SK108997A3 - Expression of sucrose phosphorylase in plants - Google Patents
Expression of sucrose phosphorylase in plants Download PDFInfo
- Publication number
- SK108997A3 SK108997A3 SK1089-97A SK108997A SK108997A3 SK 108997 A3 SK108997 A3 SK 108997A3 SK 108997 A SK108997 A SK 108997A SK 108997 A3 SK108997 A3 SK 108997A3
- Authority
- SK
- Slovakia
- Prior art keywords
- plant cells
- plant
- promoter
- cells
- sucrose
- Prior art date
Links
- 108020000005 Sucrose phosphorylase Proteins 0.000 title claims abstract description 61
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 title description 57
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims abstract description 119
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 claims abstract description 58
- 239000008107 starch Substances 0.000 claims abstract description 58
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 claims abstract description 58
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 claims abstract description 46
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 claims abstract description 43
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 claims abstract description 23
- 235000012015 potatoes Nutrition 0.000 claims abstract description 17
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 claims abstract description 13
- 241000194019 Streptococcus mutans Species 0.000 claims abstract description 12
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims description 41
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 41
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 32
- 240000003768 Solanum lycopersicum Species 0.000 claims description 25
- 235000007688 Lycopersicon esculentum Nutrition 0.000 claims description 22
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 claims description 22
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 21
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 claims description 21
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 claims description 19
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 claims description 16
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 claims description 16
- 108700023224 Glucose-1-phosphate adenylyltransferases Proteins 0.000 claims description 15
- 241000209140 Triticum Species 0.000 claims description 15
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 claims description 14
- 240000005979 Hordeum vulgare Species 0.000 claims description 14
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 claims description 12
- 235000007340 Hordeum vulgare Nutrition 0.000 claims description 11
- 235000016383 Zea mays subsp huehuetenangensis Nutrition 0.000 claims description 11
- 235000009973 maize Nutrition 0.000 claims description 11
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 claims description 10
- 101710091688 Patatin Proteins 0.000 claims description 10
- 244000017020 Ipomoea batatas Species 0.000 claims description 9
- 240000003183 Manihot esculenta Species 0.000 claims description 9
- 244000105624 Arachis hypogaea Species 0.000 claims description 8
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 8
- 235000002678 Ipomoea batatas Nutrition 0.000 claims description 7
- 244000070406 Malus silvestris Species 0.000 claims description 7
- 238000009826 distribution Methods 0.000 claims description 7
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 claims description 7
- 150000002430 hydrocarbons Chemical class 0.000 claims description 7
- 241000219310 Beta vulgaris subsp. vulgaris Species 0.000 claims description 6
- 239000004215 Carbon black (E152) Substances 0.000 claims description 6
- 240000009088 Fragaria x ananassa Species 0.000 claims description 6
- 244000018633 Prunus armeniaca Species 0.000 claims description 6
- 240000007651 Rubus glaucus Species 0.000 claims description 6
- 108091023045 Untranslated Region Proteins 0.000 claims description 6
- 235000020232 peanut Nutrition 0.000 claims description 6
- 235000016735 Manihot esculenta subsp esculenta Nutrition 0.000 claims description 5
- 241000220324 Pyrus Species 0.000 claims description 5
- 235000021016 apples Nutrition 0.000 claims description 5
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 5
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 5
- 235000021013 raspberries Nutrition 0.000 claims description 5
- 235000021012 strawberries Nutrition 0.000 claims description 5
- 241000209134 Arundinaria Species 0.000 claims description 4
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 claims description 4
- 244000299507 Gossypium hirsutum Species 0.000 claims description 4
- 240000005561 Musa balbisiana Species 0.000 claims description 4
- 235000009827 Prunus armeniaca Nutrition 0.000 claims description 4
- 235000021536 Sugar beet Nutrition 0.000 claims description 4
- 235000021015 bananas Nutrition 0.000 claims description 4
- 235000021017 pears Nutrition 0.000 claims description 4
- 229920002494 Zein Polymers 0.000 claims description 3
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 claims description 3
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 claims description 3
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 claims description 3
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 claims description 3
- 240000000111 Saccharum officinarum Species 0.000 claims description 2
- 238000003780 insertion Methods 0.000 claims description 2
- 230000037431 insertion Effects 0.000 claims description 2
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 claims description 2
- 230000005030 transcription termination Effects 0.000 claims description 2
- 241001057636 Dracaena deremensis Species 0.000 claims 3
- 240000002024 Gossypium herbaceum Species 0.000 claims 3
- 235000004341 Gossypium herbaceum Nutrition 0.000 claims 3
- 240000000905 Nymphoides indica Species 0.000 claims 2
- 235000017590 Nymphoides indica Nutrition 0.000 claims 2
- 240000001987 Pyrus communis Species 0.000 claims 2
- 239000005019 zein Substances 0.000 claims 2
- 229940093612 zein Drugs 0.000 claims 2
- 244000307700 Fragaria vesca Species 0.000 claims 1
- 244000235659 Rubus idaeus Species 0.000 claims 1
- 244000204900 Talipariti tiliaceum Species 0.000 claims 1
- 240000006365 Vitis vinifera Species 0.000 claims 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 claims 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 claims 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 abstract description 80
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 abstract description 27
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 abstract description 27
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 abstract description 27
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 abstract description 25
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 abstract description 23
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 abstract description 20
- 230000009466 transformation Effects 0.000 abstract description 17
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 13
- 208000034656 Contusions Diseases 0.000 abstract description 4
- 208000034526 bruise Diseases 0.000 abstract description 3
- 230000008021 deposition Effects 0.000 abstract description 2
- 238000002845 discoloration Methods 0.000 abstract 1
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 30
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 26
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 25
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 25
- 108090000364 Ligases Proteins 0.000 description 22
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 21
- 101150031572 gtfA gene Proteins 0.000 description 20
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 20
- 102000003960 Ligases Human genes 0.000 description 18
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 16
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 12
- 206010020649 Hyperkeratosis Diseases 0.000 description 11
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 10
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 10
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 10
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 10
- 241000589158 Agrobacterium Species 0.000 description 9
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 9
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 9
- 239000005562 Glyphosate Substances 0.000 description 8
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 8
- XDDAORKBJWWYJS-UHFFFAOYSA-N glyphosate Chemical compound OC(=O)CNCP(O)(O)=O XDDAORKBJWWYJS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 229940097068 glyphosate Drugs 0.000 description 8
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 8
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 8
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 8
- 108010068370 Glutens Proteins 0.000 description 7
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 7
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 7
- 230000006870 function Effects 0.000 description 7
- 238000006165 Knowles reaction Methods 0.000 description 6
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 6
- 108010043934 Sucrose synthase Proteins 0.000 description 6
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 6
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 6
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 6
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 6
- 101100507655 Canis lupus familiaris HSPA1 gene Proteins 0.000 description 5
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 5
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 5
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 5
- 230000008569 process Effects 0.000 description 5
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 5
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 5
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 4
- 241000589155 Agrobacterium tumefaciens Species 0.000 description 4
- 235000006008 Brassica napus var napus Nutrition 0.000 description 4
- 235000004977 Brassica sinapistrum Nutrition 0.000 description 4
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 4
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 4
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 4
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 4
- 108700001094 Plant Genes Proteins 0.000 description 4
- HXXFSFRBOHSIMQ-VFUOTHLCSA-N alpha-D-glucose 1-phosphate Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](OP(O)(O)=O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O HXXFSFRBOHSIMQ-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 4
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 4
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 4
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 4
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 4
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 4
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 4
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 4
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 4
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 4
- 235000014698 Brassica juncea var multisecta Nutrition 0.000 description 3
- 240000000385 Brassica napus var. napus Species 0.000 description 3
- 235000006618 Brassica rapa subsp oleifera Nutrition 0.000 description 3
- 235000003222 Helianthus annuus Nutrition 0.000 description 3
- MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N Raffinose Natural products O(C[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O[C@@]2(CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O1)[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N 0.000 description 3
- MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N UNPD196149 Natural products OC1C(O)C(CO)OC1(CO)OC1C(O)C(O)C(O)C(COC2C(C(O)C(O)C(CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 3
- 241000219094 Vitaceae Species 0.000 description 3
- 108010055615 Zein Proteins 0.000 description 3
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 108010031100 chloroplast transit peptides Proteins 0.000 description 3
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 3
- 230000013020 embryo development Effects 0.000 description 3
- 230000000408 embryogenic effect Effects 0.000 description 3
- 229950010772 glucose-1-phosphate Drugs 0.000 description 3
- 235000021021 grapes Nutrition 0.000 description 3
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 3
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 3
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 3
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 3
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 3
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 3
- 239000006870 ms-medium Substances 0.000 description 3
- 230000031787 nutrient reservoir activity Effects 0.000 description 3
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 3
- 235000013606 potato chips Nutrition 0.000 description 3
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 3
- MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N raffinose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- 210000003934 vacuole Anatomy 0.000 description 3
- LWTDZKXXJRRKDG-KXBFYZLASA-N (-)-phaseollin Chemical compound C1OC2=CC(O)=CC=C2[C@H]2[C@@H]1C1=CC=C3OC(C)(C)C=CC3=C1O2 LWTDZKXXJRRKDG-KXBFYZLASA-N 0.000 description 2
- 239000005631 2,4-Dichlorophenoxyacetic acid Substances 0.000 description 2
- WFPZSXYXPSUOPY-ROYWQJLOSA-N ADP alpha-D-glucoside Chemical compound C([C@H]1O[C@H]([C@@H]([C@@H]1O)O)N1C=2N=CN=C(C=2N=C1)N)OP(O)(=O)OP(O)(=O)O[C@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O WFPZSXYXPSUOPY-ROYWQJLOSA-N 0.000 description 2
- 240000002791 Brassica napus Species 0.000 description 2
- LMKYZBGVKHTLTN-NKWVEPMBSA-N D-nopaline Chemical compound NC(=N)NCCC[C@@H](C(O)=O)N[C@@H](C(O)=O)CCC(O)=O LMKYZBGVKHTLTN-NKWVEPMBSA-N 0.000 description 2
- 102000004163 DNA-directed RNA polymerases Human genes 0.000 description 2
- 108090000626 DNA-directed RNA polymerases Proteins 0.000 description 2
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 2
- 108700039691 Genetic Promoter Regions Proteins 0.000 description 2
- 108700037728 Glycine max beta-conglycinin Proteins 0.000 description 2
- 244000020551 Helianthus annuus Species 0.000 description 2
- 241000192130 Leuconostoc mesenteroides Species 0.000 description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 2
- UOZODPSAJZTQNH-UHFFFAOYSA-N Paromomycin II Natural products NC1C(O)C(O)C(CN)OC1OC1C(O)C(OC2C(C(N)CC(N)C2O)OC2C(C(O)C(O)C(CO)O2)N)OC1CO UOZODPSAJZTQNH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108700005078 Synthetic Genes Proteins 0.000 description 2
- HSCJRCZFDFQWRP-JZMIEXBBSA-N UDP-alpha-D-glucose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](N2C(NC(=O)C=C2)=O)O1 HSCJRCZFDFQWRP-JZMIEXBBSA-N 0.000 description 2
- HSCJRCZFDFQWRP-UHFFFAOYSA-N Uridindiphosphoglukose Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OP(O)(=O)OP(O)(=O)OCC1C(O)C(O)C(N2C(NC(=O)C=C2)=O)O1 HSCJRCZFDFQWRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JUGOREOARAHOCO-UHFFFAOYSA-M acetylcholine chloride Chemical compound [Cl-].CC(=O)OCC[N+](C)(C)C JUGOREOARAHOCO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- 230000001627 detrimental effect Effects 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 2
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 2
- 210000003754 fetus Anatomy 0.000 description 2
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 2
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 2
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 2
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 235000014571 nuts Nutrition 0.000 description 2
- -1 oleosines Proteins 0.000 description 2
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 2
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 229960001914 paromomycin Drugs 0.000 description 2
- UOZODPSAJZTQNH-LSWIJEOBSA-N paromomycin Chemical compound N[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](N)C[C@@H](N)[C@@H]2O)O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)N)O[C@@H]1CO UOZODPSAJZTQNH-LSWIJEOBSA-N 0.000 description 2
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 235000021251 pulses Nutrition 0.000 description 2
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 2
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 2
- 235000015067 sauces Nutrition 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N thymine Chemical compound CC1=CNC(=O)NC1=O RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 2
- 238000009827 uniform distribution Methods 0.000 description 2
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NKDFYOWSKOHCCO-YPVLXUMRSA-N 20-hydroxyecdysone Chemical compound C1[C@@H](O)[C@@H](O)C[C@]2(C)[C@@H](CC[C@@]3([C@@H]([C@@](C)(O)[C@H](O)CCC(C)(O)C)CC[C@]33O)C)C3=CC(=O)[C@@H]21 NKDFYOWSKOHCCO-YPVLXUMRSA-N 0.000 description 1
- 108010020183 3-phosphoshikimate 1-carboxyvinyltransferase Proteins 0.000 description 1
- HZWWPUTXBJEENE-UHFFFAOYSA-N 5-amino-2-[[1-[5-amino-2-[[1-[2-amino-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-5-oxopentanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-5-oxopentanoic acid Chemical compound C1CCC(C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)N2C(CCC2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(O)=O)N1C(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 HZWWPUTXBJEENE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710166809 ADP-glucose phosphorylase Proteins 0.000 description 1
- WFPZSXYXPSUOPY-UHFFFAOYSA-N ADP-mannose Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C(C(C1O)O)OC1COP(O)(=O)OP(O)(=O)OC1OC(CO)C(O)C(O)C1O WFPZSXYXPSUOPY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000235858 Acetobacter xylinum Species 0.000 description 1
- 235000002837 Acetobacter xylinum Nutrition 0.000 description 1
- 108010016219 Acetyl-CoA carboxylase Proteins 0.000 description 1
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 1
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 1
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 description 1
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- 241000589176 Agrobacterium vitis Species 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 244000144725 Amygdalus communis Species 0.000 description 1
- 102000013142 Amylases Human genes 0.000 description 1
- 108010065511 Amylases Proteins 0.000 description 1
- 241000208223 Anacardiaceae Species 0.000 description 1
- 241000208173 Apiaceae Species 0.000 description 1
- 240000007087 Apium graveolens Species 0.000 description 1
- 235000015849 Apium graveolens Dulce Group Nutrition 0.000 description 1
- 235000010591 Appio Nutrition 0.000 description 1
- 241000219194 Arabidopsis Species 0.000 description 1
- 241000223678 Aureobasidium pullulans Species 0.000 description 1
- 108010018763 Biotin carboxylase Proteins 0.000 description 1
- 240000007124 Brassica oleracea Species 0.000 description 1
- 235000003899 Brassica oleracea var acephala Nutrition 0.000 description 1
- 235000011301 Brassica oleracea var capitata Nutrition 0.000 description 1
- 235000001169 Brassica oleracea var oleracea Nutrition 0.000 description 1
- 241000219193 Brassicaceae Species 0.000 description 1
- 244000025254 Cannabis sativa Species 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 235000002566 Capsicum Nutrition 0.000 description 1
