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TW201300420A - 抗降血鈣素基因相關胜肽（ａｎｔｉ－ｃｇｒｐ）或抗降血鈣素基因相關胜肽受器（ａｎｔｉ－ｃｇｒｐ－ｒ）抗體或抗體片段治療或預防慢性及急性型腹瀉之用途 - Google Patents

抗降血鈣素基因相關胜肽（ａｎｔｉ－ｃｇｒｐ）或抗降血鈣素基因相關胜肽受器（ａｎｔｉ－ｃｇｒｐ－ｒ）抗體或抗體片段治療或預防慢性及急性型腹瀉之用途 Download PDF

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Ann C Raddant
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John A Latham
Jeffrey T L Smith
Leon F Garcia-Martinez
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Abstract

本發明係有關於藉由投予一治療或預防有效量之具有CGRP結合特異性的抗體及其片段而用於治療慢性或急性型腹瀉之方法。該等方法尤其在引起CGRP水平升高之病況或治療中預防或減少腹瀉，如在與腹瀉相關聯的胃腸道(結腸)中及/或腸或泌尿系統的不當電解質與液體排出。更具體地，本發明係有關於使用本文所述的抗CGRP抗體與片段及其結合片段之治療。

Description

抗降血鈣素基因相關胜肽(ANTI-CGRP)或抗降血鈣素基因相關胜肽受器 (ANTI-CGRP-R)抗體或抗體片段治療或預防慢性及急性型腹瀉之用途 相關申請案
本申請案主張於2011年6月14日提出申請及標題為“抗CGRP抗體與抗體片段在患有引起CGRP水平升高的疾病或接受治療之個體中治療腹瀉之用途”之第61/496,873號美國暫准申請案(代理人案號67858.770000)的利益，及主張於2011年5月20日提出申請及標題為“抗降血鈣素基因相關胜肽(抗CGRP)組成物及其用途”之第61/488,660號美國暫准申請案(代理人案號67858.730300)的利益，其中各者在此完整地併入本案以為參考資料。
本申請案含有一序列表，其業已經由EFS-Web以ASCII格式提交及在此完整地併入本案以為參考資料。該ASCII副本係於2012年5月18日創建，檔案名稱為67858o730304.txt及檔案大小為203,920位元。
發明領域
本發明係有關於發現與CGRP或CGRP受器結合的多肽及/或抑制CGRP/CGRP受器交互作用的其他多肽諸如抗CGRP或抗CGRP受器抗體與抗體片段或抑制CGRP/CGRP受器交互作用的CGRP或CGRP受器片段可用於治療或預防腹瀉，尤其與引起CGRP水平升高的病況或治療相關聯之腹瀉。在本文中提及涉及CGRP增加之例示性病況或治療。本發明尤其有關於在患有與CGRP水平升高相關聯的一病況或接受治療之一個體，而該病況或治療引起腹 瀉及/或結腸的電解質與液體通量增加，用於抑制、預防或治療腹瀉及/或維持電解質平衡與結腸中的液體水平之方法，其包括投予一有效量的抗CGRP抗體或抗CGRP抗體片段。例示性病況例如包括功能性腸道異常疾病與發炎性腸道疾病、細菌或病毒感染，及更具體地包括胃食道逆流、消化不良、激躁性腸症候群、功能性腹痛症候群、憩室病與憩室炎、克隆氏(Crohn)症、迴腸炎、膠原性結腸炎、淋巴球性結腸炎、潰瘍性結腸炎、癌症或與CGRP增加及腹瀉相關聯之癌症治療諸如化學療法、放射線治療、甲狀腺髓質癌及結腸直腸癌。
此外，本發明提供在動物模式中篩檢對於人類降血鈣素基因相關胜肽(以下簡稱“CGRP”)具有結合特異性之多肽諸如抗CGRP或抗CGRP受器抗體及其片段(包括Fab片段)以及CGRP或CGRP受器的片段之方法，以測定其活體內效應，特別是其等拮抗CGRP的不良副作用之能力及治療涉及過量CGRP的病況，尤其與腹瀉相關聯的CGRP相關病況或治療。本發明亦有關於用於篩檢與CGRP增加相關及與腹瀉相關聯的疾病與功能失調之方法，及用於預防或治療涉及CGRP及與腹瀉相關聯的疾病與功能失調之特定治療方案，其係藉由單獨投予該抗體或其片段或連同投予其他活性劑而進行。
相關技術之說明
降血鈣素基因相關胜肽(CGRP)係以長度為37 個胺基酸的多功能性神經胜肽形式產生。在人類中存在二種CGRP形式，即CGRP-α與CGRP-β形式，而其等的活性相近。人類的CGRP-α與CGRP-β相差3個胺基酸，及衍生自不同的基因。CGRP胜肽家族包括澱粉素、腎上腺髓素及降血鈣素，然而其等各具有獨特的受器與生物活性。Doods,H.於期刊“Curr.Op.Invest.Drugs”第2(9)期第1261-68頁(2001年)乙文。
CGRP係從諸如三叉神經的多種組織釋出，當三叉神經被活化時，會在腦膜內釋出神經胜肽而媒介神經源性發炎，神經源性發炎的特徵在於血管舒張、血管滲漏及肥大細胞降解。Durham,P.L.於期刊“New Eng.J.Med.”第350(11)期第1073-75頁(2004年)乙文。CGRP的生物效應係經由CGRP受器(CGRP-R)媒介，CGRP受器係由七個跨膜組分聯同受器相關膜蛋白(RAMP)所組成。CGRP-R進一步需要受器組分蛋白(RCP)的活性，其係經由G蛋白與腺苷酸環化酶的高效偶合作用及cAMP生產作用所不可或缺者。Doods,H.於期刊“Curr.Op.Invest.Drugs”第2(9)期第1261-68頁(2001年)乙文。
偏頭痛是神經血管性功能失調，其影響美國約10%的成年人口，及典型伴隨著劇烈頭痛。約20至30%的偏頭痛患者感受到前兆，包含在偏頭痛事件之前及/或伴隨發生的局灶性神經系統現象。據信CGRP在偏頭痛的發生扮演一顯著角色。例如，在偏頭痛的頭痛期間發現頸靜脈血液中的CGRP血漿濃度升高，而其他神經胜肽並未升高。此 外，Arulmozhi等人指出，在偏頭痛患者中發現下列各項：(1)在血漿CGRP濃度與偏頭痛之間存在很強的相關性；(2)輸注CGRP產生偏頭痛式的頭痛；(3)基線CGRP水平升高；及(4)偏頭痛發作期間之血漿CGRP水平係與頭痛劇烈程度顯著相關聯。Arulmozhi,D.K.等人於期刊“Vas.Pharma.”第43期第176-187頁(2005年)乙文。此外，在期刊“International Association for the Study of Pain PII”：S0304-3959(11)00313-7乙文中及2011年6月6日線上發表的doi：10.1016/j.pain.2011.04.033乙文中，Hou等人報導降血鈣素基因相關胜肽β於角質細胞的表現作用係涉及神經性病變與發炎疼痛機制。
偏頭痛的一種有效治療方法係投予曲普坦(triptan)類，曲普坦是色胺式藥物家族，及包括舒馬普坦(sumatriptan)與利扎曲坦(rizatriptan)。該家族的成員對於包括5-HT1B、5-HT1D及5-HT1F在內的多種血清素受器具有親和性。該藥物家族的成員選擇性地造成腦部血管收縮，但亦在冠狀動脈血管上引發血管收縮效應。Durham,P.L.於期刊“New Eng.J.Med.”第350(11)期第1073-75頁(2004年)乙文。已患有心臟疾病的病患在投藥後有理論上的冠狀動脈痙攣風險，及在服用曲普坦(triptan)類之後，在罕見情況可能發生心臟事件。需注意其禁用於患有冠狀動脈血管疾病的病患。
同樣地，通常經由投予特定的麻醉藥品或非類固醇類消炎藥(NSAID)來對付疼痛。然而，施用該等治療方 法可能要付上某些不良後果的代價。NSAID有可能導致腎臟衰竭、腸出血及肝功能異常。麻醉藥品有可能導致噁心、嘔吐、心智功能受損及成癮。因此，需要另覓疼痛的替代療法，以避免某些該等不良後果。
據信CGRP在多種疾病與功能失調中扮演一角色，包括但不限於偏頭痛、頭痛及疼痛。由於察知CGRP涉及該等與其他功能失調，技藝中仍需要適用於預防或治療與CGRP相關聯的疾病與功能失調之組成物與方法，同時避免不良副作用。技藝中尤其仍需要用於減少或抑制與CGRP相關聯的疾病或功能失調諸如偏頭痛、頭痛及疼痛之組成物或方法。
除了上述病況之外，亦存在對於與CGRP增加相關聯的其他病況或不良副作用之治療需求。就這方面而言，文獻中曾報導的一些軼事性證據顯示，CGRP水平之增加可能在與腹瀉相關聯的一些疾病中扮演一角色。例如，Rolston等人於期刊“Digestive Diseases and Sciences”第34(4)期第612-6頁(1989年4月)之“靜脈內降血鈣素基因相關胜肽刺激活體內大鼠結腸之淨排水量”乙文中，報導外源性降血鈣素基因相關胜肽影響大鼠小腸與大腸中的水與電解質淨通量。其等報導在結紮腸環中，靜脈內降血鈣素基因相關胜肽(CGRP)誘發結腸的液體排出作用，但對於小腸並無效用。其等亦報導使用一種單向灌流技術，其等在CGRP的靜脈內投藥之際觀察到大鼠結腸之立即與呈現劑量依賴性的排水作用，及亦觀察到鈉、鉀與氯化物的淨排出作用之增 加。其等認為該等觀察結果顯示，CGRP的高循環濃度可能涉及甲狀腺髓質癌中所伴隨發生的水瀉症候群。
此外，Keates等人於期刊“Gastroenterology”第114期第956-64頁(1998年)之“在艱難梭狀芽孢桿菌(Clostridium difficile)毒素A所誘發的小鼠腸炎期間之背根神經節與迴腸黏膜中的CGRP向上調控作用”乙文中，報導CGRP可能在毒素A媒介型腹瀉中扮演一角色，及一CGRP拮抗劑實質上抑制毒素A媒介型腹瀉與發炎。
此外，Picard等人於期刊“International Journal of Radiation Biology”第77期第3號第349-356頁(2001年)之“傳入神經在大鼠藉由腹部輻照所誘發的早期腸黏膜改變中之保護性角色”乙文中，報導在腹部輻照後及尤其在放射性腸炎中之CGRP水平增加，放射性腸炎係特徵在於腹瀉與其他炎性反應之一病況。
發明概要
腹瀉患者除了不舒服之外，特別當腹瀉是慢性或嚴重時可危及生命，尤其對於老年病患及嬰兒與幼年孩童以及患有與慢性腹瀉相關聯的疾病諸如癌症與病毒感染之病患而言，慢性腹瀉實質上可耗竭液體與電解質水平。腹瀉有二種基本類型，即急性與慢性。
腹瀉一般歸類為每日有鬆散或水性排便三次或更多次之一病況。它是開發中國家的常見死因，及為全球嬰兒死因的第二位。經由腹瀉流失液體可能造成脫水與 電解質不平衡。在2009年，估計腹瀉造成110萬名五歲以上人士之死亡，及造成150萬名五歲以下孩童之死亡。具有適量電解質的口服脫水補充液(ORS)與鋅片係首選的治療方式，及估計在過去25年已拯救五千萬名孩童。應儘早開始投予ORS。在用ORS治療的頭一或二小時，確實時常發生嘔吐，但這現象鮮少阻止成功的補充水分，因大部分的液體仍被吸收了。世界衛生組織(WHO)建議若孩童嘔吐時，則等候五或十分鐘，然後再度開始及更緩慢地進行。
WHO所建議的自製溶液包括加鹽飲料(如加鹽的米水或加鹽優酪乳飲料)及加鹽的蔬菜或雞湯。如果可取得，可在該自製溶液中添加增補性鉀以及增補性鋅，或與自製溶液一起服用。亦建議若是腹瀉患者能夠，則應持續或恢復進食，因進食加速正常腸功能之恢復，及通常縮短腹瀉持續的時間。乾淨的白水可為所投予的數種液體之一。有商品化溶液諸如倍得力(Pedialyte)，及救援機構諸如聯合國兒童基金會(UNICEF)廣泛派發的鹽包與糖包。
腹瀉除了歸類為慢性與急性之外，該病況亦分成不同類型，該種分類係以起因與疾病的表現為基礎。其中一類型是“分泌性腹瀉”。分泌性腹瀉係指主動分泌作用之增加，或抑制吸收作用。結構之損傷極微或全無。該類型的腹瀉最常見之起因係一種霍亂毒素，其刺激陰離子及尤其是氯離子的分泌作用。在該類型的腹瀉中，即使在禁食期間，腸道所分泌的液體係與血漿等張。[8]< >即使並未從口進食，腹瀉仍持續。
第二種類型是“滲透性腹瀉”。滲透性腹瀉可能在太多的水進入腸道時發生。當個體所喝的溶液具有過量的糖或過量的鹽時，該等糖或鹽可吸引體內的水進入腸內及造成滲透性腹瀉。此外，滲透性腹瀉也可能是消化不良(如胰臟疾病或乳糜瀉)的結果，其中營養素留在腸腔中而吸引水進入。或可能由滲透壓型瀉劑造成(滲透壓型瀉劑係藉由吸引水進入腸內而減輕便秘)。在健康個體中，過多的鎂或維生素C或未消化的乳糖可能產生滲透性腹瀉與腸鼓脹。患有乳糖不耐症的個體在攝取異常大量的乳製品後，可能難以吸收乳糖。在果糖吸收不良的個體中，攝入過多的果糖也可能造成腹瀉。同時具有高葡萄糖含量的高果糖食品之可吸收性更高，及較不易引起腹瀉。糖醇類諸如山梨糖醇(經常存在於無糖食品中)很難被身體吸收，及大量的糖醇類可能導致滲透性腹瀉。
第三種腹瀉類型是“滲出性腹瀉”。發生滲出性腹瀉時，糞便帶有血液與膿。滲出性腹瀉係發生在發炎性腸道疾病諸如克隆氏(Crohn)症或潰瘍性結腸炎，及諸如大腸桿菌(E.coli)的感染或其他形式的食物中毒。
第四種腹瀉類型是“蠕動相關性腹瀉”。蠕動相關性腹瀉係由食物快速移動通過腸道(過度蠕動)所引起。若食物移動通過胃腸道的速度過快，則吸收營養素與水分的時間不足。其可能由於迷走神經切斷術或糖尿病性神經病變，或由於月經併發症。甲狀腺機能亢進症可產生過度蠕動而導致該類型的腹瀉。腹瀉可用抗蠕動劑(諸如洛 哌丁胺(loperamide))治療。在切除一部分的腸道而促使營養素的總吸收時間縮短之個體中，可觀察到過度蠕動現象。
第五種腹瀉類型是“炎性腹瀉”。炎性腹瀉發生於黏膜內襯或刷狀緣受到損傷時，其導致富含蛋白液體之被動式損失，及吸收該等所損失液體之能力降低。在本類型的腹瀉中可發現其他三種類型腹瀉之特性。其可由細菌感染、病毒感染、寄生蟲感染或自體免疫問題諸如發炎性腸道疾病引起。其亦可由結核病、結腸癌及腸炎引起。
與腹瀉相關之一病況是“痢疾”。一般而言，若糞便中帶血，則不是腹瀉，而是痢疾。該血液係腸組織受到侵襲的痕跡。痢疾係志賀桿菌屬(Shigella)、溶組織內阿米巴原蟲(Entamoeba histolytica)及沙門氏桿菌屬(Salmonella)等之一症狀。
腹瀉的最常見原因是輪狀病毒所引起的病毒性胃腸炎，其佔了五歲以下孩童病例的40%。然而就旅客而言，則以細菌感染為主。各種毒素諸如蘑菇中毒與藥物亦可引起急性腹瀉。
如上文所述，腹瀉可分為慢性或急性腹瀉。“慢性腹瀉可為數種影響腸的慢性醫學病況之表現的一部分。常見的起因包括潰瘍性結腸炎、克隆氏(Crohn)症、微小性結腸炎、乳糜瀉、激躁性腸症候群及膽汁酸吸收不良。
感染性腹瀉有多種原因，包括病毒、細菌及寄生蟲。諾羅病毒(Norovirus)是成人病毒性腹瀉最常見的原因，但五歲以下孩童最常見的原因是輪狀病毒。第40與 41型腺病毒與星狀病毒也引起顯著數量的感染。
細菌曲桿菌(Campylobacter)係細菌性腹瀉的常見原因，但由沙門氏桿菌、志賀桿菌及大腸桿菌(Escherichia coli)(大腸桿菌(E.coli))的一些菌株所引起的感染亦經常發生。在老年人中，尤其該等因非相關的感染接受抗生素治療者，由艱難梭狀芽孢桿菌(Clostridium difficile)所產生的一毒素經常引起嚴重腹瀉。
一些寄生蟲諸如梨形鞭毛蟲屬(Giardia)的原生動物及溶組織內阿米巴原蟲(Entamoeba histolytica)可能引起腹瀉，若未被診斷出及用藥物諸如甲硝唑(Metronidazole)治療，則可能引起慢性感染。
慢性腹瀉的其他原因包括：如食物過敏與食物不耐症如乳糜瀉(麩質不耐症)、乳糖不耐症(非歐洲人中所常見之對於乳糖的不耐症)中之酵素缺乏症或黏膜異常；及由於無法吸收維生素B12所造成之果糖吸收不良、惡性貧血或腸功能受損；喪失胰臟分泌作用，其可能由於囊腫纖維症或胰臟炎、結構缺陷如短腸症候群(經手術移除腸道)及輻射後纖維症，諸如通常在癌症治療與其他藥物治療之後發生，包括化學療法中所用的藥劑；及特定藥物，如抑制脂肪吸收之奧利司他(orlistat)。
潰瘍性結腸炎的特點在於慢性帶血型腹瀉及主要影響靠近直腸的遠端結腸之發炎。克隆氏(Crohn)症典型影響結腸中標界良好的腸段及經常影響小腸末端。
腹瀉的另一原因是激躁性腸症候群(IBS)，其 通常出現可由排便疏解的腹部不適及在過去三個月中每星期至少3天出現排便異常(腹瀉或便秘)。可經由改變飲食、可溶性纖維補充劑及/或藥物諸如洛哌丁胺(loperamide)或可待因之組合，來管理腹瀉型IBS的症狀。約30%的腹瀉型IBS病患罹患膽汁酸吸收不良，其可由異常SeHCAT試驗診斷出。
腹瀉的其他原因是慢性酒精攝取；缺血性腸道疾病；微小性結腸炎；膽鹽吸收不良(初級膽汁酸腹瀉)及其中過量的膽汁酸在結腸造成分泌性腹瀉；荷爾蒙分泌型腫瘤(一些荷爾蒙(如血清素)若分泌過量(通常來自一腫瘤)則可能造成腹瀉)。
諸如洛哌丁胺(loperamide)(宜莫痢(Imodium))與鹼式水楊酸鉍之藥物，則可能有利於治療一些腹瀉病況，然而其等在某些情況下可能有所禁忌。
雖然抗生素有利於特定類型的急性腹瀉，其等通常不使用，除非在特定的情況下。事實上，抗生素亦可能引起腹瀉，而抗生素相關型腹瀉係全身性抗生素治療最常見的不良效應。
諸如(佩托比斯摩(Pepto-Bismol))中的鉍化合物可用於治療一些腹瀉病況。此外，抗蠕動劑可用於治療一些腹瀉病況。其等包括洛哌丁胺(loperamide)。有時使用可待因治療腹瀉，來減緩蠕動及排泄物質移動通過腸道。此外，膽汁酸螯合劑諸如膽苯烯胺、考來替泊(colestipol)及考來維侖(colesevelam)在由於膽汁酸吸收不良的慢性腹 瀉中可具有效用。
鋅增補作用可用於治療一些慢性腹瀉病況。益生菌有時可用於減少症狀持續的時間。
如上所述，第二類型的腹瀉是急性腹瀉。急性腹瀉最常見的原因是病毒、細菌及寄生蟲感染。細菌亦可引起急性食物中毒。急性腹瀉的第三種重要原因係開始服用新的藥物。
急性腹瀉的其他特定原因包括病毒性胃腸炎，其係全球急性腹瀉最常見的原因。病毒性胃腸炎可能以散發形式發生(在單獨個體發生)，或以流行形式發生(在群體之間發生)。散發性腹瀉可能由數種不同的病毒引起，及據信因人與人的接觸而傳播。流行性腹瀉(例如在遊輪上)最常見的原因係感染稱為杯狀病毒之一病毒科，其中最常見的是諾羅病毒(norovirus)屬(例如“諾沃克(Norwalk)因子”)。杯狀病毒係因罹病的食物處理人員污染了食物而傳染，或因人與人的接觸而傳染。
急性腹瀉的另一原因是由細菌產生的毒素所引起之食物中毒。該等毒素引起腹痛(痙攣)與嘔吐，亦造成小腸分泌大量的水而導致腹瀉。食物中毒的症狀通常持續不到24小時。有些細菌毒素係在食物被食用前在食物中產生，而其他細菌毒素係在食物被食用後在腸道中產生。
金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)係在食物被食用前在食物中產生毒素之一細菌實例。通常，被葡萄球菌屬(Staphylococcus)污染的食物(諸如沙拉、肉品或 塗有美乃滋的三明治)係在未冷藏情況下在室溫放置過夜。葡萄球菌屬的細菌在食物中增生及產生毒素。產氣莢膜梭孢桿菌(Clostridium perfringens)係在食品(通常為罐裝食品)中增生及當受污染的食物被食用後在小腸產生毒素之一細菌實例。
急性腹瀉的另一原因是通常由大腸桿菌(E.coli)型細菌的致病性菌株所引起之旅遊者腹瀉。有時，其他細菌或寄生蟲可引起旅遊者腹瀉(例如志賀桿菌屬(Shigella)、梨形鞭毛蟲屬(Giardia)、曲桿菌(Campylobacter))。由其他生物體所引起的腹瀉通常持續超過3天。
急性腹瀉的又一原因是細菌性小腸結腸炎，其係當致病性細菌侵襲小腸與結腸時引發小腸結腸炎(小腸與結腸之發炎)。細菌性小腸結腸炎的特徵在於發炎跡象(糞便中有血或膿、發燒)及腹痛與腹瀉。在美國，引起急性小腸結腸炎之最常見的細菌是空腸曲桿菌(Campylobacter jejuni)。引起小腸結腸炎的其他細菌包括志賀桿菌屬(Shigella)、沙門氏桿菌屬(Salmonella)及EPEC。通常因飲用受污染的水或食用受污染的食品諸如蔬菜、家禽及乳製品，而感染該等細菌。
通常由於抗生素治療，而導致由艱難梭狀芽孢桿菌(Clostridium difficile)型細菌所引起的小腸結腸炎。艱難梭狀芽孢桿菌(Clostridium difficile)亦為引起腹瀉之最常見的院內感染(在醫院期間發生的感染)。遺憾的是在未服 用抗生素或未去醫院的個體之間，該感染亦在增加。
急性腹瀉的另一原因是大腸桿菌(E.coli)O157：H7，其係一種大腸桿菌(E.coli)菌株及產生引起出血性小腸結腸炎(具有出血現象的小腸結腸炎)的毒素。在美國曾爆發著名的出血性小腸結腸炎，及追查到起因在於漢堡中的碎牛肉受到污染(因此又稱為漢堡結腸炎)。感染大腸桿菌(E.coli)O157：H7之病患中約5%，尤其是孩童，可能產生溶血性尿毒症候群(HUS)，該症候群可能導致腎臟衰竭。一些證據顯示長期使用止瀉劑或使用抗生素可能增加HUS發生之機會。
急性腹瀉的又一原因是寄生蟲感染，其較常發生在美國以外的地區。例如，登山或在國外旅行的個體發生藍氏梨形鞭毛蟲(Giardia lamblia)感染，及其係由受污染的飲用水傳播。隱孢子蟲屬(Cryptosporidium)係造成腹瀉的另一種寄生蟲，及通常由受污染的水傳播。
急性腹瀉的又一原因是藥物所引發的腹瀉。最常引起腹瀉的藥物是含鎂的制酸劑與營養增補劑。引起腹瀉之其他類型的藥物包括：非類固醇類消炎藥(NSAID)、化療藥物、抗生素、控制心臟跳動不規則的藥物(抗心律不整劑)與高血壓用藥、米索前列醇(misoprostol)(喜克潰(Cytotec))、奎尼丁(quinidine)(奎納格魯(Quinaglute)、奎尼待克斯(Quinidex))、奧沙拉嗪(olsalazine)(Dipentum)、秋水仙素(秋水仙素(Colchicine))、甲氧氯普胺(metoclopramide)(利格蘭(Reglan))及西沙必利(cisapride)(普 瑞博斯(Propulsid)、嗎丁啉(Motilium))。
慢性腹瀉的常見起因包括激躁性腸症候群。感染性疾病諸如藍氏梨形鞭毛蟲(Giardia lamblia)；AIDS感染；細菌在小腸中過度生長；感染後腹瀉，其中個體在急性病毒、細菌或寄生蟲感染後發生慢性腹瀉(亦稱作感染後IBS)；發炎性腸道疾病(IBD)；克隆氏(Crohn)症與潰瘍性結腸炎；及其他疾病造成小腸及/或結腸發炎，通常引起慢性腹瀉，結腸癌及特別是遠端結腸的結腸癌，可能導致大便變稀、嚴重便秘、碳水化合物(糖)吸收不良。諸如乳糖酶缺乏症(亦稱為乳糖或牛乳不耐症)、脂肪吸收不良型胰臟炎或胰臟癌、阻止消化後脂肪的吸收作用之小腸內襯疾病如乳糜瀉、內分泌疾病諸如甲狀腺機能亢進症或低能的腦垂腺或腎上腺(艾迪森氏(Addison)病)及濫用瀉劑。
急性與慢性腹瀉均可能涉及不良併發症，包括身體由於腹瀉而喪失過量的液體與電解質所導致之脫水現象。在排便量大的急性腹瀉成人病患中常見脫水現象，尤其當液體的攝取因精神萎靡或與噁心及嘔吐相關聯而受限時，及在發生病毒胃腸炎或細菌感染的嬰兒與幼年孩童中常見脫水現象。
中度至重度脫水可能造成會發生暈厥的姿勢性低血壓(站立時由於血液體積減少而暈倒及血液體積之減少造成站立時的血壓降低)、尿量減少、重度虛弱、休克、腎臟衰竭、混淆意識、酸中毒(血液中的酸過多)及甚至昏迷。
當長期或重度腹瀉時，電解質(礦物質)亦隨著 水而流失，及可能發生礦物質或電解質缺乏症。其中最常發生鈉與鉀的缺乏症。亦可能發生氯化物與碳酸氫鹽異常。最後，由於含有刺激性物質的水狀糞便經常通過而可能刺激肛門。
因此，預防或治療諸如上述不同形式的腹瀉及特別是急性或慢性腹瀉之一種有效方法，將是有利的。
沿著這條思路，本發明提供用於治療或預防CGRP相關型腹瀉之方法與藥物，其包括投予與CGRP或CGRP受器結合的至少一種多肽及/或抑制CGRP/CGRP受器交互作用之一多狀。該等多肽包括抗CGRP或抗CGRP受器抗體與抗體片段，及抑制CGRP/CGRP受器交互作用之CGRP或CGRP受器的片段或變異體。該等療法有效治療或預防腹瀉，特別是因與CGRP水平增加相關聯的疾病病況或治療而發生之腹瀉，如胃腸系統及更特別是結腸中之CGRP水平增加。
本發明尤其有關於在患有引起腹瀉及/或結腸的電解質與液體通量增加之一病況(如胃腸病況、癌症、病毒或感染性功能失調)或與導致CGRP水平升高相關聯之治療(諸如輻射或化學療法)之一個體，用於抑制、預防或治療腹瀉及/或維持電解質平衡與結腸中的液體水平之方法，其包括投予一有效量的抗CGRP抗體或抗CGRP抗體片段。該等病況例如包括功能性腸道異常疾病與發炎性腸道疾病、細菌或病毒所引發之腹瀉、輻射與化學療法，及更具體地包括選自由胃食道逆流、消化不良、激躁性腸症候群、功 能性腹痛症候群、憩室病與憩室炎所組成之群組之功能性腸道異常疾病；選自由克隆氏(Crohn)症、迴腸炎、膠原性結腸炎、淋巴球性結腸炎及潰瘍性結腸炎所組成之群組之發炎性腸道疾病；及與腹瀉相關聯的癌症諸如甲狀腺髓質癌與結腸直腸癌。
本發明亦有關於在動物模式中篩檢對於人類降血鈣素基因相關胜肽(以下簡稱“CGRP”)或CGRP受器具有結合特異性或抑制CGRP/CGRP受器交互作用之抗體及其片段(包括Fab片段)之方法，來測定其活體內效應，特別是其等拮抗CGRP的不良副作用及在涉及過量CGRP的病況或療法中治療或預防腹瀉之能力。
此外，本發明涉及評估一種候選的抗CGRP抗體或抗體片段或抑制CGRP/CGRP受器交互作用的另一多肽用於治療或預防腹瀉之潛在活體內功效之一種方法，其包括測定該抗體或其他多肽是否在投予外源性CGRP的一囓齒動物中抑制腹瀉，及與在該候選的CGRP抗體或抗體片段或其他多肽抑制劑不存在下投予CGRP之一囓齒動物相比較。
此外，本發明涉及投予一種抗CGRP或抗CGRP受器抗體或抗體片段或抑制CGRP/CGRP受器交互作用的另一多肽之一種方法，該方法係用於治療特徵在於CGRP水平增加之神經與疼痛病況，而該等病況係與腹瀉相關聯。
本發明亦有關於用於治療與腹瀉相關聯的一 病況之藥物，該病況係選自胃食道逆流、消化不良、激躁性腸症候群、功能性腹痛症候群，憩室病、憩室炎、克隆氏(Crohn)症、迴腸炎、膠原性結腸炎、淋巴球性結腸炎及潰瘍性結腸炎、甲狀腺髓質癌或結腸直腸癌。
本發明進一步有關於基於一囓齒動物的CGRP動物模式中之結果，評估該候選的抗體或抗體片段在人類中用於預防或治療CGRP相關型腹瀉之一適宜治療劑量或給藥方案之方法。
本發明另進一步有關於在患有引起腹瀉及/或結腸的電解質與液體通量增加之與CGRP水平升高相關聯的一病況之一個體，用於抑制、預防或治療腹瀉及/或維持電解質平衡及結腸中的液體水平之組成物，其包含一有效量的一種抗CGRP或抗CGRP受器抗體或抗CGRP或抗CGRP受器抗體片段，及選擇性地包含另一活性劑。
就此而言，本發明特別有關於組成物，其係用於治療或預防功能性腸道異常疾病或發炎性腸道疾病、細菌或病毒所引發之腹瀉、與腹瀉相關聯的癌症諸如甲狀腺髓質癌或結腸直腸癌，及例如包括胃食道逆流、消化不良、激躁性腸症候群、功能性腹痛症候群、憩室病與憩室炎之功能性腸道異常疾病或發炎性腸道疾病；或選自由克隆氏(Crohn)症、迴腸炎、膠原性結腸炎、淋巴球性結腸炎及潰瘍性結腸炎所組成之群組之發炎性腸道疾病。其中該等療法投予一有效量的一種抗CGRP抗體或抗體片段，該抗體或抗體片段係以單一藥物療法方式投藥或與另一活性劑 合併投藥。
本發明的較佳實施例係有關於特異性抗體及其片段用於治療或預防與CGRP水平增加相關聯的疾病或治療中之腹瀉之治療用途，該抗體或抗體片段具有CGRP結合特異性，特別是具有所欲的抗原決定位特異性、高親和性或結合性及/或功能性質之抗體。本發明的其他較佳實施例係有關於分析法及本文所述抗體之用途，其包含本文所述之VH、VL及CDR多肽的序列及編碼其等的聚核苷酸。本發明的一個較佳實施例係有關可與CGRP結合的嵌合或人化抗體及其片段(包括Fab片段)及/或抑制藉由CGRP與CGRP受器(“CGRP-R”)的結合作用所媒介之生物活性。
在本發明的另一較佳實施例中，該分析法與療法使用全長抗體及其Fab段，在導致CGRP水平增加的疾病或病況中治療或預防腹瀉，及抑制由CGRP-α、CGRP-β及大鼠CGRP所驅動的cAMP生產作用。在本發明的又一較佳實施例中，設想全長及其Fab片段在投藥後減少領受者的血管舒張作用。
在本發明的另一實施例中，可與CGRP結合的嵌合或人化抗體及其片段(包括Fab片段)或CGRP受器係適用在導致CGRP水平增加的疾病或病況中朝向減少、治療或預防腹瀉之方法中，該疾病或病況諸如偏頭痛(不論有無前兆)、癌症或腫瘤、與癌症或腫瘤生長相關聯之血管生成作用、與癌症或腫瘤存活相關聯之血管生成作用、體重減輕、疼痛、偏癱性偏頭痛、叢發性頭痛、偏頭痛性神經痛、慢 性頭痛、緊張性頭痛、一般性頭痛、熱潮紅、慢性陣發性半邊頭痛、由於頭部或頸部的潛在構造問題所引起之次發性頭痛、顱部神經痛、鼻竇性頭痛(諸如例如與鼻竇炎相關者)及過敏所引發的頭痛或偏頭痛。
在本發明的另一實施例中，可與CGRP結合之嵌合或人化抗體及其片段(包括Fab片段)係適用於朝向減少、治療或預防下列各者之方法中：腹瀉及與胃食道逆流、消化不良、激躁性腸症候群、發炎性腸道疾病、克隆氏症、迴腸炎、潰瘍性結腸炎、腎絞痛、痛經、膀胱炎、經期、分娩、停經、攝護腺炎或胰臟炎相關聯的內臟疼痛。
在本發明的另一實施例中，該等抗體與人化抗體係在導致CGRP水平增加的疾病或病況中用於治療或預防腹瀉，該等抗體與人化抗體可自兔免疫細胞(B淋巴球)衍生，及可基於其等與人類生殖細胞系序列的同源性(序列一致性)而加以選擇。該等抗體可能需要很少的序列改質作用或全無序列改質作用，以使得有助於在人化作用後保有功能性質。本發明的又一實施例係有關包含VH、VL及CDR多肽之抗CGRP抗體的片段，如自兔免疫細胞及編碼其等之聚核苷酸所衍生者，以及該等抗體片段及編碼其等的聚核苷酸在創建可與CGRP及/或CGRP/CGRP-R複合體結合的新穎抗體與多肽組成物之用途，該等組成物係在導致CGRP水平增加的疾病或病況中用於治療或預防腹瀉。
本發明亦設想抗CGRP抗體及其結合片段與一或多種功能性或可檢測性基團接合之接合物，其係在導 致CGRP水平增加的疾病或病況中用於治療或預防腹瀉。本發明亦設想製造該嵌合或人化抗CGRP或抗CGRP/CGRP-R複合抗體及其結合片段之方法，其等係在導致CGRP水平增加的疾病或病況中用於治療或預防腹瀉。在一實施例中，結合片段包括但不限於Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv、scFv片段、SMIP(小分子免疫藥劑)、駱駝抗體、奈米抗體及IgNAR。
本發明的實施例係有關於抗CGRP抗體及其結合片段用於診斷、評估與治療與CGRP或其異常表現相關聯的疾病與功能失調之用途，該等疾病與功能失調係因CGRP水平增加而引起腹瀉。本發明亦設想抗CGRP抗體的片段用於診斷、評估與治療與CGRP或其異常表現相關聯的疾病與功能失調之用途，諸如其中腸道CGRP水平增加而引起腹瀉之疾病或病況。本發明的其他實施例係有關於在重組型宿主細胞中，例如在哺乳類動物細胞諸如CHO、NSO或HEK293細胞中，或在酵母菌細胞(例如諸如二倍體畢赤酵母屬(Pichia)之二倍體酵母菌)與其他酵母菌株中，生產抗CGRP抗體或其片段。
圖式中數個視圖之簡單說明
第1圖提供對應於全長抗體Ab1之聚核苷酸與多肽序列。
第2圖提供對應於全長抗體Ab2之聚核苷酸與多肽序列。
第3圖提供對應於全長抗體Ab3之聚核苷酸與多肽序列。
第4圖提供對應於全長抗體Ab4之聚核苷酸與多肽序列。
第5圖提供對應於全長抗體Ab5之聚核苷酸與多肽序列。
第6圖提供對應於全長抗體Ab6之聚核苷酸與多肽序列。
第7圖提供對應於全長抗體Ab7之聚核苷酸與多肽序列。
第8圖提供對應於全長抗體Ab8之聚核苷酸與多肽序列。
第9圖提供對應於全長抗體Ab9之聚核苷酸與多肽序列。
第10圖提供對應於全長抗體Ab10之聚核苷酸與多肽序列。
第11圖提供對應於全長抗體Ab11之聚核苷酸與多肽序列。
第12圖提供對應於全長抗體Ab12之聚核苷酸與多肽序列。
第13圖提供對應於全長抗體Ab13之聚核苷酸與多肽序列。
第14圖提供對應於全長抗體Ab14之聚核苷酸與多肽序列。
第15圖提供遵循下文第1例中用於抗體Ab1、Ab2、Ab3及Ab4的操作程序所獲得之CGRP-α ELISA結合數 據。
第16圖提供遵循下文第1例中用於抗體Ab5、Ab6、Ab7及Ab8的操作程序所獲得之CGRP-α ELISA結合數據。
第17圖提供遵循下文第1例中用於抗體Ab9、Ab10及Ab14的操作程序所獲得之CGRP-α ELISA結合數據。
第18圖提供遵循下文第1例中用於抗體Ab11、Ab12及Ab13的操作程序所獲得之CGRP-α ELISA結合數據。
第19圖顯示遵循下文第1例中的操作程序所獲得之抗體Ab1、Ab2及Ab4對於CGRP-α驅動的cAMP生產作用之抑制作用。
第20圖顯示遵循下文第1例中的操作程序所獲得之抗體Ab3對於CGRP-α驅動的cAMP生產作用之抑制作用。
第21圖遵循下文第1例中的操作程序所獲得之抗體Ab5與Ab6對於CGRP-α驅動的cAMP生產作用之抑制作用。
第22圖顯示遵循下文第1例中的操作程序所獲得之抗體Ab7、Ab8、Ab9及Ab10對於CGRP-α驅動的cAMP生產作用之抑制作用。
第23圖顯示遵循下文第1例中的操作程序所獲得之抗體Ab11、Ab12及Ab13對於CGRP-α驅動的cAMP 生產作用之抑制作用。
第24圖顯示遵循下文第1例中的操作程序所獲得之抗體Ab14對於CGRP-α驅動的cAMP生產作用之抑制作用。
第25圖顯示遵循下文第1例中的操作程序所獲得之抗體Ab1、Ab2及Ab3對於CGRP-β驅動的cAMP生產作用之抑制作用。
第26圖顯示遵循下文第1例中的操作程序所獲得之抗體Ab4、Ab5及Ab6對於CGRP-β驅動的cAMP生產作用之抑制作用。
第27圖顯示遵循下文第1例中的操作程序所獲得之抗體Ab7與Ab8對於CGRP-β驅動的cAMP生產作用之抑制作用。
第28圖顯示遵循下文第1例中的操作程序所獲得之抗體Ab9、Ab10及Ab14對於CGRP-β驅動的cAMP生產作用之抑制作用。
第29圖顯示遵循下文第1例中的操作程序所獲得之抗體Ab11、Ab12及Ab13對於CGRP-β驅動的cAMP生產作用之抑制作用。
第30圖顯示遵循下文第1例中的操作程序所獲得之抗體Ab1、Ab2、Ab4及Ab5對於大鼠CGRP驅動的cAMP生產作用之抑制作用。
第31圖顯示遵循下文第1例中的操作程序所獲得之抗體Ab3與Ab6對於大鼠CGRP驅動的cAMP生產作 用之抑制作用。
第32圖顯示遵循下文第1例中的操作程序所獲得之抗體Ab7與Ab8對於大鼠CGRP驅動的cAMP生產作用之抑制作用。
第33圖顯示遵循下文第1例中的操作程序所獲得之抗體Ab9對於大鼠CGRP驅動的cAMP生產作用之抑制作用。
第34圖顯示遵循下文第1例中的操作程序所獲得之抗體Ab10對於大鼠CGRP驅動的cAMP生產作用之抑制作用。
第35圖顯示遵循下文第1例中的操作程序所獲得之抗體Ab11與Ab12對於大鼠CGRP驅動的cAMP生產作用之抑制作用。
第36圖顯示遵循下文第1例中的操作程序所獲得之抗體Ab13對於大鼠CGRP驅動的cAMP生產作用之抑制作用。
第37圖顯示遵循下文第1例中的操作程序所獲得之抗體Ab14對於大鼠CGRP驅動的cAMP生產作用之抑制作用。
第38圖顯示遵循下文第6例中的操作程序所獲得之抗體Ab1-Ab13對於經放射性標記的CGRP與CGRP-R的結合作用之抑制作用。
第39圖顯示相對於一對照組抗體，在大鼠模式中藉由投予抗體Ab3與Ab6接著投予辣椒素所獲得之血 管舒張作用之降低，其係遵循下文第7例中的操作程序而獲得。
第40圖顯示相對於一對照組抗體，在大鼠模式中藉由投予不同濃度的抗體Ab6接著投予辣椒素所獲得之血管舒張作用之降低，其係遵循下文第7例中的操作程序而獲得。
第41圖包含實驗結果，其中評估CGRP在基因轉殖型Nestin/hRamp1小鼠中之效應。數據顯示大鼠CGRP-α投藥作用在Nestin/hRAMP1 tg小鼠中引發腹瀉，及腹膜內注射Ab3(在CGRP投藥前約24小時投予30毫克/公斤)在Nestin/hRAMP1 tg小鼠中抑制由腦室內(ICV)注射大鼠CGRP-α所引發之腹瀉。
第42圖包含實驗結果，其顯示在C57BL/6J小鼠中，由腦室內(ICV)方式注射的人類CGRP-α係以具劑量依賴性方式引發腹瀉。
第43圖包含實驗結果，其顯示在C57/BL6J小鼠中，Ab3的腹膜內注射作用(在人類CGRP-α投藥前約24小時以腹膜內方式投予30毫克/公斤)抑制經ICV注射的人類CGRP-α所引發之腹瀉。
第44圖包含實驗結果，其顯示在C57/BL6J小鼠中，Ab3(在人類CGRP-α投藥前約24小時以腹膜內方式投予30毫克/公斤)抑制經腹膜內注射的人類CGRP-α所引發之腹瀉。
第45圖顯示Ab3與Ab6(均按10毫克/公斤投予) 預防CGRP所引發的腹瀉。負對照組動物(經一對照組抗體與磷酸鹽緩衝的生理食鹽水治療，左側柱狀)並未發生腹瀉，而80%的正對照組動物(經CGRP與一種負對照組抗體治療，實心柱狀)發生腹瀉。Ab3(斜線條紋柱狀)與Ab6(平行紋線柱狀)的投藥作用分別將腹瀉發生率降至40%與60%。
第46圖顯示第45圖所示實驗之CGRP所引發的腹瀉之糞便毛重。相較於負對照組動物(第一柱狀)，糞便毛重因CGRP投藥作用(第二柱狀)而大幅增加。然而，經Ab3與經Ab6治療的動物顯示糞便毛重大幅減少(分別為第三與第四柱狀)。所示數值係各試驗組的所有動物之平均值±平均值的標準誤差(SEM)。
第47圖係在又一實驗(二種抗體皆按30毫克/公斤投予)中確認Ab3與Ab6預防CGRP所引發的腹瀉。在負對照組動物中未發生腹瀉(經一對照組抗體與磷酸鹽緩衝的生理食鹽水治療，第一柱狀)，但在80%的正對照組動物(實心的第二柱狀)觀察到腹瀉。Ab3(斜線條紋的第三柱狀)與Ab6(平行紋線的第四柱狀)分別將腹瀉發生率降至20%與40%。
第48圖顯示第47圖所示實驗之CGRP所引發的腹瀉之糞便毛重。相較於負對照組動物(空心的第一柱狀)，CGRP的投藥作用(實心的第二柱狀)大幅增加糞便毛重。然而，經Ab6治療的動物顯示糞便毛重大幅減少(格紋的第四柱狀)，而經Ab3治療的動物(平行紋線的第三柱狀)的平均糞便毛重係與負對照組動物(空心的左側柱狀)相 若。所示數值係各試驗組的所有動物之平均值±平均值的標準誤差(SEM)。
較佳實施例之詳細說明 定義
需瞭解本發明不侷限於特定方法論、操作程序、細胞株、動物的物種或屬及所述試劑，因這些可能有所不同。亦應瞭解本文中所用的術語僅為了敘述具體實施例之目的，及並非意欲限制本發明的範圍，本發明的範圍僅受到所附申請專利範圍之限制。如本文中所用之單數形式的“一(a)”、”一(an)”及“該”係包括複數的所指對象，除非上下文顯然另有規定。因此，例如凡述及“一細胞”時，係包括該等細胞中之多者；而凡述及“該蛋白”時，係包括一或多種蛋白及嫻熟技藝者所熟知之等效物，依此類推。本文中所用的所有技術與科學用語的含義，係與具有本發明所屬技術的一般技能者通常理解的含義相同，除非顯然另有規定。
降血鈣素基因相關胜肽(CGRP)：如本文中所用之CGRP不僅包含可從美國胜肽(American Peptides)公司(美國加州桑尼維爾(Sunnyvale))與巴亨(Bachem)公司(美國加州托倫斯(Torrance))取得之下列智人(Homo sapiens)CGRP-α與智人(Homo sapiens)CGRP-β胺基酸序列：CGRP-α：ACDTATCVTHRLAGLLSRSGGVVKNNFVPTNVGSKAF-NH2(序列辨識編號：281)，其中胺基端苯丙胺 酸係經醯胺化；CGRP-β：ACNTATCVTHRLAGLLSRSGGMVKSNFVPTNVGSKAF-N H2(序列辨識編號：282)，其中胺基端苯丙胺酸係經醯胺化；但亦包含該等CGRP胺基酸序列的任何膜結合形式，以及突變體(mutant)(突變體(mutien))、剪接變異體、異構體、直系同源物、同源物及該序列的變異體。本文中之CGRP係尤其包含囓齒動物的CGRP與其他哺乳類動物的CGRP序列。
本文之“CGRP受器”包括CGRP所特異性結合的所有內源性受器，包括人類與囓齒動物的CGRP及其他哺乳類動物CGRP。“CGRP受器”亦包括CGRP所特異性結合的CGRP受器之突變體、剪接變異體、異構體、直系同源物、同源物、片段及變異體。尤其，本文之CGRP受器包括人類、大鼠、小鼠及非人類靈長類動物CGRP受器及其他哺乳類動物的CGRP受器序列。
本文之“CGRP/CGRP受器抑制劑”係指一分子，較佳為抑制CGRP與其受器的交互作用之一種多肽，諸如一抗體或抗體片段。非限制性實例包括與CGRP或CGRP受器及CGRP或CGRP受器的片段特異性結合之抗體與抗體片段。
“腹瀉”係指排便頻率增加或糞便較無法成形(糞便較為鬆散)。雖然排便頻率與糞便鬆散度之變化係各自獨立，二者經常同時發生變化。需要區別腹瀉與其他四種病況。雖然該等病況可能伴有腹瀉，其等的起因與治療時 常與腹瀉不同。該等其他病況為：排便失禁，其係無法控制(延遲)排便直到適當時間，例如直到該個體可以上廁所時；直腸急迫感，其係突然有排便的強烈衝動，如果廁所無法立即可用則會失禁；排便不完全，其係在排便後不久，又感覺需要再排便，然而在第二次排便時很難再排出糞便；及在用餐後立即排便。
可基於排便頻率或糞便硬度(鬆散度)，就絕對或相對而言界定腹瀉。
排便頻率。絕對性腹瀉係排便多於正常。因此，因為健康個體每日排便次數最多約三次，可將腹瀉界定為超過三次的任何排便次數。相對性腹瀉係排便多於平常。因此，若通常一天排便一次之個體開始一天排便二次，則出現腹瀉，即使一天的排便不超過三次，亦即並無絕對性腹瀉。
糞便的硬度。較難基於糞便硬度來界定絕對性腹瀉，因為健康個體的糞便硬度可能因其等的膳食而有很大差異。因此，食用大量蔬菜的個體之糞便將比食用少量蔬菜的個體來得鬆散。液狀或水狀糞便總是不正常及被視為腹瀉。較容易基於糞便硬度來界定相對性腹瀉。因此，個體的糞便若比平常鬆散即為腹瀉，即使糞便硬度可能位於正常範圍內亦然。
腹瀉一般分為二種類型，即急性與慢性。急性腹瀉持續數天至最多一個星期。慢性腹瀉可按數種方式界定，但幾乎總是持續超過三個星期。急性與慢性腹瀉通 常具有不同的起因，所需的診斷試驗不同，而所涉及的治療亦通常不相同。
“治療或預防CGRP所引發的腹瀉”係指相對於未經治療的一個體，該項治療如一種抗CGRP抗體或片段的投藥作用係在需要的一個體中有效抑制或治療腹瀉及/或維持適當的電解質及結腸中的液體水平。
“CGRP所引發的腹瀉或CGRP相關型腹瀉”係指造成CGRP水平升高之一病況或治療，尤其在胃腸系統及尤其結腸中造成結腸的液體排出作用之增加、電解質平衡受損及一或多次的水狀排便(腹瀉)中之一或多者。
本文之“引發CGRP相關型腹瀉之治療”係指造成與腹瀉相關聯的CGRP水平增加之一疾病病況之任何治療，如輻射、化學療法、藥物療法。
“CGRP相關型疾病或病況”係與CGRP水平增加相關聯之任何疾病或病況，其係相對於正常個體的CGRP水平而言。
配對勝任型酵母菌物種：在本發明中係意欲廣泛包括可在培養中生長的任何二倍體或四倍體酵母菌。該酵母菌物種可能以單倍體、二倍體或其他多倍體形式存在。在適當的條件下，一特定倍體的細胞可能以該形式增殖無限世代。二倍體細胞亦可產孢而形成單倍體細胞。序列配對可經由進一步配對或融合二倍體菌株而產生四倍體菌株。本發明設想單倍體酵母菌以及例如藉由配對或球形質體融合產生的二倍體或其他多倍體酵母菌細胞之用途。
在本發明的一實施例中，配對勝任型酵母菌係釀母菌科(Saccharomycetaceae)之一成員，其包括下列各屬：Arxiozyma、Ascobotryozyma、固囊酵母屬(Citeromyces)、德巴利酵母屬(Debaryomyces)、德克酵母屬(Dekkera)、假囊酵母屬(Eremothecium)、伊薩酵母屬(Issatchenkia)、釀酒酵母屬(Kazachstania)、克魯維酵母屬(Kluyveromyces)、柯達菌屬(Kodamaea)、路德酵母屬(Lodderomyces)、管囊酵母屬(Pachysolen)、畢赤酵母屬(Pichia)、酵母菌屬(Saccharomyces)、子囊酵母菌屬(Saturnispora)、Tetrapisispora、有孢圓酵母屬(Torulaspora)、擬感爾酵母屬(Williopsis)及接合酵母菌屬(Zygosaccharomyces)。可能適用於本發明中之其他酵母菌類型包括耶鲁維亞酵母屬(Yarrowia)、紅冬孢酵母屬(Rhodosporidium)、假絲酵母菌屬(Candida)、漢遜氏酵母菌屬(Hansenula)、Filobasium、鎖擲酵母屬(Sporidiobolus)、布勒擲孢酵母屬(Bullera)、白冬孢酵母屬(Leucosporidium)及線黑粉菌屬(Filobasidella)。
在本發明的一個較佳實施例中，配對勝任型酵母菌係畢赤酵母屬(Pichia)之一成員。在本發明的又一較佳實施例中，屬於畢赤酵母屬(Pichia)的配對勝任型酵母菌係下列物種之一：巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)、甲醇畢赤酵母(Pichia methanolica)及多形漢遜氏酵母(Hansenula polymorpha)(安格斯畢赤酵母(Pichia angusta))。在本發明的一個特佳實施例中，屬於畢赤酵母屬(Pichia)的配對勝任型酵母菌係巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)。
單倍體酵母菌細胞：具有其正常基因體(染色體)補體的單套各基因之一細胞。
多倍體酵母菌細胞：具有其正常基因體(染色體)補體的多套各基因之一細胞。
二倍體酵母菌細胞：具有其正常基因體(染色體)補體之二套(對偶基因)的實質上每個基因之一細胞，其係典型藉由二個單倍體細胞的融合(配對)方法形成。
四倍體酵母菌細胞：具有其正常基因體(染色體)補體之四套(對偶基因)的實質上每個基因之一細胞，其係典型藉由二個單倍體細胞的融合(配對)方法形成。四倍體可帶有二個、三個、四個或更多個不同的表現組合體。該等四倍體可在釀酒酵母(S.cerevisiae)中藉由選擇性配對同型接合的異宗配合a/a與α/α二倍體而獲得，及在畢赤酵母屬(Pichia)中藉由單倍體的序列配對而獲得營養缺陷型二倍體。例如，一[甲硫胺酸 組胺酸]單倍體可與[腺嘌呤 組胺酸]單倍體配對而獲得二倍體[組胺酸]；及一[甲硫胺酸 精胺酸]單倍體可與[腺嘌呤 精胺酸]單倍體配對而獲得二倍體[精胺酸]；然後二倍體[組胺酸]x二倍體[精胺酸]而獲得四倍體原始營養型。嫻熟技藝者將瞭解所述之二倍體細胞的益處與用途，亦可適用於四倍體細胞。
酵母菌配對：二個單倍體酵母菌細胞自然融合而形成一個二倍體酵母菌細胞之過程。
減數分裂：二倍體酵母菌細胞進行減數分裂而形成四個單倍體孢子產物之過程。各孢子然後可萌發及 形成無性生長的單倍體細胞株。
篩選標記：篩選標記係一基因或基因片段，其在例如經由一轉形事件而領受該基因的一細胞上賦予生長表現型(物理生長特徵)。該篩選標記容許該細胞在未領受該篩選標記基因的細胞無法生長之條件下，在一篩選性生長培養基中存活與生長。篩選標記基因一般分為數種類型，包括：正篩選標記基因，諸如當二種溫度敏感性(“ts”)突變體交互雜交或將一種ts突變體轉形時，賦予一細胞對於抗生素或其他藥物、溫度的抗性之一基因；負篩選標記基因，諸如一生物合成基因，其賦予一細胞在缺乏一特定營養素的培養基中生長之能力及該營養素係不具有該生物合成基因的所有細胞所需者，或諸如使得不具有野生型基因的細胞無法生長之一種誘變型生物合成基因之類。適宜的標記包括但不限於：ZEO、G418、LYS3、MET1、MET3a、ADE1、ADE3、URA3之類。
表現載體：該等DNA載體含有促進操控外來蛋白在標的宿主細胞內的表現作用之元件。便利地，首先在一細菌宿主如大腸桿菌(E.coli)中進行序列操控作用及轉形用DNA的生產作用，及載體通常包括促進該等操控作用之序列，包括一個細菌性複製起點及適當的細菌性篩選標記。篩選標記係編碼轉形宿主細胞在一篩選性培養基中存活或生長所需的蛋白。宿主細胞若未經含有篩選基因的載體轉形，則無法在該培養基中存活。典型的篩選基因所編碼的蛋白係(a)賦予對於抗生素或其他毒素之抗性，(b)補充 營養缺陷型之不足，或(c)供應無法從複合培養基取得的關鍵性營養素。酵母菌之例示性載體及轉形方法係述於例如美國紐約州普萊恩維尤(Plainview)的冷泉港實驗室出版社(Cold Spring Harbor Laboratory Press)出版之Burke,D.、Dawson,D.及Stearns,T.(2000年)所著“酵母菌遺傳學方法：冷泉港實驗室課程手冊(Methods in yeast genetics：a Cold Spring Harbor Laboratory course manual)”。
本發明的方法所用之表現載體將進一步包括酵母菌特異性序列，包括用於辨識轉形酵母菌株之可篩選的營養缺陷型或藥物標記。藥物標記可進一步用於擴增一酵母菌宿主細胞中的載體套數。
所感興趣的多肽編碼序列係以可操作方式與轉錄及轉譯調節序列連接，該轉錄及轉譯調節序列在酵母菌細胞中提供多肽的表現作用。該等載體組分可包括但不限於下列一或多者：一增強子元件、一啟動子及一轉錄終止序列。用於分泌多肽之序列亦可包括如訊號序列之類。酵母菌複製起點係選擇性的，其通常以表現載體形式納入酵母菌基因體中。在本發明的一實施例中，所感興趣的多肽係以可操作方式與提供酵母菌二倍體細胞的最佳化多肽分泌作用之序列連接或融合。
當與另一核酸序列處於一功能性關係時，則該核酸係“以可操作方式連接”。例如，若訊號序列的DNA係以參與多肽分泌作用的蛋白前體形式表現，則訊號序列的DNA係以可操作方式與多狀的DNA連接；若一啟動子或 增強子影響該序列的轉錄作用，則該啟動子或增強子係以可操作方式與編碼序列連接。一般而言，“以可操作方式連接”係指連接的DNA序列係相鄰的，及在分泌前導的情況係相鄰及位於讀框中。然而，增強子不一定要相鄰。連接作用係藉由在合宜的限制酶酶切位點之接合作用而完成，或任擇地經由嫻熟技藝者所熟悉的PCR/重組方法完成(美國加州卡爾斯巴德(Carlsbad)的英杰(Invitrogen)公司之GatewayR技術)。若不存在該等位點，則依據習用作法使用合成的寡核苷酸轉接子或連接子。
啟動子係位於一結構基因(一般約100至1000鹼基對以內)的起始密碼子上游(5’)之未轉譯序列，其控制以可操作方式與其連接之特定核酸序列的轉錄作用與轉譯作用。啟動子分為數種類型：誘導性、持續性及可抑制性啟動子(回應缺乏抑制子之情況而增加轉錄作用水平)。誘導性啟動子可回應培養條件的一些變化，如一營養素之存在與否或溫度之變化，而起始在其等控制下的DNA轉錄水平之增加。
酵母菌啟動子片段亦可作為同源重組作用的位點，及將表現載體導入至酵母菌基因體中的相同位點；任擇地，使用一篩選標記作為同源重組作用的位點。畢赤酵母屬(Pichia)的轉形作用係述於Cregg等人(1985年)於期刊“Mol.Cell.Biol.”第5期第3376-3385頁乙文。
來自畢赤酵母屬(Pichia)的適宜啟動子之實例包括AOX1與啟動子(Cregg等人(1989年)於期刊“Mol. Cell.Biol.”第9期第1316-1323頁乙文)；ICL1啟動子(Menendez等人(2003年)於期刊“Yeast”第20(13)期第1097-108頁乙文)；甘油醛-3-磷酸去氫酶啟動子(GAP)(Waterham等人(1997年)於期刊“Gene”第186(1)期第37-44頁乙文)；及FLD1啟動子(Shen等人(1998年)於期刊“Gene”第216(1)期第93-102頁乙文)。GAP啟動子係一強力的持續性啟動子，而AOX與FLD1啟動子係誘導性啟動子。
其他的酵母菌啟動子包括ADH1、醇去氫酶II、GAL4、PHO3、PHO5、Pyk及自其等所衍生的嵌合啟動子。此外，可在本發明中使用非酵母菌啟動子，諸如哺乳類動物、昆蟲、植物、爬蟲類、兩棲動物、病毒及禽類啟動子。在最典型的情況，啟動子將包含一個哺乳類動物啟動子(對於所表現基因而言可能是內源性)，或將包含一個酵母菌或病毒啟動子，而在酵母菌系統中提供有效的轉錄作用。
可依重組方式產生所感興趣的多肽，不僅是直接重組，亦可與一異源多肽重組成為融合多肽，異源多肽如一訊號序列或在成熟蛋白或多肽胺基端具有特定酶切位點的其他多肽。一般而言，該訊號序列可為載體的一組分，或可為插入載體中之多肽編碼序列的一部分。所選擇的異源性訊號序列較佳係經由宿主細胞內可用的標準路徑辨識與處理者。已證實釀酒酵母(S.cerevisiae)α因子前原訊號有效分泌來自巴斯德畢赤酵母(P.pastoris)的多種重組型蛋白。其他酵母菌訊號序列包括α配對因子訊號序列、轉化 酶訊號序列及衍生自所分泌的其他酵母菌多肽之訊號序列。此外，該等訊號胜肽序列可經工程設計而在二倍體酵母菌表現系統中提供增強的分泌作用。所感興趣的其他分泌訊號亦包括哺乳類動物訊號序列，其對於所分泌的蛋白而言可為異源性，或對於所分泌的蛋白而言可為一固有序列。訊號序列包括前胜肽序列，及在一些情況下可包括原胜肽序列。技藝中已知該等訊號序列中的多者，包括在免疫球蛋白鏈上所發現的訊號序列，如K28前原毒素序列、PHA-E、FACE、人類MCP-1、人類血清白蛋白訊號序列、人類Ig重鏈、人類Ig輕鏈之類。如參見Hashimoto等人於期刊“Protein Eng”第11(2)期第75頁(1998年)乙文；及Kobayashi等人於期刊“Therapeutic Apheresis”第2(4)期第257頁(1998年)乙文。
可藉由在載體中插入一轉錄活化子序列，而增加轉錄作用。該等活化子係DNA的順式作用元件，通常約10至300鹼基對，其作用在啟動子上而增加其轉錄作用。轉錄增強子係相對地不具有定向與位置依賴性，已發現轉錄增強子位於轉錄單元的5’與3’，位於一內含子之內，以及位於編碼序列本身之內。可將增強子剪接至表現載體中位於編碼序列的5’或3’之一位置，但較佳位於啟動子5’之一位點。
用於真核宿主細胞中的表現載體亦可含有用於終止轉錄作用及用於安定mRNA所需之序列。通常可在真核細胞或病毒DNA或cDNA的非轉譯區之轉譯終止密碼 子的3’，取得該等序列。該等區所含有的核苷酸段係轉錄為mRNA非轉譯部分中之聚腺苷酸化片段形式。
採用標準接合技術或PCR/重組方法，建構含有上文所列的一或多種組分之適宜載體。將所分離的質體或DNA片段按所欲形式酶切、量身訂做及再接合而產生所需的質體，或經由重組方法產生。為分析及確認所建構質體中的序列正確，使用接合混合物來進行宿主細胞之轉形作用，及酌情藉由抗生素抗性(如安比西林(ampicillin)或濟歐辛(Zeocin))篩選成功轉形體。製備來自該轉形體的質體，藉由限制內切酶酶切作用進行分析及/或定序。
可使用以att位點與重組酵素為基礎之重組方法，將DNA序列插入一載體中，而作為片段限制酶切作用與接合作用之替代方案。該等方法例如述於Landy(1989年)於期刊“Ann.Rev.Biochem.”第58期第913-949頁乙文；及為嫻熟技藝者所知。該等方法所採用的分子間DNA重組作用，係藉由λ與大腸桿菌(E.coli)編碼的重組蛋白之混合物所媒介。重組作用發生在交互作用的DNA分子上之特異性附著(att)位點之間。有關att之說明請參見由Weisberg編輯之“Lambda II”乙書(美國紐約冷泉港之冷泉港實驗室(Cold Spring Harbor Laboratory Press)出版公司)第211-250頁之Weisberg與Landy(1983年)所著“噬菌體λ中之位點特異性重組作用(Site-Specific Recombination in Phage Lambda)”乙文。將側臨重組位點的DNA段交換，以使得在重組作用後，att位點係由各親代載體捐出之序列所組成的雜交序列。重 組作用可發生在具任何拓撲的DNA之間。
可藉由將所感興趣的序列接合至一適當的載體中；經由使用特異性引子而產生含有att B位點之一PCR產物；產生供選殖至含有att位點的適當載體中之cDNA庫之類，而在所感興趣的一序列中引入att位點。
如本文中所用之摺疊一詞係指多肽與蛋白之三維結構，其中胺基酸殘基之間的交互作用發揮功用而穩定該結構。雖然非共價交互作用攸關結構之確定，所感興趣的蛋白通常具有由二個半胱胺酸殘基所形成的分子內及/或分子間共價雙硫鍵。就天然存在的蛋白及多肽或其衍生物與變異體而言，正確的摺疊典型係產生最佳生物活性的配置方式，及可便利地藉由針對活性如配位體結合作用、酵素活性等之分析法來監測。
在一些情況下，例如當所欲的產物係出於合成時，以生物活性為基礎的分析法之意義不大。該等分子的正確摺疊則可能以物理性質、能量考量、模擬研究之類為基礎而測定。
可藉由引入編碼增進摺疊與雙硫鍵形成的一或多種酵素亦即摺疊酶、伴護蛋白(chaperonin)等之序列，而進一步將表現宿主改質。使用如技藝中所知的載體、標記等，該等序列可持續性或誘導性地在酵母菌宿主細胞中表現。包括足以促成所欲表現模式的轉錄調節元件之序列，較佳經由一種靶向方法而安定地導入酵母菌基因體中。
例如，真核細胞PDI不僅是蛋白半胱胺酸氧化 作用與雙硫鍵異構化作用的有效催化劑，並且展現伴護活性。PDI的共同表現作用可促進具有多個雙硫鍵的活性蛋白之生產作用。亦感興趣的是BIP(免疫球蛋白重鏈結合蛋白)、環親和素(cyclophilin)之類的表現作用。在本發明的一實施例中，單倍體親代菌株中之各者表現一獨特的摺疊酵素，如一菌株可能表現BIP，而另一菌株可能表現PDI或其組合。
