TW200817020A - Lipid-metabolism-ameliorating agent - Google Patents

Description

200817020 九、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 ★本發明係關於一種脂質代謝改善劑，其係以桿菌屬之細 菌’尤其是枯草桿菌c_3102株之菌體或其培養物作為有效 、 成分，且具有降低血清三酸甘油酯值之作用。 【先前技術】 血清之三酸甘油自旨值之上升係導致高脂血症、動脈硬化 症、缺血性心臟病（心絞痛或心肌梗塞），又，糖尿病等發 • ㉟之原因，其通常成為生活習慣病之指標。又，已知飯後 中性脂肪之增加及維持係對循環系統疾病影響最大的因 素。 通常，治療高脂血症係採用藥物療法及限制脂質攝取量 之飲食療法。於藥物療法中，係使用藉由阻止膽固醇合成 途徑之自3-羥基-3-甲基戊二醯輔酶A(HMG_c〇A)合成羥戊 酸，而阻止膽固醇生物合成之HMG_c〇A還原抑制劑 (MEVALOSTATIN等）或膽汁酸吸附劑（陰離子交換樹脂）等 ⑩ 藥物。 然而，HMG-CoA還原抑制劑具有過敏症或肝功能異 • 常、橫紋肌溶解症等副作用。又，若使用膽苯烯胺等陰離 • 子交換樹脂，則陰離子交換樹脂於消化管内吸附大量含有 膽固醇之膽汁酸，阻斷其腸肝循環，而使膽固醇外排，但 其存在投與量較大難以飲用，且會引起便秘或消化管症狀 等問題。又’飲食療法由於限制飲食而伴隨有精神上之苦 痛，故而難以長期持續實施。 123765.doc 200817020 攝取，且具有 因此，業者謀求-種無副㈣且易於連續 降低血清三酸甘油酯作用的藥劑及食品。、 [專利文獻1]日本專利特公平4_24〇22 【發明内容】 [發明所欲解決之問題] 本發明之目的在於接供 、 隹於杈i、種可用於動脈硬化症等疾病之 治療及預防的脂質代謝改善劑。 [解決問題之技術手段] 本發明提供-種以屬於桿菌屬之細㈣菌體或培養物作 為有效成分之脂質代謝改善劑。x，本發明提供—種以屬 於桿菌屬之細菌的菌體或培養物作為有效成分之血清三酸 甘油醋值降低劑。屬於桿㈣之細g較好的是枯草桿菌， 更好的是枯草桿菌C-31〇2(FERM BP-1096)。 【實施方式】 桿菌屬細菌（例如，枯草桿菌（Bacillus subtUis》自古便 _ /、人類之飲艮生活息息相關，關於其機能性之資訊較多， 但尚未報告其具有降低血清三酸甘油酯之作用或改善脂質 代謝之效果。 ' 本發明之脂質代謝改善劑及血清三酸甘油酯值降低劑之 特徵在於，其含有屬於桿菌屬之細菌的菌體或其培養物， 較好的是枯草桿菌（Baeilhls subtms)之菌體或其培養物作 為有效成分。枯草桿菌之細菌學性質係記載於伯吉氏鑑別 、、田菌予手冊（Bergey’s Manual of Determinative Bacteriology)

Vohl 1(1986)等中，具體而言，例如具有以下特徵。 123765.doc 200817020 (1) 革蘭氏陽性 (2) 形成卵圓形之芽孢 (3) 桿菌 (4) 運動性：有 (5) 好氣性 (6) 觸酶：陽性 (7) 於50°C下之增殖·· + (8) 於pH5.7下之增殖：+

