RS66418B9

RS66418B9 - Agonisti glp-1 receptora i njihove upotrebe

Info

Publication number: RS66418B9
Application number: RS20250036A
Authority: RS
Inventors: Gary Erik Aspnes; Scott W Bagley; John M Curto; David James Edmonds; Mark E Flanagan; Kentaro Futatsugi; David A Griffith; Kim Huard; Yajing Lian; Chris Limberakis; Allyn T Londregan; Alan M Mathiowetz; David W Piotrowski; Roger B Ruggeri
Original assignee: Pfizer
Priority date: 2018-06-13
Filing date: 2019-06-11
Publication date: 2025-05-30
Also published as: EP4219487B9; MD4219487T2; SI3806955T1; MD3806955T3; ECSP20078651A; CN112533674B; IL279300A; ES3012643T3; GEP20237453B; EP3806955B9; IL279300B2; ES2949954T9; MY199157A; IL279300B1; CL2020003222A1; FI3806955T3; CN119462622A; AU2019285491A1; KR20210019529A; UY38261A

Description

Opis

OBLAST PRONALASKA

[0001] Ovde su obezbeđene 6-karboksilne kiseline benzimidazola i 4-aza-, 5-aza- i 7-azabenzimidazol kao GLP-1R agonisti, postupci za pravljenje navedenih jedinjenja i postupci koji sadrže primenu navedenih jedinjenja na sisara kome je to potrebno.

STANJE TEHNIKE

[0002] Dijabetes je glavni problem javnog zdravlja zbog sve veće prevalencije i povezanih zdravstvenih rizika. Bolest se karakteriše visokim nivoom glukoze u krvi koji je rezultat poremećaja u proizvodnji insulina, delovanja insulina ili oba. Prepoznata su dva glavna oblika dijabetesa, tip 1 i tip 2. Dijabetes tipa 1 (T1D) se razvija kada imuni sistem tela uništi beta ćelije pankreasa, jedine ćelije u telu koje proizvode hormon insulin koji reguliše nivo glukoze u krvi. Da bi preživeli, ljudi sa dijabetesom tipa 1 moraju imati insulin koji se daje injekcijom ili pumpom. Dijabetes melitus tipa 2 (koji se generalno naziva T2DM) obično počinje ili sa insulinskom rezistencijom ili kada postoji nedovoljna proizvodnja insulina da bi se održao prihvatljiv nivo glukoze.

[0003] Trenutno su dostupni različiti farmakološki pristupi za lečenje hiperglikemije, a zatim i T2DM (Hampp, C. et al. Use of Antidiabetic Drugs in the U.S., 2003-2012, Diabetes Care 2014, 37, 1367-1374). Oni se mogu grupisati u šest glavnih klasa, od kojih svaka deluje kroz različit primarni mehanizam: (A) Sekretogog insulina, uključujući sulfonil-uree (npr. glipizid, glimepirid, gliburid), meglitinidi (npr. nateglidin, repaglinid), dipeptidil peptidaza IV ( inhibitori DPP-IV) (npr. sitagliptin, vildagliptin, alogliptin, dutogliptin, linagliptin, saksogliptin) i agonisti receptora peptida-1 sličnih glukagonu (GLP-1R) (npr. , koji pojačavaju lučenje insulina delujući na beta ćelije pankreasa). Sulfonil-uree i meglitinidi imaju ograničenu efikasnost i podnošljivost, uzrokuju povećanje telesne težine i često izazivaju hipoglikemiju. Inhibitori DPP-IV imaju ograničenu efikasnost. Tržišni agonisti GLP-1R su peptidi koji se primenjuju potkožnom injekcijom. Liraglutid je dodatno odobren za lečenje gojaznosti. (B) Smatra se da biguanidi (npr. metformin) deluju prvenstveno smanjenjem proizvodnje glukoze u jetri. Biguanidi često izazivaju gastrointestinalne smetnje i laktacidozu, što dodatno ograničava njihovu upotrebu. (C) Inhibitori alfaglukozidaze (npr. akarboza) smanjuju apsorpciju glukoze u crevima. Ovi agensi često izazivaju gastrointestinalne smetnje. (D) Tiazolidindioni (npr. pioglitazon, rosiglitazon) deluju na specifični receptor (receptor-gama aktiviran proliferatorom peroksizoma) u jetri, mišićima i masnom tkivu. Oni regulišu metabolizam lipida, a zatim pojačavaju odgovor ovih tkiva na delovanje insulina. Česta upotreba ovih lekova može dovesti do povećanja telesne težine i može izazvati edem i anemiju. (E) Insulin se koristi u težim slučajevima, bilo sam ili u kombinaciji sa gore navedenim agensima, a česta upotreba takođe može dovesti do povećanja telesne težine i nosi rizik od hipoglikemije. (F) inhibitori natrijum-glukoza povezanog kotransportera 2 (SGLT2) (npr. dapagliflozin, empagliflozin, kanagliflozin, ertugliflozin) inhibiraju reapsorpciju glukoze u bubrezima i time snižavaju nivoe glukoze u krvi. Ova nova klasa lekova može biti povezana sa ketoacidozom i infekcijama urinarnog trakta.

[0004] Međutim, sa izuzetkom GLP-1R agonista i inhibitora SGLT2, lekovi imaju ograničenu efikasnost i ne rešavaju najvažnije probleme, opadajuću funkciju β-ćelija i povezanu gojaznost.

[0005] Gojaznost je hronična bolest koja je veoma rasprostranjena u savremenom društvu i povezana je sa brojnim medicinskim problemima uključujući hipertenziju, hiperholesterolemiju i koronarnu bolest. Dalje je u visokoj korelaciji sa T2DM i insulinskom rezistencijom, od kojih je poslednja generalno praćena hiperinsulinemijom ili hiperglikemijom, ili oba. Pored toga, T2DM je povezan sa dva do četiri puta povećanim rizikom od bolesti koronarnih arterija. Trenutno, jedini tretman koji eliminiše gojaznost sa visokom efikasnošću je barijatrijska hirurgija, ali ovaj tretman je skup i rizičan. Farmakološka intervencija je generalno manje efikasna i povezana je sa neželjenim efektima. Stoga postoji očigledna potreba za efikasnijom farmakološkom intervencijom sa manje neželjenih efekata i pogodnom primenom.

[0006] Iako je T2DM najčešće povezan sa hiperglikemijom i insulinskom rezistencijom, druge bolesti povezane sa T2DM uključuju insulinsku rezistenciju jetre, poremećenu toleranciju glukoze, dijabetičku neuropatiju, dijabetičku nefropatiju, dijabetičku retinopatiju, gojaznost, dislipidemiju, hipertenziju, hiperinsulinemiju i masnu nealkoholnu bolest (NAD)..

[0007] NAFLD je hepatična manifestacija metaboličkog sindroma i predstavlja spektar hepatičkih stanja koja obuhvata steatozu, nealkoholni steatohepatitis (NASH), fibrozu, cirozu i na kraju hepatocelularni karcinom. NAFLD i NASH se smatraju primarnim oboljenjima masne jetre jer čine najveći udeo osoba sa povišenim lipidima u jetri. Ozbiljnost NAFLD/NASH zasniva se na prisustvu lipida, inflamatornog ćelijskog infiltrata, baloniranja hepatocita i stepena fibroze. Iako ne napreduju svi pojedinci sa steatozom u NASH, značajan deo to čini.

[0008] GLP-1 je inkretinski hormon dugačak 30 aminokiselina koji luče L-ćelije u crevima kao odgovor na ingestiju hrane. Pokazalo se da GLP-1 stimuliše lučenje insulina na fiziološki i od glukoze zavisan način, smanjuje lučenje glukagona, inhibira pražnjenje želuca, smanjuje apetit i stimuliše proliferaciju beta ćelija. U nekliničkim eksperimentima GLP-1 promoviše kontinuiranu kompetenciju beta ćelija stimulisanjem transkripcije gena važnih za lučenje insulina zavisno od glukoze i promocijom neogeneze beta ćelija (Meier, et al. Biodrugs.

2003; 17 (2): 93-102).

[0009] Kod zdrave osobe, GLP-1 igra važnu ulogu u regulisanju nivoa glukoze u krvi nakon obroka stimulisanjem lučenja insulina zavisnog od glukoze u pankreasu, što rezultuje povećanom apsorpcijom glukoze na periferiji. GLP-1 takođe potiskuje lučenje glukagona, što dovodi do smanjenog oslobađanja glukoze u jetri. Pored toga, GLP-1 odlaže pražnjenje želuca i usporava pokretljivost tankog creva odlažući apsorpciju hrane. Kod ljudi sa T2DM, normalan post-prandijalni porast GLP-1 je odsutan ili smanjen (Vilsboll T, et al. Diabetes.

2001. 50; 609-613).

[0010] Holst (Physiol. Rev. 2007, 87, 1409) i Meier (Nat. Rev. Endocrinol. 2012, 8, 728) opisuju da agonisti GLP-1 receptora, kao što su GLP-1, liraglutid i eksendin-4, imaju tri glavne farmakološke aktivnosti za poboljšanje kontrole glikemije kod pacijenata sa T2DM smanjenjem glukoze pri gladovanju i postprandijalne glukoze (FPG i PPG): (i) povećanje lučenje insulina zavisno od glukoze (poboljšana prva i druga faza), (ii) aktivnost supresije glukagona u hiperglikemijskim uslovima, (iii) kašnjenje brzine pražnjenja želuca što dovodi do usporene apsorpcije glukoze dobijene iz obroka.

[0011] Ostaje potreba za prevencijom i/ili lečenjem kardiometaboličkih i pridruženih bolesti koja se lako primenjuju.

KRATAK OPIS SLIKA

[0012]

SLIKA 1 predstavlja uočenu rendgensku difrakciju praha za anhidrovani (anhidratni) kristalni oblik (Forma 1) tris soli jedinjenja Primera 7.

SLIKA 2 predstavlja uočenu rendgensku difrakciju praha za anhidrovani (anhidratni) kristalni oblik (Forma A) tris soli jedinjenja Primera 10.

DETALJAN OPIS PRONALASKA

[0013] Ovaj pronalazak se odnosi na jedinjenja Formule I

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, pri čemu

R je F, CI ili -CN;

p je 0 ili 1;

Prsten A je fenil ili 6-člani heteroaril;

m je 0, 1, 2 ili 3;

svaki R<1>je nezavisno izabran između halogena, -CN, -C1-3alkil, i -OC1-3alkil, pri čemu je alkil C1-3alkil i OC1-3alkil je supstituisan sa 0 do 3 F atoma;

R<2>je H ili -C1-3alkil, pri čemu je alkil supstituisan sa 0 do 1 OH;

svaki R<3>je nezavisno F, -OH, -CN, -C1-3alkil, -OC1-3alkil, i -C3-4cikloalkil, ili 2 R<3>mogu zajedno ciklizovati da bi formirali -C3-4spirocikloalkil, pri čemu je alkil C1-3alkil i OC1-3alkil, cikloalkil ili spirocikloalkil mogu biti supstituisani kako valenca dozvoljava sa 0 do 3 F atoma i sa 0 do 1 -OH;

k je 0, 1 ili 2;

X-L je N-CH2, CHCH2, ili ciklopropil;

Y je CH ili N;

R<4>je -C1-3alkil, -C0-3alkilen-C3-6cikloalkil, -C0-3alkilen-R<5>, ili -C1-3alkilen-R<6>,

pri čemu navedeni alkil može biti supstituisan kako valenca dozvoljava sa 0 do 3 supstituenta nezavisno odabrana od 0 do 3 F atoma i 0 do 1 supstituenta izabranog od -C0-1alkilen-CN, -C0-1alkilen-OR<O>, -SO2-N(R<N>)2, -C(O)-N(R<N>)2, -N(C=O)(R<N>), i -N(R<N>)2, i

pri čemu navedeni alkilen i cikloalkil mogu biti nezavisno supstituisani kako valenca dozvoljava sa 0 do 2 supstituenta nezavisno odabrana od 0 do 2 F atoma i 0 do 1 supstituenta odabranog od -C0-1alkilen-CN, -C0-1alkilen-OR<O>, i -N(R<N>)2;

R<5>je 4- do 6-člani heterocikloalkil, pri čemu navedeni heterocikloalkil može biti supstituisan sa 0 do 2 supstituenta kako valenca dozvoljava nezavisno izabran između:

0 do 1 okso (=O),

0 do 1 -CN,

0 do 2 F atoma, i

0 do 2 supstituenta nezavisno izabrana od -C1-3alkil i -OC1-3alkil, pri čemu je alkil C1-3alkil i OC1-3alkil može biti supstituisan sa 0 do 3 supstituenta kako valenca dozvoljava nezavisno izabran između:

0 do 3 F atoma,

0 do 1 -CN, i

0 do 1 -OR<O>;

R<6>je 5- do 6-člani heteroaril, pri čemu pomenuti heteroaril može biti supstituisan sa 0 do 2 supstituenta kako valenca dozvoljava nezavisno izabran između:

0 do 2 halogena,

0 do 1 supstituenta izabranog od -OR<O>i -N(R<N>)2, i

0 do 2 -C1-3alkil, pri čemu alkil može biti supstituisan sa 0 do 3 supstituenta kako valenca dozvoljava nezavisno izabran između:

0 do 3 F atoma, i

0 do 1 -OR<O>;

svaki R<O>je nezavisno H, ili -C1-3alkil, pri čemu C1-3alkil može biti supstituisan sa 0 do 3 F atoma;

svaki R<N>je nezavisno H, ili -C1-3alkil;

Z<1>, Z<2>, i Z<3>su svaki -CR<Z>, ili

jedan od Z<1>, Z<2>, i Z<3>je N, a druga dva su -CR<Z>; i

svaki R<Z>je nezavisno H, F, Cl ili -CH3.

[0014] Drugi primer izvođenja se odnosi na jedinjenja Formule II

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, pri čemu

R je F;

p je 0 ili 1;

Prsten A je fenil ili piridinil;

m je 0, 1 ili 2;

R<2>je H ili CH3;

X-L je N-CH2, ili ciklopropil;

Y je CH ili N;

Z<3>je -CR<Z>ili N; i

R<Z>je H, F, Cl ili -CH3.

[0015] Sledeći primer izvođenja se odnosi na jedinjenja Formule III

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, pri čemu

Prsten A je fenil ili piridinil;

m je 0, 1 ili 2;

svaki R<1>je nezavisno izabran između F, CI i -CN;

R<2>je H ili CH3; i

Y je CH ili N.

[0016] Sledeći primer izvođenja se odnosi na jedinjenja Formule IV

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, pri čemu

m je 0, 1 ili 2;

svaki R<1>je nezavisno izabran između F, CI i -CN;

R<2>je H ili CH3; i

Y je CH ili N.

[0017] Sledeći primer izvođenja se odnosi na jedinjenja Formule V

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu, pri čemu

m je 0 ili 1;

R<1>je F, CI ili -CN;

R<2>je H ili CH3; i

Y je CH ili N.

[0018] Sledeći primer izvođenja se odnosi na jedinjenja Formule IV ili Formule V, gde fenil ili piridinil prstena A ima jedan R<1>para supstituisan u odnosu na ugljenik pomenutog fenila ili piridinila vezan za dioksolan da bi se obezbedilo:

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu

svaki R<1>je nezavisno izabran između F, CI i -CN;

R<2>je H ili CH3; i

Y je CH ili N.

[0019] Sledeći primer izvođenja se odnosi na jedinjenja drugih primera izvođenja ovde, na primer, jedinjenja Formule I ili II, ili njihove farmaceutski prihvatljive soli, gde je X-L N-CH2; i Y je CH ili N. Iz ovde opisanih primera izvođenja, u takvom slučaju, X je N i L je CH2.

[0020] Sledeći primer izvođenja se odnosi na jedinjenja drugih primera izvođenja ovde, na primer, jedinjenja Formule I ili II, ili njihove farmaceutski prihvatljive soli, gde je X-L CHCH2; i Y je N. Iz ovde opisanih primera izvođenja, u takvom slučaju, X je CH i L je CH2.

[0021] Sledeći primer izvođenja se odnosi na jedinjenja drugih primera izvođenja ovde, na primer, jedinjenja Formule I ili II, ili njihove farmaceutski prihvatljive soli, gde je X-L CHCH2; i Y je CH. Iz ovde opisanih primera izvođenja, u takvom slučaju, X je CH i L je CH2.

[0022] Sledeći primer izvođenja se odnosi na jedinjenja drugih primera izvođenja ovde, npr., jedinjenja Formule I, ili II, ili njihove farmaceutski prihvatljive soli, gde je X-L ciklopropil; a Y je N.

[0023] Uprimerima izvođenja gde je X-L ciklopropil, jedinjenja Formule I ili II bi obezbedila:

[0024] Sledeći primer izvođenja se odnosi na jedinjenja Formule I, II, III, IV ili V, gde R<4>je -CH2CH2OCH3, C1-3alkilen-R<5>, ili C1-3alkilen-R<6>ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

[0025] Sledeći primer izvođenja se odnosi na jedinjenja Formule II, III, IV ili V, gde R<4>je kao što je definisano za jedinjenja Formule I, ili njihovu farmaceutski prihvatljivu so.

[0026] Sledeći primer izvođenja se odnosi na jedinjenja Formule I, II, III, IV ili V, gde R<4>je -C1-3alkil, pri čemu navedeni alkil može biti supstituisan kako valenca dozvoljava sa 0 do 1 supstituentom odabranim od -C0-1alkilen-OR<O>, i -N(R<N>)2ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

[0027] Sledeći primer izvođenja se odnosi na jedinjenja Formule I, II, III, IV ili V, gde R<4>je -(CH2)2OCH3, ili -(CH2)2N(CH3)2ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

[0028] Sledeći primer izvođenja se odnosi na jedinjenja Formule I, II, III, IV ili V, gde R4je -CH2-R<5>, pri čemu je R<5>je 4- do 5-člani heterocikloalkil, pri čemu navedeni heterocikloalkil može biti supstituisan sa 0 do 2 supstituenta kako valenca dozvoljava nezavisno izabran između:

0 do 2 F atoma, i

0 do 1 supstituenta izabranog od -OCH3i -CH2OCH3;

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

[0029] Sledeći primer izvođenja se odnosi na jedinjenja Formule I, II, III, IV ili V, gde je heterocikloalkil

pri čemu heterocikloalkil može biti supstituisan sa 0 do 2 supstituenta kako valenca dozvoljava, npr., supstitucija vodonika, nezavisno odabranog od:

0 do 1 okso (O=),

0 do 1 -CN,

0 do 2 F atoma, i

0 do 2 supstituenta nezavisno izabrana od -C1-3alkil i -OC1-3alkil, pri čemu je alkil C1-3alkil i OC1-3alkil može biti nezavisno supstituisan sa 0 do 3 supstituenta kako valenca dozvoljava nezavisno izabran između:

0 do 3 F atoma,

0 do 1 -CN, i

0 do 1 -OR<O>,

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

[0030] Sledeći primer izvođenja se odnosi na jedinjenja Formule I, II, III, IV ili V, gde je heterocikloalkil

0 do 1 -CN,

0 do 2 F atoma, i

0 do 3 F atoma,

0 do 1 -CN, i

0 do 1 -OR<O>ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

[0031] Sledeći primer izvođenja se odnosi na jedinjenja Formule I, II, III, IV ili V, gde je

1

heterocikloalkil

pri čemu heterocikloalkil može biti supstituisan sa 0 do 1 supstituentom kako valenca dozvoljava, npr., zamena vodonika, izabranog od:

-CN,

F atom, i

0 do 1 supstituenta nezavisno izabranog od -C1-3alkil i -OC1-3alkil, pri čemu je alkil C1-3alkil i OC1-3alkil može biti supstituisan sa 0 do 3 supstituenta kako valenca dozvoljava nezavisno izabran između:

0 do 3 F atoma,

0 do 1 -CN, i

0 do 1 -OR<O>,

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

[0032] Sledeći primer izvođenja se odnosi na jedinjenja Formule I, II, III, IV ili V, gde je heterocikloalkil

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

[0033] Sledeći primer izvođenja se odnosi na jedinjenja Formule I, II, III, IV ili V, gde je heterocikloalkil

pri čemu heterocikloalkil može biti supstituisan kako valenca dozvoljava sa 0 do 1 metil, pri čemu pomenuti metil može biti supstituisan sa 0 do 3 F atoma, ili njegovom farmaceutski prihvatljivom solju.

[0034] Sledeći primer izvođenja se odnosi na jedinjenja Formule I, II, III, IV ili V, gde je heterocikloalkil

pri čemu je heterocikloalkil nesupstituisan.

[0035] Sledeći primer izvođenja se odnosi na jedinjenja Formule I, II, III, IV ili V, gde -CH2R<5>i azot na kom je R<4>vezan obezbeđuje:

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.

[0036] Sledeći primer izvođenja se odnosi na jedinjenja Formule I, II, III, IV ili V, gde R4je -CH2-R<6>, pri čemu je R<6>je 5-člani heteroaril, pri čemu pomenuti heteroaril može biti supstituisan sa 0 do 2 supstituenta kako valenca dozvoljava nezavisno izabran između:

0 do 2 halogena, pri čemu je halogen nezavisno izabran između F i CI,

0 do 1 -OCH3, i

0 do 1 -CH3, -CH2CH3, -CF3, ili -CH2CH2OCH3;

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu.

[0037] Sledeći primer izvođenja se odnosi na jedinjenja Formule I, II, III, IV ili V, gde je heteroaril

pri čemu pomenuti heteroaril može biti supstituisan sa 0 do 2 supstituenta kako valenca dozvoljava, npr., supstitucija vodonika, nezavisno odabranog od:

0 do 2 halogena, pri čemu je halogen nezavisno izabran između F i CI,

0 do 1 supstituenta izabranog od -OR<O>i -N(R<N>)2, ili

0 do 3 F atoma, i

0 do 1 -OR<O>;

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.

[0038] Sledeći primer izvođenja se odnosi na jedinjenja Formule I, II, III, IV ili V, gde je heteroaril

pri čemu pomenuti heteroaril može biti supstituisan sa 0 do 2 supstituenta kako valenca dozvoljava, npr., supstituciju vodonika, nezavisno odabranog od:

0 do 2 halogena, pri čemu je halogen nezavisno izabran između F i CI,

0 do 1 supstituenta izabranog od -OR<O>i -N(R<N>)2, ili

0 do 3 F atoma, i

0 do 1 -OR<O>;

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.

[0039] Sledeći primer izvođenja se odnosi na jedinjenja Formule I, II, III, IV ili V, gde je heteroaril

pri čemu pomenuti heteroaril može biti supstituisan sa 0 do 1 supstituentom kako valenca dozvoljava sa -C1-2alkil, pri čemu alkil može biti supstituisan sa 0 do 3 supstituenta kako valenca dozvoljava nezavisno izabran između:

0 do 3 F atoma, i

0 do 1 -OR<O>; i

svaki R<O>je nezavisno H, ili -C1-3alkil;

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so. Prepoznaće se da bi bilo koji supstituent zamenio H na ugljeniku ili azotu koji se supstituiše. Neograničavajući primer supstituisanih heteroarila su:

[0040] Prepoznaće se da je H zamenjen supstituentom, na primer, R<6s>(dozvoljen supstituent na bilo kom heteroarilu R<6>), da bi se obezbedilo:

1

pri čemu je R<6s>je -C1-2alkil, pri čemu alkil može biti supstituisan sa 0 do 3 supstituenta kako valenca dozvoljava nezavisno izabran između:

0 do 3 F atoma, i

0 do 1 -OR<O>; i

svaki R<O>je nezavisno H, ili -C1-3alkil;

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.

[0041] Sledeći primer izvođenja se odnosi na jedinjenja Formule I, II, III, IV ili V, gde je heteroaril

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

[0042] Sledeći primer izvođenja se odnosi na jedinjenja drugih primera izvođenja ovde, na primer, jedinjenja Formule I, II, III, IV ili V, gde Z<1>, Z<2>, i Z<3>su svaki CR<Z>ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

[0043] Sledeći primer izvođenja se odnosi na jedinjenja drugih primera izvođenja ovde, na primer, jedinjenja Formule I, II, III, IV ili V, gde R<Z>je H, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

[0044] Sledeći primer izvođenja se odnosi na jedinjenja drugih primera izvođenja ovde, na primer, jedinjenja Formule I, II, III, IV ili V, gde Z<1>, Z<2>, i Z<3>su svaki CH, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

[0045] Sledeći primer izvođenja se odnosi na jedinjenja drugih primera izvođenja ovde, na primer, jedinjenja Formule I, II, III, IV ili V, gde R<3>je -CH3, ili -CF3; i k je 1, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

[0046] Sledeći primer izvođenja se odnosi na jedinjenja drugih primera izvođenja ovde, na primer, jedinjenja Formule I, II, III, IV ili V, gde svaki R<1>je nezavisno F, Cl, ili -CN, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

[0047] Sledeći primer izvođenja se odnosi na jedinjenja drugih primera izvođenja ovde, na primer, jedinjenja Formule I, II, III, IV ili V, gde R4je -CH2-R<5>ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

[0048] Sledeći primer izvođenja se odnosi na jedinjenja drugih primera izvođenja ovde, na primer, jedinjenja Formule I, II, III, IV ili V, gde R4je -CH2-R<6>ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

[0049] Sledeći primer izvođenja se odnosi na jedinjenja drugih primera izvođenja ovde, na primer, jedinjenja Formule I, II, III, IV ili V, gde je jedinjenje slobodna kiselina.

[0050] Sledeći primer izvođenja se odnosi na bilo koju varijantu jedinjenja Formule I, II, III, IV ili V, gde Prsten A i R<2>obezbediti:

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu

R je F, CI ili -CN;

p je 0 ili 1;

m je 0, 1 ili 2; i

svaki R<1>je nezavisno izabran između halogena, -CN, -C1-3alkil, i -OC1-3alkil, pri čemu je alkil C1-3alkil i OC1-3alkil je supstituisan sa 0 do 3 F atoma.

[0051] Sledeći primer izvođenja se odnosi na jedinjenja Formule I, II, III, IV ili V, gde R<2>je H, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

[0052] Sledeći primer izvođenja se odnosi na jedinjenja prema pronalasku, gde R<2>je H, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

[0053] Sledeći primer izvođenja se odnosi na jedinjenja prema pronalasku, gde je jedinjenje 2-({4-[2-(4-hloro-2-fluorofenil)-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-1-[(2S)-oksetan-2-ilmetil ]-lH-benzimidazol-6-karboksilna kiselina; ili

2-({4-[2-(4-hloro-2-fluorofenil)-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-7-fluoro-1-[(2S)-oksetan -2-ilmetil]-lH-benzimidazol-6-karboksilna kiselina;

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

[0054] Sledeći primer izvođenja se odnosi na jedinjenja prema pronalasku, gde je jedinjenje 2-({4-[(2S)-2-(4-hloro-2-fluorofenil)-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-1-[(2S)-oksetan -2-ilmetil]-lH-benzimidazol-6-karboksilna kiselina; ili

2-({4-[(2S)-2-(4-hloro-2-fluorofenil)-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-7-fluoro-1-[( 2S)-oksetan-2-ilmetil]-lH-benzimidazol-6-karboksilna kiselina;

1

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

[0055] Sledeći primer izvođenja se odnosi na jedinjenja prema pronalasku, gde R<2>je CH3ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

[0056] Sledeći primer izvođenja se odnosi na jedinjenja prema pronalasku, gde je jedinjenje 2-({4-[2-(4-hloro-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-1-[(2S)-oksetan -2-ilmetil]-lH-benzimidazol-6-karboksilna kiselina;

2-({4-[2-(4-cijano-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-1-[(2S)-oksetan -2-ilmetil]-lH-benzimidazol-6-karboksilna kiselina;

2-({4-[2-(5-hloropiridin-2-il)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-1-[(2S)-oksetan -2-ilmetil]-lH-benzimidazol-6-karboksilna kiselina;

2-({4-[2-(4-hloro-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-3-(1,3-oksazol -2-ilmetil)-3H-imidazo[4.5-b]piridin-5-karboksilna kiselina;

2-({4-[2-(4-hloro-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-1-[(1-etil- 1H-imidazol-5-il)metil]-1H-benzimidazol-6-karboksilna kiselina;

2-({4-[2-(4-hloro-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-1-(1,3-oksazol -4-ilmetil)-1H-benzimidazol-6-karboksilna kiselina;

2-({4-[2-(4-hloro-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-1-(piridin-3-ilmetil )-1H-benzimidazol-6-karboksilna kiselina;

2-({4-[2-(4-hloro-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-1-(1,3-oksazol -5-ilmetil)-1H-benzimidazol-6-karboksilna kiselina;

2-({4-[2-(4-hloro-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-1-[(1-etil- 1H-1.2,3-triazol-5-il)metil]-1H-benzimidazol-6-karboksilna kiselina;

2-({4-[2-(4-hloro-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-1-(1,3-oksazol -2-ilmetil)-1H-benzimidazol-6-karboksilna kiselina;

2-({4-[2-(4-hloro-2-fluorofenil)-7-fluoro-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-1-[( 2S)-oksetan-2-ilmetil]-1H-benzimidazol-6-karboksilna kiselina;

2-({4-[2-(4-cijano-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-1-(1,3-oksazol -2-ilmetil)-1H-benzimidazol-6-karboksilna kiselina; ili

2-({4-[(2S)-2-(4-hloro-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-7-fluoro- 1-[(2S)-oksetan-2-ilmetil]-1H-benzimidazol-6-karboksilna kiselina;

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

[0057] Sledeći primer izvođenja se odnosi na jedinjenja prema pronalasku, gde je jedinjenje 2-({4-[(2S)-2-(4-hloro-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-1-[( 2S)-oksetan-2-ilmetil]-lH-benzimidazol-6-karboksilna kiselina; ili

1

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

[0058] Sledeći primer izvođenja se odnosi na jedinjenja prema pronalasku, gde je jedinjenje 2-({4-[(2S)-2-(4-cijano-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-1-[(2S)-oksetan-2-ilmetil]-lH-benzimidazol-6-karboksilna kiselina;

2-({4-[(2S)-2-(5-hloropiridin-2-il)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-1-[( 2S)-oksetan-2-ilmetil]-lH-benzimidazol-6-karboksilna kiselina; ili

2-({4-[(2S)-2-(4-hloro-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-1-[( 1-etil-1H-imidazol-5-il)metil]-1H-benzimidazol-6-karboksilna kiselina;

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

[0059] Sledeći primer izvođenja se odnosi na jedinjenja prema pronalasku, gde je jedinjenje 2-({4-[(2R)-2-(4-cijano-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-1-[( 2S)-oksetan-2-ilmetil]-lH-benzimidazol-6-karboksilna kiselina;

2-({4-[(2R)-2-(5-hloropiridin-2-il)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-1-[( 2S)-oksetan-2-ilmetil]-lH-benzimidazol-6-karboksilna kiselina; ili

2-({4-[(2R)-2-(4-hloro-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-1-[( 1-etil-1H-imidazol-5-il)metil]-1H-benzimidazol-6-karboksilna kiselina;

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

[0060] Sledeći primer izvođenja se odnosi na jedinjenja prema pronalasku, gde je jedinjenje 2-({4-[2-(4-cijano-2-fluorofenil)-2*-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-1-[(2S)- oksetan-2-ilmetil]-1H-benzimidazol-6-karboksilna kiselina, pri čemu hiralnost 2* dolazi od C56;

2-({4-[2-(5-hloropiridin-2-il)-2*-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-1-[(2S)-oksetan-2-ilmetil]-1H-benzimidazol-6-karboksilna kiselina, pri čemu hiralnost 2* dolazi od P9;

2-({4-[2-(4-hloro-2-fluorofenil)-2*-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-1-[(1-etil) -1H-imidazol-5-il)metil]-1H-benzimidazol-6-karboksilna kiselina, pri čemu hiralnost 2* dolazi od 17;

2-({4-[2-(4-hloro-2-fluorofenil)-7-fluoro-2*-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-1-[ (2S)-oksetan-2-ilmetil]-1H-benzimidazol-6-karboksilna kiselina, pri čemu hiralnost 2* dolazi od 96; ili

2-({4-[2-(4-cijano-2-fluorofenil)-2*-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-1-(1,3-oksazol-2-ilmetil)-1H-benzimidazol-6-karboksilna kiselina, pri čemu kiralnost 2* dolazi od

1

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

[0061] Sledeći primer izvođenja uključuje jedinjenje koje je 2-({4-[(2S)-2-(4-hloro-2-fluorofenil)-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-1-[(2S)-oksetan-2-ilmetil]-lH-benzimidazol-6-karboksilna kiselina, ili njena farmaceutski prihvatljiva so, gde je so tris so.

[0062] Sledeći primer izvođenja uključuje jedinjenje koje je 2-({4-[(2S)-2-(4-hloro-2-fluorofenil)-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-1-[(2S)-oksetan-2-ilmetil]-1H-benzimidazol-6-karboksilna kiselina, kao slobodna kiselina.

[0063] Sledeći primer izvođenja uključuje jedinjenje koje je

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

[0064] Sledeći primer izvođenja obuhvata jedinjenje koje je 2-({4-[(2S)-2-(4-hloro-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il} metil)-1-[(2S)-oksetan-2-ilmetil]-1H-benzimidazol-6-karboksilna kiselina, ili farmaceutski prihvatljiva so, gde je so tris so {tris so ovog jedinjenja je takođe poznata kao : 1,3-dihidroksi-2-(hidroksimetil)propan-2-aminijum 2-({4-[(2S)-2-(4-hloro-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol- 4-il]piperidin-1-il}metil)-1-[(2S)-oksetan-2-ilmetil]-1H-benzimidazol-6-karboksilat}.

[0065] U nekim primera izvođenja, ovaj pronalazak obezbeđuje kristalni oblik anhidrovane tris soli 2-({4-[(2S)-2-(4-hloro-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol-4 -il]piperidin-1-il}metil)-1-[(2S)-oksetan-2-ilmetil]-1H-benzimidazol-6-karboksilna kiselina. U nekim daljim primera izvođenja, kristalni oblik anhidrovane (anhidratne) tris soli 2-({4-[(2S)-2-(4-hloro-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol-4 -il]piperidin-1-il}metil)-1-[(2S)-oksetan-2-ilmetil]-1H-benzimidazol-6-karboksilna kiselina je označena kao "Forma I" koji se karakteriše prema svom potpisu jedinstvenog čvrstog stanja u odnosu na, na primer, difrakciju rendgenskih zraka praha (PXRD), opisanu ovde (kao što je u suštini prikazano na Slici 1). U nekim primera izvođenja, Forma I pokazuje difrakciju rendgenskih zraka praha koja sadrži najmanje dva karakteristična pika, u smislu 2θ, izabrana između 3.7 ± 0.2°; 7.3 ± 0.2°; 8.5 ± 0.2°; 10.1±0.2°; 14.7±0.2°; i 16.9±0.2°. U nekim primera izvođenja, Forma I pokazuje difrakciju rendgenskih zraka praha koja sadrži najmanje tri karakteristična pika, u smislu 2θ, izabrana između 3.7 ± 0.2°; 7.3 ± 0.2°; 8.5 ± 0.2°; 10.1±0.2°; 14.7±0.2°; i 16.9±0.2°. U nekim primera izvođenja, Forma I pokazuje difrakcionu sliku rendgenskih zraka praha koja sadrži najmanje

1

četiri karakteristična pika, u smislu 2θ, izabrana između 3.7 ± 0.2°; 7.3 ± 0.2°; 8.5 ± 0.2°; 10.1±0.2°; 14.7±0.2°; i 16.9±0.2°. U nekim primera izvođenja, Forma I pokazuje difrakciju rendgenskih zraka praha koja sadrži najmanje pet karakterističnih pikova, u smislu 2θ, izabranih između 3.7 ± 0.2°; 7.3 ± 0.2°; 8.5 ± 0.2°; 10.1±0.2°; 14.7±0.2°; i 16.9±0.2°.

[0066] U nekim primera izvođenja, Forma I pokazuje difrakciju rendgenskih zraka praha koji sadrži karakteristične pikove, u smislu 2θ, na 3.7 ± 0.2° i 7.3 ± 0.2°.

[0067] U nekim primera izvođenja, Forma I pokazuje difrakciju rendgenskih zraka praha koja sadrži pikove, u smislu 2θ, na 3.7 ± 0.2°; 7.3 ± 0.2°; i 14.7 ± 0.2°. U nekim daljim primera izvođenja, Forma I pokazuje difrakciju rendgenskih zraka praha koja dalje sadrži najmanje jedan pik, u smislu 2θ, izabran između 8.5±0.2°; 10.1±0.2°; i 16.9±0.2°.

[0068] U nekim primera izvođenja, Forma I pokazuje difrakciju rendgenskih zraka praha koja sadrži pikove, u smislu 2θ, na 3.7 ± 0.2°; 7.3 ± 0.2°; 14.7 ± 0.2°; i 16.9±0.2°.

[0069] U nekim primera izvođenja, Forma I pokazuje difrakciju rendgenskih zraka praha koja sadrži pikove, u smislu 2θ, na 3.7 ± 0.2°; 7.3 ± 0.2°; 8.5 ± 0.2°; 10.1±0.2°; 14.7±0.2°; i 16.9±0.2°.

[0070] U nekim primera izvođenja, Forma I pokazuje difrakciju rendgenskih zraka praha u suštini kao što je prikazano na Slici 1. Lista difrakcionih pikova izraženih u smislu stepena 2θ i relativnih intenziteta sa relativnim intenzitetom od ≥ 3.0% je data iznad u Tabeli X1.

[0071] Kao što je dobro poznato u tehnici difrakcije praha, relativni intenziteti pikova (refleksije) mogu varirati, u zavisnosti od tehnike pripreme uzorka, procedure postavljanja uzorka i posebnog instrumenta koji se koristi. Dodatno, varijacije instrumenta i drugi faktori mogu uticati na 2-teta vrednosti. Zbog toga, dodele XRPD pikova mogu da variraju za plus ili minus oko 0.2°.

[0072] Sledeći primer izvođenja obuhvata jedinjenje koje je 2-({4-[(2S)-2-(4-hloro-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il} metil)-1-[(2S)-oksetan-2-ilmetil]-1H-benzimidazol-6-karboksilna kiselina, kao slobodna kiselina.

[0073] Sledeći primer izvođenja uključuje jedinjenje koje je

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

[0074] Sledeći primer izvođenja uključuje jedinjenje koje je

2-({4-[2-(5-hloropiridin-2-il)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-1-[(2S)-

1

oksetan -2-ilmetil]-1H-benzimidazol-6-karboksilna kiselina;

2-({4-[(2R)-2-(5-hloropiridin-2-il)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-1-[( 2S)-oksetan-2-ilmetil]-lH-benzimidazol-6-karboksilna kiselina; kao slobodna kiselina.

[0075] Sledeći primer izvođenja uključuje jedinjenje koje je

2-({4-[2-(5-hloropiridin-2-il)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-1-[(2S)-oksetan -2-ilmetil]-1H-benzimidazol-6-karboksilna kiselina;

2-({4-[(2R)-2-(5-hloropiridin-2-il)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-1-[( 2S)-oksetan-2-ilmetil]-lH-benzimidazol-6-karboksilna kiselina; ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu je so tris so.

[0076] Sledeći primer izvođenja uključuje jedinjenje koje je 2-({4-[2-(5-hloropiridin-2-il)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-1 -[(2S)-oksetan-2-ilmetil]-1H-benzimidazol-6-karboksilna kiselina, DIAST-Ks2:

ili njihova farmaceutski prihvatljiva so. U nekim daljim primera izvođenja, ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenje koje je 2-({4-[2-(5-hloropiridin-2-il)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1- il}metil)-1-[(2S)-oksetan-2-ilmetil]-1H-benzimidazol-6-karboksilna kiselina, DIAST-X2 ili tris so [tj. njihova 1,3-dihidroksi-2-(hidroksimetil)propan-2-amin so]. Hiralni centar na levom delu složene strukture je označen kao "abs" da bi se ukazalo da hiralni centar ima samo jednu stereo-konfiguraciju (tj. ne racemat u odnosu na taj hiralni centar).

[0077] U nekim primera izvođenja, ovaj pronalazak obezbeđuje kristalni oblik anhidrovane tris soli 2-({4-[2-(5-hloropiridin-2-il)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidina -1-il}metil)-1-[(2S)-oksetan-2-ilmetil]-1H-benzimidazol-6-karboksilna kiselina, DIAST-X2. U nekim daljim primera izvođenja, kristalni oblik anhidrovane (anhidratne) tris soli 2-({4-[2-(5-hloropiridin-2-il)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidina -1-il}metil)-1-[(2S)-oksetan-2-ilmetil]-1H-benzimidazol-6-karboksilna kiselina, DIAST-X2, označena je kao "Forma A"

2

koja se karakteriše prema svom jedinstvenom portpisu čvrstog stanja u odnosu na, na primer, difrakciju rendgenskih zraka praha (PXRD), opisanu ovde (kao što je u suštini prikazano na Slici 2). U nekim primera izvođenja, Forma A pokazuje difrakciju rendgenskih zraka praha koja sadrži najmanje dva karakteristična pika, u smislu 2θ, izabrana između 7.7 ± 0.2°; 15.2 ± 0.2°; 15.7±0.2°; i 17.6±0.2°. U nekim primera izvođenja, Forma A pokazuje difrakciju rendgenskih zraka praha koja sadrži najmanje tri karakteristična pika, u smislu 2θ, izabrana između 7.7 ± 0.2°; 15.2 ± 0.2°; 15.7±0.2°; i 17.6±0.2°. U nekim primera izvođenja, Forma A pokazuje difrakciju rendgenskih zraka praha koja sadrži karakteristične pikove, u smislu 2θ, izabrane između 7.7 ± 0.2°; 15.2 ± 0.2°; 15.7±0.2°; i 17.6±0.2°.

[0078] U nekim primera izvođenja, Forma I pokazuje difrakciju rendgenskih zraka praha koja sadrži karakteristične pikove, u smislu 2θ, na 7.7 ± 0.2° i 17.6 ± 0.2°.

[0079] U nekim primera izvođenja, Forma A pokazuje difrakciju rendgenskih zraka praha koja sadrži pikove, u smislu 2θ, na 7.7 ± 0.2°; 15.2 ± 0.2°; i 17.6 ± 0.2°.

[0080] U nekim primera izvođenja, Forma I pokazuje difrakciju rendgenskih zraka praha koja sadrži pikove, u smislu 2θ, na 7.7 ± 0.2°; 15.2 ± 0.2°; i 15.7 ± 0.2°.

[0081] U nekim primera izvođenja, Forma I pokazuje difrakciju rendgenskih zraka praha koja sadrži pikove, u smislu 2θ, na 7.7 ± 0.2°; 15.2 ± 0.2°; 15.7±0.2°; i 17.6±0.2°.

[0082] U nekim primera izvođenja, Forma A pokazuje uzorak difrakcije rendgenskih zraka praha u suštini kao što je prikazano na Slici 2. Lista difrakcionih pikova izraženih u smislu stepena 2θ i relativnih intenziteta sa relativnim intenzitetom od ≥ 3.0% je data iznad u Tabeli X2 .

[0083] Kao što je dobro poznato u tehnici difrakcije praha, relativni intenziteti pikova (refleksije) mogu varirati, u zavisnosti od tehnike pripreme uzorka, procedure postavljanja uzorka i posebnog instrumenta koji se koristi. Dodatno, varijacije instrumenta i drugi faktori mogu uticati na 2-teta vrednosti. Prema tome, dodele XRPD pikova mogu da variraju za plus ili minus oko 0.2°.

[0084] U drugom aspektu, pronalazak obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju koja sadrži jedinjenje Formule I, II, III, IV ili V, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, kao što je definisano u bilo kojoj od varijanti opisanih ovde, u mešavini sa najmanje jednom farmaceutski prihvatljivom pomoćnom supstancom. Ovo bi uključivalo farmaceutsku kompoziciju koja sadrži jedinjenje Formule I, II, III, IV ili V, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, kao što je definisano u bilo kojoj od varijanti opisanih ovde, u mešavini sa najmanje jednim farmaceutski prihvatljivim ekscipijensom i jednim ili više drugih terapeutskih agenasa o kojima se ovde raspravlja.

[0085] Pronalazak takođe uključuje sledeće realizacije:

jedinjenje Formule I, II, III, IV ili V, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, kao što je definisano u bilo kom od ovde opisanih izvođenja, za upotrebu kao lek;

jedinjenje Formule I, II, III, IV ili V, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, kao što je definisano u bilo kojoj od varijanti opisanih ovde, za upotrebu u prevenciji i/ili lečenju kardiometaboličkih i povezanih bolesti o kojima se ovde raspravlja, uključujući T2DM, preddijabetes, NASH i kardiovaskularne bolesti;

jedinjenje Formule I, II, III, IV ili V, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, kao što je definisano u bilo kojoj od varijanti opisanih ovde, za upotrebu u lečenju bolesti ili stanja za koje je agonist GLP-1R je naznačeno; ili

farmaceutska kompozicija za lečenje bolesti ili stanja za koje je indikovan agonist GLP-1R, koji sadrži jedinjenje Formule I, II, III, IV ili V, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, kako je definisano u bilo kom od ovde opisanih primera izvođenja.

[0086] Svaki primer ili njegova farmaceutski prihvatljiva so mogu se štititi pojedinačno patentnim zahtevom ili grupisati zajedno u bilo kojoj kombinaciji sa bilo kojim brojem bilo kog i svakog primera izvođenja opisanog ovde.

[0087] Pronalazak se takođe odnosi na farmaceutsku kompoziciju koja sadrži jedinjenje Formule I, II, III, IV ili V, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, kako je definisano u bilo kojoj od varijanti opisanih ovde, za upotrebu u lečenju i/ili prevenciji kardiometaboličkih i povezanih bolesti o kojima se ovde raspravlja, uključujući T2DM, pred-dijabetes, NASH i kardiovaskularne bolesti.

[0088] Sledeći primer izvođenja pronalaska se odnosi na jedinjenje Formule I, II, III, IV ili V, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, kao što je definisano u bilo kojoj od varijanti opisanih ovde, za upotrebu u lečenju i/ili prevenciji kardiometaboličkih i povezane bolesti uključujući dijabetes (T1D i/ili T2DM, uključujući preddijabetes), idiopatski T1D (tip 1b), latentni autoimuni dijabetes kod odraslih (LADA), rani T2DM (EOD), atipični dijabetes u mladosti (YOAD), dijabetes sa početkom zrelosti mladih (MODY), dijabetes povezan sa neuhranjenošću, gestacijski dijabetes, hiperglikemija, insulinska rezistencija, insulinska rezistencija jetre, poremećena tolerancija na glukozu, dijabetička neuropatija, dijabetička nefropatija, bolest bubrega (npr. akutni poremećaj bubrega, tubularna disfunkcija, promene na proksimalnim tubulima), dijabetička retinopatija, disfunkcija adipocita, visceralna adipozna depozicija, apneja u snu, gojaznost (uključujući hipotalamičnu gojaznost i monogenu gojaznost) i srodni komorbiditeti (npr. osteoartritis i inkontinencija urina), poremećaji u ishrani nervoza, i sindromska gojaznost kao što su Prader-Willi i Bardet-Biedl sindromi), povećanje telesne težine usled upotrebe drugih agenasa (npr. od upotrebe steroida i antipsihotika), prekomerna potreba za šećerom, dislipidemija (uključujući hiperlipidemiju, hipertrigliceridemiju, povećan ukupni holesterol visok LDL holesterol i nizak HDL holesterol), hiperinsulinemija, NAFLD (uključujući srodne bolesti kao što su steatoza, NASH, fibroza, ciroza i hepatocelularni karcinom), kardiovaskularne bolesti, ateroskleroza (uključujući bolest koronarnih arterija), periferna vaskularna bolest, hipertenzija, endotelna disfunkcija, oštećena vaskularna usklađenost, kongestivna srčana insuficijencija, infarkt miokarda (npr. nekroza i apoptoza), moždani udar, hemoragični moždani udar, ishemijski moždani udar, traumatska povreda mozga, plućna hipertenzija, restenoza nakon angioplastike, intermitentna klaudikacija, postprandijalna lipemija, metabolička acidoza, ketoza, artritis, osteoporoza, Parkinson-ova bolest, hipertrofija leve komore, bolest perifernih arterija, makularna degeneracija, katarakta, glomeruloskleroza, hronična bubrežna insuficijencija, metabolički sindrom, sindrom X, predmenstrualni sindrom, angina pektoris, tromboza, ateroskleroza, prolazni ishemijski napadi, vaskularna restenoza, poremećeni metabolizam glukoze, stanja poremećene glukoze u plazmi pri gladovanju, hiperurikemija, giht, erektilna disfunkcija, poremećaji kože i vezivnog tkiva, psorijaza, ulceracije na stopalima, ulcerozni kolitis, hiper apo B lipoproteinemija, Alzheimer-ova bolest, šizofrenija, kognitivno oštećenje, inflamatorna bolest creva, sindrom kratkog creva, sindrom kratkog creva, Crohn-ova bolest, kolitis, sindrom iritabilnog creva, prevencija ili lečenje sindroma policističnih jajnika i lečenje zavisnosti (npr. zloupotreba alkohola i/ili droga).

[0089] Skraćenice koje se ovde koriste su sledeće:

Termin "alkil", kako se ovde koristi, označava monovalentnu ugljovodoničnu grupu pravog ili razgranatog lanca formule -CnH(2n+1). Neograničavajući primeri uključuju metil, etil, propil, butil, 2-metil-propil, 1.1-dimetiletil, pentil i heksil.

[0090] Termin "alkilen", kako se ovde koristi, označava dvovalentnu ugljovodoničnu grupu pravog ili razgranatog lanca formule -CnH2n-. Neograničavajući primeri uključuju etilen i propilen.

[0091]Termin "cikloalkil", kako se ovde koristi, označava cikličnu, monovalentnu ugljovodoničnu grupu formule -CnH(2n-1)koji sadrže najmanje tri atoma ugljenika. Neograničavajući primeri uključuju ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil i cikloheksil.

[0092]Termin "halogen", kako se ovde koristi, odnosi se na fluorid, hlorid, bromid ili jodid.

[0093]Termin "heterocikloalkil", kako se ovde koristi, odnosi se na cikloalkil grupu u kojoj je jedna ili više metilenskih grupa u prstenu (-CH2-) je zamenjena grupom izabranom od -O-,

2

-S- ili azota, pri čemu azot može da obezbedi tačku vezivanja ili može biti supstituisan kako je predviđeno u okviru svakog primera izvođenja. Tamo gde azot obezbeđuje tačku vezivanja, strukturni crtež heterocikloalkila bi imao vodonik na pomenutom azotu. Generalno, heterocikloalkil može biti supstituisan sa 0 do 2 supstituenta kako valenca dozvoljava da se nezavisno bira između okso, -CN, halogena, alkila i –O alkila, a alkil može biti dalje supstituisan. Primetiće se da kada postoji 0 supstitucija, heterocikloalkil je nesupstituisan.

[0094]Termin "heteroaril", kako se ovde koristi, odnosi se na monociklični aromatični ugljovodonik koji sadrži od 5 do 6 atoma ugljenika u kome je najmanje jedan od atoma ugljenika u prstenu zamenjen heteroatomom izabranim između kiseonika, azota i sumpora. Takva heteroaril grupa može biti vezana preko atoma ugljenika u prstenu ili, gde valenca dozvoljava, preko atoma azota u prstenu. Generalno, heteroaril može biti supstituisan sa 0 do 2 supstituenta kako valenca dozvoljava da se nezavisno bira između halogena, OH, alkila, O-alkila i amino (npr. NH2, NHalkil, N(alkil)2), a alkil može biti dalje supstituisan. Primetiće se da kada postoji 0 supstitucija, heteroaril je nesupstituisan.

Sobna temperatura: RT (15 do 25 °C).

Metanol: MeOH.

Etanol: EtOH.

Izopropanol: iProOH.

Etil acetat: EtOAc.

Tetrahidrofuran: THF.

Toluen: PhCH3.

Cezijum karbonat: Cs2CO3.

Litijum bis(trimetilsilil)amid: LiHMDS.

Natrijum t-butoksid: NaOtBu.

Kalijum t-butoksid: KOtBu.

Litijum diizopropilamid: LDA.

Trietilamin: Et3N.

N,N-diizopropiletilamin: DIPEA.

Kalijum karbonat: K2CO3.

Dimetil formamid: DMF.

Dimetil acetamid: DMAc.

Dimetil sulfoksid: DMSO.

N-metil-2-pirolidinon: NMP.

Natrijum hidrid: NaH.

Trifluorosirćetna kiselina: TFA.

Trifluorosirćetni anhidrid: TFAA.

Anhidrid sirćetne kiseline: Ac2O.

Dihlorometan: DCM.

1,2-dihloretan: DCE.

Hlorovodonična kiselina: HCl.

1.8-Diazabiciklo[5.4.0]undec-7-en: DBU.

Kompleks boran-dimetilsulfida: BH3-DMS.

Kompleks boran-tetrahidrofuran: BH3-THF.

Litijum aluminijum hidrid: LAH.

Sirćetna kiselina: AcOH.

Acetonitril: MeCN.

p-toluensulfonska kiselina: pTSA.

Dibenzilidin aceton: DBA.

2.2'-Bis(difenilfosfino)-1,1’-binaftalen: BINAP.

