TW201000112A - Use of dehydrosulphurenic acid for inhibiting the growth of cancer cells - Google Patents
Use of dehydrosulphurenic acid for inhibiting the growth of cancer cells Download PDFInfo
- Publication number
- TW201000112A TW201000112A TW097122699A TW97122699A TW201000112A TW 201000112 A TW201000112 A TW 201000112A TW 097122699 A TW097122699 A TW 097122699A TW 97122699 A TW97122699 A TW 97122699A TW 201000112 A TW201000112 A TW 201000112A
- Authority
- TW
- Taiwan
- Prior art keywords
- compound
- cell
- growth
- pharmaceutical composition
- cells
- Prior art date
Links
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 title claims abstract description 10
- LIVBXKAVLWBDCR-FRRGXQJJSA-N dehydrosulphurenic acid Natural products [H][C@@]1(C[C@H](O)[C@@]2(C)C3=CC[C@]4([H])[C@]([H])(CC[C@H](O)C4(C)C)C3=CC[C@]12C)[C@@H](CCC(=C)C(C)C)C(O)=O LIVBXKAVLWBDCR-FRRGXQJJSA-N 0.000 title claims abstract description 7
- 230000005907 cancer growth Effects 0.000 title abstract description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 108
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 claims abstract description 50
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 41
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 41
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 claims abstract description 41
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 claims abstract description 41
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 18
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 claims abstract description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 115
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 claims description 36
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 claims description 31
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 28
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 22
- 230000012010 growth Effects 0.000 claims description 22
- 241001486992 Taiwanofungus camphoratus Species 0.000 claims description 19
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 18
- 230000022131 cell cycle Effects 0.000 claims description 13
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 8
- 230000011278 mitosis Effects 0.000 claims description 8
- 230000030833 cell death Effects 0.000 claims description 6
- 230000034994 death Effects 0.000 claims description 6
- 101100220616 Caenorhabditis elegans chk-2 gene Proteins 0.000 claims description 5
- 230000000394 mitotic effect Effects 0.000 claims description 5
- 108010060385 Cyclin B1 Proteins 0.000 claims description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 3
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 claims description 3
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 claims description 3
- 102000016736 Cyclin Human genes 0.000 claims description 2
- 108050006400 Cyclin Proteins 0.000 claims description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 2
- 230000009278 visceral effect Effects 0.000 claims description 2
- 102000008178 Cyclin B1 Human genes 0.000 claims 2
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 claims 2
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 claims 1
- 210000002768 hair cell Anatomy 0.000 claims 1
- 230000006618 mitotic catastrophe Effects 0.000 claims 1
- 230000020477 pH reduction Effects 0.000 claims 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 84
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 14
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 14
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 13
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 12
- -1 ethyl acetate) Chemical class 0.000 description 12
- 230000009036 growth inhibition Effects 0.000 description 10
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 9
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 9
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 8
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 8
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 8
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 7
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 7
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- KLWPJMFMVPTNCC-UHFFFAOYSA-N Camptothecin Natural products CCC1(O)C(=O)OCC2=C1C=C3C4Nc5ccccc5C=C4CN3C2=O KLWPJMFMVPTNCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- VSJKWCGYPAHWDS-FQEVSTJZSA-N camptothecin Chemical compound C1=CC=C2C=C(CN3C4=CC5=C(C3=O)COC(=O)[C@]5(O)CC)C4=NC2=C1 VSJKWCGYPAHWDS-FQEVSTJZSA-N 0.000 description 6
- 229940127093 camptothecin Drugs 0.000 description 6
- VSJKWCGYPAHWDS-UHFFFAOYSA-N dl-camptothecin Natural products C1=CC=C2C=C(CN3C4=CC5=C(C3=O)COC(=O)C5(O)CC)C4=NC2=C1 VSJKWCGYPAHWDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 6
- 241000208843 Arctium Species 0.000 description 5
- 230000001640 apoptogenic effect Effects 0.000 description 5
- 230000008859 change Effects 0.000 description 5
- 238000006356 dehydrogenation reaction Methods 0.000 description 5
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 5
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 5
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 5
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 5
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 5
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 5
- 235000003130 Arctium lappa Nutrition 0.000 description 4
