以移除少量均二聚體。
對於源於mIgG2a且在鉸鏈中含有2個半胱胺酸殘基之F(ab’)2片段，藉由如Scheer等人(付梓中)中所述用N-乙基順丁烯二醯亞胺(NEM)部分封端來產生單一反應性半胱胺酸。簡言之，藉由在pH 4.5下於乙酸鈉緩衝液中處理來用胃蛋白酶(1% w/w)消化抗體。在消化1小時之後，藉由在SP-HP陽離子交換樹脂上捕捉來自消化混合物分離F(ab’)2且藉由10CV鹽梯度之0-1M NaCl純化。接著用1mM TCEP在含有25mm MES(pH 5.8)、2mM EDTA及300mM NaCl之緩衝液中還原F(ab’)2並藉由添加5mM去氫抗壞血酸(DHAA)來氧化Fab以在重鏈與輕鏈之間再形成二硫鍵。
藉由如之前所述(Scheer等人；付梓中)進行胃蛋白酶消化、部分NEM封端及結合於雙馬來醯亞胺來產生雙fab(UCHT1.v9)之效應物 臂。簡言之，接著使在鉸鏈處之兩個硫醇(cys殘基)與1當量之N-乙基順丁烯二醯亞胺(NEM)(Sigma Aldrich)反應。使含有單一反應性半胱胺酸之不同抗FCRH5 Fab’與結合於雙順丁烯二醯亞胺交聯劑之抗CD3 Fab’一起在室溫下培育隔夜。藉由凝膠過濾使約100kDa交聯Fab與未反應物質分離且接著藉由SDS-PAGE、質譜分析及分析型尺寸排阻層析進行表徵。
TDB表現及純化
藉由兩種不同方法產生TDB：共培養表現兩個抗體臂之各者之細菌或藉由各別表現各臂且接著在活體外將其黏接。策略已描述於Christoph Spiess等人2012中且描述於2011年5月31日申請之PCT/US10/58958中，該專利以引用的方式併入本文中。簡言之，對於共培養策略，使表現抗CD3(孔)之大腸桿菌與表現抗腫瘤標靶(鈕)之大腸桿菌在預定比率下在振盪器燒瓶中一起生長以使其產生類似量之各半體。接著收集共培養之細菌肉湯，在微射流機中破碎細胞且藉由蛋白質A親和力純化抗體。已觀測到在微射流及蛋白質A捕捉期間，兩臂黏接且形成鉸鏈間二硫橋鍵(Christoph Spiess等人2012)。或者，藉由高細胞密度發酵來使抗體半體各別生長且藉由蛋白質A層析獨立分離。接著在1：1莫耳比下組合純化半體且在2mM DTT存在下在50mM Tris(pH 8.5)中培育4小時以允許黏接及鉸鏈區中之二硫化物還原。相對於無DTT之相同緩衝液透析24-48小時導致形成鏈間二硫鍵。對於兩種產生策略，雙特異性抗體均藉由如Christoph Spiess等人2012中所述之疏水性相互作用層析(HIC)自污染物純化。使用Endosafe便攜式測試系統分析所得物質之內毒素含量，且必要時，藉由用0.1%曲通(Triton)X-114洗滌蛋白質來降低內毒素含量。
TDB表徵
藉由如之前所述(Jackman等人2010)之質譜分析法(LC-ESI/TCF)來分析雙特異性抗體之分子量。亦藉由使用Agilent 1：100 HPLC系統，在Zenix SEC-300管柱(Sepax Technologies USA)中進行分析型尺寸排阻層析來分析抗體。藉由使用2100生物分析儀及蛋白質230晶片進行電泳來對殘餘抗體片段之存在定量。
血球分級分離
使用淋巴細胞分離介質(MP biomedicals,Solon,OH)自健康志願者之血液分離PBMC。使用來自Miltenyi之人類CD8+分離套組(#130-094-156)，藉由陰性選擇來自PBMC提取CD8+細胞。
活體外細胞毒性分析(T細胞殺傷)
對於活體外細胞毒性分析，將1x104個靶細胞接種在96孔盤上且培育隔夜。與或不與TDB或雙Fab一起添加3x104個CD8+ T細胞且在+37℃中培育48小時。藉由用生長培養基洗滌兩次來移除T細胞。使用CellTiter-Glo®發光細胞活力分析(Promega,Madison,WI)量測細胞活力。
或者，藉由流動式細胞測量術監測活體外細胞毒性。根據製造商方案(Invitrogen,#C34554)用羧基螢光素丁二醯亞胺基酯(CFSE)標記靶細胞。以3：1 E：T比率混合CFSE標記之靶細胞與來自人類PBMC之純化CD8+ T細胞且與TDB或雙Fab一起培育48小時。在培育結束時，藉由胰蛋白酶消散細胞且自盤收集。將細胞再懸浮於等體積之PBS+2% FBS+1mM EDTA+碘化丙啶(PI)中。在FACSCalibur上以自動形式進行流動式細胞測量分析。藉由對CFSE+/PI陰性細胞進行閘控來對活靶細胞之數目進行計數。如下計算細胞毒性之百分比：細胞毒性%(無TDB之活靶細胞數目-有TDB之活靶細胞數目)/(無TDB之活靶細胞數目)x 100。
分析T細胞活化
在存在或不存在TDB下混合靶細胞與純化CD8+ T細胞且藉由流動式細胞測量術分析T細胞活化。在培育結束時，細胞用CD8-FITC(BD Biosciences,555634)及CD69-PE(BD Biosciences,555531)染色。
次選殖上清液、單株抗體、雙Fab及TDB之結合
為測試與內源性FcRH5表現性癌細胞或FcRH5轉染之癌細胞之結合，使用EDTA/PBS消散細胞。將1x105個細胞懸浮於100ul中且與初級抗體(1體積之非IgG定量次選殖上清液、4ug/ml IgG定量次選殖上清液或2ug/ul純化單株抗體)一起培育小時。細胞用FACS緩衝液(PBS、1%BSA、2mM EDTA)洗滌兩次且與1：1000稀釋之用PE標記之山羊抗小鼠二級抗體或1：100稀釋之山羊抗小鼠APC一起培育。細胞用FACS緩衝液 洗滌兩次且在FACSCalibur上進行流動式細胞測量分析。當指示時，根據製造商方案(Invitrogen)對抗體進行直接氙標記。為分析與NK或B細胞之結合，使100萬個人類PBMC與4ug/ml IgG定量次選殖上清液一起培育60分鐘，洗滌且與1：100稀釋之用APC標記之山羊抗小鼠二級抗體一起培育。接著再次洗滌細胞兩次且使用抗CD56(PE；BD Biosciences #555516)及抗CD19(PE；BD Biosciences #340364)染色，隨後進行流動式細胞測量並分析與人類CD56+及CD19+細胞之結合。
結果
最初，為產生針對膜鄰近Ig域之同功異型物特異性抗體，用人類FcRH5c的重組桿狀病毒產生之E11蛋白(SEQ ID NO：1之胺基酸745-848)及C端His表現標籤免疫小鼠)。此免疫策略未導致對FcRH5之顯著免疫反應且未能產生單株抗FcRH5抗體。第二免疫策略為用編碼FcRH5c(SEQ ID NO：1)之胺基酸745-977之質體進行的DNA免疫，該等胺基酸編碼人類FcRH5之膜鄰近Ig域、跨膜域及細胞內域。此免疫策略未導致對FcRH5之顯著免疫反應且未能產生單株抗FcRH5抗體。第三免疫策略利用對應於FcRH5之膜鄰近Ig域之肽，其與石蟹獼猴FcRH5同源且與不與人類FcRH1、FcRH2、FcRH3及FcRH4同源。此免疫策略未導致對FcRH5之顯著免疫反應且未能產生單株抗FcRH5抗體。
對於第四免疫策略，在CHO細胞中產生由人類FcRH5之膜鄰近Ig域(SEQ ID NO：1之胺基酸殘基745-850)組成之具有N端Flag表現標籤的E11蛋白。以上重組蛋白用於免疫小鼠。如以上所詳述進行免疫；開發及表徵小鼠抗FcRH5 E11抗體。
在6劑重組E11(SEQ ID NO：1之胺基酸殘基745-850)之後，使用FACS分析血清中之FcRH5結合抗體。偵測到與表現人類全長FcRH5、石蟹獼猴全長FcRH5或人類E11域跨膜域及細胞質域之SVT2細胞而非載體轉染之SVT2細胞的顯著反應性，指示FcRH5反應性抗體存在於所有5只經免疫小鼠之血清中。
在9劑之後，使來自經免疫小鼠之淋巴細胞與X63-Ag8.653小鼠骨髓瘤細胞電融合。選擇323IgG陽性融合瘤次純系供進一步篩檢。藉 由ELISA測試純系與重組E11蛋白(SEQ ID NO：1之胺基酸殘基745-850)之結合(未顯示)，且藉由FACS測試純系與表現人類全長FcRH5、石蟹獼猴全長FcRH5或人類FcRH5 E11域跨膜域及細胞質域之SVT2細胞之結合。識別總計26個純系結合表現人類FcRH5之細胞及表現石蟹獼猴FcRH5之細胞，從而指示交叉物種反應性(表2)。進一步表徵次選殖上清液與以下之結合：A)用人類FcRH5轉染之多發性骨髓瘤細胞，B)內源性表現人類FcRH5之細胞(MOLP-2骨髓瘤細胞、來自健康供體之周邊人類CD19+ B細胞)，C)經轉染以表現人類FcRH1、FcRH2、FcRH3或FcRH4之SVT2細胞，D)表現人類FcRH5之截短形式(缺乏包括E11之4個Ig域；SEQ ID NO：1之胺基酸464-850)之293細胞及E)NK細胞。此外，藉由ELISA分析上清液與可溶性FcRH5a之結合。基於此等分析，選擇單株抗體進行純化。
圖2顯示五種純化E11抗體、非同功異型物選擇性抗FcRH5抗體10A8(其結合FcRH5c之Ig樣域4-5)及對N端gD標籤具有特異性之對照抗體結合表現人類FcRH5(圖2A)或石蟹獼猴FcRH5(圖2B)之SVT2細胞的劑量範圍。根據製造商方案(Invitrogen #z25051、z25151、z25251)用APC-螢光團直接標記此分析中之抗體。發現相較於先前所述之非同功異型物選擇性FcRH5抗體10A8及7D11(兩者均結合FcRH5c之Ig樣域4-5)，代表性E11抗體5A10與人類FcRH5轉染之EJM(圖3A)及OPM2(圖3B)多發性骨髓瘤細胞株的結合類似或更佳(Elkins等人,2012；Polson等人,2006)。MOLP-2細胞為內源性表現低含量之FcRH5之極少數已知多發性骨髓瘤細胞株之一。5A10、5F1、3G7及6D2次選殖上清液染色MOLP-2細胞之強度類似於7D11(圖3C-F)。
兩種各別測試經設計以闡明在膜鄰近Ig域9(E11)存在下之結合依賴性。首先，產生缺乏包括由E11免疫產生之抗體之預期結合位點的Ig域6-9(SEQ ID NO：1之胺基酸464-850)之截短人類FcRH5c突變體。在293細胞中表現具有N端gD標籤之此構築體且依次經受2.5ug/ml次選殖上清液及PE標記之山羊抗小鼠二級抗體(1：1000稀釋)處理。測試之次純系皆不結合表現截短人類FcRH5c之293細胞(圖4A)。相反，偵測到與表現野生型人類FcRH5c之293細胞之結合。gD或非同功異型物選擇性抗體純系(10A8)之結合未因突變而改變。此結果顯示E11抗體之結合位點包括在Ig域6-9中。
藉由測試與可溶性FcRH5a同功異型物之結合來進一步顯示同功異型物選擇性。為此，轉染293細胞以表現具有C端HIS表現標籤之可溶性同功異型物。以使用抗HIS抗體進行之西方墨點分析確認FcRH5a蛋白之表現。在條件培養基中偵測到來自FcRH5a而非載體轉染之細胞之65kD條帶(未顯示)。對於ELISA，各盤用抗HIS捕捉抗體塗佈且與1：10稀釋之包括HIS標記之可溶性FcRH5a同功異型物的條件培養基一起培育1小時。E11單株抗體用於以1-0.001ug/ml濃度偵測，培育1小時，隨後與山羊抗小鼠HRP抗體一起培育，且最後與TMB受質一起培育。儘管純系2H7及5A10顯示與可溶性FcRH5a之可觀反應性，但其他測試單株抗體未 顯示任何可偵測結合(圖5A)。此結果確認Ig-域9(E11)為抗體1G7、3A4、3B12、3G7及5F1之結合所需，且因此此等抗體對全長FcRH5同功異型物(FcRH5c)具有選擇性。
FcRH5係在B細胞中內源性表現(Hatzivassiliou等人,2001；Polson等人,2006)。為評估次選殖上清液與B細胞之結合，自健康供體之血液提取PBMC。使100萬個人類PBMC與4ug/ml次選殖上清液一起培育60分鐘，洗滌且與1：100稀釋之用APC標記之山羊抗小鼠二級抗體一起培育。接著再次洗滌細胞兩次且用PE標記之抗CD19(BD Biosciences #340364)染色，隨後進行流動式細胞測量並分析與CD19+細胞之結合。大多數上清液誘導CD19+細胞中之APC信號超過對照(無初級抗體，抗gD)顯著移動(圖5B)，從而指示與B細胞結合。
Fc受體同源物(FcRH)家族分子彼此具有高度同源性(Miller等人,2002)。在E11抗體所靶向之膜鄰近域之間，同源性尤其較高(Miller等人,2002)。為研究與家族成員之交叉反應性，在SVT2細胞中表現FcRH1、FcRH2、FcRH3及FcRH4(皆包括N端gD表現標籤)且細胞用次選殖上清液及山羊抗小鼠PE二級抗體染色。藉由所有細胞株中之來自抗gD抗體之信號確認轉染之FcRH之表現。相較於用gD抗體染色，上清液皆不顯著結合FcRH2表現細胞(圖6B)。1B8、1H11、3C10、4G8及6D2顯示與FcRH1低程度結合(圖6A)且1F4結合FcRH4(圖6D)。總之，來自FcRH3表現SVT2細胞之信號較低(包括gD對照抗體)，從而指示低表現量。偵測到1F4及4H8上清液與FcRH3表現SVT2細胞之結合程度較低(圖6C)。
因為FcRH3表現SVT2細胞中之總信號較低，所以使用來自健康供體之PBMC進行進一步測試。如上所述對PBMC染色，但替代CD19使用CD56(BD Biosciences #555516)閘控屬於NK細胞的所研究之細胞群體。NK細胞內源性表現FcRH3(Polson等人,2006)，且如所預期，由先前所述單株抗FcRH3抗體染色(Polson等人,2006)。亦在CD56+細胞中偵測到FcRH1表現，但E11次選殖上清液皆不顯著染色NK細胞(圖7)，從而顯示缺乏與內源性表現之FcRH3之交叉反應性。
使用上述相同方案在SVT2細胞中再測試家族成員之交叉 反應性，但使用新鮮試劑且用FcRH1、FcRH2、FcRH3及FcRH4再轉染SVT2細胞。如上所述再測試純化抗體產生顯著不同於第一系列實驗之結果。此等更新結果概述於表4中。並非顯示與其他FcRH家族成員之少許交叉反應性至無交叉反應性，除一種抗體(1G7)之外的所有抗體皆顯示顯著結合FcRH5與至少一或多個其他家族成員兩者。在不受理論束縛下，鑑於各種FcRH家族成員中之末個Ig樣域之序列類似性，此抗體交叉反應性量為將預期之量。