1,1’-ferocendiil-bis(difenilfosfin): dppf.

1,3-bis(difenilfosfino)propan: DPPP.

3-hloroperbenzoeva kiselina: m-CPBA.

Terc-butil metil etar: MTBE.

Metansulfonil: Ms.

N-metilpirolidinon: NMP.

Tankoslojna hromatografija: TLC.

Superkritična tečna hromatografija: SFC.

4-(dimetilamino)piridin: DMAP.

terc-butiloksikarbonil: Boc.

1- [Bis(dimetilamino)metilen]-1H-1.2,3-triazolo[4.5-b]piridinijum 3-oksid heksafluorofosfat: HATU.

Petroleum etar: PE.

2-(1H-benzotriazol-1-il)-1.1,3.3-tetrametiluronijum heksafluorofosfat: HBTU. 2-amino-2-(hidroksimetil)propan-1,3-diol: tris.

tris(dibenzilidenaceton)dipaladijum: Pd2(dba)3

[0095]<1>Spektri H nuklearne magnetne rezonance (NMR) su u svim slučajevima bili u skladu sa predloženim strukturama. Karakteristični hemijski pomaci (δ) su dati u delovima na milion

2

u odnosu na preostali protonski signal u deuterisanom rastvaraču (CHCl3na 7.27 ppm; CD2HOD na 3.31 ppm; MeCN na 1.94 ppm; DMSO na 2.50 ppm) i navode se korišćenjem konvencionalnih skraćenica za označavanje glavnih pikova: npr. s, singlet; d, dublet; t, triplet; q, kvartet; m, multiplet; br, širok. Simbol ^ označava da je<1>H NMR područje pika pretpostavljeno jer je pik bio delimično zaklonjen pikom vode. Simbol ^^ označava da je<1>H NMR područje pika pretpostavljeno jer je pik delimično zaklonjen pikom rastvarača.

[0096] Kako se ovde koristi, talasasta linija, označava tačku vezivanja supstituenta za drugu grupu.

[0097] Jedinjenja i intermedijeri opisani u nastavku su imenovani korišćenjem konvencije imenovanja koja je obezbeđena sa ACD/ChemSketch 2012, verzija datoteke C10H41, Build 69045 (Advanced Chemistry Development, Inc., Toronto, Ontario, Canada). Konvencija imenovanja obezbeđena sa ACD/ChemSketch 2012 je dobro poznata stručnjacima i veruje se da je konvencija o imenovanju obezbeđena sa ACD/ChemSketch 2012 generalno u skladu sa preporukama IUPAC (International Union for Pure and Applied Chemistry)) za nomenklaturu organske hemije i pravila CAS indeksa. Primetiće se da hemijski nazivi mogu imati samo zagrade ili zagrade i “zagrade”. Stereohemijski deskriptori se takođe mogu postaviti na različite lokacije unutar samog imena, u zavisnosti od konvencije imenovanja. Stručnjak sa uobičajenim veštinama prepoznaće ove varijacije formatiranja i razumeti da obezbeđuju istu hemijsku strukturu.

[0098] Farmaceutski prihvatljive soli jedinjenja Formule I, II, III, IV ili V uključuju kisele adicione i bazne soli.

[0099] Pogodne kiselinske adicione soli se formiraju od kiselina koje formiraju netoksične soli. Primeri uključuju acetat, adipat, aspartat, benzoat, bezilat, bikarbonat/karbonat, bisulfat/sulfat, borat, kamzilat, citrat, ciklamat, edizilat, ezilat, format, fumarat, gluceptat, glukonat, glukuronat, heksafluorofosfat, hibenzat, hidrohlorid/hlorid, һidrobromid/bromid, һidrojodid/jodid, izetionat, laktat, maleat, maleat, malonat, mezilat, metilsulfat, naftilat, 2-napsiilat, nikotinat, nitrat, orotat, oksalat, oksalat, palmitat, pamoat, fosfat/һidrogen fosfat/diһidrogen fosfat, piroglutamat, saharat, stearat, sukcinat, tanat, tartarat, tozilat, trifluoroacetat, 1<.>5-nafatalendisulfonsku kiselinu i ksinafoatne soli.

[0100] Pogodne bazne soli se formiraju od baza koje formiraju netoksične soli. Primeri uključuju aluminijum, arginin, benzatin, kalcijum, holin, dietilamin, bis(2-hidroksietil)amin (diolamin), glicin, lizin, magnezijum, meglumin, 2-aminoetanol (olamin), kalijum, natrijum,

2

2-amino-2-(hidroksimetil)propan-1,3-diol (tris ili trometamin) i soli cinka.

[0101] Takođe se mogu formirati hemisoli kiselina i baza, na primer, hemisulfatne i hemikalcijumove soli. Za pregled odgovarajućih soli, pogledajte Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use by Stahl and Wermuth (Wiley-VCH, 2002).

[0102] Farmaceutski prihvatljive soli jedinjenja Formule I mogu se pripremiti jednim ili više od tri postupka:

(i) reakcijom jedinjenja Formule I sa željenom kiselinom ili bazom;

(ii) uklanjanjem zaštitne grupe labilne kiseline ili baze sa pogodnog prekursora jedinjenja Formule I ili otvaranjem prstena pogodnog cikličnog prekursora, na primer, laktona ili laktama, korišćenjem željene kiseline ili baze; ili

(iii) pretvaranjem jedne soli jedinjenja Formule I u drugu reakcijom sa odgovarajućom kiselinom ili bazom ili pomoću odgovarajuće jonoizmenjivačke kolone.

[0103] Sve tri reakcije se obično izvode u rastvoru. Dobijena so se može istaložiti i prikupiti filtracijom ili se može povratiti isparavanjem rastvarača. Stepen jonizacije u rezultujućoj soli može da varira od potpuno jonizovane do skoro nejonizovane.

[0104] Jedinjenja Formule I, i njihove farmaceutski prihvatljive soli, mogu postojati u nesolvatiranim i rastvorenim oblicima. Termin 'solvat' se ovde koristi da opiše molekularni kompleks koji sadrži jedinjenje Formule I, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i jedan ili više farmaceutski prihvatljivih molekula rastvarača, na primer, etanol. Termin 'hidrat' se koristi kada je navedeni rastvarač voda.

[0105] Trenutno prihvaćen sistem klasifikacije za organske hidrate je onaj koji definiše izolovano mesto, kanal ili hidrate koordinisane metalnim jonima - videti Polymorphism in Pharmaceutical Solids, K. R. Morris (Ed. H. G. Brittain, Marcel Dekker, 1995). Hidrati izolovanog mesta su oni u kojima su molekuli vode međusobno izolovani od direktnog kontakta organskim molekulima koje se nalaze između njih. U kanalnim hidratima, molekuli vode leže u rešetkastim kanalima gde su pored drugih molekula vode. U hidratima koordinisanim metalnim jonima, molekuli vode su vezani za metalni jon.

[0106] Kada su rastvarač ili voda čvrsto vezani, kompleks može imati dobro definisanu stehiometriju nezavisno od vlažnosti. Međutim, kada su rastvarač ili voda slabo vezani, kao u kanalnim solvatima i higroskopnim jedinjenjima, sadržaj vode/rastvarača može zavisiti od vlažnosti i uslova sušenja. U takvim slučajevima, nestehiometrija će biti norma.

[0107] U okviru pronalaska su takođe uključeni višekomponentni kompleksi (osim soli i

2

solvata) u kojima su lek i najmanje jedna druga komponenta prisutni u stehiometrijskim ili nestehiometrijskim količinama. Kompleksi ovog tipa uključuju klatrate (kompleks inkluzije leka) i ko-kristale. Prethodni se obično definišu kao kristalni kompleksi neutralnih molekularnih konstituenata koji su povezani zajedno kroz nekovalentne interakcije, ali takođe mogu biti kompleksi neutralnog molekula sa soli. Ko-kristali se mogu pripremiti kristalizacijom topljenjem, rekristalizacijom iz rastvarača ili fizičkim mlevenjem komponenti zajedno - videti Chem Commun, 17, 1889-1896, O. Almarsson i M. J. Zaworotko (2004.). Za opšti pregled višekomponentnih kompleksa, videti J Pharm Sci, 64 (8), 1269-1288, Haleblian (avgust 1975.).

[0108] Jedinjenja pronalaska mogu postojati u kontinuumu čvrstih stanja u rasponu od potpuno amorfnog do potpuno kristalnog. Izraz 'amorfan' se odnosi na stanje u kojem materijalu nedostaje redosled dugog dometa na molekularnom nivou i, u zavisnosti od temperature, može da pokaže fizička svojstva čvrste supstance ili tečnosti. Obično takvi materijali ne daju karakteristične uzorke difrakcije rendgenskih zraka i, iako pokazuju svojstva čvrste supstance, formalnije se opisuju kao tečnost. Prilikom zagrevanja dolazi do promene od čvrstih u tečne osobine koje karakteriše promena stanja, tipično drugog reda („stakleni prelaz“). Termin 'kristalni' se odnosi na čvrstu fazu u kojoj materijal ima pravilnu uređenu unutrašnju strukturu na molekularnom nivou i daje karakterističan uzorak difrakcije rendgenskih zraka sa definisanim pikovima. Takvi materijali kada se dovoljno zagreju takođe će pokazati svojstva tečnosti, ali promenu iz čvrstog u tečnost karakteriše promena faze, tipično prvog reda („tačka topljenja“).

[0109] Jedinjenja Formule I mogu takođe postojati u mezomorfnom stanju (mezofaza ili tečni kristal) kada su podvrgnuta odgovarajućim uslovima. Mezomorfno stanje je srednje između pravog kristalnog stanja i pravog tečnog stanja (bilo rastopljenog ili rastvora). Mezomorfizam koji nastaje kao rezultat promene temperature opisuje se kao „termotropan“, a onaj koji nastaje dodavanjem druge komponente, kao što je voda ili drugi rastvarač, opisuje se kao „liotropan“. Jedinjenja koja imaju potencijal da formiraju liotropne mezofaze su opisana kao 'amfifilna' i sastoje se od molekula koji poseduju jonski (kao što je -COO-Na<+>, -COO-K<+>, ili SO3-Na<+>) ili nejonske (kao što je -N-N<+>(CH3)3) grupa polarne glave. Za više informacija videti Crystals and the Polarizing Microscope by N. H. Hartshorne and A. Stuart, 4th Edition (Edward Arnold, 1970).

[0110] Jedinjenja Formule I mogu da ispolje polimorfizam i/ili jednu ili više vrsta izomerizma (npr. optički, geometrijski ili tautomerni izomerizam). Jedinjenja Formule I mogu takođe biti izotopski obeležena. Takva varijacija je implicitna za jedinjenja Formule I

2

definisana onakva kakva jesu u odnosu na njihove strukturne karakteristike i stoga u okviru obima pronalaska.

[0111] Jedinjenja Formule I koja sadrže jedan ili više asimetričnih atoma ugljenika mogu postojati kao dva ili više stereoizomera. Tamo gde jedinjenje Formule I sadrži alkenil ili alkenilen grupu, mogući su geometrijski cis/trans (ili Z/E) izomeri. Tamo gde su strukturni izomeri međusobno konvertibilni preko barijere niske energije, može se javiti tautomerna izomerija ('tautomerizam'). Ovo može imati oblik protonske tautomerije u jedinjenjima Formule I koja sadrže, na primer, imino, keto ili oksim grupu, ili takozvanu valentnu tautomeriju u jedinjenjima koja sadrže aromatični deo. Iz toga sledi da jedno jedinjenje može pokazati više od jedne vrste izomerizma.

[0112] Farmaceutski prihvatljive soli jedinjenja Formule I mogu takođe da sadrže protivjon koji je optički aktivan (npr. d-laktat ili l-lizin) ili racemski (npr. dl-tartarat ili dlarginin).

[0113] Cis/trans izomeri se mogu razdvojiti konvencionalnim tehnikama koje su dobro poznate stručnjacima, na primer, hromatografijom i frakcionom kristalizacijom.

[0114] Konvencionalne tehnike za pripremu/izolaciju pojedinačnih enantiomera uključuju hiralnu sintezu iz odgovarajućeg optički čistog prekursora ili razdvajanje racemata (ili racemata soli ili derivata) korišćenjem, na primer, hiralne tečne hromatografije visokog pritiska (HPLC). Alternativno, racemski prekursor koji sadrži hiralni estar može biti razdvojen enzimskom rezolucijom (videti, npr. Int J Mol Sci 29682-29716 od A. C. L. M. Carvaho et. al. (2015)). U slučaju kada jedinjenje Formule I sadrži kiseli ili bazni deo, so se može formirati sa optički čistom bazom ili kiselinom kao što je 1-feniletilamin ili vinska kiselina. Dobijena dijastereomerna smeša može se razdvojiti frakcionom kristalizacijom i jedna ili obe dijastereomerne soli se konvertuju u odgovarajući(e) čist(e) enantiomer(e) na način koji je dobro poznat stručnjaku. Alternativno, racemat (ili racemski prekursor) može kovalentno da reaguje sa pogodnim optički aktivnim jedinjenjem, na primer, alkoholom, aminom ili benzil hloridom. Dobijena dijastereomerna smeša se može razdvojiti hromatografijom i/ili frakcionom kristalizacijom na način koji je stručnjaku dobro poznat da bi se dobili odvojeni dijastereomeri kao pojedinačni enantiomeri sa 2 ili više hiralnih centara. Hiralna jedinjenja Formule I (i njihovi hiralni prekursori) mogu se dobiti u enantiomerno obogaćenom obliku korišćenjem hromatografije, tipično HPLC, na asimetričnoj smoli sa mobilnom fazom koja se sastoji od ugljovodonika, obično heptana ili heksana, koji sadrži od 0 do 50% od zapremina izopropanola, tipično od 2% do 20%, i od 0 do 5% zapremine alkilamina, tipično 0.1% dietilamina. Koncentrovanje eluata daje obogaćenu smešu. Može se koristiti hiralna hromatografija korišćenjem sub- i superkritičnih tečnosti. Postupci za hiralnu

2

hromatografiju korisni u nekim primera izvođenja ovog pronalaska su poznati u tehnici (videti, na primer, Smith, Roger M., Loughborough University, Loughborough, UK; Chromatographic Science Series (1998), 75 (SFC with Packed Columns), pp. 223-249 i reference koje su tamo citirane). U nekim relevantnim primerima ovde, kolone su dobijene od Chiral Technologies, Inc, West Chester, Pennsilvania, USA, podružnice kompanije Daicel<®>Chemical Industries, Ltd., Tokyo, Japan.

[0115] Kada bilo koji racemat kristališe, mogući su kristali dva različita tipa. Prvi tip je racemsko jedinjenje (pravi racemat) pomenut gore, gde se proizvodi jedan homogeni oblik kristala koji sadrži oba enantiomera u ekvimolarnim količinama. Drugi tip je racemska smeša ili konglomerat gde se proizvode dva oblika kristala u ekvimolarnim količinama od kojih svaki sadrži jedan enantiomer. Dok oba kristalna oblika prisutna u racemskoj mešavini imaju identična fizička svojstva, mogu imati različita fizička svojstva u poređenju sa pravim racematom. Racemske smeše se mogu razdvojiti konvencionalnim tehnikama poznatim stručnjacima - videti, na primer, Stereochemistry of Organic Compounds by E. L. Eliel and S. H. Wilen (Wiley, 1994).

[0116] Mora se naglasiti da su jedinjenja Formule I ovde prikazana u jednom tautomernom obliku, svi mogući tautomerni oblici su uključeni u obim pronalaska.

[0117] Ovaj pronalazak obuhvata sva farmaceutski prihvatljiva izotopski obeležena jedinjenja Formule I u kojima je jedan ili više atoma zamenjeno atomima koji imaju isti atomski broj, ali atomsku masu ili maseni broj različit od atomske mase ili masenog broja koji preovlađuje u prirodi.

[0118] Primeri izotopa pogodnih za uključivanje u jedinjenja pronalaska uključuju izotope vodonika, kao što su<2>H i<3>H, ugljenik, kao npr<11>C,<13>C i<14>C, hlor, kao npr<36>Cl, fluor, kao npr<18>F, jod, kao npr<123>I i<125>I, azot, kao npr<13>N i<15>N, kiseonik, kao npr<15>O,<17>O i<18>O, fosfor, kao npr<32>P, i sumpor, kao npr<35>S.

[0119] Određena izotopski obeležena jedinjenja Formule I, na primer ona koja sadrže radioaktivni izotop, korisna su u studijama distribucije leka i/ili supstrata u tkivu. Radioaktivni izotopi tricijum, tj.<3>H, i ugljenik-14, tj.<14>C, posebno su korisni za ovu spiku s obzirom na njihovu lakoću ugradnje i dostupna sredstva za detekciju.

[0120] Zamena sa težim izotopima kao što je deuterijum, tj.<2>H, može da pruži određene terapeutske prednosti koje su rezultat veće metaboličke stabilnosti, na primer, produženi in vivo poluživot ili smanjeni zahtevi za dozom.

[0121] Zamena sa izotopima koji emituju pozitron, kao npr<11>C,<18>F,<15>O i<13>N, može biti korisno u studijama pozitronske emisione topografije (PET) za ispitivanje zauzetosti receptora supstrata.

[0122] Izotopski obeležena jedinjenja Formule I mogu se generalno pripremiti konvencionalnim tehnikama poznatim stručnjacima ili postupcima analognim onima opisanim u pratećim Primerima i Preparacijama korišćenjem odgovarajućeg izotopski obeleženog reagensa umesto prethodno upotrebljenog neobeleženog reagensa.

[0123] Farmaceutski prihvatljivi solvati u skladu sa pronalaskom uključuju one u kojima rastvarač kristalizacije može biti izotopski supstituisan, npr. D2O, d6-aceton, d6-DMSO.

[0124] Jedan način sprovođenja pronalaska je davanje jedinjenja Formule I u obliku proleka. Dakle, određeni derivati jedinjenja Formule I koji sami po sebi mogu imati malu ili nikakvu farmakološku aktivnost mogu, kada se daju u ili na telo, biti pretvoreni u jedinjenje Formule I koje ima željenu aktivnost, na primer hidrolitičkim cepanjem, posebno hidrolitičkim cepanjem koje promoviše enzim esteraza ili peptidaza. Takvi derivati se nazivaju 'prolekovi'. Dodatne informacije o upotrebi prolekova mogu se naći u ' ’Pro-drugs as Novel Delivery Systems’, Vol. 14, ACS Symposium Series (T. Higuchi and W. Stella) i ‘Bioreversible Carriers in Drug Design’, Pergamon Press, 1987 (Ed. E. B. Roche, American Pharmaceutical Association). Takođe se može uputiti na Nature Reviews/Drug Discovery, 2008, 7, 355 i Current Opinion in Drug Discovery and Development, 2007, 10, 550.

[0125] Prolekovi se, na primer, mogu proizvesti zamenom odgovarajućih funkcionalnosti prisutnih u jedinjenjima Formule I sa određenim delovima koji su stručnjacima poznatim kao 'pro-ostatci' kao što je opisano, na primer, u ’Design of Prodrugs’ by H. Bundgaard (Elsevier, 1985) and Y. M. Choi-Sledeski and C. G. Wermuth, ’Designing Prodrugs and Bioprecursors’ in Practice of Medicinal Chemistry, (Fourth Edition), Chapter 28, 657-696 (Elsevier, 2015).

[0126] Dakle, prolek je (a) estar ili amid derivat karboksilne kiseline u jedinjenju Formule I; (b) estar, karbonat, karbamat, fosfat ili etar derivat hidroksilne grupe u jedinjenju Formule I; (c) amid, imin, karbamat ili amin derivat amino grupe u obliku jedinjenja Formule I; (d) derivat oksima ili imina karbonil grupe u jedinjenju Formule I; ili (e) metil, primarni alkohol ili aldehidnu grupu koja može biti metabolički oksidovana u karboksilnu kiselinu u jedinjenju Formule I.

[0127] Neki specifični primeri prolekova uključuju:

(i) gde jedinjenje Formule I sadrži funkcionalnu grupu karboksilne kiseline (-COOH), njen estar, kao što je jedinjenje u kome je vodonik funkcionalne grupe karboksilne kiseline jedinjenja Formule I zamenjen sa C1-C8alkil (npr. etil) ili (C1-C8alkil)C(=O)OCH2- (na primer.<t>BuC(=O)OCH2-);

(ii) gde jedinjenje Formule I sadrži alkoholnu funkcionalnost (-OH), njegov estar, kao što je

1

jedinjenje u kome je vodonik alkoholne funkcionalnosti jedinjenja Formule I zamenjen sa -CO(C1-C8alkil) (npr. metilkarbonil) ili je alkohol esterifikovan sa amino kiselinom;

(iii) gde jedinjenje Formule I sadrži alkoholnu funkcionalnost (-OH), njegov etar, kao što je jedinjenje u kome je vodonik alkoholne funkcionalnosti jedinjenja Formule I zamenjen sa (C1-C8alkil)C(=O)OCH2- ili -CH2OP(=O)(OH)2;

(iv) gde jedinjenje Formule I sadrži alkoholnu funkcionalnost (-OH), njegov fosfat, kao što je jedinjenje u kome je vodonik alkoholne funkcionalnosti jedinjenja Formule I zamenjen sa -P(=O)(OH )2ili -P(=O)(ONa)2ili -P(=O)(O)2Ca<2+>;

(v) gde jedinjenje Formule I sadrži primarnu ili sekundarnu amino funkcionalnost (-NH2ili -NHR gde je R = H), njegov amid, na primer, jedinjenje u kome je, u zavisnosti od slučaja, jedan ili oba vodonika amino funkcionalnosti jedinjenja Formule I zamenjena sa (C1-C10)alkanoil, -COCH2NH2ili je amino grupa derivatizovana sa amino kiselinom;

(vi) gde jedinjenje Formule I sadrži primarnu ili sekundarnu amino funkcionalnost (-NH2ili -NHR gde je R = H), njegov amin, na primer, jedinjenje u kome, u zavisnosti od slučaja, jedan ili oba vodonika amino funkcionalnosti jedinjenja Formule Y je/su zamenjena sa -CH2OP(=O)(OH)2;

(vii) gde je grupa karboksilne kiseline unutar jedinjenja Formule I zamenjena metil grupom, -CH2OH grupa ili aldehidna grupa.

[0128] Određena jedinjenja Formule I mogu sama da deluju kao prolekovi drugih jedinjenja Formule I. Takođe je moguće da se dva jedinjenja Formule I spoje zajedno u obliku proleka. U određenim okolnostima, prolek jedinjenja Formule I može se stvoriti unutrašnjim povezivanjem dve funkcionalne grupe u jedinjenju Formule I, na primer formiranjem laktona.

Primena i doziranje

[0129] Tipično, jedinjenje pronalaska se primenjuje u količini efikasnoj za lečenje stanja kao što je ovde opisano. Jedinjenja pronalaska se mogu davati kao jedinjenje per se, ili alternativno, kao farmaceutski prihvatljiva so. Za spike primene i doziranja, jedinjenje samo po sebi ili njegova farmaceutski prihvatljiva so će se jednostavno nazivati jedinjenja pronalaska.

[0130] Jedinjenja pronalaska se daju na bilo koji pogodan način u obliku farmaceutske kompozicije prilagođene takvom putu, i u dozi efikasnoj za predviđeni tretman. Jedinjenja pronalaska se mogu davati oralno, rektalno, vaginalno, parenteralno ili lokalno.

2

[0131] Jedinjenja pronalaska se mogu davati oralno. Oralna primena može uključivati gutanje, tako da jedinjenje ulazi u gastrointestinalni trakt, ili se može primeniti bukalna ili sublingvalna primena kojom jedinjenje ulazi u krvotok direktno iz usta.

[0132] U drugom aspektu, jedinjenja pronalaska se takođe mogu davati direktno u krvotok, u mišiće ili u unutrašnji organ. Pogodna sredstva za parenteralnu primenu uključuju intravensku, intraarterijsku, intraperitonealnu, intratekalnu, intraventrikularnu, intrauretralnu, intrasternalnu, intrakranijalnu, intramuskularnu i subkutanu. Pogodni uređaji za parenteralnu primenu uključuju injektore sa iglama (uključujući mikroigle), injektore bez igle i tehnike infuzije.

[0133] U drugom aspektu, jedinjenja pronalaska se takođe mogu primeniti lokalno na kožu ili mukozu, odnosno dermalno ili transdermalno. U drugom aspektu, jedinjenja pronalaska se takođe mogu davati intranazalno ili inhalacijom. U drugom aspektu, jedinjenja pronalaska se mogu davati rektalno ili vaginalno. U drugom izvođenju, jedinjenja pronalaska se takođe mogu davati direktno u oko ili uho.

[0134] Režim doziranja za jedinjenja pronalaska i/ili kompozicije koje sadrže navedena jedinjenja zasniva se na različitim faktorima, uključujući tip, starost, težinu, pol i zdravstveno stanje pacijenta; ozbiljnost stanja; put primene; i aktivnost određenog upotrebljenog jedinjenja. Stoga režim doziranja može uveliko varirati. U jednom aspektu, ukupna dnevna doza jedinjenja pronalaska je tipično od oko 0.001 do oko 100 mg/kg (tj. mg jedinjenja pronalaska po kg telesne težine) za lečenje naznačenih stanja o kojima se ovde raspravlja. U drugom aspektu, ukupna dnevna doza jedinjenja pronalaska je od oko 0.01 do oko 30 mg/kg, a u drugom aspektu, od oko 0.03 do oko 10 mg/kg, a u još jednom aspektu, od oko 0.1 do oko 3. Nije neuobičajeno da se primena jedinjenja pronalaska ponavlja više puta u toku dana (tipično ne više od 4 puta). Višestruke doze dnevno se obično mogu koristiti za povećanje ukupne dnevne doze, ako se želi.

[0135] Za oralnu primenu, kompozicije se mogu obezbediti u obliku tableta koje sadrže 0.1, 0.5, 1.0, 2.5, 5.0, 10.0, 15.0, 25.0, 30.0, 50.0, 75.0, 100, 125, 150, 175, 200, 250 i 500 m aktivnog sastojka za simptomatsko prilagođavanje doze pacijentu. Lek tipično sadrži od oko 0.01 mg do oko 500 mg aktivnog sastojka, ili u drugom aspektu, od oko 1 mg do oko 100 mg aktivnog sastojka. Intravenozno, doze mogu da se kreću od oko 0.01 do oko 10 mg/kg/minutu tokom infuzije konstantne brzine.

[0136] Pogodni subjekti prema pronalasku uključuju subjekte sisare. U jednom aspektu, ljudi su pogodni subjekti. Ljudi mogu biti bilo kog pola i u bilo kojoj fazi razvoja.

Farmaceutske kompozicije

[0137] U sledećem primeru izvođenja, pronalazak obuhvata farmaceutske kompozicije. Takve farmaceutske kompozicije sadrže jedinjenje pronalaska zajedno sa farmaceutski prihvatljivim nosačem. Mogu biti prisutne i druge farmakološki aktivne supstance. Kako se ovde koristi, "farmaceutski prihvatljiv nosač" uključuje sve rastvarače, disperzione medije, obloge, antibakterijske i antifungalne agense, izotonične agense i agense za odlaganje apsorpcije i slično koji su fiziološki kompatibilni. Primeri farmaceutski prihvatljivih nosača uključuju jedan ili više od vode, fiziološkog rastvora, fiziološkog rastvora puferovanog fosfatom, dekstroze, glicerola, etanola i slično, kao i njihove kombinacije, i mogu u svom sastavu uključivati izotonične agense, na primer, šećere, natrijum hlorid ili polialkohole kao što su kao manitol ili sorbitol. Farmaceutski prihvatljive supstance kao što su sredstva za vlaženje ili manje količine pomoćnih supstanci kao što su sredstva za vlaženje ili emulgatori, konzervansi ili puferi, koji produžavaju rok trajanja ili efikasnost antitela ili dela antitela.

[0138] Kompozicije ovog pronalaska mogu biti u različitim oblicima. To uključuje, na primer, tečne, polučvrste i čvrste dozne oblike, kao što su tečni rastvori (npr. rastvori za injekcije i rastvori za infuziju), disperzije ili suspenzije, tablete, pilule, praškovi, lipozomi i supozitorije. Oblik zavisi od nameravanog načina primene i terapeutske primene.

[0139] Tipične kompozicije su u obliku rastvora za injekcije ili infuzije, kao što su kompozicije slične onima koje se koriste za pasivnu imunizaciju ljudi antitelima uopšte. Jedan način primene je parenteralni (npr. intravenoski, subkutano, intraperitonealno, intramuskularno). U drugom aspektu, antitelo se primenjuje intravenskom infuzijom ili injekcijom. U još jednom izvođenju, antitelo se primenjuje intramuskularnom ili subkutanom injekcijom.

[0140] Oralna primena čvrstog doznog oblika može biti, na primer, predstavljena u diskretnim jedinicama, kao što su tvrde ili meke kapsule, pilule, kapsule, pastile ili tablete, od kojih svaka sadrži unapred određenu količinu najmanje jednog jedinjenja pronalaska. U drugom izvođenju, oralna primena može biti u obliku praha ili granula. U drugom izvođenju, oralni oblik doze je sublingvalan, kao što je, na primer, pastila. U takvim čvrstim doznim oblicima, jedinjenja Formule I se obično kombinuju sa jednim ili više pomoćnih sredstava. Takve kapsule ili tablete mogu sadržati formulaciju sa kontrolisanim oslobađanjem. U slučaju kapsula, tableta i pilula, dozni oblici takođe mogu sadržati puferske agense ili se mogu pripremiti sa enteričkim oblogama.

[0141] U drugom izvođenju, oralna primena može biti u tečnom doznom obliku. Tečni dozni

4

oblici za oralnu primenu obuhvataju, na primer, farmaceutski prihvatljive emulzije, rastvore, suspenzije, sirupe i eliksire koji sadrže inertne razblaživače koji se obično koriste u tehnici (npr. voda). Takve kompozicije takođe mogu da sadrže adjuvanse, kao što su sredstva za vlaženje, emulgovanje, suspendovanje, aromatiziranje (npr. zaslađivači) i/ili sredstva za postizanje mirisa.

[0142] U drugom aspektu, pronalazak obuhvata parenteralni dozni oblik. "Parenteralna primena" uključuje, na primer, subkutane injekcije, intravenske injekcije, intraperitonealno, intramuskularne injekcije, intrasternalne injekcije i infuziju. Preparati za injektiranje (tj. sterilne injektabilne vodene ili uljne suspenzije) mogu biti formulisane u skladu sa poznatim stanjem tehnike korišćenjem odgovarajućih sredstava za dispergovanje, vlaženje i/ili agensa za suspendovanje.

[0143] U drugom aspektu, pronalazak obuhvata oblik za lokalnu dozu. "Lokalna primena" uključuje, na primer, transdermalnu primenu, kao što je preko transdermalnih flastera ili uređaja za jontoforezu, intraokularnu primenu, ili intranazalnu ili inhalaciju. Kompozicije za topikalnu primenu takođe uključuju, na primer, lokalne gelove, sprejeve, masti i kreme. Lokalna formulacija može da sadrži jedinjenje koje poboljšava apsorpciju ili prodiranje aktivnog sastojka kroz kožu ili druga zahvaćena područja. Kada se jedinjenja ovog pronalaska daju transdermalnim uređajem, primena će biti obavljena korišćenjem flastera ili tipa rezervoara i porozne membrane ili tipa čvrstog matriksa. Tipične formulacije za ovu spiku uključuju gelove, hidrogelove, losione, rastvore, kreme, masti, pudere u prahu, obloge, pene, filmove, flastere za kožu, obloge, implantate, sunđere, vlakna, zavoje i mikroemulzije. Lipozomi se takođe mogu koristiti. Tipični nosači uključuju alkohol, vodu, mineralno ulje, tečni petrolatum, beli vazelin, glicerin, polietilen glikol i propilen glikol. Mogu biti ugrađeni pojačivači penetracije - videti npr. B.C. Finnin i T.M. Morgan, J. Pharm. Sci., vol. 88, pp.

955-958, 1999.

[0144] Formulacije pogodne za lokalnu primenu u oko uključuju, na primer, kapi za oči u kojima je jedinjenje ovog pronalaska rastvoreno ili suspendovano u pogodnom nosaču. Tipična formulacija pogodna za očnu ili auralnu primenu može biti u obliku kapi mikronizovane suspenzije ili rastvora u izotoničnom, pH prilagođenom, sterilnom fiziološkom rastvoru. Druge formulacije pogodne za očnu i auralnu primenu uključuju masti, biorazgradive (tj. apsorbujuće gel sunđere, kolagen) i ne-biorazgradive (tj. silikon) implante, pločice, sočiva i sisteme čestica ili vezikula, kao što su niozomi ili lipozomi. Polimer kao što je unakrsno povezana poliakrilna kiselina, polivinil alkohol, hijaluronska kiselina, celulozni polimer, na primer, hidroksipropilmetilceluloza, hidroksietilceluloza ili metilceluloza, ili heteropolisaharidni polimer, na primer, gelan guma, može biti ugrađen zajedno sa konzervansom, kao što je benzalkonijum hlorid. Takve formulacije se takođe mogu dostaviti jontoforezom.

[0145] Za intranazalnu primenu ili davanje inhalacijom, jedinjenja pronalaska se prikladno isporučuju u obliku rastvora ili suspenzije iz posude za raspršivanje pumpe koju pacijent stisne ili pumpe ili kao aerosol sprej iz posude pod pritiskom ili nebulizatora, uz upotrebu odgovarajućeg pogonskog goriva. Formulacije pogodne za intranazalnu primenu se obično daju u obliku suvog praha (ili sami, kao smeša, na primer, u suvoj mešavini sa laktozom, ili kao čestice mešane komponente, na primer, pomešane sa fosfolipidima, kao što je fosfatidilholin) iz inhalatora suvog praha ili kao aerosol sprej iz kontejnera pod pritiskom, pumpe, spreja, raspršivača (poželjno raspršivača koji koristi elektrohidrodinamiku za proizvodnju fine magle), ili nebulizatora, sa ili bez upotrebe odgovarajućeg potisnog gasa, kao što je 1,1,1,2-tetrafluoroetan ili 1,1,1,2,3,3,3-heptafluoropropan. Za intranazalnu upotrebu, prah može da sadrži bioadhezivni agens, na primer, hitozan ili ciklodekstrin.

[0146] U drugom aspektu, pronalazak obuhvata rektalni dozni oblik. Takav rektalni dozni oblik može biti u obliku, na primer, supozitorija. Kakao puter je tradicionalna baza za supozitorije, ali se mogu koristiti različite alternative prema potrebi.

[0147] Mogu se takođe koristiti i drugi materijali za nosače i načini primene poznati u farmaceutskoj tehnici. Farmaceutske kompozicije pronalaska se mogu pripremiti bilo kojom od dobro poznatih tehnika farmacije, kao što su efikasne formulacije i procedure primene. Gore navedena razmatranja u vezi sa efikasnim formulacijama i postupcima administracije su dobro poznata u tehnici i opisana su u standardnim udžbenicima. Formulisanje lekova se razmatra u npr. Hoover, John E., Remington’s Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton,

Pennsylvania, 1975; Liberman et al., Eds., Pharmaceutical Dosage Forms, Marcel Decker, New York, N.Y., 1980; i Kibbe et al., Eds., Handbook of Pharmaceutical Excipients (3rd Ed.), American Pharmaceutical Association, Washington, 1999.

Zajednička primena

[0148] Jedinjenja pronalaska se mogu koristiti sama, ili u kombinaciji sa drugim terapeutskim agensima. Pronalazak obezbeđuje bilo koju od upotreba, postupaka ili kompozicija kako je ovde definisano pri čemu se jedinjenje bilo koje varijante Formule I ovde, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, ili farmaceutski prihvatljiv solvat pomenutog jedinjenja ili soli, koristi u kombinaciji sa jednim ili više drugih terapeutskih agenasa o kojima se ovde govori. Ovo bi uključivalo farmaceutsku kompoziciju za lečenje bolesti ili stanja za koje je indikovan agonist GLP-1R, koji sadrži jedinjenje Formule I, II, III, IV ili V, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, kao što je definisan u bilo kojoj od varijanti opisanih ovde, i jedan ili više drugih terapeutskih agenasa o kojima se ovde raspravlja.

[0149] Primena dva ili više jedinjenja "u kombinaciji" znači da se sva jedinjenja primenjuju dovoljno vremenski blisko da svako od njih može da generiše biološki efekat u istom vremenskom okviru. Prisustvo jednog agensa može da promeni biološke efekte drugog jedinjenja. Dva ili više jedinjenja se mogu davati simultano, istovremeno ili uzastopno. Dodatno, simultana primena se može izvesti mešanjem jedinjenja pre primene ili primenom jedinjenja u istom trenutku, ali kao odvojeni dozni oblici na istom ili različitom mestu primene.

[0150] Izrazi "istovremena primena", "zajednička administracija", "simultana primena" i "primenjena istovremeno" znače da se jedinjenja primenjuju u kombinaciji.

[0151] U drugom aspektu, pronalazak obezbeđuje postupke lečenja koji uključuju davanje jedinjenja iz ovog pronalaska u kombinaciji sa jednim ili više drugih farmaceutskih agenasa, pri čemu jedan ili više drugih farmaceutskih agenasa mogu biti izabrani od agenasa o kojima se ovde raspravlja.

[0152] U jednom aspektu, jedinjenja ovog pronalaska se daju sa antidijabetičkim agensom uključujući, ali bez ograničenja na, biguanide (npr., metformin), sulfonilurea (npr., tolbutamid, glibenclamid, gliklazid, hlorpropamid, tolazamid, acetoheksamid, gliklopiramid, glimepirid, ili glipizid), tiazolidindion (npr., pioglitazon, rosiglitazon, ili lobeglitazon), glitazar (npr., saroglitazar, aleglitazar, muraglitazar ili tesaglitazar), meglitinid (npr., nateglinid, repaglinid), inhibitor dipeptidil peptidaze 4 (DPP-4) (npr., sitagliptin, vildagliptin, saksagliptin, linagliptin, gemigliptin, anagliptin, teneligliptin, alogliptin, trelagliptin, dutogliptin, ili omarigliptin), glitazon (npr., pioglitazon, rosiglitazon, balaglitazon, rivoglitazon, ili lobeglitazon), natrijum-glukoza povezani transporter 2 (SGLT2) inhibitor (npr., empagliflozin, kanagliflozin, dapagliflozin, ipragliflozin, ipragliflozin, tofogliflozin, sergliflozin etabonat, remogliflozin etabonat, ili ertugliflozin), SGLTL1 inhibitor, GPR40 agonist (FFAR1/FFA1 agonist, npr., fasiglifam), glukoza zavisni insulinotropni peptid (GIP) i njegovi analozi, inhibitor alfa glukozidaze (npr., voglibose, acarbose, ili miglitol), ili insulin ili insulin analog, uključujući farmaceutski prihvatljive soli specifično imenovanih agenasa i farmaceutski prihavtljive solvate pomenutih agenasa i soli.

[0153] U drugom aspektu, jedinjenja ovog pronalaska se primenjuju sa agensom protiv gojaznosti uključujući, ali ne ograničavajući se na peptid II ili njegov analog, agonist neuropeptidnog I receptora tipa 2 (NPIR2), antagonist NPIR1 ili NPIR5, kanabinoidni receptor tipa 1 ( CB1R) antagonist, inhibitor lipaze (npr., orlistat), humani proislet peptid (HIP), agonist melanokortinskog receptora 4 (npr. setmelanotid), antagonist receptora 1 hormona koji koncetruje melanin, agonist farnezoidnog X receptora (FXR) (npr. obetiholna kiselina), zonisamid, fentermin (sam ili u kombinaciji sa topiramatom), inhibitor ponovnog preuzimanja norepinefrina/dopamina (npr. bupropion), antagonist opioidnih receptora (npr. naltrekson), kombinacija norepinefrina/dopamina i inhibitora ponovnog preuzimanja dopamina i opioidnog receptora (npr., kombinacija bupropiona i naltreksona), analog GDF-15, sibutramin, agonist holecistokinina, amilin i njegovi analozi (npr. pramlintid), leptin i njegovi analozi (npr. metroleptin), serotonergički agens (npr. lorkaserin), inhibitor metionin aminopeptidaze 2 (MetAP2) (npr. beloranib ili ZGN-1061), fendimetrazin, dietilpropion, benzfetamin, SGLT2 inhibitor (npr. etabonat, ili ertugliflozin), inhibitor SGLTL1, dvostruki inhibitor SGLT2/SGLT1, modulator receptora faktora rasta fibroblasta (FGFR), aktivator protein kinaze aktivirane AMP (AMPK), biotin, modulator MAS receptora ili agonist receptora glukagona (sam ili u kombinacija sa drugim GLP-1R agonistom, npr., liraglutidom, eksenatidom, dulaglutidom, albiglutidom, liksisenatidom ili semaglutidom), uključujući farmaceutski prihvatljive soli specifično imenovanih agenasa i farmaceutski prihvatljive solvate navedenih agenasa i soli.

[0154] U sledećem primeru izvođenja, jedinjenja ovog pronalaska se daju u kombinaciji sa jednim ili više od sledećeg: sredstvom za lečenje NASH uključujući, ali ne ograničavajući se na PF-05221304, FXR agonist (npr., obetiholna kiselina), PPAR α/δ agonist (npr. elafibranor), sintetički konjugat masne kiseline i žučne kiseline (npr. aramhol), inhibitor kaspaze (npr. emrikasan), monoklonsko antitelo anti-lizil oksidaza homolog 2 (LOKSL2) (npr. simtuzumab), 3 inhibitor (npr. GR-MD-02), MAPK5 inhibitor (npr. GS-4997), dvostruki antagonist receptora hemokina 2 (CCR2) i CCR5 (npr. cenikrivirok), agonist faktora rasta fibroblasta 21 (FGF21) (npr. BMS-986036), antagonist receptora leukotriena D4 (LTD4) (npr. tipelukast), analog niacina (npr. ARI 3037MO), inhibitor ASBT (npr. voliksibat), inhibitor acetil-CoA karboksilaze (ACC) (npr., NDI 010976 ili PF-05221304), inhibitor ketoheksokinaze (KHK), inhibitor diacilgliceril aciltransferaze 2 (DGAT2), antagonist CB1 receptora, anti-CB1R antitelo ili inhibitor kinaze 1 koja reguliše apoptotski signal (ASK1), uključujući farmaceutski prihvatljive soli specifično imenovanih agenasa i farmaceutski prihvatljive solvate navedenih agenasa i soli.

[0155] Neka specifična jedinjenja koja se mogu koristiti u kombinaciji sa jedinjenjima iz ovog pronalaska za lečenje bolesti ili poremećaja opisanih ovde (npr. NASH) uključuju: 4-(4-(1-izopropil-7-okso-1.4,6.7-tetrahidrospiro[indazol-5.4'-piperidin]-1'-karbonil)-6-metoksipiridin-2-il)benzojeva kiselina , koji je primer selektivnog ACC inhibitora i pripremljena je kao slobodna kiselina u Primeru 9 u U.S. Patent No. 8,859,577, koji je U.S. nacionalna faza Međunarodne prijave br. PCT/IB2011/054119.

[0156] Kristalni oblici 4-(4-(1-izopropil-7-okso-1.4,6.7-tetrahidrospiro[indazol-5.4'-piperidin]-1'-karbonil)-6-metoksipiridin-2-il )benzojeva kiseline, uključujući anhidrovani mono-tris oblik (Forma 1) i trihidrat mono-tris soli (Forma 2), opisani su u Međunarodnoj PCT prijavi br. PCT/IB2018/058966;

[0157] (S)-2-(5-((3-etoksipiridin-2-il)oksi)piridin-3-il)-N-(tetrahidrofuran-3-il)pirimidin-5-karboksamid, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, i njegove kristalne čvrste forme (Forma 1 i Forma 2) je primer inhibitora DGAT2 opisanog u Primeru 1 u U.S. Patent No.

10,071,992;

[0158] [(1R.5S,6R)-3-{2-[(2S)-2-metilazetidin-1-il]-6-(trifluorometil)pirimidin-4-il}-3-azabiciklo[3.1.0]heks- 6-il]sirćetna kiselina, ili njena farmaceutski prihvatljiva so, (uključujući njenu kristalnu slobodnu kiselinu) je primer inhibitora ketoheksokinaze i opisana je u Primeru 4 U.S. Patent No.9,809,579; i

FXR agonist Tropifexor ili njegova farmaceutski prihvatljiva so je opisan u Primeru 1-1B u U.S. Patent No.119,150,568.

[0159] Ovi agensi i jedinjenja pronalaska mogu se kombinovati sa farmaceutski prihvatljivim nosačima kao što su fiziološki rastvor, Ringer-ov rastvor, rastvor dekstroze i slično. Određeni režim doziranja, tj. doza, vreme i ponavljanje, zavisiće od određene osobe i medicinske istorije tog pojedinca.

[0160] Prihvatljivi nosači, ekscipijenti ili stabilizatori su netoksični za primaoce u korišćenim dozama i koncentracijama, i mogu sadržati pufere kao što su fosfat, citrat i druge organske kiseline; soli kao što je natrijum hlorid; antioksidansi uključujući askorbinsku kiselinu i metionin; konzervansi (kao što su oktadecildimetilbenzil amonijum hlorid; heksametonijum hlorid; benzalkonijum hlorid, benzetonijum hlorid; fenol, butil ili benzil alkohol; alkil parabeni, kao što su metil ili propil paraben; katehol; rezorcinol; cikloheksanol; 3-pentanol; i m-krezol); polipeptide male molekularne težine (manje od oko 10 ostataka); proteini, kao što su serumski albumin, želatin ili Ig; hidrofilni polimeri kao što je polivinilpirolidon; aminokiseline kao što su glicin, glutamin, asparagin, histidin, arginin ili lizin; monosaharidi, disaharidi i drugi ugljeni hidrati uključujući glukozu, manozu ili dekstrine; helatni agensi kao što je EDTA; šećeri kao što su saharoza, manitol, trehaloza ili sorbitol; protivjoni koji stvaraju soli kao što je natrijum; kompleksi metala (npr. kompleksi Zn-proteina); i/ili nejonske površinski aktivne materije kao što je TWEEN<™>, PLURONICS<™>ili polietilen glikol (PEG).

[0161] Lipozomi koji sadrže ove agense i/ili jedinjenja pronalaska se pripremaju postupcima poznatim u tehnici, kao što su opisani u U.S. Pat. No. 4,485,045 i 4,544,545. Lipozomi sa produženim vremenom cirkulacije su otkriveni u U.S. Patent No. 5,013,556. Posebno korisni lipozomi mogu se dobiti postupkom reverzne faze isparavanja sa lipidnom kompozicijom koja sadrži fosfatidilholin, holesterol i PEG-derivatizovan fosfatidiletanolamin (PEG-PE). Lipozomi se ekstrudiraju kroz filtere definisane veličine pora da bi se dobili lipozomi željenog prečnika.

[0162] Ovi agensi i/ili jedinjenja pronalaska takođe mogu biti zarobljeni u mikrokapsulama pripremljenim, na primer, tehnikama koacervacije ili interfacijskom polimerizacijom, na primer, hidroksimetilceluloza ili želatino-mikrokapsule i poli-(metilmetakrilat) mikrokapsule, respektivno, u sistemima za isporuku koloidnog leka (na primer, lipozomi, albuminske mikrosfere, mikroemulzije, nano-čestice i nanokapsule) ili u makroemulzijama. Takve tehnike su otkrivene u Remington, The Science and Practice of Pharmacy, 20th Ed., Mack Publishing (2000.).

[0163] Mogu se koristiti preparati sa produženim oslobađanjem. Pogodni primeri preparata sa produženim oslobađanjem obuhvataju polupropusne matrice čvrstih hidrofobnih polimera koji sadrže jedinjenje Formule I, II, III, IV ili V, pri čemu su matrice u obliku oblikovanih artikala, npr. filmova ili mikrokapsula. Primeri matrica sa produženim oslobađanjem uključuju poliestre, hidrogelove (na primer, poli(2-hidroksietil-metakrilat) ili poli(vinilalkohol)), polilaktide (U.S. Pat. No.3,773,919), kopolimeri L-glutaminske kiseline i 7 etil-L-glutamata, nerazgradivi etilen-vinil acetat, razgradivi kopolimeri mlečne kiseline i glikolne kiseline kao što su oni koji se koriste u LUPRON DEPOT<™>(mikrosfere za injekcije sastavljene od kopolimera mlečne kiseline i glikolne kiseline i leuprolid acetata), saharoze acetat izobutirata i poli-D-(-)-3-hidroksibuterne kiseline.

[0164] Formulacije koje se koriste za intravensku primenu moraju biti sterilne. Ovo se lako postiže, na primer, filtriranjem kroz sterilne filtracione membrane. Jedinjenja pronalaska se generalno stavljaju u kontejner koji ima sterilni pristupni otvor, na primer, vrećicu za intravenski rastvor ili bočicu sa čepom koji se može probiti iglom za hipodermičku injekciju.

[0165] Odgovarajuće emulzije se mogu pripremiti korišćenjem komercijalno dostupnih emulzija masti, kao što je Intralipid<™>, Liposin<™>, Infonutrol<™>, Lipofundin<™>i Lipifizan<™>.

4

Aktivni sastojak može biti rastvoren u prethodno mešanoj kompoziciji emulzije ili alternativno može biti rastvoren u ulju (npr. sojino ulje, ulje šafranike, ulje semena pamuka, ulje kukuruza ili bademovo ulje) i emulzija koja se formira mešanjem sa fosfolipidom (npr. fosfolipidi jaja, fosfolipidi soje ili sojin lecitin) i vodom. Shvatiće se da se mogu dodati i drugi sastojci, na primer glicerol ili glukoza, da se podesi toničnost emulzije. Odgovarajuće emulzije će tipično sadržati do 20% ulja, na primer, između 5 i 20%. Emulzija masti može da sadrži kapljice masti između 0.1 i 1.0 µm, posebno 0.1 i 0.5 µm, i ima pH u opsegu od 5.5 do 8.0.

[0166] Kompozicije emulzije mogu biti one pripremljene mešanjem jedinjenja pronalaska sa Intralipidom<™>ili njihove komponente (sojino ulje, fosfolipidi jaja, glicerol i voda).

[0167] Kompozicije za inhalaciju ili insuflaciju obuhvataju rastvore i suspenzije u farmaceutski prihvatljivim, vodenim ili organskim rastvaračima, ili njihove smeše, i prahove. Tečne ili čvrste kompozicije mogu sadržati pogodne farmaceutski prihvatljive ekscipijente kao što je gore navedeno. U nekim primera izvođenja, kompozicije se primenjuju oralnim ili nazalnim respiratornim putem za lokalni ili sistemski efekat. Kompozicije u poželjno sterilnim farmaceutski prihvatljivim rastvaračima mogu se raspršiti upotrebom gasova. Rastvori za raspršivanje mogu se udisati direktno iz uređaja za raspršivanje ili uređaj za raspršivanje može biti pričvršćen za masku za lice, zastor ili mašinu za disanje sa povremenim pozitivnim pritiskom. Kompozicije rastvora, suspenzije ili praha mogu se davati, poželjno oralno ili nazalno, iz uređaja koji daju formulaciju na odgovarajući način.

Kompleti

[0168] Drugi aspekt pronalaska obezbeđuje komplete koji sadrže jedinjenje Formule I, II, III, IV ili V ili farmaceutske kompozicije koje sadrže jedinjenje Formule I, II, III, IV ili V pronalaska. Komplet može uključivati, pored jedinjenja Formule I, II ili III, pronalaska ili njegove farmaceutske kompozicije, dijagnostička ili terapeutska sredstva. Komplet takođe može da sadrži uputstva za upotrebu u dijagnostičkom ili terapijskom postupku. U nekim primera izvođenja, komplet uključuje jedinjenje Formule I, II, III, IV ili V, ili njegovu farmaceutsku kompoziciju i dijagnostički agens. U drugim primera izvođenja, komplet uključuje jedinjenje Formule I, II, III, IV ili V, ili njegovu farmaceutsku kompoziciju.

[0169] U još jednom aspektu, pronalazak obuhvata komplete koji su pogodni za upotrebu u izvođenju postupaka lečenja opisanih ovde. U jednom aspektu, komplet sadrži prvi oblik doze koji sadrži jedno ili više jedinjenja pronalaska u količinama dovoljnim za sprovođenje postupaka pronalaska. U drugom aspektu, komplet sadrži jedno ili više jedinjenja pronalaska u količinama dovoljnim za sprovođenje postupaka pronalaska i kontejner za doziranje i kontejner za doziranje.

PRIPREMA

[0170] Jedinjenja Formule I, II, III, IV ili V mogu se dobiti opštim i specifičnim postupcima opisanim u nastavku, koristeći opšte opšte znanje stručnjaka u oblasti sintetičke organske hemije. Takva opšta znanja mogu se naći u standardnim referentnim knjigama kao npr Comprehensive Organic Chemistry, Ed. Barton and Ollis, Elsevier; Comprehensive Organic Transformations: A Guide to Functional Group Preparations, Larock, John Wiley and Sons; i Compendium of Organic Synthetic Methods, Vol. I-XII (publikovan od strane Wiley-Interscience) Početni materijali koji se ovde koriste su komercijalno dostupni ili se mogu pripremiti rutinskim postupcima poznatim u tehnici.

