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TW200800258A - Immunogenic substances comprising a polyinosinic Acid-Polycytidylic acid based adjuvant - Google Patents

Immunogenic substances comprising a polyinosinic Acid-Polycytidylic acid based adjuvant Download PDF

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TW200800258A
TW200800258A TW096101298A TW96101298A TW200800258A TW 200800258 A TW200800258 A TW 200800258A TW 096101298 A TW096101298 A TW 096101298A TW 96101298 A TW96101298 A TW 96101298A TW 200800258 A TW200800258 A TW 200800258A
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adjuvant
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pika
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Inventor
Haixiang Lin
Lie Tao Li
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Newbiomed Pika Pte Ltd
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Description

200800258 九、發明說明： 【發明所屬之技術領域3 發明領域 ^ 本發明大致涉及免疫原組合物和其使用方法。更特定 ' 5地，本發明涉及一種免疫原組合物，包含聚核苷酸佐劑以 • ϋ多種抗原物質，用以促進宿主體内的疾病特異性免 疫反應。 【先前技術3 • 發明背景 10 免疫系統具有産生特異性和非特異性免疫力。非特異 性免疫包含多種細胞及作用機制，例如巨嗤細胞 (macrophages)或顆粒細胞（granul〇cytes)的吞嗔作用 (phagocytosis)以呑嗟外來顆粒或抗原，以及天然殺傷細胞 、 （NK細胞）活性等。非特異性免疫力依賴是原來的免疫機 15制，且不會展現出特雜和記憶性的獲得性特性，該獲得 性特性疋特異性免疫反應的典型特點。特異性和非特異性 免疫之間的關鍵性差異是以Β#σΤ細胞的特異性反應爲基 礎。這些細胞主要是在被特定抗原所活化後 獲得他們的反 應性，而且在未來暴露於該特定抗原時展現&免疫記憶 2〇性。因此接種疫苗（涉及免疫特異性和記憶性)是一種保護機 體以對抗有害病原體的有效機制。 -般而言’ Β和Τ淋巴細胞在他們的細胞表面上有針對 特定抗原的特定堂體，產生特異性免疫力。該特異性免疫 系統會對各抗原以二種方式特異免疫反應：1}體液免疫反 5 200800258 應，涉及刺激B細胞並産生抗體或免疫球蛋白、抗原及輔助 T細胞（主要爲Th2)功能，以及2)細胞免疫反應，一般涉及T 細胞、包括細胞毒性T淋巴細胞(CTLs)和其他涉及CTL反應 的産生的細胞例如，抗原遞呈細胞以及Thl細胞。 5 爲持續尋求更安全且更有效的疫苗，重組、純化及合 成等新技術已被用以改善抗原的品質和特異性。純化、亞 單位或合成抗原顯現出安全性增加但免疫原性降低，而此 已成爲檢定出有效佐劑的一個驅動力。因此有效佐劑日漸 成爲現代疫苗的一種必要成份。佐劑通常是化合物，當它 10和抗原共同給予時(與該抗原相結合，或在給予該抗原以前 給予）會促進和/或改變對於該特定抗原的免疫反應。 常見促進免疫反應的典型佐劑包括：鋁化合物(該佐劑 常被通稱爲鋁佐劑“Alum”)、水包油乳劑（完全弗氏佐劑CFA 是一種水包油乳劑，含有經乾燥和熱殺滅的結核桿菌）、皂 15甙(從皂質樹歧分離而來，該佐劑活性成 份被稱爲QuileA)、CPGODN(合成寡聚脫氧核苷酸，含有 去甲基化的CpG二核苷酸）、從明尼蘇達Re595沙氏桿菌 (心/mo狀//a Re595)的脂多糖衍生而來的單磷酰 脂A(MPL)、脂質體(通常由如磷脂等可生物降解性材料製成) 2〇以及可生物降解性聚合微球體（由如聚膦腈 (polyphosphazene)和聚酐等多種聚合物製成）。這些化合物 的佐劑性質已經過評估各有優缺點。 聚核苷酸複合物已在試驗用作佐劑等多種用途上。雙 鏈RNAs(dsRNAs)是非常有效的生物修飾因子，可在納摩爾 200800258 濃度下對細胞引起明顯作用。dsRNA的調控效應包括在分 子和細胞水平上廣泛的作用。 在分子水平上，dsRNAs可誘導如干擾素(interferon)的 合成、蛋白質激酶的産生、增進組織兼容性抗原以及抑制 5代謝作用等生物效應。在細胞水平上，dsRNA可激發如熱 原性(pyrogenicity)、細胞分裂（mit〇genicity)、巨嗟細胞活 化、活化體液免疫、活化細胞免疫以及引發抗病毒等生物 效應。dsRNAs的免疫調控效應已被揭露於美國專利第 4，124,702號，其提出dsRNAs在活的動物細胞中誘導干擾素 10産生。美國專利第3,906,092號提出含有聚核苷酸或聚核苷 酸複合物的疫苗增強佐劑型疫苗抗體反應。Houston等人建 立PICLC(聚肌苷酸聚胞苷酸poly_L-離胺酸羧基-甲基纖維 素複合物)作一種有效的佐劑，藉此增加初級抗體反應而無 需其他佐劑的輔助。 15 作爲被研究最多的聚核苷酸複合物中的一種，聚肌苷 酸-聚胞苷酸(PIC)在用於猴和人體時並不有效，這是因爲 PIC在進入體内後不穩定。因此許多方式用來改進pIC的不 足，例如，由PIC與poly-L-賴氨酸氩溴酸鹽複合物對於胰核 糖核酸酶水解的抵抗性較原PIC高約5至15倍。 2〇 Lin等人敍述，一種包含聚肌苷酸-聚胞苷酸、卡那黴素 和鈣離子的抗病毒藥物可用作一種佐劑（參見Lin，βί α/.，A new immunostimulatory complex (PICKCa) in experimental rabies: antiviral and adjuvant effects, Arch Virol, 131： 307-19, 1993;以及中國專利93105862.7號）。中國專利第93105862.7 7 200800258 號^1、由nc、卡那黴素和約離子所構成的複合物（簡稱 PICKCa)在人和哺乳動物作爲疫苗佐劑用途。但是，Lh發 現該種原先發現的PICKCa型作爲佐齊!時不能提供最佳的 有效性/安全性狀態，且在某些情況下會引起令人無法接受 5 的不良副作用。 本發明提供具有改善有效性和安全性狀態的新穎免疫 原組合物，以及使用該等組合物的方法。本發明免疫原組 合物包含聚核皆酸佐劑和抗原。 文獻 10 相關參考資料列示於下： JP 1093540A2; 美國專利第4，124,702號 美國專利第3,692,899號 美國專利第3,906,092號 15 美國專利第4,389,395號 美國專利第4,349,538號 美國專利第4,024,241號 美國專利第3,952,097號
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Laboratory Techniques in Rabies Edited by F X Meslin, Μ M Kaplan，H Koprowski 4th，1996, Edition ISBN 92 4 1544 1 【發明内容3 15 發明概要 總的來說，本發明涉及新穎的免疫原組合物，其包含 聚核普酸佐劑和免疫原性或抗原性物質，以及用以促進免 疫反應的方法。 因此，本發明提供一種免疫原組合物。該組合物包含： 20 (a)聚核苷酸佐劑，該佐劑包含：聚核糖肌苷-聚核糖胞苷 Ϊ文(PIC)、至少一種抗生素以及至少一個正價離子；以及(b) 至少一種抗原，其中該組合物被配製成供持續釋放給予形 式。 依據本發明的免疫原組合物可包含聚核苷酸佐劑組合 10 200800258 物，該聚核苷酸佐劑組合物中的分子在分子量上是異質 的，其中該分子量爲至少66,000道爾頓。 圖式簡單說明 第1圖-以含有PIKA和/或HBsAg adw的疫苗進行免疫. 5後，利用ELISPOT法來檢測産生干擾素的小鼠脾細胞； 弟2圖-以含有PIKA和/或HBsAg adw的疫苗進行免疫 後，利用ELISPOT法來檢測産生m-2的小鼠脾細胞； 第3圖-以含有ΡΙΚΑ和/或HBsAg adw的疫苗進行免疫 後，利用ELISPOT法來檢測被小鼠脾細胞所産生的IL-4 ; 10 第4圖-以含有PIKA和/或HBsAg adw的疫苗進行免疫 後，利用ELISA法檢測來自於小鼠血清(稀釋4〇〇倍）的特異 性IgG效價； 第5圖-以含有PIKA和/或滅活裂解型流感抗原 (inactivated split influenza antigen)的疫苗進行免疫之後，利 15用ELISPOT法來檢測産生干擾素-T的小鼠脾細胞； 第6圖-以含有PIKA和/或滅活裂解型流感抗原的疫苗 進行免疫後，利用ELISPOT法來檢測產生IL-2的小鼠脾細 胞； 第7圖-以含有PIKA和/或滅活裂解型流感抗原的疫苗 2〇 進行免疫後，利用ELISPOT法來檢測産生IL-4的小鼠脾細 胞； 第8圖·以含有PIKA和/或滅活裂解型流感抗原的疫苗 進行免疫後，利用ELISA·法檢測來自於小鼠血清（稀釋900 倍）的特異性IgG效價； 11 200800258 第9圖-以含有PIKA和/或HIV gp 120抗原的疫苗進行免 疫後，利用ELISPOT法來檢測産生干擾素-7的小鼠脾細 胞； 第10圖-以含有PIKA和/或HIV gpl20抗原的疫苗進行 5 免疫後，利用ELISPOT法來檢測産生IL-2的小鼠脾細胞； 第11圖-以含有PIKA和/或HIV gpl20抗原的疫苗進行 免疫後，利用ELISPOT法來檢測産生IL_4的小鼠脾細胞； 第12圖·以含有PIKA和/或HIV gpl20抗原的疫苗進行 免疫後，利用FACS法來分析小鼠脾細胞，圖中顯示表達干 10 擾素-r的CD4+細胞百分率； 第13圖-以含有PIKA和/或炭疽菌rPA抗原的疫苗進行 免疫後，利用ELISPOT法來檢測産生干擾素1的小氣脾細 胞； 第14圖-以含有PIKA和/或炭疽菌rPA抗原的疫苗進行 15 免疫後，利用ELISPOT法來檢測産生IL-2的小鼠脾細胞； 第15圖-以含有PIKA和/或炭疽菌rPA抗原的疫苗進行 免疫後，利用ELISPOT法來檢測産生IL-4的小鼠脾細胞； 第16圖-以含有PIKA和/或炭疽菌rPA抗原的疫苗進行 免疫後，利用FACS法來分析小鼠脾細胞，圖中顯示表達干 20 擾素 7的CD4+細胞百分率； 第17圖-以含有PIKA和/或炭疽菌rpA抗原的疫苗進行 免疫後，利用ELISA法檢測來自於小鼠血清(稀釋4〇〇件 特異性IgG效價； 第18圖·以含有PIK A和/或炭疽菌r pA抗原的疫苗進^ 12 200800258 4 5 免疫16周之後，利用ELISA法檢測來自於小鼠血清的特異 性IgG效價； 第19圖-以含有PIKA和/或HSV2-gD抗原的疫苗進行免 疫後，利用ELISPOT法來檢測産生干擾素-τ的小鼠脾細 胞； 第20圖·以含有PIKA和/或HSV2-gD抗原的疫苗進行免 疫後，利用ELISPOT法來檢測産生IL-2的小鼠脾細胞； 第21圖-以含有PIKA和/或HSV2-gD抗原的疫苗進行免 疫後，利用ELISPOT法來檢測産生IL-4的小鼠脾細胞； 10 第22圖-以含有ΡΙΚΑ和/或HSV2-gD抗原的疫苗進行免 疫後，利用FACS法來分析小鼠脾細胞，圖中顯示表達干擾 素-r的CD4+細胞百分率； 第23圖-以含有PIKA和/或HSV2-gD抗原的疫苗進行免 疫後，利用ELISA法檢測來自於小鼠血清（稀釋2,700倍）的 15 特異性IgG效價； 第24圖_以含有PIKA和/或滅活H5N1抗原的疫苗進行 免疫後，利用ELISPOT法來檢測産生干擾素的小鼠脾細 胞； 第25圖-以含有PIKA和/或滅活H5N1抗原的疫苗進行 20 免疫後，利用ELISPOT法來檢測産生IL-2的小鼠脾細胞； 第26圖-以含有PIKA和/或滅活H5N1抗原的疫苗進行 免疫後，利用ELISPOT法來檢測産生IL-4的小鼠脾細胞； 第27圖-以含有PIKA和/或滅活H5N1抗原的疫苗進行 免疫後，利用FACS法來分析小鼠脾細胞，圖中顯示表達干 13 200800258 擾素-r的CD4+細胞百分率； 第28圖·以含有PIKA和/或滅活H5N1抗原的疫苗進行 免疫後，利用ELISA法檢測來自於小鼠血清(稀釋900倍）的 特異性IgG效價； 5 第29圖-以含有PIKA和/或全部滅活SARS抗原的疫苗 進行免疫後，利用ELISA法檢測來自於小鼠血清（稀釋 16,000倍）的特異性IgG效價； 第30圖-以含有PIKA和/或滅活H5抗原的疫苗進行免疫 後，利用ELISA法檢測來自於雞血清的特異性抗體H5N1的 !〇 效價； 第31圖-以含有PIKA和/或滅活H9抗原的疫苗進行免疫 後，利用ELISA法檢測來自於雞血清的特異性抗體H9N2的 效價； 第32圖-暴露於野生型狂犬病毒後再接受狂犬病疫苗 15 治療的小鼠的存活率； 第33圖·以含有PIKA和/或HBsAg adw的疫苗進行免疫 後，利用ELISA法檢測來自於小鼠血清的特異性抗體效價； 第34圖-以含有PIKA和/或滅活裂解型流感抗原的疫苗 進行免疫後，利用ELISA法檢測來自於小鼠血清的特異性 2〇 抗體效價； 第35圖-以含有PIKA和/或HBsAg的疫苗進行免疫之 後，利用ELISA法檢測來自於小鼠企清的特異性igG1效價； 第36圖-以含有PIKA和/或HBsAg的疫苗進行免疫之 後，利用ELISA法檢測來自於小鼠血清的特異性IgG2a效 14 200800258 價； 第37圖-以含有ΠΚΑ和/或HBsAg的疫苗進行免疫之 後，利用ELISPOT法來檢測產生干擾素的小鼠脾細胞； 第38圖-以含有ΠΚΑ和/或HBsAg的疫苗進行免疫之 5 後，以2ug/ml的IPQ肽再刺激6天，利用ELISPOT法來檢測 産生干擾素-7"的小鼠脾細胞。 表1提供一個可作爲抗原來源的典型病毒病原體以及 與這些機體相關的疾病的列表。 ® 表2提供一個可作爲抗原來源的典型細菌病原體以及 10 與這些機體相關的疾病的列表。 表3提供一個可作爲抗原來源的典型真菌病原體以及 與這些機體相關的疾病的列表。 表4提供一個可作爲抗原來源的典型寄生蟲以及與這 些機體相關的疾病的列表。 15 表5提供一個可作爲抗原來源的典型癌腫(例如以組織 種類來分類）的列表。 _ 【實施方式】 較佳實施例之詳細說明 本發明可通過後續對於本發明一些實施方案描述以及 20其中所包括的實施例的詳細内容而更容易被瞭解。 本申請在整篇内容中參照公開文獻，這些公開文獻的 内谷被並入本申請中作爲參考，以充分地敍述本發明所屬 技術領域的水準。 在進一步敍述本發明之前，應明瞭本發明不會被局限 15 1 200800258 於所述特定實施方案中 的。亦應明瞭本說明書 貫施方案，而非作& ，因爲這些實施方案必然是多椽 中所使用的用語僅是爲了闡述特定 〃 爲限制’因爲本發明的範圍將會被僅僅 界定在所附的權利要求中。 本說明書中所使用的所有技術和科學
除非另行界定， #材料均可用以實施或測試本發明。本說明書中所提到的 W所有公開文獻均被並入於此作爲參考，以揭示並說明所述 公開文獻中的方法和/或材料。 應注意’如本申請說明書和權利要求中所使用的用 m除非刚後文意指明另有其他意義，否則單數形用語 a、‘and”和“the”包括複數形用語。因此，例如提及“免疫 15原組合物，，即包括該組合物的的複數形式，提及“該抗原，，即 包括提及一或多個抗原以及熟習於本領域技術人士所知悉 的等效體等等。此外應注意，權利要求可被撰寫成排除任 何可選擇性成分。因此，此一說明是要作爲使用例如“僅有 (solely)”、‘‘只有（only)”等排除性用語於權利要求構成要件 20的相關載述内容時或是使用“負向，，限制（“negative” limitation)時的前述基礎(antecedent basis)。 名詞定義 在陳述本發明的詳細内容之前，應當瞭解被使用於本 說明書中的數個用語。 16 200800258 使用於此處的“佐劑”此用語是指增加或改變宿主對於 抗原化合物的免疫反應的任何物質或物質混合物。特定地 呑見. 1 · “PICKCa”此用語是一般性地指稱由PIc卡那黴素和 5辦所構成的組合物，而和組合物的特定物理和免疫原性無 關。 2· “Av-PICKCa”是指PICKCa在商業上被使用作爲抗病 毒藥劑的形式。 3· “PIKA”是指本發明組合物，包含I>IC、抗生素(例如 10 卡那黴素）以及陽離子(例如鈣），其中所述PIKA的特徵在於 物理特性(例如本說明書中所敍述的分子量、尺寸等），以使 得PIKA在給予後可展現出一個佐劑的特性，且具有相較於 以PICKCa爲例更低的副作用（例如毒性降低）以及相較於以 Av-PICKCa爲例更高的效力強度（例如促進增強的免疫反 15 應）。 “聚I:C”或“PIC”等用語是指含有聚核糖肌苷和聚核糖 胞苷核酸的組合物，亦分別稱作爲聚肌苷酸-聚胞苷酸。 “含PIC分子”或“含I>IC化合物”是非限制性地指稱 PIC，它可選擇性地通過複合或組合所述含PIC分子的組合 2〇物中的抗生素（例如卡那黴素）以及陽離子（例如鈣）中的至 少一者或二者。在一實施方案中，在複合物中該含PIC分子 不包含聚-L-賴氨酸或其衍生物。 在本發明佐劑組合物的前後文中所使用的“異質”此用 語是指該組合物的成份(例如含I>IC分子)在分子量、尺寸或 17 200800258 此二者的物理特性上不是均一的。當組合物被描述成對於 給定物理特性呈異質，且進一步通過該物理特性的數值範 圍來描述時，即是將該組合物鼓述成實質上包含以具有分 佈在所述範圍内的物理特性爲特徵的分子。雖然該組合^ 5可能不會含有代表所述範圍的下及上限内的每一物理特性 數值的分子，但該組合物通常會包含至少一個具有該上限 數值或下限數值物理特性的分子。在某些實施方案中，兮 組合物可包含位於用以描述該組合物的所述物理特性範圍 以外的分子。這些在組合物中位於所定範圍以外的分子不 1〇會實質影響該組合物的基本的和新穎的特性。 “個體”此用語在此和“宿主，，、“主體，，和“動物，，互換使 用，包括人類及所有畜養(如家畜和寵物)和野生的動物及禽 鳥，其非限制性地包括牛、馬、乳牛、豬、綿羊、山羊、 狗、貓、兔、鹿、紹、雞、轉、鶴、火雞、鬥雞等。 15 “抗體”此用語包括多克隆抗體及單克隆抗體以及這些 抗體的抗原化合物結合片段’包括ΡΆ、F(ab，)2、Fd、FV 片段，以及這些抗體和片段的單鏈衍生物。此外，“抗體，， 此用語包括天然發生的抗體以及非天然發生的抗體，包括 例如嵌合型（chimedc)、雙功能型（bifuncti〇nal)*人源化 20 (humanized)抗體，以及相關的合成異構形式(iS0f0rms)C3“抗 體”此用語可和“免疫球蛋白”互換使用。 如本說明書中所使用，“抗原化合物，，此用語是指可在 適當情形下被免疫系統所辨識（例如結合至抗體或被加 工，以誘導細胞免疫反應）的任何物質。 18 200800258 如本說明書中所使用，“抗原，，包括但不限於細胞、細 胞挺取物、1 蛋白貝、脂蛋白、糖蛋白、核蛋白、多狀、狀、 多糖、多袖^ ^赠織合物、多糠的肽仿真體、脂肪、糠脂質、糖 類、病養、+ + 病t提取物、細菌、細菌提取物、真菌、真菌 、 、多細胞生物例如寄生蟲、以及過敏原。抗原可爲 生（例如來自於被給予該抗原的個體以外的其他來 來自於一個不同的物種）或是内源性(例如源自於宿
