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TW201138808A - Serum albumin binding molecules - Google Patents

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TW201138808A
TW201138808A TW100115218A TW100115218A TW201138808A TW 201138808 A TW201138808 A TW 201138808A TW 100115218 A TW100115218 A TW 100115218A TW 100115218 A TW100115218 A TW 100115218A TW 201138808 A TW201138808 A TW 201138808A
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TW
Taiwan
Prior art keywords
polypeptide
domain
saba
seq
protein
Prior art date
Application number
TW100115218A
Other languages
English (en)
Inventor
Michael L Gosselin
David Fabrizio
Joanna F Swain
Tracy S Mitchell
Ray Camphausen
Sharon T Cload
Eric Furfine
Paul E Morin
Ranjan Mukherjee
Simeon I Taylor
Original Assignee
Bristol Myers Squibb Co
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Bristol Myers Squibb Co filed Critical Bristol Myers Squibb Co
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Description

201138808 六、發明說明： 相關申請案 本申請案主張2010年5月3曰申請之美國臨時申請案第 61/330,672號的權益，該申請案以全文引用的方式併入本 文中。 【先前技術】
許多治療劑，尤其諸如肽、多肽及聚核苷酸之生物製劑 的效用因血清半衰期不足而受損。此需要以高頻率及/或 較咼劑量投與該等治療劑，或使用持續釋放調配物，以維 持為治療效果所必需之血清含量。頻繁地全身投與藥物會 引起相當大的消極副作用。舉例而言，頻繁地全身注射給 個體帶來相當大的不適，且造成投藥相關性感染之高風 險，並可能需要住院治療或頻繁地到醫院就》，尤其當欲 靜脈内投與㈣劑時。另外，在長期治療中，每天靜脈内 注射亦會導致相當大的如下副作用：由反覆穿刺血管引起 之組織苑痕形成及血管病變。已知關於所有頻繁的全身性 治療劑投與均存在類似問題，例如向糖尿病患者投與胰島 素’或向羅患多發性硬化症的患者投與干擾素藥物。所有 此等因素均導致患者順純降低並增加衛生线之成本。 本申請案提供可延長各種治療劑之血清半衰期的化合 ^具有延長之血清半衰期的化合物，及延長治療劑之血 月半衰』的方法。用於延長治療劑之血清半衰期的該等化 合物及方法可以成本有效的方式製造或實施，具有所需生 物物理學性質(例如Tm、實質上單體或充分摺疊卜且尺寸 155490.doc 201138808 足夠小而允許組織穿透。 【發明内容】
Fn3之融合分子及其用途。 蛋白III型 蛋白結合 在一態樣中，本發明提供一種包含第十纖維結合蛋白H】 型（10Fn3)結構域之多肽，其中該i〇Fn3結構域結合於人類血 清白蛋白（HSA)之結構域I或π之KD為1 μΜ或以下，且其中 在白蛋白存在下該多肽之血清半衰期為在血清白蛋白不存 在下該多肽之血清半衰期的至少5倍。在一實施例中，相 對於野生型1()Fn3結構域，該1%3結構域在％、dE及FG 環中之一或多者中包含經修飾之胺基酸序列。 在某些實施例中’該1GFn3結構域在5.5至7.4之pH值範圍 内結合於118八。在一實施例中，該1(^113結構域在5.5至7.4 之pH值範圍内結合於HSA之KD為200 nM或以下。在另一 實施例中，該1GFn3結構域在pH 5.5下結合於HSA之KD為 200 ιιΜ或以下。 在一些態樣中，本文提供一種包含1GFn3結構域之多 肽，其中該1GFn3結構域結合於HSA且..包含與SEQ ID NO: 2 至少70%—致之胺基酸序列。在一實施例中，該1()Fn3結構 域包括包含SEQ ID NO: 5所示之胺基酸序列的BC環、包含 SEQ ID NO: 6所示之胺基酸序列的DE環及包含託卩ID NO: 7所示之胺基酸序列的FG環中之一或多者。 在任一上述態樣及實施例中，該1〇Fn3結構域亦結合於 155490.doc 201138808 恆河猴（rhesus)血清白蛋白（RhSA)、食蟹獼猴（cynomolgous monkey)血清白蛋白（CySA)或鼠類血清白蛋白（MuSA)中之 一或多者。在某些實施例中’該1GFn3結構域不與RhSA、 CySA或MuSA中之一或多者交叉反應。
在任一上述態樣及實施例中，該1QFn3結構域結合於HSA 之KD為1 μΜ或以下。在一些實施例中，該1GFn3結構域結 合於HS A之KD為500 nM或以下。在其他實施例中，該 10Fn3結構域結合於HSA之KD為至少200 nM ' 100 nM、50 nM、20 nM、10 nM 或 5 nM。 在任一上述態樣及實施例中，該1QFn3結構域結合於HSA 之結構域I或II。在一實施例中，該1GFn3結構域結合於 HSA之結構域I與Π。在一些實施例中，該1GFn3結構域在 5.5至7.4之pH值範圍内結合於JJSA。在其他實施例中，該 ?113結構域在口115.5下結合於118八之{^1)為20〇11]^或以下。 在另一實施例中，該10Fn3結構域在5.5至7·4之pH值範圍内 結合於 HSA 之 KD 為至少 500 nM、200 nM、1〇〇 nM、50 nM、20 nM、1〇 nM或5 nM。在一實施例中，該i〇Fn3結構 域在pH 5.5下結合於HSA之KD為至少500 nM、2〇〇 nM、 100 nM、50 nM、2G nM、10 nM或 5 nM。 在任一上述態樣及實施例中，在血清白蛋白存在下該多 肽之血清半衰期為在血清白蛋白不存在下該多肽之血清半 衰期的至少2倍。|某些實施例中，在血清白蛋白存在下 該多狀之A清半衰期為在血清自蛋自不存在下料狀之金 清半衰期的至少5倍、7倍、1Q倍、12倍、15倍、2()倍、22 155490.doc 201138808 倍、25倍、27倍或30倍。在一些實施例中，血清白蛋白為 HSA、RhSA、CySA或 MuSA 中之任一者。 在任一上述態樣及實施例中，在血清白蛋白存在下該多 叙之血清半衰期為至少2〇小時。在某些實施例中，在血清 白蛋白存在下該多肽之血清半衰期為至少2小時、2 5小 時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小 時、10小時、12小時、15小時、20小時、25小時、30小 時、40小時、50小時、75小時、90小時、1〇〇小時、no小 時、120小時、130小時、150小時、170小時或200小時。 在一些實施例中’在靈長類（例如人類或猴）或鼠類中觀察 到該多肽之半衰期。 在一態樣中，本發明提供一種包含10Fn3結構域之多 肽，其中該1GFn3結構域結合於HSA且包括包含SEQ ID NO: 5所示之胺基酸序列的BC環、包含SEQ ID NO: 6所示 之胺基酸序列的DE環及包含SEQ ID NO: 7所示之胺基酸序 列的FG環。在另一態樣中，該1QFn3結構域包括包含SEQ ID NO: 5所示之胺基酸序列的BC環、包含SEQ ID NO: 6所 示之胺基酸序列的DE環及包含SEQ ID NO: 7所示之胺基酸 序列的FG環中之一或多者。 在一態樣中，本發明提供一種包含1GFn3結構域之多 肽，其中該1GFn3結構域結合於HSA且包括包含SEQ ID NO: 9所示之胺基酸序列的BC環、包含SEQ ID NO: 10所示 之胺基酸序列的DE環及包含SEQ ID NO: 11所示之胺基酸 序列的FG環》在另一態樣中，該1GFn3結構域包括包含 155490.doc 201138808 SEQ ID NO: 9所示之胺基酸序列的BC環、包含SEQ ID NO: 10所示之胺基酸序列的DE環及包含SEQ ID NO: 11所 示之胺基酸序列的FG環中之一或多者。 在一態樣中，本發明提供一種包含1()Fn3結構域之多 肽，其中該1GFn3結構域結合於HSA且包括包含SEQ ID NO: 13所示之胺基酸序列的BC環、包含SEQ ID NO: 14所 示之胺基酸序列的DE環及包含SEQ ID NO: 15所示之胺基 酸序列的FG環。在另一態樣中，該1QFn3結構域包括包含 SEQ ID NO: 13所示之胺基酸序列的BC環、包含SEQ ID NO: 14所示之胺基酸序列的DE環及包含SEQ ID NO: 15所 示之胺基酸序列的FG環中之一或多者。 在一態樣中，本發明提供一種包含1()Fn3結構域之多 肽，其中該1GFn3結構域結合於HSA且包括包含SEQ ID NO: 17所示之胺基酸序列的BC環、包含SEQ ID NO: 18所 示之胺基酸序列的DE環及包含SEQ ID NO: 19所示之胺基 酸序列的FG環。在另一態樣中，該1()Fn3結構域包括包含 SEQ ID NO: 17所示之胺基酸序列的BC環、包含SEQ ID NO: 18所示之胺基酸序列的DE環及包含SEQ ID NO: 19所 示之胺基酸序列的FG環中之一或多者。
在任一上述態樣及實施例中，該1QFn3結構域亦結合於 恆河猴血清白蛋白（RhSA)、食蟹獼猴血清白蛋白（CySA)或 鼠類血清白蛋白（MuSA)中之一或多者。在一些實施例 中，該10Fn3結構域不與RhSA、CySA或MuSA中之一或多 者交叉反應。在某些實施例中，該1QFn3結構域結合於HSA 155490.doc 201138808 之KD為1 μΜ或以下。在其他實施例中，該1GFn3結構域結 合於 HSA 之 KD為至少 1·5 μΜ、1.2 μΜ、1 μΜ、700 nM、 500 ηΜ、300 ηΜ、200 ηΜ、100 ηΜ、75 ηΜ、50 ηΜ、25 ηΜ、10 ηΜ 或 5 ηΜ。 在任一上述態樣及實施例中，該1 QFn3結構域結合於HS A 之結構域I或II。在某些實施例中，該10Fn3結構域結合於 HSA之結構域I與II。在某些實施例中，該ι〇ρη3結構域在 5.5至7.4之pH值範圍内結合於HSA。在一實施例中，該 10Fn3結構域在pH 5.5下結合於HSA之KD為200 ηΜ或以下。 在另一實施例中，該10Fn3結構域在5.5至7.4之pH值範圍内 結合於 HSA 之 KD 為至少 500 ηΜ、200 ηΜ、1〇〇 ηΜ、50 ηΜ、20 ηΜ、10 ηΜ或5 ηΜ。在一實施例中，該i〇Fn3結構 域在1)115.5下結合於1^八之《：0為至少50〇111^、2〇〇11]^、 100 ηΜ、50 ηΜ、20 ηΜ、10 ηΜ或 5 ηΜ。 在任一上述態樣及實施例中，在血清白蛋白存在下該多 肽之血清半衰期為在血清白蛋白不存在下該多肽之血清 衰期的至少2倍《•在某些實施例中，在血清白蛋 該多肽之灰清半衰期為在血清白蛋白不存在下該多狀之 清半衰期的至少5倍、7倍、1()倍、12倍、15倍、2〇倍、： 血清白蛋白為 倍、25倍、27倍或3〇倍。在一些實施例中 HSA、RhSA、CySA 或 MuSA 中之任一者。 在任一上述態樣及實施例中，在血清白蛋白存在下該多 肽之血清半衰期為至少2〇小時。在某些實施例中，在血清 白蛋白存在下該多狀之血清半衰期為至少2小時、”小 155490.doc 201138808 時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小 時、10小時、12小時、15小時、20小時' 25小時、30小 時、40小時、50小時、75小時、90小時、1〇〇小時、11〇小 時、120小時、130小時、150小時、170小時或200小時。 在一些實施例中，在靈長類（例如人類或猴）或鼠類中觀察 到該多肽之半衰期。 在一態樣中，本發明提供一種包含第十纖維結合蛋白ΠΙ 型（1QFn3)結構域及異源蛋白質之融合多肽，其中該i〇Fn3結 構域結合於HS A之KD為1 μΜ或以下。在某些實施例中，該 10Fn3結構域包含與SEQ ID NO: 4至少70% —致之胺基酸序 列。在一實施例中，該10Fn3結構域包含具有SEQ ID NO: 5 所示之胺基酸序列的BC環、具有SEQ ID NO: 6所示之胺基 酸序列的DE環及具有SEQ ID NO:7所示之胺基酸序列的FG 環。在另一實施例中，該1GFn3結構域包含具有SEQ ID NO: 5所示之胺基酸序列的BC環、具有SEQ ID NO: 6所示 之胺基酸序列的DE環及具有SEQ ID NO: 7所示之胺基酸序 列的FG環中之一或多者。 在一實施例中，該異源蛋白質係選自纖維母細胞生長因 子21(FGF21)、胰島素、胰島素受體肽、GIP(葡萄糖依賴 性促胰島素多肽）、骨形態生成蛋白9(BMP-9)、澱粉素 (amylin)、肽 YY(PYY3_36)、胰多肽（PP)、介白素 21(IL-21)、升糖素樣（glucagon-like)肽 l(GLP-l)、菌絲黴素 (Plectasin)、顆粒蛋白前體（Progranulin)、骨辑素（OCN)、 愛帕林（Apelin)或包含1QFn3結構域之多肽。在其他實施例 155490.doc 201138808 中，該異源蛋白質係選自GLP-l、腸促胰島素類似物 4(Exendin 4)、脂聯素、IL-1RA(介白素1受體拮抗劑）、 VIP(血管活性腸肽）、PACAP(垂體腺苷酸環化酶激活多 肽）、痩素、INGAP(胰島新生相關蛋白）、BMP(骨形態生 成蛋白）及骨鈣素（OCN)。在一實施例中，該異源蛋白質包 含SEQ ID NO: 118所示之序列。 在某些實施例中，該異源蛋白質包含結合於除血清白蛋 白外之標靶蛋白質的第二10Fn3結構域。在其他實施例 中，該融合多肽進一步包含結合於標靶蛋白質之第三 1QFn3結構域。在一實施例中，該第三1GFn3結構域結合於 與第二1GFn3結構域相同之標靶。在其他實施例中，第三 1()Fn3結構域結合於與第二1GFn3結構域不°同之標靶。 在一實施例中，該融合多肽之10Fn3結構域亦結合於恆 河猴血清白蛋白（RhSA)、食蟹獮猴血清白蛋白（CySA)或鼠 類血清白蛋白（MuSA)中之一或多者。在其他實施例中， 該10Fn3結構域不與RhSA、CySA或MuSA中之一或多者交 又反應。 在某些實施例中，該融合多肽之10Fn3結構域結合於HSA 之KD為1 μΜ或以下《在一些實施例中，該1Qpn3結構域結 合於HSA之KD為500 nM或以下。在其他實施例中，該 1〇Fn3結構域結合於HSA之KD為至少200 nM、100 nM、50 nM、20 nM、10 nM或 5 nM。 在其他實施例中，該融合多肽之〗0Fn3結構域結合於HSA 之結構域I或II。在一實施例中，該1GFn3結構域結合於 155490.doc •10· 201138808 HSA之結構域丨與^。在一些實施例中，該1()ρη3結構域在 5.5至7.4之pH值範圍内結合於hSa。在其他實施例中，該 1呩113結構域在1)115.5下結合於1^八之反1)為2〇〇11]^或以下。 在另一貫施例中，該i〇Fn3結構域在5 5至7 4之？11值範圍内 結合於HSA之KD為至少 5〇〇 nM、200 nM、100 nM、50 nM、20 nM、10 nM或5 nM。在一實施例中，該10ρη3結構 域在pH 5.5下結合於fjSA之KD為至少500 nM、200 nM、
100 ηΜ、50 ηΜ、20 ηΜ、1〇 ηΜ或 5 ηΜ。 在一些實施例中，在血清白蛋白存在下該融合多肽之血 清半衰期為在Α清自蛋4存在下該多肽之血清半衰期的 至少5倍。在某些實施例中，在血清白蛋白存在下該融合 多肽之血清半衰期為在血清白蛋白不存在下該多肽之血清 半衰期的至少2倍、5倍、7倍、1〇倍、12倍、Η倍、 倍22倍、25倍、27倍或30倍。在一些實施例中，血清白
蛋白為HSA、RhSA、CySA或MuSA中之任一者。 在某些實施例中，在血涪 &血^蛋白存在下該融合多肽之灰 >月+哀期為至少20小時。在某些實施例中，在血 存在下該融合多肽之血清半衰期為至少2小時、 3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小二： 1 〇小時、12小時、15小時、7 η丨士 日寻、20小時' 25小時、3〇小時 小時、5〇小時、75小時、90小時、1〇〇小時、ιι〇小時 120小時、130小_、150小時、170小時或200小時。在一 2施例中’在$長類⑼如人類或狼）或鼠類中觀 融合多肽之半衰期。 j该 155490.doc 201138808 在任一上述態樣及實施例中，該1 QFn3結構域包含選自 SEQ ID NO: 8、12、16、20及 24-44之序列。 在一態樣中’本發明提供一種包含第十纖維結合蛋白Ιπ 型（1QFn3)結構域之多肽’其中該10Fn3結構域（i)相對於野 生型10Fn3結構域，在AB、BC、CD、DE、EF及FG環中之 一或多者中包含經修飾之胺基酸序列；（ii)結合於野生型 Fn3結構域不結合之標把分子；且（丨丨丨）包含具有序列 (ED)n之（：端尾部’其中η為3至7之整數。在某些實施例 中，該10Fn3結構域包含與SEQ ID NO: 1之殘基9-94所示之 胺基酸序列具有至少60% —致性的胺基酸序列。在一實施 例中，該C端尾部進一步在N端包含E、I或EI。在一些實施 例中，C端尾部提高該多肽之溶解度及/或減少其聚集。 在某些實施例中，相對於野生型10Fn3結構域，該〗〇Fn3 結構域在BC、DE及FG環之每一者中包含經修_之胺基酸 序列。在某些實施例中，該多肽結合於標靶之〖〇為丨μΜ 或以下。 在一些態樣中，本發明提供一種包含任一上述態樣及實 施例之多肽的醫藥組合物。在某些實施例中，該醫藥組合 物包含丁二酸、甘胺酸及山梨糖醇。在例示性實施例中， 該組合物包含5 ηΜ至30 mM丁二酸、5〇/〇至15%山梨糖醇及 2.5%至10%甘胺酸（pH 6.0)。在某些實施例中，該組合物 包含10 mM丁二酸、8%山梨糖醇及5%甘胺酸（ρΗ 6 〇)。在 其他實施例中’該醫藥組合物進一步包含生理學上可接受 之载劑。 155490.doc -12- 201138808 【實施方式】 定義 如本文中所使用，以下術語及短語應具有下文所述之含 義。除非另有定義，否則本文中所使用之所有技術及科學 術語均具有與一般技術者通常所瞭解相同之含義。 除非本文另外明確指示’否則單數形式「一」及「該」 包括複數個指示物。 術語「包含」以包涵性開放意義使用，此意謂可包括其 他要素。 術語「包括」用於意謂「包括（但不限於）」。「包括」 及「包括（但不限於）」可互換使用。 術6吾「抗體樣蛋白質」係指具有「免疫球蛋白樣摺疊」
之非免疫球蛋白蛋白質，亦即包含結構上組織成一組β或P 樣股，從而形成β片之約80-150個胺基酸殘基，其中該等β 或β樣股藉由插入環部分而連接。該等ρ片在產生兩個由連 接β或β樣股之環構成的「面」時，形成抗體樣蛋白質之穩 定核心。如本文所述，此等環可經改變而產生特定配位體 結合位點，且可在不破壞蛋白質之總體穩定性情況下產生 該等變化。該種抗體樣蛋白質之―實例為「基於纖維結合 蛋白之骨架蛋白質」，其意謂基於纖維結合蛋白m型結構 域（Fn3)之多肽。在—態樣中，抗體樣蛋白質基於第十纖 維結合蛋白III型結構域（i〇Fn3)。 「多肽」意謂具有兩個或兩個以上胺基酸之任何序列， 而與長度、轉譯後修飾或功能無關。「多肽」、「肽」及 155490.doc •13- 201138808 「蛋白質」在本文中可互換使用。 「胺基酸序列一致性百分比（％)」在本文中係定義為： 在比對序列及必要時引入間隙，以達成最大序列一致性百 分比，且不將任何保守性取代視為序列一致性之一部分 後，第一序列中與第二序列中之胺基酸殘基一致之胺基酸 殘基的百分比。出於測定胺基酸序列一致性百分比之目 的，比對可以屬於此項技術技能範圍内之多種方式達成， 例如使用公開可得到之電腦軟體，諸如BLAST、BLAST-2 ALIGN、ALIGN-2或 Megalign(DNASTAR)軟體。熟習 此項技術者可確定適用於量測比對之參數，包括在所比較 之序列全長上達成最大比對所需的任何演算法。然而，出 於本文之目的’胺基酸序列一致性％值如下文所述藉由使 用序列比較電腦程式ALIGN-2來獲得。ALIGN-2序列比較 電腦程式係由Genentech，Inc.創造，其已在美國版權局 (U_S· Copyright Office)(Washington D.C.，20559)與用戶文
件一起備案’在美國版權局其以美國版權登記號 TXU510087登記，且可公開經由 Genentech，Inc.(South San Francisco，Calif)得到。ALIGN-2程式應經編譯以於UNIX 操作系統、較佳為數位UNIX V4.0D上使用。所有序列比 較參數均由ALIGN-2程式設定且並不變化。 出於本文之目的，如下計算特定胺基酸序列A與特定胺 基酸序列B之胺基酸序列一致性％(其或者可表述為特定胺 基酸序列A與特定胺基酸序列B具有或包含某一胺基酸序 列一致性％) : 10〇x(X/Y)，其中X為在A與b之序列比對程 155490.doc 14 201138808
式ALIGN-2比對中由該程式評定為一致匹配之胺基酸殘基 的數目，且其中Y為B之胺基酸殘基的總數。應瞭解，若 胺基酸序列A之長度不等於胺基酸序列B之長度，則人與B 之胺基酸序列一致性％不會等於B與A之胺基酸序列一致性 %。 術語「治療有效量」係指可有效治療哺乳動物之疾病或
病症及/或在一定程度上緩解與該病症相關之一或多種症 狀之藥物的量。 術語「SABA」係指血清白蛋白結合4dnectinsTMdenjm Albumin Binding A_dneCtinSTM)。AdnectinsTM(Adnexus， Bristol-Myers Squibb R&D Company)為基於第十纖維結合 蛋白in型結構域’亦即Fn3之第十模組（1〇Fn3)之配位體結 合骨架蛋白質。 胺基酸序列或化合物之半衰期（^)通常可定義為在活體 内多肽之血清濃度降低5G%所用料間，料低係由於例 如藉由天然機制降解該序列或化合物及/或清除或螯合該 序列或化合物。半衰期可以此項技術中已知之任何方式來
測定，諸如利用藥物動力學分析。參見例如M⑽㈣及D bon「Ph_C0klneties」，由 μ_ιι)61^ 出版第 2 修訂版（_。半衰期可使用諸如—、μ及曲線下 面積(AUC)之參數來表示。「半衰期延長」係指此等參數 中之任-者、此等參數中之任兩者或所有三個此等參數增 加。在某些實施財’半衰期延長係指t“增加，而…2_ a或AUC或兩者有增加或無增加。 155490.doc •15- 201138808 術語「pk」為「藥物動力學」之縮寫且涵蓋化合物之 性質，包括例如個體對其之吸收、分佈、代謝及消除。 「ΡΚ調節蛋白質」或「ΡΚ部分」係指當與生物活性分子 融合或與其一起投與時影響生物活性分子之藥物動力學性 質的任何蛋白質、肽或部分。 綜述
Fn3係指纖維結合蛋白之in型結構域。Fn3結構域為小 的、單體的、可溶且穩定《其缺乏二硫鍵且因此在還原條 件下為穩定的。Fn3之總體結構類似於免疫球蛋白摺疊。 依自N端至C端之次序，Fn3結構域包含β或β樣股，A; 環，ΑΒ ; β或β樣股，Β ;環，BC ; β或β樣股，C ;環， CD ; β或β樣股，D ;環，DE ; β或β樣股，Ε ;環，EF ; β 或β樣股，F ;環’ FG ;及β或β樣股，g。七個反平行β股 排列成兩個β片，其在產生兩個由連接β或β樣股之環構成 的「面」時，形成穩定核心。環ΑΒ、CD及EF位於一個面 上且環BC、DE及FG位於相反面上。任何或所有環AB、 BC、CD、DE、EF及FG均可參與配位體結合。Fn3存在至 少15個不同模組’且雖然該等模組之間的序列同源性較 低，但其三級結構均共有高度相似性。
Adnectins™(Adnexus » Bristol-Myers Squibb R&D Company) 為基於第十纖維結合蛋白III型結構域，亦即Fn3之第十模 組（1GFn3)之配位體結合骨架蛋白質。天然存在之人類1QFn3 的胺基酸序列如SEQ ID NO: 1所示：
F5DFP/?DIEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGETG 155490.doc 16 201138808 GNSPV〇EFTVPGSKSTATISGLKPGVrtyrf yjγγ ^ SPASSKPISINYRT (SEQ ID NO:l)(對 ab、CD 及 EF 環加有 下劃線，且對BC、FG及DE環以粗體突出）。 在SEQ ID ΝΟ:1中’ AB環對應於殘基15·16，BC環對應 於殘基21-30，CD環對應於殘基39-45，DE環對應於殘基 51-56，EF環對應於殘基60-66 ’且fg環對應於殘基76-87。（Xu 等人，Chemistry & Biology 2002 9:933-942)。 BC、DE及FG環沿分子之一個面排列且ab、CD及EF環沿 分子之相反面排列。在SEQ ID NO: 1中，β股A對應於殘基 9- 14，β股B對應於殘基17-20，β股C對應於殘基31_38，β 股D對應於殘基46-50 ’ β股Ε對應於殘基57-59，β股F對應 於殘基67-75 ’且β股G對應於殘基88-94。該等股經由相應 環彼此連接，例如股Α及Β經由環ΑΒ以股A、環ΑΒ、股Β 構造等連接。SEQ ID N〇:l之開頭8個胺基酸（上文斜體）可 能缺失’而仍保留分子之結合活性。形成疏水性核心 (「核心胺基酸殘基」）所涉及之殘基包括對應於SEQ ID NO: 1之以下胺基酸的胺基酸：L8、V10、A13、L18、 120、W22、Y32、134、Y36、F48、V50、A57、159、 L62、Y68、170、V72、A74、188、190及 Y92，其中核心 胺基酸殘基由單字母胺基酸密碼、隨後其在SEQ ID NO: 1 中之位置表示。參見例如Dickinson等人，J. Mol· Biol. 236: 1079-1092 (1994)。 10Fn3在結構及功能上類似於抗體，尤其抗體之可變 區。雖然1GFn3結構域可描述為「抗體模擬物」或「抗體 155490.doc -17- 201138808 樣蛋白質」’但其提供許多優於習知抗體之優點。詳言 之，與抗體相比，.其展現較好摺疊及熱穩定性性質，且其 缺乏已知在某些條件下妨礙或阻礙適當摺疊之二硫鍵。例 示性基於血清白蛋白1GFn3之結合物主要為Tm平均為約 65°C之單體。 10Fn3之BC、DE及FG環類似於免疫球蛋白之互補決定區 (CDR)。在此等環區中胺基酸序列之變化可改變1〇Fn3之結 合特異性。亦可製備在AB、CD及EF環中具有修飾之1QFn3 結構域以產生結合於所需標靶之分子。環外之蛋白質序列 類似於免疫球蛋白之構架區且在1GFn3之結構構形中起作 用。1GFn3之框架樣區中的變化可允許達到結構構形並不 如此改變以致破壞配位體結合的程度。產生1GFn3配位體 特異性結合物之方法已描述於以下專利中：PCT公開案第 WO 00/034787號、第 WO 01/64942號及第 WO 02/032925 號，其揭示高親和力TNFa結合物；PCT公開案第WO 2008/097497號，其揭示高親和力VEGFR2結合物；及PCT 公開案第WO 2008/066752號，其揭示高親和力IGFIR結合 物。討論1GFn3結合物及選擇結合物之方法的其他參考文 獻包括PCT公開案第WO 98/056915號、第WO 02/081497號 及第WO 2008/03 1098號及美國公開案第2003 186385號。 如上文所述，對應於SEQ ID NO: 1之殘基21-30、5卜56 及76-87的胺基酸殘基分別定義BC、DE及FG環。然而，應 瞭解並非環區中之每一殘基均需要經修飾以產生對所需標 靶（諸如人類血清白蛋白）具有強親和力之1〇Fn3結合物。舉 155490.doc •18· 201138808 例而言，在本文所述之許多實例中，僅對應於Bc環之胺 基酸23-30及DE環之52-55的殘基經修飾以產生高親和力 〇Fn3結合物。因此，在某些實施例中，BC環可由對庳於 SEQ ID NO: 1之殘基23-30的胺基酸定義，且DE環可由對 應於SEQ ID NO: 1之殘基52-55的胺基酸定義。另外，亦 可製造環區中之插入及缺失，而仍產生高親和力1〇Fn3結 合物。舉例而言，SEQ ID NO: 4(SABA 1)為HSA結合物之 一實例’其中FG環含有四個胺基酸缺失，亦即對應於SEQ ID NO·· 1之21-29的11個殘基經7個胺基酸置換。SEq ID NO. 113為HSA結合物之一實例，其中FG環含有胺基酸插 入’亦即對應於SEQ ID NO:1之胺基酸21-29的11個殘基經 12個胺基酸置換。 因此’在一些實施例中，相對於野生型人類i〇Fn3中之 相應環’選自BC、DE及FG之一或多個環的長度可延長或 縮短。在一些實施例中，環之長度可延長2-25個胺基酸。 在一些實施例中，環之長度可減少1-11個胺基酸。詳言 之，1QFn3之FG環的長度為12個殘基，而抗體重鏈中之相 應環在4-28個殘基範圍内。因此，為最佳化抗原結合， 1GFn3之FG環的長度及序列可改變以涵蓋4-28個殘基之 CDR3範圍以獲得最大可能可撓性及抗原結合親和力。在 一些實施例中，整合素結合基元「精胺酸-甘胺酸-天冬胺 酸」（RGD)可經極性胺基酸-中性胺基酸·酸性胺基酸序列 置換（沿N端至C端方向）。 1QFn3通常以對應於SEQ ID NO: 1之數字1的胺基酸殘基 155490.doc -19- 201138808 開始。然而’具有胺基酸缺失之結構域亦涵蓋於本發明 中。在一些實施例中’對應於SEq ID NO: 1之開頭8個胺 基酸的胺基酸殘基缺失。其他序列亦可添加至N或C端。 舉例而言’另一MG序列可置於10Fn3之N端。Μ通常會裂 解’在Ν端留下g ^在一些實施例中，延長序列可位於 10Fn3 域之 C 端’例如 EIDKPSQ (SEQ ID NO: 54)、 EIEKPSQ (SEQ ID NO: 60)或 EIDKPSQLE (SEQ ID NO: 61)。該等C端序列在本文中稱為尾部或延長部分且在本文 中進一步描述。在一些實施例中，His6標籤可位於N端或c 端0 i〇Fn3之非配位體結合序列，亦即「i〇Fn3骨架」可改 變，其限制條件為1GFn3保留配位體結合功能及/或結構穩 定性。在一些實施例中，Asp 7、Glu 9及Asp 23中之一或 多者經另一胺基酸置換，例如非帶負電胺基酸殘基（例如 Asn、Lys等）。已報導此等突變具有在中性pH值下使突變 Fn3之穩疋性提向至高於野生型形式之作用（參見pcT公 開案第WO 02/04523號）β已揭示有益或中立之ι〇ρ·η3骨架 中的各種其他變化。參見例如Bat〇ri等人，pr〇tein Eng. 2002 15(12):1015-20 ; Koide 等人，Biochemistry 2001 40(34):10326-33。
Fn3骨架可藉由一或多個保守性取代來修飾。10ρη3骨 架中之多達5〇/〇、1〇%、20%或甚至3〇%或更多胺基酸可藉 由保守性取代來改變而不實質上改變〗〇Fn3對配位體之親 和力。舉例而言，骨架修飾較佳使i〇Fn3結合物對配位體 155490.doc •20· 201138808 之結合親和力降低至小於W1⑽、1/5G、i/25、i/iq、ι/5或 "2。可能該等變化將改變，n3之活體内免疫原性，且雖 然免疫原性降低，但該等變化將為所需的。如本文十所使 用 保寸性取代」為在物理或功能上類似於相應參考殘 基之殘基。亦即，保守性取代及其參考殘基具有類似尺 寸、形狀、電荷、化學性質(包括形成共價鍵或氫鍵之能 力）或其類似性質。較佳保守性取代為滿足Dayh〇ff等人， Atlas of Protein Sequence and Structure 5:345-352 (1978Λ 增刊）中對可接受之點突變所定義之標準的彼等保守性取 代。保守性取代之實例為以下各組中之取代：（幻纈胺酸、 甘胺酸，（b)甘胺酸、丙胺酸；（c)纈胺酸、異白胺酸、白 胺酸；（d)天冬胺酸、麩胺酸；（幻天冬醯胺、麩醯胺酸； ⑴絲胺酸、蘇胺酸；（g)離胺酸、精胺酸、曱硫胺酸；及 (h)苯丙胺酸、酪胺酸。 在某些實施例中，基於10Fn3骨架之抗體樣蛋白質通常 可由以下序列定義：
EyVAAT(X)flSLLI(X)xYYRITYGE(X^〇EFTV(X>)J,ATirX>).D YTITVYAV(X)JSINYRT (SEP ID N0:2)= 在SEQ ID NO:2中，AB環由Χα表示，CD環由表示， EF環由Xc表示，BC環由Xx表示，DE環由Xy表示，且FG環 由Xz表示。X表示任何胺基酸且X後之下標表示胺基酸數 目之整數。詳言之，α可為1-15、2-15、1-10、2-10、1-8、2-8、1-5、2-5、1-4、2-4、1-3、2-3 或 1-2個胺基酸中 之任一者；且6、c、X、j；及ζ可各獨立地為2-20、2-15、2- 155490.doc •21 · 201138808 6·20、6-15、6-10、6- 10、2-8、5-20、5-15、5-10、5-8 8、2-7、5-7或6-7個胺基酸中之任—者。在較佳實施例 中’ α為2個胺基酸，0為7個胺基酸，咖個胺基酸，以9 個胺基酸’少為6個胺基酸，且硪12個胺基酸。相對於seq ID NO: 1所示之相應胺基酸，β股之序列可在所有7個骨架 區中具有0至10、0至8、0至6、〇至5、〇至4、〇至3、〇至2 或0至1個取代、缺失或添加中之任一者。在一例示性實施 例中，相對於SEQ ID N0: i所示之相應胺基酸，β股之序 列可在所有7個骨架區中具有〇至10、〇至8、〇至6、〇至5、 0至4、0至3、0至2或0至1個保守性取代中之任一者。在某 些實施例令，核心胺基酸殘基為固定的且任何取代、保守 性取代、缺失或添加存在於除核心胺基酸殘基外之殘基 處。在例示性實施例中，由（X),、（乂)3；及（χ)ζ表示之BC、 DE及FG環分別經包含來自下表所示之任一HSA結合物 (亦即表 2 中之 SEQ ID NO: 4、8、12、16、20及 24-44)之 BC、DE及FG環序列的多肽置換。 在某些實施例中，基於1GFn3骨架之抗體樣蛋白質通常 可由以下序列定義： EVVAATPTSLLirX^YYRITYGETGGNSPVOEFTVrxV.ATTS GLKPGVDYTITVYAV(X)JSINYRT ί^.Ο ID ΝΟ:3)。 在SEQ ID ΝΟ:3中，BC環由Χχ表示，DE環由Xy表示， 且FG環由Xz表示。X表示任何胺基酸且X後之下標表示胺 基酸數目之整數。詳言之，X、y及z可各獨立地為2-20、2-15、2-10、2-8、5-20、5-15、5-10、5-8、6-20、6-15、6- 155490.doc -22- 201138808 1〇 6 8、2-7、5-7或6-7個胺基酸中之任一者。在較佳實 施例中，X為9個胺基酸，丫為6個胺基酸，且2為12個胺基 ^相對於SEQ ID N0: 1所示之相應胺基酸，β股之序列 可在所有7個骨架區中具有〇至10、0至8、0至6、0至5、0 至4、0至3、〇至2或〇至丨個取代、缺失或添加中之任一 者。在一例示性實施例中，相對於SEQ ID NO: 1所示之相 應胺基酸’ β股之序列可在所有7個骨架區中具有〇至1〇、〇 至8、0至6、〇至5、〇至4、〇至3、〇至2或0至1個保守性取 代中之任一者。在某些實施例中，核心胺基酸殘基為固定 的且任何取代、保守性取代、缺失或添加存在於除核心胺 基酸殘基外之殘基處。在例示性實施例中，由（X)x、（X)y 及（X)z表不之Bc、DE及FG環分別經包含來自下表2中所示 之任一 HSA結合物（亦即表2中之SEQ ID NO: 4、8、12、 16、20及24-44)之BC、DE及FG環序列的多肽置換。 具有ED尾部之i〇Fn3結構域 在一態樣中’本發明提供一種包含第十纖維結合蛋白m 型（Fn3)結構域之多肽，其中該ι〇ρη3結構域⑴相對於野 生型Fn3結構域’在ab、BC、CD、DE、EF及F〇環中之 一或多者中包含經修飾之胺基酸序列；（ii)結合於野生型 Fn3結構域不結合之標靶分子；且…丨）包含具有序列 (£〇)11之(：端尾部，其中11為2-1〇、2-8、2-5、3-1〇、3-8、3-7、3-5 或 4-7之整數，或其中11為2、3、4、5、6、7、8、9 或10 〇 在某些實施例中，i〇Fn3結構域包含與SEQIDNO: 1之殘 155490.doc •23- 201138808 基9-94所示的胺基酸序列具有至少60%、65%、70%、 75%、80%、85%、90%、95%、97%、98%或 99%—致性的 胺基酸序列。在某些實施例中，10Fn3結構域包含SEQ ID NO: 1、2或3。在某些實施例中，10Fn3結構域包含SEQ ID NO: 1之胺基酸9-94。 在某些實施例中，具有ED尾部之^Fn3結構域在C端包含 緊接著ED重複序列之E、I或EI。在一些實施例中，ED重 複序列提高1QFn3結構域之溶解度及/或減少其聚集。 在某些實施例中，相對於野生型10Fn3域，具有ED尾部 之1()Fn3域在BC、DE及FG環之每一者中包含經修飾之胺基 酸序列。在其他實施例中，具有ED尾部之1GFn3結構域結 合於所需標靶之KD為1 μΜ或以下。 血清白蛋白結合物 1〇Fn3結構域由於其約1〇 kDa之小尺寸而經由腎過濾及降 解自循環快速清除（ti/2=在小鼠體内15-45分鐘；在狼體内3 小時）。在某些態樣中，本申請案提供特異性結合於血清 白蛋白（例如人類血清白蛋白（HSA))以延長丨〇Fn3結構域之 ti/2的1GFn3結構域》 HSA之血清濃度為6〇〇 μΜ且在人體内t1/2為19天。HSA 之ti/2延長已部分歸因於其經由新生^受體（FcRn)再循環。 在經由内體攝取至内皮細胞中後，HSA以pH值依賴性方式 結合FcRn;此相互作用使hSA再循環回到血流中，從而分 流至遠離溶酶體降解》FcRn經廣泛表現且認為再循環路徑 為組成性的。在大多數細胞類型中，大部分FcRn存在於細 155490.doc •24· 201138808 胞内分選内體中。HSA容易藉由流體相胞飲作用之非特異 性機制内在化且由FcRn自溶酶體降解中救出。在内體中所 見之酸性pH值下，HSA對FcRn之親和力增加（在pH 6 〇下 為5 μΜ)。一旦結合於FcRn ’則HSA分流至遠離溶酶體降 解路徑，胞轉（transcytosed)至細胞表面並在細胞表面釋 放。 在一態樣中，本發明提供包含血清白蛋白結合i〇Fn3結 構域之抗體樣蛋白質。在例示性實施例中，本文所述之金 清白蛋白結合10Fn3蛋白質結合於HSA之KD為小於3 μΜ、 2.5 μΜ、2 μΜ、1.5 μΜ、1 μΜ、500 ηΜ、1〇〇 ηΜ、50 ηΜ、10 ηΜ、1 ηΜ、500 ΡΜ、100 ΡΜ、50 ΡΜ或 1〇 ρΜ。 在某些貫施例中，本文所述之血清白蛋白結合ι〇ρη3蛋白 質在25°C或37°C下在5.5至7_4之pH值範圍内結合於HSA之 KD 為小於 3 μΜ、2.5 μΜ、2 μΜ、1.5 μΜ、1 μΜ、500 ηΜ、100 ηΜ、50 ηΜ、10 ηΜ、1 ηΜ、500 ρΜ、1〇〇 ρΜ、 50 ρΜ或10 ρΜ。在一些實施例中，與在7 4或更大之阳值 下對HSΑ之結合親和力相比’本文所述之血清白蛋白蜂人 1吁113蛋白質在小於7.4之？11值下較緊密地結合於1^八。 在某些實施例中’本文所述之HSA結合10Fn3蛋白質亦可 結合來自狼、大鼠或小鼠中之一或多者的血清白蛋白。在 某些實施例中’本文所述之血清白蛋白結合i〇Fn3蛋白質 結合於恆河猴血清白蛋白（RhSA)或食蟹獼猴血清白蛋白 (CySA)之 KD 為小於 3 μΜ、2.5 μΜ、2 μΜ、1,5 μΜ、j μΜ、500 ηΜ ' 100 ηΜ、50 ηΜ、10 ηΜ、1 ηΜ ' 500 ΡΜ咬 155490.doc -25- 201138808 100 pM。 在某些實施例中，本文所述之血清白蛋白結合1GFn3蛋 白質結合於HSA之結構域I及/或結構域II。在一實施例 中，本文所述之血清白蛋白結合1 QFn3蛋白質不結合於HSA 之結構域III。 在某些實施例中’血清白蛋白結合1GFn3(SABA)包含與 野生型10Fn3結構域（SEQ ID NO: 1)具有至少40%、50%、 60%、70%、75%、80%或85%—致性的序列。在一實施例 中，相對於野生型1QFn3結構域，BC、DE或FG環中之至少 一者經修飾。在另一實施例中，相對於野生型1GFn3結構 域，BC、DE或FG環中之至少兩者經修飾。在另一實施例 中，相對於野生型1QFn3結構域，BC、DE及FG環中之所有 三者均經修飾。在其他實施例中，SABA包含與表2中所示 之 26個核心 SABA序列（亦即 SEQ ID NO: 4、8、12、16、 20及24-44)中之任一者或表2中所示之延長SABA序列（亦即 SEQ ID NO: 89-116，減去6xHIS標籤）中之任一者具有至 少 40%、50%、60% ' 70%、75%、80%、85% ' 90%或 95% 一致性。 在某些實施例中，如本文所述之SABA可包含如SEQ ID NO: 2或3所示之序列，其中由（X)x、（X)j^ (X)z表示之 BC、DE及FG環分別經來自26個核心SAB A序列（亦即表2中 之 SEQ ID NO: 4、8、12、16、20及 24-44)中之任一者或與 26個核心SABA序列之BC、DE及FG環序列至少75%、 80%、85%、90%、95%、97%、98% 或 99%—致之序列的 155490.doc -26- 201138808 一組各別指定BC、DE及FG環置換。在例示性實施例中， 如本文所述之SABA由SEQ ID NO: 3定義且具有來自26個 核心SABA序列（亦即表2中之SEQ ID NO: 4、8、12、16、 20及24-44)中之任一者的一組BC、DE及FG環序列。相對 於SEQ ID NO: 1之骨架胺基酸殘基，該等SABA之骨架區 可具有0至20、0至15、0至10、〇至8、0至6、0至5、〇至 4、0至3、0至2或0至1個取代、保守性取代、缺失或添加 中之任一者。舉例而言，SABA1具有SEQ ID NO: 4所示之 核心序列且包含如SEQ ID NO: 5-7分別所示之BC、DE及 FG環。因此，基於SABA1核心之SABA可包含SEQ ID NO: 2或3，其中（X)x 包含SEQ ID NO: 5，（X)y 包含 SEQ ID NO: 6，且（X)z包含SEQ ID NO: 7。預期使用來自其他SABA核 心序列之該組BC、DE及FG環的類似構築體。相對於SEQ ID NO: 1之骨架胺基酸殘基，該等SABA之骨架區可包含0 至 20、0 至 15、0 至 10、0 至 8、0 至 6、0 至 5、0 至 4、0 至 3、 0至2或0至1個取代、保守性取代、缺失或添加中之任一 者。可進行該等骨架修飾，只要SABA能夠以所需KD結合 血清白蛋白（例如HSA)即可。 在某些實施例中，SABA(例如SABA核心序列或基於如 上文所述者之序列）可經修飾以包含N端延長部分序列及/ 或C端延長部分序列。例示性延長部分序列展示於表2中。 舉例而言，稱為SABA1.1之SEQ ID NO: 89包含具有N端序 列 MGVSDVPRDLE (SEQ ID NO: 45，稱為 AdNTl)及 C 端序 列 EIDKPSQ (SEQ ID NO: 54，稱為 AdCTl)之核心 SABA 1 155490.doc ·27· 201138808 序列（SEQ ID NO: 4)。然而，SABA1.1進一步在C端包含 His6標籤，應瞭解His6標籤完全視情況存在且可位於N或C 端延長部分序列中之任何地方。此外，表2中所提供之任 一例示性N或C端延長部分序列（SEQ ID NO: 45-64及215) 及其任何變異體可用於修飾表2中所提供之任何特定SAB A 核心序列。在某些實施例中，表2中所提供之連接子序列 (SEQ ID NO: 65-88、216-221 及 397)可單獨或與 SEQ ID NO: 54-64或215中之一者組合用作C端尾部序列。 在某些實施例中，C端延長部分序列（亦稱為「尾部」） 包含E及D殘基，且長度可為8至50、10至30、10至20、5 至10及2至4個胺基酸。在一些實施例中，尾部序列包括基 於ED之連接子，其中序列包含ED之串聯重複序列。在例 示性實施例中，尾部序列包含2-10、2-7、2-5、3-10、3-7、3-5、3、4或5個ED重複序列。在某些實施例中，基於 ED之尾部序列亦可包括其他胺基酸殘基，例如：EI、 EID、ES、EC、EGS及EGC。該等序列部分基於已知 八(11^化111^尾部序列，諸如 EIDKPSQ (SEQ ID NO: 54)，其 中殘基D及K已被移除。在例示性實施例中，基於ED之尾 部在ED重複序列之前包含E、I或EI殘基。 在其他實施例中，當設計SABA融合分子，例如SEQ ID NO: 147(SABAl-FGF21vl6)(其中 EIEDEDEDEDED 與 GSGSGSGS連接）時，尾部序列可視需要與其他已知連接 子序列（例如表2中之SEQ ID NO: 65-88、216-221及397)組 合。 155490.doc -28- 201138808 血清白蛋白結合AdnectinTM(SABA)之融合物 本發明之一態樣提供包含血清白蛋白結合1〇Fn3(SABA) 及至；一個其他部分之結合物。該其他部分可適用於任何 診斷性、成像或治療性目的。 在某些實施例中，相對於不與SABA結合之部分的血清 半衰期，與SABA融合之部分的血清半衰期得到延長。在 某些實施例中，SABA融合物之血清半衰期為不與SABA融 合之部分的血清半衰期之至少2〇、4〇、6〇、80、1〇〇、 120、150、180、200、400、600、800、1000、1200、 1500、1800、1900、2000、2500 或 3000°/ρ 在其他實施例 中，SABA融合物之血清半衰期為不與SABA融合之部分的 血清半衰期之至少1.5倍、2倍、2.5倍、3倍、3.5倍、4 倍、4.5倍、5倍、6倍、7倍、8倍、10倍、12倍、13倍、 15倍、17倍、20倍、22倍、25倍、27倍、30倍、35倍、40 倍或50倍《在一些實施例中，5αβΑ融合物之血清半衰期 為至少2小時、2 · 5小時、3小時、4小時、5小時、6小時、 7小時、8小時、9小時、1〇小時、15小時、20小時、25小 時、30小時、35小時、40小時、50小時、60小時、70小 時、80小時、90小時、1〇〇小時、11〇小時、12〇小時、13〇 小時、135小時、140小時、150小時、160小時或200小 時。 在某些實施例中’ SABA融合蛋白結合於HSa之kd為小 於 3 μΜ、2.5 μΜ、2 μΜ、1.5 μΜ、1 μΜ、500 nM、100 ηΜ、50 ηΜ、10 ηΜ、1 ηΜ、500 ρΜ、100 ρΜ、50 ρΜ或 155490.doc -29- 201138808 10 pM。在某些實施例中，SABA融合蛋白在25°C或37°C下 在5.5至7.4之pH值範圍内結合於HSA之KD為小於3μM、 2.5 μΜ、2 μΜ、1.5 μΜ、1 μΜ、500 ηΜ、100 ηΜ、50 ηΜ、10 ηΜ、1 ηΜ、500 ρΜ、100 ρΜ、50 ρΜ或 10 ρΜ。 在一些實施例中，與在pH 7.4下結合相比，SABA融合蛋 白在小於7.4之pH值下較緊密地結合於HS A。 因此，本文所述之SABA融合分子適用於藉由在治療性 部分與SABA之間形成融合物來延長治療性部分（例如 FGF21)之半衰期。該等融合分子可用於治療對融合物中所 含之治療性部分的生物活性有反應之病狀。本發明涵蓋 SABA融合分子於由任一以下蛋白質或分子降解所引起之 疾病中的用途。 異源部分 在一些實施例中，SABA與第二部分融合，該第二部分 為小有機分子、核酸或蛋白質。在一些實施例中，SABA 與治療性部分融合，該治療性部分靶向受體、受體配位 體、病毒外殼蛋白、免疫系統蛋白質、激素、酶、抗原或 細胞信號傳導蛋白質。該融合物可藉由將第二部分連接於 SABA分子之末端（亦即SABA-治療性分子或治療性分子-SABA配置）來形成。 在例示性實施例中，該治療性部分為VEGF、VEGF-Rl、VEGF-R2、VEGF-R3、Her-l、Her-2、Her-3、EGF-I、EGF-2、EGF-3、α3、cMet、ICOS、CD40L、LFA-I、 c-Met、ICOS、LFA-I、IL-6、Β7·1、W1.2、0X40 ' IL- 155490.doc -30- 201138808
lb、TACI、IgE、BAFF 或 BLys、TPO-R、CD19、CD20、 CD22、CD33、CD28、IL-I-R1、TNF-α、TRAIL-RJ、補體 受體1、FGFa、骨橋蛋白、玻璃連結蛋白、埃弗林 (Ephrin)Al-A5、埃弗林 B1-B3、α-2-巨球蛋白、CCL1、 CCL2、CCL3、CCL4、CCL5、CCL6、CCL7、CXCL8、 CXCL9、CXCLIO、CXCLI 1、CXCL12、CCL13、 CCL14、CCL15、CXCL16、CCL16、CCL17、CCL18、 CCL19、CCL20、CCL21、CCL22、PDGF、TGFb、 GMCSF、SCF、p40(IL12/IL23)、ILIb、ILIa、ILlra、 IL2、IL3、IL4、IL5、IL6、IL8、ILIO、IL12、IL15、 IL23、Fas、FasL、Flt3 配位體、41BB、ACE ' ACE-2、 KGF、FGF-7、SCF、網蛋白（Netrin)l、網蛋白 2、IFNa、 IFNb、IFNg、卡斯蛋白酶（Caspase)2、卡斯蛋白酶3、卡斯 蛋白酶7、卡斯蛋白酶8、卡斯蛋白酶10、ADAM SI、 ADAM S5、ADAM 8、ADAM 9、ADAM 15、ADAM TS1、ADAM TS5 ;脂聯素、ALCAM、ALK-I、APRIL、 填脂結合蛋白（Annexin)V、血管生成素、雙調蛋白 (Amphiregulin)、金管位蛋白（Angiopoietin)l、血管位蛋白 2、血管位蛋白4、87-1/€〇80、87-2/〇〇86、87-111、；87-H2、B7-H3、Bcl-2、BACE-I、BAK、BCAM、BDNF、 bNGF、bECGF、BMP2、BMP3、BMP4、BMP5、BMP6、 BMP7、BMP8 ; CRP、鈣黏素6、鈣黏素8、鈣黏素11 ;組 織蛋白酶A、組織蛋白酶B、組織蛋白酶C、組織蛋白酶 D、組織蛋白酶E、組織蛋白酶L、組織蛋白酶S、組織蛋 155490.doc -31· 201138808 白酶V、組織蛋白酶 X; CDl la/LFA-l、LFA-3、GP2b3a、 GH受體、RSV F蛋白、IL-23(p40、pl9)、IL-12、CD80、 CD86、CD28、CTLA-4、α4-β1、α4-β7、TNF/淋巴毒素、 IgE、CD3、CD20、IL-6、IL-6R、BLYS/BAFF、IL-2R、 HER2、EGFR、CD33、CD52、地高辛（Digoxin)、Rho (D)、水痘、肝炎、CMV、破傷風、牛痘、抗蛇毒、肉毒 桿菌、Trail-Rl、Trail-R2、cMet、TNF-R 家族（諸如 LA NGF-R)、CD27、CD30、CD40、CD95、淋巴毒素 a/b 受 體、Wsl-I、TL1A/TNFSF15、BAFF、BAFF-R/TNFRSF13C、 TRAIL R2/TNFRSF10B 、 TRAIL R2/TNFRSF10B 、
Fas/TNFRSF6 CD27/TNFRSF7、DR3/TNFRSF25、HVEM/ TNFRSF14、TROY/TNFRSF19、CD40 配位體/TNFSF5、 BCMA/TNFRSF17、CD30/TNFRSF8、LIGHT/TNFSF14、 4-1BB/TNFRSF9 ' CD40/TNFRSF5 ' GITR/[y]NFRSF 18、 骨保護蛋白 /TNFRSF1 IB、RANK/TNFRSF1 IA、TRAIL R3/TNFRSF10C 、 TRAIL/TNFSFIO 、 TRANCE/RANK L/TNFSF11 、 4-lBBg己位體/TNFSF9 、 TWEAK/TNFSF12 、 CD40酉己位體/TNFSFS、Fas酉己位體/TNFSF6、REL/T/TNFIISF19L·、 APRIL/TNFSF13、DcR3/TNFRSF6B、TNF RI/TNFRSFIA、 TRAIL Rl/TNFRSFIOA、TRAIL R4/TNFRSF10D、CD30配 位體 /TNFSF8、GITR 配位體 /TNFSF18、TNFSF18、 TACI/TNFRSF13B、NGF R/TNFRSF16 、0X40 g己位體 /TNFSF4、TRAIL R2/TNFRSF10B、TRAIL R3/TNFRSF10C、 TWEAK R/TNFRSF12、BAFF/BLyS/TNFSF13、DR6/TNFRSF21 155490.doc -32- s 201138808 、TNF-a/TNFSFl A、Pro-TNF-a/TNFSFlA、淋巴毒素 β R/TNFRSF3、淋巴毒素 β R(LTbR)/Fc 嵌合體、TNF RI/TNFRSFIA 、 TNF-p/TNFSF IB 、 PGRP-S 、 TNF RI/TNFRSFIA、TNF RII/TNFRSFIB、EDA-A2、TNF-a/TNFSFIA、EDAR、XEDAR、TNF RI/TNFRSFIA。
備受關注的是以純化形式市售之人類標靶蛋白質以及結 合於此等標靶蛋白質之蛋白質。實例為：4EBP1、14-3-3 ζ、53BP1、2B4/SLAMF4、CCL21/6Ckine、4-1BB/TNFRSF9 、8D6A、4-1BB 配位體/TNFSF9、8·側氧基-dG、4-胺基-1,8-萘二甲醯亞胺、A2B5、胺肽酶LRAP/ERAP2、A33、 胺肽酶N/ANPEP、Aag、胺肽酶P2/XPNPEP2、ABCG2、胺 肽酶P1/XPNPEP卜 ACE、胺肽酶PILS/ARTS1、ACE-2、無 羊膜（Amnionless)、肌動蛋白、雙調蛋白、β-肌動蛋白、 ΑΜΡΚ α 1/2、活化素 A、ΑΜΡΚ α 1、活化素 ΑΒ、ΑΜΡΚ α 2、活化素Β、ΑΜΡΚ β 1、活化素C、ΑΜΡΚ β 2、活化素 RIA/ALK-2、雄激素 R/NR3C4、活化素 RIB/ALK-4、血管 生成素、活化素RIIA、血管位蛋白-1、活化素RIIB、血管 位蛋白-2、ADAM8、血管位蛋白-3、ADAM9、血管位蛋 白-4、ADAM10、血管位蛋白樣1、ADAM12、血管位蛋白 樣2、ADAM15、血管位蛋白樣3、TACE/ADAM17、血管 位蛋白樣4、ADAM19、血管位蛋白樣7/CDT6、ADAM33、 血管抑制素、ADAMTS4、磷脂結合蛋白A1/磷脂結合蛋白 I、ADAMTS5、磷脂結合蛋白A7、ADAMTS1、磷脂結合 蛋白A10、ADAMTSL-1/普克汀（Punctin)、填脂結合蛋白 155490.doc -33- 201138808 V、脂聯素/Acrp30、ANP、AEBSF、AP位點、聚蛋白聚 糖、APAF-I、聚集蛋白（Agrin)、APC、AgRP、APE、 AGTR-2、APJ、AIF、APLP-I、Akt、APLP-2、Akt卜載 脂蛋白（Apolipoprotein)AI、Akt2、載脂蛋白 B、Akt3、 APP、血清白蛋白、APRIL/TNFSF13、ALCAM、ARC、 ALK-I、阿特明（Artemin)、ALK-7、芳基硫酸酯酶 AJARSA、鹼性磷酸酶、ASAH2/N-醯基神經鞘胺醇醯胺水 解酶-2、a 2u-球蛋白、ASC、α-l-酸醣蛋白、ASGR1、α-胎蛋白、ASK1、ALS、ATM、釉母細胞ATRIP、 AMICA/JAML、奥羅拉（Aurora)A、AMIGO、奥羅拉 B、 AMIG02、阿星（Axin)-l、AMIG03、Axl、胺基酿化酶 /ACY1、天青殺素（Azurocidin)/CAP37/HBP、胺肽酶 A/ENPEP、B4GALT1、BIM、B7-1/CD80、6-生物素-17-NAD、B7-2/CD86、BLAME/SLAMF8 、B7-H1/PD-L1 、 CXCL13/BLC/BCA-1、B7-H2、BLIMP1、B7-H3、BIk、 B7-H4 ' BMI-I ' BACE-I > BMP-1/PCP ' BACE-2 ' BMP-2、Bad、BMP-3、BAFF/TNFSF13B、BMP-3b/GDF-10、 BAFF R/TNFRSF 13C、BMP-4、Bag-1、BMP-5、BAK、 BMP-6、BAMBI/NMA、BMP-7、BARD 1、BMP-8、Bax、 BMP-9、BCAM、BMP-10、Bcl-10、BMP-15/GDF-9B、 Bcl-2、BMPR-IA/ALK-3、Bcl-2 相關蛋白八1、6]\^11-IB/ALK-6、Bcl-w、BMPR-II、Bcl-x、BNIP3L、Bcl-xL、 BOC、BCMA/TNFRSF17、BOK、BDNF、BPDE、苯 f 醯 胺、短尾基因（Brachyury)、普通 β鏈、B-Raf、β IG-H3、 -34-
155490.doc s 201138808 CXCL14/BRAK、β細胞調節素、BRCA1、β-防禦素 (Defensin)2、BRCA2、BID、BTLA、雙聚糖（Biglycan)、 Bub-1、Bik 樣殺手蛋白、c-jun、CD90/Thyl、c-Rel、 CD94、CCL6/C10、CD97、Clq R1/CD93、CD151、 ClqTNFl、CD160、ClqTNF4、CD163、ClqTNF5、 CD164、補體組分 CIr、CD200、補體組分 CIs、CD200 R1、補體組分C2、CD229/SLAMF3、補體組分C3a、 CD23/Fc ε RII、補體組分 C3d、CD2F-10/SLAMF9、補體 組分C5a、CD5L、鈣黏素-4/R-鈣黏素、CD69、鈣黏素-6、CDC2、鈣黏素-8、CDC25A、鈣黏素-11、CDC25B、 鈣黏素-12、CDCP1、鈣黏素-13、CDO、鈣黏素-17、 CDX4、E-鈣黏素、CEACAM-l/CD66a、N-鈣黏素、 CEACAM-6、P-!丐黏素、親環蛋白（Cerberus)l、VE-在弓黏 素、CFTR、鈣結合蛋白（Calbindin)D、cGMP、鈣神經蛋 白A、Chem R23、飼神經蛋白B、飢莫瑞（Chemerin)、約網 織蛋白（Calreticulin)-2、趨化因子樣品包、CaM激酶II、殼 質酶（Chitinase)3樣 1、cAMP、殼三糖苦酶（Chitotriosidase)/ CHIT1、類大麻酚 Rl、Chkl、類大麻酚 R2/CB2/CNR2、 Chk2、CAR/NR1I3、CHL-1/L1CAM-2、碳酸酐酶 I、膽鹼 乙醯基轉移酶/CbAT、碳酸酐酶II、軟骨凝集蛋白 (Chondrolectin)、碳酸針酶III、脊索發生素（Chordin)、碳 酸酐酶IV、脊索發生素樣1、碳酸酐酶VA、脊索發生素樣 2、碳酸酐酶VB ' CINC-I、碳酸酐酶VI、CINC-2、碳酸酐 酶VII、CINC-3、碳酸酐酶VIII、卡拉斯賓（Claspin)、碳酸 155490.doc -35^ 201138808 酐酶IX、緊密連接蛋白（Claudin)-6、碳酸酐酶X、CLC、 碳酸酐酶XII、CLEC-I、碳酸酐酶XIII、CLEC-2、碳酸酐 酶XIV、CLECSF 13/CLEC4F、羧甲基離胺酸、 CLECSF8、叛肽酶 A1/CPA1、CLF-I、羧肽酶 A2、CL-P1/COLEC12、羧肽酶 A4、簇蛋白（Clusterin)、羧肽酶 m、 簇蛋白樣1、羧肽酶E/CPE、CMG-2、羧肽酶XI、CMV UL146、心肌營養蛋白（Cardiotrophin)-l、CMV UL147、 肌肽二肽酶 1、CNP、卡隆特（Caronte)、CNTF、CART、 CNTF Ra、卡斯蛋白酶、凝聚因子II/凝血酶、卡斯蛋白 酶-1、凝聚因子111/組織因子、卡斯蛋白酶-2、凝聚因子 VII、卡斯蛋白酶-3、凝聚因子X、卡斯蛋白酶-4、凝聚因 子XI、卡斯蛋白酶-6、凝聚因子XIV/蛋白C、卡斯蛋白酶-7、COCO、卡斯蛋白酶-8、黏結蛋白（Cohesin)、卡斯蛋白 酶-9、膠原蛋白I、卡斯蛋白酶-10、膠原蛋白II、卡斯蛋 白酶-12、膠原蛋白IV、卡斯蛋白酶-13、常見γ鏈/IL-2 R γ、卡斯蛋白酶肽抑制劑、COMP/凝血栓蛋白 (Thrombospondin)-5、過氧化氫酶、補體組分CIrLP、β-連 環蛋白（Catenin)、補體組分ClqA、組織蛋白酶1、補體組 分ClqC、組織蛋白酶3、補體因子D、組織蛋白酶6、補體 因子I、組織蛋白酶A、補體MASP3、組織蛋白酶B、連接 蛋白（Connexin)43、組織蛋白酶C/DPPI、接觸蛋白 (Contactin)-1、組織蛋白酶D、接觸蛋白-2/TAG1、組織蛋 白酶E、接觸蛋白-4、組織蛋白酶F、接觸蛋白-5、組織蛋 白酶Η、庫林（Corin)、組織蛋白酶L、庫努林（Cornulin)、 155490.doc •36· 201138808 組織蛋白酶Ο、CORS26/ClqTNF，3、組織蛋白酶S、大鼠皮 層幹細胞、組織蛋白酶V、皮質醇、組織蛋白酶XITJ?、 COUP-TF I/NR2F1、CBP、COUP-TF II/NR2F2、CCI、 COX-I、CCK-A R、COX-2、CCL28、CRACC/SLAMF7、 CCR1、C-反應十生蛋白、CCR2、肌酸激酶、肌肉/CKMM、 CCR3、肌酸酐、CCR4、CREB、CCR5、CREG、CCR6、 CRELD1、CCR7、CRELD2、CCR8、CRHBP、CCR9、 CRHR-I、CCRIO、CRIM卜 CD155/PVR、克里普托（Cripto) 、CD2、CRISP-2、CD3、CRISP-3、CD4、橫脈缺失 (Crossveinless)-2、CD4+/45RA-、CRTAM、CD4+/45RO-、 CRTH-2 ' CD4+/CD62L-/CD44 ' CRY1 > CD4+/CD62L+/CD44 、隱秘蛋白（Cryptic)、CD5、CSB/ERCC6、CD6、 CCL27/CTACK、CD8、CTGF/CCN2、CD8+/45RA-、 CTLA-4、CD8+/45RO-、庫比林（Cubilin)、CD9、 CX3CR1、CD14、CXADR、CD27/TNFRSF7、CXCL16、 CD27 配位體 /TNFSF7、CXCR3、CD28、CXCR4、 CD30/TNFRSF8、CXCR5、CD30 配位體 /TNFSF8、 CXCR6、CD31/PECAM-1、親環素蛋白（Cyclophilin)A、 CD34、Cyr61/CCN1、CD36/SR-B3、胱抑素 A、CD38、胱 抑素B、CD40/TNFRSF5、胱抑素C、CD40配位體 /TNFSF5、胱抑素D、CD43、胱抑素E/M、CD44、胱抑素 F、CD45、胱抑素Η、CD46、胱抑素H2、CD47、胱抑素 S、CD48/SLAMF2、胱抑素 SA、CD55/DAF、胱抑素 SN、 CD58/LFA-3、細胞色素c、CD59、Αρο細胞色素c、 155490.doc -37- 201138808 CD68 、Holo細胞色素c 、CD72 、細胞角蛋白 (Cytokeratin)8、CD74、細胞角蛋白 14、CD83、細胞角蛋 白 19、CD84/SLAMF5、西托寧（Cytonin)、D6、DISP1、 DAN、Dkk-1 、DANCE、Dkk-2、DARPP-32、Dkk-3 、 DAX1/NR0B1、Dkk-4、DCC、DLEC、DCIR/CLEC4A、 DLL1、DCAR、DLL4、DcR3/TNFRSF6B、d-螢光素、DC-SIGN、DNA連接酶 IV、DC-SIGNR/CD299、DNA 聚合物
β 、 DcTRAIL R1/TNFRSF23 、 DNAM-I 、 DcTRAIL R2/TNFRSF22、DNA-PKcs、DDIU、DNER、DDR2、Dopa 去缓酶 /DDC、DEC-205、DPCR-I、Decapentaplegic、 DPP6、核心聚糖（Decorin)、DPP A4、戴克汀（Dectin)-1/CLEC7A 、 DPPA5/ESG1 、 Dectin-2/CLEC6 A 、
DPPII/QPP/DPP7、DEP-1/CD148、DPPIV/CD26、沙漠刺 蜎因子（Desert Hedgehog)、DR3/TNFRSF25、結蛋白 (Desmin)、DR6/TNFRSF21、橋粒芯糖蛋白（Desmoglein)-1、DSCAM、橋粒芯糖蛋白-2、DSCAM-L1、橋粒芯糖蛋 白-3、DSPG3、散亂蛋白（Dishevelled)-l、Dtk、散亂蛋白-3、發動蛋白（Dynamin)、EAR2/NR2F6、EphA5、ECE-I、 EphA6、ECE-2、EphA7、ECF-L/CHI3L3、EphA8、ECM-I、EphBl、大腸桿菌抑制劑（Ecotin)、EphB2、EDA、 EphB3、EDA-A2、EphB4、EDAR、EphB6、EDG-I、埃弗 林、EDG-5、埃弗林-A1 ' EDG-8、埃弗林-A2、eEF-2、埃 弗林-A3、EGF、埃弗林-A4、EGF R、埃弗林-A5、 EGPJ、埃弗林-B、EG-VEGF/PK1、埃弗林-B1、eIF2 a、 155490.doc •38- s 201138808
埃弗林- B2、eIF4E、埃弗林-B3、EIk-Ι、埃匹根（Epigen)、 EMAP-II、表皮形態發生素（Epimorphin)/突觸融合蛋白 (Syntaxin)2、EMMPRIN/CD147、表皮調節素（Epiregulin)、 CXCL5/ENA、EPR-1/Xa受體、埃杜坎（Endocan)、ErbB2、 埃杜格林（Endoglin)/CD105、ErbB3、四聚糖(Endoglycan)、 ErbB4、核酸内切酶III、ERCC1、核酸内切酶IV、 ERCC3、核酸内切酶V、ERK1/ERK2、核酸内切酶VIII、 ERK1、埃杜里培林（Endorepellin)/基底膜蛋白聚糖 (Perlecan)、ERK2、内皮抑制素（Endostatin)、ERK3、内皮 素（Endothelin)-l、ERK5/BMK1、英格瑞里德（Engrailed)-2、ERR a/NR3B卜 EN-RAGE、ERR P/NR3B2、腸肽酶/腸 激酶、ERR γ/ΝΙ13Β3、CCL1 1/嗜酸粒細胞趨化蛋白 (Eotaxin)、紅企球生成素（Erythropoietin)、CCL24/嗜酸粒 細胞趨化蛋白-2、紅血球生成素R、CCL26/嗜酸粒細胞趨 化蛋白-3、ESAM、EpCAM/TROP-1、ER a/NR3Al、 EPCR、ER p/NR3 A2、Eph、核酸外切酶 III、EphAl、埃斯 托新（Exostosin)樣 2/EXTL2、. EphA2、埃斯托新樣 3/EXTL3、EphA3、FABPl、FGF-BP、FABP2、FGFRl-4、FABP3、FGF Rl、FABP4、FGF R2、FABP5、FGF R3、FABP7、FGF R4、FABP9、FGF R5、補體因子 B、 Fgr、FADD、FHR5、FAM3A、纖維結合蛋白、FAM3B、 纖維膠凝蛋白（Ficolin)-2、FAM3C、纖維膠凝蛋白-3、 FAM3D、FITC、纖維母細胞活化蛋白α/FAP、FKBP38、 Fas/TNFRSF6、Flap、Fas 配位體 /TNFSF6、FLIP、 155490.doc -39- 201138808 FATPl、FLRG、FATP4、FLRTl、FATP5、FLRT2、Fc γ RI/CD64、FLRT3、Fc γ RIIB/CD32b、Flt-3、Fc γ RIIC/CD32c、Flt-3 配位體、Fc γ RIIA/CD32a、卵泡抑素 (Follistatin)、Fc γ RIII/CD16、印泡抑素樣 1、FcRHl/IRTA5 、FosB/G0S3 ' FcRH2/IRTA4、FoxD3、FcRH4/IRTAl、
FoxJl、FcRH5/IRTA2、FoxP3、Fc 受體樣 3/CD16-2、 Fpg、FEN-I、FPR1、胎球蛋白（Fetuin)A、FPRL1、胎球蛋 白 B、FPRL2、酸性 FGF、CX3CL1/趨化因子（Fractalkine)、 鹼性FGF、捲曲蛋白（Frizzled)-l、FGF-3、捲曲蛋白-2、 FGF-4、捲曲蛋白-3、FGF-5、捲曲蛋白-4、FGF-6、捲曲 蛋白-5、FGF-8、捲曲蛋白-6、FGF-9、捲曲蛋白-7、FGF-10、捲曲蛋白-8、FGF-11、捲曲蛋白-9、FGF-12、Frk、 FGF-13、sFRP-1、FGF-16、sFRP-2、FGF-17、sFRP-3、
FGF-19、sFRP-4、FGF-20、弗林蛋白（Furin)、FGF-21、 FXR/NR1H4、FGF-22、Fyn、FGF-23、G9a/EHMT2、GFR α-3/GDNF R a-3 ' GABA-A-R a 1 ' GFR a-4/GDNF R a-4、GABA-A-R a 2、GITR/TNFRSF18、GABA-A-R a 4、 GITR配位體/TNFSF18、GABA-A-Ra5、GLI-I、GABA· A-Ra6、GLI-2、GABA-A-Rpl、GLP/EHMTl、GABA-A-R β 2、GLP-I R、GABA-A-R β 3、升糖素、GABA-A-R γ 2、葡糖胺（N-乙酿基）-6-硫酸酯酶/GNS、GABA-B-R2、. GIuRl 、 GAD1/GAD67 、 GluR2/3 、 GAD2/GAD65 、
GluR2、GADD45 a、GluR3、GADD45 β、GluU、GADD45 γ、Glut2、半乳糖凝集素（Galectin)-1、Glut3、半乳糖凝集 155490.doc -40- s 201138808 素-2、Glut4、半乳糖凝集素-3、Glut5 '半乳糖凝集素-3 BP、麵氧還蛋白（Glutaredoxin)l、半乳糖凝集素-4、甘胺 酸R、半乳糖凝集素-7、血型糖蛋白（Glycophorin)A、半乳 糖凝集素-8、糖苷蛋白（Glypican)2、半乳糖凝集素-9、糖 苷蛋白3、GalNAc4S-6ST、糠苷蛋白5、GAP-43、糖苷蛋 白 6、GAPDH、GM-CSF、Gasl、GM-CSF R a、Gas6、 GMF-β 、 GASP-l/WFIKKNRP 、 gpl30 、 GASP-2/WFIKKN、糖原磷酸化酶BB/GPBB、GATA-I、GPR15、 GATA-2 、 GPR39 、 GATA-3 、 GPVI 、 GATA-4 、 GR/NR3C1、GATA-5、Gr-1/Ly-6G、GATA-6、粒溶蛋白 (Granulysin)、GBL、顆粒酶（Granzyme)A、GCNF/NR6A1、 顆粒酶B、CXCL6/GCP-2、顆粒酶D、G-CSF、顆粒酶G、 G-CSF R、顆粒酶 H、GDF-I、GRASP、GDF-3 GRB2、 GDF-5、骨形態形成蛋白拮抗蛋白（Gremlin)、GDF-6、 GRO、GDF-7、CXCL1/GRO α、GDF-8、CXCL2/GRO β、 GDF-9、CXCL3/GRO γ、GDF-11、生長激素、GDF-15、 生長激素 R、GDNF、GRP75/HSPA9B、GFAP、GSK-3 α/β、GFI-I、GSK-3 a、GFR α-1/GDNF R α-I、GSK-3 β、 GFR a-2/GDNF R a-2、EZFIT、H2AX、組胺酸、H60、 HM74A、HAI-I、HMGA2、HAI-2、HMGB1、HAI-2A、 TCF-2/HNF-1 β、HAI-2B、HNF-3 p/FoxA2、HAND1、 HNF-4 a/NR2 A卜 HAPLN1、HNF-4 Y/NR2A2、氣管胰蛋 白酶樣蛋白酶 /HAT、HO-1/HMOX1/HSP32、HB-EGF、 HO-2/HMOX2、CCL 14a/HCC-l、HPRG、CCL14b/HCC- -41 - 155490.doc 201138808 3、Hrk、CCL16/HCC-4、HRP-I、a HCG、HS6ST2、 Hck、HSD-I、HCR/CRAM-A/B、HSD-2、HDGF、HSP 10/EPF、血色素、HSP27、赫帕索辛（Hepassocin)、 HSP60、HES-1、HSP70、HES-4、HSP90、HGF、HTRA/
蛋白酶 Do、HGF 活化因子、HTRA1/PRSS11、HGF R、 HTRA2/0mi、HIF-I ct、HVEM/TNFRSF14、HIF-2 a、透明 質酸蛋白（Hyaluronan)、HIN-1/分泌球蛋白（Secretoglobulin) 3A1、4-羥基壬烯酸、Hip、CCL1/I-309/TCA-3、IL-IO、 cIAP(廣譜）、IL-IO R α、cIAP-l/HIAP-2、IL-IO R β、 cIAP-2/HIAP-l、IL-11、IBSP/唾液酸蛋白（Sialoprotein) II、EL-11 R a、ICAM-1/CD54、IL-12、ICAM-2/CD102、 IL-12/IL-23 p40、ICAM-3/CD50、IL-12 R β 1、ICAM-5、 IL-12 R β 2、ICAT、IL-13、ICOS、IL-13 R a 1、艾杜糖 2-硫酸酯酶/EOS、IL-13 R a 2、EFN、IL-15、IFN-a、IL-
15Ra、IFN-al、IL-16、IFN-a2、IL-17、IFN-a4b、IL-17 R、IFN-a A、IL-17 RC、IFN-a B2、IL-17 RD、IFN-a C、IL-17B、IFN-a D、IL-17B R、IFN-a F、IL-17C、IFN_ a G、IL-17D、IFN-a H2、IL-17E、IFN-a I、IL-17F、 IFN-a J1、IL-18/IL-1F4、IFN-a K、IL-18 BPa、IFN-a WA、IL-18 BPc、IFN-α/β IU、IL-18 BPd、IFN-α/β R2、 IL-18 R a/IL-1 R5、IFN-β、IL-18 R β/IL-l R7、IFN-γ、 IL-19、IFN-γ IU、IL-20、IFN-γ R2、IL-20 R a、IFN-ω、 IL-20 R β、IgE、IL-21、IGFBP-I、IL-21 R、IGFBP-2、 IL-22、IGFBP-3、IL-22 R、IGFBP-4、IL-22BP、IGFBP- 155490.doc • 42· s 201138808 5 ' IL-23 ' IGFBP-6 > IL-23 R > IGFBP-L1 ' IL-24 ' IGFBP-rpl/IGFBP-7 ' IL-26/AK155 ' IGFBP-rPIO ' IL-27 ' IGF- 1、 EL-28A、IGF-I R、IL-28B、IGF-II、IL-29/EFN-X 1、 IGF-II R、IL-31、IgG、EL-31 RA、IgM、IL-32 a、 IGSF2、IL-33、IGSF4A/SynCAM、ILT2/CD85J、 IGSF4B、ILT3/CD85k、IGSF8、ILT4/CD85d、IgY、 ILT5/CD85a、IkB-β、ILT6/CD85e、IKK a、豪豬蛋白 籲 （Indian Hedgehog)、IKK ε、INSRR、ΕΚΚ γ、胰島素、IL-I α/IL-IF卜胰島素 R/CD220、IL-I P/IL-1F2、胰島素原、 IL-lra/IL-lF3、胰島素降解酶（Insulysin)/EDE、IL-1F5/FIL1 δ、整合素 a 2/CD49b、IL-1F6/FIL1 ε、整合素 α 3/CD49c、IL-1F7/FIL1 ζ、整合素α 3 β l/VLA-3、IL-1F8/FIL1 η、整合素 α 4/CD49d、IL-1F9/IL-1 m、整合素 α 5/CD49e、IL-1F10/IL-1HY2、整合素α 5 β 1、IL-I RI、整 合素 a 6/CD49f、IL-I RII、整合素 α 7、IL-I R3/IL-1 R # AcP、整合素a 9、IL-I R4/ST2、整合素a E/CD103、IL-I R6/IL-1 R rp2、整合素a L/CD1 la、IL-I R8、整合素a L β 2、 IL-I R9、整合素a M/CD1 lb、IL-2、整合素a Μ β 2、 IL-2 R a、整合素a V/CD51、IL-2 ΙΙβ、整合素ανβ5、 IL-3、整合素 a V β 3、IL-3 Ra、整合素 ανβ6、IL-3 R β、整合素 a XJCD1 Ic、IL-4、整合素 β 1/CD29、IL-4 R、 整合素β 2/CD18、IL-5、整合素β 3/CD61、IL-5 R a、整 合素 β 5、IL-6、整合素 β 6、IL-6 R、整合素 β 7、IL-7、 CXCL10/EP-10/CRG-2 、 IL-7 R a/CD127 、 IRAKI 、 155490.doc -43· 201138808 CXCRl/IL-8 RA、IRAK4、CXCR2/IL-8 RB、ERS-I、 CXCL8/IL-8、Islet-1、IL-9、CXCL1 1/I-TAC、IL-9 R、傑 格德（Jagged)l、JAM-4/IGSF5、傑格德 2、JNK、JAM-A、 JNK1/JNK2、JAM-B/VE-JAM、JNKJ、JAM-C、JNK2、激