CD8+ T細胞尤其為最強力免疫效應細胞。可藉由使用同時結合T細胞與腫瘤抗原兩者之雙特異性抗體(或抗體片段)募集T細胞之活性以殺傷腫瘤細胞。雙重結合可導致T細胞之多株活化及特異性殺傷腫瘤抗原表現細胞(Liu等人,1985；Shalaby等人,1992)。若干腫瘤標靶及若干雙特異性抗體平台已證明此方法具有一般性靈活性及臨床前可行性。重要的是，有希望之臨床活性已用CD19靶向性、T細胞活化性雙特異性scFv抗體片段蘭妥莫單抗(blinatumomab)(MT103；MicroMet)證明。用低至60ug/m2/天之劑量治療導致針對復發非霍奇金氏淋巴瘤及急性淋巴母細胞性白血病之治療之臨床試驗中的反應延長(Bargou等人,2008；Dreier等人,2002)。
藉由產生雙特異性雙Fab分子來研究FcRH5抗體以雙特異性抗體形式活化T細胞及介導殺傷之能力。簡言之，藉由蛋白水解裂解抗體，隨後進行還原、再氧化反應且使用雙順丁烯二醯亞胺結合Fab片段來產生此等雙特異性分子(Scheer等人,2012b及如上所述)。抗CD3抗體純系UCHT1結合與T細胞受體合併之人類CD3。先前已顯示UCHT1.v9為高效T細胞結合臂(Junttila等人,2012及如上所述；Zhu等人,1995)且因此用於FcRH5雙Fab。選擇由E11免疫獲得之9個抗FcRH5抗體純系(1G7、2H7、3G7、5A10、5F1、6D2、3B12、3C10、3F10)用於目標臂且與UCHT1.v9結合以產生CD3-FcRH5雙特異性雙Fab分子。
除雙Fab分子之外，亦使用鈕入孔技術(Merchant等人,1998)產生全長雙特異性抗體(T細胞依賴性雙特異性抗體；TDB)，該技術依賴於驅動抗體半體雜二聚化之一對互補工程改造Fc區。如在雙Fab之情況下，UCHT1.v9(Zhu等人,1995)用作抗CD3(孔)。對於目標臂(鈕)，使用由FcRH5 E11免疫獲得之抗體純系、非同功異型物選擇性抗FcRH5純系(10A8)(Elkins等人,2012)或抗HER2純系4D5(曲妥珠單抗(trastuzumab))(Carter等人,1992)。已詳述TDB之產生及純化(Junttila等人,2012；Scheer等人,2012a及如上所述)。
藉由使標靶與CD8+ T細胞(效應細胞)一起培育48小時及使用Cell Titer Glo分析或FACS殺傷分析(上述分析)量測殺傷活性來研究雙特異性分子介導對FcRH5轉染之293靶細胞之殺傷的能力。併有抗FcRH5 E11目標臂之所有9個雙Fab皆高效介導靶細胞殺傷(圖8A-B)。在低至1-10ng/ml濃度下偵測到殺傷活性，且在10-100ng/ml濃度下，殺傷活性飽和。對於大多數純系，最大殺傷活性超過80%。相較於HER2-TDB，殺傷活性類似(圖8A-B)。人類HER2在293細胞中以低含量表現(資料未顯示)。相反，殺傷活性遠超僅能夠殺傷約20%標靶之非同功異型物選擇性FcRH5-TDB(10A8)(圖8A-B)。使用併有2H7、3G7及5A10 FcRH5-E11純系作為目標臂之全長TDB形式偵測到類似強健活性(圖8C-D)。在2H7及3G7之TDB與雙Fab形式之間未偵測到顯著差異，從而指示Fc即不為活性所必需亦不對殺傷活性具有抑制性。併有2H7及3G7作為目標臂之FcRH5雙Fab及全長TDB亦能夠高效介導對內源性表現低含量之FcRH5之MOLP2細胞的殺傷(圖9A)。在量測在細胞膜上表現CD69之CD8+細胞之比例的反應中追蹤T細胞活化。T細胞活化對應於殺傷活性且對於雙Fab與TDB兩者而言為類似的(圖9B)。結果之概述顯示於表3中。
參考文獻
Bargou, R.等人(2008). Science 321, 974-977.
Carter, P.等人(1992). Proc Natl Acad Sci U S A 89, 4285-4289.
Dreier, T.等人(2002). Int J Cancer 100, 690-697.
Elkins, K.等人(2012). Mol Cancer Ther 11, 2222-2232.
Hatzivassiliou, G.等人(2001). Immunity 14, 277-289.
Liu, M. A.等人(1985). Proc Natl Acad Sci U S A 82, 8648-8652.
Merchant, A. M.等人(1998). Nat Biotechnol 16, 677-681.
Miller, I等人(2002). Blood 99, 2662-2669.
Polson, A. G.等人(2006). Expression pattern of the human FcRH/IRTA receptors in normal tissue and in B-chronic lymphocytic leukemia. International immunology 18, 1363-1373.
Shalaby, M. R.等人(1992). J Exp Med 175, 217-225.
Zhu, Z.等人(1995). Int J Cancer 62, 319-324.
儘管上述本發明已出於清楚理解之目的藉由說明及實例方式相當詳細地加以描述，但描述及實例不應解釋為限制本發明之範疇。本文引用之所有專利及科學文獻之揭示內容皆以全文引用的方式明確併入本文中。
可變輕鏈域
1C8.1
(SEQ ID NO：110)
1G7.2
(SEQ ID NO：112)
2H7.3
(SEQ ID NO：114)
3A4.2
(SEQ ID NO：116)
3B12.1.1
(SEQ ID NO：118)
3C10
(SEQ ID NO：120)
3F10
(SEQ ID NO：122)
3G3
(SEQ ID NO：124)
3G7.1.5
(SEQ ID NO：126)
5A10.1.3
(SEQ ID NO：128)
5F1.1.5
(SEQ ID NO：130)
6D2
(SEQ ID NO：132)
1G7’
(SEQ ID NO：134)
可變重鏈域
1C8.1
(SEQ ID NO：111)
1G7.2
(SEQ ID NO：113)
2H7.3
(SEQ ID NO：115)
3A4.2
(SEQ ID NO：117)
3B12.1.1
(SEQ ID NO：119)
3C10
(SEQ ID NO：121)
3F10
(SEQ ID NO：123)
3G3
(SEQ ID NO：125)
3G7.1.5
(SEQ ID NO：127)
5A10.1.3
(SEQ ID NO：129)
5F1.1.5
(SEQ ID NO：131)
6D2
(SEQ ID NO：133)
1G7’
(SEQ ID NO：135)
FcRH5c
(SEQ ID NO：1)
<110> 美商建南德克公司
<120> 抗FCRH5抗體
<130> GNE-0413 US
<140> 103121621
<141> 2014/06/23
<150> 61/838,534
<151> 2013-06-24
<160> 136
<170> PatentIn 3.5版
<210> 1
<211> 977
<212> PRT
<213> 智人
<400> 1
<210> 2
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 2
<210> 3
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 3
<210> 4
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 4
<210> 5
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 5
<210> 6
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 6
<210> 7
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 7
<210> 8
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 8
<210> 9
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 9
<210> 10
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 10
<210> 11
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 11
<210> 12
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 12
<210> 13
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 13
<210> 14
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 14
<210> 15
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 15
<210> 16
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 16
<210> 17
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 17
<210> 18
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 18
<210> 19
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 19
<210> 20
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 20
<210> 21
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 21
<210> 22
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 22
<210> 23
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 23
<210> 24
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 24
<210> 25
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 25
<210> 26
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 26
<210> 27
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 27
<210> 28
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 28
<210> 29
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 29
<210> 30
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 30
<210> 31
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 31
<210> 32
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 32
<210> 33
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 33
<210> 34
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 34
<210> 35
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 35
<210> 36
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 36
<210> 37
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 37
<210> 38
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 38
<210> 39
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 39
<210> 40
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 40
<210> 41
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 41
<210> 42
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 42
<210> 43
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 43
<210> 44
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 44
<210> 45
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 45
<210> 46
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 46
<210> 47
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 47
<210> 48
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 48
<210> 49
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 49
