[go: up one dir, main page]

RS61775B1 - Mikrornk jedinjenja i postupci za modulaciju mir-21 aktivnosti - Google Patents

Mikrornk jedinjenja i postupci za modulaciju mir-21 aktivnosti

Info

Publication number
RS61775B1
RS61775B1 RS20210552A RSP20210552A RS61775B1 RS 61775 B1 RS61775 B1 RS 61775B1 RS 20210552 A RS20210552 A RS 20210552A RS P20210552 A RSP20210552 A RS P20210552A RS 61775 B1 RS61775 B1 RS 61775B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
nucleoside
certain embodiments
methoxyethyl
bicyclic
nucleosides
Prior art date
Application number
RS20210552A
Other languages
English (en)
Inventor
Balkrishen Bhat
Original Assignee
Sanofi Sa
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Sanofi Sa filed Critical Sanofi Sa
Publication of RS61775B1 publication Critical patent/RS61775B1/sr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/02—Drugs for disorders of the urinary system of urine or of the urinary tract, e.g. urine acidifiers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/04—Drugs for skeletal disorders for non-specific disorders of the connective tissue
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C12N2310/11—Antisense
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C12N2310/11—Antisense
    • C12N2310/113—Antisense targeting other non-coding nucleic acids, e.g. antagomirs
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
    • C12N2310/323—Chemical structure of the sugar modified ring structure
    • C12N2310/3231—Chemical structure of the sugar modified ring structure having an additional ring, e.g. LNA, ENA
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/34—Spatial arrangement of the modifications
    • C12N2310/343—Spatial arrangement of the modifications having patterns, e.g. ==--==--==--
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/35—Nature of the modification

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Endocrinology (AREA)

