TW201113279A

TW201113279A - Pharmaceutical compositions useful for treating HCV

Info

Publication number: TW201113279A
Application number: TW099119939A
Authority: TW
Inventors: William E Delaney; Hongmei Mo; Weidong Zhong
Original assignee: Gilead Sciences Inc
Priority date: 2009-06-23
Filing date: 2010-06-18
Publication date: 2011-04-16
Also published as: US20100324059A1; WO2010151487A1; UY32721A; AR077138A1

Description

201113279 六、發明說明：【發明所屬之技術領域】本發明關於用於治療C型肝炎病毒感染之治療分子的組合物。【先前技術】 C型肝炎被視爲肝臟之慢性病毒疾病，其特徵爲肝病。雖然瞄準肝臟之藥物使用廣泛且顯示出有效，但毒性及其他副作用限制其用途。HCV之抑制劑可用來限制HCV感染之確立及進展並可用於HCV之診斷法中。新的HCV治療劑的發掘是有需要的。【發明內容】於一種觀點中，本發明提供各自包含化合物1及化合物2的組成物。化合物1具有如下列式1所示之結構：

式1 F

化合物2具有如下列式2所示之結構： -5- 201113279

化合物1及化合物2二者均可抑制HCV複製。雖然不欲受限於學理，咸信，化合物1爲HCV NS5B聚合酶之抑制劑。化合物 1 揭示於 PCT/US2007/0i 55 5 3 (WO 2008/005519 )中（其全部內容納爲此文之參考資料）。再者，雖然不欲受限於學理，咸信，化合物2爲HCV NS3/4A蛋白酶之抑制劑。化合物2揭示於WO 20020 1 8369及US2005 1 97299中 (該刊物之全部內容納爲此文之參考資料）。化合物2具有非專利USAN名稱泰拉普維爾（telaprevir )。實例3中所列之數據顯示在HCV複製子分析中所測得之化合物1與化合物2間的協同交互作用。因此，本申請案之實例3中揭示之數據建議化合物1及2之組合物爲有利之 H C V感染治療劑。本發明之組成物通常包含足夠之化合物1及化合物2以在將此二種化合物作爲治療攝生法之一部分投予人類時提供有效治療HCV感染的劑量。因此，於一觀點中，本發明提供包含化合物1和化合物2以及一或多種藥學上可接受之載體的藥學組成物。例如：本發明之組成物可包含1毫克至1 〇〇毫克之化合 201113279 物1及100毫克至1200毫克之化合物2。再舉例而言，本發明之組成物可包含30毫克至50毫克之化合物1及600毫克至 1〇〇〇毫克之化合物2。於另一觀點中，本發明提供用於治療人類HCV感染之方法，其中各方法包括投予有此需要之人類（諸如被C型肝炎病毒感染之人）治療上有效量之化合物1及化合物2的組合物之步驟。在實行本發明此觀點之方法時，化合物1 及化合物2之合倂量可有效治療HCV感染，但化合物1及化合物2之量亦可能個別有效地治療HCV感染。化合物1及化合物2可一起投服（如：爲單位劑量之形式，諸如錠劑），或者，化合物1及化合物2可分別投服。化合物1可與化合物2同時投服，或在化合物2之前或之後投服。通常，化合物1及化合物2係每日投服。於一體系中，曰劑量係在分開之次劑量中投服，諸如每天二次或三次。因此，例如：可在數天、數週或數個月之治療期間內每天投服二次化合物1 :而化合物2可在延長爲數天、數週或數個月之治療期間內的每一天中每8小時投服一次。例如：於實行本發明此觀點之方法時，係每日投予有此需要之人類1毫克至1〇〇毫克之化合物1及100毫克至1200毫克之化合物2。再舉例而言，可每日投予有此需要之人類30毫克至 5〇毫克之化合物1及600毫克至1000毫克之化合物2。治療期可延長爲，如：從12週至48週（諸如從12週至24週）。於一體系中，化合物1及化合物2係經口投服（如：以錠劑或膠囊之形式投服）。於另一體系中，化合物1及化 201113279 合物2係藉由注射投服（諸如經由靜脈內注射投服）。於另一體系中’化合物1及化合物2係藉由氣溶膠遞送投服。本發明之另一觀點包括化合物1及化合物2之組合物於製造用於治療人類HCV感染之藥物上的用途。本發明之另一觀點包括用於治療或預防人類HCV感染之含有化合物1及化合物2的組成物。本發明之範圍包括觀點及體系之所有組合。 [詳細說明] 現在詳細說明本發明之某些申請專利範圍，其實例說明於伴隨之結構和化學式中。雖然本發明將與列舉之申請專利範圍一起說明，需理解，其並不欲將本發明限制於那些申請專利範圍。相反地，本發明欲涵蓋所有替代、修改及等同者，這些可能包括在如申請專利範圍所定義之本發明範圍內。此處所列舉之所有文件的全部內容各納爲所有目的之參考資料。當此文中使用商標時，申請者係欲獨立包括該商標產品及該商標產品之活性藥學成分。此處所使用之“化合物1 ”意指化合物1或其藥學上可接受之鹽、溶劑化物、酯或立體異構物。此處所使用之“化合物2”意指化合物2或其藥學上可接受之鹽、溶劑化物、酯或立體異構物。此處所使用之“治療上有效量” 一詞係指可有效改善 -8 - 201113279 人類至少一種HCV感染之症狀的化合物1及化合物2組合物之量。因此’例如：於一些被HCV感染之個體中，治療上有效量之化合物1及化合物2的組合物可有效使被感染之個人體內所存在之HCV病毒粒子的病毒載量減少達到統計上顯著量。病毒載量可經由，例如：使用如COBAS TaqMan HCV分析（羅氏分子系統（R〇che Molecular Systems)測量血駿HCV RNA量而予以測量。根據本發明，接受化合物1及化合物2之組合物治療之被HCV感染的個人通常可感受到與HCV感染相關之—或全部症狀改善。例如：HCV患者可能感受到下列與HCV感染相關之一或全部症狀改善：發燒、頭痛、肌肉疼痛 '疲倦、食慾喪失、噁心、嘔吐及腹瀉。本發明關於包含化合物丨及化合物2之方法、用途及組成物。化合物1具有下列結構：