[0171] U pripremi jedinjenja Formule I, II, III, IV ili V, primećeno je da neki od postupaka pripreme koji su ovde opisani mogu zahtevati zaštitu udaljene funkcionalnosti (npr. primarni amin, sekundarni amin, karboksil u prekursorima Formule I ). Potreba za takvom zaštitom će varirati u zavisnosti od prirode daljinske funkcionalnosti i uslova postupka pripreme. Potrebu za takvom zaštitom lako će utvrditi stručnjak u ovoj oblasti. Upotreba takvih postupaka zaštite/deprotekcije je takođe u okviru stručnosti u ovoj oblasti. Za opšti opis zaštitnih grupa i njihove upotrebe, videti T.W. Greene, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley & Sons, New York, 1991.

[0172] Na primer, određena jedinjenja sadrže primarne amine ili funkcionalne grupe karboksilne kiseline koje mogu da ometaju reakcije na drugim mestima molekula ako se ne zaštite. Shodno tome, takve funkcionalnosti mogu biti zaštićene odgovarajućom zaštitnom grupom koja se može ukloniti u narednom koraku. Pogodne zaštitne grupe za zaštitu amina i karboksilne kiseline uključuju one zaštitne grupe koje se obično koriste u sintezi peptida (kao što su N-t-butoksikarbonil (Boc), benziloksikarbonil (Cbz) i 9-fluorenilmetilenoksikarbonil (Fmoc) za amine i niži alkil ili benzil estre kiseline) koje generalno nisu hemijski reaktivne pod opisanim reakcionim uslovima i tipično se mogu ukloniti bez hemijske promene druge funkcionalnosti u jedinjenjima Formule I.

[0173] Šeme opisane u nastavku imaju za cilj da pruže opšti opis metodologije korišćene u pripremi jedinjenja ovog pronalaska. Neka od jedinjenja ovog pronalaska mogu da sadrže jedan ili više hiralnih centara sa stereohemijskom oznakom (R) ili (S). Stručnjaku će biti očigledno da se sve sintetičke transformacije mogu sprovesti na sličan način, bilo da su materijali obogaćeni enantio ili racemski. Dodatno, razdvajanje do željenog optički aktivnog materijala može se desiti na bilo kojoj željenoj tački u sekvenci korišćenjem dobro poznatih postupaka kao što su opisani ovde i u literaturi za hemiju. Na primer, intermedijeri (npr. S4, S7, S8, S24, S40, i S41) i finalna jedinjenja (npr. S25 i S42) mogu da se razdvoje korišćenjem hiralnih hromatografskih metoda. Alternativno, hiralne soli se mogu koristiti za izolovanje enantiomerno obogaćenih intermedijera i finalnih jedinjenja.

[0174] U šemama koje slede, promenljive X, Y, Z<1>, Z<2>, Z<3>, R, R<1>, R<2>, R<3>, R<4>, m, p i k su kao što je ovde opisano za jedinjenja Formule I, II, III, IV ili V osim ako nije drugačije naznačeno. Radi jednostavnosti, promenljiva A se koristi za označavanje prstena A i njegovog opcionog supstituenta R<1>. Za dole navedene šeme, svaki X<1>, X<2>, X<3>, i X<4>može nezavisno da bude odlazeća grupa kao što je bilo koji alkil ili aril sulfonat (npr. mezilat, tozilat ili triflat), ili halogen ili bilo koja druga grupa koja može biti zamenjena aminom ili korišćena u reakciji kuplovanja posredovanom metalom. X<4>može takođe biti zaštićena karboksilna kiselina (tj., estar). Kada je zaštitna grupa identifikovana kao Pg<1>može biti zaštitna grupa za alkil amin kao što je benzil, benzhidril, alil ili slično; karbamatnu zaštitnu grupu kao što su Boc, Cbz, ili slično; ili amid zaštitnu grupu kao što je trifluoroacetamid. Kada je zaštitna grupa identifikovana kao Pg<2>, može biti zaštitna grupa za kiselinu kao što je metil, etil, benzil, t-butil ili slično. Kada je zaštitna grupa identifikovana kao Pg<3>može biti zaštitna grupa alkohola kao što je trimetilsililetoksietil; ili acil grupa kao što je acetil, benzoil ili slično; ili trialkilsilil grupa kao što je trimetilsilil, terc-butildimetilsilil, triizopropilsilil ili slično. R<2a>je H ili -C1-2alkil, pri čemu alkil može imati 0 do 1 OH. R<4a>je C1-2alkil, C0-

2alkilen-C3-6cikloalkil, C0-2alkilen-R<5>, ili C1-2alkilen-R<6>, pri čemu navedeni alkil, alkilen ili cikloalkil mogu biti nezavisno supstituisani kako valenca dozvoljava sa 0 do 3 F atoma i 0 do 1 supstituentom nezavisno odabranim od C0-1alkilen-OR<O>i -N(R<N>)2.

[0175] Supstituisani piperidin S8, gde je R<2>= H i Y = CH, može se dobiti kao što je objašnjeno u Šemi 1. Aril ili heteroaril bromid S1 može se tretirati sa alkil litijumom, na primer butil litijumom ili terc-butil litijumom, da bi se dobila aril- ili heteroaril-litijum vrsta koja može da reaguje sa aldehidom S2 da bi se dobio diol S3. Drugi aril ili heteroaril organometalni reagensi, kao što su, ali bez ograničenja, Grignard-ovi reagensi, takođe se mogu koristiti u pripremi S3. Reakcija se obično izvodi na temperaturi oko -70 °C. Diol S3 može se zatim oksidovati sa NaIO4da obezbedi acetal S4 (R<2>= H). Jedinjenje S4 zatim može reagovati sa supstituisanom boronskom kiselinom ili boronatnim estrom (S5) u prisustvu paladijumskog katalizatora i kompleksa liganda na način Suzuki reakcije (Maluenda and

4

Navaro, Molecules, 2015, 20, 7528-7557) za dobijanje jedinjenja opšte formule S6.

Redukcija olefina da bi se dobila jedinjenja opšte strukture S7 može se izvesti u atmosferi vodonika (15-100 psi H2) u alkoholnom rastvaraču kao što je MeOH ili EtOH ili alternativno u aprotonskom organskom rastvaraču kao što je EtOAc ili THF u prisustvu odgovarajućeg katalizatora kao što je paladijum na ugljeniku, Pd(OH)2na ugljeniku (Pearlman katalizator), PtO2(Adams katalizator), ili tris(trifenilfosfin) rodijum(I) hlorid (Wilkinson katalizator). Reagensi za transfer hidrogenacije, na primer amonijum format ili dihidrobenzen, ili slično, mogu se upotrebiti korišćenjem odgovarajućeg katalizatora. Alternativno, redukcija se može postići alternativnim postupcima poznatim stručnjacima u tehnici korišćenjem reagensa kao što su trietil silan ili drugi silani, pod kiselom ili metalnom katalizom, ili metalnih reduktora, kao što je magnezijum ili slično. Alternativno, olefin se može funkcionalizovati postupcima poznatim stručnjacima za uvođenje R<3>grupe. Na primer, olefin se može hidroborovati da bi se proizveo alkohol koji bi mogao da se alkiluje ili dalje konvertuje u nitrilnu, F ili alkil grupu. Uklanjanje Pg<1>može se izvesti sa mnogim postupcima opisanim u literaturi da bi se dobili amini S8.

Šema 1

[0176] Šema 2 daje alternativnu pripremu jedinjenja opšte strukture S4. Reakcija odgovarajuće supstituisanih diola opšte strukture S9 sa aldehidima ili ketonima opšte strukture S10a u prisustvu kiseline kao što je p-toluensulfonska kiselina ili piridinijum ptoluensulfonat u aprotonskom organskom rastvaraču kao što je toluen ili benzen mogu da daju jedinjenja opšte strukture S4. Reakcija se obično zagreva na refluksu pomoću Dean-Stark zamke da bi se azeotropno uklonila voda. Dioli S9 takođe mogu reagovati sa cikličnim (tačkasta linija postoji) ili acikličnim (tačkasta linija je odsutna) acetalima ili ketalima opšte strukture S10b pod kiselom katalizom. Isto važi i za ciklične ili aciklične tioacetale ili tioketale opšte strukture S10c pod uticajem živinih soli, blagih oksidanata ili alkilirajućih reagensa, da bi se dobila jedinjenja S4. Alternativno, dioli opšte formule S9 mogu reagovati sa odgovarajuće supstituisanim alkinom S11 u aprotonskom rastvaraču kao što je toluen u prisustvu trirutenijum dodekakarbonila na temperaturi oko 100 °C da bi se isporučila jedinjenja opšte strukture S4 gde je R<2>= CH2R<2a>. U slučajevima kada R<2>sadrži alkoholnu funkcionalnu grupu, kao što je CH2OH, grupa za zaštitu alkohola (Pg<3>), kao što je acetat, mogu se ugraditi u jedinjenja opšte strukture S10. Zaštitna grupa se zatim može ukloniti u sledećem koraku. Intermedijer S4 se zatim može dalje modifikovati korišćenjem postupaka opisanih za Šemu 1 da bi se dobili amini opšte strukture S8.

Šema 2

[0177] Kao što je dato u šemi 3, konverzija od S4 na jedinjenja opšte strukture S7 gde se Y = N može postići na takav način kao što je Buchvald-Hartvig C-N sprega između jedinjenja opšte strukture S4 i odgovarajuće supstituisanog i zaštićenog piperazina S12 u prisustvu paladijumskog ili bakarnog katalizatora i kompleksa liganda. Ove reakcije se generalno izvode između 0 i 110 °C u aprotonskim organskim rastvaračima kao što su, ali ne ograničavajući se na 1,4-dioksan i PhCH3sa dodatkom baze kao što je Cs2CO3, LiHMDS ili NaOtBu. Uklanjanje Pg<1>može se izvesti sa mnogim postupcima opisanim u literaturi za dobijanje amina S8 gde je Y = N.

4

Šema 3

[0178] Jedinjenja amina S8 pripremljena postupcima opisanim u Šemama 1-3 mogu se alkilovati sa zaštićenim 2-bromoacetatom u prisustvu pogodne baze kao što je K2CO3, Et3N, NaH ili LiHMDS u polarnom aprotonskom rastvaraču kao što je, ali ne ograničavajući se na, DMF, DMAc, DMSO ili NMP za isporuku jedinjenja opšte strukture S13 (X= N, L = CH2). Standardna hidroliza estra se može izvesti da bi se dobile kiseline S14. Ako Pg<2>je t-butil, standardne kisele metode uklanjanja zaštite kao što su TFA/DCM, HCl/1,4-dioksan, HCl/EtOAc ili drugi pogodni uslovi mogu se koristiti za isporuku kiselina S14. Ako Pg<2>je metil ili etil, standardne osnovne metode uklanjanja zaštite kao što je vodeni NaOH u metanolu ili etanolu, ili drugi pogodni uslovi mogu se koristiti za isporuku kiselina S14.

Šema 4

[0179] Jedinjenja opšte strukture S15 (Šema 5) mogu da reaguju sa aminima R<4>NH2u prisustvu baza kao što su natrijum-, kalijum- ili cezijum karbonat, -bikarbonat, hidroksid, acetat ili organska aminska baza kao što je Et3N, DIPEA, DBU i slično u polarnom aprotonskom rastvaraču kao što je, ali ne ograničavajući se na THF, DMF, DMAc, DMSO ili NMP, ili protonskom rastvaraču kao što je voda, MeOH, EtOH ili iPrOH ili njihovoj smeši za isporuku jedinjenja opšte strukture S16. Primetićemo da ako primer pruža R<4>sa razdvojenim enantiomernim centrom, drugi enantiomer ili njegova racemska smeša mogu se dobiti izborom odgovarajućeg početnog materijala. Poželjno X<3>supstituenti uključuju F, Cl i Br, poželjno X<4>grupe uključuju Cl, Br, i -CO2-Pg<2>. Na redukciju nitro grupe može uticati hidrogenacija na 1-6 atm H2sa metalnim katalizatorom kao što je paladijum na ugljeniku ili Raney nikl u protonskom rastvaraču kao što je MeOH ili EtOH ili aprotonskim rastvaračem kao što su DMF, THF ili EtOAc. Alternativno, nitro grupa se može redukovati gvožđem, cinkom, SnCl2ili drugim pogodnim metalom u kiseloj sredini kao što je 1N HCl, AcOH ili

4

vodeni rastvor NH4Cl u THF ili metanolu da bi se dobila jedinjenja opšte strukture S17 (Šema 5a). Jedinjenja kao što su S18 mogu biti acilirana acil halogenidima na standardni način ili karboksilatima preko standardnih protokola spajanja amida da bi se dobila jedinjenja S19. Redukcija na jedinjenja S20 može se izvesti pod standardnim uslovima sa redukcionim agensima kao što su LAH ili BH3-THF ili BH3-DMS (šema 5b).

Šema 5

[0180] Jedinjenja diamina S17 i S20 pripremljena postupcima opisanim u šemama 5a i 5b, zajedno označena kao diamin S21 (Šema 6), mogu biti acilovani kiselinama opšte strukture S14 pod standardnim protokolima spajanja amida za isporuku amida S22 koji će postojati kao smeša od 100% S22a do 100% S22b. Ova smeša amina S22 može biti ciklizovana da isporuči jedinjenja opšte strukture S23 raznim postupcima. Amin S22 može se zagrejati sredstvom za dehidrataciju kao što je T3P<®>ili alkil alkohol kao što je n-butanol u mikrotalasnim uslovima (10-60 min na 120-180°C) za isporuku jedinjenja S23. Alternativno, smeša jedinjenja S22 može se zagrevati u kiselim uslovima kao što je AcOH od 60-100 °C ili pod baznim uslovima kao što je vodeni rastvor NaOH ili KOH u 1,4-dioksanu od 60-100 °C da bi se obezbedio S23. Jedinjenja opšte strukture S23 (X<4>= Cl, Br ili I) mogu se pretvoriti u estre strukture S24 karbonilacijom katalizovanom paladijumom u atmosferi ugljen monoksida od 15-100 psi na temperaturi od 20-100 na temperaturi od 20-100 °C sa odgovarajućim alkoholom kao što je MeOH ili EtOH ili drugi alkil alkohol. Hidroliza estra S24 može se izvesti kao što je opisano u Šemi 4 da bi se dobile kiseline S25. Za jedinjenja S22 gde je X<4>= CO2-Pg<2>pretvaranje u estar S24 nastavlja pod sličnim uslovima kao što je prethodno opisano, osim za upotrebu osnovne metode ciklizacije gde jedinjenje S25 može biti izolovano direktno iz reakcione smeše. Za jedinjenja S24 gde X<4>je CO2tBu, uklanjanje zaštite do kiseline S25 može se izvesti u kiselim uslovima opisanim u Šemi 4. Alternativno,

4

za jedinjenja S24 gde Pg<2>je C1-C8alkil, kao što je metil, etil, heksil ili oktil, deprotekcija estra može biti izvedena sa različitim enzimima uključujući esteraze, proteaze, peptidaze, lipaze i glikozidaze koji su dobro poznati stručnjacima u ovoj oblasti. Hidroliza se takođe može izvesti tretiranjem estra sa vodenim rastvorom 1.5,7-triazabiciklo[4.4.0]dec-5-ena na sobnoj temperaturi.

Šema 6

[0181] Pored toga, diamin S21 može se konvertovati u 2-hlorometil benzimidazol S26 (šema 7) putem nekoliko postupaka. Tretman sa 2-hloracetil hloridom ili hlorosirćetnim anhidridom u aprotonskom rastvaraču kao što je 1,4-dioksan praćen zagrevanjem na 40-100 °C tokom 2-18 h može dati željeni benzimidazol S26 gde Z<1>, Z<2>i Z<3>su CH. U slučajevima kada Z<1>, Z<2>i Z<3>nisu svi CR<z>, nakon tretmana sa 2-hloroacetil hloridom u aprotonskom rastvaraču kao što je 1,4-dioksan u trajanju od 30 min do 4 h, rastvarač se zamenjuje kiselim medijumom kao što je AcOH ili TFA, a zatim se zagreva na 40-100 °C tokom 2 -18 h da bi se dobilo željeno jedinjenje S26. Diamin S21 takođe se može tretirati anhidridom hlorosirćetne kiseline na temperaturi između 0 i 80 °C u aprotonskom rastvaraču kao što je, ali ne ograničavajući se na

4

1,4-dioksan, THF ili MeCN, nakon čega sledi zagrevanje od 2 do 18 h na 60-100°C da isporuči željeno jedinjenje S26. Pored toga, diamin S21 može se tretirati sa 2-hloro-1,1,1-trimetoksietanom u aprotonskom rastvaraču kao što je, ali ne ograničavajući se na 1,4-dioksan, THF ili MeCN, ili protonskim rastvaračem, npr., MeOH ili EtOH, u prisustvu kiselog katalizatora, npr. pTSA, na 20-100 °C. Alternativno, diamini S21 se mogu zagrejati na 100-180 °C sa 2-hidroksisirćetnom kiselinom u aprotonskom rastvaraču, kao što je, ali bez ograničenja na, mezitilen, da bi se dobio hidroksimetil intermedijer. Konverzija hidroksimetil grupe u hlorometil jedinjenje S26 može se postići standardnim postupcima, uključujući tretman sa SOCl2u aprotonskom rastvaraču. Jedinjenja opšte strukture S26 može da reaguje sa jedinjenjima S8 u prisustvu baza kao što su natrijum-, kalijum- ili cezijum karbonat, -bikarbonat, NaH ili organska amin baza kao što je Et3N, DIPEA, DBU i slično u polarnom aprotonskom rastvaraču, kao što su, ali ne ograničavajući se na THF, MeCN, DMF, DMAc, DMSO ili NMP, za isporuku jedinjenja S23 (X<4>= Cl, Br, I) ili jedinjenja S24 (X<4>= CO2-Pg<2>) koji se zatim koriste za dobijanje jedinjenja S25 putem postupaka opisanih u šemi 6.

Šema 7

[0182] Alternativno (šema 8), jedinjenja opšte strukture S26 mogu reagovati sa odgovarajuće supstituisanim i zaštićenim piperazinima S12, u prisustvu baza kao što su natrijum-, kalijumili cezijum karbonat, -bikarbonat, NaH ili organske amin baze kao što je Et3N, DIPEA, DBU i slično u polarnom aprotonskom rastvaraču, kao što su, ali ne ograničavajući se na THF, MeCN, DMF, DMAc, DMSO ili NMP, da bi se obezbedila jedinjenja S27 (Šema 8). Uklanjanje Pg<1>može se izvesti mnogim postupcima opisanim u literaturi za dobijanje amina S28. Konverzija u jedinjenja opšte strukture S23 (X<4>= CI, Br ili I) ili S24 (X<4>= CO2-Pg<2>) može se postići na takav način kao što je Buchvald-Hartvig C-N sprega između jedinjenja opštih struktura S4 i kao što je prethodno opisano u Šemi 3. Jedinjenja opšte strukture S23 ili S24 zatim se mogu koristiti za dobijanje jedinjenja strukture S25 putem postupaka opisanih u šemi 6.

4

Šema 8

[0183] Jedinjenja opšte strukture S25 se takođe mogu pripremiti kao što je objašnjeno u Šemi 9. Diol S9 može biti zaštićen da bi dao S29. Trimetilsililetoksimetil grupa je poželjna zaštitna grupa. Zaštita diola kao odgovarajućeg acetala, na primer formaldehid acetala, takođe je poželjna. Jedinjenje S29 zatim može reagovati sa supstituisanom boronskom kiselinom ili boronatnim estrom (S5) i olefin se zatim redukuje postupcima opisanim u Šemi 1 da bi se dobila jedinjenja opšte formule S31 gde je Y = CH. Alternativno, jedinjenje S29 može biti kuplovano sa piperazinima opšte strukture S12 korišćenjem postupaka opisanih u Šemi 3 da se obezbedi S31 gde je Y = N. Jedinjenjima opšte strukture S31 može biti skinuta zaštita i zatim spojena sa S26 da daju jedinjenja opšte strukture S33 korišćenjem postupaka opisanih u Šemi 7. Alternativno, jedinjenja opšte strukture S33 mogu se pripremiti od S32 konverzijom od S32 na odgovarajući derivat N-sirćetne kiseline i naknadne kondenzacije sa diaminima S21 kao što je opisano u šemama 4 i 6. Uklanjanje zaštite od S33 korišćenjem postupaka poznatih stručnjacima može da obezbedi diole opšte strukture S34 koji tada može da reaguje sa alkinima opšte strukture S11 korišćenjem postupaka opisanih u Šemi 2 da se obezbedi S23 ili S24. Alternativno, S34 može se pretvoriti u S23 ili S24 koristeći aldehide, ketone ili njihove derivate, kao što je objašnjeno u Šemi 2. Jedinjenja opšte strukture S23 ili S24 zatim se mogu koristiti za dobijanje jedinjenja strukture S25 putem postupaka opisanih u šemi 6.

Šema 9

[0184] Jedinjenja opštih struktura S24 i S33 gde Y = N i X-L = ciklopropil se mogu pripremiti kao što je objašnjeno u Šemi 10. Zaštićeni piperidinon S35 može biti homologovan sa nezasićenim estarom S36 korišćenjem postupaka koji su dobro poznati stručnjacima u ovoj oblasti. Na primer, Horner-Vadsvorth-Emmons olefinacija S42 sa fosfonatom, kao što je etil (dietoksifosforil)acetat, koji je deprotonovan jakom bazom kao što je litijum, natrijum ili kalijum terc-butoksid, može da obezbedi S36. Reakcija se obično izvodi u aprotonskom rastvaraču kao što je THF ili DME, na temperaturi od oko 0 do -50 °C. Konverzija S36 u derivat ciklopropana S37 može se postići tretmanom sa sulfoksonijum ilidom dobijenim od trimetilsulfoksonijum jodida i baze, kao što je kalijum terc-butoksid ili natrijum hidrid. Deprotekcija S37 i naknadno kuplovanje dobijene karboksilne kiseline S38 sa S21, gde je X<4>= CO2Pg<2>, korišćenjem postupaka opisanih u Šemi 6 mogu da se dobiju jedinjenja opšte formule S39. Deprotekcija S39 i sprega sa S4 korišćenjem postupaka opisanih u Šemi 3 može dati jedinjenja opšte strukture S24 gde je Y = N i X-L je ciklopropil. Jedinjenja opšte strukture S24 zatim se mogu koristiti za dobijanje jedinjenja strukture S25 putem postupaka opisanih u šemi 6. Alternativno, S40 može reagovati sa S29 korišćenjem postupaka opisanih u Šemi 3 da se dobije S33 gde je Y = N i X-L = ciklopropil. Jedinjenja opšte strukture S33 zatim se mogu koristiti za dobijanje jedinjenja strukture S25 putem postupaka opisanih u šemama 6 i 9.

1

Šema 10

[0185] Alternativno, jedinjenja opšte strukture S25 gde je Y = N i X-L je ciklopropil može se pripremiti kao što je opisano u Šemi 11. Uklanjanje Pg<1>iz S37 obezbeđuje derivat piperidina S43. Kuplovanje S43 sa S4 na način sličan onome opisanom u Šemi 3 obezbeđuje S13 gde je Y = N i X-L je ciklopropil. Uklanjanje zaštite onda može da obezbedi jedinjenja opšte strukture S14 koja se onda mogu koristiti za pripremu S25 kao što je opisano u šemi 6.

Šema 11

PRIMERI

[0186] Sledeće ilustruje sintezu neograničavajućih jedinjenja ovog pronalaska. Dodatna jedinjenja u okviru ovog pronalaska mogu biti pripremljena korišćenjem postupaka ilustrovanih u ovim Primerima, bilo sama ili u kombinaciji sa tehnikama koje su opšte poznate u tehnici.

[0187] Eksperimenti su generalno izvedeni u inertnoj atmosferi (azot ili argon), posebno u slučajevima kada su korišćeni reagensi ili intermedijeri osetljivi na kiseonik ili vlagu. Komercijalni rastvarači i reagensi su generalno korišćeni bez daljeg prečišćavanja. Po potrebi su korišćeni anhidrovani rastvarači, uglavnom AcroSeal<®>proizvodi kompanije Acros Organics, Aldrich<®>Sure/Seal<™>od Sigma-Aldrich, ili DriSolv<®>proizvodi kompanije EMD Chemicals. U drugim slučajevima, komercijalni rastvarači su propušteni kroz kolone pune 4Å molekularnih sita, sve dok se ne postignu sledeći QC standardi za vodu: a) <100 ppm za

2

dihlorometan, toluen, N,N-dimetilformamid i tetrahidrofuran; b) <180 ppm za metanol, etanol, 1,4-dioksan i diizopropilamin. Za veoma osetljive reakcije, rastvarači su dalje tretirani metalnim natrijumom, kalcijum hidridom ili molekularnim sitom i destilovani neposredno pre upotrebe. Proizvodi su generalno sušeni pod vakuumom pre nego što su preneti na dalje reakcije ili predati na biološko ispitivanje. Podaci masene spektrometrije se izvode iz instrumentacije tečne hromatografije-masene spektrometrije (LCMS), hemijske jonizacije pod atmosferskim pritiskom (APCI) ili gasne hromatografije-masene spektrometrije (GCMS). Simbol ◆ označava da je uzorak izotopa hlora primećen u spektru mase.

Hiralne separacije su korišćene za odvajanje enantiomera ili dijastereomera nekih intermedijera tokom pripreme jedinjenja pronalaska. Kada je izvršeno hiralno odvajanje, razdvojeni enantiomeri su označeni kao ENT-1 ili ENT-2 (ili DIAST-1 ili DIAST-2), prema njihovom redosledu eluiranja. U nekim primerima izvođenja, enantiomeri označeni kao ENT-1 ili ENT-2 mogu se koristiti kao početni materijali za pripremu drugih enantiomera ili dijastereomera. U takvim situacijama, dobijeni enantiomeri koji su dobijeni su označeni kao ENT-X1 i ENT-X2, respektivno, prema njihovim početnim materijalima; slično, pripremljeni dijastereomeri su označeni kao DIAST-X1 i DIAST-X2, respektivno, (ili DIAST-prema njihovim početnim materijalima. DIAST-Y i DIAST-Z nomenklatura se koristi na sličan način, u sintezama koje koriste više intermedijera.

[0188] Za jedinjenja sa dva hiralna centra, stereoizomeri u svakom stereocentru su razdvojeni u različito vreme. Oznaka ENT-1 ili ENT-2 (ili DIAST-1 ili DIAST-2) intermedijera ili primera odnosi se na redosled eluiranja za odvajanje urađeno u tom koraku. Poznato je da kada se stereoizomeri u hiralnom centru razdvoje u jedinjenje sa dva ili više centara, razdvojeni enantiomeri su dijastereomeri jedan drugog. Kao primer, ali bez ograničenja, Primeri 15 i 16 imaju dva hiralna centra. Hiralni centar ciklopropilnog dela je odvojen kada je intermedijer C36 podeljen na ENT-1, dajući intermedijer P17, i ORL-2, dajući intermedijer P18. P18 zatim je korišćen u pripremi C70, koji je imao jedan stereoizomer obogaćen na ciklopropil hiralnom ugljeniku i mešavinu stereoizomera na ugljeniku dioksolana. C70 je zatim odvojen u DIAST-Y1 na ugljeniku dioksolana, dajući intermedijer C71, i DIAST-Y2 na ugljeniku dioksolana, dajući intermedijer C72, gde su ovi intermedijari obogaćeni jednim stereoizomerom. C71 je zatim korišćen za pripremu Primera 15, koji je po imenu identifikovan kao 2-{6-[2-(4-hloro-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]-6-azaspiro [2,5]okt-1-il}-1-(2-metoksietil)-1H-benzimidazol-6-karboksilna kiselina, DIAST-X1, trifluoroacetatna so [od P18 preko C71]. U ovim preparacijama, nakon što se smeša podvrgne postupcima razdvajanja, hiralni centar se identifikuje sa "abs" blizu tog centra, uz podrazumevanje da razdvojeni enantiomeri možda nisu enantiomerno čisti. Tipično, obogaćeni enantiomer u svakom hiralnom centru je >90% izolovanog materijala. Poželjno, obogaćeni enantiomer u svakom centru je >98% smeše.

[0189] U nekim primerima, optička rotacija enantiomera je merena pomoću polarimetra. Prema njegovim posmatranim podacima o rotaciji (ili njegovim specifičnim podacima o rotaciji), enantiomer sa rotacijom u smeru kazaljke na satu je označen kao (+)-enantiomer, a enantiomer sa rotacijom u smeru suprotnom od kazaljke na satu je označen kao (-)-enantiomer. Racemska jedinjenja su naznačena ili odsustvom nacrtane ili opisane stereohemije, ili prisustvom (+/-) pored strukture; u ovom poslednjem slučaju, naznačena stereohemija predstavlja relativnu (a ne apsolutnu) konfiguraciju supstituenata jedinjenja.

[0190] Reakcije koje su se odvijale kroz detektabilne intermedijere su generalno praćene LCMS i ostavljene da se nastave do pune konverzije pre dodavanja sledećih reagenasa. Za sinteze koje se odnose na postupke u drugim Primerima ili Postupcima, uslovi reakcije (vreme reakcije i temperatura) mogu da variraju. Generalno, reakcije su praćene tankoslojnom hromatografijom ili masenom spektrometrijom i podvrgnute obradi kada je to bilo potrebno. Prečišćavanje može da varira između eksperimenata: generalno, rastvarači i odnosi rastvarača koji se koriste za eluente/gradijente su izabrani da obezbede odgovarajući Rfs ili retenciona vremena. Svi početni materijali u ovim Preparacijama i Primerima su ili komercijalno dostupni ili se mogu dobiti postupcima poznatim u tehnici ili kako je ovde opisano.

Priprema P1

terc-butil 4-[2-(4-hloro-2-fluorofenil)-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-karboksilat (P1)

[0191]

4

Korak 1. Sinteza 2-bromo-6-[(4-hloro-2-fluorofenil)(hidroksi)metil]fenola (C1).

[0192] Ovaj eksperiment je izveden u dve serije istih razmera. n-Butillitijum (2.5 M rastvor u heksanu; 32.8 mL, 82.0 mmol) je polako dodat u -70 °C rastvor 1-bromo-4-hloro-2-fluorobenzena (17.2 g, 82.1 mmol) u dietil etru (100 mL ), dok je temperatura reakcione smeše održavana ispod -60 °C. Nakon što je reakciona smeša mešana na -70 °C tokom 20 minuta, polako je dodat rastvor 3-bromo-2-hidroksibenzaldehida (5.5 g, 27 mmol) u dietil etru (100 mL), dok je reakciona temperatura održavana ispod -60 °C. Posle još 1 sata mešanja na -70 °C, reakcija je ugašena dodavanjem vodenog rastvora amonijum hlorida (50 mL) na -70 °C, a rezultujuća smeša je razblažena vodom (100 mL). Dve serije su kombinovane u ovom trenutku i ekstrahovane etil acetatom (400 mL); organski sloj je ispran zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (200 mL), osušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan in vacuo. Silika gel hromatografija (Gradijent: 0% do 7% etil acetata u petrol etru) dala je C1 kao belu čvrstu supstancu. Kombinovani prinos: 15.7 g, 47.4 mmol, 88%.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 7.44 (dd, J = 8.0, 1.5 Hz, 1H), 7.37 (dd, J = 8.1, 8.1Hz, 1H), 7.15 (brdd, J = 8.5, 2.1Hz, 1H), 7.12 - 7.05 (m, 2H), 6.80 (dd, J = 7.8, 7.8 Hz, 1H), 6.78 (s, 1H), 6.31 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 3.02 (br d, J = 4.9 Hz, IH).

Korak 2. Sinteza 4-bromo-2-(4-hloro-2-fluorofenil)-1,3-benzodioksola (C2).

[0193] Rastvoru C1 (15.7 g, 47.4 mmol) u metanolu (450 mL) dodat je rastvor natrijum perjodata (25.4 g, 119 mmol) u vodi (105 mL), i reakciona smeša je mešana na 30 °C tokom 16 sati, nakon čega je koncentrovana in vacuo. Nakon što je ostatak razblažen dihlorometanom (500 mL), ispran je vodom (500 mL). Rastvor dihlorometana je zatim osušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan in vacuo. Prečišćavanje hromatografijom na silika gelu (eluent: petrol etar) obezbedilo je C2 kao belu čvrstu supstancu. Prinos: 10.0 g, 30.3 mmol, 64%. Sledeći<1>H NMR podaci su dobijeni iz eksperimenta sprovedenog na isti način, ali u manjem obimu.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.67 - 7.61 (m, 2H), 7.50 (s, 1H), 7.43 (br dd, J = 8, 2 Hz, 1H), 7.09 (dd, J = 8.3, 1.1Hz, 1H), 7.01 (dd, J = 7.9, 1.1Hz, 1H), 6.86 (dd, J = 8.1, 8.1Hz, IH).

Korak 3. Sinteza terc-butil4-[2-(4-hloro-2-fluorofenil)-1,3-benzodioksol-4-il]-3,6-dihidropiridin-1(2H)-karboksilat (C3).

[0194] Reakciona boca koja sadrži suspenziju C2 (8.00 g, 24.3 mmol), terc-butil 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-3,6-dihidropiridin-1(2H)-karboksilat (9.01 g, 29.1 mmol), natrijum karbonat (5.15 g, 48.6 mmol) i [1,1’-bis(difenilfosfino)ferocen]dihloropaladijum(II) [Pd(dppf)Cl2; 888 mg, 1.21 mmol] u 1,4-dioksanu (80 mL) i vodi (32 mL) je evakuisano i napunjeno azotom. Ovaj ciklus evakuacije je ponovljen dva puta, a zatim je reakciona smeša mešana na 90 °C tokom 16 sati. Nakon uklanjanja rastvarača in vacuo, ostatak je podeljen između etil acetata (200 mL) i vode (200 mL). Organski sloj je ispran zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (100 mL), osušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Hromatografijom na silika gelu (Gradijent: 0% do 4.3% etil acetata u petrol etru) dobijen je proizvod, koji je kombinovan sa materijalom iz slične reakcije sprovedene korišćenjem C2 (2.00 g, 6.07 mmol) da se dobije C3 kao svetložuta guma. Kombinovani prinos: 10.3 g, 23.8 mmol, 78%.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 7.53 (dd, J = 8.3, 7.8 Hz, 1H), 7.23 - 7.16 (m, 3H), 6.88 - 6.83 (m, 2H), 6.81 -6.76 (m, 1H), 6.34 - 6.28 (br m, 1H), 4.05 - m, 2H), 3.61 (br dd, J = 6.5 Hz, 2H), 2.59 - 2.50 (br m, 2H), 1.48 (s, 9H).

Korak 4. Sinteza terc-butil 4-[2-(4-hloro-2-fluorofenil)-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-karboksilata (P1).

[0195] Rastvor C3 (10.3 g, 23.8 mmol) i tris(trifenilfosfin)rodijum(I) hlorida (Wilkinson katalizator; 1.54 g, 1.66 mmol) u metanolu (100 mL) je mešan na 50 °C pod vodonikom (45 psi) tokom 18 sati. Reakciona smeša je zatim filtrirana kroz sloj dijatomejske zemlje, a filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom i podvrgnut hromatografiji na silika gelu (Gradijent: 0% do 9% etil acetata u petrolej etru). Dobijeni materijal je kombinovan sa onim iz slične reakcije koja je izvedena korišćenjem C3 (1.67 g, 3.87 mmol) da se dobije P1 kao bezbojna guma. Kombinovani prinos: 10.3 g, 23.7 mmol, 86%. LCMS m/z 456.1◆ [M+Na<+>].<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 7<.>52 (dd, J = 8.5, 7.6 Hz, 1H), 7.23 - 7.17 (m, 2H), 7.16 (s, 1H), 6.83 (dd, J = 7.8, 7.8 Hz, 1H), 6.78 - 6.69 (m, 2H), 4.35 - 4.10 (br m, 2H), 2.89 - 2.71 (m, 3H), 1.89 - 1.77 (m, 2H), 1.73 - m, 2H), 1.47 (s, 9H).

Priprema P2

terc-butil 4-[2-(4-hloro-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-karboksilat (P2)

[0196]

Korak 1. Sinteza 4-bromo-2-(4-hloro-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksola (C4).

[0197] U rastvor 3-bromobenzen-1,2-diola (330 g, 1.75 mol) u toluenu (1.5 L) dodat je 1-(4-hloro-2-fluorofenil)etanon (316 g, 1.83 mol) i p-toluensulfonska kiselina (6.02 g, 35.0 mmol). Reakcioni aparat je opremljen Dean-Stark zamkom i reakciona smeša je zagrevana na 140 °C tokom 60 sati, nakon čega je rastvor koncentrovan in vacuo i prečišćen korišćenjem hromatografije na silika gelu (Eluent: petroleum etar); C4 dobija se kao smeša žutog ulja i čvrste supstance. Prinos: 158 g, 460 mmol, 26%.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d): δ 7.54 (dd, J = 8.4, 8.4 Hz, 1H), 7.17-7.10 (m, 2H), 6.95 (dd, J = 7.9, 1.4 Hz, 1H), 6.75 (dd, komponenta ABX obrasca, J = 7.8, 1.4 Hz, 1H), 6.70 (dd, komponenta ABX obrasca, J = 7.9, 7.9 Hz, 1H), 2.11 (d, J = 1.1Hz, 3H).

Korak 2. Sinteza terc-butil 4-[2-(4-hloro-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il-3,6-dihidropiridin-1(2H)-karboksilata (C5).

[0198] terc-butil 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-3,6-dihidropiridin-1(2H)-karboksilat (62 g, 200 mmol) i natrijum karbonat (100 g, 940 mmol) su dodati u rastvor C4 (58.0 g, 169 mmol) u 1,4-dioksanu (600 mL). Posle dodavanja [1,1’-bis(difenilfosfino)ferocen]dihloropaladijuma(II) (6.0 g, 8.2 mmol), reakciona smeša je zagrejana do 90 °C i mešana 16 sati. Zatim je dodata voda (500 mL) i dobijena smeša je ekstrahovana etil acetatom (2 × 500 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (2 × 500 mL), osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani in vacuo. Silika gel hromatografija (Gradijent: 0% do 9% etil acetata u petrol etru) dala je C5 kao žuto ulje. Prinos: 56.0 g, 126 mmol, 75%.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 7.50 (dd, J = 8.2, 8.2 Hz, 1H), 7.17 - 7.09 (m, 2H), 6.83 - 6.77 (m, 2H), 6.74 (dd, komponenta ABX obrasca, J = 5.4, 3.6 Hz, 1H), 6.39 - 6.33 (br m, 1H), 4.14 - 4.08 (m, 2H), 3.70 - 3.56 (m, 2H), 2.66 - 2.45 (m, 2H), 2.07 (m, 2H), 2.07 (m, 2H), 3.70 - 3.56 Hz, 1H. J = 1.1Hz, 3H), 1.50 (s, 9H).

Korak 3. Sinteza terc-butil 4-[2-(4-hloro-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-karboksilata (P2).

[0199] Rastvoru C5 (56.0 g, 126 mmol) u metanolu (200 mL) je dodat tris(trifenilfosfin)rodijum(I) hlorid (Wilkinson katalizator; 8.10 g, 8.75 mmol), i reakciona smeša je zagrevana na 50 °C 18 sati pod vodonikom (45 psi). Zatim je ohlađena na 25 °C i filtrirana kroz dijatomejsku zemlju. Filtrat je koncentrovan in vacuo, i prečišćen dva puta korišćenjem hromatografije na silika gelu (prva kolona - gradijent: 0% do 9% etil acetata u petrolej etru; druga kolona - gradijent: 0% do 2% etil acetata u petrolej etru), dajući P2 kao žuta čvrsta supstanca. Prinos: 37.0 g, 82.6 mmol, 66%. LCMS m/z 392.1◆ [(M-2-metilprop-1-en)+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 7.51 (dd, J = 8.3, 8.0 Hz, 1H), 7.17 - 7.09 (m, 2H), 6.77 (dd, komponenta ABC obrasca, J = 7.8, 7.8 Hz, 1H), 6.70 (dd, komponenta ABC obrasca, J = 7.7, 1.3 Hz, 1H), 6.66 (dd, komponenta ABC obrasca, J = 7.8, 1.3 Hz, 1H), 4.37 - 4.13 (br m, 2H), 2.92 - 2.73 (m, 3H), 2.05 (d, J = 1.1Hz, 3H), 1.90-1.63 (m, 4H), 1.49 (s, 9H).

Priprema P3

4-[(2S)-2-(4-hloro-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il] piperidin, p-toluen sulfonatna so (P3)

[0200]

Korak 1. Izolovanje terc-butil 4-[(2R)-2-(4-hloro-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-karboksilata (C6) i terc-butil 4-[(2S)-2-(4-hloro-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-karboksilata (C7).

[0201] Razdvajanje od P2 (75.2 g, 168 mmol) u njegove sastavne enantiomere sprovedeno je preko SFC (superkritična fluidna hromatografija)_[Kolona: Chiral Technologies Chiralpak AD-H, 5 µm; Mobilna faza: 4:1 ugljen-dioksid / (2-propanol koji sadrži 0.2% 1-aminopropan-2-ol)]. Prvo eluirano jedinjenje je označeno kao C6, i enantiomer koji se drugi eluira kao C7. Navedene apsolutne konfiguracije su dodeljene na osnovu određivanja strukture monokristala rendgenskim zracima izvršenog na C8, koji je izveden iz C6 (vidi dole).

C6 - Prinos: 38.0 g, 84.8 mmol, 50%. Retenciono vreme 3.64 minuta [Kolona: Chiral Technologies Chiralpak AD-H, 4.6 × 250 mm, 5 µm; Mobilna faza A: ugljen-dioksid; Mobilna faza B: 2-propanol koji sadrži 0.2% 1-aminopropan-2-ola; Gradijent: 5% B tokom 1.00 minuta, zatim 5% do 60% B tokom 8.00 minuta; Brzina protoka: 3.0 mL/min; Povratni pritisak: 120 bar].

C7 - Prinos: 36.8 g, 82.2 mmol, 49%. Retenciono vreme 4.19 minuta (analitički SFC uslovi identični onima koji se koriste za C6).

Korak 2. Sinteza p-toluensulfonatne soli 4-[(2S)-2-(4-hloro-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidina (P3).

[0202] Rastvor C7 (1.62 g, 3.62 mmol) u etil acetatu (36 mL) je tretiran sa monohidratom ptoluensulfonske kiseline (791 mg, 4.16 mmol) i zagrevan na 45 °C. Posle 23 sata, reakciona smeša je ostavljena da se ohladi do sobne temperature i čvrsta supstanca je sakupljena filtracijom. Isprano je mešavinom etil acetata i heptana (1:1, 2 × 15 mL) da bi se dobilo P3 kao bela čvrsta supstanca. Prinos: 1.37 g, 2.63 mmol, 73%. LCMS m/z 348.1◆ [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8<.>53 (v br s, 1H), 8.29 (v br s, 1H), 7.65 - 7.55 (m, 2H), 7.47 (d, J = 8.1Hz, 2H), 7.35 (dd, J = 8.4, 2.0 Hz, 1H), 7.11 (d, J = 7.8 Hz, 2H), 6.88 - 6.81 (m, 2H), 6.75 - 6.68 (m, 1H), 3.42 - 3.33 (m, 2H), 3.11 - 2.93 (m, 3H), 2.29 (s, 3H), 2.03 (s, 3H), 1.98-1.82 (m, 4H).

Konverzija C6 do metansulfonatne soli 4-[(2R)-2-(4-hloro-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidina (C8) za određivanje apsolutna stereohemije

[0203]

[0204] p-toluensulfonska kiselina (377 mg, 2.19 mmol) je dodata u rastvor C6 (490 mg, 1.09 mmol) u etil acetatu (5.5 mL), i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Posle razblaživanja sa dodatnim etil acetatom, reakciona smeša je isprana uzastopno vodenim rastvorom natrijum bikarbonata, vodom i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida, osušena preko natrijum sulfata, filtrirana i koncentrovana in vacuo. Prinos: 375 mg, 1.08 mmol, 99%.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 7.59 (dd, J = 8.3. 8.3 Hz, 1H), 7.27 (dd, J = 10.9, 2.0 Hz, 1H), 7.20 (brdd, J = 8.4, 2.1Hz, 1H), 6.81 -6.75 (m, 1H), 6.74 - 6.67 (m, 2H), 3.18 - 3.09 (m, 2H), 2.88 - 2.77 (m, 1H), 2.77 - 2. , 2H), 2.02 (d, J = 0.7 Hz, 3H), 1.85-1.73 (m, 4H).

[0205] 0.1 M rastvor ove slobodne baze (4-[(2R)-2-(4-hloro-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin) u etil acetatu je pripremljen i podvrgnut ispitivanju soli. Ovde je opisano samo formiranje soli metansulfonata. Smeša metansulfonske kiseline (25 µL, 39 µmol) i rastvora supstrata (0.1 M; 0.25 mL, 25 µmol) je mešana preko noći. Zatim je dodato dovoljno metanola da se rastvori prisutna čvrsta supstanca i dodat je etil acetat (3 mL). Dobijeni rastvor je ostavljen da polako ispari, bez mešanja, da bi se dobili kristali C8; jedan od njih je korišćen za dole opisano određivanje strukture monokristala rendgenskim zracima.

Rendgensko određivanje strukture monokristala C8

Monokristalna rendgenska analiza

[0206] Prikupljanje podataka je obavljeno na Bruker D8 Quest difraktometru na sobnoj temperaturi. Prikupljanje podataka se sastojalo od omega i fi skeniranja.

[0207] Struktura je rešena intrinzičnim faziranjem korišćenjem SHELX softverskog paketa u prostornoj grupi ortorombske klase P212121. Struktura je naknadno rafinisana metodom najmanjih kvadrata pune matrice. Svi nevodonikovi atomi su pronađeni i rafinisani korišćenjem parametara anizotropnog pomeranja.

[0208] Formiranje metansulfonatne soli je potvrđeno prenosom protona N1_H1X_O4.

[0209] Atomi vodonika koji se nalaze na azotu i kiseoniku pronađeni su iz Furijeove mape razlike i rafinisani sa ograničenim rastojanjima. Preostali atomi vodonika su postavljeni na izračunate pozicije i dozvoljeno im je da se kreću na svojim atomima nosačima. Završno preciziranje uključivalo je parametre izotropnog pomeranja za sve atome vodonika.

[0210] Analiza apsolutne strukture primenom postupaka verovatnoće (Hooft, 2008) izvršena je pomoću PLATON (Spek). Rezultati pokazuju da je apsolutna struktura ispravno dodeljena; postupak izračunava da je verovatnoća da je struktura ispravna 100%. Hooft-ov parametar je prijavljen kao 0.02 sa esd od 0.0012, a Parson-ov parametar je prijavljen kao 0.07 sa esd od 0.009. Apsolutna konfiguracija na C7 je potvrđena kao (R).

[0211] Asimetrična jedinica se sastoji od jednog molekula protonovane slobodne baze C8 i jednog molekula deprotonovane metansulfonske kiseline. Konačni R-indeks je bio 4.6%. Konačna Furijeova razlika nije otkrila nestalu ili pogrešno postavljenu elektronsku gustinu.

[0212] Odgovarajuće informacije o kristalu, prikupljanju podataka i preciziranju sumirane su u tabeli A. Atomske koordinate, dužine veze, uglovi veze i parametri pomeranja su navedeni u tabelama B - D.

Softver i reference

[0213]

SHELXTL, Version 5.1, Bruker AXS, 1997.

PLATON, A. L. Spek, J. Appl. Cryst.2003, 36, 7-13.

1

MERCURY, C. F. Macrae, P. R. Edington, P. McCabe, E. Pidcock, G. P. Shields, R. Taylor, M. Towler, and J. van de Streek, J. Appl. Cryst.2006, 39, 453-457.

OLEX2, O. V. Dolomanov, L. J. Bourhis, R. J. Gildea, J. A. K. Howard, and H. Puschmann, J. Appl. Cryst.2009, 42, 339-341.

R. W. W. Hooft, L. H. Straver, and A. L. Spek, J. Appl. Cryst.2008, 41, 96-103.

H. D. Flack, Acta Cryst.1983, A39, 867-881.

Tabela A. Kristalni podaci i preciziranje strukture za C8.

Empirijska formula C20H23ClFNO5S

Težina formule 443.90

Temperatura 296(2) K

Talasna dužina 1.54178 Å

Kristalni sistem Orthorhombic

Prostorna grupa P212121

Dimenzije jedinične ćelije a = 6.5348(5) A α = 90°

b = 9.3688(7) A β = 90°

c = 35.214(3) A γ = 90°

Zapremina 2155.9(3) Å<3>

Z 4

Gustina (izračunato) 1.368 Mg/m<3>

Koeficijent apsorpcije 2.823 mm<-1>

F(000) 928

Veličina kristala 0.480 × 0.100 × 0.040 mm<3>

Theta opseg za prikupljanje 2.509 do 70.483°

podataka

Opsezi indeksa -7<=h<=7, -11<=k<=8, -42<=I<=42

Prikupljene refleksije 16311

Nezavisne refleksije 4035 [Rint= 0.0638]

Kompletnost do teta = 67.679° 99.0%

Korekcija apsorpcije Empirijski

Postupak prečišćavanja Uključeni najmanji kvadrati pune matrice F<2>

Podaci / ograničenja / parametri 4035 / 2 / 271

2

Dobro uklopljeno F<2>0.832

Konačni R indeksi [I>2σ(I)] R1 = 0.0463, vR2 = 0.1227

R indeksi (svi podaci) R1 = 0.0507, vR2 = 0.1294 Parametar apsolutne strukture -0.003(18)

Koeficijent ekstinkcije 0.0051(6)

Najveća razlika pika i rupe 0.256 i -0.305 e.A<-3>

Tabela B. Atomske koordinate (× 10<4>) i ekvivalentni parametri izotropnog pomeranja (A<2>× 10<3>) za C8. U(ekv) je definisan kao jedna trećina traga ortogonalizovanog U<ij>tenzora.

x y z U(ekv) S(1) 3842(2) 9910(1) 5317(1) 57(1) Cl(1) -1625(2) -718(1) 6588(1) 80(1) O(1) 6138(4) 3727(3) 6876(1) 53(1) F(1) 639(5) 3071(4) 7503(1) 89(1) O(2) 3445(4) 5043(3) 7117(1) 57(1) O(4) 2909(6) 11013(4) 5082(1) 78(1) O(3) 3708(7) 10299(4) 5708(1) 83(1) N(1) 10461 (5) 2909(4) 5493(1) 56(1) C(9) 5652(6) 4826(4) 6629(1) 44(1) C(1) 3361(7) 1662(4) 6697(1) 53(1) C(6) 2957(6) 2523(4) 7012(1) 49(1) C(10) 4075(6) 5613(4) 6776(1) 47(1) C(14) 6628(6) 5138(4) 6294(1) 47(1) O(5) 5833(7) 9578(4) 5179(1) 96(1) C(15) 8265(6) 4182(4) 6130(1) 49(1) C(5) 1105(7) 2270(5) 7190(1) 59(1) C(16) 7309(6) 3048(5) 5874(1) 54(1) C(2) 1971(7) 670(4) 6567(1) 55(1) C(4) -286(7) 1288(5) 7080(1) 64(1) C(7) 4448(6) 3667(4) 7142(1) 52(1) C(13) 5876(8) 6374(5) 6113(1) 60(1) C(11) 3359(7) 6819(4) 6602(1) 57(1) C(8) 5296(8) 3485(6) 7537(1) 64(1) C(19) 9905(7) 4976(6) 5902(1) 67(1) C(17) 8902(7) 2063(5) 5702(1) 59(1) C(12) 4316(8) 7178(5) 6263(1) 65(1) C(3) 150(7) 497(4) 6756(1) 56(1) C(18) 11476(7) 3977(6) 5738(1) 73(1) C(20) 2328(14) 8399(7) 5260(2) 117(3)

Tabela C. Dužina veze [Å] i uglovi [°] za C8.