“所欲蛋白”或“所欲抗體”係以可互換方式使用，及一般係指對於一標的具有特異性之一親代抗體，亦即如本文所述之CGRP或一嵌合或人化抗體或自其所衍生的一結合部分。”抗體”一詞係意欲包括具有適合與辨識一抗原決定位的特定形狀之任何含有多肽鏈的分子結構，其中該分子結構與抗原決定位之間的一或多種非共價結合交互作用使該複合體安定。原型抗體分子係免疫球蛋白，及來自所有來源如人類、囓齒動物、兔、牛、羊、豬、狗、其他哺乳類動物、雞、其他禽類等之所有類型的免疫球蛋白、IgG、IgM、IgA、IgE、IgD等，皆被視為“抗體”。如本發明，適用作為生產抗體的起始原料之較佳來源是兔子。已有眾多抗體編碼序列被描述過；及其他可藉由技藝中所熟知的方法產生。實例包括嵌合抗體、人類抗體與其他非人類哺乳類動物抗體、人化抗體、單鏈抗體(諸如scFvs)、駱駝抗體、奈米抗體、IgNAR(從鯊魚所衍生的單鏈抗體)、小模組免疫藥劑(SMIP)及抗體片段諸如Fabs、Fab’、F(ab’)2之類。參見Streltsov VA等人於2005年11月期刊“Protein Sci.”第14(11)期第2901-9頁及電子版為2005年9月30日之“鯊魚IgNAR抗體可變域之結構及早期發育同型之模擬研究(Structure of a shark IgNAR antibody variable domain and modeling of an early-developmental isotype)”乙文；Greenberg AS等人於1995年3月9日期刊“Nature”第374(6518)期第168-73頁之“在鯊魚中進行重排作用及廣泛體細胞多樣化作用的一個新抗原受器基因家族(A new antigen receptor gene family that undergoes rearrangement and extensive somatic diversification in sharks)”乙文；Nuttall SD等人於2001年8月期刊“Mol Immunol.”第38(4)期第313-26頁之“從鬚鯊分離出新的抗原受器及作為用於展示蛋白環庫之一鷹架(Isolation of the new antigen receptor from wobbegong sharks,and use as a scaffold for the display of protein loop libraries)”乙文；Hamers-Casterman C等人於1993年6月3日期刊“Nature”第363(6428)期第446-8頁之“全無輕鏈之天然存在的抗體(Naturally occurring antibodies devoid of light chains)”乙文；Gill DS等人於2006年12月期刊“Curr Opin Biotechnol.”第17(6)期第653-8頁及電子版為2006年10月19日之“使用新穎蛋白鷹架所發現之生物藥物(Biopharmaceutical drug discovery using novel protein scaffolds)”乙文。
例如，可藉由基因工程產生抗體或抗原結合片段。在該技術中，如同其他方法，用所欲的抗原或免疫原將產生抗體的細胞致敏化。從產生抗體的細胞分離出之 傳訊RNA，係作為使用PCR擴增反應生產cDNA之模板。藉由在表現載體中插入擴增的免疫球蛋白cDNA之適當部分，而產生一個載體庫，其中載體各含有保留初始抗原特異性的一個重鏈基因與一個輕鏈基因。藉由將重鏈基因庫與輕鏈基因庫組合而建構一組合庫。這產生了共同表現重鏈與輕鏈(類似於一抗體分子的Fab片段或抗原結合片段)之一個殖株庫。將帶有該等基因的載體共轉染至一宿主細胞中。當在經轉染的宿主中誘發抗體基因合成作用時，重鏈與輕鏈蛋白自組裝而產生活性抗體，及可用抗原或免疫原篩檢而檢出該活性抗體。
所感興趣的抗體編碼序列包括該等藉由固有序列所編碼者，以及因著基因密碼簡併性而與所揭露的核酸在序列上不相同之核酸及其變異體。變異體多肽可包括胺基酸(aa)取代作用、添加作用或刪除作用。胺基酸取代作用可為保留性胺基酸取代作用，或為去除非必需胺基酸之取代作用，諸如改變一醣基化位點，或藉由取代或刪除非功能所必需的一或多個半胱胺酸殘基而盡量減少摺疊錯誤。可設計變異體，而使得保留或增強該蛋白之一特定區的生物活性(如一功能域、催化性胺基酸殘基等)。變異體亦包括本文中所揭露之多肽的片段，特別是生物活性片段及/或對應於功能域的片段。已知在試管中用於誘發所選殖基因的突變作用之技術。在本發明中亦包括經一般分子生物技術改質之多肽，而使得增進其等對於蛋白分解性降解作用的抗性，或將溶解性質最佳化，或使其等更適合作為治 療劑。
可藉由將來自一物種之產生抗體型細胞的輕鏈與重鏈變異區(VL與VH)與來自另一物種的輕鏈與重鏈固定區組合之重組方式，產生在導致CGRP水平增加的疾病或病況中用於治療或預防腹瀉之如本發明的嵌合抗體。嵌合抗體典型採用囓齒動物或兔的變異區及人類的固定區，而使得產生主要是人類域之一抗體。該等嵌合抗體的生產作用係技藝中所熟知，及可藉由標準方式達成(如述於第5,624,659號美國專利，其在此完整地併入本案以為參考資料)。進一步設想本發明之嵌合抗體的人類固定區可選自IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgG5、IgG6、IgG7、IgG8、IgG9、IgG10、IgG11、IgG12、IgG13、IgG14、IgG15、IgG16、IgG17、IgG18或IgG19固定區。
進行人化抗體的工程設計而含有甚至更多類似人類的免疫球蛋白域，及僅納入動物所衍生抗體的互補決定區。其可藉由仔細檢視單株抗體變異區之高度變異環的序列，及使其等與人類抗體鏈的結構擬合。這個方法雖然表面上看來複雜，但施行上是簡單的。如參見第6,187,287號美國專利，其在此完整地併入本案以為參考資料。
除了整體的免疫球蛋白(或其等的重組對應體)之外，可合成包含抗原決定位結合位點(如Fab’、F(ab’)2或其他片段)之免疫球蛋白片段。可採用重組型免疫球蛋白技術，設計“片段”或微小免疫球蛋白。例如，可藉由合成一個融合的可變輕鏈區與一個可變重鏈區，而產生用於本 發明中的“Fv”免疫球蛋白。亦對於抗體組合物感興趣，如包含二種獨特的Fv特異性之雙鏈抗體。在本發明的另一實施例中，免疫球蛋白片段係涵蓋SMIP(小分子免疫藥劑)、駱駝抗體、奈米抗體及IgNAR。
免疫球蛋白及其片段可在轉譯後加以改質，如添加作用性基團諸如化學連接子；可檢測性基團諸如螢光染料、酵素、毒素、受質、生物發光物質、放射性物質、化學發光基團之類；或特異性結合基團諸如鏈黴抗生物素蛋白、抗生物素蛋白或生物素之類，可用於本發明的方法與組成物中。附加的作用性分子之實例係提供於下文中。
若一聚核苷酸序列依據基因密碼的轉譯作用產生一多肽序列，則該聚核苷酸序列係“對應”於該多肽序列(亦即該聚核苷酸序列“編碼”該多肽序列)；若一聚核苷酸序列與另一聚核苷酸序列編碼相同的多肽序列，則該二序列係彼此“對應”。
一DNA建構體的“異源”區或“異源”域係一較大型DNA分子內之一段可識別的DNA，及未發現其與自然存在之該較大型分子有所關聯。因此，當該異源區編碼一哺乳類動物基因時，該基因兩側的DNA通常並非側臨來源生物體的基因體中之該哺乳類動物基因體DNA。異源區之另一實例係一建構體，其中編碼序列本身並非自然中所存在者(如cDNA，其中該基因體編碼序列含有內含子或為具有不同於天然基因的密碼子之合成序列)。對偶基因變異或自然發生的突變事件並不產生本文中所界定之DNA異源 區。
一“編碼序列”係(鑑於基因密碼)對應於或編碼一蛋白或胜肽序列之密碼子的一讀框內序列。若二個序列或其等的互補序列編碼相同的胺基酸序列，則該等編碼序列係彼此對應。聯同適當的調節序列之一編碼序列可轉錄與轉譯成為多肽。聚腺苷酸化訊號與轉錄終止序列通常位於該編碼序列的3’側。”啟動子序列”係一DNA調節區，其可與細胞中的RNA聚合酶結合及起始下游(3’方向)編碼序列的轉錄作用。啟動子序列典型含有用於與調節分子(如轉錄作用因子)結合的附加位點，該等調節分子會影響該編碼序列的轉錄作用。當RNA聚合酶與細胞中的啟動子序列結合及將編碼序列轉錄成為mRNA時，編碼序列係在啟動子序列的“控制下”或與啟動子“在操作上連接”，該mRNA然後進而轉譯成為該編碼序列所編碼之蛋白。
載體係用來將一外來物質諸如DNA、RNA或蛋白質引入一生物體或宿主細胞中。典型的載體包括重組型病毒(用於聚核苷酸)及脂質體(用於多肽)。“DNA載體”係諸如質體、噬菌體或黏接質體之一複製子，另一聚核苷酸段可連接其上，而導致所連接段之複製作用。“表現載體”係含有調節序列之一DNA載體，該調節序列引導一適當宿主細胞之多肽合成作用。這通常表示一啟動子與RNA聚合酶結合及起始mRNA的轉錄作用，以及核糖體結合位點與起始訊號引導mRNA轉譯成為多肽。將一聚核苷酸序列導入一表現載體之正確位點與正確讀框中，接著藉由該載體 將一適當的宿主細胞轉形，使得能夠生產該聚核苷酸序列所編碼的多肽。
聚核苷酸序列的“擴增反應”係在試管中生產多套的特定核酸序列。經擴增的序列通常是DNA形式。Van Brunt的評論文章述及用於進行該擴增反應的多種技術(1990年期刊“Bio/Technol.”第8(4)期第291-294頁乙文)。聚合酶鏈反應或PCR係核酸擴增反應之原型，及應將本文中所用之PCR視為其他適宜的擴增反應技術之例示。
現在已充分瞭解脊椎動物之抗體的一般結構(Edelman,G.M.於期刊“Ann.N.Y.Acad.Sci.”第190期第5頁(1971年)乙文)。抗體係由分子量約23,000道爾頓的二個相同輕質多肽鏈(“輕鏈”)與分子量53,000至70,000的二個相同重鏈(“重鏈”)所組成。四個鏈係在“Y”構型中由雙硫鍵連接，其中重鏈係從“Y”構型的口開始托架在輕鏈上。”Y”構型的“分支”係示為Fab區；”Y”構型的主幹部分係示為FC區。胺基酸序列的定向係自“Y”構型頂部的胺基端至各鏈底部的羧基端。胺基端所具備的變異區係對於引發它的抗原具有特異性，及其長度約為100個胺基酸，在輕鏈與重鏈之間及抗體與抗體之間略有不同。
各鏈中的變異區係與一固定區連接，該固定區延伸至鏈的剩餘長度及在一特定類型的抗體中不隨著抗體特異性(亦即誘發它的抗原)而異。有五種主要的固定區類型，其等決定免疫球蛋白分子之類型(IgG、IgM、IgA、IgD及IgE及其等對應於γ、μ、α、δ及ε(gamma、mu、alpha、 delta或epsilon)重鏈固定區)。固定區或類型決定後續的抗體作用性功能，包括補體的活化作用(霍爾特、萊因哈特、溫斯頓(Holt,Rinehart,Winston)公司(1976年)出版之Kabat,E.A.所著“免疫學與免疫化學之結構概念(Structural Concepts in Immunology and Immunochemistry)”乙書第二版第413-436頁)，及其他細胞反應(W.B.桑德斯(W.B.Sanders)公司(1980年)出版之Andrews,D.W.等人所著“臨床免疫生物學(Clinical Immunobiology)”第1-18頁；Kohl,S.等人於期刊“Immunology”第48期第187頁(1983年)乙文)；而可變區決定其所反應的抗原。將輕鏈分類為(kappa)或λ(lambda)。可用或λ輕鏈製備各重鏈類型。輕鏈與重鏈係彼此共價鍵結，及當藉由融合瘤或藉由B細胞產生免疫球蛋白時，二重鏈的“尾部”部分係藉由雙硫鍵而彼此共價鍵結。
“變異區”或“VR”之用詞係指一抗體之各對輕鏈與重鏈內直接涉及抗體與抗原結合作用之域。各重鏈在一端有一個可變域(VH)及接著數個固定域。各輕鏈在一端有一個可變域(VL)及在另一端有一個固定域；輕鏈的固定域係與重鏈的第一個固定域對齊，而輕鏈的可變域係與重鏈的可變域對齊。
“互補決定區”、“高度變異區”或“CDR”等詞係指在一抗體的輕鏈或重鏈變異區中所發現之一或多個高度變異區或互補決定區(CDR)(參見美國馬里蘭州貝塞斯達(Bethesda)國家衛生研究院(1987年)出版之Kabat,E.A.等人之“具免疫益處之蛋白質序列(Sequences of Proteins of Immunological Interest)”)。該等用詞係包括如Kabat等人所界定之高度變異區(美國衛生與公眾服務部(Department of Health and Human Services)於1983年出版之Kabat,E.A.等人之“具免疫益處之蛋白質序列”)或抗體的三維結構中之高度變異環(Chothia與Lesk於期刊“J Mol.Biol.”第196期第901-917頁(1987年)乙文)。各鏈中的CDR係藉由架構區而維持在鄰近處，及與其他鏈的CDR有助於形成抗原結合位點。在CDR內，有被述為選擇性決定區(SDR)之所選出的胺基酸，其等代表CDR在抗體-抗原交互作用中所用的關鍵接觸殘基(Kashmiri,S.於期刊“Methods”第36期第25-34頁(2005年)乙文)。
“架構區”或“FR”之用詞係指在一抗體的輕鏈與重鏈變異區內之一或多個架構區(參見美國馬里蘭州貝塞斯達(Bethesda)國家衛生研究院(1987年)出版之Kabat,E.A.等人之“具免疫益處之蛋白質序列”)。該等用詞包括在一抗體的輕鏈與重鏈變異區內之CDR之間所插入的該等胺基酸序列區。
具有CGRP結合活性之抗CGRP抗體及其結合片段 抗體Ab1
本發明廣泛設想任何抗CGRP抗體或抗體片段在造成涉及腹瀉之CGRP水平增加的任一疾病或病況中，用於治療或預防CGRP相關型腹瀉及/或結腸的液體或電解質排出作用增加之用途。在本申請案中辨識出造成與腹瀉相關聯的CGRP增加之病況或治療。
在一個較佳實施例中，本發明包括用於治療或預防CGRP相關型腹瀉之嵌合抗體，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一可變輕鏈序列：QVLTQTASPVSAAVGSTVTINCQASQSVYDNNYLAWYQQKPGQPPKQLIYSTSTLASGVSSRFKGSGSGTQFTLTISDLECADAATYYCLGSYDCSSGDCFVFGGGTEVVVKR(序列辨識編號：1)。
本發明亦包括用於治療或預防CGRP相關型腹瀉之嵌合抗體，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一輕鏈序列：QVLTQTASPVSAAVGSTVTINCQASQSVYDNNYLAWYQQKPGQPPKQLIYSTSTLASGVSSRFKGSGSGTQFTLTISDLECADAATYYCLGSYDCSSGDCFVFGGGTEVVVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(序列辨識編號：2)。
本發明進一步包括用於治療或預防CGRP相關型腹瀉之嵌合抗體，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一可變重鏈序列：QSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGLDLSSYYMQWVRQAPGKGLEWIGVIGINDNTYYASWAKGRFTISRASSTTVDLKMTSLTTEDTATYFCARGDIWGPGTLVTVSS(序列辨識編號：3)。
本發明亦包括用於治療或預防CGRP相 關型腹瀉之嵌合抗體，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一重鏈序列：QSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGLDLSSYYMQWVRQAPGKGLEWIGVIGINDNTYYASWAKGRFTISRASSTTVDLKMTSLTTEDTATYFCARGDIWGPGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(序列辨識編號：4)。
本發明進一步設想用於治療或預防CGRP相關型腹瀉之抗體，其包含序列辨識編號：5、序列辨識編號：6及序列辨識編號：7的多肽序列中之一或多者，其中序列辨識編號：5、序列辨識編號：6及序列辨識編號：7係對應於序列辨識編號：1的可變輕鏈序列或序列辨識編號：2的輕鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)；及/或包含序列辨識編號：8、序列辨識編號：9及序列辨識編號：10的多肽序列中之一或多者，其中序列辨識編號：8、序列辨識編號：9及序列辨識編號：10係對應於序列辨識編號：3的可變重鏈序列或序列辨識編號：4的重鏈序列之互補決定區 (CDR或高度變異區)；或包含該等多肽序列之組合。在本發明的另一實施例中，本發明的抗體或其片段包含CDR、可變重鏈與可變輕鏈序列及包括其中所有者之上文所列重鏈與輕鏈序列中之一或多者的組合物，或任擇地由其等所組成。
本發明亦設想具有CGRP結合特異性之用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的抗體片段。在本發明的一實施例中，本發明之抗體片段包含序列辨識編號：1或序列辨識編號：2的多肽序列，或任擇地由其等所組成。在本發明的另一實施例中，本發明之抗體片段包含序列辨識編號：3或序列辨識編號：4的多肽序列，或任擇地由其等所組成。
在本發明的又一實施例中，具有CGRP結合特異性之用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的抗體片段包含序列辨識編號：5、序列辨識編號：6及序列辨識編號：7的多肽序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：5、序列辨識編號：6及序列辨識編號：7係對應於序列辨識編號：1的可變輕鏈序列或序列辨識編號：2的輕鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)。
在本發明的又一實施例中，具有CGRP結合特異性之用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的抗體片段包含序列辨識編號：8、序列辨識編號：9及序列辨識編號：10的多肽序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：8、序列辨識編號：9及序列辨識編號：10係對應於序列辨識編號：3的可變重鏈序列或序列辨識編號：4 的重鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)。
本發明亦設想抗體片段，其包括本文所述之用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的抗體片段中之一或多者。在本發明的一實施例中，具有CGRP結合特異性的抗體片段包含下列所有抗體片段中之一者、二者、三者或多者，或任擇地由其等所組成：序列辨識編號：1的可變輕鏈區；序列辨識編號：3的可變重鏈區；序列辨識編號：1的可變輕鏈區之互補決定區(序列辨識編號：5、序列辨識編號：6及序列辨識編號：7)；及序列辨識編號：3的可變重鏈區之互補決定區(序列辨識編號：8、序列辨識編號：9及序列辨識編號：10)。
在本發明的一個特佳實施例中，用於治療或預防CGRP相關型腹瀉之嵌合型抗CGRP抗體係Ab1，其包含序列辨識編號：2與序列辨識編號：4，或任擇地由其等所組成，及具有本文所述生物活性中之至少一者。
在本發明之另一特佳實施例中，用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的抗體片段包含具有CGRP結合特異性的Fab(片段抗原結合)片段，或任擇地由其等所組成。就抗體Ab1而言，Fab片段包括序列辨識編號：1的可變輕鏈序列與序列辨識編號：3的可變重鏈序列。本發明的該實施例進一步設想在該Fab中的序列辨識編號：1及/或序列辨識編號：3之添加作用、刪除作用及變異體，同時保留CGRP結合特異性。
在此(下文)所述之本發明的一實施例中，可藉 由Ab1的酵素酶切作用(如木瓜酶)，產生用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的Fab片段。在本發明的另一實施例中，可經由在諸如CHO、NSO或HEK 293細胞的哺乳類動物細胞、真菌、昆蟲或微生物系統諸如酵母菌細胞(例如諸如二倍體畢赤酵母屬(Pichia)之二倍體酵母菌)與其他酵母菌株中的表現作用，產生用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的抗CGRP抗體諸如Ab1或其Fab片段。適宜的畢赤酵母屬(Pichia)物種包括但不限於巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)。
抗體Ab2
在一實施例中，本發明包括用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的人化抗體，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一可變輕鏈序列：QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYDNNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSSGDCFVFGGGTKVEIKR(序列辨識編號：11)。
本發明亦包括用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的人化抗體，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一輕鏈序列：QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYDNNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSSGDCFVFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVY ACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(序列辨識編號：12)。
本發明進一步包括人化抗體用於治療或預防CGRP相關型腹瀉，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一可變重鏈序列：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGLDLSSYYMQWVRQAPGKGLEWVGVIGINDNTYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSS(序列辨識編號：13)。
本發明亦包括用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的人化抗體，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一重鏈序列：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGLDLSSYYMQWVRQAPGKGLEWVGVIGINDNTYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(序列辨識編號：14)。
本發明進一步設想用於治療或預防CGRP相 關型腹瀉之抗體，其包含序列辨識編號：15、序列辨識編號：16及序列辨識編號：17的多肽序列中之一或多者，其中序列辨識編號：15、序列辨識編號：16及序列辨識編號：17係對應於序列辨識編號：11的可變輕鏈序列或序列辨識編號：12的輕鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)；及/或包含序列辨識編號：18、序列辨識編號：19及序列辨識編號：20的多肽序列中之一或多者，其中序列辨識編號：18、序列辨識編號：19及序列辨識編號：20係對應於序列辨識編號：13的可變重鏈序列或序列辨識編號：14的重鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)；或包含該等多肽序列之組合。在本發明的另一實施例中，本發明的抗體或其片段包含CDR、可變重鏈與可變輕鏈序列及包括其中所有者之上文所列重鏈與輕鏈序列中之一或多者的組合物，或任擇地由其等所組成。
本發明亦設想具有CGRP結合特異性之用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的抗體片段。在本發明的一實施例中，本發明之抗體片段包含序列辨識編號：11或序列辨識編號：12的多肽序列，或任擇地由其等所組成。在本發明的另一實施例中，本發明之抗體片段包含序列辨識編號：13或序列辨識編號：14的多肽序列，或任擇地由其等所組成。
在本發明的又一實施例中，具有CGRP結合特異性之用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的抗體片段包含序列辨識編號：15、序列辨識編號：16及序列辨識編號： 17的多肽序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：15、序列辨識編號：16及序列辨識編號：17係對應於序列辨識編號：11的可變輕鏈序列或序列辨識編號：12的輕鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)。
在本發明的又一實施例中，具有CGRP結合特異性之用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的抗體片段包含序列辨識編號：18、序列辨識編號：19及序列辨識編號：20的多肽序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：18、序列辨識編號：19及序列辨識編號：20係對應於序列辨識編號：13的可變重鏈序列或序列辨識編號：14的重鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)。
本發明亦設想抗體片段，其包括本文所述之用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的抗體片段中之一或多者。在本發明的一實施例中，具有CGRP結合特異性的抗體片段包含下列所有抗體片段中之一者、二者、三者或多者，或任擇地由其等所組成：序列辨識編號：11的可變輕鏈區；序列辨識編號：13的可變重鏈區；序列辨識編號：11的可變輕鏈區之互補決定區(序列辨識編號：15、序列辨識編號：16及序列辨識編號：17)；及序列辨識編號：13的可變重鏈區之互補決定區(序列辨識編號：18、序列辨識編號：19及序列辨識編號：20)。
在本發明的一個特佳實施例中，用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的人化抗CGRP抗體係Ab2，其包含序列辨識編號：12與序列辨識編號：14，或任擇地由其等 所組成，及具有本文所述生物活性中之至少一者。
在本發明之另一特佳實施例中，用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的抗體片段包含具有CGRP結合特異性的Fab(片段抗原結合)片段，或任擇地由其等所組成。就抗體Ab2而言，Fab片段包括序列辨識編號：11的可變輕鏈序列與序列辨識編號：13的可變重鏈序列。本發明的該實施例進一步設想該Fab中的序列辨識編號：11及/或序列辨識編號：13之添加作用、刪除作用及變異體，同時保留CGRP結合特異性。
在此(下文)所述之本發明的一實施例中，可藉由Ab2的酵素酶切作用(如木瓜酶)，產生用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的Fab片段。在本發明的另一實施例中，可經由在諸如CHO、NSO或HEK 293細胞的哺乳類動物細胞、真菌、昆蟲或微生物系統諸如酵母菌細胞(例如諸如二倍體畢赤酵母屬(Pichia)之二倍體酵母菌)與其他酵母菌株中的表現作用，產生用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的抗CGRP抗體諸如Ab2或其Fab片段。適宜的畢赤酵母屬(Pichia)物種包括但不限於巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)。
抗體Ab3
在一實施例中，本發明包括用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的人化抗體，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一可變輕鏈序列：QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYDNNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQ PEDVATYYCLGSYDCSSGDCFVFGGGTKVEIKR(序列辨識編號：21)。
本發明亦包括用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的人化抗體，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一輕鏈序列：QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYDNNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSSGDCFVFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(序列辨識編號：22)。
本發明進一步包括人化抗體用於治療或預防CGRP相關型腹瀉，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一可變重鏈序列：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGLDLSSYYMQWVRQAPGKGLEWVGVIGINDNTYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSS(序列辨識編號：23)。
本發明亦包括用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的人化抗體，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一重鏈序列：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGLDLSSYYMQWVRQAPGKGLEWVGVIGINDNTYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSSASTK GPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDARVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(序列辨識編號：24)。
本發明進一步設想用於治療或預防CGRP相關型腹瀉之抗體，其包含序列辨識編號：25、序列辨識編號：26及序列辨識編號：27的多肽序列中之一或多者，其中序列辨識編號：25、序列辨識編號：26及序列辨識編號：27係對應於序列辨識編號：21的可變輕鏈序列或序列辨識編號：22的輕鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)；及/或包含序列辨識編號：28、序列辨識編號：29及序列辨識編號：30的多肽序列中之一或多者，其中序列辨識編號：28、序列辨識編號：29及序列辨識編號：30係對應於序列辨識編號：23的可變重鏈序列或序列辨識編號：24的重鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)；或包含該等多肽序列之組合。在本發明的另一實施例中，本發明的用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的抗體或其片段包含CDR、可變重鏈與可變輕鏈序列及包括其中所有者之上文所列重鏈與輕鏈序列中之一或多者的組合物，或任擇地由其等所組成。
本發明亦設想具有CGRP結合特異性之用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的抗體片段。在本發明的一實施例中，本發明之抗體片段包含序列辨識編號：21或序列辨識編號：22的多肽序列，或任擇地由其等所組成。在本發明的另一實施例中，本發明之抗體片段包含序列辨識編號：23或序列辨識編號：24的多肽序列，或任擇地由其等所組成。
在本發明的又一實施例中，具有CGRP結合特異性的抗體片段包含序列辨識編號：25、序列辨識編號：26及序列辨識編號：27的多肽序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：25、序列辨識編號：26及序列辨識編號：27係對應於序列辨識編號：21的可變輕鏈序列或序列辨識編號：22的輕鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)。
在本發明的又一實施例中，具有CGRP結合特異性之用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的抗體片段包含序列辨識編號：28、序列辨識編號：29及序列辨識編號：30的多肽序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：28、序列辨識編號：29及序列辨識編號：30係對應於序列辨識編號：23的可變重鏈序列或序列辨識編號：24的重鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)。
本發明亦設想用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的抗體片段，其包括本文所述抗體片段中之一或多者。在本發明的一實施例中，具有CGRP結合特異性的抗體 片段包含下列所有抗體片段中之一者、二者、三者或多者，或任擇地由其等所組成：序列辨識編號：21的可變輕鏈區；序列辨識編號：23的可變重鏈區；序列辨識編號：21的可變輕鏈區之互補決定區(序列辨識編號：25、序列辨識編號：26及序列辨識編號：27)；及序列辨識編號：23的可變重鏈區之互補決定區(序列辨識編號：28、序列辨識編號：29及序列辨識編號：30)。
在本發明的一個特佳實施例中，用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的嵌合型抗CGRP抗體係Ab3，其包含序列辨識編號：22與序列辨識編號：24，或任擇地由其等所組成，及具有本文所述生物活性中之至少一者。
在本發明之另一特佳實施例中，用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的抗體片段包含具有CGRP結合特異性的Fab(片段抗原結合)片段，或任擇地由其等所組成。就抗體Ab3而言，Fab片段包括序列辨識編號：21的可變輕鏈序列與序列辨識編號：23的可變重鏈序列。本發明的該實施例進一步設想該Fab中的序列辨識編號：21及/或序列辨識編號：23之添加作用、刪除作用及變異體，同時保留CGRP結合特異性。
在此(下文)所述之本發明的一實施例中，可藉由Ab3的酵素酶切作用(如木瓜酶)，產生用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的Fab片段。在本發明的另一實施例中，可經由在諸如CHO、NSO或HEK 293細胞的哺乳類動物細胞、真菌、昆蟲或微生物系統諸如酵母菌細胞(例如諸如二 倍體畢赤酵母屬(Pichia)之二倍體酵母菌)與其他酵母菌株中的表現作用，產生用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的抗CGRP抗體諸如Ab3或其Fab片段。適宜的畢赤酵母屬(Pichia)物種包括但不限於巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)。
抗體Ab4
在一實施例中，本發明包括用於治療或預防CGRP相關型腹瀉之嵌合抗體，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一可變輕鏈序列：QVLTQTPSPVSAAVGSTVTINCQASQSVYHNTYLAWYQQKPGQPPKQLIYDASTLASGVPSRFSGSGSGTQFTLTISGVQCNDAAAYYCLGSYDCTNGDCFVFGGGTEVVVKR(序列辨識編號：31)。
本發明亦包括用於治療或預防CGRP相關型腹瀉之嵌合抗體，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一輕鏈序列：QVLTQTPSPVSAAVGSTVTINCQASQSVYHNTYLAWYQQKPGQPPKQLIYDASTLASGVPSRFSGSGSGTQFTLTISGVQCNDAAAYYCLGSYDCTNGDCFVFGGGTEVVVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(序列辨識編號：32)。
本發明進一步包括用於治療或預防CGRP相關型腹瀉之嵌合抗體，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一可變重鏈序列： QSLEESGGRLVTPGTPLTLTCSVSGIDLSGYYMNWVRQAPGKGLEWIGVIGINGATYYASWAKGRFTISKTSSTTVDLKMTSLTTEDTATYFCARGDIWGPGTLVTVSS(序列辨識編號：33)。
本發明亦包括用於治療或預防CGRP相關型腹瀉之嵌合抗體，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一重鏈序列：QSLEESGGRLVTPGTPLTLTCSVSGIDLSGYYMNWVRQAPGKGLEWIGVIGINGATYYASWAKGRFTISKTSSTTVDLKMTSLTTEDTATYFCARGDIWGPGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(序列辨識編號：34)。
本發明進一步設想用於治療或預防CGRP相關型腹瀉之抗體，其包含序列辨識編號：35、序列辨識編號：36及序列辨識編號：37的多肽序列中之一或多者，其中序列辨識編號：35、序列辨識編號：36及序列辨識編號：37係對應於序列辨識編號：31的可變輕鏈序列或序列辨識 編號：32的輕鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)；及/或包含序列辨識編號：38、序列辨識編號：39及序列辨識編號：40的多肽序列中之一或多者，其中序列辨識編號：38、序列辨識編號：39及序列辨識編號：40係對應於序列辨識編號：33的可變重鏈序列或序列辨識編號：34的重鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)；或包含該等多肽序列之組合。在本發明的另一實施例中，本發明的抗體或其片段包含CDR、可變重鏈與可變輕鏈序列及包括其中所有者之上文所列重鏈與輕鏈序列中之一或多者的組合物，或任擇地由其等所組成。
本發明亦設想具有CGRP結合特異性之用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的抗體片段。在本發明的一實施例中，本發明之抗體片段包含序列辨識編號：31或序列辨識編號：32的多肽序列，或任擇地由其等所組成。在本發明的另一實施例中，本發明之抗體片段包含序列辨識編號：33或序列辨識編號：34的多肽序列，或任擇地由其等所組成。
在本發明的又一實施例中，具有CGRP結合特異性之用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的抗體片段包含序列辨識編號：35、序列辨識編號：36及序列辨識編號：37的多肽序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：35、序列辨識編號：36及序列辨識編號：37係對應於序列辨識編號：31的可變輕鏈序列或序列辨識編號：32的輕鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)。
在本發明的又一實施例中，具有CGRP結合特異性之用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的抗體片段包含序列辨識編號：38、序列辨識編號：39及序列辨識編號：40的多肽序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：38、序列辨識編號：39及序列辨識編號：40係對應於序列辨識編號：33的可變重鏈序列或序列辨識編號：34的重鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)。
本發明亦設想用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的抗體片段，其包括本文所述抗體片段中之一或多者。在本發明的一實施例中，具有CGRP結合特異性的抗體片段包含下列所有抗體片段中之一者、二者、三者或多者，或任擇地由其等所組成：序列辨識編號：31的可變輕鏈區；序列辨識編號：33的可變重鏈區；序列辨識編號：31的可變輕鏈區之互補決定區(序列辨識編號：35、序列辨識編號：36及序列辨識編號：37)；及序列辨識編號：33的可變重鏈區之互補決定區(序列辨識編號：38、序列辨識編號：39及序列辨識編號：40)。
在本發明的一個特佳實施例中，用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的人化抗CGRP抗體係Ab4，其包含序列辨識編號：32與序列辨識編號：34，或任擇地由其等所組成，及具有本文所述生物活性中之至少一者。
在本發明之另一特佳實施例中，用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的抗體片段包含具有CGRP結合特異性的Fab(片段抗原結合)片段，或任擇地由其等所組成。就 抗體Ab4而言，Fab片段包括序列辨識編號：31的可變輕鏈序列與序列辨識編號：33的可變重鏈序列。本發明的該實施例進一步設想該Fab中的序列辨識編號：31及/或序列辨識編號：33之添加作用、刪除作用及變異體，同時保留CGRP結合特異性。
在此(下文)所述之本發明的一實施例中，可藉由Ab4的酵素酶切作用(如木瓜酶)，產生用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的Fab片段。在本發明的另一實施例中，可經由在諸如CHO、NSO或HEK 293細胞的哺乳類動物細胞、真菌、昆蟲或微生物系統諸如酵母菌細胞(例如諸如二倍體畢赤酵母屬(Pichia)之二倍體酵母菌)與其他酵母菌株中的表現作用，產生用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的抗CGRP抗體諸如Ab4或其Fab片段。適宜的畢赤酵母屬(Pichia)物種包括但不限於巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)。
抗體Ab5
在一實施例中，本發明包括用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的人化抗體，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一可變輕鏈序列：QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYHNTYLAWYQQKPGKVPKQLIYDASTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCTNGDCFVFGGGTKVEIKR(序列辨識編號：41)。
本發明亦包括用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的人化抗體，其具有CGRP結合特異性及具 有包含如下所列序列之一輕鏈序列：QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYHNTYLAWYQQKPGKVPKQLIYDASTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCTNGDCFVFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(序列辨識編號：42)。
本發明進一步包括人化抗體用於治療或預防CGRP相關型腹瀉，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一可變重鏈序列：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIDLSGYYMNWVRQAPGKGLEWVGVIGINGATYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSS(序列辨識編號：43)。
本發明亦包括用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的人化抗體，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一重鏈序列：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIDLSGYYMNWVRQAPGKGLEWVGVIGINGATYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDG VEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(序列辨識編號：44)。
本發明進一步設想用於治療或預防CGRP相關型腹瀉之抗體，其包含序列辨識編號：45、序列辨識編號：46及序列辨識編號：47的多肽序列中之一或多者，其中序列辨識編號：45、序列辨識編號：46及序列辨識編號：47係對應於序列辨識編號：41的可變輕鏈序列或序列辨識編號：42的輕鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)；及/或包含序列辨識編號：48、序列辨識編號：49及序列辨識編號：50的多肽序列中之一或多者，其中序列辨識編號：48、序列辨識編號：49及序列辨識編號：50係對應於序列辨識編號：43的可變重鏈序列或序列辨識編號：44的重鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)；或包含該等多肽序列之組合。在本發明的另一實施例中，本發明的抗體或其片段包含CDR、可變重鏈與可變輕鏈序列及包括其中所有者之上文所列重鏈與輕鏈序列中之一或多者的組合物，或任擇地由其等所組成。
本發明亦設想具有CGRP結合特異性之用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的抗體片段。在本發明的一實施例中，本發明之抗體片段包含序列辨識編號：41或序列辨識編號：42的多肽序列，或任擇地由其等所組成。在本 發明的另一實施例中，本發明之抗體片段包含序列辨識編號：43或序列辨識編號：44的多肽序列，或任擇地由其等所組成。
在本發明的又一實施例中，具有CGRP結合特異性之用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的抗體片段包含序列辨識編號：45、序列辨識編號：46及序列辨識編號：47的多肽序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：45、序列辨識編號：46及序列辨識編號：47係對應於序列辨識編號：41的可變輕鏈序列或序列辨識編號：42的輕鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)。
在本發明的又一實施例中，具有CGRP結合特異性之用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的抗體片段包含序列辨識編號：48、序列辨識編號：49及序列辨識編號：50的多肽序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：48、序列辨識編號：49及序列辨識編號：50係對應於序列辨識編號：43的可變重鏈序列或序列辨識編號：44的重鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)。
本發明亦設想用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的抗體片段，其包括本文所述抗體片段中之一或多者。在本發明的一實施例中，具有CGRP結合特異性的抗體片段包含下列所有抗體片段中之一者、二者、三者或多者，或任擇地由其等所組成：序列辨識編號：41的可變輕鏈區；序列辨識編號：43的可變重鏈區；序列辨識編號：41的可變輕鏈區之互補決定區(序列辨識編號：45、序列辨識編 號：46及序列辨識編號：47)；及序列辨識編號：43的可變重鏈區之互補決定區(序列辨識編號：48、序列辨識編號：49及序列辨識編號：50)。
在本發明的一個特佳實施例中，用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的嵌合型抗CGRP抗體係Ab5，其包含序列辨識編號：42與序列辨識編號：44，或任擇地由其等所組成，及具有本文所述生物活性中之至少一者。
在本發明之另一特佳實施例中，用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的抗體片段包含具有CGRP結合特異性的Fab(片段抗原結合)片段，或任擇地由其等所組成。就抗體Ab5而言，Fab片段包括序列辨識編號：41的可變輕鏈序列與序列辨識編號：43的可變重鏈序列。本發明的該實施例進一步設想該Fab中的序列辨識編號：41及/或序列辨識編號：43之添加作用、刪除作用及變異體，同時保留CGRP結合特異性。
在此(下文)所述之本發明的一實施例中，可藉由Ab5的酵素酶切作用(如木瓜酶)，產生用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的Fab片段。在本發明的另一實施例中，可經由在諸如CHO、NSO或HEK 293細胞的哺乳類動物細胞、真菌、昆蟲或微生物系統諸如酵母菌細胞(例如諸如二倍體畢赤酵母屬(Pichia)之二倍體酵母菌)與其他酵母菌株中的表現作用，產生抗CGRP抗體諸如Ab5或其Fab片段。適宜的畢赤酵母屬(Pichia)物種包括但不限於巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)。
抗體Ab6
在一實施例中，本發明包括用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的人化抗體，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一可變輕鏈序列：QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYHNTYLAWYQQKPGKVPKQLIYDASTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCTNGDCFVFGGGTKVEIKR(序列辨識編號：51)。
本發明亦包括用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的人化抗體，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一輕鏈序列：QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYHNTYLAWYQQKPGKVPKQLIYDASTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCTNGDCFVFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(序列辨識編號：52)。
本發明進一步包括人化抗體用於治療或預防CGRP相關型腹瀉，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一可變重鏈序列：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIDLSGYYMNWVRQAPGKGLEWVGVIGINGATYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSS(序列辨識編號：53)。
本發明亦包括用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的人化抗體，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一重鏈序列：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIDLSGYYMNWVRQAPGKGLEWVGVIGINGATYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDARVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(序列辨識編號：54)。
本發明進一步設想用於治療或預防CGRP相關型腹瀉之抗體，其包含序列辨識編號：55、序列辨識編號：56及序列辨識編號：57的多肽序列中之一或多者，其中序列辨識編號：55、序列辨識編號：56及序列辨識編號：57係對應於序列辨識編號：51的可變輕鏈序列或序列辨識編號：52的輕鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)；及/或包含序列辨識編號：58、序列辨識編號：59及序列辨識編號：60的多肽序列中之一或多者，其中序列辨識編號：58、序列辨識編號：59及序列辨識編號：60係對應於序列 辨識編號：53的可變重鏈序列或序列辨識編號：54的重鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)；或包含該等多肽序列之組合。在本發明的另一實施例中，本發明的抗體或其片段包含CDR、可變重鏈與可變輕鏈序列及包括其中所有者之上文所列重鏈與輕鏈序列中之一或多者的組合物，或任擇地由其等所組成。
本發明亦設想具有CGRP結合特異性之用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的抗體片段。在本發明的一實施例中，本發明之抗體片段包含序列辨識編號：51或序列辨識編號：52的多肽序列，或任擇地由其等所組成。在本發明的另一實施例中，本發明之抗體片段包含序列辨識編號：53或序列辨識編號：54的多肽序列，或任擇地由其等所組成。
在本發明的又一實施例中，具有CGRP結合特異性之用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的抗體片段包含序列辨識編號：55、序列辨識編號：56及序列辨識編號：57的多肽序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：55、序列辨識編號：56及序列辨識編號：57係對應於序列辨識編號：51的可變輕鏈序列或序列辨識編號：52的輕鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)。
在本發明的又一實施例中，用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的抗體片段具有CGRP結合特異性包含序列辨識編號：58、序列辨識編號：59及序列辨識編號：60的多肽序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列 辨識編號：58、序列辨識編號：59及序列辨識編號：60係對應於序列辨識編號：53的可變重鏈序列或序列辨識編號：54的重鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)。
本發明亦設想用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的抗體片段，其包括本文所述抗體片段中之一或多者。在本發明的一實施例中，具有CGRP結合特異性之用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的抗體片段包含下列所有抗體片段中之一者、二者、三者或多者，或任擇地由其等所組成：序列辨識編號：51的可變輕鏈區；序列辨識編號：53的可變重鏈區；序列辨識編號：51的可變輕鏈區之互補決定區(序列辨識編號：55、序列辨識編號：56及序列辨識編號：57)；及序列辨識編號：53的可變重鏈區之互補決定區(序列辨識編號：58、序列辨識編號：59及序列辨識編號：60)。
在本發明的一個特佳實施例中，用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的人化抗CGRP抗體係Ab6，其包含序列辨識編號：52與序列辨識編號：54，或任擇地由其等所組成，及具有本文所述生物活性中之至少一者。
在本發明之另一特佳實施例中，用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的抗體片段包含具有CGRP結合特異性的Fab(片段抗原結合)片段，或任擇地由其等所組成。就抗體Ab6而言，Fab片段包括序列辨識編號：51的可變輕鏈序列與序列辨識編號：53的可變重鏈序列。本發明的該實施例進一步設想該Fab中的序列辨識編號：51及/或序列辨 識編號：53之添加作用、刪除作用及變異體，同時保留CGRP結合特異性。