化合物1 F

化合物2具有下列結構： £ -9- 201113279 化合物2

如在活體外HCV複製子分析中所測量者，實例3中所列之數據顯示出化合物1及化合物2之組合物具有抗· H C V 活性’且化合物1及化合物2以協同方式交互作用。因此，化合物1和化合物2二者，以及化合物1與化合物2之組合物可用於，例如：在活體外及活體內抑制HCV複製，諸如抑制被HCV感染之人類體內的HCV複製。化合物1和化合物2 ，以及其組合物亦可用於，例如：在分析中鑑定在活體外或活體內抑制，或影響HCV複製之額外分子，或硏究活細胞中HCV複製之機制。化合物1和化合物2之鹽型或溶劑化物可用於實行本發明。通常，但非必定，化合物1及2之鹽類爲藥學上可接受之鹽類。包含在“藥學上可接受之鹽類”一詞內之鹽類係指化合物1及化合物2之非毒性鹽類。合適之藥學上可接受之鹽類的實例包括無機酸加成鹽，諸如氯化物、溴化物、硫酸鹽、磷酸鹽及硝酸鹽：有機酸加成鹽，諸如醋酸鹽 '半乳糖二酸鹽（galactarate)、丙酸鹽、琥珀酸鹽' 乳酸鹽 '乙醇酸鹽、蘋果酸鹽、酒石酸鹽、檸檬酸鹽、馬來酸鹽、富馬酸鹽、甲磺酸鹽、對· -10 - 201113279 甲苯磺酸鹽及抗壞血酸鹽；帶有酸性胺基酸之鹽類，諸如天門冬胺酸鹽及麩胺酸鹽；鹼金屬鹽類，諸如鈉鹽及鉀鹽 ;鹼土金屬鹽類，諸如鎂鹽及鈣鹽；銨鹽；有機鹼性鹽類，諸如三甲胺鹽 '三乙胺鹽、吡啶鹽、甲吡啶鹽、二環己胺鹽及N，N'-二苄基乙二胺鹽；以及帶有鹼性胺基酸之鹽類，諸如離胺酸鹽及精胺酸鹽。在一些情況中，該鹽類可爲水合物或乙醇溶劑化物。本發明之藥學組成物包括爲純化狀態或爲組成物形式 (其中該化合物係與任何其他藥學上相容之物質組合，該藥學上相容之物質可爲惰性或生理上活性）之化合物1及化合物2。所產生之藥學組成物可用於，如：治療人類之 HCV感染。化合物1及化合物2之投服方式可有不同。例如：組成物可經口投服，諸如在溶劑（諸如水性或非水性液體）內以液體形式投服，或在固體載體中投服。供口服之組成物包括藥九、錠片、膠囊、囊形錠劑（caplets)、糖漿及溶液，包括硬膠囊及延時釋出膠囊（time-release capsule) 。標準賦形劑包括結合劑、充塡劑、染色劑、助溶劑，等。組成物可配製成單位劑型，或爲複數或次單位劑量。可使用包含液態之藥學惰性載體（諸如水或其他藥學上相容之液體或半固體）的組成物。這類液體及半固體之使用爲熟習本技藝之人士所熟知。再舉例而言，該組成物可經由注射投服，即，經由靜脈內、肌肉內、皮下、腹腹內、動脈內、鞘內；及腦室內 -11 - 201113279 投服。靜脈內投服爲較佳之注射法。用於注射之合適載體爲熟習本技藝之人士所熟知者，且包括，例如：5%右旋糖溶液、生理食鹽水及磷酸鹽緩衝之生理食鹽水》化合物亦可以注入液或注射液之形式（亦即，爲在藥學上可接受之液體或液體混合物中之懸浮液或乳劑形式）投服。亦可經由吸入將化合物直接投至呼吸道，即，以氣溶膠之形式經由鼻或口投服。因此，本發明之一種觀點包括新穎、有效、安全、不刺激及生理上相容之可吸入的組成物，該組成物包含用於治療HCV感染之化合物1及化合物2 〇投遞化合物1及2之路徑的其他實例包括直腸投遞（諸如藉由栓劑投服）或透皮投服。化合物1及2可一起或分別投服，且當分別投服時，其可同時投服或以任何順序依序投服。化合物1及2之量、投服之相關時機將經過選擇以達到所需療效。化合物1及化合物2可經由下列方式同時投服來達成合倂投服：（1 )在包含二種化合物之單一藥學組成物中；或（2)在各包含該二種化合物之一的分別藥學組成物中。該組合物亦可以連續方式分別投服，其中係先投服一種治療劑，再投服第 —及另一第二治療劑，或者，反之亦然。這類依序投服可爲時間上接近或遙遠。化合物1及2通常以包含至少一種藥學上可接受之載體的藥學組成物形式投服。此處所使用之“藥學上可接受之載體”一詞係指任何與活性成分一起配製之材料或物質， -12- 201113279 以協助其製備及/或其施用或散播至欲治療部位。適合用於本發明組成物之藥學載體爲熟習本技藝之人士所熟知者。該藥學載體其包括添加劑，諸如濕潤劑、分散劑、黏附劑、乳化劑、溶劑、滑動劑、塗覆層、抗細菌及抗真菌劑 (例如：酣、山梨酸、氯丁醇）及等張劑（諸如糖類或氯化鈉）’惟其彼等與製藥中所使用者相一致，即，其對哺乳動物無毒性。本發明之藥學組成物係以任何已知方式製備，例如：在單步驟或多步驟程序中將活性成分與所選擇之載體材料和當合適時，其他添加劑，諸如表面活性劑，一起均勻混合、塗覆及/或硏磨。