- 229940121981 Carboxypeptidase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 101710127041 Carboxypeptidase inhibitor Proteins 0.000 description 1
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 1
- 244000020518 Carthamus tinctorius Species 0.000 description 1
- 235000003255 Carthamus tinctorius Nutrition 0.000 description 1
- 235000009025 Carya illinoensis Nutrition 0.000 description 1
- 244000068645 Carya illinoensis Species 0.000 description 1
- 102000030523 Catechol oxidase Human genes 0.000 description 1
- 108010031396 Catechol oxidase Proteins 0.000 description 1
- 241000701459 Caulimovirus Species 0.000 description 1
- 108010022172 Chitinases Proteins 0.000 description 1
- 241000193469 Clostridium pasteurianum Species 0.000 description 1
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 1
- 108020004394 Complementary RNA Proteins 0.000 description 1
- 241000723382 Corylus Species 0.000 description 1
- 235000007466 Corylus avellana Nutrition 0.000 description 1
- 241000219112 Cucumis Species 0.000 description 1
- 235000015510 Cucumis melo subsp melo Nutrition 0.000 description 1
- 240000008067 Cucumis sativus Species 0.000 description 1
- 235000010799 Cucumis sativus var sativus Nutrition 0.000 description 1
- 241000219104 Cucurbitaceae Species 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-VRPWFDPXSA-N D-Fructose Natural products OC[C@H]1OC(O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-VRPWFDPXSA-N 0.000 description 1
- IMXSCCDUAFEIOE-UHFFFAOYSA-N D-Octopin Natural products OC(=O)C(C)NC(C(O)=O)CCCN=C(N)N IMXSCCDUAFEIOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- YAHZABJORDUQGO-NQXXGFSBSA-N D-ribulose 1,5-bisphosphate Chemical compound OP(=O)(O)OC[C@@H](O)[C@@H](O)C(=O)COP(O)(O)=O YAHZABJORDUQGO-NQXXGFSBSA-N 0.000 description 1
- 235000002767 Daucus carota Nutrition 0.000 description 1
- 244000000626 Daucus carota Species 0.000 description 1
- 239000005504 Dicamba Substances 0.000 description 1
- 241000220485 Fabaceae Species 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- 108010061711 Gliadin Proteins 0.000 description 1
- 101710186901 Globulin 1 Proteins 0.000 description 1
- 108010044091 Globulins Proteins 0.000 description 1
- 102000006395 Globulins Human genes 0.000 description 1
- 241000208818 Helianthus Species 0.000 description 1
- 101000713585 Homo sapiens Tubulin beta-4A chain Proteins 0.000 description 1
- 101000611635 Hordeum vulgare Pathogenesis-related protein PRB1-3 Proteins 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 241000192132 Leuconostoc Species 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- 101710140999 Metallocarboxypeptidase inhibitor Proteins 0.000 description 1
- 108010085220 Multiprotein Complexes Proteins 0.000 description 1
- 102000007474 Multiprotein Complexes Human genes 0.000 description 1
- NWBJYWHLCVSVIJ-UHFFFAOYSA-N N-benzyladenine Chemical compound N=1C=NC=2NC=NC=2C=1NCC1=CC=CC=C1 NWBJYWHLCVSVIJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101150005851 NOS gene Proteins 0.000 description 1
- 101710202365 Napin Proteins 0.000 description 1
- 244000061176 Nicotiana tabacum Species 0.000 description 1
- 235000002637 Nicotiana tabacum Nutrition 0.000 description 1
- 101001068522 Nicotiana tabacum Pathogenesis-related protein 1B Proteins 0.000 description 1
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 1
- 238000002944 PCR assay Methods 0.000 description 1
- 240000004370 Pastinaca sativa Species 0.000 description 1
- 235000017769 Pastinaca sativa subsp sativa Nutrition 0.000 description 1
- 241000589779 Pelomonas saccharophila Species 0.000 description 1
- 101710163504 Phaseolin Proteins 0.000 description 1
- 241000758706 Piperaceae Species 0.000 description 1
- 241000209504 Poaceae Species 0.000 description 1
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 1
- 235000014443 Pyrus communis Nutrition 0.000 description 1
- 102220513475 Rab-interacting lysosomal protein_E35S_mutation Human genes 0.000 description 1
- 244000088415 Raphanus sativus Species 0.000 description 1
- 235000006140 Raphanus sativus var sativus Nutrition 0.000 description 1
- 235000007201 Saccharum officinarum Nutrition 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000208292 Solanaceae Species 0.000 description 1
- 108010043943 Starch Phosphorylase Proteins 0.000 description 1
- 108010039811 Starch synthase Proteins 0.000 description 1
- 102000004357 Transferases Human genes 0.000 description 1
- 108090000992 Transferases Proteins 0.000 description 1
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 1
- 101800000385 Transmembrane protein Proteins 0.000 description 1
- 241000219793 Trifolium Species 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 102100036788 Tubulin beta-4A chain Human genes 0.000 description 1
- 108090000848 Ubiquitin Proteins 0.000 description 1
- 102000044159 Ubiquitin Human genes 0.000 description 1
- 235000003095 Vaccinium corymbosum Nutrition 0.000 description 1
- 240000000851 Vaccinium corymbosum Species 0.000 description 1
- 235000017537 Vaccinium myrtillus Nutrition 0.000 description 1
- 108020000999 Viral RNA Proteins 0.000 description 1
- 101001036768 Zea mays Glucose-1-phosphate adenylyltransferase large subunit 1, chloroplastic/amyloplastic Proteins 0.000 description 1
- FJJCIZWZNKZHII-UHFFFAOYSA-N [4,6-bis(cyanoamino)-1,3,5-triazin-2-yl]cyanamide Chemical compound N#CNC1=NC(NC#N)=NC(NC#N)=N1 FJJCIZWZNKZHII-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 235000020224 almond Nutrition 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 description 1
- 235000019418 amylase Nutrition 0.000 description 1
- 229940025131 amylases Drugs 0.000 description 1
- 229940019748 antifibrinolytic proteinase inhibitors Drugs 0.000 description 1
- 229940009098 aspartate Drugs 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 108010019077 beta-Amylase Proteins 0.000 description 1
- 108010051210 beta-Fructofuranosidase Proteins 0.000 description 1
- GINJFDRNADDBIN-FXQIFTODSA-N bilanafos Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCP(C)(O)=O GINJFDRNADDBIN-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 235000021014 blueberries Nutrition 0.000 description 1
- 101150085995 bol gene Proteins 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 235000020226 cashew nut Nutrition 0.000 description 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 229930002868 chlorophyll a Natural products 0.000 description 1
- ATNHDLDRLWWWCB-AENOIHSZSA-M chlorophyll a Chemical compound C1([C@@H](C(=O)OC)C(=O)C2=C3C)=C2N2C3=CC(C(CC)=C3C)=[N+]4C3=CC3=C(C=C)C(C)=C5N3[Mg-2]42[N+]2=C1[C@@H](CCC(=O)OC\C=C(/C)CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)[C@H](C)C2=C5 ATNHDLDRLWWWCB-AENOIHSZSA-M 0.000 description 1
- 229930002869 chlorophyll b Natural products 0.000 description 1
- NSMUHPMZFPKNMZ-VBYMZDBQSA-M chlorophyll b Chemical compound C1([C@@H](C(=O)OC)C(=O)C2=C3C)=C2N2C3=CC(C(CC)=C3C=O)=[N+]4C3=CC3=C(C=C)C(C)=C5N3[Mg-2]42[N+]2=C1[C@@H](CCC(=O)OC\C=C(/C)CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)[C@H](C)C2=C5 NSMUHPMZFPKNMZ-VBYMZDBQSA-M 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 239000003184 complementary RNA Substances 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 244000038559 crop plants Species 0.000 description 1
- 230000001351 cycling effect Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- IWEDIXLBFLAXBO-UHFFFAOYSA-N dicamba Chemical compound COC1=C(Cl)C=CC(Cl)=C1C(O)=O IWEDIXLBFLAXBO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000005069 ears Anatomy 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 210000002472 endoplasmic reticulum Anatomy 0.000 description 1
- ZINJLDJMHCUBIP-UHFFFAOYSA-N ethametsulfuron-methyl Chemical compound CCOC1=NC(NC)=NC(NC(=O)NS(=O)(=O)C=2C(=CC=CC=2)C(=O)OC)=N1 ZINJLDJMHCUBIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000005188 flotation Methods 0.000 description 1
- 235000012020 french fries Nutrition 0.000 description 1
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 1
- 238000003633 gene expression assay Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 101150013858 glgC gene Proteins 0.000 description 1
- 230000006377 glucose transport Effects 0.000 description 1
- 150000002402 hexoses Chemical class 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 229910052816 inorganic phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 239000001573 invertase Substances 0.000 description 1
- 235000011073 invertase Nutrition 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 235000008960 ketchup Nutrition 0.000 description 1
- 235000021374 legumes Nutrition 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 235000008935 nutritious Nutrition 0.000 description 1
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 1
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 101150072645 pea gene Proteins 0.000 description 1
- 108020004410 pectinesterase Proteins 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- LWTDZKXXJRRKDG-UHFFFAOYSA-N phaseollin Natural products C1OC2=CC(O)=CC=C2C2C1C1=CC=C3OC(C)(C)C=CC3=C1O2 LWTDZKXXJRRKDG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 230000008635 plant growth Effects 0.000 description 1
- 238000013492 plasmid preparation Methods 0.000 description 1
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 1
- 230000010152 pollination Effects 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 1
- 210000001938 protoplast Anatomy 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 230000008117 seed development Effects 0.000 description 1
- 239000006152 selective media Substances 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- UNFWWIHTNXNPBV-WXKVUWSESA-N spectinomycin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](NC)[C@@H](O)[C@H]([C@@H]([C@H]1O1)O)NC)[C@]2(O)[C@H]1O[C@H](C)CC2=O UNFWWIHTNXNPBV-WXKVUWSESA-N 0.000 description 1
- 229960000268 spectinomycin Drugs 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 108010009751 sucrose-phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 230000008719 thickening Effects 0.000 description 1
- 229940113082 thymine Drugs 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 238000011426 transformation method Methods 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000017260 vegetative to reproductive phase transition of meristem Effects 0.000 description 1
- 239000001993 wax Substances 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/10—Transferases (2.)
- C12N9/1048—Glycosyltransferases (2.4)
- C12N9/1051—Hexosyltransferases (2.4.1)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
- C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
- C12N15/8242—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with non-agronomic quality (output) traits, e.g. for industrial processing; Value added, non-agronomic traits
- C12N15/8243—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with non-agronomic quality (output) traits, e.g. for industrial processing; Value added, non-agronomic traits involving biosynthetic or metabolic pathways, i.e. metabolic engineering, e.g. nicotine, caffeine
- C12N15/8245—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with non-agronomic quality (output) traits, e.g. for industrial processing; Value added, non-agronomic traits involving biosynthetic or metabolic pathways, i.e. metabolic engineering, e.g. nicotine, caffeine involving modified carbohydrate or sugar alcohol metabolism, e.g. starch biosynthesis
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A40/00—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production
- Y02A40/10—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production in agriculture
- Y02A40/146—Genetically Modified [GMO] plants, e.g. transgenic plants
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
Expresia sacharózo-fosforylázy v rastlinách
Oblasť techniky
Výhody genetického inžinierstva v poslednej dobe poskytujú potrebné prostriedky na premenu rastlín, tak, aby obsahovali cudzie gény. Teraz sa dajú produkovať rastliny, ktoré majú výnimočné charakteristiky, dôležité z hľadiska poľnohospodárskeho a zberu plodín. Celkom určite k jednému takémuto výhodnému rysu patrí zvýšený obsah škrobu a/alebo tuhých látok a kvalita rôznych plodín. Ďalšou črtou je zvýšený obsah oleja a bielkovín v semenách rôznych plodín.
Doterajší stav techniky
Sacharóza je zásobnou jednotkou uhlíka, ktorá je transportovaná zo zdrojových tkanív vo väčšine rastlín do zásobných tkanív. V zásobnom tkanive je hydrolyzovaná na žložky, kde spravidla dochádza k tvorbe iných, komplexnejších zásobných jednotiek, najmä škrobu, proteínu a oleja. Hydrolýza je dokončená najmä sacharózasyntetázou, ktorá vytvára UDP-glukózu a fruktózu. UDP-glukóza sa premieňa na glukózo-1 -fosfát.
Zvýšenie obsahu škrobu v zásobných tkanivách v rôznych plodinách sa dosiahlo použitím genetického kódovania bakteriálnej ADP-glukózopyrofosforylázy (viď PCT prihláška WO 91/19806 (zhodná s US pat. prihláškou číslo 08/120 703, Kishore; tu zahrnutá týmto odkazom). Tento enzým katalyzuje produkciu ADP-glukózy z glukózo-1-fosfátu. Bolo taktiež zistené, že jeho expresia počas určitých fáz vývoja semena môže znížiť obsah oleja. Uvažuje sa, že k tomu dochádza z dôvodu odvádzania surového materiálu škrobovou cestou, čo sa prejaví znížením schopnosti produkovať olej.
Počas zberu, manipulácie a skladovania zemiakov dochádza k ich pomliaždeniu. Pomliaždenina vyzerá ako tmavá škvrna najmä v oblasti kôry hľuzy. Pomliaždenie môže viesť k stratám na kvalite a nižšej prijateľnosti takýchto zemiakov a výrobkov z nich spotrebiteľom. Zistilo sa, že druhy zemiakov s vysokým obsahom škrobu sú chúlostivejšie na pomliaždenie. Bolo by potrebné znížiť stupeň alebo dopad pomliaždenia zatiaľ čo obsah škrobu v hľuze by sa zvýšil.
- 2 Taktiež je žiaduce rovnomernejšie rozdelenie škrobu a tuhých látok v zemiakovej hľuze. Dreň alebo jadro zemiaka má všeobecne nižší obsah tuhých látok ako vonkajšia oblasť alebo oblasť šupy. Keď sa hľuzy zemiakov pri výrobe zemiakových hranolkov krájajú pozdĺžne, stredné časti týchto hranolkov majú nižšiu hladinu tuhých látok ako konce, a to sa obzvlášť týka hranolkov zo stredu hľuzy. Hranolky s nižším obsahom tuhých látok vyžadujú dlhšiu dobu prípravy, aby sa dosiahol rovnaký stupeň prijateľnosti pre spotrebiteľa. Dlhšie doby smaženia môžu mať za následok presmaženie hranolkov s vyšším obsahom tuhých látok. V dôsledku dlhšieho smaženia dochádza tiež k vyššej absorpcii tuku, a preto hranolky s nižším obsahom tuhých látok a tie s oblasťami s nižším obsahom tuhých látok budú obsahovať viac tuku. Hranolky s vyšším obsahom tuku sú menej výživné. Pri výrobe zemiakových lupienkov, plátkov, sa zemiaková hľuza krája naprieč a nerovnomerné rozdelenie tuhých látok sa v smažených výrobkoch prejaví tak, že okraje lupienkov sú presmažené, stredy nedosmažené s vysokým obsahom tuku (najmä v strede). Nerovnomerné rozdelenie tuhých látok v zemiakovej hľuze sa prejaví aj počas lúpania neprimeranými stratami tuhých látok zo šupy zemiakových hľúz.
Pri paradajkách je tiež žiaduci vyšší obsah tuhých látok. Vyšší obsah tuhých látok vo forme rozpustných (obyčajne cukry a kyseliny) a nerozpustných tuhých látok napomáha k účinnejšiemu spracovaniu a výťažku produktov, napríklad kečupu, pasty, omáčky a omáčky typu salsa. Tieto tuhé látky taktiež zlepšujú chuť a konzistenciu vyrobených produktov. Vyšší obsah tuhých látok zlepšuje aj chuť čerstvých paradajok.
Sacharóza-fosforyláza je mikrobiálny enzým, ktorý katalyzuje tvorbu glukóza-1fosfátu priamo zo sacharózy. Jeho aktivita bola pozorovaná v celom rade druhov baktérií a húb a z mnohých týchto druhov bol tento enzým izolovaný (Pimentel a spol., 1992; Vandamme a spol., 1987). Gény tohto enzýmu boli izolované z druhov Agrobacterium (Foumier a spol., 1994 a odkazy, tu citované), Streptococcus mutans, nazvaný gtfA (Russell a spol., Perry a spol.) a Leuconostoc mesenteroides, nazvaný spi (Kitao a spol., 1992). Heterologická expresia génu z S. mutans v E. coli je uverejnená v US patente 4 888 170 (Curtiss, 1989), zahrnuté na tomto mieste týmto odkazom. Užitočnosť transformovaného mikroorganizmu spočíva v tom, že sa používa ako vakcína proti S. mutans.
Predmetom vynálezu je poskytnúť zlepšené prostriedky na zvýšenie obsahu škrobu v rôznych rastlinách. Ďalším cieľom je zaistiť prostriedok na zníženie obsahu sacharózy v semenách olej ovitých plodín, čo sa prejaví v znížení obsahu nežiaducich uhľovodíkov, napríklad stachylózy a rafinózy, zatiaľ čo stúpne množstvo uhlíka dostupného na tvorbu oleja a bielkovín. Ďalším cieľom je poskytnúť nové konštrukcie DNA, ktoré sú užitočné na uskutočnenie uvedených cieľov. Ešte ďalšou úlohou je poskytnúť zemiakové hľuzy, ktoré majú zvýšený obsah škrobu s rovnomernejším rozdelením v celej hľuze. Ešte ďalším cieľom vynálezu je získať zemiakové hľuzy so zníženou náchylnosťou na pomliaždenie a ešte ďalším cieľom je získať zlepšené obilniny, napríklad kukuricu, ryžu, pšenicu a jačmeň.
Podstata vynálezu
Vynález poskytuje štruktúry DNA, ktoré kódujú enzým sacharóza-fosforylázu (SP), ktorý je použiteľný na tvorenie zvýšeného obsahu škrobu v rastlinách. Semená, získané podľa vynálezu, majú zníženú hladinu sacharózy a ostatných uhľovodíkov, čo sa prejaví v náraste obsahu oleja a proteínov ako výsledok expresie sacharózafosforylázy. , ,
Aby sa dosiahlo vyššieuvedené vynález predkladá spôsob modifikácie obsahu uhľovodíkov v cieľových bunkách geneticky transformovaných rastlín, zahrnujúci kroky:
a) vloženie (inzerciu) rekombinantu do genómu rastlinnej bunky, dvojvláknovej molekuly DNA so sekvenciou obsahujúcou (i) promótor, ktorý funguje v bunkách cieľového rastlinného tkaniva, (ii) štruktúrnu sekvenciu DNA, spôsobujúcu tvorbu sekvencie RNA, ktorá kóduje enzým sacharóza-fosforylázu, (iii) népreloženú (netranslátovanú) sekvenciu DNA 3 -konca, ktorá v rastlinných bunkách spôsobuje termináciu transkripcie a adíciu polyadenylových nekleotidov na 3 -koniec sekvencie RNA,
b) získanie transformovaných rastlinných buniek; a
c) regeneráciu geneticky transformovaných rastlín z transformovaných rastlinných buniek.
v
Ďalším aspektom vynálezu je poskytnutie rekombinantu, dvojvláknovej molekuly DNA so sekvenciou obsahujúcou
- 4 (i) promótor, ktorý funguje v bunkách cieľového rastlinného tkaniva, (ii) štruktúrnu sekvenciu DNA, spôsobujúcu tvorbu sekvencie RNA, ktorá kóduje enzým sacharóza-fosforylázu (iii) nepreloženú (netranslátovanú) sekvenciu DNA 3 -konca, ktorá v rastlinných bunkách spôsobuje termináciu transkripcie a adíciu polyadenylových nekleotidov na 3 -koniec sekvencie RNA;
Predložený vynález sa ďalej týka transformovaných rastlinných buniek, ktoré obsahujú DNA, skladajúcu sa z vyššie spomenutých prvkov (i), (ii) a (iii). Ďalej sa vynález týka diferencovaných zemiakov, paradajok a obilnín, ktoré majú zvýšený obsah škrobu v hľuzách, plodoch a semenách a diferencovaných olejnatých plodín, ktoré majú znížený obsah sacharózy a oligosacharidov, obsahujúcich sacharózu (napríklad stachylózu a rafinózu), v semenách.
Vynález sa ďalej týka spôsobov zvýšenia obsahu škrobu pri tvorbe škrobu v rastlinných orgánoch, napríklad hľuzách zemiakov a semenách obilnín, a zníženia hladiny sacharózy v olejnatých plodinách, napríklad v sójových bôboch, kanole, čo vedie k nárastu obsahu oleja a bielkovín. Pri uskutočňovaní- spôsobu bolo pri zemiakoch neočakávane zistené, že medzi jadrom a šupou hľuzy dochádza k rovnomernejšiemu rozdeleniu škrobu. Spôsob podľa predloženého vynálezu poskytuje zemiaky, ktoré majú zníženú náchylnosť voči pomliaždeniu.