Description

Opis
OBLAST PRONALASKA
[0001] Ovde su pruženi sastavi za modulaciju miR-21 aktivnosti, kako je definisano patentnim zahtevima.
OPIS STANJA TEHNIKE
[0002] MikroRNK (mikroRNK), takođe poznati i kao „zrele mikroRNK“, su mali (dugački približno 18-24 nukleotida), nekodirajući molekuli RNK kodirani u genima biljaka i životinja. U određenim slučajevima, visoko konzervirane, endogeno eksprimirane mikroRNK regulišu eksprimiranje gena vezujući se za 3'-neprevedene regione (3'-UTR) specifičnih mRNK. Preko 1000 različitih mikroRNK je identifikovano kod biljaka i životinja. Izgleda da određene zrele mikroRNK potiču iz dugih endogenih primarnih mikroRNK transkripata (takođe poznatih kao pri-mikroRNK, pri-mir, pri-miR ili pri-pre-mikroRNK) koji često imaju dužinu koja se meri stotinama nukleotida (Lee, et al., EMBO J., 2002, 21(17), 4663-4670).
[0003] Funkcionalne analize mikroRNK otkrile su da ove male nekodirajuće RNK doprinose različitim fiziološkim procesima kod životinja, uključujući tajming razvoja, organogenezu, diferencijaciju, stvaranje obrazaca, embriogenezu, kontrolu rasta i programiranu smrt ćelija. Primeri određenih procesa u kojima učestvuju mikroRNK uključuju diferencijaciju matičnih ćelija, neurogenezu, angiogenezu, hematopoezu i egzocitozu (opisano od strane Alvarez-Garcia i Miska, Development, 2005, 132, 4653-4662).
[0004] WO 2007/027894 se odnosi na antisens jedinjenja, sastavi i postupke za modulaciju eksprimiranja, obrade i funkcije miRNK.
SAŽETAK PRONALASKA
[0005] Ovde je pruženo jedinjenje koje sadrži modifikovani oligonukleotid komplementaran sa miR-21 (SEQ ID NO: 1), gde se modifikovani oligonukleotid:
a. sastoji od 16 do 22 povezanih nukleozida, i gde modifikovani oligonukleotid obuhvata najmanje 16 susednih nukleozida narednog nukleozidnog obrasca I u 5' ka 3' orijentaciji:
(R)X-N<B>-N<Q>-N<Q>-N<B>-(N<Q>-N<Q>-N<Q>-N<B>)3-N<Q>-N<Z>
gde je svaki R, nezavisno, ne-biciklični nukleozid; X iznosi od 1 do 4;
svaki N<B>je, nezavisno, biciklični nukleozid;
svaki N<Q>je, nezavisno, ne-biciklični nukleozid; i
N<Z>je modifikovan nukleozid, i gde
(i) svaki biciklični nukleozid obuhvata ne-metilovanu nukleobazu, ili
(ii) najviše dva ne-biciklična nukleozida su 2'-O-metoksietil nukleozidi i svaki drugi nebiciklični nukleozid je β-D-dezoksiribonukleozid; ili
b. sastoji od 16 do 19 povezanih nukleozida, i gde modifikovani oligonukleotid obuhvata najmanje 16 susednih nukleozida narednog nukleozidnog obrasca II u 5' ka 3' orijentaciji:
N<M>-N<B>-N<Q>-N<Q>-N<B>-(N<Q>-N<Q>-N<Q>-N<B>)3-N<Q>-N<Z>
gde je N<M>, nezavisno, modifikovan nukleozid koji nije biciklični nukleozid;
svaki N<B>je, nezavisno, biciklični nukleozid;
svaki N<Q>je, nezavisno, ne-biciklični nukleozid; i
N<Z>je modifikovan nukleozid, i gde
(i) svaki biciklični nukleozid obuhvata ne-metilovanu nukleobazu, ili
(ii) najviše dva ne-biciklična nukleozida su 2'-O-metoksietil nukleozidi i svaki drugi nebiciklični nukleozid je β-D-dezoksiribonukleozid; ili
c. sastoji od 16 do 19 povezanih nukleozida, i gde modifikovani oligonukleotid obuhvata najmanje 16 susednih nukleozida narednog nukleozidnog obrasca III u 5' ka 3' orijentaciji:
(R)X-N<B>-N<Q>-N<Q>-N<B>-(N<Q>-N<Q>-N<Q>-N<B>)3-N<Y>-N<Z>
gde svaki R je ne-biciklični nukleozid; X iznosi od 1 do 4;
svaki N<B>je biciklični nukleozid;
svaki N<Q>je ne-biciklični nukleozid;
N<Y>je modifikovan nukleozid ili nemodifikovan nukleozid; i
N<Z>je modifikovan nukleozid, i gde
(i) svaki biciklični nukleozid obuhvata ne-metilovanu nukleobazu, ili
(ii) najviše dva ne-biciklična nukleozida su 2'-O-metoksietil nukleozidi i svaki drugi nebiciklični nukleozid je β-D-dezoksiribonukleozid; ili
d. sastoji od 16 do 19 povezanih nukleozida, i gde modifikovani oligonukleotid obuhvata najmanje 16 susednih nukleozida narednog nukleozidnog obrasca IV u 5' ka 3' orijentaciji:
N<M>-N<B>-N<Q>-N<Q>-N<B>-(N<Q>-N<Q>-N<Q>-N<B>)3-N<Y>-N<Z>
gde je N<M>modifikovan nukleozid koji nije biciklični nukleozid;
svaki N<B>je biciklični nukleozid;
svaki N<Q>je ne-biciklični nukleozid;
N<Y>je modifikovan nukleozid ili nemodifikovan nukleozid; i
N<Z>je modifikovan nukleozid, i gde
(i) svaki biciklični nukleozid obuhvata ne-metilovanu nukleobazu, ili
(ii) najviše dva ne-biciklična nukleozida su 2'-O-metoksietil nukleozidi i svaki drugi nebiciklični nukleozid je β-D-dezoksiribonukleozid.
[0006] Takođe je ovde pružen farmaceutski sastav koji sadrži jedinjenje pronalaska i farmaceutski prihvatljiv nosač.
[0007] Ovde je takođe pruženo jedinjenje pronalaska ili farmaceutski sastav pronalaska za upotrebu u terapiji, kao što je upotreba u tretmanu fibroze.
[0008] Ovde je takođe pruženo jedinjenje pronalaska ili farmaceutski sastav pronalaska, za upotrebu u postupku tretmana, sprečavanja ili odlaganja pojave bolesti povezane sa miR-21, koji uključuje primenu jedinjenja ili smeše pacijentu koji ima bolest povezanu sa miR-21, gde je bolest fibroza, kao što je fibroza izabrana između fibroze bubrega, fibroze pluća, fibroze jetre, fibroze srca, fibroze kože, fibroze povezane sa uzrastom, fibroze slezine, skleroderma i fibroze nakon transplantacije.
[0009] Ovde su obelodanjena jedinjenja koja sadrže modifikovani oligonukleotid, gde je nukleobazna sekvenca modifikovanog oligonukleotida komplementarna sa miR-21 i gde modifikovani oligonukleotid ima ovde opisan nukleozidni obrazac.
[0010] Ovde su obelodanjeni postupci za inhibiranje miR-21 aktivnosti koji uključuju dovođenje u dodir ćelije sa ovde opisanim jedinjenjem. U određenim slučajevima ćelija je in vivo. U određenim slučajevima ćelija je in vitro.
[0011] Ovde su obelodanjena jedinjenja za upotrebu u postupcima za tretman bolesti povezane sa miR-21 kako je definisano patentnim zahtevima, koji se sastoje od primene ovde opisanog jedinjenja kod pacijenta koji ima bolest povezanu sa miR-21. U određenim otelotvorenjima, životinja je čovek.
[0012] Ovde opisana jedinjenja su predviđena za upotrebu u terapiji.
[0013] Ovde su obelodanjena jedinjenja koja obuhvataju modifikovani oligonukleotid koji se sastoji od 8 do 22 povezanih nukleozida, gde je nukleobazna sekvenca modifikovanog oligonukleotida komplementarna sa miR-21 (SEQ ID NO: 1) i gde modifikovani oligonukleotid obuhvata najmanje 8 susednih nukleozida narednog nukleozidnog obrasca I u 5' ka 3' orijentaciji:
(R)X-N<B>-N<Q>-N<Q>-N<B>-(N<Q>-N<Q>-N<Q>-N<B>)3-N<Q>-N<Z>
gde je svaki R, nezavisno, ne-biciklični nukleozid; X iznosi od 1 do 4; svaki N<B>je, nezavisno, biciklični nukleozid; svaki N<Q>je, nezavisno, ne-biciklični nukleozid; i svaki N<Z>je, nezavisno, modifikovan nukleozid.
[0014] Ovde su obelodanjena jedinjenja koja obuhvataju modifikovani oligonukleotid koji se sastoji od 8 do 19 povezanih nukleozida, gde je nukleobazna sekvenca modifikovanog oligonukleotida komplementarna sa miR-21 (SEQ ID NO: 1) i gde modifikovani oligonukleotid obuhvata najmanje 8 susednih nukleozida narednog nukleozidnog obrasca II u 5' ka 3' orijentaciji:
N<M>-N<B>-N<Q>-N<Q>-N<B>-(N<Q>-N<Q>-N<Q>-N<B>)3-N<Q>-N<Z>
gde N<M>je, nezavisno, modifikovan nukleozid koji nije biciklični nukleozid; svaki N<B>je, nezavisno, biciklični nukleozid; svaki N<Q>je, nezavisno, ne-biciklični nukleozid; i N<Z>je, nezavisno, modifikovan nukleozid.
[0015] Ovde su obelodanjena jedinjenja koja obuhvataju modifikovani oligonukleotid koji se sastoji od 8 do 19 povezanih nukleozida, gde je nukleobazna sekvenca modifikovanog oligonukleotida komplementarna sa miR-21 (SEQ ID NO: 1) i gde modifikovani oligonukleotid obuhvata najmanje 8 susednih nukleozida narednog nukleozidnog obrasca III u 5' ka 3' orijentaciji:
(R)X-N<B>-N<Q>-N<Q>-N<B>-(N<Q>-N<Q>-N<Q>-N<B>)3-N<Y>-N<Z>
gde je svaki R ne-biciklični nukleozid; X iznosi od 1 do 4; svaki N<B>je biciklični nukleozid; svaki N<Q>je ne-biciklični nukleozid; N<Y>je modifikovan nukleozid ili nemodifikovan nukleozid; i svaki N<Z>je modifikovan nukleozid.
[0016] Ovde su obelodanjena jedinjenja koja obuhvataju modifikovani oligonukleotid koji se sastoji od 8 do 19 povezanih nukleozida, gde je nukleobazna sekvenca modifikovanog oligonukleotida komplementarna sa miR-21 (SEQ ID NO: 1) i gde modifikovani oligonukleotid obuhvata najmanje 8 susednih nukleozida narednog nukleozidnog obrasca IV u 5' ka 3' orijentaciji:
N<M>-N<B>-N<Q>-N<Q>-N<B>-(N<Q>-N<Q>-N<Q>-N<B>)3-N<Y>-N<Z>
gde je N<M>modifikovan nukleozid koji nije biciklični nukleozid; svaki N<B>je biciklični nukleozid; svaki N<Q>je ne-biciklični nukleozid; N<Y>je modifikovan nukleozid ili nemodifikovan nukleozid; i N<Z>je modifikovan nukleozid.
[0017] U određenim otelotvorenjima nukleozidnog obrasca I ili III, X iznosi 1, X iznosi 2, X iznosi 3 ili X iznosi 4.
[0018] U određenim otelotvorenjima bilo kog ovde navedenog jedinjenja, modifikovani oligonukleotid se sastoji od 17, 18, 19, 20, 21 ili 22 povezanih nukleozida nukleozidnog obrasca I, II, III ili IV kako je definisano patentnim zahtevima.
[0019] U određenim otelotvorenjima bilo kog ovde navedenog jedinjenja, nukleobazna sekvenca modifikovanog oligonukleotida je najmanje 90% komplementarna, najmanje 95% komplementarna ili je 100% komplementarna sa nukleobaznom sekvencom od miR-21 (SEQ ID NO: 1).
[0020] U određenim otelotvorenjima bilo kog ovde obelodanjenog jedinjenja, nukleobaza na položaju 1 od miR-21 je uparena sa prvom nukleobazom na 3'-kraju modifikovanog oligonukleotida.
[0021] U određenim otelotvorenjima bilo kog ovde navedenog jedinjenja, svaki biciklični nukleozid se nezavisno bira između LNK nukleozida, cEt nukleozida i ENK nukleozida.
[0022] U određenim otelotvorenjima bilo kog ovde navedenog jedinjenja, najmanje dva nebiciklična nukleozida sadrže šećerne delove koje se međusobno razlikuju. U određenim otelotvorenjima bilo kog ovde navedenog jedinjenja, svaki ne-biciklični nukleozid ima istu vrstu šećernog dela.
[0023] U određenim otelotvorenjima bilo kog ovde navedenog jedinjenja, svaki biciklični nukleozid je cEt nukleozid. U određenim otelotvorenjima, cEt nukleozid je S-cEt nukleozid. U određenim otelotvorenjima, cEt nukleozid je R-cEt nukleozid. U određenim otelotvorenjima bilo kog ovde navedenog jedinjenja, svaki biciklični nukleozid je LNK nukleozid.
[0024] U određenim otelotvorenjima bilo kog ovde navedenog jedinjenja, svaki ne-biciklični nukleozid se nezavisno bira između β-D-dezoksiribonukleozida, β-D-ribonukleozida, 2'-O-metil nukleozida, 2'-O-metoksietil nukleozida i 2'-fluoronukleozida. U određenim otelotvorenjima bilo kog od ovde navedenih jedinjenja, svaki ne-biciklični nukleozid se nezavisno bira između β-D-dezoksiribonukleozida i 2'-O-metoksietil nukleozida. U određenim otelotvorenjima bilo kog ovde navedenog jedinjenja, svaki ne-biciklični nukleozid je β-D-dezoksiribonukleozid. U određenim otelotvorenjima bilo kog ovde navedenog jedinjenja, svaki ne-biciklični nukleozid je 2'-O-metoksietil nukleozid.
[0025] U ovde navedenim jedinjenjima, svaki biciklični nukleozid sadrži ne-metiliranu nukleobazu.
[0026] U ovde navedenim jedinjenjima, najviše dva ne-biciklična nukleozida su 2'-O-metoksietil nukleozidi. U određenim takvim otelotvorenjima, svaki drugi ne-biciklični nukleozid je β-D-dezoksiribonukleozid.
[0027] U određenim otelotvorenjima bilo kog ovde navedenog jedinjenja, 5'-najdalji i 3'-najdalji ne-biciklični nukleozidi su 2'-O-metoksietil nukleozidi, a svaki drugi ne-biciklični nukleozid je β-D-dezoksiribonukleozid. U određenim otelotvorenjima bilo kog ovde navedenog jedinjenja, dva ne-biciklična nukleozida su 2'-MOE nukleozidi, a svaki drugi nebiciklični nukleozid je β-D-dezoksiribonukleozid.
[0028] U određenim otelotvorenjima nukleozidnog obrasca I ili III, svaki nukleozid od R je 2'-O-metoksietil nukleozid. U određenim otelotvorenjima nukleozidnog obrasca I ili III, tri nukleozida od R su 2'-O-metoksietil nukleozidi, i jedan nukleozid od R je β-Ddezoksiribonukleozid.
[0029] U određenim otelotvorenjima bilo kog ovde navedenog jedinjenja, najmanje jedna internukleozidna veza je modifikovana internukleozidna veza. U određenim otelotvorenjima bilo kog ovde navedenog jedinjenja, svaka internukleozidna veza je modifikovana internukleozidna veza. U određenim otelotvorenjima, modifikovana internukleozidna veza je fosforotioatna internukleozidna veza.
[0030] U određenim otelotvorenjima bilo kog ovde navedenog jedinjenja, najmanje jedan nukleozid sadrži modifikovanu nukleobazu. U određenim otelotvorenjima bilo kog ovde navedenog jedinjenja, najmanje jedan citozin je 5-metil citozin. U određenim otelotvorenjima bilo kog ovde navedenog jedinjenja, svaki citozin je 5-metilcitozin. U određenim otelotvorenjima bilo kog ovde navedenog jedinjenja, citozin na položaju dva modifikovanog oligonukleotida je 5-metilcitozin.
[0031] U određenim otelotvorenjima nukleozidnog obrasca I, R se sastoji od četiri povezana nukleozida N<R1>-N<R2>-N<R3>-N<R4>, gde N<R1>je 2'-O-metoksietil nukleozid i svaki od N<R2>-N<R3>-N<R4>je β-D-dezoksiribonukleozid; svaki N<B>je S-cEt nukleozid; svaki N<Q>je β-D-dezoksiribonukleozid; i N<Z>je 2'-O-metoksietil nukleozid. U određenim otelotvorenjima nukleozidnog obrasca I, svaki R je 2'-O-metoksietil nukleozid; X iznosi 1; svaki N<B>je S-cEt nukleozid; svaki N<Q>je β-D-dezoksiribonukleozid; i N<Z>je 2'-O-metoksietil nukleozid. U određenim otelotvorenjima nukleozidnog obrasca I, svaki R je 2'-O-metoksietil nukleozid; X iznosi 1; svaki N<B>je S-cEt nukleozid; svaki N<Q>je 2'-O-metoksietil nukleozid; i N<Z>je 2'-O-metoksietil nukleozid. U određenim otelotvorenjima nukleozidnog obrasca I, svaki R je 2'-O-metoksietil nukleozid; X iznosi 1; svaki N<B>je S-cEt nukleozid; svaki N<Q>je β-D-dezoksiribonukleozid; i N<Z>je S-cEt nukleozid. U određenim otelotvorenjima nukleozidnog obrasca I, svaki R je 2'-O-metoksietil nukleozid; X iznosi 1; svaki N<B>je LNK nukleozid; svaki N<Q>je β-D-dezoksiribonukleozid; i N<Z>je 2'-O-metoksietil nukleozid. U određenim otelotvorenjima nukleozidnog obrasca I, svaki R je 2'-O-metoksietil nukleozid; X iznosi 1; svaki N<B>je LNK nukleozid; svaki N<Q>je β-D-dezoksiribonukleozid; i N<Z>je LNK nukleozid.
[0032] U određenim otelotvorenjima nukleozidnog obrasca II, N<M>je 2'-O-metoksietil nukleozid; svaki N<B>je S-cEt nukleozid; svaki N<Q>je β-D-dezoksiribonukleozid; i N<Z>je 2'-O-metoksietil nukleozid. U određenim otelotvorenjima nukleozidnog obrasca II, N<M>je 2'-Ometoksietil nukleozid; svaki N<B>je S-cEt nukleozid; svaki N<Q>je 2'-O-metoksietil nukleozid; i N<Z>je 2'-O-metoksietil nukleozid. U određenim otelotvorenjima nukleozidnog obrasca I, N<M>je 2'-O-metoksietil nukleozid; svaki N<B>je S-cEt nukleozid; svaki N<Q>je β-D-dezoksiribonukleozid; svaki N je β-D-dezoksiribonukleozid; i N<Z>je S-cEt nukleozid. U određenim otelotvorenjima nukleozidnog obrasca II, N<M>je 2'-O-metoksietil nukleozid; svaki N<B>je LNK nukleozid; svaki N<Q>je β-D-dezoksiribonukleozid; i N<Z>je 2'-O-metoksietil nukleozid. U određenim otelotvorenjima nukleozidnog obrasca II, N<M>je 2'-O-metoksietil nukleozid; svaki N<B>je LNK nukleozid; svaki N<Q>je β-D-dezoksiribonukleozid; i N<Z>je LNK nukleozid.
[0033] U određenim otelotvorenjima nukleozidnog obrasca III, svaki R je 2'-O-metoksietil nukleozid; X iznosi 1; svaki N<B>je S-cEt nukleozid; svaki N<Q>je β-D-dezoksiribonukleozid; N<Y>je β-D-dezoksiribonukleozid; i N<Z>je 2'-O-metoksietil nukleozid. U određenim otelotvorenjima nukleozidnog obrasca III, svaki R je 2'-O-metoksietil nukleozid; X iznosi 1; svaki N<B>je S-cEt nukleozid; svaki N<Q>je β-D-dezoksiribonukleozid; N<Y>je β-D-dezoksiribonukleozid; i N<Z>je S-cEt nukleozid. U određenim otelotvorenjima nukleozidnog obrasca III, svaki R je 2'-O-metoksietil nukleozid; X iznosi 1; svaki N<B>je S-cEt nukleozid; svaki N<Q>je β-D-dezoksiribonukleozid; N<Y>je S-cEt nukleozid; i N<Z>je S-cEt nukleozid.
[0034] U određenim otelotvorenjima nukleozidnog obrasca IV, N<M>je 2'-O-metoksietil nukleozid; svaki N<B>je S-cEt nukleozid; svaki N<Q>je β-D-dezoksiribonukleozid; N<Y>je β-D-dezoksiribonukleozid; N<Z>je 2'-O-metoksietil nukleozid. U određenim otelotvorenjima nukleozidnog obrasca IV, N<M>je 2'-O-metoksietil nukleozid; svaki N<B>je S-cEt nukleozid; svaki N<Q>je β-D-dezoksiribonukleozid; N<Y>je β-D-dezoksiribonukleozid; i N<Z>je S-cEt nukleozid. U određenim otelotvorenjima nukleozidnog obrasca IV, N<M>je 2'-O-metoksietil nukleozid; svaki N<B>je S-cEt nukleozid; svaki N<Q>je β-D-dezoksiribonukleozid; N<Y>je S-cEt nukleozid; i N<Z>je S-cEt nukleozid.
[0035] U određenim otelotvorenjima bilo kog ovde navedenog jedinjenja, modifikovani oligonukleotid ima nukleobaznu sekvencu SEQ ID NO: 3, gde je svaki T u sekvenci nezavisno izabran od T i U. U određenim otelotvorenjima bilo kog ovde navedenog jedinjenja, modifikovani oligonukleotid ima nukleobaznu sekvencu SEQ ID NO: 4, gde je svaki T u sekvenci nezavisno izabran između T i U.
[0036] Ovde su obelodanjeni postupci za inhibiranje miR-21 aktivnosti koji uključuju dovođenje u dodir ćelije sa ovde navedenim jedinjenjem. U određenim slučajevima ćelija je in vivo. U određenim slučajevima ćelija je in vitro. U određenim slučajevima, ćelija je ćelija fibroblasta, hiperproliferativna ćelija, keratinocit ili hipoksična ćelija. U određenim slučajevima, ćelija fibroblasta je hiperproliferativna ćelija fibroblasta.
[0037] Ovde su obelodanjeni postupci za smanjenje eksprimiranja kolagena u ćeliji, koji sadrže dovođenje u dodir ćelije sa ovde pruženim jedinjenjem.
[0038] Ovde su obelodanjena jedinjenja koja se koriste u postupcima za tretman, sprečavanje ili odlaganje pojave bolesti povezane sa miR-21 kako je definisano patentnim zahtevima, koja uključuju primenu pacijentu koji ima takvu bolest bilo kog od ovde navedenih jedinjenja.
[0039] U određenim otelotvorenjima, bolest je fibroza. U određenim otelotvorenjima fibroza je fibroza bubrega, fibroza pluća, fibroza jetre, fibroza srca, fibroza kože, starosna fibroza, fibroza slezine, skleroderma ili fibroza nakon transplantacije.
[0040] U nekim otelotvorenjima, fibroza je fibroza bubrega i prisutna je kod pacijenta koji ima bolest odabranu između glomeruloskleroze, tubulointersticijske fibroze, IgA nefropatije, intersticijske fibroze/tubularne atrofije; hroničnog oštećenja bubrega, glomerularne bolesti, glomerulonefritisa, dijabetes melitusa, idiopatske fokalne segmentne glomeruloskleroze, membranske nefropatije, glomerulopatije u kolapsu, hronične rekurentne infekcije bubrege i bubrežne bolesti u završnoj fazi. U određenim otelotvorenjima, fibroza bubrega je rezultat akutne ili ponavljajuće traume bubrega.
[0041] U nekim otelotvorenjima, fibroza je fibroza jetre i prisutna je kod pacijenta koji ima bolest odabranu između hronične povrede jetre, infekcije hepatitisa, ne-alkoholnog steatohepatitisa i ciroze.
[0042] U određenim otelotvorenjima, plućna fibroza je idiopatska plućna fibroza, ili pacijent ima hroničnu opstruktivnu bolest pluća.
[0043] U određenim otelotvorenjima, bolest je upalna bolest.
1
[0044] Ovde su obelodanjeni postupci za promociju zarastanja rana kod pacijenta koji uključuju primenu pacijentu koji ima akutnu ili hroničnu ranu bilo kog od ovde navedenih jedinjenja. U određenim otelotvorenjima, hronična rana je akutna ili hronična hirurška rana, prodorna rana, avulziona povreda, povreda lomljenja, povreda cepanja, opekotina, razderotina, rana od ugriza, arterijski čir, venski čir, čir pod pritiskom ili dijabetički čir. U nekim otelotvorenjima, jedinjenje se primenjuje lokalno u ranu.
[0045] Ovde su obelodanjeni postupci za tretman fibroproliferativnog poremećaja kod pacijenta koji uključuju primenu pacijentu bilo kog od ovde navedenih jedinjenja.
[0046] Bilo koji od ovde opisanih postupaka može obuhvatati odabir pacijenta sa povišenim eksprimiranjem miR-21 u jednom ili više tkiva.
[0047] U određenim otelotvorenjima, primena bilo kog ovde navedenog jedinjenja smanjuje eksprimiranje kolagena.
[0048] U određenim otelotvorenjima, pacijentu je potrebna poboljšana funkcija organa, gde se funkcija organa bira između funkcije srca, funkcije pluća, funkcije jetre i funkcije bubrega. U određenim otelotvorenjima, primena bilo kog ovde navedenog jedinjenja poboljšava funkciju organa kod pacijenta, gde se funkcija organa bira između funkcije srca, funkcije pluća, funkcije jetre i funkcije bubrega.
[0049] Bilo koji ovde obelodanjen postupak uključuje procenu funkcije bubrega kod pacijenta, što može uključivati merenje azota uree u krvi pacijenta; merenje kreatinina u krvi pacijenta; merenje klirensa kreatinina kod pacijenta; merenje proteinurije kod pacijenta; merenje albumin:Cr odnosa kod pacijenta; i/ili merenje urinarnog izlaza kod pacijenta.
[0050] Bilo koji ovde obelodanjen postupak može obuhvatati procenu funkcije jetre kod pacijenta, što može uključivati merenje nivoa alanin aminotransferaze u krvi pacijenta; merenje nivoa aspartat aminotransferaze u krvi pacijenta; merenje nivoa bilirubina u krvi pacijenta; merenje nivoa albumina u krvi pacijenta; merenje protrombinskog vremena kod pacijenta; merenje ascita kod pacijenta; i/ili merenje encefalopatije kod pacijenta.
[0051] Bilo koji ovde obelodanjen postupak može obuhvatati procenu funkcije pluća kod pacijenta, što može uključivati merenje vitalnog kapaciteta pacijenta; merenje prinudnog vitalnog kapaciteta pacijenta; merenje zapremine prinudnog izdaha u jednoj sekundi kod pacijenta; merenje vršne brzine ekspiratornog protoka kod pacijenta; merenje prinudnog ekspiratornog protoka kod pacijenta; merenje maksimalne dobrovoljne ventilacije kod pacijenta; određivanje odnosa zapremine prinudnog izdisaja u jednoj sekundi i prinudnog vitalnog kapaciteta pacijenta; merenje odnosa ventilacije/perfuzije kod pacijenta; merenje ispiranja azota kod pacijenta; i/ili merenje apsolutne zapremine vazduha u jednom ili više pluća pacijenta.
[0052] Bilo koji ovde obelodanjen postupak može obuhvatati procenu funkcije srca kod pacijenta, što može uključivati merenje srčanog izlaza kod pacijenta; merenje udarne zapremine kod pacijenta; merenje srednje brzine sistolnog izbacivanja kod pacijenta; merenje sistolnog krvnog pritiska kod pacijenta; merenje udela izbacivanja leve komore kod pacijenta; određivanje udarnog indeksa kod pacijenta; određivanje srčanog indeksa kod pacijenta; merenje procentualnog frakcionog skraćivanja leve komore kod pacijenta; merenje srednje brzine obodnog skraćivanja vlakana kod pacijenta; merenje obrasca brzine priliva leve komore kod pacijenta; merenje obrasca brzine protoka plućnih vena kod pacijenta; i/ili merenje rane vršne dijastolne brzine mitralnog prstena kod pacijenta.
[0053] Bilo koji od ovde opisanih postupaka može obuhvatati primenu pacijentu najmanje jednog terapeutskog agensa odabranog od protiv-upalnog agensa, imunosupresivnog agensa, anti-dijabetičkog agensa, digoksina, vazodilatatora, inhibitora angiotenzin II konvertujućeg enzima (ACE), blokatora angiotenzin II receptora (ARB), blokatora kalcijumovih kanala, izosorbid dinitrata, hidralazina, nitrata, hidralazina, beta blokatora, natriuretskih peptida, heparinoida i inhibitora faktora rasta vezivnog tkiva. U određenim otelotvorenjima, protivupalni agens je nesteroidni protiv-upalni agens, gde je nesteroidni protiv-upalni agens opciono odabran od ibuprofena, COX-1 inhibitora i COX-2 inhibitora. U određenim otelotvorenjima, imunosupresivni agens se bira između kortikosteroida, ciklofosfamida i mofetilmikofenolata. U nekim otelotvorenjima, protiv-upalni agens je kortikosteroid, gde je kortikosteroid opciono prednizon. U određenim otelotvorenjima, inhibitori angiotenzin II konvertujućeg enzima (ACE) se biraju između kaptoprila, enalaprila, lizinoprila, benazeprila, kvinaprila, fozinoprila i ramiprila. U određenim otelotvorenjima, blokatori angiotenzin II receptora (ARB) su izabrani između kandesartana, irbesartana, olmesartana, losartana, valsartana, telmisartana i eprosartana.
[0054] U određenim otelotvorenjima, bolest je rak. U određenim otelotvorenjima, rak je rak jetre, rak dojke, rak bešike, rak prostate, rak debelog creva, rak pluća, mozak, hematološki rak, rak pankreasa, rak glave i vrata, rak jezika, rak želuca, rak kože, ili rak štitne žlezde. U određenim otelotvorenjima, rak jetre je hepatocelularni rak. U određenim otelotvorenjima, rak mozga je multiformni glioblastom. U određenim otelotvorenjima, hematološki rak je akutna mijelogena leukemija, akutna limfocitna leukemija, akutna monocitna leukemija, multipli mijelom, hronična limfotična leukemija, hronična mijeloična leukemija, Hodžkinov limfom ili ne-Hodžkinov limfom.
[0055] U nekim otelotvorenjima, ovde obelodanjeni postupci uključuju primenu pacijentu najmanje jedne dodatne terapije protiv raka. U određenim otelotvorenjima, terapija protiv raka je agens koji oštećuje DNK, inhibitor proliferacije, anti-folat, inhibitor receptora faktora rasta, anti-angiogeni agens, inhibitor receptora tirozin kinaze, inhibitor kinaze, inhibitor faktora rasta, citotoksični agens, terapija zračenjem ili hirurška resekcija tumora. U određenim otelotvorenjima, agens koji oštećuje DNK je 1,3-bis (2-hloroetil)-1-nitrozourea, busulfan, karboplatin, karmustin, hlorambucil, cisplatin, ciklofosfamid, dakarbazin, daunorubicin, doksorubicin, epirubicin, etopozid, idarubamidin, idarubamidin, irinotekan, lomustin, mehloretamin, melfalan, mitomicin C, mitoksantron, oksaliplatin, temozolomid ili topotekan. U određenim otelotvorenjima, antifolat je metotreksat, aminopterin, timidilat sintaza, serin hidroksimetiltransferaza, foliilpoliglutamil sintetaza, g-glutamil hidrolaza, glicinamid-ribonukleotid transformilaza, leukovorin, amino-imidazol-karboksamidribonukleotid transformilaza, 5-flouroacil, ili folatni transporter. U određenim otelotvorenjima, inhibitor receptora faktora rasta je erlotinib ili gefitinib. U određenim otelotvorenjima, inhibitor angiogeneze je bevacizumab, talidomid, karboksiamidotriazol, TNP-470, CM101, IFN-α, faktor trombocita-4, suramin, SU5416, trombospondin, VEGFR antagonist, inhibitorni faktor angiogeneze izveden iz hrskavice, inhibitor matrične metaloproteaze, angiostatin, endostatin, 2-metoksistradiol, tekogalan, tetratiomolibdat, prolaktin ili linomid. U određenim otelotvorenjima, inhibitor kinaze je bevacizumab, BIBW 2992, cetuksimab, imatinib, trastuzumab, gefitinib, ranibizumab, pegaptanib, sorafenib, dasatinib, sunitinib, erlotinib, nilotinib, lapatinib, panitumumab, vandetanib, E7080, pazopanib, mubritinib, or fostamatinib.
[0056] U određenim otelotvorenjima, primena pacijentu koji ima rak rezultuje smanjenjem
1
veličine tumora i/ili broja tumora. U određenim otelotvorenjima, primena pacijentu koji ima rak sprečava ili odlaže povećanje veličine tumora i/ili broja tumora. U određenim otelotvorenjima, primena pacijentu koji ima rak sprečava ili usporava metastatsku progresiju. U određenim otelotvorenjima, primena pacijentu koji ima rak produžava ukupno vreme preživljavanja i/ili preživljavanje pacijenta bez progresije. U nekim otelotvorenjima, ovde obelodanjeni postupci uključuju odabir pacijenta sa povišenim serumskim alfa-fetoproteinom i/ili povišenim serumskim des-gama-karboksiprotrombinom. U određenim otelotvorenjima, ovde obelodanjeni postupci uključuju smanjenje serumskog alfa-fetoproteina i/ili serumskog des-gama-karboksiprothrombina. U nekim otelotvorenjima, ovde pruženi postupci uključuju odabir životinje koja ima abnormalnu funkciju jetre.
[0057] U bilo kom od ovde obelodanjenih postupaka, pacijent je čovek.
[0058] U bilo kom od ovde obelodanjenih postupaka, jedinjenje je prisutno kao farmaceutski sastav.
[0059] Bilo koje ovde navedeno jedinjenje može biti za upotrebu u terapiji. Bilo koje ovde navedeno jedinjenje može biti za upotrebu u tretmanu fibroze. Bilo koje ovde navedeno jedinjenje može biti za upotrebu u promociji zarastanja rana. Bilo koje ovde navedeno jedinjenje može biti za upotrebu u tretmanu raka. Bilo koje ovde navedeno jedinjenje može biti za upotrebu u sprečavanju i/ili odlaganju pojave metastaza.
[0060] Bilo koje ovde navedeno jedinjenje može biti za upotrebu u tretmanu srčanih bolesti.
[0061] Bilo koje ovde navedeno jedinjenje može biti za upotrebu u pripremi leka. Bilo koje ovde navedeno jedinjenje može biti za upotrebu u pripremi leka za tretman fibroze. Bilo koje ovde navedeno jedinjenje može biti za upotrebu u pripremi leka za pospešivanje zarastanja rana. Bilo koje ovde navedeno jedinjenje može biti za upotrebu u pripremi leka za tretman raka. Bilo koje ovde navedeno jedinjenje može biti za upotrebu u pripremi leka za sprečavanje i/ili odlaganje pojave metastaza.
KRATAK OPIS SLIKA
[0062]
Slika 1 prikazuje odnos urinarnog albumina i kreatinina (ACR, µgAlb/mgCr) u mišjem modelu ishemijske reperfuzije/nefrektomije (IR/Nx) kojima se primenjuju anti-miR21 jedinjenja, kao što je opisano u Primeru 5.
Slika 2 prikazuje eksprimiranje (A) kolagena 1A1 i (B) kolagena 3A1 u bubrezima mišjeg UUO modela, kojima se primenjuju anti-miR21 jedinjenja, kao što je opisano u Primeru 6.
DETALJAN OPIS
[0063] Ukoliko nije drugačije definisano, svi ovde korišćeni tehnički i naučni izrazi imaju isto značenje kao što ih uobičajeno razume stručnjak u oblasti kojoj pronalazak pripada. Ako nisu pružene specifične definicije, nomenklatura koja se koristi u vezi sa analitičkom hemijom, sintetičkom organskom hemijom i medicinskom i farmaceutskom hemijom, ovde opisani postupci i tehnike, dobro su poznati i često se koriste u struci. U slučaju da ovde postoji više definicija pojmova, one u ovom odeljku prevladavaju. Standardne tehnike mogu se koristiti za hemijsku sintezu, hemijsku analizu, farmaceutsku pripremu, formulaciju i isporuku i tretman pacijenta. Određene takve tehnike i postupci mogu se naći, na primer, u „Modifikacije ugljenih hidrata u antisens istraživanju “Carbohydrate Modifications in Antisense Research“ uređeno od strane Sangvi i Cook, American Chemical Society, Washington D.C., 1994; i „Remington's Pharmaceutical Sciences,“ Mack Publishing Co., Easton, Pa., 18. izdanje, 1990. Kada se upućuje na URL ili drugi takav identifikator ili adresu, podrazumeva se da se takvi identifikatori mogu menjati i da se određene informacije na Internetu mogu menjati, ali da se ekvivalentne informacije mogu naći pretragom interneta. Pozivanje na njih dokazuje dostupnost i javno širenje takvih informacija.
[0064] Pre nego što se predloženi sastavi i postupci obelodane i opišu, treba shvatiti da je ovde korišćena terminologija namenjena samo opisivanju određenih otelotvorenja i da nije ograničena. Mora se primetiti da, kao što se koristi u specifikaciji i priloženim zahtevima, oblici jednine uključuju oblike množine, osim ako kontekst jasno ne nalaže drugačije.
Definicije
[0065] „Fibroza“ označava stvaranje ili razvoj viška vlaknastog vezivnog tkiva u organu ili tkivu. U određenim otelotvorenjima, fibroza se javlja kao reparativni ili reaktivni proces. U nekim otelotvorenjima, fibroza se javlja kao odgovor na oštećenje ili povredu. Izraz
1
„fibroza“ treba shvatiti kao stvaranje ili razvoj viška vlaknastog vezivnog tkiva u organu ili tkivu kao reparativni ili reaktivni proces, za razliku od stvaranja vlaknastog tkiva kao normalnog sastojka organa ili tkiva.
[0066] „Pacijent za kog se sumnja da ima“ označava pacijenta koji pokazuje jedan ili više kliničkih pokazatelja bolesti.
[0067] „Pacijent za kog se sumnja da ima fibrozu“ označava pacijenta koji pokazuje jedan ili više kliničkih pokazatelja fibroze.
[0068] „Fibroblast“ označava ćeliju iz koje nastaje vezivno tkivo.
[0069] „Fibroproliferativni poremećaj“ označava poremećaj koji karakteriše prekomerna proliferacija i/ili aktivacija fibroblasta.
[0070] „Rak jetre“ označava maligni tumor jetre, bilo primarni rak ili metastazirani rak. U određenim otelotvorenjima, rak jetre uključuje, ali nije ograničen na, rak koji nastaje iz hepatocita, kao što su, na primer, hepatomi i hepatocelularni rakovi; fibrolamelarni rak; i holangiokarcinomi (ili rak žučnih kanala).
[0071] „Metastaze“ označavaju proces kojim se rak širi sa mesta na kom je prvi put nastao kao primarni tumor na druga mesta u telu. Metastatska progresija primarnog tumora odražava više faza, uključujući razdvajanje od susednih ćelija primarnog tumora, preživljavanje u cirkulaciji i rast na sekundarnom mestu.
[0072] „Ukupno vreme preživljavanja“ označava vremenski period tokom kog pacijent preživi nakon dijagnoze ili tretmana bolesti. U određenim otelotvorenjima, bolest je rak. U nekim otelotvorenjima, ukupno vreme preživljavanja je preživljavanje nakon dijagnoze. U nekim otelotvorenjima, celokupno vreme preživljavanja je preživljavanje nakon početka tretmana.
[0073] „Preživljavanje bez progresije bolesti“ označava vremenski period tokom kog pacijent koji ima bolest preživljava, bez pogoršanja bolesti. U određenim otelotvorenjima, preživljavanje bez progresije bolesti procenjuje se gradiranjem ili bodovanjem bolesti. U
1
određenim otelotvorenjima, preživljavanje bez progresije bolesti pacijenta koji ima rak jetre procenjuje se procenom veličine tumora, broja tumora i/ili metastaza.
[0074] „Anti-miR“ označava oligonukleotid koji ima nukleobaznu sekvencu koja je komplementarna sa mikroRNK. U određenim otelotvorenjima, anti-miR je modifikovani oligonukleotid.
[0075] „Anti-miR-X“ gde „miR-X“ označava određenu mikroRNK, što znači oligonukleotid koji ima nukleobaznu sekvencu koja je komplementarna sa miR-X. U nekim otelotvorenjima, anti-miR-X je komplementaran sa miR-X. U određenim otelotvorenjima, anti-miR-X je najmanje 80%, najmanje 85%, najmanje 90% ili najmanje 95% komplementaran sa miR-X. U određenim otelotvorenjima, anti-miR-X je modifikovani oligonukleotid.
[0076] „miR-21“ označava zrelu miRNK koja ima nukleobaznu sekvencu UAGCUUAUCAGACUGAUGUUGA (SEQ ID NO: 1).
[0077] „Sekvenca matične petlje miR-21“ označava sekvencu matične petlje koja ima nukleobaznu sekvencu
[0078] „Ciljana nukleinska kiselina“ označava nukleinsku kiselinu za koju je oligomerno jedinjenje dizajnirano za hibridizaciju.
[0079] „Ciljanje“ označava proces dizajniranja i odabira nukleobazne sekvence koja će se hibridizovati sa ciljanom nukleinskom kiselinom.
[0080] „Ciljano na“ označava imati nukleobaznu sekvencu koja će omogućiti hibridizaciju do ciljane nukleinske kiseline.
[0081] „Ciljano delovanje“ označava interakciju oligonukleotida sa mikroRNK kojoj je komplementaran, na način koji menja aktivnost, eksprimiranje ili nivo mikroRNK. U određenim otelotvorenjima, ciljano delovanje znači anti-miR u interakciji sa mikroRNK kojoj je komplementaran, tako da je aktivnost mikroRNK inhibirana.
1
[0082] „Modulacija“ označava poremećaj funkcije, količine ili aktivnosti. U određenim otelotvorenjima, modulacija znači povećanje funkcije, količine ili aktivnosti. U određenim otelotvorenjima, modulacija znači smanjenje funkcije, količine ili aktivnosti.
[0083] „Eksprimiranje“ označava bilo koje funkcije i korake pomoću kojih se kodirane informacije gena pretvaraju u strukture prisutne i operativne u ćeliji.
[0084] „5' ciljano mesto“ označava nukleobazu ciljane nukleinske kiseline koja je komplementarna sa 3'-najdaljom nukleobazom određenog oligonukleotida.
[0085] „3' ciljano mesto“ označava nukleobazu ciljane nukleinske kiseline koja je komplementarna sa 5'-najdaljom nukleobazom određenog oligonukleotida.
[0086] „Region“ označava deo povezanih nukleozida unutar nukleinske kiseline. U određenim otelotvorenjima, oligonukleotid ima nukleobaznu sekvencu koja je komplementarna regionu ciljane nukleinske kiseline. Na primer, u određenim takvim otelotvorenjima oligonukleotid je komplementaran regionu mikroRNK sekvence matične petlje. U određenim takvim otelotvorenjima, oligonukleotid je komplementaran sa regionom mikroRNK sekvence matične petlje.
[0087] „Segment“ označava manji ili pod-deo regiona.
[0088] „Nukleobazna sekvenca“ označava redosled susednih nukleobaza u oligomernom jedinjenju ili nukleinskoj kiselini, tipično navedenim u orijentaciji 5' ka 3', nezavisno od bilo kakvih modifikacija šećera, veza i/ili nukleobaze.
[0089] „Susedne nukleobaze“ označavaju nukleobaze koje su neposredno susedne nukleinskoj kiselini.
[0090] „Komplementarnost nukleobaze“ označava sposobnost dve nukleobaze da se nekovalentno uparuju vodoničnom vezom.
[0091] „Komplementarno“ označava da je jedna nukleinska kiselina sposobna za hibridizaciju sa drugom nukleinskom kiselinom ili oligonukleotidom. U određenim
1
otelotvorenjima, komplementarno se odnosi na oligonukleotid sposoban za hibridizaciju sa ciljanom nukleinskom kiselinom.
[0092] „Potpuno komplementaran“ označava da je svaka nukleobaza oligonukleotida sposobna da se upari sa nukleobazom na svakom odgovarajućem položaju u ciljanoj nukleinskoj kiselini. U određenim otelotvorenjima, oligonukleotid je komplementaran mikroRNK, tj. svaka nukleobaza oligonukleotida je komplementarna nukleobazi na odgovarajućem položaju u mikroRNK. U određenim otelotvorenjima, oligonukleotid u kom svaka nukleobaza ima komplementarnost sa nukleobazom unutar regiona mikroRNK sekvence matične petlje u potpunosti je komplementaran mikroRNK sekvenci matične petlje.
[0093] „Procentualna komplementarnost“ označava procenat nukleobaza oligonukleotida koji su komplementarni sa delom jednake dužine ciljane nukleinske kiseline. Procenat komplementarnosti izračunava se deljenjem broja nukleobaza oligonukleotida koji su komplementarni nukleobazama na odgovarajućim položajima u ciljanoj nukleinskoj kiselini sa ukupnim brojem nukleobaza u oligonukleotidu.
[0094] „Procenat identičnosti“ označava broj nukleobaza u prvoj nukleinskoj kiselini koje su identične nukleobazama na odgovarajućim položajima u drugoj nukleinskoj kiselini, podeljen ukupnim brojem nukleobaza u prvoj nukleinskoj kiselini. U određenim otelotvorenjima, prva nukleinska kiselina je mikroRNK, a druga nukleinska kiselina je mikroRNK. U određenim otelotvorenjima, prva nukleinska kiselina je oligonukleotid, a druga nukleinska kiselina je oligonukleotid.
[0095] „Hibridizovati“ označava kalemljenje komplementarnih nukleinskih kiselina koje se javljaju kroz komplementarnost nukleobaze.
[0096] „Nepodudarenost“ označava nukleobazu prve nukleinske kiseline koja nije sposobna za uparivanje sa nukleobazom na odgovarajućem položaju druge nukleinske kiseline.
[0097] „Identično“ u kontekstu nukleobaznih sekvenci znači da imaju istu nukleobaznu sekvencu, nezavisno od modifikacija šećera, veze i/ili nukleobaze i nezavisno od metilnog stanja bilo kog prisutnog pirimidina.
1
[0098] „MikroRNK“ označava endogenu nekodirajuću RNK između 18 i 25 nukleobaza, koja je proizvod cepanja pre-mikroRNK enzimom Dicer. Primeri zrelih mikroRNK nalaze se u bazi podataka mikroRNK koja je poznata kao miRBase (http://microrna.sanger.ac.uk/). U određenim otelotvorenjima, mikroRNK se skraćuje kao „mikroRNK“ ili „miR."
[0099] „Pre-mikroRNK“ ili „pre-miR“ označava nekodirajuću RNK koja ima strukturu ukosnice, koja je proizvod cepanja pri-miR dvostrukom lančanom RNK-specifičnom ribonukleazom poznatom kao Drosha.
[0100] „Sekvenca matične petlje“ označava RNK koja ima strukturu ukosnice i sadrži zrelu mikroRNK sekvencu. Pre-mikroRNK sekvence i sekvence matične petlje mogu se preklapati. Primeri sekvenci matične petlje nalaze se u bazi podataka mikroRNK koja je poznata kao miRBase (http://microma.sanger.ac.uk/).
[0101] „Pri-mikroRNK“ ili „pri-miR“ označava nekodirajuću RNK koja ima strukturu ukosnice koja je supstrat za dvolančanu RNK-specifičnu ribonukleazu Drosha.
[0102] „mikroRNK prekursor“ označava transkript koji potiče od genomske DNK i koji sadrži nekodirajuću, strukturiranu RNK koja sadrži jednu ili više mikroRNK sekvenci. Na primer, u određenim otelotvorenjima, mikroRNK prekursor je pre-mikroRNK. U određenim otelotvorenjima, mikroRNK prekursor je pri-mikroRNK.
[0103] „MikroRNK-regulisan transkript“ označava transkript koji je regulisan pomoću mikroRNK.
[0104] „Monocistronski transkript“ označava mikroRNK prekursor koji sadrži jednu mikroRNK sekvencu.
[0105] „Policistronski transkript“ označava mikroRNK prekursor koji sadrži dve ili više mikroRNK sekvenci.
[0106] „Sekvenca semena“ označava nukleobaznu sekvencu koja sadrži od 6 do 8 susednih nukleobaza nukleobaza 1 do 9 od 5'-kraja zrele mikroRNK sekvence.
2
[0107] „Sekvenca podudaranja semena“ označava nukleobaznu sekvencu koja je komplementarna sekvenci semena i iste je dužine kao sekvenca semena.
