TW201124427A

TW201124427A - IL-1 binding proteins

Info

Publication number: TW201124427A
Application number: TW099135501A
Authority: TW
Inventors: Chung-Ming Hsieh; Cheng-Bin Wu; Miller Renee; Dominic J Ambrosi
Original assignee: Abbott Lab
Priority date: 2009-10-15
Filing date: 2010-10-15
Publication date: 2011-07-16
Also published as: KR20120104542A; CA2775402A1; EP2488201A1; CN102655880A; ZA201202610B; US20110142761A1; US20130295004A1; WO2011047266A1; RU2012119788A; UY32949A; AU2010306681A1; EP2488201A4; JP2013507929A; US8398966B2; AR078650A1; IN2012DN02634A; IL219202A0; BR112012007365A2; MX2012004412A

Description

201124427 六、發明說明：【發明所屬之技術領域】本發明係關於IL-1结人| ^ 、° 口蛋白’且具體而言係關於其於預防及/或治療IL-1介導之疾病中的用途。本申請案主張2_年10月15曰申請之美國臨時申請案第 61/251’856號的優先權，出於任何目的其全部内容以引用的方式併入本文中。【先前技術】、.田胞激素諸如；丨白素](IL])及腫瘤壞死因子為由各種細胞（諸如單核細胞及巨噬細胞）產生之分子，其為發炎過程之介體。介白素]為具有各種生物及生理作用之細胞激素，包括發熱、前列腺素合成（在例如纖維母細胞、肌肉細胞及内皮細胞中）、τ淋巴細胞活化及介白素_2 產生。介白素-1超家族：IL-1超家族之初始成員為IL_la、iL_ 1β及IL-1受體拮抗劑（il-IRa)。iL-la及IL-Ιβ為針對感染之免疫防禦所涉及的促炎性細胞激素。IL_1Ra為與IL_la 及IL-Ιβ競爭受體結合從而阻斷其在免疫活化中之作用的分子。近年來，已發現IL-1超家族中加入了其他分子，包括 IL-18(參見 Dinarello (1994) FASEB J. 8(15):1314-3225; Huising等人，（2004) Dev. Comp. Immunol. 28(5):395-413) 及另六種與IL-la、IL-Ιβ或IL-1RA具有結構同源性之基因。該後加之六個成員稱為IL1F5、IL1F6、IL1F7、 IL1F8、IL1F9及 IL1F10。因此，IL-lct、IL-Ιβ及 IL-1RA 已 151544.doc 201124427 分別更名為IL-1F1、IL_1F2及IL_1F3(參見Sims等人， (2001) Trends Immunol. 22(1〇):536_537 ; Dunn 等人 (2001) Trends Immunol. 22(10):533-536)。已描述IL-1 家族之另一推疋成員’稱為IL-33或IL-1F11，但此名稱未在 HGNC基因家族命名資料庫中得到官方認可。 IL-lct與IL-Ιβ皆由巨噬細胞、單核細胞及樹突狀細胞產生。其形成身體針對感染之發炎性反應的重要部分。此等細胞激素增加内皮細胞上黏附因子之表現以使白血球（對抗病原體之細胞）能夠移位至感染部位且重設下視丘體溫調節中樞，從而導致體溫升高，自身表現為發熱。因此， IL-1被稱為内源性致熱原。體溫升高有助於身體免疫系統對抗感染。IL-1在血細胞生成調節中亦為重要的。比_1〇1為各種免疫反應、發炎過程及血細胞生成所涉及之多效性細胞激素。IL-la由活性巨噬細胞產生，藉由誘導IL_2釋放、 B細胞成熟與增殖及纖維母細胞生長因子活性來刺激胸腺細胞增殖。IL-la蛋白與發炎性反應有關’鑑別為内源性致熱原’且據報導刺激自滑膜細胞釋放前列腺素及膠原。其以由妈蛋白酶以蛋白分解方式加工且以仍未充分研究之機制釋放之原蛋白形式產生。此基因及另外八種介白素1家族基因在染色體2上形成細胞激素基因叢。化_1〇1及其致病作用洋細描述於Ibelgaufts，Lexikon Zytokine (Cytokine Dictionary)，Medikon Verlag，Munich 1992及其中所引用之文獻中。亦在例如〇ppenheim等人，（1986)

Immunol. Today 7:45-56 ; Durum 等人，（1985) Ann. Rev. 151544.doc 201124427

ImmUnol. 3:263.287 及 Synn〇ns 等人，（i989) Lymph〇]dne Res. 8:365-372中提及IL-Ia的非所需作用。IL1(^於其在增加軟骨再吸收中之作用而最初被稱為「分解代謝產物」’而且由於其對滑膜細胞中之膠原酶及前列腺素的刺激作用而被稱為「單核細胞細胞因子」（MCF)及因對急性期反應具有刺激效應而被稱為「白血球内源性因子」 (LEM)。另外，IL-lcx具有廣譜生物活性，因為IL_la由許多不同細胞合成，諸如單核細胞、巨嗤細胞、纖維母細胞、内皮細胞及淋巴細胞，且許多細胞具有對IL la具有特異性之受體。因此，IL-la作為各種病症及病症症狀之引發物而佔有重要地位。此等病症通常為幾乎無治療方法之極嚴重病症。已提出，此等基因之多形現象與類風濕性關節炎及阿茲海默氏病（Alzheimer's disease)相關。一般而 5 ’ IL-1與許多人類疾病有關，包括關節炎、肺纖維化、中樞神經系統疾病、糖尿病及某些心血管疾病。周邊組織中之IL-Ιβ產生亦與發熱相關之痛覺過敏（對疼痛之敏感性增加）相關（Morgan等人，（2004) Brain Res. 1022(1-2):96-100)。在很大程度上，比^之此兩種形式結合相同細胞受體。此受體由兩個相關但不相同之次單元構成，該等次單元經由通常與某些其他受體共用之路徑傳輪細胞内信號。此等其他受體包括先天免疫受體之Toll家族及IL-18之受體。IL-la及IL-Ιβ亦具有類似生物性質，包括誘發發熱、慢波睡眠及嗜中性球增多症、T及B淋巴細胞活化、纖維母細胞增殖、針對某些細胞之細胞毒性、誘導膠 151544.doc 201124427 原酶、合成肝急性期蛋白及增加群落刺激因子及膠原蛋白之產生。已分離及表現編碼IL -1之兩種不同形式的eDNA ;此等 cDNA表示兩種不同基因產物，稱為iL-ip(Auron等人， (1984) /V〇c，iVai/· «SW. t/iSd 81:7909)及 IL-Ια (Lomedico 等人，（1984) Nature 312:458)。與蛋白質層面上由人類單核細胞產生之主要形式。人類 IL-1之該兩種形式僅共有26%胺基酸同源性。儘管其具有不同多肽序列，但IL-1之該兩種形式具有結構相似性 (Auron等人，（1985) */. Mo/· Ce// 2:169)，亦即胺基酸同源性限於IL-1分子之個別區》 IL-la及IL-Ιβ係以前驅肽形式產生。換言之，其以長蛋白質形式產生，接著經加工以釋放被稱為成熟蛋白質之較短活性分子。成熟IL-Ιβ例如在經由蛋白質卡斯蛋白酶 (caspase)家族之某一成員（稱為卡斯蛋白酶_丨或介白素“轉化酶（ICE))裂解後自IL-Ιβ前體（Pro-IL-Ιβ)釋放。人類IL1 超家族之各成員之成熟形式的三維結構由產生筒狀蛋白質之12-14個β股構成。此項技術中需要改良的結合IL-Ιβ之抗體，以用於針對 IL-Ιβ相關疾病之新穎療法及用於偵測樣品及組織中之il_ 1β ° 【發明内容】本發明提供一種新穎結合蛋白家族，包括單株抗體 (mAb)、CDR移植抗體、人類化抗體、親和力成熟抗體及 151544.doc 201124427 其片段，其能夠結合人類IL-Ιβ，以高親和力結合，且結合並中和IL-Ιβ。本發明提供一種用於抑制人類IL-Ιβ之治療方法且提供治療與IL-Ιβ含量增加相關之疾病及病症（尤其發炎性病症）的組合物及方法。本發明亦提供一種能夠結合IL-Ιβ之抗體或其抗原結合部分，其中該能夠結合IL-1β之抗體或其抗原結合部分包含選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 29、SEQ ID NO: 30、SEQ ID NO: 31、SEQ ID NO: 32、SEQ ID NO: 33、 SEQ ID NO: 34、SEQ ID NO: 35、SEQ ID NO: 36、SEQ ID NO: 37、SEQ ID NO: 38、SEQ ID NO: 39及 SEQ ID NO: 40。在另一實施例中，本發明提供偵測及/或量測樣品、混合物及組織中之人類IL-Ιβ的方法。在本發明之一態樣中，分離之結合蛋白能夠結合人類 IL-Ιβ且包含至少一個包含選自由以下組成之群的胺基酸序列之CDR: SEQ ID NO:26之殘基31-35(CDR-H1); SEQ ID NO:26 之殘基 50-65(CDR-H2) ; SEQ ID NO:26 之殘基98-111(CDR-H3) ; SEQ ID NO:27 之殘基 24-34(CDR-Ll) ; SEQ ID NO:27 之殘基 50-56(CDR-L2);及 SEQ ID NO:27 之殘基 89-97(CDR-L3)。

在另一實施例中，結合蛋白包含至少三個選自可變域 CDR組之CDR，其中該可變域CDR組選自由以下組成之群：VH CDR組，包含SEQ ID y〇:26之殘基 31-35(CDR-Hl)、SEQ ID NO:26 之殘基 50-65(CDR-H2)及 SEQ ID NO:26 之殘基 98-lll(CDR-H3);及 VL CDR 組，包含 SEQ

S 151544.doc 201124427 ID NO:27 之殘基 24-34(CDR-Ll)、SEQ ID NO:27 之殘基 50-56(CDR-L2)及 SEQ ID NO:27 之殘基 89-97(CDR-L3) » 在一實施例中，結合蛋白包含含三個CDR之可變重鏈 (VH)組且亦包含含三個CDR之可變輕鏈（VL)組。在本發明之另一實施例中，包含一或多個上述CDR之 IL-1 β結合蛋白進一步包含相應的人類重鏈受體架構序列 (對於CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列而言）及/或相應的人類輕鏈受體架構序列（對於CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3 序列而言）。在一實施例中，本發明之結合蛋白的人類重鏈受體架構序列選自表3之任何人類重鏈受體架構序列，且本發明之結合蛋白的人類輕鏈受體架構序列選自表4之任何人類輕鏈受體架構序列。因此，在一實施例中，本發明之結合蛋白的人類受體架構序列選自由SEq id NO: 1〇_ 17(其為人類重鏈受體架構序列）及seq id NO: 18-25(其為人類輕鏈受體架構序列）組成之群。在一實施例中，人類受體架構序列選自由SEQ ID NO: 1〇_13(重鏈）、14_17(重鏈）、18-21(輕鏈）及22-25(輕鏈）組成之群。 IL-Ιβ結合蛋白可包含含至少一個架構區(FR)胺基酸取代之人類受體架構，其中該架構之胺基酸序列與該人類受體架構之序列至少65%一致，且包含至少7〇個與該人類受體架構一致之胺基酸殘基。在另-實施例中，本發明之IL，結合蛋白包含人類受體架構，其中該㈣架構在關鍵殘基冑包含Μ 一個架構區胺基酸取代，該關鍵殘基選自由以下組成之群. 151544.doc 201124427 鄰接CDR之殘基；糖基化位點殘基；稀有殘基；能夠與人類IL-1 β相互作用之殘基；能夠與CDR相互作用之殘基；典型殘基；重鏈可變區與輕鏈可變區之間的接觸殘基；維尼爾區（Vernier zone)内之殘基；及

Chothia定義之可變重鏈CDR1與Kabat定義之第一重鏈架構之間重疊的區中之殘基。在一實施例中，IL-1 β結合蛋白可包含關鍵殘基，其中該關鍵殘基選自由以下組成之群：1Η、12Η、24Η、27Η、 29Η、37Η、48Η、49Η、67Η、71Η、73Η ' 76Η、78Η、 94Η、1L、2L、3L、4L、43L、49L、64L、83L(全部均為 Kabat編號）。在另一實施例中，本發明之IL-1 β結合蛋白包含共同人類可變域，其為本文所述之共同人類可變域。在另一態樣中，本發明提供IL-Ιβ結合蛋白，其包含至少一個包含選自由以下組成之群的胺基酸序列之可變域： SEQ ID NO: 28 ' SEQ ID NO: 29 > SEQ ID NO: 30 ' SEQ ID NO: 31、SEQ ID NO: 32、SEQ ID NO: 33、SEQ ID NO: 34、SEQ ID NO: 35、SEQ ID NO: 36、SEQ ID NO: 37、SEQ ID NO: 38、SEQ ID NO: 39及 SEQ ID NO: 40。在另一態樣中，本發明提供IL-Ιβ結合蛋白，其包含含 151544.doc -9- 201124427 選自由 SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:30、 SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32 及 SEQ ID NO:33 組成之群的胺基酸序列之可變重鏈多肽，其中該等結合蛋白能夠結合人類IL-Ιβ。在另一態樣中，本發明提供IL-Ιβ結合蛋白，其包含含選自由 SEQ ID N〇:3 4、SEQ ID N〇:3 5、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:39及SEQ ID NO:40組成之群的胺基酸序列之可變輕鏈多肽，其中該等結合蛋白能夠結合人類IL-Ιβ。在另一態樣中，本發明提供結合蛋白，其包含含選自由 SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32及SEQ ID NO:33組成之群的胺基酸序列之可變重鏈多肽，及含選自由SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:3 8、SEQ ID NO:39及SEQ ID NO:40組成之群的胺基酸序列之可變輕鏈多肽，其中該等結合蛋白能夠結合人類 IL-Ιβ 。在另一態樣中，結合蛋白包含選自由以下組成之群的可變重鏈多肽及可變輕鏈多肽：SEQ ID NO:30及SEQ ID NO:36 ; SEQ ID NO:30及 SEQ ID NO:37 ; SEQ ID NO:30及 SEQIDNO:39;U&SEQIDNO:3 0&SEQIDNO:40。在另一態樣中，結合蛋白包含選自由以下組成之群的可變重鏈多肽及可變輕鏈多肽：SEQ ID NO:33及SEQ ID NO:36 ; SEQ ID NO:33及 SEQ ID NO:37 ; SEQ ID NO:33及 SEQ ID NO:39 ;以及 SEQ ID NO:33及 SEQ ID NO:40。 151544.doc -10- 201124427 在另一態樣中’本發明提供一種上述結合蛋白，其中該結合蛋白為免疫球蛋白分子、二硫基連接之以、單株抗體、scFv、嵌合抗體、單域抗體、CDR移植抗體、微型雙功能抗體、人類化抗體、多特異性抗體、Fab、雙重特異性抗體、DVD-IgTM結合蛋白、Fab'、雙特異性抗體、 F(ab，）2 或 Fv ° 在另一態樣中’上述結合蛋白包含選自由以下組成之群的免疫球蛋白重鏈恆定域：人類IgM恆定域、人類1§(}4恆定域、人類IgGl恆定域、人類IgE恆定域、人類Ig〇}2恆定域、人類IgG3恆定域及人類IgA恆定域。在另一態樣中，本發明之結合蛋白進一步包含具有選自由SEQ ID n〇:2& SEQ ID NO:3組成之群的胺基酸序列之重鏈恆定區及另外包含具有選自由SEQ ID NO:4及SEQ ID NO:5組成之群的胺基酸序列之輕鏈恆定區。在本發明之另一態樣中，本發明之結合蛋白能夠調節人類IL-Ιβ之生物功能及另外能夠中和人類。在本發明之一態樣中，本發明之結合蛋白對標靶具有選自由以下組成之群的締合速率常數（K〇n):至少約1〇2 Μ、·1 ; 至少約103 Μ-、-1 ; 及至少約106 M-1S-1 至少約 ΙΟ4 jy^s·1 ;至少約 1〇5 m-1s-1 ; ’如藉由表面電漿子共振所量測。另I樣中本發明之IL· 1 β結合蛋白對標把具有選由以下組成之群的解離速率常數（K〇ff):至多約ι〇_3 ^ ; 至多約10·4 s·1 ;至多約10-5 s-i 表面電漿子共振所量測。及至多約10_6 s·1，如藉由 151544.doc -11 - 201124427 在另一態樣中，本發明之IL_ip結合蛋白對於IL_ip標靶刀子具有選自由以下組成之群的解離常數（KD):至多約 10 M，至多約1(Τ8 Μ ;至多約10-9 M ;至多約1〇·10 M ; 至多約10·11 Μ ;至多約10-12 M ;及至多約1〇.13 M。另外、纟σ合蛋白對於1L-Ιβ具有選自由以下組成之群的解離常數(KD).約 ΐ.3ΐχΐ〇-10 μ ;約 1.47x10·〗° Μ ;約 1·61χ10·10 Μ ;約 l』6xl〇.10 Μ ;約 2.02Χ10·10 Μ ;約 2.06Χ10.10 Μ ;約 2‘3><1〇'1()]^;及約2.84><1〇-1〇河。在本發明之另一態樣中，本發明之結合蛋白進一步包含選自由免疫黏附分子、顯影劑、治療劑及細胞毒性劑組成之群的藥劑。該顯影劑可為此項技術中已知之任何顯影劑’包括（但不限於）放射性標記（包括（但不限於）3Η、 14C、35S、90Υ、99Tc、lllln、1251、1311、177Lu、 166Η〇及153Sm)、酶、螢光標記、發光標記、生物發光標記、磁性標記或生物素分子。該治療劑或細胞毒性劑可為抗代謝物、烷基化劑、抗生素、生長因子、細胞激素、抗血&生成劑、4几有絲分裂劑、蒽環黴素（anthraCycline)、毒素及細胞凋亡劑。在另一態樣中’本發明之IL-Ιβ結合蛋白經糖基化。在一實施例中，該糖基化為人類糖基化模式。在本發明之一態樣中’ IL-1 β結合蛋白為晶體。在一實施例中，該晶體為無載劑藥物控制釋放晶體。在另一實施例中，結晶結合蛋白之活體内半衰期大於其可溶性對應物。在又一實施例中’結晶結合蛋白在結晶後保留生物活 151544.doc -12- 201124427 性。本發明之一態樣係關於一種分離之核酸，其編碼以上所揭示之任一結合蛋白或其抗原結合部分。在一實施例中，本發明提供一種分離之核酸，其編碼選自由以下組成之群的多肽：包含重鏈可變域（VH)之多肽，其中該重鏈可變域包含本文所述之CDR-H1、CDR-H2及/或CDR-H3 ;包含輕鏈可變域（VL)之多肽，其中該輕鏈可變域包含本文所述之 CDR-L1、CDR-L2及/或CDR-L3，或兩種多肽之組合。本發明之另一實施例提供一種包含以上所揭示之分離之核酸的載體，其中該載體選自由以下組成之群：pcDNA、 pTT(Durocher等人，（2002) Nucl. Acids Res. 30(2e9):l-9)、 pTT3(具有額外多個選殖位點之ρττ)、pEFBOS(Mizushima 及 Nagata (1990) Nucl· Acids Res. 18(17):5322)、pBV、 pJV、pBJ及 pHybE。在另一態樣中’宿主細胞經本文所揭示之載體轉型。在一實施例中，該宿主細胞為原核細胞，包括（但不限於）大腸桿菌（Escherichia coli)。在另一實施例中，宿主細胞為真核細胞，包括（但不限於）原生生物細胞、動物細胞、植物細胞及真菌細胞。在另一實施例中，宿主細胞為哺乳動物細胞’包括（但不限於）CH〇細胞及COS細胞；或真菌細胞’例如釀酒酵母（Saccharomyces cerevisiae);或昆蟲細胞，例如Sf9。在另一態樣中，本發明提供一種產生結合IL_ 1 β之結合蛋白的方法，其包含在足以產生結合IL_ip之結合蛋白的 151544.doc •13- 201124427 條件下在培養基中培養以上所揭示之任一宿主細胞。在另一實施例中，本發明提供一種根據本文所揭示之方法所產生的結合蛋白。在一實施例中’本發明提供一種用於釋放結合蛋白之組合物，其中該組合物包含調配物，該調配物又包含如本文所揭示之結晶結合蛋白、結晶抗體構築體或結晶抗體結合物、成分及至少一種聚合載劑。在一實施例中，該聚合載劑為一或多種選自由以下組成之群的聚合物：聚（丙烯酸）、聚（氰基丙烯酸酯）、聚（胺基酸）、聚（酸酐）、聚（縮肽）、聚（醋）、聚（乳酸）、聚（乳酸·共·乙醇酸）或PLGa、聚 (b-技基丁酸醋）' 聚（己内酯）、聚（二氧雜環己酮）；聚（乙二醇）、聚（（經基丙基）曱基丙烯醯胺）、聚[(有機）偶磷氮]、聚（原酸酯）、聚（乙烯醇）、聚（乙烯基。比咯啶酮）、順丁烯一酸酐-烷基乙烯醚共聚物、氧化異丙烯多元醇類 (phonic P〇丨y〇1)、白蛋白、海蕩酸鹽、纖維素及纖維素衍生物、膠原蛋白、血纖蛋白、明膠、玻尿酸、寡膽、甘基聚糖（glycamin〇glycan)、硫酸化多醣其摻合物及共物。在另-態樣中’該成分選自由白蛋白、藉糖、海糖' 乳糖醇 '明膠、羥基丙基·b_環糊精、甲氧基聚乙二及聚乙二醇組成之群。在另_實施例中，本發明提供一治療哺乳㈣之方法’其包含向該哺乳動物投與有效量本文所揭示之組合物的步驟。

本發明亦提供醫藥組合物，其包含如本Μ㈣U 聯合蛋白(或其IL，結纟部分)及醫藥學上可接受之 I5J544.doc 201124427 劑。该本發明之醫藥組合物可進一步包含至少一種其他藥 ^在一特定實施例中，本發明之醫藥組合物包含至少一種:於治療因α·1β活性而受害之病症的其他藥劑。在另旦/施例中’其他藥劑選自由以下組成之群：㈣劑、顯 w劑、細胞毒性劑、血管生成抑制劑、激酶抑制劑、協同刺激刀子阻斯劑、黏附分子阻斷劑、抗細胞激素抗體、抗細胞激素抗體之功能片段、胺甲嗓吟（誠h〇trexate)、環抱 (y Ρ〇ηη)、雷帕黴素（rapamycin)、FK506、可偵測標記或報導體、★ 拮抗訓、抗風濕病藥、肌肉鬆弛藥、麻醉藥、非類固醇消炎藥⑽Am)、止痛劑、麻醉齊/、、鎮靜劑、局部麻醉劑、神經肌肉阻斷劑、抗微生物劑、抗牛皮癣劑、皮質類固醇、同化類固m球生成素、免疫法、免疫球蛋白、免疫抑制劑、生長激素、激素替代藥物、放射性藥物、抗抑鬱劑、抗精神病藥、興奮劑、哮喘藥物、β促效劑、吸入性類固醇、口服類固醇、腎上腺素或其類似物、細胞激素及細胞激素拮抗劑。在另-態樣中，本發明提供—種抑制人類iL ip活性之方法’其包含使人類本文所揭示之結合蛋白接觸以使得人類IL,活性得到抑制。在另一態樣中，本發明提供-種抑制罹患因IL_lp活性而受害之病症的人類個體之人類IL_1P活性的方法，其包含向該人類個體投與本文所揭示之結合蛋白以使得人類個體之人類几_1{3活性得到抑制並實現治療。在另-態樣中，本發明提供一種治療(例如治癒、抑 € 151544.doc 1e 201124427 制、改善、抑制、延緩或預防發作、或預防重現或復發）個體之IL-1 β相關病症的方法。在一實施例中，該方法包括向該個體投與足以治療或預防該IL_丨0相關病症之量的如本文所述之IL-Ιβ結合蛋白（例如IL_ip拮抗劑，諸如抗 IL-Ιβ抗體或其片段）。^―卬拮抗劑可向個體單獨投與或與如本文所述之其他治療性儀器治療組合投與。在本發明之一態樣中’ IL_ip結合蛋白或其結合部分可用於使用此項技術中可用之各種基於抗體之免疫偵測系統中的任一者來偵測人類IL_丨p，該等系統利用抗體偵測所需標靶抗原（或其抗原決定基）。該等免疫偵測系統包括（但不限於）免疫沈澱法、免疫墨點法（西方墨點法（Western blot)、點免疫墨點法（immun〇d〇t bl〇t))、酶聯免疫吸附檢定（ELISA)、放射免疫檢定（RIA)、組織免疫組織化學、表面電漿子共振（SPR)、夹層免疫檢定、親和力方法（例如親和珠粒、親和管柱）' 免疫競爭檢定、免疫晶片檢定（利用連接於矽晶片之結合蛋白）及螢光活化細胞分選（FACS)。對於一些免疫偵測系統，使用此項技術中可用於使抗體分子連接於相同固體基質之方法，使如本文所述之1 p結合蛋白（或其結合部分）連接於固體基質以使得所連接之結。蛋白在用於特定免疫偵測系統期間保留其結合人類IL-1 β之旎力。該等固體基質包括（但不限於）基於纖維素之濾紙（例如纖維素、硝基纖維素、乙酸纖維素濾紙）、耐綸 (nylon)濾紙或膜、塑性表面（例如微量滴定板或量油尺之表面）、玻璃基板（例如珠粒、載片、玻璃棉）、聚合粒子 151544.doc 16 201124427 (例如瓊脂糖、聚丙烯醯胺）及矽晶片。在另-態樣中’本發明提供一種该測活體外樣品（例如生物樣品’諸如全血、纟清、血漿、尿液、唾液、組嘰、舌檢體)中乩，之存在的方法。該方法可用於診斷疾病或病症，例如免疫細胞相關病症。方法包括：⑴使測試樣品或對照樣品與如本文所述之IL七結合蛋白（或其結合部分傳觸；及⑼彳貞測結合蛋白或其結合部分與該測試樣品或該對照樣品之間複合物之形成’其中測試樣品中複合物之形成相對於對照樣品或相對於在較早時間點獲取之另一測試樣品中複合物之形成統計顯著之變化指示樣品中存纽 ΐβ ° 在另-態樣中’本發明提供一種活體内偵測虬，之存在（例如在個體中活體内顯影）的方法。該方法用於診斷疾病或病症，例如IL-Ιβ相關恭；.注。士、上“ P _症方法包括··⑴在使結合蛋白或其結合部分結合於α_1β之條件下向測試個體或對照個體投與如本文所述之IL_ip結合蛋白或其結合部分；及（ii)偵測該結合蛋白或i社人却八飞八、、·。。部分與比-Ιβ之間複合物之㈣’其中該㈣㈣中複合物之形成相對於該對照個體或相對於在較W獲取之㈣個财複合物之形成統計顯著之變化指示存在江·^。在另一態樣中，本發明之人 Θ之、.、D合蛋白適用於治療選自由以下組成之群的病症：類風濕性關節炎、骨關節[幼年型慢性關節炎、膿毒性關節炎、萊姆關節炎（_ ⑽叫牛皮癣性關節炎' 反應性關節炎、脊椎關節 151544.doc -17- 201124427 病、全身性紅斑狼瘡、克羅恩氏病（Crohn's disease)、潰瘍性結腸炎、發炎性腸病、胰島素依賴性糖尿病、甲狀腺炎、哮喘、過敏性疾病、牛皮癬、皮炎、硬皮病、移植物抗宿主疾病、器官移植排斥反應、與器官移植相關之急性或慢性免疫疾病、肉狀瘤病、動脈粥樣硬化、彌漫性血管内凝血、川崎氏病（Kawasaki’s disease)、格雷氏病（Grave's disease)、腎病症候群、慢性疲勞症候群、韋格納氏肉牙膜病（Wegener's granulomat〇sis)、亨偌-絲奇恩賴紫癜 (Henoch-Schoenlein purpura)、腎顯微性管炎、慢性活性肝炎、葡萄膜炎、敗血性休克、中毒性休克症候群、敗血症症候群、惡病質、傳染性疾病 '寄生蟲疾病、後天免疫缺乏症候群、急性橫貫性脊髓炎、亨廷頓氏舞蹈病 (Huntington’s chorea)' 帕金森氏病（Parkins〇nis disease)、阿兹海默氏病（Alzheimer's disease)、中風、原發性膽汁性肝硬化、溶血性貧血、惡性病、心臟衰竭、心肌梗塞、阿狄森氏病（Addison’s disease)、偶發性I型多腺體分泌不足症及π型多腺體分泌不足症、施密特症候群（Schmidt，s syndrome)、成人（急性）呼吸窘迫症候群、脫髮、斑形脫髮、血清陰性關節病、關節病、萊特爾氏病（Reiter's disease)、牛皮癖性關節病、潰瘍性大腸炎關節病、腸病性滑膜炎、衣原體、耶氏桿菌（yersinia)及沙門氏菌 (salmonella)相關關節病、脊椎關節病、動脈粥樣化病/動脈硬化、異位性過敏、自體免疫大皰病、尋常天疱瘡、葉型天疱瘡、類天疱瘡、線性IgA疾病、自體免疫溶血性貧 151544.doc -18- 201124427 血、庫姆陽性溶血性貧血（Coombs p〇sitive haem〇iytic anaemia)、後天惡性貧血、幼年型惡性貧血、肌痛腦炎/皇家自由病（Royal Free Disease)、慢性皮膚黏膜念珠菌病' 巨細胞性動脈炎、原發性硬化性肝炎、隱原性自體免疫肝 k、後天免疫缺乏病症候群、後天免疫缺乏相關疾病、b 型肝炎、C型肝炎、一般變異性免疫缺乏症（一般變異性低丙種球蛋白血症）、擴張型心肌病、女性不孕症、卵巢衰竭、卵巢早衰、纖維變性肺病、隱原性纖維化性肺泡炎、發炎後間質性肺病、間質性肺炎、結締組織病相關間質性肺病、混合性結締組織病相關肺病、全身性硬化症相關間質性肺病、類風濕性關節炎相關間質性肺病 '全身性紅斑狼瘡相關肺病、皮肌炎/多發性肌炎相關肺病、休格連氏病（Sjagren’s disease)相關肺病、僵直性脊椎炎相關肺病、 ▲•管炎擴散性肺病、含鐵血黃素沉著症相關肺病、藥物誘發之間質性肺病、纖維化、放射性纖維化、閉塞性細支氣官炎、慢性嗜伊紅血球性肺炎、淋巴細胞性浸潤性肺病、感染後間質性肺病、痛風性關節炎、自體免疫肝炎、i型自體免疫肝炎（典型自體免疫或狼瘡樣肝炎）、2型自體免疫肝炎（抗LKM抗體肝炎）、自體免疫介導之低血糖、B型抗胰島素症伴以黑棘皮病、甲狀旁腺機能減退、與器官移植相關之急性免疫疾病、與器官移植相關之慢性免疫疾病、骨關節炎、原發性硬化性膽管炎' 1型牛皮癬、2型牛皮癣、特發性白血球減少症、自體免疫嗜中性球減少症、腎病NOS、絲球體腎炎、腎顯微性血管炎、萊姆病 151544.doc 5 19 201124427 disease) '盤狀紅斑狼瘡、特發性男性不育症或n〇s、精液自體免疫、多發性硬化症（所有亞型）、交感性眼炎、因結締組織疾病繼發之肺循環血壓過高（pulm〇na7 hypertension secondary to connective tissue disease)、古巴士德氏症候群（Goodpasture’s syndrome)、結節性多動脈炎之肺部病徵、急性風濕熱、類風濕性脊椎炎、斯蒂爾氏病 (Still’s disease)、全身性硬化症、休格連氏症候群 (Sjdrgren's syndrome)、高安氏病（Takayasu's disease)/動脈炎、自體免疫血小板減少症、特發性血小板減少症、自體免疫甲狀腺病、曱狀腺功能宄進、曱狀腺腫自體免疫甲狀腺功能低下（橋本氏病（Hashimoto’s disease))、萎縮性自體免疫曱狀腺功能低下、原發性黏液水腫、晶狀體源性葡萄膜炎、原發性血管炎、白斑症、急性肝病、慢性肝病、酒精性肝硬變、酒精誘發之肝損傷、膽汁鬱積、特應性肝病、藥物誘發之肝炎、非酒精性脂肪變性肝炎、過敏及哮喘、B群鏈球菌（GBS)感染、精神病症（例如抑鬱症及精神分裂症）、Th2型及Thl型介導之疾病、急性及慢性疼痛（不同形式之疼痛）及癌症（諸如肺癌、乳癌、胃癌、膀脱癌、結腸癌、胰腺癌、卵巢癌、前列腺癌及直腸癌）及造血性惡性病（白jk病及淋巴瘤）、無β脂蛋白血症、手足發紺、急性及慢性寄生或感染過程、急性白血病、急性淋巴母細胞白血病（ALL)、急性骨髓白血病（AML)、急性或慢性細菌感染、急性胰臟炎、急性腎衰竭、腺癌、心房異位性心跳、AIDS癡呆複合症、酒精誘發之肝炎、過敏性結膜 151544.doc •20- 201124427 炎、過敏性接觸性皮炎、過敏性鼻炎、同種異體移植排斥反應、α-1-抗胰蛋白酶缺乏症、肌萎縮性側索硬化、貧血、心絞痛、前角細胞退化、抗CD3療法、抗磷脂症候群、抗受體過敏性反應、主動脈及周邊動脈瘤、主動脈剝離、動脈咼壓、動脈硬化、動靜脈瘺、共濟失調、心房纖維性顫動（持續或突發性）、心房撲動、房室傳導阻滯、Β 細胞淋巴瘤、骨移植排斥反應、骨髓移植（ΒΜΤ)排斥反應、束支傳導阻滯、伯基特淋巴瘤（Burkitt，s iyniph〇ma)、燒傷、心律不整、心臟頓抑症候群、心臟腫瘤、心肌病、心肺分流術發炎反應、軟骨移植排斥反應、小腦皮質退化、小腦病症、紊亂性或多源性心房頻脈、化學療法相關之病症、慢性骨髓性白血病（CML)、慢性酒精中毒、慢性發炎病變、慢性淋巴細胞白血病（CLL)、慢性阻塞性肺病 (COPD)、慢性水楊酸鹽中毒、結腸直腸癌、充血性心臟衰竭、結膜炎、接觸性皮炎、肺心病、冠狀動脈病、唐傑二氏病（Creutzfeldt-Jakob disease)、培養陰性敗血症、囊腫性纖維化、細胞激素療法相關之病症、拳擊員癡呆、脫髓鞘疾病、出血性登革熱（dengue hemorrhagic fever)、皮炎、皮膚病狀、糖尿病（diabetes)、糖尿病（diabetes mellitus)、糖尿病性動脈硬化疾病、泛發性路易體疾病 (diffuse Lewy body disease)、擴張充血型心肌病、基底神紅郎病症、中年唐氏症候群（D〇wn，s Syndrorne in middle age)、由阻斷CNS多巴胺（dopamine)受體之藥物所誘發之藥物誘發性運動病症、藥物過敏、濕疹、腦脊髓炎、心内 15I544.doc -21 - 201124427 膜炎、内分泌病、會厭炎、埃-巴二氏病毒感染（Epstein-Barr virus infection) '肢端紅痛症、錐體束外及小腦病症、家族性噬血淋巴組織細胞瘤病（familial hematophagocytic lymphohistiocytosis)、胎兒胸腺植入排斥反應、弗里德賴希氏共濟失調（Friedreich’s ataxia)、功能性周邊動脈病症、真菌敗血症、氣性壞疽、胃潰瘍、腎小球性腎炎、任何器官或組織之移植排斥反應、革蘭氏陰性敗血症（gram negative sepsis)、革蘭氏陽性敗血症（gram positive sepsis)、由細胞内有機體引起之肉芽腫、毛細胞白血病、哈洛弗登-史巴茲氏蒼白球色素退化症 (Hallervorden-Spatz disease)、橋本甲狀腺炎（Hashim〇t〇，s thyroiditis)、花粉熱、心臟移植排斥反應、血色素沉著、血液透析、溶血性尿毒癥候群/溶血栓性血小板減少性紫癜、出血、A型肝炎、希氏束心律不整（His bundle arrhythmias)、HIV感染/HIV神經病、霍奇金氏病 (Hodgkin’s disease)、過動性運動障礙、過敏性反應、過敏性肺炎、高血壓、運動功能減退之運動障礙、下視丘·腦下垂體_腎上腺轴分析、特發性阿狄森氏病、特發性肺纖維化、抗體介導之細胞毒性、虛弱、嬰兒脊髓性肌萎縮、主動脈發炎、A型流行性感冒、電離輻射曝露、虹膜睫狀體炎/葡萄膜炎/視神經炎、缺血後再灌注損傷、缺血性中風、幼年型類風濕性關節炎（JRA)、幼年型脊髓性肌萎縮、卡波西氏肉瘤（Kaposi’s sarcoma)、腎移植排斥反應、退伍軍人病（legionella)、利什曼病（leishmaniasis)、麻風、 151544.doc •22· 201124427 皮質脊髓系統病變、脂肪水腫、肝移植排斥反應、淋巴水腫、瘧疾、惡性淋巴瘤、惡性組織細胞增多病、惡性黑色素瘤、腦膜炎、腦膜炎球菌血症、代謝/特發性、偏頭痛、粒線體多系統病症、混合性結締組織病、單株丙種球蛋白病、多發性骨髓瘤、多發性系統退化（Mencel Dejerine-Thomas Shi-Drager及Machado-Joseph)、重症肌無力、胞内禽結核分枝桿菌、結核分枝桿菌、骨髓發育不良症候群、心肌梗塞、心肌缺血性病症、鼻咽癌、新生兒慢性肺病 '腎炎、腎病、神經退化性疾病、神經性I型肌肉萎縮、嗜中性白血球減少性發燒、非霍奇金氏淋巴瘤（n〇n_ Hodgkin's lymphoma) '腹主動脈及其分支閉塞、閉塞性動脈病症、OKT3®療法、睪丸炎/附睪炎、睪丸炎/輸精管重新接合術、器官腫大、骨質疏鬆症、胰腺移植排斥反應、胰腺癌、腫瘤伴隨症候群/惡性血鈣過多、曱狀旁腺移植排斥反應、骨盆發炎性疾病、常年性鼻炎、心包疾病、周邊動脈粥樣硬化疾病、周邊血管性病症、腹膜炎、惡性貧血、肺囊蟲肺炎、肺炎、POEMS症候群（多發性神經病、器官腫大、内分泌病、單株丙種球蛋白病及皮膚變化症候群）、灌注後症候群、泵送後症候群、MI後心切開術症候群、子癇前期、進行性核上性麻痒、原發性肺動脈高壓、放射療法、里諾氏現象（Raynaud’s phenomenon)、里諾氏病（Raynaud’s disease)、雷富孫氏病（Refsum's disease)、規則性窄波QRS心動過速、腎血管高血壓、再灌注損傷、限制性心肌病、肉瘤、硬皮病、老年性舞蹈病、路易體型老 151544.doc -23- 201124427 年瘋呆症（senile dementia of Lewy body type)、血清陰性關節病、休克、鐮狀細胞貧血、皮膚同種移植排斥反應、皮膚變化症候群、小腸移植排斥反應、實體腫瘤、特異性心律不整、脊椎共濟失調、脊髓小腦退化、鏈球菌性肌炎、小腦結構病變、亞急性硬化性全腦炎、昏厥 '心血管系統之梅毒、全身性過敏反應、全身性發炎反應症候群、全身性發作幼年型類風濕性關節炎、T細胞或FAB ALL、毛細血管擴張、血栓閉塞性血管炎、血小板減少症、毒性、移植、外傷/出血、ΠΙ型過敏性反應' IV型過敏性、不is疋絞痛、尿毒癥、尿敗血症、蓴麻療、心臟瓣膜疾病、靜脈曲張、血管炎、靜脈疾病、靜脈血栓形成、心室纖維性顫動、病毒及真菌感染、病毒性腦炎/無菌性腦膜 k、病毋相關嗜血細胞症候群、魏尼凱_柯薩可夫症候群 (Wernicke-Korsakoff Syndrome)、威爾遜氏病（Wilson，s dlSeaSe)、任何器官或組織異種移植排斥反應、急性冠狀動脈症候群、急性特發性多發性神經炎、急性發炎脫髓鞘多發性神經根神經病、急性局部缺血、成人斯蒂爾氏病、斑形脫髮、全身性過敏反應、抗赫抗體症候群、再生障礙性貧血、動脈硬化、異位性濕疹、異位性皮炎、自體免疫皮炎、與鏈球菌感染相關之自體免疫病症、.自體免疫腸病自體免疫聽力損失、自體免疫淋巴組織增生症候群 (A二S)、自體免疫心肌炎、自體免疫卵巢早衰、眼瞼炎、支乳管擴張、大皰性類天疱瘡、心血管疾病、災難性抗磷月曰症候群、乳糜λ寫、頸椎病、慢性局部缺血、瘢痕性類天 I51544.doc •24- 201124427 疱瘡、伴以多發性硬化症風險之臨床上分離症候群 (CIS)、結膜炎、兒童發作精神錯亂、慢性阻塞性肺病 (COPD)、淚囊炎、皮肌炎 '糖尿病性視網膜病、糖尿病、椎間盤突出、椎間盤脫垂、藥物誘發之免疫溶血性貧血、心内膜炎、子宮内膜異位、内眼炎、上鞏膜炎、多形性紅斑、嚴重多形性紅斑、妊娠期類天疱瘡、格-巴二氏症候群（Guillain-Barr0 syndrome，GBS)、花粉熱、休茲氏症候群（Hughes Syndrome)、特發性帕金森氏病、特發性間質性肺炎、IgE介導之過敏、免疫溶血性貧血、包涵體肌炎、傳染性眼睛發炎性疾病、發炎性脫髓鞘病、發炎性心臟病、發炎性腎病、IPF/UIP、虹膜炎、角膜炎、乾燥性角膜結膜炎、庫斯毛耳氏疾病（Kussmaul Disease)或庫斯毛耳-麥爾氏疾病（Kussmaul-Meier disease)、蘭德里麻痒 (Landry's paralySis)、蘭格罕氏細胞組織細胞增多病 (Langerhan’s cell histiocytosis)、網狀青斑、黃斑退化、顯微性多血管炎、白赫鐵列夫症（m〇rbus bechterev)、運動神經元病症、黏膜類天疱瘡、多重器官衰竭、重症肌無力、骨髓發育不良症候群、心肌炎、神經根病症、神經病、非 A型非B型肝炎、視神經炎、骨質溶解、少關節型兒童期類風濕性關節炎（pauciarticular JRA)、周邊動脈閉塞性疾病（PAOD)、周邊血管疾病（pvD)、周邊動脈疾病（pAD)、靜脈k、結節性多動脈炎（或結節性動脈周炎）、多軟骨炎、風濕性多肌痛、白髮症、多關節型JRA、多内分泌腺刀泌不足症候群、多發性肌炎、風濕性多肌痛（pmR)、泵 151544.doc 5 -25- 201124427 送後症候群、原發性帕金森氏病、前列腺炎、純紅血球再生不良、原發性腎上腺機能不全、復發性視神經脊髓炎、再狹窄、風濕性心臟病、薩福症（SAPHO)(滑膜炎、痤瘡、腹皰病、骨肥大及骨炎）、硬皮病、繼發性澱粉樣變性、肺休克、鞏膜炎、坐骨神經痛、繼發性腎上腺機能不全、聚石夕氧相關結締組織病、角層下膿皰性皮膚病（sneddon_ Wilkinson dermatosis)、僵直性脊椎炎、史蒂芬瓊森症候群（Stevens-Johnson Syndrome，SJS)、全身性發炎反應症候群、顳動脈炎、弓形蟲視網膜炎、中毒性表皮壞死溶解、檢貝性脊髄炎、TRAPS( 1型腫瘤壞死因子受體（tnfr) 相關週期性症候群）；B型抗胰島素症伴以黑棘皮病；1型過敏性反應、II型糖尿病、蓴麻疹、常見間質性肺炎