- 235000008078 Arctium minus Nutrition 0.000 description 4
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 4
- 206010036790 Productive cough Diseases 0.000 description 4
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 4
- MWKFXSUHUHTGQN-UHFFFAOYSA-N decan-1-ol Chemical compound CCCCCCCCCCO MWKFXSUHUHTGQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 4
- 210000003470 mitochondria Anatomy 0.000 description 4
- 230000006667 mitochondrial pathway Effects 0.000 description 4
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 4
- BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N platinum Chemical compound [Pt] BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 4
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 4
- 210000003802 sputum Anatomy 0.000 description 4
- 208000024794 sputum Diseases 0.000 description 4
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 231100000002 MTT assay Toxicity 0.000 description 3
- 238000000134 MTT assay Methods 0.000 description 3
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 3
- HZKFHDXTSAYOSN-UHFFFAOYSA-N Polyporic acid Chemical class O=C1C(O)=C(C=2C=CC=CC=2)C(=O)C(O)=C1C1=CC=CC=C1 HZKFHDXTSAYOSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 3
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 3
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- XVLXYDXJEKLXHN-UHFFFAOYSA-M dioc6 Chemical compound [I-].O1C2=CC=CC=C2[N+](CCCCCC)=C1C=CC=C1N(CCCCCC)C2=CC=CC=C2O1 XVLXYDXJEKLXHN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 238000007877 drug screening Methods 0.000 description 3
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 3
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 3
- 230000002438 mitochondrial effect Effects 0.000 description 3
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N succinic acid Chemical compound OC(=O)CCC(O)=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000004565 tumor cell growth Effects 0.000 description 3
- 238000000870 ultraviolet spectroscopy Methods 0.000 description 3
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 102000004091 Caspase-8 Human genes 0.000 description 2
- 108090000538 Caspase-8 Proteins 0.000 description 2
- 102000011727 Caspases Human genes 0.000 description 2
- 108010076667 Caspases Proteins 0.000 description 2
- 102000009058 Death Domain Receptors Human genes 0.000 description 2
- 108010049207 Death Domain Receptors Proteins 0.000 description 2
- 102100032340 G2/mitotic-specific cyclin-B1 Human genes 0.000 description 2
- 239000004166 Lanolin Substances 0.000 description 2
- 108010057466 NF-kappa B Proteins 0.000 description 2
- 102000003945 NF-kappa B Human genes 0.000 description 2
- 239000002033 PVDF binder Substances 0.000 description 2
- 208000020584 Polyploidy Diseases 0.000 description 2
- 101000595041 Rattus norvegicus Podocalyxin Proteins 0.000 description 2
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 2
- 102100040247 Tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 2
- 108010073929 Vascular Endothelial Growth Factor A Proteins 0.000 description 2
- 102000005789 Vascular Endothelial Growth Factors Human genes 0.000 description 2
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N adenosine Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 2
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 2
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 2
- 102000055102 bcl-2-Associated X Human genes 0.000 description 2
- AFYNADDZULBEJA-UHFFFAOYSA-N bicinchoninic acid Chemical compound C1=CC=CC2=NC(C=3C=C(C4=CC=CC=C4N=3)C(=O)O)=CC(C(O)=O)=C21 AFYNADDZULBEJA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 2
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 239000007884 disintegrant Substances 0.000 description 2
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 2
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 2
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 2
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 2
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 2
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 2
- 235000003599 food sweetener Nutrition 0.000 description 2
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 2
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 2
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 2
- 229940039717 lanolin Drugs 0.000 description 2
- 235000019388 lanolin Nutrition 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 2
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- VNWKTOKETHGBQD-UHFFFAOYSA-N methane Chemical compound C VNWKTOKETHGBQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000034 method Methods 0.000 description 2
- 210000005088 multinucleated cell Anatomy 0.000 description 2
- VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N n'-amino-n-iminomethanimidamide Chemical compound N\N=C\N=N VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N 0.000 description 2
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 2
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- 229910052697 platinum Inorganic materials 0.000 description 2
- 210000001850 polyploid cell Anatomy 0.000 description 2
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 2
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 2
- 229920002981 polyvinylidene fluoride Polymers 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 2
- BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N propan-1-ol Chemical compound CCCO BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JUJWROOIHBZHMG-RALIUCGRSA-N pyridine-d5 Chemical compound [2H]C1=NC([2H])=C([2H])C([2H])=C1[2H] JUJWROOIHBZHMG-RALIUCGRSA-N 0.000 description 2
- BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N renifolin D Natural products CC(=C)[C@@H]1Cc2c(O)c(O)ccc2[C@H]1CC(=O)c3ccc(O)cc3O BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 125000002328 sterol group Chemical group 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 239000001384 succinic acid Substances 0.000 description 2
- 229910021653 sulphate ion Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 2
- 238000012353 t test Methods 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 2
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 2
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 2
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 2
- WWTBZEKOSBFBEM-SPWPXUSOSA-N (2s)-2-[[2-benzyl-3-[hydroxy-[(1r)-2-phenyl-1-(phenylmethoxycarbonylamino)ethyl]phosphoryl]propanoyl]amino]-3-(1h-indol-3-yl)propanoic acid Chemical compound N([C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)O)C(=O)C(CP(O)(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)OCC=1C=CC=CC=1)CC1=CC=CC=C1 WWTBZEKOSBFBEM-SPWPXUSOSA-N 0.000 description 1
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 1
- 238000001644 13C nuclear magnetic resonance spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- AZKSAVLVSZKNRD-UHFFFAOYSA-M 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide Chemical compound [Br-].S1C(C)=C(C)N=C1[N+]1=NC(C=2C=CC=CC=2)=NN1C1=CC=CC=C1 AZKSAVLVSZKNRD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- GKLGUKVTTNJEBK-UHFFFAOYSA-N 3-hexyl-2-[3-(3-hexyl-1,3-benzoxazol-3-ium-2-yl)prop-2-enylidene]-1,3-benzoxazole Chemical compound O1C2=CC=CC=C2[N+](CCCCCC)=C1\C=C\C=C1/N(CCCCCC)C2=CC=CC=C2O1 GKLGUKVTTNJEBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RJZGSLRXDFRJJY-UHFFFAOYSA-N 4,7,7-trimethylbicyclo[4.1.0]heptan-6-ol Chemical compound C1C(C)CCC2C(C)(C)C21O RJZGSLRXDFRJJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000183611 Acacia suaveolens Species 0.000 description 1
- 102000007471 Adenosine A2A receptor Human genes 0.000 description 1
- 108010085277 Adenosine A2A receptor Proteins 0.000 description 1
- 235000001674 Agaricus brunnescens Nutrition 0.000 description 1
- 240000002234 Allium sativum Species 0.000 description 1
- 102100021569 Apoptosis regulator Bcl-2 Human genes 0.000 description 1
- 101100313763 Arabidopsis thaliana TIM22-2 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 239000002126 C01EB10 - Adenosine Substances 0.000 description 1
- 108090000397 Caspase 3 Proteins 0.000 description 1
- 102100029855 Caspase-3 Human genes 0.000 description 1
- 206010008428 Chemical poisoning Diseases 0.000 description 1
- 108010058546 Cyclin D1 Proteins 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010067770 Endopeptidase K Proteins 0.000 description 1
- OTMSDBZUPAUEDD-UHFFFAOYSA-N Ethane Chemical compound CC OTMSDBZUPAUEDD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010016952 Food poisoning Diseases 0.000 description 1
- 208000019331 Foodborne disease Diseases 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 230000006370 G0 arrest Effects 0.000 description 1
- 230000037057 G1 phase arrest Effects 0.000 description 1
- 102100024165 G1/S-specific cyclin-D1 Human genes 0.000 description 1
- 230000004668 G2/M phase Effects 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101000971171 Homo sapiens Apoptosis regulator Bcl-2 Proteins 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 108090000144 Human Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000003839 Human Proteins Human genes 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 102000043136 MAP kinase family Human genes 0.000 description 1
- 108091054455 MAP kinase family Proteins 0.000 description 1
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 1
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 1
- 241000282320 Panthera leo Species 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 101710179684 Poly [ADP-ribose] polymerase Proteins 0.000 description 1
- 102100023712 Poly [ADP-ribose] polymerase 1 Human genes 0.000 description 1
- 241000222341 Polyporaceae Species 0.000 description 1
- 241000222640 Polyporus Species 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 108010090931 Proto-Oncogene Proteins c-bcl-2 Proteins 0.000 description 1
- 102000013535 Proto-Oncogene Proteins c-bcl-2 Human genes 0.000 description 1
- 244000251905 Pseudocydonia sinensis Species 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 102000006382 Ribonucleases Human genes 0.000 description 1
- 108010083644 Ribonucleases Proteins 0.000 description 1
- 230000018199 S phase Effects 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930182558 Sterol Natural products 0.000 description 1
- 208000010513 Stupor Diseases 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005864 Sulphur Substances 0.000 description 1
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 1
- BZHJMEDXRYGGRV-UHFFFAOYSA-N Vinyl chloride Chemical compound ClC=C BZHJMEDXRYGGRV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 210000000683 abdominal cavity Anatomy 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 208000009956 adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 229960005305 adenosine Drugs 0.000 description 1