[0108] „Oligomerno jedinjenje“ označava jedinjenje koje sadrži mnoštvo povezanih monomernih podjedinica. Oligomerna jedinjenja obuhvataju oligonukleotide.
[0109] „Oligonukleotid“ označava jedinjenje koje sadrži mnoštvo povezanih nukleozida, od kojih svaki može biti modifikovan ili nemodifikovan, nezavisno jedan od drugog.
[0110] „Prirodna internukleozidna veza“ označava 3' do 5' fosfodiestarsku vezu između nukleozida.
[0111] „Prirodni šećer“ označava šećer koji se nalazi u DNK (2'-H) ili RNK (2'-OH).
[0112] „Internukleozidna veza“ označava kovalentnu vezu između susednih nukleozida.
[0113] „Povezani nukleozidi“ označavaju nukleozide spojene kovalentnom vezom.
[0114] „Nukleobaza“ označava heterociklični deo sposoban za nekovalentno uparivanje sa drugom nukleobazom.
[0115] „Nukleozid“ označava nukleobazu povezanu sa šećernim delom.
[0116] „Nukleotid“ označava nukleozid koji ima fosfatnu grupu kovalentno povezanu sa šećernim delom nukleozida.
[0117] „Jedinjenje koje sadrži modifikovani oligonukleotid koji se sastoji od“ određenog broja povezanih nukleozida označava jedinjenje koje uključuje modifikovani oligonukleotid koji ima određeni broj povezanih nukleozida. Prema tome, jedinjenje može sadržati dodatne supstituente ili konjugate. Ako nije drugačije naznačeno, jedinjenje ne uključuje nikakve dodatne nukleozide osim onih u oligonukleotidu.
[0118] „Jedinjenje koje sadrži modifikovani oligonukleotid koji se sastoji od“ određenog broja povezanih nukleozida označava jedinjenje koje uključuje modifikovani oligonukleotid koji ima određeni broj povezanih nukleozida. Prema tome, jedinjenje može sadržati dodatne supstituente ili konjugate. Ukoliko nije drugačije naznačeno, jedinjenje ne uključuje nikakve dodatne nukleozide osim onih modifikovanog oligonukleotida.
[0119] „Modifikovani oligonukleotid“ označava oligonukleotid koji ima jednu ili više modifikacija u odnosu na prirodni terminus, šećer, nukleobazu i/ili internukleozidnu vezu. Modifikovani oligonukleotid može sadržati nemodifikovane nukleozide.
[0120] „Jednolančani modifikovani oligonukleotid“ označava modifikovani oligonukleotid koji nije hibridizovan sa komplementarnim lancem.
[0121] „Modifikovani nukleozid“ označava nukleozid koji ima bilo kakvu promenu u odnosu na prirodni nukleozid. Modifikovani nukleozid može imati modifikovani šećer i nemodifikovanu nukleozidnu bazu. Modifikovani nukleozid može imati modifikovani šećer i modifikovanu nukleozidnu bazu. Modifikovani nukleozid može imati prirodni šećer i modifikovanu nukleozidnu bazu. U određenim otelotvorenjima, modifikovani nukleozid je biciklični nukleozid. U određenim otelotvorenjima, modifikovani nukleozid je ne-biciklični nukleozid.
[0122] „Modifikovana internukleozidna veza“ označava svaku promenu u odnosu na prirodnu internukleozidnu vezu.
[0123] „Fosforotioatna internukleozidna veza“ označava vezu između nukleozida gde je jedan od ne-premošćujućih atoma atom sumpora.
[0124] „Modifikovani šećerni deo“ označava supstituciju i/ili bilo koju promenu od prirodnog šećera.
[0125] „Nemodifikovana nukleobaza“ označava prirodne heterociklične baze od RNK ili DNK: purinske baze adenin (A) i gvanin (G), i pirimidinske baze timin (T), citozin (C) (uključujući 5-metilcitozin) i uracil (U).
[0126] „5-metilcitozin“ označava citozin koji sadrži metil grupu vezanu za položaj 5.
[0127] „Ne-metilirani citozin“ označava citozin koji nema metil grupu vezanu za položaj 5.
[0128] „Modifikovana nukleobaza“ označava bilo koju nukleobazu koja nije nemodifikovana nukleobaza.
[0129] „Furanozil“ označava strukturu koja se sastoji od 5-očlanog prstena koji se sastoji od četiri atoma ugljenika i jednog atoma kiseonika.
[0130] „Prirodni furanozil“ označava ribofuranozil koji se nalazi u prirodnoj RNK ili dezoksiribofuranozil koji se nalazi u prirodnoj DNK.
[0131] „Šećerni deo“ označava prirodni furanozil ili modifikovani šećerni deo.
„Modifikovani šećerni deo“ označava supstituisani šećerni deo ili surogat šećera.
[0132] „Supstituisani šećerni deo“ označava furanozil koji nije prirodni furanozil.
Supstituisani šećerni delovi uključuju, ali se ne ograničavaju na šećerne delove koji sadrže modifikacije na 2'-položaju, 5'-položaju i/ili 4'-položaju prirodnog furanozila. Određeni supstituisani šećerni delovi su biciklični šećerni delovi.
[0133] „Surogat šećera“ označava strukturu koja ne sadrži furanozil i koja je sposobna da zameni prirodni furanozil nukleozida, tako da se rezultujući nukleozid može (1) ugraditi u oligonukleotid i (2) hibridizovati u komplementarni nukleozid. Takve strukture uključuju relativno jednostavne promene furanozila, kao što su prstenovi koji sadrže različit broj atoma (npr. 4, 6 ili 7-očlani prstenovi); zamena kiseonika furanozila atomom koji nije kiseonik (npr. ugljenik, sumpor ili azot); ili i promena broja atoma i zamena kiseonika. Takve strukture mogu takođe sadržati supstitucije koje odgovaraju onima koje su opisane za supstituisane šećerne delove (npr.6-očlani surogati karbocikličnog bicikličnog šećera koji opciono sadrže dodatne supstituente). Surogat šećera takođe uključuje složenije zamene šećera (npr. neprstenasti sistem peptidne nukleinske kiseline). Surogat šećera uključuje, ali nisu ograničeni na, morfoline, cikloheksenile i cikloheksitole.
[0134] „2'-O-metil šećer“ ili „2'-OMe šećer“ označava šećer koji ima O-metil modifikaciju na položaju 2'.
2
[0135] „2'-O-metoksietil šećer“ ili „2'-MOE šećer“ označava šećer koji ima O-metoksietil modifikaciju na položaju 2'.
[0136] „2'-O-fluoro“ ili „2'-F“ označava šećer koji ima fluoro modifikaciju 2' položaju.
„Biciklični šećerni deo“ označava modifikovani šećerni deo koji sadrži 4 do 7-očlani prsten (uključujući, ali ne ograničavajući se na furanozil) koji sadrži most koji povezuje dva atoma 4 do 7-očlanog prstena kako bi se stvorio drugi prsten, što rezultuje bicikličnom strukturom. U određenim otelotvorenjima, 4 do 7-očlani prsten je šećerni prsten. U određenim otelotvorenjima, 4 do 7-očlani prsten je furanozil. U određenim takvim otelotvorenjima, most povezuje 2'-ugljenik i 4'-ugljenik furanozila.
[0137] „Šećerni deo zaključane nukleinske kiseline (LNK)“ označava supstituisani šećerni deo koji sadrži (CH2)-O most između 4' i 2' atoma prstena furanoze.
[0138] „ENK šećerni deo“ označava supstituisani šećerni deo koji sadrži (CH2)2-O most između 4' i 2' atoma prstena furanoze.
[0139] „Ograničeni etilni (cEt) šećerni deo“ označava supstituisani šećerni deo koji sadrži CH(CH3)-O most između 4' i 2' atoma prstena furanoze. U određenim otelotvorenjima, CH(CH3)-O most je ograničen u S orijentaciji. U određenim otelotvorenjima, (CH2)2-O je ograničen u R orijentaciji.
[0140] „S-cEt šećerni deo“ označava supstituisani šećerni deo koji sadrži S-ograničen CH(CH3)-O most između 4' i 2' atoma prstena furanoze.
[0141] „R-cEt šećerni deo“ označava supstituisani šećerni deo koji sadrži R-ograničen CH(CH3)-O most između 4' i 2' atoma prstena furanoze.
[0142] „2'-O-metil“ nukleozid označava 2'-modifikovani nukleozid koji ima modifikaciju 2'-O-metil šećera.
[0143] „2'-O-metoksietil nukleozid“ označava 2'-modifikovani nukleozid koji ima modifikaciju 2'-O-metoksietil-šećera. 2'-O-metoksietil nukleozid može sadržati modifikovanu ili nemodifikovanu nukleobazu.
[0144] „2'-fluoro nukleozid“ označava 2'-modifikovani nukleozid koji ima modifikaciju 2'-fluoro šećera.2'-fluoro nukleozid može sadržati modifikovanu ili nemodifikovanu nukleobazu.
[0145] „Biciklični nukleozid“ označava 2'-modifikovani nukleozid koji ima biciklični šećerni deo. Biciklični nukleozid može imati modifikovanu ili nemodifikovanu nukleozidnu bazu.
[0146] „cEt nukleozid“ označava nukleozid koji sadrži cEt šećerni deo. cEt nukleozid može sadržati modifikovanu ili nemodifikovanu nukleobazu.
[0147] „S-cEt nukleozid“ označava nukleozid koji sadrži S-cEt šećerni deo.
[0148] „R-cEt nukleozid“ označava nukleozid koji sadrži R-cEt šećerni deo.
[0149] „Ne-biciklični nukleozid“ označava nukleozid koji ima šećer koji nije biciklični šećer. U određenim otelotvorenjima, ne-biciklični nukleozid sadrži prirodni šećer. U nekim otelotvorenjima, ne-biciklični nukleozid sadrži modifikovani šećer. U određenim otelotvorenjima, ne-biciklični nukleozid je β-D-dezoksiribonukleozid. U određenim otelotvorenjima, ne-biciklični nukleozid je 2'-O-metoksietil nukleozid.
[0150] „β-D-dezoksiribonukleozid“ označava prirodni DNK nukleozid. β-D-dezoksiribonukleozid može sadržati modifikovanu ili nemodifikovanu nukleobazu.
[0151] „β-D-ribonukleozid“ označava prirodni RNK nukleozid. β-D-ribonukleozid može sadržati modifikovanu ili nemodifikovanu nukleobazu.
[0152] „LNK nukleozid“ označava nukleozid koji sadrži LNK šećerni deo.
[0153] „ENK nukleozid“ označava nukleozid koji sadrži ENK šećerni deo.
[0154] „Motiv“ označava obrazac modifikovanih i/ili nemodifikovanih nukleobaza, šećera i/ili internukleozidnih veza u oligonukleotidu. U određenim otelotvorenjima, motiv je nukleozidni obrazac.
[0155] „Nukleozidni obrazac“ označava obrazac modifikacija nukleozida u modifikovanom
2
oligonukleotidu ili njegovom regionu. Nukleozidni obrazac je motiv koji opisuje raspored nukleozidnih modifikacija u oligonukleotidu.
[0156] „Potpuno modifikovani oligonukleotid“ znači da su svaka nukleobaza, svaki šećer i/ili svaka internukleozidna veza modifikovani.
[0157] „Uniformno modifikovani oligonukleotid“ znači da svaka nukleobaza, svaki šećer i/ili svaka internukleozidna veza imaju istu modifikaciju duž modifikovanog oligonukleotida.
[0158] „Stabilizujuća modifikacija“ označava modifikaciju nukleozida koja pruža poboljšanu stabilnost modifikovanom oligonukleotidu, u prisustvu nukleaza, u odnosu na onu koju pružaju 2'-dezoksinukleozidi povezani fosfodiestarskim internukleozidnim vezama. Na primer, u određenim otelotvorenjima, stabilizujuća modifikacija je stabilizujuća nukleozidna modifikacija. U nekim otelotvorenjima, stabilizujuća modifikacija je modifikacija internukleozidne veze.
[0159] „Stabilizujući nukleozid“ označava nukleozid modifikovan da pruži poboljšanu stabilnost nukleaze oligonukleotidu u odnosu na onu koju pruža 2'-dezoksinukleozid. U jednom aspektu, stabilizujući nukleozid je 2'-modifikovani nukleozid.
[0160] „Stabilizujuća internukleozidna veza“ označava internukleozidnu vezu koja pruža poboljšanu stabilnost nukleaze oligonukleotidu u odnosu na onu koju pruža fosfodiestarska internukleozidna veza. U jednom otelotvorenju, stabilizujuća internukleozidna veza je fosforotioatna internukleozidna veza.
[0161] „Pacijent“ označava čoveka ili životinju koja nije čovek, odabranu za tretman ili terapiju.
[0162] „Pacijent koji ima potrebu za tim“ označava stanje u kom je pacijent identifikovan kao da su mu potrebni terapija ili tretman.
[0163] „Pacijent za kog se sumnja da ima“ označava pacijenta koji pokazuje jedan ili više kliničkih pokazatelja bolesti.
2
[0164] „Primena“ označava pružanje farmaceutskog agensa ili sastava pacijentu i uključuje, ali nije ograničen na, primenu od strane medicinskog stručnjaka i samo-primenu.
[0165] „Parenteralna primena“ podrazumeva primenu injekcijom ili infuzijom.
[0166] Parenteralna primena uključuje, ali nije ograničena na, subkutanu primenu, intravensku primenu ili intramuskularnu primenu.
[0167] „Subkutana primena“ podrazumeva primenu neposredno ispod kože.
[0168] „Intravenska primena“ označava primenu u venu.
[0169] „Intrakardijalna primena“ označava primenu u srce. U nekim otelotvorenjima, intrakardijalna primena se dešava putem katetera. U određenim otelotvorenjima, intrakardijalna primena se javlja putem operacije na otvorenom srcu.
[0170] „Plućna primena“ označava primenu u pluća.
[0171] „Istovremena primena“ odnosi se na istovremenu primenu dva agensa na bilo koji način na koji se kod pacijenta istovremeno pokazuju farmakološki efekti oba agensa.
Istovremena primena ne zahteva da se oba agensa primenjuju u jednom farmaceutskom sastavu, u istom doznom obliku ili istim putem primene. Efekti oba agensa ne moraju se istovremeno manifestovati. Efekti se moraju preklapati samo u određenom vremenskom periodu, i ne moraju biti skupi.
[0172] „Trajanje“ označava vremenski period tokom kog se neka aktivnost ili događaj nastavljaju. U određenim otelotvorenjima, trajanje tretmana je vremenski period tokom kog se primenjuju doze farmaceutskog agensa ili farmaceutskog sastava.
[0173] „Terapija“ označava postupak tretmana bolesti. U nekim otelotvorenjima, terapija uključuje, ali nije ograničena na, hemoterapiju, terapiju zračenjem ili primenu farmaceutskog agensa.
[0174] „Tretman“ podrazumeva primenu jednog ili više specifičnih postupaka koji se koriste za tretman ili ublažavanje bolesti. U određenim otelotvorenjima, specifični postupak je
2
primena jednog ili više farmaceutskih agenasa.
[0175] „Ublažavanje“ označava smanjenje težine najmanje jednog pokazatelja stanja ili bolesti. U određenim otelotvorenjima, poboljšanje uključuje kašnjenje ili usporavanje napredovanja jednog ili više indikatora stanja ili bolesti. Ozbiljnost indikatora može se odrediti subjektivnim ili objektivnim merama koje su poznate stručnjacima.
[0176] „Pod rizikom od razvoja“ označava stanje u kom je pacijent predisponiran da razvije stanje ili bolest. U određenim otelotvorenjima, pacijent pod rizikom od razvoja stanja ili bolesti pokazuje jedan ili više simptoma stanja ili bolesti, ali ne pokazuje dovoljan broj simptoma kako bi se dijagnostikovalo stanje ili bolest. U određenim otelotvorenjima, pacijent pod rizikom od razvoja stanja ili bolesti pokazuje jedan ili više simptoma stanja ili bolesti, ali u manjoj meri potreban je za dijagnozu stanja ili bolesti.
[0177] „Sprečiti početak“ označava sprečavanje razvoja stanja ili bolesti kod pacijenta koji je pod rizikom od razvoja bolesti ili stanja. U određenim otelotvorenjima, pacijent pod rizikom od razvoja bolesti ili stanja prima tretman sličan tretmanu koji prima pacijent koji već ima bolest ili stanje.
[0178] „Odložiti početak“ označava odložiti razvoj stanja ili bolesti kod pacijenta koji je pod rizikom od razvoja bolesti ili stanja. U određenim otelotvorenjima, pacijent pod rizikom od razvoja bolesti ili stanja prima tretman sličan tretmanu koji prima pacijent koji već ima bolest ili stanje.
[0179] „Terapijski agens“ označava farmaceutski agens koji se koristi za tretman, poboljšanje ili prevenciju bolesti.
[0180] „Doza“ označava određenu količinu farmaceutskog agensa koja se pruža u jednoj primeni. U određenim otelotvorenjima, doza se može primeniti u dva ili više bolusa, tablete ili injekcije. Na primer, u određenim otelotvorenjima, gde je subkutana primena poželjna, za željenu dozu je potrebna zapremina koju nije lako primeniti jednom injekcijom. U takvim otelotvorenjima, dve ili više injekcija mogu se koristiti za postizanje željene doze. U određenim otelotvorenjima, doza se može primeniti u dve ili više injekcija kako bi se smanjila reakcija na mestu injekcije kod pojedinca. U određenim otelotvorenjima, doza se
2
primenjuje kao spora infuzija.
[0181] „Dozna jedinica“ označava oblik u kom je pružen farmaceutski agens. U određenim otelotvorenjima, dozna jedinica je bočica koja sadrži liofilizovani oligonukleotid. U određenim otelotvorenjima, dozna jedinica je bočica koja sadrži rekonstituisani oligonukleotid.
[0182] „Terapeutski efikasna količina“ odnosi se na količinu farmaceutskog agensa koja pruža terapeutsku korist za životinju.
[0183] „Farmaceutski sastav“ označava mešavinu supstanci pogodnih za primenu kod pojedinca koja uključuje farmaceutski agens. Na primer, farmaceutski sastav može sadržati sterilni vodeni rastvor.
[0184] „Farmaceutski agens“ označava supstancu koja pruža terapeutski efekat kada se primenjuje pacijentu.
[0185] „Aktivni farmaceutski sastojak“ označava supstancu u farmaceutskom sastavu koja pruža željeni efekat.
[0186] „Poboljšana funkcija organa“ označava promenu funkcije organa prema normalnim granicama. U određenim otelotvorenjima, funkcija organa procenjuje se merenjem molekula koji se nalaze u krvi pacijenta. Na primer, u određenim otelotvorenjima, poboljšana funkcija jetre se meri smanjenjem nivoa transaminaza jetre u krvi.
[0187] „Prihvatljivi sigurnosni profil“ označava obrazac neželjenih efekata koji je unutar klinički prihvatljivih granica.
[0188] „Neželjeni efekat“ označava fiziološki odgovor koji se može pripisati tretmanu koje nije željeni efekat. U određenim otelotvorenjima, neželjeni efekti uključuju, ali nisu ograničeni na, reakcije na mestu injekcije, abnormalnosti testa funkcije jetre, abnormalnosti bubrežne funkcije, toksičnost jetre, bubrežnu toksičnost, abnormalnosti centralnog nervnog sistema i miopatije. Takvi neželjeni efekti mogu se otkriti direktno ili indirektno. Na primer, povećani nivo aminotransferaze u serumu može ukazivati na toksičnost jetre ili na abnormalnost funkcije jetre. Na primer, povećani bilirubin može ukazivati na toksičnost jetre
2
ili na abnormalnost funkcije jetre.
[0189] „Reakcija na mestu injekcije“ označava upalu ili abnormalno crvenilo kože na mestu injekcije kod pojedinca.
[0190] „Pridržavanje pacijenta“ označava pridržavanje preporučene ili propisane terapije od strane pacijenta.
[0191] „Pridržavati se“ označava pridržavanje preporučene terapije od strane pacijenta.
[0192] „Preporučena terapija“ označava tretman koji medicinski stručnjak preporučuje za tretman, poboljšanje, odlaganje ili sprečavanje bolesti.
Pregled
[0193] miR-21 je sveprisutno eksprimirana mikroRNK koja je povezana sa različitim ćelijskim procesima, uključujući ćelijsku diferencijaciju, proliferaciju, apoptozu i matrični obrt. Pored toga, miR-21 je povezan sa više bolesti. miR-21 je često regulisan na gore kod raka, i inhibicija miR-21 pokazala je smanjenje rasta tumora u nekoliko životinjskih modela raka. Inhibicija miR-21 u životinjskom modelu srčane hipertrofije pokazala je ulogu miR-21 u srčanim bolestima. Uloga u fibrozi prikazana je na životinjskim modelima fibroze srca, fibroze bubrega i fibroze pluća. Studija inhibicije miR-21 u modelu eksplantanta tkiva pokazala je da inhibicija miR-21 pospešuje zarastanje rana. Kao takvi, miR-21 inhibitori korisni su u raznim istraživanjima i kliničkim uslovima.
[0194] Kako bi se identifikovali snažni miR-21 inhibitori, dizajniran je veliki broj anit-miR-21 jedinjenja. Jedinjenja su varirala u dužini, kao i u broju, položaju i identitetu bicikličnih nukleozida i ne-bicikličnih nukleozida. Početna serija jedinjenja je testirana u in vitro testu luciferaze, koji je identifikovao podskup jedinjenja kao aktivna jedinjenja vitro aktivna jedinjenja. Ova in vitro aktivna jedinjenja zatim su ispitana u in vivo testovima za identifikaciju onih jedinjenja koja su snažni miR-21 inhibitori in vivo. Od početnog in vitro i in vivo ispitivanja, određena jedinjenja su izabrana kao osnova za dizajn dodatnih jedinjenja. Eksperimentalno uočene korelacije između strukture i aktivnosti (i in vitro i in vivo) korišćene su kao informacije za dizajn ovih dodatnih jedinjenja, sa daljim varijacijama dužine i izbora i rasporeda bicikličnih i ne-bicikličnih nukleozida. I in vitro i in vivo skrining testovi su zatim ponovljeni za ova dodatna jedinjenja. Određena jedinjenja su takođe testirana na druga svojstva, na primer, osetljivost na aktivnost egzonukleaze. Primećeno je da najaktivnija in vitro jedinjenja najaktivnija in vitro nisu nužno bila najaktivnija in vivo jedinjenja najaktivnija in vivo, i dalje da su neka umereno aktivni in vitro jedinjenja umereno aktivna in vitro bila visoko aktivna in vivo jedinjenja. Od 178 pregledanih jedinjenja in vitro tokom ovog procesa, 60 su identifikovano kao aktivna u testu luciferaze. Od ovih 60 aktivnih in vitro jedinjenja, podskup je identifikovan kao aktivan in vivo. Kroz ovaj iterativni postupak dizajniranja i skrininga jedinjenja, primećeno je da su jedinjenja koja imaju određene obrasce bicikličnih i ne-bicikličnih modifikacija snažni miR-21 inhibitori in vivo. Kao takva, ova jedinjenja su korisna za modulaciju ćelijskih procesa koji se promovišu aktivnošću miR-21. Dalje, takva jedinjenja su korisna za tretman, prevenciju i/ili odlaganje pojave bolesti povezanih sa miR-21. Takve bolesti mogu biti okarakterisane abnormalno visokim eksprimiranjem miR-21 u odnosu na uzorke koji nisu pogođeni bolešću. Takve bolesti uključuju, ali nisu ograničene na, fibrozu, akutnu povredu bubrega, srčanu hipertrofiju, infarkt miokarda i rak. Pored toga, ovde opisani sastavi i postupci mogu se koristiti za pospešivanje zarastanja rana.
Određeni modifikovani oligonukleotidi ciljani na miR-21
[0195] Ovde su pruženi modifikovani oligonukleotidi koji imaju određene obrasce bicikličnih i ne-bicikličnih nukleozida, kako su definisani patentnim zahtevima. Modifikovani oligonukleotidi koji imaju ovde identifikovane obrasce su efikasni inhibitori miR-21 aktivnosti.
[0196] Svaki od ovde prikazanih nukleozidnih uzoraka prikazan je u orijentaciji 5' ka 3'.
[0197] U određenim slučajevima, ovde su obelodanjena jedinjenja koja obuhvataju modifikovani oligonukleotid koji se sastoji od 8 do 22 povezanih nukleozida, gde je nukleobazna sekvenca modifikovanog oligonukleotida komplementarna sa miR-21 (SEQ ID NO: 1) i gde modifikovani oligonukleotid obuhvata najmanje 8 susednih nukleozida narednog nukleozidnog obrasca I u 5' ka 3' orijentaciji:
(R)X-N<B>-N<Q>-N<Q>-N<B>-(N<Q>-N<Q>-N<Q>-N<B>)3-N<Q>-N<Z>
1
gde je svaki R ne-biciklični nukleozid; X iznosi od 1 do 4;
svaki N<B>je biciklični nukleozid;
svaki N<Q>je ne-biciklični nukleozid; i
svaki N<Z>je modifikovan nukleozid.
[0198] U određenim otelotvorenjima nukleozidnog obrasca I, X iznosi 1. U određenim otelotvorenjima nukleozidnog obrasca I, X iznosi 2. U određenim otelotvorenjima nukleozidnog obrasca I, X iznosi 3. U određenim otelotvorenjima nukleozidnog obrasca I, X iznosi 4.
[0199] U određenim slučajevima, ovde su obelodanjena jedinjenja koja obuhvataju modifikovani oligonukleotid koji se sastoji od 8 do 19 povezanih nukleozida, gde je nukleobazna sekvenca modifikovanog oligonukleotida komplementarna sa miR-21 (SEQ ID NO: 1) i gde modifikovani oligonukleotid obuhvata najmanje 8 susednih nukleozida narednog nukleozidnog obrasca II u 5' ka 3' orijentaciji:
N<M>-N<B>-N<Q>-N<Q>-N<B>-(N<Q>-N<Q>-N<Q>-N<B>)3-N<Q>-N<Z>
gde N<M>je modifikovan nukleozid koji nije biciklični nukleozid;
svaki N<B>je biciklični nukleozid;
svaki N<Q>je ne-biciklični nukleozid; i
N<Z>je modifikovan nukleozid.
[0200] U određenim slučajevima, ovde su obelodanjena jedinjenja koja obuhvataju modifikovani oligonukleotid koji se sastoji od 8 do 22 povezanih nukleozida, gde je nukleobazna sekvenca modifikovanog oligonukleotida komplementarna sa miR-21 (SEQ ID NO: 1) i gde modifikovani oligonukleotid obuhvata najmanje 8 susednih nukleozida narednog nukleozidnog obrasca III u 5' ka 3' orijentaciji:
(R)X-N<b>-N<Q>-N<Q>-N<B>-(N<Q>-N<Q>-N<Q>-N<B>)3-N<Y>-N<Z>
gde je svaki R ne-biciklični nukleozid; X iznosi od 1 do 4;
svaki N<B>je biciklični nukleozid;
svaki N<Q>je ne-biciklični nukleozid;
N<Y>je modifikovan nukleozid ili nemodifikovan nukleozid; i
svaki N<Z>je modifikovan nukleozid.
2
[0201] U određenim otelotvorenjima nukleozidnog obrasca III, X iznosi 1. U određenim otelotvorenjima nukleozidnog obrasca I, X iznosi 2. U određenim otelotvorenjima nukleozidnog obrasca III, X iznosi 3. U određenim otelotvorenjima nukleozidnog obrasca III, X iznosi 4.
[0202] U određenim slučajevima, ovde su obelodanjena jedinjenja koja obuhvataju modifikovani oligonukleotid koji se sastoji od 8 do 19 povezanih nukleozida, gde je nukleobazna sekvenca modifikovanog oligonukleotida komplementarna sa miR-21 (SEQ ID NO: 1) i gde modifikovani oligonukleotid obuhvata najmanje 8 susednih nukleozida narednog nukleozidnog obrasca IV u 5' ka 3' orijentaciji:
N<M>-N<B>-N<Q>-N<Q>-N<B>-(N<Q>-N<Q>-N<Q>-N<B>)3-N<Y>-N<Z>
gde N<M>je modifikovan nukleozid koji nije biciklični nukleozid;
svaki N<B>je biciklični nukleozid;
svaki N<Q>je ne-biciklični nukleozid;
N<Y>je modifikovan nukleozid ili nemodifikovan nukleozid; i
N<Z>je modifikovan nukleozid.
[0203] Naredna otelotvorenja se primenjuju na bilo koji od nukleozidnih obrazaca kako je definisano patentnim zahtevima.
[0204] U određenim otelotvorenjima kako su definisana patentnim zahtevima, modifikovani oligonukleotid sadrži najmanje 16, najmanje 17, najmanje 18, najmanje 19, najmanje 20, najmanje 21 ili 22 susednih nukleozida ovde opisanog nukleozidnog obrasca.
[0205] U određenim otelotvorenjima bilo kog od ovde opisanih nukleozidnih obrazaca, nukleobazna sekvenca modifikovanog oligonukleotida je najmanje 90% komplementarna sa miR-21 (SEQ ID NO: 1). U određenim otelotvorenjima, nukleobazna sekvenca modifikovanog oligonukleotida je najmanje 95% komplementarna sa (SEQ ID NO: 1). U određenim otelotvorenjima, nukleobazna sekvenca modifikovanog oligonukleotida je 100% komplementarna sa (SEQ ID NO: 1).
[0206] U određenim otelotvorenjima bilo kog od ovde opisanih nukleozidnih obrazaca, nukleobazna sekvenca modifikovanog oligonukleotida je komplementarna sa miR-21 tako da je položaj 1 od mikroRNK uparen sa 3'-terminalnom nukleobazom oligonukleotida. Na primer:
Podrazumeva se da u SEQ ID NO: 3 i SEQ ID NO: 4 svaki „T“ u sekvenci može nezavisno biti ili „T“ nukleobaza ili „U“ nukleobaza, i da jedinjenje koje ima sekvencu SEQ ID NO: 3 ili SEQ ID NO: 4 može sadržati svaki T, svaki U ili bilo koju kombinaciju U i T. Prema tome, prisustvo „T“ na različitim položajima u SEQ ID NO: 3 i SEQ ID NO: 4 tokom predmetnog obelodanjenja i u pratećem spisku sekvenci nije ograničeno u pogledu toga da li je ta određena nukleobaza „T“ ili „U."
[0207] U određenim otelotvorenjima bilo kog od ovde opisanih nukleozidnih obrazaca, svaki biciklični nukleozid se nezavisno bira između LNK nukleozida, cEt nukleozida i ENK nukleozida. U određenim otelotvorenjima, šećerni delovi najmanje dva biciklična nukleozida se međusobno razlikuju. U određenim otelotvorenjima, svi biciklični nukleozidi imaju iste šećerne delove kao drugi. U određenim otelotvorenjima, svaki biciklični nukleozid je cEt nukleozid. U određenim otelotvorenjima, svaki biciklični nukleozid je LNK nukleozid.
[0208] U određenim otelotvorenjima bilo kog od ovde opisanih nukleozidnih obrazaca, cEt nukleozid je S-cEt nukleozid. U određenim otelotvorenjima bilo kog od ovde opisanih nukleozidnih obrazaca, cEt nukleozid je R-cEt nukleozid.
[0209] U određenim otelotvorenjima bilo kog od ovde opisanih nukleozidnih obrazaca, svaki ne-biciklični nukleozid se nezavisno bira između β-D-dezoksiribonukleozida, β-D-ribonukleozida, 2'-O-metil nukleozida, 2'-O-metoksietil nukleozida i 2'-fluoronukleozida.
[0210] U određenim otelotvorenjima bilo kog od ovde opisanih nukleozidnih obrazaca, svaki ne-biciklični nukleozid se nezavisno bira između β-D-dezoksiribonukleozida i 2'-O-metoksietil nukleozida.
4
[0211] U određenim otelotvorenjima bilo kog od ovde opisanih nukleozidnih obrazaca, najmanje dva ne-biciklična nukleozida sadrže šećerne delove koji se međusobno razlikuju i nezavisno se biraju između β-D-dezoksiribonukleozida, β-D-ribonukleozida, 2'-O-metil nukleozida, 2'-O-metoksietil nukleozida i 2'-fluoronukleozida.
[0212] U određenim otelotvorenjima bilo kog od ovde opisanih nukleozidnih obrazaca, najmanje dva ne-biciklična nukleozida sadrže šećerne delove koji se međusobno razlikuju i nezavisno se biraju između β-D-dezoksiribonukleozida i 2'-O-metoksietil nukleozida.
[0213] U određenim otelotvorenjima bilo kog od ovde opisanih nukleozidnih obrazaca, svaki ne-biciklični nukleozid ima istu vrstu šećernog dela i odabran je između β-D-dezoksiribonukleozida, β-D-ribonukleozida, 2'-O-metil nukleozida, 2'-O-metoksietil nukleozida i 2'-fluoronukleozida.
[0214] U određenim otelotvorenjima bilo kog od ovde opisanih nukleozidnih obrazaca, svaki ne-biciklični nukleozid je β-D-dezoksiribonukleozid. U određenim otelotvorenjima, svaki nebiciklični nukleozid je 2'-O-metil nukleozid.
[0215] U određenim otelotvorenjima bilo kog od ovde opisanih nukleozidnih obrazaca, ne više od 3 ne-biciklična nukleozida su 2'-O-metoksietil nukleozidi. U određenim otelotvorenjima, najviše 2 ne-biciklična nukleozida su 2'-O-metoksietil nukleozidi. U određenim otelotvorenjima, ne više od 1 ne-bicikličnog nukleozida je 2'-O-metoksietil nukleozid.
[0216] U određenim otelotvorenjima bilo kog od ovde opisanih nukleozidnih obrazaca, jedan ne-biciklični nukleozid je 2'-MOE nukleozid, i svaki drugi ne-biciklični nukleozid je β-D-dezoksiribonukleozid. U određenim otelotvorenjima, dva ne-biciklična nukleozida su 2'-O-metoksietil nukleozidi, i svaki drugi ne-biciklični nukleozid je β-D-dezoksiribonukleozid. U određenim otelotvorenjima, tri ne-biciklična nukleozida su 2'-O-metoksietil nukleozidi i svaki drugi ne-biciklični nukleozid je β-D-dezoksiribonukleozid.
[0217] U određenim otelotvorenjima bilo kog od ovde opisanih nukleozidnih obrazaca, 5'-najdalji ne-biciklični nukleozid i 3'-najdalji ne-biciklični nukleozid su 2'-O-metoksietil nukleozidi, i svaki drugi ne-biciklični nukleozid je β-D-dezoksiribonukleozid.
[0218] U određenim otelotvorenjima bilo kog nukleozidnog obrasca I, gde X iznosi 4, svaki nukleozid od R je 2'-O-metoksietil nukleozid. U određenim otelotvorenjima nukleozidnog obrasca I, gde X iznosi 4, dva nukleozida od R su β-D-dezoksiribonukleozidi, a dva nukleozida od R su 2'-O-metoksietil nukleozidi. U određenim otelotvorenjima nukleozidnog obrasca I, gde X iznosi 4, tri nukleozida od R su β-D-dezoksiribonukleozidi, i jedan nukleozid od R je 2'-O-metoksietil nukleozid.
[0219] U određenim otelotvorenjima nukleozidnog obrasca I, R je NR1-NR2-NR1-NR4 gde je N.R1 je 2'-MOE nukleozid, N.R2 je β-D-dezoksiribonukleozid, N.R3 je β-D-dezoksiribonukleozid i N.R4 je β-D-dezoksiribonukleozid.
[0220] U određenim otelotvorenjima nukleozidnog obrasca I, R se sastoji od četiri povezana nukleozida N<R1>-N<R2>-N<R3>-N<R4>, gde N<R1>je 2'-O-metoksietil nukleozid i svaki od N<R2>-N<R3>-N<R4>je β-D-dezoksiribonukleozid; svaki N<B>je S-cEt nukleozid; svaki N<Q>je β-D-dezoksiribonukleozid; i N<Z>je 2'-O-metoksietil nukleozid. U određenim otelotvorenjima, modifikovani oligonukleotid ima nukleobaznu sekvencu SEQ ID NO: 4, gde je svaki T u sekvenci nezavisno izabran od T i U.
[0221] U određenim otelotvorenjima nukleozidnog obrasca I, X iznosi 1 i svaki nukleozid od R je 2'-O-metoksietil nukleozid; svaki N<B>je S-cEt nukleozid; svaki N<Q>je 2'-O-metoksietil nukleozid; i N<Z>je 2'-O-metoksietil nukleozid. U određenim otelotvorenjima, modifikovani oligonukleotid ima nukleobaznu sekvencu SEQ ID NO: 3, gde je svaki T u sekvenci nezavisno izabran od T i U.
[0222] U određenim otelotvorenjima nukleozidnog obrasca I, X iznosi 4 i svaki nukleozid od R je 2'-O-metoksietil nukleozid; svaki N<B>je S-cEt nukleozid; svaki N<Q>je 2'-O-metoksietil nukleozid; i N<Z>je 2'-O-metoksietil nukleozid. U određenim otelotvorenjima, modifikovani oligonukleotid ima nukleobaznu sekvencu SEQ ID NO: 4, gde je svaki T u sekvenci nezavisno izabran od T i U.
[0223] U određenim otelotvorenjima nukleozidnog obrasca II, N<M>je 2'-O-metoksietil nukleozid; svaki N<B>je S-cEt nukleozid; svaki N<Q>je β-D-dezoksiribonukleozid; i N<Z>je 2'-Ometoksietil nukleozid. U određenim otelotvorenjima, modifikovani oligonukleotid ima nukleobaznu sekvencu SEQ ID NO: 3, gde je svaki T u sekvenci nezavisno izabran od T i U.
[0224] U određenim otelotvorenjima nukleozidnog obrasca II, N<M>je 2'-O-metoksietil nukleozid; svaki N<B>je S-cEt nukleozid; svaki N<Q>je β-D-dezoksiribonukleozid; i N<Z>je S-cEt nukleozid. U određenim otelotvorenjima, modifikovani oligonukleotid ima nukleobaznu sekvencu SEQ ID NO: 3, gde je svaki T u sekvenci nezavisno izabran od T i U.
[0225] U određenim otelotvorenjima nukleozidnog obrasca II, N<M>je 2'-O-metoksietil nukleozid; svaki N<B>je LNK nukleozid; svaki N<Q>je β-D-dezoksiribonukleozid; i N<Z>je 2'-O-metoksietil nukleozid. U određenim otelotvorenjima, modifikovani oligonukleotid ima nukleobaznu sekvencu SEQ ID NO: 3, gde je svaki T u sekvenci nezavisno izabran od T i U.
[0226] U određenim otelotvorenjima nukleozidnog obrasca II, N<M>je 2'-O-metoksietil nukleozid; svaki N<B>je LNK nukleozid; svaki N<Q>je β-D-dezoksiribonukleozid; i N<Z>je LNK nukleozid. U određenim otelotvorenjima, modifikovani oligonukleotid ima nukleobaznu sekvencu SEQ ID NO: 3, gde je svaki T u sekvenci nezavisno izabran od T i U.
[0227] U određenim otelotvorenjima nukleozidnog obrasca III, R je modifikovan nukleozid koji nije biciklični nukleozid; i X iznosi 1. U određenim otelotvorenjima nukleozidnog obrasca III, R je modifikovan nukleozid koji nije biciklični nukleozid; X iznosi 1; i svaki N<Q>je nemodifikovan nukleozid. U određenim otelotvorenjima nukleozidnog obrasca III, R je modifikovan nukleozid koji nije biciklični nukleozid; X iznosi 1; svaki N<Q>je nemodifikovan nukleozid; svaki N<B>je nezavisno izabran od S-cEt nukleozida i LNK nukleozida; i N<Y>je izabran od β-D-dezoksiribonukleozida, 2'-O-metoksietil dezoksiribonukleozida, 2'-O-metoksietil nukleozida, i LNK nukleozida. U određenim otelotvorenjima nukleozidnog obrasca III, R je modifikovan nukleozid koji nije biciklični nukleozid; X iznosi 1; i svaki N<Q>je β-D-dezoksiribonukleozid. U određenim otelotvorenjima nukleozidnog obrasca III, R je modifikovan nukleozid koji nije biciklični nukleozid; X iznosi 1; svaki N<Q>je β-D-dezoksiribonukleozid; svaki N<B>je nezavisno izabran od S-cEt nukleozida i LNK nukleozida; i N<Y>je izabran od β-D-dezoksiribonukleozida, 2'-O-metoksietil dezoksiribonukleozida, 2'-O-metoksietil nukleozida, i LNK nukleozida. U određenim otelotvorenjima nukleozidnog obrasca III, R je modifikovan nukleozid koji nije biciklični nukleozid; X iznosi 1; svaki N<Q>je nemodifikovan nukleozid; svaki N<B>je S-cEt nukleozid; i N<Y>je izabran od β-D-dezoksiribonukleozida, 2'-O-metoksietil nukleozida, i S-cEt nukleozida. U određenim otelotvorenjima nukleozidnog obrasca III, R je modifikovan nukleozid koji nije biciklični nukleozid; X iznosi 1; svaki N<Q>je β-D-dezoksiribonukleozid; svaki N<B>je S-cEt nukleozid; i N<Y>je izabran od β-D-dezoksiribonukleozida, 2'-O-metoksietil nukleozida, i S-cEt nukleozida. U određenim otelotvorenjima, modifikovani oligonukleotid obrasca III ima nukleobaznu sekvencu SEQ ID NO: 3, gde je svaki T u sekvenci nezavisno izabran od T i U.
[0228] U određenim otelotvorenjima nukleozidnog obrasca IV, N<M>je 2'-O-metoksietil nukleozid; svaki N<B>je izabran od S-cEt nukleozida i LNK nukleozida; svaki N<Q>je izabran od β-D-dezoksiribonukleozida i 2'-O-metoksietil nukleozida; N<Y>je izabran od 2'-O-metoksietil nukleozida, S-cEt nukleozida, S-cEt nukleozida, i β-D-dezoksiribonukleozida; i N<Z>je izabran od 2'-O-metoksietil nukleozida, S-cEt nukleozida, i S-cEt nukleozida. U određenim otelotvorenjima, modifikovani oligonukleotid obrasca IV ima nukleobaznu sekvencu SEQ ID NO: 3, gde je svaki T u sekvenci nezavisno izabran od T i U.
[0229] U određenim otelotvorenjima nukleozidnog obrasca IV, N<M>je 2'-O-metoksietil nukleozid; svaki N<B>je S-cEt nukleozid; svaki N<Q>je izabran od β-D-dezoksiribonukleozida i 2'-O-metoksietil nukleozida; N<Y>je izabran od 2'-O-metoksietil nukleozida, S-cEt nukleozida, i β-D-dezoksiribonukleozida; i N<Z>je izabran od 2'-O-metoksietil nukleozida i S-cEt nukleozida. U određenim otelotvorenjima, modifikovani oligonukleotid obrasca IV ima nukleobaznu sekvencu SEQ ID NO: 3, gde je svaki T u sekvenci nezavisno izabran od T i U.
[0230] U određenim otelotvorenjima nukleozidnog obrasca IV, N<M>je 2'-O-metoksietil nukleozid; svaki N<B>je S-cEt nukleozid; svaki N<Q>je β-D-dezoksiribonukleozid; N<Y>je S-cEt nukleozid; i N<Z>je S-cEt nukleozid. U određenim otelotvorenjima, modifikovani oligonukleotid obrasca IV ima nukleobaznu sekvencu SEQ ID NO: 3, gde je svaki T u sekvenci nezavisno izabran od T i U.
[0231] Jedinjenja obelodanjena ova imaju nukleobazne sekvence i modifikacije kao što je prikazano u Tabeli 1. Nukleozidne modifikacije su naznačene na naredni način: nukleozidi koje ne sledi indeks ukazuju na β-D-dezoksiribonukleozide; nukleozidi praćeni indeksom „E“ označavaju 2'-MOE nukleozide; nukleozidi praćeni indeksom „L“ su LNK nukleozidi; nukleozidi praćeni indeksom „S“ ukazuju na S-cEt nukleozide. Svaka internukleozidna veza je fosforotioatna internukleozidna veza. Gornji indeks „Me“ ukazuje na 5-metil grupu na bazi nukleozida.
Tabela 1: Anti-miR-21 jedinjenja
[0232] U određenim otelotvorenjima kako su definisana patentnim zahtevima, modifikovani oligonukleotid se sastoji od 16, 17, 18, 19, 20, 21 ili 22 povezanih nukleozida.
[0233] U nekim otelotvorenjima, modifikovani oligonukleotid koji ima bilo koji od ovde opisanih nukleozidnih obrazaca sadrži najmanje jednu modifikovanu internukleozidnu vezu. U određenim otelotvorenjima, svaka internukleozidna veza je modifikovana internukleozidna veza. U određenim otelotvorenjima, modifikovana internukleozidna veza je fosforotioatna internukleozidna veza.
[0234] U određenim otelotvorenjima, modifikovani oligonukleotid ima nukleobaznu sekvencu u kojoj je najmanje jedna nukleobaza citozin. U određenim otelotvorenjima, najmanje jedan citozin je 5-metil citozin. U određenim otelotvorenjima, svaki citozin je 5-metil citozin. U određenim otelotvorenjima, najmanje jedan nukleozid sadrži modifikovanu nukleobazu.
[0235] Modifikovani oligonukleotidi mogu da se podvrgnu cepanju egzonukleazama i/ili endonukleazama na različitim položajima u modifikovanom oligonukleotidu. Proizvodi takvog enzimskog cepanja mogu zadržati miR-21 inhibitornu aktivnost i kao takvi se smatraju aktivnim metabolitima. Kao takav, metabolički proizvod modifikovanog oligonukleotida može se koristiti u ovde opisanim postupcima, gde je navedeni proizvod definisan u patentnim zahtevima.
[0236] U određenim otelotvorenjima, modifikovani oligonukleotid ciljan na miR-21 ima nukleozidni obrazac izabran iz Tabele 2A i kako je dalje definisano patentnim zahtevima, gde je N<M>modifikovan nukleozid koji nije biciklični nukleozid; svaki N<B>je biciklični nukleozid; svaki N<Q>je ne-biciklični nukleozid; i N<Z>je modifikovan nukleozid.
Tabela 2A: Metabolički proizvodi nukleozidnog obrasca II
4
[0237] U određenim otelotvorenjima, modifikovani oligonukleotid ciljan na miR-21 ima nukleozidni obrazac odabran iz Tabele 2B i kako je dalje definisano patentnim zahtevima, gde je N<M>modifikovan nukleozid koji nije biciklični nukleozid; svaki N<B>je biciklični nukleozid; svaki N<Q>je ne-biciklični nukleozid; N<Y>je modifikovan nukleozid ili nemodifikovan nukleozid; i N<Z>je modifikovan nukleozid.
Tabela 2B: Metabolički proizvodi nukleozidnog obrasca IV
[0238] U određenim otelotvorenjima, modifikovani oligonukleotid ciljan na miR-21 ima nukleozidni obrazac i nukleobaznu sekvencu izabrane iz Tabele 3A i kako je dalje definisano patentnim zahtevima. Nukleozidi koji nisu praćeni indeksom ukazuju na β-D-dezoksiribonukleozide. Nukleozidi praćeni indeksom „E“ ukazuju na 2'-MOE nukleozide. Nukleozidi praćeni indeksom „S“ ukazuju na S-cEt nukleozide. Svaka internukleozidna veza je fosforotioatna internukleozidna veza. Nukleobaze mogu ali ne moraju sadržati metil grupu na 5' položaju.
Tabela 3A: Metabolički proizvodi jedinjenja # 25070
[0239] U određenim otelotvorenjima, modifikovani oligonukleotid ciljan na miR-21 ima nukleozidni obrazac i nukleobaznu sekvencu izabrane iz Tabele 3B i kako je dalje definisano patentnim zahtevima. Nukleozidi koji nisu praćeni indeksom ukazuju na β-D-dezoksiribonukleozide. Nukleozidi praćeni indeksom „E“ ukazuju na 2'-MOE nukleozide. Nukleozidi praćeni indeksom „S“ ukazuju na S-cEt nukleozide. Svaka internukleozidna veza je fosforotioatna internukleozidna veza. Nukleobaze mogu ali ne moraju sadržati metil grupu na 5' položaju.
Tabela 3B: Metabolički proizvodi jedinjenja # 25923
[0240] U određenim otelotvorenjima, modifikovani oligonukleotid ciljan na miR-21 ima nukleozidni obrazac i nukleobaznu sekvencu izabrane iz Tabele 3C i kako je dalje definisano patentnim zahtevima. Nukleozidi koji nisu praćeni indeksom ukazuju na β-D-dezoksiribonukleozide. Nukleozidi praćeni indeksom „E“ ukazuju na 2'-MOE nukleozide. Nukleozidi praćeni indeksom „S“ ukazuju na S-cEt nukleozide. Svaka internukleozidna veza je fosforotioatna internukleozidna veza. Nukleobaze mogu ali ne moraju sadržati metil grupu na 5' položaju.
