RU2002126270A

RU2002126270A - Нитрилаза из rhodococcus rhodochrous ncimb 11216

Info

Publication number: RU2002126270A
Application number: RU2002126270/13A
Authority: RU
Inventors: Марион РЕСС-ЛЕШКЕ (DE); Марион РЕСС-ЛЕШКЕ; Бернхард ХАУЭР (DE); Бернхард ХАУЭР; Ральф МАТТЕС (DE); Ральф МАТТЕС; Дирк ЭНГЕЛЬС (DE); Дирк ЭНГЕЛЬС
Original assignee: БАСФ Акциенгезельшафт (DE); Басф Акциенгезельшафт
Priority date: 2000-03-03
Filing date: 2001-02-27
Publication date: 2004-03-10
Also published as: EP1268757A1; KR20020077520A; CN1411506A; MXPA02008123A; WO2001064857A1; AU3380201A; NO20024169D0; BR0108883A; US20030157672A1; ZA200207902B; CA2400446A1; RU2283864C2; IL151096A0; NO20024169L; PL359496A1; HUP0300155A2; JP2003530832A; DE10010149A1; AU2001233802B2

Claims

1. Выделенная последовательностью нуклеиновых кислот, кодирующая полипептид с активностью нитрилазы, выбранная из группы, включающей а) последовательность нуклеиновых кислот с представленной в SEQ ID NO:1 последовательностью, б) последовательности нуклеиновых кислот, которые как результат дегенерированного генетического кода, отводятся от представленной в SEQ ID NO:1 последовательности нуклеиновых кислот, в) производные представленной в SEQ ID NO:1 последовательности нуклеиновых кислот, кодирующие полипептиды с представленными в SEQ ID NO:2 аминокислотными последовательностями и имеющие по меньшей мере 97% гомологию на аминокислотном уровне, без существенного снижения ферментативной активности полипептидов.

2. Аминокислотная последовательность, кодируемая последовательностью нуклеиновых кислот по п.1.

3. Аминокислотная последовательность по п.1, кодируемая представленной в SEQ ID NO:1 последовательностью.

4. Конструкт нуклеиновых кислот, содержащий последовательность нуклеиновых кислот по п.1, причем последовательность нуклеиновых кислот связана с одним или несколькими регуляторными сигналами.

5. Вектор, содержащий последовательность нуклеиновых кислот по п.1 или конструкт нуклеиновых кислот по п.4.

6. Рекомбинантный микроорганизм, содержащий последовательность нуклеиновых кислот по п.1, конструкт нуклеиновых кислот по п.4 или вектор по п.5.

7. Рекомбинантный микроорганизм по п.6, представляющий собой бактерии вида Escherichia, Rhodococcus, Nocardia, Streptomyces или Mycobacterium.

8. Способ получения хиральных или ахиральных карбоновых кислот, отличающийся тем, что нитрилы в присутствии аминокислотной последовательности по п.2 или 3 или растущего, покоящегося или раскрытого микроорганизма по п.6 или 7 преобразуют в хиральные или ахиральные карбоновые кислоты.

9. Способ получения хиральных или ахиральных карбоновых кислот по п.8, отличающийся тем, что нитрилы формулы I

в присутствии аминокислотной последовательности по п.2 или 3 или растущего, покоящегося или раскрытого микроорганизма по п.6 или 7 преобразуют в карбоновые кислоты общей формулы II

причем заместители в формулах I и II имеют следующие значения:

n = 0 или 1;

m = 0, 1, 2 или 3, причем при m>2 между двумя смежными атомами углерода не обязательно имеется двойная связь;

р = 0 или 1;

А, В, D и Е означают независимо друг от друга СН, N или CR³;

Н означает О, S, NR⁴, СН или CR³, если n=0, или СН, N или CR³, если n=1, причем два смежных остатка А, В, D, Е или Н вместе могут образовывать другое замещенное или незамещенное, ароматическое, насыщенное или частично насыщенное кольцо, содержащее от 5 до 8 атомов в кольце, которое может содержать один или несколько гетероатомов, таких, как О, N или S и, причем не больше трех остатков А, В, D, Е или Н представляют собой гетероатом,

R¹ означает водород, замещенный или незамещенный, разветвленный или неразветвленный С₁-С₁алкил или C₁-С₁₀алкокси-, замещенный или незамещенный арил- или гетарил-, гидрокси-, галоген-, C₁-С₁₀алкиламино или амино-;

R² означает водород, замещенный или незамещенный, разветвленный или неразветвленный C₁-С₁₀алкил или C₁-C₁₀алкокси-, замещенный или незамещенный арил- или гетарил-, гидрокси-, C₁-С₁₀алкиламино- или амино-;

R³ означает водород, замещенный или незамещенный, разветвленный или неразветвленный C₁-C₁₀алкил-, или C₁-C₁₀алкокси замещенный или незамещенный арил-, гетарил-, гидрокси-, галоген-, C₁-С₁₀алкиламино- или амино-;

R⁴ означает водород, замещенный или незамещенный, разветвленный или неразветвленный C₁-С₁₀алкил-.

10. Способ по п.8 или 9, отличающийся тем, что его проводят в водном реакционном растворе при значении рН между 4 и 11.

11. Способ по пп.8-10, отличающийся тем, что в нем реакции взаимодействия подвергают от 0,01 до 10 мас.% нитрила.

12. Способ по пп.8-11, отличающийся тем, что его проводят при температуре от 0 до 80°С.

13. Способ по пп.8-12, отличающийся тем, что хиральные или ахиральные карбоновые кислоты получают экстракцией или кристаллизацией или экстракцией и кристаллизацией из реакционного раствора с выходом от 60 до 100%.