(UIP)、血官炎、春季結膜炎、病毒性視網膜炎、伏格特_ 小柳-原田症候群（v〇gt-K〇yanagi_Harada syndr〇me，VKH 症候群）、濕性黃斑退化及創傷癒合。

自體免疫葡萄膜炎。

之第二藥劑之前、與其同時或在其種治療罹患因人類IL-1 β 包含在投與如上文所論述其之後投與本文所述之任 151544.doc •26· 201124427 一結合蛋白的步驟。在另一實施例中，可與一或多種1L· 1β拮抗劑（例如抗IL-Ιβ抗體或其片段）共投與及/或共調配之其他治療劑包括（但不限於）TNF拮抗劑；TNF受體之可溶性片段；ENBREL®(依那西普（etanercept)) ; TNF酶拮抗劑；TNF轉化酶（TACE)抑制劑；簟毒鹼受體拮抗劑；TGF-β拮抗劑；干擾素γ ; °比非尼酮（perfenidone);化學治療劑，胺甲喋呤；來氟米特（leflunomide);西羅莫司 (sirolimus)(雷帕黴素）或其類似物，CCI-779 ; COX2或 cPLA2抑制劑；NSAID ;免疫調節劑；p38抑制劑；TPL-2、MK-2及NFkB抑制劑；布替耐德（budenoside);表皮生長因子；皮質類固醇；環孢素；柳氮磺胺吡啶；胺基水楊酸鹽；6-疏基°票吟；硫唾11票吟（azathioprine);曱石肖哮》坐 (metronidazole); 脂肪加氧酶抑制劑；美沙拉嗓 (mesalamine);奥色拉秦（olsalazine);巴柳氮 (balsalazide);抗氧化劑；凝血脂素抑制劑；IL-1受體拮抗劑；抗IL-Ιβ抗體；抗IL-6抗體；生長因子；彈性酶抑制劑；吡啶基-咪唑化合物；TNF、LT、ILlα、IL-lβ、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、 IL-11、IL-12、IL-14、IL-15、IL-16、IL-17、IL-18、IL-19 、 IL-20 、 IL-21 、 IL-22 、 IL-23 、 IL-24 、 IL-25 、 IL-26 、 IL-27、IL-28、IL-29、IL_30、IL-31、IL-32、IL-33、 EMAP-II、GM-CSF、FGF或PDGF之抗體或或促效劑； CD2、CD3、CD4、CD8、CD25、CD28、CD30、CD40、 CD45、CD69、CD90或其配位體之抗體；FK506 ;雷帕黴 -27- 151544.doc 201124427 素；黴紛酸嗎啉乙醋；布洛芬（ibuprofen);潑尼龍 (prednisolone);磷酸二酯酶抑制劑；腺苷促效劑；抗血栓形成劑；補體抑制劑；腎上腺素劑；IRAK、NIK、IKK、 p3 8或MAP激酶抑制劑；IL-Ιβ轉化酶抑制劑；TNFa轉化酶抑制劑；T細胞信號傳導抑制劑；金屬蛋白酶抑制劑；6_ 巯基嘌呤，血管緊張素轉化酶抑制劑；可溶性細胞激素受體，可溶性p55 TNF受體；可溶性p75 tNF受體；sIL_ 1RI ’ sIL-lRII ; sil-6R ;消炎細胞激素；IL_4 ; IL_1〇 ; IL-11 ;及 TGFp。在一實施例中，本文所揭示之醫藥組合物係藉由至少一種選自由以下組成之群之模式投與個體：非經腸、皮下、肌肉内、靜脈内、關節内、支氣管内、腹内、囊内、軟骨内、腔内、體腔内（intracelial)、小腦内、側腦室内、大腸内、子宮頸内、胃内、肝内、心肌内、骨内、骨盆内、心包内 '腹膜内、胸膜内、前列腺内、肺内、直腸内、腎内、視網膜内、脊椎内、滑膜内、胸腔内、子宮内、膀胱内大丸藥、陰道、直腸、經頻、舌下、鼻内及經皮途徑。本發月之態樣提供針對本發明之至少一種IL_丨β結合蛋的至ν 種1L~ 1 β抗個體基因型抗體。該抗個體基因型抗體包括含有如下分子之任何蛋白質或肽，該分子包含免疫球蛋白合χ t 千之至少一部分’諸如（但不限於）重鏈或輕鏈之至少一袖、·Ρ , 補決定區（CDR)或其配位體結合部分、重鍵或輕鍵可趨Γό ^ 燹^、重鏈或輕鏈恆定區、架構區或其可併入 151544.doc -28· 201124427 本發明之結合蛋白中的任何部分。【實施方式】本發明係關於結合人結合蛋白尤其抗 IL-Ιβ抗體，或其抗原結合部分。本發明之各種態樣係關於抗體及抗體片段，及其醫藥組合物，以及製造該等抗體及其IL-Ιβ結合片段之核酸、重組表現載體及宿主細胞。本發明亦涵蓋使用本發明之結合蛋白偵測人類IL_丨p、活體外或活體内抑制人類IL_丨p活性及調控基因表現之方法。除非本文另外定義，否則與本發明關聯使用之科技術語應具有熟習此項技術者通常所瞭解之含義。術語之含義及範疇應為明確的，然而若發生任何潛在的含義不明確，則本文所提供之定義優先於任何詞典或外在定義。此外，除非上下文另有要求，否則單數術語應包括複數且複數術語應包括單數《在本申請案中，除非另有規定，否則術語「或」包括「及/或」。此外，使用術語「包括」不具有限制性。又，除非另外具體規定，否則諸如「元件」或「組分」之術語涵蓋包含一個單元之元件及組分以及包含一個以上次單元之元件及組分。通常，關於本文中所述之細胞及組織培養、分子生物學、免疫學、微生物學、遺傳學、蛋白質及核酸化學及核酸雜交所使用之命名法及其技術為此項技術中熟知且常用之命名法及其技術。除非另有指示，否則本發明之方法及技術一般根據此項技術中熟知且如本說明書通篇所引用且 5 151544.doc -29- 201124427 討論之各種一般及更特定參照案中所述之習知方法來進行。如此項技術中通常實現或如本文中所述，酶促反應及純化技術根據製造商之說明書來進行。關於本文中所述之分析化學、合成有機化學及藥物與醫藥化學所使用之命名法及其實驗室程序與技術為此項技術中熟知且常用之彼等命名法及其實驗室程序與技術^對於化學合成、化學分析、醫藥製備、調配及傳遞以及患者之治療使用標準技術。為可更易於瞭解本發明，選定術語定義如下。術語「多肽」意謂胺基酸之任何聚合鏈。術語「肽」及「蛋白質」可與術語多肽互換使用且亦指胺基酸之聚合鏈。術語「多肽」④蓋天然或人造蛋白質、蛋白質片段及蛋白質序列之多肽類似物。多肽可為單體«合物。術語「分離之蛋白質或「八」次77離之多肽」意謂根據其得到起源或來源而不與在直夭妙仙 '、天然狀態下伴隨其之天然締合组分締合’實質上不含來自同一物種之其他蛋白f，由來自不同物種之細胞表現，或自鈇、及自然界十不存在之蛋白質或多肽。因此，經化學合成或在个u於其天然起源之細胞的細胞系統中合成之多肽與其夭妙、具天然締合纟且分「分離」。藉由分離，使用此項技術中熟知之蛋白 — 赏曰貝純化技術亦可使蛋白質貫質上不含天然締合組分。術語「回收」意謂藉由分離之蛋白質純化技術使化學物f 丨項技術中熟知締合組分之過程。于物貝（4如多狀）實質上不含天然 151544.doc 201124427 術語「人類ΙΙΜβ」（本文中縮寫為hIL-Ιβ或IL-Ιβ)包括各種免疫反應、發炎過程及血細胞生成所涉及之多效性細胞激素。術語人類IL_ip包括可藉由標準重組表現方法製備之重組人類IL-ip(rh IL-Ιβ) » 表1 :人類IL-ΐβ之序列

蛋白質序列識別符胺基酸序列 123456789012345678901234567890 人類IL 1β SEQIDNO.:! APVRSLNCTLRDSQQKSLVMSGPYELKALH LQGQDMEQQVVFSMSFVQGEESNDKIPVAL GLKEKNLYLSCVLKDDKPTLQLESVDPKNY PKKKMEKRFVFNKIEINNKLEFESAQFPNW YISTSQAENMPVFLGGTKGGQDITDFTMQF VSS 「生物活性.」係指IL-Ιβ之所有固有生物性質。IL-Ιβ之生物性質包括（但不限於）結合IL-1受體；（其他實例包括：誘發發熱、慢波睡眠及嗜中性球增多症、T及B淋巴細胞活化、纖維母細胞增殖、對某些細胞之細胞毒性、誘發膠原酶、合成肝急性期蛋白及增加群落刺激因子及膠原蛋白之產生）。關於抗體、蛋白質或肽與第二化學物質之相互作用的術語「特異性結合」意謂該相互作用視關於化學物質之特定結構（例如抗原決定子或抗原決定基）的存在而定，例如抗體識別且結合於特異性蛋白質結構而非結合於一般蛋白質。若抗體對於抗原決定基「A」具有特異性，則在含有標記之「A」及抗體之反應中，含有抗原決定基a(或游離、未標記之A)之分子的存在將減少結合於抗體之標記之 A的量。 151544.doc -31 - 201124427 術語「抗體」廣泛地指包含四條多肽鏈（兩條重（Η)鏈及兩條輕（L)鍵）之任何免疫球蛋白（Ig)分子’或其保留Ig分子之基本抗原決定基結合特徵之任何功能性片段、突變體、變異體或衍生物。該等突變體、變異體或衍生物抗體形式為此項技術中所已知，其非限制性實施例討論如下。在全長抗體中，每一重鏈包含重鏈可變區（本文中縮寫為HCVR或VH)及重鏈恆定區。該重鏈恆定區包含3個域，即CHI、CH2及CH3。每一輕鏈包含輕鏈可變區（本文中縮寫為LCVR或VL)及輕鏈恆定區。該輕鏈恆定區包含一個域，即CL。該等VH及VL區可進一步再分成稱為互補決定區（CDR)之高變區，其間散置有稱為架構區（FR)之更保守區域。每一 VH及VL由3個CDR及4個FR構成，其自胺基末端至羧基末端按以下順序排列：FR1、CDR1、FR2、 CDR2、FR3、CDR3、FR4。免疫球蛋白分子可為任何類型（例如 IgG、IgE、IgM、IgD、IgA及 IgY)、種類（例如 IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgAl 及 IgA2)或子類。抗體之術語「抗原結合部分」係指保留特異性結合於抗原（例如hIL-Ια)之能力的抗體之一或多個片段。抗體之抗原結合功能可由全長抗體之片段進行。該等抗體實施例亦可具有雙特異性、雙重特異性或多特異性形式；特異性結合於兩個或兩個以上不同抗原。涵蓋於抗體之術語「抗原結合部分」内之結合片段的實例包括（i)Fab片段，其為由 VL、VH、CL及CH1域組成之單價片段；（ii)F(ab')2片段，其為包含兩個Fab片段在鉸鏈區處由雙硫橋連接之二價片 151544.doc -32- 201124427 段；（iii)由VH及CH1域組成之Fd片段；（iv)由抗體之單臂的VL及VH域組成之Fv片段；（v)包含單一可變域之dAb片段（Ward 等人，（1989) 341:544-546, PCT公開案第賈0 90/05144號）；及卜丨）分離之互補決定區（001〇。此外，儘管Fv片段之兩個域（VL及VH)由各別基因編碼，但其可使用重組方法由合成連接子連接，該連接子能夠使其製成VL及VH區配對形成單價分子之單一蛋白質鏈（稱為單鏈Fv(scFv);參見例如 Bird等人。（1988) Sciewce 242··423-426 ；及 Huston 等人.（1988) /Voc. iVa". Jcad. 5W. 85:5879-5883)。該等單鏈抗體（scFv)亦意欲涵蓋於抗體之術語「抗原結合部分」内。亦涵蓋其他形式之單鏈抗體，諸如微型雙功能抗體。微型雙功能抗體為二價、雙特異性抗體，其中VH及VL域表現於單一多肽鏈上，但使用過短而無法使同一鏈上之兩個域之間配對的連接子，由此迫使該等域與另一鏈之互補區配對且產生兩個抗原結合位點 (參見例如 Holliger等人，（1993) TVoc.爪3"_ dead. 90:6444-6448 ； Poljak 等人，(1994) Structure 2:1121-1123)。該等抗體結合部分為此項技術中所已知 (Kontermann 及 Dtibel 編，Antibody Engineering (2001) Springer-Verlag. New York.第 790 頁（ISBN 3-540-41354-5))。術語「抗體構築體」係指包含一或多個連接於連接多肽或免疫球蛋白恆定域之本發明之抗原結合部分的多肽。連接多肽包含兩個或兩個以上由肽鍵連接之胺基酸殘基且用 5 151544.doc •33- 201124427 於連接一或多個抗原結合部分。該等連接多肽為此項技術中所熟知（參見例如Holliger等人，（1993) Proc. A/W/·

Sci. USA 90:6444-6448 ； Poljak 等人，(1994) Structure 2:1121-1123)。免疫球蛋白恆定域係指重鏈或輕鏈恆定域。人類IgG重鏈（γ)及輕鏈（κ及δ)恆定域胺基酸序列為此項技術所知且呈現於表2中。表2:人類IgG重鏈及輕鏈恆定域之序列

蛋白質序列識別符序列 123456789012345678901234567890 Igy-Ι恆定區 SEQ ID NO.:2 ASTKGPSVFFLAPSSKSTSGGTAALGCLVK DYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSS GLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPS NTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGG PSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCWVDVS HEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYN STYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKA LPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREE MTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQP ENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRW QQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK Igy-1恆定區突變體 SEQ ID NO.:3 ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVK DYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSS GLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPS NTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGG PSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVS HEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYN STYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKA LPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREE MTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQP ENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRW QQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK Ig κ恆定區 SEQ IDNO.:4 TVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNN FYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDS KDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTH QGLS S PVTKS FNRGEC IgX恆定區 SEQ ID NO.:5 QPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLIS DFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQ SNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTH EGSTVEKTVAPTECS 此外，抗體或其抗原結合部分可為藉由抗體或其抗原結 •34- 151544.doc 201124427 合部分與一或多種其他蛋白質或肽共價或非共價締合所形成之較大免疫黏附分子的一部分。該等免疫黏附分子之實例包括使用抗生蛋白鏈菌素核心區形成四聚合scFv分子 (Kipriyanov等人，（1995) Human Antibod· and Hybridomas 6:93-101)及使用半胱胺酸殘基、標記肽及C末端多組胺酸標記形成二價及生物素標記scFv分子（Kipriyanov等人， (1994) Mol. Immunol. 31:1047-1058)。諸如 Fab 及 F(ab’）2 片段之抗體抗原結合部分可使用全抗體之諸如相應木瓜蛋白酶或胃蛋白酶消化之習知技術，由全抗體製備。此外，如本文中所述’可使用標準重組DNA技術獲得抗體、其抗原結合部分及免疫黏附分子。「分離之抗體」係指實質上不含具有不同抗原特異性之其他抗體的抗體（例如特異性結合hIL- 1β之分離之抗體實質上不含特異性結合除hIL-Ιβ以外之抗原的抗體然而，特異性結合IL-1 β之分離之抗體可對其他抗原（諸如來自其他物種之IL-1 β分子）具有交叉反應性。此外，分離之抗體可實質上不含其他細胞物質及/或化學物質。術語「人類抗體」意欲包括具有源自人類生殖系免疫球蛋白序列之可變區及怪定區的抗體。本發明之人類抗體可例如在CDR中且尤其在CDR3中包括不由人類生殖系免疫球蛋白序列編碼之胺基酸殘基（例如藉由活體外隨機或定點突變誘發或藉由活體内體細胞突變引入之突變）。然而，術語「人類抗體」不包括源自另一哺乳動物物種（諸如小鼠）之生殖系的CDR序列已移植於人類架構序列上之 151544.doc 5 -35- 201124427 抗體。術語「重組人類抗體」包括藉由重組方法製備、表現、形成或分離之所有人類抗體，諸如使用轉染至宿主細胞中之重組表現載體表現之抗體（進一步在下文章節H C中描述），自重組組合性人類抗體庫分離之抗體（H〇0genboom (1997) Trends Biotechnol.. 15:62-70; Azzazy及 Highsmith (2002) Clin. Biochem. 35:425-445 ; Gavilondo 及 Larrick (2000) BioTechniques 29:128-145 ; Hoogenboom及 Chames (2000) Immunology Today 21:371-378)，自人類免疫球蛋白基因之轉殖基因動物（例如小鼠）分離的抗體（參見例如

Taylor 等人，（1992) Nucl· Acids Res. 20:6287-6295 ; Kellermann及 Green (2002) Curr. Opin. Biotechnol· 13:593-597 ; Little等人，（2000) Immunol. Today 21:364-370)，或藉由包括使人類免疫球蛋白基因序列拼接於其他DNA序列之任何其他方法製備、表現、形成或分離之抗體。該等重組人類抗體具有源自人類生殖系免疫球蛋白序列之可變區及f亙定區。然而，在某些實施例中，使該等重組人類抗體經受活體外突變誘發（或當使用人類Ig序列之轉殖基因動物時，使其經受活體内體細胞突變誘發）且因此，重組抗體之VH及VL區的胺基酸序列為雖然源自人類生殖系VH及 VL序列且與其相關但可能不天然存在於活體内人類抗體生殖系譜中之序列。術語「嵌合抗體」係指包含來自一個物種之重鏈及輕鏈可變區序列及來自另一物種之恆定區序列的抗體，諸如具 151544.doc •36· 201124427 有鼠類重鏈及輕鏈可變區連接於人類恆定區之抗體。術語「CDR移植抗體」係指包含來自一個物種之重鏈及輕鏈可變區序列但其中VH及/或VL區之一或多個CDR區的序列經另一物種之CDR序列置換的抗體，諸如具有人類重鏈及輕鏈可變區且其中一或多個人類CDR(例如CDR3)已經鼠類CDR序列置換之抗體，例如，如自鼠類單株抗體針對人類IL-Ιβ獲得。術語「CDR」係指抗體可變序列内之互補決定區。重鏈及輕鏈可變區之每一者中存在三個CDR，對於每一可變區，該等CDR指定為CDR1、CDR2及CDR3。術語「CDR 組」係指抗原結合位點之單一可變區（亦即VH或VL)中存在之含三個CDR的組。此等CDR之精確邊界已根據不同系統不同地加以定義。Kabat所描述之系統（Kabat等人， (1987, 1991) Sequences of Proteins of Immunological

Interest (National Institutes of Health, Bethesda, Maryland) 不僅提供適用於抗體之任何可變區之明確的殘基編號系統，而且提供定義三個CDR之精確殘基邊界。此等CDR可稱為 Kabat CDR。Chothia及同事（Chothia 及 Lesk (1987) J. Mol. Biol. 196:901-917 及 Chothia 等人，（1989) Nature 3 42:877-883)發現Kabat CDR内之某些子部分儘管在胺基酸序列層面上具有極大相異性，但是採用幾乎一致的肽骨架構形。此等子部分指定為LI、L2及L3或HI、H2及H3，其中「L」及「H」分別表示輕鏈區及重鏈區。此等區域可稱為Chothia CDR，其具有與Kabat CDR重疊之邊界。定義 5 151544.doc -37- 201124427 與Kabat CDR重疊之CDR的其他邊界已由Padlan等人， (1995) FASEB J. 9:133-139及 MacCallum (1996) J. Mol. Biol. 262(5):732-745描述。其他CDR邊界定義可能不嚴格遵循以上系統之一者，但仍會與Kabat CDR重疊，即使根據特定殘基或殘基群或甚至整個CDR不顯著影響抗原結合之預測或實驗研究結果而可將其縮短或延長。雖然某些實施例使用Kabat或Chothia定義之CDR，但本文中所用之方法可利用根據任一此等系統所定義之CDR。術語「Kabat編號」'「Kabat定義」及「Kabat標記」在本文中可互換使用。此等術語係指對比抗體或其抗原結合部分之重鏈及輕鏈可變區中的其他胺基酸殘基可變性更高 (亦即高變）之胺基酸殘基進行編號的系統（Kabat等人， (1971) Ann. NY Acad. Sci. 190:382-391 及 Kabat 等人， (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest,第五版，U.S. Department of Health and Human Services, NIH 出版物第91-3242號）。對於重鏈可變區，高變區範圍為 CDR1之胺基酸位置31至35，CDR2之胺基酸位置50至65，及CDR3之胺基酸位置95至102。對於輕鏈可變區，高變區範圍為CDR1之胺基酸位置24至34，CDR2之胺基酸位置50 至56，及CDR3之胺基酸位置89至97。在過去二十年，重鏈可變區及輕鏈可變區之胺基酸序列之大量公開資料庫的增長及分析已可瞭解可變區序列中架構區（FR)與CDR序列之間的典型邊界且使得熟習此項技術者能夠根據Kabat編號、Chothia編號或其他系統準確地確 151544.doc -38- 201124427 定 CDR。參見例如 Martin, Kontermann及 Dtibel編，Antibody Engineering (Springer-Verlag, Berlin, 2001),第 31 章.，第 432-433頁。以下提供適用於確定重鏈可變（VH)區及輕鏈可變（VL)區之胺基酸序列中Kabat CDR之胺基酸序列的方 • 法： . 鑑別CDR-L1胺基酸序列：起始為離VL區胺基末端之約24個胺基酸殘基； CDR-L1序列之前的殘基始終為半胱胺酸（C); CDR-L1序列之後的殘基始終為色胺酸（W)殘基，通常為 Trp-Tyr-Gln(W-Y-Q)，以及 Trp-Leu-Gln(W-L-Q)、Trp-Phe-Gln(W-F-Q)及 Trp-Tyr-Leu(W-Y-L); 長度通常為10至17個胺基酸殘基。鑑別CDR-L2胺基酸序列：起始為CDR-L1末端之後始終16個殘基； CDR-L2序列之前的殘基一般為Ile-Tyr(I-Y)，以及Val-Tyr(V-Y)、Ile-Lys(I-K)及 Ile-Phe(I-F); 長度始終為7個胺基酸殘基。鑑別CDR-L3胺基酸序列： . 起始為CDR-L2末端之後始終33個胺基酸； CDR-L3胺基酸序列之前之殘基始終為半胱胺酸（C); CDR-L3序歹ij之後的殘基始終為？1^-01丫-又-01丫（戸-0-乂-G)(SEQ ID NO:6)，其中X為任何胺基酸；長度通常為7至11個胺基酸殘基。鑑別CDR-H1胺基酸序列： 151544.doc •39- 201124427 起始為離VH區胺基末端之約31個胺基酸殘基及半胱胺酸（C)之後始終9個殘基； CDR-H1序列之前的殘基始終為Cys-X-X-X-X-X-X-X-X(SEQ ID NO:7)，其中X為任何胺基酸；在CDR-H1序列之後的殘基始終為Trp(W)，通常為Trp-Val(W-V)，以及Trp-Ile(W-I)及Trp-Ala(W-A); 長度通常為5至7個胺基酸殘基。鑑別CDR-H2胺基酸序列：起始為CDR-H1末端之後始終15個胺基酸殘基； CDR-H2 序列之前的殘基通常為1^11-0111-1>?-116-017(1^-E-W-I-G)(SEQ ID NO:8)，但亦存在其他變化；在 CDR-H2 序列之後的殘基為 Lys/Arg-Leu/Ile/Val/Phe/ Thr/Ala-Thr/Ser/Ile/Ala(K/R-L/I/V/F/T/A-T/S/I/A)；長度通常為16至19個胺基酸殘基。鑑別CDR-H3胺基酸序列：起始為CDR-H2末端之後始終33個胺基酸殘基及半胱胺酸（C)'之後始終3個胺基酸殘基； CDR-H3序歹ij之前的殘基始終為Cys-X-X(C-X-X)，其中 X為任何胺基酸，通常為Cys-Ala-Arg(C-A-R); 在CDR-H3序列之後的殘基始終為1>卩-01丫-乂-01丫（\^-0-X-G)(SEQ ID NO:9)，其中X為任何胺基酸；長度通常為3至25個胺基酸殘基。術語「受體」及「受體抗體」係指提供或編碼一或多個架構區之胺基酸序列之至少80%、至少85%、至少90%、 151544.doc •40- 201124427 至少95%、至少98°/。或100%的抗體或核酸序列。在一些實施例中，術語「受體」係指提供或編碼恆定區之抗體胺基酸或核酸序列。在又一實施例中，術語「受體」係指提供或編碼一或多個架構區及恆定區之抗體胺基酸或核酸序列。在一特定實施例中’術語「受體」係指提供或編碼一或多個架構區之胺基酸序列之至少80%、至少85%、至少 90%、至少95。/◦、至少98%或100%的人類抗體胺基酸或核酸序列。根據此實施例’受體可含有至少1個、至少2個、至少3個、至少4個、至少5個或至少10個不存在於人類抗體之一或多個特定位置之胺基酸殘基。受體架構區及/或受體恆定區可例如源自或獲自生殖系抗體基因、成熟抗體基因、功能抗體（例如此項技術中熟知之抗體、開發中之抗體或市售抗體）。術語「典型」殘基係指CDR或架構中之殘基，其定義如

Chothia等人，（1987) J· Mol. Biol. 196:901-917、Chothia等人，（1992) J. Mol. Biol. 227:799所定義之特定典型CDR結構。根據Chothia%人，許多抗體之cdr的重要部分儘管在胺基酸序列層面上具有巨大多樣性，但具有幾乎相同的肽主鏈構形。各典型結構主要指定一組使胺基酸殘基之鄰接區段形成環之肽主鏈扭轉角。術》。供體」及「供體抗體」係指提供一或多個CDR之抗體。在一實施例中，供體抗體為來自不同於獲得或得到架構區之抗體的物種之抗體。在人類化抗體之情形下，術 πσ供體抗體」係指提供一或多個CDR之非人類抗體。 151544.doc •41 - 201124427 術語「架構」或「架構序列」係指可變區減去CDR之剩餘序列。因為CDR序列之確切定義可由不同系統確定，所以架構序列之含義遵循相應的不同解釋。六個CDR(輕鏈之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3以及重鏈之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3)亦將輕鏈及重鏈上之架構區在每一鏈上分成四個亞區（FR1、FR2、FR3及FR4)，其中CDR1位於FR1與 FR2之間，CDR2位於FR2與FR3之間，且CDR3位於FR3與 FR4之間。在不將特定亞區指定為FR1、FR2、FR3或FR4 之情況下，架構區在以其他名稱提及時表示單一天然存在之免疫球蛋白鏈之可變區中的組合FR。FR表示四個亞區中之一者，且FRs表示構成架構區之四個亞區中之兩者或兩者以上。人類重鏈及輕鏈受體序列為此項技術所知。在本發明之一實施例中，人類重鏈及輕鏈受體序列選自表3及表4中所述之序列。表3 :重鏈受體序列