Tabela 3C: Metabolički proizvodi jedinjenja # 25221
4
Određene upotrebe pronalaska
Modulacija miR-21 aktivnosti
[0241] Ovde navedena jedinjenja su snažni i specifični inhibitori miR-21 aktivnosti, i stoga su korisna za moduliranje miR-21 aktivnosti.
[0242] MikroRNK se vezuju i potiskuju eksprimiranje mesindžer RNK. U određenim slučajevima, inhibiranje mikroRNK aktivnosti dovodi do de-represije mesindžer RNK, tj. eksprimiranje mesindžer RNK je povećano na nivou RNK i/ili proteina. Ovde su obelodanjeni postupci za modulaciju eksprimiranja miR-21 regulisanog transkripta, koji sadrže dovođenje u dodir ćelije sa jedinjenjem prema pronalasku, gde jedinjenje sadrži modifikovani oligonukleotid koji ima sekvencu koja je komplementarna sa miR-21.
[0243] U određenim otelotvorenjima, transkript regulisan sa miR-21 je YOD1, i inhibicija miR-21 rezultuje povećanjem nivoa YOD1 mRNK. U određenim otelotvorenjima, miR-21 regulisani transkript je PPAR-alfa, i inhibicija miR-21 rezultuje povećanjem nivoa PPAR-alfa mRNK. U određenim otelotvorenjima, transkript regulisan sa miR-21 je RNF167.
[0244] U određenim otelotvorenjima, transkript regulisan sa miR-21 je SPG20. U određenim otelotvorenjima, inhibicija miR-21 u jetri dovodi do povećanja nivoa SPG20 mRNK.
[0245] U određenim otelotvorenjima, nakon dovođenja u dodir ćelije sa jedinjenjem pronalaska, primećuje se najmanje 1,5 puta povećanje mRNK nivoa transkripta regulisanog sa miR-21. U određenim otelotvorenjima, nakon dovođenja u dodir ćelije sa jedinjenjem prema pronalasku, primećuje se najmanje 2,0 puta povećanje mRNK nivoa transkripta regulisanog sa miR-21. U određenim otelotvorenjima, mRNK nivo transkripta regulisanog sa mikroRNK povećava se najmanje 2,5 puta. U određenim otelotvorenjima, mRNK nivo transkripta regulisanog sa mikroRNK povećava se najmanje 3,0 puta. U određenim otelotvorenjima, mRNK nivo transkripta regulisanog sa mikroRNK povećava se najmanje 3,5 puta. U određenim otelotvorenjima, mRNK nivo transkripta regulisanog sa mikroRNK povećava se najmanje 4,0 puta. U određenim otelotvorenjima, mRNK nivo transkripta regulisanog sa mikroRNK povećava se najmanje 4,5 puta. U određenim otelotvorenjima, mRNK nivo transkripta regulisanog sa mikroRNK povećava se najmanje 5,0 puta.
[0246] Poznato je da određene mikroRNK ciljaju nekoliko mesindžer RNK, u nekim slučajevima stotine mesindžer RNK. Inhibiranje aktivnosti jedne mikroRNK može dovesti do uočljivih promena u eksprimiranju mnogih mikroRNK ciljeva. Ovde su obelodanjeni postupci za modulaciju višestrukih transkripata regulisanih sa miR-21, koji uključuju inhibiranje miR-21 aktivnosti, gde se javljaju široke promene eksprimiranja gena.
[0247] U određenim otelotvorenjima, fenotipske promene mogu se uočiti nakon inhibicije miR-21 sa jedinjenjem iz pronalaska. Takve fenotipske promene mogu se desiti sa ili bez uočljivih promena u eksprimiranju transkripta regulisanog sa miR-21.
4
Fibroproliferativni poremećaji
[0248] Normalan fiziološki odgovor na oštećenje ili povredu organa ili tkiva podrazumeva sanaciju oštećenog tkiva, što je osnovni biološki proces neophodan za preživljavanje. Tokom procesa popravke, nakon uklanjanja stranih materijala, bakterija i oštećenog tkiva, fibroblasti migriraju na mesto povrede kako bi položili novu vanćelijsku matricu, koja se zatim strukturno organizuje kao deo faze remodeliranja tkiva.
[0249] Fibroblasti su najrasprostranjenije ćelije u vezivnom tkivu i odgovorne su za sintezu retikulina i drugih elastičnih vlakana koja podržavaju vanćelijsku matricu i igraju važnu ulogu u normalnom zarastanju rana (Sempowski, G.D. et al., 2002. Wound Repair Regeneration. 3: 120-131). Fibroblasti su odgovorni za taloženje kolagena, koji je neophodan za obnavljanje povređenog tkiva i vraćanje njegove strukture i funkcije. Tokom procesa zarastanja rana, aktivirani fibroblasti se transformišu u miofibroblaste, koji su alfa-SMA+ fibroblasti koji luče kolagen. U početnim fazama procesa zarastanja rane, miofibroblasti proizvode matrične metaloproteaze, koje narušavaju bazalnu membranu i omogućavaju efikasno regrutovanje upalnih ćelija na mesto povrede. Tokom kasnijih faza saniranja povrede, miofibroblasti pospešuju kontrakciju rane, proces kojim ivice rane migriraju prema centru rane. Dakle, aktivnost fibroblasta je od suštinskog značaja za normalan proces zarastanja.
[0250] Fibroblasti koji učestvuju u normalnom procesu sanacije povrede mogu biti izvedeni iz lokalnih mezenhimskih ćelija, regrutovanih iz koštane srži ili izvedenih epitelnomezenhimskom tranzicijom. Epitelno-mezenhimalna tranzicija (EMT) opisuje niz brzih promena ćelijskog fenotipa (Kalluri, R. and Neilson, E.G.2003. J. Clin. Invest.112: 1776-1784) tokom kojih statične epitelne ćelije gube ćelija-ćelija dodire, stiču mezenhimske osobine i manifestuju migratorni fenotip. Rezidentni fibroblasti, infiltrirani fibrociti ili pericitu slične ćelije takođe mogu učestvovati u procesu saniranja povrede.
[0251] Pod nekim uslovima, proces obnavljanja tkiva se dešava u prekomernoj količini, što rezultuje prekomernom akumulacijom komponenti vanćelijske matrice (ECM) i značajnim preuređivanjem ECM, što doprinosi stvaranju trajnog fibrotičnog ožiljka. Stvaranje ovog viška vlaknastog vezivnog tkiva, proces poznat kao fibroza, doprinosi abnormalnim promenama u arhitekturi tkiva i ometa normalno funkcionisanje organa.
4
[0252] Fibroza se može javiti u bilo kom delu tela, i može biti posledica raznih fizičkih, metaboličkih, ishemijskih, zaraznih, upalnih ili imunoloških povreda. Iako anatomska mesta, poreklo i kliničke manifestacije fibroze mogu biti različiti, postoje važne patološke karakteristike zajedničke svim vrstama fibroze. Bez obzira na mesto na kom se javlja fibroza, fibrotični proces uključuje lučenje i aktivaciju profibrotičnih citokina, ekspanziju i aktivaciju mezenhimskih ćelijskih populacija i sintezu i organizaciju vanćelijske matrice i na kraju dovodi do uništavanja normalnog tkiva. Ako se ne tretira, fibroza može dovesti do različitih stanja srca, pluća, bubrega, jetre, oka i kože, između ostalih tkiva.
[0253] Kao što je ovde prikazano, inhibicija miR-21 u modelu fibroze dovela je do smanjenog taloženja kolagena. Shodno tome, ovde su obelodanjeni sastavi i postupci za tretman, sprečavanje i/ili odlaganje pojave fibroze, koji uključuju primenu pacijentu jedinjenja koje sadrži modifikovani oligonukleotid, gde je modifikovani oligonukleotid komplementaran sa miR-21. Pacijent je možda dobio dijagnozu fibroze, može biti pod rizikom od razvoja fibroze ili može postojati sumnja da ima fibrozu.
[0254] U određenim otelotvorenjima, pacijent koji ima fibrozu ima fibrozu bubrega, fibrozu pluća, fibrozu jetre, fibrozu srca, fibrozu kože, starosnu fibrozu, fibrozu slezine, sklerodermu ili fibrozu nakon transplantacije.
[0255] Mnoge bolesti ili abnormalnosti bubrega karakteriše prisustvo fibroze. Kao takva, ovde navedena jedinjenja su korisna za tretman, poboljšanje, sprečavanje i/ili odlaganje pojave bilo koje bolesti bubrega koja se karakteriše prisustvom fibroze. U određenim otelotvorenjima, pacijent koji ima fibrozu ima bolest ili stanje bubrega. U određenim otelotvorenjima, pacijent pod rizikom od razvoja fibroze ima bolest ili stanje bubrega. U određenim otelotvorenjima, pacijent za kog se sumnja da ima fibrozu ima bolest ili stanje bubrega. Shodno tome, ovde su obelodanjeni postupci za tretman pacijenta koji je pod rizikom da razvije ili se sumnja da ima fibrozu, gde pacijent ima bolest ili stanje bubrega. Bolest ili stanje bubrega mogu biti jedno ili više od, bez ograničavanja na, bolesti glomerula, tubulointersticijske fibroze, IgA nefropatije, intersticijske fibroze/tubularne atrofije, glomeruloskleroze, glomerulonefritisa, dijabetes melitusa, idiopatske fokalne segmentalne glomeruloskleroze, membranske nefropatije, membranske nefropatije, glomerulopatije u kolapsu, hronične refkurentne infekcije bubrega, dijabetes melitusa, dijabetične nefropatije,
4
hronične refkurentne infekcije bubrega, hipertenzije, sistemske hipertenzije, intraglomerularne hipertenzije ili bolesti bubrega u završnoj fazi.
[0256] Hronična bolest bubrega može se okarakterisati prisustvom fibroze. Shodno tome, u određenim otelotvorenjima, bolest ili stanje bubrega je hronična bolest bubrega. U određenim otelotvorenjima, pacijent je pod rizikom od razvoja hronične bolesti bubrega. U određenim otelotvorenjima, pacijent sa akutnom povredom bubrega rizikuje da razvije fibrozu i/ili hroničnu bolest bubrega. Shodno tome, ovde opisani sastavi i postupci mogu se primenjivati kod pacijenta koji ima akutnu povredu bubrega, radi sprečavanja ili odlaganja pojave fibroze i/ili hronične bolesti bubrega.
[0257] U određenim otelotvorenjima, pacijent koji ima fibrozu ima fibrozu bubrega koja je rezultat akutne ili rekurentne traume bubrega. Trauma može nastati operacijom, hemoterapijom, tretmanom zračenjem, odbacivanjem alografta, hroničnim odbacivanjem transplantata i akutnim odbacivanjem transplantata.
[0258] U određenim otelotvorenjima, fibroza bubrega može nastati izlaganjem bilo kom agensu koji može biti nefrotoksičan nakon akutnog ili hroničnog izlaganja. Takvi agensi uključuju farmaceutske agense, uključujući, ali ne ograničavajući se na, analgetike, nesteroidne protiv-upalne lekove, antibiotike, litijum, ciklosporin, mesalazin, kontrastne supstance, hemoterapijske agense; okupacione toksine, uključujući, ali ne ograničavajući se na teške metale; i toksini iz okoline, uključujući, ali ne ograničavajući se na teške metale (npr. kadmijum, živin hlorid) ili biljne nefrotoksine (npr. aristolohična kiselina).
[0259] Mnoge bolesti ili abnormalnosti jetre karakteriše prisustvo fibroze. Stoga, u određenim otelotvorenjima, pacijent koji ima fibrozu ima bolest ili stanje jetre. U određenim otelotvorenjima, pacijent pod rizikom od razvoja fibroze ima bolest ili stanje jetre. U određenim otelotvorenjima, pacijent za kog se sumnja da ima fibrozu ima bolest ili stanje jetre. Shodno tome, ovde su obelodanjeni postupci za tretman pacijenta koji je pod rizikom da razvije ili se sumnja da ima fibrozu, gde pacijent ima bolest ili stanje jetre. U određenim otelotvorenjima, bolest ili stanje jetre može biti jedno ili više od, ali ne ograničavajući se na, hronične povrede jetre, infekcije virusom hepatitisa (uključujući infekciju virusom hepatitisa C i hepatitisa B), ne-alkoholne masne bolesti jetre (NAFLD), nr-alkoholni steatohepatitis (NASH), alkoholna bolest jetre (ALD), alkoholni steatohepatitis, premošćujuća fibroza ili
4
ciroza. U određenim otelotvorenjima, bolest ili stanje jetre su povezani sa izlaganjem toksičnim hemikalijama. U određenim otelotvorenjima, bolest ili stanje jetre nastaje usled izlaganja farmaceutskim agensima, npr. acetaminofen. U određenim otelotvorenjima, pacijent koji prima hemoterapiju je pod rizikom da razvije fibrozu jetre i/ili hroničnu povredu jetre.
[0260] Fibroza može biti prisutna kod mnogih bolesti ili abnormalnosti pluća. Stoga, u određenim otelotvorenjima, pacijent koji ima fibrozu ima bolest ili stanje pluća. U određenim otelotvorenjima, pacijent pod rizikom od razvoja fibroze ima bolest ili stanje pluća. U određenim otelotvorenjima, pacijent za kog se sumnja da ima fibrozu ima bolest ili stanje pluća. Shodno tome, ovde su obelodanjeni postupci za tretman pacijenta koji je pod rizikom da razvije ili se sumnja da ima fibrozu, gde pacijent ima bolest ili stanje pluća. U određenim otelotvorenjima, bolest ili stanje pluća može biti jedno ili više od, ali ne ograničavajući se na, fibroze pluća, idiopatske fibroze pluća ili hronične opstruktivne bolesti pluća. U određenim otelotvorenjima, fibroza pluća može nastati udisanjem čestica, kao što su one koje se nalaze u silika gelu, azbestu, zagađivačima vazduha ili dimu cigareta.
[0261] U određenim otelotvorenjima fibroza je fibroza srca.
[0262] U nekim otelotvorenjima fibroza je fibroza kože. U nekim otelotvorenjima fibroza je starosna fibroza. U nekim otelotvorenjima fibroza je fibroza slezine.
[0263] Skleroderma je hronična autoimuna bolest koju, između ostalih simptoma, karakteriše fibroza. U nekim otelotvorenjima, pacijent koji ima fibrozu ima sklerodermu. U određenim otelotvorenjima, pacijent koji ima sklerodermu ima fibrozu u unutrašnjim organima, pored fibroze kože.
[0264] Fibroza se često javlja u presađenim organima, što dovodi do gubitka funkcije organa i na kraju do hroničnog odbacivanja presađenog organa. Prevencija ili tretman fibroze u presađenim organima može sprečiti ili odložiti hronično odbacivanje presađenog organa, ili drugim rečima može produžiti funkciju presađenog organa. Shodno tome, u određenim otelotvorenjima pacijent ima post-transplantacionu fibrozu. U određenim otelotvorenjima, post-transplantaciona fibroza je post-transplantaciona fibroza bubrega. U određenim otelotvorenjima, fibroza povezana sa transplantacijom je post-transplantaciona fibroza jetre. U određenim otelotvorenjima, ovde opisano jedinjenje primenjuje se pre transplantacije. U
4
određenim otelotvorenjima, ovde opisano jedinjenje primenjuje se istovremeno sa transplantacijom. U određenim otelotvorenjima, ovde opisano jedinjenje primenjuje se nakon transplantacije.
[0265] Ovde su obelodanjeni postupci za tretman pacijenta koji ima fibroproliferativni poremećaj. U određenim otelotvorenjima, takvi postupci uključuju primenu pacijentu koji ima ili sumnja da ima fibroproliferativni poremećaj modifikovanog oligonukleotida koji ima nukleobaznu sekvencu koja je komplementarna sa miRNK, ili njenog prekursora. U određenim otelotvorenjima, miRNK je miR-21.
Rak i metastaze
[0266] Nenormalno visoko eksprimiranje miR-21 dokazana je kod brojnih vrsta raka. Dalje, inhibicija miR-21 u in vitro i in vivo modelima pokazala je da su miR-21 inhibitori korisni za inhibiciju ćelijskih procesa koji podržavaju rast ćelija raka, kao i za tretman raka.
[0267] Shodno tome, u određenim otelotvorenjima, ovde navedena jedinjenja koriste se za tretman, sprečavanje, poboljšanje i/ili odlaganje pojave raka. U određenim otelotvorenjima, rak je rak jetre, rak dojke, rak pluća, rak debelog creva, rak jajnika, rak grlića materice, leukemija, limfom, rak mozga, rak jednjaka, Hodžkinov limfom, ne-Hodžkinov limfom, rak bubrega, melanom, mijelom, rak usne šupljine, rak pankreasa, rak prostate, rektalni rak, rak želuca, rak bešike, rak štitaste žlezde ili rak testisa. U određenim otelotvorenjima, rak jetre je hepatocelularni rak. U određenim otelotvorenjima, rak jetre nastaje usled metastaziranja raka koji potiče iz drugog dela tela, na primer raka kostiju, raka debelog creva ili raka dojke.
[0268] U određenim otelotvorenjima, kod raka jetre, miR-21 je povišen i nivo jednog ili više transkripata regulisanih sa miR-21 je smanjen. U određenim otelotvorenjima, smanjeni transkript regulisan sa miR-21 je SPG20.
[0269] U određenim otelotvorenjima, rak jetre je hepatocelularni rak (HCC). Dijagnoza hepatocelularnog raka obično se postavlja testovima za snimanje jetre, kao što su ultrazvuk abdomena, spiralna računarska tomografija (CT) ili trofazna CT. Takvi testovi za snimanje mogu se izvoditi zajedno sa merenjem nivoa alfa-fetoproteina u krvi i/ili nivoa des-gamakarboksiprotrombina u krvi. Kod određenih pacijenta, MRI se može koristiti umesto CT skeniranja. Testovi za snimanje jetre omogućavaju procenu veličine, broja, lokacije, metastaza izvan jetre, prohodnosti i ili invazije tumora na arterije i vene jetre. Ova procena pomaže u odluci o načinu terapijske ili palijativne intervencije koje su odgovarajuće.
Konačna dijagnoza se obično potvrđuje biopsijom igle i histopatološkim pregledom.
[0270] Shodno tome, u određenim otelotvorenjima, rak jetre se detektuje nakon skeniranja računarskom tomografijom (CT) koja otkriva tumore. U određenim otelotvorenjima, rak jetre se otkriva nakon snimanja magnetnom rezonancom (MRI). U određenim otelotvorenjima, HCC je okarakterisan kao jedan primarni tumor. U određenim otelotvorenjima, HCC se karakteriše kao višestruki primarni tumor. U određenim otelotvorenjima, HCC je okarakterisan kao slabo definisan primarni tumor sa infiltrativnim obrascem rasta. U određenim otelotvorenjima, HCC je jedan primarni tumor sa vaskularnom invazijom. U određenim otelotvorenjima, HCC se karakteriše kao višestruki primarni tumor sa vaskularnom invazijom. U određenim otelotvorenjima, HCC je metastazirao u jedan ili više limfnih čvorova. U određenim takvim otelotvorenjima, limfni čvorovi su regionalni limfni čvorovi. U određenim otelotvorenjima, HCC je metastazirao u jedno ili više udaljenih tkiva. U određenim otelotvorenjima, HCC je metastazirao u druge regione jetre, portalnu venu, limfne čvorove, nadbubrežne žlezde, kosti ili pluća. U određenim otelotvorenjima, prisutna je fibroza.
[0271] Brojni sistemi su korišćeni za predviđanje prognoze za HCC, uključujući TNM sistem, Okuda sistem, Barcelona Clinic Liver Cancer (BCLC) i CLIP skor. Svaki od ovih sistema sadrži četiri osobine koje su prepoznate kao važne odrednice preživljavanja: težina osnovne bolesti jetre, veličina tumora, širenje tumora u susedne strukture i prisustvo metastaza. TNM sistem klasifikuje HCC kao stadijum I, II, III, IV ili V. BCLC klasifikuje HCC kao stadijum A1, A2, A3, A4, B, C i D i uključuje razmatranje Child-Pugh rezultata.
[0272] U određenim otelotvorenjima, rak jetre je klasifikovan kao stadijum 1, stadijum 2, stadijum 3A, stadijum 3B, stadijum 3C ili stadijum 4. Stadijum 1 karakteriše rak koji nije veći od 2 cm i nije počeo da se širi. U stadijumu 2 rak utiče na krvne sudove u jetri ili postoji više od jednog tumora u jetri. U stadijumu 3A, rak je veći od 5 cm ili se proširio na krvne sudove u blizini jetre. U stadijumu 3B, rak se proširio na obližnje organe, poput creva ili želuca, ali se nije proširio na limfne čvorove. U stadijumu 3C rak može biti bilo koje veličine i proširio se na obližnje limfne čvorove. U stadijumu 4 rak se proširio na delove tela dalje od
1
jetre, poput pluća.
[0273] Biomarkeri u krvi pacijenta mogu se koristiti za poboljšanje dijagnoze raka jetre, stadijuma raka jetre ili za razvijanje prognoze za preživljavanje. Takvi biomarkeri uključuju biomarkere tumora krvi, kao što su alfa-fetoprotein i des-gama karboksiprothrombin. U određenim takvim otelotvorenjima, pacijent ima povišen alfa-fetoprotein u krvi. U određenim takvim otelotvorenjima, pacijent ima povišen des-gama karboksiprotrombin u krvi.
[0274] Pacijent koji ima rak jetre takođe može da pati od abnormalne funkcije jetre. Funkcija jetre može se proceniti testovima funkcije jetre, koji, između ostalog, mere nivoe transaminaza jetre u krvi. U nekim otelotvorenjima, pacijent koji ima abnormalnu funkciju jetre ima povišene transaminaze jetre u krvi. Transaminaze jetre u krvi uključuju alanin aminotransferazu (ALT) i aspartat aminotransferazu (AST). U nekim otelotvorenjima, pacijent koji ima abnormalnu funkciju jetre ima povišen bilirubin u krvi. U određenim otelotvorenjima, pacijent ima abnormalne nivoe albumina u krvi.
[0275] U određenim otelotvorenjima, funkcija jetre pacijenta procenjuje se po Child-Pugh klasifikacionom sistemu, koji definiše tri klase funkcije jetre. U ovom sistemu klasifikacije tačke se dodeljuju merenjima u jednoj od pet kategorija: nivoi bilirubina, nivoi albumina, protrombinsko vreme, asciti i encefalopatija. Po jedan poen dodeljuje se za svaku od narednih prisutnih karakteristika: bilirubin u krvi manji od 2,0 mg/dl; albumin u krvi veći od 3,5 mg/dl; protrombinsko vreme manje od 1,7 međunarodnog normalizovanog odnosa (INR); asciti su odsutni; ili je encefalopatija odsutna. Dva poena se dodeljuju za svaku od narednih prisutnih karakteristika: bilirubin u krvi od 2-3 mg/dl; bilirubin u krvi od 3,5 do 2,8 mg/dl; protrombinsko vreme od 1,7-2,3 INR; asciti su blagi do umereni; ili je encefalopatija blaga. Tri poena se dodeljuju za svaku od narednih prisutnih karakteristika: bilirubin veći od 3,0 mg/dl; albumin u krvi manji od 2,8 mg/dl; protrombinsko vreme veće od 2,3 INR; asciti su teški do refraktorni; ili je encefalopatija teška. Ocene se sabiraju i klasi A dodeljuje se ocena 5-6 poena, klasi B dodeljuje ocena 7-9 poena, i klasi C ocena 10-15 poena,
[0276] Pacijent koji ima rak jetre možda je ranije bolovao ili trenutno pati od hronične infekcije hepatitisa C, hronične infekcije hepatitisa B, ne-alkoholne masne bolesti jetre ili ciroze. Pacijenti koji imaju rak jetre praćen i/ili urzokovan infekcijom hepatitisa C, infekcijom hepatitisa B, ne-alkoholnom masnom bolešću jetre ili cirozom mogu se tretirati
2
ovde opisanim postupcima.
[0277] Odgovor pacijenta na tretman može se proceniti testovima sličnim onima koji se koriste za dijagnozu raka jetre, uključujući, ali nisu ograničeni na, CT skeniranje, MRI i biopsiju igle. Odgovor na tretman takođe se može proceniti merenjem biomarkera u krvi radi poređenja sa nivoima biomarkera u pre tretmana.
[0278] miR-21 je takođe povezan sa procesom metastaziranja. Iako se EMT javlja u normalnim fiziološkim procesima, EMT je povezan sa procesom metastaza. Značaj EMT u progresiji tumora istražen je u nekoliko studija (Greenburg, G. and Hay, E.1986. Dev. Biol.
115: 363-379; Boyer, B. et al., 1989. J. Cell. Biol.109: 1495-1509; Uehara, Y. et al., 1992. J. Cell. Biol.117: 889-894). Epitelne ćelije se drže zajedno kroz integrine u osnovnoj vanćelijskoj matrici (ECM) koja se naziva bazalna membrana. Mezenhimske ćelije, sa druge strane, imaju sposobnost invazije i kretanja kroz trodimenzionalnu strukturu ECM. Prema tome, EMT barem površno podseća na transformaciju normalnih adherentnih ćelija u metastatski fenotip.
[0279] Ovde su obelodanjeni postupci za tretman, sprečavanje, poboljšanje i/ili odlaganje pojave metastaza. Metastaze mogu nastati usled migracije ćelija raka sa bilo kog primarnog mesta raka na bilo koje sekundarno mesto raka.
Akutna povreda bubrega
[0280] Akutna povreda bubrega je brzi gubitak funkcije bubrega, koji može biti izazvan brojnim uzrocima, uključujući malu količinu krvi, izloženost toksinima i urinarnu opstrukciju. Povišeni miR-21 primećen je u modelu akutne povrede bubrega. Shodno tome, u određenim otelotvorenjima, ovde navedena jedinjenja se koriste za tretman, sprečavanje, poboljšanje i/ili odlaganje početka akutne povrede bubrega. U određenim otelotvorenjima, akutna povreda bubrega može biti rezultat izloženosti toksičnim supstancama, kao što su toksini iz okoline ili terapijski agensi protiv raka. Akutna povreda bubrega može nastati oštećenjem samog bubrega, na primer u uslovima kao što su glomerulonefritis, akutna tubularna nekroza i akutni intersticijski nefritis. U određenim otelotvorenjima, akutna povreda bubrega je uzrokovana opstrukcijom urinarnog trakta, poput one povezane sa benignom hiperplazijom prostate, kamenjem u bubrezima, začepljenim urinarnim kateterom, kamenom u bešici, malignitetom bešike, mokraćnog kanala ili bubrega. U određenim otelotvorenjima, akutna povreda bubrega može preći u fibrozu i/ili hroničnu bolest bubrega. Prema tome, u nekim otelotvorenjima, ovde navedena jedinjenja primenjuju se pacijentu sa akutnom povredom bubrega kako bi se sprečio ili odložio početak fibroze i/ili hronične bolesti bubrega. U nekim otelotvorenjima, ovde navedena jedinjenja se primenjuju pacijentu radi poboljšanja oporavka od akutne povrede bubrega.
Srčane bolesti
[0281] Povišeno eksprimiranje miR-21 pronađena je kod ljudskih srčanih bolesti, i inhibicija miR-21 u relevantnim životinjskim modelima pokazala je poboljšanje fibroze srca i funkcije srca. Shodno tome, u određenim otelotvorenjima, ovde navedena jedinjenja se koriste za tretman, sprečavanje, poboljšanje i/ili odlaganje pojave jedne ili više srčanih bolesti. U određenim otelotvorenjima, srčana bolest je fibroza srca, povećanje srca, hipertrofija srca, dilatacija srca, hipertrofijska kardiomiopatija, srčana insuficijencija, remodeliranje nakon infarkta miokarda, infakrt miokarda, kardiomiopatija (na primer, hipertrofijska kardiomiopatija, restriktivna kardiomiopatija, dilatirana kardiomiopatija (DMC), idiopatska dilatirana kardiomiopatija ili dilatirana kardiomiopatija sa aritmijama), dijastolna srčana insuficijencija, hronična atrijalna fibrilacija, primarna plućna hipertenzija, sindrom akutnog respiratornog distresa, sindrom brugada, progresivna bolest provodnosti srca, uremični perikarditis, antraciklinska kardiomiopatija, arterijska fibroza, limfna fibroza nakon zračenja, sarkoidoza, skleroderma, endokardijalna fibroelastoza, serotonergični višak, srčana valvulopatija, atrijalna fibroza, atrijalna fibrilacija, mitralna valvularna bolest, hipertenzija, hronična ventrikularna disfunkcija, preopterećenje pritiska i zapremine ili fibroza miokarda.
Ćelijski procesi
[0282] Ovde su obelodanjeni sastavi i postupci za smanjenje ili sprečavanje proliferacije ili aktivacije fibroblasta. Ovde su takođe obelodanjeni sastavi i postupci za inhibiranje sinteze vanćelijske matrice, koji uključuju, ali nisu ograničeni na sintezu kolagena, fibronektina, kolagenaze ili inhibitora tkiva metaloproteinaze.
[0283] Ovde su obelodanjeni postupci za modulaciju ćelijskih procesa povezanih sa epitelnomezenhimskom tranzicijom (EMT). Takvi postupci uključuju dovođenje u dodir epitelne
4
ćelije sa jedinjenjem koje se sastoji od modifikovanog oligonukleotida, gde je modifikovani oligonukleotid komplementaran sa miR-21. U određenim otelotvorenjima, dovođenje u dodir odlaže prelazak epitelne ćelije u fibroblast. U određenim otelotvorenjima, dovođenje u dodir sprečava prelazak epitelne ćelije u fibroblast.
[0284] U određenim otelotvorenjima, ovde navedeno jedinjenje može zaustaviti, usporiti ili smanjiti proliferaciju ćelija raka. U određenim otelotvorenjima, ovde navedeno jedinjenje može da indukuje apoptozu u ćelijama raka. U određenim otelotvorenjima, ovde navedeno jedinjenje može smanjiti preživljavanje ćelija raka.
[0285] U određenim otelotvorenjima, epitelna ćelija je ćelija raka. U određenim otelotvorenjima, dovođenje u dodir odlaže metastaziranje ćelije raka. U određenim otelotvorenjima, dovođenje u dodir sprečava metastaziranje ćelije raka.
Određeni klinički ishodi
[0286] U određenim otelotvorenjima, primena ovde opisanih jedinjenja ili postupaka rezultuje jednim ili više klinički poželjnih ishoda kod pacijenta. Takva poboljšanja mogu se koristiti za određivanje stepena u kom pacijent reaguje na tretman.
[0287] U nekim otelotvorenjima klinički poželjan ishod je ublažavanje fibroze. U nekim otelotvorenjima klinički poželjan ishod je usporavanje daljeg napredovanja fibroze. U nekim otelotvorenjima klinički poželjan ishod je zaustavljanje daljeg napredovanja fibroze. U nekim otelotvorenjima klinički poželjan ishod je smanjenje fibroze. U nekim otelotvorenjima klinički poželjan ishod je smanjenje sadržaja kolagena u organu koji ima fibrozu.
[0288] U nekim otelotvorenjima klinički poželjan ishod je poboljšanje fibroze u bilo kom organu ili tkivu. U nekim otelotvorenjima klinički poželjan ishod je usporavanje daljeg napredovanja fibroze. U nekim otelotvorenjima klinički poželjan ishod je zaustavljanje daljeg napredovanja fibroze. U nekim otelotvorenjima klinički poželjan ishod je smanjenje fibroze. U nekim otelotvorenjima klinički poželjan ishod je smanjenje sadržaja kolagena u zahvaćenom organu.
[0289] U nekim otelotvorenjima klinički poželjan ishod je poboljšana funkcija bubrega.
Funkcija bubrega može se proceniti jednim ili više poznatih postupaka koji se obično izvode u kliničkim uslovima, uključujući, ali bez ograničavanja na: merenje azota uree u krvi pacijenta; merenje kreatinina u krvi pacijenta; merenje klirensa kreatinina kod pacijenta; merenje proteinurije kod pacijenta; merenje odnosa mikroalbumina: kreatinina kod pacijenta; merenje urinarnog izlaza kod pacijenta; merenje urinarnih mRNK nivoa molekula-1 (KIM-1) kod povrede bubrega; i/ili merenje nivoa klasterina u urinu.
[0290] U određenim otelotvorenjima, klinički poželjan ishod je poboljšana funkcija jetre. Funkcija jetre može se proceniti jednim ili više poznatih postupaka koji se obično izvode u kliničkom okruženju, uključujući, ali bez ograničavanja na: merenje nivoa alanin aminotransferaze u krvi pacijenta;
merenje nivoa aspartat aminotransferaze u krvi pacijenta; merenje nivoa bilirubina u krvi pacijenta; merenje nivoa albumina u krvi pacijenta; merenje protrombinskog vremena kod pacijenta; merenje ascita kod pacijenta; i/ili merenje encefalopatije kod pacijenta.
[0291] U nekim otelotvorenjima klinički poželjan ishod je poboljšana funkcija pluća kod pacijenta koji ima plućnu fibrozu. U određenim otelotvorenjima, pacijent ima idiopatsku plućnu fibrozu. Funkcija pluća može se proceniti jednim ili više poznatih postupaka koji se obično izvode u kliničkom okruženju, uključujući, ali bez ograničavanja na: merenje vitalnog kapaciteta pacijenta; merenje prinudnog vitalnog kapaciteta pacijenta; merenje zapremine prinudnog izdaha u jednoj sekundi kod pacijenta; merenje vršne brzine ekspiratornog protoka kod pacijenta; merenje prinudnog ekspiratornog protoka kod pacijenta; merenje maksimalne dobrovoljne ventilacije kod pacijenta; određivanje odnosa prinudnog zapremine izdisaja u jednoj sekundi i prinudnog vitalnog kapaciteta pacijenta; merenje odnosa ventilacije/perfuzije kod pacijenta; merenje ispiranja azota kod pacijenta; merenje apsolutne zapremine vazduha u jednom ili više pluća pacijenta; i sprovođenje testa od 6 minuta hoda.
[0292] U nekim otelotvorenjima klinički poželjan ishod je poboljšana srčana funkcija kod pacijenta koji ima fibrozu srca. Srčana funkcija se može proceniti jednim ili više poznatih postupaka koji se obično izvode u kliničkom okruženju, uključujući, ali bez ograničavanja na: merenje srčanog izlaza kod pacijenta; merenje udarne zapremine kod pacijenta; merenje srednje brzine sistolnog izbacivanja kod pacijenta; merenje sistolnog krvnog pritiska kod pacijenta; merenje udela izbacivanja leve komore kod pacijenta; određivanje udarnog indeksa kod pacijenta; određivanje srčanog indeksa kod pacijenta; merenje procentualnog udela skraćivanja leve komore kod pacijenta; merenje srednje brzine obodnog skraćivanja vlakana kod pacijenta; merenje obrasca brzine priliva leve komore kod pacijenta; merenje obrasca brzine protoka plućnih vena kod pacijenta; merenje vršne rane dijastolne brzine mitralnog prstena kod pacijenta.
[0293] U nekim otelotvorenjima klinički poželjan ishod je smanjenje broja tumora i/ili smanjenje veličine tumora kod pacijenta koji ima rak. U nekim otelotvorenjima klinički poželjan ishod je smanjenje broja ćelija raka kod pacijenta koji ima rak. Dodatni klinički poželjni ishodi uključuju produženje ukupnog vremena preživljavanja pacijenta i/ili produženje vremena preživljavanja pacijenta bez progresije bolesti. U određenim otelotvorenjima, primena ovde navedenog jedinjenja sprečava povećanje veličine tumora i/ili broja tumora. U određenim otelotvorenjima, primena ovde navedenog jedinjenja sprečava metastatsku progresiju. U određenim otelotvorenjima, primena ovde navedenog jedinjenja usporava ili zaustavlja metastatsku progresiju. U određenim otelotvorenjima, primena ovde navedenog jedinjenja sprečava ponavljanje tumora. U određenim otelotvorenjima, primena ovde navedenog jedinjenja sprečava ponavljanje metastaza tumora.
[0294] Određeni poželjni klinički ishodi mogu se proceniti merenjem biomarkera u krvi. U određenim otelotvorenjima, primena ovde navedenog jedinjenja može rezultovati smanjenjem alfa-fetoproteina i/ili des-gama karboksiprothrombina u krvi. Primena ovde navedenog jedinjenja može dalje rezultovati poboljšanjem funkcije jetre, što dokazuje smanjenje nivoa ALT i/ili AST u krvi.
Određene dodatne terapije
[0295] Tretmani fibroze ili bilo kog od ovde navedenih stanja mogu obuhvatati više od jedne terapije. Kao takvi, u određenim otelotvorenjima, kako su definisani u ovde obelodanjenim patentnim zahtevima, postoje postupci za tretman pacijenta koji ima ili za kog se sumnja da ima fibrozu, koji uključuju primenu najmanje jedne terapije uz primenu modifikovanog oligonukleotida koji ima nukleobaznu sekvencu koja je komplementarna sa miR-21.
[0296] U određenim otelotvorenjima, najmanje jedna dodatna terapija sadrži farmaceutski agens.
[0297] U određenim otelotvorenjima, farmaceutski agensi uključuju protiv-upalne agense. U određenim otelotvorenjima, protiv-upalni agens je steroidni protiv-upalni agens. U određenim otelotvorenjima, steroidni protiv-upalni agens je kortikosteroid. U određenim otelotvorenjima, kortikosteroid je prednizon. U određenim otelotvorenjima, protiv-upalni agens je nesteroidni protiv-upalni lek. U određenim otelotvorenjima, nesteroidni protivupalni agens je ibuprofen, COX-I inhibitor ili COX-2 inhibitor.
[0298] U određenim otelotvorenjima, farmaceutski agensi uključuju imunosupresivne agense. U određenim otelotvorenjima, imunosupresivni agens je kortikosteroid, ciklofosfamid ili mofetilmikofenolat.
[0299] U određenim otelotvorenjima, farmaceutski agensi uključuju anti-dijabetički agens. Anti-dijabetički agensi uključuju, ali nisu ograničeni na, bigvanide, inhibitore glukozidaze, insuline, sulfoniluree i tiazolidendione.
[0300] U određenim otelotvorenjima, farmaceutski agensi uključuju blokatore angiotenzin II receptora (ARB). U određenim otelotvorenjima, blokator angiotenzin II receptora je kandesartan, irbesartan, olmesartan, losartan, valsartan, telmisartan ili eprosartan.
[0301] U određenim otelotvorenjima, farmaceutski agensi uključuju, ali nisu ograničeni na, diuretike (npr. sprionolakton, eplerenon, furosemid), inotrope (npr. dobutamin, milrinon), digoksin, vazodilatatore, inhibitore angiotenzin II konvertujućeg enzima (ACE) (npr. kaptopril, enalapril, lizinopril, benazepril, kvinapril, fozinopril i ramipril), blokatori kalcijumovih kanala, izosorbid dinitrat, hidralazin, nitrati (npr. izosorbid mononitrat, izosorbid dinitrat), hidralazin, beta blokatori (npr. karvedilol, metoprolol), i natriuretski peptidi (npr. nesiritid).
[0302] U određenim otelotvorenjima, farmaceutski agensi uključuju heparinoide. U određenim otelotvorenjima, heparinoid je pentosan polisulfat.
[0303] U određenim otelotvorenjima, farmaceutski agens je farmaceutski agens koji blokira jedan ili više odgovora na fibrogene signale.
[0304] U određenim otelotvorenjima, farmaceutski agens je terapija protiv faktorom rasta vezivnog tkiva. U određenim otelotvorenjima, anti-CTGF terapija je monoklonsko antitelo protiv CTGF.
[0305] U određenim otelotvorenjima, dodatna terapija može biti farmaceutski agens koji poboljšava imunološki sistem tela, uključujući niske doze ciklofosfamida, timostimulina, vitamina i dodataka ishrani (npr. antioksidansi, uključujući vitamine A, C, E, beta-karoten, cink, selen, glutation, koenzim K-10 i ehinaceja) i vakcine, npr. imunostimulišući kompleks (ISCOM), koji sadrži formulaciju vakcine koja kombinuje multimernu prezentaciju antigena i pomoćnog agensa.
[0306] U određenim otelotvorenjima, dodatna terapija je izabrana za tretman ili ublažavanje neželjenih efekata jednog ili više farmaceutskih sastava predmetnog pronalaska. Takvi neželjeni efekti uključuju, ali nisu ograničeni na, reakcije na mestu injekcije, abnormalnosti testova funkcije jetre, abnormalnosti bubrežne funkcije, toksičnost jetre, bubrežnu toksičnost, abnormalnosti centralnog nervnog sistema i miopatije. Na primer, povećani nivo aminotransferaze u serumu može ukazivati na toksičnost jetre ili na abnormalnost funkcije jetre. Na primer, povećani bilirubin može ukazivati na toksičnost jetre ili na abnormalnost funkcije jetre.
[0307] Dalji primeri dodatnih farmaceutskih agenasa uključuju, ali nisu ograničeni na, imunoglobuline, uključujući, ali ne ograničavajući se na, intravenski imunoglobulin (IVIg); analgetike (npr. acetaminofen); salicilate; antibiotile; antivirusne agense; antimikotične agense; adrenergičke modifikatore; hormone (npr. anabolički steroidi, androgen, estrogen, kalcitonin, progestin, somatostatin i tiroidni hormoni); imunomodulatore; relaksante mišića; antihistaminike; agense za osteoporozu (npr. bifosfonati, kalcitonin i estrogeni); prostaglandinei, antineoplastične agense; psihoterapijske agense; sedative; otrovni hrast ili proizvode od toxicodendron vernix; antitela; i vakcine.
[0308] Tretmani raka često sadrže više od jedne terapije. Stoga, u određenim otelotvorenjima, predmetno obelodanjenje se odnosi na postupke za smanjenje ili sprečavanje metastaza koje uključuju primenu pacijentu jedinjenja koje sadrži modifikovani oligonukleotid, gde je modifikovani oligonukleotid komplementaran sa miR-21, i primenu najmanje jedne dodatne terapije koja je terapija protiv raka.
[0309] U određenim otelotvorenjima, terapija protiv raka je hemoterapija. Pogodni hemoterapijski agensi uključuju docetaksel, ciklofosfamid, ifosfamid, metotreksat, vinblastin, cisplatin, 5-fluorouracil, gemcitabin, doksorubicin, mitomicin c, sorafenib, etopozid, karboplatin, epirubicin, irinotetin i oksali. Dodatno pogodan hemoterapijski agens uključuje oligomerno jedinjenje, osim ovde ciljanog miR-21, koji se koristi za tretman raka.
[0310] U određenim otelotvorenjima, terapija protiv raka je terapija zračenjem. U određenim otelotvorenjima, terapija protiv raka je hirurška resekcija tumora. U nekim otelotvorenjima, terapija protiv raka je agens koji oštećuje DNK, inhibitor proliferacije, anti-folat, inhibitor receptora faktora rasta, anti-angiogeni agens, inhibitor receptora tirozin kinaze, inhibitor kinaze, inhibitor faktora rasta ili citotoksični agens.
[0311] U određenim otelotvorenjima, agens koji oštećuje DNK je 1,3-bis (2-hloroetil)-1-nitrozourea, busulfan, karboplatin, karmustin, hlorambucil, cisplatin, ciklofosfamid, dakarbazin, daunorubicin, doksorubicin, epirubicin, etopozid, idarubamidin, idarubamidin, irinotekan, lomustin, mehloretamin, melfalan, mitomicin C, mitoksantron, oksaliplatin, temozolomid ili topotekan.
[0312] U određenim otelotvorenjima, antifolat je metotreksat, aminopterin, timidilat sintaza, serin hidroksimetiltransferaza, foliilpoliglutamil sintetaza, g-glutamil hidrolaza, glicinamidribonukleotid transformilaza, leukovorin, amino-imidazol-karboksamid-ribonukleotid transformilaza, 5-luorouracil ili folatni transporter.
[0313] U određenim otelotvorenjima, receptor za faktor rasta je erlotinib ili gefitinib.
[0314] U određenim otelotvorenjima, inhibitor angiogeneze je bevacizumab, talidomid, karboksiamidotriazol, TNP-470, CM101, IFN-α, faktor trombocita-4, suramin, SU5416, trombospondin, VEGFR antagonist, inhibitorni faktor angiogeneze izveden iz hrskavice, inhibitor matrične metaloproteaze, angiostatin, endostatin, 2-metoksistradiol, tekogalan, tetratiomolibdat, prolaktin ili linomid.
[0315] U određenim otelotvorenjima, inhibitor kinaze je bevacizumab, BIBW 2992, cetuksimab, imatinib, trastuzumab, gefitinib, ranibizumab, pegaptanib, sorafenib, dasatinib, sunitinib, erlotinib, nilotinib, lapatinib, panitumumab, vandetanib, E7080, pazopanib, mubritinib, ili fostamatinib.
Određene mikroRNK nukleobazne sekvence
[0316] Modifikovani oligonukleotidi koji imaju ovde opisani nukleozidni obrazac imaju nukleobaznu sekvencu koja je komplementarna sa miR-21 (SEQ ID NO: 1), ili njen prekursor (SEQ ID NO: 2). U određenim otelotvorenjima, svaka nukleobaza modifikovanog oligonukleotida je sposobna da se bazno upari sa nukleobazom na svakom odgovarajućem položaju u nukleobaznoj sekvenci od miR-21, ili njenom prekursoru. U određenim otelotvorenjima, nukleobazna sekvenca modifikovanog oligonukleotida može imati jedan ili više nepodudarenih baznih parova u odnosu na nukleobaznu sekvencu od miR-21 ili sekvencu prekursora, i ostaje sposobna za hibridizaciju sa ciljanom sekvencom.
[0317] Kako je miR-21 sekvenca sadržana u miR-21 sekvenci prekursora, modifikovani oligonukleotid koji ima nukleobaznu sekvencu koja je komplementarna sa miR-21 takođe je komplementaran sa regionom miR-21 prekursora.
[0318] U određenim otelotvorenjima definisanim patentnim zahtevima, modifikovani oligonukleotid se sastoji od određenog broja povezanih nukleozida koji je jednak dužini miR-21.