肽原（Kininogen)、激肽釋放酶（Kallikrein)3/PSA、高分子 激肽原（Kininostatin)、激肽釋放酶4、KER/CD158、激肽 釋放酶5、KER2DL1、激肽釋放酶6/甘油磷酸鈣 (Neurosin)、KIR2DL3、激肽釋放酶7、KIR2DL4/CD158d、 激肽釋放酶8/紐羅普星（Neuropsin)、KIR2DS4、激肽釋放 酶9、KIR3DL1、血漿激肽釋放酶/KLKB1、KER3DL2、激 肽釋放酶10、Kirrel2、激肽釋放酶11、KLF4、激肽釋放 酶12、KLF5、激肽釋放酶13、KLF6、激肽釋放酶14、 Klotho、激肽釋放酶 15、Klotho β、KC、KOR、Keapl、克 里曼（Kremen)-l、Kell、克里曼·2、KGF/FGF-7、LAG-3、 LINGO-2、LAIR1、Lipin 2、LAIR2、脂質運載蛋白 (Lipocalin)-l、層黏連蛋白α 4、脂質運載蛋白-2/NGAL、 層黏連蛋白γ 1、5-脂肪加氧酶、層黏連蛋白I、LXR a/NRlH3、層黏連蛋白S、LXR p/NRlH2、層黏連蛋白-1、 Livin、層黏連蛋白-5、LEX、LAMP、LMIR1/CD300A、 蘭格林（Langerin)、LMIR2/CD300c > LAR、LMIR3/ CD300LF、拉特星（Latexin)、LMIR5/CD300LB、排印蛋白 (Layilin)、LMIR6/CD300LE、LBP、LM02、LDL R、 LOX-l/SR-E卜 LECT2、LRH-1/NR5A2、LEDGF、LRIG卜 萊夫替（Lefty)、LRIG3、Lefty· 1、LRP-I、Lefty-A、LRP- 155490.doc -44- s 201138808
6、豆英蛋白（Legumain)、LSECtin/CLEC4G、瘦素、光蛋 白聚糖（Lumican)、痩素 R、CXCL15/ 郎金（Lungkine)、白 三稀B4、XCL1/淋巴細胞趨化蛋白（Lymphotactin)、白三稀 B4 R1、淋巴毒素、LEF、淋巴毒素 P/TNFSF3、LIF R α、 淋巴毒素 β R/TNFRSF3、LIGHT/TNFSF14、Lyn、立米汀 (Limitin)、Lyp、LIMPII/SR-B2、離胺醯基氧化酶同源物 2、LIN-28、LYVE-I、LINGO-I、α 2-巨球蛋白、 CXCL9/MIG、MAD2L1、骨引導因子（Mimecan)、MAdCAM-1、脊椎蛋白（Mindin)、MafB、鹽皮質激素R/NR3C2 ' MafF、CCL3L1/MIP-1 α 同功異型物 LD78 β、MafG、 CCL3/MIP-1 α、MafK、CCL4L1/LAG-1、MAG/西格樂 (Siglec)-4a、CCL4/MIP-1 β、MANF、CCL15/MEP-1 δ、 MAP2、CCL9/10/MIP-1 γ、ΜΑΡΚ、MIP-2、馬拉普星 (Marapsin)/ 盤克里星（Pancreasin)、CCL19/MIP-3 β、 MARCKS、CCL20/MIP-3 α、MARCO、MIP-I、Mashl、 MIP-II、軟骨基質蛋白（Matrilin)-2、MIP-III、軟骨基質蛋 白-3、MIS/AMH、軟骨基質蛋白-4、MIS RII、蛋白裂解 酶（Matriptase)/ST14、MIXL1、MBL、MKK3/MKK6、 MBL-2、MKK3、黑素皮質素（Melanocortin)3R/MC3R、 MKK4、MCAM/CD146、MKK6'MCK-2、MKK7、McI-I、MKP-3、MCP-6、MLH-I、CCL2/MCP-1、MLK4 a、 MCP-11 > MMP ' CCL8/MCP-2 ' MMP-1 ' CCL7/MCP-3/MARC ' MMP-2 ' CCL13/MCP-4 ' MMP-3 ' CCL12/MCP-5、MMP-7、M-CSF、MMP-8、M-CSF R、MMP-9、II型 155490.doc -45- 201138808 MCV、MMP-IO、MD-I、MMP-I 1、MD-2、MMP-12、 CCL22/MDC、MMP-13、MDL-1/CLEC5A、MMP-14、 MDM2、MMP-15、MEA-I、MMP-16/MT3-MMP、MEK1/MEK2 、MMP-24/MT5-MMP、MEK1、MMP-25/MT6-MMP、 MEK2、MMP-26、整合蛋白βΐ結合蛋白（Melusin)、 MMR、MEPE、MOG、安眠蛋白（Meprin)a、CCL23/MPIF-1、安眠蛋白 β、M-Ras/R-Ras3、Mer、Mrel 1、間皮素 (Mesothelin)、MRP1鎳紋蛋白（Meteorin)、MSK1/MSK2、 曱硫胺酸胺肽酶1、MSK1、甲硫胺酸胺肽酶、MSK2、甲 硫胺酸胺肽酶 2、MSP、MFG-E8、MSP R/Ron、MFRP、 Mug、MgcRacGAP、MULT-I、MGL2、木薩施（Musashi)-1、MGMT、木薩施-2、MIA、MuSK、MICA、MutY DNA 糖基化酶、MICB、MyD88、MICL/CLEC12A、髓過氧物 酶、β 2微球蛋白、心肌蛋白（Myocardin)、中期腎蛋白 (Midkine)、肌纖蛋白（Myocilin)、MIF、肌紅蛋白 (Myoglobin) 、NAIP NGFI-B y/NR4A3 、Nanog 、 NgR2/NgRH卜 CXCL7/NAP-2、NgR3/NgRH2、Nbsl、巢蛋 白（Nidogen)-l/内動蛋白（Entactin)、NCAM-1/CD56、巢蛋 白-2、NCAM-L1、一氧化氮、黏連蛋白（Nectin)-l、硝基 酪胺酸、黏連蛋白-2/CD1 12、NKG2A、黏連蛋白-3、 NKG2C、黏連蛋白-4、NKG2D、再生蛋白（Neogenin)、 NKp30、腦啡狀酶（Neprilysin)/CDIO、NKp44、腦。非狀酶-2/MMEL1/MMEL2、NKp46/NCRl 、巢蛋白（Nestin)、 NKp80/KLRF卜 NET02、NKX2.5、網蛋白-1、NMDA R、 -46- 155490.doc 201138808
NR1次單位、網蛋白-2、NMDA R、NR2A次單位、網蛋 白-4、NMDA R、NR2B 次單位、網蛋白-Gla、NMDA R、NR2C 次單位、網蛋白-G2a、N-Me-6,7-diOH-TIQ、神 經調節蛋白（Neuregulin)-1/NRG1、謹德爾（Nodal)、神經調 節蛋白-3/NRG3、頭蛋白（Noggin)、紐立 $丁（Neuritin)、勿 動蛋白（Nogo)受體、NeuroDl、勿動蛋白-A、神經束蛋白 (Neurofascin)、ΝΟΜΟ、神經原質蛋白（Neurogenin)-l、 Nope、神經原質蛋白-2、諾里蛋白（Norrin)、神經原質蛋 白-3、eNOS、溶神經蛋白（Neurolysin)、iNOS、後葉激素 運載蛋白（Neurophysin)II、nNOS、神經纖毛蛋白（Neuropilin)-1、諾池（Notch)-l、神經纖毛蛋白-2、諾池-2、紐羅普汀 (Neuropoietin)、諾池-3、紐羅曲明（Neurotrimin)、諾池-4、神經秩蛋白（Neurturin)、NOV/CCN3、NFAM1、 NRAGE、NF-H、NrCAM、NFkBl、NRL、NFkB2、NT-3、NF-L、NT-4、NF-M、NTB-A/SLAMF6、NG2/MCSP、 NTm、NGF R/TNFRSF16、核幹細胞因子（Nucleostemin)、 β-NGF、Nurr-1/NR4A2、NGFI-B a/NR4A卜 OAS2、食懲 蛋白（Orexin)B、OBCAM、OSCAR、OCAM、OSF-2/骨膜 蛋白（Periostin)、OCIL/CLEC2d、制癌蛋白（Oncostatin) M/OSM、OCILRP2/CLEC2i、OSM R β、Oct-3/4、骨活素 (Osteoactivin)/GPNMB 、OGGI 、骨黏附蛋白聚糖 (Osteoadherin)、寡聚物1、寡聚物2、寡聚物3、骨約素、 募聚物1、骨母細胞分化素（Osteocrin)、寡聚物2、骨橋蛋 白（Osteopontin)、寡聚物3、骨保護蛋白/TNFRSF1 IB、少 155490.doc -47· 201138808 突膠質細胞（Oligodendrocyte)標記物01、Otx2 '少突膠質 細胞標記物 04、OV-6、OMgp、OX40/TNFRSF4、眼科新 糖蛋白（Opticin)、0X40配位體/TNFSF4、食慾蛋白A、 OAS2、食慾蛋白 B、OBCAM、OSCAR、OCAM、OSF-2/ 骨膜蛋白、0CIL/CLEC2d、制癌蛋白 M/OSM、0CILRP2/ CLEC2i、OSM R β、Oct-3/4、骨活素/GPNMB、0GG1、骨 黏附蛋白聚糖、寡聚物1、寡聚物2、寡聚物3、骨鈣素、 寡聚物1、骨母細胞分化素、寡聚物2、骨橋蛋白、寡聚物 3、骨保護蛋白/TNFRSF1 IB、少突膠質細胞標記物01、 0tx2、少突膠質細胞標記物04、OV-6、OMgp、 OX40/TNFRSF4、目艮科新糖蛋白、0X40西己位體/TNFSF4、 食慾蛋白 A、RACK1、Ret、Radi、REV-ERB α/NRlDl、 Radl7、REV-ERB P/NR1D2、Rad51、Rex-1、Rae-1、 RGM-A、Rae-1 a、RGM-B、Rae-1 β、RGM-C、Rae-1 δ、 Rheb、Rae-1 ε、核糖體蛋白 S6、Rae-1 γ、RIP卜 Raf-1、 R0B01、RAGE、R0B02、RalA/RalB、R0B03、RalA、 R0B04、RalB、R0R/NRlFl-3(廣譜）、RANK/TNFRSF1 1A、ROR a/NRIFI、CCL5/RANTES、ROR y/NRlF3、 RaplA/B、RTK樣孤兒受體 1/ROR卜 RAR a/NRIBI、RTK 樣孤兒受體 2/ROR2、RAR p/NRlB2、RP105、RAR γ/ΝΙ11Β3、RP A2、Ras、RSK(廣譜）、RBP4、RSK1/ RSK2、RECK、RSK1、Reg 2/PAP、RSK2、Reg I、 RSK3、Reg II、RSK4、Reg III、R-脊椎蛋白（Spondin)l、 Reg Ilia、R-脊椎蛋白2、Reg IV、R-脊椎蛋白3、鬆弛素 -48- 155490.doc 201138808 (Relaxin)-l、RUNX1/CBFA2、鬆弛素-2、RUNX2/CBFA1、 鬆弛素-3、RUNX3/CBFA3、RELM α、RXR a/NR2Bl、 RELM β、RXR P/NR2B2 ' RELT/TNFRSF19L、RXR y/NR2B3、抵抗素（Resistin)、SIOOAIO、SLITRK5、 S100A8、SLPI、S100A9、SMAC/Diablo、SIOOB、 Smadl、SIOOP、Smad2、SALL1、Smad3、δ-肌聚糖蛋白 (Sarcoglycan)、Smad4、Sca-1/Ly6、Smad5、SCD-I、 Smad7 ' SCF、Smad8、SCF R/c-kit、SMC1、SCGF、a-平 滑肌肌動蛋白、SCL/Tall、SMUG1、SCP3/SYCP3、蝸牛 蛋白（Snail)、CXCL12/SDF-1 、鈉鈣交換蛋白1 、 SDNSF/MCFD2、索吉（Soggy)-1、α-分泌酶、音螺蛋白 (Sonic Hedgehog)、γ-分泌酶、SorCSl、β-分泌酶、 SorCS3、Ε-選擇素、選蛋白（Sortilin)、L-選擇素、 SOST、P-選擇素、SOX1、臂板蛋白（Semaphorin)3A、 SOX2、臂板蛋白3C、SOX3、臂板蛋白3E、SOX7、臂板 蛋白3F、SOX9、臂板蛋白6A、S0X10、臂板蛋白6B、 SOX 17、臂板蛋白6C、SOX21臂板蛋白6D、SPARC、臂 板蛋白7 A、SPARC樣1、分離酶、SP-D、絲胺酸/蘇胺酸 填酸酶受質I、脊骨蛋白（Spinesin)、絲胺酸蛋白酶抑制劑 蛋白（Serpin)Al、F-脊椎蛋白、絲胺酸蛋白酶抑制劑蛋白 A3、SR-AI/MSR、絲胺酸蛋白酶抑制劑蛋白A4/激肽釋放 酶結合蛋白（Kallistatin)、Src、絲胺酸蛋白酶抑制劑蛋白 A5/蛋白C抑制劑、SREC-I/SR-F1、絲胺酸蛋白酶抑制劑蛋 白A8/血管緊張素原、SREC-II、絲胺酸蛋白酶抑制劑蛋白 155490.doc •49- 201138808 B5、SSEA-I、絲胺酸蛋白酶抑制劑蛋白Cl/抗凝血酶-III、 SSEA-3、絲胺酸蛋白酶抑制劑蛋白D1/肝素輔因子II、 SSEA-4、絲胺酸蛋白酶抑制劑蛋白E1/PAI-1 、 ST7/LRP12、絲胺酸蛋白酶抑制劑蛋白E2、斯塔比林 (Stabilin)-l、絲胺酸蛋白酶抑制劑蛋白F1、斯塔比林-2、 絲胺酸蛋白酶抑制劑蛋白F2、斯弼素（Stanniocalcin)l、絲 胺酸蛋白酶抑制劑蛋白G1/C1抑制劑、斯鈣素2、絲胺酸蛋 白酶抑制劑蛋白12、STAT1、血清澱粉樣蛋白A1、 STAT2、SF-1/NR5A1、STAT3、SGK、STAT4、SHBG、 STAT5a/b、SHIP、STAT5a、SHP/NR0B2、STAT5b、SHP-I、STAT6、SHP-2、VE-抑制素（Statin)、SIGIRR、斯蒂拉 (Stella)/Dppa3、西格樂-2/CD22、STRO-I、西格樂-3/CD33、物質P、西格樂-5、續醯胺酶/SGSH、西格樂-6、 硫酸酯酶調節因子1/SUMF1、西格樂-7、硫酸酯酶調節因 子2/SUMF2、西格樂-9、SUM01、西格樂-10、SUM02/3/4、 西格樂-11、SUM03、西格樂-F、過氧化物歧化酶、 SIGNR1/CD209、過氧化物歧化酶-1/Cu-Zn SOD、 SIGNR4、過氧化物歧化酶-2/Mn-SOD、 SIRP β 1 、過氧化 物歧化酶-3/EC-SOD、SKI、凋亡抑制蛋白（Survivin)、 SLAM/CD150、突觸素（Synapsin)I、睡美人轉座酶（Sleeping Beauty Transposase)、多配體蛋白聚糖（Syndecan)-I/CD 138、Slit3、多配體蛋白聚糖-2、SLITRK1、多配體蛋白聚 糖-3、SLITRK2、多配體蛋白聚糖-4、SLITRK4、 TACI/TNFRSF13B、TMEFF 1/血栓調節蛋白（Tomoregulin)- 155490.doc -50- 201138808 1、TA02、TMEFF2、TAPP1、TNF-a/TNFSF IA、 CCL17/TARC ' TNF-p/TNFSFIB > τ > TNF RI/TNFRSFIA ' TC21/R-Ras2、TNF RII/TNFRSF1B、TCAM-I、TOR、 TCCR/WSX-1、TP-I、TC-PTP、TP63/TP73L、TDG、TR、 CCL25/TECK > TR a/NRIAl、腱蛋白（Tenascin)C、TR β 1/NR1A2 、腱蛋白 R 、 TR2/NR2C1 、 TER-119 、
TR4/NR2C2、TERT、TRA-1-85、睪丸蛋白聚糖（Testican)l/ SPOCK1、TRADD、睪丸蛋白聚糖 2/SPOCK2、TRAF-1、 睪丸蛋白聚糖 3/SPOCK3、TRAF-2、TFPI、TRAF-3、 TFPI-2、TRAF-4、TGF-α、TRAF-6、TGF-β、TRAIL/ TNFSF10、TGF-β 1、TRAIL Rl/TNFRSFIOA、LAP(TGF-p 1)、TRAIL R2/TNFRSF10B、潛伏 TGF-β 1、TRAIL R3/TNFRSF10C、TGF-β 1.2 ' TRAIL R4/TNFRSF10D、 TGF-β 2 > TRANCE/TNFSF1 1、TGF-β 3、TfR(轉鐵蛋白 R)、TGF-β 5、Apo-轉鐵蛋白、潛伏 TGF-β bp 1、Holo-轉 鐵蛋白、潛伏TGF-β bp2、Trappin-2/ElaHn、潛伏TGF-β bp4、TREM-1、TGF-β RI/ALK-5、TREM-2、TGF-β RII、 TREM-3 > TGF-β Rllb、TREML1/TLT-1、TGF-β RIII、 TRF-I、嗜熱菌蛋白酶、TRF-2、硫氧還蛋白-1、TRH-降 解胞外酶/TRHDE .、硫氧還蛋白-2、TRIM5、硫氧還蛋白-80、三肽基-肽酶I、硫氧還蛋白樣5/TRP14、TrkA、 THOP1、TrkB、血栓調節素（Thrombomodulin)/CD141、 TrkC、血小板生成素（Thrombopoietin)、TROP-2、血小板 生成素R、肌約蛋白（Troponin)I肽3、凝血栓蛋白-1、肌妈 -51 - 155490.doc 201138808 蛋白T、凝血栓蛋白-2、TROY/TNFRSF 19、凝血栓蛋白-4、胰蛋白酶1、胸腺生成素（Thymopoietin)、騰蛋白酶 2/PRSS2、胸腺趨化激素-1 、姨蛋白酶3/PRSS3、Tie-Ι、 類胰蛋白酶-5/Prss32、Tie-2、類騰蛋白酶α/TPSl、TIM-I /KIM-I /HAVCR、類胰蛋白酶β-1/Μ0ΡΤ-7、TIM-2、類胰 蛋白酶 P-2/TPSB2、TIM-3、類胰蛋白酶 s/BSSP-4、TIM-4、類胰蛋白酶γ-1/TPSGl、TIM-5、色胺酸羥化酶、丁1]^-6、TSC22、TIMP-I、TSG、ΤΙΜΡ·2、TSG-6、TIMP-3、 TSK、ΤΙΜΡ-4、TSLP、TL1A/TNFSF15、TSLP R、TLPU、 TSP50 、TLR2 、β-ΙΙΙ 微管蛋白、TLR3 、TWEAK/ TNFSF12、TLR4、TWEAK R/TNFRSF 12、TLR5、Tyk2、 TLR6、磷酸化酪胺酸、TLR9、酪胺酸羥化酶、 TLX/NR2E1、酪胺酸磷酸酶受質I、泛素（Ubiquitin)、 UNC5H3、Ugi、UNC5H4、UGRP1、UNG、ULBP-I、 uPA、ULBP-2、uPAR、ULBP-3、URB、UNC5H1、 UVDE、UNC5H2、辣椒素（Vanilloid)Rl、VEGF R、 VASA、VEGF Rl/Flt-1、血管抑制蛋白（Vasohibin)、VEGF R2/KDR/Flk-1、伐索林（Vasorin)、VEGF R3/FU-4、血管新 生抑制素、多能素（Versican)、Vav-1、VG5Q、VCAM-I、 VHR、VDR/NR1I1、波形蛋白（Vimentin)、VEGF、玻璃連 結蛋白、VEGF-B、VLDLR、VEGF-C、vWF-A2、VEGF-D、突觸核蛋白（Synuclein)-a、Ku70、WASP、Wnt-7b、 WIF-I、Wnt-8aWISP-l/CCN4、Wnt-8b、WNKl、Wnt-9a ' Wnt-1 ' Wnt-9b ' Wnt-3a ' Wnt-lOa ' Wnt-4 ' Wnt- 155490.doc -52- 201138808 10b、Wnt-5a、Wnt-11、Wnt-5b、wnvNS3、Wnt7a、 XCR1、XPE/DDB1、XEDAR、XPE/DDB2、Xg、XPF、 XIAP、XPG、XPA、XPV、XPD、XRCC1、Yes、YY1、 EphA4。 多種人類離子通道為備受關注之標靶。非限制性實例包 括5-羥色胺3受體次單位、5-羥色胺3受體前驅體、5-羥色 胺受體3次單位C、AAD 14蛋白、乙醯膽鹼受體蛋白、α次 單位前驅體、乙醯膽鹼受體蛋白、β次單位前驅體、乙醯 膽鹼受體蛋白、δ次單位前驅體、乙醯膽鹼受體蛋白、ε 次單位前驅體、乙醯膽鹼受體蛋白、γ次單位前驅體、酸 感應離子通道3剪接變異體b、酸感應離子通道3剪接變異 體c、酸感應離子通道4、ADP-核糖焦磷酸酶、線粒體前驅 體、α A-電壓依賴性辦通道、胺氣。比脉（Amiloride)敏感性 陽離子通道1、神經元胺氯吡脒敏感性陽離子通道2、神經 元胺氣°比脒敏感性陽離子通道4同功異型物2、胺氣吡脒敏 感性納通道、胺氣。比脉敏感性納通道α-次單位、胺氣°比脒 敏感性納通道β-次單位、胺氣D比脉敏感性納通道δ-次單 位、胺氯°比脉敏感性鈉通道γ-次單位、填脂結合蛋白Α7、 頂端樣蛋白（Apical-like protein)、ΑΤΡ敏感性内向性整流 鉀通道1、ATP敏感性内向性整流鉀通道10、ATP敏感性内 向性整流鉀通道11、ATP敏感性内向性整流鉀通道14、 ATP敏感性内向性整流鉀通道15、ATP敏感性内向性整流 卸通道8、妈通道α12.2次單位、飼通道α12.2次單位、約通 道αΙΕ次單位、δ19 δ40 δ46剪接變異體、鈣活化鉀通道α次 155490.doc -53- 201138808 單位1、鈣活化鉀通道β次單位1、鈣活化鉀通道β次單位 2、鈣活化鉀通道β次單位3、鈣依賴性氣通道-1、陽離子 通道 TRPM4B、CDNA FLJ90453 fis、純系 NT2RP3001542 (高度類似於含鉀通道四聚化域6)、CDNA FLJ90663 fis、 純系PLACE 1005031(高度類似於氣化物細胞内通道蛋白 5)、CGMP閘控陽離子通道β次單位、氣通道蛋白、氯通道 蛋白2、氣通道蛋白3、氣通道蛋白4、氣通道蛋白5、氣通 道蛋白6、氯通道蛋白CIC-Ka、氯通道蛋白CIC-Kb、氯通 道蛋白、骨骼肌、氯化物細胞内通道6、氣化物細胞内通 道蛋白3、氣化物細胞内通道蛋白4、氣化物細胞内通道蛋 白 5、CHRNA3蛋白、Clcn3e蛋白、CLCNKB蛋白、CNGA4 蛋白、滯蛋白（Cullin)-5、環狀GMP閘控鉀通道、環狀核苷 酸閘控陽離子通道4、環狀核苷酸閘控陽離子通道α 3、環 狀核苷酸閘控陽離子通道β 3、環狀核苷酸閘控嗅覺通 道、囊性纖維化跨膜傳導調節因子、細胞色素Β-245重 鏈、敏感性L型二氫吡啶、鈣通道α-2/δ次單位前驅體、含 FX YD結構域之離子轉運調節因子3前驅體、含FXYD結構 域之離子轉運調節因子5前驅體、含FXYD結構域之離子轉 運調節因子6前驅體、含FXYD結構域之離子轉運調節因子 7、含FXYD結構域之離子轉運調節因子8前驅體、G蛋白 活化内向性整流鉀通道1、G蛋白活化内向性整流鉀通道 2、G蛋白活化内向性整流鉀通道3、G蛋白活化内向性整 流鉀通道4、γ-胺基丁酸受體α·1次單位前驅體、γ_胺基丁 酸受體α-2次單位前驅體、γ-胺基丁酸受體α·3次單位前驅 155490.doc -54· 201138808 體、γ-胺基丁酸受體α-4次單位前驅體、γ-胺基丁酸受體α-5次單位前驅體、γ-胺基丁酸受體α-6次單位前驅體、γ-胺 基丁酸受體β-l次單位前驅體、γ-胺基丁酸受體β-2次單位 前驅體、γ-胺基丁酸受體β-3次單位前驅體、γ-胺基丁酸受 體δ次單位前驅體、γ-胺基丁酸受體ε次單位前驅體、γ-胺 基丁酸受體γ-l次單位前驅體、γ-胺基丁酸受體γ-3次單位 前驅體、γ-胺基丁酸受體pi次單位前驅體、γ-胺基丁酸受 體ρ-1次單位前驅體、γ-胺基丁酸受體ρ-2次單位前驅體、 γ-胺基丁酸受體Θ次單位前驅體、GluR6紅藻胺酸受體、麩 胺酸受體1前驅體、麩胺酸受體2前驅體、麩胺酸受體3前 驅體、麩胺酸受體4前驅體、麩胺酸受體7、麩胺酸受體 B、麩胺酸受體δ-l次單位前驅體、麩胺酸受體、離子移變 紅藻胺酸1前驅體、麩胺酸受體、離子移變紅藻胺酸2前驅 體、麩胺酸受體、離子移變紅藻胺酸3前驅體、麩胺酸受 體、離子移變紅藻胺酸4前驅體、麩胺酸受體、離子移變 紅藻胺酸5前驅體、麩胺酸[NMDA]受體次單位3 Α前驅 體、麩胺酸[NMDA]受體次單位3B前驅體、麩胺酸 [NMDA]受體次單位ε 1前驅體、麩胺酸[NMDA]受體次單 位ε 2前驅體、麩胺酸[NMDA]受體次單位ε 4前驅體、麩胺 酸[NMDA]受體次單位ζ 1前驅體、甘胺酸受體α-l鏈前驅 體、甘胺酸受體α-2鏈前驅體、甘胺酸受體α-3鏈前驅體、 甘胺酸受體β鏈前驅體、H/ACA核糖核蛋白複合物次單位 1、高親和力免疫球蛋白ε受體β-次單位、假想蛋白 DKFZp31310334、假想蛋白 DKFZp761M1724、假想蛋白 155490.doc -55· 201138808 FLJ12242、假想蛋白FLJ14389、假想蛋白FLJ14798、假想 蛋白FLJ14995、假想蛋白FLJ16180、假想蛋白FLJ16802、 假想蛋白FLJ32069、假想蛋白FLJ37401、假想蛋白 FLJ3 8750、假想蛋白FLJ40162、假想蛋白FLJ41415、假想 蛋白FLJ90576、假想蛋白FLJ90590、假想蛋白FLJ90622、 假想蛋白KCTD15、假想蛋白MGC15619、1型肌醇1，4,5-三 磷酸受體、2型肌醇1，4,5-三磷酸受體、3型肌醇1，4,5-三磷 酸受體、中電導妈活化鉀通道蛋白4、内向性整流钟通道 13、内向性整流鉀通道16、内向性整流舒通道4、内向性 整流K(+)通道陰性調節因子Kir2.2v、紅藻胺酸受體次單位 KA2a、KCNH5蛋白、KCTD 17蛋白、KCTD2蛋白、角蛋 白形成細胞相關跨膜蛋白1、Kv通道相互作用蛋白4、梅拉 MGC 15619蛋白、黏 黏脂蛋白-3、多重抗 斯達，;丁（Melastatin) 1、膜蛋白 MLC1 ’ 脂蛋白（Mucolipin)-l、黏脂蛋白-2、 藥性相關蛋白4、N-甲基-D-天冬胺酸受體2C次單位前驅 體、NADPH氧化酶同源物1、Navl.5、神經兀乙酿膽驗受 體蛋白、α-10次單位前驅體、神經元乙酿膽驗受體蛋白、 α-2次單位前驅體、神經元乙醯膽鹼受體蛋白、α-3次單位 前驅體、神經元乙醯膽鹼受體蛋白、α_4次單位前驅體、 神經元乙醯膽鹼受體蛋白' α·5次單位前驅體、神經元乙 醯膽鹼受體蛋白、α-6次單位前驅雜、神經兀乙酿膽驗受 體蛋白、α-7次單位前驅體、神經元乙酿膽驗受體蛋白、 α-9次單位前驅體、神經元乙醯膽鹼受體蛋白、卜2次單位 前驅體、神經元乙醯膽鹼受體蛋白、β_3次單位前驅體、 155490.doc • 56- 201138808 神經元乙醯膽鹼受體蛋白、β_4次單位前驅體、神經元電 壓依賴性鈣通道a 2D次單位、Ρ2Χ嘌呤受體1、ρ2χΒ票吟受 體2、Ρ2Χ嘌呤受體3、Ρ2Χ嘌呤受體4、Ρ2χ嘌呤受體5、 Ρ2Χ°示呤焚體6、Ρ2Χ嘌呤受體7、胰鉀通道TALK_Ib、胰鉀 通道TALK-Ic、胰鉀通道TALK-Id、磷酸神經膜前驅體、 漿脂蛋白（Plasmolipin)、多囊性腎病2相關蛋白、多囊性腎 病2樣1蛋白、多囊性腎病2樣2蛋白、多囊性腎病及卵膠相 關蛋白則驅體之受體、多囊腎蛋白（p〇lyCystin)_2、舒通道 調節因子、鉀通道子族κ成員1、鉀通道子族κ成員10、鉀 通道子私Κ成員12、鉀通道子族Κ成員13、鉀通道子族Κ成 員15、鉀通道子族Κ成員16、鉀通道子族κ成員17、鉀通 道子私Κ成員2、鉀通道子族κ成員3、鉀通道子族κ成員 4、鉀通道子族Κ成員5、鉀通道子族κ成員6、鉀通道子族 Κ成員7、鉀通道子族κ成員9、含鉀通道四聚化域3、含鉀 通道四聚化域蛋白12、含鉀通道四聚化域蛋白14、含鉀通 道四聚化域蛋白2、含鉀通道四聚化域蛋白4、含鉀通道四 聚化域蛋白5、含鉀通道四聚化域1〇、含鉀通道四聚化域 蛋白13、含鉀通道四聚化域丨、電壓閘控鉀通道子族a成員 1、電壓閘控鉀通道子族A成員2、電壓閘控鉀通道子族A 成員4、電壓閘控鉀通道子族A成員5、電壓閘控鉀通道子 族A成員6、電壓閘控鉀通道子族B成員丨、電壓閘控鉀通 道子族B成員2、電壓閘控鉀通道子族c成員丨、電壓閘控 鉀通道子族C成員3、電壓閘控鉀通道子族c成員4、電壓 閘控鉀通道子族D成員1'電壓閘控鉀通道子族D成員2、 155490.doc -57- 201138808 電壓閘控鉀通道子族D成員3、電壓閘控鉀通道子族E成員 1、電壓閘控鉀通道子族E成員2、電壓閘控鉀通道子族E成 員3、電壓閘控鉀通道子族e成員4、電壓閘控鉀通道子族F 成員1、電壓閘控鉀通道子族G成員1、電壓閘控鉀通道子 族G成員2、電壓閘控鉀通道子族g成員3、電壓閘控鉀通 道子族G成員4、電壓閘控鉀通道子族η成員1、電壓閘控 鉀通道子族Η成員2、電壓閘控鉀通道子族η成員3、電壓 閘控鉀通道子族Η成員4、電壓閘控鉀通道子族η成員5、 電壓閘控鉀通道子族Η成員6、電壓閘控鉀通道子族Η成員 7、電壓閘控鉀通道子族η成員8、電壓閘控鉀通道子族 KQT成員1、電壓閘控鉀通道子族KQT成員2、電壓閘控钾 通道子族KQT成員3、電壓閘控鉀通道子族KQT成員4、電 壓閘控鉀通道子族KQT成員5、電壓閘控鉀通道子族S成員 1、電壓閘控鉀通道子族S成員2、電壓閘控鉀通道子族s成 員3、電壓閘控鉀通道子族ν成員2、電壓閘控卸通道子族 Η成員7同功異型物2、鉀/鈉超極化活化環狀核苷酸閘控通 道1、鉀/鈉超極化活化環狀核苷酸閘控通道2、卸/鈉超極 化活化環狀核苷酸閘控通道3、卸/鈉超極化活化環狀核苷 酸閘控通道4、可能的線粒體輸入受體次單位τ〇Μ4〇同源 物、嘌呤型受體Ρ2Χ5同功異型物A、假定的4重複電堡閑 控離子通道、假定的氣通道蛋白7、假定的GluR6紅藻胺酸 受體、假定的離子通道蛋白CATSPER2變異體1、假定的離 子通道蛋白CATSPER2變異體2、假定的離子通道蛋白 CATSPER2變異體3、鉀通道蛋白變異體！之假定調節因 155490.doc • 58 · 201138808 子、假定的絡胺酸-蛋白填酸酶TPTE、雷諾定（Ryan〇dine) 受體1、雷諾定受體2、雷諾定受體3、SH3KBP1結合蛋白 1、短的暫時受體潛在通道1、短的暫時受體潛在通道4、 短的暫時受體潛在通道5、短的暫時受體潛在通道6、短的 暫時受體潛在通道7、小電導鈣活化鉀通道蛋白1、小電導 鈣活化鉀通道蛋白2同功異型物b、小電導鈣活化鉀通道蛋 白3同功異型物b、小電導鈣活化鉀通道SK2、小電導鈣活 化鉀通道SK3、鈉通道、鈉通道β-丨次單位前驅體、π型鈉 通道蛋白α次單位、III型鈉通道蛋白單位、…型鈉通道 蛋白α次單位、IX型鈉通道蛋白α次單位、ν型鈉通道蛋白 «次單位、VII型納通道蛋白α次單位' vm型鈉通道蛋白α 次單位' X型鈉通道蛋白α次單位、χι型鈉通道蛋白α次單 位、鈉及氣化物活化ΑΤΡ敏感性鉀通道、轉運鈉/鉀之a订 酶γ鍵、精子相關陽離子通以、精子相關陽離子通道2同 功異型物4、突觸融合蛋白姻、暫時受體潛在陽離子通道 子族Α成員i、暫時受體潛在陽離子通道子族μ成員2 時受體潛在陽料通料_以3、暫時受體潛在陽離 子通道子族Μ成員6、暫時受體潛在陽離子通道子族 7、暫時受體潛在陽離子通道子族ν成員i、暫時受體 陽離子通道子族、暫時受體潛在陽離子通道子; 成員3、暫時受體潛在陽離子通道子0成員4、暫時成、 潛在陽離子通道子族V成員5、暫時受體潛在陽離子通^子 族V成員6、暫時受體潛在通道“剪接變異體、 潛在通道”剪接變異體、暫時受體潛在通道7γ剪接= 155490.doc •59- 201138808 體、趙瘤壞死因子、α誘導性蛋白丨、内皮細胞雙孔約通道 蛋白2、VDAC4蛋白、f壓閘控_通道Kv32b、電壓問控 鈉通道βΙΒ次單位、電壓依賴性陰離子通道、電壓依賴性 陰離子通道2、電壓依賴性陰離子敏感性通道蛋白丨、電壓 依賴性陰離子敏感性通道蛋白2、電壓依賴性陰離子敏感 性通道蛋白3、電壓依賴性鈣通道γ-1次單位、電壓依賴性 鈣通道γ-2次單位、電壓依賴性鈣通道γ_3次單位、電壓依 賴性鈣通道γ-4次單位、電壓依賴性鈣通道γ·5次單位、電 壓依賴性鈣通道γ-6次單位、電壓依賴性鈣通道γ_7次單 位、電壓依賴性鈣通道γ_8次單位、電壓依賴性^型鈣通道 α-lC次單位、電壓依賴性L型鈣通道alD次單位、電壓依 賴性L型鈣通道a-is次單位、電壓依賴性匕型鈣通道卜丨次 單位、電壓依賴性L型鈣通道β_2次單位、電壓依賴性[型 鈣通道β-3次單位、電壓依賴性匕型鈣通道ρ_4次單位、電 壓依賴性Ν型鈣通道α-ΐΒ次單位、電壓依賴性p/Q型鈣通道 a_1A次單位、電壓依賴性R型鈣通道α-1Ε次單位、電壓依 賴性τ型鈣通道a_1G次單位、電壓依賴性丁型鈣通道 人單位、電壓依賴性T型軒通道a_ 11次單位、電壓閘控l型 鈣通道(x-1次單位、電壓閘控鉀通道β-1次單位、電壓閘控 鉀通道β-2次單位、電壓閘控鉀通道ρ_3次單位、電壓閘控 鉀通道KCNA7。人類電壓閘控鈉通道之Navl x家族亦為特 別有前途之標靶。此家族包括例如通道Navl 6及Navl 8。 在其他實施例中，治療性蛋白質可為G蛋白偶合受體 (GPCR)。例示性GPCR包括（但不限於）A類視紫質樣受體， 155490.doc -60· 201138808 諸如脊椎動物!型毒蕈鹼乙酿膽鹼、 酿膽驗、脊椎動物3型毒葦驗乙酿膽驗、脊椎動 驗乙酿膽驗；腎上腺素受體（Wa腎上腺素受體、2型以腎 上腺素受體、1型β腎上腺素受體、2f}p腎上腺素受體、3 型β腎上腺素受體、脊椎動物丨型多巴胺（D〇pamine卜脊椎 動物2型多巴胺、脊椎動物3型多巴胺、脊椎動物4型多巴 胺、1型組胺、2型組胺、3型組胺' 4型組胺、丨型血清 素、2型血清素、3型血清素、4型血清素、5型血清素、6 型血清素、7型血清素、8型血清素、纟他血清素類型、痕 量胺、1型血管緊張素、2型血管緊張素、鈐蟾素 (Bombesin)、緩激肽（Bradykinin)、C5a 過敏毒素
(anaphylatoxin)、Fmet-leu-phe、APJ樣、A型介白素 _8、B 型介白素-8、其他類型介白素_8、c_c趨化激素1型至 及其他類型、C-X-C趨化激素（2至6型及其他類型）、C_X3_ C趨化激素、膽囊收縮素cck、A型CCK、B型CCK、其他 CCK、内皮素、黑皮素（黑皮素細胞刺激激素、促腎上腺 皮質激素、黑皮素激素）、達菲抗原（Duffy antigen)、泌乳 素釋放肽（GPR10)、神經肽γ(ι至7型）、神經肽γ、其他神
經肽Y、神經調壓素（Neurotensin)、類鸦片（〇、κ、Μ、X 型）、生長抑素（1至5型）、速激肽（受質ρ(Νκι)、受質 K(NK2)、神經調節肽κ(ΝΚ3)、速激肽樣！、速激肽樣2、 血管加壓素/加壓催產素（1至2型）、加壓催產素、催產素/ 中催產素、海螺緊張素（Conopressin)、神經節肽（Gaianin) 樣、蛋白酶活化樣、食慾蛋白（0rexin)及神經肽 155490.doc -61- 201138808 FF.QRFP、趨化激素受體樣、神經調節肽。樣（神經調節肽 U、PRXamide)、激素受體（彡卩泡刺激激素、促黃體激素絨 膜促性腺素激素、促曱狀腺素、丨型促性腺激素、π型促性 腺激素）、（視紫質）視蛋白、脊椎動物視紫質（1_5型）、脊椎 動物5型視紫質、節肢動物視紫質、節肢動物i型視紫質、 節肢動物2型視紫質、節肢動物3型視紫質、軟體動物視紫 質、視紫質、嗅覺（嗅覺II家族1至13)、前列腺素（前列腺 素E2亞型EP1、前列腺素E2/D2亞型EP2、前列腺素E2亞型 EP3、前列腺素E2亞型EP4、前列腺素F2-a、前列環素）、 血栓素、1至3型腺苷、嘌呤受體、嘌呤受體p2RYi_4,6，l 1 GPR91、嗓呤受體P2RY5,8,9，10 GPR35,92,174、嘌呤受體 P2RY12-14 GPR87(UDP-葡萄糖）、類大麻酚、血小板活化 因子、促性腺激素釋放激素、I型促性腺激素釋放激素、Η 型促性腺激素釋放激素、脂動激素樣、庫拉左寧 (Corazonin)、促曱狀腺素釋放激素及促泌素、促甲狀腺素 釋放激素、生長激素促泌素、生長激素促泌素樣、蛻皮引 發激素（ETHR)、褪黑素（Melatonin)、溶性勒脂及LPA (EDG)、神經鞘胺醇1·磷酸酯Edg-Ι、溶血磷脂酸Edg-2、 神經鞘胺醇1-磷酸酯Edg-3、溶血磷脂酸Edg-4、神經鞘胺 醇1-填酸酯Edg-5、神經鞘胺醇1-磷酸酯Edg-6、溶血磷脂 酸Edg-7、神經鞘胺醇磷酸酯Edg-8、其他Edg白三烯B4 受體、白三烯B4受體BLT1、白三烯B4受體BLT2、A類孤 兒/其他、假定的神經傳遞素、SREB、Mas原癌基因及Mas 相關（MRGs)、GPR45樣、半胱胺醯基白三烯、G蛋白偶合 155490.doc • 62- 201138808
膽汁酸受體、游離脂肪酸受體（GP40、GP41、GP43)、B類 分泌素樣、抑鈣素、促皮質素釋放因子、胃抑制、升糖 素、生長激素釋放激素、甲狀旁腺激素、PACAP、分泌 素、血管活性腸多肽、虫知蛛毒素親和蛋白（Latrophilin)、1 型蜘蛛毒素親和蛋白、2型蜘蛛毒素親和蛋白、3型蜘蛛毒 素親和蛋白、ETL受體、腦特異性血管生成抑制劑（BAI)、 瑪 士撒拉樣蛋白（Methuselah-like protein，MTH)、|弓黏素 EGF LAG(CELSR)、極大G蛋白偶合受體、C類促代謝型麩 胺酸/信息素、I至III組促代謝型麩胺酸、鈣感應樣、細胞 外鈣感應、信息素、其他鈣感應樣、假定的信息素受體、 GABA-B、GABA-B 亞型 1、GABA-B 亞型 2、GABA-B 樣、 孤兒GPRC5、孤兒GPCR6、無七的新娘蛋白（Bride of sevenless protein，BOSS)、味覺受體（T1R)、D類真菌信息 素、真菌信息素A-因子樣（STE2.STE3)、真菌信息素B樣 (BAR、BBR、RCB、PRA)、E類cAMP受體、眼白化病蛋 白、捲曲蛋白/斯木森德（Smoothened)家族、A組捲曲蛋白 (Fz 1及2及4及5及7-9)、B組捲曲蛋白（Fz 3及6)、C組捲曲 蛋白（其他）、犁鼻受體、線蟲化學受體、昆蟲氣味受體及 Z類古菌/細菌/真菌視蛋白。 在其他實施例中，本文所述之SABA融合物可包含任一 以下活性多肽：BOTOX、Myobloc、Neurobloc ' Dysport (或其他血清型之肉毒桿菌神經毒素）、阿葡糖苷酶α、達 托黴素（daptomycin)、ΥΗ-16、絨膜促性腺激素α、非格司 亭（filgrastim)、西曲瑞克（cetrorelix)、介白素-2、阿地白 155490.doc -63- 201138808 介素（aldesleukin)、替西白介素（teceleukin)、地尼白介素 (denileukin diftitox)、干擾素α-η3(注射劑）、干擾素α-ηΐ、 DL-8234、干擾素、桑托里（Suntory)(y-Ia)、干擾素γ、胸 腺素 α 1、他索納明（tasonermin)、DigiFab、ViperaTAb、 EchiTAb、CroFab、奈西立肽（nesiritide)、阿巴西普 (abatacept)、阿法赛特（alefacept)、利比（Rebif)、艾托特明 a(eptotermin alfa)、特立帕肽（teriparatide)(骨質疏鬆症）、 可注射抑鈣素（骨病）、抑鈣素（鼻部、骨質疏鬆症）、依那 西普（etanercept)、血色素格魯他姆（glutamer)250(牛）、德 羅崔庫金（drotrecogin)a、膠原蛋白酶、卡培立肽 (carperitide)、重組人類表皮生長因子（外用凝膠，傷口癒 合）、DWP-401、達貝泊汀 a(darbepoetin alfa)、依泊汀 co(epoetin omega)、依泊汀β、依泊；丁 α、地西盧定 (desirudin)、來匹盧定（lepirudin)、比伐盧定（bivalirudin)、 諾那凝血素a(nonacog alpha)、Mononine、依他凝血素 a(eptacog alfa)(活化）、重組因子 VIII+VWF、Recombinate、 重組因子VIII、因子VIII(重組）、血源性凝血因子 (Alphanate)、辛凝血素 a(octocog alfa)、因子VIII、帕里弗 明（palifermin)、印地激酶（Indikinase)、替奈普酶 (tenecteplase)、阿替普酶（alteplase)、帕米普酶 (pamiteplase)、瑞替普酶瑞替普酶（reteplase)、那替普酶 (nateplase)、孟替普酶（monteplase)、促卵泡素 a(follitropin alfa)、rFSH、hpFSH、米卡芬淨（micafungin)、非格司亭 (pegfilgrastim)、來諾拉提（lenograstim)、那托司亭 155490.doc -64- 201138808
(nartograstim)、舍莫瑞林（sermorelin)、升糖素、艾塞那肽 (exenatide)、普蘭林狀（pramlintide)、伊米苦酶（imiglucerase) 、加硫酶（galsulfase)、留可曲平（Leucotropin)、莫拉司亭 (molgramostim)、乙酸曲普瑞林（triptorelin acetate)、組胺 瑞林（histrelin)(皮下植入，Hydron)、地洛瑞林（deslorelin)、 組胺瑞林、那法瑞林（nafarelin)、亮丙瑞林（leuprolide)持 續釋放儲存物（ATRIGEL)、亮丙瑞林植入物（DUROS)、戈 舍瑞林（goserelin)、索瑪曲平（somatropin)、優曲平 (Eutropin)、KP-102程式、索·瑪曲平、索瑪曲平、美卡舍 明（mecasermin)(生長失敗）、恩夫韋地（enfuvirtide)、〇rg_ 33408、精胰島素（insulin glargine)、離穀胰島素（insulin glulisine)、膜島素（吸入型）、；離脯胰島素（insulin lispro)、地特姨島素（insulin detemir)、胰島素（經頰）、 RapidMist)、美卡舍明林菲培（mecasermin rinfabate)、阿 那白滯素（anakinra)、西莫白介素（celmoleukin)、99mTc-阿 西肽（99mTc-apcitide)注射劑、麥羅匹德（myelopid)、貝特 絲絨（Betaseron)、乙酸格拉默（glatiramer acetate)、格旁 (Gepon)、沙格司亭（sargramostim)、奥普瑞白介素 (oprelvekin)、人類白血球衍生α干擾素、Bilive、胰島素 (重組）、重組人類胰島素、門冬胰島素（insulin aspart)、美 卡舍明、羅擾素-A(Roferon-A)、干擾素-α 2、阿爾法弗隆 (Alfaferone)、干擾素alfacon-Ι、干擾素α、阿溫耐克斯 (Avonex)重組人類促黃體生成激素、阿法錯道酶a(dornase alfa)、曲弗明（trafermin)、齊考諾肽（ziconotide)、他替瑞 155490.doc -65- 201138808 林（taltirelin)、地博特明 a(dibotermin alfa)、阿托西班 (atosiban)、貝卡普勒明（becaplermin)、依替巴狀 (eptifibatide)、紮馬拉（Zemaira)、CTC-111、夏伐克 (Shanvac)-B、HPV 疫苗（四價）、NOV-002、奥曲肽 (octreotide)、蘭瑞肽（lanreotide)、安瑟斯替（ancestim)、無 半乳糖甘酶（agalsidase)p、無半乳糖甘酶α、艾杜糖酿酸水 解酶（laronidase)、醋肽銅（prezatide copper acetate)(外用凝 膠）、拉布立酶（rasburicase)、蘭尼單抗（ranibizumab)、阿 克替姆（Actimmune)、佩樂能（PEG-Intron)、曲可明 (Tricomin)、重組馬塵蟎過敏去敏注射劑、重組人類甲狀 旁腺激素（PTH)l-84(sc，骨質疏鬆症）、依泊汀δ、轉殖基 因抗凝血酶III、格蘭蒂曲平（Granditropin)、透明質酸酶 (Vitrase)、重組肤島素、干擾素-α(口服口含鍵）、GEM-2 IS、伐普肽（vapreotide)、艾杜硫酶（idursulfase)、奧馬曲 拉（omapatrilat)、重組血清白蛋白、賽妥珠單抗 (certolizumab pegol)、穀卡匹酶（glucarpidase)、人類重組 C1酯酶抑制劑（血管性水腫）、拉諾替普酶（lanoteplase)、重 組人類生長激素、恩夫韋地（enfuvirtide)(無針注射， Biojector 2000)、VGV-I、干擾素（α)、蘆西納坦 (lucinactant)、阿肽地爾（aviptadil)(吸入型，肺病）、艾替 班特（icatibant)、埃可蘭肽（ecallantide)、奥米加南 (omiganan)、奥羅格雷（Aurograb)、乙酸培西加南 (pexiganan acetate)、ADI-PEG-20、LDI-200、地加瑞克 (degarelix)、貝辛白介素（cintredekin besudotox)、Favld、 155490.doc -66- 201138808
MDX-1379、ISAtx-247、利拉魯肽（liraglutide)、特立帕肽 (骨質疏鬆症）、替法可近（tifacogin)、AA-4500、T4N5脂質 體洗液、卡托馬單抗（catumaxomab)、DWP-413、ART-123 、 克 里薩林 （Chrysalin) 、 去 胺普酶 （desmoteplase) 、 安 地普酶（amediplase)、絨促卵泡素a(corifollitropin alpha)、 TH-9507、替度魯肽（teduglutide)、戴麥德（Diamyd)、 (DWP-412)、生長激素（持續釋放注射）、重組G-CSF、胰島 素（吸入型，AIR)、胰島素（吸入型，Technosphere)、胰島 素（吸入型，AERx)、RGN-303、DiaPep277、干擾素p(C型 肝炎病毒感染（HCV))、干擾素α-η3( 口服）、貝拉他西普 (belatacept)、經皮胰島素貼片、AMG-531、ΜΒΡ-8298、 西雷西普（Xerecept)、奥培巴坎（opebacan)、AIDSVAX ' GV-1001、LymphoScan、豹娃酶（ranpirnase)、利普散 (Lipoxysan)、盧舒普肽（lusupultide)、ΜΡ52(β-填酸三弼載 體，骨再生）、黑色素瘤疫苗、西普樂克（sipuleucel)-T、 CTP-37、印瑟吉（Insegia)、維特斯朋（vitespen)、人類凝血 酶（冷;東’手術抽血）、凝金酶、TransMID、蛇毒纖溶酶 (alfimeprase)、聚乙二醇化重組豬尿酸酶（Puricase)、特利 加壓素（terlipressin)(靜脈内’肝腎症候群）、EUR-1008M、重組FGF-I(可注射，血管疾病）、BDM-E、羅替格 普肽（rotigaptide)、ETC-216、P-113、MBI-594AN、耐久 黴素（duramycin)(吸入型，囊性纖維化）、SCV-07、0PI-45、内皮抑制素、血管抑制素、ABT-510、保曼布克 (Bowman Birk)抑制劑濃縮物、XMP-629、99mTc-Hynic-鱗 155490.doc •67· 201138808 脂結合蛋白V、卡哈拉德（kahalalide)F、CTCE-9908、替維 瑞克（teverelix)(延長釋放）、奥紮里克（ozarelix)、羅米德 普（romidepsin)、BAY-50-4798、介白素-4、PRX-321、佩 斯坎（Pepscan)、埃布他德金（iboctadekin)、rh乳鐵傳遞蛋 白（rh lactoferrin)、TRU-015、IL-21、ATN-161、西舍吉肽 (cilengitide)、阿爾布芬（Albuferon)、比費西克斯 (Biphasix)、IRX-2、ω干擾素、PCK-3145、CAP-232、帕 斯雷肽（pasireotide)、huN901-DMl、卵巢癌免疫治療疫 苗、SB-249553、Oncovax-CL、OncoVax-P、BLP-25、 CerVax-16、多抗原決定基肽黑色素瘤疫苗（MART-I， gplOO，路胺酸酶）、奈米非肽（nemifitide)、rAAT(吸入 型）、rAAT(皮膚病）、CGRP(吸入型，哮喘）、 (pegsunercept)、胸腺素 β-4、普利德普（plitidepsin)、GTP-200、雷莫拉寧（ramoplanin)、GRASPA、OBI-I、AC-100、 經魚抑舜素（口服，eligen)、抑約素（口服，骨質疏鬆症）、 艾沙瑞林（examorelin)、卡普瑞林（capromorelin)、卡德法 (Cardeva)、維拉弗明（乂613£6〇11111)、1311-丁]\1-601、1(^-220、TP-10、烏拉立肽（ularitide)、地來司他（depelestat)、 赫馬肽（hematide)、克里薩林（表面）、rNAPc2、重組因子 VIII(聚乙二醇化脂質體）、bFGF、聚乙二醇化重組葡激酶 變異體、V-10153、SonoLysis Prolyse、NeuroVax、CZEN-002、胰島細胞新生療法、rGLP-1、BIM-51077、LY-548806、埃克斯肽（exenatide)(控制釋放，Medisorb)、 AVE-0010、GA-GCB、阿伏瑞林（avorelin)、AOD-9604、 155490.doc -68- 201138808 乙酸利那洛肽（linaclotide acetate)、CETi-I、赫莫斯盤 (Hemospan)、VAL(可注射）、快速作用膜島素（可注射， Viadel)、鼻内胰島素、胰島素（吸入型）、胰島素（口服， eligen)、重組甲硫胺醯基人類瘦素、皮崔金拉（pitrakinra) (皮下注射，eczema)、皮崔金拉（吸入型乾粉，哮喘）、木 替金（Multikine)、RG-1068、MM-093、NBI-6024、AT-001、PI-0824、Org-39141、CpnlO(自體免疫疾病/炎症）、 ta乳鐵傳遞蛋白（talactoferrin)(表面）、rEV-13 1 (眼用）、 rEV-131(呼吸道疾病）、口服重組人類胰島素（糖尿病）、 RPI-78M、奥普瑞白介素（口服）、CYT-99007 CTLA4-Ig、 DTY-001、（valategrast)、干擾素 α-η3(表面）、IRX-3、 RDP-5 8、；壽弗隆（Tauferon)、膽汁鹽刺激性脂肪酶、梅里 斯普酶（Merispase)、驗性構酸酶、EP-2104R、美拉諾坦 (Melanotan)-II、布雷默浪丹（bremelanotide)、ATL-104、 重組人類微纖維蛋白溶酶（recombinant human microplasmin)、AX-200、SEMAX、ACV-I、Xen-2174、 CJC-1008、強啡肽（dynorphin)A、SI-6603、LAB GHRH、 AER-002、BGC-728、瘧疾疫苗（病毒顆粒，PeviPRO)、 ALTU-135、細小病毒B 19疫苗、流感疫苗（重組神經胺 糖酸苦酶）、癔疾/HBV疫苗、炭疽病疫苗、Vacc-5q、 Vacc-4x、HIV疫苗（口服）、HPV疫苗、Tat類毒素、 YSPSL、CHS-13340、ΡΤΗ(1-34)脂質體乳膏（諾華體 (Novasome))、奥斯布林（Ostabolin)-C、PTH類似物（表面， 牛皮癣）、MBRI-93.02、MTB72F 疫苗（肺結核）、MVA- 155490.doc -69- 201138808
Ag85 A疫苗（肺結核）、FAR-404、BA-210、重組噬菌體 F1V 疫苗、AG-702、OxSODrol、rBetVl、Der-pl/Der-p2/Der-p7過敏靶向性疫苗（塵蟎過敏）、PR1肽抗原（白血 病）、突變ras疫苗、HPV-16 E7脂肽疫苗、迷路疫苗（腺 癌）、CML疫苗、WT1-肽疫苗（癌症）、IDD-5、CDX-110、 朋曲斯（Pentrys)、諾雷林（Norelin)、CytoFab、P-9808、 VT-111、艾羅卡肽（icrocaptide)、替柏明（telbermin)(皮膚 病，糖尿病足部潰瘍）、產平曲韋（rupintrivir)、雷替庫羅 (reticulose)、rGRF、P1A、α-半乳糖苷酶 A、ACE-011、 ALTU-140、CGX-1160、血管緊張素治療疫苗、D-4F、 ETC-642 、 APP-018 、 rhMBL 、 SCV-07( 口 月艮，肺結核）、 DRF-7295 ' ABT-828、ErbB2特異性免疫毒素（抗癌劑）、 DT388IL-3 、TST-10088 、PRO-1762 、庫姆波托 (Combotox)、縮膽囊肽-B/胃泌素·受體結合肽、1 1 lln-hEGF、AE-37、曲妥珠單抗（trastuzumab)-DMl、拮抗劑 G、IL-12(重組）、PM-02734、IMP-321、rhIGF-BP3、 81^-883、（：1^-1647(表面）、基於1^19之放射免疫治療劑 (癌症）、Re-188-P-2045、AMG-386、DC/I540/KLH疫苗（癌 症）、VX-001、AVE-9633、AC-9301、NY-ESO-I 疫苗 (肽）、NA17.A2肽、黑色素瘤疫苗（脈衝抗原治療劑）、前 列腺癌疫苗、CBP-501、重組人類乳鐵傳遞蛋白（乾眼 病）、FX-06、AP-214、WAP-8294A2(可注射）、ACP-HIP、 SUN-11031、肽YY [3-36](肥胖，鼻内）、FGLL、阿塞西普 (atacicept)、BR3-Fc、BN-003、BA-058、人類甲狀旁腺激 155490.doc • 70- 201138808 素1-34(鼻内，骨質疏鬆症）、F-18-CCR1、八丁-1001(乳糜瀉/ 糖尿病）、JPD-003、PTH(7-34)脂質體乳膏（諾華體）、耐久 黴素（眼用，乾眼病）、CAB-2、CTCE-0214、糖聚乙二醇 化紅血球生成素、EPO-Fc、CNTO-528、AMG-114、JR-013、因子 XIII、胺基康定（aminocandin)、PN-951、 716155、SUN-E7001、TH-03 18、BAY-73-7977、替維瑞克 (立即釋放）、EP-51216、hGH(控制釋放，Biosphere)、 OGP-I、（sifuvirtide)、TV-4710、ALG-889 ' Org-41259、 rhCCIO、F-991、胸腺五肽（thymopentin)(肺病）、 r(m)CRP、肝選擇性胰島素、蘇巴林（subalin)、L 19-IL-2 融合肽、内生多肽（elafin)、NMK-150、ALTU-139、EN-122004、rhTPO、血小板生成素受體促效劑（血小板減少 症）、AL-108、AL-208、神經生長因子拮抗劑（疼痛）、 SLV-317、CGX-1007、INNO-105、口服特立帕肽 (eligen)、GEM-OS卜 AC-162352、PRX-302、LFn-p24融合 物疫苗（Therapore)、EP-1043、肺炎鍵球菌（S pneumoniae) 兒科疫苗、瘧疾疫苗、腦膜炎奈瑟菌（Neisseria meningitidis)B類疫苗、新生兒B類鏈球菌疫苗）、炭疽熱疫 苗、HCV疫苗（gpEl+gpE2+MF-59)、中耳炎療法、HCV疫 苗（核心抗原 +ISCOMATRIX)、hPTH(l-34)(經皮， ViaDerm)、768974、SYN-101、PGN-0052、阿維庫明 (aviscumine)、BIM-23 190、肺結核疫苗、多抗原決定基酪 胺酸酶狀、癌症疫苗、恩卡斯替母（6111^81^111)、八？€-8024、GI-5005、ACC-001、TTS-CD3、血管乾向性 155490.doc -71· 201138808 TNF(實體腫瘤）、去胺加壓素（desmopressin)(經頰控制釋 放）、奥那西普（onercept)、TP-9201。 在其他例示性實施例中，SABA與選自（但不限於）以下 之部分融合：FGF21(纖維母細胞生長因子21)、GLP-1 (升 糖素樣肽1 )、腸促胰島素類似物4、胰島素、胰島素受體 肽、GIP(葡萄糖依賴性促胰島素多肽）、脂聯素、il-lRa(介白素1受體拮抗劑）、VIP(血管活性腸肽）、 PACAP(垂體腺苷酸環化酶激活多肽）、痩素、iNgaP(胰島 新生相關蛋白）、BMP-9(骨形態生成蛋白_9)、澱粉素、 PYY3-36(肽 YY3·36)、PP(膜多肽）、il-21(介白素 21) ' 菌絲 黴素、PRGN(顆粒蛋白前體）、阿斯曲林（Atstrrin)、IFN(干 擾素）、愛帕林及骨鈣素（OCN)。 在其他例示性實施例中，SABA與一或多個其他Μα結 構域融合。舉例而言’ SABA可與一個、兩個、三個、四 個或四個以上其他丨GFn3結構域融合。該等其他丨〇Fn3結構 域可結合於除jk清白蛋白外之相同或不同標乾。 在某些實施例中，本申請案提供一種可由下式表示之 SABA-Y融合物：SABA_Xi_YdSABA，# 中 saba為 如本文所述之SABA多肽（包括任何N端及/或c端延長部
治療性部分。
SABA-Y融合物： ，本申請案提供一種可由下式表示之 • SABA-X^Cys-Xa-Y 或 Y_Xl_Cys_X2_ 155490.doc 201138808 SABA，其中SABA為如本文所述之SABA多肽（包括任何N 端及/或C端延長部分），Xi為視情況存在之多肽連接子（適 合之連接子包括例如SEQ ID NO: 65-88、216-221或397中 之任一者），Cys為半胱胺酸殘基，X2為化學衍生之間隔子 (適合間隔子之實例展示於表1中），且Y為如本文所述之治 療性部分。在例示性實施例中，該化學衍生之間隔子含有 順丁烯二醯亞胺部分，其可用於藉由如本文進一步所述之 邁克爾加成（Michael addition)使治療性部分結合於SABA 多肽之C端Cys，或使SABA多肽結合於治療性部分之C端 Cys。 在其他態樣中，SABA可結合於兩個或兩個以上治療性 部分。舉例而言，兩個部分可以如下多種配置結合於 SABA，例如自融合物序列之N端至C端：X-Y-SABA、X-SABA-Y或SABA-X-Y，其中X及Y表示兩個不同治療性部 分。該兩個不同治療性部分可選自本文揭示之任一部分。 1. FGF21 纖維母細胞生長因子21 (FGF21)為信號傳導蛋白質之 FGF家族的成員。此等蛋白質藉由結合及活化FGF受體（細 胞表面酪胺酸激酶家族之成員）來起作用。FGF21為該家族 之非典型成員，因為其不結合肝素，而需要β-klotho(其為 單向跨膜蛋白）作為活性之共受體。此等受體具有廣泛組 織分佈，但β-klotho表現侷限於某些組織（肝臟、脂肪及胰 臟）且β-klotho之組織選擇性表現賦予FGF21標靶特異性。 活體外研究表明FGFRlc(FGFRl之同功異型物）及FGFR4分 155490.doc -73· 201138808 別為白色脂肪組織及肝臟中之較佳受體。 FGF21充當代謝調節因子，且FGF21之失調可導致各種 代謝病症。FGF21藉由誘導ERK磷酸化及GLUT1表現而增 加3T3-L1脂肪細胞及初級人類脂肪細胞培養物之葡萄糖攝 取。在INS-1E細胞及分離之胰島中，FGF21誘導ERK及 AKT磷酸化。在肝細胞株中，FGF21刺激典型FGF信號傳 導（ERK磷酸化）且減少葡萄糖產生。如下文進一步所述， 本文所述之SABA-FGF21可用於治療或預防各種代謝疾病 及病症。 在一態樣中，本申請案提供與血清白蛋白結合1QFn3(亦 即SABA)融合之FGF21及該等融合物（本文通常稱為FGF21-SABA融合物）之用途。FGF21-SABA融合物係指具有各種 配置之融合物，包括例如SABA-FGF21、FGF21-SABA、 FGF21-SABA-FGF21等。某些例示性構築體展示於表2 中。然而，應瞭解如本文所揭示之FGF21包括保留FGF21 功能活性之FGF21變異體、截短形式及任何經修飾形式。 亦即，如本文所述之FGF-21亦包括經修飾形式，包括某些 胺基酸已缺失或經取代之片段以及變異體，及一或多個胺 基酸已變為經修飾之胺基酸或非天然存在之胺基酸的修 飾，及諸如糖基化之修飾，只要經修飾形式保留FGF-21之 生物活性即可。 舉例而言，野生型全長？0?21如5£卩10>^0:117所示。 表2中所呈現之所有卩0?21變異體均含有3£卩1〇]^0:118所 示之核心FGF21序列。各種N端序列（諸如SEQ ID NO: 119- 155490.doc -74- 201138808 124中之任一者所示之彼等序列）可添加至核心FGF21序列 (SEQ ID ΝΟ··118)之N端並保留功能活性。另外，His6標籤 可添加至N端（例如SEQ ID NO: 128-131)。核心FGF21序列 缺乏C端絲胺酸，其可或可不添加至核心序列之C端而不 影響其活性。此外，FGF21與SABA之融合分子可以次序 FGF21-SABA或SABA-FGF21(包括如本文所述且此項技術 中已知之任何視情況存在之末端延長部分及連接子序列） 連接而不影響FGF21功能活性（參見例如實例B6)。 在例示性實施例中，本申請案提供一種SABA-FGF21融 合物，其中該FGF21部分包含SEQ ID NO: 117-118或125-131之序列，或與SEQ ID NO: 117-118或125-131中之任一 者具有至少 70%、75%、80%、85%、90%、95%、97%、 98%或99%—致性的序列。在某些實施例中，SABA-FGF21 融合物包含SEQ ID NO: 132-174中之任一者的序列，或與 SEQ ID NO: 132-174中之任一者具有至少70%、75%、 80%、85%、90%、95%、97%、98% 或 99%—致性的序 列。 在某些實施例中，本申請案提供一種可由下式表示之 SABA-FGF21 融合物：SABA-X】-FGF21 或 FGF21-X!-SABA，其中SABA為如本文所述之SABA多肽（包括任何N 端及/或C端延長部分），X!為多肽連接子（適合之連接子包 括例如SEQ ID NO: 65-88、216-221或397中之任一者），且 FGF21為如本文所述之FGF21肽。 2.胰島素 155490.doc -75- 201138808 在另一態樣中，本發明描述SABA與胰島素之融合分 子。肤島素為調郎體内能量及葡萄糖代謝之激素。多狀由 騰β-胰島細胞分泌於血液中，在血液中該多肽刺激肝臟、 肌肉及脂肪細胞自血液攝取葡萄糖並促進糖原生成及脂質 生成。腺島素分泌及/或活動中之任何步驟失靈可導致許 多病症’包括氧利用、脂肪生成、糖原生成、脂質生成、 葡萄糖攝取、蛋白質合成、熱生成及維持基礎代謝率之失
調。此失靈導致包括（但不限於）高胰島素血症、胰島素抗 性、胰島素缺乏、高血糖症、高脂質血症、高酮血症、糖 尿病及糖尿病性腎病之疾病及/或病症。因此，本文所述 之SABA·膜島素融合多肽可適用於治療患有該等疾病及/或 病症之個體。 在例示性實施例可應用於本發明之胰島素部分包相 天然存在之騰島素、生物合絲島素、胰島素衍生物及海 似物。胰島素類似物為天然存在之胰
物’諸如至少-個胺基酸殘基已經取代、添加及/或二 之人類胰島素或動物形式之胰島素。該等胺基酸可為合成 =修飾胺基酸1島素衍生物為天㈣在之騰島素或姨 島=似物之衍生物’其例如藉由向一或多個胺基酸添加 物疋化學基團來經化學修舞。例示性胰島素類似 物也述於美國專利第 式併入本文^第，76,6如巾，該案以全文引用的方 3·联島素受髏狀 在態樣中，本發明描述SABA與牍$ | _ 八興腸島素受體肽之融合 155490.doc 3 -76- 201138808 分子。在某些實施例中，該胰島素受體肽包含胰島素受體 之胺基酸 687 至 710(KTDSQILKELEESSFRKTFEDYLH ; SEQ ID NO: 175)。胰島素受體為由胰島素活化之跨膜受 體酪胺酸激酶。胰島素受體活化引發信號級聯反應，最終 使得葡萄糖轉運體轉運至細胞表面，以使得細胞可自血液 吸收葡萄糖。葡萄糖攝取主要在脂肪細胞及肌細胞中進 行。胰島素受體之功能障礙與胰島素不敏感性或抗性相 關，其通常導致2型糖尿病及當細胞無法吸收葡萄糖時所 引起之其他併發症。與胰島素受體基因突變相關之其他病 症包括楼妖精貌症候群（Donohue Syndrome)及羅布森-曼登 赫爾症候群（Rabson-Mendenhall Syndrome)。因此，本文 所述之SABA-胰島素受體肽融合物的例示性用途可包括治 療患有如2型糖尿病或與細胞葡萄糖攝取不足相關之其他 病症、矮妖精貌症候群及羅布森-曼登赫爾症候群之病症 的個體。 4. BMP-9 在某些態樣中，本發明描述SABA與BMP-9之融合分 子。各種BMP-9組合物描述於美國專利第5,661,007號及第 6,287,8 16號中，該等專利以全文引用的方式併入本文中。 骨形態生成蛋白（BMP)屬於生長因子及細胞激素之TGF-β 家族。BMP誘導骨及軟骨形成並介導許多其他組織中之形 態生成變化。BMP信號傳導為胚胎發育以及出生後組織之 生長及維持所必需的。信號傳導路徑亦與範圍為脊椎病症 至癌症至反流誘發性食管炎等疾病相關。 155490.doc -77- 201138808 已發現超過二十種BMP。在此等分子i BMp_9主要在 非實質性肝細胞t表現，且與肝細貽夕祕社t 丹叶細胞之增殖及功能（尤其 肝葡萄糖產生）有關。BMP·9亦似乎在癌細胞m皮細 胞中之信號傳導、骨生成、軟骨生成、認知等中起其他作 用。因此，本文所述之SABA.BMP_9融合多肽可適用於治 療各種疾病及病症，例如治療各義型之傷口及展現肝臟 衰退之疾病，以及治療包括骨及/或軟骨缺損、牙周病及 各種癌症之其他疾病及/或病症。 5·汲粉素（amylin) 在些態樣中，本發明描述SABA與澱粉素之融合分 子。澱粉素（或胰島澱粉樣蛋白多肽，IApp)為由胰β細胞 分泌之具有37個胺基酸之小肽激素。殿粉素與膦島素同時 分泌，且認為其在控制胰島素分泌、葡萄糖恆定、胃排空 及向腦部傳達飽腹感信號中起作用。殺粉素形成原纖維， 其與胰β細胞之凋亡細胞死亡有關。與此發現一致，澱粉 素通常見於罹患2型糖尿病或具有胰島素瘤（一種神經内分 泌腫瘤）之患者的胰島中。 澱粉素可用作糖尿病患者之治療劑。澱粉素肽之製備描 述於美國專利第5,367,052號中，該案以全文引用的方式併 入本文中。類似地，美國專利第6,61〇,824號及第7,271，238 號（以全文引用的方式併入本文中）描述藉由糖基化Asn、 Ser及/或Thr殘基所形成之澱粉素的促效劑類似物，其可用 於處置或預防低血糖病。因此，本文所述之SABA_澱粉素 融合多肽可例如適用於治療患有低血糖症、肥胖、糖尿 155490.doc •78· 201138808 病、飲食障礙、胰島素抗性症候群及心血管疾病之個體。 SABA-澱粉素融合物之製備描述於實例中。 在一態樣中，本申請案提供與血清白蛋白結合1QFn3(亦 即SABA)融合之澱粉素及該等融合物（本文通常稱為SABA-澱粉素融合物）之用途。SABA-澱粉素融合物係指具有各 種配置之融合物，包括例如SABA-澱粉素及澱粉素-SABA。在例示性實施例中，SABA-澱粉素融合物經配置 以使得澱粉素肽之C端游離，此允許羧基端進行醯胺化。 某些例示性SABA-澱粉素融合構築體展示於表2中。然 而，應瞭解如本文所揭示之澱粉素包括保留澱粉素功能活 性之澱粉素變異體、截短形式及任何經修飾形式。亦即， 如本文所述之澱粉素亦包括經修飾形式，包括某些胺基酸 已缺失或經取代之片段以及變異體，及一或多個胺基酸已 變為經修飾之胺基酸或非天然存在之胺基酸的修飾，及諸 如糖基化之修飾，只要經修飾形式保留澱粉素之生物活性 即可。例示性澱粉素序列以SEQ ID NO: 296-303呈現於表 2中。 在例示性實施例中，本申請案提.供一種SABA-澱粉素融 合物，其中該澱粉素部分包含SEQ ID NO: 296-303中之任 一者的序列，或與SEQ ID NO: 296-303中之任一者具有至 少 70%、75%、80%、85%、90%、95%、97%、98%或 99% 一致性的序列。在某些實施例中，SABA-澱粉素融合物包 含SEQ ID NO: 304-328中之任一者的序列，或與SEQ ID NO: 304-328中之任一者具有至少70%、75%、80%、 155490.doc •79· 201138808 85%、90%、95%、97%、98% 或 99%—致性的序列 β 在某些實施例中’本申請案提供一種可由下式表示之 SABA-澱粉素融合物：SABA-Xi•澱粉素，其中SABA為如 本文所述之SABA多肽（包括任何n端及/或c端延長部分）， X!為多肽連接子（適合之連接子包括例如SEQ ID NO: 65-88、216-221或397中之任一者），且澱粉素為如本文所述之 殿粉素肽。澱粉素肽較佳在C端經醯胺化。澱粉素肽可另 外包含Cys1’7或Cys2’7二硫鍵。 在某些實施例中，本申請案提供一種可由下式表示之 SABA-澱粉素融合物：SABAKys-Xr澱粉素，其中 SABA為如本文所述之SABA多肽（包括任何N端及/或c端延 長部分），X!為視情況存在之多肽連接子（適合之連接子包 括例如 SEQ ID NO: 65-88、215-221 或 397 中之任—者），
Cys為半胱胺酸殘基，&為化學衍生之間隔子（適合間隔子 之實例展示於表1中）’且澱粉素為如本文所述之澱粉素 狀。搬粉素肽較佳在C端經醯胺化》澱粉素肽可另外包含
Cys或Cys ’7二硫鍵。在例示性實施例中，化學衍生之間 隔子含有順丁烯二醯亞胺部分，其可用於藉由如本文進一 步所述之邁克爾加成使澱粉素肽結合於Sab A多肽之c端 Cys。 6. PYY3-36 在其他態樣中，本發明描述SABA與PYY之融合分子。 肽YY(亦稱為P YY、肽酪胺酸酪胺酸或胰肽γγ)為由細胞 響應進食而在回腸及結腸中釋放之具有36個胺基酸的蛋白 155490.doc •80· 201138808 質。PYY分泌於胰臟中且幫助經由抑制胰臟分泌（例如胰 島素）來控制能量恆定，由此使得血糖含量提高並傳導需 要減少進食之信號。存在PYY之兩種主要形式，即全長形 式（1-36)及截短形式（3-36)。循環PYY免疫反應性之最常見 形式為ΡΥΥ3·36。PYY3.3jf Y2受體之親和力高於PYY丨_36。 另外，PYY13_36對Y2受體具有類似高效力，從而表明殘基 4-12對於此受體並不重要（Κ. McCrea等人，2-36[K4,RYYSA(19-23)]PP a novel Y5-receptor preferring ligand with strong stimulatory effect on food intake, Regul. 87 1-3 (2000)，第47-58頁）。此外，已描述基於 PYY(22-36)及（25-36)之結構的甚至更短PYY片段類似物， 其顯示相對於其他ΝΡΥ受體（Yl、Υ4及Υ5)之Υ2選擇性。 參見例如美國專利第5,604,203號及第6,046，167號，該等專 利以引用的方式併入本文中。ΡΥΥ肽及偶合於反應性基團 之功能衍生物描述於美國專利第7,601,691號中，該案以引 用的方式併入本文中。 ΡΥΥ與許多生理活性有關，包括營養攝取、細胞增殖、 脂肪分解及血管收縮。詳言之，已顯示ΡΥΥ3.36降低人類之 食愁及食物攝取（參見例如Batterham等人，Nature 418:656-654，2002)。因此，本文所述之SABA-ΡΥΥ融合多肽的例 示性用途可包括治療肥胖、糖尿病、飲食障礙、胰島素抗 性症候群及心血管疾病。 在一態樣中，本申請案提供與血清白蛋白結合1()Fn3(亦 即SABA)融合之PYY及該等融合物（本文通常稱為SABA- 155490.doc -81 - 201138808 PYY融合物）之用途。SABA-ΡΥΥ融合物係指具有各種配置 之融合物，包括例如SABA-PYY及PYY-SABA。在例示性 實施例中，SABA-ΡΥΥ融合物經配置以使得PYY肽之C端 游離，此允許羧基端進行醯胺化。某些例示性SABA-PYY 融合構築體展示於表2中。然而，應瞭解如本文所揭示之 PYY包括保留PYY功能活性之PYY變異體、截短形式及任 何經修飾形式。亦即，如本文所述之PYY亦包括經修飾形 式，包括某些胺基酸已缺失或經取代之片段以及變異體， 及一或多個胺基酸已變為經修飾之胺基酸或非天然存在之 胺基酸的修飾，及諸如糖基化之修飾，只要經修飾形式保 留PYY之生物活性即可。例示性PYY序列以SEQ ID NO: 329-337及408-418呈現於表2中。