_内’例如身體的疾病因子、癌抗原、病毒感染細胞所 産生的^原等等）。抗原可以是天然型（例如天然産生的）、 10 合成型 %夏組型。抗原包含細胞提取物、完整細胞和純化 抗原，复由ς ^ Τ純化”此用語是指該抗原呈現相較於抗原通常 存在的1 展境和/或相較於粗提物(例如抗原的培養形式）更爲 豐富的形式。 兒明書中所使用的“免疫原組合物，，此用語是指由二 或更夕種物質（例如抗原和佐劑)所構成的組合，當將這些物 貝、6予信主時會共同激發免疫反應。 “多肽Μ、“肽，，、“寡肽，，和“蛋白，，等用語在本說明書中可 互換使用，它們的意思是任何長度氨基酸聚合物形式，該 聚合物形式可包括編碼和非編碼性氨基酸、經化學或生化 20修飾或衍生的氨基酸以及具有修飾肽主鏈的多肽。 “抗原化合物有效量”是指抗原化合物的用量將會致使 個體產生針對該抗原化合物的特異性免疫反應，該抗原化 合物可選擇性地和佐劑組合。 “免疫反應”此用語是指脊椎動物個體的免疫系統對於 19 200800258 抗原性或免疫原性化合物的任何反應。典型的免疫反應包 括但不限於局部及系統性細胞及體液免疫反應，例如包括 CD8 + CTLs的抗原特異性誘導作用在内的細胞毒性T淋巴 細胞(CTL)反應、包括T-細胞增殖反應和細胞因子釋出作用 5 在内的輔助T-細胞反應，以及包括抗體反應在内的B-細胞 免疫反應。 本說明書所使用的“誘導免疫反應”此用語是一般性地 包含免疫反應的誘導和/或增強（induction and/or potentiation)。 1〇 “誘導免疫反應”此用語是指刺激、起始或誘導一個免 疫反應。 “增強（potentiating)免疫反應”是指一個既存的免疫反 應被改善、助長、補充、擴增、促進、增加或延長。 “增強免疫反應”此表達方式或類似表達方式的意思 15 是，相較於先前的免疫反應狀態，免疫反應被提高、改善 或上升，而對宿主有利，所述先前的免疫反應狀態例如給 予本發明的免疫原組合物之前的免疫反應狀態。 “體液免疫力（humoral immunity)”和“體液免疫反應 (humoral immune response)”等用語是指因應抗原刺激而産 20 生抗體分子的免疫形式。 “細胞免疫(cell-mediated immunity)”和“細胞免疫反靡 (cell-mediated immune response)’’等用語是指淋巴細胞所提 供的免疫防禦力，例如T淋巴細胞在靠近受害細胞時所提供 的防禦力。細胞免疫反應通常包括淋巴細胞的增殖。當測 20 200800258 量“淋巴細胞的增殖”時，會測量淋巴細胞因應特定抗原的 增殖能力。淋巴細胞增殖是指B細胞、T-輔助細胞或細胞毒 性T-淋巴細胞(CTL)的細胞增殖。 “免疫原量”此用語是指，相較於沒有聚核苷酸佐劑時 5 抗原所誘導的免疫反應，當與本發明的免疫原組合物共同 給予時足以刺激免疫反應的抗原用量。 “免疫增效量（immunopotentiating amount)” 此用語是 指’相較於沒有聚核苷酸佐劑時所觀察到的抗體效價和/或 細胞免疫反應水平，當佐劑和在本發明組合物中的抗原化 10 合物共同給予時，致使抗體效價和/或細胞免疫反應增加所 需的佐劑量。 本說明書中所使用的“治療，，此用語是一般性地指稱獲 得所需藥理和/或生理效應。該效應從完全地和/或部分地防 止疾病或其症狀的角度來看可以是屬於預防性質的，和/或 15該效應從完全地和/或部分地穩定或治癒疾病和/或疾病所 導致的負面效果來看可以是屬於醫療性質的。本說明書中 所使用的“治療，，此用語涵蓋對於個體（特別是哺乳動物個 體’更特別是人類）體内的疾病的任何處理，且包括：⑷ 預防可能有罹病傾向但尚未診斷出罹病的個體發生疾病或 2〇症狀’（b)遏制疾病症狀，例如阻止該疾病症狀的發展；或 疋舒緩疾病症狀，例如致使該疾病或症狀消退；（c)降低疾 病傳木物質所産生的産物水平(例如毒素、抗原等）；(d)降 低對於疾病傳染物質的不利生理反應(例如發燒、組織水腫 等)。 21 200800258 如本"兒月θ中所使用，“混合”此用語包括用以組合組 〇物的成a的任何方法；這些方法包括但不限於摻合、分 配、溶解、乳化、凝隹 ^ , Λ /规果、懸浮或將組合物的組成份合理地 加以組合的其他方法。 5 > _子上可接&的鹽’，的化學物意指該鹽是藥用上可接 又的且擁有母化合物的所需藥理活性。這些鹽包括：⑴ 口成孤的酉夂例如鹽酸、氣漠酸、硫酸、确酸、填酸等無 機酉夂共同^/成鹽，或是和例如乙酸、丙酸、已酸、環戊丙 酉夂^乙酸、丙酮酸、乳酸、丙二酸、破拍酸、蘋果酸、 10馬來酉夂、虽馬酸、酒石酸、棒檬酸、苯甲酸、3_(4_羥基苯 酰基)苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲石《、乙績酸、1，2-乙 一石頁酸、2-羥基乙磺酸、笨磺酸、4_氯苯磺酸、2_萘磺酸、 4-甲苯磺酸、樟腦磺酸、葡庚糖酸、4,4，_亞甲基雙_(3_羥基 -2-烯-1-羧酸）、3-苯基丙酸、三曱基乙酸、三級丁基乳酸、 15月桂基硫酸、葡萄糖酸、谷氨酸、羥基萘曱酸、水楊酸、 硬脂酸、#康酸等有機酸等共同形成鹽；或是(2)當母化合 物中所存在的酸性質子被如鹼金族金屬離子、鹼土族金屬 離子或銘離子等金屬離子所置換，或是配位有如乙醇胺、 一乙醇胺、二乙醇胺、氨基丁三醇(tr〇methamine)、甲基葡 20 萄糖胺(N，ethylglucamine)等有機鹼時，所形成的鹽。 本說明書中所使用的“單位劑型，，此用語是指數個在實 體上呈分離的單位，適合作爲使用於人類和動物個體的單 位劑量’各個單位含有一預定量的本發明化合物，該預定 量經計算後呈現一個足以和藥學/藥理上可接受的稀釋 22 200800258 劑、載劑或載體共同産生所需效應的用量。 示性膏施方案 本發明涉及用在人類、非人類動物或細胞培養物中引 起和/或促進免疫反應的免疫原組合物和方法，該免疫反應 5可爲體液和/或細胞免疫反應。一般而言，本發明免疫原組 合物包含抗原（“抗原組合物”)和佐劑。該佐劑的存在會促進 或改變對於該抗原的免疫反應。該佐劑可通過影響免疫球 蛋白、趨化因子和/或細胞因素的亞型（異構型)的産生而改 瓷免疫反應的品質。結果先天性免疫力、體液和/或細胞免 10疫反應因該佐劑的存在而更加有效。 一個特別的優點在於PIKA佐劑和抗原物質相組合可 有效地引起特異體液免疫反應，從而增進保護性免疫力。 另一個重要優點在於PIKA佐劑和抗原物質相組合可 引起特異細胞免疫反應，而該特異細胞免疫反應是治療用 15疫苗在限制和治療細胞内病毒、細菌和病原感染時以及臨 床疾病治療(例如治療癌症或自體免疫疾病）時所需要的。 因此，本發明包括組合物，這些組合物具有特殊的產 物特性，使這些組合物特別適合使用作爲疫苗，以給予動 物和/或人類’以因應對於誘導有益免疫反應之安全佐劑的 2〇 需求。 因此’本發明提供可安全地使用於人類和動物的佐劑 和免疫原組合物。 因此，本發明提供一種免疫原組合物，包含··（a)聚核 普酸佐劑，該佐劑包含：聚核糖肌苷-聚核糖胞苷酸(PIC)、 23 200800258 至少一種抗生素以及至少一個正價離子；以及(b)至少一個 抗原；其中該組合物被配製成供持續釋放給予之用。 依據本發明的免疫原組合物可包含聚核苷酸佐劑组合 物，該組合物中的分子在分子量上是異質的，其中該分子 5量爲至少66,〇〇〇道爾頓。66,000道爾頓的數值相當於約64§ 沈降係數單位（Svedbergs)的分子尺寸。因此，66,〇〇〇至 1，200,000道爾頓的分子量範圍相當於約64至24〇沈降係數 單位的分子尺寸。 在一些實施方案中，PIKA佐劑組合物包含聚核苷酸、 H) -種抗生素以及-個正價離子，其中該聚核㈣可爲聚核 糖肌苦-聚核糖胞普酸(PIC);該抗生素可爲卡那黴素，以及 該離子可以是鈣。 在一個特別相關方面’本發明提供一種用以增進抗原 化合物的抗原性的免疫原組合物，包含可誘導抗原特異性 15 細胞免疫反應的聚核苷酸佐劑組合物。 在-個特別相關方面’本發明提供—種用以增進抗原 化合物的抗原性的免疫原組合物，包含可誘導抗原特異性 體液免疫反應的聚核苷酸佐劑組合物。 在一個特別相關方面，本發明提供用以增進抗原化合 2〇物之抗原性的免疫原組合物，包含可誘導特定細胞和體液 合併免疫反應的聚核苷酸佐劑組合物。 在一個特別相關方面，本發明提供佐劑組合物或含有 佐劑組合物的免疫原組合物’其中該佐劑組合物或該免疫 原組合物被冷凍乾燥。 24 200800258 在一個特別相關方面，本發明提供聚核苷酸佐劑組合 物在製備一用以誘導宿主免疫原反應的藥劑上的用途。
聚核苷酸佐I 本發明免疫原組合物具有含PIC聚核苷酸佐劑（例如 5 PIKA組合物)通常包含聚肌苷酸、聚胞苷酸、一種抗生素(例 如卡那黴素），以及二價離子(例如鈣）。請明瞭，本說明書 以PIKA作爲這種含PIC佐劑的範例。 相關含PIC佐劑可利用在本領域中可得的方法來製 造。含PIC佐劑組合物可通過任何適當方法所製造。例如， 10聚核苷酸佐劑組合物可通過在具有pH6至pH8的pH值的氣 化鈉/磷酸鹽緩衝液内，將聚肌苷酸、聚胞苷酸、種抗生素 和正價離子來源加以混合而製成。聚肌苷酸和聚胞苷酸的 濃度通常爲0·1至10 mg/ml，通常爲0 5至5㈤以—且更常爲 0.5 至2.5 mg/ml。增色值（hyperchromicity vaiue)應高於 15 10%、高於15%、高於20%或高於50%。PIC的製備以及和抗 生素（如卡那黴素）和正價離子（如約）的組合通常是在符合 於國際k良制私規範（Good Manufacturing Process)的品質 標準下進行。 在本發明的某些實施方案中，該佐劑的抗生素組份是 20卡那辙素。當該抗生素是卡那黴素時，在一些實施方案中， ,聚核苷酸佐劑組合物内的卡那黴素可和一或多種抗生素共 同使用或被一或多種抗生素所取代，這些抗生素選自於包 括泰百黴素 '蒽環黴素、丁苷菌素硫酸鹽、慶大黴素、潮 Μ素、艾米康絲菌素、雙去氧卡那黴素、暗黴素、美它酰 25 200800258 胺、新黴素、嘌呤黴素、鏈黴素和鏈脲黴素所構成的群組 中。本發明聚核苷酸佐劑組合物内的抗生素(例如卡那黴素 等）的濃度通常爲約1〇單位/mlS1〇〇,〇〇〇單位/m卜約1〇〇單 位/ml至10,〇〇〇單位/m卜或約5〇〇單位/ml至5,〇〇〇單位/如。 5 在本發明的某些實施方案中，該聚核苷酸佐劑組合物 更包含正價離子（陽離子），通常是二價正價離子，且通常是 驗金族金屬的陽離子。在本發明的組合物内，該正價離子 1 又被用作爲正價離子的來源，例如鹽或複合物，例如一 種有機或無機鹽或複合物，且通常是無機鹽或有機複合 10物。典型的正價離子包括但不必然限於鈣、鎘、鋰、鎂、 鈽、鉋、鉻、鈷、氘、鎵、碘、鐵或鋅。 該正價離子可以呈任何適當的鹽或有機複合物的形 式’包括但不必然限於氯化物、.氟化物、氫氧化物、填酸 鹽或硫酸鹽。例如，當該正價離子是鈣時，則該離子可呈 15 碳酸鈣、氯化鈣、氟化鈣、氫氧化鈣、磷酸鈣或硫酸鈣的 形式。 本發明的組合物内可配有正價離子(例如鈣），該正價離 子的濃度位在約lOumol至10mmol/ml的範圍内，通常爲約 50 umol至5 mmol/ml，且更常爲約 1〇〇 Umol至1 mmol/ml。 2〇 本說明書中所使用的“rnnol”此用語意指微摩爾。 當本發明佐劑組合物中的正價離子是鈣時，則它可和 其他正價離子相組合或被其他正價離子所取代，這些正價 離子包括鑛、鋰、鎂、鈽、铯、鉻、始、氛、鎵、峨、鐵 或鋅，其中這些離子可呈無機鹽或有機複合物的形式。 26 200800258 所得的組合物是含PIC佐劑組合物，其另含有抗生素和 正價離子。在一特定實施方案中，當該抗生素是卡那黴素 及該正價離子是的時，該産品可稱爲piCKCa。在相關實施 方案中PICKCa』σ物可無限制地含有不同物理特性的分 5 子。 PIKA佐劑組合物 在特疋的例不性實施方案中，該含pic佐劑是pika。 PIKA可通過多種方式來制得，以從來制得特別有 利。PIKA可通過涉及分離和/或濃縮具杨界定分子尺寸和 H) /或分子量之分子的額外制程，而從職^制得。利用過 ^層析、減理、離心分離、電泳和類似方法來分離和 濃縮具有特定特性的聚核普酸分子均爲標準製備方法，且 爲熟習於本領域技術人士所知悉。 在特別相關的實施方案中，本發明的特點是被通稱爲 15 PIKA的佐劑’其包含聚核糖肌|_聚核糖胞普酸(呢）、抗 生素(例如卡那黴素)以及正價離子(例如舞離子），其中該組 合物含有在分子量上爲異質的佐劑分子，該分子的分子量 爲为66,000至1，2〇〇,〇〇〇道爾頓。也就是說，該佐劑組合物 包含重量分佈於約66，_至、，_道爾頓的範圍内的分 20 子。 在相關實施方案中，該組合物中的|>1&八聚核苷酸佐劑 組合物分子是異質的，也就是說這些佐劑分子的重量分佈 在分子量範圍内，其中該分子量爲約3〇〇,〇〇〇至道 爾頓，或是約66,000至660,000道爾頓，或是約300,〇0〇至 27 200800258 660,000道爾頓，或是約300,000至2,000,000道爾頓，或是約 66,000至約1〇〇,〇〇〇道爾頓，1〇〇,〇〇〇至200,000道爾頓，或是 約300,000至約4,000,000道爾頓，或是約500,000至1，000,000 道爾頓，或是約1，〇〇〇,〇〇〇至1，5〇〇,〇〇〇道爾頓，或是約 5 1，500,000至2,000,000道爾頓，或是約2,000,000至2,500,000 道爾頓，或是約2,500,000至3,000,000道爾頓，或是約 3,000,000至3,500,000道爾頓，或是約3,500,00〇至4,〇00,00〇 道爾頓，或是約4,000,000至4,500,000道爾頓，或是約 4,500,000至5,000,000道爾頓。 10 在相關實施方案中，該組合物中的PIKA聚核苷酸佐劑 組合物分子具有平均分子量，該平均分子量等於或高於 66,000道爾頓，或是等於或高於150,000道爾頓，或是等於 或高於250,000道爾頓，或是等於或高於350,000道爾頓，或 是等於或高於500,000道爾頓，或是等於或高於650,000道爾 15 頓，或是等於或高於750,000道爾頓，或是等於或高於 1，000,000道爾頓，或是等於或高於1，200,000道爾頓，或是 等於或高於1，500,000道爾頓，或是等於或高於2,0〇〇,〇〇〇道 爾頓。 在特別相關的實施方案中，本發明的特點是一種被通 20 稱爲PIKA的聚核苷酸佐劑，包含聚核糖肌苷-聚核糖胞普酸 (PIC)、抗生素以及正價離子，其中該組合物含有在分子尺 寸上呈異質的佐劑分子，也就是說這些佐劑分子的尺寸分 佈在一個分子尺寸範圍内，這些佐劑分子的沈降係數單位 (Svedbergs)爲約6.43S至24.03S。 28 200800258 在相關實施方案中，該組合物中的PIKA聚核苷酸佐劑 組合物分子是異質的，也就是說這些佐劑分子的尺寸分佈 在一個分子尺寸範圍内，其中該分子尺寸爲約12.8S至 24.03S ’或是約3至12S，或是約6.43至18.31S，或是約12.8 5 至 18.31S，或是約 12.8S至30.31S，或是約 12.8S至41.54S , 或是約13.5S至18.31S，或是約13.5S至24.03S，或是約16.14 至22.12S，或是約22.12S至26.6S，或是約26.6S至30.31S， 或是約30.31S至33.55S，或是約33.55S至36.45S，或是約 36.45S 至 39.1S，或是約 39.1S 至 41.54S，或是約 41.54S 至 10 43.83S，或是約43.83S至45.95S。 在其他相關實施方案中，該ΠΚΑ聚核苷酸佐劑組合物 具有一平均沈降係數單位（Svedbergs)，該平均沈降係數高 於9，或是高於12，或是高於13·5，或是高於15，或是高於 16’或疋局於π’或是高於18，或是高於19，或是高於20， 15或是高於21，或是高於22，或是高於25，或是高於30。 免疫原性皙 一種包括有Ι>ΙΚΑ和抗原的免疫原組合物能夠以至少 二種方式來引起抗原特異性免疫反應：i)體液免疫反應，涉 及刺激B細胞産生抗體或免疫球蛋白（其他細胞亦涉及産生 2〇抗體反應過程，例如抗原遞呈細胞(APCs，包括巨噬細胞) 及輔助T細胞(Thl和Th2)，以及H)細胞免疫反應，一般涉及 T細胞、包括細胞毒性τ淋巴細胞(CTLs)和其他涉及CTL反 應產生的細胞，例如Thl和/或Th2細胞以及抗原遞呈細胞。 此外’該聚核苷酸佐劑組合物可通過影響所産生的免 29 200800258 疫球蛋白亞型（異構型）以及它們的親和力’來改變免疫反應 的性質。 因此，本發明免疫原組合物所誘導的免疫原反應的程 度和性質可通過測量由免疫系統的細胞所産生的細胞因 5子、趨化因子和抗體等分子的存在而進行評估。 白介素-4主要是由活化的Th2細胞所産生。白介素_4 (IL-4)的産生會活化B細胞，從而産生Ig(}丨和igE免免疫球蛋 白（抗體），其可在血清樣品中測量。IL-4被視爲Th2免疫反 應的一個指標和典型細胞因子。Th2細胞可促進抗體反應。 10 白；|素_2(IL_2)主要是由活化的Thl細胞、NK細胞和淋 巴因子活化型殺傷細胞(LAK)所産生。IL-2可幫助T細胞的 增殖和成熟’此爲有效的適應性細胞免疫反應中的一個必 要階段。 干擾素-r(INF-T〇可由多種細胞産生，包括天然殺傷 15細胞和CD4和CD8+T細胞，在適應性免疫反應中扮演一必 要角色’包括將巨噬細胞活化成爲具有高度微生物殺傷力 的細胞。另外，干擾素-γ是影響誘使特定Thl T細胞發展的 因子’從而向上調控適應性細胞免疫反應。 本發明思及將本發明聚核苷酸佐劑和抗原共同使用的 20 方法’以例如誘導機體内的抗原特異性體液反應和/或特異 性細胞’例如T細胞免疫反應。所誘導的免疫反應可爲在之 前沒有免疫的個體中對於抗原的反應，或是可用以促進之 前已有的免疫反應（例如加強劑）。已發現本發明的含PIKA 免疫原組合物已被發現具有本說明書所敍述的優異性質。 30 200800258 許多不同種類的抗原已在活體内測試其於存在或不存 在PIKA佐劑下誘導免疫反應的能力。受測抗原包括··乙型 肝炎adw型表面抗原重組蛋白、滅活裂解型流感疫苗（得自 於Sanofi Pasteur藥廠的VAXIGRIP)、合成型HIV肽抗原、第 5 2型單純皰疹病毒gD抗原重組蛋白、重組型炭疽菌保護蛋白 抗原、滅活型全病毒禽流感抗原品系H5N1和滅活型全病毒 嚴重急性呼吸道綜合症(SARS)滅活抗原。 在各例中，PIKA佐劑和抗原的共同存在相較於抗原或 PIKA單獨存在更能夠增進細胞因子的表達。特別是，細胞 10因子干擾素-γ、IL-2和IL-4的增進表達（參見實施例L1、 1.2、1·3、1·4、1.5和1·6)顯示PIKA佐劑的存在更能激發專 一性適應免疫力，更特別是，細胞因子干擾素、IL_2的增 強表達顯示主要的Thl細胞免疫力在PIKA佐劑的存在下被 顯著地增強。細胞免疫反應活性是治療細胞内病毒、細菌 15和寄生蟲感染所必須的關鍵特性，且對於發展治療用疫苗 特別重要。 此外，含PIKA組合物通過CD4+T細胞而刺激干擾素_γ 的産生（實施例1.3、1.4、1·5和1.6)。此種特性確認pika可 增強宿主的適應性免疫反應。 20 血清内被觀測到的抗體增加顯示PIKA佐劑誘導有利 的體液免疫反應。隨著將PIKA加入免疫原組合物，觀察到 特異性抗體IgG的效價增加（參見實施例ΐ·ι、1.2、ι.4、、 1.6、2, 3、5和 6) 〇 當PIKA佐劑與滅活抗原（實施例1 ·2、1.6、2、3、4和6)、 31 200800258 肽抗原（實施例1·3)和重組型抗原（實施例1.1、1.4、1.5、5 和7)相組合時，可促進宿主體内的免疫反應。 PIK A佐劑的一個特性在於提供適當保護以限制和/或 根除宿主體内的感染，和/或降低因病原感染所導致的疾病 5 症狀的危險性。實施例1·2和6中所使用的抗原VAXIGRIP (Sanofi Pasteur)本身就是一種人用流感疫苗，其可引起被 認爲足以提供保護的免疫力程度以防止實際流感病毒感 染。免疫系統所表達的有益細胞因子(IL-2、干擾素-γ和IL_4) 和特異性IgG的水平顯示，添加PIKA至VAXIGRIP可進一步 10 增進免疫反應。 爲進一步展現PIKA的保護性質，24只10天齡雞被接種 以一種含有PIKA和滅活禽流感抗原的組合物，該禽流感抗 原包括病毒株H5N1和H9N2(實施例3)。這些雞只隨後以活 的H5N1病毒加以攻毒，並觀察二周。觀察期間結束時，被 15 接種以PIKA/抗原組合物的雞只存活率爲83%，相較之下， 對照組中24只未預先接種pika/抗原組合物的雞只被暴露 於活病毒，存活率只有17%。 在顯示PIKA佐劑的治療促進性質的相關實驗中，數隻 Balb/c鼠被攻毒以野生型狂犬病病毒的一個病毒株(實施例 2〇 4)。感染之後，三群動物在治療時被接種以不同的狂犬病 疫苗。被接種以倉鼠腎細胞滅活純化型狂犬病抗原加上 PIKA的組合的鼠群存活率達到80%。給予倉鼠腎細胞純化 型狂犬病抗原和鋁佐劑的第二群鼠的存活率爲15%。另 外，給予Sanofi-Aventis的“Verorab” - Vero細胞滅活狂犬病 32 200800258 5 疫苗的第三群鼠具有20%的存活率。 爲進一步展現PIKA佐劑的性質，實施例7顯示PIKA和 adw型HBsAg的共同存在能促進在小鼠血清内特異性 IgGl(表26圖35)的産生，並更顯著地促進IgG2a(表27圖36) 的效價。此觀察結果的結論是ΠΚΑ可促進治療性免疫反 應，特別是Thl偏好型免疫反應。 在一個相關實驗中（實施例7)，PIKA在含adw型HBsAg 的疫苗配方中的存在顯示可促進被CD8 T細胞肽抗原表位 所刺激的脾細胞産生干擾素-r。這個結果顯示pika誘導 10 CD8+T細胞免疫反應（表28圖37)。 另外，（實施例7)PIKA存在於含HbsAg的疫苗配方中顯 示可促使活體外和2ug/ml CD8 T細胞肽抗原表位共同培養 6天的脾細胞産生干擾素-r。這個結果顯示pika誘導中心 記憶T細胞反應。 15 其他特徵 在另一實施方案中，本發明的免疫原組合物進一步通 過PIKA佐劑和抗原的相對存在量來界定，其中該存在量是 通過數量、濃度、體積、分子數目或其他被認可的度量來 測量。 20 在相關實施方案中，本發明的免疫原組合物包含聚核 苷酸佐劑組合物和一或多種抗原，其中佐劑和抗原的存在 量是通過分子的重量或數目來界定，而呈現下列比例··低 於1比1，000、低於1比900、低於1比800、低於1比7〇〇、低 於1比500、低於1比400、低於1比3〇〇、低於1比200、低於][ 33 200800258 比1 〇〇、低於1比50、低於i比i〇、低於J比5、低於】比2、約 1比卜高於2比卜高於5比卜高於1〇比卜高於池匕】、高 於100比1、高於細比卜高於300比卜高於糊比】、高於 獅比卜高於600比1、高於彻比卜高於800比卜高於900 5 比卜高於1，〇〇〇比1。 在另-個相關實施方案中，本發明的免疫原組合物是 通過劑量來界定，該劑量是指欲給予以便誘導最佳免疫反 應的疫苗用量，或是另指給予劑量範圍，其涵蓋用以引起 免疫反應所需要的最低劑量，至過量即會潛在性地誘導不 10良副作用因而在醫學上無法證明可增加有利反應的最高劑 量° 在某些特別相關的實施方案中，該免疫原組合物包含 聚核苷酸佐劑組合物和抗原，其中抗原的單位劑量是以數 里來计异’該數量爲高於〇 lug、高於〇.5ug、高於〇 〇〇1 mg、高於0.005 mg、高於〇·〇ι mg、高於0 025 mg、高於0.05 mg、高於0.075 mg、高於〇.1 mg、高於0·25 mg、高於〇 5 mg、 尚於1·2 mg、高於1.4 mg、高於1·ό mg、高於1.8 mg、高於 2·0 mg、咼於2·5 mg、高於3 mg、高於3.5mg、高於4 mg、 高於5 mg、高於6 mg、高於7 mg、高於8 mg、高於9 mg、 20 咼於mg、高於15 mg、高於20 mg、高於25 mg或是高於 50 mg 〇 抗原的最佳量和抗原相對於PIKA佐劑的最佳比例可 通過觀測宿主體内的抗體效價和其他免疫反應等標準研究 方法來確認。 34 200800258 抗原 在特別相關的實施方案中’本發明提供聚核苷酸佐劑 組合物以及抗原或疫苗，其中該抗原的來源爲人類抗原、 動物抗原、植物抗原、源自於病毒、細菌（包括分枝桿菌 5 (Mycobacterium))、真菌或寄生蟲中的任一種的感染物的一 種或夕種衣劑、痴腫抗原、過敏性成分以及例如會導致自 體免疫疾病的其他抗原。 在某些實施方案中，該抗原可從粗制或純化的天然來 源衍生而來，並以它的原始存活形式來使用，或是於被殺 10死、滅活、截短、減毒或轉形成爲不可回復形式或是去毒 或突變成爲無毒性形式或被過濾或純化後使用。 在某些實施方案中，該抗原是被分離的微生物抗原， 例如病毒抗原、細菌抗原 '真菌抗原、過敏性成分抗原、 癌腫抗原或自體免疫抗原。在其他實施方案中，抗原是完 15整的滅活抗原。使完整抗原滅活的方法爲業界所熟知；任 何常用方法均可使用以使抗原滅活，且可針對相關抗原種 類而適當地選用。這些使抗原滅活的方法包括例如利用光 反應性化合物；氧化劑；輻射線(例如UV射線；γ-射線）； 核黃素和UV射線的組合；溶劑_去污劑處理(例如以有機溶 20劑二-Ν-丁基罐酸醋和Tween 80等去污劑來處理）；聚乙二 醇處理；巴斯德滅菌法（熱處理）；以及低pH處理；以胃蛋 白酶或胰蛋白酶進行溫和酶處理；亞甲藍(MB)光處理；以 一甲基亞甲藍(DMMB)和可見光進行處理；以S-59(—種補 骨脂内酯衍生物）和UVA照射進行處理；以及類似方法。 35 200800258 在特別相關的實施方案十，抗原玎通過固相合成法來 合成，或是可通過重組遺傳技術而獲得，或是可被人爲製 造以仿真病原體的免疫原性質。 多肽抗原可利用本技藝所熟知標準蛋白純化方法從天 5然來源分離，這些標準方法包括但不限於液相層析法(例如 高效液相層析法、快速蛋白液相層析法等）、尺寸排它性層 析法、凝膠電泳（包括一維凝膠電泳、二維凝膠電泳）、親和 層析法或其他純化技術。可使用固相肽合成技術，這些技 術是熟習於本領域技術人士所知悉的。請參見jones，The 1〇 Chemical Synthesis of Peptides (Clarendon Press, Oxford) (1994)。一般而言，在這些方法中，肽是通過將活化單體單 元順序加入結合有增長肽鏈的固相來製造。建構完成的重 組DNA技術可用以製造多肽，這些方法包括但不限於例如 將表達構建體導入適當的宿主細胞中（例如在活體外細胞 15 培養基中生長成爲單細胞實體的真核宿主細胞，例如酵母 菌、昆蟲細胞、哺乳動物細胞等，或原核細胞(例如在活體 外細胞培養基中生長的），該表達構建體含有編碼一多肽的 核苷酸序列，而産生遺傳基因改變的宿主細胞；在適當的 培養條件下，蛋白質可被該遺傳基因改變的宿主細胞所制 20 得。 在一些實施方案中，該抗原爲純化抗原，例如具有約 25%至50%的純度、約50%至约75%的純度、約75%至約85% 的純度、約85%至約90%的純度、約90%至約95%的純度、 約95%至約98%的純度、約98%至約99%的純度，或高於99% 36 200800258 的純度。 抗原可爲非細胞型、囊封型、感染性克隆(infecti〇us clone)、擴增片段(replicon)、具載體型(vectored)、微囊封 型(microencapsulated)、單價、二價或多價的。 5 本發明的聚核苷酸佐劑組合物亦可用於促進免疫反 應’該免疫反應是針對運用DNA疫苗和/或DNA表達蛋白所 産生的抗原。這些疫苗中用以編碼抗原的DNA序列可以是 “裸露的”，或是被容納在一個如脂質體的載體系統内。 在一個特別相關方面，本發明的免疫原組合物可通過 10 選用一或多種抗原和PIKA佐劑相組合來界定。 具體上說，本發明提供免疫原組合物和其使用方法， 其中該免疫原組合物包含PIKA佐劑以及病毒抗原，其中典 型的抗原包括但不限於表1所述一或多種病毒的抗原。 表1 :病毒病原體和疾病