SEQ ID No. 蛋白質區序列 12345678901234567890123456789012 10 VH4-59 FR1 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIS 11 VH4-59 FR2 WIRQPPGKGLEWIG 12 VH4-59 FR3 RVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADT AVYYCAR 13 JH4 FR4 WGQGTLVTVSS 14 VH3-53 FR1 EVQLVESGGGLIQPGGSLRLSCAASGFTVS 15 VH3-53 FR2 WVRQAPGKGLEWVS 16 VH3-53 FR3 RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDT AVYYCAR 17 hJH4FR4 WGQGTLVTVSS 151544.doc •42- 201124427 表4 :輕鏈受體序列

SEQ ID No. 蛋白質區序列 12345678901234567890123456789012 18 018 FR1 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC 19 018 FR2 WYQQKPGKAPKLLIY 20 018 FR3 GVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYC 21 JK2FR4 FGQGTKLEIK 22 A14FR1 DVVMTQSPAFLSVTPGEKVTITC 23 A14FR2 WYQQKPDQAPKLLIK 24 A14 FR3 GVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLEAEDAATYYC 25 JK2 FR4 FGQGTKLEIK 術語「生殖系抗體基因」或「基因片段」係指由非淋巴樣細胞編碼之免疫球蛋白序列，其未經歷成熟過程，從而導致遺傳學重排及突變以表現特定免疫球蛋白。（參見例如 Shapiro 等人，（2002) Crit. Rev. Immunol. 22(3): 183-200 ； Marchalonis 等人，（2001) Adv. Exp. Med. Biol· 484:13-30)。本發明之各種實施例所提供之一個優點係基於如下認知：生殖系抗體基因比成熟抗體基因更可能保留物種中個體之必需胺基酸序列結構特徵，因此當用於治療該物種時，不太可能識別為來自外來來源。術語「關鍵」殘基係指可變區内對抗體（尤其人類化抗體）之結合特異性及/或親和力具有較大影響之某些殘基。關鍵殘基包括（但不限於）以下一或多者：鄰接CDR之殘基、潛在糖基化位點（可為N-或0-糖基化位點）、稀有殘基、能夠與抗原相互作用之殘基、能夠與CDR相互作用之殘基、典型殘基、重鏈可變區與輕鏈可變區之間的接觸殘基、維尼爾區内之殘基及可變重鏈CDR1之Chothia定義與第一重鏈架構之Kabat定義之間重疊的區中之殘基。 5 151544.doc •43- 201124427 術語「人類化抗體」係指包含來自非人物種（例如小鼠）之重鏈及輕鏈可變區序列，但其中VH及/或VL序列之至少一部分已變為更加「擬人類」（亦即與人類生殖系可變序列更加相似）的抗體。一種類型之人類化抗體為CDR移植抗體’其中將非人類CDR序列引入人類VH及VL序列中以置換相應非人類架構（FR)序列《舉例而言，「人類化抗體」為免疫特異性結合於所關注之抗原且包含實質上具有人類抗體之胺基酸序列的架構（FR)區及實質上具有非人類抗體之胺基酸序列的互補決定區（CDr)之抗體或其變異體、衍生物、類似物或片段。在CDR之情形下，術語「實質上」係指胺基酸序列與非人類抗體CDR之胺基酸序列至少80%、至少85%、至少90°/❶、至少95〇/〇、至少98%或至少 99%—致的CDR。人類化抗體包含實質上全部至少一個且通常兩個可變域（Fab、Fab'、F(ab，）2、FabC、Fv)，其中所有或實質上所有CDR區均對應於非人類免疫球蛋白（亦即供體抗體）之彼等CDR區且所有或實質上所有架構區均為人類免疫球蛋白共同序列之彼等架構區。在一實施例中，人類化抗體亦包含免疫球蛋白恆定區（Fc)(通常為人類免疫球蛋白恆定區）之至少一部分。在一些實施例中，人類化抗體含有輕鏈以及至少重鏈之可變域。抗體亦可包括重鍵之CH1、鉸鏈區、CH2、CH3及CH4區。在一些實施例中’人類化抗體僅含有人類化輕鏈。在一些實施例中，人類化抗體僅含有人類化重鏈。在特定實施例中，人類化抗體僅含有輕鏈之人類化可變域及/或人類化重鏈。 151544.doc -44 - 201124427 人類化抗體可選自任何類別之免疫球蛋白，包括IgM、 IgG、IgD、IgA及IgE，及任何同型，包括（但不限於）IgGl、IgG2、IgG3及IgG4。人類化抗體可包含來自一個以上類別或同型之序列，且特定恆定域可經選擇以使用此項技術中熟知之技術優化所需效應功能。人類化抗體之架構區及CDR區不需要與親本序列精確對應’例如供體抗體CDR或共同架構可藉由取代、插入及/ 或缺失至少一個胺基酸殘基來突變.誘發以使得該位點處之 CDR或架構殘基不與供體抗體或共同架構對應。然而，在一特定實施例中，該等突變不會為大範圍的。通常，人類化抗體殘基之至少80%、至少85%、至少90%及至少95%將與親本FR及CDR序列之彼等殘基對應。術語「共同架構」係指共同免疫球蛋白序列中之架構區。術語「共同免疫球蛋白序列」係指由相關免疫球蛋白序列家族中最常存在之胺基酸（或核苷酸）形成之序列（參見例如Winnaker (1987) From Genes to Clones (Verlagsgesellschaft, Weinheim, Germany))。因此，「共同免疫球蛋白序列」可包含「共同可變域」及/或「共同恆定域」。「共同可變域」又可包含或多個「共同架構區」及/或一或多個「共同Cdr」。在免疫球蛋白家族中’共同序列中之每一位置係由該家族中該位置處隶常存在之胺基酸佔據β若兩個胺基酸同等頻率存在，則共同序列中可包括任一者。術語「維尼爾」區係指可調整CDR結構及微調以適合抗原之架構殘基的亞群，如F〇〇te及Winter (1992) J. Mol 151544.doc 5 -45- 201124427

Biol. 224:487-499所述。維尼爾區殘基構成下伏於CDR之層且可對CDR之結構及抗體親和力產生影響。術語「多價結合蛋白」在本說明書中用於表示包含兩個或兩個以上抗原結合位點之結合蛋白。多價結合蛋白經工程改造成具有兩個或兩個以上抗原結合位點，且一般不為天然存在之抗體。術語「多特異性結合蛋白」係指能夠結合兩個或兩個以上相關或無關標靶之結合蛋白。雙可變域 (DVD)結合蛋白為包含兩個或兩個以上抗原結合位點之結合蛋白且為四價或多價結合蛋白。該等DVD結合蛋白可為單特異性的，亦即能夠結合一個抗原，或為多特異性的，亦即能夠結合兩個或兩個以上抗原。包含兩個重鏈DVD多肽及兩個輕鏈DVD多肽之DVD結合蛋白稱為DVD-IgTM分子。DVD-Ig分子之每一半各包含重鏈DVD-Ig多肽及輕鏈 DVD多肽以及兩個抗原結合位點。每一結合位點各包含重鏈可變域及輕鏈可變域，其中每一抗原結合位點總共6個 CDR參與抗原結合。DVD結合蛋白及製造DVD結合蛋白之方法揭示於美國專利第7,612,181號中，該專利以引用之方式併入本文中。本發明之一態樣係關於一種DVD結合蛋白，其包含能夠結合人類IL-Ιβ之結合蛋白。在另一態樣中，該DVD結合蛋白能夠結合IL-Ιβ及第二標靶。在一實施例中，DVD結合蛋白能夠結合IL-la及IL-Ιβ。術語「中和」係指當結合蛋白特異性結合細胞激素時，會中和細胞激素之生物活性。在一實施例中，中和結合蛋 151544.doc • 46- 201124427 白為結合於hIL-Ιβ導致hIL_ip之生物活性受抑制的中和抗體。較佳地，中和結合蛋白結合匕江·”且使之生物活性降低至少約20%、至少約4〇%、至少約6〇%、至少約 80%、至少約85%、至少約9〇%、至少約95%或至少約 100 /。。由中和結合蛋白抑制hIL_丨P之生物活性可藉由量測此項技術中熟知之一或多種hIL-Ιβ生物活性指示物來評估。術語「抗原決定基」包括能特異性結合於免疫球蛋白或 T、’.田胞又體之任何多肽決定子。在某些實施例中，抗原決定基決^子包括分子之化學活性表面基團（諸如胺基酸、糖側鏈 '磷醯基或磺醯基），且在某些實施例中，其可具有特定三維結構特徵及/或特定電荷特徵。抗原決定基為抗原中與抗體結合之區域。因此，抗原決定基係由抗原 (或其片段）t已知結合於特異性結合搭配物上之互補位點的區段之胺基酸殘基組成。抗原性片段可含有一個以上抗原決疋基。在某些實施例中，當抗體在蛋白質及/或大分子之複雜此σ物中識別其標輕抗原時’即認為該抗體可特異性結合抗m體交又競爭（-者阻止另-者之結合或調節作用），則認為抗體「結合於同一抗原決定基」。另外抗原决疋基之結構定義（重I、類似、相同）為提供資訊的’但因為功能定義涵蓋結構（結合性）及功能（調節性、競爭性）參數，所以其通常更具相關性。表面電水子共振」係指藉由例如使用BIACORES ^^(Biacore International AB, a GE Healthcare c〇mDanv. 151544.doc •47· 201124427

Uppsala，Sweden and Piscataway, New Jersey)來偵測生物感應器基質内之蛋白質濃度的變化，而可實時分析生物特異性相互作用之光學現象。關於其他說明，可參見 J0nsson，U·等人，（1993) Ann. Biol. Clin. 51:19_26 ; J0nsson，U•等人，（1991) BioTtechniques li:620_627; Johnsscm，B.等人，（1995) j M〇1 Rec〇gnh 8:125i3i ;及

Johnsson，B.等人，（19W) Anal. Biochem· 198:268-277。術語「Kon」係指如此項技術中已知之結合蛋白（例如抗體）與抗原締合以形成例如抗體/抗原複合物之締合速率常數。「Kon」亦稱為術語「締合速率常數」或「“」，其在本文中可互換使用。此數值指示抗體與其標靶抗原之結合速率或抗體與抗原之間的複合物形成速率，亦可由以下公式表示：抗體（「Ab」）+抗原（「Ag」hAb.Ag。術语「Koff」係指如此項技術中已知之結合蛋白（例如抗體）自例如抗體/抗原複合物解離之解離速率常數。「Koff」亦稱為術語「解離速率常數」或「kd」，其在本文中可互換使用。此值指示抗體自其標靶抗原解離或Ab-

Ag複合物隨時間分離為游離抗體及抗原之解離速率，其如由以下等式所示：

Ab+Ag —Ab-Ag 術》D「平衡解離常數」或「Kd」在本文中可互換使用’係指在滴定量測中在平衡狀態下所獲得之值，或藉由將解離速率常數（koff)除以締合速率常數（k〇n)所獲得之 151544.doc -48- 201124427 值。締合速率常數、解離速率常數及平衡解離常數用於表示抗體與抗原之結合親和力。測定缔合及解離速率常數之方法為此項技術中所熟知。使用基於螢光之技術提供檢查在生理緩衝液中處於平衡狀態下之樣品的高靈敏性及能力。可使用其他實驗性方法及儀器，諸如BIACORES(生物分子相互作用分析）檢疋（例如可講自Biacore International AB，a GE Healthcare company，Uppsala, Sweden之儀器）。另外’亦可使用KinExA®(動力學排除檢定）檢定，其可購自 Sapidyne Instruments(Boise, Idaho) ° 術語「標記之結合蛋白」係指具有所併入之提供結合蛋白之鑑別之標記的蛋白質。在一態樣中，標記為可偵測標記物’例如併入經放射性標記之胺基酸或將可由標記之抗生物素蛋白偵測的生物素基部分連接於多肽（例如含有螢光標記物之抗生蛋白鏈菌素或可藉由光學或比色法谓測之酶活性）。多肽之標記的實例包括（但不限於）以下：放射性同位素或放射性核素（例如3H、14c、35s、90Y、99Te、 1ΠΙη、Ι25Ι、131Ι、177Lu、166Ηο及丨53Sm);螢光標記（例如 FITC、若丹明（rhodamine)及鑭系元素磷光體）、酶標記（例如辣根過氧化酶、螢光素酶、鹼性磷酸酶）；化學發光標記物；生物素基；由二級報導體識別之預定多肽抗原決定基（例如白胺酸拉鏈對序列、二級抗體之結合位點、金屬結合域及抗原決定基標記）；及磁性劑，諸如亂螯合物。術語「抗體結合物」係指以化學方式連接於第二化學部分（諸如治療劑或細胞毒性劑）之結合蛋白（諸如抗體）。術 5 151544.doc -49· 201124427 s吾「樂劑」表示化合物、化合物之混合物、生物大分子或由生物材料製成之萃取物。在一態樣中，治療劑或細胞毒性劑包括（但不限於）百曰咳毒素（pertussis toxin)、紫杉醇 (taxol)、細胞遲緩素B(cytochalasin B)、短桿菌肽D (gramicidin D)、溴化乙錠、吐根素（emetine)、絲裂黴素 (mitomycin)、依託泊苷（etoposide)、特諾波賽 (tenoposide) 長春新驗（vincristine)、長春驗 (vinblastine)、秋水仙驗（colchicine)、阿徽素 (doxorubicin)、道諾黴素（daunorubicin)、二羥基炭疽菌素二酮（dihydroxy anthracin dione)、米托蒽酿 (mitoxantrone)、米拉黴素（mithramycin)、放線菌素 D(actinomycin D)、1-去氫睪固酮、糖皮質激素、普魯卡因（procaine)、四卡因（tetracaine)、利多卡因（lidocaine)、普萘洛爾（propranolol)及嘌呤黴素以及其類似物或同系物。術語「晶體」及「結晶」係指以晶體形式存在之抗體或其抗原結合部分。晶體為固態物質之一種形式，其不同於諸如非晶形固態或液晶態之其他形式。晶體由原子、離子、分子（例如蛋白質，諸如抗體）或分子組裝體（例如抗原/ 抗體複合物）之規則的重複三維陣列構成。此等三維陣列根據此領域中充分瞭解之特定數學關係來排列。晶體中重複之基本單元或構建塊稱為不對稱單元。不對稱單元以符合特定、明確定義之晶體學對稱性的排列方式重複將提供晶體之「單位晶胞」。單位晶胞在所有三維中藉由規則^ I51544.doc •50· 201124427 移（regular translation)重複將提供晶體。參見Gieg0及 Ducruix (1999)第 1章，Crystallization of Nucleic Acids and Proteins, a Practical Approach,第 2 版，（Ducruix 及 GiegS編）（Oxford University Press, New York, 1999)第 ι· 16頁。術語「聚核苷酸」意謂兩個或兩個以上核苷酸（核糖核苷酸或去氧核糖核苷酸或任一類型之核苷酸的經修飾形式）之聚合形式。該術語包括單股及雙股形式之DNa或 RNA ’但在一實施例中為雙股。術刀離之聚核苷酸」意謂如下聚核苷酸（例如源自基因組、cDNA或合成來源，或其組合）：不與在自然界中與其締合、在自然界中與其可操作地連接或在自然界中作為較大序列之一部分出現之聚核苷酸的全部或一部分締合。術語分子。載體」係指能夠轉運其所連接之另一核酸的核酸一種類型之載體為「質體」，其係指可接合其他 DNA區奴之壤狀雙股_八環。另一類型之載體為病毒載體，其中其他DNA區段可接合於病毒基因組中。某些載體月b夠在引入其之宿主細胞中自主複製（例如具有細菌複製起點之細菌载體及游離型哺乳動物載體)。其他載體(例如非游離型哺乳動物载體）可在引人宿主細胞中後整合於宿、也基因組中，且藉此與宿主基因組-起複製。此外，某些載體能夠弓丨導i 引V其可刼作地連接之基因的表現。該等體在本文中稱為「圣_ 重"且表現載體」（或簡稱為「表現載 151544.doc •51 · 201124427 體」）〇一般而言，適用於番έΒ Λ以匕. 、用、重、.且DNA技術中之表現載體通常呈質體形式。在本說明書令，因為質體為載體之最常用形式，所以「質體」與「載體」可互換使用。然而，本發明意欲包括該等起等效功能之其他形式的表現載體，諸如病毒載體(例如複製缺陷型反轉錄病毒、腺病毒及腺相關病毒）。術語「可操作地連接」係指組分之安置使得其以其所欲方式起作用。「可操作料接」於編碼序狀㈣序列以使得編碼序列之表現在與控制序列相容之條件下達成的方式接合。「可操作地連接」之序列包括與所關注之核酸鄰接的表現控制序列，以反式起作用（亦即位於不同於所關注之核酸的核酸分子上，但仍對所關注之核酸施加控制) 之表現控制序列，及位於與所關注之核酸相同的核酸分子上但間隔-定距離之表現控制序列。術語「表現控制序歹J」係拓為貝現其所接合之編碼序列的表現及加工所必需之聚核普酸序列。表現控制序列包括適當轉錄起始、終止、啟動子及強化子序列；有效RNA加工信號，諸如拼接及聚腺苦酸化信號；使細胞fmRNA穩定之序列；提高轉譯效率之序列（亦即κ。z a k共同序列）；增強蛋白質穩定性之序列’及必要時增加蛋白f分泌之序列。該等控制序列之丨生質視伯主有機體而不同；在原核生物中，該等控制序列一般包括啟動？、核糖體結合位點及轉錄終止序列；在真核生物中，該等控制序列一般包括啟動子及轉錄終止序列。術語「控制序列」意欲包括存在對於表現及加工極為 151544.doc -52- 201124427 重要的組分，且亦可包括存在具有益處之其他組分，例如前導序列及融合搭配物序列。轉型」係指外源DNA進入宿主細胞之任何過程。轉型可使用此項技術中熟知用於例如將外來核酸序列插入原核或真核宿主細胞中之各種方法在天然或人工條件下進行。該方法基於所轉型之宿主細胞來選擇且可包括（但不限於）病毒感染、電穿孔、脂質體轉染及粒子轟擊。該等「轉型」細胞包括所插入之DNA能夠以自主複製質體形式或作為宿主染色體之一部分複製的穩定轉型細胞。其亦包括在有限時間内短暫表現所插入之DNA或RNA的細胞。術s吾「重組宿主細胞」（或簡稱為「宿主細胞」）係指外源DNA已引入其中之細胞。應瞭解，該等術語意欲不僅指特疋個體細胞，而且指該細胞之子代。因為某些修飾可因突變或環境影響而發生於繼代中，所以該子代實際上可能不與母細胞相同，但仍包括在術語「宿主細胞」之範嘴内。在一態樣中’宿主細胞包括選自生物界之任一者的原核及真核細胞。真核細胞包括原生生物、真菌、植物及動物細胞。在另一實施例中’宿主細胞包括（但不限於）原核細胞株大腸桿菌；哺乳動物細胞株CHO、HEK 293及 COS ;昆蟲細胞株Sf9 ;及真菌細胞釀酒酵母。重組DNA、寡核苷酸合成以及組織培養與轉型（例如電穿孔及脂質體轉染）可使用標準技術。酶促反應及純化技術可根據製造商之說明書或如此項技術中通常所實現或如本文中所述進行。上述技術及程序一般可根據此項技術中 151544.doc •53- 201124427 熟知且如本說明書通篇所引用並論述之各種一般及更特定之參考文獻中所述之習知方法來進行。參見例如Sambrook 等人，Molecular Cloning: A Laboratory Manual,第 2版 (Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York 1989)。術語「轉殖基因有機體」係指具有含有轉殖基因之細胞的有機體，其中引入有機體（或有機體之祖先）中之轉殖基因表現不天然表現於有機體中之多肽。「轉殖基因」為 DNA構築體'其穩定且可操作地整合於發育成轉殖基因有機體之細胞的基因組中’從而引導所編碼之基因產物在轉殖基因有機體之一或多種細胞類型或組織中之表現。術語「調控」及「調節」可互換使用，且係指所關注之分子之活性（例如hIL-Ιβ之生物活性）的改變或變化。調節可為所關注之分子之某一活性或功能的量值之增加或降低。分子之例示性活性及功能包括（但不限於）結合特徵、酶活性、細胞受體活化及信號轉導。因此’術語「調節劑」為能夠使所關注之分子之活性或功能（例如hIL-la之生物活性）改變或變化的化合物。舉例而言’與不存在調節劑之情況下所觀察到之活性或功能的量值相比，調節劑可引起分子之某一活性或功能的量值增加或降低。在某些實施例中，調節劑為抑制劑，其降低分子之至種活性或功能的量值。例示性抑制劑包括（但不限於）蛋白質、肽、抗體、肽體（peptibody)、碳水化合物或小有機分子。肽抗描述於例如PCT公開案第wo 151544.doc •54· 201124427 01/83525號中。術έ吾「促效劑」係指备盘拼關竹知曰與所關注之分子接觸時與不存在促效劑之情泥下所觀察到之活性或功能的量值相比引起分子之某-活性或功能的量值增加之調節劑。所關注之特定促效劑可包括(但不限於)IL，多肽或結合於IL-1P之多肽、核酸、碳水化合物或任何其他分子。術語「拮抗劑」3戈「抑制劑」係指當與所關注之分子接觸時與不存在拮抗劑之情況下所觀察到之活性或功能的量值相比引起刀子之某_活性或功能的量值降低之調節劑。拮抗劑包括阻斷或調節江，之生物或免疫活性之彼等拮抗劑。IL-ίβ之拮抗劑及抑制劑可包括（但不限於）結合於 IL-Ιβ之蛋白質、核、碳水化合物或任何其他分子。術'。有效置」係指足以減少或改善病症或其一或多種症狀之嚴重程度及/或持續時間，防止病症進展，引起病症消退’防止與病症相關之一或多種症狀復發、發展、發作或進展’偵測病&，或增強或改良另一療法(例如預防之預防或治療作料療法之量。術語「樣品」以其最廣泛意義使用。「生物樣品」包括 (但不限於）任何量之來自活物或原先為活物之物質。节等活物包括(但不限於)人類、小鼠、大鼠、猴、狗、兔子\ 其他動物°该等物質包括（但不限於）也液、也清、尿液、滑液、細胞、器官、組織、骨髓、淋巴結及脾。 I.結合人類IL-la之抗體本發明之—態樣提供分離之單株抗冑或其抗原結合部 151544.doc 5 •55- 201124427 分’其以高親和力結合於IL-1 β，具有慢解離速率且具有焉中和能力。本發明之第二態樣提供結合IL_丨β之嵌合抗體。本發明之第三態樣提供結合比-ΐβ之CDR移植抗體或其抗原結合部分。本發明之第四態樣提供結合江—丨^之人類化抗體或其抗原結合部分。在一實施例中，該等抗體或其部分為分離之抗體。在一實施例中，本發明之抗體中和人類抗IL-Ιβ抗體。 Α.製造抗IL-Ιβ抗體之方法本發明之抗體可藉由此項技術已知之許多技術中之任一者來製造。 1·使用融合瘤技術得到抗IL-ΐρ單株抗體單株抗體可使用此項技術已知之各種技術來製備，包括使用融合瘤、重組及噬菌體呈現技術或其組合。舉例而言，單株抗體可使用包括此項技術中已知且例如在以下文獻中教示之技術的融合瘤技術來製造：Harlow及Lane, Antibodies: A Laboratory Manual，第 2版，（Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, 1988)； Hammerling 等人編，「Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas」，Research Monographs in Immunology，第 3 卷（總編 J.L. Turk) (Elsevier，Ν·Υ.，1981)第 563-587 頁。術語「單株抗體」不限於經由融合瘤技術製造之抗體。術 #吾「早株抗體」係指抗體源自早· ~~純系’包括任何真核、原核或噬菌體純系，而非指其製造方法。使用融合瘤技術製造及篩選特異性抗體之方法為常規方 151544.doc -56- 201124427 法且為此項技術中所熟知。在一實施例中，本發明提供產生單株抗體之方法以及藉由該方法製造之抗體，該方法包含培養分泌本發明之抗體的融合瘤細胞，其中該融合瘤藉由使自用本發明之抗原免疫的小鼠分離之脾細胞與骨髓瘤細胞融合，接著針對分泌能夠結合本發明之多肽的抗體之融合瘤純系篩選自融合得到之融合瘤來產生。簡言之，可用IL-Ιβ抗原使小鼠免疫。在一特定實施例中，將乩七抗原與佐劑一起投與來刺激免疫反應。該等佐劑包括完全或不凡全弗氏佐劑（complete 〇r incompiete Freund,s adjuvant)、RIBI(胞壁醯二肽）或ISC〇M(免疫刺激複合物）。該等佐劑可藉由將多肽隔離於局部沈積物中來保護該多肽以免快速分散，或其可含有刺激宿主分泌對巨噬細胞及免疫系統之其他組分具有趨化性之因子的物質。在一實施例中，若投與多肽，則免疫時程將包括兩次或兩次以上分佈在若干週内之多肽投藥。在用IL-1 β抗原使動物免疫後，可自該動物獲得抗體及/ 或產生抗體之細胞。藉由出血或處死動物自動物獲得含抗 IL-Ιβ抗體之血清。血清可按自動物獲得時之原樣使用，可自血π獲得免疫球蛋白部分，或可自血清純化抗IL_工ρ 抗體。以此方式獲得之血清或免疫球蛋白為多株血清或免疫球蛋白’因此具有一組異源性質。旦偵測到免疫反應，例如在小鼠血清中偵測到對抗原 IL-Ιβ具有特異性之抗體，即收集小鼠脾並分離脾細胞。接著藉由熟知技術將脾細胞與例如可得自ATCC之細胞株 151544.doc .57- 201124427 SP20之細胞的任何適合骨髓瘤細胞融合。藉由限制稀釋法來選擇及選殖融合瘤。接著藉由此項技術已知之方法，針對分泌能夠結合IL-1 β之抗體的細胞檢定融合瘤純系。可藉由用陽性融合瘤純系使小鼠免疫來產生一般含有高含量抗體之腹水。在另一實施例中，可自免疫動物製備產生抗體之永生化融合瘤。免疫後，處死該動物且如此項技術中所熟知，將脾Β細胞與永生化骨髓瘤細胞融合。（參見例如Harl〇w及 Lane，同上）。在一特定實施例中，骨髓瘤細胞不分泌免疫球蛋白多肽（非分泌性細胞株）。融合及抗生素選擇後，使用IL-1 β或其一部分或表現IL_丨β之細胞篩選融合瘤。在一特定實施例中，使用酶聯免疫檢定（ELISA)或放射免疫檢定（RIA)來進行初始篩選。EUSA篩選之一實例提供於 pCT公開案第w〇 00/37504號中。如下文進一步論述，針對包括穩定融合瘤生長、高抗產生及所需抗體特徵之所需特徵選擇、選殖及進一步篩生抗IL 1β抗體之融合瘤。融合瘤可在同基因型動物缺乏免疫系統之動物(例如裸小鼠)中活體内培養及擴增或在細胞培養物中活體外培養及擴增。選擇、選殖及擴融合瘤之方法為熟習此項技術者所熟知。在-實施例巾，融合瘤為小鼠融合瘤。在另一實施 :融合瘤在非人類、非小鼠物種(諸如大鼠、绵羊人翻點1 +或馬)中產生。在另-實施例中，融合瘤 'σ瘤，其中人類非分泌性骨髓瘤與表現抗IL-Ιβ 151544.doc •58- 201124427 體之人類細胞融合。識別特異性抗原決定基之抗體片段可藉由已知技術產生。舉例而言’本發明之Fab及F(ab')2片段可藉由使用諸如木瓜蛋白酶（產生Fab片段）或胃蛋白酶（產生F(ab')2片段）之酶蛋白水解裂解免疫球蛋白分子來產生。F(ab')2片段含有可變區、輕鏈恆定區及重鏈CH1區。 2.使用SLAM得到抗IL-lp單株抗體在本發明之另一態樣中，如美國專利第5,627,052號、 PCT公開案第 WO 92/02551 號及 Babcook 等人，（1996) Proc. Natl· Acad· Sci· USA 93 :7843-7848 中所述，重組抗體係使用此項技術中稱為選擇之淋巴細胞抗體方法（selected lymphocyte antibody method，SLAM)之程序，自單一分離之淋巴細胞產生。在此方法中，使用抗原特異性溶血空斑檢定篩選分泌所關注之抗體的單一細胞（例如源自免疫之動物的淋巴細胞），其中抗原虬-ΐβ或其片段經由使用連接子（諸如生物素）偶合於綿羊紅盘球且用於鑑別分泌對於IL_ 1 β具有特異性之抗體的單一細胞。鑑別所關注之分泌抗體的細胞後，藉由反轉錄酶PCR自細胞取得重鏈及輕鏈可變區cDNA ’且接著在適當免疫球蛋白恆定區（例如人類恆定區）之情形下可於諸如C0S或CH〇細胞之哺乳動物宿主細胞中表現此等可變區。隨後可對經源自活體内選擇之淋巴細胞之經擴增免疫球蛋白序列轉染的宿主細胞進行進一步活體外分析及選擇，例如藉由淘選經轉染之細胞以分離表現比-Ιβ之抗體的細胞。擴增之免疫球蛋白序列可進一步在 151544.doc -59- 201124427 活體外進行操控，諸如藉由活體外親和力成熟方法，諸如 PCT公開案第wo 97/29131號及第WO 00/56772號中所述之彼等方法。 3. 使用轉殖基因動物得到抗IL-ip單株抗體在本發明之另一實施例中，藉由用IL-Ιβ抗原使包含一些或所有人類免疫球蛋白基因座之非人類動物免疫來製造抗體。在一實施例中’非人類動物為XENOMOUS®轉殖基因小鼠，其為包含人類免疫球蛋白基因座之大片段且缺乏小鼠抗體產生之工程改造之小鼠品系。參見例如Green等人，（1994) Nature Genet. 7:13-21及美國專利第 5,916,771 號、第 5,939,598 號、第 5,985,615號、第 5,998,209號、第 6,075，181 號、第 6,091,001 號、第 6，114,598 號及第 6,130,364號。亦參見PCT公開案第WO 91/1 0741號、第WO 94/02602號、第 WO 96/34096號、第 WO 96/33735 號、第 WO 98/16654號、第 WO 98/24893號、第 WO 98/50433號' 第 WO 99/45031號、第 WO 99/53049號、第 WO 00/09560號及第WO 00/37504號。XENOMOUSE®轉殖基因小鼠產生完全人類抗體之成人樣人類譜系，且產生抗原特異性人類單株抗體。XENOMOUSE®轉殖基因小鼠經由引入人類重鏈基因座及X輕鏈基因座之百萬驗基（megabase)規模的生殖系構型YAC片段而含有約80%之人類抗體譜系。參見 Mendez等人，（1997) Nature Genet. 15:146-156，及 Green及 Jakobovits (1998) J. Exp. Med. 188:483-495。 4. 使用重組抗體庫得到抗IL_ip單株抗體 151544.doc •60· 201124427 亦可使用活體外方法製造本發明之抗體’其中篩選抗體庫以鑑別具有所需結合特異性之抗體。此對重組抗體庫篩選之方法為此項技術中所熟知且包括例如以下文獻中所述之方法：美國專利第5,223,409號；PCT公開案第WO 92/18619號、第 WO 91/17271 號、第 WO 92/20791 號、第 WO 92/15679號、第 WO 93/01288號、第 WO 92/01047號、第 WO 92/09690號、第 WO 97/29131 號；Fuchs等人，（1991) Bio/Technology 9:1369-1372 ; Hay 等人，（1992) Hum. Antibod. Hybridomas 3 :8 1-85 ; Huse 等人，（1 989) Science 246:1275-1281 ; McCafferty 等人，（1990) Nature 348:552-554 ; Griffiths 等人，（1993) EMBO J. 12:725-734 ; Hawkins 等人，（1992) J. Mol· Biol. 226:889-896 ； Clackson 等人， (1991) Nature 352:624-628 ； Gram^ A, (1992) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:3576-3580 ; Garrard 等人，（1991) Bio/Technology 9:1373-1377 ; Hoogenboom 等人，（1991) Nucl. Acids Res. 19:4133-4 137 ;及 Barbas 等人，（1991) Proc. Natl· Acad· Sci. USA 88:7978-7982，及美國專利申請案第 2003/0186374號。重組抗體庫可來自經IL-Ιβ或IL-Ιβ之一部分免疫之個體。或者，重組抗體庫可來自天然個體，亦即未經IL-Ιβ 免疫之個體，諸如來自未經人類IL-1 β免疫之人類個體的人類抗體庫。藉由用包含人類IL-1 β之肽篩選重組抗體庫以藉此選擇識別IL-Ιβ之抗體來選擇本發明之抗體。進行該篩選及選擇之方法為此項技術中所熟知，諸如先前段落 5 151544.doc •61 · 201124427 中之參考文獻中所述之方法。為選擇對hIL ip具有特定結 «親和力之本發明之抗體，諸如以特^ k。"速率常數盘人類1L’解離之抗體，可使用此項技術已知之表面電聚子共振方法來選擇具有所需^速率常數之抗體。為選擇對肌’具有特定中和活性之本發明之抗體，諸如具有特定 5〇之抗體，可使用此項技術已知之評估1 p活性之抑制的標準方法。在態樣中，本發明係關於一種結合人類il- 1 β之分離之杬體或其抗原結合部分。在一特定實施例中，該抗體為中和抗體。在各種實施例中，抗體為重組抗體或單株抗體。舉例而言’本發明之抗體亦可使用此項技術中已知之各種噬菌體呈現方法來產生。在噬菌體呈現方法中，功能抗體域呈現於帶有編碼其之聚核苷酸序列之噬菌體粒子的表面上。詳言之，可利用該噬菌體呈現由譜系或組合抗體庫 (例如人類或鼠類）表現之抗原結合域。可用抗原，例如使用k δ己之抗原或結合或捕獲於固體表面或珠粒之抗原，來選擇或鐘別表現結合所關注之抗原之抗原結合域的噬菌體。此等方法中所用之噬菌體通常為絲狀噬菌體，包括由 Fab、Fv或二硫化物穩定之Fv抗體域與噬菌體基因ΠΙ或基因VIII蛋白質重組融合之噬菌體表現的fd&M13結合域。可用於製造本發明之抗體之噬菌體呈現方法的實例包括以下文獻中所揭示之彼等方法：Brinkmann等人，（1995) J. Immunol. Methods 182:41-50 ; Ames 等人，（1995) J. 151544.doc -62· 201124427