在例示性實施例中，本申請案提供一種SABA-PYY融合 物，其中該PYY部分包含SEQ ID NO: 329-337或408-418中 之任一者的序列；與SEQ ID NO: 329-337或408-418中之任 一者具有至少 70%、75%、80%、85%、90%、95%、 97%、98% 或 99% —致性的序列；具有 SEQ ID NO: 329-333 或 33 5-337 中之任一者之殘基 3-36、13-36、21-36、22-36、24-36 或 25-36 的序列；與具有 SEQ ID NO: 329-333 或 335-3 37 中之任一者之殘基 3-36、13-3 6、21-36、22·3 6、 24-36 或 25-36 的序列具有至少 70%、75%、80%、85%、 90%、95%、97%、98%或99%—致性.的序列；或具有V31L 取代之任一上述序列。在某些實施例中，SABA-PYY融合 物包含SEQ ID NO: 338-344中之任一者的序列，或與SEQ 155490.doc -82 · 201138808 ID NO: 33 8-344 中之任一者具有至少 70%、75%、80%、 85%、90%、95%、97%、98%或 99%— 致性的序列。 在某些實施例中，本申請案提供一種可由下式表示之 SABA-PYY融合物：SABA-ΧγΡΥΥ，其中SABA為如本文 所述之SABA多肽（包括任何N端及/或C端延長部分），乂〗為 多肽連接子（適合之連接子包括例如SEQ ID NO: 65-88、 216-221或397中之任一者），且PYY為如本文所述之PYY Φ 肽。PYY肽較佳在C端經醯胺化。 在某些實施例中，本申請案提供一種可由下式表示之 SABA-PYY融合物：SABA-Xj-Cys-Xs-PYY，其中 SABA為 如本文所述之SABA多肽（包括任何N端及/或C端延長部 分），X!為視情況存在之多肽連接子（適合之連接子包括例 如 SEQ ID NO: 65-88、215-221 或 397 中之任一者），Cys為 半胱胺酸殘基，X2為化學衍生之間隔子（適合間隔子之實 例展示於表1中），且PYY為如本文所述之PYY肽。PYY肽 _ 較佳在C端經醯胺化。在例示性實施例中，化學衍生之間 隔子含有順丁烯二醯亞胺部分，其可用於藉由如本文進一 步所述之邁克爾加成使PYY肽結合於SABA多肽之C端 Cys。 7.胰多肽 在一些態樣中，本發明描述SABA與胰多肽之融合分 子。胰多肽（PP)為胰多肽激素家族之成員，該家族亦包括 神經肽Y(NPY)及肽YY(PYY)。PP為由胰多肽細胞響應進 食、運動及禁食而釋放之具有36個胺基酸的蛋白質。ΡΡ見 155490.doc -83- 201138808 於胰臟、胃腸道及CNS中，在其中其影響膽囊收縮、胰臟 分泌、腸動力以及諸如糖原分解及降低脂肪酸含量之代謝 功能。PP亦與食物攝取、能量代謝及下視丘肽及胃内激素 之表現有關。另外，PP在與食物攝取增加相關之條件下減 少。P P亦可與腫瘤發生有關，諸如腺肽細胞之罕見惡性腫 瘤。PP可投與患者，例如減少肝葡萄糖產生（美國專利第 5,830,434號）。本文所揭示之3八6八-?丫丫融合多肽的例示 性用途可包括治療肥胖、糖尿病、飲食障礙、膜島素抗性 症候群及心血管疾病。 在一態樣中，本申請案提供與血清白蛋白結合1QFn3(亦 即SABA)融合之PYY及該等融合物（本文通常稱為SABA-PP 融合物）之用途。SABA-PP融合物係指具有各種配置之融 合物，包括例如SABA-PP及PP-SABA。在例示性實施例 中，SABA-PP融合物經配置以使得PP肽之C端游離，此允 許羧基端進行醯胺化。某些例示性SABA-PP融合構築體展 示於表2中。然而，應瞭解如本文所揭示之PP包括保留PP 功能活性之PP變異體、截短形式及任何經修飾形式。亦 即，如本文所述之PP亦包括經修飾形式，包括某些胺基酸 已缺失或經取代之片段以及變異體，及一或多個胺基酸已 變為經修飾之胺基酸或非天然存在之胺基酸的修飾，及諸 如糠基化之修飾，只要經修飾形式保留PP之生物活性即 可。例示性PP序列以SEQ ID NO: 345-357呈現於表2中。 在例示性實施例中，本申請案提供一種SABA-PP融合 物，其中該PP部分包含SEQ ID NO: 345-357中之任一者的 155490.doc •84- 201138808 序列，或與SEQ ID NO: 345-357中之任一者具有至少 70%、75%、80% ' 85%、90% ' 95%、97%、98%或 99% — 致性的序列。在某些實施例中，SABA-PP融合物包含SEQ ID NO: 358-364中之任一者的序列，或與SEQ ID NO: 358-364中之任一者具有至少70%、75%、80%、85%、90%、 95%、97%、98%或99% —致性的序列。 在某些實施例中，本申請案提供一種可由下式表示之 SABA-PP融合物：SABA-Χ,-ΡΡ，其中SABA為如本文所述 之SABA多肽（包括任何N端及/或C端延長部分），X,為多肽 連接子（適合之連接子包括例如SEQ ID NO: 65-88、216-221或397中之任一者），且PP為如本文所述之PP肽。PP肽 較佳在C端經醯胺化。 在某些實施例中，本申請案提供一種可由下式表示之 SABA-PP融合物：SABA-Xi-Cys-XrPP，其中SABA為如本 文所述之SABA多肽（包括任何N端及/或C端延長部分），X〗 為視情況存在之多肽連接子（適合之連接子包括例如SEQ ID NO: 65-88、215-221或397中之任一者），Cys為半胱胺 酸殘基，X2為化學衍生之間隔子（適合間隔子之實例展示 於表1中），且PP為如本文所述之PP肽。PP肽較佳在C端經 醯胺化。在例示性實施例中，化學衍生之間隔子含有順丁 烯二醯亞胺部分，其可用於藉由如本文進一步所述之邁克 爾加成使PP肽結合於SABA多肽之C端Cys。 8.介白素21(IL-21) 在另一態樣中，本發明描述SABA與IL-21之融合分子。 155490.doc •85- 201138808 IL-21 為 I 型細胞激素，其與 IL-2、IL-4、IL-7、IL-9及 IL· 15共用常見受體γ鏈。IL-21在活化人類CD4+ T細胞中表 現’在T輔助細胞之Th2及Thl7亞群、T濾泡細胞及NK T細 胞中調升。細胞激素在調節所有此等細胞類型之功能中具 有作用。Β細胞亦由IL-21調節》視與協同刺激信號之相互 作用及Β細胞之發育階段而定，il-21可誘導增殖，分化為 產生Ig之漿細胞’或在小鼠與人類中細胞凋亡。單獨IL_21 及IL-21與Th細胞衍生之細胞激素組合可調節類別轉換重 組為IgG、IgA或IgE同型’此表示其在塑造b細胞之效應功 能中的重要作用。因此’經由其對免疫細胞之多種作用， IL-21在正常免疫反應之許多態樣中起作用。 作為免疫系統之調節劑’已研究IL_21作為用於單獨癌 症療法或癌症療法與其他療法之組合的免疫刺激劑之用 途、作為免疫療法之輔助療法的用途及作為病毒療法之用 途，以及需要調升免疫系統之用途。臨床上與臨床前所治 療之特疋癌症為轉移性黑色素瘤、腎細胞癌、結腸癌、胰 臟癌、乳癌、胸腺瘤、頭頸部鱗狀細胞癌及神經膠質瘤 (關於評述，參見Sondergaard& Skak，Tissue八以匕⑶％ 74⑹· 467 479’ 2009)。另外，IL_21調升與各種人類T細胞 介導Τ細胞相關之發炎性病理學有關，包括克羅恩氏病 (Cohn’s disease ’ CD)、潰瘍性結腸炎、主要形式之發炎 性腸病（IBD)、幽門螺旋桿菌相關胃炎（触▲咖 〜-related gastritis)、乳糜瀉、異位性皮膚炎、全 身性紅斑狼瘡、類風渴降關 风廊f生關卽炎及牛皮癖（關於評述，參 155490.doc 201138808 見 Monteleone 等人，Trends Pharmacol Sci，30(8) 441 -7, 2009)。例示性IL-21蛋白描述於美國專利第6,3〇7,〇24號及 第7,473,765號中’該等專利以引用的方式併入本文中。 本文所述之SABA-IL21融合多肽額例示性用途包括治療 某些類型之癌症、病毒相關疾病以及各種T細胞介導或τ細 胞相關之發炎性病症’諸如克羅恩氏病（CD) '潰瘍性結腸 炎、主要形式之發炎性腸病（IBD)、幽門螺旋桿菌相關胃 炎、乳糜瀉、異位性皮膚炎（AD)、全身性紅斑狼瘡、類風 濕性關節炎及牛皮癖。 在一態樣中，本申請案提供與企清白蛋白結合1 〇Fn3 (亦 即SABA)融合之IL-21及該等融合物（本文通常稱為SABA_ IL21融合物）之用途。SABA_IL21融合物係指具有各種配置 之融合物’包括例如saba_IL21&IL21_SAba。某些例示 性S AB A-IL21融合構築體展示於表2中。然而，應瞭解如 本文所揭示之IL-21包括保留IL_21功能活性之IL_21變異 體、截短形式及任何經修飾形式。亦即，如本文所述之 IL-21亦包括經修飾形式，包括某些胺基酸已缺失或經取 代之片段以及變異體，及一或多個胺基酸已變為經修飾之 胺基酸或非天然存在之胺基酸的修飾，及諸如糖基化之修 飾，只要經修飾形式保留IL_21之生物活性即可。例示性 IL-21序列以SEQ ID NO: 286-287呈現於表2中。 在例示性實施例申’本申請案提供一種Saba-IL21融合 物，其中該IL21部分包含冗卩ID N〇: 286_287中之任一者 的序列’或與SEQ ID NO: 286-287中之任一者具有至少 155490.doc -87- 201138808 70%、75%、80%、85%、90%、95%、97%、98% 或 99% — 致性的序列。在某些實施例中，SABA-IL21融合物包含 SEQ ID NO: 290-295中之任一者的序列，或與SEQ ID NO: 290-295中之任一者具有至少70%、75%、80%、85%、 90%、95%、97%、98%或 99%— 致性的序列》 在某些實施例中，本申請案提供一種可由下式表示之 SABA-IL21融合物：SABA-X丨-IL21或 IL21-X丨-SABA，其 中SABA為如本文所述之SABA多肽（包括任何N端及/或C端 延長部分），Χι為多肽連接子（適合之連接子包括例如SEQ ID NO: 65-88、216-221 或 397 中之任一者），且 IL21 為如本 文所述之IL-21肽。 9.升糖素樣肽l(GLP-l)/腸促胰島素類似物-4 在另一態樣中，本發明描述SABA與GLP-1之融合分子。 升糖素樣肽l(GLP-l)為由腸内分泌L細胞響應營養攝取而 釋放之具有30或31個胺基酸之肽（SEQ ID NO: 226及227) » 此激素可藉由調節葡萄糖恆定及發揮抗糖尿病作用之多種 機制來起作用。GLP-1信號傳導可增強葡萄糖依賴性胰島 素分泌’抑制升糖素以葡萄糖依賴性方式分泌，延緩胃排 空，使得降低食物攝取及體重，並在動物模型中引起β細 胞質量增加。 天然GLP-1之治療性效用為有限的，因為其活體内半衰 期小於2分鐘，此歸因於其被普遍存在之蛋白酶，二肽基 肽酶IV(DPP-IV)快速降解。因為DPP-IV優先裂解在第二位 置具有丙胺酸或脯胺酸之胺基端二肽，所以一種增加半衰 155490.doc -88 * 201138808 期之策略為改變活性GLP-1中之第二胺基酸（位置8)以使得 該肽不再為DPP-IV受質。位置8之丙胺酸可經各種天然（或 非天然）胺基酸置換，包括甘胺酸、絲胺酸、蘇胺酸或纈 胺酸，以產生具有DPP-IV抗性之GLP-1類似物。然而，具 有DPP-IV抗性之GLP-1類似物仍具有相對短的藥物動力學 半衰期，因為其經由腎臟清除來消除。舉例而言，有效且 具有DPP-IV抗性之GLP-1受體促效劑，合成腸促胰島素類 似物-4 (SEQ ID NO: 228 ; Byetta中之有效藥劑成分）仍必 須對人類糖尿病患者每日投與兩次，因為其被腎臟快速清 除。 另一種產生長效GLP-1受體促效劑之方法為在與諸如白 蛋白或轉鐵蛋白之長壽命蛋白質相同之開放閱讀框架中表 現具有DPP-IV抗性之GLP-1類似物。一種該融合蛋白，與 人類血清白蛋白融合之阿必魯泰（albiglutide)(具有DPP-IV 抗性之GLP-1類似物）目前正在III期臨床試驗中進行評估。 在所有報導之情況下，活性融合蛋白在融合蛋白之胺基端 具有具有DPP-IV抗性之GLP-1受體促效劑；C端融合物之 有效性顯著較小。 在例示性實施例中，SABA-GLP-1融合蛋白自N端至C端 包含：具有DPP-IV抗性之GLP-1受體促效劑（可能包括基於 GLP-1或腸促胰島素類似物-4之序列）、連接子及SABA。 SABA-GLP-1及SABA-腸促胰島素類似物融合多肽之例 示性用途包括治療糖尿病、肥胖、大腸急躁症及將得益於 降低血漿葡萄糖、抑制胃及/或腸活力及抑制胃及/或腸排 155490.doc •89- 201138808 空或抑制食物攝取之其他病狀。 在一態樣中，本申請案提供與血清白蛋白結合1GFn3(亦 即SABA)融合之GLP-1或腸促胰島素類似物及該等融合物 (本文通常稱為SABA-GLP-1或SABA-腸促胰島素類似物融 合物）之用途。SABA-GLP-1或SABA-腸促胰島素類似物融 合物係指具有各種配置之融合物，包括例如3八8八-01^-1、GLP-1-SABA、SABA-腸促胰島素類似物及腸促胰島素 類似物-SABA。某些例示性SABA-GLP-1及SABA-腸促胰 島素類似物融合構築體展示於表2中》然而，應瞭解如本 文所揭示之GLP-1及腸促胰島素類似物包括保留GLP-1或 腸促胰島素類似物功能活性之GLP-1及腸促胰島素類似物 變異體、截短形式及任何經修飾形式。亦即，如本文所述 之GLP-1及腸促胰島素類似物亦包括經修飾形式，包括某 些胺基酸已缺失或經取代之片段以及變異體，及一或多個 胺基酸已變為經修飾之胺基酸或非天然存在之胺基酸的修 飾，及諸如糖基化之修飾，只要經修飾形式保留GLP-1或 腸促胰島素類似物之生物活性即可。例示性GLP-1序列以 SEQ ID NO: 226-227呈現於表2中去例示性腸促胰島素類 似物序列以SEQ ID NO: 228呈現於表2中。 在例示性實施例中，本申請案提供一種SABA-GLP-1融 合物，其中該GLP-1部分包含SEQ ID NO: 226-227中之任 一者的序列，或與SEQ ID NO: 226-227中之任一者具有至 少 70%、75%、80%、85%、90%、95%、97%、98%或 99% 一致性的序列。在某些實施例中，SABA-GLP-1融合物包 155490.doc -90· 201138808 含SEQ ID NO: 229-232中之任一者的序列，或與SEQ ID NO: 229-232中之任一者具有至少70%、75%、80%、 85%、90%、95%、97%、98%或 99%— 致性的序列。 在某些實施例中，本申請案提供一種可由下式表示之 SABA-GLP-1 融合物：SABA-X!-GLP-1 或 GLP-1-Xj-SABA，其中SAB.A為如本文所述之SABA多肽（包括任何N 端及/或C端延長部分），Xi為多肽連接子（適合之連接子包 括例如SEQ ID NO: 65-88、216-221或397中之任一者）’且 GLP-1為如本文所述之GLP-1肽。 在例示性實施例中，本申請案提供一種SABA-腸促姨島 素類似物融合物，其中該腸促胰島素類似物部分包含SEQ ID NO: 228，或與 SEQ ID NO: 228具有至少 70%、75%、 80%、85%、90%、95%、97%、98% 或 99%—致性的序 列。在某些實施例中，SABA-腸促胰島素類似物融合物包 含SEQ ID NO: 233-236中之任一者的序列，或與SEQ ID NO: 233-236中之任一者具有至少70%、75%、80%、 85%、90%、95%、97%、98%或 99%— 致性的序列。 在某些實施例中，本申請案提供一種可由下式表示之 SABA-腸促胰島素類似物融合物：SABA-X!-腸促胰島素類 似物或腸促跋島素類似物· X1_ S AB A ’其中SABA為如本文 所述之SABA多肽（包括任何N端及/或C端延長部分），又！為 多肽連接子（適合之連接子包括例如SEQ ID NO: 65-88、 216-221或397中之任一者），且腸促胰島素類似物為如本文 所述之腸促胰島素類似物肽。 155490.doc -91· 201138808 ίο.菌絲黴素 在另一態樣中，本發明描述SABA與菌絲黴素之融合分 子《菌絲黴素為自真菌，腐生子囊菌假黑盤菌 «i'gre//a)分離之新穎殺菌性抗微生物肽。 在活體外，菌絲黴素可以與萬古黴素（vancomycin)與青黴 素（penicillin)相當之速率快速殺死金黃色葡萄球菌 (iSVap/^/ococcw*? awrews)及肺炎鍵球菌（/SVrepiococcws /»«ewwo«k)，包括對習知抗生素具有抗性之多種菌株，但 對哺乳動物細胞無細胞毒性作用。在活體内，菌絲黴素亦 顯示在小鼠中之極低毒性且可與萬古黴素及青黴素同樣有 效地治癒由肺炎鏈球菌引起之腹膜炎及肺炎。參見例如 Mygind PH 等人，Plectasin is a peptide antibiotic with therapeutic potential from a saprophytic fungus, Nature 437:975-980 (2005) ; Brinch KS 等人，Plectasin shows intracellular activity against Staphylococcus aureus in human THP-1 monocytes and in the mouse peritonitis model, Antimicrob Agents Chemother 53:4801 -4808 (2009) ; 3. Hara S等人，Plectasin has antibacterial activity and no effect on cell viability or IL-8 production, Biochem Biophys Res Commun 374:709-713 (2008);及 Ostergaard C 等人，High cerebrospinal fluid (CSF) penetration and potent bactericidal activity in CSF of NZ2114, a novel plectasin variant, during experimental pneumococcal meningitis, Antimicrob Agents Chemother 53:1581-1585 (2009)。假定 155490.doc -92- 201138808 具有此等特徵，菌絲黴素為用作有希望之抗生素產品之具 有吸引力的候選者。參見例如Xiao-Lan J等人，High-Level Expression of the Antimicrobial Peptide Plectasin in co"，Curr Microbiol 61:197-202 (2010)。因 此’本文所述之SABA-菌絲黴素融合多肽可用作抗細菌 劑。 在一態樣中，本申請案提供與血清白蛋白結合WFn3(亦 即SABA)融合之菌絲黴素及該等融合物（本文通常稱為 SABA-菌絲黴素融合物）之用途。SABA_菌絲黴素融合物係 指具有各種配置之融合物，包括例如SABA-菌絲黴素及菌 絲黴素-SABA。某些例示性SABA-菌絲黴素融合構築體展 示於表2中。然而，應瞭解如本文所揭示之菌絲黴素包括 保留菌絲黴素功能活性之菌絲黴素變異體、截短形式及任 何經修飾形式。亦即，如本文所述之菌絲黴素亦包括經修 飾形式’包括某些胺基酸已缺失或經取代之片段以及變異 體’及一或多個胺基酸已變為經修飾之胺基酸或非天然存 在之胺基酸的修飾’及諸如糖基化之修飾，只要經修飾形 式保留菌絲黴素之生物活性即可。例示性菌絲黴素序列以 SEQ ID NO·· 237呈現於表2中。 在例示性實施例中，本申請案提供一種3八8八_菌絲黴素 融合物，其中該菌絲黴素部分包含SEQ ID N0: 237，或與 SEQ ID NO: 237具有用少 70%、75%、8〇%、85%、9〇%、 95 /〇 97 /〇、98%或99%—致性的序列。在某些實施例中， SABA-菌絲黴素融合物包含SEq ID N〇: 々Μ中之任一 155490.doc •93· 201138808 者的序列，或與SEQ ID NO: 238-239中之任一者具有至少 70%、75%、80%、85%、90%、95%、97%、98%或 99% — 致性的序列。 在某些實施例中，本申請案提供一種可由下式表示之 SABA-菌絲黴素融合物：SABA-X! -菌絲黴素或菌絲黴素-Χ,-SABA，其中SABA為如本文所述之SABA多肽（包括任 何N端及/或C端延長部分），X!為多肽連接子（適合之連接 子包括例如SEQ ID NO: 65-88、216-221或397中之任一 者），且菌絲黴素為如本文所述之菌絲黴素肽。 11.顆粒蛋白前體（PRGN)及阿斯曲林 在另一態樣中，本發明描述SABA與顆粒蛋白前體或 SABA與阿斯曲林之融合分子。顆粒蛋白前體及包含來自 顆粒蛋白前體之3個片段的阿斯曲林（一種經工程改造之蛋 白質）為腫瘤壞死因子（TNF)受體結合物，其拮抗TNF信號 傳導。顆粒蛋白前體及阿斯曲林在小鼠關節炎模型中預防 炎症。參見例如Tang, W等人，The Growth Factor Progranulin Binds to TNF Receptors and Is Therapeutic Against Inflammatory Arthritis in Mice, Science, ScienceExpress, 2011年3月10日，補充資料。任一蛋白質之SABA融合物可 為TNFa介導性疾病之潛在治療劑。 在一態樣中，本申請案提供與血清白蛋白結合1GFn3(亦 即SABA)融合之顆粒蛋白前體或阿斯曲林及該等融合物 (本文通常稱為SABA-PRGN或SABA-阿斯曲林融合物）之用 途。SABA-PRGN或SΑΒΑ-阿斯曲林融合物係指具有各種 155490.doc •94· 201138808 配置之融合物，包括例如SABA-PRGN、PRGN-SABA、 SABA- P可斯曲林及阿斯曲林-SABA。某些例示性SABA-PRGN及SABA-阿斯曲林融合構築體展示於表2中。然而， 應瞭解如本文所揭示之顆粒蛋白前體及阿斯曲林包括保留 顆粒蛋白前體或阿斯曲林功能活性之顆粒蛋白前體及阿斯 曲林變異體、截短形式及任何經修飾形式。亦即，如本文 所述之顆粒蛋白前體及阿斯曲林亦包括經修飾形式，包括 某些胺基酸已缺失或經取代之片段以及變異體，及一或多 個胺基酸已變為經修飾之胺基酸或非天然存在之胺基酸的 修飾，及諸如糖基化之修飾，只要經修飾形式保留顆粒蛋 白前體或阿斯曲林之生物活性即可。例示性顆粒蛋白前體 序列以SEQ ID NO: 240-241呈現於表2中去例示性阿斯曲 林序列以SEQ ID NO: 242呈現於表2中。 在例示性實施例中，本申請案提供一種SABA-PRGN融 合物，其中該PRGN部分包含SEQ ID NO: 240-241中之任 一者的序列，或與SEQ ID NO·· 240-241中之任一者具有至 少 70%、75%、80%、85%、90%、95%、97%、98%或 99% 一致性的序列。在某些實施例中，SABA-PRGN融合物包 含SEQ ID NO: 243-246中之任一者的序列，或與SEQ ID NO: 243-246中之任一者具有至少70%、75%、80%、 85%、90%、95%、97%、98% 或 99%— 致性的序列。
在某些實施例中，本申請案提供一種可由下式表示之 SABA-PRGN 融合物：SABA-X^PRGN 或 PRGN-X^SABA， 其中SABA為如本文所述之SABA多肽（包括任何N端及/或C 155490.doc -95- 201138808 端延長部分），Xl為多肽連接子（適合之連接子包括例如 SEQ ID NO: 65-88、216-221 或 397 中之任一者），且 PRGN 為如本文所述之顆粒蛋白前體肽。 在例示性實施例中，本申請案提供一種SABA-阿斯曲林 融合物，其中該阿斯曲林部分包含SEQ ID NO: 242，或與 SEQ ID NO: 242具有至少 70%、75%、80%、85%、90%、 95%、97%、98%或99%—致性的序列。在某些實施例中， SABA-阿斯曲林融合物包含SEQ ID NO: 247-250中之任一 者的序列，或與SEQ ID NO: 247-250中之任一者具有至少 70%、75%、80%、85%、90%、95%、97%、98%或 99% — 致性的序列。 在某些實施例中，本申請案提供一種可由下式表示之 SABA-阿斯曲林融合物：SABA-X,-阿斯曲林或阿斯曲林-Xj-SABA，其中SABA為如本文所述之SABA多肽（包括任 何N端及/或C端延長部分），X!為多肽連接子（適合之連接 子包括例如SEQ ID NO: 65-88、216-221或397中之任一 者），且阿斯曲林為如本文所述之阿斯曲林肽。 12.骨鈣素（OCN) 在某些態樣中，本發明描述SABA與骨鈣素之融合分 子。骨鈣素（OCN，亦稱為骨麩胺酸蛋白或BGP)為由骨母 細胞產生之具有49個胺基酸的蛋白質並分泌於血流及骨基 質中。血漿OCN含量經受生物變化，包括晝夜循環、季 節、性別、年齡及月經週期。OCN以羧化、未羧化及羧化 不全形式存在，該等未羧化及羧化不全形式與經由刺激胰 155490.doc • 96· 201138808 島素分泌、胰β細胞增殖及增強胰島素敏感性（部分經由月旨 聯素介導）來調節能量代謝有關。胰島素促進骨重塑，且 其在骨母細胞中之信號傳導增加未羧化及/或羧化不全 OCN釋放至循環中，此又改善葡萄糖處理。因此，本文所 述之SABA-OCN融合多肽可用於治療胰島素相關病症，包 括氧利用、脂肪生成、糖原生成、脂質生成、葡萄糖攝 取、蛋白質合成、熱生成及維持基礎代謝率之失調。此失 靈導致包括（但不限於）高胰島素血症、胰島素抗性、騰島 素缺乏、高血糖症、高脂質血症、高酮血症、糖尿病及糖 尿病性腎病之疾病及/或病症。 在一態樣中，本申請案提供與血清白蛋白結合1GFn3(亦 即SABA)融合之OCN及該等融合物（本文通常稱為SABA-OCN融合物）之用途。SABA-OCN融合物係指具有各種配 置之融合物，包括例如SABA-OCN及OCN-SABA。某些例 示性SABA-OCN融合構築體展示於表2中。然而，應瞭解 如本文所揭示之OCN包括保留OCN功能活性之OCN變異 體、截短形式及任何經修飾形式。亦即’如本文所述之 OCN亦包括經修飾形式，包括某些胺基酸已缺失或經取代 之片段以及變異體，及一或多個胺基酸已變為經修飾之胺 基酸或非天然存在之胺基酸的修飾，及諸如糖基化之修 飾，只要經修飾形式保留OCN之生物活性即可。例示性 OCN序列以SEQ ID NO: 365-378呈現於表2中。 在例示性實施例中，本申請案提供一種SABA-OCN融合 物，其中該OCN部分包含SEQ ID NO: 365-378中之任一者 155490.doc •97· 201138808 的序列，或與SEQ ID NO: 365·378中之任一者具有至少 70%、75%、80%、85%、90%、95%、97%、98%或 99% — 致性的序列。在某些實施例中，SABA-OCN融合物包含 SEQ ID NO: 379-396中之任一者的序列，或與SEQ ID NO: 379-396中之任一者具有至少70%、75%、80%、85%、 90%、95%、97%、98%或 99%— 致性的序列。 在某些實施例中，本申請案提供一種可由下式表示之 SABA-OCN融合物：SABA-Xi-OCN 或OCN-XrSABA，其 中SABA為如本文所述之SABA多肽（包括任何N端及/或C端 延長部分），Χι為多肽連接子（適合之連接子包括例如SEQ ID NO: 65-88、216-221或397中之任一者），且OCN為如本 文所述之OCN肽。 在某些實施例中，本申請案提供一種可由下式表示之 SABA-OCNafe^^ ： SABA-Xi-Cys-Xa-OCN^OCN-Xj-Cys-X2-SABA，其中SABA為如本文所述之SABA多肽（包括任 何N端及/或C端延長部分），X!為視情況存在之多肽連接子 (適合之連接子包括例如SEQ ID NO: 65-88、216-221或397 中之任一者），Cys為半胱胺酸殘基，X2為化學衍生之間隔 子（適合間隔子之實例展示於表1中），且OCN為如本文所述 之OCN肽。在例示性實施例中，該化學衍生之間隔子含有 順丁烯二醯亞胺部分，其可用於藉由如本文進一步所述之 邁克爾加成使OCN肽結合於SABA多肽之C端Cys，或使 SABA多肽結合於OCN肽之C端Cys ° 13.干擾素λ(ΙΡΝλ) 155490.doc • 98- 201138808 在另一態樣中，本發明描述SABA與干擾素-λ(ΙΡΝ-λ)之 融合分子。人類干擾素（IFN)分成三個主要類型：I型、Π 型及III類型。I型IFN表述為針對病毒感染之防禦的第一 線。I型IFN之主要作用為在病毒感染第一天期間限制病毒 擴散，從而使得具有足夠時間產生針對感染之強適應性免 疫反應。II型及III型IFN顯示I型IFN之一些抗病毒性質。 IFN-λ為III型IFN。人類編碼三種IFN-λ分子：IFN-X1(IL-_ 29)、IFN42(IL-28A)及 IFN43(IL-28B)。如 US 7，135，170 中所述，已顯示IL-28及IL-29適用於治療肝炎病毒感染。 重要的是，顯示IL-28及IL-29具有此等抗病毒活性而無與 使用其他先前已知IFN療法相關之一些毒性。與I型IFN療 法有關之毒性之一為骨髓抑制。此歸因於骨髓祖細胞之1 型IFN抑制。因為IL-29並不如I型IFN治療所見的顯著抑制 骨髓細胞擴增或B細胞增殖，所以IL-29將具有較小的與治 療相關之毒性《將預期IL-28A及IL-28B具有類似結果。 • 因此，本文所述之SABA-IFN-λ融合多肽的例示性用途 包括治療病毒感染之個體，包括例如諸如A型肝炎、B型 肝炎、C型肝炎及D型肝炎之病毒感染。本文所述之SABA-IFN-λ融合多肽亦可用作治療與以下相關之病毒感染的抗 病毒劑：呼吸道融合性病毒、疱疹病毒、埃-巴二氏病毒 (Epstein-Barr virus)、流感病毒、腺病毒' 副流感病毒、 鼻病毒、柯薩奇病毒（coxsackie virus)、痘苗病毒、西尼耳 病毒（west nile virus)、登革熱病毒、委内端拉馬腦炎病毒 (Venezuelan equine encephalitis virus)、伯欽特病毒 155490.doc -99- 201138808 (pichinde virus)及脊髓灰質炎病毒。本文所述之SABA-IFN-λ融合多肽可用於治療具有慢性或急性病毒感染之個 體。 在某些實施例中，本文所述之SABA-IFNX融合物可提供 優於與其他藥物動力學部分（例如PEG)融合之IFNX多狀的 益處。詳言之，本文所提供之SABA-IFISa融合物可使得與 PEG-IFNX結合物相比IFNI分子之血清半衰期得到顯著改 善。該等半衰期延長可允許降低頻率之給藥方案，例如與 使用其他IFNX治療劑（如PEG-IFNX結合物）之更頻繁的給藥 (諸如每週給藥一次）相比，SABA-IFNX融合物可允許每月 給藥一次。 在一態樣中，本申請案提供與血清白蛋白結合1GFn3(亦 即SABA)融合之IFNI及該等融合物（本文通常稱為SABA-ΙΡΝλ融合物）之用途》SABA-IFISa融合物係指具有各種配 置之融合物，包括例如SABA-IFNX及IFNX-SABA。某些例 示性SABA-IFNX融合構築體展示於表2中。然而，應瞭解 如本文所揭示之IFNI包括保留IFNI功能活性之IFNX變異 體、截短形式及任何經修飾形式。亦即，如本文所述之 IFNI亦包括經修飾形式，包括某些胺基酸已缺失或經取代 之片段以及變異體，及一或多個胺基酸已變為經修飾之胺 基酸或非天然存在之胺基酸的修飾，及諸如糖基化之修 飾，只要經修飾形式保留IFNI之生物活性即可。例示性 IFNX序列以SEQ ID NO: 251-257呈現於表2中。 在例示性實施例中，本申請案提供一種SABA-IFNX融合 155490.doc •100· 201138808 物，其中該IFNI部分包含SEQ ID NO·· 251-257中之任一者 的序列，或與SEQ ID NO: 251-257中之任一者具有至少 70%、75%、80%、85%、90%、95%、97%、98%或 99% — 致性的序列。在某些實施例中，SABA-IFNX融合物包含 SEQ ID NO: 258-285中之任一者的序列，或與SEQ ID NO: 258-285中之任一者具有至少70%、75%、80%、85%、 90%、95%、97%、98%或 99%— 致性的序列。 在某些實施例中，本申請案提供一種可由下式表示之 SABA-IFNX融合物：SABA-XrIFNX 或 IFNX-X】-SABA，其 中SABA為如本文所述之SABA多肽（包括任何N端及/或C端 延長部分），Χι為多狀連接子（適合之連接子包括例如SEQ ID NO: 65-88、216-221 或 397 中之任一者），且 IFNI為如本 文所述之IFNX狀。 14.愛帕林 在另一態樣中，本申請案提供SABA與愛帕林之融合分 子。愛帕林為G蛋白偶合受體APJ之内源性配位體。愛帕 林基因編碼裂解為較短活性片段之具有77個胺基酸的前原 蛋白。全長成熟肽為愛帕林-36，但愛帕林-17及愛帕林_13 亦具有活性（M Kleinz等人，Pharmacol. Ther. 107:198-21 1 (2005))。愛帕林在中樞神經系統及周邊組織中廣泛表現， 且細胞表現包括内皮細胞及脂肪細胞（見上）。已顯示愛帕 林使得血管擴張且改善心臟衰竭患者之血液動力學及心臟 概況，以及在臨床前模型中預防動脈粥樣硬化（AG Japp等 人，Circ. 121: 1818-1827 (2010);及HY Chun等人，J. Clin. 155490.doc • 101 - 201138808
Invest. 1 18: 3343-3 354 (2008))。另外，愛帕林投藥與在糖 尿病臨床前模型中改善胰島素敏感性相關（C Dray等人， Cell Metabolism 8: 437-445 (2008))» 因此，本文所述之 SABA-愛帕林融合多肽的例示性用途可包括治療糠尿病、 肥胖、飲食障礙、胰島素抗性症候群及心血管疾病（例如 心臟衰竭、動脈粥樣硬化及高血壓）。 在一態樣中，本申請案提供與血清白蛋白結合1GFn3(亦 即SABA)融合之愛帕林及該等融合物（本文通常稱為SABA-APLN融合物）之用途^ SABA-APLN融合物係指具有各種 配置之融合物，包括例如SABA-APLN及APLN-SABA。某 些例示性SABA-APLN融合構築體展示於表2中。然而，應 瞭解如本文所揭示之愛帕林包括保留愛帕林功能活性之 IFNI變異體、截短形式及任何經修飾形式。亦即，如本文 所述之愛帕林亦包括經修飾形式，包括某些胺基酸已缺失 或經取代之片段以及變異體，及一或多個胺基酸已變為經 修飾之胺基酸或非天然存在之胺基酸的修飾，及諸如糖基 化之修飾，只要經修飾形式保留愛帕林之生物活性即可。 例示性愛帕林序列以SEQ ID NO: 419-423呈現於表2中。
在例示性實施例中，本申請案提供一種SABA-APLN融 合物，其中該愛帕林部分包含SEQ ID NO: 419-423中之任 一者的序列，或與SEQ ID NO: 419-423中之任一者具有至 少 70%、75%、80%、85%、90%、95%、97%、98% 或 99% 一致性的序列。在某些實施例中，SABA-APLN融合物包 含SEQ ID NO: 424-430中之任一者的序列，或與SEQ ID
155490.doc -102- S 201138808 NO: 424-430中之任一者具有至少70%、75%、80%、 85%、90%、95%、97%、98%或 99%— 致性的序列。 在某些實施例中，本申請案提供一種可由下式表示之 SABA-APLN融合物：SABA-XrAPLN 或 APLN-X^SABA， 其中SABA為如本文所述之SABA多肽（包括任何N端及/或C 端延長部分），Χι為多肽連接子（適合之連接子包括例如 SEQ ID NO: 65-88、216-221 或 397 中之任一者），且 APLN ^ 為如本文所述之APLN肽。
15·其他AdnectinsTM 在某些態樣中，本申請案提供與結合於除血清白蛋白 (例如HSA)外之標靶分子的1QFn3結構域融合之SABA，產 生 SABA-1QFn3 或 1QFn3-SABA構型之 AdnectinTM二聚體融合 分子。在其他態樣中，本申請案提供與兩個或兩個以上 1GFn3結構域融合之SABA，由此形成多聚體。舉例而言， 在一實施例中，本申請案提供與兩個1GFn3結構域（1GFn3a& • 10Fn3b)融合之SABA，其中10Fn3a及10Fn3b各結合於不同標 靶分子，且皆不結合於血清白蛋白（例如HSA)。所得 AdnectinTM 三聚體之構型可為：SABA-1QFn3a-1GFn3b、 10Fn3a-SABA-10Fn3b或 10Fn3a-10Fn3b-SABA。 在例示性實施例中，SABA與包含SEQ ID NO: 1-3中之 任一者或與SEQ ID NO: 1-3中之任一者具有至少50%、 60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、97%、 98%或99%—致性的序列之1GFn3結構域融合，其中BC、 DE及FG環分別相對於野生型BC、DE及FG環之序列經修 155490.doc -103 - 201138808 飾，且其中該1()Fn3結構域結合於標靶（除整合素外）之KD為 小於500 μΜ。1GFn3結構域可另外包含如本文所述之N端及/ 或C端延長部分。在某些實施例中，1QFn3結構域結合於為 如本文所述之治療性部分的標靶。在例示性實施例中，在 包含另一 1GFn3結構域之融合物中，1GFn3結構域結合於 VEGFR2、TNFa、IGF1R或EGFR。在例示性實施例中，在 包含另外兩個1QFn3結構域之融合物中，1QFn3結構域結合 於 VEGFR2及 IGF1R或 EGFR及 IGF1R。 籲 結合/連接子 SABA融合物可共價或非共價連接。在一些實施例中， 血清白蛋白結合1GFn3可直接或經由多肽連接子間接連接 於異源分子。適合於使SABA連接於所關注之蛋白質的連 接子為使得各別結構域彼此獨立地摺疊形成不會破壞融合 蛋白之任一成員的功能性之三維結構的彼等連接子。例示 性連接子以SEQ ID NO: 65-88、216-221及397提供於表2 中。 籲 本發明提供許多適合之連接子，包括基於甘胺酸-絲胺 酸之連接子、基於甘胺酸-脯胺酸之連接子以及具有胺基 酸序歹iJPSTSTST (SEQ ID NO: 85)之連接子。在一些實施 例中，連接子為基於甘胺酸-絲胺酸之連接子。此等連接 子包含甘胺酸及絲胺酸殘基且長度可為8至50、10至30及 10至20個胺基酸。實例包括具有胺基酸序列（GS)7 (SEQ ID NO: 72)、G(GS)6 (SEQ ID NO: 67)及 G(GS)7G (SEQ ID NO: 69)之連接子。其他連接子含有麩胺酸且包括例如 155490.doc -104·
S 201138808 (GSE)5 (SEQ ID NO: 74)及 GGSE GGSE (SEQ ID NO: 78)。 其他例示性甘胺酸-絲胺酸連接子包括（GS)4 (SEQ ID NO: 71)、（GGGGS)7 (SEQ ID NO: 80)、（GGGGS)5 (SEQ ID NO: 81)及（GGGGS)3G (SEQ ID NO: 82)。在一些實施例 中，連接子為基於甘胺酸-脯胺酸之連接子。此等連接子 包含甘胺酸及脯胺酸殘基且長度可為3至30、10至30及3至 20個胺基酸。實例包括具有胺基酸序列（GP)3G (SEQ ID NO: 83)、（GP)5G (SEQ ID NO: 84)及GPG之連接子。在其 他實施例中，連接子可為長度為3至30、10至30及3至20個 胺基酸的基於脯胺酸-丙胺酸之連接子。脯基於胺酸丙胺 酸之連接子的實例包括例如（PA)3 (SEQ ID NO: 86)、（PA)6 (SEQ ID NO: 87)及（PA)9 (SEQ ID NO: 88)。預期最佳連接 子長度及胺基酸組成可藉由此項技術中熟知之方法使用常 規實驗來確定。 在一些實施例中，本文所述之融合物經由具有可由血液 或標靶組織中之蛋白酶裂解的蛋白酶位點之多肽連接子連 接於SABA。該等實施例可用於釋放治療性蛋白質以用於 較好的傳遞或治療悻質或更有效的產生。 其他連接子或間隔子可在Fn3結構域與多肽連接子之間 引入Fn3結構域之C端。其他連接子或間隔子可在Fn3結構 域與多肽連接子之間引入Fn3結構域之N端。 在一些實施例中，治療性部分可直接或經由聚合連接子 間接連接於SABA。聚合連接子可用於最佳改變融合物各 組分之間的距離以形成具有一或多種以下特徵之蛋白質融 155490.doc -105- 201138808 合物：1)當結合於所關注之蛋白質時，結合一或多個蛋白 質結構域之位阻降低或增加；2)蛋白質穩定性或溶解度增 加；3)蛋白質聚集減少；及4)蛋白質之總結合力（avidity) 或親和力增加。 在一些實施例中，治療性部分經由生物相容性聚合物 (諸如聚合糖）連接於SABA。該聚合糖可包括酶裂解位 點，其可由血液或標靶組織中之酶裂解。該等實施例可用 於釋放治療性蛋白質以使傳遞或治療性質較佳或更有效產 生。 SABA-神經肽融合物 在某些實施例中，本案提供SABA-神經肽融合物。例示 性神經肽包括例如澱粉素、PYY及PP。SABA-神經肽融合 物可以構築呈多肽融合物，或呈經化學衍生之間隔子連接 的結合物。在一個實施例中，SABA-神經肽融合物為包含 SABA、胺基酸連接子及神經肽之多肽融合物。因為許多 神經肽在C端經醯胺化，所以融合蛋白之例示性配置自N 端至C端為SABA、胺基酸連接子及神經肽。在另一實施例 中，SABA-神經肽融合物含有使SABA連接於神經肽之化 學衍生之間隔子。SABA-神經肽結合物之例示性配置如 下：（1) SABA-Cys-化學衍生之間隔子-神經肽；或（2) SABA-胺基酸連接子-Cys-化學衍生之間隔子-神經肽。 SABA-神經肽融合物可在宿主細胞中產生，諸如如本文進 一步所述之微生物或哺乳動物細胞。由化學衍生之間隔子 連接之SABA-神經肽融合物的肽組分可由宿主細胞產生或 155490.doc -106- 201138808 由化學合成產生或其組合。在一個例示性實施例中，由化 學衍生之間隔子連接的SABA-神經肽融合物係由宿主細胞 (諸如大腸桿菌）中產生之SABA及由化學合成產生之神經 肽組裝。下文及實例中描述產生SABA-神經肽融合物之其 他詳情。 許多神經肽含有C端α-醯胺基，對於其生物活性很重 要。舉例而言，澱粉素、ΡΥΥ及ΡΡ肽均具有C端醯胺化。 在哺乳動物細胞中，α-醯胺化可由肽基-甘胺酸α-醯胺化單 加氧酶（ΡΑΜ)(—種催化肽基-甘胺酸受質轉化為α-醯胺化 產物之雙功能酶）處理。 存在多種製備C端醯胺化肽之技術。舉例而言，肽前驅 體（具有C端甘胺酸或甘胺酸-離胺酸-精胺酸或其他延長部 分）可在活體外由純化之ΡΑΜ酶處理。ΡΑΜ及使用ΡΑΜ製 備C端醯胺化肽之方法為熟習此項技術者所已知。參見例 如1^ 4,708,934、1^ 5,789,234及1^ 6,319,685。（：端醯胺 化亦可在表現内源性ΡΑΜ之哺乳動物表現系統中完成。融 合蛋白可表現為延長a-甘胺酸或a-甘胺酸-離胺酸-精胺酸 序列之前驅體分子。當在真核細胞（例如CHO、NIH 3T3及 BHK)中表現為分泌性蛋白質時，蛋白質可由内源性PAM 酶裂解且產生C端叛醯胺。參見例如Endocrinology (1991) V129:553-555 (1991); and Molecular and Cellular
Endocrinology 9 1:135-141 (1993)。C端醢胺化亦可在共表 現人類PAM之哺乳動物表現系統中完成。參見例如 Chinese Journal of Biotechnology (2002) v 18:20-24 155490.doc -107- 201138808 (2002) ° 除COOH向CONH2之活體外PAM酶轉化外，可使用馬瑞 費德合成（Merrifield synthesis)形成所關注之蛋白質上的缓 醯胺末端。馬瑞費德合成使得在馬瑞費德合成過程期間順 丁烯二醯亞胺部分連接於肽之N端。順丁烯二醯亞胺部分 允許使用位於兩個多肽結構域之間且可用作間隔子的各種 非胺基酸部分在兩個胺基酸序列（包括例如SABA及羧基醯 胺化神經肽）之間形成結合物。可用作間隔子之適合非胺 基酸部分的實例展示於下表1中。順丁烯二醯亞胺結合反 應之益處在於其可容易對蛋白質進行，其在有利於蛋白質 分子之溫和條件下得到高產率，且其對少數副產物具有高 度特異性。 表1.用於使SABA分子結合於在N端具有順丁烯二醯亞 胺部分之肽的例示性連接子/間隔子。 連接子/間隔子 結構或序列 1 6-胺基己酸(Ahx) 0 Η2Ν 2 (GS)5 Gly-Ser-Gly-Ser-Gly-Ser-Gly-Ser-Gly-Ser 3 PEG(9-原子） Η2Ν 4 PEG(13-原子） 0 H2N 5 PEG(16-原子） o 6 PEG(20-原子） H h2n N ν||^0^||^〇Η O 0 7 PEG(40-原子） 0 Q 4-(N-順丁烯二醯亞胺甲基)-環己烷- HO 0 1-甲酸(MCC) 155490.doc -108- 201138808 9 3-順丁烯二醯亞胺苯甲酸(MB) °^α 10 4-((蛾乙醯基)胺基甲基)環己烷-1-曱 酸(IAC) 11 3-(碘乙醯基)-胺基苯甲酸(IAB) 在一些實施例中，本文所述之c端醯胺化合成肽可在溶 液狀態下藉由使用通常在肽之N端的順丁烯二醯亞胺基團 使SABA之C端Cys的氫硫基邁克爾加成至肽之順丁烯二醯 亞胺衍生物上，得到穩定硫醚鍵來與含有C端Cys殘基之 SABA結合。相同結合可藉由用肽之鹵烷基衍生物（諸如經 由使用溴-乙酸或碘-乙酸醯化而引入至肽上之溴-曱基或 碘-甲基）使SABA之Cys氫硫基烷基化來達成。熟習此項技 術者應認識到，此類型之肽-蛋白質結合可使用若干種不 同方法來達成，例如類似G. T. Hermanson， 「Bioconjugate Techniques」，Academic Press，San Diego, CA，1996所述之 彼等程序的生物結合程序。 在另一實施例中，中性連接子或間隔子位於肽上之毓 基-反應性基團與天然或經修飾之肽序列之間。連接子或 間隔子可使得位阻降低且有助於肽結合於其同源受體或蛋 白質搭配物。適合之連接子包括（但不限於）表1中所述之彼 等連接子。顯示具有巯基-反應性順丁烯二醯亞胺或碘乙 醯基之連接子8-11且其可使用此項技術中所述之相應N-丁 二醯亞胺基活性酯偶合於肽。 本文所述之肽及肽類似物可藉由化學合成，使用諸如以 155490.doc •109- 201138808 下中所述之彼等技術的各種固相技術來製備：G. Barany及 R.B. Merrifield, 「The Peptides: Analysis, Synthesis, Biology」；第 2卷「Special Methods in Peptide Synthesis, Part A」，第 3-284 頁，E. Gross 及 J. Meienhofer 編， Academic Press，New York, 1980 ;或 W. C. Chan及 P. D. White, 「Fmoc Solid Phase Peptide Synthesis - A Practical Approach」，Oxford University Press·，Oxford，UK, 2000。 用於肽合成之例示性策略基於用於暫時保護α-胺基之 Fmoc(9-苐基曱基甲氧羰基）基團與用於暫時保護胺基酸側 鏈之第三丁基組合（參見例如E. Atherton及R. C. Sheppard， 「The Fluorenylmethoxycarbonyl Amino Protecting Group」， 「The Peptides: Analysis, Synthesis, Biology」；第 9 卷 「Special Methods in Peptide Synthesis, Part C」，第 1-38 頁，S. Undenfriend及 J. Meienhofer編，Academic Press, San Diego, 1987)。 可以逐步方式在不溶性聚合物載體（亦稱為「樹脂」）上 自肽之羧基端開始來合成肽。藉由經由形成醯胺或酯鍵而 使肽之C端胺基酸附接於樹脂來開始合成。此允許最終釋 放分別呈C端醯胺或曱酸形式之所得肽。 C端胺基酸及用於合成之其他胺基酸較佳具有其區別保 護之α-胺基及側鏈官能基（若存在）以使得α-胺基保護基可 在合成期間選擇性移除。胺基酸之偶合藉由活化其呈活性 酯形式之羧基及其與附於樹脂之Ν端胺基酸之未封端α-胺 基的反應來進行。重複α-胺基脫除保護基及偶合之循環直 155490.doc -110· 201138808 至組裝整個肽序列。接著自樹脂釋放肽，伴隨通常在適當 清除劑存在下脫除側鏈官能基之保護基以限制副反應。所 得肽可藉由逆相製備型HPLC來純化。 用作最終肽之前驅體的肽基-樹脂之合成可利用市售交 聯聚苯乙烯聚合物樹脂（Novabiochem, San Diego, CA)或 ChemMatrix PEG 聚合物樹脂（PCAS BioMatrix，Quebec City，Canada)。較佳固體載體包括例如：4-(2’，4’-二曱氧基 φ 苯基-Fmoc-胺基曱基）-苯氧基乙醯基-對甲基二苯曱基胺樹 脂（Rink醯胺MBHA樹脂）；9-Fmoc-胺基-卩山口星-3-基氧基-馬 瑞費德樹脂（Sieber醯胺樹脂）；用於C端羧醯胺之4-(9-Fmoc)胺基曱基-3,5-二曱氧基苯氧基）戊醯基-胺基甲基-馬 瑞費德樹脂（PAL樹脂），及相應基於ChemMatrix PEG之樹 脂。第一與隨後胺基酸之偶合可使用分別由DIC/HOBt、 HBTU/HOBt 或 DIC/6-Cl-HOBt 或 HCTU/6-Cl-HOBt 製備之 HOBt或6-Cl-HOBt活性酯完成。 # 本文所述之肽及肽類似物的合成可使用自動肽合成器， 諸如 Liberty微波肽合成器（CEM Corp.，Matthews，North Carolina)來進行。逐步固相肽合成可使用實例中所述之 Fmoc/第三丁基保護策略來進行。在一些實施例中，使用 圖21中所示之Fmoc胺基酸衍生物。 在澱粉素衍生物之情況下，受Acm保護之Cys殘基（例如 Cys2,7或Cys1’7)之間的二硫鍵可經由對樹脂之碘介導性氧 化來形成（Chan及White, 2000)。用於其各別肽之肽基-樹脂 前驅體可使用任何標準程序裂解及脫除保護基（參見例如 155490.doc -111 - 201138808 D. S. King等人，Int. J. Peptide Protein Res. 36: 255-266 (1990))。在一些實施例中，在水、TIS及苯酚存在下使用 TFA作為清除劑。通常，在室溫下在TFA/水/TIS(94:3:3， v:v:v ;每 100 mg肽基樹脂 1 mL)或 TFA/水/苯酚（90:5:5 ; V:v:w)中攪拌肽基-樹脂2-3小時。接著濾除廢樹脂且在減 壓下濃縮或乾燥TFA溶液❶所得粗肽可沈澱且用Et20洗滌 或直接再溶解於DMS0、DMF或50% AcCN水溶液中以藉 由製備型HPLC進行純化。 具有所需純度之肽可藉由使用製備型HPLC純化（例如在 Shimadzu LC-8A型號液相層析儀上）來獲得。舉例而言， 可將粗狀溶液注射至Phenomenex Luna C 18(5 μιη， 21.2x250 mm)管柱上且用MeCN於水（兩者皆經0.1% TFA緩 衝）中之線性梯度，使用14-20 mL/min之流速溶離，其中藉 由220 nm下之UV吸光度來監測流出物。經純化肽之結構 可藉由電喷霧LCMS分析來證實。舉例而言，可藉由 LC/MS，在連接於Waters Acquity超效液相層析儀（UPLC) 之Waters ZQ 2000單四極質譜儀（Milford，MA)上分析肽樣 品。可使用 2· 1 x50 mm、1.7 μιη、300 A、Acquity BEH300 C18 管柱（Waters，Milford，MA)，用在〇·8 mL/min下梯度溶 離來達成層析分離。管柱溫度可為50°C。移動相A可為含 0.05% TFA之98:2水：乙腈且移動相B可為含0.04% TFA之乙 腈。線性梯度可在1、2或5分鐘内由2%至80%移動相B形 成。可使用2 pL注射液且ESI MS數據可自m/z 500至m/z 1500或自m/z 1000至m/z 2000得到。儀器可以單位解析度 155490.doc -112· 201138808 來操作^ 結合多肽之去免疫化 血清白蛋白結合物及其融合物之胺基酸序列可改變以消 除一或多個B細胞或T細胞抗原決定基。包括本文所述之 SABA融合物的蛋白質可經去免疫化以使其對特定物質不 具有免疫原性或免疫原性較小。去免疫化可經由結構變為 蛋白質來達成。可使用熟習此項技術者已知之任何去免疫 化技術，參見例如WO 00/34317 ’其揭示内容以全文引用 的方式併入本文中。 在一實施例中，可分析血·清白蛋白結合物及其融合物之 序列中MHC II型結合基元之存在。舉例而言，可與MHC 結合基元之資料庫進行比較，藉由在全球資訊網上在 sitewehil.wehi.edu.au上搜尋「基元」資料庫。或者，MHC II型結合肽可使用計算穿線方法來鑑別，諸如由Altuvia等 人（J. Mol. Biol. 249 244-250 (1995))設計之彼等方法，藉 此測試多肽之連續重疊肽與MHC II型蛋白之結合能力。計 算結合預測演算法包括iTopeTM、Tepitope、SYFPEITHI、 EpiMatrix(EpiVax)及 MHCpred。為幫助鑑別 MHC II型結合 肽’可尋找與成功呈現之肽（諸如兩親性及Rothbard基元） 及組織蛋白酶B及其他處理酶之裂解位點有關的相關序列 特點。 鑑別出潛在（例如人類）T細胞抗原決定基，此等抗原決 定基接著藉由按需要改變一或多個胺基酸以消除T細胞抗 原決定基來消除。此通常將涉及改變T細胞抗原決定基自 155490.doc -113- 201138808 身中之一或多個胺基酸。此可涉及根據蛋白質之初級結構 改變相鄰於抗原決定基之胺基酸或在初級結構中不相鄰但 在分子之二級結構中相鄰之胺基酸◦所涵蓋之常見改變將 為胺基酸取代，但有可能在某些情況下，胺基酸添加或缺 失將為適當的。所有改變均可藉由重組DNA技術來完成， 以使得最終分子可藉由自重組宿主表現來製備，例如藉由 充分明確之方法，但亦可使用蛋白質化學反應或任何其他 分子改變方法。 一旦移除所鑑別之T細胞抗原決定基，可再次分析去免 疫化序列以確保尚未形成新T細胞抗原決定基，且若其已 形成’則可刪去抗原決定基。 不需要移除計算鑑別之所有τ細胞抗原決定基。熟習此 項技術者應瞭解特定抗原決定基之r強度」或甚至潛在免 疫原性的顯著性。各種計算方法產生潛在抗原決定基之計 分。熟習此項技術者應認識到，僅需要移除高計分抗原決 定基。熟習此項技術者亦應認識到，移除潛在抗原決定基 與維持蛋白質之結合親和力或其他生物活性之間存在平 衡。因此，一種策略為將取代依序引入SABA4Saba融合 蛋白中，接著測試標靶結合或其他生物活性及免疫原性。 在一態樣中，與人類個體中之初始蛋白相比，去免疫化 SABA或SABA融合蛋白之免疫原性較小（更確切而言，引 起HAMA反應降低）。測定免疫原性之檢定在熟習此項技術 者之知識範圍内。可進行測定免疫反應之公認方法以監測 特定個體或在臨床試驗期間之HAMA反應。可在開始投與 155490.doc •114- 201138808 該療法時及整個投藥中對投與去免疫化蛋白質之個體進# 免疫原性評估。量測HAMA反應’例如藉由使用此項技術 者已知之方法（包括表面電漿子共振技術（BIAc〇re)& /咬固 相ELISA分析）偵測來自個體之血清樣品中去免疫化蛋白質 之抗體。或者’设什成量測T細胞活化事件之活體外於^ — 亦指示免疫原性。 其他修飾 • 在某些實施例中’企清白蛋白結合物及其融合物可進一 步包含轉譯後修飾。例示性轉譯後蛋白質修飾包括磷酸 化、乙醯化、曱基化、ADP核糖基化、泛素化、糖基化、 羰基化、類泛素化（SUm〇ylation)、生物素標記或添加多肽 側鏈或疏水基。因此，經修飾之血清白蛋白結合物及其融 合物可含有非胺基酸要素，諸如脂質、多醣或單醣及磷酸 酯。糖基化之較佳形式為唾液酸化（sialylati〇n)，其使一或 多個唾液酸部分結合於多肽。唾液酸部分改善溶解度及血 鲁料衰期’同時亦降低蛋自f之可能免疫原性。參見例如 Raju等人 Bi0Chemistry. 2001 Jul 31;4〇(3〇):8868 76。針對 血者白蛋白結合物或其融合物結合特定血清白蛋白（例如 A或RhSA)之胃b力及/或在融合物之情況下由特異性非 1〇Fn3部分賦予之功能作用（例如fgf2丨對葡萄糖攝取之作 用），可測試該等非胺基酸要素對企清白蛋白結合物或其 融合物之功能性的作用。 載趙及聚核苷酸實施例 本發明亦包括編碼本文所述之任—蛋白f的核酸序列。 155490.doc •115· 201138808 如熟習此項技術者所瞭解，由於第三驗基簡併性，所以幾 乎每-胺基酸均可由編碼核苦酸序列中之一個以上三聯密 碼子表示。另外，少數驗基對變化可導致所編碼胺基酸序 列中之保守性取代，但預期不會實質上改變基因產物之生 物活性。因此，編碼本文所述之蛋白質的核酸序列可略微 修改序列且仍可編碼其各別基因產物。編碼本文所述之血 清白蛋白結合物及其融合物的某些例示性核酸包括具有表 3中所示之序列的核酸。 編碼本文所揭示之各種蛋白質或多肽中之任一者的核酸 可經化學合成。可選擇密碼子用法以改善在細胞中之表 現。該密碼子用法將視所選細胞類型而定。已開發用於大 腸桿菌大腸桿菌及其他細菌，以及哺乳動物細胞、植物細 胞、酵母細胞及昆蟲細胞之特殊化密碼子用法模式。參見 例如：Mayfield等人，Proc Natl Acad Sci U S A. 2003 100(2):438-42 ; Sinclair 等人 Protein Expr Purif. 2002 (1):96-105; Connell ND. Curr Opin Biotechnol. 2001 (5):446-9 ; Makrides等人 Microbiol Rev. 1996 60(3):512-38 ;及 Sharp等人 Yeast. 1991 7(7):657-78。 用於核酸操作之通用技術在熟習此項技術者之範圍内且 亦例如描述於 Sambrook 等人，Molecular Cloning: A Laboratory Manual,第 1-3卷，Cold Spring Harbor Laboratory Press，第 2版，1989，或 F. Ausubel 等人，Current Protocols in Molecular Biology (Green Publishing and Wiley-Interscience: New York，1987)及定期更新中，該等文獻以 155490.doc •116- 201138808 引用的方式併入本文中。編碼蛋白質之DNA可操作地連接 於來源於哺乳動物、病毒或昆蟲基因之適合的轉錄或轉譯 調節兀件。該等調節元件包括轉錄啟動子、視情況存在之 控制轉錄的操縱序列、編碼適合之mRNA核糖體結合位點 的序列及控制轉錄及轉譯終止之序列。另外併入在宿主中 重複實驗之能力（通常由複製起點賦予）及有助於認識轉化 體之選擇基因。適合之調節元件為此項技術所熟知。 本文所述之蛋白質及融合蛋白可以具有異源多肽之融合 蛋白形式產生’其較佳為在成熟蛋白質或多肽之N端具有 特異性裂解位點信號序列或其他多肽。所選之異源信號序 列較佳為可由宿主細胞識別及處理（亦即由信號肽酶裂解） 之信號序列。對於不識別及處理天然信號序列之原核宿主 細胞而言，信號序列經例如選自鹼性磷酸酶、青黴素酶、 ipp或熱穩定腸毒素π前導序列之群的原核信號序列取代。 對於酵母分泌而言’天然信號序列可經例如酵母轉化酶前 導序列、a因子前導序列（包括酵母（Saccharomyces)及克魯 維酵母（Kluyveromyces)a-因子前導序列）或酸性磷酸酶前 導序列、白色念珠菌（C. albicans)葡糖澱粉酶前導序列或 PCT公開案WO 90/13646中所述之信號取代。在嗔乳動物 細胞表現中，可使用哺乳動物信號序列以及病毒分泌性前 導序列，例如單純疱疹gD信號。該等前驅體區域之DNA可 在閱讀框架中接合於編碼蛋白質之DNA。 用於真核宿主細胞（例如酵母、真菌、昆蟲、植物、動 物、人類或來自其他多細胞生物體之有核細胞）之表現載 155490.doc -117- 201138808 體亦將含有終止轉錄及穩定mRNA所必需之序列。該等序 列通常得自真核生物或病毒DNA或cDNA之5'及有時3,未轉 譯區。此等區域含有轉錄為編碼多價抗體之mRNA的非轉 譯部分中之聚腺苷酸化片段的核苷酸區段。一種適用之轉 錄終止組分為牛生長激素聚腺苷酸化區域。參見pct公開 案第WO 94/1 1026號及其中所揭示之表現載體。 重組DNA亦可包括任何類型之蛋白質標藏序列，其可適 用於純化蛋白質《蛋白質標籤之實例包括（但不限於）組胺 酸標籤、FLAG標籤、myc標籤、HA標籤或GST標籤。用 於細菌、真菌、酵母及哺乳動物細胞宿主之適當選殖及表 現載體可見於 Cloning Vectors: A Laboratory Manual， (Elsevier，New York，1985)中，該文獻之相關揭示内容以 引用的方式併入本文中。 如熟習此項技術者將顯而易見，使用適合於宿主細胞之 方法將表現構築體引入宿主細胞中。將核酸引入宿主細胞 中之各種方法為此項技術所已知，包括（但不限於）電穿 孔；使用氣化鈣、氣化铷、磷酸鈣、DEAE-葡聚糖或其他 物質轉染；微粒轟擊；脂質轉染；及感染（其中載體為感 染劑）。 適合之宿主細胞包括原核生物、酵母、哺乳動物細胞或 細菌細胞。適合之細菌包括革蘭氏陰性（grarn negative)或 革蘭氏陽性（gram positive)生物體，例如大腸桿菌或芽胞 桿菌屬。酵母，較佳來自酵母屬 (Saccharomyces species)(諸如釀酒酵母（s. cerevisiae))亦可 155490.doc •118- 201138808 用於產生多肽。亦可使用各種哺乳動物或昆蟲細胞培養物 系統來表現重組蛋白質。用於在昆蟲細胞中產生異源蛋白 質之桿狀病毒系統由Luckow及Summers(Bio/Technology, 6:47, 1988)評述。在一些情況下，需要在脊椎動物細胞中 產生蛋白質，諸如用於糖基化，且繁殖培養物（組織培養 物）中之脊椎動物細胞已變成常規程序。適合之哺乳動物 宿主細胞系的實例包括内皮細胞、COS-7猴腎臟細胞、 CV-1、L細胞、C127、3T3、中國倉鼠卵巢（CHO)、人類胚 腎細胞、海拉（HeLa)、293、293T及BHK細胞株《對於許 多應用而言，本文所述之蛋白質多聚體之小尺寸將使得大 腸桿菌成為較佳表現方法。 蛋白質產生 用本文所述用於產生蛋白質之表現或選殖載體使宿主細 胞轉型，且將宿主細胞培養於視情況經改良以誘導啟動 子、選擇轉化體或擴增編碼所需序列之基因的習知營養培 養基中。
可將用於產生本發明之蛋白質的宿主細胞培養於各種培 養基中。諸如哈姆氏F10(Ham’s F10)(Sigma)、最低必需培 養基（(MEM)，Sigma)、RPMI-1640(Sigma)及杜爾貝科氏改 良伊格爾培養基（(DMEM)，Sigma)之市售培養基適合於培 養宿主細胞。此外，Ham等人，Meth. Enz. 58:44 (1979)， Barnes等人，Anal. Biochem.102:255 (1980);美國專利第 4,767,704 號；第 4,657,866 號；第 4,927,762 號；第 4,560,655 號；或第 5，122,469 號；WO 90/03430 ; WO 155490.doc •119- 201138808 87/00195 ;或美國專利第Re. 30,985號中所述之任何培養 基可用作宿主細胞之培養基。任何此等培養基均可視需要 補充激素及/或其他生長因子（諸如胰島素、轉鐵蛋白或表 皮生長因子）、鹽（諸如氣化鈉、鈣、鎂及磷酸鹽）、緩衝液 (諸如HEPES)、核苷酸（諸如腺苷及胸苷）、抗生素（諸如 GENTAMYCINtm藥物）、痕量元素（定義為無機化合物，通 常以在微莫耳範圍内之最終濃度存在）及葡萄糖或等效能 源。亦可包括熟習此項技術者已知之適當濃度的任何其他 必要補充劑。諸如溫度、pH值及其類似條件之培養條件為 先前用於選擇用於表現之宿主細胞的彼等條件，且對於一 般技術者將顯而易見。 本文所揭示之蛋白質亦可使用細胞轉譯系統產生。出於 該等目的，編碼蛋白質之核酸必須經修飾以允許活體外轉 錄產生mRNA並允許mRNA在所用之特定無細胞系統中進 行無細胞轉譯。例示性無真核細胞轉譯系統包括例如無哺 乳動物或酵母細胞轉譯系統，且例示性無原核細胞轉譯系 統包括例如無細菌細胞轉譯系統。 本文所揭示之蛋白質亦可藉由化學合成產生（例如藉由
Solid Phase Peptide Synthesis，第 2版，1984，The Pierce
Chemical Co.，Rockford，IL中所述之方法）。蛋白質之修飾 亦可藉由化學合成產生。 本文所揭示之蛋白質可藉由蛋白質化學反應領域中通常 已知之用於蛋白質之分離/純化方法來純化。非限制性實 例包括萃取、再結晶、鹽析（例如使用硫酸敍或硫酸納）、 155490.doc -120- 201138808 離心、透析、超濾、吸附層析、離子交換層析、疏水性層 析、正相層析、電泳、逆流分佈或此等方法之任何組合。 純化後’可藉由此項技術已知之各種方法中之任一者（包 括（但不限於）過濾及透析）將蛋白質交換至不同緩衝液中及/ 或漠縮。 經純化蛋白質較佳為至少85%純度，更佳為至少95。/〇純 度’且最佳我至少98%純度。不考慮純度之精確數值，蛋 白質之純度足以用作醫藥產品。 成像、診斷性及其他應用 基於與SABA融合之異源分子的一致性，本文所提供之 SABA融合物可用於治療各種疾病及病症^ SABA融合物之 應用可由熟習此項技術者根據此項技術中之知識及本文所 提供之資訊來判定。本文詳細描述各種sabA融合蛋白之 用途。SABA融合物可投與任何哺乳動物個體或患者，包 括人類與非人類生物體。 本文所述之血清白蛋白結合物及融合分子可標記可偵測 物且用於接觸表現例如由融合分子結合之蛋白質的細胞以 用於成像或#斷性應用。可使用此項技術中已知之用於使 蛋白質結合於可偵測部分的任何方法，包括以下所述之彼 等方法.Hunter等人，Nature 144:945 (1962); David等人， Biochemistry 13:1014 (1974) ； Pain# A, J. Immunol. Meth. 40:219 (1981);及 Nygren，j. Hist〇chem _ Cyt〇chem 30:407 (1982) 〇 在某些實施例中，本文所述之血清白蛋白結合物及融合 155490.doc -121- 201138808 分子進一步連接於能夠偵測之標記（例如該標記可為放射 性同位素、螢光化合物、酶或酶輔因子）。標記可為放射 性藥劑，諸如：放射性重金屬，諸如鐵螯合物，釓或錳之 放射性螯合物，氧、氮、鐵、碳或鎵之正電子發射體， 43K ’ 52Fe ’ 57Co ’ 67Cu，67Ga ’ 68Ga，123Ι，125Ι，131ι，叫 或C。固定於該部分之血清白蛋白結合物或融合分子可 用作成像劑且以有效用於哺乳動物（諸如人類）中之診斷性 用途的量投與，接著偵測成像劑之定位及積累。成像劑之 定位及積累可藉由放射性閃爍攝影術、核磁共振成像、電 腦斷層攝影術或正電子發射斷層攝影法來偵測。如熟習此 項技術者將顯而易見，放射性同位素之投與量視放射性同 位素而定。一般技術者可容易基於用作活性部分之特定放 射性核種的特定活性及能量來調配成像劑之投與量。 血清白蛋白結合物及融合分子亦適用作親和純化劑。在 此方法中，使用此項技術中熟知之方法將蛋白質固定於適 合之載體（諸如葡聚糖凝膠樹脂或濾紙）上。蛋白質可用於 任何已知檢定方法中，諸如競爭性結合檢定、直接及間接 夾層檢定及免疫沈澱免疫沈澱檢定（zola，Mon⑽1Qnal Antibodies: A Manual ofTechniques，第 147 158 頁（crc Press，Inc·，1987))。 SABA-FGF21融合物之例示性用途 本文所提供之SABA-FGF21融合物可用於治療或預防一 或多種以下疾病：糖尿病、高血糖症、葡萄糖耐受異常、 姓娠期糖尿病、姨島素抗性、高胰島素血症、視網膜病、 155490.doc -122- 201138808 神經病、腎病、傷口癒合、動脈粥樣硬化及其續發症（急 性冠狀動脈症候群、心肌梗塞、心絞痛、周邊血管疾病、 間歇性跛行、心肌缺血、中風、心臟衰竭）、代謝症候 群、高血壓、肥胖、血脂異常、高脂質血症、高三酸甘油 酯血症、高膽固醇血症、低HDL、高LDL、血管再狹窄、 周邊動脈疾病、脂質失調、骨病（包括骨質疏鬆症）、 PCOS、HIV蛋白酶相關脂肪代謝障礙、青光眼及發炎性疾 病，諸如牛皮癬、類風濕性關節炎及骨關節炎；及治療來 自皮質類固醇治療之與糖尿病、脂肪代謝障礙及骨質疏鬆 症有關之副作用。在某些實施例中，本文所提供之saba_ FGF21融合物可用於治療或預防個體之肥胖或減輕體重或 預防體重增加。在一例示性實施例中，S ABA-FGF21融合 物可用於減輕BMI為25-29.9之個體之體重或預防體重增 加。在另一例示性實施例中’ SABA-FGF21融合物可用於 減輕BMI230之個體之體重或預防體重增加。在另一實施 例中，SABA-FGF21融合物可用於治療總膽固醇含量22〇〇 mg/dL及/或三酸甘油醋含量之丨5〇 mg/dL之個體《在其他實 施例中，SABA-FGF21融合物可用於治療或降低胰島素抗 性及/或增加脂肪組織之葡萄糖攝取。在其他實施例中， SABA-FGF21融合物可用於減慢糖尿病前期個體之糖尿病 進程。在其他貫施例中’ SABA-FGF21融合物可用於降低 個體之血糖含量，降低三酸甘油酯含量，降低膽固醇含 夏，增加月b 1消耗’增加脂肪利用及/或增加脂質排泄。 如本文中所使用’ 「預防」疾病或病症係指相對於未經 155490.doc -123- 201138808 處理之對照樣品降低統計樣品中疾病狀況之發生概率，或 相對於未經處理之對照樣品延遲該疾病或病症之—或多種 症狀的發作或降低其嚴重程度q基於已知與#通群體相 比增加罹患臨床疾病狀況之風險的因素選擇患者進行預防 !·生療法b本文中所使用，術語「治療」包括⑷抑制疾病 狀況’亦即停止其發展’·及7或⑻緩解疾病狀況，亦即一 旦其確定後使疾病狀況消退。 在某些實施例中，本申請案提供包含單獨作為活性成分 之治療有效量的SABA_FGF21融合物或該融合物與醫藥載 劑之組合的醫藥組合物。視情況，可使用單獨SABa_ =F21融合物，該融合物與本文所述之其他融合物之組 合，或與一或多種其他治療劑（例如抗糖尿病劑或其他醫 藥活性物質）之組合》 在某些實施例中，SABA-FGF21融合物可單獨投與或與 一或多種其他治療劑組合投與^ 「組合投與」或「組合療 法」意謂SABA-FGF21融合物與一或多種其他治療劑同時 投與所治療之哺乳動物。當組合投與時，各組分可同時投 與或以任何次序在不同時間點依序投與。因此，各組分可 以足夠接近之時間分開投與以提供所需治療效果。 本文所提供之SABA-FGF21融合物可與以下藥劑組合使 用·抗糖尿病劑、抗高血糖劑、抗高胰島素血症劑、抗視 網膜病劑、抗神經病劑、抗腎病劑、抗動脈粥樣硬化劑、 抗局部缺血劑、抗高血壓劑、抗肥胖劑、抗血脂異常劑、 抗同脂質血症劑、抗高三酸甘油酯血症劑、抗高膽固醇血 155490.doc •124- 201138808 症劑、抗再狹窄劑、抗胰劑、降脂劑、食慾減退劑、記憶 增強劑、抗癡呆劑或認知促進劑、食慾抑制劑、治療心臟 衰竭、治療周邊動脈疾病及消炎劑。 與SABA-FGF21融合物組合使用之抗糖尿病劑包括（但不 限於）胰島素促泌素或胰島素增敏劑、GPR40受體調節劑或 其他抗糖尿病劑。此等藥劑包括（但不限於）二肽基肽酶 IV(DP4)抑制劑（例如西他列汀（sitagliptin)、薩格列汀 (saxagliptin)、阿洛利停（alogliptin)、維格列、;丁（vildagliptin) 及其類似物）、雙胍（例如二曱雙胍、苯乙雙胍及其類似 物）、續醯脲（例如格列本脲（gliburide)、格列美脲 (glimepiride)、格列。比。秦（glipizide)及其類似物）、葡糖苷 酶抑制劑（例如阿卡波糠（acarbose)、米格列醇（miglitol)及 其類似物）、ΡΡΑΙΙγ促效劑（諸如噻唑啶二酮，例如羅格列 酮（rosiglitazone)、Β比格列酮（pioglitazone)及其類似物）、 PPAR α/γ雙重促效劑（例如莫格列紮（muraglitazar)、替格 列紮（tesaglitazar)、阿格列紮（aleglitazar)及其類似物）、葡 糖激酶活化因子（如Fyfe，M.C.T.等人，Drwg·? 〇/ Me Fwiwre, 34(8):641-653 (2009)所述，且其併入本文以供參 考。）、GPR119 受體調節劑（MBX-2952、PSN821、APD597 及其類似物）、SGLT2抑制劑（達格列淨（dapagliflozin)、卡 格列淨（canagliflozin)、雷格列淨（remagliflozin)及其類似 物）、澱粉素類似物（諸如普蘭林肽）及/或胰島素》用於治 療糖尿病之當前及新興療法的評述可見於以下文獻中： Mohler，M.L等人，Mei/icz'wa/ iieiearcA 29(1):125- 195 (2009)，及Mizuno，C.S等人，CwrrewiMe山ϋα/ 155490.doc -125- 201138808 15:61-74 (2008)中。 SABA-FGF21融合物亦可視情況與一或多種降低食慾劑 組合使用’諸如安非拉_ (diethylpropion)、苯曱曲秦 (phendimetrazine)、芬特明（phentermine)、奥利司他 (orlistat)、諾美停（sibutramine)、羅卡色林（lorcaserin)、普 蘭林肽、托0比酯（topiramate)、MCHR1受體拮抗劑、胃泌 酸調節素（oxyntomodulin)、納曲酮（naltrexone)、澱粉素 肽、NPY Y5受體調節劑、NPY Y2受體調節劑、NPY Y4受 體調節劑、西替利斯他（cetilistat)、5HT2c受體調節劑及其 類似物。SABA-FGF21融合物亦與升糖素樣肽-1受體（GLP-1 R)組合使用，諸如艾塞那肽（exenatide)、利戈魯泰 (liraglutide)、GPR-1(1_36)醯胺、GLP-l(7-36)醯胺、GLP-1(7-37)(如Habener之美國專利第5,614,492號中所揭示，該 專利之揭示内容以引用的方式併入本文中），其可經由注 射、鼻内或藉由經皮或經頰裝置來投與。用於治療肥胖之 當前及新興療法的評述可見於以下文獻中：Melnikova，I 等人，iVVziMre Drug Discover少，5:369-370 (2006);
Jones, D., Nature Reviews: Drug Discovery, 8:833-834 (2009) ； Obici, S., Endocrinology, 150(6):2512-2517 (2009)； 及 Elangbam，C.S·，Fei· Pfli/jo/·，46(1):10-24 (2009)。 在某些實施例中，SABA-FGF21融合物之投與劑量為約 10 ng 至 20 mg、10 ng 至 5 mg、10 ng 至 2 mg、10 ng 至 1 mg、100 ng至 20 mg、100 ng至 5 mg、100 ng至 2 mg、100 ng至 1 mg、1 pg至 20 mg、1 pg至 5 mg、1 pg至 2 mg、1 pg 155490.doc -126· 201138808 至 1 mg、10 pg至 20 mg、10 pg至 5 mg、10 pg至 2 mg、10 pg至 1 mg、0.01 至 20 mg、0.01 至 10 mg、0.1 至 20 mg、0.1 至 10 mg、0.01 至 5 mg、0_1 至 5 mg或 0.7 至 5 mg、或約 10 ng、100 ng、1 pg、10 pg、100 pg、或約 1、2、2.5、3、
4、5、6、7、8、9、10 mg。在某些實施例中，SABA-FGF21融合物之投與劑量為約100 pg/kg至200 pg/kg、100 pg/kg至 50 pg/kg、100 pg/kg至 20 pg/kg、100 pg/kg至 10 pg/kg、1 ng/kg至 200 pg/kg、1 ng/kg至 50 pg/kg、1 ng/kg 至 20 pg/kg、1 ng/kg至 10 gg/kg、10 ng/kg至 200 pg/kg、10 ng/kg 至 50 pg/kg、10 ng/kg 至 20 pg/kg、10 ng/kg 至 10 pg/kg、100 ng/kg至 200 pg/kg、100 ng/kg至 50 pg/kg、100 ng/kg至 20 pg/kg、100 ng/kg至 10 pg/kg、0.1 至 200 pg/kg、 0.1 至 100 pg/kg、1 至 200 pg/kg、1 至 100 pg/kg、0.1 至 50 pg/kg、1 至 50 pg/kg 或 7 至 50 pg/kg、或約 100 pg/kg、1 ng/kg、10 ng/kg、100 ng/kg、或 1、2、5、10、20、25、 30、40、50、60、75、100、125、150、200或 250 pg/kg ° SABA-FGF21融合物可每天（例如每天一次、兩次、三次或 四次）或頻率較小地（例如每隔一天一次、每週一或兩次或 每月）給與。在例示性實施例中，SABA-FGF21融合物之投 與劑量為以每週計約0.01至20 mg、約0.01至10 mg、約0·1 至 20 mg、約 0.1 至 10 mg、約 0.01 至 5 mg、約 0.1 至 5 mg或 約 0.7 至 5 mg、或約1、2、2.5、3、4、5、6、7、8、9、10 mg。在例示性實施例中，S AB A-FGF21融合物之投與劑量 為以每週計約0·1至200 pg/kg、約0.1至100 pg/kg、約1至 155490.doc -127- 201138808 200 pg/kg、約 1至 100 pg/kg、約 0.1 至 50 pg/kg、約 1至 50 pg/kg或約 7至 50 pg/kg、或約 1、2、5、1 0、20、25、30、 40、50、60、75、100、125、150、200 或 250 pg/kg。在例 示性實施例中，SABA-FGF21融合物之投與劑量為以每天 計約 10 ng至 20 mg、約 10 ng至 5 mg、約 10 ng至 2 mg、約 10 ng至 1 mg、約 10 ng至 500 pg、約 1 〇 ng至 200 pg、約 100 ng至 20 mg、約 100 ng至 5 mg、約 1 〇〇 ng至 2 mg、約 100 ng 至 1 mg、約 100 ng至 500 gg、約 1 〇〇 ng至 200 pg、約 1 pg至 20 mg、約 1 pg至 5 mg、約 1 gg至 2 mg、約 1 pg至 1 mg、約 1 pg 至 5 00 pg、約 1 pg 至 200 pg、約 10 pg 至 20 mg、約 10 pg 至 5 mg、約 10 pg 至 2 mg、約 10 |xg 至 1 mg、約 10 pg 至 500 pg、約 10 pg至 200 pg、或約 10ng、100ng、1 pg、10 pg、100 pg、200 pg、500 pg、1 mg、1.5 mg、2 mg、2.5 mg、3 mg或5 mg。在例示性實施例中，SABA-FGF21融合 物之投與劑量為以每天計約100 pg/kg至200 pg/kg、約100 pg/kg至 50 pg/kg、約 100 pg/kg至 20 pg/kg、約 100 pg/kg至 5 pg/kg、約 100 pg/kg至 2 pg/kg、約 1 ng/kg至 200 pg/kg、 約 1 ng/kg至 50 pg/kg、約 1 ng/kg至 20 pg/kg、約 1 ng/kg至 5 pg/kg、約1 ng/kg 至 2 gg/kg、約 10 ng/kg 至 200 pg/kg、約 10 ng/kg至 50 pg/kg、約 10 ng/kg至 20 pg/kg、約 10 ng/kg至 5 pg/kg、約 10 ng/k;g至 2 pg/kg、約 100 ng/kg至 200 pg/kg、 約 100 ng/kg至 50 pg/kg、約 100 ng/kg至 20 pg/kg、約 100 ng/kg至 5 pg/kg、約 100 ng/kg至 2 pg/kg、約 1 pg/kg至 200 pg/kg、約1 pg/kg 至 50 pg/kg、約1 pg/kg 至 20 pg/kg、約1 155490.doc •128- 201138808 pg/kg 至 5 pg/kg、約 1 pg/kg 至 2 pg/kg、約 10 gg/kg 至 200 pg/kg、約 10 pg/kg至 5 0 pg/kg、或約 10 pg/kg至 20 pg/kg、 或約 100 pg/kg、1 ng/kg、10 ng/kg、100 ng/kg、500 ng/kg、1 pg/kg、5 pg/kg、10 pg/kg、20 (ig/kg、50 pg/kg、100 pg/kg或200 pg/kg。另外，如此項技術中所已 知，針對年齡以及體重、一般健康狀況、性別、膳食、投 藥時間、藥物相互作用及疾病嚴重程度的調整可為必需 的，且將由熟習此項技術者使用常規實驗來確定。 治療調配物及投藥方式 本發明提供投與與SABA融合之治療性部分的方法，其 中當與SABA融合時，該治療性部分之半衰期延長。投與 融合構築體之技術及劑量將視與SABA融合之治療性部分 之類型及所治療之特定病狀而變化，但可容易由熟習此項 技術者確定。一般而言，管理機構要求將欲用作治療劑之 蛋白質試劑調配至具有可接受低含量之熱原質。因此，治 療性調配物通常將與其他調配物不同，因為其實質上無熱 原質，或至少含有不超過如適當管理機構（例如FDA)所測 定之可接受含量之熱原質。在某些實施例中，SABA及其 融合分子之醫藥調配物包含例如1 -20 mM 丁二酸、2-10% 山梨糖醇及1-10%甘胺酸（4.0-7.0)。在一例示性實施例 中，SABA及其融合分子之醫藥調配物包含例如10 mM丁 二酸、8%山梨糖醇及5%甘胺酸（pH 6.0)。 在一些實施例中，SABA及其融合物對於哺乳動物（尤其 人類）為醫藥學上可接受的。「醫藥學上可接受之」多肽 155490.doc .129- 201138808 係指投與動物而無顯著不良醫學結果之多肽。醫藥學上可 接受之SABA及其融合物的實例包括缺乏整合素結合域 (RGD)之14η3結構域及基本上無内毒素或具有極低内毒素 含量之SABA或SABA融合物之組合物。 治療性組合物可以單位劑型與醫藥學上可接受之稀釋 劑、載劑或賦形劑一起投與。作為非限制性實例，投藥可 非經腸（例如靜脈内、皮下）、經口或表面進行。組合物可 呈以下形式：用於經口投藥之丸劑、錠劑、膠囊、液體或 持續釋放錠劑；用於靜脈内、皮下或非經腸投藥之液體； 或用於局部投藥之膠凝、洗劑、軟膏、乳膏或聚合物或其 他持續釋放媒劑。 此項技術中熟知之用於製備調配物的方法例如見於 「Remington: The Science and practice 〇f Pharmacy」（第 20版，A.R. Gennaro AR.編，2〇00, LiPPincott Williams &