S(1)-O(5) 1.423(4) C(4)-C(3) 1.389(6) S(1)-O(3) 1.428(3) C(4)-H(4) 0.9300 S(1)-O(4) 1.458(3) C(7)-C(8) 1.506(6) S(1)-C(20) 1.738(6) C(13)-C(12) 1.373(7) CI(1)-C(3) 1.729(5) C(13)-H(13) 0.9300 O(1)-C(9) 1.385(4) C(11)-C(12) 1.388(7) O(1)-C(7) 1.449(4) C(11)-H(11) 0.9300 F(1)-C(5) 1.367(4) C(8)-H(8A) 0.9600 O(2)-C(10) 1.376(4) C(8)-H(8B) 0.9600 O(2)-C(7) 1.449(4) C(8)-H(8C) 0.9600 N(1)-C(18) 1.478(6) C(19)-C(18) 1.505(7) N(1)-C(17) 1.486(5) C(19)-H(19A) 0.9700 N(1)-H(1X) 0.99(2) C(19)-H(19B) 0.9700 N(1)-H(1Y) 0.97(2) C(17)-H(17A) 0.9700 C(9)-C(10) 1.369(5) C(17)-H(17B) 0.9700 C(9)-C(14) 1.375(5) C(12)-H(12) 0.9300 C(1)-C(2) 1.378(6) C(18)-H(18A) 0.9700 C(1)-C(6) 1.395(5) C(18)-H(18B) 0.9700 C(1)-H(1) 0.9300 C(20)-H(20A) 0.9600 C(6)-C(5) 1.384(6) C(20)-H(20B) 0.9600 C(6)-C(7) 1.519(6) C(20)-H(20C) 0.9600 C(10)-C(11) 1.369(5)

C(14)-C(13) 1.409(6) O(5)-S(1)-O(3) 116.2(3) C(14)-C(15) 1.509(5) O(5)-S(1)-O(4) 110.1(2) C(15)-C(16) 1.527(5) O(3)-S(1)-O(4) 109.9(2)

4

C(15)-C(19) 1.531(6) O(5)-S(1)-C(20) 107.6(4) C(15)-H(15) 0.9800 O(3)-S(1)-C(20) 106.6(3) C(5)-C(4) 1.351 (7) O(4)-S(1)-C(20) 105.9(4) C(16)-C(17) 1.518(6) C(9)-O(1)-C(7) 105.0(3) C(16)-H(16A) 0.9700 C(10)-O(2)-C(7) 105.2(3) C(16)-H(16B) 0.9700 C(18)-N(1)-C(17) 112.3(3) C(2)-C(3) 1.372(6) C(18)-N(1)-H(1Ks) 107(3) C(2)-H(2) 0.9300 C(17)-N(1)-H(1Ks) 113(3) C(18)-N(1)-H(1Y) 113(3) C(1)-C(2)-H(2) 120.3 C(17)-N(1)-H(1Y) 103(3) C(5)-C(4)-C(3) 117.5(4) H(1Ks)-N(1)-H(1Y) 108(4) C(5)-C(4)-H(4) 121.2 C(10)-C(9)-C(14) 124.1(3) C(3)-C(4)-H(4) 121.2 C(10)-C(9)-O(1) 109.6(3) O(1)-C(7)-O(2) 105.7(3) C(14)-C(9)-O(1) 126.3(3) O(1)-C(7)-C(8) 108.7(3) C(2)-C(1)-C(6) 121.9(4) O(2)-C(7)-C(8) 108.8(3) C(2)-C(1)-H(1) 119.0 O(1)-C(7)-C(6) 108.7(3) C(6)-C(1)-H(1) 119.0 O(2)-C(7)-C(6) 108.6(3) C(5)-C(6)-C(1) 115.3(4) C(8)-C(7)-C(6) 115.8(3) C(5)-C(6)-C(7) 123.0(3) C(12)-C(13)-C(14) 122.4(4) C(1)-C(6)-C(7) 121.7(4) C(12)-C(13)-H(13) 118.8 C(9)-C(10)-C(11) 122.1(4) C(14)-C(13)-H(13) 118.8 C(9)-C(10)-O(2) 110.3(3) C(10)-C(11)-C(12) 115.6(4) C(11)-C(10)-O(2) 127.5(4) C(10)-C(11)-H(11) 122.2 C(9)-C(14)-C(13) 113.6(4) C(12)-C(11)-H(11) 122.2 C(9)-C(14)-C(15) 122.1(3) C(7)-C(8)-H(8A) 109.5 C(13)-C(14)-C(15) 124.2(3) C(7)-C(8)-H(8B) 109.5 C(14)-C(15)-C(16) 110.4(3) H(8A)-C(8)-H(8B) 109.5 C(14)-C(15)-C(19) 114.1(3) C(7)-C(8)-H(8C) 109.5 C(16)-C(15)-C(19) 108.4(3) H(8A)-C(8)-H(8C) 109.5 C(14)-C(15)-H(15) 107.9 H(8B)-C(8)-H(8C) 109.5 C(16)-C(15)-H(15) 107.9 C(18)-C(19)-C(15) 112.2(4) C(19)-C(15)-H(15) 107.9 C(18)-C(19)-H(19A) 109.2 C(4)-C(5)-F(1) 117.2(4) C(15)-C(19)-H(19A) 109.2 C(4)-C(5)-C(6) 125.0(4) C(18)-C(19)-H(19B) 109.2 F(1)-C(5)-C(6) 117.9(4) C(15)-C(19)-H(19B) 109.2 C(17)-C(16)-C(15) 112.2(3) H(19A)-C(19)-H(19B) 107.9 C(17)-C(16)-H(16A) 109.2 N(1)-C(17)-C(16) 110.1(3) C(15)-C(16)-H(16A) 109.2 N(1)-C(17)-H(17A) 109.6 C(17)-C(16)-H(16B) 109.2 C(16)-C(17)-H(17A) 109.6 C(15)-C(16)-H(16B) 109.2 N(1)-C(17)-H(17B) 109.6 H(16A)-C(16)-H(16B) 107.9 C(16)-C(17)-H(17B) 109.6 C(3)-C(2)-C(1) 119.4(4) H(17A)-C(17)-H(17B) 108.2 C(3)-C(2)-H(2) 120.3 C(13)-C(12)-C(11) 122.1(4) C(1)-C(2)-H(2) 120.3 C(13)-C(12)-H(12) 118.9 C(11)-C(12)-H(12) 118.9 C(2)-C(3)-C(4) 120.8(4) H(18A)-C(18)-H(18B) 108.2 C(2)-C(3)-Cl(1) 119.6(3) S(1)-C(20)-H(20A) 109.5 C(4)-C(3)-Cl(1) 119.6(3) S(1)-C(20)-H(20B) 109.5 N(1)-C(18)-C(19) 109.9(3) H(20A)-C(20)-H(20B) 109.5 N(1)-C(18)-H(18A) 109.7 S(1)-C(20)-H(20C) 109.5 C(19)-C(18)-H(18A) 109.7 H(20A)-C(20)-H(20C) 109.5 N(1)-C(18)-H(18B) 109.7 H(20B)-C(20)-H(20C) 109.5 C(19)-C(18)-H(18B) 109.7

[0214] Transformacije simetrije koje se koriste za generisanje ekvivalentnih atoma.

Tabela D. Parametri anizotropnog pomeranja (Å<2>× 10<3>) za C8. Eksponent faktora anizotropnog pomeranja ima oblik: -2π<2>[h<2>a*<2>U<11>+ ... 2 h k a* b* U<12>].

U<11>U<22>U<33>U<23>U<13>U<12>

S(1) 73(1) 48(1) 48(1) -2(1) 7(1) -1(1) Cl(1) 81(1) 78(1) 81(1) -8(1) 1(1) -8(1) O(1) 54(1) 50(1) 56(1) 14(1) 10(1) 17(1) F(1) 83(2) 103(2) 79(2) -40(2) 38(2) -6(2) O(2) 66(2) 49(1) 54(1) 2(1) 11(1) 18(1) O(4) 87(2) 84(2) 64(2) 19(2) 17(2) 21(2) O(3) 122(3) 80(2) 47(1) -3(1) 7(2) -13(2) N(1) 47(2) 73(2) 48(2) 7(2) 3(1) 11(2) C(9) 51(2) 38(2) 44(2) 2(1) -7(1) 2(2) C(1) 63(2) 46(2) 50(2) 5(2) 21(2) 13(2) C(6) 55(2) 47(2) 45(2) 5(1) 11(2) 19(2) C(10) 55(2) 39(2) 46(2) -5(1) -4(2) 6(2) C(14) 54(2) 46(2) 42(2) 0(1) -9(2) -5(2) O(5) 88(2) 88(3) 113(3) -24(2) 13(2) 21(2) C(15) 47(2) 61(2) 40(2) 3(2) -3(1) -2(2) C(5) 60(2) 62(2) 54(2) -6(2) 19(2) 13(2) C(16) 43(2) 53(2) 65(2) -4(2) 8(2) -6(2) C(2) 72(3) 49(2) 45(2) 2(2) 16(2) 14(2) C(4) 57(2) 68(3) 65(2) -3(2) 23(2) 6(2) C(7) 54(2) 50(2) 51(2) 7(2) 12(2) 16(2) C(13) 81(3) 54(2) 46(2) 9(2) -4(2) 4(2) C(11) 70(3) 46(2) 54(2) -8(2) -14(2) 17(2) C(8) 69(3) 71(3) 51(2) 4(2) 4(2) 15(2) C(19) 54(2) 78(3) 70(3) -13(2) 2(2) -25(2) C(17) 54(2) 57(2) 67(2) -3(2) 8(2) 3(2) C(12) 96(3) 43(2) 56(2) 5(2) -14(2) 13(2) C(3) 64(2) 52(2) 52(2) 4(2) 2(2) 14(2) C(18) 43(2) 103(4) 73(3) 7(3) 3(2) -18(2) C(20) 153(7) 87(4) 110(5) -14(4) -6(5) -57(5)

Priprema soli P3, di-p-toluoil-L-tartrata

4-[(2S)-2-(4-hloro-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin, di-p-toluoil-L-tartratna so (P3, di-p-toluoil-L-tartratna so).

[0215]

[0216] Rastvor C13, slobodne baze (519 mg, 1.49 mmol) i di-p-toluoil-L-vinske kiseline (278 mg, 0.719 mmol) u acetonitrilu (7.5 mL) je mešan na 50 °C tokom 1.5 sata. Smeša je ostavljena da se ohladi na sobnu temperaturu na 0.2 °C/min. Posle 15 sati na sobnoj temperaturi, smeša je zagrejana do 65 °C i napunjena acetonitrilom (15 mL). Smeša je ostavljena da se ohladi na sobnu temperaturu na 0.2 °C/min. Posle 15 sati na sobnoj temperaturi, smeša je zagrejana do 54 °C. Posle 3 sata, čvrsta supstanca je sakupljena filtracijom, i osušena u vakuumskoj peći na 35 °C pod azotom, dajući P3, di-p-toluoil-L-tartarat so kao belu čvrstu supstancu (217 mg, 0.296 mmol, 20%, 82% ee).

[0217] Rastvor P3, di-str-toluoil-L-tartarat so (217 mg, 0.296 mmol, 82% ee) u acetonitrilu (8.0 mL) na 50 °C je ostavljen da se ohladi do sobne temperature pri 0.2 °C/minuti. Posle 15 sati, čvrsta supstanca je sakupljena filtracijom i osušena u vakuum pećnici na 35 °C pod azotom, dajući P3, di-str-toluoil-L-tartarat so kao belu čvrstu supstancu (190 mg, 0.259 mmol, 88%, 88% ee). LCMS m/z 348.1 ◆ [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8<.>9 -8.5 (br s, 2H), 7.79 (d, J = 8.1Hz, 4H), 7.64 - 7.54 (m, 2H), 7.34 (dd, J = 8.4, 2.1Hz, 1H), 7.26 (d, J = 8.0 Hz, 4H), 6.87 - 6.78 (m, 2H), 6.69 (dd, J = 6.7, 2.5 Hz, 1H), 5.58 (s, 2H), 3.37 - 3.28 (m, 2H, pretpostavljeno; delimično zaklonjeno pikom vode), 3.05 - 2.89 (m, 3H), 2.33 (s, 6H), 2.02 (s, 3H), 1.92-1.80 (m, 4H). Retenciono vreme: pik 1 (4.97 minuta, manji) i pik 2 (5.31 minuta, glavni) {Kolona: Chiralpak IC-U 3.0 × 50 mm, 1.6 µm; Mobilna faza A: ugljen-dioksid; Mobilna faza B: 0.1% izopropilamina u metanolu; Gradijent: 10% B tokom 5.00 minuta, zatim 45% B tokom 0.6 minuta; Brzina protoka: 1.7 mL/min; Povratni pritisak: 130 bara}.

Priprema P4

terc-butil 4-[2-(4-cijano-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-karboksilat (P4)

[0218]

[0219] Suspenzija P2 (2.00 g, 4.46 mmol), cink cijanid (734 mg, 6.25 mol), cink (70.1 mg, 1.07 mmol), 1,1’-bis(difenilfosfino)ferocen (dppf; 198 mg, 0.357 mmol) i tris(difenilfosfino)ferocen (0) (164 mg, 0.179 mmol) u N,N-dimetilacetamidu (20 mL) je mešana na 120 °C tokom 16 sati, nakon čega je filtrirana. Filtrat je pomešan sa vodom (50 mL) i ekstrahovan etil acetatom (3 × 50 mL); kombinovani organski slojevi su zatim isprani uzastopno vodom (30 mL) i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (20 mL) i koncentrovani in vacuo. Hromatografija na silika gelu (Gradijent: 0% do 30% etil acetata u petrolej etru) dala je čvrstu supstancu, koja je tretirana acetonitrilom (15 mL) i vodom (15 mL) i podvrgnuta liofilizaciji. Ovo je obezbedilo P4 kao svetlo žutu čvrstu supstancu. Prinos: 1.17 g, 2.67 mmol, 60%. LCMS m/z 461.3 [M+Na<+>].<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) 7.71 (dd, J= 7.7, 7.6 Hz, 1H), 7.45 (dd, J = 8.0, 1.6 Hz, 1H), 7.42 (dd, J= 10.0, 1.5 Hz, 1H), 6.79 (dd, komponenta ABC obrasca, J = 7.7, 7.6 Hz, 1H), 6.72 (dd, komponenta ABC obrasca, J = 7.8, 1.3 Hz, 1H), 6.68 (dd, komponenta ABC obrasca, J = 7.8, 1.3 Hz, 1H), 4.37 - 4.14 (br m, 2H), 2.91 - 2.73 (m, 3H), 2.07 (d, J = 1.1Hz, 3H), 1.89-1.62 (m, 4H), 1.49 (s, 9H).

Pripreme P5 i P6

4-bromo-2-fenil-1,3-benzodioksol, ENT-1 (P5) i 4-bromo-2-fenil-1,3-benzodioksol, ENT-2 (P6)

[0220]

Korak 1. Sinteza 2-bromo-6-[hidroksi(fenil)metil]fenola (C9).

[0221] Fenillitijum (1.9 M rastvor u 1-butoksibutanu; 78.5 mL, 149 mmol) je polako dodat u -70 °C rastvor 3-bromo-2-hidroksibenzaldehida (10.0 g, 49.7 mmol) u tetrahidrofuranu (70 mL) pri brzini koja je održavala temperaturu reakcije ispod -60 °C. Dobijena suspenzija je mešana na -70 °C tokom 1 sata, a zatim ostavljena da se zagreje na sobnu temperaturu preko noći, nakon čega je izlivena u 0 °C vodeni rastvor amonijum hlorida (30 mL). Ova smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 30 mL), a kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (30 mL), osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani in vacuo. Silika gel hromatografija (gradijent: 0% do 5% etil acetata u petrolej etru) je dala C9 kao žutu čvrstu supstancu. Prinos: 6.11 g, 21.9 mmol, 44%.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) 57.45 - 7.28 (m, 6H), 7.22 - 7.18 (m, 1H), 7.06 (br d, J = 7.7 Hz, 1H), 6.77 (dd, J = 7.9, 7.8 Hz, IH), 6.06 (br s, IH), 2.89 (br s, 1H).

Korak 2. Sinteza 4-bromo-2-fenil-1,3-benzodioksola (C10).

[0222] Rastvoru C9 (6.11 g, 21.9 mmol) u metanolu (370 mL) dodat je rastvor natrijum perjodata (11.7 g, 54.7 mmol) u vodi (175 mL). Reakciona smeša je mešana na 30 °C tokom 40 sati, nakon čega je veći deo metanola uklonjen koncentrovanjem in vacuo. Dobijena smeša je ekstrahovana dihlorometanom (5 × 100 mL), a kombinovani organski slojevi su isprani uzastopno vodenim rastvorom natrijum sulfita (100 mL) i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (100 mL), osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Obezbeđena je hromatografija na silika gelu (eluent: petroleum etar). C10 kao bezbojno ulje. Prinos: 4.50 g, 16.2 mmol, 74%. LCMS m/z 278.5 (uočen obrazac izotopa broma) [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) 5 7.62 - 7.57 (m, 2H), 7.49 - 7.43 (m, 3H), 7.04 (s, 1H), 7.00 (dd, J = 8.0, 1.4 Hz, 1H), 6.79 (dd, komponenta ABX obrasca, J = 7.8, 1.4 Hz, 1H), 6.75 (dd, komponenta ABX obrasca, J = 7.9, 7.8 Hz, IH).

Korak 3. Izolacija 4-bromo-2-fenil-1,3-benzodioksola, ENT-1 (P5) i 4-bromo-2-fenil-1,3-benzodioksola, ENT-2 (P6).

[0223] Enantiomeri koji sadrže C10 (5.00 g, 18.0 mmol) su razdvojeni korišćenjem SFC [Kolona: Chiral Technologies ChiralCel OD, 10 um; Mobilna faza: 3:1 ugljen-dioksid / (metanol koji sadrži 0.1% amonijum hidroksida)]. Enantiomer koji je prvi eluirao je označen kao ENT-1 (P5), i enantiomer drugog eluiranja kao ENT-2 (P6); oba su dobijena kao žuta ulja.

[0224] P5 Prinos: 2.20 g, 7.94 mmol, 44%. LCMS m/z 277.0 (uočen obrazac izotopa broma) [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) 57.63 - 7.55 (m, 2H), 7.51 - 7.42 (m, 3H), 7.04 (s, 1H), 7.00 (dd, J = 8.0, 1.3 Hz, 1H), 6.80 (dd, komponenta ABX obrasca, J = 7.8, 1.4 Hz, 1H), 6.75 (dd, komponenta ABX obrasca, J = 7.9, 7.8 Hz, IH). Retenciono vreme 3.28 minuta (Kolona: Chiral Technologies ChiralCel OD-H, 4.6 × 150 mm, 5 µm; Mobilna faza A: ugljen-dioksid; Mobilna faza B: metanol koji sadrži 0.05% dietilamina; Gradijent: 5% do 40% B tokom 5.5 minuta; Brzina protoka: 2.5 mL/min).

[0225] P6 Prinos: 2.00 g, 7.22 mmol, 40%. LCMS m/z 276.9 (uočen obrazac izotopa broma) [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 7.63 - 7.55 (m, 2H), 7.50 - 7.42 (m, 3H), 7.04 (s, 1H), 7.00 (dd, J = 8.0, 1.4 Hz, 1H), 6.80 (dd, komponenta ABX obrasca, J = 7.8, 1.4 Hz, 1H), 6.75 (dd, komponenta ABX obrasca, J = 7.9, 7.9 Hz, IH). Retenciono vreme 3.73 minuta (analitički uslovi identični onima koji se koriste za P5).

Priprema P7

terc-butil 4-[2-(5-hloropiridin-2-il)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-karboksilat (P7)

[0226]

Korak 1. Sinteza 2-(4-bromo-2-metil-1,3-benzodioksol-2-il)-5-hloropiridina (C11).

[0227] Smeša 5-hloro-2-etinilpiridina (1.80 g, 13.1 mmol), 3-bromobenzen-1,2-diola (2.47 g,

1

13.1 mmol) i trirutenijum dodekakarbonila (167 mg, 0.261 mmol) u toluenu (25 mL) ) je degazirana 1 minut, a zatim zagrevana na 100 ° C tokom 16 sati. Reakciona smeša je razblažena etil acetatom (30 mL) i filtrirana kroz sloj dijatomejske zemlje; filtrat je koncentrovan in vacuo i prečišćen korišćenjem hromatografije na silika gelu (Gradijent: 0% do 1% etil acetata u petrolej etru) da bi se dobilo C11 kao žuto ulje. Prinos: 1.73 g, 5.30 mmol, 40%. LCMS m/z 325.6 (uočen obrazac izotopa brom-hlor) [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 8.63 (dd, J = 2.4, 0.7 Hz, 1H), 7.71 (dd, komponenta ABX obrasca, J = 8.4, 2.4 Hz, 1H), 7.60 (dd, komponenta ABX obrasca, J = 8.4, 0.7 Hz, 1H), 6.97 (dd, J = 8.0, 1.4 Hz, 1H), 6.76 (dd, komponenta ABX obrasca, J = 7.8, 1.4 Hz, 1H), 6.72 (dd, komponenta ABX obrasca, J = 8.0, 7.8 Hz, IH), 2.10 (s, 3H).

Korak 2. Sinteza terc-butil 4-[2-(5-hloropiridin-2-il)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il-3,6-dihidropiridin-1(2H)-karboksilata (C12).

[0228] [1,1’-Bis(difenilfosfino)ferocen]dihloropaladijum(II) (388 mg, 0.530 mmol) je dodat u suspenziju C11 (1.73 g, 5.30 mmol), terc-butil 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-3,6-dihidropiridin-1(2H)-karboksilata (1.64 g, 5.30 mmol) i cezijum karbonata (5.18 g, 15.9 mmol) u 1,4-dioksanu (35 mL) i vodi (6 mL). Reakciona smeša je mešana na 90 °C tokom 4 sata, nakon čega je razblažena etil acetatom (30 mL) i vodom (5 mL). Organski sloj je koncentrovan in vacuo a ostatak je podvrgnut hromatografiji na silika gelu (Gradijent: 0% do 5% etil acetata u petrolej etru), dajući C12 kao žutu gumu. Prinos: 1.85 g, 4.31 mmol, 81%. LCMS m/z 451.0◆ [M+Na<+>].<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 8<.>62 (dd, J = 2.5, 0.8 Hz, 1H), 7.69 (dd, komponenta ABX obrasca, J = 8.4, 2.4 Hz, 1H), 7.57 (dd, komponenta ABX obrasca, J = 8.4, 0.8 Hz, 1H), 6.84 - 6.79 (m, 2H), 6.78 - 6.73 (m, 1H), 6.39 - 6.33 (br m, 1H), 4.13 - 4.07 (m, 2H), 3.68 - m, 2H), 2.60-2.51 (br m, 2H), 2.07 (s, 3H), 1.49 (s, 9H).

Korak 3. Sinteza terc-butil 4-[2-(5-hloropiridin-2-il)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-karboksilata (P7).

[0229] Rastvor C12 (2.61 g, 6.08 mmol) i tris(trifenilfosfin)rodijum(I) hlorid (Wilkinson katalizator; 563 mg, 0.608 mmol) u metanolu (100 mL) je degaziran pod vakuumom i zatim pročišćen vodonikom; ovaj ciklus evakuacije-čišćenja sproveden je ukupno tri puta. Reakciona smeša je zatim mešana na 60 °C pod vodonikom (50 psi) tokom 16 sati, nakon čega je filtrirana. Filtrat je koncentrovan in vacuo, i ostatak je prečišćen korišćenjem

2

hromatografije na silika gelu (Gradijent: 0% do 10% etil acetata u petrolej etru); dobijeni materijal je kombinovan sa materijalom iz slične hidrogenacije koja je sprovedena na C12 (110 mg, 0.256 mmol) da se obezbedi P7 kao svetložuta guma. Kombinovani prinos: 2.05 g, 4.76 mmol, 75%. LCMS m/z 431.3◆ [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 8<.>62 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 7.69 (dd, komponenta ABX obrasca, J = 8.4, 2.4 Hz, 1H), 7.57 (d, polovina AB kvarteta, J = 8.4 Hz, 1H), 6.79 (dd, komponenta ABC obrasca, J = 7.8, 7.7 Hz, 1H), 6.72 (dd, komponenta ABC obrasca, J = 7.8, 1.3 Hz, 1H), 6.68 (brd, komponenta ABC obrasca, J = 7.9 Hz, 1H), 4.32-4.12 (br m, 2H), 2.91-2.73 (m, 3H), 2.05 (s, 3H), 1.90-1.62 (m, 4H), 1.48 (s, 9H).

Pripreme P8 i P9

terc-butil 4-[2-(5-hloropiridin-2-il)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-karboksilat, ENT-1 (P8) i terc-butil 4-[2-(5-hloropiridin-2-il)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-karboksilat, ENT-2 (P9)

[0230]

[0231] Odvajanje od P7 (500 mg, 1.16 mmol) u njegove sastavne enantiomere je izvršeno korišćenjem SFC {Kolona: Phenomenex Lux Amylose-1, 5 µm; Mobilna faza: 9:1 ugljendioksid / [2-propanol koji sadrži 0.2% (7 M amonijak u metanolu)]}. Enantiomer koji je prvi eluirao je označen kao ENT-1 (P8), i enantiomer koji je eluirao drugi kao ENT-2 (P9).

P8 Prinos: 228 mg, 0.529 mmol, 46%. Retenciono vreme 4.00 minuta {Kolona: Phenomenex Lux Amylose-1, 4.6 × 250 mm, 5 µm; Mobilna faza A: ugljen-dioksid; Mobilna faza B: [2-propanol koji sadrži 0.2% (7 M amonijak u metanolu)]; Gradijent: 5% B tokom 1.00 minuta, zatim 5% do 60% B tokom 8.00 minuta; Brzina protoka: 3.0 mL/min; Povratni pritisak: 120 bara}.

P9 Prinos: 229 mg, 0.531 mmol, 46%. Retenciono vreme 4.50 minuta (analitički uslovi identični onima koji se koriste za P8).

Priprema P10

{4-[2-(4-hloro-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il} sirćetna kiselina (P10)

[0232]

Korak 1. Sinteza 4-[2-(4-hloro-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidina, ptoluensulfonatne soli (C13).

[0233] Rastvor P2 (5.0 g, 11 mmol) i p-toluensulfonske kiseline (4.81 g, 27.9 mmol) u etil acetatu (100 mL) je mešana na 60 °C tokom 2 sata, nakon čega je koncentrovana in vacuo Dobijen je C13 kao žuta guma. Ovaj materijal je prenet direktno u sledeći korak. LCMS m/z 347.9◆ [M+H]<+>.

Korak 2. Sinteza etil {4-[2-(4-hloro-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}acetata (C14).

[0234] Kalijum karbonat (7.71 g, 55.8 mmol) i etil bromoacetat (1.86 g, 11.2 mmol) su dodati u rastvor C13 (iz prethodnog koraka; ≤11 mmol) u acetonitrilu (150 mL), i reakciona smeša je mešana na 55 °C tokom 16 sati. Zatim je filtrirana, a filtrat je koncentrovan in vacuo i prečišćen korišćenjem hromatografije na silika gelu (Gradijent: 0% do 30% etil acetata u petrolej etru) da bi se dobilo C14 kao žuta guma. Na osnovu<1>H NMR analize, ovaj materijal

4

nije bio potpuno čist. Prinos: 3.57 g, 8.23 mmol, 75% u 2 koraka.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d), C14 samo pikovi: δ 7.52 (dd, J = 8.4, 8.0 Hz, 1H), 7.17 - 7.07 (m, 2H), 6.77 (dd, komponenta ABC obrasca, J = 7.8, 7.8 Hz, 1H), 6.72 - 6.67 (m, 2H), 4.21 (q, J = 7.1Hz, 2H), 3.27 (s, 2H), 3.07 (m, 2H), 2.70 (tt, J = 12.1, 3.8 Hz, 1H), 2.35 (ddd, J = 11.5, 11.5, 2.7 Hz, 2H), 2.04 (d, J = 1.1Hz, 3H), 2.02 - 1.76 (m, 4H), 1.29 (t, J = 7.1Hz, 3H).

Korak 3. Sinteza {4-[2-(4-hloro-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il} sirćetne kiseline (P10).

[0235] Rastvor C14 (3.57 g, 8.23 mmol) i vodeni rastvor natrijum hidroksida (3 M; 13.7 mL, 41.1 mmol) u smeši metanola (80 mL) i tetrahidrofurana (40 mL) je mešan na 25 °C tokom 16 sati. Nakon uklanjanja rastvarača in vacuo, vodeni ostatak je zakišeljen do pH 7 dodavanjem 1 M hlorovodonične kiseline, a zatim ekstrahovan smešom dihlorometana i metanola (10:1, 2 × 100 mL). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobilo P10 kao žuta čvrsta supstanca. Prinos: 2.95 g, 7.27 mmol, 88%. LCMS m/z 406.2◆ [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 7<.>61 (dd, J = 8.3, 8.3 Hz, 1H), 7.29 (dd, J = 10.9, 2.0 Hz, 1H), 7.22 (ddd, J = 8.4, 2.0, 0.8 Hz, 1H), 6.82 (dd, komponenta ABC obrasca, J = 8.3, 7.1Hz, 1H), 6.78 - 6.72 (m, 2H), 3.65 - 3.54 (br m, 2H), 3.51 (s, 2H), 3.04 - 2.88 (m, 3H), 2.23 - 2.07 (m, 2H), 3.04 -2.88 (m, 2H), 2.23 - 2.07 (m, 2H).2H), 2.07-1.93 (m, 2H), 2.04 (d, J = 1.1Hz, 3H).

Priprema P11

Metil 2-(hlorometil)-1-(2-metoksietil)-1H-benzimidazol-6-karboksilat (P11)

[0236]

Korak 1. Sinteza metil 3-[(2-metoksietil)amino]-4-nitrobenzoata (C15).

[0237] Bezbojnom rastvoru metil 3-fluoro-4-nitrobenzoata (50 g, 250 mmol) u tetrahidrofuranu (400 mL) dodat je trietilamin (40.7 g, 402 mmol, 55.8 mL), a zatim 2-metoksietanamin (30. 402 mmol) u tetrahidrofuranu (100 mL), kap po kap, na sobnoj temperaturi. Dobijeni žuti rastvor je mešan na 55 °C tokom 18 sati. Rastvor je ohlađen do sobne temperature i koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se uklonio tetrahidrofuran. Dobijena žuta čvrsta supstanca je rastvorena u etil acetatu (800 mL) i isprana zasićenim vodenim rastvorom amonijum hlorida (250 mL). Vodena faza je odvojena i ekstrahovana etil acetatom (200 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (3 × 250 mL), osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobilo C15 (60.2 g, 94%) kao žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (600 MHz, hloroform-d) δ 8.23 (d, 1H), 8.17 (br s, 1H), 7.58 (d, 1H), 7.25 (dd, 1H), 3.95 (s, 3H), 3.69-3.73 (m, 2H), 3.56 (m, 2H), 3.45 (s, 3H); LCMS m/z 255.4 [M+H]<+>.

Korak 2. Sinteza metil 4-amino-3-[(2-metoksietil)amino]benzoata (C16).

[0238] Rastvoru C15 (30 g, 118 mmol) u metanolu (500 mL) je dodat Pd/C (10 g, 94 mmol). Ova reakcija je mešana na sobnoj temperaturi pod 15 psi vodonika tokom 18 sati. Crna suspenzija je filtrirana kroz dijatomejsku zemlju i filter kolač je ispran metanolom (500 mL). Kombinovani filtrati su koncentrovani in vacuo da bi sde dobilo C16 (26.5 g, kvantitativno) kao smeđe ulje, koje je očvrslo stajanjem.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 7.48 (dd, 1H), 7.36 (d, 1H), 6.69 (d, 1H), 3.87 (s, 3H), 3.77 (br s, 2H), 3.68 (t , 2H), 3.41 (s, 3H), 3.32 (t, 2H); LCMS m/z 224.7 [M+H]<+>.

Korak 3. Sinteza metil 2-(hlorometil)-1-(2-metoksietil)-1H-benzimidazol-6-karboksilata (P11).

[0239] Rastvoru C16 (5.00 g, 22.3 mmol) u tetrahidrofuranu (100 mL) dodat je 2-hloro-1.1,1-trimetoksietan (3.31 mL, 24.6 mmol), a zatim monohidrat p-toluensulfonske kiseline (84.8 mg, 0.446 mmol). Reakciona smeša je zagrevana na 45 °C tokom 5 sati, nakon čega je koncentrovana in vacuo; zaostalo ulje je rastvoreno u etil acetatu (10 mL) i zagrevano do formiranja rastvora. Ovo je polako mešano uz hlađenje na sobnu temperaturu preko noći. Talog je sakupljen filtracijom i ispran heptanom da bi se dobio P11 kao siva čvrsta materija. Prinos: 5.73 g, 20.3 mmol, 91%.<1>H NMR (600 MHz, hloroform-d) δ 8.12 (br s, 1H), 8.01 (br d, J = 8.6 Hz, IH), 7.79 (d, J = 8.4 Hz, IH), 4.96 (s, 2H), 4.52 (t, J = 5.1Hz, 2H), 3.96 (s, 3H), 3.74 (t, J = 5.1Hz, 2H), 3.28 (s, 3H).

Korak 4. Sinteza hidrohloridne soli metil 2-(hlorometil)-1-(2-metoksietil)-1H-benzimidazol-6-karboksilata (P11, HCl so).

[0240] Rastvor C16 (5.0 g, 24 mmol) u 1,4-dioksanu (100 mL) je zagrejan na 100 °C, dodat je rastvor anhidrida hlorosirćetne kiseline (4.1 g, 24.5 mmol) u 1,4-dioksanu (60 mL) preko levka za dodavanje u periodu od 10 sati, i reakciona smeša je mešana još 12 sati na 100 °C. Sledećeg dana, reakcija je ohlađena do sobne temperature i 1,4-dioksan je uklonjen pod sniženim pritiskom. Sirova reakciona smeša je rastvorena u etil acetatu i isprana zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata. Sloj etil acetata je odvojen, osušen preko natrijum sulfata i filtriran. Rastvor 4 M hlorovodonika u 1,4-dioksanu (1,1 ekviv.) je dodat u rastvor etil acetata uz stalno mešanje. Hidrohloridna so P11 istaložena je kao bledo žuta čvrsta supstanca. Suspenzija je mešana 1 sat i hidrohloridna so P11 je zatim sakupljena filtracijom da bi se dobila žuta čvrsta supstanca (6.1 g, 86%).<1>H NMR (600 MHz, CD3OD) δ 8.64 (s, 1H), 8.30 (d, 1H), 7.92 (d, 1H), 5.32 (s, 2H), 4.84 (m, 2H), 3.99 (s, 3H), 3.83 (t, 2H) ), 3.31 (s, 3H). LCMS m/z 283.2 [M+H]<+>.

Priprema P12

Metil 1-(2-metoksietil)-2-(piperazin-1-ilmetil)-1H-benzimidazol-6-karboksilat (P12)

Korak 1. Sinteza metil 2-{[4-(terc-butoksikarbonil)piperazin-1-il]metil}-1-(2-metoksietil-1H-benzimidazol-6-karboksilatа (C17).

[0242] Jedinjenje P11 (1.59 g, 5.62 mmol) je dodato u mešavinu terc-butil piperazin-1-karboksilata na 15 °C (1.00 g, 5.37 mmol) i kalijum karbonata (2.97 g, 21.5 mmol) u acetonitrilu (15 mL) i reakciona smeša je mešana na 55 °C tokom 12 sati. Zatim je kombinovana sa sličnom reakcijom koja je izvedena korišćenjem P11 i terc-butil piperazin-1-karboksilata (200 mg, 1.07 mmol), i smeša je filtrirana. Nakon što je filtrat koncentrovan in vacuo, ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (Gradijent: 0% do 60% etil acetata u petrolej etru) da bi se dobilo C17 kao bledo žuta čvrsta supstanca. Kombinovani prinos: 2.30 g, 5.32 mmol, 83%. LCMS m/z 433.0 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 8.12 (d, J= 1.5 Hz, 1H), 7.96 (dd, J = 8.4, 1.5 Hz, 1H), 7.73 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 4.58 (t, J = 5.4 Hz, 2H), 3.95 (s, 3H), 3.89 (s, 2H), 3.73 (t, J = 5.4 Hz, 2H), 3.46 - 3.37 (br m, 4H), 3.28 (s, 3H), 2.54 - 2.44 (br m, 4H), 1.45 (s, 9H).

Korak 2. Sinteza metil 1-(2-metoksietil)-2-(piperazin-1-ilmetil)-1H-benzimidazol-6-karboksilata (P12).

[0243] Rastvoru C17 (2.30 g, 5.32 mmol) u dihlorometanu (80 mL) dodat je rastvor hlorovodonika u etil acetatu (20 mL). Reakciona smeša je mešana na 20°C tokom 2 sata, nakon čega je koncentrovana in vacuo. Ostatak je razblažen vodom (20 mL), podešen na pH od 9 do 10 dodavanjem zasićenog vodenog rastvora natrijum bikarbonata i ekstrahovan smešom etil acetata i metanola (10:1, 15 × 50 mL). Kombinovani organski slojevi su sušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani in vacuo da bi se dobilo P12 kao bledo žuta čvrsta supstanca. Prinos: 1.68 g, 5.05 mmol, 95%. LCMS m/z 332.8 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 8.13 (br s, 1H), 7.96 (br d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.72 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 4.59 (t, J = 5.5 Hz, 2H), 3.95 (s, 3H), 3.86 (s, 2H), 3.75 (t, J = 5.5 Hz, 2H), 3.29 (s, 3H), 2.87 (t, J = 4.8 Hz, 4H), 2.50 (br m, 4H).

Priprema P13

6-bromo-2-(hlorometil)-1-(2-metoksietil)-1H-imidazo[4.5-b]piridin (P13)

[0244]

Korak 1. Sinteza 5-bromo-N-(2-metoksietil)-2-nitropiridin-3-amina (C18).

[0245] Rastvor 5-bromo-3-fluoro-2-nitropiridina (400 mg, 1.81 mmol) i 2-metoksietanamina (408 mg, 5.43 mmol) u tetrahidrofuranu (10 mL) je mešan na 25 °C tokom 2 sata, nakon čega je razblažen etil acetatom (100 mL) i ispran vodom (50 mL). Organski sloj je ispran zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (50 mL), osušen preko magnezijum sulfata, filtriran i koncentrovan da bi se dobilo C18 kao žuta čvrsta supstanca. Prinos: 430 mg, 1.56 mmol, 86%.

Korak 2. Sinteza 5-bromo-N<3>-(2-metoksietil)piridin-2.3-diamina (C19).

[0246] Rastvor C18 (430 mg, 1.56 mmol), amonijum hlorida (833 mg, 15.6 mmol) i gvožđa u prahu (870 mg, 15.6 mmol) u smeši metanola (10 mL) i vode (2 mL) mešan je na 80 °C tokom 30 minuta. Dobijena suspenzija je sipana u vodu (50 mL) i ekstrahovana etil acetatom (2 × 50 mL); kombinovani organski slojevi su osušeni preko magnezijum sulfata, filtrirani i koncentrovani da bi se dobilo C19 kao smeđa čvrsta supstanca. Prinos: 350 mg, 1.42 mmol, 91%.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 7.63 (d, J = 2.1Hz, 1H), 6.88 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 4.33 - 4.19 (br s, 2H), 3.65 (dd, J = 5.6, 4.6 Hz, 2H), 3.40 (s, 3H), 3.22 (br t, J = 5 Hz, 2H).

Korak 3. Sinteza 6-bromo-2-(hlorometil)-1-(2-metoksietil)-1H-imidazo[4.5-b]piridina (P13).

[0247] Rastvor C19 (400 mg, 1.63 mmol) u 1,4-dioksanu (8 mL) je tretiran sa hloroacetil hloridom (0.284 mL, 3.57 mmol) i mešan na sobnoj temperaturi sve dok LCMS analiza nije pokazala potpunu konverziju C19 na intermedijerni amid. Nakon uklanjanja 1,4-dioksana in vacuo, ostatak je rastvoren u trifluorosirćetnoj kiselini (8 mL) i zagrevan na 80 °C tokom 18 sati, nakon čega je reakciona smeša ohlađena do sobne temperature i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Dobijeno ulje je rastvoreno u etil acetatu (50 mL) i neutralizovano dodavanjem zasićenog vodenog rastvora natrijum bikarbonata. Vodeni sloj je ekstrahovan etil acetatom (20 mL), a kombinovani organski slojevi su osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani in vacuo. Silika gel hromatografija (Gradijent: 0% do 80% etil acetata u heptanu) dala je P13 kao čvrsu supstancu. Prinos: 176 mg, 0.578 mmol, 35%. LCMS m/z 306.1 (uočen obrazac izotopa brom-hlor) [M+H]<+>.<1>H NMR (600 MHz, hloroform-d) δ 8.58 (br s, 1H), 7.89 (br s, 1H), 4.92 (s, 2H), 4.44 (t, J = 5.0 Hz, 2H), 3.71 (t, J = 5.0 Hz, 2H), 3.28 (s, 3H).

Priprema P14

Metil 2-{[4-(2.3-dihidroksifenil)piperidin-1-il]metil}-1-(2-metoksietil)-1H-benzimidazol-6-karboksilat (P14)

[0248]

Korak 1. Sinteza [(3-bromobenzen-1,2-diil)bis(oksimetandiiloksietan-2.1-diil)]bis(trimetilsilana) (C20).

[0249] Ova reakcija je izvedena u dve serije identične razmere. N,N-Diizopropiletilamin (37.8 mL, 217 mmol) je dodat u kapima u rastvor 3-bromobenzen-1,2-diola (10.0 g, 52.9 mmol) u tetrahidrofuranu (300 mL). Nakon što je smeša mešana 10 minuta na 20 °C, [2-(hlorometoksi)etil](trimetil)silan (19.2 mL, 108 mmol) je dodat u kapima tokom 5 minuta, i mešanje je nastavljeno 16 sati na sobnoj temperaturi (18 °C). Ponovo je dodat N,N-diizopropiletilamin (27.6 mL, 158 mmol), a zatim je u kapima dodat [2-(hlorometoksi)etil](trimetil)silan (14.0 mL, 79.1 mmol) na sobnoj temperaturi (18 °C). Posle još 2.5 sata na sobnoj temperaturi, reakciona smeša je filtrirana, a filtrat je koncentrovan in

1

vacuo. U ovom trenutku, sirovi proizvodi iz dve serije su kombinovani i prečišćeni korišćenjem hromatografije na silika gelu (Gradijent: 0% do 7% etil acetata u petrolej etru), da bi se dobilo C20 kao bezbojno ulje. Na osnovu<1>H NMR analize, ovaj materijal nije bio potpuno čist. Kombinovani prinos: 22.9 g, 50.9 mmol, 48%.<1>H NMR (400 MHz, hloroformd), C20 samo pikovi: δ 7.19 (dd, J = 8.1, 1.5 Hz, 1H), 7.12 (dd, J = 8.3, 1.4 Hz, 1H), 6.90 (dd, J = 8.2.8.2 Hz, 1H), 5.26 - 5.19 (m, 4H), 4.00 - 3.92 (m, 2H), 3.80 - 3.73 (m, 2H), 1.00 -0.91 (m, 4H), 0.03 (s, 9H), 0 (s, 9H).

Korak 2. Sinteza terc-butil 4-(2.3-bis{[2-(trimetilsilil)etoksi]metoksi}fenil)-3,6-dihidropiridin-1(2H)-karboksilata (C21).

[0250] Reakcioni sud koji sadrži suspenziju C20 (6.11 g, 13.6 mmol), terc-butil 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-3,6-dihidropiridin-1(2H)-karboksilata (5.04 g, 16.3 mmol), vodeni rastvor natrijum karbonata (1 M; 40.8 mL, 40.8 mmol) i [1,1’-bis(difenilfosfino)ferocen]dihloropaladijum(II) (497 mg, 0.679 mmol) u 1,4-dioksanu (100 mL) je evakuisan i napunjen azotom. Ovaj ciklus evakuacije je ponovljen dva puta, a zatim je reakciona smeša mešana na 85 °C tokom 16 sati, nakon čega je reakciona smeša razblažena vodom (40 mL) i ekstrahovana etil acetatom (3 × 150 mL). Kombinovani organski slojevi su sušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani in vacuo. Prečišćavanje hromatografijom na silika gelu (Gradijent: 0% do 8% metanola u dihlorometanu) dalo je C21 kao žuto ulje. Prinos: 5.47 g, 9.91 mmol, 73%.<1>H NMR (600 MHz, hloroform-d) δ 7.10 (brd, J = 8.2 Hz, 1H), 6.98 (dd, J = 7.9, 7.9 Hz, 1H), 6.81 (br d, J = 7.7 Hz, 1H), 5.79 (br s, 1H), 5.23 (s, 2H), 5.07 (s, 2H), 4.03 (br s, 2H), 3.83 - 3.74 (m, 4H), 3.59 (br s , 2H), 2.52 (br s, 2H), 1.49 (s, 9H), 1.01 - 0.89 (m, 4H), 0.01 (s, 9H), 0.01 (s, 9H).

Korak 3. Sinteza terc-butil 4-(2.3-bis{[2-(trimetilsilil)etoksi]metoksi}fenil)piperidin-1-karboksilata (C22).

[0251] Rastvor C21 (12.5 g, 22.6 mmol) u metanolu (300 mL) je tretiran sa 10% paladijumom na ugljeniku (2.94 g, 2.76 mmol) i hidrogenizovan 16 sati na 40 psi i 25 °C. LCMS analiza u ovom trenutku je pokazala konverziju u proizvod: LCMS m/z 576.0 [M+Na<+>]. Nakon što je reakciona smeša filtrirana i filter kolač ispran metanolom (2 × 100 mL), kombinovani filtrati su koncentrovani in vacuo da bi se dobilo C22 kao bezbojno ulje. Prinos: 11.2 g, 20.1 mmol, 89%.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 7.05 - 6.97 (m, 2H),

2

6.83 (dd, J = 6.9, 2.5 Hz, 1H), 5.22 (s, 2H), 5.13 (s, 2H), 4.38 - 4.10 (br m, 2H), 3.90 - 3.82 (m, 2H), 3.81 - 3.73 (m, 2H) , 3.22 (tt, J= 12.2, 3.5 Hz, 1H), 2.79 (brdd, J = 12.8, 12.8 Hz, 2H), 1.78 (br d, J = 13 Hz, 2H), 1.65-1.52 (m, 2H), 1.48 (s, 9H), 1.04-0.91 (m, 4H), 0.03 (s, 9H), 0.00 (s, 9H).

Korak 4. Sinteza 4-(2.3-bis{[2-(trimetilsilil)etoksi]metoksi}fenil)piperidina (C23).

[0252] Rastvoru C22 (7.23 g, 13.0 mmol) na sobnoj temperaturi (15 °C) u dihlorometanu (90 mL) dodat je 2,6-dimetilpiridin (2.39 g, 22.3 mmol), nakon čega je u kapima dodat trimetilsilil trifluorometansulfonat (3.80 g, 17.1 mmol). Reakciona smeša je mešana na 15°C tokom 16 sati, nakon čega su dodati još 2,6-dimetilpiridin (909 mg, 8.48 mmol) i trimetilsilil trifluorometansulfonat (1.45 g, 6.52 mmol). Posle mešanja na sobnoj temperaturi (15 °C) još 5 sati, LCMS analiza reakcione smeše pokazala je prisustvo proizvoda: LCMS m/z 454.1 [M+H]<+>. Reakciona smeša je koncentrovana in vacuo, a ostatak je ispran uzastopno vodenim rastvorom amonijum hlorida (3 × 100 mL) i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (100 mL), osušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobilo C23 kao smeđe ulje (6.6 g). Ovaj materijal je prenet direktno u sledeći korak.

Korak 5. Sinteza metil 2-{[4-(2.3-bis{[2-(trimetilsilil)etoksi]metoksi}fenil)piperidin-1-il]metil}-1-(2-metoksietil)-1H-benzimidazol-6-karboksilata (C24).

[0253] Rastvoru C23 (iz prethodnog koraka; 6.6 g, ≤13 mmol) u acetonitrilu (150 mL) je dodat P11 (3.08 g, 10.9 mmol), a zatim kalijum karbonat (10.1 g, 73.1 mmol), i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi (15 °C) tokom 16 sati. LCMS analiza u ovom trenutku je pokazala prisustvo proizvoda: LCMS m/z 700.2 [M+H]<+>. Reakciona smeša je filtrirana, a filtrat je koncentrovan in vacuo; prečišćavanje hromatografijom na silika gelu (Gradijent: 34% do 56% etil acetata u petrolej etru) dalo je C24 kao žuto ulje. Prinos: 5.4 g, 7.7 mmol, 59% u 2 koraka.<1>1H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 8.16 - 8.12 (m, 1H), 7.96 (dd, J = 8.5, 1.5 Hz, 1H), 7.73 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.04 - 6.96 (m, 2H), 6.86 (dd, J = 6.7, 2.6 Hz, 1H), 5.21 (s, 2H), 5.12 (s, 2H), 4.63 (t, J = 5.5 Hz, 2H), 3.95 (s, 3H), 3.93 - 3.83 (m, 4H), 3.80 - 3.72 (m, 4H), 3.31 (s, 3H), 3.17 - 3.06 (m, 1H), 2.99 ( br d, J = 11.2 Hz, 2H), 2.35 -2.22 (m, 2H), 1.81 (br d, polovina AB kvarteta, J = 12.6 Hz, 2H), 1.75-1.61 (m, 2H), 1.04-0.91 (m, 4H), 0.05 (s, 9H), -0.01 (s, 9H).

Korak 6. Sinteza metil 2-{[4-(2.3-dihidroksifenil)piperidin-1-il]metil}-1-(2-metoksietil)-1H-benzimidazol-6-karboksilata (P14).

[0254] Rastvor hlorovodonika u 1,4-dioksanu (4 M; 96 mL, 384 mmol) je dodat u rastvor na sobnoj temperaturi (18 °C) C24 (6.40 g, 9.14 mmol) u 1,4-dioksanu (120 mL). Nakon završetka dodavanja, reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi (18 °C) tokom 16 sati, kombinovana sa sličnom reakcijom izvedenom korišćenjem C24 (1.00 g, 1.43 mmol) i koncentrovana in vacuo. Ostatak je tretiran smešom dihlorometana i metanola (20:1, 150 mL) i mešan na sobnoj temperaturi (18 °C) 1 sat, nakon čega je čvrsta supstanca (4.85 g) sakupljena filtracijom. Ovaj materijal je tretiran vodom (100 mL), a smeša je podešena na pH od 7 do 8 dodavanjem vodenog rastvora natrijum bikarbonata, mešana na sobnoj temperaturi (18 °C) tokom 30 minuta i filtrirana. Filter kolač je ispran vodom (2 × 20 mL), zatim pomešan sa metanolom (100 mL) i koncentrovan in vacuo. Dobijeni materijal je tretiran petrolej etrom (100 mL) i mešan na sobnoj temperaturi (18 °C) 30 minuta. Posle filtracije, filter kolač je pomešan sa toluenom (30 mL) i koncentrovan in vacuo da bi se dobilo P14 kao siva čvrsta materija. Kombinovani prinos: 2.92 g, 6.64 mmol, 63%. LCMS m/z 440.1 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.21 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.81 (dd, J = 8.5, 1.6 Hz, 1H), 7.66 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 6.64 - 6.51 (m, 3H), 4.63 (t, J = 5.3 Hz, 2H), 3.88 (s, 3H), 3.84 (s, 2H), 3.75 (t, J = 5.3 Hz, 2H), 3.22 (s, 3H), 2.97 - 2.78 (m, 3H), 2.18 (br dd, J = 11, 11Hz, 2H), 1.75-1.64 (m, 2H), 1.64-1.49 (m, 2H).

Priprema P15

Metil 2-(hlorometil)-1-[(2S)-oksetan-2-ilmetil]-1H-benzimidazol-6-karboksilat (P15)

[0255]

4

[0256] Cela ova sekvenca je izvedena u velikim razmerama. Generalno, pre reakcija, kao i posle dodavanja reagensa, reaktori su evakuisani do -0.08 do -0.05 MPa, a zatim punjeni azotom do normalnog pritiska. Ovaj proces je generalno ponovljen 3 puta, a zatim je procenjen sadržaj kiseonika da bi se osiguralo da je ≤1.0%. Za procese ekstrakcije i ispiranja organskih slojeva, smeše su generalno mešane 15 do 60 minuta, a zatim ostavljene da se slegnu 15 do 60 minuta pre razdvajanja slojeva.

Korak 1. Sinteza (2S)-2-[(benziloksi)metil]oksetana (C25).

[0257] Ova reakcija je izvedena u tri serije približno iste razmere. Stakleni reaktor od 2000 L je napunjen sa 2-metilpropan-2-olom (774.7 kg). Kalijum terc-butoksid (157.3 kg, 1402 mol) je dodat preko levka za dodavanje čvrste supstance, i smeša je mešana 30 minuta. Zatim je dodat trimetilsulfoksonijum jodid (308.2 kg, 1400 mol) na isti način i reakciona smeša je zagrevana na 55 °C do 65 °C tokom 2 do 3 sata, nakon čega je (2S)-2-[(benziloksi)metil] oksiran (92.1 kg, 561 mol) je dodat brzinom od 5 do 20 kg/sat. Nakon što je reakciona smeša održavana na 55 °C do 65 °C tokom 25 sati, ohlađena je na 25 °C do 35 °C, i filtrirana kroz dijatomejsku zemlju (18.4 kg). Filter kolač je ispran terc-butil metil etrom (3 × 340 kg), a kombinovani filtrati su prebačeni u reaktor od 5000 L, tretirani prečišćenom vodom (921 kg) i mešani 15 do 30 minuta na 15 °C do 30 °C. Organski sloj je zatim dva puta ispran rastvorom natrijum hlorida (230.4 kg) u prečišćenoj vodi (920.5 kg) i koncentrovan pod sniženim pritiskom (≤ -0.08 MPa) na ≤45 °C. n-Dodat je heptan (187 kg) i dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom (≤ -0.08 MPa) na ≤45 °C; organska faza je prečišćena hromatografijom na silika gelu (280 kg), sa natrijum hloridom (18.5 kg) na piku kolone. Sirovi materijal je stavljen na kolonu korišćenjem n-heptana (513 kg), a zatim eluiran smešom n-heptana (688.7 kg) i etil acetata (64.4 kg). Tri serije su kombinovane, obezbeđujući C25 kao 85% čisto svetlo žuto ulje (189.7 kg, 906 mmol, 54%).<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d), C25 samo pikovi: δ 7.40 - 7.32 (m, 4H), 7.32 - 7.27 (m, 1H), 4.98 (dddd, J = 8.1, 6.7, 4.9, 3.7 Hz, 1H), 4.72 - 4.55 (m, 4H), 3.67 (dd, komponenta ABX obrasca, J = 11.0, 4.9 Hz, 1H), 3.62 (dd, komponenta ABX obrasca, J = 11.0, 3.7 Hz, IH), 2.72 - 2.53 (m, 2H).