在此(下文)所述之本發明的一實施例中，可藉由Ab6的酵素酶切作用(如木瓜酶)，產生用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的Fab片段。在本發明的另一實施例中，可經由在諸如CHO、NSO或HEK 293細胞的哺乳類動物細胞、真菌、昆蟲或微生物系統諸如酵母菌細胞(例如諸如二倍體畢赤酵母屬(Pichia)之二倍體酵母菌)與其他酵母菌株中的表現作用，產生用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的抗CGRP抗體諸如Ab6或其Fab片段。適宜的畢赤酵母屬(Pichia)物種包括但不限於巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)。
抗體Ab7
在一實施例中，本發明包括用於治療或預防CGRP相關型腹瀉之嵌合抗體，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一可變輕鏈序列：QVLTQTASPVSAAVGSTVTINCQASQSVYNYNYLAWYQQKPGQPPKQLIYSTSTLASGVSSRFKGSGSGTQFTLTISDVQCDDAATYYCLGSYDCSTGDCFVFGGGTEVVVKR(序列辨識編號：61)。
本發明亦包括用於治療或預防CGRP相關型腹瀉之嵌合抗體，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一輕鏈序列：QVLTQTASPVSAAVGSTVTINCQASQSVYNYNYLAWYQQKPGQPPKQLIYSTSTLASGVSSRFKGSGSGTQFTLTISDV QCDDAATYYCLGSYDCSTGDCFVFGGGTEVVVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(序列辨識編號：62)。
本發明進一步包括用於治療或預防CGRP相關型腹瀉之嵌合抗體，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一可變重鏈序列：QEQLKESGGRLVTPGTSLTLTCTVSGIDLSNHYMQWVRQAPGKGLEWIGVVGINGRTYYASWAKGRFTISRTSSTTVDLKMTRLTTEDTATYFCARGDIWGPGTLVTVSS(序列辨識編號：63)。
本發明亦包括用於治療或預防CGRP相關型腹瀉之嵌合抗體，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一重鏈序列：QEQLKESGGRLVTPGTSLTLTCTVSGIDLSNHYMQWVRQAPGKGLEWIGVVGINGRTYYASWAKGRFTISRTSSTTVDLKMTRLTTEDTATYFCARGDIWGPGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSD GSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(序列辨識編號：64)。
本發明進一步設想用於治療或預防CGRP相關型腹瀉之抗體，其包含序列辨識編號：65、序列辨識編號：66及序列辨識編號：67的多肽序列中之一或多者，其中序列辨識編號：65、序列辨識編號：66及序列辨識編號：67係對應於序列辨識編號：61的可變輕鏈序列或序列辨識編號：62的輕鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)；及/或包含序列辨識編號：68、序列辨識編號：69及序列辨識編號：70的多肽序列中之一或多者，其中序列辨識編號：68、序列辨識編號：69及序列辨識編號：70係對應於序列辨識編號：63的可變重鏈序列或序列辨識編號：64的重鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)；或包含該等多肽序列之組合。在本發明的另一實施例中，本發明的抗體或其片段包含CDR、可變重鏈與可變輕鏈序列及包括其中所有者之上文所列重鏈與輕鏈序列中之一或多者的組合物，或任擇地由其等所組成。
本發明亦設想具有CGRP結合特異性之用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的抗體片段。在本發明的一實施例中，本發明之抗體片段包含序列辨識編號：61或序列辨識編號：62的多肽序列，或任擇地由其等所組成。在本發明的另一實施例中，本發明之抗體片段包含序列辨識編號：63或序列辨識編號：64的多肽序列，或任擇地由其等所組成。
在本發明的又一實施例中，具有CGRP結合特異性之用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的抗體片段包含序列辨識編號：65、序列辨識編號：66及序列辨識編號：67的多肽序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：65、序列辨識編號：66及序列辨識編號：67係對應於序列辨識編號：61的可變輕鏈序列或序列辨識編號：62的輕鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)。
在本發明的又一實施例中，具有CGRP結合特異性之用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的抗體片段包含序列辨識編號：68、序列辨識編號：69及序列辨識編號：70的多肽序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：68、序列辨識編號：69及序列辨識編號：70係對應於序列辨識編號：63的可變重鏈序列或序列辨識編號：64的重鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)。
本發明亦設想用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的抗體片段，其包括本文所述抗體片段中之一或多者。在本發明的一實施例中，具有CGRP結合特異性的抗體片段包含下列所有抗體片段中之一者、二者、三者或多者，或任擇地由其等所組成：序列辨識編號：61的可變輕鏈區；序列辨識編號：63的可變重鏈區；序列辨識編號：61的可變輕鏈區之互補決定區(序列辨識編號：65、序列辨識編號：66及序列辨識編號：67)；及序列辨識編號：63的可變重鏈區之互補決定區(序列辨識編號：68、序列辨識編號：69及序列辨識編號：70)。
在本發明的一個特佳實施例中，用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的嵌合型抗CGRP抗體係Ab7，其包含序列辨識編號：62與序列辨識編號：64，或任擇地由其等所組成，及具有本文所述生物活性中之至少一者。
在本發明之另一特佳實施例中，用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的抗體片段包含具有CGRP結合特異性的Fab(片段抗原結合)片段，或任擇地由其等所組成。就抗體Ab7而言，Fab片段包括序列辨識編號：61的可變輕鏈序列與序列辨識編號：63的可變重鏈序列。本發明的該實施例進一步設想該Fab中的序列辨識編號：61及/或序列辨識編號：63之添加作用、刪除作用及變異體，同時保留CGRP結合特異性。
在此(下文)所述之本發明的一實施例中，可藉由Ab7的酵素酶切作用(如木瓜酶)，產生用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的Fab片段。在本發明的另一實施例中，可經由在諸如CHO、NSO或HEK 293細胞的哺乳類動物細胞、真菌、昆蟲或微生物系統諸如酵母菌細胞(例如諸如二倍體畢赤酵母屬(Pichia)之二倍體酵母菌)與其他酵母菌株中的表現作用，產生抗CGRP抗體諸如Ab7或其Fab片段。適宜的畢赤酵母屬(Pichia)物種包括但不限於巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)。
抗體Ab8
在一實施例中，本發明包括嵌合或人化抗體用於治療或預防CGRP相關型腹瀉，其具有CGRP結合特 異性及具有包含如下所列序列之一可變輕鏈序列：QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYNYNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSTGDCFVFGGGTKVEIKR(序列辨識編號：71)。
本發明亦包括用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的人化抗體，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一輕鏈序列：QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYNYNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSTGDCFVFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(序列辨識編號：72)。
本發明進一步包括人化抗體用於治療或預防CGRP相關型腹瀉，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一可變重鏈序列：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIDLSNHYMQWVRQAPGKGLEWVGVVGINGRTYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSS(序列辨識編號：73)。
本發明亦包括用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的人化抗體，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一重鏈序列： EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIDLSNHYMQWVRQAPGKGLEWVGVVGINGRTYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(序列辨識編號：74)。
本發明進一步設想用於治療或預防CGRP相關型腹瀉之抗體，其包含序列辨識編號：75、序列辨識編號：76及序列辨識編號：77的多肽序列中之一或多者，其中序列辨識編號：75、序列辨識編號：76及序列辨識編號：77係對應於序列辨識編號：71的可變輕鏈序列或序列辨識編號：72的輕鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)；及/或包含序列辨識編號：78、序列辨識編號：79及序列辨識編號：80的多肽序列中之一或多者，其中序列辨識編號：78、序列辨識編號：79及序列辨識編號：80係對應於序列辨識編號：73的可變重鏈序列或序列辨識編號：74的重鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)；或包含該等多肽序列之組合。在本發明的另一實施例中，本發明的抗體或其 片段包含CDR、可變重鏈與可變輕鏈序列及包括其中所有者之上文所列重鏈與輕鏈序列中之一或多者的組合物，或任擇地由其等所組成。
本發明亦設想具有CGRP結合特異性之用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的抗體片段。在本發明的一實施例中，本發明之抗體片段包含序列辨識編號：71或序列辨識編號：72的多肽序列，或任擇地由其等所組成。在本發明的另一實施例中，本發明之抗體片段包含序列辨識編號：73或序列辨識編號：74的多肽序列，或任擇地由其等所組成。
在本發明的又一實施例中，具有CGRP結合特異性之用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的抗體片段包含序列辨識編號：75、序列辨識編號：76及序列辨識編號：77的多肽序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：75、序列辨識編號：76及序列辨識編號：77係對應於序列辨識編號：71的可變輕鏈序列或序列辨識編號：72的輕鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)。
在本發明的又一實施例中，具有CGRP結合特異性之用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的抗體片段包含序列辨識編號：78、序列辨識編號：79及序列辨識編號：80的多肽序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：78、序列辨識編號：79及序列辨識編號：80係對應於序列辨識編號：73的可變重鏈序列或序列辨識編號：74的重鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)。
本發明亦設想用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的抗體片段，其包括本文所述抗體片段中之一或多者。在本發明的一實施例中，具有CGRP結合特異性之用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的抗體片段包含下列所有抗體片段中之一者、二者、三者或多者，或任擇地由其等所組成：序列辨識編號：71的可變輕鏈區；序列辨識編號：73的可變重鏈區；序列辨識編號：71的可變輕鏈區之互補決定區(序列辨識編號：75、序列辨識編號：76及序列辨識編號：77)；及序列辨識編號：73的可變重鏈區之互補決定區(序列辨識編號：78、序列辨識編號：79及序列辨識編號：80)。
在本發明的一個特佳實施例中，用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的人化抗CGRP抗體係Ab8，其包含序列辨識編號：72與序列辨識編號：74，或任擇地由其等所組成，及具有本文所述生物活性中之至少一者。
在本發明之另一特佳實施例中，用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的抗體片段包含具有CGRP結合特異性的Fab(片段抗原結合)片段，或任擇地由其等所組成。就抗體Ab8而言，Fab片段包括序列辨識編號：71的可變輕鏈序列與序列辨識編號：73的可變重鏈序列。本發明的該實施例進一步設想該Fab中的序列辨識編號：71及/或序列辨識編號：73之添加作用、刪除作用及變異體，同時保留CGRP結合特異性。
在此(下文)所述之本發明的一實施例中，可藉 由Ab8的酵素酶切作用(如木瓜酶)，產生用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的Fab片段。在本發明的另一實施例中，可經由在諸如CHO、NSO或HEK 293細胞的哺乳類動物細胞、真菌、昆蟲或微生物系統諸如酵母菌細胞(例如諸如二倍體畢赤酵母屬(Pichia)之二倍體酵母菌)與其他酵母菌株中的表現作用，產生用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的抗CGRP抗體諸如Ab8或其Fab片段。適宜的畢赤酵母屬(Pichia)物種包括但不限於巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)。
抗體Ab9
在一實施例中，本發明包括用於治療或預防CGRP相關型腹瀉之嵌合抗體，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一可變輕鏈序列：QVLTQTPSPVSAAVGSTVTINCQASQNVYNNNYLAWYQQKPGQPPKQLIYSTSTLASGVSSRFRGSGSGTQFTLTISDVQCDDAATYYCLGSYDCSRGDCFVFGGGTEVVVKR(序列辨識編號：81)。
本發明亦包括用於治療或預防CGRP相關型腹瀉之嵌合抗體，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一輕鏈序列：QVLTQTPSPVSAAVGSTVTINCQASQNVYNNNYLAWYQQKPGQPPKQLIYSTSTLASGVSSRFRGSGSGTQFTLTISDVQCDDAATYYCLGSYDCSRGDCFVFGGGTEVVVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHK VYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(序列辨識編號：82)。
本發明進一步包括用於治療或預防CGRP相關型腹瀉之嵌合抗體，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一可變重鏈序列：QSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGIGLSSYYMQWVRQSPGRGLEWIGVIGSDGKTYYATWAKGRFTISKTSSTTVDLRMASLTTEDTATYFCTRGDIWGPGTLVTVSS(序列辨識編號：83)。
本發明亦包括用於治療或預防CGRP相關型腹瀉之嵌合抗體，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一重鏈序列：QSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGIGLSSYYMQWVRQSPGRGLEWIGVIGSDGKTYYATWAKGRFTISKTSSTTVDLRMASLTTEDTATYFCTRGDIWGPGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(序列辨識編號：84)。
本發明進一步設想用於治療或預防CGRP相 關型腹瀉之抗體，其包含序列辨識編號：85、序列辨識編號：86及序列辨識編號：87的多肽序列中之一或多者，其中序列辨識編號：85、序列辨識編號：86及序列辨識編號：87係對應於序列辨識編號：81的可變輕鏈序列或序列辨識編號：82的輕鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)；及/或包含序列辨識編號：88、序列辨識編號：89及序列辨識編號：90的多肽序列中之一或多者，其中序列辨識編號：88、序列辨識編號：89及序列辨識編號：90係對應於序列辨識編號：83的可變重鏈序列或序列辨識編號：84的重鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)；或包含該等多肽序列之組合。在本發明的另一實施例中，本發明的用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的抗體或其片段包含CDR、可變重鏈與可變輕鏈序列及包括其中所有者之上文所列重鏈與輕鏈序列中之一或多者的組合物，或任擇地由其等所組成。
本發明亦設想具有CGRP結合特異性之用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的抗體片段。在本發明的一實施例中，本發明的抗體片段用於治療或預防CGRP相關型腹瀉 包含序列辨識編號：81或序列辨識編號：82的多肽序列，或任擇地由其等所組成。在本發明的另一實施例中，本發明之抗體片段包含序列辨識編號：83或序列辨識編號：84的多肽序列，或任擇地由其等所組成。
在本發明的又一實施例中，具有CGRP結合特異性之用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的抗體片段包含序列辨識編號：85、序列辨識編號：86及序列辨識編號： 87的多肽序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：85、序列辨識編號：86及序列辨識編號：87係對應於序列辨識編號：81的可變輕鏈序列或序列辨識編號：82的輕鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)。
在本發明的又一實施例中，具有CGRP結合特異性之用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的抗體片段包含序列辨識編號：88、序列辨識編號：89及序列辨識編號：90的多肽序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：88、序列辨識編號：89及序列辨識編號：90係對應於序列辨識編號：83的可變重鏈序列或序列辨識編號：84的重鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)。
本發明亦設想用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的抗體片段，其包括本文所述抗體片段中之一或多者。在本發明的一實施例中，具有CGRP結合特異性之用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的抗體片段包含下列所有抗體片段中之一者、二者、三者或多者，或任擇地由其等所組成：序列辨識編號：81的可變輕鏈區；序列辨識編號：83的可變重鏈區；序列辨識編號：81的可變輕鏈區之互補決定區(序列辨識編號：85、序列辨識編號：86及序列辨識編號：87)；及序列辨識編號：83的可變重鏈區之互補決定區(序列辨識編號：88、序列辨識編號：89及序列辨識編號：90)。
在本發明的一個特佳實施例中，用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的嵌合型抗CGRP抗體係Ab9，其包 含序列辨識編號：82與序列辨識編號：84，或任擇地由其等所組成，及具有本文所述生物活性中之至少一者。
在本發明之另一特佳實施例中，用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的抗體片段包含具有CGRP結合特異性的Fab(片段抗原結合)片段，或任擇地由其等所組成。就抗體Ab9而言，用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的Fab片段包括序列辨識編號：81的可變輕鏈序列與序列辨識編號：83的可變重鏈序列。本發明的該實施例進一步設想該Fab中的序列辨識編號：81及/或序列辨識編號：83之添加作用、刪除作用及變異體，同時保留CGRP結合特異性。
在此(下文)所述之本發明的一實施例中，可藉由Ab9的酵素酶切作用(如木瓜酶)，產生用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的Fab片段。在本發明的另一實施例中，可經由在諸如CHO、NSO或HEK 293細胞的哺乳類動物細胞、真菌、昆蟲或微生物系統諸如酵母菌細胞(例如諸如二倍體畢赤酵母屬(Pichia)之二倍體酵母菌)與其他酵母菌株中的表現作用，產生用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的抗CGRP抗體諸如Ab9或其Fab片段。適宜的畢赤酵母屬(Pichia)物種包括但不限於巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)。
抗體Ab10
在一實施例中，本發明包括用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的人化抗體，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一可變輕鏈序列：QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQNVYNNNYLAWYQ QKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSRGDCFVFGGGTKVEIKR(序列辨識編號：91)。
本發明亦包括用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的人化抗體，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一輕鏈序列：QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQNVYNNNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSRGDCFVFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(序列辨識編號：92)。
本發明進一步包括人化抗體用於治療或預防CGRP相關型腹瀉，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一可變重鏈序列：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIGLSSYYMQWVRQAPGKGLEWVGVIGSDGKTYYATWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCTRGDIWGQGTLVTVSS(序列辨識編號：93)。
本發明亦包括用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的人化抗體，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一重鏈序列：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIGLSSYYMQWVRQAPGKGLFWVGVIGSDGKTYYATWAKGRFTISRDNSKTTV YLQMNSLRAEDTAVYFCTRGDIWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(序列辨識編號：94)。
本發明進一步設想用於治療或預防CGRP相關型腹瀉之抗體，其包含序列辨識編號：95、序列辨識編號：96及序列辨識編號：97的多肽序列中之一或多者，其中序列辨識編號：95、序列辨識編號：96及序列辨識編號：97係對應於序列辨識編號：91的可變輕鏈序列或序列辨識編號：92的輕鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)；及/或包含序列辨識編號：98、序列辨識編號：99及序列辨識編號：100的多肽序列中之一或多者，其中序列辨識編號：98、序列辨識編號：99及序列辨識編號：100係對應於序列辨識編號：93的可變重鏈序列或序列辨識編號：94的重鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)；或包含該等多肽序列之組合。在本發明的另一實施例中，本發明的抗體或其片段包含CDR、可變重鏈與可變輕鏈序列及包括其中所有者之上文所列重鏈與輕鏈序列中之一或多者的組合物，或 任擇地由其等所組成。
本發明亦設想具有CGRP結合特異性之用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的抗體片段。在本發明的一實施例中，本發明之抗體片段包含序列辨識編號：91或序列辨識編號：92的多肽序列，或任擇地由其等所組成。在本發明的另一實施例中，本發明的抗體片段用於治療或預防CGRP相關型腹瀉 包含序列辨識編號：93或序列辨識編號：94的多肽序列，或任擇地由其等所組成。
在本發明的又一實施例中，具有CGRP結合特異性之用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的抗體片段包含序列辨識編號：95、序列辨識編號：96及序列辨識編號：97的多肽序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：95、序列辨識編號：96及序列辨識編號：97係對應於序列辨識編號：91的可變輕鏈序列或序列辨識編號：92的輕鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)。
在本發明的又一實施例中，具有CGRP結合特異性之用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的抗體片段包含序列辨識編號：98、序列辨識編號：99及序列辨識編號：100的多肽序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：98、序列辨識編號：99及序列辨識編號：100係對應於序列辨識編號：93的可變重鏈序列或序列辨識編號：94的重鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)。
本發明亦設想用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的抗體片段，其包括本文所述抗體片段中之一或多 者。在本發明的一實施例中，具有CGRP結合特異性的抗體片段包含下列所有抗體片段中之一者、二者、三者或多者，或任擇地由其等所組成：序列辨識編號：91的可變輕鏈區；序列辨識編號：93的可變重鏈區；序列辨識編號：91的可變輕鏈區之互補決定區(序列辨識編號：95、序列辨識編號：96及序列辨識編號：97)；及序列辨識編號：93的可變重鏈區之互補決定區(序列辨識編號：98、序列辨識編號：99及序列辨識編號：100)。
在本發明的一個特佳實施例中，用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的人化抗CGRP抗體係Ab10，其包含序列辨識編號：92與序列辨識編號：94，或任擇地由其等所組成，及具有本文所述生物活性中之至少一者。
在本發明之另一特佳實施例中，用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的抗體片段包含具有CGRP結合特異性的Fab(片段抗原結合)片段，或任擇地由其等所組成。就抗體Ab10而言，用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的Fab片段包括序列辨識編號：91的可變輕鏈序列與序列辨識編號：93的可變重鏈序列。本發明的該實施例進一步設想該Fab中的序列辨識編號：91及/或序列辨識編號：93之添加作用、刪除作用及變異體，同時保留CGRP結合特異性。
在此(下文)所述之本發明的一實施例中，可藉由Ab10的酵素酶切作用(如木瓜酶)，產生用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的Fab片段。在本發明的另一實施例中，可經由在諸如CHO、NSO或HEK 293細胞的哺乳類動物細 胞、真菌、昆蟲或微生物系統諸如酵母菌細胞(例如諸如二倍體畢赤酵母屬(Pichia)之二倍體酵母菌)與其他酵母菌株中的表現作用，產生抗CGRP抗體諸如Ab10或其Fab片段。適宜的畢赤酵母屬(Pichia)物種包括但不限於巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)。
抗體Ab11
在一實施例中，本發明包括用於治療或預防CGRP相關型腹瀉之嵌合抗體，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一可變輕鏈序列：QVLTQTASPVSPAVGSTVTINCRASQSVYYNNYLAWYQQKPGQPPKQLIYSTSTLASGVSSRFKGSGSGTQFTLTISDVQCDDAATYYCLGSYDCSNGDCFVFGGGTEVVVKR(序列辨識編號：101)。
本發明亦包括嵌合抗體，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一輕鏈序列：QVLTQTASPVSPAVGSTVTINCRASQSVYYNNYLAWYQQKPGQPPKQLIYSTSTLASGVSSRFKGSGSGTQFTLTISDVQCDDAATYYCLGSYDCSNGDCFVFGGGTEVVVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(序列辨識編號：102)。
本發明進一步包括用於治療或預防CGRP相關型腹瀉之嵌合抗體，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一可變重鏈序列： QSLEESGGRLVTPGGSLTLTCTVSGIDVTNYYMQWVRQAPGKGLEWIGVIGVNGKRYYASWAKGRFTISKTSSTTVDLKMTSLTTEDTATYFCARGDIWGPGTLVTVSS(序列辨識編號：103)。
本發明亦包括用於治療或預防CGRP相關型腹瀉之嵌合抗體，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一重鏈序列：QSLEESGGRLVTPGGSLTLTCTVSGIDVTNYYMQWVRQAPGKGLEWIGVIGVNGKRYYASWAKGRFTISKTSSTTVDLKMTSLTTEDTATYFCARGDIWGPGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(序列辨識編號：104)。
本發明進一步設想用於治療或預防CGRP相關型腹瀉之抗體，其包含序列辨識編號：105、序列辨識編號：106及序列辨識編號：107的多肽序列中之一或多者，其中序列辨識編號：105、序列辨識編號：106及序列辨識編號：107係對應於序列辨識編號：101的可變輕鏈序列或 序列辨識編號：102的輕鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)；及/或包含序列辨識編號：108、序列辨識編號：109及序列辨識編號：110的多肽序列中之一或多者，其中序列辨識編號：108、序列辨識編號：109及序列辨識編號：110係對應於序列辨識編號：103的可變重鏈序列或序列辨識編號：104的重鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)；或包含該等多肽序列之組合。在本發明的另一實施例中，本發明的抗體或其片段包含CDR、可變重鏈與可變輕鏈序列及包括其中所有者之上文所列重鏈與輕鏈序列中之一或多者的組合物，或任擇地由其等所組成。
本發明亦設想具有CGRP結合特異性之用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的抗體片段。在本發明的一實施例中，本發明之抗體片段包含序列辨識編號：101或序列辨識編號：102的多肽序列，或任擇地由其等所組成。在本發明的另一實施例中，本發明之抗體片段包含序列辨識編號：103或序列辨識編號：104的多肽序列，或任擇地由其等所組成。
在本發明的又一實施例中，具有CGRP結合特異性之用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的抗體片段包含序列辨識編號：105、序列辨識編號：106及序列辨識編號：107的多肽序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：105、序列辨識編號：106及序列辨識編號：107係對應於序列辨識編號：101的可變輕鏈序列或序列辨識編號：102的輕鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)。
在本發明的又一實施例中，具有CGRP結合特異性之用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的抗體片段包含序列辨識編號：108、序列辨識編號：109及序列辨識編號：110的多肽序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：108、序列辨識編號：109及序列辨識編號：110的多肽序係對應於序列辨識編號：103的可變重鏈序列或序列辨識編號：104的重鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)。
本發明亦設想用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的抗體片段，其包括本文所述抗體片段中之一或多者。在本發明的一實施例中，具有CGRP結合特異性之用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的抗體片段包含下列所有抗體片段中之一者、二者、三者或多者，或任擇地由其等所組成：序列辨識編號：101的可變輕鏈區；序列辨識編號：103的可變重鏈區；序列辨識編號：101的可變輕鏈區之互補決定區(序列辨識編號：105、序列辨識編號：106及序列辨識編號：107)；及序列辨識編號：103的可變重鏈區之互補決定區(序列辨識編號：108、序列辨識編號：109及序列辨識編號：110)。
在本發明的一個特佳實施例中，用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的嵌合型抗CGRP抗體係Ab11，其包含序列辨識編號：102與序列辨識編號：104，或任擇地由其等所組成，及具有本文所述生物活性中之至少一者。
在本發明之另一特佳實施例中，用於治療或 預防CGRP相關型腹瀉的抗體片段包含具有CGRP結合特異性的Fab(片段抗原結合)片段，或任擇地由其等所組成。就抗體Ab11而言，用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的Fab片段包括序列辨識編號：101的可變輕鏈序列與序列辨識編號：103的可變重鏈序列。本發明的該實施例進一步設想該Fab中的序列辨識編號：101及/或序列辨識編號：103之添加作用、刪除作用及變異體，同時保留CGRP結合特異性。
在此(下文)所述之本發明的一實施例中，可藉由Ab11的酵素酶切作用(如木瓜酶)，產生用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的Fab片段。在本發明的另一實施例中，可經由在諸如CHO、NSO或HEK 293細胞的哺乳類動物細胞、真菌、昆蟲或微生物系統諸如酵母菌細胞(例如諸如二倍體畢赤酵母屬(Pichia)之二倍體酵母菌)與其他酵母菌株中的表現作用，產生抗CGRP抗體諸如Ab11或其Fab片段。適宜的畢赤酵母屬(Pichia)物種包括但不限於巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)。
抗體Ab12
在一實施例中，本發明包括用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的人化抗體，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一可變輕鏈序列：QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCRASQSVYYNNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSNGDCFVFGGGTKVEIKR(序列辨識編號：111)。
本發明亦包括用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的人化抗體，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一輕鏈序列：QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCRASQSVYYNNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSNGDCFVFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(序列辨識編號：112)。
本發明進一步包括人化抗體，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一可變重鏈序列：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIDVTNYYMQWVRQAPGKGLEWVGVIGVNGKRYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSS(序列辨識編號：113)。
本發明亦包括用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的人化抗體，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一重鏈序列：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIDVTNYYMQWVRQAPGKGLEWVGVIGVNGKRYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFL FPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(序列辨識編號：114)。
本發明進一步設想用於治療或預防CGRP相關型腹瀉之抗體，其包含序列辨識編號：115、序列辨識編號：116及序列辨識編號：117的多肽序列中之一或多者，其中序列辨識編號：115、序列辨識編號：116及序列辨識編號：117係對應於序列辨識編號：111的可變輕鏈序列或序列辨識編號：112的輕鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)；及/或包含序列辨識編號：118、序列辨識編號：119及序列辨識編號：120的多肽序列中之一或多者，其中序列辨識編號：118、序列辨識編號：119及序列辨識編號：120係對應於序列辨識編號：113的可變重鏈序列或序列辨識編號：114的重鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)；或包含該等多肽序列之組合。在本發明的另一實施例中，本發明的用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的抗體或其片段包含CDR、可變重鏈與可變輕鏈序列及包括其中所有者之上文所列重鏈與輕鏈序列中之一或多者的組合物，或任擇地由其等所組成。
本發明亦設想具有CGRP結合特異性之用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的抗體片段。在本發明的一實 施例中，本發明的抗體片段用於治療或預防CGRP相關型腹瀉 包含序列辨識編號：111或序列辨識編號：112的多肽序列，或任擇地由其等所組成。在本發明的另一實施例中，本發明之抗體片段包含序列辨識編號：113或序列辨識編號：114的多肽序列，或任擇地由其等所組成。
在本發明的又一實施例中，具有CGRP結合特異性之用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的抗體片段包含序列辨識編號：115、序列辨識編號：116及序列辨識編號：117的多肽序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：115、序列辨識編號：116及序列辨識編號：117係對應於序列辨識編號：111的可變輕鏈序列或序列辨識編號：112的輕鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)。
在本發明的又一實施例中，具有CGRP結合特異性之用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的抗體片段包含序列辨識編號：118、序列辨識編號：119及序列辨識編號：120的多肽序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：118、序列辨識編號：119及序列辨識編號：120係對應於序列辨識編號：113的可變重鏈序列或序列辨識編號：114的重鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)。
本發明亦設想用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的抗體片段，其包括本文所述抗體片段中之一或多者。在本發明的一實施例中，具有CGRP結合特異性之用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的抗體片段包含下列所有抗體片段中之一者、二者、三者或多者，或任擇地由其等所 組成：序列辨識編號：111的可變輕鏈區；序列辨識編號：113的可變重鏈區；序列辨識編號：111的可變輕鏈區之互補決定區(序列辨識編號：115、序列辨識編號：116及序列辨識編號：117)；及序列辨識編號：113的可變重鏈區之互補決定區(序列辨識編號：118、序列辨識編號：119及序列辨識編號：120)。
在本發明的一個特佳實施例中，用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的人化抗CGRP抗體係Ab12，其包含序列辨識編號：112與序列辨識編號：114，或任擇地由其等所組成，及具有本文所述生物活性中之至少一者。
在本發明之另一特佳實施例中，用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的抗體片段包含具有CGRP結合特異性的Fab(片段抗原結合)片段，或任擇地由其等所組成。就抗體Ab12而言，用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的Fab片段包括序列辨識編號：111的可變輕鏈序列與序列辨識編號：113的可變重鏈序列。本發明的該實施例進一步設想該Fab中的序列辨識編號：111及/或序列辨識編號：113之添加作用、刪除作用及變異體，同時保留CGRP結合特異性。
在此(下文)所述之本發明的一實施例中，可藉由Ab12的酵素酶切作用(如木瓜酶)，產生用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的Fab片段。在本發明的另一實施例中，可經由在諸如CHO、NSO或HEK 293細胞的哺乳L類動物細胞、真菌、昆蟲或微生物系統諸如酵母菌細胞(例如諸如二倍體畢赤酵母屬(Pichia)之二倍體酵母菌)與其他酵母菌株 中的表現作用，產生用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的抗CGRP抗體諸如Ab12或其Fab片段。適宜的畢赤酵母屬(Pichia)物種包括但不限於巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)。
抗體Ab13
在一實施例中，本發明包括用於治療或預防CGRP相關型腹瀉之嵌合抗體，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一可變輕鏈序列：AIVMTQTPSSKSVPVGDTVTINCQASESLYNNNALAWFQQKPGQPPKRLIYDASKLASGVPSRFSGGGSGTQFTLTISGVQCDDAATYYCGGYRSDSVDGVAFAGGTEVVVKR(序列辨識編號：121)。
本發明亦包括用於治療或預防CGRP相關型腹瀉之嵌合抗體，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一輕鏈序列：AIVMTQTPSSKSVPVGDTVTINCQASESLYNNNALAWFQQKPGQPPKRLIYDASKLASGVPSRFSGGGSGTQFTLTISGVQCDDAATYYCGGYRSDSVDGVAFAGGTEVVVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(序列辨識編號：122)。
本發明進一步包括用於治療或預防CGRP相關型腹瀉之嵌合抗體，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一可變重鏈序列： QSVEESGGGLVQPEGSLTLTCTASGFDFSSNAMWWVRQAPGKGLEWIGIIYNGDGSTYYASWVNGRFSISKTSSTTVTLQLNSLTVADTATYYCARDLDLWGPGTLVTVSS(序列辨識編號：123)。
本發明亦包括用於治療或預防CGRP相關型腹瀉之嵌合抗體，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一重鏈序列：QSVEESGGGLVQPEGSLTLTCTASGFDFSSNAMWWVRQAPGKGLEWIGCIYNGDGSTYYASWVNGRFSISKTSSTTVTLQLNSLTVADTATYYCARDLDLWGPGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(序列辨識編號：124)。
本發明進一步設想用於治療或預防CGRP相關型腹瀉之抗體，其包含序列辨識編號：125、序列辨識編號：126及序列辨識編號：127的多肽序列中之一或多者，其中序列辨識編號：125、序列辨識編號：126及序列辨識編號：127係對應於序列辨識編號：121的可變輕鏈序列或 序列辨識編號：122的輕鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)；及/或包含序列辨識編號：128、序列辨識編號：129及序列辨識編號：130的多肽序列中之一或多者，其中序列辨識編號：128、序列辨識編號：129及序列辨識編號：130係對應於序列辨識編號：123的可變重鏈序列或序列辨識編號：124的重鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)；或包含該等多肽序列之組合。在本發明的另一實施例中，本發明的抗體或其片段包含CDR、可變重鏈與可變輕鏈序列及包括其中所有者之上文所列重鏈與輕鏈序列中之一或多者的組合物，或任擇地由其等所組成。
本發明亦設想具有CGRP結合特異性之用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的抗體片段。在本發明的一實施例中，本發明之抗體片段包含序列辨識編號：121或序列辨識編號：122的多肽序列，或任擇地由其等所組成。在本發明的另一實施例中，本發明之抗體片段包含序列辨識編號：123或序列辨識編號：124的多肽序列，或任擇地由其等所組成。
在本發明的又一實施例中，具有CGRP結合特異性之用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的抗體片段包含序列辨識編號：125、序列辨識編號：126及序列辨識編號：127的多肽序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：125、序列辨識編號：126及序列辨識編號：127係對應於序列辨識編號：121的可變輕鏈序列或序列辨識編號：122的輕鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)。
在本發明的又一實施例中，具有CGRP結合特異性之用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的抗體片段包含序列辨識編號：128、序列辨識編號：129及序列辨識編號：130的多肽序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：128、序列辨識編號：129及序列辨識編號：130係對應於序列辨識編號：123的可變重鏈序列或序列辨識編號：124的重鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)。
本發明亦設想用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的抗體片段，其包括本文所述抗體片段中之一或多者。在本發明的一實施例中，具有CGRP結合特異性的抗體片段包含下列所有抗體片段中之一者、二者、三者或多者，或任擇地由其等所組成：序列辨識編號：121的可變輕鏈區；序列辨識編號：123的可變重鏈區；序列辨識編號：121的可變輕鏈區之互補決定區(序列辨識編號：125、序列辨識編號：126及序列辨識編號：127)；及序列辨識編號：123的可變重鏈區之互補決定區(序列辨識編號：128、序列辨識編號：129及序列辨識編號：130)。
在本發明的一個特佳實施例中，用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的嵌合型抗CGRP抗體係Ab13，其包含序列辨識編號：122與序列辨識編號：124，或任擇地由其等所組成，及具有本文所述生物活性中之至少一者。
在本發明之另一特佳實施例中，抗體片段包含具有CGRP結合特異性的Fab(片段抗原結合)片段，或任擇地由其等所組成。就抗體Ab13而言，用於治療或預防 CGRP相關型腹瀉的Fab片段包括序列辨識編號：121的可變輕鏈序列與序列辨識編號：123的可變重鏈序列。本發明的該實施例進一步設想該Fab中的序列辨識編號：121及/或序列辨識編號：123之添加作用、刪除作用及變異體，同時保留CGRP結合特異性。
在此(下文)所述之本發明的一實施例中，可藉由Ab13的酵素酶切作用(如木瓜酶)，產生用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的Fab片段。在本發明的另一實施例中，可經由在諸如CHO、NSO或HEK 293細胞的哺乳類動物細胞、真菌、昆蟲或微生物系統諸如酵母菌細胞(例如諸如二倍體畢赤酵母屬(Pichia)之二倍體酵母菌)與其他酵母菌株中的表現作用，產生用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的抗CGRP抗體諸如Ab13或其Fab片段。適宜的畢赤酵母屬(Pichia)物種包括但不限於巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)。
抗體Ab14
在一實施例中，本發明包括用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的人化抗體，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一可變輕鏈序列：QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQNVYNNNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSRGDCFVFGGGTKVEIKR(序列辨識編號：131)。
本發明亦包括用於治療或預防CGRP相 關型腹瀉的人化抗體，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一輕鏈序列：QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQNVYNNNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSRGDCFVFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(序列辨識編號：132)。
本發明進一步包括人化抗體用於治療或預防CGRP相關型腹瀉，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一可變重鏈序列：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIGLSSYYMQWVRQAPGKGLEWVGVIGSDGKTYYATWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCTRGDIWGQGTLVTVSS(序列辨識編號：133)。
本發明亦包括用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的人化抗體，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一重鏈序列：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIGLSSYYMQWVRQAPGKGLEWVGVIGSDGKTYYATWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCTRGDIWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDARVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLF PPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(序列辨識編號：134)。