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000001772 anti-angiogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000719 anti-leukaemic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002946 anti-pancreatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 239000000729 antidote Substances 0.000 description 1
- 230000034720 apoptotic signaling pathway Effects 0.000 description 1
- 239000006286 aqueous extract Substances 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000003149 assay kit Methods 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 description 1
- OQUUTERJWTYTHP-UHFFFAOYSA-N butanedioate;1h-tetrazol-1-ium Chemical compound [NH2+]1C=NN=N1.[NH2+]1C=NN=N1.[O-]C(=O)CCC([O-])=O OQUUTERJWTYTHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004611 cancer cell death Effects 0.000 description 1
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 238000013043 cell viability test Methods 0.000 description 1
- 229940044683 chemotherapy drug Drugs 0.000 description 1
- 230000010428 chromatin condensation Effects 0.000 description 1
- 239000000084 colloidal system Substances 0.000 description 1
- 229940126208 compound 22 Drugs 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 239000000287 crude extract Substances 0.000 description 1
- 238000004163 cytometry Methods 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 230000006866 deterioration Effects 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 238000001378 electrochemiluminescence detection Methods 0.000 description 1
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N ethidium bromide Chemical compound [Br-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005542 ethidium bromide Drugs 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 230000001815 facial effect Effects 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 229940124600 folk medicine Drugs 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 1
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 1
- 235000004611 garlic Nutrition 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000762 glandular Effects 0.000 description 1
- 201000005787 hematologic cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000024200 hematopoietic and lymphoid system neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000011132 hemopoiesis Effects 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009545 invasion Effects 0.000 description 1
- 208000028867 ischemia Diseases 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 206010024378 leukocytosis Diseases 0.000 description 1
- 239000007937 lozenge Substances 0.000 description 1
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 1
- XELZGAJCZANUQH-UHFFFAOYSA-N methyl 1-acetylthieno[3,2-c]pyrazole-5-carboxylate Chemical compound CC(=O)N1N=CC2=C1C=C(C(=O)OC)S2 XELZGAJCZANUQH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 239000003068 molecular probe Substances 0.000 description 1
- 210000003003 monocyte-macrophage precursor cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- AJDUTMFFZHIJEM-UHFFFAOYSA-N n-(9,10-dioxoanthracen-1-yl)-4-[4-[[4-[4-[(9,10-dioxoanthracen-1-yl)carbamoyl]phenyl]phenyl]diazenyl]phenyl]benzamide Chemical compound O=C1C2=CC=CC=C2C(=O)C2=C1C=CC=C2NC(=O)C(C=C1)=CC=C1C(C=C1)=CC=C1N=NC(C=C1)=CC=C1C(C=C1)=CC=C1C(=O)NC1=CC=CC2=C1C(=O)C1=CC=CC=C1C2=O AJDUTMFFZHIJEM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000017066 negative regulation of growth Effects 0.000 description 1
- 235000012149 noodles Nutrition 0.000 description 1
- 238000012758 nuclear staining Methods 0.000 description 1
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 description 1
- 150000003833 nucleoside derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 150000002894 organic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 229920005575 poly(amic acid) Polymers 0.000 description 1
- 230000006659 positive regulation of apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- ZDWVWKDAWBGPDN-UHFFFAOYSA-O propidium Chemical compound C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CCC[N+](C)(CC)CC)=C1C1=CC=CC=C1 ZDWVWKDAWBGPDN-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000012146 running buffer Substances 0.000 description 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000003595 spectral effect Effects 0.000 description 1
- 150000003432 sterols Chemical class 0.000 description 1
- 235000003702 sterols Nutrition 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 238000012916 structural analysis Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 150000003467 sulfuric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- UGNWTBMOAKPKBL-UHFFFAOYSA-N tetrachloro-1,4-benzoquinone Chemical compound ClC1=C(Cl)C(=O)C(Cl)=C(Cl)C1=O UGNWTBMOAKPKBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000036962 time dependent Effects 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
- 230000002087 whitening effect Effects 0.000 description 1
- 239000001043 yellow dye Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
- A61K31/575—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids substituted in position 17 beta by a chain of three or more carbon atoms, e.g. cholane, cholestane, ergosterol, sitosterol
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Description