Dodatočnou výhodou je aktivita sacharóza-fosforylázy v zásobných tkanivách, napríklad v zemiakovej hľuze. Súvisí to so zvýšením hydrolytickej aktivity enzýmu voči sacharóze, s tým, že jeho Km (Michaelisova konštanta) je pre sacharózu (1 mM až 25 M) oveľa nižšia, ako je táto hodnota pre enzýmy hydrolyzujúce rastlinnú sacharózu, tj. sacharóza-syntetáza a invertáza, ktoré majú Km v rozsahu 50 mM až 300 mM. Toto je dôležité pri spevňovaní a zhrubnutí takýchto zásobných tkanív, čo sa prípadne prejaví zvýšeným výťažkom.
Príklady uskutočnenia vynálezu
Expresia rastlinného génu, ktorý existuje vo forme dvoj vláknovej DNA, zahrnuje transkripciu mediátorovej RNA (mRNA) z jedného vlákna DNA pomocou enzýmu RNA-polymerázy a následné spracovanie primárneho transkriptu mRNA vnútri jadra.
- 5 Toto spracovanie sa týka pripojenia netranslátovanej oblasti, polyadenylovaných nukleotidov na 3 -koniec DNA.
Transkripcia DNA na mRNA je riadená oblasťou DNA, ktorá sa obvykle nazýva promótor. Oblasť promótora obsahuje sekvenciu báz, ktorá signalizuje RNApolymeráze spojenie s DNA a počiatok transkripcie mRNA s použitím jedného z vlákien DNA ako templátu, za súčasného vzniku zodpovedajúceho komplementárneho vlákna RNA.
V literatúre bol opísaný rad promótorv, ktoré sú aktívne v rastlinných bunkách. Patria sem promótory nopalin-syntetáza (NOS) a oktopin-syntetáza (OCS), ktoré sú nesené nádor-indukujúcimi plazmidmi Agrobacterium tumefaciens, promótory caulimovírusov, napríklad vírusu mozaiky krtičníka, svetlom indukovateľný promótor z malej podjednotky ribulóza-l,5-bisfosfátkarboxylázy (ssRUBISCO, veľmi rozšírený rastlinný polypeptid) a promótor génu bielkoviny viažuci chlorofyl a/b, atď. Všetky tieto promótory boli použité na vytvorenie rôznych typov DNA konštruktov, ktoré sú exprimované v rastlinách; viď napríklad PCT prihláška WO 84/02913 (Rogers a kol., , Monsanto). ·
Promótory, pri ktorých je známe alebo zistené, že spôsobujú transkripciu (prepis) DNA v rastlinných bunkách, môžu byť vo vynáleze použité. Takéto promótory môžu byť získané z rôznych zdrojov, napríklad z rastlín a rastlinných vírusov, a zahrnujú (ale neobmedzujú sa len na tieto) promótor CaMV35S a promótory izolované z rastlinných génov, napríklad génov ssRUBISCO. Ako je uvedené nižšie, je výhodné, aby bol určitý vybraný promótor schopný spôsobiť expresiu v dostatočnej miere, čo sa prejaví tvorbou účinného množstva enzýmu sacharóza-fosforylázy (SP), ktorý umožní požadovaný nárast obsahu škrobu. Ďalej je výhodné spôsobiť expresiu génu sacharóza-fosforylázy v špecifických tkanivách rastlín, napríklad v koreni, hľuze, semene, plode atď. a vybraný promótor by mal mať požadovanú tkanivovú a vývojovú špecificitu. Odborníkom v danej oblasti bude zrejmé, že množstvo sacharózafosforylázy, potrebné na indukciu požadovaného nárastu obsahu škrobu, sa môže líšiť podľa druhu rastliny a ďalej platí, že príliš vysoká úroveň aktivity sacharózafosforylázy môže rastline škodiť. Preto by funkcia promótora mala byť optimalizovaná výberom promótora s požadovanými schopnosťami tkanivovej expresie a približnou silou promótora a výberom transformantu, ktorý produkuje požadovanú aktivitu sacharóza-fosforylázy v cieľových tkanivách. Táto cesta výberu z
- 6 poolu (banky) transformantov je v rastlinách obvykle zapojená do expresie heterologických štruktúrnych génov, pretože existuje rozdiel medzi transformantmi obsahujúcimi rovnaký heterologický gén v závislosti od miesta inzercie génu v rastlinnom genóme (všeobecne sa hovorí o polohovom účinku „position effect“).
Promótory, použité v dvojvláknových molekulách DNA podľa vynálezu, sa s výhodou prejavujú relatívne vysokým stupňom expresie v tkanivách, kde je požadovaný zvýšený obsah škrobu a/alebo suchej hmoty, napríklad zemiaková hľuza, plody paradajok, pšenice, ryže a jačmeňa. Expresia dvojvláknových molekúl DNA podľa vynálezu pomocou konštitutívneho promótora, umožňujúceho expresiu molekuly DNA vo všetkých alebo vo väčšine rastlinných tkanív, bude zriedka výhodná a v niektorých prípadoch môže byť škodlivá pre rast rastliny.
Ukázalo sa, že promótor patatinu triedy I je jednak vysoko účinný a jednak hľuzovo špecifický (Bevan a kol., 1986; Jefferson a kol., 1990). Sekvencia asi 1,0 kb časti promótora hľuzovo špecifického patatinu triedy I je výhodná pre expresiu v hľuze podľa vynálezu. Rad ďalších génov je známych svojou hľuzovou špecifickou alebo zosilnenou expresiou,' vrátane ADPGPP génov hľúz zemiakov, obidvoch, veľkých aj malých jednotiek (Muller a kol., 1990), sacharóza-syntetázy (Salanoubat a Belliard, 1987, 1989), hlavných hľuzových proteínov, vrátane 22 kd proteínových komplexov a inhibítorov proteinázy (Hannapel, 1990), génu syntetázy škrobu, obsiahnutej v škrobových zrnách (GBSS) (Rohde a kol., 1990) a iných patatinov tried I a II (Rocha-Sosa a kol., 1989; Mignery a kol., 1988). Ďalšími promótormi, od ktorých sa očakáva, že budú použiteľné v predloženom vynáleze, vrátane tých, ktoré majú zosilnenú alebo špecifickú expresiu v hľuzách zemiakov, sú promótory normálne spojované s expresiou biosyntézy škrobu alebo modifikáciou enzýmových génov alebo tie, ktoré majú rozdielne modely expresie v zemiakových hľuzách. Príklady týchto promótorov zahrnujú promótory génov syntetázy škrobu, obsiahnuté v škrobových zrnách a ostatné syntetázy škrobu, vetviace enzýmy (Kossmann a kol., 1991; Blennow, A. a Johansson, G., 1991; WO 92/14827; WO 92/11375), disproporciačné enzýmy (Takaha a kol., 1993), enzýmy štiepiace miesta rozvetvovania, amylázy, fosforylázy škrobu (Nakano a kol., 1989; Mori a kol., 1991), pektín-esterázy (Ebbelaar a spol., 1993), glykoproteín 40 kDa, ubichitin, inhibítor aspartát-proteinázy (Stukerlj a kol., 1990), inhibítor karboxypeptidázy, hľuzovej polyfenoloxidázy (Shahar a kol., 1992; GenBank Accession čísla M95156 a M95197),
- 7 predpokladaný inhibítor trypsínu a iné hľuzové cDNA (Stiekema a kol., 1988) a β-amylázy a sporamíny (z Ipomea batatas; Yoshida a kol., 1992; Ohta a kol., 1991).
Okrem toho špecifické hľuzové promótory môžu byť identifikované skúmaním cDNA knižnice zemiakov na gény, ktoré sú selektívne alebo výhodne exprimované v hľuzách a potom sa určia oblasti promótora, aby sa získali promótory hľuzovo selektívne alebo zosilnené.
Ostatné promótory môžu byť taktiež použité na expresiu génu sacharózafosforylázy v špecifických tkanivách, napríklad semenách alebo plodoch. β-konglycinín (tiež známy ako 7S proteín) je jedným z hlavných zásobných proteínov v sójových bôboch (Glycine max) (Tiemey, 1987). Promótor pre β-konglycinín, alebo iné pre semeno špecifické promótory, napríklad promótory napinu a faseolinu, môžu byť použité na over-expresiu génu sacharóza-fosforylázy výslovne v semenách. Toto by viedlo k zníženiu obsahu sacharózy v semenách, čo sa odrazí v poklese nežiaducich oligosacharidov a potencionálne v náraste obsahu oleja a/alebo proteínov, čo by bolo žiaduce v semenách, z ktorých sa získavajú olej alebo proteíny, napríklad sójové bôby, kanola, repka olejka, slnečnica, saflor atd·.. Gén sacharóza-fosforylázy poskytne rýchlejšie viac surového materiálu, ale regulačný systém rastliny, pokiaľ nie je ovplyvnená inými enzýmami, vznikajúcimi z heterológnych génov, bude riadiť (regulovať) ich využitie v zásobných tkanivách.
Zeíny sú skupinou zásobných proteínov, nájdené v kukuričnej endosperme. Boli izolované genómové klony pre gény zeínov (Pedersen, 1982) a promótory z týchto klonov, vrátane 15 kD, 16 kD, 19 kD, 22 kD, 27 kD a gama-gény môžu byť tiež použité na expresiu génu sacharóza-fosforylázy v semenách kukurice a iných rastlín. Iné promótory, známe svojou funkciou v kukurici, zahrnujú promótory nasledujúcich génov: waxy, Brittle, Shrunken 2, vetviace enzýmy I a II, syntetázy škrobu, enzýmy štiepiace miesta vetvenia, oleozíny, glutelíny a sacharóza-syntetázy. Zvlášť vhodným promótorom na expresiu génu sacharóza-fosforylázy v endosperme kukurice je promótor génu glutelínu z ryže, najmä promótor Osgt-1 (Zheng a kol., 1993).
Ak sa má radšej zvýšiť obsah oleja v semene kukurice ako obsah škrobu, má sa vybrať promótor, ktorý umožňuje expresiu génu sacharóza-fosforylázy počas ukladania oleja. Takýto promótor by bol potom aktivovaný počas tvorby rastlinného zárodku. Príkladmi promótorov aktívnych počas embryogenézy sú promótory,
- 8 pochádzajúce z génov globulínu 1 a proteínov (vretienka) aktívnych v neskorej embryogenéze.
Príklady promótorov, vhodných na expresiu génu sacharóza-fosforylázy pre pšenicu, zahrnujú tie promótory, ktoré patria génom podjednotiek ADP-glukózapyrofosforylázy (ADPGPP), syntetázy škrobu obsiahnutej v zrnách škrobu a ostatných syntetáz škrobu, vetviacich enzýmov a enzýmov štiepiacich miesta vetvenia, proteínov hojne sa vyskytujúcich v embryogenéze, gliadínov a glutenínov. Príkladmi takýchto promótorov ryže sú promótory, patriace génom podjednotiek ADPGPP, syntetázy škrobu obsiahnuté v škrobových zrnách a ostatné syntetázy škrobu, vetviacich enzýmov a enzýmov štiepiacich miesta vetvenia, syntetázy sacharózy a glutelínov. Obzvlášť výhodným promótorom je promótor ryžového glutelínu Otgt-1. Príklady takýchto promótorov jačmeňa zahrnujú promótory, patriace génom podjednotiek ADPGPP, syntetázy škrobu obsiahnutej v škrobových zrnách a ostatných syntetáz škrobu, vetviacich enzýmov a enzýmov štiepiacich miesta vetvenia, syntetázy sacharózy a glutelínov, hordeínov a zárodočných globulínov a aleuron špecifických proteínov. , .
Obsah tuhých látok v plode paradajky sa môže zvýšiť expresiou génu sacharózafosforylázy za špecifickým promótorom plodu. Promótor z genómového klonu 2A11 (Pear, 1989) bude viesť expresiu ADP-glukóza-pyrofosforylázy v plode paradajky. E8 promótor (Deikman, 1988) by taktiež exprimoval gén sacharóza-fosforylázy v plode paradajky. Ďalšie promótory, ktoré fungujú v období zeleného plodu paradajky, sú zverejnené v PCT prihláške PCT/US94/07072, podanej 27. júna 1994, designujúcej US, ktorá je tu týmto odkazom zahrnutá. Označený TFM7 a TFM9. TFM7, izolovaný z paradajky, je fragmentom DNA s približne 2,3 kb, z ktorého je zobrazená časť 1,4 kb 3 -konca v SEQ ID č.3. TFM9 je fragmentom DNA s asi 900 kb, z ktorého'je zobrazená časť 400 kb 3 -konca v SEQ ID č.3.
Tu sa zistilo, že promótory zemiakovej hľuzy budú fungovať v rastline paradajky, budú spôsobovať špecifickú expresiu uvedeného génu v plode (viď US 08/344 639, Barry a kol., podaná 4. novembra 1994, týmto odkazom tu začlenená). Takéto promótory zahrnujú promótory zemiakového patatinu, zemiakové ADPGPP promótory a promótory syntetázy škrobu obsiahnuté v škrobových zrnách. Obzvlášť výhodným promótorom na expresiu plodu paradajky je promótor génu kódujúci malú podjednotku ADPGPP v zemiaku.
- 9 Obsah tuhých látok v koreňovom tkanive môže byť zvýšený expresiou génu sacharóza-fosforylázy za koreňovo špecifickým promótorom. Promótor z génu kyslej chitinázy (Samac a kol., 1990) bude exprimovať gén sacharóza-fosfatázy v koreňovom tkanive. Expresia v koreňovom tkanive môže byť dosiahnutá aj využitím koreňových špecifických subdomén promótora CaMV35S, ktorý bol identifikovaný (Benefey a kol., 1989).
RNA produkovaná konštruktom DNA podľa vynálezu môže tiež obsahovať netranslátovanú vedúcu sekvenciu 5 -konca. Táto sekvencia môže byť odvodená od promótora vybraného na expresiu génu a môže byť špecificky modifikovaná, takže sa zvýši translácia mRNA. 5 -nepreložené oblasti môžu byť získané z vírusových RNA, z vhodných eukaryotických génov alebo umelej génovej sekvencie. Vynález nie je obmedzený konštruktami, zobrazenými v nasledujúcich príkladoch, kde je nepreložená oblasť odvodená z 5 -netranslátovanej sekvencie, ktorá sprevádza sekvenciu promótora. Skôr môže byť odvodená netranslátovaná vedúca sekvencia z nesúvisiaceho promótora alebo kódujúcej sekvencie, ako je uvedené vyššie.
Cieľová signálna sekvencia
Prípadným spôsobom zvýšenia rýchlosti hydrolýzy sacharózy by bolo nasmerovanie sacharóza-fosforylázy do apoplastu. To vyžaduje signálny peptid na N-konci funkčného proteínu. Výhodným príkladom sekvencie kódujúcej takúto signálnu sekvenciu je signálna sekvencia rastlinného endoplazmatického retikula z PR-1B proteínu (Ohshima a kol., 1990). Teda sacharóza-fosforyláza by bola aktívna v apoplaste, čo by umožnilo extracelulámu hydrolýzu sacharózy a rýchlejší transport glukózy do bunky.
Ďalšou možnosťou je nasmerovať sacharóza-fosforylázu do vakuoly. Nasmerovanie sacharóza-fosforylázy do vakuoly rastlinnej bunky vyžaduje dodatkovú informáciu v podobe signálneho peptidu (Nakamura a Matsuoka, 1993). Aby sa enzým nasmeroval do vakuoly, môže byť preprosignálny peptid pripojený k aminokoncu FT (Sonnewald a kol., 1991). Prípadne môže byť predĺženie sekvencie karboxylového konca spojené s ER signálnou sekvenciou.
- 10 Sacharóza-fosforyláza
Tu použitý termín „sacharóza-fosforyláza“ znamená enzým, ktorý katalyzuje reverzibilnú premenu sacharózy a anorganického fosforečnanu na a-D-glukózo-1fosfát a D-fruktózu. Dá sa izolovať z mnohých bakteriálnych zdrojov, vrátane Streptococcus mutans, Clostridium pasteurianum (Vandamme a kol., 1987), Pseudomonas saccharophila (Silverstein a kol.), Pseudomonas putrifaciens, Pullularia pullulans, Acetobacter xylinum (Vandamme a kol., 1987), druhy Agrobacterium (Foimier a kol., 1994) a Leuconostoc mesenteroides.
Gén enzýmu sacharóza-fosforylázy sa dá získať známymi spôsobmi a už bol získaný z rôznych organizmov, napríklad z druhov Agrobacterium (Foumier a kol., 1994) a Leuconostoc messenteroides (Kitao a kol., 1992). Gén z S. mutans bol exprimovaný v E. coli (Robeson a kol., 1983, identifikovanie glutazyl-transferázovej aktivity). Izolácia génu zo Streptococcus mutans je opísaná v nižšie uvedených príkladoch. Jeho sekvencia je uvedená ako SEQ ID č.5. Tento gén môže byť použitý tak, ako bol izolovaný, jeho vložením do rastlinných expresívnych vektorov, vhodných pre vybraný spôsob transformácie, ako je opísané nižšie. > .
Gén kódujúci sacharóza-fosforylázu (ORF 488) bol identifikovaný y Ti plazmidoch Agrobacterium vitus (predtým A. tumefaciens biotyp 3). Príbuzné sekvencie boli opísané v Ti plazmidoch iných kmeňov A. tumefaciens, najmä pTic58 (Foumier a kol., 1994). Je pravdepodobné, že gén kódujúci sacharóza fosforylázu môže byť nájdený na všetkých takýchto plazmidoch.
Predčistenie enzýmu sacharóza-fosforylázy bolo uvedené pri iných bakteriálnych a hubových zdrojoch (opísané vyššie). Dostupnosť týchto materiálov je ľahká, kvôli sekvenčnému klonovaniu génu tohto enzýmu, keď protein môže byť použitý ako imunogén na zvýšenie množstva protilátok, ktoré môžu byť použité na identifikáciu klonov v knižniciach na základe expresie proteínov, napríklad gtl 1 (Sambrook a kol.). Peptidové sekvencie N-konca takýchto proteínov sa dajú získať rutinným sekvencovamm bielkovín. Ďalej nasledujú dobre známe postupy čiastočnej proteolýzy, takto môžu byť stanovené sekvencie vnútorných oblastí. Takéto sekvencie potom môžu byť použité na navrhovanie nukleotidových sond alebo primérov, ktoré môžu byť použité na identifikáciu génov bánk klonov alebo na amplifikáciu génu alebo časti génu z RNA, cDNA alebo preparátov DNA zo zdrojového organizmu.