Immunol. Methods 184:177-186 ; Kettleborough 等人， (1994) Eur. J· Immunol. 24:952-958; Persic 等人，（1997) Gene 187 9-18 ; Burton等人，（1994) Adv. Immunol· 57:191· 280;PCT申請案第PCT/GB91/01134號；PCT公開案第WO 90/02809號；第 WO 91/10737號；第 WO 92/01047號；第 WO 92/18619號；第 WO 93/11236號；第 WO 95/15982號；第 WO 95/20401 ;及美國專利第 5,698,426號；第 5,223,409 號；第 5,403,484號；第 5,580,717號；第 5,427,908號；第 5,750,753 號；第 5,821，047 號；第 5,571，698 號；第 5,427,908 號；第 5,516,637 號；第 5,780,225 號；第 5,658,727號；第 5,733,743號及第 5,969，108號。在噬菌體選擇後，可自噬菌體分離抗體編碼區且用於產生包括人類抗體之全抗體或任何其他所需抗原結合片段，且例如如下文詳細描述，使其在包括哺乳動物細胞、昆蟲細胞、植物細胞、酵母及細菌之任何所需宿主中表現。舉例而言，亦可藉由使用此項技術中已知之方法來採用重組製造Fab、Fab’及F(ab')2片段之技術，已知方法諸如以下文獻中所揭示之彼等方法：PCT公開案第WO 92/22324號； Mullinax等人，（1992) BioTechniques 12(6):864-869 ; Sawai 等人，（1995) Am. J. Reprod. Immunol. 34:26-34 ;及 Better 等人，（1988) Science 240:1041-1043。可用於製造單鏈Fv 及抗體之技術的實例包括以下文獻中所述之彼等技術：美國專利第4,946,778號及第5,258,498號；Huston等人， (1991) Methods Enzymol. 203:46-88 ; Shu 等人，(1993) £ 151544.doc -63 - 201124427

Proc. Natl· Acad. Sci· USA 90:7995-7999;及 Skerra等人， (1988) Science 240:1038-1041 o 可應用此項技術已知用於篩選大型組合庫之其他方法替代藉由噬菌體呈現篩選重組抗體庫來鑑別本發明之雙重特異性抗體。如PCT公開案第WO 98/31700號，及Roberts及 Szostak (1997) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94:12297-12302 中所述，一種類型之替代表現系統為重組抗體庫表現為 RNA-蛋白質融合物的系統。在此系統中，藉由在3,端處帶有嗓吟Μ素（一種狀基受體抗生素）之合成mRNA的活體外轉譯而在mRNA與其編碼之肽或蛋白質之間產生共價融合。因此，可基於所編碼之肽或蛋白質（例如抗體或其一部分）的性質（諸如抗體或其一部分與雙重特異性抗原之結合），自mRNA之複雜混合物（例如組合庫）富集特異性 mRNA。藉由篩選該等庫所回收之編碼抗體或其部分的核酸序列可藉由如以上所述之重組方式（例如在哺乳動物宿主細胞中）表現，且此外，可藉由再進行幾輪已向最初選擇之序列中引入突變之mRNA-肽融合物的筛選或藉由如以上所述之活體外使重組抗體親和力成熟之其他方法使表現之核酸序列進一步親和力成熟。在另一方法中，本發明之抗體亦可使用此項技術中已知之酵母呈現方法來產生。在酵母呈現方法中，使用遺傳方法將抗體域繫栓於酵母細胞壁且使其呈現於酵母之表面上。詳言之，可利用該酵母呈現由譜系或組合抗體庫（例如人類或鼠類）表現之抗原結合域。可用於製造本發明之 151544.doc -64- 201124427 抗體之酵母呈現方法的實例包括美國專利第6 699,658號中所揭示之彼等方法。 B.重組IL-Ιβ抗體之製造本發明之抗體可藉由此項技術中已知之許多技術中之任一者來製造。舉例而言，自宿主細胞表現，其中藉由標準技術將編碼重鏈及輕鏈之表現載體轉染至宿主細胞中。術語「轉染」之各種形式意欲涵蓋常用於將外源DNA引入原核或真核生物宿主細胞中之多種技術，例如電穿孔、磷酸鈣沈澱、DEAE-葡聚糖轉染及其類似技術。雖然有可能在原核或真核生物宿主細胞中表現本發明之抗體，但較佳在真核細胞中表現抗體，且最佳在哺乳動物宿主細胞中表現，因為該等真核細胞（且尤其哺乳動物細胞）比原核細胞更有可能組裝及分泌經適當摺疊且具免疫活性之抗體。表現本發明之重組抗體的例示性哺乳動物宿主細胞包括中國倉鼠卵巢（CHO細胞）（包括Urlaub及Chasin，（1980) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216-4220 中所述之dhfr-CHO細胞，其與DHFR可選標記物一起使用，例如Kaufman 及 Sharp (1982) J. Mol. Biol. 159:601-621 中所述）、NS0骨髓瘤細胞、COS細胞及SP2細胞。當將編碼抗體基因之重組表現載體引入哺乳動物宿主細胞中時，該等抗體係藉由將該等宿主細胞培養一段足以允許該抗體在宿主細胞中表現或允許該抗體分泌至該等宿主細胞藉以生長之培養基中的時間來製造。可使用標準蛋白質純化方法，自培養基中回收抗體。 151544.doc -65· 201124427 亦可使用宿主細胞產生功能抗體月段，諸如Fab片段或 scFv分子。應瞭解，以上程序之變化係在本發明之範疇内。舉例而言，可能希望用編碼本發明抗體之輕鏈及/或重鏈之功能片段的DNA轉染宿主細胞。亦可使用重組dna 技術來移除一些或所有編碼不為結合所關注之抗原所必需之輕鏈與重鏈中之任一者或兩者的DNA。本發明之抗體亦涵蓋由該等截短之DNA分子表現的分子。另外，可藉由用標準化學交聯方法使本發明之抗體與第二抗體交聯產生雙功能抗體’其中一條重鏈及一條輕鏈為本發明之抗體且另一條重鏈及輕鏈對除人類IL_ip以外之抗原具有特異性。在重組表現本發明之抗體或其抗原結合部分的特定系統中’藉由碟酸鈣介導之轉染將編碼抗體重鏈與抗體輕鏈之重、"且表現載體引入dhfr-CHO細胞中。在重組表現載體中，抗體重鏈與輕鏈基因各自可操作地連接於cmv強化子 /AdMLP啟動子調控元件以驅動基因之高水準轉錄。重組表現載體亦帶有DHFR基因，該基因允許使用胺甲喋呤選擇/擴增來選擇已經載體轉染之CHO細胞。培養所選擇之轉型體宿主細胞以允許表現抗體重鏈及輕鏈，且自培養基中回收完整抗體。使用標準分子生物學技術來製備重組表現載體’轉染宿主細胞，選擇轉型體，培養宿主細胞且自培養基中回收抗體。此外，本發明提供一種合成本發明之重組抗體的方法’該方法係藉由在適合之培養基中培養本發明之宿主細胞直至合成本發明之重組抗體來進行。該方法可進一步包含自該培養基中分離重組抗體。 151544.doc -66 - 201124427 1.抗IL-ip抗體表5提供本發明之小鼠抗hIL-Ιβ單株抗體（mAb)之VH及 VL區的胺基酸序列。表5:小鼠抗人類IL-Ιβ之VH及VL區的胺基酸序列

SEQ ID No. 蛋白質區胺基酸序列 123456789012345678901234567890 26 1B12.4H4VH DYQVSWIRQPPG民 GLEWLGLIWGGGDTYYN SPLKSRLSIRKDNSKSQyFLKMNSLQTDDT ： AVYYCAKQRTLWGYDLYGMDYWGQGTSVTV SS 27 1B12.4H4VL ETTVTQSPASLSMAIGEKVTIRCITSTDID VDMNWYQQKPGEPPKLLISQGNTLRPGVPS RFSSSGSGTDFVFIIENMLSEDVADYYCLQ SDNLPLTFGAGTKLELK 2.抗IL-Ιβ嵌合抗體嵌合抗體為抗體之不同部分源自不同動物物種之分子，諸如具有源自鼠類單株抗體之可變區及人類免疫球蛋白恆定區的抗體。製造嵌合抗體之方法為此項技術所已知且在實例中論述。參見例如 Morrison (1985) Science 229:1202-1207 ; Oi等人，（1986) BioTechniques 4:214-221 ; Gillies等人，（1989) J. Immunol. Methods 125:191-202 ;及美國專利第 5,807,715 號；第 4,816,567 號；及第 4,816,397 號。另外，可使用開發用於藉由剪接來自具有適當抗原特異性之小鼠抗體分子的基因以及·來自具有適當生物活性之人類抗體分子的基因來製造「嵌合抗體」之技術（Morrison等人， (1984) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81:6851-6855 ； Neuberger 等人，（1984) Nature 312:604-608 ;及 Takeda 等人，（1985) Nature 314:452-454)。 151544.doc -67- 201124427 3. 抗IL-Ιβ CDR移植抗體本發明之CDR移植抗體包含來自人類抗體之重鏈及輕鏈可變區序列’其中VH及/或VL之一或多個CDR區經本發明之鼠類抗體的CDR序列置換。來自任何人類抗體之架構序列均可充當CDR移植之模板。然而，該架構上之直鏈置換通常導致損失部分對抗原之結合親和力。人類抗體與初始鼠類抗體之同源性愈高，組合鼠類CDR與人類架構在CDR 中引入可降低親和力之畸變的可能性愈低。因此，在一實施例中，經選擇以置換鼠類可變架構（除CDR外）之人類可變架構與鼠類抗體可變區架構具有至少約65%、至少約 70%、至少約75%、至少約80%、至少約85%、至少約 90%、至少約95%、約100%之序列一致性。製造CDR移植抗體之方法為此項技術所知且與該等CDR移植抗體之人類化一起詳細描述於實例中（亦參見EP專利第EP 0 239 400 號；PCT公開案第WO 91/09967號；美國專利第5,225,539 號；第5,530，101號；及第5,5 85,089號）；飾面或重設表面 (EP專利第 EP 0 592 106號及第 EP 0 519 596號；Padlan (1991) Mol. Immunol· 28(4/5):489-498 ; Studnicka 等人， (1994) Protein Eng. 7(6):805-814 ; Roguska等人，（1994) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91:969-973)，及鏈洗牌（美國專利第 5,565,352號）。 4. 抗IL-ip人類化抗體人類化抗體為具有來自非人類物種之一或多個互補決定區（CDR)及來自人類免疫球蛋白分子之架構區的抗體分 151544.doc -68- 201124427 子。已知的人類Ig序列揭示於例如以下中：www.ncbi.nlm. nih.gov/entrez-/query.fcgi www.atcc.org/phage/hdb.html ； www.sciquest.com/ ； www.abcam.com/ ; www.antibodyresource.com/ onlinecomp.html ; www.public.iastate.edu/.about.pedro/research_ tools.html ; www.mgen.uni-heidelberg.de/SD/IT/IT.html ; www. whfreeman. com/immunology/CH-05/kuby 0 5 .htm ; www.library.thinkquest.org/12429/Immune/Antibody.html ； www.hhmi.org/grants/lectures/199 6/vlab/ ； www.path.cam. ac.uk/.about.mrc7/m-ikeimages.html ; www.antibodyresource.com/ ； mcb.harvard.edu/BioLinks/Immunology.html.www.immunologylink. com/ ； pathbox. wu stl.edu/. about, he enter/index.-html ； www. biotech.ufl.edu/.about.hcl/ ； www.pebio.com/pa/340913/340913.html-;www.nal.usda.gov/awic/pubs/antibody/ ； www.m.ehime-u. acjp/.about.yasuhito-/Elisa.html ; www.biodesign.com/table.asp ; www.icnet.uk/axp/facs/davies/lin-ks.html : www.biotech. ufl.edu/.about.fee 1/protocol.html ； www.isac-net.org/sites_ geo.html ； aximtl.imt.unimarburg.de/.about.rek/AEP-Start.html ; baserv.uci.kun.nl/.about.jraats/1 inksl.html ; www.recab.uni-hd.de/immuno.bme.nwu.edu/ I www.mrc-cpe.cam.ac.uk/imt-doc/public/INTRO.html ; www.ibt.unam.mx/vir/V_mice.html ; imgt.cnusc.fr:81 04/ ; www.biochem.ucl.ac.uk/.about.martin/ abs/index.html ; antibody.bath.ac.uk/ ； abgen.cvm.tamu. e du/lab/wwwabgen.html ; www.unizh.ch/.about.honegger/AHOsem-inar/SlideO 1 .html ; www.cryst.bbk.ac.uk7.about.ubcg07s/ ; 151544. doc • 69- 201124427 www.nimr.mrc.ac.uk/CC/ccaewg/ccaewg.htm ; www.path.cam. ac.uk/.about.mrc7/humanisation/TAHHP.html ; www.ibt.unam. mx/vir/structure/stat_aim.html ； www.biosci.missouri.edu/ smithgp/index.html ； www.cryst.bioc.cam.ac.uk八abo-ut.fmolina/ Web-pages/Pept/spottech.html ； www.jerini.de/fr roducts.htm ； www.patents.ibm.com/ibm.html ； Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest, U.S. Dept. Health (1983)。如此項技術中已知，該等輸入序列可用於降低免疫原性或降低、增強或修飾結合、親和力、締合速率、解離速率、親合力、特異性、半衰期或任何其他適合之特徵。人類架構區中之架構殘基可經來自CDR供體抗體之相應殘基取代以改變（例如改良）抗原結合。該等架構取代係藉由此項技術中熟知之方法鑑別，例如藉由建立CDR與架構殘基之相互作用的模型以鑑別對抗原結合重要之架構殘基及進行序列比較以鑑別特定位置之異常架構殘基。（參見例如美國專利第5,585,089號及Riechmann等人，（1988) Nature 332:323-327)。三維免疫球蛋白模型普遍可獲得且為熟習此項技術者所熟知。可獲得說明及呈現所選擇之候選免疫球蛋白序列之可能的三維構形結構的電腦程式。對此等呈現之檢查允許分析殘基在候選免疫球蛋白序列起作用過程中可能的作用，亦即分析影響候選免疫球蛋白結合其抗原之能力的殘基。以此方式，可自共同序列及輸入序列選擇及組合FR殘基以實現所需之抗體特徵，諸如增加對 151544.doc •70- 201124427 標把抗原之親和力。一般而言，CDR殘基直接且最實質性地涉及影響抗原結合。抗體可使用此項技術中已知之各種技術來人類化，諸如（但不限於）以下文獻中所述之彼等技術：Jones 等人，（1986) Nature 321:522-525 ; Verhoeyen 等人，（1988) Science 239:1534-1536); Sims等人，（1993) J. Immunol· 151: 2296-2308 ; Chothia及 Lesk (1987) J. Mol· Biol. 196:901-917; Carter等人，（1992) Proc. Natl· Acad. Sci. USA 89:4285-4289 ; Presta等人，（1993) J. Immunol. 151:2623-2632 ； Padlan (1991) Mol. Immunol. 28(4/5):489-498; Studnicka 等人，（1994) Protein Eng. 7(6):805-814 ; Roguska.等人，（1994) Proc· Natl. Acad. Sci. USA 91:969-973 ; PCT 公開案第 WO 91/09967 號、第 WO 99/06834 (PCT/US98/16280)號、第 WO 97/20032(PCT/US96/18978) 號 '第 WO 92/11272(PCT/US91/09630)號、第 WO 92/03461 (PCT/US91/05939)號、第 WO 94/18219(PCT/US94/01234) 號、第 WO 92/01047(PCT/GB91/01134)號、第 WO 93/06213 (PCT/GB92/01755)號、第 WO 90/14443 號、第 WO 90/ 14424號及第WO 90/14430號；歐洲公開案第EP 0592106 號、第EP 05 19596號及第EP 0239400號；美國專利第 5,565,332 號；第 5,723,323 號；第 5,976,862 號；第 5,824,514 號；第 5,817,483 號；第 5,814,476 號；第 5,763，192 號；第 5,723,323 號；第 5,766,886 號；第 5,714,352 號；第 6,204,023 號；第 6,180,370 號；第 5,693,762 號；第 5,530,101 號；第 5,585,089 號；第 151544.doc -71 - 201124427 5,225,539 號；及第 4,816,567 號。 C.抗體之產生及產生抗趙之細胞株在一實施例中，本發明之抗IL-Ιβ抗體展現降低或中和 IL-1 β活性之高能力，例如如藉由此項技術中已知之若干活體外及活體内檢定中之任一者所評估。在一實施例中，本發明之抗IL-Ιβ抗體亦展現降低或申和IL_ip活性之高能力。在特定實施例中，如藉由表面電漿子共振所測定，分離之抗體或其抗原結合部分會結合人類IL_丨β，其中該抗體或其抗原結合部分依約〇. i s·!或更小之、^速率常數與人類 IL-Ιβ解離，或其依約1χ1〇-6 M或更小之1〇^抑制人類比1 活性。或者如藉^面電f子共振所測定，抗體或其抗原結合部分可依約1χ10·2 s-丨或更小之。速率常數與人類L 1β解離’或可依約1Xl0-7河或更小之IC5〇抑制人類化_聯性。或者如藉由表面電紫子共振所測定，抗體或其抗原結合部分可依約1Χ10-?或更小之koff速率常數與人類㈣解離，或依以約1M0-S _更小之〜抑制人類i]L_ip活性。或者如藉由表面電漿子共振所測定，抗體或其抗原結合部分可依約m〜或更小之koff速率常數與人·_1β 解離，或可依約lxl0.9 Μ或更小之〜抑制江活性。或藉由表面電漿子共振所測定，抗體或其抗原結合部分 ° 1〇 S或更小之匕“速率常數與人類IL-Ιβ解離，或可依約1χΐ〇·ι。贱更小之％。抑制IL ip活性。或者如藉由表面電漿子共振所測定，抗體或其抗原結合部分可依約 J51544.doc •72· 201124427 S·1或更小之koff速率常數與人類江-”解離，或可依約lxio·11 Μ或更小之1C5。抑制人類IL-Ιβ活性。在某些實施例中，抗體包含重鏈恆定區，諸如IgG1、

IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgE、IgM 或 IgD 恆定區。在一實施例中，該重鏈恆定區為IgGl重鏈恆定區或IgG4重鏈恆定區。此外，抗體可包含輕鏈恆定區，即κ輕鏈恆定區或λ 輕鏈恆定區。在一實施例中，抗體包含κ輕鏈恆定區。或者’抗原結合部分可為例如Fab片段或單鍵ρν片段。置換Fc部分中之胺基酸殘基以改變抗體效應功能為此項技術所知（美國專利第5,648,260號及第5,624,821號）。抗體之Fc部分介導若干重要效應功能，例如細胞激素誘導、抗體依賴性細胞介導型細胞毒性（ADCC)、吞噬作用、補體依賴性細胞毒性（CDC)以及抗體及抗原_抗體複合物之半衰期/ ^除率。視治療目標而定，在一些情況下，此等效應功能為治療性抗體所需，但在其他情況下，可能為不必要的或甚至有害的。某些人類IgG同型（尤其IgG1&IgG3)分別經由結合FcYR及補體ciq而介導ADCC及CDC。新生兒 Fc文體（FcRn)為測定抗體之循環半衰期的關鍵組分。在又貫把例中，置換抗體恆定區（例如抗體之Fc區）中之至少一個胺基酸殘基，以使得抗體之效應功能得以改變。一個實施例提供一種標記之結合蛋白，其中本發明之抗體或其抗原結合部分衍生化或連接於另一功能分子（例如另一肽或蛋白質）。舉例而言，本發明之標記之結合蛋白可藉由使本發明之抗體或其抗原結合部分（藉由化學偶 151544.doc •73- 201124427 合'遺傳融合、#共價締合或其他方式）功能性連接於一或多個他刀子貫體來衍生，該一或多個分子實體諸如另一抗體（例如雙特異性抗體或微型雙功能抗體）、可偵測劑、細胞毒性劑、醫藥劑及/或可介導抗體或其抗原結合部分與另一分子（諸如抗生蛋白鏈菌素核心區或聚組胺酸標記）締合之蛋白質或肽。本發明之抗體或其抗原結合部分可藉以衍生化之適用可偵測劑包括螢光化合物。例示性螢光可偵測劑包括螢光素、異硫氰酸螢光素、若丹明（rhodamine)、5_二曱基胺小奈碩醯氯、藻紅素及其類似物。亦可用諸如鹼性磷酸酶、辣根過氧化扭、葡萄糖氧化酶及其類似酶之可摘測酶使抗體衍生化。當用可偵測酶使抗體衍生化時，其藉由添加該酶藉以用於產生可偵測反應產物之其他試劑來偵測。舉例而言，當存在可偵測劑辣根過氧化酶時，添加過氧化氫及二胺基聯苯胺會產生可偵測之有色反應產物。亦可用生物素使抗體衍生化，且經由間接量測抗生物素蛋白或抗生蛋白鏈菌素結合來偵測。本發明之另一實施例提供一種結晶結合蛋白。在一實施例中，本發明係關於如本文所揭示之全抗比_113抗體及其片段的晶體，及包含該等晶體之調配物及組合物。在一實施例中，結晶結合蛋白之活體内半衰期比結合蛋白之可溶性對應物長。在另一實施例中，結合蛋白在結晶後保留生物活性。

本發明之結晶結合蛋白可根據此項技術中已知且如pcT 151544.doc •74· 201124427 公開案第WO 02/72636號中所揭示之方法來製造。本發明之另一實施例提供一種糖基化結合蛋白，其中抗體或其抗原結合部分包含一或多個碳水化合物殘基。初期活體内蛋白質產生可進行進一步加工，稱為轉譯後修斜。詳言之，可以酶促方式添加糖（糖基）殘基，一種稱為糖基化之過程。帶有共價連接之寡醣側鏈的所得蛋白質稱為糖基化蛋白質或醣蛋白。蛋白質糖基化視所關注之蛋白質的胺基酸序列以及用於表現蛋白質之宿主細胞而定。不同有機體可產生不同糖基化酶（例如糖基轉移酶及糖苦酶）且可利用不同受質（核苷酸糖）。歸因於該等因素，蛋白質糖基化模式及糖基殘基之組成可視用於表現特定蛋白質之宿主系統而不同。適用於本發明之糖基殘基可包括（但不限於）葡萄糖、半乳糖、甘露糖、海藻糖、n_乙醯葡糖胺及唾液酸。在一實施例中，糖基化結合蛋白包含使得糖基化模式為人類模式之糖基殘基。熟習此項技術者已知不同蛋白質糖基化可產生不同蛋白質特徵。舉例而言，在諸如酵母之微生物宿主中產生且利用酵母内源性路徑糖基化之治療蛋白質的功效與在諸如 CHO細胞株之哺乳動物細胞中表現之相同蛋白質相比可降低。該等醣蛋自亦可在人類巾具有免疫原性且在投藥後展不縮紐之活體内半衰期。人類及其他動物中之特異性受體可識別特異性糖基殘基且促進蛋白質自*流快速清除。盆他副作用可包括蛋白質摺疊、溶解性、對蛋白酶之敏感度、流量、轉運、區室化、分泌、由其他蛋白質或因子識 § 15I544.doc •75- 201124427 別、抗原性或過敏原性發生變化。因此，從業者可能偏好具有特定糖基化組成及模式之治療性蛋白質，例如與人類細胞或預定個體動物之物種特異性細胞中所產生相同或至少類似的糖基化組成及模式。表現不同於宿主細胞之糖基化蛋白質的糖基化蛋白質可藉由基因修飾宿主細胞以表現異源糖基化酶來達成。使用此項技術已知之技術’從業者可產生展現人類蛋白質糖基化之抗體或其抗原結合部分。舉例而言，已基因修飾酵母品系以表現非天然存在之糖基化酶以使得在此等酵母品系中產生之糖基化蛋白（醣蛋白）展現與動物細胞、尤其人類細胞之彼蛋白質糖基化相同之蛋白質糖基化（美國專利第 7,449,3 08號及第 7,029,872號）。此外，熟習此項技術者應瞭解，所關注之蛋白質可使用經基因工程改造以表現各種糖基化酶之宿主細胞庫來表現’以使得該庫之成員宿主細胞產生具有變異糖基化模式之所關注之蛋白質。從業者隨後可選擇及分離具有特定新穎糖基化模式之所關注之蛋白質。在一實施例中，具有特定選擇之新穎糖基化模式的蛋白質展現改良或改變之生物性質。 D.抗IL-lp抗體之用途假定本發明之結合蛋白（例如抗IL-1 β抗體）及其抗原結合部分具有結合於人類IL-1 β之能力，則其可用於使用此項技術中可用之眾多基於抗體之免疫偵測系統中的任一者來偵測IL-1 β(例如在生物樣品中，諸如全血、血清、血漿、 151544.doc •76- 201124427 尿液、唾液、組織樣品）^該等免疫偵測系統包括（但不限於）免疫沈殿、免疫墨點法（西方墨點法）、酶聯免疫吸附檢定（ELISA)、放射免疫檢定（RIA)、組織免疫組織化學、表面電衆子共振（SPR)、夾層免疫檢定、基於抗體之親和力方法（例如親和珠粒、親和管柱）、免疫競爭檢定、免疫晶 • 片檢定（連接於矽晶片之結合蛋白）及螢光活化細胞分選 (FACS)。對於一些免疫偵測系統，使用此項技術中可用於使各抗體分子連接於同一固體基質之方法，使本發明之 IL-Ιβ結合蛋白（或其結合部分）（或其一部分）連接於固體基質以使得所連接之結合蛋白在用於特定免疫偵測系統期間保留其結合人類IL-1P之能力。該等固體基質包括（但不限於）基於纖維素之濾紙（例如纖維素、硝基纖維素、乙酸纖維素）、耐綸（nylon)濾紙、塑性表面（例如微量滴定板、抗體量油尺）、玻璃基板（例如濾紙、珠粒、載片、玻璃棉）、聚合粒子（例如瓊脂糖、聚丙烯醯胺）及矽晶片。舉例而言，免疫偵測系統可用於偵測活體外樣品（例如生物樣品，諸如全血、血清、血衆、組織、尿液、唾液、組織活檢體）中IL-Ιβ之存在的方法中。該方法可用於診斷疾病或 ' 病症，例如免疫細胞相關病症。該方法包括：⑴使測試樣 • 或對照樣品與如本文所述之〗L-ip結合蛋白或其IL1p^ 合部分接觸，及（ii)侦測抗化-丨卩結合蛋白（或其結合部分°) 與測試樣品或對照樣品中之IL_ip之間複合物之形成，其 7測試樣品中複合物之形成相對於對照樣品（或相對於在較早時間點獲取之另一測試樣品中複合物之形成）統計顯 151544.d〇( -77- 201124427 著之變化指示樣品中存在IL-1 β。作為另一實例，可利用活體内偵測人類lL_ip之存在（例如在個體中活體内顯影）的方法。該方法可用於診斷疾病或病症’例如相關病症1方法包括··⑴在允許結合蛋白或其ΙΙΜβ結合部分結合IL_ip之條件下向測試個體或對照個體投與如本文所述之:IL-ίβ結合蛋白或其1£_1<3結合部分；及（Π)偵測該結合蛋白或其結合部分與比^之間複合物之形成，其中該測試個體中複合物之形成相對於^ 照個體或相對於在較早時間點獲取之測試個體中複合物之形成統計顯著之變化指示存在IL_丨β。偵測本發明之樣品（例如生物樣品）中之IL_ip的方法包令使樣品與本文所述之IL__合蛋白（或其江·職合部分接觸，及谓測結合於江，之結合蛋白（或其結合部分）或未 :合之結合蛋白(或其未結合之結合部分)以_測該樣 2之UP。結合蛋白（或其一部分）直接或間接經可偵測物質標記以有助㈣測結合或未結合之結合蛋白（或其― 4刀）。该等可铺測物質為此項技術所知且非限制性實例 =括各種酶、辅基（prGsthetiegrGup)、螢光物f、發光物性生物質’:適合的酶之實例包括辣根過氧化酶、鹼人物^卜半讀㈣或乙醯膽㈣酶。適合的輔基複 :1ΓΓ括抗生蛋白鍵菌素/生物素及抗生物素蛋白/ 氛酸榮光Ϊ合的螢光物f之實例包括傘酮、螢光素、異硫等紅辛丹明、二氣三唤基胺螢光素、丹續醯氯或 “、…、。發光物質之實例包括魯米諾（—D。適合的放 151544.doc -78- 201124427 射性物質之實例包括放射性同位素3Η、14C、3 5 S、90Υ、 99Tc、lllln、125Ι、131Ι、177Lu、166Η〇及 153Sm。代替給結合蛋白作標記，可藉由競爭免疫檢定，利用經可偵測物質標記之重組人類（rh)lL_ip標準物及未標記之IL_ 1β結合蛋白（或其IL-Ιβ結合部分）檢定樣品（例如生物流體）中之人類IL-Ιβ。在此檢定中，合併樣品、標記之沌iL ip 標準物及IL-Ιβ結合蛋白，且測定結合於未標記之結合蛋白的標記之rh IL-Ιβ標準物之量。樣品中之人類辽_^的量與結合於IL-Ιβ結合蛋白之標記之rh ILip標準物的量成反比。類似地，亦可藉由競爭免疫檢定，利用經可债測物質標記之rh IL··準物及本文所述之未標記之up結合蛋白檢定樣品中之人類IL_ 1 β。在一實施例中，本發明之IL_ip結合蛋白及其α_ιρ結合部分能夠在活體外與活體内中和IL]p活性。因此，本發明之該等結合蛋白及訊，結合部分可用於抑制性，例如在含有IL,之細胞培養物中、在人類個體中咬在具有與本發明之結合篮甲次又又反應的IL-Ιβ之其他哺乳動物個體中。在—實施例中、他南礼 ^ ^ ^ 不七明‘供一種抑制IL-Ιβ 活性之方法，其包含使IL__本發明之結合合部分接觸以使得1L_職性得到抑制。舉例而言= 有或懷疑含有IL-ΐβ之細胞培養物 3 加本發明之結合蛋白(或其結該培養基中添 1β活性。 Μ以抑制培養物中之IL- 宜為罹患在另-實施例中，本發明提供一種降低個體、 151544.doc •79· 201124427 因IL-1 β活性而受害之疾病或病症之個體的化-丨β活性的方法。本發明提供降低罹患該疾病或病症之個體之IL_ 1 β活性的方法，該方法包含向個體投與本發明之結合蛋白或其抗原結合部分以使得該個體之IL-1J3活性得以降低。在一貝把例中，该IL-1 β為人類il- 1 β，且該個體為人類個體。或者’該個體可為表現本發明之結合蛋白能夠結合之 1β的哺乳動物。此外，個體可為已引入IL_1|3(例如藉由投與IL-Ιβ或藉由表現IL-Ιβ轉殖基因）之哺乳動物。可出於治療性目的向人類個體投與本發明之結合蛋白。此外，可出於獸醫目的或作為人類疾病之動物模型，向表現本發明之結合蛋白能夠結合之IL-1 β的非人類哺乳動物投與本發明之結合蛋白。關於後者，該等動物模型可適用於評估本發明之抗體的治療功效（例如測試投藥劑量及投藥時程）。術語「因IL-Ιβ活性而受害之病症」包括罹患該病症之個體中IL-Ιβ之存在已顯示或疑似造成該病症之病理生理學或為促使病症惡化之因素的疾病或其他病症。因此，因 IL-Ιβ活性而受害之病症為預期降低1_^活性會減輕病症之症狀及/或進展的病症。該等病症之跡象可在於例如罹患該病症之個體的生物流體中IL_ip之濃度增加（例如個體之血清、血漿 '滑液等中之江-”濃度增加），其可例如使用如上文所述之抗IL-Ιβ結合蛋白來偵測。可用本發明之結合蛋白治療之病症的非限制性實例包括以下關於本發明之結合蛋白之醫藥組合物的章節中所論述之彼等病症。 E.醫藥組合物 151544.doc •80· 201124427 本發明亦k供醫藥組合物’其包含本發明之結合蛋白 (例如抗體或其抗原結合部分）及醫藥學上可接受之載劑。包含本發明之結合蛋白的醫藥組合物用於（但不限於）診斷、偵測或監測病症；預防、治療、抑制、控制或改善病症或其一或多種症狀；及/或研究。在一特定實施例中，組合物包含一或多種本發明之結合蛋白。在另一實施例中，醫藥組合物包含一或多種本發明之結合蛋白及除一或多種本發明之結合蛋白以外的—或多種可治療因江_職性而受害之病症的預防劑或治療劑。詳言之，已知預防劑或治療劑適用於或已用於或目前正用於預防'治療、控制或改善病症或其一或多種症狀。根據此等實施例組合物可進一步包含載劑、稀釋劑或賦形劑。本心明之結合蛋白可併入適於投與個體之醫藥組合物中。通常，醫藥組合物包含本發明之結合蛋白(例如抗體或其抗原結合部分)及醫藥學上可接受之載劑。術語「醫 ==可接受之載劑」包括生理學上相容之任何溶劑、分散介質、包衣、抗細g劑及抗真_、等張劑及吸收延遲 WJ及其類似物。醫荜學上可垃a 樂子上T接又之載劑的實例包括水、生理食鹽水、鱗酸鹽緩衝生理食鹽水、右旋糖、甘油、乙醇及其類似物中之一或多去w Β , ’ 及其組合。組合物中較佳包括專張劑，例如糖、多元醇（諸带 ^ 甘4糖醇、山梨糖醇）或氯化鈉。醫藥學上可接受之载 m 進—步包含較少置之輔助物貝’諸如濕潤劑或乳化劑防腐劑或緩衝液，其可增加 -體或其抗原結合部分之存放期或有效性。

S 151544.doc 201124427 已知各種傳遞系統且其可用於投與一或多種本發明之結合蛋白或一或多種本發明之抗體與適用於預防、控制、治療或改善病症或其一或多個症狀之預防劑或治療劑的組合，例如封裝於脂質體、微粒、微囊中，能夠表現抗體或抗體片段之重組細胞，受體介導之胞吞作用（參見例如wu 及 Wu (1987) J. Biol· Chem. 262:4429-4432)，核酸構築為反轉錄病毒或其他載體之一部分等。投與本發明之預防劑或治療劑之方法包括（但不限於）非經腸投藥（例如皮内、肌肉内、腹膜内、靜脈内及皮下）、硬膜外投藥、瘤内投藥及黏膜投藥（例如鼻内及經口途徑）。另外，可利用肺部投藥’例如藉由使用吸入器或霧化器及與氣溶膠化劑一起調配。參見例如美國專利第6,019,968號；第5,985,320號；第 5,985,309 號；第 5,934,272 號；第 5,874,064 號；第 5,855,913號，第 5,290,540號及第 4,880,078號；及卩〇：1[公開案第 WO 92/19244號；第 WO 97/32572號；第 WO 97/44013 號；第WO 98/313牝號及第WO 99’/669〇3號。在一實施例中，本發明之結合蛋白、組合療法或本發明之組合物係使用Alkermes AIR⑧肺部藥物傳遞技術（Alkermes，Inc , Cambridge，Massachusetts)來投與。預防劑或治療劑可藉由任何便利途徑來投與，例如藉由輸注或快速注射，藉由經上皮或黏膜皮膚内壁（例如口腔黏膜、直腸及腸黏膜等）吸收’且可與其他生物活性劑一起投與。投藥可為全身或局部投藥。在一特定實施例中，可能需要局部向需要治療之區域投 151544.doc -82- 201124427 與本發明之預防劑或治療劑，例如藉由局部輸注、藉由、、主射或藉助於植入物達成。該植入物可為多孔或：包括膜及基質，諸如賽萊（sialastie)膜' 聚合物 '纖維基質 (例如TISSUEL®)或膠原蛋白基質。在一實施例中，向個體之患病區域局部㈣有纟量之—或多種本發明之抗體枯抗劑以預防、治療、控制及/或改善病症或其症狀。在另只施例中，向個體之患病區域局部投與有效量之—戍多種本發明之抗體以及有效量之除本發明之結合蛋白以外的或夕種療法（例如一或多種預防劑或治療劑）以預防、治療、控制及/或改善病症或其一或多種症狀。在另一實施例中，預防劑或治療劑可以控制釋放或持續釋放系統來傳遞。在一實施例中，可使用泵來達成控制或持續釋放（參見 Langer (1990) Science 249:1527-1533;

Sefton (1987) CRC Crit. Rev. Biomed. Eng. 14:201-240 ； Buchwald 等人，（1980) Surgery 88:507-516; Saudek 等人， (1989) Ν· Engl· J. Med. 321:574-579)。在另一實施例中，可使用聚合物質達成本發明之療法的控制釋放或持續釋放 (參見例如 Medical Applications of Controlled Release, (Langer及 Wise編）（CRC Press, Inc.，Boca Raton, 1984); Controlled Drug Bioavailability, Drug Product Design and Performance，（Smolen及 Ball編）（Wiley, New York, 1984); Langer及Peppas (1983) J. Macromol. Sci. Rev. Macromol. Chem. Phys. C23 :6 卜 126 ;亦參見 Levy 等人，（1985) Science 228:190-192 ; During 等人，（1989) Ann. Neurol. 25:35 1- 151544.doc -83- 201124427 356 ; Howard等人，（1989) J. Neurosurg. 71:105-112 ;美國專利第 5,679,377號；第 5,916,597號；第5,912,015號；第 5,989,463號；及第5，128,326號；及PCT公開案第WO 99/15 154號及第WO 99/20253號。持續釋放調配物中所使用之聚合物的實例包括（但不限於）聚（2-羥基乙基甲基丙烯酸酯）' 聚（曱基丙烯酸甲酯）、聚（丙烯酸）、聚（乙烯-共-乙酸乙烯酯）、聚（曱基丙烯酸）、聚乙交酯（PLG)、聚酸酐、聚（N-乙烯基》比咯啶酮）、聚（乙烯醇）、聚丙烯醯胺、聚（乙二醇）、聚丙交酯（PLA)、聚（丙交酯-共-乙交酯）（PLGA)及聚原酸酯。在一實施例中，持續釋放調配物中所使用之聚合物為惰性的’不含可浸出雜質，儲存穩定，無菌且生物可降解。在另一實施例中，控制或持續釋放系統可與預防或治療性標靶鄰近安置，因此僅需要全身性劑量之一部分 (參見例如 Goodson，J.M·，第 6章，Medical Applications of Controlled Release,第 II卷，Applications and Evaluation, (Langer及 Wise編）（CRC Press, Inc.，Boca Raton, 1984),第 115-138頁）。控制釋放系統論述於 Langer (1990) Science 249:1527-1 5 3 3之評述中。可使用熟習此項技術者已知之任何技術製造包含一或多種本發明之治療劑的持續釋放調配物。參見例如美國專利第4,526,938號；及PCT公開案第WO 91/05548 號及第 WO 96/20698 號；及 Ning 等人，（1996) Radiother. Oncol· 39:179-189; Song 等人，（1996) PDA J.