201000112 九、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明係關於一種化合物之應用，尤其係關於 —種利用由牛樟芝（▲的蠢萃取物中 所分離純化之化合物抑制腫瘤細胞生長之用途。 【先前技術】 牛樟芝⑽Od/flczVwawowea)，屬於非褶菌目、多孔科 之夕年生蕈菌類，別名掉蒜、紅掉或紅掉芝等，為台灣本土 特有藥用錢，其係腐生於唯—宿主牛_ 之中空樹幹内壁。其子實體生長緩慢，再加上牛 樟樹分布數量極為稀少，野生種牛樟芝得之不易，故更 顯其彌足珍貴。在台灣民俗醫學上，牛樟芝為上好的解毒 劑’對食物中毒、農藥中毒，均有良好的解毒作用，民間亦 常用以治療肝病毒感染等肝臟相關疾病。 牛樟芝如同一般食藥用之蕈菇類，具有許多複雜的成 刀，且數種成分已被證實具有藥理及生物活性，其中分離自 牛樟芝之萃取物與腺核甘(aden〇sine)可藉由分別抑制c_細氨 基末端激酶(C-細 kinase，概)與eg激酶㈣版㈣的活性 亚活化腺核甘A體’進而獅缺血誘發之ρα2細胞〉周亡 5 201000112 (Lu, Μ. Κ·, Cheng, J. J” Lai，W. L., Lin, Y. J·，and Huang, N. Κ. 2008. Fermented Antrodia cinnamomea extract protects rat PC 12 ceils from serum deprivation-induced apoptosis: the roie of the MAPK family. J.Agric.Food Chern.^ 56(3): 865-874)(Lu, Μ. K., Cheng, J. J., Lai, W. L., Lin, Y. R., and Huang, N. K. 2006. Adenosine as an active component of Antrodia cinnamomea that prevents rat PC 12 cells from serum deprivation-induced apoptosis through the activation of adenosine A(2A) receptors. 5W., 79(3): 252-258);萃取自牛 樟芝子實體之乙酸乙酯(ethyl acetate)可減弱人類肝癌細胞 PLC/PRF/5PLC/PRF/5之侵犯(invasion)，且其作用機制係與 抑制 NF-kappa B 活性相關(Hsu，Y· L·, Kuo, P. L.，Cho, C. Y., Ni, W. C., Tzeng, T. F., Ng, L. T., Kuo, Y. H., & Lin, C. C. 2007. Antrodia cinnamomea fruiting bodies extract suppresses the invasive potential of human liver cancer cell line PLC/PRF/5 through inhibition of nuclear factor kappaB pathway. Food C72em.7bx/co/.，45(7): 1249-1257);分離自牛樟芝之多醣體可 精由抑制血管内皮細胞生長因子（Vascular endothelial growth factor, VEGF)受體訊息傳導及血管新生，以抑制 201000112 cyclin D1 的表現(Cheng，J. J·，Huang，N. K.，Chang, Τ. Τ.， Wang, D. L., & Lu, Μ. K. 2005. Study for anti-angiogenic activities of polysaccharides isolated from Antrodia cinnamomea in endothelial cells. 5W.，76(26): 3029-3042) ° 白血病(leukemia)俗稱血癌，位居兒童惡性腫瘤發生率首 位，佔所有腫瘤的40%左右，其形成主因為白血球前驅細胞 受遺傳、病毒感染、藥物等因素的影響，造成細胞異常增生。 雖然目前臨床上治療有許多治療進展，然而治療時仍常有副 作用大及兩復發率所致無法完全治癒的困難。膜臟癌主要為 胰管上皮細胞的腺癌，由於胰臟位處於後腹腔，癌症初期的 症狀不明顯，檢查上也比較困難，同時由於此癌症具有高度 復發以及遠處轉移的特性，以及其對傳統化療藥物與放射線 治療之抗性’因此其在成人癌症巾整體治療效果目前仍不理 想’無法財術嫌者，整體五年存醇低於5 %，係為高 致死率之驗病。由於白血病以及輯癌治解低，因此能 否開U作用）且可有效治療該些癌症之新麵物仍是目 前迫切需要解決的課題。 雖然由目前諸多報導可得知牛樟芝 7 201000112 臟癌癌細胞之相_究結果，且频其所含成分已陸續被分 析出’但究竟萃取財之何财效齡可促解樟芝達到抑 繼瘤細胞絲’目前職處於試驗階段，縣有具體之相 關有效成分發表’有待進-步實驗研究來釐清，故若能將牛 樟芝萃取祕-步純化分析找ώ料取物巾所含真正有效 抑癌成分，並將其應用於抑制白血病與胰臟癌癌細胞生長 上，對於人類白血病以及胰臟癌之治療實將產生莫大的助 益。 【發明内容】 為研究出牛樟芝萃取物中所含可抑制癌細胞生長 之有效成份，本發明係由牛樟芝萃取物中分離純化出 具下列結構式之化合物：
如式（1 )結構式之化合物’其化學名為24-亞曱基羊 毛甾烧-7,9(11)-二烯-3β，15α-二醇-21-酸 (24-methylenelanosta-7,9(ll)-diene-3p,15a-diol-21-〇ic acid) > 201000112 气 IL 色夕孔 ί 酸（dehydrosulphurenic acid )，分子 式為c3IH48o4’分子量為484。 本發明Φ 4- 之去氣硫色多孔菌酸化合物係分離純化 自牛樟芝子警獅' 古瓦體之有機溶劑萃取物，有機溶劑可包括 酉r員（例如甲醇、乙醇或丙醇）、酯類（例如乙酸乙 酉曰）烧類（例如己烧）或鹵烧（例如im、氣乙 烷）立一中車又佳者為乙醇，但並不以此為限，凡是可 自牛樟芝萃取出去氫硫色多孔菌酸化合物之有機 皆可應用於此。 去氫硫色多孔菌酸化合物係藉由誘發人類胰臟癌細 胞BxPc-3產生細胞凋亡(apoptosis)，進而抑制其生長；去氡 硫色多孔菌酸化合物對於人類白血病細胞U937之生長抑 制機制’則係經由細胞瑪亡以及有絲分裂障礙(mit〇tic catastrophe)之路徑。 藉由前述化合物’本發明係將其應用於抑制腫瘤 細胞生長上’使能進一步用於治療癌症之醫藥組成份 中，增益癌症之治療效果。本發明化合物得應用之範 圍包括抑制白血病以及胰臟癌細胞等之生長，使續等 腫瘤細胞無法迅速生長，進而抑制腫瘤之增生，延缓 腫瘤之惡化，因此，可進一步利用於白血病以及胰臟 癌等癌症之治療上。 201000112 另一方面，本發明中亦可將去氫硫色多孔菌酸化合 物利用於治療白血病以及胰臟癌等醫藥組成物之成分 中，藉以抑制該等腫瘤細胞的生長。前述醫藥組成物 除包括有效劑量之去氫硫色多孔菌酸化合物外，尚可包 括藥學上可接受的載體。載體可為賦形劑（如水）、 填充劑（如蔵糖或殿粉）、黏合劑（如纖維素衍生物）、 稀釋劑、崩解劑、吸收促進劑或甜味劑，但並未僅限 於此。本發明醫藥組成物可依一般習知藥學之製備方 法生產製造，將有效成分劑量之去氫硫色多孔菌酸化合 物與一種以上之載體相混合，製備出所需之劑型，此 劑型可包括錠劑、粉劑、粒劑、膠囊或其他液體製劑， 但未以此為限。 以下將配合圖式進一步說明本發明的實施方式， 下述所列舉的實施例係用以闡明本發明，並非用以限 定本發明之範圍，任何熟習此技藝者，在不脫離本發 明之精神和範圍内，當可做些許更動與潤飾，因此本 發明之保護範圍當視後附之申請專利範圍所界定者為 準。 【實施方式】 首先取牛掉芝（cz·肋amomea )子實體利用 習知萃取方式，以水或有機溶劑進行萃取，藉以取得 牛樟芝水萃取物或有機溶劑萃取物。其中，有機溶劑 10 201000112 可包括醇類（例如曱醇、乙醇或丙醇）、酯類（例如 乙酸乙醋）、烧類（例如己貌）或鹵烧（例如氯曱燒、 氯乙烧）’但並不以此為限。其中較佳者為醇類，更 佳者為乙醇。經萃取過後之牛樟芝有機溶劑粗萃取 物’可進一步藉由各種管柱層析如:Diaion HP20，silica gel，Sephadex LH-20及逆相層析如rp_c18等加以分離純 化，之後再對所得每一純質進行抑癌效果的測試。再 針對具抑癌效果之分液藉由各種光譜數據如核磁共振 (NMR)、質譜(MS)或紫外線光譜(UV)，比旋光值進行成分 結構式分析，最終即發現本發明中如式（1)之去氫硫色 多孔菌酸化合物係具有抑制不同癌症腫瘤細胞生長之 夕文果。 為證實去氫硫色多孔菌酸化合物對腫瘤細胞生長 =抑制效果，本發明中係以Μττ分析法，根據美國國 豕癌症研究所（National Cancer Institute, NCI)抗腫瘤 ，物篩檢模式，對包括白金病與胰臟癌等腫瘤細胞進 二、I存活率之測试，並藉由檢測去氫硫色多孔菌酸化 合物處理癌細胞後之形態觀察以及細胞週期分布情形進 一步了解去氫硫色多孔菌酸化合物對癌細胞之作用機 制。由該些測試證實去氫硫色多孔菌酸化合物可降低白 ，病細胞（包括U937)以及胰臟癌細胞（包括Bxpc_3) 等^細胞生長率。此外，由形態學觀察結果可知去氫硫 色夕孔菌酸化合物所引發白血病癌細胞死亡之形態包含細 201000112 胞祠亡(apoptosis)及有絲分裂障礙(她〇此catastr〇phe)，而胰 臟癌細胞形態經去氫硫色多孔菌酸化合物處理後，先有大量 圓球狀細胞接著出現明顯凋亡現象。同時細胞週期之結果顯 示去氫硫色多孔菌酸化合物會造成白金病癌細胞之週期初 期呈現明顯G2/M積堆，接續為S期之增加；經處理後之胰 臟癌細胞週期則會停滯於G0/G1期。去氫硫色多孔菌酸化合 物誘發白血病癌細胞生長抑制之可能途徑包含細胞凋亡與 有絲分裂障礙。基於上述結果，可將去氫硫色多孔菌酸化合 物應用於白血病與胰臟癌等腫瘤細胞之生長抑制上， 亚可進一步利用於白血病與胰臟癌等癌症之治療。茲 對前述實施方式詳盡說明如下： 實施例1 : 去鐵色夕孔闺酸（dehydrosulphurenic acid )的分離 首先取約200克之牛樟芝從）子實 體’利用W知萃取方式，以水於贼下萃取3次，濃縮萃取 液獲侍25.4克之固體萃取物；剩下之子實體殘渣以乙醇加熱 迴流_敗)4 :欠，每次共約6小時，接著進行萃取物之過濾 並使有機溶劑揮發。將乙醇濃縮物(518克)懸浮於15升水 中’亚以II積比為1:1之二氣甲燒(dichl⑽methane)與水劃分 t藉以分為有機祕部份與水雜祕部份。將該有機成 W於甲醇中並區分為可溶於甲醇部份(3 8.丨克)以及不溶於 曱醇。卩份(U1克）’可溶於甲醇部份則利用LH_2〇 12 201000112 ^乙萨丁成分分離，接著應用石夕膠薄片置進 4 S日& 統展開的薄層層析法(Thin Layer omatography’ TLC)所顯示的概況，將分賴絲分為$ 個分部（fraction)，再經石夕膠柱層層析法（c〇i_
Chro她graphy)分離成8個次分部，其所用的沖提劑為甲醇 溶劑以梯度比方式加人二氯代溶射，其第3個分部阳 克)再溶解於f賴區分為可溶於f醇部份⑼.5克)以及不溶 於曱醇部份(1.1克），可溶於曱醇部份，其中第3次分部以高 效液相層析（High Performance Liquid Chromatography System，HPLC)，使用 Cosmosil 5C18_AR-II 管柱及曱醇 /水/乙酸溶劑系統’進而獲得去氫硫色多孔菌酸化合物。 去氫硫色多孔菌酸化合物之化學名為24-亞 甲基羊毛甾烧-7,9(11)-二烯-3β，15α-二醇-21-酸 (24-methylenelanosta-7,9(ll)-diene-3p,15a-diol-21-oic acid) > 分子式為C31H48O4，分子量為484，呈白色粉末狀。核
磁共振（NMR)分析值則如下所示：[a]D+60.0°(c 0.25,