- 11 Detekcia E. coli, obsahujúcej klony sacharóza-fosforylázy, je možná aj pestovaním na minimálnom médiu, kde sacharóza je jediným zdrojom uhlíka (Ferretti a kol., 1988).
Ostatné mikroorganizmy, ktoré využívajú sacharóza-fosforylázu na hydrolýzu sacharózy, môžu byť nájdené testovaním organizmov na využitie sacharózy ako jediného zdroja uhlíka (Russell a kol.). Proteín môže byť následne vyizolovaný využitím dobre známych metód z frakcií, majúcich enzýmovú aktivitu. Gén kódujúci proteín môže byť potom izolovaný tak, ako bolo práve uvedené.
Teda, vo vynáleze je možné izolovať a využiť mnoho rôznych génov, ktoré kódujú proteín, majúci sacharóza-fosforylázovú aktivitu.
Polyadenylačný signál
Netranslátovaná oblasť 3 -konca chimérického rastlinného génu obsahuje polyadenylačný signál, ktorý spôsobuje v rastlinách pripojenie polyadenylových nukleotidov na 3 -koniec RNA. Príkladom vhodných 3 -oblastí sú, napríklad, 3 -prepísané, nepreložené oblasti, obsahujúce polyadenylačný signál génov plazmidu (Ti), spôsobujúce nádor z Agrobacterium, napríklad gén nopalin-syntetázy (NOS) a ďalej napríklad rastlinné gény, ako sú gény zásobných proteinov sóje a malá podjednotka génu ribulóza-l,5-bis-fosfátkarboxylázy (ssRUBISCO). Príkladom výhodnej 3 -oblasti je oblasť génu ssRUBISCO hrachu, známeho aj ako E9 3 -oblasť.
Syntetická stavba génu
Gén sacharóza-fosforylázy zo Streptococcus mutans je bohatý na adenín a tymín, čo môže mať nepriaznivý vplyv na vysoký stupeň expresie v rastlinných bunkách, hoci, ako je znázornené nižšie, gén sa exprimuje primerane, čím pozitívne ovplyvňuje obsah škrobu. Pokiaľ je požadované, sekvencia génu sacharóza-fosforylázy môže byť zmenená bez toho, aby sa zmenila sekvencia proteínu takým spôsobom, ktorý by mohol zvýšiť expresiu a mať teda dokonca pozitívnejší vplyv na obsah škrobu v transformovaných rastlinách. Pravidlá uskutočnenia zmien génovej sekvencie sú vysvetlené v WO 90/10076 (Fischhoff a kol.). Gén, syntetizovaný podľa nasledujúcich pravidiel tu vysvetlených, môže byť zavedený do rastlín, ako je opísané nižšie, výsledkom čoho sú zvýšené hladiny expresie enzýmu sacharóza-fosforylázy. Toto môže byť užitočné najmä pri jednoklíčnolistových rastlinách, napríklad pri kukurici, ryži, pšenici a jačmeni.
- 12 Kombinácie s inými transgénmi
Účinok sacharóza-fosforylázy v transgénnych rastlinách môže byť zvýšený jej spojením s inými génmi, ktoré majú pozitívny účinok na obsah škrobu a/alebo oleja. Napríklad na spojenie s génom pre sacharóza-fosforylázu môže byť použitý gén, ktorý zvýši aktivitu ADP-glukóza-fosforylázy (ADPGPP) v rastlinách. Takéto ADPGPP gény zahrnujú gén glgC E. coli a jeho mutant glgC\6. WO 91/19806 opisuje spôsob, ako začleniť tento gén do viacerých rastlinných druhov, aby sa zvýšil obsah škrobu a/alebo tuhých látok.
Iný gén, ktorý môže byť spojený so sacharóza-fosforylázou, aby sa zvýšil obsah škrobu, je gén pre sacharózafosfát-syntetázu (SPS), ktorý môže byť získaný z rastlín. WO 92/16631 zahrnuje jeden takýto gén a jeho použitie v transgénnych rastlinách.
Ďalším génom, ktorý môže byť spojený so sacharóza-fosforylázou, aby sa zvýšil obsah oleja, je gén acetyl-CoA karboxylázy, ktorý sa dá získať z rastlín. WO 93/11243 zahrnuje jeden takýto gén.
Transformácia rastlín a regenerácia
Rastliny, v ktorých je možné zvýšiť obsah polysacharidov ((napríklad škrob) spôsobom podľa vynálezu zahrnujú, ale neobmedzujú sa len na tieto, kukuricu, pšenicu, ryžu, paradajky, zemiaky, sladké zemiaky, arašidy, jačmeň, bavlnu, jahody, maliny a kasavu. Rastliny, v ktorých je možné upraviť obsah uhľovodíkov spôsobom podľa vynálezu, zahrnujú (ale neobmedzujú sa len na tieto) kukuricu, pšenicu, ryžu, paradajky, zemiaky, sladké zemiaky, arašidy, jačmeň, cukrovú repu, cukrovú trstinu, jablká, hrušky, pomaranče, hrozno, jahody, maliny a kasavu. Rastliny, v ktorých je možné znížiť tvorbu farebných škvŕn, vznikajúcich v dôsledku pomliaždenia, spôsobom podľa vynálezu, zahrnujú (ale neobmedzujú sa len na tieto) zemiaky, sladké zemiaky, arašidy, jačmeň, cukrovú repu, cukrovú trstinu, jablká, hrušky, marhule, pomaranče, hrozno, banány, skorocel a kasavu. Rastliny, v ktorých je možné zlepšiť rovnomerný obsah tuhých látok spôsobom podľa vynálezu, zahrnujú (ale neobmedzujú sa len na tieto) zemiaky, sladké zemiaky, banány, skorocel a kasavu. Rastliny, v ktorých je možné zvýšiť výťažok zberového materiálu spôsobom podľa vynálezu, zahrnujú (ale neobmedzujú sa len na tieto) kukuricu, pšenicu, ryžu, paradajky, zemiaky, sladké zemiaky, arašidy, jačmeň, cukrovú repu, cukrovú trstinu, jablká, hrušky, pomaranče, marhule, banány, skorocel, hrozno, bavlnu, jahody, maliny
- 13 a kasavu. Rastliny, v ktorých môže byť znížený obsah sacharózy, čo vedie k zvýšeniu obsahu oleja alebo proteínov, zahrnujú sójové bôby, kukuricu, canolu a slnečnicu.
Dvojvláknová molekula DNA podľa vynálezu, obsahujúca gén sacharózafosforylázy, môže byť vložená do genómu rastliny akýmkoľvek vhodným spôsobom. Vhodnými rastlinnými transformačnými vektormi sú tie, ktoré sú odvodené z Ti plazmidu Agrobacterium tumefaciens, rovnako aj tie, ktoré sú uverejnené napríklad v Herrera-Estrella (1983), Bevan (1984), Klee (1985) a EPO publikácii 120 516 (Schilperoort a kol.). Okrem toho sú rastlinné transformačné vektory odvodené od Ti alebo koreň indukujúcich plazmidov (Ri) z Agrobacterium, na vloženie DNA konštruktov podľa vynálezu do rastlinných buniek môžu byť použité alternatívne metódy. Takéto metódy môžu zahrnovať napríklad použitie lipozómov, elektroporáciu, chemické látky, zvyšujúce zachytávanie voľnej DNA, dodanie voľnej DNA mikroprojektilovým bombardovaním a transformáciu, využívajúcu vírusy alebo peľ.
Plazmidový expresívny vektor, vhodný na zavedenie génu sacharóza-fosforylázy do jednoklíčnolistových rastlín využitím, mikroprojektilového bombardovania, je. zložený z: promótora, ktorý je špecifický alebo zosilnený pre expresiu v zásobných tkanivách škrobu v jednoklíčnolistových rastlinách, všeobecne endosperma, takých ako sú promótory génov zeínu, nájdené v kukuričnej endosperme (Pedersen a spol.,
1982) , ďalej z intrónu, ktorý poskytuje miesto spojenia, aby sa uľahčila expresia génu, ako je napríklad intrón Hsp70 (PCT publikácia WO93/19189) a z 3 polyadenylačnej sekvencie, ako je napríklad sekvencia 3 nopalín-syntetázy (NOS 3, Fraley a spol.,
1983) . Táto expresívna kazeta môže byť zostavená z replík s mnohými kópiami vhodnými na výrobu veľkého množstva DNA.
Obzvlášť užitočným rastlinným transfomačným vektorom z Agrobacterium na použitie na transformáciu dvojklíčnolistových rastlín je plazmidový vektor pMON530 (Rogers, S.G., 1987). Plazmid pMON530 je derivátom pMON505, pripraveným prenosom 2,3 kb Stul-Hindlll fragmentu z pMON316 (Rogers, S.G., 1987) do pMON526. Plazmid pMON526 je jednoduchým derivátom pMON505, v ktorom je Smal miesto odstránené vyštiepením s Xmal, reakciou s Klenowou polymerázou a ligáciou. Plazmid pMON530 má zachované všetky vlastnosti pMON505 a CaMV35SNOS expresívnej kazety a teraz obsahuje jedinečné štiepne miesto pre Smal medzi promótorom a polyadenylačným signálom.
- 14 Binárny vektor pMON505 je derivátom pMON200 (Rogers, S.G., 1987), v ktorom homológna oblasť Ti plazmidu, LIH, bola nahradená 3,8 kb HindlII na Smal segmente mini RK2 plazmidu, pTJS75 (Schmidhauser & Helinski, 1985). Tento segment obsahuje RK2 začiatok replikácie, oriV a začiatok prenosu, oriT, na konjugáciu do Agrobacterium použitím tri-parentálneho procesu párovania (Horsh & Klee, 1986). Plazmid pMON505 si ponecháva všetky dôležité rysy z pMON200, vrátane syntetického multi-íinkera na inzertovanie požadovaných DNA fragmentov, chimerického NOS/NPTII/NOS génu odolnosti voči kanamycínu v rastlinných bunkách, spektinomycín/streptomycín rezistentnej determinanty pre výber v E. coli a A. tumefaciens, intaktného génu nopalín-syntetázy pre ľahké zaznamenanie transformantov a dedičnosti v potomstve a pBR322 začiatok replikácie na uľahčenie výroby veľkého množstva vektora v E. coli. Plazmid pMON505 obsahuje jednovláknový T-DNA okraj, odvodený od pravého konca pTi37 T-DNA nopalínového typu. Southemova analýza ukázala, že plazmid pMON505 a akákoľvek DNA, ktorá ho nesie, sú integrované do rastlinného genómu, čo znamená, že celý plazmid je. T-DNA, ktorá je vložená do rastlinného genómu. Jeden koniec integrovanej DNÁ je umiestnený medzi pravou okrajovou sekvenciou a génom nopalín-syntetázy a ďalší koniec je medzi okrajovou sekvenciou a sekvenciami pBR322.
Ďalší obzvlášť užitočný Ti plazmidový kazetový vektor je pMON17227. Tento vektor je opísaný Barrym a kol. v WO 92/04449 (zodpovedá US 07/749,611, tu zahrnutá týmto odkazom) a obsahuje gén, ktorý kóduje enzým vyvolávajúci glyfosátovú rezistenciu (označený CP4) a ktorý je vynikajúcim selekčným génom signálneho znaku mnohých rastlín, vrátane zemiakov a paradajok. Gén je fúzovaný s Arabidopsis EPSPS chloroplastovým tranzitným peptidom (CTP2) a exprimovaný z FMW promótora, ako je tu opísané.
Keď je získaný primeraný počet buniek (alebo protoplastov) obsahujúcich gén sacharóza-fosforylázy alebo cDNA, sú tieto bunky regenerované za vzniku celých rastlín. Voľba metodiky kroku regenerácie nie je rozhodujúca, sú dostupné vhodné protokoly pre hostiteľov z čeľade Leguminosae (strukoviny: lucerna, sója, ďatelina, atď.), Umbelliferae (okolíkokveté: mrkva, zeler, paštrnák), Cruciferae (krížokveté: kapusta, reďkovka, canola/semeno repky olejnatej, atď.), Cucurbitaceae (tekvicovité: melón, uhorka), Gramineae (trávovité: pšenica, jačmeň, ryža, kukurica, atď.),
- 15 Solanaceae (ľulkovité: zemiaky, tabak, paradajky, paprika), rôzne kvetné plodiny, ako je slnečnica a stromy s orechmi ako plodmi, ako sú mandle, kešu orechy, lieskové orechy a pekanové orechy; viď, napríklad Ammirato, 1984; Shimamoto, 1989; Fromm, 1990; Vasil, 1990; Vasil, 1992; Hayashimoto, 1989; Shimamoto, 1989 a Datta, 1990.
Nasledujúce príklady lepšie vysvetľujú postup podľa vynálezu a nemajú v žiadnom prípade ohraničovať rozsah vynálezu. Odborníkom v odbore bude jasné, že môžu byť vykonané rôzne modifikácie spôsobov, odseknutia, atď. génov tu opísaných, bez toho, aby sa dostali mimo rozsah vynálezu.
Príklad 1
Všetky základné DNA manipulácie, napríklad PCR, agarózová elektroforéza, reštrikčné štiepenie, ligácie a transformácie E. coli boli uskutočnené podľa štandardných postupov, opísaných Sambrook-om a kol.
, Gén sacharóza-fosforylázy, gtfA, bol generovaný PCR amplifikáciou z buniek Streptococcus mutans. Gén ból amplifikovaný použitím 5 -oligonukleotidu. 5'-CCCGGATCCA TGGCAATTAC AAATAAAAC (SEQ ID No.l) a 3 -oligonukleotidu
5'-GGGGAGCTCA CTCGAAGCTT ATTGTTTGAT CATTTTCTG (SEQ ID No.2)
Podmienky PCR cyklovania sú nasledujúce: 94 °C, 3 ; 55 °C, 2 ; 72 °C, 2 (5 cyklov); 94 °C, 1 ; 55 °C, 2; 72 °C, 2 (30 cyklov). PCR produkt s 1462 bp bol prečistený s použitím purifikačného systému GeneClean (Bio 101, Vista, Kalifornia), štiepený BamHI a Sací a vložený do miest Ba/wHI a Sad pUC119. Ligovaná DNA bola transformovaná do JM101 a bielo-modrá skrínovanie sa použilo na identifikovanie kolónií na prípravu plazmidov a reštrikčné štiepenie. Štiepenie s Hindlii sa použilo na zistenie transformantov obsahujúcich gén gtfA. Na fenotypovú expresiu sa preverovali klony so správnymi reštrikčnými štruktúrami a to schopnosťou využitia sacharózy ako jediného zdroja uhlíka, a to nasledovne: klony boli transformované do kmeňa galE.coli, SK1592 a pestované na minimálnom kultivačnom médiu, obsahujúcom rafinózu (ktorá je vychytávaná a hydrolyzovaná na galaktózu a sacharózu) a bol identifikovaný aktívny kloň, ktorý bol nazvaný pMON17353.
i 16 Aby sa umožnila konštitutívna expresia gtfA v rastlinách zostavila sa expresívna kazeta. Fragment, obsahujúci zosilnený promótor 35S (Kay, R., 1987), 3 oblasť nopalín-syntetázy (Bevan, M., 1984) a chrbticu (skelet) vektora pUC, bol pripravený z pMON999 (Rogers a kol., 1987) reštrikčným štiepením s Bg/II a Sad. Fragment, obsahujúci oblasť kódujúcu gtfA, bol pripravený z pMON17353 reštrikčným štiepením s BamHI a Sad. Správne fragmenty boli oddelené elektroforézou na agarózovom géle a prečistené purifikačným systémom GeneClean. Fragmenty boli ligované, transformované do E. coli JM101 a domnelé rekombinantné plazmidy boli skúmané reštrikčným štiepením s Notl. Bol identifikovaný jeden kloň, nazvaný pMON 173 59.
Na cielenú expresiu gtfA. v zemiakovej hľuze bola vytvorená druhá expresívna kazeta. Fragment, obsahujúci patatinový 1.0 promótor (opísaný vyššie), 3 oblasť nopalín-syntetázy a chrbticu vektora pUC, bol pripravený z vektorového medziproduktu reštrikčným štiepením s žtawHI a Sad. Na smerovanie expresie gtfA v plodoch paradajok bola tiež vytvorená expresívna kazeta. Fragment, obsahujúci promótor TFM7, 3 oblasť nopalín-syntetázy a chrbticu vektora pUC, bol pripravený reštrikčným štiepením z MON16987 (PCT prihláška PCT/US94/07072, podaná 27. júna 1994), ktorý je odvodený z pMON999, ale obsahuje promótor TFM7. Správne fragmenty boli oddelené elektroforézou na agarózovom géle a prečistené purifikačným systémom GeneClean. Každý z týchto fragmentov bol ligovaný na Tta/wHI a Sad fragment z pMON 17353. Transformácia a skríning klonov boli opísané vyššie. Klony boli označené ako správne a boli pomenované pMON17356 (Patl.O/g//i4/NOS) a pMON 173 89 (TFM7/gŕ/4/NOS).
Bola skonštruovaná tretia expresívna kazeta na vedenie expresie gtfA v zemiakovej hľuze s použitím 3.5 kb promótora patatinu. Patatinový 3.5 promótor sa získal z pBI240.7 (Bevan a kol., 1986). Väčšina 3.5 promótora sa vyrezala z pBI240.7 od polohy HindlII (pri približne -3500) k Xbal polohe pri -337 a spojila so zvyškom promótora, od polohy Xbal po polohu BglII pri +22 (predtým poloha Dral), trojnásobnou ligáciou do vektora, ktorý poskytol miesto BG1II, za vytvorenia pMON17280. Medziproduktový vektor bol pripravený štiepením pMON 17353 s BamWSad a inzerciou fragmentu do pBS. Tento vektor sa štiepil s EcoRI a Sad. pMON 17280 sa štiepil s EcoRI a Sad, čím vznikol fragment obsahujúci patatinový 3.5 promótor, 3 oblasť nopalín-syntetázy a chrbtica pUC vektora. Fragmenty správnej veľkosti boli získané elektroforézou na agarózovom géli a postupom GeneClean. Fragmenty boli ligované, transformované do E. coli JM101 a skúmané reštrikčným štiepením s Hindlll. Jeden kloň bol označený ako správny a bol pomenovaný pMON 17495.