Wilkins，Philadelphia，PA)中。用於非經腸投藥之調配物可 例如含有賦形劑、無菌水、生理食鹽水、聚伸烷基二醇 (諸如聚乙二醇）、植物來源油類或氫化萘。詳言之，生物 可降解丙交酯聚合物、丙交酯/乙交酯共聚物或聚氧乙烯_ 聚氧丙烯共聚物可用於控制化合物之釋放。奈米粒子調配 物（例如生物可降解奈米粒子、固體脂質奈米粒子、脂質 體）可用於控制化合物之生物分佈。其他潛在適用之非經 腸傳遞系統包括乙烯·乙酸乙烯酯共聚物粒子、滲透泵、 可植入輸注系統及脂質體。調配物中化合物之濃度視許多 因素而變化’包括所投與之藥物劑量及投藥途徑。 155490.doc 201138808 多肽可視情況以醫藥學上可接受之鹽形式投與，諸如常 用於製藥工業中之無毒酸加成鹽或金屬錯合物。酸加成鹽 之實例包括有機酸’諸如乙酸、乳酸、雙M萘酸、順丁稀 二酸、檸檬酸、蘋果酸、抗壞血酸、丁二酸、苯甲酸、棕 櫚酸、辛二酸、水楊酸、酒石酸、曱烷磺酸、甲苯磺酸或 二氟乙酸或其類似酸；聚合酸，諸如鞣酸、羧甲基纖維素 或其類似酸，及無機酸，諸如鹽酸'氫溴酸、硫酸、構酸 或其類似酸。金屬錯合物包括鋅、鐵及其類似物。在一實 例中，在乙酸鈉存在下調配多肽以增加熱穩定性。 適於口服使用之調配物包括含有活性成分與無毒醫藥學 上可接受之賦形劑混合之錠劑。此等賦形劑可例如為惰性 稀釋劑或填充劑（例如蔗糖及山梨糖醇）、潤滑劑、助流劑 及抗黏著劑（例如硬脂酸鎖、硬脂酸鋅、硬脂酸、二氧化 矽、氫化植物油或滑石）。 適於口服使用之調配物亦可以咀嚼錠劑形式，或以活性 成分與惰性固體稀釋劑混合之硬明膠膠囊形式，或以活性 成分與水或油介質混合之軟明膠膠囊形式提供。 治療有效劑量係指對所投與對象產生治療效果之劑量。 精確劑量將視欲治療之病症而定，且可由熟習此項技術者 使用已知技術來確定。一般而言，SABA或SABA融合物依 每天約0.01 gg/kg至約50 mg/kg、較佳每天〇.〇1 mg/kg至約 30 mg/kg '最佳每天〇· 1 mg/kg至約20 mg/kg投與。多肽可 每天（例如每天一次、兩次、三次或四次）或依較低頻率（例 如每隔一天一次 '每週一或兩次或每月）給與。另外，如 155490.doc -131 - 201138808 此項技術中所已知，針對年齡以及體重、一般健康狀況、 性別、膳食、投藥時間、藥物相互作用及疾病嚴重程度所 作的調整可為必需的，且將可由熟習此項技術者使用常規 實驗來確定。 實例 正被概述之本發明可較容易地藉由參考以下實例來瞭 解，該等實例僅出於說明本發明之某些態樣及實施例之目 的而被包括且不欲以任何方式限制本發明。 序列概要 本申請案中所提及之許多序列概示於以下表2中。除非 另作說明’否則所有N端延長部分均以單下劃線表示，所 有C端尾部/延長部分均以雙下劃線表示，且對連接子序列 加框。對各核心SΑΒΑ序列之環區BC、DE及FG加陰影。 表2 ·例示性序列概要
SEQ ID NO: 序列 名稱 描述 序列 例示性血清白蛋白結合Adnectins1 m(SABA) 1 luFn3WT 野生型人類1QFn3結構域 VSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVT VRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPGSKST ATISGLKPGVDYTITVYAVTGRGDSPAS SKPISINYRT 2 luFn3v6 具有6個可變環之一般 10Fn3 EVVAAT (X) aSLLI (X) XYYRITYGE (X) bQEFTV (X) yATI (X) CDYTITVYAV (X) 2ISINYRT 3 ,0Fn3v3 具有3個可變環之一般 l0Fn3 EVVAATPTSLLI (X) XYYRITYGETGGN SPVQEFTV (X) yATISGLKPGVDYTITV YAV(X)ZISINYRT 4 SABA1 核心 1 Adnectin EVVAATPTSLLISWhSYYEQN^YYRITY GETGGNSPVQEFTV^YSQliTATISGLKP GVDYTITVYAViYGSKYYyjpiSINYRT 5 SABA1BC 核心1 BC環_____- HSYYEQNS 6 SABA1DE 核心1DE環____ YSQT 7 SABA1FG 核心1FG環_______ YGSKYYY 155490.doc -132- 201138808
lSEQ5 :♦ Π>、 *ΝΟ: •名祿， -:私 無.餐 ?，描述(' i . .；-/' ·>' .夂 <·ν , ' • .: - 4:. 序列 . ? · ' 8 SABA2 核心2 Adnectin1M EVVAATPTSLLISWjPKyDI^T 酬 YYRITY GETGGNSPVQEFTV^rll^^^ISGLKP GVDYT ITVYAVSSKDDYYPHEH^PI S IN Y RT 9 SABA2BC 核心2BC環 PKYDKTGH 10 SABA2DE 核心2 DE環 TRQT 11 SABA2FG 核心2FG環 SKDDYYPHEHR 12 SABA3 核心 3 Adnectinllvi EVVAATPTSLLISWteNDGPGL^YYRITY GETGGNSPVQEFTV^SSQTjTATISGLKP GVDYTIΤ V WKKAY^S^P IS 工 N Y RT 13 SABA3BC 核心3 BC環 SNDGPGLS 14 SABA3DE 核心3 DE環 SSQT 15 SABA3FG 核心3 FG環 SYYTKKAYSAG 16 SABA4 核心4Adnectin1M ;含有 骨架突變(粗體）；骨架 理想形式為SABA5 EMVAATPTSLLISWEDDSYYSRjYYRITY GETGGNS PVQE FTVPjSDLY|TATI SGLKP GVDYT ITVYAVT^DV'T E)LlSSS,P IS IN Y RT 17 SABA4BC 核心4BC環 EDDSYYSR 18 SABA4DE 核心4DE環 SDLY 19 SABA4FG 核心4FG環 YDVTDLIMHE 20 SABA5 核心5 Adnectin1M ;參見 關於SABA4之描述；校 正殘基為粗體 EWAATPTSLLISWEDDSYYSI^YYRITY GETGGNSPVQEFTV^SDLY 丨TATISGLKP GVDYT ITVYAVTjYDVTDLIMHE：PI S IN Y RT 21 SABA5BC 核心5 BC環 EDDSYYSR 22 SABA5DE 核心5 DE環 SDLY 23 SABA5FG 核心5 FG環 YDVTDLIMHE 24 SABA6 核心6 AdnectinIM EVVAATPTSLLIS W&MBEY DVi^Y YRIT Y GETGGNS PVQE FTVpHtY^TATISGLKP GVDYTITVYAVTiRlkANNYMYG'PI SINY RT 25 SABA7 核心7 Adnectin™ EVVAATPTSLLISW|HBEHVAP|YYRITY GETGGNSPVQEFTV^YPfjTATISGLKP 〇ν〇ΥΤΙΤνΥΑντ|ΤΜΕΚΥΡΤ〇^ΡΙ3ΙΝΥ RT 26 SABA8 核心8 AdnectinIM EVVAATPTSLLISWjQHYRRSGHjYYRITY GETGGNSPVQEFTVpPSSlTATISGLKP GVDYTITVYAV'SSKDpYXPHEHR'PISINY RT 27 SABA9 核心9 Adnectin™ EVVAATPTSLLISWgASHY^^g^YYRITY GETGGNSPVQEFTV^YHiffATISGLKP GVDYTITVYAVTbAQEHYQ^PISINYRT 28 SABA 10 核心 10 Adnectin™ EVVAATPTSLLISWSYYHS^YYRITY GETGGNSPVQEFT\^PP^TMISGLKP GVDYT ITVYAV|ySAKSYY[P ISIN YRT 155490.doc •133- 201138808 SEQ ID NO: 序列 名稱 描述 序列 29 SABA11 核心 11 Adnectin™ EVVAATPTSLLISW 良KYSKHGHjYYRITY GETGGNSPVQEFTV^GNAjTATISGLKP GVDYTITVYAVjEDTNDYPHT_PISINY RT 30 SABA12 核心 12 Adnectin™ EVVAATPTSLLISWhGEPDQT^'YYRITY GETGGNSPVQEFTV^PYRR:TATISGLKP GVDYTITVYAVfSGYTGHY^PISINYRT 31 SABA13 核心 13 Adnectin™ EVVAATPTSLLISW^KYSKHGI^YYRITY GETGGNSPVQEFTVpDPSSYiTATISGLKP GVDYTITVYAV扫KDDYYPHEHR丨 PISINY RT 32 SABAH 核心 14 Adnectin™ EVVAATPTSLLISWjYEPYTPIBYYRITY GETGGNSPVQEFTVPjGYY^TATISGLKP GVDYTIT VYAViYGYYQYljP IS IN YRT 33 SABA15 核心 15 Adnectin™ EVVAATPTSLLISWfeKYSKHGH；YYRITY GETGGNSPVQEFTV^SGNA;TATISGLKP GVDYT I TVYAVjS DDNKY YHQH^P IS IN Y RT 34 SABA16 核心 16 Adnectin™ EVVAATPTSLLISWjGHYRRSGriYYRITY getggnspvqeftvIdpssyItatisglkp GVDYTITVYAV扫KDDYYPHE時ISINY RT 35 SABA17 核心 17 Adnectin™ EVVAATPTSLLISW 艮KYSKHGrfYYRITY GETGGNS PVQEFTVPjSGN^TAT ISGLKP GVDYTITVYAViEDTNDYPHTH^PISINY RT 36 SABA18 核心 18 Adnectin™ EVVAATPTSLLISW^EPGAS^YYYRITY GETGGNSPVQEFTV^YYBfTATISGLKP GVDYTITVYAViYGYYEYE^ISINYRT 37 SABA19 核心 19 Adnectin™ EVVAATPTSLLISWjQSYYAHS^YYRITY GETGGNSPVQEFTVPfiPPQTATISGLKP GVDYTITVYA*AGSSYYi?ISINYRT 38 SABA20 核心 20 Adnectin™ EVVAATPTSLLISW^HYRRSGHjYYRITY GETGGNSPVQEFTVjDPSSYTATISGLKP GVDYTITVYAV^KDDYYPHEH^PISINY RT 39 SABA21 核心21 Adnectin™ EVVAATPTSLLISW^EPGTPVjYYYRITY GETGGNSPVQEFTVFAYY§TATISGLKP GVDYTITVYAV^GYYDYSlPISINYRT 40 SABA22 核心 22 Adnectin™ EVVAATPTSLLISW^RYEKTQHYYRITY getggnspvqeftv^pesg|tatisglkp GVD YT 工 T V Y AVjiAGYEY PHT_ ISIN Y RT 41 SABA23 核心 23 Adnectin™ EVVAATPTSLLISWjVKSEEYY^YYRITY GETGGNSPVQEFTV^YV^TATISGLKP GVDYT I TVYAV；TEYYYAGAWSViPI S IN YRT 42 SABA24 核心 24 Adnectin™ EVVAATPTSLLISWftrDPYTYGSjYYRITY GETGGNSPVQEFTV；GPYTT；TATISGLKP 155490.doc -134-
s 201138808
SEQ r'iDr ：m :鄉 $，名稱 序列 GVDYTITVYAVlSYYYSTQ!PISINYRT 43 SABA25 核心 25 Adnectin11^ EVVAAT PT S L LISWbNDGPGL^YYRITY GETGGNSPVQEFTV^SSQ—TATISGLKP GVDYT IT VYAV^ YYTKKAYSAG'P IS IN Y RT 44 SABA26 核心 26 Adnectin™ EVVAATPTSLLISWj£pPYYKPD:YYRITY GETGGNSPVQEFTVPRDY^TATISGLKP gvdytitvyaviysyygyy[pisinyrt ； 4, ，； 4 % t例示性Adrtectin™N端延長部分序列 45 AdNTl 例示性前導序列 MGVSDVPRDL 46 AdNT2 例示性前導序列 GVSDVPRDL 47 AdNT3 例示性前導序列 VSDVPRDL 48 AdNT4 例示性前導序列 SDVPRDL 49 AdNT5 例示性前導序列 DVPRDL 50 AdNT6 例示性前導序列 VPRDL 51 AdNT7 例示性前導序列 PRDL 52 AdNT8 例示性前導序列 RDL 53 AdNT9 例示性前導序列 DL -Λ)泠 ％ 1示性Adiiectiri1M〇!S延長部分序列 54 AdCTl 例示性尾部 EIDKPSQ 55 AdCT2 例示性尾部 EIDKPS 56 AdCT3 例示性尾部 EIDKPC 57 AdCT4 例示性尾部 EIDKP 58 AdCT5 例示性尾部 EIDK 59 AdCT6 例示性尾部 El 60 AdCT7 例示性尾部 EIEKPSQ 61 AdCT8 例示性尾部 EIDKPSQLE 62 AdCT9 例示性尾部 EIEDEDEDEDED 63 AdCTIO 例示性尾部 EIEKPSQEDEDEDEDED 64 AdCTl 1 例示性尾部 EGSGS 215 AdCTl2 例示性尾部 E 65 LI g(gs)2 GGSGS 66 L2 g(gs)4 GGSGSGSGS 67 L3 G(GS)fi GGSGSGSGSGSGS 68 L4 G(GS)7 GGSGSGSGSGSGSGS 69 L5 g(gs)7g GGSGSGSGSGSGSGSG 70 L6 GSGS GSGS 71 L7 (GS)4 GSGSGSGS 72 L7 (GS)7 GSGSGSGSGSGSGS 73 L9 GS(A)9GS GSAAAAAAAAAGS 74 L10 (gse)5 GSEGSEGSEGSEGSE 75 Lll (PAS)5 PASPASPASPASPAS 76 L12 (gsp)5 GSPGSPGSPGSPGSP 77 L13 GS(TVAAPS)2 GSTVAAPSTVAAPS 155490.doc -135- 201138808 SEQ ID NO: 序列 名稱 描述 序列 78 L14 (ggse)2 GGSEGGSE 79 L15 (st)3g STSTSTG 80 L16 (ggggs)7 GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGG GSGGGGS 81 L17 (GGGGS)s GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGG GS 82 LI 8 (GGGGS)3G GGGGSGGGGSGGGGSG 83 L19 (GP)3G GPGPGPG 84 L20 (GP)sG GPGPGPGPGPG 85 L21 P(ST)3 PSTSTST 86 L22 (PA)3 PAPAPA 87 L23 (pa)6 PAPAPAPAPAPA 88 L24 (pa)9 PAPAPAPAPAPAPAPAPA 216 L25 (ggggs)3 GGGGSGGGGSGGGGS 217 L26 (ED)5 EDEDEDEDED 218 L27 (ED)3 EDEDED 219 L28 (ED)4 EDEDEDED 220 L29 (ed)6 EDEDEDEDEDED 221 L30 (GSP)4GS GSPGSPGSPGSPGS 397 L31 (ed)5g EDEDEDEDEDG Adnectin?核，ci序列之例示性延長部分^ ^ 89 SABA1.1 具有AdNTl及AdCTl末 端序列加上His6標籤之 Adnectin™核心1序列 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY PISINYRTEIDKPSOHHHHHH 90 SABA1.2 具有AdNTl及AdCT8末 端序列之AdnectinTIV^ 心1序列 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY PISINYRTEIEDEDEDEDED 91 SABA1.3 具有AdNTl及AdCT9末 端序列加上His6標籤之 AdnectinTIV^^ 心 1 序列 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY PISINYRTEIEDEDEDEDEDHHHHHH 222 SAB A 1.4 具有八(11'叮2及八£1(：丁12 末端序列之Adnectin™ 核心1序列 GVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYYE QNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQT TATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYYP ISINYRTE 223 SABA1.5 具有AdNTl及AdCT7末 端序列之Adnectin™核 心1序列 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY PISINYRT旦 224 SABA1.6 具有 AdNTl 及 AdCT12 末端序列之Adnectin™ 核心1序列 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY PISINYRTEIEKPSO 225 SABA1.7 具有AdNTl及AdCT6末 端序列之Adnectin™核 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY 155490.doc -136-
s 201138808
SEQ ID ♦N❻：》 序対一 夸.導.ϊ r ' ~ ^ 描c' '' ' , ·¥ <φ , . ·,«-- 4 — 疒。 序列 , . 心1序列 PISINYRTEI 92 SABA2.1 具有AdNTl及AdCTl末 端序列加上His6標籤之 Adnectin™核心2序列 MGVSDVPRDLEWAATPTSLLISWPKYD KTGHYYRITYGETGGNSPVQEFTVPTRQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVSKDDYYP HEHRPISINYRTEIDKPSOHHHHHH 93 SABA3.1 具有AdNTl及AdCTl末 端序列加上His6標籤之 Adnectin™核心3序列 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWSNDG PGLSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVSYYTKKA YSAGPISINYRTEIDKPSOHHHHHH 94 SABA4.1 具有AdNTl及AdCTl末 端序列加上His6標籤之 Adnectin™核心4序列 MGVSDVPRDLEMVAATPTSLLISWEDDS YYSRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSDL YTATISGLKPGVDYTITVYAVTYDVTDL IMHEPISINYRTEIDKPSOHHHHHH 95 SABA5.1 具有AdNTl及AdCTl末 端序列加上His6標籤之 AdnectinTK^^ 心5序列 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWEDDS YYSRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSDL YTATISGLKPGVDYTITVYAVTYDVTDL IMHEPISINYRTEIDKPSOHHHHHH 96 SABA6.1 具有AdNTl及AdCTl末 端序列加上His6標籤之 Adnectin™核心6序列 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWYMDE YDVRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPNYY NTATISGLKPGVDYTITVYAVTRIKANN YMYGPISINYRTEIDKPSOHHHHHH 97 SABA7.1 具有AdNTl及AdCTl末 端序列加上His6標籤之 Adnectin™核心7序列 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWNHLE HVARYYRITYGETGGNSPVQEFTVPEYP TTATISGLKPGVDYTITVYAVTITMLKY PTQSPISINYRTEIDKPSOHHHHHH 98 SABA8.1 具有AdNTl及AdCTl末 端序列加上His6標籤之 Adnectin™核心8序列 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWGHYR RSGHYYRITYGETGGNSPVQEFTVDPSS YTATISGLKPGVDYTITVYAVSKDDYYP HEHRPISINYRTEIDKPSOHHHHHH 99 SABA9.1 具有AdNTl及AdCTl末 端序列加上His6標籤之 Adnectin™核心9序列 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDASH YERRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPRYH HTATISGLKPGVDYTITVYAVTQAQEHY QPPISINYRTEIDKPSOHHHHHH 100 SABA10.1 具有AdNTl及AdCTl末 端序列加上His6標籤之 Adnectin™核心10序列 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWNSYY HSADYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYPP TTATISGLKPGVDYTITVYAVYSAKSYY PISINYRTEIDKPSOHHHHHH 101 SABA11.1 具有AdNTl及AdCTl末 端序列加上His6標籤之 Adnectin™核心11序列 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWSKYS KHGHYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSGN ATATISGLKPGVDYTITVYAVEDTNDYP HTHRPISINYRTEIDKPSOHHHHHH 102 SABA12.1 具有AdNTl及AdCTl末 端序列加上His6標籤之 Adnectin™核心12序列 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHGEP DQTRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPPYR RTATISGLKPGVDYTITVYAVTSGYTGH YQPISINYRTEIDKPSOHHHHHH 103 SABA13.1 具有AdNTl及AdCTl末 端序列加上His6標籤之 Adnectin™核心13序列 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWSKYS KHGHYYRITYGETGGNSPVQEFTVDPSS YTATISGLKPGVDYTITVYAVSKDDYYP HEHRPISINYRTEIDKPSOHHHHHH 155490.doc -137- 201138808 SEQ ID NO: 序列 名稱 描述 序列 104 SABA 14.1 具有AdNTl及AdCTl末 端序列加上His6標籤之 Adnectin™核心14序列 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWYEPY TPIHYYRITYGETGGNSPVQEFTVPGYY GTATISGLKPGVDYTITVYAVYGYYQYT PISINYRTEIDKPSOHHHHHH 105 SABA15.1 具有AdNTl及AdCTl末 端序列加上His6標籤之 Adnectin™核心15序列 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWSKYS KHGHYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSGN ATATISGLKPGVDYTITVYAVSDDNKYY HQHRPISINYRTEIDKPSOHHHHHH 106 SABA16.1 具有AdNTl及AdCTU末 端序列加上His6標籤之 Adnectin™核心16序列 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWGHYR RSGHYYRITYGETGGNSPVQEFTVDPSS YTATISGLKPGVDYTITVYAVSKDDYYP HEHRPISINYRTEIDKPSOHHHHHH 107 SABA17.1 具有AdNTl及AdCTl末 端序列加上His6標籤之 Adnectin™核心17序列 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWSKYS KHGHYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSGN ATATISGLKPGVDYTITVYAVEDTNDYP HTHRPISINYRTEIDKPSOHHHHHH 108 SABA18.1 具有AdNTl及AdCTl末 端序列加上His6標籤之 Adnectin™核心18序列 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWYEPG ASVYYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSYY HTATISGLKPGVDYTITVYAVYGYYEYE PISINYRTEIDKPSOHHHHHH 109 SABA19.1 具有AdNTl及AdCTl末 端序列加上His6標藏之 Adnectin™核心19序列 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWQSYY AHSDYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYPP QTATISGLKPGVDYTITVYAVYAGS SYY PISINYRTEIDKPSOHHHHHH 110 SABA20.1 具有AdNTl及AdCTl末 端序列加上His6標籤之 Adnectin™核心20序列 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWGHYR RSGHYYRITYGETGGNSPVQEFTVDPSS YTATISGLKPGVDYTITVYAVSKDDYYP HEHRPISINYRTEIDKPSOHHHHHH 111 SABA21.1 具有AdNTl及AdCTl末 端序列加上His6標籤之 Adnectin™核心21序列 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWPEPG TPVYYYRITYGETGGNSPVQEFTVPAYY GTATISGLKPGVDYTITVYAVYGYYDYS PISINYRTEIDKPSOHHHHHH 112 SABA22.1 具有AdNTl及AdCTl末 端序列加上His6標籤之 Adnectin™核心22序列 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWYRYE KTQHYYRITYGETGGNSPVQEFTVPPES GTATISGLKPGVDYTITVYAVYAGYEYP HTHRPISINYRTEIDKPSOHHHHHH 113 SABA23.1 具有AdNTl及AdCTl末 端序列加上His6標籤之 Adnectin™核心23序列 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWVKSE EYYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYYV ΗΤΑΤISGLKPGVDYTITVYAVTEYYYAG AVVSVPISINYRTEIDKPSOHHHHHH 114 SABA24.1 具有AdNTl及AdCTl末 端序列加上His6標籤之 Adnectin™核心24序列 MGVSDVPRDLEWAATPTSLLISWYDPY TYGSYYRITYGETGGNSPVQEFTVGPYT TTATISGLKPGVDYTITVYAVSYYYSTQ PISINYRTEIDKPSOHHHHHH 115 SABA25.1 具有AdNTl及AdCTl末 端序列加上His6標籤之 Adnectin™核心25序列 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWSNDG PGLSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVSYYTKKA YSAGPISINYRTEIDKPSOHHHHHH 116 SABA26.1 具有AdNTl及AdCTl末 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWPDPY 155490.doc -138·
s 201138808
SEQ ID NO: m :·；：' ό ή播述 ' 各、 序列 — ! .· . ：;： . 端序列加上His6標籤之 Adnectin™核心26序列 YKPDYYRITYGETGGNSPVQEFTVPRDY TTATISGLKPGVDYTITVYAVYSYYGYY PISINYRTEIDKPSOHHHHHH ，、f、、例‘示性FGF2i序列3 ; f ;< '： '· 117 FGF21 野生型全長FGF21 MDSDETGFEHSGLWVSVLAGLLGACQAH PIPDSSPLLQFGGQVRQRYLYTDDAQQT EAHLEIREDGTVGGAADQSPESLLQLKA LKPGVIQILGVKTSRFLCQRPDGALYGS LHFDPEACSFRELLLEDGYNVYQSEAHG LPLHLPGNKSPHRDPAPRGPARFLPLPG LPPALPEPPGILAPQPPDVGSSDPLSMV GPSQGRSPSYAS 118 FGF21 核 心 FGF21核心序列 PLLQFGGQVRQRYLYTDDAQQTEAHLEI REDGTVGGAADQSPESLLQLKALKPGVI QILGVKTSRFLCQRPDGALYGSLHFDPE ACSFRELLLEDGYNVYQSEAHGLPLHLP GNKSPHRDPAPRGPARFLPLPGLPPALP EPPGILAPQPPDVGSSDPLSMVGPSQGR SPSYA y . -s. 二 sif/ » * . 1匈端序列 119 FNT1 例示性前導序列 MDSDETGFEHSGLWVSVLAGLLGACQAH PIPDSS 120 FNT2 例示性前導序列 HPIPDSS 121 FNT3 例示性前導序列 PIPDSS 122 FNT4 例示性前導序列 DSS 123 FNT5 例示性前導序列 IPDSS 124 FNT6 例示性前導序列 PDSS v 1 r —F_21^心序种之例示性延長部分 125 FGF21vl FGF21變異體1 :具有 His6標籤、接著FNT3前 導序列及C端S之FGF21 核心序列 MHHHHHHPIPDSSPLLQFGGQVRQRYLY TDDAQQTEAHLEIREDGTVGGAADQSPE SLLQLKALKPGVIQILGVKTSRFLCQRP DGALYGSLHFDPEACSFRELLLEDGYNV YQSEAHGLPLHLPGNKSPHRDPAPRGPA RFLPLPGLPPALPEPPGILAPQPPDVGS SDPLSMVGPSQGRSPSYAS 126 FGF21v2 FGF21變異體2 ΜΗ PIP DS S PLLQ FGGQVRQRYLYT DDAQ QTEAHLEI RE DGT VGGAADQS PE SLLQL KALKPGVIQILGVKTSRFLCQRPDGALY GSLHFDPEACSFRELLLEDGYNVYQSEA HGLPLHLPGNKSPHRDPAPRGPARFLPL PGLPPALPEPPGILAPQPPDVGSSDPLS MVGPSQGRSPSYAHHHHHH 127 FGF21v3 FGF21變異體3 MHPIPDSSPLLQFGGQVRQRYLYTDDAQ QTEAHLEIREDGTVGGAADQSPESLLQL KALKPGVIQILGVKTSRFLCQRPDGALY GSLHFDPEACSFRELLLEDGYNVYQSEA HGLPLHLPGNKSPHRDPAPRGPARFLPL 155490.doc -139- 201138808
SEQ ID NO: 序列 名稱 描述1 序列 PGLPPALPEPPGILAPQPPDVGSSDPLS MVGPSQGRSPSYASHHHHHH 128 FGF21v4 FGF21變異體4 MHHHHHHPIPDSSPLLQFGGQVRQRYLY TDDAQQTEAHLEIREDGTVGGAADQSPE SLLQLKALKPGVIQILGVKTSRFLCQRP DGALYGSLHFDPEACSFRELLLEDGYNV YQSEAHGLPLHLPGNKSPHRDPAPRGPA RFLPLPGLPPALPEPPGILAPQPPDVGS SDPLSMVGPSQGRSPSYA 129 FGF21v5 FGF21變異體5 MHHHHHHDSSPLLQFGGQVRQRYLYTDD AQQTEAHLEIREDGTVGGAADQSPESLL QLKALKPGVIQILGVKTSRFLCQRPDGA LYGSLHFDPEACSFRELLLEDGYNVYQS EAHGLPLHLPGNKSPHRDPAPRGPARFL PLPGLPPALPEPPGILAPQPPDVGSSDP LSMVGPSQGRSPSYAS 130 FGF21v6 FGF21變異體6 MHHHHHHIPDSSPLLQFGGQVRQRYLYT DDAQQTEAHLEIREDGTVGGAADQSPES LLQLKALKPGVIQILGVKTSRFLCQRPD GALYGSLHFDPEACSFRELLLEDGYNVY QSEAHGLPLHLPGNKSPHRDPAPRGPAR FLPLPGLPPALPEPPGILAPQPPDVGSS DPLSMVGPSQGRSPSYAS 131 FGF21v7 FGF21變異體7 MHHHHHHPLLQFGGQVRQRYLYTDDAQQ TEAHLEIREDGTVGGAADQSPESLLQLK ALKPGVIQILGVKTSRFLCQRPDGALYG SLHFDPEACSFRELLLEDGYNVYQSEAH GLPLHLPGNKSPHRDPAPRGPARFLPLP GLPPALPEPPGILAPQPPDVGSSDPLSM VGPSQGRSPSYAS 例示性融合物：XAdL-SABA-XAfXuc-XFL-FGI^l 132 SABA1- FGF21vl SABA1-FGF21 變異體 1 ： 具有AdNTl前導序列及 AdCT7尾部序列之 SABA核心1序列，接著 為(GS)7連接子，其連接 具有FGF21前導序列 FNT3及C端S之FGF21核 心序列 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY PISINYRTEIEKPSOlGSGSGSGSGSGSGl IsIpipdsspllqfggqvrqrylytddaqq TEAHLEIREDGTVGGAADQSPESLLQLK ALKPGVIQILGVKTSRFLCQRPDGALYG SLHFDPEACSFRELLLEDGYNVYQSEAH GLPLHLPGNKSPHRDPAPRGPARFLPLP GLPPALPEPPGILAPQPPDVGSSDPLSM VGPSQGRSPSYAS 133 SABA1- FGF21v2 SABA1-FGF21 變異體 2;參見關於變異體1之 類似描述 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY PISINYRTEIDKPSOHHHHHHGSGSGSG SGSGSGSHPIPDSSPLLQFGGQVRQRYL
155490.doc ·14〇·
S 201138808
SEQ Π) NO: 辱对1看' 心名 - ..JW . i. · «* /V.' 碟'年V· '參：？ ί.. ..：*A. 、： s«»> Λ jca +、fe· 、·. - X» > t 序列 .ii- *' * Ί Ί - YTDDAQQTEAHLEIREDGTVGGAADQSP ESLLQLKALKPGVIQILGVKTSRFLCQR PDGALYGSLHFDPEACSFRELLLEDGYN VYQSEAHGLPLHLPGNKSPHRDPAPRGP ARFLPLPGLPPALPEPPGILAPQPPDVG SSDPLSMVGPSQGRSPSYA 134 SABA1- FGF21v3 SABA1-FGF21 變異體 3;參見關於變異體1之 類似描述 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY PISINYRTEIDKPSOHHHHHH|GSGSGSG SGSGSGSPIPDSSPLLQFGGQVRQRYLY TDDAQQTEAHLEIREDGTVGGAADQSPE SLLQLKALKPGVIQILGVKTSRFLCQRP DGALYGSLHFDPEACSFRELLLEDGYNV YQSEAHGLPLHLPGNKSPHRDPAPRGPA RFLPLPGLPPALPEPPGILAPQPPDVGS SDPLSMVGPSQGRSPSYAS 135 SABA 卜 FGF21v4 SABA1-FGF21 變異體 4;參見關於變異體1之 類似描述 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY PISINYRTEIDKPSlGGSGSGSGSGSGSGl 回PIPDSSPLLQFGGQVRQRYLYTDDAQQ TEAHLEIREDGTVGGAADQSPESLLQLK ALKPGVIQILGVKTSRFLCQRPDGALYG SLHFDPEACSFRELLLEDGYNVYQSEAH GLPLHLPGNKSPHRDPAPRGPARFLPLP GLPPALPEPPGILAPQPPDVGSSDPLSM VGPSQGRSPSYASHHHHHH 136 SABA1- FGF21v5 SABA1-FGF21 變異體 5;參見關於變異體1之 類似描述 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY PISINYRTEIDKPSlGGSGSGSGSGSGSGl 回HPIPDSSPLLQFGGQVRQRYLYTDDAQ QTEAHLEIREDGTVGGAADQSPESLLQL KALKPGVIQILGVKTSRFLCQRPDGALY GSLHFDPEACSFRELLLEDGYNVYQSEA HGLPLHLPGNKSPHRDPAPRGPARFLPL PGLPPALPEPPGILAPQPPDVGSSDPLS MVGPSQGRSPSYAHHHHHH 137 SABA1- FGF21v6 SABA1-FGF21 變異體 6;參見關於變異體1之 類似描述 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY PISINYRTEIDKPSlGGSGSGSGSGSGSGl IsIpipdsspllqfggqvrqrylytddaqq TEAHLEIREDGTVGGAADQSPESLLQLK ALKPGVIQILGVKTSRFLCQRPDGALYG SLHFDPEACSFRELLLEDGYNVYQSEAH GLPLHLPGNKSPHRDPAPRGPARFLPLP 155490.doc -141 - 201138808
SEQ ID NO: 序列 名稱 描述 序列 GLPPALPEPPGILAPQPPDVGSSDPLSM VGPSQGRSPSYAS 138 SABA1- FGF21v7 SABA1-FGF21 變異體 7;參見關於變異體1之 類似描述 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY PISINYRTEIDKPSlGGSGSGSGSGSGSGl [slHP IP DS S PLLQFGGQVRQRYL YT DDAQ QTEAHLEIREDGTVGGAADQSPESLLQL KALKPGVIQILGVKTSRFLCQRPDGALY GSLHFDPEACSFRELLLEDGYNVYQSEA HGLPLHLPGNKSPHRDPAPRGPARFLPL PGLPPALPEPPGILAPQPPDVGSSDPLS MVGPSQGRSPSYA 139 SABA1- FGF21v8 SABA1-FGF21 變異體 8;參見關於變異體1之 類似描述 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY PISINYRTEIEKPSOHHHHHHGSGSGSG SGSGSGS丨PIPDSSPLLQFGGQVRQRYLY TDDAQQTEAHLEIREDGTVGGAADQSPE SLLQLKALKPGVIQILGVKTSRFLCQRP DGALYGSLHFDPEACSFRELLLEDGYNV YQSEAHGLPLHLPGNKSPHRDPAPRGPA RFLPLPGLPPALPEPPGILAPQPPDVGS SDPLSMVGPSQGRSPSYAS 140 SABA1- FGF21v9 SABA1-FGF21 變異體 9;參見關於變異體1之 類似描述 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY PISINYRT^IGGSGSGSGSPIPDSSPLL QFGGQVRQRYLYTDDAQQTEAHLEIRED GTVGGAADQSPESLLQLKALKPGVIQIL GVKTSRFLCQRPDGALYGSLHFDPEACS FRELLLEDGYNVYQSEAHGLPLHLPGNK SPHRDPAPRGPARFLPLPGLPPALPEPP GILAPQPPDVGSSDPLSMVGPSQGRSPS YAS 141 SABA1- FGF21vlO SABA1-FGF21 變異體 1〇 ;參見關於變異體1 之類似描述 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY PISINYRTMGGSGSlPIPDSSPLLQFGG QVRQRYLYTDDAQQTEAHLEIREDGTVG GAADQSPESLLQLKALKPGVIQILGVKT SRFLCQRPDGALYGSLHFDPEACSFREL LLEDGYNVYQSEAHGLPLHLPGNKSPHR DPAPRGPARFLPLPGLPPALPEPPGILA PQPPDVGSSDPLSMVGPSQGRSPSYAS 142 SABA1- FGF21vll SABA1-FGF21 變異體 11 :參見關於變異體1 之類似描述 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY
155490.doc •142- s 201138808
SEQ …):ID永' NO: f ♦序孙…i 餐·'老轎、 • 、•: Ί.. 4 Ί .，會.插 喊：4'. · ♦'喝 睿梦巧...3 序列 ·. . · : PISINYRTEIPIPDSSPLLQFGGQVRQR YLYTDDAQQTEAHLEIREDGTVGGAADQ SPESLLQLKALKPGVIQILGVKTSRFLC QRPDGALYGSLHFDPEACSFRELLLEDG YNVYQSEAHGLPLHLPGNKSPHRDPAPR GPARFLPLPGLPPALPEPPGILAPQPPD VGSSDPLSMVGPSQGRSPSYAS 143 SABAl- FGF21vl2 SABA1-FGF21 變異體 12 ;參見關於變異體1 之類似描述 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY PISINYRT 腳 HHHHH|GSGSGSGS 丨 PIPD SSPLLQFGGQVRQRYLYTDDAQQTEAHL EIREDGTVGGAADQSPESLLQLKALKPG VIQILGVKTSRFLCQRPDGALYGSLHFD PEACSFRELLLEDGYNVYQSEAHGLPLH LPGNKSPHRDPAPRGPARFLPLPGLPPA LPEPPGILAPQPPDVGSSDPLSMVGPSQ GRSPSYAS 144 SABA1- FGF21vl3 SABA1-FGF21 變異體 13 ;參見關於變異體1 之類似描述 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY PISINYRTE_IHHHHHH|GSGS|PIPDSSPL LQFGGQVRQRYLYTDDAQQTEAHLEIRE DGTVGGAADQSPESLLQLKALKPGVIQI LGVKTSRFLCQRPDGALYGSLHFDPEAC SFRELLLEDGYNVYQSEAHGLPLHLPGN KSPHRDPAPRGPARFLPLPGLPPALPEP PGILAPQPPDVGSSDPLSMVGPSQGRSP SYAS 145 SABA1- FGF21vl4 SABA1-FGF21 變異體 14 ;參見關於變異體1 之類似描述 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY PISINYRTUHHHHHHPIPDSSPLLQFG GQVRQRYLYTDDAQQTEAHLEIREDGTV GGAADQSPESLLQLKALKPGVIQILGVK TSRFLCQRPDGALYGSLHFDPEACSFRE LLLEDGYNVYQSEAHGLPLHLPGNKSPH RDPAPRGPARFLPLPGLPPALPEPPGIL APQPPDVGSSDPLSMVGPSQGRSPSYAS 146 SABA1- FGF21vl5 SABA1-FGF21 變異體 15 ;參見關於變異體1 之類似描述 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY PISINYRTEIEDEDEDEDEDPIPDSSPL LQFGGQVRQRYLYTDDAQQTEAHLEIRE DGTVGGAADQSPESLLQLKALKPGVIQI LGVKTSRFLCQRPDGALYGSLHFDPEAC SFRELLLEDGYNVYQSEAHGLPLHLPGN KSPHRDPAPRGPARFLPLPGLPPALPEP PGILAPQPPDVGSSDPLSMVGPSQGRSP 155490.doc •143- 201138808 SEQ ID NO: 序列 名稱 描述 序列 SYAS 147 SABA1- FGF21vl6 SABA1-FGF21 變異體 16 ;參見關於變異體1 之類似描述 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY PISINYRTEIEDEDEDEDEdGSGSGSGSl PIPDSSPLLQFGGQVRQRYLYTDDAQQT EAHLEIREDGTVGGAADQSPESLLQLKA LKPGVIQILGVKTSRFLCQRPDGALYGS LHFDPEACSFRELLLEDGYNVYQSEAHG LPLHLPGNKSPHRDPAPRGPARFLPLPG LPPALPEPPGILAPQPPDVGSSDPLSMV GPSQGRSPSYAS 148 SABA1- FGF21vl7 SABA1-FGF21 變異體 17 ;參見關於變異體1 之類似描述 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY PISINYRTEllGSAAAAAAAAAGSPIPDS SPLLQFGGQVRQRYLYTDDAQQTEAHLE IREDGTVGGAADQSPESLLQLKALKPGV IQILGVKTSRFLCQRPDGALYGSLHFDP EACSFRELLLEDGYNVYQSEAHGLPLHL PGNKSPHRDPAPRGPARFLPLPGLPPAL PEPPGILAPQPPDVGSSDPLSMVGPSQG RSPSYAS 149 SABA1- FGF21vl8 SABA1-FGF21 變異體 18 ;參見關於變異體1 之類似描述 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY pisinyrtei|gsegsegsegsegse|pip DSSPLLQFGGQVRQRYLYTDDAQQTEAH LEIREDGTVGGAADQSPESLLQLKALKP GVIQILGVKTSRFLCQRPDGALYGSLHF DPEACSFRELLLEDGYNVYQSEAHGLPL HLPGNKSPHRDPAPRGPARFLPLPGLPP ALPEPPGILAPQPPDVGSSDPLSMVGPS QGRSPSYAS 150 SABA1- FGF21vl9 SABA1-FGF21 變異體 19 ;參見關於變異體1 之類似描述 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY PISINYRTE I|PAS PAS PAS PAS PAS|P IP DSSPLLQFGGQVRQRYLYTDDAQQTEAH LEIREDGTVGGAADQSPESLLQLKALKP GVIQILGVKTSRFLCQRPDGALYGSLHF DPEACSFRELLLEDGYNVYQSEAHGLPL HLPGNKSPHRDPAPRGPARFLPLPGLPP ALPEPPGILAPQPPDVGSSDPLSMVGPS QGRSPSYAS 151 SABA1- FGF21v20 SABA1-FGF21 變異體 20 ;參見關於變異體1 之類似描述 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY PISINYRTEIGSPGSPGSPGSPGSP|PIP 155490.doc •144-
s 201138808
SEQ ib •NGr- 1 專列: 令v承聲'言、播，述 '彳 · -¾. . - '- ΐ· r" 序列 DSSPLLQFGGQVRQRYLYTDDAQQTEAH LEIREDGTVGGAADQSPESLLQLKALKP GVIQILGVKTSRFLCQRPDGALYGSLHF DPEACSFRELLLEDGYNVYQSEAHGLPL HLPGNKSPHRDPAPRGPARFLPLPGLPP ALPEPPGILAPQPPDVGSSDPLSMVGPS QGRSPSYAS 152 SABA1- FGF21v21 SABA1-FGF21 變異體 21 ;參見關於變異體1 之類似描述 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY PISINYRTEI|GSTVAAPSTVAAPS|PIPD SSPLLQFGGQVRQRYLYTDDAQQTEAHL Hredgtvggaadqspesllqlkalkpg VIQILGVKTSRFLCQRPDGALYGSLHFD PEACSFRELLLEDGYNVYQSEAHGLPLH LPGNKSPHRDPAPRGPARFLPLPGLPPA LPEPPGILAPQPPDVGSSDPLSMVGPSQ GRSPSYAS 153 SABA1- FGF21v22 SABA1-FGF21 變異體 22 ;參見關於變異體1 之類似描述 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY PISINYRTMGGSEGGSElPIPDSSPLLQ FGGQVRQRYLYT DDAQQTEAHLEIRE DG TVGGAADQSPESLLQLKALKPGVIQILG VKTSRFLCQRPDGALYGSLHFDPEACSF RELLLEDGYNVYQSEAHGLPLHLPGNKS PHRDPAPRGPARFLPLPGLPPALPEPPG ILAPQPPDVGSSDPLSMVGPSQGRSPSY AS 154 SABA1- FGF21v23 SABA1-FGF21 變異體 23 ;參見關於變異體1 之類似描述 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY PISINYRTHSTSTSTGPIPDSSPLLQF GGQVRQRYLYTDDAQQTEAHLEIREDGT VGGAADQSPESLLQLKALKPGVIQILGV KTSRFLCQRPDGALYGSLHFDPEACSFR ELLLEDGYNVYQSEAHGLPLHLPGNKSP HRDPAPRGPARFLPLPGLPPALPEPPGI LAPQPPDVGSSDPLSMVGPSQGRSPSYA S 155 SABA1- FGF21v24 SABA1-FGF21 變異體 24 ;參見關於變異體1 之類似描述 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY PISINYRTEIEKPS〇lGGSGSGSGS|PIPD SSPLLQFGGQVRQRYLYTDDAQQTEAHL EIREDGTVGGAADQSPESLLQLKALKPG VIQILGVKTSRFLCQRPDGALYGSLHFD PEACSFRELLLEDGYNVYQSEAHGLPLH LPGNKSPHRDPAPRGPARFLPLPGLPPA 155490.doc -145- 201138808 SEQ ID NO: 序列 名稱 描述 __ 序列 LPEPPGILAPQPPDVGSSDPLSMVGPSQ GRSPSYAS 156 SABA1- FGF21v25 SABA1-FGF21 變異體 25 ;參見關於變異體1 之類似描述 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY PISINYRTEIEKPSOGGSGSlPIPDSSPL LQFGGQVRQRYLYTDDAQQTEAHLEIRE DGTVGGAADQSPESLLQLKALKPGVIQI LGVKTSRFLCQRPDGALYGSLHFDPEAC SFRELLLEDGYNVYQSEAHGLPLHLPGN KSPHRDPAPRGPARFLPLPGLPPALPEP PGILAPQPPDVGSSDPLSMVGPSQGRSP SYAS 157 SABA1- FGF21v26 SABA1-FGF21 變異體 26 ;參見關於變異體1 之類似描述 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY PISINYRTEIEKPSOPIPDSSPLLOFGG QVRQRYLYT DDAQQTEAHLEIRE DGTVG GAADQSPESLLQLKALKPGVIQILGVKT SRFLCQRPDGALYGSLHFDPEACSFREL LLEDGYNVYQSEAHGLPLHLPGNKSPHR DPAPRGPARFLPLPGLPPALPEPPGILA PQPPDVGSSDPLSMVGPSQGRSPSYAS 158 SABA1- FGF21v27 SABA1-FGF21 變異體 27 ;參見關於變異體1 之類似描述 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY PISINYRTEIEKPSOHHHHHH|GSGSGSG| 囘PIPDSSPLLQFGGQVRQRYLYTDDAQQ TEAHLEIREDGTVGGAADQSPESLLQLK ALKPGVIQILGVKTSRFLCQRPDGALYG SLHFDPEACSFRELLLEDGYNVYQSEAH GLPLHLPGNKSPHRDPAPRGPARFLPLP GLPPALPEPPGILAPQPPDVGSSDPLSM VGPSQGRSPSYAS 159 SABA1- FGF21v28 SABA1-FGF21 變異體 28 ;參見關於變異體1 之類似描述 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY PISINYRTEIEKPSOHHHHHHGSGSPIP DSSPLLQFGGQVRQRYLYTDDAQQTEAH LEIREDGTVGGAADQSPESLLQLKALKP GVIQILGVKTSRFLCQRPDGALYGSLHF DPEACSFRELLLEDGYNVYQSEAHGLPL HLPGNKSPHRDPAPRGPARFLPLPGLPP ALPEPPGILAPQPPDVGSSDPLSMVGPS QGRSPSYAS 160 SABA1- FGF21v29 SABA1-FGF21 變異體 29 ;參見關於變異體1 之類似描述 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY PISINYRTEIEKPSOHHHHHHPIPDSSP 155490.doc •146-
s 201138808
SEQ ID :N〇r '夢 .y.. [10··- ^·：^^：. .':4. .|： -ψ.· ψ Λ： , .. ^ ,i； . , 序列 LLQFGGQVRQRYLYTDDAQQTEAHLEIR EDGTVGGAADQSPESLLQLKALKPGVIQ ILGVKTSRFLCQRPDGALYGSLHFDPEA CSFRELLLEDGYNVYQSEAHGLPLHLPG NKSPHRDPAPRGPARFLPLPGLPPALPE PPGILAPQPPDVGSSDPLSMVGPSQGRS PSYAS 161 SABA 卜 FGF21v30 SABA1-FGF21 變異體 3〇 ;參見關於變異體1 之類似描述 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY PISINYRTEIEKPSOEDEDEDEDEDPIP DSSPLLQFGGQVRQRYLYTDDAQQTEAH LEIREDGTVGGAADQSPESLLQLKALKP GVIQILGVKTSRFLCQRPDGALYGSLHF DPEACSFRELLLEDGYNVYQSEAHGLPL HLPGNKSPHRDPAPRGPARFLPLPGLPP ALPEPPGILAPQPPDVGSSDPLSMVGPS QGRSPSYAS 162 SABA1- FGF21v31 SABA1-FGF21 變異體 31 ;參見關於變異體1 之類似描述 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY pisinyrteiekpsoedededededIgsgI |SGSGS|PIPDSSPLLQFGGQVRQRYLYTD DAQQTEAHLEIREDGTVGGAADQSPESL LQLKALKPGVIQILGVKTSRFLCQRPDG ALYGSLHFDPEACSFRELLLEDGYNVYQ SEAHGLPLHLPGNKSPHRDPAPRGPARF LPLPGLPPALPEPPGILAPQPPDVGSSD PLSMVGPSQGRSPSYAS 163 SABA1- FGF21v32 SABA1-FGF21 變異體 32 ;參見關於變異體1 之類似描述 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY PISINYRTEIEKPS〇lGSAAAAAAAAAGS| PIPDS S PLLQ FGGQVRQRYLYT DDAQQT EAHLEIREDGTVGGAADQSPESLLQLKA LKPGVIQILGVKTSRFLCQRPDGALYGS LHFDPEACSFRELLLEDGYNVYQSEAHG LPLHLPGNKSPHRDPAPRGPARFLPLPG LPPALPEPPGILAPQPPDVGSSDPLSMV GPSQGRSPSYAS 164 SABA 卜 FGF21v33 SABA1-FGF21 變異體 33 ;參見關於變異體1 之類似描述 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY PISINYRTEIEKPSdGSEGSEGSEGSEG| IseIpipdsspllqfggqvrqrylytddaq QTEAHLEIREDGTVGGAADQSPESLLQL KALKPGVIQILGVKTSRFLCQRPDGALY GSLHFDPEACSFRELLLEDGYNVYQSEA HGLPLHLPGNKSPHRDPAPRGPARFLPL 155490.doc -147- 201138808
SEQ ID NO: 序列 名稱 描述 序列 PGLPPALPEPPGILAPQPPDVGSSDPLS MVGPSQGRSPSYAS 165 SABA1- FGF21v34 SABA1-FGF21 變異體 34 ;參見關於變異體1 之類似描述 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY pisinyrteiekpsoIpaspaspaspasp| [asIpipdsspllqfggqvrqrylytddaq QTEAHLEIREDGTVGGAADQSPESLLQL KALKPGVIQILGVKTSRFLCQRPDGALY GSLHFDPEACSFRELLLEDGYNVYQSEA HGLPLHLPGNKSPHRDPAPRGPARFLPL PGLPPALPEPPGILAPQPPDVGSSDPLS MVGPSQGRSPSYAS 166 SABA1- FGF21v35 SABA1-FGF21 變異體 35 ;參見關於變異體1 之類似描述 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY PISINYRTEIEKPSOGSPGSPGSPGSPG fslPPIPDSSPLLQFGGQVRQRYLYTDDAQ QTEAHLEIREDGTVGGAADQSPESLLQL KALKPGVIQILGVKTSRFLCQRPDGALY GSLHFDPEACSFRELLLEDGYNVYQSEA HGLPLHLPGNKSPHRDPAPRGPARFLPL PGLPPALPEPPGILAPQPPDVGSSDPLS MVGPSQGRSPSYAS 167 SABA1- FGF21v36 SABA1-FGF21 變異體 36 ;參見關於變異般1 之類似描述 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY PISINYRTEIEKPS〇lGSTVAAPSTVAAP| IsIpipdsspllqfggqvrqrylytddaqq TEAHLEIREDGTVGGAADQSPESLLQLK ALKPGVIQILGVKTSRFLCQRPDGALYG SLHFDPEACSFRELLLEDGYNVYQSEAH GLPLHLPGNKSPHRDPAPRGPARFLPLP GLPPALPEPPGILAPQPPDVGSSDPLSM VGPSQGRSPSYAS 168 SABA1- FGF21v37 SABA1-FGF21 變異體 37 ;參見關於變異體1 之類似描述 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY PISINYRTEIEKPS〇lGGSEGGSE|PIPDS SPLLQFGGQVRQRYLYTDDAQQTEAHLE IREDGTVGGAADQS PESLLQLKALKPGV IQILGVKTSRFLCQRPDGALYGSLHFDP EACSFRELLLEDGYNVYQSEAHGLPLHL PGNKSPHRDPAPRGPARFLPLPGLPPAL PEPPGILAPQPPDVGSSDPLSMVGPSQG RSPSYAS ' 169 SABA1- FGF21v38 SABA1-FGF21 變異體 38 ;參見關於變異體1 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ
155490.doc -148·
S 201138808
SEQ *TD " NO: 岸判a”: 彳:::':署A -:Ί . ¢:: . -'Φ ^ " ..-^5 N； .'Vv '二 .:5 ψ 、... 序列 之類似描述 TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY PISINYRTEIEKPSOSTSTSTGPIPDSS PLLQFGGQVRQRYLYTDDAQQTEAHLEI REDGTVGGAADQSPESLLQLKALKPGVI QILGVKTSRFLCQRPDGALYGSLHFDPE ACSFRELLLEDGYNVYQSEAHGLPLHLP GNKSPHRDPAPRGPARFLPLPGLPPALP EPPGILAPQPPDVGSSDPLSMVGPSQGR SPSYAS 170 SABA5- FGF21v39 SABA1-FGF21 變異體 39 ;參見關於變異體1 之類似描述 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWEDDS YYSRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSDL YTATISGLKPGVDYTITVYAVTYDVTDL IMHEPISINYRTEIEKPSGGSGSGSGSGj SGSGSPIPDSSPLLQFGGQVRQRYLYTD DAQQTEAHLEIREDGTVGGAADQSPESL LQLKALKPGVIQILGVKTSRFLCQRPDG ALYGSLHFDPEACSFRELLLEDGYNVYQ SEAHGLPLHLPGNKSPHRDPAPRGPARF LPLPGLPPALPEPPGILAPQPPDVGSSD PLSMVGPSQGRSPSYASHHHHHH W 示性螓合物：tttGtB-XufXA^SABA-XAT 171 FGF21- SABAlvl FGF21-SABA1 變異體 1 ： 具有FNT3前導序列及C 端S之FGF21核心序列， 接著為G(GS)7G連接 子，其連接具有AdNT3 前導序列及AdCTl尾 部、接著His6標籤之 8人8八核心1序列 MPIPDSSPLLQFGGQVRQRYLYTDDAQQ TEAHLEIREDGTVGGAADQSPESLLQLK ALKPGVIQILGVKTSRFLCQRPDGALYG SLHFDPEACSFRELLLEDGYNVYQSEAH GLPLHLPGNKSPHRDPAPRGPARFLPLP GLPPALPEPPGILAPQPPDVGSSDPLSM VGPSQGRSPSYASlGGSGSGSGSGSGSGS| (g|vsdvprdlevvaatptslliswhsyye QNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQT TATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYYP ISINYRTEIDKPSOHHHHHH 172 FGF21- SABAlv2 FGF21-SABA1 變異體 2;參見關於變異體1之 類似描述 MPIPDSSPLLQFGGQVRQRYLYTDDAQQ TEAHLEIREDGTVGGAADQSPESLLQLK ALKPGVIQILGVKTSRFLCQRPDGALYG SLHFDPEACSFRELLLEDGYNVYQSEAH GLPLHLPGNKSPHRDPAPRGPARFLPLP GLPPALPEPPGILAPQPPDVGSSDPLSM VGPSQGRSPSYAS]GGSGSGSGSGSGSGS| (gIvsdvprdlevvaatptslliswhsyye QNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQT TATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYYP 工SINYRTEIEKPSOHHHHHH 173 FGF21- SABAlv3 FGF21-SABA1 變異體 3;參見關於變異體1之 類似描述 MPIPDSSPLLQFGGQVRQRYLYTDDAQQ TEAHLEIREDGTVGGAADQSPESLLQLK ALKPGVIQILGVKTSRFLCQRPDGALYG SLHFDPEACSFRELLLEDGYNVYQSEAH GLPLHLPGNKSPHRDPAPRGPARFLPLP 155490.doc •149- 201138808 SEQ ID NO: 序列 名稱 描述 序列 GLPPALPEPPGILAPQPPDVGSSDPLSM VGPSQGRSPSYASlGGSGSGSGSGSGSGS| |g|vsdvprdlevvaatptslliswhsyye QNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQT TATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYYP ISINYRTEIEKPSO : XFL-FGF21-XT V.XAI-SABA-XAT-XT„-Xr,-FGF21 174 FGF21- SABA1- FGF21vl 例示性三聚體融合物， 其中包含SABA核心1之 序列側接FGF21核心序 列，各包含獨特N及C延 長部分序列 MHHHHHH工PDSSPLLQFGGQVRQRYLYT DDAQQTEAHLEIREDGTVGGAADQSPES LLQLKALKPGVIQILGVKTSRFLCQRPD GALYGSLHFDPEACSFRELLLEDGYNVY QSEAHGLPLHLPGNKSPHRDPAPRGPAR FLPLPGLPPALPEPPGILAPQPPDVGSS DPLSMVGPSQGRSPSYAS|GSGSGSGSGS GSGS|VSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHS YYEQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPY SQTTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKY yypisinyrteidkps|ggsgsgsgsgsg| |SGS|PDSSPLLQFGGQVRQRYLYTDDAQQ TEAHLEIREDGTVGGAADQS PESLLQLK ALKPGVIQILGVKTSRFLCQRPDGALYG SLHFDPEACSFRELLLEDGYNVYQSEAH GLPLHLPGNKSPHRDPAPRGPARFLPLP GLPPALPEPPGILAPQPPDVGSSDPLSM VGPSQGRSPSYAS 4 W示性GLP-1及脒促姨島^ t類似物序列及融合物 226 GLP-lvl GLP-1 變異體1 : GLP-1(7-36)，視情況可含有 C端α醯胺基 HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVK GR 227 GLP-lv2 GLP-1 變異體2 : GLP-1(7-37) HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVK GRG 228 腸促胰島 素類似物-4 腸促胰島素類似物-4， 視情況可含有C端α醯胺 基 HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKN GGPSSGAPPPS 229 GLP-1- SABAlvl GLP-1-SABA1 變異體 1 :具有Ν端Met之GLP-1(7-37)與(GGGGS)3 連接 子融合，與SABA1.4融 合 MHAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLV KGR|GGGGGSGGGGSGGGGSGVSDVPRDL EVVAATPTSLLISWHSYYEQNSYYRITY GETGGNSPVQEFTVPYSQTTATISGLKP GVDYTITVYAVYGSKYYYPISINYRTE 230 GLP-l- SABAlv2 GLP-1-SABA1 變異體 2 :具有N端Met之GLP-1(7-37)與(ED)5連接子融 合，與SABA1.4融合 MHAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLV KGRG|E DE DE DE DE D G VS DV PRDLEVVAA TPTSLLISWHSYYEQNSYYRITYGETGG NSPVQEFTVPYSQTTATISGLKPGVDYT ITVYAVYGSKYYYPISINYRTE 231 SABA1- GLP-lvl SABA1-GLP-1 變異體 1 : SABA1.5 與 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ 155490.doc