病毒分類 疾病 1 腺病毒科(Adenoviridae) 2 哺乳動物腺病毒屬(Mastadenovims) Common cold 3 沙粒病毒科A至F 4 沙粒病毒科(Arenaviridae) 5 舊世界性沙粒病毒(Old world arenaviruses) 6 伊派病毒(Ippy virus) 7 拉沙病毒(Lassa virus) 拉沙熱(Lassa fever) 8 淋巴球性脈絡叢腦膜炎病毒(Lymphocytic choriomeningitis virus) 淋巴球性脈絡叢腦膜炎(Lymphocytic choriomeningitis disease) 9 生狀病毒科(Astroviridae) 10 哺乳動物星狀病毒屬(Mamastrovims) 11 人類星狀病毒(Human astrovirus) 腸胃炎 37 200800258 12 本揚病毒科 13 漢坦病毒屬(Hantavirus) 14 漢灘病毒(Hantaan vims) 韓國出血熱(Korean hemorrhagic fever) 15 内羅病毒(Nairovims) 16 克裏米亞-剛果出血熱病毒(Crimean-Congo hemorrhagic fever virus) 出血熱(Hemorrhagic Fevers) 17 正布尼病毒屬(Orthobunyavirus) 18 加利福利亞腦炎病毒(California encephalitis virus) 克羅斯腦炎(La Crosse Encephalitis) 19 白虫令熱病毒屬(Phlebovirus) 20 立(夫特山)榖熱病毒(Rift Valley fever vims) 立夫特山谷熱(Rift Valley Fever) 21 杯狀病毒科(Caliciviridae) 22 膿融病毒(Norovirus) 23 諸沃克病毒(Norwalk vims) 腹寫 24 黃病毒科(Flaviviridae) 25 黃病毒 26 登革病毒群〇3engue virus group) 登革熱(Dengue) 27 曰本腦炎病毒群(Japanese encephalitis virus group) 28 曰本腦炎病毒 曰本腦炎 29 聖路易腦炎病毒(St. Louis encephalitis virus) 聖路易腦炎(St. Louis encephalitis disease) 30 西尼羅病毒(West Nile vims) 西尼羅病毒病（West Nile vims disease) 31 蜱傳腦炎病毒群(tick-bome encephalitis vims group) 蜱傳腦炎(Tick-bome encephalitis) 32 黃熱為毒群(Yellow fever vims group) 黃熱病 33 丙肝病毒屬(Hepacivims) 34 c型肝炎病毒 c型肝炎 35 G型肝炎病毒 G型肝炎 36 嗜肝DNA 病毒科(Hepadnaviridae) 37 正嗜肝DNA 病毒屬(Orthohepadnavims) 38 B型肝炎病毒 B型肝炎 39 D型肝炎病毒(Hepatitis delta vims) D型肝炎 40 肝炎病毒科(Hepeviridae) 38 200800258 肝炎病毒屬(Hepevirus) 42 43 ^〜 44〜----- 45-----〜 46 ^'—, 47 48 ----^ 49— 50 51— 52 53 —〜 54'—. 55 56— 57 '^^ 58 59 60— 61—、 62 —^ 63 1^〜 64— 65— 66 ----- 67— 68 —、 69—. 70 E型肝炎病毒 皰療病毒科(Herpesviridae) α 皰療病毒亞科(Alphaherpesvirinae) 單純皰療病毒屬(Simplexvirus) 第 1 型獼猴皰療病毒(Cercopithecineherpesviras 1) 第1型人類皰疹病毒 第2型人類皰疹病毒 水疫病毒屬(Varicellovirus) 第3型人類皰療病毒(Varicella zoster virus) 乙型皰療病毒亞科(Betaherpesvirinae) 細胞巨化病毒(Cytomegalovirus) 第5型人類皰疹病毒 玫瑰療病毒屬(Roseolovirus) 第6型人類皰療病毒 第7型人類皰療病毒 丙型皰療病毒亞科(Gammaherpesvirinae) 淋巴隱伏病毒屬(Lymphocryptovirus) 第4型人類皰疹病毒 猴病毒屬(Rhadinovims) 第8型人類皰疹病毒 單分子負鏈RNA病毒目(Mononegavirales) 絲狀病毒科(Filoviridae) 類伊波拉病毒(Ebola-like viruses) 埃博拉病毒(Ebola virus) 馬爾堡病毒(Marburgvirus) 副黏液病毒科(Paramyxoviridae) 副枯液病毒亞科(Paramyxovirinae) 予德拉尼帕病毒屬(Henipavims) E型肝炎 B病毒感染(B Vims Infection) 第 1 型單純皰療(Herpes simplex type 1) 第2型單純皰療(Herpes simplex type 2)_ 水痘(Chicken pos)' 帶；tyfe^Shingels) 細胞巨化病毒(CMV) 皰疹 皰疹 EB 病毒感染（Epstein-Barr Infection) 絶療 埃博拉病毒病(ebola disease) 馬爾堡出血熱(Marburg hemorrhagic fever) 39 200800258 71 麻療病毒屬(Morbillivims) 72 痳療病毒(Measles vims) 痲疹 73 呼吸道病毒屬(Respirovirus) 74 第1型人類副流感病毒(Human parainfluenza virus 1) 人類副流感病毒 75 第3型人類副流感病毒(Human parainfluenza virus 3) 人類副流感病毒 76 AS腺炎病毒屬(Rubulavirus) 77 第2型人類副流感病毒(Human parainfluenza virus 2) 人類副流感病毒 78 第4型人類副流感病毒(Human parainfluenza virus 4) 人類副流感病毒 79 月思腺炎病毒(Mumps vims) 腮腺炎 80 肺病毒亞科(Pnemnovirinae) 81 間質肺病毒(Metapneumovirus) 82 人類間質肺病毒(Human metapneumovirus) 人類間質肺病毒 83 肺病毒屬(Pneumovims) 84 人類呼吸道融合病毒(Human respiratory syncytial vims) 人類呼吸道融合症（Human respiratory syncytial disease) 85 杆狀病毒科(Rhabdoviridae) 86 狂犬病毒屬(Lyssavims) 87 狂犬病毒(Rabies vims) 狂犬病 88 巢病毒目(Nidovirales) 89 冠狀病毒科(Coronaviridae) 90 冠狀病毒(Coronavirus) 91 第二群物種 92 人類冠狀病毒(Human coronavirus) 冠狀病毒 93 SAKS冠狀病毒 ^ARS 94 曲狀病毒屬(Torovims) 95 人類曲狀病毒(Human torovims) 曲狀病毒病(Torovirus disease) 96 小 RNA 病毒科(Picomaviridae) 97 口瘡病毒屬(Aphthovirus) 98 A型馬鼻炎病毒(Equine rhinitis A virus) 99 口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease vims) 口蹄疫病毒 40 200800258
100 腸病毒(Enterovirus) 101 A型人類腸病毒(Human enterovims A) 102 人類柯薩奇病毒(Human coxsackievirus) 人類柯薩奇病毒| 103 人類腸病毒 人類腸病毒 104 B型人類腸病毒 105 腸病毒 人類腸病毒 106 人類柯薩奇病毒 人類柯薩奇病毒 107 人類埃可病毒(Human echovirus) 人類埃可病毒 108 C型人類腸病毒 109 人類柯薩奇病毒 人類柯薩奇病毒 110 D型人類腸病毒 111 人類腸病毒 人類腸病毒 112 脊髓灰白質炎病毒(Poliovirus) 113 人類脊髓灰白質炎病毒(Human poliovirus) 脊髓灰質炎 ^ 114 人類腸病毒(Human enterovirus sp.) 人類腸病毒 115 未分類腸病毒 116 人類腸病毒(Human enterovirus sp.) 人麵病毒 一 117 肝病毒屬(Hepatovims) 118 A型肝炎病毒 甲型肝炎病毒 - 119 副腸孤病毒屬(Parechovirus) 120 人類副腸孤病毒屬(Human parechovirus) 人類副腸孤病毒 '一-—— 121 人類副腸孤病毒 ----^_ 122 鼻病毒屬 Rhinovirus (感冒病毒common cold viruses) -—- 123 A型人類鼻病毒 ----- 124 人類鼻病毒 感冒 '-- 125 B型人類鼻病毒 126 人類鼻病毒 感冒 ~ ^^— 127 未分類人類鼻病毒 ~~—~^^ 128 A類鼻病毒 感冒 --— 129 正黏液病毒科(Orthomyxoviridae) ----^ 一 ----- 41 200800258 130 A 型流感病毒(Mluenzavirus A) 131 A型流感病毒 流感 132 B型流感病毒 133 B型流感病毒 流感 134 C型流感病毒 135 C型流感病毒 流感 136 副黏液病毒科(Paramyxoviridae) 137 副黏液病毒亞科(Paramyxo virinae) 138 亨德拉尼帕病毒屬(Henipavims) 139 亨德拉病毒(Hendra vims) 亨德拉病毒 140 乳頭瘤病毒科(Papillomaviridae) 141 甲型乳頭瘤病毒(Alphapapillomavirus) 142 人類乳頭瘤病毒 人類乳頭瘤病毒 143 乙型乳頭瘤病毒(Betapapillomavirus) 144 人類乳頭瘤病毒 人類乳頭瘤病毒 145 丙型乳頭瘤病毒(Gammapapillomavims) 146 人類乳頭瘤病毒 人類乳頭瘤病毒 147 Mu 型乳頭瘤病毒(Mupapillomavirus) 148 人類乳頭瘤病毒 人類乳頭瘤病毒 149 未分類乳頭瘤病毒 150 人類乳頭瘤病毒型 人類乳頭瘤病毒 151 細小病毒科(Parvoviridae) 152 細小病毒亞科(Parvovirinae) 153 紅病毒屬(Erythrovims) 154 人類細小病毒(Human parvovirus) 155 未分類紅病毒 156 人類紅病毒 人類紅病毒(Human erythrovims) 157 多瘤病毒科(Polyomaviridae) 158 多瘤病毒(Polyomavirus) 159 JC型多瘤病毒 漸進性多發腦白質病變(Progressive multifocal leukencephalopathy) 42 200800258
160 癌病毒科(Poxviridae) 161 痘病毒脊索亞科(Chordopoxvirinae) 162 正痘病毒屬(Orthopoxvirus) 163 猴癌病毒(Monkeypox virus) 猴痘 164 天花病毒(Variola virus) 天花(Smallpox) 165 呼腸孤病毒科(Reoviridae) 166 輪狀病毒(Rotavirus) 167 A型輪狀病毒 腹瀉 168 B型輪狀病毒 腹瀉 169 C型輪狀病毒 腹瀉 170 反轉錄病毒科(Retroviridae) 171 正反轉錄病毒亞科(Orthoretrovirinae) 172 <5 反轉錄病毒屬(Deltaretrovirus) 173 靈長類嗜T-淋巴球病毒第1型（primate T-lymphotropic vims 1) 174 人類嗜T-淋巴球病毒第1型（Human T-lymphotropic vims 1) 人T淋巴細胞病毒 175 靈長類嗜T-淋巴球病毒第2型 176 人類嗜Τ-淋巴球病毒第2型 人T淋巴細胞病毒 177 靈長類嗜Τ-淋巴球病毒第3型 178 人類嗜Τ-淋巴球病毒第3型 人T淋巴細胞病毒 179 慢病毒屬(Lentivirus) 180 靈長類慢病毒群 181 人類免疫不全症病毒第1及2型(Human immunodeficiency virus type 1 and type 2) HIV 182 未分類反轉錄病毒 183 愛滋病相關病毒(Aids-associated retrovirus) 184 人類内源性反轉錄病毒(Human endogenous retroviruses) 185 披膜病毒科(Togaviridae) 186 甲病毒屬(Alphavirus) 187 東方馬腦炎病毒群(EEEV complex) 188 東方馬腦炎病毒(Eastern equine encephalitis virus) 東方馬腦炎 43 200800258 189 SFV群 190 基孔肯亞病毒(Chikungunya virus) 基孔肯亞熱 191 委内瑞拉馬腦炎病毒群(VEEV complex) 192 委内瑞拉馬腦炎病毒(Venezuelan equine encephalitis virus) 委内瑞拉馬腦炎 193 西方馬腦脊髓炎病毒群(WEEV complex) 194 西方馬腦脊髓炎病毒（Western equine encephalomyelitis vims) 西方馬腦炎 195 風療病毒屬(Rubivirus) 196 風療病毒(Rubella virus) 風疹、德國痲疹 具體上說，本發明提供免疫原組合物和其使用方法， 其中該免疫原組合物包含PIKA佐劑以及細菌抗原，其中典 型的抗原包括但不限於表2所述一或多種細菌的抗原。 表2 :細菌病原體和疾病 細菌分類 疾病 1 放線菌門(Actinobacteriaj 2 放線菌(綱)（高G+C含量格蘭氏陽性菌） 3 酸微菌亞綱(Acidimicrobidae) 4 放線菌亞綱(Actinobacteridae) 5 放線菌目(Actinomycetales) 6 棒桿菌亞目(Coiynebacterineae) 7 棒桿菌科(Corynebacteriaceae) 8 棒桿菌屬(Corynebacterium) 9 白喉棒桿菌(Coiynebacterium d^toiae) 白喉(Diphtheria) 10 放線菌亞綱(Actinobacteridae) 11 放線菌目(Actinomycetales) 12 棒桿菌亞目(Corynebacterineae) 13 分枝桿菌科(Mycobacteriaceae) 44 200800258
14 分枝桿菌屬(Mycobacterium) 15 膿腫分枝桿菌(Mycobacterium abscesses) 版腫分枝桿菌感染(Mycobacterium abscessus infection) 16 禽結核分枝桿菌群(Mycobacterium -----avium complex)_ 膿腫分枝桿菌感染 17 麻風分支桿菌(Mycobacterium leprae) 麻風病(Leprosy)/ 漢生氏症(Hansen’s Disease、 18 結核桿菌(Mycobacterium tuberculosis) 結核桿菌感染（Mycobacterium tuberculosis Infection) 19 Nocardiadeae 20 土壤絲菌屬(Nocardia) 21 星形土壤絲菌(Nocardia asteroids) 土壤絲菌病(Nocardiosis) 22 鼻疽土壤絲菌(Nocardia farcinica) 土壤絲菌病 23 新星土壤絲菌(Nocardia nova) Λ壤絲菌病 24 耳道炎土壤絲菌(Nocardia transvalensis) 土壤絲菌病 25 巴西土壤絲菌(Nocardia brasiliensis) 土壤絲菌病 26 假巴西土壌絲菌（Nocardia _—_ pseudobrasiliensis) 土壤絲菌病 27 28 衣原體門/疲微卤門群(Chlamydiae/Vermcomicrobia groups 29 衣原體門(Chlamydiae) 30 衣原體綱(Chlamydiae) 31 衣原體目(Chlamydiales) 32 衣原體科(Chlamydiaceae) 33 衣原體屬(Chlamydia) 34 砂眼衣原體(Chlamydia trachomatis) 衣原體(Chlamydia) 35 肺炎衣原體(Chlamydia pneumoniae) 肺炎 36 鸚鶴披衣菌(Chlamydia psittaci) 鱗轉病(Psittacosis) 37 A、 B、Ba和C型砂眼衣原體 (Chlamydia trachomatis, serovars A, B, Ba, and C) 砂眼(Trachoma) 38 肺炎嗜衣體(ChlamydopMapQaimQniae) 肺炎 39 厚壁菌門(Firmicutes)(革籣氏陽性菌） 40 桿菌綱(Bacilli) 41 芽抱桿菌目(Bacillales) 42 芽孢桿菌科(Bacillaceae) 45 200800258 43 芽孢桿菌屬(Bacillus) 壤樣芽孢桿菌群(Bacillus cereus group) 炭疽桿菌(Bacillus anthracis) 李斯特氏菌科(Listeriaceae) 李斯特菌屬(Listeria) 單核細胞增多性李氏桿菌（Listeria monocytogenes、 葡萄球菌科(Staphylococcaceae) 葡萄球菌屬(Staphylococcus) 金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus) 金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus) 炭疽病(Anthrax) 李斯特菌病(Listeriosis) 53 54 55 56 57 58 59 61 62 63 64 65 66 67 68 69 71 萬古黴素中度敏感性金黃色葡萄球菌和 萬古黴素抗藥性金黃色葡萄球菌 (Staphylococcus aureus VISA and VRSA) 乳桿菌目(Lactobacillales) 鏈球菌科(Streptococcaceae) 鏈球菌目(Streptococcus) 鏈球菌A群 鏈球菌B群 肺炎雙球菌(Streptococcus pneumoniae) 梭狀桿菌綱(Clostridia) 梭狀桿菌目(Clostridiales) 梭狀桿菌科(Clostridaceae) 梭狀桿菌屬(Clostridium) 肉毒梭狀桿菌(Clostridium botulinum) 難治梭狀桿菌(Clostridium difficile) 破傷風梭狀桿菌(Clostridium tetani) 柔膜菌綱(Mollicutes) 支原體目(Mycoplasmatales) 支原體科(Mycoplasmataceae) 支原體屬(Mycoplasma) 肺炎支原體(Mycoplasma pneumonia) 中毒性休克綜合症 (Toxic Shock Syndrome"___ f 氧西林(Metiiicillin)▲藥性 葡萄球菌(MRSA、_、 金黃色葡萄球菌(VISA/VRSA)的感染 鏈球菌疾病 獲紅熱 〇Searlet Fever) 腦膜炎(Meningitis) 肺炎 肉毒桿菌中毒(Botulism) 腹λ寫 破傷風(Tetanus Disease) 肺炎支原體感染 46 200800258
72 變形菌門(Proteobacteria)(紫色細菌和近親） 73 α-變形菌綱(Alphaproteobacteria) 74 根瘤菌目(Rhizobiales)(根瘤菌） 75 巴通體科(Bartonellaceae) 76 巴通體屬(Bartonella) 77 漢賽氏巴通體(Bartonella henselae) 貓播癢'症(Cat Scratch Disease) 78 布魯氏菌科(Bmcellaceae) 79 布魯氏菌屬(Brucella) 布魯氏菌症(Brucellosis) 80 81 立克次體目(Rickettsiales)(立克次體） 82 無形體科(Anaplasmataceae) 83 無形體屬(Anaplasma) 流行性斑療傷寒(Typhus Fevers) 84 埃裏希體屬(Ehrlichia) 流行性斑療傷寒 85 立克次體科(Rickettsiaceae) 86 立克次體(Rickettsieae) 87 恙蟲(Orientia) 88 東方恙蟲立克次體（Orientia tsutsugamushi) 流行性斑療傷寒 89 立克次體屬(Rickettsia) 90 斑療熱群(Spotted fever group) 91 立氏立克次體(Rickettsia rickettsii) 立氏立克次體感染 92 普氏立克次體（Rickettsia prowazekii) 流行性斑疹傷寒 93 斑療傷寒立克次體(Rickettsia typhi) 流行性斑疹傷寒 94 95 0 -變形菌綱(Betaproteobacteria) 96 伯克氏菌目(Burkholderiales) 97 産驗菌科(Alcaligenaceae) 98 包特氏菌屬(Bordetella) 99 百曰咳包特氏菌(Bordetella pertussis) 百日咳(Pertussis) 100 伯克氏菌科(Burkholderiaceae) 101 伯克氏菌屬(Burkholderia) 47 102200800258 洋蔥伯克氏菌群(Burkholderia cepacia complex)_ 103 洋蔥伯克氏菌(Burkholderia cepacia) 洋蔥伯克氏菌感染(Bwkholderia cepacia Infection)_ 104 類鼻疽伯克氏菌（Burkholderia pseudomallei)_ 類鼻疽(Melioidosis) 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 128 129 130 131 奈氏菌目(Neisseriales) 奈氏菌科(Neisseriaceae) 奈氏菌屬(Neisseria) 淋病奈氏雙球菌(Neisseria gonorrhoeae) 腦膜炎奈氏菌、腦膜炎雙球菌(Neisseria meningitidis, meningococcus)_ δ-/ε-變形菌亞門 ε-變形菌綱(Epsilonproteobacteria) 彎曲菌目(Campylobacterales) 彎曲菌科(Campylobactemceae) 彎曲菌屬(Campylobacter) 空腸彎曲菌(Campylobacter jejuni) 螺桿菌科(Helicobacteraceae) 螺桿菌屬(Heliobacter) 幽門螺桿菌(Heliobacter pylori) γ-變形菌綱(Gammaproteobacteri) 腸桿菌目(Enterobacteriales) 腸桿菌目科(Entrobacteriaceae) 埃希氏菌屬(Escherichia) 大腸桿菌(Escherichia coli) 沙門氏桿菌(Salmonella) 傷寒沙門氏桿菌(Salmonella typhi) 志賀氏桿菌屬(Shigella) 痛i疾志贺氏桿菌(Shigella dysenteriae) 福氏志賀氏桿菌(Shigella flexneri) 宋内氏志賀氏桿菌(Shigella sonnei) 葉爾辛氏菌屬(Yersinia) 鼠疫葉爾辛氏菌(Yersinia pestis) 淋病(Gonorrhea) 腦膜炎(Meningitis) 彎曲菌感染 腹瀉 幽門螺桿菌感染 痢疾(Dy sentery> 沙門氏桿菌症(Salmonellosis) 傷寒沙門氏桿菌感染/傷寒 痢疾 腹瀉 志裊氏桿菌症(Shigellosis) 葉爾辛氏菌症(Yersiniosis) 鼠疫(Plague) 48 200800258