V pMON17356, pMON17359, PMON17389 a pMON17495 môžu byť promótor, gén gtfA a 3'oblasť Nos izolované na Notl reštrikčnom fragmente. Tieto fragmenty potom môžu byť vložené do jedinečného miesta Notl buď vektora pMON 17227 (opísané vyššie) alebo pMON17320, aby sa skonštruovali glyfosát voliteľné rastlinné transformačné vektory. pMON17320 je derivátom pMON17227, ktorý obsahuje tiež patatin 1.0/CTPl-g/gC16 kazetu. Spojenie CTPl-g/gC16 kóduje modifikovanú ADPglukóza-pyrofosforylázu, ako je opísané Kishorom v WO 91/19806. Vektor bol skonštruovaný aj na expresiu GtfA paradajok kombináciou génu gtfA. a 3 oblasti z pMON17356 s asi 2.0 kb promótorom génu malej podjednotky zemiakovej ADPglukóza-pyrofosforylázy (viď US č. 08/344,639, Barry a kol., podaná 4.11.1994, tu začlenená týmto odkazom) v, rastlinnom transformačnom vektore, za vzniku pMON17486.
Vektor DNA bol pripravený štiepením s Notl, pričom nasledovala reakcia s črevnou teľacou alkalickou fosfatázou (CIAP). Fragmenty obsahujúce gtfA boli pripravené štiepením s Notl, elektroforézou na agarózovom géli a prečistením pomocou GeneClean. Vektor a inzert DNA je ligovaný, transformovaný do kmeňa LE392 E. coli a produkty transformácie boli testované reštrikčným štiepením a identifikovali sa klony, obsahujúce gtfA expresívnu kazetu. Klony, v ktorých prebehla transkripcia z gtfA kazety rovnakým smerom ako transkripcia z voliteľného signálneho znaku, boli označené za správne a pomenované pMON 17357 (FMV/CP4/E9, Patl.O/g//A/NOS), pMON17358 (Patl.0/CTP-g/g/C16/E9,
Patl.O/gŕ/A/NOS, FMV/CP4/E9), pMON17360 (FMV/CP4/E9, E35S/g//A/NOS), pMON17390 (TFM7/gZ/A/NOS), pMON17392 (Patl.0/CTP-g/g/C16/E9,
TFM7/g//A/NOS, FMV/CP4/E9) a pMON 17496 (FMV/CP4/E9, Pat3.5/CTP/gŕ/A/NOS).
- 18 Bol zhotovený transformačný vektor na smerovanie expresie gZ/Ά do semena kukurice. Fragment, obsahujúci promótor Osgt-1 glutelínu, intrón Hsp70 (opísané vyššie), 3 oblasť nopalín-syntetázy, odolnosť voči kanamycínu a chrbticu pUC, bol pripravený reštrikčným štiepením, elektroforézou na agarózovom géli a purifikačným systémom GeneClean. Fragment obsahujúci oblasť, kódujúcu gZ/A, bol pripravený z pMON17359 reštrikčným štiepením s Noci a Notl. Fragmenty boli ligované, transformované a vyhodnotené reštrikčným štiepením. Správny kloň bol identifikovaný a označený pMON24502 (Osgt/Hsp70/gZ/A/NOS).
Bol skonštruovaný transformačný vektor na smerovanie expresie gtfA génu v semenách olejnatých plodín. Fragment BamHl-EcoRI z pMON17353 bol vložený na miesta 5g/II-£coRI medziproduktového vektora, aby sa získal pMON26104, ktorý umiestnil gtfA gén za 7s promótor (pojednávané vyššie) a využil 3' koncovú sekvenciu. Fragment Notl, obsahujúci FMV promótor, fúziu CTP2 a génu rezistencie voči glyfosatu a Nos 3 sekvenciu, bol vložený do miesta Notl z pMON26104 kvôli získaniu pMON26106, čo j e. rastlinný transformačný vektor, ohraničený z dvoch strán dvoma kazetami s rovnakou orientáciou.
Príklad 2
Vektor pMON17357 bol transformovaný do kalusu zemiaka Russet Burbank, pričom nasledoval postup opísaný Barrym a kol. v WO 94/28149, čím sa získala glyfosátová selekcia transformovaných línií. Získaný počet línií bol vyhodnotený v poľných pokusoch. Výsledky týchto pokusov sú uvedené v tabuľke 1. Je zrejmé, že niekoľko línií bolo identifikovaných ako línie obsahujúce vyššie hladiny škrobu (merané ako celková tuhá látka) a u niektorých z nich bolo znížené pomliaždenie.
| Tabuľka 1 | ||
| identifikácia línie | tuhé látky (%) priemer | index pomliaždenia priemer |
| kontrola | 21,9 | 3,399 |
| 1 | 22,9 | 3,798 |
| 3 | 22,2 | 3,479 |
| 4 | 23,3 | 2,899 |
| 6 | 21,8 | 2,798 |
| 8 | 22,7 | 2,979 |
| 11 | 21,6 | 2,968 |
| 12 | 22,0 | 3,383 |
| 14 | 22,3 | 3,218 |
| 15 | 22,7 | 2,979 |
| 17 | 22,3 | 3,394 |
| 18 | 21,7 | 3,394. |
| 19 | 22,4 ' | 3,213 |
| 22 | 22,7 | 3,503 |
Hľuzy z dvanástich línií boli testované na akékoľvek zmeny rozloženia škrobu medzi dreňou a vonkajším obalom. Toto bolo dosiahnuté ošúpaním hľúz, nakrájaním na plátky v podobe hranolkov a meraním tuhých látok s využitím porovnávacieho flotačného soľankového testu. Priemerná hladina tuhých látok v plátkoch dužiny bola odrátaná od priemeru hladiny tuhých látok v plátkoch šupy. Teda rozdiel tuhých látok, ktorý je menší ako hodnota získaná z kontroly (4,16 % v tomto teste), je známkou rovnomernejšieho rozloženia škrobu v hľuze, čo je žiaduce. Výsledky sú uvedené v tabuľke 2. Ako vidno, rozdiel v tuhých látkach medzi dužinou a šupou bol znížený v desiatich z dvanástich línií.
- 20 Tabuľka 2
| línia | rozdiel tuhých látok (%) |
| kontrola | 4,61 |
| 3 | 4,53 |
| 4 | 4,16 |
| 6 | 3,57 |
| 8 | 3,20 |
| 11 | 3,94 |
| 12 | 4,39 |
| 14 | 4,67 |
| 15 | 3,56 |
| 17 | 2,61 |
| 18 | 3,79 |
| 19 | 5,19 |
| 22 | 3,92 |
| V nasledujúcom roku bolo päť z týchto línií | |
| viacerých lokalitách. (Línia číslo 8 bola testovaná len | |
| nárast tuhých látok v | týchto piatich líniách, ukazujúci i |
| pri každej línii preukázaný. Výsledky sú v tabuľke 3. | |
| Tabuľka 3 | |
| línia | nárast tuhých látok |
| 1 | 0,256 |
| 4 | 0,856 |
| 8 | 2,61 |
| 15 | 0,211 |
| 22 | 0,162 |
Príklad 3
Expresia gtfA v kukurici predstavuje novú katalytickú aktivitu, ktorá môže uľahčiť príjem sacharózy do endospermy vytvorením strmšieho koncentračného gradientu a uchovaním energie, pretože na premenu sacharózy na hexózu sa bežne vyžaduje ekvivalent jedného mólu ATP. Vektor pMON24502 bol do kukurice zavedený pomocou mikroprojektilového bombardovania použitím dvoch rozdielnych typov embryogénnych tkanív kalusu pre transformáciu. Transformácia prebehla spoločne s buď (1) pMON 19476, ktorý obsahuje selekčnú kazetu zosilneného 35S promótora, Hsp70 intrón, NPII kódujúcu sekvenciu rezistencie voči kanamycínu a nos 3 sekvenciu alebo (2) pMON19336, ktorý obsahuje dve selekčné kazety reziszencie voči glyfosatu, každá využíva promótor ryžového aktinu a intrón Hsp70, ale jedna využíva gén kódujúci glyfosatoxidázu a jedna využíva gén CP4 rezistencie voči glyfosatu.
(1) Nevyvinuté embryá kukurice (genotyp H99) boli izolované spôsobom opísaným v EP 586 355 A2. Embryogénny kalus sa získal cca dvojtýždňovou kultiváciou nevyvinutých embryí na médiu, ako je opísané v Duncan a kol. (1985), nazvanom médium D. Po dvoch týždňoch bol získaný kalus (typ 1), ktorý bol udržovaný subkultiváciou každé 2 až 3 týždne na čerstvom D médiu. Približne štyri hodiny pred bombardovaním bol aktívne rastúci kalus (uprostred subkultivačného cyklu) daný na médium D s prídavkom manitolu a sorbitolu kvôli vyvolaniu osmotického šoku. Približne asi 16 až 24 hodín po ostreľovaní časticami potiahnutými pMON24502 a pMON19476 sa tkanivo umiestnilo na médium D, ktoré neobsahuje manitol resp. sorbitol. Približne po dvoch dňoch bolo tkanivo premiestnené na médium D obsahujúce paromomycín. Rezistentné tkanivo je premiestňované na čerstvé médium D s paromomycínom v približne trojtýždňových intervaloch. Regenerácia rastliny je dokončená na médiu D so 6-benzylaminopurínom (bez dicamby) pre 3 až 6 dňový „pulz“, pričom nasledovalo umiestnenie na MS médium bez hormónov.
(2) Kalus typu II, odvodený z nevyvinutých embryí „Hi-Π“ genotypu, bol použitý v metóde podľa Denney a kol, 1984. Kalus typu II bol najskôr upravený na médiu N6 1-100-500, obsahujúcom 0,4 M manitolu + sorbitolu (0,2 M každého) a to štyri hodiny pred bombardovaním s pMON24502 a pMON19336 a bol ponechaný na rovnakom médiu 16 až 24 hodín po bombardovaní. Tkanivo bolo potom premiestnené do N6 1-100-500 média bez prídavku manitolu resp. sorbitolu. Výber bol dokončený použitím 1 až 3 mM glyfosatu v N6 1-0-25 médiu (neobsahujúcom žiadne kasaminové kyseliny).
Plodné rastliny kukurice boli získané každým zo spôsobov a ich semená boli testované. Expresia gt/A bola potvrdená Western blotting analýzou s využitím kozej protilátky pôsobiacej proti E. co/i-exprimovanej gtfA. Zo 16 línií, ktoré boli testované na expresiu, 9 preukázalo expresiu gtfA na približne 0,05 až 0,5 % z celkového bunkového proteínu. Rýchlosť biosyntézy škrobu v tkanive kukuričnej endospermy exprimujúcej gtfA (sacharóza-fosforylázu) bola meraná in vitro s použitím testu prijímania cukru, ktorý už bol opísaný (Felker a kol., 1990). Poľné rastliny sa testovali pomocou PCR kvôli identifikovaniu pozitívnych a negatívnych segregantov. Pozitívne a kontrolné klasy z dvoch GtfA transformovaných línií (Knowl a De) boli pozberané o 20 až 22 dní po opelení v dobe lineárneho plnenia zrna. Boli odobraté časti endospermy a sýtili sa 14C sacharózou š koncentráciou 50 a 200 mM. Koncentrácia 200 mM najviac zodpovedá fyziologickým podmienkam, ale z dôvodu nižšej Km GtfA pre sacharózu ako pri endogénnych enzýmoch bola použitá nižšia koncentrácia (50 mM), aby sa zlepšila pravdepodobnosť merania účinku GtfA. Po jednej a dvoch hodinách po pridaní 14C bola zistená rádioaktivita patriaca frakcii škrobu. Výsledky dvoch línií boli zhrnuté v nasledujúcej tabuľke (spomenuté hodnoty sú udané ako priemer počtu pulzov zodpovedajúci frakcii škrobu).
Tabuľka 4A
Pridanie 50 mM sacharózy
| čas odoberania vzoriek (h) | kontrola | Knowl |
| 1 | 9033 | 20895 |
| 2 | 15947 | 26695 |
| kontrola | De | |
| 1 | 10909 | 10860 |
| 2 | 19193 | 24284 |
- 23 Tabuľka 4B
Pridanie 20 mM sacharózy
| čas odoberania vzoriek (h) | kontrola | Knowl |
| 1 | 9880 | 12980 |
| 2 | , 11175 | 21407 |
| kontrola | De | |
| 1 | 7703 | 7471 |
| 2 | 11038 | 13007 |
Z výsledkov je zrejmé, že tkanivá endospermy kukurice exprimujúce GtfA môžu rýchlejšie (dvakrát) produkovať škrob ako kontroly. Rozdiely v rýchlosti produkcie škrobu sú zrejmejšie pri nižších koncentráciách substrátu, čo je prípadne spôsobené kinetickými rozdielmi medzi GtfA a endogénnou sacharóza-syntetázou voči substrátu. Rozdiely boli taktiež zaznamenané pri porovnaní účinkov pri líniách De a Knowl;
podľa Knowl-a sa prejavil pozitívnejší účinok. Expresia GtfA je pri Knowl-ovi veľmi, vysoká, v rozsahu 0,5 % celkového proteínu, kdežto pri De je to 0,05 % celkového proteínu. Rozdiely medzi rýchlosťami biosyntézy škrobu sú pravdepodobne funkciou hladín expresie GtfA.
Príklad 4
Vektor pMON26106 bol zavedený do kalusu canoly a sóje cestou transformácie Agrobacterium (Hinchee a kol.). Po výbere transformovaných buniek s použitím glyfosatu a regeneráciou celých rastlín sa semená z týchto rastlín pozberajú a analyzujú sa. ,
Príklad 5
Vektor pMON24502 bol zavedený do buniek mikroprojektilovým bombardovaním. Boli izolované nevyvinuté pšeničné zárodky, ako je opísané Vasilom a kol. (1993). Embryogénny kalus bol získaný kultiváciou nevyvinutých zárodkov počas 4 až 7 dní na modifikovanom MS médiu, obsahujúcom cca 40 g/1 maltózy a cca 2 mg/1 2,4-D. Kalus bol vystavený ostreľovaniu mikroprojektilmi potiahnutými pMON24502 a plazmidom, obsahujúcim gén rezistencie voči bialofos. Jeden deň po
- 24 bombardovaní boli nevyvinuté embryá prenesené na rastové médium, obsahujúce selektívne činidlo bialafos. Po 7 dňoch rastu na rastovom a selektívnom médiu bol kalus, vytvorený z nevyvinutého zárodku, prenesený do média, umožňujúceho tvorbu výhonkov (modifikované MS médium bez 2,4-D), obsahujúceho bialofos a nechal sa rásť 28 až 40 dní. Na potvrdenie prítomnosti génu gtfk vo výhonkoch sa vykonala PCR skúška. Výhonky, obsahujúce gén gtfA, boli zakorenené a dané do pôdy. Po vyrastení a dorastení do dospelosti semená týchto rastlín mali zvýšené hladiny obsahu škrobu.
Príklad 6
Vektor pMON24502 môže byť zavedený do buniek ryže pomocou mikroprojektilového bombardovania. Po regenerácii a výbere boli transformované rastliny podrobené testu na expresiu génu a rastliny s vysokou mierou expresie sa pestovali do úplnej zrelosti. Semená vyvinutých rastlín mali zvýšené hladiny škrobu.
Všetky publikácie a patenty, spomenuté v tomto opise, sú tu zahrnuté týmto odkazom.
Z vyššie uvedeného bude zrejmé, že týmto vynálezom budú dobre dosiahnuteľné vyššie uvedené výsledky a ciele spoločne s výhodami, ktoré sú zjavné a ktoré sú vynálezu vlastné.
Myslí sa tým, že určité črty a vedľajšie kombinácie sú na úžitok a môžu byť týmto použité bez odkazu na iné znaky a kombinácie. Toto sa považuje za spadajúce do rozsahu nárokov.
Pretože môžu byť uskutočnené mnohé možné riešenia podľa vynálezu bez toho, aby šli nad jeho rozsah, ráta sa s tým, že všetky tu zaznamenané údaje alebo údaje zobrazené na sprievodných obrázkoch majú byť chápané len ako ilustratívne a nie obmedzujúce.