Pharm. Sci. Technol. 50:372-377 ； Cleek 等人，（1997) 151544.doc -84- 201124427

Proceed Int'l. Symp. Control. Rel. Bioact. Mater. 24:853- 854，及 Lam 等人，（1997) Proeeed Ιιη4 Symp. Control Rel. Bioact. Mater. 24:759-760。在本發明之組合物為編碼預防劑或治療劑之核酸的一特定實施例中，可藉由將核酸構築為適當核酸表現載體之一部分且投與其以使其變為細胞内的來活體内投與核酸以促進其編碼之預防或治療劑之表現，此舉之實現係例如藉由使用反轉錄病毒載體（參見美國專利第4,98〇,286號），或藉由直接注射’或藉由使用微粒轟擊（例如基因搶； Biolistic，Dupont) ’或以脂質或細胞表面受體或轉染劑包覆’或藉由將其與已知進入細胞核之同源異形盒 (homeobox)樣肽連接而投與（參見例如j〇ii〇t等人，（1991)

Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88:1864-1868)。或者，可將核酸引入細胞内且併入宿主細胞DNA中以藉由同源重組表現。本發明之醫藥組合物係經調配以與其預定投與途徑相容°投藥途徑之實例包括（但不限於）非經腸（例如靜脈内、皮内、皮下）、經口、鼻内（例如吸入）、經皮（例如表面）、經黏膜及直腸投藥。在一特定實施例中，組合物根據常規程序調配為適合於靜脈内、皮下、肌肉内、經口、鼻内咬表面投與人類之醫藥組合物。用於靜脈内投與之組合物通常為無菌等滲水性緩衝液中之溶液。必要時，組合物亦可包括增溶劑及減輕注射部位之疼痛的局部麻醉劑（諸如利多卡因（lignocamne))。 151544.doc -85 - 201124427 若本發明之組合物表面投與，則組合物可調配為軟膏、乳膏、經皮貼片、洗劑'凝膠、洗髮劑、喷霧劑、氣溶膠、溶液、乳液形式或熟習此項技術者熟知之其他形式。參見例如 Remington's Pharmaceutical Sciences and

Introduction to Pharmaceutical Dosage Forms,第 19 版. (Mack Publishing Co，，Easton，Pennsylvania，1995)。對於不可喷霧之表面劑型，通常使用包含與表面施用相容之載劑或一或多種賦形劑且動力學黏度較佳大於水之黏性至半固體或固體形式。其他適合之調配物包括（但不限於）懸浮液、散劑、擦劑、油膏及其類似物。在一實施例中，該等調配物^L滅菌或與助劑（例如防腐劑、穩定劑、濕潤劑、緩衝液或鹽）混合以影響各種性質，諸如滲透壓。其他適合之表面劑型包括可喷霧之氣溶膠製劑，纟中活性成分例如合併固體或液體惰性載劑與加壓揮發性物質(例如氣體推進劑，諸如FREO_混合封裂或封裝於壓擠瓶中。必要時’亦可向醫藥組合物及劑型中添加増濕劑或保濕齊卜該等其他成分之實例為此項技術中所熟知。若本發明之方法包含富、，内技與組合物，則組合物可調g 成氣溶膠形式、噴霧劑、霖壯 ^ 務剤霧狀物或滴液形式。詳言之，才據本發明使用之預防劑或心， W 療劑可方便地使用適合之推i 片1 (例如二氣二氟曱烷、= 翁作山斗、 —虱軋曱烷、二氣四氟乙烷、_ 务…膜+命、自加壓包裝或噴霧器呈現：亂洛膠贺霧形式傳遞。在加壓 ^ ^ ^ pq 塾軋〉谷膠之情況下，劑量單>1 了猎由k供閥門以傳遞計量 ^里來確定。可調配含有化， 151544.doc • 86 - 201124427 物與適合之粉末基劑（諸如乳糖或殿粉）的粉末混合物之用於：入器或吹入器中的膠囊及藥包(由例如明膠構成)。本土月之方法包含經口投藥，則組合物可調配為經口使用之錠劑、膠囊、扁囊劑、膠囊鍵' 溶液、懸 T液及其類似物之形式。錠劑或膠囊可藉由習知方式用醫樂學上可接受之賦形劑製備，該等賦形劑諸如黏合劑（例 7預膠凝化玉米殿粉、聚乙烯吼㈣酮缝基丙基甲基纖，，隹素）、填充劑（例如乳糖、微晶纖維素或鱗酸氫飼卜潤滑劑（例如硬脂酸鎖、滑石或二氧切）、崩解劑（例如馬龄著殿粉或乙醇酸殿粉鈉)或濕潤劑(例如十藉由此項技術令熟知之方法' 體製劑可採用(但不限於)、容劑。經〇、）液 '糖漿或懸浮液形式，或其 β見為在使用之刖用水或其他適合媒劑復原之乾燥產品。該等液體製劑可藉由習知方式用醫藥學上可接受之添備’該等添加劑諸如懸浮劑(例如山梨糖醇糖漿、 =㈣生物或氫化可食用脂肪）；乳化劑（例如㈣脂或阿拉伯膠：;非水性媒劑(例如杏仁&、油性酿(。iiy )乙醇或刀館植物油）；及防腐劑（例如對經基苯甲酸甲西曰或對羥基苯f酸丙酷或山含有緩衝鹽、調味劑、著色劑及甜^該等製劑亦可酌情狀甜味劑。經口投與之製劑了t適當調配以緩慢釋放、控制治療劑。控㈣放切續釋放預防劑或部方法可包含例如藉由使用吸入器或霧化器經肺。又與^溶膠化劑一起調配之組合物。參見例如美國專 151544.doc -87- 201124427 利第 6,019, 968 號；第 5,985,320號；第 5,985,309 號；第 5,934,272 號；第 5,874,064 號；第 5,855,913 號；第 5,290,540號及第4,880,078號；及PCT公開案第W〇 92/19244號、第 WO 97/32572號、第 WO 97/44013 號、第 WO 98/31346號及第WO 99/66903號。在一特定實施例中，本發明之抗體、組合療法及/或本發明之組合物係使用Alkermes AIR®肺部藥物傳遞技術（Ancermes，Inc.， Cambridge, Massachusetts)來投與。本發明之方法可包含投與經調配用於藉由注射（例如藉由快速注射或連續輸注）非經腸投與之組合物。用於注射之調配物可呈現為添加有防腐劑之單位劑型（例如在安瓿中或在多劑量容器中）。組合物可採用諸如於油性或水性媒劑中之懸浮液、溶液或乳液的形式且可含有諸如懸浮劑、穩定劑及/或分散劑之調配劑。或者，活性成分可呈在使用之前用適合之媒劑（例如無®無熱原質水）復原的散本發明之方法可另外包含投與調配為儲槽式製劑之組物。該等長效調配物可藉由植入（例如皮下或肌肉内）或由肌肉内注射來投與。因此，例如組合物可與適合之聚 =性物質(例如以於可接受之油令的乳液形式)或離父換树脂或以難溶㈣生物（例如以難㈣鹽形配0 / 〜’ 形式之組合物》諸如衍生自本發明之方法涵蓋醫藥學上可接受之鹽投與調配為中性或鹽包括與陰離子形成之鹽 151544.doc -88- 201124427 鹽酸、磷酸、乙酸、草酸、酒成之鹽’諸如衍生自氫氧化鈉氧化約、虱氧化鐵、異丙胺、組胺酸、普魯卡因等之鹽。石酸等之鹽；及與陽離子形、氫氧化鉀、氫氧化銨、氫二乙胺、2-乙基胺基乙醇、組合物之成分通常單獨或混合在一起以單位劑型來提供’例^以指示活性劑之量的密封容器（諸如安瓶或藥囊）中之乾燥綠粉末或無水濃縮物形式。#投藥模式為輸注時，組合物可以含有無菌醫藥級水或生理食鹽水之輸液瓶來分配。當投藥模式為注射時，可提供含有注射用無菌水或生理食鹽水之安瓶以便各成分可在投藥之前混合。詳言之，本發明亦提供將本發明之—或多種預防劑或治療劑或醫藥組合物封裝於指示藥劑之量的氣密容器（諸如安瓶或樂囊）中。在一實施例中，本發明之一或多種預防劑或治療劑或醫藥組合物以氣密容器中之乾燥無菌束乾粉末或無水濃縮物形式供應且可經復原（例如用水或生理食鹽水）至適於投與個體之濃度。在一實施例中，本發明之一或夕種預防劑或治療劑或醫藥組合物以至少約5 、至少約10 mg、至少約15 mg、至少約25 mg、至少約35 mg、至少約45 mg、至少約5〇 mg、至少約75 或至少約 mg之單位劑量以氣密容器中之乾燥無菌凍乾粉末形式提供。本發明之凍干預防劑或治療劑或醫藥組合物應在約 2 C與約8 C之間儲存於其初始容器中且本發明之預防劑或治療劑或醫藥組合物應在復原後i週内' 5天内、72小時内、48小時内、24小時内、12小時内、6小時内、5小時 151544.doc -89· 201124427 内、3小時内或1小時内投與。在一替代實施例中，本發明之一或多種預防劑或治療劑或醫藥組合物以液體形式提供於指示藥劑之$及濃度的氣密容器中。在一實施例中，所投與之組合物的液體形式係以至少約〇25 mg/ml、至少約 0.5 mg/m卜至少約1 mg/nU、至少約2 5 mg/mi、至少約5 mg/ml '至少約8 mg/ml、至少約mg/mi、至少約μ mg/kg、至少約25 mg/ml、至少約5〇 mg/ml、至少約乃 mg/ml或至少約100 mg/mi提供於氣密容器中。液體形式應在約2 C與約8 C之間儲存於其最初容器中。本發明之結合蛋白可併入適於非經腸投與之醫藥組合物中。在一態樣中，結合蛋白係製備為含有約〇丨至約250 mg/mU几體之可注射溶液。可注射溶液可由於火石玻璃或琥珀小瓶、安瓿或預填充注射器中之液體或凍乾劑型構成。緩衝液可為L-組胺酸（約！至約5〇 mM)，最佳為約5至約10 mM，pH值為5.0至7.0(最佳為約ρΗ 6·〇)。其他適合之緩衝液包括（但不限於）琥珀酸鈉、檸檬酸鈉、磷酸鈉或磷酸鉀。可使用濃度為約〇至約3 〇〇 mM(例如對於液體劑型，為約150 mM)之氯化鈉改變溶液之毒性。對於凍乾劑型，可包括防凍劑，主要為約0%至約1〇%蔗糖（例如為約〇 5% 至約1.0%)。其他適合之防凍劑包括海藻糖及乳糖。對於凍乾劑型，可包括增積劑，主要為約1%至約1〇%甘露糖醇 (例如為約2%至約4%)。穩定劑可用於液體與凍乾劑型中，主要為約1至約50 mM L·甲硫胺酸（最佳為約5至約1〇 mM)。其他適合之增積劑包括甘胺酸、精胺酸，可以約〇% 151544.doc -90· 201124427 至約0.05%聚山梨醇酯-80(最佳為約0.005%至約〇 01%)形式包括在内。其他界面活性劑包括（但不限於）聚山梨酸醋 20及BRIJ界面活性劑。本發明之組合物可呈多種形式。此等形式包括例如液體、半固體及固體劑型，諸如液體溶液（例如可注射溶液及可輸注溶液）、分散液或懸浮液、銳劑、丸劑、散劑、脂質體及栓劑。特定形式視預定投藥模式及治療性應用而定。典型組合物呈可注射或可輸注溶液形式，諸如類似於與其他抗體一起用於人類被動免疫之組合物的組合物。投藥模式為非經腸（例如靜脈内、皮下、腹膜内、肌肉内）。在一實施例中，藉由靜脈内輸注或注射投與抗體。在另一實施例中，藉由肌肉内或皮下注射投與抗體。

著視需要過濾滅菌來製備。分之組合合併於適當溶劑中，接 °通常藉由將活性化合物併入無

151544.doc °亥無菌媒劑含有基礎分散介質及所需其他成分。在用於製備無菌末的情況下，例示性製備方法為〃得到活性成份加上來自先前無菌需成份的粉末。可例如藉由使用諸敎液之情況下藉由維持所需粒度及 5 -91 · 201124427 藉由使用界面活性劑來維持溶液之適當流動性。可注射租合物之延長吸收性可藉由在組合物中包括例如單硬脂酸鹽及明膠等延遲吸收劑來達成。雖然可藉由此項技術中已知之多種方法來投與本發明之結合蛋白，但對於許多治療性應用而言，例示性投藥途徑 /模式為皮下注射、靜脈内注射或輸注。如熟習此項技術者應瞭解，投藥途徑及/或模式將視所需結果而變化。在某些實施例中，活性化合物可使用可保護化合物以免快速釋放之載劑製備，諸如控制釋放調配物，包括植入物、經皮貼片及微囊封傳遞系統。可使用生物可降解、生物相容性聚合物，諸如乙稀乙酸乙烯醋、聚酸酐、聚乙醇酸、膠原蛋白、聚原酸醋及聚乳酸。製備該等調配物之許多方法均已取得專利權或通f為熟習技術者所已知。參見例如

Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems J.R‘ Robinson編，Marcel 歸以心，γ_，i978。在某些實施例中，本發明之抗體或其抗原結合部分可例如與惰性稀釋劑或可同化之可食用載劑一起經口投與。化合物（必要時及其他成份）亦可封裝於硬f或軟質明膠膠囊中，壓縮成錠劑，或直接併入個體之飲食中。對於經口治療性投藥，可將化合物與賦形劑合併且以可攝取錠劑、經頰錠劑、片劑、膠囊、酿劑 '懸浮液、糖聚、儒米紙囊劑及其類似物之形式使用。為藉由除非經腸投藥以外之形式來投與本發明之化合物，可能有必要用防止其失活之物質包覆化合物或將化合物與該物質一起共投與。 151544.doc •92· 201124427 補充活性化合物亦可併入组合物中。在某些實施例中，將本發明之結合蛋白（例如抗體）或其抗原結合部分與一或多種適用於治療因江’活性而受害之病症的其他治療劑共調配及/或共投與。舉例而言， ° J將本發明之抗hIL-Ιβ結合蛋白或其抗原結合部分與-或多種結合其他標把之其他抗體（例如結合其他細胞激素或結合細胞表面分子之抗體）共調配及/或共投盘。此夕卜，—十夕〇此外或多種本發明之結合蛋白可與兩種或兩種以上上述治療劑組合使用。該等組合療法宜利用較低劑量之所投與之治療劑，從而避免與各種單一療法相關之可能的毒性或併發症。在某些實施例中’如本文所述之IL_ip結合蛋白或其L ΐβ結合部分連接於此項㈣中已知之延長半衰期之媒介物。該等媒介物包括（但不限於）以域、聚乙二醇及聚葡萄糖。該等媒介物描述於例如美國專利第6,660,843號及公開 PCT公開案第WO 99/25〇44號中。在一特定實施例中，藉由基因療法投與包含編碼本發明之結合蛋白之一或多個多肽或本發明之另一預防劑或治療劑之核苷酸序列的核酸分子以治療、預防、控制或改善病症或其一或多種症狀。基因療法係指藉由向個體投與所表現或可表現之核酸所進行之療法。在本發明之此實施例中，核酸產生其所編碼之本發明之結合蛋白的結合多肽或介導預防或治療作用之預防劑或治療劑。可根據本發明使用此項技術中可利用之基因療法之任何方法。對於基因療法之方法的一般評述，參見G〇ldspiel等 151544.doc 5 •93- 201124427 人，（1993) Clin. Pharm. 12:488-505 ; Wu 及 Wu (1991) Biotherapy 3:87-95 ; Tolstoshev (1993) Ann. Rev.

Pharmacol. Toxicol. 32:573-596 ； Mulligan (1993) Science 260:926-932 ;及 Morgan 及 Anderson (1993) Ann. Rev. Biochem. 62:191-217 ； Robinson, C. (1993) Trends

Biotechnol. 11(5):155。可使用之此項技術中通常已知之重組DNA技術的方法描述於Ausubel等人（編），Current Protocols in Molecular Biology (John Wiley & Sons, New

York, 1993);及 Kriegler，Gene Transfer and Expression, A Laboratory Manual，（Stockton Press, New York，1990)中。基因療法之各種方法的詳細描述揭示於US 2005/0042664 中。 IL-Ιβ在與涉及免疫及發炎性元件之多種疾病相關的病理學中起關鍵作用。此等疾病包括（但不限於）：後天免疫缺乏病症候群；後天免疫缺乏相關疾病；後天惡性貧血，急性趙狀動脈症候群；急性及慢性疼痛（不同形式之疼痛）；急性特發性多發性神經炎；與器官移植相關之急性免疫疾病；與器官移植相關之急性或慢性免疫疾病’急性發炎脫髓鞘多發性神經根神經病：急性局部缺血；急性肝病；急性風濕熱；急性橫貫性脊髓炎；阿狄森氏病；成人（急性）呼吸窘迫症候群；成人斯蒂爾氏病；酒精性肝硬變；酒精誘發之肝損傷；過敏性疾病；過敏；脫髮，斑形脫髮·’阿茲海默氏病；全身性過敏反應；僵直性脊椎炎，僵直性脊椎炎相關肺病；抗磷脂抗體症候群；再 151544.doc •94- 201124427 生障礙性貧企；動脈硬化；關節病；哮喘；動脈粥樣化病/ 動脈硬化；動脈硬化；異位性過敏；異位性濕疹；異位性皮炎；萎縮性自體免疫曱狀腺功能低下；自體免疫大皰病；自體免疫皮炎；自體免疫糖尿病；與鏈球菌感染相關之自體免疫病症；自體免疫腸病；自體免疫溶血性貧血；自體免疫肝炎；自體免疫聽力損失；自體免疫淋巴組織增生症候群（ALPS);自體免疫介導之低血糖；自體免疫心肌炎；自體免疫嗜中性球減少症；自體免疫卵巢早衰；自體免疫血小板減少症（AITP);自體免疫甲狀腺病；自體免疫葡萄膜炎，閉塞性細支氣管炎；貝徹氏病（Beh?et，s disease);眼瞼炎；支氣管擴張；大皰性類天疱瘡；惡病貝，心血官疾病；災難性抗磷脂症候群；乳糜瀉；頸椎病，衣原體；膽汁鬱積；慢性活性肝炎；慢性嗜伊紅血球性肺炎；慢性疲勞症候群；與器官移植相關之急性或慢性免疫疾病；慢性局部缺血；慢性肝病；慢性皮膚黏膜念珠菌病；瘢痕性類天疱瘡；伴以多發性硬化症風險之臨床上分離症候群（CIS); —般變異性免疫缺乏症（一般變異性低丙種球蛋白血症）；結締組織病相關間質性肺病；結膜炎；庫姆陽性溶血性貧血；兒童發作精神錯亂；慢性阻塞性肺病（C〇PD);克羅恩氏病；隱原性自體免疫肝炎；隱原性纖維化性肺泡炎·，淚囊炎；抑鬱症；硬皮病；皮肌炎；皮肌炎/多發性肌炎相關肺病·’糖尿病性視網膜病；糖尿病；擴張型心肌病：盤狀紅斑狼瘡；#間盤突出；椎間盤脫垂；彌漫性血管内凝血；藥物誘發之肝炎；藥物誘 151544.doc -95- 201124427 發之間質性肺病；藥物誘發之免疫溶血性貧血；心内膜炎；子宮内膜異位；内眼炎•·腸病性滑膜炎；上鞏膜炎；多开> 性紅斑；嚴重多形性紅斑；女性不孕症；纖維化；纖維變性肺病；妊娠期類天疱瘡；巨細胞性動脈炎（GCA); 絲球體腎炎；甲狀腺腫自體免疫甲狀腺功能低下（橋本氏病）；古巴士德氏症候群（GVHD);格雷氏病；B群鏈球菌 (BGS)感染；格-巴二氏症候群（BGS);含鐵血黃素沉著症相關肺病；花粉熱；心臟衰竭；溶血性貧血；亨偌-絲奇恩賴紫癜；B型肝炎；〇型肝炎；休茲氏症候群；亨廷頓氏舞蹈病；曱狀腺功能亢進；甲狀旁腺機能減退；特發性白血球減；症，特發性血小板減少症；特發性帕金森氏病；特發性間質性肺炎；特應性肝病；IgE介導之過敏；免疫溶血性貧血；包涵體肌炎；傳染性疾：“專染性眼睛 ’X人r生疾病’ I炎性腸病；發炎性脫髓鞘病；發炎性心臟病’發炎性腎病；胰島素依賴性糖尿病；間質性肺炎； IPF/UIP ;虹膜炎；幼年型慢性關節炎丨幼年型惡性貧血；幼年型類風濕性關節炎（JRA);川崎氏病；角膜炎；乾燥性㈣結膜炎；庫斯毛耳氏疾病或庫斯毛耳_麥爾氏疾病；蘭德里麻痒；赭故（ζΡ Λ ,, 鬧格罕氏細胞組織細胞增多病；線性

IgA疾病；網狀青斑；萊水啤關卽炎，淋巴細胞性浸潤性肺

病；黃斑退化；特發性男M 男吐不月症或NOS ;惡性病；腎顯微性血管炎；顯微性多血总* _ 吕X，混合性結締組織病相關肺病；白赫鐵列夫症；運勒站 _ 動砷！几病症；黏膜類天疱瘡；多發性硬化症（所有亞型：甩原發性進行性、繼發性進行性、 151544,doc -96- 201124427 復發緩解型等”多重器官衰竭；肌痛腦炎/皇家自由病；重症肌無力；骨髓發育不良症候群；心肌梗塞；心肌炎；腎病症候群；神經根病症；神經病；非酒精性脂肪變性肝炎；非A型非B型肝炎；視神經炎；器官移植排斥反應；骨關節炎；骨質溶解"P巢癌；印巢衰竭；胰臟炎；寄生蟲疾病，帕金森氏病；少關節型兒童期類風濕性關節炎；類天疮瘡；葉型天錢；尋常天祕；周邊動脈閉塞性疾病（PAOD);周邊血管疾病（PVD);周邊動脈疾病（pAD)；晶狀體源性葡萄膜炎；靜脈炎；肖節性多動脈炎(或結節㈣脈周炎多軟骨炎；風濕性多肌痛；白髮症；多關玲型JRA，多内分泌腺分泌不足症候群；多發性肌炎；工型多腺體分泌不足症及„型多腺體分泌不足症；風濕性多肌痛（PMR);感染後間質性肺病；發炎後間質性肺病；果送後症候群；_巢早衰；原發性膽汁性肝硬化；原發性黏液水腫，原發性帕金森氏病；原發性硬化性膽管炎；原發性硬化陵肝炎，原發性血管炎；前列腺癌及直腸癌及造血性惡性病（白血病及淋巴瘤）；前列腺炎；牛皮癖；i型牛皮癬；2型牛皮癖；+皮癖性關節炎；牛皮癣性關節病；因結締組織疾病繼發之肺循環血壓過高；結節性多動脈炎之肺部病徵；純紅血球再生不良；原發㈣上腺機能不全；、射改纖維化’反應性關即萊特爾病；復發性視神經脊髓炎1病謹；再狹窄；類風濕性關節炎；類風濕性關節炎相關間質性肺病；風濕性心臟病；薩福症(滑膜炎、痤瘡、腹皰病、骨肥大及骨炎）；肉狀瘤精神分