132 軍團桿菌目(Legionellales) 133 柯克斯體科(Coxiellaceae) 134 柯克斯體屬(Coxiella) 135 伯氏柯克斯體(Coxiella burnetii) Q 型熱(Q Fever) 136 軍團桿菌科(Legionellaceae) 137 軍團桿菌屬(Legionella) 138 嗜肺性軍團病桿菌（Legionella pneumophila) 軍團桿菌症（Legionellosis/ Legionnaire’s Disease) 139 嗜肺性軍團病桿菌（Legionella pneumophila) 龐提亞克熱(Pontiac Fever) 140 巴斯德氏菌目(Pasteurellales) 141 巴斯德氏菌科(Pasteurellaceae) 142 嗜血桿菌屬(Haemophilus) 143 杜克雷嗜血桿菌(Haemophilus ducreyi) 杜克雷嗜血桿菌感染 144 b型血清型流感嗜金桿菌 (Haemophilus influenzae serotype b) b型血清型流感嗜血桿菌(Hft)感染 145 假單胞菌目(Pseudomonadales) 146 假單胞菌科(Pseudomonadaceae) 147 假單胞菌屬(Pseudomonas) 148 綠膿桿函群（Pseudomonas aeruginosa group) 149 綠腹桿菌 綠膿桿菌感染 150 莫拉氏菌科(Moraxellaceae) 151 不動桿菌屬(Acinobacter) 不動桿菌感染 152 硫發菌目(Thiotrichales) 153 法蘭西斯氏菌科(Francisellaceae) 154 法蘭西斯氏菌屬(Francisella) 155 土拉熱弗朗西絲（氏）菌（Francisella tularenis) 土拉熱弗朗西絲(氏)菌感染 156 。弧菌目(Vibrionales) - 157 弧菌科(Vibrionaceae) 158 弧菌屬(Vibrio) 159 副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus) 副溶血弧菌感染 160 創傷弧菌(W)rio vulnificus) 創傷弧菌感染 161 霍亂弧菌(Vibrio cholerae) 霍亂 49 200800258 162 螺旋體門(Spirochaetes) 163 螺旋體綱(Spirochaetes (class)) 164 螺旋體目(Spirochaetales) 165 鈎端螺旋體科(Leptospiraceae) 166 鈎端螺旋體屬(Leptospira) 鈎端螺旋體病(Leptospirosis) 167 螺旋體科(Spirochaetaceae) 168 疏u螺旋體屬(Borrelia) 169 伯氏疏螺旋體群(Boirelia burgdorferi Group) 170 伯氏疏螺旋體群(Borrelia burgdorferi) 來姆症(Lyme Disease) 171 密螺旋體屬(Treponema) 172 梅毒螺旋體(Treponema pallidun) 梅毒(Syphilis) 具體上說，本發明提供一種免疫原組合物和其使用方 法，其中該免疫原組合物包含PIKA佐劑以及真菌抗原，其 中典型的抗原包括但不限於表3所述一或多種真菌的抗原。 表3 :真菌病體和疾病 真菌分類 疾病 1 子囊菌門(Ascomycota (ascomycetes)) 2 盤菌亞門(Pezizomycotina) 3 散囊菌綱(Eurotiomycetes) 4 散囊菌目(Eurotiales) 5 發菌科(Trichocomaceae) 6 發菌科有絲分裂孢子世代 7 曲菌屬(Aspergillus) 曲菌病(Aspergillosis) 8 Onygenales 9 Ajellomycetaceae 10 Ajellomyces 11 Ajellomyces capsulatus 12 英膜組織胞漿菌（Histoplasma capsulatum) 組織胞漿菌(Histoplasmosis) 50 200800258
13 皮炎芽生菌(Blastomycoides dermatitidis) 芽生菌病(Blastomycosis) 14 裸嚢菌科(Arthodermataceae) 金錢癬(Ringworm) 15 Onygenales有絲分裂孢子世代 16 球孢子菌屬(Coccidiodes) 17 粗球抱子菌(Coccidiodes immitis) 球孢子菌病(Coccidioidomycosis)、 山谷—(Valley fever) 18 副球孢子菌屬(Paracoccidioides) 19 巴西副球孢子菌（Paracoccidioides brasiliensis) 20 糞科菌綱(Sordariomycetes) 21 糞科菌亞綱(Sordariomycetidae) 22 蛇 口殼目(Ophiostomatales) 23 蛇 口殼科(Ophiostomataceae) 24 蛇口殼科有絲分裂孢子世代 25 申克氏孢子絲菌(Sponothrix sdienddi) 孢子絲菌病(Sporotrichosis) 26 肺孢子蟲綱(Pneumocystidomycetes) 27 肺孢子蟲目(Pneumocystidales) 28 肺孢子蟲科(Pneumocystidaceae) 29 肺孢子蟲屬(Pneumocystis) 30 肺囊蟲(Pneumocystis jiroveci) 肺孢子蟲感染(PCP Infection) 31 酵母綱(Saccharomycotina) 32] 酵母目（Saccharomycetes) 33 酵母科(Saccharomycetales) 34 酵母科有絲分裂孢子世代 35 念珠菌屬(Candida) 36 白色念珠菌(Candida albicans) 念珠菌病（Candidiasis)、鶴口瘡 (Thrush) 37 擔子菌門(Basidiomycota (basidiomycetes)) 38 層菌綱(Hymenomycetes) 39 異擔子菌亞綱(Heterobasidiomycetes) 40 Tremellomycetidae 41 銀耳 S (Tremellales) 42 銀耳科(Tremellaceae) 51 200800258 43 線擔菌屬(Filobasidiella) 44 新型線擔菌（Filobasidiella neoformans) 45 新型 球菌（Cryptococcus neoformans) 隱球菌病(Cryptococcosis) 46 後生動物亞界(Metoza) 47 真後生動物亞界(Eumetazoa) 48 兩側對稱動物(Bilareria) 49 無體腔動物(Acoelomata) 50 扁形動物門(Platyhelminthes) 51 吸蟲綱(Trematoda) 52 複殖亞綱(Digenae) 53 Strigeidida 54 裂體科(Schistosomatidea) 55 裂體屬(Schistosoma) 56 埃及血吸蟲（Schistosoma —丨 —___haematobium)_ 血吸蟲症(Schistosomiasis) 57 曰本血吸蟲（Schistosoma ---- -japonicum)_ 血吸蟲症 58 曼氏血吸蟲（Schistosoma mansoni) 血吸蟲症 59 假體腔動物(Pseudocoelomata) 60 線蟲綱(Nematoda) 61 色矛亞綱(Chromadorae) 62 旋尾目Spimrida 63 絲蟲總科(Filarioidea) 64 蟠尾絲蟲科(Onchocercidae) 65 絲蟲屬(Brugia) 66 馬來絲蟲(Brngia malayi) 淋巴性絲蟲病(Lymohatic filariasis) 具體上說，本發明提供一種免疫原組合物和其使用方 法，其中該免疫原組合物包含PIKA佐劑以及寄生蟲抗原， 其中典型的抗原包括但不限於表4所述一或多種寄生蟲的 抗原。 52 200800258 表4 :寄生蟲病原體和疾病
寄生蟲分類 疾病 1 肉足鞭毛門(原生動物門)(Phylum Sarcomastigophora (the protozoa)) 2 鞭毛蟲亞門(Subphylum Mastigophora (tiie flagellates)) 3 動鞭綱(Class Zoomastigophorea) 4 毛滴嘉目(OrderTrichomonadida) 5 脆弱雙核阿米巴 (Dientamoeba fiagilis) 脆弱雙核阿米巴感染 6 雙體目(Order Diplomonadida) 7 藍氏賈第蟲（賈第蟲病）（Giardia lamblia腸賈第蟲（Giardia (giardiasis)) intestinalis) 賈第养.病/買第蟲感染 (Giardiasis/Giardia Infection) 8 動質體目(Order Kinetoplastida) 9 利什曼原蟲(Leishmania) 黑熱病(Kala-Azar) 10 布氏羅得西亞錐蟲 (Trypanosoma cruzi) 查加斯病(Chagas Disease) 11 布氏岡比亞錐蟲 (Trypanosoma brucei) 非洲錐轰病（Afiican Tiypanosomiasis) 12 肉足蟲亞門(變形轰)(Subphylum Sarcodim (Uie amoebae》 13 根足總綱(Siq)erclass Rhizopoda) 14 葉足綱(Class Lobosea) 15 變形蟲目(Order Amoebida) 16 痢疾阿米巴(Entamoeba histolytica) 阿米巴病(Amebiasis) 17 頂覆門(Phylum 4)iconplexa) 18 胞子蟲綱(Class Sporozoea) 19 球蟲亞鋼(Subclass Coccidia) 20 真球蟲目(Order Eucoccidiorida) 21 艾美球蟲亞目(Suborder Eimeriorina) 22 艾美球蟲 ^KFamily Eimeriina) 23 等胞球蟲(Isospora belli) 等胞球蟲感染 24 肉孢子蟲科(Family Sarcocystidae) 25 弓漿蟲(弓漿蟲病)(Toxoplasma gondii (toxoplasmosis)) 弓漿蟲病 26 隱抱子蟲 i^KFamily Cryptosporidiidae) 27 微小隱孢子蟲（隱孢子蟲病)(Cryptosporidium parvum (cryptosporidosis)) 隱抱子蟲病 53 200800258 28 圓孢子蟲（Cyclospom cayetanensis) 圓孢子蟲病 (Cyclosporiasis) 29 焦蟲亞綱(Subclass Piroplasmasina) 30 巴貝斯蟲科(Family Babesiidae) 31 巴貝斯蟲屬(Babesia) 例如田鼠巴貝斯蟲 (Babesia microti)和分歧 巴貝斯轰（Babesia divergens) 巴貝斯蟲感染 32 纖毛門(纖毛蟲)(Ph>ium Ciliophora (Ihe ciliates)) 33 Class Litostomatea 34 Order Vestibuliferida 35 結腸小袋纖毛蟲 (Balantidium coli) 小袋纖毛蟲感染 (Balantidium Infection) 36 扁形動物門(扁蟲)(PhylumPlath>iielminthes (the flatworms)) 37 吸蟲綱(Class Trematoda) 38 複殖亞綱(複殖性吸蟲)(Subclass Digenea (the digenetic trematodes)) 39 Order Echinostomatifomies 40 吸蟲 fliFamily Fasciolidea) 41 肝吸蟲(Fasciola hqjatica) 吸蟲病(Fascioliasis) 42 布氏薑片蟲(Fasciolopsis buski) 薑片蟲病(Fasciolopsiasis) 43 Order Strigeifomies 44 裂體科(Family Schistosomatidae) 45 曼氏血吸蟲(Schistosoma mansoni)、埃及血吸蟲(S. haematobium)和日本血吸 蟲(S.japonicum) 血吸蟲症(Schistosomiasis) 46 後睾目(Order Opistiiorchifonnes) 47 後睾科(Faniily Opisthorchiidae) 48 中華肝吸蟲(Clonorchis sinensis) 肝吸蟲病 (Clonorchis Infection) 49 異形科(Family Hetoophyidae) 50 異形異形吸蟲 (Heterophyes heterophyes) 異形吸蟲感染(Heterophyes Infection) 51 Orcfe Plagiorchifonnes 52 Suborder Plagiorchiata 53 雙腔吸蟲 f^KFamily Dicrocoeliidae) 54 癔原蟲屬(Platynostomum sp.) 瘧疾(Malaria) 54 200800258
55 住胞吸蟲亞目(Suborder Troglotremata) 56 住胞吸蠢 Troglotrematidae) 57 並殖吸蟲(Paragonimus) 並殖吸蟲病 (Paragonimiasis) 58 縧轰綱(Class Cestoidea) 59 真縧蟲亞綱(纟條蟲)(Subclass Eucestoda (the 鄉 ewoms)) 60 圓葉目(Order Cyclophyllidea) 61 犬覆孔縧蟲(DbyUdium caninum) 覆孔繼蟲感染 62 多房棘球縧蟲 (Echinoccus muMoclaris) 泡型包蟲症 （Alveolar Hydatid Disease) 63 短小包膜縧蟲 (Hymenolepis nana) 短小包膜、縧蟲症 (Hymenolepiasis) 64 無鈎條蟲（Taenia saginata) 矣條蟲症、嚢蟲症(Taeniasis， Cysticerosis) 65 Order Proteocephalata 66 麝貓後睾吸蟲 (Opisthorchis \dverrmi) 麝貓後睾吸蟲感染 67 擬葉目(Order Pseudophyllidea) 68 廣節裂頭縧蟲 (Diphyllobotbrium latum) 裂頭縧蟲感染 69 線蟲門(圓蟲)(PhylumNematoda (the roundwomis)) 70 無尾感器綱(Class Aphasmida (=Enoplea)) 71 鞭蟲目(Order Trichurida) 72 毛細科(Family C^)illaridae) 73 菲律賓毛線蟲 (C^pillaria philippinensis) 毛線蟲感染 74 毛形^KFamily Trichinellidae) 75 旋毛蟲屬(Trichinella) 旋毛蟲病（Trichinellosis/ Trichinosis) 76 鞭蟲 ^Family Trichuridae) 77 毛首鞭形線蟲(Trichmis trichiura) 鞭蟲症(Trichuriasis) 78 小杆綱(Class Rhabditae) 79 小杆目(Order Rhabditidae) 80 糞小杆線蠢(Strongyloides stercomlis) 小杆線蟲症 (Strongyloidiasis) 81 圓蟲目(Order Stongyiida) 82 钩蟲科(Family Ancylostomidae) 83 十二指腸鈎蟲 (Ancylostoma duodenale) 鈎蟲感染 55 200800258 84 廣東住血線蟲 (Angiostrongylus cantonensis) 住血線蟲病 (Angiostrongyliasis) 85 細蟲目(Order Ascaridida) 86 細蟲屬(Ascaris) 蟲感染 87 犬弓首線蠢(Toxocam canis)、貓弓首線蟲(T. cati) 腸道isj蟲感染 88 貝利細蟲(Baylisascaris) 貝利細蟲染 89 簡單異尖線蟲(AnisaMs simplex)和覆管線蟲 (Pseudoterranova decipiens) 異尖線蟲病(Anisakiasis) 90 尖尾目(Order Oxyurida) 91 螺形住腸線蟲(Enterobius vermicularis) 蟯蟲感染 92 旋尾 § (Order Spirurida) 93 旋尾亞目(Suborder Spirurina) 94 蟠尾絲蟲科(Family Onchocercidae) 95 旋盤尾線蟲(盤尾絲蟲病、河盲病）（Onchocerca volvulus (Onchocerciasis, riverblindness)) 盤尾絲蟲病 (Onchocerciasis) 96 IS形亞目(Suborder Camallanina) 97 龍線蟲矛+(Family Dracunculidae) 98 麥地那龍線蟲 (Dracunculus medinensis) 幾内亞蠕蟲症（Guinea Worm Disease) 99 節肢動物門(Phylum Arthropoda) 100 曱殼亞門(Subphylum Crustacea) 101 昆蟲綱(Class Insecta) 102 ML S (Order Anoplura) 103 頭益（Pediculus humanus capitis) 頭為病(Pediculosis) 104 螯肢亞門(Subphylum Chelicerata) 105 蛛形綱(Class Arachnida) 106 蜗目(Order Acari) 107 無氣門亞目(Suborder Astigmata) 108 挤iS(Sarcoptes scabiei) 挤癬(Scabies)
56 200800258 本舍明供一種免疫原組合物和其使用方法，其中該 免疫原組合物包含PIKA佐劑以及過敏成份抗原（“過敏原，，) 或疫苗，其中該抗原或疫苗的來源是從源自於人類或動物 過敏成分來源的病原衍生而來或是仿真該病原來産生，該 5病原包括植物、動物、真菌、昆蟲、食品、藥物、灰塵和 塵瞒等。 過敏原包括但不限於環境空氣過敏原；豕草/花粉熱 (ragweed/hayfever)等植物花粉；雜草花粉過敏原；牧草花 粉過敏原；石茅高梁(Johnson grass);樹木花粉過敏原；黑 10麥草(ryegrass);屋塵蟎(例如Der p I，Der f I等）等蜘蛛類過 敏原：儲藏室粉蟎過敏原；日本柳杉花粉熱；黴菌孢子過 敏原，動物過敏原（例如狗、天竺鼠、倉鼠、沙鼠、大氣、 小鼠等過敏原）；食物過敏原（例如甲殼類水產品過敏原；例 如花生等堅果類；柑橘類水果）；昆蟲過敏原；毒液：（膜翅 15 目昆蟲(Hymenoptera)、胡蜂、蜜蜂、木胡蜂、黃蜂、火蟻）； 來自於蟑螂、跳蚤、蚊子等其他環境昆蟲的過敏原；鏈球 菌抗原等細菌過敏原；蛔蟲抗原等寄生蟲過敏原；病毒抗 原，真囷孢子’藥物過敏原；抗生素；青黴素(penicillins) 和相關化合物；其他抗生素；激素（胰島素）、酶（鏈激酶 2〇 (streptokinase))等完整蛋白；可作爲不完全抗原或半抗原 (haptens)的所有藥物和它們的代謝物；可作爲半抗原並作 爲過敏原的工業用化學品和它們的代謝物（例如酸酐（例如 苯偏三甲酸酐)和異氰酸酯(例如甲苯二異氰酸酯))；麵粉(例 如導致麵包師哮喘症(Baker’s asthma)的過敏原、蓖麻籽、 57 200800258 咖《非旦和月.』述工業用化學品等職業過敏原；蛋過敏原；以 及非人類動物中的人類蛋白。 過敏原包括但不限於細胞、細胞提取物、蛋白質、多 狀狀、多糖、多糖綴合物、多糖的狀或非肽仿真體以及 5其他分子、小分子、脂肪、_質和糖類。 特定天然、動物和植物過敏原的範例包括但不限於下 列屬所特有的蛋白：犬屬（家犬（Canis familiaris));