本發明之藥學組成物可包含溶解形式之化合物1及化合物2，其中化合物1及化合物2係溶解在合適之溶劑或助溶劑，或彼等之組合物中。該溶劑通常包括不同之有機酸 (通常爲C4-C24)，諸如癸酸、油酸或月桂酸。另外，可使用聚乙二醇（PEGs)及/或短、中或長鏈之單、二或三酸甘油脂來溶解化合物1及化合物2以用於液態調製劑。亦可使用聚乙二醇化之短、中或長鏈脂肪酸。通常，該製劑爲水性，即，水本身爲僅有之溶劑，雖然其通常亦包括助溶劑（諸如有機酸或其他上述試劑）。最普遍之有機酸爲羧酸，其酸度與羧基-COOH有關。磺酸（含有基團〇S03H )爲此處所使用之相對較强的酸。一般而言，該酸宜含有親脂性結構區。單或二-羧酸爲合適者。 -13- 201113279 合適之表面活性劑可選擇地與任何本發明之藥學組成物一起使用。這類試劑亦稱爲乳化劑（emulgents或 emulsifiers)且可用於本發明之藥學組成物中。其爲具合適之乳化、分散及/或濕潤性質之非離子性、陽離子性及/ 或陰離子材料。合適之陰離子性表面活性劑包括水溶性皂類及水溶性之合成表面活性劑。合適之皂類爲鹼金屬或鹼土金屬鹽類、較高脂肪酸（c1()-c22)之未經取代或經取代的銨鹽，如：油酸或硬脂酸之鈉鹽或鉀鹽、取自椰子油或獸脂油之天然脂肪酸混合物的鈉鹽或鉀鹽。合成之表面活性劑包括聚丙烯酸之鈉鹽或鈣鹽；脂肪磺酸鹽及硫酸鹽 ;磺酸化之苯並咪唑衍生物及烷芳基磺酸鹽。脂肪磺酸鹽或硫酸鹽通常爲下列形式：鹼金屬或鹼土金屬鹽類、未經取代之銨鹽或被具有8至22個碳原子之烷基或醯基取代之銨鹽，如：木質素磺酸或十二烷基磺酸之鈉鹽或鈣鹽，或自天然脂肪酸取得之脂肪醇硫酸鹽的混合物、硫酸或磺酸酯類之鹼金屬或鹼土金屬鹽類（諸如月桂基硫酸鈉），以及脂肪醇/環氧乙烷加合物之磺酸類。合適之磺酸化苯並咪唑衍生物較佳地含有8至22個碳原子。烷芳基磺酸鹽之實例爲十二烷基苯磺酸或二丁基-萘磺酸、或萘-磺酸/甲醛縮合物之鈉、鈣或醇胺鹽。亦合適者爲該相對應之磷酸鹽類，如：磷酸酯及對-壬基苯酚與環氧乙烷及/或環氧丙烷之加合物、或磷脂的鹽類。用於此目的之合適的磷脂爲天然（源自動物或植物細胞）或合成之腦磷脂或卵磷脂型的磷脂，諸如：磷脂醯乙醇胺、磷脂醯絲胺酸、磷脂醯甘油 -14- 201113279 、溶血卵磷脂、心憐脂、二辛基磷脂醯-膽驗、二棕櫚醯-膽鹼及彼等之混合物。帶有這類試劑之水性乳液係在本發明之範圍內。合適之非離子性表面活性劑包括烷基酚'脂肪醇、脂肪酸、脂族胺或醯胺類（其分子中含有至少12個碳原子）、烷基芳烴磺酸鹽及二烷基磺基琥珀酸鹽之聚乙氧化及聚丙氧化的衍生物，諸如脂醇及環脂醇、飽和及不飽和脂肪酸和烷基酚之聚乙二醇醚衍生物’該衍生物較佳地在（.脂族）烴部分中含有3至10個乙二醇醚基團及8至20個碳原子且在烷基酚之烷基部分中含有6至18個碳原子。其他合適之非離子性表面活性劑爲聚氧乙烯與聚丙二醇、乙二胺基聚丙二醇（其烷基鏈中含有1至10個碳原子）之水溶性加合物，該加合物含有2〇至250個乙二醇醚基團及/或10至 100個丙二醇醚基團。這類化合物通常在每一丙二醇單位中含有1至5個乙二醇單位。非離子性表面活性劑之代表性實例爲壬基酚-聚乙氧基乙醇、蓖麻油聚乙醇醚、聚氧化丙烯/聚氧化乙烯加合物、三丁基苯氧基聚乙氧基乙醇、聚乙二醇及辛基苯氧基聚乙氧基乙醇。聚乙烯山梨糖醇酐 (諸如聚氧化乙烯山梨糖醇酐三油酸酯）、甘油、山梨糖醇酐、蔗糖及五赤癖醇之脂肪酸酯類亦爲合適之非離子性表面活性劑。合適之陽離子性表面活性劑包括季銨鹽，尤其是鹵化物，其具有可選擇地被如下群體取代之4個烴基··鹵素、苯基、經取代之苯基或羥基；例如：含有至少一個C8-C22 201113279 烷基（如：十六烷基、月桂基、棕櫚基、肉豆蔻基及油基 )作爲N-取代基，以及未經取代或鹵化之低級烷基、苄基及/或羥基-低級烷基作爲其他取代基的季銨鹽^ 適合本目的之表面活性劑的更詳細描述可在下列文獻中找到：' McCutcheon's Detergents and Emulsifiers Annual ^ ( MC Publishing Corp., Ridgewood, New Jersey, 19 8 1)，^ Tensid-Taschenbucw^，2nd ed. ( Hanser Verlag， Vienna, 19 8 1 )及 ~ Encyclopaedia of Surfactants, 〃 (