- 25 Bibliografia
Ammirato, P.V. a kol.: Handbook of Planí Celí Culture - Crop Species, Macmillan Publ. Co. (1984)
Benfey, P., Ren, L., Chua, N.H. (1989): EMBO J, 5: 2195-2202
Bevan, M. (1984): Nucleic Acids Res. 12 (22): 8711-8721
Bevan a kol. (1986): Nucleic Acids Res. 14 (11): 4625-4638
Blennow, A., Johansson, G (1991): Phytochemistry 30: 437-444
Datta a kol. (1990): Biotechnology 8: 736-640
Deikman, J, Fisher, R.L. (1988): EMBO J 7: 3315-3320
Denney a kol. (1994): Plánt Celí Tiss. & Organ Cult. 36: 1-7
Duncan a kol. (1985): Planta 165: 322-332
Ebbelaar a kol. (1993): Int. Symp. on Gen. Manip. of Plánt Methabolism and Growth., 29-31 March, Norwich UK, Abstract 9
Felker, F.C., Liu, K.C., Shannon, J.C. (1990): Plánt Physiology 94, 996-1001
Ferretti a kol. (1988): Infection and Immun. 56: 1585-1588
Foumier a kol. (1994): Mol. Plánt - Microbe Inter. 7: 164-172
Fraley a kol. (1983): PNAS USA 80: 4803-4807
Fraley a kol. (1985): Bio/Technology 3: 629-635
Fraley a kol. (1986): Critical Reviews in Plánt Sciences 4: 1-46
Fromm, M. a kol. (1990): Bio/Technology 8: 833-839
Fromm, M. (1990): UCLA Symposium on Molecular Strategies for Crop
Improvement, apríl 16.-22., 1990, Keystone, CO
Hannapel, D.J. (1990): Plánt Phys. 94: 919-925
Hayashimoto, A., Li. Z., Murai, N. (1990): Plánt Physiol. 93: 857-863
Herrera-Estrella, L. a kol. (1983): Náture 303: 209
Hinchee a kol. (1988): Biotechnology 6: 915-922
Horsch, R.B., Klee, H. (1986): PNAS USA 83: 4428-4432
Iglesias a kol. (1993): J. Biol. Chem. 268: 1081-1086
Jefferson a kol. (1990): Plánt Mol. Biol. 14: 995-1006
Kay, R., Chán, A., Daly, M., McPherson, J. (1987): Science 263: 1299-1302
Kitao, S., Nakano, E. (1992): J. Ferment. Bioeng. 73: 174-184
Klee, H.J. akol. (1985): Bio/Technology 3: 637-642
- 26 Klee, H.J., Rogers, S.G. (1989): Plánt gene vectors and genetic transformation: plánt transformation systems based on the use of Agrobacterium tumefaciens. Celí Culture a Somatic Celí, Genetics of Plants 6,1-23
Klein a kol. (1989): Bio/Technology 6: 559-563
Kossmann a kol. (1991): Mol. Gen. Genet. 230: 39-44
Mignery a kol. (1988): Gene 62: 27-44
Mori a kol. (1991): J. Biol. Chem. 266: 18446-18453
Muller a kol. (1990): Mol. Gen. Genet. 224: 136-146
Nakamura, K., Matsuoka, K. (1993): Plánt Physiol. 101: 1-5
Nakano a kol. (1989): J. Biochem. 106: 691-695
Ohtaakol. (1991): Mol. Gen. Genet. 225: 369-378
Oshima a kol. (1990): Nucleic Acid Research 18: 181
Pear a kol. (1989): Plánt Mol. Biol. 13: 639-651
Pedersen a kol. (1982): Celí 29: 1015-1026
Perry, D., Kuramitsu, H.K. (1990): Infect. Immun. 58(10): 3462-3464
Pimentel a kol. (1992): Revista de Microbiologia 23: 199-205
Robeson a kol. (1983): J. Bacteriol. 153: 211-221
Rocha-Sosa a kol. (1989): EMBO J. 8 (1): 23-29
Rogers, S.G., Klee, H.J., Horsch, R.B., Fraley, R.T. (1987): Improved Vectors for Plánt Transformation: Expression Cassette Vectors and new Selectable Markers. V: Methods in Enzymology. Vydali Wu, R. a Grossman, L., 253-277, San Diego: Academic Press
Rogers, S. a kol. (1987): V: 153 Methods in Enzymology. Vydali Weissbach, H., Weissbach, A. 253: Academic Press
Rogers, S., Klee, H. (1987): Pathways to genetic manipulation employing Agrobacterium. Plánt Gene Research, Plánt DNA Infectious Agents, zv. IV. Hohn, T., Schell, J., eds. Springer-Verlag, Vienna, 179-203
Rohde akol. (1990): J. Gene & Breed. 44: 311-315
Russell a kol. (1988): Infect. Immun. 56(10): 2763-2765
Samac a kol. (1990): Plánt Physiol. 93: 907-914
Sambrook a kol.: Molecular cloning: A laboratory manual, 2nd ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., 1989 Schmidhauser, T.J., Helinski, D.R. (1985): J. Bacteriol. 154-165
- 27 Shahar a kol. (1992): Plánt Celí. 4: 135-147
Shimmamoto, K. a kol. (1989); Náture 338: 274-276
Silverstein, R. a kol. (1967): J. Biol. Chem. 242: 1338-1346
Solanoubat, M., Belliard, G. (1987): Gene 60: 47-56
Solanoubat, M., Belliard, G. (1989): Gene 84: 181-185
Sonnewald a kol. (1991): Plánt J. 1: 95-106
Stiekema a kol. (1988): Plánt Mil. Biol. 11: 255-269
Stukerlj a kol. (1990): Nucl. Acids Res. 18: 46050
Takaha a kol. (1993): J. Biol. Chem. 26 8: 1391-1396
Tiemey a kol. (1987): Piata 172: 356-363
Vandamme a kol. (1987): Adv. Appl. Microbiol. 32: 163-201
Vasil, V., Redway, F., Vasil, J. (1990): Bio/Technology 8: 429-434
Vasil a kol. (1992): Bio/Technology 10: 667-674
Vasil a kol. (1993): Bio/Technology 11: 1153-1158
Yoshida a kol (1992): Gene 10: 255-259
Zheng a kol (1993): Plánt J. 4: 3357-3366
- 28 Zoznam sekvencií
1) Všeobecné informácie
i) prihlasovateľ (A) meno : Monsanto Company (B) ulica : 800 North Lindbergh Boulevard (C) mesto : St. Louis (D) štát: Missouri (E) krajina : Spojené štáty americké (F) smerovacie číslo (ZIP): 63167 (G) telefón: (314) 694-3131 (H) telefax: (314)694-5435 ii) názov vynálezu : Expresia sacharóza-fosforylázy v rastlinách iii) počet sekvencií: 5 iv) (A) typ nosiča : disketa (B) počítač : kompatibilný IBM PC (C) operačný systém : PC-DOS/MS-DOS (D) programové vybavenie : Patentln Release# 1.0, verzia # 1.30 (EPO) vi) dátum priority prihlášky (A) číslo prihlášky : US 08/386,860 (B) dátum podania : 10. februára 1995 , I
2) informácie o SEQ ID č.l:
(i) charakteristika sekvencie (A) dĺžka : 29 bázových párov (B) typ : nukleová kyselina (C) špirála: jednoduchá (D) topológia: lineárna
- 29 (ii) typ molekuly : iná nukleová kyselina (A) opis : /dese = „syntetická DNA“ (xi) opis sekvencie : SEQ ID č. 1
CCCGGATCCA TGGCAATTAC AAATAAAAC 29
2) informácie o SEQ ID č.2:
(i) charakteristika sekvencie (A) dĺžka : 39 bázových párov (B) typ : nukleová kyselina (C) špirála: jednoduchá (D) topológia: lineárna (ii) typ molekuly : iná nukleová kyselina (A) opis : /dese = „syntetická DNA“ (xi) opis sekvencie : SEQ ID č.2
GGGGAGCTCA CTCGAAGCTT ATTGTTTGAT CATTTTCTG
2) informácie o SEQ ID č.3:
(i) charakteristika sekvencie (A) dĺžka : 1478 bázových párov (B) typ : nukleová kyselina (C) špirála: dvojitá (D) topológia : lineárna (ii) typ molekuly : genomová kyselina (xi) opis sekvencie : SEQ ID č.3
| agccttgtgt | TAGGGGGTAT | TCAAACCTTC | TTTGACTGAA | AATTTTATTA | TTTATACATG | 60 |
| TTTAAAATTA | CTTTTTAATC | TATATATAAT | AGATATCAAT | CCTTCATTTA | ATTGTÁTTTT | 120 |
| TGTATTAATT | CTATAAATAT | TAAATTACTT | TATTAAAAAT | TCTAATTCTG | TCACTCGTCA | 180 |
| TTTCATAATA | TTCTTGACGG | TGATGGTAGT | GATAATTACG | TTGATTGGAG | CCACATGGGC | 240 |
| CGCTACTTTT | TAAAAGGATG | AACCTTGGAA | TGTAGTGAAT | GTTGAGTCTC | ATAGCTCACT | 300 |
| CACGGACTCA | ACAGCAAAAT | CTGTCCTCTT | TTTCCCTTCT | CCAATTCACA | TACTGTCACT | 360 |
| TGGACAAATA | ATATTTGAAA | ATTTTGGCCT | AAAGTTAGGT | TTGGAGCCGT | ATGGTAATTT | 420 |
| GATACACAAA | TTATTATATA | ATTGATATAT | CAGGTATATA | TATCAAGTTG | TCGCTTCTTC | 480 |
| GTTCATTGTT | TCTCTCACTA | AAATTTTCAA | TTCACTTTTT | AAAAAATCGA | TAAATTTTTA | 540 |
| ATATAACTTT | ACATAACATA | TTCAAAATTA | CAAAAATAAA | GGATATTTTT | ATATGTTTAT | 600 |
| TTTTAATGTA | AGATTAAATA | TTTAGAATTC | TTTTTAAGAA | CGGTACAAGC | AAATTAAAAG | 660 |
| AGÄGAAGGTA | TATTAGTGGG | CCTATGTATC | TTTGATATCA | TATGCCTCTC | AAAGAGCATC | 720 |
| CTGÄTGAGTC | TATATATCTT | TGTTGATAGT | GATTTAACCA | ŤTTATGTATG | TACGTAGTAC | 780 |
| TAAGACATGT | TAAATAAGAT | CCTAGAGAAA | GATTTTTGGA | AAAGTGAAAA | CAGCAATAAA | 840 |
| GAAAAGTCAT | TTAAACACTT | TCCAACAAAC | ATTTGGTAAT | CGATTTTAAT | TACCCACTTA | 900 |
| AACAAAACTA | TTTGTACGTA | AAATGTTTÄA | GTAGAAAAGÄ | GATTTTTTTA | AÄAAAAAAAA | 960 |
| GAAGGCAAGA | GGTCATATAT | CTGACCCTTC | CTTAAATCCC | CGCGTATAAC | ACTTTCTTTT | 1020 |
| TTTTGTGTGT | GTATGTTCAG | GAACATTTGT | attttctatt | TGAAATTTCT | CATTAAGTCA | 1080 |
| AATTCGAAAT | CTTTTAAATA | ATGTAGAGAA | ATCTCATTAT | ATTTAACAAT | CCCACTTGAT | 1140 |
| GAATTCCTAA | ACATTTTCTA | TAAAATAACA | CTAAATCTTT | AATTATACAT | ATTACATACC | .1200 |
| TAACTCAAGC | AATCTTGTCG | GAAAAATCAT | TAGAAAAGAA | TTGGAAATAG | GGAAATAAAT | 1260 |
| ÄGACATATTT | TGGTTAGTAT | CTTTGTCTAT | AAGAATGGGT | GTGTTAAAGA | GCTAGTGCCA | ; 1320 |
| TAGTGTACCA | TTCTATTGGT | AGCATTTGGC | AAGAGTTATT | CCCTCTCTCC | ATACCAATGG | 1380 |
| AGAAGTTTAA | TCTTGCTAGA | GTCTTATTGT | TGCTTCTTCA | ACTTGGAACT | TTGTTCATTG | 1440 |
1478
CCCATGCATG TCCTTATTGT CCATATCCTC CTTCCACC
2) informácie o SEQ ID č.4:
(i) charakteristika sekvencie (A) dĺžka : 450 bázových párov (B) typ : nukleová kyselina (C) špirála: dvojitá (D) topológia : lineárna (ii) typ molekuly : genomová kyselina (xi) opis sekvencie : SEQ ID č.4
| AAATAAATAT | TTCAAAGTAA | ATTGTTACTC | CCTCTATCCC | ATACTCTTTT | CTTTTTTTAA | 60 |
| TCGATTTCTT | ACTCTAATTG | AACTATTGGA | GACAACTTAA | ATGTAAATTT | TTTTTTTCTT | 120 |
| TATCAAAATG | ATTGGCTGCT | ATATAAATAT | CTAATGGTTA | TTATACATAA | ATTTTAATAT | 180 |
| TTTTTATAAA | AAAATATCGA | GCTAAATCAT | ATCGTTTAAA | TATAGAGÄTG | TGTTATTTAT | 240 |
| TTAAAAATTA | ATTTTAAAAA | AGTGAATATT | GTAAATTAGG | ATGAAAGAGT | ATTATATTGG | 300 |
| TTGTCGCAGT | ATAAATACCC | TGCATGCCÁT | TACATTTGTT | CAATCATCTT | TGCAACGATT | 360 |
| TGTGTGCTTT | AGCTTCCTTA | CATAACATGG | CTTCTATAAC | TAAAGCCTCA | TTACTTATCC | 420 |
| TTTTCCTCTC | CTTGAATCTC | CTTTTCTTCG | 450 |
2) 2) informácie o SEQ ID č.5:
(i) charakteristika sekvencie (A) dĺžka : 1446 bázových párov (B) typ : nukleová kyselina (C) špirála: dvojitá (D) topológia: lineárna (ii) typ molekuly : genomová kyselina (xi) opis sekvencie : SEQ ID č.5
| ATGGCAATTA | CAAATAAAAC | AATGTTGATT | ACTTACGCAG | ACAGTTTGGG | TAAAAATTTG | 60 |
| AAAGAATTGA | ATGAAAATAT | TGAGAATTAT | TTTGCAGATG | CTGTTGGCGG | TGTCCATTTG | 120 |
| CTGCCATTCT | TTCCTTCCAC | AGGTGATCGT | GCCTTTGCAC | CGATTGATTA | CCATGAAGTT | 180 |
| GACTCTGCTT | TTGGCGATTG | GGATGATGTC | AAACGTTTGG | GTGAAAAATA | TTACCTCATG | 240 |
| TTTGATTTCA | TGATTAATCA | TATTTCGCGT | CAGTCTAAAT | ATTATAAAGA | TTACCAAGAA | 300 |
| AAGCATGAAG | CAAGTGCTTA | TAAAGATCTA | TTTTTAAATT | GGGATAAATT | TTGGCCTAAA | 360 |
| AATCGCCCGA | CACAAGAAGA | TGTGGACCTG | ATTTATAAGC | GTAAGGATCG | AGCACCTAAG | 420 |
| CAGGAAATCC | AATTTGCAGA | TGGCAGTGTT | GAACATCTCT | GGAACACTTT | TGGGGAGGAA | 480 |
| CAGATTGATC | TTGACGTGAC | TÄAAGAAGTG | ACTATGGATT | TTATTCGCTC | TACCATTGAA | 540 |
| AATTTAGCAG | CCAACGGCTG | TGATCTCATT | CGTTTGGATG | CCTTTGCTTA | TGCTGTTAAA | 600 |
| AAGCTAGATA | CGAATGATTT | CTTTGTTGAA | CCTGAAATCT | GGACTCTGCT | AGATAAAGTT | 660 |
| CGTGATATAG | CTGCTGTATC | GGGTGCGGAA | ATCTTGCCGG | AAATTCATGA | ACACTATACT | 720 |
| ATTCAATTTA | AAATTGCAGA | CCATGATTAC | TATGTTTATG | ATTTTGCCCT | GCCTATGGTG | 780 |
| ACGCTCTACA | GCCTATATTC | GGGCAAGGTT | GACCGTCTTG | CCAAATGGGT | GAAAATGAGT | 840 |
| CCGATGAAAC | AGTTCACCAC | CCTTGATACA | CATGACGGTA | TTGGTGTGGT | TGATGTTAAG | 900 |
| GATATCCTGA | CTGACGAAGA | AÄTTACCTAT | ACTTCTAATG | AGCTTTATAA | GGTCGGTGCC | 960 |
| AATGTCAATC | GTAAGTATTC | AACTGCCGAA | TATAATAACT | TGGATATCTA | TCAAATTAAT | 1020 |
| TCAACTTACT | ATTCAGCACT | TGGTGATGAT | GATCAAAAAT | ACTTTTTGGC | CCGGTTGATA | 1080 |
| CAAGCTTTTG | CTCCAGGTAT | TCCACAGGTT | TATTACGTTG | GCTTTTTAGC | TGGCAAGAAT | 1140 |
| GATCTTGAAT | TACTGGAAAG | CACTAAAGAA | GGCCGCATTA | TCAACCGTCA | TTATTATAGT | 1200 |
| AGTGAAGAAA | TTGCTAAGGA | AGTGAAGCGG | CCAGTTGTCA | AGGCACTTTT | AAATCTCTTT | 1260 |
| ACTTACCGCA | TTCAGTCAGC | AGCTTTTGAT | TTGGATGGCC | GTATTGAAGT | GGAAACGCCA | 1320 |
| AATGAAGAGA | ACATTGTCAT | AGAACGTCAA | AATAAAGATG | GCAGTCATAT | CGCAACAGCA | 1380 |
| GAGATTAATC | TCCAAGATAT | GACATACAGA | GTAACAGAAA | ATGATCAAAC | AATAAGCTTC | 1440 |
1446
Claims (28)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Spôsob prípravy transgénnej rastliny, zahrnujúci kroky:a) inzerciu rekombinantu do genómu rastlinnej bunky, dvoj reľazcovej molekuly DNA, skladajúcej sa z:(i) promótora, funkčného v bunkách cieľového rastlinného tkaniva (ii) štruktúrnej sekvencie DNA, ktorá zaisťuje produkciu RNA sekvencie, kódujúcej enzým sacharóza-fosforylázu, (iii) 3 netranslátovanú DNA sekvenciu, ktorá v rastlinných bunkách spôsobí ukončenie transkripcie a adíciu polyadenylátových nukleotidov k 3 koncu sekvencie RNA;b) získanie transformovaných rastlinných buniek; ac) regeneráciu geneticky transformovanej rastliny z uvedených transformovaných rastlinných buniek, genómu, v ktorom je obsiahnutý uvedený rekombinant, dvojreťazcová molekula DNA) kroku a).í ’ I * *
- 2. Spôsob podľa nároku 1, kde uvedená sekvencia kódujúca enzým sacharózafosforylázu je získaná zo Streptococcus mutans.
- 3. Spôsob podľa nároku 2, kde uvedená DNA sekvencia, kódujúca sacharózafosforylázu, má sekvenciu uvedenú v SEQ ID č. 5.
- 4. Spôsob podľa nároku 1, kde uvedená geneticky transformovaná rastlina má vlastnosť, vybranú zo skupiny zahrnujúcej modifikovaný obsah uhľovodíkov; zvýšený obsah polysacharidov, napríklad škrobu; zvýšený výťažok; zlepšenú rovnomernosť rozdelenia tuhých látok; a zníženú citlivosť tvorby škvŕn v dôsledku pomliaždenia.
- 5. Spôsob podľa nároku 4, kde uvedenou vlastnosťou je modifikovaný obsah uhľovodíkov.- 34
- 6. Spôsob podľa nároku 5, kde uvedený modifikovaný obsah uhľovodíkov zodpovedá zvýšenému obsahu tuhých látok.
- 7. Spôsob podľa nároku 6, kde uvedená geneticky transformovaná rastlina je vybraná zo skupiny zahrnujúcej zemiaky a paradajky.