<210> 50
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 50
<210> 51
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 51
<210> 52
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 52
<210> 53
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 53
<210> 54
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 54
<210> 55
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 55
<210> 56
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 56
<210> 57
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 57
<210> 58
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 58
<210> 59
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 59
<210> 60
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 60
<210> 61
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 61
<210> 62
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 62
<210> 63
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 63
<210> 64
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 64
<210> 65
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 65
<210> 66
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 66
<210> 67
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 67
<210> 68
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 68
<210> 69
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 69
<210> 70
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 70
<210> 71
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 71
<210> 72
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 72
<210> 73
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 73
<210> 74
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 74
<210> 75
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 75
<210> 76
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 76
<210> 77
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 77
<210> 78
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 78
<210> 79
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 79
<210> 80
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 80
<210> 81
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 81
<210> 82
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 82
<210> 83
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 83
<210> 84
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 84
<210> 85
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 85
<210> 86
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 86
<210> 87
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 87
<210> 88
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 88
<210> 89
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 89
<210> 90
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 90
<210> 91
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 91
<210> 92
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 92
<210> 93
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 93
<210> 94
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 94
<210> 95
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 95
<210> 96
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 96
<210> 97
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 97
<210> 98
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 98
<210> 99
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 99
<210> 100
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 100
<210> 101
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 101
<210> 102
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 102
<210> 103
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 103
<210> 104
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 104
<210> 105
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 105
<210> 106
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 106
<210> 107
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 107
<210> 108
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 108
<210> 109
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 109
<210> 110
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多肽
<400> 110
<210> 111
<211> 129
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多肽
<400> 111
<210> 112
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多肽
<400> 112
<210> 113
<211> 133
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多肽
<400> 113
<210> 114
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多肽
<400> 114
<210> 115
<211> 129
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多肽
<400> 115
<210> 116
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多肽
<400> 116
<210> 117
<211> 129
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多肽
<400> 117
<210> 118
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多肽
<400> 118
<210> 119
<211> 131
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多肽
<400> 119
<210> 120
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多肽
<400> 120
<210> 121
<211> 134
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多肽
<400> 121
<210> 122
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多肽
<400> 122
<210> 123
<211> 131
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多肽
<400> 123
<210> 124
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多肽
<400> 124
<210> 125
<211> 131
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多肽
<400> 125
<210> 126
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多肽
<400> 126
<210> 127
<211> 129
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多肽
<400> 127
<210> 128
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多肽
<400> 128
<210> 129
<211> 130
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多肽
<400> 129
<210> 130
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多肽
<400> 130
<210> 131
<211> 132
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多肽
<400> 131
<210> 132
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多肽
<400> 132
<210> 133
<211> 129
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多肽
<400> 133
<210> 134
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多肽
<400> 134
<210> 135
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多肽
<400> 135
<210> 136
<211> 233
<212> PRT
<213> 智人
<400> 136