S 151544.doc •97· 201124427 裂症’施密特症候群；硬皮病；繼發性澱粉樣變性；肺休克；鞏m骨神經痛；繼發性腎上腺機能不全；敗灰症症候群；膿毒性關節炎；敗灰性休克；血清陰性關節病；聚石夕氧相關結、缔組織病；休格連氏病相關肺病；休格連氏症候群；角層下膿皰性皮膚病；精液自體免疫；脊椎關節病；僵直性脊椎炎；史蒂芬-瓊森症候群（SJS);斯蒂爾氏病；中風；交感性眼炎；全身性發炎反應症候群；全身性紅斑狼瘡；全身性紅斑狼瘡相關肺病；全身性硬化症；全身性硬化症相關間質性肺病；高安氏病/動脈炎；顳動脈炎；Th2型及Thl型介導之疾病；甲狀腺炎；中毒性休克症候群；弓形蟲視網膜炎；中毒性表皮壞死溶解；橫貫性脊髓炎；TRAPS(1型腫瘤壞死因子受體（TNFR)相關週期性症候群）；B型抗胰島素症伴以黑棘皮病；1型過敏性反應；1型自體免疫肝炎（典型自體免疫或狼瘡樣肝炎）；2 型自體免疫肝炎（抗LKM抗體肝炎）；„型糖尿病；潰瘍性大腸炎關節病；潰瘍性結腸炎；尿敗血症；常見間質性肺炎（UIP)，葡萄膜炎；血管炎擴散性肺病；血管炎；春季結膜炎；病毒性視網膜炎；白斑症；伏格特·小柳_原田症候群（VKH症候群）；韋格納氏肉牙腫病；濕性黃斑退化. 創傷癒合；耶氏桿菌及沙門氏菌相關關節病。在一特定實施例中，本發明之IL-Ιβ結合蛋白及其抗原結合部分用於治療類風濕性關節炎、骨關節炎、兄羅恩氏病、多發性硬化症、胰島素依賴性糖尿病及牛皮癖。本發明之IL-Ιβ結合蛋白及其抗原結合部分丨刀亦可用於治 15I544.doc •98· 201124427 療罹患自體免疫疾病、尤其與炎症相關之彼等疾病（包括僵直性脊椎炎、過敏、自體免疫糖尿病及自體免疫葡萄膜炎）之人類。本發明之IL-Ιβ結合蛋白或其抗原結合部分亦可與一或多種適用於治療自體免疫及發炎性疾病之其他治療劑一起投與。本發明之IL - 1 β結合蛋白或其抗原結合部分可單獨或組合使用以治療該等疾病。應瞭解，本發明之結合蛋白或其抗原結合部分可單獨使用或與另一藥劑（例如治療劑）組合使用，該另一藥劑由熟習此項技術者根據其預定目的而選擇。舉例而言，該另一藥劑可為技術公認之適用於治療由本發明之抗體治療之疾病或病狀的治療劑。另一藥劑亦可為賦予治療組合物有益屬性之藥劑，例如影響組合: 度的藥劑。之組合包括本文所述之1L_1P結合蛋白或其抗原 ……少一種以下所列之其他藥劑。該组合亦可包括種以上其他藥劑，例如兩種或三# 組合使得所形成之組合物可進行其預㈣用即可^ 例示性組合包括太守邮、+. > ττ 合片段及非類固醇，、肖二Μ結合蛋白或其抗原結貝固醇4炎樂物_ID)，諸如布 (ibuprofen)。其他例示备为原結合片段，及皮^ 本文所述之抗體或其抗反質類固醇，包括潑尼龍（㈣㈣ :用：：之副作用可藉由當與本發明 )蛋白組合治療患者時逐漸減少所需之類回醇劑量來降; I5I544.doc •99- 201124427 除。可與本發明之抗體或抗體部分組合之類風濕性關節炎治療劑的非限制性實例包括以下：細胞激素抑制消炎藥 (CSAID);以下其他人類細胞激素或生長因子之抗體或拮抗劑，例如 TNF、LT、IL-Ια、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、 IL-6、IL-7、IL-8、IL-15、IL-16、IL-18、IL-21、干擾素、EMAP-II、GM-CSF、FGF及PDGF。本發明之抗體或其抗原結合部分可與以下細胞表面分子之抗體組合，諸如 CD2、CD3、CD4、CD8、CD25、CD28、CD30、CD40、 CD45、CD69、CD80(B7.1)、CD86(B7.2)、CD90、CTLA 或其配位體，包括CD154(gp39或CD40L)。與本發明之IL-la結合蛋白或其抗原結合部分組合的例示性治療劑在自體免疫及後續發炎級聯反應中之不同點進行干擾’例如TNF结抗劑（如嵌合、人類化或人類tnF抗體）、D2E7(PCT 公開案第 WO 97/29131 號）、CA2 (REMICADEa)、CDP 571及可溶性p55或p75 TNF受體、其衍生物（p75TNFRlgG(ENBRELa)或 p55TNFRlgG(來那西普 (Lenercept))，以及TNFa轉化酶（TACE)抑制劑，及其他il-1抑制劑（介白素-1-轉化酶抑制劑，IL-1RA等）。與抗體及其抗原結合片段組合之其他藥劑包括介白素11、與亿_1&功能並行起作用、視IL-1 a功能而起作用或與IL-1 a功能協同起作用之藥劑，諸如IL-18拮抗劑（例如IL-18結合蛋白，諸如抗體或可溶性IL-18受體或其抗原結合片段）。與抗體及其抗原結合片段組合之其他藥劑包括非消耗性抗CD4抑制劑、協同刺激路徑CD80(B7.1)或CD86(B7.2)之拮抗劑，包 151544.doc •100- 201124427 括抗體、可溶性受體、拮抗配位體或其抗原結合片段。本發明之結合蛋白或其抗原結合部分亦可與治療類風濕性關節炎之藥劑組合，諸如胺甲喋呤、6挪、硫唑嘌呤柳氮磺胺吡啶、美沙拉嗪、奥色拉秦氯喹/羥氯喹、青黴胺 . (pencillamine)、硫代蘋果酸鈉（肌肉内及經口）、硫唑嗓 • 呤、秋水仙鹼（colchicine)、皮質類固醇（經口、吸入及局部注射）、β·2腎上腺素受體促效劑（沙丁胺醇 (salbutamol)、特布他林（terbutaline)、沙美特羅 (salmeteral))、黃嘌呤（茶鹼、胺茶鹼）、色甘酸鹽奈多羅米（nedocromil)、酮替酚（ket〇tifen)、異丙托銨 (ipratropium)及氧托銨（oxitropium)、環孢素、FK5〇6、雷帕黴素、黴酚酸嗎啉乙酯（myc〇phen〇late m〇fetU)、來氟米特（leflunomide)、NSAID(例如布洛芬）、皮質類固醇（諸如潑尼龍）、磷酸二酯酶抑制劑、腺苷促效劑、抗血栓形成劑、補體抑制劑、腎上腺素劑、干擾促炎性細胞激素（諸如丁NFa或IL-1)信號傳導之藥劑（例如IRAK、NIK、IKK、 ρ38及MAP激酶抑制劑）、匕—邛轉化酶抑制劑、ΤΝ]ρα轉化酶（TACE)抑制劑、τ細胞信號傳導抑制劑（諸如激酶抑制 • 劑）、金屬蛋白酶抑制劑、柳氮磺胺咣啶、硫唑嘌呤、6_疏 • 基嘌呤、血管緊張素轉化酶抑制劑、可溶細胞激素受體及其衍生物（例如可溶性p55或p75 TNF受體及衍生物 P75TNFRIgG(ENBREd p55TNFRIgG(來那西普））、仙_ 1RI、sIL-lRII、sil-6R)、消炎細胞激素（例如 IL 4、 10 IL-11、IL-13 及 TGFp)、赛利克西（ceiecoxib)、葉酸、 151544.doc • 101 - 201124427 羥氯喹硫酸鹽、羅非考昔（rofecoxib)、依那西普、英利昔單抗（infliximab)、萘普生（naproxen)、伐地考昔 (valdecoxib)、柳氮磺胺吡啶、曱潑尼龍 (methylprednisolone)、美儂西康（meloxicam)、曱潑尼龍乙酸酯、硫代蘋果酸金鈉、阿司匹靈（aspirin)、曲安奈德 (triamcinolone acetonide)、丙氧芬萘磺酸鹽 /apap、葉酸鹽、萘丁美酮（nabumetone)、雙氣芬酸（diclofenac)、吡羅昔康（piroxicam)、依託度酸（etodolac)、雙氣芬酸鈉、惡丙嗪（oxaprozin)、羥考酮鹽酸鹽（OXyC〇d〇ne hcl)、重酒石酸二氫可待因酮（hydrocodone bitartrate)/apap、雙氣芬酸納 / 米索前列醇（misoprostol)、芬太尼（fentanyl)、阿那白滯素 (anakinra)(人類重組）、曲馬多鹽酸鹽（tramadol hcl)、雙水楊酯、舒林酸（sulindac)、氰鈷維生素/fa/維生素B6、乙酿胺苯酚、阿侖膦酸鈉、潑尼龍、硫酸嗎啡、鹽酸利多卡因、吲哚美辛（indomethacin)、葡糖胺硫酸鹽（glucosamine sulf)/軟骨素、阿米替林鹽酸鹽（amitriptyline hcl)、續胺。密 °定（sulfadiazine)、經考酮鹽酸鹽/乙醯胺苯驗、奥洛他定鹽酸鹽（olopatadine hcl)、米索前列醇、萘普生鈉（naproxen sodium)、奧美拉 °坐(omeprazole)、環碟酿胺 (cyclophosphamide)、利妥昔單抗（rituximab)、IL-1 TRAP、MRA、CTLA4-IG ' IL-18 BP、抗 IL-18、抗 IL15、 BIRB-796、SCIO-469、VX-702、AMG-548、VX-740、羅氟司特（Roflumilast)、IC-485、CDC-801 及美索普蘭 (Mesopram) ° 151544.doc •102· 201124427 可與本發明之IL-Ιβ結合蛋白（例如抗體）或其抗原結合蛋。之用於發炎性腸病之治療劑的非限制性實例包括以下’布替耐德；表皮生長因子、皮質類固醇、環孢素、柳氮確胺。比唆、胺基水揚酸鹽、6•疏基嗓吟、硫。坐啤吟、甲石肖嚷嗤 '脂肪加氧酶抑制劑、美沙拉嘻、奥色拉秦、巴柳 ^抗氧化劑、凝血脂素抑制劑、心受體拮抗劑、抗几_ ip單株抗體、抗IL-6單株抗體、生長因子、彈性酶抑制劑、。比。定基-味。坐化合物、以下其他人類細胞激素或生長因子之抗體或拮抗劑，例如TNF、LT、IL_lp、、江 6、IL-7、IL-8、IL-15、IL_16、IL-17、IL_18EM:pn、-GM-CSF、FGF及PDGF。本發明之抗體或其抗原結合部分可與以下細胞表面分子之抗體組合，諸如CD2、CD3、 CD4 、 CD8 、 CD25 、 CD28 、 CD30 、 CD4〇、 CD45 、 CD69、CD90及其配位體。本發明之結合蛋白或其抗原結合部分亦可與以下藥劑組合，諸如胺甲嗓呤、環孢素、 FK506、雷帕黴素、黴酚酸嗎啉乙酯、來氟米特、 NSAID(例如布洛芬）、皮質類固醇（諸如潑尼龍）、磷酸二瞻制劑、腺苷促效劑、抗血栓形成劑、補體抑制劑、腎上腺素劑、干擾促炎性細胞激素（諸如丁邮或化」）伴號傳導之藥劑（例如IRAK、NIK、IKK、p38或崎激酶㈣劑）、仏-丨卩轉化酶抑制劑、TNFa轉化酶抑制劑、τ細胞信號傳導抑制劑(諸如激酶抑制劑）、金屬蛋白酶抑制劑、柳 ' 6__ w、血管緊張素轉化酶抑制劑、可溶細胞激素受體及其衍生物（例如可溶性？55或 15I544.doc -103- 201124427 p75TNF 受體、sIL-lRI、sIL-lRII、SIL-6R)及消炎細胞激素（例如 IL-4、IL-10、IL-11、IL-13 及 TGFp)。可與如本文所述之IL-Ιβ結合蛋白或其抗原結合蛋白組合之用於克羅恩氏病之治療劑的例示性實例包括以下： TNF拮抗劑，例如抗TNF抗體、D2E7(PCT公開案第 97/29131 號；HUMIRA®)、CA2(REMICADE®)、CDP 571、 TNFR-Ig 構築體、p75TNFRIgG(ENBREL®)及 p55TNFRIgG (來那西普））抑制劑及PDE4抑制劑。本發明之結合蛋白或其抗原結合部分可與皮質類固醇（例如布替耐德及地塞米松（dexamethasone))組合。本發明之結合蛋白或其抗原結合部分亦可與以下組合：諸如柳氮磺胺吡啶、5-胺基水楊酸及奥色拉秦等藥劑及干擾促炎性細胞激素（諸如IL-1)之合成或作用之藥劑（例如IL-1 β轉化酶抑制劑及il- 1RA)。本發明之結合蛋白或其抗原結合部分亦可與Τ細胞信號傳導抑制劑（例如酪胺酸激酶抑制劑6-巯基嘌呤）一起使用。本發明之結合蛋白或其抗原結合部分可與IL-11組合。本發明之結合蛋白或其抗原結合部分可與以下組合：美沙拉嗪、潑尼松、硫唑嘌呤、Μ嘌呤、英利昔單抗、曱潑尼龍琥珀酸鈉、地芬諾酯（diphenoxylate)/阿托品硫酸鹽（atr〇p sulfate)、洛略丁胺鹽酸鹽、胺曱喋呤、奥美拉唑、葉酸鹽、環丙沙星/右旋糖-水、重酒石酸二氫可待因酮/apap、四環素鹽酸鹽、醋酸氟輕鬆（fluocinonide)、甲硝噠e坐、硫柳汞/棚酸、消膽胺/蔗糖、環丙沙星鹽酸鹽、硫酸笑菪驗、鹽酸略替咬、11米達°坐余鹽酸鹽（midaz〇iam 151544.doc • 104- 201124427 hydrochloride)、羥考酮鹽酸鹽/乙醯胺苯酚、鹽酸異丙嘻、碗酸鈉、續胺曱°惡°坐（sulfamethoxazole)/甲氧节咬 (trimethoprim)、賽利克西、聚卡波非（polycarbophil)、丙氧芬萘續酸鹽、氫化可的松（hydrocortisone)、多種維生素、巴柳氮二鈉（balsalazide disodium)、填酸可待因 (codeine phosphate)/apap、考來維命鹽酸鹽（colesevelam hcl)、氰鈷維生素、葉酸、左氧氟沙星（levofloxacin)、曱潑尼龍、那他珠單抗（natalizumab)及干擾素-γ。可與本發明之IL-Ιβ結合蛋白或抗原結合部分組合之用於多發性硬化症之治療劑的非限制性實例包括以下：皮質類固醇、潑尼龍 '甲潑尼龍、硫唑嘌呤、環磷醯胺、環孢素、胺甲嗓e令、4-胺基°比咬、替紮尼定（tizanidine)、干擾素-pia(AVONEX® ; Biogen)、干擾素-pib (BETASERON® ; Chiron/Berlex)、干擾素a-n3(Interferon Sciences/Fujimoto)、干擾素-ot(Alfa Wassermann/J&J)、干擾素 piA-IF(Serono/ Inhale Therapeutics)、聚乙二醇化干擾素 a 2b(Enzon/ Schering-Plough)、共聚物 l(Cop-l ; COPAXONE® ; Teva Pharmaceutical Industries, Inc·)、高壓氧、靜脈内免疫球蛋白、克拉屈濱（clabribine)、其他人類細胞激素或生長因子及其受體（例如 TNF、LT、IL-Ιβ、IL-2、IL-6、IL-7、 IL_8、IL_1A、IL-15、IL-16、IL-18、EMAP-II、GM-CSF、FGF及PDGF)之抗體或拮抗劑或抑制劑。本發明之抗體或其抗原結合部分可與以下細胞表面分子之抗體組合：諸如 CD2、CD3、CD4、CD8、CD19、CD20、CD25、 151544.doc -105- 201124427 CD28、CD30、CD40、CD45、CD69、CD80、CD86、 CD90或其配位體。本發明之抗體或其抗原結合部分亦可與以下藥劑組合：諸如FK506、雷帕黴素、黴酚酸嗎淋乙酯、來氟米特、NSAID(例如布洛芬）、磷酸二略酶抑制劑、腺苷促效劑、抗血栓形成劑、補體抑制劑、腎上腺素劑、干擾促炎性細胞激素（諸如TNFa或IL-1)信號傳導之藥劑（例如IRAK、NIK、IKK、p38或MAP激酶抑制劑）、IL_ lb轉化酶抑制劑、TACE抑制劑、T細胞信號傳導抑制劑 (諸如激酶抑制劑）、金屬蛋白酶抑制劑、柳氮磺胺η比唆、硫唑嘌呤、6-巯基嘌呤、血管緊張素轉化酶抑制齊,|、可溶細胞激素受體及其衍生物（例如可溶性ρ55或p75 TNF受體、sIL-lRI、sIL-lRII、SIL-6R)、，消炎細胞激素（例如 IL_ 4、IL-10、IL-13 及 TGFP)、COPAXONE®及卡斯蛋白酶抑制劑（例如卡斯蛋白酶-1抑制劑）。本發明之IL-1 β結合蛋白或其抗原結合部分亦可與以下藥劑組合，諸如阿偷單抗（alemtuzumab)、屈大麻紛 (dronabinol)、Unimed、達利珠單抗（daclizumab)、米托蒽酉昆、紮利羅登鹽酸鹽（xaliproden hydrochloride)、胺。比咬 (fampridine)、醋酸格拉替美（glatiramer acetate)、那他珠單抗、西那必多（sinnabidol)、a-免疫因子NNS03、ABR-215062 、 AnergiX.MS 、趨化因子受體拮抗劑、 BBR-2778、卡勒胍素（calagualine)、CPI-1189、LEM(脂質體囊封之米托蒽醌）、THC.CBD(大麻鹼促效劑）MBP-8298、美索普蘭（PDE4抑制劑）、MNA-715、抗IL-6受體抗體、紐若 151544.doc -106- 201124427 華（neurovax)、°比非尼酮阿羅卓普（pirfenidone allotrap) 1258(RDP-1258)、sTNF-Rl、他侖帕奈、特立氟胺 (teriflunomide)、TGF-P2、替普利莫泰（tiplimotide)、VLA-4结抗劑（例如 TR-14i035、VLA4-Ultrahaler、Antegran-ELAN/Biogen)、干擾素γ拮抗劑、IL-4促效劑。可與本發明之IL-1 β結合蛋白或其抗原結合部分組合之用於治療或預防心絞痛之治療劑的非限制性實例包括以下：阿司匹靈、石肖酸甘油、單石肖酸異山梨醇、美托洛爾琥珀酸鹽（metoprolol succinate)、阿替洛爾（atenolol)、美托洛爾酒石酸鹽（metoprolol tartrate)、胺氯地平苄確酸鹽 (amlodipine besylate)、地爾硫卓鹽酸鹽（diltiazem hydrochloride)、二硝酸異山梨醇、氯吡格雷硫酸氫鹽 (clopidogrel bisulfate)、硝苯地平、阿托伐他汀辦 (atorvastatin calcium)、氣化鉀、呋喃苯胺酸、辛伐他汀 (simvastatin)、維拉帕米鹽酸鹽（verapamil hcl)、地高辛 (digoxin)、普萘洛爾鹽酸鹽（pr〇pranolol hydrochloride)、卡維地洛（carvedilol)、賴諾普利（lisinopril)、螺内醋、氫氣噻嗪（hydrochlorothiazide)、依那普利順丁烯二酸鹽 (enalapril maleate)、納多洛爾（nadolol)、雷米普利 (ramipril)、依謹肝素鈉（en〇xaparin sodium)、肝素鈉、類沙坦（valsartan)、索他洛爾鹽酸鹽（s〇talol hydrochloride)、非諾貝特（fenofibrate)、依澤替米貝（ezetimibe)、布美他尼 (bumetanide)、洛沙坦钟（i〇sartan potassium)、賴諾普利 (lisinopril)/氫氣噻嗪、非洛地平（fei〇dipine)、卡托普利 5 151544.doc •107· 201124427 (captopril)及比索洛爾反丁烯二酸鹽（bis〇pr〇i〇i fumarate) ° 可與本發明之結合蛋白或其抗原結合部分組合之用於治療或預防僵直性脊椎炎之治療劑的非限制性實例包括以下：布洛芬、雙氯芬酸及米索前列醇 '萘普生、美儂西康、,°木美辛、雙氯芬酸、赛利克西、羅非考昔、柳氮續胺吡啶、胺甲喋呤、硫唑嘌呤、米諾環素（min〇cycHn)、潑尼松（prednisone)、依那西普及英利昔單抗。可與本發明之IL-Ιβ結合蛋白或其抗原結合部分組合之用於治療或預防哮喘之治療劑的非限制性實例包括以下：沙丁胺醇（albuterol)、沙美特羅（saimeter〇1)/氟替卡松 (fluticasone)、孟魯司特鈉（montelukast sodium)、敗替卡松丙酸酯（Huticasone propionate)、布地奈德 (budesonide)、潑尼松、沙美特羅羥萘曱酸鹽、左旋沙丁胺醇鹽酸鹽（levalbuterol hcl)、沙丁胺醇硫酸鹽/異丙托銨、潑尼龍磷酸鈉、曲安奈德、二丙酸倍氯米松、溴化異丙托錢、阿奇徽素（azithromycin)、。比布特羅乙酸鹽 (pirbuterol acetate)、潑尼龍、無水茶鹼、曱潑尼龍號站酸鈉、克拉黴素、紮魯司特（zafirlukast)、福莫特羅反丁晞二酸鹽（formoterol fumarate)、流感病毒疫苗、曱潑尼龍、阿莫西林三水合物（amoxicillin trihydrate)、氟尼縮松 (flunisolide)、過敏症注射液、色甘酸鈉、鹽酸菲索特非那定（fexofenadine hydrochloride)、氟尼縮松/薄荷腦、阿莫西林（amoxicillin)/棒酸鹽、左氧氟沙星（levofi〇xacin)、 -108- 151544.doc 201124427 吸入器輔助裝置、愈創甘油醚、地塞米松磷酸鈉、莫西沙星鹽酸鹽（moxifloxacin hcl)、鹽酸強力黴素（doxycycline hyclate)、愈創甘油醚/d-美沙芬（d-methorphan)、p-麻黃驗/ cod/氯务尼（chl〇rphenir)、加替沙星（gatifloxacin) ' 西替利嗪鹽酸鹽（cetirizine hydrochloride)、糠酸莫美他松 (mometasone furoate)、沙美特羅羥萘甲酸鹽、苯佐那酯 (benzonatate)、頭孢胺苄（cephaiexin)、pe/氫可酮 / 氯芬尼西替利嗪鹽酸鹽/偽麻黃驗、苯腎上腺素/cod/異丙嗪、可待因/異丙嗪、頭孢丙烯（cefpr〇zil)、地塞米松、愈創甘油醚/偽麻黃鹼、氯芬尼拉明（chlorpheniramine)/氫可酮、奈多羅米鈉（nedocromil sodium)、特布他林硫酸鹽、腎上腺素、甲潑尼龍及羥異丙腎上腺素硫酸鹽 (metaproterenol sulfate)。可與本發明之IL-1 β結合蛋白或其抗原結合部分組合之用於治療或預防C0PD之治療劑的非限制性實例包括以下：沙丁胺醇硫酸鹽/異丙托銨、演化異丙托銨、沙美特羅/氟替卡松、沙丁胺醇、沙美特羅經萘甲酸鹽、氟替卡权丙酸醋、潑尼松、無水茶驗、甲潑尼龍破錢鈉、孟魯司特鈉、布地奈德、福莫特羅反丁烯二酸鹽、曲安奈德、左氧氟沙星、愈創甘油趟、阿奇黴素、二丙酸倍氯米松、 ^旋沙丁胺醇鹽酸鹽、氣尼縮松、頭孢曲松納、阿莫西林一水合物、加替沙星、皆# q 星矛' 魯司特、阿莫西林/棒酸鹽、氟匕縮松/薄荷腦、氣芬尼拉明/盘缺乃虱可酮、羥異丙腎上腺素硫酉夂鹽、甲潑尼龍、糠酸莫美他松、 P·麻頁驗/cod/氯芬尼、 151544.doc 109· 201124427 吼布特羅乙酸鹽、P-麻黃鹼/氯雷他定（l0ratadine)、特布他林硫酸鹽、溴化噻托銨、（R,R)-福莫特羅、TgAAT、西洛司特（cilomilast)及羅氟司特。可與本發明之IL-1 β結合蛋白或其抗原結合部分組合之用於治療或預防HCV之治療劑的非限制性實例包括以下：干擾素-a-2a、干擾素_a_2b、干擾素-a coni、干擾素_α_ nl、·聚乙二醇化干擾素_a_2a、聚乙二醇化干擾素_a_2b、病毒°坐、聚乙二醇化干擾素-a-2b+病毒唾、熊去氧膽酸、甘草酸、胸腺法新（thymalfasin)、邁克瑟敏（maxamine)、 VX-497及用以經由介入以下標靶治療HCV之任何化合物： HCV聚合轉、HCV蛋白酶、HCV解螺旋酶、HOV IRES(内部核糖體入口位點）。可與本發明之結合蛋白或其抗原結合部分組合之用於治療或預防特發性肺纖維化之治療劑的非限制性實例包括以下：潑尼松、硫唑嘌呤、沙丁胺醇、秋水仙鹼、沙丁胺醇硫酸鹽、地高辛、γ干擾素、甲潑尼龍sod succ、勞拉西泮 (lorazepam)、°夫塞米（furoseniide)、賴諸普利、硝，酸甘油、螺内酯、環磷醯胺' 溴化異丙托銨、放線菌素d、阿替普酶（alteplase)、氟替卡松丙酸酯、左氧氟沙星、羥異丙腎上腺素硫酸鹽、硫酸嗎啡、羥考酮鹽酸鹽、氯化卸、曲女奈德、無水他克莫司、|弓、干擾素-α、胺甲嗓吟、徽酚酸嗎啉乙酯及干擾素-γ-lb。可與本發明之IL-Ιβ結合蛋白或其抗原結合部分組合之用於治療或預防心肌梗塞之治療劑的非限制性實例包括以 • no· 151544.doc 201124427 下：阿司匹靈、硝酸甘油、美托洛爾酒石酸鹽、依諾肝素鈉、肝素鈉、氯吡格雷硫酸氫鹽、卡維地洛、阿替洛爾、硫酸嗎_、美托洛爾琥珀酸鹽、華法林納（warfarin sodium)、賴諾普利、單硝酸異山梨醇、地高辛、呋塞米、辛伐他汀、雷米普利、替奈普酶、依那普利順丁烯二酸鹽、托西邁、瑞替普酶（retavase)、洛沙坦鉀、01：那普利鹽酸鹽/mag carb、布美他尼、阿替普酶、依那普利拉 (enalaprilat)、胺蛾酮鹽酸鹽（amiodarone hydrochloride)、替羅非班鹽酸鹽m-水合物（tirofiban hcl m-hydrate)、地爾硫卓鹽酸鹽、卡托普利、厄貝沙坦、纈沙坦、普萘洛爾鹽酸鹽、福辛普利鈉、鹽酸利多卡因、埃替菲巴肽 (eptifibatide)、頭孢唑林鈉（cefazolin sodium)、硫酸阿托平、胺基己酸、螺内酯、干擾素、索他洛爾鹽酸鹽、氯化卸、多庫酯鈉（docusate sodium)、多巴酷丁胺鹽酸鹽、阿普唑侖（alprazolam)、普伐他汀鈉（pravastatin sodium)、阿托伐他>丁 #5 、味達坐余鹽酸鹽（mj d azo 1 am hydrochloride)、鹽酸哌替啶、二硝酸異山梨醇、腎上腺素、多巴胺鹽酸鹽、比伐盧定（bivalirudin)、羅素他、;丁、依澤替米貝/辛伐他汀、阿伐麥布（avasimibe)及卡立泊來德 (cariporide) ° 可與本發明之IL-1 β結合蛋白或其抗原結合部分組合之用於治療或預防牛皮癣之治療劑的非限制性實例包括以下：鈣泊三醇、丙酸氯氟美松（cl〇betas〇1 pr〇pi〇nate)、曲女奈德、鹵貝他索丙酸酯（halobetasol propionate)、他紮羅 5 151544.doc Π1 201124427 汀（tazarotene)、胺曱喋吟、醋酸氟輕鬆、經加強之二丙酸倍他米松、氟輕鬆（fluocinolone acetonide)、阿曲汀 (acitretin)、焦油洗髮精、倍他米松戊酸鹽、糠酸莫美他松、酮康。坐（ketoconazole)、普莫卡因/膚輕鬆 (fluocinolone)、氫化可的松戊酸鹽、氟氫縮松 (flurandrenolide)、尿素、倍他米松（betamethasone)、丙酸氣氟美松（clobetasol propionate)/emoll、氟替卡松丙酸酯、阿奇黴素、氫化可的松、增濕藥方、葉酸、地奈德 (desonide)、口比美莫司（pimecr〇limus)、煤焦油、二氟拉松二乙酸酯（diflorasone diacetate)、依那西普葉酸、乳酸、甲氧沙林（methoxsalen)、he/次沒食子酸鉍/znox/resoI·、曱潑尼龍乙酸鹽、潑尼松、防釀劑、哈西奈德（halcinonide)、水杨S文、，¾、二盼、氣可托龍特戊酸醋（ci〇c〇rt〇i〇ne pivalate)、煤餾出物、煤焦油/水揚酸、煤焦油/水楊酸/ 硫、去經米松（desoximetasone)、二氮雜環庚烷、潤膚劑、醋酸氟輕鬆/潤膚劑、礦物油/蓖麻油/na iact、礦物油/花生油、石油/十四烷酸異丙酯、補骨脂素、水楊酸、皂/三溴沙侖（tribromsalan)、硫柳汞/硼酸、賽利克西、英利昔單抗、環孢素、阿法賽特、依法珠單抗（efalizuniab)、他克莫司、。比美莫司、PUVA、UVB及柳氮磺胺吡啶。可與本發明之IL-Ιβ結合蛋白或其抗原結合部分組合之用於治療或預防牛皮癬性關節炎之治療劑的非限制性實例包括以下：胺甲喋呤、依那西普、羅非考昔、賽利克西、葉酸、柳氮磺胺吼啶、萘普生、來氟米特' 曱潑尼龍乙酸 151544.doc -112- 201124427 引朵美辛、羥氯喹硫酸鹽、潑尼松、舒林酸、加強之。丙酉夂倍他米松、英利昔單抗、胺甲嗓吟、葉酸、曲安奈德又氯芬酸、二甲亞颯、吡羅昔康、雙氯芬酸鈉、酮基布洛芬、美儂西康、甲潑尼龍、萘丁美酮（nabumetone)、托美丁納（t〇lmetin s〇dium)、鈣泊三醇、環孢素、雙氣芬 I鈉/米索刖列醇 '醋酸氟輕鬆、葡糖胺硫酸鹽、硫代蘋果酸金鈉、重酒石酸二氫可待因酮/apap、布洛芬 '利塞膦酸鈉（nsedronate sodium)、磺胺嘧啶、硫鳥嘌呤、伐地考昔 '阿法赛特及依法珠單抗。可與本發明之IL_ 1 β結合蛋白或其抗原結合部分其組合之用於治療或預防再狹窄之治療劑的非限制性實例包括以下：西羅莫司（sirolimus)、紫杉醇、依維莫司 (everolimus)、他克莫司、ABT-578及乙醯胺苯酚。可與本發明之IL-Ιβ結合蛋白或其抗原結合蛋白組合之用於治療或預防坐骨神經痛之治療劑的非限制性實例包括以下：重酒石酸二氫可待因酮/apap、羅非考昔 '環苯紮平鹽酸鹽（cyclobenzaprine hcl) '曱潑尼龍、萘普生、布洛芬、羥考酮鹽酸鹽/乙醯胺苯酚、赛利克西、伐地考昔、甲潑尼龍乙酸鹽、潑尼松、磷酸可待因/apap、曲馬多鹽酸鹽/乙醯胺苯酚、美他沙酮、美儂西康、美索巴莫 (methocarbamol)、鹽酸利多卡因、雙氯芬酸鈉、加巴喷丁、地塞米松、肌安寧（carisoprodol)、酮咯酸緩血酸胺 (ketorolac tromethamine)、吲哚美辛、乙醯胺苯酚、二氣雜環庚烷、萘丁美酮、羥考酮鹽酸鹽、替紮尼定鹽酸鹽、 151544.doc 113· 201124427 雙氯芬酸鈉/米索前列醇、丙氧芬萘磺酸鹽/apap、asa/羥考酮/羥考酮ter(〇xyc〇d〇ne ter)、布洛芬/重酒石酸二氫可待因酮、曲馬多鹽酸鹽、依託度酸、丙氧芬鹽酸鹽、阿米替林鹽酸鹽、肌安寧/磷酸可待因/asa、硫酸嗎啡、多種維生素、萘普生鈉、奧芬那君檸檬酸鹽（orphenadrine citrate)及替馬西泮（temazepam)。可與本發明之IL-1 β結合蛋白或其抗原結合部分組合之用於治療或預防全身性紅斑狼瘡（SLE)之治療劑的非限制性貫例包括以下：NSAID，例如雙氯芬酸、萘普生、布洛芬、。比羅昔康 '吲哚美辛；C0X2抑制劑，例如賽利克西、羅非考昔、伐地考昔；抗癔疾劑，例如羥氣喹；類固醇，例如潑尼松、潑尼龍、布替耐德、地塞米松；細胞毒素，例如硫唑嘌呤、環磷醯胺、黴酚酸嗎啉乙酯、胺甲喋吟；PDE4之抑制劑或嘌呤合成抑制劑，例如 CELLCEPT®。本發明之結合蛋白或其抗原結合部分亦可與以下藥劑組合：諸如柳氮磺胺吡啶、5_胺基水楊酸、奥色拉秦、硫唑嘌呤（Imuran))及干擾促炎性細胞激素（諸如 IL-1)合成、產生或作用之藥劑（例如卡斯蛋白酶抑制劑，如IL-Ιβ轉化酶抑制劑及IL_lra)。本發明之結合蛋白或其杬原結合部分亦可與以下一起使用：τ細胞信號傳導抑制劑（例如酪胺酸激酶抑制劑）或靶向Τ細胞活化分子之分子 (例如CTLA-4-IgG或抗Β7家族抗體及抗叩-丨家族抗體）。本發明之結合蛋白或其抗原結合蛋白可與以下組合：IL-11 或抗細胞激素抗體，例如芳妥珠單抗f〇n〇t〇lizumab(抗 151544.doc -114· 201124427 IFNg抗體）；或抗受體受體抗體，例如抗IL-6受體抗體及B 細胞表面分子之抗體。本發明之結合蛋白或其抗原結合部分亦可與以下一起使用：LJP 394(阿貝莫司（abetimus))、消耗或滅活B細胞之藥劑（例如利妥昔單抗（抗CD20抗體））、lymphostat-B(抗BlyS抗體）、TNF拮抗劑（例如抗TNF 抗體）、D2E7(PCT公開案第WO 97/29131號； HUMIRA®)、CA2(REMICADE®)、CDP 571、TNFR-Ig構築體（p75TNFRIgG(ENBREL®)及 p55TNFRIgG(來那西普））。本發明之醫藥組合物可包括「治療有效量」或「預防有效量」之本發明之IL-Ιβ結合蛋白或其抗原結合部分。「治療有效量」係指在必需劑量及必需時間下有效達成所需治療結果之量。本文所述之結合蛋白或其抗原結合部分之治療有效劑量可由熟習此項技術者確定且可根據諸如個體之疾病狀態、年齡、性別及體重以及抗體或其抗原結合部分在個體中引起所需反應之能力等因素而變化。治療有效量亦為抗體或其抗原結合部分之治療有益作用超過任何毒性或有害作用的量。「預防有效量」係指在必需劑量及必需時間下有效達成所需預防結果之量。通常，因為預防劑量在疾病之前或在疾病早期用於個體，所以預防有效量將小於治療有效量。可調整給藥方案以提供最佳所需反應（例如治療或預防反應）。舉例而言，可投與單次大丸藥，可隨時間投與若干分次劑量，或可按治療情況之緊急需要所指示按比例減

I 151544.doc -115- 201124427 少或增加劑量。為便於投藥及劑量之均一性，尤其宜將非經腸組合物調配成單位劑型。如本文中所使用之單位劑型係指適合作為單-劑量料待治療之哺㈣物個體的物理個別單元’·每-單元含有預定量之計劃產生所需治療作用的活性化合物與所需醫藥载劑缔合。本發明之單位劑型的規格由以下因素決定且直接視其而定：⑷活性化合物之獨特特徵及待達成之特定治療或預防作用；及（b)為此項技術所所固有之混合該活性化合物以治療個體之敏感性的限制。本發明之IL-Ιβ結合蛋白或其抗原結合部分之治療或預防有效量的例示性非限制範圍為約〇」至約2〇 mg/kg、約1 至約10 mg/kg。劑量值可隨待減輕之病狀的類型及嚴重程度而變化1於任何特定個體，特定給藥方案應隨著時間根據個體需要及投與組合物或監督組合物之投與者的專業判斷而調整。本文所闡述之劑量範圍僅為例示性的且不欲限制所主張組合物之範疇或實踐。對熟習此項技術者而言將顯而易知，本文所述之本發明之組合物及方法的其他適合之修改及改編為明顯的且在不脫離本發明之範疇或本文所揭示之實施例的情況下可使用適合之等效物來進行。參考以下實例將更明確地瞭解本發明’該等實例僅出於說明之目的而包括在内且不欲限制本發明。實例實例1 :產生抗人類IL-Ιβ單株抗體 151544.doc 201124427 如下獲得小鼠抗人類IL-Ιβ單株抗體：實例1.1:用人類IL-lp抗原使小鼠免疫在第1天，將與完全弗氏佐劑（complete Freund's adjuvant)或 Immunoeasy佐劑（Qiagen，Valencia, CA)混合之 20 微克重組純化人類 IL-lp(R&D Systems, Minneapolis， MN，USA)皮下注入五隻6-8週齡Balb/C、五隻C57B/6小鼠及五隻AJ小鼠體内。在第24天、第38天及第49天，將與不完全弗氏佐劑或Immunoeasy佐劑混合之20微克重組純化人類IL-Ιβ變異體皮下注入同一小鼠中。在第84天或第112天或第144天，向小鼠靜脈内注射1 重組純化人類il- 1 β變異體。實例1.2 :產生融合瘤根據 Kohler，G_ 及 Milstein (1975) Nature 256:495 中所述之既定方法’將自貫例1 · 1中所述之免疫小鼠獲得之脾細胞與SP2/0-Ag-14細胞以5:1之比率融合以產生融合瘤。在 96孔板中’將融合產物以每孔25xl〇6個脾細胞之密度塗於含有偶氮絲胺酸及次黃嘌呤之選擇培養基中。融合後七至十天’觀察到巨觀融合瘤群落。藉由ELISA測試來自含有融合瘤群落之每一孔的上清液中IL_ip之抗體的存在（如實例3.1中所述）。隨後在用於IL_82MRC_5生物檢定中，測試呈現IL-Ιβ特異性活性之上清液中和IL1p之能力（如實例 3.2中所述）。實例1.3 ·抗人類IL-Ιβ單株抗趙之鐘別及表徵將產生結合於IL-Ιβ且能夠特異性結合IL ip之抗體且尤 151544.doc 5 •117· 201124427 其在MRC-5生物檢定中IC5〇值為5 nM或小於5 nM之抗體的融合瘤擴增並藉由限制稀釋法選殖。將融合瘤細胞在含有10%低IgG胎牛血清之培養基 (Hyclone #SH30151, Logan，UT)中擴增。平均而言，利用標準方法，每一融合瘤採集250 mL上清液（源自無性繁殖系群體），濃縮且藉由蛋白A親和層析純化。純化之mAb抑制IL-Ιβ活性之能力係如實例3.2中所述使用MRC-5生物檢定來測定。實例1.4:測定各鼠類抗人類IL-Ιβ單株抗體之可變區的胺基酸序列對於各胺基酸序列測定，藉由離心分離約l〇x 1〇6個融合瘤細胞，且按照製造商之說明書，用Trizol(Gibco BRL/Invitrogen，Carlsbad，CA.)加工以分離總 RNA。按照製造商之說明書，使用Superscript第一股合成系統 (Invitrogen，Carlsbad，CA)合成總 RNA之第一股DNA。使用寡聚（dT)引發第一股合成以選擇聚（A)+ RNA。隨後藉由 PCR，使用經設計用於擴增鼠類免疫球蛋白可變區之引子 (Ig-Primer Sets，Novagen，Madison，WI)來擴增第一股 cDNA產物。在瓊脂糖凝膠上解析PCR產物’切下，純化，隨後用TOPO選殖套組次選殖至PCR2.1-TOPO載體 (Invitrogen, Carlsbad，CA)中，且轉型至TOP10化學感受態大腸桿菌（Invitrogen，Carlsbad，CA)中。對轉型體進行群落 PCR，以鑑別含有插入物之純系。使用QIAprep Miniprep 套組（Qiagen，Valencia，CA)自含有插入物之純系中分離質 151544.doc •118- 201124427 體DNA。使用M13前置及M13反置引子（Fermentas Life Sciences, Hanover MD)對質體中之插入物的兩條股測序以確定可變重鏈或可變輕鏈DNA序列。抗IL-Ιβ單株抗體之可變重鏈及可變輕鏈序列展示於表5中。實例2:重組抗人類IL-Ιβ抗體實例2.1:重組嵌合抗人類IL-ip抗體之構築及表現藉由在細菌中同源重組，編碼鼠類抗人類IL-1 β單株抗體1Β12.4Η4之重鏈恆定區的DNA經編碼含有2個鉸鏈區胺基酸突變之人類IgGl恆定區之cDNA片段置換。此等突變為在位置234(EU編號）處白胺酸變為丙胺酸及在位置235處白胺酸變為丙胺酸（Lund等人，（1991) J. Immunol. 147:2657)。此等抗體之每一者的輕鏈恆定區經人類κ恆定區置換。藉由共轉染接合於pHybE表現質體中之嵌合重鏈及輕鏈cDNA，將全長嵌合抗體短暫表現於HEK 293-6E細胞中（美國專利公開案第US 20090239259號）。藉由蛋白A 瓊脂糖凝膠層析純化含有重組嵌合抗體之細胞上清液且藉由添加酸緩衝液溶離結合之抗體。中和抗體且透析於PBS 中〇將編碼嵌合1B12.4H4之重鏈cDNA與1B12.4H4嵌合輕鏈 cDNA(兩者接合於pHybE載體中）共轉染至HEK 293-6E細胞中。藉由蛋白A瓊脂糖凝膠層析純化含有重組嵌合抗體之細胞上清液且藉由添加酸緩衝液溶離結合之抗體。中和抗體且透析於PBS中。接著如實例3.2中所述，測試純化之嵌合抗人類IL-Ιβ單株抗體抑制IL-Ιβ誘導之MRC-5細胞產生 5 151544.doc -119- 201124427 IL-8之能力。實例2.2:人類化抗人類IL-ΐρ抗體之構築及表現實例2.2.1 :選擇人類抗體架構根據Huang等人，（2005) Methods 36:35-42之方法，確定 VH及VL CDR之典型結構。基於典型結構，適當受體人類 VH架構序列為3-13、3-53、3-66、4-34及4-59，且適當受體人類VL架構序列包括Vkl、一些Vk3、Vk5及Vk6亞組。基於1B12VH區之胺基酸109-122與hJHl-6序列之比對，選擇hJH4作為受體人類FR4序列。藉由用『X』逐漸替代CDR或架構殘基來形成四個其他 VH序列（IB 12VHx、-XX、-XXX及-χχχχ)。IB 12VHs 為移除 D及J區之VH序列。在Vector NTI®軟體之比對X程式 (Invitrogen，Carlsbad, CA)中，將五個序列與人類VH序列比對。關注總架構或僅關注對環構形及VH/VL界面重要之特定殘基’ VH4-59與1B12 VH序列具有最佳總同源性。選擇此架構作為用於移植1B12 VH CDR序列之受體人類生殖系架構。選擇VH3-53作為來自另一 VH家族之替代受體人類架構。比對VH4序列以鑑別VH4-59中可使VH4-59變為 VH4共同序列以使人類化序列之免疫原性潛力降至最低之架構殘基。VH4-59之序列比對顯示不需要引入架構殘基變化來使VH4-59變為VH4共同序列。序列比對顯示欲用作受體架構之VH4-59序列為主要共同序列。類似地，比對所有 VH3序列以鑑別VH3-53中可使VH3-53變為VH3共同序列以使免疫原性潛力降至最低之架構殘基。鑑別兩個VH3共同 151544.doc •120· 201124427 變化（112¥及¥29?)。比對亦顯示欲用作受體架構之乂113-53 序列為來自三個已知VH3-53多形現象之第一序列。可製備具有九個所提出之回復突變中之一至八個的任何組合且有或無Q1E變化之第一組序列以產生免疫原性潛力較小或與來自VH4-59生殖系序列之天然存在人類VH序列的總一致性較佳之其他人類化1B12VH序列。為測定在來源於VH4-59之人類抗體中所提出之回復突變的佔有率，自NCBI IgBlast資料庫將源自VH4-59之人類 VH序列下載至批量fasta檔案中，藉由ClustalW加以比對，且藉由logobar進行觀察。用Adobe Illustrator編輯輸出.eps 檔案以移除間隙、信號肽、大部分CDR3及恆定區序列。此分析適用於瞭解所提出之回復突變及小鼠VH CDR殘基是否在可來源於VH4-59之825個天然人類抗體中呈現。在九個所提出（G27F、I29L、I48L、V67L、V71K ' T73N、 N76S、F78V及R94K)之回復突變中，在超過1%之此等序列中觀察到 G27F、I29L、V67L、N76S、F78V及 R94K。可製備具有十個所提出之回復突變中之一至九個的任何組合且具有兩個I12V及V29F VH3架構共同變化中之零至兩個的第二組序列以產生免疫原性潛力較小或與來自VH3-53生殖系序列之天然存在人類VH序列的總一致性較佳之其他人類化1B12 VH序列。自NCBI IgBlast資料庫將源自 VH3-53之人類VH序列下載至批量fasta檔案中，藉由 ClustalW加以比對，且藉由logobar進行觀察。用Adobe Illustrator編輯輸出.eps檔案以移除間隙、信號肽及恒定區 5 151544.doc •121 · 201124427 序列。此分析適用於瞭解所提出之ίο個回復突變及小鼠 VH CDR殘基是否在可來源於VH3-53之174個天然人類抗體中呈現。在10個所提出（A24V、F29L、V37I、V48L、 S49G、F67L、R71K、N76S、L78V及 R94K)之回復突變中，在超過1%之此等序列中觀察到A24V、F29L、R71K、 N76S、L78V及R94K。 VL序列中支撐環結構及VH/VL界面之殘基概述於PCT公開案第W02008021156號中。藉由用『X』逐漸替代CDR或架構殘基來形成四個其他VL序列（IB 12VLx、-XX、-XXX及 -xxxx)。1B12VLS 為移除 J 區之 VL序列。在 Vector NTI® 軟體之比對X程式中將五個序列與人類Vk序列比對。僅考慮具有2-1-1典型CDR結構之人類Vk生殖系序列。選擇人類乂让生殖系1-33/018作為受體架構以進行1812.4114¥[人類化。選擇人類Vk生殖系6D41/A14作為備用受體架構以由另一亞組進行人類化。比對所有人類Vkl生殖系序列以鑑別1-33/018中可使1-33/018變為Vkl共同序列以芒果可確免疫原性潛力降至最低曰潛在架構殘基。鑑別兩個Vkl共同變化（F73L及I83F)。此等變化使人類化1B12 VL序列之免疫原性潛力降至最低。不對6D41/A14進行相同分析，因為 Vk6亞組中僅存在兩個不同生殖系序列。可製備含有七個所提出之回復突變（I2T、M4V、A43P、 Y49S、G64S、DIE及Q3T)中之一至六個的任何組合且有或無I83F Vkl共同變化的另外第一組序列以達成較佳IgG 功能、較小免疫原性潛力或與來自〇1 8生殖系序列之天然 151544.doc -122· 201124427 存在人類VL序列之較佳總一致性。可製備具有七個所提出之回復突變（V2T、M4V、A43P、K49S、G64S、DIE及 V3T)中之一至六個的任何組合之另外第二組序列以達成較佳IgG功能、較小免疫原性潛力或較好與來自6D41/A14生殖系序列之天然存在人類VL序列之較佳總同源性。自NCBI IgBlast資料庫將源自1-33/018之人類Vk序列下載至一個批量fasta槽案中，藉由ClustalW加以比對，且藉由logobar進行觀察。用Adobe Illustrator編輯輸出.eps播案以移除間隙、信號肽及恆定區序列。此分析適用於瞭解所提出之回復突變及小鼠VH CDR殘基是否在可來源於1-33/01 8之260個天然人類抗體中呈現。在七個所提出之回復突變中，在超過1%之此等序列中觀察到DIE及Y49S。實例2.2.2 :抗人類IL-ip單株抗體1B12.4H4之人類化藉由電子雜交將來自表5中所述之抗IL-Ιβ抗體1B12.4H4 的重鏈CDR序列移植於兩個人類架構上。第一組包含mAb hlB12VH.lz、hlB12VH.l 及 hlB12VH.la。hlB12VH,lz 為含有VH4-59及JH4架構序列之CDR移植人類化1B12 VH。 hlB12VH.l為進一步合併有Q1E架構變化以防止N末端焦麩胺酸鹽形成之人類化設計。hlB12VH.la為含有Q1E變化及所有可能的架構回復突變G27F、I29L、I48L、V67L、 V71K、T73N、N76S、F78V及R94K之人類化設計。第二組包含 mAb hlB12VH.2z 、 hlB12VH.2 及 hlB12VH.2a。hlB12VH.2z 為含有 VH3-53 及 hJH4 架構序列之CDR移植人類化1B12 VH。MB12VH.2為合併有I12V及