MeOH); 1H NMR (300 MHz, pyridine-d5): δ 1.90 (2H, m, H-2), 3.43 (1H, t,J= 7.6 Hz, H-3), 1.32 (1H, m, H-5), 2.16 (2H, m, H-6), 6.48 (1H, br s, H-7), 5.39 (1H, d, 6.0 Hz, H-ll), 2.37 (1H, Η-12β), 2.70 (1H, H-12a), 4.75 (1H, dd, J= 5.9, 9.3 Hz, H-15), 1.09 (3H, s, H-18), 1.10 (3H, s, H-19), 2.23 (1H, H- 25), 1.01 (3H, d,J= 6.8 Hz, H-26), 0.99 (3H, d, 6.8 Hz, H-27), 4.85 (1H, br s, H-28a), 4.88 (1H, br s, H-28b), 1.42 (3H, s, H-29), 1.17 (3H, s, H-30), 1.12 (3H, s, H-31); 13C NMR (75 13 201000112 MHz，pyridine-d5): δ 36.9 (t, C-l)，28.7 (t，C-2)，78.0 (d, C-3) 39.4 (s, C-4), 49.8 (d, C-5), 23.6 (t, C-6), 122.3 (d, €-7^ l42 〇 (s, C-8), 147.1 (s, C-9), 38.0 (s, C-10), H6.3(d, C-ll), 36.5 (t C-12), 45.0 (s, C-13), 52.6 (s, C-14), 73.8 (d, C-15)539 6 〇 C-16), 46.5 (d, C-17), 16.9 (q, C- 18), 23.1 (q, C-19), 48.9 (d C-20)，178.6 (s, C-21)，32·8 (t，C-22), 31.9 (t，C-23)，155 9 (s’ C-24), 34.3 (d, C-25), 21.9 (q, C-26), 22.0 (q, C-27), l〇7.i ^ C-28)，18.3 (q，C-29)，28.8 (q, C-30)，16.6 (q, C-31)。’ ’ 實施例2 : 體外抗白血病細胞之活性測試 為進一步測試去氫硫色多孔菌酸化合物對腫瘤細 胞之抑制效果，本實施例將根據美國國家癌症研究所 (NCI)抗腫瘤藥物篩檢模式進行之。取去氫硫色多孔 菌酸化合物’加入含有人類白血病細胞 U937(monoblastoid leukemic cell line)之培養液中，以進行 腫瘤細胞存活率之測試。細胞存活率之測試可採習知 之MTT分析法進行分析，而U937為組織淋巴瘤細胞， 購自美國菌種保存中心(American Type Culture Collection， ATCC)，其係屬於人類白血病細胞系的一種，在造血過 程中被分級為單核母細胞(monoblasts)。 MTT分析法是一種常見用於分析細胞增生（cell proliferation)、存活率（percent 〇f viable cells)以及 14 201000112 細胞毒性（cytotoxicity )的分析方法。其中’ ΜΤΤ ( 3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]2,5-diphenyltetrazolium bromide)為一黃色染劑，它可被活細胞吸收並被粒腺 體中的琥珀酸四0坐還原酶（succinate tetrazolium reductase )還原成不溶水性且呈藍紫色的formazan， 因此藉由formazan形成與否，即可判斷並計算細胞之 存活率。 首先將人類白血病細胞U937置於含有牛灰清（fetal calf serum，FCS)之RPMI 1640培養液中培養24小時， 並使細胞維持於對數(exponential)生長狀態。將增生後 之細胞，使用濃度分別為0(控制組）、1.25、2.5、5、10 pg/ml之去氫硫色多孔菌酸化合物（實驗組），於pi、 5 % C〇2下培養24-72小時。其後，於避光的環境下 於每一孔内加入500 pg/ml的MTT，反應4小時後再 於每一孔内加入5〇0 μΐ isopropanol終止反應。最後以 酵素免疫分析儀在570 nm吸光波長下測定其吸光 值’藉以計算細胞的存活率。所得結果係以平均值土 標準誤差值(SEM)表示之’並藉由t檢定⑺化叫統計程 式比對各實驗結果間差異，其中p值小於〇 〇5代表具 有統計上之顯著差異，其結果如第一圖所示。 、八 由第一圖可知，於試驗第一天，藉由濃度為U5、25、 5、10 pg/ml之去氫硫色多孔菌酸化合物的作用，其可有效氺 制人類白血病細胞U937之生長，且生長抑制率會隨去^石^ 15 201000112 色多孔菌酸化合物濃度增加而提升，至試驗第三天，各濃度 去氫硫色多孔菌酸化合物對人類白血病細胞U937之生長抑 制率皆超過60%，且濃度為5與10 pg/ml之去氫硫色多孔菌 酸化合物之生長抑制率可達約95%以上，最高可達98.9%， ICso約為2 pg/ml(結果未示）。因此可證實牛樟芝萃取物中之 去氫硫色多孔菌酸化合物確實能狗利用於白血病細胞生長 之抑制，且其抑制作用係遵循劑量依賴性原則 (dose-dependent manner)與時間依賴性原則 (time-dependent manner)。 實施例3 : 體外抗胰臟癌細胞之活性測試 本測試亦係根據美國國家癌症研究所(NCI)抗腫 瘤藥物篩檢模式進行，將分離純化之去氫硫色多孔菌酸 化合物，加入含有人類胰臟癌細胞BxP〇3之培養液 中’並採前述MTT分析法進行分析，藉以測試胰臟癌 細胞存活率’其中’ BxPc-3屬於胰臟癌細胞系，購自美 國菌種保存中心(ATCC) ’其係為係為源自於人類胰腺癌 之貼附型上皮細胞株。 首先將人類胰臟癌細胞BxPc-3培養於DMEM培養 液中，此培養液尚包含：l〇〇IU/ml盤尼希林咖此丨丨此； Invitrogen，Carlsbad，CA)、100 pg/ml 鏈黴素(Strept〇mycin ; Invitrogen，Carlsbad，CA)、2 mM 麩醯胺酸 _amine ; 16 201000112
Invitrogen，Carlsbad, CA)以及 10%胎牛血清（fetal bovine serum，FBS ; Atlanta Biologicals, Norcross, GA)。將增生後 之細胞，使用濃度分別為0(控制組）、5、10pg/ml之去 氫硫色多孔菌酸化合物（實驗組），於37°C、5% C〇2 下培養24-72小時。其後，於避光的環境下於每一孔 内加入500 pg/ml的MTT ’反應4小時後再於每一孔 内加入500 μΐ isopropanol終止反應。最後以酵素免疫 分析儀在570 mn吸光波長下測定其吸光值，藉以計 算細胞的存活率。所得結果係以平均值士標準誤差值 (SEM)表示之’並藉由t檢定(纟-test)統計程式比對各實 驗結果間差異，其中户值小於〇.05代表具有統計上之 顯著差異’其結果如第二圖所示。 第二圖結果顯示，去氫硫色多孔菌酸化合物係可顯著 抑制人類胰臟癌細胞BxPc_3之生長，且生長抑制率會 隨去氫硫色多孔菌酸化合物濃度增加而提升，同時亦會隨作 用時間增長而增進生長抑制率，至試驗第三天，濃度為 5與10 pg/ml之去氫硫色多孔菌酸化合物之生長抑制率已 超過60% ’最高可達82 5%，IC5〇約為5 _結果未 不）。因此可证實牛樟芝萃取物中之去氮硫色多孔菌酸化 合物峰實能_用於人類騰臟癌細胞生長之抑制，且 其抑制作㈣遵彳_量依賴性制與時間依賴性原則。 實施例4 : 17 201000112 腫瘤細胞經去氫硫色多孔菌酸化合物處理後之細胞週期分 析 本試驗係利用流式細胞儀分析去氫硫色多孔菌酸化合物 對人類白jk病細胞U937與人類胰臟癌細胞BxPC-3之細胞 增殖的影響。
取濃度為1.25、2.5、5、10 pg/ml之去氫硫色多孔菌酸化 合物處理人類白血病細胞U937 ’以濃度為5與10 pg/ml之去 氫硫色多孔菌酸化合物處理人類胰臟癌細胞Bxpc_3，並分 別以未經處理之U937以及BxPc-3作為控制組。取上述處理後 之細胞’於4°C下以70%乙醇固定1小時，接著利用CyCieTEST PLUS DNA套組(Becton Dickinson, Lincoln Park, NJ)中提供 之含有〇·5 mg/ml 峨化丙錠(pr〇pidium i〇dide)與0.1 mg/ml RNAse之碳化丙錠溶液染色30分鐘，再以流式細胞儀（F1〇w cytometry, FACScalibur ; Becton Dickionson)檢測該些細胞 中的DNA含量，收集來自104細胞之資料並以M〇dFit(Bect〇n Dickinson)軟體分析細胞週期之變化，其結果如第三圖與 第四圖所示。 请參閱第二圖之結果，其顯示相較於未處理之控制 組’於實驗第一天’經去氫硫色多孔菌酸化合物處理之人 18 201000112 類白血病細胞U937會於G2/M期呈現顯著之停滯扣代吨現 象’而當去氫硫色多孔i酸化合物濃度較高以及處理時間較 長時(實驗第二及三天）’ sub-Gl細胞核族群比例有明顯增 加赵勢’此表不去鼠硫色多孔囷酸化合物會誘發細胞〉周亡， 多倍體(polyploid)細胞之比例亦會隨去氫硫色多孔菌酸化合 物劑量的增加而增多，此結果指出可能形成多核細胞 (multinucleated cell) ° 睛參閱第四圖’由該些結果可知經去氫硫色多孔菌 酸化合物處理之人類胰臟癌細胞BxPc_3會出現顯著之 G0/G1停滯，其sub-Gl細胞核族群比例亦有明顯增加趨勢， 但卻未出現如人類白血病細胞U937所觀察到具有多倍體 細胞比例變化的現象，其係以低倍體(hyp0(jipi〇id)細胞為 主’此顯示人類胰臟癌細胞BxPc-3死亡之主要模式為細胞 〉周亡。 實施例5 : 經去氫硫色多孔菌酸化合物處理後之腫瘤細胞型態分析 將人類白血病細胞U937與人類胰臟癌細胞BxPc»3 經去氫硫色多孔菌酸化合物處理24-72小時，以Liu，s染色 劑染色後，利用相位差倒立式顯微鏡直接觀察細胞外形的變 201000112 化，並以未經處理之細胞為控制組，其結果如第五圖與第 六圖所示。 請參閱第五圖’由圖中細胞型態可觀察到人類白 血病細胞U937經去氫硫色多孔菌酸化合物處理後，會誘發 腫瘤細胞之細胞凋亡與有絲分裂障礙(mitotic catastr〇phe);由 第六圖之結果可知，經去氫硫色多孔菌酸化合物處理之人 類騰臟癌細胞BxPc-3會呈現獨特之細胞型態變化，其中， 於試驗第一天會出現圓球狀(balloon)之細胞型態，於試驗第 二天後則可觀察到典型細胞凋亡之變化；其中，先前文獻亦 報導’藉由TNF-α處理後處於細胞凋亡階段之類纖維母細胞 (fibroblast-like cell)會出現圓球狀之細胞型態(Okamoto, K.， Mizuno, M., Nakahara, N., Natsume, A., Yoshida, J., Mori, T., Hori, S., & Kobayashi, H. 2002. Process of apoptosis induced by TNF-alpha in murine fibroblast Ltk-cells: continuous observation with video enhanced contrast microscopy. 却即—&，7(1): 77-86)，此說明去氫硫色多孔菌酸化合物可 造成人類胰臟癌細胞BxPC-3之細胞凋亡。 實施例6 : 去氫硫色多孔菌酸化合物對腫瘤細胞核内DNA之影響 20 201000112 除前述型態外觀上的變化外，細胞凋亡發生時細胞亦會 產生一些生化特性上的改變，包括細胞核染色質的濃集 (chromatin condensation )、細胞皺縮裂解形成凋亡小體 (apoptotic body )以及凋亡後期之DNA斷裂(intemucle〇s〇mal cleavage of DNA)而在DNA 電泳時形成DNA梯度(DNA ladder) 等。因此為進一步確認去氫硫色多孔菌酸化合物抑制人類白 血病細胞U937以及人類胰臟癌細胞Bxpc_3生長係與細胞 凋亡之何階段有關，本試驗利用£^八電泳檢測是否有細胞凋 亡後期’細胞核内DNA裂解成梯度片段的產生。