-150- s 201138808 > ID、 <N0:- w w 擊卜參'、 ~Wm 序列 (GGGGS)3連接子融合 與 GLP-U7-37)融合
TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY
PISINYRTEGGGGSGGGGSGGGGSHAEG
TFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRG 232 SABA1- GLP-lv2 SABA1-GLP-1 變異體 2 : SABA1.5與(ED)5連 接子融合，與GLP-1(7-37)融合
MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY
PISINYRTEEDEDEDEDEDHAEGTFTSD
VSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRG 233 腸促胰島 素類似物-4- SABAlvl
腸促胰島素類似物-4-SABA1變異體1 :具有N 端Met之腸促胰島素類 似物-4與(GGGGS)3連接 子融合，與SABA1.4融 合
MHGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLK
NGGPSSGAPPPS[GGGGSGGGGSGGGGS|G VSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYYEQ NSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQTT ATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYYPI SINYRTE 234 235 236 237 238 239 155490.doc 腸促胰島 素類似物-4- SABAlv2 SABA1-腸 促胰島素 類似物-4vl SABA1-腸 促胰島素 類似物-4v2
Plec SABA1- Plec
Plec- SABA1 腸促胰島素類似物-4-SABA1變異體1 :具有N 端Met之腸促胰島素類 似物-4與(ED)5連接子融 合，與SABA1.4融合 SABA1-腸促胰島素類 似物-4變異體1 : SABA1.5 與(GGGGS)3 連 接子融合，與腸促胰島 素類似物-4融合 SABA1-腸促騰島素類 似物-4變異體2 : 3^八1.5與(£0)5連接子 融合，與腸促胰島素類 似物-4融合
MHAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLV
KGRGEDEDEDEDEDGVSDVPRDLEVVAA
TPTSLLISWHSYYEQNSYYRITYGETGG N S PVQEFTVPY SQTTATISGLKPGVDYT ITVYAVYGSKYYYPISINYRTE
MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY
PISINYRTE GGGGSGGGGSGGGGS HGEG
TFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPS SGAPPPS
MGVSDVPRDLEVVAATPT SLLISWHSΥΪ EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY
PISINYRTE|EDEDEDEDED|HGEGTFTSD LSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPP PS 示性纖麵棄細及敲合物 菌絲黴素(Plec) 具有AdNTl延長部分之 SABA1核心與(ed)5連 接子融合，與菌絲黴素 融合 菌絲黴素與具有AdNT3 及L26延長部分之 SABA1核心融合
MGFGCNGPWDEDDMQCHNHCKSIKGYKG GYCAKGGFVCKCY
MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY
PISINYRTEDEDEDEDEDMGFGCNGPWD
EDDMQCHNHCKSIKGYKGGYCAKGGFVC KCY
MGFGCNGPWDEDDMQCHNHCKSIKGYKG GYCAKGGFVCKCYVS DVPRDLEVVAAT P TSLLISWHSYYEQNSYYRITYGETGGNS PVQEFTVPYSQTTATISGLKPGVDYTIT VYAVYGSKYYYPISINYRTEDEDEDEDE D •151- 201138808 SEQ ID NO: 序列 名稱 描述 序列 例示性顆粒蛋白前體及阿斯曲林序列及融合物 240 PRGNvl 顆粒蛋白前體(PRGN)變 異體卜信號序列加有 ϋΐ^且阿斯曲林中所 用的元素以V、篇竽母/斜 發/.B下割線表元 MWTLVSWVALTAGLVAGTRCPDGQFCPV ACCLDPGGASYSCCRPLLDKWPTTLSRH LGGPCQVDAHCSAGHSCIFTVSGTSSCC PFPEAVACGDGHHCCPRGFHCSADGRSC FQRSGNNSVGAIQCPDSQFECPDFSTCC VMVOGSVIGCCPMPQASCCEDRVHCCPHG AFCDLVHTRCITPTGTHPLAKKLPAQRT NRAVALSSSVMCPDARSRCPDGSTCCEL PSGKYGCCPMPNATCCSDHLHCCPQDTV CDL1QSKCLSKENATTDLLTKLPAHTVG DVKCDMEVSCPDGYTCCRLQSGAWGCCP FTQAVCCEDHIHCCPAGFTCDTQKGTCS QGPHQVPWMEKAPAHLSLPDPQALKRDV PCDNVSSCPSSDTCCQLTSGEWGCCPIP EAVCCSDHQHCCPQGYTCNAEGQCQRGS EIVAGLEKMPARRASLSHPRDIGCDQHT SCPVGQTCCPSLGGSWACCQLPHAVCCE DRQHCCPAGYTCNVKARSCEKEVVSAQP ATFLARSPHVGVKDVECGEGHFCHDNQT CCRDNRQGWACCPYRQGVCCADRRHCCP AGFRCAARGTKCLRREAPRWDAPLRDPA LRQLL 241 PRGNv2 I»RGN變異體2 : PRGN(21-588) TRCPDGQFCPVACCLDPGGASYSCCRPL LDKWPTTLSRHLGGPCQVDAHCSAGHSC IFTVSGTSSCCPFPEAVACGDGHHCCPR GFHCSADGRSCFQRSGNNSVGAIQCPDS QFECPDFSTCCVMVDGSWGCCPMPQASC CEDRVHCCPHGAFCDLVHTRCITPTGTH PLAKKLPAQRTNRAVALSSSVMCPDARS RCPDGSTCCELPSGKYGCCPMPNATCCS DHLHCCPQDTVCDLIQSKCLSKENATTD LLTKLPAHTVGDVKCDMEVSCPDGYTCC RLQSGAWGCCPFTQAVCCEDHIHCCPAG FTCDTQKGTCEQGPHQVPWMEKAPAHLS LPDPQALKRDVPCDNVSSCPSSDTCCQL TSGEWGCCPIPEAVCCSDHQHCCPQGYT CVAEGQCQRGSEIVAGLEKMPARRASLS HPRDIGCDQHTSCPVGQTCCPSLGGSWA CCQLPHAVCCEDRQHCCPAGYTCNVKAR SCEKEVVSAQPATFLARSPHVGVKDVEC GEGHFCHDNQTCCRDNRQGWACCPYRQG VCCADRRHCCPAGFRCAARGTKCLRREA PRWDAPLRDPALRQLL 242 ATST 阿斯曲林(ATST) PQASCCEDRVHCCPHGAFCDLVHTRCIT PTGTHPLAKKLPAQRTNRAVALSSSSKE DATTDLLTKLPAHTVGDVKCDMEVSCPD GYTCCRLQSGAWCEQGPHQVPWMEKAPA HLSLPDPQALKRDVPCDNVSSCPSSDTC 155490.doc 152-
S 201138808
SEQ #ID ·" 务NO:' '“序'擎 〜'名^^ '齡 '、Ί.參.· 娜' 響：*齊：-會d輪述‘：二- -r 等·^ ♦ 备.A, -；： 't ' Φ' φ· ^ Ά '·- € Λ： / 序列 .. ·ν - 、 . 丫 -；：, ：·- ' ^ χ CQLTSGEWGCCPIP 243 PRGN- SABAlvl PRGN-SABA1 變異體 1 :具有Ν端Met之 PRGN(21-588)與 (GGGGS)3連接子融合， 與SABA1.4融合 MTRCPDGQFCPVACCLDPGGASYSCCRP LLDKWPTTLSRHLGGPCQVDAHCSAGHS CIFTVSGTSSCCPFPEAVACGDGHHCCP RGFHCSADGRSCFQRSGNNSVGAIQCPD SQFECPDFSTCCVMVDGSWGCCPMPQAS CCEDRVHCCPHGAFCDLVHTRCITPTGT HPLAKKLPAQRTNRAVALSSSVMCPDAR SRCPDGSTCCELPSGKYGCCPMPNATCC SDHLHCCPQDTVCDLIQSKCLSKENATT DLLTKLPAHTVGDVKCDMEVSCPDGYTC CRLQSGAWGCCPFTQAVCCEDHIHCCPA GFTCDTQKGTCEQGPHQVPWMEKAPAHL SLPDPQALKRDVPCDNVSSCPSSDTCCQ LTSGEWGCCPIPEAVCCSDHQHCCPQGY TCVAEGQCQRGSEIVAGLEKMPARRASL SHPRDIGCDQHTSCPVGQTCCPSLGGSW ACCQLPHAVCCEDRQHCCPAGYTCNVKA RSCEKEVVSAQPATFLARSPHVGVKDVE CGEGHFCHDNQTCCRDNRQGWACCPYRQ GVCCADRRHCCPAGFRCAARGTKCLRRE APRWDAPLRDPALRQLL|GGGGSGGGGSG GGGSGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWH SYYEQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVP YSQTTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSK YYYPISINYRTE 244 PRGN- SABAlv2 PRGN-SABA1 變異體 2 :具有N端Met之 PRGN(21-588)與(ED)5 連接子融合，與 SABA1.4 融合 MTRCPDGQFCPVACCLDPGGASYSCCRP LLDKWPTTLSRHLGGPCQVDAHCSAGHS CIFTVSGTSSCCPFPEAVACGDGHHCCP RGFHCSADGRSCFQRSGNNSVGAIQCPD SQFECPDFSTCCVMVDGSWGCCPMPQAS CCEDRVHCCPHGAFCDLVHTRCITPTGT HPLAKKLPAQRTNRAVALSSSVMCPDAR SRCPDGSTCCELPSGKYGCCPMPNATCC SDHLHCCPQDTVCDLIQSKCLSKENATT DLLTKLPAHTVGDVKCDMEVSCPDGYTC CRLQSGAWGCCPFTQAVCCEDHIHCCPA GFTCDTQKGTCEQGPHQVPWMEKAPAHL SLPDPQALKRDVPCDNVSSCPSSDTCCQ LTSGEWGCCPIPEAVCCSDHQHCCPQGY TCVAEGQCQRGSEIVAGLEKMPARRASL SHPRDIGCDQHTSCPVGQTCCPSLGGSW ACCQLPHAVCCEDRQHCCPAGYTCNVKA RSCEKEVVSAQPATFLARSPHVGVKDVE CGEGHFCHDNQTCCRDNRQGWACCPYRQ GVCCADRRHCCPAGFRCAARGTKCLRRE APRWDAPLRDPALRQLLEDEDEDEDEDG VSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYYEQ NSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQTT 155490.doc •153- 201138808 SEQ 序列 Π> 名稱 NO: 描述 序列
ATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYYPI SINYRTE 245 SABA1-PRGNvl 246 SABA1-PRGNv2 155490.doc SABA1-PRGN 變異體 1 : SABA1.5 與 (GGGGS)3連接子融合， 與 PRGN(21-588)融合 SABA1-PRGN 變異體 2 : SABA1.5與(ED)5連 接子融合，與PRGN(21-588)融合
MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY PISINYRTE|GGGGSGGGGSGGGGS|TRCP DGQFCPVACCLDPGGASYSCCRPLLDKW PTTLSRHLGGPCQVDAHCSAGHSCIFTV SGTSSCCPFPEAVACGDGHHCCPRGFHC SADGRSCFQRSGNNSVGAIQCPDSQFEC PDFSTCCVMVDGSWGCCPMPQASCCEDR VHCCPHGAFCDLVHTRCITPTGTHPLAK KLPAQRTNRAVALSSSVMCPDARSRCPD GSTCCELPSGKYGCCPMPNATCCSDHLH CCPQDTVCDLIQSKCLSKENATTDLLTK LPAHTVGDVKCDMEVSCPDGYTCCRLQS GAWGCCPFTQAVCCEDHIHCCPAGFTCD TQKGTCEQGPHQVPWMEKAPAHLSLPDP QALKRDVPCDNVSSCPSSDTCCQLTSGE WGCCPIPEAVCCSDHQHCCPQGYTCVAE GQCQRGSEIVAGLEKMPARRASLSHPRD IGCDQHTSCPVGQTCCPSLGGSWACCQL PHAVCCEDRQHCCPAGYTCNVKARSCEK EVVSAQPATFLARSPHVGVKDVECGEGH FCHDNQTCCRDNRQGWACCPYRQGVCCA DRRHCCPAGFRCAARGTKCLRREAPRWD APLRDPALRQLL_ MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY PISINYRTg|EDEDEDEDED|TRCPDGQFC PVACCLDPGGASYSCCRPLLDKWPTTLS RHLGGPCQVDAHCSAGHSCIFTVSGTSS CCPFPEAVACGDGHHCCPRGFHCSADGR SCFQRSGNNSVGAIQCPDSQFECPDFST CCVMVDGSWGCCPMPQASCCEDRVHCCP HGAFCDLVHTRCITPTGTHPLAKKLPAQ RTNRAVALSSSVMCPDARSRCPDGSTCC ELPSGKYGCCPMPNATCCSDHLHCCPQD TVCDLIQSKCLSKENATTDLLTKLPAHT VGDVKCDMEVSCPDGYTCCRLQSGAWGC CPFTQAVCCEDHIHCCPAGFTCDTQKGT CEQGPHQVPWMEKAPAHLSLPDPQALKR DVPCDNVSSCPSSDTCCQLTSGEWGCCP IPEAVCCSDHQHCCPQGYTCVAEGQCQR GSEIVAGLEKMPARRASLSHPRDIGCDQ HTSCPVGQTCCPSLGGSWACCQLPHAVC CEDRQHCCPAGYTCNVKARSCEKEVVSA QPATFLARSPHVGVKDVECGEGHFCHDN •154· 201138808
.'SEQ.':: ID >： s序列^ f名稱、 -f #'#'· - V-' 爹r. . ' -鲁.：务..-.V : . . 彳 ' 序列 QTCCRDNRQGWACCPYRQGVCCADRRHC CPAGFRCAARGTKCLRREAPRWDAPLRD PALRQLL 247 ATST- SABAlvl ATST-SABA1 變異體 1 :具有N端Met之阿斯 曲林與(GGGGS)3連接子 融合，與SABA1.4融合 MPQASCCEDRVHCCPHGAFCDLVHTRCI TPTGTHPLAKKLPAQRTNRAVALSSSSK EDATTDLLTKLPAHTVGDVKCDMEVSCP DGYTCCRLQSGAWCEQGPHQVPWMEKAP AHLSLPDPQALKRDVPCDNVSSCPSSDT CCQLTSGEWGCCPIPGGGGSGGGGSGGG GSGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSY YEQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYS QTTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYY YPISINYRTE 248 ATST- SABAlv2 ATST-SABA1 變異體 2 :具有N端Met之阿斯 曲林與(ED)5連接子融 合，與SABA1.4融合 0PQASCCEDRVHCCPHGAFCDLVHTRCI TPTGTHPLAKKLPAQRTNRAVALSSSSK EDATTDLLTKLPAHTVGDVKCDMEVSCP DGYTCCRLQSGAWCEQGPHQVPWMEKAP AHLSLPDPQALKRDVPCDNVSSCPSSDT CCQLTSGEWGCCPIPEDEDEDEDED|GVS DVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYYEQNS YYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQTTAT ISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYYPISI NYRTE 249 SABA1- ATSTvl SABA1-ATST 變異體 1 : SABA1.5 與 (GGGGS)3連接子融合， 與阿斯曲林融合 MGVSDVPRDLEWAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY PIS INYRTE|GGGGSGGGGSGGGGS|PQAS CCEDRVHCCPHGAFCDLVHTRCITPTGT HPLAKKLPAQRTNRAVALSSSSKEDATT DLLTKLPAHTVGDVKCDMEVSCPDGYTC CRLQSGAWCEQGPHQVPWMEKAPAHLSL PDPQALKRDVPCDNVSSCPSSDTCCQLT SGEWGCCPIP 250 SABA1- ATSTv2 SABA1-ATST變異體 2 : SABA1.5 與(ED)5連 接子融合，與阿斯曲林 融合 MGVSDVPRDLEWAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY PISINYRTEEDEDEDEDEDPQASCCEDR VHCCPHGAFCDLVHTRCITPTGTHPLAK KLPAQRTNRAVALSSSSKEDATTDLLTK LPAHTVGDVKCDMEVSCPDGYTCCRLQS GAWCEQGPHQVPWMEKAPAHLSLPDPQA LKRDVPCDNVSSCPSSDTCCQLTSGEWG CCPIP ' …例:示性IFN庠列及融合物 251 IFNXvl ΕΝλΙ變異體1 GPVPTSKPTTTGKGCHIGRFKSLSPQEL ASFKKARDALEESLKLKNWSCSSPVFPG NWDLRLLQVRERPVALEAELALTLKVLE AAAGPALEDVLDQPLHTLHHILSQLQAC 155490.doc -155· 201138808 SEQ ID NO: 序列 名稱 描述 ~~ 序列 IQPQPTAGPRPRGRLHHWLHRLQEAPKK ESAGCLEASVTFNLFRLLTRDLKYVADG NLCLRTSTHPEST 252 IFNXv2 IFNkl變異體2 : C171S 取代之 IFNXl GPVPTSKPTTTGKGCHIGRFKSLSPQEL ASFKKARDALEESLKLKNWSCSSPVFPG NWDLRLLQVRERPVALEAELALTLKVLE AAAGPALEDVLDQPLHTLHHILSQLQAC IQPQPTAGPRPRGRLHHWLHRLQEAPKK ESAGCLEASVTFNLFRLLTRDLKYVADG NLSLRTSTHPEST 253 IFNXv3 IFNX1 變異體3 失6個胺基酸且具有 C165S 取代之 Π?Νλ1 KPTTTGKGCHIGRFKSLSPQELASFKKA RDALEESLKLKNWSCSSPVFPGNWDLRL LQVRERPVALEAELALTLKVLEAAAGPA LEDVLDQPLHTLHHILSQLQACIQPQPT AGPRPRGRLHHWLHRLQEAPKKESAGCL EASVTFNLFRLLTRDLKYVADGNLSLRT STHPEST 254 IF_4 IFNXl變異體4 : Ν端缺 失6個胺基酸且具有 D161E及C165S取代之 IFN λΐ KPTTTGKGCHIGRFKSLSPQELASFKKA RDALEESLKLKNWSCSSPVFPGNWDLRL LQVRERPVALEAELALTLKVLEAAAGPA LEDVLDQPLHTLHHILSQLQACIQPQPT AGPRPRGRLHHWLHRLQEAPKKESAGCL EASVTFNLFRLLTRDLKYVAEGNLSLRT STHPEST 255 IFNXv5 IFNXl變異體5 : Ν端缺 失6個胺基酸且具有 G162A及C165S取代之 IFN λΐ KPTTTGKGCHIGRFKSLSPQELASFKKA RDALEESLKLKNWSCSSPVFPGNWDLRL LQVRERPVALEAELALTLKVLEAAAGPA LEDVLDQPLHTLHHILSQLQACIQPQPT AGPRPRGRLHHWLHRLQEAPKKESAGCL EASVTFNLFRLLTRDLKYVADANLSLRT STHPEST 256 IFNXv6 IFN λΐ變異體6 :具有 D167E及C171S取代之 IFNXl GPVPTSKPTTTGKGCHIGRFKSLSPQEL ASFKKARDALEESLKLKNWSCSSPVFPG NWDLRLLQVRERPVALEAELALTLKVLE AAAGPALEDVLDQPLHTLHHILSQLQAC IQPQPTAGPRPRGRLHHWLHRLQEAPKK ESAGCLEASVTFNLFRLLTRDLKYVAEG NLSLRTSTHPEST 257 IFNXv7 IFN λΐ變異體7 :具有 G168A及C171S取代之 IFN λΐ GPVPTSKPTTTGKGCHIGRFKSLSPQEL ASFKKARDALEESLKLKNWSCSSPVFPG NWDLRLLQVRERPVALEAELALTLKVLE AAAGPALEDVLDQPLHTLHHILSQLQAC IQPQPTAGPRPRGRLHHWLHRLQEAPKK ESAGCLEASVTFNLFRLLTRDLKYVADA NLSLRTSTHPEST 258 IFNX- SABAlvl IFlSa-SABAl 變翼體1 : 具有N端Met之IFNXvl與 (GGGGS)3連接子融合， MGPVPTSKPTTTGKGCHIGRFKSLSPQE LASFKKARDALEESLKLKNWSCSSPVFP GNWDLRLLQVRERPVALEAELALTLKVL EAAAGPALEDVLDQPLHTLHHILSQLQA -156-
I55490.doc s 201138808
SEQ ID * *NO:; .s序吒. Mm I 々.+.命·-¾ t • i描述. v Ί蚤-# 专 奮 > ΛΨ\ . 與SABA1.4融合 CIQPQPTAGPRPRGRLHHWLHRLQEAPK KESAGCLEASVTFNLFRLLTRDLKYVAD GNLCLRTSTHPESTGGGGSGGGGSGGGG| IsIgvsdvprdlevvaatptslliswhsyy EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY PISINYRTE 259 IFNX- SABAlv2 IFNX-SABAl 變異體2 : 具有N端Met之IFNXv2與 (ggggs)3連接子融合， 與SABA1.4融合 MGPVPTSKPTTTGKGCHIGRFKSLSPQE LASFKKARDALEESLKLKNWSCSSPVFP GNWDLRLLQVRERPVALEAELALTLKVL EAAAGPALEDVLDQPLHTLHHILSQLQA CIQPQPTAGPRPRGRLHHWLHRLQEAPK KESAGCLEASVTFNLFRLLTRDLKYVAD GNLSLRTSTHPESTGGGGSGGGGSGGGG [sIgvsdvprdlevvaatptslliswhsyy EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY PISINYRTE 260 if·- SABAlv3 IFNX-SABAl 變異體3 : 具有N端Met之Π?Νλν3與 (GGGGS)3連接子融合， 與SABA1.4融合 MKPTTTGKGCHIGRFKSLSPQELASFKK ARDALEESLKLKNWSCSSPVFPGNWDLR LLQVRERPVALEAELALTLKVLEAAAGP ALEDVLDQPLHTLHHILSQLQACIQPQP TAGPRPRGRLHHWLHRLQEAPKKESAGC LEASVTFNLFRLLTRDLKYVADGNLSLR TSTHPEST|GGGGSGGGGSGGGGSGVSDV PRDLEVVAATPTSLLISWHSYYEQNSYY RITYGETGGNSPVQEFTVPYSQTTATIS GLKPGVDYTITVYAVYGSKYYYPISINY RTE 261 IFNX- SABAlv4 IFNk-SABAl 變異體4 : 具有N端Met之ΙΡΝλν4與 (GGGGS)3連接子融合， 與SABA1.4融合 MKPTTTGKGCHIGRFKSLSPQELASFKK ARDALEESLKLKNWSCSSPVFPGNWDLR LLQVRERPVALEAELALTLKVLEAAAGP ALEDVLDQPLHTLHHILSQLQACIQPQP TAGPRPRGRLHHWLHRLQEAPKKESAGC LEASVTFNLFRLLTRDLKYVAEGNLSLR TSTHPESTGGGGSGGGGSGGGGSGVSDV PRDLEVVAATPTSLLISWHSYYEQNSYY RITYGETGGNSPVQEFTVPYSQTTATIS GLKPGVDYTITVYAVYGSKYYYPISINY RTE 262 IFNk- SABAlv5 IFNX-SABAl 變異體5 : 具有N端Met之IFNXv5與 (GGGGS)3連接子融合， 與SABA1.4融合 MKPTTTGKGCHIGRFKSLSPQELASFKK ARDALEESLKLKNWSCSSPVFPGNWDLR LLQVRERPVALEAELALTLKVLEAAAGP ALEDVLDQPLHTLHHILSQLQACIQPQP TAGPRPRGRLHHWLHRLQEAPKKESAGC LEASVTFNLFRLLTRDLKYVADANLSLR TSTHPESTGGGGSGGGGSGGGGSGVSDV PRDLEVVAATPTSLLISWHSYYEQNSYY 155490.doc z\ -157· 201138808
SEQ ID NO: 序列 名稱 描述 序列 RITYGETGGNSPVQEFTVPYSQTTATIS GLKPGVDYTITVYAVYGSKYYYPISINY RTE 263 IFNX- SABAlv6 IFNX-SABAl 變異體6 : 具有N端Met之ΙΡΝλν6與 (GGGGS)3連接子融合， 與SABA1.4融合 MGPVPTSKPTTTGKGCHIGRFKSLSPQE LASFKKARDALEESLKLKNWSCSSPVFP GNWDLRLLQVRERPVALEAELALTLKVL EAAAGPALEDVLDQPLHTLHHILSQLQA CIQPQPTAGPRPRGRLHHWLHRLQEAPK KESAGCLEASVTFNLFRLLTRDLKYVAE GNLSLRTSTHPEST|GGGGSGGGGSGGGG 回 GVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY PISINYRTE 264 iFm- SABAlv7 IFMSABAl 變異體7 : 具有N端Met之IFNXv7與 (GGGGS)3連接子融合， 與SABA1.4融合 MGPVPTSKPTTTGKGCHIGRFKSLSPQE LASFKKARDALEESLKLKNWSCSSPVFP GNWDLRLLQVRERPVALEAELALTLKVL EAAAGPALEDVLDQPLHTLHHILSQLQA CIQPQPTAGPRPRGRLHHWLHRLQEAPK KESAGCLEASVTFNLFRLLTRDLKYVAD ANLSLRTSTHPESTGGGGSGGGGSGGGG 回GVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY PISINYRTE 265 iFm- SABAlv8 IFNX-SABAl 變異體8 : 具有N端Met之IF>avl與 (ED)5連接子融合，與 SABA1.4 融合 MGPVPTSKPTTTGKGCHIGRFKSLSPQE LASFKKARDALEESLKLKNWSCSSPVFP GNWDLRLLQVRERPVALEAELALTLKVL EAAAGPALEDVLDQPLHTLHHILSQLQA CIQPQPTAGPRPRGRLHHWLHRLQEAPK KESAGCLEASVTFNLFRLLTRDLKYVAD GNLCLRTSTHPESTEDEDEDEDEDGVSD VPRDLEVVAATPTSLLISWHSYYEQNSY YRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQTTATI SGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYYPISIN YRTE 266 IFNX- SABAlv9 IFISa-SABAl 變異體9 : 具有N端Met之IFNkv2與 (ED)5連接子融合，與 SABA1.4 融合 MGPVPTSKPTTTGKGCHIGRFKSLSPQE LASFKKARDALEESLKLKNWSCSSPVFP GNWDLRLLQVRERPVALEAELALTLKVL EAAAGPALEDVLDQPLHTLHHILSQLQA CIQPQPTAGPRPRGRLHHWLHRLQEAPK KESAGCLEASVTFNLFRLLTRDLKYVAD GNLSLRTSTHPEST|EDEDEDEDED|GVSD VPRDLEVVAATPTSLLISWHSYYEQNSY YRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQTTATI SGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYYPISIN YRTE 267 IFNX- IFNX-SABAl 變異砬 MKPTTTGKGCHIGRFKSLSPQELASFKK
155490.doc -158· s 201138808
SEQ ID NO: 夸、序列: 令名:稱 參.舉--Ί ’ .參：命 & 揭逃 M . -.V： ；; :d ，卜：、e 1 : j 序列 SABA1 vlO l〇 ·具有N端Met之 ΙΡΝλν3與(ED)5連接子融 合’與SABA1.4融合 ARDALEESLKLKNWSCSSPVFPGNWDLR LLQVRERPVALEAELALTLKVLEAAAGP ALEDVLDQPLHTLHHILSQLQACIQPQP TAGPRPRGRLHHWLHRLQEAPKKESAGC LEASVTFNLFRLLTRDLKYVADGNLSLR TSTHPESTEDEDEDEDEDGVSDVPRDLE VVAATPTSLLISWHSYYEQNSYYRITYG ETGGNSPVQEFTVPYSQTTATISGLKPG VDYTITVYAVYGSKYYYPISINYRTE 268 ΙΕΝλ- SABA1 vll ΙΡΝλ-S AB A1 變異體 11 :具有>^Met之 IFmv4與(ED)5連接子融 合，與SABA1.4融合 MKPTTTGKGCHIGRFKSLSPQELASFKK ARDALEESLKLKNWSCSSPVFPGNWDLR LLQVRERPVALEAELALTLKVLEAAAGP ALEDVLDQPLHTLHHILSQLQACIQPQP TAGPRPRGRLHHWLHRLQEAPKKESAGC LEASVTFNLFRLLTRDLKYVAEGNLSLR TSTHPEST|EDEDEDEDEDGVSDVPRDLE VVAATPTSLLISWHSYYEQNSYYRITYG ETGGNSPVQEFTVPYSQTTATISGLKPG VDYTITVYAVYGSKYYYPISINYRTE 269 IFNX- SABA1 vl2 ΙΡΝλ-SABAl 變異體 12 :具有N端Met之 ΙΡΝλν5與(ED)5連接子融 合，與SABA1.4融合 MKPTTTGKGCHIGRFKSLSPQELASFKK ARDALEESLKLKNWSCSSPVFPGNWDLR LLQVRERPVALEAELALTLKVLEAAAGP ALEDVLDQPLHTLHHILSQLQACIQPQP TAGPRPRGRLHHWLHRLQEAPKKESAGC LEASVTFNLFRLLTRDLKYVADANLSLR TSTHPEST|EDEDEDEDEDlGVSDVPRDLE VVAATPTSLLISWHSYYEQNSYYRITYG ETGGNSPVQEFTVPYSQTTATISGLKPG VDYTITVYAVYGSKYYYPISINYRTE 270 λ- SABA1 vl3 IF>a-SABAl 變異體 13 :具有N端Met之 IFNXv6與(ED)5連接子融 合，與SABA1.4融合 MGPVPTSKPTTTGKGCHIGRFKSLSPQE LASFKKARDALEESLKLKNWSCSSPVFP GNWDLRLLQVRERPVALEAELALTLKVL EAAAGPALEDVLDQPLHTLHHILSQLQA CIQPQPTAGPRPRGRLHHWLHRLQEAPK KESAGCLEASVTFNLFRLLTRDLKYVAE GNLSLRTSTHPEST 丨 EDEDEDEDED|GVSD VPRDLEVVAATPTSLLISWHSYYEQNSY YRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQTTATI SGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYYPISIN YRTE 271 IFNX- SABA1 vl4 ΙΡΝλ-SABAl 變異體 14 :具有N端Met之 10^7與职))5連接子融 合，與SABA1.4融合 MGPVPTSKPTTTGKGCHIGRFKSLSPQE LASFKKARDALEESLKLKNWSCSSPVFP GNWDLRLLQVRERPVALEAELALTLKVL EAAAGPALEDVLDQPLHTLHHILSQLQA CIQPQPTAGPRPRGRLHHWLHRLQEAPK KESAGCLEASVTFNLFRLLTRDLKYVAD ANLSLRTSTHPEST|EDEDEDEDED|GVSD VPRDLEVVAATPTSLLISWHSYYEQNSY YRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQTTATI 155490.doc -159- 201138808 SEQ Π) NO: 序列 名稱 描述 序列 SGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYYPISIN YRTE 272 SABA1- IFNXvl SABAl-IFNX 變異體 1 : SABA1.5 與(GGGGS)3 連 接子融合，與ΙΡΝλνΙ融 合 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY PISINYRTEGGGGSGGGGSGGGGSGPVP TSKPTTTGKGCHIGRFKSLSPQELASFK KARDALEESLKLKNWSCSSPVFPGNWDL RLLQVRERPVALEAELALTLKVLEAAAG PALEDVLDQPLHTLHHILSQLQACIQPQ PTAGPRPRGRLHHWLHRLQEAPKKESAG CLEASVTFNLFRLLTRDLKYVADGNLCL RTSTHPEST 273 SABA1- IFNXv2 SABAl-IFNX變異體2 : SABA1.5 與(GGGGS)3 連 接子融合，與ΙΡΝλν2融 合 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY PISINYRTEGGGGSGGGGSGGGGSGPVP TSKPTTTGKGCHIGRFKSLSPQELASFK KARDALEESLKLKNWSCSSPVFPGNWDL RLLQVRERPVALEAELALTLKVLEAAAG PALEDVLDQPLHTLHHILSQLQACIQPQ PTAGPRPRGRLHHWLHRLQEAPKKESAG CLEASVTFNLFRLLTRDLKYVADGNLSL RTSTHPEST* 274 SABA1- ΙΡΝλν3 SABAl-IFNX 變異體3 : SABA1.5 與(GGGGS)3 連 接子融合，與ΙΡΝλν3融 合 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY pisinyrteggggsggggsggggs|kptt TGKGCHIGRFKSLSPQELASFKKARDAL EESLKLKNWSCSSPVFPGNWDLRLLQVR ERPVALEAELALTLKVLEAAAGPALEDV LDQPLHTLHHILSQLQACIQPQPTAGPR PRGRLHHWLHRLQEAPKKESAGCLEASV TFNLFRLLTRDLKYVADGNLSLRTSTHP EST 275 SABA1- IFmv4 SABAl-IFNX 變異體4 : SABA1.5 與(GGGGS)3 連 接子融合，與ΙΡΝλν4融 合 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY PISINYRTE|GGGGSGGGGSGGGGSKPTT TGKGCHIGRFKSLSPQELASFKKARDAL EESLKLKNWSCSSPVFPGNWDLRLLQVR ERPVALEAELALTLKVLEAAAGPALEDV LDQPLHTLHHILSQLQACIQPQPTAGPR PRGRLHHWLHRLQEAPKKESAGCLEASV TFNLFRLLTRDLKYVAEGNLSLRTSTHP EST 276 SABA1- IFNXv5 SABAl-IFNX變異體5 : SABA1.5 與(GGGGS)3 連 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY 155490.doc •160·
s 201138808
SEQ ID敫 NO: 4弃列 读名稱/ m芩i 鲁' # n -¾ #.· <χ·- .·& . .5 ：：r ' %- -- ,：V 4 序列 .V , < 、 .. - ? * — . 接子融合，與IFNXv5融 合 PISINYRTElGGGGSGGGGSGGGGS|KPTT TGKGCHIGRFKSLSPQELASFKKARDAL EESLKLKNWSCSSPVFPGNWDLRLLQVR ERPVALEAELALTLKVLEAAAGPALEDV LDQPLHTLHHILSQLQACIQPQPTAGPR PRGRLHHWLHRLQEAPKKESAGCLEASV TFNLFRLLTRDLKYVADANLSLRTSTHP EST 277 SABAl- IFNXv6 3八8八1-正>^變異體6: SABA1.5 與(GGGGS)3連 接子融合，與IFNkv6融 合 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY PISINYRTE)GGGGSGGGGSGGGGSGPVP TSKPTTTGKGCHIGRFKSLSPQELASFK KARDALEESLKLKNWSCSSPVFPGNWDL RLLQVRERPVALEAELALTLKVLEAAAG PALEDVLDQPLHTLHHILSQLQACIQPQ PTAGPRPRGRLHHWLHRLQEAPKKESAG CLEASVTFNLFRLLTRDLKYVAEGNLSL RTSTHPEST 278 SABA1- IFNkv7 8八8入1-吓>认變異體7: 3八6八1.5與(00003)3連 接子融合，與IFNXv7融 合 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY PISINYRTE|GGGGSGGGGSGGGGS|GPVP TSKPTTTGKGCHIGRFKSLSPQELASFK KARDALEESLKLKNWSCSSPVFPGNWDL RLLQVRERPVALEAELALTLKVLEAAAG PALEDVLDQPLHTLHHILSQLQACIQPQ PTAGPRPRGRLHHWLHRLQEAPKKESAG CLEASVTFNLFRLLTRDLKYVADANLSL RTSTHPEST 279 SABA1- IFNXv8 3八8八1-11?1^變異體8: 3八8八1.5與(£0)5連接子 融合，與IFNXvl融合 MGVSDVPRD EQNSYYRIT TTATISGLK PISINYRTE TTGKGCHIG LEESLKLKN RERPVALEA VLDQPLHTL RPRGRLHHW VTFNLFRLL PEST LEVVAATPTSLLISWHSYY YGETGGNSPVQEFTVPYSQ PGVDYTITVYAVYGSKYYY EDEDEDEDEDlGPVPTSKPT RFKSLSPQELASFKKARDA WSCSSPVFPGNWDLRLLQV ELALTLKVLEAAAGPALED HHILSQLQACIQPQPTAGP LHRLQEAPKKESAGCLEAS TRDLKYVADGNLCLRTSTH 280 SABA1- IFNXv9 SABAl-IFNX變異體9 : SABA1.5與(ED)5連接子 融合，與IFNXv2融合 MGVSDVPRD EQNSYYRIT TTATISGLK PISINYRTE TTGKGCHIG LEESLKLKN RERPVALEA VLDQPLHTL LEVVAATPTSLLISWHSYY YGETGGNSPVQEFTVPYSQ PGVDYTITVYAVYGSKYYY EDEDEDEDEDlGPVPTSKPT RFKSLSPQELASFKKARDA WSCSSPVFPGNWDLRLLQV ELALTLKVLEAAAGPALED HHILSQLQACIQPQPTAGP 155490.doc -161 - 201138808 SEQ ID NO: 序列 名稱 描述 序列 RPRGRLHHWLHRLQEAPKKESAGCLEAS VTFNLFRLLTRDLKYVADGNLSLRTSTH PEST 281 SABA1- IFNXvlO SABA l-IFISa變異體 10 : SABA1.5與〇ED)5連 接子融合，與IFNXv3融 合 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY PISINYRTIEDEDEDEDED|KPTTTGKGC HIGRFKSLSPQELASFKKARDALEESLK LKNWSCSSPVFPGNWDLRLLQVRERPVA LEAELALTLKVLEAAAGPALEDVLDQPL HTLHHILSQLQACIQPQPTAGPRPRGRL HHWLHRLQEAPKKESAGCLEASVTFNLF RLLTRDLKYVADGNLSLRTSTHPEST 282 SABA1- IFNXvll SABAl-IFNX變異體 11 : SABA1.5與(ED)5連 接子融合，與ΙΡΝλν4融 合 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY pisinyrte]ededededed|kptttgkgc HIGRFKSLSPQELASFKKARDALEESLK LKNWSCSSPVFPGNWDLRLLQVRERPVA LEAELALTLKVLEAAAGPALEDVLDQPL HTLHHILSQLQACIQPQPTAGPRPRGRL HHWLHRLQEAPKKESAGCLEASVTFNLF RLLTRDLKYVAEGNLSLRTSTHPEST 283 SABA1- IFmvl2 SABAl-IFNX變異體 12 : SABA1.5 與(ED)5連 接子融合，與IFNXv5融 合 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY pisinyrte)ededededed|kptttgkgc HIGRFKSLSPQELASFKKARDALEESLK LKNWSCSSPVFPGNWDLRLLQVRERPVA LEAELALTLKVLEAAAGPALEDVLDQPL HTLHHILSQLQACIQPQPTAGPRPRGRL HHWLHRLQEAPKKESAGCLEASVTFNLF RLLTRDLKYVADANLSLRTSTHPEST 284 SABA1- IFNXvl3 SABAl-IFNX變異體 13 : SABA1.5與(ED)5連 接子融合，與IFNXv6融 合 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY pisinyrte|ededededed|gpvptskpt TTGKGCHIGRFKSLSPQELASFKKARDA LEESLKLKNWSCSSPVFPGNWDLRLLQV RERPVALEAELALTLKVLEAAAGPALED VLDQPLHTLHHILSQLQACIQPQPTAGP RPRGRLHHWLHRLQEAPKKESAGCLEAS VTFNLFRLLTRDLKYVAEGNLSLRTSTH PEST 285 SABA1- IFNXvl4 SABAl-ΙΡΝλ 變異體 14 : SABA1.5與(ED)5連 接子融合，與IFNkv7融 合 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY PISINYRTEEDEDEDEDEDGPVPTSKPT TTGKGCHIGRFKSLSPQELASFKKARDA 155490.doc • 162·
S 201138808
SEQ ID ^ -NO:« 、序列 兮方稱冬 ψ "φ φ '*" 劣〆 ':身.你.餐-蕾.气..ΐ 今，：-秦：· 序列 - ' - > ' LEESLKLKNWSCSSPVFPGNWDLRLLQV RERPVALEAELALTLKVLEAAAGPALED VLDQPLHTLHHILSQLQACIQPQPTAGP RPRGRLHHWLHRLQEAPKKESAGCLEAS VTFNLFRLLTRDLKYVADANLSLRTSTH PEST ‘ a 赋，★雜'ck、4 参 *例牲ϊί4一2序列友融合物r ... 286 IL21vl IL-21變異體1 :具有加 下劃線之天然前導序列 的人類IL-21 MDSSPGNMERIVICLMVIFLGTLVHKSS SQGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDL VPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQL KSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNA GRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERF KSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 287 IL21v2 IL-21變異體2 :無前導 序列之人類IL-21 MQGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDL VPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQL KSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNA GRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERF KSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 288 IL21nal IL21核酸序列變異體1 : 編碼具有天然前導序列 之人類IL-21序列的核苷 酸序列，該序列中編碼 該前導序列之部分加有 下劃線；以在哺乳動物 細胞中表現 ATGGATTCCAGTCCTGGCAACATGGAGA GGATTGTCATCTGTCTGATGGTCATCTT CTTGGGGACACTGGTCCACAAATCAAGC TCCCAAGGTCAAGATCGCCACATGATTA GAATGCGTCAACTTATAGATATTGTTGA TCAGCTGAAAAATTATGTGAATGACTTG GTCCCTGAATTTCTGCCAGCTCCAGAAG ATGTAGAGACAAACTGTGAGTGGTCAGC TTTTTCCTGTTTTCAGAAGGCCCAACTA AAGTCAGCAAATACAGGAAACAATGAAA GGATAATCAATGTATCAATTAAAAAGCT GAAGAGGAAACCACCTTCCACAAATGCA GGGAGAAGACAGAAACACAGACTAACAT GCCCTTCATGTGATTCTTATGAGAAAAA ACCACCCAAAGAATTCCTAGAAAGATTC AAATCACTTCTCCAAAAGATGATTCATC AGCATCTGTCCTCTAGAACACACGGAAG TGAAGATTCCTGA 289 IL21na2 IL21核酸序列變異體2 : 編碼無前導序列之人類 IL-21序列的核苷酸序 列；序列已經部分密碼 子最佳化以在大腸桿菌 中表現 ATGCAAGGTCAAGATCGCCACATGATTA GAATGCGTCAACTTATAGATATTGTTGA TCAGCTGAAAAATTATGTGAATGACCTG GTTCCGGAATTCCTGCCGGCTCCGGAAG ATGTTGAGACCAACTGTGAGTGGTCCGC TTTCTCCTGTTTCCAGAAAGCCCAGCTG AAATCCGCAAACACCGGTAACAACGAAC GTATCATCAACGTTTCCATTAAAAAACT GAAACGTAAACCGCCGTCCACCAACGCA GGTCGTCGTCAGAAACACCGTCTGACCT GCCCGTCCTGTGATTCTTATGAGAAAAA ACCGCCGAAAGAATTCCTGGAACGTTTC AAATCCCTGCTGCAGAAAATGATTCACC 155490.doc -163· 201138808
SEQ ID NO: 序列 名稱 描述 序列 AGCACCTGTCCTCTCGTACCCACGGTTC CGAAGATTCCTGA 290 IL21- SABAlvl IL21-SABA1 變異體 1 : 具有天然前導序列之 IL21與(GGGS)3連接子 融合，與SABA1.4融合 MDSSPGNMERIVICLMVIFLGTLVHKSS SQGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDL VPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQL KSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNA GRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERF KSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS|GGGGSG| GGGSGGGGSGVSDVPRDLEVVAATPTSL LISWHSYYEQNSYYRITYGETGGNSPVQ EFTVPYSQTTATISGLKPGVDYTITVYA VYGSKYYYPISINYRTE 291 IL21- SABAlv2 IL21-SABA1 變異體2 : 無前導序列之IL21與 (GGGS)3連接子融合， 與SABA1.4融合 MQGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDL VPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQL KSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNA GRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERF KSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDSlGGGGSGl |GGGSGGGGS|GVSDVPRDLEWAATPTSL LISWHSYYEQNSYYRITYGETGGNSPVQ EFTVPYSQTTATISGLKPGVDYTITVYA VYGSKYYYPISINYRTE 292 1L2\- SABAlv3 IL21-SABA1 變異體3 : 具有天然前導序列之 IL21與(ED)5連接子融 合，與SABA1.4融合 MDSSPGNMERIVICLMVIFLGTLVHKSS SQGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDL VPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQL KSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNA GRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERF KSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDSEDEDED| EDEDGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWH SYYEQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVP YSQTTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSK YYYPISINYRTE 293 IL21- SABAlv4 IL21-SABA1 變異體4 : 無前導序列之IL21與 (ED)5連接子融合，與 SABA1.4 融合 MQGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDL VPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQL KSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNA GRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERF KSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDSEDEDED EDEDGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWH SYYEQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVP YSQTTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSK YYYPISINYRTE 294 SABA1- IL21vl SABA1-IL21 變異體1 : 3八8八1.5與(0003)3連 接子融合，與無前導序 列之IL-21融合 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY PISINYRTEjGGGGSGGGGSGGGGSMQGQ DRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEF LPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSAN TGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQ KHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLL
155490.doc -164-
S 201138808
SEQ v ID^ ., NO: 士序列 - V 丄‘ '^i}. t# -ψ ' 1 、- -亡-j-.:资-η -V-；； 序列 ^ ' * QKMIHQHLSSRTHGSEDS 295 SABA1- IL21v2 SABA1-IL21 變異體2 : SABA1.5與(ED)5連接子 融合，與無前導序列之 IL-21融合 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY pisinyrteIedededededmqgqdrhmi RMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPE DVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNE RIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLT CPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIH QHLSSRTHGSEDS .^ ·；. ^ ^ i 4 w i例不性爽粉棄^轉ί及融合物：V ::; 296 AMYvl 澱粉素(AMY)變異體 1 :人類澱粉素(具有Cys 2-7二硫鍵及C端醯胺化） KCNTATCATQRLANFLVHSSNNFGAILS STNVGSNTY 297 AMYv2 AMY變異體2:普蘭林 肽(具有Cys 2-7二硫鍵 及C端醯胺化） KCNTATCATQRLANFLVHSSNNFGPILP PTNVGSNTY 298 AMYv3 AMY變異體3 :達伐林 肽(Davalintide)(具有 Cys 2-7二硫鍵及C端醯胺化） KCNTATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTG SNTY 299 AMYv4 AMY變異體4 : UGP-281(具有Cys 1-7二硫鍵 及C端醯胺化） CSNLSTCVLGKLSNELHKLNTYPRTDVG ΆΝΤΥ 300 AMYv5 AMY變異體5 :大鼠澱 粉素(具有Cys 2-7二硫 鍵及C端醯胺化） KCNTATCATQRLANFLVRSSNNLGPVLP PTNVGSNTY 301 AMYv6 AMY變異體6 :豬澱粉 素(具有Cys 2-7二硫鍵 及C端醯胺化） KCNMATCATQHLANFLDRSRNNLGTIFS PTKVGSNTY 302 AMYv7 AMY變異體7 :貓澱粉 素(具有Cys 2-7二硫鍵 及C端醯胺化） KCNTATCATQRLANFLIRSSNNLGAILS PTNVGSNTY 303 AMYv8 AMY變異體8 :鮭魚抑 鈣素(具有Cys 1-7二硫 鍵及C端醯胺化） CSNLSTCVLGKLSNELHKLNTYPRTNTG SGTP 304 SABA1- AMYvl SABA-澱粉素融合物變 異體1 : SABA1.6與 (ED)5連接子融合，與 AMYvl融合，具有C端 醯胺化 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY PISINYRTEIEKPSOEDEDEDEDEDKCN TATCATQRLANFLVHSSNNFGAILSSTN VGSNTY 305 SABA1- AMYv2 SABA-澱粉素融合物變 異體1 : SABA1.7與 (ED)5連接子融合，與 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY PISINYRT^IEDEDEDEDEDKCNTATCA 155490.doc -165- 201138808 SEQ ID NO: 序列 名稱 描述 AMYvl融合 醯胺化 具有C端 序列
TQRLAN FLVHS SNN FGAILS STNVGSNT Y 306 307 308 309 310 311 312 313 SABA1- AMYv3 SABA1- AMYv4 SABA1- AMYv5 SABA1- AMYv6 SABA1- AMYv7 SABA1- AMYv8 SABA 卜 AMYv9
SABA1- AMYvlO SABA-澱粉素融合物變 異體3 : SABA1.6與 G(GS)4連接子融合，與 AMYvl融合，具有C端 醯胺化 SABA-澱粉素融合物變 異體4 : SABA1.7與 G(GS)4連接子融合，與 AMYvl融合，具有C端 醯胺化 SABA-;殿粉素融合物變 異體5 : SABA1.6與 (ED)5連接子融合，與 AMYv2融合，具有C端 醯胺化 SABA-殿粉素融合物變 異體6 : SAB A 1.7與 (ED)5連接子融合，與 AMYv2融合，具有C端 醯胺化 SABA-殿粉素融合物變 異體7 : SABA1.6與 G(GS)4連接子融合，與 AMYv2融合，具有c端 醯胺化 SAB A-殿粉素融合物變 異體8 : SABA1.7與 G(GS)4連接子融合，與 AMYv2融合，具有c端 醯胺化 SABA-澱粉素融合物麥' 異體9 : SABA1.6與 (ED)5連接子融合，與 AMYv3融合，具有c端 醯胺化 SABA-殿粉素融合物變 異體 10 : SABA1.7與 (ED)5連接子融合，與 AMYv3融合，具有c端
MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY
PISINYRTEIEKPS〇lGGSGSGSGS|KCNT ATCATQRLANFLVHSSNNFGAILSSTNV GSNTY
MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY
PISINYRTEIGGSGSGSGSKCNTATCAT
QRLANFLVHSSNNFGAILSSTNVGSNTY
MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY pisinyrteiekpsoIe"dedededed|kcn TATCATQRLANFLVHSSNNFGPILPPTN VGSNTY
MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY
PISINY RTEllEDEDEDEDEDlKCNTATCA TQRLANFLVHSSNNFGPILPPTNVGSNT Y
MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY
PISINYRTEIEKPSOlGGSGSGSGSlKCNT ATCATQRLAN FLVH SSNNFGPILPPTNV GSNTY
MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY
PISINYRTEIGGSGSGSGSKCNTATCAT
QRLANFLVHSSNNFGPILPPTNVGSNTY
MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY
pisinyrteiekpsoIededededed|kcn TATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNT Y
MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY
PI sinyrteiIededededed|kcntatcv LGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY
155490.doc s 201138808 SEQ.，ID .... NO: .爆.：< 醯胺化 列 314 SABA1- AMYvll SABA-澱粉素融合物變 異體11 : SABA1.6 與 G(GS)4連接子融合，與 AMYv3融合，具有C端 醯胺化
MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY
PISINYRTEIEKPS〇lGGSGSGSGS|KCNT ATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY 315 SABA1- AMYvl2 SABA-殺粉素融合物變 異體 12 : SABA1.7 與 G(GS)4連接子融合，與 AMYv3融合，具有C端 醯胺化
MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY
PISINYRTEIGGSGSGSGSKCNTATCVL
GRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY 316 317 318 319 320 321 155490.doc SABA1- AMYvl3 SABA1- AMYvl4 SABA1- AMYvl5 SABA1- AMYvl6 SABA1- AMYvl7 SABA1- AMYvl8 SABA-殿粉素融合物變 異體13 : SABA1.6與 (ED)5連接子融合，與 AMYv4融合，具有C端 醯胺化 SAB A-澱粉素融合物變 異體 14 : SABA1.7與 (ED)5連接子融合，與 AMYv4融合，具有C端 醯胺化 SABA-殿粉素融合物變 異體15 : SABA1.6與 G(GS)4連接子融合，與 AMYv4融合’具有c端 醯胺化 SABA-殺粉素融合物變 異體16 : SABA1.7與 G(GS)4連接子融合，與 AMYv4融合，具有c端 醯胺化 SABA-殺粉素融合物變 異體17 : SABA1.6-Cys-XrAMYvl，具有C端醯 胺化，其中Xi為順丁烯 二醯亞胺-PEG20 SAB A-澱粉素融合物變 異體18 : SABA1.7-(ED)5G-Cys-Xr AMYvl ’具有C端醯胺 化，其中X!為順丁烯二 醯亞胺-PEG20 -167·
MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY PISINYRTEIEKPSOlEDEDEDEDEDjCSN LSTCVLGKLSNELHKLNTYPRTDVGANT Y
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PISINYRTEIEDEDEDEDEDCSNLSTCV
LGKLSNELHKLNTYPRTDVGANTY
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STCVLGKLSNELHKLNTYPRTDVGANTY
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PISINYRTEIGGSGSGSGSCSNLSTCVL
GKLSNELHKLNTYPRTDVGANTY
MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY PIS IN YRTEIEKPSOlcl-Χτ -KCNTATCA TQRLANFLVHSSNNFGAILSSTNVGSNT Y
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PISINYRTEIEDEDEDEDEDGC-Xi-KC
NTATCATQRLANFLVHSSNNFGAILSST NVGSNTY 201138808 SEQID NO: 322 323 324 325 326 327 328 序列 名稱 SABA1- AMYvl9 SABA1- AMYv20 SABA1- AMYv21 SABA1- AMYv22 SABA1- AMYv23 SABA1- AMYv24 SABA1- AMYv25 描述 SABA-;殿粉素融合物變 異體 19 : SABA1.6-Cys-Χι-ΑΜΥν2 ’具有c端醯 胺化，其中又!為順丁烯 二醯亞胺-PEG20 SABA-殿粉素融合物變 異體20 : SABA1.7-(ED)5G-Cys-X,-AMYv2 ’具有c端醯胺 化，其中X!為順丁烯二 醯亞胺-PEG20 SABA-澱粉素融合物變 異體21 _ SABA1.6-Cys_ XrAMYv3，具有c端醯 胺化，其中乂丨為順丁烯 二醯亞胺-PEG20 SABA-殿粉素融合物變 異體22 : SABA1,7_ (ED)5G-Cys-Xr AMYv3，具有c端醯胺 化，其中X!為順丁烯二 醯亞胺-PEG20 SABA-澱粉素融合物變 異體23 . SABA1.6-Cys_ XrAMYv4，具有c端醯 胺化’其中又〖為順丁烯 二醯亞胺-PEG20 SABA-澱粉素融合物變 異體24 : SABA1.7-(ED)5G-Cys-Xr AMYv4，具有c端酿胺 化，其中Xi為順丁烯二 醯亞胺-PEG20 SABA-澱粉素融合物變 異體24 : SABA1.7-(ED)5G-Cys-X】-AMYv5 ’ 具有 c 端醯胺 化及位於兩個陰影Cys 殘基之二硫橋，其中乂丨 為順丁烯二醯亞胺-PEG20 序列
MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY PISINYRTEIEKPSOIcI-XtKCNTATCA TQRLANFLVHSSNNFGPILPPTNVGSNT Y
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PISINYRTEljEDEDEDEDEDGCl-Xi-KC NTATCATQRLAN FLVHS SNN FG PIL P PT NVGSNTY
MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY PISINYRTEIEKPSOIcI-XtKCNTATCV LGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY
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PISINYRTEIEDEDEDEDEDGC-Xi-KC
NTATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSN TY
MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY PISINYRTEIEKPSOlcl-Xi-CSNLSTC VLGKLSNELHKLNTYPRTDVGANTY
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PISINYRTEIEDEDEDEDEDGC-Xi-CS
NLSTCVLGKLSNELHKLNTYPRTDVGAN TY
MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY PISINYRTEljEDEDEDEDEDGCl-Xi-K^ NTATCATQRLANFLVRSSNNLGPVLPPT NVGSNTY 例示性PYY庠5 及級合物 329 PYYvl 肽YY(PYY)變異體i : YPIKPEAPGEDASPEELNRYYASLRHYL 155490.doc .168.