S 151544.doc -123 - 201124427 V29F VH3架構共同變化之人類化設計。hlB12VH.2a為含有VH3架構共同變化及所有可能的架構回復突變A24V、 F29L(F 為 VH3 共同序列）、V37I、V48L、S49G、F67L、 R71K、N76S、L78V及R94K之人類化設計。此等所提出之構築體中未見N-連接糖基化模式（N-{P}-S/T)。可能不需要所有回復突變。第1組中之回復突變I48L、V71K及T73N以及第2組中之F29L、V37I、V48L、S49G及F67L不在人類抗體中呈現。必要時，一些回復突變可在後續親和力成熟過程期間移除。藉由電子雜交將來自表5中所述之抗IL-Ιβ抗體1B12.4H4 的輕鏈CDR序列移植於兩個人類架構上。第一組包含mAb hlB12VL.lz、hlB12VL.l、hlB12VL.la 及 hlB12VL.lb。 hlB12VL.lz為含有018及Jk2架構序列之直接CDR移植人類化1B12 VL。hlB12VL.l為合併有I83F Vkl架構共同變化之人類化設計。hiB12VL.1 a為含有共同變化及5個架構回復突變（I2T、M4V、A43P、Y49S、G64S)之人類化設計。 hlB12VL. lb為含有共同變化及7個架構回復突變（5個同上及2個其他N末端回復突變DIE及Q3T)之人類化設計。第二組包含 mAb hlB12VL.2、hlB12VL.2a 及 hlB12VL.2b。 hlB12VL.2為含有A14及Jk2架構序列之直接CDR移植人類化1B12 VL。hlB12VL.2a為含有5個架構回復突變（V2T、 M4V、A43P、K49S、G64S)之人類化設計。 hlB12VL.2b為含有7個架構回復突變（5個同上及2個其他 N末端回復突變DIE及V3T)之人類化設計。所提出之構築 151544.doc •124· 201124427 體中未見N-連接糖基化模式（N-{P}-S/T)。可能不需要所有回復突變。形式1中之回復突變I2T、Q3T、M4V、A43P及 G64S不在人類抗體中呈現。存在極少來源於6D41/A14生殖系序列之人類抗體。 • 必要時，一些回復突變可在後續親和成熟過程期間移 . 除。表6為本發明之人類化抗hIL-Ιβ抗體之VH及VL區之胺基酸序列的清單。表6:人類化1B12VH/VL變異體之胺基酸序列的清單 SEO ID No. 蛋白質區序列 123456789012345678901234567890 .... .. .. ... , . · 28 .. .. \ / ·,； . .... ....... :. hlB12.4H4VH.lz- ·· ... QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSiS DYGVSWIRQP PGKGLEWIGLIWG6GDTYYN SPLKSRVTISVDTS KNQFSLKLS SVTAADT AVYYCARQRTLWGYDLYaiDYWGQGTLVTV ss . ......... .... s ···:'· hlB12.4H4VH.l Έν〇Ι^Ε30_νΚΡ3ΕΤΙ^ΕΤ(：Τν3603Ι3 DYGVSWIRQPPGKGLEWIGLIWGGGDTYYN ：SPLKSRVTISVDT SKNQFSLKLS SVTAADT AVYYCARQRTLWGYDLY(3MPYWGQGTLVTV SS:.' 30 • * * , ,· ,’·，，’·.，. *· * · · ·> . , ... hlB12.4H4VH.la .· ... EVQLQESGPGLVKPS.ETLSLTCTVSGFSLS.： DYGVSWIRQPPGKGLEWLGLIWGGGDTYYN βΡΙιΚέΚΕΤΙΞΚΟΝΞΚεονΒΙ^Ι^νΤΑΑΟΤ : AVYYCAKQRTLWGYDLYGMDYWGQGTLVTV ss:: 31 hlB12.4H4VH.2z EVQLVE S GGGLIQPGGSLRLSCAASGFTVS DYGVSWVRQAPGKGLEWVSLIWGGGDTYYN SPLKSRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDT AVYYCARQRTLWGYDLYGMDYWGQGTLVTV SS. hlB12.4H4VH.2 EVQL.VESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS DYGVSWVRQA PGKGLEWVSLIWGGGDTYYN splksrftiSrdnskntlylqmnslraedt AVYYCARQRTLWGYDLYOIDYWGQGTLVTV ss...: 151544.doc -125- 201124427

SEQ ID No. 蛋白質區序列 33 hlB12.4H4VH.2a EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFTLS DYGVSWIRQAPGKGLEWLGLIWGGGDTYYN SPLKSRLTISKDNSKSTVYLQMNSLRAEDT AVYYCAKQRTLWGYDLYGMDYWGQGTLVTV SS 34 hlB12.4H4VL.l DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCITSTDID VDMNWYQQKPGKAPKLLIYQ6NTLRPGVPS RFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDFATYYCLQ SDNLPLTFGQGTKLEIK 35 hlB12.4H4VL.lz DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCITSTDID VDMNWYQQKPGKAPKLLIYQGNTLRPGVPS RFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCLQ SDNLPLTFGQGTKLEIK 36 hlB12.4H4VL.la DTQVTQSPSSLSASVGDRVTITCITSTDID VDMNWYQQKPGKPPKLLISQGNTLRPGVPS RFSSSGSGTDFTFTISSLQPEDFATYYCLQ SDNLPLTFGQGTKLEIK 37 hlB12.4H4VL.lb ETTVTQSPSSLSASVGDRVTITCITSTDID VDMNWYQQKPGKPPKLLISQGNTLRPGVPS RFSSSGSGTDFTFTISSLQPEDFATYYCLQ SDNLPLTFGQGTKLEIK 38 hlB12.4H4VL.2 DVVMTQS PAFLSVT PGEKVTITCITSTDID VDMNWYQQKPDQAPKLLIKQGNTLRPGVPS RFSGSGSGTDFTFTISSLEAEDAATYYCLQ SDNLPLTFGQGTKLEIK 39 hlB12.4H4VL.2a DTVVTQSPAFLSVTPGEKVTITCITSTDID VDMNWYQQKPDQPPKLLISQGNTLRPGVPS RFSSSGSGTDFTFTISSLEAEDAATYYCLQ SDNLPLTFGQGTKLEIK 40 hlB12.4H4VL.2b ETTVTQSPAFLSVTPGEKVTITCITSTDID VDMNWYQQKPDQPPKLLISQGNTLRPGVPS RFSSSGSGTDFTFTISSLEAEDAATYYCLQ SDNLPLTFGQGTKLEIK 實例2.2.3 :構築人類化抗體可使用該等序列來使用標準DNA合成或擴增技術合成核酸且使用標準重組DNA技術將所需抗體片段組裝至表現載體中，以在細胞中表現。舉例而言，自胺基酸序列測定核酸密碼子，且藉由 Blue Heron Biotechnology, Inc. (www.blueheronbio.com) Bothell, WA USA合成寡核普酸 -126- 151544.doc 201124427 DNA。將寡核苷酸組裝至300-2,000個鹼基對之雙股DNA片段中，選殖至質體載體中且進行序列檢驗。使用酶促方法組裝所選殖之片段以得到完整基因且次選殖至表現載體中 ° (參見 7,306,914 ; 7,297,541 ； 7,279,159 ； 7,150,969 ；

20080115243 ；20080102475 ； 20080081379 ； 20080075690 ； 20080063780 ；20080050506 ； 20080038777 ； 20080022422 ； 20070289033 ；20070287170 ； 20070254338 ； 20070243194 ； 20070225227 ；20070207171 ； 20070150976 ； 20070135620 ； 20070128190 ；20070104722 ； 20070092484 ； 20070037196 ； 20070028321 ；20060172404 ； 20060162026 ； 20060153791 ； 20030215458 ;及20030157643) 〇舉例而言，可藉由電子雜交將上述構築之人類化抗體插入pHybE載體中之多個選殖位點中（美國專利公開案第US 2009/0239259號）。分離細菌群落且萃取質體DNA ;對整個 cDNA插入物進行測序。將對應於每一抗體之正確人類化重鏈及輕鏈共轉染至HEK 293-6E細胞中以短暫產生全長人類化抗人類IL-Ιβ抗體。將含有重鏈移植cDNA及輕鏈移植 cDNA之pHybE載體共轉染至HEK 293-6E細胞中。藉由蛋白A瓊脂糖凝膠層析純化含有重組嵌合抗體之細胞上清液，且藉由添加酸緩衝液溶離結合之抗體。中和抗體且透析於PBS中。人類化抗體描述於表7中。基於VH及VL洗牌之人類化1B12抗體之不同組合列於表 7中。 5 151544.doc -127- 201124427 表7:基於VH及VL·洗牌之人類化1B12抗體之組合 1B12 VL hlB12 VL.lz hlB12 VL.l hlB12 VL.l a hlB12 VL.lb hlB12 VL.2 hlB12 VL.2a hlB12 VL.2b 1B12VH hlB12VH.lz hlB12VH.l hlB12VH.la 1 2 3 4 hlB12VH.2z hlB12VH.2 hlB12VH.2a 5 6 7 8 表8提供選殖至IgG表現載體中以進行功能表征之鼠類單株抗體1B12之人類化可變區。CDR以粗體展示。表8:鼠類單株抗體1B12之人類化可變區

SEQ ID No. 蛋白質區序列 123456789012345678901234567890 30 1B12.1 VH EVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGFSLS DYGVSWIRQPPGKGLEWLGLIWGGGDTYYN SPLKSRLTISKDNSKSQVSLKLSSVTAADT AVYYCAKQRTLWGYDLYOmYWGQGTLVTV SS 41 1B12.1 VH CDR HI SEQ ID NO:26之殘基 31-35 DYGVS 42 1B12.1 VH CDRH2 SEQ ID NO:26之殘基 50-65 LIWGGGDTYYNSPLKS 43 1B12.1 VH CDRH3 SEQ ID NO:26之殘基 98-111 QRTLWGYDLYGMDY 36 1B12.1 VL DTQVTQSPSSLSASVGDRVTITCITSTDID VDMNWYQQKPGKPPKLLISQGNTLRPGVPS RFSSSGSGTDFTFTISSLQPEDFATYYCLQ SDNLPLTFGQGTKLEIK 44 1B12.1 VL CDR LI SEQ ID NO:27之殘基 24-34 ITSTDIDVDMN 45 1B12.1 VL CDRL2 SEQ ID NO:27之殘基 50-56 Q6NTLRP • 128- 151544.doc 201124427

SEQ ID No. 蛋白質區序列 123456789012345678901234567890 46 1B12.1 VL CDRL3 SEQ ID NO:27之殘基 89-97 LQSDNLPLT 30 1B12.2 VH EVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGFSLS DYGVSWIRQPPGKGLEWLGLIWGGGDTYYN SPLKSRLTISKDNSKSQVSLKLSSVTAADT AVYYCAKQRTLWGYDLYGMDYWGQGTLVTV SS 41 1B12.2 VH CDRH1 SEQ ID NO:26之殘基 31-35 DY6VS 42 1B12.2 VH CDR H2 SEQ ID NO:26之殘基 50-65 LIWGGGDTYYNSPLKS 43 1B12.2 VH CDRH3 SEQ ID NO:26之殘基98-111 QRTLWGYDLYGMDY 37 1B12.2 VL ETTVTQSPSSLSASVGDRVTITCITSTDID VDMNWYQQKPGKPPKLLISQGNTLRPGVPS RFSSSGSGTDFTFTISSLQPEDFATYYCLQ SDNLPLTFGQGTKLEIK 44 1B12.2 VL CDR LI SEQ ID NO:27之殘基 24-34 ITSTDIDVDMN 45 1B12.2 VL CDRL2 SEQ ID NO:27之殘基 50-56 QGNTLRP 46 1B12.2 VL CDRL3 SEQ ID NO:27之殘基 89-97 LQSDNLPLT 30 1B12.3 VH EVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGFSLS DYGVSWIRQPPGKGLEWLGLIWGGGDTYYN SPLKSRLTISKDNSKSQVSLKLSSVTAADT AVYYCAKQRTLWGYDLYOIDYWGQGTLVTV SS 41 1B12.3 VH CDR HI SEQ ID NO:26之殘基 31-35 DY6VS 42 1B12.3 VH CDRH2 SEQ ID NO:26之殘基 50-65 LIWGGGDTYYNSPLKS 43 1B12.3 VH CDRH3 SEQ ID NO:26之殘基98-111 QRTLWGYDLYOIDY -129- 151544.doc 201124427

SEQ ID No. 蛋白質區序列 123456789012345678901234567890 39 1B12.3 VL DTVVTQSPAFLSVTPGEKVTITCITSTDID VDMNWYQQKPDQPPKLLISQGNTLRPGVPS RFSSSGSGTDFTFTISSLEAEDAATYYCLQ SDNLPLTFGQGT KLEIK 44 1B12.3 VL CDRL1 SEQ ID NO:27之殘基 24-34 ITSTDIDVDMN 45 1B12.3 VL CDRL2 SEQ ID NO:27之殘基 50-56 Q6NTLRP 46 1B12.3 VL CDRL3 SEQ ID NO:27之殘基 89-97 LQSDNLPLT 30 1B12.4 VH EVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGFSLS DYGVSWIRQPPGKGLEWLGLIWGGGDTYYN SPLKSRLTISKDNSKSQVSLKLSSVTAADT AVYYCAKQRTLWGYDLYOIDYWGQGTLVTV SS 41 1B12.4 VH CDRH1 SEQ ID NO:26之殘基 31-35 DYGVS 42 1B12.4 VH CDRH2 SEQ ID NO:26之殘基 50-65 LIHGGGDTYYNSPLKS 43 1B12.4 VH CDRH3 SEQ ID NO:26之殘基98-111 QRTLWGYDLYOdDY 40 1B12.4 VL ETTVTQSPAFLSVTPGEKVTITCITSTDID VDMNWYQQKPDQPPKLLISQGNTLRPGVPS RFSSSGSGTDFTFTISSLEAEDAATYYCLQ SDNLPLTFGQGTKLEIK 44 1B12.4 VL CDRL1 SEQ ID NO:27之殘基 24-34 ITSTDIDVDMN 45 1B12.4 VL CDRL2 SEQ ID NO:27之殘基 50-56 QGNTLRP 46 1B12.4 VL CDR L3 SEQ ID NO:27之殘基 89-97 LQSDNLPLT 33 1B12.5 VH EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFTLS DYGVSWIRQAPGKGLEWLGLIWGGGDTYYN SPLKSRLTISKDNSKSTVYLQMNSLRAEDT AVYYCAKQRTLWGYDLYOIDYWGQGTLVTV SS 151544.doc -130- 201124427

SEQ ID No. 蛋白質區序列 123456789012345678901234567890 41 1B12.5 VH CDRH1 SEQ ID NO:26之殘基 31-35 DYGVS 42 1B12.5 VH CDRH2 SEQ ID NO:26之殘基 50-65 LIWGGGDTYYNSPLKS 43 1B12.5 VH CDRH3 SEQ ID NO:26之殘基98-111 QRTLWGYDLYGMDY 36 1B12.5 VL DTQVTQSPSSLSASVGDRVTITCITSTDID VDMNWYQQKPGKPPKLLISQGNTLRPGVPS RFSSSGSGTDFTFTISSLQPEDFATYYCLQ SDNLPLTFGQGTKLEIK 44 1B12.5 VL CDRL1 SEQ ID NO:27之殘基 24-34 ITSTDIDVDMN 45 1B12.5 VL CDRL2 SEQ ID NO:27之殘基 50-56 QGNTLRP 46 1B12.5 VL CDRL3 SEQ ID NO:27之殘基 89-97 LQSDNLPLT 33 1B12.6 VH EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFTLS DYGVSWIRQAPGKGLEWLGLIWGGGDTYYN SPLKSRLTISKDNSKSTVYLQMNSLRAEDT AVYYCAKQRTLWGYDLYGMDYWGQGTLVTV SS 41 1B12.6 VH CDRH1 SEQ ID NO:26之殘基 31-35 DYGVS 42 1B12.6 VH CDRH2 SEQ ID NO:26之殘基 50-65 LIWGGGDTYYNSPLKS 43 1B12.6 VH CDRH3 SEQ ID NO:26之殘基 98-111 QRTLWGYDLYGMDY 37 1B12.6 VL ETTVTQSPSSLSASVGDRVTITCITSTDID VDMNWYQQKPGKPPKLLISQGNTLRPGVPS RFSSSGSGTDFTFTISSLQPEDFATYYCLQ SDNLPLTFGQGTKLEIK 44 1B12.6 VL CDRL1 SEQ ID NO:27之殘基 24-34 ITSTDIDVDMN -131 - 151544.doc 5 201124427

SEQ ID No. 蛋白質區序列 123456789012345678901234567890 45 1B12.6 VL CDRL2 SEQ ID NO:27之殘基 50-56 QGNTLRP 46 1B12.6 VL CDRL3 SEQ ID NO:27之殘基 89-97 LQSDNLPLT 33 1B12.7 VH EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFTLS DYGVSWIRQAPGKGLEWLGLIWGGGDTYYN SPLKSRLTISKDNSKSTVYLQMNSLRAEDT AVYYCAKQRTLWGYDLYGMDYWGQGTLVTV SS 41 1B12.7 VH CDRH1 SEQ ID NO:26之殘基 31-35 DYGVS 42 1B12.7 VH CDRH2 SEQ ID NO:26之殘基 50-65 LIWGGGDTYYNSPLKS 43 1B12.7 VH CDRH3 SEQ ID NO:26之殘基98-111 QRTLWGYDLYGMDY 39 1B12.7 VL DTVVTQSPAFLSVTPGEKVTITCITSTDID VDMNWYQQKPDQPPKLLISQGNTLRPGVPS RFSSSGSGTDFTFTISSLEAEDAATYYCLQ SDNLPLT FGQGT KLEIK 44 1B12.7 VL CDRL1 SEQ ID NO:27之殘基 24-34 ITSTDIDVDMN 45 1B12.7 VL CDRL2 SEQ ID NO:27之殘基 50-56 QGNTLRP 46 1B12.7 VL CDRL3 SEQ ID NO:27之殘基 89-97 LQSDNLPLT 33 1B12.8 VH EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFTLS DYGVSWIRQAPGKGLEWLGLIWGGGDTYYN SPLKSRLTISKDNSKSTVYLQMNSLRAEDT AVYYCAKQRTLWGYDLYGMDYWGQGTLVTV SS 41 1B12.8 VH CDRH1 SEQ ID NO:26之殘基 31-35 DYGVS 42 1B12.8 VH CDRH2 SEQ ID NO:26之殘基 50-65 LIWGGGDTYYNSPLKS -132- 151544.doc 201124427

SEQ ID No. 蛋白質區序列 123456789012345678901234567890 43 1B12.8 VH CDRH3 SEQ ID NO:26之殘基98-111 QRTLWGYDLYGMDY 40 1B12.8 VL ETTVTQSPAFLSVTPGEKVTITCITSTDID VDMNWYQQKPDQPPKLLISQGNTLRPGVPS RFSSSGSGTDFTFTISSLEAEDAATYYCLQ SDNLPLTFGQGTKLEIK 44 1B12.8 VL CDRL1 SEQID NO:27之殘基 24-34 ITSTDIDVDMN 45 1B12.8 VL CDRL2 SEQID NO:27之殘基50-56 QGNTLRP 46 1B12.8 VL CDRL3 SEQID NO:27之殘基 89-97 LQSDNLPLT 實例3:人類IL-Ιβ抗體之功能表征實例3.1 : IL-ΐρ酶聯免疫吸附檢定方案為判定抗IL-Ιβ mAb是否結合人類IL-Ιβ，在4°C下將 ELISA培養板（Nunc，MaxiSorp，Rochester, NY)與用 2 pg/ml 之Pierce塗佈緩衝液（Jackson Immunoresearch, West Grove， PA)稀釋之抗人類Fc抗體一起培育隔夜。用洗滌緩衝液（含 0.05% Tween 20之PBS)洗滌培養板五次，且在25°C下每孔用 200 μΐ superblock 阻斷緩衝液（Thermo scientific， #3 75 15)阻斷1小時。藉由輕叩培養板移除阻斷緩衝液，且將含2 pg/ml 各抗體之含有 10% superblock、0·5°/〇 tween-20 的PBS以每孔100 μΐ添加至各孔中並在25°C下培育1小時。用lxPBST洗滌各孔五次，且以1:6連續稀釋液滴定1 pg/ml 生物素標記抗原（對於含數微克至數皮克之範圍的含10% superblock、0.05% tween 20的PBS)。接著將各抗原稀釋液 151544.doc • 133- 201124427 添加至培養板中且在25°C下培育1小時。用lxPBST洗滌各孔五次且在25°C下與polyHRP抗生蛋白鏈菌素（KPL #474 -3000，Gaithersburg, MD) — 起培育 1 小時。用 1 xPBST洗蘇各孔五次，且每孔添加 100 μΐ ULTRA-TMB ELISA(Pierce, Rockford, IL)。顯色後，用1 N HCL終止反應且量測450 nM下之吸光度。結果展示於表9中，且數值指示人類抗IL-1β抗體與人類IL-Ιβ結合。表9 :藉由ELISA測得之人類化抗體與人類IL-ip之結合抗IL-Ιβ mAb 在hIL-lp ELISA 中之EC50(pM) 1B12.1 39.9 1B12.2 37.6 1B12.3 43.8 1B12.4 37.8 1B12.5 48.8 1B12.6 45.9 1B12.7 58.2 1B12.8 47.9 實例3·2:人類化IL-Ιβ抗體之中和效力為檢查本發明之抗人類IL-Ιβ抗體的功能活性，在量測抗體抑制IL-Ιβ活性之能力的MRC-5檢定中使用該等抗體。MRC-5細胞株為以劑量依賴性方式應答人類IL-Ιβ產生IL-8之人類肺纖維母細胞株》MRC-5細胞最初獲自ATCC 且在10% FBS完全MEM中繼代培養並在37°C、5% C02恆溫箱中生長。為測定抗體針對IL-Ιβ之中和效力，將抗體（50 μΐ)添加至96孔板（最終濃度範圍為lxl 〇·7至1x1 〇_15 M)中且在37°C、5% C02下與50 μΐ人類IL-Ιβ(最終濃度為50 pg/mL)—起預培育1小時。接著將抗原抗體複合物（1〇〇 pL) 添加至MRC-5細胞（以每孔100 μΐ細胞以lE5/ml之濃度預先 151544.doc -134· 201124427 塗佈24小時）中。在37°C、5% C02恆溫箱中培育檢定培養板隔夜。藉由抑制IL-8產生之能力來測定抗體效力。藉由基於化學發光之檢定量測人類IL-8產生。表10概述針對人類IL-Ιβ之抗體效力。表10:人類化IL-ip抗體之中和效力抗IL-Ιβ mAb 針對人類IL-lp之效力IC50(pM) 1B12.1 151 1B12.2 146 1B12.3 303 1B12.4 597 1B12.5 319 1B12.6 378 1B12.7 581 1B12.8 484 實例3.3 :藉由表面電漿子共振量測IL-Ιβ抗體之親和力 BIACORETM檢定（Biacore，Inc., Piscataway, NJ)測定抗體之親和力並進行締合、解離速率常數之動力學量測。在 25°C下，藉由基於表面電漿子共振之量測，使用Biacore™ 3000儀器（Biacore™ AB，Uppsala, Sweden)，使用操作1^8-EP(10 mM HEPES [pH 7.4]、150 mM NaC卜 3 mM EDTA及 0.005%界面活性劑P20)測定抗體與重組純化人類IL-Ιβ之結合。除非另有規定，否則所有化學物質均獲自Biacore® AB(Uppsala, Sweden)。根據製造商之說明書及程序，在25 pg/ml下，使用標準胺偶合套組將用10 mM乙酸鈉（pH 4.5) 稀釋之約5,000 RU之山羊抗小鼠IgG(FcY)片段特異性多株抗體（Pierce Biotechnology Inc, Rockford，Illinois)直接固定於CM5研究級生物感測器晶片上。用乙醇胺阻斷生物感測器表面上未反應之部分。使用流槽2及4中之經修飾之羧 151544.doc -135- 201124427 甲基葡聚糖表面作為反應表面。使用流槽丨及3中無山羊抗小鼠IgG之未經修飾之羧甲基葡聚糖作為參考表面。對於動力學分析，使用Biaevaluation 4 〇丨軟體，將衍生自1;1 朗繆耳結合模型（Langmuir binding m〇del)之速率等式同時

擬合所有八個注射液之締合相及解離相（使用整體擬合分析）。用HEPES緩衝生理食鹽水稀釋純化之抗體以捕捉於山羊抗小鼠IgG特異性反應表面上。以5微升/分鐘之流速將待捕捉作為配位體之小鼠抗體（25 pg/ml)注射於反應基質上。在25微升/分鐘之連續流速下測定締合及解離速率常數kon(單位為Μ、·1)及koff(單位為s-1}。藉由在1〇_2〇〇 nM 範圍内之丨0個不同抗原濃度下進行動力學結合量測來得到速率常數。接著根據下式由動力學速率常數計算抗體與標靶抗原之間的反應的平衡解離常數（單位為: KD=koff/kon。隨時間變化記錄結合，且計算動力學速率常數。在此檢定中，可測得締合速率快至⑺6… 率慢。表Μ示人類抗㈣抗體之親測。表11 :藉由Biacore測得之人類化抗體對人類IL IP之親和力

本發明以全文引用的方式合併分子生物學領域中熟知二 151544.doc • 136· 201124427 技術。此等技術包括（但不限於）以下公開案中所述之技術：

Ausubel 等人編，Short Protocols In Molecular Biology (1999年第 4版）John Wiley & Sons, NY (ISBN 0-471-32938-X)。

Lu及 Weiner編，Cloning and Expression Vectors for Gene

Function Analysis (2001) BioTechniques Press, Westborough, MA,第 298 頁（ISBN 1-881299-21-X)。

Kontermann 及 Diibel 編，Antibody Engineering (2001) Springer-Verlag, NY,第 790 頁（ISBN 3-540-41354-5)。

Old 及 Primrose，Principles of Gene Manipulation: An Introduction To Genetic Engineering (1985 年第 3 版）

Blackwell Scientific Publications, Boston, MA. Studies in Microbiology; V.2:第 409 頁（ISBN 0-632-01318-4)。

Sambrook等人，Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2d ed. (Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor，NY)，第 1-3卷（ISBN 0-87969-309-6)。

Winnacker, From Genes To Clones: Introduction To Gene Technology (1987) VCH 出版社，NY (Horst Ibelgaufts 翻譯），第 634頁（ISBN 0-89573-614-4)。以引用的方式併入出於任何目的，本申請案通篇可能引用之所有引用參考文獻（包括參考文獻、專利、專利申請案及網站）的内容以全文引用的方式明確地併入本文中，其中所引用之參考文 5 151544.doc -137- 201124427 獻亦如此。除非另有指示，否則本發明之實踐將採技術中熟知之免疫學、分子生物學及細胞生物學：術。枝等效物在不脫離本發明之精神或本質特徵的情況下，本發明可以其他料形式實施。因此，上述實施例在各個方面均被視為說明而非限制本文所述之本發明。因&，本發明之範疇由隨附申請專利範圍而非由以上描述來指示且因此，本文中意欲涵蓋屬於巾請專利範圍之等效物之含義及範圍内的所有變化。 151544.doc 138-