[0319] U određenim otelotvorenjima definisanim patentnim zahtevima, broj povezanih nukleozida modifikovanog oligonukleotida je manji od dužine miR-21. Modifikovani oligonukleotid koji ima broj povezanih nukleozida manji od dužine miR-21, gde je svaka nukleobaza modifikovanog oligonukleotida komplementarna svakoj nukleobazi na odgovarajućem položaju miR-21, smatra se modifikovanim oligonukleotidom koji ima nukleobaznu sekvencu koja je u potpunosti komplementarna regionu miR-21 sekvence. Na primer, modifikovani oligonukleotid koji se sastoji od 19 povezanih nukleozida, gde je svaka nukleobaza komplementarna odgovarajućem položaju od miR-21 koji je 22 nukleobaza dugačak, u potpunosti je komplementaran sa miR-21 regionom nukleobaze 19. Takav modifikovani oligonukleotid ima približno 86% ukupne komplementarnosti na celoj dužini miR-21 i ima 100% komplementarnosti sa delom miR-21 od 19 nukleobaza.
[0320] U određenim otelotvorenjima, modifikovani oligonukleotid sadrži nukleobaznu
1
sekvencu koja je komplementarna sekvenci semena, tj. modifikovani oligonukleotid sadrži sekvencu koja odgovara semenu. U određenim otelotvorenjima, sekvenca semena je heksamerna sekvenca semena. U određenim takvim otelotvorenjima, sekvenca semena je nukleobaza 1-6 od miR-21. U određenim takvim otelotvorenjima, sekvenca semena je nukleobaza 2-7 od miR-21. U određenim takvim otelotvorenjima, sekvenca semena su nukleobaze 3-8 od miR-21. U određenim otelotvorenjima, sekvenca semena je heptamerna sekvenca semena. U određenim takvim otelotvorenjima, heptamerna sekvenca semena je nukleobaza 1-7 od miR-21. U određenim takvim otelotvorenjima, heptamerna sekvenca semena je nukleobaza 2-8 od miR-21. U određenim otelotvorenjima, sekvenca semena je oktamerna sekvenca semena. U određenim takvim otelotvorenjima, oktamerna sekvenca semena je nukleobaza 1-8 od miR-21. U određenim otelotvorenjima, oktamerna sekvenca semena je nukleobaza 2-9 od miR-21.
[0321] U određenim otelotvorenjima, modifikovani oligonukleotid ima nukleobaznu sekvencu koja ima jedno nepodudaranje u odnosu na nukleobaznu sekvencu od miR-21, ili njen prekursor. U određenim otelotvorenjima, modifikovani oligonukleotid ima nukleobaznu sekvencu koja ima dve nepodudaranja u odnosu na nukleobaznu sekvencu od miR-21, ili njen prekursor. U određenim takvim otelotvorenjima, modifikovani oligonukleotid ima nukleobaznu sekvencu koja nema više od dva nepodudaranja u odnosu na nukleobaznu sekvencu od miR-21, ili njen prekursor. U određenim takvim otelotvorenjima, nepodudarene nukleobaze su susedne. U određenim takvim otelotvorenjima, nepodudarene nukleobaze nisu susedne.
[0322] U određenim otelotvorenjima, broj povezanih nukleozida modifikovanog oligonukleotida je veći od dužine miR-21. U određenim takvim otelotvorenjima, nukleobaza dodatnog nukleozida je komplementarna nukleobazi miR-21 sekvence matične petlje. U određenim otelotvorenjima, broj povezanih nukleozida modifikovanog oligonukleotida je veći od dužine miR-21. U određenim takvim otelotvorenjima, dodatni nukleozid je na 5' kraju oligonukleotida. U određenim takvim otelotvorenjima, dodatni nukleozid je na 3' kraju oligonukleotida. U određenim otelotvorenjima, broj povezanih nukleozida modifikovanog oligonukleotida je dva veći od dužine miR-21. U određenim takvim otelotvorenjima, dva dodatna nukleozida su na 5' kraju oligonukleotida. U određenim takvim otelotvorenjima, dva dodatna nukleozida su na 3' kraju oligonukleotida. U određenim takvim otelotvorenjima, jedan dodatni nukleozid se nalazi na 5' kraju, i jedan dodatni nukleozid se nalazi na 3' kraju
2
oligonukleotida. U određenim otelotvorenjima, region oligonukleotida može biti u potpunosti komplementaran nukleobaznoj sekvenci od miR-21, ali ceo modifikovani oligonukleotid nije u potpunosti komplementaran sa miR-21. Na primer, modifikovani oligonukleotid koji se sastoji od 24 povezana nukleozida, gde su nukleobaze nukleozida od 1 do 23 komplementarne odgovarajućem položaju od miR-21 koji je dugačak 22 nukleobaze, ima deo od 22 nukleozida koji je u potpunosti komplementaran nukleobaznoj sekvenci od miR-21 i ima približno 96% ukupne komplementarnosti sa nukleobaznom sekvencom od miR-21.
Određeni modifikovani oligonukleotidi
[0323] U nekim otelotvorenjima, kako je definisano patentnim zahtevima, modifikovani oligonukleotid se sastoji od 16 povezanih nukleozida. U nekim otelotvorenjima, kako je definisano patentnim zahtevima, modifikovani oligonukleotid se sastoji od 17 povezanih nukleozida. U nekim otelotvorenjima, kako je definisano patentnim zahtevima, modifikovani oligonukleotid se sastoji od 18 povezanih nukleozida. U nekim otelotvorenjima, kako je definisano patentnim zahtevima, modifikovani oligonukleotid se sastoji od 19 povezanih nukleozida. U nekim otelotvorenjima, modifikovani oligonukleotid sastoji se od 20 povezanih nukleozida. U nekim otelotvorenjima, modifikovani oligonukleotid se sastoji od 21 povezanog nukleozida. U nekim otelotvorenjima, modifikovani oligonukleotid se sastoji od 22 povezana nukleozida.
[0324] Ovde prikazane nukleobazne sekvence, uključujući, ali ne ograničavajući se na one koje se mogu naći u primerima i u spisku sekvenci, nezavisne su od bilo kakve modifikacije nukleinske kiseline. Kao takve, nukleinske kiseline definisane sa SEQ ID NO mogu sadržati, nezavisno, jednu ili više modifikacija jednog ili više šećernog dela, jednu ili više internukleozidnih veza i/ili jednu ili više nukleobaza.
[0325] Iako spisak sekvenci koji prati ovu prijavu identifikuje svaku nukleobaznu sekvencu kao „RNK“ ili „DNK“ prema potrebi, u praksi te sekvence mogu biti modifikovane bilo kojom kombinacijom hemijskih modifikacija. Stručnjak će lako uvideti da je takva oznaka kao „RNK“ ili „DNK“ za opis modifikovanih oligonukleotida donekle proizvoljna. Na primer, modifikovani oligonukleotid koji sadrži nukleozid koji sadrži 2'-OH šećerni deo i timinsku bazu može se opisati kao DNK koja ima modifikovani šećer (2'-OH za prirodni 2'-H od DNK) ili kao RNK koji imaju modifikovanu bazu (timin (metilovani uracil) za prirodni uracil od RNK).
[0326] Shodno tome, ovde obelodanjene sekvence nukleinskih kiselina, uključujući, ali ne ograničavajući se na one u spisku sekvenci, namenjene su da obuhvate nukleinske kiseline koje sadrže bilo koju kombinaciju prirodne ili modifikovane RNK i/ili DNK, uključujući, ali ne ograničavajući se na takve nukleinske kiseline sa modifikovanim nukleobazama. Daljim primerom i bez ograničavanja, oligonukleotid koji ima nukleobaznu sekvencu „ATCGATCG“ obuhvata bilo koji oligonukleotid koji ima takvu nukleobaznu sekvencu, bilo da je modifikovan ili nemodifikovan, uključujući, ali ne ograničavajući se na, takva jedinjenja koja sadrže RNK baze, poput onih koja imaju „AUCGAUCG“ sekvencu i onih koja imaju neke DNK baze i neke RNK baze kao što su „AUCGATCG“ i oligonukleotide koji imaju druge modifikovane baze, kao što je „AT<me>CGAUCG“, gde<me>C označava 5-metilcitozin. Slično tome, oligonukleotid koji ima nukleobaznu sekvencu „AUCGAUCG“ obuhvata bilo koji oligonukleotid koji ima takvu nukleobaznu sekvencu, bilo da je modifikovan ili nemodifikovan, uključujući, ali ne ograničavajući se na, takva jedinjenja koja sadrže DNK baze, poput onih koja imaju „ATCGATCG“ sekvencu i onih koja imaju neke DNK baze i neke RNK baze kao što je „AUCGATCG“ i oligonukleotide koji imaju druge modifikovane baze, kao što je „AT<me>CGAUCG“, gde<me>C označava 5-metilcitozin.
Određene modifikacije
[0327] Oligonukleotidi koji su ovde obelodanjeni mogu da sadrže jednu ili više modifikacija nukleobaze, šećera i/ili internukleozidne veze, i kao takvi su modifikovani oligonukleotidi. Modifikovana nukleobaza, šećera i/ili internukleozidna veza mogu se odabrati u nemodifikovanom obliku zbog poželjnih svojstava kao što su, na primer, pojačani unos ćelija, povećani afinitet za druge oligonukleotide ili ciljeve nukleinske kiseline i povećana stabilnost u prisustvu nukleaza.
[0328] U određenim otelotvorenjima kako su definisana patentnim zahtevima, modifikovani oligonukleotid sadrži jedan ili više modifikovanih nukleozida. U određenim takvim otelotvorenjima definisanim patentnim zahtevima, modifikovani nukleozid je stabilizujući nukleozid. Primer stabilizujućeg nukleozida je šećerno modifikovani nukleozid.
4
[0329] U određenim otelotvorenjima kako su definisana patentnim zahtevima, modifikovani nukleozid je nukleozid modifikovan šećerom. U određenim takvim otelotvorenjima definisanim patentnim zahtevima, nukleozidi modifikovan šećerom mogu dalje sadržati prirodni ili modifikovani heterociklični bazni deo i/ili prirodnu ili modifikovanu internukleozidnu vezu i mogu uključivati dalje modifikacije nezavisne od modifikacije šećera. U određenim otelotvorenjima definisanim patentnim zahtevima, šećerno modifikovani nukleozid je 2'-modifikovani nukleozid, gde je šećerni prsten modifikovan na 2' ugljeniku iz prirodne riboze ili 2'-dezoksi-riboze.
[0330] U određenim otelotvorenjima, 2'-modifikovani nukleozid ima biciklični šećerni deo. U određenim takvim otelotvorenjima, biciklični šećerni deo je D šećer u alfa konfiguraciji. U određenim takvim otelotvorenjima, biciklični šećerni deo je D šećer u beta konfiguraciji. U određenim takvim otelotvorenjima, biciklični šećerni deo je L šećer u alfa konfiguraciji. U određenim takvim otelotvorenjima, biciklični šećerni deo je L šećer u beta konfiguraciji.
[0331] U određenim otelotvorenjima, biciklični šećerni deo sadrži grupu za premošćavanje između 2 'i 4'-ugljenikovog atoma. U određenim takvim otelotvorenjima, grupa za premošćavanje sadrži od 1 do 8 povezanih biradikalnih grupa. U određenim otelotvorenjima, biciklični šećerni deo sadrži od 1 do 4 povezane biradikalne grupe. U određenim otelotvorenjima, biciklični šećerni deo sadrži 2 ili 3 povezane biradikalne grupe. U određenim otelotvorenjima, biciklični šećerni deo sadrži 2 povezane biradikalne grupe.
Primeri takvih 4' do 2' supstituenata šećera uključuju, ali nisu ograničeni na: -[C(Ra)(Rb)]n-, -[C(Ra)(Rb)]n-O-, -C(RaRb)-N(R)-O- ili, -C(RaRb)-O-N(R)-; 4'-CH2-2', 4'-(CH2)2-2', 4'-(CH2)3-2'; 4'-(CH2)-O-2' (LNK); 4'-(CH2)-S-2'; 4'-(CH2)2-O-2' (ENK); 4'-CH(CH3)-O-2' (cEt) i 4'-C-H(CH2OCH3)-O-2', i njihovi analozi (pogledati, npr., SAD patent 7,399,845, objavljen 15. jula 2008); 4'-C(CH3)(CH3)-O-2' i njihovi analozi, (pogledati, npr., WO2009/006478, objavljen 8. januara 2009); 4'-CH2-N(OCH3)-2' i njihovi analozi (pogledati, npr., WO2008/150729, objavljen 11. decembra 2008); 4'-CH2-O-N(CH3)-2' (pogledati, npr., US2004/0171570, objavljen 2. septembra 2004); 4'-CH2-O-N(R)-2', i 4'-CH2-N(R)-O-2'-, gde je svaki R, nezavisno, H, zaštitna grupa, ili C1-C12alkil; 4'-CH2-N(R)-O-2', gde R je H, C1-C12alkil, ili zaštitna grupa (pogledati, SAD patent 7,427,672, objavljen 23. septembra 2008); 4'-CH2-C(H)(CH3)-2' (pogledati, npr., Chattopadhyaya, et al., J. Org. Chem., 2009, 74, 118-134); i 4'-CH2-C(=CH2)-2' i njihovi analozi (pogledati, objavljena PCT međunarodna prijava WO 2008/154401, objavljena 8. decembra 2008).
[0332] U određenim otelotvorenjima, takvi 4' do 2' mostovi nezavisno obuhvataju 1 ili od 2 do 4 povezane grupe nezavisno izabrane od -[C(Ra)(Rb)]n, -C(Ra)=C(Rb)-, -C(Ra)=N-,
-C(=NRa)-, -C(=O)-, -C(=S)-, -O-, -Si(Ra)2-, -S(=O).-, i -N(Ra)-;
gde:
x iznosi 0, 1, ili 2;
n iznosi 1, 2, 3, ili 4;
svaki Rai Rb, je, nezavisno, H, zaštitna grupa, hidroksil, C1-C12alkil, supstituisan C1-C12alkil, C2-C12alkenil, supstituisan C2-C12alkenil, C2-C12alkinil, supstituisan C2-C12alkinil, C5-C20aril, supstituisan C5-C20aril, heterocikl radikal, supstituisan heterocikl radikal, heteroaril, supstituisan heteroaril, C5-C7aliciklični radikal, supstituisan C5-C7aliciklični radikal, halogen, OJ1, NJ1J2, SJ1, N3, COOJ1, acil (C(=O)-H), supstituisan acil, CN, sulfonil (S(=O)2-J1), ili sulfoksil (S(=O)-J1); i
svaki J1i J2je, nezavisno, H, C1-C12alkil, supstituisan C1-C12alkil, C2-C12alkenil, supstituisan C2-C12alkenil, C2-C12alkinil, supstituisan C2-C12alkinil, C5-C20aril, supstituisan C5-C20aril, acil (C(=O)-H), supstituisan acil, heterocikl radikal, supstituisan heterocikl radikal, C1-C12aminoalkil, supstituisan C1-C12aminoalkil, ili zaštitna grupa.
[0333] Nukleozidi koji sadrže takve biciklične šećerne delove nazivaju se bicikličnim nukleozidima ili BNK. U određenim otelotvorenjima, biciklični nukleozidi uključuju, ali nisu ograničeni na, (A) α-L-Metileneoksi (4'-CH2-O-2') BNK; (B) β-D-Metileneoksi (4'-CH2-O-2') BNK; (C) etileneoksi (4'-(CH2)2-O-2') BNK; (D) Aminooksi (4'-CH2-O-N(R)-2') BNK; (E) oksiamino (4'-CH2-N(R)-O-2') BNK; (F) Metil(metileneoksi) (4'-CH(CH3)-O-2') BNK (takođe se naziva ograničeni etil ili cEt); (G) metilen-tio (4'-CH2-S-2') BNK; (H) metilenamino (4'-CH2-N(R)-2') BNK; (I) metil karbociklični (4'-CH2-CH(CH3)-2') BNK; (J) c-MOE (4'-CH2-OMe-2') BNK i (K) propilen karbociklični (4'-(CH2)3-2') BNK kako je prikazano u nastavku.
gde je Bx nukleobazni deo i R je, nezavisno, H, zaštitna grupa, ili C1-C12alkil.
[0334] U određenim otelotvorenjima, 2'-modifikovan nukleozid obuhvata 2'-supstituentnu grupu izabranu od članova halo, allil, amino, azido, SH, CN, OCN, CF3, OCF3, O-, S-, ili N(Rm)-alkil; O-, S-, ili N(Rm)-alkenil; O-, S- ili N(Rm)-alkinil; O-alkilenil-O-alkil, alkinil, alkaril, aralkil, O-alkaril, O-aralkil, O(CH2)2SCH3, O-(CH2)2-O-N(Rm)(Rn) ili O-CH2-C(=O)-N(Rm)(Rn), gde svaki je Rm i Rn, nezavisno, H, amino zaštitna grupa ili supstituisan ili nesupstituisan C1-C10alkil. Ove 2'-supstituentne grupe mogu se dalje supstituisati sa jednom ili više supstituentnih grupa koje se nezavisno izabranih od članova hidroksil, amino, alkoksi, karboksi, benzil, fenil, nitro (NO2), tiol, tioalkoksi (S-alkil), halogen, alkil, aril, alkenil i alkinil.
[0335] U određenim otelotvorenjima, 2'-modifikovani nukleozid sadrži 2'-supstituentnu grupu odabranu od F, NH2, N3, OCF3, O-CH3, O(CH2)3NH2, CH2-CH=CH2, O-CH2-CH=CH2, OCH2CH2OCH3, O(CH2)2SCH3, O-(CH2)2-O-N(Rm)(Rn), -O(CH2)2O(CH2)2N(CH3)2, i N-supstituisanog acetamida (O-CH2-C(=O)-N(Rm)(Rn) gde je svaki Rmand Rn, nezavisno H, amino zaštitna grupa ili supstituisani ili nesupstituisani C1-C10alkil.
[0336] U određenim otelotvorenjima, 2'-modifikovani nukleozid sadrži 2'-supstituentnu grupu odabranu od F, OCF3, O-CH3, OCH2CH2OCH3, 2'-O(CH2)2SCH3, O-(CH2)2-ON(CH3)2, -O(CH2)2O(CH2)2N(CH3)2, i O-CH2-C(=O)-N(H)CH3.
[0337] U određenim otelotvorenjima, 2'-modifikovani nukleozid sadrži 2'-supstituentnu grupu odabranu od F, O-CH3, i OCH2CH2OCH3.
[0338] U određenim otelotvorenjima, šećerno modifikovani nukleozid je 4'-tio modifikovani nukleozid. U određenim otelotvorenjima, šećerno modifikovani nukleozid je 4'-tio-2'-modifikovani nukleozid. 4'-tio modifikovani nukleozid ima β-D-ribonukleozid gde je 4'-O zamenjen sa 4'-S.4'-tio-2'-modifikovani nukleozid je 4'-tio modifikovani nukleozid koji ima 2'-OH zamenjen sa 2'-supstituentnom grupom. Pogodne 2'-supstituentne grupe uključuju 2'-OCH3, 2'-O-(CH2)2-OCH3, i 2'-F.
[0339] U određenim otelotvorenjima, modifikovani oligonukleotid sadrži jednu ili više internukleozidnih modifikacija. U određenim takvim otelotvorenjima, svaka internukleozidna veza modifikovanog oligonukleotida je modifikovana internukleozidna veza. U određenim otelotvorenjima, modifikovana internukleozidna veza sadrži atom fosfora.
[0340] U određenim otelotvorenjima, modifikovani oligonukleotid sadrži najmanje jednu fosforotioatnu internukleozidnu vezu. U određenim otelotvorenjima, svaka internukleozidna veza modifikovanog oligonukleotida je fosforotioatna internukleozidna veza.
[0341] U određenim otelotvorenjima, modifikovana internukleozidna veza ne sadrži atom fosfora. U određenim takvim otelotvorenjima, internukleozidna veza je formirana alkil internukleozidnom vezom kratkog lanca. U određenim takvim otelotvorenjima, internukleozidna veza se formira od cikloalkilnih internukleozidnih veza. U određenim takvim otelotvorenjima, internukleozidna veza nastaje mešovitom heteroatomskom i alkilnom internukleozidnom vezom. U određenim takvim otelotvorenjima, internukleozidna veza je formirana mešovitim heteroatomskim i cikloalkilnim internukleozidnim vezama. U određenim takvim otelotvorenjima, internukleozidna veza je formirana od jedne ili više heteroatomskih internukleozidnih veza sa kratkim lancem. U određenim takvim otelotvorenjima, internukleozidna veza je formirana od jedne ili više heterocikličnih internukleozidnih veza. U određenim takvim otelotvorenjima, internukleozidna veza ima amidnu kičmu. U određenim takvim otelotvorenjima, internukleozidna veza ima mešavinu N, O, S i CH2sastavnih delova.
[0342] U određenim otelotvorenjima definisanim patentnim zahtevima, modifikovani oligonukleotid sadrži jednu ili više modifikovanih nukleobaza. U određenim otelotvorenjima, modifikovani oligonukleotid sadrži jedan ili više 5-metilcitozina. U određenim otelotvorenjima, svaki citozin modifikovanog oligonukleotida sadrži 5-metilcitozin.
[0343] U određenim otelotvorenjima definisanim patentnim zahtevima, modifikovana nukleobaza je izabrana između 5-hidroksimetil citozina, 7-deazaguanina i 7-deazaadenina. U određenim otelotvorenjima, modifikovana nukleobaza se bira između 7-deaza-adenina, 7-deazaguanozina, 2-aminopiridina i 2-piridona. U određenim otelotvorenjima, modifikovana nukleobaza je izabrana između 5-supstituisanih pirimidina, 6-azapirimidina i N-2, N-6 i 0-6 supstituisanih purina, uključujući 2 aminopropiladenin, 5-propiniluracil i 5-propinilcitozin.
[0344] U određenim otelotvorenjima definisanim patentnim zahtevima, modifikovana nukleobaza sadrži policiklični heterocikl. U određenim otelotvorenjima, modifikovana nukleobaza sadrži triciklični heterocikl. U određenim otelotvorenjima, modifikovana nukleobaza sadrži derivat fenoksazina. U određenim otelotvorenjima, fenoksazin se može dalje modifikovati da formira nukleobazu koja je u struci poznata kao G-spona.
Određeni farmaceutski sastavi
[0345] Ovde su pruženi farmaceutski sastavi koji sadrže oligonukleotide kako su definisani patentnim zahtevima. U određenim otelotvorenjima, takvi farmaceutski sastavi se koriste za tretman metaboličkih poremećaja i pridruženih stanja. Pogodni načini primene uključuju, ali nisu ograničeni na, oralno, rektalno, transmukozno, crevno, enteralno, topikalno, supozitorijume, inhalaciju, intratekalno, intrakardijalno, intraventrikularno, intraperitonealno, intranazalno, intraokularno, intratumoralno i parenteralno (npr. intravenozno, intramuskularno, intramedularno i subkutano). U određenim otelotvorenjima, farmaceutski intratekali se primenjuju kako bi se postigla lokalna, a ne sistemska izloženost. Na primer, farmaceutski sastavi mogu se injektirati direktno u područje željenog efekta (npr. u jetru).
[0346] U određenim otelotvorenjima, farmaceutski sastav se primenjuje u obliku dozne jedinice (npr. tableta, kapsula, bolus, itd.). U nekim otelotvorenjima, farmaceutski sastavi sadrže modifikovani oligonukleotid pri dozi u rasponu odabranom od 25 mg do 800 mg, 25 mg do 700 mg, 25 mg do 600 mg, 25 mg do 500 mg, 25 mg do 400 mg, 25 mg do 300 mg, 25 mg do 200 mg, 25 mg do 100 mg, 100 mg do 800 mg, 200 mg do 800 mg, 300 mg do 800 mg, 400 mg do 800 mg, 500 mg do 800 mg, 600 mg do 800 mg, 100 mg do 700 mg, 150 mg do 650 mg, 200 mg do 600 mg, 250 mg do 550 mg, 300 mg do 500 mg, 300 mg do 400 mg, i 400 mg do 600 mg. U određenim otelotvorenjima, takvi farmaceutski sastavi sadrže modifikovani oligonukleotid pri dozi izabranoj od 25 mg, 30 mg, 35 mg, 40 mg, 45 mg, 50 mg, 55 mg, 60 mg, 65 mg, 70 mg, 75 mg, 80 mg, 85 mg, 90 mg, 95 mg, 100 mg, 105 mg, 110 mg, 115 mg, 120 mg, 125 mg, 130 mg, 135 mg, 140 mg, 145 mg, 150 mg, 155 mg, 160 mg, 165 mg, 170 mg, 175 mg, 180 mg, 185 mg, 190 mg, 195 mg, 200 mg, 205 mg, 210 mg, 215 mg, 220 mg, 225 mg, 230 mg, 235 mg, 240 mg, 245 mg, 250 mg, 255 mg, 260 mg, 265 mg, 270 mg, 270 mg, 280 mg, 285 mg, 290 mg, 295 mg, 300 mg, 305 mg, 310 mg, 315 mg, 320 mg, 325 mg, 330 mg, 335 mg, 340 mg, 345 mg, 350 mg, 355 mg, 360 mg, 365 mg, 370 mg, 375 mg, 380 mg, 385 mg, 390 mg, 395 mg, 400 mg, 405 mg, 410 mg, 415 mg, 420 mg, 425 mg, 430 mg, 435 mg, 440 mg, 445 mg, 450 mg, 455 mg, 460 mg, 465 mg, 470 mg, 475 mg, 480 mg, 485 mg, 490 mg, 495 mg, 500 mg, 505 mg, 510 mg, 515 mg, 520 mg, 525 mg, 530 mg, 535 mg, 540 mg, 545 mg, 550 mg, 555 mg, 560 mg, 565 mg, 570 mg, 575 mg, 580 mg, 585 mg, 590 mg, 595 mg, 600 mg, 605 mg, 610 mg, 615 mg, 620 mg, 625 mg, 630 mg, 635 mg, 640 mg, 645 mg, 650 mg, 655 mg, 660 mg, 665 mg, 670 mg, 675 mg, 680 mg, 685 mg, 690 mg, 695 mg, 700 mg, 705 mg, 710 mg, 715 mg, 720 mg, 725 mg, 730 mg, 735 mg, 740 mg, 745 mg, 750 mg, 755 mg, 760 mg, 765 mg, 770 mg, 775 mg, 780 mg, 785 mg, 790 mg, 795 mg, i 800 mg. U određenim takvim otelotvorenjima, farmaceutski sastav sadrži dozu modifikovanog oligonukleotida izabranu od 25 mg, 50 mg, 75 mg, 100 mg, 150 mg, 200 mg, 250 mg, 300 mg, 350 mg, 400 mg, 500 mg, 600 mg, 700 mg, i 800mg.
[0347] U određenim otelotvorenjima, farmaceutski agens je sterilni liofilizovani modifikovani oligonukleotid koji je rekonstituisan sa pogodnim razblaživačem, npr. sterilnom vodom za injekcije ili sterilnim fiziološkim rastvorom za injekcije. Rekonstituisani proizvod se primenjuje u obliku subkutane injekcije ili u obliku intravenske infuzije nakon razblaživanja u fiziološkom rastvoru. Liofilizovani lek se sastoji od modifikovanog oligonukleotida koji je pripremljen u vodi za injekcije ili fiziološkom rastvoru za injekcije, podešen na pH 7,0-9,0 koristeći kiselinu ili bazu tokom pripreme, i zatim liofilizovan.
Liofilizovani modifikovani oligonukleotid može biti 25-800 mg oligonukleotida.
Podrazumeva se da ovo obuhvata 25, 50, 75, 100, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 275, 300, 325, 350, 375, 425, 450, 475, 500, 525, 550, 575, 600, 625, 650, 675, 700, 725, 750, 775, i 800 mg modifikovanog liofilizovanog oligonukleotida. Dalje, u nekim otelotvorenjima, liofilizovani modifikovani oligonukleotid je količina oligonukleotida u rasponu odabranom od 25 mg do 800 mg, 25 mg do 700 mg, 25 mg do 600 mg, 25 mg do 500 mg, 25 mg do 400 mg, 25 mg do 300 mg, 25 mg do 200 mg, 25 mg do 100 mg, 100 mg do 800 mg, 200 mg do 800 mg, 300 mg do 800 mg, 400 mg do 800 mg, 500 mg do 800 mg, 600 mg do 800 mg, 100 mg do 700 mg, 150 mg do 650 mg, 200 mg do 600 mg, 250 mg do 550 mg, 300 mg do 500 mg, 300 mg do 400 mg, i 400 mg do 600 mg. Liofilizovani lek može biti pakovan u prozirnu staklenu bočicu tipa I od 2 ml (obrađenu amonijum sulfatom), zatvorenu zatvaračem od brombutil gume i zapečaćenu aluminijumskom FLIP-OFF® zaptivkom.
[0348] U određenim otelotvorenjima, ovde pruženi farmaceutski sastavi mogu dodatno sadržati i druge pomoćne komponente koje se konvencionalno nalaze u farmaceutskim sastavima, na njihovim nivoima upotrebe utvrđenim u struci. Tako, na primer, smeše mogu sadržati dodatne, kompatibilne, farmaceutski aktivne materijale kao što su, na primer, antipruritici, adstringenti, lokalni anestetici ili protiv-upalni agensi, ili mogu sadržati dodatne materijale korisne u fizičkoj formulaciji različitih oblika doziranja sastava predmetnog pronalaska, kao što su boje, agensi za aromatizaciju, konzervansi, antioksidansi, agensi za zamućivanje, agensi za zgušnjavanje i stabilizatori. Međutim, takvi materijali, kada se dodaju, ne bi trebalo da ometaju biološke aktivnosti komponenti sastava predmetnog pronalaska. Formulacije se mogu sterilisati i, po želji, mešati sa pomoćnim agensima, npr. lubrikantima, konzervansima, stabilizatorima, ovlaživačima, emulgatorima, solima za uticaj na osmotski pritisak, puferima, bojama, aromama i/ili aromatičnim supstancama i slično koje nemaju štetno delovanje sa oligonukleotidima u formulaciji.
[0349] Lipidni delovi se koriste u terapijama nukleinskim kiselinama u različitim postupcima. U jednom postupku, nukleinska kiselina se uvodi u prethodno formirane lipozome ili lipoplekse napravljene od smeša katjonskih lipida i neutralnih lipida. U drugom postupku, DNK kompleksi sa mono- ili poli-katjonskim lipidima nastaju bez prisustva neutralnog lipida. U određenim otelotvorenjima, lipidni deo je odabran da poveća distribuciju farmaceutskog agensa u određenoj ćeliji ili tkivu. U određenim otelotvorenjima, lipidni deo je odabran da poveća distribuciju farmaceutskog agensa u masnom tkivu. U određenim otelotvorenjima, lipidni deo je odabran da poveća distribuciju farmaceutskog agensa u mišićnom tkivu.
1
[0350] U određenim otelotvorenjima, INTRALIPID se koristi za pripremu farmaceutskog sastava koji sadrži oligonukleotid. Intralipid je masna emulzija pripremljena za intravensku primenu. Sastoji se od 10% sojinog ulja, 1,2% fosfolipida žumanca, 2,25% glicerina i vode za injekcije. Pored toga, dodat je natrijum hidroksid za podešavanje pH tako da konačni raspon pH iznosi od 6 do 8,9.
[0351] U određenim otelotvorenjima, farmaceutski sastav ovde sadrži jedinjenje poliamina ili lipidni deo kompleksiran sa nukleinskom kiselinom. U određenim otelotvorenjima, takvi preparati sadrže jedno ili više jedinjenja, od kojih svako pojedinačno ima strukturu definisanu formulom (Z), ili njihovu farmaceutski prihvatljivu so,
gde je svaki X<a>i X<b>, za svaku pojavu, nezavisno C1-6alkilen; n iznosi 0, 1, 2, 3, 4, ili 5; svaki R je nezavisno H, gde najmanje n 2 R delova u najmanje oko 80% molekula jedinjenja formule (Z) u preparatu nisu H; m iznosi 1, 2, 3 ili 4; Y je O, NR<2>, ili S; R<1>je alkil, alkenil, ili alkinil; od kojih je svaki opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata; i R<2>je H, alkil, alkenil ili alkinil; od kojih je svaki opciono supstituisan, od kojih je svaki opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata; pod uslovom da, ako n = 0, tada najmanje n 3 R delova nisu H. Takvi preparati su opisani u PCT publikaciji WO/2008/042973. Određeni dodatni preparati su opisani kod Akinc et al., Nature Biotechnology 26, 561 - 569 (01 May 2008).
[0352] U određenim otelotvorenjima, ovde pruženi farmaceutski sastavi sadrže jedan ili više modifikovanih oligonukleotida i jedan ili više ekscipijenasa. U određenim takvim otelotvorenjima, ekscipijensi se biraju između vode, rastvora soli, alkohola, polietilen glikola, želatina, laktoze, amilaze, magnezijum stearata, talka, silicijumske kiseline, viskoznog parafina, hidroksimetilceluloze i polivinilpirolidona.
[0353] U određenim otelotvorenjima, ovde pružen farmaceutski sastav je pripremljen upotrebom poznatih tehnika, uključujući, ali ne ograničavajući se na, mešanje, rastvaranje, granuliranje, pravljenje dražeja, levigaciju, emulgovanje, kapsuliranje, uvlačenje ili tabletiranje.
2
[0354] U određenim otelotvorenjima, ovde pružen farmaceutski sastav je tečnost (npr. suspenzija, eliksir i/ili rastvor). U nekim od takvih otelotvorenja, tečan farmaceutski sastav se priprema koristeći sastojke poznate u struci, uključujući, ali ne ograničavajući se na, vodu, glikole, ulja, alkohole, arome, konzervanse i agense za bojenje.
[0355] U određenim otelotvorenjima, ovde pružen farmaceutski sastav je čvrsta supstanca (npr. orah, tableta i/ili kapsula). U nekim od takvih otelotvorenja, čvrsta farmaceutski sastav koja sadrži jedan ili više oligonukleotida priprema se pomoću sastojaka poznatih u struci, uključujući, ali ne ograničavajući se na, skrobove, šećere, razblaživače, agense za granulaciju, lubrikante, veznike i agensa za raspadanje.
[0356] U određenim otelotvorenjima, ovde pružen farmaceutski sastav formulisan je kao depo preparat. Neki takvi depo preparati obično deluju duže od preparata koji nisu depo. U određenim otelotvorenjima, takvi preparati se primenjuju implantacijom (na primer subkutano ili intramuskularno) ili intramuskularnom injekcijom. U određenim otelotvorenjima, depo preparati se pripremaju koristeći pogodne polimerne ili hidrofobne materijale (na primer emulzija u prihvatljivom ulju) ili jonoizmenjivačke smole ili kao teško rastvorljivi derivati, na primer, kao slabo rastvorljiva so.
[0357] U određenim otelotvorenjima, ovde pružen farmaceutski sastav sadrži sistem za isporuku. Primeri sistema za isporuku uključuju, ali nisu ograničeni na, lipozome i emulzije. Određeni sistemi za isporuku su korisni za pripremu određenih farmaceutskih sastava, uključujući one koje sadrže hidrofobna jedinjenja. U određenim otelotvorenjima, koriste se određeni organski rastvarači kao što je dimetilsulfoksid.
[0358] U određenim otelotvorenjima, ovde pružen farmaceutski sastav sadrži jedan ili više molekula za isporuku specifičnih za tkivo, dizajniranih da isporuče jedan ili više farmaceutskih agenasa predmetnog pronalaska u određena tkiva ili tipove ćelija. Na primer, u određenim otelotvorenjima, farmaceutski sastavi uključuju lipozome obložene antitelom specifičnim za tkivo.
[0359] U određenim otelotvorenjima, ovde pružen farmaceutski sastav sadrži sistem korastvarača. Neki od takvih sistema rastvarača sadrže, na primer, benzil alkohol, nepolaran površinski aktivni agens, organski polimer koji se meša sa vodom i vodenu fazu. U određenim otelotvorenjima, takvi sistemi ko-rastvarača se koriste za hidrofobna jedinjenja. Neograničavajući primer takvog sistema ko-rastvarača je VPD sistem ko-rastvarača, koji je rastvor apsolutnog etanola koji sadrži 3% tež./zap. benzilnog alkohola, 8% tež./zap. nepolarnog surfaktanta Polisorbat 80™ i 65 % tež./zap. polietilen glikola 300. Proporcije takvih sistema sa rastvaračima mogu se znatno menjati bez značajnih promena njihovih karakteristika rastvorljivosti i toksičnosti. Dalje, identitet komponenti rastvarača može biti različit: na primer, druge površinski aktivne supstance mogu se koristiti umesto Polisorbata 80™; veličina udeo polietilen glikola može da varira; drugi biokompatibilni polimeri mogu zameniti polietilen glikol, npr. polivinil pirolidon; a drugi šećeri ili polisaharidi mogu zameniti dekstrozu.
[0360] U određenim otelotvorenjima, ovde pružen farmaceutski sastav sadrži sistem sa produženim oslobađanjem. Neograničavajući primer takvog sistema sa produženim oslobađanjem je polupropusna matrica čvrstih hidrofobnih polimera. U određenim otelotvorenjima, sistemi sa odloženim oslobađanjem mogu, u zavisnosti od njihove hemijske prirode, oslobađati farmaceutske agense tokom perioda koji se meri u satima, danima, nedeljama ili mesecima.
[0361] U određenim otelotvorenjima, ovde pružen farmaceutski sastav je pripremljen za oralnu primenu. U nekim od takvih otelotvorenja, farmaceutski sastav je formulisan kombinovanjem jednog ili više jedinjenja koja sadrže modifikovani oligonukleotid sa jednim ili više farmaceutski prihvatljivih nosača. Neki od takvih nosača omogućavaju farmaceutskim sastavima da se formulišu kao tablete, pilule, dražeje, kapsule, tečnosti, gelovi, sirupi, kaše, suspenzije i slično, za oralno unošenje od strane pacijenta. U određenim otelotvorenjima, farmaceutski sastavi za oralnu upotrebu dobijaju se mešanjem oligonukleotida i jednog ili više čvrstih ekscipijenasa. Pogodni ekscipijensi uključuju, ali nisu ograničeni na, punila, poput šećera, uključujući laktozu, saharozu, manitol ili sorbitol; preparate celuloze kao što su, na primer, kukuruzni skrob, pšenični skrob, pirinčani skrob, krompirov skrob, želatin, tragakant gume, metil celuloza, hidroksipropilmetil-celuloza, natrijum karboksimetilceluloza i/ili polivinilpirolidon (PVP). U određenim otelotvorenjima, takva smeša je opciono mlevena, i pomoćni dodaci su opciono dodati. U određenim otelotvorenjima, farmaceutski sastavi se formiraju za dobijanje tableta ili jezgara dražeja. U određenim otelotvorenjima, dodaju se ageni za razgradnju (npr. umreženi polivinil pirolidon, agar ili alginska kiselina ili njihova so,
4
kao što je natrijum alginat).
[0362] U određenim otelotvorenjima, jezgra dražeja su obložena. U određenim takvim otelotvorenjima mogu se koristiti koncentrovani rastvori šećera, koji mogu opciono sadržati arapsku gumu, talk, polivinil pirolidon, karbopol gel, polietilen glikol i/ili titanijum dioksid, rastvore lakova i pogodne organske rastvarače ili smeše rastvarača. Boje ili pigmenti se mogu dodavati tabletama ili oblogama dražeja.
[0363] U određenim otelotvorenjima, farmaceutski sastavi za oralnu primenu su kapsule sa pritiskom napravljene od želatina. Neke od takvih kapsula sa pritiskom sadrže jedan ili više farmaceutskih agenasa predmetnog pronalaska u smeši sa jednim ili više punila kao što je laktoza, veznika kao što su skrobovi i/ili lubrikanata kao što je talk ili magnezijum stearat i, opciono, stabilizatora. U određenim otelotvorenjima, farmaceutski sastavi za oralnu primenu su meke, zatvorene kapsule napravljene od želatina i plastifikatora, kao što su glicerol ili sorbitol. U određenim mekim kapsulama, jedan ili više farmaceutskih agenasa predmetnog pronalaska se rastvaraju ili suspenduju u pogodnim tečnostima, kao što su masna ulja, tečni parafin ili tečni polietilen glikoli. Pored toga, mogu se dodati stabilizatori.
[0364] U određenim otelotvorenjima, farmaceutski sastavi su pripremljeni za bukalnu primenu. Određeni takvi farmaceutski sastavi su tablete ili pastile formulisane na uobičajeni način.
[0365] U određenim otelotvorenjima, farmaceutski sastav je pripremljen za primenu injekcijom (npr. Intravenozno, subkutano, intramuskularno, itd.). U nekim od takvih otelotvorenja, farmaceutski sastav sadrži nosač i formulisan je u vodenom rastvoru, kao što su voda ili fiziološki kompatibilni puferi kao što su Henksov rastvor, Ringerov rastvor ili fiziološki slani pufer. U određenim otelotvorenjima, uključeni su i drugi sastojci (npr. sastojci koji pomažu u rastvorljivosti ili služe kao konzervansi). U određenim otelotvorenjima, injekcione suspenzije se pripremaju pomoću odgovarajućih tečnih nosača, agenasa za suspendovanje i slično. Određeni farmaceutski sastavi za injekcije su predstavljeni u obliku jedinične doze, na primer, u ampulama ili u kontejnerima sa više doza. Određeni farmaceutski sastavi za injekcije su suspenzije, rastvori ili emulzije u uljanim ili vodenim nosačima i mogu sadržati agense za formulisanje kao što su agensi za suspendovanje, stabilizaciju i/ili raspršivanje. Određeni rastvarači pogodni za upotrebu u farmaceutskim sastavima za injekcije uključuju, ali nisu ograničeni na, lipofilne rastvarače i masna ulja, kao što su susamovo ulje, estri sintetičkih masnih kiselina, kao što su etil oleat ili trigliceridi, i lipozomi. Vodene suspenzije za injekcije mogu sadržati supstance koje povećavaju viskoznost suspenzije, poput natrijum karboksimetil celuloze, sorbitola ili dekstrana. Po želji, takve suspenzije mogu takođe sadržati pogodne stabilizatore ili agense koji povećavaju rastvorljivost farmaceutskih agenasa kako bi se omogućila priprema visoko koncentrovanih rastvora.
[0366] U određenim otelotvorenjima, farmaceutski sastav je pripremljen za transmukoznu primenu. U nekim od takvih otelotvorenja u formulaciji se koriste penetranti koji odgovaraju barijeri koja se prožima. Takvi penetranti su opšte poznati u struci.
[0367] U određenim otelotvorenjima, farmaceutski sastav je pripremljen za primenu inhalacijom. Određeni takvi farmaceutski sastavi za inhalaciju su pripremljeni u obliku aerosolnog spreja u pakovanju pod pritiskom ili u nebulizatoru. Određeni takvi farmaceutski sastavi sadrže potisni gas, npr. dihlorodifluorometan, trihlorofluorometan, dihlorotetrafluoroetan, ugljen dioksid ili drugi pogodan gas. U određenim otelotvorenjima, koristeći aerosoa pod pritiskom, dozna jedinica se može odrediti pomoću ventila koji isporučuje odmerenu količinu. U određenim otelotvorenjima, mogu se formulisati kapsule i kertridži za upotrebu u inhalatoru ili insuflatoru. Određene takve formulacije sadrže smešu praha farmaceutskog agensa pronalaska i pogodnu bazu praha kao što su laktoza ili skrob.
[0368] U određenim otelotvorenjima, farmaceutski sastav je pripremljen za rektalnu primenu, kao što su supozitorijumi ili retencioni klistir. Određeni takvi farmaceutski sastavi sadrže poznate sastojke, kao što su kakao puter i/ili drugi gliceridi.
[0369] U određenim otelotvorenjima, farmaceutski sastav je pripremljen za lokalnu primenu. Neki od takvih farmaceutskih sastava sadrže blage hidratantne baze, kao što su masti ili kreme. Primeri pogodnih masnih baza uključuju, ali nisu ograničeni na njih, petrolatum, petrolatum i isparljivi silikoni, i lanolin i vodu u uljanim emulzijama. Primeri pogodnih baza kreme uključuju, ali nisu ograničeni na, hladnu kremu i hidrofilnu mast.
[0370] U određenim otelotvorenjima, ovde pružen farmaceutski sastav sadrži modifikovani oligonukleotid u terapeutski efikasnoj količini. U određenim otelotvorenjima, terapeutski efikasna količina je dovoljna da spreči, ublaži ili olakša simptome bolesti ili da produži preživljavanje pacijenta koji se tretira. Određivanje terapeutski efikasne količine je u granicama mogućnosti stručnjaka.
[0371] U određenim otelotvorenjima, jedan ili više ovde modifikovanih oligonukleotida je formulisan kao prolek. U određenim otelotvorenjima, nakon in vivo primene, prolek se hemijski pretvara u biološki, farmaceutski ili terapeutski aktivniji oblik oligonukleotida. U određenim otelotvorenjima, prolekovi su korisni jer ih je lakše primenjivati nego odgovarajući aktivni oblik. Na primer, u određenim slučajevima, prolek može biti bioraspoloživiji (npr. oralnom primenom) nego što je to odgovarajući aktivni oblik. U određenim slučajevima, prolek može imati poboljšanu rastvorljivost u poređenju sa odgovarajućim aktivnim oblikom. U određenim otelotvorenjima, prolekovi su manje rastvorljivi u vodi od odgovarajućeg aktivnog oblika. U određenim slučajevima, takvi prolekovi imaju superiorni prenos kroz ćelijske membrane, gde je rastvorljivost u vodi štetna za pokretljivost. U određenim otelotvorenjima, prolek je estar. U određenim takvim otelotvorenjima, estar se metabolički hidrolizuje u karboksilnu kiselinu nakon primene. U određenim slučajevima jedinjenje koje sadrži karboksilnu kiselinu je odgovarajući aktivni oblik. U određenim otelotvorenjima, prolek sadrži kratki peptid (poliaminokiselina) vezan za kiselinsku grupu. U nekim od takvih otelotvorenja, peptid se cepa nakon primene kako bi se formirao odgovarajući aktivni oblik.
[0372] U određenim otelotvorenjima, prolek se proizvodi modifikovanjem farmaceutski aktivnog jedinjenja tako da će se aktivno jedinjenje regenerisati nakon in vivo primene. Prolek može biti dizajniran da menja metaboličku stabilnost ili transportne karakteristike leka, da prikrije neželjene efekte ili toksičnost, da poboljša ukus leka ili da promeni druge karakteristike ili svojstva leka. Zahvaljujući poznavanju farmakodinamičkih procesa i metabolizma lekova in vivo, stručnjaci, kada je poznato farmaceutski aktivno jedinjenje, mogu da dizajniraju predlekove jedinjenja (pogledati, npr., Nogrady (1985) Medicinal Chemistry A Biochemical Approach, Oxford University Press, New York, pages 388-392).
Određeni putevi primene
[0373] U određenim otelotvorenjima, primena pacijentu uključuje parenteralnu primenu. U određenim otelotvorenjima, primena pacijentu uključuje intravensku primenu. U određenim otelotvorenjima, primena pacijentu uključuje subkutanu primenu.
[0374] U određenim otelotvorenjima, primena pacijentu uključuje intraarterijsku primenu. U nekim otelotvorenjima, primena pacijentu uključuje intrakardijalnu primenu. Pogodni agensi za intrakardijalnu primenu uključuju upotrebu katetera ili primenu tokom operacije na otvorenom srcu. U određenim otelotvorenjima, primena uključuje upotrebu stenta.
[0375] U određenim otelotvorenjima, primena uključuje plućnu primenu. U nekim otelotvorenjima, plućna primena uključuje isporuku aerosolizovanog oligonukleotida u pluća pacijenta udisanjem. Nakon udisanja aerosolizovanog oligonukleotida od strane pacijenta, oligonukleotid se distribuira u ćelije i normalnog i upaljenog plućnog tkiva, uključujući alveolarne makrofage, eozinofile, epitel, endotel krvnih sudova i epitel bronhija. Pogodan uređaj za isporuku farmaceutskog sastava koja sadrži modifikovani oligonukleotid uključuje, ali nije ograničen na, standardni uređaj za raspršivanje. Formulacije i postupci za moduliranje veličine kapljica pomoću nebulizatora za ciljanje određenih delova respiratornog trakta i pluća dobro su poznati stručnjacima. Dodatni pogodni uređaji uključuju inhalatore sa suvim prahom ili inhalatore sa odmerenim dozama.