Korak 2. Sinteza (2S)-oksetan-2-ilmetanola (C26).

[0258] 10% Paladijum na ugljeniku (30.7 kg) je dodat kroz levak za dodavanje u rastvor na od 10 °C do 30 °C 85% čistoće C25 (iz prethodnog koraka; 185.3 kg, 884.8 mol) u tetrahidrofuranu (1270 kg) u autoklavnom reaktoru od nerđajućeg čelika od 3000 L. Levak za dodavanje je ispran prečišćenom vodom i tetrahidrofuranom (143 kg), a ispiranja su dodata u reakcionu smešu. Nakon što je sadržaj reaktora pročišćen azotom, isti je na sličan način pročišćen vodonikom, povećavajući pritisak na 0.3 do 0.5 MPa, a zatim odzračen na 0.05 MPa. Ovo pročišćavanje vodonikom je ponovljeno 5 puta, nakon čega je pritisak vodonika povećan na 0.3 do 0.4 MPa. Reakciona smeša je zatim zagrejana na 35 °C do 45 °C. Posle 13 sati, tokom kojih je pritisak vodonika održavan na 0.3 do 0.5 MPa, smeša je ventilisana do 0.05 MPa, i pročišćena pet puta azotom, povećanjem pritiska na 0.15 do 0.2 MPa, a zatim odzračivanjem na 0.05 MPa. Nakon što je smeša ohlađena na 10 °C do 25 °C, filtrirana je, a reaktor je ispran tetrahidrofuranom (2 × 321 kg). Filter kolač je dva puta natopljen ovom tečnošću za ispiranje i zatim filtriran; koncentrovanje pri sniženom pritisku (≤ -0.06 MPa) izvedeno je na ≤40 °C, dajući C26 (62.2 kg, 706 mol, 80%) u tetrahidrofuranu (251 kg)

Korak 3. Sinteza (2S)-oksetan-2-ilmetil 4-metilbenzensulfonata (C27).

[0259] 4-(dimetilamino)piridin (17.5 kg, 143 mol) je dodat u rastvor od 10 °C do 25 °C C26 (iz prethodnog koraka; 62.2 kg, 706 mol) u tetrahidrofuranu (251 kg) i trietilamina (92.7 kg, 916 mol) u dihlorometanu (1240 kg). Posle 30 minuta, dodat je p-toluensulfonil hlorid (174.8 kg, 916.9 mol) u porcijama u intervalima od 20 do 40 minuta, i reakciona smeša je mešana na 15 °C do 25 °C tokom 16 sati i 20 minuta. Dodata je prečišćena voda (190 kg); nakon mešanja, organski sloj je ispran vodenim rastvorom natrijum bikarbonata (pripremljen sa 53.8 kg natrijum bikarbonata i 622 kg prečišćene vode), a zatim ispran vodenim rastvorom amonijum hlorida (pripremljen sa 230 kg amonijum hlorida i 624 kg prečišćene vode). Posle konačnog ispiranja sa prečišćenom vodom (311 kg), organski sloj je filtriran kroz Nutsche filter od nerđajućeg čelika koji je prethodno napunjen silika gelom (60.2 kg). Filterski kolač je natopljen dihlorometanom (311 kg) tokom 20 minuta, a zatim filtriran; kombinovani filtrati su koncentrovani na sniženom pritisku (≤ -0.05 MPa) i ≤40 °C dok nije ostalo 330 do 400 L. Zatim je dodat tetrahidrofuran (311 kg), na 15 °C do 30 °C, i smeša je koncentrovana na isti način, do krajnje zapremine od 330 do 400 L. Dodavanje tetrahidrofurana i koncentrovanje su ponovljeni, ponovo do zapremine od 330 do 400 L, dajući svetlo žuti rastvor od C27 (167.6 kg, 692 mmol, 98%) u tetrahidrofuranu (251.8 kg).<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d), C27 samo pikovi: δ 7<.>81 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.34 (d, J = 8.1Hz, 2H), 4.91 (ddt, J = 8.0, 6.7, 3.9 Hz, 1H), 4.62 - 4.55 (m, 1H), 4.53 - 4.45 (m, 1H), 4.14 (d, J = 3.9 Hz, 2H), 2.75-2.63 (m, IH), 2.60-2.49 (m, IH), 2.44 (s, 3H).

Korak 4. Sinteza (2S)-2-(azidometil)oksetana (C28).

[0260] N,N-Dimetilformamid (473 kg), natrijum-azid (34.7 kg, 534 mol) i kalijum jodid (5.2 kg, 31 mol) su kombinovani u 3000 L staklenom reaktoru na 10 °C do 25 °C. Nakon dodavanja od C27 (83.5 kg, 344.6 mol) u tetrahidrofuranu (125.4 kg), reakciona smeša je zagrevana na 55 °C do 65 °C tokom 17 sati i 40 minuta, nakon čega je ohlađena na 25 °C do 35 °C, a azot je pušten u mehurićima iz donjeg ventila 15 minuta. Zatim su dodati terc-butil metil etar (623 kg) i prečišćena voda (840 kg), a dobijeni vodeni sloj je ekstrahovan dva puta sa terc-butil metil etrom (312 kg i 294 kg). Kombinovani organski slojevi su isprani prečišćenom vodom (2 × 419 kg) uz održavanje temperature na 10 °C do 25 °C, dajući C28 (31.2 kg, 276 mol, 80%) u rastvoru gornjeg organskog sloja (1236.8 kg).

Korak 5. Sinteza 1-[(2S)-oksetan-2-il]metanamina (C29).

[0261] 10% Paladijum na ugljeniku (3.7 kg) je dodat kroz levak za dodavanje u rastvor od 10 °C do 30 °C C28 [iz prethodnog koraka; 1264 kg (31.1 kg od C28, 275 mol)] u tetrahidrofuranu (328 kg) u autoklavnom reaktoru od nerđajućeg čelika od 3000 L. Levak za dodavanje je ispran tetrahidrofuranom (32 kg), a ispiranje je dodato u reakcionu smešu.

Nakon što je sadržaj reaktora pročišćen azotom, na sličan način je pročišćen vodonikom, povećavajući pritisak na 0.05 do 0.15 MPa, a zatim odzračen na 0.03 do 0.04 MPa. Ovo pročišćavanje vodonikom je ponovljeno 5 puta, nakon čega je pritisak vodonika povećan na 0.05 do 0.07 MPa. Reakciona temperatura je povećana na 25 °C do 33 °C, a pritisak vodonika je održavan na 0.05 do 0.15 MPa tokom 22 sata, dok se vodonik menjao svakih 3 do 5 sati. Smeša je zatim pročišćena pet puta azotom, povećanjem pritiska na 0.15 do 0.2 MPa, a zatim odzračivanjem na 0.05 MPa. Nakon filtracije, tetrahidrofuran (92 kg i 93 kg) je korišćen za pranje reaktora, a zatim natapanje filter kolača. Kombinovani filtrati su koncentrovani na sniženom pritisku (≤ -0.07 MPa) i ≤45 °C, dajući C29 (18.0 kg, 207 mol, 75%) u tetrahidrofuranu (57.8 kg).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6), C29 samo pikovi: δ 4<.>62 (ddt, J = 7.6, 6.6, 5.1Hz, 1H), 4.49 (ddd, J = 8.6, 7.3, 5.6 Hz, 1H), 4.37 (dt, J = 9.1, 5.9 Hz, 1H), 2.69 (d, J = 5.1Hz, 2H), 2.55-2.49 (m, IH), 2.39 (m, 1H).

Korak 6. Sinteza metil 4-nitro-3-{[(2S)-oksetan-2-ilmetil]amino}benzoata (C30).

[0262] Kalijum karbonat (58.1 kg, 420 mol) je dodat u rastvor metil 3-fluoro-4-nitrobenzoata (54.8 kg, 275 mol) u tetrahidrofuranu (148 kg) u staklenom reaktoru od 100 L i smeša je mešana za 10 minuta. Rastvor C29 (29.3 kg, 336 mol) u tetrahidrofuranu (212.9 kg) i reakciona smeša je mešana na 20 °C do 30 °C tokom 12 sati, nakon čega je dodat etil acetat (151 kg) i smeša je filtrirana kroz silika gel (29 kg). Filter kolač je ispran etil acetatom (150 kg i 151 kg), a kombinovani filtrati su koncentrovani na sniženom pritisku (≤ -0.08 MPa) i ≤45 °C do zapremine od 222 do 281 L. Nakon što je smeša bila ohlađena na 10 °C do 30 °C, dodat je n-heptan (189 kg), mešanje je vršeno 20 minuta, i smeša je koncentrovana na sniženom pritisku (≤ -0.08 MPa) i ≤45 °C do zapremine 222 L. n-heptan (181 kg) je ponovo dodat u smešu referentnom brzinom od 100 do 300 kg/sat, i mešanje je nastavljeno 20 minuta. Smeša je uzorkovana sve dok rezidualni tetrahidrofuran nije bio ≤5%, a rezidualni etil acetat nije bio 10% do 13%. Smeša je zagrejana na 40 °C do 45 °C i mešana 1 sat, nakon čega je ohlađena na 15 °C do 25 °C brzinom od 5 °C do 10 °C na sat, a zatim mešana na 15 °C. C do 25 °C tokom 1 sata. Filtracijom pomoću centrifuge od nerđajućeg čelika dobijen je filter kolač, koji je ispran smešom etil acetata (5.0 kg) i n-heptana (34 kg), a zatim mešan sa tetrahidrofuranom (724 kg) na 10 °C do 30 °C za 15 minuta; filtracijom se dobija žuta čvrsta supstanca koja se uglavnom sastoji od C30 (57.3 kg, 210 mol, 76%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 8.34 (t, J = 5.8 Hz, IH), 8.14 (d, J = 8.9 Hz, IH), 7.63 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 7.13 (dd, J = 8.9, 1.8 Hz, 1H), 4.99 (dddd, J = 7.7, 6.7, 5.3, 4.1Hz, 1H), 4.55 (ddd, J = 8.6, 7.3, 5.8 Hz, 1H), 4.43 (dt, J = 9.1, 6.0 Hz, 1H), 3.87 (s, 3H), 3.67 - 3.61 (m, 2H), 2.67 (dddd, J = 11.1, 8.6, 7.7, 6.2 Hz, IH), 2.57 - 2.47 (m, 1H).

Korak 7. Sinteza metil 2-(hlorometil)-1-[(2S)-oksetan-2-ilmetilj-1H-benzimidazol-6-karboksilata (P15).

[0263] Rastvor C30 (iz prethodnog koraka; 51.8 kg, 190 mol) u tetrahidrofuranu (678 kg), u autoklavnom reaktoru od 3000 L, tretiran je sa 10% paladijuma na ugljeniku (5.2 kg) na 10 °C do 30 °C. Cev za dodavanje je isprana tetrahidrofuranom (46 kg) i ispiranje je dodato u reakcionu smešu. Nakon što je sadržaj reaktora pročišćen azotom, isti je na sličan način pročišćen vodonikom, povećavajući pritisak na 0.1 do 0.2 MPa, a zatim odzračen na 0.02 do 0.05 MPa. Ovo pročišćavanje vodonikom je ponovljeno 5 puta, nakon čega je pritisak vodonika povećan na 0.1 do 0.25 MPa. Reakciona smeša je mešana na 20°C do 30°C, i svaka 2 do 3 sata, smeša je pročišćena azotom tri puta, a zatim je pročišćena vodonikom pet puta; posle svake konačne razmene vodonika, pritisak vodonika je povećan na 0.1 do 0.25 MPa. Posle ukupnog reakcionog vremena od 11.25 sati, reakciona smeša je spuštena do normalnog pritiska i pet puta pročišćena azotom, povećanjem pritiska na 0.15 do 0.2 MPa i zatim odzračivanjem na 0.05 MPa. Zatim je filtrirana, a filter kolač je dva puta ispran tetrahidrofuranom (64 kg i 63 kg); kombinovano ispiranje i filtrat su koncentrovani pod sniženim pritiskom (≤ -0.08 MPa) i ≤40 °C do zapremine od 128 do 160 L. Dodan je tetrahidrofuran (169 kg) i smeša je ponovo koncentrovana do zapremine od 128 do 160 L; ovaj proces je ponovljen ukupno 4 puta, dajući rastvor intermedijera metil 4-amino-3-{[(2S)-oksetan-2-ilmetil]amino}benzoata.

[0264] Ovom rastvoru je dodat tetrahidrofuran (150 kg), a zatim 2-hloro-1.1,1-trimetoksietan (35.1 kg, 227 mol) i monohidrat p-toluensulfonske kiseline (1.8 kg, 9.5 mol). Nakon što je reakciona smeša mešana 25 minuta, zagrevana je na 40 °C do 45 °C tokom 5 sati, nakon čega je koncentrovana pod sniženim pritiskom do zapremine od 135 do 181 L. 2-Propanol (142 kg) je bio dodata, i smeša je ponovo koncentrovana do zapremine od 135 do 181 L, nakon čega su dodati 2-propanol (36.5 kg) i prečišćena voda (90 kg), i mešanje je nastavljeno do dobijanja rastvora. Ovo je filtrirano pomoću in-line tečnog filtera, a zatim tretirano prečišćenom vodom (447 kg) pri referentnoj brzini od 150 do 400 kg/sat na 20 °C do 40 °C. Nakon što je smeša ohlađena na 20°C do 30°C, mešana je 2 sata, a čvrsta supstanca je sakupljena filtriranjem pomoću centrifuge. Filter kolač je ispran rastvorom 2-propanola (20.5 kg) i prečišćene vode (154 kg); nakon sušenja, P15 Dobija se kao bela čvrsta supstanca (32.1 kg, 109 mol, 57%).<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 8.14 - 8.11 (m, 1H), 8.01 (dd, J = 8.5, 1.1Hz, 1H), 7.79 (br d, J = 8.6 Hz, 1H), 5.26 - 5.18 (m, 1H), 5.04 (s, 2H), 4.66 - 4.58 (m, 2H), 4.53 (dd, komponenta ABX obrasca, J = 15.7, 2.7 Hz, 1H), 4.34 (dt, J = 9.1, 6.0 Hz, IH), 3.96 (s, 3H), 2.82 - 2.71 (m, IH), 2.48 - 2.37 (m, 1H).

Priprema P16

Metil 2-(hlorometil)-1-metil-1H-benzimidazol-6-karboksilat (P16)

[0265]

[0266] Metil 4-amino-3-(metilamino)benzoat (206 mg, 1.14 mmol) je rastvoren u 1,4-dioksanu (11.5 mL) i tretiran sa hloracetil hloridom (109 uL, 1.37 mmol). Smeša je mešana na 100 °C tokom 3 sata i ohlađena do sobne temperature. Dodati su trietilamin (0.8 mL, 7 mmol) i heptan (10 mL) i filtrirani. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom i sirov materijal je prečišćen hromatografijom na silika gelu (eluent: 40% etil acetat u heptanu) da bi se dobilo 120 mg P16 (44%).<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) 88.14 (s, 1H), 8.01 (d, 1H), 7.78 (d, 1H), 4.87 (s, 2H), 3.97 (s, 3H), 3.94 (s, 3H); LCMS m/z 239.1 [M+H]<+>.

Pripreme P17 i P18

Metil 2-(6-azaspiro[2,5]okt-1-il)-1-(2-metoksietil)-1H-benzimidazol-6-karboksilat, ENT-1 (P17) i metil 2-(6-azaspiro[2,5]okt-1-il)-1-(2-metoksietil)-1\-\-benzimidazol-6-karboksilat, ENT-2 (P18)

[0267]

Korak 1. Sinteza terc-butil 4-(2-etoksi-2-oksoetiliden)piperidin-1-karboksilata (C31).

[0268] Rastvor kalijum terc-butoksida (65.9 g, 587 mmol) u tetrahidrofuranu (500 mL) je dodat u 0 °C rastvor etil (dietoksifosforil)acetata (132 g, 589 mmol) u tetrahidrofuranu (500 mL), i dobijena suspenzija je mešana na 0 °C tokom 1 sata, nakon čega je ohlađena na -50 °C. Ukapavanjem je dodat rastvor terc-butil 4-oksopiperidin-1-karboksilata (90.0 g, 452 mmol) u tetrahidrofuranu (1.5 L) na -50 °C, a reakciona smeša je zatim ostavljena da se polako zagreje do 20 °C, a zatim mešana 16 sati na 20 °C. Posle dodavanja vode (1 L), smeša je koncentrovana in vacuo za uklanjanje tetrahidrofurana. Vodeni ostatak je ekstrahovan etil acetatom (2 × 800 mL), a kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (500 mL), osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Dobijeni materijal je ispran nekoliko puta petroleterom (200 mL) da bi se obezbedilo C31 kao bela čvrsta supstanca. Prinos: 95.0 g, 353 mmol, 78%.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 5.71 (s, 1H), 4.16 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 3.55 -3.43 (m, 4H), 2.94 (br t, J = 5.5 Hz, 2H), 2.28 (br t, J = 5.5 Hz, 2H), 1.47 (s, 9H), 1.28 (t, J = 7.0 Hz, 3H).

1

Korak 2. Sinteza 6-terc-butil 1-etil 6-azaspiro[2,5]oktan-1.6-dikarboksilata (C32).

[0269] U rastvor trimetilsulfoksonijum jodida (140 g, 636 mmol) u dimetil sulfoksidu (800 mL) dodat je kalijum terc-butoksid (71.2 g, 634 mmol) u jednoj porciji na 20 °C. Nakon što je reakciona smeša mešana na 20°C tokom 1.5 sata, u kapima je dodat rastvor C31 (95.0 g, 353 mmol) u dimetil sulfoksidu (800 mL), i mešanje je nastavljeno na 20 °C tokom 16 sati. Zatim je dodat zasićeni vodeni rastvor natrijum hlorida (2.0 L); dobijena smeša je neutralizovana dodavanjem amonijum hlorida, i ekstrahovana etil acetatom (3.0 L). Kombinovani organski slojevi su isprani uzastopno vodom (2 × 1.0 L) i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (2.0 L), osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani in vacuo. Prečišćavanje hromatografijom na silika gelu (eluent: 10:1 petrol etar/etil acetat) dalo je C32 kao žuto ulje.<1>H NMR analiza je pokazala da je prisutan strani alifatski materijal. Prinos: 80 g, 280 mmol, 79%.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d), C32 samo pikovi: δ 4.19 - 4.09 (m, 2H), 3.55 - 3.39 (m, 3H), 3.27 (ddd, J = 13.0, 7.0, 4.5 Hz, 1H), 1.76 - 1.64 (m, 2H), 1.56 (dd, J = 8.0, 5.5 Hz, 1H, pretpostavljeno; delimično zaklonjeno pikom vode), 1.47 (s, 9H), 1.47 - 1.37 (m, 2H), 1.27 (t, J = 7.0 Hz, 3H), 1.17 (dd, J = 5.0, 5.0 Hz, 1H), 0.93 (dd, J = 8.0, 4.5 Hz, IH).

Korak 3. Sinteza 6-(terc-butoksikarbonil)-6-azaspiro[2.5oktan]-1-karboksilne kiseline (C33).

[0270] Smeši C32 (80 g, 280 mmol) u tetrahidrofuranu (500 mL) i vodi (500 mL) dodat je litijum hidroksid monohidrat (37.4 g, 891 mmol) u jednoj porciji. Reakciona smeša je mešana na 25 °C tokom 16 sati, nakon čega je razblažena vodom (600 mL) i isprana etil acetatom (3 × 300 mL). Organski slojevi su odbačeni, a vodeni sloj je zakiseljen do pH 3 do 4 dodavanjem 6 M hlorovodonične kiseline. Dobijena smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 600 mL), a kombinovani organski slojevi su osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani in vacuo. Trituracija ostatka sa petrolej etrom (300 mL) dala je C33 kao belu čvrstu supstancu. Prinos: 42.0 g, 164 mmol, 59%. LCMS m/z 278.2 [M+Na<+>].<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.15 - 12.03 (br s, 1H), 3.43 - 3.25 (m, 3H, pretpostavljeno; delimično zaklonjeno pikom vode), 3.23 - 3.12 (m, 1H), 1.64 - 1.50 (m, 2H), 1 , J = 7.5, 5.5 Hz, 1H), 1.39 (s, 9H), 1.39-1.28 (m, 2H), 0.96-0.88 (m, 2H).

2

Korak 4. Sinteza terc-butil 1-({4-(metoksikarbonil)-2-[(2-metoksietil)amino]fenil)karbamoil)-6-azaspiro[2,5]oktan-6-karboksilata (C34).

[0271] Rastvor C33 (570 mg, 2.23 mmol), C16 (500 mg, 2.23 mmol) i O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronijum heksafluorofosfata (HATU; 1.27 g, 3.34 mmol) u N,N-dimetilformamid (10 mL) je mešan na 30 °C tokom 30 minuta, nakon čega je dodat trietilamin (902 mg, 8.91 mmol) i mešanje je nastavljeno na 30 °C tokom 16 sati. Reakciona smeša je zatim sipana u vodu (60 mL) i ekstrahovana etil acetatom (3 × 50 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (3 × 50 mL), osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani in vacuo. Silika gel hromatografija (eluent: 1:1 petrol etar/etil acetat) je dala C34 kao smeđe ulje, koje je preneto direktno u sledeći korak.

Korak 5. Sinteza metil 2-[6-(terc-butoksikarbonil)-6-azaspiro[2,5]okt-1-il]-1-(2-metoksietil)-1H-benzimidazol-6-karboksilata (C35).

[0272] Rastvor C34 (iz prethodnog koraka, ≤2.23 mmol) u sirćetnoj kiselini (15 mL) je mešana na 50 °C tokom 16 sati, nakon čega je koncentrovana in vacuo da bi se dobilo C35 kao smeđe ulje. Ovaj materijal je direktno korišćen u sledećem koraku. LCMS m/z 444.1 [M+H]<+>.

Korak 6. Sinteza metil 2-(6-azaspiro[2,5]okt-1-il)-1-(2-metoksietil)-1H-benzimidazol-6-karboksilata (C36).

[0273] Trifluorosirćetna kiselina (5 mL) je dodata u ratsvor C35 (iz prethodnog koraka; ≤2.23 mmol) u dihlorometanu (10 mL), i reakciona smeša je mešana na 25 °C tokom 2 sata. Nakon uklanjanja rastvarača in vacuo, ostatak je bazifikovan dodavanjem zasićenog vodenog rastvora kalijum karbonata (40 mL) i ekstrahovan smešom dihlorometana i metanola (10:1, 3 × 40 mL). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko magnezijum sulfata, filtrirani, koncentrovani in vacuo, i podvrgnuti hromatografiji na silika gelu (eluent: 10:1:0.1 dihlorometan/metanol/koncentrovani amonijum hidroksid) da bi se dobilo C36 kao žuta čvrsta supstanca. Prinos: 640 mg, 1.86 mmol, 83% u tri koraka. LCMS m/z 344.1 [M+H]<+>.

Korak 7. Izolovanje metil 2-(6-azaspiro[2.5]okt-1-il)-1-(2-metoksietil)-1H-benzimidazol-6karboksilata, ENT-1 (P17) i metil 2-(6-azaspiro[2,5]okt-1-il)-1-(2-metoksietil)-1H-benzimidazol-6-karboksilata, ENT-2 (P18).

[0274] Razdvajanje C36 (630 mg, 1.83 mmol) u njegove sastavne enantiomere sprovedeno je korišćenjem SFC [Kolona: Chiral Technologies Chiralpak AD, 10 um; Mobilna faza: 55:45 ugljen-dioksid / (etanol koji sadrži 0.1% amonijum hidroksida)]. Prvi eluirani pik je označen kao ENT-1 (P17), i drugi eluirani enantiomer kao ENT-2 (P18); oba su izolovana kao bledo žuta čvrsta supstanca.

P17 Prinos: 300 mg, 0.874 mmol, 48%. LCMS m/z 344.1 [M+H]<+>. Retenciono vreme: 5.10 minuta (Kolona: Chiral Technologies Chiralpak AD-3, 4.6 × 150 mm, 3 µm; Mobilna faza A: ugljen-dioksid; Mobilna faza B: etanol koji sadrži 0.05% dietilamina; Gradijent: 5% do 40% B preko 55. minuta, zatim držan na 40% B tokom 3.0 minuta; Brzina protoka: 2.5 mL/minuti).

P18 Prinos: 240 mg, 0.699 mmol, 38%. LCMS m/z 344.1 [M+H]<+>. Retenciono vreme: 7.35 minuta (analitički uslovi identični onima koji se koriste za P17).

Priprema P19

Metil 4-amino-3-{[(1-etil-1H-imidazol-5-il)metil]amino}benzoat (P19)

[0275]

Korak 1. Sinteza metil 3-{[(1-etil-1H-imidazol-5-il)metil]amino}-4-nitrobenzoata (C37).

[0276] Trietilamin (3.65 mL, 26.2 mmol) je dodat u rastvor metil 3-fluoro-4-nitrobenzoata (1.00 g, 5.02 mmol) i 1-(1-etil-1H-imidazol-5-il)metanamina, dihidrohloridne soli ( 1.00 g, 5.05 mmol) u smeši tetrahidrofurana (12 mL) i metanola (8 mL). Reakciona smeša je mešana na 60 °C tokom 40 sati, nakon čega je koncentrovana in vacuo i prečišćena korišćenjem hromatografije na silika gelu (Gradijent: 0% do 2% metanola u dihlorometanu) da bi se dobilo C37 kao narandžasta čvrsta supstanca. Prinos: 1.27 g, 4.17 mmol, 83%.<1>H NMR (400

4

MHz, hloroform-d) δ 8.24 (d, J = 8.8 Hz, IH), 7.98 - 7.91 (m, IH), 7.68 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 7.57 (br s, 1H), 7.33 (dd, J = 8.8, 1.7 Hz, 1H), 7.11 (br s, 1H), 4.53 (d, J = 4.9 Hz, 2H), 3.99 (q, J = 7.3 Hz, 2H), 3.95 (s, 3H), 1.47 (t, J = 7.3 Hz, 3H).

Korak 2. Sinteza metil 4-amino-3-{[(1-etil-1).H-imidazol-5-il)metil]amino}benzoata (P19).

[0277] Smeša vlažnog paladijuma na ugljeniku (144 mg) i C37 (412 mg, 1.35 mmol) u metanolu (13 mL) je mešana pod balonom vodonika 16 sati na 25 °C. Reakciona smeša je zatim filtrirana kroz sloj dijatomejske zemlje i filtrat je koncentrovan in vacuo da bi se dobilo P19 kao siva čvrsta supstanca. Prinos: 340 mg, 1.24 mmol, 92%.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 7.66 (br s, 1H), 7.38 - 7.29 (m, 2H), 6.97 (br s, 1H), 6.67 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 4.35 (s, 2H), 4.11 (q, J = 7.3 Hz, 2H), 3.81 (s, 3H), 1.44 (t, J = 7.3 Hz, 3H).

Priprema P20

metil 4-amino-3-(metilamino)benzoat (P20)

[0278]

Korak 1. Sinteza metil 3-(metilamino)-4-nitrobenzoata (D1).

[0279] U rastvor metil 3-fluoro-4-nitrobenzoata (5.10 g, 25.6 mmol) u tetrahidrofuranu (60 mL) dodat je metilamin (38.4 mL, 76.8 mmol, 2 M u tetrahidrofuranu), ukapavanjem, tokom 10 minuta. Bledo žuti rastvor je odmah nakon dodavanja postao tamno narandžasti i mešan je 2 sata na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je zatim razblažena dietil etrom (100 mL) i organski sloj je ispran uzastopno vodom (50 mL) i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (50 mL). Organski sloj je osušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobilo 5.26 g metil 3-(metilamino)-4-nitrobenzoata (98%) kao tamno narandžasta čvrsta supstanca. LCMS m/z 211.1 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 8.22 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 8.00 (br s, 1H), 7.56 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 7.25 (dd, J = 8.9, 1.7 Hz, 1H, pretpostavljeno; delimično zamagljeno pikom rastvarača), 3.95 (s, 3H), 3.09 (d, J = 5.1Hz, 3H).

Korak 2. Sinteza metil 4-amino-3-(metilamino)benzoata (P20).

[0280] Rastvor D1 (5.26 g, 25.0 mmol) u etanolu (150 mL) je dodat u Parr<®>bocu od 500 mL prethodno napunjenu sa 10% paladijuma na ugljeniku (50% vode; 1 g). Smeša je šejkirana pod atmosferom vodonika od 50 psi 1 sat na sobnoj temperaturi, nakon čega je filtrirana i filter kolač je ispran etanolom (100 mL). Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobilo 4.38 g P20 (97%) kao prljavo bela čvrsta supstanca. LCMS m/z 181.1 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 7.46 (dd, J = 8.0, 1.9 Hz, IH), 7.34 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 6.68 (d, J = 8.0 Hz, IH), 3.87 (s, 3H), 3.72 (br s, 2H), 3.21 (br s, IH), 2.91 (s, 3H).

Pripreme P21 i P22

5-bromo-N<3>-metilpiridin-2.3-diamin (P21) i 5-bromo-N<3,6->dimetilpiridin-2.3-diamina (P22)

[0281]

[0282] Intermedijer P21 je sintetizovan prema proceduri iz literature (Choi, J.I. et al. J. Med. Chem. 2012, 55, 852-870). Srednji P22 je sintetisan istim postupkom.

Priprema P23

Metil 2-(hlorometil)-1-[(1-metil-1H-imidazol-5-il)metil]-1H-benzimidazol-6-karboksilat (P23)

[0283]

Korak 1. Sinteza metil 3-{[(1-metil-1H-imidazol-5-il)metil]amino}-4-nitrobenzoata (D2).

[0284] U bezbojni rastvor metil 3-fluoro-4-nitrobenzoata (1.0 g, 5.0 mmol) u N,N-dimetilformamidu (10 mL) je polako dodat 1-(1-metil-1).H-imidazol-5-il)metanamin (670 mg, 6.0 mmol) i trietilamin (762 mg, 7.53 mmol). Reakciona smeša je mešana na 60 °C tokom 16 sati, nakon čega je sipana u vodu (30 mL) i ekstrahovana dihlorometanom (3 × 30 mL). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Sirovi materijal je prečišćen hromatografijom na silika gelu (Eluent: 20% metanol u dihlorometanu). Dobijena žuta čvrsta supstanca je triturisana sa 30:1 petrol etar/etil acetat da bi se dobilo D2 (1.2 g, 82%) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS m/z 290.9 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 8<.>25 (d, J = 8.9 Hz, IH), 7.98 - 7.92 (m, 1H), 7.70 (d, J = 1.7 Hz, IH), 7.49 (s, 1H), 7.34 (dd, J = 8.9, 1.7 Hz, 1H), 7.12 (s, 1H), 4.54 (d, J = 5.0 Hz, 2H), 3.96 (s, 3H), 3.67 (s, 3H).

Korak 2. Sinteza metil 4-amino-3-{[(1-metil-1)H-imidazol-5-il)metil]amino}benzoata (D3).

[0285] Suspenziji D2 (5.46 g, 18.8 mmol) u metanolu (160 mL) je dodat vlažni 10% paladijum na ugljeniku (1 g). Smeša je mešana pod 1 atmosferom vodonika tokom 36 sati na 20 °C. Reakciona smeša je filtrirana i filter kolač je ispran metanolom (200 mL). Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobilo D3 (4.8 g, 98%) kao braon čvrsta supstanca. LCMS m/z 260.9 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.56 (s, 1H), 7.18 (br d, J = 8.1Hz, IH), 7.12 (br s, IH), 6.87 (s, 1H), 6.55 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 5.50 (s, 2H), 4.84 (t, J = 5.2 Hz, IH), 4.23 (d, J = 5.0 Hz, 2H), 3.73 (s, 3H), 3.63 (s, 3H).

Korak 3. Sinteza metil 2-(hidroksimetil)-1-[(1-metil-1H-imidazol-5-il)metil]-1H-benzimidazol-6-karboksilata (D4).

[0286] Smeša D3 (780 mg, 3.00 mmol) i 2-hidroksisirćetne kiseline (342 mg, 4.49 mmol) u 1.3,5-trimetilbenzenu (8 mL) je mešana na 140 °C tokom 14 sati i na 25 °C tokom 48 sati. Bistri žuti rastvor je dekantovan da bi se dobio smeđi ostatak koji je rastvoren u metanolu (50 mL) i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirovi materijal je prečišćen hromatografijom na silika gelu (eluent: 20% metanol u dihlorometanu) da bi se dobilo D4 (318 mg, 35%) kao žuta pena. LCMS m/z 300.9 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.13 - 8.11 (m, IH), 7.83 (dd, J = 8.4, 1.6 Hz, 1H), 7.71 (d, J = 8.5 Hz, IH), 7.59 (s, IH), 6.58 (s, 1H), 5.69 (s, 2H), 4.75 (s, 2H), 3.84 (s, 3H), 3.53 (s, 3H).

Korak 4. Sinteza metil 2-(hlorometil)-1-[(1-metil-1H-imidazol-5-il)metil]-1H-benzimidazol-6-karboksilata (P23).

[0287] Suspenziji D4 (500 mg, 1.66 mmol) u dihlorometanu (10 mL) i N,N-dimetilformamidu (3 mL) je dodat tionil hlorid (990 mg, 0.60 mL, 8.32 mmol), kap po kap, na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 1 sat, zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom. Dobijeni smeđi ostatak je triturisan sa dihlorometanom (10 mL). Čvrste materije su sakupljene filtracijom i isprane dihlorometanom (5 mL) da bi se dobilo P23 (431 mg, 73%) kao prljavo bela čvrsta supstanca. LCMS m/z 318.9◆ [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9<.>17 (s, 1H), 8.31 (s, 1H), 7.93 (br d, J= 8.5 Hz, 1H), 7.82 (d, J= 8.5 Hz, IH), 7.11 (s, IH), 5.92 (s, 2H), 5.13 (s, 2H), 3.87 (s, 3H), 3.87 (s, 3H).

Priprema P24

5-hloro-2-(hlorometil)-3-metil-3H-imidazo[4.5-b]piridin (P24)

[0288]

Korak 1. Sinteza 6-hloro-N-metil-3-nitropiridin-2-amina (D5).

[0289] U suspenziju 2.6-dihloro-3-nitropiridina (200 g, 1.04 mol) i Na2CO3(132 g, 1.24 mol) u etanolu (1 L) dodat je rastvor metilamina u tetrahidrofuranu (2.0 M; 622 mL, 1.24 mol), kap po kap, na 0 °C preko šprica. Po završetku dodavanja, reakciona smeša je mešana na 18 °C tokom 6 sati. Smeša je filtrirana i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobila žuta čvrsta supstanca. Sirovi materijal je prečišćen hromatografijom na silika gelu (Gradijent: 0% do 5% etil acetata u petrolej etru) da bi se dobilo D5 (158 g, 81% prinos) kao žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.72 (br s, 1H), 8.41 (d, J = 8.6 Hz, IH), 6.76 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 3.00 (d, J = 4.8 Hz, 3H).

Korak 2. Sinteza 6-hloro-N<2>-metilpiridin-2.3-diamina (D6).

[0290] Smeši D5 (15.8 g, 84.2 mmol) u sirćetnoj kiselini (100 mL) je dodato gvožđe u prahu (15.4 g, 276 mmol). Reakciona smeša je mešana na 80 °C tokom 3 sata, nakon čega je ohlađena do sobne temperature i filtrirana. Filter kolač je ispran etil acetatom (2 × 100). Kombinovani organski slojevi su koncentrovani pod sniženim pritiskom i sirovi materijal je prečišćen hromatografijom na silika gelu (eluent: 1:1 etil acetat/petroleum etar) da bi se dobilo D6 (8.40 g, 63% prinosa) kao braon čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, hloroformd) δ 6.79 (d, J = 7.7 Hz, IH), 6.49 (d, J = 7.7 Hz, IH), 3.00 (s, 3H).

Korak 3. Sinteza 5-hloro-2-(hlorometil)-3-metil-3H-imidazo[4.5-b] piridina (P24).

[0291] Rastvoru D6 (50.0 g, 317 mmol) u 1,4-dioksanu (1.2 L) je dodat hloroacetil hlorid (55.5 mL, 698 mmol) i reakciona smeša je mešana na 15 °C tokom 50 minuta. Zatim je koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobila smeđa čvrsta supstanca, koja je stavljena u trifluorosirćetnu kiselinu (1.2 L) i mešana na 80 °C tokom 60 sati. Smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobilo smeđe ulje, koje je razblaženo etil acetatom (1 L) i neutralizovano dodavanjem zasićenog vodenog rastvora natrijum bikarbonata. Kada se oslobađanje ugljen-dioksida smanjilo, slojevi su razdvojeni, a vodeni sloj je ekstrahovan etil acetatom (200 mL). Organski ekstrakti su kombinovani, osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Sirovi materijal je prečišćen hromatografijom na silika gelu (Gradijent: 10% do 25% etil acetata u petrolej etru) da bi se dobilo P24 (61.0 g, 79% prinos) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS m/z 215.7 (uočen uzorak dihloro izotopa) [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.13 (d, J = 8.3 Hz, IH), 7.37 (d, J = 8.4 Hz, IH), 5.11 (s, 2H), 3.84 (s, 3H).

Primeri 1 i 2

trifluoroacetatna so 2-({4-[2-(4-hloro-2-fluorofenil)-1,3-benzodioksol-4-il]piperazin-1-il}metil)-1-(2-metoksietil)-1H-benzimidazol-6-karboksilne kiseline, ENT-X1 (1) [od C39]; i trifluoroacetatna so 2-({4-[2-(4-hloro-2-fluorofenil)-1,3-benzodioksol-4-il]piperazin-1-il}metil)-1-(2-metoksietil)-1H-benzimidazol-6-karboksilna kiselina, ENT-X2 (2) [od C40]

[0292]

1

Korak 1. Sinteza metil 2-({4-[2-(4-hloro-2-fluorofenil)-1,3-benzodioksol-4-il]piperazin-1-il}metil)-1-(2-metoksietil) )-1H-benzimidazol-6-karboksilata (C38).

[0293] Ovaj eksperiment je izveden u dve serije identične razmere. Reakcioni sud koji sadrži smešu C2 (500 mg, 1.52 mmol), P12 (530 mg, 1.59 mmol), [2'.6'-bis(propan-2-iloksi)bifenil-2-il](dicikloheksil)fosfan (Rufos; 142 mg, 0.304 mmol), tris(dibenzilidenaceton)dipaladijum(0) ( 139 mg, 0.152 mmol) i cezijum karbonata (1.48 g, 4.54 mmol) u toluenu (15 mL) je evakuisano i napunjeno azotom. Ovaj ciklus evakuacije je ponovljen dva puta, nakon čega je reakciona smeša mešana na 100 °C tokom 16 sati, kombinovana sa drugom šaržom i filtrirana. Filtrat je koncentrovan, a ostatak je podvrgnut hromatografiji na silika gelu (Gradijent: 0% do 60% etil acetata u petrolej etru) praćeno preparativnom tankoslojnom hromatografijom (Eluent: 1:1 petrolej etar/etil acetat) da bi se dobilo C38 kao bledo žuta čvrsta supstanca. Kombinovani prinos: 600 mg, 1.03 mmol, 34%. LCMS m/z 581.0◆ [M+H]<+>.

Korak 2. Izolovanje metil 2-({4-[2-(4-hloro-2-fluorofenil)-1,3-benzodioksol-4-il]piperazin-1-il}metil)-1-(2-metoksietil) )-1H-benzimidazol-6-karboksilat, ENT-1 (C39) i metil 2-({4-[2-(4-hloro-2-fluorofenil)-1,3-benzodioksol-4-il]piperazin-1-il}metil)-1-(2-metoksietil)-1H-benzimidazol-6-karboksilat, ENT-2 (C40).

1 1

[0294] Razdvajanje C38 (780 mg, 1.34 mmol) u njegove sastavne enantiomere je izvršeno korišćenjem SFC [Kolona: Chiral Technologies Chiralpak AD, 10 um; Mobilna faza: 3:2 ugljen-dioksid / (etanol koji sadrži 0.1% amonijum hidroksida)]. Prvo eluirani enantiomer, označen kao ENT-1 (C39), dobija se kao bela čvrsta supstanca. Prinos: 282 mg, 0.485 mmol, 36%. LCMS m/z 581.0◆ [M+H]<+>. Retenciono vreme 1.90 minuta (Kolona: Chiral Technologies Chiralpak AD-3, 4.6 × 50 mm, 3 µm; Mobilna faza: ugljen-dioksid; Mobilna faza B: etanol koji sadrži 0.05% dietilamina; Gradijent: 5% B tokom 0.20 minuta, zatim 5 minuta % do 40% B tokom 1.4 minuta, zatim držano na 40% B tokom 1.05 minuta; Brzina protoka: 4.0 mL/min).

[0295] Drugi eluirani enantiomer, označen kao ENT-2, (C40), je podvrgnut drugom prečišćavanju korišćenjem SFC [Kolona: Chiral Technologies Chiralpak AD, 10 µm; Mobilna faza: 3:2 ugljen-dioksid / (etanol koji sadrži 0.1% amonijum hidroksida)]. Ovo je obezbedilo C40 kao bledosmeđu čvrstu supstancu. Prinos: 280 mg, 0.482 mmol, 36%. LCMS m/z 581.0◆ [M+H]<+>. Retenciono vreme 2.18 minuta (analitički uslovi identični onima koji se koriste za C39).

Korak 3. Sinteza trifluoroacetatne soli 2-({4-[2-(4-hloro-2-fluorofenil)-1,3-benzodioksol-4-il]piperazin-1-il}metil)-1-(2-metoksietil) -1H-benzimidazol-6-karboksilne kiseline, ENT-X1 (1) [od C39].

[0296] Vodeni rastvor litijum hidroksida (2 M; 0.30 mL, 0.60 mmol) je dodat u rastvor C39 (70 mg, 0.12 mmol) u smeši metanola (3 mL) i tetrahidrofurana (3 mL). Nakon što je reakciona smeša mešana na 25 °C tokom 16 sati, ponovo je dodat vodeni rastvor litijum hidroksida (2 M; 0.30 mL, 0.60 mmol) i mešanje je nastavljeno dodatnih 20 sati. Reakciona smeša je zatim podešena na pH 7 dodavanjem 1 M hlorovodonične kiseline, a zatim koncentrovana in vacuo za uklanjanje metanola i tetrahidrofurana. Ostatak je podešen na pH od 5 do 6 dodavanjem trifluorosirćetne kiseline i zatim prečišćen HPLC reverzne faze (kolona: Agela Durashell C18, 5 µm; Mobilna faza A: 0.1% trifluorosirćetne kiseline u vodi; Mobilna faza B: acetonitril Gradijent: 30% do 60% B) da bi se dobilo 1 kao bela čvrsta supstanca. Prinos: 40.5 mg, 59.5 umol, 50%. LCMS m/z 567.0◆ [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 8<.>37 (brs, 1H), 8.07 (dd, J = 8.5, 1.5 Hz, 1H), 7.79 (d, J = 8.6 Hz, 1H),

1 2

7.59 (dd, J = 8.0, 8.0 Hz, 1H), 7.34 (dd, J = 10.2, 2.0 Hz, 1H), 7.30 (brdd, J = 8.3, 2.0 Hz, 1H), 7.22 (s, 1H), 6.87 (dd, J = 8.1, 8.1Hz, 1H), 6.63 (br d, J = 8 Hz, 1H), 6.60 (br d, J = 8 Hz, 1H), 4.70 (s, 2H), 4.65 (t, J = 4.8 Hz, 2H), 3.75 (t, J = 4.8 Hz, 2H), 3.59-3.42 (m, 8H), 3.29 (s, 3H).

Korak 4. Sinteza trifluoroacetatne soli 2-({4-[2-(4-hloro-2-fluorofenil)-1,3-benzodioksol-4-il]piperazin-1-il}metil)-1-(2-metoksietil) -1H-benzimidazol-6-karboksilne kiseline, ENT-X2 (2) [od C40].

[0297] Vodeni rastvor litijum hidroksida (2 M; 0.30 mL, 0.60 mmol) je dodat u rastvor C40 (69 mg, 0.12 mmol) u smeši metanola (3 mL) i tetrahidrofurana (3 mL). Nakon što je reakciona smeša mešana na 25 °C tokom 16 sati, ponovo je dodat vodeni rastvor litijum hidroksida (2 M; 0.30 mL, 0.60 mmol) i mešanje je nastavljeno dodatnih 20 sati. Reakciona smeša je podešena na pH 7 dodavanjem 1 M hlorovodonične kiseline, a zatim koncentrovana in vacuo za uklanjanje metanola i tetrahidrofurana. Ostatak je podešen na pH od 5 do 6 dodavanjem trifluorosirćetne kiseline i zatim prečišćen pomoću HPLC reverzne faze (kolona: Agela Durashell C18, 5 µm; Mobilna faza A: 0.1% trifluorosirćetne kiseline u vodi; Mobilna faza B: acetonitril Gradijent: 30% do 60% B) da bi se dobilo 2 kao bela čvrsta supstanca. Prinos: 22.9 mg, 33.6 umol, 28%. LCMS m/z 567.0◆ [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, metanold4) δ 8<.>40 - 8.35 (m, 1H), 8.07 (dd, J = 8.6, 1.5 Hz, 1H), 7.79 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.59 (dd, J = 8.0, 8.0 Hz, 1H), 7.35 (dd, J = 10.2, 2.0 Hz, 1H), 7.31 (brdd, J = 8, 2 Hz, 1H), 7.22 (s, 1H), 6.87 (dd, J = 8.3, 8.0 Hz, 1H), 6.63 (br d, J = 8 Hz, 1H), 6.60 (br d, J = 8 Hz, 1H), 4.68 (s, 2H), 4.65 (t, J = 4.9 Hz, 2H), 3.76 (t, J = 4.8 Hz, 2H), 3.57-3.40 (m, 8H), 3.29 (s, 3H).

Primer 3

trifluoroacetatna so 2-({4-[2-(4-hloro-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-1-(2-metoksietil)- 1H-imidazo[4.5-b]piridin-6-karboksilne kiseline (3)

[0298]

1

Korak 1. Sinteza 4-[2-(4-hloro-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidina (C13, slobodna baza).

[0299] Rastvoru P2 (300 mg, 0.670 mmol) u etil acetatu (3.5 mL) dodat je monohidrat ptoluensulfonske kiseline (318 mg, 1.67 mmol). Reakciona smeša je mešana na 60 °C tokom 1 sata, nakon čega je bazifikovana dodavanjem zasićenog vodenog rastvora kalijum karbonata (20 mL) i ekstrahovana smešom dihlorometana i metanola (10:1, 3 × 50 mL). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad magnezijum sulfata, filtrirani i koncentrovani in vacuo da bi se dobilo C13, slobodna baza, kao smeđa čvrsta supstanca. Prinos: 230 mg, 0.661 mmol, 99%.

Korak 2. Sinteza 6-bromo-2-({4-[2-(4-hloro-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil) -1-(2-metoksietil)-1H-imidazo[4.5-b]piridina (C41).

[0300] Suspenzija C13, slobodna baza (130 mg, 0.374 mmol), P13 (130 mg, 0.427 mmol), i kalijum karbonata (172 mg, 1.24 mmol) u acetonitrilu (2 mL) je mešana na 50 °C tokom 16 sati. Reakciona smeša je zatim prečišćena preparativnom tankoslojnom hromatografijom

1 4

(eluent: etil acetat) da bi se dobilo C41 kao smeđe ulje. Prinos: 114 mg, 0.185 mmol, 49%. LCMS m/z 617.1 (uočen obrazac izotopa brom-hlor) [M+H]<+>.

Korak 3. Sinteza metil 2-({4-[2-(4-hloro-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il)metil)-1- (2-metoksietil)-1H-imidazo[4.5-b]piridin-6-karboksilata (C42).

[0301] Rastvor C41 (114 mg, 0.185 mmol), 1,3-bis(difenilfosfino)propana (15.3 mg, 37.1 µmol), paladijum(II) acetata (8.3 mg, 37 µmol) i trietilamina (187 mg, 1.85 mmol) u smeši metana (5 mL) i N,N-dimetilformamida (1 mL) je mešan na 80 °C pod ugljen monoksidom (50 psi) tokom 16 sati. Nakon što je reakciona smeša razblažena etil acetatom (50 mL), isprana je zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (2 × 50 mL), osušena iznad magnezijum sulfata, filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Prečišćavanje preparativnom tankoslojnom hromatografijom (eluent: etil acetat) dalo je C42 kao bezbojno ulje. Prinos: 60.0 mg, 0.101 mmol, 55%. LCMS m/z 617.2 (uočen uzorak izotopa hlora [M+Na<+>].

Korak 4. Sinteza trifluoracetatne soli 2-({4-[2-(4-hloro-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-1-( 2-metoksietil)-1H-imidazo[4.5-b]piridin-6-karboksilne kiseline (3).

[0302] Rastvoru C42 (60.0 mg, 0.101 mmol) u metanolu (2.0 mL) dodat je vodeni rastvor natrijum hidroksida (3 M; 1.0 mL, 3.0 mmol), i reakciona smeša je mešana na 20 °C tokom 2 sata. Zatim je podešena na pH 7 dodavanjem 1 M hlorovodonične kiseline i ekstrahovana smešom dihlorometana i metanola (10:1, 3 × 30 mL). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad magnezijum sulfata, filtrirani, koncentrovani in vacuo, i prečišćeni korišćenjem HPLC reverzne faze (kolona: Boston Green ODS, 5 µm; Mobilna faza A: 0.1% trifluorosirćetne kiseline u vodi; Mobilna faza B: acetonitril; Gradijent: 10% do 95% B) da bi se dobilo 3 kao bela čvrsta supstanca . Prinos: 29.6 mg, 42.6 umol, 42%. LCMS m/z 581.0◆ [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 9<.>13 (d, J= 1.9 Hz, 1H), 8.74 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 7.63 (dd, J = 8.3, 8.3 Hz, 1H), 7.30 (dd, J = 10.9, 2.0 Hz, 1H), 7.24 (ddd, J = 8.4, 2.0, 0.7 Hz, 1H), 6.89 - 6.84 (m, 1H), 6.82 - 6.77 (m, 2H), 4.98 - 4.89 (m, 2H, pretpostavljeno; u velikoj meri zaklonjeno pikom vode), 4.64 (t J = 4.8 Hz, 2H), 4.04 - 3.92 (br m, 2H), 3.75 (dd, J = 5.4, 4.2 Hz, 2H), 3.51 - 3.39 (m, 2H), 3.31 (s, 3H), 3.19 - 3.06 (m, 1H), 2.41 - 2.24 (m, 2H), 2.24 - 2.12 (m, 2H) ), 2.06 (d, J = 1.0 Hz, 3H).

1

Primeri 4 i 5

Amonijum 2-({4-[(2R)-2-(4-hloro-2-fluorofenil)-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-1-[(2S)-oksetan-2-ilmetil]-1H-benzimidazol-6-karboksilat (4) i amonijum 2-({4-[(2S)-2-(4-hloro-2-fluorofenil)-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-1-[(2S)-oksetan-2-ilmetil]-1H-benzimidazol-6-karboksilat (5)

[0303]

Korak 1. Sinteza trifluoracetatne soli 4-[2-(4-hloro-2-fluorofenil)-1,3-benzodioksol-4-il]piperidina (C43).

[0304] Rastvoru P1 (300 mg, 0.691 mmol) u dihlorometanu (5 mL) dodata je trifluorosirćetna kiselina (1.3 mL). Reakciona smeša je mešana na 29°C tokom 2 sata, nakon čega je koncentrovana in vacuo da bi se dobilo C43 kao smeđe ulje, koje je direktno korišćeno u sledećem koraku.

1

Korak 2. Sinteza metil 2-({4-[(2R)-2-(4-hloro-2-fluorofenil)-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-1-[(2S)-oksetan-2-ilmetil]-1H-benzimidazol-6-karboksilata (C44) i metil 2-({4-[(2S)-2-(4-hloro-2-fluorofenil)-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-1-[(2S)-oksetan-2-ilmetil]-1H-benzimidazol-6-karboksilata (C45).