Claims

201124427 七、申請專利範圍： 1. 一種能夠結合IL-Ιβ之抗體或其抗原結合部分，其中該能夠結合IL-1 β之抗體或其抗原結合部分包含選自由以下組成之群的胺基酸序列·· SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 29、SEQ ID NO: 30、SEQ ID NO: 31、SEQ ID NO: 32、 SEQ ID NO: 33、SEQ ID NO: 34、SEQ ID NO: 35、SEQ ID NO: 36、SEQ ID NO: 37、SEQ ID NO: 38、SEQ ID NO: 39及 SEQ ID NO: 40。 2. —種能夠結合IL-Ιβ之抗體或其抗原結合部分，其中該抗體或其抗原結合部分包含至少一個包含選自由以下組成之群的胺基酸序列的CDR : SEQ ID NO:26之殘基31-35(CDR-H1) ; SEQ ID NO:26 之殘基 50-65(CDR-H2); SEQ ID NO:26 之殘基 98-lll(CDR-H3) ; SEQ ID NO:27 之殘基 24-34(CDR-Ll); SEQ ID NO:27 之殘基 50_56(CDR_ L2);及 SEQ ID NO:27之殘基 89-97(CDR-L3)。 3. 如請求項2之結合蛋白，其中該結合蛋白包含至少三個 CDR。 4. 如請求項3之結合蛋白，其中該至少三個CDR選自可變域CDR組，其中該可變域CDR組選自由以下組成之群： VHCDR 組，包含 SEQIDNO:26 之殘基 31-35(CDR-H1)、 SEQ ID NO:26之殘基 50-65(CDR-H2)及 SEQ ID NO:26之殘基 98-lll(CDR-H3);及 VL CDR 組，包含 SEQ ID NO:27 之殘基 24-34(CDR-Ll)、SEQ ID NO:27 之殘基 50-56(CDR-L2)及 SEQ ID NO:27 之殘基 89-97(CDR-L3)。 151544.doc 201124427 5. 如請求項4之結合蛋白，其包含至少兩個可變域CDR 組。 6. 如請求項5之結合蛋白，其中該至少兩個可變域CDR組為 VH CDR 組，包含 SEQ ID NO:26 之殘基31-35(0〇11-Hl)、SEQ ID NO:26 之殘基 50-65(CDR-H2)及 SEQ ID NO:26 之殘基 98-lll(CDR-H3);及 VL CDR 組，包含 SEQ ID NO:27 之殘基 24-34(CDR-Ll)、SEQ ID NO:27 之殘基 50-5 6(CDR-L2)及 SEQ ID NO:27之殘基 89-97(CDR-L3)。 7. 如請求項6之結合蛋白，其進一步包含人類受體架構。 8. 如請求項7之結合蛋白，其中該人類受體架構包含選自由SEQ ID NO:10-17及SEQ ID NO:18-25組成之群的胺基酸序列。 9. 如請求項7或8之結合蛋白，其中該人類受體架構包含至少一個架構區胺基酸取代，其中該架構之胺基酸序列與該人類受體架構之序列至少65% —致且包含至少70個與該人類受體架構一致之胺基酸殘基。 10. 如請求項8之結合蛋白，其中該人類受體架構在關鍵殘基處包含至少一個架構區胺基酸取代，其中該關鍵殘基選自由以下組成之群：鄰接CDR之殘基 '糖基化位點殘基、稀有殘基、能夠與人類IL-Ιβ相互作用之殘基、能夠與CDR相互作用之殘基、典型殘基、重鏈可變區與輕鏈可變區之間的接觸殘基、維尼爾區（Vernier zone)内之殘基、及Chothia定義之可變重鏈CDR1與Kabat定義之第一重鏈架構之間重疊區中之殘基。 151544.doc 201124427 11. 如請求項10之結合蛋白’其中該關鍵殘基選自由以下組成之群：1Η、12Η、24Η、27Η、29Η、37Η、48Η、 49Η、67Η、71Η、73Η、76Η、78Η、94Η、1L、2L、 3L、4L、43L、49L、64L及 83L ° 12. 如請求項11之結合蛋白，其中該結合蛋白包含共同人類受體。 13. 如請求項1之結合蛋白，其包含：含選自由SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 29、SEQ ID NO: 30、SEQ ID NO: 31、 SEQ ID NO: 32及SEQ ID NO: 33組成之群的胺基酸序列的可變重鏈多肽；及含選自由SEQ ID NO: 34、SEQ ID NO: 35、SEQ ID NO: 36、SEQ ID NO: 37、SEQ ID NO: 38、SEQ ID NO: 39及SEQ ID NO: 40組成之群的胺基酸序列的可變輕鏈多肽。 14. 如請求項13之結合蛋白，其中該結合蛋白包含可變重鏈多肽及可變輕鏈多肽’該等多肽包含選自由以下組成之群的各別胺基酸序列：SEQ ID NO: 30及SEQ ID NO: 36 ; SEQ ID NO: 30及 SE(J ID NO: 37, SEQ ID NO: 30及 SEQ ID NO: 39 ; SEQ ID NO: 30及 SEQ ID NO: 40 ; SEQ ID NO: 33 及 SEQ ID NO: 36 ;以及 SEQ ID NO: 33 及 SEQ ID NO: 37、SEQ ID NO: 33及 SEQ ID NO: 39、SEQ ID NO: 33及 SEQ ID NO: 40。 15. 如請求項1之結合蛋白，其中該結合蛋白選自由以下組成之群：免疫球蛋白分子、二硫基連接之Fv、單株抗體、scFv、嵌合抗體、單域抗體、CDR移植抗體、微型 % 151544.doc 201124427 雙功能抗體 '人類化抗體、多特異性抗體、Fab、雙重特異性抗體、DVD-Ig蛋白、Fab'、雙特異性抗體、 F(ab，)2及 Fv。 16.如請求項1之結合蛋白，其中該結合蛋白包含選自由以下組成之群的免疫球蛋白重鏈位定域：人類IgM值定域、人類IgG4恆定域、人類IgGl恆定域、人類IgE怪定域、人類IgG2恆定域、人類IgG3恆定域及人類IgA恆定域0 17.如凊求項1之結合蛋白，其進一步包含具有選自由sEq ID NO: 2及SEQ ID NO: 3組成之群的胺基酸序列之重鏈恆定區。 18.如請求項1之結合蛋白，其進一步包含具有選自由SEQ ID NO: 4及SEQ ID NO: 5組成之群的胺基酸序列之輕鍵恆定區。 19. 如請求項丨之結合蛋白，其中該結合蛋白能夠調節人類 IL-Ιβ之生物功能。 20. 如請求項丨之結合蛋白，其中該結合蛋白能夠中和人類 IL-Ιβ 〇如明求項1之結合蛋白，其中如藉由表面電漿子共振所置測，該結合蛋白對該標靶的締合速率常數（Kon)係選自以下組成之群：至少約1〇2 ;至少約ι〇3 μ·、1 ;至少約1〇4 M·1，；至少約105 ；及至少約ι〇6 Μ_γι。 22·:請求項以結合蛋白’其中如藉由表面電聚子共振所量測，該結合蛋白對該標靶的解離速率常數（K〇ff)係選 151544.doc 201124427 、了、且成之群.至多約10-3 s·1 ;至多約i〇-4 s·1 ;至多約ι〇· s-1 ;及至多約1〇_6 j，。 23. 24. 25. 26. 27. 28, 如請求項1之結合蛋白’其中該結合蛋白對繼的解離常f(KD)係選自以下組成之群：至多約1G·7 至多勺M ’至夕約10 9 M ;至多約1〇-丨° Μ ;至多約l〇.n t至多約Wm;及至多1〇·13μ。如凊求項23之結合蛋白，其中該結合蛋白對的解離常數(KD)係選自以下組成之群：約[η，1〇 μ ;約 1〇 Μ，約 i·61〆10-10 Μ ;約 1·86χ10·10 Μ ;約 1〇 Μ，約 2·〇6χ1〇_10 μ ;約 2.3xl(r10 Μ ;及約 2.84xl〇-】〇 Μ。如π求項1之結合蛋白，其中該結合蛋白進一步包含選自由免疫黏附分子、顯影劑、治療劑及細胞毒性劑組成之群的藥劑。如凊求項25之結合蛋白，其中該藥劑為選自由以下組成之群的顯影劑：放射性標記、酶、螢光標記、發光標己生物發光標記、磁性標記及生物素。如請求項25之結合蛋白’其中該顯影劑為選自由以下組成之群的放射性標記：3Η、14C、35S、90Υ、99Tc、 Ulln、1251、1311、177Lu、I66H0及 153Sm。如請求項25之結合蛋白，其中該藥劑為選自由以下組成之群的治療劑或細胞毒性劑：抗代謝物、烷基化劑、抗生素、生長因子、細胞激素、抗血管生成劑、抗有絲分裂劑、蒽環黴素（anthracycline)、毒素及細胞凋亡劑。 151544.doc 201124427 29. 如請求項i之結合蛋白，化模式。 30. 如凊求項1之結合蛋白，白0 其中該結合蛋白具有人類糖基其中該結合蛋白為結晶結合蛋 31. 如請求項3 0之結合蛋白， _ /、中έ亥結晶結合蛋白為無載劑樂物控制釋放結晶結合蛋白。 3 2.如請求項3 1之結合蛋白，期大於可溶性對應物。 3 3.如請求項3 1之結合蛋白性0 其中該結合蛋白之活體内半衰 ’其中該結合蛋白保留生物活 34. 種刀離之核酸，其編碼如請求項i之結合蛋白胺基酸序列。 35. 種載體，其包含編碼如請求項1之結合蛋白胺基酸序列的分離之核酸。 36·如請求項35之載體’其中該載體選自由pcDNA、PTT、 ρΤΤ3、pEFBOS、pBV、pJV、pHybE 及 pBJ 組成之群。 37. —種宿主細胞’其包含如請求項35之載體。 38. 如請求項37之宿主細胞，其中該宿主細胞為原核細胞。 39. 如請求項38之宿主細胞’其中該宿主細胞為大腸桿菌 (Escherichia coli)。 40. 如請求項37之宿主細胞，其中該宿主細胞為真核細胞。 41 ·如請求項40之宿主細胞’其中該真核細胞選自由原生生物細胞、動物細胞、植物細胞及真菌細胞組成之群。 42.如請求項40之宿主細胞’其中該真核細胞為選自由哺乳 151544.doc 201124427 動物、、，田胞、禽類細胞及昆蟲細胞組成之群的動物細胞。 43. 如仴求項40之佰主細胞，其中該宿主細胞為CH〇或c〇s 細胞。 44. 如明求項41之宿主細胞，其中該宿主細胞為hek 293 6e — 細胞。 . 45.如咕求項40之宿主細胞，其中該宿主細胞為酵母細胞。 46. 如請求項45之宿主細胞，其中該酵母細胞為釀酒酵母 (Saccharomyces cerevisiae) ° 47. 如請求項40之宿主細胞，其中該宿主細胞為昆蟲sf9細胞。 48. —種產生能夠結合比-…之蛋白質的方法，該方法包含在足以產生能夠結合IL-ΐβ之結合蛋白的條件下，在培養基中培養如請求項37所述之宿主細胞的步驟。 49. 一種蛋白質’其係根據如請求項48之方法產生。 50. —種釋放結合蛋白之組合物，該組合物包含： (a) 調配物’其中該調配物包含如請求項3〇之結晶結合蛋白及成分；及 ‘ (b) 至少一種聚合載劑。 • 5 1.如請求項50之組合物，其中該聚合載劑為選自由以下組，成之群的聚合物··聚（丙烯酸）、聚（氰基丙烯酸酯）、聚 (胺基酸）、聚（酸酐）、聚（縮肽）、聚（酯）、聚（乳酸）、聚 (乳酸-共-乙醇酸）或PLGA、聚（b-羥基丁酸酯）、聚（己内酯）、聚（二氧雜環己;聚（乙二醇）、聚（（羥基丙基）甲基丙烯醯胺）、聚[(有機）偶磷氮]、聚（原酸酯）、聚（乙烯 151544.doc 201124427 醇）、聚（乙烯基吡咯啶酮）、順丁烯二酸酐-烷基乙稀基醚/、ΛΚ物、氧化異丙稀多元醇類（plUr〇nic p〇ly〇l) '白蛋白、海藻酸鹽、纖維素及纖維素衍生物、膠原蛋白、血纖蛋白、明膠、玻展酸、寡醣、甘胺基聚糖 (glycaminoglycan)及硫酸化多醣以及其摻合物及共聚物。 52. 53. 54. 55. 56. 57. 58. 如請求項50之組合物，其中該成分選自由白蛋白、糖、海藻糖、乳糖醇 '明膠、羥基丙基_b_環糊精、曱氧基聚乙二醇及聚乙二醇組成之群。一種治療哺乳動物之方法，其包括向該哺乳動物投與有效量之如請求項5 〇之組合物的步驟。一種醫藥組合物，其包含如請求項丨之結合蛋白及醫藥子上可接受之載劑。如凊求項54之醫藥組合物，其中該醫藥學上可接受之載劑的功能為作為適用於增加該結合蛋白之吸收或分散的佐劑。如凊求項55之醫藥組合物’其中該佐劑為玻尿酸酶。 :請求項54之醫藥組合物’其進一步包含至少一種用於治療因IL-1 β活性而受害之病症的其他藥劑。如靖求項57之醫藥組合物，其中該其他藥劑選自由以下組成之群：治療劑；顯影劑；細胞毒性劑；血管生成抑制劑；激酶抑制劑；協同刺激分子阻斷劑；黏附分子阻斷劑；抗細胞激素抗體或其功能片段；胺甲喋呤 (meth0trexate);環孢素（cyel〇sp〇rin);雷帕黴 ^ 151544.doc 201124427 (fapamyein) ; FK506 ;可福測择 4 i 劑m忘遂. 偵別標5己或報導體；TNF拮抗齊！ ’抗風濕病樂，肌由羞彡邮益· 〜 m弛樂，麻醉藥；非類固醇消炎樂（NSAID),止痛劑；麻醉劑；項靜W ’局部麻醉劑；神經肌肉阻斷劑；抗微生物 w杌午皮癖劑；皮質類固酵，同化類固醇；紅血球生成音. &生成素，免疫法；免疫球蛋白；免疫抑制劑；生長激素；激素替代藥物；放射性藥物；抗抑鬱劑"充精神病藥；興奮劑；哮喘藥物；_ 效劑，吸入性類固醇；口服類固冑；腎上腺素或類似物，細胞激素；及細胞激素拮抗劑。 59. 60. 61. 62. 一種降低人類IL-1P活性之方法’其包含使人類il__ 如請求項1之結合蛋白接觸，以便降低人_-肺性。、一種降低羅患眺，活性而受害之病症的人類個體之人類IL-M活性的方法，其包含向該人類個體投與如請求項 1之釔合蛋白，以便降低該人類個體之人類江—ip活性。一種治療個體之因江_;^活性而受害之疾病或病症的方法°亥方法猎由向該個體投與如請求項1之結合蛋白，以達成該治療。如請求項61之方法，其中該病症選自由以下組成之群：類風濕性關節炎、骨關節炎、幼年型慢性關節炎、膿毒性關節炎、莱姆關節炎（Lyme arthritis)、牛皮癬性關節 k、反應性關節炎、脊椎關節病、全身性紅斑狼瘡、克羅恩氏病（Crohn's disease)、潰瘍性結腸炎、發炎性腸病、胰島素依賴性糖尿病、甲狀腺炎、哮喘、過敏性疾病、牛皮癖、皮炎、硬皮病、移植物抗宿主疾病、器官 S 151544.doc 201124427 移植排斥反應、與器官移植相關之急性或慢性免疫疾病、肉狀瘤病、動脈粥樣硬化、彌漫性血管内凝血、川崎氏病（Kawasaki’s disease)、格雷氏病（Grave's disease)、腎病症候群、慢性疲勞症候群、韋格納氏肉牙腫病（Wegener’s granulomatosis)、亨偌-絲奇恩賴紫癒 (Henoch-Schoenlein purpura)、腎顯微性血管炎、慢性活性肝炎、葡萄膜炎、敗血性休克、中毒性休克症候群、敗血症症候群、惡病質 '傳染性疾病、寄生蟲疾病、後天免疫缺乏症候群、急性橫貫性脊髓炎、亨廷頓氏舞蹈病（Huntington’s chorea)、帕金森氏病（Parkins〇n,s disease)、阿纽海默氏病（Alzheimer’s disease)、中風、原發性膽汁性肝硬化、溶血性貧血、惡性病 '心臟衰竭、心肌梗塞、阿狄森氏病（Addison's disease)、偶發性I型多腺體分泌不足症及II型多腺體分泌不足症、施密特症候群（Schmidt’s syndrome)、成人（急性）呼吸窘迫症候群、脫髮、斑形脫髮、血清陰性關節病、關節病、萊特爾氏病（Reiter’s disease)、牛皮癬性關節病、潰瘍性大腸炎關節病、腸病性滑膜炎、衣原體、耶氏桿菌（yersinia) 及沙門氏菌（salmonella)相關關節病、脊椎關節病、動脈粥樣化病/動脈硬化、異位性過敏、自體免疫大皰病、尋常天疱瘡、葉型天疱瘡、類天疱瘡、線性IgA疾病、自體免疫溶血性貧血、庫姆陽性溶血性貧血（Coombs positive haemolytic anaemia)、後天惡性貧血、幼年型惡性貧血、肌痛腦炎/皇家自由病（r〇yal free disease)、慢 151544.doc •10- 201124427 性皮膚黏膜;t珠®病、巨細胞性動脈炎、原發性硬化性肝炎、隱原性自體免疫肝炎、後天免疫缺乏病症候群、後天免疫缺乏相關疾病、B型肝炎、c型肝炎、一般變異性免疫缺乏症（一般變異性低丙種球蛋白血症卜擴張型〜肌病、女性不孕症、卵巢衰竭、卵巢早衰、纖維變性肺病、隱原性纖維化性肺泡炎、發炎後間質性肺病、間質性肺炎、結締組織病相關間質性肺病、混合性結締组織病相關肺病、全身性硬化症相關間質性肺病 '類風濕性關節炎相關間質性肺病、全身性紅斑狼瘡相關肺病:、皮肌炎/多發性肌炎相關肺病、休格連氏病（Sj0gren，s dlsease)相關肺病、僵直性脊椎炎相關肺病、血管炎擴散性肺病、含鐵血黃素沉著症相關肺病、藥物誘發之間質性肺病、纖維化、放射性纖維化、閉塞性細支氣管炎、 k性嗜伊紅血球性肺炎、淋巴細胞性浸潤性肺病、感染後間質性肺病、痛風性關節炎、自體免疫肝炎、丨型自體免疫肝炎（典型自體免疫或狼瘡樣肝炎）、2型自體免疫肝炎（抗LKM抗體肝炎）、自體免疫介導之低血糖、B型抗胰島素症伴以黑棘皮病、甲狀旁腺機能減退、與器官移植相關之急性免疫疾病、與器官移植相關之慢性免疫疾病、骨關節炎、原發性硬化性膽管炎、1型牛皮癖、2 型牛皮癣、特發性白血球減少症、自體免疫嗜中性球減少症、腎病NOS、絲球體腎炎、腎顯微性血管炎、萊姆病（Lyme disease)、盤狀紅斑狼瘡、特發性男性不育症或 NOS、精液自體免疫、多發性硬化症（所有亞型）、交感 151544.doc 201124427 性眼炎、因結締組織疾病繼發之肺循環血壓過高 (pulmonary hypertension secondary to connective tissue disease)、古巴士德氏症候群（G〇〇dpasture,s syndr〇me)、結節性多動脈炎之肺部病徵、急性風濕熱、類風濕性脊椎炎、斯蒂爾氏病（Still's disease)、全身性硬化症、休格連氏症候群（Sjiirgren's syndrome)、高安氏病 (Takayasu’s disease)/動脈炎、自體免疫血小板減少症、特發性血小板減少症、自體免疫甲狀腺病、曱狀腺功能亢進、曱狀腺腫自體免疫甲狀腺功能低下（橋本氏病 (Hashimoto's disease))、萎縮性自體免疫曱狀腺功能低下、原發性黏液水腫、晶狀體源性葡萄膜炎、原發性血管炎、白斑症、急性肝病、慢性肝病、酒精性肝硬變、酒精誘發之肝損傷、膽汁鬱積、特應性肝病、藥物誘發之肝炎、非酒精性脂肪變性肝炎、過敏及哮喘、B群鏈球菌（GBS)感染、精神病症（例如抑鬱症及精神分裂症）、 Th2型及Thl型介導之疾病、急性及慢性疼痛（不同形式之疼痛）及癌症（諸如肺癌、乳癌、胃癌、膀胱癌、結及癌、胰腺癌、卵巢癌、前列腺癌及直腸癌）及造血性惡七病（白血病及淋巴瘤）、無β脂蛋白血症、手足發紺、急士及慢性寄生或感染過程、急性白血病、急性淋巴母細月丨白血病（ALL)、急性骨髓白血病（AML)、急性或慢性細菌感染、急性胰臟炎、急性腎衰竭、腺癌、心房異位性心跳、AIDS癡呆複合症、酒精誘發之肝炎、過敏性結膜炎 '過敏性接觸性皮炎、過敏性鼻炎 '同種異體移植排 151544.doc 12 201124427 斥反應、α-l-抗胰蛋白酶缺乏症、肌萎縮性側索硬化、貧血、心絞痛' 前角細胞退化、抗CD3療法、抗磷脂症候群、抗受體過敏性反應、主動脈及周邊動脈瘤、主動脈剝離、動脈兩壓、動脈硬化、動靜脈瘺、共濟失調、心房纖維性顫動（持續或突發性）、心房撲動、房室傳導阻滯、Β細胞淋巴瘤 '骨移植排斥反應 '骨髓移植（ΒΜΤ) 排斥反應、束支傳導阻滯、伯基特淋巴瘤（Burkittis lymphoma)、燒傷、心律不整、心臟頓抑症候群、心臟腫瘤、心肌病、心肺分流術發炎反應、軟骨移植排斥反應、小腦皮質退化、小腦病症、紊亂性或多源性心房頻脈、化學療法相關之病症、慢性骨髓性白血病（CML)、慢性酒精中毋、慢性發炎病變' 慢性淋巴細胞白血病 (CLL)、慢性阻塞性肺病（C0PD)、慢性水楊酸鹽中毒、結腸直腸癌、充血性心臟衰竭、結膜炎、接觸性皮炎、肺心病、冠狀動脈病、唐傑二氏病（Creutzfeidt-Jakob disease)、培養陰性敗也症、囊腫性纖維化、細胞激素療法相關之病症、拳擊員癡呆、脫髓鞘疾病、出血性登革熱（dengue hemorrhagic fever)、皮炎、皮膚病狀、糖尿病（diabetes)、糖尿病（diabetes mellitus)、糖尿病性動脈硬化疾病、泛發性路易體疾病（diffuse Lewy body disease)、擴張充血型心肌病、基底神經節病症、中年唐氏症候群（Down’s syndrome in middle age)、由阻斷CNS 多巴胺（dopamine)受體之藥物所誘發之藥物誘發性運動病症、藥物過敏、濕疹、腦脊髓炎、心内膜炎、内分泌 5 151544.doc -13- 201124427 病、會厭炎、埃-巴二氏病毒感染（Epstein-Barr virus infection)、肢端紅痛症、錐體束外及小腦病症、家族性嗤jk淋巴組織細胞瘤病（familial hematophagocytic lymphohistiocytosis)、胎兒胸腺植入排斥反應、弗里德賴希氏共濟失調（Friedreich’s ataxia)、功能性周邊動脈病症、真菌敗血症、氣性壞疽、胃潰瘍、腎小球性腎炎、任何器官或組織之移植排斥反應、革蘭氏陰性敗血症（gram negative sepsis)、革蘭氏陽性敗血症（gram positive sepsis)、由細胞内有機體引起之肉芽腫、毛細胞白血病、哈洛弗登-史巴茲氏蒼白球色素退化症 (Hallervorden-Spatz disease)、橋本曱狀腺炎 (Hashimoto's thyroiditis)、花粉熱、心臟移植排斥反應、血色素沉著、血液透析、溶血性尿毒癥候群/溶血栓性血小板減少性紫癜、出血、A型肝炎、希氏束心律不整（His bundle arrhythmias)、HIV感染/HIV神經病、霍奇金氏病（Hodgkin's disease)、過動性運動障礙、過敏性反應、過敏性肺炎、高血壓' 運動功能減退之運動障礙、下視丘-腦下垂體-腎上腺軸分析、特發性阿狄森氏病、特發性肺纖維化、抗體介導之細胞毒性、虛弱、嬰兒脊髓性肌萎縮、主動脈發炎、A型流行性感冒、電離輻射曝路、虹膜睫狀體炎/葡萄膜炎/視神經炎、缺血後再灌注損傷、缺血性中風、幼年型類風濕性關節炎、幼年型脊髓性肌萎縮、卡波西氏肉瘤（Kaposi's sarcoma)、腎移植排斥反應、退伍軍人病（legi〇nella)、利什曼病 151544.doc 201124427 (leishmaniasis)、麻風、皮故資介髓系統病變 '脂肪水腫、肝移植排斥反應、淋巴水脎匕尺腫、癔疾、惡性淋巴瘤、惡性組織細胞增多病、惡性黑色素瘤、腦膜炎、腦膜炎球菌血症、代謝/特發性 '偏頭痛、粒線❹系制症、混合性結締組織病、單株丙種球蛋白病、多發性骨髓瘤、多發性系統退化（Mencel Dejerine Th〇mas shi Drager& chado J〇seph)、重症肌無力胞内禽結核分枝桿菌、結核分枝桿g、骨歸育不良症候群、心肌梗塞、心肌缺血性病症、鼻咽癌、新生兒慢性肺病、腎炎、腎病、神經退化性疾病、神經性！型肌肉萎縮、冑中性白企球減 v性發燒、非霍奇金氏淋巴瘤（n〇n_H〇dgkin，s lymphoma)、腹主動脈及其分支之閉塞、閉塞性動脈病症、OKT3®療法、睪丸炎/附睪炎、睪丸炎/輸精管重新接合術、器官腫大、骨質疏鬆症、胰腺移植排斥反應、胰腺癌、腫瘤伴隨症候群/惡性血鈣過多、甲狀旁腺移植排斥反應、骨盆發炎性疾病、常年性鼻炎、心包疾病、周邊動脈粥樣硬化疾病、周邊血管性病症、腹膜炎、惡性貧血、肺囊蟲肺炎、肺炎、p〇EMS症候群（多發性神經病 '器官腫大、内分泌病、單株丙種球蛋白病及皮膚變化症候群）、灌注後症候群、泵送後症候群、MI後心切開術症候群、子癇前期、進行性核上性麻痒、原發性肺動脈高壓、放射療法、里諸氏現象（Raynaucj，s phenomenon)、里諾氏病（Raynaucj’s disease)、雷富孫氏病（Refsum's disease)、規則性窄波QRS心動過速、腎血 S 151544.doc •15 201124427 S冋血壓、再灌注損傷、限制性心肌病、肉瘤 '硬皮病、老年性舞蹈病、路易體型老年癡呆症(senile dementia of Lewy body type)、血清陰性關節病休克、鐮狀細胞貧血、皮膚同種移植排斥反應、皮膚變化症候群、小腸移植排斥反應、實體腫瘤、特異性心律不整、脊椎共濟失調、脊髓小腦退化、鏈球菌性肌炎、小腦結構病變、亞急性硬化性全腦炎、昏厥、心血管系統之梅毋、全身性過敏反應、全身性發炎反應症候群、全身性發作幼年型類風濕性關節炎、T細胞或FAB ALL·、毛細血管擴張、血栓閉塞性血管炎、血小板減少症、毒性、移植、外傷/出血、ΠΙ型過敏性反應、IV型過敏性、不穩定絞痛、尿毒癥、尿敗血症、蓴麻疹 '心臟瓣膜疾病、靜脈曲張、血管炎、靜脈疾病、靜脈血栓形成、心室纖維性顫動、病毒及真菌感染、病毒性腦炎/無菌性腦膜炎、病毒相關嗜血細胞症候群、魏尼凱·柯薩可夫症候群（Wernicke-Korsakoff syndrome)、威爾遜氏病（Wilson's disease)、任何器官或組織異種移植排斥反應、急性冠狀動脈症候群、急性特發性多發性神經炎、急性發炎脫髓鞘多發性神經根神經病、急性局部缺血、成人斯蒂爾氏病、斑形脫髮、全身性過敏反應、抗磷脂抗體症候群' 再生障礙性貧血、動脈硬化、異位性濕疹、異位性皮炎、自體免疫皮炎、與鏈球菌感染相關之自體免疫病症、自體免疫腸病、自體免疫聽力損失、自體免疫淋巴組織增生症候群（ALPS)、自體免疫心肌炎、自體免疫印 151544.doc -16· 201124427 巢早衰、眼瞼炎、支氣管擴張、大皰性類天疱瘡、心血管疾病、災難性抗磷脂症候群、乳糜瀉、頸椎病、慢性局部缺血、瘢痕性類天疱瘡、伴以多發性硬化症風險之臨床上分離症候群（CIS)、結膜炎、兒童發作精神錯亂、慢性阻塞性肺病（COPD)、淚囊炎、皮肌炎、糖尿病性視網膜病、糖尿病、椎間盤突出、椎間盤脫垂、藥物誘發之免疫溶血性貧血、心内膜炎、子宮内膜異位、内眼 k、上韋膜炎、多形性紅斑、嚴重多形性紅斑' 姓娠期類天疱瘡、格-巴二氏症候群（Guillain_Barr0 syndr(>me， GBS)、花粉熱、休兹氏症候群（Hughes Syndrome)、特發性帕金森氏病、特發性間質性肺炎、IgE介導之過敏、免疫溶血性貧jk、包涵體肌炎、傳染性眼睛發炎性疾病、發炎性脫髓鞘病、發炎性心臟病、發炎性腎病、 IPF/UIP、虹膜炎、角膜炎、乾燥性角膜結膜炎、庫斯毛耳氏疾病（Kussmaul Disease)或庫斯毛耳-麥爾氏疾病 (Kussmaul_Meier disease)、蘭德里麻痺（Landry，s paralysis)、蘭格罕氏細胞組織細胞增多病（Langerhan，s cell histiocytosis)、網狀青斑、黃斑退化、顯微性多血管炎、白赫鐵列夫症（morbus bechterev)、運動神經元病症、黏膜類天疱瘡、多重器官衰竭、重症肌無力、骨髓發月不良症候群、心肌炎、神經根病症、神經病、非A 型非B型肝炎、視神經炎、骨質溶解、少關節型兒童期類風濕性關節炎（pauciarticular JRA)、周邊動脈閉塞性疾病（PAOD)、周邊血管疾病（pvD)、周邊動脈疾病 151544.doc •17· 201124427 (PAD)、靜脈炎、結節性多動脈炎（或結節性動脈周炎）、多軟骨炎、風濕性多肌痛、白髮症、多關節型JRA、多内分泌腺分泌不足症候群、多發性肌炎、風濕性多肌痛 (PMR)、泵送後症候群、原發性帕金森氏病、前列腺炎、純紅血球再生不良、原發性腎上腺機能不全、復發性視神經脊髓炎、再狹窄、風濕性心臟病、薩福症 (S APHO)(滑膜炎、痤瘡、膿皰病、骨肥大及骨炎）、硬皮病、繼發性澱粉樣變性、肺休克、鞏膜炎、坐骨神經痛、繼發性腎上腺機能不全、聚矽氧相關結締組織病、角層下膿皰性皮膚病（Sneddon-Wilkinson dermatosis)、僵直性脊椎炎、史蒂芬-瓊森症候群（Stevens-Johnson Syndrome，SJS)、全身性發炎反應症候群、顳動脈炎、弓形蟲視網膜炎、中毒性表皮壞死溶解、橫貫性脊髓炎、TRAPS(1型腫瘤壞死因子受體（TNFR)相關週期性症候群）；B型抗胰島素症伴以黑棘皮病；1型過敏性反應、II型糖尿病、蓴麻疹、常見間質性肺炎（UIP)、血管炎、春季結膜炎、病毒性視網膜炎、伏格特-小柳-原田症候群（Vogt-Koyanagi-Harada syndrome)(VKH症候群）、濕性黃斑退化及創傷癒合。 63. —種治療罹患因IL-1 β而受害之病症之患者的方法，該方法包含在投與第二藥劑之前、與其同時或在其之後投與如請求項1之結合蛋白的步驟，其中該第二藥劑選自由以下組成之群：TNF拮抗劑；TNF受體之可溶性片段； ENBREL® ; TNF酶拮抗劑；TNF轉匕酶（TACE)抑制劑； 151544.doc -18· 201124427 簟毒鹼受體拮抗劑；TGF-β拮抗劑；干擾素γ ;吡非尼酮 (perfenidone);化學治療劑，胺甲喋呤；來氟米特 (leflunomide)；西羅莫司（sirolimus)(雷帕黴素 (rapamycin))或其類似物，CCI-779; COX2 或 cPLA2抑制劑；NSAID ;免疫調節劑；p38抑制劑；TPL-2、MK-2及 NFkB抑制劑；布替耐德（budenoside);表皮生長因子；皮質類固醇；環抱素；柳氮確胺°比咬（sulfasalazine);胺基水楊酸鹽；6-疏基n票吟；硫嗤嗓吟（azathioprine);甲硝達嗤（metronidazole);脂肪加氧酶抑制劑；美沙拉嗓 (mesalamine);奥色拉秦（olsalazine);巴柳氮 (balsalazide);抗氧化劑；凝血脂素抑制劑；IL-1受體拮抗劑；抗IL-lb抗體；抗IL-6抗體；生長因子；彈性酶抑制劑；。比啶基-咪唑化合物；TNF、LT、IL-Ιβ、IL-2、 IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-11、IL-12、IL-14、IL-15、IL-16、IL-17、IL-18、IL-19、IL-20、IL-21、IL-22、IL-23、IL-24、IL-25、IL-26、IL_27、IL-28、IL-29、IL-30、IL-31、IL-32、IL-33、EMAP-II、GM-CSF、FGF 或 PDGF 之抗體或促效劑；CD2、CD3、CD4、CD8、CD25、CD28、CD30、 CD40、CD45、CD69、CD90或其配位體之抗體； FK5 06 ;雷帕黴素；徽盼酸嗎琳乙醋（mycophenolate mofetil);布洛芬（ibuprofen);潑尼龍（prednisolone);填酸二酯酶抑制劑；腺苷促效劑；抗血栓形成劑；補體抑制劑；腎上腺素劑；IRAK、NIK、IKK、p38或MAP激酶 5 151544.doc -19- 201124427 抑制劑；IL-lb轉化酶抑制劑；TNFa轉化酶抑制劑；丁細胞信號傳導抑制劑；金屬蛋白酶抑制劑；6-疏基嗓吟；血管緊張素轉化酶抑制劑；可溶性細胞激素受體；可溶性P55 TNF受體；可溶性p75 TNF受體； 1RII ’ SIL-6R ;消炎細胞激素；及TGFb。 64. 如請求項61之方法，其中對個體之該投藥法係藉由至少 -種選自以下之模式進行：非經腸、皮下、肌肉内、靜脈内、關節内、支氣管内、腹内、囊内、軟骨内、腔内、體腔内（intracelial)、小腦内、侧腦室内、大腸内、子宮頸内、胃内、肝内、心肌内、骨内、骨盆内、心包内、腹膜内、胸膜内、前列腺内、肺内 '直腸内、腎内、視網膜内、脊椎内、滑膜内、胸腔内、子宮内、膀胱内、大丸藥、陰道、直腸、經頓、舌下、鼻内及經皮。 65. 一種偵測樣品中之人類IL，的方法，其包含： (1)使該樣品與如請求項1所述之IL-Ιβ結合蛋白或其IL_ 1 β結合部分接觸；及 (u)偵測抗IL-Ιβ結合蛋白或其結合部分與該樣品中之 IL 1 β之間複合物之形成’其中相對於對照樣品或相對於在車乂早時間點獲取之另—測試樣品，該樣品中之複合物化成具有統5十上之顯著變化時，表示該樣品中存在人類 IL-Ιβ 。 66·如請求項65之方法’其中該樣品選自由全血、血衆、血 151544.doc •20· 201124427 清、尿、唾液及組織活檢體組成之群。 67. 一種偵測人類個體中之人類IL_ip的方法，其包含· ⑴在允許如請求項〗所述之IL_ip結合蛋白或其士合部分與人諷，結合之條件下，向測試個體或對昭：體投與該IL-1P結合蛋白或其IL_ip結合部分；及 ⑴）偵測該結合蛋白或其結合部分與α 之間複合物的形成’其中相對於該對照個體絲對於該測試個體在 :夺間點所形成之複合物，該測試個體中該複合物之形成具有統計上顯著變化時，表示存在IL ip。 151544.doc 201124427 四、指定代表圖： (一) 本案指定代表圖為：（無） (二) 本代表圖之元件符號簡單說明：五、本案若有化學式時，請揭示最能顯示發明特徵的化學式： (無） 151544.doc -2-