Chemical Publishing Co., New York, 1981)。用於配製及投服之技術的進一步細節可在Remington's Pharmaceutical Sciences 之最新版本中找到（Maack Publishing Co, Easton, Pa.)° 包含化合物1及化合物2之組成物可以類似於本技藝中已知之方式製造（如：藉由習知之混合、溶解、粒化、糖衣製造、磨細、乳化、包囊、捕捉或凍乾方法）。包含化合物1及化合物2之組成物亦可藉由習知方式（如：塗覆）改質以提供合適之釋出特徵，如：持續釋出或經瞄準之釋出。於另一觀點中，本發明提供用於治療人類HCV感染之方法，其中各方法包括投予有此需要之人類（諸如被C型肝炎病毒感染之人類）治療上有效量之化合物1及化合物2 的組合物之步驟。本發明之藥學組成物可用於實行本發明之治療方法。於實行本發明此觀點之方法時，化合物1及化合物2之 -16- 201113279 組合量可有效治療HCV感染，但化合物1及化合物2之量亦可能個別有效地治療HCV感染。化合物1及化合物2可一起投服（如：爲單位劑量之形式’諸如錠劑）’或者化合物 1及化合物2可分別投服。化合物1可與化合物2同時投服，或在化合物2之前或之後投服。通常，化合物1及化合物2係每日投服。於一體系中，日劑量係在分開之次劑量中投服，諸如每天二次或三次。因此，例如：可在數天、數週或數個月之治療期間內每天投服化合物1二次；而化合物2可在延長爲數天、數週或數個月之治療期間內的每一天中每8小時投服一次。例如：於實行本發明此觀點之方法時，係每日投予有此需要之人類1毫克至100毫克之化合物1及100毫克至1200毫克之化合物2。再舉例而言，可每日投予有此需要之人類30毫克至 5〇毫克之化合物1及600毫克至1000毫克之化合物2。治療期可延長爲，如：從12週至48週（諸如從12週至24週）。下列實例僅用於說明目前考慮用於實行本發明之最佳模式，但不應用於限制本發明。【實施方式】實例la 5-({6-[2,4-雙（三氟甲基）苯基]嗒畊-3_基}甲基）_2-( 2-氟苯基）-5H-咪唑並[4,5-c]吡啶之合成方法化合物1具有IUPAC名稱：5- ( {6-[2,4-雙（三氟甲基 )苯基]嗒哄-3-基}甲基）-2-(2-氟苯基）_511-咪唑並 2' -17- 201113279 [4,5-。]吡啶，及0人8名稱：5^-咪唑並[4,5-〇]吡啶，5-[[6· [2,4-雙（三氟甲基）苯基]嗒哄-3-基]甲基]-2-(2-氟苯基 )0 於此製造化合物1之方法中’已發現二甲基乙烷或其相關溶劑（其均具有通式Rl〇R2〇 ( R40 ) aR3，其中R1、 R2、R3及R4係各自獨立選自Ci-C6烷基，且&爲0或1 )較習知之溶劑DMF更特別有利β通常，R1、R2、R3及R4係各自獨立爲烷基，且a通常爲0» C|-C6烷基包括具有1至6 個碳原子之完全飽和之一級、二級或三級烴基，且因此包括，但不限於：甲基、乙基、丙基、丁基，等。步驟1