Claims (74)

  1. 一種經分離抗FcRH5抗體，其結合FcRH5c之細胞外域之同功異型物c特異性區域。
  2. 如申請專利範圍第1項之抗體，其中該同功異型物c特異性區域包含Ig樣域9。
  3. 如申請專利範圍第1至2項中任一項之抗體，其中該同功異型物c特異性區域包含SEQ ID NO：1之胺基酸743-850。
  4. 如申請專利範圍第1至3項中任一項之抗體，其中該抗體包含：a)重鏈，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：38之HVR-H1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：62之HVR-H2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：86之HVR-H3；及/或b)輕鏈，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：2之HVR-L1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：14之HVR-L2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：26之HVR-L3。
  5. 如申請專利範圍第4項之抗體，其中該重鏈包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：50之HVR-H1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：74之HVR-H2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：98之HVR-H3。
  6. 如申請專利範圍第1至3項中任一項之抗體，其中該抗體包含：a)重鏈，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：39之HVR-H1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：63之HVR-H2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：87之HVR-H3；及/或b)輕鏈，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：3之HVR-L1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：15之HVR-L2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：27之HVR-L3。
  7. 如申請專利範圍第6項之抗體，其中該重鏈包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：51之HVR-H1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：75之HVR-H2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：99之HVR-H3。
  8. 如申請專利範圍第1至3項中任一項之抗體，其中該抗體包含：a)重鏈，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：40之HVR-H1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：64之HVR-H2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：88之HVR-H3；及/或b)輕鏈，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：4之HVR-L1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：16之HVR-L2、及含有胺基酸 序列SEQ ID NO：28之HVR-L3。
  9. 如申請專利範圍第8項之抗體，其中該重鏈包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：52之HVR-H1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：76之HVR-H2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：100之HVR-H3。
  10. 如申請專利範圍第1至3項中任一項之抗體，其中該抗體包含：a)重鏈，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：41之HVR-H1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：65之HVR-H2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：89之HVR-H3；及/或b)輕鏈，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：5之HVR-L1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：17之HVR-L2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：29之HVR-L3。
  11. 如申請專利範圍第10項之抗體，其中該重鏈包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：53之HVR-H1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：77之HVR-H2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：101之HVR-H3。
  12. 如申請專利範圍第1至3項中任一項之抗體，其中該抗體包含：a)重鏈，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：42之HVR-H1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：66之HVR-H2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：90之HVR-H3；及/或b)輕鏈，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：6之HVR-L1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：18之HVR-L2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：30之HVR-L3。
  13. 如申請專利範圍第12項之抗體，其中該重鏈包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：54之HVR-H1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：78之HVR-H2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：102之HVR-H3。
  14. 如申請專利範圍第1至3項中任一項之抗體，其中該抗體包含：a)重鏈，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：43之HVR-H1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：67之HVR-H2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：91之HVR-H3；及/或b)輕鏈，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：7之HVR-L1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：19之HVR-L2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：31之HVR-L3。
  15. 如申請專利範圍第14項之抗體，其中該重鏈包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：55之HVR-H1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：79之HVR-H2、及 含有胺基酸序列SEQ ID NO：103之HVR-H3。
  16. 如申請專利範圍第1至3項中任一項之抗體，其中該抗體包含：a)重鏈，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：44之HVR-H1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：68之HVR-H2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：92之HVR-H3；及/或b)輕鏈，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：8之HVR-L1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：20之HVR-L2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：32之HVR-L3。
  17. 如申請專利範圍第16項之抗體，其中該重鏈包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：56之HVR-H1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：80之HVR-H2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：104之HVR-H3。
  18. 如申請專利範圍第1至3項中任一項之抗體，其中該抗體包含：a)重鏈，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：45之HVR-H1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：69之HVR-H2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：93之HVR-H3；及/或b)輕鏈，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：9之HVR-L1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：21之HVR-L2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：33之HVR-L3。
  19. 如申請專利範圍第18項之抗體，其中該重鏈包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：57之HVR-H1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：81之HVR-H2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：105之HVR-H3。
  20. 如申請專利範圍第1至3項中任一項之抗體，其中該抗體包含：a)重鏈，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：46之HVR-H1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：70之HVR-H2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：94之HVR-H3；及/或b)輕鏈，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：10之HVR-L1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：22之HVR-L2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：34之HVR-L3。
  21. 如申請專利範圍第20項之抗體，其中該重鏈包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：58之HVR-H1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：82之HVR-H2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：106之HVR-H3。
  22. 如申請專利範圍第1至3項中任一項之抗體，其中該抗體包含：a)重鏈，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：47之HVR-H1、含有胺基酸序列 SEQ ID NO：71之HVR-H2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：95之HVR-H3；及/或b)輕鏈，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：11之HVR-L1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：23之HVR-L2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：35之HVR-L3。