- 8. Spôsob podľa nároku 4, kde uvedenou vlastnosťou je zlepšená rovnomernosť rozdelenia tuhých látok.
- 9. Spôsob podľa nároku 8, kde uvedená geneticky transformovaná rastlina je vybraná zo skupiny zahrnujúcej zemiaky a paradajky.
- 10. Spôsob podľa nároku 4, kde uvedenou vlastnosťou je znížená citlivosť k tvorbe škvŕn v dôsledku pomliaždenia.
- 11. Spôsob podľa nároku 10, kde uvedená geneticky transformovaná rastlina je. 1 vybraná zo skupiny zahrnujúcej zemiaky, bánány, jablká, pšenicu, vínnu révu a marhule.
- 12. Spôsob podľa nároku 4, kde uvedenou vlastnosťou je zvýšený obsah polysacharidov, napríklad škrobu.
- 13. Spôsob podľa nároku 12, kde uvedená geneticky transformovaná rastlina je vybraná zo skupiny zahrnujúcej kukuricu, pšenicu, ryžu, paradajky, zemiaky, sladké zemiaky, bUrské oriešky, jačmeň, bavlnu, jahody, maliny a kasavu.
- 14. Spôsob podľa nároku 4, kde uvedenou vlastnosťou je zvýšený výťažok.
- 15. Spôsob podľa nároku 12, kde uvedená geneticky transformovaná rastlina je vybraná zo skupiny zahrnujúcej kukuricu, pšenicu, ryžu, paradajky, zemiaky, sladké zemiaky, burské oriešky, jačmeň, cukrovú repu, cukrovú trstinu, jablká, hrušky, pomaranče, marhule, vínnu révu, bavlnu, jahody, maliny a kasavu.- 35
- 16. Spôsob podľa nároku 1, kde uvedená rastlinná bunka je vybraná zo skupiny zahrnujúcej rastlinné bunky zemiaka, rastlinné bunky kukurice, rastlinné bunky ryže, rastlinné bunky pšenice, rastlinné bunky paradajky, rastlinné bunky jačmeňa, rastlinné bunky cukrovej repy, rastlinné bunky sladkých zemiakov, rastlinné bunky burských orieškov, rastlinné bunky cukrovej trstiny, rastlinné bunky vínnej révy, rastlinné bunky hrušky, rastlinné bunky jablka, rastlinné bunky pomaranča, rastlinné bunky kasavy, rastlinné bunky banánu, rastlinné bunky skorocelu, rastlinné bunky bavlny, rastlinné bunky jahody, rastlinné bunky maliny, rastlinné bunky marhule.*..
- 17. Spôsob podľa nároku 16, kde uvedenou rastlinnou bunkou je rastlinná bunka a zemiaka.
- 18. Spôsob podľa nároku 16, kde uvedenou rastlinnou bunkou je rastlinná bunka kukurice.
- 19. Spôsob podľa nároku 16, kde, uvedená rastlinná, bunka je vybraná zo skupiny ŕ zahrnujúcej rastlinnú bunku pšenice, rastlinnú bunku jačmeňa, rastlinnú bunku ryže, rastlinnú bunku paradajky.
- 20. Rekombinant, dvojreťazcová molekula DNA, obsahujúca v sekvencii:a) promótor, funkčný v bunkách cieľového rastlinného tkaniva (ii) štruktúrnu sekvenciu DNA, ktorá zaisťuje produkciu RNA sekvencie, kódujúcej enzým sacharóza-fosforylázu, (iii) 3 netranslátovanú oblasť, ktorá v rastlinných bunkách spôsobí ukončenie transkripcie a adíciu polyadenylátových nukleotidov na 3 koniec sekvencie RNA.
- 21. Molekula DNA podľa nároku 20, kde uvedená sekvencia DNA, kódujúca enzým sacharóza-fosforylázu, je získaná zo Streptococcus mutans.
- 22. Molekula DNA podľa nároku 21, kde uvedená sekvencia DNA, kódujúca enzým sacharóza-fosforylázu, má sekvenciu zobrazenú v SEQ ID č.5.- 36
- 23. Molekula DNA podľa nároku 20, kde uvedený promótor je vybraný zo skupiny, zahrnujúcej promótor zeín, promótor patatin, promótor ryžového glutelínu, 7s promótor sóje, promótor podjednotky ADP-glukóza-pyrofosforylázy, TFM7 promótor a TFM9 promótor.
- 24. Transformovaná rastlinná bunka, obsahujúca rekombinant, dvojreťazcovú molekulu DNA, obsahujúcu v sekvencii:a) promótor, funkčný v bunkách cieľového rastlinného tkanivab) štruktúrnu sekvenciu DNA, ktorá zaisťuje produkciu RNA sekvencie, kódujúcej enzým sacharóza-fosforylázu,c) 3 netranslátovanú oblasť, ktorá v rastlinných bunkách spôsobí ukončenie transkripcie a adíciu polyadenylátových nukleotidov na 3 koniec sekvencie RNA.
- 25. Rastlinná bunka podľa nároku 24, kde uvedená sekvencia, kódujúca enzým sacharóza-fosforylázu, je zo Streptococcus mutans.
- 26. Rastlinná bunka podľa nároku 25, kde uvedená sekvencia, kódujúca enzým sacharóza-fosforylázu, má sekvenciu zobrazenú v SEQ ID č.5.
- 27. Rastlinná bunka podľa nároku 24, kde uvedený promótor je zo skupiny, zahrnujúcej promótor zeínu, promótor patatinu, promótor ryžového glutelínu, 7s promótor sóje, promótor podjednotky ADP-glukóza-pyrofosforylázy, TFM7 promótor a TFM9 promótor.
- 28. Rastlinná bunka podľa nároku 24, kde uvedená rastlinná bunka je vybraná zo skupiny zahrnujúcej rastlinné bunky zemiaka, rastlinné bunky kukurice, rastlinné bunky ryže, rastlinné bunky pšenice, rastlinné bunky paradajky, rastlinné bunky jačmeňa, rastlinné bunky cukrovej repy, rastlinné bunky sladkých zemiakov, rastlinné bunky burských orieškov, rastlinné bunky cukrovej trstiny, rastlinné bunky vínnej révy, rastlinné bunky hrušky, rastlinné bunky jablka, rastlinné bunky pomaranča, rastlinné bunky kasavy, rastlinné bunky banánu, rastlinné bunky- 37 skorocelu, rastlinné bunky bavlny, rastlinné bunky jahody, rastlinné bunky maliny, rastlinné bunky marhule.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US38686095A | 1995-02-10 | 1995-02-10 | |
| PCT/US1996/001959 WO1996024679A1 (en) | 1995-02-10 | 1996-02-08 | Expression of sucrose phosphorylase in plants |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SK108997A3 true SK108997A3 (en) | 1998-05-06 |
Family
ID=23527368
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SK1089-97A SK108997A3 (en) | 1995-02-10 | 1996-02-08 | Expression of sucrose phosphorylase in plants |
Country Status (19)
| Country | Link |
|---|---|
| US (6) | US5716837A (sk) |
| EP (1) | EP0808371B1 (sk) |
| JP (1) | JPH10513364A (sk) |
| KR (1) | KR19980702105A (sk) |
| AR (2) | AR000895A1 (sk) |
| AT (1) | ATE342368T1 (sk) |
| AU (1) | AU695131B2 (sk) |
| BG (1) | BG101883A (sk) |
| BR (1) | BR9607586A (sk) |
| CA (1) | CA2212560C (sk) |
| CZ (1) | CZ254397A3 (sk) |
| DE (1) | DE69636620T2 (sk) |
| EA (1) | EA000634B1 (sk) |
| GE (1) | GEP20012472B (sk) |
| HU (1) | HUP9802064A3 (sk) |
| NZ (1) | NZ303029A (sk) |
| PL (1) | PL321738A1 (sk) |
| SK (1) | SK108997A3 (sk) |
| WO (1) | WO1996024679A1 (sk) |
Families Citing this family (116)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5716837A (en) * | 1995-02-10 | 1998-02-10 | Monsanto Company | Expression of sucrose phosphorylase in plants |
| DE19619917A1 (de) * | 1996-05-17 | 1997-11-20 | Max Planck Gesellschaft | Kartoffelpflanzen mit einer verringerten Aktivität der cytosolischen Stärkephosphorylase und einem veränderten Keimungsverhalten |
| US6420629B1 (en) | 1996-09-09 | 2002-07-16 | B.C. Research Inc. | Process of increasing plant growth and yield and modifying cellulose production in plants |
| GB9624685D0 (en) * | 1996-11-27 | 1997-01-15 | Isis Innovation | Transgenic plants |
| EA200000029A1 (ru) * | 1997-06-17 | 2000-08-28 | Монсанто Компани | Экспрессия фруктозо-1,6-бисфосфатальдолазы в трансгенных растениях |
| US6716474B2 (en) | 1997-06-17 | 2004-04-06 | Monsanto Technology Llc | Expression of fructose 1,6 bisphosphate aldolase in transgenic plants |
| US6441277B1 (en) | 1997-06-17 | 2002-08-27 | Monsanto Technology Llc | Expression of fructose 1,6 bisphosphate aldolase in transgenic plants |
| US6133035A (en) * | 1997-07-16 | 2000-10-17 | Dna Plant Technology Corporation | Method of genetically transforming banana plants |
| US6891088B1 (en) * | 1998-05-13 | 2005-05-10 | Bayer Bioscience Gmbh | Transgenic plants with a modified activity of a plastidial ADP/ATP translocator |
| US6635806B1 (en) * | 1998-05-14 | 2003-10-21 | Dekalb Genetics Corporation | Methods and compositions for expression of transgenes in plants |
| IL125425A (en) | 1998-07-20 | 2008-12-29 | Israel State | ADPGPPase CONTROL OF STARCH SYNTHESIS IN TOMATOES |
| DE19857654A1 (de) | 1998-12-14 | 2000-06-15 | Max Planck Gesellschaft | Beeinflussung des Blühverhaltens von Pflanzen durch Expression Saccharose-spaltender Proteine |
| WO2000078984A2 (en) * | 1999-06-21 | 2000-12-28 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Enhanced floral sink strength and increased stability of seed set in plants |
| US7531718B2 (en) * | 1999-08-26 | 2009-05-12 | Monsanto Technology, L.L.C. | Nucleic acid sequences and methods of use for the production of plants with modified polyunsaturated fatty acids |
| US6472588B1 (en) | 1999-09-10 | 2002-10-29 | Texas Tech University | Transgenic cotton plants with altered fiber characteristics transformed with a sucrose phosphate synthase nucleic acid |
| US8697950B2 (en) * | 1999-11-10 | 2014-04-15 | University Of Connecticut | Vacuolar pyrophosphatases and uses in plants |
| US20020178464A1 (en) * | 1999-11-10 | 2002-11-28 | Whitehead Institute For Biomedical Research | Proton transporters and uses in plants |
| US7534933B2 (en) * | 2000-08-18 | 2009-05-19 | University Of Connecticut | Transgenic plants overexpressing a plant vacuolar H + -ATPase |
| CA2438388A1 (en) * | 2001-02-22 | 2002-09-06 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Manipulation of sucrose synthase genes to improve stalk and grain quality |
| MXPA03009627A (es) | 2001-04-24 | 2004-01-29 | Cornell Res Foundation Inc | MOLECULA SINTETICA DE ACIDO NUCLEICO PARA IMPARTIR CARACTERiSTICAS MULTIPLES. |
| BR0212339A (pt) * | 2001-09-05 | 2006-05-23 | Monsanto Technology Llc | promotor 7s alfa especìfico para semente na expressão de genes em plantas |
| WO2005024017A1 (en) * | 2002-03-15 | 2005-03-17 | Monsanto Technology Llc | Nucleic acid molecules associated with oil in plants |
| US20040003432A1 (en) * | 2002-05-06 | 2004-01-01 | Pharmacia Corporation | Production of hexosamines and uses thereof |
| ES2420929T3 (es) | 2002-07-18 | 2013-08-27 | Monsanto Technology Llc | Procedimientos de utilización de polinucleótidos artificiales y sus composiciones para reducir el silenciamiento de transgenes |
| WO2004024926A2 (de) * | 2002-09-10 | 2004-03-25 | Sungene Gmbh & Co. Kgaa | Transgene expressionskassetten zur expression von nukleinsäuren in kohlenhydrat-speichernden sink-geweben von pflanzen |
| US20040133944A1 (en) * | 2003-01-08 | 2004-07-08 | Delta And Pine Land Company | Seed oil suppression to enhance yield of commercially important macromolecules |
| EP1613730A4 (en) | 2003-03-28 | 2007-12-05 | Monsanto Technology Llc | NEW PLANT PROMOTORS FOR USE IN THE EARLY SEED DEVELOPMENT PHASE |
| WO2004101748A2 (en) * | 2003-05-07 | 2004-11-25 | Monsanto Technology Llc | A method of increasing yield in a plant and genes useful therefor |
| ATE504645T1 (de) * | 2003-06-23 | 2011-04-15 | Univ North Carolina State | Für fructooligosaccharid-nutzende verbindungen codierende nukleinsäuren aus lactobacillus acidophilus und verwendungen davon |
| PL1658364T3 (pl) | 2003-08-25 | 2017-10-31 | Monsanto Technology Llc | Elementy regulatorowe tubuliny do stosowania w roślinach |
| EP2272967B1 (en) | 2003-10-02 | 2015-12-23 | Monsanto Technology LLC | Stacking crop improvement traits in transgenic plants |
| EP2333079B1 (en) | 2004-01-20 | 2016-03-30 | Monsanto Technology LLC | Chimeric promoters for use in plants |
| AR048685A1 (es) | 2004-04-09 | 2006-05-17 | Monsanto Technology Llc | Metodos para el control de infestaciones de insectos en plantas. |
| EP1788861B1 (en) | 2004-08-24 | 2017-04-12 | Monsanto Technology, LLC | Adenylate translocator protein gene non-coding regulatory elements for use in plants |
| US8370323B2 (en) * | 2004-08-31 | 2013-02-05 | Intel Corporation | Providing information services related to multimodal inputs |
| US20070005490A1 (en) * | 2004-08-31 | 2007-01-04 | Gopalakrishnan Kumar C | Methods and System for Distributed E-commerce |
| US7873911B2 (en) * | 2004-08-31 | 2011-01-18 | Gopalakrishnan Kumar C | Methods for providing information services related to visual imagery |
| WO2006031780A2 (en) | 2004-09-13 | 2006-03-23 | Monsanto Technology Llc | Promoter molecules for use in plants |
| EP2003206A1 (en) | 2004-09-14 | 2008-12-17 | Monsanto Technology, LLC | Promoter molecules for use in plants |
| US7679763B2 (en) * | 2004-11-29 | 2010-03-16 | Hewlett-Packard Development Company, L.P. | System and method for managing capabilities in a network |
| AU2006217847B2 (en) | 2005-02-26 | 2011-04-07 | Basf Plant Science Gmbh | Expression cassettes for seed-preferential expression in plants |
| CN101198701B (zh) * | 2005-04-19 | 2013-04-24 | 巴斯福植物科学有限公司 | 单子叶植物中的淀粉胚乳特异性和/或萌芽胚特异性表达 |
| EP1874937A2 (en) | 2005-04-20 | 2008-01-09 | BASF Plant Science GmbH | Expression cassettes for seed-preferential expression in plants |
| BRPI0614070A2 (pt) | 2005-05-10 | 2018-07-31 | Basf Plant Science Gmbh | cassetes de expressão, sequência de nucleotídeos isolada, seqüência sintética reguladora de transcrição, métodos para proporcionar uma seqüência sintética de nucleotídeos reguladora de transcrição, e um cassete de expressão, vetor, organismo não-humano ou célula hospedeira transgênico(a), e, célula de planta ou planta transgênica |
| US20060272045A1 (en) * | 2005-05-17 | 2006-11-30 | Hinkle Christine C | Brittle-2 regulatory elements for use in plants |
| US8993846B2 (en) | 2005-09-06 | 2015-03-31 | Monsanto Technology Llc | Vectors and methods for improved plant transformation efficiency |
| PT2431473T (pt) | 2005-09-16 | 2017-02-15 | Monsanto Technology Llc | Métodos para o controlo genético de infestações por insetos em plantas e suas composições |
| WO2007098042A2 (en) | 2006-02-17 | 2007-08-30 | Monsanto Technology Llc | Chimeric regulatory sequences comprising introns from dicotyledons for plant gene expression |
| CA2652377C (en) | 2006-05-16 | 2014-04-22 | Monsanto Technology Llc | Use of non-agrobacterium bacterial species for plant transformation |
| CN101631868B (zh) | 2007-02-16 | 2016-02-10 | 巴斯福植物科学有限公司 | 用于在单子叶植物中调节胚特异性表达的核酸序列 |
| US7838729B2 (en) | 2007-02-26 | 2010-11-23 | Monsanto Technology Llc | Chloroplast transit peptides for efficient targeting of DMO and uses thereof |
| US8044260B2 (en) | 2007-03-09 | 2011-10-25 | Monsanto Technology Llc | Method of meristem excision and transformation |
| MY173854A (en) * | 2007-03-13 | 2020-02-25 | Malaysian Palm Oil Board | Expression regulatory elements |
| WO2008131101A1 (en) | 2007-04-20 | 2008-10-30 | Novartis Ag | Dispenser with pivotable extension tube |
| CA2720737C (en) | 2008-04-07 | 2017-02-21 | Monsanto Technology Llc | Plant regulatory elements and uses thereof |
| JP5158639B2 (ja) | 2008-04-11 | 2013-03-06 | 独立行政法人農業生物資源研究所 | 植物の内胚乳に特異的に発現する遺伝子および該遺伝子のプロモーター、並びにそれらの利用 |
| AR072105A1 (es) | 2008-06-11 | 2010-08-04 | Syngenta Participations Ag | Composiciones y metodos para la produccion de carbohidratos fermenta-bles en plantas |