°' CI SMI SM2 化合物 MW 量毫莫耳數當量 SM1 128.56 5克 38.9 1 TCCA 232.41 3.62 克 15.6 0.4 CHCb 130毫升在60°C將三氯異三聚氰酸（TCCA)加到市售的起始材料（SM1 )之CHC13溶液中。然後，將溶液攪拌1·5小時，冷卻之並以HiFlo-Celite過濾之。將濾液在真空下濃縮並乾燥。SM2之產量爲5.03 7克。 -18- 201113279 步驟2

化合物 MW 量毫莫耳數當量 SM2 163 5.073 克 31.12 1 Core 213.2 6.635 克 31.12 1 NaOH (10%) 40 1.245 克 31.12 1 DMF 320毫升將NaOH加到稱爲“核心”的起始材料（依下述取得 )之DMF (二甲基甲醯胺）溶液中。然後，將SM2 (自步驟1取得）溶解在DMF ( 2〇毫升）中並慢慢加到溶液中。將反應攪拌3小時，以水稀釋之並以EtO Ac萃取之。以 Na2S04乾燥有機層。移除溶劑並以DCM (二氯甲烷）使產物再結晶。SM3之產量爲5.7克。

SM3 化合物⑴ -19- 201113279 化雜 MW 量莫耳數當量 SM3 453.79 95.毫克 0.209 1 DME 500微升 2N 水性 NaaCOs 313微升 0.626 3 2,4·雙⑶-苯麵酸 257.93 80.9毫克 0.313 1.5 Pd(PPh3)4 1155 12毫克 0.0104 0.05 將稱爲“ SM3”的化合物溶解在二甲氧基乙烷（DME )中。將2,4_雙（三氟甲基）苯基醒酸及2N NazCOs水溶液加到此溶液中。將Pd ( PPh3 ) 4加到所產生之雙相混合物中，然後，將反應物在8 0 °C加熱7 2小時。將反應物冷卻至室溫並通過矽藻土（ Celite )過濾，以EtOAc清洗矽藻土。將濾液在真空中濃縮。利用MeOH/CH2Cl2將殘留物在 6克Si02上純化，以洗提出化合物。由此取得之化合物受至fJPPh3(0)污染。將產物在1毫米Chromatotron盤上於1% 步驟中以〇至5%之MeOH/CH2Cl2再純化。將純分餾液合倂並在真空中濃縮，之後在高度真空下乾燥12小時。結果可取得1 1.8毫克無PPh3污染之化合物（1)的游離鹼。 JH NMR ( 300MHz, CD3OD) 6.20 ( s, 2) 7.32 ( m, 3 ) 7.52 ( m, 1 ) 7.78 ( d, 1 ) 7.89 ( d, 1 ) 7.95 ( s, 2) -20- 201113279 8. 1 5 ( m, 3 ) 8.35 ( d, 1 ) 9.12 ( s, 1 ) LC/MS M + H = 5 1 8 實例lb 5-({6-[2,4-雙（三氟甲基）苯基]嗒哄-3-基}甲基）-2-( 2-氟苯基）-5H-咪唑並[4,5-c]吡啶之合成方法此實例係針對使用下列流程圖製造化合物1之額外方法。流程圖1