  23. 如申請專利範圍第22項之抗體，其中該重鏈包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：59之HVR-H1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：83之HVR-H2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：107之HVR-H3。
  24. 如申請專利範圍第1至3項中任一項之抗體，其中該抗體包含：a)重鏈，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：48之HVR-H1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：72之HVR-H2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：96之HVR-H3；及/或b)輕鏈，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：12之HVR-L1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：24之HVR-L2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：36之HVR-L3。
  25. 如申請專利範圍第24項之抗體，其中該重鏈包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：60之HVR-H1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：84之HVR-H2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：108之HVR-H3。
  26. 如申請專利範圍第1至3項中任一項之抗體，其中該抗體包含：a)重鏈，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：49之HVR-H1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：73之HVR-H2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：97之HVR-H3；及/或b)輕鏈，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：13之HVR-L1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：25之HVR-L2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：37之HVR-L3。
  27. 如申請專利範圍第26項之抗體，其中該重鏈包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：61之HVR-H1、含有胺基酸序列SEQ ID NO：85之HVR-H2、及含有胺基酸序列SEQ ID NO：109之HVR-H3。
  28. 如前述申請專利範圍中任一項之抗體，其中該抗體包含：a)與胺基酸序列SEQ ID NO：111具有至少95%序列一致性之VH序列及/或與胺基酸序列SEQ ID NO：110具有至少95%序列一致性之VL序列；b)與胺基酸序列SEQ ID NO：113具有至少95%序列一致性之VH序列 及/或與胺基酸序列SEQ ID NO：112具有至少95%序列一致性之VL序列；c)與胺基酸序列SEQ ID NO：115具有至少95%序列一致性之VH序列及/或與胺基酸序列SEQ ID NO：114具有至少95%序列一致性之VL序列；d)與胺基酸序列SEQ ID NO：117具有至少95%序列一致性之VH序列及/或與胺基酸序列SEQ ID NO：116具有至少95%序列一致性之VL序列；e)與胺基酸序列SEQ ID NO：119具有至少95%序列一致性之VH序列及/或與胺基酸序列SEQ ID NO：118具有至少95%序列一致性之VL序列；f)與胺基酸序列SEQ ID NO：121具有至少95%序列一致性之VH序列及/或與胺基酸序列SEQ ID NO：120具有至少95%序列一致性之VL序列；g)與胺基酸序列SEQ ID NO：123具有至少95%序列一致性之VH序列及/或與胺基酸序列SEQ ID NO：122具有至少95%序列一致性之VL序列；h)與胺基酸序列SEQ ID NO：125具有至少95%序列一致性之VH序列及/或與胺基酸序列SEQ ID NO：124具有至少95%序列一致性之VL序列；i)與胺基酸序列SEQ ID NO：127具有至少95%序列一致性之VH序列及/或與胺基酸序列SEQ ID NO：126具有至少95%序列一致性之VL序列；j)與胺基酸序列SEQ ID NO：129具有至少95%序列一致性之VH序列及/或與胺基酸序列SEQ ID NO：128具有至少95%序列一致性之VL序列；k)與胺基酸序列SEQ ID NO：131具有至少95%序列一致性之VH序列及/或與胺基酸序列SEQ ID NO：130具有至少95%序列一致性之VL序列；l)與胺基酸序列SEQ ID NO：133具有至少95%序列一致性之VH序列 及/或與胺基酸序列SEQ ID NO：132具有至少95%序列一致性之VL序列；或m)與胺基酸序列SEQ ID NO：135具有至少95%序列一致性之VH序列及/或與胺基酸序列SEQ ID NO：134具有至少95%序列一致性之VL序列。
  29. 如申請專利範圍第1至28項中任一項之抗體，其中該抗體包含：a)VH序列SEQ ID NO：111及/或VL序列SEQ ID NO：110；b)VH序列SEQ ID NO：113及/或VL序列SEQ ID NO：112；c)VH序列SEQ ID NO：115及/或VL序列SEQ ID NO：114；d)VH序列SEQ ID NO：117及/或VL序列SEQ ID NO：116；e)VH序列SEQ ID NO：119及/或VL序列SEQ ID NO：118；f)VH序列SEQ ID NO：121及/或VL序列SEQ ID NO：120；g)VH序列SEQ ID NO：123及/或VL序列SEQ ID NO：122；h)VH序列SEQ ID NO：125及/或VL序列SEQ ID NO：124；i)VH序列SEQ ID NO：127及/或VL序列SEQ ID NO：126；j)VH序列SEQ ID NO：129及/或VL序列SEQ ID NO：128；k)VH序列SEQ ID NO：131及/或VL序列SEQ ID NO：130；l)VH序列SEQ ID NO：133及/或VL序列SEQ ID NO：132；或m)VH序列SEQ ID NO：135及/或VL序列SEQ ID NO：134。
  30. 如申請專利範圍第1至29項中任一項之抗體，其中該抗體為單株抗體。
  31. 如申請專利範圍第1至30項中任一項之抗體，其中該抗體為人類抗體、人類化抗體或嵌合抗體。
  32. 如申請專利範圍第1至31項中任一項之抗體，其中該抗體為結合FcRH5之抗體片段。
  33. 如申請專利範圍第1至32項中任一項之抗體，其中該抗體為IgG1、IgG2a或IgG2b抗體。
  34. 如申請專利範圍第1至33項中任一項之抗體，其中該抗體具有以下特徵中一或多者：a)與全長人類及石蟹獼猴FcRH5具有交叉反應性，b)不與FcRH1、FcRH2、FcRH3及/或FcRH4交叉反應，c)結合內源性FcRH5，d)不與FcRH5a交叉反應，及e)不與FcRH5之另一Ig樣域交 叉反應。
  35. 如申請專利範圍第1至34項中任一項之抗體，其中該抗體為雙特異性抗體。
  36. 如申請專利範圍第35項之抗體，其中雙特異性抗體結合FcRH5及CD3。
  37. 一種經分離核酸，其編碼如申請專利範圍第1至36項中任一項之抗體。
  38. 一種宿主細胞，其包含如申請專利範圍第37項之核酸。
  39. 一種產生抗體之方法，其包括培養如申請專利範圍第38項之宿主細胞以產生該抗體。
  40. 一種免疫結合物，其包含如申請專利範圍第1至36項中任一項之抗體及細胞毒性劑。
  41. 如申請專利範圍第41項之免疫結合物，其具有式Ab-(L-D)p，其中：(a)Ab為如申請專利範圍第1至36項中任一項之抗體；(b)L為連接子；(c)D為選自美登木素(maytansinoid)、奧里斯他汀(auristatin)、卡奇黴素(calicheamicin)、吡咯并苯并二氮呯及奈莫柔比星(nemorubicin)衍生物之藥物；且(d)p在1-8之範圍內。
  42. 如申請專利範圍第41項之免疫結合物，其中D為奧里斯他汀。
  43. 如申請專利範圍第42項之免疫結合物，其中D具有式DE 且其中R2及R6各自為甲基，R3及R4各自為異丙基，R5為H，R7為第二丁基，各R8係獨立地選自CH3、O-CH3、OH及H；R9為H；且R18為-C(R8)2-C(R8)2-芳基。
  44. 如申請專利範圍第41項之免疫結合物，其中該藥物為MMAE。
  45. 如申請專利範圍第41項之免疫結合物，其中D為式A之吡咯并苯并二氮呯： 其中該等點線指示視情況在C1與C2或C2與C3之間存在雙鍵；R2係獨立地選自H、OH、=O、=CH2、CN、R、OR、=CH-RD、=C(RD)2、O-SO2-R、CO2R及COR，且視情況進一步選自鹵基或二鹵基，其中RD係獨立地選自R、CO2R、COR、CHO、CO2H及鹵基；R6及R9係獨立地選自H、R、OH、OR、SH、SR、NH2、NHR、NRR'、NO2、Me3Sn及鹵基；R7係獨立地選自H、R、OH、OR、SH、SR、NH2、NHR、NRR'、NO2、Me3Sn及鹵基；Q係獨立地選自O、S及NH；R11為H或R，或其中Q為O、SO3M，其中M為金屬陽離子；R及R'係各自獨立地選自視情況經取代之C1-8烷基、C3-8雜環基及C5-20芳基，且視情況對於基團NRR'，R及R'連同其所連接之氮原子一起形成視情況經取代之4員、5員、6員或7員雜環；R12、R16、R19及R17分別如R2、R6、R9及R7所定義；R"為C3-12伸烷基，該鏈可間雜有一或多個雜原子及/或視情況經取代之芳環；且X及X'係獨立地選自O、S及N(H)。
  46. 如申請專利範圍第45項之免疫結合物，其中D具有以下結構： 其中n為0或1。
  47. 如申請專利範圍第45項之免疫結合物，其中D具有選自以下之結構： ；及 其中RE及RE"係各自獨立地選自H或RD，其中RD係獨立地選自R、CO2R、COR、CHO、CO2H及鹵基；其中Ar1及Ar2各自獨立地為視情況經取代之C5-20芳基；且其中n為0或1。
  48. 如申請專利範圍第41項之免疫結合物，其中D為式B之吡咯并苯并二氮呯： 其中該水平波形線指示與該連接子共價連接之位點；RV1及RV2係獨立地選自H、甲基、乙基、苯基、氟取代之苯基及C5-6雜環基；且n為0或1。
  49. 如申請專利範圍第41項之免疫結合物，其中D為奈莫柔比星衍生物。
  50. 如申請專利範圍第49項之免疫結合物，其中D具有選自以下之結構：
  51. 如申請專利範圍第41至50項中任一項之免疫結合物，其中該連接子可由蛋白酶裂解。
  52. 如申請專利範圍第51項之免疫結合物，其中該連接子包含val-cit二肽或Phe-高Lys二肽。
  53. 如申請專利範圍第41至50項中任一項之免疫結合物，其中該連接子具有酸不穩定性。
  54. 如申請專利範圍第53項之免疫結合物，其中該連接子包含腙。
  55. 如申請專利範圍第53項之免疫結合物，其具有下式： 其中S為硫原子。
  56. 如申請專利範圍第46項之免疫結合物，其具有選自以下之式：
  57. 如申請專利範圍第50項之免疫結合物，其具有選自以下之式：
  58. 如申請專利範圍第41至57項中任一項之免疫結合物，其中p在2-5之範圍內。
  59. 一種醫藥調配物，其包含如申請專利範圍第1至36項中任一項之抗體及/或如申請專利範圍第41至58項中任一項之免疫結合物及醫藥學上可接受之載劑。
  60. 如申請專利範圍第59項之醫藥調配物，其進一步包含另一治療劑。
  61. 一種治療患有FcRH5陽性癌症之個體之方法，該方法包含向該個體投與有效量之如申請專利範圍第1至36項中任一項之抗體及/或如申請專利範圍第41至59項中任一項之免疫結合物。
  62. 如申請專利範圍第61項之方法，其中該FcRH5陽性癌症為B細胞增生性病症。
  63. 如申請專利範圍第61至62項中任一項之方法，其進一步包含向該個體投與另一治療劑。
  64. 一種抑制FcRH5陽性細胞之增殖之方法，該方法包含在容許如申請專利範圍第1至36項中任一項之抗體及/或如申請專利範圍第41至59項中任一項之免疫結合物結合該細胞之表面上之FcRH5的條件下使該細胞暴露於該抗體及/或該免疫結合物，藉此抑制該細胞之增殖。
  65. 如申請專利範圍第64項之方法，其中該細胞為B細胞。
  66. 如申請專利範圍第1至36項中任一項之抗體，其結合於標記。
  67. 如申請專利範圍第66項之抗體，其中該標記為正子發射體。
  68. 如申請專利範圍第67項之抗體，其中該正子發射體為89Zr。
  69. 一種偵測生物樣品中之人類FcRH5之方法，其包含在容許如申請專利範圍第1至36項或第66至68項中任一項之抗FcRH5抗體結合天然存在之人類FcRH5的條件下使該生物樣品與該抗FcRH5抗體接觸，及偵測在該抗FcRH5抗體與該生物樣品中之天然存在之人類FcRH5之間是否形成複合物。
  70. 如申請專利範圍第69項之方法，其中該抗FcRH5抗體為如申請專利範圍第9項或申請專利範圍第15項之抗體。
  71. 如申請專利範圍第69至70項中任一項之方法，其中該生物樣品為血液樣品。
  72. 一種用於偵測FcRH5陽性癌症之方法，其包含(i)向患有或懷疑患有FcRH5陽性癌症之受試者投與經標記抗FcRH5抗體，其中該經標記抗FcRH5抗體包含如申請專利範圍第1至36項中任一項之抗FcRH5抗體，及(ii)偵測該受試者中之該經標記抗FcRH5抗體，其中偵測到該經標記抗FcRH5抗體指示該受試者中存在FcRH5陽性癌症。
  73. 如申請專利範圍第72項之方法，其中該經標記抗FcRH5抗體包含結合於正子發射體之抗FcRH5抗體。
  74. 如申請專利範圍第72至73項中任一項之方法，其中該正子發射體為89Zr。
TW103121621A 2013-06-24 2014-06-23 抗ｆｃｒｈ５抗體 TWI725931B (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201361838534P 2013-06-24 2013-06-24
US61/838,534 2013-06-24