本發明進一步設想用於治療或預防CGRP相關型腹瀉之抗體，其包含序列辨識編號：135、序列辨識編號：136及序列辨識編號：137的多肽序列中之一或多者，其中序列辨識編號：135、序列辨識編號：136及序列辨識編號：137係對應於序列辨識編號：131的可變輕鏈序列或序列辨識編號：132的輕鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)；及/或包含序列辨識編號：138、序列辨識編號：139及序列辨識編號：140的多肽序列中之一或多者，其中序列辨識編號：138、序列辨識編號：139及序列辨識編號：140係對應於序列辨識編號：133的可變重鏈序列或序列辨識編號：134的重鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)；或包含該等多肽序列之組合。在本發明的另一實施例中，本發明的抗體或其片段包含CDR、可變重鏈與可變輕鏈序列及包括其中所有者之上文所列重鏈與輕鏈序列中之一或多者的組合物，或任擇地由其等所組成。
本發明亦設想具有CGRP結合特異性之用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的抗體片段。在本發明的一實施例中，本發明的抗體片段用於治療或預防CGRP相關型腹 瀉包含序列辨識編號：131或序列辨識編號：132的多肽序列，或任擇地由其等所組成。在本發明的另一實施例中，本發明之抗體片段包含序列辨識編號：133或序列辨識編號：134的多肽序列，或任擇地由其等所組成。
在本發明的又一實施例中，具有CGRP結合特異性之用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的抗體片段包含序列辨識編號：135、序列辨識編號：136及序列辨識編號：137的多肽序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：135、序列辨識編號：136及序列辨識編號：137係對應於序列辨識編號：131的可變輕鏈序列或序列辨識編號：132的輕鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)。
在本發明的又一實施例中，具有CGRP結合特異性之用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的抗體片段包含序列辨識編號：138、序列辨識編號：139及序列辨識編號：140的多肽序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：138、序列辨識編號：139及序列辨識編號：140係對應於序列辨識編號：133的可變重鏈序列或序列辨識編號：134的重鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)。
本發明亦設想用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的抗體片段，其包括本文所述抗體片段中之一或多者。在本發明的一實施例中，具有CGRP結合特異性的抗體片段包含下列所有抗體片段中之一者、二者、三者或多者，或任擇地由其等所組成：序列辨識編號：131的可變輕鏈區；序列辨識編號：133的可變重鏈區；序列辨識編號：131 的可變輕鏈區之互補決定區(序列辨識編號：135、序列辨識編號：136及序列辨識編號：137)；及序列辨識編號：133的可變重鏈區之互補決定區(序列辨識編號：138、序列辨識編號：139及序列辨識編號：140)。
在本發明的一個特佳實施例中，用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的人化抗CGRP抗體係Ab14，其包含序列辨識編號：132與序列辨識編號：134，或任擇地由其等所組成，及具有本文所述生物活性中之至少一者。
在本發明之另一特佳實施例中，用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的抗體片段包含具有CGRP結合特異性的Fab(片段抗原結合)片段，或任擇地由其等所組成。就抗體Ab14而言，Fab片段包括序列辨識編號：131的可變輕鏈序列與序列辨識編號：133的可變重鏈序列。本發明的該實施例進一步設想該Fab中的序列辨識編號：131及/或序列辨識編號：133之添加作用、刪除作用及變異體，同時保留CGRP結合特異性。
在此(下文)所述之本發明的一實施例中，可藉由Ab14的酵素酶切作用(如木瓜酶)，產生用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的Fab片段。在本發明的另一實施例中，可經由在諸如CHO、NSO或HEK 293細胞的哺乳類動物細胞、真菌、昆蟲或微生物系統諸如酵母菌細胞(例如諸如二倍體畢赤酵母屬(Pichia)之二倍體酵母菌)與其他酵母菌株中的表現作用，產生抗CGRP抗體諸如Ab14或其Fab片段。適宜的畢赤酵母屬(Pichia)物種包括但不限於巴斯德畢赤 酵母(Pichia pastoris)。
在另一實施例中，抗體片段可能以下列非限制性形式中之一或多者呈現：Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv及單鏈Fv抗體形式。在一個較佳實施例中，本文所述之用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的抗CGRP抗體進一步包含固定輕鏈序列，其包含如下所列序列：VAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(序列辨識編號：283)。
在另一較佳實施例中，本文所述之用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的抗CGRP抗體進一步包含γ-1固定重鏈多肽序列，其包含如下所列序列：ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(序列辨識編號：284)。
在另一實施例中，本發明設想用於治療或預防CGRP相關型腹瀉之一種分離的抗CGRP抗體，其包含選 自下列之一VH多肽序列：序列辨識編號：3、13、23、33、43、53、63、73、83、93、103、113、123或133或其變異體；及進一步包含選自下列之一VL多肽序列：序列辨識編號：1、11、21、31、41、51、61、71、81、91、101、111、121或131或其變異體，其中該VH或VL多肽中的一或多個架構殘基(FR殘基)已被另一胺基酸殘基取代，而產生與CGRP特異性結合之一抗CGRP抗體。本發明設想用於治療或預防CGRP相關型腹瀉之該等抗體的人化與嵌合形式。該嵌合抗體可包括衍生自IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgG5、IgG6、IgG7、IgG8、IgG9、IgG10、IgG11、IgG12、IgG13、IgG14、IgG15、IgG16、IgG17、IgG18或IgG19固定區之一Fc。
在本發明的一實施例中，在本文中所提及的人化過程起始之前，用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的抗體或VH或VL多肽係源自或選自一或多種兔子B細胞群。
在本發明的另一實施例中，用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的抗CGRP抗體及其片段不具有CGRP-R結合特異性。在本發明的又一實施例中，抗CGRP抗體及其片段抑制CGRP與CGRP-R的結合作用。在本發明的另一實施例中，用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的抗CGRP抗體及其片段抑制CGRP與CGRP-R及/或與附加的蛋白及/或與其多聚體之結合作用，及/或拮抗其生物效應。
如本文段落[0127]中所述，用於治療或預防CGRP相關型腹瀉之抗體及其片段可在轉譯後加以改質，而添加作用性基團諸如化學連接子；可檢測性基團諸如螢光 染料、酵素、毒素、受質、生物發光物質、放射性物質及化學發光基團；或功能性結合基團諸如例如鏈黴抗生物素蛋白、抗生物素蛋白、生物素、細胞毒素、細胞毒性劑及放射性物質。
抗體或其片段亦可進行化學改質而提供附加的優點，諸如增加多肽的溶解性、安定性及循環時間(活體內半衰期)，或降低免疫生成性(參見第4,179,337號美國專利)。用於衍生化作用之化學基團可選自水溶性聚合物，諸如聚乙二醇、乙二醇/丙二醇共聚物、羧甲基纖維素、聚葡萄糖、聚乙烯醇之類。抗體及其片段可在分子內的隨機位置或在分子內的預定位置進行改質，及可包括一個、二個、三個或更多個連接的化學基團。
聚合物可具有任何分子量，及可為分支或未分支者。就聚乙二醇而言，為便於處理與製造，分子量較佳介於約1 kDa與約100 kDa之間(“約”一詞表明在製備聚乙二醇時，有些分子比所述分子量來得重，有些分子則較輕)。依所欲的治療廓型(如所欲的持續釋出期間、若有任何生物活性時之效應、處理之方便性、抗原性程度或缺乏抗原性及聚乙二醇對於一治療性蛋白或類似物的其他已知效應)而定，可採用其他分子量。例如，聚乙二醇的平均分子量可約為200、500、1000、1500、2000、2500、3000、3500、4000、4500、5000、5500、6000、6500、7000、7500、8000、8500、9000、9500、10,000、10,500、11,000、11,500、12,000、12,500、13,000、13,500、14,000、14,500、15,000、15,500、 16,000、16,500、17,000、17,500、18,000、18,500、19,000、19,500、20,000、25,000、30,000、35,000、40,000、50,000、55,000、60,000、65,000、70,000、75,000、80,000、85,000、90,000、95,000或100,000 kDa。分支型聚乙二醇係述於例如第5,643,575號美國專利；Morpurgo等人於期刊“Appl.Biochem.Biotechnol.”第56期第59-72頁(1996年)乙文；Vorobjev等人於期刊“Nucleosides Nucleotides”第18期第2745-2750頁(1999年)乙文；及Caliceti等人於期刊“Bioconjug.Chem.”第10期第638-646頁(1999年)乙文，各者的揭露內容在此併入本案以為參考資料。
有數種連接方法可供嫻熟技藝者使用，如參見EP 0 401 384，其在此併入本案以為參考資料(將PEG與G-CSF偶合)，亦參見Malik等人於期刊“Exp.Hematol.”第20期第1028-1035頁(1992年)乙文(報導使用三氟代乙烷磺醯氯之GM-CSF的聚乙二醇化作用)。例如，經由一反應基諸如游離胺基或羧基，聚乙二醇可經由胺基酸殘基而共價結合。反應基係可與一活化的聚乙二醇分子結合者。具有一游離胺基的胺基酸殘基可包括離胺酸殘基及胺基端胺基酸殘基；具有一游離羧基者可包括天冬胺酸殘基麩胺酸殘基及羧基端胺基酸殘基。巰基亦可作為用於連接聚乙二醇分子的反應基。就治療目的而言，較佳連接在一胺基上，諸如連接在胺基端或離胺酸基上。
如上文所述，聚乙二醇可經由與任何數目的胺基酸殘基之鍵結而與蛋白連接。例如，聚乙二醇可經由 與離胺酸、組胺酸、天冬胺酸、麩胺酸或半胱胺酸殘基的共價鍵而與多肽連接。可採用一或多種反應化學來連接聚乙二醇與特定的胺基酸殘基(如離胺酸、組胺酸、天冬胺酸、麩胺酸或半胱胺酸)或連接一種類型以上的胺基酸殘基(如離胺酸、組胺酸、天冬胺酸、麩胺酸或半胱胺酸及其組合物)。
任擇地，用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的抗體或其片段可經由與白蛋白(包括但不限於重組型人類血清白蛋白或片段或其變異體(如參見於1999年3月2日頒證之第5,876,969號美國專利、EP專利0 413 622及於1998年6月16日頒證之第5,766,883號美國專利，其等在此完整地併入本案以為參考資料))或其他循環型血液蛋白諸如轉鐵蛋白或鐵蛋白融合，而增加活體內半衰期。在一個較佳實施例中，本發明的多肽及/或抗體(包括片段或其變異體)係與成熟形式的人類血清白蛋白融合(亦即如EP專利0322094第1與2圖中所示之人類血清白蛋白的第1至585個胺基酸)，該專利在此完整地併入本案以為參考資料。本發明亦涵蓋本發明之聚核苷酸所編碼的融合蛋白。
就可檢測性基團而言，進一步的例示性酵素包括但不限於山葵過氧化酶、乙醯膽鹼酯酶、鹼性磷酸酶、β-半乳糖苷酶及螢光素酶。進一步的例示性螢光物質包括但不限於玫瑰紅、螢光黃、螢光黃異硫氰酸鹽、繖形酮、二氯三胺、藻紅素及丹磺醯氯。進一步的例示性化學發光基團包括但不限於流明諾(luminol)。進一步的例示性生 物發光物質包括但不限於螢光素與水母發光蛋白。進一步的例示性放射性物質包括但不限於碘125(125I)、碳14(14C)、硫35(35S)、氚(3H)及磷32(32P)。
就功能性基團而言，例示性細胞毒性劑包括但不限於甲氨蝶呤、胺喋呤、6-巰嘌呤、6-硫鳥嘌呤、阿糖胞苷(cytarabine)、5-氟尿嘧啶達卡巴仁(decarbazine)；烷化劑諸如氮芥(mechlorethamine)、沙奧特帕(thioepa)苯丁酸氮芥(chlorambucil)、黴法蘭(melphalan)、卡莫司汀(carmustine)(BSNU)、絲裂黴素C、洛莫司汀(lomustine)(CCNU)、1-甲基亞硝脲、塞克羅邁得(cyclophosphamide)、氮芥(mechlorethamine)、白消安(busulfan)、二溴甘露醇、鏈佐黴素、絲裂黴素C、順二氯二胺鉑(II)(DDP)順鉑與卡鉑(carboplatin)(伯爾定(paraplatin))；蒽環素包括唐黴素(daunorubicin)(先前稱為道諾黴素(daunomycin))、多柔比星(doxorubicin)(阿德力黴素(adriamycin))、地托比星(detorubicin)、洋紅黴素(carminomycin)、伊達比星(idarubicin)、表柔比星(epirubicin)、米托蒽醌(mitoxantrone)與比生群(bisantrene)；抗生素包括更生黴素(dactinomycin)(放線菌素D)、博萊黴素(bleomycin)、卡奇黴素(calicheamicin)、光輝黴素(mithramycin)及安曲黴素(mithramycin)(AMC)；及抗有絲分裂劑諸如長春花生物鹼、長春新鹼及長春鹼。其他細胞毒性劑包括太平洋紫杉醇(紫杉醇)、蓖麻毒蛋白、綠膿桿菌外毒素、吉西他濱(gemcitabine)、細胞遲緩素B、短桿菌肽(gramicidin)D、溴 化乙啶、吐根鹼、依托泊苷(etoposide)、替尼泊苷(tenoposide)、秋水仙素、二羥基炭疽菌素二酮、1-去氫睪固酮、糖皮質素、普魯卡因(procaine)、四卡因(tetracaine)、利多卡因(lidocaine)、普萘洛爾(propranolol)、嘌呤黴素、丙卡巴肼(procarbazine)、羥基脲、天冬醯胺酸酶、皮質類固醇、米托坦(mytotane)(O,P'-(DDD))、干擾素及該等細胞毒性劑的混合物。
進一步的細胞毒性劑包括但不限於化療藥物，諸如卡鉑(carboplatin)、順鉑、太平洋紫杉醇、吉西他濱(gemcitabine)、卡奇黴素(calicheamicin)、多柔比星(doxorubicin)、5-氟尿嘧啶、絲裂黴素C、放線菌素D、環磷醯胺、長春新鹼及萊黴素(bleomycin)。來自植物與細菌的毒性酵素諸如蓖麻毒蛋白、白喉毒素及假單胞菌毒素，可與人化或嵌合抗體或其結合片段接合而產生細胞類型特異性殺滅試劑(Youle等人於期刊“Proc.Nat’l Acad.Sci.USA”第77期第5483頁(1980年)乙文；Gilliland等人於期刊“Proc.Nat’l Acad.Sci.USA”第77期第4539頁(1980年)乙文；Krolick等人於期刊“Proc.Nat’l Acad.Sci.USA”第77期第5419頁(1980年)乙文。
其他細胞毒性劑包括如Goldenberg於第6,653,104號美國專利中所述之細胞毒性核糖核酸酶。本發明的實施例亦有關於放射性免疫複合物，其中發射α或β粒子的一種放射性核種係在使用或不使用複合物形成劑之下，與抗體或其結合片段安定地偶合。該等放射性核種包 括β-發射體諸如磷-32(32P)、鈧-47(47Sc)、銅-67(67Cu)、鎵-67(67Ga)、釔-88(88Y)、釔-90(90Y)、碘-125(125I)、碘-131(131I)、釤-153(153Sm)、鎦-177(177Lu)、錸-186(186Re)或錸-188(188Re)，及α-發射體諸如砈-211(211At)、鉛-212(212Pb)、鉍-212(212Bi)或鉍-213(213Bi)或錒-225(225Ac)。
將一抗體或其結合片段與一可檢測性基團之類接合之方法係技藝中所知，諸如例如Hunter等人於期刊“Nature”第144期第945頁(1962年)乙文；David等人等人於期刊“Biochemistry”第13期第1014頁(1974年)乙文；Pain等人等人於期刊“J.Immunol.Meth.”第40期第219頁(1981年)乙文；及Nygren,J.於期刊“Histochem.and Cytochem.”第30期第407頁(1982年)乙文所述之該等方法。
本文中所述之實施例進一步包括與本文中所載列的抗體、抗體片段、雙鏈抗體、SMIP、駱駝抗體、奈米抗體、IgNAR、多肽、變異區及CDR實質上同源之變異體與等效物。其等可含有例如保留性取代突變作用(亦即藉由類似的胺基酸取代一或多個胺基酸)。例如，保留性取代作用係指用另一個同類胺基酸取代一胺基酸，如用另一個酸性胺基酸取代一個酸性胺基酸，用另一個鹼性胺基酸取代一個鹼性胺基酸，或用另一個中性胺基酸取代一個中性胺基酸。保留性胺基酸取代作用之目的係技藝中所熟知。
在另一實施例中，本發明設想多肽序列，其與本文中所載列之抗體片段、變異區及CDR的多肽序列中之任一或多者的序列同源性係至少90%或以上。本發明設 想多肽序列，其與本文中所載列之抗體片段、變異區及CDR的多肽序列中之任一或多者的序列同源性更佳至少95%或以上，序列同源性甚至更佳為至少98%或以上，及序列同源性又更佳為至少99%或以上。用於測定核酸與胺基酸序列之間的同源性之方法，係具一般技藝者所熟知。
在另一實施例中，本發明進一步設想本文中所載列的抗體片段、變異區及CDR之進一步具有抗CGRP活性的上述多肽同源物。本文中所載列之抗CGRP活性的非限制性實例，例如述於下文之段落[0329]至[0350]中。
在另一實施例中，本發明進一步設想與前述任何序列結合的抗遺傳型抗體之產生與用途。在一例示性實施例中，可對於領受一抗CGRP抗體之一個體投予該種抗遺傳型抗體，而調控、降低或中和抗CGRP抗體的效應。該抗遺傳型抗體亦可適用於治療自體免疫疾病，該自體免疫疾病的特徵在於存在抗CGRP抗體。該抗遺傳型抗體進一步的例示性用途，係用於檢測本發明的抗CGRP抗體，例如監測個體血液或其他體液中所存在的抗CGRP抗體水平。
本發明亦設想抗CGRP抗體，其包含用於取代本文所述之其他任一聚核苷酸序列之本文所述之任一多肽或聚核苷酸序列。例如但不侷限於此，本發明設想抗體，其包含本文中所述之任一可變輕鏈與可變重鏈序列的組合；及進一步設想抗體，其係用本文所述的任一CDR序列取代本文所述的其他任一CDR序列而產生。
本發明的附加例示性實施例
在另一實施例中，本發明設想用於治療或預防CGRP相關型腹瀉之一或多種抗人類CGRP抗體或其抗體片段，其係以選自Ab1、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、Ab11、Ab12、Ab13或Ab14之一種抗人類CGRP抗體形式，以特異性方式與一完整的人類CGRP多肽或其片段中之相同的線性或構型抗原決定位結合及/或競爭與相同的線性或構型抗原決定位結合。在一個較佳實施例中，抗人類CGRP抗體或其片段係以Ab3、Ab6、Ab13、Ab12或Ab14形式，以特異性方式與一完整的人類CGRP多肽或其片段中之相同的線性或構型抗原決定位結合及/或競爭與相同的線性或構型抗原決定位結合。
本發明的一個較佳實施例係有關用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的嵌合或人化抗體及其片段(包括Fab片段)，其具有CGRP結合特異性及抑制由CGRP與CGRP受器的結合作用所媒介之生物活性。在本發明的一個特佳實施例中，用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的嵌合或人化抗CGRP抗體係選自Ab3、Ab6、Ab10、Ab13或Ab14。
本發明的一個較佳實施例係有關在動物模式中篩檢對於人類降血鈣素基因相關胜肽(以下簡稱“CGRP”)具有結合特異性之抗體及其片段(包括Fab片段)之方法，以測定其活體內效應，特別是其等拮抗包括CGRP相關型腹瀉在內的CGRP不良副作用及治療涉及過量CGRP的病況之能力。
本發明之另一個更具體的較佳實施例，係涉及評估一種候選的抗CGRP抗體或抗體片段之潛在活體內功效之一種方法，其包括相較於在該候選的CGRP抗體或抗體片段不存在下投予CGRP之一囓齒動物，測定該抗體是否抑制CGRP相關型腹瀉。
本發明之另一個更具體的較佳實施例，係涉及評估一種候選的抗CGRP抗體或抗體片段在治療一神經病況的潛在活體內功效之一種方法，該神經病況的特徵在於CGRP水平增加。
本發明之另一個更具體的較佳實施例，係涉及評估一種候選的抗CGRP抗體或抗體片段在治療一種伴有腹瀉之CGRP關聯性功能失調的潛在活體內功效之一種方法，該CGRP關聯性功能失調諸如偏頭痛或慢性偏頭痛(不論有無前兆)、體重減輕、癌症或腫瘤、與癌症或腫瘤生長相關聯之血管生成作用、與癌症或腫瘤存活相關聯之血管生成作用、偏癱性偏頭痛、叢發性頭痛、偏頭痛性神經痛、慢性頭痛、緊張性頭痛、一般性頭痛、熱潮紅、慢性陣發性半邊頭痛、由於頭部或頸部的潛在構造問題所引起之次發性頭痛、顱部神經痛、鼻竇性頭痛(諸如例如與鼻竇炎相關者)、過敏所引發的頭痛或偏頭痛、疼痛、發炎疼痛、手術後傷口疼痛、複雜性局部疼痛症候群、癌症疼痛、原發性或轉移性骨癌疼痛、骨折疼痛、慢性疼痛、骨質疏鬆性骨折疼痛、燒傷引起的疼痛、骨質疏鬆症、痛風關節疼痛、腹痛、與鐮狀細胞危象相關聯的疼痛及其他傷害性疼 痛；以及肝細胞癌、乳癌、肝硬化、神經源性疼痛、神經性病變疼痛、傷害性疼痛、三叉神經痛、帶狀疱疹後之神經痛、幻肢疼痛、纖維肌痛、痛經、卵巢痛、反射性交感神經失養症、神經源性疼痛、骨關節炎或類風濕性關節炎疼痛、下背疼痛、糖尿病性神經病變、坐骨神經痛；或與下列相關聯之疼痛或內臟疼痛：胃食道逆流、消化不良、激躁性腸症候群、激躁性結腸、痙攣性結腸、黏膜性結腸炎、發炎性腸道疾病、克隆氏症、迴腸炎、潰瘍性結腸炎、腎絞痛、痛經、膀胱炎、經期、分娩、停經、攝護腺炎，胰臟炎，腎絞痛、痛經、包括間質性膀胱炎在內之(IC)膀胱炎、與腸塞絞痛相關聯之手術、憩室炎、腹膜炎、心包膜炎、肝炎、闌尾炎、結腸炎、膽囊炎、子宮內膜異位、慢性及/或急性胰臟炎、心肌梗塞、腎臟疼痛、胸膜疼痛、攝護腺炎、骨盆腔疼痛、器官創傷、慢性傷害性疼痛、慢性神經性病變疼痛、慢性發炎疼痛、纖維肌痛、突發性疼痛及持續性疼痛。
本發明之另一個更具體的較佳實施例係涉及使用一種抗CGRP抗體或抗體片段治療一種伴有腹瀉之CGRP關聯性功能失調之一種方法，其中該病況係源自惡性腫瘤或源自較佳選自下列的一或多種癌症之癌症疼痛：腺體組織的腺癌、器官胚胎組織的胚細胞瘤、上皮組織的癌症、形成血球細胞的組織之白血病、淋巴組織的淋巴瘤、骨髓的骨髓瘤、結締或支持組織的肉瘤、腎上腺癌、愛滋病相關性淋巴瘤、貧血、膀胱癌、骨癌、腦癌、乳癌、類 癌瘤、子宮頸癌、化學療法、結腸癌、細胞減少症、子宮內膜癌、食道癌、胃癌、頭部癌症、頸癌、肝膽癌、腎臟癌、白血病(leukemia)、肝癌、肺癌、淋巴瘤、霍奇金氏(Hodgkin)病、淋巴瘤、非霍奇金氏病、神經系統腫瘤、口腔癌、卵巢癌、胰臟癌、前列腺癌、直腸癌、皮膚癌、胃部癌症、睾丸癌、甲狀腺癌、尿道癌、骨癌、結締組織的肉瘤癌症、骨組織的癌症、造血細胞的癌症、骨髓癌症、多發性骨髓瘤、白血病(leukaemia)、原發性或轉移性骨癌、轉移至骨的腫瘤、浸潤神經與中空型內臟之腫瘤、鄰近神經構造之腫瘤。癌症疼痛又較佳包括內臟疼痛，較佳為源自胰臟癌及/或至腹部的轉移作用之內臟疼痛。癌症疼痛又較佳包括軀體疼痛，較佳為由於骨癌、轉移至骨、手術後疼痛、結締組織的肉瘤癌症、骨組織的癌症、骨髓造血細胞的癌症、多發性骨髓瘤、白血病(leukaemia)、原發性或轉移性骨癌中之一或多者之軀體疼痛。
本發明的再一較佳實施例係有關於在患有一病況之一個體中抑制、預防或治療腹瀉及/或維持電解質平衡與腸道中液體水平之方法，該病況係與引起腹瀉及/或增加腸道的電解質與液體通量之CGRP水平升高相關聯，該方法包括投予一有效量的抗CGRP抗體或抗CGRP抗體片段。
本發明的另一較佳實施例係特別有關於在患有功能性腸道異常疾病或發炎性腸道疾病、細菌或病毒所引發之腹瀉、與腹瀉相關聯的癌症諸如甲狀腺髓質癌或結腸直腸癌的個體中治療或預防腹瀉之方法，及更具體地患 有功能性腸道異常疾病或發炎性腸道疾病，例如包括胃食道逆流、消化不良、激躁性腸症候群、功能性腹痛症候群、憩室病與憩室炎；或選自由克隆氏(Crohn)症、迴腸炎、膠原性結腸炎、淋巴球性結腸炎及潰瘍性結腸炎所組成之群組之發炎性腸道疾病，其中該等療法係以單一藥物治療方式投予一有效量的一種抗CGRP抗體或抗體片段，或與另一活性劑併用。
本發明的其他較佳實施例係有關於具有CGRP結合特異性的特異性抗體及其片段之篩檢分析法與治療用途，特別是具有所欲的抗原決定位特異性、高親和性或結合性及/或功能性質之抗體。在本發明的較佳實施例中，係有關於分析法及本文所述抗體之用途，包含本文所述VH、VL及CDR多肽之序列及編碼其等的聚核苷酸。本發明的一個較佳實施例係有關嵌合或人化抗體及其片段(包括Fab片段)，其可與CGRP結合的及/或抑制由CGRP與CGRP受器(“CGRP-R”)的結合作用所媒介之生物活性。
在本發明的又一實施例中設想減少、治療或預防可包括不良副作用腹瀉在內之與CGRP相關聯的疾病或功能失調之一方法，其係藉由影響經由CGRP所媒介的該等生物活性，而得以防止經由CGRP與CGRP-R的結合作用所媒介之生物活性。在本文中提供與CGRP相關聯的疾病與功能失調之又一非限制性清單。
在本發明的另一實施例中，如藉由使用橫跨人類天然的CGRP多肽全長之重疊線性胜肽片段之抗原決 定位製圖，確定用於治療或預防CGRP相關型腹瀉之抗人類CGRP抗係在Ab3、Ab6、Ab13或Ab14所特異性結合之一完整的CGRP多肽或其片段上，以特異性方式與相同的線性或構型抗原決定位結合之一抗體。
本發明亦關於如本文中所揭露之用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的一種抗CGRP抗體，其係以一抗體或抗體片段形式與相同的CGRP抗原決定位結合及/或與一種抗CGRP抗體競爭與CGRP結合，其包括但不限於選自Ab1、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、Ab11、Ab12、Ab13或Ab14之一種抗CGRP抗體。
在另一實施例中，本發明亦關於用於治療或預防CGRP相關型腹瀉之一種分離的抗CGRP抗體或抗體片段，其包含選自3、13、23、33、43、53、63、73、83、93、103、113、123或133或其變異體之VH多肽序列中所含有的一或多個CDR，及/或選自1、11、21、31、41、51、61、71、81、91、101、111、121或131或其變異體之VL多肽序列中所含有的一或多個CDR。
在本發明的一實施例中，在前二段落中所論及之抗人類CGRP抗體在各可變輕鏈區與可變重鏈區包含至少二個互補決定區(CDR)，其等係與選自Ab1、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、Ab11、Ab12、Ab13或Ab14之抗人類CGRP抗體中所含有者相同。
在一個較佳實施例中，上文所論及之抗人類CGRP抗體在各可變輕鏈區與可變重鏈區包含至少二個互 補決定區(CDR)，其等係與Ab3或Ab6中所含有者相同。在另一實施例中，上文所論及之抗人類CGRP抗體的所有CDR，係與選自Ab1、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、Ab11、Ab12、Ab13或Ab14之一抗人類CGRP抗體中所含有的CDR相同。在本發明的一個較佳實施例中，上文所論及之抗人類CGRP抗體的所有CDR係與選自Ab3或Ab6之一抗人類CGRP抗體中所含有的CDR相同。
本發明進一步設想上文所論及之用於治療或預防CGRP相關型腹瀉的一或多種抗人類CGRP抗體係經脫醣基化；或經最低限度的醣基化，如缺乏N-醣基化作用但可能包含一些O-醣基化作用，諸如甘露糖殘基，及/或含有一Fc區，該Fc區係經改質而改變作用性功能、半衰期、蛋白溶解作用及/或醣基化作用；其係人類、人化、單鏈或嵌合型；及其係衍生自一種兔(親代)抗人類CGRP抗體之一種人化抗體。
本發明進一步設想用於治療或預防CGRP相關型腹瀉之一或多種抗人類CGRP抗體，其中該抗體之可變輕鏈區與可變重鏈區中的架構區(FR)分別為人類FR，其係未改質或已藉由用親代兔抗體的對應FR殘基取代可變輕鏈或重鏈區中的一或多個人類FR殘基而改質，及其中該人類FR係衍生自人類可變重鏈與輕鏈抗體序列，其係選自一個人類胚系抗體序列庫，及其選擇係基於其等對於對應的兔可變重鏈或輕鏈區之同源性水平係高於該庫所含有的其他人類胚系抗體序列。
在本發明的一實施例中，用於治療或預防CGRP相關型腹瀉之抗人類CGRP抗體或片段，係以特異性方式與表現CGRP的人類細胞及/或與活體內循環型可溶性CGRP分子結合，CGRP係包括表現在患有與CGRP表現型細胞相關聯的疾病之一病患的人類細胞上或藉由該等細胞所表現者。
在另一實施例中，可能伴有腹瀉之CGRP相關疾病係選自偏頭痛(不論有無前兆)、體重減輕、癌症或腫瘤、與癌症或腫瘤生長相關聯之血管生成作用、與癌症或腫瘤存活相關聯之血管生成作用、偏癱性偏頭痛、叢發性頭痛、偏頭痛性神經痛、慢性頭痛、緊張性頭痛、一般性頭痛、熱潮紅、慢性陣發性半邊頭痛、由於頭部或頸部的潛在構造問題所引起之次發性頭痛、顱部神經痛、鼻竇性頭痛(諸如例如與鼻竇炎相關者)、過敏所引發的頭痛或偏頭痛、疼痛、發炎疼痛、手術後傷口疼痛、複雜性局部疼痛症候群、癌症疼痛、原發性或轉移性骨癌疼痛、骨折疼痛、慢性疼痛、骨質疏鬆性骨折疼痛、燒傷引起的疼痛、骨質疏鬆症、痛風關節疼痛、腹痛、與鐮狀細胞危象相關聯的疼痛及其他傷害性疼痛；以及肝細胞癌、乳癌、肝硬化、神經源性疼痛、神經性病變疼痛、傷害性疼痛、三叉神經痛、帶狀疱疹後之神經痛、幻肢疼痛、纖維肌痛、痛經、卵巢痛、反射性交感神經失養症、神經源性疼痛、骨關節炎或類風濕性關節炎疼痛、下背疼痛、糖尿病性神經病變、坐骨神經痛；或與下列相關聯之疼痛或內臟疼痛：胃食道 逆流、消化不良、激躁性腸症候群、激躁性結腸、痙攣性結腸、黏膜性結腸炎、發炎性腸道疾病、克隆氏症、迴腸炎、潰瘍性結腸炎、腎絞痛、痛經、膀胱炎、經期、分娩、停經、攝護腺炎，胰臟炎，腎絞痛、痛經、包括間質性膀胱炎在內之(IC)膀胱炎、與腸塞絞痛相關聯之手術、憩室炎、腹膜炎、心包膜炎、肝炎、闌尾炎、結腸炎、膽囊炎、子宮內膜異位、慢性及/或急性胰臟炎、心肌梗塞、腎臟疼痛、胸膜疼痛、攝護腺炎、骨盆腔疼痛、器官創傷、慢性傷害性疼痛、慢性神經性病變疼痛、慢性發炎疼痛、纖維肌痛、突發性疼痛及持續性疼痛。
在本發明的另一實施例中，所治療之可能與腹瀉相關聯的疾病係源自惡性腫瘤或較佳地選自下列一或多種癌症之癌症疼痛：腺體組織的腺癌、器官胚胎組織的胚細胞瘤、上皮組織的癌症、形成血球細胞的組織之白血病、淋巴組織的淋巴瘤、骨髓的骨髓瘤、結締或支持組織的肉瘤、腎上腺癌、愛滋病相關性淋巴瘤、貧血、膀胱癌、骨癌、腦癌、乳癌、類癌瘤、子宮頸癌、化學療法、結腸癌、細胞減少症、子宮內膜癌、食道癌、胃癌、頭部癌症、頸癌、肝膽癌、腎臟癌、白血病(leukemia)、肝癌、肺癌、淋巴瘤、霍奇金氏(Hodgkin)病、淋巴瘤、非霍奇金氏病、神經系統腫瘤、口腔癌、卵巢癌、胰臟癌、前列腺癌、直腸癌、皮膚癌、胃部癌症、睾丸癌、甲狀腺癌、尿道癌、骨癌、結締組織的肉瘤癌症、骨組織的癌症、造血細胞的癌症、骨髓癌症、多發性骨髓瘤、白血病(leukaemia)、原 發性或轉移性骨癌、轉移至骨的腫瘤、浸潤神經與中空型內臟之腫瘤、鄰近神經構造之腫瘤。癌症疼痛又較佳包括內臟疼痛，較佳為源自胰臟癌及/或至腹部的轉移作用之內臟疼痛。癌症疼痛又較佳包括軀體疼痛，較佳為由於骨癌、轉移至骨、手術後疼痛、結締組織的肉瘤癌症、骨組織的癌症、骨髓造血細胞的癌症、多發性骨髓瘤、白血病(leukaemia)、原發性或轉移性骨癌中一或多者之軀體疼痛。
本發明進一步設想直接或間接與一可檢測性標記或治療劑連接之用於腹瀉的抗人類CGRP抗體或片段。
本發明亦設想一或多種核酸序列，其導致如上文所列的一抗人類CGRP抗體或抗體片段之表現作用，其包括該等包含酵母菌或人類的較佳密碼子或任擇地由其等所組成者。本發明亦設想包含該核酸序列之載體(包括質體或重組型病毒載體)。本發明亦設想表現上文所列抗體中的至少一者之宿主細胞或重組型宿主細胞，其等包括一哺乳類動物、酵母菌、細菌及昆蟲細胞。在一個較佳實施例中，該宿主細胞係一酵母菌細胞。在又一較佳實施例中，該酵母菌細胞係二倍體酵母菌細胞。在一個更佳的實施例中，該酵母菌細胞係畢赤酵母屬(Pichia)酵母菌。
本發明亦設想一種治療方法，其包括對於患有與表現CGRP的細胞相關聯之導致腹瀉的一疾病或病況之一病患，該方法投予一治療有效量之本文所述的至少一種抗人類CGRP抗體或片段。本發明亦設想該治療方法可涉及投予本文中所揭露的二或多種抗CGRP抗體或其片段。若 對於病患投予一種以上的抗體，該多種抗體可同時或並行投藥，或可交錯投藥。可治療的疾病係示於上文所列的非限制性清單及本文他處。在一個較佳實施例中，該疾病係選自偏頭痛，頭痛、體重減輕、疼痛、癌症疼痛或神經性病變疼痛。在另一實施例中，該治療進一步包括投予另一治療劑或選自化學療法、放射線療法、細胞介素投藥作用或基因療法之療法。
在本發明的一個非限制性實施例中，另一治療劑或療法包括類鴉片、諸如NSAID之止痛劑、紫杉醇(太平洋紫杉醇)或其衍生物、鉑類化合物諸如卡鉑(carboplatin)或順鉑、蒽環素諸如多柔比星(doxorubicin)、烷化劑諸如環磷醯胺、抗代謝藥物諸如5-氟尿嘧啶或依托泊苷(etoposide)。
本發明進一步設想用於檢測是否存在表現CGRP的細胞之一種活體內成像方法，其包括投予一診斷有效量的至少一種抗人類CGRP抗體。在一實施例中，該投藥作用進一步包括投予一種放射性核種或螢光團，該放射性核種或螢光團係協助檢測位於表現CGRP的疾病位點之抗體。在又一實施例中，使用該活體內成像方法之結果來協助設計一適當的治療方案，其包括涵蓋放射線療法、化學療法或其組合之治療方案。
本發明之抗CGRP抗體的抗CGRP活性及其對於CGRP腹瀉具有結合特異性的片段，亦可藉由其等對於CGRP的結合強度或親和性加以說明。在本發明的一實施例 中，本發明之具有CGRP結合特異性的抗CGRP抗體及其片段係與CGRP結合，而其解離常數(KD)係小於或等於5x10-7M、10-7M、5x10-8M、10-8M、5x10-9M、10-9M、5x10-10M、10-10M、5x10-11M、10-11M、5x10-12M、10-12M、5x10-13M或10-13M。較佳地，抗CGRP抗體及其片段係與CGRP結合，而其解離常數(KD)係小於或等於10-11M、5x10-12M或10-12M。在本發明的另一實施例中，本發明之具有CGRP結合特異性的抗CGRP抗體及其片段係與一線性或構型CGRP抗原決定位結合。
在本發明的另一實施例中，本發明之抗CGRP抗體的抗CGRP活性及其具有CGRP結合特異性的片段係與CGRP結合，及其解離速率係小於或等於10-4S-1、5x10-5S-1、10-5S-1、5x10-6S-1、10-6S-1、5x10-7S-1或10-7S-1。
在本發明的又一實施例中，本發明之抗CGRP抗體的抗CGRP活性及其具有CGRP結合特異性的片段，係藉由預防、紓緩或降低與CGRP相關聯的疾病與功能失調及特別是腹瀉之症狀，或任擇地治療與CGRP相關聯的疾病與功能失調，而展現抗CGRP活性。與CGRP相關聯的疾病與功能失調之非限制性實例係載列於本文中。
編碼抗CGRP抗體多肽之聚核苷酸 抗體Ab1
本發明係進一步關於編碼具有CGRP結合特異性的抗體多肽之聚核苷酸。在本發明的一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：1的可變輕鏈多 肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成：CAAGTGCTGACCCAGACTGCATCCCCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAAGCACAGTCACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATGATAACAACTACCTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCAACTGATCTATTCTACATCCACTCTGGCATCTGGGGTCTCATCGCGGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGACCTGGAGTGTGCCGATGCTGCCACTTACTACTGTCTAGGCAGTTATGATTGTAGTAGTGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGT(序列辨識編號：141)。
在本發明的一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：2的輕鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成：CAAGTGCTGACCCAGACTGCATCCCCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAAGCACAGTCACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATGATAACAACTACCTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCAACTGATCTATTCTACATCCACTCTGGCATCTGGGGTCTCATCGCGGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGACCTGGAGTGTGCCGATGCTGCCACTTACTACTGTCTAGGCAGTTATGATTGTAGTAGTGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCC GCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG(序列辨識編號：142)。
在本發明的另一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：3的可變重鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成：CAGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCACAGTCTCTGGACTCGACCTCAGTAGCTACTACATGCAATGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGATCGGAGTCATTGGTATTAATGATAACACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGCCTCGTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACCAGTCTGACAACCGAGGACAGGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGGGGACATCTGGGGCCCAGGCACCCTCGTCACCGTCTCGAGC(序列辨識編號：143)。
在本發明的一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：4的重鏈多肽序列之下列聚核苷 酸序列，或任擇地由其所組成：CAGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCACAGTCTCTGGACTCGACCTCAGTAGCTACTACATGCAATGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGATCGGAGTCATTGGTATTAATGATAACACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGCCTCGTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACCAGTCTGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGGGGACATCTGGGGCCCAGGCACCCTCGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCAcCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGG AGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA(序列辨識編號：144)。
在本發明的又一實施例中，編碼具有CGRP結合特異性的抗體片段之聚核苷酸，係包含序列辨識編號：145、序列辨識編號：146及序列辨識編號：147的聚核苷酸序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：145、序列辨識編號：146及序列辨識編號：147係對應於編碼辨識編號：1的輕鏈可變序列或序列辨識編號：2的輕鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)之聚核苷酸序列。
在本發明的又一實施例中，編碼具有CGRP結合特異性的抗體片段之聚核苷酸，係包含序列辨識編號：148、序列辨識編號：149及序列辨識編號：150的聚核苷酸 序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：148、序列辨識編號：149及序列辨識編號：150係對應於編碼序列辨識編號：3的重鏈可變序列或序列辨識編號：4的重鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)之聚核苷酸。
本發明亦設想聚核苷酸序列，其包括編碼本文所述抗體片段的聚核苷酸序列中之一或多者。在本發明的一實施例中，編碼具有CGRP結合特異性的抗體片段之聚核苷酸，係包含編碼抗體片段的下列所有聚核苷酸中之一者、二者、三者或多者，或任擇地由其等所組成：編碼序列辨識編號：1的輕鏈可變序列之聚核苷酸序列辨識編號：141；編碼序列辨識編號：2的輕鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：142；編碼序列辨識編號：3的重鏈可變序列之聚核苷酸序列辨識編號：143；編碼序列辨識編號：4的重鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：144；編碼序列辨識編號：1的輕鏈可變序列或序列辨識編號：2的輕鏈序列之互補決定區(序列辨識編號：145、序列辨識編號：146及序列辨識編號：147)之聚核苷酸；及編碼序列辨識編號：3的重鏈可變序列或序列辨識編號：4的重鏈序列之互補決定區(序列辨識編號：148、序列辨識編號：149及序列辨識編號：150)之聚核苷酸。
在本發明的一個較佳實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼具有CGRP結合特異性的Fab(片段抗原結合)片段之聚核苷酸，或任擇地由其等所組成。就抗體Ab1 而言，編碼全長式Ab1抗體之聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：2的輕鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：142及編碼序列辨識編號：4的重鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：144，或任擇地由其等所組成。
本發明的另一實施例設想被導入一表現載體中之該等聚核苷酸，以供在哺乳類動物細胞諸如CHO、NSO、HEK-293中表現，或在真菌、昆蟲或微生物系統諸如酵母菌細胞及諸如畢赤酵母屬(Pichia)的酵母菌中表現。適宜的畢赤酵母屬(Pichia)物種包括但不限於巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)。在此(下文)所述之本發明的一實施例中，可藉由Ab1的酵素酶切作用(如木瓜酶)產生Fab片段，接著全長聚核苷酸在一適宜的宿主中表現。在本發明的另一實施例中，可經由Ab1聚核苷酸在諸如CHO、NSO或HEK 293細胞的哺乳類動物細胞、真菌、昆蟲或微生物系統諸如酵母菌細胞(例如諸如二倍體畢赤酵母屬(Pichia)之二倍體酵母菌)與其他酵母菌株中之表現作用，產生抗CGRP抗體諸如Ab1或其Fab片段。適宜的畢赤酵母屬(Pichia)物種包括但不限於巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)。
抗體Ab2
本發明係進一步關於編碼具有CGRP結合特異性的抗體多肽之聚核苷酸。在本發明的一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：11的可變輕鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成： CAAGTGCTGacccagtctccatcctccctgtctgcatctgt aggagacagagtcaccatcAATtgcCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATGATAACAACTACCTAGCCtggtatcagcagaaaccagggaaagttcctaagCAActgatctatTCTACATCCACTCTGGCATCTggggtcccatctcgtttcagtggcagtggatctgggacagatttcactctcaccatcagcagcctgcagcctgaagatgttgcaacttattactgtCTAGGCAGTTATGATTGTAGTAGTGGTGATTGTTTTGTTttcggcggaggaaccaaggtggaaatcaaacgt(序列辨識編號：151)。
在本發明的一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：12的輕鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成：CAAGTGCTGacccagtctccatcctccctgtctgcatctgtaggagacagagtcaccatcAATtgcCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATGATAACAACTACCTAGCCtggtatcagcagaaaccagggaaagttcctaagCAActgatctatTCTACATCCACTCTGGCATCTggggtcccatctcgtttcagtggcagtggatctgggacagatttcactctcaccatcagcagcctgcagcctgaagatgttgcaacttattactgtCTAGGCAGTTATGATTGTAGTAGTGGTGATTGTTTTGTTttcggcggaggaaccaaggtggaaatcaaacgtACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAG TCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG(序列辨識編號：152)。
在本發明的另一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：13的可變重鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成：gaggtgcagctTgtggagtctgggggaggcttggtccagcctggggggtccctgagactctcctgtgcaGTCtctggaCTCGACCTCagtAGCTACTACATGCAAtgggtccgtcaggctccagggaaggggctggagtgggtcGGAGTCATTGGTATCAATGATAACACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCcgattcaccatctccagagacaattccaagACCACGGTGtatcttcaaatgaacagcctgagagctgaggacactgctgtgtatTTCtgtGCTAGAGGGGACATCtggggccaagggaccctcgtcaccgtcTCGAGC(序列辨識編號：153)。
在本發明的一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：14的重鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成：gaggtgcagctTgtggagtctgggggaggcttggtccagcctggggggtccctgagactctcctgtgcaGTCtctggaCTCGACCTCagtAGCTACTACATGCAAtgggtccgtcaggctccagggaaggggctggagtgggtcGGAGTCATTGGTATCAATGATAACACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCcgattcaccatctccagagacaattccaagACCACGGTGtatcttcaaatgaacagcctgagagctgaggacactgctgtgtatTTCtgtGCTAGAGGGGACATCtggggccaagggaccctcgtcaccgtcTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCAc CCTCCTCCaAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGaTCTCCCgGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATG AGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA(序列辨識編號：154)。
在本發明的又一實施例中，編碼具有CGRP結合特異性的抗體片段之聚核苷酸，係包含序列辨識編號：155、序列辨識編號：156及序列辨識編號：157的聚核苷酸序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：155、序列辨識編號：156及序列辨識編號：157係對應於編碼序列辨識編號：11的輕鏈可變序列或序列辨識編號：12的輕鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)之聚核苷酸。
在本發明的又一實施例中，編碼具有CGRP結合特異性的抗體片段之聚核苷酸，係包含序列辨識編號：158、序列辨識編號：159及序列辨識編號：160的聚核苷酸序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：158、序列辨識編號：159及序列辨識編號：160係對應於編碼序列辨識編號：13的重鏈可變序列或序列辨識編號：14的重鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)之聚核苷酸。
本發明亦設想聚核苷酸序列，其包括編碼本文所述抗體片段的聚核苷酸序列中之一或多者。在本發明的一實施例中，編碼具有CGRP結合特異性的抗體片段之聚核苷酸，係包含編碼抗體片段的下列所有聚核苷酸中之一者、二者、三者或多者，或任擇地由其等所組成：編碼序列辨識編號：11的輕鏈可變序列之聚核苷酸序列辨識編 號：151；編碼序列辨識編號：12的輕鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：152；編碼序列辨識編號：13的重鏈可變序列之聚核苷酸序列辨識編號：153；編碼序列辨識編號：14的重鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：154；編碼序列辨識編號：11的輕鏈可變序列或序列辨識編號：12的輕鏈序列之互補決定區(序列辨識編號：155、序列辨識編號：156及序列辨識編號：157)之聚核苷酸；及編碼序列辨識編號：13的重鏈可變序列或序列辨識編號：14的重鏈序列之互補決定區(序列辨識編號：158、序列辨識編號：159及序列辨識編號：160)之聚核苷酸。
在本發明的一個較佳實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼具有CGRP結合特異性的Fab(片段抗原結合)片段之聚核苷酸，或任擇地由其等所組成。就抗體Ab2而言，編碼全長式Ab2抗體之聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：12的輕鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：152與編碼序列辨識編號：14的重鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：154，或任擇地由其等所組成。
本發明的另一實施例設想被導入一表現載體中之該等聚核苷酸，以供在哺乳類動物細胞諸如CHO、NSO、HEK-293中表現，或在真菌、昆蟲或微生物系統諸如酵母菌細胞及諸如畢赤酵母屬(Pichia)的酵母菌中表現。適宜的畢赤酵母屬(Pichia)物種包括但不限於巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)。在此(下文)所述之本發明的一實施例中，可藉由Ab2的酵素酶切作用(如木瓜酶)產生Fab片 段，接著在一適宜的宿主中表現全長聚核苷酸。在本發明的另一實施例中，可經由Ab2聚核苷酸在諸如CHO、NSO或HEK 293細胞的哺乳類動物細胞、真菌、昆蟲或微生物系統諸如酵母菌細胞(例如諸如二倍體畢赤酵母屬(Pichia)之二倍體酵母菌)與其他酵母菌株之表現作用，產生抗CGRP抗體諸如Ab2或其Fab片段。適宜的畢赤酵母屬(Pichia)物種包括但不限於巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)。
抗體Ab3
本發明係進一步關於編碼具有CGRP結合特異性的抗體多肽之聚核苷酸。在本發明的一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：21的可變輕鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成：CAAGTGCTGacccagtctccatcctccctgtctgcatctgtaggagacagagtcaccatcAATtgcCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATGATAACAACTACCTAGCCtggtatcagcagaaaccagggaaagttcctaagCAActgatctatTCTACATCCACTCTGGCATCTggggtcccatctcgtttcagtggcagtggatctgggacagatttcactctcaccatcagcagcctgcagcctgaagatgttgcaacttattactgtCTAGGCAGTTATGATTGTAGTAGTGGTGATTGTTTTGTTttcggcggaggaaccaaggtggaaatcaaacgt(序列辨識編號：161)。