[0305] Rastvoru C43 (iz prethodnog koraka, ≤0.691 mmol) u acetonitrilu (10 mL) je dodat P15 (204 mg, 0.692 mmol), zatim kalijum karbonat (956 mg, 6.92 mmol). Reakciona smeša je mešana na 29°C tokom 16 sati, nakon čega je filtrirana; filtrat je koncentrovan in vacuo da bi se dobio ostatak, koji je prečišćen preparativnom tankoslojnom hromatografijom (Eluent: 2:1 petrol etar/etil acetat) da bi se dobila smeša dijastereomernih proizvoda kao žuta guma (178 mg). Razdvajanje na dva proizvoda je izvršeno preko SFC [Kolona: Chiral Technologies ChiralCel OD, 5 µm; Mobilna faza: 55:45 ugljen-dioksid / (metanol koji sadrži 0.1% amonijum hidroksida)]. Dijastereomer koji prvi eluira, dobijen kao žuto ulje, označen je kao C44. Prinos: 44.3 mg, 74.8 umol, 11% u 2 koraka. LCMS m/z 592.1◆ [M+H]<+>. Retenciono vreme 4.26 minuta (Kolona: Chiral Technologies ChiralCel OD-3, 4.6 × 100 mm, 3 µm; Mobilna faza: ugljen-dioksid; Mobilna faza B: metanol koji sadrži 0.05% dietilamina; Gradijent: 5% do 40% B tokom 4.5 minuta; , zatim držan na 40% B tokom 2.5 minuta; Brzina protoka: 2.8 mL/min).

[0306] Dijastereomer koji eluira drugi je podvrgnut drugom prečišćavanju preko SFC [Kolona: Chiral Technologies ChiralCel OD, 5 um; Mobilna faza: 3:2 ugljen-dioksid / (metanol koji sadrži 0.1% amonijum hidroksida)], dajući dijastereomer iz drugog eluiranja kao bezbojno ulje, koje je označeno kao C45. Prinos: 38 mg, 64 µmol, 9% u 2 koraka. LCMS m/z 592.1◆ [M+H]<+>. Retenciono vreme 4.41 minuta (analitički uslovi identični onima koji se koriste za C44).

[0307] Navedene apsolutne stereohemije na dioksolanu su dodeljene preko korelacije potencije od 5 sa uzorkom 5, slobodnom kiselinom sintetizovanom iz intermedijera C48; apsolutna stereohemija tog intermedijera određena je rendgenskim određivanjem monokristalne strukture (vidi dole) C49, hemisulfatne soli C48.

Korak 3. Sinteza amonijuma 2-({4-[(2R)-2-(4-hloro-2-fluorofenil)-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-1-[(2S)-oksetan-2-ilmetil]-1H-benzimidazol-6-karboksilata (4).

[0308] Vodeni rastvor litijum hidroksida (2 M; 0.80 mL, 1.6 mmol) je dodat u rastvor C44 (44.3 mg, 74.8 umol) u smeši metanola (1 mL) i tetrahidrofurana (1 mL), i reakciona smeša je mešana na 26 °C tokom 3 sata. Zatim je pH podešen na 7 dodavanjem trifluorosirćetne

1

kiseline, a rezultujuća smeša je koncentrovana. in vacuo i prečišćena korišćenjem HPLC reverzne faze (kolona: Agela Durashell C18, 5 µm; Mobilna faza A: 0.05% amonijum hidroksida u vodi; Mobilna faza B: acetonitril; Gradijent: 30% do 50% B) da bi se dobilo 4 kao bela čvrsta supstanca. Prinos: 26.6 mg, 44.7 umol, 60%. LCMS m/z 578.0 ◆ [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 8<.>31 (d, J = 1.4 Hz, 1H), 7.96 (dd, J = 8.5, 1.6 Hz, 1H), 7.66 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.57 (dd, J = 8.0, 8.0 Hz, 1H), 7.34 (dd, J = 10.1, 2.0 Hz, 1H), 7.29 (br dd, J = 8.3, 2.0 Hz, 1H), 7.20 (s, 1H), 6.86 - 6.79 (m, 1H), 6.77 (br dd, komponenta ABC obrasca, J = 7.9, 1.3 Hz, 1H), 6.73 (dd, komponenta ABC obrasca, J = 7.5, 1.4 Hz, 1H), 5.29 - 5.18 (m, 1H), 4.9 - 4.78 (m, 1H, pretpostavljeno; delimično zaklonjeno pikom vode), 4.68 (dd, J = 15.3, 2.7 Hz, 1H), 4.54 (td, J = 8.0, 5.9 Hz, 1H), 4.44 (dt, J = 9.2, 5.9 Hz, 1H), 4.02 (AB kvartet, JAB= 13.9 Hz, ΔvAB= 49.0 Hz, 2H), 3.18 - 3.08 (m, 1H), 3.05 - 2.96 (m, 1H), 2.81 - 2.68 (m, 2H), 2.56 - 2.45 (m, 1H), 2.45 - 2.20 (m, 1H) ), 2.03-1.88 (m, 2H), 1.88-1.79 (m, 2H).

Korak 4. Sinteza amonijum 2-({4-[(2S)-2-(4-hloro-2-fluorofenil)-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-1-[(2S)-oksetan-2-ilmetil]-1H-benzimidazol-6-karboksilata (5).

[0309] Vodeni rastvor litijum hidroksida (2 M; 0.80 mL, 1.6 mmol) je dodat u rastvor C45 (38 mg, 64 umol) u smeši metanola (1 mL) i tetrahidrofurana (1 mL), i reakciona smeša je mešana na 24 °C tokom 2.5 sata. Zatim je podešena na pH 7 dodavanjem 1 M hlorovodonične kiseline, a rezultujuća smeša je koncentrovana in vacuo i prečišćena korišćenjem HPLC reverzne faze (kolona: Agela Durashell C18, 5 µm; Mobilna faza A: 0.05% amonijum hidroksida u vodi; Mobilna faza B: acetonitril; Gradijent: 29% do 49% B), obezbeđujući 5 kao belu čvrstu supstancu. Prinos: 27.9 mg, 46.9 umol, 73%. LCMS m/z 577.9 ◆ [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 8<.>32 (d, J = 1.4 Hz, 1H), 7.96 (dd, J = 8.5, 1.5 Hz, 1H), 7.66 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.56 (dd, J = 8.0, 8.0 Hz, 1H), 7.34 (dd, J = 10.2, 2.0 Hz, 1H), 7.29 (brdd, J = 8.3, 2.0 Hz, 1H), 7.20 (s, 1H), 6.85 - 6.80 (m, 1H), 6.77 (dd, komponenta ABC obrasca, J = 8.0, 1.3 Hz, 1H), 6.73 (dd, komponenta ABC obrasca, J = 7.5, 1.4 Hz, 1H), 5.30 - 5.20 (m, 1H), 4.9 - 4.79 (m, 1H, pretpostavljeno; delimično zaklonjeno pikom vode), 4.68 (dd, J = 15.4, 2.7 Hz, 1H), 4.62 - 4.54 (m, 1H), 4.44 (dt, J = 9.2, 5.9 Hz, 1H), 4.02 (AB kvartet, JAB= 13.9 Hz, ΔvAB= 44.6 Hz, 2H), 3.18 - 3.09 (m, 1H), 3.06 - 2.97 (m, 1H), 2.80 - 2.67 (m, 2H), 2.55 - 2.30 (m, 3H), 2.02 - 1.48 (m, 1H) ).

Alternativna sinteza Primera 5, slobodna kiselina

1

2-({4-[(2S)-2-(4-hloro-2-fluorofenil)-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-1-[(2S)-oksetan-2-ilmetil]-1H-benzimidazol-6-karboksilna kiselina (5, slobodna kiselina)

[0310]

Korak 1. Izolacija terc-butil 4-[(2R)-2-(4-hloro-2-fluorofenil)-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-karboksilata (C46) i terc-butil 4-[(2S)-2-(4-hloro-2-fluorofenil)-1,3-

1

benzodioksol-4-il]piperidin-1-karboksilata (C47).

[0311] Razdvajanje P1 (10 g, 23 mmol) u njegove sastavne enantiomere izvedeno je korišćenjem HPLC reverzne faze [Kolona: Phenomenex Lux Amylose-1, 5 µm; Mobilna faza: 9:1 ugljen-dioksid / (2-propanol koji sadrži 0.2% 1-aminopropan-2-ol)]. Enantiomer koji je prvi eluirao je označen kao C46, i enantiomer koji se drugi eluira kao C47; oba su dobijena kao bezbojna ulja. Apsolutne stereohemije naznačene za C46 i C47 dodeljene su na osnovu određivanja strukture monokristala rendgenskim zracima sprovedenog na C49, koji je sintetizovan iz C47 (vidi dole).

C46 Prinos: 4.47 g, 10.3 mmol, 45%. Retenciono vreme: 3.98 minuta [Kolona: Phenomenex Lux Amylose-1, 4.6 × 250 mm, 5 µm; Mobilna faza A: ugljen-dioksid; Mobilna faza B: 2-propanol koji sadrži 0.2% 1-aminopropan-2-ola; Gradijent: 5% B tokom 1.00 minuta, zatim 5% do 60% B tokom 8.00 minuta; Brzina protoka: 3.0 mL/min; Povratni pritisak: 120 bar].

C47 Prinos: 4.49 g, 10.3 mmol, 45%. Retenciono vreme: 4.32 minuta (analitički SFC uslovi identični onima koji se koriste za C46).

Korak 2. Sinteza 4-[(2S)-2-(4-hloro-2-fluorofenil)-1,3-benzodioksol-4-il]piperidina (C48).

[0312] p-toluensulfonska kiselina monohidrat (566 mg, 2.98 mmol) je dodata u rastvor C47 (1.12 g, 2.58 mmol) u etil acetatu (26 mL). Nakon što je reakciona smeša zagrevana na 45 °C tokom 16 sati, koncentrovana je in vacuo, rastvorena u etil acetatu, i isprana zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata. Vodeni slojevi su ekstrahovani etil acetatom, a kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida, osušeni iznad natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom, dajući C48 kao penastu belu čvrstu supstancu (947 mg), LCMS m/z 334.0◆ [M+H]<+>. Deo ovog materijala, koji je još uvek sadržao nešto p-toluensulfonske kiseline, korišćen je u sintezi C50 u nastavku.

[0313] Drugi deo penaste bele čvrste supstance (440 mg) je rastvoren u etil acetatu (25 mL) i ispran zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata (2 x 15 mL); organski sloj je osušen preko magnezijum sulfata, filtriran i koncentrovan in vacuo da bi se dobilo C48 (350 mg) kao bezbojno ulje koje više nije sadržalo p-toluensulfonsku kiselinu. Podešeni prinos: 350 mg, 1.05 mmol, 88%.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 7.53 (dd, J = 8.4, 7.8 Hz, 1H), 7.22 - 7.13 (m, 3H), 6.87 - 6.80 (m, 1H), 6.79 - 6.71 (m, 2H), 3.23 - 3.14 (m, 2H), 2.86 - m2 , 3H), 1.90-1.68 (m, 4H).

11

Korak 3. Sinteza hemisulfatne soli 4-[(2S)-2-(4-hloro-2-fluorofenil)-1,3-benzodioksol-4-il]piperidina (C49).

[0314] 0.1 M rastvor od C48 (bezbojno ulje iz prethodnog dela) u etil acetatu je pripremljeno i podvrgnuto ispitivanju soli. Ovde je opisano samo formiranje sulfatne soli. Smeša sumporne kiseline (25 µmol) i rastvora supstrata (0.1 M, 250 µL, 25 µmol) je zagrevana na 45 °C tokom 1 sata, ostavljena da se ohladi do sobne temperature i mešana 15 sati. Dobijena suspenzija je tretirana metanolom (približno 150 uL) dok se ne formira rastvor; ovo je ostavljeno da polako ispari preko noći, sve dok nije ostalo približno 50 µL rastvarača. Jedan od rezultujućih kristala je analiziran rendgenskim određivanjem monokristalne strukture, uspostavljajući apsolutnu stereohemiju kao što je prikazano.

Rendgensko određivanje strukture monokristala C49

Monokristalna rendgenska analiza

[0315] Prikupljanje podataka je obavljeno na Bruker D8 Venture difraktometru na sobnoj temperaturi. Prikupljanje podataka se sastojalo od omega i fi skeniranja.

[0316] Struktura je rešena intrinzičnim faziranjem korišćenjem SHELX softverskog paketa u prostornoj grupi trikliničke klase P1. Struktura je naknadno rafinisana metodom najmanjih kvadrata pune matrice. Svi nevodonikovi atomi su pronađeni i rafinisani korišćenjem parametara anizotropnog pomeranja.

[0317] Atomi vodonika koji se nalaze na azotu pronađeni su iz Furijeove mape razlike i rafinisani sa ograničenim rastojanjima. Preostali atomi vodonika su postavljeni na izračunate pozicije i dozvoljeno im je da se kreću na svojim atomima nosačima. Završno preciziranje uključivalo je parametre izotropnog pomeranja za sve atome vodonika.

[0318] Asimetrična jedinica se sastoji od dva protonovana molekula C48, jedan molekul dvostruko deprotonovane sumporne kiseline i jedan molekul vode sa punom popunjenošću. Stoga, struktura je hemisulfatna so i hemihidrat. Hlorofluorofenil prsten je poremećen i modelovan sa zauzetošću od 60/40, sa prstenom obrnutim preko dva položaja.

[0319] Analiza apsolutne strukture primenom postupaka verovatnoće (Hooft, 2008) izvršena je pomoću PLATON (Spek). Rezultati pokazuju da je apsolutna struktura ispravno dodeljena; postupak izračunava da je verovatnoća da je struktura ispravna 100.0. Hooftov parametar je prijavljen kao 0.061 sa esd od 0.004, a Parsonov parametar je prijavljen kao 0.063 sa esd od 0.005.

[0320] Konačni R-indeks je bio 3.1%. Konačna Furije razlika nije otkrila nestalu ili pogrešno postavljenu elektronsku gustinu.

[0321] Odgovarajuće informacije o kristalu, prikupljanju podataka i preciziranju sumirane su u tabeli E. Atomske koordinate, dužine veze, uglovi veze i parametri pomeranja navedeni su u tabelama F - H.

Softver i reference

[0322]

SHELXTL, Version 5.1, Bruker AXS, 1997.

PLATON, A. L. Spek, J. Appl. Cryst.2003, 36, 7-13.

R. W. W. Hooft, L. H. Straver, and A. L. Spek, J. Appl. Cryst.2008, 41, 96-103.

H. D. Flack, Acta Cryst.1983, A39, 867-881.

Tabela E. Kristalni podaci i preciziranje strukture za C49.

Empirijska formula C36H38Cl2F2N2O9S

Težina formule 783.64

Temperatura 296(2) K

Talasna dužina 1.54178 Å

Kristalni sistem Triklinika

Prostorna grupa P1

Dimenzije jedinične ćelije a = 5.9095(2) A α = 86.5910(10)° b = 6.1712(2) A β = 89.3680(10)° c = 25.6096(8) A γ = 75.7680(10)° Zapremina 903.68(5) Å<3>

Z 1

Gustina (izračunato) 1.440 Mg/m<3>

Koeficijent apsorpcije 2.743 mm<-1>

F(000) 408

Veličina kristala 0.380 × 0.120 × 0.080 mm<3>

Teta opseg za prikupljanje 3.458 do 72.096°

podataka

Opsezi indeksa -7<=h<=7, -7<=k<=7, -31<=l<=31

Prikupljene refleksije 24619

Nezavisne refleksije 6399 [Rint= 0.0323]]

Kompletnost do teta = 67.679° 96.6%

Korekcija apsorpcije Empirijski

Postupak prečišćavanja Uključeni najmanji kvadrati pune

matrice F<2>

Podaci / ograničenja / parametri 6399 / 9 / 495

Dobro uklopljeno F<2>1.014

Konačni R indeksi [l>2σ(l)] R1 = 0.0305, vR2 = 0.0805

R indeksi (svi podaci) R1 = 0.0310, vR2 = 0.0810

Parametar apsolutne strukture 0.058(4)

Koeficijent ekstinkcije n/a

Najveća razlika pika i rupe 0.167 i -0.184 e.Å<-3>

Tabela F. Atomske koordinate (× 10<4>) i ekvivalentni parametri izotropnog pomeranja (A<2>× 10<3>) za C49. U(ekv) je definisana kao jedna trećina traga ortogonalizovanog U<ij>tenzora.

x y z U (ekv) S(1) 8968(1) 2512(1) 4774(1) 33(1) Cl(1) 2534(3) 7001(5) 9863(1) 161(1) F(1) 9192(9) 7761(7) 8721(2) 95(1) C(1) 7533(7) 6719(7) 8821(1) 72(1) C(2) 6041(9) 7355(8) 9230(2) 92(1) C(3) 4428(8) 6206(10) 9350(2) 93(2) C(4) 4276(8) 4392(9) 9082(2) 86(1) C(5) 5801(7) 3784(7) 8678(1) 69(1) C(6) 7444(6) 4930(5) 8533(1) 56(1) Cl(1') 2534(3) 7001(5) 9863(1) 161(1)

11

F(1') 6045(13) 1811(12) 8450(3) 95(1) C(1') 5801(7) 3784(7) 8678(1) 69(1) C(2') 4276(8) 4392(9) 9082(2) 86(1) C(3') 4428(8) 6206(10) 9350(2) 93(2) C(4') 6041(9) 7355(8) 9230(2) 92(1) C(5') 7533(7) 6719(7) 8821(1) 72(1) C(6') 7444(6) 4930(5) 8533(1) 56(1) Cl(2) -2047(5) 12265(3) 154(1) 157(1) F(2) -2662(7) 5436(7) 1220(2) 92(1) C(19) -1591(6) 7059(7) 1154(1) 68(1) C(20) -2327(8) 8653(9) 752(2) 88(1) C(21) -1157(9) 10260(8) 665(2) 88(1) C(22) 728(9) 10361(7) 964(2) 80(1) C(23) 1431(6) 8731(6) 1364(1) 65(1) C(24) 274(5) 7058(5) 1472(1) 54(1) Cl(2') -2047(5) 12265(3) 154(1) 157(1) F(2') 3433(15) 8441(16) 1630(4) 92(1) C(19') 1431(6) 8731(6) 1364(1) 65(1) C(20') 728(9) 10361(7) 964(2) 80(1) C(21') -1157(9) 10260(8) 665(2) 88(1) C(22') -2327(8) 8653(9) 752(2) 88(1) C(23') -1591(6) 7059(7) 1154(1) 68(1) C(24') 274(5) 7058(5) 1472(1) 54(1) N(1) 4370(3) 2950(4) 5713(1) 41(1) N(2) 4133(4) 8236(3) 4386(1) 42(1) O(1) 10923(4) 2331(5) 8233(1) 77(1) O(2) 7874(4) 3730(4) 7651(1) 64(1) O(3) 1766(4) 6201(4) 2352(1) 64(1) O(4) 2966(5) 3591(4) 1729(1) 75(1) O(5) 9024(3) 2305(3) 4214(1) 50(1) O(6) 7650(4) 989(3) 5024(1) 63(1) O(7) 11358(3) 1934(4) 4982(1) 64(1) O(8) 7789(3) 4827(3) 4909(1) 46(1) O(1V) 10276(4) 6879(4) 5537(1) 54(1) C(7) 9086(6) 4293(6) 8090(1) 63(1) C(8) 9234(4) 1745(5) 7490(1) 44(1) C(9) 11056(5) 930(6) 7834(1) 54(1) C(10) 12654(5) -1059(6) 7768(1) 62(1) C(11) 12316(5) -2213(6) 7338(1) 58(1) C(12) 10459(4) -1405(5) 6994(1) 47(1) C(13) 8826(4) 623(4) 7066(1) 38(1) C(14) 6762(4) 1637(4) 6711(1) 37(1) C(15) 7243(4) 3516(4) 6343(1) 42(1) C(16) 5126(4) 4639(4) 6009(1) 44(1) C(17) 3883(5) 1105(5) 6056(1) 50(1) C(18) 5997(4) -38(4) 6386(1) 41 (1) C(25) 996(6) 5296(6) 1900(1) 60(1) C(26) 3848(5) 4738(4) 2505(1) 45(1) C(27) 4542(6) 3183(5) 2133(1) 52(1) C(28) 6579(6) 1567(5) 2178(1) 56(1) C(29) 7932(6) 1577(5) 2620(1) 56(1) C(30) 7236(5) 3123(5) 2992(1) 51(1) C(31) 5126(5) 4786(4) 2944(1) 42(1) C(32) 4261 (4) 6474(4) 3352(1) 39(1) C(33) 6145(5) 7543(5) 3544(1) 51(1) C(34) 5139(5) 9272(4) 3932(1) 50(1) C(35) 2313(5) 7116(5) 4227(1) 49(1) C(36) 3263(4) 5420(4) 3826(1) 42(1)

Tabela G. Dužina veze [Å] i uglovi [°] za C49.

S(1)-O(5) 1.4463(18) S(1)-O(7) 1.4668(19) S(1)-O(6) 1.475(2) S(1)-O(8) 1.4863(18) Cl(1)-C(3) 1.731(4) F(1)-C(1) 1.314(6)

11

C(1)-C(6) 1.375(5) C(1)-C(2) 1.374(6) C(2)-C(3) 1.343(8) C(2)-H(2) 0.9300 C(3)-C(4) 1.369(8) C(4)-C(5) 1.373(6) C(4)-H(4) 0.9300 C(5)-C(6) 1.370(5) C(5)-H(5) 0.9300 C(6)-C(7) 1.493(5) Cl(1')-C(3') 1.731(4) F(1')-C(1') 1.357(8) C(1')-C(6') 1.370(5) C(1')-C(2') 1.373(6) C(2')-C(3') 1.369(8) C(2')-H(2') 0.9300 C(3')-C(4') 1.343(8) C(4')-C(5') 1.374(6) C(4')-H(4') 0.9300 C(5')-C(6') 1.375(5) C(5')-H(5') 0.9300 C(6')-C(7) 1.493(5) Cl(2)-C(21) 1.739(4) F(2)-C(19) 1.312(5) C(19)-C(24) 1.378(5) C(19)-C(20) 1.378(6) C(20)-C(21) 1.348(7) C(20)-H(20) 0.9300 C(21)-C(22) 1.375(7) C(22)-C(23) 1.384(6) C(22)-H(22) 0.9300 C(23)-C(24) 1.385(5) C(23)-H(23) 0.9300

11

C(24)-C(25) 1.485(5) Cl(2')-C(21') 1.739(4) F(2')-C(19') 1.340(9) C(19')-C(20') 1.384(6) C(19')-C(24') 1.385(5) C(20')-C(21') 1.375(7) C(20')-H(20') 0.9300 C(21')-C(22') 1.348(7) C(22')-C(23') 1.378(6) C(22')-H(22') 0.9300 C(23')-C(24') 1.378(5) C(23')-H(23') 0.9300 C(24')-C(25) 1.485(5) N(1)-C(1 7) 1.480(4) N(1)-C(16) 1.480(3) N(1)-H(1X) 0.95(2) N(1)-H(1Y) 0.97(2) N(2)-C(34) 1.483(4) N(2)-C(35) 1.487(4) N(2)-H(2X) 0.96(2) N(2)-H(2Y) 0.99(2) O(1)-C(9) 1.368(4) O(1)-C(7) 1.445(4) O(2)-C(8) 1.373(3) O(2)-C(7) 1.443(3) O(3)-C(26) 1.380(3) O(3)-C(25) 1.440(3) O(4)-C(27) 1.369(4) O(4)-C(25) 1.447(4) O(1V)-H(1WX) 0.93(2) O(1V)-H(1WY) 0.94(2) C(7)-H(7) 0.9800 C(8)-C(9) 1.374(4)

11

C(8)-C(13) 1.376(4) C(9)-C(10) 1.370(5) C(10)-C(11) 1.387(5) C(10)-H(10) 0.9300 C(11)-C(12) 1.390(4) C(11)-H(11) 0.9300 C(12)-C(13) 1.400(4) C(12)-H(12) 0.9300 C(13)-C(14) 1.514(3) C(14)-C(18) 1.518(3) C(14)-C(15) 1.528(3) C(14)-H(14) 0.9800 C(15)-C(16) 1.518(3) C(15)-H(15A) 0.9700 C(15)-H(15B) 0.9700 C(16)-H(16A) 0.9700 C(16)-H(16B) 0.9700 C(17)-C(18) 1.513(4) C(17)-H(17A) 0.9700 C(17)-H(17B) 0.9700 C(18)-H(18A) 0.9700 C(18)-H(18B) 0.9700 C(25)-H(25) 0.9800 C(26)-C(31) 1.367(4) C(26)-C(27) 1.379(3) C(27)-C(28) 1.363(4) C(28)-C(29) 1.394(5) C(28)-H(28) 0.9300 C(29)-C(30) 1.376(4) C(29)-H(29) 0.9300 C(30)-C(31) 1.408(4) C(30)-H(30) 0.9300 C(31)-C(32) 1.514(3)

11

C(32)-C(33) 1.527(4) C(32)-C(36) 1.524(3) C(32)-H(32) 0.9800 C(33)-C(34) 1.510(4) C(33)-H(33A) 0.9700 C(33)-H(33B) 0.9700 C(34)-H(34A) 0.9700 C(34)-H(34B) 0.9700 C(35)-C(36) 1.515(3) C(35)-H(35A) 0.9700 C(35)-H(35B) 0.9700 C(36)-H(36A) 0.9700 C(36)-H(36B) 0.9700 O(5)-S(1)-O(7) 109.68(13) O(5)-S(1)-O(6) 109.65(13) O(7)-S(1)-O(6) 109.45(15) O(5)-S(1)-O(8) 111.22(11) O(7)-S(1)-O(8) 109.11 (11) O(6)-S(1)-O(8) 107.69(11) F(1)-C(1)-C(6) 118.6(4) F(1)-C(1)-C(2) 119.1(4) C(6)-C(1)-C(2) 122.1(4) C(3)-C(2)-C(1) 118.9(4) C(3)-C(2)-H(2) 120.5 C(1)-C(2)-H(2) 120.5 C(2)-C(3)-C(4) 121.6(4) C(2)-C(3)-Cl(1) 119.3(4) C(4)-C(3)-Cl(1) 119.1(5) C(3)-C(4)-C(5) 118.2(5) C(3)-C(4)-H(4) 120.9 C(5)-C(4)-H(4) 120.9 C(6)-C(5)-C(4) 122.4(4) C(6)-C(5)-H(5) 118.8

11

C(4)-C(5)-H(5) 118.8 C(5)-C(6)-C(1) 116.7(3) C(5)-C(6)-C(7) 122.7(3) C(1)-C(6)-C(7) 120.6(3) F(1')-C(1')-C(6') 114.7(4) F(1')-C(1')-C(2') 122.1(5) C(6')-C(1')-C(2') 122.4(4) C(3')-C(2')-C(1') 118.2(5) C(3')-C(2')-H(2') 120.9 C(1')-C(2')-H(2') 120.9 C(4')-C(3')-C(2') 121.6(4) C(4')-C(3')-Cl(1') 119.3(4) C(2')-C(3')-Cl(1') 119.1(5) C(3')-C(4')-C(5') 118.9(4) C(3')-C(4')-H(4') 120.5 C(5')-C(4')-H(4') 120.5 C(6')-C(5')-C(4') 122.1(4) C(6')-C(5')-H(5') 118.9 C(4')-C(5')-H(5') 118.9 C(1')-C(6')-C(5') 116.7(3) C(1')-C(6')-C(7) 122.7(3) C(5')-C(6')-C(7) 120.6(3) F(2)-C(19)-C(24) 119.3(4) F(2)-C(19)-C(20) 118.1(4) C(24)-C(19)-C(20) 122.5(4) C(21)-C(20)-C(19) 118.4(4) C(21)-C(20)-H(20) 120.8 C(19)-C(20)-H(20) 120.8 C(20)-C(21)-C(22) 122.4(4) C(20)-C(21)-CI(2) 118.9(4) C(22)-C(21)-CI(2) 118.7(4) C(21)-C(22)-C(23) 117.8(4) C(21)-C(22)-H(22) 121.1

12

C(23)-C(22)-H(22) 121.1 C(22)-C(23)-C(24) 122.0(4) C(22)-C(23)-H(23) 119.0 C(24)-C(23)-H(23) 119.0 C(19)-C(24)-C(23) 116.8(3) C(19)-C(24)-C(25) 120.3(3) C(23)-C(24)-C(25) 122.9(3) F(2')-C(19')-C(20') 123.5(5) F(2')-C(19')-C(24') 113.9(5) C(20')-C(19')-C(24') 122.0(4) C(21')-C(20')-C(19') 117.8(4) C(21')-C(20')-H(20') 121.1 C(19')-C(20')-H(20') 121.1 C(22')-C(21')-C(20') 122.4(4) C(22')-C(21')-CI(2') 118.9(4) C(20')-C(21')-CI(2') 118.7(4) C(21')-C(22')-C(23') 118.4(4) C(21')-C(22')-H(22') 120.8 C(23')-C(22')-H(22') 120.8 C(24')-C(23')-C(22') 122.5(4) C(24')-C(23')-H(23') 118.7 C(22')-C(23')-H(23') 118.7 C(23')-C(24')-C(19') 116.8(3) C(23')-C(24')-C(25) 120.3(3) C(19')-C(24')-C(25) 122.9(3) C(17)-N(1)-C(16) 112.6(2) C(17)-N(1)-H(1X) 110.7(19) C(16)-N(1)-H(1X) 108(2) C(17)-N(1)-H(1Y) 108(2) C(16)-N(1)-H(1Y) 112.4(19) H(1Ks)-N(1)-H(1Y) 105(3) C(34)-N(2)-C(35) 112.2(2) C(34)-N(2)-H(2X) 109.7(19) C(35)-N(2)-H(2X) 109.7(19) C(34)-N(2)-H(2Y) 107.7(19) C(35)-N(2)-H(2Y) 110.8(19) H(2Ks)-N(2)-H(2Y) 107(3) C(9)-O(1)-C(7) 106.0(2) C(8)-O(2)-C(7) 105.9(2) C(26)-O(3)-C(25) 105.9(2) C(27)-O(4)-C(25) 105.7(2) H(1VKS)-O(1W)-H(1WY) 105(4) O(2)-C(7)-O(1) 106.5(3) O(2)-C(7)-C(6) 110.4(3) O(1)-C(7)-C(6) 111.2(3) O(2)-C(7)-C(6') 110.4(3) O(1)-C(7)-C(6') 111.2(3) O(2)-C(7)-H(7) 109.6 O(1)-C(7)-H(7) 109.6 C(6)-C(7)-H(7) 109.6 C(9)-C(8)-O(2) 110.0(2) C(9)-C(8)-C(13) 123.4(2) O(2)-C(8)-C(13) 126.6(2) O(1)-C(9)-C(10) 128.1(3) O(1)-C(9)-C(8) 110.1(3) C(10)-C(9)-C(8) 121.7(3) C(9)-C(10)-C(11) 116.3(3) C(9)-C(10)-H(10) 121.8 C(11)-C(10)-H(10) 121.8 C(10)-C(11)-C(12) 122.0(3) C(10)-C(11)-H(11) 119.0 C(12)-C(11)-H(11) 119.0 C(11)-C(12)-C(13) 121.3(3) C(11)-C(12)-H(12) 119.4 C(13)-C(12)-H(12) 119.4 C(8)-C(13)-C(12) 115.3(2) C(8)-C(13)-C(14) 119.8(2) C(12)-C(13)-C(14) 124.9(2) C(13)-C(14)-C(18) 114.2(2) C(13)-C(14)-C(15) 111.38(19) C(18)-C(14)-C(15) 108.70(19) C(13)-C(14)-H(14) 107.4 C(18)-C(14)-H(14) 107.4 C(15)-C(14)-H(14) 107.4 C(16)-C(15)-C(14) 111.7(2) C(16)-C(15)-H(15A) 109.3 C(14)-C(15)-H(15A) 109.3 C(16)-C(15)-H(15B) 109.3 C(14)-C(15)-H(15B) 109.3 H(15A)-C(15)-H(15B) 107.9 N(1)-C(16)-C(15) 109.9(2) N(1)-C(16)-H(16A) 109.7 C(15)-C(16)-H(16A) 109.7 N(1)-C(16)-H(16B) 109.7 C(15)-C(16)-H(16B) 109.7 H(16A)-C(16)-H(16B) 108.2 N(1)-C(17)-C(18) 110.94(19) N(1)-C(17)-H(17A) 109.5 C(18)-C(17)-H(17A) 109.5 N(1)-C(17)-H(17B) 109.5 C(18)-C(17)-H(17B) 109.5 H(17A)-C(17)-H(17B) 108.0 C(17)-C(18)-C(14) 110.6(2) C(17)-C(18)-H(18A) 109.5 C(14)-C(18)-H(18A) 109.5 C(17)-C(18)-H(18B) 109.5 C(14)-C(18)-H(18B) 109.5 H(18A)-C(18)-H(18B) 108.1 O(3)-C(25)-O(4) 106.6(2)

12

O(3)-C(25)-C(24') 111.0(3) O(4)-C(25)-C(24') 109.4(3) O(3)-C(25)-C(24) 111.0(3) O(4)-C(25)-C(24) 109.4(3) O(3)-C(25)-H(25) 109.9 O(4)-C(25)-H(25) 109.9 C(24)-C(25)-H(25) 109.9 C(31)-C(26)-C(27) 123.2(3) C(31)-C(26)-O(3) 127.3(2) C(27)-C(26)-O(3) 109.5(2) C(28)-C(27)-O(4) 127.7(2) C(28)-C(27)-C(26) 121.9(3) O(4)-C(27)-C(26) 110.3(2) C(27)-C(28)-C(29) 116.3(2) C(27)-C(28)-H(28) 121.9 C(29)-C(28)-H(28) 121.9 C(30)-C(29)-C(28) 121.8(3) C(30)-C(29)-H(29) 119.1 C(28)-C(29)-H(29) 119.1 C(29)-C(30)-C(31) 121.7(3) C(29)-C(30)-H(30) 119.2 C(31)-C(30)-H(30) 119.2 C(26)-C(31)-C(30) 115.1(2) C(26)-C(31)-C(32) 121.5(2) C(30)-C(31)-C(32) 123.4(2) C(31)-C(32)-C(33) 113.3(2) C(31)-C(32)-C(36) 111.48(19) C(33)-C(32)-C(36) 108.02(19) C(31)-C(32)-H(32) 107.9 C(33)-C(32)-H(32) 107.9 C(36)-C(32)-H(32) 107.9 C(34)-C(33)-C(32) 110.5(2) C(34)-C(33)-H(33A) 109.6 C(32)-C(33)-H(33A) 109.6

C(34)-C(33)-H(33B) 109.6

C(32)-C(33)-H(33B) 109.6

H(33A)-C(33)-H(33B) 108.1

N(2)-C(34)-C(33) 110.6(2)

N(2)-C(34)-H(34A) 109.5

C(33)-C(34)-H(34A) 109.5

N(2)-C(34)-H(34B) 109.5

C(33)-C(34)-H(34B) 109.5

H(34A)-C(34)-H(34B) 108.1

N(2)-C(35)-C(36) 110.71(19)

N(2)-C(35)-H(35A) 109.5

C(36)-C(35)-H(35A) 109.5

N(2)-C(35)-H(35B) 109.5

C(36)-C(35)-H(35B) 109.5

H(35A)-C(35)-H(35B) 108.1

C(35)-C(36)-C(32) 111.9(2)

C(35)-C(36)-H(36A) 109.2

C(32)-C(36)-H(36A) 109.2

C(35)-C(36)-H(36B) 109.2

C(32)-C(36)-H(36B) 109.2

H(36A)-C(36)-H(36B) 107.9

[0323] Transformacije simetrije koje se koriste za generisanje ekvivalentnih atoma.

Tabela H. Parametri anizotropnog pomeranja (Å<2>× 10<3>) za C49. Eksponent faktora anizotropnog pomeranja ima oblik: -2π<2>[h<2>a*<2>U<11>+ ... 2 h k a* b* U<12>].

U<11>U<22>U<33>U<23>U<13>U<12>

S(1) 32(1) 32(1) 32(1) -3(1) -2(1) -1(1) Cl(1) 107(1) 258(2) 90(1) -63(1) 19(1) 19(1) F(1) 111(2) 91(2) 98(2) -30(2) 6(2) -46(2) C(1) 81(2) 71(2) 60(2) -20(2) -16(2) -6(2) C(2) 100(3) 92(3) 74(3) -42(2) -16(2) 7(2)

12

C(3) 70(2) 134(4) 53(2) -27(2) -7(2) 19(3) C(4) 71(2) 116(3) 67(2) 0(2) -1(2) -16(2) C(5) 75(2) 70(2) 59(2) -11(2) -7(2) -10(2) C(6) 65(2) 54(2) 42(1) -8(1) -18(1) -1(1) Cl(1') 107(1) 258(2) 90(1) -63(1) 19(1) 19(1) F(1') 111(2) 91(2) 98(2) -30(2) 6(2) -46(2) C(1') 75(2) 70(2) 59(2) -11(2) -7(2) -10(2) C(2') 71(2) 116(3) 67(2) 0(2) -1(2) -16(2) C(3') 70(2) 134(4) 53(2) -27(2) -7(2) 19(3) C(4') 100(3) 92(3) 74(3) -42(2) -16(2) 7(2) C(5') 81(2) 71(2) 60(2) -20(2) -16(2) -6(2) C(6') 65(2) 54(2) 42(1) -8(1) -18(1) -1(1) Cl(2) 243(2) 110(1) 80(1) 12(1) -39(1) 26(1) F(2) 88(2) 106(2) 93(2) -12(2) -22(2) -44(2) C(19) 62(2) 77(2) 62(2) -26(2) -12(2) -5(2) C(20) 85(3) 98(3) 66(2) -20(2) -31(2) 10(2) C(21) 117(3) 74(3) 51(2) -11(2) -10(2) 18(2) C(22) 104(3) 70(2) 60(2) -9(2) 8(2) -8(2) C(23) 58(2) 73(2) 60(2) -13(2) -3(1) -6(2) C(24) 50(2) 60(2) 47(2) -23(1) -4(1) -2(1) Cl(2') 243(2) 110(1) 80(1) 12(1) -39(1) 26(1) F(2') 88(2) 106(2) 93(2) -12(2) -22(2) -44(2) C(19') 58(2) 73(2) 60(2) -13(2) -3(1) -6(2) C(20') 104(3) 70(2) 60(2) -9(2) 8(2) -8(2) C(21') 117(3) 74(3) 51(2) -11(2) -10(2) 18(2) C(22') 85(3) 98(3) 66(2) -20(2) -31(2) 10(2) C(23') 62(2) 77(2) 62(2) -26(2) -12(2) -5(2) C(24') 50(2) 60(2) 47(2) -23(1) -4(1) -2(1) N(1) 30(1) 59(1) 32(1) -3(1) -4(1) -7(1) N(2) 49(1) 38(1) 37(1) -11(1) -5(1) 0(1) O(1) 58(1) 107(2) 55(1) -23(1) -26(1) 6(1) O(2) 64(1) 66(1) 50(1) -21(1) -23(1) 12(1) O(3) 66(1) 62(1) 52(1) -27(1) -19(1) 11(1)

12

O(4) 92(2) 64(1) 56(1) -32(1) -20(1) 10(1) O(5) 62(1) 51 (1) 34(1) -5(1) -2(1) -9(1) O(6) 76(1) 43(1) 70(1) -4(1) 32(1) -14(1) O(7) 45(1) 68(1) 69(1) -29(1) -22(1) 13(1) O(8) 45(1) 35(1) 53(1) -9(1) -4(1) 2(1) O(1V) 56(1) 50(1) 51 (1) -3(1) -12(1) 1(1) C(7) 68(2) 73(2) 45(2) -12(1) -14(1) -12(2) C(8) 38(1) 51(1) 36(1) -4(1) -3(1) 0(1) C(9) 42(1) 76(2) 39(1) -1(1) -9(1) -4(1) C(10) 38(1) 87(2) 48(2) 10(1) -8(1) 6(1) C(11) 45(1) 60(2) 55(2) 9(1) 2(1) 13(1) C(12) 41 (1) 46(1) 47(1) 0(1) 3(1) 0(1) C(13) 34(1) 43(1) 34(1) 2(1) -1(1) -4(1) C(14) 30(1) 44(1) 31 (1) -4(1) -1(1) 0(1) C(15) 41 (1) 38(1) 45(1) 0(1) -12(1) -7(1) C(16) 44(1) 43(1) 39(1) -3(1) -6(1) 4(1) C(17) 39(1) 73(2) 42(1) -1(1) -3(1) -23(1) C(18) 41 (1) 46(1) 39(1) -4(1) 2(1) -14(1) C(25) 65(2) 62(2) 51(2) -22(1) -9(1) -8(1) C(26) 55(1) 37(1) 37(1) -8(1) 1(1) -2(1) C(27) 72(2) 41 (1) 39(1) -9(1) -2(1) -6(1) C(28) 79(2) 39(1) 43(1) -10(1) 11(1) 1(1) C(29) 62(2) 45(2) 48(2) -2(1) 7(1) 8(1) C(30) 58(2) 45(2) 42(1) -1(1) -1(1) 1(1) C(31) 54(1) 34(1) 34(1) -4(1) 2(1) -4(1) C(32) 50(1) 30(1) 33(1) -4(1) -6(1) 0(1) C(33) 63(2) 45(1) 54(2) -9(1) 17(1) -28(1) C(34) 59(2) 38(1) 58(2) -9(1) -1(1) -22(1) C(35) 46(1) 46(1) 56(2) -17(1) 16(1) -11(1) C(36) 39(1) 36(1) 53(1) -15(1) 12(1) -13(1)

Korak 4. Sinteza metil 2-({4-[(2S)-2-(4-hloro-2-fluorofenil)-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-1-[(2S)-oksetan-2-ilmetil]-1H-benzimidazol-6-karboksilata (C50).

12

[0324] Rastvor C48 (500 mg penaste bele čvrste supstance odozgo, korigovano za ptoluensulfonsku kiselinu: 1.25 mmol) u acetonitrilu (6 mL) je tretirano sa N,N-diizopropiletilaminom (0.68 mL, 3.9 mmol) i ostavljen da se meša 5 minuta na 45 °C. Nakon dodavanja P15 (319 mg, 1.08 mmol), mešanje na 45 °C je nastavljeno tokom 7.25 sati, nakon čega je reakciona smeša razblažena vodom (6 mL) i acetonitrilom (2 mL) na 45 °C. Dobijena heterogena smeša je ostavljena da se ohladi na sobnu temperaturu i mešana 72 sata. Dodato je još vode (5 mL) i nakon narednih 30 minuta mešanja, čvrsta supstanca je sakupljena filtracijom i isprana smešom acetonitrila i vode (15:85, 3 × 5 mL), da bi se dobilo C50 kao bela čvrsta supstanca sa blagim ružičastim prelivom. Prinos: 605 mg, 1.02 mmol, 82%. LCMS m/z 592.0◆ [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) 5 8<.>17 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.96 (dd, J = 8.5, 1.5 Hz, 1H), 7.73 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.51 (dd, J = 8.0, 8.0 Hz, 1H), 7.19 (br s, 1H), 7.18 - 7.14 (m, 2H), 6.85 - 6.79 (m, 1H), 6.76 - 6.71 (m, 2H), 5.26 - 5.18 (m 1H), 4.73 (dd, komponenta ABX obrasca, J = 15.3, 5.9 Hz, 1H), 4.67 (dd, komponenta ABX obrasca, J = 15.3, 3.5 Hz, 1H), 4.63 - 4.55 (m, 1H), 4.38 (ddd, J = 9.1, 6.0, 5.9 Hz, 1H), 3.94 (s, 5H), 3.03 - 2.89 (m, 2H), 2.77 - 2.65 (m, 2H), 2.51 - 2.39 (m, 1H), 2.34 - 2. , 2H), 1.91-1.76 (m, 4H).

Korak 5. Sinteza 2-({4-[(2S)-2-(4-hloro-2-fluorofenil)-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-1-[(2S)-oksetan-2-ilmetil]-1H-benzimidazol-6-karboksilne kiseline (5, slobodna kiselina).

[0325] Suspenzija od C50 (595 mg, 1.00 mmol) u metanolu (10 mL) je zagrejana na 45 °C i tretirana vodenim rastvorom natrijum hidroksida (1 M; 2.01 mL, 2.01 mmol). Posle 21 sata na 45 °C, reakciona smeša je ostavljena da se ohladi do sobne temperature; zatim je tretirana vodenim rastvorom limunske kiseline (1 M, 1 mL), čime je pH doveden na 5 do 6. Dodata je voda (10 mL) i smeša je mešana 1 sat, nakon čega je čvrsta supstanca sakupljena filtracijom.. Isprana je smešom metanola i vode (1:10, 3 × 5 mL), da bi se dobila čvrsta supstanca (433 mg). Deo ovog materijala (300 mg) je mešan sa smešom heptana i etil acetata (1:3, 5 mL) na 40 °C tokom 1 sata; nakon hlađenja do sobne temperature uz kontinuirano mešanje, čvrsta supstanca je sakupljena filtracijom i isprana smešom heptana i etil acetata (3:1, 3 × 3 mL) da bi se dobilo 5, slobodna kiselina, kao bela čvrsta supstanca. Prinos: 260 mg, 0.450 mmol, što odgovara 65% za celu reakciju. LCMS m/z 578.0◆ [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12<.>75 (v br s, 1H), 8.26 (br s, 1H), 7.79 (dd, J = 8.4, 1.6 Hz, 1H), 7.66 - 7.56 (m, 3H), 7.40 (dd, J = 8.3, 2.0 Hz, 1H), 7.35 (s, 1H), 6.87 - 6.75 (m, 3H), 5.13 - 5.03 (m, 1H), 4.76 (dd,

12

komponenta ABX obrasca, J = 15.3, 7.2 Hz, 1H), 4.62 (dd, komponenta ABX obrasca, J = 15.2, 2.8 Hz, 1H), 4.46 - 4.38 (m, 1H), 4.34 (ddd, J = 9.0, 5.9, 5.8 Hz, 1H), 3.84 (AB kvartet, JAB= 13.5 Hz, ΔνAB= 67.7 Hz, 2H), 3.00 (br d, J = 11.2 Hz, 1H), 2.84 br (d, J = 11.3 Hz, 1H), 2.71-2.56 (m, 2H), 2.45-2.34 (m, IH), 2.28-2.08 (m, 2H), 1.84-1.65 (m, 4H).

[0326] Utvrđeno je da je ovaj materijal iste apsolutne konfiguracije kao prethodni Primer 5 poređenjem njegove biološke aktivnosti sa onom kod oba 4 i 5: u testu 2, ovaj uzorak 5, slobodna kiselina pokazao je EK50od 25 nM (geometrijska sredina 3 ponavljanja). Aktivnost u testu 2 za amonijum soli Primera 4 i Primera 5 bile su >20000 nM (2 ponavljanja) i 20 nM (geometrijska sredina 3 ponavljanja), respektivno.

Sinteza Primera 5, 1,3-dihidroksi-2-(hidroksimetil)propan-2-aminijum soli

1,3-dihidroksi-2-(hidroksimetil)propan-2-aminijum 2-({4-[(2)S)-2-(4-hloro-2-fluorofenil)-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-1-[(2S)-oksetan-2-ilmetil]-1H-benzimidazol-6-karboksilat (5, 1,3-dihidroksi-2-(hidroksimetil)propan-2-aminijum so).

[0327]

[0328] Smeša 5, slobodne kiseline (0.50 g, 0.86 mmol) u tetrahidrofuranu (4 mL) tretirana je vodenim rastvorom 2-amino-2-(hidroksimetil)propan-1,3-diola (Tris, 1.0 M; 0.5 mL, 1.0 mmol). Posle 20 sati, smeša je koncentrovana in vacuo sa etanolom (2 × 6 mL). Smeša je tretirana etanolom (4 mL). Posle mešanja tokom 48 sati, čvrsta supstanca je sakupljena filtracijom, isprana etanolom (2 × 10 mL) i osušena pod vakuumom da bi se dobilo 5, 1,3-dihidroksi-2-(hidroksimetil)propan-2-aminijum so, kao bela čvrsta supstanca. Prinos: 410 mg, 0.586 mmol, 68%.<1>H NMR (600 MHz, DMSO-d6), karakteristični pikovi: δ 8.19 (s, 1H), 7.78 (br d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.62 - 7.58 (m, 2H), 7.55 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.40 (dd, J = 8.4, 2.0 Hz, 1H), 7.35 (s, 1H), 6.85 - 6.80 (m, 2H), 6.79 (dd, J = 6.9, 2.4 Hz, 1H), 5.11 - 5.05 (m,

12

1H), 4.73 (dd, J = 15.2, 7.2 Hz, 1H), 4.60 (dd, J = 15.3, 2.9 Hz, 1H), 4.45 - 4.39 (m, 1H), 4.34 (ddd, J = 9.0, 6.0, 5.8 Hz, 1H), 3.91 (d, J = 13.5 Hz, IH), 3.74 (d, J = 13.5 Hz, 1H), 2.99 (br d, J = 11.1Hz, 1H), 2.85 (br d, J = 11.3 Hz, 1H), 2.68 - 2.59 (m, 2H), 2.44 - 2.37 (m, 1H), 2.25 - 2.18 (m, 1H), 2.17 - 2.10 (m, 1H), 1.80 - 1.49 (m, 1H) ). mp = 168 °C do 178 °C.

Primeri 6 i 7

Amonijum 2-({4-[(2R)-2-(4-hloro-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-1-[(2S)-oksetan-2-ilmetil]-1H-benzimidazol-6-karboksilat (6) i amonijum 2-({4-[(2S)-2-(4-hloro-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-1-[(2S)-oksetan-2-ilmetil]-1H-benzimidazol-6-karboksilat (7)

[0329]

1

Korak 1. Sinteza p-toluensulfonatne soli 4-[2-(4-hloro-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidina (C13).

[0330] Rastvor P2 (150 mg, 0.335 mmol) i monohidrat p-toluensulfonske kiseline (159 mg, 0.836 mmol) u etil acetatu (2.0 mL) je mešan na 60 °C tokom 3.5 sata. Reakciona smeša je koncentrovana in vacuo da bi se dobilo C13 kao smeđe ulje, koje je direktno korišćeno u sledećem koraku. LCMS m/z 348.1+ [M+H]<+>.

Korak 2. Sinteza metil 2-({4-[2-(4-hloro-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-1- [(2S)-oksetan-2-ilmetil]-1H-benzimidazol-6-karboksilata (C51).

[0331] Suspenziji C13 (iz prethodnog koraka; ≤0.335 mmol) i kalijum karbonata (232 mg, 1.68 mmol) u acetonitrilu (5.0 mL) dodat je P15 (99.1 mg, 0.336 mmol). Reakciona smeša je mešana na 60 °C tokom 10 sati, nakon čega je filtrirana, a filtrat je koncentrovan in vacuo. Nakon što je ostatak (390 mg) kombinovan sa materijalom iz slične reakcije koja je izvedena korišćenjem C13 (≤0.11 mmol), razblažen je vodom (20 mL) i ekstrahovan smešom dihlorometana i metanola (10:1, 3 × 30 mL). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani, koncentrovani in vacuo, i podvrgnuti preparativnoj tankoslojnoj hromatografiji (eluent: 1:1 dihlorometan/metanol), dajući C51, smešu dijastereomera, kao bezbojno ulje. Kombinovani prinos: 80.6 mg, 0.133 mmol, 30% u 2 koraka. LCMS m/z 606.2+ [M+H]<+>.

Korak 3. Izolovanje metil 2-({4-[(2R)-2-(4-hloro-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-1-[(2S)-oksetan-2-ilmetil]-1H-benzimidazol-6-karboksilata (C52) i metil 2-({4-[(2S)-2-(4-hloro-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-1-[(2S)-oksetan-2-ilmetil]-1H-benzimidazol-6-karboksilata (C53).

[0332] Razdvajanje C51 (180 mg, 0.297 mmol) u njegove sastavne dijastereomere sprovedeno je preko ponovljenog SFC [Kolona: Chiral Technologies Chiralpak AD, 10 um; Mobilna faza: 65:35 ugljen-dioksid / (etanol koji sadrži 0.1% amonijum hidroksida)]. Prvi dijastereomer koji eluira je označen kao C52. Prinos: 61.2 mg, 0.101 mmol, 34%. LCMS m/z 627.9+ [M+Na<+>]. Retenciono vreme: 5.03 minuta (Kolona: Chiral Technologies Chiralpak AD-3, 4.6 × 150 mm, 3 µm; Mobilna faza A: ugljen-dioksid; Mobilna faza B: etanol koji sadrži 0.05% dietilamina; Gradijent: 5% do 40% B preko 55. minuta, zatim držan na 40% B

1 1

tokom 3.0 minuta; Brzina protoka: 2.5 mL/minuti).

[0333] Drugi dijastereomer koji eluira je označen kao C53. Nakon analize, pokazalo se da je ovaj materijal kontaminiran odgovarajućim etil estrom; uveden je u korak hidrolize (da bi se stvorio 7) kao ova smeša. Prinos: 40.0 mg, 66.0 umol, 22%. LCMS m/z 606.0◆ [M+H]<+>. Retenciono vreme: 5.19 minuta (analitički uslovi identični onima koji se koriste za C52).