| US20100257639A1 (en) * | 2009-02-26 | 2010-10-07 | Robert Edward Bruccoleri | Methods and compositions for altering sugar beet or root crop storage tissue |
| US20120277117A1 (en) | 2009-02-27 | 2012-11-01 | Adel Zayed | Hydroponic apparatus and methods of use |
| AU2010240916B2 (en) | 2009-04-22 | 2016-05-12 | Basf Plant Science Company Gmbh | Whole seed specific promoter |
| CA2766858A1 (en) | 2009-07-10 | 2011-01-13 | Basf Plant Science Company Gmbh | Expression cassettes for endosperm-specific expression in plants |
| WO2011050271A1 (en) | 2009-10-23 | 2011-04-28 | Monsanto Technology Llc | Methods and compositions for expression of transgenes in plants |
| AU2010325720A1 (en) | 2009-12-03 | 2012-07-19 | Basf Plant Science Company Gmbh | Expression cassettes for embryo-specific expression in plants |
| ES2882425T3 (es) | 2010-01-14 | 2021-12-01 | Monsanto Technology Llc | Elementos reguladores de plantas y usos de los mismos |
| AU2011278315B2 (en) | 2010-07-12 | 2015-05-28 | Inbiose N.V. | Metabolically engineered organisms for the production of added value bio-products |
| EP2611925B1 (en) | 2010-08-30 | 2017-11-29 | Dow AgroSciences LLC | Sugarcane bacilliform viral (scbv) enhancer and its use in plant functional genomics |
| EP2651207B1 (en) | 2010-12-17 | 2017-11-08 | Monsanto Technology LLC | Methods for improving competency of plant cells |
| HUE035893T2 (en) | 2011-03-25 | 2018-05-28 | Monsanto Technology Llc | Plant regulatory elements and uses thereof |
| EA031636B1 (ru) | 2011-05-13 | 2019-01-31 | Монсанто Текнолоджи Ллс | Регуляторные элементы растений и их применение |
| EP2565265A1 (en) | 2011-09-02 | 2013-03-06 | Philip Morris Products S.A. | Isopropylmalate synthase from Nicotiana tabacum and methods and uses thereof |
| AR090204A1 (es) | 2012-02-29 | 2014-10-29 | Dow Agrosciences Llc | Potenciador viral baciliforme de caña de azucar (scbv) y su uso en la genomica funcional de plantas |
| US9663793B2 (en) | 2012-04-20 | 2017-05-30 | Monsanto Technology, Llc | Plant regulatory elements and uses thereof |
| UA118661C2 (uk) | 2012-12-19 | 2019-02-25 | Монсанто Текнолоджи Ллс | Рекомбінантна молекула днк, яка має промоторну активність |
| US9218165B2 (en) * | 2013-02-21 | 2015-12-22 | International Business Machines Corporation | System and method for an object instance acquirer |
| MX370800B (es) | 2013-03-14 | 2020-01-07 | Monsanto Technology Llc | Elementos reguladores de plantas y sus usos. |
| KR102495525B1 (ko) | 2013-03-14 | 2023-02-06 | 몬산토 테크놀로지 엘엘씨 | 식물 조절 성분 및 이의 용도 |
| US10131929B2 (en) | 2014-12-23 | 2018-11-20 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Enzymatically produced cellulose |
| EP3274462A4 (en) | 2015-03-26 | 2018-12-26 | The Texas A&M University System | Conversion of lignin into bioplastics and lipid fuels |
| CA2992488A1 (en) | 2015-08-28 | 2017-03-09 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Ochrobactrum-mediated transformation of plants |
| US11913166B2 (en) | 2015-09-21 | 2024-02-27 | Modern Meadow, Inc. | Fiber reinforced tissue composites |
| US11732269B2 (en) | 2015-10-02 | 2023-08-22 | Monsanto Technology Llc | Recombinant maize B chromosome sequence and uses thereof |
| KR20170096096A (ko) | 2016-02-15 | 2017-08-23 | 브렌던 패트릭 퍼셀 | 콜라겐 피브릴을 함유하는 생제작된 물질을 제조하는 방법 |
| PE20190125A1 (es) | 2016-03-11 | 2019-01-17 | Monsanto Technology Llc | Elementos reguladores vegetales y sus usos |
| WO2017205287A1 (en) | 2016-05-24 | 2017-11-30 | Monsanto Technology Llc | Plant regulatory elements and uses thereof |
| WO2018005589A1 (en) | 2016-06-28 | 2018-01-04 | Cellectis | Altering expression of gene products in plants through targeted insertion of nucleic acid sequences |
| WO2018005491A1 (en) | 2016-06-28 | 2018-01-04 | Monsanto Technology Llc | Methods and compositions for use in genome modification in plants |
| CN118813634A (zh) | 2017-01-19 | 2024-10-22 | 孟山都技术公司 | 植物调控元件及其用途 |
| CA3008850A1 (en) | 2017-06-29 | 2018-12-29 | Modern Meadow, Inc. | Yeast strains and methods for producing collagen |
| AU2018253595A1 (en) | 2017-11-13 | 2019-05-30 | Modern Meadow, Inc. | Biofabricated leather articles having zonal properties |
| WO2019139616A1 (en) | 2018-01-12 | 2019-07-18 | The Texas A&M University System | Increasing plant bioproduct yield |
| JP7431172B2 (ja) | 2018-04-23 | 2024-02-14 | ダニスコ・ユーエス・インク | ホスホリラーゼ酵素を用いたβ－１，３グリコシド結合を含むグルカンの合成 |
| WO2020023278A1 (en) | 2018-07-23 | 2020-01-30 | Danisco Us Inc | Alpha-glucose-1 -phosphate synthesis from sucrose and glucan synthesis using glucan phosphorylases |
| CN112639106B (zh) | 2019-01-10 | 2024-09-13 | 孟山都技术公司 | 植物调控元件和其用途 |
| WO2020150443A1 (en) | 2019-01-17 | 2020-07-23 | Modern Meadow, Inc. | Layered collagen materials and methods of making the same |
| CN114008203A (zh) | 2019-05-29 | 2022-02-01 | 孟山都技术公司 | 使用基因组编辑产生显性等位基因的方法和组合物 |
| CN114072165A (zh) | 2019-07-02 | 2022-02-18 | 科德克希思公司 | 工程化蔗糖磷酸化酶变体酶 |
| CN110343654B (zh) * | 2019-08-15 | 2021-03-30 | 江南大学 | 一种产蔗糖磷酸化酶的基因工程菌 |
| CN110656077B (zh) * | 2019-11-07 | 2021-10-08 | 江南大学 | 一种生产蔗糖磷酸化酶的方法及其应用 |
| EP4314289A1 (en) | 2021-03-26 | 2024-02-07 | Flagship Pioneering Innovations VII, LLC | Production of circular polyribonucleotides in a prokaryotic system |
| TW202300650A (zh) | 2021-03-26 | 2023-01-01 | 美商旗艦先鋒創新有限責任（Ｖｉｉ）公司 | 真核系統中環狀多核糖核苷酸的產生 |
| AR125217A1 (es) | 2021-03-26 | 2023-06-28 | Flagship Pioneering Innovations Vii Llc | Producción de polirribonucleótidos circulares en un sistema procariota |
| CN113832182B (zh) * | 2021-09-13 | 2023-06-27 | 深圳大学 | 一种水稻Osspear2突变体植株的制备方法 |
| UY39997A (es) | 2021-11-01 | 2023-05-15 | Flagship Pioneering Innovations Vii Llc | Polinucleótidos para modificar organismos |
| KR20240135651A (ko) | 2022-01-20 | 2024-09-11 | 플래그쉽 파이어니어링 이노베이션스 Vii, 엘엘씨 | 유기체를 변형하기 위한 폴리뉴클레오티드 |
| EP4584381A1 (en) | 2022-09-09 | 2025-07-16 | Friedrich-Alexander-Universität Erlangen-Nürnberg | Plant regulatory elements and uses thereof |
| AR132592A1 (es) | 2023-05-03 | 2025-07-16 | Flagship Pioneering Innovations Vii Llc | Arn satélite de ghabrivirales artificiales |
| WO2024229395A1 (en) | 2023-05-03 | 2024-11-07 | Flagship Pioneering Innovations Vii, Llc | Partitiviral satellite rna amplification systems for plants |
| AR132585A1 (es) | 2023-05-03 | 2025-07-16 | Flagship Pioneering Innovations Vii Llc | Sistemas de amplificación de arn satélite endornavirales para plantas |
| AR132591A1 (es) | 2023-05-03 | 2025-07-16 | Flagship Pioneering Innovations Vii Llc | Arn satélite de secoviridae artificiales |
| AR132588A1 (es) | 2023-05-03 | 2025-07-16 | Flagship Pioneering Innovations Vii Llc | Arn satélite de tymovirales artificiales |
| WO2024229347A1 (en) | 2023-05-03 | 2024-11-07 | Flagship Pioneering Innovations Vii, Llc | Artificial tombusviridae satellite rnas |
| WO2024229362A1 (en) | 2023-05-03 | 2024-11-07 | Flagship Pioneering Innovations Vii, Llc | ARTIFICIAL MARTELLIVIRALES SATELLITE RNAs |
| AR132586A1 (es) | 2023-05-03 | 2025-07-16 | Flagship Pioneering Innovations Vii Llc | Arn satélite de amalgavirus artificiales |
| AR132589A1 (es) | 2023-05-03 | 2025-07-16 | Flagship Pioneering Innovations Vii Llc | Arn satélite de solemoviridae artificiales |
| US20250075226A1 (en) | 2023-08-29 | 2025-03-06 | University Of Freiburg | Proteins for regulation of symbiotic infection and associated regulatory elements |
| WO2026006779A1 (en) | 2024-06-27 | 2026-01-02 | The Regents Of The University Of California | Transgenic plants expressing fern rapid non-photochemical quenching (npq) proteins |
Family Cites Families (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4036996A (en) * | 1976-04-26 | 1977-07-19 | The Quaker Oats Company | Process for the production of an improved simulated casein from proteinaceous mixtures |
| US4888170A (en) * | 1981-10-22 | 1989-12-19 | Research Corporation | Vaccines obtained from antigenic gene products of recombinant genes |
| US4770710A (en) * | 1987-07-02 | 1988-09-13 | American Maize-Products Company | Novel starch and products produced therefrom |
| WO1990002484A1 (en) * | 1988-09-06 | 1990-03-22 | Washington University | Oral immunization by transgenic plants |
| US5034323A (en) * | 1989-03-30 | 1991-07-23 | Dna Plant Technology Corporation | Genetic engineering of novel plant phenotypes |
| DE4004800C2 (de) * | 1990-02-13 | 2000-12-21 | Aventis Cropscience Gmbh | Im Habitus und Ertrag veränderte transgene Pflanzen |
| US5349123A (en) * | 1990-12-21 | 1994-09-20 | Calgene, Inc. | Glycogen biosynthetic enzymes in plants |
| US5498830A (en) * | 1990-06-18 | 1996-03-12 | Monsanto Company | Decreased oil content in plant seeds |
| ATE212670T1 (de) * | 1990-06-18 | 2002-02-15 | Monsanto Technology Llc | Erhöhter stärkegehalt in pflanzen |
| IL100908A0 (en) * | 1991-02-22 | 1992-11-15 | Salk Inst Biotech Ind | Invertase genes and their use |
| IL103241A0 (en) * | 1991-10-07 | 1993-02-21 | Univ California | Tomato acid invertase gene |
| US5716837A (en) * | 1995-02-10 | 1998-02-10 | Monsanto Company | Expression of sucrose phosphorylase in plants |
| US5713837A (en) * | 1995-12-28 | 1998-02-03 | Royce Medical Company | Unitary orthopaedic brace |
-
1996
- 1996-02-06 US US08/596,024 patent/US5716837A/en not_active Expired - Fee Related
- 1996-02-08 WO PCT/US1996/001959 patent/WO1996024679A1/en not_active Ceased
- 1996-02-08 JP JP8524483A patent/JPH10513364A/ja active Pending
- 1996-02-08 BR BR9607586A patent/BR9607586A/pt not_active IP Right Cessation
- 1996-02-08 AT AT96905492T patent/ATE342368T1/de not_active IP Right Cessation
- 1996-02-08 HU HU9802064A patent/HUP9802064A3/hu unknown
- 1996-02-08 NZ NZ303029A patent/NZ303029A/xx unknown
- 1996-02-08 CA CA002212560A patent/CA2212560C/en not_active Expired - Lifetime
- 1996-02-08 SK SK1089-97A patent/SK108997A3/sk unknown
- 1996-02-08 EA EA199700168A patent/EA000634B1/ru not_active IP Right Cessation
- 1996-02-08 CZ CZ972543A patent/CZ254397A3/cs unknown
- 1996-02-08 EP EP96905492A patent/EP0808371B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1996-02-08 DE DE69636620T patent/DE69636620T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1996-02-08 GE GEAP19963870A patent/GEP20012472B/en unknown
- 1996-02-08 PL PL96321738A patent/PL321738A1/xx unknown
- 1996-02-08 AR ARP960101325A patent/AR000895A1/es not_active Application Discontinuation
- 1996-02-08 AU AU49235/96A patent/AU695131B2/en not_active Expired
-
1997
- 1997-08-08 US US08/907,740 patent/US6235971B1/en not_active Ceased
- 1997-08-09 KR KR19970705500A patent/KR19980702105A/ko not_active Ceased
- 1997-09-08 BG BG101883A patent/BG101883A/xx unknown
-
1998
- 1998-02-09 US US09/020,818 patent/US6222098B1/en not_active Expired - Lifetime
-
2001
- 2001-03-01 US US09/797,467 patent/US6476295B2/en not_active Expired - Lifetime
-
2002
- 2002-11-05 US US10/287,933 patent/US20030110535A1/en not_active Abandoned
-
2003
- 2003-05-22 US US10/443,787 patent/USRE39114E1/en not_active Expired - Lifetime
-
2004
- 2004-07-22 AR ARP040102598A patent/AR046003A2/es active IP Right Grant
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| ATE342368T1 (de) | 2006-11-15 |
| JPH10513364A (ja) | 1998-12-22 |
| GEP20012472B (en) | 2001-06-25 |
| CA2212560C (en) | 2008-12-02 |
| AU4923596A (en) | 1996-08-27 |
| DE69636620D1 (de) | 2006-11-23 |
| CZ254397A3 (cs) | 1998-01-14 |
| EP0808371A1 (en) | 1997-11-26 |
| AR000895A1 (es) | 1997-08-06 |
| AU695131B2 (en) | 1998-08-06 |
| US5716837A (en) | 1998-02-10 |
| MX9706128A (es) | 1997-11-29 |
| WO1996024679A1 (en) | 1996-08-15 |
| NZ303029A (en) | 1999-01-28 |
| US20030110535A1 (en) | 2003-06-12 |
| DE69636620T2 (de) | 2007-08-30 |
| AR046003A2 (es) | 2005-11-23 |
| PL321738A1 (en) | 1997-12-22 |
| US6222098B1 (en) | 2001-04-24 |
| US6476295B2 (en) | 2002-11-05 |
| US6235971B1 (en) | 2001-05-22 |
| HUP9802064A2 (hu) | 1998-12-28 |
| EA000634B1 (ru) | 1999-12-29 |
| US20010016953A1 (en) | 2001-08-23 |
| EP0808371B1 (en) | 2006-10-11 |
| USRE39114E1 (en) | 2006-05-30 |
| BG101883A (en) | 1998-07-31 |
| EA199700168A1 (ru) | 1997-12-30 |
| HUP9802064A3 (en) | 2000-11-28 |
| BR9607586A (pt) | 1998-07-07 |
| KR19980702105A (sk) | 1998-07-15 |
| CA2212560A1 (en) | 1996-08-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| SK108997A3 (en) | Expression of sucrose phosphorylase in plants | |
| RU2148081C1 (ru) | Способ получения генетически трансформированных растений с повышенным содержанием крахмала и рекомбинантная двухцепочечная днк-молекула | |
| AU724942B2 (en) | Transgenic potatoes having reduced levels of alpha glucan L- or H-type tuber phosphorylase activity with reduced cold-sweetening | |
| US5773693A (en) | Pea ADP-glucose pyrophosphorylase subunit genes and their uses | |
| US20050009165A1 (en) | Raffinose synthase gene, method for producing raffinose, and transgenic plant | |
| CZ299374B6 (cs) | Molekuly nukleové kyseliny kódující sacharózofruktosyltransferázu závislou na sacharóze (SST), vektor, hostitelská bunka, zpusob prípravy SST, SST, transgenní rostlinná bunka, rostlina, rostlinný rozmnožovací materiál a zpusob prípravy 1-kestózy, nys | |
| CA2176109A1 (en) | Transgenic fructan accumulating crops and methods for their production | |
| CZ20001680A3 (cs) | Molekuly nukleové kyseliny kódující enzymy, které mají fruktosyltransferázovou aktivitu, a způsoby přípravy inulinu s dlouhým řetězcem | |
| AU672017B2 (en) | Dna sequences and plasmids for the preparation of plants with changed sucrose concentration | |
| JP3431177B2 (ja) | 習性及び収量において変更されたトランスジェニック植物を作製するプラスミド | |
| JPH10509033A (ja) | トマト果実プロモーター | |
| CA2287914C (en) | Raffinose synthase gene, method for producing raffinose, and transgenic plant | |
| JP2002209462A (ja) | トランスジェニック植物種子におけるタンパク質産生 | |
| US6653532B1 (en) | Methods for influencing the flowering behavior of plants by enhancing the saccharose-cleaving activity in the apical meristem | |
| JP4410318B2 (ja) | ラフィノース合成酵素遺伝子、ラフィノースの製造法及び形質転換植物 | |
| CN1180380A (zh) | 植物中蔗糖磷酸化酶的表达 | |
| US7250277B2 (en) | Soybean raffinose synthase and a method for producing raffinose | |
| JP3861370B2 (ja) | ラフィノース合成酵素遺伝子、ラフィノースの製造法及び形質転換植物 | |
| WO2000053746A2 (en) | Method of delaying or inhibiting sprouting in plants | |
| JP4238909B2 (ja) | ラフィノース合成酵素遺伝子、ラフィノースの製造法及び形質転換植物 | |
| MXPA97006128A (en) | Expression of la sacarosa fosforil | |
| AU777455B2 (en) | Nucleic acid molecules from artichoke (cynara scolymus) encoding enzymes having fructosyl polymerase activity |