在本發明的一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：22的輕鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成：CAAGTGCTGacccagtctccatcctccctgtctgcatctgt aggagacagagtcaccatcAATtgcCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATGATAACAACTACCTAGCCtggtatcagcagaaaccagggaaagttcctaagCAActgatctatTCTACATCCACTCTGGCATCTggggtcccatctcgtttcagtggcagtggatctgggacagatttcactctcaccatcagcagcctgcagcctgaagatgttgcaacttattactgtCTAGGCAGTTATGATTGTAGTAGTGGTGATTGTTTTGTTttcggcggaggaaccaaggtggaaatcaaacgtACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG(序列辨識編號：162)。
在本發明的另一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：23的可變重鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成：gaggtgcagctTgtggagtctgggggaggcttggtccagcctggggggtccctgagactctcctgtgcaGTCtctggaCTCGACCTCagtAGCTACTACATGCAAtgggtccgtcaggctccagggaaggggctggagtgggtcGGAGTCATTGGTATCAATGATAACACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCcgattcaccatctccagagacaattccaagACCACGGTGtatcttcaaatgaacagcctgagagctgaggacactgctgtgtatTTCtgtG CTAGAGGGGACATCtggggccaagggaccctcgtcaccgtcTCGAGC(序列辨識編號：163)。
在本發明的一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：24的重鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成：gaggtgcagctTgtggagtctgggggaggcttggtccagcctggggggtccctgagactctcctgtgcaGTCtctggaCTCGACCTCagtAGCTACTACATGCAAtgggtccgtcaggctccagggaaggggctggagtgggtcGGAGTCATTGGTATCAATGATAACACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCcgattcaccatctccagagacaattccaagACCACGGTGtatcttcaaatgaacagcctgagagctgaggacactgctgtgtatTTCtgtGCTAGAGGGGACATCtggggccaagggaccctcgtcaccgtcTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCAcCCTCCTCCaAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACGCGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGaTCTCCCgGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCA CGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA(序列辨識編號：164)。
在本發明的又一實施例中，編碼具有CGRP結合特異性的抗體片段之聚核苷酸，係包含序列辨識編號：165、序列辨識編號：166及序列辨識編號：167的聚核苷酸序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：165、序列辨識編號：166及序列辨識編號：167係對應於編碼序列辨識編號：21的輕鏈可變序列或序列辨識編號：22的輕鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)之聚核苷酸。
在本發明的又一實施例中，編碼具有CGRP結 合特異性的抗體片段之聚核苷酸，係包含序列辨識編號：168、序列辨識編號：169及序列辨識編號：170的聚核苷酸序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：168、序列辨識編號：169及序列辨識編號：170係對應於編碼序列辨識編號：23的重鏈可變序列或序列辨識編號：24的重鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)之聚核苷酸。
本發明亦設想聚核苷酸序列，其包括編碼本文所述抗體片段的聚核苷酸序列中之一或多者。在本發明的一實施例中，編碼具有CGRP結合特異性的抗體片段之聚核苷酸，係包含編碼抗體片段的下列所有聚核苷酸中之一者、二者、三者或多者，或任擇地由其等所組成：編碼序列辨識編號：21的輕鏈可變序列之聚核苷酸序列辨識編號：161；編碼序列辨識編號：22的輕鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：162；編碼序列辨識編號：23的重鏈可變序列之聚核苷酸序列辨識編號：163；編碼序列辨識編號：24的重鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：164；編碼序列辨識編號：21的輕鏈可變序列或序列辨識編號：22的輕鏈序列之互補決定區(序列辨識編號：165、序列辨識編號：166及序列辨識編號：167)之聚核苷酸；及編碼序列辨識編號：23的重鏈可變序列或序列辨識編號：24的重鏈序列之互補決定區(序列辨識編號：168、序列辨識編號：169及序列辨識編號：170)之聚核苷酸。
在本發明的一個較佳實施例中，本發明的聚 核苷酸係包含編碼具有CGRP結合特異性的Fab(片段抗原結合)片段之聚核苷酸，或任擇地由其等所組成。就抗體Ab3而言，編碼全長式Ab3抗體之聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：22的輕鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：162與編碼序列辨識編號：24的重鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：164，或任擇地由其等所組成。
本發明的另一實施例設想被導入一表現載體中之該等聚核苷酸，以供在哺乳類動物細胞諸如CHO、NSO、HEK-293中表現，或在真菌、昆蟲或微生物系統諸如酵母菌細胞及諸如畢赤酵母屬(Pichia)的酵母菌中表現。適宜的畢赤酵母屬(Pichia)物種包括但不限於巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)。在此(下文)所述之本發明的一實施例中，可藉由的酵素酶切作用(如木瓜酶)產生Fab片段，Ab3接著在一適宜的宿主中表現全長聚核苷酸。在本發明的另一實施例中，可經由Ab3聚核苷酸在諸如CHO、NSO或HEK 293細胞的哺乳類動物細胞、真菌、昆蟲或微生物系統諸如酵母菌細胞(例如諸如二倍體畢赤酵母屬(Pichia)之二倍體酵母菌)與其他酵母菌株之表現作用，產生抗CGRP抗體諸如Ab3或其Fab片段。適宜的畢赤酵母屬(Pichia)物種包括但不限於巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)。
抗體Ab4
本發明係進一步關於編碼具有CGRP結合特異性的抗體多肽之聚核苷酸。在本發明的一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：31的可變輕鏈 多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成：CAAGTGCTGACCCAGACTCCATCCCCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAAGCACAGTCACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATCATAACACCTACCTGGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAACAACTGATCTATGATGCATCCACTCTGGCGTCTGGGGTCCCATCGCGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGGCGTGCAGTGTAACGATGCTGCCGCTTACTACTGTCTGGGCAGTTATGATTGTACTAATGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGT(序列辨識編號：171)。
在本發明的一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：32的輕鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成：CAAGTGCTGACCCAGACTCCATCCCCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAAGCACAGTCACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATCATAACACCTACCTGGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAACAACTGATCTATGATGCATCCACTCTGGCGTCTGGGGTCCCATCGCGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGGCGTGCAGTGTAACGATGCTGCCGCTTACTACTGTCTGGGCAGTTATGATTGTACTAATGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGC CATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG(序列辨識編號：172)。
在本發明的另一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：33的可變重鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成：CAGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGTTCCGTCTCTGGCATCGACCTCAGTGGCTACTACATGAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGATCGGAGTCATTGGTATTAATGGTGCCACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACCAGTCTGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGGGGACATCTGGGGCCCGGGCACCCTCGTCACCGTCTCGAGC(序列辨識編號：173)。
在本發明的一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：34的重鏈多肽序列之下列聚核 苷酸序列，或任擇地由其所組成：CAGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGTTCCGTCTCTGGCATCGACCTCAGTGGCTACTACATGAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGATCGGAGTCATTGGTATTAATGGTGCCACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACCAGTCTGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGGGGACATCTGGGGCCCGGGCACCCTCGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCAcCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGG AGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA(序列辨識編號：174)。
在本發明的又一實施例中，編碼具有CGRP結合特異性的抗體片段之聚核苷酸，係包含序列辨識編號：175、序列辨識編號：176及序列辨識編號：177的聚核苷酸序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：175、序列辨識編號：176及序列辨識編號：177係對應於編碼序列辨識編號：31的輕鏈可變序列或序列辨識編號：32的輕鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)之聚核苷酸。
在本發明的又一實施例中，編碼具有CGRP結合特異性的抗體片段之聚核苷酸，係包含序列辨識編號：178、序列辨識編號：179及序列辨識編號：180的聚核苷酸 序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：178、序列辨識編號：179及序列辨識編號：180係對應於編碼序列辨識編號：33的重鏈可變序列或序列辨識編號：34的重鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)之聚核苷酸。
本發明亦設想聚核苷酸序列，其包括編碼本文所述抗體片段的聚核苷酸序列中之一或多者。在本發明的一實施例中，編碼具有CGRP結合特異性的抗體片段之聚核苷酸，係包含編碼抗體片段的下列所有聚核苷酸中之一者、二者、三者或多者，或任擇地由其等所組成：編碼序列辨識編號：31的輕鏈可變序列之聚核苷酸序列辨識編號：171；編碼序列辨識編號：32的輕鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：172；編碼序列辨識編號：33的重鏈可變序列之聚核苷酸序列辨識編號：173；編碼序列辨識編號：34的重鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：174；編碼序列辨識編號：31的輕鏈可變序列或序列辨識編號：32的輕鏈序列之互補決定區(序列辨識編號：175、序列辨識編號：176及序列辨識編號：177)之聚核苷酸；及編碼序列辨識編號：33的重鏈可變序列或序列辨識編號：34的重鏈序列之互補決定區(序列辨識編號：178、序列辨識編號：179及序列辨識編號：180)之聚核苷酸。
在本發明的一個較佳實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼具有CGRP結合特異性的Fab(片段抗原結合)片段之聚核苷酸，或任擇地由其等所組成。就抗體Ab4 而言，編碼全長式Ab4抗體之聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：32的輕鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：172與編碼序列辨識編號：34的重鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：174，或任擇地由其等所組成。
本發明的另一實施例設想被導入一表現載體中之該等聚核苷酸，以供在哺乳類動物細胞諸如CHO、NSO、HEK-293中表現，或在真菌、昆蟲或微生物系統諸如酵母菌細胞及諸如畢赤酵母屬(Pichia)的酵母菌中表現。適宜的畢赤酵母屬(Pichia)物種包括但不限於巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)。在此(下文)所述之本發明的一實施例中，可藉由Ab4的酵素酶切作用(如木瓜酶)產生Fab片段，接著在一適宜的宿主中表現全長聚核苷酸。在本發明的另一實施例中，可經由Ab4聚核苷酸在諸如CHO、NSO或HEK 293細胞的哺乳類動物細胞、真菌、昆蟲或微生物系統諸如酵母菌細胞(例如諸如二倍體畢赤酵母屬(Pichia)之二倍體酵母菌)與其他酵母菌株之表現作用，產生抗CGRP抗體諸如Ab4或其Fab片段。適宜的畢赤酵母屬(Pichia)物種包括但不限於巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)。
抗體Ab5
本發明係進一步關於編碼具有CGRP結合特異性的抗體多肽之聚核苷酸。在本發明的一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：41的可變輕鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成：CAAGTGCTGacccagtctccatcctccctgtctgcatctgt aggagacagagtcaccatcAATtgcCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATCATAACACCTACCTGGCCtggtatcagcagaaaccagggaaagttcctaagCAActgatctatGATGCATCCACTCTGGCATCTggggtcccatctcgtttcagtggcagtggatctgggacagatttcactctcaccatcagcagcctgcagcctgaagatgttgcaacttattactgtCTGGGCAGTTATGATTGTACTAATGGTGATTGTTTTGTTttcggcggaggaaccaaggtggaaatcaaacgt(序列辨識編號：181)。
在本發明的一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：42的輕鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成：CAAGTGCTGacccagtctccatcctccctgtctgcatctgtaggagacagagtcaccatcAATtgcCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATCATAACACCTACCTGGCCtggtatcagcagaaaccagggaaagttcctaagCAActgatctatGATGCATCCACTCTGGCATCTggggtcccatctcgtttcagtggcagtggatctgggacagatttcactctcaccatcagcagcctgcagcctgaagatgttgcaacttattactgtCTGGGCAGTTATGATTGTACTAATGGTGATTGTTTTGTTttcggcggaggaaccaaggtggaaatcaaacgtACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGT CACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG(序列辨識編號：182)。
在本發明的另一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：43的可變重鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成：gaggtgcagctTgtggagtctgggggaggcttggtccagcctggggggtccctgagactctcctgtgcaGTCtctggaATCGACCTCagtGGCTACTACATGAACtgggtccgtcaggctccagggaaggggctggagtgggtcGGAGTCATTGGTATTAATGGTGCCACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCcgattcaccatctccagagacaattccaagACCACGGTGtatcttcaaatgaacagcctgagagctgaggacactgctgtgtatTTCtgtGCTAGAGGGGACATCtggggccaagggaccctcgtcaccgtcTCGAGC(序列辨識編號：183)。
在本發明的一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：44的重鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成：gaggtgcagctTgtggagtctgggggaggcttggtccagcctggggggtccctgagactctcctgtgcaGTCtctggaATCGACCTCagtGGCTACTACATGAACtgggtccgtcaggctccagggaaggggctggagtgggtcGGAGTCATTGGTATTAATGGTGCCACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCcgattcaccatctccagagacaattccaagACCACGGTGtatcttcaaatgaacagcctgagagctgaggacactgctgtgtatTTCtgtGCTAGAGGGGACATCtggggccaagggaccctcgtcaccgtcTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCAc CCTCCTCCaAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGaTCTCCCgGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATG AGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA(序列辨識編號：184)。
在本發明的又一實施例中，編碼具有CGRP結合特異性的抗體片段之聚核苷酸，係包含序列辨識編號：185、序列辨識編號：186及序列辨識編號：187的聚核苷酸序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：185、序列辨識編號：186及序列辨識編號：187係對應於編碼序列辨識編號：41的輕鏈可變序列或序列辨識編號：42的輕鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)之聚核苷酸。
在本發明的又一實施例中，編碼具有CGRP結合特異性的抗體片段之聚核苷酸，係包含序列辨識編號：188、序列辨識編號：189及序列辨識編號：190的聚核苷酸序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：188、序列辨識編號：189及序列辨識編號：190係對應於編碼序列辨識編號：43的重鏈可變序列或序列辨識編號：44的重鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)之聚核苷酸。
本發明亦設想聚核苷酸序列，其包括編碼本文所述抗體片段的聚核苷酸序列中之一或多者。在本發明的一實施例中，編碼具有CGRP結合特異性的抗體片段之聚核苷酸，係包含編碼抗體片段的下列所有聚核苷酸中之一者、二者、三者或多者，或任擇地由其等所組成：編碼序列辨識編號：41的輕鏈可變序列之聚核苷酸序列辨識編 號：181；之編碼序列辨識編號：42的輕鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：182；編碼序列辨識編號：43的重鏈可變序列之聚核苷酸序列辨識編號：183；編碼序列辨識編號：44的重鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：184；編碼序列辨識編號：41的輕鏈可變序列或序列辨識編號：42的輕鏈序列之互補決定區(序列辨識編號：185、序列辨識編號：186及序列辨識編號：187)之聚核苷酸；及編碼序列辨識編號：43的重鏈可變序列或序列辨識編號：44的重鏈序列之互補決定區(序列辨識編號：188、序列辨識編號：189及序列辨識編號：190)之聚核苷酸。
在本發明的一個較佳實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼具有CGRP結合特異性的Fab(片段抗原結合)片段之聚核苷酸，或任擇地由其等所組成。就抗體Ab5而言，編碼全長式Ab5抗體之聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：42的輕鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：182與編號：44的重鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：184編碼序列辨識，或任擇地由其等所組成。
本發明的另一實施例設想被導入一表現載體中之該等聚核苷酸，以供在哺乳類動物細胞諸如CHO、NSO、HEK-293中表現，或在真菌、昆蟲或微生物系統諸如酵母菌細胞及諸如畢赤酵母屬(Pichia)的酵母菌中表現。適宜的畢赤酵母屬(Pichia)物種包括但不限於巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)。在此(下文)所述之本發明的一實施例中，可藉由Ab5的酵素酶切作用(如木瓜酶)產生Fab片 段，接著在一適宜的宿主中表現全長聚核苷酸。在本發明的另一實施例中，可經由Ab5聚核苷酸在諸如CHO、NSO或HEK 293細胞的哺乳類動物細胞、真菌、昆蟲或微生物系統諸如酵母菌細胞(例如諸如二倍體畢赤酵母屬(Pichia)之二倍體酵母菌)與其他酵母菌株之表現作用，產生抗CGRP抗體諸如Ab5或其Fab片段。適宜的畢赤酵母屬(Pichia)物種包括但不限於巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)。
抗體Ab6
本發明係進一步關於編碼具有CGRP結合特異性的抗體多肽之聚核苷酸。在本發明的一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：51的可變輕鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成：CAAGTGCTGacccagtctccatcctccctgtctgcatctgtaggagacagagtcaccatcAATtgcCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATCATAACACCTACCTGGCCtggtatcagcagaaaccagggaaagttcctaagCAActgatctatGATGCATCCACTCTGGCATCTggggtcccatctcgtttcagtggcagtggatctgggacagatttcactctcaccatcagcagcctgcagcctgaagatgttgcaacttattactgtCTGGGCAGTTATGATTGTACTAATGGTGATTGTTTTGTTttcggcggaggaaccaaggtggaaatcaaacgt(序列辨識編號：191)。
在本發明的一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：52的輕鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成：CAAGTGCTGacccagtctccatcctccctgtctgcatctgt aggagacagagtcaccatcAATtgcCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATCATAACACCTACCTGGCCtggtatcagcagaaaccagggaaagttcctaagCAActgatctatGATGCATCCACTCTGGCATCTggggtcccatctcgtttcagtggcagtggatctgggacagatttcactctcaccatcagcagcctgcagcctgaagatgttgcaacttattactgtCTGGGCAGTTATGATTGTACTAATGGTGATTGTTTTGTTttcggcggaggaaccaaggtggaaatcaaacgtACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG(序列辨識編號：192)。
在本發明的另一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：53的可變重鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成：gaggtgcagctTgtggagtctgggggaggcttggtccagcctggggggtccctgagactctcctgtgcaGTCtctggaATCGACCTCagtGGCTACTACATGAACtgggtccgtcaggctccagggaaggggctggagtgggtcGGAGTCATTGGTATTAATGGTGCCACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCcgattcaccatctccagagacaattccaagACCACGGTGtatcttcaaatgaacagcctgagagctgaggacactgctgtgtatTTCtgtG CTAGAGGGGACATCtggggccaagggaccctcgtcaccgtcTCGAGC(序列辨識編號：193)。
在本發明的一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：54的重鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成：gaggtgcagctTgtggagtctgggggaggcttggtccagcctggggggtccctgagactctcctgtgcaGTCtctggaATCGACCTCagtGGCTACTACATGAACtgggtccgtcaggctccagggaaggggctggagtgggtcGGAGTCATTGGTATTAATGGTGCCACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCcgattcaccatctccagagacaattccaagACCACGGTGtatcttcaaatgaacagcctgagagctgaggacactgctgtgtatTTCtgtGCTAGAGGGGACATCtggggccaagggaccctcgtcaccgtcTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCAcCCTCCTCCaAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACGCGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGaTCTCCCgGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCA CGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA(序列辨識編號：194)。
在本發明的又一實施例中，編碼具有CGRP結合特異性的抗體片段之聚核苷酸，係包含序列辨識編號：195、序列辨識編號：196及序列辨識編號：197的聚核苷酸序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：195、序列辨識編號：196及序列辨識編號：197係對應於編碼序列辨識編號：51的輕鏈可變序列或序列辨識編號：52的輕鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)之聚核苷酸。
在本發明的又一實施例中，編碼具有CGRP結 合特異性的抗體片段之聚核苷酸，係包含序列辨識編號：198、序列辨識編號：199及序列辨識編號：200的聚核苷酸序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：198、序列辨識編號：199及序列辨識編號：200係對應於編碼序列辨識編號：53的重鏈可變序列或序列辨識編號：54的重鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)之聚核苷酸。
本發明亦設想聚核苷酸序列，其包括編碼本文所述抗體片段的聚核苷酸序列中之一或多者。在本發明的一實施例中，編碼具有CGRP結合特異性的抗體片段之聚核苷酸，係包含編碼抗體片段的下列所有聚核苷酸中之一者、二者、三者或多者，或任擇地由其等所組成：編碼序列辨識編號：51的輕鏈可變序列之聚核苷酸序列辨識編號：191；編碼序列辨識編號：52的輕鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：192；編碼序列辨識編號：53的重鏈可變序列之聚核苷酸序列辨識編號：193；編碼序列辨識編號：54的重鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：194；編碼序列辨識編號：51的輕鏈可變序列或序列辨識編號：52的輕鏈序列之互補決定區(序列辨識編號：195、序列辨識編號：196及序列辨識編號：197)之聚核苷酸；及編碼序列辨識編號：53的重鏈可變序列或序列辨識編號：54的重鏈序列之互補決定區(序列辨識編號：198、序列辨識編號：199及序列辨識編號：200)之聚核苷酸。
在本發明的一個較佳實施例中，本發明的聚 核苷酸係包含編碼具有CGRP結合特異性的Fab(片段抗原結合)片段之聚核苷酸，或任擇地由其等所組成。就抗體Ab6而言，編碼全長式Ab6抗體之聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：52的輕鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：192與編碼序列辨識編號：54的重鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：194，或任擇地由其等所組成。
本發明的另一實施例設想被導入一表現載體中之該等聚核苷酸，以供在哺乳類動物細胞諸如CHO、NSO、HEK-293中表現，或在真菌、昆蟲或微生物系統諸如酵母菌細胞及諸如畢赤酵母屬(Pichia)的酵母菌中表現。適宜的畢赤酵母屬(Pichia)物種包括但不限於巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)。在此(下文)所述之本發明的一實施例中，可藉由Ab6的酵素酶切作用(如木瓜酶)產生Fab片段，接著在一適宜的宿主中表現全長聚核苷酸。在本發明的另一實施例中，可經由Ab6聚核苷酸在諸如CHO、NSO或HEK 293細胞的哺乳類動物細胞、真菌、昆蟲或微生物系統諸如酵母菌細胞(例如諸如二倍體畢赤酵母屬(Pichia)之二倍體酵母菌)與其他酵母菌株之表現作用，產生抗CGRP抗體諸如Ab6或其Fab片段。適宜的畢赤酵母屬(Pichia)物種包括但不限於巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)。
抗體Ab7
本發明係進一步關於編碼具有CGRP結合特異性的抗體多肽之聚核苷酸。在本發明的一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：61的可變輕鏈 多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成：CAAGTGCTGACCCAGACTGCATCCCCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAAGCACAGTCACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATAATTACAACTACCTTGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCAACTGATCTATTCTACATCCACTCTGGCATCTGGGGTCTCATCGCGATTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGACGTGCAGTGTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTCTAGGCAGTTATGACTGTAGTACTGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGT(序列辨識編號：201)。
在本發明的一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：62的輕鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成：CAAGTGCTGACCCAGACTGCATCCCCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAAGCACAGTCACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATAATTACAACTACCTTGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCAACTGATCTATTCTACATCCACTCTGGCATCTGGGGTCTCATCGCGATTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGACGTGCAGTGTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTCTAGGCAGTTATGACTGTAGTACTGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCC ATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG(序列辨識編號：202)。
在本發明的另一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：63的可變重鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成：CAGGAGCAGCTGAAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACATCCCTGACACTCACCTGCACCGTCTCTGGAATCGACCTCAGTAACCACTACATGCAATGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATCGGAGTCGTTGGTATTAATGGTCGCACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAACCTCGTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACCAGGCTGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGGGGACATCTGGGGCCCAGGCACCCTGGTCACCGTCTCGAGC(序列辨識編號：203)。
在本發明的一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：64的重鏈多肽序列之下列聚核 苷酸序列，或任擇地由其所組成：CAGGAGCAGCTGAAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACATCCCTGACACTCACCTGCACCGTCTCTGGAATCGACCTCAGTAACCACTACATGCAATGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATCGGAGTCGTTGGTATTAATGGTCGCACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAACCTCGTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACCAGGCTGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGGGGACATCTGGGGCCCAGGCACCCTGGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCAcCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGG AGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA(序列辨識編號：204)。
在本發明的又一實施例中，編碼具有CGRP結合特異性的抗體片段之聚核苷酸，係包含序列辨識編號：205、序列辨識編號：206及序列辨識編號：207的聚核苷酸序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：205、序列辨識編號：206及序列辨識編號：207係對應於編碼序列辨識編號：61的輕鏈可變序列或序列辨識編號：62的輕鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)之聚核苷酸。
在本發明的又一實施例中，編碼具有CGRP結合特異性的抗體片段之聚核苷酸，係包含序列辨識編號：208、序列辨識編號：209及序列辨識編號：210的聚核苷酸 序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：208、序列辨識編號：209及序列辨識編號：210係對應於編碼序列辨識編號：63的重鏈可變序列或序列辨識編號：64的重鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)之聚核苷酸。
本發明亦設想聚核苷酸序列，其包括編碼本文所述抗體片段的聚核苷酸序列中之一或多者。在本發明的一實施例中，編碼具有CGRP結合特異性的抗體片段之聚核苷酸，係包含編碼抗體片段的下列所有聚核苷酸中之一者、二者、三者或多者，或任擇地由其等所組成：編碼序列辨識編號：61的輕鏈可變序列之聚核苷酸序列辨識編號：201；編碼序列辨識編號：62的輕鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：202；之聚核苷酸序列辨識編號：203編碼序列辨識編號：63的重鏈可變序列；編碼序列辨識編號：64的重鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：204；編碼序列辨識編號：61的輕鏈可變序列或序列辨識編號：62的輕鏈序列之互補決定區(序列辨識編號：205、序列辨識編號：206及序列辨識編號：207)之聚核苷酸；及編碼序列辨識編號：63的重鏈可變序列或序列辨識編號：64的重鏈序列之互補決定區(序列辨識編號：208、序列辨識編號：209及序列辨識編號：210)之聚核苷酸。
在本發明的一個較佳實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼具有CGRP結合特異性的Fab(片段抗原結合)片段之聚核苷酸，或任擇地由其等所組成。就抗體Ab7 而言，編碼全長式Ab7抗體之聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：62的輕鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：202與編碼序列辨識編號：64的重鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：204，或任擇地由其等所組成。
本發明的另一實施例設想被導入一表現載體中之該等聚核苷酸，以供在哺乳類動物細胞諸如CHO、NSO、HEK-293中表現，或在真菌、昆蟲或微生物系統諸如酵母菌細胞及諸如畢赤酵母屬(Pichia)的酵母菌中表現。適宜的畢赤酵母屬(Pichia)物種包括但不限於巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)。在此(下文)所述之本發明的一實施例中，可藉由Ab7的酵素酶切作用(如木瓜酶)產生Fab片段，接著在一適宜的宿主中表現全長聚核苷酸。在本發明的另一實施例中，可經由Ab7聚核苷酸在諸如CHO、NSO或HEK 293細胞的哺乳類動物細胞、真菌、昆蟲或微生物系統諸如酵母菌細胞(例如諸如二倍體畢赤酵母屬(Pichia)之二倍體酵母菌)與其他酵母菌株之表現作用，產生抗CGRP抗體諸如Ab7或其Fab片段。適宜的畢赤酵母屬(Pichia)物種包括但不限於巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)。
抗體Ab8
本發明係進一步關於編碼具有CGRP結合特異性的抗體多肽之聚核苷酸。在本發明的一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：71的可變輕鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成：CAAGTGCTGacccagtctccatcctccctgtctgcatctgt aggagacagagtcaccatcAATtgcCAGGCCAGTCAGAGTGTTTAcAATTACAACTACCTTGCCtggtatcagcagaaaccagggaaagttcctaagCAActgatctatTCTACATCCACTCTGGCATCTggggtcccatctcgtttcagtggcagtggatctgggacagatttcactctcaccatcagcagcctgcagcctgaagatgttgcaacttattactgtCTGGGCAGTTATGATTGTAGTACTGGTGATTGTTTTGTTttcggcggaggaaccaaggtggaaatcaaacgt(序列辨識編號：211)。
在本發明的一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：72的輕鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成：CAAGTGCTGacccagtctccatcctccctgtctgcatctgtaggagacagagtcaccatcAATtgcCAGGCCAGTCAGAGTGTTTAcAATTACAACTACCTTGCCtggtatcagcagaaaccagggaaagttcctaagCAActgatctatTCTACATCCACTCTGGCATCTggggtcccatctcgtttcagtggcagtggatctgggacagatttcactctcaccatcagcagcctgcagcctgaagatgttgcaacttattactgtCTGGGCAGTTATGATTGTAGTACTGGTGATTGTTTTGTTttcggcggaggaaccaaggtggaaatcaaacgtACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGT CACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG(序列辨識編號：212)。
在本發明的另一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：73的可變重鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成：gaggtgcagctTgtggagtctgggggaggcttggtccagcctggggggtccctgagactctcctgtgcaGTCtctggaATCGACCTCagtAACCACTACATGCAAtgggtccgtcaggctccagggaaggggctggagtgggtcGGAGTCGTTGGTATcAATGGTCGCACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCcgattcaccatctccagagacaattccaagACCACGGTGtatcttcaaatgaacagcctgagagctgaggacactgctgtgtatTTCtgtGCTAGAGGGGACATCtggggccaagggaccctcgtcaccgtcTCGAGC(序列辨識編號：213)。
在本發明的一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：74的重鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成：gaggtgcagctTgtggagtctgggggaggcttggtccagcctggggggtccctgagactctcctgtgcaGTCtctggaATCGACCTCagtAACCACTACATGCAAtgggtccgtcaggctccagggaaggggctggagtgggtcGGAGTCGTTGGTATcAATGGTCGCACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCcgattcaccatctccagagacaattccaagACCACGGTGtatcttcaaatgaacagcctgagagctgaggacactgctgtgtatTTCtgtGCTAGAGGGGACATCtggggccaagggaccctcgtcaccgtcTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCA cCCTCCTCCaAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGaTCTCCCgGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATG AGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA(序列辨識編號：214)。
在本發明的又一實施例中，編碼具有CGRP結合特異性的抗體片段之聚核苷酸，係包含序列辨識編號：215、序列辨識編號：216及序列辨識編號：217的聚核苷酸序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：215、序列辨識編號：216及序列辨識編號：217係對應於編碼序列辨識編號：71的輕鏈可變序列或序列辨識編號：72的輕鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)之聚核苷酸。
在本發明的又一實施例中，編碼具有CGRP結合特異性的抗體片段之聚核苷酸，係包含序列辨識編號：218、序列辨識編號：219及序列辨識編號：220的聚核苷酸序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：218、序列辨識編號：219及序列辨識編號：220係對應於編碼之互補決定區(CDR或高度變異區)之聚核苷酸序列辨識編號：73的重鏈可變序列或序列辨識編號：74的重鏈序列。
本發明亦設想聚核苷酸序列，其包括編碼本文所述抗體片段的聚核苷酸序列中之一或多者。在本發明的一實施例中，編碼具有CGRP結合特異性的抗體片段之聚核苷酸，係包含編碼抗體片段的下列所有聚核苷酸中之一者、二者、三者或多者，或任擇地由其等所組成：編碼序列辨識編號：71的輕鏈可變序列之聚核苷酸序列辨識編 號：211；編碼序列辨識編號：72的輕鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：212；編碼序列辨識編號：73的重鏈可變序列之聚核苷酸序列辨識編號：213；編碼序列辨識編號：74的重鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：214；編碼序列辨識編號：71的輕鏈可變序列或序列辨識編號：72的輕鏈序列之互補決定區(序列辨識編號：215、序列辨識編號：216及序列辨識編號：217)之聚核苷酸；及編碼序列辨識編號：73的重鏈可變序列或序列辨識編號：74的重鏈序列之互補決定區(序列辨識編號：218、序列辨識編號：219及序列辨識編號：220)之聚核苷酸。
在本發明的一個較佳實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼具有CGRP結合特異性的Fab(片段抗原結合)片段之聚核苷酸，或任擇地由其等所組成。就抗體Ab8而言，編碼全長式Ab8抗體之聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：72的輕鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：212與編碼序列辨識編號：74的重鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：214，或任擇地由其等所組成。
本發明的另一實施例設想被導入一表現載體中之該等聚核苷酸，以供在哺乳類動物細胞諸如CHO、NSO、HEK-293中表現，或在真菌、昆蟲或微生物系統諸如酵母菌細胞及諸如畢赤酵母屬(Pichia)的酵母菌中表現。適宜的畢赤酵母屬(Pichia)物種包括但不限於巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)。在此(下文)所述之本發明的一實施例中，可藉由Ab8的酵素酶切作用(如木瓜酶)產生Fab片 段，接著在一適宜的宿主中表現全長聚核苷酸。在本發明的另一實施例中，可經由Ab8聚核苷酸在諸如CHO、NSO或HEK 293細胞的哺乳類動物細胞、真菌、昆蟲或微生物系統諸如酵母菌細胞(例如諸如二倍體畢赤酵母屬(Pichia)之二倍體酵母菌)與其他酵母菌株之表現作用，產生抗CGRP抗體諸如Ab8或其Fab片段。適宜的畢赤酵母屬(Pichia)物種包括但不限於巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)。
抗體Ab9
本發明係進一步關於編碼具有CGRP結合特異性的抗體多肽之聚核苷酸。在本發明的一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：81的可變輕鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成：CAAGTGCTGACCCAGACTCCATCCCCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAAGCACAGTCACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAATGTTTATAATAACAACTACCTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCAACTGATCTATTCTACGTCCACTCTGGCATCTGGGGTCTCATCGCGATTCAGAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGACGTGCAGTGTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTCTAGGCAGTTATGATTGTAGTCGTGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGT(序列辨識編號：221)。