[0376] U određenim otelotvorenjima, farmaceutski sastavi se primenjuju kako bi se postigla lokalna, a ne sistemska izloženost. Na primer, plućna primena isporučuje farmaceutski sastav u pluća, uz minimalnu sistemsku izloženost.
[0377] Dodatni pogodni putevi primene uključuju, ali nisu ograničeni na, oralni, rektalni, transmukozni, crevni, enteralni, topikalni, supozitorijumski, intratekalni, intraventrikularni, intraperitonealni, intranazalni, intraokularni, intramuskularni, intramedularni i intratumoralni.
Određena jedinjenja
[0378] Ovde su pružena jedinjenja koja sadrže modifikovani oligonukleotid koji ima određene nukleozidne obrasce kako je definisano patentnim zahtevima, i upotreba ovih jedinjenja za modulaciju aktivnosti, nivoa ili eksprimiranja ciljane nukleinske kiseline kako je definisano patentnim zahtevima. U određenim otelotvorenjima definisanim patentnim zahtevima, jedinjenje sadrži oligonukleotid. U određenim takvim otelotvorenjima definisanim patentnim zahtevima, jedinjenje se sastoji od oligonukleotida. U određenim takvim otelotvorenjima, jedinjenje sadrži modifikovani oligonukleotid hibridizovan sa komplementarnim lancem, tj. jedinjenje sadrži dvolančano oligomerno jedinjenje.
[0379] U određenim otelotvorenjima, jedinjenje sadrži modifikovani oligonukleotid konjugovan sa jednim ili više delova koji pojačavaju aktivnost, ćelijsku distribuciju ili ćelijsko prihvatanje rezultujućih antisens oligonukleotida. U određenim takvim otelotvorenjima ostatak je deo holestarola. U određenim otelotvorenjima, ostatak je lipidni deo. Dodatni delovi za konjugaciju uključuju ugljene hidrate, fosfolipide, biotin, fenazin, folat, fenantridin, antrakinon, akridin, fluoresceine, rodamine, kumarine i boje. U određenim otelotvorenjima, konjugovana grupa je vezana direktno za oligonukleotid. U određenim otelotvorenjima, konjugovana grupa je vezana za modifikovani oligonukleotid vezujućim delom odabranim između amino, hidroksila, karboksilne kiseline, tiola, nezasićenja (npr. dvostruke ili trostruke veze), 8-amino-3,6-dioksaoktanske kiseline (ADO), sukcinimidil 4-(N-maleimidometil)cikloheksan-1-karboksilata (SMCC), 6-aminoheksanske kiseline (AHEX ili AHA), supstituisanog C1-C10 alkila, supstituisanog ili nesupstituisanog C2-C10 alkenila i supstituisanog ili nesupstituisanog C2-C10 alkinila. U određenim takvim otelotvorenjima, supstituentna grupa je izabrana između hidroksila, amino, alkoksi, karboksi, benzila, fenila, nitro, tiola, tioalkoksi, halogena, alkila, arila, alkenila i alkinila.
[0380] U određenim takvim otelotvorenjima definisanim patentnim zahtevima, jedinjenje sadrži modifikovani oligonukleotid koji ima jednu ili više stabilizacionih grupa koje su vezane za jedan ili oba kraja modifikovanog oligonukleotida kako bi poboljšale svojstva kao što je, na primer, stabilnost nukleaze. U stabilizacione grupe su uključene strukture kapica. Ove terminalne modifikacije štite modifikovani oligonukleotid od razgradnje egzonukleaze i mogu pomoći u isporuci i/ili lokalizaciji unutar ćelije. Kapica može biti prisutna na 5'-kraju (5'-kapica), ili na 3'-kraju (3'-kapica), ili može biti na oba kraja. Strukture kapica uključuju, na primer, obrnute dezoksi nebazne kapice.
[0381] Pogodne strukture kapica uključuju članove grupe koji čine 4',5'-metilen nukleotid, 1-(beta-D-eritrofuranozil) nukleotid, 4'-tio nukleotid, karbociklični nukleotid, 1,5-anhidroheksitol nukleotid, L-nukleotid, alfa-nukleotid, modifikovani bazni nukleotid, fosforoditioatna veza, treo-pentofuranozil nukleotid, aciklični 3', 4'-seko nukleotid, aciklični 3,4-dihidroksibutil nukleotid, aciklični 3,5-dihidroksipendtil nukleotid, 3'-3'-invertovani nukleotidni deo, 3'-3'-invertovani nebazni deo, 3'-2'-invertovani nukleotidni deo, 3'-2'-invertovani nebazni deo, 1,4-butandiol fosfat, 3'-fosforamidat, heksilfosfat, aminoheksil fosfat, 3'-fosfat, 3'-fosforotioat, fosforoditioat, premošćujući metilfosfonatni deo i nepremošćujući metilfosfonatni deo 5'-amino-alkil fosfat, 1,3-diamino-2-propil fosfat, 3-aminopropil fosfat, 6-aminoheksil fosfat, 1,2-aminododecil fosfat, hidroksipropil fosfat, 5'-5'-invertovani nukleotidni deo, 5'-5'-invertovani nebazni deo, 5'-fosforamidat, 5'-fosforotioat, 5'-amino, premošćujući i/ili ne-premošćujući 5'-fosforamidat, fosforotioat i 5'-merkapto deo.
Određene dodatne terapije
[0382] Tretmani bolesti povezane sa miR-21 mogu sadržati više od jedne terapije. Kao takvi, u nekim otelotvorenjima ovde obelodanjeni su postupci za tretman pacijenta koji ima ili se sumnja da ima bolest povezanu sa miR-21, koja uključuje primenu najmanje jedne terapije uz primenu modifikovanog oligonukleotida koji ima nukleobaznu sekvencu koja je komplementarna sa mikroRNK.
[0383] U određenim otelotvorenjima, najmanje jedna dodatna terapija sadrži farmaceutski agens.
[0384] U određenim otelotvorenjima, farmaceutski agensi uključuju protiv-upalne agense. U određenim otelotvorenjima, protiv-upalni agens je steroidni protiv-upalni agens. U određenim otelotvorenjima, steroidni protiv-upalni agens je kortikosteroid. U određenim otelotvorenjima, kortikosteroid je prednizon. U određenim otelotvorenjima, protiv-upalni agens je nesteroidni protiv-upalni lek. U određenim otelotvorenjima, nesteroidni protivupalni agens je ibuprofen, COX-I inhibitor ili COX-2 inhibitor.
[0385] U određenim otelotvorenjima, farmaceutski agensi uključuju anti-dijabetičke agense. Anti-dijabetički agensi uključuju, ali nisu ograničeni na, bigvanide, inhibitore glukozidaze, insuline, sulfoniluree i tiazolidendione.
[0386] U određenim otelotvorenjima, farmaceutski agensi uključuju, ali nisu ograničeni na, diuretike (npr. sprionolakton, eplerenon, furosemid), inotrope (npr. dobutamin, milrinon0), digoksin, vazodilatatore, inhibitore angiotenzin II konvertujućeg enzima (ACE) (npr. kaptopril, enalapril, lizinopril, benazepril, kinapril, fosinopril i ramipril), blokatore receptora angiotenzina II (ARB) (npr. kandesartan, irbesartan, olmesartan, losartan, valsartan, telmisartan, eprosartan), blokatore kalcijumskih kanala, izosorbidid nitrat, hidrazid nitrat, hidrat mononitrat, izosorbid dinitrat), hidralazin, beta-blokatore (npr. karvedilol, metoprolol) i natriuretske peptide (npr. nesiritid).
[0387] U određenim otelotvorenjima, farmaceutski agensi uključuju heparinoide. U određenim otelotvorenjima, heparinoid je pentosan polisulfat.
[0388] U određenim otelotvorenjima, farmaceutski agens je farmaceutski agens koji blokira jedan ili više odgovora na fibrogene signale.
[0389] U određenim otelotvorenjima, farmaceutski agens je terapija protiv faktora rasta vezivnog tkiva. U određenim otelotvorenjima, anti-CTGF terapija je monoklonsko antitelo protiv CTGF.
[0390] U određenim otelotvorenjima, dodatna terapija može biti farmaceutski agens koji poboljšava imunološki sistem tela, uključujući niske doze ciklofosfamida, timostimulina, vitamina i dodataka ishrani (npr. antioksidansi, uključujući vitamine A, C, E, beta-karoten, cink, selen, glutation, koenzim K-10 i ehinaceja) i vakcine, npr. imunostimulišući kompleks (ISCOM), koji sadrži formulaciju vakcine koja kombinuje multimernu prezentaciju antigena i pomoćnog agensa.
[0391] U određenim otelotvorenjima, dodatna terapija je izabrana za tretman ili ublažavanje neželjenih efekata jednog ili više farmaceutskih sastava predmetnog obelodanjenja. Takvi neželjeni efekti uključuju, ali nisu ograničeni na, reakcije na mestu injekcije, abnormalnosti testova funkcije jetre, abnormalnosti bubrežne funkcije, toksičnost jetre, bubrežnu toksičnost, abnormalnosti centralnog nervnog sistema i miopatije. Na primer, povećani nivo aminotransferaze u serumu može ukazivati na toksičnost jetre ili na abnormalnost funkcije jetre. Na primer, povećani bilirubin može ukazivati na toksičnost jetre ili na abnormalnost funkcije jetre.
[0392] Dalji primeri dodatnih farmaceutskih agenasa uključuju, ali nisu ograničeni na, imunoglobuline, uključujući, ali ne ograničavajući se na, članove grupe koju čine intravenski imunoglobulin (IVIg); analgetici (npr. acetaminofen); salicilati; antibiotici; antivirusni agensi; antimikotični agensi; adrenergički modifikatori; hormoni (npr. anabolički steroidi, androgen, estrogen, kalcitonin, progestin, somatostan i tiroidni hormoni); imunomodulatori;
1
relaksanti mišića; antihistaminici; agensi za osteoporozu (npr. bifosfonati, kalcitonin i estrogeni); prostaglandini, antineoplastični agensi; psihoterapijski agensi; sedativi; otrovni hrast ili proizvodi od toxicodendron vernix; antitela; i vakcine.
Određeni kompleti
[0393] Predmetno obelodanjenje takođe uključuje komplete. U nekim slučajevima, kompleti sadrže jedno ili više jedinjenja pronalaska koja sadrže modifikovani oligonukleotid, gde je nukleobazna sekvenca oligonukleotida komplementarna sa nukleobaznom sekvencom od miR-21. Jedinjenja komplementarna sa miR-21 mogu imati bilo koji od ovde opisanih nukleozidnih obrazaca. U nekim slučajevima, jedinjenja komplementarna sa miR-21 mogu biti prisutna u bočici. U, na primer, pakovanjima za izdavanje može biti više bočica, kao što je 10. U nekim slučajevima, bočica je proizvedena tako da je dostupna špricem. Komplet takođe može sadržati uputstva za upotrebu jedinjenja komplementarnih sa miR-21.
[0394] U nekim slučajevima, kompleti se mogu koristiti za primenu pacijentu jedinjenja komplementarnog sa miR-21. U takvim slučajevima, pored jedinjenja komplementarnih sa miR-21, komplet može dalje da sadrži jedan ili više narednih sastojaka: špric, alkoholni tampon, vatu i/ili podlogu od gaze. U nekim slučajevima, jedinjenja komplementarna sa miR-21 mogu biti prisutna u napunjenom špricu (kao što su špricevi za jednu dozu, na primer, igla kalibra 27 od 1⁄2 inča sa štitnikom za iglu), pre nego u bočici. Mnoštvo napunjenih špriceva, kao što je 10, može biti prisutno u, na primer, pakovanjima za izdavanje. Komplet takođe može sadržati uputstva za primenu jedinjenja komplementarnih sa miR-21.
Određeni eksperimentalni modeli
[0395] U određenim slučajevima, predmetno obelodanjenje se odnosi na postupke upotrebe i/ili ispitivanja modifikovanih oligonukleotida predmetnog pronalaska u eksperimentalnom modelu. Stručnjaci mogu da odaberu i modifikuju protokole za takve eksperimentalne modele kako bi procenili farmaceutski agens prema pronalasku.
[0396] Generalno, modifikovani oligonukleotidi se prvo ispituju u kultivisanim ćelijama. Pogodni tipovi ćelija uključuju one koji su povezani sa ćelijskim tipom za koji je poželjna primena modifikovanog oligonukleotida in vivo. Na primer, pogodni tipovi ćelija za proučavanje ovde opisanih postupaka uključuju primarne ili kultivisane ćelije.
2
[0397] U određenim slučajevima, procenjuje se u kojoj meri modifikovani oligonukleotid ometa miR-21 aktivnost u kultivisanim ćelijama. U određenim slučajevima, inhibicija mikroRNK aktivnosti može se proceniti merenjem nivoa mikroRNK. Alternativno, može se meriti nivo predviđenog ili potvrđenog transkripta regulisanog sa mikroRNK. Inhibicija mikroRNK aktivnosti može rezultovati povećanjem miR-21 regulisanog transkripta i/ili proteina kodiranog transkriptom regulisanim od strane miR-21. Dalje, u određenim slučajevima mogu se meriti određeni fenotipski ishodi.
[0398] Stručnjaku je na raspolaganju nekoliko životinjskih modela za proučavanje miR-21 na modelima ljudskih bolesti. Na primer, miR-21 inhibitori se mogu proučavati na modelima raka, kao što su ortotopični modeli ksenografta, modeli raka izazvani toksinima ili genetski indukovani modeli raka. Na takvim modelima raka, studije se mogu izvoditi kako bi se procenili efekti inhibitora miR-21 na veličinu tumora, broj tumora, celokupno preživljavanje i/ili preživljavanje bez progresije.
[0399] Efekti miR-21 inhibitora na srčanu funkciju i fibrozu mogu se proučavati na modelima transaortalne trake ili infarkta miokarda, od kojih svaki indukuje abnormalnu srčanu funkciju i fibrozu. Modeli fibroze bubrega uključuju jednostranu ureteralnu opstrukciju i ishemiju/reperfuzionu povredu. Tokom ranih vremenskih tačaka, model reperfuzione povrede bubrežne ishemije može se koristiti kao model akutne povrede bubrega, dok kasnije vremenske tačke služe kao model fibroze bubrega. Modeli fibroze jetre indukuju se, na primer, intoksikacijom ugljen-tetrahloridom ili resekcijom žučnih kanala. Efekti miR-21 na fibrozu pluća mogu se proučavati, na primer, na modelu fibroze pluća izazvane bleomicinom. Modeli za zarastanje rana takođe su dostupni iskusnom majstoru, na primer miševi C57Bl/KsJ-db/db, koji pokazuju nekoliko karakteristika dijabetesa kod odraslih, kao što je izrazito odloženo zatvaranje rane.
Određeni kvantitativni testovi
[0400] Efekti antisens inhibicije miR-21 nakon primene modifikovanih oligonukleotida mogu se proceniti različitim postupcima poznatim u struci. U određenim slučajevima, ovi postupci se koriste za određivanje nivoa mikroRNK u ćelijama ili tkivima in vitro ili in vivo. U određenim slučajevima, promene mikroRNK nivoa mere se analizom mikronizova. U određenim slučajevima, promene mikroRNK nivoa mere se jednim od nekoliko komercijalno dostupnih PCR testova, kao što su TaqMan® MicroRNA Assay (Applied Biosystems). U određenim slučajevima, antisens inhibicija miR-21 procenjuje se merenjem mRNK nivoa i/ili nivoa proteina cilja od miR-21. Antisens inhibicija miR-21 generalno rezultuje povećanjem mRNK nivoa i/ili nivoa proteina na cilju od mikroRNK.
Analiza delovanja na cilju
[0401] Modulacija mikroRNK aktivnosti sa anti-miR ili mikroRNK mimikom može se proceniti merenjem delovanja na cilju. U određenim otelotvorenjima, delovanje na cilju se meri mikroniz profilisanjem mRNK. Sekvence mRNK koje modulira (povećava ili smanjuje) anti-miR ili mikroRNK mimik se pretražuju za mikroRNK sekvence semena, kako bi se uporedila modulacija mRNK koje su ciljevi od mikroRNK, i modulacija mRNK koje nisu ciljevi od mikroRNK. Na taj način se može proceniti interakcija anti-miR sa miR-21, ili miR-21 mimikom sa svojim ciljevima. U slučaju anti-miR, mRNK čiji su nivoi eksprimiranja povećani pregledaju se za sekvence mRNK koje sadrže seme koje se podudara sa mikroRNK za koji je anti-miR komplementaran.
PRIMERI
[0402] Naredni primeri su predstavljeni kako bi se potpunije ilustrovala neke otelotvorenja pronalaska. Međutim, ni na koji način ih ne treba tumačiti kao ograničavanje širokog obima pronalaska.
Primer 1: In vitro skrining anti-miR-21 jedinjenja
[0403] Različiti anti-miR ciljani na miR-21, i koji sadrže cEt nukleozide, procenjeni su za svoj inhibitorni efekat na miR-21 aktivnost. Kao što je prikazano u Tabeli A, ova jedinjenja su varirala po dužini i broju, tipu i položaju modifikovanih nukleozida.25919 sadrži 2'-MOE i 2'-fluoro nukleozide i poznato je da inhibira miR-21, te je prema tome uključen kao pozitivna kontrola. Preostala jedinjenja sadrže cEt nukleozide u kombinaciji sa 2'-MOE nukleozidima i/ili β-D-dezoksiribonukleozidima.
Tabela A: anti-miR-21 jedinjenja
4
[0404] U prethodnoj Tabeli A, nukleozidi koji nisu praćeni indeksom ukazuju na β-D-dezoksiribonukleozide. Nukleozidi praćeni indeksom „E“ ukazuju na 2'-MOE nukleozide. Nukleozidi praćeni indeksom „S“ ukazuju na S-cEt nukleozide. Nukleozidi praćeni indeksom „F“ ukazuju na 2'-fluoro nukleozide. Svaka internukleozidna veza je fosforotioatna internukleozidna veza. Gornji indeks „Me“ ukazuje na 5-metil grupu na pirimidinskoj bazi nukleozida.
[0405] Jedinjenja su procenjena na inhibitornu miR-21 aktivnost u testu luciferaze. Konstrukt mikroRNK senzora za luciferazu dizajniran je pomoću pGL3-MCS2 (Promega). Konstrukt je uveden u Hela ćelije kako bi se testirala sposobnost anti-miR jedinjenja da inhibiraju miR-21 aktivnost. U ovom testu, miR-21 prisutan u Hela ćelijama vezuje se za svoja srodna mesta u konstruktu senzora luciferaze i potiskuje eksprimiranje luciferaze. Kada se odgovarajući antimiR uvede u ćelije, on se vezuje za miR-21 i olakšava suzbijanje eksprimiranja luciferaze. Tako će u ovom testu anti-miR, koji su efikasni inhibitori eksprimiranja miR-21, izazvati povećanje eksprimiranja luciferaze.
[0406] 1 dan: Hela ćelije (ATCC), stabilno transficirane sa konstruktom luciferaze dizajniranim da sadrži sekvencu koja je komplementarna sa miR-21, posejane su u T-170 boce (BD Falcon) pri 3,5<∗>10<6>ćelija/boca. Hela ćelije su uzgajane u Dulbecco-vom modifikovanom Eagle-ovom medijumu sa visokom glukozom (Invitrogen).
[0407] Dan 2: Svaka boca Hela ćelija je transficirana sa 0,5 ug phRL senzorskog plazmida (Promega) koji eksprimira Renilu koji će se koristiti u normalizaciji. Hela ćelije su transficirane upotrebom 20 ul Lipofectamine 2000/boca (Invitrogen). Posle 4 sata transfekcije, ćelije su isprane sa PBS i tripsinizovane. Hela ćelije su postavljene na 40k/komorica u ploče sa 24 komorica (BD Falcon) i ostavljene preko noći.
[0408] Dan 3: Hela ćelije su transficirane sa anti-miR koristeći Lipofectin (Invitrogen) pri 2,5 ul Lipofectin/100nM ASO/ml Opti-MEM I redukovanog serumskog medijuma (Invitrogen) tokom 4 sata. Nakon ASO transfekcije, Hela ćelije su napunjene Dulbecco-vim modifikovanim Eagle-ovim medijumom sa visokom glukozom (Invitrogen).
[0409] Dan 4: Hela ćelije se pasivno liziraju i aktivnost luciferaze meri se pomoću Dual-Luciferase Reporter Assay System (Promega).
[0410] Analiza luciferaze je izvedena za ispitivanje sposobnosti anti-miR sa ovde opisanim nukleozidnim uzorcima da inhibiraju miR-21 aktivnost. Rezultati su upoređeni sa „lažnim“ tretmanom, u kom ćelije nisu imale tretman protiv miR. Eksperiment je ponovljen, i rezultati dve eksperimentalne replike prikazani su u narednoj Tabeli B, pošto se vrednost luciferaze normalizovala na aktivnost beta-galaktozidaze.
Tabela B: Inhibitorna aktivnost anti-miR-21 jedinjenja
[0411] Kao što je ilustrovano u Tabeli B, nekoliko jedinjenja koja sadrže cEt pokazala su inhibiciju miR-21 na način koji zavisi od doze: 25068, 25070, 25072 i 25082.
Primer 2: Modifikovane nukleozidne varijacije anti-miR-21 jedinjenja 25070
[0412] Kao što je prikazano u prethodnom primeru, 25070 je snažni inhibitor miR-21 aktivnosti u testu luciferaze. Kako bi se procenile promene u tipu modifikovanog nukleozida na različitim položajima od 25070, dizajnirana su dodatna anti-miR-21 jedinjenja, kao što je prikazano u Tabeli C.
Tabela C: Dodatna anti-miR-21 jedinjenja
[0413] U prethodnoj Tabeli F, nukleozidi koji nisu praćeni indeksom ukazuju na β-D-dezoksiribonukleozide. Nukleozidi praćeni indeksom „E“ ukazuju na 2'-MOE nukleozide. Nukleozidi praćeni indeksom „S“ ukazuju na S-cEt nukleozide. Nukleozidi praćeni indeksom „F“ ukazuju na 2'-fluoro nukleozide. Svaka internukleozidna veza je fosforotioatna internukleozidna veza. Gornji indeks „Me“ ukazuje na 5-metil grupu na pirimidinskoj bazi nukleozida.
[0414] Analiza luciferaze izvedena je kako je ovde opisano kako bi se testirala sposobnost anti-miR u Tabeli F da inhibiraju miR-21 aktivnost. Rezultati su upoređivani sa „lažnim“ tretmanom, u kom ćelije nisu imale anti-miR tretman. Eksperiment je ponovljen, i rezultati dva replikata eksperimenta prikazani su u narednoj Tabeli D, kao stepen promene vrednosti luciferaze u odnosu na lažni tretman.
Tabela D: Test luciferaze različitih anti-miR-21 jedinjenja
[0415] Kao što je prikazano u Tabeli D, nekoliko jedinjenja koja sadrže cEt pokazala su inhibiciju miR-21 na način koji zavisi od doze, pored 25070: 25922, 25923 i 25924. AntimiR-21 jedinjenja 25116 i 25117, od kojih je svako ima modifikaciju šećera u svakom nukleozidu, gde je svaki citozin 5-metilcitozin, nisu bili efikasni miR-21 inhibitori.
Primer 3: Upoređivanje nukleozidnih obrazaca koji daju aktivnost jedinjenjima antimiR-21
[0416] Kako bi se utvrdio odnos nukleozidnih obrazaca koji su davali aktivnost anti-miR-21 jedinjenjima, upoređen je raspored modifikovanih i nemodifikovanih nukleozida među aktivnim anti-miR-21 jedinjenjima, što je prikazano u Tabeli E.
Tabela E: Aktivna anti-miR-21 jedinjenja koja sadrže cEt
[0417] Poređenje postavljanja modifikovanih i nemodifikovanih nukleozida (Tabela F iznad) otkrilo je određene nukleozidne obrasce koji su bili zajednički za svako visoko aktivno antimiR-21 jedinjenje.
[0418] Na primer, poređenje strukture na 5'-terminusu svakog jedinjenja otkrilo je region koji se kreće u dužini od 1 do 4 nukleozida, od kojih je svaki ne-biciklični nukleozid (Kolona „R“ u Tabeli G u nastavku). Naredni region ima jedan biciklični nukleozid, praćen sa dva nebiciklična nukleozida, i zatim jedan biciklični nukleozid (Kolona „1“ u Tabeli G u nastavku).
[0419] Zatim sledi ponavljajući blok od četiri nukleozida, tri ne-biciklična nukleozida, praćena jednim bicikličnim nukleozidom, i ovaj blok od četiri nukleozida javlja se ukupno tri puta (Kolona „2“ u Tabeli G u nastavku).
[0420] U svakom aktivnom anti-miR-21, dva 3'-terminalna nukleozida su ne-biciklični nukleozidi (Kolona „T“ u Tabeli G u nastavku).
Tabela G: Struktura nukleozidnog obrasca
[0421] Ovaj nukleozidni obrazac predstavljen je narednom formulom I, u 5' ka 3' orijentaciji:
(R)X-N<B>-N<Q>-N<Q>-N<B>-(N<Q>-N<Q>-N<Q>-N<B>)3-N<Q>-N<Z>
gde je svaki R ne-biciklični nukleozid; X iznosi od 0 do 4;
svaki N<B>je biciklični nukleozid;
svaki N<Q>je ne-biciklični nukleozid; i
svaki N<Z>je modifikovan nukleozid.
[0422] Ova formula obuhvata svaki od nukleozidnih obrazaca aktivnih anti-miR-21 jedinjenja 25068, 25070, 25072, 25082, 25922, 25923 i 25924, pokazujući da nukleozidni obrazac I pruža aktivnu anti-miR aktivnost, sa fleksibilnošću omogućenom u izboru bicikličnog nukleozida, ne-bicikličnog nukleozida i modifikovanog nukleozida. Shodno tome, ovde su pruženi sastavi koji sadrže modifikovane oligonukleotide koji imaju komplementarnost nukleobaze sa miR-21 i nukleozidni obrazac opisan formulom I.
1
[0423] Kako bi se utvrdio odnos između nukleozidnih obrazaca koji su dali aktivnost aktivnim anti-miR-21 jedinjenjima koja su dužine 19 povezanih nukleozida, upoređeno je postavljanje modifikovanih i nemodifikovanih nukleozida u svim visokoaktivnim jedinjenjima, što je prikazano u Tabeli H. Kako bi se ilustrovao sličan raspored određenih nukleozida, jedinjenja su ponovo prikazana u Tabeli I.
Tabela H: Aktivna anti-miR-21 jedinjenja
Tabela I: Poravnanje nukleozida aktivnih anti-miR-21 jedinjenja prikazanih u Tabeli H
[0424] Poređenje rasporeda modifikovanih i nemodifikovanih nukleozida (Tabela I iznad)
2
otkrilo je određene nukleozidne obrasce koji su bili zajednički svakom visokoaktivnom antimiR-21 jedinjenju čija dužina iznosi 19 povezanih nukleozida.
[0425] Na primer, poređenje struktura na 5'-terminusu svakog jedinjenja otkrilo je jedan modifikovani nukleozid, koji nije biciklični nukleozid (Kolona „N<M>“ u Tabeli J u nastavku). Naredni region ima jedan biciklični nukleozid, a slede ga dva ne-biciklična nukleozida, i zatim jedan biciklični nukleozid (Kolona „1“ u Tabeli J u nastavku).
[0426] Zatim sledi ponavljajući blok od četiri nukleozida, tri ne-biciklična nukleozida, praćena jednim bicikličnim nukleozidom, i ovaj blok od četiri nukleozida javlja se ukupno tri puta (Kolona „2“ u Tabeli J u nastavku).
[0427] U svakom aktivnom anti-miR-21 pretposlednji nukleozid na 3'-terminusu je nemodifikovani nukleozid (Kolona „N“ u Tabeli J u nastavku). Nukleozid na 3' terminusu, koji je komplementaran nukleozidnoj bazi na položaju 1 od miR-21, je modifikovani nukleozid (Kolona „N<Z>“ u Tabeli J u nastavku).
Tabela J: Sličnosti nukleozidnog obrasca s
[0428] Ovaj nukleozidni obrazac predstavljen je narednom formulom II, u orijentaciji 5' ka 3':
N<M>-N<B>-N<Q>-N<Q>-N<B>-(N<Q>-N<Q>-N<Q>-N<B>)3-N<Q>-N<Z>
gde N<M>je modifikovan nukleozid koji nije biciklični nukleozid;
svaki N<B>je biciklični nukleozid;
svaki N<Q>je ne-biciklični nukleozid; i
N<Z>je modifikovan nukleozid.
[0429] Ovde obelodanjeni podaci pokazuju da ovaj nukleozidni obrazac daje aktivnost jedinjenju anti-miR-21, i dalje da se aktivnost jedinjenja održava sa nizom modifikovanih nukleozida. Shodno tome, ovde su pruženi sastavi koji sadrže modifikovani oligonukleotid koji ima nukleobaznu sekvencu koja je komplementarna sa miR-21 i nukleozidnim obrascem formule II.
[0430] Slične analize su sprovedene sa grupom anti-miR-21 jedinjenja, uključujući 25211 i 25220. Kao rezultat prethodnih analiza, uspostavljene su formule III do V.
Primer 2: Inhibicija miR-21 u modelu fibroze bubrega
[0431] Unilateralna ureteralna opstrukcija (UUO) je dobro uspostavljeni eksperimentalni model oštećenja bubrega koji dovodi do intersticijske fibroze, pa se stoga koristi kao eksperimentalni model koji odražava ljudsku bolest bubrega. UUO se indukuje hirurškim vezanjem jednog uretera. Kako fibrozu karakteriše porast kolagena, prisustvo i stepen fibroze bubrega može se utvrditi merenjem sadržaja kolagena. Za procenu sadržaja kolagena mere se i kolagen 1A1 (Col 1A1) i kolagen 3A1 (Col 3A1). Fibroza bubrega može se vizualizovati bojenjem uzoraka tkiva pikro-sirius crvenom kako bi se otkrilo povećanje sadržaja kolagena. Fibroza bubrega se takođe može posmatrati merenjem količine hidroksiprolina, koji je glavna komponenta kolagena, u uzorku.
[0432] anti-miR-21 jedinjenja koja sadrže cEt, za koja je utvrđeno da su aktivna u testu luciferaze, testirana su u UUO modelu fibroze bubrega. Za 25919 koji sadrži 2'-MOE i 2'-fluoro modifikacije je poznato da inhibira miR-21 aktivnost in vivo i uključen je kao pozitivna kontrola. Grupe od po 8 životinja tretirane su na naredni način: samo UUO, UUO sa PBS ili UUO sa anti-miR-21 jedinjenjem. U odnosu na dan UUO procedure, PBS ili antimiR-21 jedinjenje je primenjeno na dane -3, -1 i 5.Aanti-miR-21 jedinjenja su primenjena pri dozi od 20 mg/kg. Kako su jedinjenja anti-miR primenjena pre UUO procedure, ovaj režim doziranja smatra se profilaktičkim tretmanom. Na dan 11, životinje su žrtvovane i izolovan je bubreg radi merenja eksprimiranja kolagena. Eksprimiranje kolagena izmereno je koristeći PCR u realnom vremenu i normalizovano prvo na GAPDH, a zatim na lažne kontrolne životinje. Eksprimiranje kolagena 1A1 i kolagena 3A1 prikazano je u Tabeli K u nastavku.
Tabela K: Nekoliko anti-miR-21 jedinjenja smanjuju eksprimiranje kolagena u UUO modelu
4
[0433] Ova studija je ponovljena 2 do 3 puta sa svakom od gore navedenih tretman grupa. Meta-analiza studija otkrila je da je 25070 tretman pokazao najveću snagu, sudeći prema proceni eksprimiranja kolagena, što je rezultovalo inhibicijom kolagena 1A1 od 40% i kolagenom 3A1 od 30%.25068 je takođe bio aktivan u smanjenju eksprimiranja kolagena, ali u manjoj meri od 25070.25072 i 25082, iako su aktivni miR-21 inhibitori u ovde opisanim in vitro testovima, nisu dosledno demonstrirali smanjenje eksprimiranja kolagena.
[0434] Ponovljena je UUO studija kako bi se potvrdila aktivnost 25070. Anti-miR je primenjen subkutano pri dozi od 20 mg/kg. Rezultati u Tabeli L u nastavku potvrđuju da je 25070 snažan inhibitor eksprimiranja kolagena 1A1 i kolagena 3A1.
Tabela L: Profilaktička primena 25070 smanjuje eksprimiranje kolagena u UUO modelu
[0435] Poređenjem UUO studija otkriveno je da je 25070 visoko moćan inhibitor eksprimiranja kolagena u UUO modelu, pa je stoga 25070 kandidat za terapijski agens za tretman fibroze, uključujući fibrozu bubrega.
Primer 3: Poređenje anti-miR-21 sa blokatorom receptora angiotenzina
[0436] Pokazano je da blokator receptora za angiotenzin irbesartan blokira stvaranje tubulointersticijske fibroze u modelu hronične bubrežne povrede koju karakteriše fibroza. Efekti od 25070 upoređivani su sa irbesartanom u UUO modelu fibroze.
[0437] Kontrolne grupe za tretman obuhvatale su samo UUO (lažno) i UUO sa PBS primenom subkutano. Dodatna kontrolna grupa je uključivala UUO sa nosačem Tween-MC/20 peroralno.25070 je primenjen subkutano pri dozi od 20 mg/kg 5 dana pre, 2 dana pre i 3 dana nakon UUO procedure. Irbesartan je primenjen peroralno svakog dana od dana 0 do 7, u skladu sa UUO procedurom. Životinje su žrtvovane dana 10 prema UUO proceduri. Tkivo bubrega je prikupljeno za merenje eksprimiranja kolagena 1A1 i kolagena 3A1.
Rezultati su prikazani u Tabeli M u nastavku i ilustruju statistički značajno smanjenje (p < ,05 pomoću jednosmernog ANOVA) eksprimiranja Col1A1 kod životinja tretiranih sa 25070, u odnosu na životinje tretirane fiziološkim rastvorom. Irbesartan nije zabeležio statistički značajno smanjenje eksprimiranja Col1A1. I irbesartan i 25070 su proizveli statistički značajno smanjenje eksprimiranja Col3a1, dok je 25070 proizveo veće smanjenje u poređenju sa irbesartanom.
Tabela M: 25070 smanjuje eksprimiranje kolagena u većoj meri nego irbesartan u UUO modelu
[0438] Dodatni pokazatelj fibroze je procenat bubrežnog tkiva koje pokazuje eksprimiranje kolagena prateći UUO proceduru. Shodno tome, bubrežno tkivo je takođe prikupljeno za histološku analizu, kako bi se procenio udeo bubrežnog tkiva koji pokazuje povećano eksprimiranje kolagena; rezultati su u Tabeli N u nastavku. „Udeo površine kolagena“ meri se histološki kroz kvantitativnu obradu slike površine bubrežnog tkiva koja je obojeno u crveno pomoću picrosirius crvene bolje; procenat detektovan kao crven normalizuje se površinom sekcije bubrega. Kako su delovi tkiva analizirani na slepi način, iako su uzorci u Tabelama M i N iz iste studije, numerisanje uzoraka u Tabeli N u nastavku ne mora nužno odgovarati numerisanju uzoraka u Tabeli M iznad.
Tabela N: 25070 smanjuje eksprimiranje kolagena u većoj meri nego irbesartan u UUO modelu
1
[0439] Ovi rezultati pokazuju da inhibicija miR-21 sa 25070 inhibira eksprimiranje kolagena sa većom aktivnošću od irbesartana, dalje potvrđujući da je 25070 agens za tretman, prevenciju i/ili ublažavanje fibroze.
Primer 4: Inhibicija miR-21 u modelu ishemije/reperfuzione povrede
[0440] Model ishemije reperfuzione povrede (IRI) stvara se kod miša jednostranim ili obostranim stezanjem bubrežnih arterija, što dovodi do oštećenja tubula, upale i fibroze. Disfunkcija bubrega može se javiti rano (<5 dana) ili kasno (> 7 dana) u ovom modelu, s tim da su rane vremense tačke korisne za testiranje agenasa kandidata za tretman akutne povrede bubrega, dok su kasnije vremenske tačke korisne za modeliranje hronične fibroze.
[0441] Anti-miR-21 jedinjenja su testirana u jednostranom IRI modelu. Jednostrani IRI indukovan je u periodu od 30 minuta. Grupe za tretman bile su naredne: lažna IRI procedura; IRI sa PBS koji se primenjuje subkutano; IRI sa anti-miR-21 jedinjenjem 25070 koje se primenjuje intraperitonealno pri dozi od 20 mg/kg; 2'-fluoro/2'-MOE modifikovani anti-miR-21 25919 primenjen intraperitonealno pri dozi od 20 mg/kg; i 2'-fluoro/2'modifikovan
1 1
nepodudaren anti-miR-21 (koja ima tri nepodudaranja sa sekvencom od miR-21) 25319 primenjen intraperitonealno pri dozi od 20 mg/kg. PBS ili anti-miR jedinjenje je primenjeno na dane 5, 6 i 7 nakon IRI, i životinje su žrtvovane 14 dana nakon IRI. Kako se jedinjenje anti-miR primenjuje 5 dana nakon povrede bubrega ili kasnije, kada je fibroza već donekle nastupila, ovaj režim tretmana smatra se terapijskim režimom, a ne profilaktičkim režimom.
[0442] Tkivo bubrega je prikupljeno za analizu eksprimiranja kolagena 1A1 i kolagena 3A1 (prikazano u Tabeli O) i udela površine kolagena (prikazan u Tabeli P). „Udeo površine kolagena“ analiziran je slepo, stoga iako su uzorci u Tabelama O i P iz iste studije, numerisanje uzoraka u Tabeli O ne odgovara numerisanju uzoraka u Tabeli P. Greška tokom obrade uzoraka je sprečila analizu udela površine kolagena za kontrolni tretman anti-miR-21 nepodudarenosti, pa su rezultati za ovu grupu tretmana predstavljeni samo za eksprimiranje kolagena 1A1 i kolagena 3A1. U ovoj studiji, 25070 je proizveo statistički značajno smanjenje udela površine kolagena.
Tabela O: 25070 smanjuje eksprimiranje kolagena u IRI modelu sa doziranjem na dane 5, 6 i 7
1 2
Tabela P: 25070 smanjuje udeo površine kolagena u IRI modelu sa doziranjem na dane 5, 6 i 7
1
[0443] Slična studija je izvedena sa istim grupama tretmana i dodatnim danima tretmana. U ovoj studiji, tretmani su primenjeni intraperitonealno na dane 5, 6, 7, 14 i 21, nakon IRI
1 4
procedure. Životinje su žrtvovane na dan 27, i tkivo bubrega je sakupljeno za analizu eksprimiranja kolagena 1A1 i kolagena 3A1, kao i udeo površine kolagena. „Udeo površine kolagena“ analiziran je slepo, tako da iako su uzorci u Tabelama ! i R iz iste studije, numerisanje uzoraka u Tabeli ! u nastavku ne odgovara numerisanju uzoraka u Tabeli R. U ovoj studiji, 25070 je proizveo statistički značajno smanjenje udela površine kolagena.
Tabela Q: 25070 smanjuje eksprimiranje kolagena u IRI modelu doziranjem na dane 5,
6, 7, 14 i 21
1
Tabela R: 25070 smanjuje udeo površine kolagena u IRI modelu doziranjem na dane 5,
6, 7, 14 i 21
1
[0444] Ove studije pokazuju smanjenje sadržaja kolagena nakon inhibicije miR-21 u modelu akutne povrede bubrega. Dakle, anti-miR-21 jedinjenje 25070 je terapeutski agens za tretman akutne povrede bubrega. Na primer, sprečavanje ili odlaganje pojave fibroze nakon akutne povrede bubrega može sprečiti ili odložiti početak hronične bolesti bubrega.
1
[0445] Kako bi se procenila fleksibilnost primene anti-miR-21 jedinjenja 25070, aktivnost jedinjenja u 14-dnevnoj studiji iznad, gde je anti-miR-21 primenjen na dane 3, 5 i 7 u skladu sa IRI procedurom, poređena je sa drugom 14-dnevnom studijom gde je anti-miR-21 primenjen intraperitonealno na dane 3, 5 i 7 nakon IRI procedure. Podaci u Tabeli S pokazuju da je slična inhibicija eksprimiranja kolagena primećena u obe studije, što ukazuje da raspored doziranja može biti fleksibilan. Promena stepena eksprimiranja kolagena 1A1 ili kolagena 3A1 u odnosu na lažne životinje prikazana je u Tabeli S i ilustruje statistički značajno smanjenje eksprimiranja kolagena sa bilo kojim rasporedom doziranja.
Tabela S: 25070 smanjuje eksprimiranje kolagena u IRI modelu sa doziranjem na dane 3, 5 i 7
1
Primer 5: Inhibicija miR-21 u modelu reperfuzione povrede ishemije/nefrektomije
[0446] Model reperfuzione povrede ishemije/nefrektomije (IR/Nx) kreira se kod miša privremenim jednostranim stezanjem arterije u jednom bubregu, što dovodi do oštećenja tubula, upale i fibroze, nakon čega sledi uklanjanje drugog bubrega u kasnijoj vremenskoj tački. U ovom modelu, faza akutne disfunkcije bubrega korisna je za testiranje agensa kandidata za tretman akutne povrede bubrega (tj. do otprilike prvih 5 dana), dok sui kasnije faze disfunkcije bubrega korisne su za modeliranje hronične fibroze (tj. nakon približno prvih 5 dana).
1
[0447] Anti-miR-21 jedinjenja su testirana u IR/Nx modelu.25109, 6-obazna nepodudarenost sa miR-21, korišćena je kao kontrolno jedinjenje (AEASATCSTGTCSTCAUSAATASAAE; gde nukleozidi koje ne prati indeks ukazuju na β-dezoksinukleozide; nukleozidi praćeni indeksom „E“ označavaju 2'-MOE nukleozide; nukleozidi praćeni indeksom „S“ ukazuju na S-cEt nukleozide; a sve internukleozidne veze su fosforotioatne internukleozidne veze).
[0448] Jednostrani IR je indukovan u periodu od 30 minuta. Tretman grupe bile su naredne: lažni IR postupak; IR sa PBS koji se primenjuje subkutano; IR sa nepodudarenom kontrolom 25109 primenjenom subkutano pri dozi od 20 mg/kg; IR sa anti-miR-21 jedinjenjem 25070 koje se primenjuje subkutano pri dozi od 20 mg/kg; i IR sa anti-miR-21 jedinjenjem 25923 primenjenim subkutano pri dozi od 20 mg/kg. PBS ili anti-miR je primenjen na dane 2, 3, 4 i 8 dana IR. Na dan 9, zdrav bubreg je uklonjen nefrektomijom sa svake životinje, i životinje su žrtvovane na dan 9. Neposredno pre žrtvovanja, urin je sakupljan direktnom punkcijom bešike.
[0449] Odnos urinarnog albumina i kreatinina izmeren je u urinu svakog miša. Rezultati tog eksperimenta prikazani su na Slici 1. U ovoj studiji su i 25070 i 25923 doveli do statistički značajnog smanjenja odnosa urinarnog albumina i kreatinina. Geometrijska sredina odnosa albumina i kreatinina u svakoj grupi miševa bila je 16 µgAlb/mgCr (kontrola samo sa nefrektomijom), 127 µgAlb/mgCr (IR/Nx, PBS kontrola), 140 µgAlb/mgCr (IR/Nx, 25109 kontrola), 40 µgAlb/mgCr (IR/Nx, 25070) i 31 µgAlb/mgCr (IR/Nx, 25923). Nivoi azota i serumskog kreatinina uree u krvi bili su slični kod svih IR/Nx miševa i povišeni su u odnosu na kontrolne miševe samo sa nefrektomijom (podaci nisu prikazani).
Primer 6: Preživljavanje miševa IR/Nx modela nakon primene anti-miR-21 jedinjenja
[0450] Stopa preživljavanja miševa IR/Nx modela dva dana nakon nefrektomije određena je u šest različitih eksperimenata kako bi se utvrdilo da li primena anti-miR-21 jedinjenja povećava preživljavanje. U prva tri eksperimenta, anti-miR-21 jedinjenje je primenjeno na dane 5, 6 i 7 nakon ishemije reperfuzione povrede, i nefrektomija se dogodila na dan 10 ili 11. U druga tri eksperimenta, anti-miR-21 jedinjenje je primenjeno na dane 2, 3 i 4, i nefrekromija se dogodila na dan 7. Stope preživljavanja IR/Nx miševa u svakom eksperimentu prikazane su u Tabeli T.
11
Tabela T: 25070 povećava stopu preživljavanja IR/Nx miševa dva dana nakon nefrektomije.
[0451] U prva tri eksperimenta, u kojima se nefrektomija dogodila na dane 10 ili 11, stopa preživljavanja miševa tretiranih sa PBS bila je 55%, dok je stopa preživljavanja miševa tretiranih sa 25070 iznosila 80% (P=0,02 korišćenjem jednostranog Fišerovog tačnog testa). U druga tri eksperimenta, u kojima se nefrektomija dogodila na dan 7, stopa preživljavanja miševa tretiranih sa PBS bila je 52%, dok je stopa preživljavanja miševa tretiranih sa 25070 iznosila 69% (P=0,11 korišćenjem jednostranog Fišerovog tačnog testa).
Primer 7: Dizajn dodatnih anti-miR-21 jedinjenja
[0452] Nakon primene jedinjenja 25070 miševima, utvrđeno je da oko 50% jedinjenja prisutnog u bubrežnom tkivu nema 3'-terminalni nukleozid 7 dana nakon injekcije. Stabilnost 25070 i 25923 procenjena je u ex vivo testu homogenata jetre. U ovom testu, 5 µM oligonukleotida je inkubirano u homogenatu jetre (50 mg tkiva po ml) tokom 24 sata na 37 °C. Nakon ove inkubacije, oligonukleotid je ekstrahovan tečnost-tečnost ekstrakcijom (LLE), i zatim ekstrakcijom u čvrstoj fazi (SPE). Dužine i količine oligonukleotida merene su masenom spektrometrijom tečne hromatografije visokih performansi (HPLC-TOF MS). Aktivnost nukleaze u homogenatu jetrenog tkiva potvrđena je upotrebom referentnih oligonukleotida, koji su uključivali jedinjenje sa poznatom rezistencijom na aktivnost nukleaze, jedinjenje osetljivo na aktivnost 3'-egzonukleaze i jedinjenje osetljivo na aktivnost endonukleaze. Za kontrolu efikasnosti ekstrakcije korišćeno je interno standardno jedinjenje. U ovom testu, oko 58% jedinjenja 25070 je prisutno kao jedinjenje pune dužine, a oko 27% jedinjenja 25070 nema 3'-terminalni nukleozid. Oko 68% jedinjenja 25923 prisutno je kao jedinjenje pune dužine, a oko 18% jedinjenja nema 3'-terminalni nukleozid.
[0453] Dizajnirana su dodatna jedinjenja koja su testirana na stabilnost ex vivo i in vivo. Ex vivo je izveden kako je opisano iznad. Za testiranje in vivo, jedinjenja su primenjena miševima, izolovano je bubrežno tkivo i izvršena je ekstrakcija i detektovanje jedinjenja kao i za ex vivo test. Tabela U prikazuje strukturu jedinjenja 25923, 25220 i 25221 i rezultate merenja stabilnosti.
[0454] Jedinjenja 25220 i 25221, kao i 25923, testirana su u UUO modelu na svoje efekte na fibrozu. Grupe od 8 životinja tretirane su na naredni način: lažna hirurgija, UUO sa PBS, UUO sa 25220, UUO sa 25221 ili UUO sa 25923. U odnosu na dan UUO procedure, PBS ili anti-miR-21 jedinjenje je primenjeno na dane -5, -3 i 3. Anti-miR-21 jedinjenja su primenjena pri dozi od 20 mg/kg. Kako su jedinjenja anti-miR primenjena pre UUO procedure, ovaj režim doziranja smatra se profilaktičkim tretmanom. Desetog dana životinje su žrtvovane i izolovan je bubreg radi merenja eksprimiranja kolagena. Eksprimiranje kolagena izmereno je sa PCR u realnom vremenu i normalizovano do GAPDH.
[0455] Rezultati tog eksperimenta prikazani su na Slici 2. Eksprimiranje kolagena 1A1 i kolagena 3A1 prikazano je na Slici 2A, odnosno 2B. Primena jedinjenja 25220 ili 25221 smanjila je eksprimiranje kolagena 1A1 i kolagena 3A1 za statistički značajan iznos (* = p < 0,05; ** = p < 0,01; *** = p < 0,001), kao i primena jedinjenja 25923.
[0456] Različite modifikacije pronalaska, pored ovde opisanih, biće očigledne stručnjacima iz prethodnog opisa. Namera je da takve modifikacije takođe padnu unutar opsega priloženih
11