Dermatophagoides (例如粉塵蜗（Dermat〇phag〇ides farinae));貓屬（家貓（Felis domesticus));豚草屬（豚草 10 (Ambrosia artemiisfolia));黑麥草屬（例如多年生黑麥草 (Lolirnn pererme)或多花黑麥草（L〇lhim；柳杉 屬（日本柳杉（Cryptomeria japonica));鏈格孢屬（煉格孢菌 (Alteraaria alternate));紅樺（Alder);赤楊屬（Alnus gultinoasa)，樺屬（瘤皮樺（Betula verrucosa));櫟屬（白橡 15 (Quercus alba));木犀屬（油撖欖(〇iea europa));蒿屬（野艾 (Artemisia vulgaris));車前草（例如長葉車前草（piantag0 lanceolata));牆草屬（例如直牆草（parietaria officinalis)或猶 大牆草(Parietaria judaica));小蠊屬（例如德國小蠊(Blattella germanica));蜜蜂(例如 Apis multiflorum);柏木屬（例如絲 20 柏（Cupressus sempervirens)、亞利桑那柏（Cupressus arizonica)和大果柏（Cupressus macrocarpa);圓柏屬（例如 Juniperus sabinoides、錯筆柏（Juniperus virginiana)、杜松 (Juniperus communis)和 Juniperus ashei);側柏屬（例如東方 側柏（Thuya orientalis);扁柏屬（例如日本扁柏 58 200800258 (Chamaecyparis obtuse));大蠊屬（例如美洲大蠊(Periplaneta Americana));我I觀草屬（例如偃麥草(Agropyron repens)); 黑麥屬（例如黑麥（Secale cereale));小麥屬（例如小麥 (Triticum aestivum));鴨茅屬（例如鴨茅（Dactylis 5 glomerata));狐茅屬（例如草地狐茅（Festuca elatior));早熟 禾屬（例如草地早熟禾(Poa pratensis)或加拿大早熟禾(P〇a compressa));燕麥屬（例如燕麥(Avena sativa));絨毛草屬（例 如絨毛草（Holcus lanatus));黃花茅屬（例如黃花茅 (Anthoxanthum odoratum));燕麥草屬（例如燕麥草 10 (Arrhenatherum elatius));剪股穎屬（例如小糠草（Agrostis alba));梯牧草屬（例如梯牧草(phleum pretense));鷂草屬（例 如鹬草（Phalaris arundinacea));雀稗屬（例如百喜草 (Paspahmi notatimi));高梁屬（例如石茅高粱（S〇rghum halepensis))，和雀麥屬（例如無芒雀麥(Br〇mus inermis)) 〇 15 在一個相關實施方案中，本發明提供聚核苷酸佐劑組 合物和其使用方法，其中該免疫原組合物包含PIKA佐劑以 及自體免疫抗原或疫苗。 具體上說，本發明提供免疫原組合物和其使用方法， 其中該免疫原組合物僅包含PI κ A佐劑或PI κ A與癌腫抗原 20的組合，其中典型的抗原包括但不限於表5所述一或多種癌 腫的抗原。 59 200800258 表5 :癌腫 癌腫分類和疾病 1 骨骼 2 尤英家系腫瘤(Ewing’s Family of Tumors) 3 骨肉瘤(Osteosarcoma) 4 腦 5 腦瘤 6 腦幹神經膠質瘤(Bmin Stem Glioma) 7 小腦星狀細胞瘤(Cerebellar Astrocytoma) 8 大腦星狀細胞瘤/惡性神經膠質瘤(Cerebral Astrocytoma/Malignant Glioma) 9 室管膜瘤(Ependymoma) 10 髓母細胞瘤(Medulloblastoma) 11 幕上原始神經外胚葉腫瘤和和松果體母細胞瘤(Supratentorial Primitive Neuroectodermal Tumors and Pineoblastoma) 12 視覺神經路徑和下丘腦膠質瘤(Visual Pathway and Hypothalamic Glioma) 13 14 乳房 15 乳癌 16 消化道/勝胃道 17 肛門癌(Anal Cancer) 18 肝外膽管癌(Bile Duct Cancer，Extrahepatic) 19 腸胃道類癌腫瘤(Carcinoid Tumor，Gastrointestinal) 20 結腸癌(Colon Cancer) 21 食道癌(^Esophageal Cancer) 22 膽囊癌(Gallbladder Cancer) 23 肝癌(Liver Cancer) 24 胰臟癌(Pancreatic Cancer) 25 直腸癌(Rectal Cancer) 60 200800258
26 小腸癌(Small Intestine Cancer) 27 胃癌(Stomach (Gastric) Cancer) 28 内分泌 29 腎上腺皮質癌(Adrenocortical Carcinoma) 30 腸胃道類癌腫瘤(Carcinoid Tumor, Gastrointestinal) 31 騰島細胞瘤(胰臟内心泌)(Islet Cell Carcinoma (Endocrine Pancreas)) 32 副甲狀腺癌(Parathyroid Cancer) 33 嗜鉻細胞瘤(Pheochromocytoma) 34 腦下垂體腫瘤(Pituitary Tumor) 35 甲狀腺癌(Thyroid Cancer) 36 眼 37 眼球内黑色素瘤(Melanoma，Intraocular) 38 視網膜母細胞瘤(Retinoblastoma) 39 泌尿生殖器 40 膀胱癌(Bladder Cancer) 41 腎(腎細胞)癌 42 陰莖癌(Penile Cancer) 43 前列腺癌(Prostate Cancer) 44 腎盂及輸尿管移行上皮癌(Renal Pelvis and Ureter Cancer, Trmisitional Cell) 45 睾丸癌(Testicular Cancer) 46 尿道癌(Urethral Cancer) 47 威爾姆氏腫瘤和其他兒童腎臟腫瘤(Wilms’ Tumor and Other Childhood Kidney Tumors) 48 生殖細胞(Germ Cell) 49 顱外生殖細胞瘤(Extracranial Germ Cell Tumor) 50 性腺外生殖細胞瘤(Extragonadal Germ Cell Tumor) 51 卵巢生殖細胞瘤(Ovarian Germ Cell Tumor) 52 睾丸癌(Testicular Cancer) 61 200800258 53 婦科 54 子宮頸癌(Cervical Cancer) 55 子宮内膜癌(Endometrial Cancer) 56 滋養層細胞腫瘤(Gestational Trophoblastic Tumor) 57 卵巢上皮癌(Ovarian Epithelial Cancer) 58 卵巢生殖細胞瘤(Ovarian Genii Cell Tumor) 59 低度惡性卵巢腫瘤(Ovarian Low Malignant Potential Tumor) 60 子宮肉瘤(Uterine Sarcoma) 61 陰道癌(Vaginal Cancer) 62 外陰癌(Vulvar Cancer) 63 64 頭部和頸部 65 下咽癌(Hypopharyngeal Cancer) 66 喉癌(Laiyngeal Cancer) 67 唇部和 口腔癌(Lip and Oral Cavity Cancer) 68 不明原發竈頸部轉移性鱗狀細胞癌(Metastatic Squamous Neck Cancer with Occult Primary) 69 鼻咽癌(Nasopharyngeal Cancer) 70 口咽癌(Oropharyngeal Cancer) 71 副鼻竇和鼻腔癌(Paranasal Sinus and Nasal Cavity Cancer) 72 副甲狀腺癌(Parathyroid Cancer) 73 唾腺癌(Salivary Gland Cancer) 74 血液(Hematologic/Blood) 75 白血病(Leukemia) 76 急性淋巴細胞白血病(Acute Lymphoblastic Leukemia) 77 急性骨髓性白血病(Acute Myeloid Leukemia) 78 慢性淋巴細胞白血病(Chronic Lymphocytic Leukemia) 79 慢性骨髓性白血病(Chronic Myelogenous Leukemia) 62 200800258
80 發狀細胞性白血病(Hairy Cell Leukemia) 81 淋巴癌(Lymphoma) 82 AIDS-相關性淋巴癌(AEDS-Related Lymphoma) 83 皮膚性T-細胞淋巴瘤(Cutaneous T-Cell Lymphoma) 84 何傑金氏淋巴癌(Hodgkin’s Lymphoma) 85 蕈狀肉芽腫(Mycosis Fungoides) 86 非何傑金氏淋巴癌(N〇n-Hodgkin’s Lymphoma) 87 原發性中樞神經系統淋巴瘤(Primary Central Nervous System Lymphoma) 88 Sezary 綜合症(Sezary Syndrome) 89 皮膚性 T-細胞淋巴瘤(T-Cell Lymphoma，Cutaneous) 90 華氏巨球蛋白企症(Waldenstr0m’s Macroglobulinemia) 91 其他 92 慢性骨聽增生性病變(Chronic Myeloproliferative Disorders) 93 多發性骨髓瘤/質漿細胞瘤(Multiple Myeloma/Plasma Cell Neoplasm) 94 骨髓發育不良綜合症(Myelodysplastic Syndromes) 95 骨聽發育不良/骨聽增生性疾病(Myelodysplastic/Myeloproliferative Diseases) 96 肺 97 非小細胞肺癌(Non-Small Cell Lirng Cancer) 98 小細胞肺癌(Small Cell Lung Cancer) 99 骨路肌肉 100 尤英家系腫瘤(Ewing’s Family of Tumors) 101 骨肉瘤/骨惡性纖維組織細胞瘤 (Osteosarcoma/Malignant Fibrous Histiocytoma of Bone) 102 橫紋肌肉瘤(Rhabdomyosarcoma) 103 軟組織肉瘤(Soft Tissue Sarcoma) 104 子宮肉瘤(Uterine Sarcoma) 105 神經 106 腦瘤 63 200800258 107 腦幹神經膠質瘤(Brain Stem Glioma) 108 小腦星狀細胞瘤(Cerebellar Astrocytoma) 109 大腦星狀細胞瘤/惡性神經膠質瘤(Cerebral Astrocytoma/Malignant Glioma) 110 室管膜瘤(Ependymoma) 111 髓母細胞瘤(Medulloblastoma) 112 幕上原始神經外胚葉腫瘤和和松果體母細胞瘤(Supratentorial Primitive Neuroectodermal Tumors and Pineoblastoma) 113 視覺神經路徑和下丘腦膠質瘤(Visual Pathway and Hypothalamic Glioma) 114 神經母細胞瘤(Neuroblastoma) 115 腦下垂體腫瘤(Pituitary Tumor) 116 原發性中樞神經系統淋巴瘤(Primary Central Nervous System Lymphoma) 117 呼吸系统/胸腔 118 非小細胞肺癌(Lung Cancer, Non-Small Cell) 119 小細胞肺癌(Lung Cancer, Small Cell) 120 惡性間皮瘤(Malignant Mesothelioma) 121 胸腺瘤和胸腺癌（Thymoma and Thymic Carcinoma) 122 皮膚 123 皮膚性T-細胞淋巴瘤(Cutaneous T-Cell Lymphoma) 124 卡波西氏瘤(Kaposi’s Sarcoma) 125 黑色素瘤(Melan〇ma) 126 默克爾氏細胞癌(Merkel Cell Carcinoma) 127 皮膚癌 在一個相關實施方案中，癌腫抗原的來源可爲：1).病 毒蛋白，例如乙型肝炎病毒(HBV)、Epstein-Barr病毒(EBV) 和人類乳頭瘤病毒(HPV)，其分別在肝細胞癌、淋巴癌和子 5 宮頸癌的發展上具有重要性；2)·完整癌細胞，其可經過滅 64 200800258 活和/或這些細胞的未純化和/或半純化提取物；3)·腫瘤相關 抗原（TAAs)例如腫瘤特異性致癌蛋白、糠基化蛋白、神經 節糖苷、糖脂、粘質素(mucins)、肽、糠類和抗獨特型 (anti-idiotype)單株抗體。 5 在一個相關實施方案中，含聚核苷酸佐劑的免疫原組 合物可通過防止既有癌腫繼續生長、防止治癒的癌腫復 發、或疋去除未被先前療程所滅殺的癌細胞，而用以治療 癌腫。此療秋可在其他療程之前、同時或之後給予個體， 因此可形成治療癌症的完整組合式療程的一部分。 10 在一個相關實施方案中，治療用癌腫疫苗可以誘導腫 瘤特異性免疫反應以對抗原發性腫瘤和轉移性腫瘤。另 外，誘導強免疫力可促使建立免疫記憶力，從而降低或遏 制腫瘤的復發。癌腫疫苗可誘導特異性抗體來對抗腫瘤相 關性表面抗原’優選爲誘導細胞免疫反應，且更優選爲具 15有誘導Thl免疫反應的偏好。 本發明的免疫原組合物可包含各種習知腫瘤特異性抗 原或腫瘤相關抗原（TAA)中的任何一種。可以使用但並非必 須使用完整的TAA分子。取而代之地，可使用TAA的一部 分，例如它的一個抗原表位。可被使用於YFV中的腫瘤相 20關抗原（或是它的含抗原表位片段）包括但不限於 MAGE-2、MAGE_3、MUC-1、MUC-2、HER-2、高分子量 黑色素瘤相關抗原MAA、GD2、癌胚抗原（CEA)、TAG-72、 卵巢相關抗原0V-TL3和MOV18、TUAN、甲型幼兒蛋白 (AFP)、〇FP、CA-125、CA_50、CA-19-9、腎腫瘤相關抗原 65 200800258 G250、EGP-40(也被稱作爲EpCAM)、S100(惡性專色素瘤 相關抗原）、p53以及p21ras。任何TAA(包括前述住何TAA 和或它的抗原表位）的合成型類似物均可使用。另外，、组人 物内可以包含一或多種TAAs(或它的抗原表位元）的組合。 在一些實施方案中，本發明的免疫原組合物包含聚核 苷酸佐劑以及至少二種不同的抗原，例如在一些實施方案 中’本發明的免疫原組合物包含二種抗原、三種抗原、四 種抗原、五種抗原或是超過五種抗原。 其他成份 在一些貫施方案中，本發明的免疫原組合物除了 pika 佐劑和抗原以外，另包含一或多種成份例如免疫調節劑、 載劑等。 在一特別相關的實施方案中，本發明提供一種免疫原 組合物和其使用方法，其中該免疫原組合物包含piKA佐 15劑、抗原或疫苗，以及另一種免疫調節物質（包含佐劑在 内），其中適合的免疫調節物質包括但不限於：鋁組合物例 如氫氧化鋁；含有免疫原物質的水包油乳劑組合物或是乳 劑’包括元全弗氏佐劑（Complete Freund’s Adjuvant);含有 經乾燥和熱殺滅的結核桿菌的水包油乳劑；不完全弗氏佐 20 劑(Incomplete Freimd’s Adjuvant);含有分枝桿菌細胞壁成 份的乳劑；含有角鯊烯(squalene)的乳劑(MF-59);去毒化的 内毒素；脂質A衍生物，包括微生物單磷脂酰脂質a(MPL); 半抗原；硝化纖維素吸收性蛋白；皂甙，包含從皂質樹 Quillaja Saponoria皮分離而來的免疫調節劑顆粒，例如 200800258 QS21 ;人類内源性免疫調節劑；從細菌衍生而來的佐劑， 包括去曱基化的CpG二聚核苷酸；募聚脫氧核苷酸(例如合 成寡核苷酸），含有去甲基化的CpG二聚核苷酸；脂質體(例 如由如磷脂等可生物降解性材料製成的脂質體）；可生物降 5解性聚合微球體（由如聚乳酸-共-甘醇酸(PLGA)、聚膦腈 (polyphosphazene)和聚酐等多種聚合物製成的聚合微球 體）；白介素-2 ;卡介苗；顆粒性白血球及單核球群落刺激 因子，Montanide ISA-51;錄孔蟲戚血藍蛋白（Keyhole limpet hemocyanin)，DNA，蛋白；囊封型抗原（encapSuiate(j 10 antigens);免疫刺激複合物(iscom’s);霍亂毒素和霍亂毒 素衍生物；小帶閉合毒素(zonula 0CClU(jens toxin);大腸桿 菌忌熱性腸毒素(Escherichia coli heat-labile enterotoxin); 忌熱性毒素和忌熱性毒素衍生物；百日咳毒素和百日咳毒 素衍生物；胞壁酰二肽(muramyl dipeptide)衍生物；賽比克 15 藥廠(SePPic^m〇ntanide系列佐劑；聚-二(羧負離子基苯氧 基）膦腈以及利甚曼原蟲延長因子（leishmania d〇ngati〇n factor)。 當本發明的免疫原組合物和另佐劑共同給予時，聚核 苷酸佐劑可在給予該另佐劑之前和/或之後和/或同時給 20予。例如，聚核苷酸佐劑可在初次給予抗原時併合給予， 隨後追加給予-劑含有其中-種佐劑或所有二種佐劑的疫 苗。選擇性地，初次給予的疫苗可排除聚核苷酸佐劑，但 後續給予病人含有該聚核苷酸佐劑的免疫原物質。 在某些實施方案中，本發明的免疫原组合物可以和細 67 200800258 胞因子或是例如 IL-1、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL_7、IL-10、 IL_12、IL-15等其他輔助刺激分子共同給予。 在一個相關實施方案中，本發明提供一種免疫原物 質，包含ΠΚΑ佐劑、一或多種抗原物質，加上一適當載劑。 5该載劑可爲例如油水乳劑、懸浮液、脂質載劑、鋁鹽、脂 質體卷(cochleates)、ISCOMs、脂質體、活細菌載體、活病 毒載體、微球體、核酸疫苗、聚合物、聚合物環、氟化鈉、 轉基因植物、病毒原質體(virosomes)、類病毒顆粒，以及 其他常用傳輸載體。 10 聚核苷酸佐劑可直接給予個體或是和傳輸複合物共同 給予。該傳輸複合物是一種併合有致標手段的物質，例如 對於諸如樹突細胞(dendritic cell)等標的細胞表面具有更高 親和力和/或易被標的細胞所吸收的分子。傳輸複合物的範 例包括但不限於並有下列物質的核酸傳輸複合物：固醇(例 15如膽固醇）、脂肪(例如正價離子脂肪、病毒原質體或脂質體) 或是標的細胞特異性結合成份（例如能被一標的細胞特異 I*生义體所辨識的配位體）。優選的複合物在活體内是足夠穩 定以防止在被標的細胞内化之前顯著崩解。但是，該複合 物在細胞内的適當條件下是可以裂解的。 20 在相關實施方案中，含有PIKA佐劑的組合物不包含聚 -L-賴氨酸或其衍生物。 在某些實施方案中，本發明提供一種包含本發明免疫 原組合物的組合套裝。在某些實施方案中，本發明提供一 200800258 種且0套衣，包含分別位元在不同配方内的PIKA佐劑和抗 原。 在一個相關實施方案中，本發明提供一種組合套裝， 包含聚核苦酸佐劑和免疫原化合物，其中該免疫原物質是 5抗原。 貝疋 ^在-些實施方案中，本發明的組合套裝包含配製於無 囷^體(例如水性)配方内的本發明免疫原組合物，其中該配 疋…、菌的且盛裝在無菌容器、無菌小管或無菌注射筒内。 、在些貝施方案中，本發明的組合套裝包含被配製成 1〇 ^射㈣本發明免疫原組合物。在-些實施方案中，本發 的、、且a套衣包含配製於無菌液體配方内的本發明免疫原 、…物麗衣在無菌注射筒内；以及針頭。本發明的組合 套衣包含配製於無菌液體配方内且呈一單位劑量（例如單 人J里）的本發明免疫原組合物，盛裝在無菌注射筒内；以 15 及針頭。 在-些實施方案中，本發明的組合套裝包含被冷束乾 燥且被盛裝在無菌容器内的本發明免疫原組合物，以及含 有用以復原冷;東乾燥組合物的無菌液體的容器。在一些實 施方案中，該組合套裝另包含復原冷康乾燥組合物的無菌 20 液體的指南。 在一些實她方案中，本發明的組合套裝包含一免疫原 組合物，該免疫原組合物被配製成通過直腸、陰道、鼻、 口（包括經呼吸道吸入）、眼、局部、肺臟、眼球或透皮來給 予，以及適當傳輸裝置，例如吸入器、栓劑施用器等。 69 200800258 在一些實施方案中，本發明的組合套裝另包含例如有 關給予劑量和給予頻率的使用指南。在一些實施方案中， 指南是被直接印刷在組合套裝上。在其他的實施方案中， 指南是被設置成爲包裝内容物的印刷品。指南亦可被設置 5 在其他媒介物上，例如呈數位或類比形式的電子媒體上， 例如錄音匣、錄音帶、光盤、多功能數位光盤等。 本發明的免疫原組合物可被配置在任一種配方中。例 如，本發明的免疫原組合物可被製備成爲一種可注射型溶 10 液、乾燥粉末、液態溶液例如水性或生理食鹽水溶液，或 成爲懸浮液、油膏、乳劑、片劑、包衣片劑、微膠囊、栓 劑、液滴、藥片、顆粒、糖衣錠、膠囊、凝膠、糖漿或漿 液。所需免疫原組合物配方的製備被一般性地敍述在 Vaccine 4th Edition by Stanley A Plotkin et al.5 W.B. 15 Saunders Company; 4th edition 2003。適當的配方亦被敍述 在例如 A. Gennaro (2000) “Remington: The Science and Practice of Pharmacy，” 20th edition，Lippincott，Williams，& Wilkins ； Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems (1999) H.C. Ansel et al·，eds·，7th ed·，Lippincott， 20 Williams，& Wilkins ;以及 Handbook of Pharmaceutical Excipients (2000) A.H. Kibbe et al.5 eds., 3rd ed. Amer. Pharmaceutical Assoc. ; Methods in Molecular Medicine, Vol. 87: Vaccine Protocols，2nd edition (2003)，Humana Press; Mucosal Vaccines (1996)，Kiyono et al” eds.，Academic 70 200800258