在本發明的一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：82的輕鏈多肽序列之下列聚核 苷酸序列，或任擇地由其所組成：CAAGTGCTGACCCAGACTCCATCCCCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAAGCACAGTCACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAATGTTTATAATAACAACTACCTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCAACTGATCTATTCTACGTCCACTCTGGCATCTGGGGTCTCATCGCGATTCAGAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGACGTGCAGTGTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTCTAGGGAGTTATGATTGTAGTCGTGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG(序列辨識編號：222)。
在本發明的另一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：83的可變重鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成：CAGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCC TGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCACAGTCTCTGGAATCGGCCTCAGTAGCTACTACATGCAGTGGGTCCGCCAGTCTCCAGGGAGGGGGCTGGAATGGATCGGAGTCATTGGTAGTGATGGTAAGACATACTACGCGACCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAAGACCTCGTCGACCACGGTGGATCTGAGAATGGCCAGTCTGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTACCAGAGGGGACATCTGGGGCCCGGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGC(序列辨識編號：223)。
在本發明的一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：84的重鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成：CAGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCACAGTCTCTGGAATCGGCCTCAGTAGCTACTACATGCAGTGGGTCCGCCAGTCTCCAGGGAGGGGGCTGGAATGGATCGGAGTCATTGGTAGTGATGGTAAGACATACTACGCGACCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAAGACCTCGTCGACCACGGTGGATCTGAGAATGGCCAGTCTGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTACCAGAGGGGACATCTGGGGCCCGGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCAcCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGT GTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA(序列辨識編號：224)。
在本發明的又一實施例中，編碼具有CGRP結合特異性的抗體片段之聚核苷酸，係包含序列辨識編號：225、序列辨識編號：226及序列辨識編號：227的聚核苷酸序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：225、序列辨識編號：226及序列辨識編號：227係對應於編碼序列辨識編號：81的輕鏈可變序列或序列辨識編號：82的輕鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)之聚核苷酸。
在本發明的又一實施例中，編碼具有CGRP結合特異性的抗體片段之聚核苷酸，係包含序列辨識編號：228、序列辨識編號：229及序列辨識編號：230的聚核苷酸序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：228、序列辨識編號：229及序列辨識編號：230係對應於編碼序列辨識編號：83的重鏈可變序列或序列辨識編號：84的重鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)之聚核苷酸。
本發明亦設想聚核苷酸序列，其包括編碼本文所述抗體片段的聚核苷酸序列中之一或多者。在本發明的一實施例中，編碼具有CGRP結合特異性的抗體片段之聚核苷酸，係包含編碼抗體片段的下列所有聚核苷酸中之一者、二者、三者或多者，或任擇地由其等所組成：編碼序列辨識編號：81的輕鏈可變序列之聚核苷酸序列辨識編號：221；編碼序列辨識編號：82的輕鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：222；編碼序列辨識編號：83的重鏈可變序列 之聚核苷酸序列辨識編號：223；編碼序列辨識編號：84的重鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：224；編碼序列辨識編號：81的輕鏈可變序列或序列辨識編號：82的輕鏈序列之互補決定區(序列辨識編號：225、序列辨識編號：226及序列辨識編號：227)之聚核苷酸；及編碼序列辨識編號：83的重鏈可變序列或序列辨識編號：84的重鏈序列之互補決定區(序列辨識編號：228、序列辨識編號：229及序列辨識編號：230)之聚核苷酸。
在本發明的一個較佳實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼具有CGRP結合特異性的Fab(片段抗原結合)片段之聚核苷酸，或任擇地由其等所組成。就抗體Ab9而言，編碼全長式Ab9抗體之聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：82的輕鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：222與編碼序列辨識編號：84的重鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：224，或任擇地由其等所組成。
本發明的另一實施例設想被導入一表現載體中之該等聚核苷酸，以供在哺乳類動物細胞諸如CHO、NSO、HEK-293中表現，或在真菌、昆蟲或微生物系統諸如酵母菌細胞及諸如畢赤酵母屬(Pichia)的酵母菌中表現。適宜的畢赤酵母屬(Pichia)物種包括但不限於巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)。在此(下文)所述之本發明的一實施例中，可藉由Ab9的酵素酶切作用(如木瓜酶)產生Fab片段，接著在一適宜的宿主中表現全長聚核苷酸。在本發明的另一實施例中，可經由Ab9聚核苷酸在諸如CHO、NSO 或HEK 293細胞的哺乳類動物細胞、真菌、昆蟲或微生物系統諸如酵母菌細胞(例如諸如二倍體畢赤酵母屬(Pichia)之二倍體酵母菌)與其他酵母菌株之表現作用，產生抗CGRP抗體諸如Ab9或其Fab片段。適宜的畢赤酵母屬(Pichia)物種包括但不限於巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)。
抗體Ab10
本發明係進一步關於編碼具有CGRP結合特異性的抗體多肽之聚核苷酸。在本發明的一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：91的可變輕鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成：CAAGTGCTGacccagtctccatcctccctgtctgcatctgtaggagacagagtcaccatcAATtgcCAGGCCAGTCAGAATGTTTAcAATAACAACTACCTAGCCtggtatcagcagaaaccagggaaagttcctaagCAActgatctatTCTACATCCACTCTGGCATCTggggtcccatctcgtttcagtggcagtggatctgggacagatttcactctcaccatcagcagcctgcagcctgaagatgttgcaacttattactgtCTGGGCAGTTATGATTGTAGTCGTGGTGATTGTTTTGTTttcggcggaggaaccaaggtggaaatcaaacgt(序列辨識編號：231)。
在本發明的一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：92的輕鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成：CAAGTGCTGacccagtctccatcctccctgtctgcatctgtaggagacagagtcaccatcAATtgcCAGGCCAGTCAGAATGTTTAcAATAACAACTACCTAGCCtggtatcagcagaaaccagggaaagttccta agCAActgatctatTCTACATCCACTCTGGCATCTggggtcccatctcgtttcagtggcagtggatctgggacagatttcactctcaccatcagcagcctgcagcctgaagatgttgcaacttattactgtCTGGGCAGTTATGATTGTAGTCGTGGTGATTGTTTTGTTttcggcggaggaaccaaggtggaaatcaaacgtACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG(序列辨識編號：232)。
在本發明的另一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：93的可變重鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成：gaggtgcagctTgtggagtctgggggaggcttggtccagcctggggggtccctgagactctcctgtgcaGTCtctggaATCGGCCTCagtAGCTACTACATGCAAtgggtccgtcaggctccagggaaggggctggagtgggtcGGAGTCATTGGTAGTGATGGTAAGACATACTACGCGACCTGGGCGAAAGGCcgattcaccatctccagagacaattccaagACCACGGTGtatcttcaaatgaacagcctgagagctgaggacactgctgtgtatTTCtgtACCAGAGGGGACATCtggggccaagggaccctcgtcaccgtcTCGAGC(序列辨識編號：233)。
在本發明的一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：94的重鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成：gaggtgcagctTgtggagtctgggggaggcttggtccagcctggggggtccctgagactctcctgtgcaGTCtctggaATCGGCCTCagtAGCTACTACATGCAAtgggtccgtcaggctccagggaaggggctggagtgggtcGGAGTCATTGGTAGTGATGGTAAGACATACTACGCGACCTGGGCGAAAGGCcgattcaccatctccagagacaattccaagACCACGGTGtatcttcaaatgaacagcctgagagctgaggacactgctgtgtatTTCtgtACCAGAGGGGACATCtggggccaagggaccctcgtcaccgtcTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCAcCCTCCTCCaAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGaTCTCCCgGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGG GAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA(序列辨識編號：234)。
在本發明的又一實施例中，編碼具有CGRP結合特異性的抗體片段之聚核苷酸，係包含序列辨識編號：235、序列辨識編號：236及序列辨識編號：237的聚核苷酸序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：235、序列辨識編號：236及序列辨識編號：237係對應於編碼序列辨識編號：91的輕鏈可變序列或序列辨識編號：92的輕鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)之聚核苷酸。
在本發明的又一實施例中，編碼具有CGRP結合特異性的抗體片段之聚核苷酸，係包含序列辨識編號：238、序列辨識編號：239及序列辨識編號：240的聚核苷酸 序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：238、序列辨識編號：239及序列辨識編號：240係對應於編碼序列辨識編號：93的重鏈可變序列或序列辨識編號：94的重鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)之聚核苷酸。
本發明亦設想聚核苷酸序列，其包括編碼本文所述抗體片段的聚核苷酸序列中之一或多者。在本發明的一實施例中，編碼具有CGRP結合特異性的抗體片段之聚核苷酸，係包含編碼抗體片段的下列所有聚核苷酸中之一者、二者、三者或多者，或任擇地由其等所組成：編碼序列辨識編號：91的輕鏈可變序列之聚核苷酸序列辨識編號：231；編碼序列辨識編號：92的輕鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：232；編碼序列辨識編號：93的重鏈可變序列之聚核苷酸序列辨識編號：233；編碼序列辨識編號：94的重鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：234；編碼序列辨識編號：91的輕鏈可變序列或序列辨識編號：92的輕鏈序列之互補決定區(序列辨識編號：235、序列辨識編號：236及序列辨識編號：237)之聚核苷酸；及編碼序列辨識編號：93的重鏈可變序列或序列辨識編號：94的重鏈序列之互補決定區(序列辨識編號：238、序列辨識編號：239及序列辨識編號：240)之聚核苷酸。
在本發明的一個較佳實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼具有CGRP結合特異性的Fab(片段抗原結合)片段之聚核苷酸，或任擇地由其等所組成。就抗體 Ab10而言，編碼全長式Ab10抗體之聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：92的輕鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：232與編碼序列辨識編號：94的重鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：234，或任擇地由其等所組成。
本發明的另一實施例設想被導入一表現載體中之該等聚核苷酸，以供在哺乳類動物細胞諸如CHO、NSO、HEK-293中表現，或在真菌、昆蟲或微生物系統諸如酵母菌細胞及諸如畢赤酵母屬(Pichia)的酵母菌中表現。適宜的畢赤酵母屬(Pichia)物種包括但不限於巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)。在此(下文)所述之本發明的一實施例中，可藉由Ab10的酵素酶切作用(如木瓜酶)產生Fab片段，接著在一適宜的宿主中表現全長聚核苷酸。在本發明的另一實施例中，可經由Ab10聚核苷酸在諸如CHO、NSO或HEK 293細胞的哺乳類動物細胞、真菌、昆蟲或微生物系統諸如酵母菌細胞(例如諸如二倍體畢赤酵母屬(Pichia)之二倍體酵母菌)與其他酵母菌株之表現作用，產生抗CGRP抗體諸如Ab10或其Fab片段。適宜的畢赤酵母屬(Pichia)物種包括但不限於巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)。
抗體Ab11
本發明係進一步關於編碼具有CGRP結合特異性的抗體多肽之聚核苷酸。在本發明的一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：101的可變輕鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成： CAGGTGCTGACCCAGACTGCATCCCCCGTGTCTCCAGCTGTGGGAAGCACAGTCACCATCAATTGCCGGGCCAGTCAGAGTGTTTATTATAACAACTACCTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCAACTGATCTATTCTACATCCACTCTGGCATCTGGGGTCTCATCGCGGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGACGTGCAGTGTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTCTAGGCAGTTATGATTGTAGTAATGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGT(序列辨識編號：241)。
在本發明的一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：102的輕鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成：CAGGTGCTGACCCAGACTGCATCCCCCGTGTCTCCAGCTGTGGGAAGCACAGTCACCATCAATTGCCGGGCCAGTCAGAGTGTTTATTATAACAACTACCTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCAACTGATCTATTCTACATCCACTCTGGCATCTGGGGTCTCATCGCGGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGACGTGCAGTGTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTCTAGGCAGTTATGATTGTAGTAATGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTT GTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG(序列辨識編號：242)。
在本發明的另一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：103的可變重鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成：CAGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGAGGATCCCTGACACTCACCTGCACAGTCTCTGGAATCGACGTCACTAACTACTATATGCAATGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGATCGGAGTCATTGGTGTGAATGGTAAGAGATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACCAGTCTGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGGCGACATCTGGGGCCCGGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGC(序列辨識編號：243)。
在本發明的一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：104的重鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成： CAGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGAGGATCCCTGACACTCACCTGCACAGTCTCTGGAATCGACGTCACTAACTACTATATGCAATGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGATCGGAGTCATTGGTGTGAATGGTAAGAGATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACCAGTCTGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGGCGACATCTGGGGCCCGGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCAcCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTC ACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA(序列辨識編號：244)。
在本發明的又一實施例中，編碼具有CGRP結合特異性的抗體片段之聚核苷酸，係包含序列辨識編號：245、序列辨識編號：246及序列辨識編號：247的聚核苷酸序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：245、序列辨識編號：246及序列辨識編號：247係對應於編碼之互補決定區(CDR或高度變異區)之聚核苷酸序列辨識編號：101的輕鏈可變序列或序列辨識編號：102的輕鏈序列。
在本發明的又一實施例中，編碼具有CGRP結合特異性的抗體片段之聚核苷酸，係包含序列辨識編號：248、序列辨識編號：249及序列辨識編號：250的聚核苷酸序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編 號：248、序列辨識編號：249及序列辨識編號：250係對應於編碼序列辨識編號：103的重鏈可變序列或序列辨識編號：104的重鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)之聚核苷酸。
本發明亦設想聚核苷酸序列，其包括編碼本文所述抗體片段的聚核苷酸序列中之一或多者。在本發明的一實施例中，編碼具有CGRP結合特異性的抗體片段之聚核苷酸，係包含編碼抗體片段的下列所有聚核苷酸中之一者、二者、三者或多者，或任擇地由其等所組成：編碼序列辨識編號：101的輕鏈可變序列之聚核苷酸序列辨識編號：241；編碼序列辨識編號：102的輕鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：242；編碼序列辨識編號：103的重鏈可變序列之聚核苷酸序列辨識編號：243；編碼序列辨識編號：104的重鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：244；編碼序列辨識編號：101的輕鏈可變序列或序列辨識編號：102的輕鏈序列之互補決定區(序列辨識編號：245、序列辨識編號：246及序列辨識編號：247)之聚核苷酸；及編碼序列辨識編號：103的重鏈可變序列或序列辨識編號：104的重鏈序列之互補決定區(序列辨識編號：248、序列辨識編號：249及序列辨識編號：250)之聚核苷酸。
在本發明的一個較佳實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼具有CGRP結合特異性的Fab(片段抗原結合)片段之聚核苷酸，或任擇地由其等所組成。就抗體Ab11而言，編碼全長式Ab11抗體之聚核苷酸係包含編碼序 列辨識編號：102的輕鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：242與編碼序列辨識編號：104的重鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：244，或任擇地由其等所組成。
本發明的另一實施例設想被導入一表現載體中之該等聚核苷酸，以供在哺乳類動物細胞諸如CHO、NSO、HEK-293中表現，或在真菌、昆蟲或微生物系統諸如酵母菌細胞及諸如畢赤酵母屬(Pichia)的酵母菌中表現。適宜的畢赤酵母屬(Pichia)物種包括但不限於巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)。在此(下文)所述之本發明的一實施例中，可藉由Ab11的酵素酶切作用(如木瓜酶)產生Fab片段，接著在一適宜的宿主中表現全長聚核苷酸。在本發明的另一實施例中，可經由Ab11聚核苷酸在諸如CHO、NSO或HEK 293細胞的哺乳類動物細胞、真菌、昆蟲或微生物系統諸如酵母菌細胞(例如諸如二倍體畢赤酵母屬(Pichia)之二倍體酵母菌)與其他酵母菌株之表現作用，產生抗CGRP抗體諸如Ab11或其Fab片段。適宜的畢赤酵母屬(Pichia)物種包括但不限於巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)。
抗體Ab12
本發明係進一步關於編碼具有CGRP結合特異性的抗體多肽之聚核苷酸。在本發明的一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：111的可變輕鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成：CAAGTGCTGacccagtctccatcctccctgtctgcatctgt aggagacagagtcaccatcAATtgcCGGGCCAGTCAGAGTGTTTAcTATAACAACTACCTAGCCtggtatcagcagaaaccagggaaagttcctaagCAActgatctatTCTACATCCACTCTGGCATCTggggtcccatctcgtttcagtggcagtggatctgggacagatttcactctcaccatcagcagcctgcagcctgaagatgttgcaacttattactgtCTGGGCAGTTATGATTGTAGTAATGGTGATTGTTTTGTTttcggcggaggaaccaaggtggaaatcaaacgt(序列辨識編號：251)。
在本發明的一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：112的輕鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成：CAAGTGCTGacccagtctccatcctccctgtctgcatctgtaggagacagagtcaccatcAATtgcCGGGCCAGTCAGAGTGTTTAcTATAACAACTACCTAGCCtggtatcagcagaaaccagggaaagttcctaagCAActgatctatTCTACATCCACTCTGGCATCTggggtcccatctcgtttcagtggcagtggatctgggacagatttcactctcaccatcagcagcctgcagcctgaagatgttgcaacttattactgtCTGGGCAGTTATGATTGTAGTAATGGTGATTGTTTTGTTttcggcggaggaaccaaggtggaaatcaaacgtACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGT CACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG(序列辨識編號：252)。
在本發明的另一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：113的可變重鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成：gaggtgcagctTgtggagtctgggggaggcttggtccagcctggggggtccctgagactctcctgtgcaGTCtctggaATCGACGTCACTAACTACTACATGCAAtgggtccgtcaggctccagggaaggggctggagtgggtcGGAGTCATTGGTGTGAATGGTAAGAGATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCcgattcaccatctccagagacaattccaagACCACGGTGtatcttcaaatgaacagcctgagagctgaggacactgctgtgtatTTCtgtGCCAGAGGGGACATCtggggccaagggaccctcgtcaccgtcTCGAGC(序列辨識編號：253)。
在本發明的一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：114的重鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成：gaggtgcagctTgtggagtctgggggaggcttggtccagcctggggggtccctgagactctcctgtgcaGTCtctggaATCGACGTCACTAACTACTACATGCAAtgggtccgtcaggctccagggaaggggctggagtgggtcGGAGTCATTGGTGTGAATGGTAAGAGATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCcgattcaccatctccagagacaattccaagACCACGGTGtatcttcaaatgaacagcctgagagctgaggacactgctgtgtatTTCtgtGCCAGAGGGGACATCtggggccaagggaccctcgtcaccgtcTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCA cCCTCCTCCaAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGaTCTCCCgGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATG AGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA(序列辨識編號：254)。
在本發明的又一實施例中，編碼具有CGRP結合特異性的抗體片段之聚核苷酸，係包含序列辨識編號：255、序列辨識編號：256及序列辨識編號：257的聚核苷酸序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：255、序列辨識編號：256及序列辨識編號：257係對應於編碼序列辨識編號：111的輕鏈可變序列或序列辨識編號：112的輕鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)之聚核苷酸。
在本發明的又一實施例中，編碼具有CGRP結合特異性的抗體片段之聚核苷酸，係包含序列辨識編號：258、序列辨識編號：259及序列辨識編號：260的聚核苷酸序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：258、序列辨識編號：259及序列辨識編號：260係對應於編碼序列辨識編號：113的重鏈可變序列或序列辨識編號：114的重鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)之聚核苷酸。
本發明亦設想聚核苷酸序列，其包括編碼本文所述抗體片段的聚核苷酸序列中之一或多者。在本發明的一實施例中，編碼具有CGRP結合特異性的抗體片段之聚核苷酸，係包含編碼抗體片段的下列所有聚核苷酸中之一者、二者、三者或多者，或任擇地由其等所組成：編碼序列辨識編號：111的輕鏈可變序列之聚核苷酸序列辨識編 號：251；編碼序列辨識編號：112的輕鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：252；編碼序列辨識編號：113的重鏈可變序列之聚核苷酸序列辨識編號：253；編碼序列辨識編號：114的重鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：254；編碼序列辨識編號：111的輕鏈可變序列或序列辨識編號：112的輕鏈序列之互補決定區(序列辨識編號：255、序列辨識編號：256及序列辨識編號：257)之聚核苷酸；及編碼序列辨識編號：113的重鏈可變序列或序列辨識編號：114的重鏈序列之互補決定區(序列辨識編號：258、序列辨識編號：259及序列辨識編號：260)之聚核苷酸。
在本發明的一個較佳實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼具有CGRP結合特異性的Fab(片段抗原結合)片段之聚核苷酸，或任擇地由其等所組成。就抗體Ab12而言，編碼全長式Ab12抗體之聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：112的輕鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：252與聚核苷酸序列辨識編號：254編碼序列辨識編號：114的重鏈序列，或任擇地由其等所組成。
本發明的另一實施例設想被導入一表現載體中之該等聚核苷酸，以供在哺乳類動物細胞諸如CHO、NSO、HEK-293中表現，或在真菌、昆蟲或微生物系統諸如酵母菌細胞及諸如畢赤酵母屬(Pichia)的酵母菌中表現。適宜的畢赤酵母屬(Pichia)物種包括但不限於巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)。在此(下文)所述之本發明的一實施例中，可藉由Ab12的酵素酶切作用(如木瓜酶)產生Fab片 段，接著在一適宜的宿主中表現全長聚核苷酸。在本發明的另一實施例中，可經由Ab12聚核苷酸在諸如CHO、NSO或HEK 293細胞的哺乳類動物細胞、真菌、昆蟲或微生物系統諸如酵母菌細胞(例如諸如二倍體畢赤酵母屬(Pichia)之二倍體酵母菌)與其他酵母菌株之表現作用，產生抗CGRP抗體諸如Ab12或其Fab片段。適宜的畢赤酵母屬(Pichia)物種包括但不限於巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)。
抗體Ab13
本發明係進一步關於編碼具有CGRP結合特異性的抗體多肽之聚核苷酸。在本發明的一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：121的可變輕鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成：GCCATCGTGATGACCCAGACTCCATCTTCCAAGTCTGTCCCTGTGGGAGACACAGTCACCATCAATTGCCAGGCCAGTGAGAGTCTTTATAATAACAACGCCTTGGCCTGGTTTCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCGCCTGATCTATGATGCATCCAAACTGGCATCTGGGGTCCCATCGCGGTTCAGTGGCGGTGGGTCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGTGGCGTGCAGTGTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTGGAGGCTACAGAAGTGATAGTGTTGATGGTGTTGCTTTCGCCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGT(序列辨識編號：261)。
在本發明的一實施例中，本發明的聚核苷酸 係包含編碼序列辨識編號：122的輕鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成：GCCATCGTGATGACCCAGACTCCATCTTCCAAGTCTGTCCCTGTGGGAGACACAGTCACCATCAATTGCCAGGCCAGTGAGAGTCTTTATAATAACAACGCCTTGGCCTGGTTTCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCGCCTGATCTATGATGCATCCAAACTGGCATCTGGGGTCCCATCGCGGTTCAGTGGCGGTGGGTCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGTGGCGTGCAGTGTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTGGAGGCTACAGAAGTGATAGTGTTGATGGTGTTGCTTTCGCCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG(序列辨識編號：262)。
在本發明的另一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：123的可變重鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成： CAGTCGGTGGAGGAGTCCGGGGGAGGCCTGGTCCAGCCTGAGGGATCCCTGACACTCACCTGCACAGCCTCTGGATTCGACTTCAGTAGCAATGCAATGTGGTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATCGGATGCATTTAcAATGGTGATGGCAGCACATACTACGCGAGCTGGGTGAATGGCCGATTCTCCATCTCCAAAACCTCGTCGACCACGGTGACTCTGCAACTGAATAGTCTGACAGTCGCGGACACGGCCACGTATTATTGTGCGAGAGATCTTGACTTGTGGGGCCCGGGCACCCTCGTCACCGTCTCGAGC(序列辨識編號：263)。
在本發明的一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：124的重鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成：CAGTCGGTGGAGGAGTCCGGGGGAGGCCTGGTCCAGCCTGAGGGATCCCTGACACTCACCTGCACAGCCTCTGGATTCGACTTCAGTAGCAATGCAATGTGGTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATCGGATGCATTTAcAATGGTGATGGCAGCACATACTACGCGAGCTGGGTGAATGGCCGATTCTCCATCTCCAAAACCTCGTCGACCACGGTGACTCTGCAACTGAATAGTCTGACAGTCGCGGACACGGCCACGTATTATTGTGCGAGAGATCTTGACTTGTGGGGCCCGGGCACCCTCGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCAcCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCT GGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTC CCTGTCTCCGGGTAAATGA(序列辨識編號：264)。
在本發明的又一實施例中，編碼具有CGRP結合特異性的抗體片段之聚核苷酸，係包含序列辨識編號：265、序列辨識編號：266及序列辨識編號：267的聚核苷酸序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：265、序列辨識編號：266及序列辨識編號：267係對應於編碼序列辨識編號：121的輕鏈可變序列或序列辨識編號：122的輕鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)之聚核苷酸。
在本發明的又一實施例中，編碼具有CGRP結合特異性的抗體片段之聚核苷酸，係包含序列辨識編號：268、序列辨識編號：269及序列辨識編號：270的聚核苷酸序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：268、序列辨識編號：269及序列辨識編號：270係對應於編碼序列辨識編號：123的重鏈可變序列或序列辨識編號：124的重鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)之聚核苷酸。
本發明亦設想聚核苷酸序列，其包括編碼本文所述抗體片段的聚核苷酸序列中之一或多者。在本發明的一實施例中，編碼具有CGRP結合特異性的抗體片段之聚核苷酸，係包含編碼抗體片段的下列所有聚核苷酸中之一者、二者、三者或多者，或任擇地由其等所組成：編碼序列辨識編號：121的輕鏈可變序列之聚核苷酸序列辨識編號：261；編碼序列辨識編號：122的輕鏈序列之聚核苷酸 序列辨識編號：262；編碼序列辨識編號：123的重鏈可變序列之聚核苷酸序列辨識編號：263；編碼序列辨識編號：124的重鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：264；編碼序列辨識編號：121的輕鏈可變序列或序列辨識編號：122的輕鏈序列之互補決定區(序列辨識編號：265、序列辨識編號：266及序列辨識編號：267)之聚核苷酸；及編碼序列辨識編號：123的重鏈可變序列或序列辨識編號：124的重鏈序列之互補決定區(序列辨識編號：268、序列辨識編號：269及序列辨識編號：270)之聚核苷酸。
在本發明的一個較佳實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼具有CGRP結合特異性的Fab(片段抗原結合)片段之聚核苷酸，或任擇地由其等所組成。就抗體Ab13而言，編碼全長式Ab13抗體之聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：122的輕鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：262與編碼序列辨識編號：124的重鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：264，或任擇地由其等所組成。
本發明的另一實施例設想被導入一表現載體中之該等聚核苷酸，以供在哺乳類動物細胞諸如CHO、NSO、HEK-293中表現，或在真菌、昆蟲或微生物系統諸如酵母菌細胞及諸如畢赤酵母屬(Pichia)的酵母菌中表現。適宜的畢赤酵母屬(Pichia)物種包括但不限於巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)。在此(下文)所述之本發明的一實施例中，可藉由Ab13的酵素酶切作用(如木瓜酶)產生Fab片段，接著在一適宜的宿主中表現全長聚核苷酸。在本發明 的另一實施例中，抗CGRP抗體諸如Ab13或其Fab片段可經由之表現作用，產生Ab13聚核苷酸在諸如CHO、NSO或HEK293細胞的哺乳類動物細胞、真菌、昆蟲或微生物系統諸如酵母菌細胞(例如諸如二倍體畢赤酵母屬(Pichia)之二倍體酵母菌)與其他酵母菌株。適宜的畢赤酵母屬(Pichia)物種包括但不限於巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)。
抗體Ab14
本發明係進一步關於編碼具有CGRP結合特異性的抗體多肽之聚核苷酸。在本發明的一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：131的可變輕鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成：CAAGTGCTGacccagtctccatcctccctgtctgcatctgtaggagacagagtcaccatcAATtgcCAGGCCAGTCAGAATGTTTAcAATAACAACTACCTAGCCtggtatcagcagaaaccagggaaagttcctaagCAActgatctatTCTACATCCACTCTGGCATCTggggtcccatctcgtttcagtggcagtggatctgggacagatttcactctcaccatcagcagcctgcagcctgaagatgttgcaacttattactgtCTGGGCAGTTATGATTGTAGTCGTGGTGATTGTTTTGTTttcggcggaggaaccaaggtggaaatcaaacgt(序列辨識編號：271)。
在本發明的一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：132的輕鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成：CAAGTGCTGacccagtctccatcctccctgtctgcatctgtaggagacagagtcaccatcAATtgcCAGGCCAGTCAGAATGTTTAc AATAACAACTACCTAGCCtggtatcagcagaaaccagggaaagttcctaagCAActgatctatTCTACATCCACTCTGGCATCTggggtcccatctcgtttcagtggcagtggatctgggacagatttcactctcaccatcagcagcctgcagcctgaagatgttgcaacttattactgtCTGGGCAGTTATGATTGTAGTCGTGGTGATTGTTTTGTTttcggcggaggaaccaaggtggaaatcaaacgtACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG(序列辨識編號：272)。
在本發明的另一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：133的可變重鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成：gaggtgcagctTgtggagtctgggggaggcttggtccagcctggggggtccctgagactctcctgtgcaGTCtctggaATCGGCCTCagtAGCTACTACATGCAAtgggtccgtcaggctccagggaaggggctggagtgggtcGGAGTCATTGGTAGTGATGGTAAGACATACTACGCGACCTGGGCGAAAGGCcgattcaccatctccagagacaattccaagACCACGGTGtatcttcaaatgaacagcctgagagctgaggacactgctgtgtatTTCtgtACCAGAGGGGACATCtggggccaagggaccctcgtcaccgtcTCGA GC(序列辨識編號：273)。
在本發明的一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：134的重鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成：gaggtgcagctTgtggagtctgggggaggcttggtccagcctggggggtccctgagactctcctgtgcaGTCtctggaATCGGCCTCagtAGCTACTACATGCAAtgggtccgtcaggctccagggaaggggctggagtgggtcGGAGTCATTGGTAGTGATGGTAAGACATACTACGCGACCTGGGCGAAAGGCcgattcaccatctccagagacaattccaagACCACGGTGtatcttcaaatgaacagcctgagagctgaggacactgctgtgtatTTCtgtACCAGAGGGGACATCtggggccaagggaccctcgtcaccgtcTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCAcCCTCCTCCaAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACGCGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGaTCTCCCgGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGA CGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA(序列辨識編號：274)。
在本發明的又一實施例中，編碼具有CGRP結合特異性的抗體片段之聚核苷酸，係包含序列辨識編號：275、序列辨識編號：276及序列辨識編號：277的聚核苷酸序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：275、序列辨識編號：276及序列辨識編號：277係對應於編碼序列辨識編號：131的輕鏈可變序列或序列辨識編號：132的輕鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)之聚核苷酸。
在本發明的又一實施例中，編碼具有CGRP結合特異性的抗體片段之聚核苷酸，係包含序列辨識編號： 278、序列辨識編號：279及序列辨識編號：280的聚核苷酸序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：278、序列辨識編號：279及序列辨識編號：280係對應於編碼序列辨識編號：133的重鏈可變序列或序列辨識編號：134的重鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)之聚核苷酸。
本發明亦設想聚核苷酸序列，其包括編碼本文所述抗體片段的聚核苷酸序列中之一或多者。在本發明的一實施例中，編碼具有CGRP結合特異性的抗體片段之聚核苷酸，係包含編碼抗體片段的下列所有聚核苷酸中之一者、二者、三者或多者，或任擇地由其等所組成：編碼序列辨識編號：131的輕鏈可變序列之聚核苷酸序列辨識編號：271；編碼序列辨識編號：132的輕鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：272；編碼序列辨識編號：133的重鏈可變序列之聚核苷酸序列辨識編號：273；編碼序列辨識編號：134的重鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：274；編碼序列辨識編號：131的輕鏈可變序列或序列辨識編號：132的輕鏈序列之互補決定區(序列辨識編號：275、序列辨識編號：276及序列辨識編號：277)之聚核苷酸；及編碼序列辨識編號：133的重鏈可變序列或序列辨識編號：134的重鏈序列之互補決定區(序列辨識編號：278、序列辨識編號：279及序列辨識編號：280)之聚核苷酸。
在本發明的一個較佳實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼具有CGRP結合特異性的Fab(片段抗原 結合)片段之聚核苷酸，或任擇地由其等所組成。就抗體Ab14而言，編碼全長式Ab14抗體之聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：132的輕鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：272與編碼序列辨識編號：134的重鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：274，或任擇地由其等所組成。
本發明的另一實施例設想被導入一表現載體中之該等聚核苷酸，以供在哺乳類動物細胞諸如CHO、NSO、HEK-293中表現，或在真菌、昆蟲或微生物系統諸如酵母菌細胞及諸如畢赤酵母屬(Pichia)的酵母菌中表現。適宜的畢赤酵母屬(Pichia)物種包括但不限於巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)。在此(下文)所述之本發明的一實施例中，可藉由Ab14的酵素酶切作用(如木瓜酶)產生Fab片段，接著在一適宜的宿主中表現全長聚核苷酸。在本發明的另一實施例中，可經由Ab14聚核苷酸在諸如CHO、NSO或HEK 293細胞的哺乳類動物細胞、真菌、昆蟲或微生物系統諸如酵母菌細胞(例如諸如二倍體畢赤酵母屬(Pichia)之二倍體酵母菌)與其他酵母菌株之表現作用，產生抗CGRP抗體諸如Ab14或其Fab片段。適宜的畢赤酵母屬(Pichia)物種包括但不限於巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)。
在一實施例中，本發明係有關一種分離的聚核苷酸，其包含編碼選自序列辨識編號：3、13、23、33、43、53、63、73、83、93、103、113、123或133的抗CGRP VH抗體胺基酸序列或編碼其變異體之一聚核苷酸，其中至 少一個架構殘基(FR殘基)已被存在於一種兔抗CGRP抗體VH多肽的對應位置之一胺基酸取代或經保留性胺基酸取代作用取代。
在另一實施例中，本發明係有關一種分離的聚核苷酸，其包含編碼1、11、21、31、41、51、61、71、81、91、101、111、121或131的抗CGRP VL抗體胺基酸序列或編碼其變異體之聚核苷酸序列，其中至少一個架構殘基(FR殘基)已被存在於一種兔抗CGRP抗體VL多肽的對應位置之一胺基酸取代或經保留性胺基酸取代作用取代。
在又一實施例中，本發明係有關一或多種異源性聚核苷酸，其包含編碼下列所含多肽之一序列：序列辨識編號：1與序列辨識編號：3；序列辨識編號：11與序列辨識編號：13；序列辨識編號：21與序列辨識編號：23；序列辨識編號：31與序列辨識編號：33；序列辨識編號：41與序列辨識編號：43；序列辨識編號：51與序列辨識編號：53，序列辨識編號：61與序列辨識編號：63；序列辨識編號：71與序列辨識編號：73；序列辨識編號：81與序列辨識編號：83；序列辨識編號：91與序列辨識編號：93；序列辨識編號：101與序列辨識編號：103；序列辨識編號：111與序列辨識編號：113；序列辨識編號：121與序列辨識編號：123；或序列辨識編號：131與序列辨識編號：133。
在另一實施例中，本發明係有關一種分離的聚核苷酸，其所表現的多肽係含有從一種抗CGRP抗體衍生的至少一種CDR多肽，其中所表現的多肽本身係與CGRP 特異性結合，或當與另一聚核苷酸序列組合表現時係與CGRP特異性結合，其所表現的多肽係含有從一種抗CGRP抗體衍生的至少一種CDR多肽，其中該至少一種CDR係選自序列辨識編號：1、3、11、13、21、23、31、33、41、43、51、53、61、63、71、73、81、83、91、93、101、103、111、113、121、123、131或序列辨識編號：133的VL或VH多肽中所含者。
亦設想包含該聚核苷酸之宿主細胞與載體。
本發明進一步設想載體，其所包含之聚核苷酸序列係編碼如本文中所載列的可變重鏈與輕鏈多肽序列以及個別互補決定區(CDR或高度變異區)；以及設想包含該載體序列之宿主細胞。在本發明的一實施例中，該宿主細胞係一酵母菌細胞。在本發明的另一實施例中，該酵母菌宿主細胞係屬於畢赤酵母屬(Pichia)。
B細胞之篩檢與分離作用
在一實施例中，本發明設想可用於分離至少一種CGRP抗原特異性細胞之抗原特異性B細胞殖株種群之製備與分離作用，該CGRP抗原特異性細胞可用於生產對抗CGRP的單株抗體，其對於所欲的一CGRP抗原或對於對應於該一抗體的一核酸序列具特異性。例如在授予Carvalho-Jensen等人之第US 2007/0269868號美國專利公開案中，教導該抗原特異性B細胞殖株種群之製備與分離方法，該專利公開案的揭露內容在此完整地併入本案以為參考資料。在本文之實例中亦教導該抗原特異性B細胞殖株種 群之製備與分離方法。技藝中已知按尺寸或密度“富集”一細胞種群之方法。如參見第5,627,052號美國專利。在藉由抗原特異性富集該細胞種群之外，可使用該等步驟。