-21 - 201113279 過程摘要

核心 MW = 213.2 co2h

2-氟基甲酸 MW = 140.11

3,4-二胺基吡啶 MW = 109.13 1) 甲磺酸 2) 五氧化磷 3) 100oC, 4七小時

4) H2〇, NH4OH 將甲磺酸加到在反應器中之2-氟苯甲酸中，該反應器主動冷卻，使溫度保持在客50 °C。然後，將3,4-二胺基吡啶分批地加到此冷卻之漿液中，溫度保持在S 3 5 °C «然後，將反應器之內容物加熱至50 °C。將五氧化磷一次加入其中。然後，將反應在90-1 10°C加熱至少3小時》採取反應物之樣本以藉由HPLC分析完成。將反應冷卻至周圍溫度，並將水分批緩慢地加到其中以使反應冷卻。接著以水稀釋反應。藉由過濾移除不溶物。以氫氧化銨將濾液之pH 調整爲5.5-5.8。令反應在周圍溫度下自行種晶及粒化〜4小時。然後，以氫氧化銨將pH値調整爲8.0-9.3。將漿液保持在周圍溫度下至少2小時。藉由過濾分離出固體，先以水，再以IPE清洗之。將濕團塊在不超過60 °C之真空中乾燥，直到剩餘之水S 1 %。乾燥產物爲稱爲“核心”之化合物。材料之摘要分子量重量比莫耳比二胺基吡啶 109.13 1.0 1.0 氟苯甲酸 140.11 1.4 1.1 甲磺酸 96.1 7.0 8.0 五氧化磷 141.94 1.3 1.0 水 18.02 40 --- __異丙醚 102.17 5.0 —- 氫氧化銨 35.09 ~10 一- -22- 201113279 流程圖la

MW = 306.21 (3)

化合物⑴ MW = 517.41 將2a之1,2-二氯乙烷溶液加熱至40-45 °C。加入三氯異三聚氰酸，並將混合物在60-7 0°C加熱至少2小時。採取反應之樣本以藉HPLC分析完成。將反應冷卻至周圍溫度。加入矽藻土以吸附不溶物，再藉由過濾移除固體。以0.5N 氫氧化鈉溶液清洗濾液。將有機層濃縮至最低之可攪動體積並以DMF取代之。該化合物稱爲“核心”，並加入1 0% 氫氧化鈉水溶液。將反應在周圍溫度下攪拌至少8小時。採取反應之樣本以藉HP LC分析完成。在反應中加入額外之1 0%量的1 0%氫氧化鈉溶液。然後，將水加到反應中以分離粗產物’化合物（1 )。粒化至少1小時後，分離出固體，並以水和異丙醚清洗之。將濕團塊從醋酸乙酯中再結晶，以提供低熔點（〜220 °C )之化合物（1 )(多形體I ) 。然後’在少於約0.5%水之存在下，將濕團塊在醋酸乙酯中再漿化以取得高熔點（~2 3 6 °C )之化合物（1 )(多形體Π)。經由過濾收集固體，並以醋酸乙酯清洗之。將濕團塊在不超過60 °C之真空中乾燥，以取得乾燥之結晶多形體Π 。 -23- 201113279 材料摘要分子量重量比莫耳比 3-氯-6-甲基塔哄 128.56 1.0 1.0 2,4雙(三氟甲基)苯基酾酸 257.93 4.0 2.0 X-Phos 476.72 0.18 0.05 醋酸鈀 224.49 0.04 0.025 1,2-二甲氧基乙烷 90.12 16.7 — 碳酸鉀 138.21 2.15 2.0 水 18.02 7.8 — 碘化銅 190.45 0.037 0.025 矽藻土一 0.25 —-- 庚烷 100.2 22.4 實例2 :化合物2之製備化合物 2 具有 IUPAC 名稱：（1 S,3aR，6aS ) -N-[l ( S )-[2-(環丙胺基）草醯基]丁基](N-(吡哄-2-基羰基 )-L-環己基甘胺醯-3-甲基-L-纈胺醯）全氫環戊並[c]吡咯-1-羧醯胺。 -24- 201113279

取得前驅物N-醯基三肽（vm )的途徑係由下列所組成 :將N-Cbz-l-第三-白胺酸（ΧΠΙ)與雙環胺基酯（XIV) ^3' -25- 201113279 偶合以提供經保護之二肽（X V )，在Pearlman氏催化劑上藉由催化性氫解作用自其移除N-Cbz基團，以產生（ XVI)。然後，將二肽酯（XVI)與Ν-Cbz-l-環己基甘胺酸（XW)偶合，以產生（XVDI)，其進一步藉由催化性氫解作用去保護，以提供三肽酯（ΧΚ)。使用CDI，以吡畊羧酸（m )將（χκ )醯化，在甲酸中用hci處理所產生之N-醯基三肽第三丁醋（XX)，以提供靶的中間產物（M ) ( Revill, P.； Serradell, N.; Bolos, J.; Rosa, E.;