取人類白血病細胞U937以及人類胰臟癌細胞BxPc-3 經濃度為5 pg/ml之去氫硫色多孔菌酸化合物分別處理24、48 與72小時’並以經4μΜ抗癌物質Camptothecin處理24小時之 U937作為陽性對照組。取上述處理後之細胞，以〇 5毫升細胞 溶解缓衝液(lysisbuffer)分解該些細胞，該缓衝液係含有pH 為8.0之5 mM電泳緩衝液(Tris-borate, TBE)、0·25毫升Nonidet P-40以及 1 mM EDTA ’ 再加入RNase (Sigma，St Louis, MO) 至最終濃度為20 pg/ml，並置於3r>c下反應i小時，進一步將 細胞以300 pg/ml之proteinase K處理1小時，並分離出其 DNA。將該DNA以1.5%電泳膠置於含丨师EDTA之5 mM 21 201000112 TBE電泳緩衝液(pH 8.0)中進行電泳分析，接著將膠片以溴化 酿液(Ethidium Bromide)染色，再於紫外光下觀察，其結果 如第七圖所示。 由第七圖電泳結果顯示，相較於對照組所呈現之完整 DNA片段，經去氫硫色多孔菌酸化合物處理之人類 白血病 細胞U937中的DNA皆明顯斷裂成梯度片段。此結果確認由 去氫硫色多孔菌酸化合物誘發之U937細胞死亡模式係與細 胞凋亡後期有關。此外，人類胰臟癌細胞BxPc_3之電泳結 果並未觀察到DNA斷裂片段。（結果未示） 實施例7 : 腫瘤細胞經去氫硫色多孔菌酸化合物處理後粒線體膜電位 (mitochondrial transmembrane potential)的變化 粒線體(Mitochondria)路徑係為目前已知誘發細胞凋亡 的路徑之一’在細胞凋亡進行的時候，粒線體接受了細胞凋 亡的刺激’會調節Bcl_2家族蛋白，造成粒線體内外膜不穩 疋’便會釋出凋亡因子(apoptigenic factors)，進而誘發細胞凋 亡的發生。為探討去氫硫色多孔菌酸化合物誘使腫瘤細胞走 白 >周亡的作用機制’本試驗係檢測去氫硫色多孔菌酸化合物 22 201000112 對粒線體路徑中膜電位的影響。
將人類白血病細胞U937以濃度為5 pg/ml之去氫硫色 多孔菌酸化合物處理16小時，並以經4μΜ抗癌物質 Camptothecin處理16小時之U937作為陽性對照組，未經處理 之細胞為控制組。將上述細胞以PBS清洗後，加入40 nM 3,3’-dihexyloxacarbocyanine(DiOC6⑶；Molecular Probes， Eugene, OR)於37°C下避光培養15分鐘，立刻以流式細胞儀 分析之’並分別以波長為488 nm之激發光(excitation)與波長 為530 nm之發射光(emission)偵測綠螢光密度，以此代表粒線 體膜電位的變化，其結果如第八圖所示。 細胞凋亡過程中若受粒線體途徑影響，則粒線體的膜電 位會下降。於第八圖結果中，相較於控制組與陽性對照組膜 電位，其中陽性對照組抗癌物質Campt〇thecin之膜電位係下 降約37.1%’經去氫硫色多孔菌酸化合物處理之人類白血病 細胞U937並未呈現顯著下降趨勢，此表示去氮硫色多孔菌酸 化合物所誘導腫瘤細胞走向凋亡的路徑，可能與粒線體途徑 無關係。 實施例8 : 23 201000112 去氫硫色多孔菌酸化合物對由凋亡訊息受體傳導路徑（dea也 receptor pathway )中與腫瘤細胞凋亡相關蛋白質的影響 凋亡訊息受體傳導路徑係為一種誘發細胞凋亡的訊息 傳遞路役’某些死亡因子(deathfact〇r)例如丁娜七等，與細胞 膜上的死亡受體(death receptor, DR)如：TNF family形成鍵 結，進而將死亡訊息發送到細胞内，誘發一連串凋亡事件產 生。在整個細胞凋亡發生的過程中，會有一群對天門冬胺酸 有特異性的蛋白酶：caspase包含caspases-3與caspase-8等被活 化’並且對下游的蛋白如Poly(ADP_rib〇se)p〇lymerase(pARp) 產生水解作用，造成細胞凋亡的發生。為探討去氫硫色多孔 菌酸化合物誘使腫瘤細胞走向凋亡的作用機制，本試驗係以 西方墨點法檢測去氫硫色多孔菌酸化合物對凋亡訊息受體 傳導路徑的影響。 將人類白血病細胞U937以濃度為5 jag/mi之去氫硫色 多孔菌酸化合物分別處理〇.5、1、2、4與16小時，並以經4μΜ 抗癌物質Camptothecin處理16小時之U937作為對照組，未麫 處理之細胞為控制組。以bicinchoninic acid (BCA) assay套組 (Pierce, Rockford, IL)萃取出上述細胞之蛋白質，取等量蛋白 質（各樣品均取50μ§)以10%SDS-PAGE於20 mA以及7(M〇〇 24 201000112 伏特之定電流下進行電泳，隨後將膠體上之蛋白質轉移到 PVDF膜上。將PVDF膜以含有5 %無脂牛奶(de-fatted milk) 進行block後，加入對人類蛋白質具專一性的抗體包括： anti-Bcl-2、anti，Bax、anti-caspase 3、anti-caspase 8、anti-Cyclin B1、anti-p-Chk2以及anti-Actin(該些抗體皆購自 Transduction Laboratories，Lexington，KY，USA)，並於室溫下反應3小時， 再加入接有horseradish peroxidase之二級抗體（購自
Transduction Laboratories, Lexington, KY, USA)，最後以ECS 系統（Enhanced chemiluminescence system ; Amersham Pharmacia，Piscataway, NJ)分析之，結果係如第九圖所示。 請參閱第九圖，由圖中可觀察到相較於控制組與 對照組所示該些與細胞凋亡以及有絲分裂障礙相關之 蛋白貝表現置，經去氫硫色多孔菌酸化合物處理後之人 類白血病細胞U937會微幅增進Bcl-2的表現量，而對Bax的 表現量則無顯著影響，此外，腫瘤細胞中之caspase_3與 caspase-8蛋白酶表現量並未因去氫硫色多孔菌酸化合物之處 理而產生變化’且亦未出現PARP蛋白質被切割之片段；然 而去氫硫色多孔菌酸化合物可向上調節週期素蛋白質cyclin B1的表現量’且增進chk2的磷酸化，此顯示去氫硫色多孔菌 25 201000112 酸化合物對人類白金病細胞U937生長抑制作用可能係因 有絲分裂期細胞死亡所造成。 综上所述，由牛樟芝萃取物中所分離得之去氫硫 色多孔菌酸化合物可有效抑制人類胰臟癌細胞BxPc_3以 及人類白血病細胞U937。其中，由細胞週期及細胞型態觀 察結果可知，去氫硫色多孔菌酸化合物係藉由誘發人類胰 臟癌細胞BxPc-3產生細胞凋亡，進而抑制其生長；人類白 血病細胞U937經去氫硫色多孔菌酸化合物處理後所誘發之 生長抑制的機制則為細胞凋亡以及有絲分裂障礙，其對於粒 線體路徑以及凋亡訊息受體傳導路徑中的caspase並無影 響，且該有絲分裂障礙之傳導路徑係與有絲分裂其細胞停滯 與檢查點(checkpoint)激酶活化有密切關聯性，同時前述結果 中所不週期素蛋白質cyclin B1表現量的向上調節以及Chk2 磷酸化的增加，說明去氫硫色多孔菌酸化合物所誘發有絲分 裂期腫瘤細胞的死亡係與Chk2活化有關。 另一方面’本發明亦可將去氫硫色多孔菌酸化合物 利用於治療胰臟癌與白血病等醫藥組成物之成分中， 藉以抑制泫等腫瘤細胞的生長，並助益於胰臟癌與白 血病腫瘤之治療。前述醫藥組成物除包括有效劑量之 26 2〇1〇0〇112 去氫硫色多孔菌酸化合物外，尚可包括藥學上可接受的 戴體。载體可為賦形劑（如水）、填充劑（如蔗糖或殺 麵）、點合劑（如纖維素衍生物）、稀釋劑、崩解劑、 收促進劑或甜味劑，但並未僅限於此。本發明醫藥 、、且成物可依一般習知藥學之製備方法生產製造，將去 气力L色夕孔菌酸化合物有效成分劑量與一種以上之載體 相〉昆合’製備出所需之劑型，此劑型可包括錠劑、粉 劑、粒劑、膠囊或其他液體製劑，但未以此為限。 【圖式簡單說明】 苐一圖係本發明實施例人類白血病細胞U937於含有 濃度分別為1.25、2.5、5與10 pg/ml去氫硫色多孔菌酸 化合物之培養基中培養24-72小時後的生長抑制率結果 1 ； 圖。處理。垂直線代表三次獨立試驗之標準偏差值。 第二圖係本發明實施例人類胰臟癌細胞BxPc_3於含 有濃度分別為5與1〇 pg/ml去氫硫色多孔菌酸化合物之 培養基中培養24-72小時後的生長抑制率結果圖。垂直線 代表三次獨立試驗之標準偏差值。 第三圖係本發明實施例經去氫硫色多孔菌酸化合物處 理人類白血病細胞U937之細胞週期分析結果。（A)圖 係第一至三天未經處理之控制組；（B)圖係經125 27 201000112 pg/ml去氫硫色多孔菌酸化合物處理一至三天；（c)圖係 經2.5 pg/ml去氫硫色多孔菌酸化合物處理一至三天；(D) 圖係經5.0 pg/ml去氫硫色多孔菌酸化合物處理一至三 天；（E)圖係經10.0 pg/ml去氫硫色多孔菌酸化合物處理 一至三天。 第四圖係本發明實施例經去氫硫色多孔菌酸化合物處 理人類胰臟癌細胞BxPc-3之細胞週期分析結果。（a) 圖係第二至三天未經處理之控制組；（B)圖係經5.0 pg/ml去氫硫色多孔菌酸化合物處理二至三天；（c)圖係 經10.0 pg/ml去氫硫色多孔菌酸化合物處理二至三天。 第五圖係本發明實施例經去氫硫色多孔菌酸化合物處 理人類白血病細胞U937之細胞型態分析結果。（A)圖 係未經處理之控制組；（B)圖係經5 pg/ml去氫硫色多 孔菌酸化合物處理一天；（C)圖係經5μ_1去氫硫色多 孔菌酸化合物處理二天；（D)圖係經1.25pg/ml去氫硫 色多孔菌酸化合物處理三天。所有圖示之放大倍率皆 相同；橫線表示20 // m。 第六圖係本發明實施例經去氫硫色多孔菌酸化合物處 理人類胰臟癌細胞BxPc-3之細胞型態分析結果。（A) 圖係未經處理之控制組；(B)圖係經1〇 Pg/ml去氫硫色 多孔菌酸化合物處理一天；（C)圖係經1〇 Pg/ml去氫硫 色多孔菌酸化合物處理二天；（D)圖係經去氫 硫色多孔菌酸化合物處理三天。所有圖示之放大倍率 28 201000112 第七圖係本發明實施例經去氫硫色多孔菌酸化合物處 理人類白血病細胞U937之DNA電泳分析結果。圖中， Μ ·· DNA marker ; 1 :抗癌物質 4μΜ Camptothecin 處 理24小時；2 : 5 pg/ml去氫硫色多孔菌酸化合物處理24 小時，3 . 5 pg/ml去氫硫色多孔菌酸化合物處理48小時； 4 . 5 pg/ml去氫硫色多孔菌酸化合物處理72小時。 第八圖係本發明實施例經去氫硫色多孔菌酸化合物處 理人類白血病細胞U937之膜電位分析結果。圖中，灰 色條區·未經處理之控制組；實心線：5 μ§/ιη1去氫 硫色多孔菌酸化合物處理16小時；點狀線：4μΜ Camptothecin 處理 16 小時。 第九圖係本發明實施例經去氫硫色多孔菌酸化合物處 理人類白血病細胞U937後，與細胞死亡相關蛋白質之 表現量的分析結果。圖中，第一行：未經處理之控制 組；第二行：4μΜ Camptothecin處理16小時；第三行： 5 μ8/ιη1去氫硫色多孔菌酸化合物處理〇 5小時；第四行： 5 pg/ml去氫硫色多孔菌酸化合物處理1小時；第五行： 5 pg/ml去氫硫色多孔菌酸化合物處理2小時；第六行： 5 pg/ml去氫硫色多孔菌酸化合物處理4小時；第七行： 5 pg/ml去氫硫色多孔菌酸化合物處理16小時。 【主要元件符號說明】 無 29
Claims (1)
- 201000112 十、申請專利範圍： 種具有下列結構式之化合物用以製備抑制腫瘤細 胞生長之藥物之用途，其中該腫瘤細胞係為 白jk病或 騰臟癌之腫瘤細胞。2、 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中該化合物 係由牛樟芝萃取物所分離製得。 3、 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中該化合物 係去氫硫色多孔菌酸（dehydrosulphurenic acid )。 4、 如申請專利範圍第1或3項所述之用途，其中該白 血病腫瘤細胞係U937細胞株。 5、 如申請專利範圍第4項所述之用途，其中該化合物 係藉由細胞凋亡(apoptosis)以抑制胰臟癌腫瘤細胞之 生長。 6、 如申請專利範圍第5項所述之用途，其中該化合物 係藉由使白血病腫瘤細胞之G2/M細胞週期呈現停 滯(arrest)，並使sub-Gl細胞核族群比例增加，以誘發細 胞凋亡。 30 201000112 7、 如申請專利範圍第4項所述之用途，其中該化合物 係藉由有絲分裂障礙(mit〇tic catastrophe)以抑制白血病 腫瘤細胞之生長。 8、 如申請專利範圍第7項所述之用途，其中該化合物 係藉由向上調節週期素蛋白質cyclin B1的表現量，並增 進Chk2的磷酸化，以誘發有絲分裂障礙。 9、 如申請專利範圍第1或3項所述之用途，其中該胰 臟癌腫瘤細胞係BxPc-3細胞株。 10、 如申請專利範圍第9項所述之用途，其中該化合 物係藉由細胞〉周亡(apoptosis)以抑制胰臟癌腫瘤細胞 之生長。 11、 如申請專利範圍第10項所述之用途’其中該化合 物係藉由使胰臟癌腫瘤細胞之G0/G1細胞週期呈現 停滯(arrest)，並使sub-Gl細胞核族群比例增加’以诱發 細胞〉周亡。 12、 一種抑制腫瘤細胞生長之醫藥組成物’其係包括 一有效劑量具有下列結構式之化合物以及一藥學 上可接受之載體，其中該腫瘤細胞係為白血病或膜 臟癌之腫瘤細胞。 31 20100011213、 如申請專利範圍第12項所述之醫藥組成物，其中 該化合物係由牛樟芝萃取物所分離製得。 14、 如申請專利範圍第12項所述之醫藥組成物，其中 該化合物係去氫硫色多孔菌酸（dehydrosulphurenic acid)。 15、 如申請專利範圍第12或14項所述之醫藥組成物， 其中該白血病腫瘤細胞係U937細胞系。 16、 如申請專利範圍第15項所述之醫藥組成物，其中 該化合物係藉由細胞调亡(apoptosis)以抑制白血病腫 瘤細胞之生長。 17、 如申請專利範圍第16項所述之醫藥組成物，其中 該化合物係藉由使白血病腫瘤細胞之G2/M細胞週 期呈現停滯(arrest;)，並使sub-Gl細胞核族群比例增加， 以誘發細胞〉周亡。 18、 如申請專利範圍第15項所述之醫藥組成物，其中 該化合物係藉由有絲分裂障礙(mitotic catastrophe)以抑 制白血病腫瘤細胞之生長。 32 201000112 19、 如申請專利範圍第18項所述之醫藥組成物，其中 該化合物係藉由向上調節週期素蛋白質cyclin B1的表 現里，並增進Chk2的填酸化’以誘發有絲分裂障礙。 20、 如申請專利範圍第12或14項所述之醫藥組成物， 其中該胰臟癌腫瘤細胞係BxPc-3細胞系。 21、 如申請專利範圍第20項所述之醫藥組成物，其中 該化合物係藉由細胞凋亡(apoptosis)以抑制胰臟癌腫 瘤細胞之生長。 22、 如申請專利範圍第21項所述之醫藥組成物，其中 該化合物係藉由使胰臟癌腫瘤細胞之G0/G1細胞 週期呈現停滯(arrest) ’並使sub_Gl細胞核族群比例增 加，以誘發細胞凋亡。 33