人化抗體之方法
在另一實施例中，本發明設想用於人化抗體重鏈與輕鏈之方法。例如在授予Olson等人之第US 2009/0022659號美國專利申請公開案與在授予Garcia-Martinez等人之第7,935,340號美國專利中，教導可應用於抗CGRP抗體之用於人化抗體重鏈與輕鏈之方法其中各者的揭露內容在此完整併入本案以為參考資料。
產生抗體及其片段之方法
另一實施例中，本發明設想用於產生抗CGRP抗體及其片段腹瀉之方法。例如在授予Olson等人之第US 2009/0022659號美國專利申請公開案與在授予Garcia-Martinez等人之第7,935,340號美國專利中，教導用於生產由配對勝任型酵母菌的多倍體及較佳二倍體或四倍體菌株所分泌之抗CGRP抗體及其片段之方法，其中各者的揭露內容在此完整併入本案以為參考資料。
產生抗體之其他方法係具一般技藝者所熟知。例如，產生嵌合抗體之方法係現在技藝中眾所周知者(例如參見授予Cabilly等人之第4,816,567號美國專利；Morrison等人於期刊“P.N.A.S.USA”第81期第8651-55頁(1984年)乙文；Neuberger,M.S.等人於期刊“Nature”第314第268-270頁(1985年)乙文；Boulianne,G.L.等人於期刊 “Nature”第312第643-46頁(1984年)乙文，其中各者的揭露內容在此完整併入本案以為參考資料)。
同樣地，產生人化抗體之方法係現在技藝中眾所周知者(例如參見授予Queen等人之第5,530,101號、第5,585,089號、第5,693,762號及第6,180,370號美國專利；授予Winter之第5,225,539號與第6,548,640號美國專利；授予Carter等人之第6,054,297號、第6,407,213號及第6,639,055號美國專利；授予Adair之第6,632,927號美國專利；Jones,P.T.等人於期刊“Nature”第321第522-525頁(1986年)乙文；Reichmann,L.等人於期刊“Nature”第332第323-327頁(1988年)乙文；Verhoeyen,M.等人於期刊“Science”第239第1534-36頁(1988年)乙文，其中各者的揭露內容在此完整併入本案以為參考資料)。
亦可使用具一般技藝者所熟知的習用技術，藉由建構含有一操縱組與編碼一抗體重鏈的一DNA序列之一表現載體，而產生本發明之具有CGRP結合特異性腹瀉的抗體多肽，其中編碼抗體特異性所需的CDR之DNA序列係衍生自一非人類細胞來源，較佳為一種兔子B細胞來源，而編碼該抗體鏈的其餘部分之DNA序列係衍生自一人類細胞來源
使用具一般技藝者所熟知的相同習用方式，產生第二表現載體，該表現載體含有一操縱組及編碼一抗體輕鏈之一DNA序列，其中編碼抗體特異性所需的CDR之DNA序列係衍生自一非人類細胞來源，較佳為一種兔子B 細胞來源，而編碼該抗體鏈的其餘部分之DNA序列係衍生自一人類細胞來源。
藉由具一般技藝者所熟知的習用技術，將表現載體轉染至一宿主細胞中，而產生經轉染的宿主細胞，藉由具一般技藝者所熟知的習用技術培養該經轉染的宿主細胞，而產生該抗體多肽。
該宿主細胞可用上述的二個表現載體進行共轉染，第一表現載體含有編碼一操縱組與輕鏈所衍生的一種多肽之DNA，而第二載體含有編碼一操縱組與重鏈所衍生的一種多肽之DNA。該二載體含有不同的篩選標記，但所達成之重鏈與輕鏈多肽的表現作用較佳係實質上相等的。任擇地，可使用單一載體，及該載體包括同時編碼重鏈與輕鏈多肽的DNA。重鏈與輕鏈的編碼序列可包含cDNA、基因體DNA或二者。
用於表現抗體多肽之宿主細胞可為一細菌細胞諸如大腸桿菌(E.coli)，或一真核細胞諸如巴斯德畢赤酵母(P.pastoris)。在本發明的一實施例中，可使用針對此目的明確界定之哺乳類動物細胞類型，諸如骨髓瘤細胞、中國倉鼠卵巢(CHO)細胞株、NSO細胞株或HEK293細胞株。
用於建構載體之通用方法、產生宿主細胞所需之轉染方法及從該宿主細胞產生抗體多肽所需之培養方法，皆涵蓋習用技術。雖然用於產生抗體之細胞株較佳為哺乳類動物細胞株，可任擇使用其他適宜的任一細胞株，諸如一細菌細胞株，諸如大腸桿菌(E.coli)所衍生的細菌菌 株或一酵母菌細胞株。
同樣地，抗體多肽一旦產生後，可依據技藝中的標準程序進行純化，諸如例如掃流式過濾作用、硫酸銨沉澱作用、親和性管柱層析法之類。
本文中所述之抗體多肽亦可用於設計與合成胜肽或非胜肽模擬劑，其等將適用於與本發明的抗體多肽相同之治療應用。例如參見Saragobi等人於期刊“Science”第253期第792-795頁(1991年)乙文，其內容在此完整地併入本案以為參考資料。
篩檢分析
本發明亦包括篩檢分析法，其設計係在顯現CGRP關聯性疾病或功能失調的症狀之病患中，用於協助辨識與CGRP及腹瀉相關聯的疾病與功能失調。
在本發明的一實施例中，本發明的抗CGRP抗體或其CGRP結合片段係用於檢測從顯現一CGRP關聯性疾病或功能失調的症狀與腹瀉之病患所獲得的生物試樣是否存在CGRP。若存在CGRP，或若與可比較的一生物試樣中的疾病前CGRP水平比較時顯示其水平及尤其在結腸的水平較高，則可能有利於診斷伴有腹瀉之CGRP關聯性疾病或功能失調。
本發明的另一實施例提供一診斷或篩檢分析法，以在顯現本文中所提及之CGRP關聯性疾病或功能失調的症狀之病患中協助診斷與CGRP相關聯的疾病或功能失調，其包括使用一種轉譯後改質的抗CGRP抗體或其結合片 段，分析從該病患取得的一生物試樣中之CGRP表現水平。抗CGRP抗體或其結合片段可進行轉譯後改質，而包含諸如先前在揭露內容中所述之一可檢測性基團。
使用本文中所闡述之一種經改質的抗CGRP抗體或其結合片段，測定生物試樣中的CGRP水平，及將生物試樣中的CGRP水平與一標準CGRP水平(如正常生物試樣中的水平)比較。嫻熟的臨床醫師理解在正常生物試樣之間可能存在些許變異性，及當評估結果時會將其納入考量。在本發明的一實施例中，可使用本發明的抗CGRP抗體來取得CGRP表現水平與癌症進程的一特定階段之關聯性。嫻熟技藝者能在眾多個體中測量CGRP，以建立對應癌症進程的臨床界定階段之CGRP表現作用範圍。該等範圍將容許嫻熟的執業醫師在經診斷罹患癌症的一個體中測量CGRP，及將各個體的水平與對應該癌症各階段的範圍互相關聯。嫻熟技藝者將瞭解藉由在不同的時間間隔測量病患的CGRP，可測定癌症進程。
上述分析法亦可適用於監測一疾病或功能失調，其中在據信患有一CGRP關聯性疾病或功能失調的一病患之生物試樣中所獲得的CGRP水平，係與來自相同病患的先前生物試樣中的CGRP水平比較，以確定該病患的CGRP水平是否因例如一治療方案而改變。
本發明亦關於檢測是否存在表現CGRP的細胞之一種活體內成像方法，其包括投予一診斷有效量之一診斷性組成物。例如，該活體內成像作用係適用於表現 CGRP的腫瘤或轉移之檢測或成像，及可適用作為用於設計有效的癌症治療程序之規劃療法的一部分。該治療程序例如可包括一或多種輻射、化學療法、細胞介素療法、基因療法及抗體療法，以及一種抗CGRP抗體或其片段。
本發明進一步提供用於檢測本發明的抗CGRP抗體與CGRP的結合作用之一套組。尤其該套組可用於檢測是否存在與本發明的抗CGRP抗體或其免疫反應性片段進行特異性反應之CGRP。該套組亦可包括與一受質結合之一抗體、具有抗原反應性之一種二級抗體及用於檢測二級抗體與抗原的反應之一試劑。該套組可為一種ELISA套組及可酌情包括受質、初級與二級抗體，及其他所需的任何試劑諸如可檢測性基團、酵素受質及呈色試劑，例如本文中所述者。該診斷套組亦可為免疫墨點套組之形式。該診斷套組亦可為化學發光套組之形式(美國馬里蘭州蓋瑟斯堡之Meso Scale Discovery公司)。該診斷套組亦可為一種鑭系元素式檢測套組(美國加州聖荷西之珀金埃爾默(PerkinElmer)公司)。
嫻熟的臨床醫師將瞭解生物試樣包括但不限於血清、血漿、尿液、唾液、黏液、胸腔積液、滑膜液及脊髓液。
紓緩或減少與CGRP相關聯的疾病與功能失調之症狀或進行治療或預防之方法
本文所述之抗CGRP抗體或其片段，係適用於 紓緩或減少與CGRP相關聯的疾病與功能失調之症狀或進行治療或預防，及尤其是腹瀉。在一個較佳實施例中將顯示抗CGRP抗體或抗體片段是有效的(在第8例所揭露的囓齒動物模式中阻斷與過量循環型CGRP相關聯之包括腹瀉在內的不良副作用)。
本文所述之抗CGRP抗體或其片段以及組合物，亦能以如下文所詳述之一藥學組成物形式，對於需要治療與CGRP相關聯的疾病與功能失調之病患投予一治療有效量。
在本發明的另一實施例中，本文所述之抗CGRP抗體或其片段，係適用於針對下列CGRP相關病況中之腹瀉進行症狀紓緩或減少或進行治療或預防：CGRP相關病況包括偏頭痛(不論有無前兆)、體重減輕、癌症或腫瘤、與癌症或腫瘤生長相關聯之血管生成作用、與癌症或腫瘤存活相關聯之血管生成作用、疼痛、偏癱性偏頭痛、叢發性頭痛、偏頭痛性神經痛、慢性頭痛、緊張性頭痛、一般性頭痛、熱潮紅、慢性陣發性半邊頭痛、由於頭部或頸部的潛在構造問題所引起之次發性頭痛、顱部神經痛、鼻竇性頭痛(諸如例如與鼻竇炎相關者)及過敏所引發的頭痛或偏頭痛。
在本發明的一實施例中，本文所述之抗CGRP抗體或其片段及/或與第二劑，係適用於針對與下列非限制性清單中的CGRP相關疾病與功能失調相關聯之腹瀉進行症狀紓緩或減少或進行治療或預防：疼痛、發炎疼痛、手 術後傷口疼痛、複雜性局部疼痛症候群、癌症疼痛、原發性或轉移性骨癌疼痛、骨折疼痛、慢性疼痛、骨質疏鬆性骨折疼痛、燒傷引起的疼痛、骨質疏鬆症、痛風關節疼痛、腹痛、與鐮狀細胞危象相關聯的疼痛及其他傷害性疼痛；以及肝細胞癌、乳癌、肝硬化、神經源性疼痛、神經性病變疼痛、傷害性疼痛、三叉神經痛、帶狀疱疹後之神經痛、幻肢疼痛、纖維肌痛、痛經、卵巢痛、反射性交感神經失養症、神經源性疼痛、骨關節炎或類風濕性關節炎疼痛、下背疼痛、糖尿病性神經病變、坐骨神經痛；或與下列相關聯之疼痛或內臟疼痛：胃食道逆流、消化不良、激躁性腸症候群、激躁性結腸、痙攣性結腸、黏膜性結腸炎、發炎性腸道疾病、克隆氏症、迴腸炎、潰瘍性結腸炎、腎絞痛、痛經、膀胱炎、經期、分娩、停經、攝護腺炎，胰臟炎，腎絞痛、痛經、包括間質性膀胱炎在內之(IC)膀胱炎、與腸塞絞痛相關聯之手術、憩室炎、腹膜炎、心包膜炎、肝炎、闌尾炎、結腸炎、膽囊炎、子宮內膜異位、慢性及/或急性胰臟炎、心肌梗塞、腎臟疼痛、胸膜疼痛、攝護腺炎、骨盆腔疼痛、器官創傷、慢性傷害性疼痛、慢性神經性病變疼痛、慢性發炎疼痛、纖維肌痛、突發性疼痛與持續性疼痛；及源自惡性腫瘤或源自較佳地選自下列的一或多種癌症之癌症疼痛：腺體組織的腺癌、器官胚胎組織的胚細胞瘤、上皮組織的癌症、形成血球細胞的組織之白血病、淋巴組織的淋巴瘤、骨髓的骨髓瘤、結締或支持組織的肉瘤、腎上腺癌、愛滋病相關性淋巴瘤、貧血、膀胱癌、 骨癌、腦癌、乳癌、類癌瘤、子宮頸癌、化學療法、結腸癌、細胞減少症、子宮內膜癌、食道癌、胃癌、頭部癌症、頸癌、肝膽癌、腎臟癌、白血病(leukemia)、肝癌、肺癌、淋巴瘤、霍奇金氏(Hodgkin)病、淋巴瘤、非霍奇金氏病、神經系統腫瘤、口腔癌、卵巢癌、胰臟癌、前列腺癌、直腸癌、皮膚癌、胃部癌症、睾丸癌、甲狀腺癌、尿道癌、骨癌、結締組織的肉瘤癌症、骨組織的癌症、造血細胞的癌症、骨髓癌症、多發性骨髓瘤、白血病(leukaemia)、原發性或轉移性骨癌、轉移至骨的腫瘤、浸潤神經與中空型內臟之腫瘤、鄰近神經構造之腫瘤。癌症疼痛又較佳包括內臟疼痛，較佳為源自胰臟癌及/或至腹部的轉移作用之內臟疼痛。癌症疼痛又較佳包括軀體疼痛，較佳為由於一或多種骨癌、轉移至骨、手術後疼痛、結締組織的肉瘤癌症、骨組織的癌症、骨髓造血細胞的癌症、多發性骨髓瘤、白血病(leukaemia)、原發性或轉移性骨癌之軀體疼痛。
在本發明的另一實施例中，本文中所述之抗CGRP抗體或其片段及/或與第二劑，係適用於紓緩或減少下列非限制性清單中的疾病與功能失調之症狀或進行治療或預防：癌症或腫瘤、與癌症或腫瘤生長相關聯之血管生成作用、與癌症或腫瘤存活相關聯之血管生成作用。
在本發明的另一實施例中，本文中所述之抗CGRP抗體或其片段及/或與第二劑，係適用於紓緩或減少下列非限制性清單中的疾病與功能失調之症狀或進行治療或預防：神經源性、神經性病變或傷害性疼痛。神經性病 變疼痛可包括但不限於三叉神經痛、帶狀疱疹後之神經痛、幻肢疼痛、纖維肌痛、痛經、卵巢痛、反射性交感神經失養症及神經源性疼痛。在其他的較佳實施例中，骨關節炎或類風濕性關節炎疼痛、下背疼痛、糖尿病性神經病變、坐骨神經痛及其他神經性病變疼痛。
在本發明的另一實施例中，本文所述之抗CGRP抗體或其片段及/或與第二劑，係適用於紓緩或減少下列非限制性清單中的疾病與功能失調之症狀或進行治療或預防：腹瀉，及與胃食道逆流、消化不良、激躁性腸症候群、發炎性腸道疾病、克隆氏症、迴腸炎、潰瘍性結腸炎、腎絞痛、痛經、膀胱炎、經期、分娩、停經、攝護腺炎或胰臟炎相關聯的內臟疼痛。
投藥作用
在本發明的一實施例中，本文中所述之抗CGRP抗體或其CGRP結合片段以及該抗體或抗體片段的組合物，係以介於約0.1與100.0毫克/領受個體的體重公斤數之間之一濃度投藥至一個體。在本發明的一個較佳實施例中，本文中所述之抗CGRP抗體或其CGRP結合片段以及該抗體或抗體片段的組合物，係以約0.4毫克/領受個體的體重公斤數之濃度投藥至一個體。在本發明的一個較佳實施例中，本文中所述之抗CGRP抗體或其CGRP結合片段以及該抗體或抗體片段的組合物，係以每26個星期或以下一次之頻率投藥至一領受個體，諸如每16個星期或以下一次、每8個星期或以下一次、每4個星期或以下一次、每2個星期或 以下一次、每個星期或以下一次或每日以下一次之頻率。
可每兩個星期或以下一次、每個星期或以下一次、每日以下一次、每日多次及/或每數小時投予Fab片段。在本發明的一實施例中，病患係每日領受有效獲得所欲結果之0.1毫克/公斤至40毫克/公斤的Fab片段，其係以每日分成1至6次的分次劑量給藥，或以一持續釋出形式給藥。
需瞭解對於一特定病患所投予的抗體或Fab濃度，可能高於或低於在上文段落[0566]與[0567]中所列的例示性投藥濃度。
嫻熟技藝者將可經由實驗決定有效劑量及投藥頻率，例如遵循本文中的揭露內容及下列之教導：美國紐約之麥格羅-希爾‧古德曼(McGraw-Hill Goodman)公司出版之Goodman,L.S.,Gilman,A.,Brunton,L.L.,Lazo,J.S.及Parker,K.L.(2006年)所著“古德曼與吉爾曼之治療學藥理基礎(Goodman & Gilman's the pharmacological basis of therapeutics)”乙書；美國費城之利平科特‧威廉斯‧威爾金斯(Lippincott Williams & Wilkins)公司出版之Howland,R.D.,Mycek,M.J.,Harvey,R.A.,Champe,P.C.及Mycek,M.J.(2006年)所著“藥理學--利平科特之圖解總論(Pharmacology.Lippincott's illustrated reviews)”乙書；及美國賓州費城等之利平科特‧威廉斯‧威爾金斯(Lippincott Williams & Wilkins)公司出版之Golan,D.E.(2008年)所著“藥理學原理：藥物治療之病理生理學基礎(Principles of pharmacology：the pathophysiologic basis of drug therapy)”乙書。
在本發明的另一實施例中，本文中所述之抗CGRP抗體或其CGRP結合片段以及該抗體或抗體片段的組合物，係以一藥學調配物形式投予至一個體。
一“藥學組成物”係指適合投藥至一哺乳類動物之化學或生物組成物。可特別配製該等組成物供經由數種路徑中的一或多者投藥，該等路徑包括但不限於頰、表皮、硬脊膜外、吸入作用、動脈內、心臟內、腦室內、真皮內、肌內、鼻內、眼內、腹膜內、椎管內、髓鞘內、靜脈內、口服、非經腸、經由一灌腸劑或栓劑之直腸方式、皮下、真皮下、舌下、經皮及經黏膜。此外，可藉由注射液劑、散劑、液劑、凝膠劑、滴劑之方式或其他投藥方式，進行投藥。
在本發明的一實施例中，本文中所述之抗CGRP抗體或其CGRP結合片段以及該抗體或抗體片段的組合物，可選擇性地與一或多種活性劑組合投藥。該等活性劑包括止痛劑、抗組織胺劑、退燒藥、消炎藥、抗生素、抗病毒劑及抗細胞介素劑。活性劑包括促效劑、拮抗劑及TNF-α、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-12、IL-13、IL-18、IFN-α、IFN-γ、BAFF、CXCL13、IP-10、VEGF、EPO、EGF、HRG、肝細胞生長因子(HGF)、鐵調素之調節劑，包括對於前述任一者具有反應性之抗體，及對於其等任一受器具有反應性之抗體。活性劑亦包括但不限於2-芳基丙酸類、醋氯芬酸(Aceclofenac)、阿西美辛(Acemetacin)、乙醯水楊酸(阿斯匹靈)、阿氯芬酸(Alclofenac)、阿明洛芬 (Alminoprofen)、阿莫西普(Amoxiprin)、4-胺安替比林(Ampyrone)、芳基鏈烷酸類、阿扎丙宗(Azapropazone)、貝諾酯(benorylate)/貝諾酯(Benorilate)、苯洛芬(Benoxaprofen)、溴芬酸(Bromfenac)、卡洛芬(Carprofen)、塞來考昔(celecoxib)、三水楊酸膽鹼鎂、氯非宗(Clofezone)、COX-2抑制劑、右布洛芬(Dexibuprofen)、右酮洛芬(Dexketoprofen)、待可芬(diclofenac)、二氟尼柳(diflunisal)、屈昔康(Droxicam)、鄰乙氧苯甲酸胺(Ethenzamide)、依托度酸(Etodolac)、依托考昔(Etoricoxib)、非斯拉明(Faislamine)、芬那酸類、芬布芬(Fenbufen)、非諾洛芬(Fenoprofen)、氟芬那酸、氟諾洛芬(Flunoxaprofen)、氟比洛芬(Flurbiprofen)、伊布洛芬(ibuprofen)、異丁普生(Ibuproxam)、吲哚美辛(Indometacin)、吲哚洛芬(Indoprofen)、凱布宗(Kebuzone)、酮洛芬(Ketoprofen)、酮咯酸(Ketorolac)、氯諾昔康(Lornoxicam)、洛索洛芬(Loxoprofen)、蘆米考昔(Lumiracoxib)、水楊酸鎂、甲氯芬那(Meclofenamic)酸、甲芬那(Mefenamic)酸、美洛昔康(Meloxicam)、安乃近(Metamizole)、水楊酸甲酯、莫非布宗(Mofebutazone)、萘丁美酮(Nabumetone)、萘普生(Naproxen)、N-芳基鄰胺基苯甲酸類、神經生長因子(NGF)、奥沙美辛(Oxametacin)、4,5-二苯-2-唑丙酸(Oxaprozin)、昔康(Oxicam)類、羥布宗(Oxyphenbutazone)、帕瑞考昔(Parecoxib)、安替比林(Phenazone)、保泰松(Phenylbutazone)、保泰松(Phenylbutazone)、吡羅昔康 (Piroxicam)、吡洛芬(Pirprofen)、洛芬(profen)類、丙谷美辛(Proglumetacin)、吡唑啶衍生物、羅非考昔(Rofecoxib)、雙水楊酸酯、水楊醯胺、水楊酸鹽類、物質P、磺吡酮(Sulfinpyrazone)、舒林酸(Sulindac)、舒洛芬(Suprofen)、替諾昔康(Tenoxicam)、泰普菲(Tiaprofenic)酸、托芬那(Tolfenamic)酸、痛必定(Tolmctin)及伐地考昔(Valdecoxib)。
抗組織胺劑可為阻止組織胺的作用或阻止組織胺自細胞(如肥大細胞)釋出之任一化合物。抗組織胺劑包括但不限於阿伐斯汀(acrivastine)、阿司咪唑(astemizole)、阿扎他定(azatadine)、阿扎他定(azelastine)、betatastine、溴苯那敏(brompheniramine)、布克力嗪(buclizine)、西替利嗪(cetirizine)、西替利嗪類似物、氯苯那敏(chlorpheniramine)、氯馬斯汀(clemastine)、CS 560、賽庚啶(cyproheptadine)、地氯雷他定(desloratadine)、右旋氯苯那敏(dexchlorpheniramine)、依巴斯汀(ebastine)、依匹斯汀(epinastine)、非索非那定(fexofenadine)、HSR 609、羥、左卡巴斯汀(levocabastine)、樂雷塔定(loratidine)、甲基莨菪鹼、咪唑斯汀(mizolastine)、諾阿斯咪唑(norastemizole)、苯茚達明(phenindamine)、普洛敏太定(promethazine)、吡拉明(pyrilamine)、特非那定(terfenadine)及曲尼司特(tranilast)。
抗生素包括但不限於阿米卡星(Amikacin)、胺基苷類、阿莫西林(Amoxicillin)、安比西林(Ampicillin)、安沙黴素(Ansamycin)類、砷凡納明(Arsphenamine)、阿奇黴 素(Azithromycin)、阿洛西林(Azlocillin)、氨曲南(Aztreonam)、枯草菌素、碳頭孢烯、碳青黴烯類、羧苄西林(Carbenicillin)、頭孢克洛(Cefaclor)、頭孢羥氨苄(Cefadroxil)、頭孢氨苄(Cefalexin)、頭孢噻吩(Cefalothin)、頭孢噻吩(Cefalotin)、頭孢孟多(Cefamandole)、頭孢唑林(Cefazolin)、頭孢地尼(Cefdinir)、頭孢托侖(Cefditoren)、頭孢吡肟(Cefepime)、頭孢克肟(Cefixime)、頭孢哌酮(Cefoperazone)、頭孢噻肟(Cefotaxime)、頭孢西丁(Cefoxitin)、頭孢泊肟(Cefpodoxime)、頭孢丙烯(Cefprozil)、頭孢他啶(Ceftazidime)、頭孢布烯(Ceftibuten)、頭孢唑肟(Ceftizoxime)、頭孢吡普(Ceftobiprole)、頭孢曲松(Ceftriaxone)、頭孢呋辛(Cefuroxime)、頭孢菌素類、氯黴素、西司他丁(Cilastatin)、環丙沙星(Ciprofloxacin)、克拉黴素(Clarithromycin)、克林黴素(Clindamycin)、氯唑西林(Cloxacillin)、柯利黴素(Colistin)、複方磺胺甲基異唑(Co-trimoxazole)、達福普汀(Dalfopristin)、地美環素(Demeclocycline)、雙氯西林(Dicloxacillin)、地紅黴素(Dirithromycin)、多立培南(Doripenem)、多西環素(Doxycycline)、依諾沙星(Enoxacin)、厄他培南(Ertapenem)、紅黴素、孟表多(Ethambutol)、氟氯西林(Flucloxacillin)、磷黴素(Fosfomycin)、富來頓(Furazolidone)、梭鏈孢酸、加替沙星(Gatifloxacin)、格爾德黴素(Geldanamycin)、慶大黴素(Gentamicin)、醣肽類、除莠黴素(Herbimycin)、亞胺培南(Imipenem)、異菸酸肼 (Isoniazid)、卡那黴素(Kanamycin)、左氧氟沙星(Levofloxacin)、林可黴素(Lincomycin)、利奈唑胺(Linezolid)、洛美沙星(Lomefloxacin)、氯碳頭孢(Loracarbef)、巨環內酯類、磺胺米隆(Mafenide)、美羅培南(Meropenem)、甲氧西林(Meticillin)、甲硝唑(Metronidazole)、美洛西林(Mezlocillin)、米諾環素(Minocycline)、單內醯胺類、莫昔沙星(Moxifloxacin)、莫匹羅星(Mupirocin)、萘夫西林(Nafcillin)、新黴素、奈替米星(Netilmicin)、呋喃妥因(Nitrofurantoin)、諾氟沙星(Norfloxacin)、氧氟沙星(Ofloxacin)、苯唑西林(Oxacillin)、土黴素、巴龍黴素(Paromomycin)、盤尼西林、盤尼西林類、哌拉西林(Piperacillin)、平板黴素(Platensimycin)、多黏菌素B、多肽類、普隆托西(Prontosil)、吡甲醯胺、喹啉酮類、奎奴普丁(Quinupristin)、利福平(Rifampicin)、雷發平(Rifampin)、羅紅黴素(Roxithromycin)、大觀黴素(Spectinomycin)、鏈黴素、乙醯磺胺、磺胺甲二唑、對胺基苯磺醯胺、柳氮磺吡啶(Sulfasalazine)、磺胺異唑、磺醯胺類、替考拉寧(Teicoplanin)、替利黴素(Telithromycin)、四環黴素、四環黴素類、替卡西林(Ticarcillin)、替硝唑(Tinidazole)、泰百黴素(Tobramycin)、甲氧苄啶(Trimethoprim)、甲氧苄啶-磺胺甲異唑、醋竹桃黴素(Troleandomycin)、曲伐沙星(Trovafloxacin)及萬古黴素(Vancomycin)。
活性劑亦包括醛固酮、倍氯米松 (Beclometasone)、倍他米松(Betamethasone)、皮質類固醇類、皮質醇、醋酸皮質酮、醋酸去氧皮質固酮、地塞米松(Dexamethasone)、氟氫可的松(Fludrocortisone)、糖皮質素類、氫化可的松(Hydrocortisone)、甲潑尼龍(Methylprednisolone)、潑尼松龍(Prednisolone)、潑尼松(Prednisone)、類固醇類及去炎松(Triamcinolone)。亦設想該等活性劑之任一適宜組合物。
“藥學賦形劑”或“藥學上可接受的賦形劑”係在其中配製一活性治療劑之一載劑，及通常是一種液體。在本發明的一實施例中，該活性治療劑係本文中所述之一人化抗體，或其一或多種片段。賦形劑一般並未提供該調配物任何藥理活性，雖然其可能提供化學及/或生物安定性以及釋出特性。例示性調配物可參見例如由Grennaro,A.編輯之雷明頓製藥學(Remington’s Pharmaceutical Sciences)乙書第19版(1995年出版)，其在此併入本案以為參考資料。
如本文中所用之“藥學上可接受的載劑”或“賦形劑”包括生理上可相容的溶劑、分散介質、塗料、抗細菌與抗真菌劑、等張性與吸收延緩劑中之任一者及所有者。在一實施例中，該載劑係適用於非經腸投藥作用。任擇地，該載劑可適用於靜脈內、腹膜內、肌內或舌下投藥作用。藥學上可接受的載劑包括無菌水溶液或分散液，及包括供即席製備無菌可注射式溶液或分散液之無菌粉末。技藝中熟知該等介質與作用劑用於藥學活性物質之用途。除了與該活性化合物不相容的任一習用介質與作用劑之 外，設想其等在本發明的藥學組成物中之用途。亦可在組成物中納入補充的活性化合物。
藥學組成物典型必須無菌及在製造與儲存條件下安定。本發明設想該藥學組成物係以冷凍乾燥型式存在。可將該組成物配製成溶液、微乳液、脂質體或其他適於高藥物濃度的有序結構。載劑可為例如含有水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇與液態聚乙二醇)及其適宜混合物之一溶劑或分散介質。本發明進一步設想在藥學組成物中納入一安定劑。例如在分散液情況下，可藉由維持所需粒度及藉由使用表面活性劑，而維持適當的流動性。
在許多情況下，較佳在組成物中包括等張劑例如糖類、多元醇類諸如甘露糖醇、山梨糖醇或氯化鈉。可藉由在組成物中包括延遲吸收作用的作用劑例如單硬脂酸鹽類與明膠，而促成可注射式組成物的吸收作用之延遲。此外，可將鹼性多肽配製在一緩釋型調配物中，例如在包含一緩釋型聚合物之組成物中。可用保護活性化合物免於快速釋出之載劑，製備該化合物，諸如其中包括植入物與微膠囊化輸送系統之一控制釋出型調配物。可使用生物可降解性、生物可相容性聚合物，諸如醋酸乙烯酯、聚酸酐類、聚乙醇酸、膠原蛋白、聚原酸酯、聚乳酸及聚乳酸、聚乙醇酸共聚物(PLG)。用於製備該等調配物的眾多方法係嫻熟技藝者所知。
就所引述的各實施例而言，可藉由多種劑型投予該等化合物。設想具一般技藝者所知之任何生物上可 接受的劑型及其組合物。該等劑型的實例包括但不限於可復水性散劑、酏劑、液體、液劑、懸液劑、乳劑、散劑、顆粒劑、顆粒劑、微米顆粒劑、可分散性顆粒劑、扁囊劑、吸入劑、氣霧吸入劑、貼劑、顆粒性吸入劑、植入物、儲存型植入物、可注射式劑型(包括皮下、肌內、靜脈內及皮內)、輸注劑型及其組合物。
本發明所述各種實施例之上述說明並非意欲窮舉或將本發明侷限於所揭露的確切形式。在此係為了說明之目的而陳述本發明的特定實施例及用於本發明的實例，嫻熟相關技藝者所認出之各種等效改質作用，在本發明的範圍內皆屬可能。本文所提供關於本發明的教導可應用在上述實例以外的其他目的。
鑑於上述詳細說明，可在本發明進行該等與其他改變。一般而言，在下列申請專利範圍中，所用詞語不應被解釋將本發明侷限於說明書與申請專利範圍中所揭露的特定實施例。因此，本發明並非受限於揭露內容，本發明的範圍完全由下列申請專利範圍所決定。
可用特別述於前述說明與實例中的該等方式以外之其他方式，實施本發明。鑑於上述教導可能進行本發明的眾多改質作用與變化，及其等因此係位於所附申請專利範圍的範疇之內。
與用於獲得抗原特異性B細胞殖株種群之方法相關之特定教導，係揭露於2006年5月19日提出申請之第60/801,412號美國暫准專利申請案中，其揭露內容在此完 整地併入本案以為參考資料。
與兔衍生型單株抗體的人化作用及用以維持抗原結合親和性之較佳的序列改質作用相關之特定教導，係揭露於第PCT/US2008/064421號國際申請案中，其係對應於2008年5月21日提出申請及標題為“新穎兔抗體人化作用方法與人化兔抗體”之第WO/2008/144757號國際公開案，其揭露內容在此完整地併入本案以為參考資料。
與使用配對勝任型酵母菌及對應方法產生抗體或其片段相關之特定教導，係揭露於2006年5月8日提出申請之第11/429,053號美國專利申請案(美國專利申請公開案US 2006/0270045)中，其揭露內容在此完整地併入本案以為參考資料。
本專利申請案提出申請時所附序列表中所揭露的特定CGRP抗體聚核苷酸與多肽及該序列表的揭露內容，係在此完整地併入本案以為參考資料。
在本發明背景、詳細說明及實例中所引述各文獻的完整揭露內容(包括專利、專利申請案、期刊文章、摘要、手冊、書籍或其他揭露內容)，係在此完整地併入本案以為參考資料。
提出下列實例係為了提供該等具一般技藝者完整的揭露內容及說明如何製作與使用本發明，而並非意欲限制視為本發明之範圍。就所用數值(如量、溫度、濃度等)而言，已努力確保準確性，但應容許一些實驗誤差與偏差。除非另有說明，份係重量份，分子量係平均分子量， 溫度係以攝氏度數為單位；及壓力係大氣壓力或接近大氣壓力。
實例 第1例：CGRP結合型抗體之製備作用
藉由使用本文中所述之抗體篩選程序，可產生廣泛的抗體組。
免疫接種策略
用人類CGRPα(美國加州桑尼維爾(Sunnyvale)的美國胜肽(American Peptides)公司及美國加州托倫斯(Torrance)的巴亨(Bachem)公司)進行兔的免疫接種。免疫接種係首先皮下(sc)注射位於完全弗氏(Freund)佐劑(CFA)(西克瑪(Sigma)公司)中之100微克的抗原及混合100微克的KLH，接著注射分隔二個星期之二個補強劑，各補強劑含有50微克的抗原及與位於不完全弗氏(Freund)佐劑(IFA)(西克瑪(Sigma)公司)中的50微克混合。動物在第55天犧牲，及藉由ELISA(抗原辨識作用)與藉由抑制K-N-MC中由CGRP所驅動的cAMP增加，而測定血清效價。
抗體篩選效價之評估
為了識別與人類CGRP結合的抗體及進行特性分析，藉由ELISA測試含有抗體的溶液。簡言之，經中性卵白素塗佈的平皿(賽默科技(Thermo Scientific)公司)，使用在ELISA緩衝液(位於pH7.4的PBS中之0.5%魚皮明膠)中稀釋之胺基端生物素化人類CGRPα(每孔50微升，1微克/毫升)進行塗佈，其係在室溫進行約1小時或任擇地在4℃過 夜。然後在室溫進一步用ELISA緩衝液阻斷該等平皿1小時，及使用清洗緩衝液(PBS、0.05%妥文(Tween)20)清洗。所測試的血清試樣係使用ELISA緩衝液進行系列稀釋。將50微升的稀釋後血清試樣轉移至孔中，及在室溫培養1小時。在培養後，用清洗緩衝液清洗平皿。為進行顯影，在孔中添加一種抗兔特異性Fc-HRP(在ELISA緩衝液中進行1：5000稀釋作用)，及在室溫培養45分鐘。使用清洗溶液進行3次清洗步驟之後，該平皿係使用TMB受質在室溫顯影2分鐘，及使用0.5M氯化鈉將該反應驟冷。在450奈米讀取各孔的吸光度。
藉由功能性活性(對於CGRP所驅動的cAMP水平之抑制作用)測定血清試樣之效價
為了識別具功能性活性的抗體及進行特性分析，使用電致化學發光(Meso Scale Discovery公司(MSD公司))，分析對於CGRP所驅動的cAMP水平增加之抑制作用。簡言之，在一個96孔圓底聚苯乙烯平皿(寇斯塔(Costar)公司)中，在MSD分析緩衝液(4-羥乙基哌乙磺酸(Hepes)、氯化鎂、pH值為7.3、1毫克/毫升的阻斷劑A，Meso Scale Discovery公司)中進行待測試的抗體製劑之系列稀釋作用。在該平皿中，添加在MSD分析緩衝液中稀釋的人類CGRPα(最終濃度為10奈克/毫升)，及在37℃培養1小時。如分析套組製造商所建議，使用適當的對照組。使用EDTA溶液(於PBS中的5 mM溶液)使人類神經上皮瘤細胞(SK-N-MC，ATCC)剝離，及使用生長培養基(MEM、10% 的FBS、抗生素)而藉由離心作用清洗。將分析緩衝液中的細胞數目調整為每毫升2百萬個細胞，及在cAMP分析平皿中添加細胞之前，添加IBMX(3-異丁基-1-甲基黃嘌呤，西克瑪(Sigma)公司)至最終濃度為0.2 mM。當培養人類CGRPα抗體溶液1小時後，將20微升之含有細胞的溶液轉移至cAMP分析平皿。所測試的所有試樣皆以二重複進行，及具有適當的對照組。在孔中添加10微升的細胞，及該平皿在室溫與振盪下培養30分鐘。當細胞與CGRP溶液一起培養時，藉由在溶解緩衝液(MSD公司)中製作經TAG標記的cAMP(MSD公司)之1：200溶液，而製備終止溶液。為終止細胞-CGRP培養作用，在細胞中添加20微升的終止溶液，及該平皿在室溫與振盪下培養1小時。用水將讀取緩衝液(MSD公司)稀釋四次，及在平皿的所有孔中添加100微升。然後使用Sector Imager 2400(MSD公司)讀取該平皿，及使用Prism軟體進行數據擬合與測定IC50。
採集組織
一旦建立可接受的效價後，即犧牲兔子。採集脾臟、淋巴結及全血，及如下進行處理：藉由將脾臟與淋巴結的組織解離，及用20毫升注射器的柱塞推壓通過一個70微米的無菌金屬絲網(飛世爾(Fisher)公司)，而將脾臟與淋巴結處理成為單細胞懸浮液。在PBS中收集細胞。藉由離心作用清洗細胞二次。在最後一次清洗之後，藉由錐蟲藍測定細胞密度。細胞係於1500 rpm離心10分鐘；將上清液棄置。將細胞再懸浮於適當體積 之位於FBS(海克隆(Hyclone)公司)的10%二甲亞碸(DMSO，西克瑪(Sigma)公司)中，及按1毫升/小瓶分配。將小瓶置於慢速冷凍室中及於-70℃儲存24小時，及儲存於液態氮中。
藉由將全血與等份之上述不具有FBS的低葡萄糖培養基混合，而分離末梢血液單核細胞(PBMC)。在45毫升的錐形管(康寧(Corning)公司)中，在8毫升的兔淋巴細胞分離液(西達蘭(Cedarlane)公司)上小心地將35毫升的全血混合物分層，及在無制動情況下在室溫及2500 rpm離心30分鐘。在離心後，使用一個玻璃製巴斯德吸量管(VWR公司)小心地將PBMC層移出，加以合併及置於一個乾淨的50毫升小瓶中。藉由在室溫與1500 rpm離心10分鐘，用上述改良型培養基清洗細胞，及藉由錐蟲藍染色作用測定細胞密度。在最後一次清洗之後，將細胞再懸浮於適當體積的10% DMSO/FBS培養基中，及如上述冷凍。
B細胞之篩選、富集及培養條件
在設置B細胞培養當天，將PBMC、脾細胞或淋巴結小瓶解凍待用。從液態氮槽中取出小瓶，及置於37℃水浴中直至解凍為止。將小瓶的內容物轉移至15毫升的錐形離心管(康寧(Corning)公司)中，及在管中緩慢添加10毫升的上述改良型RPMI。細胞係於2K RPM離心5分鐘，及將上清液棄置。將細胞再懸浮於10毫升的新鮮培養基中。藉由錐蟲藍測定細胞密度與存活性。
a)下列操作程序係用於Ab1與Ab13
如下將細胞與生物素化型人類CGRPα預混合。再度清洗細胞及依1E07個細胞/80微升培養基而再度懸浮。依5微克/毫升的最終濃度，在細胞懸浮液中添加生物素化型人類CGRPα，及於4℃培養30分鐘。使用10毫升PBF[無鈣/鎂型PBS(海克隆(Hyclone)公司)、2 mM乙烯二胺四醋酸鹽(EDTA)、0.5%牛血清白蛋白(BSA)(西克瑪(Sigma)公司之無生物素型)]進行清洗二次，而除去未結合的生物素化型人類CGRPα。在第二次清洗之後，再度依1E07細胞/80微升PBF將細胞懸浮，及在細胞懸浮液中依每10E7細胞添加20微升的MACS®鏈黴抗生物素蛋白珠(美國加州奧本(Auburn)的美天旎生技(Miltenyi Biotech)公司)。細胞與珠係於4℃培養15分鐘，及每10E7細胞以2毫升的PBF清洗一次。
b)下列操作程序係用於Ab4、Ab7、Ab9及Ab11：
如下將生物素化型人類CGRPα預加載至鏈黴抗生物素蛋白珠上。將75微升的鏈黴抗生物素蛋白珠(美國加州奧本的美天旎生技公司)與胺基端經生物素化的huCGRPα(最終濃度為10微克/毫升)及300微升的PBF混合。在4℃培養該混合物30分鐘，及使用MAGS®分離管柱(美天旎生技公司)將未結合的生物素化型人類CGRPα移除，及用1毫升的沖洗液除去未結合的物質。然後將物質取出，再將上述細胞依每1E7個細胞100微升之方式再度懸浮，然後在4℃培養該混合物30分鐘，及以10毫升的PBF清洗一次。
下列係適用於a)與b)二者的操作程序：在清洗 後，將細胞再懸浮於500微升的PBF中及擱置待用。在一磁性架(美天旎公司)上，用500毫升的PBF預沖洗MACS®MS管柱(美國加州奧本的美天旎生技公司)。經由一預濾器將細胞懸浮液施用至管柱，及收集結合的部分。用2.5毫升的PBF緩衝液清洗該管柱。將管柱從磁性架移開，及置於一個乾淨、無菌的1.5毫升微量試管上。在管柱頂部添加1毫升的PBF緩衝液，及收集陽性篩選細胞。藉由錐蟲藍染色作用測定陽性細胞部分的產率與存活性。陽性篩選作用所獲得者係平均為起始細胞濃度的1%。
建立先導性細胞篩選，以提供有關供培養用的接種水平之資訊。平皿係依10、25、50、100或200個富集性B細胞/孔接種。此外，各孔含有最終體積為250微升/孔之位於高葡萄糖改良型RPMI培養基中之50K個細胞/孔之經輻射的EL-4.B5細胞(5,000雷得(rad))及一適當水平的活化型兔T細胞上清液(參見美國專利申請公開案20070269868)(依製備作用而自1至5%)。培養物係在4%二氧化碳中及於37℃培養5至7天。
藉由抗原辨識作用(ELISA)之B細胞培養篩選
為識別產生抗人類CGRPα抗體之孔，使用所述藉由抗原辨識作用(ELISA)測定血清試樣效價的相同操作程序，及其變化如下。簡言之，用胺基端與羧基端生物素化的人類CGRPα之混合物(每孔50微升及各為1微克/毫升)進行塗佈經中性卵白素塗佈的平皿。B細胞上清液試樣(50微升)未經事先稀釋即進行試驗。
使用CGRP所驅動的cAMP生產作用來辨識B細胞上清液中的功能性活性
為測定B細胞上清液中所含有的功能性活性，使用所述用於測定血清試樣的功能性效價之一類似程序，及其修改如下。簡言之，使用B細胞上清液(20微升)來取代稀釋後的多株血清試樣。
抗原特異性B細胞之分離作用
將含有所感興趣的孔之平皿從-70℃移出，及每孔使用200微升的培養基(10% RPMI完整型，55 μM BME)清洗五次，而從各孔回收細胞。藉由離心作用將所回收的細胞沉澱，及小心移除上清液。將沉澱後的細胞再懸浮於100微升的培養基中。為識別表現抗體的細胞，用胺基端與羧基端生物素化的人類CGRPα之組合物，塗佈經鏈黴抗生物素蛋白塗佈的磁珠(英杰(Invitrogen)公司之M280岱拿珠(dynabead))。藉由系列稀釋作用而最佳化個別的生物素化型人類CGRPα吡量。然後將含有約4x10E7個經塗佈的珠之100微升與再懸浮的細胞混合。在該混合物中添加15微升之在培養基中進行1：100稀釋的山羊抗兔H&L IgG-FITC(傑克森免疫研究(Jackson Immunoresearch)公司)。
取出20微升的細胞/珠/抗兔H&L懸浮液，及以5微升的液滴分配至先前經西克瑪寇(Sigmacote)(西克瑪(Sigma)公司)處理的一個單孔式載玻片上，總計每個玻片35至40液滴。使用石蠟油的防滲障壁(貝克(JTBaker)公司)來浸沒該等液滴，及在37℃與4%二氧化碳的培養箱中，在黑 暗中培養玻片90分鐘。
可藉由抗體分泌作用所產生的周圍螢光環、與珠相關聯的生物素化抗原之辨識作用及後續藉由螢光-IgG檢測試劑之檢測作用，辨識出產生抗體的特定B細胞。 一旦辨識出所感興趣的一細胞後，則經由顯微操作器(艾本德(Eppendorf)公司)回收。將合成與輸出抗體的細胞轉移至一微離心管中，使用乾冰冷凍及儲存於-70℃。
來自抗原特異性B細胞的抗體序列之擴增與定序
使用一種組合型RT-PCR式方法，從所分離的單個B細胞回收抗體序列。設計含有限制酵素的引子，而在標的免疫球蛋白基因(重鏈與輕鏈)諸如兔免疫球蛋白序列的保留與固定區中黏合，及使用一種二步驟套式PCR回收作用來擴增該抗體序列。分析來自各孔的擴增子之回收作用與尺寸完整性。所得的片段然後用AluI剪切而製作序列選殖性的酶解圖譜。相同序列在其等的電泳分析中展示一共同的分段模式。然後使用PCR引子內所含有的限制酵素位點剪切原始的重鏈與輕鏈擴增子片段，及選殖置入一表現載體中。擴增及純化含有次選殖DNA片段的載體。在表現作用之前，確認所次選殖的重鏈與輕鏈之序列。
具所欲抗原特異性及/或功能性質的單株抗體之重組生產作用
為測定從特定B細胞所回收的抗體之抗原特異性與功能性質，將驅動所欲的成對重鏈與輕鏈序列表現之載體轉染至HEK-293細胞中。
藉由ELISA之重組型抗體的抗原辨識作用
藉由ELISA測試含有抗體的溶液，而進行重組表現型抗體對於人類-CGRPα的結合能力之特性分析。所有培養作用皆在室溫進行。簡言之，用含有CGRPα的溶液(於PBS中為1微克/毫升)，塗佈Immulon IV平皿(賽默科技(Thermo Scientific)公司)達2小時。經CGRPα塗佈的平皿然後在清洗緩衝液(PBS、0.05%妥文(Tween)-20)中清洗三次。然後使用一阻斷溶液(PBS、0.5%魚皮明膠、0.05%妥文(Tween)-20)阻斷該等平皿約1小時。然後將阻斷溶液移除，該等平皿然後與所試驗抗體的稀釋系列培養約1小時。在培養結束時，用清洗緩衝液清洗平皿三次，及進一步與含有二級抗體的一溶液(具Fc片段特異性之過氧化酶標記型亞芬普爾(affinipure)F(ab’)2片段山羊抗人IgG(傑克森免疫研究(Jackson Immunoresearch)公司)培養約45分鐘，及清洗三次。在該時點一受質溶液(BioFx公司的TMB過氧化酶受質)及在黑暗中培養3至5分鐘。藉由添加含有鹽酸的一溶液(0.5M)而終止反應，及在一平皿分析儀中，在450奈米讀取該平皿。
結果：第15至18圖顯示抗CGRP抗體Ab1至Ab14與CGRPα結合及辨識CGRPα。
藉由調控CGRP所驅動的細胞內cAMP水平及對於大鼠的交叉反應性而進行重組型抗體的功能性特徵分析
為分析重組表現型抗體對於CGRPα所媒介的cAMP細胞水平增加之抑制能力，使用一種電致化學發光分 析套組(Meso Scale Discovery公司，MSD)。簡言之，在一個96孔圓底聚苯乙烯平皿(寇斯塔(Costar)公司)中，在MSD分析緩衝液(4-羥乙基哌乙磺酸(Hepes)、氯化鎂、pH值為7.3、1毫克/毫升的阻斷劑A，Meso Scale Discovery公司)中進行待測試的抗體製劑之系列稀釋作用。在該平皿中，添加在MSD分析緩衝液中稀釋的人類CGRPα(最終濃度為25奈克/毫升)，及在37℃培養1小時。如分析套組製造商所建議，使用適當的對照組。使用EDTA溶液(5 mM)使人類神經上皮瘤細胞(SK-N-MC，ATCC)剝離，及使用生長培養基(MEM、10%的FBS、抗生素)而藉由離心作用清洗。將分析緩衝液中的細胞數目調整為每毫升2百萬個細胞，及在cAMP分析平皿中添加細胞之前，添加IBMX(西克瑪(Sigma)公司之50 mM的3-異丁基-1-甲基黃嘌呤)至最終濃度為0.2 mM。當培養人類CGRPα抗體溶液1小時後，將20微升之含有細胞的溶液轉移至cAMP分析平皿。所測試的所有試樣皆以二重複進行，及具有適當的對照組。在孔中添加10微升的細胞，及該平皿在室溫與振盪下培養30分鐘。當細胞與CGRP溶液一起培養時，藉由在溶解緩衝液(MSD公司)中製作經TAG標記的cAMP(MSD公司)之1：200溶液，而製備終止溶液。為終止細胞-CGRP培養作用，在細胞中添加20微升的終止溶液，及該平皿在振盪下培養1小時。用水將讀取緩衝液(MSD公司)稀釋四次，及在平皿的所有孔中添加100微升。然後使用Sector Imager 2400(MSD公司)讀取該平皿，及使用Prism軟體進行數據擬合與測定IC50。
為試驗重組型抗體對於人類CGRPβ之拮抗能力，用CGRP促效劑(CGRPβ的最終濃度為10奈克/毫升)取代而進行一類似分析。使用大鼠CGRP(最終濃度為5奈克/毫升)與大鼠L6細胞株(ATCC)，評估重組型抗體對於大鼠CGRP媒介型cAMP生成作用之辨識與抑制。
結果：第19至37圖表明抗CGRP抗體Ab1至Ab14抑制CGRPα、CGRPβ及大鼠CGRP媒介型細胞cAMP水平之增加。
第2例：Fab片段之酵素性生產作用
按照製造商的說明，使用固定化木瓜酶(賽默/皮爾斯(Thermo/Pierce)公司)進行木瓜酶酶切作用。簡言之，在含有半胱胺酸/鹽酸的緩衝液中，純化抗體在37℃與溫和搖動下與固定化木瓜酶一起培養。藉由取一等分試樣及使用SDS-PAGE分析重鏈之剪切，而監測酶切作用。為終止反應，將固定化木瓜酶離心除去，及使用pH 7.5的50 mM Tris清洗及加以過濾。藉由使用MabSelectSure(GE)管柱，將未剪切的全長抗體與Fc片段移除。
第3例：酵母菌細胞表現作用 用於重鏈與輕鏈的巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)表現載體之建構作用
將商業合成的人化輕鏈與重鏈片段次選殖至一個pGAP表現載體中。PGAP表現載體使用GAP啟動子來驅動供輸出用的免疫球蛋白鏈與人類血清白蛋白(HSA)引導序列之表現作用。此外，該載體含有共同元件，諸如一 細菌複製起點及一套的卡那黴素(Kanamycin)抗性基因，該抗性基因賦予巴斯德畢赤酵母(P.pastoris)對於抗生素G418之抗性。G418提供對於含有導入其等基因體中的所欲表現載體之菌株之一種篩選方式。
將表現載體轉形至巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)的單倍體met1與lys3宿主菌株中之轉形作用
用於單倍體巴斯德畢赤酵母(P.pastoris)菌株的轉形作用及巴斯德畢赤酵母(P.pastoris)生殖週期的操控作用之所有方法，係如“畢赤酵母屬操作程序(Pichia Protocols)”(美國紐澤西州托托瓦(Totowa)的胡馬納出版社(Humana Press)於1998年出版及由Higgings,DR與Cregg,JM編輯之“分子生物學方法(Methods in Molecular Biology)”乙書)中所述進行。在轉形之前，在GAP啟動子序列內將各載體直線化，以引導載體嵌入巴斯德畢赤酵母(P.pastoris)基因體的GAP啟動子基因座。使用電穿孔進行單倍體菌株的轉染作用，及在YPDS(酵母菌萃取液、蛋白腖右旋葡萄糖及山梨糖醇)G418瓊脂平皿上篩選成功轉形體。藉由南方墨點分析法測定單倍體菌株的重鏈與輕鏈基因套數。然後進行單倍體菌株配對，及就其等在缺乏胺基酸標記(亦即離胺酸與甲硫胺酸)之情況下的生長能力進行篩選。所產生的二倍體植株然後進行最終的南方墨點分析，來確認重鏈與輕鏈基因的套數。使用生物薄膜干涉技術的蛋白A生物感測器來監測表現作用(弗泰生物(ForteBio)公司之八位組(Octet)系統)，而篩選表現所感興趣的抗體之一 植株。
第4例：Ab3、Ab6與Ab14於巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)中之表現作用
製作用於表現全長抗體的三種畢赤酵母屬(Pichia)菌株。就所有表現全長抗體的菌株而言，創建單倍體菌株及進行後續配對。一單倍體菌株表現全長輕鏈序列，而另一單倍體菌株表現全長重鏈序列。使用各個二倍體菌株來產生一研究細胞庫，及供用於一生物反應器中的表現作用。
首先使用包含下列營養素(重量/體積%)的培養基，使用該研究細胞庫擴增接種體：3%的酵母菌萃取液、4%的無水右旋葡萄糖、1.34%的YNB、0.004%的生物素及100 mM的磷酸鉀。為生產供發酵槽所用的接種體，在30℃與300 rpm的振盪式培養箱中擴增該細胞庫約24小時。然後將10%接種體添加至作業容積為2.5公升的拉弗斯(Labfors)容器中，該容器中含有1公升的無菌生長培養基。該生長培養基係由下列營養素所組成：18.2克/公升的硫酸鉀、36.4克/公升的磷酸二氫銨、12.8克/公升的磷酸氫二鉀、3.72克/公升的七水合硫酸鎂、10克/公升的二水合檸檬酸鈉、40克/公升的甘油、30克/公升的酵母菌萃取液、4.35毫升/公升的PTM1微量金屬及2041.67毫升/公升的消泡劑。PTM1微量金屬溶液係由下列組分所組成：6克/公升的五水合硫酸銅、0.08克/公升的碘化鈉、3克/公升的硫酸錳水合物、0.2克/公升的二水合鉬酸鈉、0.02克/公升的硼酸、0.5 克/公升的氯化鈷、20克/公升的氯化鋅、65克/公升的七水合硫酸亞鐵、0.2克/公升的生物素及5毫升/公升的硫酸。
生物反應器的製程控制參數之設定如下：攪拌作用為1000 rpm，氣流為每分鐘1.35標準公升，溫度為28℃及使用氫氧化銨將pH值控制在6。並未提供氧氣之補充。
讓發酵培養物生長約12至16小時直至如溶氧激增所示之初始甘油耗盡為止。在溶氧激增後，讓培養物飢餓約3小時。在該飢餓期間之後，在反應器中添加大量乙醇，而使乙醇達到1%(重量/體積)。讓發酵培養物達到平衡達15至30分鐘。在添加大量乙醇之30分鐘後，開始添加進料及設定在1毫升/分鐘的恆定速率達40分鐘，然後使用乙醇感測探針(雷文生物科技(Raven Biotech)公司)，藉由乙醇感測器控制進料幫浦，而在剩餘的操作期間將乙醇濃度維持在1%。進料係由下列組分所組成：50克/公升的酵母菌萃取液、500克/公升的右旋葡萄糖、3克/公升的七水合硫酸鎂及12毫升/公升的PTM1微量金屬。就全長Ab6與Ab14的發酵作用而言，亦在進料中添加二水合檸檬酸鈉(0.5克/公升)。總發酵時間約為90小時。
第5例：人化抗體之方法
人化抗體之方法先前曾述於所頒證之第7935340號美國專利，其揭露內容在此完整地併入本案以為參考資料。在一些情況下，需判定活性之維持是否需要附加的兔架構殘基。在一些情況下，人化抗體仍需要保留一 些關鍵性兔架構殘基，以將親和性或活性之損失降至最低。在該等情況下，需要將人類胚系序列的一或多個架構胺基酸改回原有的兔胺基酸，方能具有所欲活性。該等改變係由實驗方式測定，而識別哪些兔殘基係保留親和性與活性所需。如今這是可變重鏈與輕鏈人化胺基酸序列的終端。
第6例：抑制CGRP與其細胞受器的結合作用
為分析重組表現型抗體對於CGRP與其細胞受器結合作用之抑制能力，如先前所述[Elshourbagy等人於期刊“Endocrinology”第139期第1678頁(1998年)乙文；Zimmerman等人於期刊“Peptides”第16期第421頁(1995年)乙文]進行一種放射性配位體結合分析。使用重組型人類CGRP受器、降血鈣素受器類受器及RAMP1(密里博(Millipore)公司的化學篩(Chemiscreen))之膜製備作用。抗體稀釋液係與經125碘放射性標記的人類CGRPα(0.03nM)在室溫預培養30分鐘。估算在0.1 μM人類CGRPα存在下之非特異性結合。將膜過濾及清洗。然後進行過濾器之計數，以測定特異性結合之經125碘放射性標記的人類CGRPα。結果：第38圖顯示抗CGRP抗體Ab1-Ab13抑制CGRP與其細胞受器的結合作用。
第7例：抗CGRP抗體在大鼠中對於神經源性血管舒張之抑制作用
CGRP係一強力的血管舒張劑(期刊“Nature”第313期第54-56頁(1985年)乙文與期刊“Br J.Clin. Pharmacol.”第26(6)期第691-5頁(1988年)乙文)。使用以非侵入性方式測量CGRP受器拮抗劑活性之一種藥力學分析法，來進行抗CGRP抗體的特性分析。該模式係仰賴在局部施用辣椒素溶液之後，使用雷射都卜勒(Doppler)成像技術所測量的皮膚血流量變化。辣椒素活化瞬時受器電位類香草素第一型受器(TRPV-1)，產生神經源性發炎及經由局部釋出血管活性介質包括CGRP與物質P，而產生血管舒張作用(期刊“Br J.Pharmacol.”第110期第772-776頁(1993年)乙文)。
在進行血管舒張分析之前一天，經由IP(腹膜內)對動物投予試驗劑或對照組。在給藥之後，將動物的背側下背部區域剃光除毛，該區域約2x6公分。然後將動物各歸回籠中過夜。在試驗當天，即給藥後約24小時，用愛沙氟倫(isoflurane)氣體將動物麻醉及放置在一控溫式加熱墊上，及裝上鼻錐以持續輸送愛沙氟倫。雷射都卜勒成像器係用於觀察血管舒張作用。將藉由633奈米氦氖雷射所產生的一束同調紅光導向該剃毛區域，即一矩形區域(2x6公分)，及以中等分解析度模式掃描。首先獲得一基線都卜勒掃描，及藉由識別二個類似的低通量區域而預先決定O型環放置位置。將二個橡膠O型環(直徑約1公分)放置在所選定區域，及進行基線掃描。當掃描完成後，立即各在二個O型環內施用位於5微升的乙醇：丙酮溶液(1：1)中的1毫克辣椒素。在施用辣椒素之2.5、5、7.5、10、12.5、15、17.5、20、22.5、25、27.5及30分鐘後，重複進行都卜勒掃描。將 二個O型環內各相較於基線平均通量的變化百分比，繪製作為由於辣椒素之血管舒張結果。
為試驗重組表現型抗體對於CGRP與其細胞受器的結合作用之抑制能力，如先前所述進行一種放射性配位體結合分析。
結果：第39與40圖表明在投予辣椒素之後，抗CGRP抗體Ab3與Ab6在模式中減少血管舒張作用。
第8例：抗CGRP抗體在二種小鼠品系(Nestin/人類RAMP1基因轉殖型小鼠與C57BL/6J小鼠)中阻斷CGRP所引發的腹瀉之用途
最初係基於CGRP抗體對於CGRP所引發的畏光症或懼光之效應之研究，而發現CGRP抗體可用於預防或治療CGRP所引發的腹瀉。其確立偏頭痛的特點之一係畏光症或對光線的敏感性增加[Mulleners等人於期刊“Headache”第41期第31-39頁(2001年)乙文；Recober等人於期刊“J.Neuroscience”第29期第8798-8804頁(2009年)乙文]。亦已知偏頭痛患者對於CGRP所引發的頭痛敏感，而非偏頭痛患者則不然[期刊“Neurology”第22期第241-246頁(2009年)乙文中之回顧評論)]。CGRP與稱作CLR(降血鈣素類受器)的一種G蛋白偶合受體結合，CLR係與第1型受器活性改質蛋白(RAMP1)相伴作用在CGRP的結合與傳訊之媒介作用上。在試管中，CGRP活性係因CGRP受器的RAMP1次單元之過度表現作用而大幅提高[(期刊“J.Neurosci.”第27期第2693-2703頁(2007年)乙文]。為研究小鼠的懼光行 為，建立一種nestin/人類-RAMP1基因轉殖型小鼠模式[Recober等人期刊“J.Neuroscience”第29期第8798-8804頁(2009年)乙文；Russo等人於期刊“Mol.Cell.Pharmacol.”第1期第264-270頁(2009年)乙文]。當暴露於CGRP時，該等小鼠展現與偏頭痛相關聯的症狀，特別是懼光(文獻同上)。該操作程序詳述如下。
懼光作用之操作程序
在標準條件下每籠飼養2至5隻小鼠，來試驗抗CGRP抗體阻斷CGRP所引發的畏光症之能力，光週期為12小時(美國中部標準時間早上5點鐘/美國中部夏令時間早上6點開燈及美國中部標準時間下午5點/美國中部夏令時間下午6點關燈，及可自由取用水與飼料。研究中所用的小鼠係包括在含有二個轉殖對偶基因Tg(Nes-cre)1Kln/J與Tg(RAMP1)對偶基因(B6；SJL-Tg(Nes-cre)1KlnTg(RAMP1)之基因型Nestin/hRAMP1的小鼠群體中。在B6基因背景上，藉由自傑克森(Jackson)實驗室(種源003771)獲得的小鼠之子代間互配，而將Nes-cre導入該等小鼠中。
用於操作程序中的對照組小鼠係非基因轉殖型或含有轉殖基因nestin-cre或Cx1-GFP-hRAMP1的單一基因轉殖型(未表現hRAMP1)之同窩小鼠。在隔離設施中，藉由將CX1-GFP-hRAMP1小鼠與非基因轉殖型同窩小鼠回交，而維持種源群。為進行行為研究，在非隔離設施中，藉由將CX1-GFP-hRAMP1單一基因轉殖型與nestin-cre小鼠交配而維持小鼠群體。所有小鼠的管理係遵循愛荷華大學 動物管理與使用委員會所核准之動物管理與程序，及進一步按照國家衛生研究院的標準執行。
該操作程序中所用的材料與設備包括一個光/暗箱及試驗箱(美國佛蒙特州聖阿爾班(St.Albans)之麥德聯營(Med Associates)有限公司)，該試驗箱包括含有16束紅外線陣列之一樹脂玻璃開放空間(27x27x20.3公分)。藉由對於可見光而言不透明的一個暗色插片物，將光/暗箱分為兩個同樣大小的區域。在暗色插片上有個開口(5.2x6.8公分)而容許小鼠在二個區域之間自由移動。將該試驗箱放置在一個聲音衰減及具有風扇通風的櫃(56x38x36公分)(麥德聯營有限公司)中。整個系統有6個試驗箱，及由用於記錄與收集數據的電腦軟體(麥德聯營有限公司)加以整合。