Telaprevir，Drugs Fut 32 ( 9 ) : 788 ( 2007 ))。實例3 :化合物1及化合物2之組合物的抗HCV活性材料及方法藉由Gilead Sciences (加州Foster市）合成化合物1。自Acme生物科學有限公司（加州Belmont市）購買化合物 2。自Reblikon (德國Mainz)取得HCV基因型lb複製子細胞（Huh-luc)。這些細胞中之複製子稱爲I3 8 91uc-ubi-neo/NS3-37ET並編碼可選擇之抗性標記（新黴素磷酸轉移酶）以及螢火蟲螢光素酶報告基因。將Huh-luc細胞維持在有補充10%胎牛血清（FBS ; Hy cl one，猶他州Logan 市）及0.5毫克/毫升G-418(GIBCO)之杜白可氏改質之伊果氏基質（DMEM ; GIBCO，加州Carlsbad市）中。將細胞一週傳代二次並維持在次融合水準。

以每槽5xl03細胞（在100微升，不含G-418之DMEM -26- 201113279 培養基質中）之密度將複製子細胞接種在96槽盤中。將化合物1及化合物2在1 00%DMSO (史格馬（Sigma ))中進行系列稀釋（1 : 3)。以1 : 2 0 0之稀釋比將這些系列稀釋液加到細胞中以使在200微升總體積中之最終濃度爲 0-5%DMSO。將培養盤在37°C培育3天，然後移除培養基質，且將細胞溶解並利用螢光素酶分析商品（Promega，威斯康辛州麥廸生市）分析螢光素酶活性。經藥物處理之樣本的HCV複製子量係以未經處理之對照組（定義爲1〇〇% )的百分比表示，並利用XLFit4軟體（IDBS，加州 Emeryville )將數據擬合至邏輯劑量反應程式y = a/ ( 1+ ( x/b ) c )。依前述自所產生之程式計算EC50値（Delaney, W. E.，e t al,，Antimicrobial Agents Chemotherapy, 45(6 ):1 705-1 7 1 3 ( 200 1 ) ) 〇以每槽5xl03細胞（在100微升之培養基質中）之密度將複製子細胞接種在96槽盤中。依上述將化合物1及化合物2在100%DMSO中進行系列稀釋並以矩陣版式將其加入 96槽盤中，以取得最終體積爲200微升且最終濃度爲 0.5 %OMSO之界定的不同藥物濃度和比例組。對各單獨之藥物而言，選擇測試之濃度範圍的中點作爲EC50値。將細胞培養3天並依上述分析螢光素酶表現。在組合物硏究方面，進行二個獨立實驗，每組複製三份》利用由 Prichard 和 Shipman ( Prichard MN, Aseltine KR, Shipman C, Jr., MacSynergyTM Π ， Version 1.0. University of Michigan, Ann Arbor, Michigan, 1 993 ；

S -27- 201113279

Prichard M.N., Shipman C., Jr., Antiviral Res 14 ( 4-5) ：181-205 ( 1990 ) ； Prichard M.N., Shipman C, Jr.,

Antivir Ther 1(1) · 9-20 ( 1 996 ) ； Prichard Μ. N., et a 1., Antimicrob Agents Chemother 3 7 ( 3 ) : 540-5 ( 1993 )硏發之MacSynergy Π程式分析數據。該軟體假定藥物間之累加性交互作用（根據Bliss獨立性模型）計算理論抑制値，並定量理論抑制値及觀察抑制値間之統計上有意義的差異。在三維中標繪這些相差値可產生一表面，其中Z 平面昇高代表化合物間之抗病毒協同作用，降低代表抗病毒拮抗作用。計算出之表面偏差體積係以nM2%表示。根據Prichard及Shipman，組合物效果之定義如下： •若體積MOOnM2，則爲高度協同。 .若體積>50且S ΙΟΟηΜ2，則爲中度協同》 •若體積>-50nM2且S 50nM2，則爲累加性。 •若體積>-1〇〇ηΜ2且S 50nM2，則爲中度拮抗性。 •若體積S - ΙΟΟηΜ2，則爲拮抗性。結果利用HCV lb複製子系統評估化合物1與化合物2之組合物的抗病毒效果。利用MacSynergyn程式分析所產生之數據，其提供顯示來自累加性之顯著偏差的平面繪圖。表 1中摘要自2至3個獨立實驗取得之來自累加性的統計上有意義偏差之定量。與化合物1組合時，化合物2具有50至 ΙΟΟηΜ2%之協同體積及0至-25nM2%之拮抗體積。這些結 -28- 201113279 果暗示化合物1與化合物2具適度之協同交互作用。表1 化合物1與化合物2之組合物的抗病毒協同性和拮抗性以及藥物交互作用的定量用於與化合物1組合之藥物協同體積(nM屮拮抗體積_» 交互作用化合物2 79.5 ± 10_5 0±0 中度協同 a 數値代表二或三個複製三組進行之獨立實驗的平均値土標準差 -29-