Press ;以及 Vaccine Adjuvants: Preparation Methods and Research Protocols (2000) D.T· CTHagan，Humana Press。 本發明的免疫原組合物可被微囊封、並入脂質體卷 (encochleated)、塗布在微型金質顆粒上、或是容納於脂質 5體、氣霧劑或丸片内以植入皮膚，或是被乾燥於一尖銳物 件(例如一針頭）上以刮擦進入皮膚内。 在另一貫施方案中，本發明的免疫原物質可單獨傳輸 或與懸浮液系統併合傳輸。在一些實施方案中，該懸浮液 系統是選自於由例如巨分子複合物、奈米膠囊、微球體、 10微珠粒和脂體基質系統所構成的群組中。脂體基質系統可 遥擇性地含有水包油乳劑、微胞(micdles)、混合微胞(mixed micelles)或脂質體(lip〇s〇mes)。 在某些實施方案中，含有PIKA佐劑的本發明免疫原組 δ物疋壬藥學上可接受性溶液的形式，該溶液可例行性地 15 3有藥予上可接文濃度的鹽、緩衝劑、防腐劑、兼容性載 劑、佐劑和其他任擇性治療用組份。該組合物可含有例如 朋解劑、枯合劑、包覆劑、膨脹劑、潤滑劑、香料、甘味 劑或助溶劑等添加劑。 在某些實施方案中，含有PIKA佐劑的本發明免疫原組 2〇合物是以其原物形式或藥學上可接受的鹽形式來給予。 本發明的免疫原組合物可以無菌和非無菌形式來使 用·，例如膠囊、«溶液、液滴、乳劑、懸浮液、_ (+ 1Γδ)油月、拴劑、凝膠、軟膠囊、喷劑、吸入劑、氣 務背J者刀末 >；劑、包衣片、菱鍵⑽哪eS)、微膠囊、检 71 200800258 5 10 在某些實施方案中，ΡΙΚΑ&劑組合物以及包含ρικΑ 佐劑和抗原化合物的免疫原組合物可被冷練乾燥，以呈固 體形式長時穩定保存。冷淥乾燥法是《本領域技術人士 所知悉的。 ^搪衣峰agees)、糖漿、漿液、顆粒、灌腸劑(_㈣ ^樂片。可以運用任何惰性載劑，例如生理食鹽水或構酸 以衝化生理食鹽水、穩定劑、驅動劑等任何惰性載劑， 心性制被包封在用以幫助給藥的明膠膠囊内或是在微 =或載㈣’或是可以運贼得本發财輯使用的化 °物具有適用於本發明方法的溶解性質的任何載劑。 在-個特別相關方面，本發明提供佐劑組合物或免疫 原組合物’其中該免疫原組合物，或是被包含在該免疫原 組合物的佐劑組合物，呈體讀體形錢是位於溶液 或懸浮液或乳劑内。 本發明的免疫原組合物可借著通過呼吸道吸入途徑 (經口腔、氣管内、鼻内）的藥用傳輸系統來給予個體。因此， 本發明的免疫肋合物可被配製朗合吸人料的形式。 該藥用傳輸系統適合於將本發明的細菌組合物局部給予至 支氣管的枯膜被覆層而進行吸入性治療。本發明可運用依 賴壓縮氣體驅動力的系統而將細菌喷出容器。爲達成此一 目的，可使用氣霧劑或加壓容器。 本說明書所使用的“氣霧劑，，此用語是依據它的慣用意 義來使用，意指被加壓推進氣體攜載至施行治療地址的極 細微液態或固態顆粒。當藥用氣霧劑被運用於本發明時， 72 200800258 該氣霧劑含有免疫原組合物，而該免疫原組合物可被溶 解、懸浮或乳化在由流體載劑和抛射劑所構成的混合物 中。氣霧劑可呈溶液、懸浮液、乳劑、粉末或半固體製劑 的形式。本發明所使用的氣霧劑是意圖以細微固態顆粒或 5 液態氣霧的形式通過個體的呼吸道來給予。被熟習本項技 術人士所知悉的各種拋射劑均可被使用。適當拋射劑的範 例包括但不限於烴類或其他適當氣體。以加壓氣霧劑爲 例，其劑量可通過設置一閥件來設定，以傳輸經計算的用 10 數個不同種類的呼吸道吸入方法可被使用於本發明。 本發明的免疫原組合物基本上可被配製成三種不同種類的 吸入用配方。第一，本發明的免疫原組合物可與低沸點拋 射劑共同配製。這種配方通常通過常用定量吸入器（MDI，s) 來給予。但是，可運用美國專利第5,404,871號和第5,542,410 15 號中所論及的技術來測量個體的呼吸體積和流速，而將常 用MDI’s加以改裝以增進重復給藥的能力。 選擇性地，本發明的免疫原組合物可被配製在水性或 酒精溶液中’並通過常用霧化器來傳輸。在一些實施方案 中，這種溶液配方是利用例如美國專利第5,497,763號、第 20 5,544,646號、第5,718,222號和第5,660，166號中所揭露的裝 置和系統來霧化。 另外，本發明的免疫原組合物可被配製成乾粉配方。 這種配方的給予方式可透過産生該粉末的氣霧之後再簡單 地吸入該乾粉配方。這種給予方式的實施技術被敍述在美 73 200800258 國專利第5,775,320號和美國專利第5,740,794號中。 適合鼻内給予的配方包括鼻用喷劑、鼻用滴劑、氣霧 劑配方等。 在一些實施方案中，本發明的免疫原組合物被配製成 5 持續釋放劑（例如控制釋放型配方）。例如，在一些實施方案 中’本發明的免疫原組合物被配製成丸片或柱體，並以貯 釋>主射劑（depot injections)或植入物的形式植入肌肉内或皮 下。這種植入物通常會應用如可生物降解性聚合物等習知 惰性材料。可注射的貯釋形式可通過在如聚乳酸聚甘醇酸 10 (P〇1ylactide-polyglyc〇lide)等可生物降解性聚合物中形成本 發明免疫原組合物的微膠囊基質來製成。其他適用的可生 物降解性聚合物的範例包括聚（原酸酯Xpoly(orthoesters)) 和聚酐。可注射的貯釋配方亦可通過將組合物埋覆在可與 身體組織兼容的脂質體或微乳劑内來製成。傳輸釋放系統 15 亦包括下列範例：以聚合物爲基礎的系統、微膠囊、脂肪、 水减膠釋放系統、石夕橡膠系統(Sylastic systems)、肽系統、 以肽爲基礎的系統、蠟質覆膜、壓片、部分融合型植入物。 其他形式的持續釋放劑是熟習於本領域技術人士所知悉 的。 20絲 在一個特別相關方面，本發明提供一種用以刺激和/或 促進對於抗原化合物的免疫反應的方法，包含將本發明的 免疫原組合物給予宿主。在一些實施方案中，該宿主是人 類。在其他實施方案中，該宿主是非人類動物，例如非人 74 200800258 5 類哺乳動物、禽鳥物種等。 在某些實施方案中，該聚核苷佐劑組合物可被使用在 疫苗内。該疫苗組合物可選擇性地含有其他佐劑。所涵蓋 的疫苗種類爲抗傳染病、抗癌症、抗過敏和抗自體免疫疾 病。 另外，本發明提供一種用以促進對於抗原化合物的免 疫反應的方法，包含將本發明的免疫原組合物給予宿主。 該宿主是人類或非人類動物。 在某些實施方案中，該佐劑和該抗原共同被給予。在 10 其他實施方案中，該佐劑是在給予該抗原之前或之後被給 予〇 本發明的免疫原組合物在一些實施方案中是通過肌肉 内、腹腔内、靜脈、皮下或皮内注射等胃腸道外注射來傳 輸。在其他實施方案中，該免疫原組合物是以注射以外的 15 • 方式（例如不以機械裝置來破壞上皮細胞障壁的方式）經皮 内傳輸。在其他實施方案中，該免疫原組合物是通過直腸、 陰道、鼻、口（包括經呼吸道吸入）、眼、眼球、局部、肺臟 或透皮來傳輸。 個體會透過環境接觸而暴露於抗原中，因而會有發展 20 出例如過敏反應、傳染病、自體免疫疾病或癌症的危險。 在其他實施方案中，個體因先前透過環境接觸而暴露於抗 原中，結果罹患傳染病、自體免疫疾病、癌症或過敏症。 在某些實施方案中，當含有聚核苷酸佐劑的免疫原組 合物的給予形式是用以治療癌症時，傳輸方式是將該免疫 75 200800258 原組合物直接注射進入腫瘤或腫瘤附近。在一些實施方案 中，該免疫原組合物是平均地傳輸於腫瘤表面或内部以增 進生物分佈性，從而增進治療效果。 例如，對於以水溶液進行胃腸道外給予而言，該溶液 5在必要時應戎被適當地緩衝化，且先以足量的生理食鹽水 或葡萄糖來稀釋以使其呈現等張。這些特定的水性溶液特 別適用於靜脈和腹腔内給予。關於這點，熟習本領域技術 人士將可參照本申請揭示内容而知悉可供使用的無菌水性 媒介物。可供本發明使用的典型注射媒介物包括含有或不 10含有分散劑和7或防腐劑的緩衝液，以及食用油、礦物油、 鳕魚肝油、角鯊烯(squalene)、一-、二·或三酸甘油酯，以 及這些成份的混合物。 本發明的免疫原組合物是以有效量被給予，也就是 說’本發明的免疫原組合物的用量在選定給予途徑中可有 15效地刺激、誘導或增進免疫反應。在一些實施方案中，免 疫反應是被特定病原性微生物所産生的抗原所激發。在一 些實施方案中，本發明的免疫原組合物的用量可有效地遏 制和/或根除病原性微生物的感染和/或降低感染所並發的 症狀。 20 例如’在一些實施方案中，將本發明的免疫原組合物 給予個體可有效地治療一傳染病，其中傳染病的治療包含 下列一或多者：降低病原體在個體内的數目（例如降低病毒 、街里降低細菌負荷量(bacterialload)、降低原蟲數目、 降低蠕蟲數目）和/或降低傳染病相關參數，該參數包括但不 76 200800258 5 限於傳染物質所産生的産物水平的降低(例如毒素、抗原 等）；以及降低對於該傳染物質的非所需生理反應（例如發 燒、組織水腫等）。 這些組成所需的精確用量是隨著個體不同，依據個體 的物種、年齡、體重及一般狀態，被治療或預防的疾病、 感染或病況的嚴重性，所使用的特定化合物及它的給予形 式等而有所變化。熟習本領域技術人士得知本說明書的公 開的内容後，可僅僅利用例行實驗而決定適當的用量。初 • 次給予後，個體可再接受一或多次適當間隔的追加免疫。 10 在一些實施方案中，——系列劑量的本發明免疫原組合 物被給予。在這些實施方案中，第一劑本發明免疫原組合 物是爲了給予疫苗。第二劑本發明免疫原組合物是在個體 因暴露於該第一劑而已經被免疫致敏化之後再給予該個 體。加強劑(booster)可在初次免疫數日、數周或數月之後給 15 • 予，依據病人的反應和狀況而定。例如，加強劑在給予第 一劑約2日至約12個月後給予，例如在給予第一劑約2日至 約7日、約1周至約2周、約2周至約4周、約4周至約8周、約 8周至約6個月、或6個月至約12個月後給予。本發明亦思及 利用第三、四、五、六劑或後續劑量來進行第三、四、五、 20 六次或後續加強免疫的應用。 在某些實施方案中，給予手段可包含數個替代性途徑 的組合，例如：在系統性給予劑型（例如腹腔、肌肉内、皮 下或皮内給予）之後接續以粘膜傳輸劑型（例如經鼻内吸 入），反之亦然。 77 200800258 在某些實施方案中，聚核苷佐劑可以和給予病人的第 一劑抗原或是和給予病人的任何後續配劑或是和給予病人 的所有配劑合併給予。所給予的至少一劑中將會包含PIKA 佐劑以作爲完整流程的一部分。 5 在某些實施方案中，所給予的免疫原組合物的組成可 以在初始給予和加強劑之間和/或數個加強之間具有變 化。舉例來說，所給予的初次配劑可包含DNA疫苗，而加 強劑是呈重組蛋白疫苗的形式。所給予的至少一劑中將會 包含ΠΚΑ佐劑以作爲完整流程的一部分。 !〇 運用標準分析方法可容易地測定對於抗原的抗體反應 是否已經在個體内被誘導或促進。例如，酶連結免疫吸附 分析(ELISA)、放射性免疫分析(RIA)、免疫沈降分析和蛋 白墨點（“western blot”)分析等免疫分析以及中和分析（例如 活體外或活體内的病毒感染性中和分析可用以測定體液或 15 其他生物樣品（例如個體的血清、分泌物或其他流體）内對於 微生物抗原具有特異性的抗體的存在。 運用標準分析方法可容易地測定對於抗原的C D 4免疫 反應是否已經在個體内被誘導，例如螢光_活化細胞分類法 (fluorescence_activated cell sorting (FACS))(請參見例如 20 Waldrop et al· (1997) 乂 C/z>z· /πναί· 99:1739-1750);細胞内 細胞因子分析用以測定抗原刺激後細胞因子的産生（參見 例如 Suni et al_ (1998) /· /zwmwwo/· MeiAods 212:89-98 ; Nomura et al. (2000) Cytometry 40:60-68 ； Ghanekar et al. (2001) C7z>z. 叹8:628-631) ; MHC-肽 78 200800258 多聚體染色分析，例如利用可被檢測地標誌(例如被螢光標 誌）的可溶性第II類MHC/肽多聚體（參見例如Bill and Kotzin (2002) Arthritis Res. 4:261-265 ί Altman et al. (1996) Science 274:94-96，以及 Murali-Kristina et al· (1998) /mmtm办 5 8:177-187);酶連結免疫點（ELISPOT)分析（參見例如
Hutchings et al· (1989) J· /mmw⑽/· Mw/zo心 120:1-8 ;以及
Czerkinsky et al. (1983) J. Immunol Methods 65:109-121) 等。作爲細胞内細胞因子分析的一個非限制性實施例，全 血被抗原和共刺激抗體(例如抗-CD28、抗-CD49d)刺激2小 10 時以上；加入佈雷菲德菌素A(Brefeldin A)以抑制細胞因子 分泌；以及處理細胞以利用針對CD4以及針對TNF-a、IFN-γ 和IL-2等細胞因子的螢光標誌抗體進rfacs分析。 運用常用分析方法可以測定對於抗原（例如病原體）的 抗原特異性CD8(例如細胞毒性T細胞；“CTL”)反應是否被 15誘導，這些分析方法包括但不限於通過測量CTL對於細胞 表面上表達出抗原的標的細胞所造成的特異性分解作用， 其中標的細胞已並有可檢測標誌，該標誌在標的細胞分解 後會釋出且可利用例如51Cr-釋放分析、以鑭螢光爲基礎的 細胞分解分析等方法來測量。 20 適合進行治農的個體 適合利用本發明誘導對於微生物病原體的免疫反應的 方法以及治療或預防微生物病原體感染的方法來進行治療 的個體，包括包被病原性微生物感染的個體；易被病原性 微生物感染但尚未被感染的個體；以及具有被病原性微生 79 200800258 物感染的危險性但尚未被感染的個體。適合的個體包括嬰 兒、幼童、青少年和成人。 適合利用本發明誘導對於微生物病原體的免疫反應的 方法以及治療或限制微生物病原體感染的方法來進行治療 $的個體包括小兒科目標族群，例如約1歲至約17歲之間的個 體，包括嬰兒(例如約1個月至約丨歲）、幼童（例如約丨歲至約 12歲)和青少年(例如約13歲至約π歲）。 適合利用本發明誘導對於微生物病原體的免疫反應的 方法以及治療或限制微生物病原體感染的方法來進行治療 1〇的個體包括新生兒，例如1天至約14天齡的個體（例如人類 新生兒），例如約1天至約2天齡、約2天至約10天齡、或是 約10天至約14天齡。 在特定實施方案中，該個體是一位約1〇歲或更年少（例 如約5歲或更年少）的人類兒童，且免疫原組合物在下列一 15或多個日守間被給予：出生後2周、1個月、2個月、3個月、4 侗月、5個月、6個月、7個月、8個月、9個月、10個月：11 個月、12個月、15個月、18個月或21個月，或是在2歲、3 歲、4歲、5歲、6歲、7歲、8歲、9歲或1〇歲時。在一些實 施方案中’本發明的免疫原組合物被給予一位元在約6個月 %裏約6歲的年齡個體，其中該個體在約6個月齡時接 受第一劑，並在例如2歲、4歲和6歲時接受2-3劑的後續加 強劑。 在特疋實施方案中，該個體是一位約li歲至49歲的人 _成人。在一些貫施方案中，該個體是一位5〇至65歲、65 80 200800258 歲至75歲、75至85歲或超過85歲的老年人類成人。 在一些實施方案中，本發明的免疫原組合物是在一個 體與微生物病原體的實際或潛在來源（例如已知被微生物 病原體所感染或懷疑被感染的個體)接觸之後(例如在確認 5或懷疑接觸之後)立即給予該個體。例如，在一些實施方案 中，本發明的免疫原組合物是在個體已知被微生物病原體 所感染或懷疑被感染的個體接觸之後約！小時内、約2小時 内、約5小時内、約8小時内、約小時内、約18小時内、 約24小時内、約2日内、約4日内、約7日内、約2周内或1個 10 月内給予該個體。 在一些實施方案中’本發明的免疫原組合物被給予已 知或懷疑是微生物病原體的攜帶者的個體，無論他們是否 顯現感染症狀。 適合利用本發明誘導對於微生物病原體的免疫反應的 15方法以及治療或限制微生物病原體感染的方法來進行治療 的個體包括缺乏CD4+ T細胞的個體（「€1)4+_缺乏性」個 體）’例如具有低於正常數目的功能性CD4+ T淋巴細胞的個 體。本說明書所使用的「正常個體」此用語的意思是，所 具有的CD4 T淋巴細胞水平和功能是位在族群正常範圍内 20的個體，就人類而言，通常每毫升血液中具有600至1500個 CD4+ T淋巴細胞。CD4+_缺乏性個體包括罹患後天免疫不全 症或原發性免疫不全症的個體。後天免疫不全症可能是因 放射線治療或化學治療等所造成的暫時性CD4+缺乏。 具有健康完整的免疫彳、統但具有轉變^CD4+缺乏的危 81 200800258 險性的個體（「高危險」個體）亦適合以本發明的方法來产 療。高危險個體包括但不限於較一般族群具有更高可雛 轉變成CD4+缺乏的個體。具有轉變成cm、乏的危險性的 個體包括但秘於因爲和被HIV錢的個體進行性活動而 5具有受HIV感染的危險性的個體；靜脈藥物使用者；可能被 暴露於<^HIV❹的血液、血液製品或其他受卿所污染的 體液的個體；通過受HIV感染個體的産道的嬰兒；被腑感 染母親所哺育的嬰兒等。 適合利用本發明治療癌症的方法來進行治療的個體包 1〇括已被致癌物質所感染的個體；易於罹患癌症但尚未被診 斷出罹患癌症的個體；以及具有罹患癌症的危險但尚未被 診斷出罹患癌症的個體。適合的個體包括嬰兒、幼童、青 少年和成人。 適合利用本發明治療癌症的方法來進行治療的個體包 15括已被診斷出罹患癌症的個體。先前已接受例如化學治療 或放射線治療來治療癌症而現在正監控該先前所治療的癌 症是否復發的個體；以及接受骨髓移植手術或其他器官移 植手術的個體。 適合利用本發明用以治療過敏的配方和方法來進行治 20療的個體包括已被診斷出患有過敏的個體。可以接受本說 明書所述方法和藥劑來進行治療的個體包括已知對於一或 多種過敏原具有過敏反應（allergic hypersensitivity)的個 體。可以接雙治療的個體包括罹患前述任何一種過敏性疾 病的個體。具有對於一或多種過敏原産生過敏反應的危險 82 200800258 =個體也可以接受治療。接受一或多個治療過敏性疾病 的標準療程但治療失敗的個體也適合利用本發明。 適合接受治療的個體包括居住在工業國家的個體；居 $住在發展中國家的個體；居住在鄉村地區的個體；居住在 較偏遠隔離地區的個體等。 本發明的免疫原組合物的目標族群是依據微生物病原 體的不同而有所變化的。 以上所述内容是一般性地敍述本發明。以下描述實施 1例將可協助瞭解本發明。彡些實施例僅以例示說明爲目 10的，而非意圖對於本發明的範圍加以限制。當情勢所趨或 爲因時制宜時，當可思及本發明在形式上的變化和等效性 取代。雖然本說明書使用特定的用語，但是這些用語是意 圖供說明之用，而不是以限制爲目的。 實施例 15實施例1 : PIKA和各種抗原相組合以誘導特異性免疫反應 這個實施例涉及利用PIKA和各種抗原相組合以在活 體内刺激特異性免疫反應。這個研究利用共通流程進行一 系列獨立實驗，但每次利用一種不同的抗原。受測抗原包 括：乙型肝炎adw型表面抗原重組蛋白、滅活裂解型流感疫 2〇苗（得自於Sanofi Pasteur的VAXIGRIP)、合成型HIV肽抗 原、弟2型單純皰療病毒gD抗原重組蛋白、重組型炭疽菌保 遵蛋白抗原、滅活型全病毒禽流感抗原品系和滅活型 全病毒嚴重急性呼吸道綜合症(SARS)滅活抗原。. 個別實驗的流程涉及將陣列Balb/c小鼠（每組3只）接種 83 200800258 以抗原組合物、抗原和PIKA佐劑（一種由主要位在約66kDa 至l，200kDa的重量分佈範圍内的PIKA分子所構成的異質組 合物）、PIKA、含有磷酸鹽緩衝溶液(PBS)的對照組。 依據所使用的各種抗原給予實際劑量。在初次注射後 5 第10至14天，給予小鼠相同的加強劑疫苗。在加強劑注射 後弟10至14天採取血液樣品’隨後處死小鼠並從脾臟取得 組織樣品。實驗結果是以各組内個別小鼠的測驗結果的平 均值來呈現。 製備脾臟細胞的懸浮液，並將來自於各只小鼠的細胞 1〇 懸浮液的樣品置入ELISPOT培養板的6-12孔中並加以培 養。該ELISPOT培養板的各孔容納有200ul的脾細胞懸浮 液，每孔約有2xl05至1χ10ό個細胞(詳見下表）。對於各只小 鼠的脾細胞培養樣品來說’半數含有脾細胞的孔是以培養 基來培育，另外半數的孔是利用特定抗原的兩種不同濃度 15其中一種來刺激並進行評估。培養板是在環境受控制的條 件下於37°C培育20小時之後，再進行最後準備並利用具標 準型ELISPOT培養板讀數機來讀取資料。 運用本領域技術人員所知悉的標準ELISPOT測驗法來 檢測産生細胞因子IL-4、IL-2和干擾素_γ的細胞數目。 2〇 運用流式細胞師選分析法(Flow Cytometry analysis)來 檢測CD4+ T細胞所産生的干擾素-γ。螢光_活化細胞分類儀 (FACS)的應用是本領域技術人員所知悉的。簡單來說，濃 度爲2·5χ106個細胞/ml的脾細胞溶液被製備並分置於個別 小管，每個樣品置入2ml。隨後製備接受抗原刺激的樣品， 84 200800258 並在環境受控制的條件下於 以洗滌並染色，再置入具標
下於37t培育5小時。接著將樣品加 具標準型FACS讀數機中讀取資料。 的標準ELIS A測驗法來檢 特異性抗體效價。 貝也歹1 U ·重組型乙型肝炎表面抗原⑽咖）_ 下表6所顯示的結果是利用乙型肝炎—型表面抗原重 、、、蛋白來檢測産生干擾素_γ、IL_^IL_4的細胞存在數目的 ELISPOT測驗結果。表6中的資料(也請一併參見第i 、2和3 圖）代表ELISPOT讀數和斑點形成細胞（sp〇t forming cells) 10的數目’也就是産生細胞因子的細胞數目的直接測量值。 斑點形成細胞數目隨著PIKA佐劑的加入而顯著增加 (相較於僅加入抗原）顯示將PIKA佐劑加入乙型肝炎表面抗 原重組蛋白可以促進被培養的脾細胞表達細胞因子干擾素 -γ、IL-2和IL-4。所觀察到的細胞因子表達顯示pika佐劑的 15存在促進了體液和細胞免疫系統的適應性免疫反應。 85 200800258 表6-以含有PIKA和/或HBsAg adw的疫苗進行免疫之後， 利用ELISPOT法來檢測産生細胞因子的小鼠脾細胞 小鼠群組 第1組 第2組 第3組 第4組 HBsAg 4ug+ PIKA50ug HBsAg 4ug PIKA lOOug PBS 産生INF-j的細胞數目 /lxl〇6個脾細胞 539 26 - 2 産生IL-2的細胞數目 /lxl〇6個脾細胞 347 60 3 10 產生EL-4的細胞數目 ΠχΙΟ6個脾細胞 210 82 - 1 以HBsAg2.0ug/ml進行刺激單位：斑點形成脾細胞 對於處死前所採血液樣品所進行的ELIS A測驗結果（下 表7和第4圖）顯示ΠΚΑ的存在明顯地促進了免疫反應，該免 疫反應是通過血清中所測得的特異性抗體效價來計算。 表7-以含有PIKA和/或HBsAgadw的疫苗進行免疫之後，利 用ELISA法檢測來自於小鼠血清的特定IgG效價 小鼠群組 弟1組 第2組 第3組 第4組 HBsAg 4ug+ PIKA 50ug HBsAg 4ug PIKA lOOug PBS 400倍稀釋下 在405 nm的吸 光值 2.057 0.323 0.084 0.08 得到的結論是PIKA佐劑的加入促進了對於HBsAg的 整體免疫反應’特別是特異性免疫反應，更特別是適應性 免疫反應’且主要是Thl偏好型免疫反應以及促進細胞免疫 反應。 200800258 貫知例 1·2 : VAXIGRIP (Sanofi Pasteur)，含有類HlNl、H3N2 病毒株和h/Shanghai5 /3 61 /2QQ2病毒株的滅活純化流感抗原 下表8所顯示的結果是利用VAXIgRIP疫苗（由Sanofi ， Pasteur藥廠所生産的一種滅活裂解人類流感疫苗）來檢測 5産生干擾素1、IL-2和IL-4的細胞存在數目的ELISP0T測驗 結果。表8中的資料（也請一併參見第5、6和7圖）代表 • ELISP0T讀數和斑點形成細胞的數目，也就是細胞因子産 生量的直接測量值。 斑點形成細胞數目隨著PIKA佐劑的加入而顯著增加 10 (相較於僅加入抗原）顯示將pika佐劑加入流感抗原可以促 進被培養的脾細胞表達細胞因子干擾素-γ、IL-2和IL-4。所 觀察到的細胞因子表達顯示PIKA佐劑的存在促進了體液 和細胞免疫系統的適應性免疫反應。 87 200800258 表8-以含有PIKA和/或滅活裂解型流感抗原（inactivated split influenza antigen)的疫苗進行免疫之後，利用ELISPOT 法來檢測産生細胞因子的小鼠脾細胞 第1組 第2組 第3組 第4組 第5組 小鼠群 組 Flu 4.5ug Flu 4.5ug + PIKA 50ug Flu 4.5ug + PKA 100ug PIKA 100ug PBS 産生INF-γ的 細胞數目 /2.5xl05 個脾 細胞 未進行 刺激 1 - 2 1 - 以flu進 行刺激 81 148 252. 