用於監測結果的軟體為活性監測(Activity Monitor)第6.02版(麥德聯營有限公司)。記錄時所採用的軟體設定包含：解析度為50 ms，箱的尺寸為3，靜息延遲為500 ms，動態觸發為3，工作階段類型為C，工作階段時間為20分鐘，阻斷間隔為300秒，及壓縮檔為DEFAULT.ZIP。
在操作程序中，各箱的光源係裝設在聲音衰減櫃的天花板上之一個LED面板。LED面板含有36個準直的1瓦特LED燈泡(5500k日光白型)(美國加州柏林根(Burlingame)的LED批發商(LEDwholesalers)公司)。為控制光強度，各LED面板係與一可調光式LED驅動器連接(美國加州聖荷西之美國愛爾多LED(eldoLED America)有限公司的線性驅動器(LINEARdrive))，使得可能的光強度範圍係自 約300至27,000勒克司(lux)。標準光強度約為1000至1200勒克司(lux)，除非另有說明。
藉由將一個簡易型規格30x0.5英吋的針插入非不透射線的聚乙烯管材(內徑0.38毫米及外徑1.09毫米)，而手工製作所用的注射器。使用上述管材，在針上放置一個塞子(長度約為1公分)，而留下約2.5毫米的斜面未被覆蓋。該等注射器係與10微升的漢米爾頓(Hamilton)注射筒連接。
以腦室注射方式對於小鼠注射在杜貝可(Dulbecco)經磷酸鹽緩衝的生理食鹽水(D-PBS)(海克隆(Hyclone)公司)中稀釋的大鼠α-CGRP(西克瑪(Sigma)公司)。所輸送的總劑量為0.5奈莫耳。例如，在250或500微升的無菌PBS中稀釋250或500微克的CGRP，使得最終濃度為1微克/微升。CGRP係於-20℃儲存，及冷凍解凍該等分試樣至多一次。PBS係於4℃儲存。
對於小鼠投予本文中所揭露的一種例示性抗CGRP抗體(Ab3)，其在投藥之前係於4℃儲存。在該操作程序中，在抗體的投藥作用之前，亦即在試驗之約24小時前，進行小鼠稱重，然後領受全身性(腹膜內(ip))注射劑量為30毫克/公斤之載劑、對照組抗體(抗長葉毛地黃苷抗體)或CGRP-結合抗體。亦篩選檢查小鼠是否具有可能影響該分析法之任何異常身體狀況，諸如缺少一眼、白內障或其他異常狀況諸如理毛行為等。在投予抗體那日之後，用推車將籠中的小鼠從動物房送至行為房中，及在進行任何注射 或試驗之前，讓其等適應至少1小時。從籠子移開運送時所需的任何覆蓋物，在適應期間開啟正常光照條件(標準頂部螢光照明)，及在該程序的剩餘期間皆維持開啟狀態。此外，在適應期間開啟所有發出聲音的設備，包括麻醉裝置、光/暗箱及LED面板，及維持開啟狀態直至試驗完成為止。在適應期間，人類通常儘可能少在該房間出現。
在適應後，將各小鼠置於吸氣室中，及投予3.5%愛沙氟倫(isoflurane)。在小鼠被麻醉後，將其轉移至鼻錐及維持3.5%愛沙氟倫的投藥作用，使得小鼠在注射期間維持被麻醉狀態。之後，使用注射器，藉由瞄準前囪後方1毫米及中線右方1毫米處，穿過完好無損的頭皮直接注射至右側腦室中，而完成藥物投藥作用。
通常為了一致性起見，所有注射係由受訓過一段期間的同一人員進行，其藉由注射染料至腦室中所顯示的成功率係高於90%。所注射的藥物係2.0微升的載劑(D-PBS)微升抑或位於2.0微升載劑中的2.0微克CGRP(1微克/微升)，其係如前述[Recober等人期刊“J.Neuroscience”第29期第8798-8804頁(2009年)乙文]，藉由瞄準前囪後方1毫米及中線右方1毫米處，穿過完好無損的頭皮直接注射至右側腦室中而投予。在輸送2.0微升完畢之後，讓針留置在原處10秒，然後再移除。然後記錄注射時間。
小鼠在注射之後，在試驗前在用紙巾作為墊料之未被覆蓋的空籠中恢復30分鐘。在恢復期間，記錄下列事項：腹瀉、排尿過多、注射後出血、異常行為諸如靜 止不動、抽搐等。基於該等觀察，而判定相對於僅投予CGRP與對照組(載劑或載劑中的對照組抗體)之基因轉殖型小鼠，抗CGRP抗體的投藥作用是否在投予抗體及稍後在腦室投予CGRP的基因轉殖型小鼠中對於CGRP所引發的腹瀉具有效用(預防性或紓緩性)。在該操作程序中，抑制CGRP所引發的腹瀉之抗體被認定為可能適用於治療或預防急性或慢性腹瀉，尤其是與CGRP水平升高相關聯之腹瀉。
在恢復30分鐘後，進行光程序試驗。將各隻小鼠沿著光亮區約略中央的後牆放置(離二區中間開口之最遠處)。此時即開始記錄。一次最多可試驗6隻小鼠(每箱1隻小鼠)。在試驗期間，將裝有試驗箱的架子推回櫃中及將門關閉。該軟體記錄小鼠的動作達20分鐘。在記錄完畢之後，將各隻小鼠取出且置回居籠中，及送回動物房。
結果
使用該操作程序，證實在本文中稱為Ab3之艾爾德生物製藥(Alder Biopharmaceuticals)公司所研發的一種抗CGRP抗體，造成基因轉殖型小鼠在光中停留統計上顯著量的時間。(因與另一不同發明相關而未顯示該等結果，該發明係揭露於2011年6月14日提出申請之第61/496,860號美國暫准申請案(代理人案號67858.760000)及與本申請案同日提出申請之美國序號＿＿＿(代理人案號67858.730303)，及該申請案在此併入本案以為參考資料)。
就與本發明相關部分而言，發現在該等實驗期間，經相同的艾爾德(Alder)抗CGRP抗體(Ab3)治療之小 鼠並未發生CGRP相關型腹瀉。雖然在懼光研究所用及未投予抗CGRP抗體的基因轉殖型小鼠中之大多數，CGRP投藥作用引發腹瀉；然而在領受CGRP投藥作用及進一步以全身方式(腹膜內方式)投予Ab3的相同基因轉殖型小鼠中，未觀察到腹瀉。
該等結果係示於第41圖中。更具體地，第41圖包含實驗結果，其中顯示以腦室內(ICV)方式注射的CGRP在基因轉殖型Nestin/hRamp1小鼠中之效應。數據顯示以ICV方式注射的大鼠CGRP在Nestin/hRAMP1 tg小鼠中引發腹瀉，而腹膜內注射Ab3(在CGRP投藥前約24小時投予30毫克/公斤)在nestin/hRAMP1 tg小鼠中抑制腦室內(ICV)所注射的CGRP所引發之腹瀉。
從圖中可看出，未領受CGRP的所有基因轉殖型Nestin/hRamp1小鼠(僅投予IP載劑與ICV載劑的小鼠)並未發生腹瀉。在該等研究中，RAMP1基因轉殖型C57/BL6J小鼠領受大鼠CGRP(α)。
相反地，在領受ICV方式投予的大鼠CGRP及進一步投予對照組(位於IP載劑中或IP與ICV載劑的組合物中之對照組抗體)之相同基因轉殖型小鼠中，大多數發生腹瀉(分別在領受CGRP與抗體或載劑對照組的小鼠中之90%或約80%觀察到)。最顯著地，第41圖的數據顯示領受艾爾德(Alder)Ab3抗體與CGRP之所有基因轉殖型小鼠並未發生腹瀉。
此外，在非基因轉殖型小鼠(C57BL/6J小鼠) 中進行實驗。相較於使用Nestin/hRAMP1小鼠之先前研究，對於C57/BL6J品系投予人類CGRP(α)。該等實驗得到類似的結果，亦即抗CGRP抗體在該等動物中防止CGRP相關型腹瀉。該等結果共同表明，與CGRP特異性結合之抗體(及抑制CGRP/CGRP受器交互作用之可能的其他多肽)可在不同個體中用於抑制CGRP相關型腹瀉，及用於治療諸如在本文中提及之該等涉及CGRP水平過量的不同病況或療法。
第42至44圖包含在非基因轉殖型(C57BL/6J小鼠)中進行之該等類似的CGRP實驗之結果。該等結果顯示，相同的抗CGRP抗體(Ab3)在領受人類CGRP的C57BL/6J小鼠中防止腹瀉。相反地，在領受人類CGRP(α)與相同對照組之C57BL/6J小鼠中，大多數發生腹瀉。
更詳細地，第42圖包含實驗結果，其顯示人類CGRP(與大鼠CGRP類似)之腦室內(ICV)注射作用在C57BL/6J小鼠中以具劑量依賴性方式引發腹瀉。數據亦顯示在經由腦室內注射投予2.0微克的人類CGRP之C57BL/6J小鼠中，約80%發生腹瀉；而領受對照組或較低量的人類CGRP(0.4微克)之小鼠皆未發生腹瀉。
第43圖包含附加實驗之結果，其顯示腹膜內注射Ab3(在CGRP投藥前約24小時以腹膜內方式投予30毫克/公斤)在C57/BL6J小鼠中抑制經ICV方式注射的CGRP所引發之腹瀉。相反地，對照組抗體或載劑之投藥作用對於經ICV注射的CGRP所引發之腹瀉並無效應。
第44圖包含附加實驗之結果，其顯示Ab3(在 人類CGRP投藥前約24小時以腹膜內注射方式投予30毫克/公斤)在C57/BL6J小鼠中抑制IP注射的CGRP所引發之腹瀉。相反地，位於與Ab3相同的載劑中之對照組抗體之投藥作用對於CGRP所引發之腹瀉並無效應。
在不同的小鼠品系中所獲得的該等結果令人信服地表明，一種抗CGRP抗體或抗體片段的投藥作用可防止或改善腹瀉，尤其與CGRP水平升高相關聯的病況中之腹瀉。該等結果進一步顯示，當藉由二種不同方式(腹膜內或腦室內注射作用)投予CGRP時獲得類似的預防性效應，及對於不同的物種具有特異性。因此，不論是經由全身性或經由ICV注射作用而局部性輸送，抗CGRP抗體顯然能夠與CGRP有效結合及防止其不良的腹瀉作用。
此外，結果顯示經投予CGRP的囓齒動物中之分析法，可用於評估一種候選的抗CGRP抗體或另一CGRP/CGRP受器多肽抑制劑是否可用於抑制或治療特徵在於CGRP過量之胃腸功能失調或其他病況，該等胃腸功能失調或其他病況係涉及排便、電解質平衡及/或液體排出之異常，及尤其是腹瀉。該等病況例如包括發炎性腸道疾病，細菌或病毒所引發之腹瀉。功能性腸道異常疾病係選自由下列所組成之群組：胃食道逆流、消化不良、激躁性腸症候群、功能性腹痛症候群、憩室病與憩室炎、克隆氏(Crohn)症、迴腸炎、膠原性結腸炎、淋巴球性結腸炎及潰瘍性結腸炎及與腹瀉相關聯的癌症與癌症治療，如甲狀腺髓質癌或結腸直腸癌及先前所指出之其他病況。
第9例：CGRP抗體投藥作用對於結腸排出之效應
在C57BL/6小鼠中進行實驗，來評估CGRP抗體投藥作用對於治療或預防腹瀉及相關胃腸功能失調之潛在功效。相較於第8例中使用C57BL/6J小鼠之實驗，本實驗採用較高劑量的CGRP與較低劑量的抗體；然而，Ab3與Ab6仍有效減少腹瀉發生率。
方法
將6至8個星期大的雄性C57BL/6小鼠(哈倫實驗室(Harlan Laboratories)公司)個別眷養在習用的透明聚碳酸酯籠或透明/黃色的聚碳酸酯微隔離籠，籠中有認證之經輻射照射的接觸墊料，及讓小鼠適應研究設施至少24小時。提供飼料與水供自由取食。設定環境控制而將溫度維持在攝氏18至26度(華氏64至79度)，相對濕度為30%至70%。維持12：12小時的光：暗週期。
基於到達次日之體重，將動物隨機分成四個治療組(每組10隻動物)。審查各組的平均體重，以確保平均數值與標準偏差滿足同質性之假設。
在第1天，對於治療組1與2投予負對照組抗體(與抗CGRP抗體相同之同型)，及第3與4組分別領受抗體Ab3與Ab6(所有抗體係以腹膜內方式按10毫克/公斤投予及劑量體積為2.63毫升/公斤)。
在第2天，以腹膜內方式對於治療組2、3與4投予CGRP(0.05毫克/公斤及劑量體積為3.33毫升/公斤)，及以腹膜內方式對於第1組投予等劑量體積之經磷酸鹽緩衝的 生理食鹽水。在給藥後，立即將動物置於其等居籠以外的一籠中之一張吸水紙上。紙張在放置至籠底之前，先稱重及記錄重量。在CGRP給藥後，監測各動物的排便達30分鐘。觀察腹瀉的發生率與總重(黏在紙張上者)。若出現鬆散糞便，則記錄為腹瀉的陽性率。藉由抓著紙張的長邊而將紙張從籠中取出，及在取出時以約45度的角度輕輕晃動紙張，而進行糞便毛重之測定。糞便若滾落，則視為正常糞便，黏在紙張上者則視為腹瀉。然後將黏有糞便的紙張置於天秤上稱重。
結果
在CGRP投藥作用後，在30分鐘的觀察期間評估二種不同的抗CGRP抗體對於胃腸不適及在這種情況下為腹瀉之效應，及與二個對照組比較。如第45圖中所示，正對照組動物(領受CGRP與負對照組抗體)中之80%發生腹瀉，相較於領受Ab6與Ab3的動物中僅有60%與40%發生腹瀉。並無負對照組動物發生腹瀉。此外，領受CGRP抗體之動物的糞便毛重係顯著低於對照組動物(第46圖)。此外，相對於領受抗CGRP抗體之動物，領受對照組抗體之動物的糞便硬度較為液狀(水狀)，這表明CGRP抗體幫助恢復正常胃腸功能之是另一個跡象，及特別是正常的結腸排出。
該等結果進一步確認抗CGRP抗體可有效預防或治療腹瀉與相關病況。
第10例：CGRP抗體投藥作用對於結腸排出之效應
在C57BL/6小鼠中進行又一實驗，來評估CGRP抗體投藥作用對於治療或預防腹瀉及相關胃腸功能 失調之潛在功效。所採用的抗CGRP抗體劑量係比第9例高，及對於腹瀉發生率與糞便毛重之效應更為明顯。
方法
以實驗方式在C57BL/6小鼠中引發腹瀉，如同第9例，四個治療組各有10隻小鼠，但各抗體的劑量高三倍(30毫克/公斤及劑量體積為7.89毫升/公斤)，及CGRP的劑量體積高三倍，雖然CGRP的劑量相同(0.05毫克/公斤及劑量體積為10毫升/公斤)。第1組(負對照組)在第1天領受負對照組抗體，及在第2天領受經磷酸鹽緩衝的生理食鹽水。第2、3與4組在第1天分別領受對照組抗體、Ab3與Ab6，及在第2天領受CGRP。抗體與CGRP係以腹膜內投予。
結果
在CGRP投藥作用後，在30分鐘的觀察期間評估二種不同的抗CGRP抗體對於胃腸不適及在這種情況下為腹瀉之效應，及與二個對照組比較。如第47圖中所示，正對照組動物(領受CGRP與負對照組抗體)中之80%發生腹瀉，相較於領受Ab6與Ab3的動物中僅有40%與20%發生腹瀉。並無負對照組動物發生腹瀉。此外，領受CGRP抗體之動物的糞便毛重係顯著低於對照組動物(第48圖)。此外，相對於領受抗CGRP抗體之動物，領受對照組抗體之動物的糞便硬度較為液狀(水狀)，這是表明CGRP抗體幫助恢復正常胃腸功能之另一個跡象，及特別是正常的結腸排出。
該等結果進一步確認抗CGRP抗體可有效預防或治療腹瀉與相關病況。
第1圖提供對應於全長抗體Ab1之聚核苷酸與多肽序列。
第2圖提供對應於全長抗體Ab2之聚核苷酸與多肽序列。
第3圖提供對應於全長抗體Ab3之聚核苷酸與多肽序列。
第4圖提供對應於全長抗體Ab4之聚核苷酸與多肽序列。
第5圖提供對應於全長抗體Ab5之聚核苷酸與多肽序列。
第6圖提供對應於全長抗體Ab6之聚核苷酸與多肽序列。
第7圖提供對應於全長抗體Ab7之聚核苷酸與多肽序列。
第8圖提供對應於全長抗體Ab8之聚核苷酸與多肽序列。
第9圖提供對應於全長抗體Ab9之聚核苷酸與多肽序列。
第10圖提供對應於全長抗體Ab10之聚核苷酸與多肽序列。
第11圖提供對應於全長抗體Ab11之聚核苷酸與多肽序列。
第12圖提供對應於全長抗體Ab12之聚核苷酸與多肽序列。
第13圖提供對應於全長抗體Ab13之聚核苷酸與多肽序列。
第14圖提供對應於全長抗體Ab14之聚核苷酸與多肽序列。
第15圖提供遵循下文第1例中用於抗體Ab1、Ab2、Ab3及Ab4的操作程序所獲得之CGRP-α ELISA結合數據。
第16圖提供遵循下文第1例中用於抗體Ab5、Ab6、Ab7及Ab8的操作程序所獲得之CGRP-α ELISA結合數據。
第17圖提供遵循下文第1例中用於抗體Ab9、Ab10及Ab14的操作程序所獲得之CGRP-α ELISA結合數據。
第18圖提供遵循下文第1例中用於抗體Ab11、Ab12及Ab13的操作程序所獲得之CGRP-α ELISA結合數據。
第19圖顯示遵循下文第1例中的操作程序所獲得之抗體Ab1、Ab2及Ab4對於CGRP-α驅動的cAMP生產作用之抑制作用。
第20圖顯示遵循下文第1例中的操作程序所獲得之抗體Ab3對於CGRP-α驅動的cAMP生產作用之抑制作用。
第21圖遵循下文第1例中的操作程序所獲得之抗體Ab5與Ab6對於CGRP-α驅動的cAMP生產作用之抑制作用。
第22圖顯示遵循下文第1例中的操作程序所獲得之抗體Ab7、Ab8、Ab9及Ab10對於CGRP-α驅動的cAMP生產作用之抑制作用。
第23圖顯示遵循下文第1例中的操作程序所獲得之抗體Ab11、Ab12及Ab13對於CGRP-α驅動的cAMP生產作用之抑制作用。
第24圖顯示遵循下文第1例中的操作程序所獲得之抗體Ab14對於CGRP-α驅動的cAMP生產作用之抑制作用。
第25圖顯示遵循下文第1例中的操作程序所獲得之抗體Ab1、Ab2及Ab3對於CGRP-β驅動的cAMP生產作用之抑制作用。
第26圖顯示遵循下文第1例中的操作程序所獲得之抗體Ab4、Ab5及Ab6對於CGRP-β驅動的cAMP生產作用之抑制作用。
第27圖顯示遵循下文第1例中的操作程序所獲得之抗體Ab7與Ab8對於CGRP-β驅動的cAMP生產作用之抑制作用。
第28圖顯示遵循下文第1例中的操作程序所獲得之抗體Ab9、Ab10及Ab14對於CGRP-β驅動的cAMP生產作用之抑制作用。
第29圖顯示遵循下文第1例中的操作程序所獲得之抗體Ab11、Ab12及Ab13對於CGRP-β驅動的cAMP生產作用之抑制作用。
第30圖顯示遵循下文第1例中的操作程序所獲得之抗體Ab1、Ab2、Ab4及Ab5對於大鼠CGRP驅動的cAMP生產作用之抑制作用。
第31圖顯示遵循下文第1例中的操作程序所獲得之抗 體Ab3與Ab6對於大鼠CGRP驅動的cAMP生產作用之抑制作用。
第32圖顯示遵循下文第1例中的操作程序所獲得之抗體Ab7與Ab8對於大鼠CGRP驅動的cAMP生產作用之抑制作用。
第33圖顯示遵循下文第1例中的操作程序所獲得之抗體Ab9對於大鼠CGRP驅動的cAMP生產作用之抑制作用。
第34圖顯示遵循下文第1例中的操作程序所獲得之抗體Ab10對於大鼠CGRP驅動的cAMP生產作用之抑制作用。
第35圖顯示遵循下文第1例中的操作程序所獲得之抗體Ab11與Ab12對於大鼠CGRP驅動的cAMP生產作用之抑制作用。
第36圖顯示遵循下文第1例中的操作程序所獲得之抗體Ab13對於大鼠CGRP驅動的cAMP生產作用之抑制作用。
第37圖顯示遵循下文第1例中的操作程序所獲得之抗體Ab14對於大鼠CGRP驅動的cAMP生產作用之抑制作用。
第38圖顯示遵循下文第6例中的操作程序所獲得之抗體Ab1-Ab13對於經放射性標記的CGRP與CGRP-R的結合作用之抑制作用。
第39圖顯示相對於一對照組抗體，在大鼠模式中藉由投予抗體Ab3與Ab6接著投予辣椒素所獲得之血管舒張作用之降低，其係遵循下文第7例中的操作程序而獲得。
第40圖顯示相對於一對照組抗體，在大鼠模式中藉由投予不同濃度的抗體Ab6接著投予辣椒素所獲得之血管舒 張作用之降低，其係遵循下文第7例中的操作程序而獲得。
第41圖包含實驗結果，其中評估CGRP在基因轉殖型Nestin/hRamp1小鼠中之效應。數據顯示大鼠CGRP-α投藥作用在Nestin/hRAMP1 tg小鼠中引發腹瀉，及腹膜內注射Ab3(在CGRP投藥前約24小時投予30毫克/公斤)在Nestin/hRAMP1 tg小鼠中抑制由腦室內(ICV)注射大鼠CGRP-α所引發之腹瀉。
第42圖包含實驗結果，其顯示在C57BL/6J小鼠中，由腦室內(ICV)方式注射的人類CGRP-α係以具劑量依賴性方式引發腹瀉。
第43圖包含實驗結果，其顯示在C57/BL6J小鼠中，Ab3的腹膜內注射作用(在人類CGRP-α投藥前約24小時以腹膜內方式投予30毫克/公斤)抑制經ICV注射的人類CGRP-α所引發之腹瀉。
第44圖包含實驗結果，其顯示在C57/BL6J小鼠中，Ab3(在人類CGRP-α投藥前約24小時以腹膜內方式投予30毫克/公斤)抑制經腹膜內注射的人類CGRP-α所引發之腹瀉。
第45圖顯示Ab3與Ab6(均按10毫克/公斤投予)預防CGRP所引發的腹瀉。負對照組動物(經一對照組抗體與磷酸鹽緩衝的生理食鹽水治療，左側柱狀)並未發生腹瀉，而80%的正對照組動物(經CGRP與一種負對照組抗體治療，實心柱狀)發生腹瀉。Ab3(斜線條紋柱狀)與Ab6(平行紋線柱狀)的投藥作用分別將腹瀉發生率降至40%與60%。
第46圖顯示第45圖所示實驗之CGRP所引發的腹瀉之糞便毛重。相較於負對照組動物(第一柱狀)，糞便毛重因CGRP投藥作用(第二柱狀)而大幅增加。然而，經Ab3與經Ab6治療的動物顯示糞便毛重大幅減少(分別為第三與第四柱狀)。所示數值係各試驗組的所有動物之平均值±平均值的標準誤差(SEM)。
第47圖係在又一實驗(二種抗體皆按30毫克/公斤投予)中確認Ab3與Ab6預防CGRP所引發的腹瀉。在負對照組動物中未發生腹瀉(經一對照組抗體與磷酸鹽緩衝的生理食鹽水治療，第一柱狀)，但在80%的正對照組動物(實心的第二柱狀)觀察到腹瀉。Ab3(斜線條紋的第三柱狀)與Ab6(平行紋線的第四柱狀)分別將腹瀉發生率降至20%與40%。
第48圖顯示第47圖所示實驗之CGRP所引發的腹瀉之糞便毛重。相較於負對照組動物(空心的第一柱狀)，CGRP的投藥作用(實心的第二柱狀)大幅增加糞便毛重。然而，經Ab6治療的動物顯示糞便毛重大幅減少(格紋的第四柱狀)，而經Ab3治療的動物(平行紋線的第三柱狀)的平均糞便毛重係與負對照組動物(空心的左側柱狀)相若。所示數值係各試驗組的所有動物之平均值±平均值的標準誤差(SEM)。
<110> RUSSO,ANDREW F. KAISER,ERIC A. RECOBER,ANA KUBURAS,ADISA RADDANT,ANN C. KOVACEVICH,BRIAN ROBERT LATHAM,JOHN A. SMITH,JEFFREY T.L. GARCIA-MARTINEZ,LEON F.
<120> 抗降血鈣素基因相關胜肽(ANTI-CGRP)或抗降血鈣素基因相關胜肽 受器(ANTI-CGRP-R)抗體或抗體片段治療或預防慢性及急性型腹瀉 之用途
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<223> 人工序列之說明：合成聚核苷酸
<400> 182
<210> 183
<211> 333
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成聚核苷酸
<400> 183
<210> 184
<211> 1326
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成聚核苷酸
<400> 184
<210> 185
<211> 39
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 185
<210> 186
<211> 21
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 186
<210> 187
<211> 39
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 187
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<211> 15
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 188
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<211> 48
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 189
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<211> 9
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 190
<210> 191
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成聚核苷酸
<400> 191
<210> 192
<211> 660
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成聚核苷酸
<400> 192
<210> 193
<211> 333
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成聚核苷酸
<400> 193
<210> 194
<211> 1326
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成聚核苷酸
<400> 194
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<211> 39
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 195
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<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 196
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<211> 39
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 197
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<211> 15
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 198
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<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 199
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<211> 9
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 200
<210> 201
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成聚核苷酸
<400> 201
<210> 202
<211> 660
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成聚核苷酸
<400> 202
<210> 203
<211> 330
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成聚核苷酸
<400> 203
<210> 204
<211> 1323
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成聚核苷酸
<400> 204
<210> 205
<211> 39
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 205
<210> 206
<211> 21
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 206
<210> 207
<211> 39
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 207
<210> 208
<211> 15
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 208
<210> 209
<211> 48
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 209
<210> 210
<211> 9
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 210
<210> 211
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成聚核苷酸
<400> 211
<210> 212
<211> 660
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成聚核苷酸
<400> 212
<210> 213
<211> 333
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成聚核苷酸
<400> 213
<210> 214
<211> 1326
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成聚核苷酸
<400> 214
<210> 215
<211> 39
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 215
<210> 216
<211> 21
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 216
<210> 217
<211> 39
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 217
<210> 218
<211> 15
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 218
<210> 219
<211> 48
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 219
<210> 220
<211> 9
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 220
<210> 221
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成聚核苷酸
<400> 221
<210> 222
<211> 660
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成聚核苷酸
<400> 222
<210> 223
<211> 327
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成聚核苷酸
<400> 223
<210> 224
<211> 1320
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成聚核苷酸
<400> 224
<210> 225
<211> 39
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 225
<210> 226
<211> 21
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 226
<210> 227
<211> 39
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 227
<210> 228
<211> 15
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 228
<210> 229
<211> 48
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 229
<210> 230
<211> 9
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 230
<210> 231
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成聚核苷酸
<400> 231
<210> 232
<211> 660
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成聚核苷酸
<400> 232
<210> 233
<211> 333
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成聚核苷酸
<400> 233
<210> 234
<211> 1326
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成聚核苷酸
<400> 234
<210> 235
<211> 39
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 235
<210> 236
<211> 21
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 236
<210> 237
<211> 39
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 237
<210> 238
<211> 15
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 238
<210> 239
<211> 48
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 239
<210> 240
<211> 9
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 240
<210> 241
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成聚核苷酸
<400> 241
<210> 242
<211> 660
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成聚核苷酸
<400> 242
<210> 243
<211> 327
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成聚核苷酸
<400> 243
<210> 244
<211> 1320
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成聚核苷酸
<400> 244
<210> 245
<211> 39
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 245
<210> 246
<211> 21
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 246
<210> 247
<211> 39
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 247
<210> 248
<211> 15
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 248
<210> 249
<211> 48
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 249
<210> 250
<211> 9
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 250
<210> 251
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成聚核苷酸
<400> 251
<210> 252
<211> 660
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成聚核苷酸
<400> 252
<210> 253
<211> 333
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成聚核苷酸
<400> 253
<210> 254
<211> 1326
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成聚核苷酸
<400> 254
<210> 255
<211> 39
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 255
<210> 256
<211> 21
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 256
<210> 257
<211> 39
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 257
<210> 258
<211> 15
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 258
<210> 259
<211> 48
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 259
<210> 260
<211> 9
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 260
<210> 261
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成聚核苷酸
<400> 261
<210> 262
<211> 660
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成聚核苷酸
<400> 262
<210> 263
<211> 333
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成聚核苷酸
<400> 263
<210> 264
<211> 1326
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成聚核苷酸
<400> 264
<210> 265
<211> 39
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 265
<210> 266
<211> 21
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 266
<210> 267
<211> 36
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 267
<210> 268
<211> 15
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 268
<210> 269
<211> 51
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 269
<210> 270
<211> 12
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 270
<210> 271
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成聚核苷酸
<400> 271
<210> 272
<211> 660
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成聚核苷酸
<400> 272
<210> 273
<211> 333
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成聚核苷酸
<400> 273
<210> 274
<211> 1326
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成聚核苷酸
<400> 274
<210> 275
<211> 39
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 275
<210> 276
<211> 21
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 276
<210> 277
<211> 39
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 277
<210> 278
<211> 15
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 278
<210> 279
<211> 48
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 279
<210> 280
<211> 9
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 280
<210> 281
<211> 37
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<223> C端醯胺化
<400> 281
<210> 282
<211> 37
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<223> C端醯胺化
<400> 282
<210> 283
<211> 105
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 283
<210> 284
<211> 330
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 284

Claims (77)

  1. 一種在患有與腹瀉或痢疾相關聯的一病況之個體中抑制、預防或治療腹瀉或痢疾及/或維持適當的電解質及結腸中的液體水平之方法，其包括投予一有效量的抗CGRP抗體或抗CGRP抗體片段或一抗CGRP受器抗體或抗體片段。
  2. 如申請專利範圍第1項之方法，其中該腹瀉或痢疾係與CGRP增加相關聯。
  3. 如申請專利範圍第1或2項之方法，其中該腹瀉係急性腹瀉或慢性腹瀉。
  4. 如申請專利範圍第1或2項之方法，其中該腹瀉包括滲透性腹瀉、分泌性腹瀉、蠕動性腹瀉、滲出性腹瀉及/或炎性腹瀉。
  5. 如申請專利範圍第1或2項之方法，其中腹瀉係由選自下列之一慢性或急性病況造成：功能性腸道異常疾病、激躁性腸症候群、腹腔疾病、胰臟疾病、胰臟炎、第1型或第2型糖尿病、囊腫纖維症、克隆氏(Crohn)症、糖尿病性神經病變、月經、甲狀腺機能亢進症、荷爾蒙不平衡、腸炎、發炎性腸道疾病、微小性結腸炎、缺血性腸道疾病、潰瘍性結腸炎、黏膜炎或結核病。
  6. 如申請專利範圍第1或2項之方法，其中與腹瀉相關聯之病況係一細菌、寄生蟲或病毒所引發的腹瀉。
  7. 如申請專利範圍第1或2項之方法，其中導致腹瀉之病況係選自溶組織內阿米巴原蟲(Entaamoeba histolytica)、 梨形鞭毛蟲屬(Giardia)或另一原生動物之一寄生蟲。
  8. 如申請專利範圍第1或2項之方法，其中導致腹瀉之病況係選自大腸桿菌(E coli)、志賀桿菌屬(Shigella)、溶組織內阿米巴原蟲(Entaamoeba histolytica)、沙門氏桿菌屬(Salmonella)、曲桿菌(Campylobacter)或艱難梭狀芽孢桿菌(Clostridium difficile)之一細菌。
  9. 如申請專利範圍第1或2項之方法，其中導致腹瀉之病況係選自輪狀病毒、RSV、HIV、諾羅病毒、腺病毒及星狀病毒之一病毒。
  10. 如申請專利範圍第1或2項之方法，其中導致腹瀉之病況係食物中毒。
  11. 如申請專利範圍第1或2項之方法，其中與腹瀉相關聯之病況係選自由胃食道逆流、消化不良、激躁性腸症候群、功能性腹痛症候群、膽汁酸吸收不良及憩室炎所組成之群組之一功能性腸道異常疾病。
  12. 如申請專利範圍第1或2項之方法，其中與腹瀉相關聯者係選自由克隆氏(Crohn)症、迴腸炎、膠原性結腸炎、淋巴球性結腸炎及潰瘍性結腸炎所組成之群組之一發炎性腸道疾病。
  13. 如申請專利範圍第1或2項之方法，其中與腹瀉相關聯之病況係之一癌症或與腹瀉相關聯的癌症治療。
  14. 如申請專利範圍第13項之方法，其中該癌症係甲狀腺髓質癌、荷爾蒙分泌性腫瘤病況、腎臟癌、肝癌或一結腸直腸癌。
  15. 如申請專利範圍第13項之方法，其中與腹瀉相關聯的癌症治療係選自化學療法、細胞介素療法及輻射或其組合。
  16. 如申請專利範圍第13或15項之方法，，其中該治療造成黏膜炎或小腸刷狀緣損傷。
  17. 如申請專利範圍第15項之方法，其中該化學療法包括一鉑類化合物。
  18. 如申請專利範圍第1或2項之方法，其中與腹瀉相關聯之病況係一藥物、化學療法、一免疫療法、細胞療法及/或輻射療法。
  19. 如申請專利範圍第18項之方法，其中與腹瀉相關聯的藥物係一抗生素、止痛劑諸如NSAID或類鴉片化合物、抗憂鬱劑或荷爾蒙。
  20. 如申請專利範圍第1或2項之方法，其中該抗體或抗體片段係以單一藥物治療方式投予。
  21. 如申請專利範圍第1或2項之方法，其中該抗體或抗體片段係與另一抗腹瀉治療劑投予。
  22. 如申請專利範圍第21項之方法，其中另一藥劑係一抗蠕動劑諸如洛哌丁胺(loperamide)、鉍化合物、可待因、鋅化合物、膽汁酸螯合劑諸如膽苯烯胺、考來替泊(colestipol)或考來維侖(colesevelam)、電解質溶液或益生菌。
  23. 如申請專利範圍第1至22項中任一項之方法，其中該抗體或抗體片段係一抗人類CGRP抗體或抗體片段，其係 以選自Ab1、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、Ab11、Ab12、Ab13或Ab14之一種抗人類CGRP抗體形式，以特異性方式與一完整的人類CGRP多肽或其片段中之相同或重疊線性或構型抗原決定位結合及/或競爭與相同或重疊線性或構型抗原決定位結合。
  24. 如申請專利範圍第1至23項中任一項之方法，其中該抗體或抗體片段係以Ab3、Ab6、Ab13或Ab14形式，以特異性方式與一完整的人類CGRP多肽或其一片段中之相同或重疊線性或構型抗原決定位結合及/或競爭與相同或重疊線性或構型抗原決定位結合。
  25. 如申請專利範圍第1至24項中任一項之方法，其中該抗體片段係選自一Fab片段、一Fab’片段或一F(ab’)2片段。
  26. 如申請專利範圍第25項之方法，其中該片段係一Fab片段。
  27. 如申請專利範圍第1至26項中任一項之方法，其中該抗人類CGRP抗體或抗體片段係包含與選自Ab1、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、Ab11、Ab12、Ab13或Ab14之一抗人類CGRP抗體所含有者相同之1個、2個、3個、4個、5個或所有6個CDR。
  28. 如申請專利範圍第27項之方法，其中至少2個CDR係與選自Ab1、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、Ab11、Ab12、Ab13或Ab14之一抗體所含有者相同。
  29. 如申請專利範圍第27項之方法，其中至少3個CDR係與選自Ab1、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、Ab11、Ab12、Ab13或Ab14之一抗體所含有者相同。
  30. 如申請專利範圍第27項之方法，其中至少4個CDR係與選自Ab1、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、Ab11、Ab12、Ab13或Ab14之一抗體所含有者相同。
  31. 如申請專利範圍第27項之方法，其中至少5個CDR係與選自Ab1、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、Ab11、Ab12、Ab13或Ab14之一抗體所含有者相同。
  32. 如申請專利範圍第27項之方法，其中所有6個CDR係與選自Ab1、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、Ab11、Ab12、Ab13或Ab14之一抗體所含有者相同。
  33. 如申請專利範圍第1至32項中任一項之方法，其中該抗體或抗體片段所包含之一可變輕鏈係包括序列辨識編號：25的CDR1序列、序列辨識編號：26的CDR2序列及序列辨識編號：27的CDR3序列，及/或其所包含之一可變重鏈係包括序列辨識編號：28的CDR1序列、序列辨識編號：29的CDR2序列及序列辨識編號：30的CDR3序列。
  34. 如申請專利範圍第1至32項中任一項之方法，其中該抗 體或抗體片段所包含之一可變輕鏈係包括序列辨識編號：55的CDR1序列、序列辨識編號：56的CDR2序列及序列辨識編號：57的CDR3序列，及/或其所包含之一可變重鏈係包括序列辨識編號：58的CDR1序列、序列辨識編號：59的CDR2序列及序列辨識編號：60的CDR3序列。
  35. 如申請專利範圍第1至32項中任一項之方法，其中該抗體或抗體片段在各可變輕鏈區與可變重鏈區包含至少2個互補決定區(CDR)，其等係與選自Ab2、Ab3、Ab4、Ab5或Ab6、Ab13或Ab14之抗人類CGRP抗體中所含有者相同。
  36. 如申請專利範圍第1至32項中任一項之方法，其中該抗體或抗體片段在各可變輕鏈區與可變重鏈區包含至少3、4、5或6個互補決定區(CDR)，其等係與Ab3、Ab6、Ab13或Ab14中所含有者相同。
  37. 如申請專利範圍第1至36項中任一項之方法，其中該抗體或抗體片段係非醣基化或缺乏N-醣基化作用，或者若經醣基化則僅含有甘露糖殘基。
  38. 如申請專利範圍第1至37項中任一項之方法，其中該抗體或抗體片段所含有的一Fc區係業已改質而改變作用性功能、半衰期、蛋白溶解作用及/或醣基化作用。
  39. 如申請專利範圍第1至38項中任一項之方法，其中該抗體或抗體片段係一人化、單鏈或嵌合抗體。
  40. 如申請專利範圍第1至39項中任一項之方法，其中該抗體或抗體片段係與表現CGRP的人類細胞及/或與活體 內循環型可溶性CGRP分子特異性結合。
  41. 如申請專利範圍第1至40項中任一項之方法，其中該抗體或抗體片段所包含之一VH多肽序列係選自序列辨識編號：3、13、23、33、43、53、63、73、83、93、103、113、123或133或其變異體及與其之一致性係至少90%；及其所進一步包含之一VL多肽序列係選自序列辨識編號：1、11、21、31、41、51、61、71、81、91、101、111、121或131或其變異體及與其之一致性係至少90%，其中在該VH或VL多肽中的一或多種架構(FR)或CDR殘基已被另一胺基酸殘基取代，而產生與CGRP特異性結合之一抗CGRP抗體。
  42. 如申請專利範圍第41項之方法，其中該FR殘基中的一或多者已被存在於一親代兔抗CGRP抗體中的對應位點之一胺基酸取代，及從中該VH或VL多肽所含有的互補決定區(CDR)已被衍生或藉由一保留性胺基酸取代作用取代。
  43. 如申請專利範圍第1至42項中任一項之方法，其中該抗體或抗體片段係人化型。
  44. 如申請專利範圍第1至42項中任一項之方法，其中該抗體或抗體片段係嵌合型。
  45. 如申請專利範圍第1至39項中任一項之方法，其中該抗體或抗體片段係包含一單鏈抗體。
  46. 如申請專利範圍第44項之方法，其中該嵌合抗體係包含一人類Fc。
  47. 如申請專利範圍第46項之方法，其中該人類Fc係衍生自IgG1、IgG2、IgG3或IgG4。
  48. 如申請專利範圍第1至47項中任一項之方法，其中該抗體或抗體片段係抑制CGRP與CGRP-R及/或其多聚體、CGRP-CGRP-R複合體中的一或多種附加蛋白之結合作用，及/或拮抗其生物效應。
  49. 如申請專利範圍第41項之方法，其中該抗體或抗體片段包含一多肽序列，其與本文所述多肽序列中任一者的同源性係至少90%或以上。
  50. 如申請專利範圍第41項之方法，其中該抗體或抗體片段包含一多肽序列，其與本文所述多肽序列中任一者的同源性係至少95%或以上。
  51. 如申請專利範圍第1至50項中任一項之方法，其中該CGRP抗體或抗體片段與CGRP結合所具有的解離速率(Koff)係小於或等於10-4S-1、5x10-5S-1、10-5S-1、5x10-6S-1、10-6S-1、5x10-7S-1或10-7S-1。
  52. 如申請專利範圍第1至51項中任一項之方法，其中該抗體或抗體片段係抑制CGRP與CGRP-R及/或其多聚體之產生，及CGRP與CGRP-R及複合體中一或多種附加蛋白之產生。
  53. 如申請專利範圍第1至52項中任一項之方法，其中該抗CGRP抗體或抗體片段所結合的CGRP抗原決定位係與選自Ab1、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、Ab11、Ab12、Ab13或Ab14之一抗CGRP 抗體相同或重疊。
  54. 如申請專利範圍第1至53項中任一項之方法，其中該抗CGRP抗體或抗體片段係包含選自序列辨識編號：3、13、23、33、43、53、63、73、83、93、103、113、123或133之VH多肽序列中所含有的一或多個CDR及/或選自序列辨識編號：1、11、21、31、41、51、61、71、81、91、101、111、121或131之VL多肽序列中所含有的一或多個CDR。
  55. 如申請專利範圍第1至54項中任一項之方法，其中該抗體或抗體片段係以肌內、皮下、靜脈內、直腸、藉由輸注作用、口服、經皮或經由吸入方式投予。
  56. 如申請專利範圍第1至54項中任一項之方法，其中該抗體或抗體片段係以靜脈內方式投予。
  57. 如申請專利範圍第1或2項之方法，其中該CGRP相關型腹瀉係選自與激躁性腸症候群、發炎性腸道疾病、克隆氏症、迴腸炎、潰瘍性結腸炎、霍亂、胰臟疾病、乳糖不耐症、果糖吸收不良、吸收不良、鎂過量或過度攝取、維生素C過量或過度攝取、山梨糖醇過量或過度攝取、食物中毒、大腸桿菌(E.coli)感染、酵素缺乏症、黏膜異常、乳糜瀉、麩質不耐症、惡性貧血、食品過敏、食物不耐症、短腸症候群、輻射後纖維症相關聯之腹瀉；與化學療法、奧利司他(orlistat)治療、囊腫纖維症、胰臟炎、慢性酒精攝取、缺血性腸道疾病、微小性結腸炎、膽鹽吸收不良(初級膽汁酸腹瀉)、血清素分泌作用或水 平升高相關聯之腹瀉；或學步期幼兒腹瀉。
  58. 如申請專利範圍第1或2項之方法，其中該治療進一步包括投予另一治療劑或療法，該另一治療劑或療法係選自由抗生素、抗病毒劑、吸收劑、抗蠕動藥物、鉍化合物、次柳酸鉍、膽汁酸螯合劑、益生菌、消化酵素、乳糖酶、鋅、口服補液療法及其任一組合所組成之群組。
  59. 如申請專利範圍第58項之方法，其中該抗蠕動劑係選自由洛哌丁胺(loperamide)(宜莫痢(Imodium))、具有顛茄鹼之苯乙哌啶(止瀉寧(Lomotil))、鴉片製劑、鴉片鎮痛酊、可待因及嗎啡所組成之群組。
  60. 如申請專利範圍第58項之方法，其中該膽汁酸螯合劑係選自由膽苯烯胺、考來替泊(colestipol)及考來維侖(colesevelam)所組成之群組。
  61. 如申請專利範圍第1或2項之方法，其中具有CGRP結合特異性之抗CGRP抗體或抗體片段係包含選自下列之可變輕鏈CDR1、CDR2與CDR3多肽序列及可變重鏈CDR1、CDR2及CDR3多肽序列：
  62. 如申請專利範圍第61項之方法，其中該抗體或抗體片段係一scFv、駱駝抗體、奈米抗體、IgNAR(從鯊魚所衍生的單鏈抗體)、Fab、Fab’、或F(ab’)2片段。
  63. 如申請專利範圍第61項之方法，其中該抗CGRP抗體或抗體片段係一Fab片段。
  64. 如申請專利範圍第61項之方法，其中該抗體或抗體片段係包含選自下列之一可變輕鏈多肽序列與一可變重鏈多肽序列：
  65. 如申請專利範圍第61項之方法，其中該抗體或抗體片段係包含選自下列之一輕鏈多肽序列與一重鏈多肽序列：
  66. 如申請專利範圍第61項之方法，其中該抗體或抗體片段所包含之一可變輕鏈與可變重鏈多肽序列分別與序列辨識編號：1、11、21、31、41、51、61、71、81、91、101、111、121或131的可變輕鏈多肽序列中之一者及序列辨識編號：3、13、23、33、43、53、63、73、83、93、103、113、123或133的可變重鏈多肽序列中之一者之一致性係各至少90%。
  67. 如申請專利範圍第61項之方法，其中該抗體或抗體片段係嵌合型或人化型。
  68. 如申請專利範圍第61項之方法，其中該抗CGRP抗體或抗體片段係完全脫醣基化或缺乏N-醣基化作用或僅包含甘露糖殘基。
  69. 如申請專利範圍第61項之方法，其中該抗CGRP抗體或抗體片段係包含一人類固定域。
  70. 如申請專利範圍第61項之方法，其中該抗CGRP抗體或抗體片段係一IgG1、IgG2、IgG3或IgG4抗體。
  71. 如申請專利範圍第61項之方法，其中該抗CGRP抗體或抗體片段所含有的一Fc區係業已改質而改變作用性功能、半衰期、蛋白溶解作用及/或醣基化作用中之至少一者。
  72. 如申請專利範圍第61項之方法，其中該抗CGRP抗體或抗體片段所含有的一Fc區係包含一突變作用，其改變或除去醣基化作用或除去N-醣基化作用。
  73. 如申請專利範圍第61項之方法，其中該抗CGRP抗體或抗體片段係直接或間接與一可檢測性標記或治療劑連接。
  74. 如申請專利範圍第61項之方法，其中該抗CGRP抗體或抗體片段係進一步包含一作用性基團。
  75. 如申請專利範圍第74項之方法，其中該作用性基團係一可檢測性基團或一功能性基團。
  76. 如申請專利範圍第75項之方法，其中該可檢測性基團係一螢光染料、一酵素、一受質、一生物發光物質、一放射性物質或一化學發光物質。
  77. 如申請專利範圍第75項之方法，其中該功能性基團係鏈黴抗生物素蛋白、抗生物素蛋白、生物素、一細胞毒素、一細胞毒性劑或一放射性物質。
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