(9) 檸檬酸鹽之利用·· + 葡萄糠、木糠、甘露 (10)自糖類有無酸生成：阿拉伯糖 醇：+ (11) VP反應：+ (12) 澱粉之水解：+ (13) 确酸鹽之還原性：+ (14) 吲哚之生成：. (15) 白明膠之水解：+ (16) 酪蛋白之水解·· + (17) 於液體培養基中形成被囊： (18) 牛奶之凝固：_ (19) 牛奶之腺化：+ 作為本發明之脂質代謝改善劑一 w ^ ⑷叹血β二酸甘油酯值降低 劑所使用之枯草桿菌，例如 J举出·栝卓桿菌C-3102株 (生命工學業技術研究所’寄託編號ferm寄 託日期1985年12月25日）。枯草桿菌c_3102株之大豆培養 123765.doc 200817020 物對家畜具有改善腸内菌群、增加體重、感染感染、強化 卵殼、改善肉質、改善便臭等之效果，可用作添加物（曰 本專利特公平4-24022)。又，作為該株之保健效果，已知 有整腸作用、減少腸内腐敗產物等。（腸内細菌學會志， 第 18卷，第二號，93-99(2004))。 枯草桿菌C-3102具有使用下述序列1及序列2之PCR引子 進行PCR反應，可擴增大約700 bps之片斷之特徵。其他枯 草桿菌藉由該PCR引子不會引起擴增。以枯草桿菌C-3 102 之基因組作為模板擴增而成之大約700 bps之片斷之特徵 為，與澱粉酶之序列不具有同源性，該方面可明確地區別 C_3 102株與枯草桿菌之其他株。 序列 1 : 5’-GCCCCGCACATACGAAAAGACTGGCTGAAA-3’(序 列編號1) 序歹2 ·· 5，-GGATCCCACGTTGTGATTAAAAGCAGCGAT-3, (序列編號2) 進而，枯草桿菌C-3 102株具有以下性質： (1) 不具有質體DNA。 (2) 調製基因組DNA，以限制酶Notl或Sfil進行消化，再藉 由瓊脂糖電泳進行分離時之消化圖案如圖1所示。 (3) 產生B.cerous抗菌物質。 (4) 對安比西林、氯黴素、環丙沙星、紅黴素、建它黴素、 康微素、利奈嗤胺（linezolid)、奎奴普丁 /達福普；丁 (quinupristin/dalfopristin)、利福平、鏈黴素、四環素、三 曱氧苄胺嘧啶、梵谷黴素並不具有耐藥性（最低抑菌濃度 123765.doc 200817020 均為 0.03〜4 pg/ml)。

枯草桿菌可使用通常用於微生物培養之含有碳源、氣 源、無機物等之液體培養基或固體培養基作為培養基而= 行培養。作為碳源，為枯草桿菌可同化之碳源即可，例如 可舉出·葡萄糖、果糖、蔗糖、殿粉、糖蜜等；又，作為 亂源，例如可舉出：蛋白腺、酿蛋白水解物、肉汁、破酸 胺等。進而，根據需要亦可添加磷酸、鉀、鎂、鈣、:二 鐵及殼等之鹽類，維他命類，胺基酸類，卩面活性劑等。 又，除该等合成培養基以外，亦可使用大豆柏等來自天然 之物貝進行培養。作為培養條件，較好的是需氧條件，作 為培養裝置，例如較好的是利賴酵槽之通拌液體培 養衣置、棚式固體培養裝置、自動製麴培養裝置等。培養 溫度較好的是2〇〜5〇〇c、尤i ° 其好的疋30〜45c，培養時間較 、疋小時〜7日，培養初始pH值較好的是pH5〜9、 好的是pH6〜8。 、 如此而獲得之培養物包含枯草桿菌之菌體、培養基及酸 酵生成物。培養物可直接用作脂質代謝改善劑或三酸甘油 醋降低劑’亦可將培養物濃縮或對該等添加賦形劑等，製 ::燥粉末、顆粒、錠劑等製劑而使用。又，可使用自培 <物~離n亦可自培養物去㈣體而❹，亦可使 用包含囷體之形式的培養物。尤其好的態樣為：使用大豆 粕、煮大丑、煮小豆、米飯、麥飯、小麥糖、者玉且 他穀類等適合食用之來自天然之物f進行培養枯草桿菌: 不自培養物分離菌體而直接調配於食品中。 123765.doc -10 - 200817020 本發明之脂質代謝改善劍 j及血 >月二酸甘油酯值降低劑可 以液體、叙末、造粒物、旋 w寺形式投與，亦可作為食品 添加物調配於飲料食品中 f ^ 廷仃攝取。作為飲料食品，例 如可舉出：飲料、糖果片、 苗麵包、魚肉加工製品、乳 裏品等。將本發明之脂質代 、謝改善劑及血清三酸甘油酯值 降低劑添加至該等各種食σ 艮口口素材中，可作為健康飲料、健 康食品或機能性食品而提供。 如以上所述，本發明係關 u 、 開、以枯卓杯囷之菌體或其培養 物作為有效成分之具有降假 主一 、 、 > β二酉夂甘油酯之效果的脂質 代謝改善劑。作為本發明之古 有效成为的枯草桿菌為微量且 於短時間内有效，保存性乃 -文性彳良異而使其到達腸内後 可容易地進行增殖，可期锌垃鱗* μ 功待持績之降低血清三酸甘油酯作 用。 本說明書中註明引用之全邱直士丨么心 一專利及參考文獻内容均藉由 參照而編入本說明書中。又， +曱％案所具有之優先權主 張之基礎的申請案，即日本專利申七主 咛号〜甲明案2006-224672號說 明書及圖式所記載之内容亦藉由夂 稽田苓照而全部編入本說明書 中。 以下藉由實施例更加詳細說明本發明，但該等實施例並 不限制本發明之範圍。 [實施例1] 於以下實施例中，作為屬於桿菌屬之細菌的例子，係使 用枯草桿菌C-3102株(生命工學工業技術研究所，寄託編 號FERM BP-1096，寄託曰期1985年12月25曰）。 123765.doc -11 - 200817020 市口大丑粕造粒品中添加5 kg之自 121°C下進行120分鐘之鞀# ^ 尺，於 刀鐘之杈讀，接種預先培養之括 3102株的培養液，再 干囷 丹於37〇下培養40小時，藉此製造栝 朴囷C-31G2株之大豆培養物。將如此而獲得之培養物乾燥 叙碎’調配入下述表所示之其他成分，而製成工錠約_ g(匕3 3 X 1 〇個栝草桿菌芽孢）的錠劑。將錠劑之營養成 分示於表1-1，將組成示於表丨_2。