s 201138808
SEQ 丨琢 作' ‘'蠢 1 '' i 描述 ~~ 々 5 v-〆:、： \ 序列 、- .1 . 化） NLVTRQRY 408 ΡΥΥν2 狀ΥΥ(ΡΥΥ)變異縣2 · 人類ΡΥΥ3·36(具Wc端醯 胺化） IKPEAPGEDASPEELNRYYASLRHYLNL VTRQRY 409 PYYv3 肽YY(PYY)變異體3: 人類ΡΥΥΒ-36(具有C端 醯胺化） SPEELNRYYASLRHYLNLVTRQRY 410 PYYv4 肽ΥΥ(ΡΥΥ)變異體4: _ 人類ΡΥΥ21-36(具有C端 醯胺化） YASLRHYLNLVTRQRY 411 PYYv5 肽ΥΥ(ΡΥΥ)變異體5: __ 人類ΡΥΥ22_36(具有c端 醯胺化） ASLRHYLNLVTRQRY 412 ΡΥΥνθ 狀ΥΥ(ΡΥΥ)變異體6 : 人類ΡΥΥ24·36(具有c端 醯胺化） LRHYLNLVTRQRY 413 PYYv7 肽ΥΥ(ΡΥΥ)變異ΙΪ7 : 人類ΡΥΥ25·36(具有C端 醯胺化） RHYLNLVTRQRY 414 ΡΥΥνδ 肽ΥΥ(ΡΥΥ)變異體8 : 人類 PYYl3-36(L31)(具有 C 端醯胺化） SPEELNRYYASLRHYLNLLTRQRY 415 PYYv9 肽YY(PYY)變異體9 : 人類 PYY21-36(L3I)(具有 C 端醯胺化） YASLRHYLNLLTRQRY 416 PYYvlO 肽YY(PYY)變異體10 : 人類 PYY22-36(L31)(具有 C 端醯胺化） ASLRHYLNLLTRQRY 417 PYYvll 肽YY(PYY)變異體11 : 人類 PYY24-36(L31)(具有 C 端醯胺化） LRHYLNLLTRQRY 418 PYYvl2 肽ΥΎ(ΡΥΥ)變異體12 : 人類 PYY25-36(L31)(具有 C 端醯胺化） RHYLNLLTRQRY 330 PYYvl3 PYY變異體13 :狒狒 PYY(具有C端醯胺化） YPIKPEAPGEDASPEELSRYYASLRHYL NLVTRQRY 331 PYYvl4 PYY變異體14 :狗 ργγ(具有C端醯胺化） YPAKPEAPGEDASPEELSRYYASLRHYL NLVTRQRY 332 PYYvl5 PYY變異體15 :兔 ργγ(具有C端醯胺化） YPSKPEAPGEDASPEELNRYYASLRHYL NLVTRQRY 333 PYYvl6 PYY變異體16 :小鼠 YPAKPEAPGEDASPEELSRYYASLRHYL 155490.doc -169· 201138808 SEQ Π) NO: 序列 名稱 描述 序列 ΡΥΥ(具有C端酿胺化） NLVTRQRY 334 ΡΥΥνΠ ΡΥΥ變異體17 :小鼠 ΡΥΥ3-36(具有C端醢胺 化） AKPEAPGEDASPEELSRYYASLRHYLNL VTRQRY 335 PYYvl8 ΡΥΥ變異體18 :豬/狗/ 大鼠ΡΥΥ(具有C端醯胺 化） YPAKPEAPGEDASPEELSRYYASLRHYL NLVTRQRY 336 ΡΥΥν19 ΡΥΥ變異體19 :母牛 ΡΥΥ(具有C端醯胺化） YPAKPQAPGEHASPDELNRYYTSLRHYL NLVTRQRF 337 ΡΥΥν20 ΡΥΥ變異體20 :雞 ΡΥΥ(具有C端醢胺化） AYPPKPESPGDAASPEEIAQYFSALRHY INLVTRQRY 338 SABA1- ΡΥΥνΙ SABA1-PYY融合物變 異體1 : SABA1.6與 (ED)5連接子融合，與 PYYv2融合，具有C端 醯胺化 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY pisinyrteiekpsoIededededed|ikp EAPGEDASPEELNRYYASLRHYLNLVTR QRY 339 SABA1- ΡΥΥν2 SABA1-PYY融合物變 異體2 : SABA1.7與 (ED)5連接子融合，與 PYYv2融合，具有C端 醯胺化 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY PISINYRTEIEDEDEDEDEDIKPEAPGE DASPEELNRYYASLRHYLNLVTRQRY 340 SABA1- ΡΥΥν3 SABA1-PYY融合物變 異體3 : SABA1.6與 G(GS)4連接子融合，與 PYYv2融合，具有C端 醯胺化 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY PISINYRTEIEKPSOGGSGSGSGSIKPE APGEDASPEELNRYYASLRHYLNLVTRQ RY 341 SABA1- ΡΥΥν4 SABA1-PYY融合物變 異體4 : SABA1.7與 G(GS)4連接子融合，與 PYYv2融合，具有C端 醯胺化 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY PISINYRTEIJGGSGSGSGSIKPEAPGED ASPEELNRYYASLRHYLNLVTRQRY 342 SABA1- ΡΥΥν5 SABA1-PYY融合物變 異體5 : SABA1.6-Cys-XrPYYv2，具有C端醯 胺化，其中X〗為順丁烯 二醯亞胺-PEG20 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY PISINYRTEIEKPSO0-Xi-IKPEAPGE DASPEELNRYYASLRHYLNLVTRQRY 343 SABA1- ΡΥΥνό SABA1-PYY融合物變 異體6 : SABA1.7-(ED)5G-Cys-Xr PYYv2，具有C端醖胺 化，其中X〗為順丁烯二 醯亞胺-PEG20 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY PISINYRTIIEDEDEDEDEDGC-XrlK PEAPGEDASPEELNRYYASLRHYLNLVT RQRY 155490.doc -170·
s 201138808
SEQ ''ID* NO: 取.序⑽τ * 序列 . ? 、 - 344 SABA1- PYYv7 SABAl-PYY融合物變 異體7 : SABA1.7-(ED)5G-Cys-Xr ΡΥΥνΠ ’具端醯胺 化，其中Χι為順丁烯二 醯亞胺-PEG20 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY PISINYRT^IEDEDEDEDEDGC-XrAK PEAPGEDASPEELSRYYASLRHYLNLVT RQRY ,喊，Ί ^ v/'； ..s Λ p “例布性PP序歹*· 展敏备物 345 PPvl 胰多肽(PP)變異體1:人 類/猴子PP(具有C端醯胺 化） APLEPVYPGDNATPEQMAQYAADLRRYI NMLTRPRY 346 PPv2 PP變異體2 :公牛PP(具 有C端醢胺化） APLEPEYPGDNATPEQMAQYAAELRRY工 NMLTRPRY 347 PPv3 PP變異體3 :豬/狗PP(具 有C端醯胺化） APLEPVYPGDDATPEQMAQYAAELRRYI NMLTRPRY 348 PPv4 PP變異體4 :綿羊PP(真 有C端醯胺化） ASLEPEYPGDNATPEQMAQYAAELRRYI NMLTRPRY 349 PPv5 PP變異體5 :馬/斑馬 PP(具有C端醯胺化） APMEPVYPGDNATPEQMAQYAAELRRYI NMLTRPRY 350 PPv6 PP變異體6 :貓/御子/老 虎/豹/獵豹/貘PP(具有C 端酿胺化） APLEPVYPGDNATPEQMAQYAAELRRYI NMLTRPRY 351 PPv7 PP變異體7 :犀牛PP(具 有C端醯胺化） SPLEPVYPGDNATPEQMAQYAAELRRYI NMLTRPRY 352 PPv8 PP變異體8 :天竺鼠 PP(具有C端醯胺化） APLEPVYPGDDATPQQMAQYAAEMRRYI NMLTRPRY 353 PPv9 PP變異體9 :小鼠PP(具 有C端醯胺化） APLEPMYPGDYATPEQMAQYETQLRRYI NTLTRPRY 354 PPvlO PP變異體10 :大鼠 PP(具有C端醯胺化） APLEPMYPGDYATHEQRAQYETQLRRYI NTLTRPRY 355 PPvll PP變異體11 :栗鼠 PP(具有C端醯胺化） APLEPVYPGDNATPEQMAQYAAELRRYI NMLTRPRY 356 PPvl 2 PP變異體12 :兔PP(具 有C端醯胺化） APPEPVYPGDDATPEQMAEYVADLRRYI NMLTRPRY 357 PPvl 3 PP變異體13 :刺蜎 PP(具有c端醯胺化） VPLEPVYPGDNATPEQMAQYAAELRRYI NMLTRPRY 358 SABA1- PPvl SABA1-PP融合物變異 體1 : SABA1.6 與(ED)5 連接子融合，與PPvl融 合，具有C端酿胺化 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY PISINYRTEIEKPSOlEDEDEDEDEDAPL E P V Y PG DNAT PEQMAQ YAADLRR YINML TRPRY 359 SABA1- PPv2 SABA1-PP融合物變異 體2 : SABA1.7與(ED)5 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ 155490.doc -171 . 201138808
SEQ ID NO: 序列 名稱 描述 序列 連接子融合，與PPvl融 合，具有C端醯胺化 TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY PISINYRTEllEDEDEDEDEDAPLEPVYP GDNATPEQMAQYAADLRRYINMLTRPRY 360 SABA1- PPv3 SABA1-PP融合物變異 體3 : SABA1.6與G(GS)4 連接子融合，與PPvl融 合，具有C端醯胺化 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY PISINYRTEIEKPSOGGSGSGSGSAPLE PVYPGDNATPEQMAQYAADLRRYINMLT RPRY 361 SABA1- PPv4 SABA1-PP融合物變異 體4 : SABA1.7與G(GS)4 連接子融合，與PPvl融 合，具有C端醯胺化 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY PISINYRT^ljGGSGSGSGSAPLEPVYPG DNATPEQMAQYAADLRRYINMLTRPRY 362 SABA1- PPv5 SABA1-PP融合物變異 體5 : SABA1.6-Cys-Xr PPvl，具有C端醯胺 化，其中X!為順丁烯二 醯亞胺-PEG20 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY PISINYRTEIEKPSOlcl-Xi-APLEPVYP GDNATPEQMAQYAADLRRYINMLTRPRY 363 SABA1- PPv6 SABA1-PP融合物變異 體6 : SABA1.7-(ED)5G-Cys-X丨-PPvl，具有C端 醯胺化，其中Xi為順丁 烯二醯亞胺-PEG20 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY PISINYRTEIEDEDEDEDEDGC-Xi-AP LEPVYPGDNATPEQMAQYAADLRRYINM LTRPRY 364 SABA1- PPv7 SABA1-PP融合物變異 體7 : SABA1.7-(ED)5G-Cys-XpPPvS，具有 C端 醯胺化，其中Xi為順丁 烯二醯亞胺-PEG20 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY PISINYRT^JEDEDEDEDEDGC-XrAP LEPMYPGDYATPEQMAQYETQLRRYINT LTRPRY 例示性骨鈣素序列及融合物 365 OCNvl 骨鈣素(OCN)變異體1 : 人類OCN YLYQWLGAPVPYPDPLEPRREVCELNPD CDELADHIGFQEAYRRFYGPV 366 OCNv2 OCN變異體2 :人類 G316A YLYQWLGAPVPYPDPLEPRREVCELNPD CDKLADHIGFQEAYRRFYGPV 367 OCNv3 OCN變異體3 :人類 G353A YLYQWLGAPVPYPDPLEPRREVCELNPD CDELADHIGFQEAYQRFYGPV 368 OCNv4 OCN變異體4 :黑猩猩 YLYQWLGAPVPYPDTLEPRREVCELNPD CDELADHIGFQEAYRRFYGPV 369 OCNv5 OCN變異體5 :恆河猴 YLYQWLGAPAPYPDPLEPKREVCELNPD CDELADHIGFQEAYRRFYGPV 370 OCNv6 OCN變異體6 :牛 YLDHWLGAPAPYPDPLEPKREVCELNPD CDELADHIGFQEAYRRFYGPV 371 OCNv7 OCN變異體7 :狗 YLDSGLGAPVPYPDPLEPKREVCELNPN CDELADHIGFQEAYQRFYGPV 372 OCNv8 OCN變異體8 :豬 YLDHGLGAPAPYPDPLEPRREVCELNPD 155490.doc -172-
s 201138808
SEQ ID NO: |濟名满+ ' ' Ψ •嘴 ψ'· . 序列 CDELADHIGFQEAYRRFYGIA 373 OCNv9 OCN變異體9 :綿羊 YLDPGLGAPAPYPDPLEPRREVCELNPD CDELADHIGFQEAYRRFYGPV 374 OCNvlO OCN變異體10 :兔 QLIDGQGAPAPYPDPLEPKREVCELNPD CDELADQVGLQDAYQRFYGPV 375 OCNvll OCN變異體11 :小鼠 YLGASVPSPDPLEPTREQCELNPACDEL S DQYGLKTAYKRIYGITI 376 OCNvl2 OCN變異體12 :大鼠 YLNNGLGAPAPYPDPLEPHREVCELNPN CDELADHIGFQDAYKRIYGTTV 377 OCNvl3 OCN變異體13 :雞 HYAQDSGVAGAPPNPLEAQREVCELSPD CDELADQIGFQEAYRRFYGPV 378 OCNvl4 OCN變異體14 :爪蟾 SYGNNVGQGAAVGSPLESQREVCELNPD CDELADHIGFQEAYRRFYGPV 379 SABA1- OCNvl SABA1-OCN融合物變 異體1 : SABA1.5與 (ED)5連接子融合，與 OCNvl融合 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY PISINYRTEEDEDEDEDED|YLYQWLGAP VPYPDPLEPRREVCELNPDCDELADHIG FQEAYRRFYGPV 380 SABA1- OCNv2 SABA1-OCN融合物變 異體2 : SABA1.5與 (GGGGS)3連接子融合， 與OCNvl融合 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY PISINYRTEGGGGSGGGGSGGGGSYLYQ WLGAPVPYPDPLEPRREVCELNPDCDEL ADHIGFQEAYRRFYGPV 381 SABA1- OCNv3 SABA1-OCN融合物變 異體3 : SABA1.6-Cys-Xi-OCNvl，其中X丨為 順丁烯二醯亞胺-PEG20 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY PISINYRTEIEKPSOld-XrYLYOWLGA PVPYPDPLEPRREVCELNPDCDELADHI GFQEAYRRFYGPV 382 SABA1- OCNv4 SABA1-OCN融合物變 異體4 : SABA1.5與 (ED)5連接子融合，與 OCNv2融合 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY PISINYRTE|EDEDEDEDEDlYLYQWLGAP VPYPDPLEPRREVCELNPDCDKLADHIG FQEAYRRFYGPV 383 SABA1- OCNv5 SABA1-OCN融合物變 異體5 : SABA1.5與 (GGGGS)3連接子融合， 與OCNv2融合 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY PISINYRTE GGGGSGGGGSGGGGS YLYQ WLGAPVPYPDPLEPRREVCELNPDCDKL ADHIGFQEAYRRFYGPV 384 SABA1- OCNv6 SABA1-OCN融合物變 異體6 : SABA1.6-Cys-Xi-OCNv2，其中又丨為 順丁烯二醯亞胺-PEG20 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY PISINYRTEIEKPSOlcl-Xi-YLYOWLGA PVPYPDPLEPRREVCELNPDCDKLADHI 155490.doc -173· 201138808 SEQ ID NO: 序列 名稱 描述 序列 GFQEAYRRFYGPV 385 SABA1- OCNv7 SABA1-OCN融合物變 異體7 : SABA1.5與 (ED)5連接子融合，與 OCNv3融合 MGVSDVPRD EQNSYYRIT TTATISGLK PISINYRTE VPYPDPLEP FQEAYQRFY LEVVAATPTSLLISWHSYY YGETGGNSPVQEFTVPYSQ PGVDYTITVYAVYGSKYYY EDEDEDEDEDYLYQWLGAP RREVCELNPDCDELADHIG GPV 386 SABA1- OCNv8 SABA1-OCN融合物變 異體8 : SABA1.5與 (GGGGS)3連接子融合， 與OCNv3融合 MGVSDVPRD EQNSYYRIT TTATISGLK PISINYRTE WLGAPVPYP ADHIGFQEA LEVVAATPTSLLISWHSYY YGETGGNSPVQEFTVPYSQ PGVDYTITVYAVYGSKYYY GGGGSGGGGSGGGGSYLYQ DPLEPRREVCELNPDCDEL YQRFYGPV 387 SABA1- OCNv9 SABA1-OCN融合物變 異體9 : SABA1.6-Cys-Xr〇CNv3，其中又!為 順丁烯二醯亞胺-PEG20 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY PISINYRTEIEKPSOO-XrYLYOWLGA PVPYPDPLEPRREVCELNPDCDELADHI GFQEAYQRFYGPV 388 OCN- SABAlvl OCN-SABA1融合物變 異體1 : OCNvl 與(ED)5 連接子融合，與 SABA1.4融合，可具有 視情況存在之N端甲硫 胺酸 YLYQWLGAPVPYPDPLEPRREVCELNPD CDELADHIGFQEAYRRFYGPVEDEDEDE DEDlGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHS YYEQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPY SQTTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKY YYPISINYRTE 389 OCN- SABAlv2 OCN-SABA1融合物變 異體2 : OCNvl與 (GGGGs)3連接子融合， 與SABA1.4融合，可具 有視情況存在之N端甲 硫胺酸 YLYQWLGAPVPYPDPLEPRREVCELNPD CDELADHIGFQEAYRRFYGPV|GGGGSGG| |GGSGGGGS|GVSDVPRDLEVVAATPTSLL ISWHSYYEQNSYYRITYGETGGNSPVQE FTVPYSQTTATISGLKPGVDYTITVYAV YGSKYYYPISINYRTE 390 OCN- SABAlv3 OCN-SABA1融合物變 異體3:00^1-氏0^3-Cys-XrSABAl.4，其中 Χι為順丁烯二醯亞胺-PEG20，可具有視情況 存在之N端甲硫胺酸 YLYQWLGAPVPYPDPLEPRREVCELNPD CDELADHIGFQEAYRRFYGPVEDEDEDE丨 |DEDGC|-Xi-GVS DVPRDLEVVAAT PT SL LISWHSYYEQNSYYRITYGETGGNSPVQ EFTVPYSQTTATISGLKPGVDYTITVYA VYGSKYYYPISINYRTg 391 OCN- SABAlv4 OCN-SABA1融合物變 異體4 : OCNv2與(ED)5 連接子融合，與 SABA1.4融合，可具有 視情況存在之N端甲硫 胺酸 YLYQWLGAPVPYPDPLEPRREVCELNPD CDKLADHIGFQEAYRRFYGPV|EDEDEDE| iDEDlGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHS YYEQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPY SQTTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKY YYPISINYRT^ 392 OCN- SABAlv5 OCN-SABA1融合物變 異體5 : 〇CNv2與 YLYQWLGAPVPYPDPLEPRREVCELNPD CDKLADHIGFQEAYRRFYGPV|GGGGSGG| 155490.doc •174·
S 201138808
_Q ID NO: 序列:.· > 名稱?' 4 iu.、續 々* -二，Ί .—卜.\ ·*' ^ Φ： -.4· .吒.i ; 序列 (GGGGs)3連接子融合， 與SABA1.4融合，可具 有視情況存在之N端甲 硫胺酸 GGSGGGGSGVSDVPRDLEVVAATPTSLL ISWHSYYEQNSYYRITYGETGGNSPVQE FTVPYSQTTATISGLKPGVDYTITVYAV YGSKYYYPISINYRTg 393 OCN- SABAlv6 OCN-SABA1融合物變 異體6 : OCNv2<ED)5G-Cys-Xi-SABAl.4 .，其中 Χι為順丁烯二醯亞胺-PEG20，可具有視情況 存在之N端曱硫胺酸 YLYQWLGAPVPYPDPLEPRREVCELNPD CDKLADHIGFQEAYRRFYGPVEDEDEDE DEDGC-Xi-GVSDVPRDLEVVAATPTSL LISWHSYYEQNSYYRITYGETGGNSPVQ EFTVPYSQTTATISGLKPGVDYTITVYA VYGSKYYYPISINYRTE 394 OCN- SABAlv7 OCN-SABA1融合物變 異體7 : OCNv3 與(ED)5 連接子融合，與 SABA1.4融合，可具有 視情況存在之N端甲硫 胺酸 YLYQWLGAPVPYPDPLEPRREVCELNPD C DELADHIGFQEAYQRFYG PV|E DE DE DE| |DED|GVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHS YYEQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPY SQTTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKY YYPISINYRTE 395 OCN- SABAlv8 OCN-SABA1融合物變 異體8 : OCNv3與 (GGGGs)3連接子融合， 與SABA1.4融合，可具 有視情況存在之N端曱 硫胺酸 YLYQWLGAPVPYPDPLEPRREVCELNPD CDELADHIGFQEAYQRFYGPV)GGGGSGG| |GGSGGGGS|GVSDVPRDLEVVAATPTSLL 工SWHSYYEQNSYYRITYGETGGNSPVQE FTVPYSQTTATISGLKPGVDYTITVYAV YGSKYYYPISINYRT星 396 OCN- SABAlv9 OCN-SABA1融合物變 異體9 : OCNv3-(ED)5G-Cys-Xi-SABAl.4，其中 Χι為順丁烯二醯亞胺-PEG20，可具有視情況 存在之N端曱硫胺酸 YLYQWLGAPVPYPDPLEPRREVCELNPD C DKLADHIG FQEAYRRF YG P V]E DE DE DE| |DEDGC|-Xi-GVSDVPRDLEVVAATPTSL LISWHSYYEQNSYYRITYGETGGNSPVQ EFTVPYSQTTATISGLKPGVDYTITVYA VYGSKYYY PISINYRTE . *甚 i*舍1焉性農柏林患列及敎合物 419 APLVvl 愛帕林(APLN)變異體1 MNLRLCVQALLLLWLSLTAVCGGSLMPL PDGNGLEDGNVRHLVQPRGSRNGPGPWQ GGRRKFRRQRPRLSHKGPMPF 420 APLNv2 APLN變異體2 :對應於 APLNvl 之殘基 42-77 LVQPRGSRNGPGPWQGGRRKFRRQRPRL SHKGPMPF 421 APLNv3 APLN變異體3 :對應於 APLNvl 之殘基 61-77 KFRRQRPRLSHKGPMPF 422 APLNv4 APLN變異體4 :對應於 APLNvl 之殘基 65-77 QRPRLSHKGPMPF 423 APLNv5 APLN變異體5 :對應於 APLNvl 之殘基 66-77 RPRLSHKGPMPF 424 SABA1- APLNvl SABA1-APLN融合物變 異體1 : SABA1.7與 (ED)5連接子融合，與 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY 155490.doc •175- 201138808
SEQ ID NO: 序列 名稱 描述 序列 APLNv4融合 PISINYRTEIEDEDEDEDEDlQRPRLSHK GPMPF 425 SABA1- APLNv2 SABA1-APLN融合物變 異體2 : SABA1.6與 6XHis及(GS)7連接子融 合，與APLNv4融合 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY PISINYRTEIDKPSOHHHHHHGSGSGSG SGSGSGSQRPRLSHKGPMPF 426 SABA1- APLNv3 SABA1-APLN融合物變 異體3 : SABA1.6與 (GS)7連接子融合，與 APLNv4融合 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY PISINYRTEIDKPSOGSGSGSGSGSGSG [sIqrprlshkgpmpf 427 SABA1- APLNv4 SABA1-APLN融合物變 異體4 : SABA1.6與 6XHis及(GS)7連接子融 合，與APLNv2融合 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY PISINYRTEIDKPSOHHHHHHGSGSGSGl ISGSGSGSLVQPRGSRNGPGPWQGGRRKF RRQRPRLSHKGPMPF 428 SABA1- APLNv5 SABA1-APLN融合物變 異體5 : SABA1.6與 (GS)7連接子融合，與 APLNv2融合 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYY EQNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQ TTATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYY PISINYRTEIDKPS〇lGSGSGSGSGSGSG| 回LVQPRGSRNGPGPWQGGRRKFRRQRPR LSHKGPMPF 429 APLN- SABAlvl APLN-SABA1融合物變 異體1 : APLNv4與(GS)7 連接子融合，與 SABA1.4融合，可具有 視情況存在之N端曱硫 胺酸 QRPRLSHKGPMPFlGSGSGSGSGSGSGS|G VSDVPRDLEVVAATPTSLLISWHSYYEQ NSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQTT ATISGLKPGVDYTITVYAVYGSKYYYPI SINYRT星 430 APLN- SABAlv2 APLN-SABA1融合物變 異體2 : APLNv2與(GS)7 連接子融合，與 SABA1.4融合，可具有 視情況存在之N端曱硫 胺酸 LVQPRGSRNGPGPWQGGRRKFRRQRPRL SHKGPMPF|GSGSGSGSGSGSGSGVSDVP RDLEVVAATPTSLLISWHSYYEQNSYYR 工TYGETGGNSPVQEFTVPYSQTTATISG LKPGVDYTITVYAVYGSKYYYPISINYR TE
155490.doc •176-
S 201138808 表3.某些例示性梭酸序列（SEQ ID NO: 176-214及397-407)。
SEQ ID NO: r.. ϊ « ^ 列… , A …： 、： 176 299 SABA1- FGF21v2 atgggtgtttctgatgttccgcgtgatctggaagttgttgcagcaaccccgacc agcctgctgattagctggcatagctattatgaacagaatagctattatcgcatt acctatggtgaaaccggtggtaattctccggttcaggaatttaccgttccgtat agccagaccaccgcaaccattagcggtctgaaaccgggtgttgattataccatt accgtgtatgcagtgtatggcagcaaatattattatccgattagcattaattat cgcaccgaaattgataaaccgagccagcataatcatcaccatcatggtagcggt agcggttcaggtagcggttctggttctggtagccatccgattccggatagctct ccgctgctgcagtttggtggtcaggttcgtcagcgttatctgtataccgatgat gcacagcagaccgaagcacatctggaaattcgtgaagatggcaccgttggtggt gcagcagatcagtctccggaaagcctgctgcagctgaaagcactgaagccaggt gttattcagattctgggtgttaaaaccagccgttttctgtgtcagcgtccggat ggtgcactgtatggtagcctgcattttgatccggaagcatgcagctttcgtgaa ctgctgctggaagatggctataatgtgtatcagagcgaagcacatggtctgccg ctgcatttacctggtaataaatctccgcatcgtgatccggcaccgcgtggtccg gcacgtttcctgcctctgcctggtctgcctccggcactgccagaacctccgggt attctggcaccgcagcctccggatgttggtagcagcgatccgctgtctatggtt qgtccgagccaqggtcgtaqcccgaqctatqca 177 299 SABA1- FGF21v3 atgggtgtttctgatgttccgcgtgatctggaagttgttgcagcaaccccgacc agcctgctgattagctggcatagctattatgaacagaatagctattatcgcatt acctatggtgaaaccggtggtaattctccggttcaggaatttaccgttccgtat agccagaccaccgcaaccattagcggtctgaaaccgggtgttgattataccatt accgtgtatgcagtgtatggcagcaaatattattatccgattagcattaattat cgcaccgaaattgataaaccgagccagcatcatcatcaccatcatggtagcggt agcggttcaggtagcggttctggttctggtagcccgattccggatagctctccg ctgctgcagtttggtggtcaggttcgtcagcgttatctgtataccgatgatgca cagcagaccgaagcacatctggaaattcgtgaagatggcaccgttggtggtgca gcagatcagtctccggaaagcctgctgcagctgaaagcactgaagccaggtgtt attcagattctgggtgttaaaaccagccgttttctgtgtcagcgtccggatggt gcactgtatggtagcctgcattttgatccggaagcatgcagctttcgtgaactg ctgctggaagatggctataatgtgtatcagagcgaagcacatggtctgccgctg catttacctggtaataaatctccgcatcgtgatccggcaccgcgtggtccggca cgtttcctgcctctgcctggtctgcctccggcactgccagaacctccgggtatt ctggcaccgcagcctccggatgttggtagcagcgatccgctgtctatggttggt ccqaqccaqgqtcgtaqcccqagctatqcaagc 178 299 SABA1- FGF21v4 atgggtgtttctgatgttccgcgtgatctggaagttgttgcagcaaccccgacc agcctgctgattagctggcatagctattatgaacagaatagctattatcgcatt acctatggtgaaaccggtggtaattctccggttcaggaatttaccgttccgtat agccagaccaccgcaaccattagcggtctgaaaccgggtgttgattataccatt accgtgtatgcagtgtatggcagcaaatattattatccgattagcattaattat cgcaccgaaattgataaaccgagcggtggtagcggtagcggttcaggtagcggt tctggttctggtagcccgattccggatagctctccgctgctgcagtttggtggt caggttcgtcagcgttatctgtataccgatgatgcacagcagaccgaagcacat ctggaaattcgtgaagatggcaccgttggtggtgcagcagatcagtctccggaa agcctgctgcagctgaaagcactgaagccaggtgttattcagattctgggtgtt aaaaccagccgttttctgtgtcagcgtccggatggtgcactgtatggtagcctg cattttgatccggaagcatgcagctttcgtgaactgctgctggaagatggctat aatgtgtatcagagcgaagcacatggtctgccgctgcatttacctggtaataaa tctccgcatcgtgatccggcaccgcgtggtccggcacgtttcctgcctctgcct ggtctgcctccggcactgccagaacctccgggtattctggcaccgcagcctccg gatgttggtagcagcgatccgctgtctatggttggtccgagccagggtcgtagc ccqagctatgcaagccatcatcatcaccatcat -177- 155490.doc 201138808 SEQ ID NO: aa長度 序列名稱 DN尤字列 A:、 · ..:: . .':l· .. 179 299 SABA1- FGF21v5 atgggtgtttctgatgttccgcgtgatctggaagttgttgcagcaaccccgacc agcctgctgattagctggcatagctattatgaacagaatagctattatcgcatt acctatggtgaaaccggtggtaattctccggttcaggaatttaccgttccgtat agccagaccaccgcaaccattagcggtctgaaaccgggtgttgattataccatt accgtgtatgcagtgtatggcagcaaatattattatccgattagcattaattat cgcaccgaaattgataaaccgagcggtggtagcggtagcggttcaggtagcggt tctggttctggtagccatccgattccggatagctctccgctgctgcagtttggt ggtcaggttcgtcagcgttatctgtataccgatgatgcacagcagaccgaagca catctggaaattcgtgaagatggcaccgttggtggtgcagcagatcagtctccg gaaagcctgctgcagctgaaagcactgaagccaggtgttattcagattctgggt gttaaaaccagccgttttctgtgtcagcgtccggatggtgcactgtatggtagc ctgcattttgatccggaagcatgcagctttcgtgaactgctgctggaagatggc tataatgtgtatcagagcgaagcacatggtctgccgctgcatttacctggtaat aaatctccgcatcgtgatccggcaccgcgtggtccggcacgtttcctgcctctg cctggtctgcctccggcactgccagaacctccgggtattctggcaccgcagcct ccggatgttggtagcagcgatccgctgtctatggttggtccgagccagggtcgt agcccgagctatgcacatcatcatcaccatcat 180 300 FGF21- SABAlvl atgccgattccggatagctctccgctgctgcagtttggtggtcaggttcgtcag 1 cgttatctgtataccgatgatgcacagcagaccgaagcacatctggaaattcgt gaagatggcaccgttggtggtgcagcagatcagtctccggaaagcctgctgcag ctgaaagcactgaaaccgggtgttattcagattctgggtgttaaaaccagccgt tttctgtgtcagcgtccggatggtgcactgtatggtagcctgcattttgatccg gaagcatgcagctttcgtgaactgctgctggaagatggctataatgtgtatcag agcgaagcacatggtctgccgctgcatctgcctggtaataaatctccgcatcgt gatccggcaccgcgtggtccggcacgtttcctgccgctgcctggtctgcctccg gcactgccagaacctccgggtattctggcaccgcagcctccggatgttggtagc agcgatccgctgtctatggttggtccgagccagggtcgtagcccgagctatgca agcggtggtagcggtagcggttctggtagcggttcaggttctggttctggtgtt tctgatgttccgcgtgatctggaagttgttgcagcaaccccgaccagcctgctg attagctggcatagctattatgaacagaatagctattatcgcattacctatggt gaaaccggtggtaattctccggttcaggaatttaccgttccgtatagccagacc accgcaaccattagcggtctgaagcctggtgtggattataccattaccgtgtat gcagtttatggcagcaaatattattatccgattagcattaattatcgcaccgaa attgataaaccgagccagcatcatcatcaccatcat 181 303 SABA5- FGF21 atgggtgtttctgatgttccgcgtgatctggaagttgttgcagcaaccccgacc agcctgctgattagctgggaagatgatagctattatagccgctattatcgcatt acctatggtgaaaccggtggtaattctccggttcaggaatttaccgttccgagc gatctgtataccgcaaccattagcggtctgaaaccgggtgttgactataccatt 1 accgtttatgccgttacctatgacgttaccgatctgattatgcatgaaccgatc agcattaattatcgcaccgagattgataaaccgagcggtggtagcggtagcggt tctggtagcggttcaggttcaggtagcccgattccggatagctctccgctgctg cagtttggtggtcaggttcgtcagcgttatctgtatactgatgatgcacagcag accgaagcacatctggaaattcgtgaagatggcaccgttggtggtgcagcagat cagtctccggaaagcctgctgcagctgaaagcactgaaacctggtgttattcag attctgggtgttaaaaccagccgttttctgtgtcagcgtccggatggtgcactg tatggtagcctgcattttgatccggaagcatgcagctttcgtgaactgctgctg gaagatggctataatgtgtatcagagcgaagcacatggtctgccgctgcatctg cctggtaataaatctccgcatcgtgatccggoaccgcgtggtccggcacgtttt ctgccgctgcctggtctgcctccggcactgcctgaaccgcctggtattctggca ccgcagcctccggatgttggtagcagcgatccgctgtctatggttggtccgagc cagggtcgtagcccgagctatgcaagccatcatcatcatcaccattga 182 184 FGF21v5 atgcateatcatcatcaecatgatagctctccgctgetgcagtttggtggtcag gttcgtcagcgttatctgtataccgatgatgcacagcagaccgaagcacatctg 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S 201138808
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SEQ ID NO: 浊長度ί 序列名稱： 、讀人〉 ' ii ^ DNA序列 、孓、、、 .. 、 catctggaaattcgtgaagatggcaccgttggtggtgcagcagatcagagtccg gaaagcctgctgcagctgaaagcactgaaacctggtgttattcagattctgggt gttaaaaccagccgttttctgtgtcagcgtccggatggtgcactgtatggtagc ctgcattttgatccggaagcatgtagctttcgtgaactgctgctggaagatggt tataatgtttatcagagcgaagctcatggtctgccgctgcatctgcctggtaat aaaagtccgcatcgtgatccggcaccgcgtggtccggcacgttttctgcctctg cctggtttacctccggcactgcctgaaccgcctggtattctggcaccgcagcct ccggatgttggtagcagcgatccgctgagcatggttggtccgagccagggtcgt agcccgagctatgcaagctga 211 294 SABA1- FGF21v35 atgggcgttagtgatgttccgcgtgatctggaagttgttgcagcaaccccgacc agcctgctgattagctggcatagctattatgaacagaatagctattatcgcatt acctatggtgaaaccggtggtaatagtccggttcaggaatttaccgttccgtat agccagaccaccgcaaccattagcggtctgaaaccgggtgttgattataccatt accgtttatgcggtgtatggcagcaaatattattatccgattagcatcaattat cgcaccgaaatcgaaaaaccgagccaaggtagccctggtagtccgggttcaccg ggttctccgggtagccctccgattccggatagcagtccgctgctgcagtttggt ggtcaggttcgtcagcgttatctgtataccgatgatgcacagcagaccgaagca catctggaaattcgtgaagatggcaccgttggtggtgcagcagatcagagtccg ' gaaagcctgctgcagctgaaagcactgaaacctggtgttattcagattctgggt gttaaaaccagccgttttctgtgtcagcgtccggatggtgcactgtatggtagc ctgcattttgatccggaagcatgtagctttcgtgaactgctgctggaagatggt tataatgtttatcagagcgaagctcatggtctgccgctgcatctgcctggtaat aaaagtccgcatcgtgatccggcaccgcgtggtccggcacgttttctgcctctg cctggtttacctccggcactgcctgaaccgcctggtattctggcaccgcagcct ccggatgttggtagcagcgatccgctgagcatggttggtccgagccagggtcgt agcccgagctatgcaagctga 212 293 SABA1- FGF21v36 atgggcgttagtgatgttccgcgtgatctggaagttgttgcagcaaccccgacc agcctgctgattagctggcatagctattatgaacagaatagctattatcgcatt acctatggtgaaaccggtggtaatagtccggttcaggaatttaccgttccgtat agccagaccaccgcaaccattagcggtctgaaaccgggtgttgattataccatt accgtttatgcggtgtatggcagcaaatattattatccgattagcatcaattat cgcaccgaaatcgaaaaaccgagccaaggtagcaccgttgcagcaccgagcacc gtggcagcccctagcccgattccggatagcagtccgctgctgcagtttggtggt caggttcgtcagcgttatctgtataccgatgatgcacagcagaccgaagcacat ctggaaattcgtgaagatggcaccgttggtggtgcagcagatcagagtccggaa agcctgctgcagctgaaagcactgaaacctggtgttattcagattctgggtgtt aaaaccagccgttttctgtgtcagcgtccggatggtgcactgtatggtagcctg cattttgatccggaagcatgtagctttcgtgaactgctgctggaagatggttat aatgtttatcagagcgaagctcatggtctgccgctgcatctgcctggtaataaa agtccgcatcgtgatccggcaccgcgtggtccggcacgttttctgcctctgcct ggtttacctccggcactgcctgaaccgcctggtattctggcaccgcagcctccg gatgttggtagcagcgatccgctgagcatggttggtccgagccagggtcgtagc ccgagctatgcaagctga 213 287 SABA1- FGF21v37 atgggcgttagtgatgttccgcgtgatctggaagttgttgcagcaaccccgacc agcctgctgattagctggcatagctattatgaacagaatagctattatcgcatt acctatggtgaaaccggtggtaatagtccggttcaggaatttaccgttccgtat agccagaccaccgcaaccattagcggtctgaaaccgggtgttgattataccatt accgtttatgcggtgtatggcagcaaatattattatccgattagcatcaattat cgcaccgaaatcgaaaaaccgagccaaggtggtagcgaaggtggtagtgaaccg attccggatagcagtccgctgctgcagtttggtggtcaggttcgtcagcgttat ctgtataccgatgatgcacagcagaccgaagcacatctggaaattcgtgaagat ggcaccgttggtggtgcagcagatcagagtccggaaagcctgctgcagctgaaa gcactgaaacctggtgttattcagattctgggtgttaaaaccagccgttttctg tgtcagcgtccggatggtgcactgtatggtagcctgcattttgatccggaagca tgtagctttcgtgaactgctgctggaagatggttataatgtttatcagagcgaa gctcatggtctgccgctgcatctgcctggtaataaaagtccgcatcgtgatccg gcaccgcgtggtccggcacgttttctgcctctgcctggtttacctccggcactg cctgaaccgcctggtattctggcaccgcagcctccggatgttggtagcagcgat ccgctgagcatggttggtccgagccagggtcgtagcccgagctatgcaagctga 155490.doc -187- 201138808 SEQ ID NO: aa長度 :：< ..：： 序列名稱 ,Λ· ·： 、 - 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SEQ m； NO: aa長座i % ' ^ 序列名稱 ^ s 、、x + S 、 * 、 ' v 二. £ |v 命 4 3 , . J 。 : : :义 叙 Ίκ 〜 cgtagcccgagctatgcgtaataa 401 293 SABA1- FGF21v6 Atgggtgtttctgatgttccgcgtgatctggaagttgttgcagcaaccccgacc agcctgctgattagctggcatagctattatgaacagaatagctattatcgcatt acctatggtgaaaccggtggtaattctccggttcaggaatttaccgttccgtat agccagaccaccgcaaccattagcggtctgaaaccgggtgttgattataccatt accgtgtatgcagtgtatggcagcaaatattattatccgattagcattaattat cgcaccgaaattgataaaccgagcggtggtagcggtagcggttcaggtagcggt tctggttctggtagcccgattccggatagctctccgctgctgcagtttggtggt caggttcgtcagcgttatctgtataccgatgatgcacagcagaccgaagcacat ctggaaattcgtgaagatggcaccgttggtggtgcagcagatcagtctccggaa agcctgctgcagctgaaagcactgaagccaggtgttattcagattctgggtgtt aaaaccagccgttttctgtgtcagcgtccggatggtgcactgtatggtagcctg cattttgatccggaagcatgcagctttcgtgaactctgctggaagatggctata atgtgtatcagagcgaagcacatggtctgccgctgcatttacctggtaataaat ctccgcatcgtgatccggcaccgcgtggtccggcacgtttcctgcctctgcctg gtctgcctccggcactgccagaacctccgggtattctggcaccgcagcctccgg atgttggtagcagcgatccgctgtctatggttggtccgagccagggtcgtagcc cgagctatgcaagctga 402 293 SABA1- FGF21v7 atgggtgtttctgatgttccgcgtgatctggaagttgttgcagcaaccccgacc agcctgctgattagctggcatagctattatgaacagaatagctattatcgcatt acctatggtgaaaccggtggtaattctccggttcaggaatttaccgttccgtat agccagaccaccgcaaccattagcggtctgaaaccgggtgttgattataccatt accgtgtatgcagtgtatggcagcaaatattattatccgattagcattaattat cgcaccgaaattgataaaccgagcggtggtagcggtagcggttcaggtagcggt tctggttctggtagccatccgattccggatagctctccgctgctgcagtttggt ggtcaggttcgtcagcgttatctgtataccgatgatgcacagcagaccgaagca catctggaaattcgtgaagatggcaccgttggtggtgcagcagatcagtctccg gaaagcctgctgcagctgaaagcactgaagccaggtgttattcagattctgggt gttaaaaccagccgttttctgtgtcagcgtccggatggtgcactgtatggtagc ctgcattttgatccggaagcatgcagctttcgtgaactgctgctggaagatggc tataatgtgtatcagagcgaagcacatggtctgccgctgcatttacctggtaat aaatctccgcatcgtgatccggcaccgcgtggtccggcacgtttcctgcctctg cctggtctgcctccggcactgccagaacctccgggtattctggcaccgcagcct ccggatgttggtagcagcgatccgctgtctatggttggtccgagccagggtcgt agcccgagctatgcatga 403 299 SABA1- FGF21v8 atgggtgtttctgatgttccgcgtgatctggaagttgttgcagcaaccccgacc agcctgctgattagctggcatagctattatgaacagaatagctattatcgcatt acctatggtgaaaccggtggtaattctccggttcaggaatttaccgttccgtat agccagaccaccgcaaccattagcggtctgaaaccgggtgttgattataccatt accgtgtatgcagtgtatggcagcaaatattattatccgattagcattaattat cgcaccgaaattgaaaaaccgagccagcatcatcatcaccatcatggtagcggt agcggttcaggtagcggttctggttctggtagcccgattccggatagctctccg ctgctgcagtttggtggtcaggttcgtcagcgttatctgtataccgatgatgca cagcagaccgaagcacatctggaaattcgtgaagatggcaccgttggtggtgca gcagatcagtctccggaaagcctgctgcagctgaaagcactgaagccaggtgtt attcagattctgggtgttaaaaccagccgttttctgtgtcagcgtccggatggt gcactgtatggtagcctgcattttgatccggaagcatgcagctttcgtgaactg ctgctggaagatggctataatgtgtatcagagcgaagcacatggtctgccgctg catttacctggtaataaatctccgcatcgtgatccggcaccgcgtggtccggca cgtttcctgcctctgcctggtctgcctccggcactgccagaacctccgggtatt ctggcaccgcagcctccggatgttggtagcagcgatccgctgtctatggttggt ccgagccagggtcgtagcccgagctatgcaagctga 404 300 FGF21- SABAlv2 atgccgattccggatagctctccgctgctgcagtttggtggtcaggttcgtcag cgttatctgtataccgatgatgcacagcagaccgaagcacatctggaaattcgt gaagatggcaccgttggtggtgcagcagatcagtctccggaaagcctgctgcag ctgaaagcactgaaaccgggtgttattcagattctgggtgttaaaaccagccgt tttctgtgtcagcgtccggatggtgcactgtatggtagcctgcattttgatccg gaagcatgcagctttcgtgaactgctgctggaagatggctataatgtgtatcag agcgaagcacatggtctgccgctgcatctgcctggtaataaatctccgcatcgt 155490.doc 189· 201138808 SEQ Π) NO: aa長度、； 序列名稱 列： - V :. gatccggcaccgcgtggtccggcacgtttcctgccgctgcctggtctgcctccg gcactgccagaacctccgggtattctggcaccgcagcctccggatgttggtagc agcgatccgctgtctatggttggtccgagccagggtcgtagcccgagctatgca agcggtggtagcggtagcggttctggtagcggttcaggttctggttctggtgtt tctgatgttccgcgtgatctggaagttgttgcagcaaccccgaccagcctgctg attagctggcatagctattatgaacagaatagctattatcgcattacctatggt gaaaccggtggtaattctccggttcaggaatttaccgttccgtatagccagacc accgcaaccattagcggtctgaagcctggtgtggattataccattaccgtgtat gcagtttatggcagcaaatattattatccgattagcattaattatcgcaccgaa attgaaaaaccgagccagcatcatcatcaccatcattga 405 294 FGF21- SABAlv3 atgccgattccggatagctctccgctgctgcagtttggtggtcaggttcgtcag cgttatctgtataccgatgatgcacagcagaccgaagcacatctggaaattcgt gaagatggcaccgttggtggtgcagcagatcagtctccggaaagcctgctgcag ctgaaagcactgaaaccgggtgttattcagattctgggtgttaaaaccagccgt tttctgtgtcagcgtccggatggtgcactgtatggtagcctgcattttgatccg gaagcatgcagctttcgtgaactgctgctggaagatggctataatgtgtatcag agcgaagcacatggtctgccgctgcatctgcctggtaataaatctccgcatcgt gatccggcaccgcgtggtccggcacgtttcctgccgctgcctggtctgcctccg gcactgccagaacctccgggtattctggcaccgcagcctccggatgttggtagc agcgatccgctgtctatggttggtccgagccagggtcgtagcccgagctatgca agcggtggtagcggtagcggttctggtagcggttcaggttctggttctggtgtt tctgatgttccgcgtgatctggaagttgttgcagcaaccccgaccagcctgctg attagctggcatagctattatgaacagaatagctattatcgcattacctatggt gaaaccggtggtaattctccggttcaggaatttaccgttccgtatagccagacc accgcaaccattagcggtctgaagcctggtgtggattataccattaccgtgtat gcagtttatggcagcaaatattattatccgattagcattaattatcgcaccgaa attgaaaaaccgagccagtga 406 186 FGF21v6 atgcatcatcatcaccatcatattccggatagctctccgctgctgcagtttggt ggtcaggttcgtcagcgttatctgtataccgatgatgcacagcagaccgaagca catctggaaattcgtgaagatggcaccgttggtggtgcagcagatcagtctccg gaaagcctgctgcagctgaaagcactgaaaccgggtgttattcagattctgggt gttaaaaccagccgttttctgtgtcagcgtccggatggtgcactgtatggtagc ctgcattttgatccggaagcatgtagctttcgtgaactgctgctggaagatggc tataatgtgtatcagagcgaagcacatggtctgccgctgcatctgcctggtaat aaatctccgcatcgtgatccggcaccgcgtggtccggcacgttttctgccactg cctggtctgcctccggcactgccagaaccgccgggtattctggcaccgcagccg ccggatgttggtagcagcgatccgctgagcatggttggtccgagccagggtcgt agcccgagctatgcaagc \ 407 181 FGF21v7 atgcatcatcatcaccatcatccgctgctgcagtttggtggtcaggttcgtcag cgttatctgtataccgatgatgcacagcagaccgaagcacatctggaaattcgt gaagatggcaccgttggtggtgcagcagatcagtctccggaaagcctgctgcag ctgaaagcactgaaaccgggtgttattcagattctgggtgttaaaaccagccgt tttctgtgtcagcgtccggatggtgcactgtatggtagcctgcattttgatccg gaagcatgtagctttcgtgaactgctgctggaagatggctataatgtgtatcag agcgaagcacatggtctgccgctgcatctgcctggtaataaatctccgcatcgt gatccggcaccgcgtggtccggcacgttttctgccactgcctggtctgcctccg gcactgccagaaccgccgggtattctggcaccgcagccgccggatgttggtagc agcgatccgctgagcatggttggtccgagccagggtcgtagcccgagctatgca age A. jk ^ Φ M ^Adnectins™(SABA) 實例Al·候選血清白蛋白結合AdnectinTM之篩選及選擇 概要 將稱為PROfusion之選擇技術（參見例如Roberts及 155490.doc •190-
201138808
Szostak, Proc Natl Acad Sci USA. 94(23):12297-302, 1997 及WO 2008/066752)應用於具有經設計成之BC、DE 及FG環的可變區之DNA文庫。自此設計形成超過i〇13個分 子之隨機文庫’且對HS A之生物素標記形式施加選擇壓力 以分離具有所需結合性質之候選血清白蛋白結合 AdnectinTM(SABA)。 高產量蛋白質產生(HTTP)方法 使用高產量蛋白質產生方法（HTPP)純化各種HSA結合 AdnectinsTM。將所選結合物選殖至含有HIS6標籤之pET9d 載體中且轉型至大腸桿菌BL21(DE3)pLysS細胞中。按24 孔格式將轉型細胞接種於5 ml含有50 pg/mL卡那黴素之LB 培養基中且在37°C下生長隔夜。藉由自隔夜培養物中吸出 200 μΐ且將其分配於適當孔中來製備新鮮5 ml LB培養基 (5 0 gg/mL卡那黴素）培養物以用於誘導型表現。使培養物 在37°C下生長直至A600 0.6-0.9。用1 mM異丙基-β-硫代半 乳糖苷（IPTG)誘導後，使培養物在3〇。(：下再生長4小時且 藉由在4°C下在322〇xg下離心1〇分鐘來收集。將細胞集結 粒冷凍於-80°C下。 藉由再懸浮於450 μΐ溶解緩衝液（50 mM NaH2P04、0.5 M NaCl、lxComplete™蛋白酶抑制劑混合物-無 EDTA(Roche)、1 mM PMSF、10 mM CHAPS、40 mM咪 唑、1 mg/ml溶菌酶、3〇 gg/ml DNA酶、2 pg/ml抑肽酶， pH 8.0)中來溶解細胞集結粒（24孔格式）且在室溫下振盪1 小時。使溶解物澄清且藉由轉移至裝備有96孔650 μΐ收集 155490.doc -191 - 201138808
盤之96孔Whatman GF/D Unifilter中來再置成96孔格式並 在20〇xg下離心5分鐘。將澄清之溶解物轉移至已用平衡緩 衝液（50 mM NaH2P04、0.5 M NaC卜 10 mM CHAPS、40 mM_e坐，pH 8.0)平衡之96孔Ni螯合培養板中且培育5分 鐘。移除未結合物質。用1號洗滌緩衝液（50 mM NaH2P04、0.5 M NaCH、5 mM CHAPS、40 mM咪唑，pH 8.0)以每孔2χ〇·3 ml洗滌樹脂。接著，用PBS以每孔3x〇.3 ml洗滌樹脂。在溶離之前，用50 μΐ溶離緩衝液（PBS +20 mM EDTA)洗滌各孔，培育5分鐘且利用真空丟棄此洗液。 藉由再向各孔施加100 μΐ溶離緩衝液來溶離蛋白質。在室 溫下培育30分鐘後，在20〇xg下離心培養板5分鐘且將溶離 之蛋白質收集於含有5 μΐ 0.5 M MgCl2且固定於Ni培養板 之底部的96孔收集盤中。使用BCA蛋白質檢定，用SGE(對 照AdnectinTM)作為蛋白質標準物來定量溶離之蛋白質。 SGE Adnectin為野生型 10Fn3 結構域（SEQ ID NO: 1)，其中 整合素結合域（位置78-80之胺基酸RGD)已經SGE置換。 HSA - RhSAAMuSAjL^M^ELISA 為了檢定HSA之直接結合物，在4°C下用含10 Kg/mL HSA(Sigma，St. Louis，MO)之 PBS 塗佈 MaxiSorpTM 培養板 (Nunc International, Rochester, NY)隔夜，隨後在室溫下在 酷·蛋白阻斷緩衝液（Thermo Scientific, Rockford, IL)中阻斷 1 -3小時。在單點篩選檢定中，用酪蛋白阻斷緩衝液按1:20 稀釋經純化之HTPP AdnectinsTM且在室溫下使其結合於各 孔中之HSA持續1小時。在劑量反應檢定中，使用範圍為 155490.doc -192- 201138808 0.1 nM至1 μΜ之濃度。在用PBST洗滌以移除未結合之 Adnectins™後，在室溫下將用酪蛋白阻斷緩衝液按1:25〇〇 稀釋之抗His mAb-HRP結合物（R&D Systems，MN)添加至 所結合之標記His之AdnectinsTM中1小時。藉由用PBST洗 滌移除過量結合物且根據製造商之說明書，使用TMB偵測 試劑（BD Bio sciences)谓測所結合之 AdnectinsTM。 藉由分析型尺寸排阻層析法進行聚集量測
對自HTPP獲得之SABA進行尺寸排阻層析（SEC)。使用 Superdex 200 5/150 或 Superdex 75 5/150 管柱（GE
Healthcare)，在 Agilent 1100 或 1200 HPLC 系統上進行得自 HTPP之物質的SEC，並在A214 nm及A28〇 nm下進行UV偵測 及進行螢光偵測（激發=280 nm、發射=350 nm)。在SEC管 柱上依適當流速使用100 mM硫酸鈉、100 mM磷酸鈉、150 mM氯化鈉（pH 6.8)之緩衝液。使用凝膠過濾標準物（Bio· Rad Laboratories，Hercules, CA)進行分子量校準。 顯示對HTPP純化SABA所作之SEC的結果主要為單體且 相對於球狀凝膠過濾標準物（BioRad)在10 kDa之估計範圍 内溶離。 5.鑑別候選血清白蛋白結合AdnectinTM(SABA)
作為針對HSA/RhSA/MuSA結合及生物物理學標準之篩 選的結果，鑑別及選擇四種獨特血清白蛋白結合 AdnectinsTM(SABA)以在小鼠中評估其半衰期。為進行活 體外及活體内表徵，對四種SABA採用中等規模。表2提供 自PROfusion鑑別之26種獨特SABA核心序列（指定為SABA 155490.doc -193- 201138808 1-26)的序列。SABA4具有骨架突變’在中等規模之前將 其固定。SABA4之骨架理想形式為SABA5 » SABA4及 SABA5在6C、DE及FG環中具有相同序列。 實例A2.候選SABA之產生及調配 SABA之中等規模蛋白質產生 將實例A1中所述之所選SABA、隨後His6標籤選殖至pET 9d載體中且在大腸桿菌BL21(DE3)pLysS細胞中表現（關於 指定為 SABA1.1、SABA2.1、SABA3.1 及 SABA5.1 之各標 記His之SABA序列，參見表2)。使用20 ml接種培養物（自 單培養板群落產生）接種1公升含有50 pg/mL卡那黴素之LB 培養基。使培養物在37t下生長直至A6G() 0.6-1.0。在用1 mM異丙基-β-硫代半乳糖苷（IPTG)誘導後，使培養物在 3〇°C下再生長4小時且藉由在4°C下在2l〇,〇〇〇xg下離心30 分鐘來收集。將細胞集結粒冷凍於-80°C下。在冰上使用 Ultra-turrax均質儀（IKA works)將細胞集結粒再懸浮於25 mL 溶解緩衝液（20 mM NaH2P04、0.5 M NaCl、 lxCompleteTM蛋白酶抑制劑混合物-無EDTA(Roche)，pH 7.4)中。藉由高壓均質化（218,000 psi)，使用Μ-110S型號 的微流化機（MicroHuidics)來達成細胞溶解。藉由在4°C下 在23,30〇xg下離心30分鐘來分離可溶部分。經由0.45 μπι過 渡器使上清液澄清。將澄清之溶解物裝載於用20 mM NaH2P〇4、0.5 M NaCl(pH 7.4)預平衡之 HisTrap 管柱（GE) 上。接著依序用25管柱體積之20 mM NaH2P04、0·5 Μ NaCl(pH 7.4)、20 管柱體積之 20 mM NaH2P04、0.5 Μ 155490.doc 201138808
NaCl、25 mM咪唑（pH 7.4)及35管枉體積之20 mM NaH2PO4、0.5MNaCl、40mM咪唑（pH7.4)洗滌管柱。用 15管柱體積之20 mM NaH2P〇4、〇·5 M NaC卜 500 mM咪唑 (pH 7.4)溶離蛋白質，基於A28〇下之吸光度混合溶離份且 相對於1><?8 8、5〇11^1'1^、15〇111]^化(：1(?118.5)或50 mMNaOAc、150mMNaCl(pH4.5)進行透析。藉由0·22 μιη過濾來移除任何沈殿物。 中等規模表現及純化得到具有高純度及活性之 AdnectinsTM，其以可溶形式表現且自細菌細胞溶質之可溶 部分純化出來。在Superdex 200 或 Superdex 75 10/30GL 上 用 100 mM NaP04、1〇〇 mM NaS04、150 mM NaCl(pH 6.8)(GE Healthcare)之移動相所作的SEC分析證明主要單體 AdnectinsTM。
SABA1.2^ PISZ 選擇一種特定 SABA，即 SABA1.2 (SEQ ID NO: 80)用於 初步調配篩選。SABA1.2包含10Fn3之「核心1」序列上的 (ED)5延長部分。對於SABA 1.2，鑑別在pH 6.0下及在5 mg/mL產物濃度下10 mM丁二酸、8%山梨糖醇、5%甘胺酸 之穩定調配物。在此調配物中，如藉由差示掃描熱量測定 法（DSC)，使用1.25 mg/mL之蛋白質濃度所測定，蛋白質 熔化溫度為75°C。該調配物提供在4t：及25°C下令人滿意 的物理及化學穩定性，且初始聚集體含量為1.2%。在穩定 一個月後，聚集含量極低（在4°C下為1.6%且在25°C下為 3.8%) ^在如自-80°C及-20°C轉變至周圍溫度之五個凍融循 155490.doc -195- 201138808 環後，蛋白質亦在此調配物中為穩定的。另外’在此調配 物中，SABA1.2可在4°C及周圍溫度下溶解至至少20 mg/mL蛋白質濃度而無沈澱析出或聚集增加。 實例A3.候選SABA之生物物理學表徵 尺寸排阻層析 對自中等規模過程得到之候選SABA進行標準尺寸排阻 層析（SEC)。使用 Superdex 200 10/30 或 Superdex 75 10/30 管柱（GE Healthcare) ’ 在 Agilent 1100 或 1200 HPLC 系統上 進行中等規模物質之SEC ’並在A?!4 nm及八28〇 nm下進行 UV偵測及進行螢光偵測（激發=280 nm、發射=350 nm)。在 SEC管柱上依適當流速使用1〇〇爪厘硫酸鈉、10〇 mM破酸 鈉、150 mM氣化鈉（pH 6.8)之緩衝液。使用凝膠過濾標準 物（Bio-Rad Laboratories, Hercules，CA)進行分子量校準。 對中等規模純化之SABA所作之SEC的結果顯示主要為 單體AdnectinTM且相對於如圖所示之球狀凝膠過濾標準物 (BioRad)在10 kDa之估計範圍内溶離。 熱穩定性 進行中等規模SABA之差示掃描熱量測定（DSC)分析以測 定其各別Tm。藉由在3個大氣壓下使溫度以每分鐘1度之速 率自5°C勻變至95°C ，用N-DSC II熱量計（Calorimetry Sciences Corp)掃描1 mg/ml溶液。相對於適當緩衝液之對 照操作，使用最佳擬合，使用Orgin軟體（OrginLab Corp) 分析資料。SEC及DSC分析之結果概括於表4中。 155490.doc -196- 201138808 表4.對候選SABA所作之SEC及DSC分析的概括。
純系 SEC DSC(Tm) 單體(％) 二聚體(％) SABA1.1 92.3 7.7 63.9〇C SABA5.1 88 12 70.1°C SABA2.1 91 9 58.5〇C/78.2〇C SABA3.1 99 BLD 65.2〇C 實例A4·結合於血清白蛋白之候選SABA1的表徵
藉由將各別血清白蛋白（HSA/RhSA/MuSA)固定於 Biasensor CM5晶片表面上且使一系列濃度之SABA流過參 考流槽與固定之白蛋白兩者來測定自實例A1及A2中所述 之HTPP及/或中等規模物質純化出之所選SABA純系的動力 學。另外，在範圍為pH 5.5至pH 7.4之各種pH值條件下進 行白蛋白結合。HSA結合Adnectins™ SABA2.1、SABA3.1 ' SABA4,1(SABA5.1)及 SABA1.1 與 RhSA 交叉反應，但不與 MuSA交叉反應。SABA2及SABA4結合具有pH敏感性，然 而純系SABA3顯示HSA結合具有pH值抗性直至pH 6.0。 SABA1.1符合pH值抗性及親和力/動力學之生物化學標準 直至pH 5_5。 藉由Biacore測定結構域定位。藉由將HSA或僅由HSA-結構域I及II或HSA-結構域III組成之構築體固定於 Biasensor CM5晶片表面上且使一系列濃度之SABA流過參 考流槽與固定之白蛋白兩者來測定自HTPP及/或中等規模 物質純化之所選SABA純系。純系SABA2及SABA1結合於 HSA及HSA-結構域I-II構築體，但不結合於HSA-結構域III 構築體。純系SABA3及SABA4結合於HSA，但不結合於 HSA-結構域I-II或HSA-結構域III構築體。結果概括於下表 155490.doc •197· 201138808 5中。 表5.候選SABA(SABA1.1、2.1、3.1及4.1)之結合親和 力及動力學。