Publications (2)

Publication Number Publication Date
TW201508008A true TW201508008A (zh) 2015-03-01
TWI725931B TWI725931B (zh) 2021-05-01

Family

ID=51212984

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW103121621A TWI725931B (zh) 2013-06-24 2014-06-23 抗ｆｃｒｈ５抗體

Country Status (29)

Country Link
US (3) US10435471B2 (zh)
EP (3) EP3336106B1 (zh)
JP (2) JP6684208B2 (zh)
KR (1) KR20160022912A (zh)
CN (2) CN105473618A (zh)
AR (1) AR096687A1 (zh)
AU (2) AU2014302617B2 (zh)
BR (1) BR112015032224B1 (zh)
CA (1) CA2915480C (zh)
DK (3) DK3336106T3 (zh)
ES (3) ES2659229T3 (zh)
FI (1) FI3736291T3 (zh)
HK (1) HK1222663A1 (zh)
HR (3) HRP20180352T1 (zh)
HU (3) HUE049446T2 (zh)
IL (2) IL243129B (zh)
LT (3) LT3736291T (zh)
MX (1) MX376663B (zh)
MY (2) MY176285A (zh)
NO (1) NO2955475T3 (zh)
PL (3) PL3013861T3 (zh)
PT (3) PT3736291T (zh)
RS (3) RS56878B1 (zh)
RU (2) RU2019109452A (zh)
SG (2) SG10201804338PA (zh)
SI (3) SI3013861T1 (zh)
TW (1) TWI725931B (zh)
WO (1) WO2014210064A1 (zh)
ZA (2) ZA201509261B (zh)

Cited By (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TWI731861B (zh) * 2015-06-16 2021-07-01 美商建南德克公司 FcRH5之人源化及親和力成熟抗體及使用方法
US11186650B2 (en) 2013-12-17 2021-11-30 Genentech, Inc. Anti-CD3 antibodies and methods of use
US11352431B2 (en) 2013-06-24 2022-06-07 Genentech, Inc. Anti-FCRH5 antibodies
US11466094B2 (en) 2016-11-15 2022-10-11 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-CD20/anti-CD3 bispecific antibodies
US12195547B2 (en) 2021-04-30 2025-01-14 Hoffmann-La Roche Inc. Dosing for combination treatment with anti-CD20/anti-CD3 bispecific antibody and anti-CD79B antibody drug conjugate
US12291575B2 (en) 2021-05-14 2025-05-06 Genentech, Inc. Methods for treatment of CD20-positive proliferative disorder with mosunetuzumab and polatuzumab vedotin
US12351643B2 (en) 2020-11-04 2025-07-08 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-CD20/anti-CD3 bispecific antibodies
US12492261B2 (en) 2020-11-04 2025-12-09 Genentech, Inc. Subcutaneous dosing of anti-CD20/anti-CD3 bispecific antibodies
US12516118B2 (en) 2020-11-04 2026-01-06 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-CD20/anti-CD3 bispecific antibodies and anti-CD79b antibody drug conjugates

Families Citing this family (75)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US10973920B2 (en) 2014-06-30 2021-04-13 Glykos Finland Oy Saccharide derivative of a toxic payload and antibody conjugates thereof
ES2959683T3 (es) 2014-07-15 2024-02-27 Juno Therapeutics Inc Células manipuladas para terapia celular adoptiva
AU2015314744A1 (en) 2014-09-12 2017-03-02 Genentech, Inc. Anti-CLL-1 antibodies and immunoconjugates
US9616114B1 (en) 2014-09-18 2017-04-11 David Gordon Bermudes Modified bacteria having improved pharmacokinetics and tumor colonization enhancing antitumor activity
CN116063565A (zh) 2014-12-05 2023-05-05 纪念斯隆-凯特琳癌症中心 靶向Fc受体样5的嵌合抗原受体及其用途
EP3259285A2 (en) 2015-02-16 2017-12-27 Lonza Ltd Cl and/or ch1 mutated antibodies for drug conjugation
US10676723B2 (en) 2015-05-11 2020-06-09 David Gordon Bermudes Chimeric protein toxins for expression by therapeutic bacteria
WO2016205200A1 (en) 2015-06-16 2016-12-22 Genentech, Inc. Anti-cll-1 antibodies and methods of use
MA42895A (fr) 2015-07-15 2018-05-23 Juno Therapeutics Inc Cellules modifiées pour thérapie cellulaire adoptive
NZ743124A (en) * 2015-12-04 2022-11-25 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Antibodies targeting fc receptor-like 5 and methods of use
JP7105235B2 (ja) 2016-12-01 2022-07-22 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド 免疫ｐｅｔイメージングのための放射性標識された抗ｐｄ－ｌ１抗体
US11129906B1 (en) 2016-12-07 2021-09-28 David Gordon Bermudes Chimeric protein toxins for expression by therapeutic bacteria
US11180535B1 (en) 2016-12-07 2021-11-23 David Gordon Bermudes Saccharide binding, tumor penetration, and cytotoxic antitumor chimeric peptides from therapeutic bacteria
IL268667B2 (en) 2017-02-10 2024-12-01 Regeneron Pharma Radiolabeled antibodies against LAG3 for immuno-PET imaging
MX2020000916A (es) 2017-07-24 2020-09-10 Regeneron Pharma Anticuerpos anti-cd8 y usos de estos.
KR20200097253A (ko) 2017-11-01 2020-08-18 주노 쎄러퓨티크스 인코퍼레이티드 T 세포 조성물의 생산방법
WO2019089858A2 (en) 2017-11-01 2019-05-09 Juno Therapeutics, Inc. Methods of assessing or monitoring a response to a cell therapy
WO2019089848A1 (en) 2017-11-01 2019-05-09 Juno Therapeutics, Inc. Methods associated with tumor burden for assessing response to a cell therapy
JP7447006B2 (ja) 2017-11-01 2024-03-11 ジュノー セラピューティクス インコーポレイテッド Ｂ細胞成熟抗原（ｂｃｍａ）に特異的なキメラ抗原受容体
CN111511370A (zh) 2017-11-01 2020-08-07 朱诺治疗学股份有限公司 对b细胞成熟抗原具有特异性的抗体和嵌合抗原受体
SG11202003688PA (en) 2017-11-01 2020-05-28 Juno Therapeutics Inc Process for generating therapeutic compositions of engineered cells
TW201925782A (zh) 2017-11-30 2019-07-01 瑞士商諾華公司 靶向bcma之嵌合抗原受體及其用途
KR102862251B1 (ko) 2017-12-08 2025-09-22 주노 쎄러퓨티크스 인코퍼레이티드 세포 요법을 위한 표현형 마커 및 관련 방법
SG11202005272SA (en) 2017-12-08 2020-07-29 Juno Therapeutics Inc Process for producing a composition of engineered t cells
WO2019113556A1 (en) 2017-12-08 2019-06-13 Juno Therapeutics, Inc. Serum-free media formulation for culturing cells and methods of use thereof
EP3737692A4 (en) 2018-01-09 2021-09-29 Elstar Therapeutics, Inc. CALRETICULIN AND MODIFIED T-LYMPHOCYTES BINDING CONSTRUCTIONS FOR THE TREATMENT OF DISEASES
CN118772287A (zh) 2018-02-08 2024-10-15 豪夫迈·罗氏有限公司 双特异性抗原结合分子和使用方法
US12152073B2 (en) 2018-03-14 2024-11-26 Marengo Therapeutics, Inc. Multifunctional molecules that bind to calreticulin and uses thereof
IL317554A (en) 2018-06-01 2025-02-01 Novartis Ag Anti-BCMA binding molecules and their uses
US20210123075A1 (en) 2018-06-08 2021-04-29 Novartis Ag Compositions and methods for immunooncology
WO2020010250A2 (en) 2018-07-03 2020-01-09 Elstar Therapeutics, Inc. Anti-tcr antibody molecules and uses thereof
AR116109A1 (es) 2018-07-10 2021-03-31 Novartis Ag Derivados de 3-(5-amino-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona y usos de los mismos
JP7538109B2 (ja) 2018-08-09 2024-08-21 ジュノー セラピューティクス インコーポレイテッド 組み込まれた核酸を評価するための方法
AU2019374103A1 (en) 2018-11-01 2021-05-20 Juno Therapeutics, Inc. Chimeric antigen receptors specific for G Protein-Coupled Receptor Class C Group 5 Member D (GPRC5D)
AU2019372331A1 (en) 2018-11-01 2021-05-27 Juno Therapeutics, Inc. Methods for treatment using chimeric antigen receptors specific for B-cell maturation antigen
CN113271945A (zh) 2018-12-20 2021-08-17 诺华股份有限公司 包含3-(1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮衍生物的给药方案和药物组合
MX2021009763A (es) 2019-02-15 2021-09-08 Novartis Ag Derivados de 3-(1-oxo-5-(piperidin-4-il)isoindolin-2-il)piperidina -2,6-diona y usos de los mismos.
MX2021009764A (es) 2019-02-15 2021-09-08 Novartis Ag Derivados de 3-(1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona sustituidos y usos de los mismos.
CN119661722A (zh) 2019-02-21 2025-03-21 马伦戈治疗公司 结合t细胞相关癌细胞的多功能分子及其用途
AU2020224681A1 (en) 2019-02-21 2021-09-16 Marengo Therapeutics, Inc. Antibody molecules that bind to NKp30 and uses thereof
BR112021021200A2 (pt) 2019-05-01 2021-12-21 Juno Therapeutics Inc Células expressando um receptor quimérico de um locus cd247 modificado, polinucleotídeos relacionados e métodos
CA3136737A1 (en) 2019-05-01 2020-11-05 Juno Therapeutics, Inc. Cells expressing a recombinant receptor from a modified tgfbr2 locus, related polynucleotides and methods
JP2023507190A (ja) 2019-12-20 2023-02-21 ノバルティス アーゲー 増殖性疾患を治療するための抗ＴＧＦβ抗体及びチェックポイント阻害薬の使用
WO2021138474A2 (en) 2020-01-03 2021-07-08 Marengo Therapeutics, Inc. Anti-tcr antibody molecules and uses thereof
AU2021251265A1 (en) 2020-04-10 2022-11-03 Juno Therapeutics, Inc. Methods and uses related to cell therapy engineered with a chimeric antigen receptor targeting B-cell maturation antigen
US20230178239A1 (en) 2020-05-13 2023-06-08 Juno Therapeutics, Inc. Methods of identifying features associated with clinical response and uses thereof
EP4168007A1 (en) 2020-06-23 2023-04-26 Novartis AG Dosing regimen comprising 3-(1-oxoisoindolin-2-yl)piperidine-2,6-dione derivatives
US20240216508A1 (en) 2020-06-26 2024-07-04 Juno Therapeutics Gmbh Engineered t cells conditionally expressing a recombinant receptor, related polynucleotides and methods
EP4188549A1 (en) 2020-08-03 2023-06-07 Novartis AG Heteroaryl substituted 3-(1-oxoisoindolin-2-yl)piperidine-2,6-dione derivatives and uses thereof
EP4240756A1 (en) 2020-11-04 2023-09-13 Juno Therapeutics, Inc. Cells expressing a chimeric receptor from a modified invariant cd3 immunoglobulin superfamily chain locus and related polynucleotides and methods
AU2021373366A1 (en) 2020-11-06 2023-06-01 Novartis Ag Cd19 binding molecules and uses thereof
WO2022122709A1 (en) 2020-12-07 2022-06-16 Sotio Biotech A.S. Antibody-drug conjugates based on humanized cldn18.2 antibodies
EP4267194A1 (en) 2020-12-23 2023-11-01 SOTIO Biotech a.s. Tumor-specific claudin 18.2 antibody-drug conjugates
CN117693508A (zh) 2021-03-03 2024-03-12 朱诺治疗学股份有限公司 T细胞疗法和dgk抑制剂的组合
TW202304979A (zh) 2021-04-07 2023-02-01 瑞士商諾華公司 抗ＴＧＦβ抗體及其他治療劑用於治療增殖性疾病之用途
GB2623199A (en) 2021-04-08 2024-04-10 Marengo Therapeutics Inc Multifunctional molecules binding to TCR and uses thereof
TW202309294A (zh) 2021-04-27 2023-03-01 瑞士商諾華公司 病毒載體生產系統
KR20240018454A (ko) 2021-05-06 2024-02-13 주노 테라퓨틱스 게엠베하 T 세포의 자극 및 형질도입 방법
US20250101379A1 (en) 2022-01-28 2025-03-27 Juno Therapeutics, Inc. Methods of manufacturing cellular compositions
KR20240158391A (ko) 2022-02-18 2024-11-04 라쿠텐 메디칼, 인크. 항-프로그래밍된 사멸-리간드 1(pd-l1) 항체 분자, 암호화 폴리뉴클레오티드 및 사용 방법
JP2025512342A (ja) 2022-04-13 2025-04-17 ジェネンテック， インコーポレイテッド 治療用タンパク質の医薬組成物および使用方法
WO2023213969A1 (en) 2022-05-05 2023-11-09 Juno Therapeutics Gmbh Viral-binding protein and related reagents, articles, and methods of use
WO2023214325A1 (en) 2022-05-05 2023-11-09 Novartis Ag Pyrazolopyrimidine derivatives and uses thereof as tet2 inhibitors
US20250302954A1 (en) 2022-05-11 2025-10-02 Celgene Corporation Methods to overcome drug resistance by re-sensitizing cancer cells to treatment with a prior therapy via treatment with a t cell therapy
WO2023230548A1 (en) 2022-05-25 2023-11-30 Celgene Corporation Method for predicting response to a t cell therapy
EP4532695A1 (en) 2022-05-25 2025-04-09 Celgene Corporation Methods of manufacturing t cell therapies
CN120152717A (zh) 2022-09-08 2025-06-13 朱诺治疗学股份有限公司 T细胞疗法和连续或间歇dgk抑制剂给药的组合
AU2023369684A1 (en) 2022-10-26 2025-04-17 Novartis Ag Lentiviral formulations
CN116120465B (zh) * 2022-11-01 2023-10-13 邦恩泰(山东)生物医药科技集团股份有限公司 一种靶向bcma和/或fcrh5的嵌合抗原受体及其应用
EP4615960A1 (en) 2022-11-09 2025-09-17 C3S2 GmbH Methods for manufacturing engineered immune cells
WO2024102954A1 (en) 2022-11-10 2024-05-16 Massachusetts Institute Of Technology Activation induced clipping system (aics)
WO2024124132A1 (en) 2022-12-09 2024-06-13 Juno Therapeutics, Inc. Machine learning methods for predicting cell phenotype using holographic imaging
WO2024161021A1 (en) 2023-02-03 2024-08-08 Juno Therapeutics Gmbh Methods for non-viral manufacturing of engineered immune cells
CN116789849B (zh) * 2023-04-12 2024-03-08 南京紫珑生物科技有限公司 一种嵌合抗原受体及其应用
TW202525277A (zh) * 2023-08-10 2025-07-01 瑞典商阿斯特捷利康公司 蒽環黴素衍生物和綴合物及其用途