[0334] Navedene apsolutne stereohemije dioksolana su dodeljene preko korelacije potencije 7 sa uzorkom od 7, slobodna kiselina sintetizovanim iz intermedijera P3 (vidi dole, Alternativna sinteza Primer 7, slobodna kiselina); apsolutna stereohemija P3 ustanovljena je rendgenskim određivanjem monokristalne strukture C8 (vidi gore).

Korak 4. Sinteza amonijuma 2-([4-[(2R)-2-(4-hloro-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-1-[(2S)-oksetan-2-ilmetil]-1H-benzimidazol-6-karboksilata (6).

[0335] Vodeni rastvor litijum hidroksida (2 M; 0.990 mL, 1.98 mmol) je dodat u rastvor C52 (60 mg, 99 umol) u smeši metanola (1.0 mL) i tetrahidrofurana (1.0 mL), i reakciona smeša je mešana na 20 °C tokom 16 sati. Trifluorosirćetna kiselina je dodavana sve dok pH reakcione smeše nije dostigao 7, nakon čega je koncentrovana in vacuo, a ostatak je prečišćen korišćenjem HPLC reverzne faze (kolona: Agela Durashell C18, 5 µm; Mobilna faza A: 0.05% amonijum hidroksida u vodi; Mobilna faza B: acetonitril; Gradijent: 29% do 49% B), dajući 6 kao belu čvrstu supstancu. Prinos: 14.4 mg. 23.6 µmol, 24%. LCMS m/z 592.0◆ [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4), karakteristični pikovi: δ 8<.>35 (d, J = 1.3 Hz, 1H), 7.97 (dd, J = 8.5, 1.5 Hz, 1H), 7.67 (d, J= 8.5 Hz, 1H), 7.58 (dd, J = 8.3, 8.3 Hz, 1H), 7.28 (dd, J= 10.9, 2.0 Hz, 1H), 7.21 (br dd, J = 8.4, 1.9 Hz, 1H), 6.81 - 6.75 (m, 1H), 6.74 - 6.68 (m, 2H), 5.33 - 5.25 (m, 1H), 4.72 (dd, J = 15.4, 2.7 Hz, 1H), 4.49 (dt, J = 9.1, 6.0 Hz, 1H), 4.03 (AB kvartet, JAB= 13.9 Hz, ΔνAB= 47.8 Hz, 2H), 3.14 (br d, J = 11Hz, 1H), 3.02 (br d, J = 11.5 Hz, 1H), 2.88 - 2.78 (m, 1H), 2.77 - 2.68 (m, 1H), 2.60 - 2.50 (m, 1H), 2.47 - 2.32 (m, 2H), 2.03 (d, J = 1.1Hz, 3H), 2.01 - 1.87 (m, 2H), 1.87 - 1.78 (br m, 2H).

Korak 5. Sinteza amonijuma 2-({4-[(2S)-2-(4-hloro-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-1-[(2S)-oksetan-2-ilmetil]-1H-benzimidazol-6-karboksilata (7).

[0336] Vodeni rastvor litijum hidroksida (2 M; 0.642 mL, 1.28 mmol) je dodat u rastvor C53

1 2

(38.9 mg, 64.2 µmol) u smeši metanola (1.0 mL) i tetrahidrofurana (1.0 mL). Nakon što je reakciona smeša mešana na 20 °C tokom 16 sati, pH je podešen na 7 dodavanjem trifluorosirćetne kiseline, koncentrovana in vacuo, i prečišćena korišćenjem HPLC reverzne faze (kolona: Agela Durashell C18, 5 µm; Mobilna faza A: 0.05% amonijum hidroksida u vodi; Mobilna faza B: acetonitril; Gradijent: 0% do 80% B), dajući 7 kao belu čvrstu supstancu. Prinos: 25.1 mg, 41.2 umol, 64%. LCMS m/z 591.9◆ [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4), karakteristični pikovi: δ 8<.>34 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 7.98 (dd, J = 8.5, 1.6 Hz, 1H), 7.68 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.58 (dd, J = 8.3, 8.3 Hz, 1H), 7.28 (dd, J = 10.9, 2.0 Hz, 1H), 7.20 (br dd, J = 8.4, 1.9 Hz, 1H), 6.81 - 6.74 (m, 1H), 6.74 - 6.67 (m, 2H), 5.33 - 5.23 (m, 1H), 4.73 (dd, J = 15.4, 2.7 Hz, 1H), 4.68 - 4.61 (m, 1H), 4.48 (dt, J = 9.1, 5.9 Hz, 1H), 4.05 (AB kvartet, JAB= 13.9 Hz, ΔνAB= 44.1Hz, 2H), 3.15 (br d, J = 11.7 Hz, 1H), 3.03 (br d, J = 11.6 Hz, 1H), 2.87 - 2.69 (m, 2H), 2.60 - 2.49 (m, 1H), 2.48 - 2.33 (m, 2H), 2.03 (br s, 3H), 2.01 - 1.77 (m, 4H) .

Alternativna sinteza Primera 7, slobodna kiselina

2-({4-[(2S)-2-(4-hloro-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-1-[(2S)-oksetan-2-ilmetil]-1H-benzimidazol-6-karboksilna kiselina (7, slobodna kiselina)

[0337]

Korak 1. Sinteza metil 2-({4-[(2S)-2-(4-hloro-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-1-[(2S)-oksetan-2-ilmetil]-1H-benzimidazol-6-karboksilata (C53).

1

[0338] N,N-Diizopropiletilamin (15.1 mL, 86.9 mmol) je dodat u smešu P3 (8.22 g, 15.8 mmol) u acetonitrilu (185 mL); nakon mešanja 5 minuta, dodat je P15 (4.57 g, 15.5 mmol) i reakciona smeša je zagrevana na 45 °C. Posle 4 sata, reakciona smeša je koncentrovana in vacuo do polovine prvobitne zapremine, a dobijena smeša je razblažena vodom (100 mL) i ekstrahovana etil acetatom (2 × 100 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom (50 mL), osušeni preko magnezijum sulfata, filtrirani i koncentrovani in vacuo. Silika gel hromatografija (Gradijent: 50% do 100% etil acetata u heptanu) je dala C53 kao belu čvrstu supstancu. Prinos: 8.4 g, 13.9 mmol, 88%. LCMS m/z 606.1+ [M+H]<+>.<1>H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 8<.>30 (s, 1H), 7.82 (br d, J = 8.4 Hz, IH), 7.67 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.58 - 7.53 (m, 2H), 7.33 (dd, J = 8.4, 2.1Hz, 1H), 6.80 - 6.76 (m, 2H), 6.76 - 6.72 (m, 1H), 5.14 - 5.07 (m, 1H), 4.81 (dd, J = 15.2, 7.2 Hz, 1H), 4.67 (dd, J = 15.3, 2.8 Hz, 1H), 4.51 - 4.44 (m, 1H), 4.37 (ddd, J = 8.9, 5.9, 5.9 Hz, 1H), 3.97 (d, J = 13.6 Hz, IH), 3.87 (s, 3H), 3.78 (d, J = 13.5 Hz, 1H), 3.02 (br d, J = 11.1Hz, 1H), 2.86 (br d, J = 11.3 Hz, 1H), 2.74-2.60 (m, 2H), 2.48-2.41 (m, 1H), 2.29-2.22 (m, 1H), 2.21-2.14 (m, 1H), 2.02 (s, 3H), 1.83-1.73 (m, 2H), 1.73-1.64 (m, 2H).

Korak 2. Sinteza 2-({4-[(2S)-2-(4-hloro-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-1-[(2S)-oksetan-2-ilmetil]-1H-benzimidazol-6-karboksilne kiseline (7, slobodna kiselina).

[0339] Smeša C53 (8.40 g, 14.0 mmol) u metanolu (135 mL) je zagrejana na 45 °C, i tretirana vodenim rastvorom natrijum hidroksida (1 M; 27.7 mL, 27.7 mmol). Posle 20 sati, reakciona smeša je koncentrovana in vacuo do polovine prvobitne zapremine. Dobijena smeša je razblažena vodom (100 mL), a vodeni rastvor limunske kiseline (1 M, 15 mL) je korišćen za podešavanje pH na 5 do 6. Dobijena čvrsta supstanca je filtrirana, isprana vodom (2 × 15 mL) i prebačena u levak za odvajanje kao rastvor u etil acetatu (50 mL); na ovaj način je uklonjena zaostala voda. Organski sloj je osušen preko magnezijum sulfata, filtriran, kombinovan sa četiri prethodno pripremljene serije po sličnom postupku (količina C53 korišćena u ovim reakcijama je 987 mg, 1.63 mmol; 1.15 g, 1.90 mmol; 8.57 g, 14.1 mmol; i 12.6 g, 20.8 mmol) i koncentrovana in vacuo. Dobijena lepljiva čvrsta supstanca je tretirana sa 10% etil acetata u heptanu (500 mL). Posle 4 sata, čvrsta supstanca je sakupljena filtracijom i isprana sa 10% etil acetata u heptanu (2 × 25 mL) da bi se dobilo 7, slobodna kiselina, kao bela čvrsta supstanca. Prinos 29.4 g, 0.527 mmol, 74% za kombinovane

1 4

reakcije. LCMS 592.2◆ [M+H]+.<1>H NMR (600 MHz, DMSO-d6): δ 12<.>74 (br s, 1H), 8.28 (s, 1H), 7.80 (br d, J = 8.4 Hz, IH), 7.64 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.59 - 7.52 (m, 2H), 7.33 (dd, J = 8.4, 2.1Hz, 1H), 6.81-6.76 (m, 2H), 6.76-6.72 (m, 1H), 5.14-5.07 (m, 1H), 4.79 (dd, J = 15.3, 7.3 Hz, 1H), 4.65 (dd, J = 15.2, 2.8 Hz, 1H), 4.51 - 4.45 (m, 1H), 4.38 (ddd, J = 9.0, 5.9, 5.9 Hz, 1H), 3.96 (brd, J = 13.6 Hz, IH), 3.78 (brd, J = 13.5 Hz, 1H), 3.02 (br d, J = 11.1Hz, 1H), 2.86 (br d, J = 11.1Hz, 1H), 2.74-2.60 (m, 2H), 2.48-2.41 (m, 1H), 2.29-2.21 (m, 1H), 2.21-2.14 (m, 1H), 2.02 (s, 3H), 1.83-1.74 (m, 2H), 1.74-1.64 (m, 2H). Utvrđeno je da je ovaj materijal iste apsolutne konfiguracije kao prethodni Primer 7 poređenjem njegove biološke aktivnosti sa onom kod oba 6 i 7: u testu 2, ovaj uzorak od 7, slobodna kiselina pokazao je EK50od 4.3 nM (geometrijska sredina 3 ponavljanja). Aktivnost u testu 2 za amonijum soli Primer 6 i Primer 7 bile su 2400 nM (geometrijska sredina 5 ponavljanja) i 2.9 nM (geometrijska sredina 8 ponavljanja), respektivno.

Sinteza 7S-1. Sinteza Primera 7, 1,3-dihidroksi-2-(hidroksimetil)propan-2-aminijum soli

1,3-dihidroksi-2-(hidroksimetil)propan-2-aminijum 2-({4-[(2)S)-2-(4-hloro-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il)metil)-1-[(2S)-oksetan-2-ilmetilj-1H-benzimidazol-6-karboksilat (7.1,3-dihidroksi-2-(hidroksimetil)propan-2-aminijum so).

[0340]

[0341] Smeša 7, slobodna kiselina (2.00 g, 3.38 mmol) u tetrahidrofuranu (16 mL) tretiran je vodenim rastvorom 2-amino-2-(hidroksimetil)propan-1,3-diola (Tris, 1.0 M; 3.55 mL, 3.55 mmol). Posle 18 sati, reakciona smeša je koncentrovana in vacuo i tretirana sa etanolom (30 mL). Nakon što je ova smeša mešana 23 sata, čvrsta supstanca je sakupljena filtracijom i isprana etil acetatom (2 × 10 mL) da bi se dobilo 7.1,3-dihidroksi-2-(hidroksimetil)propan-2-aminijum so kao bela čvrsta supstanca. Prinos: 1.41 g, 1.98 mmol, 59%. LCMS m/z

1

592.3+ [M+H]<+>.<1>H NMR (600 MHz, DMSO-d6), karakteristični pikovi: δ 8<.>20 (s, 1H), 7.79 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.59 - 7.52 (m, 3H), 7.33 (br d, J = 8.5 Hz, 1H), 6.81 - 6.72 (m, 3H), 5.14 - 5.07 (m, 1H), 4.76 (dd, J = 15.2, 7.2 Hz, 1H), 4.63 (br d, J = 15.4 Hz, 1H), 4.50 - 4.44 (m, 1H), 4.37 (ddd, J = 8.9, 5.9, 5.9 Hz, 1H), 3.94 (d, J = 13.4 Hz, IH), 3.76 (d, J = 13.4 Hz, 1H), 3.01 (br d, J = 11.1Hz, 1H), 2.86 (br d, J = 11.2 Hz, 1H), 2.73 - 2.60 (m, 2H), 2.5 - 2.41 (m, 1H), 2.27 - 2.20 (m, 1H), 2.20 - 2.13 (m, 1H), 2.02 (s, 3H), 1.83-1.64 (m, 4H). mp = 175 °C do 180 °C.

Sinteza 7S-2. Alternativna sinteza Primera 7, 1,3-dihidroksi-2-(hidroksimetil)propan-2-aminijum so

[0342] 3.3 M rastvor 2-smino-2-(hidroksimetil)-1,3-propandiola (1.0 ekviv., 1.93 L) u vodi je dodat u rastvor 7, slobodne kiseline (3.74 kg) u izopropanolu (20 L) na 65°C. Dodato je još izopropanola (19 L), a zatim metanola (19 L) uz održavanje temperature na 65°C. Smeša je polako hlađena na 45°C tokom 2 sata, a zatim je držana na 45°C najmanje 12 sati. Smeša je zatim ohlađena na 5°C tokom 3 sata, a zatim držana na 5°C najmanje 3 sata. Smeša je zatim filtrirana i čvrsta supstanca je sakupljena, isprana etil acetatom (2 × 10 mL) da bi se dobilo 7.1,3-dihidroksi-2-(hidroksimetil)propan-2-aminijum so kao bela čvrsta supstanca (prinos: 3.64 kg, 80.9%). LCMS i<1>Dobijeni su H NMR podaci, koji su suštinski isti kao oni u Sintezi 7S-1 prikazanoj prethodno.

Pribavljanje podataka difrakcije rendgenskih zraka praha (PXRD) za Formu I Primera 7, 1,3-dihidroksi-2-(hidroksimetil)propan-2-aminijum so

[0343] Bela čvrsta supstanca tris soli iz Primera 7 (iz obe Sinteza 7S-1 i Sinteza 7S-2) je podvrgnuta PXRD analizi i utvrđeno je da je kristalni materijal (koji je označen kao Forma I ovog bezvodnog kristalnog oblika). Analiza difrakcije rendgenskih zraka praha je sprovedena korišćenjem Bruker AXS D8 Endeavour difraktometra opremljenog Cu izvorom zračenja. Prorez za divergenciju je postavljen na 15 mm neprekidnog osvetljenja. Difraktovano zračenje je detektovano PSD-Lynx Eye detektorom, sa otvorom detektora PSD postavljenim na 2.99 stepeni. Napon i amperaža rendgenske cevi su podešeni na 40 kV i 40 mA respektivno. Podaci su prikupljeni na talasnoj dužini Cu (CuKα= 1.5418 A) u Theta-Theta goniometru od 3.0 do 40.0 stepeni 2-Theta koristeći veličinu koraka od 0.01 stepen i vreme koraka od 1.0 sekunde. Ekran protiv raspršivanja je postavljen na fiksno rastojanje od 1.5

1

mm. Uzorci su rotirani tokom prikupljanja podataka. Uzorci su pripremljeni tako što su stavljeni u silikonski držač uzoraka sa niskom pozadinom i rotirani tokom sakupljanja. Podaci su prikupljeni korišćenjem Bruker DIFFRAC Plus softvera, a analiza je obavljena pomoću EVA diffract plus softvera. PXRD datoteka sa podacima nije obrađena pre pretraživanja pikova. Koristeći algoritam za pretragu pikova u EVA softveru, pikovi izabrani sa graničnom vrednošću od 1 korišćeni su za preliminarne dodele pikova. Da bi se osigurala validnost, prilagođavanja su napravljena ručno; izlaz automatizovanih dodela je vizuelno proveren, a pozicije pikova su podešene na maksimum pika. Uglavnom su izabrani pikovi sa relativnim intenzitetom od ≥ 3%. Tipično, nisu izabrani pikovi koji nisu rešeni ili su bili u skladu sa šumom. Tipična greška povezana sa pozicijom pika od PXRD navedenog u USP do /- 0.2° 2-Theta (USP-941). Jedna difrakciona šema je dosledno primećena i data je na slici 1. Spisak difrakcionih pikova izraženih u smislu stepena 2θ i relativnih intenziteta sa relativnim intenzitetom od ≥ 3.0% PXRD iz uzorka dobijenog pomoću Synthesis 7S-2 je dat prethodno u tabeli X1.

Tabela X1

Ugao (2teta) Relativni intenzitet (%)

3.7 74.3

7.3 83.3

8.1 12.5

8.5 6.5

10.1 6.6

13.6 3.5

14.7 49.8

15.2 7.9

15.5 28.7

15.9 18.3

16.9 60.8

17.4 26.3

17.7 11.4

17.9 13.5

18.9 75.4

19.7 18.7

20.2 100.0

1

21.5 14.8

22.2 31.7

22.9 10.1

23.5 34.6

23.7 8.2

24.4 6.5

24.9 8.7

25.2 6.4

25.9 14.7

26.4 48.6

26.7 12.5

27.5 15.8

27.9 6.1

28.3 10.5

29.5 15.5

29.8 12.6

30.2 12.1

30.9 3.4

31.7 16.4

33.3 17.2

34.0 14.9

35.8 4.8

37.5 3.2

38.6 5.3

Primeri 8 i 9

2-({4-[2-(4-cijano-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-1-[(2S)-oksetan -2-ilmetil]-1H-benzimidazol-6-karboksilna kiselina, DIAST-X1 (8) [od C56]; i 2-({4-[2-(4-cijano-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-1-[(2S)-oksetan-2-ilmetil]-1H-benzimidazol-6-karboksilna kiselina, DIAST-X2 (9) [od C57]

[0344]

1

Korak 1. Sinteza p-toluensulfonatne soli 3-fluoro-4-[2-metil-4-(piperidin-4-il)-1,3-benzodioksol-2-il]benzonitrila (C54).

[0345] Rastvoru P4 (161 mg, 0.367 mmol) u etil acetatu (8 mL) dodata je p-toluensulfonska kiselina (158 mg, 0.919 mmol), i reakciona smeša je mešana na 65 °C tokom 16 sati. Uklanjanje rastvarača in vacuo dalo je C54 kao tamno žuta guma; ovaj materijal je prenet direktno u sledeći korak.

Korak 2. Sinteza metil 2-({4-[2-(4-cijano-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-1- [(2S)-oksetan-2-ilmetil]-1H-benzimidazol-6-karboksilata (C55).

[0346] Rastvoru C54 (iz prethodnog koraka; ≤0.367 mmol) u acetonitrilu (3.7 mL) je dodat

1

kalijum karbonat (219 mg, 1.58 mmol), a zatim P15 (115 mg, 0.390 mmol). Reakciona smeša je mešana na 50 °C tokom 20 sati, nakon čega je razblažena etil acetatom (10 mL) i filtrirana. Filter kolač je ispran etil acetatom (3 × 10 mL), a kombinovani filtrati su koncentrovani in vacuo. Silika gel hromatografija (Gradijent: 0% do 100% etil acetata u petrolej etru) je dala C55 kao tamnožuto ulje. Prinos: 191.0 mg, 0.320 mmol, 87% u 2 koraka. LCMS m/z 619.1 [M+Na<+>].

Korak 3. Izolovanje metil 2-({4-[2-(4-cijano-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-1- [(2S)-oksetan-2-ilmetil]-1H-benzimidazol-6-karboksilata, ENT-1 (C56) i metil 2-({4-[2-(4-cijano-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-1-[(2S)-oksetan-2-ilmetil]-1H-benzimidazol-6-karboksilata, ENT-2 (C57).

[0347] Razdvajanje C55 (191 mg, 0.320 mmol) u njegove sastavne stereoizomere na dioksolanu sprovedeno je preko SFC [Kolona: Chiral Technologies ChiralCel OD, 5 um; Mobilna faza: 3:2 ugljen-dioksid / 2-propanol]. Prvi izomer koji se eluira, dobijen kao bela guma, označen je kao ENT-1 (C56). Prinos: 114 mg; ovaj materijal je sadržao rezidualni etanol. LCMS m/z 597.1 [M+H]<+>. Retenciono vreme 4.40 minuta (Kolona: Chiral Technologies ChiralCel OD-3, 4.6 × 100 mm, 3 µm; Mobilna faza: ugljen-dioksid; Mobilna faza B: 2-propanol koji sadrži 0.05% dietilamina; Gradijent: 5% do 40% B preko 4.5 minuta, zatim držano na 40% B tokom 2.5 minuta; brzina protoka: 2.8 mL/min).

[0348] Izomer drugog eluiranja je ponovo prečišćen korišćenjem SFC [Kolona: Chiral Technologies ChiralCel OD, 5 um; Mobilna faza: 55:45 ugljen-dioksid / (2-propanol koji sadrži 0.1% amonijum hidroksida)], da bi se dobila bezbojna guma koja je označena kao ENT-2 (C57). Prinos: 50 mg, 83.8 umol, 26%. LCMS m/z 597.1 [M+H]<+>. Retenciono vreme 4.74 minuta (analitički uslovi identični onima koji se koriste za C56).

Korak 4. Sinteza 2-({4-[2-(4-cijano-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-1-[ (2S)-oksetan-2-ilmetil]-1H-benzimidazol-6-karboksilne kiseline, DIAST-X1 (8) [od C56].

[0349] Rastvor C56 (114 mg, 0.191 mmol) u acetonitrilu (10 mL) tretiran je vodenim rastvorom 1,3,4,6,7,8-heksahidro-2H-pirimido[1,2-a]pirimidin (0.97 M, 394 uL, 0.382 mmol), i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 23 sata. Dodato je više vodenog rastvora 1,3,4,6,7,8-heksahidro-2H-pirimido[1,2-a]pirimidina (0.97 M, 394 uL, 0.382 mmol)

14

i mešanje je nastavljeno tokom 6 sati, nakon čega je pH pažljivo podešen na 7 do 8 dodavanjem 1 M hlorovodonične kiseline. Nakon uklanjanja isparljivih materija in vacuo, prečišćavanje je izvedeno korišćenjem HPLC reverzne faze (kolona: Agela Durashell C18, 5 µm; Mobilna faza A: 0.05% amonijum hidroksida u vodi; Mobilna faza B: acetonitril; Gradijent: 30% do 50% B) da bi se obezbedilo 8 kao bela čvrsta supstanca. Prinos: 22.2 mg, 38.1 umol, 20%. LCMS m/z 583.3 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4): δ 8.19 (d, J = 1.4 Hz, 1H), 7.94 (dd, J = 8.4, 1.5 Hz, 1H), 7.77 (dd, J = 7.7, 7.7 Hz, 1H), 7.64 (dd, J = 10.6, 1.6 Hz, 1H), 7.58 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.57 (dd, J = 8.0, 1.5 Hz, 1H), 6.81 - 6.75 (m, 1H), 6.75 - 6.68 (m, 2H), 5.34 - 5.25 (m, 1H), 4.73 (dd, J = 15.3, 3.0 Hz, 1H), 4.67 - 4.59 (m, 1H), 4.49 (dt, J = 9.2, 6.0 Hz, 1H), 3.96 (AB kvartet, JAB= 13.7 Hz, ΔνAB= 41.2 Hz, 2H), 3.06 (br d, J = 11Hz, 1H), 2.95 (br d, J = 11Hz, IH), 2.87 - 2.76 (m, 1H), 2.71 (tt, J = 12.0, 3.9 Hz, IH), 2.61 - 2.50 (m, IH), 2.36 - 2.21 (m, 2H), 2.06 (s, 3H), 1.95 - 1.72 (m, 4H).

Korak 5. Sinteza 2-({4-[2-(4-cijano-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-1-[(2S)-oksetan-2-ilmetil}-1H-benzimidazol-6-karboksilne kiseline, DIAST-X2 (9) [od C57].

[0350] Rastvor C57 (50 mg, 84 µmol) u acetonitrilu (10 mL) tretiran je vodenim rastvorom 1,3,4,6,7,8-heksahidro-2H-pirimido[1,2-a]pirimidin (0.97 M; 173 uL, 0.168 mmol). Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi (oko 25 °C) 16 sati, nakon čega je dodata dodatna količina vodenog rastvora 1,3,4,6,7,8-heksahidro-2H-pirimido[1,2-a]pirimidina (0.97 M; 173 uL, 0.168 mmol) i mešanje je nastavljeno na 25 °C tokom 29 sati. Reakciona smeša je zatim pažljivo podešena na pH 7 do 8 dodavanjem 1 M hlorovodonične kiseline; dobijena smeša je koncentrovana in vacuo i podvrgnuta HPLC reverzne faze (kolona: Xtimate<™>C18, 5 µm; Mobilna faza A: 0.05% amonijum hidroksida u vodi; Mobilna faza B: acetonitril; Gradijent: 27% do 67% B), dala je 9 kao belu čvrstu supstancu. Prinos: 18.0 mg, 30.9 umol, 37%. LCMS m/z 583.3 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 8.36 - 8.33 (m, IH), 7.97 (dd, J = 8.5, 1.5 Hz, 1H), 7.78 (dd, J = 7.7, 7.7 Hz, 1H), 7.70-7.63 (m, 2H), 7.57 (dd, J = 8.0, 1.5 Hz, 1H), 6.83 - 6.76 (m, 1H), 6.76 - 6.71 (m, 2H), 5.34 - 5.25 (m, 1H), 4.95 - 4.85 (m, 1H, pretpostavljeno; delimično zal. pik), 4.73 (dd, komponenta ABX obrasca, J = 15.3, 2.7 Hz, 1H), 4.68 - 4.60 (m, 1H), 4.50 (dt, J = 9.2, 6.0 Hz, 1H), 4.02 (AB kvartet, JAB= 13.8 Hz, ΔνAB= 48.2 Hz, 2H), 3.13 (br d, J = 11Hz, 1H), 3.01 (br d, J = 11.5 Hz, 1H), 2.89 - 2.78 (m, 1H), 2.78 - 2.68 (m, 1H), 2.60 - 2.50 (m, 1H), 2.45 - 2.30 (m, 2H), 2.07 (br s, 3H) 2.00-1.86 (m, 2H), 1.83 (m, 2H).

Primer 10

2-({4-[2-(5-hloropiridin-2-il)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il}piperidin-1-il}metil)-1-[(2S)-oksetan-2-ilmetil]-1H-benzimidazol-6-karboksilna kiselina, DIAST-X2 (10) [od P9]

[0351]

Korak 1. Sinteza p-toluensulfonatna soli 5-hloro-2-[2-metil-4-(piperidin-4-il)-1,3-benzodioksol-2-il]piridina, ENT-X2, (C58) [od P9].

[0352] Rastvor P9 (228 mg, 0.529 mmol) u etil acetatu (2.7 mL) je tretiran sa monohidratom p-toluensulfonske kiseline (116 mg, 0.610 mmol), i reakciona smeša je zagrevana na 50 °C tokom 16 sati. Zatim je ostavljeno da se meša na sobnoj temperaturi preko noći, nakon čega je talog sakupljen filtracijom i ispran smešom etil acetata i heptana (1:1, 2 × 20 mL) da bi se dobilo C58 kao bela čvrsta supstanca. Prinos: 227 mg, 0.451 mmol, 85%. LCMS m/z 331.0◆ [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8<.>73 (d, J = 2.4 Hz, IH), 8.61 - 8.46 (br m, 1H), 8.35 - 8.18 (br m, 1H), 8.02 (dd, J = 8.5, 2.5 Hz, 1H), 7.64 (d, J = 8.5 Hz, IH), 7.47 (d, J = 7.8, 2H), 7.11 (d, J = 7.8 Hz, 2H), 6.89 - 6.81 (m, 2H), 6.72 (pentet, J = 4.0 Hz, 1H), 3.45 -3.27 (m, 2H, pretpostavljeno; delimično zaklonjeno pikom vode), 3.10 - 2.91 (m, 3H), 2.28 (s, 3H), 2.02 (s, 3H), 1.907 - 1.87 (m, 4H).

Korak 2. Sinteza metil 2-({4-[2-(5-hloropiridin-2-il)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-1- [(2S)-oksetan-2-ilmetil]-1H-benzimidazol-6-karboksilata, DIAST-Y2 (C59) [od P9].

[0353] N,N-Diizopropiletilamin (0.234 mL, 1.34 mmol) je dodat u rastvor C58 (225 mg, 0.447 mmol) u acetonitrilu (2.2 mL). Nakon što je ova smeša mešana 5 minuta na 45 °C, P15 (120 mg, 0.407 mmol) je dodato i mešanje je nastavljeno na 45 °C tokom 16 sati, nakon čega je ponovo dodat P15 (11 mg, 37 umol). Posle dodatna 3 sata mešanja, reakciona smeša je tretirana vodom (2.5 mL) i ostavljena da se ohladi do sobne temperature. Dodato je još vode (5 mL) i dobijena suspenzija je mešana 2 sata, nakon čega je čvrsta supstanca sakupljena filtracijom i isprana smešom acetonitrila i vode (15:85, 3 × 5 mL) da bi se dobilo C59 kao prljavo bela čvrsta supstanca (252 mg). Ovaj materijal je sadržao nešto N,N-diizopropiletilamina na osnovu<1>H NMR analize, i direktno je prenet na sledeći korak. LCMS m/z 589.1◆ [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) 8<.>61 (d, J = 2.3 Hz, IH), 8.18 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 7.96 (dd, J = 8.5, 1.5 Hz, 1H), 7.74 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.67 (dd, komponenta ABX obrasca, J = 8.4, 2.4 Hz, 1H), 7.59 - 7.51 (m, 1H), 6.82 - 6.75 (m, 1H), 6.74 - 6.66 (m, 2H), 5.28 - 5.19 (m, 1H), 4.75 (dd, komponenta ABX obrasca, J = 15.3, 6.0 Hz, 1H), 4.68 (dd, komponenta ABX obrasca, J = 15.3, 3.4 Hz, 1H), 4.67 - 4.58 (m, 1H), 4.41 (ddd, J = 9.1, 5.9, 5.9 Hz, 1H), 3.95 (s, 2H), 3.95 (s, 3H), 3.07 - 2.89 (m, 2H), 2.81 - 2.69 (m, 2H), 2.53 -2.41 (m, 2H) ), 2.37-2.22 (m, 2H), 2.05 (s, 3H), 1.93-1.74 (m, 4H).

Korak 3. Sinteza 2-({4-[2-(5-hloropiridin-2-il)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-1-[ (2S)-oksetan-2-ilmetil]-1H-benzimidazol-6-karboksilne kiseline, DIAST-X2 (10) [od P9].

[0354] Suspenzija C59 (iz prethodnog koraka; 250 mg, ≤0.407 mmol) u metanolu (2 mL) je zagrejana do 40°C, nakon čega je dodat vodeni rastvor natrijum hidroksida (1 M; 0.81 mL, 0.81 mmol). Posle 17 sati, reakciona smeša je ostavljena da se ohladi do sobne temperature, a pH je podešen na 5 do 6 sa 1 M vodenim rastvorom limunske kiseline. Dobijena smeša je razblažena vodom (2 mL), mešana 2 sata i ekstrahovana etil acetatom (3 × 5 mL); kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (5 mL), osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani in vacuo da bi se dobila penasta čvrsta supstanca. Ovaj materijal je stavljen u smešu etil acetata i heptana (1:1, 4 mL), zagrejan na 50 °C, a zatim ostavljen da se ohladi i meša preko noći. Filtracija je dala 10 kao

14

belu čvrstu supstancu. Prinos: 179 mg, 0.311 mmol, 76% u 2 koraka. LCMS m/z 575.1◆ [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12<.>73 (br s, IH), 8.71 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.27 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 8.00 (dd, J = 8.5, 2.5 Hz, 1H), 7.80 (dd, J = 8.4, 1.6 Hz, 1H), 7.64 (d, J = 8.4 Hz, IH), 7.60 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 6.83 - 6.72 (m, 3H), 5.14 - 5.06 (m, 1H), 4.77 (dd, komponenta ABX obrasca, J = 15.2, 7.2 Hz, 1H), 4.63 (dd, komponenta ABX obrasca, J = 15.2, 2.8 Hz, 1H), 4.50 - 4.42 (m, 1H), 4.37 (ddd, J = 9.0, 5.9, 5.9 Hz, 1H), 3.85 (AB kvartet, JAB= 13.6 Hz, ΔνAB= 71.5 Hz, 2H), 3.01 (br d, J = 11.2 Hz, 1H), 2.85 (br d, J = 11.2 Hz, 1H), 2.74-2.57 (m, 2H), 2.47-2.38 (m, 1H), 2.29-2.10 (m, 2H), 2.01 (s, 3H), 1.81-1.64 (m, 4H).

Sinteza 10S-1. Sinteza Primera 10, 1,3-dihidroksi-2-(hidroksimetil)propan-2-aminijum soli

Sinteza 1,3-dihidroksi-2-(hidroksimetil)propan-2-aminijum 2-({4-[2-(5-hloropiridin-2-il)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il ]piperidin-1-il)metil)-1-[(2S)-oksetan-2-ilmetil]-1H-benzimidazol-6-karboksilata, DIAST-X2 (10.1,3-dihidroksi-2-(hidroksimetil)propan-2-aminijum so) [od P9].

[0355]

[0356] Smeša 10 (1.54 g, 2.68 mmol) u tetrahidrofuranu (10 mL) tretirana je vodenim rastvorom 2-amino-2-(hidroksimetil)propan-1,3-diola (Tris, 1.0 M; 2.81 mL, 2.81 mmol). Posle 24 sata, reakciona smeša je koncentrovana in vacuo sa etanolom (2 × 50 mL). Ostatak je tretiran etanolom (15 mL). Posle mešanja tokom 20 sati, čvrsta supstanca je sakupljena filtracijom i isprana hladnim etanolom (5 mL) da bi se dobila 10.1,3-dihidroksi-2-(hidroksimetil)propan-2-aminijum so kao bela čvrsta supstanca. Prinos: 1.41 g, 2.03 mmol, 76%. LCMS m/z 575.3◆ [M+H]<+>.<1>H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 8<.>71 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.21 (br s, 1H), 8.00 (dd, J = 8.5, 2.5 Hz, 1H), 7.79 (br d, J = 8.4 Hz, IH), 7.60 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.57 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.82 - 6.73 (m, 3H), 5.13 - 5.07 (m, 1H), 4.74 (dd, J = 15.3, 7.2 Hz, 1H), 4.61 (dd, J = 15.3, 2.9 Hz, 1H), 4.49 - 4.43 (m, 1H), 4.37 (ddd, J = 9.0, 5.9, 5.9 Hz, 1H), 3.93 (d, J = 13.6 Hz, IH), 3.75 (d, J = 13.5 Hz, 1H), 3.01 (br d, J = 11.3 Hz, 1H), 2.86 (br d, J = 11.4 Hz, 1H), 2.73-2.59 (m, 2H), 2.48-2.37 (m, 1H), 2.27-2.20 (m, 1H), 2.19-2.12 (m, 1H), 2.01 (s, 3H), 1.82-1.66 (m, 4H). mp = 184 °C do 190 °C.

Sinteza 10S-2. Alternativna sinteza Primera 10, 1,3-dihidroksi-2-(hidroksimetil)propan-2-aminijum soli

[0357] Smeša 10 (8.80 gm, 15.3 mmol) u 2-metiltetrahidrofuranu (90 ml) je koncentrovana in vacuo na rotacionom uparivaču, u vodenom kupatilu na 37°C, da se smanji ukupna zapremina na ~54 ml. U smešu je dodat izopropanol (90 ml), a zatim ponovo koncentrovana rezultujuća smeša do zapremine od ~54 ml. U smešu je dodat izopropanol (135 ml), nakon čega je usledilo dodavanje vodenog tris amina (3M; 5.0 ml, 0.98 ekviv.). Dobijena smeša/rastvor je mešana na sobnoj temperaturi; i čvrsti talog je počeo da se formira u roku od ~15 min. Smeša je zatim mešana na sobnoj temperaturi dodatnih 5 h. Dobijena smeša/gusta suspenzija je ohlađena na 0°C i ohlađena suspenzija je mešana još oko 2 h. Suspenzija je filtrirana i isprana hladnim izopropanolom (3 × 15 ml). Sakupljena čvrsta supstanca je ostavljena da se osuši na vazduhu na levku za sakupljanje oko 90 min, a zatim je prebačena u vakuum peć na sušenje preko noći. Posle ~16 sati na 50°C/23inHg vakuuma (sa blagim ispuštanjem azota) 8.66 gm 10.1,3-dihidroksi-2-(hidroksimetil)propan-2-aminijum so je dobijeno kao bela čvrsta supstanca; 99.8 % površine prema UPLC (prinos: 12.5 mmol, 81%). Dobijeni su LCMS i<1>H NMR podaci, koji su suštinski isti kao oni u Sintezi 10S-1 prikazanoj prethodno.

Pribavljanje podataka difrakcije rendgenskih zraka praha (PKSRD) za formu A Primera 10, 1,3-dihidroksi-2-(hidroksimetil)propan-2-aminijum so (takođe poznata kao Forma A anhidrovane tris soli jedinjenja Primera 10)

[0358] Bela čvrsta supstanca tris soli iz Primera 10 (iz obe Sinteze 10S-1 i Sinteze 10S-2) je podvrgnuta PXRD analizi i utvrđeno je da je kristalni materijal (koji je označen kao Forma A). Analiza difrakcije rendgenskih zraka praha je sprovedena korišćenjem Bruker AXS D8 Endeavour difraktometra opremljenog Cu izvorom zračenja. Prorez za divergenciju je postavljen na 15 mm neprekidnog osvetljenja. Difraktovano zračenje je detektovano PSD-

14

Lynx Eye detektorom, sa otvorom detektora PSD postavljenim na 2.99 stepeni. Napon i amperaža rendgenske cevi su podešeni na 40 kV i 40 mA respektivno. Podaci su prikupljeni na talasnoj dužini Cu (CuKα= 1.5418 A) u Theta-Theta goniometru od 3.0 do 40.0 stepeni 2-Theta koristeći veličinu koraka od 0.01 stepen i vreme koraka od 1.0 sekunde. Ekran protiv raspršivanja je postavljen na fiksno rastojanje od 1.5 mm. Uzorci su rotirani tokom prikupljanja podataka. Uzorci su pripremljeni tako što su stavljeni u silikonski držač uzoraka sa niskom pozadinom i rotirani tokom sakupljanja. Podaci su prikupljeni korišćenjem Bruker DIFFRAC Plus softvera, a analiza je obavljena pomoću EVA diffract plus softvera. PXRD datoteka sa podacima nije obrađena pre pretraživanja pikova. Koristeći algoritam za pretragu pikova u EVA softveru, pikovi izabrani sa graničnom vrednošću od 1 korišćeni su za preliminarne dodele pikova. Da bi se osigurala validnost, prilagođavanja su napravljena ručno; izlaz automatizovanih dodela je vizuelno proveren, a pozicije pikova su podešene na maksimum. Generalno su birani pikovi sa relativnim intenzitetom od ≥ 3%. Tipično, nisu izabrani pikovi koji nisu rešeni ili su bili u skladu sa šumom. Tipična greška povezana sa pozicijom pika od PXRD navedenog u USP bila je do /- 0.2° 2-Theta (USP-941). Lista difrakcionih pikova izraženih u smislu stepena 2θ i relativnih intenziteta sa relativnim intenzitetom od ≥ 3.0% PXRD iz uzorka dobijenog pomoću Synthesis 10S-2 je data iznad u Tabeli X2.

Tabela Ks2

Ugao (2 teta) Relativni intenzitet (%)

3.9 18.4

7.7 36.3

8.1 10.4

8.7 3.4

10.2 4.1

14.6 5.8

15.2 30.1

15.7 45.5

16.0 31.3

16.8 8.7

17.6 86.0

19.2 46.6

14

19.8 31.4

20.2 25.0

21.1 100.0

21.4 40.2

22.2 37.0

23.0 19.8

24.3 43.0

25.0 9.9

26.0 15.8

27.3 35.3

28.2 14.1

29.3 19.7

29.8 11.7

31.6 9.3

32.8 6.0

34.0 14.4

34.5 12.1

35.4 3.0

36.5 4.1

Primer 11

Format so 1-(2-metoksietil)-2-({4-[2-metil-2-(piridin-3-il)-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-1H- benzimidazol-6-karboksilne kiseline (11)

[0359]

14

Cela ova sintetička sekvenca je izvedena u formatu biblioteke.

Korak 1. Sinteza metil 1-(2-metoksietil)-2-({4-[2-metil-2-(piridin-3-il)-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il }metil)-1H-benzimidazol-6-karboksilata (C60).

[0360] Smeša P14 (44 mg, 100 µmol) i 3-etinilpiridina (21 mg, 200 µmol) u toluenu (800 µL) tretirani su natrijum bikarbonatom (100 µmol), a zatim trirutenijum dodekakarbonilom (6 mg, 9 µmol). Reakciona bočica je zatim zatvorena i šejkirana na 120 °C tokom 16 sati. Uklanjanje rastvarača pomoću Speedvac<®>koncentratora dalo je C60, koji je direktno preneto u sledeći korak.

Korak 2. Sinteza Format soli 1-(2-metoksietil)-2-({4-[2-metil-2-(piridin-3-il)-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il} metil)-1H-benzimidazol-6-karboksilne kiseline (11).

[0361] Vodeni rastvor natrijum hidroksida (1.0 M; 200 µL, 200 µmol) je dodat u rastvor C60 (iz prethodnog koraka, ≤100 µmol) u smeši metanola (400 µL) i tetrahidrofurana (400 µL). Reakciona bočica je zatvorena i šejkirana na 80 °C tokom 16 sati, nakon čega je reakciona smeša uparena korišćenjem Speedvac<®>koncentratora, i prečišćen korišćenjem HPLC reverzne faze (kolona: Agela Durashell C18, 5 µm; Mobilna faza A: 0.225% mravlja kiselina u vodi; Mobilna faza B: acetonitril; Gradijent: 12% do 52% B) da bi se dobilo 11. Prinos: 2.2 mg, 4.2 µmol, 4% u 2 koraka. LCMS m/z 529 [M+H]<+>. Retenciono vreme: 2.47 minuta (Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 × 50 mm, 5 µm; Mobilna faza A: 0.0375% trifluorosirćetne kiseline u vodi; Mobilna faza B: 0.01875% trifluorosirćetne kiseline u acetonitrilu; Gradijent: 5% B 1% preko 0.6 minuta; 5% do 100% B tokom 3.4 minuta; Brzina protoka: 0.8 mL/min).

14

Primer 12

2-({4-[2-(4-hloro-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il)metil)-1-[2-(dimetilamino) etil]-1H-benzimidazol-6-karboksilna kiselina (12)

[0362]

Cela ova sintetička sekvenca je izvedena u formatu biblioteke.

Korak 1. Sinteza metil 3-{[2-(dimetilamino)etil]amino}-4-nitrobenzoata (C61).

[0363] Metil 3-fluoro-4-nitrobenzoat (0.2 M rastvor u N,N-dimetilformamid; 1 mL, 200 µmol) je tretiran sa N,N-dimetiletan-1,2-diaminom (18 mg, 200 µmol) i N,N-diizopropiletilaminom (78 mg, 600 µmol). Reakciona bočica je zatim zatvorena i šejkirana na 50 °C tokom 16 sati, nakon čega je reakciona smeša uparena korišćenjem Speedvac<®>koncentratora da bi se dobilo C61. Ovaj materijal je prenet direktno u sledeći korak.

Korak 2. Sinteza metil 4-amino-3-{[2-(dimetilamino)etil]amino}benzoata (C62).

14

[0364] Cink u prahu je aktiviran korišćenjem razblažene hlorovodonične kiseline. Dodat je metanol (2 mL). C61 (iz prethodnog koraka, ≤200 µmol), nakon čega vodeni rastvor kalcijum hlorida (1.0 M; 200 µL, 200 µmol) i aktivirani cink u prahu (130 mg, 2.0 mmol). Reakciona bočica je zatvorena i šejkirana na 70 °C tokom 16 sati, nakon čega je reakciona smeša filtrirana. Filtrat je koncentrovan korišćenjem Speedvac<®>koncentratora, a ostatak je stavljen u vodu (2 mL) i zatim ekstrahovan etil acetatom (2 × 3 mL). Kombinovani organski slojevi su upareni korišćenjem Speedvac<®>koncentratora da bi se dobilo C62 (procenjeno na 150 µmol), koji je direktno korišćen u sledećem koraku.

Korak 3. Sinteza metil 4-[({4-[2-(4-hloro-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}acetil)amino] -3-{[2-(dimetilamino)etil]amino}benzoata (C63).

[0365] Jedinjenje P10 (41 mg, 100 umol) je dodato u C62 (iz prethodnog koraka, približno 150 µmol), i smeša je tretirana an N,N-dimetilacetamid rastvorom 2-hidroksipiridin 1-oksida i 1-[3-(dimetilamino)propil]-3-etilkarbodiimid hidrohlorida (0.1 M u svakom; 1 mL, 100 µmol svakog). Zatim je dodat N,N-diizopropiletilamin (39 mg, 300 umol), a reakciona bočica je zatvorena i šejkirana na 50 °C tokom 16 sati. Reakciona smeša je zatim koncentrovana korišćenjem Speedvac<®>koncentratora i prečišćena korišćenjem preparativne tankoslojne hromatografije da bi se obezbedio C63, koji je prenet direktno na sledeći korak.

Korak 4. Sinteza metil 2-({4-[2-(4-hloro-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-1- [2-(dimetilamino)etil]-1H-benzimidazol-6-karboksilata (C64).

[0366] Smeša sirćetne kiseline (500 µL) i C63 (iz prethodnog koraka, ≤100 µmol) je šejkirana u zatvorenoj bočici na 150 °C tokom 2 sata, nakon čega je reakciona smeša uparena pomoću Speedvac<®>koncentratora. Rezultujući C64 je prenet direktno na sledeći korak.

Korak 5. Sinteza 2-({4-[2-(4-hloro-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-1-[ 2-(dimetilamino)etil]-1H-benzimidazol-6-karboksilne kiseline (12).

[0367] Rastvor C64 (iz prethodnog koraka, ≤100 µmol) u etanolu (500 µL) je tretiran vodenim rastvorom litijum hidroksida (2.0 M; 500 µL, 1 mmol), a reakciona smeša je šejkirana na 50 °C tokom 2 sata u zatvorenu bočicu. Nakon što je pH smeše podešen na 7

1

dodavanjem 1.0 M hlorovodonične kiseline, dobijena smeša je koncentrovana korišćenjem Speedvac<®>koncentratora, a zatim prečišćen pomoću HPLC reverzne faze [Kolona: Agela Durashell C18, 5 µm; Mobilna faza A: amonijum hidroksid u vodi (pH 10); Mobilna faza B: acetonitril; Gradijent: 25% do 65% B] da be se dobilo 12. Prinos: 7.0 mg, 12 µmol, 12% u 3 koraka. LCMS m/z 593 [M+H]<+>. Retenciono vreme: 2.45 minuta (Kolona: Vaters KSBridge C18, 2.1 × 50 mm, 5 µm; Mobilna faza A: 0.0375% trifluorosirćetne kiseline u vodi; Mobilna faza B: 0.01875% trifluorosirćetne kiseline u acetonitrilu; Gradijent: 1010% B preko 4.0 minuta; Brzina protoka: 0.8 mL/min).

Primer 13

2-({4-[2-(4-hloro-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-3-(1,3-oksazol -2-ilmetil)-3H-imidazo[4.5-b]piridin-5-karboksilna kiselina (13)

[0368]

Korak 1. Sinteza metil 6-[(1,3-oksazol-2-ilmetil)amino]-5-nitropidin-2-karboksilata (C65).

[0369] Trietilamin (532 mg, 5.26 mmol) je dodat u suspenziju hidrohloridne soli 1-(1,3-

1 1

oksazol-2-il)metanamina (236 mg, 1.75 mmol) i metil 6-hloro-5-nitropiridin-2-karboksilata (386 mg, 1.78 mmol) u tetrahidrofuranu (5 mL). Nakon što je reakciona smeša mešana na 25 °C tokom 14 sati, sipana je u vodu (30 mL) i ekstrahovana dihlorometanom (2 × 50 mL). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko magnezijum sulfata, filtrirani i koncentrovani in vacuo; hromatografija na silika gelu (Gradijent: 0% do 5% metanola u dihlorometanu) dala je C65 kao žutu čvrstu supstancu. Prinos: 310 mg, 1.11 mmol, 63%. LCMS m/z 278.7 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) 58.69 - 8.61 (br m, 1H), 8.58 (d, J = 8.4 Hz, IH), 7.65 (d, J = 0.8 Hz, 1H), 7.46 (d, J = 8.4 Hz, IH), 7.11 (d, J = 1.0 Hz, 1H), 5.07 (d, J = 5.3 Hz, 2H), 3.97 (s, 3H).

[0370] Ostatak ove sintetičke sekvence izveden je u formatu biblioteke.

Korak 2. Sinteza metil 5-amino-6-[(1,3-oksazol-2-ilmetil)amino]piridin-2-karboksilata (C66).

[0371] Vodeni rastvor amonijum hlorida (5.0 M; 400 µL, 2.0 mmol), praćen sa aktiviranim cinkom (131 mg, 2.0 mmol), dodat je u rastvor C65 (56 mg, 200 µmol) u metanolu (2.0 mL). Reakciona bočica je zatim zatvorena i šejkirana na 30 °C tokom 16 sati, nakon čega je reakciona smeša filtrirana. Filtrat je koncentrovan korišćenjem Speedvac<®>koncentratora, zatim pomešan sa vodom (1.0 mL) i ekstrahovan dihlorometanom (3 × 1.0 mL); kombinovani organski slojevi su upareni korišćenjem Speedvac<®>koncentratora da obezbedi C66, koji je direktno prenet u sledeći korak.

Korak 3. Sinteza metil 5-[({4-[2-(4-hloro-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}acetil)amino] -6-[(1,3-oksazol-2-ilmetil)amino]piridin-2-karboksilata (C67).

[0372] Smeša P10 (81 mg, 200 µmol) i C66 (iz prethodnog koraka, ≤200 µmol) je pomešana sa N,N-dimetilacetamidom i zatim tretiran sa N,N-diizopropiletilamin (100 µL, 600 µmol). Rastvor koji sadrži 1-[3-(dimetilamino)propil]-3-etilkarbodiimid hidrohlorid (0.24 M) i dodat je 2-hidroksipiridin 1-oksid (0.1 M) u N,N-dimetilacetamidu (1.0 mL, koji sadrži 240 µmol 1-[3-(dimetilamino)propil]-3-etilkarbodiimid hidrohlorida i 100 µmol 2-hidroksipiridin 1-oksida), a reakciona bočica je zatvorena i šejkirana na 50 °C 16 sati. Isparljive materije su zatim uklonjene pomoću Speedvac<®>koncentratora, a ostatak je podvrgnut preparativnoj tankoslojnoj hromatografiji da bi se dobio C67, koji je prenet direktno na sledeći korak.

1 2

Korak 4. Sinteza metil 2-({4-[2-(4-hloro-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-3- (1,3-oksazol-2-ilmetil)-3H-imidazo[4.5-b]piridin-5-karboksilata (C68).

[0373] Smeša sirćetne kiseline (1.0 mL) i C67 (iz prethodnog koraka, ≤200 µmol) je šejkirana na 150 °C tokom 2 sata, nakon čega je reakciona smeša uparena korišćenjem Speedvac<®>koncentratora. Rezultujući C68 je direktno korišćen u sledećem koraku.

Korak 5. Sinteza 2-({4-[2-(4-hloro-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il)metil)-3-( 1,3-oksazol-2-ilmetil)-3H-imidazo[4.5-b]piridin-5-karboksilne kiseline (13).

[0374] Vodeni rastvor litijum hidroksida (2.0 M; 1.0 mL, 2.0 mmol) je dodat u smešu C68 (iz prethodnog koraka, ≤200 µmol) u tetrahidrofuranu (1.0 mL). Posle dodavanja metanola (500 uL), reakciona bočica je zatvorena i šejkirana na 50 °C tokom 16 sati. Nakon uklanjanja isparljivih materija pomoću Speedvac<®>koncentratora, dodat je dimetil sulfoksid (1.0 mL) i pH je podešen na 7 do 8 koncentrovanom hlorovodoničnom kiselinom. Dobijena smeša je prečišćena korišćenjem HPLC reverzne faze [Kolona: Agela Durashell C18, 5 um; Mobilna faza A: amonijum hidroksid u vodi (pH 10); Mobilna faza B: acetonitril; Gradijent: 24% do 64% B] da bi se dobilo 13. Prinos: 3.9 mg, 6.5 µmol, 3% u 4 koraka. LCMS m/z 604 [M+H]<+>. Retenciono vreme: 3.14 minuta (Kolona: Vaters KSBridge C18, 2.1 × 50 mm, 5 µm; Mobilna faza A: 0.0375% trifluorosirćetne kiseline u vodi; Mobilna faza B: 0.01875% trifluorosirćetne kiseline u acetonitrilu; Gradijent: 5% B 1% preko 0.6 minuta; 5% do 100% B tokom 3.4 minuta; Brzina protoka: 0.8 mL/min).