Adnectin1M 標靶 K〇(nM) KofKs") 是否對pH 7.4-5.5 具 有抗性？ HSA上之抗原決 定基 SABA2 HSA 33.8 +/- 20.5(n=6) 1.71E-04 --- 結構域I-II RhSA 63.6 4.42E-04 SABA3 HSA 863 6.82E-02 +++(直至 pH 6.0) 既非結構域I-II亦 非111(界面?） RhSA 431 3.37E-02 SABA4 HSA 412 +/- 8(n=4) 7.82E-04 既非結構域I-II亦 非111(界面?） RhSA >1000 3.83E-03 SABA1 HSA 47.2 +/- 18.2(n=9) 4.57E-04 *H-+ 結構域I-II RhSA 778 +/- 313(n=4) 5.45E-03 實例A5.候選SABA之活體内t1/2的檢査 測定小鼠中之HSA的半衰期以允許評估小鼠中之hsA結 合 AdnectinsTM，因為 HSA結合 AdnectinsTM 不與 MuSA 交叉 反應。將HSA以20 mg/kg(圖1A)及50 mg/kg劑量（圖1B)注 入約6週齡的Ncr裸雌性小鼠之尾靜脈中，且藉由ELIS A測定 注射後每隔一段時間獲取之血液樣品中HSA之濃度。使用 WinNonlin軟體及非隔室模型化，分別測得依2〇 mg/kg及 50 mg/kg注入小鼠中之HSA的tm為約24小時及約20小時。 小鼠中之SABA1-4的半衰期測定 製備一公升大腸桿菌生長量之HSA結合純系SABA 1.1、 SABA2.1、SABA3.1及SABA4.1，力σ以純化並移除内毒 素。在有或無HSA情況下將各SABA變異體注入小鼠尾靜 脈中，且使用經開發而用於偵測血漿樣品中之AdnectinTM 的基於定量ELISA之檢定測定注射後每隔一段時間獲取之 血液樣品中的濃度。使用非隔室模型化，用WinNonlin軟 155490.doc -198- 201138808 體測定各AdnectinTM之藥物動力學參數。 在約6週齡的Ncr裸雌性小鼠中在存在或不存在HSA下比 較各SABA之藥物動力學概況》共注射HSA之小鼠具有與 各SABA預混合之HSA(HSA為3-4莫耳過量），因為結合純 系對HSA及RhSA具有選擇性且不結合小鼠血清白蛋白。 小鼠血漿中之SABA1.1的半衰期為0.56小時，而與HSA共 注射之SABA1.1的半衰期為5.6小時，半衰期增加約10倍 (圖2A)。小鼠血聚中之SABA2.1的半衰期為0.24小時，而 與115八共注射之8八8八2.1的半衰期為2.8小時，半衰期增加 約12倍（圖2B)。小鼠血漿中之SABA3.1的半衰期為0.28小 時，而與HSA共注射之SABA3.1的半衰期為0.53小時，半 衰期增加約2倍（圖2C)。小鼠血漿中之SABA4.1的半衰期為 0.66小時，而與115人共注射之3八6八4的半衰期為4.6小時， 半衰期增加約7倍（圖2D)。本實例概要展示於圖3中。表6 概括 SABA1.1、SABA2.1、SABA3.1、SABA4.1 及 SABA5.1 之類似資料；當可用時，比較食蟹獼猴中之半衰期。 表 6.小鼠及猴中之 SABA1.1、SABA2.1、SABA3.1、 SABA4.1 及 SABA5.1 的資料。 純系 ΡΚ(Τ1/2) 註釋 小鼠 食蟹獼狼 SABA1.1 5·6小時 96-137小時 Tl/2=96-137小時 SABA4.1 4.6小時 ND 對RhSA之弱結合親和力》 在pH<6.0下觀察到KD減小>2倍 SABA5.1 4.6小時 12小時 對RhSA之弱結合親和力》 在pH<6.0下觀察到KD減小:>2倍 SABA2.1 2.8小時 ΝΑ 在pH£6.5下結合喪失 SABA3.1 32分錄 ΝΑ 在小鼠中觀察到弱T1/2 155490.doc -199- 201138808 食蟹獼猴中之SABA1.1及SABA5.1的半衰期測定 在食蟹獼猴中進行SABA1.1(圖4A)及SABA5.1(圖4B)之 概念研究的三週單劑量試驗以評估2隻食蟹獼猴中1 mg/kg(mpk)靜脈内劑量下之藥物動力學。使用經開發而用 於偵測血漿樣品中之AdnectinTM的基於定量ELISA之檢定 來評估藥物動力學。SABA1.1之半衰期在96-137小時之範 圍内（圖4A及表7)。SABA5.1之半衰期為約12小時且僅可用 ELISA量測直至120小時（圖4B及表8)。表7概括SABA1.1之 資料；表8概括SABA5.1之資料。 表7 : SABA1.1之資料。 猴 tl/2(hr) Cmax (pg/mL) AUCall (hr*pg/mL) Clobs (mL/hr/kg) Vz_obs (mL/kg) #1 95.8 9.03 673.7 1.45 200.8 #2 136.6 7.24 625.1 1.60 315.2 表8 : SABA5.1之資料。 HL—λ—ζ (hr) Cmax (pg/mL) AUCall (hr*pg/mL) Cl_obs (mL/hr/kg) Vz一obs (mL/kg) N 2 2 2 2 2 平均值 12.186 17.358 246.882 4.089 72.507 SD 1.451 3.08 36.245 0.596 19.045 最小值 11.16 15.18 221.25 3.67 59.04 最大值 13.21 19.54 272.51 4.51 85.97 cv% 11.9 17.7 14.7 14.6 26.3 實例A6.結合於i清白蛋白之SABA1的表徵
SABA1.1 及 1.2 結合於HSA 及 RhSA SABA1.2，即包含（ED)5延長部分之「核心1」1GFn3 (SEQ ID NO: 90)在中性pH值及25°C下結合於人類血清白 蛋白（HSA)之平均締合速率常數（ka)為8.21E+03 ΜΛ·1，且 平均解離速率常數（kd)為4.43Ε-04 s·1，所計算之平均1(^為 155490.doc •200· 201138808 55.3 nM(表9)。對於恆河猴血清白蛋白（RhSA)而言，所量 測之平均締合速率常數為6.6E+03 ΜΛ·1，且解離速率常數 為3.78Ε-03 s_1，從而獲知所計算之平均KD為580 nM。可 在高達1 μΜ下觀察到SABA1.2與小鼠或大鼠血清白蛋白之 間無可量測的相互作用（表9及圖5)。在37°C下，ka&kd增 加2至5倍，從而使得對HSA之親和力增加約2倍及對RhSA 之親和力增加1/2(表9)。
表9.在HBS-P缓衝液中SABA1.2結合於白蛋白之動力學 參數。 白蛋白 溫度(°c) ka(l/Ms) kd(l/s) Κ〇(ηΜ) 人類 25 8.21 ± 1.19 E+03 4.43 ± 0.65 E-04 55.3 ± 13.7 恆河猴 6.60 ± 1.18 E+03 3.78 ± 0.45 E-03 580 ± 62.6 小鼠 無可觀察之結合 人類 37 3.38E+04 8.15E-04 24.1 恆河猴 1.89E+04 1.85E-02 977.4 小鼠 無可觀察之結合
另外，進行熱量測定滴定以測定SABA1與HSA之間的化 學計量。在此項研究中，使用SABA1.1，即包含His6延長 部分之「核心1」1QFn3 (SEQ ID NO: 89)。將HSA(每次注 射10 μΐ 115 μΜ蛋白質溶液）注入含有濃度為8.1 μΜ之 5八8八1.1的量熱單元中。在37°(：下在1>63緩衝液（？117.4)中 進行實驗。圖6展示3人3人1.1以1:1化學計量結合於113八。 SABA1.2在低ρΉ值下有效地結合於HSA 白蛋白之長半衰期（例如HSA之t1/2為19天）在很大程度上 歸因於以下事實：其藉由在内體中存在之低pH值條件下結 合於新生Fc受體FcRn而自内吞路徑再循環。如表10中所 155490.doc -201 - 201138808 示，3八8八1.2在5.5之内體卩11值下有效地結合1^八，此表明 一旦結合於HSA，SABA1之t1/2亦將得益於FcRn再循環機 制。 表10.在MES緩衝液中在pH 7.4及5.5下之白蛋白結合動 力學的比較。 白蛋白 pH值 ka(l/Ms) kd(l/s) Κ〇(ηΜ) 人類 7.4 9.26E+03 3.88E-04 41.9 5.5 9.44E+03 2.70E-04 28.6 恆河猴 7.4 6.16E+03 2.95E-03 479 5.5 7.57E+03 2.72E-03 359
SABA1.2結合於HSA之結構域I及II，但不結合於結構域III 使用重組HSA片段相對於N端結構域I或II定位白蛋白上 之結合位點SABA1.2且無可偵測的與結構域III之結合（圖 7)。因為結構域III為HSA中主要與FcRn相互作用之結構 域，所以不太可能的是SABA1.2將與FcRn競爭HSA結合， 從而又提高完全利用延長半衰期之再循環機制的可能性。 實例A7. SABA1.2之活體内藥理學 在食蟹獼猴中進行SABA1.2之四週單劑量預毒物學研究 以評估兩個不同劑量下之藥物動力學。亦在包括靜脈内與 皮下投藥組之三週單劑量預毒物學研究中評估藥物動力學 及生物可用性。在此等研究之每一者中，使用經開發而用 於偵測血漿樣品中之SABA1.2的基於定量ELISA之檢定結 合使用WinNonlin軟體之非隔室模型化來評估SABA1.2之 藥物動力學。 向猴子靜脈内投與1 mpk及10 mpk之SABA 1.2。使用 WinNonlin軟體進行非隔室分析以評估藥物動力學參數。 155490.doc •202· 201138808 如圖20及下文所述之參數所示，SABA1.2在此項研究中展 現劑量依賴性藥物動力學，如藉由濃度-時間曲線下面積 (AUC)評估所測定。1〇 mpk之SABA1.2清除率（CL)為0.15 ml/hr/kg，β相半衰期〇1/2)為143小時，分佈體積（Vz)為30 mL/kg，且總藥物暴露（AUCall)為 5,609,457 hr*nmol/L(表 11)。1 mpk 之 SABA1.2 清除率（CL)為 0.4 ml/hr/kg，半衰期 (t1/2)為124小時，分佈體積（Vz)為72 mL/kg，且總藥物暴 露（AUCall)為 214,636 hr*nmol /L(表 11)。 在皮下或靜脈内投與SABA1.2後，β相藥物動力學概況 相似（圖9)。靜脈内1 mpk之SABA1.2清除率（CL)為0.22 ml/hr/kg，β相半衰期（tl/2)為125小時，分佈體積（Vz)為40 mL/kg，且總藥物暴露（AUCall)為 357,993 hr*nmol/L(表 11)。皮下 1 mpk 之 SABA 1.2清除率（CL)為 0.32 ml/hr/kg，β 相半衰期（t1/2)為134小時，分佈體積（Vz)為62 mL/kg，且 總藥物暴露（AUCall)為251,339 hr*nmol/L(表11)。與靜脈 内相比，皮下相對生物可用性（F)為0.7。 表11.猴中之SABA1.2的藥物動力學參數。 研究編號 2 劑量(mg/kg) 1 10 1 1 投藥途徑 靜脈内 靜脈内 靜脈内 皮下 N 3 3 1 2 CL(mL/hr/kg) 0.4 0.15 0.22 0.32 Vz(mL/kg) 72 30 40 62 AUCall(hr*nmol/L) 214,636 5,609,457 357,993 251,339 βΤι^Οι) 124 .143 125 134 生物可用性(F) n/a n/a n/a 0.7 實例A8·人類血清白蛋白與SABA1.2之複合物的結構 155490.doc -203- 201138808 藉由 Proteros Biostructures GmbH，自 100 mM 乙酸鈉（pH 4.75)、100 mM NaCl及28% PEG200使人類血清白蛋白與 SABA1.2之複合物結晶。使用自由安裝系統（FMS)使晶體 繞射最佳化且在油中急速冷卻。 藉由 Proteros Biostructures GmbH，以瑞士光源束線 (Swiss Light Source beamline)PXI/X06SA收集資料，其間 將晶體維持於100 K下。波長為1.0015 A且偵測器為Pilatus 6M(Dectris)。用 XDS 及 XSCALE 處理資料（W. Kabsch (2010), XDS. Acta Crystallogr. Sect. D 66, 125-132 ； W. Kabsch (2010)，Integration, scaling, space-group assignment and post-refinement, Acta Crystallogr. Sect. D 66, 133-144) 並得到以下統計資料：空間群：ΡΖΘβ!;單位晶胞： a=61.6 人；b=124.1 A ; c=100.0 A。 表12.結構資料之概括。 解析度 量測值 單值 冗餘度 完成％ R值 Ι/σι 總體 50.00-1.96 330257 55260 6.0 99.0 0.039 23.1 第一層 50.00-4.30 30746 5523 5.6 99.2 0.024 56.1 最後一層 2.03-1.96 32596 5527 5.9 98.6 0.681 2.7 使用分子置換程式MOLREP(Vagin, A.及Teplyakov，A. (1997), MOLREP: an Automated Program for Molecular Replacement. ·/· Cr少30，1022-1025)及使用 PDB輸入1BM0作為搜尋模型來確定人類血清白蛋白之結 構。根據基於PDB輸入1FNF殘基1423-1502之搜尋模型， 使用分子置換程式PHASER來確定Adnectin部分之結構 (A.J. McCoy, R.W. Grosse-Kunstleve, P.D. Adams, M.D. 155490.doc -204- 201138808
Winn, L.C. Storoni & R.J. Read (2007), Phaser Crystallographic Software, ·/.却/?/· O少5·ία//ο§τ. 40，658-674) 〇
使用 BUSTER/TNT(Blanc，E·，Roversi，P.，Vonrhein，C.， Flensburg，C.，Lea，S. M.及Bricogne，G. (2004)，Refinement of severely incomplete structures with maximum likelihood in BUSTER/TNT, Acta Crystallogr. Sect. D 60, 2210-2221) 進行模型改進且用COOT進行模型建立（Emsley，P.及 Cowtan，K. (2004)，Coot: model-building tools for molecular graphics, Acta Crystallogr Sect. D 60: 2126-2132 ； Emsley, P., Lokhamp, B., Scott, W.G. & Cowtan, K. (2010), Features and Development of Coot, Acta Crystallogr Sect. D 66: 486-501) 0 用 PyMol(DeLano, W.L. (2002)，The PyMol Molecular graphics System, DeLano Scientific, San Carlos, CA, US ； 可在全球資訊網上在pym〇1.〇rg上得到）製備顯示圖。 最後一輪改進得到表13中所示之統計資料。 表13.來自最後一輪改進之統計資料。 循環 R-free R-work rms鍵 rms角 開始 1 0.264 0.233 0.011 1.1 結束 5 0.248 0.211 0.010 1.1 結構之描述 SABA1.2之結合位點確實位於人類血清白蛋白（HuSA)之 結構域1上（圖17A及17B)。HuSA之以下殘基與Adnectin接 觸（基於成熟HuSA序列’減去信號及前肽區進行編號）： Pro 35 、 Phe 36 、 Glu 37 ' Pro 113' Arg 114 、 Leu 115 、 Arg 117、Pro 118、Glu 119 ' Val 122、Met 123、Phe 155490.doc •205- 201138808 134 、 Lys 137 、 Tyr 140 、 Glu 141 、 Arg 144 、 Arg 145及 Tyr 161。（Sheriff，S.，Hendrickson, W. A.及 Smith, J.L· (1987), Structure of Myohemerythrin in the Azidomet State at 1.7/1.3 A Resolution, J. Mol. Biol. 197, 273-296 i Sheriff, S. (1993)， Some methods for examining the interactions between two molecules, Immunomethods 3, 191-196)。相互作用殘基之較廣泛的定義將為至少部分嵌 埋之彼等殘基，除上文列入處於接觸中之殘基外，其還包 括以下殘基：Asp 38、Thr 125、Ala 126、Asp 129、Thr 133、Tyr 138及 Leu 182。
Adnectin經由BC、DE及FG環相互作用且具有以下殘基 與 HuSA 接觸：His 25、Ser 26、Tyr 27、Glu 29、Gin 30、 Asn 31 ' Pro 53、Tyr 54、Ser 55、Thr 57、Tyr 78、Tyr 83及 Tyr 84(屬於 SABA 1.2，例如 SEQ ID NO:90)。除先前 所列之殘基外，以下殘基至少部分因相互作用而嵌埋： Trp 24、Ser 32、Tyr 33、Gin 56、Gly 79及 Lys 81(屬於 SABA1.2，例如 SEQ ID NO:90)。 實例Α9· SABA安全性研究之I期設計 將在健康男性志願者中進行靜脈内投與之SABA1.2的1 期、部分不知情、安慰劑對照之藥物動力學研究。志願者 將為18歲至60歲之健康成.年男性個體，其目前未接受處方 或非處方藥物治療並符合方案對健康及器官功能規定之限 制。SABA1.2為對人類血清白蛋白（HSA)具有結合親和力 之非治療性Adnectin。當與將另外被快速消除之各別治療 155490.doc -206· 201138808 性Adnectin或其他蛋白質一起整合至單一多肽鏈中時，其 意欲充當白蛋白結合物以延長血清半衰期（t_half)。將用 0.1 mg/kg、0.3 mg/kg或 1·〇 mg/kg SABA1 2或安慰劑處理 各群組個體，每兩週處理一次，總共投與藥物兩次。 研究設計。志願者個體將隨機化接受SABA1 2或安慰 劑，且將間隔14天接受兩個劑量之其隨機化治療，每次為 1小％輸注，隨後為2週樣品收集及觀察期；在第二觀察期 • 後，將針對安全性再追蹤個體4週。將在第1及15天投與治 療（SABA1.2或安慰劑）。 將在漸增劑量之SABA1.2下招募三個連續群組。各個別 劑量群組將另外分成3個亞組，其以部分不知情（個體及研 究人員將對輸注物之性質不知情；藥劑師並非不知情）方 式依序暴露於SABA 1.2或安慰劑（參見圖！ 8)。各群組之第 一亞組將僅含有1位經活性藥物處理之個體以使風險減至 最小。 修在第1群組之所有個體均已完成其第29天就診且已評估 PK發現（預期達4週）後，第2群組將開始研究，假設第i群 組不符合超越所規定之未觀察到不良事件之水準（n〇 observed adverse event level，NOAEL)的標準（參見下 文）。同樣，第3群組直至第2群組完成及pk評估後才開 始，假設未超越NOAEL。 NOAEL將被定義為低於最低劑量1個水準之劑量，其中 a)2個或2個以上經有效處理（非安慰劑）之個體經歷任何2級 國家癌症研究所（National Cancer Institute，NCI ; US)不良 155490.doc • 207- 201138808 事件常用術語標準（Common Terminology Criteria for Adverse Events)(CTCAE v4.03)SABA1.2相關毒性；或 b)至 少1個經有效處理之個體經歷任何2 3級SABA 1.2相關毒 性。NOAEL將為不符合任一此等標準時所達成之最高劑 量。在第2或3群組超越NOAEL標準之情況下，下一較低群 組將被宣佈達到NOAEL且所有剩餘個體將以NOAEL處 理，以便在研究中處理總共37個個體（28個接受SABA1.2及 9個接受安慰劑）。此係為了維持試圖支持藥物動力學（PK) 及免疫原性評估以及在安全性觀察下支持適當數目之個體 的統計精確度。若發現第1群組之劑量超過NOAEL，則將 不對其他個體進行給藥並結束研究。 研究評估及主要终點。研究之主要終點將為PK且將包 括所有劑量之平均T-HALF、最大血漿濃度（Cmax)、全身 清除率（CL)、自給藥起至給藥間隔結束之濃度-時間曲線 下面積（AUCtlast)及穩態下之分佈體積（Vss)。將在研究第1 及15天開始每次輸注之前及之後0.5(輸注中途）、1(輸注結 束）、1.5、2、3、5、7、24、48、72、96或120及168小時 收集用於PK分析之連續樣品。另外，將在第29(第1 5天給 藥後之336小時試樣）、36、43、50及57天收集用於 SABA1.2血漿濃度測定之單一隨機樣品。 安全性評估將包括生命徵象、身體檢查、心電圖、臨床 實驗室評估及不良事件。另外，將藉由量測抗藥物抗體 (ADA)、自體免疫性之血清指示物（抗核抗體[ANA]、C3及 C4)及臨床觀察（例如皮疹、輸注反應、肌肉或關節疼痛等） 155490.doc -208- 201138808 來評估免疫原性。將進行HLA分類及τ細胞刺激檢定以試 圖瞭解任何觀察到之免疫原性的機制。 統計方法。在25個個體中，所觀察到之133 159小時或 更久的Τ-HALF之單側95%信賴區間（CI)之下限將不會延長 至120小時。為獲得25個經有效處理之完成者，每個給藥 群組將包括額外1個個體，總共28個經有效處理之個體。
將血槳P K參數依據劑量及在劑量範圍内變化的囊總統 計資料列成表格。將使用非隔室方法，自SABA12血裝濃 度相對於時間得出PK參數。若獲批准，則隔室方法可用於 進一步瞭解處置。將由95% CI估算平均丁 _HALF。將報導 Cmax AUC"ast、R及CL之幾何平均值及; Tmax之中值 (最小、最大”及其他參數之平均值與標準偏差。將評估 SABA1.2之劑量比例。將使用線性混合效應模型化將對數 轉換之AUC及Cmax擬合成對數轉換之劑量。將構建關係
斜率之對稱、漸近95% CI。若95% CI包括值！ 〇 斷出劑量比例。相反地，若95% CI不包括值ι 〇 斷出非比例度。 則將推 則將推 將依據劑罝及總體描述性地概括安全性結果。 起始劑量基本原理《«當每週給與兩次達到5個劑量時， 食蟹獼猴之NOEL(未觀察到作用之水準）為靜脈内 mg/kg。基於以體表面積表示之劑量，此人類臨床試驗中 之SABAL2之起始劑量((u mg/kg)表示安全因數為猴之 NO·1·;而此研究中之最高計劃劑量（1 mg/kg)表示 安全因數為i/io。基於預計之人類Cmax及繼，此臨床研 155490.doc 201138808 究中之起始劑量表示相對於猴NOEL下之第15天猴Cmax及 AUC而言安全因數分別為約600倍及200倍；而基於此研究 中之最高計劃劑量，預計之人類Cmax及AUC表示相對於 第15天猴參數而言安全因數分別為約50倍及20倍。因此， 已對此研究中之給藥水準考慮到足夠的安全因數。 B. FGF21-SABA融合分子 實例B1.製備FGF21-SABA融合分子 概要 將本文所揭示之所有FGF21-SABA DNA序·列置於市售表 現載體 pET29b(EMD Biosciences，San Diego, CA, USA) 中。將序列適當地置於質體載體中恰好位於核糖體結合位 點下游之NDEI與XHOI限制性核酸内切酶位點之間（圖 10)。 將表現載體轉型至宿主菌株BL21(DE3)(EMD Biosciences) 中且以包涵體形式表現至各種水準。或者，可將其轉型至 大腸桿菌菌株之氧化菌株中，諸如「Origami™」（EMD Biosciences)。後述宿主菌株含有硫氧還蛋白還原酶（irxfi) 與麩胱甘肽還原酶（gor)基因之突變，此大大增強大腸桿菌 細胞質中之二硫鍵形成。在適當注意下，表現各種FGF21-SABA融合物，諸如表2中所述之彼等融合物。 藉由熟習此項技術者通常已知之標準轉型方法，將經純 化之質體DNA表現載體併入或「轉型」至以上所述之大腸 桿菌宿主中。簡言之，在冰上解凍商業上製備之勝任細胞 (EMD biosciences)且輕輕混合以確保細胞均勻地懸浮。將 155490.doc •210· 201138808 此等細胞之2〇 μΐ等分試樣吸移至在冰上以冰預冷卻之1 5 ml聚丙烯微量離心管中。將約1 μ1經純化之質體〇να( 1 -10 ng/μΐ質體）直接添加至細胞中並輕輕攪拌而混合。將該等 管保持於冰上5分鐘，接著在42°C水浴中加熱正好30秒。 將經加熱之管立即置於冰上並靜置2分鐘。向各管中添加 8〇 μΐ室溫SOC或LB培養基。藉由塗於含有卡那黴素之培養 基上來完成對轉化體之選擇以獲得pET 29b質體編碼之抗 藥性。 藉由使轉型細胞之隔夜菌元培養物（starter culture)生長 來起始可溶FGF21-SABA融合多肽在Origami 2細胞株中之 表現。使用細胞接種各含有1公升LB培養基（Luria Broth) 之2公升搖瓶且在37°C下在250-300 RPM劇烈振盪下生長直 至達到0.6至0.8之O.D. 600 nm。此時，添加0.1 mM IPTG(異丙基β-D-l-硫代哌喃半乳糖苷）以引發T7 RNA聚合 酶誘導且使振盪培育箱之溫度降低至18°c。持續醱酵12_ 16小時且藉由離心收集細胞並以包裝之濕細胞糊狀物形式 冷凍於-80°C下。 亦藉由使轉型細胞之隔夜菌元培養物生長來起始FGF21-SABA融合多肽以包涵體（IB)形式在bl21(DE3)細胞株中之 表現。使用細胞接種各含有1公升〇vernight Express™培養 基（EMD Biosciences及 MeAoA 2, 233-235, 2005)之 2公升搖瓶。出於形成包涵體之目的，不需要降低醱酵溫 度’而是使細胞在37。(：下生長12-16小時，隨後藉由離心 收集。將所收集之細胞以包裝之濕細胞糊狀物形式冷凍 155490.doc •211 - 201138808 於-8 o °c下。 所述FGF21-SΑΒΑ變異體之純化視所用之確切的序列變 異體及蛋白質是否以細胞溶質可溶形式在Origami細胞株 中表現或以包涵體形式在BL21細胞株中表現而變化。方法 亦視序列是否含有有助於純化之6x組胺酸標籤而定。然 而’一般而言，純化方法共用熟習此項技術者所熟悉之常 見技術。以下為純化方法之詳細描述。 細跑溶解及製備包涵餿(IB)集結粒 依8-10份緩衝液比丨份包裝之細胞糊狀物之稀釋度將細 胞懸浮於溶解緩衝液中。使用Avestin c-5均質機（Avestin
Inc· Ottawa，Ontario，Canada)，藉由在 2000 PSI下通過兩 -人來以機械方式溶解細胞。溶解後，離心溶解物（4,〇〇〇 RPM ’ 20-30分鐘）並丟棄可溶部分。用〇 5〇/〇 Trit〇n χ_1〇〇 洗滌包涵體集結粒以移除細胞碎片且再次離心懸浮液。重 複此過程（通常2或3次）直至集結粒顯現為均勻白色。接著 用PBS緩衝液洗蘇所得的富集之把製備體集結粒以移除過 量清潔劑。 溶解包涵艘
含有6xHis標籤之蛋白質融合物變異體且 ，步驟。或者可捕捉 且在此階段使用金 155490.doc -212· 201138808 屬螯合層析步驟（IMAC)進一步純化。離液劑變性物質可結 合於管柱且洗滌污染物，隨後在補充有咪唑之變性缓衝液 存在下溶離。 再摺疊及氧化 將脈-HC1溶解物質稀釋至約1 mg/mL蛋白質（由280 nM下 之吸光度估計）且置於3 · 5 MWCO透析管中。接著在4〇C下 在輕柔授拌下將透析裝置中之樣品漂浮於4 L再摺疊緩衝
液（50 mM Tris、150 mM NaC卜 1 mM EDTA，pH 9.0)中隔 夜第一天早晨’用新鮮再摺疊緩衝液更換透析再摺疊緩 衝液。在此過程期間，融合蛋白之FGF21結構域中的二硫 橋鍵谷易被空氣氧化。此簡單的透析方法為方便的且需要 時可-人處理若干樣品。或者，可用尿素替代脈-聰來使 蛋白質變性。或者，再指疊及氧化亦可使用將分子自高離 液鹽濃度快速稀釋至較低鹽濃度來進行。或者可使用確定 之還原賴胱甘肽與氧化型㈣甘肽（GSH/GSSG)的氧化 還原混合物替代空氣氧化來使系統再摺疊。 或者$可在結合於層析樹脂載體時使此等蛋白質再摺 f ’以替代在自由擴勒JI皆段站士 L ^ H由如上文所述之透析或快速 使此等蛋白f再㈣。此方法通常具有優點及改善之 =曾因為其將再摺疊期内會導致大量聚集及產率損失之 蛋白質相互作用最小化。 移除沈澱物 =等條件下的再摺疊及氧化步驟 蛋白f均保持可溶。-部分分子以聚集狀態存在二： I55490.doc -213- 201138808 沈澱物形式自溶液中下沈。經由在16,000 RPM下用ss-34 轉子離心1小時來移除此沈澱物，接著通常經由0.2 μηι針 筒過濾器過濾，隨後層析》 層析分離
可經由使用Resource Q或類似離子交換介質系統（GE
Healthcare，Piscataway NJ)純化再指疊之FGF21-SABA融合 物以移除DNA及其他污染物。用再摺疊緩衝液（5〇 mM Tris(pH 9.0)加上 150 mM NaC卜 1 mM EDTA)平衡40 mL Resource Q管柱且使澄清之再指4物質通過該官柱。在此 等條件下，大部分FGF21-SABA變異體通過樹脂床而不結 合。來自經洗滌包涵體之DNA及其他細胞碎片保留於管柱 樹脂上。或者此時可使用固定金屬離子親和層析（IMAC)步 驟捕捉含有6><His標籤之摺疊之蛋白質融合物變異體且用 咪唑或組胺酸之梯度溶離。 濃縮 接著使用Pellicon® XL裝置及Labscale™切向流動過濾 (TFF)系統（Millipore Inc.，Billerica, MA)將第一層析步驟 中富集之蛋白質樣品濃縮至約4 mg/mL ° 尺寸排阻層析 接著使用經？83緩衝液（卩117.2)預平衡之26/60 86卩1^(^1 S100 或 26/60 Superdex 75尺寸排阻管柱（GE Healthcare, Piscataway NJ，USA)進一步純化FGF21-SABA融合物之約 4 mg/mL樣品。混合對應於單體蛋白質融合物之樣品且必要 時將樣品稀釋至1-2 mg/ml，隨後冷凍於-80°C下。使用此 155490.doc •214- 201138808 方法，每100 mL由初始自動誘導培養基產生之包涵體可純 化出多達20 mg的FGF21-SABA融合物。 實例B2.結合於血清白蛋白之FGF21-SABA融合物的表徵 使用等溫滴定熱量測定法，在Microcal VP-ITC儀器 (Microcal Inc. Amherst MA，USA)上進行 FGF21-SABA 融合 物變異體與人類血清白蛋白之結合能力及熱力學表徵。另 外，在 Biacore T100儀器（GE Healthcare Inc, Piscataway， NJ)上進行FGF21-SABA1融合物變異體與人類血清白蛋白 (HSA，Sigma #A3782，St. Louis MO, USA)、食蟹獼猴血清 白蛋白（CySA ’ Equitech-Bio #CMSA，Kerrville, TX，USA) 及鼠類血清白蛋白（MuSA，Sigma#A3559)之結合能力及動 力學表徵。下文描述詳細實驗條件。 在熱量測定檢定中，使用FGF21-SABA變異體5八8八1-FGF21vl (SEQ ID NO: 132)。37〇C下之代表性滴定曲線展 示於圖11中且KD經計算為3.8 nM。在SPR研究中，檢查 SABAl-FGF21vl及 SABAl-FGF21v3 (SEQ ID NO: 134)。 1000、500、250、125及62.5 nM融合物與來自人類 (HSA)、食蟹獼猴（CySA)及鼠類（MuSA)之血清白蛋白的結 合之SPR感測圖資料展示於圖12中。表14概括此等融合物 與HSA、CySA及MuSA之結合的動力學資料。 155490.doc -215· 201138808
表 14. SABAl-FGF21vl 及 SABAl-FGF21v3與 HSA、CySA 及MuSA之結合的SPR動力學資料。 分析物 配位體 流速 (μΙ/min) 溫度 (°C) ka(l/Ms) kd(l/s) KD(nM) SABA1- FGF21v3 HSA 30 37 6.16E+03 1.03E-03 170 60 37 5.87E+03 1.07E-03 180 CySA 30 37 5.31E+03 1.17E-02 2200 60 37 4.38E+03 1.36E-02 3100 MuSA 30 37 在高達1 【分析物下未觀察到結合 60 37 在高達1 μΜ分析物下未觀察到結合 SABA1- FGF21vl HSA 30 25 3.38Ε+03 3.33E-04 98 30 37 5.96Ε+03 1.11E-03 190 CySA 30 25 3.93Ε+03 4.70E-03 1200 30 37 4.44Ε+03 1.23E-02 2800 MuSA 30 25 在高達1 【分析物下未觀察到結合 30 37 在高運1 μΜ分析物下未觀察到結合 詳細方案 等溫滴定熱量測定法 將經純化之SABA1-FGF21融合蛋白及商業製備之人類血 清白蛋白（HSA，Sigma #A3782，St. Louis MO，USA)在各別 3,500 MW透析袋中相對於PBS緩衝液（10 mM磷酸鈉、i3〇 mM氣化納，pH 7.1)進行透析以確保與實驗匹配之適當溶 劑。將SABA-FGF21融合蛋白加上緩衝液依範圍為0.4 mg/mL至1.0 mg/mL蛋白質之濃度置於儀器樣品單元中。 將匹配緩衝液置於參考單元中。使用由純蛋白質之蛋白質 序列計算之消光係數測定濃度。在37°C下平衡儀器反應單 元。自注射器向反應單元中反覆注射，每次10 μΐ，且監測 每莫耳HSA之過量熱。將所得資料集減去基線且針對注入 單元中之HSA之稀釋熱進行校正。使用OriginTMW估套裝 軟體（Microcal Inc.)2.0.2版擬合所得熱分析圖資料以估算 155490.doc -216- 201138808 蛋白質-蛋白質結合反應之化學計量、焓及平衡解離常數 (kd)。 表面電聚子共振 將血清白蛋白溶解於PBS緩衝液（10 mM磷酸鈉、130 mM氯化鈉，pH 7.1)中達至10 mg/ml之濃度，且隨後用10 mM乙酸鈉（pH 5.0)稀釋至8-10 pg/ml以用於固定。根據通 用製造商準則，在25°C下使用標準含乙基（二甲基胺基丙 基）碳化二亞胺（EDC)/N-羥基丁二醯亞胺（NHS)化學物質之 HBS-EP+操作緩衝液將血清白蛋白固定於S CM5系列感應 晶片上。用EDC/NHS活化流槽1且用乙醇胺阻斷。各用 EDC/NHS活化流槽2、3及4，隨後固定8-10 pg/ml血清白蛋 白，且用乙醇胺阻斷以達成700 RU HSA(流槽2)、1100 RU CySA(流槽3)及1050 RU MuSA(流槽4)之表面密度。在 25°C或37°C下在含有0.05% tween-20(操作緩衝液）之PBS緩 衝液中進行動力學實驗。用PBS操作緩衝液將含SABA1-FGF21v3(15.3 μΜ)或 SΑΒΑ 1-FGF21 v 1 (40·6 μΜ)之 PBS(pH 7.2)的儲備溶液稀釋至1 μΜ，隨後連續稀釋（2:1)以產生各 蛋白質之 1.0 μΜ、0.5 μΜ、0.25 μΜ、0.125 μΜ、0.063 μΜ 的濃度系列。將此等樣品以30 μΐ/min或60 μΐ/min之流速注 射至流槽1-4中持續300秒，其中解離時間為420秒，以檢 查質量傳遞限制。以30 μΐ/min用10 mM甘胺酸（pH 2.0)脈 衝2次持續30秒來再生所有表面。藉由自流槽2、3或4資料 減去流槽1資料，接著自各感測圖減去各別緩衝液循環來 「雙重參考」原始感測圖。使用Biacore T100評估軟體 155490.doc -217- 201138808 2.0.2版將雙重參考之感測圖資料擬合成1:1朗繆耳模型 (Langmuir model)以測定締合速率常數（ka)、解離速率常數 (kd)及平衡解離常數（KD)。 實例B3. HEK-p-klotho細胞中之SABA1-FGF21融合物的活 想外活性 FGF21在β-klotho存在下誘導ERK磷酸化。因此，構建現 在的ΗΕΚ-β-klotho檢定系統以檢查FGF21-SABA融合物之 活體外功能活性。具體而言，如在HEK β-Klotho表現穩定 細胞pERK 1/2檢定中使用未融合且標記His之 FGF21(「FGFvl」；SEQ ID NO: 125)作為比較者所量測， 測定SABAl-FGF21vl (SEQ ID NO: 132)融合蛋白之活體外 活性、效力（EC5〇)及功效（以佔自不與SABA融合之FGF21 分子觀察到之最大活性的百分比表示）。 如圖13中所示，SABAl-FGF21vl劑量依賴性地刺激穩定 表現人類β-klotho之HEK細胞中的pERK 1/2含量。效力 (EC5G)相對於標記His之FGF21右移約15倍，且功效為標記 His 之 FGF21 之 62%(參見下表 15)。因此，SABAl-FGF21vl 保留FGF21活性，即使當結合於人類血清白蛋白時亦然。 表15. SABA-FGF21融合物與對照FGF21相比之效力。 蛋白質 ECso(nM) 功效(％) 標記His6之FGF21 7 ±4 100 SABAl-FGF21vl 102±53 62±9 *如在HEK β-Klotho表現穩定細胞pERK 1/2檢定中所量測之化合物的效 力（EC50)及功效（標記His6之FGF21最大活性的％)。來自多次實驗之彙集 數據以來自N24非依賴性檢定之平均值±標準偏差給出。 在不内源性地表現β-klotho之HEK母細胞的特異性檢定 155490.doc -218· 201138808 中，標記His之FGF21與SABAl-FGF21vl皆不刺激pERK 1/2含量，而陽性對照物FGF1刺激pERK 1/2含量（圖14A)。 在使用相同蛋白質稀釋液但使用標準檢定HEK β-klotho穩 定細胞之平行實驗中，所有三種蛋白質均顯示活性（圖 14B)。因此，SABAl-FGF21vl保留FGF21之特異性，即使 當結合於白蛋白時亦然。 在當前的基於細胞之檢定中，有必要首先測定活化 pERK磷酸化路徑所必需之藥物濃度。為此目的，在細胞 培養基中在存在及不存在HS A下將融合蛋白滴定於細胞 中。在添加HSA之情況下，其以血流中所見之生理濃度 (30 mg/mL至40 mg/mL約500 μΜ HSA)添加。此濃度為使 所有FGF21-SABA融合蛋白飽和所必需之濃度的數千倍以 上。FGF21-SABA-HSA溶液結合常數為約4 nM(參見圖 11)。在不考慮HSA存在之檢定中蛋白質融合物之活性不 發生變化，此表明當融合蛋白與HSA複合時，FGF21結構 域之活性不改變。 以下為實驗方法之詳細描述。 ΗΕΚ-β-klotho穩定細胞株構建 構建穩定表現人類β-klotho之HEK細胞株。人類β-klotho 構築體在具有C端FLAG標籤之CMV啟動子控制下編碼全 長蛋白質。根據使用標準技術之製造商方案，使用脂染胺 2000(Invitrogen 目錄號 1 1668027)，用線性化 cDNA 轉染 HEK 293 細胞。在含 600 pg/ml(Invitrogen 目錄號 10131)遺 傳黴素及高葡萄糖並含有L-楚醯胺酸、Hepes(Invitrogen目 155490.doc -219- 201138808 錄號 12430054)及 10% FBS(Hyclone 目錄號 SH30071)的杜爾 貝科氏改良伊格爾培養基中選擇14天後分離陽性純系。進 一步藉由西方墨點分析（Western Blot analysis)表徵陽性穩 定純系且藉由 AlphaScreen(Perkin Elmer 目錄號 TGRES50K) 分析表徵p-ERK活化。 HEK β-klotho pERK 1/2檢定 將穩定表現人類β-klotho之HEK細胞以每孔20,000個細 胞塗於96孔組織培養板中之含有10%(v/v)FBS(Hyclone)及 600 pg/ml G418(Gibco)的 DMEM高葡萄糖培養基（Gibco) 中。第二天，移除培養基且用無血清之DMEM高葡萄糖培 養基替換並培育細胞隔夜。第三天早晨，移除無血清培養 基且將細胞與用含有3%(w/v)無脂肪酸人類血清白蛋白之 PBS調製的蛋白質稀釋液一起培育總共7分鐘。按一式三份 測試稀釋液，三個培養板之每一者各一個孔。在7分鐘培 育結束時，移除蛋白質稀釋液且每孔添加1〇〇 μΐ 1 xAlphaScreen溶解緩衝液（Perkin-Elmer)並在振盪下培育 約10-15分鐘。將含有細胞溶解物之培養板冷凍於-80。(：下 至少30分鐘或直至有備於檢定。根據製造商之指示，使用
Surefire AlphaScreen pERK 1/2 套組（perkin Elmer)，使用 384孔白色Proxiplates(Perkin Elmer)分析來自每孔之4 μΐ解 凍之細胞溶解物的pERK 1/2。在室溫下在黑暗中培育培養 板兩小時，接著在Envision 2103多板讀取器（perkin Elmer) 上讀取。使用Graph Pad Prism軟體，使用非線性回歸分析 分析數據。 155490.doc •220· 201138808 如上所述使用不内源性地表現β-klotho之HEK母細胞株 進行選擇性檢定。在彼等實驗中使用FGF1作為陽性對照 物。 實例B4. 3T3-L1脂肪細胞中之SABAl-FGF21vl的活體外 活性 3T3-L1細胞（ATCC # CL-173)為可分化為小鼠脂肪細胞 之小鼠纖維母細胞。因為β-klotho僅在分化之3T3-L1細胞 中表現，所以有必要在進行如實例B3中所述之β-klotho pERK 1/2檢定前首先使其分化。類似於其在HEK系統中之 活性，SABAl-FGF21vl保留磷酸化3T3-L1脂肪細胞中之 ERK的能力，且此活性與標記His之FGF21相當。結果展示 於表16中。 表16.在3T3-L1脂肪細胞中SABAl-FGF21vl活性與標記 His之FGF21相當。 化合物 EC5〇(nM) 活化倍數 標記His之FGF21 4±2 2.1 ±0.2 SABAl-FGF21vl 11±4 1.8 ±0.2 以下為實驗方法之詳細描述。
3T3-L1脂肪細胞之分化
使細胞生長於補充有10%優級胎牛血·清（characterized fetal bovine serum，Hyclone# SH30071.〇3)及 1χ抗生素-抗 黴劑（Gibco # 15240-096)之 DMEM 培養基（Invitrogen # 12430-054)中。在含5% C02之37°C培育箱中培養細胞。接 著為如ATCC產品資訊頁中所述之繼代培養程序，例外為 使用 TrypLE Express(Gibco # 12605)替代姨蛋白酶-EDTA 155490.doc -221 - 201138808 溶液。 在分化前約68小時，將每孔5500個細胞（150 μΐ培養基 中）接種於96孔培養板（Falcon #353072)中；可根據接種時 間及其倍增時間調整細胞數目，但在開始分化程序時細胞 為100%匯合。為開始分化，小心地吸出細胞上清液且將 200 μΐ新鮮分化培養基1(含有500 μΜ IBMX、100 nM地塞 米松（dexamethasone)、240 nM騰島素之生長培養基，全部 均來自Sigma)添加至各細胞孔中。接著培育細胞41至48小 時，隨後小心地吸出細胞上清液且將200 μΐ分化培養基 11(含有240 nM胰島素之生長培養基）添加至各細胞孔中。 在培育細胞第二個4 8小時時段後，小心地吸出細胞上清液 且向各孔中添加200 μΐ常規生長培養基。接著再培育細胞 48至72小時，此時其將充分分化為脂肪細胞。 對3T3-L1脂肪細胞建立pERK檢定 在分化第九至第十天，自細胞中吸出生長培養基且用 200 μΐ含2〇/〇胎牛血清之DMEM(Invitrogen # 12320-032)使 細胞挨餓隔夜。第二天，使用T〇mtec Quadra，用含有測 試藥劑（FGF21或其—種變異體）或作為對照物之pBS之100 μΐ DMEM加上0.1%無脂肪酸BSA(sigma # A6003)刺激饑餓 細胞以確保同時添加至培養板之所有96孔中。接著在含 95%空氣/5% C〇2之37。(：培育箱中培育培養板7分鐘^ 7分 鐘後’自細胞中移除處理培養基且向各孔中添加1〇〇…溶 解緩衝液。溶解緩衝液原料為PerkhElmeri AlphaScreen SureFire p-ERKl/2檢定套組（目錄號TGRES1〇K)，其補充 155490.doc •222- 201138808 有 0.5 mM DTT(Sigma，D9779)、5 mM焦填酸納（Sigma， S6422)、1 mM原飢酸納（Sigma S6508)及Roche之蛋白酶抑 制劑錠劑（#04693159001)。偵測方案係基於檢定套組：在 培養板振盪器上攪動含溶解緩衝液之培養板約15分鐘且冷 凍於-80°C下30分鐘。在室溫下解凍培養板（約40分鐘）且攪 動溶解物（藉由用移液管上下吸移20次）以確保完全溶解。 接著將來自各孔之4 μΐ溶解物轉移至384孔培養板中且向各 孔中添加7 μΐ反應混合物（根據套組方案混合之活化緩衝液 及IgG偵測供體及接受體珠粒[PerkinElmer #6760617Μ])。 密封培養板且攪動1-2分鐘，隨後在22°C下在遮光區中培 育2小時。最後在PerkinElmer Envision 2103多標記讀取器 上，使用標準α篩選設置讀取培養板。 實例Β5.糖尿病小鼠中之SABAl-FGF21vl的活體内 功效 已顯示FGF21增加3T3-L1脂肪細胞及初級人類脂肪細胞 培養物中之葡萄糖攝取。因此，監測糖尿病〇办/〇6小鼠中 之血漿葡萄糖含量表示一種可評估FGF21-SABA融合蛋白 之功能活性的方法。在8週齡時開始，糖尿病小鼠接 受每天皮下給藥持續7天（每組n=8)。所有方案均由BMS ACUC委員會批准。第7天，自早上8點開始，在給藥後24 小時及3小時檢查進食中葡萄糖含量。用PBS調配標記His 之 FGF21 及 SABAl-FGF21vl且分別以 0.3 mg/kg 及 1.0 mg/kg 給與。 為評估結合於人類白蛋白之SABAl-FGF21vl的功效，將 155490.doc -223- 201138808 融合蛋白（1 mg/kg)與莫耳過量之人類血清白蛋白（6 mg/kg) 一起培育且在另一組中注射混合物（每天皮下注射持續7 天）。使用人類血清白蛋白（6 mg/kg)作為另一對照組。 圖15中所示之結果指示在給藥後3小時，與PBS媒劑對 照組相比，SABAl-FGF21vl使葡萄糖降低29%且此降低與 第7天之標記His之FGF21相當（圖15A)。相比之下，與HSA 對照組相比，SABAl-FGF21vl與人類白蛋白之組合使血漿 葡萄糖含量降低46%。 在給藥後24小時，SABAl-FGF21vl使葡萄糖降低之量值 為7%，而SABAl-FGF21vl與HSA之組合為41%，且因此在 第7天最後給藥後持續24小時（圖15B)。因此，SABA1-FGF21vl極有效於降低小鼠之血漿葡萄糖含量，即使 當結合於人類血清白蛋白時亦然。在人類白蛋白存在及不 存在下SABAl-FGF21vl之暴露展示於表17及18中。 SABAl-FGF21vl之暴露在人類血清白蛋白存在下比在其不 存在下要大。 表17.在給藥後3小時標記His之FGF21及SABAl-FGF21vl 之血漿濃度。 標記His6之FGF21 SABAl-FGF21vl HSA+SABAl-FGF21vl (0.3 mg/kg) (1 mg/kg) (1 mg/kg) 濃度(ng/ml) 99 1370 8757 S.D. 39 326 895 SD :標準偏差 155490.doc •224· 201138808 表18.在給藥後24小時標記His之FGF21及SABAl-FGF21vl之血漿濃度。 標記His6之FGF21 SABAl-FGF21vl HSA+SABAl-FGF21vl (0.3 mg/kg) (1 mg/kg) (1 mg/kg) 濃度(ng/ml) <LLO〇 <LLO〇 5095 S.D. 2166 <LLOQ小於定量下限。 實例B6.量測小鼠及猴中之SABAl-FGF21vl血漿t1/2 對小鼠及猴進行各種活體内研究以表徵標記His之FGF21 及SABAl-FGF21vl之藥物動力學。使用基於ELISA之配位 體結合檢定量測所有小鼠及猴血漿樣品中之標記His之 FGF21 及 SABAl-FGF21vl。 靜脈内及皮下投藥後小鼠中之標記His之FGF21及SABA1-FGF2U1的藥物動力學 標記His之FGF21 在CD-1小鼠中靜脈内投藥（1 mg/kg)後，標記His之 FGF21的穩態分佈體積（Vss)為0.27 L/kg。總體身體血漿清 除率（CLTp)值為12 mL/min/kg。最終半衰期（Τι/2)為〇·5小 時。皮下投藥後，充分吸收標記His之FGF21 ^絕對皮下生 物可用性為約100%。表觀皮下最終半衰期（T1/2)為〇.6小 時。 SABAl-FGF21vl 在CD-1小鼠中靜脈内投藥（1.6 mg/kg)後’ SABA1
FGF21vl的穩態分佈體積（Vss)為0.12 L/kg。總體身體血衆 清除率（CLTp)值為2.9 mL/min/kg。最終半衰期（T!/2)為U 155490.doc -225- 201138808 小時，比標記His之FGF21(0.5小時）長❶皮下投藥後，充分 吸收SABAl-FGF21vl。表觀皮下最終半衰期（Τι/2)為1 9小 時。 亦在與人類血清白蛋白（6 mg/kg)預混合後向ob/〇b小鼠 皮下投與1 mg/kg之SABAl-FGF21vl。表觀皮下最終半衰 期（T"2)進一步延長至9小時。 靜脈内及皮下投藥後猴中之標記HlsiFGFll及SABA1-FGF2U1的藥物動力學 標記His之FGF21 在靜脈内投藥（0.5 mg/kg)後，標記His之FGF21的穩態分 佈體積（Vss)為1 L/kg。總體身體血漿清除率（CLTP)值為 6.4 mL/min/kg。最終半衰期（τ1/2)為1.9小時。皮下投藥 後’充分吸收標記His之FGF21。絕對皮下生物可用性為 65%。表觀皮下最終半衰期（τ1/2)為4.3小時。 SABAl-FGF21vl 在靜脈内投藥（0.08 mg/kg)後，SABAl-FGF21vl的穩態 分佈體積（Vss)為0.08 L/kg。總體身體血漿清除率（CLTp) 值為0.012 mL/min/kg。最終半衰期（T1/2)為97小時。皮下 投藥後，充分吸收SABAl-FGF21vl。絕對皮下生物可用性 為68%。表觀皮下最終半衰期（Τ1/2)為67小時。 圖16展示與標記His之FGF21相比，猴中之例示性融合物 SABAl-FGF21v3 (SEQ ID NO: 134)及 FGF21-SABAlvl(其 中 SABA 部分位於 FGF21 之 C端）（SEQ ID NO: 171)的 t1/2。 結果指示與單獨FGF21相比，融合物使t1/2增加約27倍。數 155490.doc •226- 201138808 據概括於下表19中。 表19. SABA-FGF21融合物之藥物動力學數據。 CL Vdss Tl/2 mL/min/Kg L/kg h 標記His之FGF21 6.4 1.0 1.9 SABA1-FGF2W3 0.04 0.11 52.7 FGF21-SABAlvl 0.02 0.06 50.3 實例 B7. SABAl-FGF21vl 降低 ob/ob小鼠中之HbAlc 對糖尿病ob/ob小鼠檢查SABAl-FGF21vl之其他短期及 長期效應。在3週每天治療後研究結束時，觀察到血漿葡 萄糖、胰島素及總膽固醇減少。血漿丙胺酸轉胺酶有減少 且β-羥基丁酸酯含量發生升高。在口服葡萄糖耐受性測試 中，經SABAl-FGF21vl處理之動物顯示處理葡萄糖負荷之 能力增加。 對接受三種不同劑量之SABAl-FGF21vl(0.01 mg/kg或 0.1 mg/kg或1 mg/kg)之一與人類血清白蛋白（HSA，6 mg/kg)之預混物並注射（每天皮下）達到14天的糖尿病ob/ob 小鼠（每組n=8)進行另一實驗》對照組僅接受HSA(6 mg/kg，於PBS中）。在最後給藥後24小時量測血漿樣品中 之HbAlc(參見圖19) »對照組（僅接受HSA)顯示與基線值相 比HbAlc含量未有降低。最低劑量（〇.〇1 mg/kg)顯示未有降 低，中間劑量（0.1 mg/kg)顯示降低0.39%，其在統計上不 為顯著的8 1 mg/kg(或mpk)之最高劑量顯示相對於基線降 低0.9%，及HbAlc減去媒劑降低0.94%，此在統計上為顯 著的。因此，與人類白蛋白共注射之SABAl-FGF21vl可有 155490.doc •227· 201138808 效降低糖尿病小鼠之HbAlc含量。 在最後給藥後24小時，0.01 mg/kg、0.1 mg/kg及1 mg/kg 劑量下之SABAl-FGF21vl血漿含量分別為3.85 ng/ml、 2.28 ng/ml及 28.73 ng/ml 〇 實例B8.食蟹獼猴中之SABAl-FGF21vl的藥物動力學 在靜脈内（IV)投藥後，SABAl-FGF21vl之穩態分佈體積 (Vss)為0.076 L/kg。此值大於血漿體積，但小於細胞外液 體積，此表明SABAl-FGF21vl主要存在於細胞外間隙中。 SABAl-FGF21vl之總體身體血漿清除率較低（0.71 mL/h/kg)，此與高親和力結合於猴血清白蛋白一致。最終 半衰期（T1/2)為97小時（參見圖20及表20)。此外，SABA1-FGF21vl顯示在猴中有良好的皮下（SC)生物可用性（參見圖 20及表20)。絕對皮下生物可用性為68%。 表20.猴中之3八8八1-?〇卩21¥1的單劑量藥物動力學參數 (平均值土 SD)。 物 種 途徑 品系 劑量 (mg/kg) Cmax (nM) Tmax ⑻ AUCtot (nM.h) Tl/2 (h) CLTp (mL/h/kg) Vss (L/kg) F (%) 猴 靜脈 内 食蟹 獼猴 0.08 - - 3621 97 0.71 0.076 - 皮下 食蟹 獼猴 0.08 22_4±10·8* 13 ±9* 2454 ±779 - - - 68 *不收集三種動物之一的給藥後24小時之血漿樣品；猴：Ν=2(靜脈内）及 3(皮下）。 C. 實例Cl.用於化學衍生之間隔子連接的SABA-合成肽融合 分子之SABA多肽之製備 使用下文所述之方法產生SABA1.7-(ED)5G-Cys多肽與合 155490.doc -228 - 201138808 成衍生之肽結合以形成SAB A融合蛋白。此方法亦可用於 產生經由多肽連接子共價連接之s ABA_肽融合物。 將編碼 SABA1.7 (SEQ ID NO: 225)與（ED)5G C端尾部 (SEQ ID NO: 397)及 C端 His殘基（SABA1.7-(ED)5G -Cys)之 DNA序列置於市售表現載體pET29b(EMD Biosciences，San Diego, CA，USA)中。將序列適當地置於該質體載體中恰好 位於核糖體結合位點下游之NDEI與XHOI限制性核酸内切 酶位點之間（圖10)。將該表現載體轉型至宿主菌株 BL21(DE3)(EMD Biosciences)中且以包涵體形式表現。 藉由熟習此項技術者通常已知之標準轉型方法，將經純 化之質體DNA表現載體併入或「轉型」至以上所述之大腸 桿菌宿主中。簡言之，商業上製備之勝任細胞（EMD biosciences)在冰上解床且輕輕混合以綠保細胞均勻地懸 浮。將此等細胞之20 μΐ等分吸移至在冰上以冰預冷卻之 1.5 ml聚丙烯微量離心管中。將約1 μΐ經純化之質體 DNA(1-10 ng/μΐ質體）直接添加至細胞中並輕輕攪拌混合。 該等管保持於冰上5分鐘，接著在42°C水浴中加熱正好30 秒。經加熱之管立即置於冰上並靜置2分鐘。向各管中添 加80 μΐ室溫SOC或LB培養基。藉由塗於含有卡那黴素之培 養基上來完成轉化體之選擇，以獲得pET 29b質體編碼之 藥物抗性。
藉由使轉型細胞之隔夜菌元培養物生長來起始可溶性 SABA1.7-(ED)5G- Cys在大腸桿菌中之表現。使用細胞接種 2公升搖瓶，各含有1公升Overnight Express™培養基（EMD 155490.doc -229· 201138808
Biosciences及Nature Methods 2: 233-235 (2005))。振盪培 育箱之溫度可降低至18°C以改善可溶物產率。持續醱酵 12-16小時，藉由離心收集細胞，並以包裝之濕細胞糊冷 凍於-8(TC。發現形成蛋白質包涵體（IB)有利，因為其有助 於保護並使最少宿主細胞蛋白酶裂解。 細胞溶解及製備包涵體(1B)集結粒 解凍細胞並依8-10份緩衝液比1份包裝之細胞糊狀物之 稀釋度懸浮於溶解緩衝液中。使用Avestin C-5均質機 (Avestin Inc. Ottawa, Ontario, Canada)，藉由在 2000 PSI下 通過兩次來以機械方式溶解細胞。溶解後，離心溶解物 (4,000 RPM，20-30分鐘）並丟棄可溶部分。用0.5% Triton X-100洗滌包涵體集結粒以移除細胞碎片且再次離心懸浮 液。重複此過程（通常2或3次），隨後集結粒顯現為均勻白 色。接著用PBS緩衝液洗滌所得的富集之IB製備體集結粒 以移除過量清潔劑。 溶解包涵想 接著將經洗滌且去除清潔劑之IB集結粒溶解於經50 mM Tris-HCl(pH 8.0)及 500 mM NaCl緩衝之6 Μ胍-HC1中。大 部分以此方式製備之物質自由進入液相，然而有少量細胞 碎片殘留且藉由在16,000 RPM下用SS-34轉子離心1小時來 移除。保留上清液以進行再摺疊及氧化步驟。或者可捕捉 含有6xHis標籤之蛋白質且在此階段使用金屬螯合層析步 驟（IMAC)進一步純化。離液劑變性物質可結合於管柱且洗 滌污染物’隨後在補充有咪唑之變性緩衝液存在下溶離。 155490.doc -230- 201138808 再摺疊（及控制氧化) 將脈-HC1溶解物質稀釋至約1 mg/mL蛋白質（由280 nM下 之吸光度估計）且置於3.5 MWCO透析管中。接著在4°C下 在輕柔擾拌下將透析裝置中之樣品漂浮於4 L再摺疊緩衝 液（50 mM Tris、150 mM NaCl、1 mM EDTA，pH 9.0)中隔 仪。第二天早晨，用新鮮再摺疊緩衝液更換透析再摺疊緩 衝液。 • 在此過程期間，可視需要完成二硫化物氧化之調節及/ 或融合蛋白之橋鍵形成。對於諸如澱粉素之肽，其需要在 其多狀序列中之兩個半胱胺酸殘基之間形成二硫橋鍵以實 現適當的最終形式，使系統在透析過程期間被空氣氧化。 對於3八3八1.7-斤0)5〇{78，其含有必須被還原以使得其可 為稍後與所關注肽結合之順丁烯二醯亞胺的單個半胱胺酸 殘基，可藉由在再摺疊過程結束時添加還原劑（例如TCEp 參[2-羧乙基]膦（TCEP)或二硫蘇糖醇（DTT))使氧化減至最 * 少。亦可藉由在PH 4·5下再摺疊來完成在最少氧化情況下 之再摺疊，其中Cys胺基酸之硫酵鹽陰離子不容易聚集並 開始形成二硫橋鍵。 此等簡單的透析方法為方便的且需要時可一次處理若干 樣品。或者，可用尿素替代胍^^來使蛋白質變性。或 者，再摺疊及氧化亦可使用將分子自高離液鹽濃度快速稀 釋至較低鹽濃度來進行。或者可使用確定之還原型麩胱甘 肽與氧化型麩胱甘肽（GSH/GSSG)的氧化還原混合物替代 空氣氧化來使系統再摺疊。或者，亦可在結合於層析樹脂 155490.doc -231 - 201138808 載體時使此等蛋白質再摺疊，以替代在自由擴散階段經由 如上文所述之透析或快速稀釋使此等蛋白質再摺疊。此方 法通常具有改善之產率，因為其將再摺疊期内會導致大量 聚集及產率損失之蛋白質相互作用最小化。 移除沈澱物 在再摺疊步驟（及在需要時採用的氧化步驟）結束時，並 非所有蛋白質均保持可溶。一部分蛋白質以聚集狀態存在 且容易以沈澱物形式自溶液中下沈。經由在16,000 RPM下 用SS-34轉子離心1小時來移除此物質，接著通常經由0.2 μηι針筒過遽器過濾、，隨後層析。 層析分離 可經由使用Resource Q或類似離子交換介質系統（GE Healthcare, Piscataway NJ)純化再指疊之 SABA1_7-(ED)5G-Cys以移除DNA及其他污染物。用再摺疊缓衝液（50 mM Tris(pH 9.0)加上 150 mM NaCn、1 mM EDTA)平衡 40 mL Resource Q管柱且使澄清之再摺疊物質通過該管柱。在此 等條件下，大部分多肽通過樹脂床而不結合。來自經洗滌 包涵體之DNA及其他細胞碎片保留於管柱樹脂上。或者此 時可使用固定金屬離子親和層析（IMAC)步驟捕捉含有 6xHis標籤之摺疊之多肽且用咪唑或組胺酸之梯度溶離。 尺寸排阻層析 接著可使用經PBS緩衝液（pH 7.2)預平衡之26/60 Sephacryl S100 或 26/60 Superdex 75 尺寸排阻管柱（GE Healthcare, Piscataway NJ，USA)進一步純化 SABA1.7- 155490.doc -232 - 201138808 (ED)5G-Cys。混合對應於單體蛋白質之樣品且必要時將樣 品稀釋至1 -2 mg/ml ’隨後冷凍於_8〇。(：下。所表現及純化 之蛋白質的表現及純化產率在本文中有變化。使用此等方 法’每公升由初始自動誘導培養基產生之包涵體可產生純 化產率為0.5 mg至10 mg或以上之經純化蛋白質。 實例C2.化學合成用於由化學衍生之間隔子連接的SABA-神經肽融合分子之神經肽 實勿C2-i ··合成3-順丁烯二醢亞胺丙醢基_PEG2(r大鼠澱粉 素：Mal-(PEG)20-KCNTATCATQRLANFLVRSSNNLGPV LPPTNVGSNTY-NH2 藉由固相合成，使用Liberty微波肽合成器（CEM Corp.，
Matthews，North Carolina)製備該肽。在75°C 下使用按20W
之電力脈衝序列提供之微波加熱進行脫除Fmoc保護及偶合 步驟。用插入反應容器中之光纖探針監測反應溫度。自置 於50 mL聚丙烯容器中之0.25 mmol受Fmoc保護之PAL-PEG 樹脂（0.34 mmol/g)開始該合成。使用由製造商提供之〇 25 毫莫耳規模的方法偶合胺基酸。在各偶合步驟開始時，藉 由用含有0.1 M HOBt之5%哌嗪的DMF溶液處理兩次（每次5 分鐘）來移除Fmoc基團。在5次20 mL DMF洗滌後，藉由用 0.5 M HCTU(4當量）之DMF溶液及2 M DIEA(8當量）之NMP 溶液活化5分鐘來依次偶合所需Fmoc-胺基酸。在各偶合結 束時，用5次20 mL DMF洗滌來洗滌樹脂。在偶合Fm〇c· PEG2〇之前，移除一半肽基-樹脂（0125 mm〇l)，且如上文 所述使Fmoc-PEGw偶合於合成器上。將脫除Fm〇c之肽基- 155490.doc -233 · 201138808 樹脂轉移至燒結聚丙烯反應器中且藉由用HOAt/DIC(5當 量）活化16小時來手動偶合3-順丁烯二醯亞胺丙酸。用 DMF(4x5 mL)及 DCM(4x5 mL)及再次 DMF(4x5 mL)洗滌肽 基-樹脂。添加I2(20當量）之10 mL DMF溶液且攪拌混合物 1小時。用DMF(5x5 mL)及DCM(3x5 mL)洗滌樹脂，得到 作為環狀二硫化物產物之所需大鼠澱粉素肽衍生物Mal-(PEG)2〇-KCNTATCATQRLANFLVRSSNNLGPVLPPTNVGS nty-nh2(醯胺）。 脫除肽之保護基且藉由在室溫下用TFA/水/苯酚 (90:5:5 ; v:v:w)(15 mL)處理90分鐘而自樹脂釋放。渡除廢 樹脂且再用裂解溶液（2χ2·5 mL)沖洗。蒸發合併之濾液至 約4 mL且藉由添加Et2〇(35 mL)使產物沈殿。藉由離心收 集沈澱之產物，再用Et20洗滌並乾燥，得到灰白色固體 (理論值之50%)。 如下藉由製備型RP-HPLC，在Shimadzu LC-8A型號液相 層析儀上純化粗肽。將該肽溶解於水/AcCN/TFA (60:40:0.1)中，經由0.45 μιη過濾器過濾，且每次將30 mg 注射至 Phenomenex Luna C18 管柱（21.2x100 mm ; 5 μ)上。 在45分鐘内使用25-45% Β之Α溶液的梯度以15 mL/min溶離 產物，在220 nm下進行UV偵測。溶劑A : 0.1% TFA水溶 液；溶劑B : 0.1% TFA之AcCN溶液。合併如用分析型 HPLC所測定之含有乾淨產物的溶離份並凍乾，得到呈白 色凍乾物形式之至少95%純的產物。藉由LC/MS分析在電 喷霧模式下證實該肽之性質。以實驗方式觀察到之m/z離 155490.doc -234- 201138808 子（M+3H)3+/3 = 1464.0 及（M+4H)4+/4=1097.9 與所計算之分 子量4389.9 D—致。 穿你C2-2 ··合成3-順丁烯二醯亞胺丙醯基-(GS)5-大鼠澱粉 素：Mal-GSGSGSGSGS-KCNTATCATQRLANFLVRSSNN LGPVLPPTNVGSNTY-NH2 使用實例C2-1中所述之相同固相偶合及二硫化物環化方 法製備該肽，得到作為環狀二硫化物產物之所需大鼠澱粉 素肽衍生物 Mal-GSGSGSGSGS-KCNTATCATQRLANFLV RSSNNLGPVLPPTNVGSNTY-NH2(醯胺）。在脫除保護基及 自樹脂釋放後，如實例C2-1中所述藉由製備型RP-HPLC純 化粗肽，例外為在40分鐘内使用10-55% B之A溶液的梯度 溶離該肽，得到至少98%純的產物。藉由LC/MS分析在電 喷霧模式下證實該肽之性質。來源於以實驗方式觀察到之 m/z 離子（Μ+3Η)3+/3 = 1598·3 及（Μ+4Η)4+/4=1199·3 的 4792.2 D分子量在所計算之分子量4791.2 D的1道爾頓内。 穿勿C2-3 .·合成3-順丁烯二醯亞胺丙醯基-Ahx-小鼠 PYY(3-36) ： Mal-Ahx-AKPEAPGEDASPEELSRYYASLRH YLNLVTRQRY-NH2 使用實例C2-1中所述之相同固相程序製備此肽，得到所 需小鼠 PYY(3-36)肽衍生物 Mal-Ahx-AKPEAPGEDASPEEL SRYYASLRHYLNLVTRQRY-NH2。使 Ala12-Ser13 及 Ala22-Ser23 殘基對偶合成 Fmoc_Ala-Ser(\|/Me，Mepro)-OH假脯胺酸 二狀形式（EMD Chemicals, Inc., San Diego, CA)。在脫除 保護基及自樹脂釋放後，如實例C2-1中所述藉由製備型 155490.doc -235 - 201138808 RP-HPLC純化粗肽，例外為在45分鐘内使用5-50%B之A溶 液的梯度溶離該肽，得到至少97%純的產物。藉由LC/MS 分析在電喷霧模式下證實該肽之性質。以實驗方式觀察到 之 m/z離子（Μ+3Η)3+/3 = 1415·8及（M+4H)4+/4=1062.2與所計 算之分子量4244.7 D—致。 紫勿C2-4 .·合成3-順丁烯二醢亞胺丙醯*_PEG2(r小鼠 PYY(3-36) ： Mal-PEG2〇-AKPEAPGEDASPEELSRYYASL RHYLNLVTRQRY-NH2 使用實例C2-3中所述之相同固相偶合程序製備此肽，例 外為偶合Fmoc-PEG2〇-〇H以替代Fmoc-6-Ahx-OH，由此得 到所需小鼠 PYY(3-36)肽衍生物 Mal-PEG20-AKPEAPGEDA SPEELSRYYASLRHYLNLVTRQRY-NH2。在脫除保護基及 自樹脂釋放後，如實例C2-3中所述藉由製備型RP-HPLC純 化粗肽，得到至少86%純的產物。藉由LC/MS分析在電喷 霧模式下證實該肽之性質。以實驗方式觀察到之m/z離子 (M+3H)3+/3 = 1484.8 及（M+4H)4+/4=1113.5 與所計算之分子 量 4449.9 D—致。 jf勿C2-5 .•合成3-順丁烯二醯亞胺丙醢基-(GS)s-小鼠 PYY(3-36) ： Mal-GSGSGSGSGS-AKPEAPGEDASPEELSR YYASLRHYLNLVTRQRY-NH2 藉由 GenScript USA，Inc.，Piscataway，NJ，使用類似於 實例C2-3中所述之彼等程序的固相程序定製合成此肽，得 到95%純度之所需小鼠PYY(3-36)肽衍生物Mal-GSGSG SGSGS-AKPEAPGEDASPEELSRYYASLRHYLNLVTRQRY- 201138808 NH2 »藉由LC/MS分析在電喷霧模式下證實該肽之性質。 以實驗方式觀察到之m/z離子（M+3H)3+/3 = 1618.5及 (厘+411)4+/4=1214.1與所計算之分子量4852.2 0—致。 ··合成3-順丁烯二醢亞胺丙醢基-Ahx-小鼠PP : Mal-Ahx-APLEPMYPGDYATPEQMAQYETQLRRYINTL TRPRY-NH2 使用實例C2-3中所述之相同固相程序製備此肽，得到所 需小鼠 PP 肽衍生物 Mal-Ahx-APLEPMYPGDYATPEQMAQ YETQLRRYINTLTRPRY-NH2(醯胺）。使 Ala12-Thr13 殘基對 偶合成 Fmoc-Ala-Thr(\|/Me’Mepro)-OH假脯胺酸二肽（EMD Chemicals, Inc.，San Diego，CA)。在脫除保護基及自樹脂 釋放後，如實例C2-3中所述藉由製備型RP-HPLC純化粗 肽，得到至少99%純的產物。藉由LC/MS分析在電喷霧模 式下證實該肽之性質。來源於以實驗方式觀察到之m/z離 子（1^!+311)3+/3 = 1533.5及（]^+411)4+/4=1150.4的 4597.5 〇分子 量在所計算之分子量4598.2 D的1道爾頓内。 實勿C2-7 ··合成3-順丁烯二醯亞胺丙醢基-PEG2()-小鼠 PP ： Mal-PEG2〇-APLEPMYPGDYATPEQMAQYETQLRR YINTLTRPRY-NH2 使用實例C2-6中所述之相同固相程序製備此肽，例外為 偶合Fmoc-PEG20-OH以替代Fmoc-6-Ahx-OH，由此得到所 需小鼠 PP 肽衍生物 Mal-PEG20-APLEPMYPGDYATPEQM AQYETQLRRYINTLTRPRY-NH2(醯胺）。在脫除保護基及 自樹脂釋放後，如實例C2-3中所述藉由製備型RP-HPLC純 155490.doc •237· 201138808 化粗肽，得到至少91 %純的產物。藉由LC/MS分析在電喷 霧模式下證實該肽之性質。來源於以實驗方式觀察到之 m/z離子（M+3H)3+/3 = 1601.9及（M+4H)4+/4=1201.7 的 4803.0 D分子量在所計算之分子量4803.4 D的1道爾頓内。 紫勿C2-« .·合成3-順丁烯二醢亞胺丙醢基-(GS)5-小鼠PP : Mal-GSGSGSGSGS-APLEPMYPGDYATPEQMAQYETQL RRYINTLTRPRY-NH2 藉由 GenScript USA，Inc.，Piscataway，NJ，使用類似於 實例C2-6中所述之彼等程序的固相程序定製合成此肽，得 到90%純度之所需小鼠PP肽衍生物Ma卜GSGSGSGSGS- aplepmypgdyatpeqmaqyetqlrryintltrpry-nh2 (醯胺）。藉由LC/MS分析在電喷霧模式下證實該肽之性 質。以實驗方式觀察到之m/z離子（M+4H)4+/4=1302.5及 (M+5H)5+/5 = 1042.1與所計算之分子量5205.7 D—致。 jf 勿 ··合成人類骨鈣素：YLYQWLGAPVPYPDPL EPRREVCELNPDCDELADHIGFQEAYRRFYGPV ，經由 Cys23-Cys29二硫化物環化 藉由 GenScript USA，Inc.，Piscataway，NJ，使用類似於 實例C2-6中所述之彼等程序的固相程序定製合成線性肽， 得到87%純度之人類OCN之所需線性前驅體。藉由在室溫 下攪拌線性肽（0.5 mg/mL; 20 mL)於50 mM TRIS緩衝液 (pH 8.1)、5 mM還原型麩胱甘肽及0.5 mM氧化型麩胱甘肽 中之溶液4天來實現該肽之氧化二硫化物環化。藉由旋轉 蒸發濃縮該溶液至10 mL且如實例C2-1中所述藉由製備型 155490.doc -238· 201138808 HPLC純化該肽，例外為在40分鐘内使用20-50% B之A溶液 的梯度進行溶離。此得到純度為99%之所需環狀人類OCN 肽。藉由LC/MS分析在電噴霧模式下證實該肽之性質。以 實驗方式觀察到之m/z離子（M+3H)3+/3=1933.3及（M+4H)4+/4= 1449.8與所計算之分子量5797.4 D—致。 實勿:合成小鼠骨鈣素：YLGASVPSPDPLEPT REQCELNPACDELSDQYGLKTAYKRIYGITI，經由 Cys19-Cys2s二硫化物環化 藉由GenScript USA，Inc.，Piscataway, NJ，使用類似於 實例C2-9中所述之彼等程序的固相程序定製合成線性肽， 得到90%純度之小鼠OCN之所需線性前驅體。使肽環化且 如實例C2-9中所述藉由製備型HPLC純化，得到98%純度之 環狀小鼠OCN肽。藉由LC/MS分析在電喷霧模式下證實該 肽之性質。以實驗方式觀察到之m/z離子（M+3H)3+/3 = 1705.3 及（M+4H)4+/4=1279.5與所計算之分子量 5114.7 D-致0 jf余/ Cm :合成大鼠骨鈣素：YLNNGLGAPAPYPDPL EPHREVCELNPNCDELADHIGFQDAYKRIYGTTV，經由 Cys23-Cys29二硫化物環化 藉由GenScript USA，Inc.，Piscataway，NJ，使用類似於 實例C2-9中所述之彼等程序的固相及氧化環化程序定製合 成二硫化物環肽，得到96%純度之所需環狀大鼠OCN。藉 由LC/MS分析在電喷霧模式下證實該肽之性質。以實驗方 式觀察到之 m/z 離子（M+3H)3+/3 = 1862.5 及（M+4H)4+M= 155490.doc •239· 201138808 1397.5與所計算之分子量5586.1 D—致。 實例C3.使用順丁烯二醢亞胺結合反應形成由化學衍生之 間隔子連接的SABA-澱粉素、SABA-PYY及SABA-PP融合 分子 用0.5 mM TCEP還原如上文所概述在Q瓊脂糖管柱（GE Healthcare, Piscataway NJ)上純化之SABA1.7-(ED)5G-Cys 蛋白。移除TCEP且進一步經由尺寸排阻層析，在用50 mM 乙酸鈉、150 mM氣化納（pH 5.2)平衡之8叩6『(16\75管柱 (GE Healthcare)上純化該蛋白質。將溶離之SABA 1.7-(ED)5G-Cys蛋白以1:1莫耳比與順丁烯二醯亞胺-PEG20-澱 粉素-CONH2、順丁烯二醯亞胺-PEG20-PYY-CONH2或順丁 烯二醯亞胺-PEG20-PP-CONH2合成肽組合於此緩衝液中且 在4°C下在輕柔振盪下培育隔夜。在培育後，0.2 μηι過濾 反應混合物且使用Superdex75 SEC管柱，用PBS(pH 7.4)自 游離反應物分離經修飾之蛋白質SABA1.7-(ED)5G-Cys-PEG20-澱粉素-CONH2 (SEQ ID NO: 328) > SABA1.7-(ED)5G-Cys-PEG20-PYY-CONH2 (SEQ ID NO: 344)4SABA1.7-(ED)5G-Cys-PEG20-PP-CONH2 (SEQ ID NO: 364)。 實例C4. SABA-神經肽（澱粉素、PYY及PP)融合物與人類 血清白蛋白之結合功效 表面電漿子共振（SPR)為可實時觀察到分子間相互作用 之直接結合技術。在此等實驗中，使用ProteOn XPR36儀 器（BioRad Laboratories)進行SPR結合研究。操作緩衝液， 即磷酸鹽緩衝生理食鹽水〇·〇5% Tween 20(pH 7.4)購自 155490.doc •240- 201138808