14 6 産生EL-2的細 胞數目 /2.5xl05 個脾 細胞 未進行 刺激 - 1 - 1 .- 以flu進 行刺激 23 85 122 1 1 産生IL-4的細 胞數目 /2·5χ105 個脾 細胞 未進行 刺激 5 10 6 4 6 以flu進 行刺激 25 38 51 9 9 單位：斑點形成脾細胞 5 對於處死前所採血液樣品所進行的ELISA測驗結果（下 表9和第8圖）顯示PIKA的存在明顯地促進了免疫反應，該免 疫反應是通過血清中所測得的特異性抗體效價來測量。 10 表9-以含有PIKA和/或滅活裂解型流感抗原的疫苗進行免 疫之後，利用ELISA法檢測來自於小鼠血清的特定IgG效價 小鼠群組 第1組 第2組 第3組 第4組 第5組 Flu 4.5 ug Flu 4.5ug + PIKA50ug Flu 4.5ug + PIKA lOOug PIKA lOOug PBS 900倍稀釋下 在405 nm的 吸光值 1.381 1.952 2.630 0.083 0.080 88 200800258 得到的結論是PIKA佐劑的加入促進了對於流感抗原 的整體免疫反應，特別是特異性免疫反應，更特別是適應 性免疫反應，又更特別是細胞免疫反應。 VAXIGRIP是一種經過認可的流感疫苗，它被認爲可以 5 顯著地降低罹患流感的危險性。PIKA的加入促進了細胞因 子的産生水平，因而顯示含有VAXIGRIP和PIKA的疫苗亦 可激發免疫反應而顯著地降低罹患流感的危險性。 實施例13 ··合成型H1V肽抗原 下表10所顯示的結果是利用HIV肽抗原來檢測産生干 10 擾素-γ、IL-2和IL-4的細胞存在數目的ELISPOT測驗結果。 表10中的資料(也請一併參見第9、10和11圖）代表ELISPOT 讀數和斑點形成細胞的數目，也就是細胞因子産生量的直 接測量值。 斑點形成細胞數目隨著ΡI κ Α佐劑的加入而顯著增加 15 (相較於僅加入抗原）顯示將PIKA佐劑加入HIV抗原可以促 進被培養的脾細胞表達細胞因子干擾素-γ、IL-2和IL-4。所 觀察到的細胞因子表達顯示ΡIΚ Α佐劑的存在促進了體液 和細胞免疫系統的適應性免疫反應。 89 200800258 表10-以含有PIKA和/或HIV gpl20抗原的疫苗進行免疫之後， 利用ELISPOT法來檢測産生細胞因子的小鼠脾細胞 第1組 第2組 第3組 第4組 小鼠 群組 HIV gpl20 3ug + PIKA 100ug mvgpi2〇 3ug PKA 100ug NS 産生INF-γ的 細胞數目 /2.5x10s 個 脾細胞 以 mv gpi2〇 4ug/ml 進行刺激 121 16 2 5 未進行刺激 1 1 2 1 産生IL-2的 細胞數目 /2·5χ105 個 脾細胞 以 mvgpi2〇 4ug/rnl 進行刺激 166 56 4 5 未進行刺激 1 3 2 _ 產生ILM的 細胞數目 /2·5χ105 個 脾細胞 以 HIV gpl20 4ug/ml進行 刺激 68 78 5 6 未進行刺激 11 5 5 3 單位··斑點形成脾細胞 FACS分析的結果顯示在下表11 (也請一併參見第12 圖）。産生干擾素-γ的CD4+ T細胞只存在於含有PIKA和HIV 抗原的配方的事實確認了適應性免疫反應已到達成熟階段 且PIKA能幫助這個過程的完成。 表11-以含有ΠΚΑ和/或HIV gpl20抗原的疫苗進行免疫之後， 10 利用FACS法來分析小鼠脾細胞 小鼠群組 第1組 第2組 第3組 第4組 HIVgpl20 3ug + PIKA 100ug HIVgp 120 3ug PIKA 100ug NS 產生干擾素-γ的CD4+ 細胞的百分率 0.194% 0,017% 0.012% 0.014% 90 200800258 得到的結論是PIKA佐劑的加人促進了對於mv抗原的 整體免疫反應’特別是特異性免疫反應，更特別是適應性 免疫反應，又更特別是細胞免疫反應。 實施例L4 ··來自於炭疽桿菌(BaciUus Anthracis)的重组型炭 5 疽菌保護蛋白抗原(rPA) 下表12所顯示的結果是利用重組炭疽菌抗原來檢測産 生干擾素-γ、IL-2和IL-4的細胞存在數目的ELISPOT測驗結 果。表12中的資料（也請一併參見第13、14和15圖）代表 ELISPOT讀數和斑點形成細胞的數目，也就是細胞因子産 10 生量的直接測量值。 斑點形成細胞數目隨著PIKA佐劑的加入而顯著增加 (相較於僅加入抗原）顯示將ΠΚΑ佐劑加入炭疽菌抗原可以 促進被培養的脾細胞表達細胞因子干擾素-γ、IL-2和IL-4。 所觀察到的細胞因子表達顯示PIKA佐劑的存在促進了體 液和細胞免疫系統的適應性免疫反應。
91 200800258 表12-以含有ΠΚΑ和/或炭疽菌rf>A抗原的疫苗進行免疫之後， 利用ELISPOT法來檢測産生細胞因子的小鼠脾細胞 第1組 第2組 第3組 第4組 小鲁 L群組 炭疽菌 rPA 3ug + PIKA 100ug 炭疽菌 rPA 3ug PIKA lOOug NS 産生INF-γ的 細胞數目 /2·5χ105 個 脾細胞 以炭疽菌 rPA4ug/ml 進行刺激 283 9 2 5 未進行刺激 135 3 2 1 産生BL-2的 細胞數目 /2.5x10、 脾細胞 以炭疽菌 rPA4ug/ml 進行刺激 134 12 3 4 未進行刺激 47 2 2 - 産生IL-4的 細胞數目 /2.5χ105 個 脾細胞 以炭疽菌 rPA4ug/ml 進行刺激 61 10 6 3 未進行刺激 9 4 5 3 單位：斑點形成脾細胞 FACS分析的結果顯示在下表13 (也請一併參見第16 圖）。産生干擾素_丫的004+ T細胞只存在於含有PIKA和rPA 抗原的配方的事實確認了適應性免疫反應已到達成熟階段 且PIKA能幫助這個過程的完成。 表13-以含有PIKA和/或炭疽菌rPA抗原的疫苗進行免疫之後， 10 利用FACS法來分析小鼠脾細胞 小鼠群組 第1組 第2組 第3組 第4組 炭疽菌 rPA 3ug + PDCA lOOug 炭疽菌 rPA 3ug PIKA lOOug PBS 産生干擾素-γ的 CD4+CD4+細胞 的百分率 0.746% 0.003% 0.010% 0.004% 92 200800258 對於處死前所採血液樣品所進行的ELISA測驗結果（下 表14以及第16和17圖）顯示PIKA的存在明顯地促進了免疫 反應，該免疫反應是通過血清中所測得的特異性抗體效價 來測量。 初次施打疫苗之後16周，利用標準eLisa測驗法來評 估來自於原始A和B組小鼠的血液樣品中的特異性抗體存 在量，可以觀察到一致性的結果。再次，PIKA和炭疽菌抗 原的共同存在可誘導顯著較高的免疫反應，該免疫反應是 通過血清中所測得的特異性抗體效價來測量。 10表Μ·以含有PIKA和/或炭疽菌rPA抗原的疫苗進行免疫之後， 利用ELISA法檢測來自於小鼠血清的特異性igG效價 第1組 第2組 小鼠群組 400倍稀釋下在 405 nm 的 吸光值 300倍稀釋下在 405 nm 的 吸光值 免疫4周 之後 免疫16 周之後 炭疽菌 rPA 3ug Η PIKA lOOug 1.29 1.03 第3組 第4組 炭疽菌 rPA3ug 0.12 PIKA lOOug 0.1
PBS 0.1 0.09 得到的結論是HKA佐劑的加入促進了對於rpA的整體 免疫反應’特财特異性免疫反應，更糾是適應性免疫 反應’又更特別是細胞免疫反應。 實施例1·5 ·· 2型單純皰疹病毒gD抗原重組蛋白 下表I5所顯示的結果是利用重組型單純跑療病毒抗原 來檢測干擾素的存在量的咖贿測驗社 果。表15中的資料（也請—併參見 93 15 200800258 ELISPOT讀數和斑點形成細胞的數目，也就是細胞因子產 生量的直接測量值。 斑點形成細胞數目隨著PIKA佐劑的加入而顯著增加 (相較於僅加入抗原）顯示將PIKA佐劑加入單純皰療病毒抗 5 原可以促進被培養的脾細胞表達細胞因子干擾素-γ、IL_2 和IL-4。所觀察到的細胞因子表達顯示PIKA佐劑的存在促 進了體液和細胞免疫系統的適應性免疫反應。 表15-以含有ΡΙΚΑ和/或HSV2-gD抗原的疫苗進行免疫之 後，利用ELISPOT法來檢測産生細胞因子的小鼠脾細胞 第1組 第2組 第3組 第4組 小鼠群組 HSV2-gD 3ug+PDCA 100ug HSV2-gD 3ug PDCA 100ug
PBS 產生INF-γ 的細胞數目 /2.5xl05 個 脾細胞 以 HSV2-gD 2.5ug/ml 進行刺激 未進行刺激 266 135 12
屋生IL-2的 細胞數目 /2·5χ1〇5 個 脾細胞 ^n«V2-gD 2.5ug/ml 進行刺激 153 57
産生IL-4的 細胞數目 /2.5x10% 脾細胞 以 HSV2-gD 2.5ug/mi $行刺激 17 行刺激
單位.斑點形成脾細胞 FACS刀析的結果顯示在下表16(也請一併參見第22 圖）。産生干擾素-γ的CD4+T細胞只存在於含有ΠΚΑ和HSV 抗原的配方的事實確認了適應性免疫反應已到達成熟階段 且PIKA能幫助這個過程的完成。 94 200800258 表16-以含有PIKA和/或HSV2_gD抗原的疫苗進行免疫之後， 利用FACS法來分析小鼠脾細胞 小鼠群組 第1組 第2組 第3組 第4組 HSV2-gD 3ug + PDCAlOOug HSV2-gD 3ug PIKAlOOug NS 産生干擾素-γ的 CD4+ 細胞的百分率 0.436% 0.056% 0.009% 0.012% 對於處死前所採血液樣品所進行的E LIS A測驗結果（下 5表17以及弟23圖）顯示PIKA的存在明顯地促進了免疫反 應，該免疫反應是通過血清中所測得的特異性抗體效價來 測量。 表17_以PIKA和/或HSV2-gD疫苗進行免疫之後，利用ELISA 法檢測來自於小鼠血清的特異性IgG效價 小鼠群組 第1組 弟2組 第3組 第4組 HSV2-gD 3ug + PIKA 100ug HSV2.gD3ug PIKA I00ug PBS 2,700倍稀釋下在 405mn的吸▲值 2.116 0.554 0.085 0.087 10 得到的結論是PIKA佐劑的加入促進了對於HSV抗原 的整體免疫反應，特別是特異性免疫反應，更特別是適應 性免疫反應，又更特別是細胞免疫反應。 實施例L6 ··滅活mm全病毒(禽流感）抗原 15 下表18所顯示的結果是利用滅活未純化型H5N1抗原 來檢測干擾素_γ、IL-2和IL-4的存在量的ELISPOT測驗結 果。表18中的資料（也請一併參見第24、25和26圖）代表 95 200800258 ELISPOT讀數和斑點形成細胞的數目，也就是細胞因子產 生量的直接測量值。 斑點形成細胞數目隨著pIKA佐劑的加入而顯著增加 (相較於僅加入抗原）顯示將PIKA佐劑加入H5N丨抗原可以 5促進被培養的脾細胞表達細胞因子干擾素-γ、IL-2和IL-4。 所觀察到的細胞因子表達顯示ρΙΚΑ佐劑的存在促進了體 液和細胞免疫系統的適應性免疫反應。 表18-以含有PIKA和/或滅活Η5Ν1抗原的疫苗進行免疫之 後，利用ELISPOT法來檢測産生細胞因子的小鼠脾細胞 小鼠群組 第1組 第2組 第3組 第4組 Η5Ν1 4ul + PIKA 100ug H5N1 4ul PIKA 100ug PBS 産生干擾素-γ 的細胞數目 /2·5χ105 個 脾細胞 以 Η5Ν1 進行刺激 394 372 23 98 未進行刺激 3 1 _ 1 產生IL-2的 細胞數目 / 2.5x105 個 脾細胞 以 Η5Ν1 進行刺激 135 97 1 2 未進行刺激 2 2 - - 産生IL-4的細 胞數目 /2.5\105個 脾細胞 以 Η5Ν1 進行刺激 184 137 10 9 未進行刺激 9 11 11 17 FACS分析的結果顯示在下表19 (也請一併參見第27 圖）。産生干擾素-γ的CD4+ T細胞只存在於含有PIKA和 H5N1抗原的配方的事實確認了適應性免疫反應已到達成 熟階段且ΠΚΑ能幫助這個過程的完成。 96 200800258 表19-以含有PIKA和/或滅活H5N1抗原的疫苗進行免疫之 後’利用FACS法來分析小鼠脾細胞 小鼠群組 第1組 第2組 第3組 第4組 Η5Ν1 4μ1 + PIKA 100ug H5N1 4μ1 PIKA 100ug NS 産生干擾素-γ 的CD4+細胞的 百分率 1.147% 0.263% 0.005% 0.011% 單位：斑點形成脾細胞 5 對於處死前所採血液樣品所進行的ELISA測驗結果（下 表20以及第28圖）顯示PIKA的存在明顯地促進了免疫反 應，該免疫反應是通過血清中所測得的特異性抗體效價來 測量。 表20-以含有PIKA和/或滅活H5N1抗原的疫苗進行免疫之 10 後，利用ELISA法檢測來自於小鼠血清的特異性IgG效價 小鼠群組 弟1組 第2組 第3組 第4組 H5N1 4μ1+ PIKA 100ug H5N1 4μ1 PIKA 100ug PBS 900倍稀釋下在 405 nm的吸光值 1.033 0.656 0.09 0.079 付到的結論是PIKA佐劑的加入促進了對於jj5N 1抗原 的整體免疫反應，特別是特異性免疫反應，更特別是適應 性免疫反應，又更特別是細胞免疫反應。 15實施例2 :滅活型全病毒SARS抗原 這個實驗的目標在於顯示將PIKA加入8八&8抗原能促 進免疫反應並刺激宿主免疫系統以産生SARS特異性保護 抗體。 又 97 200800258 在這個研究計劃中，6個各含4只Balb/c小鼠的群組(經 腹腔注射)被接種以S ARS抗原組合、抗原加上PIKA (一種由 主要位在約66kDa至l，200kDa的重量分佈範圍内的1>1&八分 子所構成的異質組合物）、PIKA或對照組。參見下表21(請 5 一併參見第29圖）。 在第0天、第14天和第28天時將相同劑量給予各群組。 第6周時抽取一血液樣品並測驗血清中的igG的存在量，以 此爲疾病特異性抗體的存在測量值。將血清稀釋16 000 倍，接著利用ELISA讀數器來測量IgG的存在量，這個過程 10 是本領域技術人員所知悉的。輸出的數值爲光學密度(〇 D.) 的讀數，其中該數值愈高表示IgG的存在量愈高。 各群組實驗結果的平均值呈現在表21，該資料顯示 PIKA佐劑的存在和IgG表達的增加之間具有相關性。 表21-以含有PIKA和/或完整滅活SARS抗原的疫苗進行免疫 15 之後，利用ELISA法檢測來自於小鼠血清的特異性IgG效價 小鼠群組 第1組 第2組 第3組 第4組 第5組 SARS 10ug SARS 10ug+ PIKA50ug SARS10ug+ PDCA250ug ΡΙΚΑ 100ug PBS 16,000倍稀釋下在 405 nm的吸光值 0.26 0.41 0.68 0.09 0.09 得到的結論是PIKA和SARS抗原的共同存在能以劑量 相依賴的方式來增加IgG的表達，從而促進宿主的免疫反 應。 20 實施例3 : PIKA疫苗提供對抗H5N1和H9N2感染的免疫保護 作用 200800258 這個實驗的目標在於顯示含有ΡΙΚΑ佐劑的龠流感疫 苗能夠保護雞只免於禽流感活病毒的感染。 這個研究是在2個各具有24只SPF雞的群組中進行。在 10天齡雞只的頸部通過皮下接種以一劑700ul的含ΡΙΚΑ(一 5 種由主要位在66kDa至660kDa的重量範圍内的PIKA分子所 構成的異質組合物）和二株禽流感病毒(H5N1和H9N2)的疫 苗。該組合物含有呈現約爲2:1的比例的抗原和PIKA佐劑。 在第7、14和21天時在雞只的翼下部分採取數個血液樣 品。測驗來自於各雞只的血液樣品中的特異性H5和H9抗體 10 的存在量。 在第21天時，以活的H5N1病毒來攻毒雞只，再觀察14 天。記錄暴露在活的H5N1病毒後第14天的雞只存活率。 各群組的平均結果(表22,請一併參見第30和31圖）顯示 PIKA的存在誘導特異性抗體的産生。 15 表22-以含有PIKA和/或滅活H5N1和H9N2抗原的疫苗進行免 疫之後，利用ELISA法檢測來自於雞血清的特異性抗體效價 抗體 第0天 第7天 第14天 第21天 H5 0 1.2 44 2.4 H9 0 1.7 2.3 3.9 單位：ELISA分析所得到的光密度值
在施打抗原/PIKA組合物疫苗的24只雞中，有21只 20 (83%)在暴露於活的H5N1病毒後第14天仍存活。在沒有接 受疫苗但仍暴露於活的H5N1病毒的對照組24只雞中，μ天 99 200800258 後僅有4只（π%)存活。 得到的結論是ΠΚΑ疫苗_提供顯著的免疫保護作 用水平以對抗H5N1病毒。 貝施例4 · PlKA疫田提供對抗狂犬病感染的免疫保護作用 5 這個研究的目標在於顯示含有ΠΚΑ佐劑的狂犬病疫 苗能夠提供對抗狂犬病錢的免疫保護作用。 4個群組(分別編號！、^、出和iv)各包含2〇只如脑spF Kimmmg小鼠，各只小鼠被攻毒以刚⑴的野生型狂犬病病 毒株CQ92。各群組接受不同種類疫苗的接種：〇一由πκα 10 (種由主要位在66kDa至660kDa的重量範圍内的pika分 子所構成的異質組合物）和倉鼠腎細胞滅活純化型狂犬病 抗原所構成的組合物，其中該PIKA和狂犬病抗原呈現丨比4 的體積比，ii)Sanofi-Aventis藥廠的Veroabvero細胞滅活型 狂犬病疫苗；iii)倉鼠腎細胞滅活純化型狂犬病疫苗和铭佐 15 劑(alum adjuvant);以及iv)磷酸鹽緩衝溶液對照組。感染後 第30至40分鐘、第3天、第6天和第9天通過皮下注射動物大 腿而給予60ul的疫苗。 各群組的存活率顯示在表23。（請一併參見第32圖）。 表23-暴露於野生型狂犬病毒後再接受狂犬病疫苗治療的 20 小鼠的存活率 疫苗 小鼠 存活率 數目 % IPHK 加上 PIKA 20 16 80% Verorab 20 4 20% 100 200800258 IP HK加上铭佐劑 20 3 15% 對照組(PBS) 20 2 10% 得到的結論是PIKA的存在顯著地增進了倉鼠腎細胞 滅活純化型狂犬病抗原所提供的免疫保護作用。 實施例5 :PIKA和乙型肝炎疫苗誘導血清中特異性抗體的産生 這個實驗的過程涉及將3個群組的Balb/c小鼠(每組3只 5小鼠)通過皮下注射施打下列組合物疫苗：第A組，僅有4ug 的乙型肝炎adw型表面抗原;第B組，4ug抗原和75ug的PIKA 佐劑（一種由主要位在約66kDa至l，200kDa的重量分佈範圍 内的PIKA分子所構成的異質組合物）；以及第c組，僅有 lOOugPIKA。 10 在初次注射後第1〇至14天，通過皮下注射給予小鼠相 同的加強劑疫苗。在加強劑注射後第1〇至14天採取血液樣 品，並利用本領域技術人員所知悉的標準ELISA測驗法來 檢驗特異性抗體的效價。 各群組實驗結果的平均值呈現在下表24(以及第33 15圖），這些資料顯示？1仏八的存在促進了對於乙型肝炎抗原的 免疫反應，該免疫反應是通過觀測血清樣品中的特異性抗 體效價來測量。 表24-以含有PIKA和/或HBsAg adw的疫苗進行免疫之後， 利用ELISA法檢測來自於小鼠血清的特異性抗體效價
小鼠群組 第1組 第2組 第3組 第4組 第5組 第6組 第7組 HBsAg 3ug HBsAg lug + PIKA 80ug HBsAg 2ug + PIKA 80ug HBsAg 3ug + PIKA 80ug HBsAg 6ug + PIKA 80ug PIKA 80ug PBS 101 200800258 12,800倍稀釋 下在405 nm 0.4160 1.9043 2.5040 2.8470 3.0240 0.0680 0.0747 的吸光值 從這個實驗得到的結論是含有PIΚ A和乙型肝炎抗原 的免疫原物質誘導了顯著免疫反應的産生，該免疫反應是 通過血清樣品中的特異性抗體效價來測量。 5 實施例6:PIKA和流感疫苗誘導血清中特異性抗體的産生 這個實驗的過程涉及將2個群組的Balb/c小鼠（每組3只 小鼠）通過皮下注射施打下列組合物疫苗：第A組，僅有4ug 的Sanofi VAXIGRIP流感疫苗；以及第B組，4ug抗原和100ug 的PIKA佐劑（一種由主要位在約66kDa至1，200kDa的重量分 10 佈範圍内的PIKA分子所構成的異質組合物）。 在初次注射後第20天，通過皮下注射給予小鼠相同的 加強劑疫苗。在初次施打疫苗後第35天採取血液樣品，並 、利用本領域技術人員所知悉的標準ELISA測驗法來檢驗特 異性抗體的效價。 15 各群組實驗結果的平均值呈現在下表25(以及第34 圖）’這些資料顯示PIKA的存在促進了對於流感疫苗抗原的 免疫反應，該免疫反應是通過觀測血清樣品中的特異性抗 體效價來測量。 表25-以含有PIKA和/或滅活裂解型流感抗原的疫苗進行免疫 2〇之後，利用ELISA法檢測來自於小鼠血清的特異性抗體效價 小鼠群組 第1組 第2組 第3組 Flu 4 ug Flu 4ug + PIKA 100ug PIKA lOOug 102 200800258 ----- ^释下在405^ΓΤ L1 1.839 2.804 0.087 從這個實驗得到的結論是含有PIΚ A和流感抗原的免 疫原物質誘導了顯著免疫反應的產生，該免疫反應是通過 5血巧樣品中的特異性抗體效價來測量。 灵施例7 : ΡΙΚΑ和乙型肝炎(adw型表面抗原）疫苗誘導治療 性免疫反應 這個實驗的過程涉及將數個各含有4只6至10周齡的 Balb/c小鼠的群組接種以商業上可購得的a(jw型HbsAg組合 10 物’該組合物含有或不含有ΠΚΑ佐劑（一種由主要位在約 66kDa至l，2〇〇kDa的重量分佈範圍内的pika分子所構成的 異質組合物）；PIKA ;或是含有磷酸鹽緩衝溶液(PBS)的對 照組。 在小鼠背部兩側給予初次皮下注射各l〇〇u卜實際劑量 15提供於下表所顯示的實驗結果中。接著在初次注射後第21 天給予小鼠相同的加強劑疫苗。在第42天時採取二個血液 樣品，隨後處死小鼠並從脾臟取得細胞以供測試之用。 進行ELISPOT分析法以篩選出分泌抗原特異性干擾素 -7的丁細胞。令來自於HBsAg的CD8 T細胞肽表位 20 (IPQSLDSWWTSL)在5ug/ml的濃度下活體外刺激取自於各 只小鼠的一個脾細胞樣品，以測量IPQSLDSWWTSL-特異 性CD8+細胞的存在量。 以2ug/ml的HBsAg肽IPQSLDSWWTSL在活體外再刺 103 200800258 激第二個脾細胞樣品歷時6天。利用5ug/ml的HBsAg肽 IPQSLDSWWTSL作爲活體外刺激劑進行ELISPOT分析以 檢測干擾素-T。進行這個分析是爲了檢測免疫之後的中心 記憶細胞反應。 5 利用ELISA分析來測量HBV抗原特異性抗體（特別是