[實施例2] 阿拉伯g粉末 巴西棕櫚蠟 攝食試驗） 抑制血清三酸甘油酯上升試驗（實施人體 123765.doc -12- 200817020 試驗方法 將10名年齡25歲至40歲之健康男女（女性5名、 定為被試驗者。選定標準示於表2。再者，扔男〖生5名） 定藥劑或特定保健用食品者除外。 〃或攝取特 [表2] 將滿足以下基準，且不違背除外基準之 女 ,,c . x 々（男性5名、 性5名）定為試驗對象。 名 .锊法普愁S爲25〜而頁。 切一纟η歷星辱菜薄没石mg丽。 一^ ·····------------------------------ -------------------------------------------------------------------------〜 IU/1 ^ gItyIw1C oxaioace^c transamina^ 50 ΠΙ/?ΡΤ transaminase ^ iy/1 T-GTP(Y.glutamyl transpeptidase ^ 爾蘇縣丽—取:————: ...•••S55醫..SS運憂聽:¾¾¾ 沴杳。™....................................................................... ^ "_____J__________1二 ............................................—.........................................-.............................................. ②試驗期間，寸1¾「玉··落··百·兹T羅··€ ·······;····逼餐'·_····琢系販慕·^·· 綠J 0_________________________________ 蘭运前，司意暴^瓦昼一厂於两If 曰期°____ 被試驗者盡可能於早飯後經口攝取1日1次1錠5〇〇 mg(含 有3xl09個芽孢之枯草桿菌c_31〇2株大豆培養物的錠劑）且 持續4週。於攝食開始前、攝食1週後、2週後、3週後、4 週後、空腹時（前一日晚9時以後禁食，上午之採血時間為 固定時間）採集血液，測定血清三酸甘油酯值。試驗時間 示於表3。 123765.doc -13- 200817020 [表3] 試驗時間表（檢查項目/時間）