Teknova(目錄號P1192)且所有實驗均在25°C下操作。根據 製造商之準則，使用購自BioRad Laboratories之胺偶合試 劑，經由胺偶合，將人類血清白蛋白直接固定於BioRad GLC晶片上。人類血清白蛋白購自Novozymes (Recombumin™)。將約5000個共振單位（RU)之人類血清白 蛋白固定於GLC晶片表面之4個各別泳道上。對於各分析 物，將範圍為15.6 nM至250 nM之五種濃度以30 μΐ/min注 射至表面上持續240秒。監測解離600秒。用100 mM HC1 再生表面。使用ProteOn管理軟體將所得資料擬合成朗繆 耳1:1結合模型。用不同濃度範圍重複實驗。在此第二實 驗中，將範圍為500 nM至32 nM之5種濃度注射於表面上， 且如上所述分析數據。對此等實驗之結果求平均值且展示 於表21中。KD為解離常數。較小數字指示與血清白蛋白有 較緊密的結合。共價連接於結合於血清白蛋白之SABA的 分子呈現較長活體内藥物動力學半衰期，如先前對於 SABA-FGF-21融合物所述。 表21 · SABA-神經肽融合物與人類血清白蛋白結合之 Kon、KoffAKD值。 蛋白質種類分析物 K〇„(l/Ms) Κ„ί,{1/8) Kd(M) SABA-澱粉素-(：01^«2結合物(3仙八1-AMYv25 ； SEQ ID NO: 328) 9.34 103 2.41 10·4 25.8 10-9 SABA-PYY3.36-CONH2 結合物(3入8入1-PYYv7 ； SEQ ID NO: 344) 9.29 103 2.08 10·4 22.5 10'9 SABA-PP-CONH2 結合物(3八8八1-APPv7 ； SEQ ID NO: 364) 7.88 103 1.42 IQ·4 18.8 10'9 實例C5. SABA-合成肽融合物之活體外活性 155490.doc -241 - 201138808 ；Τ勿C5-Jf ·· SABA-澱粉素融合物之活體外活性 澱粉素藉由活化澱粉素受體（其為Gs偶合GPCR)來誘導細 胞環狀單磷酸腺苷（cAMP)產生。因此，使用細胞CAMP產 生作為澱粉素促效劑之活體外功能活性的顯示》具體而 言，測定SABAl-AMYv25 (SEQ ID NO: 328)蛋白之活體外 活性’包括效力（ECso)及功效（以佔自澱粉素肽觀察到之最 大活性的百分比表示）。 如下表22中所示，SABAl-AMYv25刺激穩定表現澱粉素 受體之HEK細胞中產生cAMP。SABAl-AMYv25之效力 (EC50)為12·2 nM且功效為澱粉素肽之約119%。因此， SABA 1-ΑΜΥν25在活體外檢定中保留完全的澱粉素功能活 性，即使當其連接於SABA時亦然。在其他實驗中，大鼠 澱粉素與SABAl-AMYv25皆對HEK母細胞中之cAMP含量 無顯著影響，此證明其對於澱粉素受體之特異性。 激粉素受體穩定細胞株構建 澱粉素受體為抑鈣素受體（CT)及受體活性修飾蛋白質 (RAMP)之一之雜二聚體。藉由在HEK-293細胞中穩定轉染 黑猩猩CT(a)與人類受體活性修飾蛋白3(RAMP3)來產生重 組澱粉素受體細胞株。選擇此等重組受體細胞株且使用若 干澱粉素促效劑肽（包括大鼠澱粉素、鮭魚抑鈣素、人類 抑鈣素及人類CGRP)表徵。在37°C及5% C02下將穩定細胞 株培養於含10% FBS、300 pg/ml新黴素及250 pg/ml潮黴素 之完全DMEM中。 用於評估SABAl-AMYv25活性之活體外環狀AMP(cAMP)功 155490.doc •242· 201138808 能檢定 藉由使用來自Cisbio(Bedford，ΜΑ)之HTRF® cAMP檢定 套組進行cAMP檢定《在37°C及5% C02下使澱粉素受體穩 定細胞生長於BD Falcon™ 75 cm2燒瓶（BD Biosciences， Bendford，ΜΑ)中之培養基（含 10% FBS、300 pg/ml 新黴素 及250 pg/ml潮黴素之DMEM)中。使用來自Invitrogen之細 胞解離緩衝液（不含酶）自燒瓶收集細胞。在用PBS緩衝液 φ 洗滌一次後，使細胞再懸浮於檢定緩衝液（HBSS緩衝液， 2.5 mM HEPES(pH 7.5)、100 μΜ IBMX)中且裝載於 96 孔檢 定培養板（每孔約2,000個細胞）中。接著在37°C下將細胞與 澱粉素肽或SABA-澱粉素一起培育30分鐘。根據製造商之 方案（Cisbio)測定細胞中之cAMP量。 實勿C5-2 ·· SABA-PYY3.36及SABA-PP融合物之活體外活性 肽YY(PYY)及胰多肽（PP)為分別回應於食物攝取而自腸道 及胰臟分泌之天然飽腹感因子且在禁食後減少。ΡΥΥ與ΡΡ • 皆可以其全長形式分離，其全長形式為具有36個殘基之肽 醯胺。ΡΥΥ亦可進一步由酶DPPIV裂解為較短生物活性形 式ΡΥΥ(3-36)。在動物模型中及在人類中，ΡΥΥ(3-36)或ΡΡ 之周邊注射會引起食物攝取減少及體重降低。病態肥胖患 者之基礎與膳食刺激的ΡΥΥ(3-36)及/或ΡΡ含量降低。相比 之下，厭食症患者或繞通手術後體重減輕之患者具有高於 正常的血漿ΡΥΥ(3-36)及/或ΡΡ。ΡΥΥ(3-36)及ΡΡ之促效作 用在治療肥胖及代謝疾病中具有極大治療價值。ΝΡΥ Υ2 及Υ4為分別對ΡΥΥ(3-36)及ΡΡ具有最高親和力之受體。 155490.doc •243· 201138808 NPY受體屬於G蛋白偶合受體家族。在促效劑刺激後， NPY受體可刺激下游G蛋白，從而將其結合之GDP換為 GTP。使用競爭結合檢定量測SABAl-PYYv7 (SEQ ID NO:344)及 SABAl-PPv7 (SEQ ID NO: 364)對其各別受體之 結合親和力，且使用GTPyS結合檢定量測一個最早受體介 導事件時受體佔有率之功能結果。 如表22中所示，在所述檢定中所量測之效力（EC50)為 0.6 nM(PYY3.36)及52 nM(SABAl-PYYv7融合物）。在所述 檢定中所量測之效力（EC50)為1.7 nM(PP)及大於1 μπι (SABAl-PPv7融合物）。SABAl-PPv7融合物之效力降低可 歸因於用於結合SABA與PP多肽之PEG20連接子。該 PEG20連接子可為此構築體中次最佳的且具有替代性連接 子之構築體將用於改善SABA-PP融合物之效力。 受體膜製備： 使一個T150燒瓶中之過表現人類NPY Y2或Y4受體的重 組CHO細胞生長於含0.5 mg/ml G418之F-12培養基（HAM， 含L-麩醯胺酸）中直至匯合。在收集之前，用PBS(無Ca2+及 Mg2+)洗滌細胞一次，接著使用細胞解離溶液脫離。離心 後，使細胞集結粒再懸浮於1 ml溶解緩衝液（20 mM Tris-Cl(pH7.5) ' 1 mM EDTA及蛋白酶抑制因子）中且使用 Polytron均質機均質化（設置5，10秒x2)。在1,000 g下離心 均質化細胞10分鐘。收集上清液且使集結粒再懸浮於1 ml 溶解緩衝液中，均質化並再次在1，〇〇〇 g下離心10分鐘。混 合兩次離心之上清液且在100,000 g下離心60分鐘。使所得 155490.doc -244- 201138808 膜集結粒再懸浮於250 μΐ檢定緩衝液（TBS(pH 7.4)、1 mM MgCl2、2.5 mM CaCl2)中。量測蛋白質濃度且將等分試樣 儲存於-80°C下直至使用。 競爭結合檢定： 在96孔培養板中在總體積為250 μΐ的檢定緩衝液（TBS (pH 7.4)、1 mM MgCl2、2.5 mM CaCl2)中進行該檢定。反 應混合物由分析樣品（SABAl-PYYv7/SABAl-PPv7、對照 PP/PYY(3-36)、對照媒劑）、膜及 0.025 nM 125I-hPYY 或 125I-hPP(2200 Ci/mmol，PerkinElmer)組成。試劑添加次序 為：150 μΐ分析樣品、50 μΐ 125I-PYY或 125I-hPP、隨後為 50 μΐ膜（每孔於檢定緩衝液中1-3 pg)。在室溫下培育結合混 合物120分鐘。藉由使用Packard細胞收集器，將反應物轉 移至GF/C培養板（經0.5%聚伸乙基亞胺及0.1% BSA預浸透） 上來結束結合反應。接著用冰冷的50 mM Tris緩衝液（pH 7.4)(4x200 ml)洗滌過濾板。洗滌後，向各孔中添加40 μΐ Micro Scint20且在Packard TopCount閃爍計數器上對培養板 計數。 GTPyS結合檢定： 在96孔培養板上以100 μΐ總體積進行該檢定。首先向各 孔中添加10 μΐ通用缓衝液（20 mM HEPES(pH 7.4)、100 mM NaCn、1 mM MgCl2、10 μΜ GDP、0.1% BSA)。接著 依序添加10 μΐ測試樣品、40 μΐ膜（每孔於檢定緩衝液中1-3 pg)並充分混合。在25°C下在振盪下培育反應物30分鐘。 接著添加40 μΐ具有35S-GTP(0.25 pCi/ml)之SPA珠粒（每孔 155490.doc -245· 201138808 0.5 mg)且在25°C下在振盪下再培育60分鐘。藉由在1000 rpm下離心5分鐘來結束反應。 表22. SABA-澱粉素、SABA-PYY3-36及 SABA-PP融合物 之功能活性。 基於細胞之 效力 功效 方法 對HS A之親和力[根 據 SPR](nM) 澱粉素對照肽（SEQ ID NO: 300) 5.1 ±1.08 (EC50，nM) 100%* 細胞cAMP 檢定 — SABAl-AMYv25 (SE〇 ID NO: 328) 12.2 ± 1.07 (ECs〇 » nM) 119% ±3.1* 細胞cAMP 檢定 25.8 ΡΥΥΜθί照肽（SEQ ID NO: 334) 0.6 (EC50，nM) 100 GTPyS結合 功能檢定 — SABAl-PYYv7 (SEQ ID NO: 344) 52 (EC50，nM) - GTPyS結合 功能檢定 22.5 PP對照肽（SEQ ID NO: 353) 1.7 (EC50，nM) 100 GTPyS結合 功能檢定 — SABA-PP MAL結合物（SEQ ID NO: 364) >1 μΜ GTPyS結合 功能檢定 18.8 *以佔測試化合物之天然肽配位體最大活性的％呈現。結果以來自一項實 驗之一式三份量測的平均值士 SEM表示。 D.其他SABA融合分子 實例D1 : SABA-骨鈣素融合物之活體外活性 骨鈣素（OCN)刺激胰β細胞中之胰島素分泌，因此使用 來自齧齒動物胰島之胰島素產生作為評估骨鈣素（OCN)之 活體外生物功能的顯示。用天然人類OCN(hOCN)及與 adnectin SABA融合之人類OCN(SABA-hOCN)處理齧齒動 物胰島且測定與各構築體相關之胰島素分泌的增強程度。 實例D2 : SABA-愛帕林融合物 SABA-APLNv2為5八8八1.6經由6><1^標籤及（〇3)7連接子 與APLNv4融合之融合物。在經麻醉大鼠中，APLNv4在靜 155490.doc •246- 201138808 脈内傳遞60 pg/kg下展現穩固的降血壓效果。SABA-APLNv2展現15,000之分子量，其中APLNv4佔融合蛋白質 量之10%。將SABA-APLNv2以600 pg/kg之劑量靜脈内傳 遞至經麻醉大鼠，而不影響血壓。SABA-APLNv2構築體 缺乏活性之可能解釋可包括由較弱產生性碰撞頻率、位阻 或肽-PKE黏接引起效力減小。未測試S AB A-APLNv2來測 定其是否結合於HSA。 •【圖式簡單說明】 圖1展示小鼠活體内HSA半衰期。將20 mg/kg(圖1A)或50 mg/kg(圖1B)之HSA注入小鼠中。 圖2展示SABA1-4在小鼠中之半衰期測定結果。圖2A : SABA1.1 ;圖 2B : SABA2.1 ;圖 2C : SABA3.1 ;及圖 2D : SABA4.1。 圖3為展示當與HSA共注射時SABA1-4在小鼠中之半衰 期延長的概要之圖。 φ 圖4展示SABA1.1(圖4A)及SABA5.1(圖4B)在食蟹镧猴中 之半衰期測定結果。 圖5展示藉由直接結合ELISA檢定測定之SABA1.2與來自 人類、小鼠及大鼠之白蛋白的結合。 圖6展示SABA1.1及HSA化學計量之測定結果。SABA1.1 與HSA以1:1之化學計量結合。 圖7展示SABA1.2與HSA之重組結構域片段之結合的 Biacore分析。 圖8展示SABA1.2在猴中在投與1 mpk及10 mpk下的藥物 155490.doc -247- 201138808 動力學概況。 圖9展示SABA1.2在猴中在靜脈内或皮下投予1 mpk下的 藥物動力學概況。 圖10展示用於產生性表現FGF21及SABA融合物之 pET29b載體的質體圖。 圖11展示在37°C下在PBS緩衝液中SABA-FGF21vl與 HSA之融合物的代表性等溫滴定熱量測定結果。在此檢定 中測定之值：N=0.87 ; KD=3.8xlO·9 Μ ; ΔΗ=-15360卡/莫 耳。 圖 12 展示在 37°C 下 SABAl-FGF21vl 與 HSA(A)、CySA(B) 及 MuSA(C)或 SABAl-FGF21v3 與 HSA(D)、CySA(E)及 MuSA(F)之結合的SPR感測圖資料。 圖13展示標記His之FGF21相對於SABAl-FGF21vl在人 類血清白蛋白存在下刺激HEK β-Klotho細胞中之pERK 1/2 含量的活性之比較。 圖14展示在HEK母細胞中相對於在HEK β-Klotho細胞中 FGF1、標記His6之FGF21 及 SABAl-FGF21vl刺激pERK 1/2 含量之活性的比較。HEK母細胞（圖14A)及HEK β-Klotho 表現細胞（圖14B)中之pERK 1 /2含量之劑量反應刺激的代 表圖。所繪圖中之數據為三份樣品之平均值土sem。 圖15A及15B展示SABAl-FGF21vl在糖尿病小鼠中 之活體内功效的檢查結果。餐後血漿葡萄糖含量。 圖16顯示在猴中與標記His之FGF21相比SABA及FGF21 融合物使tl/2增加約27倍。 155490.doc -248- 201138808 圖17A及17B展示HuSA/SABA1.2複合物之兩個視圖，其 中第二個視圖（圖17B)繞第一個視圖（圖17A)之垂直軸旋轉 70。。HuSA以表面呈現方式展示，而SABA1 2以草圖 (cartoon)展示，亦即其中β股為箭狀且環為帶子狀。sabai 2 上之多樣化環以黑色展示，而HuSA上之接觸殘基以較淺 的灰色展示。標出HuSA之三個結構域（亦即j、Π&ΙΠ)。 圖18展示劑量遞增及處理群組之示意圖（參見實例Α9)。 • 研究週數指示研究之整個持續時間。各群組内之週數（Wk) 指示自該群組處理開始起之持續時間。（a)特定群組之處理 直至刖一群組中之最後一個個體完成第29天就診後約4週 才開始以允許進行Ρκ分析。（b)各群組中之第丨、2或3列指 示以1週交錯時間間隔（第！群組中之第1與2亞組之間的15 天時間間隔）開始之亞組。第j組將包含i個s AB A j _2處理個 體及1個戈·慰劑個體，第2組將包含4個sABA 1.2處理個體 及1個安慰劑個體；第3組將包含5個（對於第丨群組）或4個 籲（對於第2及3群、組）SABA1 2處理個體及i個（對於所有群組） 安慰劑個體❶箭頭（丨）指示處理（各組之第丨及^天）；實線㈠ 指示主動觀察期；及點線指示安全性追蹤。 圖19展示在〇b/〇b小鼠中用SABA1-FGF2W1處理14天後 之HbAlc含量。 圖20展不在猴中3^^八1_1?(31721“的平均血漿濃度相對於 時間之概況（平均值土 SD)。 圖21展不用於固相肽合成之正交保護之胺基酸的實例 (上圖）$展示適用於固相合成之其他構建嵌段（下圖）。 155490.doc •249 釋

Claims (1)

  1. 201138808 七、申請專利範圍： 1. 一種包含第十纖維結合蛋白（fibronectin) ΙΠ型（巧“）择 構域之多肽’其中該10Fn3結構域結合於人類血清白蛋白 之結構域1或2之KD為1 μΜ或以下，且其中在白蛋白存在 下該多肽之無清半衰期至少5倍大於在血清白蛋白不存 在下該多肽之血清半衰期。 2. 如請求項1之多肽，其中相對於野生型i〇Fn3結構域，該 Fn3結構域在BC、DE及FG環之一或多者中包含經修飾 之胺基酸序列。 3. 如請求項1或2之多肽’其中該i〇Fn3結構域在5.5至7.4之 pH範圍内結合於血清白蛋白。 4. 如請求項1或2之多肽，其中該i〇Fn3結構域在pH 5.5結合 於HSA之KD為200 nM或以下。 5. —種包含第十纖維結合蛋白Ins(i〇Fn3)結構域之多肽， 其中該10Fn3結構域結合於人類血清白蛋白且包含與SEQ ID NO: 2至少70°/。一致之胺基酸序列。 6·如請求項5之多肽，其中該i〇Fn3結構域包含以下一或多 者：包含SEQ ID NO: 5所示胺基酸序列的BC環、包含 SEQ ID NO: 6所示胺基酸序列的DE環及包含SEQ ID NO: 7所示胺基酸序列的FG環。 7，如請求項5之多肽，其中該10Fn3結構域包含選自SEQ ID NO: 8、12、16、20及 24-44之序列。 8.如請求項5至7中任一項之多肽，其中該i〇Fn3結構域亦結 合於值〉可猴（rhesus)血清白蛋白（RhSA)、食蟹獼猴 155490.doc 201138808 (cynomolgOUS m〇nkey)血清白蛋白（CySA)或鼠類血清白 蛋白（MuSA)中之一或多者。 9. 如請求項5至7中任一項之多肽，其中該i〇Fn3結構域不與 RhSA、CySA或MuSA中之一或多者交叉反應。 10. 如請求項5至7中任一項之多肽，其中該i〇Fn3結構域結合 於HSA之KD為1 μΜ或以下。 11. 如請求項5至7中任一項之多肽，其中該i〇Fn3結構域結合 於HSA之KD為500 nM或以下。 12. 如請求項5至7中任一項之多肽，其中該i〇Fn3結構域結合 於HSA之結構域I或II。 13. 如請求項5至7中任一項之多肽，其中該1〇1?113結構域在 5.5至7.4之pH範圍内結合於血清白蛋白。 14. 如請求項5至7中任一項之多肽，其中該1〇1^3結構域在 pH 5.5結合於HSA之KD為200 nM或以下。 15. 如請求項5至7中任一項之多肽，其中在血清白蛋白存在 下該多肽之血清半衰期至少5倍大於在血清白蛋白不存 在下該多肽之血清半衰期。 16. 17. 如請求項5至7中任一項之多肽，其中在血清白蛋白存在 下該多肽之血清半衰期為至少2小時。 一種包含第十纖維結合蛋白m型（i〇Fn3)結構域之多肽， 其中該10Fn3結構域結合於人類血清白蛋白，且包含以 下·包含SEQ ID NO: 5所示胺基酸序列的BC環' 包含 SEQ ID NO: 6所示胺基酸序列的加環及包含SEQ m n〇: 7所示胺基酸序列的fg環。 155490.doc -2 - 201138808 18.如請求項π之多肽，其中該10Fn3結構域亦結合於恆河猴 血清白蛋白（RhS A)、食蟹獼猴血清白蛋白（CySA)或鼠類 血清白蛋白（MuSA)中之一或多者。 19_如請求項π之多肽，其中該10Fn3結構域不與RhSA、 CySA或MuSA中之一或多者交叉反應。 20.如請求項17至19中任一項之多肽，其中該10Fn3結構域結 合於HSA之KD為1 μΜ或以下。 馨 21.如請求項π至19中任一項之多肽，其中該10Fn3結構域結 合於HSA之KD為500 nM或以下。 22. 如請求項17至19中任一項之多肽，其中該10Fn3結構域結 合於HSA之結構域I或Π。 23. 如請求項17至19中任一項之多肽，其中該10Fn3結構域在 5.5至7.4之pH範圍内結合於血清白蛋白。 24. 如請求項17至19中任一項之多肽，其中該10Fn3結構域在 pH 5.5結合於HSA之為200 nM或以下。 ® 25·如請求項17至丨9中任一項之多肽，其中在血清白蛋白存 在下該多肽之血清半衰期至少5倍大於在血清白蛋白不 存在下該多肽之血清半衰期。 26. 如請求項17至19中任一項之多肽，其中在血清白蛋白存 在下該多肽之血清半衰期為至少2小時。 27. —種包含第十纖維結合蛋白m型（i〇Fn3)結構域及異源蛋 白質之融合多肽，其中該10pn3結構域結合於人類血清白 蛋白之KD為1 μΜ或以下。 28. 如請求項27之融合多肽，其中該i〇Fn3結構域包含與SEq 155490.doc 201138808 ID NO: 4至少70%—致之胺基酸序列。 29. 如請求項27或28之融合多肽，其中該1QFn3結構域包含選 自SEQ ID NO: 8、12、16、20及24-44之胺基酸序列。 30. 如請求項27或28之融合多肽，其中該1QFn3結構域包含具 有SEQ ID NO: 5所示胺基酸序列的BC環、具有SEQ ID NO: 6所示胺基酸序列的DE環及具有SEQ ID NO: 7所示 胺基酸序列的FG環。 3 1.如請求項27或28.之融合多肽，其中該異源蛋白質係選自 纖維母細胞生長因子21 (FGF21)、胰島素、胰島素受體 肽、骨形態生成蛋白9(BMP-9)、澱粉素（amylin)、肽 ΥΥ(ΡΥΥ3.36)、腺多狀（PP)、介白素21(IL-21)、升糖素樣 (glucagon-like)肽 l(GLP-l)、菌絲黴素（piectasin)、顆粒 蛋白前體（Progranulin)、阿斯曲林（Atstrrin)、骨鈣素 (OCN)、愛帕林（Apelin)或包含1()Fn3結構域之多肽。 32. 如請求項31之融合多肽’其中該異源蛋白質為FGF21。 33. 如請求項32之融合多肽，其中該異源蛋白質包含SEq ID NO: 118所示之序列。 34. 如請求項27或28之融合多肽’其中該異源蛋白質包含第 一 QFn3結構域，其結合於HSA以外之標執蛋白質。 35. 如清求項34之融合多肽，其進一步包含結合於標靶蛋白 質之第三10Fn3結構域。 36. 如請求項35之融合多肽，其中該第三丨〇Fn3結構域與該第 二1GFn3結構域結合於相同標靶。 37. 如請求項35之融合多肽，其中該第三i〇Fn3結構域與該第 155490.doc 201138808 一 1QFn3結構域及該第二10Fn3結構域結合於不同標耙。 3 8 ·如請求項27或28之融合多肽，其中該10Fn3結構域亦結合 於怪河狼血清白蛋白（RhSA)、食蟹獼猴血清白蛋白 (CySA)或鼠類血清白蛋白（MuSA)中之一或多者。 39. 如請求項27或28之多肽，其中該10Fn3結構域不與 RhSA、CySA或MuSA中之一或多者交叉反應。 40. 如請求項27或28之融合多肽，其中該10Fn3結構域結合於 • HSA之KD為1 μΜ或以下。 41. 如請求項27或28之融合多肽，其中該10Fn3結構域結合於 HSA之結構域I或II » 42. 如請求項27或28之融合多肽，其中該10Fn3結構域在5.5 至7.4之pH範圍内結合於血清白蛋白。 43. 如s青求項27或28之融合多狀’其中該10Fn3結構域在pH 5.5結合於HSA之Κ〇為200 nM或以下。 44. 如晴求項27或28之融合多狀’其中在血清白蛋白存在下 Φ 該融合物之半衰期至少5倍大於該異源蛋白質單獨之半 衰期。 45. 如請求項27或28之融合多肽，其中在血清白蛋白存在下 該多肽之血清半衰期為至少2小時。 46. —種包含第十纖維結合蛋白ΙΠ型（10Fn3)結構域之多肽， 其中該1GFn3結構域⑴相對於野生型iQFn3結構域，在 AB、BC、CD、DE、EF及FG環之一或多者中包含經修 飾之胺基酸序列；（Π)結合於該野生型i〇Fn3結構域不結 合之標靶分子，及（ill)包含具有序列（ED)n2C端尾部， 155490.doc 201138808 其中η為3至7之整數。 47. 如請求項46之多肽，其中該i〇Fn3結構域包含與SEQ m NO: 1之殘基9-94所示之胺基酸序列具有至少6〇%一致性 的胺基酸序列。 48. 如請求項46或47之多肽，其中該c端尾部進一步在]^端包 含E、I或EI。 49·如凊求項46或47之多肽，其中該c端尾部增強溶解度， 或減少聚集，或兩者。 50. 如請求項46或47之多肽，其中相對於該野生型i〇Fn3結構 域，該10Fn3結構域在BC、^^及卩^各環中包含經修飾之 胺基酸序列。 51. 如請求項46或47之多肽，其中該多肽結合於該標靶之〖〇 為1 μΜ或以下。 52. 如請求項32之融合多肽，其中該多肽包含選自SEQ m NO: 132-174 之序列。 53. 如請求項31之融合多肽，其中該異源蛋白質為ργγ3 36、 ΡΡ或殿粉素。 54. —種包含第十纖維結合蛋白m型（1〇Fn3)結構域之多肽， 其中》亥Fn3結構域結合於人類血_清白蛋白且包含與seq ID NO: 8、12、16、20及24-44至少70%—致之胺基酸序 列。 55. —種醫藥組合物’其包含如請求項1至54中任一項之多 肽。 56. 如請求項55之醫藥組合物，其進一步包含生理學上可接 155490.doc 201138808 受之載劑。 種如。月求項32至33或52中任一項之融合多肽的用途， ’、係用於製造用以治療糖尿病、治療或降低胰島素抗 性、治療肥胖、減輕體重或防止體重增加、治療血脂異 常、增加脂肪組織之葡萄糖攝取或減慢糖尿病進程的藥 劑。 58. —種如請求項53之融合多肽的用途，其係用於製造用以 • 治療低血糖、肥胖、糖尿病、飲食障礙、胰島素抗性症 候群或心血管疾病之藥劑。 59. —種核酸’其編碼如請求項1至26、45至51或53中任一 項之多肽或如請求項27至45或52中任一項之融合多肽。 60. 如請求項59之核酸’其中該核酸包含表3中所示之序 列。 61. —種載體，其包含如請求項59或60之核酸。 62. 如請求項61之載體’其中該載體為表現載體。 鲁 63. —種宿主細胞，其包含如請求項61或62之載體。 64. 如請求項63之宿主細胞’其中該細胞為細菌細胞。 65. 如請求項63之宿主細胞，其中該細胞為哺乳動物細胞。 155490.doc
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115433776A (zh) * 2022-09-30 2022-12-06 中国医学科学院阜外医院 Ccn3在调控血管平滑肌细胞钙化中的应用

Families Citing this family (109)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2402567C2 (ru) 2003-12-05 2010-10-27 Бристоль-Майерз Сквибб Компани Ингибиторы рецепторов фактора роста эндотелия сосудов типа 2
US8673848B2 (en) 2012-01-27 2014-03-18 Novartis Ag Synthetic apelin mimetics for the treatment of heart failure
WO2008066752A2 (en) 2006-11-22 2008-06-05 Adnexus, A Bristol-Myers Squibb R & D Company Targeted therapeutics based on engineered proteins for tyrosine kinases receptors, including igf-ir
EP2068909B1 (en) 2007-03-30 2012-04-25 Ambrx, Inc. Modified fgf-21 polypeptides and their uses
JP2011517314A (ja) 2008-02-14 2011-06-02 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニー Ｅｇｆｒに結合する操作されたタンパク質に基づく標的化された治療薬
JP2011520961A (ja) 2008-05-22 2011-07-21 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニー 多価フィブロネクチンをベースとする足場ドメインタンパク質
EP4074327A1 (en) * 2008-06-27 2022-10-19 Duke University Therapeutic agents comprising elastin-like peptides
TWI496582B (zh) 2008-11-24 2015-08-21 必治妥美雅史谷比公司 雙重專一性之ｅｇｆｒ／ｉｇｆｉｒ結合分子
TW201138808A (en) * 2010-05-03 2011-11-16 Bristol Myers Squibb Co Serum albumin binding molecules
ES2573108T3 (es) 2010-05-26 2016-06-06 Bristol-Myers Squibb Company Proteínas de armazón a base de fibronectina que tienen estabilidad mejorada
US9139629B2 (en) * 2010-06-05 2015-09-22 The Uab Research Foundation Methods for treatment of nephrotic syndrome and related conditions
US9475850B2 (en) * 2010-06-05 2016-10-25 The Uab Research Foundation Methods for treatment of nephrotic syndrome and related conditions
US20130331329A1 (en) 2011-02-24 2013-12-12 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Biomarkers for seizures
WO2012122464A1 (en) * 2011-03-10 2012-09-13 New York University Methods and compositions for modulating tnf/tnfr signaling
ES2608835T3 (es) 2011-04-13 2017-04-17 Bristol-Myers Squibb Company Proteínas de fusión Fc que comprenden nuevos enlazadores o disposiciones
EP2710382B1 (en) 2011-05-17 2017-10-18 Bristol-Myers Squibb Company Improved methods for the selection of binding proteins
WO2012158678A1 (en) 2011-05-17 2012-11-22 Bristol-Myers Squibb Company Methods for maintaining pegylation of polypeptides
EP2729481B1 (en) * 2011-07-08 2018-10-17 Amylin Pharmaceuticals, LLC Engineered polypeptides having enhanced duration of action with reduced immunogenicity
EP2773659A2 (en) 2011-10-31 2014-09-10 Bristol-Myers Squibb Company Fibronectin binding domains with reduced immunogenicity
AU2013222414B2 (en) 2012-02-21 2018-02-15 Cytonics Corporation Systems, compositions, and methods for transplantation
PT3835310T (pt) 2012-09-13 2024-05-20 Bristol Myers Squibb Co Proteínas de domínio de estrutura à base de fibronectina que ligam à miostatina
US8921307B2 (en) 2012-11-20 2014-12-30 Novartis Ag Synthetic linear apelin mimetics for the treatment of heart failure
UY35144A (es) 2012-11-20 2014-06-30 Novartis Ag Miméticos lineales sintéticos de apelina para el tratamiento de insuficiencia cardiaca
WO2014100913A1 (en) * 2012-12-24 2014-07-03 Beijing Anxinhuaide Biotech. Co., Ltd Improving the half life of a therapeutic polypeptide by fusing with a trimeric scaffold protein via a spacer
US20150361159A1 (en) 2013-02-01 2015-12-17 Bristol-Myers Squibb Company Fibronectin based scaffold proteins
ES2814558T3 (es) * 2013-02-06 2021-03-29 Bristol Myers Squibb Co Proteínas de dominio de fibronectina tipo III con solubilidad mejorada
EP3299378B1 (en) 2013-02-12 2019-07-31 Bristol-Myers Squibb Company High ph protein refolding methods
EP2968587A2 (en) 2013-03-13 2016-01-20 Bristol-Myers Squibb Company Fibronectin based scaffold domains linked to serum albumin or a moiety binding thereto
HK1220466A1 (zh) * 2013-03-14 2017-05-05 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. 爱帕琳融合蛋白和其用途
CN103333255A (zh) * 2013-06-28 2013-10-02 复旦大学 一种长效hiv‐1膜融合抑制剂
JP2016527249A (ja) 2013-07-25 2016-09-08 ノバルティス アーゲー 合成アペリンポリペプチドのバイオコンジュゲート
AU2014293386B2 (en) 2013-07-25 2016-11-17 Novartis Ag Cyclic polypeptides for the treatment of heart failure
CN103550790B (zh) * 2013-11-04 2016-01-27 上海交通大学医学院附属瑞金医院 骨膜蛋白抗体及其在药物制备中的应用
BR112016011401A2 (pt) 2013-11-20 2017-09-26 Regeneron Pharma moduladores de aplnr e utilizações dos mesmos
CA2943241C (en) * 2014-03-20 2023-09-19 Bristol-Myers Squibb Company Serum albumin-binding fibronectin type iii domains
BR112016020053A2 (pt) * 2014-03-27 2018-02-20 Genentech, Inc. métodos de previsão da reação de pacientes que sofrem de distúrbio inflamatório, de previsão da capacidade de reação de pacientes, de identificação de pacientes que sofrem de distúrbio inflamatório e de seu tratamento, usos de kit e kits
LT3412302T (lt) 2014-10-24 2021-07-26 Bristol-Myers Squibb Company Modifikuoti fgf-21 polipeptidai ir jų panaudojimai
SG10201913004UA (en) 2014-11-21 2020-03-30 Bristol Myers Squibb Co Antibodies against cd73 and uses thereof
EA037590B1 (ru) 2014-11-25 2021-04-19 Бристол-Майерс Сквибб Компани Связывающиеся с pd-l1 полипептиды на основе 10fn3 домена для визуализации
JP6701217B2 (ja) 2014-11-25 2020-05-27 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙ 生物学的製剤の１８ｆ−放射性標識方法および組成物
CN104587457B (zh) * 2015-01-13 2017-03-22 广东海大畜牧兽医研究院有限公司 一种利用难溶或不溶蛋白、多肽抗原制备纳米微粒疫苗的方法
BR112017014194A2 (pt) 2015-01-23 2018-01-09 Novartis Ag conjugados de ácido graxo de apelina sintéticos com meia-vida melhorada
WO2016164608A1 (en) * 2015-04-07 2016-10-13 Alector Llc Methods of screening for sortilin binding antagonists
BR112017022790A2 (pt) * 2015-04-24 2018-07-17 Viiv Healthcare Uk (No. polipeptídeo, composição farmacêutica, e, método para tratamento de hiv.
EP3307782B1 (en) * 2015-06-12 2025-02-26 MacKay Medical Foundation the Presbyterian Church in Taiwan MacKay Memorial Hospital Antibodies for modulation of immunoresponse
EP3331356A4 (en) * 2015-08-04 2019-04-10 New York University PROGRANULIN (PGRN) FRAGMENTS AND DERIVATIVES FOR THE TREATMENT OR AID OF LYSOSOMAL STORAGE DISEASES
EP3708580B1 (en) 2015-09-23 2023-11-01 Bristol-Myers Squibb Company Fast-off rate serum albumin binding fibronectin type iii domains
WO2017180988A2 (en) * 2016-04-15 2017-10-19 Indiana University Research And Technology Corporation Fgf21 c-terminal peptide optimization
WO2017210335A1 (en) 2016-06-01 2017-12-07 Bristol-Myers Squibb Company Imaging methods using 18f-radiolabeled biologics
CN109562195A (zh) 2016-06-01 2019-04-02 百时美施贵宝公司 用pd-l1结合多肽进行pet成像
EP3463430B1 (en) * 2016-06-03 2025-01-01 Janssen Biotech, Inc. Serum albumin-binding fibronectin type iii domains
CN106110325A (zh) * 2016-06-08 2016-11-16 上海朗安生物技术有限公司 一种新型 glp‑1 受体激动剂的制备方法及其在神经退行性疾病治疗领域的应用
EP3471750A4 (en) * 2016-06-21 2020-02-26 Janssen Biotech, Inc. Cysteine engineered fibronectin type iii domain binding molecules
CN107693775A (zh) * 2016-08-08 2018-02-16 中国人民解放军沈阳军区总医院 Creg蛋白用于预防或治疗体重超重、肥胖及其相关疾病的医药用途
WO2018052828A1 (en) * 2016-09-14 2018-03-22 Janssen Biotech, Inc. Chimeric antigen receptors comprising bcma-specific fibronectin type iii domains and uses thereof
WO2018165344A1 (en) * 2017-03-08 2018-09-13 The Regents Of The University Of Michigan Glypican-3 peptide reagents and methods
WO2018165936A1 (zh) * 2017-03-16 2018-09-20 深圳先进技术研究院 调节能量代谢的多肽及其用途
WO2018165933A1 (zh) * 2017-03-16 2018-09-20 深圳先进技术研究院 调节糖代谢的多肽及其用途
GB201710973D0 (en) 2017-07-07 2017-08-23 Avacta Life Sciences Ltd Scaffold proteins
CA3067247A1 (en) * 2017-07-11 2019-01-17 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Polypeptides that bind complement component c5 or serum albumin and fusion proteins thereof
CN109957005B (zh) * 2017-12-22 2021-04-20 深圳先进技术研究院 一种代谢素多肽人工抗原及其制备方法、抗体以及应用
CN109957006B (zh) * 2017-12-22 2021-04-20 深圳先进技术研究院 一种代谢素多肽人工抗原以及抗体和应用
CN112368015B (zh) 2018-06-18 2025-04-29 安维达生物科技公司 细胞因子融合蛋白及其用途
US12331320B2 (en) 2018-10-10 2025-06-17 The Research Foundation For The State University Of New York Genome edited cancer cell vaccines
KR102273123B1 (ko) * 2018-10-24 2021-07-05 한국과학기술원 인간 혈장 알부민에 특이적으로 결합하는 신규한 폴리펩티드 및 이의 용도
AU2019372675A1 (en) 2018-11-02 2021-02-04 Beijing Vdjbio Co., Ltd. Modified CTLA4 and methods of use thereof
CN110582515A (zh) * 2018-11-12 2019-12-17 天境生物科技(上海)有限公司 包含cd47抗体和细胞因子的融合蛋白
US12465640B2 (en) 2019-02-25 2025-11-11 The University Of Chicago Methods and compositions for treating inflammatory and autoimmune conditions with ECM-affinity peptides linked to anti-inflammatory agents
EP3947474A4 (en) * 2019-03-25 2023-07-05 Immunwork Inc. COMPOSITE POLYPEPTIDE WITH A METAL BOND MOTIFS AND MOLECULAR CONSTRUCT THEREOF
CN109821012A (zh) * 2019-04-08 2019-05-31 河南师范大学 一种用于治疗代谢疾病的药物组合物及其缓释微球制剂
TW202434620A (zh) * 2019-07-31 2024-09-01 美商美國禮來大藥廠 鬆弛素(relaxin)類似物及其使用方法
TW202128775A (zh) 2019-10-16 2021-08-01 英商阿法克塔生命科學有限公司 PD-L1抑制劑-TGFβ抑制劑雙特異性藥物部分
CN111965356B (zh) * 2019-11-28 2023-09-08 上海荣盛生物药业股份有限公司 巯基还原组合物及荧光微球层析试纸和应用
EP4076505A4 (en) * 2019-12-18 2024-01-24 ARO Biotherapeutics Company SERUM ALBUM BINDING FIBRONECTIN TYPE III DOMAIN AND USES THEREOF
CN113092772A (zh) * 2019-12-23 2021-07-09 首都医科大学附属北京世纪坛医院 尿液黏连蛋白亚组sa-2及其多肽片段在过敏性疾病中的应用
CN111521812B (zh) * 2019-12-25 2023-02-17 瑞博奥(广州)生物科技股份有限公司 视神经脊髓炎谱系疾病生物标记物组及其应用和蛋白芯片、试剂盒
WO2021139744A1 (en) 2020-01-11 2021-07-15 Beijing Ql Biopharmaceutical Co., Ltd. Conjugates of fusion proteins of glp-1 and fgf21
CN113495147A (zh) * 2020-03-19 2021-10-12 首都医科大学附属北京世纪坛医院 尿液α2-巨球蛋白及其多肽片段在妊娠糖尿病中的应用
JP7503148B2 (ja) * 2020-04-29 2024-06-19 ワンジーン バイオテクノロジー インコーポレイテッド 新規なタンパク質結合体、並びにその非アルコール性脂肪性肝炎、肥満及び糖尿病の予防または治療用途
CN112694526B (zh) * 2020-05-27 2023-01-20 杭州先为达生物科技有限公司 一种白细胞介素29突变体蛋白
AU2021280623B9 (en) * 2020-05-27 2024-03-14 Sciwind Biosciences Co., Ltd. Interleukin 29 mutant protein
GB202101299D0 (en) 2020-06-09 2021-03-17 Avacta Life Sciences Ltd Diagnostic polypetides and methods
WO2022026643A1 (en) * 2020-07-30 2022-02-03 Anwita Biosciences, Inc. Interleukin-22 fusion proteins, and their pharmaceutical compositions and therapeutic applications
CN114075272B (zh) * 2020-08-10 2023-09-22 杭州俊丰生物工程有限公司 一种人神经调节蛋白4的制备方法
CN111983241B (zh) * 2020-09-04 2022-05-20 四川大学华西医院 诊断脑卒中认知障碍的蛋白标志物以及模型的训练方法
CN112321720A (zh) * 2020-11-05 2021-02-05 无锡和邦生物科技有限公司 一种艾塞那肽人血清白蛋白融合蛋白的纯化方法
CN114848795B (zh) * 2021-02-03 2023-04-14 四川大学 RORa蛋白及其激动剂在制备抗衰老药物中的应用
CN112870336B (zh) * 2021-02-24 2022-06-14 杭州先为达生物科技有限公司 一种白细胞介素29突变体蛋白制剂
CN115385998B (zh) * 2021-04-13 2025-08-05 杭州先为达生物科技股份有限公司 稳定的iii型干扰素蛋白及其融合蛋白
WO2022234003A1 (en) 2021-05-07 2022-11-10 Avacta Life Sciences Limited Cd33 binding polypeptides with stefin a protein
EP4288461A4 (en) * 2021-07-14 2025-07-02 Beijing Ql Biopharmaceutical Co Ltd FUSION POLYPEPTIDES FOR METABOLIC DISORDERS
TW202332694A (zh) 2021-10-07 2023-08-16 英商阿凡克塔生命科學公司 血清半衰期延長之ｐｄ－ｌ１結合多肽
TW202334196A (zh) 2021-10-07 2023-09-01 英商阿法克塔生命科學有限公司 Pd-l1結合多肽
CN114288414A (zh) * 2021-12-07 2022-04-08 深圳先进技术研究院 一种跨血脑屏障的多肽及其衍生物和应用
CN114306630A (zh) * 2021-12-07 2022-04-12 深圳先进技术研究院 一种靶向脑瘤的多肽及其衍生物和应用
CN119213021A (zh) 2022-02-10 2024-12-27 艾菲赛尔治疗株式会社 与CD40L特异性结合的Stefin A蛋白变体及其用途
WO2023183932A2 (en) * 2022-03-25 2023-09-28 New York University Monobodies binding to intercellular adhesion molecule 2 (icam-2)
CN114432429A (zh) * 2022-04-12 2022-05-06 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 一种预防或治疗骨关节炎的活性分子及其应用
WO2023218243A1 (en) 2022-05-12 2023-11-16 Avacta Life Sciences Limited Lag-3/pd-l1 binding fusion proteins
CN117645661A (zh) * 2022-09-02 2024-03-05 北京志道生物科技有限公司 一种聚乙二醇修饰的il-21衍生物及其应用
WO2024051796A1 (en) * 2022-09-09 2024-03-14 Wuxi Biologics (Shanghai) Co., Ltd. Albumin binding proteins, fusion proteins and uses thereof
CN115724951B (zh) * 2022-11-15 2023-10-03 怡道生物科技(苏州)有限公司 与11型hpv结合的抗体或其抗原结合片段及其应用
KR20250135288A (ko) * 2023-01-18 2025-09-12 베이징 큐엘 바이오파마슈티컬 컴퍼니 리미티드 융합 폴리펩타이드의 액체 약학 조성물 및 이의 사용 방법
TW202432577A (zh) * 2023-02-10 2024-08-16 美商拜奧海芬治療學有限公司 投與基於纖連蛋白之支架域蛋白以治療超重、肥胖及相關健康病狀
CN121013863A (zh) 2023-03-31 2025-11-25 艾菲赛尔治疗株式会社 Tnfr2结合多肽及使用方法
FR3147292A1 (fr) 2023-03-31 2024-10-04 Affyxell Therapeutics Co., Ltd. Cellules genetiquement modifiees dans lesquelles un acide nucleique codant pour des variantes de la proteine stefine a se liant specifiquement au tnfr2 ou une proteine de fusion comprenant celle-ci a ete introduite, et leurs utilisations
FR3147278A1 (fr) 2023-03-31 2024-10-04 Avacta Life Sciences Limited Polypeptides de liaison au tnfr2 et procedes d'utilisation
AU2024277146A1 (en) * 2023-05-22 2025-11-27 Kaida Biopharmaceuticals, Inc. Antagonist fusion polypeptides
GB202308304D0 (en) 2023-06-02 2023-07-19 Univ Ulster A fusion peptide for activation of the apj and/or glp-1 receptors

Family Cites Families (119)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
USRE30985E (en) 1978-01-01 1982-06-29 Serum-free cell culture media
US4560655A (en) 1982-12-16 1985-12-24 Immunex Corporation Serum-free cell culture medium and process for making same
US4657866A (en) 1982-12-21 1987-04-14 Sudhir Kumar Serum-free, synthetic, completely chemically defined tissue culture media
US4767704A (en) 1983-10-07 1988-08-30 Columbia University In The City Of New York Protein-free culture medium
US4708934A (en) 1984-09-27 1987-11-24 Unigene Laboratories, Inc. α-amidation enzyme
US6319685B1 (en) 1984-09-27 2001-11-20 Unigene Laboratories, Inc. Alpha-amidating enzyme compositions and processes for their production and use
GB8516415D0 (en) 1985-06-28 1985-07-31 Celltech Ltd Culture of animal cells
US4927762A (en) 1986-04-01 1990-05-22 Cell Enterprises, Inc. Cell culture medium with antioxidant
US5614492A (en) 1986-05-05 1997-03-25 The General Hospital Corporation Insulinotropic hormone GLP-1 (7-36) and uses thereof
US6018030A (en) 1986-11-04 2000-01-25 Protein Polymer Technologies, Inc. Peptides comprising repetitive units of amino acids and DNA sequences encoding the same
US5770697A (en) 1986-11-04 1998-06-23 Protein Polymer Technologies, Inc. Peptides comprising repetitive units of amino acids and DNA sequences encoding the same
US5514581A (en) 1986-11-04 1996-05-07 Protein Polymer Technologies, Inc. Functional recombinantly prepared synthetic protein polymer
US5641648A (en) 1986-11-04 1997-06-24 Protein Polymer Technologies, Inc. Methods for preparing synthetic repetitive DNA
US5367052A (en) 1987-04-27 1994-11-22 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Amylin peptides
US5789234A (en) 1987-08-14 1998-08-04 Unigene Laboratories, Inc. Expression systems for amidating enzyme
WO1990003430A1 (en) 1988-09-23 1990-04-05 Cetus Corporation Cell culture medium for enhanced cell growth, culture longevity and product expression
FR2646437B1 (fr) 1989-04-28 1991-08-30 Transgene Sa Nouvelles sequences d'adn, leur application en tant que sequence codant pour un peptide signal pour la secretion de proteines matures par des levures recombinantes, cassettes d'expression, levures transformees et procede de preparation de proteines correspondant
WO1992002536A1 (en) 1990-08-02 1992-02-20 The Regents Of The University Of Colorado Systematic polypeptide evolution by reverse translation
US5122469A (en) 1990-10-03 1992-06-16 Genentech, Inc. Method for culturing Chinese hamster ovary cells to improve production of recombinant proteins
US5773574A (en) 1990-12-03 1998-06-30 The Scripps Research Institute Polypeptides for promoting cell attachment
US5235041A (en) 1990-12-28 1993-08-10 Protein Polymer Technologies, Inc. Purification of structurally ordered recombinant protein polymers
HU222249B1 (hu) 1991-03-08 2003-05-28 Amylin Pharmaceuticals Inc. Eljárás amilin agonista peptidszármazékok és ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
US5792742A (en) 1991-06-14 1998-08-11 New York University Fibrin-binding peptide fragments of fibronectin
US6287816B1 (en) 1991-06-25 2001-09-11 Genetics Institute, Inc. BMP-9 compositions
JP3485917B2 (ja) 1991-06-25 2004-01-13 ジェネティックス・インスチチュート・リミテッド・ライアビリティ・カンパニー Ｂｍｐ−９蛋白
AU2313392A (en) 1991-08-01 1993-03-02 University Research Corporation Systematic polypeptide evolution by reverse translation
PL174721B1 (pl) 1992-11-13 1998-09-30 Idec Pharma Corp Przeciwciało monoklonalne anty-CD20
WO1994017097A1 (en) 1993-01-19 1994-08-04 Regents Of The University Of Minnesota Synthetic fibronectin fragments as inhibitors of retroviral infections
NZ265452A (en) 1993-03-29 1997-09-22 Univ Cincinnati Analogues of peptide yy, dimers and pharmaceutical compositions
AU8124694A (en) 1993-10-29 1995-05-22 Affymax Technologies N.V. In vitro peptide and antibody display libraries
US5559000A (en) 1995-01-18 1996-09-24 The Scripps Research Institute Encoded reaction cassette
DE19646372C1 (de) 1995-11-11 1997-06-19 Evotec Biosystems Gmbh Genotyp und Phänotyp koppelnde Verbindung
GB9618960D0 (en) 1996-09-11 1996-10-23 Medical Science Sys Inc Proteases
US5922676A (en) 1996-09-20 1999-07-13 The Burnham Institute Methods of inhibiting cancer by using superfibronectin
DE69739163D1 (de) 1996-10-17 2009-01-22 Mitsubishi Chem Corp Molekül, welches Genotyp und Phänotyp zusammenführt und dessen Anwendungen
US6261804B1 (en) 1997-01-21 2001-07-17 The General Hospital Corporation Selection of proteins using RNA-protein fusions
ATE332368T1 (de) 1997-01-21 2006-07-15 Gen Hospital Corp Selektion von proteinen mittels rns-protein fusionen
US5830434A (en) 1997-02-26 1998-11-03 Medical University Of South Carolina Foundation For Research Development Methods of treating non-insulin dependent diabetes mellitus with pancreatic polypeptide
WO1998048837A1 (en) 1997-04-30 1998-11-05 Enzon, Inc. Polyalkylene oxide-modified single chain polypeptides
DE69839147T2 (de) 1997-06-12 2009-02-19 Novartis International Pharmaceutical Ltd. Künstliche antikörperpolypeptide
US6159722A (en) 1997-12-03 2000-12-12 Boehringer Mannheim Gmbh Chimeric serine proteases
US6046167A (en) 1998-03-25 2000-04-04 University Of Cincinnati Peptide YY analogs
AU3463699A (en) 1998-04-03 1999-10-25 Phylos, Inc. Addressable protein arrays
EP1051432B1 (en) 1998-12-08 2007-01-24 Biovation Limited Method for reducing immunogenicity of proteins
US7115396B2 (en) 1998-12-10 2006-10-03 Compound Therapeutics, Inc. Protein scaffolds for antibody mimics and other binding proteins
GB9827228D0 (en) 1998-12-10 1999-02-03 Univ Nottingham Cancer detection method and reagents
EP1137941B2 (en) 1998-12-10 2013-09-11 Bristol-Myers Squibb Company Protein scaffolds for antibody mimics and other binding proteins
US6818418B1 (en) 1998-12-10 2004-11-16 Compound Therapeutics, Inc. Protein scaffolds for antibody mimics and other binding proteins
US6307024B1 (en) 1999-03-09 2001-10-23 Zymogenetics, Inc. Cytokine zalpha11 Ligand
IL145941A (en) 1999-04-28 2007-08-19 Univ Texas Compositions and methods for cancer treatment by selectively inhibiting vegf
US7601691B2 (en) 1999-05-17 2009-10-13 Conjuchem Biotechnologies Inc. Anti-obesity agents
KR20020033743A (ko) 1999-07-27 2002-05-07 추후기재 펩티드 수용체 리게이션 방법
EP1268544A2 (en) 2000-03-31 2003-01-02 Institut Pasteur Peptides blocking vascular endothelial growth factor (vegf)-mediated angiogenesis, polynucleotides encoding said peptides and methods of use thereof
CA2412664A1 (en) 2000-06-15 2001-12-20 Board Of Regents The University Of Texas System Regulatable, catalytically active nucleic acids
EP1301538B1 (en) 2000-07-11 2015-12-09 Research Corporation Technologies, Inc Artificial antibody polypeptides
JP2004526419A (ja) 2000-10-16 2004-09-02 フィロス インク． 抗体模倣物および他の結合タンパク質のためのタンパク質骨格
US7598352B2 (en) 2000-11-17 2009-10-06 University Of Rochester Method of identifying polypeptide monobodies which bind to target proteins and use thereof
AU2002307146B2 (en) 2001-04-04 2007-02-01 University Of Rochester AlphaNuBeta3 integrin-binding polypeptide monobodies and their use
CA2444854A1 (en) 2001-04-26 2002-11-07 Avidia Research Institute Combinatorial libraries of monomer domains
AU2002342672A1 (en) 2001-09-11 2003-03-24 Nascacell Gmbh Method for screening for inhibitors of protein/protein interaction and corresponding ribozymes
US20080193445A1 (en) 2002-01-18 2008-08-14 Liliane Goetsch Novel anti-IGF-IR antibodies and uses thereof
AU2003243436A1 (en) 2002-06-06 2003-12-22 Shohei Koide Reconstituted polypeptides
DE10227232A1 (de) 2002-06-18 2004-01-15 Aventis Pharma Deutschland Gmbh Saure Insulinzubereitungen mit verbesserter Stabilität
JP2006509041A (ja) 2002-10-23 2006-03-16 ザイモジェネティクス，インコーポレイティド Ｉｌ−２８およびｉｌ−２９を用いるウイルス感染を治療するための方法
US20080220049A1 (en) 2003-12-05 2008-09-11 Adnexus, A Bristol-Myers Squibb R&D Company Compositions and methods for intraocular delivery of fibronectin scaffold domain proteins
RU2402567C2 (ru) 2003-12-05 2010-10-27 Бристоль-Майерз Сквибб Компани Ингибиторы рецепторов фактора роста эндотелия сосудов типа 2
EP1786918A4 (en) 2004-07-17 2009-02-11 Imclone Systems Inc NEW BISPECIFIC ANTIBODY TETRAVALENT
US7597884B2 (en) 2004-08-09 2009-10-06 Alios Biopharma, Inc. Hyperglycosylated polypeptide variants and methods of use
FR2888850B1 (fr) 2005-07-22 2013-01-11 Pf Medicament Nouveaux anticorps anti-igf-ir et leurs applications
US7612181B2 (en) 2005-08-19 2009-11-03 Abbott Laboratories Dual variable domain immunoglobulin and uses thereof
EP1931770A4 (en) 2005-10-07 2009-11-25 Univ California NUCLEIC ACIDS CODING FOR MODIFIED CYTOCHROM P450 ENZYME AND METHOD OF USE THEREOF
EP1973559B1 (en) 2005-11-23 2013-01-09 Acceleron Pharma Inc. Activin-actriia antagonists and uses for promoting bone growth
EP1996227A2 (en) 2006-02-24 2008-12-03 CHIESI FARMACEUTICI S.p.A. Anti-amyloid immunogenic compositions, methods and uses
JP2009534331A (ja) 2006-04-21 2009-09-24 トランジェーヌ、ソシエテ、アノニム Ｈｐｖ‐１８を主体とするパピローマウイルスワクチン
WO2008031098A1 (en) 2006-09-09 2008-03-13 The University Of Chicago Binary amino acid libraries for fibronectin type iii polypeptide monobodies
WO2008048970A2 (en) 2006-10-16 2008-04-24 The Arizona Board Of Regents, A Body Corporate Of The State Of Arizona Acting For And On Behalf Of Arizona State University Synthetic antibodies
WO2008066752A2 (en) * 2006-11-22 2008-06-05 Adnexus, A Bristol-Myers Squibb R & D Company Targeted therapeutics based on engineered proteins for tyrosine kinases receptors, including igf-ir
ATE516814T1 (de) 2007-02-02 2011-08-15 Bristol Myers Squibb Co 10fn3 domain zur behandlung von krankheiten begleitet von unerwünschter angiogenese
CA2679548C (en) 2007-03-02 2015-01-27 Amgen Inc. Methods and compositions for treating tumor diseases
US8680019B2 (en) 2007-08-10 2014-03-25 Protelica, Inc. Universal fibronectin Type III binding-domain libraries
US8470966B2 (en) 2007-08-10 2013-06-25 Protelica, Inc. Universal fibronectin type III binding-domain libraries
AU2008287426B2 (en) 2007-08-10 2014-06-26 Protelica, Inc. Universal fibronectin type III binding-domain libraries
JP2010538972A (ja) 2007-08-20 2010-12-16 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニー 転移性癌の処置のためのｖｅｇｆｒ−２阻害剤の使用
KR101686247B1 (ko) 2007-10-31 2016-12-14 메디뮨 엘엘씨 단백질 스캐폴드
WO2009073115A1 (en) 2007-11-28 2009-06-11 Bristol-Myers Squibb Company Combination vegfr2 therapy with mtor inhibitors
AU2008345674A1 (en) 2007-12-19 2009-07-09 Centocor, Ortho Biotech Inc. Alternative scaffold protein fusions phage display via fusion to pIX of M13 phage
KR20100111283A (ko) 2007-12-27 2010-10-14 노파르티스 아게 개선된 피브로넥틴계 결합 분자 및 그들의 용도
CA2715312C (en) 2008-02-12 2012-02-07 Steven E. Nielsen Searchable electronic records of underground facility locate marking operations
JP2011517314A (ja) 2008-02-14 2011-06-02 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニー Ｅｇｆｒに結合する操作されたタンパク質に基づく標的化された治療薬
KR20110021832A (ko) 2008-05-02 2011-03-04 노파르티스 아게 개선된 피브로넥틴­기재 결합 분자 및 그의 용도
JP2011520961A (ja) 2008-05-22 2011-07-21 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニー 多価フィブロネクチンをベースとする足場ドメインタンパク質
RS55218B1 (sr) 2008-10-31 2017-02-28 Janssen Biotech Inc Kompozicije fibronektin tip iii skalno baziranih domena, metode i upotrebe
US8415291B2 (en) 2008-10-31 2013-04-09 Centocor Ortho Biotech Inc. Anti-TNF alpha fibronectin type III domain based scaffold compositions, methods and uses
TWI496582B (zh) 2008-11-24 2015-08-21 必治妥美雅史谷比公司 雙重專一性之ｅｇｆｒ／ｉｇｆｉｒ結合分子
EA201100943A1 (ru) 2008-12-16 2012-05-30 Новартис Аг Системы дрожжевого дисплея
WO2010093771A1 (en) 2009-02-11 2010-08-19 Bristol-Myers Squibb Company Combination vegfr2 therapy with temozolomide
CN102596992B (zh) 2009-02-12 2015-09-09 詹森生物科技公司 基于ⅲ型纤连蛋白结构域的支架组合物、方法及用途
US8067201B2 (en) 2009-04-17 2011-11-29 Bristol-Myers Squibb Company Methods for protein refolding
WO2011020033A2 (en) 2009-08-13 2011-02-17 Massachusetts Institute Of Technology Engineered proteins including mutant fibronectin domains
ES2860453T3 (es) 2009-10-30 2021-10-05 Novartis Ag Bibliotecas universales del dominio de unión del lado inferior de la fibronectina de tipo III
WO2011051466A1 (en) 2009-11-02 2011-05-05 Novartis Ag Anti-idiotypic fibronectin-based binding molecules and uses thereof
US20110123545A1 (en) 2009-11-24 2011-05-26 Bristol-Myers Squibb Company Combination of vegfr2 and igf1r inhibitors for the treatment of proliferative diseases
WO2011092233A1 (en) 2010-01-29 2011-08-04 Novartis Ag Yeast mating to produce high-affinity combinations of fibronectin-based binders
US8961977B2 (en) 2010-02-12 2015-02-24 University Of Rochester Antigenic mimics of discontinuous epitopes of pathogen recognized by broadly neutralizing antibodies
CN102762591A (zh) 2010-02-18 2012-10-31 百时美施贵宝公司 结合il-23的基于纤连蛋白的支架结构域蛋白质
US9249508B2 (en) 2010-03-14 2016-02-02 Mark S. Braiman Bromine-sensitized solar photolysis of carbon dioxide
SG10201505470QA (en) 2010-04-13 2015-08-28 Medimmune Llc Trail r2-specific multimeric scaffolds
PE20130238A1 (es) * 2010-04-13 2013-03-11 Bristol Myers Squibb Co Proteinas de dominio de armazon basadas en fibronectina que se unen a la proproteina convertasa subtilisina kexina tipo 9 (pcsk9)
KR101863033B1 (ko) 2010-04-30 2018-06-01 얀센 바이오테크 인코포레이티드 안정화된 파이브로넥틴 도메인 조성물, 방법 및 용도
TW201138808A (en) 2010-05-03 2011-11-16 Bristol Myers Squibb Co Serum albumin binding molecules
ES2573108T3 (es) 2010-05-26 2016-06-06 Bristol-Myers Squibb Company Proteínas de armazón a base de fibronectina que tienen estabilidad mejorada
WO2012016245A2 (en) 2010-07-30 2012-02-02 Novartis Ag Fibronectin cradle molecules and libraries thereof
EP2655411A1 (en) 2010-12-22 2013-10-30 Bristol-Myers Squibb Company Fibronectin based scaffold domain proteins that bind il-23
ES2608835T3 (es) 2011-04-13 2017-04-17 Bristol-Myers Squibb Company Proteínas de fusión Fc que comprenden nuevos enlazadores o disposiciones
EP2710382B1 (en) 2011-05-17 2017-10-18 Bristol-Myers Squibb Company Improved methods for the selection of binding proteins
WO2012158678A1 (en) 2011-05-17 2012-11-22 Bristol-Myers Squibb Company Methods for maintaining pegylation of polypeptides
KR102035713B1 (ko) 2011-09-27 2019-10-24 얀센 바이오테크 인코포레이티드 대체 결합 표면을 가진 피브로넥틴 유형 iii 반복체 기반의 단백질 스캐폴드
CA2943241C (en) 2014-03-20 2023-09-19 Bristol-Myers Squibb Company Serum albumin-binding fibronectin type iii domains
EP3708580B1 (en) * 2015-09-23 2023-11-01 Bristol-Myers Squibb Company Fast-off rate serum albumin binding fibronectin type iii domains

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115433776A (zh) * 2022-09-30 2022-12-06 中国医学科学院阜外医院 Ccn3在调控血管平滑肌细胞钙化中的应用
CN115433776B (zh) * 2022-09-30 2023-12-22 中国医学科学院阜外医院 Ccn3在调控血管平滑肌细胞钙化中的应用

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