Claims (16)

Patentni zahtevi
1. Jedinjenje koje sadrži modifikovani oligonukleotid komplementaran sa miR-21 (SEQ ID NO: 1) gde se modifikovani oligonukleotid:
a) sastoji od 16 do 22 povezanih nukleozida, i gde modifikovani oligonukleotid obuhvata najmanje 16 susednih nukleozida narednog nukleozidnog obrasca I u 5' ka 3' orijentaciji:
(R)X-N<B>-N<Q>-N<Q>-N<B>-(N<Q>-N<Q>-N<Q>-N<B>)3-N<Q>-N<Z>
gde je svaki R, nezavisno, ne-biciklični nukleozid; X iznosi od 1 do 4;
svaki N<B>je, nezavisno, biciklični nukleozid;
svaki N<Q>je, nezavisno, ne-biciklični nukleozid; i
N<Z>je modifikovan nukleozid, i gde
(i) svaki biciklični nukleozid obuhvata ne-metilovanu nukleobazu, ili
(ii) najviše dva ne-biciklična nukleozida su 2'-O-metoksietil nukleozidi i svaki drugi nebiciklični nukleozid je β-D-dezoksiribonukleozid; ili
b) sastoji od 16 do 19 povezanih nukleozida, i gde modifikovani oligonukleotid obuhvata najmanje 16 susednih nukleozida narednog nukleozidnog obrasca II u 5' ka 3' orijentaciji:
N<M>-N<B>-N<Q>-N<Q>-N<B>-(N<Q>-N<Q>-N<Q>-N<B>)3-N<Q>-N<Z>
gde N<M>je, nezavisno, modifikovan nukleozid koji nije biciklični nukleozid;
svaki N<B>je, nezavisno, biciklični nukleozid;
svaki N<Q>je, nezavisno, ne-biciklični nukleozid; i
N<Z>je modifikovan nukleozid, i gde
(i) svaki biciklični nukleozid obuhvata ne-metilovanu nukleobazu, ili
(ii) najviše dva ne-biciklična nukleozida su 2'-O-metoksietil nukleozidi i svaki drugi nebiciklični nukleozid je β-D-dezoksiribonukleozid; ili
c) sastoji od 16 do 19 povezanih nukleozida, i gde modifikovani oligonukleotid obuhvata najmanje 16 susednih nukleozida narednog nukleozidnog obrasca III u 5' ka 3' orijentaciji:
(R)X-N<B>-N<Q>-N<Q>-N<B>-(N<Q>-N<Q>-N<Q>-N<B>)3-N<Y>-N<Z>
gde je svaki R ne-biciklični nukleozid; X iznosi od 1 do 4;
svaki N<B>je biciklični nukleozid;
svaki N<Q>je ne-biciklični nukleozid;
N<Y>je modifikovan nukleozid ili nemodifikovan nukleozid; i
N<Z>je modifikovan nukleozid, i gde
(i) svaki biciklični nukleozid obuhvata ne-metilovanu nukleobazu, ili
(ii) najviše dva ne-biciklična nukleozida su 2'-O-metoksietil nukleozidi i svaki drugi nebiciklični nukleozid je β-D-dezoksiribonukleozid; ili
d) sastoji od 16 do 19 povezanih nukleozida, i gde modifikovani oligonukleotid obuhvata najmanje 16 susednih nukleozida narednog nukleozidnog obrasca IV u 5' ka 3' orijentaciji:
N<M>-N<B>-N<Q>-N<Q>-N<B>-(N<Q>-N<Q>-N<Q>-N<B>)3-N<Y>-N<Z>
gde N<M>je modifikovan nukleozid koji nije biciklični nukleozid;
svaki N<B>je biciklični nukleozid;
svaki N<Q>je ne-biciklični nukleozid;
N<Y>je modifikovan nukleozid ili nemodifikovan nukleozid; i
N<Z>je modifikovan nukleozid, i gde
(i) svaki biciklični nukleozid obuhvata ne-metilovanu nukleobazu, ili
(ii) najviše dva ne-biciklična nukleozida su 2'-O-metoksietil nukleozidi i svaki drugi nebiciklični nukleozid je β-D-dezoksiribonukleozid.
2. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, gde modifikovani oligonukleotid sadrži najmanje 17, najmanje 18, najmanje 19, najmanje 20, najmanje 21 ili 22 susedna nukleozida nukleozidnog obrasca I, II, III ili IV.
3. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 ili patentnom zahtevu 2, gde je nukleobazna sekvenca modifikovanog oligonukleotida najmanje 90% komplementarna, najmanje 95% komplementarna, ili je 100% komplementarna nukleobaznoj sekvenci od miR-21 (SEQ ID NO: 1).
4. Jedinjenje prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva, gde je svaki biciklični nukleozid nezavisno izabran između LNK nukleozida, cEt nukleozida i ENK nukleozida.
5. Jedinjenje prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva, gde je svaki ne-biciklični nukleozid nezavisno izabran između β-D-dezoksiribonukleozida i 2'-O-metoksietil nukleozida.
6. Jedinjenje prema bilo kom od patentnom zahtevu od 1 do 5, gde je najmanje jedan citozin 5-metil citozin, ili gde je svaki citozin 5-metilcitozin.
7. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, gde:
a) modifikovani oligonukleotid je modifikovani oligonukleotid patentnog zahteva 1(a), gde:
11
i) R se sastoji od četiri povezana nukleozida N<R1>-N<R2>-N<R3>-N<R4>, gde N<R1>je 2'-O-metoksietil nukleozid i svaki od N<R2>-N<R3>-N<R4>je β-D-dezoksiribonukleozid;
svaki N<B>je S-cEt nukleozid;
svaki N<Q>je β-D-dezoksiribonukleozid; i
N<Z>je 2'-O-metoksietil nukleozid;
ii) svaki R je 2'-O-metoksietil nukleozid; X iznosi 1;
svaki N<B>je S-cEt nukleozid;
svaki N<Q>je β-D-dezoksiribonukleozid; i
N<Z>je 2'-O-metoksietil nukleozid;
iii) svaki R je 2'-O-metoksietil nukleozid; X iznosi 1;
svaki N<B>je S-cEt nukleozid;
svaki N<Q>je 2'-O-metoksietil nukleozid; i
N<Z>je 2'-O-metoksietil nukleozid;
iv) svaki R je 2'-O-metoksietil nukleozid; X iznosi 1;
svaki N<B>je S-cEt nukleozid;
svaki N<Q>je β-D-dezoksiribonukleozid; i
N<Z>je S-cEt nukleozid;
v) svaki R je 2'-O-metoksietil nukleozid; X iznosi 1;
svaki N<B>je LNK nukleozid;
svaki N<Q>je β-D-dezoksiribonukleozid; i
N<Z>je 2'-O-metoksietil nukleozid; ili
vi) svaki R je 2'-O-metoksietil nukleozid; X iznosi 1;
svaki N<B>je LNK nukleozid;
svaki N<Q>je β-D-dezoksiribonukleozid; i
N<Z>je LNK nukleozid;
b) modifikovani oligonukleotid je modifikovani oligonukleotid patentnog zahteva 1(b), gde: i) N<M>je 2'-O-metoksietil nukleozid;
svaki N<B>je S-cEt nukleozid;
svaki N<Q>je β-D-dezoksiribonukleozid; i
N<Z>je 2'-O-metoksietil nukleozid;
ii) N<M>je 2'-O-metoksietil nukleozid;
svaki N<B>je S-cEt nukleozid;
svaki N<Q>je 2'-O-metoksietil nukleozid; i
N<Z>je 2'-O-metoksietil nukleozid;
11
iii) N<M>je 2'-O-metoksietil nukleozid;
svaki N<B>je S-cEt nukleozid;
svaki N<Q>je β-D-dezoksiribonukleozid;
svaki N je β-D-dezoksiribonukleozid; i
N<Z>je S-cEt nukleozid;
iv) N<M>je 2'-O-metoksietil nukleozid;
svaki N<B>je LNK nukleozid;
svaki N<Q>je β-D-dezoksiribonukleozid; i
N<Z>je 2'-O-metoksietil nukleozid; ili
v) N<M>je 2'-O-metoksietil nukleozid;
svaki N<B>je LNK nukleozid;
svaki N<Q>je β-D-dezoksiribonukleozid; i
N<Z>je LNK nukleozid;
c) modifikovani oligonukleotid je modifikovani oligonukleotid patentnog zahteva 1(c), gde: i) svaki R je 2'-O-metoksietil nukleozid; X iznosi 1;
svaki N<B>je S-cEt nukleozid;
svaki N<Q>je β-D-dezoksiribonukleozid;
N<Y>je β-D-dezoksiribonukleozid; i
N<Z>je 2'-O-metoksietil nukleozid;
ii) svaki R je 2'-O-metoksietil nukleozid; X iznosi 1;
svaki N<B>je S-cEt nukleozid;
svaki N<Q>je β-D-dezoksiribonukleozid;
N<Y>je β-D-dezoksiribonukleozid; i
N<Z>je S-cEt nukleozid; ili
iii) svaki R je 2'-O-metoksietil nukleozid; X iznosi 1;
svaki N<B>je S-cEt nukleozid;
svaki N<Q>je β-D-dezoksiribonukleozid;
N<Y>je S-cEt nukleozid; i
N<Z>je S-cEt nukleozid; ili
d) modifikovani oligonukleotid je modifikovani oligonukleotid patentnog zahteva 1(d), gde: i) N<M>je 2'-O-metoksietil nukleozid;
svaki N<B>je S-cEt nukleozid;
svaki N<Q>je β-D-dezoksiribonukleozid;
N<Y>je β-D-dezoksiribonukleozid; i
11
N<Z>je 2'-O-metoksietil nukleozid;
ii) N<M>je 2'-O-metoksietil nukleozid;
svaki N<B>je S-cEt nukleozid;
svaki N<Q>je β-D-dezoksiribonukleozid;
N<Y>je β-D-dezoksiribonukleozid; i
N<Z>je S-cEt nukleozid; ili
iii) N<M>je 2'-O-metoksietil nukleozid;
svaki N<B>je S-cEt nukleozid;
svaki N<Q>je β-D-dezoksiribonukleozid;
N<Y>je S-cEt nukleozid; i
N<Z>je S-cEt nukleozid.
8. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, gde:
a) modifikovani oligonukleotid je modifikovani oligonukleotid patentnog zahteva 1(a), gde modifikovani oligonukleotid ima strukturu izabranu od:
TE<Me>CEAEAECSAETECSAEGETECSTEGEAEUSAEAEGECSTEAE, i TE<Me>CAACSATCSAGTCSTGAUSAAGCSTAE; ili
b) modifikovani oligonukleotid je modifikovani oligonukleotid patentnog zahteva 1(b), gde modifikovani oligonukleotid ima strukturu izabranu od:
AECSAETECSAEGETECSTEGEAEUSAEAEGECSTEAE, AE<Me>CSAT<Me>CSAGT<Me>CSTGATSAAG<Me>CSTAE, AECSATCSAGTCSTGAUSAAGCSTAS, i AE<Me>CSAT<Me>CSAGT<Me>CSTGATSAAG<Me>CSTAS;
gde nukleozidi koje ne prati indeks jesu β-D-dezoksiribonukleozidi, nukleozidi koje prati indeks „E“ su 2'-MOE nukleozidi, nukleozidi koje prati indeks „S“ su S-cEt nukleozidi, a gornji indeks „Me“ označava 5-metil grupu na bazi nukleozida.
9. Jedinjenje prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva, gde modifikovani oligonukleotid ima nukleobaznu sekvencu SEQ ID NO: 3 ili gde modifikovani oligonukleotid ima nukleobaznu sekvencu SEQ ID NO: 4, i gde je svaki T u sekvenci nezavisno izabran od T i U.
10. Jedinjenje prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva, gde je najmanje jedna internukleozidna veza modifikovana internukleozidna veza, ili gde je svaka internukleozidna
11
veza modifikovana internukleozidna veza, i gde je modifikovana internukleozidna veza opciono fosforotioatna internukleozidna veza.
11. Farmaceutski sastav koja sadrži jedinjenje bilo kog od prethodnih patentnih zahteva i farmaceutski prihvatljiv nosač.
12. Jedinjenje prema bilo kom patentnom zahtevu od 1 do 10 ili farmaceutski sastav prema patentnom zahtevu 11, za upotrebu u terapiji, kao što je upotreba u tretmanu fibroze.
13. Jedinjenje prema bilo kom patentnom zahtevu od 1 do 10 ili farmaceutski sastav prema patentnom zahtevu 11, za upotrebu u postupku tretmana, sprečavanja ili odlaganja pojave bolesti povezane sa miR-21, koji obuhvata primenu jedinjenja ili smeše pacijentu koji ima bolest povezanu sa miR-21, gde je bolest fibroza, kao što je fibroza izabrana od fibroze bubrega, fibroze pluća, fibroze jetre, fibroze srca, fibroze kože, starosne fibroze, fibroze slezine, skleroderme i fibroze nakon transplantacije.
14. Jedinjenje ili sastav za upotrebu prema patentnom zahtevu 13, gde je fibroza fibroza bubrega.
15. Jedinjenje ili sastav za upotrebu prema bilo kom patentnom zahtevu od 13 do 14, gde postupak obuhvata primenu najmanje jednog terapeutskog agensa izabranog iz grupe koju čine: protiv-upalni agens; imunosupresivni agens; anti-dijabetički agens; digoksin; vazodilatator; inhibitor angiotenzin II konvertujućeg enzima (ACE), kao što je ACE inhibitor odabran od kaptoprila, enalaprila, lizinoprila, benazeprila, kvinaprila, fozinoprila i ramiprila; blokator angiotenzin II receptora (ARB), kao što je ARB inhibitor odabran od kandesartana, irbesartana, olmesartana, losartana, valsartana, telmisartana i eprosartana; blokator kalcijumovih kanala; izosorbid dinitrat; hidralazin; nitrat; hidralazin; beta-blokator; natriuretički peptid; heparinoid; i inhibitor faktora rasta vezivnog tkiva.
16. Jedinjenje ili sastav za upotrebu prema bilo kom patentnom zahtevu od 13 do 15, gde je pacijent čovek.
12
RS20210552A 2011-04-25 2012-04-25 Mikrornk jedinjenja i postupci za modulaciju mir-21 aktivnosti RS61775B1 (sr)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201161478767P 2011-04-25 2011-04-25
US201161565779P 2011-12-01 2011-12-01
EP17153724.4A EP3211082B1 (en) 2011-04-25 2012-04-25 Microrna compounds and methods for modulating mir-21 activity