Claims

201113279 七、申請專利範圍： 1 . 一種組成物，其包含化合物1及化合物2，或化合物 1及化合物2之鹽類或溶劑化物’其中化合物1具有式1所示之結構

2.如申請專利範圍第1項之組成物，其中化合物1之存在量爲1毫克至100毫克。 3 ·如申請專利範圍第1項之組成物，其中化合物1之存在量爲30毫克至50毫克。 4·如申請專利範圍第1項之組成物，其中化合物2之存在量爲100毫克至120 0毫克。 5·如申請專利範圍第1項之組成物，其中化合物2之存在量爲600毫克至1000毫克》 6·如申請專利範圍第1項之組成物，其中化合物1之 -30- 201113279 存在量爲1毫克至100毫克’且化合物2之存在量爲loo毫克至1 200毫克。 7 ·如申請專利範圍第1項之組成物’其中該組成物爲固態組成物。 8 .如申請專利範圍第1項之組成物，其中該組成物爲液態組成物。 9. 如申請專利範圍第1項之組成物，其進一步包含藥學上可接受之載體。 10. 如申請專利範圍第9項之組成物，其中該組成物爲固態組成物。 11 ·如申請專利範圍第1 〇項之組成物，其中該組成物爲錠劑形式。 1 2 ·如申請專利範圍第9項之組成物，其中該組成物爲液態組成物。 1 3 ·如申請專利範圍第9項之組成物，其中化合物1之存在量爲1鼋克至100毫克。 1 4 ·如申請專利範圍第9項之組成物，其中化合物1之存在量爲30毫克至50毫克。 15·如申請專利範圍第9項之組成物，其中化合物2之存在量爲100毫克至1200毫克。 1 6 ·如申請專利範圍第9項之組成物，其中化合物2之存在量爲600毫克至1 000毫克。 1 7.如申請專利範圍第9項之組成物，其中化合物1之存在量爲1毫克至100毫克，且化合物2之存在量爲1〇〇毫克 5 -31 - 201113279 至1 200毫克。 18.—種用於治療人類HCV感染之藥學組成物，其包含化合物1與化合物2，或化合物1及化合物2之鹽類或溶劑化物，以及藥學上可接受之載體。 1 9.如申請專利範圍第1 8項之藥學組成物，其中該化合物1與化合物2之組合物包含1毫克至100毫克之化合物1 的曰劑量。 20.如申請專利範圍第1 8項之藥學組成物，其中該化合物1與化合物2之組合物包含30毫克至50毫克之化合物1 的曰劑量。 2 1 .如申請專利範圍第1 8項之藥學組成物，其中該化合物1與化合物2之組合物包含100毫克至1200毫克之化合物2的日劑量。 22.如申請專利範圍第1 8項之藥學組成物，其中該化合物1與化合物2之組合物包含600毫克至1〇〇〇毫克之化合物2的日劑量。 23·如申請專利範圍第18項之藥學組成物，其中該化合物1與化合物2之組合物包含1毫克至100毫克之化合物1 的日劑量及100毫克至1200毫克之化合物2的日劑量。 24. 如申請專利範圍第〗8項之藥學組成物，其中化合物1係與化合物2同時投予人類^ 25. 如申請專利範圍第丨8項之藥學組成物，其中係先將化合物1投予人類，再將化合物2投予人類。 26. 如申請專利範圍第18項之藥學組成物，其中係先 -32 * 201113279 將化合物2投予人類，再將化合物1投予人類。 2 7.如申請專利範圍第24項之藥學組成物，其中化合物1及化合物2係以錠劑形式投予人類。 28.如申請專利範圍第27項之藥學組成物，其中該錠劑包含1毫克至100毫克之化合物1及100毫克至1200毫克之化合物2。 2 9.如申請專利範圍第丨8項之藥學組成物，其中化合物1及化合物2係每日投予人類一次。 3 〇.如申請專利範圍第1 8項之藥學組成物，其中化合物1及化合物2係每日投予人類超過一次。 3 1 ·如申請專利範圍第1 8項之藥學組成物，其中化合物1及化合物2係每日投予人類至少一次，期間爲12週至48 週。 3 2.如申請專利範圍第18項之藥學組成物，其中化合物1及化合物2係經口投予人類。 3 3 _如申請專利範圍第〗8項之藥學組成物，其中化合物1及化合物2係經由注射投予人類。 3 4. —種化合物1及化合物2之組合物於製造用於治療人類HCV感染之藥物的用途。 -33- 201113279 四指定代表圖： (一）本案指定代表圖為：無。 (二）本代表圖之元件符號簡單說明：無 201113279 五、本案若有化學式時，請揭示最能顯示發明特徵的化學式：無