Family Cites Families (39)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4975278A (en) 1988-02-26 1990-12-04 Bristol-Myers Company Antibody-enzyme conjugates in combination with prodrugs for the delivery of cytotoxic agents to tumor cells
WO1995009864A1 (en) 1993-10-01 1995-04-13 Teikoku Hormone Mfg. Co., Ltd. Novel peptide derivative
US20030083461A1 (en) 1997-06-16 2003-05-01 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
US6248564B1 (en) 1997-08-29 2001-06-19 Harvard University Mutant MHC class I molecules
US7105149B1 (en) 1999-11-29 2006-09-12 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Isolation of five novel genes coding for new Fc receptors-type melanoma involved in the pathogenesis of lymphoma/myeloma
EP2418212B1 (en) 1999-11-29 2016-06-15 The Trustees of Columbia University in the City of New York Isolation of five novel genes coding for new fc receptors-type melanoma involved in the pathogenesis of lymphoma/melanoma
US20040005561A1 (en) 2000-03-01 2004-01-08 Corixa Corporation Compositions and methods for the detection, diagnosis and therapy of hematological malignancies
US20040018194A1 (en) 2000-11-28 2004-01-29 Francisco Joseph A. Recombinant anti-CD30 antibodies and uses thereof
TWI255272B (en) 2000-12-06 2006-05-21 Guriq Basi Humanized antibodies that recognize beta amyloid peptide
CU23007A1 (es) 2001-04-06 2004-12-17 Ct De Inmunologia Molecular Ct De Inmunologia Mole Combinaciones inmunoterapéuticas para el tratamiencombinaciones inmunoterapéuticas para el tratamiento de tumores que sobre-expresan gangliósidos to de tumores que sobre-expresan gangliósidos
US6884869B2 (en) 2001-04-30 2005-04-26 Seattle Genetics, Inc. Pentapeptide compounds and uses related thereto
WO2002102972A2 (en) 2001-06-20 2002-12-27 Prochon Biotech Ltd. Antibodies that block receptor protein tyrosine kinase activation, methods of screening for and uses thereof
ES2431929T3 (es) 2001-09-18 2013-11-28 Genentech, Inc. Composiciones y procedimientos para el diagnóstico y el tratamiento de tumores
US7858330B2 (en) 2001-10-19 2010-12-28 Genentech, Inc. Compositions and methods for the treatment of tumor of hematopoietic origin
US7888478B2 (en) 2002-09-11 2011-02-15 Genentech, Inc. Compositions and methods for the treatment of tumor of hematopoietic origin
US20050226869A1 (en) 2001-10-19 2005-10-13 Genentech, Inc. Compositions and methods for the treatment of tumor of hematopoietic origin
WO2005063299A2 (en) 2003-12-24 2005-07-14 Genentech, Inc. Compositions and methods for the treatment of tumor of hematopoietic origin
AU2002363939A1 (en) 2001-11-20 2003-06-10 Seattle Genetics, Inc. Treatment of immunological disorders using anti-cd30 antibodies
EP1575514A2 (en) 2002-07-31 2005-09-21 Seattle Genetics, Inc. Anti-cd20 antibody-drug conjugates for the treatment of cancer and immune disorders
EP1391213A1 (en) 2002-08-21 2004-02-25 Boehringer Ingelheim International GmbH Compositions and methods for treating cancer using maytansinoid CD44 antibody immunoconjugates and chemotherapeutic agents
BR122018071808B8 (pt) 2003-11-06 2020-06-30 Seattle Genetics Inc conjugado
WO2005082023A2 (en) * 2004-02-23 2005-09-09 Genentech, Inc. Heterocyclic self-immolative linkers and conjugates
EP1753463A2 (en) 2004-06-01 2007-02-21 Genentech, Inc. Antibody drug conjugates and methods
US7521541B2 (en) 2004-09-23 2009-04-21 Genetech Inc. Cysteine engineered antibodies and conjugates
US7999077B2 (en) * 2004-09-30 2011-08-16 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services IRTA2 antibodies and methods of use
US7947839B2 (en) 2004-12-01 2011-05-24 Genentech, Inc. Heterocyclic-substituted bis-1,8 naphthalimide compounds, antibody drug conjugates, and methods of use
US20070134243A1 (en) 2004-12-01 2007-06-14 Gazzard Lewis J Antibody drug conjugates and methods
AU2006204709A1 (en) 2005-01-12 2006-07-20 Medarex, Inc. IRTA-2 antibodies and their uses
US7989595B2 (en) 2005-06-20 2011-08-02 Genentech, Inc. Compositions and methods for the diagnosis and treatment of tumor
WO2008109533A2 (en) 2007-03-02 2008-09-12 Medarex, Inc. Human antibodies that bind multiple irta family proteins, and uses thereof
ES2547552T3 (es) * 2008-02-01 2015-10-07 Genentech, Inc. Metabolito de nemorrubicina y reactivos análogos, conjugados anticuerpo-fármaco y métodos
KR101667062B1 (ko) * 2008-07-15 2016-10-17 제넨테크, 인크. 안트라시클린 유도체 접합체, 그의 제조 방법 및 항-종양 화합물로서의 그의 용도
MX2011010264A (es) 2009-04-01 2011-10-11 Genentech Inc Anticuerpos anti-fcrh5 e inmunoconjugados y metodos de uso.
RU2016110891A (ru) * 2009-04-01 2018-11-27 Дженентек, Инк. Антитела к fcrh5, их иммуноконъюгаты и способы их применения
CA2772929A1 (en) 2009-09-03 2011-03-11 Genentech, Inc. Methods for treating, diagnosing, and monitoring rheumatoid arthritis
WO2011130598A1 (en) * 2010-04-15 2011-10-20 Spirogen Limited Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
AR096687A1 (es) 2013-06-24 2016-01-27 Genentech Inc Anticuerpos anti-fcrh5
HRP20240939T1 (hr) 2013-12-17 2024-10-25 Genentech, Inc. Anti-cd3 protutijela i metode uporabe
MA42428B1 (fr) 2015-06-16 2023-10-31 Hoffmann La Roche Anticorps humanisés et à maturation d'affinité dirigés contre fcrh5 et méthodes d'utilisation