IgGl和IgG2a抗體)在血清中的存在量。在攝氏4度下，將數 個 Nunc Immunoplate Maxisorp 培養板塗布以 HbsAg (6ug/ml，配在PBS/0.01% Tween 20内）過夜。以PBS/Tween 洗蘇這些培養板，並以配在PBS内的5% FCS進行封閉處理2 10 小時。加以洗務後，加入配在PBS/Tween内的血清稀釋液2 小時。加以洗滌後，加入綴合有生物素(biotin)的大鼠抗小 鼠IgGl單克隆抗體的1/3000稀釋液，或是綴合有生物素的 大鼠抗小鼠IgG2a單克隆抗體的1/1500稀釋液。加以洗務 後，加入鏈黴親和素HRP(streptavidin HRP)(l/10,〇〇〇稀釋於 15 PBS/Tween)歷時1小時。加以洗滌後，以ABTS和過氧化氫 (1000:1)加入，歷時20分鐘。接著測量在4〇5nm下的光密度 (OD)，實驗結果是以各群組的平均值來呈現。 以配有ΠΚΑ佐劑的HBsAg進行免疫的小鼠的igG1反 應相較於僅以HBsAg進行免疫的小鼠反應高出約5倍。IgG1 20 的效價是以劑量相依賴形式增加（表26和第35圖）。 200800258 表26 :以含有PIKA和/或HBsAg的疫苗進行免疫之後’ 利用ELISA法檢測來自於小鼠血清的特異性1gG1效價 疫苗 稀釋倍數 HBsAg PIKA 50x 150x 450x l，350x 4,050x 12，150x 36,450x 109,350x 3ug 50ug 3.285 3.279 3.324 3.307 3.307 3.083 2.434 1.383 3ug lOOug 3.387 3.416 3.448 3.486 3.559 3.368 2.924 1.917 3ug 200ug 3.358 3.365 3.424 3.474 3.563 3.351 3.008 2.170 3ug - 3.065 3.065 3.135 2.966 2.814 2.362 1.546 0.790 - lOOug 0.493 0.248 0.157 0.113 0.109 0.120 0.102 0.101 PBS i〇〇ui 0.136 0.101 0.086 0.075 0.080 0.077 0.082 0.087 單位··光密度平均值
以配有PIKA佐劑的HBsAg進行免疫的小鼠的IgG2a反 5 應相較於僅以HBsAg進行免疫的小鼠反應顯著爲高。IgG2a 的效價是以劑量相依賴形式增加，提示以Thl爲主的免疫反 應增加(表27和第36圖）。
表27 :以含有PIKA和/或HBsAg的疫苗進行免疫之後， 利用ELISA法檢測來自於小鼠血清的特異性IgG2a效價 疫苗 稀釋倍數 HBsAg PIKA 50x 150x 450x l，350x 4,050x 12，150x 36,450x 109,350x 3ug 5〇ug 3.159 2.950 2.860 2.061 1.234 0.582 0.265 0.135 3ug lOOug 3.411 3.170 3.137 2.101 1.127 0.488 0.221 0.122 3ug 200ug 3.397 3.346 3.560 2.636 1.955 1.005 0.455 0.203 3ug - 0.122 0.098 0.087 0.072 0.069 0.065 0.069 0.064 - lOOug 0.108 0.086 0.078 0.070 0.067 0.068 0.067 0.065 PBS lOOul 0.088 0.078 0.074 0.067 0.066 0.066 0.066 0.067 10單位：光密度平均值 105 200800258 CD8肽表位特異性活體外刺激的EUSPOT分析顯示對 於僅以HBsAg進行免疫的小鼠無法測得反應。相對地，在 利用配有ΠΚΑ的HBsAg進行免疫之後，表達干擾素的細 胞可以谷易地測得且呈現劑量相依賴形式，提示ρΙΚΑ促進 5 了治療性免疫反應（表28和第37圖）。 表28 :以含有Ι>ΙΚΑ和/或HBsAg的疫苗進行免疫之後， 利用ELISPOT法來檢測産生干擾素的小鼠脾細胞 第1組 第2組 第3組 第4組 第5組 HBsAg 3ug 3ug 3ug 3ug - ΡΠ CA - 50ug 100ug 200ug l〇〇ug 以 5ug/ml 的IPQ肽 進行刺激 未進行 長期刺激 2 82 89 48 3 以 5ug/ml 的IPQ肽 進行刺激 以 2ug/ml 的IPQ肽再 刺^6天 209 229 490 535 21 單位：斑點形成脾細胞 10 培養脾細胞6天之後所進行的ELISPOT分析顯示來自 被含有HbsAg和PIKA佐劑的配方所免疫的小鼠中能夠産生 干擾素-7的脾細胞數目是兩倍於來自僅給予HBsAg的小 鼠的脾細胞數目。這結果確認了 PIKA的存在能夠促進中心 記憶細胞的活化(表28和第38圖）。 15 肛圖式簡單說明3 第1圖-以含有PIKA和/或HBsAg adw的疫苗進行免疫 後，利用ELISPOT法來檢測産生干擾素的小鼠脾細胞； 第2圖-以含有PIKA和/或HBsAg adw的疫苗進行免疫 106 200800258 後，利用ELISPOT法來檢測産生IL-2的小鼠脾細胞； 第3圖-以含有PIKA和/或HBsAg adw的疫苗進行免产 後，利用ELISPOT法來檢測被小鼠脾細胞所産生的IL_4 ; 第4圖·以含有PIKA和/或HBsAg adw的疫苗進行免疫 5 後，利用ELISA法檢測來自於小鼠血清(稀釋4〇〇倍）的特異 性IgG效價； 第5圖-以含有PIKA和/或滅活裂解型流感抗原 (inactivated split influenza antigen)的疫苗進行免疫之後，利 用ELISPOT法來檢測産生干擾素-r的小鼠脾細胞； 10 第6圖-以含有PIKA和/或滅活裂解型流感抗原的疫苗 進行免疫後，利用ELISPOT法來檢測産生IL-2的小鼠脾細 胞； 第7圖-以含有PIKA和/或滅活裂解型流感抗原的疫苗 進行免疫後，利用ELISPOT法來檢測産生IL-4的小鼠脾細 15 胞； 第8圖-以含有PIKA和/或滅活裂解型流感抗原的疫苗 進行免疫後，利用ELISA法檢測來自於小鼠血清（稀釋900 倍）的特異性IgG效價； 第9圖-以含有PIKA和/或HIV gpl20抗原的疫苗進行免 20 疫後，利用ELISPOT法來檢測産生干擾素的小鼠脾細 胞； 第10圖·以含有PIKA和/或HIV gpl20抗原的疫苗進行 免疫後，利用ELISPOT法來檢測産生IL_2的小鼠脾細胞； 第11圖·以含有PIKA和/或HIV gp 120抗原的疫苗進行 107 200800258 免疫後，利用ELISPOT法來檢測產生il-4的小鼠脾細跑· 第12圖-以含有PIKA和/或HIV gp 120抗原的疫苗進y 免疫後，利用FACS法來分析小鼠脾細胞，圖中顯示表達干 擾素-r的CD4+細胞百分率； 5 第13圖-以含有PIKA和/或炭疽菌rPA抗原的疫苗進扩 免疫後’利用ELISPOT法來檢測産生干擾素-7的小氣牌衾 胞； 第14圖-以含有PIKA和/或炭疽菌rpA抗原的疫苗進行 免疫後，利用ELISPOT法來檢測産生il-2的小鼠脾細胞· 10 第15圖-以含有PIKA和/或炭疽菌rPA抗原的疫苗進^一 免疫後，利用ELISPOT法來檢測産生IL-4的小鼠脾細胞· 第16圖-以含有PIKA和/或炭疽菌rPA抗原的疫苗進行 免疫後，利用FACS法來分析小鼠脾細胞，圖中顯示表達干 擾素-7的CD4+細胞百分率； 15 第丨7圖-以含有PIKA和/或炭疽菌rPA抗原的疫苗進行 免疫後，利用ELISA法檢測來自於小鼠血清(稀釋4〇〇倍）的 特異性IgG效價； 第18圖-以含有PIKA和/或炭疽菌rPA抗原的疫苗進行 免疫16周之後’利用ELISA法檢測來自於小鼠血清的特異 20 性IgG效價； 第19圖-以含有PIKA和/或HSV2-gD抗原的疫苗進行免 疫後，利用ELISPOT法來檢測産生干擾素的小鼠脾細 胞； 第20圖-以含有PIKA和/或HSV2_gD抗原的疫苗進行免 108 200800258 疫後，利用ELISPOT法來檢測産生IL-2的小鼠脾細胞； 第21圖-以含有PIKA和/或HSV2-gD抗原的疫苗進行免 疫後，利用ELISPOT法來檢測産生IL-4的小鼠脾細胞； 第22圖-以含有？仄八和/或1^¥21〇抗原的疫苗進行免 5 疫後，利用FACS法來分析小鼠脾細胞，圖中顯示表達干擾 素-7"的CD4+細胞百分率； 第23圖-以含有PIKA和/或HSV2-gD抗原的疫苗進行免 疫後，利用ELISA法檢測來自於小鼠血清（稀釋2,700倍）的 特異性IgG效價； 10 第24圖-以含有PIKA和/或滅活H5N1抗原的疫苗進行 免疫後，利用ELISPOT法來檢測産生干擾素的小氣脾細 胞； 第25圖-以含有PIKA和/或滅活H5N1抗原的疫苗進行 免疫後，利用ELISPOT法來檢測産生il-2的小鼠脾細胞； 第26圖·以含有PIKA和/或滅活H5N1抗原的疫苗進行 免疫後，利用ELISPOT法來檢測産生il-4的小鼠脾細胞； 第27圖-以含有PIKA和/或滅活H5N1抗原的疫苗進行 免疫後，利用FACS法來分析小鼠脾細胞，圖中顯示表達干 擾素_r的CD4+細胞百分率； 第28圖·以含有PIKA和/或滅活H5N1抗原的疫苗進行 免疫後’利用ELISA法檢測來自於小鼠血清(稀釋9〇〇倍）的 特異性IgG效價； 第29圖-以含有PIKA和/或全部滅活Sars抗原的疫苗 進行免疫後，利用ELISA法檢測來自於小鼠血清（稀釋 109 200800258 16,000倍）的特異性igG效價； 第30圖-以含有|>ικΑ和/或滅活H5抗原的疫苗進行免疫 後，利用ELISA法檢測來自於雞血清的特異性抗體Η5 N1的 效價； 5 第31圖-以含有PIKA和/或滅活Η9抗原的疫苗進行免疫 後，利用ELISA法檢測來自於雞血清的特異性抗體H9N2的 效價； 第32圖-暴露於野生型狂犬病毒後再接受狂犬病疫苗 治療的小鼠的存活率； 10 第33圖·以含有PIKA和/或HBsAg adw的疫苗進行免疫 後，利用ELISA法檢測來自於小鼠血清的特異性抗體效價； 第34圖_以含有PIKA和/或滅活裂解型流感抗原的疫苗 進行免疫後，利用ELISA法檢測來自於小鼠血清的特異性 抗體效價； 15 第35圖-以含有PIKA和/或HBsAg的疫苗進行免疫之 後，利用ELISA法檢測來自於小鼠血清的特異性igGl效價； 第36圖·以含有PIKA和/或HBsAg的疫苗進行免疫之 後，利用ELISA法檢測來自於小鼠血清的特異性igG2a效 價； 20 第37圖-以含有PIKA和/或HBsAg的疫苗進行免疫之 後，利用ELISPOT法來檢測産生干擾素的小鼠脾細胞； 第38圖-以含有PIKA和/或HBsAg的疫苗進行免疫之 後，以2ug/ml的IPQ肽再刺激6天，利用ELISPOT法來檢測 産生干擾素-7的小鼠脾細胞。 110 200800258 【主要元件符號說明】 (無）
111

Claims (1)

  1. 200800258 十、申請專利範圍： 1· 一種免疫原組合物，其包含：（a)聚核苷酸佐劑，該佐劑 包含：聚核糖肌苷-聚核糖胞苷酸(PIC)、至少一種抗生 素以及至少一個正價離子；以及(b)至少一種抗原；其中 5 該組合物被配製成供持續釋放使用。 2· —種免疫原組合物，其包含：（a)聚核苷酸佐劑，該佐劑 包含：聚核糖肌苷-聚核糖胞苷酸(PIC)、至少一種抗生 素以及至少一個正價離子；以及(b)至少一種病毒抗原； 其中該抗原是腺病毒（adeniviridae)、沙粒病毒 10 (arenaviridae)、星狀病毒（astroviridae)、本揚病毒 (bunyaviridae)、杯狀病毒（cliciviridae)、黃病毒 (flaviviridae)、D型肝炎病毒(hepatitis delta virus)、肝炎 病毒(hepeviridae)、皰療病毒科(herpesviridae)、單分子 負鏈RNA病毒(mononegavirales)、巢病毒(nidovirales)、 15 小RNA病毒（piconaviridae)、正黏液病毒 (orthomyxoviridae)、乳頭瘤病毒(papillomaviridae)、細 小病毒(parvoviridae)、多瘤病毒(polyomaviridae)、痘病 毒(poxviridae)、呼腸孤病毒(reoviridae)、反轉錄病毒 (retroviridae)或披膜病毒(togaviridae)中的一個抗原。 20 3· —種免疫原組合物，其包含：（a)聚核普酸佐劑，該佐劑 包含：聚核糖肌苷-聚核糖胞苷酸(PIC)、至少一種抗生 素以及至少一個正價離子；以及(b)至少一種細菌抗原； 其中該抗原是放線菌（actinobacteria)、衣原體 (chlamydiae)、革蘭式陽性菌（firmicutes)、變形菌 112 200800258 (proteobacteria)或螺旋體(spirochaetes)中的一個抗原。 4· 一種免疫原組合物，包含：（a)聚核苷酸佐劑，該佐劑包 含：聚核糖肌苷·聚核糖胞苷酸(PIC)、至少一種抗生素 以及至少一個正價離子；以及(b)至少一種真菌抗原；其 5 中該抗原是子囊菌（ascomycota)、擔子菌（basidiomycota) 或後生動物(metoza)中的一個抗原。 5· —種免疫原組合物，其包含：（a)聚核苷酸佐劑，該佐劑 包含：聚核糖肌苷-聚核糖胞苷酸(PIC)、至少一種抗生 素以及至少一個正價離子；以及(b)至少一種寄生蟲抗 10 原；其中該抗原是肉足鞭毛門（phylum sarcomastigophora)、頂覆門（phylum apicomplexa)、纖毛 門（phylum ciliophora)、扁形動物門（phylum plathyhelminthes)、線蟲門（phylum nematode)或節肢動物 門（phylum arthropoda)中的一個抗原。 15 6· 一種免疫原組合物，其包含:(a)聚核苷酸佐劑，該佐劑 包含：聚核糖肌苷-聚核糖胞苷酸(PIC)、至少一種抗生 素以及至少一個正價離子；以及(b)至少一種癌腫抗原； 其中該抗原是骨胳、腦部、乳房、消化道/腸胃道、内 分泌、眼部、泌尿生殖器、生殖細胞、婦科、頭頸部、 20 血液、肺部、骨胳肌肉、神經、呼吸系統/胸腔或皮膚 癌中的一種癌腫抗原。 7· —種免疫原組合物，其包含：（a)聚核苷酸佐劑，該佐劑 包含：聚核糖肌苷-聚核糖胞苷酸(PIC)、至少一種抗生 素以及至少一個正價離子；以及(b)由二或更多種抗原所 113 200800258 構成的組合；其中這些抗原是腺病毒(adeniviridae)、沙 粒病毒(arenaviridae)、星狀病毒(astroviridae)、本揚病毒 (bimyaviridae)、杯狀病毒（diciviridae)、黃病毒 (flaviviridae)、D型肝炎病毒(hepatitis delta virus)、肝炎 5 病毒（hepeviridae)、單分子負鏈RNA病毒
    (mononegavirales)、巢病毒（nidovirales)、小 RNA病毒 (piconaviridae)、正黏液病毒(orthomyxoviridae)、乳頭瘤 病毒(papillomaviridae)、細小病毒(parvoviridae)、多瘤 病毒(polyomaviridae)、痘病毒(poxviridae)、呼腸孤病毒 10 (reoviridae)、反轉錄病毒（retroviridae)、彼膜病毒 (togaviridae)、放線菌（actinobacteria)、衣原體 (chlamydiae)、革蘭式陽性菌（firmicutes)、變形菌 (proteobacteria)、螺旋體（spirochaetes)、子囊菌 (ascomycota)、擔子菌（basidiomycota)、肉足鞭毛門 15 (phylum sarcomastigophora)、頂覆門(phylum
    apicomplexa)、纖毛門（phylum ciliophora)、扁形動物門 (phylum plathyhelminthes)、線蟲門（phylum nematode)、 節肢動物門(phylum arthropoda)、子囊菌（ascomycota)、 擔子菌（basidiomycota)及/或後生動物（metoza)中的抗 20 原。 8· —種免疫原組合物，其包含：（a)聚核苷酸佐劑，該佐劑 包含：聚核糖肌苷-聚核糖胞苷酸(PIC)、至少一種抗生 素以及至少一個正價離子；以及(b)至少一種病毒抗原； 其中該抗原是腺病毒（adeniviridae)、沙粒病毒 114 200800258
    10 15
    20 (arenaviridae)、星狀病毒（astroviridae)、本揚病毒 (bunyaviridae)、杯狀病毒（diciviridae)、黃病毒 (flaviviridae)、D型肝炎病毒(hepatitis delta virus)、肝炎 病毒(hepeviridae)、皰療病毒科(herpesviridae)、單分子 負鏈RNA病毒(mononegavirales)、巢病毒(nidovirales)、 小RNA病毒（piconaviridae)、正黏液病毒 (orthomyxoviridae)、乳頭瘤病毒(papillomaviridae)、細 小病毒(parvoviridae)、多瘤病毒(polyomaviridae)、痘病 毒(poxviridae)、呼腸孤病毒(reoviridae)、反轉錄病毒 (retroviridae)或披膜病毒(togaviridae)中的一個抗原，其 中該組合物包含聚核苷酸佐劑組合物，該聚核苷酸佐劑 組合物中的分子在分子量上是異質的，其中該分子量爲 至少66,000道爾頓。 9· 一種免疫原組合物，其包含·· (a)聚核苷酸佐劑，該佐劑 包含：聚核糖肌苷-聚核糖胞苷酸(PIC)、至少一種抗生 素以及至少一個正價離子；以及(b)至少一種細菌抗原； 其中該抗原是放線菌（actinobacteria)、衣原體 (chlamydiae)、革蘭式陽性菌（firmicutes)、變形菌 (proteobacteria)或螺旋體(spirochaetes)中的一個抗原，其 中該組合物包含聚核苷酸佐劑組合物，該聚核苷酸佐劑 組合物中的分子在分子量上是異質的，其中該分子量爲 至少66,000道爾頓。 10· —種免疫原組合物，其包含：（a)聚核苷酸佐劑，該佐劑 包含：聚核糖肌苷·聚核糖胞苷酸(PIC)、至少一種抗生 115 200800258 素以及至少一個正價離子；以及(b)至少一種真菌抗原； 其中該抗原是子囊菌（ascomycota)、擔子菌 (basidiomycota)或後生動物(metoza)中的一個抗原，其中 該組合物包含聚核苷酸佐劑組合物，該聚核苷酸佐劑組 5 合物中的分子在分子量上是異質的，其中該分子量爲至 少66,000道爾頓。 11· 一種免疫原組合物，其包含：（a)聚核苷酸佐劑，該佐劑 包含：聚核糖肌苷-聚核糖胞苷酸(PIC)、至少一種抗生 素以及至少一個正價離子；以及(b)至少一種寄生蟲抗 1〇 原；其中該抗原是肉足鞭毛門（phylum sarcomastigophora)、頂覆門（phylum apicomplexa)、纖毛 Π (phylum ciliophora)、扁形動物門（phylum plathyhelminthes)、線蟲門（phylum nematode)或節肢動物 門(phylum arthropoda)中的一個抗原，—其中該組合物包 15 含聚核苷酸佐劑組合物，該聚核苷酸佐劑組合物中的分 子在分子量上是異質的，其中該分子量爲至少66,000道 爾頓。 12·種免疫原組合物，其包含：（a)聚核發酸佐劑，該佐劑 包含：聚核糖肌苷-聚核糖胞苷酸(PIC)、至少一種抗生 20 素以及至少一個正價離子；以及(b)至少一種癌腫抗原； 其中該抗原是骨胳、腦部、乳房、消化道/腸胃道、内 刀泌、眼部、泌尿生殖器、生殖細胞、婦科、頭頸部、 血液、肺部、骨胳肌肉、神經、呼吸系統/胸腔或皮膚 癌中的一種癌腫抗原，其中該組合物包含聚核苷酸佐劑 116 200800258 組合物，該聚核苷酸佐劑組合物中的分子在分子量上是 異質的，其中該分子量爲至少66,〇〇〇道爾頓。 13·—種免疫原組合物，其包含：聚核苷酸佐劑，該佐劑 包含：聚核糖肌苷·聚核糖胞：g：酸(PIC)、至少一種抗生 5 素以及至少一個正價離子；以及(b)由二或更多種抗原所 構成的組合，其中這些抗原是腺病毒(adeniviridae)、沙 粒病毒(arenaviridae)、星狀病毒(astroviridae)、本揚病毒 (bunyaviridae)、杯狀病毒（ciiciviridae)、黃病毒 (flaviviridae)、D型肝炎病毒(hepatitis delta virus)、肝炎 10 病毒（hepeviridae)、單分子負鏈RNA病毒 (mononegavirales)、巢病毒（nidovimles)、小 RNA病毒 (piconaviridae)、正黏液病毒(01^11〇111}^〇¥丨]^(!&6)、乳頭瘤 病毒(papillomaviridae)、細小病毒(parvoviridae)、多瘤 病毒(polyomaviridae)、痘病毒(poxviridae)、呼腸孤病毒 15 (reoviridae)、反轉錄病毒（retr〇viridae)、彼膜病毒 (togaviridae)、放線菌（actinobacteria)、衣原體 (chlamydiae)、革蘭式陽性菌（firmicutes)、變形菌 (proteobacteria)、螺旋體（spirochaetes)、子囊菌 (ascomycota)、擔子菌（basidiomycota)、肉足鞭毛門 20 (phylum sarcomastigophora)、頂覆門(phylum apicomplexa)、纖毛門(phylum ciliophora)、扁形動物門 (phylum plathyhelminthes)、線蟲門（phylum nematode)、 節肢動物門(phylum arthropoda)、子囊菌（ascomycota)、 擔子菌（basidiomycota)及/或後生動物（metoza)中的抗 117 200800258 原，其中該組合物包含聚核苷酸佐劑組合物，該聚核苷 酸佐劑組合物中的分子在分子量上是異質的，其中該分 子量爲至少66,000道爾頓。 14. 如申請專利範圍第1至13項中任一項的免疫原組合物， 5 其另外包含至少一個免疫調節物。 15. 如申請專利範圍第1至13項中任一項的免疫原組合物， 其中該抗原爲滅活微生物、減毒微生物、重組型多肽和 /或合成型多肽。 16. 如申請專利範圍第1至13項中任一項的免疫原組合物， 10 其中該免疫原組合物或是該免疫原組合物中所含有的 PIKA佐劑是呈現液體、溶液、滴液、固體、膠囊、乳 劑、懸浮液、酿劑、油膏、栓劑、凝膠、軟膠囊、喷劑、 吸入劑、氣霧劑、片劑、包衣片、微膠囊、栓劑、糖衣 錠(dragees)、糖漿、漿液、灌腸劑、顆粒、粉末、片劑 15 或菱錠(lozenges)的形式。 17. 如申請專利範圍第1至13項中任一項的免疫原組合物， 其中該佐劑組合物或免疫原組合物中的至少一者被冷 凍乾燥。 18. —種組合套裝，包含如申請專利範圍第1至13項中任一 20 項的免疫原組合物。 19. 一種如申請專利範圍第1至13項中任一項的免疫原組合 物在製造藥物上的用途，該藥物是用以促進宿主對於該 抗原的免疫反應。 20. 如申請專利範圍第19項的用途，其中該宿主罹患傳染 200800258 病，且給予該抗原激發免疫反應以對抗造成該傳染病的 病原體。 21. 如申請專利範圍第20項的用途，其中該給予是通過胃腸 道外注射、肌肉内注射、腹腔内注射、靜脈注射、皮下 5 注射、局部傳輸、透皮傳輸或皮内傳輸來進行。 22. 如申請專利範圍第19項的用途，其中該宿主是人類。 23. 如申請專利範圍第19項的用途，其中該宿主是非人類動 物。 119
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