Primer 14

2-({4-[(2S)-2-(4-hloro-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-1-metil-1H-benzimidazol-6-karboksilna kiselina (14)

[0375]

1

Korak 1. Sinteza metil 2-({4-[(2S)-2-(4-hloro-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-1-metil-1H-benzimidazol-6-karboksilata (C69).

[0376] N,N-Diizopropiletilamin (683 µL, 3.92 mmol), dodat je u smešu P3 (680 mg, 1.31 mmol) u acetonitrilu (5.2 mL); ovo je ostavljeno da se meša 5 minuta na 45 °C, nakon čega je dodat P16 (319 mg, 1.34 mmol). Mešanje je nastavljeno na 45 °C tokom 2.75 sati, a zatim je dodata voda (6 mL) pre nego što je reakciona smeša ostavljena da se ohladi na sobnu temperaturu i mešana 30 minuta. Čvrste materije su sakupljene filtracijom i isprane smešom acetonitrila i vode (1:4, 3 × 5 mL) da bi se dobilo C69 kao bela čvrsta supstanca. Prinos: 635 mg, 1.15 mmol, 88%. LCMS m/z 550.1◆ [M+H]<+>.<1>1H NMR (400 MHz, hloroform-d) 58<.>15 - 8.12 (m, 1H), 7.97 (dd, J = 8.5, 1.6 Hz, IH), 7.74 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.50 (dd, J = 8.2, 8.2 Hz, 1H), 7.16 - 7.07 (m, 2H), 6.79 - 6.73 (m, 1H), 6.72 - 6.65 (m, 2H), 3.98 (s, 3H), 3.96 (s, 3H), 3.88 (s, 2H), 3.04 - 2.93 (m, 2H), 2.76 - 2.66 (m, 1H), 2.37 - 2.25 (m, 2H), 2.04 (br s, 3H), 1.89 - 1.78 (m, 4H) .

Korak 2. Sinteza 2-({4-[(2S)-2-(4-hloro-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il)metil)-1-metil-1H-benzimidazol-6-karboksilne kiseline (14).

[0377] Smeša C69 (600 mg, 1.09 mmol) u metanolu (11 mL) je zagrejana do 45 °C, a zatim je tretirana vodenim rastvorom natrijum hidroksida (1 M; 2.2 mL, 2.2 mmol). Posle 24 sata, reakciona smeša je podešena na pH 5 do 6 dodavanjem vodenog rastvora limunske kiseline (1 M; 1.1 mL), a zatim razblažena vodom (10 mL). Dobijena smeša je ostavljena da se ohladi na sobnu temperaturu i mešana 1 sat, nakon čega je istaložena čvrsta supstanca sakupljena filtracijom i isprana smešom metanola i vode (1:4; 3 × 5 mL). Ovo je dalo 14 kao belu čvrstu supstancu. Prinos: 535 mg, 0.998 mmol, 92%. LCMS m/z 536.1◆ [M+H]<+>.<1>H NMR (400

1 4

MHz, DMSO-d6) δ 8<.>16 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 7.81 (dd, J = 8.4, 1.6 Hz, 1H), 7.64 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.59 - 7.52 (m, 2H), 7.33 (dd, J = 8.3, 2.1Hz, 1H), 6.81 - 6.70 (m, 3H), 3.94 (s, 3H), 3.84 (s, 2H), 3.01 - 2.91 (m, 2H), 2.70 - 2.59 (m, 1H), 2.28-2.16 (m, 2H), 2.02 (s, 3H), 1.73 (m, 4H).

Primeri 15 i 16

trifluoroacetatna so 2-{6-[2-(4-hloro-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]-6-azaspiro[2,5]okt-1-il}-1-(2 -metoksietil)-1H-benzimidazol-6-karboksilna kiselina, DIAST-X1 (15) [od P18 preko C71]; i trifluoroacetatna so 2-{6-[2-(4-hloro-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]-6-azaspiro[2. 5]okt-1-il}-1-(2-metoksietil)-1H-benzimidazol-6-karboksilna kiselina, DIAST-X2, (16) [od P18 preko C72]

[0378]

1

Korak 1. Sinteza metil 2-{6-[2-(4-hloro-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]-6-azaspiro[2,5]okt-1-il }-1-(2-metoksietil)-1H-benzimidazol-6-karboksilata (C70) [od P18].

[0379] Smeša P18 (240 mg, 0.699 mmol), C4 (275 mg, 0.800 mmol), cezijum karbonata (455 mg, 1.40 mmol), tris(dibenzilidenaceton)dipaladijuma(0) (40.0 mg, 43.7 µmol) i 1,1’-binaftalen-2.2'-diilbis(difenilfosfana) (BINAP; 52.2 mg, 83.8 µmol) u toluenu (5 mL) je degazirano azotom tokom 5 minuta i zatim mešano na 90 °C tokom 16 sati. Reakciona smeša je filtrirana, a filtrat je koncentrovan in vacuo; preparativna tankoslojna hromatografija (eluent: 1:1 petrol etar/etil acetat) dala je C70, smešu dijastereomera, kao žuto ulje. Prinos: 165 mg, 0.272 mmol, 39%. LCMS m/z 628.1◆ [M+Na<+>].

1

Korak 2. Izolovanje metil 2-{6-[2-(4-hloro-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]-6-azaspiro[2,5]okt-1-il }-1-(2-metoksietil)-1H-benzimidazol-6-karboksilata, DIAST-Y1 (C71) [od P18]; i metil 2-{6-[2-(4-hloro-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]-6-azaspiro[2.5]okt-1-il)-1-( 2-metoksietil)-1H-benzimidazol-6-karboksilata, DIAST-Y2 (C72) [od P18].

[0380] Razdvajanje stereoizomera na dioksolanu u C70 (165 mg, 0.272 mmol) izvedeno je korišćenjem SFC [Kolona: Chiral Technologies Chiralpak AD, 10 µm; Mobilna faza: 65:35 ugljen-dioksid / (etanol koji sadrži 0.1% amonijum hidroksida)]. Prvi izomer koji eluira je označen kao DIAST-Y1 (C71), a drugi izomer koji eluira kao DIAST-Y2 (C72); oba su izolovana kao bele čvrste supstance.

C71 Prinos: 55.0 mg, 90.7 umol, 33%. LCMS m/z 605.9◆ [M+H]<+>. Retenciono vreme 4.47 minuta (Kolona: Chiral Technologies Chiralpak AD-3, 4.6 × 100 mm, 3 µm; Mobilna faza: ugljen-dioksid; Mobilna faza B: etanol koji sadrži 0.05% dietilamina; Gradijent: 5% do 40% B tokom 4.5 minuta , zatim držan na 40% B tokom 2.5 minuta; Brzina protoka: 2.8 mL/min).

C72 Prinos: 58.0 mg, 95.7 umol, 35%. LCMS m/z 628.0◆ [M+Na<+>]. Retenciono vreme 4.88 minuta (analitički uslovi identični onima koji se koriste za C71).

Korak 3. Sinteza trifluoroacetatne soli 2-{6-[2-(4-hloro-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]-6-azaspiro[2,5]okt-1-il} -1-(2-metoksietil)-1H-benzimidazol-6-karboksilne kiseline, DIAST-X1, (15) [od P18 preko C71].

[0381] Rastvoru C71 (55.0 mg, 90.7 umol) u smeši metanola (2.0 mL) i tetrahidrofurana (1.0 mL) dodat je vodeni rastvor natrijum hidroksida (3 M; 1.0 mL, 3.0 mmol). Nakon što je reakciona smeša mešana na 20 °C tokom 2 sata, pH je podešen na 7 dodavanjem 1 M hlorovodonične kiseline, a dobijena smeša je ekstrahovana smešom dihlorometana i metanola (10:1, 3 × 30 mL). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko magnezijum sulfata, filtrirani i koncentrovani in vacuo. HPLC reverzne faze (kolona: Boston Green ODS, 5 µm; Mobilna faza A: 0.1% trifluorosirćetne kiseline u vodi; Mobilna faza B: acetonitril; Gradijent: 10% do 95% B) dala je 15 kao belu čvrstu supstancu. Prinos: 35.8 mg, 50.7 umol, 56%. LCMS m/z 592.3◆ [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 8<.>46 (s, IH), 8.21 (d, J = 8.6 Hz, IH), 7.78 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.54 (dd, J = 8.3, 8.3 Hz, 1H), 7.16 - 7.08 (m, 2H), 6.76 (dd, J = 8.2, 8.1Hz, 1H), 6.55 - 6.47 (m, 2H), 4.9 - 4.70 (m, 2H, pretpostavljeno;

1

delimično zaklonjeno pikom vode), 3.82 (t, J = 4.9 Hz, 2H), 3.66 - 3.56 (m, 1H), 3.50 - 3.41 (m, 1H), 3.19 - 3.09 (m, 1H), 3.15 (s, 3H), 3.08 - 2.99 (m, 1H), 2.63 - 2.57 (m, 1H), 2.27 -2.17 (m, 1H), 2.01 (s, 3H), 1.76 - 1.66 (m, 2H), 1.62 - 1.50 (m, 2H), 1.35 - 1.26 (m, 2H) ).

Korak 4. Sinteza trifluoroacetatne soli 2-{6-[2-(4-hloro-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]-6-azaspiro[2,5]okt-1-il} -1-(2-metoksietil)-1H-benzimidazol-6-karboksilne kiseline, DIAST-Y2, (16) [od P18 preko C72].

[0382] Rastvoru C72 (58.0 mg, 95.7 umol) u smeši metanola (2.0 mL) i tetrahidrofurana (1.0 mL) dodat je vodeni rastvor natrijum hidroksida (3 M; 1.0 mL, 3.0 mmol). Nakon što je reakciona smeša mešana na 20 °C tokom 2 sata, pH je podešen na 7 dodavanjem 1 M hlorovodonične kiseline, a dobijena smeša je ekstrahovana smešom dihlorometana i metanola (10:1, 3 × 30 mL). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko magnezijum sulfata, filtrirani i koncentrovani in vacuo. HPLC reverzne faze (kolona: Boston Green ODS, 5 µm; Mobilna faza A: 0.1% trifluorosirćetne kiseline u vodi; Mobilna faza B: acetonitril; Gradijent: 35% do 95% B) dala je 16 kao belu čvrstu supstancu. Prinos: 33.4 mg, 47.3 umol, 49%. LCMS m/z 592.2◆ [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 8<.>53 - 8.50 (m, 1H), 8.25 (dd, J = 8.6, 1.4 Hz, 1H), 7.80 (br d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.57 (dd, J = 8.4, 8.2 Hz, 1H), 7.25 (dd, J = 10.8, 2.0 Hz, 1H), 7.19 (brdd, J = 8.4, 2.1Hz, 1H), 6.77 (dd, J = 8.2, 8.1Hz, 1H), 6.55 - 6.50 (m, 2H), 4.9 - 4.72 (m, 2H, pretpostavljeno; delimično zaklonjeno pikom vode), 3.93 -3.80 (m, 2H), 3.68 - 3.58 (m, 3.58 (m, 2H), 1H), 3.41 - 3.3 (m, 1H, pretpostavljeno; delimično zaklonjen pikom rastvarača), 3.25 (s, 3H), 3.22 - 3.12 (m, 1H), 3.07 - 2.97 (m, 1H), 2.67 (dd, J = 8.3, 5.8 Hz, 1H), 2.28 - 2.17 (m, 1H), 2.01 (d, J = 1.0 Hz, 3H), 1.86-1.71 (m, 2H), 1.69-1.56 (m, 2H), 1.36-1.26 (m, 1H).

Primeri 17 i 18

amonijum 2-({4-[2-(4-hloro-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-1-[(1-etil) -1H-imidazol-5-il)metil]-1H-benzimidazol-6-karboksilat, ENT-1 (17) i amonijum 2-({4-[2-(4-hloro-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-1-[(1 -etil-1H-imidazol-5-il)metil]-1H-benzimidazol-6-karboksilat, ENT-2 (18)

[0383]

1

Korak 1. Sinteza metil 4-[({4-[2-(4-hloro-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}acetil)amino] -3-{[(1-etil-1H-imidazol-5-il)metil]amino}benzoata (C73).

[0384] O-(7-Azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronijum heksafluorofosfat (566 mg, 1.49 mmol) je dodat u smešu P19 (340 mg, 1.24 mmol) u N,N-dimetilformamidu (10 mL), i smeša je mešana na 25 °C 10 minuta. Rastvor P10 (503 mg, 1.24 mmol) i zatim je dodat N,N-diizopropiletilamin (615 µL, 3.53 mmol) u N,N-dimetilformamidu (7.7 mL) i reakciona smeša je mešana na 25 °C tokom 16 sati, nakon čega je sipana u vodu (10 mL) i ekstrahovana etil acetatom (3 × 50 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani uzastopno vodenim rastvorom amonijum hlorida (3 × 20 mL) i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (2 × 20 mL), osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani in vacuo. Nakon prečišćavanja hromatografijom na silika gelu (Gradijent: 0% do 5% metanola u etil acetatu), dobijeno je C73 kao bledo smeđa guma. Prinos: 316 mg, 0.477 mmol, 38%. LCMS m/z 662.2◆ [M+H]<+>.

Korak 2. Sinteza metil 2-({4-[2-(4-hloro-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-1- [(1-etil-1H-imidazol-5-il)metil]-1H-benzimidazol-6-karboksilata (C74).

1

[0385] Rastvor C73 (316 mg, 0.477 mmol) u sirćetnoj kiselini (14 mL) je mešan na 55 °C tokom 16 sati. Rastvarač je uklonjen pod visokim vakuumom, a ostatak je prečišćen preparativnom tankoslojnom hromatografijom (eluent: 10:1 dihlorometan/metanol) da bi se dobilo C74 kao bezbojno ulje. Prinos: 200 mg, 0.310 mmol, 65%. LCMS m/z 644.3◆ [M+H]<+>.

Korak 3. Sinteza amonijuma 2-({4-[2-(4-hloro-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-1- [(1-etil-1H-imidazol-5-il)metil]-1H-benzimidazol-6-karboksilata, ENT-1 (17) i amonijum 2-({4-[2-(4-hloro-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il)metil)-1-[(1 -etil-1H-imidazol-5-il)metil]-1H-benzimidazol-6-karboksilata, ENT-2 (18).

[0386] Smeša C74 (150 mg, 0.233 mmol) i vodeni rastvor natrijum hidroksida (2 M; 233 uL, 0.466 mmol) u smeši metanola (3 mL) i tetrahidrofurana (3 mL) je mešana na 45 °C tokom 16 sati. Nakon što je reakciona smeša podešena na pH 7 dodavanjem 1 M hlorovodonične kiseline, koncentrovana je in vacuo da bi se dobila mešavina 17 i 18. Ovi enantiomeri su razdvojeni preko SFC [Kolona: Chiral Technologies ChiralCel OD, 10 um; Mobilna faza: 1:1 ugljen-dioksid / (etanol koji sadrži 0.1% amonijum hidroksida)]. Enantiomer koji je prvi eluirao je označen kao ENT-1 (17), i enantiomer koji je eluiran drugi kao ENT-2 (18); oba su izolovana kao bele čvrste supstance.

17 Prinos: 45.0 mg, 69.5 umol, 30%. LCMS m/z 630.3◆ [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 8<.>15 (br s, 1H), 8.00 (br d, J = 8.4 Hz, IH), 7.81 (s, IH), 7.72 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.56 (dd, J = 8.3, 8.3 Hz, 1H), 7.28 (dd, J = 10.9, 2.0 Hz, 1H), 7.21 (dd, J = 8.3, 2.1Hz, 1H), 6.77 (dd, komponenta ABC obrasca, J = 8.0, 7.7 Hz, 1H), 6.69 (dd, komponenta ABC obrasca, J = 7.8, 1.2 Hz, 1H), 6.67 - 6.60 (m, 2H), 5.82 (s, 2H), 4.12 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 3.89 (AB kvartet, JAB= 14.3 Hz, ΔνAB= 6.9 Hz, 2H), 3.00 - 2.90 (m, 2H), 2.74 - 2.64 (m, 1H), 2.32 - 2.21 (m, 2H), 2.02 (s, 3H), 1.82 - 1.61 (m, 4H), 1.29 (t, J = 7.3 Hz, 3H). Retenciono vreme 5.66 minuta (Kolona: Chiral Technologies Chiralpak AD-3, 4.6 × 150 mm, 3 µm; Mobilna faza A: ugljen-dioksid; Mobilna faza B: metanol koji sadrži 0.05% dietilamina; Gradijent: 5% do 40% B tokom 5.5 minuta , zatim držan na 40% B tokom 3.0 minuta; Brzina protoka: 2.5 mL/minuti).

18 Prinos: 32.8 mg, 50.7 umol, 22%. LCMS m/z 630.3◆ [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 8<.>15 (s, IH), 8.00 (d, J = 8.5 Hz, IH), 7.81 (s, IH), 7.72 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.56

1

(dd, J= 8.3, 8.3 Hz, 1H), 7.28 (dd, J = 10.9, 2.0 Hz, 1H), 7.21 (dd, J = 8.3, 2.0 Hz, 1H), 6.77 (dd, komponenta ABC obrasca, J = 7.8, 7.8 Hz, 1H), 6.69 (dd, komponenta ABC obrasca, J = 7.9, 1.2 Hz, 1H), 6.67 - 6.60 (m, 2H), 5.82 (s, 2H), 4.12 (q, J = 7.3 Hz, 2H), 3.89 (AB kvartet, JAB= 14.1Hz, ΔνAB= 7.4 Hz, 2H), 3.01 - 2.90 (m, 2H), 2.74 - 2.63 (m, 1H), 2.31 - 2.21 (m, 2H), 2.02 (s, 3H), 1.82 - 1.60 (m, 4H), 1.29 (t, J = 7.3 Hz, 3H). Retenciono vreme 5.34 minuta (analitički SFC uslovi identični onima koji se koriste za 17).

[0387] Jedinjenja navedena u Tabeli 1 su pripremljena korišćenjem postupaka analognih primerima identifikovanim u Tabeli 2 korišćenjem odgovarajućih intermedijera identifikovanih u Tabeli 2. Jedinjenja su prečišćena korišćenjem postupaka koji su ovde razmatrani. Konačna jedinjenja mogu biti izolovana kao neutralne ili kisele ili bazne soli.

Tabela 1. Struktura i IUPAC naziv za Primere 19 - 102

1 1

12

1

14

1

11

12

1 Tabela 2. Način pripreme i fizičko-hemijski podaci za Primere 19 – 102.

1 4

1

11

1. Racemski metil estar [metil 2-({4-[2-(4-hloro-2-fluorofenil)-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-1-(2-metoksietil )-1H-benzimidazol-6-karboksilat] je razdvojen na njegove komponente enantiomere preko SFC [Kolona: Chiral Technologies ChiralCel OD-H, 5 µm; Mobilna faza: 7:3 ugljen-dioksid / (2-propanol koji sadrži 0.1% amonijum hidroksida)]. Prvi eluirani enantiomer, ENT-1 (C76), korišćen je u sintezi Primera 21, i enantiomer koji je eluirao drugi, ENT-2 (C77), pretvoren je u Primer 20. C76 retenciono vreme: 5.72 minuta (Kolona: Chiral Technologies Chiralpak OD-3, 4.6 × 150 mm, 3 µm; Mobilna faza: ugljen-dioksid; Mobilna faza B: 2-propanol koji sadrži 0.05% dietilamina; Gradijent: 5% do 40% B preko 5.5 minuta, zatim držano na 40% B tokom 3.0 minuta; Brzina protoka: 2.5 mL/min). C77 vreme zadržavanja: 6.01 minuta (analitički SFC uslovi identični onima koji se koriste za C76).

2. Metil estar (metil 2-{6-[2-(4-hloro-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]-6-

1 2

azaspiro[2,5]okt-1-il} -1-(2-metoksietil)-1H-benzimidazol-6-karboksilat) dobijen kuplovanjem C4 i P17 je odvojen na svoje sastavne stereoizomere na dioksolanu preko SFC [Kolona: Chiral Technologies Chiralpak AD, 10 µm; Mobilna faza: 65:35 ugljendioksid / (etanol koji sadrži 0.1% amonijum hidroksida)]. Prvi eluirani izomer, DIAST-1 (C78), je pretvoren u Primer 26; ispitivanjem na<1>H NMR podaci, ovaj materijal je bio enantiomer Primer 15. Drugi izomer koji eluira, DIAST-2 (C79), korišćen je u sintezi Primer 25; ispitivanjem na<1>H NMR podaci, ovaj materijal je bio enantiomer Primer 16. C78 vreme zadržavanja: 3.60 minuta (Kolona: Chiral Technologies Chiralpak AD-3, 4.6 × 100 mm, 3 µm; Mobilna faza A: ugljen-dioksid; Mobilna faza B: etanol koji sadrži 0.05% dietilamina; Gradijent: 5% do 40% B preko 45. minuta, zatim držan na 40% B tokom 2.5 minuta; Brzina protoka: 2.8 mL/minuti). C79 vreme zadržavanja: 3.82 minuta (analitički SFC uslovi identični onima koji se koriste za C78).

3. 4-(4-bromo-1,3-benzodioksol-2-il)-3-fluorobenzonitril je pripremljen tretmanom 3-fluoro-4-formilbenzonitrila i 3-bromobenzen-1,2-diola sa p-toluensulfonska kiselina u toluenu, uz uklanjanje vode pomoću Dean-Stark aparata. Ovaj materijal je zatim reagovao sa [1-(tert butoksikarbonil)piperidin-4-il](jodo)cink u prisustvu [1,1’-bis(difenilfosfino)ferocen]dihloropaladijuma(II) i bakar(i) jodida, nakon čega sledi cepanje estra korišćenjem p-toluensulfonske kiseline, da bi se dobio potreban 3-fluoro-4-[4-(piperidin-4-il)-1,3-benzodioksol-2-il]benzonitril.

4. Uslovi za analitičku HPLC. Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 × 50 mm, 5 µm; Mobilna faza A: 0.0375% trifluorosirćetne kiseline u vodi; Mobilna faza B: 0.01875% trifluorosirćetne kiseline u acetonitrilu; Gradijent: 10% do 100% B tokom 4.0 minuta; Brzina protoka: 0.8 mL/min.

5. Uslovi za analitičku HPLC. Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 × 50 mm, 5 µm; Mobilna faza A: 0.0375% trifluorosirćetne kiseline u vodi; Mobilna faza B: 0.01875% trifluorosirćetne kiseline u acetonitrilu; Gradijent: 1% do 5% B tokom 0.6 minuta; 5% do 100% B tokom 3.4 minuta; Brzina protoka: 0.8 mL/min.

6. terc-butil 4-[2-metil-2-(piridin-2-il)-1,3-benzodioksol-4-il]-3,6-dihidropiridin-1(2H)-karboksilat je sintetizovan iz 3-bromobenzen-1,2-diola i 2-etinilpiridina po postupku opisanom za sintezu C12 in Pripremi P7. Naknadna hidrogenacija preko paladijuma na ugljeniku, praćena tretmanom sa hlorovodonikom u etil acetatu, dala je potrebnu hidrohloridnu so 2-[2-metil-4-(piperidin-4-il)-1,3-benzodioksol-2-il]piridina.

7. Racemski metil estar [metil 1-(2-metoksietil)-2-({4-[2-metil-2-(piridin-2-il)-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il }metil)-1H-benzimidazol-6-karboksilat] je razdvojen na

1

njegove komponente enantiomere preko SFC [Kolona: Chiral Technologies Chiralpak AD, 10 µm; Mobilna faza: 65:35 ugljen-dioksid / (etanol koji sadrži 0.1% amonijum hidroksida)]. Prvi eluirani enantiomer ENT-1 (C80) je korišćen u sintezi Primera 90, i enantiomer ENT-2 koji se drugi eluira (C81) je pretvoren u Primer 89. C80 retenciono vreme: 4.11 minuta (Kolona: Chiral Technologies Chiralpak AD-3, 4.6 × 100 mm, 3 µm; Mobilna faza A: ugljen-dioksid; Mobilna faza B: etanol koji sadrži 0.05% dietilamina; Gradijent: 5% do 40% B preko 45. minuta, zatim držan na 40% B tokom 2.5 minuta; Brzina protoka: 2.8 mL/minuti). C81 vreme zadržavanja: 4.62 minuta (analitički SFC uslovi identični onima koji se koriste za C80).

8. Konverzija P8 i P9 do odgovarajućih cijano-supstituisanih derivata je sprovedeno korišćenjem postupaka opisanih za sintezu P4 iz P2 u Pripremi P4.

9. Tretman 1-(4-hloro-2-fluorofenil)etanona sa trimetil ortoformatom i poluensulfonskom kiselinom dala je 4-hloro-1-(1.1-dimetoksietil)-2-fluorobenzen, koji je reagovao sa 3-bromo-6-fluorobenzen-1,2-diolom u prisustvu p-toluensulfonske kiseline da bi se dobio 4-bromo-2-(4-hloro-2-fluorofenil)-7-fluoro-2-metil-1,3-benzodioksol. Ovaj materijal je pretvoren u potrebni terc-butil 4-[2-(4-hloro-2-fluorofenil)-7-fluoro-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-karboksilat korišćenjem postupka opisanog u Pripremi P1 za sintezu P1 iz C2.

10. Razdvajanje stereoizomera na dioksolanu u 96 i 97 je izvedeno korišćenjem SFC [Kolona: Chiral Technologies Chiralpak IG, 5 µm; Mobilna faza: 3:1 ugljen-dioksid / (2-propanol koji sadrži 0.2% amonijum hidroksida)]. Prvi eluirani izomer je označen kao DIAST-1 (96) i drugi eluirani izomer kao DIAST-2 (97).

11. Uslovi za analitički SFC. Kolona: Chiral Technologies Chiralpak IG, 4.6 × 100 mm, 5 µm; Mobilna faza: 7:3 ugljen-dioksid / (2-propanol koji sadrži 0.2% amonijum hidroksida); Brzina protoka: 1.5 mL/min; Povratni pritisak: 150 bar.

12. terc-butil 2-(hlorometil)-1-(1,3-oksazol-2-ilmetil)-1H-benzimidazol-6-karboksilat je sintetisan iz terc-butil 3-fluoro-4-nitrobenzoat i 1-(1,3-oksazol-2-il)metanamin, koristeći postupak opisan za sintezu P11. Naknadna reakcija sa C54 je sprovedena korišćenjem trietilamina da bi se dobio terc-butil 2-({4-[2-(4-cijano-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-1-(1.3-oksazol-2-ilmetil)-1H-benzimidazol-6-karboksilat, koji je razdvojen na komponente enantiomera korišćenjem SFC [Kolona: Chiral Technologies ChiralCel OD-H, 5 µm; Mobilna faza: 55:45 ugljen-dioksid / (etanol koji sadrži 0.1% amonijum hidroksida)]. Prvi eluirani enantiomer ENT-1 (C82) je korišćen u sintezi 99, i enantiomer ENT-2 koji se drugi eluira (C83) je pretvoren u 98.

1 4

C82 retenciono vreme: 1.47 minuta (Kolona: Chiral Technologies Chiralpak OD-3, 4.6 × 50 mm, 3 µm; Mobilna faza: ugljen-dioksid; Mobilna faza B: metanol koji sadrži 0.05% dietilamina; Gradijent: 5% B tokom 0.2 minuta, zatim 5% do 40% B tokom 1.4 minuta, zatim držano na 40% B tokom 1.05 minuta; brzina protoka: 4 mL/min). C83 retenciono vreme: 1.85 minuta (analitički SFC uslovi identični onima koji se koriste za C82).

13. Reakcija 1-bromo-2.3-difluoro-4-nitrobenzena sa bakar(I) cijanidom u 1-metilpirolidin-2-onu na povišenoj temperaturi dala je 2.3-difluoro-4-nitrobenzonitril, koji je podvrgnut tionil hloridu i metanolu da bi se dobio metil 2.3-difluoro-4-nitrobenzoat. Ovaj materijal je pretvoren, korišćenjem C29, do potrebnog metil 2-(hlorometil)-7-fluoro-1-[(2S)-oksetan-2-ilmetil]-1H-benzimidazol-6-karboksilata, postupkom opisanim u Pripremi P11 za sintezu P11 od metil 3-fluoro-4-nitrobenzoata.

14. Neophodan [2-fenil-4-(piperidin-4-il)-1,3-benzodioksol-2-il]metanol je sintetisan iz 2-okso-2-feniletil acetata, analogno postupku opisanom za sintezu C13.

CHO GLP-1R klon H6 - Test 1

[0388] Aktivnost agonista posredovana GLP-1R određena je funkcionalnim testom zasnovanim na ćeliji koristeći HTRF (Homogeneous Time-Resolved Fluorescence) cAMP komplet za detekciju (cAMP HI Range Assay Kit; CisBio cat #62AM6PEJ) koji meri nivoe cAMP u ćeliji. Postupak je kompetitivni imunološki test između prirodnog cAMP koji proizvode ćelije i egzogenog cAMP obeleženog bojom d2. Vezivanje trejsera se vizuelizuje pomoću mAb anti-cAMP obeleženog sa Cryptate. Specifični signal (tj. prenos energije) je obrnuto proporcionalan koncentraciji cAMP u standardnom ili eksperimentalnom uzorku.

[0389] Humana kodirajuća sekvenca GLP-1R (NCBI referentna sekvenca NP_002053.3, uključujući varijantu Gli168Ser koja se javlja u prirodi) je subklonirana u pcDNA3 (Invitrogen) i ćelijska linija koja stabilno eksprimira receptor je izolovana (označena kao klon H6). Analize vezivanja zasićenja (procedura analize filtracije) korišćenjem<125>I-GLP-17-36(Perkin Elmer) je pokazao da plazma membrane izvedene iz ove ćelijske linije izražavaju visoku gustinu GLP-1R (Kd: 0.4 nM, Bmak: 1900 fmol/mg proteina).

[0390] Ćelije su uklonjene iz krioprezervacije, ponovo suspendovane u 40 mL Dulbecco fosfatnog puferovanog rastvora (DPBS - Lonza Cat # 17-512K) i centrifugirane na 800 x g tokom 5 minuta na 22 °C. Ćelijska peleta je zatim ponovo suspendovana u 10 mL medijuma za rast [DMEM/F12 1:1 smeša sa HEPES, L-Gln, 500 mL (DMEM/F12 Lonza Cat # 12-719F), 10% toplotno inaktivirani fetalni goveđi serum (Gibco Cat# 16140-071), 5 mL

1

100XPen-Strep (Gibco Cat # 15140-122), 5 mL 100XL-Glutamina (Gibco Cat # 25030-081) i 500 µg Geneticin (G418) Invitrogen #10131035)]. Uzorak od 1 mL suspenzije ćelija u medijumu za rast je prebrojan na Becton Dickinson ViCell da bi se odredila vitalnost ćelija i broj ćelija po ml. Preostala ćelijska suspenzija je zatim podešena sa medijumom za rast tako da se dobije 2000 vitalnih ćelija po bunarčiću korišćenjem Matrix Combi Multidrop dozatora reagensa, a ćelije su raspoređene u ploču za ispitivanje tretiranu kulturom tkiva sa 384 bunarčića (Corning 3570). Ploča za ispitivanje je zatim inkubirana 48 sati na 37 °C u vlažnoj sredini u 5% ugljen-dioksida.

[0391] Različite koncentracije svakog jedinjenja koje se testira (u DMSO) su razblažene u puferu za ispitivanje (HBSS sa kalcijumom/magnezijumom (Lonza/BioWhittaker cat # 10-527F) /0.1% BSA (Sigma Aldrich cat # A7409-1L)/20 mM HEPES (Lonza/BioWhittaker cat #17-737E) koji sadrži 100 µM 3-izobutil-1-metilksantina (IBMKS; Sigma cat# I5879). Konačna koncentracija DMSO je 1%.

[0392] Posle 48 sati, medijum za rast je uklonjen iz bunarčića ploče za ispitivanje, a ćelije su tretirane sa 20 uL serijski razblaženog jedinjenja u puferu za ispitivanje tokom 30 minuta na 37 °C u vlažnoj sredini u 5% ugljen-dioksida. Posle 30-minutne inkubacije, 10 µL obeleženog d2 cAMP i 10 µL anti-cAMP antitela (oba razređena 1:20 u puferu za lizu ćelija; kako je opisano u protokolu za ispitivanje proizvođača) dodato je u svaki bunarčić na ploči za ispitivanje. Ploče su zatim inkubirane na sobnoj temperaturi i nakon 60 minuta, promene u HTRF signalu su očitane pomoću Envision 2104 multi-label čitača ploča korišćenjem ekscitacije od 330 nm i emisije od 615 i 665 nm. Sirovi podaci su konvertovani u nM cAMP interpolacijom sa cAMP standardne krive (kao što je opisano u protokolu testa proizvođača) i procenat efekta je određen u odnosu na zasićenu koncentraciju potpunog agonista GLP-I7-35(1 µM) uključenog na svaku ploču. EC50određivanja su napravljena na osnovu krive dozaodgovor agonista analiziranih sa programom prilagođavanja krive korišćenjem 4-parametarske logističke jednačine odgovora na dozu.

CHO GLP-1R klon C6 - Test 2

[0393] Aktivnost agonista posredovana GLP-1R određena je funkcionalnim testom zasnovanim na ćelijama koristeći HTRF (Homogeneous Time-Resolved Fluorescence) cAMP komplet za detekciju (cAMP HI Range Assay Kit; Cis Bio cat #62AM6PEJ) koji meri nivoe cAMP u ćeliji. Postupak je kompetitivni imunološki test između prirodnog cAMP koji proizvode ćelije i egzogenog cAMP obeleženog bojom d2. Vezivanje trejsera se vizuelizuje

1

pomoću mAb anti-cAMP obeleženog sa Cryptate. Specifični signal (tj. prenos energije) je obrnuto proporcionalan koncentraciji cAMP u standardnom ili eksperimentalnom uzorku.

[0394] Humana kodirajuća sekvenca GLP-1R (NCBI referentna sekvenca NP_002053.3, uključujući prirodnu varijantu Leu260Phe) je subklonirana u pcDNA5-FRT-TO i klonalna CHO ćelijska linija koja stabilno izražava nisku gustinu receptora je izolovana korišćenjem Flp-In<™>T-Rex<™>System, kako je opisao proizvođač (ThermoFisher). Analize vezivanja zasićenja (procedura analize filtracije) korišćenjem<125>I-GLP-1 (Perkin Elmer) je pokazao da plazma membrane izvedene iz ove ćelijske linije (označene kao klon C6) izražavaju nisku gustinu GLP-1R (Kd: 0.3 nM, Bmax240 fmol/mg proteina), u odnosu na ćelijsku liniju klona H6.

[0395] Ćelije su uklonjene iz krioprezervacije, ponovo suspendovane u 40 mL Dulbecco fosfatnog puferovanog rastvora (DPBS - Lonza Cat # 17-512K) i centrifugirane na 800 x g 5 minuta na 22 °C. DPBS je aspiriran, a ćelijski talog je ponovo suspendovan u 10 mL kompletnog medijuma za rast (DMEM:F12 1:1 smeša sa HEPES, L-Gln, 500 mL (DMEM/F12 Lonza Cat# 12-719F), 10% toplotno inaktivirani fetalni goveđi serum (Gibco Cat# 16140-071), 5 mL 100XPen-Strep (Gibco Cat # 15140-122), 5 mL 100XL-Glutamin (Gibco Cat # 25030-081), 700 µg/mL Hygromicin (Invitrogen Cat# 10687010) i 15 µg/mL Blasticidin (Gibco Cat # R21001). Uzorak od 1 mL ćelijske suspenzije u medijumu za rast je prebrojan na Becton Dickinson ViCell da bi se odredila vitalnost ćelija i preostali broj ćelija. Preostala ćelijska suspenzija je zatim podešena sa medijumom za rast tako da se dobije 1600 održivih ćelija po bunarčiću korišćenjem Matrix Combi Multidrop dozatora reagensa, a ćelije su raspoređene u testnu ploču sa 384 bunarčića tretiranu kulturom tkiva (Corning 3570). Ploča za ispitivanje je zatim inkubirana 48 sati na 37°C u vlažnoj sredini (95% O2, 5% CO2)

[0396] Različite koncentracije svakog jedinjenja koje se testira (u DMSO) su razblažene u puferu za ispitivanje [HBSS sa kalcijumom/magnezijumom (Lonza/BioWhittaker cat. br.10-527F)/0.1% BSA (Sigma Aldrich cat. br. A7409-1L)/20 mM HEPES (Lonza/BioWhittaker cat #17-737E)] koji sadrži 100 µM 3-izobutil-1-metilksantina (IBMX; Sigma cat# I5879). Konačna koncentracija DMSO u smeši pufera jedinjenje/analizi je 1%.

[0397] Posle 48 sati, medijum za rast je uklonjen iz bunarčića ploče za ispitivanje, a ćelije su tretirane sa 20 µL serijski razblaženog jedinjenja u puferu za ispitivanje tokom 30 minuta na 37 °C u vlažnoj sredini (95% O2, 5% CO2). Posle 30-minutne inkubacije, 10 µL obeleženog d2 cAMP i 10 µL anti-cAMP antitela (oba razređena 1:20 u puferu za lizu ćelija; kao što je opisano u protokolu za ispitivanje proizvođača) dodato je u svaki bunarčić na ploči za ispitivanje. Ploče su zatim inkubirane na sobnoj temperaturi i nakon 60 minuta, promene u

1

HTRF signalu su očitane pomoću Envision 2104 multi-label čitača ploča korišćenjem ekscitacije od 330 nm i emisije od 615 i 665 nm. Sirovi podaci su konvertovani u nM cAMP interpolacijom sa cAMP standardne krive (kao što je opisano u protokolu testa proizvođača) i procenat efekta je određen u odnosu na koncentraciju zasićenja potpunog agonista GLP-1 (1 µM) uključenog na svakoj ploči. EC50određivanja su napravljena na osnovu krive odgovora na dozu agonista analiziranih sa programom prilagođavanja krive korišćenjem 4-parametarske logističke jednačine odgovora na dozu.

[0398] U tabeli 3, podaci analize su predstavljeni sa dve (2) značajne brojke kao geometrijska sredina (EC50s) i aritmetičku sredinu (Emax) na osnovu broja navedenih ponavljanja (Broj). Prazna ćelija znači da nije bilo podataka za taj primer ili Emax nije izračunat.

Tabela 3. Biološka aktivnost za primere 1 - 102.

1

11

Claims

Patentni zahtevi 1. Jedinjenje Formule I,

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, naznačeno time da R je F, Cl ili -CN; p je 0 ili 1; Prsten A je fenil ili 6-člani heteroaril; m je 0, 1, 2 ili 3; svaki R<1>je nezavisno izabran između halogena, -CN, -C1-3alkil, ili -OC1-3alkil, pri čemu je alkil C1-3alkil i OC1-3alkil je supstituisan sa 0 do 3 F atoma; R<2>je H ili -C1-3alkil, pri čemu je alkil supstituisan sa 0 do 1 OH; svaki R<3>je nezavisno F, -OH, -CN, -C1-3alkil, -OC1-3alkil, ili -C3-4cikloalkil, ili 2 R<3>mogu zajedno da ciklizuju da formiraju -C3-4spirocikloalkil, pri čemu je alkil C1-3alkil i OC1-3alkil, cikloalkil ili spirocikloalkil mogu biti supstituisani kako valenca dozvoljava sa 0 do 3 F atoma i sa 0 do 1 -OH; q je 0, 1 ili 2; X-L je N-CH2, CHCH2, ili ciklopropil; Y je CH ili N; R<4>je -C1-3alkil, -C0-3alkilen-C3-6cikloalkil, -C0-3alkilen-R<5>, ili -C1-3alkilen-R<6>, pri čemu navedeni alkil može biti supstituisan kako valenca dozvoljava sa 0 do 3 supstituenta nezavisno odabrana od 0 do 3 F atoma i 0 do 1 supstituenta koji se bira od -C0-1alkilen-CN, -C0-1alkilen-OR<O>, -SO2-N(R<N>)2, -C(O)-N(R<N>)2, -N(C=O)(R<N>), i -N(R<N>)2, i pri čemu navedeni alkilen i cikloalkil mogu biti nezavisno supstituisani kako valenca dozvoljava sa 0 do 2 supstituenta nezavisno odabrana od 0 do 2 F atoma i 0 do 1 supstituenta odabranog od -C0-1alkilen-CN, -C0-1alkilen-OR<O>, i -N(R<N>)2; R<5>je 4- do 6-člani heterocikloalkil, pri čemu navedeni heterocikloalkil može biti supstituisan sa 0 do 2 supstituenta kako valenca dozvoljava nezavisno izabran između: 0 do 1 okso (=O), 0 do 1 -CN, 0 do 2 F atoma, i 0 do 2 supstituenta nezavisno izabrana od -C1-3alkil i -OC1-3alkil, pri čemu je alkil C1-3alkil i OC1-3alkil može biti supstituisan sa 0 do 3 supstituenta kako valenca dozvoljava nezavisno izabran između: 0 do 3 F atoma, 0 do 1 -CN, i 0 do 1 -OR<O>; R<6>je 5- do 6-člani heteroaril, pri čemu pomenuti heteroaril može biti supstituisan sa 0 do 2 supstituenta kako valenca dozvoljava nezavisno izabran između: 0 do 2 halogena, 0 do 1 supstituenta izabranog od -OR<O>i -N(R<N>)2, i 0 do 2 -C1-3alkil, pri čemu alkil može biti supstituisan sa 0 do 3 supstituenta kako valenca dozvoljava nezavisno izabran između: 0 do 3 F atoma, i 0 do 1 –OR<o>; svaki R<o>je nezavisno H, ili -C1-3alkil, pri čemu C1-3alkil može biti supstituisan sa 0 do 3 F atoma; svaki R<N>je nezavisno H, ili -C1-3alkil; Z<1>, Z<2>, i Z<3>su svaki -CR<Z>, ili jedan od Z<1>, Z<2>, i Z<3>je N, a druga dva su -CR<Z>; i svaki R<Z>je nezavisno H, F, Cl ili -CH3. za upotrebu kao lek.
2. Jedinjenje za upotrebu kao lek, kao što je tražena zaštita prema patentnom zahtevu 1, naznačeno time da jedinjenje je jedinjenje Formule II 1

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu R je F; p je 0 ili 1; Prsten A je fenil ili piridinil; m je 0, 1 ili 2; svaki R<1>je nezavisno izabran između halogena, -CN, -C1-3alkil, ili -OC1-3alkil, pri čemu je alkil C1-3alkil i OC1-3alkil je supstituisan sa 0 do 3 F atoma; R<2>je H ili CH3; X-L je N-CH2, ili ciklopropil; Y je CH ili N; Z<3>je -CR<Z>ili N; i R<Z>je H, F, Cl ili -CH3.
3. Jedinjenje za upotrebu kao lek, kao što je tražena zaštita prema patentnom zahtevu 1 ili patentnom zahtevu 2, naznačeno time da jedinjenje je jedinjenje Formule III

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu Prsten A je fenil ili piridinil; m je 0, 1 ili 2; svaki R<1>je nezavisno izabran od F, Cl ili -CN; R<2>je H ili CH3; i Y je CH ili N.
4. Jedinjenje za upotrebu kao lek, kao što je tražena zaštita prema bilo kom od patentnih 1 4 zahteva 1 do 3, naznačeno time da R4je -CH2-R<5>, pri čemu je R<5>je 4- do 5-člani heterocikloalkil, pri čemu navedeni heterocikloalkil može biti supstituisan sa 0 do 2 supstituenta kako valenca dozvoljava nezavisno izabran između: 0 do 2 F atoma, i 0 do 1 supstituenta izabranog od -OCH3i -CH2OCH3; ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
5. Jedinjenje za upotrebu kao lek, kao što je tražena zaštita prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 3, naznačeno time da R4je -CH2-R<6>, pri čemu je R<6>je 5-člani heteroaril, pri čemu pomenuti heteroaril može biti supstituisan sa 0 do 2 supstituenta kako valenca dozvoljava nezavisno izabran između: 0 do 2 halogena, pri čemu je halogen nezavisno izabran između F i Cl, 0 do 1 -OCH3, i 0 do 1 -CH3, -CH2CH3, -CF3, ili -CH2CH2OCH3; ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
6. Jedinjenje prema za upotrebu kao lek, kao što je tražena zaštita bilo kom od patentnih zahteva 1 do 5, naznačeno time da R<2>je CH3ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
7. Jedinjenje za upotrebu kao lek, kao što je tražena zaštita prema patentnom zahtevu 1, naznačeno time da je jedinjenje 2-({4-[2-(4-hloro-2-fluorofenil)-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-1-[(2S)-oksetan-2-ilmetil ]-lH-benzimidazol-6-karboksilna kiselina; 2-({4-[2-(4-hloro-2-fluorofenil)-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-7-fluoro-1-[(2S)-oksetan -2-ilmetil]-lH-benzimidazol-6-karboksilna kiselina; 2-({4-[(2S)-2-(4-hloro-2-fluorofenil)-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-1-[(2S)-oksetan -2-ilmetil]-lH-benzimidazol-6-karboksilna kiselina; 2-({4-[(2S)-2-(4-hloro-2-fluorofenil)-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-7-fluoro-1-[( 2S)-oksetan-2-ilmetil]-lH-benzimidazol-6-karboksilna kiselina; ili

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so. 1
8. Jedinjenje za upotrebu kao lek, kao što je tražena zaštita prema patentnom zahtevu 1, naznačeno time da je jedinjenje 2-({4-[2-(4-hloro-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-1-[(2S)-oksetan-2-ilmetil]-lH-benzimidazol-6-karboksilna kiselina; 2-({4-[2-(4-cijano-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-1-[(2S)-oksetan-2-ilmetil]-lH-benzimidazol-6-karboksilna kiselina; 2-({4-[2-(5-hloropiridin-2-il)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-1-[(2S)-oksetan-2-ilmetil]-lH-benzimidazol-6-karboksilna kiselina; 2-({4-[2-(4-hloro-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-3-(1,3-oksazol-2-ilmetil)-3H-imidazo[4.5-b]piridin-5-karboksilna kiselina; 2-({4-[2-(4-hloro-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-1-[(1-etil- 1H-imidazol-5-il)metil]-1H-benzimidazol-6-karboksilna kiselina; 2-({4-[2-(4-hloro-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-1-(1,3-oksazol-4-ilmetil)-1H-benzimidazol-6-karboksilna kiselina; 2-({4-[2-(4-hloro-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-1-(piridin-3-ilmetil)-1H-benzimidazol-6-karboksilna kiselina; 2-({4-[2-(4-hloro-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-1-(1,3-oksazol-5-ilmetil)-1H-benzimidazol-6-karboksilna kiselina; 2-({4-[2-(4-hloro-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-1-[(1-etil- 1H-1,2,3-triazol-5-il)metil]-1H-benzimidazol-6-karboksilna kiselina; 2-({4-[2-(4-hloro-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-1-(1,3-oksazol-2-ilmetil)-1H-benzimidazol-6-karboksilna kiselina; 2-({4-[2-(4-hloro-2-fluorofenil)-7-fluoro-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-1-[(2S)-oksetan-2-ilmetil]-1H-benzimidazol-6-karboksilna kiselina; 2-({4-[2-(4-cijano-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-1-(1,3-oksazol -2-ilmetil)-1H-benzimidazol-6-karboksilna kiselina; 2-({4-[(2S)-2-(4-hloro-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-7-fluoro- 1-[(2S)-oksetan-2-ilmetil]-1H-benzimidazol-6-karboksilna kiselina; 2-({4-[(2S)-2-(4-hloro-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-1-[( 2S)-oksetan-2-ilmetil]-lH-benzimidazol-6-karboksilna kiselina; 2-({4-[(2S)-2-(4-cijano-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-1-[( 2S)-oksetan-2-ilmetil]-lH-benzimidazol-6-karboksilna kiselina; 2-({4-[(2S)-2-(5-hloropiridin-2-il)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-1-[( 1 2S)-oksetan-2-ilmetil]-lH-benzimidazol-6-karboksilna kiselina; 2-({4-[(2S)-2-(4-hloro-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-1-[( 1-etil-1H-imidazol-5-il)metil]-1H-benzimidazol-6-karboksilna kiselina; 2-({4-[(2R)-2-(4-cijano-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-1-[( 2S)-oksetan-2-ilmetil]-lH-benzimidazol-6-karboksilna kiselina; 2-({4-[(2R)-2-(5-hloropiridin-2-il)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-1-[( 2S)-oksetan-2-ilmetil]-lH-benzimidazol-6-karboksilna kiselina; ili 2-({4-[(2R)-2-(4-hloro-2-fluorofenil)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-1-[( 1-etil-1H-imidazol-5-il)metil]-1H-benzimidazol-6-karboksilna kiselina; ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
9. Jedinjenje za upotrebu kao lek, kao što je tražena zaštita prema patentnom zahtevu 1, naznačeno time da je jedinjenje

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
10. Jedinjenje za upotrebu kao lek, kao što je tražena zaštita prema patentnom zahtevu 1, naznačeno time da je jedinjenje 2-({4-[2-(5-hloropiridin-2-il)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-1-[(2S)-oksetan -2-ilmetil]-1H-benzimidazol-6-karboksilna kiselina; 2-({4-[(2S)-2-(5-hloropiridin-2-il)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-1-[( 2S)-oksetan-2-ilmetil]-lH-benzimidazol-6-karboksilna kiselina; ili 2-({4-[(2R)-2-(5-hloropiridin-2-il)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-1-[( 2S)-oksetan-2-ilmetil]-lH-benzimidazol-6-karboksilna kiselina; ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu je so tris so.
11. Jedinjenje za upotrebu kao lek, kao što je tražena zaštita prema patentnom zahtevu 1, naznačeno time da je jedinjenje 2-({4-[2-(5-hloropiridin-2-il)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-1-[(2S)-oksetan-2-ilmetil]-1H-benzimidazol-6-karboksilna kiselina, DIAST-X2: 1

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
12. Jedinjenje za upotrebu kao lek, kao što je tražena zaštita prema patentnom zahtevu 11, naznačeno time da je jedinjenje farmaceutski prihvatljiva so 2-({4-[2-(5-hloropiridin-2-il)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin- 1-il}metil)-1-[(2S)-ksetan-2-ilmetil]-1H-benzimidazol-6-karboksilna kiselina, DIAST-X2:
13. Jedinjenje za upotrebu kao lek, kao što je tražena zaštita prema patentnom zahtevu 12, naznačeno time da je jedinjenje tris so 2-({4-[2-(5-hloropiridin-2-il)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-1-[(2S)-oksetan-2-ilmetil]-1H-benzimidazol-6-karboksilna kiselina, DIAST-X2:
14. Jedinjenje za upotrebu kao lek, kao što je tražena zaštita prema patentnom zahtevu 11, naznačeno time da je jedinjenje 2-({4-[2-(5-hloropiridin-2-il)-2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-1-[(2S)-oksetan-2-ilmetil]-1H-benzimidazol-6-karboksilna kiselina, DIAST-X2:
15. Jedinjenje za upotrebu kao lek, kao što je tražena zaštita prema patentnom zahtevu 8, naznačeno time da jedinjenje je kristalni oblik (Forma I) anhidrovane 1,3-dihidroksi-2- 1 (hidroksimetil)propan-2-aminijum soli 2-({4-[(2S)-2-(4-hloro-2-fluorofenil)- 2-metil-1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-1-[(2S)-oksetan-2-ilmetil]-1H-benzimidazol-6-karboksilne kiseline, prema patentnom zahtevu 8, koji ima obrazac difrakcije rendgenskih zraka praha (CuKα zračenje) koji sadrži najmanje dva karakteristična pika, u smislu 2θ, izabrana između 3.7 ± 0.2°; 7.3 ± 0.2°; 8.5 ± 0.2°; 10.1±0.2°; 14.7±0.2°; i 16.9±0.2°.
16. Jedinjenje za upotrebu kao lek, kao što je tražena zaštita prema patentnom zahtevu 11, naznačeno time da jedinjenje je kristalni oblik (Forma A) anhidrovane 1,3-dihidroksi-2-(hidroksimetil)propan-2-aminijum soli 2-({4-[2-(5-hloropiridin-2-il)-2-metil- 1,3-benzodioksol-4-il]piperidin-1-il}metil)-1-[(2S)-oksetan-2-ilmetil]-1H-benzimidazol-6-karboksilne kiseline, DIAST-X2, prema patentnom zahtevu 11, koji ima obrazac difrakcije rendgenskih zraka praha (CuKa zračenje) koji sadrži najmanje dva karakteristična pika, u smislu 2θ, izabrana između 7.7 ± 0.2°; 15.2 ± 0.2°; 15.7±0.2°; i 17.6±0.2°.
17. Jedinjenje za upotrebu kao lek, kao što je tražena zaštita prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 16, naznačeno time da je jedinjenje u obliku farmaceutske kompozicije koja sadrži jedinjenje i farmaceutski prihvatljiv ekscipijent. 1