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| TW097122699A TW201000112A (en) | 2008-06-18 | 2008-06-18 | Use of dehydrosulphurenic acid for inhibiting the growth of cancer cells |
| US12/265,599 US7994158B2 (en) | 2008-06-18 | 2008-11-05 | Method for inhibiting tumor growth with dehydrosulphurenic acid extracted from Antrodia cinnamomea |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| TW097122699A TW201000112A (en) | 2008-06-18 | 2008-06-18 | Use of dehydrosulphurenic acid for inhibiting the growth of cancer cells |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| TW201000112A true TW201000112A (en) | 2010-01-01 |
| TWI363631B TWI363631B (zh) | 2012-05-11 |
Family
ID=41431856
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| TW097122699A TW201000112A (en) | 2008-06-18 | 2008-06-18 | Use of dehydrosulphurenic acid for inhibiting the growth of cancer cells |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US7994158B2 (zh) |
| TW (1) | TW201000112A (zh) |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP2329816B1 (en) * | 2009-11-26 | 2016-04-13 | National Taiwan University | An anti-cancer active substance from antrodia camphorata, method for preparing the same and use thereof |
| JP5690371B2 (ja) * | 2013-04-25 | 2015-03-25 | 康力生技股▲分▼有限公司 | ベニクスノキタケの抽出方法 |
| US8865181B1 (en) | 2013-04-26 | 2014-10-21 | Kang Li Biotech Co., Ltd. | Extracting method of Antrodia cinnamomea |
| WO2016107582A1 (en) | 2014-12-30 | 2016-07-07 | Oneness Biotech Co., Ltd. | Compounds from antrodia camphorata, method for preparing the same and use thereof |
| TWI532432B (zh) * | 2015-03-02 | 2016-05-11 | 美和學校財團法人美和科技大學 | 三萜類化合物用以改善藻華現象之用途 |
| TWI574693B (zh) | 2015-03-06 | 2017-03-21 | Separation and Purification of Functional Components in Antrodia camphora by Supercritical Fluid Technology | |
| TWI601535B (zh) | 2016-06-23 | 2017-10-11 | 台灣利得生物科技股份有限公司 | 牛樟段木栽培牛樟芝子實體及固態培養菌絲體水及乙醇萃取物之組合物應用於抗癌藥輔助劑 |
-
2008
- 2008-06-18 TW TW097122699A patent/TW201000112A/zh unknown
- 2008-11-05 US US12/265,599 patent/US7994158B2/en active Active
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| TWI363631B (zh) | 2012-05-11 |
| US7994158B2 (en) | 2011-08-09 |
| US20090318400A1 (en) | 2009-12-24 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Lang et al. | Antitumor activity of an Artemisia annua herbal preparation and identification of active ingredients | |
| EP1066042B1 (en) | Steroidal saponins for treating alzheimer's disease | |
| Du et al. | Anti-inflammatory properties of uvaol on DSS-induced colitis and LPS-stimulated macrophages | |
| US20080021004A1 (en) | Sapogenin derivatives and their use in the treatment of cognitive dysfunction | |
| TW201000112A (en) | Use of dehydrosulphurenic acid for inhibiting the growth of cancer cells | |
| Zheng et al. | Compound K-induced apoptosis of human hepatocellular carcinoma MHCC97-H cells in vitro | |
| Kou et al. | Neuroprotective effects of a new triterpenoid from edible mushroom on oxidative stress and apoptosis through the BDNF/TrkB/ERK/CREB and Nrf2 signaling pathway in vitro and in vivo | |
| US20080020021A1 (en) | 5-Hydroxysapogenin derivatives with anti-dementia activity | |
| Cao et al. | Ginkgo biloba exocarp extracts induces apoptosis in Lewis lung cancer cells involving MAPK signaling pathways | |
| Ham et al. | Investigation of the component of Lycopodium serratum extract that inhibits proliferation and mediates apoptosis of human HL-60 leukemia cells | |
| Feng et al. | Oleanolic acid from Prunella Vulgaris L. induces SPC-A-1 cell line apoptosis via regulation of Bax, Bad and Bcl-2 expression | |
| Wang et al. | Acetylshikonin isolated from Lithospermum erythrorhizon roots inhibits dihydrofolate reductase and hampers autochthonous mammary carcinogenesis in Δ16HER2 transgenic mice | |
| CN102516344A (zh) | 一种具有抗肿瘤活性的化合物及其制备方法和应用 | |
| KR19980030402A (ko) | 에모딘의 항암제로서의 용도 | |
| CN106631804A (zh) | 一种从唇形科香茶菜属植物中分离出的化合物及其制备方法与应用 | |
| TWI444189B (zh) | 羊毛甾醇－８，２４－二烯－３β，１５α，２１－三醇抑制腫瘤細胞生長之用途 | |
| Kim et al. | Elm tree bark extract inhibits HepG2 hepatic cancer cell growth via pro-apoptotic activity | |
| Pengnam et al. | Furanocoumarin compounds isolated from Dorstenia foetida potentiate irinotecan anticancer activity against colorectal cancer cells | |
| CN105085308A (zh) | 菖蒲酰胺类化合物及其制备方法与应用 | |
| CN105854025B (zh) | 多靶点多肽—阿霉素复合物及其制备方法和应用 | |
| CN106236792B (zh) | 苦丁茶提取物的制备及抗阿尔兹海默症用途 | |
| CN105878229B (zh) | 甘松萍瑚烷型倍半萜化合物的用途 | |
| CN103288914B (zh) | 中药饿蚂蝗提取物的制备及抗老年性痴呆药物用途 | |
| CN112194702B (zh) | 一种达玛烷型三萜类化合物及其在制备治疗心血管疾病药物上的用途 | |
| He et al. | Succinyl rotundic acid inhibits growth and promotes apoptosis in the HeLa cervical cancer cell line |