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS61775B1 true RS61775B1 (sr) 2021-05-31

Family

ID=46025979

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20210552A RS61775B1 (sr) 2011-04-25 2012-04-25 Mikrornk jedinjenja i postupci za modulaciju mir-21 aktivnosti

Country Status (30)

Country Link
US (7) US9181547B2 (sr)
EP (3) EP3211082B1 (sr)
JP (2) JP6320292B2 (sr)
KR (2) KR20190063482A (sr)
CN (3) CN113249381A (sr)
AU (4) AU2012249851B2 (sr)
BR (1) BR112013027187A2 (sr)
CA (2) CA2833615C (sr)
CL (1) CL2013003105A1 (sr)
CO (1) CO6821889A2 (sr)
CY (1) CY1120304T1 (sr)
DK (2) DK3211082T3 (sr)
EA (1) EA025894B1 (sr)
ES (2) ES2621863T3 (sr)
HR (2) HRP20170557T2 (sr)
HU (2) HUE031595T2 (sr)
IL (3) IL229032B (sr)
LT (2) LT3211082T (sr)
MX (5) MX393138B (sr)
MY (2) MY175336A (sr)
NZ (1) NZ717921A (sr)
PH (1) PH12013502199A1 (sr)
PL (2) PL3211082T3 (sr)
PT (2) PT2702155T (sr)
RS (1) RS61775B1 (sr)
SG (1) SG194636A1 (sr)
SI (2) SI2702155T1 (sr)
TW (2) TWI698445B (sr)
UA (1) UA115652C2 (sr)
WO (1) WO2012148952A1 (sr)

Families Citing this family (22)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ES2503739T3 (es) 2004-11-12 2014-10-07 Asuragen, Inc. Procedimientos y composiciones que implican miARN y moléculas inhibidoras de miARN
SI2702155T1 (sl) 2011-04-25 2017-07-31 Regulas Therapeutics Inc. Spojine MicroRNA in postopki za modulacijo aktivnosti MIR-21
WO2013153082A1 (en) * 2012-04-10 2013-10-17 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods for the treatment of nonalcoholic steatohepatitis
AU2013251696B2 (en) 2012-04-25 2018-11-15 Sanofi MicroRNA compounds and methods for modulating miR-21 activity
UA116639C2 (uk) 2012-10-09 2018-04-25 Рег'Юлес Терап'Ютікс Інк. Способи лікування синдрому альпорта
CN117126846A (zh) 2012-11-15 2023-11-28 罗氏创新中心哥本哈根有限公司 寡核苷酸缀合物
SG11201508925WA (en) 2013-05-01 2015-11-27 Regulus Therapeutics Inc Microrna compounds and methods for modulating mir-122
EP3060664B1 (en) 2013-10-25 2021-07-07 Sanofi Microrna compounds and methods for modulating mir-21 activity
KR101625755B1 (ko) 2013-11-18 2016-05-30 울산대학교 산학협력단 ｍｉＲＮＡ 스폰지 및 이의 용도
WO2015113922A1 (en) * 2014-01-30 2015-08-06 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Poly oligomer compound with biocleavable conjugates
CN105734127A (zh) * 2016-02-29 2016-07-06 上海中医药大学 miR-21-3p在制备用于检测早期急性肾损伤的试剂中的用途
EP3449001B1 (en) 2016-04-29 2021-12-08 Aptamir Therapeutics, Inc. Inhibition of mir-22 mirna by apt-110
US20180193270A1 (en) 2016-11-29 2018-07-12 PureTech Health LLC Exosomes for delivery of therapeutic agents
CA3076367A1 (en) 2017-09-22 2019-03-28 University Of Washington In situ combinatorial labeling of cellular molecules
CN108148911B (zh) * 2018-03-02 2019-11-05 广州医科大学附属第二医院 miR-582在制备前列腺癌骨转移的诊断、预后试剂盒及药物中的应用
EP3790972A1 (en) 2018-05-08 2021-03-17 Regulus Therapeutics Inc. Galnac conjugated modified oligonucleotide as mir-122 inhibitor having hcv antiviral activity with reduced hyperbilirubinemia side-effect
CN110747266A (zh) * 2018-07-23 2020-02-04 深圳先进技术研究院 miR-21和miR-21拮抗剂在抑制预防/治疗1型糖尿病中的应用
CN109880907A (zh) * 2019-03-26 2019-06-14 中国人民解放军第八一医院 一种肝癌细胞侵袭转移的分子机制研究方法
US11965162B2 (en) 2020-04-16 2024-04-23 The Johns Hopkins University MicroRNA and inhibitors thereof and methods of treatment
WO2022165092A1 (en) * 2021-01-29 2022-08-04 Angion Biomedica Corp. Methods for treatment of fibrotic diseases
WO2025110217A1 (ja) * 2023-11-22 2025-05-30 国立大学法人東海国立大学機構 嚢胞性腎疾患の予防及び／又は治療剤
CN120505413A (zh) * 2025-07-15 2025-08-19 湖南工程学院 一种基于引物交换反应和G-四链体检测AKI相关miRNA的探针体系及方法

Family Cites Families (40)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DK1079843T3 (da) 1998-05-22 2007-07-30 Boys Town Nat Res Hospital Anvendelse af a1beta1 integrinreceptorinhibitorer og TFG beta1 inhibitorer til behandling af nyresygdom
US20060008817A1 (en) * 2000-12-08 2006-01-12 Invitrogen Corporation Methods and compositions for generating recombinant nucleic acid molecules
JP4371812B2 (ja) 2001-09-28 2009-11-25 マックス−プランク−ゲゼルシャフト・ツア・フェルデルング・デア・ヴィッセンシャフテン・エー・ファオ マイクロｒｎａ分子
WO2004041889A2 (en) 2002-11-05 2004-05-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. Polycyclic sugar surrogate-containing oligomeric compounds and compositions for use in gene modulation
US20050124591A1 (en) 2003-07-29 2005-06-09 Jin Tian Use of vitamin Ds to treat kidney disease
US7683036B2 (en) * 2003-07-31 2010-03-23 Regulus Therapeutics Inc. Oligomeric compounds and compositions for use in modulation of small non-coding RNAs
EP1661905B9 (en) 2003-08-28 2012-12-19 IMANISHI, Takeshi Novel artificial nucleic acids of n-o bond crosslinkage type
JP5192234B2 (ja) 2004-08-10 2013-05-08 アルナイラム ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド 化学修飾オリゴヌクレオチド
US20080187508A1 (en) 2004-09-08 2008-08-07 Boys Town National Research Hospital Treatment of Golmerular Basement Membrane Disease Involving Matrix Metalloproteinase-12
ES2503739T3 (es) 2004-11-12 2014-10-07 Asuragen, Inc. Procedimientos y composiciones que implican miARN y moléculas inhibidoras de miARN
US20070099196A1 (en) 2004-12-29 2007-05-03 Sakari Kauppinen Novel oligonucleotide compositions and probe sequences useful for detection and analysis of micrornas and their target mRNAs
US6995235B1 (en) 2005-05-02 2006-02-07 Univation Technologies, Llc Methods of producing polyolefins and films therefrom
EP1931780B1 (en) * 2005-08-29 2016-01-06 Regulus Therapeutics Inc. Antisense compounds having enhanced anti-microrna activity
WO2007090073A2 (en) 2006-01-27 2007-08-09 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligomeric compounds and compositions for the use in modulation of micrornas
CN102908630B (zh) 2006-01-27 2014-11-19 Isis制药公司 6-修饰的双环核酸类似物
SG10201406016SA (en) * 2006-04-03 2014-11-27 Stella Aps Pharmaceutical composition comprising anti-mirna antisense oligonucleotides
CA3024953A1 (en) * 2006-04-03 2007-10-11 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Pharmaceutical composition comprising anti-mirna antisense oligonucleotides
AU2007303205A1 (en) 2006-10-03 2008-04-10 Tekmira Pharmaceuticals Corporation Lipid containing formulations
AU2007306594A1 (en) 2006-10-09 2008-04-17 Julius-Maximilians-Universitat Wurzburg MicroRNA (miRNA) for the diagnosis and treatment of heart diseases
CA2671294A1 (en) 2006-12-08 2008-06-19 Asuragen, Inc. Mir-21 regulated genes and pathways as targets for therapeutic intervention
WO2008086807A2 (en) 2007-01-19 2008-07-24 Exiqon A/S Mediated cellular delivery of lna oligonucleotides
WO2008150729A2 (en) 2007-05-30 2008-12-11 Isis Pharmaceuticals, Inc. N-substituted-aminomethylene bridged bicyclic nucleic acid analogs
ES2386492T3 (es) 2007-06-08 2012-08-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. Análogos de ácidos nucleicos bicíclicos carbocíclicos
WO2008151631A2 (en) 2007-06-15 2008-12-18 Exiqon A/S Use of short oligonucleotides for reagent redundancy experiments in rna functional analysis
ATE538127T1 (de) 2007-07-05 2012-01-15 Isis Pharmaceuticals Inc 6-disubstituierte bicyclische nukleinsäureanaloga
CA2701547C (en) * 2007-10-04 2020-03-10 Santaris Pharma A/S Oligonucleotides which target and inhibit micrornas
CN101980712B (zh) * 2007-10-29 2015-02-18 雷古拉斯治疗公司 用于肝癌治疗的靶向微小rna
WO2009091972A2 (en) 2008-01-18 2009-07-23 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Chemically modified oligonucleotides and small molecules for use in reducing micro rna activity levels and uses thereof
CA2714120A1 (en) 2008-02-08 2009-08-13 Prosensa Holding Bv Methods and means for treating dna repeat instability associated genetic disorders
EP2096171A1 (en) 2008-02-27 2009-09-02 Julius-Maximilians-Universität Würzburg MicroRNA (miRNA) and down-stream targets for diagnostic and therapeutic purposes
EP2268811A1 (en) 2008-03-07 2011-01-05 Santaris Pharma A/S Pharmaceutical compositions for treatment of microrna related diseases
EP2401405A4 (en) 2009-02-26 2013-10-16 Univ Ohio State Res Found MICRO-RNAS FOR NON-SMOKERS AND RELATED MATERIALS AND METHODS
SG176716A1 (en) * 2009-06-08 2012-01-30 Miragen Therapeutics CHEMICAL MODIFICATION MOTIFS FOR miRNA INHIBITORS AND MIMETICS
WO2011126842A2 (en) 2010-03-30 2011-10-13 Regulus Therapeutics Inc. Targeting micrornas for the treatment of cardiac disorders
SI2702155T1 (sl) 2011-04-25 2017-07-31 Regulas Therapeutics Inc. Spojine MicroRNA in postopki za modulacijo aktivnosti MIR-21
WO2013013165A2 (en) 2011-07-21 2013-01-24 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Use of lna compounds for therapeutic inhibition of mir-21 in systemic lupus erythematosus
AU2013251696B2 (en) 2012-04-25 2018-11-15 Sanofi MicroRNA compounds and methods for modulating miR-21 activity
EP3354734B1 (en) 2012-06-21 2020-06-10 Miragen Therapeutics, Inc. Oligonucleotide-based inhibitors comprising locked nucleic acid motif
WO2014048441A1 (en) 2012-09-26 2014-04-03 Mirrx Therapeutics Oligomers with improved off-target profile
UA116639C2 (uk) 2012-10-09 2018-04-25 Рег'Юлес Терап'Ютікс Інк. Способи лікування синдрому альпорта

Also Published As

Publication number Publication date
LT3211082T (lt) 2021-05-10
CL2013003105A1 (es) 2014-08-01
SI2702155T1 (sl) 2017-07-31
EA201391492A1 (ru) 2014-04-30
US20140107183A1 (en) 2014-04-17
CN103620035A (zh) 2014-03-05
US9790496B2 (en) 2017-10-17
PL2702155T3 (pl) 2017-09-29
MX2022000212A (es) 2022-04-01
MX2019003090A (es) 2019-07-18
AU2012249851A1 (en) 2013-10-31
CY1120304T1 (el) 2019-07-10
EP3211082B1 (en) 2021-02-17
CO6821889A2 (es) 2013-12-31
MX2022006595A (es) 2022-07-01
EP2702155B1 (en) 2017-02-01
EP2702155A1 (en) 2014-03-05
TWI607016B (zh) 2017-12-01
MY175336A (en) 2020-06-19
MX393138B (es) 2025-03-24
NZ616748A (en) 2016-03-31
HRP20170557T1 (hr) 2017-06-16
US20120270928A1 (en) 2012-10-25
EP3211082A1 (en) 2017-08-30
AU2012249851A8 (en) 2013-11-14
US9181547B2 (en) 2015-11-10
MY187685A (en) 2021-10-11
NZ717921A (en) 2017-09-29
MX2019003089A (es) 2019-07-18
CA2833615A1 (en) 2012-11-01
PL3211082T3 (pl) 2021-08-02
CA2833615C (en) 2022-08-30
HUE054129T2 (hu) 2021-08-30
IL229032B (en) 2021-01-31
US20200291400A1 (en) 2020-09-17
EP2702155B9 (en) 2020-01-01
PT2702155T (pt) 2017-04-03
SI3211082T1 (sl) 2021-08-31
US12331294B2 (en) 2025-06-17
CN113151272A (zh) 2021-07-23
HK1243130A1 (en) 2018-07-06
JP2014518619A (ja) 2014-08-07
KR20140033062A (ko) 2014-03-17
EA025894B1 (ru) 2017-02-28
TW201300404A (zh) 2013-01-01
IL229032A0 (en) 2013-12-31
EP3933040A1 (en) 2022-01-05
PH12013502199A1 (en) 2014-01-27
US20140329887A1 (en) 2014-11-06
US8912161B2 (en) 2014-12-16
CN103620035B (zh) 2021-04-23
KR20190063482A (ko) 2019-06-07
DK2702155T3 (en) 2017-05-01
AU2017219156A1 (en) 2017-09-21
BR112013027187A2 (pt) 2017-06-06
AU2022203067A1 (en) 2022-05-26
HRP20210616T1 (hr) 2021-05-28
HUE031595T2 (en) 2017-07-28
ES2868950T3 (es) 2021-10-22
ES2621863T9 (es) 2020-02-13
AU2020201403A1 (en) 2020-03-12
US20160138016A1 (en) 2016-05-19
DK3211082T3 (da) 2021-05-10
KR102055172B1 (ko) 2020-01-23
CA3165397A1 (en) 2012-11-01
PT3211082T (pt) 2021-04-28
SG194636A1 (en) 2013-12-30
UA115652C2 (uk) 2017-12-11
TWI698445B (zh) 2020-07-11
AU2017219156B2 (en) 2020-01-02
AU2012249851B2 (en) 2017-06-08
LT2702155T (lt) 2017-05-10
IL266529A (en) 2019-07-31
JP6320292B2 (ja) 2018-05-09
JP2018121646A (ja) 2018-08-09
ES2621863T3 (es) 2017-07-05
HRP20170557T2 (hr) 2020-02-21
TW201811812A (zh) 2018-04-01
IL273381A (en) 2020-05-31
WO2012148952A1 (en) 2012-11-01
US20180155719A1 (en) 2018-06-07
MX2013012452A (es) 2014-11-21
US20220098583A1 (en) 2022-03-31
CN113249381A (zh) 2021-08-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US12331294B2 (en) MicroRNA compounds and methods for modulating mir-21 activity
EP2841579B1 (en) Microrna compounds and methods for modulating mir-21 activity
HK40065959A (en) Microrna compounds and methods for modulating mir-21 activity
HK1243130B (en) Microrna compounds and methods for modulating mir-21 activity
HK1195585B (en) Microrna compounds and methods for modulating mir-21 activity
HK1195585A (en) Microrna compounds and methods for modulating mir-21 activity
HK1207115B (en) Microrna compounds and methods for modulating mir-21 activity
NZ616748B2 (en) Microrna compounds and methods for modulating mir-21 activity