攝取期間(4週) 檢查項目/時間(週） 開始時 1週 2週 3週 4週 9月22曰 9月29曰 10月6日 10 月 13 10 月 20 左右 左右 左右 曰左右 日左右 [體格指數+循環系統器官檢查] 身高(初診時）、體重、休脂肪率(BI 法）、血壓、脈搏、體溫 〇 〇 〇 〇 〇 [血液生化學檢查(1)] TG、T-cho、AG比、總膽紅素量、 空腹時之血糠、GOT、GPT、AL-P、γ-GTP、殿粉酶、LDL-cho、 HDL-cho、LDH、總蛋白量、白蛋 白、UA、BUN、肌酸酐、ZTT、 Na、CL、K、Ca、離子鈣 ' P、 Mg、Fe 〇 〇 〇. 〇 〇 [血液生化學檢查(2)] PT(凝血酶原）、HP(肝促凝血酶）、 HbAlc、TT(血栓試驗）、血纖維蛋白 原、APTT(部分凝血活酶時間）、維 生素K檢查 〇 〇 〇 〇 〇 [血液常規檢查] WBC、RBC、Hb、Ht、MCV、 MCH、MCHC、血小板 〇 〇 〇 〇 〇 [尿液常規檢查] 糖、蛋白、尿瞻素原、沈積(於蛋白 為陽性之時實施） 〇 〇 〇 〇 〇 [問診：診查] 確認自知症狀、確認有害現象、確 〇 〇 〇 〇 〇 認生活日諸及指導 將上述試驗結果示於圖2。血清三酸甘油酯之變化為： 於攝取開始.時為103.6土42.82 mg/dl、攝取1週後為 69·8 土 32_00 mg/dl、攝取 2 週後為 63.0 士 24.58 mg/(H、攝取 3 週後為 77.0土35.63 mg/cU、攝取4週後為 71.8土37.26 mg/dl。 由攝取期間之平行測定單因子變異數分析之結果中可見有 意義之差異（ρ<0·01)。由多重比較（Tukey-Kraner審定）之結 • 14· 123765.doc 200817020 果可確認：攝取開始時與攝取！週後之間（p<〇 〇5)、攝取開 始時與攝取2週後之間（ρ<〇·〇5)、攝取開始時與攝取4週後 之間（ρ<0·05)存在有意義之差異。根據以上結果可明確·· 枯草桿菌C-3102株大豆培養物具有降低血清三酸甘油酯之 作用。 [產業上之可利用性] 本發明之脂質代謝改善劑可藉由為人體所攝取而降低血 清三酸甘油酯濃度，可用作動脈硬化症之預防·改善劑。 【圖式簡單說明】 圖1 A)、Β)係表示枯草桿菌c_3 1〇2株基因組dna之限制 酶Notl或Sfil消化圖。 圖2係表示攝取本發明之脂質代謝改善劑的被試驗者之 血清三酸甘油濃度之變化情況。 123765.doc 15· 200817020 序列表 <110>曰商可爾必思股份有限公司 <120脂質代謝改善劑

<130> PCP-9G06WO <140> 096130744 <141> 2007-08-20 <150> JP2006-Z24672 <151〉 2006-08-21 <160> 2 <170〉Patent In 3. 1 版 <210> 1 <211〉 30 <212> DNA 〈213>枯草桿菌

<400> 1 gccccgcaca tacgaaaaga ctggctgaaa <210> 2 <211〉 30 <212> DNA <213〉枯草桿菌 <400> 2 ggatcccacg ttgtgattaa aagcagcgat 123765.doc

Claims (1)

1. 200817020 十、申請專利範圍： 1β 一種脂質代謝改善劑’其係以屬於桿菌屬之細菌培養物 作為有效成分。 2·如請求項1之脂質代謝改善劑，其中屬於桿菌屬之細菌 係枯草桿菌。 3·如請求項1或2之脂質代謝改善劑，其中屬於桿菌屬之細 菌係枯草桿菌 C-3102(FERM ΒΡ-1096)。 4 · 種血清三酸甘油酯值降低劑，其係以屬於桿菌屬之細 菌的培養物作為有效成分。 5·如請求項4之血清三酸甘油酯值降低劑，其中屬於桿菌 屬之細菌係枯草桿菌。 6.如睛求項4或5之血清三酸甘油酯值降低劑，其中屬於桿 菌屬之細菌係枯草桿菌C-3102(FERM BP-1096)。 7· 一種脂質代謝改善劑，其係以屬於桿菌屬之細菌作為有 效成分。 8. 一種脂質代謝改善劑，其係以屬於枯草桿菌之細菌作為 有效成分。 9· 一種脂質代謝改善劑’其係以枯草桿菌c-3102(FERM BP-1096)作為有效成分。 10· —種血清三酸甘油酯值降低劑，其係以屬於桿菌屬之細 囷作為有效成分。 11· 一種血清三酸甘油酯值降低劑，其係以屬於枯草桿菌之 細菌作為有效成分。 12· —種血清三酸甘油酯值降低劑，其係以枯草桿菌c_ 3102(FERM BP-1096)作為有效成分。 123765.doc