Cited By (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US11352431B2 (en) 2013-06-24 2022-06-07 Genentech, Inc. Anti-FCRH5 antibodies
US11186650B2 (en) 2013-12-17 2021-11-30 Genentech, Inc. Anti-CD3 antibodies and methods of use
US12030947B2 (en) 2015-06-16 2024-07-09 Genentech, Inc. Humanized and affinity matured antibodies to FcRH5 and methods of use
US11192950B2 (en) 2015-06-16 2021-12-07 Genentech, Inc. Humanized and affinity matured antibodies to FcRH5 and methods of use
TWI825431B (zh) * 2015-06-16 2023-12-11 美商建南德克公司 FcRH5之人源化及親和力成熟抗體及使用方法
TWI731861B (zh) * 2015-06-16 2021-07-01 美商建南德克公司 FcRH5之人源化及親和力成熟抗體及使用方法
TWI876687B (zh) * 2015-06-16 2025-03-11 美商建南德克公司 FcRH5之人源化及親和力成熟抗體及使用方法
US11466094B2 (en) 2016-11-15 2022-10-11 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-CD20/anti-CD3 bispecific antibodies
US12351643B2 (en) 2020-11-04 2025-07-08 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-CD20/anti-CD3 bispecific antibodies
US12492261B2 (en) 2020-11-04 2025-12-09 Genentech, Inc. Subcutaneous dosing of anti-CD20/anti-CD3 bispecific antibodies
US12516118B2 (en) 2020-11-04 2026-01-06 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-CD20/anti-CD3 bispecific antibodies and anti-CD79b antibody drug conjugates
US12195547B2 (en) 2021-04-30 2025-01-14 Hoffmann-La Roche Inc. Dosing for combination treatment with anti-CD20/anti-CD3 bispecific antibody and anti-CD79B antibody drug conjugate
US12291575B2 (en) 2021-05-14 2025-05-06 Genentech, Inc. Methods for treatment of CD20-positive proliferative disorder with mosunetuzumab and polatuzumab vedotin

Also Published As

Publication number Publication date
MX2015017331A (es) 2016-06-24
JP6684208B2 (ja) 2020-04-22
CN105473618A (zh) 2016-04-06
RS64514B1 (sr) 2023-09-29
HUE036581T2 (hu) 2018-07-30
DK3736291T5 (da) 2024-08-26
DK3013861T3 (da) 2018-01-22
IL269528A (en) 2019-11-28
NZ715125A (en) 2021-08-27
IL243129B (en) 2019-09-26
CA2915480A1 (en) 2014-12-31
SI3336106T1 (sl) 2020-09-30
HRP20201111T1 (hr) 2020-10-30
LT3013861T (lt) 2018-02-12
FI3736291T3 (fi) 2023-09-25
EP3336106B1 (en) 2020-05-27
KR20160022912A (ko) 2016-03-02
LT3336106T (lt) 2020-08-10
AU2014302617B2 (en) 2019-12-19
BR112015032224A2 (pt) 2017-11-07
EP3736291A1 (en) 2020-11-11
US20150098900A1 (en) 2015-04-09
ES2659229T3 (es) 2018-03-14
HK1222663A1 (zh) 2017-07-07
PT3336106T (pt) 2020-08-27
EP3013861A1 (en) 2016-05-04
CN116063515A (zh) 2023-05-05
US20200190185A1 (en) 2020-06-18
RU2019109452A (ru) 2019-05-29
HUE049446T2 (hu) 2020-09-28
MY176285A (en) 2020-07-27
HRP20231323T1 (hr) 2024-02-16
NO2955475T3 (zh) 2018-02-17
EP3336106A1 (en) 2018-06-20
CA2915480C (en) 2023-01-03
DK3336106T3 (da) 2020-07-13
PL3336106T3 (pl) 2020-11-16
SG11201510653YA (en) 2016-01-28
DK3736291T3 (en) 2023-09-25
US20230096941A1 (en) 2023-03-30
RU2016101965A (ru) 2017-07-28
RS56878B1 (sr) 2018-04-30
HK1257261A1 (zh) 2019-10-18
PT3013861T (pt) 2018-02-21
BR112015032224B1 (pt) 2024-01-02
HUE063910T2 (hu) 2024-02-28
JP2016528882A (ja) 2016-09-23
ES2962874T3 (es) 2024-03-21
RS60418B1 (sr) 2020-07-31
SI3013861T1 (en) 2018-04-30
AU2014302617A1 (en) 2016-01-21
ZA201808451B (en) 2021-04-28
HRP20180352T1 (hr) 2018-04-06
US10435471B2 (en) 2019-10-08
JP2020048559A (ja) 2020-04-02
SG10201804338PA (en) 2018-06-28
ES2812243T3 (es) 2021-03-16
MX376663B (es) 2025-03-07
TWI725931B (zh) 2021-05-01
AR096687A1 (es) 2016-01-27
MY191169A (en) 2022-06-03
WO2014210064A1 (en) 2014-12-31
RU2687132C2 (ru) 2019-05-07
ZA201509261B (en) 2019-03-27
PL3013861T3 (pl) 2018-05-30
HK1224313A1 (zh) 2017-08-18
PT3736291T (pt) 2023-11-08
US11352431B2 (en) 2022-06-07
AU2020201918A1 (en) 2020-04-02
LT3736291T (lt) 2023-10-25
EP3013861B1 (en) 2017-11-29
PL3736291T3 (pl) 2024-02-05
SI3736291T1 (sl) 2023-12-29
EP3736291B1 (en) 2023-08-16

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20230096941A1 (en) Anti-fcrh5 antibodies
JP6192022B2 (ja) 抗Ｌｙ６Ｅ抗体及びイムノコンジュゲート並びに使用方法
CN105814084B (zh) 抗cd33抗体和免疫缀合物
TW201343674A (zh) 抗ｌｇｒ５抗體及免疫結合物
JP2017505305A (ja) 抗ｓｔｅａｐ１抗体及びイムノコンジュゲートを使用する方法
JP2016537399A (ja) 抗ｌｇｒ５抗体を使用する方法
HK40091931A (zh) 抗fcrh5抗体
HK1257261B (zh) 抗fcrh5抗体
NZ715125B2 (en) Anti-fcrh5 antibodies
HK1224313B (zh) 抗fcrh5抗體